KR20240058157A - 희토류 원소 및/또는 s-, p-, d- 블록 금속의 착물 형성을 위한 화합물, 이의 배위 화합물, 펩타이드 접합체, 이의 제조 방법 및 그 용도 - Google Patents

희토류 원소 및/또는 s-, p-, d- 블록 금속의 착물 형성을 위한 화합물, 이의 배위 화합물, 펩타이드 접합체, 이의 제조 방법 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 착화제로서 이용하기 위한 일반식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이의 배위 화합물, 펩타이드 접합체, 이들의 제조 방법 및 그 용도에 관한 것이다.

Description

희토류 원소 및/또는 s-, p-, d- 블록 금속의 착물 형성을 위한 화합물, 이의 배위 화합물, 펩타이드 접합체, 이의 제조 방법 및 그 용도
본 발명은 희토류 원소 및/또는 s-, p-, d- 블록 금속의 착물 형성으로 상당히 안정한 배위 화합물을 형성하기 위한 가교 킬레이터로서 적합한 새로운 마크로사이클릭 화합물에 관한 것이다. 이들 배위 화합물은 펩타이드 접합체를 정량적으로 검출하기 위한 표지 물질로서 및/또는 자기 공명 영상의 조영제로서 이용하기 적합하다. 본 발명은 또한 킬레이터의 제조 방법 및 펩타이드/단백질을 함유한 의약제의 추적 방법에 관한 것이다.
금속 원소는 영상 조영제, 방사선 치료제 및 생분석용 표지 물질과 같은 생의학적 용도를 찾게 되었다. 이러한 용도 대부분, 펩타이드 또는 항체에 기반한 표적화 벡터와 같이 다른 분자와 공유 연결될 수 있는 안정한 킬레이트 형태로 금속이 결합되어야 한다. 금속 원소 대부분에 적용가능한 킬레이터의 가장 보편적인 예는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 및 이의 유도체이다. 특정 금속 원소에 대해 다른 광범위한 킬레이터들이 특별히 개발되고 있다 [Price E. W., Orvig C. (2014), Chem. Soc. Rev. 43(1), 260 - 290].
희토류 원소 (스칸듐 - Sc, 이트륨 - Y, 란탄 - La, 세륨 - Ce, 프라세오디뮴 - Pr, 네오디뮴 - Nd, 프로메튬 - Pm, 사마륨 - Sm, 유로퓸 - Eu, 가돌리늄 - Gd, 테르븀 - Tb, 디스프로슘 - Dy, 홀뮴 - Ho, 에르븀 - Er, 툴륨 - Tm, 이테르븀- Yb 및 루테튬 - Lu)는 넓은 의학적 용도 범위를 제공하는 금속 군이다. 90Y, 153Sm 및 177Lu에 기반한 방사성 의약품들이 FDA에 의해 허가되었으며, 166Ho을 이용한 임상 시험이 진행 중에 있으며, 다른 것들도 양전자 방출 단층촬영술 (PET), 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT) 또는 테라피 (44Sc, 47Sc, 86Y, 149Pm, 159Gd, 149Tb, 161Tb, 165Dy, 161Ho, 169Er 및 175Yb)에 유익한 특성을 나타내었다. 임상 용도에서, 안정한, 비-방사성 Gd 킬레이트는 자기 공명 영상 (MRI)의 조영제로서 임상적으로 이용되고 있다. 희토류 원소의 안정한 동위원소는 또한 분석 목적으로 표지 물질로 제공된다. 이런 방식으로 표지되는 대상 화합물은 생물 시스템에서 백그라운드가 제로인 원소의 고유한 발광성 또는 동위원소 질량에 기반해 가시화, 추적 및 정량화를 수행할 수 있다. 고유한 동위원소 질량은, 많은 화합물들을 단일 분석 (다중화)으로ㅡ 전형적으로 유도-결합 플라즈마 질량 분광 측정 (ICP-MS)을 이용해 동시에 정량할 수 있게 하므로, 특히 유용하다 [Bodenmiller B. et al. (2012), Nat. Biotechnol. 30(9), 858-867]. 89Sr, 223Ra, 117mSn, 212Pb, 213Bi, 64Cu, 225Ac 등의 주기율표의 s-, p- 및 d-블록의 기타 금속 원소는 촬상 및 테라피용 방사성의약제 화합물에 이용된다.
실제 사용하기 위해, 금속 킬레이트는 금속 이온이 킬레이터로부터 쉽게 빠져 나와 담체 분자에서 탈착될 수 없도록 매우 안정적이어야 한다. 이런 점에서, 열역학적 안정성 상수는 충분한 정보를 제공하지 못하는데, 그 이유는 대부분의 용도가 열역학적 평형 (예, 생체내)과는 거리가 먼 조건에서 진행되기 때문이다. 대신, 금속 이온이 해당 조건에서 킬레이트로부터 탈출하는 속도를 특정하는 역동학적 비활성 (kinetic inertness)을 고려하여야 한다. 역동학적 비활성은 킬레이터의 경직성과 밀접하게 연관되어 있다. 타입 DTPA (다이에틸렌트리아민펜타아세트산)의 비환식 킬레이터는 더 유연한 구조를 가지고 있어, 더 경직된 타입 DOTA의 마크로사이클릭 킬레이터보다 역동학적 비활성이 더 낮다. 역동학적 비활성의 킬레이트는 금속 킬레이트가 과잉의 경쟁적인 생원성 킬레이터 (biogenic chelator) 및 금속 이온으로부터 도전을 받는 생체내 응용에 특히 바람직하다. 이런 이유로, 경직된 역동학적 비활성 마크로사이클릭 킬레이터가 유연한 비환식 킬레이터보다 바람직하다. 예를 들어, 실제, 승인되었거나 개발 중인 방사성 핵종 177Lu (반감기 6.7일)에 기반한 모든 방사성 의약품은, 금속이 요망하는 치유 효과를 가지기 위해 생체내에서 수 주 동안 표적 분자에 결합된 채 잔류하여야 하므로, 마크로사이클릭 킬레이터 DOTA를 이용하게 된다. 마찬가지로, MRI 조영제에는 가돌리늄(III)의 마크로사이클릭 킬레이트가 비환식 DTPA 타입보다 바람직하다. 최근, 상당량의 유리 가돌리늄이 비환식 물질로부터 생체내 방출되어 인간 뇌에 장기간 축적되는 것으로 밝혀졌다 [Fur M. L., Caravan P. (2019), Metallomics 11(2), 240-254]. 이러한 점에 대하여 잠재적인 환자 피해를 방지하기 위해, 비환식 MRI 조영제의 사용은 전세계적으로 약물 관리 기구에 의해 엄격하게 제한되고 있다. 따라서, 금속 킬레이트의 역동학적 비활성의 중요성이 의학 및 기타 응용 분야에서 커질 것이며, 더 높은 비활성을 제공하는 킬레이터가 필요할 것임에 틀림없다.
역동학적 비활성을 추가로 높이는 방법은 추가적인 고리를 이용해 마크로사이클릭 킬레이터를 보강하고 경직하게 하는데 기반다. 예를 들어, 가교된 마크로사이클릭 킬레이터 cb-TE2A (4,11-비스(카르복시메틸)-1,4,8,11-테트라아자바이사이클로[6.6.2]헥사데칸)은 비-가교 유사체보다 훨씬 더 많은 구리(II) 이온을 가진 비활성 킬레이트를 제공한다 [Boswell C. A. et al. (2004), J. Med. Chem. 47(6), 1465-1474]. 다른 유사한 킬레이터 cb-TEDPA (6,6'-((1,4,8,11-테트라아자바이사이클로[6.6.2]헥사데칸-4,11-다이일)비스(메틸렌))다이피콜린산)가 예외적으로 비활성 란탄족 원소(III) 킬레이트를 제공하는 것으로 밝혀졌다 [Rodriguez-Rodriguez A. et al. (2016), Inorg. Chem. 55(5), 2227-2239]. 또 다른 사이클렌-기반한 가교된 킬레이터도 극도의 비활성 구리(II) 킬레이트를 제공한다 [Esteves, C. V. et al. (2013), Inorg. Chem. 52(9), 5138-5153]. 이들 킬레이트들의 공통적인 특성은 브릿지가 배위 펜던트 아암과는 독립적이고 킬레이트에서 펜던트 아암과 반대측으로 배향된다는 것이다. 브릿지가 펜던트 아암 자체들을 연결한 킬레이터 역시 제작되었지만, 킬레이트 안정성에 대한 영향은 매우 부정적이었다 [Vipond, J. et al. (2007), Inorg. Chem. 46(7), 2584-2595].
역동학적 비활성이 매우 높아 역효과가 있을 경우에는 실질적인 한계가 있다. 그 이유는 금속 이온이 킬레이트를 빠져 나가는 방식을 극복해야 하는 에너지 장벽이 킬레이트 형성 중에 극복해야하는 사항과 유사하기 때문이다. 일반적으로, 킬레이트가 더 비활성일수록 만들기 더 어렵다. 생성 동역학은 고온 및 긴 반응 시간에 따라 가속화될 수 있다. 그러나, 이러한 반응 조건은 종종 방사성 의약품의 제조시 민감한 표적화 벡터 (예, 항체) 및/또는 금속 방사핵종의 반감기와는 상용 불가하다.
온화한 합성 조건에서 고도로 동역학적 비활성 금속 착물을 제조하는 새로운 유형의 킬레이터가 여전히 강력하게 요구되고 있다.
본 발명자들은 금속 이온의 착물 형성 후 구조를 경직하게 만들어 동역학 비활성을 높이는 브릿지를 형성하는 새로운 유형의 킬레이터로 배경기술의 문제를 해결하였다. 브릿지는 마주보는 펜던트 아암 상의 알킨과 아지드 치환기 간의 고리부가 반응에 기반해 배위 펜던트 아암 2개 사이에 형성된다. 이러한 반응에는 통상적인 경우에서와 같이 Cu(I) 이온에 의한 촉매화는 필요하지 않으며, 비-브릿지된 킬레이트가 형성된 후 자발적으로 이루어진다. 따라서, 킬레이터는 금속 이온에 대해 단-방향 트랩으로서 작용한다. 비-브릿지화된 킬레이트의 초기 생성은 비교적 빠르게 이루어진다. 그 후, 킬레이터 안에 금속이 포획되는 브릿지가 형성된다. 희토류 원소의 경우, 형성된 브릿지된 킬레이트는 DOTA를 가진 유사 킬레이트와 비교해 최대 6자릿수의 매우 높은 동역학적 비활성을 나타낸다. 이러한 특별히 높은 비활성은 농축 산에서 가혹한 가수분해 조건을 견딜 수 있으며 온전한 킬레이트로서 세포용해물을 액체 크로마토그래피 - 질량 분광 측정 (LC-MS)으로 정량할 수 있는 분석 표지물질로서 킬레이트의 새로운 용도를 가능하게 한다. LC-MS가 ICP-MS보다 훨씬 더 일반적인 장치이므로, 이를 사용하는 것이 더 유리하다. 유리 금속은 생체내에서 배위 화합물에서 해리되지 않아 인간 또는 동물 체내에 금속 침전이 발생되지 않으므로, 극도로 높은 비활성은 또한 킬레이트를 MRI 조영제 또는 방사성 의약품과 같이 잠재적인 생체내 사용하는데 유리하다.
본 발명에 따른 화합물은 매우 효과적인 분자 트랩으로 작동해, 금속 이온을 극도로 안정하고, 경직되고, 잘 규정된 방식으로 배위 결합할 수 있다. 비교적 적은 수의 유기 합성 단계로 리간드를 제조할 수 있다. 금속 이온의 배위 결합 후, 마크로사이클의 마주보는 펜던드 아암에 존재하는 삼중 결합과 아지드 기 간에 클릭 반응이 이루어져 트리아졸 브릿지가 형성되고, 금속 이온이 케이지 안에 갇히게 된다 (소위 클릭-집형 착물 (click-zipped complex) 형성). 트리아졸의 형성은 비가역적이며, 아래 반응식 1에 도시된다.
반응식 1. 리간드 TD647의 예에 대해 예시한 클릭-집 원리에 대한 개략적 표시.
제1 측면에서, 본 발명의 내용은 일반식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
상기 식에서,
Y는 질소 (N); N-옥사이드 (N+-O-)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1은 H; 할로겐; -OH; -N3; n이 1-3 범위의 정수인, -(CH2)nN3; R이 독립적으로 H이거나 또는 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬로부터 선택되는, -NR2; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -(CH2)nNR2; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C6-C10 아릴; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C7-C10 아릴알킬; -CF3; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -COOR; n 및 R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -(CH2)nCOOR; ; -CH2CH(OMe)2; ; -SH; -SO3H; Ar이 페닐인, -SO2AR; NO2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 이거나 또는 n이 1-3 범위의 정수인 이고; 바람직하게는, R2는 또는 이고; 더 바람직하게는, R2는 이고;
A는 독립적으로 H; n이 1-3의 정수인, -(CH2)nCOOH; -CH(CH3)COOH; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -CH((CH2)nCH3)COOH; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -CH2P(=O)(OR)2; n이 1-3의 정수인, -CH((CH2)nCOOH)COOH; n이 1-3의 정수인, -CH((CH2)nNH2)COOH; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
여기서,
R3는 이고;
R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬; C3 내지 C6 사이클로알킬; -CF3; n이 1-3 범위의 정수이고 R6가 H, 플루오레닐메틸옥시카르보닐, tert-부틸옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐로부터 선택되는, -(CH2)nNHR6; R6가 상기 정의와 동일하게 정의되는 -C(CH3)2(NHR6); 아다만틸; ; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -(CH2)nCOOH; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는 C6-C10 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5는 R1이거나, 또는 R4가 상기 정의와 동일하게 정의되는, 이고; 바람직하게는, R5는 H; -CF3; 할로겐; -OH; -NH2, -NO2, -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C7-C10 아릴알킬; 또는 이고; 및/또는
R2 및 R3는 함께 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성하고; 여기서, R4는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의되고;
단, A 최대 하나는 H이다.
본 발명의 화합물이 키랄 센터를 가진다면, 모든 거울상 이성질체, 거울상 이성질체들의 혼합물 및 라세메이트는 본 발명의 범위에 포함된다. 본 발명은 일반식 (I)의 화합물을 알칼리 금속, 암모늄 또는 아민과의 염 형태뿐 아니라 산과의 부가 염의 형태로 추가로 포함하다.
용어 "할로겐"은 F, Cl, Br 및 I의 모든 화학 동위원소를 의미하고; 특히, 이 용어는 19F, 35Cl, 37Cl, 79Br, 81Br, 127I와 같은 비-방사성 동위원소; 및 18F, 36Cl, 77Br, 83Br, 123I, 124I, 125I, 131I와 같은 방사성 동위원소를 망라한다.
일 구현예에서, A는 독립적으로 H; n이 1-3의 정수인 -(CH2)nCOOH; -CH(CH3)COOH; n이 1-3의 정수인 -CH((CH2)nCH3)COOH; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -CH2P(=O)(OR)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, R1은 H; 할로겐; -OH; -N3; -CH2N3; R이 독립적으로 H 또는 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬로부터 선택되는, -NR2; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -CH2NR2; -NH2, -NO2, -COOH 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는 C6-C10 아릴; -NH2, -NO2, -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는 C7-C10 아릴알킬; -CF3; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -COOR; n 및 R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -(CH2)nCOOR; ; -CH2CH(OMe)2; ; -SH; -SO3H; Ar이 페닐인 -SO2AR; NO2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R1은 H; 할로겐; -OH; -N3; -CH2N3; -N(CH3)2; 페닐; 카르복시페닐; -CF3; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -COOR; 및 로부터 선택된다.
일 구현예에서, R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬; C3-C6 사이클로알킬; -CF3; R6가 H, 플루오레닐메틸옥시카르보닐, tert-부틸옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐로부터 선택되는, -CH2NHR6; R6가 상기 정의와 동일하게 정의되는 -C(CH3)2(NHR6); 아다만틸; 로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R4는 H; 트리플루오로메틸; 4-피페리디닐; -CH2-NH2; 페닐; 사이클로프로필; 아다만틸; terc-부틸; 트리메틸실릴 (TMS); 트리이소프로필실릴 (TIPS); 할로겐 (F, Cl, Br, I); -C(CH3)2NH2; 및 -C(CH3)2NHBoc로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, R4는 수소이다.
본 발명의 일 구현예에서, 일반식 (I)의 화합물은 하기 치환기를 포함한다:
Y는 질소 (N)이고;
R1은 H; 할로겐; -OH; -N3; -CH2N3; R이 독립적으로 H 또는 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬로부터 선택되는, -NR2; -NH2, -NO2, -COOH 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C6-C10 아릴; -NH2, -NO2, -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C7-C10 아릴알킬; -CF3; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -COOR; ; -CH2CH(OMe)2; 로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 이고;
A는 독립적으로 H; n이 1-3의 정수인 -(CH2)nCOOH; -CH(CH3)COOH; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -CH((CH2)nCH3)COOH; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는 -CH2P(=O)(OR)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
; ; ; ; ;
상기 기들에서,
R3는 이고;
R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬; C3-C6 사이클로알킬; -CF3; R6가 H, 플루오레닐메틸옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐로부터 선택되는 -CH2NHR6; R6가 상기 정의와 동일하게 정의되는 -C(CH3)2(NHR6); 아다만틸; 로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5는 H; -CF3; 할로겐; -OH; -NH2, -NO2, -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는 C7-C10 아릴알킬; 또는 R4가 상기 정의와 동일하게 정의되는 이고; 및/또는
R2 및 R3는 함께 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성하고, 여기서 R4는 상기에서 정의되되;
단, A 최대 하나는 H이다.
바람직한 일 구현예에서, Y는 질소이며, 따라서 R1 및 R2로 치환된 피리딜 모이어티를 포함하는 펜던트 아암을 형성한다.
일 구현예에서, R1은 Y로부터 메타-위치이고, R2-CH2-로부터 파라-위치이다.
일 구현예에서, R1은 Y로부터 메타-위치이고, R2-CH2-로부터 오르토-위치이다.
다른 구현예에서, R1은 Y로부터 파라-위치이다.
바람직한 일 구현예에서, R2는 이다.
바람직하게는, R2는 이고, R1은 H, 페닐, 카르복시페닐, 할로겐 (바람직하게는, Cl), 트리플루오로메틸, 카르복실, 카르복실릭 에스테르 또는 아민을 포함하는 군으로부터 선택되고, 더 바람직하게는, R1은 H 또는 카르복시페닐이다.
일 구현예에서, Z는 이다.
바람직한 일 구현예에서, Z는 이고, R3 및 R5는 상기에 정의된 바와 동일하게 정의된다. 바람직하게는, Z는 이고, 보다 더 바람직하게는, Z는 이다.
일반식 (I)의 화합물에서, A는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 바람직하게는, A는 동일하다.
일 구현예에서, Z는 이다.
일 구현예에서, Z는 이다.
일 구현예에서, A는 -(CH2)COOH; -(CH2)2COOH; -CH2P(=O)(OEt)2; -CH2P(=O)(OH)2; -CH2P(=O)(OH)(OEt); -CH2P(=O)(Ph)(OH); -(CH2)COONH2; -(CH2)C(=O)NH-CH2COOH; -(CH2)COOtBu; -CH(CH2COOH)COOH를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, A는 -(CH2)COOH; -CH2P(=O)(OEt)2; -CH2P(=O)(OH)2; -CH2P(=O)(OH)(OEt); 및 -CH2P(=O)(Ph)(OH)를 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는, A는 -(CH2)COOH이다.
일 구현예에서, Y는 질소이고; R1은 H; Cl; -N(CH3)2; -COOH 또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, 페닐; -COOH 또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, 벤질; -CF3; -COOCH3; -COOCH(CH3)2; -COOtBu;; -SH로 이루어진 군으로부터 선택되고;
A는 독립적으로 H; n이 1 또는 2인 -(CH2)nCOOH; -CH2P(=O)(OH)2; -CH2P(=O)(OH)(OEt); -CH2P(=O)(OEt)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; -CH2P(=O)(OH)(Ph)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
; ;
여기서,
R3는 이고;
R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 사이클로프로필, terc-부틸; -CF3; -CH2NH2; -CH2N(H)(Fmoc); -C(CH3)2(NH2); -C(CH3)2(NHBoc); 아다만틸로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5는 H 또는 R4가 상기 정의와 동일하게 정의되는 이되;
단, A 최대 하나는 H이다.
바람직한 일 구현예에서, Z는 이고; R3는 이고; R4 및 R5는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의되고, 바람직하게는, R4 및 R5는 H이다.
다른 구현예에서, R2 및 R3는 함께 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성하고; 여기서, R4는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의되고, 바람직하게는, R4는 수소이다. 이러한 구현예에서, 사이클렌 모이어티의 마주보는 질소 원자 2개 간에 브릿지가 형성되고, 따라서 일반식 (I)의 화합물은 케이지-유사 구조를 형성한다. 브릿지는 일반식 (IIa) 또는 (IIb)의 엔터티이다.
여기서,
L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
; ; ; ; ;
R1, R4 및 R5는 상기 정의와 동일하게 정의된다. 링커 L은 상기와 같이 정의되는 기 Z로부터 유래한다.
바람직하게는, L은 이고, 더 바람직하게는, L은 이다.
바람직한 일 구현예에서, 일반식 (I)의 화합물은 하기 치환기 조합을 가진 화합물을 포함하는 군으로부터 선택된다:
Y는 N+-O-이고; R1, R4 및 R5는 H이다:
화합물 A Z R2 R3
TD604 -(CH2)COOH
Y는 N이고; R1, R4 및 R5는 H이다:
화합물 A Z R2 R3
TD556 -(CH2)COOH
TD1204 -(CH2)COOH
TD703 -(CH2)COOH 및 H
TD705 -CH2P(=O)(OEt)2 및 -(CH2)COOtBu
TD714 -CH2P(=O)(OH)2 및 -(CH2)COOH
TD921 -CH2P(=O)(Ph)(OH)
TD580 -CH2P(=O)(OEt)2
TD582 -CH2P(=O)(OH)(OEt)
TD581 -CH2P(=O)(OH)2
TD801 -(CH2)2COOH
TD1346 -CH(CH3)COOH
TD1408 -(CH2)COOH
cz-TD556 -(CH2)COOH
Y는 N이고; Z는 이고: R2는 이다:
화합물 R1 A
TD827 -(CH2)COOH
TD575 Ph -CH2P(=O)(OEt)2
TD576 Ph -CH2P(=O)(OH)2
TD764 Cl -(CH2)COOH
TD1063 -CF3 -(CH2)COOH
TD1092 -COOCH3 -(CH2)COOH
TD1148 -COOiPr -(CH2)COOH
TD1160 -COOtBu -(CH2)COOH
TD1176 -N(CH3)2 -(CH2)COOH
TD647 Ph -(CH2)COOH
TD742 4-카르복시페닐 -(CH2)COOH
TD779 Ph -(CH2)COONH2
TD778 Ph -(CH2)CONH-CH2COOH
TD1504 H -CH(CH2COOH)COOH;
-CH(CH3)COOH
Y는 N이고; R2 및 R3는 함께 식 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성한다:
화합물 R1 A Z R4
cz-TD425 Ph -(CH2)COOH H
cz-TD764 Cl -(CH2)COOH H
cz-TD1063 -CF3 -(CH2)COOH H
TD1188 H -(CH2)COOH -CF3
TD650 Ph -(CH2)COOH
H
Y는 N이고; R2 및 R3는 함께 식 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성한다:
화합물 R1 A Z
TD871 Ph -(CH2)COOH
Y는 N이고; R1은 페닐이고; R2는 이고: R3는 이다:
화합물 A Z
TD425 -(CH2)COOH
TD669 -(CH2)COOH
Y는 N이고; A는 -(CH2)COOH이고; R1은 H이고; R2는 이다:
화합물 Z R3 R4 R5
TD810 H
TD718 TMS H
TD728 TIPS H
TD1204 I H
TD944
Ph H
TD943 사이클로프로필 H
TD959 tBu H
TD992 아다만틸 H
TD1105 -C(CH3)2NHBoc H
TD1127 4-피페리디닐 H
Y는 N이고; A는 -(CH2)COOH이고; R2는 이고: Z는 이다:
화합물 R1 R3 R4
TD722 Ph -CH2NH2
TD1054 Ph -C(CH3)2NH2
TD744 4-카르복시페닐
-CH2-NH2
Y는 N이고; A는 -CH(CH3)COOH이고; R2는 이고: Z는 이다:
화합물 R1 R3 R4 R5 R6
TD1451 -CF3
-C(CH3)2(NHR6) -COOH tert-부틸옥시카르보닐
가장 바람직한 구현예에서, 일반식 (I)의 화합물은 Y가 질소이고, Z가 이고, 나머지 치환기들이 하기 조합으로 존재하는, 화합물들을 포함하는 군으로부터 선택된다:
화합물 R1 A R2 R3 R4 R5
TD556 H -(CH2)COOH H H
TD810 H -(CH2)COOH H
TD827 -(CH2)COOH H H
TD718 H -(CH2)COOH TMS H
TD728 H -(CH2)COOH TIPS H
TD1204 H -(CH2)COOH I H
TD944 H -(CH2)COOH Ph H
TD943 H -(CH2)COOH 사이클로프로필 H
TD959 H -(CH2)COOH tBu H
TD992 H -(CH2)COOH 아다만틸 H
TD705 H -CH2P(=O)(OEt)2 및 -(CH2)COOtBu H H
TD714 H -CH2P(=O)(OH)2 및 -(CH2)COOH H H
TD921 H -CH2P(=O)(Ph)(OH) H H
TD580 H -CH2P(=O)(OEt)2 H H
TD582 H -CH2P(=O)(OH)(OEt) H H
TD581 H -CH2P(=O)(OH)2 H H
TD575 Ph -CH2P(=O)(OEt)2 H H
TD576 Ph -CH2P(=O)(OH)2 H H
TD764 Cl -(CH2)COOH H H
TD1063 -CF3 -(CH2)COOH H H
TD1092 -COOCH3 -(CH2)COOH H H
TD1148 -COOiPr -(CH2)COOH H H
TD1160 -COOtBu -(CH2)COOH H H
TD1176 -N(CH3)2 -(CH2)COOH H H
TD647 Ph -(CH2)COOH H H
TD722 Ph -(CH2)COOH -CH2NH2 H
TD1054 Ph -(CH2)COOH -C(CH3)2NH2 H
TD1105 H -(CH2)COOH -C(CH3)2NHBoc H
TD1127 H -(CH2)COOH 4-피페리디닐 H
TD742 4-카르복시페닐 -(CH2)COOH H H
TD744 4-카르복시페닐 -(CH2)COOH -CH2-NH2 H
TD779 Ph -(CH2)COONH2 H H
TD778 Ph -(CH2)CONH-CH2COOH H H
cz-TD556 H -(CH2)COOH H H
cz-TD764 Cl -(CH2)COOH H H
cz-TD1063 -CF3 -(CH2)COOH H H
TD1188 H -(CH2)COOH
-CF3 H
TD650 Ph -(CH2)COOH
H H
TD871 Ph -(CH2)COOH
H H
다른 측면에서, 본 발명의 내용은 하기 단계를 포함하는 일반식 (I)의 화합물의 합성 방법이다:
i) Z가 상기에 정의된 바와 동일하게 정의되는 일반식 Z-Cl의 알킨 중간산물을 제공하는 단계;
ii) 일반식 (III)의 아지드 중간산물을 제공하는 단계:
여기서, Y, R1 및 R2는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의됨;
iii) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 제공하는 단계:
,
여기서, pA는 n이 1-3의 정수인 -(CH2)nCOOtBu; 벤질옥시카르보닐; -CH(CH3)COOtBu; R이 tert-부틸, 메틸 또는 에틸인, -CH(CH3)COOR; n 및 R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -CH((CH2)nCH3)COOR; n이 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의되고 R이 독립적으로 tert-부틸, 메틸 또는 에틸로부터 선택되는, -CH((CH2)nCOOR)COOR; R이 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬인, -CH2P(=O)(OR)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)를 포함하는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, pA는 -CH2COOtBu; -CH2P(O)(OEt)2; -(CH2)2COOtBu를 포함하는 군으로부터 선택됨,
iv-A) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 알킨 중간산물 Z-Cl과 반응시켜, 일반식 (V)의 중간산물을 수득하는 단계:
,
여기서, Z 및 pA는 상기에 정의된 바와 동일하게 정의됨;
또는
iv-B) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 일반식 (III)의 아지드 중간산물과 반응시켜 일반식 (VI)의 중간산물을 수득하는 단계:
,
여기서, Y, R1, R2 및 pA는 상기에 정의된 바와 동일하게 정의됨;
v-A) 일반식 (V)의 중간산물을 일반식 (III)의 아지드 중간산물과 반응시켜 일반식 (VII)의 중간산물을 수득하는 단계:
여기서, Y, R1, R2, pA 및 Z는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의됨;
또는
v-B) 일반식 (VI)의 중간산물을 알킨 중간산물 Z-Cl과 반응시켜 일반식 (VII)의 중간산물을 수득하는 단계;
vi) 선택적으로, 보호기를 가수분해하여 일반식 (I)의 화합물을 수득하는 단계.
일반적으로, 일반식 Z-Cl의 화합물은 대응하는 2-할로피리딘 (바람직하게는, Br, I) 및 말단 알킨 또는 실릴-보호된 아세틸렌으로부터 Pd(0) 촉매화된 소노가시라 가교 반응 (Sonogashira cross-coupling reaction)을 이용해 합성할 수 있거나 또는 상업적으로 입수할 수 있다.
일반식 (III)의 화합물은 아지드 모이어티의 소스로서 소듐 아지드를 이용한 비대칭화 (desymetrization)에 의해 2,6-비스(할로메틸)피리딘 (바람직하게는, Cl)으로부터 수득할 수 있다.
일반식 (IV)의 사이클렌 유도체는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 사이클렌 또는 trans-N-비스-보호된 사이클렌 (바람직하게는, 카바메이트 보호된)을 알킬 할로아세테이트 (알킬화), 알킬 아크릴레이트 (마이클 첨가) 또는 트리알킬포스파이트와 (파라)포름알데하이드 (카바크니-필드 반응)의 존재 하에 반응시켜 제조할 수 있다.
단계 iv-A), iv-B), v-A) 및 v-B)는 MeCN (바람직하게는), DMSO 또는 DMF를을 포함하는 군으로부터 선택되는 용매에서 이루어진다. 반응은 통상 수 시간 내지 최대 수일간 실온에서 이루어진다.
pA 기를 탈보호하는 단계 vi)는 선택 사항이고, 예를 들어 pA가 -CH2P(O)(OEt)2이면 탈보호는 수행하지 않고, 일반식 (I)에서 형성되는 A는 pA이다. 보호기를 탈보호하기 위한 구체적인 조건은 보호기의 화학적 특성에 따라 결정되고, 당해 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 전형적으로, terc-부틸 에스테르 보호기 및 Boc 보호기는 산성 조건 (TFA) 하에 또는 열에 의해 가수분해되고, 메틸 또는 이소프로필 보호기는 알칼리 조건 하에 가수분해되고, 에틸 포스포네이트 에스테르는 피리딘 염기 중의 트리메틸실릴브로마이드를 이용한 트랜스에스테르화에 의해 대응되는 포스폰산으로 변환된다.
본 발명의 다른 내용은 상기와 같이 정의되는 일반식 (I)의 화합물과, 란탄족 원소(III) 양이온, Na+, Ba2 +, Pb2 +, Sr2 +, Ca2 +, Cd2 +, Zn2 +, Mn2 +, Pt2 +, Cu2 +, Ni2 +, Sc3+, Y3+, Bi3 +, In3 +, Ru3 +, Ir3 +, Ga3 +, Tl3 +, Pd2 +로 이루어진 군으로부터 선택되는 금속 양이온과의 배위 화합물이고; 바람직하게는, 금속 양이온은 La3 +, Ce3 +, Pr3 +, Nd3+, Sm3 +, Eu3 +, Gd3 +, Tb3 +, Dy3 +, Ho3 +, Er3 +, Tm3 +, Yb3 +, Lu3 +, Y3+, Sc3 +, Bi3 +, In3 +, Tl3+, Pb2 +, Ca2 +, Cd2 +, Zn2 +, Cu2 +, Ni2 +, Mn2 +, Pd2 +, Na+로 이루어진 군으로부터 선택된다.
금속 이온은 40Ca, 42Ca, 43Ca, 44Ca, 46Ca, 48Ca, 45Sc, 89Y, 138La, 139La, 136Ce, 138Ce, 140Ce, 142Ce, 141Pr, 142Nd, 143Nd, 144Nd, 145Nd, 146Nd, 148Nd, 150Nd, 144Sm, 147Sm, 148Sm, 149Sm, 150Sm, 152Sm, 154Sm, 151Eu, 153Eu, 152Gd, 154Gd, 155Gd, 156Gd, 157Gd, 158Gd, 160Gd, 159Tb, 156Dy, 158Dy, 160Dy, 161Dy, 162Dy, 163Dy, 164Dy, 165Ho, 162Er, 164Er, 166Er, 167Er, 168Er, 170Er, 169Tm, 168Yb, 170Yb, 171Yb, 172Yb, 173Yb, 174Yb, 176Yb, 175Lu, 176Lu와 같은 안정적인 동위원소, 및 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 86Y, 90Y, 140Nd, 149Pm, 151Pm, 153Sm, 159Gd, 149Tb, 161Tb, 165Dy, 161Ho, 166Ho, 169Er, 167Tm, 175Yb, 177Lu와 같은 방사성 동위원소 등의, 특정 금속의 모든 화학 동위원소 (izotope)를 망라하는 것으로 이해될 것이다.
란탄족 원소 (Ln)는 원자 번호 57-71 (란탄에서 루테튬까지)의 금속 화학 원소 15종을 포함하는 화학 원소로서 정의된다.
바람직하게는, 배위 화합물은 일반식 (VIII)을 가지고:
상기 식에서, M은 금속 양이온이고, R1, R4, R5 및 A는 상기와 같이 정의되고, n은 1, 2, 3 및 4로부터 선택됨; 더 바람직하게는, 배위 화합물은 일반식 (VIIIa)을 가진다:
.
본 발명에 따른 배위 화합물은 약제학적으로 허용가능한 산의 염 및 용매화물을 또한 포함한다. 금속 양이온의 양 전하는 A 펜던트 아암 (예, 아세테이트)으로부터 기원한 음 전하 2개에 의해 균형을 이룬다. 따라서, 배위 화합물의 전체 전하 (overall charge)는 -1 (일가 금속 이온의 경우), 0 (2가 금속 이온의 경우) 또는 +1 (3가 금속 이온의 경우)이다. 배위 화합물의 전체 전하를 보상하는 반대이온은 하기 약제학적으로 허용가능한 산으로부터 유래한 음이온을 포함하는 군으로부터 선택된다:
1-하이드록시-2-나프토산; 2,2-다이클로로아세트산; 2-하이드록시에탄설폰산; 2-옥소글루타르산; 4-아세트아미도벤조산; 4-아미노살리실산; 아세트산; 아디프산; 아스코르브산 (L); 아스파르트산 (L); 벤젠설폰산; 벤조산; 캄퍼산 (+); 캄퍼-10-설폰산 (+); 카프르산 (데카노익산); 카프로산 (헥산산); 카프릴산 (옥타노익산); 탄산; 신남산; 구연산; 사이클람산; 도데실설푸르산; 에탄-1,2-다이설폰산; 에탄설폰산; 포름산; 푸마르산; 갈락타르산; 젠티신산; 글루코헵톤산 (D); 글루콘산 (D); 글루쿠론산 (D); 글루탐산; 글루타르산; 글리세로인산; 글리콜산; 히푸르산; 브롬화수소산; 염산; 이소부티르산; 락트산 (DL); 락토바이온산; 라우르산; 말레산; 말산 (- L); 말론산; 만델산 (DL); 메탄설폰산; 나프탈렌-1,5-다이설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 니코틴산; 질산; 올레산; 옥살산; 팔미트산; 팜산; 인산; 프로피온산; 피로글루탐산 (- L); 살리실산; 세바스산; 스테아르산; 숙신산; 황산; 타르타르산 (+ L); 티오시안산; 톨루엔설폰산 (p); 운데실렌산; 트리플루오로아세트산.
배위 화합물은 일반식 (I)의 유리 리간드 (바람직하게는, 케이징되지 않은, 따라서 바람직하게는, 트라졸 브릿지가 없는) 및 금속 염 (전형적으로 수용성 금속 염, 바람직하게는, 클로라이드, 나이트레이트, 아세테이트, 포르메이트, 트리플루오로아세테이트, 트리플루오로메틸설포네이트, 더 바람직하게는, 클로라이드 또는 나이트레이트 염을 포함하는 군으로부터 선택되는 금속 염)으로부터 상기 반응식 1에 따라 제조할 수 있다. 이들 반응물을 수성 환경 (pH 5-7)에서 25-100℃ 범위의 온도에서 교반함으로써, 금속 양이온은 일반식 (I)의 화합물로 배위되고, R2 및 R3 치환기는 트리아졸 브릿지 형성에 의해 케이지 내 금속 양이온을 즉 "클릭-집 (click-zip)"하게 된다 (반응 온도와 시간은 리간드 및 금속 양이온의 선택에 크게 좌우된다).
그러나, 적합한 리간드는 더 다양한 금속 이온들 (예, 란탄족 원소)이 케이지된 배위 화합물을 형성할 수 있어 바람직하더라도, 비-케이지된 (non-caged) 일반식 (I)의 화합물로 제한되는 것은 아니다. 1,5-트리아졸 브릿지를 가진 브릿지된 (케이지된) 일반식 (I)의 화합물은 금속 양이온, 전형적으로 Tl3 +, Pb2 +, Bi3 +, In3 +, Cd2 +, Ca2+, Cu2 +, Ni2 +, Mn2 +, Pd2 +, Na+을 포함하는 군으로부터 선택되는 금속 양이온과 배위 화합물을 형성할 수 있다. 1,4-트리아졸 브릿지를 가진 브릿지된 (케이지된) 일반식 (I)의 화합물은 금속 양이온, 전형적으로 La3 +, Ce3 +, Pr3 +, Nd3 +, Sm3 +, Eu3+, Gd3 +, Tb3 +, Dy3 +, Ho3 +, Er3 +, Tm3 +, Yb3 +, Lu3 +, Y3+, Tl3 +, Pb2 +, Bi3 +, In3 +, Cd2 +, Ca2+, Cu2 +, Ni2 +, Mn2 +, Pd2 +, Na+을 포함하는 군으로부터 선택되는 금속 양이온과 배위 화합물을 형성한다.
제조된 배위 화합물은 상당히 비활성이고 안정적이므로, MRI 조영제, 방사성진단제 또는 방사선요법, 펩타이드 또는 펩타이드-함유 약물 추적과 같은 다양한 용도로 적합하다.
일반식 (I)의 화합물과 금속 양이온의 배위는 사이클렌 모이어티의 마크로사이클릭 질소 원자, 기 A (펜던트 아암)와 Y 기 (Y가 N-옥사이드일 경우)에 존재하는 산소 원자 및 Y 기 (Y가 질소일 경우)의 질소 원자 및 Z 기에 존재하는 질소 원자를 통해 이루어진다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 배위 화합물은 포스트-클릭집 변환 (post-clickzip transformation)을 이행할 수 있다. 금속 양이온이 반응식 1에 따라 또는 케이지된 일반식 (I)의 화합물과의 배위에 의해 일반식 (I)의 화합물의 케이지 안에 배위된 후, 존재하는 경우, 추가적인 반응을 이행할 수 있는 것을 의미한다. 전형적으로, 이러한 관능기는 배위 화합물의 치환기 R1 또는 R5에 존재하는 할로겐, 바람직하게는, Cl, NO2 또는 SH이지만, 포스트-클릭집 변환은 R1, R4, R5 및/또는 A 기의 반응을 망라할 수 있다 (예, 비-배위된 카르복시 또는 아미노 기의 아미드 커플링 반응).
예를 들어, R1이 할로겐, 바람직하게는, Cl이거나; 또는 R1이 -CH2Cl로 치환된 C6 내지 C10 아릴인 경우, 일반식 (VIII)의 배위 화합물은 페닐보론산 (3-보로노-5-니트로벤조산 또는 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)아세트산 또는 2-(4-보로노페닐)아세트산)과의 Pd(0) 촉매화된 스즈키 가교 반응을 이용해 포스트-클릭 변환을 겪을 수 있으며, 이때 할로겐이 치환되어, 수득되는 일반식 (VIII)의 배위 화합물은 R1이 COOH이거나 또는 -COOH 또는 -CH2COOH로 치환된 C6 내지 C10 아릴일 것이다. 형성된 카르복실레이트 모이어티는 따라서 펩타이드 접합체를 합성하기 위한 아미드 커플링 반응에 이용할 수 있다. 올리고아르기닌과의 접합체는 세포 막을 통과할 수 있으며, 그래서 금속 케이지를 세포에 투입할 수 있다.
다른 가능한 포스트-클릭 변환은 R1, R4 및/또는 R5 치환기 안에 존재하는 할로겐을 NaN3와의 반응에 의해 -N3 기로 치환하는 것이다. 형성된 아지드는 구리-촉매화된 아지드-알킨 고리 부가 (CuAAC) 반응을 이용해 금속 케이지를 다른 알킨-함유 모이어티에 커플링하는 데 이용할 수 있다.
다른 가능한 포스트-클릭 변환은 R1, R4 및/또는 R5 치환기에 존재하는 TIPS 보호기의 가수분해 및 삼중 결합 (R1, R3 및/또는 R5는 임)의 보호이다. 가수분해는 K2CO3 수용액을 이용해 이루어지고, 그래서 R1, R3 및/또는 R5는 가 된다. 달성된 탈보호된 삼중 결합은 알킨과의 반응을 통해, 예를 들어 아지드와의 클릭 반응을 통해 추가로 접합되어 트리아졸 브릿지 (예, CuAAC 반응)를 형성하는데 적합하다.
다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 R1, R4 및/또는 R5에 메탄올의 부가 반응일 수 있으며, 여기서 R1, R3 및/또는 R5는 이며, 따라서 삼중 결합에서 다이메틸 아세탈 (알데하이드의 보호된 버전)로의 변환이다. 이로써 관능기 (알킨) 하나가 다른 관능기 (알데하이드)로 변환된다. 알데하이드는 염기, 하이드라진 및 산 하이드라지드와의 쉬프 염기 형성을 기반으로 접합 반응에 이용가능하다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 DBU의 존재 하에 D2O 중에 펜던트 아암의 CH2 기의 중수소화 반응일 수 있으며, 이로써 CD2 기로 변환된다. 이러한 변환은 분자의 물리-화학적 특성 (안정성 또는 반응성 측면에서)을 바꾸지 않지만, 질량 분광 측정을 이용해 중수소화되지 않은 모 분자를 완전히 구별할 수 있도록 분자의 전체 질량을 변경한다. 이는, 하나의 특정 금속을 가진 금속 이온 케이지는 2가지 다른 질량 태그로 이용할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 NaBH4 또는 NaBD4를 환원제로 이용해 Z 치환기의 피리딜 사이클을 선택적으로 환원하여 Z 기를 각각 또는 변환하는 것일 수 있으며, 여기서 Z는 이고, R3 및 R5는 상기 정의와 동일하게 정의된다. CH2 기의 중수소화와 마찬가지로, 이러한 변환은 금속 태그 목적으로 분자의 질량을 바꾼다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은, 존재한다면, R1 및/또는 R4 및/또는 R5가 -NH2 또는 -(CH2)nNH2를 함유한, R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A의 NH2 기를 FmocCl와 반응시켜, -NH2 기를 -NHFmoc 기로 변환하는 반응일 수 있다. Fmoc 기는 고상 펩타이드 합성 (SPPS)시 이용되는 가장 일반적으로 직면하는 아민 보호기이다. Fmoc 기의 도입은 따라서 SPPS에 금속 케이지의 사용을 용이하게 한다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 존재한다면 R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A의 NH2 기를 상기 정의된 바와 같은 다른 일반식 (I)의 분자 또는 이의 착물의 카르복시 기와 반응시켜, 2 이상의 일반식 (I)의 화합물 또는 이들의 금속 착물의 펩타이드 (아미드) 결합을 통해 결합된 접합체로의 접합이 이루어지는 것일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 존재한다면 R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A에서 비-배위 -COOH 기를 아미노산 또는 펩타이드의 아미노 기와 반응반응시켜 접합 목적으로 펩타이드 결합을 형성하는 것일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 R1, R4 및/또는 R5 치환기의 할로겐, 바람직하게는, Cl를 티올로 S-알킬화하여 할로겐을 설파이드로 변환하는 것일 수 있다. 티올은 예를 들어 Na2S, NaSH, N-Boc-시스테인 또는 시스테인-함유 펩타이드일 수 있으며, 반응은 DIPEA의 존재 하에 이루어질 수 있다. 본 발명에 따른 배위 화합물의 구조에 시스테인 (아미노산)의 병합은 아미드 결합 (예, 펩타이드 부착) 가능성을 추가로 열어준다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 R1, R3 및/또는 R5의 기를 아지드, 바람직하게는, 알킬- 또는 아릴아지드와 반응시켜, 알킬- 또는 아릴-을 R1, R3 및/또는 R5 기와 연결하는 트리아졸 브릿지를 형성하는 것일 수 있으며, 여기서 R1, R3 및/또는 R5는 를 함유한 것이다. 아릴아지드는 선택적으로 -COOH 또는 -CH2COOH로 치환된, 바람직하게는 C6 내지 C10 아릴아지드, 예를 들어 벤질 아지드이다. 알킬 아지드는 바람직하게는, C1 내지 C7 알킬 아지드이고, 알킬은 직선형 또는 분지형일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 R1 또는 R5의 -N3 기를 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 트리아졸 브릿지를 형성하는 것일 수 있으며, R1 또는 R5는 -N3 기를 함유한 것이다. 삼중 결합을 포함하는 치환기는 -COOH 또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환된, 예를 들어 C7 내지 C10 아릴알키닐일 수 있으며, 예를 들어 페닐 모이어티가 선택적으로 -COOH 또는 -CH2COOH로 치환될 수 있는, 페닐아세틸렌일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭집 변환은 R1 및/또는 R5의 -SH 기를 말레이미드를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 티오숙신이미드 연결을 형성하는 것일 수 있거나; 또는 R1 및/또는 R5의 -SH 기를 다른 -SH 기를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 다이설파이드 브릿지를 형성하는 것일 수 있거나; 또는 R1 및/또는 R5의 -SH 기를 알킬- 또는 아릴할로게나이드와 반응시켜 알킬- 또는 아릴-을 배위 화합물과 연결하는 티오에테르 연결을 형성하는 것일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 포스트-클릭집 변환은 R1 및/또는 R5의 -NO2 기를 -SH 기를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 티오에테르 연결을 형성하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 포스트-클릭 변환은 본 발명의 다른 배위 화합물과 반응시켜 사슬 또는 이량체를 형성하는 반응을 포함할 수 있다. 배위 화합물 사슬 또는 이량체는 양쪽 클릭-집형 케이지 안에 동일한 금속 양이온을 함유할 수 있거나, 또는 각 킬레이트에 서로 다른 금속 양이온을 함유할 수 있다. 사슬 및 이량체의 이점은 고유한 중량과 같이 2종의 케이징된 킬레이트의 특성을 겸비하여, 중량 가변성이 더 높은 질량 태그를 만들 수 있는 가능성이 있다는 것이다.
전형적으로, 배위 화합물은 제1 배위 화합물의 R1 또는 R5 기와 다음번 배위 화합물의 R1 또는 R5 기 간에 트리아졸 브릿지를 형성함으로써 사슬로 결합된다 (R5 기의 사용은 Z가 또는 일 경우에만 가능).
따라서, 배위 화합물 사슬의 일반적인 기본 구조는 (IXa) 또는 (IXb)이다:
일 구현예에서, 배위 화합물은 아민 기 (R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A)를 함유한 한 배위 화합물의 치환기와 카르복시 기 (R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A)를 함유한 다른 배위 화합물의 치환기 간에 형성되는 아미드 결합에 의해 사슬로 결합한다.
사슬은 일반적으로 본 발명에 따른 배위 화합물 2개를 포함하지만, 배위 화합물이 3개, 4개 또는 그보다 많을 수도 있다.
또 다른 구현예에서, 전술한 2가지 유형의 연결이 하나의 사슬에서 가능하며, 예를 들어, 이웃한 배위 화합물 2개는 트리아졸 브릿지 하나에 의해 연결되어, 본 발명에 따른 다른 배위 화합물과 트리아졸 브릿지를 통해 또는 아미노 또는 카르복시 기가 존재할 경우 아미드 결합을 통해 연결하는데 이용가능한 치환기가 잔류한다.
일 구현예에서, 배위 화합물들은 -SH 기를 가진 배위 화합물 하나의 치환기 R1 또는 R5와 -SH 기를 가진 다른 배위 화합물 하나의 치환기 R1 또는 R5 간에 형성되는 다이설파이드 결합 (-S-S-)을 통해 사슬로 결합한다.
배위 화합물 이량체는 본 발명에 따른 배위 화합물 2개를, 제1 배위 화합물의 R1 기와 제2 배위 화합물의 R5 기 간에 트리아졸 브릿지를 형성함으로써, 그리고 동시에 제1 배위 화합물의 R5 기와 제2 배위 화합물의 R1 기 간에 트리아졸 브릿지를 형성함으로써, 함께 결합된 상태로 포함한다.
배위 화합물 이량체의 일반 구조식은 따라서 (X)이다:
배위 화합물 사슬 또는 이량체의 합성은 제1 배위 화합물의 아지도 기와 제2 배위 화합물의 삼중 결합 간의 클릭 반응을 통해 배위 화합물 2개를 이량체로 연결하는 트리아졸 브릿지를 형성하는 것을 토대로 한다. 트리아졸 브릿지는, 제1 배위 화합물의 R1 또는 R4 또는 R5의 -N3 기와 제2 배위 화합물의 R1 또는 R4 또는 R5의 삼중 결합 간에 형성된 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 포함하는 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 금속 양이온들은 서로 상이하고, 예를 들어, 금속 양이온은 Tb3+ 및 176Yb3 +로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 내용은 약물 추적용 마커로서 이용하기 적합한 접합체이다. 다수의 약물들이 펩타이드 또는 단백질을 기반으로 하고, 이의 생체분포는 펩타이드 또는 단백질 구조에 형광 또는 방사성 마커를 부착함으로써 추적할 수 있다. 본 발명의 배위 화합물 및 이량체는 추적할 약물의 펩타이드 또는 단백질에 부착하기에 적합하다. 그래서, 흔히 이용되고 상대적으로 저렴한 장치를 이용하는 LC-MS와 같은 통례적인 방법을 이용해 단리된 세포 배양물 또는 조직에서 금속 착물의 존재를 분석할 수 있다. 이러한 세포 또는 조직은 본 발명에 따른 배위 화합물의 어떠한 분해 없이도 강산 중에 완전히 가수분해될 수 있다. 그래서, 가수분해된 샘플에서 배위 화합물을 검출할 수 있다. 이러한 방법은 배위 화합물의 매우 높은 안정성으로 인해 저렴하고 신뢰할 수 있다. 또한, LC-MS 방법은 서로 다른 금속 동위원소를 가진 여러가지 배위 화합물들을 여러개 (다중화) 이용하는 것을 가능하게 하며, 그래서 한번의 LC-MS 분석으로 모두 분석할 수 있다.
본 발명에 따른 접합체는 펩타이드 또는 단백질에 접합되는, 상기와 같이 정의되는 본 발명에 따른 배위 화합물 또는 전술한 바와 같이 정의되는 배위 화합물 이량체 또는 사슬을 포함한다. 접합은 펩타이드 또는 단백질의 아미노 기와 배위 화합물 또는 이의 사슬 또는 이량체의 카르복시 기 사이에 형성되는 아미드 결합을 통해 발생하며, 그 역도 가능하다. 따라서, 배위 화합물 또는 사슬 또는 이량체는 펩타이드 또는 단백질과 접합되기 전에 -NH2 또는 -COOH 기를 함유하여야 한다. 바람직하게는, -NH2 또는 -COOH 기는 R1 및/또는 R4 및/또는 R5 기의 일부이고, 따라서 -NH2; -(CH2)nNH2; -COOH; -(CH2)nCOOH; -NH2, -COOH, -(CH2)nNH2, 또는 -(CH2)nCOOH로 치환된, C6 내지 C10 아릴을 포함하는 군으로부터 선택되고 n이 1-3 범위의 정수인, R1 및/또는 R4 및/또는 R5 기를 가진, 배위 화합물 또는 배위 화합물 이량체로부터 접합체가 형성된다.
접합 반응 조건은 당해 기술 분야의 당업자에게 알려져 있으며, 전형적으로 반응은 DMSO 중에 25℃에서 통상적으로 이용되는 펩타이드 커플링제 (바람직하게는, HATU, PyAOP)를 유기 염기 (트리에틸아민, 에틸다이이소프로필아민)의 존재 하에 이용해 이루어진다. 일반적으로 반응은 수분 이내에 완료된다.
펩타이드는 바람직하게는, 아미노산 3-20개의 올리고펩타이드를 포함하는 군으로부터 선택되고;
단백질은 바람직하게는, 항체, 바람직하게는, 단일클론 항체를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 다른 과제는 하기 단계를 포함하는 약물 추적 방법, 바람직하게는 펩타이드계 또는 단백질계 약물 추적 방법이다:
i) 상기에서 정의된 하나 이상의 접합체를 함유한, 분석할 세포 배양물 또는 조직을 제공하는 단계로서, 펩타이드 또는 단백질이 추적할 펩타이드계 또는 단백질계 약물인, 단계;
ii) 단계 i)로부터 수득한 세포 배양물 또는 조직을 강산, 바람직하게는 비-산화성 HCl 수용액으로 가수분해해 가수분해물을 수득하는 단계;
iii) 단계 ii)의 가수분해물을 본 발명에 따른 배위 화합물 또는 배위 화합물 이량체의 존재에 대해 바람직하게는 LC-MS를 이용해 정성 및/또는 정량 분석하는 단계.
본 발명의 추가적인 과제는 약학에서, 바람직하게는 새로운 약물 개발 및 검사, 더 바람직하게는 약물 표지 및 추적에서의, 본 발명에 따른 배위 화합물 또는 배위 화합물 이량체 또는 접합체의 시험관내 용도이다.
본 발명의 다른 과제는 의료 진단에서, 바람직하게는 MRI 조영제로서, 본 발명에 따른 배위 화합물 또는 배위 화합물 이량체의 용도이다. 바람직하게는, Gd는 자기이완율 (relaxivity)이 매우 높아, Gd3 + 배위 화합물 또는 이량체는 MRI 조영제로 사용될 것이다. (일반적으로 사용되는 MRI 조영제인 GdDOTA보다 약 100x 높은) 배위 화합물의 매우 높은 동역학적 비활성으로 인해 훨씬 더 높은 용량으로 이용할 수 있으며, 인간 또는 동물에 그 자체로 유독한 유리 가돌리늄이 본 발명에 따른 배위 화합물로부터 해리되지 않는다. 따라서, 청구하는 배위 화합물은 인간 또는 동물에 사용하기 더 안전할 것으로 예상된다.
본 발명의 다른 과제는 방사성 진단제 및/또는 방사성 의약제로서 의약제에서, M이 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 86Y, 90Y, 140Nd, 149Pm, 151Pm, 153Sm, 159Gd, 149Tb, 161Tb, 165Dy, 161Ho, 166Ho, 169Er, 167Tm, 175Yb, 177Lu를 포함하는 군으로부터 선택되는 방사성 핵종인, 본 발명에 따른 배위 화합물 또는 배위 화합물 사슬 또는 배위 화합물 이량체의 용도이다. 대안적으로, 방사성 핵종은 또한 할로겐의 방사성 동위원소로서와 같이 배위 화합물의 측쇄에 존재할 수 있으며, 예를 들어 R1 및/또는 R5가 18F일 수 있다.
본 발명은 아래 실시예들을 들어 추가로 설명한다.
실시예
실시예 1: 알킨 펜던트 아암의 중간산물의 합성
TD701의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (2.47 g; 13.1 mmol; 1.0 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (149 ㎎; 782 μmol; 6.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2](225 ㎎; 321 μmol; 2.4 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (25 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 에티닐트리메틸실란 (2.0 ㎖; 14.5 mmol; 1.1 당량) 및 TEA (5.5 ㎖; 39.5 mmol; 3.0 당량)을 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 3시간 동안 RT에서 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 EtOAc (150 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)과 함께 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 어두운 색상의 (완전히 균질하진 않은) 유기층을 분리하고, 수성 층을 추가로 EtOAc로 추출하였다 (5 x 50 ㎖). 유기층을 조합해 솜마개를 통해 여과하고, 여과물을 무수 Na2SO4를 이용해 추가로 건조한 다음, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득되는 암갈색 오일성 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (330 g SiO2, 100% DCM -> 10% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 유리 염기 형태의 생산물을 어두운 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 2.16 g (80%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.24 (CH 3, s, 9H); 4.52 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.48 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.39 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.46 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.80 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC -0.3 (CH3, s); 63.9 (CH2, s); 93.4 및 104.5 (C≡C; 2 x s); 120.2 (arom ., s); 125.4 (arom ., s); 137.2 (arom ., s); 140.8 (arom ., s); 162.7 (arom ., s). ESI-HRMS: 206.0995 [M+H]+ (theor. [C11H16N1O1Si1]+ = 206.0996).
TD557의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD701 (2.16 g; 10.5 mmol; 1.0 당량)을 DCM (40 ㎖)에 용해하였다. DCM (10 ㎖) 중에 준비한 SOCl2 (1.50 ㎖; 20.7 mmol; 2.0 당량) 신선한 용액을 첨가하고, 플라스크를 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (50 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 동안 기체 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 갈색 잔사 (1H NMR에 따르면 이미 순수함)를 플래시 크로마토그래피로 정제하여 (330 g SiO2, 60% P.E./DCM -> 20% P.E./DCM), 심하게 착색된 불순물을 제거하였다. 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 거의 무색인 잔류 오일을 냉장고에 안에 두어 고체화하였다. 형성된 고체를 파쇄하고 고 진공 하에 밤새 추가로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 고운 백색 분말로서 수득하였다. 수율: 2.14 g (87%; 1 단계; TD701 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.25 (CH 3, s, 9H); 4.76 (CH 2, s, 2H); 7.50 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.55 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.86 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC -0.4 (CH3, s); 46.3 (CH2, s); 94.3 and 103.8 (C≡C; 2 x s); 123.3 (arom., s); 126.7 (arom., s); 138.1 (arom., s); 141.5 (arom., s); 157.0 (arom., s). ESI-HRMS: 224.0657 [M+H]+ (theor. [C11H15N1Cl1Si1]+ = 224.0657).
TD558의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD557 (1.05 g; 4.69 mmol; 1.0 당량)을 MeCN (40 ㎖)에 용해하였다. H2O (7 ㎖) 중에 준비한 KF (406 ㎎; 7.0 mmol; 1.5 당량) 신선한 용액을 첨가하고, 플라스크를 왕성하게 2시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 ~10 ㎖로 농축한 다음 DCM (50 ㎖) 및 희석한 NaHCO3 수용액 (50 ㎖)으로 희석하였다. 혼합물을 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 간략하게는 고 진공 하에 건조하여, 생산물을 유리 염기 형태의 옅은 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 702 ㎎ (99%; 1 단계; TD557 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.37 (C≡CH, s, 1H); 4.76 (CH 2, s, 2H); 7.53 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.57 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.87 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} 46.3 (CH2, s); 80.6 and 82.6 (C≡CH; 2 x s); 123.4 (arom., s); 126.8 (arom., s); 138.1 (arom., s); 141.3 (arom., s); 157.0 (arom., s). ESI-HRMS: 152.0262 [M+H]+ (theor. [C8H7N1Cl1]+ = 152.0262).
TD712의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (284 ㎎; 1.51 mmol; 1.0 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (14.5 ㎎; 76 μmol; 5.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (21 ㎎; 30 μmol; 2.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (4 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 에티닐트리이소프로필실란 (370 ㎕; 1.65 mmol; 1.1 당량) 및 TEA (630 ㎕; 4.52 mmol; 3.0 당랑)을 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 16시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 EtOAc (30 ㎖) 및 H2O (30 ㎖)와 함께 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 어두운 색상의 (완전히 균질하진 않은) 유기층을 분리하고, 수성 층을 추가로 EtOAc로 추출하였다 (5 x 25 ㎖). 유기층을 조합해 솜마개를 통해 여과하고, 여과물을 무수 Na2SO4를 이용해 추가로 건조한 다음, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득된 암갈색 오일성 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100% DCM -> 10% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 387 ㎎ (89%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.92-1.26 (i-Pr, m, 21H); 4.53 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.48 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.40 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.47 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.80 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC 10.7 (i-Pr, s); 18.5 (i-Pr, s); 64.0 (CH2, s); 89.4 및 106.6 (C≡C; 2 x s); 120.2 (arom ., s); 125.8 (arom ., s); 137.2 (arom ., s); 140.9 (arom ., s); 162.7 (arom., s). ESI-HRMS: 290.1932 [M+H]+ (theor. [C17H28N1O1Si1]+ = 290.1935).
TD723의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD712 (384 g; 1.33 mmol; 1.0 당량)을 DCM (5 ㎖)에 용해하였다. DCM (1 ㎖) 중에 준비한 신선한 SOCl2 (200 ㎕; 2.75 mmol; 2.1 당량) 용액을 첨가하고, 플라스크를 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (10 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 갈색 잔사 (1H NMR에 따르면 이미 순수함)를 플래시 크로마토그래피로 정제하여 (120 g SiO2, 20% DCM/P.E. -> 30% DCM/P.E.), 심하게 착색된 불순물을 제거하였다. 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 무색 잔류 오일을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고체로서 수득하였다. 수율: 356 ㎎ (87%; 1 단계; TD712 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.91-1.28 (i-Pr, m, 21H); 4.78 (CH 2, s); 7.52 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.57 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.86 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 308.1593 [M+H]+ (theor. [C17H27N1Cl1Si1]+ = 308.1596).
TD530의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (1.00 g; 5.35 mmol; 1.0 당량), N-Boc-프로파길아민 (1.00 g; 6.44 mmol; 1.2 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (102 ㎎; 536 μmol; 10.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (187 ㎎; 266 μmol; 5.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (27 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 추가로 TEA (2.24 ㎖; 16.1 mmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 18시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 EtOAc (30 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)와 함께 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 어두운 색상의 (완전히 균질하진 않은) 유기층을 분리하고, 수성 층을 추가로 EtOAc로 (3 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 솜마개를 통해 여과하고, 여과물을 무수 Na2SO4를 이용해 추가로 건조한 다음, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득된 암갈색 오일성 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (220 g SiO2, 100% DCM -> 100% EtOAc). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 610 ㎎ (43%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.40 (CH 3, s, 9H); 3.99 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.47 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.32 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.40 (NH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.44 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.79 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC 28.2 (CH3, s); 29.9 (CH2, s); 64.0 (CH2, s); 78.4 (C-CH3, s); 81.3 및 86.9 (C≡C; 2 x s); 119.8 (arom ., s); 125.0 (arom., s); 137.2 (arom ., s); 141.1 (arom ., s); 155.3 (CO, s); 162.5 (arom ., s). ESI-HRMS: 263.1390 [M+H]+ (theor. [C14H19N2O3]+ = 263.1390).
TD538의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, TD530 (568 ㎎; 2.17 mmol; 1.0 당량)을 DCM (20 ㎖)에 용해한 다음 TEA (900 ㎕; 6.46 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. DCM (5 ㎖) 중에 준비한 신선한 MsCl 용액 (355 ㎕; 4.33 mmol; 2.0 당량)을 이후 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 DCM (50 ㎖)으로 희석한 다음 NaHCO3의 희석 수용액 (50 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 341.1 [M+H]+ (theor. [C15H21N2O5S1]+ = 341.1). 이런 방식으로 수득한 TD538은 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD539에 대해 바로 이용하였다.
TD1045의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (500 ㎎; 2.67 mmol; 1.0 당량), 1,1-다이메틸프로파길아민 (420 ㎕; 3.99 mmol; 1.5 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (21 ㎎; 110 μmol; 4.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2](19 ㎎; 27 μmol; 1.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (10 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 TEA (1.10 ㎖; 7.89 mmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 18시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 혼합물을 시린지 마이크로필터 (PTFE)로 여과하고, 고상을 MeCN으로 추가로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조하고, 수득된 암갈색 고체 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100% EtOAc -> 40% EtOAc/MeOH). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색의 고형화된 오일로서 수득하였다. 수율: 283 ㎎ (56%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.38 (CH 3, s, 6H); 3.17 (NH 2, s, 2H); 4.51 (CH 2, s, 2H); 5.44 (OH, bs, 1H); 7.26 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.40 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.76 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 191.1180 [M+H]+ (theor. [C11H15N2O1]+ = 191.1180).
TD1048의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 TD1045 (280 ㎎; 1.47 mmol; 1.0 당랑)을 투입한 후 MeCN (10 ㎖) 및 Boc2O (2.0 M/드라이 THF; 1.0 ㎖; 2.00 mmol; 1.4 당량) 용액을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 증발시켜 건조하고, 수득한 노란색 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100% DCM -> 100% EtOAc). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고체로서 수득하였다. 수율: 242 ㎎ (57%; 1 단계; TD1045 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.40 (CH 3, s, 9H), 1.53 (CH 3, s, 6H); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 4); 5.44 (OH, t, 1H, 3 J HH = 4); 7.12 (NH, bs, 1H); 7.25 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.41 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.77 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 291.1704 [M+H]+ (theor. [C16H23N2O3]+ = 291.1703).
TD1050의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1048 (19 ㎎; 65 μmol; 1.0 당량)을 DCM (3 ㎖)에 용해한 다음 TEA (28 ㎕; 201 μmol; 3.1 당량)를 첨가하였다. DCM (1 ㎖) 중에 준비한 신선한 MsCl 용액 (10 ㎕; 129 μmol; 2.0 당량)을 이후 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 DCM (15 ㎖)으로 희석한 다음 NaHCO3의 희석 수용액 (15 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 추출하였다 (3 x 20 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 369.1 [M+H]+ (theor. [C17H25N2O5S1]+ = 369.1). 이런 방식으로 수득한 TD1050은 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD1054 (유사하게 TD1105)에 대해 바로 사용하였다
TD966의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (1.00 g; 5.35 mmol; 1.0 당량), N-Boc-4-에티닐피페리딘 (1.23 g; 5.88 mmol; 1.1 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (41 ㎎; 215 μmol; 4.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (75 ㎎; 107 μmol; 2.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (40 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 TEA (2.20 ㎖; 15.7 mmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 2일간 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 EtOAc (30 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)와 함께 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 어두운 색상의 (완전히 균질하지 않은) 유기층을 분리하고, 수성 층을 추가로 EtOAc로 (3 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 솜마개를 통해 여과하고, 여과물을 무수 Na2SO4를 이용해 추가로 건조한 다음, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득된 암갈색 오일성 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (220 g SiO2, 100% DCM -> 100% EtOAc). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.47 g (87%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.40 (CH 3, s, 9H); 1.44-1.57 (CH 2, m, 2H); 1.75-1.89 (CH 2, m, 2H); 2.87 (CH-C≡C tt, 1H, 3 J HH = 8, 3 J HH = 4); 3.01-3.17 (CH 2, m, 2H); 3.59-3.73 (CH 2, m, 2H); 4.51 (CH 2-O, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.44 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.32 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.41 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.76 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 317.1860 [M+H]+ (theor. [C18H25N2O3]+ = 317.1860).
TD1117의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD952 (50.0 ㎎; 158 μmol; 1.0 당량)을 DCM (6 ㎖)에 용해한 다음 TEA (66 ㎕; 473 μmol; 3.0 당량) 및 neat MsCl (25 ㎕; 323 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반한 다음 DCM (10 ㎖) NaHCO3의 희석 수용액 (10 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 395.2 [M+H]+ (theor. [C19H27N2O5S1]+ = 395.2). 이런 방식으로 수득한 TD1117은 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD1118에 대해 바로 사용하였다.
TD936의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (135 ㎎; 722 μmol; 1.0 당량), CuI (5.5 ㎎; 29 μmol; 4.0 mol%), [Pd(PPh3)2Cl2] (10.0 ㎎; 14 μmol; 2.0 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (3 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 페닐아세틸렌 (95 ㎕; 865 μmol; 1.2 당량) 및 TEA (300 ㎕; 2.15 mmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 바이얼을 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 16시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)로 여과한 다음 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조시키고, MeCN (3 ㎖)에 다시 용해해 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, +TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)의 혼합물에 용해하여 분별 깔때기로 옮겼다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류 고형물을 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 141 ㎎ (93%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.57 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.50 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.42-7.54 (arom., Ph, m, 2+3H); 7.57-7.64 (Ph, m, 2H); 7.85 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 210.0913 [M+H]+ (theor. [C14H12N1O1]+ = 210.0913).
TD939의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD936 (22 ㎎; 105 μmol; 1.0 당량)을 DCM (6 ㎖)에 용해한 다음 TEA (44 ㎕; 316 μmol; 3.0 당량) 및 neat MsCl (16 ㎕; 207 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반한 다음 NaHCO3의 희석 수용액 (5 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 288.1 [M+H]+ (theor. [C15H14N1O3S1]+ = 288.1). 이런 방식으로 수득한 TD939는 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD944에 대해 바로 사용하였다.
TD937의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (135 ㎎; 722 μmol; 1.0 당량), CuI (5.5 ㎎; 29 μmol; 4.0 mol%), [Pd(PPh3)2Cl2] (10.0 ㎎; 14 μmol; 2.0 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (3 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 사이클로프로필아세틸렌 (75 ㎕; 886 μmol; 1.2 당량) 및 TEA (300 ㎕; 2.15 mmol; 3.0 당랑)을 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 바이얼을 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 16시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)로 여과한 다음 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조시키고, MeCN (3 ㎖)에 재용해한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)의 혼합물에 용해하고, 분별 깔때기로 옮겼다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류 고형물을 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 98 ㎎ (78%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.69-0.83 (CH 2-CH, m, 2H); 0.83-0.99 (CH 2-CH, m, 2H); 1.56 (CH, tt, 3 J HH = 8, 3 J HH = 5); 4.49 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.42 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.27 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.38 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.74 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 174.0913 [M+H]+ (theor. [C11H12N1O1]+ = 174.0913).
TD940의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD937 (26 ㎎; 150 μmol; 1.0 당량)을 DCM (9 ㎖)에 용해한 다음 TEA (63 ㎕; 452 μmol; 3.0 당량) 및 neat MsCl (23 ㎕; 297 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반한 다음 NaHCO3의 희석 수용액 (5 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 252.0 [M+H]+ (theor. [C12H14N1O3S1]+ = 252.1). 이런 방식으로 수득한 TD940은 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD943에 대해 바로 사용하였다.
