KR20240036081A

KR20240036081A - 적혈구 농축액용 첨가제 용액

Info

Publication number: KR20240036081A
Application number: KR1020247006064A
Authority: KR
Inventors: 우테 그레이브만; 악셀 젤트잠; 비에브케 한트케
Original assignee: 블루트슈펜데딘스트 데르 란데쓰베르밴데 데스 도이첸 로텐 크로이쩨스 니다사흐센, 사흐센-안할트, 튜링엔, 올덴부르그 운드 브레멘 게게엠베하; 블루트슈펜데딘스트 데스 바이에른 로텐 크로이쩨스, 게마이뉴엣지그 게젤샤프트 미트 베슈랜크터 하프텅
Priority date: 2021-07-27
Filing date: 2022-07-22
Publication date: 2024-03-19
Also published as: CN117715519A; EP4344397A1; CA3227098A1; DE102021119408A1; AU2022320684A1; WO2023006151A1

Abstract

본 발명은 적혈구 농축액을 저장하기 위한 첨가제 용액, 첨가제 용액이 제공된 적혈구 농축액, 및 자외선을 조사하는 단계를 포함하는, 첨가제 용액으로 희석된 적혈구 농축액을 제조하는 방법 및 적혈구 농축액을 저장하기 위한 첨가제 용액의 용도에 관한 것이다.

Description

적혈구 농축액용 첨가제 용액

본 발명의 주제는 적혈구(red blood cell; RBC) 농축액을 저장하기 위한 첨가제 용액, 첨가제 용액이 제공된 적혈구 농축액, 및 300 내지 200nm 범위의 자외선을 조사하는 단계를 포함하는, 첨가제 용액으로 희석된 RBC 농축액을 제조하는 방법뿐만 아니라 RBC 농축액을 저장하기 위한 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분의 용도이다.

RBC 농축액은 적혈구(RBC, 적혈구)로 구성되는 "저장된 혈액의 단위"이다. 독일에서, 판매 가능한 형태로서의 RBC 농축액은 유닛당 적어도 40g의 헤모글로빈을 함유하고, 헤마토크릿이 0.5 내지 0.7인 것들이다. 헤마토크릿(약어: hct)은 혈액의 용적 중 RBC의 비율을 지칭하며, 각각의 경우에 이하에서 단위 L/L로 정의된다. 종래 기술에 따르면, RBC 농축액은 일반적으로 첨가제 용액으로 희석되고, 따라서 저장에 더 적합하게 된다. 종종 저장 용액으로 지칭되기도 하는 첨가제 용액은 적혈구를 현탁시키고 저장하는 목적을 제공한다.

RBC 농축액은 상이한 방법으로 제조될 수 있다. 전혈 기증으로부터 제조하거나 성분채집술 절차(apheresis procedure)를 사용하는 것이 일반적이다. 성분채집술 절차에서, RBC는 연속 흐름 공정을 사용하여 투석 유사 장치에서 기증자의 혈액으로부터 분리되고, 나머지 혈액 성분은 기증자의 순환계로 다시 안내된다. 예를 들어, 항응고제 ACD-A는 기계적 혈액 기증에 사용된다.

전혈 기증은 정맥 채혈을 통해 각 기증자의 특정 용적의 전혈을 플라스틱 재료로 만들어진 각 혈액 백에, 예를 들어, 450mL의 전혈을 충전하는 방식으로 일어난다. 혈액 백은 안정제 용액을 함유하거나, 안정제 용액은 전혈의 유통 기간(shelf life)을 연장하고 이의 응고를 막기 위해 전혈에 첨가된다.　

시트레이트 완충액, 인산이수소나트륨 및 D-글루코스를 포함하는 CPD 안정제 용액이 전형적인 안정제 용액이다. 일반적으로, 여기에서 전혈 450mL의 경우 63mL의 CPD 안정제 용액이, 전혈 500mL의 경우 70mL의 CPD 안정제 용액이 각각 사용된다. 전혈의 pH 값은 안정제 용액에 의해 7.1 내지 7.2로 안정화된다.

전혈 기증을 개별 성분으로 분리하면, 무엇보다도 RBC 농축액이 수득된다.

