KR20240058090A - 이종이식을 위한 방법 및 조성물 - Google Patents
이종이식을 위한 방법 및 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240058090A KR20240058090A KR1020247007100A KR20247007100A KR20240058090A KR 20240058090 A KR20240058090 A KR 20240058090A KR 1020247007100 A KR1020247007100 A KR 1020247007100A KR 20247007100 A KR20247007100 A KR 20247007100A KR 20240058090 A KR20240058090 A KR 20240058090A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cross
- dressed
- organ
- cells
- human
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 218
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 92
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims abstract description 194
- 102000044459 human CD47 Human genes 0.000 claims abstract description 102
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 86
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 319
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 152
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 95
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 47
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 43
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 43
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 39
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 39
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 claims description 38
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 claims description 30
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 26
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 26
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 22
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 19
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 19
- 102100029948 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Human genes 0.000 claims description 19
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 19
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 claims description 18
- 101000863873 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Proteins 0.000 claims description 18
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 14
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 7
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 claims description 6
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 claims description 6
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 abstract description 35
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 94
- 108091054442 EV proteins Proteins 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 13
- 230000036541 health Effects 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 7
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 7
- 206010068051 Chimerism Diseases 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 6
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 5
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 5
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 5
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 5
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 5
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 5
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 5
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 4
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 4
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 4
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 4
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 4
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940014456 mycophenolate Drugs 0.000 description 4
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 3
- 229940046731 calcineurin inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- 101710098610 Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 2
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 2
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000015286 negative regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- YYSFXUWWPNHNAZ-PKJQJFMNSA-N umirolimus Chemical compound C1[C@@H](OC)[C@H](OCCOCC)CC[C@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 YYSFXUWWPNHNAZ-PKJQJFMNSA-N 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- BICRTLVBTLFLRD-PTWUADNWSA-N voclosporin Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O BICRTLVBTLFLRD-PTWUADNWSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 1
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 description 1
- JWDYCNIAQWPBHD-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methylphenyl)glycerol Chemical compound CC1=CC=CC=C1OCC(O)CO JWDYCNIAQWPBHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSLYOANBFKQKPT-DIFFPNOSSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[[(2r)-1-(4-hydroxyphenyl)propan-2-yl]amino]ethyl]benzene-1,3-diol Chemical compound C([C@@H](C)NC[C@H](O)C=1C=C(O)C=C(O)C=1)C1=CC=C(O)C=C1 LSLYOANBFKQKPT-DIFFPNOSSA-N 0.000 description 1
- MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethyl-1-[3-(2,4,5-trichlorophenoxy)propoxy]-1,6-dihydro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound CC1(C)N=C(N)N=C(N)N1OCCCOC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUROJSBIWGDYCN-GAUTUEMISA-N AP 23573 Chemical compound C1C[C@@H](OP(C)(C)=O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 BUROJSBIWGDYCN-GAUTUEMISA-N 0.000 description 1
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 1
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016605 B-Cell Activating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 238000010356 CRISPR-Cas9 genome editing Methods 0.000 description 1
- 238000010453 CRISPR/Cas method Methods 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102100031506 Complement C5 Human genes 0.000 description 1
- 108010028773 Complement C5 Proteins 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 101000836492 Dictyostelium discoideum ALG-2 interacting protein X Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010048748 Graft loss Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914469 Homo sapiens CD82 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000980823 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD53 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001134621 Homo sapiens Programmed cell death 6-interacting protein Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010041014 Integrin alpha5 Proteins 0.000 description 1
- 108010042918 Integrin alpha5beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 1
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102100024221 Leukocyte surface antigen CD53 Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 102100027913 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1A Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108010006877 Tacrolimus Binding Protein 1A Proteins 0.000 description 1
- CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N Temsirolimus Chemical compound C1C[C@@H](OC(=O)C(C)(CO)CO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N 0.000 description 1
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 1
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 1
- 206010051956 Trichorhinophalangeal syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108700030796 Tsg101 Proteins 0.000 description 1
- 101150072717 Tsg101 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710183617 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSRGADMGIRTXAF-UHFFFAOYSA-N a-Methyldopamine Chemical compound CC(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 KSRGADMGIRTXAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 229960005347 belatacept Drugs 0.000 description 1
- 229960003270 belimumab Drugs 0.000 description 1
- 229950010015 bertilimumab Drugs 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229950002334 clenoliximab Drugs 0.000 description 1
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000284 efalizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 229950002507 elsilimomab Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 229950004292 erlizumab Drugs 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 229960001022 fenoterol Drugs 0.000 description 1
- 102000010660 flotillin Human genes 0.000 description 1
- 108060000864 flotillin Proteins 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229950001109 galiximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 231100000852 glomerular disease Toxicity 0.000 description 1
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000000688 human artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000007850 in situ PCR Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 108040006856 interleukin-3 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N iodixanol Chemical compound IC=1C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C=1N(C(=O)C)CC(O)CN(C(C)=O)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004359 iodixanol Drugs 0.000 description 1
- NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N iohexol Chemical compound OCC(O)CN(C(=O)C)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001025 iohexol Drugs 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 229950010828 keliximab Drugs 0.000 description 1
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 229950002183 lebrikizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 1
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 1
- 229950010470 lerdelimumab Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229950000128 lumiliximab Drugs 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003861 mephenesin Drugs 0.000 description 1
- 229960005108 mepolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 229950005555 metelimumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- VKHAHZOOUSRJNA-GCNJZUOMSA-N mifepristone Chemical compound C1([C@@H]2C3=C4CCC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]3CC[C@@]([C@]3(C2)C)(O)C#CC)=CC=C(N(C)C)C=C1 VKHAHZOOUSRJNA-GCNJZUOMSA-N 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003816 muromonab-cd3 Drugs 0.000 description 1
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950009675 nerelimomab Drugs 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 229950005751 ocrelizumab Drugs 0.000 description 1
- 229950010465 odulimomab Drugs 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229950002610 otelixizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229950011485 pascolizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- KASDHRXLYQOAKZ-ZPSXYTITSA-N pimecrolimus Chemical compound C/C([C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)[C@@H](OC)C[C@@H](C)C/C(C)=C/[C@H](C(C[C@H](O)[C@H]1C)=O)CC)=C\[C@@H]1CC[C@@H](Cl)[C@H](OC)C1 KASDHRXLYQOAKZ-ZPSXYTITSA-N 0.000 description 1
- 229960005330 pimecrolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 208000030761 polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000006825 purine synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000006824 pyrimidine synthesis Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960001302 ridaforolimus Drugs 0.000 description 1
- 229950005374 ruplizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010809 targeting technique Methods 0.000 description 1
- 229960000235 temsirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N temsirolimus Natural products C1CC(O)C(OC)CC1CC(C)C1OC(=O)C2CCCCN2C(=O)C(=O)C(O)(O2)C(C)CCC2CC(OC)C(C)=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C(OC)C(O)C(C)=CC(C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081330 tena Drugs 0.000 description 1
- 229950000301 teneliximab Drugs 0.000 description 1
- 229950010127 teplizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000331 teriflunomide Drugs 0.000 description 1
- UTNUDOFZCWSZMS-YFHOEESVSA-N teriflunomide Chemical compound C\C(O)=C(/C#N)C(=O)NC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 UTNUDOFZCWSZMS-YFHOEESVSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 1
- 229940107955 thymoglobulin Drugs 0.000 description 1
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 1
- 229950001802 toralizumab Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- 229940046728 tumor necrosis factor alpha inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002452 tumor necrosis factor alpha inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960003824 ustekinumab Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 229960005289 voclosporin Drugs 0.000 description 1
- 108010057559 voclosporin Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- CGTADGCBEXYWNE-JUKNQOCSSA-N zotarolimus Chemical compound N1([C@H]2CC[C@@H](C[C@@H](C)[C@H]3OC(=O)[C@@H]4CCCCN4C(=O)C(=O)[C@@]4(O)[C@H](C)CC[C@H](O4)C[C@@H](/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C3)OC)C[C@H]2OC)C=NN=N1 CGTADGCBEXYWNE-JUKNQOCSSA-N 0.000 description 1
- 229950009819 zotarolimus Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/22—Urine; Urinary tract, e.g. kidney or bladder; Intraglomerular mesangial cells; Renal mesenchymal cells; Adrenal gland
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/42—Respiratory system, e.g. lungs, bronchi or lung cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/99—Coculture with; Conditioned medium produced by genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/04—Immortalised cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Botany (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
Abstract
본 명세서에는 이종이식 방법, 예를 들어, 돼지 대 인간 이식 방법이 제공된다. 또한 본 명세서에는 세포외 소포("EV", 예를 들어, 엑소좀) 및 이를 포함하는 조성물, 예를 들어, 인간 CD47을 발현하는 EV가 제공된다. 추가로 본 명세서에는 EV의 제조 방법 및 이종이식을 위해서 이를 사용하는 방법이 제공된다. 일부 양상에서, 이종이식 방법은 이종이식편에서 인간 CD47을 발현하는 단계를 포함한다.
Description
1.
상호참조
본 출원은 미국 가출원 제63/240,637호(출원일: 2021년 9월 3일)의 이익을 주장하며, 이의 전체 개시내용은 이의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
2.
서열 목록
본 출원은 특허 센터를 통해 XML 파일 형식으로 제출된 컴퓨터 판독 가능한 서열 목록을 포함하며, 이의 전체 내용은 이의 전체가 본 명세서에 참조에 의해 포함된다. 특허 센터를 통해 제출된 서열 목록 XML 파일은 파일명이 '14648-004-228_seqlist.xml'이며, 2022년 8월 30일에 작성되었고, 파일 크기가 32,782 바이트이다.
3.
정부 라이센스 권리
본 발명은 국립 보건원(National Institutes of Health: NIH), 국립 알레르기 및 전염병 연구소(National Institute of Allergy and Infectious Diseases: NIAID)에 의해 부여된 승인 번호 P01 AI045897 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 발명에 대한 특정 권리를 갖는다.
4.
도입부
본 명세서에는 이종이식 방법, 예를 들어, 돼지 대 인간 이식 방법이 제공된다. 또한 본 명세서에는 세포외 소포(extracellular vesicle)("EV", 예를 들어, 엑소좀) 및 이를 포함하는 조성물, 예를 들어, 인간 CD47을 발현하는 EV가 제공된다. 추가로 본 명세서에는 EV의 제조 방법 및 이종이식을 위해서 이를 사용하는 방법이 제공된다. 일부 양상에서, 이종이식 방법은 이종이식편에서 인간 CD47을 발현하는 단계를 포함한다. 특정 양상에서, 이종이식 방법은 표적 조직 상의 신호 조절 단백질 α(SIRPα) 발현과 독립적이다.
5.
배경기술
현재 동종이계 공여증자의 심각한 부족으로 인해 수행되는 장기 이식 횟수가 제한적이다. 이러한 수요-공급 불균형은 다른 종의 장기(이종이식)를 사용하여 교정될 수 있다. 인간이 아닌 영장류의 사용과 연관된 윤리적 문제 및 비실용성을 고려할 때 돼지가 인간에게 가장 적합한 공여자 종으로 간주된다. 인간과의 장기 크기 및 생리학적 유사성 외에도, 돼지를 빠르게 번식시키고 근친교배하는 능력은 돼지를 특히 인간에 대한 이식편 공여자로서 기능하는 능력을 개선시킬 수 있는 유전자 변형에 순응하게 한다(Sachs 1994, Path. Biol. 42:217-219; Piedrahita et al., 2004, Am. J. Transplant, 4 Suppl. 6:43-50).
비-특이적 면역억제 요법과 결합된 이식은 높은 초기 이식 관용과 관련되어 있지만, 임상 장기 이식의 성공에 대한 주요 제한은 주로 이식의 만성 거부로 인한 후기 이식 손실이었다. 신장 이식에 의해서 수용자당 평균 4.4년의 수명이 절약될 수 있다. 문헌[Rana et al. JAMA Surg. 2015;150(3):252-259]을 참조한다. 그러나 살아있는 공여자 신장 후 10년 이내에 이식편의 30% 초과가 실패한다. 문헌[Department of Health and Human Services: 2017 Annual Data Report: Kidney [retrieved on March 22, 2021]]을 참조한다. 인터넷:< URL: srtr.transplant.hrsa.gov/annual_reports/2017/Kidney.aspx>에서 검색.
이종이식 거부를 예방하기 위해 요구되는 평생 면역억제 수준이 너무 독성이 강해서 허용될 수 없기 때문에, 성공적인 임상 이종이식을 위해서는 면역 관용이 더 중요하다. 또한, 환자에서 면역학적 관용이 달성되었는지 여부를 확실하게 나타내는 지표가 확인되지 않았으므로 면역억제 중단의 기초가 되는 실험실 매개변수가 없다.
따라서, 이종 이식의 목표는 공여자 동물로부터 유래된 혼합 키메라 세포를 이종 수용자에게 이식한 후 내구성을 최적화하는 것뿐만 아니라 공여자 동물의 건강 및 생존능력을 유지하는 것을 포함한다.
