KR20240070637A - Trpml의 조정제, 그의 조성물 및 사용 방법 - Google Patents
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Abstract
본 개시내용은 화학식 (I), (Ia), (Ib) 또는 (Ic)의 제약 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 조성물에 관한 것이다. 또한, 화학식 (I), (Ia), (Ib) 또는 (Ic)의 화합물을 포함하는, 장애를 치료하기 위한 TRPML 조정제의 사용 방법이 제공된다. 이러한 사용 방법은 섬모병증의 치료를 포함한다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 9월 30일에 출원된 U.S.S.N. 63/250,818; 및 2022년 5월 9일에 출원된 U.S.S.N. 63/339,791의 이익 및 우선권을 주장하며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 개시내용은 TRPML의 조정제이고 다양한 장애의 치료에 유용한 화합물 및 조성물에 관한 것이다.
리소솜은 세포의 재순환 중심으로서 작용하는 주요 소기관이다. 고도로 조절된 방식으로, 이는 세포가 에너지를 위해 또는 새로운 단백질 또는 막을 위한 출발 물질로서 사용하는 다양한 생체물질 (단백질, 지질, 및 막)을 보다 작은 분자 또는 화학적 빌딩 블록으로 분해한다 [예를 들어, 문헌 [de Duve, C., The lysosome turns 50. Nat Cell Biol, 2005. 7(9): p. 847-9. Parkinson-Lawrence, E.J., et al., Lysosomal storage disease: revealing lysosomal function 및 physiology. Physiology (Bethesda), 2010. 25(2): p. 102-15] 참조]. 리소솜 수송의 가수분해 효소에서의 돌연변이로 인한 리소솜 기능장애는 50종 초과의 유전적으로 정의된 리소솜 축적 질환에서 발생한다. 흥미롭게도, 리소솜 프로세싱에서의 결함은 돌연변이된 실제 효소를 넘어 소기관의 기능에 실질적인 영향을 미칠 수 있으며 - 사실상, 시스템의 기능을 막을 수 있다 - 리소솜 분해 및 막 수송/트래피킹을 변경시켜 양성 피드백 루프를 생성한다. 리소솜 축적은 또한 통상의 신경변성 질환, 예컨대 알츠하이머병 및 파킨슨병에서 나타나기 때문에, 양성 피드백 루프의 기저를 이루는 메카니즘을 이해하는 것은 LSD 뿐만 아니라 통상의 산발성 신경변성 질환에 대한 치료 접근법을 제공할 수 있다. 리소솜-국재화 양이온 채널인 TRPML1은 최근에 리소솜 기능 및 리소솜에서의 막 트래픽킹 과정의 주요 조절제로서 확인되었다. TRPML1의 인간 돌연변이는 유전성 리소솜 축적 질환인 뮤코리피드증 IV를 유발한다. 이 질환은 세포에서 지질 및 다른 생체물질의 축적에 의해 유도될 가능성이 있는 신경변성 효과에 의해 전형화된다. 관련 채널 TRPML2 및 TRPML3이 또한 리소솜 기능을 조절한다.
많은 보고는 TRPML 채널 활성화가 다수의 주요 리소솜 기능에 관여한다는 것을 시사한다. 이는 전사 인자 (TF)EB의 핵으로의 전위를 구동시킬 수 있다. TFEB는 자가포식 및 리소솜 생물발생을 조절한다. TFEB의 과다발현은 폼페병, 시스틴축적증, 다발성 술파타제 결핍을 포함한 여러 리소솜 축적 질환, 뿐만 아니라 파킨슨병 및 헌팅톤병을 포함한 통상적인 신경변성 질환에서 세포 클리어런스를 유도하는 것으로 보고되었다 (Settembre, C., et al., Signals from the lysosome: a control center for cellular clearance and energy metabolism. Nat Rev Mol Cell Biol, 2013. 14(5): p . 283-96). 따라서, TRPML 효능제에 의한 TRPML 채널의 활성화는 또한 상기 언급된 모든 질환에서 세포 클리어런스를 유발하여, 이들 파괴적인 질환에 대한 치료 표적을 제공할 수 있다.
최근에, TRPML1에 대한 강력한 합성 효능제가 보고되었다 [Shen, D., et al., Lipid storage disorders block lysosomal trafficking by inhibiting a TRP channel and lysosomal calcium release. Nat Commun, 2012. 3 : p . 731]. 이러한 SF-51-관련 화합물 (뮤코리핀 합성 효능제 1 또는 ML-SA1)은, 그의 리소솜 표적화 서열의 결실을 통해 형질 막으로 강제된 TRPML1 단백질을 안정하게 또는 일시적으로 발현하는 HEK293 세포에서 유의한 [Ca2+] 증가를 유도할 수 있었다. TRPML을 효과적으로 활성화시키기 위해서는 고농도의 ML-SAl (~10 μM)이 필요하다. 이러한 농도는 통상적으로 생체내에서 달성하기 어렵기 때문에, ML-SAl은 상기 TRPML 관련 질환을 치료하는 데 사용될 수 없다. 리앙(Liang) 등은 최근에 신규한 부류의 화합물을 보다 강력한 TRPML 활성화제로서 보고하였다 [WO 2018/005713A1]. 이들 화합물은 TRPML 활성과 관련된 장애, 예컨대 리소솜 축적 질환, 근육 이영양증, 연령-관련 공통 신경변성 질환, ROS 또는 산화성 스트레스 관련 질환, 및 노화를 치료하는 데 유용한 것으로 여겨졌다. TRPML 활성화제는 또한 다른 장애에 유용할 수 있다.
본 개시내용은 화학식 (I) 및 그의 하위화학식의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체 및 입체이성질체를 제공한다.
한 측면에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:
여기서
W1은 N 또는 CR5이고;
W2는 N 또는 CR6이고;
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -O-시클로알킬, -O-헤테로시클로알킬, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, -(CH2)1-2-시클로알킬, -(CH2)1-2-헤테로시클로알킬, 또는 NRaRb이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고;
R3은 하기이고:
각각의 R4, R5 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬 또는 -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, C1-3 알킬, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 C1-3 알킬 및 C1-6 알콕시는 중수소, 히드록실, C1-3 할로알킬, C1-3 알콕시 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 중수소, 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, C(O)-C1-6 알킬, C(O)-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
m1은 0, 1 또는 2이고;
n1은 0, 1, 2, 또는 3이고;
m2는 0, 1 또는 2이고;
n2는 0, 1, 2, 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이고;
m1 + n1은 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
m2 + n2는 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
R1 및 R2는 둘 다 아릴인 것은 아니다.
또 다른 측면에서, 하기 화학식 (Ib)의 화합물이 제공된다:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 하기 화학식 (Ic)의 화합물이 제공된다:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 명세서 또는 청구범위에 개시된 화합물로부터 선택된 화학식 (I) 또는 그의 임의의 하위화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 TRPML의 조정에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 본원에 기재된 화합물 또는 본원에 기재된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, TRPML의 조정에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 또 다른 목적 및 이점은 본원의 개시내용으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 것이며, 이는 단순히 예시적인 것이고 제한적이지 않다. 따라서, 다른 실시양태가 본 개시내용의 취지 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 통상의 기술자에 의해 인식될 것이다.
본원에 일반적으로 기재된 바와 같이, 본 개시내용은 TRPML의 조정과 연관된 장애 (예를 들어, 다낭성 신장 질환)에 유용한 화합물 (예를 들어, 화학식 (I) 및 그의 하위화학식 (Ia), (Ib) 및 (Ic)의 화합물 또는 표 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염)을 제공한다. "TRPML", "TRPML 이온 채널" 및 "TRPML 채널"은 전반적으로 상호교환가능하게 사용된다.
화합물
한 측면에서, 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:
여기서
W1은 N 또는 CR5이고;
W2는 N 또는 CR6이고;
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -O-시클로알킬, -O-헤테로시클로알킬, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, -(CH2)1-2-시클로알킬, -(CH2)1-2-헤테로시클로알킬, 또는 NRaRb이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고;
R3은 하기이고:
각각의 R4, R5 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬 또는 -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, C1-3 알킬, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 C1-3 알킬 및 C1-6 알콕시는 중수소, 히드록실, C1-3 할로알킬, C1-3 알콕시 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 중수소, 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, C(O)-C1-6 알킬, C(O)-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
m1은 0, 1 또는 2이고;
n1은 0, 1, 2, 또는 3이고;
m2는 0, 1 또는 2이고;
n2는 0, 1, 2, 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이고;
m1 + n1은 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
m2 + n2는 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
R1 및 R2는 둘 다 아릴인 것은 아니다.
일부 실시양태에서, W1은 N이다. 일부 실시양태에서, W2는 CR6이다. 일부 실시양태에서, W1은 N이고, W2는 CR6이다. 일부 실시양태에서, W1은 CR5이고, W2는 N이다. 일부 실시양태에서, W1은 N이고, W2는 N이다. 일부 실시양태에서, W1은 CR5이고, W2는 CR6이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
여기서
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -O-시클로알킬, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 또는 NRaRb이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오, 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이고;
R1 및 R2는 둘 다 아릴인 것은 아니다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
여기서
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 C1-6 알킬 또는 C3-7 시클로알킬이고, 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오, 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
여기서
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오, 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
여기서
R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 H이고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
여기서
R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딜이고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 H이고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 독립적으로 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각은 1-5개의 중수소로 임의로 치환되고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다.
일부 실시양태에서, R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 아릴이다. 일부 실시양태에서, R1은 1-3개의 독립적으로 선택된 R7로 임의로 치환된 페닐이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R7은 독립적으로 H, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알킬, 또는 C1-6 할로알콕시로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R1은 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, R1은 헤테로아릴 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 모노시클릭 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, R1은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 헤테로아릴이고, 여기서 R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 질소-함유 헤테로아릴이고, 여기서 R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 단지 N으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 질소-함유 헤테로아릴이고, 여기서 R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 티아졸, 옥사졸, 피롤, 이미다졸, 또는 피라졸이다. 일부 실시양태에서, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘, 티아졸 또는 피라졸이다. 일부 실시양태에서, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘이다. 일부 실시양태에서, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 2-피리딜이다.
일부 실시양태에서, R1은 하기이다:
일부 실시양태에서, R1은 하기이다:
일부 실시양태에서, R1은 하기이다:
1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 
.
일부 실시양태에서, R1은 4-8개의 고리 원자의 헤테로시클로알킬이고, 여기서 1-3개의 고리 원자는 N, O, 및 S로부터 선택되고, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 4-7개의 고리 원자의 모노시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 1-3개의 고리 원자는 N, O, 및 S로부터 선택되고, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 테트라히드로피란, 아제티딘, 피롤리딘, 모르폴린 또는 피페리딘이고, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, R1은 임의적인 1 또는 2개의 탄소 가교된 고리를 갖는 시클로헥실이고, R1은 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, R2는 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -O-시클로알킬, -O-헤테로시클로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬, 또는 NRaRb이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고, 여기서 R2 기의 Ra 및 Rb는 둘 다 H인 것은 아니다. 일부 실시양태에서, R2는 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 아릴이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-3개의 독립적으로 선택된 R8로 임의로 치환된 페닐이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R8은 독립적으로 H, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알킬, 또는 C1-6 할로알콕시로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 하기이다:
일부 실시양태에서, R2는 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 헤테로아릴 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 모노시클릭 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, R2는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 헤테로아릴이고, 여기서 R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 티아졸, 옥사졸, 피롤, 이미다졸, 또는 피라졸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 피리딘, 피리미딘, 피라진 또는 피라졸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 피리딘이다.
일부 실시양태에서, R2는 하기이다:
1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 
.
일부 실시양태에서, R2는 하기이다:
일부 실시양태에서, R2는 하기이다:
일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8로 임의로 치환된 C3-8 시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실이고, 각각은 1-3개의 독립적으로 선택된 R8로 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 치환되지 않는다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필이다.
일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 헤테로시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 모노시클릭 헤테로시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 갖는 4-6개의 고리 원자의 모노시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 아제티딘, 옥세탄, 피롤리딘, 테트라히드로푸란, 피페리딘, 피페라진, 테트라히드로피란 또는 모르폴린이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-4개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 아제티딘, 피롤리딘, 피페라진 또는 모르폴린이다. 일부 실시양태에서, R2는 고리 질소 원자를 함유하고, 고리 질소 원자에서 화학식 (I)에 결합된다.
일부 실시양태에서, R2는 
이다.
일부 실시양태에서, R2는 NRaRb이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환되고, 여기서 R2 기의 Ra 및 Rb는 둘 다 H인 것은 아니다. 일부 실시양태에서, Ra는 C1-6 알킬이고, Rb는 C1-6 알킬, C3-7 시클로알킬, 또는 3-7원 헤테로시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 선택된 C1-6 알킬이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R8은 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 또는 C1-6 알콕시로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 할로겐에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 실시양태에서, R2는 Me, Et, CHF2 또는 CF3이다. 일부 실시양태에서, R2는 CHF2이다. 일부 실시양태에서, R2는 CF3이다.
일부 실시양태에서, R2는 치환되지 않는다.
일부 실시양태에서, R2는 O-시클로알킬, -O-헤테로시클로알킬, 또는 C1-6 알콕시이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 -O-C3-7 시클로알킬 또는 C1-6 알콕시이고, 각각의 R2는 알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 기에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 -O-C3-7 시클로알킬 또는 C1-6 알콕시이고, 각각의 R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 할로겐에 의해 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 -O-시클로부틸, -O-프로필, -O-메틸, -OCHF2, 또는 -O-CF3이다.
일부 실시양태에서, m은 1이고, n은 1이다.
일부 실시양태에서, p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R10은 독립적으로 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각은 1-5개의 중수소로 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, 각각의 R10은 메틸이다.
일부 실시양태에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
일부 실시양태에서, R3은 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 시클로프로판으로 치환되거나; 또는 R3은 1 또는 2개의 탄소 가교 또는 단일 결합 가교를 포함하고; R3은 1-4개의 R10에 의해 임의로 추가로 치환된다.
일부 실시양태에서, R3은 하기이다:
일부 실시양태에서, R3은 하기이다:
일부 실시양태에서, R3은 하기이다:
일부 실시양태에서, R3은 임의의 추가의 R10에 의해 치환되지 않는다.
일부 실시양태에서, R4는 H이다. 일부 실시양태에서, R5는 H이다. 일부 실시양태에서, R6은 H이다. 일부 실시양태에서, R4 및 R6은 H이다. 일부 실시양태에서, R4, R5, 및 R6은 H이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 및 C3-7 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 1-3개의 할로겐으로 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, 각각의 R7은 독립적으로 각 경우에 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시 및 CF3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R9는 1-5개의 할로겐 또는 1-9개의 중수소로 임의로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 실시양태에서, R9는 에틸, 이소프로필, 또는 t-부틸이고; 각각은 1-5개의 할로겐 또는 1-9개의 중수소로 임의로 치환된다. 일부 실시양태에서, R9는 에틸, 이소프로필, 또는 t-부틸이다. 일부 실시양태에서, R9는 t-부틸이다. 일부 실시양태에서, R9는 -C(CD3)3, -CH(CD3)2, 또는 -CD2CD3이다.
일부 실시양태에서, R9는 Me, Et, t-부틸, -C(CD3)3, -CH(CD3)2, -C(CD3)3, 이소프로필, F3C-CH2-, F3C-CH(CH3)-, F3C-C(CH3)2-, 또는 FCH2-C(CH3)2-, 
이다.
일부 실시양태에서, R9는 Me, Et, t-부틸, -C(CD3)3, -CH(CD3)2, -C(CD3)3, 이소프로필, F3C-CH2-, F3C-CH(CH3)-, F3C-C(CH3)2-, 또는 FCH2-C(CH3)2-, 또는 
이다.
또 다른 측면에서, 하기 화학식 (Ib)의 화합물이 제공된다:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 하기 화학식 (Ic)의 화합물이 제공된다:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 명세서 또는 청구범위에 개시된 화합물로부터 선택된 화학식 (I) 또는 그의 임의의 하위화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML에 대한 패치 클램프 검정에서 30 μM ML-SA1을 사용하여 수득된 최대 전류의 적어도 50%를 달성하고, 1 μM 미만의 EC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML1에 대한 패치 클램프 검정에서 30 μM ML-SA1을 사용하여 수득된 최대 전류의 적어도 50%를 달성하고, 1 μM 미만의 EC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML1에 대한 패치 클램프 검정에서 30 μM ML-SA1을 사용하여 수득된 최대 전류를 달성하며, 이는 임의의 다른 TRPML에 대해 달성된 최대 전류의 적어도 10배이다.
또 다른 측면에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 부형제, 및 명세서 또는 청구범위에 개시된 화합물로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 하기 표 1에서 확인된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
표 1.
예시적인 화합물
중수소화 화합물
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물)은 중수소 농축된다.
중수소 (D 또는 2H)는 수소의 안정한 비-방사성 동위원소이고, 2.0144의 원자량을 갖는다. 수소는 자연적으로 동위원소 1H (수소 또는 경수소), D (2H 또는 중수소) 및 T (3H 또는 삼중수소)의 혼합물로서 발생한다. 중수소의 천연 존재비는 0.015%이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 H 원자를 갖는 모든 화학적 화합물에서, H 원자가 실제로 H 및 D의 혼합물을 나타내고, 약 0.015%가 D임을 인식한다. 따라서, 0.015%의 그의 천연 존재비보다 더 크게 농축된 중수소의 수준을 갖는 화합물은 비천연으로 간주되어야 하고, 그에 따라 그의 비-농축된 대응물에 비해 신규하다.
화합물의 대사 특성에 대한 중수소 변형의 효과는, 심지어 중수소 원자가 공지된 대사 부위에 혼입되는 경우에도 예측가능하지 않다. 단지 중수소화 화합물을 실제로 제조하고 시험함으로써, 대사의 속도가 그의 비-중수소화 대응물의 것과 상이할 것인지 및 어떻게 상이할 것인지를 결정할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Fukuto et al. (J. Med. Chem. 1991, 34, 2871-76)]을 참조한다. 많은 화합물은 대사가 가능한 다중 부위를 갖는다. 중수소 치환이 요구되는 부위(들) 및 대사에 대한 효과를 보기 위해 필요한 중수소화의 정도는, 존재하는 경우, 각각의 화합물에 대해 상이할 것이다.
달리 언급되지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지정된 경우에, 위치는 그의 천연 존재비 동위원소 조성으로 수소를 갖는 것으로 이해된다. 또한, 달리 언급되지 않는 한, 위치가 "D" 또는 "중수소"로서 구체적으로 지정된 경우에, 위치는 0.015%인 중수소의 천연 존재비보다 적어도 3000배 더 큰 존재비로 중수소를 갖는 것으로 이해된다 (즉, 용어 "D" 또는 "중수소"는 중수소의 적어도 45% 혼입을 나타냄).
본원에 사용된 용어 "동위원소 농축 계수"는 본 발명의 화합물의 명시된 위치에서의 D의 동위원소 존재비와 그 동위원소의 자연 발생 존재비 사이의 비를 의미한다.
본원의 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물)에 존재하는 중수소의 양을 증가시키는 것은 "중수소-농축"으로 지칭되고, 이러한 화합물은 "중수소-농축" 화합물로 지칭된다. 구체적으로 언급되지 않는 한, 농축의 백분율은 화합물에 존재하는 중수소의 백분율을 지칭한다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 화합물 상의 중수소화의 잠재적 부위에 지정된 부위에 존재하는 각각의 중수소에 대해 적어도 3500 (52.5.% 중수소 혼입), 적어도 4000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다. 중수소화 부위로서 지정된 부위에 존재하는 각각의 중수소의 동위원소 농축 계수는 다른 중수소화 부위와 독립적인 것으로 이해된다. 예를 들어, 화합물 상에 2개의 중수소화 부위가 존재하는 경우에, 하나의 부위는 52.5%로 중수소화될 수 있고, 다른 부위는 75%로 중수소화될 수 있다. 생성된 화합물은 동위원소 농축 계수가 적어도 3500 (52.5%)인 화합물인 것으로 간주될 것이다.
중수소의 천연 존재비가 약 0.015%이기 때문에, 본원의 자연 발생 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물)의 적은 백분율이 1종의 중수소가 존재하는 1종의 자연 발생 화합물을 가질 것으로 예상될 것이다.
일부 실시양태에서, 본원의 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물)은 본원의 자연 발생 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물)에 존재하는 중수소-농축의 양을 초과하는 중수소-농축의 양을 포함한다.
존재하는 중수소의 양에 대해 주어진 모든 백분율은 몰 백분율이다.
실험실에서 실험실 규모 양의 화합물 (예를 들어, 밀리그램 이상)의 어느 한 부위에서 100% 중수소화를 달성하는 것은 어려울 수 있다. 100% 중수소화가 언급되거나 또는 중수소 원자가 구조 내에 구체적으로 제시된 경우에, 적은 백분율의 수소가 여전히 존재할 수 있는 것으로 가정된다. 중수소-농축은 양성자를 중수소로 교환하거나 또는 분자를 농축된 출발 물질을 사용하여 합성함으로써 달성될 수 있다.
치료 방법
특정 실시양태에서, TRPML 이온 채널의 조정을 필요로 하는 환자에게 본원에 기재된 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체, 입체이성질체, 동위원소 표지된 유도체, 또는 본원에 기재된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, TRPML 이온 채널을 조정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, TRPML 이온 채널의 조정에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 본원에 기재된 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체, 입체이성질체, 동위원소 표지된 유도체, 또는 본원에 기재된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, TRPML 이온 채널의 활성화에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 본원에 기재된 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체, 입체이성질체, 동위원소 표지된 유도체, 또는 본원에 기재된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, TRPML1의 활성화에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 본원에 기재된 화합물 (예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체, 입체이성질체, 동위원소 표지된 유도체, 또는 본원에 기재된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물 이외에도, TRPML 채널의 조정제는 WO2018005713 및 WO2018208630을 비롯한 여러 공개물에 보고되어 있으며, 이들은 그 전문이 본원에 포함된다.
일부 실시양태에서, TRPML 이온 채널은 TRPML1이다. 일부 실시양태에서, TRPML 이온 채널은 TRPML2이다. 일부 실시양태에서, TRPML 이온 채널은 TRPML3이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML1의 조정제이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML2의 조정제이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 TRPML3의 조정제이다.
일부 실시양태에서, TRPML 이온 채널의 조정은 이온 채널의 활성화를 포함한다.
일부 실시양태에서, 질환 또는 장애는 섬모병증 (예를 들어, 다낭성 신장 질환)이다. 예시적인 섬모병증은 다낭성 신장 질환, 다낭성 신장 질환에서의 췌장낭, 바르데-비들(Bardet-Biedl) 증후군, 신결석증, 주버트(Joubert) 증후군, 멕케-그루버(Mecke-Gruber) 증후군, 구강-안면-수족지 증후군, 노인성 로켄(Loken) 증후군, 버트-호그-두베(Birt-Hogg-Dube) 증후군, 레베르(Leber) 선천성 흑암시, 알스트롬(Alstrom) 증후군, 쥐느(Jeune) 질식성 흉부 이형성증, 엘리스 반 크레블드(Ellis van Creveld) 증후군, 센센브레너(Sensenbrenner) 증후군 및 원발성 섬모 이상운동증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
한 측면에서, 리소솜의 조정에 의해 치료될 수 있는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본 개시내용의 제약 조성물 또는 본 개시내용의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 리소솜의 조정에 의해 치료될 수 있는 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
한 측면에서, 섬모병증, 신경변성 질환, 리소솜 축적 장애, 리소솜 수송 장애, 글리코겐 축적 장애, 콜레스테릴 에스테르 축적 질환, 근육 질환 (예를 들어, 근육 이영양증), 노화와 관련된 질환 (예를 들어, 피부의 광 노화), 황반 변성 (예를 들어, 스타가르트(Stargardt) 또는 연령-관련), 및 암 (예를 들어, 혈액, 뇌, 골, 폐, 간, 신장, 방광, 위, 유방, 전립선, 난소, 고환, 결장, 췌장 또는 피부의 암)으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본 개시내용의 제약 조성물 또는 본 개시내용의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 장애는 섬모병증이다.
일부 실시양태에서, 섬모병증은 다낭성 신장 질환, 다낭성 신장 질환에서의 췌장낭, 바르데-비들 증후군, 신결석증, 주버트 증후군, 멕케-그루버 증후군, 구강-안면-수족지 증후군, 노인성 로켄 증후군, 버트-호그-두베 증후군, 레베르 선천성 흑암시, 알스트롬 증후군, 쥐느 질식성 흉부 이형성증, 엘리스 반 크레블드(Ellis van Creveld) 증후군, 센센브레너(Sensenbrenner) 증후군 및 원발성 섬모 이상운동증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 장애는 다낭성 신장 질환이다. 일부 실시양태에서, 장애는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환, 상염색체 열성 다낭성 신장 질환, 또는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환과 연관된 췌장낭이다. 일부 실시양태에서, 장애는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환이다. 일부 실시양태에서, 장애는 신경변성 장애이다.
일부 실시양태에서, 신경변성 장애는 파킨슨병(Parkinson's disease), GBA-파킨슨병, LRRK2 파킨슨병, 헌팅톤병(Huntington's disease), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 진행성 핵상 마비, 전두측두엽 치매, FTDP-17, 피질기저 변성, 루이(Lewy) 소체 치매, 픽병(Pick's disease) 및 다계통 위축으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 장애는 리소솜 축적 장애이다.
일부 실시양태에서, 리소솜 축적 장애는 니만-픽병(Niemann-Pick disease), 고셔병(Gaucher's disease), 뉴런병증성 고셔병, 스핑고지질증, 파버병(Farber disease), 크라베병(Krabbe disease), 갈락토시알산증, 강글리오시드증, 고셔병, 리소솜 산 리파제 결핍, 술파티드증, 뮤코폴리사카라이드증, 뮤코리피드증, 지질증 및 올리고사카라이드증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 리소솜 축적 장애는 스핑고지질증, 파버병, 크라베병, 갈락토시알산증, 파브리병(Fabry disease), 쉰들러병(Schindler disease), 베타-갈락토시다제 장애, GM1 강글리오시드증, GM2 강글리오시드증 AB 변이체, GM2 강글리오시드증 활성화제 결핍, 샌드호프병(Sandhoff disease), 테가 -삭스병(Tay-Sachs disease), 고셔병, 리소솜 산 리파제 결핍, 니만-픽병(Niemann-Pick disease), 이염성 백질이영양증, 사포신 B 결핍, 다발성 술파타제 결핍, 후를러(Hurler) 증후군, 샤이에(Scheie) 증후군, 후를러-샤이에 증후군, 헌터(Hunter) 증후군, 산필리포(Sanfilippo) 증후군, 모르키오(Morquio) 증후군, 마로토-라미(Maroteaux-Lamy) 증후군, 슬라이(Sly) 증후군, 히알루로니다제 결핍, 시알산증, I-세포 질환, 슈도-후를러 다발이영양증, 포스포트랜스퍼라제 결핍, 뮤코리피딘 1 결핍, 산타부오리-할티아병(Santavuori-Haltia disease), 얀스키-빌초우스키병(Jansky-Bielchowsky disease), 배튼-스필마이어-보그트(Batten-Spielmeyer-Vogt) 질환, 쿠프스병(Kufs disease), 핀란드 변이체 신경 세로이드 리프푸신증, 후기 영아 변이체 신경 세로이드 리프푸신증, 제7형 신경 세로이드 리프푸신증, 노던 간질 신경 세로이드 리프푸신증, 터키 후기 영아 신경 세로이드 리프푸신증, 독일/서비안 후기 영아 신경 세로이드 리프푸신증, 선천성 카텝신 D 결핍, 월만병(Wolman disease), 알파-만노시드축적증, 베타-만노시드축적증, 아스파르틸글루코사미누리아 및 푸코시드축적증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 리소솜 축적 장애는 니만-픽병, 고셔병 및 뉴런병증성 고셔병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 장애는 시스틴축적증, 농축이골증, 살라병(Salla disease), 시알산 축적 질환 및 영아 유리 시알산 축적 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 리소솜 수송 질환이다.
일부 실시양태에서, 장애는 폼페병 및 다논병으로 이루어진 군으로부터 선택된 글리코겐 축적 질환이다.
한 측면에서, 섬모병증 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 TRPML을 조정할 수 있는 화합물의 치료 유효량, 또는 상기 화합물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 섬모병증 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 화합물은 명세서에 개시된 화합물로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 섬모병증은 다낭성 신장 질환, 다낭성 신장 질환에서의 췌장낭, 바르데-비들 증후군, 신결석증, 주버트 증후군, 멕켈-그루버 증후군, 구강-안면-수족지 증후군, 노인성 로켄 증후군, 버트-호그-두베 증후군, 레베르 선천성 흑암시, 알스트롬 증후군, 쥐느 질식성 흉부 이형성증, 엘리스 반 크레벨트 증후군, 센센브레너 증후군 및 원발성 섬모 이상운동증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 장애는 다낭성 신장 질환이다.
일부 실시양태에서, 장애는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환, 상염색체 열성 다낭성 신장 질환, 또는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환과 연관된 췌장낭이다.
일부 실시양태에서, 장애는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환이다.
일부 실시양태에서, 방법은 제2 치료제의 사용을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 섬모병증을 치료하는 것이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 mTOR 억제제, V2 수용체 길항제, 티로신 키나제 억제제, 소마토스타틴 유사체, 글루코실세라미드 신타제 억제제, 마이크로RNA-17 억제제, p53에 대한 siRNA, KEAP1-Nrf2 활성화제, 크산틴 옥시다제 억제제, PPARγ 효능제, 메트포르민 및 베타 히드록시부티레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 톨밥탄, 릭시밥탄, 모자밥탄, 사타밥탄, 시롤리무스, 타크롤리무스, 에베롤리무스, 보수티닙, 테사바티닙, 이마티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 다사티닙, 옥트레오티드, 파시레오티드, 벤글루스타트, 엘리글루스타트, 미글루스타트, 마이크로RNA-17 억제제, 바르독솔론 메틸, 알로퓨리놀, 옥시퓨리놀, 피오글리타존, 로시글리타존, 로베글리타존, 메트포르민 및 베타 히드록시부티레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 톨밥탄이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 면역조정제, 칼시뉴린 억제제, 레닌 안지오텐신 알도스테론 시스템 억제제, 항증식제, 알킬화제, 코르티코스테로이드, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 부신피질자극 호르몬 자극제, 안지오텐신 수용체 차단제, 소듐-글루코스 수송 단백질 2 억제제, 이중 소듐-글루코스 수송 단백질 1/2 억제제, 핵 인자-1 (적혈구-유래 2)-유사 2 효능제, 케모카인 수용체 2 억제제, 케모카인 수용체 5 억제제, 엔도텔린 1 수용체 길항제, 베타 차단제, 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제, 루프 또는 티아지드 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 스타틴, 단기-중간 또는 장기-작용 인슐린, 디펩티딜 펩티다제 4 억제제, 글루카곤-유사 펩티드 1 수용체 효능제, 술포닐우레아, 아폽토시스 신호-조절 키나제-1, 키마제 억제제, 선택적 gly 양이온 억제제, 레닌 억제제, 인터류킨-33 억제제, 파르네소이드 X 수용체 효능제, 가용성 구아닐레이트 시클라제 자극제, 트롬복산 수용체 길항제, 크산틴 옥시다제 억제제, 에리트로포이에틴 수용체 효능제, 칸나비노이드 수용체 유형 1 역 효능제, NADPH 옥시다제 억제제, 항-혈관 내피 성장 인자 B, 항섬유화제, 네프릴리신 억제제, 이중 CD80/CD86 억제제, CD40 길항제, 세포 콜레스테롤 및 지질 차단제, PDGFR 길항제, 슬릿 안내 리간드 2, APOL1 억제제, Nrl2 활성화제/NF-kB 억제제, 소마토스타틴 수용체 효능제, PPAR 감마 효능제, AMP 활성화 단백질 키나제 자극제, 티로신 키나제 억제제, 글루코실세라미드 신타제 억제제, 아르기닌 바소프레신 수용체 2 길항제, 크산틴 옥시다제 억제제, 바소프레신 수용체 2 길항제, 항-아밀로이드 베타 항체, 항-타우 항체, 항-시뉴클레인 항체, 도파민 전구체 (예를 들어 L-DOPA), 도파민 효능제 (예를 들어 브로모크립틴, 카베르골린, 페르골리드, 프라미펙솔 및 아포모르핀), MAO-B 억제제 (예를 들어 라사길린 및 셀레길린), 항콜린제 (예를 들어 오르페나드린, 프로시클리딘 및 트리헥시페니딜), b-글루코세레브로시다제 활성의 증진제 (예를 들어 암브록솔 및 아페고스타트), 아만타딘, 및 알츠하이머를 치료할 수 있는 작용제 (예를 들어, 아세틸콜린에스테라제 억제제, 예컨대 타크린, 리바스티그민, 갈란타민, 도네페질 및 NMDA 수용체 길항제, 예컨대 메만틴)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 COX 억제제, 예컨대 아릴카르복실산 (살리실산, 아세틸살리실산, 디플루니살, 콜린 마그네슘 트리살리실레이트, 살리실레이트, 베노릴레이트, 플루페남산, 메페남산, 메클로페남산 및 트리플룸산), 아릴알칸산 (디클로페낙, 펜클로페낙, 알클로페낙, 펜티아작, 이부프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 나프록센, 페노프로펜, 펜부펜, 수프로펜, 인도프로펜, 티아프로펜산, 베녹사프로펜, 피르프로펜, 톨메틴, 조메피락, 클로피낙, 인도메타신 및 술린닥) 및 엔올산 (페닐부타존, 옥시펜부타존, 아자프로파존, 페프라존, 피록시캄 및 이속시캄); 폐고혈압 치료제, 예컨대 프로스타노이드 (에포프로스테놀, 일로프로스트 및 트레프로스티닐), 엔도텔린 수용체 길항제 (보센탄, 암브리센탄 및 마시텐탄), 포스포디에스테라제-5 억제제 (실데나필 및 타달라필) 및 sGC 자극제 (리오시구아트); rho-키나제 억제제 예컨대 Y-27632, 파수딜 및 H-1152P; 에포프로스테놀 유도체, 예컨대 프로스타시클린, 트레프로스티닐, 베라프로스트 및 일로프로스트; 세로토닌 차단제, 예컨대 사르포그렐레이트; 엔도텔린 수용체 길항제, 예컨대 베센탄, 시탁센탄, 암브리센탄 및 TBC3711; PDE 억제제, 예컨대 실데나필, 타달라필, 우데나필 및 바르데나필; 가용성 구나일레이트 시클라제 억제제, 예컨대 리오시구아트 및 베리시구아트; 칼슘 채널 차단제, 예컨대 암로디핀, 베프리딜, 클렌티아젬, 딜티아젬, 펜딜린, 갈로파밀, 미베프라딜, 프레닐아민, 세모티아딜, 테로딜린, 베라파밀, 아라니디핀, 바미디핀, 베니디핀, 실니디핀, 에포니디핀, 엘고디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 라시디핀, 레르카니디핀, 만니디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 닐바디핀, 니모디핀, 니솔디핀, 니트렌디핀, 신나리진, 플루나리진, 리도플라진, 로메리진, 벤시클란, 에타페논 및 퍼헥실린; 티로신 키나제 억제제, 예컨대 이마티닙; 흡입용 산화질소 및 산화질소-공여제, 예컨대 흡입용 니트라이트; IκB 억제제, 예컨대 IMD 1041; 프로스타시클린 수용체 효능제, 예컨대 셀렉시팍; 조혈 자극제, 예컨대 TXA 127 (안지오텐신 (1-7)), 다르베포에틴 알파, 에리트로포이에틴, 및 에포에틴 알파; 항응고제 및 혈소판-억제제; 및 이뇨제; 식이 및 영양 보충제 예컨대 아세틸- L-카르니틴, 옥타코산올, 달맞이꽃 오일, 비타민 B6, 티로신, 페닐알라닌, 비타민 C, L-도파; 면역억제제 (이식 및 자가면역-관련 RKD에 대한 것); 항-고혈압 약물 (고혈압-관련 RKD에 대한 것, 예를 들어, 안지오텐신-전환 효소 억제제 및 안지오텐신 수용체 차단제); 인슐린 (당뇨병성 RKD에 대한 것); 지질/콜레스테롤-강하 작용제 (예를 들어, HMG-CoA 리덕타제 억제제 예컨대 아토르바스타틴 또는 심바스타틴); 및 CKD 연관 고인산혈증 또는 부갑상선기능항진증 치료제 (예를 들어, 세벨라머 아세테이트, 시나칼세트)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용은 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본 개시내용은 대상체에게 치료 유효량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 TRPML을 조정하는 방법을 추가로 제공한다.
본 개시내용은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 방법은 하기 단계를 포함한다:
(a) TRPML과 연관된 질환 또는 장애를 검출하는 단계; 및
(b) 대상체에게 치료 유효량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 단계.
특정 실시양태에서, 화학식 (I) 또는 (II)의 예시적인 화합물은 표 1 및 실시예에 기재된 화합물, 뿐만 아니라 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 호변이성질체 및 입체이성질체를 포함한다.
따라서, 본 개시내용은 섬모병증 및 관련 질환을 치료하는 데 유용한 화합물을 제공한다.
TRPML 채널을 조정하는 화합물은 임의의 상기 손상, 질환, 장애 또는 상태의 예방 및 치료에 유용할 수 있다. 이들 화합물의 활성의 시험관내 검정 이외에도, 그의 효능은 1종 이상의 동물 모델에서 용이하게 시험될 수 있다.
본 개시내용은 그의 적용에 있어서 본원에 기재된 방법 및 조성물의 세부사항으로 제한되지 않는다. 또한, 본원에 사용된 어구 및 용어는 설명의 목적을 위한 것이며, 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
제약 조성물 및 투여 경로
본 개시내용은 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또한, 대상체에게 치료 유효량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 TRPML 채널을 조정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물, 예컨대 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 제약 조성물은 본원에 기재된 장애, 예를 들어 섬모병증을 치료 또는 개선하는 데 사용될 수 있다.
제약 조성물 중 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물의 양 및 농도, 뿐만 아니라 대상체에게 투여되는 제약 조성물의 양은 임상적으로 관련된 인자, 예컨대 대상체의 의학적으로 관련된 특징 (예를 들어, 연령, 체중, 성별, 다른 의학적 상태 등), 제약 조성물 중 화합물의 용해도, 화합물의 효력 및 활성, 및 제약 조성물의 투여 방식에 기초하여 선택될 수 있다. 투여 경로 및 투여 요법에 대한 추가의 정보를 위해, 독자는 문헌 [Chapter 25.3 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참조한다.
본원에 개시된 화합물을 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 화합물을 제약 제제로서 투여하는 것이 바람직하며, 여기서 화합물은 1종 이상의 제약상 허용되는 희석제, 부형제 또는 담체와 조합된다. 본 개시내용에 따른 화합물은 인간 또는 수의학적 의약에 사용하기 위한 임의의 편리한 방식으로 투여하기 위해 제제화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약 제제에 포함된 화합물은 그 자체로 활성일 수 있거나, 또는 예를 들어 생리학적 환경에서 활성 화합물로 전환될 수 있는 전구약물일 수 있다. 선택된 투여 경로와 무관하게, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 개시내용의 화합물 및/또는 본 개시내용의 제약 조성물은 하기 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 투여 형태로 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 통상적인 방법에 의해 제제화된다.
따라서, 본 개시내용의 또 다른 측면은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제제화된, 치료 유효량의 상기 기재된 화합물 중 1종 이상을 포함하는 제약상 허용되는 조성물을 제공한다. 하기 상세히 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 제약 조성물은 고체 또는 액체 형태, 예컨대 (1) 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 로젠지, 당의정, 캡슐, 환제, 정제 (예를 들어, 협측, 설하 및 전신 흡수를 표적으로 하는 것), 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 비경구 투여, 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의해, 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속-방출 제제로서; (3) 국소 적용, 예를 들어 크림, 연고, 또는 피부에 적용되는 제어-방출 패치 또는 스프레이로서; (4) 질내로 또는 직장내로, 예를 들어 페사리, 크림 또는 발포체로서; (5) 설하로; (6) 안구로; (7) 경피로; (8) 경점막으로; (9) 비강으로; 또는 (10) 척수강내로 적용되는 것으로 투여하기 위해 특별히 제제화될 수 있다. 추가적으로, 화합물은 환자에게 이식되거나 또는 약물 전달 시스템을 사용하여 주사될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Urquhart, et al., (1994) Ann Rev Pharmacol Toxicol 24:199-236; Lewis, ed. "Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals" (Plenum Press, New York, 1981)]; 미국 특허 번호 3,773,919; 및 미국 특허 번호 35 3,270,960을 참조한다.
본원에 사용된 어구 "치료 유효량"은, 예를 들어 동물 내 세포의 적어도 하위-집단에서 EHMT1 또는 EHMT2를 조정하여 치료되는 세포에서 그 기능의 생물학적 결과를 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비로 차단함으로써 일부 목적하는 치료 효과를 생성하는 데 효과적인, 본 개시내용의 화합물, 물질 또는 화합물을 포함하는 조성물의 양을 의미한다.
본원에 사용된 어구 "전신 투여", "전신으로 투여되는", "말초 투여" 및 "말초로 투여되는"은 화합물, 약물 또는 다른 물질을 중추 신경계로 직접 투여하는 것 이외의 다른 방식으로 투여하여, 이것이 환자의 시스템으로 들어가고, 따라서 대사 및 다른 유사 과정에 적용되도록 하는 것, 예를 들어 피하 투여를 의미한다.
어구 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 부합하는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는 담체"는 대상 길항제를 신체의 한 기관 또는 부분으로부터 신체의 또 다른 기관 또는 부분으로 운반 또는 수송하는 데 수반되는 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용되는" 것이어야 한다. 제약상 허용되는 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12)에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원-무함유 물; (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19)에틸 알콜; (20) 포스페이트 완충 용액; (21) 시클로덱스트린 예컨대 캅티솔(Captisol)®; 및 (22) 제약 제제에 사용되는 다른 비-독성 상용성 물질.
용어 "제약상 허용되는 염"은 본원에 기재된 화합물 상에서 발견되는 특정한 치환기에 따라 비교적 비독성인 산 또는 염기를 사용하여 제조된 활성 화합물의 염을 포함하는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 화합물이 비교적 산성인 관능기를 함유하는 경우에, 염기 부가염은 이러한 화합물의 중성 형태를 충분한 양의 목적하는 염기와 단독으로 또는 적합한 불활성 용매 중에서 접촉시킴으로써 수득될 수 있다. 제약상 허용되는 염기 부가염의 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노 또는 마그네슘 염, 또는 유사한 염을 포함한다. 본 개시내용의 화합물이 비교적 염기성인 관능기를 함유하는 경우에, 산 부가염은 이러한 화합물의 중성 형태를 충분한 양의 목적하는 산과 단독으로 또는 적합한 불활성 용매 중에서 접촉시킴으로써 수득될 수 있다. 제약상 허용되는 산 부가염의 예는 무기 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 질산, 탄산, 일수소탄산, 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 아이오딘화수소산 또는 아인산 등으로부터 유도된 것, 뿐만 아니라 유기 산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베르산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠술폰산, p-톨릴술폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄술폰산 등으로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 아미노산의 염, 예컨대 아르기네이트 등, 및 유기 산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산 등의 염이 포함된다 (예를 들어, 문헌 [Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)] 참조). 본 개시내용의 특정의 구체적 화합물은 화합물이 염기 또는 산 부가염으로 전환되도록 하는 염기성 및 산성 관능기 둘 다를 함유한다. 이들 염은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 제약상 허용되는 담체가 본 개시내용에 적합하다.
습윤제, 유화제, 및 윤활제, 예컨대 소듐 라우릴 술페이트 및 스테아르산마그네슘, 뿐만 아니라 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제, 보존제 및 항산화제가 또한 조성물에 존재할 수 있다.
제약상 허용되는 항산화제의 예는 (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
본 개시내용의 제제는 경구, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 것을 포함한다. 제제는 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 제약 기술분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 숙주, 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 이러한 양은 100% 중에서, 약 1% 내지 약 99%, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10% 내지 약 30% 범위의 활성 성분일 것이다.
이들 제제 또는 조성물을 제조하는 방법은 본 개시내용의 화합물을 담체 및 임의로 1종 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 본 개시내용의 화합물을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합시킨 다음, 필요한 경우에 생성물을 성형함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제제는 캡슐, 카쉐, 환제, 정제, 로젠지 (향미 베이스, 통상적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트를 사용함), 분말, 과립의 형태로, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼으로서, 또는 엘릭시르 또는 시럽으로서, 또는 파스틸 (불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용함)로서 및/또는 구강 세정제 등으로서 존재할 수 있으며, 각각은 활성 성분으로서 미리 결정된 양의 본 개시내용의 화합물을 함유한다. 본 개시내용의 화합물은 또한 볼루스, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 본 개시내용의 고체 투여 형태 (캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립 등)에서, 활성 성분은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘, 및/또는 하기 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대 예를 들어, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 함습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨; (5) 용해 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대 4급 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예컨대 예를 들어, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 및 그의 혼합물; 및 (10) 착색제. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 제약 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다.
정제는 임의로 하나 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예를 들어, 소듐 스타치 글리콜레이트 또는 가교 소듐 카르복시메틸 셀룰로스), 표면-활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말화 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제, 및 본 개시내용의 제약 조성물의 다른 고체 투여 형태, 예컨대 당의정, 캡슐, 환제 및 과립은 임의로 숫자가 표기될 수 있거나, 또는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 제약-제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 갖도록 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 목적하는 방출 프로파일을 제공하는 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 마이크로구체를 사용하여 그 안의 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 이들은, 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 멸균제를 혼입함으로써, 사용 직전에 멸균수 또는 일부 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 임의로 불투명화제를 함유할 수 있고, 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로 위장관의 특정 부분에서, 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한 적절한 경우에 상기 기재된 부형제 중 1종 이상을 갖는 마이크로-캡슐화된 형태일 수 있다.
본 개시내용의 화합물의 경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분 이외에도, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 착색제, 퍼퓸제 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은 활성 화합물 이외에 현탁화제, 예를 들어 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천 및 트라가칸트, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
직장, 질 또는 요도 투여를 위한 본 개시내용의 제약 조성물의 제제는 좌제로서 제공될 수 있으며, 이는 본 개시내용의 1종 이상의 화합물을, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 1종 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있고, 실온에서는 고체이지만 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 활성 화합물을 방출할 것이다.
대안적으로 또는 추가적으로, 조성물은 카테터, 스텐트, 와이어 또는 다른 관강내 장치를 통한 전달을 위해 제제화될 수 있다. 이러한 장치를 통한 전달은 심장, 폐, 방광, 요도, 요관, 직장 또는 장으로의 전달에 특히 유용할 수 있다. 또한, 조성물은 투석 포트를 통한 전달을 위해 제제화될 수 있다.
안과용 제제, 안연고, 분말, 용액 등이 또한 본 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 고려된다.
예시적인 투여 방식은 주사, 주입, 점적주입, 흡입 또는 섭취를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "주사"는 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 뇌실내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 뇌척수내, 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다.
본원에 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 경장 및 국소 투여 이외의, 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 비경구 투여에 적합한 본 개시내용의 제약 조성물은 1종 이상의 본 개시내용의 화합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 포함하며, 이는 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 제제를 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 포함에 의해 이루어질 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터의 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이어서 약물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 좌우되며, 이는 다시 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁화시킴으로써 달성된다.