TD952의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (150 ㎎; 802 μmol; 1.0 당량), CuI (6.1 ㎎; 32 μmol; 4.0 mol%), [Pd(PPh3)2Cl2] (11.5 ㎎; 16 μmol; 2.0 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (3 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 tert-부틸아세틸렌 (200 ㎕; 1.62 mmol; 2.0 당량) 및 TEA (340 ㎕; 2.44 mmol; 3.0 당랑)을 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 바이얼을 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 24시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)로 여과한 다음 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조시키고, MeCN (3 ㎖)에 재용해한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)의 혼합물에 용해하여 분별 깔때기로 옮겼다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류 고형물을 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 146 ㎎ (96%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.30 (CH 3, s, 9H); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.43 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.26 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.39 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.74 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 190.1227 [M+H]+ (theor. [C12H16N1O1]+ = 190.1226).
TD956의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD952 (8 ㎎; 42 μmol; 1.0 당량)을 DCM (3 ㎖)에 용해한 다음 TEA (18 ㎕; 129 μmol; 3.0 당량) 및 neat MsCl (6.5 ㎕; 84 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반한 다음 DCM (5 ㎖) NaHCO3의 희석 수용액 (5 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 268.1 [M+H]+ (theor. [C13H18N1O3S1]+ = 268.1). 이런 방식으로 수득한 TD956은 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD959에 대해 바로 사용하였다.
TD965의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 (53 ㎎; 283 μmol; 1.0 당량), 1-에티닐아다만탄 (50 ㎎; 312 μmol; 1.1 당량), CuI (2.7 ㎎; 14 μmol; 5.0 mol%), [Pd(PPh3)2Cl2] (5.0 ㎎; 7 μmol; 2.5 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (1.5 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 TEA (120 ㎕; 861 μmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 바이얼을 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 2일간 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)로 여과한 다음 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조시키고, MeCN (3 ㎖)에 재용해한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)의 혼합물에 용해하여 분별 깔때기로 옮겼다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류 고형물을 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 67 ㎎ (89%; 1 단계; (6-브로모피리딘-2-일)메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.61-1.76 (Adm ., m, 6H); 1.82-1.93 (Adm ., m, 6H); 1.94-2.00 (Adm., m, 3H); 4.50 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.43 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.25 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.38 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.74 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 268.1694 [M+H]+ (theor. [C18H22N1O1]+ = 268.1696).
TD990의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD965 (21 ㎎; 79 μmol; 1.0 당량)을 DCM (3 ㎖)에 용해한 다음 TEA (33 ㎕; 237 μmol; 3.0 당량) 및 neat MsCl (12 ㎕; 155 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 용액을 20분간 RT에서 교반한 다음 DCM (10 ㎖) 및 NaHCO3의 희석 수용액 (10 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 15 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 346.1 [M+H]+ (theor. [C19H24N1O3S1]+ = 346.1). 이런 방식으로 수득한 TD990은 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD992에 대해 바로 사용하였다.
TD1194의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD558 (110 ㎎; 726 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (3.3 ㎖)에 용해한 다음 NIS (180 ㎎; 800 μmol; 1.1 당량) 및 AcOH (50 ㎕; 875 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 3시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 DCM (50 ㎖)으로 희석하였다. 형성된 2상 혼합물을 분별 깔때기로 옮긴 다음 희석한 aq. NaHCO3 및 aq. Na2S3O3를 첨가하였다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 옅은 적색 고형물로서 수득하였다. 수율: 61.5 ㎎ (31%; 1 단계; TD558 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.74 (CH 2, s, 2H); 7.48 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.54 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 277.9230 [M+H]+ (theor. [C8H6N1I1Cl1]+ = 277.9228).
TD1178의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에 CuI (60.0 ㎎; 315 μmol; 40 mol%), Phen (114 ㎎; 633 μmol; 80.0 mol%), KHCO3 (159 ㎎; 1.59 mmol; 2.0 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DCM (8 ㎖) 중의 TD558 (120 ㎎; 792 μmol; 1.0 당량) 및 Togni I (288 ㎎; 872 μmol; 1.1 당량) 용액을 격막을 통해 첨가하고, 형성된 혼합물을 2일간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고 고상을 DCM으로 추가로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 MeCN (3 ㎖)에 재용해하였다. 혼합물을 다시 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고 여과물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 DCM (50 ㎖)으로 희석하였다. 형성된 2상 혼합물을 분별 깔때기로 옮긴 다음 희석한 aq. NaHCO3을 첨가하였다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 형성된 노란색 오일을 잠시 고 진공 하에 건조하여 (오일이 고형화될 때까지), 생산물을 유리 염기 형태의 옅은 노란색 고형물로서 수득하였다 (생산물의 일부가 플라스크의 상부에 무색 결정으로 승화됨). 수율: 48.5 ㎎ (28%; 1 단계; TD558 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.83 (CH 2, s, 2H); 7.78 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.04 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 19F{1H} δF -49.2 (s). ESI-HRMS: 220.0140 [M+H]+ (theor. [C9H6N1F3Cl1]+ = 220.0135).
TD797의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, 메틸 4,6-다이브로모피콜리네이트 (200 ㎎; 678 μmol; 1.0 당량)를 THF (4 ㎖) 및 MeOH (2 ㎖)의 혼합물에 용해하였다. 형성된 약간 노란색 용액에 (10분에 걸쳐, 플라스크에 마개 장착하지 않고) 고체 NaBH4 (205 ㎎; 5.42 mmol; 8.0 당량)을 나누어 첨가하였으며, 이때 수소 기체가 집중적으로 발생되었으며, 혼합물이 거의 무색으로 바뀌었다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겨 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)로 희석하였다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 179 ㎎ (99%; 1 단계; 메틸 4,6-다이브로모피콜리네이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.53 (CH 2, s, 2H); 5.68 (OH, bs, 1H); 7.67 (arom., m, 1H); 7.89 (arom., m, 1H). ESI-HRMS: 265.8809 [M+H]+ (theor. [C6H6N1O1Br2]+ = 265.8811).
TD804의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 TD797 (100 ㎎; 375 μmol; 1.0 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (4.3 ㎎; 23 μmol; 6.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (8.0 ㎎; 11 μmol; 3.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (1.5 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 에티닐트리메틸실란 (160 ㎕; 1.16 mmol; 3.1 당량) 및 TEA (160 ㎕; 1.15 mmol; 3.1 당랑)을 첨가하였으며, 이후 혼합물이 암갈색으로 변색되었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 16시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 그 후, 혼합물을 EtOAc (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)와 함께 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 어두운 색상의 유기층을 분리하고, 수성 층을 추가로 EtOAc로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득된 암갈색 오일성 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100% DCM -> 20% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 암갈색 오일로서 수득하였다. 수율: 99 ㎎ (88%; 1 단계; TD797 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.24 (CH 3, s, 9H); 0.25 (CH 3, s, 9H); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.53 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.40 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.42 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 302.1389 [M+H]+ (theor. [C16H24N1O1Si2]+ = 302.1391).
TD806의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD804 (98 ㎎; 325 μmol; 1.0 당량)를 DCM (3 ㎖)에 용해하였다. DCM (1 ㎖) 중에 준비한 신선한 SOCl2 용액 (47 ㎕; 647 μmol; 2.0 당량)을 첨가하고, 플라스크를 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (16 ㎖)으로 희석하여 NaHCO3의 희석 수용액 (20 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 추출하였다 (3 x 20 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 갈색 오일로서 수득하였다. 수율: 102 ㎎ (98%; 1 단계; TD804 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.25 (CH 3, s, 18H); 4.74 (CH 2, s, 2H); 7.53 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.60 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 320.1051 [M+H]+ (theor. [C16H23N1O1Cl1Si2]+ = 320.1052).
TD807의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD806 (101 ㎎; 316 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (5 ㎖)에 용해하였다. H2O (800 ㎕) 중에 준비한 신선한 KF (46.4 ㎎; 800 μmol; 2.5 당량) 용액을 첨가하고, 플라스크를 5시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 ~1 ㎖로 농축하고, DCM (50 ㎖) 및 희석한 수용액 NaHCO3 (50 ㎖)로 희석하였다. 혼합물을 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 갈색 고형물로서 수득하였다. 수율: 48 ㎎ (87%; 1 단계; TD806 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.48 (C≡CH, s, 1H); 4.75 (C≡CH, s, 1H); 4.76 (CH 2, s, 2H); 7.61 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.65 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 176.0267 [M+H]+ (theor. [C10H7N1Cl1]+ = 176.0267).
TD662의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, 다이프로파길아민 (116 ㎕; 1.12 mmol; 1.0 당량)을 MeCN (2.5 ㎖)에 용해한 다음 neat 1,2-다이브로모에탄 (965 ㎕; 11.2 mmol; 10 당량) 및 NaHCO3 (113 ㎎; 1.35 mmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 2일간 80℃에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 DCM (50 ㎖)으로 희석한 다음 NaHCO3 (50 ㎖)의 희석 수용액을 첨가하였다. 형성된 2상 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 추가로 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2; 25 g; DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 69 ㎎ (31%; 1 단계; 다이프로파길아민 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 2.86 (CH 2, t, 2H, 3 J HH = 7); 3.21 (C≡CH, t, 2H, 4 J HH = 2); 3.21 (CH 2 , t, 4H, 4 J HH = 2); 3.55 (CH 2, t, 2H, 3 J HH = 7). 13C{1H} δC 30.3 (CH2, s); 41.6 (CH2, s); 53.9 (CH2, s); 76.4 and 78.5 (C≡CH, 2 x s). ESI-HRMS: 200.0070 [M+H]+ (theor. [C8H11N1Br1]+ = 200.0070).
실시예 2: 아지드 펜던트 아암의 중간산물의 합성
TD406의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, 2,6-비스(클로로메틸)피리딘 (6.17 g; 35.0 mmol; 1.2 당량)을 MeCN (80 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (1.90 g; 29.2 mmol; 1.0 당량) 및 무수 K2CO3 (4.04 g; 29.2 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 5일간 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 글래스 프릿 S3 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오렌지색 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, 30% P.E./DCM -> 100% DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 2.62 g (49%; 1 단계; NaN3 기준). 회수: 2.21 g 2,6-비스(클로로메틸)피리딘 (사용한 초기 양의 36%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.53 (CH 2, s, 2H); 4.78 (CH 2, s, 2H); 7.40 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.52 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.89 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC 46.6 (CH2, s); 54.2 (CH2, s); 121.9 (arom., s); 122.6 (arom., s); 138.5 (arom., s); 155.7 (arom., s); 156.3 (arom., s). ESI-HRMS: 183.0433 [M+H]+ (theor. [C7H8N4Cl1]+ = 183.0432).
TD595의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD406 (30 ㎎; 162 μmol; 1.0 당량)을 DCM (5 ㎖)에 용해한 다음 DCM (1 ㎖) 중에 준비한 신선한 MCPBA 용액 (77%; 72 ㎎; 320 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 형성된 용액을 3시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 DCM (20 ㎖) 및 희석한 수용액 NaHCO3 (25 ㎖)으로 희석하고, 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 바닥 층을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 추출하였다 (3 x 20 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. ESI-MS (LC-MS): 199.0 [M+H]+ (theor. [C7H8N4O1Cl1]+ = 199.0). 이런 방식으로 수득한 TD595는 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD596에 대해 바로 사용하였다.
TD726의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (1000 ㎖)에서, 다이메틸 4-클로로피리딘-2,6-다이카르복실레이트 (15.0 g; 65.3 mmol; 1.0 당량)를 THF (540 ㎖) 및 MeOH (120 ㎖)의 혼합물에 점진적으로 용해하였다. 수득된 약간 노란색 용액을 얼음조 (~5℃)를 이용해 냉각한 후 고체 NaBH4 (12.4 g; 328 mmol; 5.0 당량)를 나누어 (1시간에 걸쳐, 플라스크에 마개를 장착하지 않은 채) 첨가하였으며, 이 동안 수소 가스가 집중적으로 발생하였고, 혼합물의 색이 적색, 오렌지색, 그리고 궁극적으로 노란색으로 바뀌었다. 첨가한 후, 플라스크를 RT까지 승온시켜 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 수득된 흐린 노란색의 유백광 용액을 글래스 프릿 (S3) 상에서 여과하고, 여과물을 증발시켜 건조한 다음 추가로 (현탁물로서) DCM과 동시 증발시켰다. 잔사를 끓고 있는 H2O (~600 ㎖)에 용해하고, 수득한 고 알칼리 용액을 DCM에 의해 밤새 연속 추출하였다. (일부 결정화된 산물이 함유된) 유기층을 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 기계로 분쇄하고, 고 진공으로 (질량이 일정해질 때까지) 추가로 건조하여, 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 미세결정 분말로서 수득하였다. 수율: 10.84 g (96%; 1 단계; 기준 다이메틸 4-클로로피리딘-2,6-다이카르복실레이트). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.53 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.54 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 7.36 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 63.7 (CH2, s); 118.0 (arom., s); 144.0 (arom., s); 163.5 (arom., s). ESI-HRMS: 174.0317 [M+H]+ (theor. [C7H9N1O2Cl1]+ = 174.0316). EA (C7H8N1O2Cl1, M R = 173.6): C 48.4 (48.5); H 4.7 (4.5); N 7.7 (8.1); Cl 20.4 (21.2).
TD759의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD726 (626 ㎎; 3.61 mmol; 1.0 당량)을 DCM (20 ㎖)에 현탁하였다. DCM (10 ㎖) 중에 준비한 신선한 SOCl2 용액 (780 ㎕; 10.7 mmol; 3.0 당량)을 첨가하고, 플라스크를 열린 상태로 90분간 RT에서 교반하여 맑은 용액을 수득하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (40 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 형성된 결정화된 잔사를 분쇄하고, 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 미세결정 분말로서 수득하였다. 수율: 711 ㎎ (94%; 1 단계; 기준 TD726). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.79 (CH 2, s, 4H); 7.70 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 45.7 (CH2, s); 122.8 (arom., s); 144.4 (arom ., s); 158.2 (arom ., s). ESI-HRMS: 209.9638 [M+H]+ (theor. [C7H7N1Cl3]+ = 209.9639).
TD760의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD759 (708 ㎎; 3.36 mmol; 1.3 당량)를 MeCN (20 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (168 ㎎; 2.58 mmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (360 ㎎; 2.61 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 노란색 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, 40% P.E./DCM -> 10% P.E./DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 1시간 고 진공으로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 323 ㎎ (58%; 1 단계; 기준 NaN3). 회수: 218 ㎎ TD759 (사용한 초기량의 31%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.56 (CH 2, s, 2H); 4.78 (CH 2, s, 2H); 7.58 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.69 (arom., d, 1H, 4 J HH = 8). 13C{1H} δC 45.8 (CH2, s); 53.6 (CH2, s); 121.9 (arom ., s); 122.5 (arom., s); 144.4 (arom., s); 157.9 (arom., s); 158.2 (arom., s). ESI-HRMS: 217.0040 [M+H]+ (theor. [C7H7N4Cl2]+ = 217.0042).
TD1146의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD726 (495 ㎎; 2.85 mmol; 1.0 당량)을 DMF (11.0 ㎖; 143 mmol; 50 당랑)에 용해한 후 신선하게 분쇄한 KOH (1.6 g; 28.5 mmol; 10 당량)를 투입하였다. 수득한 현탁물을 3일간 100℃에서 공기 존재 하에 (바이얼 격막을 두꺼운 바늘 2개로 천공) 교반하였다. 그 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE; 고체는 DMF로 세척)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 조합해 바로 동결건조하여, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태로 백색 폼으로서 수득하였다. 수율: 187 ㎎ (22%; 1 단계; 기준 TD726). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.18 (CH 3, s, 6H); 4.59 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.91 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 6.84 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 183.1128 [M+H]+ (theor. [C9H15N2O2]+ = 183.1128). EA (C9H14N2O2·1.0TFA, M R = 296.2): C 44.6 (44.1); H 5.1 (4.9); N 9.5 (9.1); F 19.2 (18.2).
TD1154의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1146·1.0TFA (173.3 ㎎; 585 μmol; 1.0 당량)를 DCM (17 ㎖)에 현탁한 다음 neat SOCl2 (780 ㎕; 2.34 mmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 90분간 RT에서 교반하하여 맑은 용액을 수득하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (20 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 105.6 ㎎ (82%; 1 단계; 기준 TD726). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 2.98 (CH 3, s, 6H); 4.60 (CH 2, s, 4H); 6.73 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 219.0450 [M+H]+ (theor. [C9H13N2Cl2]+ = 219.0450).
TD1163의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1154 (103.9 ㎎; 474 μmol; 1.3 당량)를 MeCN (7 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (23.7 ㎎; 365 μmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (50.3 ㎎; 364 μmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 형성된 현탁물을 24시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, 5% EtOAc/DCM -> 10% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 1시간 고 진공으로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 33.8 ㎎ (41%; 1 단계; 기준 NaN3). 회수: 11.0 ㎎ TD1154 (사용한 초기량의 11%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 2.99 (CH 3, s, 6H); 4.32 (CH 2, s, 2H); 4.60 (CH 2, s, 2H); 6.60 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 6.73 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 226.0853 [M+H]+ (theor. [C9H13N5Cl1]+ = 226.0854).
TD1024의 합성: 유리 바이얼 (100 ㎖)에 CuI (70 ㎎; 0.37 mmol; 4.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (125 ㎎; 0.18 mmol; 2.0 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 드라이 THF (40 ㎖), 드라이 톨루엔 (40 ㎖) 및 드라이 DMF (2 ㎖) 혼합물 중의 다이메틸 4-요오도피리딘-2,6-다이카르복실레이트 (2.93 g; 9.13 mmol; 1.0 당량) 용액을 격막을 통해 첨가한 다음 에티닐트리이소프로필실란 (2.25 ㎖; 10.0 mmol; 1.1 당량) 및 TEA (3.80 ㎖; 27.3 mmol; 3.0 당랑)를 첨가하였으며, 이후 혼합물이 옅은 적색으로 바뀌었다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 20시간 동안 RT에서 교반 방치하였다. 수득된 어두운 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (250 ㎖)에 용해하고, 형성된 적색 용액을 Na2S2O3 수용액으로 1번 헹구었다. 유기층을 분리하고, Na2SO4로 건조한 후 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (220 g SiO2, 100% DCM -> 20% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 사전-정제된 생산물을 유리 염기 형태의 오렌지색 오일로 수득하였다. 수율: 3.16 g (92%; 1 단계; 다이메틸 4-요오도피리딘-2,6-다이카르복실레이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.92-1.27 (i-Pr, m, 21H); 3.92 (CH 3, s, 6H); 8.16 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 10.6 (i-Pr, s); 18.4 (i-Pr, s); 52.9 (CH3, s); 99.0 (C≡C-Si, s); 102.5 (C≡C-arom.; s); 129.3 (arom., s); 132.7 (arom., s); 148.4 (arom., s); 164.0 (CO, s). ESI-HRMS: 376.1939 [M+H]+ (theor. [C20H30N1O4Si1]+ = 376.1939).
TD808의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, TD1024 (3.15 g; 8.39 mmol; 1.0 당량)를 THF (60 ㎖) 및 MeOH (30 ㎖)의 혼합물에 용해하였다. 그 후, 고체 NaBH4 (2.55 g; 67.4 mmol; 8 당량)를 1시간에 걸쳐 나누어 첨가하였으며 (이 동안 수소 가스가 집중적으로 발생됨), 혼합물의 색이 암적색으로 바뀌었다. 첨가한 후, 플라스크를 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (200 ㎖) 및 H2O (200 ㎖)에 다시 현탁하여, 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, (현탁물로서) 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 100 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 EtOAc (500 ㎖)로 희석하였다. 형성된 갈색 용액을 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 옅은 갈색 고형물로서 수득하였다. 수율: 2.61 g (97%; 1 단계; TD1024 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.04-1.17 (i-Pr, m, 21H); 4.51 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.48 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 7.31 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 10.6 (i-Pr, s); 18.5 (i-Pr, s); 63.9 (CH2, s); 94.6 (C≡C-Si, s); 105.1 (C≡C-arom.; s); 119.8 (arom., s); 130.8 (arom., s); 161.9 (arom., s). ESI-HRMS: 320.2036 [M+H]+ (theor. [C18H30N1O2]+ = 320.2040).
TD815의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, 사전-정제한 TD808 (2.61 g; 8.17 mmol; 1.0 당량)을 DCM (100 ㎖)에 현탁하였다. DCM (10 ㎖) 중에 준비한 신선한 SOCl2 용액 (1.80 ㎖; 24.8 mmol; 3.0 당량)을 첨가하고, 플라스크를 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (100 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 75 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 2.87 g (99%; 1 단계; 기준 TD808). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.97-1.20 (i-Pr, m, 21H); 4.78 (CH 2, s, 4H); 7.59 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 10.6 (i-Pr, s); 18.4 (i-Pr, s); 45.9 (CH2, s); 96.6 (C≡C-Si, s); 103.5 (C≡C-arom.; s); 124.6 (arom ., s); 132.0 (arom., s); 157.1 (arom ., s). ESI-HRMS: 356.1368 [M+H]+ (theor. [C18H28N1Cl2Si1]+ = 356.1368).
TD817의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, TD815 (2.86 g; 8.02 mmol; 1.2 당량)를 MeCN (130 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (435 ㎎; 6.69 mmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (920 ㎎; 6.67 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오렌지색 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (220 g SiO2, 30% P.E./DCM -> 10% P.E./DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 1시간 고 진공으로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.23 g (51%; 1 단계; 기준 NaN3). 회수: 709 ㎎ TD815 (사용한 초기량의 25%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.01-1.21 (i-Pr, m, 21H); 4.55 (CH 2, s, 2H); 4.78 (CH 2, s, 2H); 7.47 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.58 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). 13C{1H} δC 10.6 (i-Pr, s); 18.4 (i-Pr, s); 46.0 (CH2, s); 53.7 (CH2, s); 96.5 (C≡C-Si, s); 103.7 (C≡C-arom.; s); 123.7 (arom., s); 124.3 (arom., s); 131.8 (arom., s); 156.6 (arom., s); 157.1 (arom ., s). ESI-HRMS: 363.1763 [M+H]+ (theor. [C18H28N4Cl1Si1]+ = 363.1766).
TD1052의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, 다이메틸 4-요오도피리딘-2,6-다이카르복실레이트 (500 ㎎; 1.56 mmol; 1.0 당량), CuI (600 ㎎; 3.15 mmol, 2.0 당량) 및 [(dppf)PdCl2] (7.0 ㎎, 10 μmol; 0.6 mol%)을 드라이 DMF (8 ㎖)에 용해한 다음 드라이 DMF (2 ㎖) 중의 메틸 2,2-다이플루오로-2-(플루오로설포닐)아세테이트 (600 ㎎; 3.12 mmol; 2.0 당량)를 첨가하였다. 형성된 어두운 혼합물을 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. 냉각한 후, 혼합물을 DCM (10 ㎖)으로 희석하여 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하였다. 고형물을 DCM으로 추가로 헹구었다. 여과물을 추가로 DCM (50 ㎖)으로 희석한 다음 희석한 수용액 NaHCO3 (5 x 25 ㎖)으로 헹구었다. 유기층을 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100 % DCM -> 15% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고형물로서 수득하였다. 수율: 366 ㎎ (89%; 1 단계; 다이메틸 4-요오도피리딘-2,6-다이카르복실레이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.97 (CH 3, s, 6H); 8.49 (arom., q, 2H, 4 J HF = 1). 19F{1H} δF -63.4 (s). ESI-HRMS: 264.0480 [M+H]+ (theor. [C10H9N1O4F3]+ = 264.0478).
TD1053의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1052 (365 ㎎; 1.39 mmol; 1.0 당량)를 MeOH (5 ㎖) 및 THF (10 ㎖)의 혼합물에 용해하였다. 형성된 무색 용액을 얼음조 (~5℃)를 이용해 냉각한 후 고체 NaBH4 (420 ㎎; 11.1 mmol; 8.0 당량)를 나누어 첨가하였으며 (30분에 걸쳐, 플라스크에 마개 비-장착), 이 과정 중에 수소 가스가 집중적으로 발생하고 혼합물의 색이 적색 및 오렌지색으로 바뀌었다. 첨가한 후, 플라스크를 RT까지 승온시켜 추가로 30분간 RT에서 교반하였다. 수득된 노란색 용액을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 고체 부하 기법, 100% EtOAc -> 15% MeOH/EtOAc). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 171 ㎎ (60%; 1 단계; TD1052 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.62 (CH 2, s, 4H); 5.65 (OH, s, 2H); 7.60 (arom., q, 2H, 4 J HF = 1). 19F{1H} δF -63.6 (s). ESI-HRMS: 208.0580 [M+H]+ (theor. [C8H9N1O2F3]+ = 208.0580).
TD1055의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1053 (169 ㎎; 816 μmol; 1.0 당량)을 DCM (20 ㎖)에 용해하였다. DCM (5 ㎖) 중에 준비한 신선한 SOCl2 용액 (237 ㎕; 3.26 mmol; 4.0 당량)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. NaHCO3의 희석 수용액 (25 ㎖)을 첨가하고, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 10분간 RT에서 교반하으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 168 ㎎ (84%; 1 단계; TD1053 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.90 (CH 2, s, 4H); 7.94 (arom., s, 2H). 19F{1H} δF -63.4 (s). APCI-HRMS: 243.9902 [M+H]+ (theor. [C8H7N1F3Cl2]+ = 243.9902).
TD1057의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1055 (143 ㎎; 586 μmol; 1.8 당량)를 MeCN (3.5 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (21.5 ㎎; 331 μmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (46 ㎎; 333 μmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 3일간 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오렌지색 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (80 g SiO2, 30% P.E./DCM -> 40% DCM/P.E.). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 1시간 고 진공으로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 43.9 g (53%; 1 단계; 기준 NaN3). 회수: 32.1 ㎎ TD1055 (사용한 초기량의 22%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.69 (CH 2, s, 2H); 4.90 (CH 2, s, 2H); 7.81 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.93 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). 19F{1H} δF -63.4 (s). APCI-HRMS: 251.0306 [M+H]+ (theor. [C8H7N4F3Cl1]+ = 251.0306).
TD549의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (250 ㎖)에 다이메틸 4-클로로피리딘-2,6-다이카르복실레이트 (5.00 g; 21.8 mmol; 1.0 당량), 페닐보론산 (3.20 g; 26.2 mmol; 1.2 당량) 및 XPhos Pd G2 (510 ㎎; 648 μmol; 3.0 mol%)를 투입한 다음 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DMF (110 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 신선하게 건조한 (고 진공 하에 히트 건 사용) Cs2CO3 (15.6 g; 47.9 mmol; 2.2 당량; 플라스크는 첨가하기 위해 잠시 개봉)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 20시간 동안 격막 하에 (그러나 외부 아르곤 투입 없이) 80℃에서 교반하였다. 수득된 어두운 혼합물을 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과하고 여과물을 H2O (500 ㎖)가 든 교반한 비이커에 부었다. 석출물을 글래스 프릿 (S2) 상에서 수집해 H2O로 헹구고, 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 오프 화이트 고형물로서 수득하였다. 수율: 3.01 g (51%; 1 단계; 다이메틸 4-클로로피리딘-2,6-다이카르복실레이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.95 (CH 3, s, 6H); 7.45- 7.57 (Ph, m, 3H); 7.82- 8.00 (Ph, m, 2H); 8.48 (arom., s, 2H); 13C{1H} δC 52.7 (CH3, s); 125.0 (arom ., s); 127.2 (Ph., s); 129.5 (Ph., s); 130.2 (Ph., s); 135.5 (Ph., s); 148.6 (arom., s); 150.0 (arom., s); 164.7 (CO., s). ESI-HRMS: 272.0916 [M+H]+ (theor. [C15H14N1O4]+ = 272.0917).
TD563의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (500 ㎖)에서, TD549 (2.98 g; 11.0 mmol; 1.0 당량)를 MeOH (100 ㎖) 및 THF (100 ㎖)의 혼합물에 용해하였다. 형성된 약간 노란색 용액을 얼음조 (~5℃)를 이용해 냉각한 후 고체 NaBH4 (2.90 g; 76.7 mmol; 9.0 당량)를 나누어 첨가하였으며 (30분에 걸쳐, 플라스크에 마개 비-장착), 이 과정 중에 수소 가스가 집중적으로 발생하고 혼합물의 색이 적색 및 오렌지색으로 바뀌었다. 첨가한 후, 플라스크를 RT까지 승온시켜 추가 30분간 RT에서로 교반하였다. 형성된 흐린 노란색 유백광 용액을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조하고, 추가로 (현탁물로서) DCM과 동시 증발시켰다. 잔사를 H2O (300 ㎖) 및 DCM (300 ㎖)의 혼합물에 용해해, 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 추출하였다 (8 x 75 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 형성된 결정화된 잔사를 분쇄하고, 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 고형물로 수득하였다. 수율: 2.29 g (97%; 1 단계; TD549 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.59 (CH 2, s, 4H); 5.45 (OH, s, 2H); 7.45-7.57 (Ph, m, 3H); 7.60 (arom., s, 2H); 7.68-7.82 (Ph, m, 2H). 13C{1H} δC 64.2 (CH2, s); 115.7 (arom., s); 126.7 (Ph, s); 129.1 (Ph, s); 129.3 (Ph, s); 138.1 (Ph, s); 148.2 (arom., s); 161.7 (arom ., s). ESI-HRMS: 216.1022 [M+H]+ (theor. [C13H14N1O2]+ = 216.1019).
TD564의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (500 ㎖)에서, TD563 (2.25 g; 10.5 mmol; 1.0 당량)을 (가볍게 가열하면서) DCM (250 ㎖)에 용해하였다. DCM (10 ㎖) 중에 준비한 신선한 용액 SOCl2 (2.27 ㎖; 31.3 mmol; 3.0 당량)을 첨가하였으며, 이후 석출물이 형성되기 시작하였다. RT에서 1시간 교반한 후, 이전에 형성된 석출물 모두 다시 용해되었다. 희석 수용액 NaHCO3 (150 ㎖)를 이후 맑은 노란색 용액에 첨가하였으며, 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 100 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 고형물로서 수득하였다. 수율: 2.59 g (98%; 1 단계; TD563 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.88 (CH 2, s, 4H); 7.47-7.58 (Ph, m, 3H); 7.77-7.85 (Ph, m, 2H); 7.86 (arom., s, 2H). 13C{1H} δC 46.6 (CH2, s); 120.3 (arom ., s); 126.9 (Ph, s); 129.3 (Ph, s); 129.7 (Ph, s); 136.5 (Ph, s); 149.5 (arom., s); 157.1 (arom., s); 157.1 (arom., s); ESI-HRMS: 252.0342 [M+H]+ (theor. [C13H12N1Cl2]+ = 252.0341).
TD566의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD564 (1.60 g; 6.35 mmol; 1.3 당량)을 (가볍게 가열하면서) MeCN (60 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (320 ㎎; 4.92 mmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (680 ㎎; 4.93 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 글래스 프릿 S3 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오렌지색 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, 15% P.E./DCM -> 100% DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 1시간 동안 고 진공 하에 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 691 ㎎ (54%; 1 단계; NaN3 기준). 회수: 613 ㎎ TD564 (사용한 초기량의 38%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 4.59 (CH 2, s, 2H); 4.84 (CH 2, s, 2H); 7.46- 7.60 (Ph, m, 3H); 7.74 (arom ., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.77-7.85 (Ph, m, 2H); 7.86 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 13C{1H} δC 46.7 (CH2, s); 54.2 (CH2, s); 119.4 (arom., s); 120.0 (arom., s); 126.9 (Ph, s); 129.3 (Ph, s); 129.7 (Ph, s); 136.6 (Ph, s); 149.3 (arom., s); 156.6 (arom., s); 157.1 (arom ., s). ESI-HRMS: 259.0747 [M+H]+ (theor. [C13H12N4Cl1]+ = 259.0745).
TD1083의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, 메틸 이소니코티네이트 (250 ㎎; 1.83 mmol; 1.0 당량)를 MeOH (10 ㎖)에 용해한 다음 농축 H2SO4 (25 ㎕)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 30분간 55℃에서 교반하였다. 냉각한 후, H2O (10 ㎖) 중의 용액 (NH4)2S2O8 (4.16 g; 18.2 mmol; 10 당량)를 점적 첨가한 다음 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 55℃에서 교반하였다. 반응물을 aq. NaHCO3에 의해 조심스럽게 퀀칭하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮기고, EtOAc로 추출하였다 (5 x 50 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 솜털같은 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 99.5 ㎎ (28%; 1 단계; 메틸 이소니코티네이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.92 (CH 3, s, 3H); 4.60 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.58 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 7.80 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 198.0759 [M+H]+ (theor. [C9H12N1O4]+ = 198.0761). EA (C9H11N1O4, M R = 197.2): C 54.8 (54.8); H 5.6 (5.5); N 7.1 (7.0).
TD1087의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD1083 (96.2 ㎎; 488 μmol; 1.0 당량)을 DCM (20 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (106 ㎕; 1.46 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 희석 수용액 NaHCO3 (20 ㎖)를 첨가해 혼합물을 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 고 진공 하에 밤새 건조해 (생산물이 서서히 결정화됨), 생산물을 유리 염기 형태의 밝은 노란색 고형물로 수득하였다. 수율: 112.8 ㎎ (99%; 1 단계; TD1083 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.92 (CH 3, s, 3H); 4.90 (CH 2, s, 4H); 7.98 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 234.0085 [M+H]+ (theor. [C9H10N1O2Cl2]+ = 234.0083).
TD1089의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1087 (112.0 ㎎; 478 μmol; 1.2 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (26.0 ㎎; 400 μmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (55.0 ㎎; 400 μmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 2시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, DCM -> 10% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여, 사전-정제한 생산물 (~20% 비스 아지드 부산물 함유)을 유리 염기 형태의 노란색 오일로 수득하였다. 수율: 49.6 ㎎. ESI-HRMS: 241.0490 [M+H]+ (theor. [C9H10N4O2Cl1]+ = 241.0487). 이런 방식으로 수득한 TD1089의 일부는 모두 추가로 정제 또는 특정화하지 않고 TD1092에 대해 바로 사용하였다.
TD1101의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, 이소프로필 이소니코티네이트 (600 ㎎; 3.63 mmol; 1.0 당량)를 MeOH (20 ㎖)에 용해한 다음 농축 H2SO4 (50 ㎕)를 첨가하였다. 그 후, H2O (20 ㎖) 중의 (NH4)2S2O8 (8.32 g; 36.5 mmol; 10 당량) 용액을 점적 첨가하고, 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응물을 aq. NaHCO3로 조심스럽게 중화하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겨 EtOAc로 추출하였다 (5 x 50 ㎖). 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 솜털같은 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 284 ㎎ (35%; 1 단계; 이소프로필 이소니코티네이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.34 (CH 3, d, 6H, 3 J HH = 6); 4.59 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.19 (CH, hept, 1H, 3 J HH = 6); 5.57 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 7.78 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 226.1076 [M+H]+ (theor. [C11H16N1O4]+ = 226.1074).
TD1109의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1101 (283 ㎎; 1.26 mmol; 1.0 당량)을 DCM (40 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (275 ㎕; 3.79 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 희석 수용액 NaHCO3 (40 ㎖)을 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 고 진공 하에 밤새 건조해 (생산물이 서서히 결정화됨), 생산물을 유리 염기 형태의 옅은 노란색 고형물로서 수득하였다. 수율: 322 ㎎ (98%; 1 단계; TD1101 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.35 (CH 3, d, 6H, 3 J HH = 6); 4.90 (CH 2, s, 4H); 5.20 (CH, hept, 1H, 3 J HH = 6); 7.96 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 262.0399 [M+H]+ (theor. [C11H14N1O2Cl2]+ = 262.0396).
TD1112의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1109 (321 ㎎; 1.23 mmol; 1.2 당량)를 MeCN (6 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (66.5 ㎎; 1.02 mmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (141 ㎎; 1.02 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, DCM -> 3% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 116 ㎎ (42%; 1 단계; NaN3 기준). 회수: 124 ㎎ TD1109 (사용한 초기량의 39%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.35 (CH 3, d, 6H, 3 J HH = 6); 4.67 (CH 2, s, 2H); 4.89 (CH 2, s, 4H); 5.19 (CH, hept, 1H, 3 J HH = 6); 7.83 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1).7.95 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 269.0800 [M+H]+ (theor. [C11H14N4O2Cl1]+ = 269.0800).
TD1119의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, tert-부틸 이소니코티네이트 (486 ㎎; 2.71 mmol; 1.0 당량)를 MeOH (15 ㎖)에 용해한 다음 농축 H2SO4 (40 ㎕)를 첨가하였다. 그 후, H2O (15 ㎖) 중의 (NH4)2S2O8 (6.20 g; 27.2 mmol; 10 당량) 용액을 점적 첨가하고, 형성된 혼합물을 추가로 30분간 80℃에서 교반하였다. 반응물을 aq. NaHCO3에 의해 조심스럽게 중화하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겨 EtOAc로 (5 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 솜털같은 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 161 ㎎ (25%; 1 단계; tert-부틸 이소니코티네이트 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.57 (CH 3, s, 9H); 4.58 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 4); 5.54 (OH, t, 2H, 3 J HH = 4); 7.73 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 240.1230 [M+H]+ (theor. [C12H18N1O4]+ = 240.1230).
TD1129의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1119 (159 ㎎; 664 μmol; 1.0 당량)을 DCM (20 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (145 ㎕; 2.00 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물에 희석 수용액 NaHCO3 (20 ㎖)을 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 고 진공 하에 밤새 건조해 (생산물이 서서히 결정화됨), 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 고형물로서 수득하였다. 수율: 175 ㎎ (95%; 1 단계; 기준 TD1119). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.57 (CH 3, s, 9H); 4.89 (CH 2, s, 4H); 7.91 (arom., s, 2H). ESI-HRMS: 276.0552 [M+H]+ (theor. [C12H16N1O2Cl2]+ = 276.0553).
TD1130의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1129 (174.0 ㎎; 630 μmol; 1.2 당량)를 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (34.0 ㎎; 523 μmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (72.0 ㎎; 522 μmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 6시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, DCM -> 3% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 58.2 ㎎ (39%; 1 단계; 기준 NaN3). 회수: 90.5 ㎎ TD1129 (사용한 초기량의 52%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.57 (CH 3, s, 9H); 4.66 (CH 2, s, 2H); 4.89 (CH 2, s, 2H); 7.79 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2).7.91 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 305.0772 [M+Na]+ (theor. [C12H15N4O2Cl1Na1]+ = 305.0776).
TD725의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에 TD726 (628 ㎎; 3.62 mmol; 1.0 당량), (4-(tert-부톡시카르보닐)페닐)보론산 (880 ㎎; 3.96 mmol; 1.1 당량) 및 XPhos Pd G2 (57 ㎎; 7.2 μmol; 2.0 mol%)를 투입한 다음 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 1,4-다이옥산 (16 ㎖)을 격막을 통해 첨가한 다음 H2O (8 ㎖) 중에 신선하게 준비한 용액 (첨가하기 전 아르곤으로 잠시 세척) K3PO4·H2O (920 ㎎; 4.00 mmol; 1.1 당량)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 격막 하에 (외부 아르곤 투입 없이) 교반하였다. 수득한 어두운 혼합물을 분별 깔때기로 옮겨 EtOAc (40 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)로 희석하였다. 교반한 후, 상층을 분리하고, 수성 층은 추가로 EtOAc로 (5 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 100% EtOAc -> 30% MeOH/EtOAc). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여, 사전-정제한 생산물을 유리 염기 형태의 오프-화이트 분말로 수득하였다. 수율: 1.04 g. NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.57 (CH 3, s, 9H); 4.61 (CH 2, d, 4H, 3 J HH = 6); 5.48 (OH, t, 2H, 3 J HH = 6); 7.64 (arom., s, 2H); 7.88 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.04 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9). 13C{1H} δC 27.8 (CH3, s); 64.2 (CH2, s); 81.0 (C-CH3, s); 115.8 (arom., s); 127.0 (arom., s); 129.9 (arom., s); 131.6 (arom., s); 142.2 (arom., s); 147.0 (arom., s); 162.0 (arom., s); 164.6 (CO, s). ESI-HRMS: 316.1539 [M+H]+ (theor. [C18H22N1O4]+ = 316.1543).
TD730의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, 사전-정제한 TD725 (1.04 g; ≤3.30 mmol; 1.0 당량)을 DCM (35 ㎖)에 현탁하였다. DCM (5 ㎖) 중에 준비한 신선한 용액 SOCl2 (721 ㎕; 9.93 mmol; ≥3.0 당량)을 이후 첨가하였다. 맑은 용액이 빠르게 형성되었으며, 플라스크를 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물에 희석 수용액 NaHCO3 (60 ㎖)을 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (5 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피에서 정제하였다 (120 g SiO2, 100% DCM -> 20% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 흐린 노란색 잔류 오일이 서서히 결정화되었다. 고형물을 분쇄하고, 고 진공 하에 밤새 추가로 건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 오프-화이트 분말로서 수득하였다. 수율: 839 ㎎ (66%; 2 단계; TD726 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.58 (CH 3, s, 9H); 4.86 (CH 2, s, 4H); 7.92 (arom., s, 2H); 7.94 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.05 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9). 13C{1H} δC 27.8 (CH3, s); 46.5 (CH2, s); 81.2 (C-CH3, s); 120.6 (arom., s); 127.2 (arom., s); 129.9 (arom., s); 132.1 (arom., s); 140.6 (arom., s); 148.3 (arom., s); 157.3 (arom., s); 164.5 (CO, s). ESI-HRMS: 352.0866 [M+H]+ (theor. [C18H20N1O2Cl2]+ = 352.0866).
TD733의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD730 (837 ㎎; 2.38 mmol; 1.3 당량)을 MeCN (18 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (119 ㎎; 1.83 mmol; 1.0 당량) 및 건조한 K2CO3 (253 ㎎; 1.83 mmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE) 상에서 여과하고, 고체 잔사를 MeCN으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 오일성 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2, 20% 펜탄/DCM -> 1% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 수득한 거의 무색 오일을 추가로 고 진공 하에 밤새 건조해 (생산물이 서서히 결정화됨), 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고형물로서 수득하였다. 수율: 230 ㎎ (35%; 1 단계; NaN3 기준). 회수: 442 ㎎ TD730 (사용한 초기량의 53%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.57 (CH 3, s, 9H); 4.62 (CH 2, s, 2H); 4.86 (CH 2, s, 2H); 7.80 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.91 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.94 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.05 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9). 13C{1H} δC 27.8 (CH3, s); 46.6 (CH2, s); 54.2 (CH2, s); 81.2 (C-CH3, s); 119.6 (arom., s); 120.3 (arom., s); 127.2 (arom., s); 129.9 (arom., s); 132.1 (arom., s); 140.7 (arom., s); 148.1 (arom., s); 156.8 (arom., s); 157.3 (arom., s); 164.5 (CO, s). ESI-HRMS: 359.1270 [M+H]+ (theor. [C18H20N4O2Cl1]+ = 359.1269).
TD1425의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에 메틸 2-브로모-6-메틸이소니코티네이트 (1.00 g; 4.35 mmol; 1.0 당량), NBS (끓는 H2O로부터 재결정화됨; 770 ㎎; 4.33 mmol; 1.0 당량), (BnO)2 (53 ㎎; 219 μmol; 5 mol%) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 격막을 통해 이후 CCl4 (21 ㎖)를 첨가하였다. 바이얼을 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 24시간 동안 75℃에서 교반 방치하였다. 냉각한 후, 혼합물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고 고형물을 DCM으로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조시키고, c-Hex (25 ㎖)에 다시 현탁하여 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (120 g SiO2, 100% c-Hex -> 80% DCM/c-Hex). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하였다. 잔류 오일을 추가로 고 진공 하에 밤새 건조해 (생산물이 결정화됨), 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 고형물로서 수득하였다. 수율: 571 ㎎ (43%; 1 단계; 메틸 2-브로모-6-메틸이소니코티네이트 기준). 회수: 314 ㎎ 메틸 2-브로모-6-메틸이소니코티네이트 (사용한 초기량의 31%). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.91 (CH 3, s, 3H); 4.79 (CH 2, s, 2H); 7.94 (arom ., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.05 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 307.8916 [M+H]+ (theor. [C8H8N1O2Br2]+ = 307.8916).
TD1428의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 TD1425 (523 ㎎; 1.69 mmol; 1.0 당량), N-Boc-1,1-다이메틸프로파길아민 (310 ㎎; 1.69 mmol; 1.0 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 CuI (13.0 ㎎; 68 μmol; 4.0 mol%) 및 [Pd(PPh3)2Cl2] (24 ㎎; 34 μmol; 2.0 mol%)를 후속적으로 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 THF (7.5 ㎖)를 격막을 통해 첨가한 다음 DIPEA (885 ㎕; 5.08 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 플라스크를 격막 하에 (외부 아르곤 부가 없이) 2일간 RT에서 교반 방치하였다. 혼합물을 증발시켜 건조시키고, DCM (15 ㎖)에 다시 현탁한 다음 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고, 고상을 DCM으로 추가로 헹구었다. 여과물을 플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (120 g SiO2, 10% EtOAc/c-Hex -> 50% EtOAc/c-Hex). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조한 다음 플래시 크로마토그래피에서 1회 다시 정제하였다 (80 g SiO2, 100% DCM -> 5% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조하고, 추가로 DCM과 함께 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 고형화된 오일로서 수득하였다. 수율: 175 ㎎ (25%; 1 단계; TD1425 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.42 (CH 3-C-O, s, 9H); 1.56 (CH 3-C-N, s, 6H); 3.91 (CH 3-O, s, 3H); 4.79 (CH 2, s, 2H); 7.23 (NH, bs, 1H); 7.71 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.97 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 411.0913 [M+H]+ (theor. [C18H24N2O4Br1]+ = 411.0914).
TD1386의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, 피리딘-2,6-다이일다이메탄올 (2.00 g; 14.4 mmol; 1.0 당량) 및 이미다졸 (0.98 g; 14.4 mmol; 1.0 당량)을 DMF (20 ㎖)에 용해한 다음 TBDMSCl (2.17 g; 14.4 mmol; 1.0 당량)을 첨가하였다. 형성된 용액을 2시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 DCM (50 ㎖) 및 희석한 수용액 NaHCO3 (50 ㎖) 혼합물에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 잠시 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 층은 DCM으로 추가로 (5 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (100 g SiO2, DCM -> 50% EtOAc/DCM). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.54 g (42%; 1 단계; 피리딘-2,6-다이일다이메탄올 기준). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.09 (CH 3, s, 6H); 0.92 (CH 3, s, 9H); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 5); 4.71 (CH 2, s, 2H); 5.37 (OH, t, 1H, 3 J HH = 5); 7.28 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.34 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.81 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 254.1569 [M+H]+ (theor. [C13H24N1O2Si1]+ = 254.1571).
TD1389의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, TD1386 (1.54 g; 6.08 mmol; 1.0 당량)을 DCM (60 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (885 ㎕; 12.0 mmol; 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물에 희석 수용액 NaHCO3 (60 ㎖)을 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 30분간 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.63 g (99%; 1 단계; 기준 TD1386). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.10 (CH 3, s, 6H); 0.92 (CH 3, s, 9H); 4.74 (CH 2, s, 2H); 4.75 (CH 2, s, 2H); 7.40 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.42 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.87 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 272.1231 [M+H]+ (theor. [C13H23N1O1Cl1Si1]+ = 272.1232).
TD1390의 합성: 유리 플라스크 (20 ㎖)에서, KCN (390 ㎎; 5.99 mmol; 1.05 당량)을 H2O (2 ㎖)에 용해한 다음 DMF (6 ㎖) 중의 TD1389 (1.55 g; 5.70 mmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 왕성하게 70분간 100℃에서 교반하였다. RT로 냉각한 후, 혼합물을 H2O (4 ㎖) 및 MeCN (8 ㎖)으로 희석하고, 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하였다. 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 남아있는 옅은 노란색 오일을 냉장고에 안에 두어 고체화하였다. 형성된 고체를 파쇄하고, 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 분말로 수득하였다. 수율: 1.23 g (82%; 1 단계; 기준 TD1389). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.10 (CH 3, s, 6H); 0.92 (CH 3, s, 9H); 4.17 (CH 2, s, 2H); 4.75 (CH 2, s, 2H); 7.30 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.40 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.86 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 263.1573 [M+H]+ (theor. [C14H23N2O1Si1]+ = 263.1574).
TD1393의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1390 (700 ㎎; 2.67 mmol; 1.00 당량)를 MeOH (2.70 ㎖; 66.7 mmol; 25 당랑)에 용해한 후 TMSCl (2.37 ㎖; 18.7 mmol; 7.0 당량)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 왕성하게 2시간 동안 60℃에서 교반하였다. RT로 냉각한 후, 혼합물을 H2O (4 ㎖)로 퀀칭한 다음 포화 수용액 NaHCO3 (5 ㎖)을 천천히 첨가해 일부 중화 (pH 3-4까지) 하였다. 형성된 2상 혼합물을 조심스럽게 증발시켜 건조한 다음 잔사에 H2O (10 ㎖)을 첨가하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 404 ㎎ (84%; 1 단계; 기준 TD1390). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.61 (CH 3, s, 3H); 3.81 (CH 2, s, 2H); 4.51 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 5); 5.39 (OH, t, 1H, 3 J HH = 5); 7.20 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.36 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.76 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 182.0811 [M+H]+ (theor. [C9H12N1O3]+ = 182.0812).
TD1395의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD1393 (340 ㎎; 1.88 mmol; 1.0 당량) 및 이미다졸 (190 ㎎; 2.79 mmol; 1.5 당량)을 DMF (6 ㎖)에 용해한 다음 TBDMSCl (425 ㎎; 2.82 mmol; 1.5 당량)을 첨가하였다. 형성된 용액을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 537 ㎎ (97%; 1 단계; 기준 TD1393). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.09 (CH 3, s, 6H); 0.91 (CH 3, s, 9H); 3.61 (CH 3, s, 3H); 3.81 (CH 2, s, 2H); 4.70 (CH 2, s, 2H); 7.23 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.32 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.79 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 296.1676 [M+H]+ (theor. [C15H26N1O3Si1]+ = 296.1677).
TD1396의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1395 (537 ㎎; 1.82 mmol; 1.0 당량)를 THF (9 ㎖) 및 MeOH (9 ㎖)의 혼합물에 용해하였다. 형성된 무색 용액에 고체 NaBH4 (2.06 g; 54.5 mmol; 30 당량)를 (10분에 걸쳐, 플라스크에 마개 비-장착) 나누어 첨가하였으며, 이 동안 수소 가스가 집중적으로 발생하였다. 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였으며, 이 동안 교반되도록 MeOH (각각 9 ㎖)로 2번 희석하였다. 이후 혼합물을 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)로 희석하여, 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 483 ㎎ (99%; 1 단계; 기준 TD1395). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 0.09 (CH 3, s, 6H); 0.92 (CH 3, s, 9H); 2.84 (CH 2, t, 2H, 3 J HH = 7); 3.71 (CH 2, td, 2H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 5); 4.62 (OH, t, 1H, 3 J HH = 5); 4.71 (CH 2, s, 2H); 7.14 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.24 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.70 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 268.1726 [M+H]+ (theor. [C14H26N1O2Si1]+ = 268.1727).
