KR20240067099A

KR20240067099A - 항-il23 항체 융합 단백질 및 용도

Info

Publication number: KR20240067099A
Application number: KR1020247012833A
Authority: KR
Inventors: 랑용 마오; 후아 잉; 이 쉬에; 신셩 진; 웨이캉 타오
Original assignee: 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드; 샹하이 헨그루이 파마수티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2021-09-30
Filing date: 2022-09-30
Publication date: 2024-05-16
Also published as: EP4410841A1; WO2023051798A1; JP2024536870A; CA3233261A1; CN117916273A; TW202323304A

Abstract

항-IL23 항체 융합 단백질 및 이의 용도에 관한 것이며, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 항-IL23 항체 및 TACl 폴리펩티드를 포함하고, 상기 항-IL23 항체는 인간 IL23 p19 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 상기 항-IL23 항체 또는 융합 단백질은 B 세포 장애 또는 자가면역 질환을 치료 또는 개선하는 데 사용될 수 있다.

Description

항-IL23 항체 융합 단백질 및 용도

본 개시는 생물기술 분야에 속하며, 보다 구체적으로 본 개시는 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질과 응용에 관한 것이다.

여기에 진술하는 내용은 단지 본 개시와 관련되는 배경 정보를 제공하는 것으로서, 종래기술을 필연적으로 구성하는 것은 아니다.

활성화된 수지상 세포, 대식세포 및 단핵세포 등에 의해 주로 생성되는 IL-23(IL23이라고도 함)은, IL-12 이종이량체 사이토카인 패밀리의 구성원으로, p19(IL23 p19 서브유닛이라고도 함)와 p40(IL23 p40 서브유닛이라고도 함)의 두 가지 서브유닛으로 이루어지며, 여기서 p40 서브유닛은 IL-12와 공통으로 함유되는 서브유닛이다(J Immunol. 2018 Sep 15;201(6):1605-1613.).

IL-23은 이의 수용체와 상호작용하여 다운스트림 신호경로를 활성화함으로써 생물학적 기능을 발휘하게 된다. IL-23 수용체는 IL-12 수용체 β1 및 IL-23 수용체의 2개의 서브유닛을 포함한다(J Immunol. 2002 Jun 1;168(11):5699-708.). IL-23은 Th17 세포 분화를 촉진할 수 있고 Th17 세포의 증식과 안정화에 대해 중요한 역할을 하며, Th17 세포가 IL-17A, IL-17F 및 IL-22 등 사이토카인을 생성하도록 촉진할 수 있으며, 이러한 염증 인자는 각질 형성 세포에 작용하여 각질 형성 세포의 활성화와 과도한 증식을 초래한다. 활성화된 각질 형성 세포는 대량의 사이토카인, 케모카인 및 항균 펩티드 등을 생성하여 T 세포 등 면역 세포를 모집하고 활성화하여 면역 응답의 캐스케이드 효과가 이루어지고 건선병 증상을 초래한다(Cutis. 2018 Mar;101(3S):5- 9.).

전신성 홍반루푸스(SLE)는 면역 반응의 과도한 활성화로 인해 유발하는 자가면역 질환이다(Nat Rev Dis Primers. 2016 Jun 16;2:16039.). SLE 질환의 진행에 다양한 세포가 관여한다. 근원은 호중구와 사멸 세포로, 호중구는 항균 단백질을 포획하는 망상의 세포외 트랩을 방출하고, 인터페론의 공통 작용 하에 I형 인터페론을 대량으로 분비하도록 pDC를 자극한다. 사멸 세포는 핵 내에서 이동성이 높은 단백질과 핵산을 자체 항원으로 방출하여 면역 세포가 뉴클레오티드 항체를 생성하도록 유도하며, 핵산과 항체의 면역 복합체는 세포 표면의 수용체와 작용하여 TLR 신호를 활성화하고 인터페론을 분비하도록 pDC를 작극한다. 인터페론은 mDC를 추가로 활성화하여 T 세포와 B 세포를 각각 활성화하는 다양한 사이토카인을 생성한다(Curr Opin Rheumatol. 2017 Mar;29(2):178-186.). 여기서, IL-12와 23은 T 세포 분화를 활성화할 수 있는 것으로 알려진 두 가지 사이토카인이다. T 세포는 활성화된 후 다양한 사이토카인을 분비하며, IL-17 등 사이토카인은 염증 세포를 모집하고 조직 손상을 초래하는 데 관여하며, IL-21 등 사이토카인은 B 세포의 공동 자극에 관여한다. BAFF와 APRIL은 B 세포에 대한 활성화 인자로서, 이들은 B 세포 표면의 수용체와 상호작용하여 B 세포의 분화 성숙 및 항체 분비를 자극한다(Nat Rev Rheumatol. 2016 Nov 22;12(12):716-730.).

TACI는 두 개의 시스테인-부유 유사 반복(cysteine-rich pseudo-repeats) 단편을 포함하는 세포외 영역, 막관통 영역 및 CAML(칼슘 조절제 및 시클로필린 리간드)과 상호작용하는 세포질 영역을 갖는 막 결합 수용체이다. TACI는 B 세포 및 T 세포의 하위 유형과 관련된다. TACI 수용체는 종양 괴사 인자 리간드 패밀리의 BAFF에 결합한다. BAFF는 TNF 패밀리에 속하는 B 세포 활성화 인자로, 주로 골수 세포막 표면에 발현되고 삼량체 형태로 존재하며, 세포막 표면의 BAFF는 프로테아제에 의해 가수분해되고 혈액순환 시스템으로 유입되는 가용성 BAFF를 형성하며, 가용성의 BAFF는 다량체의 특징을 가지고, 최대 60개의 다량체를 형성할 수 있다. 또한, BAFF는 동일한 패밀리의 다른 단백질인 APRIL과 작용하여 이종 삼량체를 형성할 수 있다. 현재, B 세포 표면에는 각각 BAFF-R, BCMA 및 TACI의 세 가지 BAFF 수용체가 있는 것으로 알려져 있다. BAFF는 이 세 가지 수용체와 작용하여 B 세포의 분화 성숙, 생존 및 조절에 관여한다. APRIL과 BAFF는 각각 BCMA와 TACI의 두 가지 공통 수용체가 있으며, APRIL은 이 두 수용체와 작용하여 B 세포의 생존 및 조절에 관여한다(Samy, E., 등, Int Rev Immunol, 2017. 36: p. 3- 19; Kamal, A. 및 M. Khamashta, Autoimmune Rev, 2014. 13: p. 1094-1101). BAFF는 B 세포의 생체 항상성(homeostasis) 유지에 매우 중요하고, BAFF 신호경로의 과도한 활성화는 자가 반응성 B 세포를 생존시키고 자가 면역 반응을 촉진하는 자가 항체를 생성할 것으로 초래한다(Cancro, M.P., D.P. D'Cruz, M.A. Khamashta, J Clin Invest, 2009. 119: p. 1066-73).

본 개시는 항-IL23 항체 및 TACI 폴리펩티드를 포함하는 항-IL23 항체 융합 단백질을 구축하며, 여기서 상기 항-IL23 항체는 인간 IL23 p19 서브유닛에 특이적으로 결합한다.

본 개시의 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에 따르면, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 TACI 폴리펩티드에 융합되는 항-IL23 항체를 포함하거나 또는 이로 구성되며; 바람직하게는, 상기 TACI 폴리펩티드는 상기 항-IL23 항체의 중쇄의 N 세그먼트 및/또는 C 단에서 상기 항-IL23 항체와 융합된다.

일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질의 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서,

(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 22, 21, 20, 19, 18, 17 또는 1의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 26, 25, 24, 23 또는 2의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32 또는 3의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 36, 35, 34, 33 또는 4의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat, IMGT, Chothia, AbM 및 Contact로부터 선택되는 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 IMGT 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Chothia 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 AbM 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Contact 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서:

(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며;

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서

(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 마우스 유래 항체, 키메라 항체 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 인간화 항체이다.

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22, 21, 20, 19, 18 또는 17 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26, 25, 24 또는 23 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29, 30, 31 또는 32 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36, 35, 34 또는 33 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iv) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4 또는 이와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1, 30, 37, 44, 49, 73, 89 및 93번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4, 17, 36, 58, 60 및 68번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다. 상기 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1E, 30T, 37V, 44G, 49G, 73N, 89R 및 93V(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4L, 17Q, 36F, 58I, 60A 및 68R(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1, 2, 28, 44, 71 및 73번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4, 36, 39, 71 및 100번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다. 상기 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1E, 2F, 28S, 44S, 71V 및 73Q(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4I, 36F, 39R, 71L 및 100S(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서,

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22, 21, 20, 19, 18 또는 17의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26, 25, 24 또는 23의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29, 30, 31 또는 32의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36, 35, 34 또는 33의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iv) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함한다.

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하며;

(ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역이이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A, L235A 돌연변이, 및/또는 S228P 돌연변이, 및/또는 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E)를 갖고, 상기 돌연변이 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서,

(i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 43과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 41과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 45와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

(i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 더 좋은 단절 방지 기능을 갖는다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 85번째의 아미노산 잔기를 포함하는 폴리펩티드 또는 이의 변이체이며; 여기서, 상기 변이체는 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 하나 이상의 부위에 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다. 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 변이체는 49T 또는 49R, 52S, 53E 또는 53Q, 57E, 65T 또는 65A, 82A 또는 82R, 및 83Y로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58에 제시된 바와 같거나 SEQ ID NO: 58의 절단 단편 또는 이의 변이체이며; 여기서 상기 절단 단편은 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 85번째의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 58 또는 이의 절단 단편에서 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 가지며, 여기서 상기 아미노산 대체 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 절단된 단편은 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 86번째 아미노산 잔기, SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 87번째 아미노산 잔기; 또는 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 88번째 아미노산 잔기를 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 서열은 SEQ ID NO: 60-63 중 임의의 하나에 제시된 바와 같다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 서열은 SEQ ID NO: 58의 변이체 또는 SEQ ID NO: 58의 절단 단편(예를 들어, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61. SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열의 절단 단편)의 변이체이며, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 58 또는 이의 절단 단편 서열에서 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 임의의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개의 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T 또는 49R, 52S, 53E 또는 53Q, 57E, 65T 또는 65A, 82A 또는 82R, 및 83Y로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개의 아미노산 대체)를 가지며, 여기서 상기 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 52S, 53E, 53Q, 57E 및 82A로부터 선택되는 임의의 하나의 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49R 및 65T 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 45R 및 65A 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49R, 65T 및 82R 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 53E 및 57E 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 52S, 53E 및 57E 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60. SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T 및 82A 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T 및 83Y 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 82A 및 83Y 아미노산 대체를 가지거나; 또는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 53E, 57E 및 82A 아미노산 대체를 갖는다. 여기서 전술한 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 51 내지 83 중 임의의 하나에 제시된 바와 같다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 60-63 및 SEQ ID NO: 66-83 중 임의의 하나에 제시된 바와 같다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83에 제시된 바와 같다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질은 다음을 포함한다:

제1 사슬: [TACI 폴리펩티드 1]-[링커 1]-[항-IL23 항체의 중쇄]-[링커 2]-[TACI 폴리펩티드 2], 및

제2 사슬: 항-IL23 항체의 경쇄,

여기서, 상기 TACI 폴리펩티드 1 및 TACI 폴리펩티드 2는 동일하거나 상이하며, 선택적으로, 상기 TACI 폴리펩티드 1 및 TACI 폴리펩티드 2는 독립적으로 본원에 기재된 임의의 TACI 폴리펩티드로부터 선택될 수 있고; 상기 링커 1 및 링커 2는 동일하거나 상이하며; 일부 실시양태에서, 상기 링커는 (G_xS)_y 링커로부터 선택되고, 여기서, x는 1-5의 정수로부터 선택되고, y는 0-6의 정수로부터 선택되며, 일부 실시양태에서, 상기 링커는 (G_xS)_y 링커로부터 선택되고, 여기서, x는 1-5의 정수로부터 선택되고, y는 1-6의 정수로부터 선택되며, 일부 실시양태에서, 상기 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO: 84에 제시된 바와 같음) 또는 GGGS(SEQ ID NO: 85에 제시된 바와 같음)이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 제1 사슬과 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하는 제2 사슬을 갖거나, 또는 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 제1 사슬과 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 제2 사슬을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 2개의 제1 사슬, 및 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하는 2개의 제2 사슬을 가지며; 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 2개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 2개의 제2 사슬을 갖는다.

다른 일 측면으로, 본 개시는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL23 항체를 제공하고, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서,

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 여기서 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat, IMGT, Chothia, AbM 및 Contact로부터 선택되는 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 IMGT 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Chothia 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 AbM 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Contact 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서:

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, (i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 마우스 유래 항체, 키메라 항체 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 인간화 항체이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서:

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1, 30, 37, 44, 49, 73, 89 및 93번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4, 17, 36, 58, 60 및 68번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1E, 30T, 37V, 44G, 49G, 73N, 89R 및 93V(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4L, 17Q, 36F, 58I, 60A 및 68R(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1, 2, 28, 44, 71 및 73번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4, 36, 39, 71 및 100번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다. 일부 실시양태에서, 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 1E, 2F, 28S, 44S, 71V 및 73Q(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함되고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역에는 4I, 36F, 39R, 71L 및 100S(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨)로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 포함된다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서,

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역이이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A, L235A 돌연변이 및/또는 S228P 돌연변이, 및/또는 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E)를 갖고, 상기 돌연변이 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서,

(i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 43과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 41과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 45와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서

(i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는

(iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 또한 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질과 경쟁적으로 인간 IL23에 결합하는, 분리된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 제공한다.

일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 아래 하나 이상의 특성을 갖는다:

A. 인간 IL-23 p19 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 특이적으로 결합하지만, 마우스 IL-23 p19에는 특이적으로 결합하지 않으며; 바람직하게는 6.00E-11M 미만(예를 들어, 6.00E-11M 미만, 5.00E-11M 미만, 4.00E-11M 미만, 3.00E-11M 미만, 2.00E-11M 미만, 1.7E-11M 미만, 1.6E-11M 미만, 1.5E-11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 인간 IL-23 p19에 결합하고, 및/또는 9.00E-11M 미만(예를 들어, 9.00E-11M 미만, 8.00E-11M 미만, 7.00E-11M 미만, 6.00E-11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 결합하며, 상기 KD 값은 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명 분석법과 같은 표면 플라즈몬 공명 분석법을 통해 측정되며; 일부 실시양태에서, 상기 KD 값은 본 개시의 시험 6 방법을 통해 검출되며;

B. IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는, 인간 IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 0.6nM 미만(예를 들어, 0.6nM 미만, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.3nM 미민 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시 형태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

C. BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 7.00nM 미만(예를 들어, 7.00nM 미만, 6.00nM 미만, 5.00nM 미만, 4.00nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만, 0.9nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

D. BAFF/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는, BAFF/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 4.50nM 미만(예를 들어, 4.50nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

E. BAFF/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는, BAFF/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 6.00nM 미만(예를 들어, 6.00nM 미만, 5.00nM 미만, 4.00nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

F. APRIL/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 1.00nM 미만(예를 들어, 1.00nM 미만, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.1nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시양태에서 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

G. APRIL/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 3.00nM 미만(예를 들어, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.50nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 2 방법을 통해 검출되며;

H. IL-17 분비를 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.03nM 미만(예를 들어, 0.03nM 미만, 0.02nM 미만, 0.01nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 IL-17 분비를 억제하며; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 4 방법을 통해 검출되며;

I. BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.5nM 미만(예를 들어, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.3nM 미만, 0.2nM 미만, 0.1nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하며; 상기 IC₅₀ 값은 PerkinElmer을 통해 검출되고; 일부 실시양태에서, 상기 IC₅₀ 값은 본 개시의 시험 3 방법을 통해 검출되며;

J. TNFα, IL-22 및 IgA 사이토카인 분비를 억제하는 활성을 가지며; 일부 실시양태에서, 상기 TNFα, IL-22 및 IgA는 본 개시의 시험 9 방법을 통해 검출되거나; 또는

K. B 세포 증식을 억제하는 활성을 가지며; 일부 실시양태에서, 상기 TNFα, IL-22 및 IgA는 본 개시의 시험 5 방법을 통해 검출된다.

본 개시는 또한 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 전술한 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 전술한 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 전술한 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 B 세포 장애 또는 자가면역 질환을 치료 또는 개선하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료 유효량의 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체 또는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 질환을 치료 또는 예방하는 약물의 제조에 있어서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체, 핵산 분자 또는 약학 조성물의 용도를 제공한다.