주사가능한 데포 형태는 생분해성 중합체, 예컨대 폴리락티드-폴리글리콜리드 중에 대상 화합물의 마이크로캡슐화 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비, 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)를 포함한다. 주사가능한 데포 제제는 또한 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼 중에 약물을 포획함으로써 제조된다.
본 개시내용의 화합물이 인간 및 동물에게 제약으로서 투여되는 경우에, 이들은 그 자체로 또는 예를 들어 0.1 내지 99.5% (보다 바람직하게는, 0.5 내지 90%)의 활성 성분을 제약상 허용되는 담체와 조합하여 함유하는 제약 조성물로서 제공될 수 있다.
동물 사료에의 본 개시내용의 활성 화합물의 첨가는 바람직하게는 유효량의 활성 화합물을 함유하는 적절한 사료 프리믹스을 제조하고, 프리믹스을 완전한 배급에 혼입시킴으로써 달성된다. 대안적으로, 활성 성분을 함유하는 중간 농축물 또는 사료 보충물이 사료에 블렌딩될 수 있다. 이러한 사료 프리믹스 및 완전한 배급물을 제조하고 투여할 수 있는 방식은 참고 문헌 (예컨대 문헌 ["Applied Animal Nutrition", W.H. Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969 or "Livestock Feeds and Feeding" O and B books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977])에 기재되어 있다.
도입 방법은 또한 재충전가능한 또는 생분해성 장치에 의해 제공될 수 있다. 다양한 서방성 중합체 장치가 개발되었고, 단백질성 생물제약을 비롯한 약물의 제어된 전달을 위해 최근 수년간 생체내에서 시험되었다. 생분해성 및 비-분해성 중합체 둘 다를 포함한 다양한 생체적합성 중합체 (히드로겔 포함)가 특정한 표적 부위에서의 화합물의 지속 방출을 위한 이식물을 형성하는 데 사용될 수 있다.
바람직하게는, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비-인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있으나, 이들 예에 제한되지는 않는다. 인간 이외의 포유동물은 신경변성 질환 또는 장애, 암 또는 바이러스 감염과 연관된 장애의 동물 모델을 나타내는 대상체로서 유리하게 사용될 수 있다.
또한, 본원에 기재된 방법은 가축 및/또는 애완동물을 치료하는 데 사용될 수 있다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있다. 대상체는 이전에 신경변성 질환 또는 장애, 암과 연관된 질환 또는 장애, 바이러스 감염과 연관된 질환 또는 장애, 또는 이러한 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 합병증을 앓고 있는 것으로 진단되었거나 또는 앓고 있는 것으로 확인되었지만, 이미 치료를 받을 필요는 없는 대상체일 수 있다.
투여량
본 개시내용의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이 아니면서 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용되는 본 개시내용의 특정한 화합물, 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정한 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 사용되는 특정한 화합물과 조합되어 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료될 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력, 및 의학 기술분야에 널리 공지된 기타 인자를 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술을 가진 의사 또는 수의사는 요구되는 제약 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 본 개시내용의 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 시작하고, 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.
화합물 및 제약 활성제는 동일한 제약 조성물로 또는 상이한 제약 조성물로 (동시에 또는 상이한 시간에) 대상체에게 투여될 수 있다. 상이한 시간에 투여되는 경우에, 화합물 및 제약 활성제는 다른 작용제의 투여 5분, 10분, 20분, 60분, 2시간, 3시간, 4시간, 8시간, 12시간, 24시간 내에 투여될 수 있다. 화합물 및 제약 활성제가 상이한 제약 조성물로 투여되는 경우에, 투여 경로는 상이할 수 있다.
담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 화합물의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 이러한 양은 100% 중에서, 약 0.1% 내지 99%, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 10% 내지 약 30% 범위의 화합물일 것이다.
독성 및 치료 효능은 예를 들어 LD50 (집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50 (집단의 50%에서 치료상 유효한 용량)를 결정하기 위해 세포 배양액 또는 실험 동물에서 표준 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 및 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, 이는 비 LD50/ED50으로 표현될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 조성물이 바람직하다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용하기 위한 투여량 범위를 제제화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양할 수 있다.
치료 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 동물 모델에서, 세포 배양에서 결정된 바와 같은 EC50 (즉, 최대 효과의 절반을 달성하는 치료제의 농도)를 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 제제화될 수 있다. 혈장에서의 수준은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 임의의 특정한 투여량의 효과는 적합한 생물검정에 의해 모니터링될 수 있다.
투여량은 의사에 의해 결정될 수 있고, 관찰된 치료 효과에 적합하도록 필요에 따라 조정될 수 있다.
치료의 지속기간 및 빈도와 관련하여, 통상의 임상의는 치료가 치료 이익을 제공하는 때를 결정하고, 투여량을 증가 또는 감소시키거나, 투여 빈도를 증가 또는 감소시키거나, 치료를 중단하거나, 치료를 재개하거나, 또는 치료 요법에 대한 다른 변경을 행할지 여부를 결정하기 위해 대상체를 모니터링하는 것이 전형적이다. 투여 스케줄은 다수의 임상 인자, 예컨대 약물에 대한 대상체의 감수성에 따라 1주 1회 내지 매일 달라질 수 있다. 목적하는 용량은 한 번에 투여되거나, 또는 하위용량, 예를 들어 2-4회 하위용량으로 분할되고, 예를 들어 하루 또는 다른 적절한 스케줄에 걸쳐 적절한 간격으로 일정 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 이러한 하위-용량은 단위 투여 형태로서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 만성적이며, 예를 들어 수주 또는 수개월의 기간에 걸쳐 1일 1회 이상의 용량이다. 투여 스케줄의 예는 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 또는 그 초과의 기간에 걸친 매일, 1일 2회, 1일 3회 또는 1일 4회 이상의 투여이다.
본 개시내용은 상기 언급된 제약 조성물 및 제제 중 임의의 것으로의 대상 화합물의 제제를 고려한다. 또한, 본 개시내용은 임의의 상기 투여 경로를 통한 투여를 고려한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 치료될 상태 및 치료될 환자의 전반적 건강, 연령 및 치수에 기초하여 적절한 제제 및 투여 경로를 선택할 수 있다.
선택된 화학적 정의
본 명세서의 다양한 위치에서, 본 개시내용의 화합물의 치환기는 군 또는 범위로 개시된다. 구체적으로, 본 개시내용은 이러한 군 및 범위의 구성원의 각각의 모든 개별 하위조합을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 용어 "C1-6 알킬"은 구체적으로 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실을 개별적으로 개시하는 것으로 의도된다.
가변기가 1회 초과로 나타나는 본 개시내용의 화합물의 경우에, 각각의 가변기는 가변기를 정의하는 마쿠쉬 군으로부터 선택된 상이한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 구조가 동일한 화합물 상에 동시에 존재하는 2개의 R 기를 갖는 것으로 기재된 경우에; 2개의 R 기는 R에 대해 정의된 마쿠쉬 군으로부터 선택된 상이한 모이어티를 나타낼 수 있다.
명확성을 위해 별개의 실시양태와 관련하여 기재된 본 개시내용의 특정 특색은 또한 단일 실시양태로 조합되어 제공될 수 있는 것으로 추가로 인지된다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태와 관련하여 기재된 본 개시내용의 다양한 특색은 또한 개별적으로 또는 임의의 적합한 하위조합으로 제공될 수 있다.
본 개시내용의 화합물이 화학 명칭의 형태로 및 화학식으로서 도시될 때 임의의 불일치가 있는 경우에 화학식이 우선할 것이다.
별표 또는 파상선이 정의된 바와 같은 코어 분자에 연결된 결합을 나타내기 위해 하위-화학식에서 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치환된"은 지정된 원자, 통상적으로 탄소, 산소 또는 질소 원자 상의 임의의 1개 이상의 수소가 나타낸 기로부터 선택된 것으로 대체되며, 단 지정된 원자의 정상 원자가를 초과하지 않고, 치환이 안정한 화합물을 생성하는 것을 의미한다. 치환기가 케토 또는 옥소 (즉, =O)인 경우에, 원자 상의 2개의 수소가 대체된다. 본원에 사용된 고리 이중 결합은 2개의 인접한 고리 원자 사이에 형성된 이중 결합 (예를 들어, C=C, C=N, N=N 등)이다.
본원에 사용된 "알킬"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소 기 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, C1-4 알킬은 C1, C2, C3 및 C4를 포함하도록 의도된다. C1-6 알킬은 C1 C2, C3, C4, C5, 및 C6 알킬 기를 포함하도록 의도되고, C1-8 알킬은 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, 및 C8을 포함하도록 의도된다. 알킬의 일부 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, s-펜틸, n-헥실, n-헵틸 및 n-옥틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알케닐"은 직쇄형 또는 분지형 배위 및 쇄를 따라 임의의 안정한 지점에서 발생할 수 있는 1개 이상의 불포화 탄소-탄소 결합의 탄화수소 쇄, 예컨대 에테닐 및 프로페닐을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, C2-6 알케닐은 C2, C3, C4, C5, 및 C6 알케닐 기를 포함하도록 의도되고, C2-8 알케닐은 C2, C3, C4, C5, C6, C7, 및 C8 알케닐 기를 포함하도록 의도된다.
본원에 사용된 "알킬렌"은 디라디칼인, 즉 2개의 부착 지점을 갖는 모이어티를 포함하는 것으로 의도된다. 디라디칼인 이러한 알킬렌 모이어티의 비제한적 예는 -CH2CH2-, 즉 각각의 말단 탄소 원자를 통해 분자의 나머지에 공유 결합된 C2 알킬 기이다. 알킬렌 디라디칼은 또한 "알킬레닐" 라디칼로서 공지되어 있다. 알킬렌 기는 1개 또는 여러 위치에서 포화 또는 불포화 (예를 들어, -CH=CH- 또는 -C≡C- 서브유닛 함유)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 알킬렌 기는 1 내지 9개의 탄소 원자 (예를 들어, 1 내지 6개의 탄소 원자, 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 2개의 탄소 원자)를 포함한다. 알킬렌 기의 일부 예는 메틸렌, 에틸렌, n-프로필렌, 이소-프로필렌, n-부틸렌, 이소-부틸렌, sec-부틸렌, tert-부틸렌, n-펜틸렌, 이소-펜틸렌, sec-펜틸렌 및 네오-펜틸렌을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "시클로알킬"은 포화 또는 불포화 비방향족 고리 기, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 용어 "C3-8 시클로알킬"은 C3, C4, C5, C6, C7 및 C8 시클로알킬 기를 포함하는 것으로 의도된다. 시클로알킬은 다중 스피로- 또는 융합 또는 가교된 고리를 포함할 수 있다. 예를 들어, 시클로알킬은 스피로 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐 또는 데실 기, 비시클로 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐 또는 데실 기, 아다만틸 기 및 노르보르닐 기를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클로알킬"은 달리 명시되지 않는 한 1개 이상의 헤테로원자 (예컨대 O, N, S 또는 Se)를 갖는 포화 또는 불포화 비방향족 3-8원 모노시클릭, 7-12원 비시클릭 (융합, 가교 또는 스피로 고리) 또는 11-14원 트리시클릭 고리계 (융합, 가교 또는 스피로 고리)를 지칭한다. 융합된 방향족 고리를 함유하는 헤테로시클로알킬 기는 융합된 방향족 고리의 고리-형성 원자를 비롯한 임의의 고리-형성 원자를 통해 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클로알킬은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 갖고 1개 이상의 산화된 고리원을 갖는 모노시클릭 4-6원 헤테로시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클로알킬은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 갖고 1개 이상의 산화된 고리원을 갖는 모노시클릭 또는 비시클릭 4-10원 헤테로시클로알킬이다. 헤테로시클로알킬 기의 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 이소인돌리닐, 인돌리닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 트리아졸리디닐, 테트라히드로푸라닐, 옥시라닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 1,2,3, 6-테트라히드로피리디닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 피라닐, 모르폴리닐, 1,4-디아제파닐, 1,4-옥사제파닐, 2-옥사-5-아자비시클로[2.2.1]헵타닐, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵타닐, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵타닐, 2,6-디아자스피로[3.3]헵타닐, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데카닐 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "아민" 또는 "아미노"는 달리 명시되지 않는 한 비치환된 -H2를 지칭한다. 본원에 사용된 "할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도 치환기를 지칭한다.
본원에 사용된 "할로알킬"은 1개 이상의 할로겐으로 치환된, 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 분지형 및 직쇄형 포화 지방족 탄화수소 기 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다 (예를 들어 -CvFwH2v.w+1, 여기서 v = 1 내지 3이고 w = 1 내지 (2v+1)임). 할로알킬의 예는 트리플루오로메틸, 트리클로로메틸, 펜타플루오로에틸 및 펜타클로로에틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "할로알콕시"는 1개 이상의 할로겐으로 치환된, 본원에 정의된 바와 같은 알콕시 기를 지칭한다. 할로알콕시 기의 예는 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 펜타플루오로에톡시, 트리클로로메톡시 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알콕실" 또는 "알콕시"는 산소 가교를 통해 부착된 나타낸 수의 탄소 원자를 갖는 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. C1-6 알콕시는 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6 알콕시 기를 포함하도록 의도된다. C1-8 알콕시는 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7 및 C8 알콕시 기를 포함하도록 의도된다. 알콕시의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시, t-부톡시, n-펜톡시, s-펜톡시, n-헵톡시 및 n-옥톡시를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "아릴"은 적어도 1개의 방향족 고리를 갖는 "공액" 또는 멀티시클릭 시스템을 포함한 방향족성을 갖는 기를 포함하고, 고리 구조에 어떠한 헤테로원자도 함유하지 않는다. 아릴은 모노시클릭 또는 폴리시클릭 (예를 들어, 2, 3 또는 4개의 융합된 고리를 가짐)일 수 있다. 용어 "Cn-m 아릴"은 n 내지 m개의 고리 탄소 원자를 갖는 아릴 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 아릴 기는 6 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 아릴 기는 페닐 또는 나프틸이다.
본원에 사용된 용어 "방향족 헤테로사이클", "방향족 헤테로시클릭" 또는 "헤테로아릴" 고리는 탄소 원자 및 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 헤테로원자, 예를 들어 1 또는 1-2 또는 1-3 또는 1-4 또는 1-5 또는 1-6개의 헤테로원자로 이루어진 안정한 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12-원 모노시클릭 또는 비시클릭 방향족 고리를 의미하는 것으로 의도된다. 비시클릭 방향족 헤테로시클릭 또는 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 고리의 경우에, 2개의 고리 중 단지 1개가 방향족일 필요가 있지만 (예를 들어, 2,3-디히드로인돌), 둘 다 방향족일 수 있다 (예를 들어, 퀴놀린). 제2 고리는 또한 헤테로사이클에 대해 상기 정의된 바와 같이 융합 또는 가교될 수 있다. 질소 원자는 치환 또는 비치환될 수 있다 (즉, N 또는 R, 여기서 R은 H 또는 정의된 바와 같은 또 다른 치환기임). 질소 및 황 헤테로원자는 임의로 산화될 수 있다 (즉, N → O 및 S(O)P, 여기서 p = 1 또는 2). 특정 화합물에서, 방향족 헤테로사이클 내의 S 및 O 원자의 총수는 1 이하이다.
방향족 헤테로사이클, 방향족 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴의 예는 아크리디닐, 아조시닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티오푸라닐, 벤조티오페닐, 벤족사졸릴, 벤족사졸리닐, 벤즈티아졸릴, 벤즈트리아졸릴, 벤즈테트라졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤즈이미다졸리닐, 벤조옥사디아졸릴, 카르바졸릴, 4aH-카르바졸릴, 카르볼리닐, 신놀리닐, 푸라자닐, 이미다졸릴, 이미다졸로닐, 1H-인다졸릴, 인돌리지닐, 인돌릴, 3H-인돌릴, 이소벤조푸라닐, 이소크로마닐, 이소인다졸릴, 이소인돌릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 메틸벤즈트리아졸릴, 메틸푸라닐, 메틸이미다졸릴, 메틸티아졸릴, 나프티리디닐, 옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 페난트리디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사티닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 프테리디닐, 퓨리닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도옥사졸릴, 피리도이미다졸릴, 피리도티아졸릴, 피리디닐, 피리디노닐, 피리딜, 피리미디닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 4H-퀴놀리지닐, 퀴녹살리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라졸릴, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 티안트레닐, 티아졸릴, 티에닐, 티에노티아졸릴, 티에노옥사졸릴, 티에노이미다졸릴, 티오페닐, 트리아지닐, 트리아졸로피리미디닐, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴 및 1,3,4-트리아졸릴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "히드록시알킬"은 알킬 기가 1개 이상의 OH 기로 치환된 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 의미한다. 히드록시알킬 기의 예는 HO-CH2-, HO-CH2-CH2- 및 CH3-CH(OH)-를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 삼중 결합에 의해 질소 원자에 연결된 탄소 원자를 갖는 치환기, 즉 C≡N을 의미한다.
본원에 사용된 "옥소"는 "C=O" 기를 의미한다.
본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 부합하는 화합물 또는 그의 호변이성질체, 또는 그의 염, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭한다. 본원에 사용된 "제약상 허용되는 염"은 개시된 화합물 또는 그의 호변이성질체의 유도체를 지칭하며, 여기서 모 화합물 또는 그의 호변이성질체는 모 화합물 또는 그의 호변이성질체의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 변형된다. 제약상 허용되는 염의 예는 염기성 잔기, 예컨대 아민의 무기 또는 유기 산 염; 산성 잔기, 예컨대 카르복실산의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비-독성 염 또는 4급 암모늄 염, 또는 그의 호변이성질체를 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비-독성 염은 2-아세톡시벤조산, 2-히드록시 에탄 술폰산, 아세트산, 아스코르브산, 벤젠 술폰산, 벤조산, 중탄산, 탄산, 시트르산, 에데트산, 에탄 디술폰산, 에탄 술폰산, 푸마르산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 글리콜리아르사닐산, 헥실레조르신산, 히드라밤산, 브로민화수소산, 염산, 히드로아이오다이드, 히드록시말레산, 히드록시나프토산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우릴 술폰산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄 술폰산, 나프실산, 질산, 옥살산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 폴리갈락투론산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 서브아세트산, 숙신산, 술팜산, 술파닐산, 황산, 탄닌산, 타르타르산 및 톨루엔 술폰산으로부터 선택된 무기 및 유기 산으로부터 유래된 것들을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 개시내용의 제약상 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물 또는 그의 호변이성질체로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제약상 허용되는 염은 물 또는 유기 용매, 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 유리 산 또는 염기 형태의 이들 화합물 또는 그의 호변이성질체를 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있으며; 일반적으로, 비수성 매질, 예컨대 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌 [Remington 's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, USA, p. 1445 (1990)]에서 찾을 수 있다.
본원에 사용된 "안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리 및 효과적인 치료제로의 제제화를 견디기에 충분히 강건한 화합물을 나타내는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "치료하는"은 치료 목적을 위해 본원에 제공된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 지칭한다. 용어 "치유적 치료"는 이미 질환을 앓고 있는 환자에게 치료를 투여하여, 기존 증상을 호전시키는 것, 증상의 기저 대사 원인을 호전시키는 것, 장애의 추가의 발생을 연기 또는 예방하는 것, 및/또는 발생할 것이거나 발생할 것으로 예상되는 증상의 중증도를 감소시키는 것과 같은 치료상 유익한 효과를 유발하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 "불포화"는 적어도 1개의 불포화도 (예를 들어, 적어도 1개의 다중 결합)를 갖는 화합물을 지칭하고, 부분 및 완전 불포화 화합물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 단독으로 또는 항미생물제로서 조합되어 투여되는 경우에 효과적인 본 개시내용의 화합물 또는 화합물의 제약상 허용되는 염 또는 호변이성질체 (화합물 및/또는 그의 호변이성질체의 조합, 및/또는 상기 화합물 또는 호변이성질체의 제약상 허용되는 염 포함)의 양을 지칭한다. 예를 들어, 유효량은 생물학적 활성을 도출하기에 충분한 조성물, 수용자 환자 또는 대상체에게 주어진 제제에 존재하는 화합물 또는 그의 호변이성질체, 또는 상기 화합물 또는 호변이성질체의 제약상 허용되는 염의 양을 지칭한다.
본 명세서에서, 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 형태를 또한 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 상충되는 경우, 본 명세서가 우선할 것이다. 본원에 사용된 "포유동물"은 인간 및 비-인간 환자를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "본 개시내용의 화학식" 또는 "본원에 개시된 화학식"은 화학식 I, 그의 하위화학식 Ia, Ib 또는 Ic, 및 그의 추가의 하위화학식 중 1종 이상을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "개시내용의 화합물" 또는 "본원에 개시된 화합물"은 개시내용의 화학식 중 1종 이상의 화합물 또는 본원에 명백하게 개시된 화합물을 포함한다.
본원에 사용된 모든 백분율 및 비는, 달리 나타내지 않는 한, 중량 기준이다.
명세서 전반에 걸쳐, 조성물이 특정 성분을 갖거나, 함유하거나 또는 포함하는 것으로 기재된 경우, 또는 공정이 특정 공정 단계를 갖거나, 함유하거나 또는 포함하는 것으로 기재된 경우, 본 개시내용의 조성물은 또한 언급된 성분으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어지고, 본 개시내용의 공정은 또한 언급된 공정 단계로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어지는 것으로 고려된다. 추가로, 단계의 순서 또는 특정 작업을 수행하기 위한 순서는 개시내용이 작동가능하게 유지되는 한 중요하지 않은 것으로 이해되어야 한다. 또한, 2개 이상의 단계 또는 작업이 동시에 수행될 수 있다.
상기 기재된 화합물의 고려되는 등가물은 그에 달리 상응하고, 그의 동일한 일반적 특성 (예를 들어, TRPML을 조정하는 능력)을 갖는 화합물을 포함하며, 여기서 화합물의 효능에 유해한 영향을 미치지 않는 1개 이상의 치환기의 단순한 변형이 이루어진다. 일반적으로, 본 개시내용의 화합물은, 예를 들어 하기 기재된 바와 같은 일반적 반응식에 예시된 방법에 의해, 또는 용이하게 입수가능한 출발 물질, 시약 및 통상적인 합성 절차를 사용하여 그의 변형에 의해 제조될 수 있다. 이들 반응에서, 그 자체로 공지되어 있으나 본원에 언급되어 있지 않은 변이체를 사용하는 것이 또한 가능하다.
본원에 사용된 단수형은 하나 또는 하나 초과 (예를 들어, 적어도 하나)의 문법적 대상을 지칭한다.
"약" 및 "대략"은 일반적으로 측정의 성질 또는 정밀도가 주어지면 측정된 양에 대한 허용가능한 오차 정도를 의미할 것이다. 예시적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20 퍼센트 (%) 이내, 전형적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내이다.
본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 장애를 치유, 치료, 경감, 완화, 변경, 해소, 호전, 개선 또는 그에 영향을 미치기 위한 목적으로, 대상체, 예를 들어 장애 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 장애), 장애의 증상 또는 장애에 대한 소인을 갖는 대상체에게 화합물을 단독으로 또는 추가의 작용제와 조합하여 적용 또는 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물을 포함하는 것으로 의도된다. 예시적인 인간 대상체는 장애, 예를 들어 본원에 기재된 장애를 갖는 인간 대상체를 포함한다. 본 개시내용의 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 비-포유동물 (예컨대 닭, 양서류, 파충류) 및 포유동물, 예컨대 비-인간 영장류, 가축 및/또는 농업상 유용한 동물, 예를 들어 양, 개, 고양이, 소, 돼지 등을 포함한다.
용어 "길항제" 및 "억제제"는 생물학적 활성을 감소시키거나 억제하는 작용제를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "활성화제" 및 "효능제"는 생물학적 활성을 증가시키거나 개시하는 작용제를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "수화물"은 물과 모 화합물의 결합에 의해 형성된 화합물을 지칭한다.
용어 "예방하는"은, 상태, 예컨대 국부 재발 (예를 들어, 통증), 질환, 예컨대 암, 증후군 복합증, 예컨대 심부전 또는 임의의 다른 의학적 상태와 관련하여 사용되는 경우에, 관련 기술분야에서 널리 이해되고 있으며, 조성물을 제공받지 않은 대상체에 비해 대상체에서 의학적 상태의 증상의 빈도를 감소시키거나 또는 그의 발병을 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다. 따라서, 예를 들어 암의 예방은, 예를 들어 통계적으로 및/또는 임상적으로 유의한 양만큼, 비치료 대조군 집단에 비해 예방적 치료를 받은 환자 집단에서 검출가능한 암성 성장의 수를 감소시키는 것, 및/또는 치료된 집단 대 비치료 대조군 집단에서 검출가능한 암성 성장의 출현을 지연시키는 것을 포함한다. 감염의 예방은, 예를 들어 치료된 집단 대 비치료 대조군 집단에서 감염의 진단 횟수를 감소시키는 것, 및/또는 치료된 집단 대 비치료 대조군 집단에서 감염 증상의 발병을 지연시키는 것을 포함한다. 통증의 예방은, 예를 들어 비치료 대조군 집단에 비해 치료된 집단에서 대상체가 경험하는 통증 감각의 크기를 감소시키거나 또는 대안적으로 이를 지연시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "용매화물"은 용매화에 의해 형성된 화합물 (예를 들어, 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온의 조합에 의해 형성된 화합물)을 지칭한다. 본 개시내용의 또 다른 측면은 유효량의 본 개시내용의 화학식의 화합물 (또는 그의 염, 또는 화합물 또는 그의 염의 용매화물, 수화물, 산화성 대사물 또는 전구약물), 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는, 인간 환자에서 사용하기에, 또는 수의학적 용도에 적합한 제약 제제를 특색으로 한다. 본 개시내용은 본 명세서에 제공된 임의의 질환 또는 상태의 증상을 치료 또는 감소시키기 위한 의약 또는 제약 제제의 제조에서의 본 개시내용의 화학식의 화합물의 용도를 추가로 고려한다. 특정한 질환 또는 상태를 치료하는 데 사용하기 위한 본 개시내용의 화학식의 화합물은 특정한 질환 또는 상태에 적절한 경로를 통한 투여를 위해 제제화될 수 있다.
본 개시내용의 화학식의 화합물은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 화학식의 화합물은 다낭성 신장 질환 등을 치료하기 위한 작용제 중 1종 이상과 공동으로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 화학식의 화합물은 국소로, 경구로, 경피로, 직장으로, 질로, 비경구로, 비강내로, 폐내로, 안구내로, 정맥내로, 근육내로, 동맥내로, 척수강내로, 피막내로, 안와내로, 심장내로, 피내로, 복강내로, 경기관으로, 피하로, 표피하로, 관절내로, 피막하로, 지주막하로, 척수내로, 흉골내로, 설하로, 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 국소로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 경구로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 비경구로 투여될 수 있다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 본원에 기재된 장애의 치료, 예를 들어 통증의 치료를 유도하거나 또는 유발하는 경구 또는 비경구 (예를 들어, 정맥내) 투여에 적합한 수용해도를 갖는 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 경구 투여에 적합한 조성물로 제제화된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 본원에 기재된 장애를 치료상 유효한 방식으로 치료하기 위해 경구 또는 비경구 (예를 들어, 정맥내) 제약 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.
본원에 개시된 특정 화합물은 특정한 기하 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 개시내용은 시스- 및 트랜스-이성질체, R- 및 S-거울상이성질체, 부분입체이성질체, (d)-이성질체, (l)-이성질체, 그의 라세미 혼합물, 및 그의 다른 혼합물을 비롯한 모든 이러한 화합물이 본 개시내용의 범주 내에 속하는 것으로 고려된다. 예를 들어, 1개의 키랄 중심이 분자에 존재하는 경우에, 본 개시내용은 라세미 혼합물, 거울상이성질체적으로 풍부한 혼합물, 및 실질적으로 거울상이성질체적으로 또는 부분입체이성질체적으로 순수한 화합물을 포함한다. 조성물은, 예를 들어 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 80% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 99% 초과의 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체를 함유할 수 있다. 추가의 비대칭 탄소 원자가 치환기, 예컨대 알킬 기에 존재할 수 있다. 모든 이러한 이성질체, 뿐만 아니라 그의 혼합물은 본 개시내용에 포함되는 것으로 의도된다.
조성물의 "거울상이성질체 과잉률" 또는 "% 거울상이성질체 과잉률"은 하기 제시된 방정식을 사용하여 계산될 수 있다. 하기 제시된 예에서 조성물은 90%의 하나의 거울상이성질체, 예를 들어 S 거울상이성질체, 및 10%의 다른 거울상이성질체, 즉 R 거울상이성질체를 함유한다.
ee = (90-10)/100 = 80%.
따라서, 90%의 하나의 거울상이성질체 및 10%의 다른 거울상이성질체를 함유하는 조성물은 80%의 거울상이성질체 과잉률을 갖는다고 한다.
조성물의 "부분입체이성질체 과잉률" 또는 "% 부분입체이성질체 과잉률"은 하기 제시된 방정식을 사용하여 계산될 수 있다. 하기 제시된 예에서 조성물은 90%의 하나의 부분입체이성질체 및 10%의 또 다른 거울상이성질체를 함유한다.
de = (90-10)/100 = 80%.
따라서, 90%의 하나의 부분입체이성질체 및 10%의 다른 부분입체이성질체를 함유하는 조성물은 80%의 부분입체이성질체 과잉률을 갖는다고 한다.
본원에 개시된 특정 화합물은 비용매화 형태 뿐만 아니라 용매화 형태, 예컨대 수화 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화 형태는 비용매화 형태와 동등하고, 본 개시내용의 범주 내에 포괄된다. 본원에 개시된 특정 화합물은 다중 결정질 또는 무정형 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 개시내용에 의해 고려되는 용도에 대해 동등하고, 본 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
실시예
본 발명의 보다 완전한 이해를 용이하게 하기 위해 하기 실시예가 제공된다. 하기 실시예는 본 발명의 예시적인 제조 및 실시 방식을 예시한다. 그러나, 대안적 방법이 유사한 결과를 수득하는 데 이용될 수 있기 때문에 본 발명의 범주는 이들 실시예에 개시된 구체적 실시양태로 제한되지 않으며, 이는 단지 예시의 목적을 위한 것이다.
일반적. 모든 산소 및/또는 수분 민감성 반응은 진공 (0.5 mmHg) 하에 화염-건조되고 사용 전에 N2로 퍼징된 유리제품에서 N2 분위기 하에 수행하였다. 모든 시약 및 용매를 상업적 공급자로부터 입수하고, 제공받는 대로 사용하거나, 또는 각주 참고문헌에 따라 합성하였다. NMR 스펙트럼은 브루커(Bruker) 400 (400 MHz 1H, 75 MHz 13C) 또는 배리안(Varian) (400 MHz 1H, 75 MHz 13C) 분광계 상에서 기록하였다. 양성자 및 탄소 화학적 이동은 NMR 용매를 참조하여 ppm (δ)으로 보고된다. 데이터는 하기와 같이 보고된다: 화학적 이동, 다중도 (br = 넓음, s = 단일선, t = 삼중선, q = 사중선, m = 다중선; 커플링 상수 (Hz)). 달리 나타내지 않는 한 NMR 데이터는 25℃에서 수집하였다. 플래쉬 크로마토그래피는 100-200 메쉬 실리카 겔을 사용하여 수행하였다. 액체 크로마토그래피/질량 분광측정법 (LCMS)은 애질런트 1200HPLC 및 6110MS 상에서 수행하였다. 분석용 박층 크로마토그래피 (TLC)를 0.2 mm 실리카 겔 플레이트 상에서 수행하였다. 시각화를 UV 광 및 수성 과망가니즈산칼륨 (KMnO4) 염색에 이어서 가열에 의해 달성하였다.
LCMS 전형적 조건:
LC-MS 조건 기기: LCMS2020(E-LCMS 008) 칼럼: 심-팩 (Shim-pack) GIST C18, 50*4.6mm 5 um 이동상: A: H2O(0.1%FA) B: CH3CN 온도: 35℃ 유량: 2.5mL/분 실행 시간: 0.1분@20%B, 1.7분 구배 (20-95% B), 이어서 0.7분@95% B, 이어서 0.4분@20% B 주입 부피: 5 uL 검출기: UV 220/254 nm 질량 범위: 100-1000 스캔: 양성/음성.
HPLC 전형적 조건:
기기: LC-20AD(E-LC 006) 칼럼: YMC 트리아트(Triart) C18, 50 x 4.6 mm,5 um 이동상: 용매 A: H2O/CH3CN/TFA=90/10/0.1 용매 B: H2O/CH3CN/TFA=10/90/0.1 유량: 2.5mL/분 실행 시간: 0.4분@ 60% B, 3.4분 구배 (60-100% B), 이어서 0.8분@100%B. 온도: 35℃ 검출기: UV.
또는
기기: LC-2010AHT(E-LC 001) 칼럼: 제미니, C18, 50 x 4.6 mm,5 um 이동상: 용매 A: H2O/CH3CN/TFA=90/10/0.1 용매 B: H2O/CH3CN/TFA=10/90/0.1 유량: 2.5mL/분 실행 시간: 0.4분@ 20% B, 3.4분 구배 (20-95% B), 이어서 0.8분@95%B. 온도: 40℃. 검출기: UV.
표 2: 약어
실시예 1. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 146)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (50 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.0 g, 9.2 mmol, 화합물 134에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (1.7 g, 9.2 mmol) 및 DIPEA (5.0 mL, 28 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트 (4.5 g, 83%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 584 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (50 mL) 중 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 3.4 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (0.35 g, 4.1 mmol), K2CO3 (9.5 g, 69 mmol) 및 Pd-118 (0.22 g, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 76%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 2.6 mmol)의 용액에 TBAF (16 mL, 16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (810 mg, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 344 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.29 mmol)의 용액에 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (84 mg, 0.35 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (9.9 mg, 0.087 mmol), CuI (17 mg, 0.087 mmol) 및 K3PO4 (190 mg, 0.87 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (82 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 456 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.46 (s, 1H), 7.38 - 7.33 (m, 2H), 6.91 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.79 - 6.72 (m, 1H), 3.69 (d, J = 2.7 Hz, 4H), 3.65 - 3.59 (m, 4H), 2.08 - 2.01 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.07 - 1.00 (m, 2H), 0.80 - 0.73 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드, 보론산 에스테르 또는 산 및 아민으로부터 화합물 146의 합성과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 유사체 474 및 475에 대해, 트리플루오로 (옥세탄-3-일)-λ4-보란 (칼륨 염)을 커플링 단계에 사용하였다. 유사체 465, 466, 467, 468, 469 및 470의 경우에, 최종 생성물을 최종 단계에서 실시예 69와 유사하게 수소화에 의해 수득하였다.
실시예 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 134)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 무수 DMF (60 mL) 중 NaH (1.0 g, 27 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 18 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반한 후, TsCl (3.4 g, 18 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 첨가한 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, 여과하고, 고체를 수집하고, 진공 하에 추가로 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (6.0 g, 77%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5.0 mL, 28 mmol) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.0 g, 9.2 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 9.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 3시간 동안 150℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 43%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (30 mL) 및 H2O (6 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 4.0 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (0.68 g, 4.8 mmol), K2CO3 (1.7 g, 12 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.29 g, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 82%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 3.3 mmol)의 용액에 TBAF (20 mL, 20 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 426 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.47 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.05 mL, 0.56 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (16 mg, 0.14 mmol), CuI (27 mg, 0.14 mmol) 및 K3PO4 (300 mg, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 47%)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이 중 30 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 13 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.52 - 8.48 (m, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 1H), 7.50 (td, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.30 - 4.04 (m, 2H), 3.39 - 3.22 (m, 3H), 2.92 - 2.70 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 134의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 3. 에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 137)의 합성
단계 1. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol)의 용액에 HCl (4.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 403 (M+H)+.
단계 2. 에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (3 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (60 mg, 0.15 mmol)의 0℃ 용액에 TEA (0.062 mL, 0.45 mmol)에 이어서 에틸 클로로포르메이트 (0.03 mL, 0.29 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (39 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.52 - 8.48 (m, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 1H), 7.50 (td, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 4.37 - 4.04 (m, 4H), 3.43 - 3.22 (m, 3H), 2.95 - 2.71 (m, 1H), 1.23 (t, J = 6.5 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 137의 합성과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다.
실시예 4. tert-부틸 4-(7-(5-클로로-2-메틸페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 159)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 6.9 mmol, 화합물 134, 단계 1에 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.6 g, 28 mmol)의 혼합물을 150℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 3.3 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.9 mL, 13 mmol), TEA (2.3 mL, 17 mmol), X-Phos (0.16 g, 0.33 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.31 g, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 1.1 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.22 mL, 2.3 mmol), K2CO3 (810 mg, 5.8 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (86 mg, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (490 mg, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (490 mg, 0.89 mmol)의 용액에 TBAF (5.4 mL, 5.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 56%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(7-(5-클로로-2-메틸페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.25 mmol)의 용액에 (5-클로로-2-메틸페닐)보론산 (130 mg, 0.76 mmol), Cu(OAc)2 (180 mg, 1.0 mmol), 피리딘 (0.12 mL, 1.5 mmol) 및 4A 분자체 (400 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 40℃로 3일 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 NH4OH로 켄칭하고, DCM으로 희석한 다음, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(5-클로로-2-메틸페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 22%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 519 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 - 8.65 (m, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.78 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 3H), 7.26 - 7.23 (m, 1H), 4.48 - 4.19 (m, 1H), 3.96 - 3.78 (m, 1H), 3.68 - 3.48 (m, 2H), 3.23 - 2.72 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.07 (s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 159의 합성과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다.
실시예 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 280)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (15 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 12 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 29 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 1.5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 84%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.97 mL, 6.6 mmol), TEA (1.2 mL, 8.3 mmol), X-Phos (0.08 g, 0.16 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.15 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 99%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 및 H2O (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.32 mL, 3.3 mmol), K2CO3 (1.2 g, 8.3 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.12 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.69 g, 75%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (690 mg, 1.3 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, 5.0 mmol, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.25 mmol)의 용액에 3-아이오도벤조니트릴 (87 mg, 0.38 mmol), (1S,2S)-시클로헥산-1,2-디아민 (8.6 mg, 0.076 mmol), CuI (48 mg, 0.25 mmol) 및 K3PO4 (160 mg, 0.76 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (52 mg, 41%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 496 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (dd, J = 4.8, 0.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.45 - 8.43 (m, 1H), 8.34 - 8.27 (m, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.95 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.86 (dt, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.77 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 4.21 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.77 - 3.60 (m, 2H), 3.12 - 2.55 (m, 4H), 1.36 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 280의 합성과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다.
실시예 6. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 192)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
아세톤 (2 L) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 g, 0.71 mol) 및 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (180 g, 0.93 mol)의 0℃ 용액에 2.0M NaOH (0.53 L)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 추가로 3시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 2회 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 g, 95%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (500 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 120 mmol)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (28 g, 140 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 H2O 및 EtOAc로 켄칭하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (10 : 1)로 연화처리하고, 여과하여 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (48 g, 70%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 물 (1 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.50 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (77 mg, 0.55 mmol), K3PO4 (210 mg, 1.0 mmol), 및 Pd(dppf)Cl2 (37 mg, 0.050 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 97%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 566 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (6 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.49 mmol)의 용액에 TBAF (3.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~64% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 87%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 412 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 0.42 mmol) 및 2-브로모피리딘 (79 mg, 0.50 mmol)의 용액에 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (97 mg, 0.85 mmol), CuI (190 mg, 0.42 mmol) 및 K3PO4 (180 mg, 0.84 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC (길슨(Gilson), C18, 물 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 53%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 489 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.52 - 8.48 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.90 (ddd, J = 8.4, 7.4, 1.9 Hz, 1H), 7.50 (td, J = 7.6, 1.7 Hz, 1H), 7.37 (tdd, J = 7.2, 5.1, 1.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 3H), 4.24 (s, 1H), 3.83 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.67 - 3.61 (m, 1H), 3.43 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.01 (dd, J = 13.0, 3.9 Hz, 1H), 2.70 (td, J = 12.3, 3.2 Hz, 1H), 2.55 (td, J = 13.0, 3.0 Hz, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 7. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 226)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 물 (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 1.2 mmol, 절차 화합물 259, 단계 1에 따라 제조됨)의 용액에 피리딘-3-일보론산 (160 mg, 1.3 mmol), Pd(dppf)Cl2 (86 mg, 0.12 mmol) 및 K2CO3 (320 mg, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 34%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.40 mmol)의 용액에 TBAF (3.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 78%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (6 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.10 mmol) 및 1-플루오로-3-아이오도벤젠 (27 mg mL, 0.12 mmol)의 용액에 CuI (19 mg, 0.10 mmol), K3PO4 (43 mg, 0.20 mmol) 및 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (23 mg, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 41%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 489 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.81 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.72 (dt, J = 10.2, 2.2 Hz, 1H), 7.66 - 7.63 (m, 1H), 7.61 - 7.55 (m, 2H), 7.18 (tdd, J = 8.4, 2.4, 0.8 Hz, 1H), 4.07 (dt, J = 9.8, 3.1 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.50 (t, J = 12.2 Hz, 2H), 3.20 - 3.13 (m, 1H), 2.95 - 2.78 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 226의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 8. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-이소시아노피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 259)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (15 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 12 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 29 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 140℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.7 mmol)의 용액에 Pd-(dtbp)Cl2 (220 mg, 0.34 mmol), K2CO3 (3.0 g, 22 mmol) 및 시클로프로필보론산 (220 mg, 2.5 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (430 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (430 mg, 0.84 mmol)의 용액에 TBAF (4.0mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭한 다음, 이를 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 83%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-이소시아노피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.20 mmol)의 용액에 CuI (37 mg, 0.20 mmol), K3PO4 (83 mg, 0.39 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (45 mL, 0.39 mmol) 및 5-브로모피리딘-3-카르보니트릴 (43 mg, 0.24 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC (C-18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-이소시아노피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (28 mg, 31%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 460 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.33 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.75 - 8.72 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.42 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.81 - 4.76 (m, 1H), 4.08 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 2H), 3.59 - 3.52 (m, 1H), 3.49 - 3.34 (m, 1H), 3.22 - 3.10 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.09 - 1.04 (m, 2H), 0.93 - 0.88 (m, 1H), 0.82 - 0.76 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 259의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 9. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 266)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-이소시아노피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.31 mmol)의 용액에 CuI (29 mg, 0.15 mmol), K3PO4 (200 mg, 0.92 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (22 mg, 0.18 mmol) 및 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (140 mg, 0.62 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 98%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 459 (M+H)+.
단계 2. (S)-3-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴
DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.30 mmol)의 용액에 TFA (0.50 mL, 6.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3로 세척하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 359 (M+H)+.
단계 3. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 (S)-3-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (75 mg, 0.21 mmol)의 용액에 DIPEA (0.20 mL, 1.0 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일-1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.52 mmol, 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 및 CDI로부터 제조됨)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 mg, 34%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.33 (s, 1H), 8.22 - 8.20 (m, 1H), 8.07 - 8.04 (m, 1H), 7.72 - 7.68 (m, 2H), 7.32 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.14 - 3.92 (m, 2H), 3.89 - 3.82 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 3.50 - 3.36 (m, 1H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 2.03 (s, 1H), 1.72 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 1.22 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.07 - 1.03 (m, 2H), 0.91 - 0.75 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 266의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 10. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-시아노피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 274)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (400 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 36 mmol)의 용액에 (3-클로로페닐)보론산 (8.7 g, 72 mmol), 4Å 분자체 (5 g), Cu(OAc)2 (16 g, 89 mmol) 및 피리딘 (17 mL, 210 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 NH4OH (30 mL) 및 빙수로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (7.5 g, 54%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 390 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (8 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.5 g, 6.4 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.2 g, 16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 140℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 g, 84%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 4.6 mmol)의 용액에 X-Phos (220 mg, 0.46 mmol), Pd(dba)3 (0.40 g, 0.46 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (2.7 mL, 18 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g)를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-시아노피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (2 mL) 및 H2O (0.4 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.13 mmol)의 용액에 K2CO3 (87 mg, 0.63 mmol), Pd(dppf)Cl2 (10 mg, 0.01 mmol) 및 3-브로모피라진-2-카르보니트릴 (47 mg, 0.25 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC (길슨, C-18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-시아노피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (32 mg, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.85 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.79 (s, 2H), 7.70 - 7.66 (m, 1H), 7.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.41 (m, 1H), 4.38 - 3.95 (m, 1H), 3.85 - 3.78 (m, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 3.53 - 3.25 (m, 1H), 3.20 - 2.87 (m, 2H), 2.66 (s, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.18 - 0.96 (m, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 274의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 11. tert-부틸 (R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 388)의 합성
단계 1. 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
아세톤 (70 mL) 중 5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 21 mmol)에 TsCl (4.1 g, 21 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 2M NaOH 용액 (13 mL)을 첨가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 여과하였다. 필터 케이크를 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (7.4 g, 88%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 386 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (20 mL) 중 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 7.8 mmol), tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 9.3 mmol) 및 DIPEA (3.9 mL, 24 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 필터 케이크를 EtOH로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.7 g, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 550 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.7 g, 6.7 mmol)를 TBAF (16 mL, THF 중 1.0 M)로 실온에서 2시간 동안 처리하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.1 g, 77%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 396 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.1 g, 5.2 mmol), K3PO4 (2.2 g, 10 mmol), CuI (0.99 g, 5.2 mmol) 및 2-브로모-4-클로로피리딘 (1.5 g, 7.8 mmol)을 건조 DMF (50 mL) 중에서 혼합하였다. 이어서 트랜스-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (0.74 g, 5.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 이어서 이를 EtOAc로 희석하고, LiCl (5% 수성 용액) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~15% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.1 g, 79%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 507 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (R)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.59 mmol) 및 아제티딘-2-온 (130 mg, 1.8 mmol)에 K3PO4 (250 mg, 1.2 mmol), CuI (110 mg, 0.59 mmol), 건조 DMF (5 mL) 및 트랜스-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (170 mg, 1.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 이어서 이를 EtOAc로 희석하고, 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~60% EtOAc에 이어서 DCM 중 0~7% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 58%)를 연황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
건조 THF (4 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 0.13 mmol)에 RhH(CO)(PPh3)3 (32 mg, 0.035 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 퍼징하였다. 이어서 PhSiH3 (70 mg, 0.65 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 60℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 정제용 TLC (석유 에테르 / EtOAc = 5:1, v/v)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R)-4-[5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 79%)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 484 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
Zn(CN)2 (75 mg, 0.64 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (75 mg, 0.065 mmol)에 건조 DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R)-4-[5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (62 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 이어서 이를 EtOAc로 희석하고, 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (석유 에테르 / EtOAc = 3:1, v/v)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (16 mg, 26%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.35 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.40 - 4.29 (m, 1H), 3.95 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.83 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.64 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.46 - 3.33 (m, 2H), 3.02 (td, J = 12.4, 3.4 Hz, 1H), 2.29 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 12. tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (화합물 392)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (15 mL) 및 물 (0.5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.1 g, 2.5 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (420 mg, 0.60 mmol), X-Phos (180 mg, 0.37 mmol), K3PO4 (1.6 g, 7.5 mmol) 및 Pd2(dba)3 (230 mg, 0.25 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 60%)을 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 402 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
EtOH (6 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (550 mg, 2.2 mmol)의 용액에 DIEA (0.66 mL, 4.0 mmol) 및 tert-부틸 4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (440 mg, 2.1 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (660 mg, 70%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 578 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (660 mg, 1.6 mmol)의 용액에 TBAF (6.5 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (410 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 424 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 7-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (400 mg, 0.95 mmol)의 용액에 CuI (90 mg, 0.47 mmol), K3PO4 (600 mg, 2.9 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (0.030 mL, 0.28 mmol) 및 2-브로모이소니코티노니트릴 (350 mg, 1.9 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (450 mg, 91%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.63 - 8.60 (m, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.50 - 7.46 (m, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 2H), 7.28 -7.18 (m, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.21 (s, 2H), 3.12 (s, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.93 - 0.88 (m, 2H), 0.74 (s, 2H).