혼합 키메라 현상은 수용자에서 T 세포, B 세포 및 자연 살해(NK) 세포 수준에서 공여자에 대한 관용을 유도할 수 있다. 문헌[Griesemer A, Yamada K. and Sykes M., 2014, Immunol. Rev. 258: 241-258. Sachs D. H., Kawai T. and Sykes M., 2014, Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4:a015529]. 조혈은 조혈 세포 상의 수용체와 골수 미세환경의 사이토카인 및 접착 분자의 상호작용을 포함하는 엄격하게 조절되는 과정이다. 이러한 수용체-리간드 상호작용의 대부분은 종-특이적(예를 들어, IL-3 및 IL-3R)이거나 종-선택적(예를 들어, SCF-cKIT, GM-CSF-GM-CSFR, VLA-5-피브로넥틴)이기 때문에, (예를 들어, 돼지로부터의) 혼합 키메라 세포는 내인성 조혈 세포(예를 들어, 인간 세포)에 비해 경쟁적으로 불리하여 이식된 세포가 점진적으로 손실된다. 내구성 있는 혼합 키메라현상은 평생 동안 T, B 및 NK 세포 관용을 가장 잘 보장할 수 있으므로 이러한 키메라현상의 손실은 바람직하지 않다.
인간 사이토카인 수용체 및 접착 분자를 돼지 공여자 동물에 도입하면 이러한 경쟁적 단점을 극복하는 데 도움이 되어 평생 키메라현상 및 관용을 보장할 수 있다(Griesemer A, Yamada K. and Sykes M., 2014, Immunol. Rev., 258: 241-258). 조혈은 엄격하게 조절되기 때문에 이러한 유전자를 돼지 게놈의 자연 유전자좌에 삽입하여 이것이 천연 조절 서열의 제어 하에 생리학적 방식으로 기능할 수 있도록 하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 천연 돼지 유전자를 파괴하고 이를 인간 대응물로 대체함으로써 달성될 수 있다. 그러나 이러한 접근법은 돼지 세포를 종-특이적 또는 종-선택적 돼지 사이토카인(또는 접착 리간드)에 각각 무반응 또는 저반응으로 만드는 문제를 가질 수 있다. 따라서 인간 트랜스진의 장기간 발현은 공여자 동물의 건강에 해로울 수 있다(Dwyer et al., J. Clin. Invest. 2004 May;113(10):1440-6, 및 Crikis et al., 2010, Am. J. Transplant; 10:242-50).
인테그린-연관 단백질(IAP)로도 알려진 CD47은 편재적으로 발현되는 50-kDa 세포 표면 당단백질이며 신호 조절 단백질(SIRP)α(CD172a 및 SHPS-1로도 알려져 있음)에 대한 리간드 역할을 한다(Brown, 2002, Curr. Opin. Cell. Biol., 14:603-7; Brown and Frazier, 2001, Trends Cell Biol., 111:130-5). CD47 및 SIRPα는 세포 이동, B 세포의 부착 및 T 세포 활성화를 비롯한 다양한 세포 과정에서 중요한 역할을 하는 세포-세포 통신 시스템을 구성한다(Liu et al., 2002, J. Biol. Chem. 277: 10028; Motegi et al., 2003, EMBO 122:2634; Yoshida et al., 2002, J. lmmunol. 168:3213; Latour et al., 2001; J. lmmunol. 167:2547). 또한, CD47-SIRPα 시스템은 대식세포에 의한 식세포작용의 음성 조절과 관련이 있다. 일부 세포 유형(즉, 적혈구, 혈소판 또는 백혈구) 표면 상의 CD47은 대식세포에 의한 식세포작용을 저해하였다. 식세포작용의 저해에서 CD47-SIRPα 상호작용의 역할은 1차 야생형 마우스 대식세포가 CD47-결핍 마우스에서 얻은 비옵소닌화 적혈구(RBC)를 빠르게 식균하지만 야생형 마우스에서 얻은 것에 대해서는 그렇지 않다는 관찰에 의해 설명되었다(Oldenborg et al., 2000; Science 288:2051). 또한 CD47은 이의 수용체인 SIRPα를 통해 Fcγ 및 보체 수용체 매개 식세포작용 둘 다를 저해하는 것으로 보고되어 있다(Oldenborg et al., J. 2001; Exp. Med. 193:855).
CD47은 편재적으로 발현되며 대식세포 및 수지상 세포(DC) 상의 중요한 저해 수용체인 신호전달 조절 단백질(SIRP)α의 리간드로서 작용한다. 새로운 증거는 CD47-SIRPα 신호전달 경로가 대식세포 및 DC 활성화의 조절에 중요한 역할을 하며 면역 장애에 대한 유망한 개입 목표를 제공한다는 것을 나타낸다. CD47-SIRPα 세포 통신 시스템은 종-특이적이다(예를 들어, 돼지 CD47은 돼지 골수 세포의 식세포작용을 저해하지 않는다). 돼지 CD47과 인간 SIRPα 사이의 교차-반응의 결여는 인간 대식세포에 의한 다른 유형의 돼지 세포(예를 들어, 돼지 간세포)에 대한 거부에 기여하고, DC 활성화를 자극하여(하기 참조) 항-돼지 T 세포 반응을 유도한다.
CD47-결핍 세포는 동계 야생형(WT) 마우스에게 주입한 후 대식세포에 의해 강력하게 거부되는데, 이는 CD47이 대식세포에게 "나를 먹지 마시오" 신호("don't eat me" signal)를 제공한다는 것을 입증한다(Oldenborg PA, et al., 2000 Science, 288:2051-4; Wang et al., 2007, Proc Natl Acad Sci U S A. 104:13744). 돼지를 이식 공급원으로 사용하는 이종이식은 임상 이식의 주요 제한 인자인 인간 장기 공여자의 심각한 부족 문제를 해결할 수 있는 잠재력을 갖는다(Yang et al., 2007, Nature reviews Immunology. 7:519-31). 대식세포에 의한 이종 세포의 강력한 거부(Abe 2002, The Journal of Immunology 168:621)는 주로 공여자 CD47과 수용자 SIRPα 사이의 기능적 상호작용의 부족으로 인해 발생하여(Wang et al., 2007, Blood; 109:836-42, Ide et al., 2007, Proc Natl Acad Sci USA 104:5062-6. Navarro-Alvarez 2014, Cell transplantation, 23:345-54), 인간 CD47 트랜스제닉 돼지의 개발로 이어진다(Tena et al., 2017, Transplantation 101:316-21; Nomura et al., 2020, Xenotransplantation. 2020; 27:e12549). 대식세포 이외에, DC의 하위-집단이 또한 SIRPα를 발현한다(Wang et al., 2007, Proc Natl Acad Sci U S A. 104:13744-9, Guilliams et al., 2016, Immunity. 45:669-84). CD47-SIRPα 신호전달은 또한 DC 활성화 및 T 세포를 프라이밍하는 능력을 저해하고, 공여자-특이적 수혈(DST) 또는 간세포 이식에 의한 T 세포 관용의 유도에 중요한 역할을 한다(Wang et al., 2007, Proc Natl Acad Sci U S A. 104:13744-9, Wang et al., 2014, Cell transplantation 23:355-63. Zhang et al., 2016, Sci Rep. 6:26839). SIRPα와의 상호작용을 통해 식세포작용을 저해하는 "나를 먹지 마시오"-분자 역할을 하는 것 외에도, 리간드(예를 들어, 항-CD47 항체, TSP-1, 가용성 SIRPα)에 대한 결찰 시 CD47 신호전달은 또한 세포 노화 또는 사멸을 유도하고 세포 증식을 억제한다.
6.
발명의 개요
일 양상에서, 본 명세서에는 이종이식 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 공여자 돼지로부터 장기를 얻는 단계; (b) 인간 CD47과 장기를 크로스-드레싱(cross-dressing)시키는 단계; (c) 장기를 인간 수용자에게 이식하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱 단계는 장기를 세포외 소포(EV)를 포함하는 인간 CD47에 노출시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, EV는 인간 세포로부터 단리된다. 일부 실시형태에서, 세포는 재조합 인간 CD47을 발현한다. 일부 실시형태에서, 세포는 트랜스제닉 세포이다.
일부 실시형태에서, 크로스-드레싱은 장기를 인간 CD47을 발현하는 EV와 함께 2시간 동안 인큐베이션시킴으로써 달성된다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱은 장기를 인간 CD47을 발현하는 EV와 함께 6시간 동안 인큐베이션시킴으로써 달성된다.
일부 실시형태에서, 크로스-드레싱은 생체외에서 장기를 관류시킴으로써 달성된다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱은 공여자 돼지, 인간 수용자 또는 이들의 조합을 생체내에서 관류시킴으로써 달성된다.
일부 실시형태에서, 방법은 인간 대식세포에 의한 식세포작용을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는(engulfing) CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 5% 내지 약 25% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 25% 내지 약 50% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 50% 내지 약 75% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 75% 내지 약 80% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 80% 내지 약 85% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 85% 내지 약 90% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 90% 내지 약 95% 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해서 측정되는 경우 크로스-드레싱된 장기의 식세포작용이 검출 가능하지 않게 한다.
일부 실시형태에서, 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 인간 대식세포로부터의 보호에 의해 장기의 생존력을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 아폽토시스 유도 없이 식세포작용을 회피한다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 식세포작용을 회피하고 어떠한 검출 가능한 수준의 아폽토시스도 나타내지 않는다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 5% 내지 약 25% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 25% 내지 약 50% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 50% 내지 약 75% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 75% 내지 약 80% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 80% 내지 약 85% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 85% 내지 약 90% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 적어도 90% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 아폽토시스는 프로피듐 아이오딘 염색에 의해서 측정된다.
일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 5% 내지 약 25% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 25% 내지 약 50% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 50% 내지 약 75% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 75% 내지 약 80% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 80% 내지 약 85% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 85% 내지 약 90% 감소된 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 적어도 90% 감소된 염증을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 5% 내지 약 25% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 25% 내지 약 50% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 50% 내지 약 75% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 75% 내지 약 80% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 80% 내지 약 85% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 85% 내지 약 90% 감소된 전신 염증을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 적어도 90% 감소된 전신 염증을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 장기는 신장이다. 일부 실시형태에서, 장기는 폐이다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 신부전을 앓는다.
일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 10 내지 20%더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 20 내지 30% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 30 내지 40% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 40 내지 50% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 50 내지 60% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 60 내지 70% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 70 내지 80% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 80 내지 90% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다. 일부 실시형태에서, 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 적어도 90% 더 적은 면역억제 요법이 필요하다.
일부 실시형태에서, 방법은 단백뇨를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 24시간당 3g 미만까지 감소된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 24시간당 500㎎까지 감소된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 24시간당 300㎎까지 감소된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 24시간당 150㎎까지 감소된다.
일부 실시형태에서, 단백뇨는 이식 2주 이내에 해결된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 이식 1개월 이내에 해결된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 이식 2개월 이내에 해결된다. 일부 실시형태에서, 단백뇨는 이식 4개월 이내에 해결된다.
일부 실시형태에서, 방법은 골수 조직을 수용자에게 이식하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 골수는 신장과 동일한 돼지로부터 채취된다. 일부 실시형태에서, 골수는 신장과 상이한 돼지로부터 채취된다. 일부 실시형태에서, 골수는 EV에 대한 노출에 의해서 인간 CD47과 크로스-드레싱된다.
일부 실시형태에서, 장기는 인간 SIRPα를 발현하지 않는다.
7. 도면의 간단한 설명
도 1A 내지 도 1C: hCD47-Tg LCL 세포(도 1C)와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47(도 1B)에 의한 돼지 LCL(도 1A)의 크로스-드레싱.
도 2: hCD47-Tg LCL 세포와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47에 의한 돼지 LCL의 크로스-드레싱.
도 3A 및 도 3B: hCD47-Tg LCL 세포(도 3B)와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47에 의한 인간 Jurkat 세포(도 3A)의 크로스-드레싱.
도 4A 내지 도 4C: WT Jurkat 세포(도 4C)와의 공배양 후 천연 hCD47(도 4B)에 의한 hCD47KO Jurkat 세포(도 4A)의 크로스-드레싱.
도 5A 및 도 5B: WT Jurkat 세포(도 5B)와의 공배양 후 천연 hCD47에 의한 피그 LCL(도 5A)의 크로스-드레싱.
도 6: WT Jurkat 세포, 돼지 LCL/CD47p/h 세포, CD47KO Jurkat 세포, WT Jurkat 세포와 혼합된 CD47KO 세포(염색 시간에 혼합됨), WT Jurkat 또는 돼지 hCD47-Tg LCL 세포와 공배양(24시간)된 CD47KO Jurkat 세포, 돼지 LCL 세포, 및 WT Jurkat 세포와 공배양(24h)된 LCL 세포 상에서의 CD47 발현. 도면의 숫자는 게이팅된 CD47KO Jurkat 세포 및 돼지 LCL 세포 상에서 CD47 염색의 평균 형광 강도(MFI)를 나타낸다.