다른 측면에서, 본 개시는 또한 약물로서 사용되는 전술한 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체, 핵산 분자 또는 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 약물은 B 세포 장애 또는 자가면역 질환을 치료하는 데 사용된다.

일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 질환은 IL23 발현과 관련된 질환 또는 병증이다. 일부 실시양태에서, 상기 자가면역 질환은 전신성 홍반루푸스, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 인슐린 의존성 당뇨병, 크론병, 류마티스 관절염, 다관절성 청소년 류마티스 관절염 및 건선성 관절염으로부터 선택되고; 상기 B 세포 장애는 종양, 만성 백혈구 백혈병, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 이식 후 림프조직 증식성 질환 및 경쇄 감마병증으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 질환은 전신성 홍반루푸스이다.

일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 치료는 피험자에게 별도의 치료 약물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

도 1: Hu29-19T 및 Hu29-24T의 구조적 개략도;
도 2: 이미퀴모드에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 홍반 심각도 점수의 실험 결과;
도 3: 이미퀴모드에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 피부 낙설 심각도 점수의 실험 결과;
도 4: 이미퀴모드에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 홍반 및 피부 낙설의 종합 점수의 결과;
도 5: 인간 IL-23에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 오른쪽 귀 두께의 실험 결과;
도 6: 인간 IL-23에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 곡선 아래 면적의 실험 결과(도면에서 음성 대조에 비해, *** P<0.001);
도 7: 인간 IL-23에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 오른쪽 귀 무게의 실험 결과(도면에서 음성 대조에 비해, ** P<0.01, *** P<0.001);
도 8: 항-IL23 항체 융합 단백질이 IgA 분비를 억제하는 실험 결과;
도 9: 항-IL23 항체 융합 단백질이 TNFα 분비를 억제하는 실험 결과;
도 10: 항-IL23 항체 융합 단백질이 IL-22 분비를 억제하는 실험 결과;
도 11: 전신성 홍반루푸스가 있는 동물의 약효 실험에서 신장 병리학 점수의 결과;
도 12: 전신성 홍반루푸스가 있는 동물의 약효 실험에서 피부 손상 점수의 결과;
도 13: 전신성 홍반루푸스가 있는 동물의 약효 실험에서 소변 단백질의 검출 결과.

용어

본 개시의 내용을 더욱 쉽게 이해할 수 있도록 특정 기술적 및 과학적 용어에 대하여 아래에서 설명한다. 본원에서 별도로 명확히 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

명세서 및 청구범위에 사용되는 단수형 "하나", "한 가지" 및 "상기"는 문맥에서 명확히 명시하지 않는 한 복수형을 포함한다.

문맥에서 별도로 명확히 요구하지 않는 한, 특허 명세서 및 청구범위에서 "포함하다", "갖는다", "함유하는" 등의 단어는 배타적이거나 빈곤적 의미가 아니라 "포함하나 이에 한정되지 않는다"는 의미로 이해되어야 한다.

용어 "사이토카인"이란 하나의 세포 집단에서 방출되어 다른 세포에서 세포간 매개체 역할을 하는 단백질을 가리키는 일반적인 용어이다. 이러한 사이토카인의 예시로는 림포카인, 모노카인, 케모카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬을 포함한다. 예시적인 사이토카인은, IL-2, IFN-γ, IL-6, TNFα, IL-17 및 IL-5를 포함한다.

본 개시에 기재된 TACI는 막 결합 수용체로서, 야생형 인간 TACI는 두 개의 시스테인-부유 유사 반복(cysteine-rich pseudo-repeats) 단편을 포함하는 세포외 영역, 막관통 영역 및 CAML(칼슘 조절제 및 시클로필린 리간드)과 상호작용하는 세포질 영역을 포함한다. 야생형 인간 TACI 세포외 영역(1-165번째 위치)은 본 개시의 SEQ ID NO: 51을 참조한다. 본 개시에서 "TACI세포외 도메인"과 "TACI 세포외 영역"은 상호 교환 가능하다.

용어 "및/또는"이란 "및"과 "또는" 두 가지 의미를 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어 표현 "A, B 및/또는 C"는 A, B 및 C, A, B 또는 C, A 또는 C, A 또는 B, B 또는 C, A와 C, A와 B, B와 C, A(단독), B(단독) 및 C(단독) 중 각각를 모두 망라하려는 것이다.

본 개시에서 사용되는 아미노산 세글자 코드와 한글자 코드는 J.biol.chem, 243, p3558(1968)에 기재된 바와 같다.

용어 "아미노산"이란 천연적으로 존재하는 아미노산과 합성된 아미노산뿐만 아니라 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모사체를 가리킨다. 천연적으로 존재하는 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 아미노산일 뿐만 아니라 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타민산 및 O-포스포세린과 같이 나중에 변형된 아미노산이다. 아미노산 유사체란 호모세린, 노르루신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸설포늄과 같이 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조(즉, 수소, 카르복실, 아미노 및 R 그룹에 결합된 α 탄소)를 갖는 화합물을 가리킨다. 이와 같은 유사체는 변형된 R 그룹(예를 들어, 노르루신) 또는 변형된 펩티드 백본을 갖지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모사체란 아미노산의 일반적인 화학 구조와는 다른 구조를 갖지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 가리킨다.

용어 "아미노산 돌연변이"는 아미노산 치환(아미노산 대체이라고도 함), 결실, 삽입 및 변형을 포함한다. 최종 작제물이 Fc 수용체에 대한 결합을 감소하는 것과 같은 원하는 특성을 보유하는 한, 치환, 결실, 삽입 및 변형의 임의의 조합을 통해 최종 작제물을 구현할 수 있다. 아미노산 서열의 결실 및 삽입은 폴리펩티드 사슬의 아미노단 및/또는 카르복실단에서의 결실 및 삽입을 포함한다. 특정 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환일 수 있다. 일 실시양태에서, 아미노산 돌연변이는 비보존적인 아미노산 치환, 즉 하나의 아미노산이 구조적 및/또는 화학적 특성이 상이한 또 다른 하나의 아미노산으로 대체되는 것이다. 아미노산 치환은 비천연적으로 존재하는 아미노산 또는 20가지 천연 아미노산의 유도체(예를 들어, 4-히드록시프롤린, 3-메틸히스티딘, 오르니틴, 호모세린, 5-히드록시리신)에 의한 대체를 포함한다. 아미노산 돌연변이는 당업계에서 공지된 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 유전적 방법에는 위치 지정 돌연변이(site-directed mutagenesi), PCR, 유전자 합성 등이 포함될 수 있다. 아미노산 측쇄 그룹을 변경시키는 방법은 유전 공학 이외에도 화학적 변형과 같은 방법을 이용할 수 있는 것으로 예상된다. 본원에서는 다양한 명칭을 사용하여 동일한 아미노산 돌연변이를 지칭할 수 있다. 본원에서, 특정 위치의 아미노산 잔기는 366W와 같이, 위치+아미노산 잔기로 표시할 수 있는데, 이는 366 부위에 있는 아미노산 잔기가 W임을 의미한다. T366W는 366번째 부위에 있는 아미노산 잔기가 원래의 T에서 W로 돌연변이되었음을 나타낸다.

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 원하는 항원 결합 활성을 나타내기만 하면 단클론 항체, 다클론 항체; 단일특이성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체); 전장 항체 및 항체 단편(또는 항원 결합 단편 또는 항원 결합 부분)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. "천연 항체"란 천연적으로 존재하는 면역글로불린 분자를 가리킨다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 이황화 결합에 의해 결합된 두 개의 동일한 경쇄와 두 개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 단백질이다. N 단으로부터 C 단까지 각 중쇄는 가변 중쇄 도메인, 중쇄 가변 영역이라고도 하는 가변 영역(VH) 하나를 가지며, 이어서 중쇄 불변 영역이 있고, 천연 IgG 중쇄 불변 영역은 통상적으로 세 개의 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 포함한다. 이와 유사하게, N 단으로부터 C 단까지, 각 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라고도 하는 가변 영역(VL) 하나를 가지며, 이어서 불변 경쇄 도메인(경쇄 불변 영역, CL)이 있다. 용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 이는 천연 항체의 구조와 대체로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역의 중쇄를 갖는 항체를 가리킨다. 천연적으로 온전한 항체 경쇄는 경쇄 가변 영역 VL 및 불변 영역 CL를 포함하며, VH는 경쇄의 아미노 말단에 있고, 경쇄 불변 영역은 κ 사슬 및 λ 사슬을 포함하고; 중쇄는 가변 영역 VH 및 불변 영역(CH1、CH2 및 CH3)을 포함하고, VH는 중쇄의 아미노 말단에 있으며, 불변 영역은 카르복실 말단에 있고, 여기서 CH3은 폴리펩티드의 아미노산 말단에 제일 가깝고, 중쇄는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 하위 유형 포함), IgA(IgA1 및 IgA2 하위 유형 포함), IgM 및 IgE를 포함하는 임의의 아이소타입에 속할 수 있다.

용어 항체 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"이란 항원이 항원에 결합하는 곳에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 가리킨다. 본원에서, 항체 중쇄 가변 영역(VH)과 경쇄 가변 영역(VL)은 각각 네 개의 보존적 프레임 영역(FR)과 세 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 여기서, 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"이란 가변 도메인 내에서 항원과의 결합에 주로 기여하는 영역을 가리키고, "프레임" 또는 "FR"은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 가리킨다. VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 3개 CDR 영역을 포함하고; VL는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 3개 CDR 영역을 포함한다. 각 VH 및 VL은 아미노 말단(N 말단이라고도 함)으로부터 카르복실 말단(C 말단이라고도 함)까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 세 개의 CDR 및 네 개의 FR로 구성된다.

CDR의 아미노산 서열 경계는 공지된 다양한 방안, 예를 들어 "Kabat" 넘버링 규칙(Kabat 등(1991). "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 참조), "Chothia" 넘버링 규칙, "ABM" 넘버링 규칙, "contact" 넘버링 규칙(Martin, ACR. Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J]. 2001 참조) 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링 규칙(Lefranc, M.P. 등, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77(2003); Front Immunol. 2018 Oct 16;9:2278) 등을 통해 결정할 수 있으며; 다양한 넘버링 시스템 간의 대응 관계는 아래 표 1에 표시된 바와 같이 당업자가 잘 알고 있는 예시적인 것이다.

표 1. CDR 넘버링 시스템 간의 관계

별도로 설명하지 않는 한, 본 개시의 실시예에서 가변 영역 및 CDR은 모두 "Kabat" 넘버링 규칙을 적용한다.

용어 "항체 단편"이란 온전한 항체와 다른 분자를 가리키며, 이는 온전한 항체가 결합되는 항원에 결합하는 온전한 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예시에는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, 단일 도메인 항체, 단쇄 Fab(scFab), 이중 항체, 선형 항체, 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv) 및 항체 단편으로 형성되는 다중특이성 항체가 포함되나 이에 한정되지 않는다.

용어 "Fc 영역" 또는 "단편 결정화 가능한 영역"은 항체 중쇄의 C 말단 영역을 정의하는 데 사용되며, 천연 Fc 영역 및 개조된 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 동일하거나 상이한 두 개의 서브유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄의 Fc 영역은 Cys226 위치에 있는 아미노산 잔기 또는 Pro230으로부터 이의 카르복시 말단까지 연장되는 것으로 정의된다. 본원에 기재된 항체의 사용에 적합한 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2(IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역의 경계는 변화될 수도 있는데, 예를 들어 Fc 영역의 C 말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)이 결실되거나 Fc 영역의 C 말단 글리신 및 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 446 및 447)이 결실되는 것이다. 별도로 설명하지 않는 한, Fc 영역에 대한 넘버링 규칙은 EU 인덱스라고도 하는 EU 넘버링 시스템이다.

용어 "키메라" 항체란 항체 중 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 물종으로부터 유래되되, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 다른 공급원 또는 물종으로부터 유래되는 항체를 가리킨다.

용어 "인간화" 항체란 비인간 항체의 반응성을 유지하면서 인간에서의 면역원성이 비교적 낮은 항체를 가리킨다. 예를 들어, 비인간 CDR 영역을 유지하고 항체의 나머지 부분을 이의 인간 대응 부분(즉, 불변 영역과 가변 영역의 프레임 영역 부분)으로 대체함으로써 구현할 수 있다.

용어 "인간 항체", "인간화 항체", "전체 인간 항체" 및 "완전 인간 항체"는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 가변 영역과 불변 영역이 인간 서열인 항체를 의미한다. 해당 용어는 인간 유전자로부터 유래했지만, 예를 들어 가능한 면역원성을 감소시키고, 친화력을 증가시키고, 원치 않는 접힘을 유발할 수 있는 시스테인 또는 글리코실화 부위를 제거하는 등 서열이 이미 변경된 항체를 망라한다. 해당 용어는 비인간 세포(인간 세포의 특징이 아닌 글리코실화를 부여할 수 있음)에서 재조합에 의해 생성된 항체를 망라한다. 해당 용어는 또한 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자좌의 일부 또는 전부를 함유하는 형질전환 마우스에서 양성된 항체를 포함한다. 인간 항체에 대한 의미는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 배제한다.

용어 "친화력"이란 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 리단드(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 결합의 상호작용의 전반적인 강도를 가리킨다. 별도로 명시하지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, 결합 "친화력"은 결합 쌍(예를 들어, 항체와 항원)의 구성원 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내부 결합 친화력을 가리킨다. 분자 X가 이의 리간드 Y에 대한 친화력은 통상적으로 해리 상수(KD)로 표현될 수 있다. 친화력은 당업계에서 알려진 일반적인 방법(본원에 기재된 방법을 포함)에 의해 측정될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "kassoc" 또는 "ka"란 특정 항체-항원의 상호작용 결합율을 가리키고, 용어 "kdis" 또는 "kd"란 특정 항체-항원의 상호작용의 해리율을 가리킨다. 용어 "KD"란 kd 대 ka의 비율(즉, kd/ka)로부터 얻어지고 몰 농도(M)로 표시되는 해리 상수를 가리킨다. 항체의 KD 값은 당업계에서 공지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, Biacore)을 측정하거나, 또는 용액 평형 적정(SET)에 의해 용액 내 친화력을 측정하는 시스템과 같은 바이오센싱 시스템을 사용한다.

용어 "이펙터 기능"이란 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 돌연변이된 아미노산 서열 Fc 영역)에 기인하고 항체 아이소타입에 따라 달라지는 생물학적 활성을 기리킨다. 항체 이펙터 기능의 예시로는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포 독성, Fc 수용체 결합, 항체 의존성 세포 매개된 세포 독성(ADCC), 식균 작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절 및 B 세포 활성화 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

용어 "단클론 항체"란 실질적으로 균질한 항체 집단을 가리키며, 즉, 해당 집단에 포함된 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 천연 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 다클론 항체 제제는 통상적으로 상이한 에피토프에 특이적인 가변 도메인에서 서로 다른 아미노산 서열을 갖는 다양한 항체를 포함한다. "단클론"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 획득한 항체의 특징을 의미하며 항체가 어느 한 특정 방법을 통해 생산되어야 한다는 의미로 해석되어서는 안 된다. 일부 실시양태에서, 본 개시에서 제공되는 항체는 단클론 항체이다.

용어 "항원"이란 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 포함)과 같은 선택적 결합제에 의해 결합될 수 있고, 또한 해당 항원에 결합할 수 있는 항체를 생성하기 위해 동물에서 사용될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 가리킨다. 항원은 다양한 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)과 상호작용할 수 있는 하나 이상의 에피토프기 있을 수 있다.