실시예 13. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((R)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 312)의 합성
DMSO (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (460 mg, 0.83 mmol)의 용액에 CuI (32 mg, 0.17 mmol), L-프롤린 (38 mg, 0.30 mmol), K2CO3 (340 mg, 2.5 mmol) 및 (R)-피롤리딘-2-일메탄올 (0.33 mL, 3.3 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 70℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 이어서 정제용 HPLC (길슨, C-18, 물 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((R)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 23%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 527 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 1H), 7.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.23 - 3.92 (m, 3H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.79 - 3.69 (m, 2H), 3.65 - 3.61 (m, 1H), 3.55 - 3.43 (m, 2H), 3.41 - 3.29 (m, 1H), 3.04 - 2.89 (m, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.19 - 2.12 (m, 1H), 2.00 - 1.88 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.18 - 1.04 (m, 3H).
실시예 14. tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (화합물 396)의 합성
단계 1. tert-부틸 7-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (750 mg, 2.7 mmol, 화합물 192, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 DIEA (0.90 mL, 5.5 mmol) 및 tert-부틸 4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (550 mg, 2.6 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (920 mg, 75%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 610 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 7-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
톨루엔 (12 mL) 중 tert-부틸 7-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (900 mg, 2.0 mmol)의 용액에 Pd-118 (97 mg, 0.15 mmol), K2CO3 (2.6 g, 19 mmol) 및 시클로프로필보론산 (190 mg, 2.2 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (240 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 524 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 tert-부틸 7-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (240 mg, 0.65 mmol)의 용액에 TBAF (2.4 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (150 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 370 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 7-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (150 mg, 0.41 mmol)의 용액에 CuI (39 mg, 0.21 mmol), K3PO4 (260 mg, 1.2 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (0.020 mL, 0.12 mmol) 및 2-브로모이소니코티노니트릴 (150 mg, 0.81 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트 (100 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.32 (s, 1H), 8.59 - 8.56 (m, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.77 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.35 - 7.32 (m, 1H), 3.87 - 3.81 (m, 2H), 3.77 - 3.73 (m, 2H), 3.61 (s, 2H), 2.02 - 1.95 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.06 - 0.98 (m, 4H), 0.83 - 0.78 (m, 4H).
실시예 15. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 404)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 및 물 (0.5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.7 mmol)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (140 mg, 0.17 mmol), K2CO3 (930 mg, 6.7 mmol) 및 (2-플루오로페닐)보론산 (280 mg, 2.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (810 mg, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 566 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (570 mg, 1.0 mmol)의 용액에 TBAF (4.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭한 다음, 이를 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 412 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
밀봉된 튜브에서, tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.37 mmol), 2,6-디브로모이소니코티노니트릴 (190 mg, 0.73 mmol), K3PO4 (160 mg, 0.73 mmol) 및 CuI (69 mg, 0.36 mmol)를 건조 DMF 중에서 혼합하였다. 이어서 (±)-트랜스-1,2-시클로헥산디아민 (100 mg, 0.73 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 90℃에서 3.5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 이어서 이를 EtOAc로 희석하고, 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~11% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 55%)를 황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 592 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (3 mL) 및 H2O (0.6 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.20 mmol), 메틸보론산 (98 mg, 1.6 mmol), Cs2CO3 (200 mg, 0.61 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0.027 mmol)의 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 이어서 이를 EtOAc 및 DCM으로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% EtOAc에 이어서 정제용 HPLC)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (23 mg, 21%)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.16 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.46 (td, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H), 7.37 (tdd, J = 7.2, 5.1, 1.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 3H), 4.32 - 4.06 (m, 1H), 3.86 - 3.61 (m, 1H), 3.56 - 3.42 (m, 2H), 3.08 (td, J = 12.3, 2.5 Hz, 1H), 2.87 - 2.59 (m, 5H), 1.43 (s, 9H), 1.01 (d, J = 5.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 사용한 것을 제외하고는 화합물 404에 대해 기재된 것과 유사한 합성 절차에 의해 제조하였다.
실시예 16. tert-부틸 (1S,6R)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (화합물 408) 및 tert-부틸 (1R,6S)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (화합물 409)의 합성
단계 1. tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (170 mg, 0.87 mmol, 화합물 192, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 DIEA (0.14 mL, 0.87 mmol) 및 tert-부틸 2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 0.72 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 0.40 mmol)의 용액에 TBAF (1.5 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (90 mg, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 356 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
DMF (6 mL) 중 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (90 mg, 0.25 mmol)의 용액에 CuI (24 mg, 0.13 mmol), K3PO4 (160 mg, 0.75 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (9.0 mg, 0.080 mmol) 및 2-브로모이소니코티노니트릴 (93 mg, 0.51 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트), 정제용 HPLC (길슨, C18, 물 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (60 mg, 53%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (1S,6R)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 및 tert-부틸 (1R,6S)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
정제용 분리 방법: 기기: 워터스 타르 80 정제용 SFC; 칼럼: 키랄셀 OJ, 250 x 21.2mm I.D., 5 μm; 이동상: CO2의 경우 A 및 MEOH+0.1%NH3H2O의 경우 B; 구배: B 40%; 유량: 50mL /분; 배압: 100 bar; 칼럼 온도: 35℃; 파장: 254 nm; 사이클-시간: 7분; 용리 시간: 1.5H
tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (60 mg)를 SFC에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다:
피크 1: 보다 짧은 체류 시간, 백색 고체로서의 22 mg. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.60 - 8.57 (m, 1H), 8.46 - 8.39 (m, 1H), 7.85 - 7.81 (m, 1H), 7.36 - 7.32 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.67 - 3.39 (m, 3H), 3.10 - 2.98 (m, 1H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.22 - 1.12 (m, 1H), 1.00 - 0.74 (m, 4H), 0.50 - 0.44 (m, 1H).
피크 2: 보다 긴 체류 시간, 백색 고체로서의 24 mg. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 - 9.29 (m, 1H), 8.59 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.45 - 8.40 (m, 1H), 7.85 - 7.81 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 1H), 3.67 - 3.60 (m, 0.5H), 3.56 - 3.46 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 1.5H), 3.10 - 2.98 (m, 1H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.21 - 1.13 (m, 1H), 0.99 - 0.90 (m, 2H), 0.82 - 0.68 (m, 2H), 0.50 - 0.44 (m, 1H).
실시예 17. 에틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1003)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
디옥산-H2O (100 mL, v/v=5/1) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 23 mmol, 화합물 192, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (3.3 g, 23 mmol), K3PO4 (9.8 g, 46 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (1.7 g, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (7.0 g, 75% 수율)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 402 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
THF (5 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 2.50 mmol)의 0℃ 용액에 TBAF (7.5 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (530 mg, 85%)을 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 248 (M+H)+.
단계 3. 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
톨루엔 (20 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (530 mg, 2.1 mmol)의 용액에 3-아이오도-5-메톡시피리딘 (600 mg, 2.6 mmol), CuI (81 mg, 0.40 mmol), 1,10-페난트롤린 (77 mg, 0.40 mmol) 및 Cs2CO3 (2.1 g, 6.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 110℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (400 mg, 53%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 355 (M+H)+.
단계 4. 에틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (10 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.30 mmol)의 용액에 에틸 피페라진-1-카르복실레이트 (63 mg, 0.30 mmol) 및 DIPEA (110 mg, 0.90 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 37%)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 22.8 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 477 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.34 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.94 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 4.00 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.24 - 3.20 (m, 4H), 3.16 - 3.09 (m, 4H), 1.15 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 1003의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 18. tert-부틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 151)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
아세톤 (2 L) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 g, 0.71 mol) 및 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (180 g, 0.93 mol)의 0℃ 용액에 2.0M NaOH (0.53 L)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 추가로 3시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 2회 세척하고, 진공하에 건조시켜, 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 g, 95%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (20 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.6 g, 11 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (2.2 g, 12 mmol) 및 DIPEA (2.8 mL, 16 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (5.5 g, 89%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 584 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.51 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.30 mL, 2.0 mmol), TEA (0.35 mL, 2.5 mmol), X-Phos (25 mg, 0.052 mmol) 및 Pd2(dba)3 (47 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 99%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 584 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.51 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.96 mL, 1.0 mmol), K2CO3 (360 mg, 2.5 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (38 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 65%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 535 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.33 mmol)의 용액에 TBAF (2.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 93%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 381 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.31 mmol)의 용액에 2-클로로-1-플루오로-4-아이오도벤젠 (0.048 mL, 0.37 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (11 mg, 0.095 mmol), CuI (18 mg, 0.095 mmol) 및 K3PO4 (200 mg, 0.94 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 509 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 6.4, 2.6 Hz, 1H), 7.79 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 3.35 (d, J = 17.5 Hz, 8H), 1.44 (s, 9H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 아릴 할라이드로부터 화합물 151의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 19. 에틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 152)의 합성
단계 1. 7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol, 화합물 151의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (3.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. 7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘. LC/MS ESI (m/z): 409 (M+H)+.
단계 2. 에틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DCM (3 mL) 중 7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (80 mg, 0.19 mmol)의 0℃ 용액에 에틸 카르보노클로리데이트 (0.040 mL, 0.39 mmol) 및 TEA (0.080 mL, 0.58 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (28 mg, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 481 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.72 - 8.66 (m, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 6.4, 2.6 Hz, 1H), 7.79 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 3H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 4.12 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.38 (s, 8H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 20. tert-부틸 4-(7-(5-클로로피리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 164)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.8 g, 13 mmol, 화합물 151, 단계 1의 절차에 따라 제조됨) 톨루엔 (50 mL)의 용액에 시클로프로필보론산 (1.1 g, 13 mmol), K2CO3 (24 g, 170 mmol) 및 Pd-118 (880 mg, 1.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.6 g, 77% 수율)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 348 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (500 mg, 1.4 mmol) 및 tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1200 mg, 5.7 mmol)의 혼합물을 150℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 61%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 0.88 mmol)의 용액에 TBAF (5.3 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 4-(7-(5-클로로피리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.33 mmol)의 용액에 3-브로모-5-클로로피리딘 (78 mg, 0.40 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (12 mg, 0.10 mmol), CuI (19 mg, 0.10 mmol) 및 K3PO4 (210 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(5-클로로피리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (53 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 469 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.81 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.26 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.19 - 3.79 (m, 3H), 3.56 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.37 - 3.03 (m, 2H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.25 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.04 (dd, J = 8.1, 1.7 Hz, 2H), 0.85 - 0.77 (m, 1H), 0.76 - 0.67 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 아릴 할라이드로부터 화합물 164의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 21. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-플루오로피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 267)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol, 화합물 259 합성의 단계 1의 절차에 따라 제조됨)의 용액을 TBAF (6.7 mL, THF 중 1.0M)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~70%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.55 g, 74%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 444 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (550 mg, 1.2 mmol)의 용액에 (3-클로로페닐)보론산 (390 mg, 2.4 mmol), Cu(OAc)2 (670 mg, 3.7 mmol), 피리딘 (0.60 mL, 7.4 mmol) 및 4A 분자체 (400 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 빙수조에서 냉각시킨 후, 반응물을 수성 NH4OH (2 mL)로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 35%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 0.43 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.25 mL, 1.7 mmol), TEA (0.30 mL, 2.1 mmol), X-Phos (21 mg, 0.043 mmol) 및 Pd2(dba)3 (40 mg, 0.043 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-플루오로피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.21 mmol)의 용액에 2-브로모-3-플루오로피라진 (77 mg, 0.43 mmol), K2CO3 (150 mg, 1.0 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (16 mg, 0.022 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(3-플루오로피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (59 mg, 51%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 524 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (dd, J = 3.9, 2.6 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.21 - 8.14 (m, 1H), 7.77 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.38 (m, 1H), 4.62 - 4.24 (m, 1H), 3.88 - 3.72 (m, 1H), 3.67 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.60 - 3.39 (m, 1H), 3.18 - 2.64 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.13 (d, J = 13.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 267의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 22. tert-부틸 4-(3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 171)의 합성
단계 1. 4-클로로-3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
무수 DMF (30 mL) 중 NaH (400 mg, 10 mmol, 미네랄 오일 중 60 중량%)의 0℃ 현탁액에 4-클로로-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.4 g, 5.0 mmol, 화합물 418, 단계 1에 대한 절차에 따라 제조됨)을 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (1.1 g, 6.0 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.7 g, 80%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 433 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 4-클로로-3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (920 mg, 2.1 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (300 mg, 2.1 mmol), K2CO3 (880 mg, 6.3 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (160 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (680 mg, 79%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 401 (M+H)+.
단계 3. 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
THF (5 mL) 중 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (680 mg, 1.7 mmol)의 용액에 TBAF (10 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (410 mg, 97%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 247 (M+H)+.
단계 4. 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
DMF (15 mL) 중 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (410 mg, 1.6 mmol)의 용액에 5-아이오도피리미딘 (690 mg, 3.3 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (57 mg, 0.49 mmol), CuI (320 mg, 1.6 mmol) 및 K3PO4 (1.1 mg, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (70 mg, 13%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 325 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (70 mg, 0.21 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 1.0 mmol)를 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(3-(2-플루오로페닐)-1-(피리미딘-5-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 mg, 2.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.29 (s, 1H), 9.00 (s, 2H), 8.12 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.54 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 7.35 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 7.08 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 3.05 (s, 8H), 1.43 (s, 9H).
실시예 23. 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 172)의 합성
단계 1. 1-플루오로-2-메틸프로판-2-올
N2 하에 건조 THF (30 mL) 중 에틸 2-플루오로아세테이트 (10 g, 94 mmol)의 -60℃ 용액에 CH3MgBr (210 mL, THF 중 1.0 M, 210 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 동일한 온도에서 1시간 동안 유지한 다음, 0℃에서 4시간 동안 유지하였다. 이를 빙수 50 mL, 및 진한 HCl (18 mL) 및 고체 NaCl (10 g)을 순차적으로 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 밤새 건조시키고, 조 온도를 25℃ 미만으로 유지하면서 회전 증발에 의해 농축시켰다. 잔류물을 정상 압력 하에 증류에 의해 정제하여 1-플루오로-2-메틸프로판-2-올 (3.5 g, 40%)을 무색 액체 (bp ~ 92℃)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 47.7 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 2.6 Hz, 6H), 히드록실 기 양성자 교환됨.
단계 2. 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
N2 하에 건조 DCM (8 mL) 중 CDI (530 mg, 3.3 mmol)에 1-플루오로-2-메틸프로판-2-올 (300 mg, 3.3 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서 이를 DCM으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (290 mg, 47%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 187 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (10 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (580 mg, 2.3 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (520 mg, 2.8 mmol, 화합물 1003의 절차에 따라, 처음 2단계) 및 DIPEA (1.6 mL, 9.7 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc에 이어서 100% DCM)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (560 mg, 60%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 398 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.50 mmol) 및 3-아이오도피리딘 (410 mg, 2.0 mmol)에 (±)-트랜스-1,2-시클로헥산디아민 (57 mg, 0.50 mmol), 및 K3PO4 (320 mg, 1.5 mmol) 및 CuI (96 mg, 0.50 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 이어서 이를 EtOAc로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 LiCl (5% 수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc에 이어서 100% DCM)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, ~70% 순도, 48%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+.
단계 5. 5-(2-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 0.24 mmol)에 HCl/디옥산 (3.0 mL, 4.0 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 5-(2-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (130 mg, 99%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 375 (M+H)+.
단계 6. 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 5-(2-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (120 mg, 0.32 mmol), 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.97 mmol) 및 DIPEA (0.26 mL, 1.6 mmol)의 혼합물을 N2 하에 80℃에서 40시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, LiCl (5% 수성), 염수로 세척한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 조 생성물 80 mg를 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-플루오로-2-메틸프로판-2-일 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (38 mg, 24%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 493 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.97 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.22 (ddd, J = 8.2, 2.6, 1.5 Hz, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 3H), 7.37 (tdd, J = 7.1, 5.1, 1.8 Hz, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 2H), 4.45 (d, J = 47.5 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 29.6 Hz, 8H), 1.45 (d, J = 2.2 Hz, 6H).
하기 화합물을 단계 4에서 5-아이오도피리미딘을 사용한 것을 제외하고는 화합물 172에 대해 기재된 것과 유사한 합성 절차에 의해 제조하였다.
실시예 24. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 186)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (500 mg, 3.9 mmol)의 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)메타논 (630 mg, 3.9 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (640 mg, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 223 (M+H)+.
단계 2. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (2 mL) 중 화합물 134와 유사한 절차에 따라 제조한 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.21 mmol)의 용액에 HCl/디옥산 (0.50 mL, 4.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘. LC/MS ESI (m/z): 406 (M+H)+.
단계 3. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (30 mg, 0.074 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.089 mmol) 및 DIPEA (0.040 mL, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (14 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 560 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.79 (d, J = 0.5 Hz, 1H), 7.47 (td, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 4.27 - 4.03 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.39 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.32 - 3.16 (m, 2H), 3.03 - 2.82 (m, 1H), 1.71 - 1.59 (m, 6H), 1.14 - 1.06 (m, 3H), 1.01 - 0.91 (m, 3H).
하기 화합물을 상응하는 보론산 및 알콜로부터 화합물 186의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 25. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-메톡시페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 278)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (15 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 12 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 29 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 1.5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸 피페라진-1-카르복실레이트 (5.8 g, 84%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.97 mL, 6.6 mmol), TEA (1.2 mL, 8.3 mmol), X-Phos (0.080 g, 0.16 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.15 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 및 H2O (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.32 mL, 3.3 mmol), K2CO3 (1.2 g, 8.3 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.12 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.69 g, 75%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (690 mg, 1.3 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-메톡시페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.30 mmol)의 용액에 1-아이오도-3-메톡시벤젠 (0.054 mL, 0.45 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (10 mg, 0.091 mmol), CuI (58 mg, 0.30 mmol) 및 K3PO4 (190 mg, 0.91 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-메톡시페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 8.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 501 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.94 (td, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.51 - 7.42 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 7.0, 5.1 Hz, 1H), 7.05 - 6.92 (m, 1H), 4.18 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.77 - 3.64 (m, 2H), 3.07 - 2.60 (m, 4H), 1.36 (s, 9H), 0.91 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 278의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 26. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(1H-피라졸-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 322)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (15 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 13 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.4 g, 32 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.9 g, 83%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(1H-피라졸-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (6 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.36 mmol)의 용액에 1H-피라졸 (49 mg, 0.72 mmol), Cs2CO3 (470 mg, 1.4 mmol), Fe(acac)3 (38 mg, 0.10 mmol) 및 Cu(acac)2 (9.4 mg, 0.036 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(1H-피라졸-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.6 mg, 5.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.50 (s, 1H), 7.77 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.63 - 7.60 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 6.52 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 4.24 - 3.79 (m, 2H), 3.67 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.32 (m, 1H), 3.14 - 2.70 (m, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.09 (s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 322의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 27. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 367)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.97 mL, 6.6 mmol), X-Phos (0.080 g, 0.16 mmol), TEA (1.2 mL, 8.3 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.15 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 -2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 및 H2O (3 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.6 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.32 mL, 3.3 mmol), K2CO3 (1.2 g, 8.3 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.12 g, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.72 g, 78%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (720 mg, 1.3 mmol)의 용액에 TBAF (5.2 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (510 mg, 98%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (510 mg, 1.2 mmol)의 용액에 2-브로모이소니코티노니트릴 (470 mg, 2.5 mmol), CuI (250 mg, 1.2 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (150 mg, 1.2 mmol) 및 K3PO4 (820 mg, 3.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 93%)를 황색 고체로서 수득하였다. 생성물 100 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 14.8 mg를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.73 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.63 (dd, J = 5.0, 0.5 Hz, 1H), 8.59 - 8.53 (m, 2H), 7.85 - 7.79 (m, 1H), 7.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 1H), 4.24 - 4.19 (m, 1H), 3.84 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 3.58 - 3.53 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 13.2, 3.9 Hz, 1H), 2.89 - 2.83 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 28. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 400)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
H2O (2 mL) 및 CH3COOH (10 mL, 86 mmol) 및 디옥산 (10 mL) 중 포름알데히드 (0.58 g, 7.1 mmol)의 0℃ 용액에 피롤리딘 (0.58 mL, 7.1 mmol)에 이어서 디옥산 중 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 6.5 mmol)의 용액을 적가하였다. N2 하에 50℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 무수 황산나트륨에 첨가하여 건조시킨 다음, 여과하였다. 여과물을 실온에서 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.63 g, 40%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 237 (M+H)+.
단계 2. 3-(4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴
DCM (25 mL) 중 4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.53 g, 2.2 mmol)의 용액에 (3-시아노페닐)보론산 (0.66 g, 4.4 mmol), Cu(OAc)2 (1.2 g, 6.7 mmol), 피리딘 (1.1 mL, 13 mmol) 및 4A 분자체 (800 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 NH4OH (2 mL)로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 3-(4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (0.26 g, 34%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 338 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (1 mL) 중 3-(4-클로로-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (100 mg, 0.29 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물을 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (75 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 502 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.38 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.13 - 8.03 (m, 1H), 7.77 - 7.69 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.90 - 3.65 (m, 3H), 3.58 - 3.40 (m, 2H), 3.27 - 3.10 (m, 1H), 2.71 - 2.58 (m, 4H), 1.86 - 1.74 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 29. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 402)의 합성
단계 1. 5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서, DMF (15 mL) 중 4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 6.7 mmol)의 용액에 NBS (0.95 g, 5.3 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 여과하여 5-브로모-4-메톡시-7H -피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.45 g, 29%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 228, 230 (M+H)+.
단계 2. 5-브로모-4-메톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서, DMF (10 mg) 중 5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (450 mg, 1.9 mmol)의 용액에 NaH (95 mg, 2.3 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 이어서 상기 혼합물에 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (430 mg, 2.2 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, N2 하에 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하였다. 이어서 반응 혼합물을 여과하여 5-브로모-4-메톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (690 mg, 91%)을 회색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 382,384 (M+H)+.
단계 3. 4-메톡시-5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 5-브로모-4-메톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (690 mg, 1.8 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (0.51 mL, 2.7 mmol), K2CO3 (1000 mg, 7.2 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (130 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-메톡시-5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (460 mg, 74%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 344 (M+H)+.
단계 4. 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (10 mL) 중 Et2Zn (13 mL)의 용액에 0℃에서 DCM (2 mL) 중 TFA (0.50 mL, 6.6 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서 상기 혼합물에 DCM (2 mL) 중 CH2I2 (0.56 mL, 6.6 mmol)의 용액을 적가하였다. 20분 동안 교반한 후, DCM (5 mL) 중 4-메톡시-5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (460 mg, 1.3 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NH4Cl (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (350 mg, 73%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 5. 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
THF (3 mL) 중 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (350 mg, 0.98 mmol)의 용액에 TBAF (3.9 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 20%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 204 (M+H)+.
단계 6. 3-(4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 벤조니트릴
DMF (5 mL) 중 4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 0.19 mmol)의 용액에 3-아이오도벤조니트릴 (180 mg, 0.78 mmol), CuI (37 mg, 0.19 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (45 mg, 0.39 mmol) 및 K3PO4 (130 mg, 0.59 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-(4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 벤조니트릴 (55 mg, 91%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 305 (M+H)+.
단계 7. 3-(4-히드록시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 벤조니트릴
DMF (2 mL) 중 3-(4-메톡시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (55 mg, 0.18 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 (310 mg, 1.8 mmol) 및 LiCl (77 mg, 1.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 3-(4-히드록시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 벤조니트릴 (50 mg, 95%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 291 (M+H)+.
단계 8. 3-(4-클로로-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 벤조니트릴
3-(4-히드록시-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (50 mg, 0.17 mmol) 및 POCl3 (5 mL)의 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 3-(4-클로로-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (50 mg, 94%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 309 (M+H)+.
단계 9. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (1 mL) 중 3-(4-클로로-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (50 mg, 0.16 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (320 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 6시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였다. 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.3 mg, 5.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 473 (M+H)+.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.38 - 8.30 (m, 1H), 8.27 - 8.18 (m, 1H), 8.08 - 8.01 (m, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 4.97 - 4.86 (m, 1H), 4.07 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 1H), 3.86 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.61 - 3.36 (m, 2H), 3.25 - 3.05 (m, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.50 (d, J = 5.9 Hz, 9H), 1.34 - 1.28 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.95 - 0.88 (m, 1H), 0.83 - 0.71 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 402의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 30. 에틸 4-(5-시클로프로필-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1004)의 합성
단계 1. 에틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (400 mg, 1.2 mmol) 및 에틸 피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 1.4 mmol)의 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (360 mg, 67%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 470 (M+H)+.
단계 2. 에틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 에틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (360 mg, 0.77 mmol)의 용액에 TBAF (5.3 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 83%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 316 (M+H)+.
단계 3. 에틸 4-(5-시클로프로필-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (15 mL) 중 에틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.32 mmol)의 용액에 3-아이오도-5-메톡시피리딘 (82 mg, 0.35 mmol), 1,10-페난트롤린 (57 mg, 0.32 mmol), CuI (60 mg, 0.32 mmol) 및 Cs2CO3 (310 mg, 0.95 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 4-(5-시클로프로필-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (31 mg, 23%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 423 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 4.09 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.66 - 3.62 (m, 4H), 3.62 - 3.57 (m, 4H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.03 - 0.97 (m, 2H), 0.88 - 0.83 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아민을 사용하여 화합물 1004의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 31. 에틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 112)의 합성
단계 1 (S)-7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.1 mmol, 화합물 114의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (3.0 mL, 디옥산 중 4.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (350 mg, 89% 수율). LC/MS ESI (m/z): 368 (M+H)+.
단계 2 에틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 (S)-7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (90 mg, 0.25 mmol)의 용액에 TEA (76 mg, 0.75 mmol)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (54 mg, 0.50 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (34 mg, 31% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 440 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 (s, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 7.48 - 7.44 (m, 2H), 6.90 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.24 - 4.17 (m, 2H), 4.16 - 4.01 (m, 1H), 4.00 - 3.81 (m, 2H), 3.65 - 3.51 (m, 1H), 3.44 - 3.30 (m, 1H), 3.28 - 3.13 (m, 1H), 2.04 (td, J = 8.0, 4.1 Hz, 1H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.04 - 0.99 (m, 2H), 0.83 - 0.77 (m, 1H), 0.74 - 0.68 (m, 1H).
실시예 32. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 114)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (50 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.3 g, 4.7 mmol)의 용액에 (4-클로로페닐)보론산 (1.5 g, 9.3 mmol), Cu(OAc)2 (2.1 g, 12 mmol) 및 피리딘 (2.2 mL, 28 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. NH3.H2O (30 mL)를 첨가하고, 반응물을 여과하였다. 여과물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (810 mg, 45%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 390 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 4-클로로-7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (800 mg, 2.1 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (820 mg, 4.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 79%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 1.6 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (280 mg, 0.16 mmol), K2CO3 (2.9 g, 21 mmol) 및 Pd-118 (100 mg, 1.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (580 mg, 76% 수율)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 468 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 (s, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 7.48 - 7.44 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 4.78 - 4.69 (m, 1H), 4.15 - 3.80 (m, 3H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.40 - 3.27 (m, 1H), 3.22 - 3.05 (m, 1H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.04 - 0.99 (m, 2H), 0.82 - 0.76 (m, 1H), 0.73 - 0.67 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 보론산 및 아민을 사용하여 화합물 114의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 33. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 119)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (20 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 7.7 mmol, 화합물 274에 대해 기재된 절차의 단계 1에 따라 제조됨), tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.1 g, 15 mmol)의 혼합물을 150℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g, 6.2 mmol, 81%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (60 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g, 6.2 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (3.6 mL, 25 mmol), Pd2(dba)3 (0.60 g, 0.62 mmol), X-Phos (0.60 g, 1.3 mmol) 및 TEA (4.3 mL, 31 mmol)의 혼합물을 95℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.8 mmol), 2-브로모피리딘 (0.35 mL, 3.6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (130 mg, 0.18 mmol) 및 K2CO3 (1.3 g, 9.0 mmol)의 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 505 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.82 - 7.76 (m, 2H), 7.69 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 4.40 - 4.16 (m, 1H), 4.03 - 3.76 (m, 1H), 3.58 (t, J = 15.4 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 3.06 - 2.71 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.04 (br. s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 119의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 34. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 121)의 합성
단계 1. (S)-7-(3-클로로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.40 mmol, 화합물 119에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TFA (5.0 mL, 67 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (수성)을 사용하여 pH 8로 염기성화시킨 다음, DCM (100 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 (S)-7-(3-클로로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (170 mg, 94%)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 405 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 (S)-7-(3-클로로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (170 mg, 0.41 mmol), 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.50 mmol) 및 DIEA (0.20 mL, 1.2 mmol)의 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (54 mg, 24%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 559 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.70 - 8.68 (m, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.01 (td, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.96 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.78 - 7.73 (m, 2H), 7.58 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 2H), 4.26 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 44.3, 12.4 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 32.0, 12.9 Hz, 2H), 3.17 (td, J = 13.1, 3.2 Hz, 1H), 3.07 - 2.81 (m, 2H), 1.67 (s, 6H), 1.02 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 35. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로-5-플루오로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 123)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 0.87 mmol, 화합물 164에 대해 기재된 절차의 단계 2에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 1.7 mmol) 및 DIPEA (670 mg, 5.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.60 mmol)의 용액에 TBAF (3.6 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (190 mg, 88%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로-5-플루오로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페리딘-4-카르복실레이트 (80 mg, 0.23 mmol)의 용액에 1-클로로-3-플루오로-5-아이오도벤젠 (120 mg, 0.46 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (7.9 mg, 0.070 mmol), CuI (13 mg, 0.070 mmol) 및 K3PO4 (150 mg, 0.69 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로-5-플루오로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (61 mg, 56%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.34 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 4.51 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.13 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.49 - 3.36 (m, 2H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.10 - 1.04 (m, 2H), 1.02 - 0.96 (m, 1H), 0.76 - 0.69 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 123의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 36. 에틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 126)의 합성
단계 1. (S)-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol, 화합물 1004에 대해 기재된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (4.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 유기 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 63%). LC/MS ESI (m/z): 419 (M+H)+.
단계 2. 에틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 (S)-5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액에 TEA (0.30 mL, 0.30 mmol)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (0.020 mL, 0.20 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(5-메톡시피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (31 mg, 63%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.33 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.94 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 7.56 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.45 (m, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 2H), 4.19 - 4.14 (m, 1H), 4.04 - 3.98 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.50 - 3.41 (m, 3H), 3.03 - 2.96 (m, 1H), 2.74 - 2.68 (m, 1H), 1.14 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 37. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 140)의 합성
단계 1. 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (1.0 g, 0.78 mmol)의 용액에 CDI (1.4 g, 0.86 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (1.1 g, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 223 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 (S)-7-(4-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (70 mg, 0.19 mmol, 화합물 461에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (84 mg, 0.38 mmol) 및 DIPEA (74 mg, 0.57 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (29 mg, 29% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.45 (s, 1H), 7.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.42 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.79 - 4.71 (m, 1H), 4.15 - 3.79 (m, 3H), 3.57 (t, J = 12.6 Hz, 1H), 3.43 - 3.32 (m, 1H), 3.30 - 3.11 (m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 1.73 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.05 - 0.99 (m, 2H), 0.84 - 0.77 (m, 1H), 0.75 - 0.68 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 140의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 38. 에틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 153)의 합성
단계 1. (S)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol, 화합물 259에 대해 기재된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (4.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 63%). LC/MS ESI (m/z): 349 (M+H)+.
단계 2. 에틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 (S)-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액에 TEA (0.30 mL, 0.30 mmol)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (0.020 mL, 0.20 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (31 mg, 63%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 421 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.74 - 4.67 (m, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 2H), 4.03 - 3.91 (m, 2H), 3.81 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.50 - 3.39 (m, 2H), 3.18 - 3.11 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.01 - 0.96 (m, 2H), 0.90 - 0.86 (m, 1H), 0.81 - 0.77 (m, 1H).
실시예 39. 에틸 (S)-4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 155)의 합성
단계 1. (S)-7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.77 mmol, 화합물 154에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (3.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하였다. 유기 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (280 mg). LC/MS ESI (m/z): 423 (M+H)+.
단계 2. 에틸 (S)-4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 (S)-7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (97 mg, 0.23 mmol)의 용액에 TEA (70 mg, 0.69 mmol)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (75 mg, 0.69 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(7-(3-클로로-4-플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (41 mg, 36%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 6.4, 2.6 Hz, 1H), 7.79 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.63 (m, 2H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 1H), 4.39 - 4.23 (m, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.62 (dd, J = 26.8, 12.6 Hz, 2H), 3.22 - 3.13 (m, 1H), 3.09 - 2.79 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 Boc-보호된 아민으로부터 화합물 155의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 40. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로펜틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 157)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
디옥산-H2O (15 mL, 5:1 v/v) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 2.6 mmol, 화합물 274에 대해 기재된 절차의 단계 1에 따라 제조됨)의 용액에 2-(시클로펜트-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (450 mg, 2.3 mmol), K2CO3 (1.1 g, 7.8 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (190 mg, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 300 mg (36% 수율)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 330 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (0.5 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.30 mmol) 및 tert-부틸 (R)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.60 mmol)의 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, DIPEA를 진공에 의해 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로펜틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOAc (8 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로펜트-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.22 mmol), PtO2 (51 mg)의 혼합물을 H2 분위기 (~1 atm) 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과물을 농축하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로펜틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (38 mg, 35% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 496. (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (s, 1H), 7.72 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.68 - 7.63 (m, 1H), 7.44 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.65 (s, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.33 - 3.19 (m, 2H), 2.28 (s, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.90 - 1.63 (m, 6H), 1.50 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 157의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 41. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 169)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 무수 DMF (60 mL) 중 NaH (1.0 g, 27 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 18 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후, TosCl (3.4 g, 18 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 첨가한 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, 여과하였다. 고체를 수집하고, 진공 하에 추가로 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (6.0 g, 77%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5.0 mL, 28 mmol) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.0 g, 9.2 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 9.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 150℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 43%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.30 mmol)의 용액에 페닐보론산 (60 mg, 0.60 mmol), K2CO3 (100 mg, 0.75 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (18 mg, 0.010 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 72%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 562 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol)의 용액에 TBAF (5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 69%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 408 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.12 mmol)의 용액에 3-아이오도피리딘 (50 mg, 0.24 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (15 mg, 0.12 mmol), CuI (25 mg, 0.12 mmol) 및 K3PO4 (280 mg, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-페닐-7-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 85%)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 29 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 485 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.09 (s, 1H), 8.58 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.33 (ddd, J = 8.3, 2.5, 1.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 8.3, 4.8 Hz, 1H), 7.61 - 7.58 (m, 2H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.10 (m, 2H), 3.47 - 3.42 (m, 1H), 3.29 - 3.21 (m, 2H), 2.97 - 2.80 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 42. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 174) 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 175)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (10 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (350 mg, 1.0 mmol, 화합물 164에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨), tert-부틸 2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 1.2 mmol) 및 DIEA (0.50 mL, 3.0 mmol)의 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (390 mg, 0.76 mmol, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z):512 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (390 mg, 0.76 mmol)의 용액에 TBAF (4.6 mL, THF 중 1.0M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL x2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.62 mmol, 81%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (20 mL) 중 tert-부틸 4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.62 mmol), 3-브로모-5-메틸피리딘 (210 mg, 1.2 mmol), 아이오딘화구리 (I) (35 mg, 0.18 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (21 mg, 0.18 mmol) 및 K3PO4 (391 mg, 1.8 mmol)의 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.27 mmol, 44%)를 수득하였으며, 이를 SFC에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다:
피크 1 (보다 짧은 체류 시간): 담황색 고체로서의 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (39 mg)로서 할당됨. LC/MS ESI (m/z): 449 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.44 - 8.40 (m, 2H), 7.93 (s, 1H), 6.95 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.53 - 4.47 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.11 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.44 - 3.32 (m, 2H), 3.09 (td, J = 12.4, 3.4 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.08 - 2.01 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.03 (dd, J = 8.3, 3.9 Hz, 2H), 0.91 - 0.86 (m, 1H), 0.70 - 0.65 (m, 1H).
피크 2 (보다 긴 체류 시간): 담황색 고체로서의 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(5-메틸피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (44 mg)로서 할당됨. LC/MS ESI (m/z): 449 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.93 (s, 1H), 6.95 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.11 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.44 - 3.31 (m, 2H), 3.09 (td, J = 12.4, 3.4 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.07 - 1.02 (m, 2H), 0.91 - 0.86 (m, 1H), 0.70 - 0.65 (m, 1H).
SFC 정제용 분리 방법: 기기: 워터스 타르(Waters Thar) 80 정제용 SFC; 칼럼: 키랄팩 IC, 250x21.2 mm I.D, 5 μm; 이동상: CO2의 경우 A 및 MeOH+0.1% NH3·H2O의 경우 B; 구배: B 40%; 유량: 50 mL /분; 배압: 100 bar; 칼럼 온도: 35℃; 파장: 220 nm; 사이클-시간: 5.0분; 용리 시간: 4시간.
실시예 43. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-3-메틸-4-(7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 183)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (5.0 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (200 mg, 1.6 mmol)의 용액에 실온에서 1-(1H-이미다졸-1-카르보닐)-1H-이미다졸 (250 mg, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 223 (M+H)+
단계 2. (S)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-3-메틸-4-[7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.25 mmol, 화합물 268에 대해 기재된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 포화 Na2CO3 용액의 첨가에 의해 중화시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 374 (M+H)+
단계 3. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-3-메틸-4-(7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 (2S)-2-메틸-1-[7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진 (50 mg, 0.13 mmol), 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일-1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (49 mg, 0.22 mmol) 및 DIEA (0.050 mL, 0.33 mmol)의 용액을 80℃에서 2일 동안 교반한 다음, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 물 및 EtOAc 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 EtOAc, 1:100에서 1:5 v/v) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-3-메틸-4-(7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (5.3 mg, 7.5%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.40 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 3H), 7.48 (dd, J = 14.1, 6.2 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 6.5, 4.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.86 - 3.68 (m, 1H), 3.56 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 23.2, 14.2 Hz, 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 2.85 (dd, J = 48.9, 12.1 Hz, 2H), 1.64 (s, 6H), 0.91 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 44. tert-부틸 4-(1-(3-클로로페닐)-3-(피리딘-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 187)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(1-(3-클로로페닐)-3-(피리딘-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 4-(3-브로모-1-(3-클로로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.12 mmol, 화합물 418 합성의 처음 2단계의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-(트리부틸스탄닐)피리딘 (0.050 mL, 0.14 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (14 mg, 0.012 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 KF (수성)로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(1-(3-클로로페닐)-3-(피리딘-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (8.4 mg, 14%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 504 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.63 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.97 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.78 - 7.75 (m, 1H), 7.69 - 7.67 (m, 1H), 7.64 - 7.55 (m, 2H), 7.51 (dt, J = 7.5, 1.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.26 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.56 - 3.42 (m, 2H), 3.24 - 3.07 (m, 4H), 2.88 - 2.73 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.84 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 주석 시약을 사용하여 화합물 187의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 45. 에틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 189)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
톨루엔 (20 ml) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (500 mg, 1.3 mmol, 화합물 274에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨), 시클로프로필보론산 (110 mg, 1.3 mmol), Pd(dtbpf)Cl2 (170 mg, 0.26 mmol) 및 K2CO3 (3.6 g, 26 mmol)의 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 77%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 304 (M+H)+.
단계 2. 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMSO (20 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 1.0 mmol) 및 TBAF (2.0 ml, THF 중 1.0M)의 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (120 mg, 42%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 288 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (10 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.35 mmol), tert-부틸 (3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.70 mmol) 및 DIEA (0.17 mL, 1.1 mmol)의 혼합물을 150℃에서 12시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 35%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 482 (M+H)+.
단계 4. 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.13 mmol)의 용액에 HCl (3.0 mL, 디옥산 중 4.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (48 mg, 100%)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 382 (M+H)+.
단계 5. 에틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (10 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 0.11 mmol) 및 DIEA (0.050 mL, 0.31 mmol)의 혼합물에 에틸 카르보노클로리데이트 (14 mg, 0.13 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM (50 ml x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (3S,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 0.033 mmol, 32%) 1006을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 454 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.49 (s, 1H), 7.88 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.50 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.39 - 7.35 (m, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.23 - 4.11 (m, 4H), 3.82 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 1.30 (t, J = 5.4 Hz, 6H), 1.06 (d, J = 6.3 Hz, 5H), 0.96 - 0.85 (m, 1H), 0.64 - 0.56 (m, 1H).
실시예 46. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 193)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (600 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 36 mmol)의 용액에 (3-클로로페닐)보론산 (11 g, 72 mmol), Cu(OAc)2 (16 g, 110 mmol), 피리딘 (18 mL, 110 mmol) 및 4A 분자체 (10 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 3일 동안 교반하였다. 빙수조로 냉각시킨 후, 반응물을 NH4OH (수용액, 50 mL)로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (11 g, 79%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 390 (M+H)+.
단계 2. 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
MeOH (40 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.0 g, 10 mmol)의 용액에 MeONa (8.0 mL, MeOH 중 4.5M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 79%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 386 (M+H)+.
단계 3. 7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMSO (20 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.3 g, 6 mmol)의 용액에 CuI (230 mg, 1.2 mmol), K2CO3 (2.5 g, 18 mmol), L-프롤린 (280 mg, 2.4 mmol) 및 피롤리딘 (850 mg, 12 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.2 g, 61%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 329 (M+H)+.
단계 4. 7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올
DCM (10 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.50 g, 1.5 mmol)의 용액을 0℃에서 BBr3 (3.0 mL)로 적가 처리하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (0.40 g, 84%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 315 (M+H)+.
단계 5. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
POCl3 (4 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (0.40 g, 1.2 mmol)의 용액을 120℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중에 재용해시키고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.20 g, 48%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 333 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.60 mmol)의 용액에 DIPEA (230 mg, 1.8 mmol) 및 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 12%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.22 (s, 1H), 7.85 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.63 (m, 1H), 7.49 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.84 - 4.78 (m, 2H), 4.50 - 4.45 (m, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 1H), 3.28 - 3.25 (m, 2H), 3.00 (td, J = 12.5, 3.6 Hz, 1H), 2.89 - 2.84 (m, 2H), 2.03 - 1.98 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 보론산 및 아민을 사용하여 화합물 193의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 최종 단계에서 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 또는 tert-부틸 (R)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 포함하는 경우에, 5 당량의 아민을 사용하고, 반응을 140℃에서 실행하였다.
실시예 47. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 211)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (100 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (12 g, 28 mmol, 화합물 192에 대해 기재된 절차의 단계 1에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (R)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 g, 55 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 g, 66%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g, 5.9 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (1.0 g, 12 mmol), K2CO3 (11 g, 77 mmol) 및 Pd-118 (390 mg, 0.59 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 63%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (30 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 3.7 mmol)의 용액에 TBAF (22 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 83%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (130 mg, 0.56 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (9.7 mg, 0.084 mmol), CuI (27 mg, 0.15 mmol) 및 K3PO4 (180 mg, 0.84 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (44 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 470 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.33 (s, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 2H), 7.29 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 6.97 - 6.89 (m, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.06 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 3.59 - 3.34 (m, 2H), 3.24 - 3.07 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 - 1.01 (m, 2H), 0.91 - 0.86 (m, 1H), 0.80 - 0.72 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 211의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 48. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 215)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.83 mmol, 화합물 192 합성의 처음 2단계의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.48 mL, 3.3 mmol), TEA (0.58 mL, 4.1 mmol), X-Phos (40 mg, 0.084 mmol) 및 Pd2(dba)3 (77 mg, 0.084 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 갈색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.83 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.16 mL, 1.6 mmol), K2CO3 (580 mg, 4.1 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (61 mg, 0.084 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 89%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 0.74 mmol)의 용액에 TBAF (4.5 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 81%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.35 mmol)의 용액에 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (100 mg, 0.42 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (12 mg, 0.11 mmol), CuI (20 mg, 0.11 mmol) 및 K3PO4 (230 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 61%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 507 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.72 - 8.67 (m, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.79 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 2H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 6.82 (tt, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 1H), 3.90 - 3.74 (m, 2H), 3.62 - 3.46 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 13.3, 3.9 Hz, 1H), 2.94 - 2.72 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 단계 2 및 4에서 상응하는 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 215의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 49. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 232)의 합성
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.26 mmol, 화합물 242에 대해 기재된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로프로필보론산 (45 mg, 0.52 mmol), 1,1'-비스(디-t-부틸포스피노)페로센 팔라듐 디클로라이드 (17 mg, 0.030 mmol) 및 K2CO3 (730 mg, 5.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 71%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 484 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (s, 1H), 7.36 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.76 (tt, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 3.77 (m, 3H), 3.58 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.17 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.06 - 1.01 (m, 2H), 0.89 - 0.82 (m, 1H), 0.66 (dd, J = 8.7, 4.3 Hz, 1H).
실시예 50. tert-부틸-(S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 235)의 합성
단계 1. tert-부틸-(S)-3-메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸-(3S)-4-[5-아이오도-7-(4-메틸벤젠술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 3.0 mmol, 화합물 268에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨), 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.3 mL, 9.0 mmol), Et3N (1.6 mL, 12 mmol), X-Phos (0.43 g, 0.90 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.83 g, 0.90 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 95℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 물 및 EtOAc 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 598 (M+H)+
단계 2. tert-부틸-(S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산-물 (12 mL, 5:1 v/v) 중 tert-부틸-(3S)-3-메틸-4-[7-(4-메틸벤젠술포닐)-5-(테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.84 mmol), 2-브로모피리딘 (130 mg, 0.84 mmol), K2CO3 (290 mg, 2.1 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (61 mg, 0.080 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-(3S)-3-메틸-4-[7-(4-메틸벤젠술포닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 44%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 549 (M+H)+
단계 3. tert-부틸-(S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸-(3S)-3-메틸-4-[7-(4-메틸벤젠술포닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.36 mmol)의 용액에 1.0M TBAF (1.1 mL, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-(S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 83%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 395 (M+H)+
단계 4. tert-부틸-(S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5.0 mL) 중 tert-부틸-(S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.20 mmol), 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (49 mg, 0.20 mmol), K3PO4 (110 mg, 0.51 mmol), CuI (12 mg, 0.060 mmol) 및 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (7.0 mg, 0.060 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸-(S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 507 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (dd, J = 4.8, 0.7 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.79 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 2H), 7.29 - 7.25 (m, 1H), 6.82 (tt, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 4.41 - 4.18 (m, 1H), 3.96 - 3.77 (m, 1H), 3.57 (m, 2H), 3.15 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 3.06 - 2.61 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.04 (s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 235의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 51. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로-5-플루오로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 236)의 합성
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (67 mg, 0.18 mmol, 화합물 259에 대해 기재된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1-브로모-3-클로로-5-플루오로벤젠 (76 mg, 0.36 mmol), CuI (34 mg, 0.18 mmol), K3PO4 (38 mg, 0.18 mmol) 및 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (21 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로-5-플루오로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (57 mg, 63%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.56 - 7.40 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.76 (m, 3H), 3.56 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.15 (app. t, J = 6.4 Hz, 6H), 1.01 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 0.84 (m, 1H), 0.69 - 0.56 (m, 1H).