도 7A 내지 도 7D: 2시간 후 WT Jurkat 세포(도 7B)로부터의 세포외 소포(도 7C) 또는 엑소좀(도 7D)에 의한 CD47KO Jurkat 세포(도 7A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 8A 내지 도 8D: 6시간 후 WT Jurkat 세포(도 8B)로부터의 세포외 소포(도 8C) 또는 엑소좀(도 8D)에 의한 CD47KO Jurkat 세포(도 8A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 9A 내지 도 9D: 2시간 후 WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포(도 9C) 또는 엑소좀(도 9D)에 의한 돼지 LCL 세포(도 9A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 10A 내지 도 10D: 6시간 후 WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포(도 10C) 또는 엑소좀(도 10D)에 의한 돼지 LCL 세포(도 10A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 1A 내지 도 1C: hCD47-Tg LCL 세포(도 1C)와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47(도 1B)에 의한 돼지 LCL(도 1A)의 크로스-드레싱.
도 2: hCD47-Tg LCL 세포와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47에 의한 돼지 LCL의 크로스-드레싱.
도 3A 및 도 3B: hCD47-Tg LCL 세포(도 3B)와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47에 의한 인간 Jurkat 세포(도 3A)의 크로스-드레싱.
도 4A 내지 도 4C: WT Jurkat 세포(도 4C)와의 공배양 후 천연 hCD47(도 4B)에 의한 hCD47KO Jurkat 세포(도 4A)의 크로스-드레싱.
도 5A 및 도 5B: WT Jurkat 세포(도 5B)와의 공배양 후 천연 hCD47에 의한 피그 LCL(도 5A)의 크로스-드레싱.
도 6: WT Jurkat 세포, 돼지 LCL/CD47p/h 세포, CD47KO Jurkat 세포, WT Jurkat 세포와 혼합된 CD47KO 세포(염색 시간에 혼합됨), WT Jurkat 또는 돼지 hCD47-Tg LCL 세포와 공배양(24시간)된 CD47KO Jurkat 세포, 돼지 LCL 세포, 및 WT Jurkat 세포와 공배양(24h)된 LCL 세포 상에서의 CD47 발현. 도면의 숫자는 게이팅된 CD47KO Jurkat 세포 및 돼지 LCL 세포 상에서 CD47 염색의 평균 형광 강도(MFI)를 나타낸다.
도 7A 내지 도 7D: 2시간 후 WT Jurkat 세포(도 7B)로부터의 세포외 소포(도 7C) 또는 엑소좀(도 7D)에 의한 CD47KO Jurkat 세포(도 7A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 8A 내지 도 8D: 6시간 후 WT Jurkat 세포(도 8B)로부터의 세포외 소포(도 8C) 또는 엑소좀(도 8D)에 의한 CD47KO Jurkat 세포(도 8A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 9A 내지 도 9D: 2시간 후 WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포(도 9C) 또는 엑소좀(도 9D)에 의한 돼지 LCL 세포(도 9A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
도 10A 내지 도 10D: 6시간 후 WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포(도 10C) 또는 엑소좀(도 10D)에 의한 돼지 LCL 세포(도 10A)의 CD47 크로스-드레싱의 측정.
8.
발명의 상세한 설명
본 명세서에는 CD47-보유 세포외 소포("EV", 예를 들어, 엑소좀) 및 이를 포함하는 조성물이 제공된다. 이러한 CD47-보유 EV는 조직을 크로스-드레싱시키는 데 사용될 수 있으며 이러한 조직이 대식세포 및 다른 식세포에 의한 식세포 제거를 회피하도록 허용하다. 이러한 방법 및 조성물은 이종이식에 사용될 수 있다. EV의 제조 방법은 섹션 6.1에 설명되어 있다. 생성된 EV를 포함하는 조성물은 섹션 6.2에 설명되어 있다. EV를 사용하여 조직을 크로스-드레싱시키는 방법은 섹션 6.3에 설명되어 있다. 이종이식에서 이러한 조직의 사용은 섹션 6.4에 설명되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 ± 10% 이내를 의미한다. 정수가 필요하거나 예상되는 경우 및 백분율의 경우, 이 용어의 범위는 다음 정수로 반올림하는 것 및 다음 정수로 반내림하는 것을 포함하는 것으로 이해된다. 명확성을 위해, 본 명세서에서 "약 X" 및 "적어도 약 X"와 같은 어구의 사용은 "X"를 포함하고 특히 언급하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "세포외 소포(EV)"는 일반적으로 세포에 의해 세포외 공간으로 분비되는 지질막으로 둘러싸인 소포를 지칭하며, 엑소좀 및/또는 미세소포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "엑소좀"은 일반적으로 미세소포와 같은 다른 EV에 비해 크기가 전형적으로 더 작은(예를 들어, 직경 30 내지 150㎚) EV의 하위세트를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "크로스-드레싱"은 일반적으로 예를 들어, 세포를 상기 단백질을 발현하는 세포 또는 EV와 함께 인큐베이션시킴으로써 유도되는 세포에서의 트랜스제닉 단백질(예를 들어, CD47)의 발현을 지칭한다.
8.1.
EV의 제조 방법
8.1.1. EV
세포외 소포(EV)는 세포에 의해 세포외 환경으로 방출되는 지질 이중층으로 둘러싸인 막이다. EV의 예는 엑소좀, 미세소포(MV) 및 아폽토시스체를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Carnino et al. Respiratory Research (2019) 20:240]을 참조한다. 특정 실시형태에서, EV는 엑소좀을 포함한다. 일부 실시형태에서, EV는 엑소좀으로 이루어진다. 특정 실시형태에서, EV는 MV를 포함한다. 일부 실시형태에서, EV는 MV로 이루어진다.
특별한 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 2,000㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 1,500㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 1,000㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 500㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 250㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 200㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 20㎚ 내지 약 150㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 50㎚ 내지 약 150㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 50㎚ 내지 약 1,500㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 50㎚ 내지 약 1,000㎚이다. 일부 실시형태에서, EV는 약 50㎚ 내지 약 500㎚이다.
엑소좀은 본 개시내용에 사용하기에 적합한 EV의 하나의 예시적인 유형이다. 엑소좀을 특징규명하기 위한 다양한 마커가 당업계에 알려져 있고, Alix, Tsg101, 테트라스파닌(예를 들어, CD63, CD81, CD82, CD53 및 CD37) 및 플로틸린을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. MV는 본 개시내용에 사용하기에 적합한 EV의 또 다른 예시적인 유형이고, 이들 소포를 정의하기 위해 사용되는 일반적인 단백질 마커는 셀렉틴, 인테그린 및 CD40 리간드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
8.1.2. EV의 공급원
본명세에는 CD47, 예를 들어, 인간 CD47을 포함하는 EV가 제공된다. 일부 실시형태에서, EV에 포함된 CD47은 EV를 방출하는 세포에 고유한 것이다. 다른 예에서, CD47은 EV를 방출하는 세포(예를 들어, 트랜스제닉 CD47)에 고유한 것이 아니다. 바람직한 실시형태에서, CD47은 트랜스제닉 인간 CD47이다.
많은 세포 유형이 EV를 방출하고 EV는 숙주 세포에 의해 방출되는 핵산, 단백질 및 지질과 같은 다양한 유형의 카고를 보유할 수 있다. 본 명세서에 제공된 EV는 배양물에서 세포주에 의해서 또는 배양물에서 1차 세포에 의해서 방출될 수 있다. 예시적인 실시형태에서, EV는 인간 세포, 예를 들어, 배양물에서 인간 1차 세포로부터 방출된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 트랜스제닉 CD47을 발현하는 인간 세포로부터 방출된다. 다른 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 인간 암 세포, 예를 들어, CD47을 과발현하는 인간 암 세포(예를 들어, Jurkat 백혈병 세포)로부터 방출된다. 본 명세서에 제공된 EV는 자연적으로 인간 CD47을 발현하는 세포, 또는 인간 CD47을 재조합적으로 발현하도록 변형된 세포, 예를 들어, 하기 섹션 6.1.3에 설명된 바와 같이 변형된 세포이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 인간 CD47을 과발현하도록 변형된 세포, 예를 들어, 하기 섹션 6.1.3에 설명된 바와 같이 변형된 세포이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 인간 CD47을 유도적으로 발현하도록 변형된 세포, 예를 들어, 하기 섹션 6.1.3에 설명된 바와 같이 변형된 세포이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 생물학적 유체, 예를 들어, EV로부터 단리된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV가 방출되는 세포는 EV 방출을 향상시키는 작용제로 처리될 수 있다. 세포로부터 EV의 방출을 향상시키는 작용제는 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 문헌[Deng et al., Theranostics 2021, 11(9):4351-4362; Wang et al. Cells 2020, 9(3):660; 및 Nakamura et al., Molecular Therapy 28(10):2203-2219 October 2020]을 참조한다. 특정 실시형태에서, EV 방출을 향상시키는 작용제는 초음파, 아디포넥틴, 노르에피네프린, 포르스콜린, 페노테롤, 메틸도파민 또는 메페네신이다.
8.1.3. EV를 방출하는 트랜스제닉 세포주의 제조 방법
또한 CD47-보유 EV를 방출하는 CD47을 발현하는 트랜스제닉 세포(예를 들어, 1차 세포 또는 세포주 세포)가 본 명세서에 제공된다. 인간 CD47의 아미노산 서열은 다음 NCBI 참조 서열(RefSeq) 수탁 번호:NP_001768; NP_001369235.1; NP_942088; 및 XP_005247966.1에서 찾을 수 있다. 인간 CD47을 암호화하는 핵산 서열은 다음 NCBI RefSeq 수탁 번호: NM_001777; NM_198793; XM_005247909.2 및 NM_001382306.1에서 찾을 수 있다. CD47의 임의의 알려진 스플라이스 변이체를 사용하여 본 명세서에 제공된 트랜스제닉 세포주를 제조할 수 있다. 인간 CD47의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열의 비제한적인 예를 표 1에 제공한다.
CD47, 예를 들어, 인간 CD47을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 본 명세서에 제공된다. 벡터는 바이러스 벡터(예를 들어, 아데노-연관 바이러스(AAV), 자가-상보적 아데노-연관 바이러스(scAAV), 아데노바이러스, 레트로바이러스, 렌티바이러스(예를 들어, 유인원 면역결핍 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 또는 변형된 인간 면역결핍 바이러스)), 뉴캐슬병 바이러스(NDV), 헤르페스 바이러스(예를 들어, 단순 포진 바이러스), 알파바이러스, 백시나 바이러스 등), 플라스미드 또는 다른 벡터(예를 들어, 비-바이러스 벡터, 예컨대, 리포플렉스, 리포솜, 폴리머로솜 또는 나노입자)를 포함할 수 있다.
8.1.3.1. 트랜스제닉 세포주의 제조 방법
트랜스제닉 세포(1차 또는 세포주 세포 포함)는 당업계에 공지되어 있거나 본 명세서에 제공된 임의의 방법을 사용하여 생산될 수 있다.
본 명세서에 제공된 트랜스제닉 세포주는 세포 DNA와 세포 내로 도입된 외인성 DNA(예를 들어, DNA 작제물, 벡터 등) 사이의 상동성 재조합(HR)을 사용하여 CD47(예를 들어, 인간 CD47)을 발현하도록 조작될 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에 제공된 일부 실시형태에서, 인간 CD47 트랜스진은 이의 필요한 모든 조절 서열과 함께 예를 들어, 인간 인공 염색체로서 세포주에 도입된다.
세포주의 게놈 내로의 인간 CD47 트랜스진의 서열-특이적 삽입(또는 넉-인)은 또한 인간 CD47의 트랜스진을 함유하는 작제물을 사용하여 표적 염색체 유전자좌의 상동성 재조합(HR)과 커플링된 서열-특이적 엔도뉴클레아제에 의해 달성될 수 있다. (Meyer et al., 2010, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107, 15022-15026. Cui et al., 2010, Nat. Biotechnol. 29:64- 67. Moehle et al., 2007, Proc Natl Acad Sci USA 104:3055-3060).
서열-특이적 엔도뉴클레아제의 또 다른 예는 RNA-가이드 DNA 뉴클레아제, 예를 들어 CRISPR/Cas 시스템을 포함한다. Cas9/CRISPR(Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeat) 시스템은 RNA-가이드 DNA-결합 및 표적 DNA의 서열-특이적 절단을 활용한다. 가이드 RNA(gRNA)(예를 들어, 20개 뉴클레오타이드 함유)는 게놈 PAM(프로토스페이서 인접 모티프) 부위(NNG)의 상류 표적 게놈 DNA 서열 및 불변 RNA 스캐폴드 영역에 상보적이다. Cas(CRISPR-연관) 단백질은 gRNA 및 gRNA가 결합하는 표적 DNA에 결합하고, PAM 부위 상류의 정의된 위치에 이중-가닥 절단을 도입한다. (Geurts et al., 2009, Science 325:433; Mashimo et al., 2010, PLoS ONE 5, e8870; Carbery et al., 2010, Genetics 186:451-459; Tesson et al., 2011, Nat. Biotech. 29:695-696. Wiedenheft et al. Nature 2012, 482:331-338; Jinek et al. Science, 2012, 337:816-821; Mali et al., 2013, Science 339:823-826; Cong et al. 2012, Science 339:819-823).