용어 "에피토프"란 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 영역(영역 또는 부위)을 가리킨다. 에피토프는 연속적인 아미노산 문자열(선형 에피토프)로 형성되거나 비연속적인 아미노산(구조적 에피토프)을 포함할 수 있는데, 예를 들어 항원의 접힘으로 인해(즉, 단백질성 항원의 3차 접힘을 통해) 공간적으로 근접하는 것이다. 구조적 에피토프는 변성 용매가 존재할 때 구조적 에피토프에 대한 항체 결합이 없어진다는 점에서 선형 에피토프와 다르다. 에피토프는 독특한 공간적 구조로 존재하는 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 특정 에피토프에 결합하는 항체(즉, 동일한 에피토프에 결합하는 항체)에 대한 스크리닝은 당업계에서 관례적 방법을 사용하여 수행될 수 있고, 알라닌 스캐닝, 펩티드 블롯팅, 펩티드 절단 분석, 에피토프 절제, 에피토프 추출, 항원의 화학적 변형(Prot. Sci. 9(2000)487-496 참조) 및 교차 차단을 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

용어 "특이적으로 결합할 수 있는", "특이적으로 결합" 또는 "결합"이란 항체가 다른 항원 또는 에피토프에 비해 더 높은 친화력으로 특정 항원 또는 해당 항원 내의 에피토프에 결합할 수 있는 능력을 가리킨다. 통상적으로, 항체는 약 1×10^-7M 또는 그 이하(예를 들어, 약 1×10^-8M, 1×10^-9M, 1×10^-10M, 1×10^-11M 또는 그 이하)의 평행 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원에 결합하는 항체의 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카제인)에 결합된 항체의 KD의 10% 또는 그 이하이다(예를 들어, 1%). KD는 알려진 방법을 사용하여 측정될 수 있는데 예를 들어, BIACORE^®표면 플라즈몬 공명 분석법을 사용하여 측정하는 것이다. 그러나, 항원 또는 항원 내 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 관련 항원, 예를 들어 다른 종(상동종)(예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascularis)(cynomolgus, cyno), 판 트로글로다이트스(Pan troglodytes)(chimpanzee, chimp))또는 칼리스테릭스 자쿠스(Callithrix jacchus)(commonmarmoset, marmoset)로부터 유래된 상응 항원에 대해 교차 반응할 수 있다.

용어 "항-IL23 항체" 및 "IL23-결합 항체"란 충분한 친화력으로 IL23에 결합할 수 있는 항체를 가리킨다. 일 실시예에서, 관련 없는 비 IL23 단백질에 대한 항체의 결합 정도는 IL23 및 IL12에 대한 해당 항체 결합보다 약 10% 작으며, 상기 결합은 BIACORE^® 표면 플라즈몬 공명 분석법에 의해 측정된다. 특정 실시예에서, IL23 단백질에 결합하는 항체는 <약 1μM, <약 100nM, <약 10nM, <약 1nM, <약 0.1nM, <약 0.01nM 또는 <약 0.001nM의 해리 상수(KD)를 갖는다. 특정 실시예에서, 항-IL23 항체는 인간 또는 시노몰구스 원숭이 IL23 p19 서브유닛의 항원 에피토프에 결합한다.

용어 "링커", "Linker" 또는 "연결자"란 두 개의 폴리펩티드 단편을 연결하는 연결 유닛를 가리키며, 통상적으로 일정한 유연성을 가지며, 연결자의 사용으로 인해 단백질 도메인의 고유적 기능이 상실된다는 것으로 이어지지는 않는다. 본원에서, 동일한 구조에 나타나는 링커는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다. 링커는 하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 1-30개, 2-24개 또는 3-15개의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커일 수 있다. 본원에 사용되는 링커는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다.

용어 "항체 의존성 세포의 세포 독성", "항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성" 또는 "ADCC"란 항체-코팅된 표적 세포와, 이펙터 세포에서 발현된 Fcγ 수용체(FcγR)에 의해 분해 활성이 있는 이펙터 세포(예컨대, 자연 살해 세포(NK), 단핵세포, 대식세포 및 호중구)의 상호작용에 의존하는 세포 사멸 유도 메커니즘이다. 예를 들어, NK 세포는 FcγRIIIa를 발현하는 반면, 단핵세포는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIIIa를 발현한다. 본원에 제공된 항체의 ADCC 활성은 체외 감정을 사용하여, 항원을 발현하는 세포를 표적 세포로, NK 세포를 이펙터 세포로 사용하고 평가할 수 있다. 분해된 세포에서 방출된 마커(예를 들어, 방사성 기질, 형광 염료 또는 천연 세포 내 단백질)에 의해 세포의 분해를 검출한다.

용어 "항체 의존성 세포 식균 작용"("ADCP")이란 항체-코팅된 표적 세포가 식세포(예컨대, 대식세포 또는 수지상 세포)의 내재화에 의해 제거되는 메커니즘을 가리킨다.

용어 "보체 의존성 세포 독성" 또는 "CDC"란 표적 결합 항체의 Fc 효과기 도메인이 보체 성분인 C1q에 결합하여 이를 활성화시키고, C1q가 계속하여 보체 캐스케이드를 활성화시킴으로써, 표적 세포의 사멸을 유도하는 세포 사멸 유도 메커니즘을 가리킨다. 보체의 활성화는 또한 표적 세포 표면에 보체 성분의 침착을 초래할 수 있으며, 이러한 보체 성분은 백혈구의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합함으로써 CDC를 촉진하게 된다.

용어 "핵산"은 본원에서 용어 "폴리뉴클레오티드"와 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 이의 중합체를 가리킨다. 상기 용어는 알려진 뉴클레오티드 유사체 또는 변형된 백본 잔기 또는 결합을 함유하는 핵산을 망라하며, 상기 핵산은 합성, 천연적으로 존재 및 비천연적으로 존재하는 것이고, 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 가지며, 참조 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사한다. 이와 같은 유사체의 예시에는 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트, 메틸포스포네이트, 키랄-메틸포스포네이트, 2-O-메틸리보뉴클레오티드, 펩티드 핵산(PNA)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. "분리된" 핵산은 천연 환경에서의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 가리킨다. 분리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자가 함유되지만 염색체 외로 또는 천연 염색체 위치와 다른 염색체 위치에 존재하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함한다. 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 코딩하는 분리된 핵산이란 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 가리키며, 단일 벡터 또는 별도의 벡터에 있는 이러한 하나 이상의 핵산 분자와, 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 하나 이상의 핵산 분자를 포함한다. 별도로 설명하지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 보존적으로 변형된 변이체(예를 들어, 축퇴성 코돈 치환)와 상보성 서열 및 명확히 지적된 서열도 암묵적으로 포함한다. 구체적으로, 아래에 상세히 설명되는 바와 같이, 축퇴성 코돈 치환은 다음과 같은 서열을 생성함으로써 얻을 수 있는데, 이러한 서열에 있어서, 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 3번째 위치가 혼합 염기 및/또는 데옥시노신 잔기에 의해 치환된다.

용어 "폴리펩티드"와 "단백질"은 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 아미노산 잔기의 중합체를 가리킨다. 해당 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 천연적으로 존재하는 아미노산의 상응하는 인공 화학적 모사체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연적으로 존재하는 아미노산 중합체 및 비천연적으로 존재하는 아미노산 중합체에도 적용된다. 별도로 설명하지 않는 한, 특정 폴리펩티드 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체도 암묵적으로 포함한다.

용어 서열 "동일성"이란 두 개의 서열에 대한 최적 정렬을 수행할 때, 최대 백분율의 서열 동일성을 획득하기 위해 필요할 때 간격을 도입하고, 그 어떠한 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로 간주하지 않으며, 두 개의 서열의 아미노산/핵산이 동등한 위치에서의 동일한 정도(백분율)를 가리킨다. 서열 동일성의 백분율을 측정하기 위해, 정렬은 당업계에 알려진 기술, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign(DNASTAR)소프트웨어와 같은 공개적으로 획득 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 구현될 수 있다. 당업자는 정렬 측정에 적합한 파라미터를 결정할 수 있는 것으로서, 비교 대상인 서열 전장에서 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 모든 알고리즘을 포함한다.

본 개시에서, 예를 들어 "XX 서열에 대한 부위"란 측정할 서열이 XX 서열과 최적으로 정렬하여 가장 높은 동일성 백분율을 획득하고, 이때, 측정할 서열과 XX 서열의 위치에 대응하는 부위는 두 개의 서열의 상대적인 부의라는 것을 의미한다. 예를 들어, SEQ ID NO: 58 서열의 자연 순서 아미노산 잔기에 대한 TACI의 세포외 영역의 서열 SEQ ID NO: 51 및 SEQ ID NO: 60의 부위는 표 2에 제시되어 있다:

표 2. SEQ ID NO: 58 부위 및 SEQ ID NO: 51 또는/ SEQ ID NO: 60에 있는 상응 부위

비고: 예를 들어, SEQ ID NO: 60에 있는 2번째 위치(자연 순서) 잔기 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 49번째 위치(자연 순서) 잔기 부위에 대응하는 부위임.

용어 "융합" 또는 "연결"이란 구성 요소(예를 들어, TACI 폴리펩티드 및 항체 중쇄)가 직접 또는 하나 이상의 링커를 통해 공유 결합에 의해 연결되는 것을 가리킨다. 링커가 펩티드 링커인 경우, 상기 공유 결합은 펩티드 결합이다.

용어 "항-IL23 항체 융합 단백질"란 항-IL23 항체가 활성 단백질에 융합된 단백질을 가리킨다. 예를 들어, TACI 폴리펩티드는 항-IL23 항체의 중쇄 말단에 융합되어 단백질을 형성한다.

용어 "벡터"란 이에 연결된 다른 폴리뉴클레오티드를 운반할 수 있는 폴리뉴클레오티드 분자를 의미한다. 벡터 유형 중 하나는 "플라스미드"로서, 추가된 DNA 세그먼트를 연결할 수 있는 고리형 이중 가닥 DNA 루프를 가리킨다. 다른 한 가지 유형의 벡터는 아데노 관련 바이러스 벡터(AAV 또는 AAV2)와 같은 바이러스 벡터로서, 바이러스 게놈에 추가된 DNA 세그먼트가 연결될 수 있다. 특정 벡터는 도입된 숙주 세포에서 자율적으로 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 개시점을 갖는 박테리아 벡터 및 부가형 포유동물 벡터). 기타 벡터(예를 들어, 비부가형 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입된 후, 숙주 세포의 게놈에 통합됨으로써, 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 용어 "발현 벡터" 또는 "발현 작제물"이란 숙주 세포를 형질전환시킬 수 있고, 또한 이에 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 이종 코딩 영역의 발현을 지시 및/또는 제어(숙주 세포와 함께)하는 핵산 서열을 함유하는 벡터를 가리킨다. 발현 작제물에는 전사, 번역에 영향을 미치거나 제어하는 서열, 및 인트론이 존재하는 경우 이에 작동 가능하게 연결된 코딩 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 미치는 서열이 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호 교환적으로 사용될 수 있고, 외인성 핵산이 도입된 세포를 가리키며, 이와 같은 세포의 자손을 포함한다. 숙주 세포는 계대 횟수에 관계없이 일차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함하는 "형질전환체"와 "형질전환된 세포"를 포함한다. 자손의 핵산 내용물이 부모 세포와 동일하지 않을 수 있으되, 돌연변이를 함유할 수 있다. 본원에서는 초기 형질전환 세포에서 스크리닝 또는 선택된 세포와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손을 포함한다. 숙주 세포에는 원핵 세포와 진핵 숙주 세포가 포함되며, 여기서 진핵 숙주 세포에는 포유동물 세포, 곤충 세포주 식물 세포 및 진균 세포가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 포유동물 숙주 세포에는 인간, 마우스, 래트, 견, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터의 세포가 포함되며, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 어린 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간암 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포 및 HEK-293 세포가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 진균 세포는 효모 및 사상 진균 세포를 포함하며, 예를 들어 피키아 파스투리스(Pichia pasteuris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브라나에페이셜리스(Pichia membranaefacialis), 피키아 미누타(Pichia minuta)(Ogataea minuta, Pichia lindneri), 피키아 오푼티아에(Pichiaopuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살리크타리아(Pichia salictaria), 피키아 구르쿰(Pichia guercuum), 피키아 피페리(Pichia pijperi), 피키아 스팁티스(Pichia stiptis), 피키아 메탄올리카(Pichia mthanolica), 피키아 속, 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomycescerevisiae), 사카로마이세스 세레비시애 속, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이버마이세스 속, 클루이버마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소포리움 럭노웬세(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 속(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미넘(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)를 포함한다. 피키아 속, 임의의 사카로마이세스 세레비시애 속, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 임의의 클루이버마이세스 속, 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 임으의 아스페르길루스 속, 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 럭노우엔세(Chrysosporium lucknowense), 임의의 푸사리움 속, 야로비아 리폴리티카(Yarrowia liplytica) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)이다.

본 출원에 사용된 바와 같이, 표현 "세포", "세포주" 및 "세포 배양물"은 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 이러한 모든 명칭은 자손을 포함한다. 따라서, 단어 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 계대 횟수에 관계없이 일차 피험자 세포 및 이로부터 유래된 이의 배양물을 포함한다. 또한, 유의적 또는 무의적 돌연변이로 인해 모든 자손의 DNA 내용물은 완전히 똑같지 않을 수도 있다는 점을 이해해야 한다. 돌연변이가 스크리닝된 원래의 형질전환 세포와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 포함된다.

"선택적" 또는 "선택적으로"는 이어서 설명되는 사건 또는 환경이 발생할 수 있으나 반드시 발생하는 것은 아님을 의미하는 것으로서, 해당 설명은 해당 사건 또는 환경이 발생하거나 또는 발생하지 않는 상황을 포함한다.

용어 "약학 조성물"이란 본원에 기재된 하나 이상의 항-IL23 항체 융합 단백질 및 생리학적/약학적으로 사용 가능한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학적 성분을 함유하는 혼합물을 의미한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 활성 성분과 구별되고 피험자에게 독성이 없는 약학적 제제의 성분을 가리킨다. 약학적으로 허용 가능한 벡터에는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제가 포함되나 이에 한정되지 않는다.

용어 "피험자" 또는 "개체"는 인간 및 비인간 동물을 포함한다. 비인간 동물은 비인간 영장류(예를 들어, 시노몰구스 원숭이), 양, 견, 소, 닭, 양서류 동물 및 파충류 동물과 같은 모든 척추동물(예를 들어, 포유류 및 비포유류)을 포함한다. 별도로 지적하지 않는 한, 상기 용어 "환자" 또는 "피험자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시노(cyno)" 또는 "시노몰구스(cynomolgus)"란 마카카 파시쿨라리스(Macaca Fascularis)를 가리킨다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 피험자는 인간이다.

"투여" 또는 "투약"은, 동물, 인간, 실험 피험자, 세포, 조직, 기관 또는 생물 유체에 적용될 때, 외인성 약물, 치료제, 진단제 또는 조성물이 동물, 인간, 피험자, 세포, 조직, 기관 또는 생물 유체와의 접촉을 가리킨다.

용어 "샘플"이란 피험자로부터 분리된 유사한 유체, 세포 또는 조직의 채집물일뿐만 아니라 피험자 체내에 존재하는 유체, 세포 또는 조직을 가리킨다. 예시적인 샘플은 혈액, 혈청 및 장막액, 혈장, 림프액, 소변, 타액, 낭종액, 누액, 배설물, 가래, 분비 조직 및 장기의 점막 분비물, 질 분비물, 복수, 흉막, 심낭, 복막, 복강 및 기타 체강의 유체, 기관지 세척액으로부터 수집된 유체, 윤활액, 피험자 또는 생물학적 공급원과 접촉하는 액체 용액과 같은 생물 유체이며, 예를 들어, 세포 및 기관 배지(세포 또는 기관 조건 배지 포함), 세척액, 등이며, 조직 생검 샘플, 미세 바늘 흡인, 수술로 절제한 조직, 장기 배양물 또는 세포 배양물이다.

"치료(treatment와 treat)" 및 "처리"(및 문법적 변형)는 치료 대상인 개체의 천연 과정을 변경하려고 시도하는 임상적 개입을 가리키며, 또한 예방을 위해 또는 임상 병리 과정 중에 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과에는 질환의 발병 또는 재발 예방, 증상의 경감, 질환의 직간접적 병리학적 결과의 경감/감소, 전이 예방, 질환의 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 경감 및 소퇴 또는 개선의 예후가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시의 항체를 사용하여 질환의 발생을 지연시키거나 질환의 진행을 완화시킨다.