일반적으로, 백혈구 고갈(leukocyte depletion)은 전혈에서 수행되거나, RBC 농축액은 RBC 농축액의 생산 전에 백혈구 고갈을 거친다. 백혈구 고갈은 기증자 백혈구의 실질적인 제거로 이해된다. 이는, 예를 들어, 독일에서와 같이 많은 국가에서 법적 요구 사항이다. 백혈구 고갈은, 예를 들어, 안정제 용액 또는 첨가제 용액과 함께 RBC 농축액을 첨가 후 혈액이 필터를 통과하여 백혈구를 억제하거나, 예를 들어, 성분채집술 동안 백혈구가 원심분리에 의해 RBC로부터 분리되는 동안 발생한다. 사용되는 필터는 종종 규정된 크기의 기공이 생성되도록 팩으로 압축되는 폴리에스테르 섬유, 또는 규정된 기공 크기를 갖는 폴리우레탄 스폰지로 구성된다.

백혈구 고갈을 위한 여과는 혈액을 수득한 직후 RBC 농축액을 수득하기 전 또는 RBC 농축액의 저장 후, 임의로 또한 환자에게 투여하기 전에 환자의 침상 옆에서 먼저 일어날 수 있다. 적어도 독일에서는 RBC 농축액을 저장하기 전에 백혈구 고갈을 수행하는 것이 일반적인 관행이다.

RBC 농축액을 생산하기 위해, 전혈을 원심분리한다. 혈장과 혈소판 및 백혈구로 구성되는 소위 버피 코트(buffy coat)를 함유하는 상청액을 분리하고, 원심분리액 또는 침전물로 잔류하는 적혈구를 첨가제 용액에 현탁시킨다.

RBC 농축액은 임의로 첨가제 용액과 상이할 수도 있는 영양 용액에 미리 한 번 더 현탁시키고, 다시 원심분리하여 그것을 다시 분리함으로써 기증자의 혈장 중 나머지를 영양 용액으로 교체한 후 RBC를 첨가제 용액에 현탁시키고 저장되도록 한다. 이렇게 세척된 RBC 농축액은 이전 수혈에 무감각한 경우(예: 예를 들어, IgA 결핍 환자에서와 같이 기증자의 혈장 단백질에 대한 알레르기 반응)에 유용하다.　

원심분리로부터 수득될 수 있는 바와 같이, RBC 농축액을 생리적으로 적합한 점도로 조정하기 위해, 첨가제 용액이 첨가되어야 하고, 이와 함께 유통 기한을 연장하는 데 필요한 물질도 또한 공급된다. 첨가제 용액은 생존율을 향상시키고, 저장 동안 발생하는 적혈구의 용혈을 감소시킨다.

RBC 농축액을 위한 첨가제 용액은 그 자체로 공지되어 있으며, 이전에 다양한 설계로 제안되었다.

염화나트륨, 글루코스 또는 프럭토스 및 아데닌 이외에, 당 알코올 만나이트를 함유하는 용액은 미국 4267269로부터 공지되어 있다. 마찬가지로, 염화나트륨, 글루코스 또는 프럭토스 및 아데닌을 함유하지만, 당 알코올로서 소르비톨 또는 자일라이트를 각각 함유하고, 임의로 구아노신을 추가로 함유하는 용액은 EP 0100419 A2에 기재되어 있다. EP 0301250 A1은 염화나트륨, 인산수소이나트륨 및/또는 인산수소나트륨, 글루코스 및/또는 프럭토스, 소르비톨, 만나이트 및/또는 자일라이트, 아데닌 및/또는 구아노신 및 임의로 콜로이드를 함유하는 첨가제 용액을 개시하고 있다.

예를 들어, 첨가제 용액 SAG-M은 경제적 중요성을 획득했다. 이는 아데닌, 글루코스, D-만니톨 및 염화나트륨을 함유한다(C.F. Hogman, K. Hedlund, Y. Sahlestrom: "Red cell preservation in protein-poor media. III. Protection against in vitro hemolysis" in Vox Sang. 1981 Nov-Dec; 41(5-6):274-81).