실시예 52. tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 239)의 합성
단계 1. 4-클로로-1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘
0℃에서 무수 DMF (10 mL) 중 NaH (780 mg, 19 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (2.0 g, 13 mmol)을 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (3.7 g, 19 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (1.4 g, 35%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 309 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (540 mg, 1.8 mmol)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (420 mg, 2.1 mmol) 및 TEA (530 mg, 5.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 H2O와 EtOAc 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 42%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 473 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1-토실-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 0.74 mmol)의 용액에 TBAF (2.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 99%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 319 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.69 mmol)의 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (140 mg, 0.76 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 397,399 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (15 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.50 mmol)의 용액에 (3,5-디플루오로페닐)보론산 (160 mg, 1.0 mmol), 4A 분자체 (200 mg), Cu(OAc)2 (370 mg, 2.0 mmol) 및 피리딘 (240 mg, 3.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃ (빙수조)에서 NH4OH (10 mL)로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 70%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 509, 511(M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.34 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (91 mg, 1.1 mmol), K2CO3 (980 mg, 7.1 mmol) 및 Pd-118 (23 mg, 0.040 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물 (80 mg)을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 mg, 22%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 471 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.42 (s, 1H), 8.03 - 7.94 (m, 2H), 6.86 (tt, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.37 (m, 2H), 3.97 (m, 1H), 3.60 (dd, J = 13.2, 3.8 Hz, 1H), 3.46 - 3.35 (m, 2H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.45 - 1.39 (m, 1H), 1.19 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.08 (ddd, J = 12.2, 5.1, 2.8 Hz, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 보론산을 사용하여 화합물 239의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 53. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 242) 및 에틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1005)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.8 g, 4.6 mmol, 화합물 193에 대해 기재된 절차의 단계 1에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 5.5 mmol) 및 DIEA (1.7 g, 14 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 H2O와 EtOAc 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.6 g, 62%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 556 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
1,4-디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.6 g, 2.9 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.5 g, 12 mmol), X-Phos (140 mg, 0.29 mmol), Pd2(dba)3 (260 mg, 0.29 mmol) 및 TEA (1.5 g, 14 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 용매를 진공 하에 제거하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 556 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 2.7 mmol)의 용액에 2-브로모-3-메틸피라진 (1000 mg, 5.8 mmol), K2CO3 (2.0 g, 15 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (210 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g)를 수득하였으며, 이 중 100 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 50 mg 백색 고체를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.59 (dd, J = 7.3, 2.6 Hz, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 2H), 7.09 - 6.99 (m, 1H), 4.16 (s, 1H), 3.69 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.57 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 1H), 2.98 (dd, J = 13.3, 4.2 Hz, 1H), 2.80 - 2.70 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.50 (s, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 4. (R)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 ml) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.9 mmol)의 용액에 HCl (5.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (R)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘. LC/MS ESI (m/z): 422 (M+H)+.
단계 5. 에틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 (R)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.24 mmol)의 용액에 TEA (72 mg, 0.71 mmol) 및 에틸 카르보노클로리데이트 (39 mg, 0.36 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 26%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.58 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 2H), 7.04 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.07 (m, 2H), 3.71 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.53 (m, 2H), 3.00 (dd, J = 13.2, 4.1 Hz, 1H), 2.76 (td, J = 12.2, 3.3 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.51 (s, 1H), 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.04 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 클로로포르메이트 및/또는 아릴 할라이드로부터 화합물 1005의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 54. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 243)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (500 mg, 3.9 mmol)의 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)메타논 (630 mg, 3.9 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 223 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 (R)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 mg, 0.12 mmol, 화합물 1005에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.18 mmol) 및 DIPEA (0.04 mL, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 576 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.59 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 2H), 7.08 - 7.01 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.70 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.57 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 1H), 3.03 (dd, J = 13.2, 4.0 Hz, 1H), 2.79 (td, J = 12.3, 3.6 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.56 - 2.53 (m, 1H), 1.63 (s, 6H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 알콜을 사용하여 화합물 243의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 55. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 246)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (50 mL) 중 4-클로로-7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.0 g, 5.0 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 7.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 140℃에서 13시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 66% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 556 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (25 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 3.4 mmol)의 용액에 XPhos (160 mg, 0.33 mmol), Pd2(dba)3 (300 mg, 0.33 mmol), TEA (1.7 g, 2.4 mL, 17 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.7 g, 2.0 mL, 14 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g)를 황색 오일로서 수득하였다. 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 556 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (1 mL) 및 H2O (90 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.50 mmol)의 용액에 K2CO3 (690 mg, 5.0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (36 mg, 0.050 mmol) 및 2-브로모-3-메틸피라진 (170 mg, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, DCM 중 MeOH)에 의해 정제하여 조 생성물 (220 mg, 84%)을 수득하였다. 조 생성물 60 mg를 정제용 HPLC (길슨, C18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (32 mg)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.71 - 7.59 (m, 2H), 7.04 (tt, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.73 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.50 (t, J = 14.6 Hz, 2H), 3.05 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.42 (s, 9H), 0.92 (d, J = 7.7 Hz, 3H).
실시예 56. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 247)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (500 mg, 3.9 mmol)의 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)메타논 (630 mg, 3.9 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (640 mg, 73% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 223 (M+H)+.
단계 2.(S)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 0.48 mmol, 화합물 246의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl/디옥산 (5.0 mL, 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (180 mg, 89%). LC/MS ESI (m/z): 422 (M+H)+.
단계 3. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 (S)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (60 mg, 0.14 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (64 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (23 mg, 29%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 576 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71 - 7.60 (m, 2H), 7.04 (tt, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 4.06 (s, 1H), 3.71 (dd, J = 44.1, 12.8 Hz, 1H), 3.49 (m, 2H), 3.07 (t, J = 12.6 Hz, 1H), 2.91 - 2.59 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.64 (s, 6H), 0.92 (d, J = 8.2 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 247의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 57. 에틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1001)의 합성
단계 1. 에틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 (S)-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (27 mg, 0.064 mmol, 화합물 247에 대해 기재된 절차의 단계 2에 따라 제조됨)의 용액에 TEA (0.50 mL)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (0.50 mL)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (18 mg, 55% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.6 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.6 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.5 (s, 1H), 7.9 (s, 1H), 7.7 - 7.6 (m, 2H), 7.0 (tt, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 4.2 - 4.0 (m, 3H), 3.8 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.5 (dd, J = 23.1, 13.3 Hz, 2H), 3.1 (m, 1H), 2.9 - 2.6 (m, 2H), 2.5 (s, 3H), 1.2 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.9 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 클로로포르메이트를 사용하여 화합물 1001의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 58. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 252)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (20 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.5 g, 5.8 mmol, 화합물 192에 대한 절차의 단계 1에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 12 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.1 g, 87%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산-물 (30 mL, 5:1 v/v) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.1 g, 5.1 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (1.4 g, 10 mmol), K2CO3 (2.1 g, 15 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (370 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하였다. 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.5 g, 4.3 mmol)의 용액에 TBAF (20 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NH4Cl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과한 후, 여과물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 65%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 426 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (30 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 2.8 mmol)의 용액에 4-아이오도-1-메틸-1H-피라졸 (1.8 g, 8.5 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (97 mg, 0.84 mmol), CuI (270 mg, 1.4 mmol) 및 K3PO4 (1.8 g, 8.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 28%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 506 (M+H)+.
단계 5. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.79 mmol)의 용액에 HCl (3.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하였다. 유기 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (400 mg). LC/MS ESI (m/z): 406 (M+H)+.
단계 6. 이소프로필 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (90 mg, 0.22 mmol)의 용액에 TEA (66 mg, 0.66 mmol)에 이어서 이소프로필 카르보노클로리데이트 (81 mg, 0.66 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3 (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 이소프로필 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 22%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 492 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.39 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.42 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.32 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 1.21 (s, 6H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 클로로포르메이트 및 커플링 파트너 (아릴 할라이드 또는 보론산)를 사용하여 화합물 252의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 59. 2,2,2-트리플루오로에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 254)의 합성
단계 1. 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올 (1.0 g, 10 mmol)의 용액에 CDI (1. 8 g, 11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 195 (M+H)+.
단계 2. 2,2,2-트리플루오로에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (70 mg, 0.18 mmol, 화합물 252에 대해 기재된 절차의 처음 5 단계에 따라 제조됨)의 용액에 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.36 mmol) 및 DIPEA (70 mg, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2,2,2-트리플루오로에틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 33%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 532 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.41 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.97 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.34 - 7.30 (m, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 4.66 - 4.46 (m, 2H), 4.19 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.47 - 3.42 (m, 1H), 3.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.30 - 3.26 (m, 1H), 2.97 - 2.83 (m, 1H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 60. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-에틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 256)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 THF (15 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.4 g, 7.0 mmol, 화합물 164에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TBAF (42 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.2 g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 194 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (100 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.2 g, 6.2 mmol)의 용액에 (3,5-디플루오로페닐)보론산 (2.0 g, 12 mmol), 피리딘 (2.9 g, 37 mmol) 및 Cu(OAc)2 (2.8 g, 16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.5 g, 63%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 306 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-에틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (70 mg, 0.23 mmol)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-에틸피페라진-1-카르복실레이트 (98 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA (180 mg, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-에틸피페라진-1-카르복실레이트 (45 mg, 41%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 484 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (s, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 6.80 - 6.72 (m, 1H), 4.50 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.27 - 4.12 (m, 2H), 4.03 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 3.13 - 3.03 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.56 - 1.52 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.08 - 1.01 (m, 2H), 0.90 - 0.84 (m, 4H), 0.68 - 0.61 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민을 사용하여 화합물 256의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 61. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 260)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 DMF (500 mL) 중 NaH (11 g, 270 mmol)의 현탁액에 DMF (150 ml) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 180 mmol)의 용액을 적가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, DMF (150 ml) 중 TsCl (50 g, 260 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수 (4 L)에 붓고, 여과하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 진공 하에 추가로 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (73 g, 94%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 434.2 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (350 ml) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 120 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (46 g, 230 mmol)의 혼합물을 140℃로 1.5시간 동안 가열하였다. DIPEA를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (52 g, 75%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598.4 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (400 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (39 g, 65 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (8.4 g, 98 mmol), K2CO3 (120 g, 850 mmol) 및 1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센 팔라듐 디클로라이드 (2.0 g, 3.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (22 g, 67% 수율, >98% 순도 및 10 g, 80% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512.5(M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (500 ml) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (79 g, 150 mmol)의 용액에 TBAF (400 ml, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 H2O로 희석하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (49 g, 88%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358.5 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (180 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (18 g, 50 mmol)의 용액에 2-브로모이소니코티노니트릴 (18 g, 100 mmol), CuI (4.8 g, 25 mmol), (+/-)-트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (1.7 g, 15 mmol) 및 K3PO4 (32 g, 150 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% EtOAc (50% DCM 함유))에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (12 g, 51% 수율, >98% 순도 및 4.6 g, 90% 순도)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 460.6 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.32 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.74 - 4.66 (m, 1H), 4.18 - 3.83 (m, 3H), 3.55 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 3.39 - 3.09 (m, 2H), 2.06-1.99 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.06 - 1.02 (m, 2H), 0.90 - 0.84 (m, 1H), 0.80 - 0.74 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민, 보론산 및 아릴 할라이드로부터 화합물 260의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 화합물 481 및 483의 제조의 경우에, 상업적으로 입수가능한 중간체 4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 화합물 260의 합성에 요약된 바와 같은 적절한 합성 단계를 사용하여 제조하였다.
실시예 62. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(1-페닐-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 261)의 합성
MeOH (8 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-클로로페닐)-3-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 0.33 mmol, 화합물 284에 대해 기재된 절차에 따라 제조됨), PtO2 (100 mg)의 혼합물을 H2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 여과하고, MeOH를 진공에 의해 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(1-페닐-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 32% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 479. (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (s, 1H), 8.18 - 8.11 (m, 2H), 7.52 (dd, J = 10.8, 5.2 Hz, 2H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 4.56 - 4.41 (m, 1H), 4.19 - 3.80 (m, 5H), 3.63 - 3.50 (m, 3H), 3.33 - 3.03 (m, 3H), 2.25 - 2.13 (m, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.31 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 63. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 268)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서, DMF (500 mL) 중 NaH (11 g, 270 mmol)의 현탁액에 DMF (150 ml) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 180 mmol)의 용액을 첨가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, DMF (150 ml) 중 TsCl (50 g, 260 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수 (4 L)에 붓고, 여과하고, 농축시켰다. 담황색 고체로서의 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (67 g, 86%). LC/MS ESI (m/z): 434.2 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (350 ml) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 120 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (46 g, 230 mmol)의 혼합물을 140℃로 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (52 g, 75%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598.4 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산-물 (500 mL; v:v=5:1) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (52 g, 87 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (24 g, 170 mmol), K2CO3 (36 g, 260 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (3.5 g, 4.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 DCM 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (34 g, 70%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 566.6 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (300 ml) 중 tert-부틸 (3S)-4-[5-(2-플루오로페닐)-7-(4-메틸벤젠술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 g, 65 mmol)의 용액에 TBAF (220 ml, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 2/3 용매를 제거한 후, 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (25 g, 93%)를 회색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 412.5 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (80 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 g, 24 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (8.9 g, 49 mmol), CuI (1.4 g, 7.3 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (0.83 g, 7.3 mmol) 및 K3PO4 (16 g, 73 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (에틸 아세테이트: 석유 에테르: 디클로로메탄 = 5:1:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.3 g, 75%)를 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514.6 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.61 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.46 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 3.56 - 3.44 (m, 2H), 3.08 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 2.89 - 2.62 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.02 (d, 3H).
하기 화합물을 아민 및 아릴 할라이드로부터 화합물 268의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 64. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 269) 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 270)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-벤질-3-(히드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, MeCN (50 mL) 중 tert-부틸 3-(히드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (4.5 g, 21 mmol) 및 TEA (4.2 mL, 42 mmol)의 용액에 (클로로메틸)벤젠 (3.2 g, 25 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하고, LCMS는 반응이 완결되었음을 나타내고, MeCN을 진공에 의해 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-벤질-3-(히드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (5.0 g, 71% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 307. (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-벤질-3-(((메틸술포닐)옥시)메틸)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, DCM (15 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-(히드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 5.0 mmol)의 용액에 TEA (0.75 mL, 7.5 mmol)에 이어서 MsCl (0.68 g, 5.9 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 4-벤질-3-(((메틸술포닐)옥시)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 94%)를 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 3. tert-부틸 4-벤질-3-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, THF (20 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-(((메틸술포닐)옥시)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 4.7 mmol)의 용액에 TBAF (9.4 mL, THF 중 1.0M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-벤질-3-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 76% 수율)를 오일로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 309 (M+H)+.
단계 4. 1-벤질-2-(플루오로메틸)피페라진
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.97 mmol)의 용액에 HCl (4.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1-벤질-2-(플루오로메틸)피페라진을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS ESI (m/z): 209 (M+H)+.
단계 5. 4-(4-벤질피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.66 mmol, 화합물 256에 요약된 절차에 따라 제조됨), 1-벤질-2-(플루오로메틸)피페라진 (200 mg, 0.98 mmol) 및 DIPEA (500 mg, 4.0 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 4-(4-벤질피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 478 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (8 mL) 중 4-(4-벤질피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.45 mmol), (Boc)2O (200 mg, 0.90 mmol) 및 Pd/C (50 mg, 약 55% 물로 습윤됨)의 혼합물을 H2 분위기 (~1 atm) 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (96 mg, 44% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 488. (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 96 mg를 SFC에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다:
피크 1: 보다 짧은 체류 시간, 화합물 269 (tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (23 mg))로 표지됨: LC/MS ESI (m/z): 488. (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.35 (s, 1H), 7.57 - 7.52 (m, 2H), 7.33 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 6.97 - 6.91 (m, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 4H), 4.30 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.45 - 3.35 (m, 2H), 3.17 - 3.10 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.07 - 1.03 (m, 2H), 0.99 - 0.93 (m, 1H), 0.72 - 0.67 (m, 1H).
피크 2: 화합물 270 ((R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (22 mg))로 표지된 보다 긴 체류 시간: LC/MS ESI (m/z): 488. (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.35 (s, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 6.97 - 6.91 (m, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 4H), 4.30 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 3.18 - 3.11 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.07 - 1.02 (m, 2H), 0.99 - 0.94 (m, 1H), 0.72 - 0.67 (m, 1H).
정제용 분리 방법: 기기: 워터스 타르 80 정제용 SFC; 칼럼: 키랄팩 AD, 250 x 21.2mm I.D., 5 μm; 이동상: CO2의 경우 A 및 MEOH+0.1%NH3H2O의 경우 B; 구배: B 30%; 유량: 50mL /분; 배압: 100 bar; 칼럼 온도: 35℃; 파장: 254 nm; 사이클-시간: 3.0분; 용리 시간: 1.8시간.
실시예 65. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(트리플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1006)의 합성
단계 1. (S)-2-(트리플루오로메틸)피페라진
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-(트리플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.27 mmol)의 용액에 HCl (2.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-2-(트리플루오로메틸)피페라진. LC/MS ESI (m/z): 155 (M+H)+.
단계 2. (S)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-(트리플루오로메틸)피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 mg, 0.16 mmol, 화합물 256에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 (S)-2-(트리플루오로메틸)피페라진 (38 mg, 0.24 mmol) 및 DIPEA (120 mg, 0.96 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (S)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-(트리플루오로메틸)피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (60 mg, 86%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 424 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(트리플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
THF (8 mL) 중 (S)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-4-(3-(트리플루오로메틸)피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (60 mg, 0.14 mmol), (Boc)2O (61 mg, 0.28 mmol), DMAP(5.1 mg, 0.040 mmol)의 혼합물을 N2 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(트리플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (19 mg, 24% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 524 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.37 (s, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 6.99 - 6.87 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 2H), 4.14 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.60 - 3.44 (m, 2H), 3.19 - 3.12 (m, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.06 - 0.98 (m, 3H), 0.70 - 0.63 (m, 1H)
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 1006의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 66. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 277)의 합성
단계 1. 3-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴
DCM (500 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.7 g, 17 mmol)의 용액에 (3-시아노페닐)보론산 (5.0 g, 34 mmol), Cu(OAc)2 (9.4 g, 51 mmol), 피리딘 (9.0 mL, 54 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 주말에 걸쳐 교반하였다. 반응물을 빙수조에서 NH4OH (25 mL)로 켄칭하고, 여과하고, 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (5.0 g, 78%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 381 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 3-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (100 mg, 0.30 mmol)의 용액에 DIEA (230 mg, 1.8 mmol) 및 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 70%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 545 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.10 mmol)의 용액에 CuI (2.0 mg, 0.010 mmol), K2CO3 (23 mg, 0.17 mmol), L-프롤린 (3.0 mg, 0.020 mmol) 및 피롤리딘 (71 mg, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (8.1 mg, 31%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 488 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.26 (s, 2H), 8.13 - 8.07 (m, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 4.82 - 4.78 (m, 1H), 4.48 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 3.89 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.39 - 3.32 (m, 2H), 3.29 - 3.25 (m, 2H), 3.02 (dt, J = 16.1, 8.0 Hz, 1H), 2.91 - 2.84 (m, 2H), 2.04 - 1.98 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 277의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 67. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-클로로페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 284)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
무수 DMF (13 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 4.1 mmol)의 현탁액에 NBS (0.87 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 61%)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 397,399 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.3 mmol)의 용액에 (3-니트로페닐)보론산 (400 mg, 2.4 mmol), Cu(OAc)2 (540 mg, 3.1 mmol), 피리딘 (0.60 mL, 7.2 mmol) 및 4A 분자체 (500 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 주말에 걸쳐 40℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 NH4OH로 켄칭하고, DCM으로 희석한 다음, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (430 mg, 66%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 518,520 (M+H)+
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(3-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 및 H2O (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (430 mg, 0.83 mmol)의 용액에 2-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (210 mg, 0.99 mmol), K2CO3 (340 mg, 2.5 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (58 mg, 0.080 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 96%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-아미노페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1-(3-니트로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 0.78 mmol)의 용액에 Pd(OH)2 (200 mg, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 분위기 하에 50℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-아미노페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 91%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-클로로페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, MeCN (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-아미노페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 0.66 mmol)의 용액에 CuCl (76 mg, 0.79 mmol)을 첨가하고, 0℃에서 5분 동안 교반한 후, t-BuONO (0.1 mL, 0.9 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 60℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-클로로페닐)-3-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37.2 mg, 11%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.46 (s, 1H), 8.31 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (ddd, J = 8.3, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.32 (ddd, J = 8.0, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 4.59 (qd, J = 6.3, 2.8 Hz, 1H), 4.14 - 4.04 (m,3H), 3.92 (t, J = 13.7 Hz, 2H), 3.69 - 3.57 (m, 3H), 3.38 - 3.32 (m, 2H), 3.19 - 3.05 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 3H), 1.94 - 1.84 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.32 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 68. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 311)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (25 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (900 mg, 3.2 mmol)의 용액에 (3-(트리플루오로메톡시)페닐)보론산 (1.3 g, 6.4 mmol), 4A 분자체 (800 mg), Cu(OAc)2 (2.6 g, 12.8 mmol) 및 피리딘 (1.5 g, 19.2 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 40℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 빙수조에서 NH4OH (3 mL)로 켄칭한 다음, 여과하고, 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (540 mg, 38%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 440 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (260 mg, 0.59 mmol)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (236 mg, 1.18 mmol), DIPEA (229 mg, 1.77 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거한 후, 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 61%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 604 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (3 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.36 mmol)의 용액에 CuI (14 mg, 0.07 mmol), L-프롤린 (17 mg, 0.14 mmol), K2CO3 (115 mg, 1.08 mmol) 및 피롤리딘 (103 mg, 1.44 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응물을 EtOAc 및 물로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (23 mg, 12%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 547 (M+H)+.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.24 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.74 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.79 (d, 1H), 4.47 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.32 (m, 1H), 3.89 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.39 - 3.32 (m, 1H), 3.29 - 3.24 (m, 3H), 3.04 - 2.96 (m, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 2H), 2.03 - 1.97 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 311의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 69. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 313)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (50 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.6 g, 9.3 mmol)의 용액에 (3,4,5-트리플루오로페닐)보론산 (4.1 g, 23 mmol), Cu(OAc)2 (4.2 g, 23 mmol), 피리딘 (4.4 mL, 56 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. NH3.H2O (80 mL)를 첨가하고, 반응물을 여과하고, 여과물을 DCM 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.5 g, 66%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 410 (M+H)+
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 1.5 mmol)의 용액에 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (590 mg, 3.0 mmol) 및 DIPEA (1.5 mg, 8.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 574 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol)의 용액에 피롤리딘-2-온 (29 mg, 0.34 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (5.9 mg, 0.050 mmol), CuI (9.5 mg, 0.050 mmol) 및 K3PO4 (220 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (19 mg, 20%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.32 (s, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 1H), 4.23 - 4.17 (m, 1H), 4.02 - 3.96 (m, 2H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.81 - 3.74 (m, 1H), 3.49 - 3.44 (m, 1H), 3.35 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 2.65 - 2.60 (m, 2H), 2.29 (dt, J = 11.4, 7.0 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아미드 (피롤리딘-2-온) 또는 아민 (피페리딘)으로부터 화합물 313의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 70. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 314) 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 315)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-벤질-3-포르밀피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, DCM (30 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-(히드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 5.9 mmol)의 용액에 DMSO (20 mL)를 첨가하고, TEA (4.1 mL, 29 mmol)를 첨가하고, 이어서 피리딘 삼산화황 (4.7 g, 29 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-벤질-3-포르밀피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 50% 수율)를 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 305 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, DCM (10 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-포르밀피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 3.0 mmol)의 용액에 DAST (950 mg, 5.9 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 34% 수율)를 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 327 (M+H)+.
단계 3. 1-벤질-2-(디플루오로메틸)피페라진
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 1.0 mmol)의 용액에 TFA (2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 227 (M+H)+.
단계 4. 4-(4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.33 mmol, 화합물 256에 요약된 절차에 따라 제조됨), 1-벤질-2-(디플루오로메틸)피페라진 (150 mg, 0.66 mmol) 및 DIPEA (260 mg, 2.0 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 4-(4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 61% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 496 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (8 mL) 중 4-(4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.20 mmol), (Boc)2O (44 mg, 0.40 mmol) 및 Pd/C (30 mg, 약 55% 물로 습윤됨)의 혼합물을 H2 분위기 (~1 atm) 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (93 mg, 91% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 506 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트를 SFC에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다:
피크 1: 보다 짧은 체류 시간, 화합물 314 (tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트)로 표지됨, LCMS ESI (m/z): 506 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.38 (s, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.34 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 6.98 - 6.90 (m, 1H), 6.16 (m, J = 56.1, 5.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.49 - 3.36 (m, 2H), 3.16 - 3.08 (m, 1H), 2.09 - 2.03 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.07 - 0.97 (m, 3H), 0.72 - 0.65 (m, 1H).
피크 2: 화합물 315 (tert-부틸 (R)-4-(5-시클로프로필-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-카르복실레이트)로 표지된 보다 긴 체류 시간, LCMS ESI (m/z): 506 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.38 (s, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.34 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 6.97 - 6.91 (m, 1H), 6.31 - 6.00 (m, 1H), 4.52 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.48 - 3.36 (m, 2H), 3.16 - 3.09 (m, 1H), 2.09 - 2.03 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.08 - 0.97 (m, 3H), 0.71 - 0.65 (m, 1H).
정제용 분리 방법: 기기: 워터스 타르 80 정제용 SFC ; 칼럼: 키랄팩 AD, 250 x 21.2mm I.D., 5 μm; 이동상: CO2의 경우 A 및 MEOH+0.1%NH3H2O의 경우 B; 구배: B 30%; 유량: 50mL /분; 배압: 100 bar; 칼럼 온도: 35℃; 파장: 240 nm; 사이클-시간: 3분; 용리 시간: 2시간.
실시예 71. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((S)-2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 316)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (40 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 36 mmol)의 용액에 (3-클로로페닐)보론산 (11 g, 72 mmol), 4A 분자체 (8 g), Cu(OAc)2 (26 g, 140 mmol) 및 피리딘 (17 g, 210 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 40℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에서 NH4OH (50 mL)로 켄칭하고, 여과하고, 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (8.8 g, 67%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 390 (M+H)+.
단계 2. 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
MeOH (20 ml) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 13 mmol)의 용액에 CH3ONa (77 ml, MeOH 중 5.0 M)를 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 55℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, 이를 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.8 g, 78%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 386 (M+H)+
단계 3. (S)-7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMSO (6 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1000 mg, 2.6 mmol)의 용액에 CuI (98 mg, 0.46 mmol), L-프롤린 (120 mg, 1.0 mmol), K2CO3 (1100 mg, 7.8 mmol) 및 (S)-2-메틸피롤리딘 (880 mg, 10 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응물을 EtOAc 및 물로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 (S)-7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 11%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 343 (M+H)+.
단계 4. (S)-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올
DMF (4 mL) 중 (S)-7-(3-클로로페닐)-4-메톡시-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.29 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 (550 mg, 2.9 mmol) 및 LiCl (120 mg, 2.9 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (80 mg, 84%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 329 (M+H)+.
단계 5. (S)-4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
POCl3 (4 mL) 중 (S)-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (40 mg, 0.12 mmol)의 용액에 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하고, 반응물을 농축시켰다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (34 mg, 81%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 347 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((S)-2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (1 mL) 중 (S)-4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-(2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (17 mg, 0.050 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.10 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((S)-2-메틸피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (16 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.24 (s, 1H), 7.86 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.64 (m, 1H), 7.49 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.12 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 2H), 3.70 (s, 1H), 3.54 - 3.36 (m, 3H), 3.01 (s, 1H), 2.69 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 2.03 - 1.95 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 1H), 1.70 - 1.62 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.15 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 316의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 72. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 321)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 및 H2O (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 2.5 mmol), (1-메틸-1H-피라졸-4-일)보론산 (630 mg, 5.0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (180 mg, 0.30 mmol) 및 K2CO3 (1000 mg, 7.5 mmol)의 혼합물을 95℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 91%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 2.3 mmol)의 용액에 TBAF (9.1 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (100 ml x 2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (850 mg, 2.1 mmol, 94%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 398 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.38 mmol), 1-브로모-3-(트리플루오로메톡시)벤젠 (180 mg, 0.76 mmol), CuI (36 mg, 0.19 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (13 mg, 0.11 mmol) 및 K3PO4 (240 mg, 1.1 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.14 mmol, 38%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 558.6 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.40 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (br, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.19 (br, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.88 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.58 (t, J = 15.0 Hz, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 1H), 2.99 (br, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.99 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 73. tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((R)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 1002)의 합성
DMSO (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.72 mmol, 화합물 274에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (28 mg, 0.14 mmol), L-프롤린 (33 mg, 0.29 mmol), K2CO3 (140 mg, 2.2 mmol) 및 (R)-피롤리딘-2-일메탄올 (290 mg, 2.9)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 이를 EtOAc 및 물로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, DCM 중 메토날)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-((R)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 26%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 527 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.20 (s, 1H), 7.83 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.52 - 7.48 (m, 1H), 7.39 - 7.35 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.65 - 4.60 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 4.38 - 4.33 (m, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 4.05 - 3.98 (m, 1H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 3.47 (dd, J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 2H), 2.31 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 2.00 (m, 2H), 1.87 - 1.79 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 1002의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 74. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 325)의 합성
단계 1. (S)-7-시클로헥실-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.30 mmol, 화합물 326, 단계 3의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl/디옥산 (1.0 mL, 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-7-시클로헥실-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (95 mg, 93%). LC/MS ESI (m/z): 340 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (0.5 mL) 중 (S)-7-시클로헥실-5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (76 mg, 0.22 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (88 mg, 0.40 mmol, 화합물 247, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 20% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.31 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.72 - 4.58 (m, 1H), 4.28 - 4.01 (m, 2H), 4.01 - 3.84 (m, 1H), 3.75 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 3.57 - 3.37 (m, 1H), 3.26 - 3.08 (m, 1H), 2.04 - 1.88 (m, 5H), 1.88 - 1.75 (m, 3H), 1.72 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.52 (dd, J = 24.8, 12.4 Hz, 2H), 1.41 - 1.32 (m, 1H), 1.30 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.10 - 0.94 (m, 2H), 0.89 - 0.79 (m, 1H), 0.79 - 0.67 (m, 1H). 19F NMR (377 MHz, MeOD) δ -85.03 (d, J = 40.1 Hz).
실시예 75. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 326)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
THF (40 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (7.0 g, 25 mmol), 시클로헥산올 (10 g, 100 mmol) 및 PPh3 (20 g, 75 mmol)의 용액에 0℃에서 DIAD (15 g, 15 mL, 75 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 석유 에테르로 용해시키고, 여과하여 고체를 제거하였다. 여과물의 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.2 g, 24% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 362 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (5 mL) 중 4-클로로-7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.8 g, 5.0 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.0 g, 25 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.6 g, 59% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (390 mg, 0.75 mmol) 및 시클로프로필보론산 (260 mg, 3.0 mmol)의 용액에 Pd(dtbpf)Cl2 (49 mg, 0.075 mmol), K2CO3 (2.1 g, 15 mmol) 및 H2O (270 mg, 0.27 mL, 15 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (290 mg, 88% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. 생성물 50 mg를 추가로 정제용 HPLC (길슨, C18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 순수한 생성물 (16.9 mg)을 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 440 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.23 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.80 - 4.68 (m, 1H), 4.57 (ddd, J = 12.1, 7.9, 3.6 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.57 - 3.45 (m, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 1H), 3.24 - 3.03 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.98 - 1.83 (m, 4H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.61 - 1.50 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.40 - 1.29 (m, 1H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.03 - 0.91 (m, 2H), 0.85 - 0.73 (m, 1H), 0.69 - 0.56 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 326의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 76. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 329)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.76 mmol, 화합물 321에 요약된 절차에 따라 제조됨), 3-아이오도벤조니트릴 (350 mg, 1.5 mmol), CuI (72 mg, 0.38 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (26 mg, 0.23 mmol) 및 K3PO4 (480 mg, 2.3 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~70% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 80%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 499 (M+H)+.
단계 2. (S)-3-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 0.52 mmol)의 혼합물에 HCl (5.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 (S)-3-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (210 mg, 100%)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 399 (M+H)+.
단계 3. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 (S)-3-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (240 mg, 0.60 mmol), 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.66 mmol) 및 DIEA (470 mg, 3.6 mmol)의 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (100 ml x2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(3-시아노페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (27 mg, 8.0%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 553 (M+H)+ 1H NMR δ 8.42 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.16 - 8.11 (m, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 4H), 4.22 (br, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.94 - 3.77 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 2H), 3.25 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.13 - 2.91 (m, 2H), 1.67 (s, 6H), 1.00 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 329의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 77. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 334)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (530 mg, 1.0 mmol, 화합물 326, 단계 3의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (38 mg, 0.20 mmol), L-프롤린 (46 mg, 0.40 mmol), K2CO3 (410 mg, 3.0 mmol) 및 피롤리딘 (710 mg, 10 mmol)을 각각 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물 (110 mg)을 황색 고체로서 수득하였다. 생성물 50 mg를 추가로 정제용 HPLC (길슨, C18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.3 mg, 1.3% 수율)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 469 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.15 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.59 (ddd, J = 12.1, 7.9, 3.6 Hz, 1H), 4.25 - 3.98 (m, 2H), 3.90 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.39 - 3.32 (m, 1H), 3.30 - 3.20 (m, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 3.09 - 2.90 (m, 1H), 2.90 - 2.76 (m, 2H), 2.07 - 1.85 (m, 8H), 1.84 - 1.69 (m, 3H), 1.60 - 1.51 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.40 - 1.30 (m, 1H), 1.05 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 334의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 78. tert-부틸-(S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 337)의 합성
단계 1. 메틸-(S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트
MeOH (7 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-[7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.90 mmol, 화합물 274에 요약된 절차에 따라 제조됨), TEA (0.37 mL, 2.7 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (99 mg, 0.13 mmol)의 현탁액을 CO 분위기 하에 70℃에서 18시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-[7-(3-클로로페닐)-5-(메톡시카르보닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 91%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 486 (M+H)+
단계 2. (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산
MeOH (5 mL) 중 tert-부틸-(3S)-4-[7-(3-클로로페닐)-5-(메톡시카르보닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.82 mmol)의 용액에 2.0M NaOH (1.0 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl을 사용하여 PH 3으로 산성화시킨 다음, EtOAc에 의해 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS(ESI)m/z: 472 (M+H)+
단계 3. tert-부틸-(S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-카르보닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF(5.0 mL) 중 4-[(2S)-4-[(tert-부톡시)카르보닐]-2-메틸피페라진-1-일]-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (150 mg, 0.32 mmol), HATU (140 mg, 0.37 mmol) 및 DIEA (100 mg, 0.80 mmol)의 현탁액을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 혼합물에 피롤리딘 (0.030 mL, 0.38 mmol)을 첨가하고, 추가로 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~15% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-(3S)-4-[7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-카르보닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 96%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 525 (M+H)+
단계 4. tert-부틸-(S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, THF (3.0 mL) 중 tert-부틸-(3S)-4-[7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-카르보닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1.0 M LiAlH4 (0.38 mL, THF 용액)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물에 10% NaOH 0.15 mL을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 1시간 동안 교반하고, 여과한 다음, EtOAc로 2회 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸-(S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(피롤리딘-1-일메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 26%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 511 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.56 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.82 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.45 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 11.3, 5.0 Hz, 1H), 4.11 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.81 (m, 1H), 3.66 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 3H), 3.37 - 3.25 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 3.01 - 2.91 (m, 2H), 2.05 - 1.92 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 79. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 338)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서, THF (10 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.0 g, 7.2 mmol)의 용액에 시클로펜탄올 (2.6 mL, 29 mmol), PPh3 (5.6 g, 22 mmol) 및 DIAD (4.3 mL, 22 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르:EtOAc = 3:1)는 대부분의 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (Rf=0.30)이 소모되었음을 나타내었고, 2개의 스팟 (Rf = 0.60, 0.70)이 형성되었다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-클로로-7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.7 g, 4.9 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 348 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (4.9 mL, 29 mmol) 중 4-클로로-7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.7 g, 4.9 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 9.8 mmol)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 120℃로 12시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 3.5 mmol)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.39 mmol)의 용액에 25℃에서 피롤리딘 (640 mg, 1.5 mmol), CuI (37 mg, 0.20 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (180 mg, 1.5 mmol) 및 K2CO3 (110 mg, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃로 8시간 동안 가열하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (50 ml)에 붓고, EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로펜틸-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.044 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 455 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.26 - 5.15 (m, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.37 (s, 1H),3.25 (s, 1H), 3.09 (s, 3H), 2.84 (s, 2H), 2.23 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.72 (m, 10H), 1.49 (s, 9H), 1.11 (s, 3H).
실시예 80. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 340)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서, THF (100 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 11 mmol), 테트라히드로-2H-피란-4-올 (1.3 g, 13 mmol) 및 PPh3 (5.6 g, 22 mmol)의 혼합물에 DIAD (4.3 mL, 22 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 필터 케이크를 EtOAc (50 ml)로 세척하여 4-클로로-5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.7 g, 44%)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 364 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (20 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.7 g, 4.7 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 9.4 mmol)의 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~70% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 59%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol), 시클로프로필보론산 (49 mg, 0.57 mmol), Pd(dtbpf)Cl2 (25 mg, 0.040 mmol) 및 K2CO3 (520 mg, 3.8 mmol)의 혼합물을 80℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (26 mg, 31%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 442.3 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.24 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.84 - 4.73 (m, 2H), 4.11 - 4.02 (m, 3H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 2H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 3.32 (br, 1H), 3.13 (br, 1H), 2.14 - 1.99 (m, 3H), 1.92 - 1.84 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.00 - 0.95 (m, 2H), 0.84 - 0.78 (m, 1H), 0.67 - 0.62 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 340의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 81. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로프로필-1-(4-이소시아노피리딘-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 343)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 1.0 mmol), 시클로프로필보론산 (260 mg, 3.0 mmol), K2CO3 (4.1 g, 30 mmol), Pd-118 (97 mg, 0.15 mmol) 및 톨루엔 (20 mL)의 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~15% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 30%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 359 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로프로필-1-(4-이소시아노피리딘-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-{3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 CuI (27 mg, 0.14 mmol), K3PO4 (120 mg, 0.56 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (41 mg, 0.29 mmol) 및 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (100 mg, 0.56 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로프로필-1-(4-이소시아노피리딘-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 23%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 461.6 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.88 - 8.80 (m, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 5.11 - 4.95 (m, 1H), 4.43 - 4.34 (m, 1H), 4.30 - 3.92 (m, 2H), 3.67 - 3.50 (m, 1H), 3.30 - 2.94 (m, 2H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.38 - 1.33 (m, 5H), 1.20 - 1.13 (m, 2H).
실시예 82. 에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 346)의 합성
단계 1. (S)-2-(5-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
0℃에서, DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.16 mmol, 화합물 268에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 414 (M+H)+.
단계 2. 에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, DCM (10 mL) 중 (S)-2-(5-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (100 mg, 0.24 mmol)의 용액에 TEA (73 mg, 0.72 mmol)에 이어서 에틸 카르보노클로리데이트 (52 mg, 0.48 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 59%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.63 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 4.36 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 4.08 (m, 2H), 3.85 - 3.73 (m, 1H), 3.59 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 1H), 3.08 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 2.93 - 2.64 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.03 (s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 산 클로라이드로부터 화합물 346의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 83. 1,1,1-트리플루오로프로판-2-일 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 348)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로프로판-2-올 (1.0 g, 8.8 mmol)의 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)메타논 (1.7 g, 11 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (1.1 g, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 209 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로프로판-2-일 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 (S)-2-(5-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (70 mg, 0.17 mmol, 화합물 346에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1,1,1-트리플루오로프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (71 mg, 0.34 mmol) 및 DIPEA (70 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로프로판-2-일 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (29 mg, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.62 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.46 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 2H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 5.28 - 5.19 (m, 1H), 4.22 (d, J = 28.8 Hz, 1H), 3.87 - 3.72 (m, 1H), 3.60 - 3.48 (m, 2H), 3.15 - 3.08 (m, 1H), 2.95 - 2.72 (m, 2H), 1.37 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.01 (t, J = 6.1 Hz, 3H)
하기 화합물을 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올로부터 화합물 348의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 84. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 352)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 1.6 mmol, 화합물 388에 약술된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.93 mL, 6.4 mmol), X-Phos (77 mg, 0.16 mmol), TEA (1.1 mL, 8.0 mmol) 및 Pd2(dba)3 (150 mg, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 95℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 91%)를 흑색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 546 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.36 mmol)의 용액에 2-브로모피리딘 (0.070 mL, 0.73 mmol), K2CO3 (250 mg, 1.8 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (27 mg, 0.037 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~90%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (26 mg, 14%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.73 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.66 - 8.55 (m, 3H), 7.84 (s, 1H), 7.64 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 4.30 (d, J = 44.9 Hz, 1H), 3.92 - 3.71 (m, 1H), 3.64 - 3.43 (m, 2H), 3.14 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 3.03 - 2.60 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.05 (s, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 352의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 85. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 353)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.30 mmol, 화합물 388에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 피리딘-3-일보론산 (74 mg, 0.60 mmol), K2CO3 (210 mg, 1.5 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (22 mg, 0.030 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~90%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (84 mg, 56%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.42 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.67 - 8.60 (m, 3H), 8.33 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 1H), 7.44 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.91 - 3.69 (m, 1H), 3.61 - 3.51 (m, 1H), 3.43 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.14 (td, J = 13.4, 2.9 Hz, 1H), 2.99 - 2.66 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.03 (d, J = 5.4 Hz, 3H).
실시예 86. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 356)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (450 mg, 1.1 mmol, 화합물 313에 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (440 mg, 2.2 mmol)의 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~70% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (530 mg, 84%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 574 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (530 mg, 0.92 mmol), 피롤리딘-2-온 (240 mg, 2.8 mmol), CuI (88 mg, 0.46 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (32 mg, 0.28 mmol) 및 K3PO4 (590 mg, 2.8 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~100% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 61%)를 회색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, THF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol)의 용액에 LiAlH4 (0.57 mL, THF 중 1.0 M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (50 ml x 2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH, V/V)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 mg, 3.1%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 517 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 8.8, 6.2 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 4.97 (br, 1H), 4.23 - 3.87 (m, 3H), 3.38 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.30 - 2.98 (m, 4H), 2.91 (br, 2H), 1.98 (br, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.13 (s, 3H).
하기 화합물을 화합물 340, 단계 1에 요약된 절차에 따라 제조된 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 356의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 87. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-시아노페닐)-3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 357)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-시아노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.3 mmol, 화합물 284에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 (3-시아노페닐)보론산 (370 mg, 2.5 mmol), Cu(OAc)2 (560 mg, 3.1 mmol), 피리딘 (0.60 mL, 7.5 mmol) 및 4A 분자체 (500 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NH4OH로 켄칭하고, DCM으로 희석한 다음, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-시아노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (510 mg, 81%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498,500 (M+H)+
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-시아노페닐)-3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-(3-시아노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.40 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (52 mg, 0.60 mmol), K2CO3 (720 mg, 5.2 mmol) 및 Pd-118 (13 mg, 0.020 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-시아노페닐)-3-시클로프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 58%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 460 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.64 (s, 1H), 8.55 - 8.51 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 2H), 5.02 (s, 1H), 4.38 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.00 - 3.95 (m, 1H), 3.63 - 3.55 (m, 1H), 3.27 - 3.01 (m, 2H), 2.20 - 2.14 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.33 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.29 - 1.25 (m, 2H), 1.19 - 1.15 (m, 2H).
실시예 88. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 359)의 합성
단계 1. (S)-7-시클로헥실-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.11 mmol, 화합물 334, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl/디옥산 (1.0 mL, 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거한 후, 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-7-시클로헥실-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (30 mg, 74%). LC/MS ESI (m/z): 369 (M+H)+.
단계 2. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (0.5 mL) 중 (S)-7-시클로헥실-4-(2-메틸피페라진-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (30 mg, 0.080 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (88 mg, 0.40 mmol, 화합물 247, 단계 1의 절차에 따라 제조됨)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-시클로헥실-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.6 mg, 6.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 523 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.10 - 4.88 (m, 1H), 4.78 - 4.58 (m, 1H), 4.27 - 3.94 (m, 2H), 3.94 - 3.77 (m, 1H), 3.45 - 3.21 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 3H), 2.91 - 2.71 (m, 2H), 2.09 - 1.99 (m, 2H), 1.99 - 1.82 (m, 6H), 1.80 - 1.74 (m, 1H), 1.69 - 1.61 (m, 2H), 1.58 (s, 6H), 1.55 - 1.46 (m, 2H), 1.27 - 1.23 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.6 Hz, 3H). 19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -83.86 (d, J = 36.1 Hz).
실시예 89. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 362)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-아이오도-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.52 mmol, 화합물 356에 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (49 mg, 0.26 mmol), K3PO4 (330 mg, 1.6 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (0.020 mL, 0.16 mmol) 및 피롤리딘-2-온 (0.080 mL, 1.1 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 빙수로 희석한 다음, 이를 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 54%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.26 mmol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 BH3 (5.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-2-메틸-4-(5-(피롤리딘-1-일)-7-(3,4,5-트리플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 23%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 517 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 4.76 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.41 - 4.34 (m, 2H), 3.92 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.35 - 3.20 (m, 4H), 3.00 - 2.93 (m, 1H), 2.88 - 2.82 (m, 2H), 2.01 - 1.97 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 90. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2,2-디플루오로시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 365)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 2.3 mmol, 화합물 399의 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-브로모이소니코티노니트릴 (1.7 g, 9.1 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (650 mg, 4.6 mmol), CuI (430 mg, 2.3 mmol) 및 K3PO4 (1.5 g, 6.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~25%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 70%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.0 mmol)의 용액에 칼륨 트리플루오로(비닐)보레이트 (270 mg, 2.0 mmol), K2CO3 (410 mg, 3.0 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (73 mg, 0.10 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 58%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 446(M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2,2-디플루오로시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.22 mmol)의 용액에 트리메틸 (트리플루오로메틸)실란 (380 mg, 2.6 mmol), NaI (130 mg, 0.88 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 마이크로웨이브에서 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2,2-디플루오로시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 81%)를 고체로서 수득하였으며, 이 중 90 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 65 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 496(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 - 9.18 (m, 1H), 8.70 - 8.66 (m, 1H), 8.52 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 7.60 - 7.55 (m, 1H), 4.52 - 4.44 (m, 1H), 4.08 - 3.97 (m, 1H), 3.85 - 3.02 (m, 6H), 2.05 - 1.75 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.26 - 1.14 (m, 3H).