"유효량"은 일반적으로 증상의 심각도 및/또는 빈도를 줄이고, 이러한 증상 및/또는 잠재적인 발병 원인을 없애고, 증상 및/또는 잠재적인 발병 원인의 발생을 예방하고, 및/또는 질환 상태로 인한 또는 이와 관련된 부상(예를 들어, 폐질환)을 개진하거나 개선하기에 충분한 양이다. 일부 실시예에서, 유효량은 치료 유효량 또는 예방 유효량이다. "치료 유효량"은 질환 상태 또는 증상, 특히 해당 질환 상태와 관련된 상태 또는 증상을 치료하거나, 해당 질환의 상태 또는 해당 질환과 어떤 식으로든 관련된 다른 바람직하지 않은 증상의 진행을 예방, 방해, 지연 또는 역전시키기에 충분한 양이다. "예방 유효량"은 피험자에게 투여할 경우, 해당 질환 상태의 발병(또는 재발)을 예방 또는 지연시키거나 해당 질환 상태 또는 관련 증상의 발병(또는 재발)의 가능성을 낮추는 것과 같이 예정되는 예방 효과를 가질 양이다. 완전한 치료 효과 또는 예방 효과는 1회 용량 투여 후에 일어나지 않을 수 있으며, 일련의 용량으로 투여한 후에 일어날 수 있다. 따라서, 치료 유효량 또는 예방 유효량은 1회 이상의 투여 방식으로 투여될 수 있다. "치료 유효량" 및 "예방 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별과 체중뿐만 아니라 치료제 또는 치료제 조합이 개체에서 원하는 응답을 유발하는 능력과 같은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 효과적인 치료제 또는 치료제 조합의 예시적인 지표로는 환자의 개선된 건강 상태 등이 포함된다.

본 개시의 항-IL23 항체

일 측면에서, 본 개시는 새로운 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질을 설계한다. 이는 아래 하나 이상의 특성을 갖는다:

A. 인간 IL-23 p19 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 특이적으로 결합하지만, 마우스 IL-23 p19에는 특이적으로 결합하지 않으며; 바람직하게는 6.00E-11M 미만(예를 들어 6.00E-11M 미만, 5.00E-11M 미만, 4.00E-11M 미만, 3.00E-11M 미만, 2.00E-11M 미만, 1.7E-11M 미만, 1.6E-11M 미만, 1.5E-11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 인간 IL-23 p19에 결합하고, 및/또는 9.00E-11M 미만(예를 들어, 9.00E-11M 미만, 8.00E-11M 미만, 7.00E-11M 미만, 6.00E -11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 결합하며, 상기 KD 값은 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명 분석법과 같은 표면 플라즈몬 공명 분석법을 통해 측정되며; 일부 실시양태에서, 상기 검출은

B. IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 인간 IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 0.6nM 미만(예를 들어, 0.6nM 미만, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.3nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

C. IL-17 분비를 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.03nM 미만(예를 들어, 0.03nM 미만, 0.02nM 미만, 0.01nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 IL-17 분비를 억제하고; 상기 IC₅₀ 값은 Elisa를 통해 검출되며;

D. BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는, 0.5nM 미만(예를 들어, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.3nM 미만, 0.2nM 미만, 0.1nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하고; 상기 IC₅₀ 값은 PerkinElmer을 통해 검출되며;

E. TNFα 및/또는 IL-22 분비를 억제하는 활성을 가지거나; 또는

F. 이미퀴모드에 의해 유발된 건선이 있는 동물 모델, 인간 IL-23에 의해 유발된 건선이 있는 동물 모델 및/또는 전신성 홍반루푸스가 있는 동물 모델에서 강한 체내 약효를 지닌다.

예시적인 항-IL23 항체

일 측면으로, 본 개시는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL23 항체를 제공하며, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서,

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체의 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat로부터 선택되는 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며, 여기서:

(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10에 제시된 바와 같거나, 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서

(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10에 제시된 바와 같거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 28에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10에 제시된 바와 같거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같다.

일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체는 마우스 유래, 키메라 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 인간화된 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역은 IGHV2-26*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ6*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 1E, 30T, 37V, 44G, 49G, 73N, 89R 및 93V로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 IGKV4-1*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ4*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 4L, 17Q, 36F, 58I, 60A 및 68R로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 여기서 항-IL23 항체는 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10에 제시된 바와 같다. 위에 기재된 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 인간화 항체이며, 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역은 IGHV1-3*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ1*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 1E, 2F, 28S, 44S, 71V 및 73Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 IGKV2-40*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ2*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 4I, 36F, 39R, 71L 및 100S로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산이 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같다. 위에 기재된 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22, 21, 20, 19, 18 또는 17에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26, 25, 24 또는 23에 제시된 바와 같거나; 또는

(ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29, 30, 31 또는 32에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36, 35, 34 또는 33에 제시된 바와 같거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2에 제시된 바와 같거나; 또는

(iv) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4에 제시된 바와 같다.

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26에 제시된 바와 같으며;

(ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25에 제시된 바와 같거나; 또는

(iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36에 제시된 바와 같다.

일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역이이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A, L235A 돌연변이, 및/또는 S228P 돌연변이, 및/또는 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E)를 갖고, 상기 돌연변이 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A, L235A 돌연변이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.

(i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42에 제시된 바와 같고, 경쇄는 SEQ ID NO: 43에 제시된 바와 같거나; 또는

(ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40에 제시된 바와 같고, 경쇄는 SEQ ID NO: 41에 제시된 바와 같거나; 또는

(iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44에 제시된 바와 같고, 경쇄는 SEQ ID NO: 45에 제시된 바와 같다.

본 개시의 항-IL23 항체 융합 단백질

본 개시는 항-IL23 항체 및 TACI 폴리펩티드를 포함하는 항-IL23 항체 융합 단백질을 구축하며, 여기서 상기 항-IL23 항체는 인간 IL23에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는 인간 IL23 p19 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 아래 하나 이상의 특성을 갖는다:

A. 인간 IL-23 p19 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 특이적으로 결합하지만, 마우스 IL-23 p19에는 특이적으로 결합하지 않으며; 바람직하게는 6.00E-11M 미만(예를 들어 6.00E-11M 미만, 5.00E-11M 미만, 4.00E-11M 미만, 3.00E-11M 미만, 2.00E-11M 미만, 1.7E-11M 미만, 1.6E-11M 미만, 1.5E-11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 인간 IL-23 p19에 결합하고, 및/또는 9.00E-11M 미만(예를 들어, 9.00E-11M 미만, 8.00E-11M 미만, 7.00E-11M 미만, 6.00E -11M 미만 또는 그 이하)의 KD 값으로 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 결합하며, 상기 KD 값은 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명 분석법과 같은 표면 플라즈몬 공명 분석법을 통해 측정되며;

C. BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 7.00nM 미만(예를 들어, 7.00nM 미만, 6.00nM 미만, 5.00nM 미만, 4.00nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만, 0.9nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

D. BAFF/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 4.50nM 미만(예를 들어, 4.50nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

E. BAFF/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 6.00nM 미만(예를 들어, 6.00nM 미만, 5.00nM 미만, 4.00nM 미만, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.00nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

F. APRIL/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 1.00nM 미만(예를 들어, 1.00nM 미만, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.1nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

G. APRIL/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 3.00nM 미만(예를 들어, 3.00nM 미만, 2.00nM 미만, 1.50nM 미만 또는 그 이하)이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;

H. IL-17 분비를 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.03nM 미만(예를 들어, 0.03nM 미만, 0.02nM 미만, 0.01nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 IL-17 분비를 억제하고; 상기 IC₅₀ 값은 Elisa를 통해 검출되며;

I. BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.5nM 미만(예를 들어, 0.5nM 미만, 0.4nM 미만, 0.3nM 미만, 0.2nM 미만, 0.1nM 미만 또는 그 이하)의 IC₅₀ 값으로 BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하고; 상기 IC₅₀ 값은 PerkinElmer을 통해 검출되며;

J. TNFα, IL-22 및 IgA 사이토카인 분비를 억제하는 활성을 갖거나; 또는

K. B 세포 증식을 억제하는 활성을 갖는다.

예시적인 항-IL23 항체 융합 단백질

상기 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 여기서 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Kabat로부터 선택되는 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이며, 여기서:

일부 실시양태에서, 여기서

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 마우스 유래 항체, 키메라 항체 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역은 IGHV2-26*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ6*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 1E, 30T, 37V, 44G, 49G, 73N, 89R 및 93V로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 IGKV4-1*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ4*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 4L, 17Q, 36F, 58I, 60A 및 68R로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시형태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10에 제시된 바와 같다. 위에 기재된 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 인간화 항체이고, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역은 IGHV1-3*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ1*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 1E, 2F, 28S, 44S, 71V 및 73Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 IGKV2-40*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ2*01로부터 유래된 FR4를 가지며, 이는 비치환된 것이거나 4I, 36F, 39R, 71L 및 100S로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산이 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체의 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12에 제시된 바와 같고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같으며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15에 제시된 바와 같고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같다. 위에 기재된 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22에 제시된 바와 같고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26에 제시된 바와 같거나; 또는

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역이이며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며; 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A, L235A 돌연변이 및/또는 S228P 돌연변이, 및/또는 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E)를 갖고, 상기 돌연변이 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 야생형 TACI 폴리펩티드(서열은 SEQ ID NO: 51과 같음)에 비해 덜 쉽게 단절된다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58에 제시된 바와 같거나 SEQ ID NO: 58의 절단된 단편 또는 이의 변이체이며; 여기서 상기 절단된 단편은 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 85번째의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 58 또는 이의 절단된 단편을 기준으로 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 가지며, 여기서 상기 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 서열은 SEQ ID NO: 58의 변이체 또는 SEQ ID NO: 58의 절단된 단편(예를 들어, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63)의 변이체이고, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 58 또는 이의 전단된 단편 서열을 기준으로 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 임의의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개의 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 여기서 상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 52S, 53E, 53Q, 57E 및 82A로부터 선택되는 임의의 하나의 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63의 서열을 기준으로 49R 및 65T 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 서열 ID NO: 63 서열을 기준으로 45R 및 65A 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49R, 65T 및 82R 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 53E 및 57E 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58. SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 52S, 53E 및 57E 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T 및 82A 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 기준으로 49T 및 83Y 아미노산 대체를 가지며; SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 82A 및 83Y 아미노산 대체를 가지거나; 또는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63 서열을 기준으로 49T, 53E, 57E 및 82A 아미노산 대체를 갖는다. 여기서 전술한 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드의 서열은 SEQ ID NO: 60-63 및 SEQ ID NO: 66-83 중 임의의 하나에 제시된 바와 같다. 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드 서열은 SEQ ID NO: 83에 제시된 바와 같다.

N 단에서 C 단으로 순차적으로는 [TACI 폴리펩티드 1]-[링커 1]-[항-IL23 항체 중쇄]-[링커 2]-[TACI 폴리펩티드 2]인 제1 사슬, 및

항-IL23 항체의 경쇄인, 제2 사슬,

여기서, 상기 TACI 폴리펩티드 1과 TACI 폴리펩티드 2는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있고, 상기 TACI 폴리펩티드 1 및 TACI 폴리펩티드 2는 독립적으로 위에 기재된 바와 같은 임의의 하나의 TACI 폴리펩티드로부터 선택될 수 있으며; 상기 링커 1과 링커 2는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있으며; 일부 실시양태에서, 상기 TACI 폴리펩티드 1과 TACI 폴리펩티드 2는 동일하며; 일부 실시양태에서, 상기 링커는 (G_xS)_y 링커로부터 선택되며, 여기서, X는 1-5의 정수로부터 선택되고, Y는 0-6의 정수로부터 선택되며, 일부 실시양태에서, 상기 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO: 84에 제시된 바와 같음) 또는 GGGS(SEQ ID NO: 85에 제시된 바와 같음)이다.

위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질의 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질의 제1 사슬은 SEQ ID NO: 47에 제시된 바와 같고, 제2 사슬은 SEQ ID NO: 43에 제시된 바와 같거나; 또는 제1 사슬은 SEQ ID NO: 46에 제시된 바와 같고, 제2 사슬은 SEQ ID NO: 41에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 위의 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 47과 같은 2개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 43과 같은 2개의 제2 사슬을 가지며; 일부 실시양태에서, 상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 46과 같은 2개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 41과 같은 2개의 제2 사슬을 갖는다.

항-IL23 항체 또는 이의 융합 단백질의 변이체

특정 실시양태에서는, 본원에서 제공하는 항-IL23 항체 또는 이의 융합 단백질의 아미노산 서열 변이체를 망라한다. 예를 들어, 항체의 결합 친화력 및/또는 기타 생물학적 특성이 개선되기를 기대할 수 있다. 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하거나, 또는 펩티드 합성을 통해 항체의 아미노산 서열 변이체를 제조할 수 있다. 이와 같은 변형은 예를 들어 항-IL23 항체 또는 이의 융합 단백질의 아미노산 서열 내에 있는 잔기에 대한 삭제 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 작제물이 항원 결합 특성과 같은 원하는 특성을 보유하는 한, 삭제, 삽입 및 치환의 모든 조합을 통해 최종 작제물을 얻을 수 있다.

변이체의 치환, 삽입 및 삭제

특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체를 제공한다. 치환 돌연변이 유발에 관심 있는 부위는 CDR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 3의 "바람직한 치환"이라는 제목 아래에 표시된다. 보다 실질적인 변화는 표 3의 "예시적인 치환"이라는 제목 아래에 제공되어 있으며, 아미노산 측쇄 유형을 참조하여 아래에 추가로 설명된 바와 같다. 아미노산 치환을 관심이 있는 항체에 도입하고, 보존/개선된 항원 결합, 감소된 면역 원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC와 같은 원하는 활성에 대해 생성물을 스크리닝할 수 있다.

표 3. 아미노산 치환

흔히 보이는 측쇄 특성에 따라 아미노산은 다음과 같이 그룹을 나눌 수 있다:

(1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성, 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 쇄 방향 확정에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비보존적 치환은 이러한 유형 중 하나의 구성원을 다른 유형의 구성원으로 대체하는 것이 필요할 것이다.

한 유형의 치환 변이체는 부모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 CDR 잔기를 치환하는 것에 관한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택을 거쳐 얻어진 변이체는 부모 항체에 비해 특정 생물학적 특성(예를 들어, 상승된 친화력, 감소된 면역 원성)에 대한 변화(예를 들어, 개선)를 가지고, 및/또는 부모 항체의 특정 생물학적 특성을 대체로 보존할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화력이 성숙된 항체이며, 예를 들어, 파지 디스플레이에 기반한 친화력 성숙 기술(본원에 기재된 기술과 같음)을 사용하여 상기 항체를 편리하게 생성할 수 있다. 요약하면, 하나 이상의 CDR 잔기를 돌연변이시키고, 변이체 항체를 파지에 디스플레이하여 이에 대해 특정 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화력)을 스크리닝한다. 예를 들어, 항체 친화력을 개선하기 위해 CDR를 변경(예를 들어, 치환)시킬 수 있다. 이와 같은 변화는 CDR "핫스팟"에 대해, 즉 체세포 성숙 과정에서, 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩된 잔기 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에 대해 이루어질 수 있는 동시에, 얻어진 변이체의 VH 또는 VL에 대해 결합 친화력을 시험할 수 있다. 친화력 성숙의 일부 실시양태에서, 다양한 방법(예를 들어, 오류 유발 PCR, 사슬 셔플링 , 또는 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발) 중 어느 한 방법을 통해, 성숙을 위해 선택되는 가변 유전자에 다양성을 도입한다. 그 다음, 2차 라이브러리를 구축한다. 그 다음, 원하는 친화력을 갖는 임의의 항체 변이체를 감정하기 위해 라이브러리를 스크리닝한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 개의 CDR 잔기(예를 들어, 한 번에 4-6개의 잔기)가 무작위화되는 CDR-지정 접근법에 관한 것이다. 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기를 특이적으로 감정할 수 있다. 특히, HCDR3과 LCDR3을 표적으로 하는 경우가 많다.