TD1401의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD1396 (94 ㎎; 352 μmol; 1.0 당량)을 DCM (3.5 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (51 ㎕; 702 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 DCM (20 ㎖)으로 희석하고, 희석 수용액 NaHCO3 (10 ㎖)를 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 30분간 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 15 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 DMF (1.7 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (46 ㎎; 708 μmol; 2.0 당량)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 냉각한 후, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해, 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 17.6 ㎎ (28%; 2 단계; 기준 TD1396). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 2.98 (CH 2, t, 2H, 3 J HH = 7); 3.69 (CH 2, td, 2H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 5); 4.53 (CH 2, d, 2H, 3 J HH = 6); 5.37 (OH, t, 1H, 3 J HH = 6); 7.18 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.32 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.73 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 201.0746 [M+Na]+ (theor. [C8H10N4O1Na1]+ = 201.0747).
TD1406의 합성: 둥근-바닥형 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1401 (16.5 ㎎; 92.6 μmol; 1.0 당량)을 DCM (1.85 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (13.5 ㎕; 186 μmol; 2.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 DCM (10 ㎖)으로 희석하고, 희석 수용액 NaHCO3 (10 ㎖)을 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 2상 혼합물을 왕성하게 추가로 30분간 RT에서 교반하였으며, 이 때 기포가 천천히 발생하였다. 혼합물을 이후 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고체로서 수득하였다. 수율: 17.7 ㎎ (97%; 1 단계; 기준 TD1401). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.02 (CH 2, t, 2H, 3 J HH = 7); 3.71 (CH 2, td, 2H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 5); 4.75 (CH 2, s, 2H); 7.32 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.41 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.79 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 197.0589 [M+H]+ (theor. [C8H10N4Cl1]+ = 197.0589).
TD1339의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (250 ㎖)에 에틸 l-락테이트 (3.54 g; 30.0 mmol; 1.00 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 3회 잠시 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DCM (100 ㎖)을 이후 격막을 통해 첨가하고, 혼합물을 얼음조 (5℃)를 이용해 냉각한 다음 무수 트리플산 (5.3 ㎖; 31.5 mmol; 1.05 당량)을 점적 첨가하고 또한 바로 드라이 피리딘 (2.54 ㎖; 31.5 mmol; 1.05 당량)을 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 5℃에서 30분간 교반하였다. 형성된 현탁물을 바로 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (140 g SiO2, DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조한 다음 잠시 고 진공 하에 건조하여, 생산물을 흐린 분홍색을 띠는 오일로 수득하였다. 수율: 5.90 g (79%; 1 단계; 기준 에틸 l-락테이트). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 1.26 (CH 3-CH2, t, 3H, 3 J HH = 7); 1.51 (CH 3-CH, d, 3H, 3 J HH = 7); 4.19-4.31 (CH 2, m, 2H); 5.27 (CH, q, 1H, 3 J HH = 7). 19F{1H} δF -77.7 (s). CI-HRMS: 251.0193 [M+H]+ (theor. [C6H10O5S1F3]+ = 251.0196).
TD1488의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 다이메틸 l-말레이트 (200 ㎎; 1.23 mmol; 1.00 당량) 및 자기 교반기를 넣고, 아르곤으로 간단히 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DCM (4 ㎖)을 격막을 통해 첨가하고, 혼합물을 얼음조 (5℃)를 이용해 냉각한 후 무수 트리플산 (220 ㎕; 1.31 mmol; 1.06 당량)을 점적한 다음 바로 드라이 피리딘 (105 ㎕; 1.30 mmol; 1.06 당량)을 점적하였다. 형성된 혼합물을 RT에서 30분간 교반하였다. 형성된 현탁물을 바로 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (30 g SiO2, DCM). 생산물이 함유된 분획을 조합해 증발시켜 건조한 다음 잠시 고 진공 하에 건조하여, 산물을 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 258 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 다이메틸 l-말레이트). NMR (DMSO-d 6 ): 1H δH 3.08 (CH 2, dd, 1H, 2 J HH = 17, 3 J HH = 5); 3.13 (CH 2, dd, 1H, 2 J HH = 17, 3 J HH = 6); 4.65 (CH 3, s, 3H); 3.78 (CH 3, s, 3H); 5.48 (CH, dd, 1H, 3 J HH = 6, 3 J HH = 5). 19F{1H} δF -77.7 (s). ESI-HRMS: 316.9910 [M+Na]+ (theor. [C7H9O7F3S1Na1]+ = 316.9913).
실시예 3: 보호된 마크로사이클릭 중간산물의 합성
TD680의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 1.54 g; 3.50 mmol; 1.6 당량)을 MeCN (100 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (300 ㎎; 2.17 mmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에 드라이 MeCN (25 ㎖) 중의 tert-부틸 브로모아세테이트 (427 ㎎; 2.19 mmol; 1.0 당량) 용액을 (2시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (150 ㎖) 및 H2O (150 ㎖)에 용해하여 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 75 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 624 ㎎ (51%; 1 단계; 기준 tert-부틸 브로모아세테이트). NMR (CD3CN): 1H δH 1.32- 1.49 (CH 3, m, 9H); 2.57- 2.76 (mc, m, 4H); 2.81- 2.98 (mc, m, 4H); 3.23-3.64 (mc, CH 2-CO, m, 8+2H); 5.00-5.15 (CH 2-Ph, m, 4H); 7.19-7.48 (Ph, m, 10H). ESI-HRMS: 555.3171 [M+H]+ (theor. [C30H43N4O6]+ = 555.3177).
TD686의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD680 (150 ㎎; 270 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 Boc2O (THF 중의 2.0 M 용액; 200 ㎕; 400 μmol; 1.5 당량)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 바로 NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 170 ㎎ (96%; 1 단계; 기준 TD680). NMR (CD3CN): 1H δH 1.17- 1.56 (CH 3, m, 18H); 2.62- 2.99 (mc, m, 4H); 3.10-3.53 (mc, CH 2-CO, m, 12+2H); 4.96-5.16 (CH 2-Ph, m, 4H); 7.20-7.47 (Ph, m, 10H). ESI-HRMS: 655.3691 [M+H]+ (theor. [C35H51N4O8]+ = 655.3701).
TD691의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 TD686 (170 ㎎; 260 μmol) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 Pd@C (17 ㎎)를 이후 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 MeOH (10 ㎖)를 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 가스 (벌룬으로부터 공급)를 혼합물에 30분간 RT에서 가하여 버블링하였다. 그 후, 촉매를 시린지 미세필터 (PTFE; 필터는 MeOH로 추가로 세척)를 사용해 여과 추출하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 100 ㎎ (≥99%; 1 단계; 기준 TD686). ESI-MS (LC-MS): 387.3 [M+H]+ (theor. [C19H39N4O4]+ = 387.3). TD691 모두 추가로 특정화하지 않고 TD692에 대해 바로 사용하였다.
TD1106의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 500 ㎎; 1.14 mmol; 1.0 당량)을 MeCN (10 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (870 ㎎; 5.69 mmol; 5.0 당량) 및 메틸 브로모아세테이트 (235 ㎕; 2.51 mmol; 2.2 당량)를 MeCN (5 ㎖) 중에 첨가하였다. 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 422 ㎎ (64%; 1 단계; 기준 Cbz2cyclen). NMR (CD3CN): 1H δH 2.63- 2.88 (mc, m, 8H); 3.19- 3.49 (mc, CH 2-CO, m, 8+4H); 3.59 (CH 3, s, 6H); 5.07 (CH 2-Ph, s, 4H); 7.21-7.41 (Ph, m, 10H). ESI-LCMS: 585.3 [M+H]+ (theor. [C30H41N4O8]+ = 585.3).
TD1116의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에 Pd@C (42 ㎎) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 MeOH (25 ㎖) 중의 TD1106 (418 ㎎; 715 μmol) 용액을 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 가스 (벌룬으로부터 공급)를 1시간 동안 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 MeOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였으며, 이는 정치시 결정화되었다. 수율: 223 ㎎ (99%; 1 단계; 기준 TD1106). NMR (CD3CN): 1H δH 2.48- 2.57 (mc, m, 8H); 2.63-2.74 (mc, m, 8H); 3.36 (CH 2-CO, s, 4H); 3.64 (CH 3, s, 6H). ESI-MS (LC-MS): 317.2 [M+H]+ (theor. [C14H29N4O4]+ = 317.2).
TD687의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, TD680 (150 ㎎; 270 μmol; 1.0 당량) 및 P(OEt)3 (232 ㎕; 1.35 mmol; 5.0 당량)을 함께 혼합한 다음 고체 (CH2O) n (12 ㎎; 400 μmol; 1.5 당량)을 첨가하였다. 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 이후 반응 혼합물을 MeCN (700 ㎕)으로 희석하여 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하였다. 필터를 MeCN으로 추가로 세척하였다. 그 후, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합친 다음 즉시 NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 약간 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 167 ㎎ (87%; 1 단계; 기준 TD680). ESI-MS (LC-MS): 705.4 [M+H]+ (theor. [C35H54N4O9P1]+ = 705.4). TD687은 모두 추가로 특정화하지 않고 TD695에 대해 바로 사용하였다.
TD695의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 TD687 (167 ㎎; 237 μmol) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 Pd@C (17 ㎎)를 이후 첨가한 다음 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 MeOH (10 ㎖)를 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 가스 (벌룬으로부터 공급)를 30분간 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (벌룬으로부터 공급) 하에 16시간 동안 RT에서 추가로 교반하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 MeOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 약간 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 100 ㎎ (97%; 1 단계; 기준 TD686). ESI-MS (LC-MS): 437.2 [M+H]+ (theor. [C19H41N4O5P1]+ = 437.3). TD695은 모두 추가로 특정화하지 않고 TD700에 대해 바로 사용하였다.
TD913의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 242 ㎎; 549 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (12 ㎖)에 용해한 다음 고체 (CH2O) n (50 ㎎; 1.67 mmol; 3.0 당량) 및 PhP(OMe)2 (350 ㎕; 2.2 mmol; 4.0 당량)을 첨가하였다. 수득한 현탁물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 이후 시린지 미세필터 (PTFE)를 통해 여과하고 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (75 ㎖) 및 H2O (75 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 259 ㎎ (61%; 1 단계; 기준 Cbz2cyclen). NMR (CD3CN): 1H δH 2.30- 3.38 (mc, CH 2-P, m, 16+4H); 3.47 (CH 3, d, 6H, 3 J HP = 11); 5.00-5.12 (CH 2-Ph, m, 4H); 7.27-7.40 (Ph, m, 10H); 7.40-7.51 (Ph, m, 4H); 7.51-7.60 (Ph, m, 2H); 7.60-7.82 (Ph, m, 4H). 31P δP 42.8 (m). ESI-HRMS: 777.3178 [M+H]+ (theor. [C40H51N4O8P2]+ = 777.3177).
TD910의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에 TD913 (250 ㎎; 322 μmol) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 Pd@C (50 ㎎)를 첨가한 후 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 MeOH (25 ㎖)를 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 가스 (벌룬으로부터 공급)를 2시간 동안 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 MeOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 161 ㎎ (98%; 1 단계; 기준 TD913). NMR (CD3CN): 1H δH 2.28- 3.14 (mc, CH 2-P, m, 16+4H); 3.53 (CH 3, d, 3H, 3 J HP = 11); 3.54 (CH 3, d, 3H, 3 J HP = 11); 7.46-7.63 (Ph, m, 6H); 7.71-7.83 (Ph, m, 4H). 31P δP 43.3 (m). ESI-HRMS: 509.2438 [M+H]+ (theor. [C24H39N4O4P2]+ = 509.2441).
TD571의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 1.00 g; 2.27 mmol; 1.0 당량) 및 P(OEt)3 (2.00 ㎖; 11.7 mmol; 5.1 당량)을 함께 혼합한 다음 고체 (CH2O) n (164 ㎎; 5.47 mmol; 2.4 당량)을 첨가하였다. 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 이후 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (SiO2; 80 g; DCM-MeOH-aq. NH3 150:10:1). 생산물이 함유된 분획들을 조합하고, 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 약간 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.29 g (77%; 1 단계; 기준 Cbz2cyclen). ESI-MS (LC-MS): 741.3 [M+H]+ (theor. [C34H55N4O10P2]+ = 741.3). TD571은 모두 추가로 특정화하지 않고 TD573에 대해 바로 사용하였다.
TD573의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에 TD571 (1.29 g; 1.74 mmol) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 고체 Pd@C (129 ㎎)를 첨가한 후 아르곤으로 (3회) 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 EtOH (96%, 70 ㎖)를 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 가스 (벌룬으로부터 공급)를 30분간 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 반응 혼합물을 추가로 수소 분위기 (벌룬으로부터 공급) 하에 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 EtOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 약간 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 776 ㎎ (95%; 1 단계; 기준 TD571). ESI-MS (LC-MS): 473.2 [M+H]+ (theor. [C18H43N4O4P2]+ = 473.3). Major portion of TD573의 주 분획은 추가로 특정화하지 않고 TD579에 대해 바로 사용하였다.
TD423의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 410 ㎎; 1.03 mmol; 1.4 당량)를 드라이 MeCN (8 ㎖)에 용해한 다음 Cs2CO3 (840 ㎎; 2.58 mmol; 3.4 당량) 및 KI (172 ㎎; 1.04 mmol; 1.4 당량)를 첨가하였다. 드라이 MeCN (2 ㎖) 중의 2-클로로-N-(프로프-2-yn-1-일)아세트아미드 (100 ㎎; 760 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 형성된 혼합물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하여, 사전-정제된 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 180 ㎎ (~75% TD423 및 ~25% 비스(치환된) 부산물로 된 혼합물 형태). ESI-MS (LC-MS): 496.4 [M+H]+ (theor. [C25H46N5O5]+ = 496.3). TD423는 모두 추가로 정제 및 특정화하지 않고 바로 TD425에 대해 사용하였다.
TD635의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 1.21 g; 3.02 mmol; 2.3 당량)를 MeCN (150 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (100 ㎖) 중의 TD558 (1202 ㎎; 1.33 mmol; 1.0 당량) 용액을 (2시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였으며, 정치시 결정화되었다. 수율: 453 ㎎ (66%; 1 단계; TD558 기준). NMR (CD3CN): 1H δH 1.39 (CH 3, s, 18H); 2.53 (mc, m, 4H); 2.61 (mc, m, 4H); 2.73 (mc, m, 4H); 2.77 (mc, m, 4H); 3.01 (CH 2-CO, s, 4H); 3.44 (C≡CH, s, 1H); 3.66 (CH 2-arom., s, 2H); 7.38 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.70 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.76 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1). 13C{1H} δC 28.4 (CH3, s); 48.2 (mc, s); 51.8 (mc, s); 52.6 (mc, s); 54.9 (mc, s); 57.6 (CH2-CO, s); 59.3 (CH2-arom., s); 78.0 (C≡CH, s); 81.3 (C-CH3, s); 84.0 (C≡CH, s); 124.9 (arom., s); 126.5 (arom., s); 137.8 (arom., s); 141.6 (arom., s); 162.8 (arom., s); 172.0 (CO, s). ESI-HRMS: 516.3542 [M+H]+ (theor. [C28H46N5O4]+ = 516.3544).
TD539의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 1.73 g; 4.32 mmol; ≥2.0 당량)를 드라이 MeCN (15 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (900 ㎎; 6.52 mmol; ≥3.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, 드라이 MeCN (10 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 TD538 (≤2.17 mmol; 1.0 당량)의 용액을 (15분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 20시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (150 ㎖) 및 H2O (150 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 100 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색의 고형화된 오일로서 수득하였다. 수율: 653 ㎎ (47%; 2 단계; 기준 TD530). NMR (CD3CN): 1H δH 1.39 (CH 3, s, 18H); 1.43 (CH 3, s, 9H); 2.51-2.84 (mc, m, 16H); 3.01 (CH 2-CO, s, 4H); 3.64 (CH 2-arom., s, 2H); 4.05 (CH 2-C≡C, bd, 2H, 3 J HH = 5); 5.97 (NH-CO, bt, 1H, 3 J HH = 5); 7.27 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.66-7.75 (arom., m, 2H). 13C{1H} δC 28.4 (CH3, s); 28.6 (CH3, s); 31.2 (CH2-C≡C, bs); 48.1 (mc, s); 51.8 (mc, s); 52.8 (mc, s); 55.1 (mc, s); 57.6 (CH2-CO, s); 59.6 (CH2-arom., s); 81.3 (C-CH3, 2 x s); 82.6 and 87.0 (C≡C, 2 x s); 124.3 (arom., s); 126.0 (arom., s); 137.7 (arom., s); 142.3 (arom., s); 162.7 (arom., s); 172.0 (CO, s). ESI-HRMS: 645.4331 [M+H]+ (theor. [C34H57N6O6]+ = 645.4334).
TD1118의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 160 ㎎; 399 μmol; ≥2.5 당량)을 MeCN (10 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (65 ㎎; 470 μmol; ≥3 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (10 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 TD1117 (≤470 mmol; 1.0 당량)의 용액을 (5분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 30 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 고체화된 오일로서 수득하였다. 수율: 62.2 ㎎ (57%; 2 단계; 기준 TD966). NMR (CD3CN): 1H δH 1.40 (CH 3, s, 18H); 1.43 (CH 3, s, 9H); 1.53-1.64 (CH 2, m, 2H); 1.82-1.91 (CH 2, m, 2H); 2.47-2.79 (mc, m, 16H); 2.79-2.88 (CH-C≡C, m, 1H); 3.01 (CH 2-CO, s, 4H); 3.06-3.18 (CH 2, m, 2H); 3.63 (CH 2-arom., s, 2H); 3.71-3.82 (CH 2, m, 2H); 7.27 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.62-7.72 (arom., m, 2H). ESI-HRMS: 699.4801 [M+H]+ (theor. [C38H63N6O6]+ = 699.4804).
TD692의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (250 ㎖)에서, TD681 (100 ㎎; 259 μmol; 1.5 당량)을 MeCN (25 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (25 ㎖) 중의 TD558 (26 ㎎; 172 μmol; 1.0 당량) 용액을 (1시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합친 다음 즉시 NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 38 ㎎ (44%; 1 단계; TD558 기준). ESI-MS (LC-MS): 502.4 [M+H]+ (theor. [C27H44N5O4]+ = 502.3). TD692는 모두 추가로 특정화하지 않고 TD703에 대해 바로 사용하였다.
TD700의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD695 (100 ㎎; 229 μmol; 1.5 당량)를 MeCN (25 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (21 ㎎; 152 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (25 ㎖) 중의 TD558 (23 ㎎; 152 μmol; 1.0 당량) 용액을 (1시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (75 ㎖) 및 H2O (75 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 20 ㎎ (24%; 1 단계; TD558 기준). ESI-MS (LC-MS): 552.3 [M+H]+ (theor. [C27H47N5O5P1]+ = 552.3). TD700은 모두 추가로 특정화하지 않고 TD705에 대해 바로 사용하였다.
TD579의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD573 (600 ㎎; 1.27 mmol; 2.0 당량)을 MeCN (10 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (10 ㎖) 중의 TD558 (30 ㎎; 488 μmol; 1.0 당량) 용액을 점적 첨가하였다 (30분에 걸쳐). 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (125 ㎖), H2O (125 ㎖) 및 aq. NaOH (1%; 20 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 137 ㎎ (48%; 1 단계; TD558 기준). ESI-MS (LC-MS): 588.3 [M+H]+ (theor. [C26H48N5O6P2]+ = 588.3). TD579는 추가로 특정화하지 않고 TD575 및 TD580에 대해 바로 사용하였다.
TD799의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, tBuDO2Prop (유리 염기; 165 ㎎; 385 μmol; 2.0 당량)를 MeCN (30 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (30 ㎖) 중의 TD558 (29 ㎎; 191 μmol; 1.0 당량) 용액에 (6시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 10시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 약간 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 47 ㎎ (45%; 1 단계; TD558 기준). NMR (CD3CN): 1H δH 1.38 (CH 3, s, 18H); 2.19-2.25 (CH 2-CO, m, 4H); 2.44-2.64 (mc, CH 2-CH2-CO, m, 16+4H); 3.41 (C≡CH, s, 1H); 3.66 (CH 2-arom., s, 2H); 7.36 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.70 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.77 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 544.3854 [M+H]+ (theor. [C30H50N5O4]+ = 544.3857).
TD663의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 210 ㎎; 524 μmol; 2.7 당량)를 MeCN (15 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (27 ㎎; 195 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (15 ㎖) 중의 TD566 (50 ㎎; 193 μmol; 1.0 당량) 용액을 (15분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 83 ㎎ (69%; 1 단계; 기준 TD566). NMR (CD3CN): 1H δH 1.33 (CH 3, s, 18H); 2.62 (mc, m, 4H); 2.66 (mc, m, 4H); 2.74 (mc, m, 4H); 2.80 (mc, m, 4H); 2.82 (CH 2-CO, s, 4H); 3.74 (CH 2-arom., s, 2H); 4.46 (CH 2-N3, s, 2H); 2.46-7.58 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.78-7.87 (Ph, m, 2H); 8.18 (arom., bs, 1H). ESI-HRMS: 623.4022 [M+H]+ (theor. [C33H51N8O4]+ = 623.4028).
TD711의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 564 ㎎; 1.41 mmol; 2.5 당량)를 MeCN (40 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (40 ㎖) 중의 TD406 (103 ㎎; 564 μmol; 1.0 당량) 용액을 (2시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 217 ㎎ (70%; 1 단계; 기준 TD406). NMR (CD3CN): 1H δH 1.39 (CH 3, s, 18H); 2.55 (mc, m, 4H); 2.60 (mc, m, 4H); 2.76 (mc, m, 8H); 3.03 (CH 2-CO, s, 4H); 3.70 (CH 2-arom., s, 2H); 4.39 (CH 2-N3, s, 2H); 7.21 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.67 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.73 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 13C{1H} δC 28.4 (CH3, s); 48.3 (mc, s); 51.8 (mc, s); 52.7 (mc, s); 54.7 (mc, s); 56.1 (CH2-N3, s); 57.7 (CH2-CO, s); 59.0 (CH2-arom., s); 81.2 (C-CH3, s); 121.2 (arom., s); 124.1 (arom., s); 138.2 (arom., s); 155.6 (arom., s); 161.9 (arom., s); 172.0 (CO, s). ESI-HRMS: 547.3716 [M+H]+ (theor. [C27H47N8O4]+ = 547.3715).
TD596의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, tBuDO2A (유리 염기; 162 ㎎; 405 μmol; ≥2.5 당량)를 MeCN (10 ㎖)에 용해하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (10 ㎖) 중의 조산물 TD633 (≤162 μmol; 1.0 당량) 용액을 (15분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 44 ㎎ (48%; 2 단계; 기준 TD406). ESI-MS (LC-MS): 563.4 [M+H]+ (theor. [C27H47N8O5]+ = 563.4). TD596은 모두 추가로 특정화하지 않고 TD604에 대해 바로 사용하였다.
TD1340의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 1.32 g; 3.0 mmol; 1.0 당량)을 드라이 MeCN (15 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (1.65 g; 12.0 mmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 그 후, 드라이 MeCN (5 ㎖) 중의 TD1339 (1.50 g; 6.0 mmol; 2.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 8시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (150 ㎖) 및 H2O (150 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 1.57 g (82%; 1 단계; 기준 Cbz2cyclen). NMR (CD3CN): 1H δH 1.09 (CH 3-CH, d, 6H, 3 J HH = 7); 1.19 (CH 3-CH2, t, 6H, 3 J HH = 7); 2.58-2.70 (mc, m, 4H); 2.76 -2.98 (mc, m, 4H); 3.23-3.52 (mc, m, 8H); 3.52-3.79 (CH, m, 2H); 4.06 (CH 2-CH3, q, 4H, 3 J HH = 7); 5.00 -5.13 (CH 2-Ph, m, 4H); 7.24-7.41 (Ph, m, 10H). ESI-HRMS: 641.3539 [M+H]+ (theor. [C34H49N4O8]+ = 641.3545).
TD1341의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에 Pd@C (127 ㎎) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. MeOH (50 ㎖) 중의 TD1340 (1.27 g; 1.98 mmol) 용액을 이후 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 기체 (벌룬으로부터 공급)를 1시간 동안 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 MeOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 723 ㎎ (98%; 1 단계; 기준 TD1340). NMR (CD3CN): 1H δH 1.16-1.33 (CH 3, m, 12H); 2.35-2.45 (mc, m, 4H); 2.56-2.65 (mc, m, 4H); 2.65-2.76 (mc, m, 4H); 2.76-2.85 (mc, m, 4H); 3.54 (CH, q, 2H, 3 J HH = 7); 4.00-4.24 (CH 2-CH3, q, 4H, 3 J HH = 7). ESI-HRMS: 372.2808 [M+H]+ (theor. [C18H37N4O4]+ = 373.2809).
TD1343의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD1341 (143 ㎎; 384 μmol; 2.0 당량)을 MeCN (15 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (26.3 ㎎; 191 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (15 ㎖) 중의 TD558 (29.0 ㎎; 191 μmol; 1.0 당량) 용액을 (15분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 46.0 ㎎ (49%; 1 단계; TD558 기준). NMR (CD3CN): 1H δH 1.14 (CH 3-CH, d, 6H, 3 J HH = 7); 1.19 (CH 3-CH2, t, 6H, 3 J HH = 7); 2.28-2.38 (mc, m, 4H); 2.45 -2.59 (mc, m, 4H); 2.59-2.94 (mc, m, 8H); 3.23 (CH, q, 2H, 3 J HH = 7); 3.41 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 3.45 (C≡CH, s, 1H); 3.88 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.06 (CH 2-CH3, q, 4H, 3 J HH = 7); 7.35-7.42 (arom., m, 1H); 7.66-7.79 (arom., m, 2H). ESI-HRMS: 488.3231 [M+H]+ (theor. [C26H42N5O4]+ = 488.3231).
TD1345의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1343 (45.0 ㎎; 92 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (51 ㎎; 196 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD406 (20.0 ㎎; 110 μmol; 1.2 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 7일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 52.9 ㎎ (90%; 1 단계; 기준 TD1343). ESI-HRMS: 634.3825 [M+H]+ (theor. [C33H48N9O4]+ = 634.3824). TD1345는 모두 추가로 특정화하지 않고 TD1346에 대해 바로 사용하였다.
TD1447의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1341 (722 ㎎; 1.94 mmol; 2.0 당량)을 MeCN (40 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (133 ㎎; 964 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (40 ㎖) 중의 TD1057 (241 ㎎; 962 μmol; 1.0 당량) 용액을 (2시간에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (100 ㎖) 및 H2O (100 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여, 생산물을 포르메이트 염 형태의 흐린 노란색 오일로 수득하였다. 수율: 367 ㎎ (60% 추정 M·1.0FA; M R = 632.7; 1 단계; 기준 TD1057). 회수: 352 ㎎ TD1341 (사용한 초기량의 49%). NMR (CD3CN): 1H δH 1.18 (CH 3-CH, d, 6H, 3 J HH = 7); 1.21 (CH 3-CH2, t, 6H, 3 J HH = 7); 2.52-2.62 (mc, m, 4H); 2.64-2.76 (mc, m, 4H); 2.81-2.94 (mc, m, 4H); 2.95-3.06 (mc, m, 4H); 3.39 (CH-CH3 , q, 2H, 3 J HH = 7); 3.81 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 3.90 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.09 (CH 2-CH3, q, 4H, 3 J HH = 7); 4.62 (CH 2-N3, s, 2H); 7.58 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.66 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 19F δF -65.10 (s). ESI-HRMS: 587.3266 [M+H]+ (theor. [C26H42N8O4F3]+ = 587.3276).
TD1449의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1447 (추정 M·FA; 263.0 ㎎; 418 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (231 ㎎; 1.67 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (10 ㎖) 중의 TD1428 (173.0 ㎎; 421 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 1일 동안 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 노란색 왁스형 오일로서 수득하였다. 수율: 309 ㎎ (81%; 1 단계; 기준 TD1447). NMR (CD3CN): 1H δH 1.10 (CH 3-CH, d, 6H, 3 J HH = 7); 1.13 (CH 3-CH2, t, 6H, 3 J HH = 7); 1.43 (CH 3-C-O, s, 9H); 1.61 (CH 3-C-N, s, 6H); 2.53-2.80 (mc, m, 12H); 2.89-3.03 (mc, m, 4H); 3.32 (CH-CH3 , q, 2H, 3 J HH = 7); 3.68 (CH 2-arom., s, 2H); 3.71 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 3.77 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 3.89 (CH 3-O, s, 3H); 3.99 (CH 2-CH3, q, 4H, 3 J HH = 7); 4.52 (CH 2-N3, s, 2H); 5.56 (NH, bs, 1H); 7.50 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.71 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.00 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.16 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 19F δF -64.98 (s). ESI-HRMS: 917.4851 [M+H]+ (theor. [C44H64N10O8F3]+ = 917.4855).
rac -TD1489의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, Cbz2cyclen (유리 염기; 178 ㎎; 404 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (225 ㎎; 1.63 mmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 그 후, MeCN (2 ㎖) 중의 TD1488 (250 ㎎; 850 μmol; 2.1 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 4일간 40℃에서 교반하였다 (반응 중에 라세미화가 발생함). 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, MeCN으로 추가로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화하고 회전 증발기에서 농축해 MeCN 대부분을 제거하였다. 혼합물을 DCM (25 ㎖)으로 희석해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 172 ㎎ (73%; 1 단계; 기준 Cbz2cyclen). ESI-MS (LC-MS): 585.3 [M+H]+ (theor. [C30H41N4O8]+ = 585.3).
TD1493의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, rac-TD1489 (유리 염기; 172 ㎎; 294 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (162 ㎎; 1.17 mmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 그 후, MeCN (2 ㎖) 중의 TD1399 (148 ㎎; 592 μmol; 2.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 70분간 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, MeCN으로 추가로 헹구었다. 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 순수한 생산물이 함유된 분획 (말레이트 아암에 키랄성 차이가 있는 더 소수성인 부분입체 이성질체가 성공적으로 분리됨)을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 회전 증발기에서 농축해 MeCN 대부분을 제거하였다. 혼합물을 DCM (25 ㎖)으로 희석해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 88.1 ㎎ (44%; 1 단계; 기준 rac-TD1489). NMR (CD3CN): 1H δH 1.09 (CH 3-CH, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.19 (CH 3-CH2, t, 3H, 3 J HH = 7); 2.44 (CH 2-CH, dd, 1H, 2 J HH = 17, 3 J HH = 6); 2.55-2.70 (mc, CH 2-CH, m, 3+2H); 2.73-7.43 (Ph, m, 10H). ESI-HRMS: 685.3439 [M+H]+ (theor. [C35H49O10N4]+ = 685.3443).
TD1495의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에 Pd@C (9 ㎎) 및 자기 교반기를 투입하고, 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. MeOH (6 ㎖) 중의 TD1493 (88.0 ㎎; 129 μmol) 용액을 이후 격막을 통해 첨가하였다. 아르곤 인풋을 제거하고, H2 기체 (벌룬으로부터 공급)를 1시간 동안 RT에서 혼합물에 투입해 버블링하였다. 그 후 촉매를 시린지 미세필터를 사용해 여과 추출하였다 (PTFE; 필터를 MeOH로 추가로 세척). 여과물을 증발시켜 건조한 다음 DCM과 1회 동시 증발시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 52.6 ㎎ (98%; 1 단계; 기준 TD1493). ESI-HRMS: 417.2706 [M+H]+ (theor. [C19H37O6N4]+ = 417.2708).
TD1497의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1495 (55 ㎎; 132 μmol; 1.7 당량)를 MeCN (5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (11.0 ㎎; 80 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 왕성하게 교반한 반응 혼합물에, MeCN (5 ㎖) 중의 TD558 (12.0 ㎎; 79 μmol; 1.0 당량) 용액을 (15분에 걸쳐) 점적 첨가하였다. 형성된 혼합물을 4일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 10 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 12.1 ㎎ (29%; 1 단계; TD558 기준). ESI-MS (LC-MS): 532.3 [M+H]+ (theor. [C27H42N5O6]+ = 532.3).
TD1500의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1497 (12.1 ㎎; 23 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖) 중의 TD406 (5.8 ㎎; 32 μmol; 1.4 당량) 용액에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (17.5 ㎎; 127 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 수득한 현탁물을 1일간 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 H2O (1 ㎖)로 희석하였다. 수득한 용액을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (25 ㎖) 및 H2O (25 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (4 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 추가로 잠시 고 진공 하에 건조하였다. 생산물을 유리 염기 형태의 흐린 노란색 오일로서 수득하였다. 수율: 11.9 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD1497). ESI-MS (LC-MS): 678.3 [M+H]+ (theor. [C34H48N9O6]+ = 678.4).
실시예 4: 비- 케이지된 마크로사이클릭 리간드의 합성
TD425의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, 조산물 TD423 (비스(치환된) 부산물이 ~25%로 함유된 혼합물에서 ~75%; 180 ㎎; ≥1.0 당량)을 드라이 MeCN (10 ㎖)에 용해한 다음 Cs2CO3 (360 ㎎; 1.11 mmol; 3.8 당량)를 첨가하였다. MeCN (5 ㎖) 중의 TD566 (75 ㎎; 290 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2번 동시 증발하여, MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 129 ㎎ (27%; 3 단계; 기준 2-클로로-N-(프로프-2-yn-1-일)아세트아미드). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.62 (C≡CH, t, 1H, 4 J HH = 3); 2.89 -3.74 (mc, CH 2-CO, m, 16+6H); 3.79 (CH 2 -C≡CH, t, 2H, 4 J HH = 3); 4.03 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.68 (CH 2-N3, s, 2H); 7.55-7.67 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.78 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.85-7.92 (Ph, m, 2H); 8.17 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 606.3151 [M+H]+ (theor. [C30H40N9O5]+ = 606.3147). EA (C30H39N9O5·0.1FA·1.3H2O, M R = 633.7): C 57.0 (56.8); H 6.6 (6.3); N 19.9 (19.5).
TD669의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD663 (30 ㎎; 48 μmol, 1.0 당량)을 드라이 MeCN (500 ㎕)에 용해한 다음 K2CO3 (20 ㎎; 145 μmol; 3 당량)를 첨가하였다. MeCN (500 ㎕) 중의 TD662 (10 ㎎; 50 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. MeCN (200 ㎕) 중의 TD662 (6 ㎎; 30 μmol; 0.6 당량)를 추가로 첨가하고, 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 형성된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 27 ㎎ (≤88% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 634.4; 2 단계; 기준 TD663). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.59-3.82 (mc, CH 2-CO, CH 2-CH 2-N(CH 2-C≡CH)2, m, 16+4+10H); 4.00 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.64 (CH 2-N3, s, 2H); 7.55-7.65 (Ph, m, 3H); 7.74 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.83-7.91 (Ph, m, 2H); 8.17 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 630.3510 [M+H]+ (theor. [C33H44N9O4]+ = 630.3511).
TD604의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD596 (44 ㎎; 78 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (33 ㎎; 239 μmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (600 ㎕) 중의 TD558 (13 ㎎; 86 μmol; 1.1 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 16일간 RT에서 교반하였다. 그 후 추가적으로 MeCN (400 ㎕) 중의 TD558 (2 ㎎; 13 μmol; 0.2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 38 ㎎ (81%; 2 단계; 기준 TD596). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.80 -3.68 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.72 (C≡CH, s, 1H); 3.93 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.17 (CH 2-arom., s, 2H); 4.74 (CH 2-N3, s, 2H); 7.48-7.67 (arom., m, 3H); 7.74-7.95 (arom., m, 3H). 13C{1H} δC 48.3 (mc, s); 48.9 (mc, s); 50.6 (CH2-N3, s); 51.4 (CH2-arom., s); 51.5 (mc, s); 51.7 (mc, s); 56.7 (CH2-CO, s); 58.8 (CH2-arom., s); 80.7 and 82.2 (C≡CH; 2 x s); 126.0 (arom., s); 126.5 (arom., s); 127.9 (arom., s); 128.5 (arom., s); 131.5 (arom., s); 140.3 (arom., s); 141.2 (arom., s); 148.4 (arom., s); 148.7 (arom., s); 157.3 (arom., s); 169.5 (CO, s). ESI-HRMS: 566.2836 [M+H]+ (theor. [C27H36N9O5]+ = 566.2834). EA (C27H35N9O5·0.1FA·1.6H2O, M R = 599.1): C 54.3 (54.4); H 6.5 (6.1); N 21.0 (20.7).
TD556의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD635 (216 ㎎; 419 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (12 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (174 ㎎; 1.26 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (3 ㎖) 중의 TD406 (92 ㎎; 504 μmol; 1.2 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 161 ㎎ (66%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.80-3.60 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.74 (C≡CH, s, 1H); 3.86 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.94 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.72 (CH 2-N3, s, 2H); 7.65 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.67 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.95-8.03 (arom., m, 3H); 8.12 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 13C{1H} δC 48.3 (mc, s); 48.4 (mc, s); 51.4 (mc, s); 51.5 (mc, s); 54.3 (CH2-N3, s); 56.6 (CH2-CO, s); 58.0 (CH2-arom., s); 58.9 (CH2-arom., s); 80.9 and 82.0 (C≡CH; 2 x s); 124.5 (arom., s); 126.2 (arom., s); 126.3 (arom., s); 128.5 (arom., s); 140.5 (arom., s); 141.2 (arom., s); 142.7 (arom., s); 155.0 (arom., s); 155.5 (arom., s); 157.2 (arom., s); 169.2 (CO, s). ESI-HRMS: 550.2880 [M+H]+ (theor. [C27H36N9O4]+ = 550.2885). EA (C27H35N9O4·0.1FA·1.6H2O, M R = 583.1): C 55.8 (55.5); H 6.6 (6.1); N 21.6 (21.2).
TD810의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD711 (103 ㎎; 188 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (130 ㎎; 942 μmol; 5.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD807 (33 ㎎; 188 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 혼성 트리플루오로아세테이트/포르메이트 염 형태의 오프 화이트 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 55 ㎎ (43%; 2 단계; 기준 TD711). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.79-3.63 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.74 (C≡CH, s, 1H); 3.82 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.87 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.92 (C≡CH, s, 1H); 4.63 (CH 2-N3, s, 2H); 7.55 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.72 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.10 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.16 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.26 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 574.2882 [M+H]+ (theor. [C29H36N9O4]+ = 574.2885). EA (C29H35N9O4·0.5TFA·0.1FA·2.1H2O, M R = 673.1): C 53.7 (53.8); H 6.0 (6.2); N 18.7 (18.7).
TD827의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD635 (157 ㎎; 304 μmol; 1.0 당량)를 드라이 MeCN (7 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (210 ㎎; 1.52 mmol; 5.0 당량)를 첨가하였다. 드라이 MeCN (3 ㎖) 중의 TD817 (110 ㎎; 303 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 대략 절반 부피로 농축한 (MeCN 대부분 제거) 다음 DCM (125 ㎖)으로 희석하였다. 형성된 2상 혼합물을 분별 깔때기로 옮겼다. 수성 상만 희석한 수용액 NaHCO3로 중화하였다. 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4으로 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 1회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 오프 화이트 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 149 ㎎ (62%; 2 단계; 기준 TD711). NMR (D2O+FA, pD ~3): 1H δH 0.86-1.33 (i-Pr, m, 21H); 2.58-3.78 (mc, CH 2-CO, C≡CH, bm, 16+4+1H); 3.93 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.06 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.56 (CH 2-N3, s, 2H); 7.37 (arom., s, 1H); 7.53 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.74 (arom., s, 1H); 7.80 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.96 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 730.4216 [M+H]+ (theor. [C38H56N9O4Si1]+ = 730.4219). EA (C38H55N9O4Si1·0.8FA·1.6H2O, M R = 795.6): C 58.6 (58.7); H 7.6 (7.7); N 15.8 (15.7); Si 3.5 (3.2).
TD718의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에서, TD711 (31 ㎎; 57 μmol; 1.0 당량)을 드라이 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (31 ㎎; 225 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. 드라이 MeCN (2 ㎖) 중의 TD706 (13 ㎎; 58 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, DCM (100 ㎖)에 희석해 분별 깔때기로 옮겼다. 수성 상만 희석한 수용액 NaHCO3로 중화하였다. 교반한 후, 하부 상을 분리하여 무수 Na2SO4를 이용해 건조하고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 1회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 23 ㎎ (61%; 2 단계; 기준 TD706). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 0.28 (CH 3, s, 9H); 2.28-3.67 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.89 (CH 2-arom., bs, 4H); 4.57 (CH 2-N3, s, 2H); 7.49 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.58-7.64 (arom., m, 1H); 7.78-7.98 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 622.6277 [M+H]+ (theor. [C30H44N9O4Si1]+ = 622.3280). EA (C30H43N9O4Si1·2.6H2O, M R = 668.7): C 53.9 (53.9); H 7.3 (7.0); N 18.9 (18.7).
TD728의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에서, TD711 (66 ㎎; 121 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (67 ㎎; 486 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD723 (37 ㎎; 120 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, DCM (150 ㎖)으로 희석한 후 형성된 2상 혼합물을 분별 깔때기로 옮겼다. 수성 상만 희석한 수용액 NaHCO3로 중화하였다. 교반한 후, 하부 상을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추가로 (2 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4로 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 1회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 64 ㎎ (71%; 2 단계; 기준 TD723). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 0.84-1.34 (i-Pr, m, 21H); 2.41-3.78 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.89 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.95 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.52 (CH 2-N3, s, 2H); 7.42 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.46 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.74 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.78 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.85 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.87 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 706.4221 [M+H]+ (theor. [C36H56N9O4Si1]+ = 706.4219). EA (C36H55N9O4Si1·2.6H2O, M R = 752.8): C 57.4 (57.7); H 8.1 (8.0); N 16.7 (16.5); Si 3.7 (3.8).
TD1204의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD711 (35.0 ㎎; 64.0 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (44.2 ㎎; 320 μmol; 5.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD1194 (21.4 ㎎; 77.1 μmol; 1.2 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 23.3 ㎎ (49%; 2 단계; 기준 TD711). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.83-3.67 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.88 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.92 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.56 (CH 2-N3, s, 2H); 7.49 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.54 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.87-8.00 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 676.1855 [M+H]+ (theor. [C27H35N9O4I1]+ = 676.1851). EA (C27H34N9O4I1·0.3FA·2.7H2O, M R = 738.0): C 44.4 (44.6); H 5.5 (5.1); N 17.1 (16.7).
TD944의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에서, TD711 (58 ㎎; 106 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (87 ㎎; 629 μmol; 6.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD939 (≤105 μmol; ≤1.0 당량)를 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 흐린 노란색 고형물로 수득하였다. 수율: 38 ㎎ (55%; 3 단계; 기준 TD936). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.82-3.67 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.91 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.95 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.58 (CH 2-N3, s, 2H); 7.40-8.07 (Ph, arom., m, 5+6H). ESI-HRMS: 626.3197 [M+H]+ (theor. [C33H40N9O4]+ = 626.3198). EA (C30H39N9O4·1.5H2O, M R = 652.8): C 60.7 (61.0); H 6.5 (6.3); N 19.3 (18.8).
TD943의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에서, TD711 (82 ㎎; 150 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (125 ㎎; 904 μmol; 6.0 당량)을 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD940 (≤150 μmol; ≤1.0 당량)를 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 흐린 노란색 고형물로 수득하였다. 수율: 66 ㎎ (71%; 3단계; 기준 TD937). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 0.74-1.06 (CH 2-CH, m, 4H); 1.35-1.66 (CH2-CH, m, 1H); 2.69-3.65 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.86 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.92 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.57 (CH 2-N3, s, 2H); 7.42 -7.53 (arom., m, 2H); 7.83-8.01 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 590.3196 [M+H]+ (theor. [C30H40N9O4]+ = 590.3198). EA (C30H39N9O4·1.5H2O, M R = 616.7): C 58.4 (58.6); H 6.9 (6.9); N 20.4 (20.3).
TD959의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (10 ㎖)에서, TD711 (23 ㎎; 42 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (35 ㎎; 253 μmol; 6.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD956 (≤42 μmol; ≤1.0 당량)을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 거의 무색 고형물로 수득하였다. 수율: 18 ㎎ (67%; 3 단계; 기준 TD952). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 1.34 (CH 3, s, 9H); 2.72-3.69 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.88 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.92 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.57 (CH 2-N3, s, 2H); 7.46 -7.55 (arom., m, 2H); 7.84-8.03 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 606.3513 [M+H]+ (theor. [C31H44N9O4]+ = 606.3511). EA (C31H43N9O4·1.8H2O, M R = 638.2): C 58.3 (58.7); H 7.4 (7.0); N 19.8 (19.4
TD992의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD711 (43 ㎎; 79 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (44 ㎎; 318 μmol; 4.1 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD990 (≤79 μmol; ≤1.0 당량)을 첨가하고, 수득한 현탁물을 16시간 동안 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 오프 화이트 솜털 고형물로 수득하였다. 수율: 42.0 ㎎ (73%; 3단계; 기준 TD965). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 1.62-1.83 (Adm ., m, 6H); 1.86-2.04 (Adm., m, 9H); 2.77-3.70 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.90 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.94 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.57 (CH 2-N3, s, 2H); 7.44 -7.56 (arom., m, 2H); 7.82-8.00 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 684.3982 [M+H]+ (theor. [C37H50N9O4]+ = 684.3980). EA (C37H49N9O4·0.3FA·1.9H2O, M R = 731.9): C 61.2 (61.2); H 7.1 (7.1); N 17.2 (17.0).
TD703의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD692 (38 ㎎; 76 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (31 ㎎; 217 μmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD406 (14 ㎎; 77 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 추가로 MeCN (1 ㎖) 중의 건조한 K2CO3 (31 ㎎; 217 μmol; 3.0 당량) 및 TD406 (10 ㎎; 55 μmol; 0.7 당량)을 첨가하고, 수득한 현탁물을 추가로 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조하고, 추가로 MeOH와 2회 동시 증발시켰다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 3회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 혼성 트리플루오로아세테이트/포르메이트 염 형태의 약간 노란색을 띠는 끈적한 오일로 수득하였다. 수율: 16 ㎎ (34%; 2 단계; 기준 TD692). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.59-3.73 (mc, CH 2-CO, m, 16+2H); 3.75 (C≡CH, s, 1H); 3.84 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.29-4.62 (CH 2-arom., CH 2-N3, m, 2+2H); 7.37 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.45 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.52 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.56 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.59 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 492.2829 [M+H]+ (theor. [C25H34N9O2]+ = 492.2830). EA (C25H33N9O2·0.3TFA·0.7FA·3.5H2O, M R = 621.1): C 50.9 (51.1); H 6.8 (6.8); N 20.3 (20.0).
TD705의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD700 (20 ㎎; 36 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (20 ㎎; 145 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD406 (9 ㎎; 49 μmol; 1.4 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 22 ㎎ (87%; 1 단계; 기준 TD406). ESI-MS (LC-MS): 698.4 [M+H]+ (theor. [C34H53N9O5P1]+ = 698.4). TD705는 모두 추가로 특정화하지 않고 TD714에 대해 바로 사용하였다.
TD714의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD705 (22 ㎎; 32 μmol; 1.0 당량)를 드라이 피리딘 (1 ㎖)에 용해한 다음 neat TMSBr (50 ㎕; 379 μmol; 12.0 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 반응물을 50% aq. MeOH (1 ㎖)로 퀀칭하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조하고, 추가로 MeOH와 2회 동시 증발시켰다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 12 ㎎ (≤64% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 590.2; 2 단계; 기준 TD705). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.73-3.71 (mc, CH 2-CO, CH 2-P, m, 16+2+1H); 3.74 (C≡CH, s, 1H); 3.84 (CH 2-arom, bs, 1H); 3.99 (CH 2-arom., bs, 1H); 4.17 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.47 (CH 2-P; bd, 2 J H = 13); 4.67 (CH 2-N3, s, 1H); 4.68 (CH 2-N3, s, 1H); 7.54 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.61 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.62 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.64 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.90 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.93 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 586.2649 [M+H]+ (theor. [C26H37N9O5P1]+ = 586.2650).
TD921의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD910 (160 ㎎; 315 μmol; 2.0 당량)을 MeCN (10 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (22 ㎎; 160 μmol; 1.0 당량)의 용액을 첨가하였다. 그 후, MeCN (5 ㎖) 중의 TD558 (24 ㎎; 158 μmol; 1.0 당량) 용액을 15분에 걸쳐 점적 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득한 알킨 함유 중간산물 (진행 중인 자기-메틸화로 인해 부분적으로 N-메틸화된/탈메틸화된 부산물과 함께; 49 ㎎; ≤78 μmol; ≤1.0 당량)을 MeCN (7 ㎖)에 용해한 다음 TD406 (18 ㎎; 119 μmol; ≥1.5 당량) 및 K2CO3 (54 ㎎; 391 μmol; ≥5.0 당량)를 첨가하고, 제조된 현탁물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 수득한 생산물의 메틸 에스테르 (진행 중인 자기-메틸화로 인해 부분적으로 N-메틸화된/탈메틸화된 부산물과 함께; 37 ㎎; ≤48 μmol; ≤1.0 당량)를 드라이 피리딘 (2 ㎖)에 용해한 다음 neat TMSBr (65 ㎕; 492 μmol; ≥12.0 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 반응물을 50% aq. MeOH (1 ㎖)로 퀀칭하고 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 25.6 ㎎ (20%; 3 단계; TD558 기준). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.56-3.75 (mc, CH 2-P, C≡CH, m, 16+4+1H); 4.20 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.29 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.45 (CH 2-N3, s, 2H); 7.23-7.77 (Ph, arom., m, 10+4H); 7.96 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.97 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 31P{1H} δP 25.1 (bs). ESI-HRMS: 796.2334 [M+H]+ (theor. [C44H34N10O2P2]+ = 796.2336). EA (C37H45N9O4P2·4.6H2O, M R = 824.6): C 53.9 (54.5); H 6.6 (6.3); N 15.3 (14.7).