하기 화합물을 적절한 아릴 할라이드를 사용하여 화합물 365의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 91. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 366)의 합성
단계 1. 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트
MeOH (2.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol, 화합물 114와 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 25℃에서 Pd(dppf)Cl2 (13 mg, 0.018 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 CO로 3회 탈기하였다. 혼합물을 CO (15 psi) 하에 80℃에서 8시간 동안 가열하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (70 mg)를 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+.
단계 2. (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산
MeOH (10 mL) 중 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트의 용액에 25℃에서 NaOH (10 mL, 2.0N)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. pH를 묽은 HCl (1 N)을 사용하여 2로 조정하였다. 혼합물을 DCM (20 mL x 4)으로 추출하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 후속 단계에 직접 사용하였다.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.21 mmol)의 용액에 벤질 알콜 (0.026 mL, 0.25 mmol), 트리에틸아민 (0.032 mL, 0.23 mmol) 및 DPPA (0.050 mL, 0.23 mmol)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1, Rf = 0.50으로 용리함)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg)를 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 577 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)(에틸)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.087 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH (3.6 mg, 0.091 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃~25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 EtI (0.0070 mL, 0.091 mmol)를 혼합물에 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)(에틸)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg)를 갈색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 605 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)(에틸)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.25 mmol)의 용액에 25℃에서 TEA (0.028 mL, 0.20 mmol), Et3SiH (0.16 mL, 0.99 mmol), 및 PdCl2 (44 mg, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS가 tert-부틸 (S)-4-(5-(((벤질옥시)카르보닐)(에틸)아미노)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트가 소모되었음을 나타낸 후, 혼합물을 여과하고, DCM 중 생성물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 471 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
아세틸 클로라이드 (0.088 mL, 1.2 mmol)를 25℃에서 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.25 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 0.025 mmol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 BH3-THF (0.050 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. MeOH (5.0 ml)를 혼합물에 0℃에서 첨가하고, 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.8 mg, 24%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 499 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.33 - 3.80 (m, 3H), 3.58 - 3.24 (m, 2H), 3.20 - 2.97 (m,5H), 1.56 (s, 9H), 1.18 (s, 3H), 1.02 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
하기 화합물을 적절한 피페라진 또는 아민을 사용하여 화합물 366의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 92. 2,2,2-트리플루오로에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 368)의 합성
단계 1. 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (5 mL) 중 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올 (500 mg, 5.0 mmol)의 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)메타논 (980 mg, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (650 mg, 67%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 195 (M+H)+.
단계 2. (S)-2-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (5 ml) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.22 mmol, 화합물 259에 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 0℃ 용액에 HCl (2.0 mL, 디옥산 중 4.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-2-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴. LC/MS ESI (m/z): 360 (M+H)+.
단계 3. 2,2,2-트리플루오로에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 (S)-2-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.14 mmol)의 용액에 2,2,2-트리플루오로에틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (32 mg, 0.17 mmol) 및 DIPEA (0.040 mL, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2,2,2-트리플루오로에틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 23%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 9.21 - 9.17 (s, 1H), 8.65 (d, J = 5.0, 0.8 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.86 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.63 (m, J = 33.3 Hz, 2H), 4.12 (m, 1H), 3.93 (m, J = 12.8 Hz, 2H), 3.64 - 3.56 (m, 1H), 3.55 - 3.44 (m, 1H), 3.36 - 3.24 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.22 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 (dt, J = 4.7, 3.8 Hz, 2H), 0.90 - 0.84 (m, 1H), 0.79 - 0.72 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 알콜을 사용하여 화합물 368의 합성과 유사하게 제조하였다.
실시예 93. 2,2,2-트리플루오로에틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 373)의 합성
단계 1. tert-부틸-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산-물 (18 mL; 5:1 혼합물) 중 tert-부틸-4-[5-아이오도-7-(4-메틸벤젠술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (2.3 g, 4.0 mmol, 화합물 146에 요약된 절차에 따라 제조됨, (2-플루오로페닐)보론산 (0.61 g, 4.4 mmol), K2CO3 (1.1 g, 8.0 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.29 g, 0.40 mmol)의 현탁액을 95℃에서 N2 분위기 하에 18시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 물 및 EtOAc 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc에 의해 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 552 (M+H)+
단계 2. tert-부틸-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (15 mL) 중 tert-부틸-4-[5-(2-플루오로페닐)-7-(4-메틸벤젠술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (1.8 g, 3.3 mmol)의 용액에 1.0M TBAF (6.5 mL, 6.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 물 및 EtOAc 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-4-[5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 92%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 398 (M+H)+
단계 3. tert-부틸-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (30 mL) 중 tert-부틸-4-[5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 3.0 mmol), 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (0.66 g, 3.6 mmol), K3PO4 (1.3 g, 6.0 mmol), CuI (0.17 g, 0.90 mmol) 및 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (0.10 g, 0.90 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 66%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 500 (M+H)+
단계 4. 2-(5-(2-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 2.0 mmol)의 용액에 TFA (4.5 mL, 60 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 EtOAc 및 포화 Na2CO3 용액 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 400 (M+H)+
단계 5. 2,2,2-트리플루오로에틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DCM (5 mL) 중 2,2,2-트리플루오로에틸-1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (58 mg, 0.30 mmol, 화합물 254에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-[5-(2-플루오로페닐)-4-(피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카르보니트릴 (80 mg, 0.20 mmol, 알콜 및 CDI로부터 제조됨)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 잔류물을 물 및 DCM 중에 현탁시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM에 의해 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2,2,2-트리플루오로에틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (18 mg, 17%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 526 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.63 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.48 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (ddd, J = 9.4, 6.1, 1.4 Hz, 2H), 7.29 - 7.19 (m, 2H), 4.45 (q, J = 8.5 Hz, 2H), 3.29 (d, J = 18.5 Hz, 8H).
실시예 94. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 374)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.68 mmol), 5-브로모-1,3-디플루오로-2-메틸벤젠 (280 mg, 1.4 mmol), CuI (64 mg, 0.34 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (23 mg, 0.20 mmol) 및 K3PO4 (430 mg, 2.0 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 85%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 444 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.45 mmol)의 0℃ 혼합물에 NBS (96 mg, 0.54 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL X 2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 42%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522, 524 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol), 피롤리딘-2-온 (33 mg, 0.38 mmol), CuI (18 mg, 0.10 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (6.6 mg, 0.060 mmol) 및 K3PO4 (120 mg, 0.57 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~100% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 50%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 527 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.10 mmol)의 0℃ 용액에 B2H6 (2.0 mL, THF 중 1.0 M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (50 ml X 2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% EtOAc)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로-4-메틸페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 mg, 21%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 7.34 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.67 (s, 1H), 4.97 (br, 1H), 4.29 - 3.83 (m, 3H), 3.50 - 3.09 (m, 4H), 2.91 (넓은 s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.99 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.14 (s, 3H).
실시예 95. 2,2,2-트리플루오로에틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 377)의 합성
단계 1. (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드
DCM (5 mL) 중 (R)-2-(5-시클로프로필-4-(3-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 0.11 mmol, 화합물 368에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 0℃ 용액에 DIPEA (28 mg, 0.22 mmol)에 이어서 DCM (1 mL) 중 트리포스겐 (22 mg, 0.070 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 422 (M+H)+.
단계 2. 2,2,2-트리플루오로에틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
2,2,2-트리플루오로에탄-1-올 (3 mL) 중 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드 (0.11 mmol)의 용액을 N2 하에 70℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 30% 에틸 아세테이트)에 이어서 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2,2,2-트리플루오로에틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 19%, 2단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.32 (s, 1H), 8.59 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.82 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.61 - 4.46 (m, 4H), 4.19 - 4.12 (m, 1H), 4.04 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.39 (dd, J = 13.1, 3.9 Hz, 1H), 3.12 (td, J = 12.5, 3.3 Hz, 1H), 2.04 - 1.98 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.09 - 1.03 (m, 2H), 1.01 - 0.95 (m, 1H), 0.75 - 0.69 (m, 1H).
하기 화합물을 적절한 알콜을 사용하여 화합물 377과 유사한 프로토콜을 사용함으로써 제조하였다.
실시예 96. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 380)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-옥소모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.59 mmol, 화합물 388에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (0.020 mL, 0.59 mmol), K3PO4 (250 mg, 1.2 mmol) 및 트랜스-N,N'-디메틸-1,2-시클로헥실디아민 (170 mg, 1.2 mmol)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 3회 탈기하였다. 혼합물을 95℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 냉각시키고, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르:EtOAc = 20:1에서 10:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-옥소모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-옥소모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.057 mmol)의 용액에 0℃에서 BH3-THF (2.0 mL, 1.0M)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 0℃에서 MeOH (5.0 ml)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔 칼럼, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.097 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (230 mg, 2.0 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (110 mg, 0.097 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 3회 탈기하고, 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O (10 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 mg, 6.0%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 505 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.14 (s, 1H), 8.73 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 5.1, 1.3 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.20 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.80 (M, 5H), 3.07 - 2.76 (m, 6H), 1.42 (s, 9H), 1.04 (d, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아미드를 변경하여 화합물 380과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 97. tert-부틸 (3S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 382)의 합성
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-[7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.090 mmol, 화합물 401에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로프로필보론산 (7.7 mg, 0.090 mmol), 1,1'-비스(디-t-부틸포스피노)페로센 팔라듐 디클로라이드 (12 mg, 0.020 mmol) 및 K2CO3 (250 mg, 1.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(5-시클로프로필-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 47%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 476.6 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.91 - 4.80 (m, 1H), 4.77 - 4.66 (m, 1H), 4.16 - 3.76 (m, 3H), 3.60 - 3.44 (m, 1H), 3.41 - 2.99 (m, 2H), 2.54 - 2.42 (m, 1H), 2.35 - 2.14 (m, 2H), 2.12 - 1.89 (m, 3H), 1.87 - 1.69 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.25 - 1.16 (m, 3H), 0.99 - 0.92 (m, 2H), 0.78 - 0.58 (m, 2H).
실시예 98. tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 383)의 합성
단계 1. 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
EtOH (20 mL) 중 2-(4,6-디클로로피리미딘-5-일)아세트알데히드 (340 mg, 1.8 mmol)의 용액에 비시클로[2.2.2]옥탄-1-아민 히드로클로라이드 (240 mg, 1.5 mmol) 및 TEA (610 mg, 0.83 mL, 6.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~10% EtOAc)에 의해 정제하여 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (330 mg, 84% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 262 (M+H)+.
단계 2. 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (2 mL) 중 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 1.1 mmol)의 용액에 NIS (380 mg, 1.7 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~10% EtOAc)에 의해 정제하여 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (420 mg, 95% 수율)을 분홍색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 388 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (2 mL) 중 7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (360 mg, 1.0 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 4.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 130℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (390 mg, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.25 mmol)의 용액에 CuI (47mg, 0.25 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (28 mg, 0.25 mmol), K3CO4 (420 mg, 2.0 mmol) 및 피롤리딘-2-온 (170 mg, 2.0 mmol)을 첨가하고, 반응물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 30~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (74 mg, 58%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 509 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
빙조에서 유지된 THF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (74 mg, 0.15 mmol)의 용액에 BH3/THF (2.9 mL, 2.9 mmol, 1.0 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙조에 있는 동안 MeOH에 의해 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (실리카 겔, 석유 에테르 중 20%, 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (28 mg, 39%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.07 (d, J = 44.4 Hz, 2H), 3.82 (s, 1H), 3.35 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.17 (m, 1H), 3.17 - 3.04 (m, 2H), 3.04 - 2.87 (m, 1H), 2.87 - 2.71 (m, 2H), 2.38 - 2.23 (m, 6H), 1.97 - 1.86 (m, 4H), 1.86 - 1.75 (m, 6H), 1.72 - 1.67 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.16 - 1.02 (m, 3H).
실시예 99. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 385)의 합성
단계 1. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 1-(1H-이미다졸-1-카르보닐)-1H-이미다졸 (540 mg, 3.4 mmol)의 용액에 실온에서 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-올 (430 mg, 3.4 mmol)을 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 223 (M+H)+
단계 2. tert-부틸-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸-4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}피페라진-1-카르복실레이트 (240 mg, 0.70 mmol, 화합물 146에 요약된 절차에 따라 제조됨), 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (150 mg, 0.84 mmol), K3PO4 (300 mg, 1.4 mmol), CuI (40 mg, 0.21 mmol) 및 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (24 mg, 0.21 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 120℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 90%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 446 (M+H)+.
단계 3. 2-(5-시클로프로필-4-(피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (2 mL) 중 tert-부틸-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.63 mmol)의 0℃ 용액에 TFA (4.5 mL, 60 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 유기 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 346 (M+H)+.
단계 4. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 2-[5-시클로프로필-4-(피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카르보니트릴 (100 mg, 0.29 mmol) 및 DIEA (0.19 mL, 1.2 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일-1H-이미다졸-1-카르복실레이트의 용액 (96 mg, 0.43 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM 및 물 사이에 첨가하여 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 14%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 500 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.32 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 4H), 3.64 (s, 4H), 2.04 (ddd, J = 12.0, 7.6, 4.8 Hz, 1H), 1.73 (s, 6H), 1.09 - 1.01 (m, 2H), 0.88 - 0.79 (m, 2H).
실시예 100. 이소프로필 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 386)의 합성
이소프로필 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (3 mL) 중 (S)-2-(5-시클로프로필-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.14 mmol, 화합물 368에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 0℃ 용액에 TEA (0.050 mL, 0.42 mmol) 및 이소프로필 카르보노클로리데이트 (26 mg, 0.21 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 이소프로필 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 32%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 446 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 9.12 (s, 1H), 8.66 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.87 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.93 (m, J = 12.5, 6.2 Hz, 1H), 4.80 (m, J = 7.2, 4.6 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.93 (m, J = 13.2 Hz, 2H), 3.64 - 3.56 (m, 1H), 3.42 (m, J = 10.5, 5.7 Hz, 1H), 3.27 - 3.15 (m, 1H), 2.11 - 2.04 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.08 (m, J = 8.1, 4.1 Hz, 2H), 0.91 - 0.85 (m, 1H), 0.78 (ddd, J = 10.7, 6.5, 4.1 Hz, 1H).
실시예 101. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-플루오로-3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 387)의 합성
단계 1. 4-플루오로-3-(트리플루오로메톡시)아닐린
H2SO4 (5 mL, H2O 중 30%) 중 4-플루오로-3-(트리플루오로메톡시)아닐린 (200 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaNO2 (140 mg, 2.0 mmol)를 조심스럽게 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, HBr (2.5 mL, H2O 중 48 중량%) 중 CuBr (290 mg, 2.0 mmol) 및 CuBr2 (450 g, 2.0 mmol)의 용액을 온도를 유지하면서 반응 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 이어서 반응물을 DCM으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 조 4-브로모-1-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)벤젠 (390 mg, DCM은 NMR에서 관찰됨)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.42 (ddd, J = 8.8, 4.1, 2.4 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 9.2 Hz, 1H). 19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -58.85 (d, J = 5.3 Hz), -130.06 (q, J = 4.8 Hz).
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-플루오로-3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (71 mg, 0.20 mmol, 화합물 259, 단계 4에서와 유사하게 제조됨) 및 4-브로모-1-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)벤젠 (200 mg, 0.30 mmol, DCM으로 오염됨)의 용액에 CuI (12 mg, 0.060 mmol), K3PO4 (130 mg, 0.60 mmol) 및 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (7.0 mg, 0.060 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-플루오로-3-(트리플루오로메톡시)페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.1 mg, 4.7% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 536 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.74 - 7.54 (m, 2H), 7.33 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.88 - 4.62 (m, 1H), 4.24 - 3.75 (m, 3H), 3.64 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.25 (m, 1H), 3.24 - 3.00 (m, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 - 0.98 (m, 2H), 0.84 - 0.75 (m, 1H), 0.75 - 0.66 (m, 1H).
실시예 102. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 389)의 합성
단계 1. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (20 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 1.50 mmol, 화합물 392에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 tert-부틸 (R)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 3.0 mmol)의 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% EtOAc, V/V)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (520 mg, 62%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 566 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.88 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0M 용액)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 EtOAc (100 ml x 2)로 추출하였다. 합한 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 27%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 412 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.24 mmol), 2-브로모피리딘-4-카르보니트릴 (89 mg, 0.49 mmol), CuI (23 mg, 0.12 mmol), 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (8.3 mg, 0.070 mmol) 및 K3PO4 (150 mg, 0.73 mmol)의 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.30 (s, 1H), 8.70 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.61 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 7.54 (td, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 7.5, 6.5 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.72 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 3.13 - 3.06 (m, 1H), 2.73 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.97 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민을 사용하여 화합물 389의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 103. 2-(5-(2-플루오로페닐)-4-(4-이소부티릴-3,3-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (화합물 391)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
EtOH (10 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 1.7 mmol)의 용액에 tert-부틸 2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 1.9 mmol) 및 DIPEA (450 mg, 3.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 79%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 1.4 mmol)의 용액에 TBAF (10 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 68%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 426 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(5-(피리딘-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.70 mmol)의 용액에 2-브로모이소니코티노니트릴 (240 mg, 1.3 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (47 mg, 0.30 mmol), CuI (25 mg, 0.10 mmol) 및 K3PO4 (200 mg, 2.0 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 110℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,2-에틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.3 mg, 2.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.42 (s, 1H), 8.62 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.45 (td, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 7.25 - 7.21 (m, 1H), 7.18 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 3.50 - 3.42 (m, 4H), 3.26 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.22 (s, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 391의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 104. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 397)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (71 mg, 0.20 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 2-브로모티아졸-5-카르보니트릴 (76 mg, 0.40 mmol)의 용액에 CuI (12 mg, 0.060 mmol), K3PO4 (130 mg, 0.60 mmol) 및 트랜스-1,2-디아미노시클로헥산 (7.0 mg, 0.060 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (14 mg, 15% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 466 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.52 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 5.00 - 4.60 (m, 1H), 4.33 - 3.99 (m, 2H), 3.99 - 3.77 (m, 1H), 3.54 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 3.38 - 3.17 (m, 1H), 3.17 - 2.92 (m, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.11 - 1.00 (m, 2H), 0.89 - 0.77 (m, 2H).
실시예 105. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로부틸-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 398)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-시클로부틸-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.50 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 빙조에서 NaH (40 mg, 1.0 mmol, 미네랄 오일 중 60 중량%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 이어서 DMF (1 mL) 중 브로모시클로부탄 (140 mg, 1.0 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 60℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 NH4Cl 수용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-시클로부틸-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (66 mg, 32% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 412 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.33 - 5.17 (m, 1H), 4.88 - 4.56 (m, 1H), 4.17 - 3.72 (m, 3H), 3.50 (t, J = 10.9 Hz, 1H), 3.40 - 3.22 (m, 1H), 3.21 - 3.00 (m, 1H), 2.55 - 2.44 (m, 2H), 2.44 - 2.30 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.19 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.01 - 0.91 (m, 2H), 0.81 - 0.71 (m, 1H), 0.70 - 0.61 (m, 1H).
실시예 106. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 399)의 합성
단계 1. 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
무수 DMF (25 mL) 중 NaH (1.0 g, 26 mmol, 미네랄 오일 중 60 중량%)의 0℃ 현탁액에 5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 22 mmol)을 여러 부분으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 추가로 20분 동안 교반한 후, 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (4.9 g, 26 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 백색 고체로서의 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.4 g, 65%). LC/MS ESI (m/z): 386, 388 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (9.5 mL, 55 mmol) 중 5-브로모-4-클로로-7-(4-메틸벤젠술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 7.8 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.2 mg, 31 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g, 83%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 550, 552 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 g, 5.4 mmol)의 용액에 TBAF (20 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 23%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 396, 398 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로-5-시아노페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.78 mmol)의 용액에 3-브로모-5-클로로벤조니트릴 (160 mg, 0.78 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸-시클로헥산-1,2-디아민 (210 mg, 1.5 mmol), CuI (270 mg, 1.4 mmol) 및 K3PO4 (320 mg, 1.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로-5-시아노페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 87%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531, 533 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로-5-시아노페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.56 mmol)의 용액에 피롤리딘-2-온 (0.17 mL, 2.3 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸-시클로헥산-1,2-디아민 (0.18 mL, 1.1 mmol), CuI (130 mg, 0.70 mmol) 및 K3PO4 (240 mg, 1.1 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 43%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 536 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.11 mmol)의 0℃ 용액에 보란 (2.0 mL, THF 중 1.0M)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃로 3시간에 걸쳐 가온하였다. 반응물을 빙수조에서 냉각시킨 후 MeOH로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로-5-시아노페닐)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 17%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 522 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 2H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.05 - 4.88 (m, 1H), 4.25 - 3.87 (m, 3H), 3.44 - 3.13 (m, 4H), 3.02 - 2.81 (m, 3H), 1.99 (s, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.18 - 1.08 (m, 3H).
실시예 107. tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 401)의 합성
단계 1. 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-올
EtOH (10 mL) 중 3-아미노시클로헥산-1-올 (1.0 g, 8.7 mmol)의 용액에 2-(4,6-디클로로피리미딘-5-일)아세트알데히드 (1.6 g, 8.7 mmol) 및 TEA (2.9 mL, 21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-올 (1.5 g, 69%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 252.4 (M+H)+.
단계 2. 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-온
DCM (20 mL) 중 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-올 (2.0 g, 7.9 mmol)의 용액에 PCC (2.6 g, 12 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-온 (1.4 g, 70%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 250.4 (M+H)+.
단계 3. 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (20 mL) 중 3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-온 (1.4 g, 5.6 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST (1.4 g, 8.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 밤새 가온되도록 하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.3 g, 85%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 272.4 (M+H)+.
단계 4. 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (6 mL) 중 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 2.2 mmol)의 용액에 아이오도 (술파닐리덴)아민 (460 mg, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 55℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (350 mg, 40%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 398.3 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (10 mL, 55 mmol) 중 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 0.76 mmol)의 용액에 tert-부틸 (3S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (370 mg, 87%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 562.5 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-[7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 0.40 mmol)의 용액에 피롤리딘-2-온 (0.14 mL, 1.8 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸-시클로헥산-1,2-디아민 (130 mg, 0.90 mmol), CuI (85 mg, 0.40 mmol) 및 K3PO4 (95 mg, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 39%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 519.7 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 유지된 THF (4 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.090 mmol)의 용액에 보란 (2.0 mL, THF 중 1.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 3시간에 걸쳐 가온되도록 하였다. 이어서 반응물을 빙수조에서 냉각시키면서 MeOH로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 31%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 505.3 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.03 - 4.86 (m, 2H), 4.27 - 3.82 (m, 3H), 3.37 - 2.81 (m, 7H), 2.54 - 2.44 (m, 1H), 2.35 - 2.15 (m, 2H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 5H), 1.85 - 1.72 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.16 - 1.04 (m, 3H).
실시예 108. tert-부틸-(S)-4-(7-((1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 406)의 합성
단계 1. 7-((1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
건조 톨루엔 (20 mL) 중 PPh3 (4.1 g, 16 mmol)의 0℃ 용액에 DIAD (3.1 mL, 16 mmol)를 적가하고, 이어서 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.5 g, 8.9 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서 (1S,2S,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-올 (0.50 g, 4.5 mmol)을 첨가하고, 추가로 18시간 동안 교반하고, 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 물 및 EtOAc의 첨가에 의해 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc에 의해 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (0.20 g, 12%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 374 (M+H)+
단계 2. tert-부틸-(S)-4-(7-((1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (0.35 mL, 2.1 mmol) 중 7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.53 mmol)의 용액에 tert-부틸-(3S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-(3S)-4-{7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 35%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 538 (M+H)+
단계 3. tert-부틸-(S)-4-(7-((1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸-(3S)-4-{7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol), 피롤리딘-2-온 (0.11 mL, 1.5 mmol), K3PO4 (320 mg, 1.5 mmol), CuI (35 mg, 0.18 mmol) 및 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (24 mg, 0.21 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸-(3S)-4-{7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 87%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 495 (M+H)+
단계 4. 트랜스-N1-(2-(4-(2-플루오로페닐)피페라진-1-일)시클로헥실)-N4,N4-디메틸벤젠-1,4-디술폰아미드
건조 THF (3.0 mL) 중 tert-부틸-(3S)-4-{7-[(1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일]-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol)의 0℃ 용액에 BH3/THF (0.65 mL, THF 중 1.0 M)를 적가하고, 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 및 에틸 아세테이트의 첨가에 의해 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸-(S)-4-(7-((1S,2R,4R)-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 17%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 481 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 10.7, 4.2 Hz, 1H), 5.14 (dt, J = 9.2, 4.4 Hz, 0.8H), 4.99 (dd, J = 25.8, 10.5 Hz, 1H), 4.74 (td, J = 8.3, 5.0 Hz, 0.2H), 4.32 - 3.78 (m, 3H), 3.44 - 2.81 (m, 7H), 2.68 (s, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 1H), 2.25 - 2.11 (m, 1H), 2.07 - 1.87 (m, 4H), 1.76 - 1.57 (m, 4H), 1.52 - 1.31 (m, 12H), 1.18 - 1.01 (m, 3H).
실시예 109. tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 407)의 합성
표제 화합물을 하기 기재된 바와 같이 tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 반응물로서 사용하여 화합물 388에 대해 기재된 바와 유사한 절차에 의해 제조하였다.
Zn(CN)2 (31 mg, 0.26 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (31 mg, 0.027 mmol)에 건조 DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (26 mg, 0.054 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 N2 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc로 희석하고, 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (석유 에테르 / EtOAc = 4:1, v/v)에 이어서 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (17 mg, 65%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.29 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.96 (br. s, 1H), 4.01 (d, J = 82.7 Hz, 3H), 3.82 (dd, J = 13.5, 6.6 Hz, 2H), 3.66 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.51 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 3.40 (br. s, 1H), 2.96 (br. s, 1H), 2.29 (m, J = 7.0 Hz, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.16 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 110. tert-부틸 (1S,6R)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (화합물 408 및 화합물 409)의 합성
단계 1. tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
EtOH (5 mL) 중 4-클로로-5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (170 mg, 0.87 mmol)의 용액에 DIEA (0.14 mL, 0.87 mmol), 및 tert-부틸 2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 0.72 mmol)를 이 순서로 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (140 mg, 0.40 mmol)의 용액에 TBAF (1.5 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (90 mg, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 356 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 5-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (90 mg, 0.25 mmol)의 용액에 CuI (24 mg, 0.13 mmol), K3PO4 (160 mg, 0.75 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (9.0 mg, 0.080 mmol) 및 2-브로모이소니코티노니트릴 (93 mg, 0.51 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (66 mg, 57%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
이성질체의 분리: tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 44 mg를 SFC (정제용 분리 방법, 기기: 워터스 타르 80 정제용 SFC, 칼럼: 키랄셀 OJ, 250 x 21.2mm I.D., 5 μm, 이동상: CO2의 경우 A 및 MEOH+0.1%NH3/H2O의 경우 B, 구배: B 40%, 유량: 50 mL /분, 배압: 100 bar, 칼럼 온도: 35℃, 파장: 254 nm, 사이클-시간: 7분, 용리 시간: 1.5시간)에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다:
피크 1: 보다 짧은 체류 시간, 화합물 408 (tert-부틸 (1S,6R)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트, 22 mg)로서 할당됨. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.60 - 8.57 (m, 1H), 8.46 - 8.39 (m, 1H), 7.85 - 7.81 (m, 1H), 7.36 - 7.32 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.67 - 3.39 (m, 3H), 3.10 - 2.98 (m, 1H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.22 - 1.12 (m, 1H), 1.00 - 0.74 (m, 4H), 0.50 - 0.44 (m, 1H).
피크 2: 보다 긴 체류 시간, 화합물 409 (tert-부틸 (1R,6S)-5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트, 22 mg)로서 할당됨: LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 - 9.29 (m, 1H), 8.59 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.45 - 8.40 (m, 1H), 7.85 - 7.81 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 1H), 3.67 - 3.60 (m, 0.5H), 3.56 - 3.46 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 1.5H), 3.10 - 2.98 (m, 1H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.21 - 1.13 (m, 1H), 0.99 - 0.90 (m, 2H), 0.82 - 0.68 (m, 2H), 0.50 - 0.44 (m, 1H).
실시예 111. tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-시아노피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 410)의 합성
단계 1. tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-((벤질옥시)카르보닐)피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 0.10 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 벤질 3-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (47 mg, 0.20 mmol)의 용액에 CMBP (48 mg, 0.20 mmol)를 N2 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-((벤질옥시)카르보닐)피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 60% 수율)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 575 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (3S)-4-(5-시클로프로필-7-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (1 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-((벤질옥시)카르보닐)피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 0.060 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 Pd/C (40 mg, 약 55% 물로 습윤됨)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. N2로 퍼징한 후, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 tert-부틸 (3S)-4-(5-시클로프로필-7-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 441 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-시아노피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN (1 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-(5-시클로프로필-7-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트의 용액에 K2CO3 (140 mg, 1.0 mmol) 및 BrCN (110 mg, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(1-시아노피페리딘-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.2 mg, 15% 수율, 2단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 466 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.89 - 4.64 (m, 2H), 4.18 - 3.73 (m, 3H), 3.64 (dt, J = 10.5, 5.2 Hz, 1H), 3.58 - 3.41 (m, 2H), 3.39 - 3.20 (m, 2H), 3.19 - 2.96 (m, 2H), 2.20 - 2.09 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.97 - 1.87 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.01 - 0.91 (m, 2H), 0.77 - 0.67 (m, 1H), 0.67 - 0.56 (m, 1H).
실시예 112. tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (화합물 412)의 합성
단계 1. tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
EtOH (10 mL) 중 4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (280 mg, 0.70 mmol, 스즈키(Suzuki) 조건: Pd2(dba)3, xantphos, K3PO4, DMF, 60℃)의 용액에 DIEA (0.35 mL, 2.1 mmol) 및 tert-부틸 2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (210 mg, 1.0 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (270 mg, 95%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 564 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (270 mg, 0.66 mmol)의 용액에 TBAF (2.8 mL)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭한 다음, 이를 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (160 mg, 57%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 410 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 5-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (160 mg, 0.38 mmol)의 용액에 CuI (36 mg, 0.19 mmol), K3PO4 (240 mg, 1.1 mmol), 트랜스-시클로헥산-1,2-디아민 (0.014 mL, 0.11 mmol) 및 2-브로모이소니코티노니트릴 (140 mg, 0.76 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 5-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디아자비시클로[4.1.0]헵탄-2-카르복실레이트 (170 mg, 88%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.42 (s, 1H), 8.61 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.40 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.22 - 7.12 (m, 2H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 3.44 - 3.28 (m, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 2.66 - 2.57 (m, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 1.43 - 1.38 (m, 9H), 0.63 - 0.52 (m, 1H), 0.20 - 0.13 (m, 1H).
실시예 113. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피라졸-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 413)의 합성
단계 1. 메틸 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트
DMF (6 mL) 중 메틸 3-브로모-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (620 mg, 3.0 mmol)의 용액에 K2CO3 (620 mg, 4.5 mmol) 및 MeI (2.1 g, 15 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0-40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하고, 농축시켜 2종의 화합물을 수득하였다:
백색 고체로서의 메틸 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (420 mg, 63%). LC/MS ESI (m/z): 219/221 (Br) (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.81 (s, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
백색 고체로서의 메틸 5-브로모-1-메틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (190 mg, 29%). LC/MS ESI (m/z): 219/221 (Br) (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.83 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.92 (s, 3H).
단계 2. 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드
메틸 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (500 mg, 2.3 mmol)를 MeOH (2 mL) 및 NH3/H2O (4 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물 및 에틸 아세테이트로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드를 백색 고체 (290 mg, 63% 수율)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 204/206 (Br) (M+H)+.
단계 3. 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르보니트릴
3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드 (280 mg, 1.4 mmol)를 PhP(O)Cl2 (3 mL) 중에 용해시키고, 80℃에서 밤새 교반하였다. 빙조에서 냉각시킨 후, 반응물을 수성 NaHCO3로 켄칭하고, 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르보니트릴을 백색 고체 (230 mg, 89% 수율)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 없음. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.77 (s, 1H), 4.04 (s, 3H).
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피라졸-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 0.25 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 3-브로모-1-메틸-1H-피라졸-5-카르보니트릴 (70 mg, 0.38 mmol)의 용액에 CuI (24 mg, 0.13 mmol), K3PO4 (210 mg, 1.0 mmol) 및 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (18 mg, 0.13 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 필터 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피라졸-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 11% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 463 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.79 - 4.66 (m, 1H), 4.34 - 3.66 (m, 6H), 3.53 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 3.36 - 3.03 (m, 2H), 2.06 - 1.95 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.07 - 0.93 (m, 2H), 0.87 - 0.79 (m, 1H), 0.77 - 0.68 (m, 1H).
실시예 114. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 414)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
건조 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (360 mg, 1.0 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 메틸 3-히드록시시클로부탄-1-카르복실레이트 (260 mg, 2.0 mmol)의 용액에 CMBP (480 mg, 2.0 mmol)를 N2 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 470 (M+H)+.
단계 2. (S)-3-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로부탄-1-카르복실산
H2O (5 mL) 및 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.64 mmol)의 용액에 LiOH (330 mg, 8.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 수성 층을 분리하고, 유기 층을 NaHCO3로 2회 추출하였다. 합한 수성 층을 HCl (1.0 M)로 중화시키고, EtOAc와 함께 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-3-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로부탄-1-카르복실산을 백색 고체 (140 mg, 47% 수율)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 456 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-카르바모일시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 및 DIPEA (0.40 mL) 중 (S)-3-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로부탄-1-카르복실산 (130 mg, 0.30 mmol)의 용액에 NH4Cl (60 mg, 1.1 mmol), HOBT (110 mg, 0.84 mmol) 및 EDCI (160 mg, 0.84 mol)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 수성 NaHCO3으로 켄칭하고, 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-카르바모일시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 오일 (150 mg, 포획된 DMF 함유)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 455 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
빙조에서 유지된 DCM (4 mL) 및 DIPEA (520 mg, 0.66 mL, 4.0 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-카르바모일시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 포획된 DMF 함유)의 용액에 TFAA (420 mg, 0.27 mL, 2.0 mmol)를 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NaHCO3으로 켄칭하고, 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-시아노시클로부틸)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 백색 고체 (19 mg, 21%)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 437 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.51 - 5.33 (m, 1H), 4.81 - 4.61 (m, 1H), 4.20 - 3.71 (m, 3H), 3.49 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 3.40 - 3.20 (m, 2H), 3.18 - 2.99 (m, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 2H), 2.02 - 1.87 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.19 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.02 - 0.90 (m, 2H), 0.78 - 0.67 (m, 1H), 0.66 - 0.55 (m, 1H).
실시예 115. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 417)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.20 mmol, 화합물 388에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 25℃에서 CuI (19 mg, 0.10 mmol), 6-메틸모르폴린-3-온 (45 mg, 0.40 mmol) 및 K2CO3 (54 mg, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 이어서 혼합물을 120℃로 가열하고, 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (20 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 20 - 25% 석유 에테르/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-메틸-5-옥소모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 55%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 542 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-메틸-5-옥소모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.11 mmol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 BH3-THF (1.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온한 다음, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 MeOH (10.0 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 50:1 - 40:1 석유 에테르/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 68%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.076 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (53 mg, 0.45 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (44 mg, 0.040 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기한 다음, 120℃로 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 50:1 - 30:1 석유 에테르/에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 26%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 519 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
라세미 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 0.019 mmol)를 키랄 정제용 HPLC (IA-H 4.6*250mm IPA+0.05%DEA 40% 8분)에 의해 분리하였다.
보다 긴 체류 시간 피크를 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-2-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 mg, 0.004 mmol)로 표지하고, 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 519 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 (s, 1H), 8.52 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.25 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.29 - 4.04 (m, 2H), 3.93 - 3.69 (m, 4H), 3.43 - 3.30 (m, 2H), 3.28 - 3.11 (m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.55 - 2.33 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.10 - 1.05 (m, 3H), 0.83 - 0.76 (m, 3H)
실시예 116. tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 418)의 합성
단계 1. 3-브로모-4-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서 DMF (15 mL) 중 4-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.0 g, 6.6 mmol)의 용액에 NBS (1.7 g, 9.8 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 Na2SO3 용액으로 켄칭한 다음, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-브로모-4-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.4 g, 94%)을 담황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 231, 233 (M+H)+.
단계 2. 3-브로모-4-클로로-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
DCM (50 mL) 중 3-브로모-4-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.4 g, 6.0 mmol), (3,5-디플루오로페닐)보론산 (2.9 g, 18 mmol), Cu(OAc)2 (2.8 g, 15 mmol) 및 피리딘 (3.0 mL, 37 mmol)의 혼합물을 산소 분위기 하에 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 암모니아로 처리하고, 여과하고, 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트, v/v)에 의해 정제하여 3-브로모-4-클로로-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (560 mg, 27%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 343, 345 (M+H)+.
단계 3. 3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-4-플루오로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
DMSO (2 mL) 중 3-브로모-4-클로로-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (100 mg, 0.30 mmol)의 용액에 TBAF (4.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2일 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-4-플루오로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (50 mg, 53%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 327, 329 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-4-플루오로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (50 mg, 0.15 mmol) 및 tert-부틸 (R)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 1.5 mmol)의 혼합물 을 150℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~35%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 38%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 507, 509 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(3-브로모-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.060 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (51 mg, 0.60 mmol), K2CO3 (160 mg, 1.2 mmol) 및 Pd-118 (19 mg, 0.030 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(3-시클로프로필-1-(3,5-디플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.8 mg, 24%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 469 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 9.9, 4.4 Hz, 2H), 6.87 - 6.80 (m, 2H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 1H), 4.00 - 3.94 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 3.44 - 3.30 (m, 2H), 2.91 - 2.79 (m, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.31 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.09 - 1.03 (m, 2H), 0.91 - 0.86 (m, 1H), 0.65 - 0.58 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 아릴 할라이드로부터 화합물 418의 합성과 유사하게 제조하였다.
실시예 117. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 419)의 합성
단계 1. 7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (10 mL) 중 5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 3.6 mmol)의 용액에 CS2CO3 (2.4 g, 7.3 mmol) 및 4-클로로-2-플루오로피리딘 (0.96 g, 7.3 mmol)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃로 가열하고, 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (50 mL)에 붓고, EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc 30:1)에 의해 정제하여 7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.2 g, 3.1 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 387 (M+H)+.
단계 2. (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-5-메틸모르폴린-3-온
DMF (10 mL) 중 7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 2.6 mmol)의 용액에 25℃에서 (6R)-6-메틸피페리딘-2-온 (0.59 g, 5.2 mmol), K3PO4 (1.1 g, 5.2 mmol), CuI (0.088 mL, 2.6 mmol) 및 트랜스-N,N'-디메틸-1,2-시클로헥산디아민 (0.74 g, 5.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 120℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (50 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 10:1)에 의해 정제하여 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-5-메틸모르폴린-3-온 (50 mg, 5.0%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 374 (M+H)+.
단계 3. (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸모르폴린
THF (2 mL) 중 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-5-메틸모르폴린-3-온 (50 mg, 0.13 mmol)의 용액에 0℃에서 BH3-THF (1.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 MeOH (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 혼합물을 농축시키고, 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸모르폴린 (40 mg, 85%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 360 (M+H)+.
단계 4. (R)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올
DMF (5 mL) 중 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸모르폴린 (40 mg, 0.11 mmol)의 용액에 25℃에서 LiCl (4.7mg, 0.11 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 (0.18 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 120℃로 가열한 다음, 25℃로 냉각시키고, H2O (30 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물 (R)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (60 mg)을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 346 (M+H)+.
단계 5. (R)-4-(4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸모르폴린
POCl3 (2.0 ml, 22 mmol) 중의 (R)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (0.11 mmol, 이론치)의 용액을 120℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 POCl3를 제거하였다. 잔류물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, H2O (10 ml x 3)로 세척하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 (R)-4-(4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸 모르폴린 (30 mg, 75%, 2단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 364 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (1.0 mL) 중 (R)-4-(4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-3-메틸모르폴린 (30 mg, 0.082 mmol)의 용액에 25℃에서 tert-부틸 (3S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 34%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 0.028 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (20 mg, 0.17 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (33 mg, 0.028 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 120℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (10 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 이어서 정제용 HPLC (0.1% 포름산)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-((R)-3-메틸모르폴리노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 mg, 6.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 519 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.59 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.29 - 4.54 (m, 2H), 4.35 - 4.04 (m, 1H), 3.99 - 3.85 (m, 3H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.50 - 3.39 (m, 1H), 3.36 - 3.27 (m, 1H), 3.23 - 3.03 (m, 4H), 2.93 (s, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.26 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 산 무수물로부터 화합물 419의 합성과 유사한 절차로 제조하였다.
실시예 118. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 424) 및 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 422)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, N2 하에 건조 DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아세트아미도-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.82 mmol)에 NaH (130 mg, 미네랄 오일 중 60%, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, CH3CH2I (260 mg, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 추가로 20분 동안 교반하고, 얼음으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~33% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 66%)를 황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, 건조 THF (4 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-에틸아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.55 mmol)에 N2 하에 BH3-THF (8.0 mL, THF 중 1.0 M)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 이를 MeOH로 조심스럽게 켄칭하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~13% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 56%)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
밀봉된 튜브에 Zn(CN)2 (90 mg, 0.77 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (90 mg, 0.078 mmol)를 첨가하였다. 이어서 건조 DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 튜브를 N2로 퍼징하고, 밀봉하였다. 혼합물을 120℃에서 2.5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 혼합물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 유기 층을 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~14% EtOAc)에 의해 정제하였다. 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 92%)를 황색 발포체로서 수득하였다. 이 생성물 35 mg를 추가로 정제용 HPLC 및 정제용 TLC에 의해 정제하여 제출을 위한 순수한 화합물 12 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 27.8 Hz, 1H), 4.45 - 3.80 (m, 3H), 3.38 (t, J = 12.1 Hz, 1H), 3.30 - 3.10 (m, 5H), 3.01 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.16 (d, J = 5.1 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
단계 4. (S)-2-(5-(디에틸아미노)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (8 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.22 mmol)에 TFA (1.0 mL)를 실온에서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-2-(5-(디에틸아미노)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 391 (M+H)+.
단계 5. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 (S)-2-(5-(디에틸아미노)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.13 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (85 mg, 0.38 mmol)에 DIPEA (66 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 유기 층을 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~14% EtOAc)에 이어서 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디에틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (34 mg, 48%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 545 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.58 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 30.0 Hz, 1H), 4.51 - 4.23 (m, 1H), 4.09 (dd, J = 67.8, 12.8 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 40.2, 13.3 Hz, 1H), 3.45 - 3.26 (m, 2H), 3.24 - 2.99 (m, 5H), 1.72 (s, 6H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
실시예 119. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 426)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
혼합 무수물을 Ac2O (2 mL) 및 HCOOH (0.9 mL)의 혼합물을 N2 하에 60℃에서 2시간 동안 교반함으로써 제조하였다. 톨루엔 (9 mL) 중 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (400 mg, 0.85 mmol, 화합물 427에 요약된 절차에 따라 제조됨)에 DPPA (300 mg, 1.1 mmol) 및 Et3N (170 mg, 1.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서 HCOOH 1.5 mL 및 혼합 무수물 1.6 mL을 첨가하고, 혼합물을 60℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. NaHCO3 (수성)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 70%)를 담황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.59 mmol)를 빙조에서 N2 하에 10분 동안 냉각시켰다. 이어서 NaH (95 mg, 미네랄 오일 중 60%, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 이를 빙조에서 냉각시키고, CH3I (170 mg, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 30분 후, 혼합물을 얼음으로 조심스럽게 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 5% LiCl (수성) 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켜 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 97%)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
건조 THF (6 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.58 mmol)를 빙조에서 15분 동안 냉각시켰다. 이어서 BH3-Me2S (3.0 mL, THF 중 2.0 M)를 적가하였다. 혼합물을 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하고, MeOH로 조심스럽게 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc 및 H2O 사이에 분배하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~14% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 57%)를 담황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
밀봉된 튜브에서, Zn(CN)2 (95 mg, 0.81 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (95 mg, 0.082 mmol)에 DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.33 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 N2로 퍼징하고, 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 유기 층을 LiCl (5% 수성) 및 염수로 세척하고, 농축시켰다. 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 95%)를 황색 발포체로서 수득하였다. 이 생성물 60 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 제출을 위한 순수한 생성물 40 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 463 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.36 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.35 - 3.84 (m, 3H), 3.42 (td, J = 13.0, 3.2 Hz, 1H), 3.29 (s, 1H), 3.12 - 2.93 (m, 1H), 2.77 (s, 6H), 1.49 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 출발 물질로서 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산을 사용한 것을 제외하고는 화합물 426에 대해 기재된 것과 유사한 합성 절차에 의해 제조하였다.
실시예 120. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 427)
단계 1. (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-3-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산
H2O (4.0 mL) 및 MeOH (16 mL) 중 메틸 (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-3-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (2.0 g, 4.1 mmol, 화합물 443에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 25℃에서 NaOH (0.66 g, 16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (40 mL)에 붓고, NaOH (2N)를 사용하여 pH = 7로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-3-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (800 mg, 41%)을 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 471 (M-H)-.
단계 2. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (3 mL) 중 (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-3-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (200 mg, 0.42 mmol)의 용액에 25℃에서 Et3N (86 mg, 0.85 mmol) 및 DPPA (0.18 mL, 0.85 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 HCOOH (39 mg, 0.85 mmol)를 혼합물에 25℃에서 첨가하였다. 포르밀 아세테이트 (75 mg, 0.85 mmol)를 혼합물에 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 60℃로 가열하고, 2시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시켰다. 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 100:1에서 10:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.42 mmol)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.21 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH (17 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, MeI (60 mg, 0.42 mmol)를 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고, 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (5.0 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc (50.0 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60.0 mg, 59%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486(M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-메틸포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.10 mmol)의 용액에 0℃에서 BH3-THF (0.51 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 다음, MeOH (5.0 ml)를 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 농축시키고, 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 40:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.064 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (45 mg, 0.38 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (37 mg, 0.032 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 120℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)으로 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디메틸아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 34%)를 황색 고체로 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 463 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.36 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.93 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.44 - 3.32 (m, 1H), 3.26 (dd, J = 13.2, 3.6 Hz, 1H), 2.99 (td, J = 12.4, 3.2 Hz, 1H), 2.78 (s, 6H), 1.49 (s, 9H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 합성의 상이한 단계에서 상응하는 산 무수물 및 적절한 커플링 파트너/아민으로부터 화합물 427의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 121. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (화합물 429)의 합성
단계 1. 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (25 mL) 중 5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 22 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (5.4 g, 44 mmol) 및 Cs2CO3 (36 g, 110 mmol)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (6.0 g, 83%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 330, 332 (M+H)+.
단계 2. 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (20 mL) 중 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (6.0 g, 18 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (31 g, 180 mmol) 및 LiOH (7.7 g, 180 mmol)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (5.5 g, 96%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 316, 318 (M+H)+.
단계 3. 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
POCl3 (20 mL)의 용액에 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (5.5 g, 17 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 이소니코티노니트릴 (5.0 g, 86%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 334,336 (M+H)+.