특정 실시양태에서, 이와 같은 변화가 항체의 항원 결합 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 CDR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화력을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변화(예를 들어, 본원에서 제공하는 바와 같은 보존적 치환)를 CDR에 수행할 수 있다. 이와 같은 변화는 예를 들어 CDR 내의 항원 접촉 잔기 외부에 있을 수 있다. 위에 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각 CDR은 변경되지 않거나 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.

돌연변이 유발 표적 부위로 삼을 수 있는 항체 내의 잔기 또는 영역을 감정하는 데 사용할 수 있는 방법을 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이라고 한다. 이와 같은 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기 그룹(예를 들어, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 전하를 띤 잔기)을 감정하고, 중성 또는 음전하를 띤 아미노산(예를 들어, Ala 또는 폴리알라닌)으로 대체하여, 해당 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받았는지 여부를 확인한다. 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 추가 치환을 도입할 수 있다. 또한, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 연구함으로써 항체와 항원 사이의 접촉점을 감정할 수 있다. 이러한 접촉 잔기와 인접한 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 원하는 특성을 포함하는지 여부를 확인하기 위해 변이체를 스크리닝할 수 있다.

아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개 잔기부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지의 아미노 및/또는 카르복실 말단 융합과 단일 또는 다수 개 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예시로는 N 단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 연장하는 효소 또는 폴리펩티드와 항체의 N 단 또는 C 단의 융합물을 포함한다.

Fc 영역의 변형

일 측면에서, 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질의 Fc 영역은 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 수용체와의 결합, 예를 들어 Fcγ 수용체와의 결합을 감소시키고 이펙터 기능을 낮추거나 제거한다. 천연 IgG Fc 영역, 구체적으로 IgG₁ Fc 영역 또는 IgG₄ Fc 영역은 본 개시의 융합 단백질이 항원을 발현하는 세포보다는 Fc 수용체를 발현하는 세포를 표적으로 하는 결과를 초래할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시의 개조된 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화력 및/또는 감소된 이펙터 기능을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 Fc 수용체에 대한 결합 친화력이 50%, 80%, 90% 또는 95% 이상 감소된다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 수용체는 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIB, FcγRIIIa와 같은 인간 Fcγ 수용체이다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 C1q와 같은 보체에 대한 결합 친화력도 감소된다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합 친화력이 감소되지 않는다. 일부 실시예에서, 개조된 Fc 영역은 감소된 이펙터 기능을 가지며, 상기 감소된 이펙터 기능은 감소된 보체 의존성 세포 독성(CDC), 감소된 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC), 감소된 항체 의존성 세포 식균(ADCP), 감소된 사이토카인 분비, 감소된 면역 복합체에 의해 매개된 항원 제시 세포의 항원 섭취, 감소된 NK 세포와의 결합, 감소된 대식세포와의 결합, 감소된 단핵세포와의 결합, 감소된 다형 핵세포와의 결합, 감소된 직접적인 신호 전달에 의한 세포 사멸, 감소된 수지상 세포 성숙 또는 감소된 T 세포에 의한 유발 중 하나 이상을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. IgG₁ Fc 영역의 경우, 위치 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 등에 있는 아미노산 잔기의 치환은 이펙터 기능을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG₁ Fc 영역이고, 위치 234 및 235에 있는 아미노산 잔기는 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이다. IgG₄ Fc 영역의 경우, 위치 228 등에 있는 아미노산 잔기 치환은 이펙터 기능을 감소시킬 수 있다.

항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 Fc 영역의 두 개의 서브유닛에 융합된 서로 다른 결합 영역을 포함할 수 있고, 따라서, 원하지 않는 동종이량체화를 초래할 수 있다. 수율 및 순도를 향상시키기 위해, 본 개시의 융합 단백질의 Fc 영역에 이종이량체화를 촉진하는 변형을 도입하는 것이 유리할 것이다. 일부 실시양태에서, 본 개시의 Fc 영역은 놉-인투-홀(knob-into-hole, KIH) 기술에 의한 개조를 포함하며, 이 방법은 제1 서브유닛의 인터페이스에 놉 구조(knob)를 도입하고 제2 서브유닛의 인터페이스에 홀 구조(hole)를 도입하는 것에 관여한다. 이로써 상기 놉 구조가 홀 구조에 위치 고정될 수 있어, 이종이량체의 형성을 촉진하고 동종이량체의 생성을 억제하도록 한다. 놉 구조는 제1 서브유닛의 인터페이스로부터 유래된 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄(예를 들어 티로신 또는 트립토판)로 치환함으로써 구축된 것이다. 홀 구조는 제2 서브유닛의 인터페이스에서 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 아미노산 측쇄(예를 들어 알라닌 또는 트레오닌)로 치환함으로써 구축된 것이다. 놉 구조 및 홀 구조는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 변경시킴으로써 제조된 것이며, 선택적인 아미노산 치환은 아래 표 4에 나타난 바와 같다:

표 4. KIH 돌연변이 조합

놉-인투-홀 기술 이외에, 이종이량체화를 구현하기 위해 다중 특이성 항체 중쇄의 CH3 도메인을 변형시키는 데 사용되는 다른 기술, 예를 들어 WO96/27011, WO98/050431, EP1870459, WO2007/110205, WO 007/147901, WO2009/089004, WO2010/129304, WO2011/90754, WO2011/143545, WO2012/058768, WO2013/157954 및 WO 013/096291 등 역시 당업계에서 알려져 있다.

Fc 영역의 C 말단은 아미노산 잔기 PGK로 끝나는 온전한 C 말단일 수 있고; 예를 들어 한 개 또는 두 개의 C 말단 아미노산 잔기가 제거된 단축된 C 말단일 수 있다. 바람직한 측면에서, 중쇄의 C 말단은 PG로 끝나는 단축된 C 말단이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 제거된 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 있거나 없는 항체 혼합물의 항체 집단을 갖는다.

재조합 방법

항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 재조합 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 방법의 경우, 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 코딩하는 하나 이상의 분리된 핵산이 제공된다.

일 실시양태에서, 본 개시는 앞서 기재된 바와 같은 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 코딩하는 분리된 핵산을 제공한다. 이와 같은 핵산은 전술한 임의의 한 것을 코딩하는 독립적인 폴리펩티드 사슬로부터 유래될 수 있다. 다른 일 측면에서, 본 개시는 이와 같은 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다. 다른 일 측면에서, 본 개시는 이와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일 실시양태에서, 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 제조하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은 발현에 적합한 조건 하에서, 상기 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포(앞서 제공된 바와 같음)를 배양하고, 선택적으로 상기 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 숙주 세포(또는 숙주 세포 배지)로부터 회수하는 단계를 포함한다.

항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 재조합하여 생성하기 위해, 단백질을 코딩하는 핵산을 분리시키고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입시킨다. 이와 같은 핵산은 일반적인 절차를 사용하여 쉽게 분리하고 시퀀싱할 수 있거나, 또는 재조합 방법을 통해 생성하거나 화학적 합성을 통해 획득할 수 있다.

항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 코딩하는 벡터를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생성될 수 있다. 발현된 후, 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 분리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.

원핵 생물 외에도, 사상균 또는 효모와 같은 진핵 미생물도 진균 및 효모 균주를 포함한 융합 단백질을 코딩하는 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 융합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있으며, 무척추동물 세포의 예시로는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용할 수 있는 많은 바큘로바이러스 균주가 이미 검증되었고; 또한 식물 세포 배양물을 숙주로 사용할 수 있는데, 예를 들어 US5959177, US 6040498, US6420548, US 7125978 및 US6417429; 또한 척추동물 세포를 숙주로 사용할 수 있으며, 예를 들어 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주이다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예시로는 SV40 형질전환된 원숭이 신장 CVl 세포주(COS-7), 인간 배아 신장 세포주(293 또는 293T 세포), 아기 햄스터 신장 세포(BHK), 마우스 세르톨리(Sertoli) 세포(TM4 세포), 원숭이 신장 세포(CV1), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76), 인간 자궁경부암 세포(HELA), 견 신장 세포(MDCK), 버팔로 래트(buffalo rat) 간 세포(BRL3A), 인간 폐세포(W138), 인간 간세포(Hep G2), 마우스 유방 종양(MMT 060562), TRI 세포, MRC 5 세포 및 FS4 세포 등이 있다. 다른 적합한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포를 포함한 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주에 대한 검토는 예를 들어 Yazaki, P. 및 Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C.(편집), Humana Press, Totowa, NJ(2004), 제255-268페이지를 참조한다.

측정

본원에 제공된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 당업계에서 알려진 다양한 측정 방법을 통해 이의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 감정, 스크리닝 또는 특징화할 수 있다. 일 측면에서, 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질 활성은 예를 들어, ELISA, 단백질 블롯팅 등과 같은 알려진 방법을 통해 시험된다.

치료 방법 및 투여 경로

본원에 제공된 임의의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 치료 방법에 사용될 수 있다. 또 다른 측면에서, 본 개시는 약물의 제조 또는 준비에 있어서, 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 B 세포 장애 또는 자가면역 질환은 IL23과 관련된 질환 또는 병증이다. 일부 실시양태에서, 상기 자가면역 질환은 전신성 홍반루푸스, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 인슐린 의존성 당뇨병, 크론병, 류마티스 관절염, 다관절성 청소년 류마티스 관절염 및 건선성 관절염으로부터 선택되고; 상기 B 세포 장애는 종양, 만성 백혈구 백혈병, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 이식 후 림프조직 증식성 질환 및 경쇄 감마병증으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 자가면역 질환은 전신성 홍반루푸스이다. 이와 같은 일 실시양태에서, 상기 용도는 피험자에게 유효량의 적어도 한 가지의 별도의 치료제(예를 들어, 한 가지, 두 가지, 세 가지, 네 가지, 다섯 가지 또는 여섯 가지의 별도의 치료제)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 앞서 임의의 실시양태에 따른 "피험자"는 인간일 수 있다.

또 다른 측면에서, 상기 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 포함하는 약학 조성물이 제공되며, 이는 예를 들어 앞서 임의의 제약 용도 또는 치료 방법에 사용된다. 일 실시양태에서, 약학 조성물은 본원에 제공된 임의의 폴리펩티드 또는 융합 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 다른 일 실시양태에서, 약학 조성물은 또한 적어도 하나의 별도의 치료제를 포함한다.

본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 단독으로 사용하거나 다른 시약과 함께 치료에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 적어도 하나의 별도의 치료제와 공동으로 투여될 수 있다.

본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질(및 임의의 별도의 치료제)은 비경구, 폐내 및 비강내 투여을 포함한 임의의 적합한 수단으로 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요하는 경우 병변 내에 투여하면 된다. 비경구 주사는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복막 내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 임의의 적절한 경로, 예를 들어 정맥 내 또는 피하 주사와 같은 주사(이 부분은 투여가 단기적인지 장기적인지에 따라 결정)를 통해 투여될 수 있다. 본원에서는 다양한 투약 시점 방안이 고려되는데, 한 번 또는 여러 시점에서 여러 번 투여, 푸시 주사 투여 및 펄스 주사를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 양호한 의료 실천에 부합되는 방식으로 배합, 투약 및 투여된다. 이러한 배경에서 고려되는 요소는 치료받는 구체적인 병증, 치료받는 구체적인 포유동물, 개인 환자의 임상적 상황, 병증의 기인, 시약의 전달 부위, 투여 방법, 투여 시간 배치 및 의학 종사자가 알려진 기타 요소를 포함한다. 폴리펩티드 또는 융합 단백질은 상기 병증을 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되고 있는 하나 이상의 시약과 함께 배합될 수도 있고 배합되지 않을 수도 있다. 이와 같은 다른 시약의 유효량은 약학 조성물에 존재하는 양, 병증 또는 치료 유형 및 기타 요소에 따라 결정된다. 이들은 통상적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로 사용되거나, 또는 다른 투여량으로 사용되고, 경험/임상에 의해 적절하다고 판단되는 임의의 경로를 통해 사용된다.

질환을 예방하거나 치료하기 위해, 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 별도의 치료제와 조합하여 사용되는 경우)의 적절한 투여량은 치료할 질환의 유형, 치료 분자의 유형, 질환의 심각도 및 병정, 예방이나 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 환자의 임상 병력 및 치료 분자에 대한 반응, 및 주치 의사의 판단에 따라 결정될 것이다. 치료 분자는 한 번의 치료 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다.

제품

본 개시의 다른 일 측면에서, 위에 기재된 병증을 치료, 예방 및/또는 진단하기 위한 재료를 포함하는 제품이 제공된다. 해당 제품은 용기와 용기에 있거나 용기와 함께 있는 라벨 또는 포장 삽입 페이지를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기 및 IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기에는 단독으로 또는 다른 조성물과 조합하여 질환을 효과적으로 치료, 예방 및/또는 진단하는 조성물이 담겨 있고, 무균 접근 개구가 있을 수 있다(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥 내 용액 백 또는 튜브형 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질이다. 라벨 또는 패키지 삽입 페이지는 선택한 병세를 치료하기 위해 해당 조성물을 사용하라는 점을 지시한다. 또한, 제품은 (a) 본 개시의 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질을 포함하는 조성물이 담긴 제1 용기, 및 (b) 별도의 세포 독성제 또는 다른 측면의 치료제를 포함하는 조성물이 담긴 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 개시의 해당 실시양태의 제품은, 상기 조성물이 특정 병세를 치료하는 데 사용될 수 있다는 점을 지시하는 패키지 삽입 페이지를 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제품은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 기타 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯한 상업적 및 사용자 관점에서 볼 때 필요한 기타 재료를 추가로 포함할 수 있다.

실시예와 시험예

아래는 실시예와 시험예를 결부하여 본 개시를 추가로 설명할 것이나, 이러한 실시예와 시험예는 본 개시의 범위를 제한하는 것이 아니다. 본 개시의 실시예와 시험예에서 구체적인 조건이 명시되지 않은 실험 방법은 통상적으로, 콜드 스프링 하버(Cold Spring Harbor)의 항체 기술 실험 매뉴얼, 분자 클론 매뉴얼과 같은 일반적인 조건에 따르거나 원료 또는 제품의 제조업체에서 권장하는 조건에 따른다. 구체적 출처를 밝히지 않은 시약은 시판되는 일반적인 시약이다.

실시예 1: 마우스 항-인간 IL-23 p19 단클론 항체의 제조

인간 IL-23 단백질(Sino Biological, CT048-H08H)을 사용하여 SJL 마우스를 면역시켰다. 3번 면역 후, 혈액을 채취하여 혈청 내 항체의 역가를 측정하고, 혈청 내 항체 역가가 높고 역가가 정체되는 경향을 보이는 마우스를 선택하여 비장 세포를 융합시키고, 융합된 하이브리드도마 세포를 96웰 세포 배양 플레이트에 도말하고, 37℃, 5%의 CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 배양 상청액을 취하여 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA)을 통해 검출되었다. 스크리닝된 양성 클론을 증폭시켜 냉동 보존하고, 단세포 클론을 획득할 때까지 두 번 내지 세 번 서브 클로닝하였다. 선택된 하이브리드도마 클론은 무혈청 세포 배양법으로 항체를 추가로 제고하고 정제하였다. 얻어진 하이브리드도마 항체는 ELISA로 항체와 인간 IL-23 단백질의 결합 및 수용체에 대한 차단 상황(방법은 본 개시의 시험예 1 및 시험예 2 참조)을 검출하고 결합 활성과 차단 활성이 양호한 하이브리드도마 세포주를 선별하였다.

단클론 항체의 서열을 클론하기 위해 단클론 하이브리드도마 세포주 mAb29 및 mAb38을 선택하였다. 과정은, 로그 성장기 하이브리드도마 세포를 수집하여 Trizol(Invitrogen, Cat# 15596-018)로 RNA를 추출하여 cDNA로 역전사시켰다. cDNA를 탬플릿으로 하여 PCR 증폭시킨 후 시퀀싱 업체에 보내고 시퀀싱을 진행하였고, 얻어진 DNA 서열에 대응되는 항체의 가변 영역의 아미노산 서열은 다음과 같다:

mAb29의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:

QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVFLNMNSLQTEDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTSVTVSS

SEQ ID NO: 1

mAb29의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:

DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGISSMHWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINRVETDDVATYYCQQANKDPYTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO: 2

mAb38의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:

EFQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDHNMNWVKQSNGKSLEWIGVINPNYGTTTYNQKFKGKATLTVDQSSSTAYMQLNILTSEDSAVYYCARRGFAYWGQGTLVTVSA

SEQ ID NO: 3

mAb38의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:

DIVISQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDLTLEISRVKAEDVGVYYCQQIAEYPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO: 4

표 5. 항체 CDR 서열 목록

비고: 표에서 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라 확인됨.