TD580의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD579 (137 ㎎; 233 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (7 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (141 ㎎; 1.02 mmol; 4.4 당량)를 첨가하였다. MeCN (3 ㎖) 중의 TD406 (50 ㎎; 274 μmol; 1.2 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 50 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 125 ㎎ (73%; 1 단계; 기준 TD579). NMR (CD3CN): 1H δH 1.21 (CH 3, t, 12H, 3 J HH = 7); 2.90 (mc, m, 8H); 2.97 (CH 2-P, d, 4H, 2 J HP = 10); 2.99 (mc, m, 4H); 3.24 (mc, m, 8H); 3.55 (C≡CH, s, 1H); 4.01 (CH 2-O-P, m, 8H); 4.21 (CH 2-arom., s, 2H); 4.48 (CH 2-N3, s, 2H); 4.55 (CH 2-arom., s, 2H); 7.37 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.49 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.51 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.54 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.80 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.84 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 31P{1H} δP 24.8 (s). ESI-MS (LC-MS): 734.5 [M+H]+ (theor. [C33H54N9O6P2]+ = 734.4).
TD582의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD580 (25 ㎎; 34 μmol; 1.0 당량)을 aq. NaOH (10%; 1 ㎖) 및 EtOH (300 ㎕)의 혼합물에 용해하고, 형성된 용액을 2일간 RT에서 교반하였다. 그 후 반응물을 AcOH (200 ㎕)로 퀀칭하고, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9 ㎎ (≤39% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 682.3; 1 단계; 기준 TD580). ESI-MS (LC-MS): 678.4 [M+H]+ (theor. [C29H46N9O6P2]+ = 678.3).
TD581의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD580 (25 ㎎; 34 μmol; 1.0 당량)을 드라이 피리딘 (1 ㎖)에 용해한 다음 neat TMSBr (110 ㎕; 833 μmol; ~25 당량)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 반응물을 50% aq. MeOH (1 ㎖)로 퀀칭하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 약간 노란색을 띠는 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6 ㎎ (≤28% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 626.2; 1 단계; 기준 TD580). ESI-MS (LC-MS): 622.3 [M+H]+ (theor. [C25H38N9O6P2]+ = 622.2).
TD575의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD579 (51 ㎎; 87 μmol; 1.2 당량)를 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (30 ㎎; 217 μmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD566 (20 ㎎; 73 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고, NaHCO3 희석 수용액으로 중화한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔사를 DCM (50 ㎖) 및 H2O (50 ㎖)에 용해해 분별 깔때기로 옮겼다. 교반한 후, 하부 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM으로 추가로 (3 x 25 ㎖) 추출하였다. 유기층을 조합해 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 글래스 프릿 (S3)을 통해 여과한 다음 증발시켜 건조하였다. 잔류물을 고 진공 하에 밤새 추가로 건조하여 생산물을 유리 염기 형태의 거의 무색 오일로서 수득하였다. 수율: 46 ㎎ (90%; 1 단계; 기준 TD566). ESI-MS (LC-MS): 810.4 [M+H]+ (theor. [C39H58N9O6P2]+ = 810.4). TD575는 추가로 특정화하지 않고 TD576에 대해 바로 사용하였다.
TD576의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD575 (23 ㎎; 28 μmol; 1.0 당량)를 드라이 피리딘 (1 ㎖)에 용해한 다음 neat TMSBr (220 ㎕; 1.67 mmol; ~60 당량)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 반응물을 50% aq. MeOH (1 ㎖)로 퀀칭하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 15 ㎎ (≤75% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 702.3; 1 단계; 기준 TD575). NMR (D2O+NaOD, pD ~8): 1H δH 2.54-3.76 (mc, CH 2-P, m, 16+4H); 3.93 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.10 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.60 (CH 2-N3, s, 2H); 7.44 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.46-7.51 (Ph, m, 3H); 7.53 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.66-7.70 (Ph, m, 2H); 7.71 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.77 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.81 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 31P{1H} δP 8.2 (bs). ESI-HRMS: 696.2575 [M-H]- (theor. [C31H40N9O6P2]- = 696.2582).
TD801의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD799 (46 ㎎; 85 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (48 ㎎; 348 μmol; 4.1 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD406 (20 ㎎; 110 μmol; 1.3 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 33 ㎎ (48%; 2 단계; 기준 TD799). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.41-3.78 (mc, CH 2-CO, CH 2-P, m, 16+2+2H); 3.89 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.95 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.52 (CH 2-N3, s, 2H); 7.42 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.46 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.74 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.78 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.85 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.87 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 578.3208 [M+H]+ (theor. [C29H40N9O4]+ = 578.3203). EA (C29H39N9O4·2.0TFA, M R = 805.7): C 49.2 (49.3); H 5.1 (5.4); N 15.6 (15.7).
TD764의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD635 (304 ㎎; 589 μmol; 1.1 당량)를 MeCN (7 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (305 ㎎; 2.21 mmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (3 ㎖) 중의 TD760 (120 ㎎; 553 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 196 ㎎ (51%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.86-3.60 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.77 (C≡CH, s, 1H); 3.79-4.06 (CH 2-arom., bm, 4H); 4.62 (CH 2-N3, s, 2H); 7.62 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.67 -7.73 (arom., m, 1H); 8.07-8.14 (arom., m, 2H); 8.17 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 582.2344 [M-H]- (theor. [C27H33N9O4Cl1]- = 582.2350). EA (C27H34N9O4Cl1·0.7TFA·1.7H2O, M R = 694.5): C 49.1 (49.0); H 5.5 (5.4); N 18.2 (18.4); Cl 5.1 (5.3).
TD1063의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD635 (50 ㎎; 97 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (67 ㎎; 485 μmol; 5.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD1057 (24 ㎎; 96 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 33.4 ㎎ (55%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.81-3.68 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.72 (C≡CH, s, 1H); 3.82 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.05 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.70 (CH 2-N3, s, 2H); 7.62-7.69 (arom., m, 1H); 7.82 (arom., s, 1H); 7.92-7.99 (arom., m, 2H); 8.38 (arom., s, 1H). 19F{1H} δF -64.2 (s). ESI-HRMS: 618.2759 [M+H]+ (theor. [C28H35N9O4F3]+ = 618.2759). EA (C28H34N9O4F3·0.1FA·1.2H2O, M R = 643.8): C 52.4 (52.8); H 5.7 (5.4); N 19.6 (19.4); F 8.8 (7.8).
TD1092의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD635 (35 ㎎; 68 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (44 ㎎; 318 μmol; 4.7 당량)을 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 사전-정제한 TD1089 (비스 아지드 부산물 ~20% 함유; 20 ㎎; <83 μmol; <1.2 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 31.9 ㎎ (74%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 2.76-3.62 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.73 (C≡CH, s, 1H); 3.83 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.99 (CH 3, s, 3H); 4.05 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.69 (CH 2-N3, s, 2H); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.02 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.05 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.15 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.58 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 608.2939 [M+H]+ (theor. [C29H38N9O6]+ = 608.2940). EA (C29H37N9O6·0.1FA·1.1H2O, M R = 632.1): C 55.3 (55.1); H 6.3 (6.0); N 19.9 (19.6).
TD1148의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD635 (44 ㎎; 85 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (2.5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (47 ㎎; 340 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD1112 (23 ㎎; 86 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 30.7 ㎎ (55%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 1.40 (CH 3, d, 6H, 3 J HH = 6); 2.77-3.63 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.70 (C≡CH, s, 1H); 3.80 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.06 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.65 (CH 2-N3, s, 2H); 5.26 (CH, hept, 1H, 3 J HH = 6); 7.65 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.93-8.00 (arom., m, 2H); 8.12 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 636.3247 [M+H]+ (theor. [C31H42N9O6]+ = 636.3253). EA (C31H41N9O6·0.1FA·1.0H2O, M R = 658.3): C 56.7 (56.4); H 6.6 (6.4); N 19.1 (18.8).
TD1160의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (100 ㎖)에서, TD1116 (50 ㎎; 158 μmol; 2.0 당량)을 MeCN (20 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (11 ㎎; 80 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (20 ㎖) 중의 TD558 (12 ㎎; 79 μmol; 1.0 당량) 용액을 2시간에 걸쳐 점적 첨가하고, 수득한 현탁물을 7일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 모노 알킬화된 중간산물이 함유된 분획들을 합치고, 바로 동결건조하였다. 수득한 고형물 (15.4 ㎎; ≤36 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (25 ㎎; 181 μmol; ≥5.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD1130 (15 ㎎; 53 μmol; ≥1.5 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 7일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 메틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 바로 동결건조하였다. 잔사를 MeOH (2 ㎖) 및 H2O (1 ㎖) 혼합물에 다시 용해한 다음 고체 LiOH·H2O (15 ㎎; 360 μmol; >10 당량)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 15분간 RT에서 교반하고, FA (15 ㎕)로 퀀칭한 후 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 고형물로 수득하였다. 수율: 1.7 ㎎ (<5%; 3단계; TD558 기준). ESI-HRMS: 650.3407 [M+H]+ (theor. [C32H44N9O6]+ = 650.3409).
TD1176의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD635 (43.5 ㎎; 84.4 μmol; 1.1 당량)를 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (42.5 ㎎; 308 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD1163 (17.3 ㎎; 76.7 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 2일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 43.6 ㎎ (80%; 2 단계; 기준 TD1163). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.74-3.62 (mc, CH 2-CO, CH 3, m, 16+4+6H); 3.70 (C≡CH, s, 1H); 3.76 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.84 (CH 2-arom., bs, 2H); ~4.7-4.8 (CH 2-N3, obscured by HOD signal); 6.85 (arom., bs, 1H); 7.02 (arom., bs, 1H); 7.64 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., bt, 1H, 3 J HH = 8); 7.94 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 593.3310 [M+H]+ (theor. [C29H41N10O4]+ = 593.3307). EA (C29H40N10O4·0.8FA·4.4H2O, M R = 708.8): C 50.5 (50.8); H 7.2 (7.1); N 19.8 (19.5).
TD647의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (50 ㎖)에서, TD635 (375 ㎎; 727 μmol; 1.0 당량)를 드라이 MeCN (20 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (300 ㎎; 2.17 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 드라이 MeCN (5 ㎖) 중의 TD566 (189 ㎎; 731 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 342 ㎎ (72%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.70-3.59 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.66 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.69 (C≡CH, s, 1H); 3.90 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.64 (CH 2-N3, s, 2H); 7.46-7.60 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.64 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 2); 7.68 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.69 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.79-7.88 (Ph, m, 2H); 8.28 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 13C{1H} δC 48.2 (mc, s); 48.3 (mc, s); 51.2 (mc, s); 51.3 (mc, s); 54.7 (CH2-N3, s); 56.4 (CH2-CO, s); 57.8 (CH2-arom., s); 59.1 (CH2-arom., s); 80.3 and 82.4 (C≡CH; 2 x s); 121.9 (arom., s); 124.4 (arom., s); 125.6 (arom., s); 128.2 (Ph, s); 128.5 (Ph, s); 130.0 (Ph, s); 130.8 (arom., s); 137.7 (Ph, s); 140.3 (arom., s); 141.2 (arom., s); 153.6 (arom., s); 155.4 (arom., bs); 156.2 (arom., s); 157.6 (arom., s); 168.7 (CO, s). ESI-HRMS: 626.3195 [M+H]+ (theor. [C33H40N9O4]+ = 626.3198). EA (C33H39N9O4·0.2FA·0.9H2O, M R = 651.2): C 61.2 (61.6); H 6.4 (6.1); N 19.4 (19.1).
TD722의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD539 (350 ㎎; 543 μmol; 1.0 당량)를 MeCN (15 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (375 ㎎; 2.72 mmol; 5.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (3 ㎖) 중의 TD566 (140 ㎎; 541 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸/Boc 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (5 ㎖)에 용해하고, 형성된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 약간 노란색 고형물을 수득하였다. 수율: 295 ㎎ (69%; 2 단계; 기준 TD566). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.74-3.64 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.72 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.98 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.10 (CH 2-C≡C, s, 2H); 4.65 (CH 2-N3, s, 2H); 7.47-7.69 (Ph, arom., m, 3+3H); 7.72 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.85-7.96 (Ph, m, 2H); 8.41 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 655.3460 [M+H]+ (theor. [C34H43N10O4]+ = 655.3463). EA (C34H42N10O4·0.7TFA·2.0H2O, M R = 770.6): C 55.2 (54.9); H 6.1 (5.8); N 18.2 (18.3); F 5.2 (5.3).
TD1054의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD663 (30.0 ㎎; 45.3 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (37.5 ㎎; 271 μmol; 5.0 당량)을 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD1050 (≤65.3 μmol; ≤1.5 당량)을 첨가하고, 수득한 현탁물을 3일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸/Boc 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 혼성 트리플루오로아세테이트/포르메이트 염 형태의 무색 고형물로 수득하였다. 수율: 23.0 ㎎ (65%; 2 단계; 기준 TD663). NMR (D2O, pD ~8): 1H δH 1.72 (CH 3, s, 6H); 2.67-3.61 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.70 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.97 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.64 (CH 2-N3, s, 2H); 7.45-7.67 (Ph, arom., m, 3+3H); 7.72 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.86-7.93 (Ph, m, 2H); 8.40 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 683.3775 [M+H]+ (theor. [C36H47N10O4]+ = 683.3776). EA (C36H46N10O4·0.3TFA·0.8FA·2.3H2O, M R = 777.3): C 57.8 (58.0); H 6.5 (6.5); N 18.0 (17.7).
TD1105의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD711 (101 ㎎; 185 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (102 ㎎; 738 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중에 신선하게 준비한 단리한 용액 TD1050 (≤222 μmol; ≤1.2 당량)을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸/Boc 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 완전히 탈보호된 중간산물이 함유된 분획들을 합쳐 바로 동결건조하였다. 수득한 고형물을 H2O (6 ㎖), MeCN (6 ㎖) 및 THF (2 ㎖)의 혼합물에 용해한 다음 Boc2O (2.0 M/드라이 THF; 315 ㎕; 630 μmol; ≥3.4 당량) 및 NaHCO3 (210 ㎎; 2.50 mmol; ≥13.5 당량)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 2일간 RT에서 교반한 다음 추가로 Boc2O (2.0 M/드라이 THF; 315 ㎕; 630 μmol; ≥3.4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 추가로 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 36.8 ㎎ (27%; 3 단계; 기준 TD711). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 1.47 (CH 3, s, 9H); 1.65 (CH 3, s, 6H); 2.85-3.65 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.91 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.95 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.59 (CH 2-N3, s, 2H); 7.51 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.59 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.89 -8.05 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 707.3988 [M+H]+ (theor. [C35H51N10O6]+ = 707.3988). EA (C35H50N10O6·0.1FA·2.0H2O, M R = 747.5): C 56.4 (56.7); H 7.3 (7.0); N 18.7 (18.5).
TD1127의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1118 (56.9 ㎎; 81.4 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (2 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (45.0 ㎎; 326 μmol; 4.0 당량) 및 TD406 (16.0 ㎎; 87.6 μmol; 1.1 당량)을 MeCN (1 ㎖) 중에 첨가하였다. 수득한 현탁물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸/Boc 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 혼성 트리플루오로아세테이트/포르메이트 염 형태의 무색 고형물로 수득하였다. 수율: 49.0 ㎎ (71%; 2 단계; 기준 TD1118). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 1.96 -2.11 (CH 2, m, 2H); 2.14 -2.29 (CH 2, m, 2H); 2.86-3.63 (mc, CH 2-CO, CH 2, CH, m, 16+4+4+1H); 3.90 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.94 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.59 (CH 2-N3, s, 2H); 7.49-7.55 (arom., m, 1H); 7.60 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 2); 7.92-8.04 (arom., m, 4H). ESI-HRMS: 633.3612 [M+H]+ (theor. [C32H45N10O4]+ = 633.3620). EA (C32H44N10O4·1.8TFA·0.1FA, M R = 878.6): C 50.9 (50.7); H 5.5 (5.9); N 16.6 (16.9).
TD742의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD635 (90 ㎎; 163 μmol; 1.1 당량)를 MeCN (6 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (85 ㎎; 616 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (2 ㎖) 중의 TD733 (55 ㎎; 153 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 18시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 87 ㎎ (80%; 2 단계; 기준 TD733). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.76-3.64 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.69 (C≡CH, s, 1H); 3.72 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.99 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.77 (CH 2-N3, s, 2H); 7.54-7.70 (arom., m, 3H); 7.85 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.96 (arom., d, 2H, 3 J HH = 8); 8.11 (arom., d, 2H, 3 J HH = 8); 8.38 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 670.3094 [M+H]+ (theor. [C34H40N9O6]+ = 670.3096). EA (C34H40N9O6·0.2FA·1.6H2O, M R = 707.8): C 58.0 (58.4); H 6.1 (5.9); N 17.8 (17.5).
TD744의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD539 (80 ㎎; 124 μmol; 1.1 당량)를 MeCN (3 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (65 ㎎; 471 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (3 ㎖) 중의 TD733 (42 ㎎; 117 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 24시간 동안 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 혼성 트리플루오로아세테이트/포르메이트 염 형태의 오프 화이트 솜털 고형물로 수득하였다. 수율: 44 ㎎ (45%; 2 단계; 기준 TD733). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.71-3.64 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.70 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.98 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.12 (CH 2-C≡C, s, 2H); 4.70 (CH 2-N3, s, 2H); 7.50-7.59 (arom., m, 2H); 7.63 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.78 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.95 (arom., d, 2H, 3 J HH = 9); 8.07 (arom., d, 2H, 3 J HH = 9); 8.42 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 699.3358 [M+H]+ (theor. [C35H43N10O6]+ = 699.3362). EA (C35H42N10O6·1.0TFA·1.3H2O, M R = 836.2): C 53.1 (52.8); H 5.5 (5.8); N 16.8 (16.9). TD750의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, TD744·1.0TFA·1.3H2O (1.5 ㎎; ~1.8 μmol; 1.0 당량)을 aq. 보레이트/NaOH 완충제 (200 mM; pH 9.0; 900 ㎕; 180 mmol; ~100 당량)에 용해한 다음 MeCN (900 ㎕) 중에 준비한 신선한 용액 FmocCl (0.6 ㎎; ~2.3 μmol; 1.3 당량)을 첨가하였다. 형성된 맑은 용액을 2시간 동안 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.8 ㎎ (≤48% 추정 M·0.2FA·xH2O; M R = 930.2; 1 단계; 기준 TD744·1.0TFA·1.3H2O). ESI-HRMS: 921.4044 [M+H]+ (theor. [C50H53N10O8]+ = 921.4042).
TD779의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (10 ㎎; 15 μmol; 1.0 당량) 및 암모늄 클로라이드 (2 ㎎; 38 μmol; 2.5 당량)를 DMSO (2 ㎖)에 용해한 다음 DIPEA (22 ㎕; 126 μmol; 8.2 당량) 및 고체 HATU (18 ㎎; 47 μmol; 3.1 당량)를 첨가하였다. 형성된 노란색 용액을 15분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 FA (6 ㎕; 169 μmol; 10 당량)로 퀀칭한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7 ㎎ (≤73% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 628.4; 1 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). NMR (D2O+FA, pD ~3): 1H δH 2.83-3.74 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 3.65 (C≡CH, s, 1H); 4.13-4.68 (CH 2-arom., bm, 4H); 4.69 (CH 2-N3, s, 2H); 7.52-7.66 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.71 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.80-7.88 (Ph, m, 2H); 7.90 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.91 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.00 (arom., bs, 1H). ESI-HRMS: 624.3503 [M+H]+ (theor. [C33H42N11O2]+ = 624.3504).
TD778의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (12 ㎎; 18 μmol; 1.0 당량) 및 글리신 tert-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (8 ㎎; 48 μmol; 2.6 당량)를 DMSO (2 ㎖)에 용해한 다음 DIPEA (26 ㎕; 149 μmol; 8.1 당량) 및 고체 HATU (21 ㎎; 55 μmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 형성된 노란색 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 FA (7 ㎕; 186 μmol; 10 당량)로 퀀칭한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9 ㎎ (62%; 2 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.83-3.93 (mc, CH 2-CO, C≡CH, bm, 16+8+1H); 4.35-4.69 (CH 2-arom., CH 2-N3., bm, 4+2H); 7.49 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.56-7.73 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.75-7.92 (Ph, arom., m, 2+2H); 8.06 (arom., s, 1H). ESI-HRMS: 738.3471 [M-H]- (theor. [C37H44N11O6]- = 738.3482). EA (C37H45N11O6·0.1FA·2.4H2O, M R = 787.7): C 56.6 (55.9); H 6.4 (5.8); N 19.6 (20.3).
TD1408의 합성: 유리 바이얼 (25 ㎖)에서, TD635 (51 ㎎; 99 μmol; 1.1 당량)를 MeCN (1 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (54 ㎎; 391 μmol; 4.4 당량)를 첨가하였다. MeCN (1 ㎖) 중의 TD1406 (17.5 ㎎; 89 μmol; 1.0 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 16시간 동안 40℃에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 41.7 ㎎ (77%; 2 단계; 기준 TD1406). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.74-4.16 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., CH 2 -CH 2-N3, C≡CH, m, 16+4+4+4+1H); 7.37-7.45 (arom., m, 1H); 7.65 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85-7.93 (arom., m, 2H); 7.96 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.06 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 564.3044 [M+H]+ (theor. [C28H38N9O4]+ = 564.3041). EA (C28H37N9O4·0.1FA·2.4H2O, M R = 611.5): C 55.2 (56.0); H 6.9 (6.7); N 20.6 (19.8).
TD1346의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1345 (52.7 ㎎; 83 μmol; 1.0 당량)를 60 % aq. MeCN (2.7 ㎖)에 용해한 다음 신선하게 준비한 aq. LiOH (1.0 m; 830 ㎕; 830 μmol; 10 당량)를 첨가하였다. 수득한 용액을 RT에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물에 FA (31 ㎕; 822 μmol; 10 당량)를 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 용액을 잠시 농축해 MeCN 대부분을 제거하고, 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 솜털같은 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 35.4 ㎎ (71%; 1 단계; 기준 TD1345). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 1.24-1.42 (CH 3, m, 6H); 2.44-3.81 (mc, CH 2-arom., C≡CH, m, 16+4+1H); 4.41-4.53 (CH-CH3, m, 2H); 4.56 (CH 2-N3, s, 2H); 7.49 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.63 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.93 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.96 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.05 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 8.10 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 578.3197 [M+H]+ (theor. [C29H40N9O4]+ = 578.3198). EA (C29H39N9O4·1.2H2O, M R = 599.3): C 58.1 (58.0); H 7.0 (6.5); N 21.0 (20.6).
TD1451의 합성: 배-형상의 유리 플라스크 (25 ㎖)에서, TD1449 (302 ㎎; 330 μmol; 1.0 당량)를 60% aq. MeCN (17 ㎖)에 용해한 다음 신선하게 준비한 aq. LiOH (1.0 m; 3.3 ㎖; 3.3 mmol; 10 당량)를 첨가하였다. 수득한 용액을 RT에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 간단히 농축해 MeCN 대부분을 제거한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 거의 양쪽성 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 257 ㎎ (87%; 1 단계; 기준 TD1449). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.37-1.60 (CH 3-C-O, CH 3-CH, m, 9+6H); 1.67 (CH 3-C-N, s, 6H); 2.66-4.30 (mc, CH 2-arom., CH-CH3, m, 16+4+2H); 4.68 (CH 2-N3, s, 2H); 7.80 (arom., s, 1H); 7.92 (arom., s, 1H); 7.98 (arom., s, 1H); 8.02 (arom., s, 1H). 19F δF -64.44 (s). ESI-HRMS: 847.4070 [M+H]+ (theor. [C39H54N10O8F3]+ = 634.3824). EA (C39H53N10O8F3·0.1FA·2.7H2O, M R = 900.1): C 52.2 (53.1); H 6.6 (6.2); N 15.6 (15.5); 6.3 (5.4).
TD1504의 합성: 유리 바이얼 (25 ㎖)에서, TD1500 (11.9 ㎎; 18 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (800 ㎕) 및 H2O (550 ㎕)에 용해한 다음 신선하게 준비한 aq. LiOH (1.0 m; 263 ㎕; 263 μmol; 15 당량)를 첨가하였다. 수득한 용액을 RT에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물에 FA (8 ㎕; 212 μmol; 12 당량)를 첨가해 퀀칭하였다. 형성된 용액을 H2O (2 ㎖)로 희석한 후 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 유리 염기 형태의 솜털같은 백색 고형물로서 수득하였다. 수율: 8.9 ㎎ (~77% 추정 M·2H2O; M R = 657.7; 2 단계; 기준 TD1500). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.28-1.45 (CH 3, m, 3H); 2.49-3.70 (mc, CH-CH3, CH-CH 2, CH 2-arom., m, 16+1+3+4H); 3.76 (C≡CH, s, 1H); 4.35-4.51 (CH 2-N3, m, 2H); 7.69 (arom., dd, 2H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.98 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.05-8.21 (arom., m, 3H). ESI-MS (LC-MS): 622.3 [M+H]+ (theor. [C30H40N9O6]+ = 622.3).
실시예 5: ( 트리아졸 기로 브릿지 형성된) 케이지된 마크로사이클릭 리간드의 합성
cz-TD425의 합성: TD425 합성 중에 부산물로서 거의 양쪽형 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3 ㎎ (≤1% 추정 M·0.1FA·xH2O; M R = 609.9; 3단계; 기준 2-클로로-N-(프로프-2-yn-1-일)아세트아미드). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.52-5.20 (mc, CH 2-CO, CH 2-NH-CO-CH 2, CH 2-arom., bm, 16+4+4+2H); 6.24 (CH 2-N3., bs, 2H); 7.56-7.72 (Ph, m, 3H); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 7.88-7.94 (Ph, m, 2H); 8.33 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.73 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 606.3143 [M+H]+ (theor. [C30H40N9O5]+ = 606.3147).
cz-TD556의 합성: TD556의 합성 중에 부산물로서 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9 ㎎ (~2%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.54-4.06 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.59 (CH 2-arom., bs, 2H); 5.02 (CH 2-arom., bs, 2H); 5.86 (CH 2-N3, bs, 2H); 7.67 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 7.70 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 7.83 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 7.87 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 8.14 (arom., bt, 1H, 3 J HH = 8); 8.16 (CH-N3, bs, 1H); 8.17 (arom., bt, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 550.2889 [M+H]+ (theor. [C27H36N9O4]+ = 550.2885). EA (C27H35N9O4·2.7TFA·0.5H2O, M R = 866.4): C 44.9 (44.8); H 4.5 (4.8); N 14.5 (14.8).
cz-TD764의 합성: TD764의 합성 중에 부산물로서 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9 ㎎ (~2%; 2 단계; 기준 TD635). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.48-3.94 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.57 (CH 2-arom., bs, 2H); 5.00 (CH 2-arom., bs, 2H); 5.94 (CH 2-N3, bs, 2H); 7.64 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.79 (arom., s, 1H); 7.84 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.92 (arom., s, 1H); 8.14 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.15 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 582.2344 [M-H]- (theor. [C27H33N9O4Cl1]- = 582.2350). EA (C27H34N9O4Cl1·1.8TFA·3.3H2O, M R = 848.7): C 43.3 (43.3); H 5.0 (4.5); N 14.9 (14.5); Cl 4.2 (4.2); F 12.1 (12.0).
cz-TD1063의 합성: TD1113의 합성 중에 부산물로서 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 1.7 ㎎. NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.57-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.70 (CH 2-arom., s, 2H); 4.99 (CH 2-arom., bs, 2H); 6.03 (CH 2-N3, bs, 2H); 7.65 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.86 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 8.05 (arom., s, 1H); 8.12-8.18 (arom., CH-N3, m, 1+1H); 8.19 (arom ., s, 1H). 19F δF -65.82 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM cz-TD1063, 10% H2O에서, pH 7.0): 19F δF -65.66 (s; δH½ = 4.6 Hz). ESI-HRMS: 618.2754 [M+H]+ (theor. [C29H35N9O4F3]+ = 618.2759).
TD1188의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD711 (70.0 ㎎; 128 μmol; 1.0 당량)을 MeCN (1.5 ㎖)에 용해한 다음 건조한 K2CO3 (71 ㎎; 514 μmol; 4.0 당량)를 첨가하였다. MeCN (1.5 ㎖) 중의 TD1178 (31 ㎎; 141 μmol; 1.1 당량) 용액을 첨가하고, 수득한 현탁물을 7일간 RT에서 교반하였다. 고형물을 시린지 미세필터 (PTFE)를 사용해 여과 추출하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). tert-부틸 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 MeCN 대부분을 제거하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켜 TFA 대부분을 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 양쪽성 형태의 백색 솜털같은 고형물로 수득하였다. 수율: 9.5 ㎎ (10%; 2 단계; 기준 TD711). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.11-4.00 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.52 (CH 2-arom., bs, 2H); 4.88-6.58 (CH 2-arom., CH 2-N3, bm, 4H); 7.66 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 7.68 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.75 (arom., bd, 1H, 3 J HH = 8); 7.85 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 8.08 (arom., bt, 1H, 3 J HH = 8); 8.16 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). 19F δF -59.35 (s). ESI-HRMS: 618.2756 [M+H]+ (theor. [C28H35N9O4F3]+ = 618.2759). EA (C28H34N9O4F3·0.2TFA·0.4FA·4.3H2O, M R = 736.3): C 47.0 (46.6); H 6.0 (5.6); N 17.1 (16.8); F 9.3 (10.1).
TD650의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (130 ㎎; 200 μmol; 1.0 당량)을 H2O (20 ㎖)에 용해한 다음 aq. 구연산 (100 mM; 20 ㎖; 2.0 mmol; 10 당량)를 pH 2.4가 되도록 첨가하였다. 이후 수득한 혼합물을 2일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 109 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). NMR (D2O, pD ~5, 95℃): 1H δH 2.69-3.63 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.22 (CH 2-arom., s, 2H); 4.58 (CH 2-arom., s, 2H); 6.22 (CH 2-N3, s, 2H); 7.61 (arom ., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.60-7.67 (Ph, m, 3H); 7.83 (arom., s, 1H); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86-7.92 (Ph, m, 2H); 8.00 (arom., s, 1H); 8.11 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.21 (CH-N3, s, 1H). 13C{1H} δC 48.5 (mc, s); 49.9 (mc, s); 50.2 (mc, s); 50.4 (mc, s); 53.4 (CH2-N3, s); 55.6 (CH2-CO, s); 57.8 (CH2-arom., s); 59.2 (CH2-arom., s); 122.6 (arom., s); 124.2 (arom., s); 125.4 (arom., s); 125.9 (arom., s); 127.8 (Ph, s); 129.9 (Ph, s); 130.7 (Ph, s); 134.5 (CH-N3, s); 137.0 (Ph, s); 138.0 (arom ., s); 139.9 (arom ., s); 147.1 (arom., s); 152.3 (arom ., bs); 153.6 (arom ., bs); 153.8 (arom ., bs); 156.8 (arom., s); 172.6 (CO, s). ESI-HRMS: 626.3200 [M+H]+ (theor. [C33H40N9O4]+ = 626.3198). EA (C33H39N9O4·0.9FA·2.0H2O, M R = 703.2): C 57.9 (58.3); H 6.4 (5.9); N 17.9 (17.5).
TD871의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (78.0 ㎎; 103 μmol; 1.0 당량)를 H2O (34 ㎖)에 용해한 다음 aq. 보레이트/CsOH 완충제 (200 mM; pH 9.0; 6.0 ㎖; 1.2 mmol; ~12 당량)를 첨가하였다. 이후 수득한 혼합물을 6일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 49.3 ㎎ (70%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). NMR (D2O, pD ~5, 95 ℃): 1H δH 2.93-3.56 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.41 (CH 2-arom., s, 2H); 4.49 (CH 2-arom., s, 2H); 6.00 (CH 2-N3, s, 2H); 7.54 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 7, 4 J HH = 2); 7.56-7.66 (Ph, m, 3H); 7.77 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.79-7.87 (Ph, m, 2H); 7.94 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.05 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 2); 8.07 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 3 J HH = 7); 8.93 (CH-N3, s, 1H). 13C{1H} δC 50.0 (mc, s); 50.7 (mc, bs); 52.0 (mc, s); 52.3 (mc, s); 54.8 (CH2-N3, s); 56.6 (CH2-CO, s); 59.9 (CH2-arom., s); 60.2 (CH2-arom., bs); 121.2 (arom., s); 121.7 (arom., s); 123.3 (arom., s); 124.5 (arom., s); 127.0 (CH-N3, s); 127.7 (Ph, s); 129.9 (Ph, s); 130.5 (Ph, s); 137.1 (Ph, s); 140.2 (arom., s); 148.0 (arom., s); 150.3 (arom., s); 151.7 (arom., s); 152.5 (arom., bs); 154.9 (arom., s); 155.0 (arom., s); 174.4 (CO, s). ESI-HRMS: 626.3199 [M+H]+ (theor. [C33H40N9O4]+ = 626.3198). EA (C33H39N9O4·0.6FA·2.3H2O, M R = 696.8): C 58.1 (57.9); H 6.5 (6.2); N 18.1 (18.2).
실시예 6: 배위 화합물의 합성
TD734의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD714·0.1FA·xH2O (6 ㎎; ~10 μmol; 1.0 당량)를 H2O (4 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.00 ㎖; 500 μmol; ~50 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 110 ㎕; 11 μmol; ~1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 산물을 부분입체이성질체 2종의 혼합물 (~11:1)로서 포르메이트 염 형태의 백색 솜털같은 고형물로 수득하였다. 수율: 5 ㎎ (≤61% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 803.6; 1 단계; 기준 TD714·0.1FA·xH2O). NMR (D2O, pD ~4, 주 이성질체 신호): 1H δH 2.50-3.82 (mc, CH 2-CO, CH 2-P, m, 16+2+1H); 3.85-4.00 (CH 2-arom., CH 2-P, m, 1+1H); 4.10 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.23 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.99 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.53 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.56 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.67 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 2); 7.83 (CH-N3, s, 1H); 7.98 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 2); 7.18 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.20 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.35 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 48.9 (mc, s); 51.3 (mc, s); 51.6 (CH2-P, d, 1 J CP = 73); 52.0 (mc, s); 52.3 (mc, s); 53.4 (mc, s); 53.5 (CH2-N3, s); 53.6 (mc, s); 55.0 (mc, s); 56.3 (mc, s); 59.7 (CH2-arom., s); 60.0 (CH2-arom., s); 61.0 (CH2-CO, s); 125.9 (arom., s); 127.6 (arom., s); 128.9 (arom., s); 130.4 (arom., s); 136.4 (CH-N3, s); 138.7 (arom., s); 142.0 (arom., s); 142.9 (arom., s); 146.2 (arom., s); 156.8 (arom., s); 157.6 (arom., s); 158.6 (arom., s); 169.5 (FA, s); 178.2 (CO, s). 31P{1H} δP 17.8 (s). ESI-HRMS: 758.1822 [M]+ (theor. [C26H34N9O5P1Lu1]+ = 758.1823).
TD925의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD921·4.6H2O (6.1 ㎎; 7.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖) 및 i-PrOH (1 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 400 ㎕; 200 μmol; 27 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 95 ㎕; 9.5 μmol; 1.3 당량)를 첨가하여, 혼합물을 7일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.5 ㎎ (≤33% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1010.0; 1 단계; 기준 TD921·4.6H2O). ESI-HRMS: 897.2158 [M]+ (theor. [C37H43N9O4P2Gd1]+ = 897.2149).
TD560의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD556·0.1FA·1.6H2O (39 ㎎; 69 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.40 ㎖; 1.70 mmol; 25 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 745 ㎕; 75 μmol; 1.1 당량)을 첨가하여, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24 ㎎ (43%; 1 단계; 기준 TD556·0.1FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 700.1867 [M]+ (theor. [C27H33N9O4Eu1]+ = 700.1862). EA ([C27H33N9O4Eu1]+[FA]-·4.5H2O, M R = 825.7): C 40.7 (40.7); H 5.2 (4.8); N 15.3 (15.0); Eu 18.4 (17.7).
TD561의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD556·0.1FA·1.6H2O (40 ㎎; 69 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.40 ㎖; 1.70 mmol; 25 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 745 ㎕; 75 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24 ㎎ (42%; 1 단계; 기준 TD556·0.1FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 705.1893 [M]+ (theor. [C27H33N9O4Gd1]+ = 705.1891). EA ([C27H33N9O4Gd1]+[FA]-·4.6H2O, M R = 832.8): C 40.4 (40.8); H 5.2 (4.9); N 15.1 (15.5); Gd 18.9 (18.1).
TD562의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD556·0.1FA·1.6H2O (40 ㎎; 69 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.40 ㎖; 1.70 mmol; 25 당량) 및 aq. TbCl3 (100 mM; 745 ㎕; 75 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 27 ㎎ (47%; 1 단계; 기준 TD556·0.1FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 706.1906 [M]+ (theor. [C27H33N9O4Tb1]+ = 706.1903). EA ([C27H33N9O4Tb1]+[FA]-·4.7H2O, M R = 836.2): C 40.2 (40.5); H 5.2 (4.9); N 15.1 (14.7); Tb 19.0 (18.7).
TD1069의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD556·0.1FA·1.6H2O (20.8 ㎎; 35.7 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.80 ㎖; 900 μmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 400 ㎕; 40.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 26.6 ㎎ (82%; 1 단계; 기준 TD556·0.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.64-3.82 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.95 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.29 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.85 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.60 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.10 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.02 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.25 (arom., t, 1+1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 722.2060 [M]+ (theor. [C27H33N9O4Lu1]+ = 722.2058). EA ([C27H33N9O4Lu1]+[TFA]-·0.3TFA·2.4H2O, M R = 913.0): C 38.9 (38.7); H 4.2 (3.8); N 13.8 (13.7); Lu 19.2 (16.5).
TD751의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD718·2.6H2O (14 ㎎; 21 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MES/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.2; 1.30 ㎖; 650 μmol; 31 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 236 ㎕; 24 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 13 ㎎ (65%; 1 단계; 기준 TD718·2.6H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 0.10 (CH 3, s, 9H); 2.61-3.83 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.94 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.24 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.24 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.54 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.92 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.75 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.98 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC -1.85 (CH3, s); 48.4 (mc, s); 48.7 (mc, s); 50.7 (mc, s); 51.9 (mc, s); 52.0 (CH2-N3, s); 53.2 (mc, s); 53.8 (mc, s); 54.4 (mc, s); 55.5 (mc, s); 58.4 (CH2-CO, s); 59.0 (CH2-arom., s); 59.1 (CH2-arom., s); 60.9 (CH2-CO, s); 125.9 (arom., s); 126.7 (arom., s); 128.3 (arom., s); 130.4 (arom., s); 141.4 (arom., s); 142.3 (arom., s); 142.6 (arom., s); 146.3 (arom., s); 147.5 (arom., s); 155.1 (arom., s); 157.7 (arom., s); 158.7 (arom., s); 171.0 (FA, s); 176.8 (CO, s); 178.6 (CO, s). ESI-HRMS: 794.2445 [M]+ (theor. [C30H41N9O4Si1Lu1]+ = 794.2453). EA ([C30H41N9O4Si1Lu1]+[FA]-·6.6H2O, M R = 958.7): C 38.8 (39.0); H 5.8 (5.3); N 13.1 (13.0); Si 2.9 (3.0); Lu 18.2 (17.4).
TD737의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD728·2.6H2O (15 ㎎; 20 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.00 ㎖; 1.00 mmol; 50 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 220 ㎕; 22 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 5일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 12 ㎎ (58%; 1 단계; 기준 TD728·2.6H2O). NMR (D2O, pD ~5): δH 0.96 (i-Pr, d, 9H, 3 J HH = 8); 0.99 (i-Pr, d, 9H, 3 J HH = 8); 1.26 (i-Pr, hept, 3H, 3 J HH = 8); 2.62-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.05 (CH 2-arom., s, 2H); 4.29 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.88 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.43 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.74 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.67 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.94 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.20 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.43 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 12.1 (i-Pr, s); 18.8 (i-Pr, 2 x s); 47.9 (mc, bs); 50.0 (mc, bs); 50.4 (mc, bs); 52.2 (mc, bs); 53.0 (CH2-N3, s); 54.0 (mc, s); 55.2 (mc, s); 57.2 (mc, s); 57.6 (mc, s); 59.3 (CH2-CO, s); 60.0 (CH2-arom., s); 62.3 (CH2-arom., bs); 64.0 (CH2-CO, s); 126.1 (arom., s); 127.4 (arom., s); 128.9 (arom., s); 130.8 (arom., s); 141.6 (arom., s); 143.3 (arom., s); 143.8 (arom., s); 144.6 (arom., s); 147.1 (arom., s); 156.1 (arom., s); 158.4 (arom., s); 159.6 (arom., s); 171.5 (FA, s); 178.0 (CO, s); 179.1 (CO, s). ESI-HRMS: 878.3396 [M]+ (theor. [C36H53N9O4Si1Lu1]+ = 878.3392). EA ([C36H53N9O4Si1Lu1]+[FA]-·5.9H2O, M R = 1030.2): C 43.1 (43.4); H 12.2 (11.8); N 12.2 (11.8); Si 2.7 (2.9); Lu 17.0 (16.9).
TD946의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD943·1.5H2O (28.1 ㎎; 45.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.00 ㎖; 1.50 mmol; 33 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 540 ㎕; 54 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 32.6 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD943·1.5H2O). NMR (D2O, pD ~5): δH 0.69-0.94 (CH 2-CH, m, 2H); 0.94-1.07 (CH 2-CH, m, 2H); 1.65 (CH2-CH, tt, 1H, 3 J HH = 8, 3 J HH = 5); 2.58-3.86 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.97 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.19 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.29 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.53 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.99 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.93 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.99 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.29 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 762.2375 [M]+ (theor. [C30H37N9O4Lu1]+ = 762.2371). EA ([C30H37N9O4Lu1]+[TFA]-·0.2TFA·1.8H2O, M R = 930.8): C 41.8 (42.2); H 4.4 (4.2); N 13.5 (13.1); F 7.3 (7.0).
TD961의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD959·1.5H2O (14.7 ㎎; 23.0 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.50 ㎖; 0.75 mmol; 33 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 280 ㎕; 28 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 20.1 ㎎ (90%; 1 단계; 기준 TD959·1.8H2O). NMR (D2O, pD ~4): δH 1.18 (CH 3, s, 9H); 2.64-3.86 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.01 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.48 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.66 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.93 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 778.2685 [M]+ (theor. [C31H41N9O4Lu1]+ = 778.2684). EA ([C31H41N9O4Lu1]+[TFA]-·0.2TFA·3.0H2O, M R = 968.5): C 41.4 (41.5); H 4.9 (4.6); N 13.0 (12.7); F 7.1 (7.4).
TD951의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD944·1.5H2O (14.4 ㎎; 22.1 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.20 ㎖; 600 μmol; 27 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 265 ㎕; 26.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 17.4 ㎎ (80%; 1 단계; 기준 TD944·1.5H2O). NMR (D2O, pD ~2): δH 2.69-3.88 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.97 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 -4.36 (CH 2-arom., m, 2H); 4.88 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.51 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.97 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.16-7.25 (Ph, m, 2H); 7.28-7.41 (Ph, m, 3H); 7.49 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.03 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.06 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 798.2379 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Lu1]+ = 798.2371). EA ([C33H37N9O4Lu1]+[TFA]-·0.2TFA·3.0H2O, M R = 988.5): C 43.0 (43.0); H 4.4 (4.3); N 12.8 (12.6); F 6.9 (6.9).
TD994의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD992·0.3FA·1.9H2O (41.6 ㎎; 56.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.85 ㎖; 1.43 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 625 ㎕; 62.5 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 8일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 52.3 ㎎ (86%; 1 단계; 기준 TD992·0.3FA·1.9H2O). NMR (D2O, pD ~4): δH 1.52-1.78 (Adm., m, 9H); 1.80-1.95 (Adm., m, 6H); 2.60-3.83 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.99 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.11 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.33 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.43 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.58 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.66 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.80 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.88-7.92 (arom., m, 2H); 8.18 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 856.3154 [M]+ (theor. [C37H47N9O4Lu1]+ = 856.3153). EA ([C37H47N9O4Lu1]+[TFA]-·0.4TFA·3.0H2O, M R = 1069.4): C 44.7 (44.3); H 5.0 (4.6); N 11.8 (11.5); F 7.5 (7.4); Lu 16.4 (14.0).
TD1221의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1204·0.3FA·2.7H2O (22.5 ㎎; 30.5 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.57 ㎖; 785 μmol; 26 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 375 ㎕; 37.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24.5 ㎎ (74%; 1 단계; 기준 TD1204·0.3FA·2.7H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.59-3.83 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.95 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.23 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.27 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.85 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.62 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.01 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.72 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.90 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.97 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.23 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.29 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 848.1020 [M]+ (theor. [C27H32N9O4I1Lu1]+ = 848.1024). EA ([C27H32N9O4I1Lu1]+[TFA]-·0.5TFA·4.1H2O, M R = 1092.3): C 33.0 (33.8); H 3.8 (3.6); N 11.5 (11.8); I 11.6 (10.9); F 7.8 (7.0).
TD782의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, TD764·0.7TFA·1.7H2O (190 ㎎; 274 μmol; 1.0 당량)를 H2O (21 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 15.4 ㎖; 7.70 mmol; 28 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 3.30 ㎖; 330 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 224 ㎎ (85%; 1 단계; 기준 TD764·0.7TFA·1.7H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.61-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.94 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.29 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.58 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.10 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.13 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 756.1664 [M]+ (theor. [C27H32N9O4Cl1Lu1]+ = 756.1668). EA ([C27H32N9O4Cl1Lu1]+[TFA]-·5.1H2O, M R = 961.9): C 36.2 (36.4); H 4.4 (4.0); N 13.1 (12.9); Cl 3.7 (3.7); F 5.9 (6.4); Lu 18.2 (16.8).