본 명세서에 기재된 방법 및 조성물의 서열-특이적 엔도뉴클레아제는 조작되거나, 키메라화되거나, 유기체로부터 단리될 수 있다. 엔도뉴클레아제는 예를 들어, 돌연변이 유발에 의해 특정 DNA 서열을 인식하도록 조작될 수 있다. (Seligman et al. (2002) Nucleic Acids Research 30: 3870-3879). 조합 조립은 상이한 효소를 형성하는 단백질 소단위가 회합되거나 융합될 수 있는 방법이다. (Amould et al. (2006) Journal of Molecular Biology 355: 443-458). 특정 실시형태에서, 이들 두 가지 접근법인 돌연변이유발 및 조합 조립을 조합하여 목적하는 DNA 인식 서열을 갖는 조작된 엔도뉴클레아제를 생성할 수 있다.
서열-특이적 뉴클레아제는 단백질 형태로 또는 서열-특이적 뉴클레아제를 암호화하는 핵산, 예컨대, mRNA 또는 cDNA 형태로 세포 내로 도입될 수 있다. 핵산은 더 큰 작제물, 예컨대, 플라스미드 또는 바이러스 벡터의 일부로 전달되거나 직접적으로, 예를 들어, 전기천공, 지질 소포, 바이러스 수송체, 미세주사 및 바이오리스틱스(biolistics)에 의해서 전달될 수 있다. 유사하게, 하나 이상의 트랜스진을 함유하는 작제물은 핵산을 세포에 도입하는 데 적절한 임의의 방법에 의해 전달될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 트랜스제닉 세포주는 인간 CD47을 유도적으로 발현시켰다. 다수의 유도성 프로모터 및 유전자 발현 시스템이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 프로모터는 화학물질, 예를 들어 테트라사이클린, 타목시펜 또는 쿠메이트에 의해 유도될 수 있다. 유전자 발현은 또한 단백질-단백질 상호작용(예를 들어, 라파마이신에 의해 제어되는 FKBP12와 mTOR 사이의 상호작용)에 의해 제어될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Kallunki et al. (2019), Cells 8:796]을 참조한다.
일 실시형태에서, 서열-특이적 재조합 시스템을 사용하여 표적 유전자의 조건부 넉아웃을 달성할 수 있다. 재조합효소는 개입 폴리뉴클레오타이드와 측접하는 특정 폴리뉴클레오타이드 서열(재조합효소 인식 부위)을 인식하고 상호 가닥 교환을 촉매하여 개입 폴리뉴클레오타이드의 반전 또는 절단을 초래하는 효소이다(Araki et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 160-164).
일 실시형태에서, 세포 내 표적 유전자의 조건부 넉아웃을 위해 Cre-loxP 시스템이 사용될 수 있다. 이것은 상동성 재조합(HR) 및 유도성 Cre 재조합효소의 발현을 통한 loxP 부위의 표적화된 통합(넉-인)을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 트랜스진(예를 들어, 재조합효소 또는 인간 CD47 트랜스진을 암호화하는)의 조건부 발현은 외인성 자극에 의해 유도되거나 비활성화될 수 있는 조절 서열을 사용함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 조건부 넉아웃 대립유전자의 서열-특이적 재조합 시스템은 예를 들어 화학물질(약물)에 의해 유도될 수 있는 재조합효소의 활성을 가짐으로써 조절될 수 있다. 화학물질은 Cre 재조합효소 유전자의 전사를 활성화하거나 Cre 재조합효소 단백질의 핵으로의 수송을 활성화할 수 있다. 대안적으로, 재조합효소는 투여된 약물의 존재보다는 투여된 약물의 부재에 의해 활성화될 수 있다. 유도성 시스템을 조절하는(따라서, 예를 들어, 조건부 넉아웃을 유도하는) 화학물질의 비제한적인 예는 테트라사이클린, 타목시펜, RU-486, 독시사이클린 등을 포함한다(Nagy A (Feb 2000), Cre recombinase: the universal reagent for genome tailoring, Genesis, 26 (2): 99-109). 예를 들어, 미국 특허 출원 제15/558,789호에 기재된 조건부 넉아웃 및 넉인 작제물을 참조하기 바란다.
8.1.3.2. EV의 염색체외 발현
특정 실시형태에서, CD47이 염색체외 DNA로부터 발현되는 EV를 생산하는 방법이 본명세서에 제공된다. 염색체외 DNA는 숙주 염색체 DNA에 통합되지 않는 DNA이다. 염색체외 DNA의 비제한적인 예는 플라스미드 및 원형 염색체외 DNA를 포함한다. 진핵세포에서는 염색체외 DNA가 핵 내부 또는 핵 외부에서 발견될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 인간 CD47을 암호화하는 벡터(예를 들어, 상기 섹션 6.1.3에 설명된 바와 같은 벡터)가 형질주입될 수 있으며, 인간 CD47 단백질은 숙주 DNA에 통합되지 않고 벡터로부터 발현된다.
8.1.3.3. 세포로부터의 EV의 단리
EV는 당업계에 공지되어 있거나 본 명세서에 기재된 임의의 방법을 사용하여 세포(예를 들어, CD47을 발현하는 트랜스제닉 세포)로부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Carnino et al. Respiratory Research (2019) 20:240]을 참조한다.
예를 들어, EV는 세포 배양 상청액의 차동 원심분리에 의해 단리될 수 있다. 예시적인 프로토콜에서, 세포 상청액을 2,000g(3,000rpm)에서 20분 동안 원심분리시켜 세포 잔해 및 죽은 세포를 제거한다. 그런 다음 EV는 45분 동안 16,500g(9,800rpm)에서 원심분리시켜 정제된다. 엑소좀은 유사한 프로토콜에 의해 얻을 수 있는데, 여기서 세포 상청액을 20분 동안 2,000g(3,000rpm)에서 원심분리시켜 세포 잔해 및 죽은 세포를 제거하고 그 다음 엑소좀을 100,000g(26,450rpm)에서 대략 2시간 내지 16시간 동안 원심분리시켜 단리시킨다.
엑소좀을 포함한 EV는 또한 밀도 구배 원심분리를 사용하여 정제될 수 있다. 이 방법에서 EV는 수크로스, 아이오헥솔 또는 아이오딕산올 용액에서 부력 밀도를 기준으로 분리된다. EV, 예컨대, 엑소좀을 분리시키는 데 사용되는 방법의 다른 예는 유기 용매(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 아세트산나트륨 또는 프로타민)를 사용한 침전, 면역침전, 항체-코팅 자기 비드(예를 들어, 항-CD63 코팅 자기 비드)를 사용한 분리, 미세유체 장치 및 한외여과를 포함한다. 예를 들어, 예시적인 프로토콜에 대해서는 문헌[Carnino et al. Respiratory Research (2019) 20:240 및 Momen-Heravi et al. Biol. Chem. 2013; 394(10): 1253-1262]를 참조하기 바란다. 추가의 예시적인 방법은 헤파린-접합 아가로스 비드를 사용한 단리(예를 들어, 문헌[Balaj et al. (2015) Sci Rep 5, 10266) 및 Tim4-친화성 정제를 사용한 정제(예를 들어, 문헌[Nakai et al. (2016) Sci Rep 6, 33935])를 사용한 단리이다.
또한, EV 단리를 위한 상용 키트가 입수 가능하며 본 명세서에 제공된 EV를 단리시키는 데 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 exoEasy Kit(Qiagen), ExoQuick® kit(Systems Bioscience), Total Exosome Isolation Reagent(ThermoFisher Scientific) 및 EasySep™ Human Pan-Extracellular Vesicle Positive Selection Kit(Stem Cell Technologies)를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 단리되거나 정제된다. 본 명세서에 제공된 EV는 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 제공된 임의의 방법을 사용하여 정제될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "단리된" 또는 "정제된" EV는 EV가 유래된 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포 물질, 미세입자 또는 다른 오염물질(예를 들어, 소기관, 지질, 콜레스테롤)이 실질적으로 없다. 특정 실시형태에서, 본 명세서 제공된 EV는 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 97%, 98%, 99%의 순도를 갖는다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 99% 초과의 순도를 갖는다. 순도는 예를 들어, 동적 광 산란 또는 단일 입자 추적 분석을 사용하여 입자 크기를 측정하거나 유세포 분석법, ELISA 또는 전자 현미경과 같은 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Balaj et al. (2015) Sci Rep 5, 10266, Nakai et al. (2016) Sci Rep 6, 33935 및 Carnino et al. (2019) Respiratory Research 20:240]을 참조한다.
8.1.3.4. mRNA 수준을 검출하기 위한 검정
mRNA 수준을 검출하거나 정량화하는 여러 방법이 당업계에 알려져 있다. 예시적인 방법은 노던 블롯, 리보뉴클레아제 보호 검정, PCR-기반 방법(예를 들어, 정량적 PCR), RNA 서열결정, Fluidigm® 분석 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 인간 CD47의 mRNA 서열을 사용하여 mRNA 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 프로브를 제조할 수 있다. 그 다음 임의의 적합한 검정, 예컨대, PCR-기반 방법, 노던 블로팅, 딥스틱 검정, TaqManTM 검정을 사용하여, 프로브를 사용하여 샘플에서 mRNA를 검출할 수 있다.
다른 실시형태에서, 생물학적 샘플에서 인간 CD47 발현을 시험하기 위한 핵산 검정이 준비될 수 있다. 검정은 전형적으로 고체 지지체 및 지지체와 접촉하는 적어도 하나의 핵산을 포함하며, 여기서 핵산은 mRNA의 적어도 일부에 상응한다. 검정은 또한 샘플 내 mRNA의 변경된 발현을 검출하기 위한 수단을 가질 수 있다. 검정 방법은 목적하는 mRNA 정보 유형에 따라 달라질 수 있다. 예시적인 방법은 노던 블롯 및 PCR-기반 방법(예를 들어, qRT-PCR)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. qRT-PCR과 같은 방법이 또한 샘플 내 mRNA의 양을 정확하게 정량화할 수 있다.
전형적인 mRNA 검정 방법은 다음 단계를 포함할 수 있다: (1) 표면-결합된 대상 프로브를 얻는 단계; (2) 특이적 결합을 제공하기에 충분한 조건 하에서 mRNA의 집단을 표면-결합된 프로브에 혼성화시키는 단계; (3) 표면-결합된 프로브에 특이적으로 결합되지 않은 핵산을 제거하기 위한 혼성화 후 세척하는 단계; 및 (4) 혼성화된 mRNA를 검출하는 단계. 각각의 단계에 사용되는 시약 및 이의 사용 조건은 특정 응용 분야에 따라 달라질 수 있다.
PCR-기반 방법과 같은 다른 방법이 또한 인간 CD47의 발현을 검출하는 데 사용될 수 있다. PCR 방법의 예는 미국 특허 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제6,927,024호에서 찾아볼 수 있다. RT-PCR 방법의 예는 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제7,122,799호에서 찾아볼 수 있다. 형광 동계 PCR 방법은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제7,186,507호에 기재되어 있다.
일부 실시형태에서, 정량적 역전사-PCR(qRT-PCR)은 RNA 표적의 검출 및 정량화 둘 다에 사용될 수 있다(Bustin et al., Clin. Sci. 2005, 109:365-379). 일부 실시형태에서, qRT-PCR-기반 검정은 세포-기반 검정 중에 mRNA 수준을 측정하는 데 유용할 수 있다. qRT-PCR-기반 방법의 예는 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제7,101,663호에서 찾아볼 수 있다.
일반적인 역전사효소-PCR 및 아가로스 겔 분석과 달리, qRT-PCR은 정량적 결과를 제공한다. qRT-PCR의 또 다른 장점은 상대적으로 사용하기 쉽고 편리하다는 것이다. Applied Biosystems 7500과 같은 qRT-PCR용 기기는 상업적으로 입수 가능하여, TaqMan® Sequence Protection Chemistry와 같은 시약도 상업적으로 입수 가능하다. 예를 들어, 제조업체의 지침에 따라 TaqMan® Gene Expression Assay를 사용할 수 있다. 이러한 키트는 인간, 마우스 및 래트 mRNA 전사체를 신속하고 안정적으로 검출하고 정량화하기 위해 사전 제형화된 유전자 발현 검정이다. 예시적인 qRT-PCR 프로그램은 예를 들어 50℃에서 2분, 95℃에서 10분, 95℃에서 15초, 이어서 60℃에서 1분의 40회 사이클이다.
8.1.3.5. 폴리펩타이드 또는 단백질 수준의 검출을 위한 검정
여러 단백질 검출 및 정량 방법을 사용하여 인간 CD47의 수준을 측정할 수 있다. 임의의 적합한 단백질 정량 방법을 사용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체-기반 방법이 사용된다. 사용될 수 있는 예시적인 방법은 면역블로팅(웨스턴 블롯), ELISA, 면역조직화학, 면역형광, 유세포 분석법, 세포분석 비드 어레이, 질량 분광학 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 직접 ELISA, 간접 ELISA 및 샌드위치 ELISA를 비롯한 여러 유형의 ELISA가 일반적으로 사용된다.
8.2.