위에 기재된 mAb29 및 mAb38 후보 분자 가변 영역 서열은 각각 PCR을 통해 VH/VK 서열을 증폭시킨 후, 발현 벡터 pHr(신호 펩티드 및 hIgG1/hkappa 불변 영역 유전자(CH1-Fc/CL) 단편 포함)과의 상동성 재조합을 수행하였고, 예시적으로 인간 중쇄 IgG1 불변 영역 서열은 SEQ ID NO: 38에 제시된 바와 같고, 인간 경쇄 κ 불변 영역 서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같으며, 재조합 키메라 항체 전장 발현 플라스미드 VH-CH1-Fc-pHr/VL-CL-pHr을 구축함으로써 이의 키메라 항체 Ch29 및 Ch38을 획득하게 되었다.

실시예 2: 마우스 항-인간 IL-23 단클론 항체의 인간화

IMGT 인간 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역 생식 계열 유전자 데이터베이스를 비교함으로써, 각각 상동성이 높은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 생식 계열 유전자를 탬플릿으로 선택하고, 마우스 유래 항체의 CDR을 상응하는 인간 유래 탬플릿에 그래프팅(Grafted)하여 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서로 가변 영역 서열을 형성한 다음, 가변 영역 서열과 인간 불변 영역 서열을 융합시켜 인간화 항체를 획득하였다.아래에서는 mAb29 및 mAb38 마우스 유래 항체의 인간화를 예시적으로 설명하며, 예시에서 항체의 CDR 아미노산 잔기는 Kabat 넘버링 시스템에 의해 확인하고 주석하였다.

1. 마우스 유래 항체 mAb29의 인간화

상동성이 높은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 생식 계열 유전자를 탬플릿으로 선택하였다. 마우스 유래 항체 mAb29의 인간화 경쇄 탬플릿은 IGKV4-1*01 및 IGKJ4*01, 즉 인간 생식 계열 경쇄 IGKV4-1*01의 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ4*01의 JK4 영역(FR4로서)을 인간화 항체의 경쇄 프레임 영역으로 선택하고; 인간화 중쇄 탬플릿은 IGHV2-26*01 및 IGHJ6*01, 즉 인간 생식 계열 중쇄 IGHV2-26*01의 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ6*01의 JH6 영역(FR4로서)을 인간화 항체의 경쇄 프레임 영역으로 선택하였다. 먼저, 마우스 유래 항체 mAb29의 CDR을 선택된 상응하는 인간 유래 탬플릿에 각각 이식하여 인간 유래 탬플릿의 CDR 영역을 대체하고; 그 다음, 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 4, 17, 36, 58, 60 및/또는 68번째(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨) 아미노산 잔기를 돌연변이시키고, 중쇄 가변 영역의 1, 30, 37, 44, 49, 73, 89 및/또는 93번째(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨) 아미노산 잔기를 돌연변이시키며, 또한, 중쇄 가변 영역의 HCDR1: SYAIS(SEQ ID NO: 5)의 1번째 아미노산 잔기를 N 또는 Q로 돌연변이시켜 새로운 HCDR1: NYAIS(SEQ ID NO: 27) 또는 QYAIS(SEQ ID NO: 28)을 획득하고, mAb29의 인간화 항체 가변 영역 서열은 다음과 같다:

> hAb29VH1의 아미노산 서열(Graft+Q1E, A49G, A93V)

EVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSSYAISWIRQPPGKALEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 17

> hAb29VH2의 아미노산 서열(Graft+Q1E, S30T, A49G, T73N, A93V)

EVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTSYAISWIRQPPGKALEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 18

> hAb29VH3의 아미노산 서열(Graft+Q1E, S30T, I37V, A49G, T73N, T89R, A93V)

EVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTSYAISWVRQPPGKALEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 19

> hAb29VH4의 아미노산 서열(Graft+S30T, I37V, A44G, A49G, T73N, T89R, A93V)

QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTSYAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 20

> hAb29VH5의 아미노산 서열(Graft+S30T, I37V, A44G, A49G, T73N, T89R, A93V+S31N):

QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLT N YAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 21

> hAb29VH6의 아미노산 서열(Graft+S30T, I37V, A44G, A49G, T73N, T89R, A93V+S31Q):

QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLT Q YAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 22

> hAb29VL1의 아미노산 서열(Graft+Y36F, G68R)

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGISSMHWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQANKDPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO: 23

> hAb29VL2의 아미노산 서열(Graft+M4L, Y36F, V58I, G68R)

DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGISSMHWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQANKDPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO: 24

> hAb29VL3의 아미노산 서열(Graft+M4L, Y36F, V58I, D60A, G68R)

DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGISSMHWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQANKDPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO: 25

> hAb29VL4의 아미노산 서열(Graft+M4L, E17Q, Y36F, V58I, D60A, G68R)

DIVLTQSPDSLAVSLGQRATINCRASESVDYYGISSMHWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQANKDPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO: 26

비고: 서열 순서는 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4이고, 서열에서 밑줄 친 부분은 CDR 영역(CDR 아미노산 잔기는 Kabat 넘버링 시스템에 의해 결정됨)이고 나머지 부분은 FR 영역임.

2. 마우스 유래 항체 mAb38의 인간화

마우스 유래 항체 mAb38의 인간화 경쇄 탬플릿은 IGKV2-40*01 및 IGKJ2*01, 즉 인간 생식 계열 경쇄 IGKV2-40*01의 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ2*01의 JK2 영역(FR4로서)을 인간화 항체 경쇄 프레임 영역으로 선택하고; 인간화 중쇄 탬플릿은 IGHV1-3*01 및 IGHJ1*01, 즉 인간 생식 계열 중쇄 IGHV1-3*01의 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ1*01의 JH1 영역(FR4로서)을 인간화 항체의 중쇄 프레임 영역으로 선택하였다. 먼저, 마우스 유래 항체 mAb38의 CDR을 선택된 상응하는 인간 유래 탬플릿에 각각 이식하여 인간 유래 탬플릿의 CDR 영역을 대체하고, 그 다음, 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 4, 36, 39, 71 및 100번째(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨) 아미노산 잔기를 돌연변이시키고, 중쇄 가변 영역의 1, 2, 28, 44, 71 및/또는 73번째(Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨) 아미노산 잔기를 돌연변이시키며, 또한, 경쇄 가변 영역의 LCDR2: LMSTRAS(SEQ ID NO: 15)의 3번째 아미노산 잔기를 Q로 돌연변이시켜 새로운 LCDR2: LMQTRAS(SEQ ID NO: 37)를 획득하고, mAb38의 인간화 항체 가변 영역의 서열은 다음과 같다:

> hAb38VH1의 아미노산 서열(Graft+Q1E, V2F, R71V)

EFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHNMNWVRQAPGQRLEWMGVINPNYGTTTYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 29

> hAb38VH2의 아미노산 서열(Graft+Q1E, T28S, R71V)

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDHNMNWVRQAPGQRLEWMGVINPNYGTTTYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 30

> hAb38VH3의 아미노산 서열(Graft+Q1E, V2F, T28S, R71V, T73Q)

EFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDHNMNWVRQAPGQRLEWMGVINPNYGTTTYNQKFKGRVTITVDQSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 31

> hAb38VH4의 아미노산 서열(Graft+Q1E, V2F, T28S, R44S, R71V, T73Q)

EFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDHNMNWVRQAPGQSLEWMGVINPNYGTTTYNQKFKGRVTITVDQSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 32

> hAb38VL1의 아미노산 서열(Graft+Q100S)

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQIAEYPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO: 33

> hAb38VL2의 아미노산 서열(Graft+Y36F, F71L, Q100S)

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDLTLKISRVEAEDVGVYYCQQIAEYPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO: 34

> hAb38VL3의 아미노산 서열(Graft+M4I, Y36F, K39R, F71L, Q100S)

DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDLTLKISRVEAEDVGVYYCQQIAEYPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO: 35

> hAb38VL4의 아미노산 서열(Graft+Y36F, F71L, Q100S+S52Q)

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLM Q TRASGVPDRFSGSGSGTDLTLKISRVEAEDVGVYYCQQIAEYPFTFGSGTKLEIK

SEQ ID NO: 36

3. 인간화 항체의 제조

항체의 경쇄 및 중쇄에 대한 발현 벡터를 각각 구축하고, 인간화 항체의 경쇄/중쇄를 각각 교차 매칭하여 조합한 후, 293E 세포를 형질감염시킨 후 배양 상청액을 수집하고 정제하여 바로 인간화된 전장 항체를 얻었다. 인간화 항체 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택될 수 있으며, 예시적으로 인간 중쇄 IgG1 불변 영역을 사용하고, 인간화 항체 경쇄 불변 영역은 인간화 κ, λ 사슬 불변 영역으로부터 선택될 수 있으며, 예시적인 항체의 불변 영역 서열은 다음과 같다:

인간 IgG1 중쇄 불변 영역(L234A, L235A 돌연변이 포함)의 아미노산 서열

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 38

인간 경쇄 κ 불변 영역의 아미노산 서열:

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 39

예시적으로, 전술한 mAb29의 인간화 항체 중쇄 가변 영역을 인간 중쇄 IgG1 불변 영역(서열은 SEQ ID NO: 38에 제시된 바와 같음)과 융합시켜 항체의 전장 중쇄를 형성하고, 인간화 항체 경쇄 가변 영역을 인간 경쇄 κ 불변 영역(서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같음)을 융합시켜 항체의 전장 경쇄를 형성하여, 아래 표 6에 나타난 바와 같은 mAb29 인간화 항체를 얻었다:

표 6. mAb29 인간화 항체

또한, 전술한 mAb38로부터 유래된 인간화 항체 중쇄 가변 영역을 인간 중쇄 IgG1 불변 영역(서열은 SEQ ID NO: 38에 제시된 바와 같음)과 융합시켜 항체의 전장 중쇄를 형성하고, 인간화 항체 경쇄 가변 영역을 인간 경쇄 κ 불변 영역(서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같음)과 융합시켜 항체의 전장 경쇄를 형성하여, 아래 표 7에 나타난 바와 같은 mAb38 인간화 항체를 얻었다:

표 7. mAb38 인간화 항체

예시적으로, 인간화 항체 경쇄/중쇄 전장 서열은 아래 표 8에 나타난 바와 같다:

표 8. 인간화 항체의 경쇄/중쇄 서열

실시예 3: 항-IL23 항체 융합 단백질의 구축

전술한 항-IL23 항체와 TACI 폴리펩티드를 융합시켜 항-IL23 항체 융합 단백질을 구축한다. 예시적으로, 항-IL23 항체는 Hu29-19 또는 Hu29-24이다. TACI 폴리펩티드는 임의의 적합한 TACI 폴리펩티드일 수 있으며, 예시적으로, TACI 폴리펩티드는 중국 특허 출원 202110348497.6(발명 명칭: 새로운 TACI 폴리펩티드, 이의 융합 단백질 및 용도, 출원일: 2021년 3월 31일) 및 이를 우선권 문서로 하는 특허 출원(본원에 전체 내용이 참조로 통합됨)에 기재된 아래 표 9에 나타난 TACI 폴리펩티드와 같은 TACI 폴리펩티드로부터 유래된 것이다:

표 9. TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열

예시적으로, 2개의 TACI 폴리펩티드(예를 들어, TACI-9-15c)를 각각 항-IL23 항체(예를 들어, Hu29-19 또는 Hu29-24) 중쇄의 N 단 및 C 단에 융합시키고, 항체 중쇄의 C 단이 융합된 TACI 폴리펩티드의 C 단에 TACI 폴리펩티드가 카르복시펩티다아제에 의해 절단되는 것을 방지하기 위해 보호 아미노산으로 SS를 첨가하였으며, 구축하여 획득한 항-IL23 항체 융합 단백질(Hu29-19T 및 Hu29-24T)의 구조적 개략도는 도 1을 참조하며, 중쇄와 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같다:

> Hu29-19T 중쇄의 아미노산 서열(SEQ ID NO: 46)

STSCREEQGEFYDHLLRDCISCASICGQHPKQCAAFCE GGGGSGGGGSGGGGSQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTNYAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGS STSCREEQGEFYDHLLRDCISCASICGQHPKQCAAFCESS

> Hu29-19T 경쇄(Hu29-19 경쇄와 동일함, SEQ ID NO: 41)

> Hu29-24T 중쇄의 아미노산 서열(SEQ ID NO: 47)

STSCREEQGEFYDHLLRDCISCASICGQHPKQCAAFCE GGGGSGGGGSGGGGSQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTQYAISWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSGIKSRLTISKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTARYYCVREGDYGSYAGAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGS STSCREEQGEFYDHLLRDCISCASICGQHPKQCAAFCESS

> Hu29-24T 경쇄(Hu29-24경쇄와 동일함, SEQ ID NO: 43)

비고: 서열에서 단일 밑줄을 친 부분은 TACI 서열이고, 이중 밑줄을 친 부분은 항체 가변 영역이며, 기울임꼴은 항체 불변 영역이고, 굵음꼴은 링커임.

본 개시에서 대조 분자 Risankizumab(WHO Drug Information Vol. 30, No. 1, 2016 참조)의 서열은 다음과 같다:

> Risankizumab 중쇄의 아미노산 서열(SEQ ID NO: 48)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDQTIHWMRQAPGQGLEWIGYIYPRDDSPKYNENFKGKVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAIPDRSGYAWFIYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

> Risankizumab 경쇄의 아미노산 서열(SEQ ID NO: 49)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASRDVAIAVAWYQQKPGKVPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQPEDVADYFCHQYSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

대조 분자 RCT-18(telitacicept, RC18, 룽창생물(Rongchang Biotechnology), WHO(서열 번호 10932))의 서열은 다음과 같다.

> RCT-18의 아미노산 서열(SEQ ID NO: 50)

SRVDQEERFPQGLWTGVAMRSCPEEQYWDPLLGTCMSCKTICNHQSQRTCAAFCRSLSCRKEQGKFYDHLLRDCISCASICGQHPKQCAYFCENKLRSPVNLPPELDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

비고: 서열에서 밑줄 친 부분은 TACI 단편이고 나머지 부분은 Fc임.

시험예

시험예 1: Elisa 결합 실험

IL-23 p19 및 BAFF에 대한 검출 대상 분자의 결합 활성은 Elisa법(검출 대상 분자 코팅)을 통해 검출되었다. 구체적인 방법은 다음과 같다:

검출 대상 샘플을 pH 7.4 PBS(Yuanpei Biotechnology, B320) 완충액으로 2μg/mL로 희석한 후, 96웰 엘리사 플레이트(Corning, 3590)에 100μL/웰의 부피로 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 액체를 버린 후, PBS로 희석한 5% 탈지우유(BD, 232100) 300μL를 각 웰에 첨가하여 블로킹시키고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 블로킹 완료 후 블로킹 용액을 버리고 PBST 완충액(0.1% tween-20을 함유한 pH 7.4 PBS)으로 플레이트를 3회 세척한 다음, 구배 희석한 IL-23(Sino Biological, CT048-H08H) 또는 BAFF(ACROBiosystems, BAF-H52D4) 용액 100μL를 각 웰에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 완료 후, 플레이트를 PBST로 3회 세척하였다. IL-23 및 BAFF에 대한 결합을 검출할 때, 각 웰에 100μL의 Anti-His-HRP(Sino Biological, 105327-MM02T-H, 1:2000 희석)를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척한 후, 각 웰에 TMB 발색 기질(KPL, 5120-0077) 100μL를 첨가하고, 실온에서 10~15분 동안 인큐베이션하고, 각 웰에 1M의 H₂SO₄를 50μL 첨가하여 반응을 종료시키고, 마이크로플레이트 리더로 450nm에서의 흡수값을 읽고, 소프트웨어를 이용하여 항체와 항원의 결합 곡선을 피팅하고 EC₅₀ 값을 계산하였다.