TD819의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (10.0 ㎎; 10.4 μmol; 1.0 당량), 3-보로노-5-니트로벤조산 (4.4 ㎎; 21 μmol; 2.0 당량) 및 XPhos Pd G2 (0.5 ㎎; ~0.6 μmol; 6 mol%)를 투입한 후 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DMF (420 ㎕)를 격막을 통해 첨가한 다음 신선하게 준비한 (그리고, 간단히 첨가하기 전 아르곤으로 세척) K3PO4·H2O 수용액 (326 mM; 160 ㎕; 52 μmol; 5.0 당량)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 16시간 동안 격막 하에 (외부 아르곤 투입 없이) 80℃에서 교반하였다. 형성된 비균질 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하고, 수득한 약간 유백광의 옅은 노란색 용액을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 그 후, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 10 ㎎ (≤96% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1000.7; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.66-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.07 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.17 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.39 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.72 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.19 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.14 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.82 (arom., dm, 1H, 4 J HH = 2); 8.92 (arom., dd, 1H, 4 J HH = 2, 4 J HH = 1); 8.97 (arom., dm, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 887.2121 [M]+ (theor. [C34H36N10O8Lu1]+ = 887.2120).
TD891의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (15.0 ㎎; 15.6 μmol; 1.0 당량), 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)페닐)아세트산 (8.0 ㎎; 30.5 μmol; 2.0 당량) 및 XPhos Pd G2 (0.7 ㎎; ~0.9 μmol; 6 mol%)를 투입한 다음 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 DMF (600 ㎕)를 격막을 통해 첨가한 다음 신선하게 준비한 (그리고, 간단하게는 첨가하기 전 아르곤으로 세척한)) aq. K3PO4·H2O (391 mM; 200 ㎕; 78 μmol; 5.0 당량) 용액을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 16시간 동안 격막 하에 (외부 아르곤 투입 없이) 80℃에서 교반하였다. 수득한 비균질 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하고, 수득한 약간 유백광의 옅은 노란색 용액을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 그 후, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7.2 ㎎ (41%; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.60-3.82 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.86 (OC-CH 2-arom., s, 2H); 3.99 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.32 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.65 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.13 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.54 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 7.92 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 7.99 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.30 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1). ESI-HRMS: 856.2418 [M]+ (theor. [C35H39N9O6Lu1]+ = 856.2426). EA ([C35H39N9O6Cl1Lu1]+[TFA]-·0.7TFA·4.6H2O, M R = 1132.4): C 40.7 (40.6); H 4.4 (4.3); N 11.1 (11.3).
TD891-OH의 합성: TD891-OH를 TD891 합성 중에 부산물로서 수득하였다 (트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물). 수율: 5.7 ㎎. NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.60-3.83 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+4+1H); 4.13 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.20 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.82 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.43 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.97 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.09 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.40 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.79 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 8.23 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 738.2003 [M]+ (theor. [C27H33N9O5Lu1]+ = 738.2007).
TD786의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (37 ㎎; 38 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (3 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaN3 (54 ㎎; 831 μmol; 20 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 농축해 DMSO 대부분을 제거하였다. 잔사를 H2O에 용해해 동결건조하였다. 조산물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 21 ㎎ (55%; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.62-3.81 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.14 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.83 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.52 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.05 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.38 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.71 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 763.2075 [M]+ (theor. [C27H32N12O4Lu1]+ = 763.2072). EA ([C27H32N12O4Lu1]+[TFA]-·0.2TFA·5.2H2O, M R = 993.0): C 35.6 (35.6); H 4.3 (4.0); N 16.9 (16.6); F 6.9 (6.8).
TD787의 합성: TD786의 합성 중에 부산물로서 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 5 ㎎ (~10%; 1 단계; 기준 TD782·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.59-3.79 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+4+1H); 4.02-4.19 (CH 2-arom., m, 2H); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.79 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.27 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.74 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 6.83 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.03 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.78 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 737.2165 [M]+ (theor. [C27H34N10O4Lu1]+ = 737.2167).
TD830의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD764·0.7TFA·1.7H2O (60 ㎎; 86 μmol; 1.0 당량)를 H2O (5 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 5.0 ㎖; 2.50 mmol; 29 당량) 및 신선하게 준비한 aq. 176YbCl3 (~90 μmol; ~1.0 eq.; 176Yb2O 18.1 ㎎을 6 M HCl 0.5 ㎖에 수시간 동안 용해한 다음 산을 증발시키고 잔사에 H2O 10 ㎖을 첨가하여 수득)를 첨가하였다. 이후 혼합물을 6시간 동안 80℃에서 교반한 다음 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 71 ㎎ (≤94% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 871.0; 1 단계; 기준 TD764·0.7TFA·1.7H2O). ESI-HRMS: 757.1680 [M]+ (theor. [C27H32N9O4Cl1 176Yb1]+ = 757.1686).
TD836의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD830]+[TFA]-·xH2O (12.1 ㎎; ~14 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (500 ㎕)에 용해한 다음 고체 NaN3 (9.0 ㎎; 138 μmol; ~10 당량)를 첨가하여, 혼합물을 30분간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (3 ㎖)로 희석해, 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9.9 ㎎ (≤81% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 877.6; 1 단계; 기준 [TD830]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 764.2085 [M]+ (theor. [C27H32N12O4 176Yb1]+ = 764.2090).
TD888의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD764·0.6TFA·1.0H2O (56.5 ㎎; 84.3 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 4.0 ㎖; 2.00 mmol; 24 당량) 및 aq. TmCl3 (100 mM; 1.00 ㎖; 100 μmol; 1.2 당량)를 첨가하여, 혼합물을 6시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 68.0 ㎎ (86%, 1 단계; 기준 TD764·0.6TFA·1.0H2O). ESI-HRMS: 750.1608 [M]+ (theor. [C27H32N9O4Cl1Tm1]+ = 750.1602). EA ([C27H32N9O4Cl1Tm1]+[TFA]-·0.2TFA·2.6H2O, M R = 933.6): C 37.8 (37.7); H 4.0 (3.8); N 13.5 (13.4); Cl 3.8 (3.9); F 7.3 (7.3); Tm 18.1 (17.8).
TD899의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에 [TD888]+[TFA]-·0.2TFA·2.6H2O (15.0 ㎎; 16.1 μmol; 1.0 당량), 2-(4-보로노페닐)아세트산 (4.2 ㎎; 23.3 μmol; 1.5 당량) 및 XPhos Pd G2 (0.7 ㎎; ~0.9 μmol; 6 mol%)를 투입한 다음 아르곤으로 3회 보호 처리하였다. 일정한 아르곤 흐름 하에 드라이 1,4-다이옥산 (600 ㎕)를 격막을 통해 첨가한 다음 신선하게 준비한 (그리고, 간략하게는 첨가하기 전 아르곤으로 세척한)) K3PO4·H2O 수용액 (391 mM; 200 ㎕; 78 μmol; 4.9 당량)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 16시간 동안 격막 하에 (외부 아르곤 투입 없이) 80℃에서 교반하였다. 수득한 비균질 혼합물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 H2O (3 ㎖)에 다시 용해하여 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과한 후 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 10.1 ㎎ (57%; 1 단계; 기준 [TD888]+[TFA]- ·0.2TFA·2.6H2O). ESI-HRMS: 850.2362 [M]+ (theor. [C35H39N9O6Tm1]+ = 850.2360). EA ([C35H39N9O6Tm1]+[TFA]-·0.2TFA·7.0H2O, M R = 1112.6): C 40.4 (40.6); H 4.8 (4.7); N 11.3 (11.1); F 6.1 (6.4).
TD822의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD810·0.5TFA·0.1FA·2.1H2O (26 ㎎; 39 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. AcOH/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.8; 2.1 ㎖; 1.05 mmol; 27 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 510 ㎕; 51 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 19 ㎎ (≤59% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 836.6; 1 단계; 기준 TD810·0.5TFA·0.1FA·2.1H2O). ESI-HRMS: 724.1861 [M]+ (theor. [C29H33N9O4Eu1]+ = 724.1862).
TD823의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD810·0.5TFA·0.1FA·2.1H2O (28 ㎎; 42 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. AcOH/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.8; 2.3 ㎖; 1.15 mmol; 28 당량) 및 aq. TbCl3 (100 mM; 530 ㎕; 53 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22 ㎎ (≤63% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 843.6; 1 단계; 기준 TD810·0.5TFA·0.1FA·2.1H2O). ESI-HRMS: 730.1899 [M]+ (theor. [C29H33N9O4Tb1]+ = 730.1903).
TD831의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD827·0.8FA·1.6H2O (50 ㎎; 63 μmol; 1.0 당량)를 abs. EtOH (8 ㎖) 및 H2O (7.5 ㎖)의 혼합물에 용해한 다음 aq. AcOH/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.8; 3.3 ㎖; 1.65 mmol; 26 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 740 ㎕; 74 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 EtOH (100 ㎖)로 희석해 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전 증발기에서 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 36 ㎎ (≤58% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 993.0; 1 단계; 기준 TD827·0.8FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 880.3189 [M]+ (theor. [C38H53N9O4Si1Eu1]+ = 880.3197).
TD885의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD831]+[TFA]-·xH2O (30.5 ㎎; 30.7 μmol; 1.0 당량)를 H2O (3.4 ㎖)에 용해한 다음 aq. K2CO3 (1.0 m; 155 ㎕; 155 μmol; ~5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 40분간 80℃에서 교반하였다. 형성된 오렌지색-갈색 (완전히 균질하진 않은) 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 15.4 ㎎ (≤60% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 836.6; 1 단계; 기준 [TD831]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 724.1858 [M]+ (theor. [C29H33N9O4Eu1]+ = 724.1862).
TD832의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD827·0.8FA·1.6H2O (47 ㎎; 59 μmol; 1.0 당량)를 abs. EtOH (8 ㎖) 및 H2O (8 ㎖)의 혼합물에 용해한 다음 aq. AcOH/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.8; 3.1 ㎖; 1.55 mmol; 26 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 720 ㎕; 72 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 EtOH (100 ㎖)로 희석해 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전 증발기에서 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 46 ㎎ (≤78% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 999.9; 1 단계; 기준 TD827·0.8FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 886.3229 [M]+ (theor. [C38H53N9O4Si1Tb1]+ = 886.3238).
TD886의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD832]+[TFA]-·xH2O (46.2 ㎎; 46.2 μmol; 1.0 당량)를 a H2O (3.3 ㎖)에 용해한 다음 aq. K2CO3 (1.0 m; 230 ㎕; 230 μmol; ~5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 40분간 80℃에서 교반하였다. 수득한 오렌지색-갈색 (완전히 균질하진 않은) 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 29.3 ㎎ (≤75% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 843.6; 1 단계; 기준 [TD832]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 730.7901 [M]+ (theor. [C29H33N9O4Tb1]+ = 730.1903).
TD829의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD827·0.8FA·1.6H2O (31 ㎎; 39 μmol; 1.0 당량)를 abs. EtOH (11 ㎖) 및 H2O (6 ㎖)의 혼합물에 용해한 다음 aq. AcOH/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.8; 2.0 ㎖; 1.00 mmol; 26 당량) 및 aq. YbCl3 (100 mM; 400 ㎕; 40 μmol; 1.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 8시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 MeOH (20 ㎖)로 희석하여 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전 증발기에서 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 38 ㎎ (≤96% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1014.0; 1 단계; 기준 TD827·0.8FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 901.3372 [M]+ (theor. [C38H53N9O4Si1Yb1]+ = 901.3373).
TD834의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD829]+[TFA]-·xH2O (37.9 ㎎; 37.4 μmol; 1.0 당량)를 50% aq. MeOH (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. K2CO3 (100 mM; 2.0 ㎖ ㎕; 200 μmol; ~5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 형성된 혼합물을 ~3 ㎖로 농축하여, 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22.5 ㎎ (≤65% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 921.8; 1 단계; 기준 [TD829]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 809.2570 [M]+ (theor. [C31H41N9O6Yb1]+ = 809.2563).
TD833의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD827·0.8FA·1.6H2O (64.8 ㎎; 81 μmol; 1.0 당량)를 i-PrOH (10 ㎖) 및 H2O (5 ㎖)의 혼합물에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 4.1 ㎖; 2.05 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 900 ㎕; 90 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전 증발기에서 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 76.3 ㎎ (78%; 1 단계; 기준 TD827·0.8FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.06-1.32 (i-Pr, m, 21H); 2.63-3.81 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.90 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.28 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.55 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.09 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.76 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.06 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 902.3386 [M]+ (theor. [C38H53N9O4Si1Lu1]+ = 902.3392). EA ([C38H53N9O4Si1Lu1]+[TFA]-·1.0TFA·4.0H2O, M R = 1202.0): C 42.0 (41.7); H 5.2 (5.0); N 10.5 (10.4); Si 2.3 (1.9); F 9.5 (9.4).
MIS007의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, [TD833]+[TFA]-·1.0TFA·4.0H2O (19 ㎎; 16 μmol; 1.0 당량)를 50% aq. MeCN (20 ㎖)에 용해한 다음 aq. K2CO3 (100 mM; 2.0 ㎖; 200 μmol; ~10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 ~3 ㎖로 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 13 ㎎ (≤81% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1016.0; 1 단계; 기준 [TD833]+[TFA]-·1.0TFA·4.0H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.68-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.96 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.17 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.18 (C≡CH, s, 1H); 4.30 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.61 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.11 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.82 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.11 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 746.2059 [M]+ (theor. [C29H33N9O4Lu1]+ = 746.2058).
TD1113의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (4.0 ㎎; 6.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 310 ㎕; 155 μmol; 25 당량) 및 aq. PrCl3 (100 mM; 67 ㎕; 6.7 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.6 ㎎ (≤10% 추정 [M]+[TFA]-·1.0TFA·xH2O; M R = 985.9; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~3): 19F δF -66.45 (bs). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1113, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.49 (bs; δH½ = 135.2 Hz). ESI-HRMS: 756.1593 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Pr1]+ = 756.1600).
TD1114의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (4.0 ㎎; 6.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 310 ㎕; 155 μmol; 25 당량) 및 aq. NdCl3 (100 mM; 67 ㎕; 6.7 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.0 ㎎ (≤33% 추정 [M]+[TFA]-·0.9TFA·xH2O; M R = 975.5; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~3): 19F δF -66.75 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1114, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.76 (s; δH½ = 47.4 Hz). ESI-HRMS: 757.1595 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Nd1]+ = 757.1601).
TD1115의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (4.0 ㎎; 6.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 310 ㎕; 155 μmol; 25 당량) 및 aq. SmCl3 (100 mM; 67 ㎕; 6.7 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3.6 ㎎ (≤63% 추정 [M]+[TFA]-·0.3TFA·xH2O; M R = 913.2; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -66.03 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1115, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.06 (s; δH½ = 1.9 Hz). ESI-HRMS: 767.1713 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Sm1]+ = 767.1721).
TD1072의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 8일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.7 ㎎ (≤66% 추정 [M]+[TFA]-·0.3TFA·xH2O; M R = 914.8; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -62.77 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1072, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -62.79 (s; δH½ = 3.3 Hz). ESI-HRMS: 768.1738 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Eu1]+ = 768.1736).
TD1179의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (4.0 ㎎; 6.5 μmol; 1.0 당량)를 H2O (13 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 326 ㎕; 163 μmol; 25 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 78 ㎕; 7.8 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.2 ㎎ (≤36% 추정 [M]+[TFA]-·0.9TFA·xH2O; M R = 988.5; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -62.98 (bs). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1179, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -62.97 (bs; δH½ = 342.9 Hz). ESI-HRMS: 773.1779 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Gd1]+ = 773.1765).
TD1073의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. TbCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 6일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.8 ㎎ (≤64% 추정 [M]+[TFA]-·0.7TFA·xH2O; M R = 967.3; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -107.22 (bs). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1073, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -107.50 (bs; δH½ = 708.6 Hz). ESI-HRMS: 774.1779 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Tb1]+ = 774.1777).
TD1074의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. DyCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 5일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3.3 ㎎ (≤75% 추정 [M]+[TFA]-·0.7TFA·xH2O; M R = 970.9; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -142.86 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1074, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -143.22 (s; δH½ = 47.2 Hz). ESI-HRMS: 779.1816 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Dy1]+ = 779.1816).
TD1075의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. HoCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 5일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.0 ㎎ (≤90% 추정 [M]+[TFA]-·0.8TFA·xH2O; M R = 984.7; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -85.69 (bs). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1075, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -85.79 (bs; δH½ = 185.8 Hz). ESI-HRMS: 780.1829 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Ho1]+ = 780.1827).
TD1076의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. ErCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.1 ㎎ (≤92% 추정 [M]+[TFA]-·1.0TFA·xH2O; M R = 987.1; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -47.48 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1076, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -47.42 (s; δH½ = 19.3 Hz). ESI-HRMS: 781.1824 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Er1]+ = 781.1827).
1077의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. TmCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.2 ㎎ (≤92% 추정 [M]+[TFA]-·1.0TFA·xH2O; M R = 1011.6; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -57.57 (bs). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1077, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -57.51 (bs; δH½ = 138.72 Hz). ESI-HRMS: 784.1863 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Tm1]+ = 784.1866).
1078의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. YbCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3.7 ㎎ (≤82% 추정 [M]+[TFA]-·0.9TFA·xH2O; M R = 1004.3; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 19F δF -59.01 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1078, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -59.00 (s; δH½ = 18.4 Hz). ESI-HRMS: 789.1913 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Yb1]+ = 789.1912).
TD1079의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (14.7 ㎎; 22.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1150 ㎕; 575 μmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 250 ㎕; 25.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 16.1 ㎎ (70%; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.69-3.85 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.12 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.19 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.38 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.88 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.75 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.23 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.12 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.28 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8), 8.43 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 19F δF -66.10 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1079, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.13 (s; δH½ = 2.4 Hz). ESI-HRMS: 790.1931 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Lu1]+ = 790.1932). EA ([C28H32N9O4Lu1F3]+[TFA]-·0.2TFA·4.1H2O, M R = 1000.2): C 36.5 (36.2); H 4.1 (3.6); N 12.6 (12.3); F 12.5 (12.0).
TD1080의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1063·0.1FA·1.2H2O (2.9 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (10 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 225 ㎕; 113 μmol; 25 당량) 및 aq. YCl3 (100 mM; 55 ㎕; 5.5 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3.6 ㎎ (≤94% 추정 [M]+[TFA]-·0.3TFA·xH2O; M R = 851.7; 1 단계; 기준 TD1063·0.1FA·1.2H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.66-3.87 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.11 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.18 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.42 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.89 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.80 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.16 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.13 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.28 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8), 8.43 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 19F δF -66.10 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1080, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.12 (s; δH½ = 2.1 Hz). ESI-HRMS: 704.1583 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Y1]+ = 704.1582).
TD651의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (30 ㎎; 46 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.30 ㎖; 1.15 mmol; 25 당량) 및 aq. LaCl3 (100 mM; 500 ㎕; 50 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 14일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 15 ㎎ (36%; 1 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.54-3.63 (mc, CH 2-CO, m, 16+3H); 3.96 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.00 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 4.09 (CH 2-CO, 1H, d, 2 J HH = 17); 4.23 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 5.72 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 6.62 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.58-7.66 (Ph, m, 3H); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83-7.95 (Ph, arom., m, 2+1H); 8.06 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.16 (CH-N3, s, 1H); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.42 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 53.5 (CH2-N3, s); 56.3 (mc, s); 58.7 (mc, s); 58.9 (mc, s); 59.2 (mc, s); 59.3 (mc, s); 60.0 (mc, s); 61.9 (mc, s); 62.5 (CH2-CO, s); 63.5 (mc, s); 65.1 (CH2-CO, s); 65.2 (CH2-arom., s); 66.6 (CH2-arom., s); 124.1 (arom., s); 124.6 (arom., s); 127.1 (arom., s); 127.9 (arom., s); 128.1 (Ph, s); 130.2 (Ph, s); 131.5 (Ph, s); 136.1 (arom, s); 136.2 (Ph., s); 136.8 (CH-N3, s); 142.0 (arom., s); 144.9 (arom., s); 153.6 (arom., s); 157.0 (arom., s); 157.5 (arom., s); 159.0 (arom., s); 171.0 (FA, s); 179.0 (CO, s); 180.4 (CO, s). ESI-HRMS: 762.2024 [M]+ (theor. [C33H37N9O4La1]+ = 762.2027). EA ([C33H37N9O4La1]+[FA]-·4.8H2O, M R = 894.1): C 45.7 (46.1); H 5.4 (4.7); N 14.1 (13.6); La 15.5 (15.0).
TD870의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (30.5 ㎎; 39.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.30 ㎖; 1.15 mmol; 29 당량) 및 aq. CeCl3 (100 mM; 545 ㎕; 54.5 μmol; 1.4 당량)를 첨가하고, 혼합물을 14일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 21.2 ㎎ (58%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 763.2012 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Ce1]+ = 763.2017). EA ([C33H37N9O4Ce1]+[FA]-·6.5H2O, M R = 925.9): C 44.1 (44.7); H 5.6 (5.1); N 13.6 (13.1); Ce 15.1 (14.5).
TD869의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (26.4 ㎎; 34.1 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.40 ㎖; 1.20 mmol; 35 당량) 및 aq. PrCl3 (100 mM; 500 ㎕; 50.0 μmol; 1.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 14일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 17.7 ㎎ (56%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 764.2035 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Pr1]+ = 764.2040). EA ([C33H37N9O4Pr1]+[FA]-·6.4H2O, M R = 924.9): C 44.2 (44.7); H 5.5 (5.0); N 13.6 (13.1); Pr 15.2 (14.8).
TD868의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (25.7 ㎎; 33.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.30 ㎖; 1.15 mmol; 35 당량) 및 aq. NdCl3 (100 mM; 460 ㎕; 46.0 μmol; 1.4 당량)를 첨가하고, 혼합물을 12일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 19.8 ㎎ (65%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 765.2039 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Nd1]+ = 765.2040). EA ([C33H37N9O4Nd1]+[FA]-·5.6H2O, M R = 913.9): C 44.7 (45.0); H 5.4 (4.6); N 13.8 (13.4); Nd 15.8 (15.2).
TD867의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (25.6 ㎎; 33.1 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.30 ㎖; 1.15 mmol; 35 당량) 및 aq. SmCl3 (100 mM; 460 ㎕; 46.0 μmol; 1.4 당량)를 첨가하고, 혼합물을 12일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22.3 ㎎ (73%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 775.2158 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Sm1]+ = 775.2160). EA ([C33H37N9O4Sm1]+[FA]-·5.8H2O, M R = 923.6): C 44.2 (44.7); H 5.4 (4.9); N 13.6 (13.3); Nd 16.3 (15.8).
TD599의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3H2O (50 ㎎; 77 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.75 ㎖; 1.88 mmol; 24 당량) 및 aq. EuCl3 (100 mM; 825 ㎕; 83 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 44 ㎎ (63%; 1 단계; 기준 TD647·1.3H2O). ESI-HRMS: 776.2171 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Eu1]+ = 776.2175). EA ([C33H37N9O4Eu1]+[FA]-·4.6H2O, M R = 903.6): C 45.2 (45.3); H 5.3 (5.1); N 14.0 (13.7); Eu 16.8 (16.5).
TD451의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, TD647·2.2H2O (2.0 ㎎; 3.1 μmol; 1.0 당량)를 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 155 ㎕; 77.5 μmol; 25 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 34 ㎕; 120 μmol; 1.1 당량)에 용해하고, 혼합물을 2일간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O로 희석해 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.3 ㎎.
TD527의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, TD647·2.2H2O (75 ㎎; 113 μmol; 1.0 당량)를 H2O (32 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 4.60 ㎖; 2.30 mmol; 20 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 1.20 ㎖; 120 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 58 ㎎ (56%; 1 단계; 기준 TD647·2.2H2O). ESI-HRMS: 781.2218 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Gd1]+ = 781.2204). EA ([C33H37N9O4Gd1]+[FA]-·5.3H2O, M R = 921.5): C 44.3 (44.7); H 5.3 (4.7); N 13.7 (13.4); Gd 17.1 (16.2).
TD600의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3H2O (50 ㎎; 77 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.75 ㎖; 1.88 mmol; 24 당량) 및 aq. TbCl3 (100 mM; 825 ㎕; 83 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 49 ㎎ (69%; 1 단계; 기준 TD647·1.3H2O). ESI-HRMS: 782.2211 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Tb1]+ = 781.2217). EA ([C33H37N9O4Tb1]+[FA]-·4.9H2O, M R = 915.9): C 44.6 (44.7); H 5.3 (5.1); N 13.8 (13.6); Tb 17.4 (17.1).
TD866의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (20.0 ㎎; 25.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.84 ㎖; 920 μmol; 36 당량) 및 aq. DyCl3 (100 mM; 370 ㎕; 37.0 μmol; 1.4 당량)를 첨가하고, 혼합물을 46시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22.2 ㎎ (89%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 787.2248 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Dy1]+ = 787.2255). EA ([C33H37N9O4Dy1]+[FA]-·7.7H2O, M R = 970.0): C 42.1 (42.5); H 5.5 (5.0); N 13.0 (12.6); Dy 16.8 (16.1).
TD648의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (22 ㎎; 34 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.72 ㎖; 860 μmol; 25 당량) 및 aq. HoCl3 (100 mM; 375 ㎕; 38 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24 ㎎ (76%; 1 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). ESI-HRMS: 788.2265 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Ho1]+ = 788.2266). EA ([C33H37N9O4Ho1]+[FA]-·5.0H2O, M R = 923.7): C 44.2 (44.2); H 5.2 (4.8); N 13.6 (13.3); Ho 17.9 (17.3).
TD865의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (20.5 ㎎; 26.5 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.84 ㎖; 920 μmol; 35 당량) 및 aq. ErCl3 (100 mM; 370 ㎕; 37.0 μmol; 1.4 당량)를 첨가하고, 혼합물을 22시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22.8 ㎎ (90%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). ESI-HRMS: 791.2280 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Er1]+ = 791.2302). EA ([C33H37N9O4Er1]+[FA]-·6.9H2O, M R = 960.3): C 42.5 (42.4); H 5.4 (4.9); N 13.1 (12.7); Er 17.4 (16.8).
TD601의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3H2O (49 ㎎; 75 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.75 ㎖; 1.88 mmol; 25 당량) 및 aq. TmCl3 (100 mM; 825 ㎕; 83 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 51 ㎎ (73%; 1 단계; 기준 TD647·1.3H2O). ESI-HRMS: 792.2299 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Tm1]+ = 792.2305). EA ([C33H37N9O4Tm1]+[FA]-·4.7H2O, M R = 922.3): C 44.3 (44.4); H 5.2 (5.1); N 13.7 (13.5); Tm 18.3 (18.3).
TD602의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3H2O (49 ㎎; 75 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.75 ㎖; 1.88 mmol; 25 당량) 및 aq. YbCl3 (100 mM; 825 ㎕; 83 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 53 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD647·1.3H2O). ESI-HRMS: 797.2347 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Yb1]+ = 797.2352). EA ([C33H37N9O4Yb1]+[FA]-·4.2H2O, M R = 917.4): C 44.5 (44.1); H 5.1 (5.1); N 13.7 (13.3); Yb 18.4 (18.7).
TD522의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·1.3TFA (30.0 ㎎; 38.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.30 ㎖; 1.15 mmol; 30 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 500 ㎕; 50.0 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 32.6 ㎎ (89%; 1 단계; 기준 TD647·1.3TFA). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.62-3.83 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.99 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.32 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.66 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.13 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.60-7.67 (Ph, m, 3H); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 7.91-7.97 (Ph, m, 2H); 7.99 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.31 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.38 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 48.9 (mc, bs); 49.1 (mc, bs); 51.8 (mc, bs); 51.9 (mc, bs); 52.9 (CH2-N3, s); 53.8 (mc, s); 53.9 (mc, bs); 54.9 (mc, s); 56.0 (mc, s); 59.2 (CH2-CO, s); 59.6 (CH2-arom., s); 59.7 (CH2-arom., s); 61.0 (CH2-CO, s); 123.7 (arom., s); 126.5 (arom., s); 127.7 (arom., s); 128.3 (Ph, s); 130.3 (Ph, s); 130.5 (arom., s); 131.8 (Ph, s); 136.0 (Ph, s); 136.4 (CH-N3, s); 138.4 (arom., s); 142.6 (arom., s); 146.4 (arom., s); 154.7 (arom., s); 156.0 (arom., s); 158.7 (arom., s); 158.8 (arom., s); 170.0 (FA, s); 177.9 (CO, s); 179.4 (CO, s). ESI-HRMS: 798.2377 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Lu1]+ = 798.2371). EA ([C33H37N9O4Lu1]+[FA]-·5.5H2O, M R = 942.8): C 43.3 (43.7); H 5.2 (4.6); N 13.4 (13.1); Lu 18.6 (18.0).
TD776의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD522]+[FA]-·5.5H2O (9.0 ㎎; 9.5 μmol; 1.0 당량)를 D2O (500 ㎕)에 용해하고, 증발시켜 건조하였다. 잔사를 D2O (500 ㎕)에 재용해한 다음 neat DBU (29 ㎕; 194 μmol; 20 당량)를 첨가하고, 형성된 용액을 2일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 D2O (500 ㎕)에 재용해한 다음 추가로 neat DBU (15 ㎕; 100 μmol; ~10 당량)를 첨가하고, 형성된 용액을 추가로 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물에 FA (75 ㎕; 2.92 mmol; ~300 당량)를 첨가해 퀀칭하고, 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 조산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다 (1H NMR 분석에서 달리 순수한 데카-중수소화된 킬레이트를 제외한 DBU ~1 당량 또는 이의 부산물이 발견됨). 따라서, 벌크 물질을 분취용 HPLC에 의해 다시 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7.6 ㎎ (≤87% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 921.7; 1 단계; 기준 [TD522]+[FA]-·5.5H2O). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.64-3.83 (mc, m, 16H); 7.59-7.67 (Ph, m, 3H); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 7.90-7.96 (Ph, m, 2H); 7.98 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.30 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.39 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 48.9 (mc, bs); 49.2 (mc, bs); 51.8 (mc, bs); 51.9 (mc, bs); 52.0-52.9 (CD2-N3, bm); 53.8 (mc, s); 53.9 (mc, bs); 54.8 (mc, s); 55.9 (mc, s); 58.2-59.7 (CD2-CO, 2 x CD2-arom., bm); 59.7-60.9 (CD2-CO, s); 123.8 (arom., s); 126.5 (arom., s); 127.8 (arom., s); 128.3 (Ph, s); 130.3 (Ph, s); 130.5 (arom., s); 131.8 (Ph, s); 136.1 (Ph, s); 136.4 (CH-N3, s); 138.5 (arom., s); 142.6 (arom., s); 146.4 (arom., s); 154.8 (arom., s); 156.0 (arom., s); 158.7 (arom., s); 158.8 (arom., s); 170.5 (FA, s); 178.0 (CO, s); 179.4 (CO, s). ESI-HRMS: 808.3004 [M]+ (theor. [C33H27D10N9O4Lu1]+ = 808.2998).
TD688의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD522]+[FA]-·5.5H2O (1 ㎎; ~1 μmol; 1.0 당량)를 MeOH (1 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaBH4 (4 ㎎; ~100 mmol; ~100 당량)를 첨가하였다. 수득한 바이얼을 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반한 다음 출발 물질이 모두 소모될 때까지 (LC-MS에 의해 분석) 추가로 NaBH4 를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하고, neat FA (200 ㎕)를 첨가해 중화한 다음 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: <1 ㎎. NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 1.42-2.23 (Pip., m, 6H); 2.52-3.70 (mc, CH 2-CO, CH 2-Pip., m, 16+3+2H); 3.76 (Pip., m, 1H); 4.16 (CH 2-CO, d, 2 J HH = 17); 4.22 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.32 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.78 (Pip., m, 1H); 5.66 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 6.88 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.68-7.74 (Ph, m, 3H); 7.91 (CH-N3, s, 1H); 7.98 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.98-8.02 (Ph, m, 2H); 8.25 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.52 (FA, s). 13C{1H} δC 22.8 (Pip., s); 27.0 (Pip., s); 29.5 (Pip., s); 50.1 (Pip., s); 51.4 (CH2-N3, s); 52.1 (mc, s); 53.4 (mc, s); 54.4 (mc, s); 54.5 (Pip., s); 55.4 (mc, s); 55.6 (mc, s); 56.0 (mc, s); 56.1 (mc, s); 56.8 (mc, s); 56.0 (CH2-Pip., s); 64.7 (CH2-CO, s); 64.8 (CH2-arom., s); 65.4 (CH2-Pip., s); 119.8 (arom., s); 123.7 (arom., s); 126.9 (Ph, s); 129.0 (Ph, s); 130.5 (Ph, s); 131.6 (CH-N3, s); 135.7 (Ph, s); 138.9 (arom., s); 153.1 (arom., s); 155.9 (arom., s); 159.0 (arom., s); 170.5 (FA, s); 178.8 (CO, s); 179.5 (CO, s). ESI-HRMS: 804.2841 [M]+ (theor. [C33H43N9O4Lu1]+ = 804.2840).
TD739의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD522]+[FA]-·5.5H2O (10 ㎎; 11 μmol; 1.0 당량)를 CD3OD (1 ㎖)에 용해한 다음 고체 NaBD4 (44 ㎎; 1.05 mmol; ~100 당량)을 첨가하였다. 수득한 바이얼을 열린 상태로 1시간 동안 RT에서 교반한 다음 추가로 NaBD4 (28 ㎎; 0.67 mmol; ~60 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 추가로 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하고, neat FA (160 ㎕; ~400 당량)를 첨가해 중화한 다음 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물 (주 부분입체이성질체)이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6 ㎎ (~60%; 1 단계; 기준 [TD522]+[FA]-·5.5H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1.33-1.77 (Pip., m, 1H); 1.93-2.09 (Pip., m, 2H); 2.42-3.62 (mc, CH 2-CO, CH2-Pip. m, 16+3H+1H); 4.07 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 17); 4.19 (CHD-arom., s, 1H); 5.56 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 6.78 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.59-7.65 (Ph, m, 3H); 7.82 (CH-N3, s, 1H); 7.87 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.88-7.93 (Ph, m, 2H); 8.14 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.43 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 23.4 (Pip., bs); 27.7 (Pip., bs); 30.3 (Pip., bs); 50.9 (Pip., bs); 52.7 (CH2-N3, s); 53.4 (mc, s); 54.7 (mc, s); 55.3 (Pip., bs); 55.7 (mc, s); 56.7 (mc, s); 56.8 (mc, s); 57.3 (mc, s); 57.4 (mc, s); 58.1 (mc, s); 61.2 (CH2-CO, s); 65.8 (CHD-arom., bs); 66.0 (CH2-Pip., s); 66.8 (CH2-CO, s); 121.1 (arom., s); 125.0 (arom., s); 128.2 (Ph, s); 130.3 (Ph, s); 131.8 (Ph, s); 132.9 (arom., s); 135.9 (Ph, s); 140.2 (arom., s); 154.3 (arom., s); 157.2 (arom., s); 160.3 (arom., s); 171.4 (FA, s); 180.1 (CO, s); 180.8 (CO, s). ESI-HRMS: 810.3215 [M]+ (theor. [C33H37D6N9O4Lu1]+ = 810.3217).
TD649의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD647·0.2FA·0.9H2O (38 ㎎; 59 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.96 ㎖; 1.48 mmol; 25 당량) 및 aq. YCl3 (100 mM; 650 ㎕; 65 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 32 ㎎ (65%; 1 단계; 기준 TD647·0.2FA·0.9H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.58-3.86 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.99 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.37 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.85 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.71 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.07 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.58-7.68 (Ph, m, 3H); 7.78-7.86 (arom., m, 2H); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 7.91-7.97 (Ph, m, 2H); 7.99 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.31 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.42 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 49.0 (mc, s); 49.2 (mc, s); 51.4 (mc, s); 51.7 (mc, s); 53.0 (CH2-N3, s); 53.9 (mc, s); 54.1 (mc, s); 54.7 (mc, s); 55.7 (mc, s); 59.5 (CH2-CO, s); 59.6 (CH2-arom., s); 59.8 (CH2-arom., s); 61.4 (CH2-CO, s); 123.9 (arom., s); 126.5 (arom., s); 127.6 (arom., s); 128.4 (Ph, s); 130.1 (arom., s); 130.3 (Ph, s); 131.8 (Ph, s); 136.2 (Ph, s); 136.8 (CH-N3, s); 138.2 (arom., s); 142.8 (arom., s); 146.0 (arom., s); 155.0 (arom., s); 155.6 (arom., s); 158.6 (arom., s); 158.7 (arom., s); 171.2 (FA, s); 177.7 (CO, s); 179.0 (CO, s). ESI-HRMS: 712.2017 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Y1]+ = 712.2022). EA ([C33H37N9O4Y1]+[FA]-·4.5H2O, M R = 838.7): C 48.7 (48.6); H 5.6 (5.2); N 15.0 (14.7); Y 10.6 (10.3).
TD890의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (15.2 ㎎; 21.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (2 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.10 ㎖; 550 μmol; 25 당량) 및 aq. Zn(NO3)2 (51.7 mM; 460 ㎕; 23.8 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, 첨가제 없음). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 15.5 ㎎ (91%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~8): 1H δH 2.43-3.38 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.14 (CH 2-arom., s, 2H); 4.25 (CH 2-arom., bs, 2H); 6.48 (CH 2-N3, bs, 2H); 7.60 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.62-7.68 (Ph, m, 3H); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.91-7.98 (Ph, m, 2H); 8.09 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.21 (CH-N3, s, 1H); 8.31 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 688.2339 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Zn1]+ = 688.2333). EA ([C33H37N9O4Zn1]·5.5H2O, M R = 788.2): C 50.3 (50.2); H 6.1 (5.8); N 16.0 (15.7); Zn 8.3 (8.5).
TD1195의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (9.0 ㎎; 12.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (780 ㎕)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 650 ㎕; 325 μmol; 25 당량) 및 aq. MnCl2 (25.0 mM; 570 ㎕; 14.3 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7.5 ㎎ (74%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). ESI-HRMS: 679.2423 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Mn1]+ = 679.2422). EA ([C33H37N9O4Mn1]·6.4H2O, M R = 794.0): C 49.9 (49.5); H 6.3 (5.9); N 15.9 (15.7); Mn 6.9 (6.2).
TD880의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (35.0 ㎎; 49.8 μmol; 1.0 당량)를 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.50 ㎖; 1.25 mmol; 25 당량) 및 aq. CdCl2 (62.6 mM; 875 ㎕; 54.8 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, 첨가제 없음). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 37.1 ㎎ (90%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.24-3.54 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.60-3.79 (CH 2-arom., m, 2H); 4.03 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 13); 4.75 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 5.51 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.95 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.58-7.67 (Ph, m, 3H); 7.71 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.80 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.93-7.98 (Ph, m, 2H); 8.04 (CH-N3, s, 1H); 8.15 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.21 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 13C{1H} δC 47.8 (mc, s); 48.3 (mc, s); 49.3 (mc, s); 50.3 (mc, s); 50.9 (mc, s); 51.1 (mc, s); 51.2 (mc, s); 51.5 (mc, s); 53.4 (CH2-N3, s); 56.6 (CH2-CO, s); 57.4 (CH2-arom., s); 57.6 (CH2-CO, s); 58.6 (CH2-arom., s); 124.3 (arom., s); 125.2 (arom., s); 128.2 (Ph, s); 128.3 (arom., s); 128.9 (arom., s); 130.2 (Ph, s); 131.3 (Ph, s); 135.3 (CH-N3, s); 136.6 (Ph, s); 138.8 (arom., s); 141.3 (arom., s); 147.4 (arom., s); 153.6 (arom., s); 156.9 (arom., s); 157.9 (arom., s); 158.3 (arom., s); 175.7 (CO, s); 177.4 (CO, s). ESI-HRMS: 738.2079 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Cd1]+ = 738.2075). EA ([C33H37N9O4Cd1]·5.1H2O, M R = 828.0): C 47.9 (47.6); H 5.7 (5.0); N 15.2 (14.6); Cd 13.6 (13.5).
TD863의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (8.2 ㎎; 11.7 μmol; 1.0 당량)를 H2O (2 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.35 ㎖; 675 μmol; 58 당량) 및 aq. Ca(NO3)2 (100 mM; 200 ㎕; 20 μmol; 1.7 당량)를 첨가하고, 혼합물을 24시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, 첨가제 없음). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7.4 ㎎ (81%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 2.20-3.58 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.62 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 3.76 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.09 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 4.54 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.56 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.02 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.57-7.65 (Ph, m, 3H); 7.66 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.72 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 7.90-7.95 (Ph, m, 2H); 8.09 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.12 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 13C{1H} δC 48.4 (mc, s); 48.5 (mc, s); 50.6 (mc, s); 50.7 (mc, s); 52.6 (mc, s); 52.7 (mc, s); 53.0 (mc, s); 53.3 (CH2-N3, s); 53.6 (mc, s); 57.9 (CH2-CO, s); 59.1 (CH2-arom., s); 59.2 (CH2-arom., s); 59.3 (CH2-CO, s); 123.3 (arom., s); 124.7 (arom., s); 127.0 (arom., s); 128.1 (Ph, s); 128.2 (arom., s); 130.1 (Ph, s); 130.9 (Ph, s); 136.7 (CH-N3, s); 137.3 (Ph, s); 139.4 (arom., s); 140.9 (arom., s); 146.7 (arom., s); 153.1 (arom., s); 155.5 (arom., s); 159.3 (arom., s); 159.5 (arom., s); 178.4 (CO, s); 179.7 (CO, s). ESI-HRMS: 664.2663 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Ca1]+ = 664.2667). EA ([C33H37N9O4Ca1]·6.7H2O, M R = 784.5): C 50.5 (50.5); H 6.5 (6.0); N 16.1 (15.6); Ca 5.1 (4.8).
TD1214의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (9.0 ㎎; 12.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (780 ㎕)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 650 ㎕; 325 μmol; 25 당량) 및 aq. Na2[PdCl4] (25 mM; 570 ㎕; 14.3 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6.4 ㎎ (58%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1.54-3.82 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.21-5.10 (CH 2-arom., bm, 4H는 물 신호와 중첩됨); 5.69 (CH 2-N3, bs, 1H); 7.42-7.54 (Ph, arom ., m, 3+1H); 7.60 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.65 (CH 2-N3, bs, 1H); 7.69-7.76 (Ph, m, 2H); 8.01 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 8.08-8.15 (arom., m, 2H); 8.47 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 730.2088 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Pd1]+ = 730.2076). EA ([C33H37N9O4Pd1]·0.2FA·7.0H2O, M R = 865.2): C 46.1 (46.4); H 6.0 (5.7); N 14.6 (14.4); Pd 12.3 (9.6).