EV 조성물
본 명세서에는 본 명세서에 기재된 EV, 예를 들어, CD47-보유 EV, 예컨대, CD47-보유 엑소좀을 포함하는 조성물("EV 조성물")이 제공된다. 정제된 EV는 동결보호제의 존재 하에서 EV를 동결시킴으로써 동결보존되거나, 동결건조되거나, 분무 건조될 수 있다. EV는 친수성 중합체(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜) 또는 스캐폴드(예를 들어, EV가 생체 내에서 결합하는 세포외 기질의 성분을 포함하는 스캐폴드)를 사용하여 안정화될 수 있다. 예를 들어, [Kusuma et al. (2018) Front. Pharmacol., 9:1199]를 참조한다.
본 명세서에 제공된 EV 조성물은 CD47 함량이 다양할 수 있다. 특정 실시형태에서, EV는 CD47 mRNA를 포함한다. 인간 CD47 mRNA의 수준은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어 섹션 6.1.3.4에 설명된 방법에 의해서 결정될 수 있다. 특정 실시형태에서 EV는 CD47 폴리펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 인간 CD47 단백질의 수준은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어 섹션 6.1.3.5에 설명된 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
따라서, 예를 들어, EV 조성물 단위에 존재하는 EV의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%가 인간 CD47을 발현한다. 유사하게, 인간 CD47은 EV 조성물 내의 총 막-회합 단백질의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 차지할 수 있다.
본 명세서에 제공된 EV 조성물은 적합한 담체, 예를 들어 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 일반적으로, "약제학적으로 허용 가능한" 담체는 생물학적으로 또는 달리 바람직한 물질이며, 즉, 이러한 물질은 독성과 같은 어떠한 바람직하지 않은 생물학적 효과도 유발하지 않고 대상체에게 투여될 수 있다. 예시적인 약제학적으로 허용 가능한 담체는 수성 용매(예를 들어 물; 밸런스 염 용액, 예컨대, 인산염 완충 식염수(PBS), 행크 밸런스 염 용액(HSB), 얼 밸런스 염 용액(EBSS); 및 세포 배양 배지)뿐만 아니라 비수성 용매(예를 들어, 지방, 오일, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일, 주사 가능한 유기 에스터, 예컨대, 에틸올레이트)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 담체는 액체, 반고체, 예를 들어 페이스트 또는 고체 담체를 포함한다. 또한, 목적하는 경우, 조성물은 보조 물질, 예컨대, 습윤제 또는 유화제, 안정화제 또는 pH 완충제를 소량 함유할 수 있다. 약제학적 조성물 내의 다양한 성분의 pH 및 정확한 농도는 잘 알려진 매개변수에 따라 조정된다. 따라서, 본 발명의 EV는 공지된 기술에 따라 약제학적으로 허용 가능한 담체에서 투여용으로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Remington, The Science And Practice of Pharmacy (22nd Ed. 2012)]을 참조한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 0.01% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 0.05% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 0.1% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 0.5% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 1% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 5% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 10% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 15% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 20% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 25% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 30% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 35% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 40% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 50% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 55% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 60% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 70% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 75% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 80% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 85% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 90% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부피 기준 중량 기준으로 95% 내지 99%의 EV를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 100%의 EV, 예컨대, 동결건조된 EV를 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 조성물에 포함된 EV의 양은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 이종이식편을 크로스-드레싱시키기에 충분한 양이다. 특정 실시형태에서, EV의 양은 이종이식편을 교배하고 장기 세포의 식세포작용을 감소시키기에 충분한 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 이종이식편을 크로스-드레싱시키고 이식 후 수용자에서 전신 염증을 감소시키기에 충분한 양이다.
특정 실시형태에서, EV의 양은 정량화된 양이다. MV 및 엑소좀을 포함한 EV의 정량화를 위한 다양한 방법이 관련 기술분야에 알려져 있다. 예를 들어, EV를 정량화하기 위한 비제한적인 예시적인 방법은 전자 현미경(EM), 표면 플라스몬 공명(SPR), 유세포 분석법, 가변 저항 펄스 감지(TRPS), 나노사이트 나노입자 추적 분석, 단백질 기반 방법 및 효소 결합 면역흡착 검정을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×106 내지 약 1.0×1015개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×107 내지 약 1.0×1014개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×108 내지 약 1.0×1013개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×109 내지 약 1.0×1012개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1010 내지 약 1.0×1011개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×106 내지 약 1.0×108개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×108 내지 약 1.0×1015개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×108 내지 약 1.0×1012개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1010 내지 약 1.0×1015개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1012 내지 약 1.0×1015개의 EV를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×106개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×107개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×108개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×109개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1010개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1011개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1012개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1013개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1014개의 EV를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0×1015개의 EV를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0마이크로그램(㎍) 내지 약 100그램(g)의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 5.0㎍ 내지 약 50g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 10.0㎍ 내지 약 10g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 50.0㎍ 내지 약 5g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 100.0㎍ 내지 약 1g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 5.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 10.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 25.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 50.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 100.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 250.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 500.0㎍의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 5.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 10.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 25.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 50.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 100.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 250.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 500.0㎎의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 1.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 5.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 10.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 25.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 50.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 100.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 250.0g의 EV 단백질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 약 500.0g의 EV 단백질을 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물에 포함된 EV의 양은 EV가 생성된 세포의 양에 대한 것이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, EV의 양은 48시간 초과 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 48시간 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 24시간 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 16시간 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 12시간 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 12시간 미만 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다.
일부 실시형태에서, EV의 양은 48시간 초과 동안 배양된 약 1.0×108 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 24시간 동안 배양된 약 1.0×108 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 16시간 동안 배양된 약 1.0×108 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 12시간 동안 배양된 1.0×106 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 12시간 미만 동안 배양된 1.0×108 내지 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다.
일부 실시형태에서, EV의 양은 48시간 초과 동안 배양된 약 1.0×106 내지 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 24시간 동안 배양된 1.0×106 내지 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 16시간 동안 배양된 1.0×106 내지 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 12시간 동안 배양된 1.0×106 내지 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 12시간 미만 동안 배양된 1.0×106 내지 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다.
일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×105개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×106개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×107개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×108개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×109개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1010개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1011개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1012개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1013개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1014개 세포로부터 수집된 양이다. 일부 실시형태에서, EV의 양은 약 1.0×1015개 세포로부터 수집된 양이다.
8.3
조직을 크로스-드레싱시키기 위해서 EV를 사용하는 방법
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "크로스-드레싱"은 예를 들어, 세포를 상기 단백질을 발현하는 세포 또는 EV와 함께 인큐베이션시킴으로써 유도되는 세포에서의 트랜스제닉 단백질(예를 들어, CD47)의 발현을 설명한다. 예를 들어, 돼지 세포는 인간 CD47을 발현하는 세포에 대한 노출에 의해서, 예를 들어, 공동 인큐베이션에 의해서 인간 CD47와 크로스-드레싱될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 공여자 돼지로부터의 골수 조직과 함께 인큐베이션된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 공여자 돼지로부터의 신장과 함께 인큐베이션된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 동일한 공여자 돼지로부터의 골수 조직 및 신장 둘 다와 함께 인큐베이션된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 EV는 제1 공여자 돼지로부터의 신장 및 제2 공여자 돼지로부터의 골수 조직과 함께 인큐베이션된다.
8.4.
이종이식에서 EV를 사용하는 방법
본 명세서에는 이종이식편을 표적 조직에 이식하기 전에 이종이식편을 CD47(예를 들어, 인간 CD47)과 크로스-드레싱시키는 단계를 포함하는 이종이식 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 표적 조직은 신장 조직이다. 다른 실시형태에서, 표적 조직은 폐 조직이다. 일부 실시형태에서, 표적 조직은 인간이다. 일부 실시형태에서, 당업계에 공지된 방법(예를 들어, 웨스턴 블로팅, 유세포 분석법 또는 정량적 중합효소 연쇄 반응)에 의해 결정된 바와 같이 표적 조직은 SIRPα(예를 들어, 인간 SIRPα)를 발현하지 않는다. 특정 측면에서, CD47 크로스-드레싱은 표적 조직에서의 신호 조절 단백질 α(SIRPα) 발현과 독립적이다.
8.4.1. 이종이식편을 EV에 노출시키는 방법
특정 실시형태에서, 크로스-드레싱은 이종이식편을 CD47을 포함하는 EV에 노출시킴으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, 크로스-드레싱은 이종이식편을 인간 CD47을 발현하는 세포주(예를 들어, 트랜스제닉 세포주)와 함께 공배양함으로써 달성된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 시험관내에서 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 생체내에서 EV에 노출된다. 예를 들어, EV, 예컨대, 엑소좀은 안구후 정맥동(retro-orbital venous sinus), 꼬리 정맥 또는 심장내 또는 유사한 접근법을 통해 주입되어 생체내에서 EV를 전달할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 생체외에서 EV에 노출된다. 특정 실시형태에서, 이종이식 혈관은 생체내에서 EV로 관류된다. 예를 들어, 이종이식편은 공여자 또는 수용자 또는 둘 다에서 생체내에서 관류될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이종이식 혈관은 생체외에서 EV로 관류된다.
일부 실시형태에서, 이종이식편은 1회를 초과하게 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 1일, 2일 또는 3일에 걸쳐 EV에 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회 또는 10회 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 동일한 EV 조성물에 반복적으로 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 다양한 EV 조성물에 노출된다.
본 명세서에 제공된 바와 같이, EV에 대한 이종이식편의 노출은 이식 전, 이식 후 또는 둘 다에서 발생할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 이식 전에 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 이식 후에 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 이식 전 및 이식 후에 EV에 노출된다.
일부 실시형태에서, 이종이식편은 이식 후에 1회를 초과하게 노출된다. 예를 들어, 이식 후 수용자는 EV가 1회 이상 주입(예를 들어, 정맥 주입)될 수 있다. 일부 실시형태에서, 수용자는 매일 EV가 주입된다. 일부 실시형태에서, 수용자는 1일 1회 초과로 EV가 주입된다. 일부 실시형태에서, 수용자는 주입된다.
구체적인 실시형태에서, 장기는 이식 전, 이식 후 또는 이들의 조합으로 EV가 생체내에서 직접 주입된다. 예를 들어, 장기는 이식 전에 직접(예를 들어, 간문맥을 통해) 관류될 수 있다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 전에 생체내에서 직접 관류된다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 후 생체내에서 직접 관류된다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 전 및 이식 후에 생체내에서 직접 관류된다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 전에 1회를 초과하게 생체내에서 직접 관류된다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 후 1회를 초과하게 생체내에서 직접 관류된다. 일부 실시형태에서, 장기는 이식 전 및 이식 후 1회를 초과하게 생체내에서 직접 관류된다.
EV에 대한 이종이식편의 노출은 이종이식편을 크로스-드레싱시키는 데 충분한 시간 동안 이루어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 약 1 내지 2시간, 2 내지 3시간, 3 내지 4시간, 4 내지 5시간, 5 내지 6시간, 6 내지 7시간, 7 내지 8시간, 8 내지 9시간, 9 내지 10시간, 10 내지 11시간 또는 11 내지 12시간 동안 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 약 12 내지 16시간 동안 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 약 16 내지 24시간 동안 EV에 노출된다. 일부 실시형태에서, 이종이식편은 24시간 초과 동안 EV에 노출된다.
일부 실시형태에서, EV는 특정 장기 또는 세포 유형에 대한 전달을 개선하도록 조작된다. 표적화 특성을 갖는 EV를 조작하는 다양한 기술이 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Murphy, D.E., et al. Exp Mol Med 51, 1-12 (2019)] 참조). 예를 들어, 일부 실시형태에서 EV는 의도된 작용 세포에 대한 EV의 표적화를 개선시키는 특정 표적화 펩타이드를 발현한다. 또 다른 예시적인 표적화 기술은 의도된 작용 세포에 대한 EV의 표적화를 개선시키는 특정 인테그린 조합을 발현하도록 EV를 조작하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조작은 EV 생산 후에 수행된다.
8.4.2. 이종이식편에 대한 EV의 노출 효과
일부 실시형태에서, 세포 상의 CD47의 크로스-드레싱은 상기 세포가 식세포작용을 회피하게 한다. 특정 실시형태에서, 세포 상의 CD47의 크로스-드레싱은 상기 세포가 아폽토시스 유도 없이 식세포작용을 회피하게 한다.
특정 실시형태에서, 예컨대, 섹션 6.4에 기재된 방법에 의해서, 본 개시내용에 따라 생성된 CD47 크로스-드레싱된 세포는 EV로부터의 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 CD47을 발현하는 세포에 비해서 CD47 리간드(예를 들어, 트롬보스폰딘(TSP-1))와의 결찰이 감소된 CD47을 발현한다. 일부 실시형태에서, 예컨대, 섹션 6.4에 기재된 방법에 의해서, 본 개시내용에 따라 생성된 CD47 크로스-드레싱된 세포는 EV로부터의 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 CD47을 발현하는 세포에 비해서 CD47 리간드(예를 들어, 트롬보스폰딘(TSP-1) 또는 SIRPα)와의 결찰이 없거나 결찰이 수준이 검출 가능하지 않은 CD47을 발현한다.