인간 IL-23에 대한 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질의 결합 실험 결과는 아래 표 10을 참조한다:

표 10. IL-23 단백질에 대한 결합 실험 결과

실험 결과는 본 개시의 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질은 인간 IL-23 단백질에 특이적으로 결합할 수 있으며, 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질은 또한 인간 BAFF 단백질에 특이적으로 결합할 수 있고, 대조 RCT-18보다 더 강한 결합 활성을 나타낸다는 것을 보여준다.

시험예 2: 리간드 및 수용체의 차단 실험

IL-23/IL-23R, BAFF/BAFF-R, BAFF/BCMA, BAFF/TACI, APRIL/BCMA, APRIL/TACI 등의 수용체 및 리간드에 대한 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질의 차단 활성은 Elisa법을 통해 검출되었다. 구체적인 방법은 다음과 같다:

수용체 단백질을 pH 7.4 PBS(Yuanpei Biotechnology, B320) 완충액으로 2μg/mL로 희석한 후, 96웰 엘리사 플레이트(Corning, 3590)에 100μL/웰의 부피로 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 액체를 버린 후 각 웰에 1% Casein 블로킹 용액(Thermo, 37528) 200μL를 첨가하여 블로킹시키고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 블로킹 완료 후, 블로킹 용액을 버리고 PBST 완충액(0.1% tween-20을 함유한 pH 7.4 PBS)으로 플레이트를 3회 세척하여 나중에 사용하기 위해 보관하였다. 고정 농도의 비오틴(Biotin)으로 표지된 리간드 단백질을 구배 희석된 항체 또는 융합 단백질과 혼합하여, 37℃에서 30분 동안 사전 인큐베이션한 후 블로킹된 엘리사 플레이트에 첨가하고 37℃에서 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 완료 후, 플레이트를 PBST로 3회 세척하고, 각 웰에 스트렙타비딘-HRP(Invitrogen, 434323, 1:4000 희석) 100μL를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상청액을 제거하고, 플레이트를 PBST로 3회 세척한 후, 각 웰에 100μL의 TMB 발색 기질(KPL, 5120-0077)을 첨가하여 실온에서 10~15분 동안 인큐베이션하고, 각 웰에 1M H₂SO₄를 50μL 첨가하여 반응을 종료시키고, 마이크로플레이트 리더로 450nm에서의 흡수값을 읽고, 소프트웨어를 이용하여 리간드와 수용체의 결합을 억제하는 곡선을 피팅하고 IC₅₀ 값을 계산하였다. 본 시험예에 사용된 리간드 단백질의 출처 정보는 다음과 같다: IL-23(Sino Biological, CT048-H08H), BAFF(Sino Biological, 10056-HNCH), APRIL(R&D Systems, 5860-AP-010/CF). 사용된 수용체 단백질의 출처 정보는 다음과 같다: IL-23R(Sino Biological, 13840-H02H), BAFF-R(Sino Biological, 16079-H02H), BCMA(Sino Biological, 10620-H02H), TACI(ACROBiosystems, TAI-H5256).

IL-23/IL-23R에 대한 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질의 차단 실험 결과는 아래 표 11을 참조한다:

표 11. IL-23/IL-23R에 대한 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질의 차단 실험 결과

항-IL23 항체 융합 단백질이 BAFF 단백질과 이의 수용체의 결합을 차단하는 실험 결과는 아래 표 12를 참조한다:

표 12. BAFF 단백질에 대한 항-IL23 항체 융합 단백질의 차단 실험 결과

항-IL23 항체 융합 단백질이 APRIL 단백질과 이의 수용체의 결합을 차단하는 실험 결과는 아래 표 13을 참조한다:

표 13. APRIL 단백질에 대한 항-IL23 항체 융합 단백질의 차단 실험 결과

IL-23/IL-23R에 대한 다른 항-IL23 항체의 차단 실험 결과는 아래 표 14를 참조한다:

표 14. IL-23/IL-23R에 대한 항-IL23 항체의 차단 실험 결과

실험 결과는 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 또는 항-IL23 항체 융합 단백질은 IL-23/IL-23R의 결합을 효과적으로 차단할 수 있으며, 항-IL23 항체 융합 단백질이 BAFF와 이의 수용체 또는 APRIL과 이의 수용체를 차단하는 활성은 대조 RCT-18에 비해 유의하게 강하다는 것을 보여준다.

시험예 3: BaF3-IL-23R 세포 증식 실험

항체와 융합 단백질의 체외 활성은 BaF3-IL-23R 세포 증식 실험을 통해 검출되었다. 실험 방법은 다음과 같다:

IL-23R 및 IL-12Rβ1을 안정적으로 발현하는 BaF3 세포(Cobioer, CBP60474)를 96웰 세포 플레이트(Corning, 3903)에 웰당 50μL의 부피, 4000개 세포로 도말하였다. 구배 희석된 검출 대상 샘플을 고정 농도의 IL-23 단백질(Sino Biological, CT048-H08H)과 혼합하여 세포 배양 플레이트에 첨가하고, 37℃의 인큐베이터에서 72시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 세포 배양 플레이트를 꺼내어 각 웰에 50μL의 Celltiter Glo 검출 용액(Promega, G755B)을 첨가하고, 진탕기에 10분 동안 놓아둔 후 꺼내어 실온에서 10분 동안 방치한 다음, 마이크로플레이트 리더(PerkinElmer, Victor3)로 생물 발광 신호를 검출하였다. 데이터는 소프트웨어를 이용하여 억제 곡선을 피팅하고 IC₅₀ 값을 계산하였다.

항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질이 BaF3-IL-23R 세포의 증식을 억제하는 실험 결과는 아래 표 15를 참조한다:

표 15. 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질이 BaF3-IL-23R 세포의 증식을 억제하는 실험 결과

다른 항-IL23 항체가 BaF3-IL-23R 세포의 증식을 억제하는 실험 결과는 아래 표 16을 참조한다:

표 16. 항-IL23 항체가 BaF3-IL-23R 세포의 증식을 억제하는 실험 결과

실험 결과는 본 개시의 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질은 모두 BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하는 강한 활성을 갖는다고 보여준다.

시험예 4: IL-17 분비 실험

항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질이 IL-23에 의해 유발된 T 세포 분화를 억제하는 상황은 IL-17 분비 실험을 통해 검출되었다. 실험 방법은 다음과 같다:

96웰 플레이트(Corning, 3599)의 각 웰에 2μg/mL의 항-마우스 CD3 항체(BioLegend, 100238) 및 2μg/mL의 항-마우스 CD28 항체(BioLegend, 102116) 100μL를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, PBS로 2회 세척하고 나중에 사용하기 위해 보관하였다. 마우스 비장을 취하여 연마한 후 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 하층의 세포를 수집하고, 세척 용액(PBS+2% FBS+2mM EDTA)으로 한 번 세척하고 원심분리하여 상청액을 제거한 다음, RBC Lysis Buffer(Invitrogen, 00-4333-57)을 첨가하고, 적혈구가 완전히 분해될 때까지 실온에서 5분 동안 방치하였다. 세포를 다시 원심분리하고 재현탁하여 계수하였다. 세포 현탁액은 Mouse CD4 Cells Kit(Invitrogen, 11415D)로 선별하고, 분리된 CD4+ T 세포를 배지 RPMI 1640 Medium(Gibco, 11875119)+ 10% FBS(Gibco, 10099-141)로 재현탁시키고 계수하여 나중에 사용하기 위해 보관하였다. 세포 현탁액을 잘 코팅된 96웰 플레이트에 도말하고, 고정 농도의 IL-23(R&D Systems, 1290-IL-010)을 구배 희석된 항체 또는 융합 단백질과 혼합하여 1시간 동안 미리 인큐베이션한 후, 96웰 플레이트에 첨가하고, 37℃의 세포 인큐베이터에서 48시간 동안 배양하였다. 96웰 플레이트를 꺼내서 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하여 상청액을 수집하고 Mouse IL-17 DuoSet ELISA Kit(R&D Systems, DY421)로 상청액 중 IL-17 함량을 검출하였다. 실험 결과는 아래 표 17을 참조한다:

표 17. IL-17 분비를 억제하는 실험 결과

실험 결과는 본 개시의 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질은 모두 IL-17 분비를 억제하는 강한 활성을 갖는다고 보여준다.

시험예 5: B 세포의 증식 실험

항-IL23 항체 융합 단백질이 BAFF 및 APRIL에 의해 유도된 B 세포 증식을 억제할 수 있는지 여부는 B 세포 증식 실험을 통해 검출되었다. 실험 방법은 다음과 같다:

마우스 비장을 취하여 연마한 후 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 하층의 세포를 수집하고, 세척 용액(PBS+2% FBS+2mM EDTA)으로 한 번 세척하고 원심분리하여 상청액을 제거한 다음, RBC Lysis Buffer(Invitrogen, 00-4333-57)을 첨가하고, 적혈구가 완전히 분해될 때까지 실온에서 5분 동안 방치하였다. 세포를 다시 원심분리하고 재현탁하여 계수하였다. 세포 현탁액을 B Cell Isolation Kit(Miltenyi Biotec, 130-090-862)로 선별하고, 분리된 B 세포를 RPMI 1640 Medium(Gibco, 11875119)+ 10% FBS(Gibco, 10099-141)+ 50μM 2-mercaptoethanol(Sigma-Aldrich, M6250)로 재현탁하여 계수하고, 세포를 96웰 세포 플레이트(Costar, 3903)에 도말하여 나중에 사용하기 위해 보관하였다. BAFF(R&D Systems, 7537-BF) 또는 APRIL(R&D Systems, 5860-AP) 단백질을 고정 농도까지 희석하고, 구배 희석된 항체 또는 융합 단백질을 첨가하고 골고루 혼합하여, 37℃에서 30분 동안 사전 인큐베이션한 다음 96웰 세포 플레이트에 첨가하고 37℃ 세포 인큐베이터에서 48시간 동안 배양하였다. 세포 배양 플레이트를 꺼내어 각 웰에 50μL의 Celltiter Glo 검출 용액(Promega, G7573)을 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고 마이크로플레이트 리더로 생물 발광 신호를 검출하여, 검출 결과는 소프트웨어를 이용하여 억제 곡선을 피팅하고 IC50 값을 계산하였다. 실험 결과는 아래 표 18을 참조한다:

표 18. B 세포 증식을 억제하는 실험 결과

실험 결과는 본 개시의 항-IL23 항체 융합 단백질이 BAFF 및 APRIL에 대한 억제 활성은 대조 RCT-18에 비해 유의하게 강하다는 것을 보여준다.

시험예 6: 친화력 시험

일정량의 검출 대상 샘플을 바이오 센서 칩 Protein A(GE, 29127556)로 친화력에 의해 포획한 후, 칩 표면에 일련의 구배 농도 항원을 통과시키고, Biacore(GE, 8K)를 이용하여 반응 신호를 실시간으로 검출함으로써 결합 및 해리 곡선을 획득하였다. 각 해리 주기가 완료된 후, 10mM 글리신-염산 용액 pH 1.5(GE, BR-1003-54)로 바이오칩을 세척하고 재생시켰다. 실험 데이터는 BIAevaluation version 4.1 소프트웨어를 이용하여 1:1 모델로 피팅함으로써 친화력 값을 얻게 되었다. 본 시험에 사용된 관련 항원 단백질은 다음과 같다: 인간 IL-23(Sino biogical, CT048-H08H), 인간 BAFF(Sinobiotic, 10056-HNCH), 인간 APRIL(R&D Systems, 5860-AP-010/CF), 시노몰구스 원숭이 IL-23(Acro Biosystems, ILB-CM52W8), 시노몰구스 원숭이 BAFF(Kactus, BAF-CM412), 시노몰구스 원숭이 APRIL(Kactus, APR-CM410B), 마우스 IL-23(R&D Systems, 1887-ML /CF), 마우스 BAFF(Acro Biosystems, BAF-M521y), 마우스 APRIL(R&D Systems, 7907-AP/CF). 친화력 시험 결과는 아래 표 19 내지 표 25를 참조한다:

표 19. 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질이 인간 IL-23 p19에 결합하는 친화력 실험 결과

표 20. 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질이 시노몰구스 원숭이 또는 마우스 IL-23 p19에 결합하는 친화력 실험 결과

표 21. 항-IL23 항체 융합 단백질이 인간 BAFF에 결합하는 친화력 실험 결과

표 22. 항-IL23 항체 융합 단백질이 시노몰구스 원숭이 또는 마우스 BAFF에 결합하는 친화력 실험 결과

표 23. 항-IL23 항체 융합 단백질이 인간 APRIL에 결합하는 친화력 실험 결과

표 24. 항-IL23 항체 융합 단백질이 시노몰구스 원숭이 또는 마우스 APRIL에 결합하는 친화력 실험 결과

표 25. 항-IL23 항체가 인간 IL-23 p19에 결합하는 친화력 실험 결과

실험 결과는 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 및 이의 융합 단백질은 높은 친화력으로 인간 IL-23 p19 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 결합할 수 있지만, 마우스 IL-23 p19에는 결합하지 않으며; 또한, 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 융합 단백질은 높은 친화력으로 인간 BAFF, 시노몰구스 원숭이 BAFF, 마우스 BAFF, 인간 APRIL, 시노몰구스 원숭이 APRIL 및 마우스 APRIL에 결합할 수 있다는 것을 보여준다.

시험예 7: 이미퀴모드에 의해 유발된 건선이 있는 동물 모델 실험

항-IL23 항체의 체내 약효는 이미퀴모드 크림(IMQ)에 의해 유발된 건선이 있는 동물 모델 실험을 통해 평가되었 다.

8~9주령의 SPF 등급 암컷 C57BL/6 hIL-23A/hIL12B 형질전환 마우스(바이오사이토젠 지앙수 유전자 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드(Biocytogen Jiangsu Gene Biotechnology Co., Ltd.))를 각 그룹에 5마리씩 무작위로 그룹을 나누었다. 실험을 시작하기 전에 마우스의 등 부분의 털을 제거하였다. 0일째부터 5일째까지 모의 수술 그룹에서는 마우스의 등 뒷부분 피부에 80mg의 바셀린(유니레버)을 골고루 바르고; 동물 모델 그룹에서는 마우스의 등 뒷부분 피부에 80mg의 이미퀴모드 크림(Beimesen)을 6일 동안 지속적으로 골고루 발랐다. 각각 0일째와 3일째에 이미퀴모드 크림을 바르기 1시간 전에 검출 대상 샘플(Risankizumab, Hu29-19, Hu29-24, Hu38-4는 모두 20mpk 용량으로 투약)을 복강 내로 주사하였다. Risankizumab을 양성 대조로, PBS를 음성 대조로 하였으며, 총 2회 투약하였다. 마우스 등 부분의 피부 홍반 및 낙설 정도를 매일 점수로 매기고, 6일째에 실험을 종료하였다.

홍반의 심각도에 대한 점수 기준은 다음과 같다: 홍반이 없음 0점; 약간 붉음 1점; 붉어졌으나 진하지 않음 2점; 짙은 붉은색 3점; 매우 붉음 4점. 낙설에 대한 점수 기준은 다음과 같다: 낙설가 없음 0점; 작은 면적의 미세한 각질 1점; 적당한 면적의 두꺼운 각질 2점; 넓은 면적의 거칠고 두꺼운 각질 3점; 넓은 면적의 큰 각질 4점.

실험 결과는 도 2 내지 도 4를 참조하며, 실험 결과는 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체는 양성 대조인 Risankizumab에 비해, 체내에서의 약효가 더 강하며, 홍반의 심각도와 피부 낙설 심각도 점수는 모두 Risankizumab보다 낮다는 것을 보여준다.

