KR20240079276A - 곤충으로부터 분리된 유산균 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 곤충으로부터 분리된 유산균 및 이의 용도에 관한 것으로, 곤충 유래 유산균의 새로운 활용 가능성을 제시한다.

Description

곤충으로부터 분리된 유산균 및 이의 용도{Lactic acid bacteria isolated from insects and uses thereof}
본 발명은 곤충으로부터 분리된 유산균 및 이의 용도에 관한 것이다.
유산균(lactic acid bacteria, LAB)은 유익한 박테리아이지만, 아직까지 곤충 유래 유산균의 특성과 기능에 대하여는 불분명한 실정이다. 곤충은 종 수 면에서 가장 다양한 동물 그룹으로, 지구상 거의 모든 환경에서 가장 큰 바이오매스를 가지고 있다. 곤충의 다양화는 장 시스템에 서식하는 미생물 군집의 기능과 밀접하게 관련되어 있다. 미생물은 장에서 음식의 소화를 촉진하거나, 포식자와 병원체로부터 숙주를 보호하고, 면역 반응을 강화하거나, 종 내 의사 소통 및 행동에 영향을 미친다. 이와 같이 곤충은 미생물과 공생 관계를 유지하면서 진화해왔다.
유산균은 식품, 특히 유제품에서 중요한 역할을 한다. 유산균은 일반적으로 안전한(GRAS) 식품 등급 미생물로 인식되며, 인간의 건강에 도움이 되는 프로바이오틱스로 사용된다. 곤충 유래 유산균 중 꿀벌의 공생 유산균에 대해 연구된 바 있다. 꿀벌은 자연 생태계와 농업 생산에 필수적인 수분 매개체로, 공생 유산균은 꿀벌 건강과 꿀 생산에 주요 역할을 하는 것으로 보고된 바 있다.
본 발명은 최근 콩과 식물, 과일나무 등의 해충으로 알려진 톱다리개미허리노린재(Riptortus pedestris) 유래 유산균을 분리 및 동정하여, 이의 특성과 기능을 분석함에 따른 새로운 활용 가능성을 제안하고자 한다.
KR 10-2022-0140282 A
본 발명은 톱다리개미허리노린재(Riptortus pedestris)의 장내 미생물의 특성 및 기능을 분석하여 새로운 활용 가능성을 제시하고자 한다.
본 발명은 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주를을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 락토코커스 락티스 B103 균주는, 바람직하게는 pH 내성이 있는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 pH 내성은, 더욱 바람직하게는 위액의 산성 또는 담즙액의 염기성에 대한 내성인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 락토코커스 락티스 B103 균주는, 바람직하게는 포도당을 탄소원으로 하여 유기산을 생산하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 유기산은, 더욱 바람직하게는 아세트산, 젖산, 프로피온산 중 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 락토코커스 락티스 B103 균주는, 바람직하게는 개체의 섭식에 의해 개체의 생존율을 증가시키는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 개체는, 바람직하게는 톱다리개미허리노린재인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 첨가제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가제를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 조성물을 제공한다.
본 발명은 톱다리개미허리노린재(Riptortus pedestris)의 장내 미생물을 분리 및 동정함에 따른 신규한 유산균을 제공한다.
본 발명의 신규한 유산균은 pH 내성이 있어, 섭식 후에도 장내에서 일정 밀도로 증식하여 군집을 이룰수 있다.
본 발명의 신규한 유산균은 포도당을 탄소원으로 하여 유기산을 생산할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균의 계통수를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균의 위액에 대한 내성을 나타낸 도이다. 도 2a는 pH 2.2의 모의위액에서 생존율을 분석한 도이고, 도 2b는 pH 2.5 모의위액에서 생존율을 분석한 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균의 담즙액에 대한 내성을 나타낸 도이다. 도 3a는 0.1% 담즙염(oxgall)에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이고, 도 3b는 0.5% 담즙염(oxgall)에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균의 성장곡선(도 4a), 포도당 소모율(도 4b), pH 변화(도 4c)를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균의 장내 생존평가 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 톱다리개미허리노린재 장내 유산균을 톱다리개미허리노린재에 공급하여 생존률(도 6a), 몸길이(도 6b), 몸무게(도 6c)를 분석한 도이다.