예를 들어, CD47에 대한 TSP-1 결합은 CD47-발현 세포에서 염증 및 사멸을 유발할 수 있다. 그러나, 본 개시내용은 부분적으로 CD47 크로스-드레싱된 세포가 아폽토시스 신호를 전달하지 않는다는 발견에 기초한다. 반대로, CD47과 크로스-드레싱되지 않고 내인성 또는 외인성으로 CD47을 발현하는 세포는 세포 사멸을 겪고 염증이 증가한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따라 생성된 CD47 크로스-드레싱된 세포는 EV로부터의 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 CD47을 발현하는 세포에 비해 감소된 세포 사멸을 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따라 생성된 CD47 크로스-드레싱된 세포는 EV로부터의 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 CD47을 발현하는 세포에 비해 SIRPα 또는 이의 단편, 키메라 및/또는 융합에 노출 시 감소된 세포 사멸을 나타낸다. 구체적인 실시형태에서, 본 개시내용에 따라 생성된 CD47 크로스-드레싱된 세포는 EV로부터의 CD47과 크로스-드레싱되지 않고 동일한 양의 SIRPα-Fc에 노출된 CD47 발현 세포에 비해, 약 50nM의 인간 SIRPα-Fc에 1시간 동안 노출 시 감소된 세포 사멸을 나타낸다.
식세포작용은 당업계에 공지되어 있거나 본 명세서에 기재된, 예를 들어 실시예 4에 기재된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 세포는 Celltrace 바이올렛으로 표지되고 인간 대식세포와 함께 인큐베이션될 수 있다. 그런 다음 유세포 분석법을 사용하여 표지된 표적 세포를 탐식한 대식세포(CD14-양성 세포)의 비율을 결정함으로써 식세포작용 수준을 측정할 수 있다. 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 이종이식편을 노출시키는 단계를 포함하는 이종이식편을 크로스-드레싱시키는 방법이 본 명세서에서 제공되며, 이 방법은 이종이식편의 식세포작용을 크로스-드레싱되지 않은 이종이식편에 비해서 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 감소시킨다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 이종이식 방법은 아폽토시스를 유도하지 않고 식세포작용을 감소시킨다. 아폽토시스는 당업계에 공지된 임의의 방법 또는 본 명세서에 기술된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 아폽토시스는 프로피듐 아이오다이드(PI) 또는 PI와 Annexin V로 세포를 염색함으로써 측정될 수 있다. 아폽토시스는 검출될 수 없거나 동종이계 CD47을 발현하는 이종이식편에 비해서 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 감소될 수 있다.
식세포작용의 회피는 세포의 더 긴 생존을 초래할 수 있고, 더 나아가 키메라 현상의 연장을 초래할 수 있다. 예를 들어, 돼지 골수 세포에서 인간 CD47의 크로스-드레싱은 돼지 골수 세포가 인간 수용자에게 이식된 후 식세포작용을 회피하게 할 수 있어서 돼지 골수 세포의 생존이 연장될 수 있다. 그러면 돼지 골수 세포의 생존 기간이 길어지면 키메라 현상이 연장될 수 있는데, 이는 이식 거부를 방지하는 데 도움이 될 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같이, 이식 전에 이식편을 인간 CD47을 포함하는 EV와 크로스-드레싱시키는 것은 이종이식편의 염증을 감소시킨다. 따라서, 일부 실시형태에서, 이종이식편의 염증은 검출 가능하지 않을 수 있거나 동종이계 CD47을 발현하는 이종이식편에 비해서 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 감소할 수 있다.
또한 본 명세서에 제공되는 바와 같이, 이식 전에 이종이식편을 인간 CD47을 포함하는 EV와 크로스-드레싱시키는 것은 수용자에서 전신 염증을 감소시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 이종이식편의 이식 후 수용자에서 전신 염증은 검출 가능하지 않을 수 있거나 동종이계 CD47을 발현하는 이종이식편의 이식 후에 비해서 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 감소할 수 있다.
이식 거부는 많은 이종이식편 수용자에게 주요 문제이며, 이는 종종 면역억제 요법의 장기 투여를 필요로 하며 식세포작용의 회피는 수용자의 이종이식편 거부를 감소시킬 수 있다. 따라서, 일 양상에서, 수용자에서 이종이식편의 거부반응을 감소시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 이 방법은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 이종이식편을 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 방법은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편의 수용자에 비해서 수용자에 대한 면역억제 요법의 투여를 감소시킨다(예를 들어, 투여는 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%만큼 또는 90%를 초과하게 감소함). 구체적인 실시형태에서, 방법은 대등한 수용자(수용자와 동일한 유형의 조직 또는 장기를 제공받은 동일한 성별 및 대등한 연령, 신장 및/또는 체중의 사람)에게 전형적으로 투여되는 면역억제 요법의 양에 비해서 수용자에 대한 면역억제 요법의 투여를 감소시키고(예를 들어, 투여는 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%만큼 또는 90%를 초과하게 감소함), 여기서 대등한 수용자는 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편을 제공받았다. 구체적인 실시형태에서, 방법은 대등한 임상 환경에서 표준 치료에 비해서 수용자에 대한 면역억제 요법의 투여를 감소시킨다(예를 들어, 투여는 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%만큼 또는 90%를 초과하게 감소함). 다른 실시형태에서, 방법은 선행 이종이식 수용 후 상기 수용자에게 필요한 면역억제 요법의 양에 비해서 수용자에 대한 면역억제 요법의 투여를 감소시키고(예를 들어, 투여는 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%만큼 또는 90%를 초과하게 감소함), 여기서 선행 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다. 다른 실시형태에서, 방법은 대등한 임상 환경에서 요구되는 면역억제요법의 양에 비해서 수용자에 대한 면역억제 요법의 투여를 감소시키고(예를 들어, 투여는 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%만큼 또는 90%를 초과하게 감소함), 여기서 대등한 임상 환경에서의 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다. 일부 실시형태에서, 방법은 수용자에게 면역억제 요법, 예를 들어 하기 섹션 6.4.3에 기재된 면역억제 요법의 추가 투여를 필요로 하지 않게 한다.
일부 실시형태에서, 방법은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편에 비해 이종이식편의 생존력을 연장시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 대등한 수용자(예를 들어, 동일한 성별 및 대등한 연령, 신장 및/또는 체중의 환자)에게 이식된 대등한 이종이식편(예를 들어, 수용자와 동일한 유형의 조직 또는 장기)에 비해서 이종이식편의 생존력을 연장시키고(예를 들어, 생존력은 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 75%, 75 내지 100%, 100 내지 200%, 200 내지 300%만큼 또는 300%를 초과하게 연장되거나; 1 내지 2년, 2 내지 3년, 3 내지 4년, 4 내지 5년, 5 내지 6년, 6 내지 8년, 8 내지 10년, 10 내지 15년 또는 15 내지 20년 연장됨), 여기서 대등한 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다. 일부 실시형태에서, 방법은 상기 수용자가 이전에 제공받았던 이종이식편의 생존력에 비해서 이종이식편의 생존력을 연장시키고(예를 들어, 생존력은 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 75%, 75 내지 100%, 100 내지 200%, 200 내지 300%만큼 또는 300%를 초과하게 연장되거나; 1 내지 2년, 2 내지 3년, 3 내지 4년, 4 내지 5년, 5 내지 6년, 6 내지 8년, 8 내지 10년, 10 내지 15년 또는 15 내지 20년 연장됨), 여기서 이전에 제공받은 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다.
일부 실시형태에서, 방법은 대등한 임상 환경에서의 이종이식편의 생존력에 비해서 생존력을 연장시키고(예를 들어, 생존력은 약 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 75%, 75 내지 100%, 100 내지 200%, 200 내지 300%만큼 또는 300%를 초과하게 연장되거나; 1 내지 2년, 2 내지 3년, 3 내지 4년, 4 내지 5년, 5 내지 6년, 6 내지 8년, 8 내지 10년, 10 내지 15년 또는 15 내지 20년 연장됨), 여기서 대등한 임상 환경에서의 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다.
일부 실시형태에서, 방법은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편의 수용자와 비교하여 수용자의 더 우수한 건강 관련 삶의 질을 초래한다. 다른 실시형태에서, 방법은 대등한 수용자(수용자와 동일한 유형의 조직 또는 장기를 제공받은 동일한 성별 및 대등한 연령, 신장 및/또는 체중의 사람)에 비해서 수용자의 더 우수한 건강 관련 삶의 질을 초래하고, 여기서 대등한 수용자는 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편을 제공받았다. 다른 실시형태에서, 방법은 수용자가 선행 이종이식 후에 경험한 건강 관련 삶의 질과 비교하여 수용자의 더 우수한 건강 관련 삶의 질을 초래한다. 다른 실시형태에서, 방법은 대등한 임상 환경에 비해서 수용자의 더 우수한 건강 관련 삶의 질을 초래하고, 여기서 대등한 임상 환경의 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다. 건강 관련 삶의 질은 건강 측면이 개인의 삶의 질에 미치는 전반적인 영향을 지칭하며, 신체적 증상, 기능적 상태, 심리적 상태 및 사회적 관계를 포함한다. 건강 관련 삶의 질은 예를 들어, 36-항목 약식 설문조사(SF-36), EuroQol-5 차원(EQ-5D) 및 신장 질환 삶의 질 도구(Kidney Disease Quality of Life Instrument: KDQOL)를 포함하여 당업계에 알려진 모든 도구에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Parizi et al. The Patient - Patient-Centered Outcomes Research (2019) 12:171-181]을 참조한다.
일부 실시형태에서, 방법은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편의 수용자에 비해서 이식편 수용자의 생존을 연장시킨다(예를 들어, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90% 또는 90 내지 100%의 연장; 또는 2 내지 3배, 3 내지 5배, 5 내지 7배, 7 내지 10배 또는 10 내지 15배). 다른 실시형태에서, 방법은 대등한 수용자(수용자와 동일한 유형의 조직 또는 장기를 제공받은 동일한 성별 및 대등한 연령, 신장 및/또는 체중의 사람)의 생존에 비해서 이식편 수용자의 생존을 연장시키고(예를 들어, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90% 또는 90 내지 100%의 연장; 또는 2 내지 3배, 3 내지 5배, 5 내지 7배, 7 내지 10배 또는 10 내지 15배), 여기서 대등한 수용자는 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않은 이종이식편을 제공받았다. 다른 실시형태에서, 방법은 대등한 임상 환경에서의 이식편 수용자의 생존에 비해서 이식편 수용자의 생존을 연장시키고(예를 들어, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90% 또는 90 내지 100%의 연장; 또는 2 내지 3배, 3 내지 5배, 5 내지 7배, 7 내지 10배 또는 10 내지 15배), 여기서 대등한 임상 환경에서의 이종이식편은 이식 전에 인간 CD47을 포함하는 EV에 노출되지 않았다.
일 양상에서, 본 명세서에 기재된 이식 방법은 단백뇨의 위험, 중증도 또는 기간을 감소시킨다. 1일 150㎎ 초과의 단백질 배설이 단백뇨의 진단으로 일반적으로 사용된다. 딥스틱 분석을 종종 사용하여 소변 내 단백질 농도를 측정한다. 이는 반정량적 방법이며, 이의 결과는 음성, 추적, 1+, 2+, 3+ 또는 4+로 표시된다. 예를 들어, 문헌[Carroll and Temte, Am Fam Physician 62(6):1333-1340 (2000)]을 참조한다. 정량적 시험을 제공하기 위해 총 단백질 수준 또는 알부민 수준만 측정할 수 있다. 결과는 총 단백질 또는 알부민 수준으로 표현될 수 있거나, 알부민 대 크레아틴 비율 또는 단백질 대 크레아틴 비율로 표현될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이식 방법은 단백뇨의 중증도를 감소킨다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이식 방법은 단백뇨의 기간을 감소킨다. 예를 들어, 본 명세서의 방법에 따라 치료된 환자의 단백뇨의 중증도는 공여자 신장이 인간 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 공여자 신장을 제공받은 환자에서 관찰된 단백뇨의 중증도에 비해서 감소될 수 있다.
일부 실시형태에서, 소변 내 단백질 수준에 의해서 측정된 바와 같은 단백뇨의 중증도는 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 95% 초과만큼 감소된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 치료된 환자는 소변에서 하루 150㎎ 초과의 단백질의 배설로서 정의되는 단백뇨를 경험하지 않을 것이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 치료된 환자는 이식 후 1, 2, 3, 3 내지 7, 7 내지 10, 10 내지 14일 또는 1 내지 2, 2 내지 3, 3 내지 4, 4 내지 5, 5 내지 6, 6 내지 7, 7 내지 8주 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6개월에 해결되는 일시적인 단백뇨를 경험할 수 있다.
일부 실시형태에서, 단백뇨가 발병한 본 명세서에 기재된 방법으로 치료된 수용자의 소변 내 총 단백질 농도는 약 60㎎/일 미만, 약 80㎎/일 미만, 약 100㎎/일 미만, 약 120㎎/일 미만, 약 140㎎/일 미만, 약 160㎎/일 미만, 약 200㎎/일 미만, 약 220㎎/일 미만, 약 240㎎/일 미만, 약 260 mg/일 미만, 약 280 mg/일 미만, 약 300 mg/일 미만, 약 320 mg/일 미만, 약 340 mg/일 미만, 약 360 mg/일 미만, 약 380 mg/일 미만 또는 약 400 mg/일 미만이다.