시험예 8: 인간 IL-23에 의해 유발된 건선이 있는 동물의 모델 실험

본 개시에서 구축된 항-IL23 항체의 체내 약효는 인간 IL-23에 의해 유도된 건선이 있는 동물 모델을 통해 평가되었다. 6~8주령의 SPF 등급 암컷 C57BL/6J 마우스(워이퉁 리화 실험 동물 테크놀로지 컴퍼니 리미티드(Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.))를 마취시킨 후, 마우스의 오른쪽 귀의 두께와 무게를 측정하고, 오른쪽 귀의 두께와 무게 데이터에 따라 각 그룹에 6마리씩 그룹을 나누었다. 그룹을 나누는 날을 0일째로 기록하였다. 1일째부터 시작하여 총 7일 동안, 매일 1μg의 인간 IL-23 단백질(R&D Systems, 1290-IL-500/CF)을 마우스의 오른쪽 귀에 피내로 주사하고, 정상 그룹의 마우스에는 PBS를 주사하였다. 0일째와 3일째에 시험 약물을 복강 내 주사하고, 각각 0일째, 2일째, 4일째, 6일째, 8일째에 마우스의 무게과 오른쪽 귀의 두께를 측정하여 기록하였으며, 오른쪽 귀의 두께 변화를 통해 해당 모델에 대한 시험 약물의 완화 효과를 평가하였다. 8일째에 실험을 종료시키고 직경이 8mm인 귀 조각을 수집하여 무게를 측정하였다.

실험 결과는 도 5, 도 6 및 도 7을 참조하며, 실험 결과는 인간 IL-23에 의해 유도된 건선이 있는 동물 모델에서, 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 Hu29-19의 체내 약효가 대조 분자인 Risankizumab에 비해 더 강하다고 보여주는데, 여기서: 모든 용량이 3mpk인 경우에, Hu29-19 그룹의 귀 두께는 대조 Risankizumab에 비해 얇았고; 곡선 아래 면적의 통계에 따르면, 3mpk 용량에서 Hu29-19의 효과가 Risankizumab보다 더 강한 것으로 보여주며; 마우스의 귀 무게의 통계에 따르면, Hu29-19 1mpk 그룹의 귀 무게는 Risankizumab 3mpk 그룹과 동일하였고, Hu29-19 3mpk 그룹의 귀 무게는 Risankizumab 그룹보다 낮은 것으로 보여준다.

시험예 9: 체내 사이토카인 분비를 억제하는 활성 평가

마우스를 인간 IL-23 및 인간 BAFF의 두 가지 단백질로 동시에 자극하여 마우스 체내에서 TNFα, IL-22 및 IgA 등 사이토카인의 생성을 유도하고, 이러한 사이토카인의 수치를 검출함으로써 항체 또는 융합 단백질의 체내 활성을 평가하게 되었다.

8주령의 SPF 등급 암컷 C57BL/6 마우스(저쟝 워이퉁 리화 실험 동물 테크놀로지 컴퍼니 리미티드(Zhejiang Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.))를 각 그룹에 5마리씩 무작위로 그룹을 나누어고, 인간 IL-23(Sino Biological, CT048-H08H)(2μg/마우스)과 인간 BAFF(Sino Biological, 10056-HNCH)(1mg/kg)의 두 가지 단백질을 혼합하여 4일 동안 매일 한 번씩 지속적으로 복강 내 주사하였다. 각각 1일째와 3일째에 단백질을 주사하기 1시간 전에, 검출 대상 샘플(RCT-18(4mpk), Risankizumab(8mpk), Hu29-19T(8.8mpk), Hu29-24T(4.4mpk))을 복강 내 주사하였다. 5일째에는 각 그룹의 마우스에서 혈장 샘플을 수집하여 TNFα, IL-22 및 IgA 수치를 각각 검출하였다. 본 시험예에 사용된 검출 키트의 출처 정보는 다음과 같다: Mouse TNF-alpha Quantikine ELISA Kit(R&D Systems, MTA00B), Mouse/Rat IL-22 Quantikine ELISA Kit(R&D Systems, M2200), Mouse IgA ELISA Kit(Abcam, ab157717). RCT-18과 Risankizumab은 양성 대조로, PBS는 음성 대조로 사용하였다. 4mpk RCT-18, 8mpk Risankizumab 및 8.8mpk Hu29-19T의 약물 몰 농도는 동일하였다.

실험 결과는 표 26, 표 27, 표 28 및 도 8, 도 9, 도 10을 참조하며, 여기서: IgA 검출 결과는 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 융합 단백질은 대조 분자 RCT-18에 비해 유의하게 강한 활성으로 IgA 분비를 억제하는 반면, Risankizumab은 IgA 분비에 대한 억제 활성이 없다는 것을 보여주고; TNFα의 검출 결과는 등가 몰 농도의 용량 하에서, 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 융합 단백질은 Risankizumab에 비해 더 강한 활성으로 TNFα 분비를 억제하는 반면, RCT-18은 유의한 억제 효과가 없다는 것을 보여주며; IL-22의 검출 결과는 등가 몰 농도의 용량 하에서, 본 개시에서 구축된 항-IL23 항체 융합 단백질은 대조 Risankizumab 및 RCT-18에 비해 더 강한 활성으로 IL-22 분비를 억제한다는 것을 보여준다.

표 26. 마우스 혈장 IgA 검출 결과(μg/mL)

표 27. 마우스 혈장 TNFα 검출 결과(pg/mL)

표 28. 마우스 혈장 IL-22 검출 결과(pg/mL)

시험예 10: 전신성 홍반루푸스가 있는 동물 모델에서의 체내 약효

MRL/lpr 마우스는 주령이 증가함에 따라 인간의 전신성 홍반루푸스와 유사한 자가면역 질환의 증상이 자발적으로 발생하였다. 해당 모델을 통해 융합 단백질의 체내 약효를 평가하였다.

암컷 MRL/lpr 마우스는 샹하이 스라이커 실험동물 컴퍼니 리미티드(Shanghai Slack Laboratory Animal Co., Ltd.)로부터 구입하여, 케이지당 5마리씩, 온도 20-25℃, 습도 40-60%의 SPF 등급 환경에서 사육하였다. 실험 전 적어도 1주일 동안, 마우스를 실험실 환경에 적응시켰다. 마우스가 9~10주령에 도달하고, 소변 단백질 및 dsDNA IgG 값이 정상 대조 마우스에 비해 유의하게 높을 때까지 피하 주사로 투약(RCT-18(8mpk), Hu29-19T(17.6mpk), Hu29 -19T(8.8mpk), Hu29-24T(17.6mpk) 및 음성 대조(PBS))을 시작하였고, 여기서 RCT-18 8mpk, Hu29-19T 17.6mpk 및 Hu29-24T 17.6mpk의 몰 농도는 동일하였다. 총 8주 동안 매주 2회(월요일과 목요일에는 각각 1회 투약) 지속적으로 투약하였다. 마우스의 모발과 피부 상태를 정기적으로 관찰하고, 마우스의 피부 손상 정도를 점수로 매기고 소변과 혈장을 수집하여 소변 단백질 함량을 검출하였다. 실험이 종료된 후, 마우스의 신장을 취하고, 고정한 다음, H&E로 염색하여 각 그룹 마우스 신장 조직의 사구체 및 세뇨관 병변과 염증 세포 침윤을 관찰하고 신장 병변의 정도를 점수로 매겼다. 본 시험예에서는, 소변 단백질은 Bradford 단백질 농도 측정을 채택하여 검출되었며, 검출 키트는 베이요타임 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드(Beyotime Biotechnology Co., Ltd.)로부터 구입하였다.

실험 결과는 표 29, 표 30, 표 31 및 도 11, 도 12, 도 13을 참조하며, 실험 결과는 RCT-18은 마우스의 소변 단백질 수치를 감소시키지 않으며, Hu29-19T는 두 개의 용량 모두에서 마우스의 소변 단백질 수치를 유의하게 감소시킬 수 있고, 전체 실험 과정에서 Hu29-19T 그룹의 마우스 소변 단백질 수치는 실험 기간 내내 실험 시작할 때와 동일하거나 더 낮게 유지되며, 증가할 경향이 전혀 없다는 것을 보여준다. Hu29-24T도 마우스의 소변 단백질을 유의하게 감소시킬 수 있다. 마우스 피부 손상의 점수 결과는, Hu29-19T 그룹 마우스의 피부 손상 점수는 지속적으로 가장 낮고, Hu29-24T는 중간 수치로 나타나며, RCT-18은 이 지표로 볼 때 유의한 약효를 못 보인다는 것을 보여준다. 마우스의 신장 병리학 점수 결과는 Hu29-19T의 두 가지 용량으로 투여한 그룹에서는 음성 그룹에 비해 통계적으로 유의한 차이가 있다는 것을 보여준다.

표 29. 마우스 신장 병리학 점수

표 30. 마우스 피부가 손상된 점수 평균값

표 31. 마우스 소변 단백질의 검출 결과(mg/dL)

시험예 11. 래트에서 생체 내 약동학적 실험

체내 약동학적 시험은 SD 래트를 이용하여 수행되었다. 수컷 SD 래트(저쟝 워이퉁 리화 실험동물 테크놀로지 컴퍼니 리미티드(Zhejiang Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.))를 각 그룹에 4마리씩 무작위로 그룹을 나누어고 정맥 주사로 투약하고, 투약 그룹에서는 투약 전과 투약 후 항응고제 없이 5분, 8시간, 24시간, 48시간, 84시간, 9일, 10일, 14일, 21일, 28일에 전혈 0.2mL를 취하고, 채혈한 후 4℃에 30분 동안 방치하고, 1000g에서 15분 동안 원심분리하여, 상층의 혈청을 취하여 EP 튜브에 넣고 -80℃에서 보관하였다. ELISA법을 사용하여 혈청 내 혈중 약물 농도를 검출하고, Winnolin 소프트웨어를 이용하여 시험 약물의 약동학적 파라미터 및 체내 반감기를 계산하였다.

래트의 체내 약동학적 실험 결과는 아래 표 32를 참조하며, 실험 결과는 본 개시의 항체 및 융합 단백질은 비교적 양호한 안정성을 가지고, 체내 반감기가 8일 초과한다는 것을 보여준다.

표 32. 래트의 체내 약동학적 실험 결과

명확한 이해를 돕기 위해, 이미 첨부된 도면과 예시에 의해 상술한 발명을 상세히 설명하였지만, 이러한 설명과 예시는 본 개시의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허와 과학 문헌의 개시 내용은 인용을 통해 완전하고 명확하게 통합되어 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

항-IL23 항체 및 TACI 폴리펩티드를 포함하는 항-IL23 항체 융합 단백질로서, 상기 항-IL23 항체는 인간 IL23 p19 서브유닛에 특이적으로 결합하며;
바람직하게는, 상기 항-IL23 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서,
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 21, 22, 20, 19, 18, 17 또는 1의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 25, 26, 24, 23 또는 2의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32 또는 3의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 36, 35, 34, 33 또는 4의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항에 있어서,
여기서:
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 또는 제2항에 있어서,
여기서:
i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21, 22, 20, 19, 18 또는 17 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25, 26, 24 또는 23 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29, 30, 31 또는 32 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36, 35, 34 또는 33 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iv) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는, i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하며;
바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며;
보다 바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서
i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 41 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 43 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 45 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 TACI 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 58의 48번째 내지 85번째의 아미노산 잔기를 포함하는 폴리펩티드 또는 이의 변이체이고; 상기 변이체는 49, 52, 53, 57, 65, 82 및 83번째 위치로부터 선택되는 하나 이상의 부위에 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위이며;
바람직하게는, 상기 변이체는 49T 또는 49R, 52S, 53E 또는 53Q, 57E, 65T 또는 65A, 82A 또는 82R, 및 83Y로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 가지며, 상기 아미노산 대체의 부위는 서열 SEQ ID NO: 58의 자연 순서에 대해 넘버링된 아미노산 잔기 부위인, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 51 내지 83 중 임의의 하나에 제시된 바와 같으며;
바람직하게는, 상기 TACI 폴리펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83에 제시된 바와 같은, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
이는:
제1 사슬: [TACI 폴리펩티드 1]-[링커 1]-[항-IL23 항체의 중쇄]-[링커 2]-[TACI 폴리펩티드 2], 및
제2 사슬: 항-IL23 항체의 경쇄를 포함하고,
상기 TACI 폴리펩티드 1 및 TACI 폴리펩티드 2는 동일하거나 상이하며, 이는 독립적으로 제6항 및 제7항에 정의된 임의의 TACI 폴리펩티드로부터 선택되며; 상기 링커 1 및 링커 2는 동일하거나 상이하며;
바람직하게는, 상기 링커는 (G_xS)_y 링커로부터 선택되며, 여기서, x는 1-5의 정수로부터 선택되고, y는 0-6의 정수로부터 선택되며, 보다 바람직하게는, 상기 링커는 SEQ ID NO: 84 또는 85에 제시된 바와 같은 링커인, 항-IL23 항체 융합 단백질.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
여기서,
상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 제1 사슬과 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항-IL23 항체 융합 단백질은 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 제1 사슬과 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하는 제2 사슬을 갖는, 항-IL23 항체 융합 단백질.
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL23 항체로서, 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서,
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 21, 22, 20, 19, 18, 17 또는 1의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 25, 26, 24, 23 또는 2의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32 또는 3의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 36, 35, 34, 33 또는 4의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체.
제10항에 있어서,
여기서:
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27, 28 또는 5의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체.
제10항 또는 제11항에 있어서,
여기서:
i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21, 22, 20, 19, 18 또는 17 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25, 26, 24 또는 23 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29, 30, 31 또는 32 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36, 35, 34 또는 33 중 임의의 하나 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iv) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는, i) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-IL23 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하며;
바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택되고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 항체 κ 또는 λ 사슬 불변 영역으로부터 선택되며;
보다 바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체.
제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-IL23 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서,
i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 41 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 43 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 45 또는 이와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
i) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) 상기 항-IL23 항체의 중쇄는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항-IL23 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는, 항-IL23 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체로서,
A. 인간 IL-23 p19 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 특이적으로 결합하지만, 마우스 IL-23 p19에는 특이적으로 결합하지 않으며; 바람직하게는 6.00E-11M 미만의 KD 값으로 인간 IL-23 p19에 결합하고, 및/또는 9.00E-11M 미만의 KD 값으로 시노몰구스 원숭이 IL-23 p19에 결합하며, 상기 KD 값은 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명 측정법을 통해 측정되며;
B. IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는, 인간 IL-23/IL-23R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 0.60nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
C. BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/BAFF-R 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 7.00nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
D. BAFF/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 4.50nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
E. BAFF/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 BAFF/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 6.00nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
F. APRIL/BCMA 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/BCMA 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 1.00nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
G. APRIL/TACI 결합을 차단하는 활성을 가지며; 바람직하게는 APRIL/TACI 결합을 차단하는 IC₅₀ 값은 3.00nM 미만이고, 상기 IC₅₀ 값은 Elisa법을 통해 검출되며;
H. IL-17 분비를 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.03nM 미만의 IC₅₀ 값으로 IL-17 분비를 억제하며; 상기 IC₅₀ 값은 Elisa를 통해 검출되며;
I. BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하는 활성을 가지며; 바람직하게는 0.5nM 미만의 IC₅₀ 값으로 BaF3-IL-23R 세포 증식을 억제하며; 상기 IC₅₀ 값은 PerkinElmer을 통해 검출되며;
J. TNFα, IL-22 및 IgA 사이토카인 분비를 억제하는 활성을 갖거나; 또는
K. B 세포 증식을 억제하는 활성을 갖는 특성 중 하나 이상을 갖는, 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 항-IL23 항체.
약학 조성물로서, 제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체, 및
하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는, 약학 조성물.
제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체를 코딩하는, 핵산 분자.
제17항에 따른 핵산 분자를 함유하는, 숙주 세포.
B 세포 장애 또는 자가면역 질환을 치료 또는 개선하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체 융합 단백질 또는 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 항-IL23 항체 또는 제16항에 따른 약학 조성물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하며;
바람직하게는, 상기 B 세포 장애 또는 자가면역 질환은 IL23 발현과 관련된 질환 또는 병증이며;
보다 바람직하게는, 상기 자가면역 질환은 전신성 홍반루푸스, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 인슐린 의존성 당뇨병, 크론병, 류마티스 관절염, 다관절성 청소년 류마티스 관절염 및 건선성 관절염으로부터 선택되고; 상기 B 세포 장애는 종양, 만성 백혈구 백혈병, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 이식후 림프조직 증식성 질환 및 경쇄 감마병증으로부터 선택되며;
가장 바람직하게는, 상기 자가면역 질환은 전신성 홍반루푸스인, 방법.