본 발명은 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주를 제공한다.
톱다리개미허리노린재(Riptortus pedestris)는 콩과 식물, 과일나무 등의 해충으로 채집 및 사육이 용이하고 취급이 간편한 이점이 있다. 본 발명은 톱다리개미허리노린재의 장내 미생물을 분리 및 동정하여 pH 내성이 우수한 유산균을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 균주를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 사료 첨가제는, 원형 그대로 사용하거나 또는 추가적으로 허용되는 곡류 및 그 부산물 등의 공지된 담체, 안정제 등을 가할 수 있으며, 필요에 따라 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제, 탄산수소나트륨(중조), 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 E, 비타민 A, D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 리이산 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제, 항생물질, 항균제 및 기타의 첨가제 등을 가할 수도 있으며, 그 형상으로서는 분체, 과립, 펠릿, 현탁액 등 의 적당한 상태일 수 있으며, 상기 사료첨가제를 공급하는 경우는 단독으로 또는 사료에 혼합하여 공급할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가제를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 곤충 사료 조성물은, 일 예로, 참나무 톱밥, 아카시아나무 톱밥, 사과나무 톱밥, 소나무 톱밥, 뽕나무 톱밥, 오리나무 톱밥 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
<준비예 1> 톱다리개미허리노린재 사육
톱다리개미허리노린재(Riptortus pedestris) 성충은 2018년 진주지역 대두 포장에서 채집하였다. 채집된 성충은 플라스틱 상자(35 × 35 × 40 cm)에 0.05% 아스코르브산(DWA)을 함유한 증류수와 대두 식물을 먹이로 공급하였으며 28℃와 장일조건(16 h light, 8 h dark)에서 사육하였다. 플라스틱 상자 안에 면 패드를 넣어 곤충 알을 회수한뒤, 새 플라스틱 상자로 옮긴 후, 후속 실험을 위해 부화 후 2령 유충까지 사육하였다.
<실시예 1> 톱다리개미허리노린재의 장내 유산균 분리 및 동정
톱다리개미허리노린재의 성충 20마리를 멸균수로 2회 헹구고 70%(v/v) 에탄올로 표면 살균하였다. 톱다리개미허리노린재의 내장을 분리하여 10mM 인산염 완충액(pH 7.0)에 넣고, 내장을 플라스틱 유봉으로 분쇄하여 인산염 완충액으로 연속 희석하였다. 희석된 장 용액을 de Man, Rogosa, and Sharpe(MRS) 한천 배지(Difco, Detroit, MI, USA)에 도말하여 28℃ 배양기에서 3일 동안 배양하였다. 원형이며 흰색을 띠는 균일한 세균 집락를 선택하여 순수 배양한 후 25%(v/v) 글리세롤과 혼합하여 -80℃에 저장하였다. 원형의 흰색 집락이 있는 그람 양성, 산화효소 음성 세균이 2% 포도당을 포함하는 MRS 배지에서 일관되게 성장하였다. 3개의 세균 분리주를 선택하여 각각 B103, B104, B105로 표시하고, 이들의 동정과 특성을 조사하는 실험을 진행하였다.