일부 실시형태에서, 단백뇨가 발병한 본 명세서에 기재된 방법으로 치료된 수용자의 소변 내 알부민의 농도는 약 5㎎/일 미만, 약 10㎎/일 미만, 약 20㎎/일 미만, 약 30㎎/일 미만, 약 40㎎/일 미만, 약 50㎎/일 미만, 약 60㎎/일 미만, 약 70㎎/일 미만, 약 80㎎/일 미만, 약 90㎎/일 미만 또는 약 100㎎/일 미만이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 환자의 24시간 소변 샘플 내의 단백질 대 크레아티닌의 비율은 약 0.2 미만, 약 0.4 미만, 약 0.6 미만, 약 0.8 미만 또는 약 1 미만이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 환자의 24시간 소변 샘플 내의 알부민 대 크레아티닌의 비율은 약 0.02 미만, 약 0.04 미만, 약 0.06 미만, 약 0.08 미만 또는 약 0.1 미만이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법으로 치료된 수용자의 단백뇨 발병 위험은 공여자 신장이 인간 CD47과 크로스-드레싱되지 않은 공여자 신장의 수용자의 위험에 비해서 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 감소된다.
8.4.3. 추가 치료
특정 양상에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 환자는 추가 치료를 받는다. 환자는 하나 이상의 상이한 방법에 의해서 추가 치료를 받을 수 있다. 추가 치료는 본 명세서에 제공된 치료 방법 이전, 치료 방법 중에 또는 치료 방법 이후에 발생할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 이종이식편을 제공받은 환자는 골수내 이식(IBBM)을 제공받는다. 특정 실시형태에서, 골수는 이종이식편과 동일한 공급원으로부터 유래된다. 특정 실시형태에서, 골수는 인간 CD47을 발현한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 이종이식편을 제공받은 환자는 면역억제 요법을 제공받는다. 면역억제 요법은 이식 거부를 줄이고/줄이거나 이종이식 결과를 개선하기 위해 표시된 임의의 FDA 승인 치료법일 수 있다. 면역억제 요법의 비제한적 예는 칼시뉴린 저해제(예를 들어, 타크롤리무스 또는 사이클로스포린), 항증식제(예를 들어, 항대사산물, 예컨대, 마이코페놀레이트, 6-머캅토퓨린 또는 이의 전구약물 아자티오프린), 포유동물 라파마이신 표적(mTOR)의 저해제(예를 들어, 시롤리무스, 라파마이신), 스테로이드(예를 들어, 프레드니손), 세포 주기 저해제(아자티오프린 또는 마이코페놀레이트 모페틸), 림프구-고갈제(예를 들어, 항-흉선세포 글로불린 또는 항체, 예컨대, 알렘투주맙, 시플리주맙 또는 바실릭시맙) 및 보조자극 차단제(예를 들어, 벨라타셉트)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Chung et al (2020)., Ann Transl Med. Mar; 8(6): 409; van der Mark et al. (2020), Eur Respir Rev; 29: 190132 및 Benvenuto et al. (2018), J Thorac Dis 10:3141-3155]을 참조한다.
면역억제 요법은 유도 요법(수술 전후 또는 수술 직후), 유지 용량 또는 급성 거부반응을 위해서 투여될 수 있다. 유도 요법은 일반적으로 바실릭시맙, 항-흉선세포 글로불린 또는 알렘투주맙을 포함한다. 면역억제 요법은 수용자의 평생 동안 계속되는 데 종종 필요한 유지 요법으로 투여될 수도 있다. 유지 면역억제 요법은 일반적으로 칼시뉴린 저해제(타크롤리무스 또는 사이클로스포린), 항증식제(마이코페놀레이트 또는 아자티오프린) 및 코티코스테로이드를 포함한다. 급성 거부반응에 대한 면역억제 요법은 일반적으로 티모글로불린 또는 마이코페놀레이트를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Chung et al. (2020), Ann Transl Med. Mar; 8: 409 및 Benvenuto et al., (2018) J Thorac Dis 10:3141-3155]을 참조한다.
면역억제제의 비제한적인 예는 (1) 항대사산물, 예컨대, 퓨린 합성 저해제(예컨대, 이노신 모노포스페이트 탈수소효소(IMMPDH) 저해제, 예를 들어, 아자티오프린, 마이코페놀레이트 및 마이코페놀레이트 모페틸), 피리미딘 합성 저해제(예를 들어, 레플루노마이드) 및 테리플루노마이드) 및 항엽산염(예를 들어, 메토트렉세이트); (2) 칼시뉴린 저해제, 예컨대, 타크롤리무스, 사이클로스포린 A, 피메크롤리무스 및 보클로스포린; (3) TNF-알파 저해제, 예컨대, 탈리도마이드 및 레날리도마이드; (4) IL-1 수용체 길항제, 예컨대, 아나킨라; (5) 포유동물 라파마이신 표적(mTOR) 저해제, 예컨대, 라파마이신(시롤리무스), 데포롤리무스, 에베롤리무스, 템시롤리무스, 조타롤리무스 및 바이오리무스 A9; (6) 코티코스테로이드, 예컨대, 프레드니손; 및 (7) 다수의 세포 또는 혈청 표적(항-림프구 글로불린 및 항흉선세포 글로불린 포함) 중 임의의 하나에 대한 항체를 포함한다.
비제한적인 예시적인 세포 표적 및 이들 각각의 저해제 화합물은 보체 성분 5(예를 들어, 에쿨리주맙); 종양 괴사 인자(TNF)(예를 들어, 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 아펠리모맙 및 골리무맙); IL-5(예를 들어, 메폴리주맙); IgE(예를 들어, 오말리주맙); BAYX(예를 들어, 네렐리모맙); 인터페론(예를 들어, 파라리모맙); IL-6(예를 들어, 엘실리모맙); IL-12 및 IL-13(예를 들어, 레브리키주맙 및 우스테키누맙); CD3(예를 들어, 무로모납-CD3, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙); CD4(예를 들어, 클레놀릭시맙, 켈릭시맙 및 자놀리무맙); CDI la(예를 들어, 에팔리주맙); CD18(예를 들어, 에를리주맙); CD20(예를 들어, 아푸투주맙, 오크렐리주맙, 파스콜리주맙); CD23(예를 들어, 루미릭시맙); CD40(예를 들어, 테넬릭시맙, 토랄리주맙); CD62L/L-셀렉틴(예를 들어, 아셀리주맙); CD80(예를 들어, 갈릭시맙); CD147/바시진(예를 들어, 가빌리모맙); CD154(예를 들어, 루플리주맙); BLyS(예를 들어, 벨리무맙); CTLA-4(예를 들어, 이필리무맙, 트레멜리무맙); CAT(예를 들어, 베르틸리무맙, 레르델리무맙, 메텔리무맙); 인테그린(예를 들어, 나탈리주맙); IL-6 수용체(예를 들어, 토실리주맙); LFA-1(예를 들어, 오둘리모맙); 및 IL-2 수용체/CD25(예를 들어, 바실릭시맙, 다클리주맙, 이노리모맙)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
8.4.4. 환자 집단
바람직한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자(예를 들어, 인간 CD47과 크로스-드레싱된 이종이식편의 수용자)는 인간 환자이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 임의의 인간 또는 인간이 아닌 포유동물을 포함한다. 비제한적인 예는 인간, 말, 돼지, 소, 쥐(rattus), 뮤린, 개 및 고양이 종의 구성원을 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이 아닌 영장류이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시형태에서, 대상체는 인간 성인이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 어린이이다. 특정 실시형태에서, 대상체는 인간이고 돼지 공여자로부터 하나 이상의 기증자 이식편을 제공받는다. 다른 특정 실시형태에서, 대상체는 인간이 아닌 영장류(예를 들어, 개코원숭이, 시노몰거스 원숭이 또는 레서스 마카크(rhesus macaque))이고, 돼지 공여자로부터 하나 이상의 이식편을 제공받는다.
일 양상에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 신장 이식이 필요하다. 환자는 신부전 또는 공여자 신장 거부로 인해 신장 이식이 필요할 수 있다. 신부전은 높은 혈압(고혈압), 신체적 부상, 당뇨병, 신장 질환(다낭성 신장 질환, 사구체 질환) 및 자가면역 장애, 예컨대, 루푸스를 포함하지만 이들로 제한되지 않은 다양한 원인을 가질 수 있다. 신부전은 급성 또는 만성일 수 있다. 신부전은 실험실 검사, 예컨대, 사구체 여과율, 혈액요소질소, 혈청 크레아티닌, 영상검사(초음파, 컴퓨터 단층촬영) 또는 신장 생검에 의해서 진단될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 1기 신장 질환을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 2기 신장 질환을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 3기 신장 질환을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 4기 신장 질환을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 5기 신장 질환을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 약 90 이상의 사구체 여과율(GFR)을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 약 60 내지 90의 GFR을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 약 30 내지 60의 GFR을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 약 15 내지 30의 GFR을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 환자는 약 15 이하의 GFR을 갖는다.
9.
실시예
본 섹션(즉, 섹션 7)의 실시예는 제한이 아닌 예의 방식으로 제공된다.
9.1
실시예 1: hCD47-Tg LCL 세포와의 공배양 후 트랜스제닉 hCD47에 의한 돼지 LCL 및 인간 Jurkat 세포의 크로스-드레싱.
본 실시예는 이종 인간 CD47이 공배양 후 비-인간 CD47 발현 세포주에서 성공적으로 발현될 수 있음을 입증한다.
인간 CD47이 EV에 의해 하나의 세포에서 또 다른 세포로 전달될 수 있는지를 결정하기 위해서, 인간 CD47(hCD47)을 발현하지 않는 모 돼지 B-림프종 세포주(LCL)로부터의 세포를 트랜스제닉 방식으로 hCD47을 발현하는 LCL 세포와 공배양하였다. 도 1A 및 도 2에 나타난 바와 같이, FACS로 측정된 바와 같이 모 돼지 LCL 세포주는 hCD47을 발현하지 않았다(도 1A, 도 2 및 표 2). 대조적으로, 트랜스제닉 인간 CD47을 발현하는 돼지 LCL 세포(hCD47-Tg LCL 세포)는 높은 수준의 CD47을 발현하였다(도 1B, 도 2 및 표 2). 특히, hCD47-Tg LCL 세포와의 공배양 후 모 LCL 세포주에서 huCD47의 검출은 hCD47 발현의 강한 증가를 나타내었다(도 1C, 도 2 및 표 2).
CD47가 CRISPR-Cas9에 의해서 넉 아웃되고 hCD47-Tg LCL 세포와 공배양된 인간 T-세포 백혈병 Jurkat 세포를 사용하여 유사한 결과가 관찰되었다. 간략하면, CD47 넉아웃(KO) Jurkat 세포를 hCD47-Tg LCL 세포와 공배양하고, hCD47 발현을 FACS로 측정하였다. 도 3B에 나타낸 바와 같이, 공배양은 CD47KO Jurkat 세포에서 hCD47 발현의 강한 증가로 이어졌다(도 3B 및 표2).
이들 데이터는, 돼지 세포가 인간 CD47을 발현하는 세포와의 공배양에 의해서 인간 CD47과 크로스-드레싱될 수 있다는 것을 나타내었다.
9.2
실시예 2: 야생형 Jurkat 세포와의 공배양 후 천연 hCD47에 의한 돼지 LCL 및 hCD47 넉아웃 Jurkat 세포의 크로스-드레싱
본 실시예는 공배양 후 하나의 세포주에서 또 다른 세포주로의 hCD47의 크로스-드레싱이 추가의 예시적인 세포주 모델에서 재현 가능하였음을 입증한다.
간략하면, CD47 넉아웃(KO) 세포를 모(야생형, WT) Jurkat 세포 또는 돼지 LCL 세포와 24시간 동안 공배양하고, 항-hCD47-BV786 mAb를 사용하는 FACS에 의해 게이팅된 CD47KO Jurkat 세포에서 hCD47 크로스-드레싱에 대해서 분석하였다. 단독으로 배양된 세포를 염색 대조군으로 사용하였고, 이것을 별도로 염색하거나 염색 직전에 혼합하였다. 대표적인 히스토그램을 나타낸다(도면의 숫자는 게이팅된 CD47KO Jurkat 세포의 평균 형광 강도(MFI)를 나타냄).
도 4A에 도시된 바와 같이, CD47KO Jurkat 세포에서 FACS에 의해 결정된 바와 같이 인간 CD47의 수준은 야생형(WT) Jurkat 세포에 비해서 거의 완전히 검출 가능하지 않았다(각각 도 4 및 도 4B; 도 6 및 표 3). CD47KO Jurkat 세포와 WT Jurkat 세포의 공배양 후, CD47KO Jurkat 세포에서 hCD47의 강한 증가가 관찰되었다(도 4C, 도 6 및 표 3).