TD876의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD650·1.1FA·1.6H2O (8.2 ㎎; 11.7 μmol; 1.0 당량)를 H2O (2.5 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 580 ㎕; 290 μmol; 25 당량) 및 aq. Pb(NO3)2 (52.4 mM; 300 ㎕; 15.7 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 5분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, 첨가제 없음). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 10.4 ㎎ (94%; 1 단계; 기준 TD650·1.1FA·1.6H2O). NMR (D2O, pD ~6): δH 2.40-3.62 (mc, CH 2-CO, bm, 16+4H); 4.20 (CH 2-arom., bm, 4H); 5.72 (CH 2-N3, bd, 1H, 2 J HH = 15); 6.18 (CH 2-N3, bd, 1H, 2 J HH = 15); 7.56-7.67 (Ph, m, 3H); 7.74 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.79 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86-7.90 (Ph, m, 2H); 7.91 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.99 (CH-N3, s, 1H); 8.08 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.16 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 832.2806 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Pb1]+ = 832.2808). EA ([C33H37N9O4Pb1]·6.4H2O, M R = 946.2): C 41.9 (42.6); H 5.3 (4.7); N 13.3 (12.6); Pb 21.9 (21.4).
TD1238의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1188·0.2TFA·0.4FA·4.3H2O (6.5 ㎎; 8.6 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 950 ㎕; 475 μmol; 56 당량) 및 고체 Tl(NO3)3·3H2O (4.2 ㎎; 9.5 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 그 후, 추가로 Tl(NO3)3·3H2O (19.0 ㎎; 43 μmol; 5.0 당량)를 첨가하여, 혼합물을 추가로 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 H2O에 다시 용해해, 바로 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 고형물로 수득하였다. 수율: 1.4 ㎎ (≤18% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 933.0; 1 단계; 기준 TD1188·0.2TFA·0.4FA·4.3H2O). NMR (D2O, pD ~4, 1H에 대해 신호 2개 세트이지만, 19F에서는 하나): δH 2.17-5.34 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+4H+4H); 5.54-5.70 (CH 2-N3, m, 1H); 6.93-7.07 (CH 2-N3, m, 1H); 7.69-8.44 (arom ., m, 6H). 19F δF -58.70 (s). ESI-HRMS: 820.2265 [M]+ (theor. [C28H32N9O4F3Tl1]+ = 820.2264).
TD735의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD722·0.7TFA·2.0H2O (100 ㎎; 130 μmol; 1.0 당량)를 H2O (30 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 7.00 ㎖; 3.50 mmol; 27 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 1.50 ㎖; 150 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 134.2 ㎎ (91%; 1 단계; 기준 TD722·0.7TFA·2.0H2O). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.65-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.01 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.04 (CH 2-NH2, d, 1H, 2 J HH = 15); 4.23 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.31 (CH 2-NH2, d, 1H, 2 J HH = 15); 4.33 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.68 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.08 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.60-7.69 (Ph, m, 3H); 7.72 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.91 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.92-7.99 (Ph, m, 2H); 8.03 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.31 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.33 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). 13C{1H} δC 34.8 (CH2-C≡C, s); 48.9 (mc, s); 49.2 (mc, s); 51.8 (mc, s); 52.0 (mc, s); 53.4 (CH2-N3, s); 53.9 (mc, s); 54.1 (mc, s); 55.2 (mc, s); 56.1 (mc, s); 59.2 (CH2-CO, s); 59.7 (CH2-arom., s); 60.0 (CH2-arom., s); 61.1 (CH2-CO, s); 124.0 (arom., s); 126.8 (arom., s); 128.2 (arom., s); 128.4 (Ph, s); 130.3 (Ph, s); 130.8 (arom., s); 131.9 (Ph, s); 136.0 (Ph, s); 136.2 (arom, s); 140.5 (arom., s); 142.8 (arom., s); 144.4 (arom., s); 155.0 (arom., s); 156.0 (arom., s); 158.9 (arom., s); 160.0 (arom., s); 170.7 (FA, s); 178.8 (CO, s); 179.3 (CO, s). ESI-HRMS: 827.2637 [M]+ (theor. [C34H40N10O4Lu1]+ = 827.2636). EA ([C34H40N10O4Lu1]+[TFA]-·1.2TFA·3.1H2O, M R = 1133.3): C 40.7 (40.9); H 4.2 (3.9); N 12.4 (12.1); Lu 11.1 (11.0).
TD1059의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1054·0.3TFA·0.8FA·2.3H2O (10.0 ㎎; 12.9 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 800 ㎕; 400 μmol; 31 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 150 ㎕; 15.0 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 10.8 ㎎ (71%; 1 단계; 기준 TD1054·0.3TFA·0.8FA·2.3H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 1.18 (CH 3, s, 3H); 1.79 (CH 3, s, 3H); 2.64-3.85 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.03 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.30 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.36 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 18); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 18); 5.62 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.83 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.60-7.68 (Ph, m, 3H); 7.83 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.89 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.91-7.98 (Ph, m, 2H); 8.03 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.28 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.30 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 855.2951 [M]+ (theor. [C36H44N10O4Lu1]+ = 855.2949). EA ([C37H45N10O4Lu1]+[TFA]-·1.0TFA·4.6H2O, M R = 1178.6): C 41.8 (41.4); H 4.7 (4.2); N 11.9 (11.7); Lu 14.8 (13.2).
TD1124의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1105·0.1FA·2.0H2O (35.2 ㎎; 47.1 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.35 ㎖; 1.18 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 520 ㎕; 52.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 4일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 41.2 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD1105·0.1FA·2.0H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.17 (CH 3, s, 3H); 1.78 (CH 3, s, 3H); 2.64-3.84 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.97 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.56 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.80 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.73 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.82 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.88 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 7.99 (arom., d, 1H, 3 J HH = 8); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 779.2636 [M]+ (theor. [C30H40N10O4Lu1]+ = 779.2636). EA ([C30H40N10O4Lu1]+[TFA]-·1.5TFA·3.9H2O, M R = 1133.9): C 37.1 (37.3); H 4.4 (3.9); N 12.4 (12.0); F 12.6 (12.1).
TD1137의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1127·1.8TFA·0.1FA (45.9 ㎎; 52.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.15 ㎖; 1.58 mmol; 30 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 690 ㎕; 69.0 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 58.2 ㎎ (98%; 1 단계; 기준 TD1127·1.8TFA·0.1FA). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 1.92 -2.13 (CH 2, m, 3H); 2.17-2.33 (CH 2, m, 1H); 2.63-3.83 (mc, CH 2-CO, CH 2, CH, m, 16+4+4+1H); 3.98 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.22 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.34 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 5.50 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.93 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.67-7.76 (arom., m, 2H); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.98 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.23 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 805.2786 [M]+ (theor. [C32H42N10O4Lu1]+ = 805.2793). EA ([C32H42N10O4Lu1]+[TFA]-·1.0TFA·5.5H2O, M R = 1131.8): C 38.2 (38.7); H 4.8 (4.5); N 12.4 (11.9); F 10.1 (9.9).
TD1182의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1176·0.8FA·4.4H2O (39.3 ㎎; 55.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.77 ㎖; 1.39 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 610 ㎕; 61.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 44.8 ㎎ (77%; 1 단계; 기준 TD1176·0.8FA·4.4H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.55 -3.78 (mc, CH 2-CO, CH 3, CH 2-arom., m, 16+4+6+2H); 4.11 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.13 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 14); 5.31 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.73 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 6.83 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.07 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.78 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 8.22 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 765.2487 [M]+ (theor. [C29H39N10O4Lu1]+ = 765.2486). EA ([C29H38N10O4Lu1]+[TFA]-·1.0TFA·3.4H2O, M R = 1053.9): C 37.6 (37.5); H 4.4 (4.1); N 13.3 (13.1); F 10.8 (10.5).
TD1152의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1148·0.1FA·1.0H2O (27.0 ㎎; 41.0 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.05 ㎖; 1.03 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 450 ㎕; 45.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24.5 ㎎ (60%; 1 단계; 기준 TD1148·0.1FA·1.0H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.43 (CH 3, d, 6H, 3 J HH = 6); 2.65-3.85 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.06 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.34 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.34 (CH, hept, 1H, 3 J HH = 6); 5.69 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.17 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.22 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.53 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 808.2425 [M]+ (theor. [C31H39N9O6Lu1]+ = 808.2426). EA ([C31H39N9O6Lu1]+[TFA]-·0.3TFA·2.5H2O, M R = 1000.9): C 40.3 (40.7); H 4.5 (4.2); N 12.6 (12.2); F 7.4 (7.6).
TD1123의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1092·0.1FA·1.1H2O (25.9 ㎎; 41.0 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.05 ㎖; 1.03 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 450 ㎕; 45.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 24.7 ㎎ (60%; 1 단계; 기준 TD1092·0.1FA·1.1H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.65-3.86 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.09 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.18 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.36 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.73 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.19 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.21 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.50 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 766.1948 [M]+ (theor. [C28H33N9O6Lu1]+ = 766.1956). EA ([C28H33N9O6Lu1]+[TFA]-·0.6TFA·3.6H2O, M R = 1012.8): C 37.0 (36.7); H 4.1 (3.6); N 12.4 (12.0); F 9.0 (8.6).
TD897의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD742·0.1FA.3.2H2O (48.6 ㎎; 66.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (15 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 3.4 ㎖; 1.70 mmol; 26 당량) 및 aq. TmCl3 (100 mM; 800 ㎕; 80.0 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 8시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 65.2 ㎎ (88%; 1 단계; 기준 TD742·0.1FA.3.2H2O). ESI-HRMS: 836.2206 [M]+ (theor. [C34H37N9O6Tm1]+ = 836.2203). EA ([C34H40N10O4Tm1]+[TFA]-·1.1TFA·2.6H2O, M R = 1121.9): C 40.9 (40.9); H 3.9 (3.8); N 11.2 (11.2); Tm 15.1 (15.2); F 10.7 (10.7).
TD748의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD742·0.2FA·1.6H2O (85 ㎎; 120 μmol; 1.0 당량)를 H2O (12 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 6.00 ㎖; 3.00 mmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 1.3 ㎖; 130 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 105 ㎎ (75%; 1 단계; 기준 TD742·0.1FA·2.9H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.64-3.86 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.98 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.18 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.34 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.71 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.17 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.92 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.94 (CH-N3, s, 1H); 7.97 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.15 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.43 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 842.2259 [M]+ (theor. [C34H37N9O6Lu1]+ = 842.2269).EA ([C34H40N10O4Lu1]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O, M R = 1172.9): C 39.7 (40.0); H 3.9 (3.5); N 10.7 (10.3); Lu 14.9 (14.9); F 11.7 (11.8).
TD785의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD742·0.1FA·2.9H2O (13 ㎎; 18 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.20 ㎖; 600 μmol; 31 당량) 및 aq. YCl3 (100 mM; 197 ㎕; 20 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 22시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 13 ㎎ (71%; 1 단계; 기준 TD742·0.1FA·2.9H2O). NMR (D2O, pD ~2): 1H δH 2.60-3.88 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.98 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.38 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.94 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.09 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.91 (CH-N3, s, 1H); 7.98 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.00 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.02 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.40 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 756.1925 [M]+ (theor. [C34H37N9O6Y1]+ = 756.1920). EA ([C34H37N9O6Y1]+[TFA]-·0.6TFA·4.8H2O, M R = 1024.5): C 43.6 (43.9); H 4.6 (4.2); N 12.3 (12.0); Y 8.7 (7.9); F 8.9 (8.5).
TD904의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD744·1.0TFA·1.3H2O (38.6 ㎎; 46.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (16 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.80 ㎖; 1.40 mmol; 30 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 550 ㎕; 55.0 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 42.2 ㎎ (75%; 1 단계; 기준 TD744·1.0TFA·1.3H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.62-3.87 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 4.03 (CH 2-NH2, d, 1H, 2 J HH = 15); 4.05 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.24 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.32 (CH 2-NH2, d, 1H, 2 J HH = 15); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.71 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.10 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.92 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.03 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.07 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.21 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.31 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.40 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 871.2536 [M]+ (theor. [C35H40N10O6Lu1]+ = 471.2535). EA ([C35H40N10O6Lu1]+[TFA]-·1.1TFA·6.0H2O, M R = 1218.2): C 38.6 (38.6); H 4.4 (4.1); N 11.5 (11.2); F 9.8 (9.5).
905의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD904]+[TFA]-·1.1TFA·6.0H2O (10.0 ㎎; 8.2 μmol; 1.0 당량)를 aq. 보레이트/NaOH 완충제 (200 mM; pH 9.0; 2.00 ㎖; 400 mmol; 50 당량)에 용해한 다음 MeCN (1.5 ㎖) 중에 준비한 신선한 용액 FmocCl (3.3 ㎎; 12.8 μmol; 1.6 당량)를 첨가하였다. 수득한 맑은 용액을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9.8 ㎎ (≤99% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1207.0; 1단계; 기준 [TD904]+[TFA]-·1.1TFA·6.0H2O). NMR (CD3CN; 화합물이 D2O에서 용해성이지만, 넓은 1H 신호로 표시됨): 1H δH 2.52-3.64 (mc, CH 2-CO, m, 16+4H); 3.89 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.03 (CH 2-NH-Fmoc, dd, 1H, 2 J HH = 15, 3 J HH = 3); 4.05 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.18 (Fmoc, t, 1H, 3 J HH = 7); 4.26-4.35 (Fmoc, m, 2H); 4.36 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.52 (CH 2-NH-Fmoc, dd, 1H, 2 J HH = 15, 3 J HH = 7); 4.78 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.50 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.54 (NH-Fmoc, dd, 1H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 3); 7.27-7.33 (Fmoc, m, 2H); 7.35-7.43 (Fmoc, CH 2-N3, m, 2+1H); 7.57-7.65 (Fmoc, CH 2-arom., m, 2+1H); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.78-7.84 (Fmoc, m, 2H); 7.91 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.97 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.14 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.18 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 9); 8.26 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 1093.3219 [M]+ (theor. [C50H50N10O8Lu1]+ = 1093.3215).
TD757의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD748]+[FA]-·6.4H2O (0.7 ㎎; 0.7 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (75 ㎕)에 용해한 다음 4-플루오로-l-페닐알라닌 하이드로클로라이드 (DMSO 중의 50 mM; 22 ㎕; 1.1 μmol; 1.5 당량), DIPEA (DMSO 중의 100 mM; 22 ㎕; 2.2 μmol; 3.1 당량) 및 HATU (신선하게 준비한 DMSO 중의 50 mM; 24 ㎕; 1.2 μmol; 1.7 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 5분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (750 ㎕)로 희석하여 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.7 ㎎ (≤90% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 1066.9; 1 단계; 기준 [TD748]+[FA]-·6.4H2O). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.56-3.79 (mc, CH 2-CO, CH 2-CH, m, 16+4+2H); 3.82 (CH 3, s, 3H); 4.02 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.96 (CH2-CH, dd, 1H, 3 J HH = 10, 3 J HH = 5); 5.68 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.04-7.20 (CH 2-N3, arom., m, 1+2H); 7.27-7.34 (arom., dd, 2H, 3 J HF = 9, 3 J HH = 6); 7.78-7.88 (arom., m, 4H); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 7.95-8.06 (arom., m, 3H); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.35 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.46 (FA, s, 1H). 19F δF -116.5 (tt, 3 J FH = 9, 4 J FH = 5). ESI-HRMS: 1021.3014 [M]+ (theor. [C44H47N10O7F1Lu1]+ = 1021.3015).
TD793의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (4.4 ㎎; 4.6 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (460 ㎕)에 용해한 다음 N-Boc-시스테인 (DMSO 중의 50 mM; 185 ㎕; 9.3 μmol; 2.0 당량) 및 DIPEA (8 ㎕; 46 μmol; 10 당량)를 첨가하고, 형성된 용액을 16시간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석해 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.0 ㎎ (≤41% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1054.8; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.28-1.54 (CH 3, m, 9H); 2.63-3.95 (mc, CH 2-CO, CH 2-S, CH 2-arom., m, 16+4+2+1H); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.26 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.48-4.63 (NH-CH-COOH, m, 1H); 4.84 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.45-5.59 (CH 2-N3, m, 1H); 7.03 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.59-7.65 (arom., m, 1H); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 7.90-7.95 (arom., m, 1H); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 941.2614 [M]+ (theor. [C35H46N10O8S1Lu1]+ = 941.2623).
TD875의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD871·0.6FA·2.3H2O (10.0 ㎎; 14.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (2 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 750 ㎕; 375 μmol; 26 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 180 ㎕; 18.0 μmol; 1.3 당량)를 첨가하였다. 수득한 현탁물을 20일간 80℃에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 추가의 H2O (16 ㎖)로 희석한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 750 ㎕; 375 μmol; 26 당량) 및 aq. GdCl3 (100 mM; 180 ㎕; 18.0 μmol; 1.3 당량)를 추가로 첨가하였다. 수득한 현탁물을 추가로 10일간 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 H2O (3.6 ㎖)에 재현탁하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 한번 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.1 ㎎ (≤18% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 826.0; 1 단계; 기준 TD871·0.6FA·2.3H2O). ESI-HRMS: 781.2205 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Gd1]+ = 781.2204).
TD874의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD871·0.6FA·2.3H2O (10.0 ㎎; 14.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (2 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 750 ㎕; 375 μmol; 26 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 180 ㎕; 18.0 μmol; 1.3 당량)를 첨가하였다. 수득한 현탁물을 20일간 80℃에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 추가의 H2O (16 ㎖)로 희석한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 750 ㎕; 375 μmol; 26 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 180 ㎕; 18.0 μmol; 1.3 당량)를 추가로 첨가하였다. 수득한 현탁물을 추가로 10일간 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 H2O (3.6 ㎖)에 다시 현탁하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 한번 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 8.6 ㎎ (≤71% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 843.2; 1 단계; 기준 TD871·0.6FA·2.3H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 2.13-3.76 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+3+1H); 4.13 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 18); 4.32 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.45 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.67 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 13); 5.81 (CH 2- N3, d, 1H, 2 J HH = 14); 6.08 (CH 2- N3, d, 1H, 2 J HH = 14); 7.56-7.64 (Ph, arom., m, 3+1H); 7.67 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.79-7.85 (Ph, m, 2H); 7.90 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.09 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.16 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (FA, s, 1H); 8.72 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 798.2376 [M]+ (theor. [C33H37N9O4Lu1]+ = 798.2371).
TD900의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD871·0.6FA·2.3H2O (4.3 ㎎; 6.2 μmol; 1.0 당량)를 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 640 ㎕; 320 μmol; 52 당량) 및 aq. CdCl2 (62.6 mM; 120 ㎕; 7.5 μmol; 1.2 당량)에 용해한 다음, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배, 첨가제 없음). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.2 ㎎ (≤92% 추정 [M]·xH2O; M R = 736.1; 1 단계; 기준 TD871·0.6FA·2.3H2O). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.00-4.41 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., bm, 16+4+4H); 5.93 (CH 2-N3, bs, 2H); 7.44 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.53-7.63 (Ph, m, 3H); 7.73-7.84 (Ph, arom., m, 2+1H); 7.88-7.96 (arom., m, 2H); 8.01 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 9.74 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 738.2081 [M+H]+ (theor. [C33H38N9O4Cd1]+ = 738.2075).
TD685의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD669·0.1FA·xH2O (17 ㎎; ~27 μmol; 1.0 당량)를 H2O (17 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 2.10 ㎖; 1.05 mmol; ~40 당량) 및 aq. YCl3 (100 mM; 290 ㎕; 29 μmol; ~1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 6주간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4 ㎎ (≤21% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 761.7; 1 단계; 기준 TD669·0.1FA·xH2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.63-3.09 (mc, CH 2-CH 2-N-CH2-C≡CH, m, 4+2H); 3.11 (C≡CH, t, 1H, 4 J HH = 2); 3.13 -3.75 (mc, CH 2-CH 2-N-CH2-C≡CH, CH 2-CO, 12+2+2H); 3.78 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 19); 3.79 (CH 2-C≡CH, dm, 1H, 2 J HH = 18); 3.91 (CH 2-C≡CH, dd, 1H, 2 J HH = 18, 4 J HH = 2); 4.01 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 19); 4.09 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.39 (CH 2-C-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 4.75 (CH 2-C-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 5.67 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.00 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.67-7.73 (Ph, m, 3H); 7.94 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.96-8.00 (Ph, m, 2H); 8.13 (CH-N3, s, 1H); 8.30 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.52 (FA, s, 1H). 13C{1H} δC 41.2 (CH2-C≡CH, s); 47.8 (CH2-C-N3, s); 52.6 (CH2-CH2-N-CH2-C≡CH, s); 54.1 (CH2-CH2-N-CH2-C≡CH, s); 54.4 (CH2-N3, s); 55.1 (mc, s); 57.2 (mc, s); 58.0 (mc, s); 59.0 (mc, s); 59.4 (mc, s); 59.5 (mc, s); 59.9 (mc, s); 60.1 (mc, bs); 66.0 (CH2-CO, s); 67.2 (CH2-CO, s); 67.6 (CH2-arom., s); 75.3 (C≡CH, s); 81.8 (C≡CH, s); 124.8 (arom., s); 127.7 (arom., s); 130.0 (Ph, s); 132.1 (Ph, s); 133.6 (Ph, s); 143.4 (arom., s); 137.5 (Ph, s); 138.1 (CH-N3, s); 156.1 (arom., s); 158.6 (arom., s); 161.4 (arom., s); 173.3 (FA, s); 181.2 (CO, s); 181.5 (CO, s). ESI-HRMS: 716.2327 [M]+ (theor. [C33H41N9O4Y1]+ = 716.2335).
TD780의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD685]+[FA]-·xH2O (3 ㎎; ~4 μmol; 1.0 당량)를 aq. MES/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.2; 375 ㎕; 188 μmol; ~50 당랑)에 용해한 후 t-BuOH ( 240 ㎕), 벤질 아지드 (500 mm in t-BuOH; 12 ㎕; 6 μmol; ~1.6 당량) 및 수용액 CuSO4 (500 mM; 3 ㎕; 1.5 μmol; ~0.4 당량)를 첨가하였다. 형성된 흐린 밝은 청색 용액에 신선하게 준비한 소듐 아스코르베이트 (100 mM; 15 ㎕; 1.5 μmol; ~0.4 당량) 수용액을 첨가하였으며, 용액의 색이 즉시 밝은 청색으로 바뀌었다. 혼합물을 1시간 동안 RT에서 교반한 다음 H2O (2.4 ㎖)에 희석해 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 3 ㎎ (≤74% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 962.8; 1 단계; 기준 TD685·xH2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 2.46-4.59 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., CH 2-CH 2-N-(CH 2-C=C)2, m, 16+4+2+8H); 5.60 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 5.71 (CH 2-Ph, s, 2H); 6.94 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.37-7.50 (Ph, m, 5H); 7.59-7.65 (Ph, m, 3H); 7.88 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.89-7.93 (Ph, m, 2H); 8.21 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.34 (CH-N3, s, 1H); 8.35 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 849.2970 [M]+ (theor. [C40H48N12O4]+ = 849.2975).
Figure pct00491
1,4 -TD1413의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1408·0.1FA·2.4H2O (10.0 ㎎; 16.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 820 ㎕; 410 μmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 196 ㎕; 19.6 μmol; 1.2 당량)를 첨가하였다. 수득한 현탁물을 1주간 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 9.3 ㎎ (≤73% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 781.6; 1 단계; 기준 TD1408·0.1FA·2.4H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 1.73-3.16 (mc, CH 2-CO, m, 12+1H); 3.27 (CH 2-CO, d, 2 J HH = 13); 3.42-3.77 (mc, CH 2-CH2-N3, CH 2-CO, m, 4+2+1H); 4.03 (CH2-CH 2-N3, ddd, 1H, 2 J HH = 14, 3 J HH = 12, 3 J HH = 16); 4.10 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 17); 4.19 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.34 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.56 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 13); 4.92-5.03 (CH2-CH 2-N3, CH 2-arom., m, 1+1H); 7.18 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.54- 7.60 (arom., m, 2H); 7.71-7.77 (arom., m, 2H); 8.11 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.13 (CH-N3, s, 1H); 8.44 (FA, s, 1H). ESI-HRMS: 736.2217 [M]+ (theor. [C28H35N9O4Lu1]+ = 736.2214).
Figure pct00492
1,5 -TD1413의 합성: 1,4-TD1413의 합성 중에 부산물로서 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.0 ㎎ (≤31% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 781.6; 1 단계; 기준 TD1408·0.1FA·2.4H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 2.62-4.60 (mc, CH 2-CO, CH2-arom., CH 2-CH2-N3, CH2-CH 2-N3, m, 16+4+3+2+1H); 4.85 (CH2-arom., m, 1H); 5.45 (CH2-CH 2-N3, bs, 1H); 7.44 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.67- 7.78 (arom., m, 2H); 7.81-7.90 (arom., CH-N3, m, 1+1H); 8.02 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (FA, s, 1H). ESI-HRMS: 736.2218 [M]+ (theor. [C28H35N9O4Lu1]+ = 736.2214).
Figure pct00493
1,5 -TD1414의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1408·0.1FA·2.4H2O (10.0 ㎎; 16.4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 820 ㎕; 410 μmol; 25 당량) 및 aq. YCl3 (100 mM; 196 ㎕; 19.6 μmol; 1.2 당량)를 첨가하였다. 수득한 현탁물을 1주간 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6.6 ㎎ (≤58% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 695.6; 1 단계; 기준 TD1408·0.1FA·2.4H2O). NMR (D2O, pD ~6): 1H δH 2.56-4.00 (mc, CH 2-CO, CH 2-CH2-N3, CH 2-arom., m, 16+4+2+1H); 4.06 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.38 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.42-4.54 (CH2-CH 2-N3, m, 1H); 4.93 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.72-5.91 (CH2-CH 2-N3, m, 1H); 7.45 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.69- 7.80 (arom., m, 2H); 7.84 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (CH-N3, s, 1H); 8.01 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.26 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.46 (FA, s, 1H). ESI-HRMS: 650.1867 [M]+ (theor. [C28H35N9O4Y1]+ = 650.1865).
Figure pct00494
1,4 -TD1414의 합성: 1,5-TD1414의 합성 중에 부산물로서 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.0 ㎎ (≤35% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 695.6; 1 단계; 기준 TD1408·0.1FA·2.4H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 1.76-3.19 (mc, CH 2-CO, m, 12+1H); 3.23 (CH 2-CO, d, 2 J HH = 13); 3.43-3.79 (mc, CH 2-CH2-N3, CH 2-CO, m, 4+2+1H); 4.06-4.24 (CH2-CH 2-N3, CH 2-arom., m, 1+2H); 4.34 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.60 (CH 2-CO, d, 1H, 2 J HH = 12); 4.89-5.05 (CH2-CH 2-N3, CH 2-arom., m, 1+1H); 7.17 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.50- 7.58 (arom., m, 2H); 7.72 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 7.74 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.09 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.14 (CH-N3, s, 1H); 8.43 (FA, s, 1H). ESI-HRMS: 650.1868 [M]+ (theor. [C28H35N9O4Y1]+ = 650.1865).
TD1350의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1346·0.1FA·3.0H2O (6.9 ㎎; 10.8 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 550 ㎕; 275 μmol; 25 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 120 ㎕; 12.0 μmol; 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 41.4 ㎎ (84%; 1 단계; 기준 TD1346·0.1FA·3.0H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.03 (CH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.12 (CH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 2.69-3.81 (mc, CH-CH3, m, 16+2H); 3.90 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.10 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.23 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.78 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.58 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.11 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.70 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.78 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.84 (CH-N3, s, 1H); 8.01 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.22 (arom., t, 1+1H, 3 J HH = 8). ESI-HRMS: 750.2370 [M]+ (theor. [C29H37N9O4Lu1]+ = 750.2371). EA ([C29H37N9O4Lu1]+[TFA]-·0.3TFA·2.1H2O, M R = 935.6): C 40.6 (40.6); H 4.5 (4.2); N 13.5 (13.2); F 7.9 (8.1).
TD1452의 합성: 유리 바이얼 (40 ㎖)에서, TD1451·0.1FA·2.7H2O (101 ㎎; 112 μmol; 1.0 당량)를 H2O (30 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 7.0 ㎖; 3.50 mmol; 31 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 1.40 ㎖; 140 μmol; 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 18일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 흐린 노란색 솜털형 고형물을 수득하였다. 수율: 115 ㎎ (76%; 1 단계; 기준 TD1451·0.1FA·2.7H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.12 (CH 3-CH, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.18 (CH 3-C-NH2, s, 3H); 1.19 (CH 3-CH, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.80 (CH 3-C-NH2, s, 3H); 2.77-3.90 (mc, CH-CO, m, 16+2H); 4.08 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.31 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.44 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 18); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 18); 5.71 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.97 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 8.05 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.11 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 8.16 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.41 (arom., d, 1H, 4 J HH = 1); 19F δF -66.1 (s). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1452, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.12 (s). ESI-HRMS: 919.2725 [M]+ (theor. [C34H43N10O6F3Lu1]+ = 919.2721). EA ([C33H43N10O6Lu1F3]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O, M R = 1353.2): C 34.6 (35.4); H 4.6 (3.7); N 10.4 (9.7); F 14.7 (14.3).
TD1453의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1451·0.1FA·2.7H2O (21.7 ㎎; 24.1 μmol; 1.0 당량)를 H2O (18 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 1.50 ㎖; 750 μmol; 31 당량) 및 aq. ErCl3 (100 mM; 300 ㎕; 30.0 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10일간 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 22.6 ㎎ (~70% 추정 [M]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O; M R = 1345; 1 단계; 기준 TD1451·0.1FA·2.7H2O). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1453, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -47.85 (s). ESI-HRMS: 910.2620 [M]+ (theor. [C34H43N10O6F3Er1]+ = 910.2617).
TD1472의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD1452]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O (20.0 ㎎; 14.8 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (1.5 ㎖)에 용해한 다음 AcOH (42 ㎕; 735 μmol; 50 당량) 및 DIPEA (181 ㎕; 1.04 mmol; 70 당량)를 첨가하였다. 신선하게 준비한 용액 PyAOP (DMSO 중의 200 mM; 368 ㎕; 73.7 μmol; 5.0 당량)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 5분간 RT에서 교반하였다. 형성된 2상 혼합물을 DMF (800 ㎕)로 희석하고, 형성된 용액을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 11.5 ㎎ (64%; 1 단계; 기준 [TD1452]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1472, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.10 (s). EA ([C36H45N10O7Lu1F3]+[TFA]-·0.8TFA·3.1H2O, M R = 1221.8): C 38.9 (39.1); H 4.3 (4.5); N 11.5 (11.3).
TD1473의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD1452]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O (16.2 ㎎; 12.0 μmol; 1.0 당량)를 MeOH (1.20 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (8.8 ㎕; 121 μmol; 10 당량)을 첨가하였다. 수득된 맑은 용액을 2일간 50℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하여 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 13.2 ㎎ (91%; 1 단계; 기준 [TD1452]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1473, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.13 (s). EA ([C35H45N10O6Lu1F3]+[TFA]-·0.2TFA·7.2H2O, M R = 1199.2): C 37.5 (37.1); H 5.0 (4.0); N 11.7 (10.7).
TD1475의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1453 (추정 [TD1453]+[TFA]-·1.5TFA·8.3H2O; M R = 1345; 20.6 ㎎; 15.3 μmol; 1.0 당량)를 MeOH (1.50 ㎖)에 용해한 다음 SOCl2 (11.2 ㎕; 154 μmol; 10 당량)를 첨가하였다. 수득된 맑은 용액을 2일간 50℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석하고, 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 15.5 ㎎ (~85% 추정 [M]+[TFA]-·0.2TFA·7.2H2O; M R = 1192; 1 단계; 기준 [TD1453]). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1475, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -48.45 (s).
TD1506의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD1504 ((추정 M·2.0H2O; M R = 657.7, 8.7 ㎎; 13.2 μmol; 1.0 당량)를 H2O (19 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 595 ㎕; 398 μmol; 30 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 159 ㎕; 15.9 μmol; 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들 (부분입체이성질체 둘다 완전 분리됨)을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6.9+3.4 ㎎ (≤62+31% 추정 [M]+[FA]-·xH2O; M R = 836.6; 1 단계; 기준 TD1504·2.0H2O). NMR (제1 이성질체, D2O, pD ~4): 1H δH 1.06 (CH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 2.53-2.65 (CH 2-CO, m, 2H); 2.76-3.84 (mc, CH-CH2, CH-CH3, m, 16+1+1H); 3.96 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.13 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.27 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.77 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.61 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.11 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.78 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.85 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.87 (CH-N3, s, 1H); 8.03 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.28 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.40 (FA, s, 1H). NMR (제2 이성질체, D2O, pD ~5): 1H δH 1.14 (CH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 2.38-2.61 (CH 2-CO, m, 2H); 2.76-3.82 (mc, CH-CH2, CH-CH3, m, 16+1+1H); 3.92 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.25 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.80 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.61 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.14 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.73 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 8.03 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.45 (FA, s, 1H). ESI-MS (LC-MS): 794.2 [M]+ (theor. [C30H37N9O6Lu1]+ = 794.2).
TD1512의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (0.5 ㎎; 0.52 μmol; 1.0 당량)를 신선하게 준비한 용액 DIPEA (DMSO 중의 100 mM; 104 ㎕; 10.4 μmol; 20 당랑)에 용해한 다음 신선하게 준비한 용액 NaSH (DMSO 중의 500 mM; 4.2 ㎕; 2.1 μmol; 4 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 15분간 RT에서 교반하였다. 혼합물을 H2O (800 ㎕)로 희석하고, 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.2 ㎎ (≤44% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 867.6; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~4): 1H δH 2.63-3.79 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+4+1H); 4.05-4.17 (CH 2-arom., m, 2H); 4.79 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 5.28 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.83 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.47 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.72 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 7.79 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.83 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.23 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8). ESI-MS (LC-MS): 754.2 [M]+ (theor. [C27H33N9O4S1Lu1]+ = 754.2).
TD1512- SO 3 H의 합성: 유리 바이얼 (2 ㎖)에서, [TD782]+[TFA]-·5.1H2O (1.0 ㎎; 1.0 μmol; 1.0 당량)를 H2O (156 ㎕)에 용해한 다음 수용액 Na2S (100 mM; 52 ㎕; 5.2 μmol; 5 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H2O (800 ㎕)로 희석하고, 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 0.3 ㎎ (≤32% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 915.6; 1 단계; 기준 [TD782]+[TFA]-·5.1H2O). NMR (D2O, pD ~7): 1H δH 2.60-3.83 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom., m, 16+4H); 4.09 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.82 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.72 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.16 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.86 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.88 (CH-N3, s, 1H); 8.06 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.25 arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.36 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). ESI-MS (LC-MS): 802.1 [M]+ (theor. [C27H33N9O7S1Lu1]+ = 802.2).
실시예 7: 배위 화합물의 사슬 합성
TD837의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, 수용액 [TD836]+[TFA]-·xH2O (~20 mM; 274 ㎕; ~5.5 μmol; 1.0 당량)를 수용액 [TD823]+[TFA]-·xH2O (~20 mM; 274 ㎕; ~5.5 μmol; 1.0 당랑)와 혼합한 다음 aq. MES/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.2; 548 ㎕; 274 μmol; ~50 당량), t-BuOH (1.1 ㎖) 및 수용액 CuSO4 (100 mM; 11 ㎕; 1.1 μmol; ~0.2 당량)를 첨가하였다. 형성된 용액에 신선하게 준비한 수용액 소듐 아스코르베이트 (100 mM; 11 ㎕; 1.1 μmol; ~0.2 당량)를 첨가하여, 혼합물을 2시간 동안 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 ~1 ㎖로 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.7 ㎎ (≤50% 추정 [M]2+[TFA]2 2-·xH2O; M R = 1721; 1 단계; 기준 [TD836]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 747.1998 [M]2+ (theor. [C56H65N21O8Tb1 176Yb1]2+ = 747.1997).
TD889의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, 수용액 [TD836]+[TFA]-·xH2O (~20 mM; 274 ㎕; ~5.5 μmol; 1.0 당량)를 수용액 [TD886]+[TFA]-·xH2O (~20 mM; 274 ㎕; ~5.5 μmol; 1.0 당랑)와 혼합한 다음 aq. MES/NaOH 완충제 (500 mM; pH 5.2; 548 ㎕; 274 μmol; ~50 당량), t-BuOH (1.1 ㎖) 및 수용액 CuSO4 (100 mM; 28 ㎕; 2.8 μmol; ~0.5 당량)를 첨가하였다. 형성된 용액에 신선하게 준비한 수용액 소듐 아스코르베이트 (100 mM; 28 ㎕; 2.8 μmol; ~0.5 당량)를 첨가하여 혼합물을 30분간 RT에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 ~1 ㎖로 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 7.8 ㎎ (≤82% 추정 [M]2+[TFA]2 2-·xH2O; M R = 1721; 1 단계; 기준 [TD836]+[TFA]-·xH2O). ESI-HRMS: 747.2002 [M]2+ (theor. [C56H65N21O8Tb1 176Yb1]2+ = 747.1997).
TD1483의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD1472]+[TFA]-·0.8TFA·3.1H2O (7.8 ㎎; 6.4 μmol; 1.0 당량) 및 [TD1473]+[TFA]-·0.2TFA·7.2H2O (7.5 ㎎; 6.4 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (335 ㎕)에 용해한 다음 DIPEA (DMF 중의 400 mM; 240 ㎕; 96 μmol; 15 당량)를 첨가하였다. 신선하게 준비한 용액 PyAOP (DMSO 중의 200 mM; 64 ㎕; 12.8 μmol; 2.0 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 1분간 볼텍싱한 다음 추가로 5분간 RT에서 세워두었다. 이후 혼합물을 H2O (1 ㎖)로 희석하고 1분 볼텍싱한 다음 5분간 RT에서 추가로 세워두었다. 반응 혼합물을 이후 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 10.8 ㎎ (≤80% 추정 [M]2+[TFA]2 -·xH2O; M R = 2090; 1 단계; 기준 [TD1472]+[TFA]-·0.8TFA·3.1H2O). NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1483, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -66.10 (CF3, s, 3F); -66.11 (CF3, s, 3F).
TD1484의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1483 (DMSO 중의 ~20 mM; 20 ㎕; 0.4 μmol; 1.0 당량), TD1473 (DMSO 중의 ~20 mM; 20 ㎕; 0.4 μmol; 1.0 당량), DIPEA (DMF 중의 400 mM; 15 ㎕; 6.0 μmol; 15 당량) 및 DMSO (21 ㎕)를 함께 혼합한 다음 PyAOP (DMSO 중의 200 mM; 4 ㎕; 0.8 μmol; 2.0 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석한 다음 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 바로 동결건조하였다. 수득한 생산물 모두 19F 특정화에 이용하였다. NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1484, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -65.86 (CF3, s, 3F); -66.09 (CF3, s, 3F); -66.10 (CF3, s, 3F).
TD1512-SS의 합성: TD1512의 합성 및 정제 중에 부산물 (트리플루오로아세테이트 염 형태)로서 수득하였다. 수율: 0.1 ㎎. ESI-MS (LC-MS): 753.3 [M]2+ (theor. [C54H64Lu2N18O8S2]2+ = 753.2).
합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, TD1483 (DMSO 중의 ~20 mM; 20 ㎕; 0.4 μmol; 1.0 당량), TD1475 (DMSO 중의 ~20 mM; 20 ㎕; 0.4 μmol; 1.0 당량), DIPEA (DMF 중의 400 mM; 15 ㎕; 6.0 μmol; 15 당량) 및 DMSO (21 ㎕)를 함께 혼합한 다음 PyAOP (DMSO 중의 200 mM; 4 ㎕; 0.8 μmol; 2.0 당량)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 H2O (2 ㎖)로 희석한 다음 30분간 RT에서 추가로 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 바로 동결건조하였다. 수득한 생산물 모두 19F NMR 특정화에 사용하였다. NMR (~50 mM MOPS/NaOH 완충제 중의 ~0.5 mM TD1485, 10% D2O에서, pH 7.0): 19F δF -48.05 (CF3, s, 3F); -65.13 (CF3, s, 3F); -67.24 (CF3, s, 3F).
실시예 8: 배위 화합물의 이량체 합성
sc-TD647의 합성: TD647의 합성 중에 부산물로 수득하였다. 수율: ~8 ㎎. NMR (D2O): 1H δH 2.69-3.65 (mc 및 CH 2-CO, 32+8H); 3.68 (C≡CH, s, 1H); 3.70 (CH 2-arom., bs, 2H); 3.75-4.12 (CH 2-arom., 6H); 4.59 (CH 2-N3., s, 2H); 5.89 (CH 2-N3, s, 2H); 7.36-7.97 (Ph and arom., 10+8H); 8.15 (arom., bs, 1H); 8.32 (arom., bs, 1H); 8.64 (CH-N3, s, 1H). ESI-HRMS: 1251.6313 [M+H]+ (theor. [C66H79N18O8]+ = 1251.6323).
TD613의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, sc-TD647·xH2O (5.0 ㎎; ~4 μmol; 1.0 당량)를 H2O (14 ㎖)에 용해한 다음 aq. MOPS/NaOH 완충제 (500 mM; pH 7.0; 800 ㎕; 400 mmol; ~100 당량) 및 aq. LuCl3 (100 mM; 88 ㎕; 8.8 μmol; ~2.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하였다. 여과물을 회전식 증발기에서 농축한 다음 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + FA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4 ㎎ (~60%; 1 단계; 기준 sc-TD647·xH2O). ESI-HRMS: 798.2368 [M]2+ (theor. [C66H74N18O8Lu2]2+ = 798.2371).
TD598의 합성: TD651의 합성 중에 부산물로서 포르메이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 6 ㎎. NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 2.47-3.99 (mc, CH 2-CO, CH 2-arom, m, 32+8+4H); 4.42 (CH 2-arom., d, 2H, 2 J HH = 17); 4.75 (CH 2-arom., d, 2H, 2 J HH = 17); 5.90 (CH 2-N3, d, 2H, 2 J HH = 16); 6.20 (CH 2-N3, d, 2H, 2 J HH = 16); 7.07 (arom., d, 2H, 4 J HH = 2); 7.44 (arom., d, 2H, 4 J HH = 2); 7.47-7.63 (Ph, m, 10H); 7.66 (arom., dd, 2H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 7.89 (arom., dd, 2H, 3 J HH = 8, 4 J HH = 1); 8.15 (arom., t, 2H, 3 J HH = 8); 8.42 (FA, s); 8.74 (CH-N3, s, 2H). 13C{1H} δC 49.3 (mc, s); 49.4 (mc, s); 51.0 (mc, s); 51.6 (mc, s); 52.5 (mc, s); 53.9 (mc, s); 54.0 (mc, s); 54.3 (mc, s); 55.6 (CH2-N3, s); 59.2 (CH2-arom., s); 59.8 (CH2-CO, s); 61.2 (CH2-arom., s); 61.9 (CH2-CO, s); 120.7 (arom., s); 121.2 (arom., s); 122.2 (arom., s); 125.4 (arom., s); 126.7 (CH-N3, s); 128.2 (Ph, s); 129.6 (Ph, s); 131.6 (Ph, s); 135.2 (Ph, s); 143.0 (arom., s); 145.5 (arom., s); 148.9 (arom., s); 150.2 (arom., s); 157.2 (arom., s); 157.3 (arom., s); 158.9 (arom., s); 170.8 (FA, s); 177.9 (CO, s); 180.5 (CO, s). ESI-HRMS: 762.2025 [M]2+ (theor. [C66H74N18O8La2]2+ = 762.2027).
실시예 9: 배위 화합물과 펩타이드의 접합체 합성
TD981의 합성: 유리 바이얼 #1 (20 ㎖)에서, HO -R(Nω-NO2)-Fmoc (886 ㎎; 2.01 mmol; 1.1 당량)를 DMSO (6 ㎖)에 (볼텍싱/가볍게 가열하면서) 용해한 다음 DBU (550 ㎕; 3.68 mmol; 2.0 당량)를 첨가하고, 형성된 용액을 잠시 볼텍싱하여 2분간 RT에서 추가로 교반하였다. 유리 바이얼 #2 (20 ㎖)에서, HO-DR(Pbf)-Fmoc (1.20 g; 1.85 mmol; 1.0 당량)를 (볼텍싱/가볍게 가열하면서) DMSO (9 ㎖) 및 NMM (1.0 ㎖; 9.09 mmol; 4.9 당량) 혼합물에 용해한 다음 고체 PyAOP (965 ㎎; 1.85 mmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 잠시 볼텍싱하고, 형성된 약간 노란색 용액을 2분간 RT에서 추가로 교반하였다. 바이얼 #1의 용액을 바이얼 #2에서 강하게 교반한 용액에 (시린지를 통해) 한번에 첨가하였다. 형성된 밝은 노란색 용액을 추가로 5분간 RT에서 가볍게 교반한 다음 neat TFA (430 ㎕; 5.62 mmol; 3.0 당량)를 첨가하였다. 이후 혼합물을 바로 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 순수한 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 바로 동결건조하였다. 불순수 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 동결건조한 다음 분취용 HPLC에 의해 다시 정제하고 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제), 다시 동결건조하였다. 이들 고형물을 합치고 균질화하여, 생산물을 오프-화이트 고형물로 수득하였다. 수율: 1.21 g (63%; 2 단계; 기준 HO-DR(Pbf)-H). ESI-MS (LC-MS): 850.4 [M+H]+ (theor. [C40H52N9O10S1]+ = 850.3). EA (C40H51N9O10S1·1.4TFA·1.4H2O, M R = 1034.8): C 49.7 (50.0); H 5.4 (5.1); N 12.2 (11.8); F 7.7 (7.8).