단계 4. 2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
THF (5 mL) 중 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (500 mg, 1.5 mmol)의 용액에 0℃에서 TBAF (5.0 ml, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (100 mg, 25%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 318,320 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트
2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 이소니코티노니트릴 (100 mg, 031 mmol)의 용액에 tert-부틸 4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (270 mg, 1.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (80 mg, 50%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510, 512 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (27 mg, 0.31 mmol), K2CO3 (430 mg, 3.1 mmol) 및 Pd-118 (4.0 mg, 0.020 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물 (80 mg)을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (35 mg, 40%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.25 (s, 1H), 8.54 - 8.48 (m, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.28 - 7.26 (m, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 2H), 3.69 - 3.58 (m, 2H), 3.49 - 3.21 (m, 2H), 1.92 - 1.84 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 0.97 - 0.88 (m, 4H), 0.75 - 0.64 (m, 4H).
하기 화합물을 상응하는 아민 (tert-부틸 3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트)으로부터 화합물 429의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 122. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 431)
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-클로로피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.28 mmol, 화합물 259에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 25℃에서 4,6-디클로로피리미딘 (0.051 mL, 0.56 mmol) 및 Cs2CO3 (180 mg, 0.56 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반한 다음, H2O (500 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 40:1 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-클로로피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 82%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 470 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-클로로피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.040 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (28 mg, 0.24 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.020 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기한 다음, 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (0.1% 포름산)에 의해 정제하였다. tert-부틸 (S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 mg, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 461 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.53 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.26 - 3.73 (m, 3H), 3.54 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 3.39 - 2.93 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 0.91 - 0.75 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 보론산으로부터 화합물 431의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 123. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 432)
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.28 mmol, 화합물 259에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-브로모피리미딘-4-카르보니트릴 (77 mg, 0.42 mmol), Pd2(dba)3 (130 mg, 0.14 mmol), X-Phos (210 mg, 0.28 mmol) 및 Cs2CO3 (180 mg, 0.56 mmol)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 탈기하였다. 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 mg, 1.4%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 461 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.21 - 3.77 (m, 3H), 3.54 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 3.20 (d, J = 77.9 Hz, 2H), 2.03 - 1.95 (m, 1H),1.50 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 0.86 (d, J = 27.0 Hz, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 화합물로부터 화합물 432의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 124. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (화합물 435)의 합성
단계 1. 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (25 mL) 중 5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 22 mmol, MeONa 및 아릴 브로마이드로부터 제조됨)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (5.4 g, 44 mmol) 및 Cs2CO3 (36 g, 110 mmol)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (6.0 g, 83%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 330, 332 (M+H)+.
단계 2. 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (20 mL) 중 2-(5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (6.0 g, 18 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (31 g, 180 mmol) 및 LiOH (7.7 g, 180 mmol)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (5.5 g, 96%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 316, 318 (M+H)+.
단계 3. 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
POCl3 (20 mL)의 용액에 2-(5-브로모-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (5.5 g, 17 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (5.0 g, 86%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 334,336 (M+H)+.
단계 4. 2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
THF (5 mL) 중 2-(5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (500 mg, 1.5 mmol)의 용액에 0℃에서 TBAF (5.0 ml, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (100 mg, 25%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 318, 320 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트
2-(5-브로모-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일) 이소니코티노니트릴 (100 mg, 0.31 mmol) 및 tert-부틸 4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (270 mg, 1.3 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (80 mg, 50%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510, 512 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트
1,4-디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 ml) 중 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (44 mg, 0.31 mmol), K2CO3 (65 mg, 0.47 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (4.0 mg, 0.020 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물 (100 mg)을 수득하였다. 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트 (70 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (s, 1H), 8.60 - 8.54 (m, 2H), 8.23 (s, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 3H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 3.55 - 3.37 (m, 2H), 3.32 - 2.94 (m, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 2H), 1.34 (s, 9H), 0.89 - 0.76 (m, 4H).
하기 화합물을 상응하는 아민 (tert-부틸 3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트)으로부터 화합물 435의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 125. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 436)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (400 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 g, 110 mmol, 화합물 268에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TBAF (440 mL, 440 mmol, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 g, 91%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 444 (M+H)+
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (60 mL) 중 tert-부틸 4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}피페리딘-1-카르복실레이트 (4.5 g, 10 mmol) 및 2-플루오로피리딘-4-카르보니트릴 (1.8 g, 15 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (16 g, 50 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 빙수로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.6, 66%)를 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 546 (M+H)+
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (50 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-[7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (550 mg, 1.0 mmol), 시클로부틸보론산 (0.19 mL, 2.0 mmol), K2CO3 (2.7 g, 19 mmol) 및 Pd-118 (66 mg, 0.10 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하고, 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 10%)를 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 474 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (s, 1H), 8.66 - 8.58 (m, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 1H), 4.07 - 3.89 (m, 1H), 3.80 - 3.63 (m, 2H), 3.58 - 3.43 (m, 3H), 3.29 - 3.12 (m, 1H), 2.53 - 2.38 (m, 2H), 2.29 - 2.02 (m, 3H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.20 (d, J = 4.8 Hz, 3H). 이 반응을 반복하여 후속 단계를 위한 또 다른 배치를 제조하였다.
단계 4. (S)-2-(5-시클로부틸-4-(2-메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
0℃에서, DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.21 mmol)의 용액에 TFA (0.31 mL, 4.2 mmol)를 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS(ESI)m/z: 374 (M+H)+
단계 5. 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 2-{5-시클로부틸-4-[(2S)-2-메틸피페라진-1-일]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일}피리딘-4-카르보니트릴 (35 mg, 0.090 mmol) 및 DIEA (0.090 mL, 0.56 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 1H-이미다졸-1-카르복실레이트의 용액 (42 mg, 0.19 mmol, 화합물 243에 요약된 절차에 따라 제조됨)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 75℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.5 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 528 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 8.61 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.96 (dd, J = 65.1, 13.4 Hz, 1H), 3.71 (dd, J = 20.3, 11.4 Hz, 2H), 3.51 (d, J = 12.6 Hz, 3H), 3.37 - 3.14 (m, 1H), 2.45 (ddd, J = 14.5, 9.9, 4.9 Hz, 2H), 2.29 - 1.91 (m, 4H), 1.72 (d, J = 3.9 Hz, 6H), 1.19 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 126. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1H-이미다졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 440)의 합성
단계 1. 메틸 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복실레이트
사염화탄소 (10 mL) 중 메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복실레이트 (260 mg, 1.0 mmol)의 용액에 NBS (200 mg, 1.1 mmol) 및 AIBN (16 mg, 0.10 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 3시간 동안 가열한 다음, 포화 NaHCO3로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0-60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 메틸 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복실레이트를 백색 고체 (200 mg, 61% 수율)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 335/337 (Br) (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77 (s, 1H), 5.30 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.59 - 3.51 (m, 2H), 0.96 - 0.89 (m, 2H), -0.01 (s, 9H).
메틸 5-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복실레이트를 또한 무색 오일 (64 mg, 19%)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z) 335/337 (Br) (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.63 - 3.56 (m, 2H), 0.94 - 0.88 (m, 2H), -0.03 (s, 9H).
단계 2. 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복스아미드
메틸 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복실레이트 (1.3 g, 3.9 mmol)를 MeOH (2 mL) 및 NH3/H2O (4 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 물로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시켜 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복스아미드를 백색 고체 (950 mg, 77% 수율)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 320/322 (Br) (M+H)+.
단계 3. 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르보니트릴
DCM (20 mL) 및 DIPEA (7 mL) 중 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르복스아미드 (900 mg, 2.8 mmol)의 용액에 TFAA (2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시켜 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르보니트릴을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 302/304 (Br) (M+H)+.
단계 4. 2-브로모-1H-이미다졸-5-카르보니트릴
DCM (5 mL) 및 EtOH (0.5mL) 중 2-브로모-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-4-카르보니트릴 (이전 단계로부터 수득함)의 혼합물에 TFA (10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 2-브로모-1H-이미다졸-5-카르보니트릴을 백색 고체 (400 mg, 83%, 2단계에 걸침)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 172/174 (Br) (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.90 (s, 1H), 2.67 (s, 1H).
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1H-이미다졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (71 mg, 0.20 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 2-브로모티아졸-5-카르보니트릴 (34 mg, 0.20 mmol)의 용액에 CuI (19 mg, 0.10 mmol), K3PO4 (210 mg, 1.0 mmol) 및 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (14 mg, 0.10 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~10%, MeOH)에 의해 정제하여 생성물과의 구리 착물을 자주색 고체로서 수득하였다. 착물을 유기 상이 무색이 될 때까지 DCM과 EDTANa2 (수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1H-이미다졸-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.2 mg, 14% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 449 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.26 (br, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 5.00 - 4.70 (m, 1H), 4.34 - 3.72 (m, 3H), 3.53 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 3.36 - 2.88 (m, 2H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.26 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.09 - 0.98 (m, 2H), 0.86 - 0.75 (m, 2H).
실시예 127. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 442)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-시클로프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCE (40 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.21 mmol, 화합물 427에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로프로필보론산 (36 mg, 0.42 mmol), K2CO3 (88 mg, 0.64 mmol), 2,2'-디피리딜 (330 mg, 0.21 mmol) 및 Cu(OAc)2 (38 mg, 0.21 mmol)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 O2로 3회 탈기하고, O2 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음, H2O (100 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 30:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-시클로프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 47%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-시클로프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.098 mmol)의 용액에 0℃에서 BH3-THF (0.98 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 MeOH (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (SiO2, 석유 에테르:EtOAc = 50:1에서 40:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 41%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.040 mmol)의 용액에 25℃에서 Zn(CN)2 (28 mg, 0.24 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.020 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시켰다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (0.1% 포름산)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 mg, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 489 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 - 9.24 (m, 1H), 8.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.24 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.19 - 3.67 (m, 3H), 3.28 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 3.22 - 2.83 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.27 - 2.19 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.05 (s, 3H), 0.72 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 0.51 - 0.37 (m, 2H).
실시예 128. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(이소프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 443)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (200 mg, 0.42 mmol, 화합물 366에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TEA (0.20 mL, 1.3 mmol) 및 DPPA (230 mg, 0.84 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. HCOOH (0.75 mL) 및 아세트산 포름산 무수물 (2.0 mL)의 제2 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하여 혼합 무수물을 수득하였다. 혼합 무수물을 제1 반응에 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 NaHCO3로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 83%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 472 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-이소프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, THF (5 mL) 중 NaH (27 mg, 0.68 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.34 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 2-아이오도프로판 (86 mg, 0.50 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 N2 하에 50℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-이소프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 74%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(이소프로필 (메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서, THF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-이소프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.25 mmol)의 용액에 BH3-THF (1.0 mL, 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(이소프로필 (메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (72 mg, 57%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(이소프로필 (메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(이소프로필 (메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (72 mg, 0.14 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (98 mg, 0.84 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (80 mg, 0.070 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC (C18, H2O 중 MeCN)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(이소프로필 (메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (19 mg, 27%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.38 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 5.0, 1.0 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.35 - 3.85 (m, 3H), 3.72 - 3.64 (m, 1H), 3.47 - 3.27 (m, 2H), 3.03 - 2.83 (m, 1H), 2.66 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.16 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 129. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 445)의 합성
단계 1. 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산
H2O (2 mL) 및 THF (2 mL) 중 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실레이트 (440 mg, 2.0 mmol)의 용액을 NaOH (320 mg, 8.0 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 HCl (1.0 M)로 켄칭하고, 물로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시켜 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산을 백색 고체 (390 mg, 96%)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 202/204 (Br) (M-H)+.
단계 2. 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복스아미드
DMF (10 mL) 및 DIPEA (3 mL) 중 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산 (450 mg, 2.2 mmol)의 용액에 NH4Cl (470 mg, 8.8 mmol), HOBt (890 mg, 6.6 mmol) 및 EDCI (1.3 g, 6.6 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 수성 NaHCO3로 켄칭하고, 염수로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기부를 농축시켜 조 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복스아미드를 오일 (1.6 g)로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 203/205 (Br) (M+H)+.
단계 3. 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르보니트릴
DCM (5 mL) 및 TEA (1.3 mL) 중 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복스아미드 (이전 단계로부터의 1.5 g)의 용액에 0℃에서 TFAA (0.56 mL)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3로 켄칭하고, 염수로 희석하고, 층을 분리하고, 유기부를 농축시켰다. 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르보니트릴을 황색 고체 (330 mg, 80% 수율, 2단계에 걸침)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 297/299 (Br) (M-H+TFA)
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (89 mg, 0.25 mmol, 화합물 260, 단계 4의 절차에 따라 제조됨) 및 4-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르보니트릴 (92 mg, 0.50 mmol)의 용액에 CuI (47 mg, 0.25 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (35 mg, 0.25 mmol) 및 K3PO4 (530 mg, 2.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-3-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 11% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 462 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.93 - 4.56 (m, 1H), 4.25 - 3.73 (m, 6H), 3.62 - 3.45 (m, 1H), 3.42 - 3.02 (m, 2H), 2.04 - 1.98 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.09 - 0.92 (m, 2H), 0.83 - 0.73 (m, 1H), 0.73 - 0.62 (m, 1H).
실시예 130. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 447)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-클로로피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (82 mg, 0.20 mmol, 화합물 268, 단계 4의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 NaH (32 mg, 0.80 mmol, 60 중량%)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 하에 20분 동안 교반하였다. 이어서 3,5-디클로로피리다진 (60 mg, 0.40 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 NH4Cl 수성으로 켄칭하고, EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-클로로피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 34% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 524/526 (Cl) (M+H)+. 및 백색 고체로서의 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-클로로피리다진-4-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 34%). LC/MS ESI (m/z): 524/526 (Cl) (M+H)+. NMR 분석에 의해 배위를 결정하였다.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-클로로피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (24 mg, 0.046 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (32 mg, 0.28 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (53 mg, 0.046 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반한 다음, EtOAc로 희석하였다. 혼합물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노피리다진-3-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.4 mg, 19% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 515 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.78 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.47 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 13.3, 6.1 Hz, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 4.43 - 4.11 (m, 1H), 3.91 - 3.63 (m, 1H), 3.57 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.48 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.08 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.95 - 2.51 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.03 (s, 3H). 19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -114.54 (s).
하기 화합물을 화합물 447의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 단계 1의 출발 물질을 상응하는 2-플루오로페닐- 또는 시클로프로필-보론산으로부터 제조하였다.
실시예 131. tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 449)의 합성
단계 1. 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서, DMF (50 mL) 중 NaH (1.2 g, 30 mmol)의 용액에 3-브로모-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (5.0 g, 25 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. TsCl (5.3 g, 28 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 여과하였다. 필터 케이크를 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (7.5 g, 84%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 351 (M+H)+.
단계 2. 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드
0℃에서, DCM (70 mL) 중 3-브로모-1 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (7.0 g, 20 mmol)의 용액에 3-클로로퍼옥시벤조산 (5.2 g, 30 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, DCM 중 MeOH)에 의해 정제하여 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (4.0 g, 54%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 367, 369 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CHCl3 (5 mL) 중 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (300 mg, 0.80 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (390 mg, 1.9 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. TsCl (180 mg, 0.96 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (47 mg, 10%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549, 551 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (62 mg, 0.10 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (16 mg, 0.11 mmol), K3PO4 (43 mg, 0.20 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (8.0 mg, 0.010 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (51 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 565 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.090 mmol)의 용액에 TBAF (1.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 96%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 411 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 0.080 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (20 mg, 0.16 mmol), 및 Cs2CO3 (1.2 g, 8.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (51 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 2H), 3.47 (s, 1H), 3.12 - 2.86 (m, 6H), 1.42 (s, 9H), 0.91 (d, J = 4.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 보론산 (단계 4, 시클로프로필보론산 (1.5 당량), K2CO3 (20 당량), Pd-118 (0.05 당량), 톨루엔, 90℃, 밤새)으로부터 화합물 449의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 132. tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 450)의 합성
단계 1. (S)-2-(3-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴
0℃에서, DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(2-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.24 mmol, 화합물 449의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TFA (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. (S)-2-(3-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴, LC/MS ESI (m/z): 413 (M+H)+.
단계 2. (S)-2-(3-(2-플루오로페닐)-4-(4-이소부티릴-2-메틸피페라진-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴
0℃에서, DCM (3 mL) 중 (S)-2-(3-(2-플루오로페닐)-4-(2-메틸피페라진-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴 (98 mg, 0.24 mmol)의 용액에 TEA (0.060 mL, 0.48 mmol) 및 이소부티릴 클로라이드 (0.040 mL, 0.36 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (S)-2-(3-(2-플루오로페닐)-4-(4-이소부티릴-2-메틸피페라진-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴 (43 mg, 36%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 483 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.25 - 8.20 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.72 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 7.48 (dd, J = 21.6, 5.9 Hz, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.20 (dd, J = 17.9, 8.3 Hz, 2H), 3.57 - 2.71 (m, 8H), 1.13 - 1.06 (m, 6H), 1.03 (d, J = 6.1 Hz, 1.5H), 0.83 (d, J = 6.3 Hz, 1.5H).
실시예 133. tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리다진-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 451)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리다진-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(6-클로로피리다진-4-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 0.019 mmol, 화합물 447, 단계 2의 절차에 따라 제조됨)의 용액에 N2 하에 Pd/C (10 mg, 약 55% 물 함유)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 분위기 하에 실온에서 3시간 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과물을 농축시켜 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(피리다진-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 mg, 20% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 490 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.85 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 9.29 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.37 (dd, J = 5.8, 2.7 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.43 (dt, J = 19.3, 6.6 Hz, 2H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 1H), 4.38 - 4.13 (m, 1H), 3.89 - 3.66 (m, 1H), 3.60 - 3.39 (m, 2H), 3.08 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 2.91 - 2.58 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.08 - 0.96 (m, 3H).
실시예 134. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 454)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-플루오로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-[5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (340 mg, 0.80 mmol, 화합물 452에 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 4-클로로-2-플루오로피리딘 (210 mg, 1.6 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (1000 mg, 3.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (370 mg, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 537 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.06 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.37 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.49 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 13.1, 5.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 4.34 - 4.07 (m, 2H), 3.44 - 3.18 (m, 3H), 2.89 (dd, J = 28.9, 18.9 Hz, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 135. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 456)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-(메톡시카르보닐)-1-메틸-1H-피롤-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
건조 DMF 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.50 mmol, 화합물 259에 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 메틸 5-브로모-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실레이트 (220 mg, 1.0 mmol), K3PO4 (320 mg, 1.5 mmol) 및 CuI (48 mg, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 트랜스-1,2-시클로헥산디아민 (72 mg, 0.50 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-(메톡시카르보닐)-1-메틸-1H-피롤-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 88%)를 황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+.
단계 2. (S)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산
MeOH (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로프로필-7-(5-(메톡시카르보닐)-1-메틸-1H-피롤-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.45 mmol)의 용액에 NaOH (89 mg, 2.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 1 N HCl을 사용하여 PH 4로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산 (180 mg, 84%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 481 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 (S)-5-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-1-메틸-1H-피롤-2-카르복실산 (180 mg, 0.38 mmol)의 용액에 HATU (210 mg, 0.56 mmol), DIPEA (190 mg, 1.5 mmol) 및 NH4Cl (40 mg, 0.75 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 67%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 480 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.25 mmol) 및 피리딘 (400 mg, 5.0 mmol)의 혼합물을 0℃에서 교반하였다. 이어서 TFAA (260 mg, 1.3 mmol)를 0℃에서 적가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, H2O 및 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 이어서 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-1-메틸-1H-피롤-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (75 mg, 65%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 462 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 6.79 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 6.12 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.83 - 4.68 (m, 1H), 4.11 - 3.77 (m, 3H), 3.54 - 3.43 (m, 4H), 3.29 - 2.97 (m, 2H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.98 - 0.91 (m, 2H), 0.72 - 0.62 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 브로마이드로부터 화합물 456의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 136. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 457)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.30 mmol, 화합물 259에 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 4-클로로-2-플루오로피리딘 (99 mg, 0.75 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (490 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 42%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 469 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.96 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.32 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.14 (dd, J = 5.3, 1.7 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.18 - 3.75 (m, 3H), 3.53 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 3.41 - 3.02 (m, 2H), 2.03 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 2H), 0.91 - 0.73 (m, 2H).
실시예 137. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 460)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (6 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.49 mmol, 화합물 252에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (140 mg, 0.98 mmol), K2CO3 (200 g, 1.5 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (37 mg, 0.050 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 70%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol)의 용액에 TBAF (3.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 95%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 426 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.13 mmol)의 용액에 2-브로모피리미딘-4-카르보니트릴 (35 mg, 0.19 mmol), Pd(dba)3 (64 mg, 0.70 mmol) 및 X-Phos (75 mg, 0.13 mmol) 및 Cs2CO3 (85 mg, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 100℃로 밤새 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, DCM 중 MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 30%)를 수득하였다. 그 중 20 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 10 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 529 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.13 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.84 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.55 (m, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 4.24 - 4.10 (m, 2H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.24 - 3.19 (m, 1H), 2.82 (s, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 460의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 138. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 462)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (15 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (12 g, 28 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.0 g, 42 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 3시간 동안 150℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸 피페라진-1-카르복실레이트 (16 g, 94%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 3.2 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.7 g, 13 mmol), TEA (2.2 mL, 16 mmol), X-Phos (0.31 g, 0.65 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.30 g, 0.32 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 95℃에서 밤새 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 및 H2O (4 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 3.2 mmol)의 용액에 2-클로로-3-메틸피라진 (0.92 g, 7.2 mmol), K2CO3 (2.5 g, 18 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.26 g, 0.36 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 62%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 578 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 2.2 mmol)의 용액에 TBAF (10 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 NH4Cl (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (950 mg, 99%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 424 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (R)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (480 mg, 1.1 mmol)의 용액에 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (310 mg, 1.3 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (71 mg, 0.50 mmol), CuI (210 mg, 1.1 mmol) 및 K3PO4 (700 mg, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(3-메틸피라진-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (780 mg, 84%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 536 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 8.57 - 8.51 (m, 3H), 7.49 - 7.43 (m, 3H), 6.84 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 58.8 Hz, 2H), 3.31 (dd, J = 24.7, 13.9 Hz, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.95 - 2.66 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.02 - 0.97 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 아릴 할라이드로부터 화합물 462의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 139. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 463)의 합성
단계 1. 에틸 (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.2 mmol, 화합물 268에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 에틸 2-브로모-4-메틸티아졸-5-카르복실레이트 (610 mg, 2.4 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (350 mg, 2.4 mmol), CuI (230 mg, 1.2 mmol) 및 K3PO4 (780 mg, 3.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~15%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실레이트 (600 mg, 84%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 581 (M+H)+.
단계 2. (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실산
MeOH (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 에틸 (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실레이트 (450 mg, 0.78 mmol)의 용액에 NaOH (160 mg, 3.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 45℃로 밤새 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 산성 pH로 조정하고, 여과하여 (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실산 (250 mg, 58%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 553 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 (S)-2-(4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-4-메틸티아졸-5-카르복실산 (70 mg, 0.13 mmol)의 용액에 NH4Cl (14 mg, 0.26 mmol), DIPEA (50 mg, 0.39 mmol) 및 HATU (98 mg, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, DCM 중 MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 71%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-카르바모일-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.090 mmol)의 용액에 TEA (91 mg, 0.90 mmol) 및 TFAA (71 mg, 0.34 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 N2 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노-4-메틸티아졸-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 63%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 534 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.57 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.47 - 7.34 (m, 3H), 7.21 - 7.19 (m, 1H), 4.46 - 4.17 (m, 1H), 3.85 - 3.69 (m, 1H), 3.63 - 3.56 (m, 1H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 3.07 (t, J = 12.4 Hz, 1H), 2.96 - 2.69 (m, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.04 (d, 3H).
실시예 140. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 484)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
i-PrMgCl의 용액 (3.6 mL, THF 중 1.0M)을 THF (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.8 mmol, 화합물 486에 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 아세톤 (5 mL)의 용액에 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 3.0%)를 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 487 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.060 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (72 mg, 0.62 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (360 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-히드록시프로판-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.7 mg, 13%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 478 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.36 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.65 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.43 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.25 - 4.09 (m, 2H), 3.69 - 3.62 (m, 1H), 3.22 - 3.07 (m, 3H), 2.91 - 2.81 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 0.90 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 141. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 485)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 1.4 mmol, 화합물 514에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-클로로티아졸-5-카르보니트릴 (390 mg, 2.7 mmol) 및 Cs2CO3 (2.2 g, 6.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 94%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 1.1 mmol), 피롤리딘-2-온 (190 mg, 2.2 mmol), CuI (100 mg, 0.55 mmol), K3PO4 (690 mg, 3.3 mmol) 및 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (160 mg, 1.1 mmol) 및 DMF (15 mL)의 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 23%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 509 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.080 mmol)의 용액에 RhH(CO)(PPh)3 (36 mg, 0.040 mmol) 및 PhSiH3 (0.090 ml, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(5-시아노티아졸-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 53%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.95 - 4.87 (m, 1H), 4.20 - 3.82 (m, 3H), 3.35 - 3.27 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 3H), 2.92 - 2.80 (m, 3H), 1.94 - 1.89 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
실시예 142. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 486)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (550 mg, 1.2 mmol) 및 4-클로로-2-플루오로피리딘 (180 mg, 1.4 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (780 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (530 mg, 79%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 555 (M+H)+.
단계 2. 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트
MeOH (6 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (530 mg, 0.94 mmol)의 용액에 25℃에서 Pd(dppf)Cl2 (69 mg, 0.094 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 CO 기체로 3회 퍼징하여 탈기하였다. 반응물을 CO 하에 80℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (360 mg, 79%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 487 (M+H)+.
단계 3. (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산
MeOH (5 mL) 중 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (360 mg, 0.74 mmol)의 용액에 실온에서 NaOH (5.0 mL, 2.0 N)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl (1 N)을 사용하여 pH 2로 조정하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-아세트아미도-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (0.74 mmol)의 용액에 실온에서 Et3N (320 mg, 3.2 mmol) 및 DPPA (0.45 mL, 2.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 다음, 아세트산 무수물 (320 mg, 3.2 mmol)로 처리하였다. 반응물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아세트아미도-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 67%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-(2-메톡시에틸)아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (10 mL) 중 NaH (55 mg, 1.3 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아세트아미도-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (320 mg, 0.66 mmol)의 용액을 적가하였다. 0℃에서 15분 동안 교반한 후, 1-브로모-2-메톡시에탄 (130 mg, 0.75 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-(2-메톡시에틸)아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 45%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 544 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(N-(2-메톡시에틸)아세트아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.30 mmol)의 용액에 BH3-THF (2.0 mL, 1.0 M)를 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (87 mg, 55%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 530 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (87 mg, 0.16 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (110 mg, 0.96 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (92 mg, 0.080 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(에틸 (2-메톡시에틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.3 mg, 6.0%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 521 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.12 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.57 - 3.51 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 3.34 - 3.31 (m, 6H), 3.27 - 3.22 (m, 1H), 3.12 (s, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.98 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 486의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다 (쿠르티우스 재배열을 아세트산 무수물 대신에 아세트산 포름산 무수물로 실행하였음).
실시예 143. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 487)의 합성
프로판-1-올 (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol, 화합물 514에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (35 mg, 0.18 mmol), 1,10-페난트롤린 (65 mg, 0.36 mmol) 및 CS2CO3 (180 mg, 0.54 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 이 반응을 동일한 규모로 반복하고, 합한 반응 혼합물을 함께 후처리하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.5 mg, 3.1%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 478 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 - 9.36 (m, 1H), 8.55 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.28 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 5.00 - 4.84 (m, 1H), 4.51 - 4.12 (m, 2H), 4.01 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.97 - 3.83 (m, 1H), 3.39 (t, J = 14.0 Hz, 1H), 3.22 - 3.00 (m, 2H), 1.92 - 1.87 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.29 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.08 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
실시예 144. tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시)카르보닐)(2-메톡시에틸)아미노)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 488)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (5 mL) 중 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (200 mg, 0.40 mmol, 화합물 486에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 Et3N (0.16 mL, 1.2 mmol), 프로프-2-엔-1-올 (0.040 mL, 0.80 mmol) 및 DPPA (0.16 mL, 0.80 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~45% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 67%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 528 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시) 카르보닐)(2-메톡시에틸)아미노)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (5 mL) 중 NaH (24 mg, 0.52 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 15분 동안 교반한 후, 1-브로모-2-메톡시에탄 (71 mg, 0.52 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(((알릴옥시) 카르보닐)(2-메톡시에틸)아미노)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 82%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 587 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.00 (s, 1H), 8.52 - 8.48 (m, 1H), 8.35 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 5.3, 1.6 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.32 - 4.96 (m, 2H), 4.77 - 4.11 (m, 5H), 3.87 - 3.47 (m, 5H), 3.43 - 3.27 (m, 5H), 3.08 - 2.91 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.23 - 1.15 (m, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민 및 알킬 할라이드로부터 화합물 488의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 145. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 489)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (25 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.7 mmol, 화합물 521에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 아제티딘-2-온 (310 mg, 4.2 mmol), CuI (170 mg, 0.80 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (250 mg, 1.7 mmol) 및 K3PO4 (1.2 g, 5.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 57%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 0.68 mmol)의 용액에 RhH(CO)(PPh)3 (180 mg, 0.20 mmol)에 이어서 PhSiH3 (0.30 ml, 2.7 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 59%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 498 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.40 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (190 mg, 1.6 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (230 mg, 0.20 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 61%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 489 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.35 (s, 1H), 8.57 (dd, J = 5.0, 0.8 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 5.11 (br. s, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.02 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 3.86 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.80 - 3.71 (m, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 3H), 2.33 - 2.26 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.16 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 146. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 490)
DMSO (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.35 mmol, 화합물 491에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 아제티딘 (40 mg, 0.70 mmol), L-프롤린 (40 mg, 0.37 mmol), CuI (67 mg, 0.35 mmol) 및 K2CO3 (150 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 7.4%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 7.78 - 7.65 (m, 2H), 7.42 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.00 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.84 - 3.70 (m, 4H), 3.67 - 3.56 (m, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 147. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 491)
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (60 mL) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 13 mmol, 화합물 522에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.5 g, 26 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.0 g, 96%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 568 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.8 mmol)의 용액에 CuI (340 mg, 1.8 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (690 mg, 3.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 67%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (s, 1H), 7.72 - 7.68 (m, 2H), 7.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 1H), 4.48 - 4.26 (m, 1H), 3.80 - 3.71 (m, 2H), 3.64 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.17 - 1.10 (m, 6H).
실시예 148. tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 493)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.3 mmol, 화합물 498에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1-클로로-3-아이오도벤젠 (600 mg, 2.5 mmol), CuI (120 mg, 0.63 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (180 mg, 1.3 mmol) 및 K3PO4 (800 mg, 3.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~15%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 506, 508 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.79 mmol)의 용액에 아제티딘 (91 mg, 1.6 mmol), CuI (150 mg, 0.79 mmol), L-프롤린 (46 mg, 0.40 mmol) 및 K2CO3 (330 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 38%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 483 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.32 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.94 - 4.85 (m, 1H), 4.12 - 3.82 (m, 3H), 3.74 - 3.68 (m, 2H), 3.58 - 3.52 (m, 2H), 3.48 - 3.31 (m, 2H), 2.99 - 2.84 (m, 1H), 2.25 - 2.18 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 149. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 496)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (80 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (5.0 g, 18 mmol)의 용액에 (3-플루오로페닐)보론산 (5.0 g, 36 mmol), 4A 분자체 (2.5 g), Cu(OAc)2 (8.1 g, 90 mmol) 및 피리딘 (17 g, 45 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 35℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 빙수조에서 수성 NH4OH (30 mL)로 켄칭하고, 여과하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 45%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 374 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (8 mL) 중 4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (400 mg, 1.1 mmol), tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (340 mg, 1.6 mmol)의 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 잔류물로 농축시키고, 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (470 mg, 79%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol), CuI (35 mg, 0.18 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (140 mg, 0.73 mmol)의 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 56%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.52 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 7.19 - 7.12 (m, 1H), 4.64 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.25 (m, 1H), 3.80 - 3.62 (m, 3H), 3.52 - 3.47 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.17 - 1.11 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 496의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 150. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 497)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (150 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 36 mmol)의 용액에 (3,5-디플루오로페닐)보론산 (11 g, 72 mmol), 4A 분자체 (5 g), Cu(OAc)2 (16 g, 90 mmol) 및 피리딘 (17 g, 210 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 35℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 빙수조에서 수성 NH4OH (60 mL)로 켄칭하고, 여과하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (6.7 g, 48%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 392 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (20 ml) 중 4-클로로-7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 7.6 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.2 g, 15 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 150℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.7 g, 86%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 570 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.7 mmol)의 용액에 아제티딘-2-온 (310 mg, 4.2 mmol), CuI (170 mg, 0.80 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (250 mg, 1.7 mmol) 및 K3PO4 (1.2 g, 5.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~65%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (420 mg, 48%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (6 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (370 mg, 0.71 mmol)의 용액에 RhH(CO)(PPh)3 (340 mg, 0.30 mmol)에 이어서 PhSiH3 (0.40 ml, 3.5 mmol)를 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (75 mg, 21%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 499 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 6.77 - 6.67 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.37 (m, 1H), 4.00 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.85 - 3.71 (m, 4H), 3.67 - 3.55 (m, 3H), 2.30 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.15 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 151. tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 498)의 합성
단계 1. 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 무수 DMF (125 mL) 중 NaH (5.0 g, 130 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (25 g, 110 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (25 g, 130 mmol)로 여러 부분으로 처리하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 빙수에 부어 켄칭하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (27 g, 65%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 386, 388 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (30 mL) 중 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (17 g, 43 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (22 g, 110 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 g, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 550, 552 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (30 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 g, 27 mmol)의 용액에 TBAF (64 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.3 g, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 396, 398 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.3 mmol)의 용액에 1,3-디플루오로-5-아이오도벤젠 (610 mg, 2.5 mmol), CuI (120 mg, 0.63 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (180 mg, 1.3 mmol) 및 K3PO4 (800 mg, 3.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~15%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 508, 510 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.79 mmol)의 용액에 아제티딘-2-온 (110 mg, 1.6 mmol), CuI (75 mg, 0.40 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (110 mg, 0.79 mmol) 및 K3PO4 (500 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~15%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 499 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3,5-디플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.56 mmol)의 용액에 0℃에서 RhH(CO)(PPh)3 (260 mg, 0.28 mmol) 및 PhSiH3 (0.34 ml, 2.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3,5-디플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 39%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 485 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 7.42 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.75 - 6.69 (m, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.20 - 3.89 (m, 3H), 3.81 - 3.75 (m, 2H), 3.66 - 3.60 (m, 2H), 3.55 - 3.38 (m, 2H), 3.05 - 2.90 (m, 1H), 2.32 - 2.25 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 152. tert-부틸 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 501)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2S,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.0 g, 2.3 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 mL, 4.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 150℃에서 40분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2S,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 92%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.82 mmol)의 용액에 CuI (630 mg, 0.82 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (0.41 mL, 3.3 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 55%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (7 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 0.45 mmol)의 용액에 TBAF (2.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 수성 포화 NH4Cl 용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 91%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 400 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 0.41 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (270 mg, 0.83 mmol) 및 2-플루오로이소니코티노니트릴 (100 mg, 0.83 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 502 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.28 - 9.27 (m, 1H), 8.61 - 8.59 (m, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.48 (m, 1H), 4.39 - 4.23 (m, 1H), 3.74 - 3.69 (m, 1H), 3.69 - 3.64 (m, 1H), 3.59 - 3.54 (m, 1H), 3.43 - 3.39 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민으로부터 화합물 501의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 153. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 504)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (50 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 g, 16 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 TBAF (19 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.0 g, 80%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (100 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.0 g, 15 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (3.2 g, 31 mmol) 및 Cs2CO3 (8.6 g, 31 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.7 g, 35%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 560 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DMSO (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 1.8 mmol) 및 K2CO3 (0.99 g, 7.2 mmol)의 용액에 H2O2 (1.0 mL)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 1.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 Na2S2O3(수성)로 켄칭하고, 물에 부었다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.88 g, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 578 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMSO (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.69 mmol)의 용액에 CuI (66 mg, 0.34 mmol), L-프롤린 (80 mg, 0.69 mmol), K2CO3 (570 mg, 4.2 mmol) 및 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄 (270 mg, 2.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 조 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 52%)를 갈색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 549 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.11 mmol) 및 TEA (1.0 mL, 81 mmol)의 용액에 TFAA (0.30 mL, 0.27 mmol)를 적가하였다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (16 mg, 28%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.23 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 5.01 - 4.93 (m, 1H), 4.77 (s, 4H), 4.39 - 4.14 (m, 1H), 3.93 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.91 - 3.84 (m, 1H), 3.71 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 3.69 - 3.48 (m, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.12 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 154. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 506)의 합성
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.75 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 4-클로로-2-플루오로피리딘 (200 mg, 1.5 mmol) 및 Cs2CO3 (2.5 g, 7.5 mmol)를 첨가하였다. N2 분위기 하에 60℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.92 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.57 - 8.54 (m, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.33 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 5.3, 1.8 Hz, 1H), 4.53 - 4.45 (m, 1H), 4.40 - 4.19 (m, 1H), 3.73 - 3.64 (m, 2H), 3.59 - 3.54 (m, 1H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.08 - 1.03 (m, 6H).
실시예 155. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 507)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
프로판-1-올 (0.5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.036 mmol, 화합물 521에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 CuI (7.0 mg, 0.021 mmol), 1,10-페난트롤린 (0.007 mL, 0.044 mmol) 및 K2CO3 (12 mg, 0.087 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 동일한 규모로 추가 4회 반복하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 5종의 반응으로부터의 반응 혼합물을 합하고, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.0 mg, 8.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 501 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.0 mg, 0.014 mmol)의 용액에 Pd(PPh3)4 (28 mg, 0.024 mmol) 및 Zn(CN)2 (4.0 mg, 0.034 mmol)를 각각 첨가하였다. N2 하에 120℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-프로폭시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.0 mg, 57%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 492 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.57 - 8.54 (m, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.30 - 7.29 (m, 0.4H, 회전이성질체), 7.28 - 7.28 (m, 0.6H, 회전이성질체), 5.08 - 5.01 (m, 1H), 4.43 - 4.22 (m, 2H), 4.06 - 3.99 (m, 2H), 3.85 - 3.79 (m, 0.5H, 회전이성질체), 3.75 - 3.69 (m, 0.5H, 회전이성질체), 3.60 - 3.54 (m, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 1H), 1.91 (dd, J = 14.0, 6.8 Hz, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.26 - 1.25 (m, 3H), 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.08 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 507의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 156. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 509)의 합성
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.50 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨, 6-클로로피리미딘-4-카르보니트릴 (140 mg, 1.0 mmol) 및 Cs2CO3 (330 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 51%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.60 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.18 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 4.61 (br. s, 1H), 4.38 (br. s, 1H), 3.83 - 3.71 (m, 2H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.48 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 157. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 510)의 합성
디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.75 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-브로모피리미딘-4-카르보니트릴 (280 mg, 1.5 mmol), Pd2(dba)3 (230 mg, 0.25 mmol), X-Phos (290 mg, 0.50 mmol) 및 Cs2CO3 (490 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, DCM 중 MeOH) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 46%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.18 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.66 - 8.63 (m, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.93 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.66 - 4.58 (m, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 3.84 - 3.73 (m, 2H), 3.68 - 3.61 (m, 1H), 3.52 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.16 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 158. 펜탄-3-일 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 512)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
25℃에서 DMF (70 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (6.0 g, 15 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 Cs2CO3 (9.8 g, 30 mmol) 및 2-플루오로이소니코티노니트릴 (9.2 g, 75 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 생성된 혼합물을 H2O (300 ml)에 붓고, EtOAc (200 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (200 mL)로 2회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.0 g, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 502 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.76 - 3.63 (m, 2H), 3.59 - 3.52 (m, 1H), 3.41 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 2. 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 g, 6.0 mmol)의 용액에 HCl (10 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 (수성)로 처리하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (2.0 g, 83%)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 402 (M+H)+.
단계 3. (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드
DCM (10 mL) 중 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (300 mg, 0.75 mmol)의 용액에 DIPEA (190 mg, 1.5 mmol)에 이어서 트리포스겐 (300 mg, 0.75 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 464.0 (M+H)+.
단계 4. 펜탄-3-일 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
(2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드 (340 mg, 0.75 mmol) 및 펜탄-3-올 (5 mL)의 혼합물을 N2 하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 펜탄-3-일 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 65%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 516 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.31 - 9.23 (m, 1H), 8.61 - 8.56 (m, 2H), 8.53 - 8.49 (m, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 1H), 4.69 - 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.48 (m, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 1H), 3.77 - 3.69 (m, 2H), 3.64 - 3.58 (m, 1H), 3.45 - 3.40 (m, 1H), 1.58 - 1.51 (m, 4H), 1.08 (dd, J = 9.2, 6.9 Hz, 6H), 0.87 - 0.81 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 512의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 159. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 514)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (600 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (90 g, 0.21 mol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (81 g, 0.42 mol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 g, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 598 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (400 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 g, 110 mmol)의 용액에 TBAF (440 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 0℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 g, 91%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 444 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (60 mL) 중 tert-부틸 4-{5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일}피페리딘-1-카르복실레이트 (4.5 g, 10 mmol) 및 2-플루오로피리딘-4-카르보니트릴 (1.8 g, 15 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (16 g, 50 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 빙수로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.6 g, 6.6 mmol, 66%)를 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 546 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산/톨루엔 (10 mL, 3:1 v/v) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트tert-부틸 4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.37 mmol)의 용액에 CsF (170 mg, 1.1 mmol), (디플루오로메틸)트리메틸실란 (920 mg, 7.5 mmol) 및 (1,3-비스(2,6-디이소프로필페닐)-1,3-디히드로-2H-이미다졸-2-일리덴)구리 (III) 클로라이드 (180 mg, 0.37 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 8.6%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 470 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 8.67 - 8.53 (m, 3H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.00 (t, J = 55.5 Hz, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 3.75 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.63 - 3.47 (m, 2H), 3.44 - 3.38 (m, 1H), 3.22 (s, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 514의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 160. 시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 515)의 합성
단계 1. 시클로프로필 카르보노클로리데이트
DCE (8 mL) 중 시클로프로판올 (40 mg, 0.70 mmol)의 용액에 DIPEA (44 mg, 1.1 mmol) 및 트리포스겐 (68 mg, 0.24 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 생성된 혼합물을 후속 단계에 직접 사용하였다.
단계 2. 시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCE (8 mL) 중 시클로프로필 카르보노클로리데이트 (0.70 mmol)의 용액에 DIPEA (44 mg, 1.1 mmol) 및 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (200 mg, 0.50 mmol, 화합물 512에 요약된 절차에 따라 제조됨)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 66%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.61 - 8.57 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 7.42 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.65 - 4.27 (m, 2H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 3.73 - 3.57 (m, 3H), 3.44 - 3.38 (m, 1H), 1.10 - 1.03 (m, 6H), 0.67 - 0.61 (m, 4H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할로겐으로부터 화합물 515의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 161. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 517)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.75 mmol, 화합물 536에 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2,6-디브로모이소니코티노니트릴 (240 mg, 0.90 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (28 mg, 0.20 mmol), CuI (140 mg, 0.75 mmol) 및 K3PO4 (320 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (370 mg, 85%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580, 582 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-브로모-4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.30 mmol)의 용액에 메틸보론산 (140 mg, 2.4 mmol), Cs2CO3 (290 mg, 0.90 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (22 mg, 0.030 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노-6-메틸피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 26%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 516 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.11 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.81 - 3.71 (m, 2H), 3.64 (dd, J = 13.4, 3.5 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.15 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 162. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 521)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.5 g, 5.7 mmol)의 용액에 TBAF (23 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 수성 포화 NH4Cl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 57%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.1 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (2.0 g, 6.4 mmol) 및 4-클로로-2-플루오로피리딘 (0.32 mL, 3.2 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 60℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 53%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 569 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (420 mg, 0.74 mmol)의 용액에 X-Phos (35 mg, 0.74 mmol), Pd2(dba)3 (68 mg, 0.74 mmol), TEA (0.51 mL, 3.7 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.43 mL, 3.0 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (270 mg, 64%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 569 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.088 mmol)의 용액에 AcOH (0.50 mL, 8.7 mmol) 및 H2O2 (0.5 mL)를 각각 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (11 mg, 28%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 459 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeCN (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.22 mmol)의 용액에 H2O (5 mL) 중 KOH (250 mg, 4.5 mmol)의 용액 및 디에틸 (브로모디플루오로메틸)포스포네이트 (70 mg, 0.26 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.6 mg, 5.9%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 509 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.00 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.19 (dd, J = 5.3, 1.8 Hz, 1H), 6.52 (t, J = 73.8 Hz, 1H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.56 - 4.48 (m, 0.5H, 회전이성질체), 4.36 - 4.27 (m, 0.5H, 회전이성질체), 4.11 - 4.05 (m, 1H), 3.84 - 3.73 (m, 1H), 3.66 - 3.59 (m, 1H), 3.50 - 3.41 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.27 - 1.25 (m, 3H), 1.19 - 1.15 (m, 3H).
실시예 163. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 522)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (300 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 36 mmol), (3-클로로페닐)보론산 (11 g, 72 mmol) 및 Cu(OAc)2 (10 g, 55 mmol)의 혼합물에 피리딘 (18 mL, 220 mmol) 및 4Å MS를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 O2 하에 2일 동안 교반하였다. 이어서 이를 수성 NH4OH (25%)로 처리하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 조 고체 생성물을 EtOAc/석유 에테르 (1:5, v/v)로 연화처리하여 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (12 g, 75% 순도, 64%)을 갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 390 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (6.5 mL, 39 mmol) 중 4-클로로-7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, ~75% 순도, 5.8 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.0 g, 15 mmol)의 혼합물을 140℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. DIPEA를 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~16% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.6 g, 82%)를 담갈색 발포체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 3. 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트
MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.72 mmol)의 용액에 TEA (0.20 mL, 1.4 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (53 mg, 0.070 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 CO 하에 70℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (270 mg, 77%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 486(M+H)+.