돼지 LCL 세포를 WT Jurkat 세포와 공배양한 경우 유사한 결과가 관찰되었다. 도 5A 및 도 5B에 도시된 바와 같이, 돼지 LCL 세포와 WT Jurkat 세포의 공배양은 공배양되지 않은 돼지 LCL 세포에 비해 hCD47 발현의 강한 증가를 초래하였다(각각 도 5A 및 도 5B 및 표 3).
이들 결과는 인간 CD47 크로스-드레싱이 인간 세포에서도 발생할 수 있고, hCD47-트랜스제닉 세포뿐만 아니라 천연 CD47만을 발현하는 세포에 의해서도 유도될 수 있음을 나타내었다.
9.3
실시예 3: WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포 또는 엑소좀에 의한 CD47KO Jurkat 세포의 CD47 크로스-드레싱
본 실시예는 CD47을 발현하는 세포로부터 단리된 EV가 CD47을 발현하지 않는 세포를 크로스-드레싱시키는 데 사용될 수 있음을 입증한다.
간략하면, MV 및 엑소좀을 10% 엑소좀 고갈된 FBS에서 배양된 WT Jurkat 세포로부터 수집된 상청액으로부터 단리시켰다. 세포 배양 상청액으로부터의 세포외 소포(EV) 및 엑소좀(Exos)을 표준 차동 원심분리 프로토콜에 의해 정제시켰다. 48시간 세포 배양물로부터 수집된 상청액을 2,000g(3,000rpm)에서 20분 동안 원심분리시켜 세포 잔해 및 죽은 세포를 제거하였다. 세포외 소포를 16,500g(9,800rpm)에서 45분 동안 원심분리시킨 후(Beckman Coulter, Optima XE-90) 펠릿화하고 PBS에 재현탁시켰다. 상청액으로부터의 펠릿화된 엑소좀을 4℃에서 2시간 동안 100,000g(26,450rpm)에서 추가로 원심분리시키고(Beckman Coulter, Optima XE-90), PBS에 재현탁시켰다.
그 다음 단리된 MV 및 엑소좀을 CD47이 넉아웃된 Jurkat 세포(CD47 KO Jurkat 세포)와 2시간 또는 6시간 동안 공배양하였다. 도 7C에 도시된 바와 같이, MV와의 2시간 동안의 공배양은 CD47 KO Jurkat 세포에서 CD47 발현의 증가를 초래하였다(도 7C 및 표 4). MV 또는 엑소좀과의 공배양 6시간 후, CD47 KO Jurkat 세포에서 CD47 발현이 증가하였다(각각 도 8C 및 도 8D, 및 표 4).
이들 데이터는 hCD47을 발현하는 세포로부터의 EV(예를 들어, MV 또는 엑소좀)가 hCD47을 발현하지 않는 세포를 크로스-드레싱시키는 데 사용될 수 있음을 나타낸다.
9.4
실시예 4: WT Jurkat 세포로부터의 세포외 소포 또는 엑소좀에 의한 돼지 LCL 세포의 CD47 크로스-드레싱
본 실시예는 돼지 세포가 공배양 후 인간 세포로부터의 hCD47과 크로스-드레싱될 수 있음을 입증한다.
간략면, MV 및 엑소좀을 상기에 기재된 바와 같이 WT Jurkat 세포로부터 단리시켰다. 그 다음 단리된 MV 및 엑소좀을 hCD47을 발현하지 않는 돼지 LCL 세포와 함께 2시간 또는 6시간 동안 공배양하였다. 도 9C에 도시된 바와 같이, MV와의 2시간 동안의 공배양은 돼지 LCL 세포에서 CD47 발현의 증가를 초래하였다(도 9C 및 표 5). MV 또는 엑소좀과의 공배양 6시간 후, 돼지 LCL 세포에서 CD47 발현이 증가하였다(각각 도 10C 및 도 10D 및 표 5).
이들 데이터는 야생형 인간 Jurkat 세포로부터 단리된 EV 또는 엑소좀에 대한 노출에 의해서 돼지 LCL 세포(돼지 CD47을 발현함)가 인간 CD47과 크로스-드레싱될 수 있음을 나타낸다.
10.
등가물
본 발명은 구체적인 실시형태를 참조하여 상세하게 설명되었지만, 기능적으로 동등한 변형은 본 발명의 범주 내에 있다는 것이 이해될 것이다. 실제로, 본 명세서에 제시되고 기재된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형이 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 당업자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본 명세서에 기재된 본 발명의 구체적인 실시형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 다음 청구범위에 포함되도록 의도된다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함되도록 구체적이고 개별적으로 제시된 것과 동일한 정도로 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
Claims (72)
- 이종이식 방법으로서,
a. 공여자 돼지로부터 장기를 얻는 단계;
b. 상기 장기를 인간 CD47과 크로스-드레싱(cross-dressing)시키는 단계; 및
c. 상기 장기를 인간 수용자에게 이식하는 단계
를 포함하는, 이종이식 방법. - 제1항에 있어서, 상기 크로스-드레싱시키는 단계는 상기 장기를 세포외 소포(extracellular vesicle: EV)를 포함하는 인간 CD47에 노출시키는 것을 포함하는, 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 EV는 인간 세포로부터 단리되는, 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 세포는 재조합 인간 CD47을 발현하는, 방법.
- 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 세포는 트랜스제닉 세포인, 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱은 상기 장기를 인간 CD47을 발현하는 EV와 함께 2시간 동안 인큐베이션시킴으로써 달성되는, 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱은 상기 장기를 인간 CD47을 발현하는 EV와 함께 6시간 동안 인큐베이션시킴으로써 달성되는, 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱은 생체외에서 상기 장기를 관류시킴으로써 달성되는, 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱은 공여자 돼지, 인간 수용자 또는 이들의 조합을 생체내에서 관류시킴으로써 달성되는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 인간 대식세포에 의한 식세포작용을 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는(engulfing) CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 5% 내지 약 25% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 25% 내지 약 50% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 50% 내지 약 75% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 75% 내지 약 80% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 80% 내지 약 85% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 85% 내지 약 90% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 크로스-드레싱되지 않은 장기 세포에 비해서 인간 대식세포에 의한 크로스-드레싱된 장기 세포의 식세포작용을 약 90% 내지 약 95% 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해서 측정되는 경우 크로스-드레싱된 장기의 식세포작용이 검출 가능하지 않게 하는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 크로스-드레싱된 세포를 탐식하는 CD14-양성 세포의 백분율의 FACS 분석에 의해 측정되는 경우 인간 대식세포로부터의 보호에 의해 상기 장기의 생존력을 증가시키는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 아폽토시스 유도 없이 식세포작용을 회피하는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 식세포작용을 회피하고 어떠한 검출 가능한 수준의 아폽토시스도 나타내지 않는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 5% 내지 약 25% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 25% 내지 약 50% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 50% 내지 약 75% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 75% 내지 약 80% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 80% 내지 약 85% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 약 85% 내지 약 90% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기로부터 얻은 세포는 크로스-드레싱되지 않은 장기로부터 얻은 세포에 비해 적어도 90% 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타내는, 방법.
- 제20항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 아폽토시스는 프로피듐 아이오딘 염색에 의해서 측정되는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 5% 내지 약 25% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 25% 내지 약 50% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 50% 내지 약 75% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 75% 내지 약 80% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 80% 내지 약 85% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 약 85% 내지 약 90% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로스-드레싱된 장기는 크로스-드레싱되지 않은 장기에 비해서 적어도 90% 감소된 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 5% 내지 약 25% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 25% 내지 약 50% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 50% 내지 약 75% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 75% 내지 약 80% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 80% 내지 약 85% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 약 85% 내지 약 90% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 크로스-드레싱되지 않은 장기의 이식에 비해서 이식 후 적어도 90% 감소된 전신 염증을 나타내는, 방법.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기는 신장인, 방법.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기는 폐인, 방법.
- 제46항에 있어서, 상기 인간 수용자는 신부전을 앓는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 10 내지 20% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 20 내지 30% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 30 내지 40% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 40 내지 50% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 50 내지 60% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 60 내지 70% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 70 내지 80% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 80 내지 90% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 수용자는 대등한 임상 환경에서 치료 표준보다 적어도 90% 더 적은 면역억제 요법이 필요한, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 단백뇨의 감소를 초래하는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 24시간당 3g 미만까지 감소되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 24시간당 500㎎까지 감소되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 24시간당 300㎎까지 감소되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 24시간당 150㎎까지 감소되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 상기 이식 2주 이내에 해결되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 상기 이식 1개월 이내에 해결되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 상기 이식 2개월 이내에 해결되는, 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백뇨는 상기 이식 4개월 이내에 해결되는, 방법.
- 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 골수 조직을 상기 수용자에게 이식하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제68항에 있어서, 상기 골수는 상기 신장과 동일한 돼지로부터 채취되는, 방법.
- 제68항에 있어서, 상기 골수는 상기 신장과 상이한 돼지로부터 채취되는, 방법.
- 제68항에 있어서, 상기 골수는 EV에 대한 노출에 의해서 인간 CD47과 크로스-드레싱되는, 방법.
- 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기는 인간 SIRPα를 발현하지 않는, 방법.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163240637P | 2021-09-03 | 2021-09-03 | |
| US63/240,637 | 2021-09-03 | ||
| PCT/US2022/075809 WO2023034894A1 (en) | 2021-09-03 | 2022-09-01 | Methods and compositions for xenotransplantation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240058090A true KR20240058090A (ko) | 2024-05-03 |
Family
ID=85413099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247007100A KR20240058090A (ko) | 2021-09-03 | 2022-09-01 | 이종이식을 위한 방법 및 조성물 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240058090A (ko) |
| CN (1) | CN117858712A (ko) |
| AU (1) | AU2022337279A1 (ko) |
| CA (1) | CA3230461A1 (ko) |
| IL (1) | IL310521A (ko) |
| WO (1) | WO2023034894A1 (ko) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007033221A2 (en) * | 2005-09-13 | 2007-03-22 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for inhibition of immune responses |
-
2022
- 2022-09-01 IL IL310521A patent/IL310521A/en unknown
- 2022-09-01 WO PCT/US2022/075809 patent/WO2023034894A1/en active Application Filing
- 2022-09-01 KR KR1020247007100A patent/KR20240058090A/ko unknown
- 2022-09-01 AU AU2022337279A patent/AU2022337279A1/en active Pending
- 2022-09-01 CA CA3230461A patent/CA3230461A1/en active Pending
- 2022-09-01 CN CN202280057874.3A patent/CN117858712A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2022337279A1 (en) | 2024-02-22 |
| CA3230461A1 (en) | 2023-03-09 |
| CN117858712A (zh) | 2024-04-09 |
| IL310521A (en) | 2024-03-01 |
| WO2023034894A1 (en) | 2023-03-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020168023A (ja) | ヒト化ｍ−ｃｓｆマウス | |
| Soulas-Sprauel et al. | Role for DNA repair factor XRCC4 in immunoglobulin class switch recombination | |
| KR20200140270A (ko) | Cartyrin 조성물 및 사용 방법 | |
| JP2020532987A (ja) | キメラリガンド受容体（ｃｌｒ）介在性の条件遺伝子発現のための組成物および方法 | |
| KR20210055046A (ko) | 키메라 항원 수용체 발현 세포의 제조 방법 | |
| KR102602199B1 (ko) | 신장 및 간 장애의 인간화 모델 | |
| US20180214487A1 (en) | Pd-l1 expressing hematopoietic stem cells and uses | |
| CN111886028A (zh) | 用于治疗神经退行性疾病和障碍的嵌合抗原受体 | |
| JP2023062132A (ja) | 移植された組織を拒絶反応から保護するための方法 | |
| JP2012525154A (ja) | 生体内でヒト肝細胞を増大させる方法 | |
| EP3578042A1 (en) | Fumarylacetoacetate hydrolase (fah)-deficient and immunodeficient rats and uses thereof | |
| CN109476716A (zh) | 治疗线粒体障碍的方法 | |
| CN110740641A (zh) | 具有改善的人先天免疫细胞发育的人源化小鼠模型 | |
| US20210017248A1 (en) | Cellular signaling domain engineering in chimeric antigen receptor-modified regulatory t cells | |
| KR20140137444A (ko) | 인간 림프 기관-유래 억제성 기질 세포의 분리 및 용도 | |
| KR20240058090A (ko) | 이종이식을 위한 방법 및 조성물 | |
| KR20180018703A (ko) | 유전자 변형 비-인간 동물 및 보체-의존성 세포 독성에 관한 방법 | |
| US20230414664A1 (en) | Genetic modifications for xenotransplantation | |
| WO2024008177A1 (en) | Engineered cells and uses thereof | |
| RU2772583C2 (ru) | Гуманизированная модель нарушений со стороны почек и печени | |
| US20240131073A1 (en) | Mir200c-epcam axis reprogramed immune cells for enhanced anti-tumor function | |
| Huang | Neonatal Pig as an Alternative Source of Islets for Transplantation | |
| WO2023147462A2 (en) | Genetic modifications for xenotransplantation | |
| WO2023091420A2 (en) | Compositions and methods for t cell engineering | |
| Li | Mechanisms of Glucocorticoids in the modulation of Graft-versus-Host Disease and the Graft-versus-Leukemia Reaction |