TD982의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD981·1.4TFA·1.4H2O (360 ㎎; 348 μmol; 1.1 당량) 및 NH4Cl (27 ㎎; 505 μmol; 1.5 당량)을 (볼텍싱/가볍게 가열하면서) DMSO (2 ㎖)에 용해한 다음 NMM (140 ㎕; 1.27 mmol; 3.0 당량) 및 고체 PyAOP (264 ㎎; 506 μmol; 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 잠시 볼텍싱하고, 수득된 밝은 노란색 용액을 추가로 5분간 RT에서 교반한 다음 DBU (380 ㎕; 2.54 mmol; 7.3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득된 밝은 노란색 용액을 추가로 2분간 RT에서 교반한 후 neat TFA (160 ㎕; 2.09 mmol; 6.0 당량)를 첨가하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 순수한 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 237 ㎎ (74%; 2 단계; 기준 TD981·1.4TFA·1.4H2O). ESI-MS (LC-MS): 627.4 [M+H]+ (theor. [C25H42N10O7S1]+ = 627.3). EA (C25H42N10O7S1·2.3TFA·1.9H2O, M R = 923.2): C 38.5 (38.7); H 5.3 (4.9); N 15.2 (14.8); F 14.2 (14.0).
TD986의 합성: 유리 바이얼 (20 ㎖)에서, TD981·1.4TFA·1.4H2O (258 ㎎; 249 μmol; 1.0 당량) 및 TD982·2.3TFA·1.9H2O (222 ㎎; 240 μmol; 1.0 당량)를 (볼텍싱/가볍게 가열하면서) DMSO (2 ㎖)에 용해한 다음 NMM (220 ㎕; 2.00 mmol; 8.3 당량) 및 고체 PyAOP (136 ㎎; 261 μmol; 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득한 밝은 노란색 용액을 추가로 RT에서 15분간 교반한 다음 DBU (221 ㎕; 1.48 mmol; 6.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득한 밝은 노란색 용액을 추가로 15분간 RT에서 교반한 후 다시 DBU (36 ㎕; 241 μmol; 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득한 밝은 노란색 용액을 추가로 5분간 RT에서 교반한 후 neat TFA (58 ㎕; 758 μmol; 3.2 당량)를 첨가하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 순수한 생산물이 함유된 분획들을 합쳐 바로 동결건조하였다. 수득한 테트라아르기닌 중간산물 NH2-R(Nω-NO2)dR(Pbf)R(Nω-NO2)dR(Pbf)-H (≤238 μmol; 1.0 당량)을 유리 바이얼 (20 ㎖)로 옮겨 TD981·1.4TFA·1.4H2O (259 ㎎; 250 μmol; ≥1.1 당량), DMSO (2 ㎖; 볼텍싱/가볍게 가열하면서 용해), NMM (276 ㎕; 2.51 mmol; ≥10.5 당량) 및 고체 PyAOP (144 ㎎; 277 μmol; ≥1.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득한 밝은 노란색 용액을 추가로 20분간 RT에서 교반한 다음 DBU (263 ㎕; 1.76 mmol; ≥7.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 간단히 볼텍싱하고, 수득한 밝은 노란색 용액을 추가로 5분간 RT에서 교반한 후 neat TFA (77 ㎕; 1.00 mmol; ≥4.0 당량)를 첨가하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 순수한 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 368 ㎎ (66%; 4 단계; 기준 TD982·2.3TFA·1.9H2O). ESI-MS (LC-MS): 923.6 [M+2H]2+ (theor. [C75H120N28O21S3]2+ = 923.4). EA (C75H120N28O21S3·3.2TFA·5.3H2O, M R = 2306.4): C 42.4 (42.8); H 5.8 (5.4); N 17.0 (16.6); F 7.9 (7.6).
TD802의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O (3.3 ㎎; 2.8 μmol; 1.0 당량) 및 H2N-GVHFYA-H·1.0TFA·xH2O (3.4 ㎎; ~4.2 μmol; ~1.5 당량)를 DMSO (1 ㎖)에 용해한 다음 DIPEA (5.0 ㎕; 29 μmol; ~10 당량) 및 PyOAP (신선하게 준비한 DMSO 중의 100 mM; 52 ㎕; 5.2 μmol; 1.9 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.4 ㎎ (≤96% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1629.5; 1 단계; 기준 [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 0.93 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 0.95 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.42 (ACH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 2.03 (VCH-(CH3)2, dhept, 1H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 7); 2.62-3.81 (mc, CH 2-CO, HCH 2, FCH 2, YCH 2, m, 16+4+2+2+2H); 3.84 (GCH 2, d, 1H, 2 J HH = 17); 3.95 (GCH 2, d, 1H, 2 J HH = 17); 4.01 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.02 (VCH, d, 1H, 3 J HH = 7); 4.15 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.35 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.45 (ACH, q, 1H, 3 J HH = 7); 4.52-4.66 (HCH, FCH, YCH, m, 1+1+1H); 4.85 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.67 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 6.59 (Y arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 6.96 (Y arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 7.08-7.18 (CH 2-N3, F arom., m, 1+2H); 7.19 (H arom., s, 1H); 7.23-7.30 (F arom., m, 3H); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.82-7.87 (arom., m, 3H); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 8.00 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 8.03 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.24 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.33 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.48 (H arom., bs, 1H). ESI-HRMS: 1515.5593 [M]+ (theor. [C68H80N18O12Lu1]+ = 1515.5605).
TD792의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD785]+[TFA]-·0.6TFA·4.8H2O (3.0 ㎎; 2.9 μmol; 1.0 당량) 및 H2N-GVHFYA-H·1.0TFA·xH2O 펩타이드 (3.4 ㎎; ~4.2 μmol; ~1.4 당량)를 DMSO (1 ㎖)에 용해한 다음 DIPEA (5.0 ㎕; 29 μmol; ~10 당량) 및 PyOAP (신선하게 준비한 DMSO 중의 100 mM; 52 ㎕; 5.2 μmol; 1.8 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 4.0 ㎎ (≤89% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1543.3; 1 단계; 기준 [TD785]+[TFA]-··0.6TFA·4.8H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 0.93 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 0.95 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.42 (ACH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 2.03 (VCH-(CH3)2, dhept, 1H, 3 J HH = 7, 3 J HH = 7); 2.62-3.81 (mc, CH 2-CO, HCH 2, FCH 2, YCH 2, m, 16+4+2+2+2H); 3.84 (GCH 2, d, 1H, 2 J HH = 17); 3.95 (GCH 2, d, 1H, 2 J HH = 17); 4.01 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.02 (VCH, d, 1H, 3 J HH = 7); 4.14 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.39 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.45 (ACH, q, 1H, 3 J HH = 7); 4.52-4.67 (HCH, FCH, YCH, m, 1+1+1H); 4.85 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.72 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 6.59 (Y arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 6.96 (Y arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 7.09 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 16); 7.10-7.16 (F arom., m, 2H); 7.21 (H arom., s, 1H); 7.24-7.30 (F arom., m, 3H); 7.78-7.86 (arom., m, 4H); 7.89 (CH-N3, s, 1H); 8.00 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 8.03 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.33 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2); 8.53 (H arom., t, 1H, 4 J HH = 2). ESI-HRMS: 1429.5264 [M]+ (theor. [C68H80N18O12Y1]+ = 1429.5256).
TD901의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD899]+[TFA]-·0.2TFA·7.0H2O (1.6 ㎎; 1.4 μmol; 1.0 당량) 및 H2N-GVHFYA-H·1.0TFA·xH2O (1.6 ㎎; ~2.0 μmol; ~1.4 당량)를 DMSO (500 ㎕)에 용해한 다음 DIPEA (2.3 ㎕; 13 μmol; 9 당량) 및 PyOAP (신선하게 준비한 DMSO 중의 100 mM; 25 ㎕; 2.5 μmol; 1.7 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 40분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 2.0 ㎎ (≤85% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1637.5; 1 단계; 기준 [TD899]+[TFA]-·0.2TFA·7.0H2O). ESI-HRMS: 762.2885 [M+H]2+ (theor. [C69H83N18O12Tm1]2+ = 762.2887).
TD902의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD891]+[TFA]-·0.7TFA·4.6H2O (1.6 ㎎; 1.4 μmol; 1.0 당량) 및 H2N-GVHFYA-H·1.0TFA·xH2O (1.6 ㎎; ~2.0 μmol; ~1.4 당량)를 DMSO (500 ㎕)에 용해한 다음 DIPEA (2.3 ㎕; 13 μmol; 9.4 당량) 및 PyOAP (신선하게 준비한 DMSO 중의 100 mM; 25 ㎕; 2.5 μmol; 1.8 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 40분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 백색 솜털형 고형물로 수득하였다. 수율: 1.8 ㎎ (≤78% 추정 [M]+[TFA]-·xH2O; M R = 1643.5; 1 단계; 기준 [TD891]+[TFA]-·0.7TFA·4.6H2O). NMR (D2O, pD ~4, 할당은 대부분의 신호들의 2종의 구분가능한 부분입체이성질체 세트로 인해 복잡해짐): 1H δH 0.91 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 0.93 (VCH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.36 (ACH 3, d, 3H, 3 J HH = 7); 1.90-4.21 (VCH-(CH3)2, mc, CH 2-CO, HCH 2, FCH 2, YCH 2, GCH 2, CH 2-arom., VCH, ACH, m, 1+16+4+2+2+2+2+5+1+1H); 4.21-4.56 (HCH, FCH, YCH, m, 1+1+1H); 4.81-4.90 (CH 2-arom., m, 1H); 5.52-5.62 (CH 2-N3, m, 1H); 6.77-7.18 (Y arom., CH 2-N3, F arom., H arom., F arom., m, 4+1+2+1+3H); 7.34-8.10 (arom., CH-N3, 8+1H); 8.21-8.30 (arom., m, 1H); 8.52-8.58 (H arom., m, 1H). ESI-HRMS: 765.2919 [M+H]2+ (theor. [C69H83N18O12Lu1]2+ = 765.2917).
TD975의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O (7.1 ㎎; 6.1 μmol; 1.0 당량) 및 H2N -[lR(Pbf)dR(Pbf)]3-H·1.0TFA·xH2O (21 ㎎; ~8.1 μmol; ~1.3 당량)를 DMSO (1 ㎖)에 용해한 다음 NMM (20 ㎕; 182 μmol; 30 당량) 및 PyOAP (15.5 ㎎; 29.7 μmol; 5.0 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 20분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). Pbf 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발하였다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다 (TFA의 양은 CCl4 중의 1,3,5-트리스(트리플루오로메틸)벤젠 용액의 외부 모세관 용액 (external capillary solution)을 이용해 qNMR에 의해 결정). 수율: 13.0 ㎎ (~85% 추정 [M]+[TFA]-·5.4TFA·xH2O; M R = 2510; 2 단계; 기준 [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O). NMR (D2O, pD ~3): 1H δH 1.41-2.07 (RCH 2, m, 24H); 2.63-3.88 (mc, CH 2-CO, RCH 2, m, 16+4+12H); 4.05 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.18 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.21-4.57 (RCH, CH 2-arom., m, 5+1H); 4.53 (RCH, t, 1H, 3 J HH = 7); 4.87 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.69 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.19 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.82 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.88 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.91 (CH-N3, s, 1H); 8.03 (arom., dm, 2H, 3 J HH = 8); 8.06-8.12 (arom., m, 3H); 8.27 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.39 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). MALDI-HRMS: 1777.8487 [M]+ (theor. [C70H110N34O11Lu1]+ = 1777.8496).
TD989의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD897]+[TFA]-·1.1TFA·2.6H2O (15.0 ㎎; 13.4 μmol; 1.0 당량) 및 TD986·3.2TFA·5.3H2O (30.9 ㎎; 13.4 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (1.5 ㎖)에 용해한 다음 DMSO 중의 NMM (400 mM, 335 ㎕; 134 μmol; ~10 당량) 용액과 DMSO 중에 준비한 신선한 용액 PyOAP (110 mM; 210 ㎕; 23.1 μmol; 1.7 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 완전히 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켰다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 밤새 RT에서 교반해 Pbf 기를 제거하였다. 수득되는 청색 용액을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 일부 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조하였다. 잔사를 H2O (10 ㎖)에 다시 용해해 시린지로 격막을 통해, Pd/C (30 ㎎)가 이미 투입된 유리 플라스크 (25 ㎖)에 넣고, 아르곤으로 보호 처리하였다. 그 후, 수소 가스를 2일간 RT에서 현탁물에 투입해 버블링하였다. 이후 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 건조하였다. 잔사를 분취용 HPLC에 의해 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다 (TFA의 양은 유사한 TD975로부터 임의적으로 설정함). 수율: 14.6 ㎎ (~45% 추정 [M]+[TFA]-·5.4TFA·xH2O; M R = 2505; 3단계; 기준 [TD897]+[TFA]-·1.1TFA·2.6H2O). MALDI-HRMS: 1771.8412 [M]+ (theor. [C70H83N34O11Tm1]+ = 1771.8435).
TD1011의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O (15.0 ㎎; 12.8 μmol; 1.0 당량) 및 TD986·3.2TFA·5.3H2O (31 ㎎; 13.4 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (1.5 ㎖)에 용해한 다음 DMSO 중의 NMM 용액 (400 mM, 340 ㎕; 136 μmol; 11 당량)과 DMSO 중에 준비한 신선한 용액 PyOAP (110 mM; 210 ㎕; 23.1 μmol; 1.8 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). Pbf 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켰다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 20% MeCN (3 ㎖)에 현탁하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다 (TFA의 양은 CCl4 중의 1,3,5-트리스(트리플루오로메틸)벤젠의 외부 모세관 용액을 이용해 qNMR에 의해 결정). 수율: 18.4 ㎎ (~55% 추정 [M]+[TFA]-·4.5TFA·xH2O; M R = 2540; 2 단계; 기준 [TD748]+[TFA]-·1.4TFA·3.2H2O). NMR (D2O, pD ~5): 1H δH 1.39-2.07 (RCH 2, m, 24H); 2.63-3.85 (mc, CH 2-CO, RCH 2, m, 16+4+12H); 4.04 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 15); 4.16 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 4.21-4.66 (RCH, CH 2-arom., m, 6+1H); 4.86 (CH 2-arom., d, 1H, 2 J HH = 16); 5.69 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.18 (CH 2-N3, d, 1H, 2 J HH = 15); 7.81 (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.86j (arom., dd, 1H, 3 J HH = 8; 4 J HH = 1); 7.90 (CH-N3, s, 1H); 7.95-8.09 (arom., m, 5H); 8.25 (arom., t, 1H, 3 J HH = 8); 8.37 (arom., d, 1H, 4 J HH = 2). MALDI-HRMS: 1912.8054 [M]+ (theor. [C70H107N37O17Lu1]+ = 1912.8048).
TD1010의 합성: 유리 바이얼 (4 ㎖)에서, [TD897]+[TFA]-·1.1TFA·2.6H2O (10.0 ㎎; 8.9 μmol; 1.0 당량) 및 TD986·3.2TFA·5.3H2O (21 ㎎; 9.1 μmol; 1.0 당량)를 DMSO (1.0 ㎖)에 용해한 다음 DMSO 중의 NMM 용액 (400 mM, 230 ㎕; 92 μmol; 10 당량)과 DMSO 중에 준비한 신선한 용액 PyOAP (110 mM; 140 ㎕; 15.4 μmol; 1.7 당량)를 첨가하고, 형성된 노란색 용액을 30분간 RT에서 교반하였다. 이후 혼합물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). Pbf 보호된 생산물이 함유된 분획들을 합치고, 증발시켜 건조한 다음 MeOH와 2회 동시 증발시켰다. 잔사를 TFA (3 ㎖)에 용해하고, 수득된 맑은 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 건조한 다음 잔류물을 20% MeCN (3 ㎖)에 현탁하였다. 혼합물을 시린지 미세필터 (RC)를 통해 여과하고, 여과물을 분취용 HPLC에 의해 바로 정제하였다 (C18; H2O-MeCN 농도구배 + TFA 첨가제). 생산물이 함유된 분획들을 합치고 바로 동결건조해, 생산물을 트리플루오로아세테이트 염 형태의 백색 솜털형 고형물로 수득하였다 (TFA의 양은 유사한 TD1011로부터 임의적으로 설정). 수율: 11.6 ㎎ (~50% 추정 [M]+[TFA]-·4.5TFA·xH2O; M R = 2530; 2 단계; 기준 [TD897]+[TFA]-·1.1TFA·2.6H2O). MALDI-HRMS: 1906.7973 [M]+ (theor. [C70H107N37O17Tm1]+ = 1906.7982).
실시예 10: 차트
차트 1. Lig 및 LnIII 이온으로부터 1,5-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 분석용 HPLC에 의해 80℃에서 1시간 후 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물의 분액을 H2O로 희석하고, 볼텍싱한 다음 원심분리하여 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. LnIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 이용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소 순으로 분류한다.
Lig λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD425 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD556 275 1% 1% 1% 2% 3% 4% 5% 11% 16% 24% 37% 52% 64% 71%
TD576 280 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
TD582↓ 275 0% 0% 5% 6% 12% 14% 15% 18% 18% 16% 15% 14% 12% 5%
TD604 280 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 1% 2% 2% 1%
TD647 280 1% 1% 1% 1% 3% 4% 5% 9% 13% 21% 32% 48% 61% 64%
TD669 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD714* 270 0% 1% 2% 3% 5% 7% 9% 17% 23% 26% 34% 40% 40% 37%
TD722 280 0% 0% 0% 0% 1% 1% 2% 3% 5% 9% 17% 27% 38% 49%
TD728 / 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 1% 2% 2%
TD742 285 1% 1% 1% 1% 3% 4% 5% 9% 15% 22% 34% 48% 55% 66%
TD778‡ 285 24% 20% 13% 9% 4% 4% 4% 9% 13% 17% 25% 31% 30% 26%
TD779‡ 280 0% 0% 0% 0% 1% 2% 3% 6% 8% 10% 12% 9% 9% 5%
TD801↑ 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD827/ 275 1% 2% 2% 3% 7% 9% 11% 21% 30% 43% 56% 68% 75% 77%
TD921↓ 275 0% 0% 5% 4% 1% 1% 0% 1% 1% 1% 1% 1% 1% 1%
TD943 280 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 1% 1% 2% 2% 3% 3% 5%
TD944 270 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 2% 2%
TD959 275 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 1% 1% 2% 3% 4% 5% 6%
TD992 275 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 1% 1% 2% 2% 4% 5% 6%
TD1054 280 0% 0% 0% 1% 2% 3% 3% 6% 10% 16% 26% 39% 53% 63%
TD1063 278 0% 1% 1% 2% 3% 4% 5% 10% 15% 22% 33% 45% 53% 54%
TD109 √ 280 0%
0% 		0%
0% 		0%
0% 		1%
0% 		1%
2% 		2%
2% 		2%
3% 		3%
6% 		5%
8% 		7%
13% 		12%
19% 		19%
26% 		24%
30% 		26%
30%
TD1105√ 275 0%
0% 		0%
0% 		0%
0% 		1%
0% 		1%
0% 		1%
0% 		1%
0% 		2%
0% 		2%
0% 		3%
1% 		4%
2% 		5%
3% 		7%
5% 		8%
9%
TD1127 278 0% 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 2% 3% 4% 7% 10% 13%
TD1148√ 280 0%
0% 		0%
0% 		0%
0% 		1%
0% 		3%
0% 		4%
0% 		5%
1% 		9%
1% 		14%
2% 		21%
3% 		33%
4% 		45%
5% 		54%
5% 		57%
6%
TD1160√ 280 - - - - 0%
3% 		- - 0%
9% 		- - - - - 3%
61%
TD1176 285 0% 0% 1% 2% 5% 6% 7% 14% 20% 31% 46% 63% 75% 85%
TD1204 278 0% 0% 0% 0% 1% 1% 1% 2% 2% 4% 6% 11% 15% 18%
? 출발 리간드의 소모가 관찰되었음에도 착물 (Ln(TD576) 또는 1,5-cz-[Ln(TD576)])은 검출되지 않음 (가장 느린: La, 가장 빠른: Lu). 반응 혼합물에는 가시적인 석출물이 함유되어 있지 않았다. 반응 혼합물 및/또는 HPLC 분액에 유기 공-용매 (MeOH 또는 MeCN)의 첨가는 유의한 효과가 없었다. 이러한 거동은 소수성이 더 낮은 유사체 TD581의 경우에서도 관찰되었다.
↓ 전체 신호 강도에 무시할 수 없는 변화가 시리즈 전체에서 관찰되었으므로, 수득한 데이터는 전체 혼합물내 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 풍부도를 정확하게 반영하는 것은 아닐 수 있다.
↑ 프로피오네이트 펜던트 아암이 반응 코스 중에 탈착되어, 1,4-cz-TD801 및 1,5-TD801 및 프로피오네이트 아암 한쪽 또는 양쪽이 제거된 대응하는 유도체의 혼합물이 생성된다.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
‡ 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 펜던트 아암은 (각각 -1 전하를 가진) 양성자 제거된 이미놀 형태로 배위된다. 그 결과, 이들 종은 아세테이트 아암으로 가수분해를 겪는다 (즉, 인 시추로 1,5-cz-[Ln(TD647)] 형성).
√ 이탤릭체 값: 측쇄에 가수분해된 기를 가진 1,5-cz-[Ln(Lig)] (TD1092 경우 Me 에스테르, TD1148 경우 i-Pr 에스테르, TD1160 경우 t-Bu 에스테르 및 TD1105 경우 Boc).
- 수행하지 않음.
차트 2. Lig 및 LnIII 이온으로부터 1,5-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1주일 후 분석용 HPLC에 의해 결정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. LnIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
Lig λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD425 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD556 275 50% 25% 64% 81% 92% 92% 91% 95% 94% 95% 95% 95% 95% 95%
TD582↓ 275 0% 0% 17% 60% 86% 87% 86% 82% 85% 79% 74% 68% 59% 26%
TD604 280 15% 17% 16% 16% 27% 51% 50% 69% 67% 69% 66% 71% 72% 74%
TD647 280 49% 50% 69% 79% 86% 89% 92% 91% 92% 95% 95% 96% 96% 96%
TD669 275 n. d. n. d. n. d. n. d. 33% 25% 24% err. 20% 14% 12% 11% 10% 7%
TD714* 270 4% 40% 80% 73% 82% 85% 85% 92% 91% 93% 93% 94% 93% 93%
TD722 280 2% 1% 3% 4% 9% 14% 19% 54% 65% 82% 91% 96% 96% 96%
TD728/ 275 13% 5% 23% 24% 34% 35% 32% 49% 54% 60% 72% 84% 88% 88%
TD742 285 40% 43% 66% 76% 87% 89% 91% 93% 93% 94% 94% 94% 93% 94%
TD764 278 25% 20% 35% 50% 73% 79% 86% 91% 93% 94% 95% 96% 96% 96%
TD778‡ 285 0% 0% 0% 0% 1% 3% 11% 15% 18% 30% 32% 31% 27% 34%
TD779‡ 280 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD801↑ 275 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD827/ 275 46% 22% 79% 84% 91% 92% 93% 95% 96% 96% 96% 97% 97% 97%
TD921↓ 275 0% 0% 55% 43% 42% 31% 28% 41% 37% 31% 26% 18% 15% 10%
TD943 280 5% 4% 10% 16% 29% 36% 40% 56% 65% 77% 88% 94% 97% 97%
TD944 270 4% 3% 6% 8% 16% 19% 23% 37% 51% 68% 84% 93% 95% 94%
TD959 275 18% 11% 27% 34% 48% 51% 54% 68% 76% 84% 93% 97% 98% 99%
TD992 275 22% 20% 33% 40% 55% 59% 61% 73% 81% 89% 95% 98% 99% 99%
TD1054 280 4% 4% 10% 11% 22% 28% 33% 55% 70% 79% 88% 94% 97% 98%
TD1063 278 5% 1% 35% 52% 57% 73% 74% 83% 86% 90% 93% 93% 95% 95%
TD1092 √ 280 0%
40% 		0%
37% 		0%
62% 		0%
73% 		0%
88% 		0%
91% 		0%
92% 		0%
93% 		0%
94% 		0%
94% 		0%
94% 		0%
95% 		0%
96% 		0%
97%
TD1105 √ 275 0%
11% 		0%
8% 		0%
21% 		0%
23% 		1%
44% 		1%
49% 		2%
57% 		1%
74% 		0%
82% 		1%
87% 		1%
92% 		1%
94% 		1%
97% 		1%
98%
TD1127 278 18% 7% 15% 25% 46% 53% 56% 72% 80% 86% 91% 93% 95% 97%
TD1148 √ 280 0%
36% 		0%
27% 		0%
61% 		0%
71% 		0%
86% 		0%
90% 		0%
90% 		0%
91% 		0%
93% 		0%
94% 		0%
94% 		0%
95% 		0%
95% 		0%
96%
TD1160 √ 280 - - - - 0%
85% 		- - 0%
89% 		- - - - - 0%
91%
TD1176 285 73% 60% 82% 85% 92% 93% 91% 94% 96% 96% 96% 96% 97% 96%
TD1204 278 0% 0% 0% 1% 4% 5% 5% 10% 17% 23% 39% 62% 76% 83%
범례: ↓ 전체 신호 강도에 무시할 수 없는 변화가 시리즈 전체에서 관찰되었으므로, 수득한 데이터는 전체 혼합물내 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 풍부도를 정확하게 반영하는 것은 아닐 수 있다.
↑ 프로피오네이트 펜던트 아암이 반응 코스 중에 탈착되어, 1,4-cz-TD801 및 1,5-TD801 및 프로피오네이트 아암 한쪽 또는 양쪽이 제거된 대응하는 유도체의 혼합물이 생성된다.
n. d. HPLC 분석 중에 탈착물화 및/또는 신호 중첩으로 인해 정확하게 측정할 수 없을 수 있음.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
‡ 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 펜던트 아암은 (각각 -1 전하를 가진) 양성자 제거된 이미놀 형태에서 배위된다. 그 결과, 이들 종은 아세테이트 아암으로 가수분해를 겪는다 (즉, 인 시추로 1,5-cz-[Ln(TD647)] 형성).
err. 기밀하게 밀봉되지 않은 바이얼 캡으로 인해 전체 반응 용매의 우발적으로 증발.
√ 이탤릭체 값: 측쇄에 가수분해된 기를 가진 1,5-cz-[Ln(Lig)] (TD1092 경우 Me 에스테르, TD1148 경우 i-Pr 에스테르, TD1160 경우 t-Bu 에스테르 및 TD1105 경우 Boc).
- 비-수행.
차트 3. Lig 및 LnIII 이온으로부터 1,5-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 분석용 HPLC에 의해 80℃에서 1시간 (A) 및 80℃에서 18시간 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. LnIII (2.0 당량); 50 mM aq. MES/NaOH 완충제 pH 5.2 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
A λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD750 270 - - - - - - 3% - - - - - - 19%
B λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD750 270 - - - - - - 9% - - - - - - 71%
범례: - 비-수행.
차트 4. Lig 및 MIII 이온으로부터 1,5-cz-[M(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1시간 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
Lig λ, ㎚ †BiIII YIII InIII ScIII RuIII IrIII GaIII
TD425 275 - 0% - 0% - - -
TD556 275 - 22% - 2% - - -
TD582 275 - 11% - 0% - - -
TD604 280 - 1% - 1% - - -
TD639 275 - 0% - 0% - - -
TD647 280 29% 20% 0% 7% - - 0%
TD669 275 - 0% - 0% - - -
TD714 * 270 - 22% - prec. - - -
TD722 280 - 9% - 3% - - -
TD728 / 275 5% 1% - 0% 0% 0% -
TD742 285 - 22% - 7% - - -
TD764 278 31% - - - - - -
TD778 ‡ 285 - 17% - 0% - - -
TD779 ‡ 280 - 4% - 0% - - -
TD801 275 - 0% - 0% - - -
TD827 / 275 - 42% - 2% - - -
TD921 275 - 0% - 0% - - -
TD943 280 - 1% - 0% - - -
TD944 270 - 1% - 0% - - -
TD959 275 - 1% - 0% - - -
TD992 275 - 2% - 0% - - -
TD1054 280 - 16% - 4% - - -
TD1063 278 - 20% - 1% - - -
TD1063 278 - 20% - 1% - - -
TD1092 √ 280 - 6%
12% 		- 1%
0% 		- - -
TD1105 √ 275 - 2%
1% 		- 0%
0% 		- - -
TD1127 278 - 2% - 0% - - -
TD1148 √ 280 - 18%
3% 		- 0%
0% 		- - -
TD1160 √ 280 - 1%
17% 		- - - - -
TD1176 285 - 30% - 6% - - -
TD1204 278 - 3% - 0% - -
범례: prec. 석출물 형성으로 인해 타당하게 측정하지 못함.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
† aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 4% DMSO 혼합물에서 수행.
‡ 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 펜던트 아암은 (각각 -1 전하를 가진) 양성자 제거된 이미놀 형태로 배위된다. 그 결과, 이들 기는 아세테이트 아암으로 가수분해를 겪는다 (즉, 인 시추로 1,5-cz-[Ln(TD647)]).
√ 이탤릭체 값: 측쇄에 가수분해된 기를 가진 1,5-cz-[Ln(Lig)] (TD1092의 경우 Me 에스테르, TD1148의 경우 i-Pr 에스테르, TD1160의 경우 t-Bu 에스테르 및 TD1105의 경우 Boc).
- 비-수행.
차트 5. Lig 및 MIII로부터 1,5-cz-[M(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 1주일 후 80℃에서 분석용 HPLC에 의해 결정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
Lig λ, ㎚ †BiIII YIII InIII ScIII RuIII IrIII GaIII
TD425 275 - 0% - 0% - - -
TD556 275 - 95% - 23% - - -
TD582 275 - 68% - 0% - - -
TD604 280 - 58% - 10% - - -
TD639 275 - 0% - 0% - - -
TD647 280 73% 93% 8% 35% - - 0%
TD669 275 - 12% - 0% - - -
TD714 * 270 - 89% - prec. - - -
TD722 280 - 71% - 14% - - -
TD728 / 275 29% 50% - 2% 0% 0% -
TD742 285 - 94% - 52% - - -
TD764 278 85% 95% - 5% - - -
TD778 ‡ 285 - 27% - 0% - - -
TD779 ‡ 280 - 0% - 0% - - -
TD801 275 - 0% - 0% - - -
TD827 / 275 - 96% - 55% - - -
TD921 275 - 14% - 0% - - -
TD943 280 - 74% - 5% - - -
TD944 270 - 63% - 4% - - -
TD959 275 - 82% - 1% - - -
TD992 275 - 87% - 2% - - -
TD1054 280 - 80% - 61% - - -
TD1063 278 - 91% - 8% - - -
TD1092 √ 280 - 0%
95% 		- 0%
17% 		- - -
TD1105 √ 275 - 0%
87% 		- 0%
60 		- - -
TD1127 278 - 83% - 29% - - -
TD1148 √ 280 - 0%
94% 		- 0%
11% 		- - -
TD1160 √ 280 - 0%
90% 		- - - - -
TD1176 285 - 95% - 31% - - -
TD1204 278 - 22% - 16% - - -
범례: prec. 석출물 형성으로 인해 타당하게 측정하지 못함.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
† aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 4% DMSO 혼합물에서 수행.
‡ 1,5-cz-[Ln(Lig)]의 펜던트 아암은 (각각 -1 전하를 가진) 양성자 제거된 이미놀 형태로 배위된다. 그 결과, 이들 기는 아세테이트 아암으로 가수분해를 겪는다 (즉, 인 시추로 1,5-cz-[Ln(TD647)] 형성).
√ 이탤릭체 값: 측쇄에 가수분해된 기를 가진 1,5-cz-[Ln(Lig)] (TD1092의 경우 Me 에스테르, TD1148의 경우 i-Pr 에스테르, TD1160의 경우 t-Bu 에스테르 및 TD1105의 경우 Boc).
- 비-수행.
차트 6. Lig 및 MII 이온으로부터 1,5-cz-[M(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1시간 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
Lig λ, ㎚ BaII PbII SrII CaII CdII PdII MnII PtII ZnII CuII NiII
TD639 275 0% - 0% 0% - - - - - - -
TD647 280 0% 2% 0% 16% 64% - - - 0% prec. 0%
TD714 * 270 0% - 0% 0% 89% - - - - - -
TD728 / 275 - 0% - 0% 1% 1% 0% 0% - - -
TD764 278 - 1% - 16% 53% 10% 1% - - - -
TD921 275 0% - 0% 0% 92% - - - - - -
TD959 275 - - - 1% 2% - - - - - -
범례: prec. 석출물 형성으로 인해 타당하게 측정하지 못함.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
- 비-수행.
차트 7. Lig 및 MII 이온으로부터 1,5-cz-[M(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 1주일 후 80℃에서 분석용 HPLC에 의해 결정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
Lig λ, nm BaII PbII SrII CaII CdII PdII MnII PtII ZnII CuII NiII
TD639 275 0% - 0% 0% - - - - - - -
TD647 280 0% 54% 0% 87% 86% - - - 0% prec. 0%
TD714 * 270 0% - 0% 6% 92% - - - - - -
TD728 / 275 - 14% - 37% 36% 1% 1% 0% - - -
TD764 278 - 37% - 95% 96% 9% 35% - - - -
TD921 275 0% - 0% 0% 96% - - - - - -
TD959 275 - - - 83% 96% - - - - - -
범례: prec. 석출물 형성으로 인해 타당하게 측정하지 못함.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
/ aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 50% i-PrOH 혼합물에서 수행.
- 비-수행.
차트 8. 1,5-cz-Lig로부터 1,5-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 직접 착화물 형성): 변환은 80℃에서 1시간 후 (A) 및 80℃에서 1주일 후 (B) 및 80℃에서 ~6개월 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. 1,5-cz-Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. LnIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
A λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD650 280 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
B λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD650 280 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
C λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD650 280 - - - - - - 0% - - - - - - 0%
범례: - 비-수행.
차트 9. 1,5-cz-Lig로부터 1,5-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 직접 착화물 형성): 변환은 RT에서 1분 (A), RT에서 1시간 (B), 80℃에서 1시간 (C) 및 80℃에서 1주일 (D) 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. 1,5-cz-Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MII 또는 MIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
A λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD650 280 - 98% - - - - - - - - 43% - -
B λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD650 280 - 99% - 2% 0% 58% - - - 59% 47% 0% -
C λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD650 280 - 98% - 96% 23% 98% - - - 91% 49% 9% -
D λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD650 280 0% 98% 0% 90% 96% 99% 0% 0% 0% 99% 78% 11% 0%
범례: † aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 ~4% DMSO 혼합물에서 수행.
- 비-수행.
차트 10. 1,4-cz-Lig로부터 1,4-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 직접 착화물 형성): 변환은 80℃에서 1주일 후 (A) 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. 1,4-cz-Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. LnIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
A λ, ㎚ LaIII CeIII PrIII NdIII SmIII EuIII GdIII TbIII DyIII HoIII ErIII TmIII YbIII LuIII
TD622 275 0% 0% 3% 6% 34% 45% 46% 61% 66% 68% 70% 71% 51% 53%
차트 11.1,4-cz-Lig로부터 1,4-cz-[Ln(Lig)] 형성 (금속 의존적인 직접 착화물 형성): 변환은 80℃에서 1시간 (A) 및 80℃에서 1주일 (B) 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. 1,4-cz-Lig (1.0 당량); 1.0 mM aq. MII 또는 MIII (2.0 당량); 50 mM aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행. 금속 이온은 이온 반경 감소에 따라 분류한다.
A λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD622 275 - 98% - 98% 20% 98% - - - 88% 42% 41% -
B λ, ㎚ BaII PbII SrII †BiIII CaII CdII YIII InIII ScIII ZnII CuII NiII GaII
TD622 275 0% 99% 0% 91% 21% 99% 51% 13% 0% 99% 48% 44% 8%
범례: † aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 중의 ~4% DMSO 혼합물에서 수행.
- 비-수행.
차트 12. 다양한 절대 농도를 이용하여 Lig로부터 1,5-cz-[Lu(Lig)] 형성 (금속 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1시간 (A), 80℃에서 1일 (B) 및 80℃에서 1주일 (C) 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 280 ㎚에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O로 희석하여 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 시약들을 일정 비율로 이용해 수행 (Lig : LuIII : aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0 = 1.0 : 1.5 : 50). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
Lig, mm 5.0 x 101 5.0 x 100 5.0 x 10-1 5.0 x 10-2 5.0 x 10-3
LuIII, mm 7.5 x 101 7.5 x 100 7.5 x 10-1 7.5 x 10-2 7.5 x 10-3
aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0, mM 2.5 x 103 2.5 x 102 2.5 x 101 2.5 x 100 2.5 x 10-1
TD647 (A) 71% 74% 70% 60% 15%
TD647 (B) 84% 96% 97% 96% 59%
TD647 (C) 86% 96% 97% 96% 57%
차트 13. Lig로부터 1,5- 및 1,4-cz-Lig 이성질체의 pH 의존적인 형성 (pH 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1시간 후 (A) 및 80℃에서 1일 후 (B) 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O에 희석하여 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 1.0 M HClO4 (pH ~0)/0.1 M HClO4 (pH ~1)/50 mM aq. 완충제 (100 당량). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
A λ, ㎚ 시스템 aq. HClO4 aq. 사이트레이트/NaOH 완충제 aq. 보레이트/NaOH 완충제
pH ~0 ~1 2.2 3.0 3.8 4.6 5.4 6.2 7.0 8.6 9.4 10.2
TD425 275 1,5 13% 13% 13% 10% 3% 1% 1% 0% 0% 0% 1% 1%
1,4 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
TD647 280 1,5 9% 44% 17% 6% 1% 1% 1% 1% 1% 2% 8% 17%
1,4 2% 3% 2% 1% 1% 1% 1% 1% 2% 3% 3% 2%
B λ, ㎚ 시스템 aq. HClO4 aq. 사이트레이트/NaOH 완충제 aq. 보레이트/NaOH 완충제
pH ~0 ~1 2.2 3.0 3.8 4.6 5.4 6.2 7.0 8.6 9.4 10.2
TD425 275 1,5 88% 90% 93% 89% 57% 15% 6% 6% 8% 10% 11% 12%
1,4 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 1% 4% 5% 4% 2%
TD647 280 1,5 72% 91% 88% 69% 22% 13% 12% 11% 19% 26% 60% 80%
1,4 8% 5% 6% 6% 6% 5% 6% 12% 23% 32% 17% 5%
차트 14. pH 10.2에서 Lig로부터 알칼리 금속 의존적인 1,5-cz-Lig 및 1,4-cz-Lig 이성질체의 형성 (알칼리 금속 의존적인 클릭-집): 변환은 80℃에서 1시간 (A) 및 80℃에서 1일 (B) 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; λ에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O에 희석하여 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 초기 성분 농도: 0.5 mM aq. Lig (1.0 당량); 50 mM aq. 보레이트/(MI)2CO3 완충제 (MI = LiI - CsI; 100 당량). 플라스틱 엔펜도르프 검사관에서 자기 교반기를 이용해 수행.
A λ, ㎚ 시스템 aq. 보레이트/(MI)2CO3 완충제 (pH 10.2)
MI LiI NaI KI RbI CsI
TD425 275 1,5 0% 1% 0% 1% 1%
1,4 0% 0% 1% 1% 1%
TD647 280 1,5 0% 15% 1% 0% 0%
1,4 0% 1% 2% 2% 2%
TD921 275 1,5 12% 30% 2% 2% 2%
1,4 1% 2% 2% 2% 2%
B λ, ㎚ 시스템 aq. 보레이트/(MI)2CO3 완충제 (pH 10.2)
MI ΨLiI NaI KI RbI CsI
TD425 275 1,5 2% 9% 10% 10% 11%
1,4 0% 1% 10% 10% 10%
TD647 280 1,5 9% 85% 10% 6% 7%
1,4 2% 1% 40% 41% 39%
TD582 275 1,5 53% 69% 11% 10% 10%
1,4 3% 2% 25% 25% 26%
TD581 280 1,5 10% 25% 7% 7% 6%
1,4 19% 26% 32% 32% 31%
TD703 270 1,5 24% 75% 14% 14% 13%
1,4 14% 10% 20% 20% 20%
TD714 270 1,5 15% 81% 10% 9% 9%
1,4 12% 7% 46% 45% 44%
TD921 275 1,5 86% 89% 23% 21% 21%
1,4 6% 4% 31% 31% 31%
범례: Ψ 반응 혼합물에는 (모든 형태) 분석물이 없는 것으로 관찰된 가시적인 석출물이 존재하였다.
차트 15. 이완 측정기 (relaxometer)(미니스펙 mq20 ㎚R 분석기; 0.5T; Bruker)에서 40.0℃에서 표준 반전 회복 펄스 시퀀스에 따른 GdIII 킬레이트 TD451 및 TD527의 자기이완율 (킬레이트 농도: 1.0 mM / aq. MOPS/NaOH 완충제, pH 7.0).
종 공식 자기이완율, mM-1s-1
TD451 [Gd(TD647)]) 2.39
TD527 1,5-cz-[Gd(TD647)]) 1.48
차트 17. 80℃ aq. 6.0 M HCl에서 킬레이트 해리 (산 탈착물화 동역학 비활성): 온전한 킬레이트의 분율 (fraction)을 1시간, 1일, 1주일 및 1개월 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 280 ㎚에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 분액을 재 착물화를 방지하기 위해 적절하게 희석하고 볼텍싱 및 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
킬레이트 공식 λ, ㎚ 1시간 1일 1주 1개월 t ½, 시간 f
TD875 A 1,4-cz-[GdIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD874 A 1,4-cz-[LuIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD900 A 1,4-cz-[CdII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD651 B 1,5-cz-[LaIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD870 B 1,5-cz-[CeIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD869 B 1,5-cz-[PrIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD868 B 1,5-cz-[NdIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD867 B 1,5-cz-[SmIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD599 B 1,5-cz-[EuIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD527 B 1,5-cz-[GdIII(TD647)] 278 2% 0% 0% 0% 1.7E -1
TD600 B 1,5-cz-[TbIII(TD647)] 278 72% 0% 0% 0% 2.7E 0
TD866 B 1,5-cz-[DyIII(TD647)] 278 95% 25% 0% 0% 1.2E 1 ± 1.3E-1
TD648 B 1,5-cz-[HoIII(TD647)] 278 99% 81% 17% 0% 6.8E 1 ± 2.7E0
TD865 B 1,5-cz-[ErIII(TD647)] 278 99% 95% 71% 24% 3.4E 2 ± 2.5E0
TD601 B 1,5-cz-[TmIII(TD647)] 278 100% 99% 92% 69% 1.4E 3 ± 1.2E1
TD602 B 1,5-cz-[YbIII(TD647)] 278 100% 100% 98% 90% 4.7E 3 ± 2.1E1
TD522 B 1,5-cz-[LuIII(TD647)] ∞ 278 100% 100% 99% 98% 3.3E 4 ± 1.4E3
TD649 B 1,5-cz-[YIII(TD647)] 278 98% 69% 7% 0% 4.5E 1 ± 3.1E-1
TD876 A 1,5-cz-[PbII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD863 A 1,5-cz-[CaII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD880 A 1,5-cz-[CdII(TD647)] 278 43% 0% 0% 0% 1.2E 0
TD890 A 1,5-cz-[ZnII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD624-La A,* √ [LaIII(p-NO2BnDOTA)] 285 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD624-Gd A,* √ [GdIII(p-NO2BnDOTA)] 285 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD624-Lu A,* √ [LuIII(p-NO2BnDOTA)] 285 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD925 B 1,5-cz-[GdIII(TD921)] 275 77% 0% 0% 0% 2.6E 0
TD748 B 1,5-cz-[LuIII(TD742)] ∞ 285 100% 100% 100% 97% 1.5E 4 ± 2.9E2
TD735 B 1,5-cz-[LuIII(TD722)] ∞ 280 100% 100% 99% 98% 2.3E 4 ± 8.3E2
TD739 B,* -- 275 100% 90% 43% 15% 1.5E 2 ± 2.6E1
TD734 B,* 1,5-cz-[LuIII(TD714)] ∞ 280 100% 100% 98% 95% 1.6E 4 ± 1.5E3
TD737 B 1,5-cz-[LuIII(TD728)] 280 100%
(87%/13%)√ 		100%
(3%/97%)√ 		99%
(0%/99%)√ 		98%
(0%/98%) √ 		―
범례: A 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 500 mM FA/NaOH 완충제 (pH 3.6; 200 ㎕)로 중화.
B 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 500 mM MOPS/NaOH 완충제 (pH 7.0; 200 ㎕)로 중화.
f 해리 데이터는 지수함수형 붕괴에 의해 피팅하였다 (등식 y = exp(-x/t); y = 온전한 킬레이트의 분율; x = 시간; t = 붕괴 상수). 킬레이트 안정성은 붕괴 상수로부터 유추 (t ½ = ln(2) x t)한 반감기 t ½로 표시함 (시간; 진하게 강조 표시). 피팅 에러는 싱글 데이터 포인트 피팅에 대해서는 표시되지 않는다.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
↓ 원액 제조: 에펜도르프 관 (0.5 ㎖)에서, 2,2',2'',2'''-(2-(4-니트로벤질)-1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라일)테트라아세트산 테트라하이드로클로라이드 (10.0 mM/H2O; 100 ㎕; 1 μmol; 1.0 당량)를 대응하는 aq. LnCl3 (100 mM; 23.5 ㎕; 1.1 μmol; 1.1 당량), H2O (59 ㎕) 및 aq. NaOH (400 mM; 17.5 ㎕; 7.0 μmol; 7.0 당량)와 혼합하였다. 제조된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반한 다음 (LC-MS에 의해 완전 변환 검증) 원심분리하였다. 그 후, 상층액을 해리 분석용 원액으로 바로 이용하였다.
-- 클릭-집 착물로만 단리됨 (모 리간드는 존재하지 않음).
∞ 추가적인 데이터 포인트를 6개월 동안 수집하였다 (피팅에 포함).
√ 괄호 안 값: 온전한 TIPS 기를 가진 킬레이트/가수분해된 TIPS 기를 가진 킬레이트.
― 반감기는 TIPS 기의 동시 가수분해로 인해 엄격하게 결정할 수 없음.
차트 18. aq. 1.0 M HCl 80℃에서 킬레이트의 해리 (산 탈착물화 동역학 비활성): 온전한 킬레이트의 분율을 1시간, 1일, 1주일 및 1개월 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 280 ㎚에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액을 aq. MOPS/NaOH 완충제 pH 7.0로 중화하고, 볼텍싱 및 원심분리한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
킬레이트 공식 λ, ㎚ 1시간 1일 1주일 1개월 t ½, 시간 f
TD875 A 1,4-cz-[GdIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD874 A 1,4-cz-[LuIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD900 A 1,4-cz-[CdII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD651 B 1,5-cz-[LaIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD870 B 1,5-cz-[CeIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD869 B 1,5-cz-[PrIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD868 B 1,5-cz-[NdIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD867 B 1,5-cz-[SmIII(TD647)] 278 62% 0% 0% 0% 1.5E 0
TD599 B 1,5-cz-[EuIII(TD647)] 278 92% 10% 0% 0% 7.3E 0 ± 2.6E-1
TD527 B 1,5-cz-[GdIII(TD647)] 278 98% 58% 1% 0% 3.0E 1 ± 4.9E-1
TD600 B 1,5-cz-[TbIII(TD647)] 278 99% 96% 78% 23% 3.7E 2 ± 3.2E1
TD866 B 1,5-cz-[DyIII(TD647)] 278 100% 99% 96% 87% 3.6E 3 ± 5.0E1
TD648 B 1,5-cz-[HoIII(TD647)] 278 100% 100% 99% 96% 1.3E 4 ± 2.6E2
TD865 B 1,5-cz-[ErIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 99% 5.9E 4 ± 1.1E3
TD601 B 1,5-cz-[TmIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD602 B 1,5-cz-[YbIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD522 B 1,5-cz-[LuIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD649 B 1,5-cz-[YIII(TD647)] 278 100% 100% 98% 92% 5.9E 3 ± 1.4E2
TD876 A 1,5-cz-[PbII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD863 A 1,5-cz-[CaII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD880 A 1,5-cz-[CdII(TD647)] 278 100% 99% 90% 63% 1.1E 3 ± 7.7E0
TD890 A 1,5-cz-[ZnII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD624-La A,* [LaIII(p-NO2BnDOTA)] 285 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD624-Gd A,* [GdIII(p-NO2BnDOTA)] 285 15% 0% 0% 0% 3.7E -1
TD624-Lu A,* [LuIII(p-NO2BnDOTA)] 285 12% 0% 0% 0% 3.3E -1
TD925 B 1,5-cz-[GdIII(TD921)] 275 100% 82% 21% 0% 7.7E 1 ± 2.3E0
범례: A 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 125 mM FA/NaOH 완충제 (pH 3.6; 200 ㎕)로 중화.
B 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 500 mM MOPS/NaOH 완충제 (pH 7.0; 200 ㎕)로 중화.
f 해리 데이터는 지수함수형 붕괴에 의해 피팅하였다 (등식 y = exp(-x/t); y = 온전한 킬레이트의 분율; x = 시간; t = 붕괴 상수). 킬레이트 안정성은 붕괴 상수로부터 유추 (t½ = ln(2) x t)한 반감기 t½로 표시함 (시간; 진하게 강조 표시). 피팅 에러는 싱글 데이터 포인트 피팅에 대해서는 표시되지 않는다.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
↓ 원액 제조: 에펜도르프 관 (0.5 ㎖)에서, 2,2',2'',2'''-(2-(4-니트로벤질)-1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라일)테트라아세트산 테트라하이드로클로라이드 (10.0 mM/H2O; 100 ㎕; 1 μmol; 1.0 당량)을 대응하는 aq. LnCl3 (100 mM; 23.5 ㎕; 1.1 μmol; 1.1 당량), H2O (59 ㎕) 및 aq. NaOH (400 mM; 17.5 ㎕; 7.0 μmol; 7.0 당량)와 혼합하였다. 제조된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반한 다음 (LC-MS에 의해 완전 변환 검증) 원심분리하였다. 그 후, 상층액을 해리 분석용 원액으로 바로 이용하였다.
차트 19. aq. 1.0 M HCl 80℃에서 킬레이트의 해리 (산 탈착물화 동역학 비활성): 온전한 킬레이트의 분율을 1시간, 1일, 1주일 및 1개월 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 280 ㎚에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O에 희석하여 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
킬레이트 공식 λ, ㎚ 1시간 1일 1주일 1개월 t ½, 시간 f
TD875 A 1,4-cz-[GdIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD874 A 1,4-cz-[LuIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD900 A 1,4-cz-[CdII(TD647)] 278 56% 0% 0% 0% 1.2E 0
TD651 B 1,5-cz-[LaIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD870 B 1,5-cz-[CeIII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD869 B 1,5-cz-[PrIII(TD647)] 278 23% 0% 0% 0% 4.7E -1
TD868 B 1,5-cz-[NdIII(TD647)] 278 76% 0% 0% 0% 1.2E 0
TD867 B 1,5-cz-[SmIII(TD647)] 278 99% 86% 35% 1% 1.1E 2 ± 7.5E-1
TD599 B 1,5-cz-[EuIII(TD647)] 278 100% 97% 83% 21% 3.8E 2 ± 5.8E1
TD527 B 1,5-cz-[GdIII(TD647)] 278 100% 99% 95% 82% 2.5E 3 ± 3.7E1
TD600 B 1,5-cz-[TbIII(TD647)] 278 100% 100% 99% 99% 3.2E 4 ± 3.3E3
TD866 B 1,5-cz-[DyIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 9.5E 4 ± 3.0E3
TD648 B 1,5-cz-[HoIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD865 B 1,5-cz-[ErIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD601 B 1,5-cz-[TmIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD602 B 1,5-cz-[YbIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD522 B 1,5-cz-[LuIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD649 B 1,5-cz-[YIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD876 A 1,5-cz-[PbII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD863 A 1,5-cz-[CaII(TD647)] 278 0% 0% 0% 0% 상당히 불안정
TD880 A 1,5-cz-[CdII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD890 A 1,5-cz-[ZnII(TD647)] 278 46% 0% 0% 0% 4.7E -1
TD624-La A,* [LaIII(p-NO2BnDOTA)] 285 9% 0% 0% 0% 2.9E -1
TD624-Gd A,* [GdIII(p-NO2BnDOTA)] 285 88% 2% 0% 0% 4.9E 0 ± 2.9E-1
TD624-Lu A,* [LuIII(p-NO2BnDOTA)] 285 76% 2% 0% 0% 2.5E 0 ± 9.6E-2
TD925 B 1,5-cz-[GdIII(TD921)] 275 100% 98% 90% 60% 9.9E 2 ± 2.2E1
범례: A 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 H2O (200 ㎕)로 희석하였다.
B 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 500 mM MOPS/NaOH 완충제 (pH 7.0; 200 ㎕)로 희석하였다.
f 해리 데이터는 지수함수형 붕괴에 의해 피팅하였다 (등식 y = exp(-x/t); y = 온전한 킬레이트의 분율; x = 시간; t = 붕괴 상수). 킬레이트 안정성은 붕괴 상수로부터 유추 (t½ = ln(2) x t)한 반감기 t½로 표시함 (시간; 진하게 강조 표시). 피팅 에러는 싱글 데이터 포인트 피팅에 대해서는 표시되지 않는다.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
↓ 원액 제조: 에펜도르프 관 (0.5 ㎖)에서, 2,2',2'',2'''-(2-(4-니트로벤질)-1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라일)테트라아세트산 테트라하이드로클로라이드 (10.0 mM/H2O; 100 ㎕; 1 μmol; 1.0 당량)를 대응하는 aq. LnCl3 (100 mM; 23.5 ㎕; 1.1 μmol; 1.1 당량), H2O (59 ㎕) 및 aq. NaOH (400 mM; 17.5 ㎕; 7.0 μmol; 7.0 당량)와 혼합하였다. 제조된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반한 다음 (LC-MS에 의해 완전 변환 검증) 원심분리하였다. 그 후, 상층액을 해리 분석용 원액으로 바로 이용하였다.
차트 20. aq. 1.0 M HCl RT에서 킬레이트의 해리 (산 탈착물화 동역학 비활성): 온전한 킬레이트의 분율을 1시간, 1일, 1주일 및 1개월 후 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 280 ㎚에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액은 H2O에 희석하여 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
킬레이트 공식 λ, ㎚ 1시간 1일 1주 1개월 t ½, 시간 f
TD875 A 1,4-cz-[GdIII(TD647)] 278 98% 58% 6% 0% 3.2E 1 ±2.1E0
TD874 A 1,4-cz-[LuIII(TD647)] 278 99% 68% 14% 0% 5.1E 1 ±4.8E0
TD900 A 1,4-cz-[CdII(TD647)] 278 100% 99% 91% 63% 1.3E 3 ± 5.8E0
TD651 B 1,5-cz-[LaIII(TD647)] 278 76% 4% 0% 0% 2.5E 0 ± 2.5E-1
TD870 B 1,5-cz-[CeIII(TD647)] 278 95% 37% 0% 0% 1.7E 1 ± 2.9E-1
TD869 B 1,5-cz-[PrIII(TD647)] 278 98% 71% 12% 0% 5.2E 1 ± 2.2E0
TD868 B 1,5-cz-[NdIII(TD647)] 278 99% 90% 54% 2% 1.8E 2 ± 1.2E1
TD867 B 1,5-cz-[SmIII(TD647)] 278 100% 100% 99% 96% 1.3E 4 ± 4.4E2
TD599 B 1,5-cz-[EuIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD527 B 1,5-cz-[GdIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD600 B 1,5-cz-[TbIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD866 B 1,5-cz-[DyIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD648 B 1,5-cz-[HoIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD865 B 1,5-cz-[ErIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD601 B 1,5-cz-[TmIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD602 B 1,5-cz-[YbIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD522 B 1,5-cz-[LuIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD649 B 1,5-cz-[YIII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD876 A 1,5-cz-[PbII(TD647)] 278 6% 0% 0% 0% 2.4E -1
TD863 A 1,5-cz-[CaII(TD647)] 278 39% 0% 0% 0% 7.3E -1
TD880 A 1,5-cz-[CdII(TD647)] 278 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
TD890 A 1,5-cz-[ZnII(TD647)] 278 100% 93% 54% 5% 1.9E 2 ± 8.5E0
TD624-La A,* [LaIII(p-NO2BnDOTA)] 285 95% 36% 0% 0% 1.6E 1 ± 1.8E-1
TD624-Gd A,* [GdIII(p-NO2BnDOTA)] 285 100% 99% 92% 79% 2.1E 3 ± 1.2E2
TD624-Lu A,* [LuIII(p-NO2BnDOTA)] 285 99% 98% 87% 67% 1.2E 3 ± 8.7E1
TD925 B 1,5-cz-[GdIII(TD921)] 275 100% 100% 100% 100% 상당히 안정
범례: A 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 H2O (200 ㎕)로 희석하였다.
B 분액 (2 ㎕)은 측정하기 전 500 mM MOPS/NaOH 완충제 (pH 7.0; 200 ㎕)로 희석하였다.
f 해리 데이터는 지수함수형 붕괴에 의해 피팅하였다 (등식 y = exp(-x/t); y = 온전한 킬레이트의 분율; x = 시간; t = 붕괴 상수). 킬레이트 안정성은 붕괴 상수로부터 유추 (t½ = ln(2) x t)한 반감기 t½로 표시함 (시간; 진하게 강조 표시). 피팅 에러는 싱글 데이터 포인트 피팅에 대해서는 표시되지 않는다.
* 부분입체이성질체 2종의 합.
↓ 원액 제조: 에펜도르프 관 (0.5 ㎖)에서, 2,2',2'',2'''-(2-(4-니트로벤질)-1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라일)테트라아세트산 테트라하이드로클로라이드 (10.0 mM/H2O; 100 ㎕; 1 μmol; 1.0 당량)를 대응하는 aq. LnCl3 (100 mM; 23.5 ㎕; 1.1 μmol; 1.1 당량), H2O (59 ㎕) 및 aq. NaOH (400 mM; 17.5 ㎕; 7.0 μmol; 7.0 당량)와 혼합하였다. 제조된 혼합물을 16시간 동안 RT에서 교반한 다음 (LC-MS에 의해 완전 변환 검증) 원심분리하였다. 그 후, 상층액을 해리 분석용 원액으로 바로 이용하였다.
차트 21. 1주일 코스 동안 aq. 3.0 M HCl 80℃에서 모델 헥사펩타이드-킬레이트 접합체의 모 킬레이트 및 개개 아미노산으로의 절단 (산 펩타이드 가수분해 동역학): 출발 킬레이트-펩타이드 접합체 (S), 킬레이트-함유 중간 산물 (I), 모 킬레이트 (P) 및 유리 리간드 (L)의 분율을 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 285 nm에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액을 MOPS 완충제, pH 7.0로 중화하고, 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
범례: ' 헥사펩타이드는 방향족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
" 헥산펩타이드는 지방족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
# 1,5-cz-Lig 및 1,5-cz-Lig-A-OH의 총합.
차트 22. 1주일 코스 동안 aq. 2.0 M HCl 80℃에서 모델 헥사펩타이드-킬레이트 접합체의 모 킬레이트 및 개개 아미노산으로의 절단 (산 펩타이드 가수분해 동역학): 출발 킬레이트-펩타이드 접합체 (S), 킬레이트-함유 중간 산물 (I), 모 킬레이트 (P) 및 유리 리간드 (L)의 분율을 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 285 nm에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액을 MOPS 완충제, pH 7.0로 중화하고, 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
범례: ' 헥사펩타이드는 방향족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
" 헥산펩타이드는 지방족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
# 1,5-cz-Lig 및 1,5-cz-Lig-A-OH의 총합.
차트 23. 1주일 코스 동안 aq. 1.0 M HCl 80℃에서 모델 헥사펩타이드-킬레이트 접합체의 모 킬레이트 및 개개 아미노산으로의 절단 (산 펩타이드 가수분해 동역학): 출발 킬레이트-펩타이드 접합체 (S), 킬레이트-함유 중간산물 (I), 모 킬레이트 (P) 및 유리 리간드 (L)의 분율을 분석용 HPLC에 의해 측정하였다 (H2O-MeCN 시스템 + 0.1% FA 첨가제; 285 nm에서 검출; 정수로 반올림; 반응 혼합물에서 취한 분액을 MOPS 완충제, pH 7.0로 중화하여 볼텍싱한 다음 HPLC에 주입). 유리 바이얼에서 자기 교반기를 사용해 수행.
범례: ' 헥사펩타이드는 방향족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
" 헥산펩타이드는 지방족 아미드 모이어티를 경유해 킬레이트와 연결된다.
# 1,5-cz-Lig 및 1,5-cz-Lig-A-OH의 총합.
차트 24. TD975, TD989, TD1010 및 TD1011 (CPP-접합체)의 세포 침투 특성. 프로토콜: 배양한 세포 (CCRF-CEM; T-림프모구성 백혈병)를 원심분리 (250 x g, RT)한 다음 PBS로 헹궈 RPMI 배지 Dutch modification (+ HEPES 완충제, 항생제 무첨가)에 농도 2.5 x 107 ㎖-1로 현탁하였다. 현탁물을 에펜도르프 관 12개에 (각각 현탁물 400 ㎕씩) 옮겼다 (CPP-접합체 조합 4종, 각각 트리플리케이트). CPP 접합체의 원액 (5.0 mM, 50 ㎕)을 해당 CPP-접합체의 최종 농도가 0.5 mM이 되도록 첨가하였다. 그 후, 세포를 37℃에서 2시간 배양하였다. 배양한 후, 샘플을 원심분리하였다 (900 x g, RT). 배지를 조심스럽게 파이펫으로 제거하고, 펠릿을 1 ㎖ PBS로 2번 헹구었다. 수득한 펠릿에 HCl (3.0 M, 500 ㎕)을 처리해 7일간 80℃에서 교반하였다. 수득한 용액을 세포 흡수에 대해 분석하였다.
세포와 배양한 CPP 접합체 세포 흡수, %
0.5 mM TD975 + 0.5 mM TD989 TD975 a 0.54±0.012% b 0.57±0.039 c TD989 a 0.47±0.049 b 0.47±0.052 c
0.5 mM TD1011 + 0.5 mM TD1010 TD1011 a 0.13±0.013% b 0.15±0.017 c TD1010 a 0.13±0.003 b 0.14±0.019 c
0.5 mM TD975 + 0.5 mM TD1010 TD975 a 0.72±0.006% b 0.73±0.020 c TD1010 a 0.06±0.036 b 0.06±0.027 c
0.5 mM TD1011 + 0.5 mM TD989 TD1011 a 0.07±0.014% b 0.07±0.049 c TD989 a 0.69±0.003 b 0.66±0.018 c
범례: a 모 CPP 접합체의 산 가수분해 후 TD748 및 TD897로서 분석.
b LC-MS에 의한 정량: 285 nm에서 UV 적분; EIC+의 ESI-MS 적분 841-843 m/z ([TD748]+) 및 835-837 m/z ([TD897]+). 정량화는 기지 농도의 TD748 및 TD897 원액을 이용한 보정을 기준으로 하였다 (UV 및 ESI-MS 모드 둘다).
c ICP에 의해 정량.
약어 및 정의
사이클렌 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸
Cbz 벤질클로로포르메이트
tBu terc-부틸
Boc 벤질옥시카르보닐
DCM 다이클로로메탄
TFA 트리플루오로아세트산
TIPS 트리이소프로필실릴
TMS 트리메틸실릴
Ph 페닐
Fmoc 플루오레닐메틸옥시카르보닐
iPr 이소프로필
MOPS 3-(N-모르폴리노)프로판설폰산
DIPEA N,N-다이이소프로필에틸아민
LC-MS 액체 크로마토그래피 - 질량 분광 측정
MRI 자기 공명 영상
아릴 방향족 고리, 예를 들어 페닐 또는 나프틸의 수소 원자 하나 제거에 의한 하나 이상의 방향족 탄화수소 고리로부터 유래한 치환기
알킬 알칸, 예를 들어 메틸 또는 에틸에서 수소 원자 하나 제거에 의해 유래한 알칸 (선형 또는 분지형)으로부터 유래한 치환기
아릴알킬 알칸 사슬, 예를 들어 벤질에서 수소 원자 하나 제거에 의해 유래한 아릴-치환된 알칸 (선형 또는 분지형) 유래 치환기
아릴알키닐 직선형 또는 분지형일 수 있는, 수소 하나의 제거를 통해 아릴-치환된 알킨으로부터 유래한 치환기 (즉, 삼중 결합 함유)
클릭-집 아지드와 삼중 결합 간의 클릭 반응이 이루어지고 트리아졸 브릿지가 형성되어 금속 배우 "지핑"이 발생한, 닫힌 케이지 (closed cage) 리간드 또는 착물
Lig 및 M 이온으로부터 유래한 1,5-cz-[M(Lig)]는 본 발명에 따른 배위 화합물의 일반적인 표기법이다. "1,5-cz-"는 1,5-트리아졸 브릿지 형성된 케이지이고, [M(Lig)]는 금속 양이온과 리간드 (일반식 (I)에 따른 화합물)의 배위 화합물을 나타낸다.