단계 4. (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산
MeOH (8 ml) 중 메틸 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트 (270 mg, 0.60 mmol)의 용액에 H2O (2 mL) 중 NaOH (90 mg, 2.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl로 pH 4~5로 켄칭하고, DCM/IPA (85:15 v/v)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (200 mg, 76%)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 472 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(5-(아지도카르보닐)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실레이트
톨루엔 (10 mL) 중 (S)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-7-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산 (200 mg, 0.42 mmol)의 용액에 TEA (0.20 mL, 1.3 mmol) 및 DPPA (230 mg, 0.84 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 아세트산 포름산 무수물 (3 mL, 아세트산 무수물 및 포름산으로부터 제조됨)로 처리하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-포르밀포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 37%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 471 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-포르밀포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCE (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-포름아미도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.15 mmol)의 용액에 시클로프로필보론산 (39 mg, 0.45 mmol), Cu(OAc)2 (55 mg, 0.30 mmol), 2,2'-비피리딘 (47 mg, 0.30 mmol) 및 K2CO3 (83 mg, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 H2O로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~70% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-시클로프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 47%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI)(m/z): 511 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (5 mml) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(N-시클로프로필포름아미도)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 0.070 mmol)의 용액에 BH3-THF (1.4 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. N2 하에 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 메탄올로 켄칭하고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(시클로프로필(메틸)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 44%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS (ESI) (m/z): 497 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.23 (s, 1H), 7.85 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 1H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 7.26 (s, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.08 (br. d, J = 12.6 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.42 - 3.31 (m, 2H), 3.15 - 3.00 (m, 1H), 2.87 (s, 3H), 2.38 - 2.29 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.09 (s, 3H), 0.79 - 0.70 (m, 2H), 0.60 - 0.42 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 보론산으로부터 화합물 522의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 164. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 538)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드
0℃에서 THF (50 mL) 중 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (2.0 g, 11 mmol)의 용액에 NaH (790 mg, 33 mmol, 60 중량%)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 20분 동안 교반한 다음, SEMCl (2.2 g, 13 mmol)로 적가 처리하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 중 0~40% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (2.1 g, 61%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 312 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 DCM (10 mL) 중 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (1.0 g, 3.3 mmol)의 용액에 비스(2-메톡시에틸)아미노황 트리플루오라이드 (BAST) (1.2 mL, 6.6 mmol)를 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 수성 NaHCO3로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 중 0~20% EtOAc)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (750 mg, 68%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 334 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 4-클로로-5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (750 mg, 2.2 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (960 mg, 4.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 95%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 2.2 mmol)의 용액에 TBAF (13 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. LCMS는 CF2 기가 알데히드로 가수분해되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~90%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.76 g, 98%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 360 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (760 mg, 2.1 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (520 mg, 4.2 mmol) 및 Cs2CO3 (2.1 g, 6.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (720 mg, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 462 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (720 mg, 1.6 mmol)의 용액에 BAST (2.8 mL, 16 mmol)를 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (440 mg, 58%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 484 (M+H)+.
단계 7. 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.57 mmol)의 용액에 HCl (5.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (150 mg, 67%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 384 (M+H)+.
단계 8. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (12 mL) 중 2-(메틸-d3)프로판-1,1,1,3,3,3-d6-2-올 (1.0 g, 12 mmol)의 용액에 DMAP (440 mg, 3.6 mmol) 및 디(피리딘-2-일) 카르보네이트 (2.59 g, 12 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 후속 단계에 직접 사용하였다.
DMF (2 mL) 중 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (45 mg, 0.11 mmol)의 용액에 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 피리딘-2-일 카르보네이트 (0.11 mL, DCM 중 1.0 M) 및 DIPEA (0.50 mL, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (28 mg, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 493 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.58 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.38 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 4.54 - 4.46 (m, 1H), 4.40 - 4.22 (m, 1H), 3.76 - 3.65 (m, 2H), 3.54 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.11 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 165. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 523)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (950 mg, 1.7 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (160 mg, 0.17 mmol), X-Phos (81 mg, 0.17 mmol), TEA (1.2 mL, 8.6 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (880 mg, 6.9 mmol)을 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 95℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 70%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI)m/z: 560 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (30 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 1.2 mmol)의 용액에 AcOH (20 mL, 350 mmol) 및 H2O2 (20 mL)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (580 mg)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 450 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeCN (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.22 mmol)의 용액에 H2O (5 mL) 중 KOH (250 mg, 0.44 mmol)의 용액 및 디에틸 (브로모디플루오로메틸)포스포네이트 (70 mg, 0.24 mmol)를 각각 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.6 mg, 6.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 500 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.35 (s, 1H), 8.60 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.39 - 7.36 (m, 1H), 6.63 (t, J = 73.6 Hz, 1H), 4.86 - 4.77 (m, 1H), 4.57 - 4.48 (m, 0.5H, 회전이성질체), 4.37 - 4.25 (m, 0.5H, 회전이성질체), 4.14 - 4.07 (m, 1H), 3.85 - 3.73 (m, 1H), 3.66 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.39 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.27 - 1.24 (m, 3H), 1.18 - 1.14 (m, 3H).
실시예 166. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 524)의 합성
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.11 mmol)의 용액에 1-(트리플루오로메틸)-1λ3-아미노-벤조[d][1,2]아이오다옥솔-3(1H)-온 (230 mg, 0.36 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 절차를 동일한 규모로 반복하고, 두 반응을 함께 후처리하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.5 mg, 2.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS(ESI) (m/z): 518 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.29 (s, 1H), 8.55 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.07 - 8.04 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 5.0, 1.0 Hz, 1H), 4.77 - 4.69 (m, 1H), 4.50 - 4.40 (m, 0.5H, 회전이성질체), 4.30 - 4.19 (m, 0.5H, 회전이성질체), 3.96 - 3.90 (m, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 1H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.21 - 1.19 (m, 3H), 1.09 - 1.05 (m, 3H).
실시예 167. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 525)의 합성
단계 1. 4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
MeOH (20 mL) 중 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (55 g, 360 mmol)의 용액에 소듐 메탄올레이트 (360 mL, 메탄올 중 5.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 필터 케이크를 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (50 g, 85%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 150 (M+H)+.
단계 2. 5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
톨루엔 (100 ml) 중 4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (25 g, 170 mmol)의 용액에 2-브로모-2-메틸프로판 (46 g, 340 mmol), 아연 트리플레이트 (61 g, 170 mmol), TBAI (62 g, 170 mmol) 및 DIEA (65 g, 500 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 120℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (480 mg, 1.5%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 206 (M+H)+.
단계 3. 2-(5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (5 mL) 중 5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (45 mg, 0.22 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (54 mg, 0.44 mmol) 및 Cs2CO3 (360 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 75%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 308 (M+H)+.
단계 4. 2-(5-(tert-부틸)-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (5 mL) 중 2-(5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.17 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (280 mg, 1.6 mmol) 및 LiCl (69 mg, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-(tert-부틸)-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 82%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 294 (M+H)+.
단계 5. 2-(5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
POCl3 (5 mL) 중 2-(5-(tert-부틸)-4-히드록시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 0.14 mmol)의 용액을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3으로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 2-(5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (22 mg, 45%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 312 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
2-(5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (22 mg, 0.07 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (61 mg, 0.29 mmol)의 혼합물을 N2 하에 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물 (30 mg)을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 490 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.35 (s, 1H), 8.62 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.36 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 2H), 3.83 - 3.77 (m, 1H), 3.74 - 3.66 (m, 2H), 3.22 - 3.16 (m, 1H), 1.54 (s, 9H), 1.49 (s, 9H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 168. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 527)의 합성
단계 1. 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산
EtOH (10 mL) 중 시스-3-아미노시클로헥산-1-카르복실산 (850 mg, 5.9 mmol)의 용액에 2-(4,6-디클로로피리미딘-5-일)아세트알데히드 (1.6 g, 8.7 mmol) 및 TEA (2.9 mL, 21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (1.5 g, 95%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 280 (M+H)+.
단계 2. 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복스아미드
DMF (4 mL) 중 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (1.5 g, 5.3 mmol)의 용액에 DIPEA (1.0 g, 12 mmol), 염화암모늄 (510 mg, 9.6 mmol) 및 HATU (3.6 g, 9.6 mmol)를 각각 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복스아미드 (960 mg, 59%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 279 (M+H)+.
단계 3. 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르보니트릴
0℃에서 DCM (10 mL) 중 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복스아미드 (960 mg, 3.4 mmol)의 용액에 TEA (1.9 mL, 14 mmol)에 이어서 TFAA (0.90 mL, 6.8 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르보니트릴 (700 mg, 80%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 261 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
시스-3-(4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르보니트릴 (680 mg, 2.60 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.6 g, 13 mmol)의 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~100% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 425(M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (50 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 1.9 mmol)의 용액에 NBS (350 mg, 2.0 mmol)를 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 DCM 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~100% EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (650 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503, 505 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.20 mmol), 시클로프로필보론산 (85 mg, 0.99 mmol), K2CO3 (2.7 g, 19 mmol) 및 Pd(dtbpf)Cl2 (97 mg, 0.15 mmol)의 현탁액을 N2 하에 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% EtOAc) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 16%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 465 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.82 - 4.57 (m, 2H), 4.19 - 3.74 (m, 3H), 3.59 - 3.45 (m, 1H), 3.40 - 3.05 (m, 2H), 2.81 - 2.66 (m, 1H), 2.41 (t, J = 12.3 Hz, 1H), 2.20 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.11 - 1.84 (m, 4H), 1.80 - 1.53 (m, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.21 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.96 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 2H), 0.79 - 0.57 (m, 2H).
실시예 169. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 528)의 합성
단계 1. 5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
THF (20 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (4.0 g, 14 mmol)의 용액에 MeONa (8.0 mL, MeOH 중 4.5 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 용매의 1/3을 제거하고, 반응 혼합물을 빙수에 부었다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 77%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 276 (M+H)+.
단계 2. 2-(5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (20 mL) 중 5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 11 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (2.7 g, 22 mmol) 및 Cs2CO3 (14 g, 44 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (3.5 g, 85%)을 백색-황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 378 (M+H)+.
단계 3. 2-(4-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (30 mL) 중 2-(5-아이오도-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (3.5 g, 9.3 mmol)의 용액에 CuI (1.8 g, 9.3 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (7.1 g, 37 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (1.5 g, 51%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 320 (M+H)+.
단계 4. 2-(4-히드록시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (20 mL) 중 2-(4-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (1.5 g, 4.7 mmol)의 용액에 TsOH (8.1 g, 47 mmol) 및 LiCl (2.0 g, 47 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-히드록시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (0.90 g, 63%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 306 (M+H)+.
단계 5. 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
POCl3 (4 mL) 중 2-(4-히드록시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (0.90 g, 3.0 mmol)의 용액을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (0.70 g, 74%)을 백색-황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 324 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (300 mg, 0.93 mmol)의 용액에 tert-부틸 3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 9.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃로 2일 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였다. 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (62 mg, 13%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 502 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.70 - 8.66 (m, 2H), 7.49 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 3.68 - 3.60 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.30 - 3.26 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.46 (s, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아민을 사용하여 화합물 528과 유사한 방식으로 제조하였다.
실시예 170. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 529)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-(시스-3-시아노시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.99 mmol), 피롤리딘-2-온 (0.23 mL, 3.0 mmol), K3PO4 (630 mg, 3.0 mmol), CuI (95 mg, 0.49 mmol) 및 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (210 mg, 1.5 mmol)의 현탁액을 N2 하에 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 508(M+H)+
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 건조 THF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol)의 용액에 BH3 (0.79 mL, THF 중 2.0 M)를 적가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 포화 NaHCO3로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(시스-3-시아노시클로헥실)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.07 - 4.87 (m, 1H), 4.75 - 4.62 (m, 1H), 4.31 - 3.80 (m, 3H), 3.44 - 3.17 (m, 2H), 3.14 - 2.90 (m, 3H), 2.88 - 2.67 (m, 3H), 2.43 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.20 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.12 - 1.88 (m, 7H), 1.66 - 1.53 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.11 (d, J = 5.4 Hz, 3H).
실시예 171. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 531)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 THF (20 mL) 중 NaH (430 mg, 11 mol, 60 중량%)의 현탁액에 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.0 g, 7.2 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (1.4 g, 8.6 mmol)를 적가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.0 g, 68%)을 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 410 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
-70℃에서 THF (6 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 1.5 mmol)의 용액에 LDA (1.5 mL, THF 중 2.0M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -70℃에서 30분 동안 교반한 후, 아이오도메탄 (310 mg, 2.2 mmol)을 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 96%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 424 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (600 mg, 1.4 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 7.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (560 mg, 65%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 602 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-6-메틸-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸 피페라진-1-카르복실레이트 (560 mg, 0.93 mmol)의 용액에 CuI (180 mg, 0.93 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (720 mg, 3.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 62%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 544 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 0.57 mmol)의 용액에 TBAF (3.4 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM 중에 용해시켰다. 유기부를 포화 NH4Cl로 2회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 47%)를 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 414 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.19 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (310 mg, 0.95 mmol) 및 2-플루오로이소니코티노니트릴 (46 mg, 0.38 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.8 mg, 2.8%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 516 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.83 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.64 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.59 - 4.42 (m, 1H), 4.41 - 4.19 (m, 1H), 3.82 - 3.68 (m, 2H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.44 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.10 (dd, J = 12.9, 6.7 Hz, 6H).
실시예 172. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리미딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 532)의 합성
단계 1. 5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올
DMF (5 mL) 중 5-(tert-부틸)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (150 mg, 0.73 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (1.3 g, 7.3 mmol) 및 LiCl (310 mg, 7.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (130 mg, 82%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 192 (M+H)+.
단계 2. 5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
POCl3 (15 mL) 및 5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (130 mg, 0.68 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 EtOAc로 희석하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3로 세척하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)에 의해 정제하여 5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (90 mg, 63%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 210 (M+H)+.
단계 3. 5-(tert-부틸)-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (5 mL) 중 5-(tert-부틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (90 mg, 0.43 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH (21 mg, 0.86 mmol, 60 중량%) 및 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (98 mg, 0.52 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~25%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-(tert-부틸)-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (120 mg, 82%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 364 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
5-(tert-부틸)-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (120 mg, 0.33 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 1.7 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 82%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 542 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.28 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 ml, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 92%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 388 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리미딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 0.15 mmol)의 용액에 2-브로모피리미딘-4-카르보니트릴 (72 mg, 0.45 mmol), Pd2(dba)3 (60 mg, 0.07 mmol), X-Phos (75 mg, 0.15 mmol) 및 Cs2CO3 (130 mg, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(4-시아노피리미딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.02 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.38 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.30 - 4.22 (m, 2H), 3.77 - 3.70 (m, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 2H), 3.14 - 3.08 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.41 (s, 9H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 173. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(6-시아노피리미딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 533)의 합성
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 0.15 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (140 mg, 0.43 mmol) 및 6-클로로피리미딘-4-카르보니트릴 (40 mg, 0.28 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 여과하였다. 여과물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(tert-부틸)-7-(6-시아노피리미딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 42%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.48 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 4.32 - 4.23 (m, 2H), 3.75 - 3.70 (m, 1H), 3.64 - 3.59 (m, 2H), 3.15 - 3.10 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.42 (s, 9H), 1.00 (t, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 174. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 534)의 합성
단계 1. 2-(4-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (4 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.28 mmol)의 용액에 HCl (0.50 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3로 염기성화시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 2-(4-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (90 mg, 80%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 402 (M+H)+.
단계 2. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (30 mL) 중 2-(메틸-d3)프로판-1,1,1,3,3,3-d6-2-올 (1.0 g, 12 mmol), 디(피리딘-2-일) 카르보네이트 (2.6 g, 12 mmol) 및 DMAP (440 mg, 3.6 mmol)의 혼합물을 실온에서 42시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 추가 조작 없이 직접 사용하였다. DMF (5 mL) 중 2-(4-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (60 mg, 0.15 mmol)의 용액에 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 피리딘-2-일 카르보네이트 (0.50 mL, DCM 중 0.40 M) 및 DIPEA (58 mg, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~25%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2S,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 64%)를 고체로서 수득하였다. 50 mg의 샘플을 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 30 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 - 9.24 (m, 1H), 8.62 - 8.56 (m, 2H), 8.50 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.57 - 4.47 (m, 1H), 4.43 - 4.17 (m, 1H), 3.75 - 3.63 (m, 2H), 3.60 - 3.53 (m, 1H), 3.41 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.09 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트를 사용하여 화합물 534의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 175. 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 535)의 합성
단계 1. 1-메틸시클로부틸 피리딘-2-일 카르보네이트
DCM (5 mL) 중 1-메틸시클로부탄-1-올 (100 mg, 1.2 mmol), 디(피리딘-2-일) 카르보네이트 (240 g, 1.1 mmol), 및 DMAP (40 mg, 0.33 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-메틸시클로부틸 피리딘-2-일 카르보네이트 (100 mg, 43%)를 수득하였다.
단계 2. 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
1-메틸시클로부틸 피리딘-2-일 카르보네이트 (120 mg, 0.56 mmol), 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (150 mg, 0.37 mmol), TEA (0.10 mL, 0.74 mmol) 및 DMF (5 mL)의 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~25%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 31%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 514 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.64 - 8.55 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.52 (br. s, 1H), 4.32 (br. s, 1H), 3.77 - 3.61 (m, 2H), 3.60- 3.54 (m, J = 12.4 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.32 - 2.22 (m, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 2H), 1.79 - 1.69 (m, 1H), 1.64 - 1.56 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.09 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 176. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 536)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 아세톤 (2 L) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 g, 0.71 mol) 및 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (180 g, 0.93 mol)의 용액에 2.0M NaOH (0.53 L)를 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 2회 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 g, 95%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIEA (100 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (20 g, 46 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 g, 92 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (26 g, 92%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (120 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.0 g, 11 mmol)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (4.3 mL, 34 mmol) 및 CuI (2.2 g, 11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (4.8 g, 75%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (50 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (4.8 g, 8.6 mmol)의 용액에 TBAF (52 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (3.2 g, 91%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 400 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.37 mmol)의 용액에 2-브로모-4-(트리플루오로메틸)피리딘 (0.09 mL, 0.75 mmol), CuI (72 mg, 0.37 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (110 mg, 0.75 mmol) 및 K3PO4 (160 mg, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (33 mg, 16%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 545 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.68 (m, 2H), 8.58 (s, 1H), 7.49 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.53 (m, 1H), 4.47 - 4.26 (m, 1H), 3.82 - 3.71 (m, 2H), 3.64 (dd, J = 13.4, 3.5 Hz, 1H), 3.48 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.15 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 536의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 177. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 537)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (610 mg, 1.0 mmol)의 용액에 메틸보론산 (600 mg, 10 mmol), K2CO3 (410 mg, 3.0 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (73 mg, 0.10 mmol)를 첨가하였다. N2 하에 90℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 60%)를 백색-황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.60 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 N2 하에 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (190 mg, 92%)를 백색-황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 346 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.29 mmol)의 용액에 2-브로모-4-(트리플루오로메틸)피리딘 (130 mg, 0.58 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (82 mg, 0.58 mmol), CuI (55 mg, 0.58 mmol) 및 K3PO4 (120 mg, 0.58 mmol)를 첨가하였다. N2 하에 100℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 95%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 491 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.24 (s, 1H), 8.61 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.99 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.52 - 4.33 (m, 2H), 3.81 - 3.73 (m, 2H), 3.67 - 3.59 (m, 1H), 3.53 - 3.47 (m, 1H), 2.46 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 6H).
실시예 178. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 494)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (15 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.67 mmol)의 용액에 (3-클로로페닐)보론산 (210 mg, 1.4 mmol), 4A 분자체 (500 mg), Cu(OAc)2 (370 mg, 2.0 mmol) 및 피리딘 (0.33 mL, 4.1 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 0℃에서 수성 NH4OH (1 mL)로 켄칭하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 18%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.12 mmol)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (0.06 mL, 0.50 mmol) 및 CuI (24 mg, 0.12 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 496 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.48 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.63 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.52 - 7.49 (m, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 4.33 - 4.27 (m, 1H), 3.99 - 3.78 (m, 1H), 3.66 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.53 - 3.34 (m, 3H), 3.20 - 3.04 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.13 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 붕산으로부터 화합물 494의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 179. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 601)의 합성
단계 1. 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (15 mL) 중 5-브로모-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 13 mmol)의 용액에 4-클로로-2-플루오로피리딘 (3.5 g, 26 mmol) 및 Cs2CO3 (6.5 g, 20 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.6 g, 50%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 339, 401 (M+H)+.
단계 2. 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올
DMF (8 mL) 중 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.6 g, 6.5 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (11 g, 65 mmol) 및 LiCl (2.8 g, 65 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (1.7 g, 80%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 325, 327 (M+H)+.
단계 3. 5-브로모-4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (1.7 g, 5.2 mmol) 및 POCl3 (10 mL)의 혼합물을 N2 하에 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-브로모-4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (1.2 g, 67%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 343, 345 (M+H)+.
단계 4. 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 THF (1 mL) 중 5-브로모-4-클로로-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (800 mg, 2.3 mmol)의 용액에 TBAF (10 ml, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (500 mg, 66%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 327, 329 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-시아노피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4,7-디아자스피로[2.5]옥탄-7-카르복실레이트
DIEA (0.5 mL) 중 5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-4-플루오로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (230 mg, 0.70 mmol)의 용액에 tert-부틸 3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 7.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 150℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 33%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 521, 523 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(5-브로모-7-(4-클로로피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.23 mmol)의 용액에 피롤리딘-2-온 (29 mg, 0.34 mmol), CuI (44 mg, 0.23 mmol), K3PO4 (200 mg, 0.92 mmol) 및 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (32 mg, 0.23 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 62%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (1 mL) 중 tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(2-옥소피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.095 mmol)의 용액에 BH3 (2.0 mL, THF 중 1.0 M)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 41%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 8. tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 4-(7-(4-클로로피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.039 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (23 mg, 0.20 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (45 mg, 0.039 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(피롤리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.0 mg, 26%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.28 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.21 (dd, J = 5.1, 0.9 Hz, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.48 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.29 (s, 2H), 3.09 (s, 4H), 1.91 (s, 4H), 1.53 (s, 6H), 1.43 (s, 9H).
실시예 180. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 602)의 합성
단계 1. 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 아세톤 (2 L) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 g, 0.71 mol) 및 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (180 g, 0.93 mol)의 용액에 2.0 M NaOH (0.53 L)를 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 2회 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 g, 95%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 434 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (0.41 mL, 2.3 mmol) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (340 mg, 0.77 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 54%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 0.42 mmol)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (0.16 mL, 1.30 mmol) 및 CuI (81 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 55%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.23 mmol)의 용액에 TBAF (1.4 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 95%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 400 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 0.22 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (55 mg, 0.45 mmol) 및 Cs2CO3 (220.2 mg, 0.67 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 70%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 502 (M+H)+.
단계 6. 2-(4-((2R,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.16 mmol)의 용액에 HCl/디옥산 (1.0 mL, 4.0M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하였다. 유기 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 402 (M+H)+.
단계 7. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 2-(4-((2R,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (60 mg, 0.15 mmol)의 용액에 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 피리딘-2-일 카르보네이트 (3.0 당량, 화합물 625에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 DIPEA (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5R)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37 mg, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.61 - 8.58 (m, 2H), 8.56 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.44 - 4.35 (m, 1H), 4.04 - 3.88 (m, 2H), 3.58 (dd, J = 13.2, 5.4 Hz, 1H), 3.27 (dd, J = 13.2, 8.2 Hz, 1H), 2.99 (dd, J = 13.9, 11.5 Hz, 1H), 1.14 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민으로부터 화합물 602의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 181. 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 604)의 합성
단계 1. 1-(트리플루오로메틸)시클로부탄-1-올
THF (5 mL) 중 시클로부타논 (500 mg, 7.1 mmol)의 용액에 트리메틸 (트리플루오로메틸)실란 (1200 mg, 8.6 mmol) 및 TBAF (0.10 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 6 M HCl (1.6 mL)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 2. 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트
1-(트리플루오로메틸)시클로부탄-1-올 (여과물)의 용액을 DCE (20 mL) 및 CDI (1300 mg, 8.0 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 70℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (200 mg)를 고체로서 수득하였다. LCMS ESI (m/z): 235 (M+H)+.
단계 3. 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.30 mmol)의 용액에 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 0.10 mmol, 화합물 602에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨) 및 DIPEA (200 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 27%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 568 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.63 - 8.57 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 7.42 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.61 - 4.20 (m, 2H), 3.76 - 3.58 (m, 3H), 3.47 - 3.37 (m, 1H), 2.87 - 2.71 (m, 2H), 2.57 - 2.44 (m, 2H), 1.97 - 1.91 (m, 1H), 1.86 - 1.77 (m, 1H), 1.09 (s, 6H).
실시예 182. 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 605)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (760 mg, 2.1 mmol, 화합물 635에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (520 mg, 4.2 mmol) 및 Cs2CO3 (2100 mg, 6.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (720 mg, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 462 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (720 mg, 1.6 mmol)의 용액에 BAST (2.8 mL, 16 mmol)를 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (440 mg, 58%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 484 (M+H)+.
단계 3. 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
0℃에서 DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.57 mmol)의 용액에 HCl/디옥산 (5.0 mL, 4.0M)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 디클로로메탄 중 메탄올)에 의해 정제하여 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (150 mg, 67%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 384 (M+H)+.
단계 4. 1-메틸시클로부틸 피리딘-2-일 카르보네이트
DCM (5 mL) 중 1-메틸시클로부탄-1-올 (100 mg, 1.2 mmol)의 용액에 디(피리딘-2-일) 카르보네이트 (250 mg, 1.2 mmol) 및 DMAP (43 mg, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 5. 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (45 mg, 0.11 mmol)의 용액에 1-메틸시클로부틸 피리딘-2-일 카르보네이트 (1.0 mL, 0.23 mmol) 및 DIPEA (0.50 mL, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (17 mg, 29%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 496 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.58 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.38 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 4.56 - 4.47 (m, 1H), 4.41 - 4.25 (m, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.56 (m, 1H), 3.46 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.15 - 2.04 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 1H), 1.64 - 1.55 (m, 1H), 1.52 (s, 3H), 1.12 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민 및 알콜로부터 화합물 605의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다 (화합물 607 및 화합물 608의 아릴 기는 울만(Ullmann) 커플링 조건을 통해 도입하였음).
실시예 183. tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(1-메틸시클로프로필)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 612)의 합성
단계 1. 3-브로모-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서 무수 DMF (10 mL) 중 NaH (610 mg, 15 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 3-브로모-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.0 g, 10 mmol)을 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 벤젠술포닐 클로라이드 (2.0 g, 11 mmol)를 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-브로모-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (3.0 g, 89%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 337, 339 (M+H)+.
단계 2. 1-(페닐술포닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
디옥산 (30 mL) 및 물 (1 mL) 중 3-브로모-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (3.0 g, 8.9 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (2.2 g, 13 mmol), K2CO3 (3.7 g, 27 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (650 mg, 0.80 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-(페닐술포닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.0 g, 76%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 299 (M+H)+.
단계 3. 1-(페닐술포닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서 DCM (8 mL) 중 Et2Zn (17 mL, 톨루엔 중 1.0 M)의 용액에 DCM (2 mL) 중 CH2I2 (0.72 mL, 8.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 20분 후, DCM (5 mL) 중 1-(페닐술포닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (500 mg, 1.7 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NH4Cl (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (310 mg, 60%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 313 (M+H)+.
단계 4. 3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드
0℃에서 DCM (15 ml) 중 3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.2 g, 3.9 mmol)의 용액에 3-클로로벤조퍼옥시산 (1.3 g, 7.7 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O로 희석하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~15% MeOH)에 의해 정제하여 3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (950 mg, 75%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 329 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (330 mg, 1.0 mmol, tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.0 g, 5.0 mmol) 및 DIPEA (480 mg, 3.8 mmol)의 용액에 PyBroP (610 mg, 1.3 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 24% 수율)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1-(페닐술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.24 mmol)의 용액에 TBAF (2.4 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (TBAF-관련 불순물을 함유한 340 mg)를 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 371 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(1-메틸시클로프로필)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (1 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸-4-(3-(1-메틸시클로프로필)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (TBAF-관련 불순물을 함유한 340 mg, ~0.20 mmol) 및 2-플루오로이소니코티노니트릴 (120 mg, 1.0 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (330 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 밤새 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 NH4Cl (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(1-메틸시클로프로필)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (62 mg, 66% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 473. (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.72 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.39 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.77 (s, 1H), 3.54 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 3.41 (s, 1H), 3.17 (dd, J = 12.2, 8.1 Hz, 1H), 3.03 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.17 - 1.09 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.90 - 0.84 (m, 1H), 0.75 (m, 2H).
실시예 184. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 613)의 합성
0℃에서 DCE (2 mL) 중 1-메틸시클로프로판-1-올 (100 mg, 1.4 mmol) 및 DIPEA (0.10 mL)의 용액에 트리포스겐 (70 mg, 0.23 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (30 mg, 0.078 mmol, 화합물 605에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)을 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (12 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 482 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.38 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.88 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 4.57 - 4.46 (m, 1H), 4.44 - 4.14 (m, 1H), 3.76 - 3.62 (m, 2H), 3.55 (dd, J = 13.4, 3.6 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.10 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.85 - 0.80 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H).
실시예 185. 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 614)의 합성
DMF (2 mL) 중 2-(5-(디플루오로메틸)-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (20 mg, 0.052 mmol, 화합물 605에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 1H-이미다졸-1-카르복실레이트 (18 mg, 0.078 mmol, 화합물 604에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 DIPEA (0.10 mL, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-(트리플루오로메틸)시클로부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 36%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 550 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.59 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.39 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.88 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 1H), 4.44 - 4.20 (m, 1H), 3.78 - 3.57 (m, 3H), 3.48 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 2H), 2.56 - 2.40 (m, 2H), 2.01 - 1.87 (m, 1H), 1.87 - 1.76 (m, 1H), 1.13 - 1.08 (m, 6H).
실시예 186. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 615)의 합성
단계 1. (E)-4-메톡시-7-(페닐술포닐)-5-(프로프-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
디옥산 (10 mL) 및 H2O (1 mL) 중 5-아이오도-4-메톡시-7-(페닐술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (690 mg, 1.8 mmol)의 용액에 (E)-프로프-1-엔-1-일보론산 (200 mg, 2.3 mmol), K2CO3 (990 mg, 7.2 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (130 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (E)-4-메톡시-7-(페닐술포닐)-5-(프로프-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 49%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 330 (M+H)+.
단계 2. 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7-(페닐술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
0℃에서 DCM (2 mL) 중 Et2Zn (9.2 mL, 톨루엔 중 1.0 M)의 용액에 CH2I2 (1.2 g, 4.6 mmol)를 적가하였다. 30분 후, DCM (10 mL) 중 (E)-4-메톡시-7-(페닐술포닐)-5-(프로프-1-엔-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (300 mg, 0.91 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 밤새 가온하였다. 반응물을 NH4Cl (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7-(페닐술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (150 mg, 48%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 344 (M+H)+.
단계 3. 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
THF (3 mL) 중 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7-(페닐술포닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (150 mg, 0.44 mmol)의 용액에 TBAF (3.9 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 50℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (80 mg, 90%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 204 (M+H)+.
단계 4. 2-(4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (10 mL) 중 4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (40 mg, 0.20 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (49 mg, 0.40 mmol) 및 Cs2CO3 (650 mg, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 50℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 82%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 306 (M+H)+.
단계 5. 2-(4-히드록시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (2 mL) 중 2-(4-메톡시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.16 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 (280 mg, 1.6 mmol) 및 LiCl (67 mg, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 2-(4-히드록시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 85%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 292 (M+H)+.
단계 6. 2-(4-클로로-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
2-(4-히드록시-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (40 mg, 0.14 mmol) 및 POCl3 (5 mL)의 혼합물을 120℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, NaHCO3 (수성)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 310 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (1 mL) 중 2-(4-클로로-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (25 mg, 0.080 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (320 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃로 6시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-메틸시클로프로필)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.6 mg, 9.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 474 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.25 (s, 1H), 8.52 (dd, J = 8.7, 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.89 - 7.62 (m, 1H), 7.28 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.85 - 4.56 (m, 1H), 4.14 - 3.87 (m, 2H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.54 - 3.29 (m, 2H), 3.14 - 2.97 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.69 - 1.56 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.42 - 1.39 (m, 1H), 1.15 - 1.09 (m, 3H), 0.82 - 0.69 (m, 3H).
하기 화합물을 상응하는 3-아이오도벤조니트릴을 사용하고 표준 울만 커플링 조건을 사용하여 화합물 615의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 187. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 617)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드
0℃에서 무수 DMF (15 mL) 중 NaH (1.2 g, 30 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (1.1 g, 6.1 mmol)를 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 트리틸 클로라이드 (3.4 g, 12 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (1.9 g, 74%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 424 (M+H)+.
단계 2. 4-클로로-5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DMF (15 ml) 중 4-클로로-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (1.1 g, 2.6 mmol)의 용액에 2,2-디플루오로-2-(트리페닐포스포니오)아세테이트 (1.9 g, 5.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (800 mg, 67%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 458 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (800 mg, 1.8 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.9 g, 8.7 mmol)의 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 28%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 636 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2,2-디플루오로비닐)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 0.49 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 66%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 656 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7-트리틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 0.32 mmol)의 용액에 TFA (1.0 ml)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (85 mg, 85%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 314 (M+H)+.
DCM (5 ml) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (85 mg, 0.27 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (120 mg, 0.54 mmol) 및 TEA (82 mg, 0.81 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~70%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 414 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액에 2-브로모피리미딘-4-카르보니트릴 (36 mg, 0.19 mmol), Pd2(dba)3 (44 mg, 0.05 mmol), X-Phos (56 mg, 0.09 mmol) 및 Cs2CO3 (95 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리미딘-2-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.0 mg, 11%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 517 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.47 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.35 - 4.23 (m, 2H), 3.81 - 3.69 (m, 2H), 3.64 - 3.54 (m, 3H), 3.28 - 3.22 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.04 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 188. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 618)의 합성
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.10 mmol, 화합물 617에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 6-클로로피리미딘-4-카르보니트릴 (27 mg, 0.19 mmol) 및 Cs2CO3 (95 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(6-시아노피리미딘-4-일)-5-(2,2,2-트리플루오로에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (16 mg, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 517 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.50 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 4.36 - 4.27 (m, 2H), 3.79 - 3.69 (m, 2H), 3.63 - 3.53 (m, 3H), 3.30 - 3.25 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.10 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 618의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 189. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 620)의 합성
단계 1. 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서 무수 DMF (10 mL) 중 NaH (740 mg, 18 mmol, 60 중량%)의 현탁액에 3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.5 g, 6.2 mmol)을 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (1.8 g, 9.2 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 10분 후, 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.2 g, 89%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 399 (M+H)+.
단계 2. 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드
0℃에서 DCM (15 ml) 중 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.2 g, 5.5 mmol)의 용액에 3-클로로퍼옥시벤조산 (1.9 g, 11 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 밤새 교반한 후, 반응물을 H2O로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~15% MeOH)에 의해 정제하여 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (1.8 g, 78%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 415 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (1.1 g, 2.7 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.9 g, 13 mmol), PyBroP (1.6 g, 3.5 mmol), DIPEA (1.4 g, 11 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 40%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 611 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.66 mmol)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (380 mg, 2.0 mmol) 및 CuI (130 mg, 0.66 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 86%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 553 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (310 mg, 0.56 mmol)의 용액에 TBAF (10 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 H2O (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 89%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 399 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.25 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (92 mg, 0.76 mmol) 및 Cs2CO3 (410 mg, 1.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 28%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 501 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.74 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 4.42 - 4.34 (m, 1H), 3.93 - 3.87 (m, 1H), 3.74 - 3.69 (m, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 2H), 2.96 - 2.91 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 190. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 623)의 합성
단계 1. 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.20 mmol, 화합물 620에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 디옥산 중 HCl (5.0 ml, 4.0M)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴 (60 mg, 75%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 401 (M+H)+.
단계 2. 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 2-(메틸-d3)프로판-1,1,1,3,3,3-d6-2-올 (3.0 g, 36 mmol)의 용액에 DMAP (1.3 g, 11 mmol) 및 디(피리딘-2-일) 카르보네이트 (7.8 g, 36 mmol)를 첨가하고, 반응물을 35℃에서 7일 동안 교반하고, 생성된 반응 용액을 후속 단계에 직접 사용하였다. DMF (8 mL) 중 2-(4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-일)이소니코티노니트릴 (60 mg, 0.15 mmol)의 용액에 DIPEA (58 mg, 0.45 mmol)에 이어서 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 피리딘-2-일 카르보네이트 (상기 기재된 용액 0.5 mL)를 첨가하였다. 80℃에서 밤새 교반한 후, DCM을 제거하고, 잔류물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~5% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2-(메틸-d3)프로판-2-일-1,1,1,3,3,3-d6 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 72% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 510 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.74 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.40 - 4.29 (m, 1H), 3.93 - 3.86 (m, 1H), 3.74 - 3.60 (m, 3H), 2.94 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 191. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(디플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 624)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-비닐-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-아이오도-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 0.54 mmol, 화합물 620에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (0.18 mL, 1.1 mmol), K2CO3 (220 mg, 1.6 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (40 mg, 0.054 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-비닐-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 94%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 511 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(1-토실-3-비닐-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 0.51 mmol)의 용액에 K2OsO4 (19 mg, 0.051 mmol) 및 NaIO4 (540 mg, 2.5 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 38%)를 갈색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 513 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.19 mmol)의 용액에 TBAF (1.2 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 93%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 359 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 0.18 mmol)의 용액에 2-플루오로이소니코티노니트릴 (44 mg, 0.36 mmol) 및 Cs2CO3 (180 mg, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 60%)를 갈색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 461 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(디플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-포르밀-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 BAST (0.10 mL, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3일에 걸쳐 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-(디플루오로메틸)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (21 mg, 40%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 483 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.73 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.99 - 7.92 (m, 1H), 7.72 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.46 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 55.4 Hz, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 1H), 3.92 - 3.80 (m, 1H), 3.75 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.56 (dd, J = 13.6, 2.6 Hz, 1H), 2.96 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
실시예 192. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 625)의 합성
단계 1. 시클로헥실 메탄술포네이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 시클로헥산올 (300 mg, 3.0 mmol) 및 TEA (1.2 mL, 9.0 mmol)의 용액에 MsCl (0.46 mL, 6.0 mmol)을 적가하였다. 1시간 후, 반응물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 시클로헥실 메탄술포네이트 (500 mg, 93%)를 황색 오일로서 수득하였다.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.12 mmol, 화합물 659에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로헥실 메탄술포네이트 (45 mg, 0.25 mmol) 및 Cs2CO3 (120 mg, 0.37 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.2 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 482 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.40 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.71 - 4.62 (m, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.13 (m, 1H), 3.69 - 3.61 (m, 2H), 3.55 (dd, J = 13.3, 3.1 Hz, 1H), 3.38 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.05 (m, 2H), 1.91 - 1.82 (m, 2H), 1.73 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.48 - 1.44 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.28 - 1.17 (m, 2H), 1.04 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 625의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 193. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 627)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.14 mmol, 화합물 630에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로헥실 메탄술포네이트 (50 mg, 0.28 mmol, 화합물 625에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨) 및 Cs2CO3 (140 mg, 0.41 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 32%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 442 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.045 mmol)의 용액에 BAST (0.08 mL, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 30℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-시클로헥실-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.7 mg, 27%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 464 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.40 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 6.86 (t, J = 56.2 Hz, 1H), 4.69 - 4.59 (m, 1H), 4.45 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.16 (m, 1H), 3.72 - 3.61 (m, 2H), 3.52 (dd, J = 13.3, 3.4 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.07 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.00 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 2H), 1.73 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.66 - 1.59 (m, 1H), 1.50 - 1.44 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.27 - 1.14 (m, 2H), 1.06 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 625의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 194. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 629)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.25 mmol, 화합물 659에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 메틸 3-히드록시시클로헥산-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.75 mmol) 및 (시아노메틸렌)트리부틸포스포란 (CMBP. 0.14 mL, 0.50 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 88%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 540 (M+H)+.
단계 2. 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산
MeOH (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.22 mmol)의 용액에 NaOH (18 mg, 0.44 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, MeOH를 제거하였다. 잔류물을 1 M HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (40 mg, 34%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (40 mg, 0.076 mmol)의 용액에 NH4Cl (8.1 mg, 0.15 mmol), HATU (29 mg, 0.076 mmol) 및 DIPEA (0.04 mL, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 87%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 525 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 0.067 mmol) 및 TEA (0.08 mL, 0.60 mmol)의 용액에 TFAA (35 mg, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (21 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 507 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 - 8.33 (m, 1H), 7.41 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.97 - 4.62 (m, 1H), 4.51 - 4.21 (m, 2H), 3.72 - 3.59 (m, 2H), 3.54 (dd, J = 13.3, 3.1 Hz, 1H), 3.46 - 3.30 (m, 1H), 3.20 - 2.62 (m, 1H), 2.53 - 2.27 (m, 1H), 2.18 - 1.99 (m, 3H), 1.94 - 1.69 (m, 2H), 1.65 - 1.53 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.10 - 0.96 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 알콜로부터 화합물 629의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다 (화합물 631 및 화합물 632는 테트라히드로-2H-피란-3-올로부터 제조하고, 최종 단계에서 SFC 키랄 분리를 통해 분리하였음).
실시예 195. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 633)의 합성
단계 1. 메틸 3-((메틸술포닐)옥시)시클로헥산-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 메틸 3-히드록시시클로헥산-1-카르복실레이트 (200 mg, 1.3 mmol) 및 TEA (0.53 mL, 3.8 mmol)의 용액에 MsCl (0.20 mL, 2.5 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 빙수로 켄칭하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 메틸 3-((메틸술포닐)옥시)시클로헥산-1-카르복실레이트 (290 mg, 97%)를 황색 오일로서 수득하였다.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (5 mL) 중 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르브알데히드 (1.0 g, 5.5 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.4 g, 11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~90%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 67%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 360 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.55 mmol)의 용액에 메틸 3-((메틸술포닐)옥시)시클로헥산-1-카르복실레이트 (260 mg, 1.1 mmol) 및 Cs2CO3 (540 mg, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 46%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+.
단계 4. 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산
MeOH (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7-(3-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.26 mmol)의 용액에 NaOH (21 mg, 0.52 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올을 제거하였다. 잔류물을 1 N HCl에 의해 pH 6으로 산성화시키고, 혼합물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (60 mg, 47%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 486 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 3-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)시클로헥산-1-카르복실산 (60 mg, 0.12 mmol)의 용액에 NH4Cl (13 mg, 0.24 mmol), HATU (47 mg, 0.12 mmol) 및 DIPEA (0.07 mL, 0.37 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 91%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 485 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-카르바모일시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (55 mg, 0.11 mmol) 및 TEA (0.14 mL, 1.0 mmol)의 용액에 TFAA (60 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 94%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 467 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 BAST (0.10 mL, 0.53 mmol)를 첨가하였다. 30℃에서 3일 동안 교반한 후, 반응물을 DCM 및 NaHCO3 (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-시아노시클로헥실)-5-(디플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.5 mg, 10%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 489 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.40 - 8.34 (m, 1H), 7.31 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 56.1 Hz, 1H), 4.92 - 4.59 (m, 1H), 4.51 - 4.24 (m, 2H), 3.74 - 3.62 (m, 2H), 3.58 - 3.13 (m, 3H), 2.76 - 2.19 (m, 2H), 2.16 - 2.00 (m, 2H), 1.96 - 1.77 (m, 2H), 1.74 - 1.54 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.10 - 1.01 (m, 6H).
하기 화합물을 3-히드록시시클로펜탄-1-카르보니트릴로부터 화합물 633의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 196. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 635)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (50 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.0 g, 11 mmol)의 용액에 (3-플루오로페닐)보론산 (2.2 g, 16 mmol), Cu(OAc)2 (5.3 g, 27 mmol) 및 피리딘 (1.7 mL, 21 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 O2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 수성 암모니아 (80 mL)를 첨가하고, 반응물을 여과하였다. 여과물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.6 g, 66%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 374 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
4-클로로-7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (2.6 g, 6.9 mmol), tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.2 g, 10 mmol) 및 DIPEA (15 mL)의 혼합물을 150℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.7 g, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 552 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (800 mg, 1.4 mmol)의 용액에 아제티딘-2-온 (400 mg, 5.6 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (200 mg, 1.4 mmol), CuI (130 mg, 0.70 mmol) 및 K3PO4 (590 mg, 2.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~100%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (8 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-(2-옥소아제티딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.0 mmol)의 용액에 RhHCO(PPh3)3 (92 mg, 0.10 mmol) 및 PhSiH3 (0.60 mL, 5.0 mmol)를 첨가하였다. N2 하에 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (470 mg, 98%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 481 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ
8.36 (s, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 2H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.02 - 6.96 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.00 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.83 - 3.57 (m, 7H), 2.32 - 2.26 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민으로부터 화합물 635의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 197. tert-부틸 (S)-4-(3-(아제티딘-1-일)-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 637)의 합성
단계 1. 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
DCM (50 mL) 중 3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (2.9 g, 12 mmol), (3-플루오로페닐)보론산 (4.9 g, 35 mmol), Cu(OAc)2 (5.8 g, 30 mmol) 및 피리딘 (5.7 mL, 71 mmol)의 혼합물을 산소 분위기 하에 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 암모니아로 처리하고, 여과하였다. 여과물을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.5 g, 37%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 339 (M+H)+.
단계 2. 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드
0℃에서 DCM (20 mL) 중 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (1.5 g, 4.4 mmol)의 용액에 3-클로로퍼옥시벤조산 (1.1 g, 6.6 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (수성)으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (920 mg, 61%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 355 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (450 mg, 1.3 mmol)의 용액에 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 6.4 mmol), DIPEA (0.90 mL, 5.1 mmol) 및 PyBroP (1.2 g, 2.5 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3일 동안 교반한 후, 반응물을 DCM 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (250 mg, 36%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 537 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-(2-옥소아제티딘-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-아이오도-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 0.28 mmol)의 용액에 아제티딘-2-온 (80 mg, 1.1 mmol), CuI (27 mg, 0.14 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (0.05 mL, 0.28 mmol) 및 K3PO4 (180 mg, 0.84 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-(2-옥소아제티딘-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 89%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 480 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(3-(아제티딘-1-일)-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(1-(3-플루오로페닐)-3-(2-옥소아제티딘-1-일)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.25 mmol)의 용액에 RhHCO(PPh3)3 (23 mg, 0.025 mmol) 및 PhSiH3 (0.15 mL, 1.3 mmol)를 첨가하였다. N2 하에 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-(아제티딘-1-일)-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 68%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 466 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.93 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.25 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.08 - 6.99 (m, 2H), 6.60 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.97 (m, 3H), 3.78 - 3.50 (m, 5H), 3.34 (m, 2H), 2.26 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.03 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민으로부터 화합물 637의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 198. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 641)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (10 mL) 및 H2O (0.1 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.36 mmol, 화합물 666에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조함)의 용액에 시클로부틸보론산 (72 mg, 0.72 mmol), K2CO3 (250 mg, 1.8 mmol) 및 Pd(dptf)Cl2 (32 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 42%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.15 mmol)의 용액에 TBAF (1.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 372 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.13 mmol)의 용액에 1-플루오로-3-아이오도벤젠 (45 mg, 0.20 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (14 mg, 0.10 mmol), CuI (19 mg, 0.10 mmol) 및 K3PO4 (43 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-시클로부틸-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 41%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 466 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (s, 1H), 7.49 - 7.37 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.98 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.17 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.76 - 3.59 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.16 (s, 1H), 2.44 - 2.32 (m, 2H), 2.12 - 1.86 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.12 (d, J = 5.5 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민, 보론산 및 아릴 할라이드로부터 화합물 641의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 199. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 649)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (60 mL) 및 H2O (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (6.0 g, 9.8 mmol)의 용액에 (2-플루오로페닐)보론산 (1.7 g, 12 mmol), K2CO3 (4.1 g, 29 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.72 g, 0.98 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.5 g, 96%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 580 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.86 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 4회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 95%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 426 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.71 mmol)의 용액에 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (100 mg, 0.71 mmol), 2-브로모-4-(트리플루오로메틸)피리딘 (400 mg, 1.8 mmol), CuI (140 mg, 0.71 mmol) 및 K3PO4 (450 mg, 2.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 86%)를 고체로서 수득하였다. 이 중 50 mg를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 백색 고체 30 mg를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 571 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.43 (td, J = 7.6, 1.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.19 - 7.11 (m, 2H), 4.30 - 3.95 (m, 2H), 3.33 - 3.13 (m, 3H), 2.93 - 2.64 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드 및 아민으로부터 화합물 649의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 200. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 652)의 합성
단계 1. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (4 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol, 화합물 649에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 HCl (0.8 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 NaHCO3 (수성)을 사용하여 pH 8로 염기성화시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0~10% MeOH)에 의해 정제하여 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (60 mg, 73%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 471 (M+H)+.