MALDI Biotyper v.3.0(Bruker Daltonics, Bremen, Germany)프로그램을 사용하여 whole-cell matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight(MALDI-TOF) mass spectrometry와 Basic Local Alignment Search Tool(BLAST) 검색을 제조업체의 지침에 따라 수행하였다. 세균 분리주의 부분 16S rRNA 유전자 영역을 27mF 프라이머(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3') 와 1492mR 프라이머(5'-GGYTACTTGTTACGACTT-3')를 사용하여 증폭시켰다. 세균의 genomic DNA를 추출한 뒤 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction, PCR)으로 PCR premix(Bioneer, Daejeon, Korea), 10ng genomic DNA 와 1mM의 프라이머를 사용하였고 T100 Thermal Cycler(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)기기를 사용하여 수행하였다. PCR 반응조건은 98℃에서 30초, 55℃에서 30초, 70℃에서 1분을 30회 순환시켰다. PCR 산물은 0.8% agarose gel 전기영동으로 확인하였고 Expin Gel SV kit(GeneAll Biotechnology, Seoul, Korea)를 사용하여 정제하였다. 염기서열 분석은 DNA 염기서열 분석업체(마크로젠, 대전, 한국)에 의뢰하였고, DNA 서열은 National Center for Biotechnology Information GenBank 데이터베이스(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/)를 사용하여 분석하였다. 16S rRNA 유전자의 염기서열을 기반으로 한 계통수는 MEGA 7.0 소프트웨어와 Neighbor-joining 방법을 사용하여 생성하였다.
MALDI-TOF 질량 분광 분석 결과에 따르면, B103과 B104는 각각 2.236과 2.256(점수 ≥ 2.0 = 종 수준 식별)의 점수를 가진 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)로 판별되었고 B105는 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis)로 2.331의 점수를 산출하였다. 도 1에서 보듯이, 계통발생학적 분석에서 B103과 B104는 Lactococcus lactis와 같은 군에 군집하였고, B105는 Enterococcus faecalis와 같은 군에 군집하였다.
이하, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주, 락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주, 엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주의 특성을 분석하였다.
<실시예 2> 위액 및 담즙염 용액에서 유산균 생존율 분석
본 실험에서는 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 세 가지 유산균의 모의위액 및 담즙염 용액에 대한 내성을 분석하였다.
2-1. 위액 내성 분석
1N HCl을 사용하여 pH 2.2 또는 2.5로 조정된 MRS 배지에 1% 펩신을 첨가하여 모의위액을 제조하였다. 28℃, MRS배지에서 2일간 배양한 세 가지 유산균을 모의위액에 각각 109 CFU/mL 농도로 접종한 후 28℃에서 2시간 배양하였다. 30분 간격으로 샘플을 채취하여 희석하고, MRS 배지에 도말하여 28℃에서 3일간 배양하였다. 세균의 생존 밀도는 집락 계수를 이용하여 결정하였다.
도 2a는 pH 2.2의 모의 위액에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이다. 엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주는 pH 2.2에서 120분간 가장 높은 생존율을 보인 반면, 락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주는 노출 60분 후 급격히 감소하여 120분에 4.26 log CFU/mL의 밀도를 보였다. 또한, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 120분간 생존율이 서서히 감소하여, 최종 4.78 log CFU/mL의 밀도로 나타났다.
도 2b는 pH 2.5의 모의위액에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이다. 세 가지 유산균 모두 높은 생존율을 보였다. 즉, 본 발명의 톱다리개미허리노린재 장내 유산균이 위액 환경에 대한 저항성을 가지는 것을 의미한다.
2-2. 담즙염 용액 내성 분석
28℃, MRS배지에서 2일간 배양한 세 가지 유산균을 0.1% 또는 0.5% 담즙염(oxgall)을 포함하는 MRS 배지에 각각 109 CFU/mL 농도로 접종한 후 28℃에서 2시간 배양하였다. 30분 간격으로 샘플을 채취하여 희석하고, MRS 배지에 도말하여 28℃에서 3일간 배양하였다. 세균의 생존 밀도는 집락 계수를 이용하여 결정하였다.
도 3a는 0.1% 담즙염(oxgall)에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이고, 도 3b는 0.5% 담즙염(oxgall)에서 유산균의 내성을 분석한 결과를 나타낸 도이다. 도 3에서 보듯이, 모든 유산균은 담즙염(oxgall) 노출 24시간 후에도 높은 생존율을 보여, 담즙염에 대한 내성을 가지는 것을 확인하였다.
<실시예 3> 포도당 소모 및 이에 따른 pH 변화 분석
본 실험에서는 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 세 가지 유산균의 포도당 이용능력을 평가하였다.