Claims (15)

  1. 일반식 (I)의 화합물:

    상기 식에서,
    Y는 질소; N-옥사이드로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R1은 H; 할로겐; -OH; -N3; n이 1-3 범위의 정수인, -(CH2)nN3; R이 독립적으로 H이거나 또는 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬로부터 선택되는, -NR2; n 및 R이 상기 정의와 동일하게 정의된, -(CH2)nNR2; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C6-C10 아릴; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, C7-C10 아릴알킬; -CF3; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -COOR; n 및 R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -(CH2)nCOOR; ; -CH2CH(OMe)2; ; -SH; -SO3H; Ar이 페닐인 -SO2AR; NO2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 이거나; 또는 n이 1-3 범위의 정수인 이고;
    A는 독립적으로 H; n이 1-3의 정수인, -(CH2)nCOOH; -CH(CH3)COOH; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -CH((CH2)nCH3)COOH; R이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -CH2P(=O)(OR)2; n이 1-3의 정수인, -CH((CH2)nCOOH)COOH; n이 1-3의 정수인, -CH((CH2)nNH2)COOH; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Z는 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:

    상기 기들에서,
    R3는 이고;
    R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬; C3 내지 C6 사이클로알킬; -CF3; n이 1-3 범위의 정수이고 R6가 H, 플루오레닐메틸옥시카르보닐, tert-부틸옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐로부터 선택되는, -(CH2)nNHR6; R6가 상기 정의와 동일하게 정의되는, -C(CH3)2(NHR6); 아다만틸; ; n이 상기 정의와 동일하게 정의되는, -(CH2)nCOOH; -NH2, -NO2, -N3, , -COOH, -CH2Cl 및/또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는 C6-C10 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5는 R1이거나, 또는 R4가 상기 정의와 동일하게 정의되는 이고;
    및/또는 R2 및 R3는 함께, R4가 상기 정의와 동일하게 정의된 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성하고;
    단, A 최대 하나는 H임.
  2. 제1항에 있어서,
    Y는 질소이고;
    R1은 H; Cl; -N(CH3)2; -COOH 또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, 페닐; -COOH 또는 -CH2COOH로 선택적으로 치환될 수 있는, 벤질; -CF3; -COOCH3; -COOCH(CH3)2; -COOtBu; 로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    A는 독립적으로 H; n이 1 또는 2인 -(CH2)nCOOH; -CH2P(=O)(OH)2; -CH2P(=O)(OH)(OEt); -CH2P(=O)(OEt)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; -CH2P(=O)(OH)(Ph)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Z는 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    ; ;
    상기 기들에서,
    R3는 이고;
    R4는 H; 할로겐; 피페리디닐; 트리메틸실릴; 트리이소프로필실릴; 페닐; 사이클로프로필, terc-부틸; -CF3; -CH2NH2; -CH2N(H)(Fmoc); -C(CH3)2(NH2); -C(CH3)2(NHBoc); 아다만틸로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5는 H이거나, 또는 R4가 상기 정의와 동일하게 정의되는 이고;
    단, A 최대 하나는 H인, 일반식 (I)의 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 Z가 이고;
    R3가 이고;
    R4 및 R5가 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의되고, 바람직하게는, R4 및 R5가 H인, 화합물.
  4. 제1항에 있어서,
    R2 및 R3가 함께 식 또는 의 1,2,3-트리아졸 기를 형성하여, 사이클렌 모이어티의 마주보는 질소 원자 2개 사이의 브릿지가 일반식 (IIa) 또는 (IIb)의 엔터티이고:

    상기 식 (IIa) 또는 (IIb)에서,
    L은 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    ; ; ; ; ;
    R1, R4 및 R5는 제1항에서 정의된 바와 동일하게 정의되고,
    바람직하게는, L은 이고, 더 바람직하게는, L은 인, 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Y가 질소이고; Z가 이고; 나머지 치환기들이 하기 조합으로 존재하는, 화합물들을 포함하는 군으로부터 선택되는, 화합물:


  6. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)의 화합물의 제조 방법:
    i) Z가 제1항에서와 동일하게 정의되는, 일반식 Z-Cl의 알킨 중간산물을 제공하는 단계;
    ii) 일반식 (III)의 아지드 중간산물을 제공하는 단계:

    상기 식에서, Y, R1 및 R2는 제1항에서 정의된 바와 동일하게 정의됨;
    iii) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 제공하는 단계:

    상기 식에서, pA는 n이 1-3의 정수인, -(CH2)nCOOtBu; 벤질옥시카르보닐; R이 tert-부틸, 메틸 또는 에틸인, -CH(CH3)COOR; n이 1-3의 정수이고 R이 tert-부틸, 메틸 또는 에틸인, -CH((CH2)nCH3)COOR; n이 1-3의 정수이고 R이 독립적으로 tert-부틸, 메틸 또는 에틸로부터 선택되는, -CH((CH2)nCOOR)COOR; R이 분지형 또는 직선형일 수 있는 C1-C6 알킬인, -CH2P(=O)(OR)2; -CH2C(=O)(NH2); -CH2C(=O)(NH)-CH2COOH; Ar이 C1-C6 알킬로 선택적으로 치환될 수 있는 페닐인, -CH2P(=O)(OH)(Ar)을 포함하는 군으로부터 선택됨;
    iv-A) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 알킨 중간산물 Z-Cl과 반응시켜 일반식 (V)의 중간산물을 수득하는 단계:

    상기 식에서, Z는 제1항에서의 정의와 동일하게 정의되고, pA는 상기 정의와 동일하게 정의됨;
    또는
    iv-B) 일반식 (IV)의 사이클렌 유도체를 일반식 (III)의 아지드 중간산물과 반응시켜 일반식 (VI)의 중간산물을 수득하는 단계:

    상기 식에서, Y, R1, R2 및 pA는 상기 정의와 동일하게 정의됨;
    v-A) 일반식 (V)의 중간산물을 일반식 (III)의 아지드 중간산물과 반응시켜 일반식 (VII)의 중간산물을 수득하는 단계:

    상기 식에서, Y, R1, R2, pA 및 Z는 상기에서 정의된 바와 동일하게 정의됨;
    또는
    v-B) 일반식 (VI)의 중간산물을 알킨 중간산물 Z-Cl과 반응시켜 일반식 (VII)의 중간산물을 수득하는 단계;
    vi) 선택적으로, 보호기를 가수분해하여 일반식 (I)의 화합물을 제조하는 단계.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)의 화합물과, 란탄족 원소(III) 양이온, Na+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+, Cd2+, Zn2+, Mn2+, Pt2+, Cu2+, Ni2+, Sc3+, Y3+, Bi3+, In3+, Ru3+, Ir3+, Ga3+, Tl3+, Pd2+로 이루어진 군으로부터 선택되는 금속 양이온과의 배위 화합물로서,
    바람직하게는, 상기 금속 양이온이 La3+, Ce3+, Pr3+, Nd3+, Sm3+, Eu3+, Gd3+, Tb3+, Dy3+, Ho3+, Er3+, Tm3+, Yb3+, Lu3+, Y3+, Sc3+, Bi3+, In3+, Tl3+, Pb2+, Ca2+, Cd2+, Zn2+, Cu2+, Ni2+, Mn2+, Pd2+, Na+로 이루어진 군으로부터 선택되는,
    배위 화합물.
  8. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제7항에 따른 배위 화합물의 제조 방법:
    i) 제6항에 따른 일반식 (I)의 화합물을 합성하는 단계;
    ii) 무기 산과 란탄족 원소(III) 양이온, Na+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+, Cd2+, Zn2+, Mn2+, Pt2+, Cu2+, Ni2+, Sc3+, Y3+, Bi3+, In3+, Ru3+, Ir3+, Ga3+, Tl3+, Pd2+로 이루어진 군으로부터 선택되는 금속 양이온의 염을 제공하는 단계로서, 바람직하게는, 상기 염이 클로라이드, 나이트레이트, 아세테이트, 포르메이트, 트리플루오로아세테이트, 트리플루오로메틸설포네이트를 포함하는 군으로부터 선택되는, 단계;
    iii) 단계 i)의 일반식 (I)의 화합물을 단계 ii)의 금속 염과 수용액 중에, 바람직하게는 25-100℃ 범위의 온도에서 적어도 1시간 동안 혼합해, 금속 양이온을 일반식 (I)의 화합물에 의해 킬레이팅하여 제7항에 따른 배위 화합물을 형성하는 단계;
    iv) 선택적으로, 단계 iii)의 배위 화합물을 변환하는 단계로서, 변환이 하기 반응 중 하나 이상으로부터 선택되는 단계:
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5에 존재하는 할로겐 기를 페닐보론산과 치환 반응하여 할로겐 치환기를 -COOH로 변환하는 단계;
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5에 존재하는 할로겐 기를 NaN3와 반응시켜 -N3 기와 치환 반응하는 단계;
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5 치환기에 존재하는 TIPS 보호기를 가수분해하여, R1 및/또는 R3 및/또는 R5가 가 되는 단계로서, R1 및/또는 R3 및/또는 R5가 인, 단계:
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5에 대해 메탄올 부가 반응을 수행해 삼중 결합을 다이메틸 아세탈로 변환하는 단계로서, R1 및/또는 R3 및/또는 R5가 인, 단계;
    - 펜던트 아암의 CH2 기를 D2O 중에 DBU의 존재 하에 중수소화하여 이를 CD2 기로 변환하는 단계;
    - Z 치환기의 피리딜 사이클을 환원제로서 NaBH4 또는 NaBD4를 이용해 선택적 환원하여 Z 기를 각각 또는 로 변환하는 단계로서, Z가 이고 R3 및 R5가 제1항에서의 정의와 동일하게 정의된, 단계;
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A의 NH2 기를 FmocCl과 반응시켜 -NH2 기를 -NHFmoc 기로 변환하는 단계로서, R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A가 -NH2 또는 -(CH2)nNH2를 함유한 것인, 단계;
    - R1 및/또는 R4 및/또는 R5 및/또는 A에 존재하는 -COOH 기를 아미노산 또는 펩타이드의 아미노 기와 반응시켜 펩타이드 결합을 형성하는 단계;
    - R1, R4 및/또는 R5 치환기의 할로겐, 바람직하게는, Cl을 티올을 이용해 S-알킬화하여 할로겐을 설파이드로 변환하는 단계;
    - R1, R3 및/또는 R5 기의 를 아지드, 바람직하게는, 알킬아지드 또는 아릴아지드와 반응시켜 알킬아지드 또는 아릴아지드를 R1, R3 및/또는 R5 기와 연결하는 트리아졸 브릿지를 형성하는 단계로서, R1, R3 및/또는 R5가 를 함유한 것인, 단계;
    - R1 및/또는 R5의 -N3 기를 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 트리아졸 브릿지를 형성하는 단계로서, R1 및/또는 R5가 -N3 기를 함유한 것인, 단계;
    - R1 및/또는 R5의 -SH 기를 말레이미드를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 티오숙신이미드 연결을 형성하는 단계;
    - R1 및/또는 R5의 -SH 기를 다른 -SH 기를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 다이설파이드 브릿지를 형성하는 단계;
    -R1 및/또는 R5의 -SH 기를 알킬할로게나이드 또는 아릴할로게나이드와 반응시켜 알킬할로게나이드 또는 아릴할로게나이드를 배위 화합물과 연결하는 티오에테르 연결을 형성하는 단계;
    - R1 및/또는 R5의 -NO2 기를 -SH 기를 포함하는 치환기와 반응시켜 치환기를 배위 화합물과 연결하는 티오에테르 연결을 형성하는 단계.
  9. 제1 배위 화합물의 R1 또는 R5 기와 그 다음 배위 화합물의 R1 또는 R5 기 간에 형성된 트리아졸 브릿지를 통해, 및/또는 아민 기를 함유한 한 배위 화합물의 치환기 R1 또는 R4 또는 R5 또는 A와 카르복시 기를 함유한 다른 배위 화합물의 치환기 R1 또는 R4 또는 R5 또는 A 간에 형성된 아미드 결합을 통해, 및/또는 -SH 기를 함유한 한 배위 화합물의 치환기 R1 또는 R5와 -SH 기를 함유한 다른 배위 화합물의 치환기 R1 또는 R5 간에 형성된 다이설파이드 결합을 통해 결합된, 제7항에 따른 배위 화합물 적어도 2종을 포함하는 배위 화합물 사슬.
  10. 일반식 (X)의 배위 화합물 이량체:

    상기 식에서, M1 및 M2는 독립적으로 제7항에서의 정의와 동일하게 정의되는 금속 양이온이고, R1, R4 및 R5는 제1항에서의 정의와 동일하게 정의됨.
  11. 펩타이드 또는 단백질에 접합된, 제7항에 따른 배위 화합물 또는 제9항에 따른 배위 화합물 사슬을 포함하는 약물 추적용 접합체로서,
    상기 제7항에 따른 배위 화합물 또는 제9항에 따른 배위 화합물 사슬이 -NH2 또는 -COOH 기를 포함하는 R1 및/또는 R4 및/또는 R5 기를 함유하고; 바람직하게는, R1 및/또는 R4 및/또는 R5는 -NH2; -(CH2)nNH2; -COOH; -(CH2)nCOOH; -NH2, -COOH, -(CH2)nNH2 또는 -(CH2)nCOOH로 치환된 C6 내지 C10 아릴로부터 선택되고, n이 1-3 범위의 정수이고,
    R1 및/또는 R4 및/또는 R5에 존재하는 -COOH 기와 펩타이드 또는 단백질의 아미노 기 간에 형성된 아미드 결합을 통해, 또는 R1 및/또는 R4 및/또는 R5에 존재하는 -NH2 기와 펩타이드 또는 단백질의 카르복시 기 간에 형성된 아미드 결합을 통해 펩타이드 또는 단백질에 접합되고, 상기 펩타이드가 아미노산 3-20개의 올리고펩타이드를 포함하는 군으로부터 선택되고; 상기 단백질이 항체, 바람직하게는, 단일클론 항체를 포함하는 군으로부터 선택되는, 접합체.
  12. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 약물 추적 방법:
    i) 제11항에 따른 하나 이상의 접합체를 함유한, 분석할 세포 배양물 또는 조직을 제공하는 단계로서, 펩타이드 또는 단백질이 추적할 펩타이드 기반의 또는 단백질 기반의 약물의 것인, 단계;
    ii) 단계 i)에서 수득한 세포 배양물 또는 조직을 강산, 바람직하게는 HCl로 가수분해하여 가수분해물을 수득하는 단계;
    iii) 단계 ii)의 가수분해물을 제7항의 배위 화합물 또는 제9항의 배위 화합물 사슬의 존재에 대해 바람직하게는 LC-MS를 이용해 정성 및/또는 정량 분석하는 단계.
  13. 약학에서, 바람직하게는 새로운 약물 개발 및 검사, 더 바람직하게는 약물 표지 및 추적에서의, 제7항에 따른 배위 화합물 또는 제9항에 따른 배위 화합물 사슬 또는 제10항에 따른 배위 화합물 이량체 또는 제11항에 따른 접합체의 시험관내 용도.
  14. 제7항 또는 제9항 또는 제10항에 있어서, 의료 진단에서, 바람직하게는 MRI 조영제로서 이용하기 위한 것인, 배위 화합물 또는 배위 화합물 사슬 또는 배위 화합물 이량체.
  15. 제7항 또는 제9항 또는 제10항에 있어서, 방사성 진단제 및/또는 방사성 의약제로서 의학에서 이용하기 위한 것이고, 상기 M이 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 86Y, 90Y, 140Nd, 149Pm, 151Pm, 153Sm, 159Gd, 149Tb, 161Tb, 165Dy, 161Ho, 166Ho, 169Er, 167Tm, 175Yb, 177Lu를 포함하는 군으로부터 선택되고, 및/또는 R1, R4 및/또는 R5가 방사성 할로겐을 함유한, 배위 화합물 또는 배위 화합물 사슬 또는 배위 화합물 이량체.
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