단계 2. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 2-(4-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 1-메틸시클로프로필 피리딘-2-일 카르보네이트 (3.0 당량, 화합물 623에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨) 및 DIPEA (43 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~80%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(5-(2-플루오로페닐)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (10 mg, 17%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 569 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.26 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 4.30 - 3.92 (m, 2H), 3.35 - 3.11 (m, 3H), 2.94 - 2.61 (m, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.79 - 0.71 (m, 2H), 0.59 - 0.48 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 652의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 201. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 654)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (25 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 3.3 mmol, 화합물 666에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로프로필보론산 (570 mg, 6.6 mmol), K2CO3 (6.8 g, 50 mmol) 및 PdCl2 (dtbpf) (190 mg, 0.30 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 65%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 2.1 mmol)의 용액에 TBAF (11 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (600 mg, 77%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 372 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.80 mmol)의 용액에 1-클로로-3-아이오도벤젠 (360 mg, 1.5 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (57 mg, 0.40 mmol), CuI (76 mg, 0.40 mmol) 및 K3PO4 (490 mg, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 482 (M+H)+.
단계 4. 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (5 ml) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (330 mg, 0.69 mmol)의 용액에 TFA (2.0 ml)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 77%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 382 (M+H)+.
단계 5. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.26 mmol)의 용액에 1-메틸시클로프로필 피리딘-4-일 카르보네이트 (3.0 당량, 화합물 623에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨) 및 DIEA (100 mg, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 80℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 H2O (50 mL)로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(3-클로로페닐)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (14 mg, 11%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 480 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.28 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 4.99 - 4.90 (m, 1H), 4.43 (s, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.65 (m, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.20 - 1.11 (m, 6H), 1.04 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 0.97 - 0.86 (m, 3H), 0.67 (m, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 654의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 202. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 659)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (50 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (26 g, 43 mmol, 화합물 666에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (24 g, 130 mmol) 및 CuI (8.0 g, 43 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (13 g, 55%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 554 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (12 g, 22 mmol)의 용액에 TBAF (42 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (7.5 g, 87%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 400 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.75 mmol)의 용액에 2-브로모-4-플루오로피리딘 (160 mg, 0.90 mmol), CuI (70 mg, 0.37 mmol), 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (110 mg, 0.75 mmol) 및 K3PO4 (480 mg, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (85 mg, 23%)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+.
단계 4. 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (85 mg, 0.17 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 (수성)으로 세척하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 395 (M+H)+.
단계 5. 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (67 mg, 0.17 mmol)의 용액에 1-메틸시클로프로필 피리딘-2-일 카르보네이트 (3.0 당량, 화합물 623에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨) 및 DIPEA (0.30 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 1-메틸시클로프로필 (2R,5S)-4-(7-(4-플루오로피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 18%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 493 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.78 - 8.66 (m, 2H), 8.62 - 8.48 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.82 - 3.63 (m, 3H), 3.49 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.15 - 1.08 (m, 6H), 0.89 (m, 2H), 0.71 - 0.59 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드로부터 화합물 659의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 203. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 666)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (100 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (10 g, 23 mmol, 화합물 602에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.9 g, 46 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (13 g, 92%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 612 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (50 mL) 및 H2O (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (4.0 g, 6.7 mmol)의 용액에 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (1.7 g, 13 mmol), K2CO3 (2.8 g, 20 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (490 mg, 0.67 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 61%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 500 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 4.0 mmol)의 용액에 TBAF (24 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 5시간 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 87%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 346 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1-플루오로-3-아이오도벤젠 (67 mg, 0.30 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (11 mg, 0.08 mmol), CuI (14 mg, 0.08 mmol) 및 K3PO4 (95 mg, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (45 mg, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 440 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.29 (s, 1H), 7.62 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.11 (m, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.77 (m, 2H), 3.65 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.56 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.49 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.19 - 1.13 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드 및 아민으로부터 화합물 666의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 204. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 695)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 1.1 mmol, 화합물 633에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 1-플루오로-3-아이오도벤젠 (490 mg, 2.2 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (78 mg, 0.55 mmol), CuI (105 mg, 0.55 mmol) 및 K3PO4 (1.4 g, 6.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 56%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 454 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3-플루오로페닐)-5-포르밀-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (280 mg, 0.61 mmol)의 용액에 BAST (680 mg, 3.1 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 DCM 및 NaHCO3 (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-(디플루오로메틸)-7-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 48%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 476 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.39 (s, 1H), 7.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 2H), 7.31 - 7.01 (m, 2H), 4.69 - 4.62 (m, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.84 - 3.73 (m, 2H), 3.62 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.18 - 1.12 (m, 6H).
실시예 205. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-에틸-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 696)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (15 mL) 및 H2O (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.5 g, 2.5 mmol, 화합물 666에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (770 mg, 5.0 mmol), K2CO3 (1.0 g, 7.5 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (220 mg, 0.30 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 512 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-토실-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (900 mg, 1.8 mmol)의 용액에 TBAF (11 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 5시간 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (540 mg, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 358 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (270 mg, 0.75 mmol)의 용액에 2-브로모-4-(트리플루오로메틸)피리딘 (340 mg, 1.5 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (53 mg, 0.38 mmol), CuI (71 mg, 0.38 mmol) 및 K3PO4 (490 mg, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 42%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 503 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5-비닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.32 mmol)의 용액에 Pd/C (100 mg, 탄소 상 10%, 약 55% 물로 습윤됨)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 H2 (~0.1 MPa) 하에 밤새 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-에틸-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (42 mg, 26%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 505 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.70 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 1H), 4.54 - 4.47 (m, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.70 - 3.63 (m, 1H), 3.51 - 3.47 (m, 1H), 2.91 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.38 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.14 (m, 6H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 할라이드 및 보론산 피나콜 에스테르로부터 화합물 696의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 206. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 700)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (20 mL) 및 물 (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-아이오도-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.2 g, 2.0 mmol, 화합물 666에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (500 mg, 2.9 mmol), K2CO3 (810 mg, 5.9 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (160 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (620 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 526 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (470 mg, 0.89 mmol)의 용액에 TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0M)를 첨가하였다. 4시간 후, 반응물을 EtOAc 및 포화 NH4Cl (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 NH4Cl (수성)로 2회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 51%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 372 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-(에톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (170 mg, 0.46 mmol)의 용액에 에틸 2-브로모이소니코티네이트 (160 mg, 0.69 mmol), CuI (44 mg, 0.23 mmol), K3PO4 (390 mg, 1.8 mmol) 및 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (33 mg, 0.23 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃로 4시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-(에톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 75%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 521 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-(에톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-(에톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-(프로프-1-엔-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.35 mmol)의 용액에 팔라듐 (100 mg, 탄소 상 10%, 약 55% 물로 습윤됨)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 분위기 (~0.1 MPa) 하에 밤새 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 523 (M+H)+.
단계 5. 2-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코틴산
MeOH (5 mL) 및 물 (4 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-(에톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.34 mmol)의 용액에 NaOH (27 mg, 0.68 mmol)를 첨가하였다. 2시간 후, 생성된 혼합물을 1 N HCl에 의해 pH 6으로 산성화시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 495 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 2-(4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코틴산 (140 mg, 0.28 mmol)의 용액에 NH4Cl (75 mg, 1.4 mmol), EDCI (81 mg, 0.42 mmol) 및 DIEA (0.39 mL, 2.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 79%)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 494 (M+H)+.
단계 7. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
0℃에서 DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-카르바모일피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.22 mmol)의 용액에 DIEA (0.08 mL, 0.45 mmol)에 이어서 TFAA (70 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 빙수로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-이소프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (41 mg, 39%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 476 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.54 (dd, J = 5.0, 0.8 Hz, 1H), 8.45 (m, 1H), 7.91 (m, 1H), 7.28 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.46 - 4.21 (m, 2H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 3.36 (m, 1H), 3.19 - 3.02 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.39 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.21 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.10 - 1.04 (m, 6H).
실시예 207. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-플루오로피리딘-2-일)-3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 701)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔 (50 mL) 및 물 (3 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-[3-아이오도-1-(4-메틸벤젠술포닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일]-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (2.4 g, 3.9 mmol, 화합물 620에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 혼합물에 메틸보론산 (0.47 g, 7.9 mmol) 및 K2CO3 (2.7 g, 20 mmol) 및 PdCl2 (dtbpf) (0.32 g, 0.39 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 NH4Cl (수성)과 EtOAc 사이에 분배하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 66%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 499 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.3 g, 2.6 mmol)의 용액에 실온에서 TBAF (3.9 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 78%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 345 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-플루오로피리딘-2-일)-3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.32 mmol), 2-브로모-4-플루오로피리딘 (62 mg, 0.35 mmol), CuI (60 mg, 0.30 mmol) 및 K3PO4 (200 mg, 0.95 mmol) 및 트랜스-N1,N2-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (14 mg, 0.10 mmol)의 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-플루오로피리딘-2-일)-3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (17 mg, 13%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 440 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 8.07 - 8.02 (m, 1H), 7.96 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.72 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H), 4.37 - 4.31 (m, 1H), 3.94 - 3.88 (m, 1H), 3.69 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 2H), 2.98 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.43 (s, 9 H), 1.22 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 키랄 아민 및 보론산으로부터 화합물 701의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 208. tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 705)의 합성
DMF (6 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.29 mmol, 화합물 701에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-플루오로피리딘-4-카르보니트릴 (97 mg, 0.79 mmol) 및 Cs2CO3 (520 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물 및 EtOAc에 부었다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(1-(4-시아노피리딘-2-일)-3-메틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 60%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 447 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.03 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 5.0, 1.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 1H), 3.95 - 3.87 (m, 1H), 3.68 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.62 - 3.52 (m, 2H), 2.98 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 209. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 706)의 합성
단계 1. 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
0℃에서 무수 DMF (10 mL) 중 NaH (120 mg, 3.1 mmol, 미네랄 오일 중 60 중량%)의 현탁액에 3-브로모-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (400 mg, 2.0 mmol)을 여러 부분으로 첨가하고, 이어서 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (580 mg, 3.1 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 40분 후, 반응물을 빙수에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (650 mg, 91%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 351, 353 (M+H)+.
단계 2. 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘
톨루엔 (10 mL) 및 H2O (1 mL) 중 3-브로모-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (600 mg, 1.7 mmol)의 용액에 시클로부틸보론산 (340 mg, 3.4 mmol), K2CO3 (1.1 g, 8.5 mmol) 및 Pd(dptf)Cl2 (110 mg, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (220 mg, 39%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 327 (M+H)+.
단계 3. 3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드
0℃에서 DCM (10 ml) 중 3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 (200 mg, 0.61 mmol)의 용액에 3-클로로벤조퍼옥시산 (210 mg, 1.2 mmol)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 0~20% MeOH)에 의해 정제하여 3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (140 mg, 67%)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 343 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 5-옥시드 (140 mg, 0.41 mmol), tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (410 mg, 2.0 mmol) 및 DIPEA (200 mg, 1.5 mmol)의 용액에 PyBrOP (290 mg, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 28% 수율)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 525 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.12 mmol)의 용액에 TBAF (1.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 371 (M+H)+.
단계 6. tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 0.07 mmol)의 용액에 1-플루오로-3-아이오도벤젠 (45 mg, 0.20 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (5.0 mg, 0.04 mmol), CuI (7.0 mg, 0.04 mmol) 및 K3PO4 (43 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(3-시클로부틸-1-(3-플루오로페닐)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (9.6 mg, 31%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 465 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 7.12 - 7.06 (m, 1H), 4.09 - 4.01 (m, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.68 - 3.61 (m, 1H), 3.51 (s, 1H), 3.27 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.19 - 3.11 (m, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.61 - 2.53 (m, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.10 - 2.01 (m, 2H), 1.93 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 0.96 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 210. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 707)의 합성
단계 1. 2-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
CH3CN (70 mL) 중 4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (7.0 g, 25 mmol) 및 2-플루오로이소니코티노니트릴 (18 g, 150 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (12 g, 38 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 25℃에서 72시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 여과에 의해 수득하고 물 및 CH3CN으로 세척하여 2-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (9.0 g, 94%)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 382 (M+H)+.
단계 2. 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
DMF (15 mL) 중 2-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (1.4 g, 3.7 mmol) 및 CuI (720 mg, 3.8 mmol)의 혼합물에 N2 하에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (2.9 g, 15 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (670 mg, 80% 순도, 1.7 mmol, 44% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 324 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.13 mmol, 화합물 709에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-(4-클로로-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (89 mg, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 43%)를 황색 오일로서 수득하였다. 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 5.8 mg를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 505 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.23 - 9.12 (m, 1H), 8.76 (m, 2H), 8.59 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 5.0, 1.3 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.80 (dd, J = 13.6, 4.1 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 13.3, 2.8 Hz, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.51 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
하기 화합물을 상응하는 아민 (용매로서 EtOH, 염기로서 DIEA, 100℃)으로부터 화합물 707의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 211. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 709)의 합성
단계 1. 에틸 (R,E)-2-((tert-부틸술피닐)이미노)아세테이트
CH2Cl2 (300 mL) 중 에틸 2-옥소아세테이트 (6.4 g, 63 mmol)의 용액에 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (7.6 g, 63 mmol) 및 4 Å 분자체 (20 g)를 첨가하였다. 72시간 후, 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 (R,E)-2-((tert-부틸술피닐)이미노)아세테이트 (7.2 g, 56%)를 무색 오일로서 수득하였다.
단계 2. 에틸 ((R)-tert-부틸술피닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3
-78℃에서 DCM (400 mL) 및 THF (120 mL) 중 에틸 (R,E)-2-((tert-부틸술피닐)이미노)아세테이트 (6.2 g, 30 mmol)의 용액에 BF3·Et2O (7.4 mL, 60 mmol)를 N2 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 5분 동안 교반하고, CD3MgI (Et2O 중 1.0 M, 60 mL, 60 mmol)로 적가 처리하였다. -78℃에서 10분 동안 교반한 후, 반응물을 NaHCO3 (수성)로 켄칭하고, EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~50%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 ((R)-tert-부틸술피닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3 (1.4 g, 21% 수율, dr = 97/3)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 225 (M+H)+. 배위를 1H NMR에 의해 확인하였다 (참조: 문헌 [J. Org. Chem. 1999, 64, 3396-3397]).
단계 3. 에틸 D-알라니네이트-3,3,3-d3
MeOH (30 mL) 중 에틸 ((R)-tert-부틸술피닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3 (1.4 g, 6.2 mmol)의 용액에 HCl (5.0 mL, 디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에 제거하여 에틸 D-알라니네이트-3,3,3-d3를 백색 고체 (1.0 g 조 HCl 염)로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 121 (M+H)+.
단계 4. 에틸 (tert-부톡시카르보닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3
MeOH (30 mL) 중 에틸 D-알라니네이트-3,3,3-d3 (1.0 g 조 HCl 염)의 용액에 TEA (1.7 mL, 12 mmol) 및 Boc2O (1.5 g, 6.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 NH4Cl (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물 에틸 (tert-부톡시카르보닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3 (1.4 g 조 물질)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 221 (M+H)+.
단계 5. (tert-부톡시카르보닐)-D-알라닌-3,3,3-d3
빙조에서 EtOH (20 mL) 및 H2O (10 mL) 중 에틸 (tert-부톡시카르보닐)-D-알라니네이트-3,3,3-d3 (1.4 g 조 물질)의 용액에 LiOH (310 mg, 13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 HCl (1.0 M)에 의해 pH 3으로 산성화시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (tert-부톡시카르보닐)-D-알라닌-3,3,3-d3 (900 mg, 75% 수율, 3 단계에 걸침)를 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 193 (M+H)+.
단계 6. 메틸 N-벤질-N-((tert-부톡시카르보닐)-D-알라닐-3,3,3-d3)-L-알라니네이트
DMF (20 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-D-알라닌-3,3,3-d3 (900 mg, 4.7 mmol) 및 메틸 벤질-L-알라니네이트 히드로클로라이드 (1.2 g, 5.2 mmol)의 용액에 DIPEA (2.4 g, 19 mmol) 및 HATU (2.7 g, 7.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 수성 NaHCO3 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~60%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 메틸 N-벤질-N-((tert-부톡시카르보닐)-D-알라닐-3,3,3-d3)-L-알라니네이트 (1.4 g, 81% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 368 (M+H)+.
단계 7. 메틸 N-(D-알라닐-3,3,3-d3)-N-벤질-L-알라니네이트
0℃에서 DCM (20 mL) 중 메틸 N-벤질-N-((tert-부톡시카르보닐)-D-알라닐-3,3,3-d3)-L-알라니네이트 (1.4 g, 3.8 mmol)의 용액에 TFA (10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응의 용매를 진공 하에 제거하여 조 생성물 메틸 N-(D-알라닐-3,3,3-d3)-N-벤질-L-알라니네이트 (1.5 g 조 TFA 염)를 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 268 (M+H)+.
단계 8. (3R,6S)-1-벤질-6-메틸-3-(메틸-d3)피페라진-2,5-디온
MeOH (10 mL) 중 메틸 N-(D-알라닐-3,3,3-d3)-N-벤질-L-알라니네이트 (1.5 g 조 TFA 염)의 용액을 N2 하에 70℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이어서 반응 혼합물을 EtOAc 및 수성 염수 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (3R,6S)-1-벤질-6-메틸-3-(메틸-d3)피페라진-2,5-디온 (1.0 g 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 236 (M+H)+.
단계 9. tert-부틸 (2R,5S)-4-벤질-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
N2 하에 빙조에서 THF (10 mL) 중 (3R,6S)-1-벤질-6-메틸-3-(메틸-d3)피페라진-2,5-디온 (1.0 g 조 물질)의 용액을 LiAlH4 (THF 중 1.0 M, 20 mL)로 적가 처리하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20% NaOH (20 mL)로 조심스럽게 켄칭하고, 생성된 혼합물을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 208 (M+H)+.
혼합물을 THF-물에 녹인 다음, Boc2O (1.7 g, 7.6 mmol)로 처리하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~10%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-벤질-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (990 mg, 85% 수율 dr = 90/10)를 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 308 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.28 (m, 4H), 7.26 - 7.21 (m, 1H), 4.17 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.69 - 3.57 (m, 2H), 3.46 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.30 (dd, J = 13.0, 3.7 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 10.9, 5.9 Hz, 1H), 2.69 (dd, J = 11.7, 4.4 Hz, 1H), 2.19 (dd, J = 11.7, 1.9 Hz, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
단계 10. tert-부틸 (2R,5S)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-벤질-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (550 mg, 1.7 mmol)의 용액에 Pd (200 mg, 탄소상 10%) (습윤))를 첨가하였다. H2 분위기 (~0.1 MPa) 하에 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 tert-부틸 (2R,5S)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (320 mg, 82%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 218 (M+H)+.
단계 11. 7-브로모-4-클로로-5-(2-플루오로-4-니트로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘
CH3CN (30 mL) 중 7-브로모-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (2.3 g, 10 mmol) 및 1,2-디플루오로-4-니트로벤젠 (9.5 g, 60 mmol)의 용액을 Cs2CO3 (4.9 g, 15 mmol)로 처리하였다. 반응물을 N2 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 여과에 의해 수득하고, 물, CH3CN 및 EtOH로 세척하여 7-브로모-4-클로로-5-(2-플루오로-4-니트로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (2.4 g, 70% 수율)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 371, 373 (M+H)+.
단계 12. 4-(7-브로모-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)-3-플루오로아닐린
EtOH (20 mL) 및 H2O (2 mL) 중 7-브로모-4-클로로-5-(2-플루오로-4-니트로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (1.1 g, 3.0 mmol)의 용액에 Fe (1.7 g, 30 mmol) 및 NH4Cl (2.4 g, 45 mmol)을 첨가하였다. N2 하에 80℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 여과하였다. 여과물을 EtOAc 및 NaHCO3 (수성) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-(7-브로모-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)-3-플루오로아닐린 (1.0 g 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 341, 343 (M+H)+.
단계 13. (3R,6S)-1-벤질-6-메틸-3-(메틸-d3)피페라진-2,5-디온
THF (20 mL) 중 4-(7-브로모-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-5-일)-3-플루오로아닐린 (1.0 g 조 물질)의 용액에 이소펜틸 니트라이트 (1.4 g, 12 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 70℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~10%, 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-브로모-4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (660 mg, 67% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 326, 328 (M+H)+.
단계 14. 7-브로모-4-플루오로-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘
TBAF (5.0 mL, THF 중 1.0 M) 및 7-브로모-4-클로로-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (200 mg, 0.61 mmol)의 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 DCM과 빙수 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 7-브로모-4-플루오로-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (170 mg, 86%)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 310, 312 (M+H)+.
단계 15. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-브로모-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (2 mL) 중 7-브로모-4-플루오로-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 (86 mg, 0.27 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.27 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-브로모-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 57%)를 황색 오일로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 507, 509 (M+H)+.
단계 16. (4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸-5-(메틸-d3)피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)보론산
-78℃에서 THF (2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-브로모-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.08 mmol) 및 (i-PrO)3B (89 mg, 0.47 mmol)의 용액에 n-BuLi (0.11 mL, 헥산 중 2.5 M)를 첨가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 직접 후속 단계에 사용하였다. LC/MS ESI (m/z): 473 (M+H)+.
단계 17. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 (4-((2S,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸-5-(메틸-d3)피페라진-1-일)-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)보론산 (상기 단계 16으로부터)의 용액에 2-브로모이소니코티노니트릴 (23 mg, 0.12 mmol), K2CO3 (35 mg, 0.25 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (6.2 mg, 0.01 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~40%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-(2-플루오로페닐)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (6.7 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 531 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.08 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.65 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.47 - 7.22 (m, 5H), 4.10 (br. s, 1H), 3.79 (br. s, 1H), 3.34 - 2.96 (m, 3H), 2.55 - 2.11 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 0.83 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
실시예 212. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 710)의 합성
DMF (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.3 mmol, 화합물 641에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-플루오로피리딘-4-카르보니트릴 (320 mg, 2.6 mmol) 및 Cs2CO3 (430 mg, 1.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 50℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트) 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로부틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 6.0%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 488 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (s, 1H), 8.78 (dd, J = 5.0, 0.7 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.80 (dd, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 4.45 (br. s, 1H), 4.25 (br. s, 1H), 3.77 - 3.63 (m, 3H), 3.58 (m, 1H), 3.43 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.47 - 2.34 (m, 2H), 2.28 - 2.13 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 2H), 1.93 - 1.77 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.06 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 213. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 화합물 711의 합성
단계 1. 2-(4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴
톨루엔 (15 mL) 중 2-(4-클로로-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (500 mg, 1.3 mmol, 화합물 707에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 시클로프로필보론산 (230 mg, 2.5 mmol), Pd-118 (86 mg, 0.13 mmol) 및 K2CO3 (3.6 g, 26 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (130 mg, 34%)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 296 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (3 mL) 중 2-(4-클로로-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)이소니코티노니트릴 (61 mg, 0.20 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.13 mmol, 화합물 709에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~30%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-시아노피리딘-2-일)-5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-메틸-2-(메틸-d3)피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 38%)를 황색 고체로서 수득하였다. 10 mg를 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 2.4 mg를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 477 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.22 (s, 1H), 8.55 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 5.0, 1.2 Hz, 1H), 4.57 - 4.33 (m, 2H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.69 (dd, J = 13.4, 4.0 Hz, 2H), 3.41 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.01 - 1.86 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.20 - 1.16 (m, 2H), 1.02 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.83 - 0.76 (m, 2H).
하기 화합물을 상응하는 보론산으로부터 화합물 711의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 214. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((S)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 713) 및 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((R)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 714)의 합성
단계 1. 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘
EtOH (15 mL) 중 2-(4,6-디클로로피리미딘-5-일)아세트알데히드 (1000 mg, 5.2 mmol)의 용액에 3,3-디플루오로시클로헥산-1-아민 HCl 염 (900 mg, 5.2 mmol) 및 TEA (2.1 g, 21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 80℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (650 mg, 46%)을 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 272 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DIPEA (2 mL) 중 4-클로로-7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (450 mg, 1.7 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (660 mg, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 140℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~25%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (700 mg, 94%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 450 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.1 mmol)의 용액에 NIS (500 mg, 2.2 mmol)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 45℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 티오황산나트륨 (수성)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (580 mg, 90%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 576 (M+H)+.
단계 4. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (580 mg, 1.0 mmol)의 용액에 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (580 mg, 3.0 mmol) 및 CuI (190 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 0~20%, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (360 mg, 69%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 518 (M+H)+.
단계 5. tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((S)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((R)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg)를 키랄 HPLC (칼럼: 키랄팩 AD-H(ADH0CE-XG136), 0.46 cm I.D. x 25 cm L., 이동상: 헥산/IPA=90/10(V/V))에 의해 분리하여 2종의 이성질체를 수득하였다.
피크 1: 체류 시간: 4.7분, 백색 고체로서의 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((S)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (추가 확인 없이 화합물 713으로서 할당됨, 95 mg). LC/MS ESI (m/z): 518 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 4.92 - 4.80 (m, 1H), 4.53 - 4.16 (m, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 2H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 3.42 - 3.34 (m, 1H), 2.55 - 2.44 (m, 1H), 2.30 - 2.08 (m, 3H), 1.95 - 1.67 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.08 - 1.01 (m, 6H)
피크 2: 체류 시간: 5.502분, 백색 고체로서의 tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-((R)-3,3-디플루오로시클로헥실)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (추가 확인 없이 화합물 714로서 할당됨, 86 mg). LC/MS ESI (m/z): 518 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 4.94 - 4.83 (m, 1H), 4.53 - 4.17 (m, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.49 (m, 1H), 3.38 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.59 - 2.47 (m, 1H), 2.32 - 2.06 (m, 3H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.83 - 1.68 (m, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.07 - 1.01 (m, 6H).
실시예 215. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에티닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 715)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-((트리메틸실릴)에티닐)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (6 ml) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-아이오도피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol, 화합물 717에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 에티닐트리메틸실란 (83 mg, 0.85 mmol), Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.02 mmol), CuI (16 mg, 0.09 mmol) 및 TEA (170 mg, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 N2 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-((트리메틸실릴)에티닐)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 86%)를 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 545 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에티닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF (1 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-((트리메틸실릴)에티닐)피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.15 mmol)의 용액에 TBAF (1.0 mL, THF 중 1.0 M)를 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NH4Cl (수성)로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 포화 NH4Cl (수성)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에티닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 49%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 473 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (s, 1H), 8.44 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.80 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 5.1, 1.3 Hz, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.40 (br. s, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 3H), 3.64 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.09 - 2.02 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.16 (m, 6H), 1.09 - 1.03 (m, 2H), 0.91 (m, 1H), 0.70 - 0.64 (m, 1H).
하기 화합물을 상응하는 아릴 아이오다이드 (tert-부틸 (2R,5S)-4-(7-(4-아이오도피리딘-2-일)-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트)로부터 화합물 715의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였으며, 이를 화합물 717에 대해 요약된 유사한 절차에 따라 제조하였다.
실시예 216. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에틸피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 717)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-아이오도피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF (8 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (350 mg, 0.94 mmol, 화합물 654에 대해 요약된 절차에 따라 제조됨)의 용액에 2-플루오로-4-아이오도피리딘 (320 mg, 1.4 mmol) 및 Cs2CO3 (620 mg, 1.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-아이오도피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (400 mg, 74%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 575 (M+H)+.
단계 2. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-비닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산 (6 ml) 및 물 (2 방울) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-아이오도피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (31 mg, 0.20 mmol), Pd(dppf)Cl2 (16 mg, 0.02 mmol) 및 K2CO3 (70 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 N2 하에 90℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-비닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 475 (M+H)+.
단계 3. tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에틸피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-비닐피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.084 mmol)의 용액에 팔라듐 (100 mg, 활성탄 상 10% (약 55% 물로 습윤))을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 분위기 (~0.1 MPa) 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-(5-시클로프로필-7-(4-에틸피리딘-2-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (33 mg, 83%)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS ESI (m/z): 477 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.41 (s, 1H), 8.38 - 8.30 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.17 (m, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.40 (br. s, 1H), 3.84 - 3.62 (m, 4H), 2.78 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.50 (s, 9H), 1.31 (t, J = 4.0 Hz, 3H), 1.16 (m, 6H), 1.08 - 1.02 (m, 2H), 0.91 (s, 1H), 0.71 - 0.64 (m, 1H).
하기 화합물을 화합물 602에 대해 요약된 절차에 따라 제조한 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트로부터 화합물 717의 합성과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
실시예 217. 형광 TRPML 검정.
TRPML1 검정
세포 배양
HEK-293 Trex 세포를 tet-유도성 플라스미드 pCDNA5 T/O 내로 클로닝된 TRPML1에 대한 인간 코딩 서열로 이루어진 구축물로 안정하게 형질감염시켰다. 돌연변이를 TRPML1 서열 내로 도입하여 세포 표면 상에서의 발현을 용이하게 하였다 (Silvia Vergarajauregui, Rosa Puertollano, Traffic. 2006 Mar; 7(3): 337-353). 간략하게, 세포를 20 mL의 배지를 함유하는 150 mm 원형 조직 배양 접시에서 배양하였다. 검정 전날, 세포를 DPBS -Ca -Mg로 헹군 다음, 트립신-EDTA로 잠시 처리하였다. 트립신-EDTA를 성장 배지로 희석하고, 세포를 계수하였다. 38 x 10^6개 세포를 0.5ug/mL 독시시클린을 함유하는 배지 중 150 mm 원형 조직 배양 디쉬에 재플레이팅하여 hTRPML1의 발현을 유도하였다.
염료 로딩
실험일 세포를 상기와 같은 플레이트로부터 수거하고, 원심분리에 의해 수집하였다. 이어서 세포를 0.1% 플루론산 및 1 마이크로몰 Fluo4-AM 염료로 보충된 링거액으로 이루어진 염료 로딩 완충제 중에 현탁시켰다. 세포를 가끔 혼합하면서 암실에서 ~60분 동안 로딩하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 로딩 배지를 흡인하고, 세포를 25 mL 링거액 중에 재현탁시키고, 암실에서 ~60분 인큐베이션하였다. 세포를 원심분리에 의해 다시 수집하고, 링거액으로 헹구고, 10 mM 칼슘을 함유하는 변형된 링거액 중에 0.2 x10^6개 세포/mL로 재현탁시켰다.
화합물 검정 플레이트
화합물을 DMSO를 사용하여 10 밀리몰의 농도로 용해시켰다. 화합물을 384 웰 흑색 벽 투명 바닥 플레이트 (그라이너(Greiner) 781091) 내로 분배함으로써 화합물 플레이트를 생성하였다. 양성 및 음성 대조군을 각각의 플레이트에 포함시켰다. 전형적으로, 100 나노몰 (20 마이크로몰 최종 농도)에서부터 반-로그 단계로 감소하여 31 피코몰 (6 나노몰 최종 농도)까지 범위로 상이한 양의 각각의 화합물을 시험하였다. 각각의 농도를 전형적으로 삼중으로 시험하였다.
검정
염료-로딩된 세포 50 마이크로리터를 상기 생성된 화합물 검정 플레이트의 각 웰에 분배하였다. 이어서 몰레큘라 디바이시스 스펙트라맥스(Molecular Devices SpectraMax) 다중모드 플레이트 판독기 또는 하마마츠(Hamamatsu) FDSS/uCell 플레이트 영상화기를 사용하여 480 nM의 여기 파장 및 540 nM의 방출 파장으로 각각의 웰에서의 형광을 결정하였다.
분석 및 통계
각각의 웰에 대해 생성된 형광을 ascii 파일로서 내보내고, 분석을 위해 LIMS에 로딩하였다. 각각의 농도에서의 각각의 화합물의 퍼센트 활성을 각각의 플레이트에 포함된 양성 및 음성 대조군 웰과의 비교에 의해 결정하였다.
TRPML2 및 TRPML3 검정
TRPML1을 적절한 TRPML2 또는 TRPML3 하위유형으로 대체함으로써 TRPML2 및 TRPML3에 대한 검정을 상기 TRPML1에 대한 것과 같이 수행하였다.
EC50 값을 프리즘(Prism)의 비-선형 회귀를 사용하여 계산하였다. 검정을 사용하여 각각의 화합물에 대해 결정된 EC50을 하기 표 3에 요약하였다. 화합물 번호는 표 1에 나타낸 것에 상응한다. 표에서, "A"는 100 nM 미만의 EC50을 나타내고, "B"는 100 nM 내지 500 nM의 EC50 범위를 나타내고; "C"는 500 nM 내지 2 μM의 EC50 범위를 나타내고; "D"는 2 μM 초과의 EC50을 나타낸다.
표 3.
본 발명의 예시적인 화합물의 효능
등가물
본원에 개시된 임의의 실시양태의 하나 이상의 특징은 또한 본 발명의 범주 내에 있는 추가의 실시양태를 생성하기 위해 본 발명의 범주 내에서 조합되고/거나 재배열될 수 있는 것으로 인식될 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 단지 상용 실험을 사용하여 본원에 기재된 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
본 발명이 상기 예시적인 실시양태에서 기재되고 예시되었지만, 본 개시내용은 단지 예로서만 이루어졌고, 본 발명의 구현의 세부사항에서의 수많은 변화가 본 발명의 취지 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 이루어질 수 있으며, 이는 단지 하기 청구범위에 의해서 제한되는 것으로 이해된다. 개시된 실시양태의 특색은 본 발명의 범주 및 취지 내에서 다양한 방식으로 조합 및/또는 재배열되어 또한 본 발명의 범주 내에 있는 추가의 실시양태를 생성할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 단지 상용 실험을 사용하여 본 개시내용에 구체적으로 기재된 구체적 실시양태에 대한 수많은 등가물을 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위의 범주에 포괄되는 것으로 의도된다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 공개는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이들 공개의 개시내용은 그 전문이 본원에 기재되고 청구된 본 발명의 날짜에 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 최신 기술을 보다 완전히 기재하기 위해 본 출원에 참조로 포함된다.
Claims (70)
- 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
여기서
R1은 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환되고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 독립적으로 H, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 알킬티오, 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
R1 또는 R2가 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬인 경우에, 동일한 탄소 상의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 함께 옥소를 형성할 수 있거나, 또는 임의의 2개의 R7 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬, 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2 또는 3이고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이고;
m + n은 2, 3 또는 4이고;
R1 및 R2는 둘 다 아릴인 것은 아니다. - 제1항에 있어서, 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
여기서
R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 H이고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C3-7 시클로알킬 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시는 할로겐, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고, 각각의 C3-7 시클로알킬은 할로겐, 히드록실, C1-6 알콕시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 중수소, 히드록실 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되거나; 또는
동일한 탄소 상의 2개의 R10은 함께 옥소를 형성할 수 있거나; 또는
임의의 2개의 R10은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 3-7원의 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 고리, 또는 1 내지 3개의 탄소 또는 단일 결합의 가교를 형성할 수 있고, 여기서 고리 또는 가교는 할로겐, 히드록실, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-6 알킬, C(O)-O-C1-6 알킬, C(O)-O-C2-6 알케닐, -(CH2)0-2-C3-7 시클로알킬, 및 3-7원 헤테로시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬은 할로겐 및 C1-6 알콕시로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 임의로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 4-7원 고리를 형성할 수 있고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다. - 제1항에 있어서, 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
여기서
R1은 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딜이고;
R2는 1-5개의 독립적으로 선택된 R8에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R3은 하기이고:
각각의 R4 및 R6은 H이고;
각각의 R7 및 R8은 각 경우에 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R9는 C1-6 알킬이고, 중수소, 할로겐, 히드록실, 및 C1-6 알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R10은 독립적으로 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각은 1-5개의 중수소로 임의로 치환되고;
p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다. - 제1항에 있어서, R1이 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 아릴인 화합물.
- 제4항에 있어서, R1이 1-3개의 독립적으로 선택된 R7로 임의로 치환된 페닐인 화합물.
- 제4항 또는 제5항에 있어서, 각각의 R7이 독립적으로 H, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알킬, 또는 C1-6 할로알콕시로부터 선택된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, R1이 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1이 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제1항 또는 제7항에 있어서, R1이 헤테로아릴 또는 헤테로시클로알킬이고, 각각의 R1이 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제1항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴인 화합물.
- 제2항 또는 제9항에 있어서, R1이 1-5개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 모노시클릭 헤테로아릴인 화합물.
- 제10항에 있어서, R1이 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 헤테로아릴이고, 여기서 R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제10항에 있어서, R1이 단지 N으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-6개의 고리 원자의 모노시클릭 질소-함유 헤테로아릴이고, 여기서 R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제12항에 있어서, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 티아졸, 옥사졸, 피롤, 이미다졸 또는 피라졸인 화합물.
- 제13항에 있어서, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘, 티아졸 또는 피라졸인 화합물.
- 제14항에 있어서, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 피리딘인 화합물.
- 제15항에 있어서, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 2-피리딜인 화합물.
- 제15항에 있어서, R1이 하기인 화합물:
. - 제17항에 있어서, R1이 하기인 화합물:
. - 제14항에 있어서, R1이 하기인 화합물:
1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 . - 제7항에 있어서, R1이 4-8개의 고리 원자의 헤테로시클로알킬이고, 여기서 1-3개의 고리 원자는 N, O 및 S로부터 선택되고, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제20항에 있어서, R1이 테트라히드로피란, 아제티딘, 피롤리딘, 모르폴린 또는 피페리딘이고, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제7항에 있어서, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬인 화합물.
- 제22항에 있어서, R1이 임의적인 1 또는 2개의 탄소 가교된 고리를 갖는 시클로헥실이고, R1이 1-4개의 독립적으로 선택된 R7에 의해 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R8이 독립적으로 중수소, 히드록시, 할로겐, 시아노 또는 C1-6 알콕시로부터 선택된 것인 화합물.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 1-5개의 독립적으로 선택된 할로겐에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬인 화합물.
- 제25항에 있어서, R2가 Me, Et, CHF2 또는 CF3인 화합물.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 치환되지 않은 것인 화합물.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, m이 1이고, n이 1인 화합물.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, p가 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6인 화합물.
- 제29항에 있어서, 각각의 R10이 독립적으로 C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각이 1-5개의 중수소로 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제30항에 있어서, 각각의 R10이 메틸인 화합물.
- 제30항 또는 제31항에 있어서, p가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6인 화합물.
- 제32항에 있어서, R3이 가장자리 융합된 또는 스피로 융합된 시클로프로판으로 치환되거나; 또는 R3이 1 또는 2개의 탄소 가교 또는 단일 결합 가교를 포함하고; R3이 1-4개의 R10에 의해 임의로 추가로 치환된 것인 화합물.
- 제33항에 있어서, R3이 하기이고:
, R3은 1-4개의 R10에 의해 임의로 추가로 치환된 것인 화합물. - 제32항에 있어서, R3이 하기이고:
, R3은 1-4개의 R10에 의해 임의로 추가로 치환된 것인 화합물. - 제35항에 있어서, R3이 하기인 화합물:
. - 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 임의의 추가의 R10에 의해 치환되지 않은 것인 화합물.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 H인 화합물.
- 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 H인 화합물.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, R4 및 R6이 H인 화합물.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R7 및 R8이 각 경우에 독립적으로 히드록시, 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 및 C3-7 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 C1-6 알킬 및 C1-6 알콕시가 1-3개의 할로겐으로 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R7이 독립적으로 각 경우에 할로겐, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 및 CF3으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, R9가 1-5개의 할로겐 또는 1-9개의 중수소로 임의로 치환된 C1-6 알킬인 화합물.
- 제43항에 있어서, R9가 에틸, 이소프로필 또는 t-부틸이고; 각각이 1-5개의 할로겐 또는 1-9개의 중수소로 임의로 치환된 것인 화합물.
- 제44항에 있어서, R9가 에틸, 이소프로필 또는 t-부틸인 화합물.
- 제44항에 있어서, R9가 -C(CD3)3, -CH(CD3)2 또는 -CD2CD3인 화합물.
- 제43항에 있어서, R9가 Me, Et, t-부틸, -C(CD3)3, -CH(CD3)2, -C(CD3)3, 이소프로필, F3C-CH2-, F3C-CH(CH3)-, F3C-C(CH3)2-, FCH2-C(CH3)2-, 인 화합물.
- 하기 화학식 (Ib)의 화합물:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다. - 하기 화학식 (Ic)의 화합물:
여기서 가변기 정의는 명세서 및 청구범위에 기재된 바와 같다. - 명세서에 개시된 화합물로부터 선택된 화학식 (I) 또는 그의 임의의 하위화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
- 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, TRPML1에 대한 패치 클램프 검정에서 30 μM ML-SA1을 사용하여 수득된 최대 전류의 적어도 50%를 달성하고, 1 μM 미만의 EC50을 갖는 화합물.
- 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, TRPML1에 대한 패치 클램프 검정에서 30 μM ML-SA1을 사용하여 수득된 최대 전류를 달성하며, 이는 임의의 다른 TRPML에 대해 달성된 최대 전류의 적어도 10배인 화합물.
- 제약상 허용되는 부형제 및 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 제약 조성물.
- TRPML 이온 채널의 조정을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제53항의 제약 조성물 또는 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, TRPML 이온 채널을 조정하는 방법.
- TRPML 이온 채널의 조정에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제53항의 제약 조성물 또는 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, TRPML 이온 채널의 조정에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
- 리소솜의 조정에 의해 치료될 수 있는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제53항의 제약 조성물 또는 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 리소솜의 조정에 의해 치료될 수 있는 장애를 치료하는 방법.
- 섬모병증, 신경변성 질환, 리소솜 축적 장애, 리소솜 수송 장애, 글리코겐 축적 장애, 콜레스테릴 에스테르 축적 질환, 근육 질환 (예를 들어, 근육 이영양증), 노화 관련 질환 (예를 들어, 피부의 광 노화), 황반 변성 (예를 들어, 스타가르트(Stargardt) 또는 연령 관련), 및 암 (예를 들어, 혈액, 뇌, 골, 폐, 간, 신장, 방광, 위, 유방, 전립선, 난소, 고환, 결장, 췌장 또는 피부의 암)으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제53항의 제약 조성물 또는 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애를 치료하는 방법.
- 제57항에 있어서, 장애가 섬모병증인 방법.
- 제58항에 있어서, 섬모병증이 다낭성 신장 질환, 다낭성 신장 질환에서의 췌장낭, 바르데-비들(Bardet-Biedl) 증후군, 신결석증, 주버트(Joubert) 증후군, 멕케-그루버(Mecke-Gruber) 증후군, 구강-안면-수족지 증후군, 노인성 로켄(Loken) 증후군, 버트-호그-두베(Birt-Hogg-Dube) 증후군, 레베르(Leber) 선천성 흑암시, 알스트롬(Alstrom) 증후군, 쥐느(Jeune) 질식성 흉부 이형성증, 엘리스 반 크레블드(Ellis van Creveld) 증후군, 센센브레너(Sensenbrenner) 증후군 및 원발성 섬모 이상운동증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
- 제59항에 있어서, 장애가 다낭성 신장 질환인 방법.
- 제60항에 있어서, 장애가 상염색체 우성 다낭성 신장 질환, 상염색체 열성 다낭성 신장 질환, 또는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환과 연관된 췌장낭인 방법.
- 제61항에 있어서, 장애가 상염색체 우성 다낭성 신장 질환인 방법.
- 제57항에 있어서, 장애가 신경변성 장애인 방법.
- 제63항에 있어서, 신경변성 장애가 파킨슨병(Parkinson's disease), GBA-파킨슨병, LRRK2 파킨슨병, 헌팅톤병(Huntington's disease), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 진행성 핵상 마비, 전두측두엽 치매, FTDP-17, 피질기저 변성, 루이(Lewy) 소체 치매, 픽병(Pick's disease) 및 다계통 위축으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
- 제57항에 있어서, 장애가 리소솜 축적 장애인 방법.
- 제65항에 있어서, 리소솜 축적 장애가 니만-픽병(Niemann-Pick disease), 고셔병(Gaucher's disease), 뉴런병증성 고셔병, 스핑고지질증, 파버병(Farber disease), 크라베병(Krabbe disease), 갈락토시알산증, 강글리오시드증, 고셔병, 리소솜 산 리파제 결핍, 술파티드증, 뮤코폴리사카라이드증, 뮤코리피드증, 지질증 및 올리고사카라이드증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
- 제66항에 있어서, 리소솜 축적 장애가 스핑고지질증, 파버병, 크라베병, 갈락토시알산증, 파브리병(Fabry disease), 쉰들러병(Schindler disease), 베타-갈락토시다제 장애, GM1 강글리오시드증, GM2 강글리오시드증 AB 변이체, GM2 강글리오시드증 활성화제 결핍, 샌드호프병(Sandhoff disease), 테이-삭스병(Tay-Sachs disease), 고셔병, 리소솜 산 리파제 결핍, 니만-픽병(Niemann-Pick disease), 이염성 백질이영양증, 사포신 B 결핍, 다발성 술파타제 결핍, 후를러(Hurler) 증후군, 샤이에(Scheie) 증후군, 후를러-샤이에 증후군, 헌터(Hunter) 증후군, 산필리포(Sanfilippo) 증후군, 모르키오(Morquio) 증후군, 마로토-라미(Maroteaux-Lamy) 증후군, 슬라이(Sly) 증후군, 히알루로니다제 결핍, 시알산증, I-세포 질환, 슈도-후를러 다발이영양증, 포스포트랜스퍼라제 결핍, 뮤코리피딘 1 결핍, 산타부오리-할티아병(Santavuori-Haltia disease), 얀스키-빌초우스키병(Jansky-Bielchowsky disease), 배튼-스필마이어-보그트(Batten-Spielmeyer-Vogt) 질환, 쿠프스병(Kufs disease), 핀란드 변이체 신경 세로이드 리프푸신증, 후기 영아 변이체 신경 세로이드 리프푸신증, 제7형 신경 세로이드 리프푸신증, 노던 간질 신경 세로이드 리프푸신증, 터키 후기 영아 신경 세로이드 리프푸신증, 독일/서비안 후기 영아 신경 세로이드 리프푸신증, 선천성 카텝신 D 결핍, 월만병(Wolman disease), 알파-만노시드축적증, 베타-만노시드축적증, 아스파르틸글루코사미누리아 및 푸코시드축적증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
- 제67항에 있어서, 리소솜 축적 장애가 니만-픽병, 고셔병 및 뉴런병증성 고셔병으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
- 제67항에 있어서, 장애가 시스틴축적증, 농축이골증, 살라병(Salla disease), 시알산 축적 질환 및 영아 유리 시알산 축적 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 리소솜 수송 질환인 방법.
- 제67항에 있어서, 장애가 폼페병(Pompe disease) 및 다논병(Danon disease)으로 이루어진 군으로부터 선택된 글리코겐 축적 질환인 방법.
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