D-glucose assay kit(glucose oxidase/peroxidase [GOPOD]; Megazyme, Wicklow, Ireland)를 제조사의 지침에 따라 사용하였다. 세 가지 유산균을 28℃, MRS 배지에서 3일간 배양하면서 12시간 간격으로 상등액을 수집하였다. 3mL의 GOPOD 시약을 100μL 상등액에 첨가하고 42℃에서 20분간 반응시켰다. 대조군 용액은 증류수를 사용하였다. 발색 반응 후, 분광 광도계(Genesys 6; Thermo Electron Corp., Waltham, MA, USA)를 사용하여 510 nm에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. 세균이 배양된 MRS 배지의 pH는 pH meter(SevenEasy; Mettler-Toledo, Greifensee, Switzerland)를 사용하여 3일 동안 4시간 또는 24시간 간격으로 측정하였다.
도 4는 본 발명의 톱다리개미허리노린재 장내 미생물의 포도당 소모와 이에 따른 pH 변화를 나타낸 도이다. 엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주는 MRS 배지에서 빠르게 성장하여 12시간 후 초기 정지기에 도달하였으며, 세균 밀도는 72시간 후 OD600 1.69 값을 나타냈다. 공급된 포도당의 65%를 빠르게 소비하였으며, pH는 4.4로 급격히 감소하였다.
락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주는 서서히 생장하여 72시간 후에 OD600 0.99의 낮은 세균 밀도를 나타내었다. 공급된 포도당의 50%를 소비하였으며, pH는 4.8에 도달하였다.
락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 72시간 후 OD600 0.76의 가장 낮은 세균 밀도를 보였다. 공급된 포도당의 43%를 소비하였으며, pH는 5.0에 도달하였다.
<실시예 4> 유기산 분석
본 실험에서는 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 세 가지 유산균이 포도당을 탄소원으로 사용하여 젖산으로 전환하는지 분석하였다.
2% 포도당을 함유하는 MRS 배지에서 28℃ 조건으로 2일간 배양하였다. 배양물을 원심분리한 뒤 상등액을 회수하였다. 각 상등액은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석을 위해 0.45μm 셀룰로오스 아세테이트 필터를 통해 여과시켰다. 젖산, 초산 등의 유기산의 농도는 자외선 검출기(L-2400; Hitachi)와 컬럼(Metacarb 87H; Varian, Palo Alto, CA, USA)이 장착된 HPLC(L-2200; Hitachi, Tokyo, Japan)를 사용하여 측정하였다. 배양 여과액의 HPLC 프로파일은 별도로 주입된 표준 유기산의 용출 프로파일과 비교하여 분석하였다. 분석 결과를 표 1에 기재하였다.
Strains
L. lactis B103 L. lactis B104 E. faecali B105
pH 5.0 4.8 4.4
Acetic acid(g/L) nd 0.62±0.05a 1.14±0.05b
Lactic acid(g/L) 1.39±0.1a 2.76±0.2b 4.69±0.2c
Propionic acid(g/L) 0.58±0.05a 0.58±0.05a 2.33±0.2b
Bacterial count(log CFU/mL) 7.23 8.64 9.27
엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주는 다른 균주에 비해 유의하게 높은 세균밀도, 낮은 pH 값, 높은 젖산, 초산, 프로피온산 함량을 보였다. 락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주는 젖산, 아세트산 및 프로피온산을 다양한 농도로 생산하였다. 한편, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 낮은 함량의 젖산과 프로피온산을 생산하였고 아세트산은 생산하지 못하였다.
<실시예 5> 장내 생존 평가
본 실험에서는 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 세 가지 유산균을 2령 약충에 공급한 뒤, 성충의 장내 생존 평가를 수행하였다.
25 μg/mL 리팜피신(rifampicin)을 함유하는 MRS에서 28℃, 2일간 배양하여, 리팜피신(rifampicin) 내성 균주를 수득하였다. 배양된 세균를 수확한 후 DWA(ascorbic acid 포함 증류수)로 세척하고, DWA에 약 108 CFU/mL 농도로 현탁시켰다. 새로 탈피한 2령 약충에게는 실험 전 24시간 DWA를 공급하지 않았고, 목마른 약충에게 유산균이 포함된 DWA를 24시간 공급하였다. 유산균을 공급한 후, 2령 약충은 상기와 같이 사육하였다. 유산균을 공급한 후, 21일에 5마리의 성충을 해부하고 내장을 분리하여 500μL 인산염 완충액으로 옮겼다. 내장을 플라스틱 유봉으로 완전히 분쇄하고 인산염 완충액로 연속 희석하였다. 희석된 장 용액을 25 μg/mL 리팜피신(rifampicin)을 함유하는 MRS 한천배지에 도말하였다. 도말한 배지는 28℃에서 3일간 배양한 후, 세균의 집락을 계수하였다.
도 5에서 보듯이, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 1.21 × 107 CFU/gut, 락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주는 5.27 × 105 CFU/gut, 엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주는 3.24 × 105 CFU/gut로 계수되었다. 즉, 섭식을 통한 접종 후, 곤충의 장에서 일정 밀도로 증식하며 성공적으로 군집화 하였음을 확인하였다. 특히, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 가장 높은 세균 밀도를 보였다.
<실시예 6> 곤충의 생존율, 체중 및 길이 평가
본 실험에서는 상기 실시예 5에서 각 유산균을 공급한 2령 약충의 생존율과 성충의 체중 및 길이를 평가하였다.
상기 실시예 5와 같이 2령 약충에 각 유산균을 공급한 뒤, 성충이 될 때까지 20일간 매일 죽은 곤충을 계수하였다. 또한, 유산균 공급 후 21일째에 톱다리개미허리노린재 성충을 아세톤에 5분간 처리하고, 70℃의 오븐에서 완전히 건조시켰다. 이후, 곤충의 건조 무게를 측정하였다. 톱다리개미허리 노린재를 희생시키기 전 24시간은 먹이를 급여하지 않았다. 성충의 몸 길이는 머리부터 복부까지 측정하였다. 평균 차이는 Cumming 추정 플롯에 점으로 나타내었다. 모든 추정 플롯은 https://www.estimationstats.com/#/을 사용하여 생성하였으며, 도 6에 분석 결과를 나타내었다.
도 6에서 보듯이, 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주를 공급한 경우의 생존률은 78.9%, 락토코커스 락티스 B104(Lactococcus lactis B104) 균주를 공급한 경우의 생존률은 60.5%, 엔테로코커스 페칼리스 B105(Enterococcus faecalis B105) 균주를 공급한 경우의 생존률은 55%로 확인되었다. 반면 DWA를 공급한 경우에는 47.3% 생존률을 보였다. 또한, 각 유산균을 공급한 경우의 몸 길이와 체중은 유의미한 차이를 나타내지는 않았다.
즉, 본 발명의 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주는 위액 및 담즙액에 내성이 있으며, 포도당을 탄소원으로 하여 유기산을 생산하고, 곤충이 섭식하여도 생존률이 우수하여, 곤충 유래 유산균의 새로운 활용 가능성을 보여주었다.
농촌진흥청 국립농업과학원 미생물은행(KACC) KACC81242BP 20221118

Claims (9)

  1. 락토코커스 락티스 B103(Lactococcus lactis B103; 수탁번호 : KACC 81242BP) 균주.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 락토코커스 락티스 B103 균주는,
    pH 내성이 있는 것인, 균주.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 pH 내성은,
    위액의 산성 또는 담즙액의 염기성에 대한 내성인 것인, 균주.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 락토코커스 락티스 B103 균주는,
    포도당을 탄소원으로 하여 유기산을 생산하는 것인, 균주.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 유기산은,
    아세트산, 젖산, 프로피온산 중 선택되는 하나 이상인 것인, 균주.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 락토코커스 락티스 B103 균주는,
    개체의 섭식에 의해 개체의 생존율을 증가시키는 것인, 균주.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 개체는,
    톱다리개미허리노린재인 것인, 균주.
  8. 제1항의 균주를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 첨가제.
  9. 제8항의 사료 첨가제를 유효성분으로 포함하는 곤충 사료 조성물.
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