현재 다음과 같이 수용액으로 판매되고 있는 PAGGS-만니톨(PAGGS-M)은 추가로 공지된 첨가제 용액이다:

47.4mmol/L D-글루코스 일수화물

8.0mmol/L 인산이수소나트륨 이수화물

8.0mmol/L 인산수소이나트륨 이수화물

1.4mmol/L 아데닌

1.4mmol/L 구아노신

54.9mmol/L 만니톨

72mmol/L 염화나트륨

문헌[W.H. Walker, M. Netz, K.H. Ganshrit: "49 Tage Lagerung von Erythrozytenkonzentraten in Blutbeuteln mit der Konservierungslosung PAGGS-Mannitol". Beitr. Infusionsther. 26(1990): 55-59, Walter et al.]에서, 첨가제 용액 PAGGS-M으로 RBC 농축액의 유통 기한을 조사했고, 여기서 CPD가 안정제 용액으로 사용되었다.

혈액 제제의 치료적 적용은 혈액 제제의 수용자가 바이러스 및/또는 박테리아에 감염될 위험과 관련이 있는 것으로 공지되어 있다. 이들은, 예를 들어, B형 간염 바이러스(HBV), 웨스트-나일(WNV) 및 C형 간염 바이러스(HCV)뿐만 아니라 AIDS 바이러스인 HIV-1 및 HIV-2 또는 박테리아, 예를 들어, 스타필로코키(staphylococci) 또는 스트렙토코키(streptococci)를 포함한다. 제제의 생산 동안 언급된 병원균을 각각 비활성화하거나 제거하는 단계가 적용되지 않을 때마다 위험이 존재한다.

병원균 비활성화는, 예를 들어, UV 방사선을 통해 수행될 수 있다. 이러한 유형의 방법은, 예를 들어, WO 2007/076832 A1로부터 공지되어 있다. 자외선(UV) 광은 파장에 따라 구별된다. 본 출원과 관련하여, 다음 정의가 이루어진다: UVA: 400 내지 320nm, UVB: 320 내지 280nm 및 UVC: 280 내지 200nm. 바이러스뿐만 아니라 박테리아는, 예를 들어, 혈장이나 세포 혈액 제제에서 단파장 자외선(UV), 즉 약 320nm 이하의 파장 범위(UVB 및 UVC)로 조사하여 비활성화될 수 있는 것으로 공지되어 있다. 320nm 이상에서는, 방사선의 에너지가 너무 낮아 미생물과 바이러스를 효과적으로 비활성화할 수 없다. 병원균 비활성화를 위한 화학적, 광화학적 및 광역학적 방법과 대조적으로, 자외선만을 조사하는 것은 일반적으로 그 자체로 효과적이며 반응성 화학물질 또는 광활성 물질의 첨가를 필요로 하지 않는다는 이점을 갖는다.

본 발명의 목적은 특히 첨가제 용액에 도입되기 전에 자외선 조사(UV irradiation)를 받은 RBC 농축액, 특히 RBC의 유통 기간을 향상시키거나, 또한 RBC의 자외선 조사 및 저장을 위한 매질을 제공하는 것이다.　

본 발명은 독립적인 특허 청구항을 특징으로 하며, 바람직한 구현예는 하위 청구항의 주제이고/이거나 아래에 기재되어 있다.

본 발명에 따른 첨가제 용액은, 물 이외에, 다음 성분:

12 내지 50mmol/L, 특히 17 내지 50mmol/L 또는 20 내지 25mmol/L의 인산수소이나트륨((Na₂HPO₄);

0.1 내지 3.5mmol/L, 특히 1.5 내지 2.5mmol/L의 아데닌;

10 내지 90mmol/L, 특히 45 내지 55mmol/L의 D-글루코스;

0.1 내지 3mmol/L, 특히 1.25 내지 1.75mmol/L의 구아노신;

10 내지 80mmol/L, 특히 20 내지 60mmol/L 또는 심지어 35 내지 45mmol/L의 염화나트륨; 및

10 내지 50mmol/L, 특히 14 내지 50mmol/L 또는 25 내지 35mmol/L의 시트르산삼나트륨을 포함한다.

특히 첨가제 용액은 다음 성분:

12 내지 50mmol/L, 특히 17 내지 50mmol/L 또는 20 내지 25mmol/L의 인산수소이나트륨(Na₂HPO₄);　

0.1 내지 3.5mmol/L, 특히 1.5 내지 2.5mmol/L의 아데닌;

10 내지 90mmol/L, 특히 45 내지 55mmol/L의 D-글루코스;

0.1 내지 3mmol/L, 특히 1.25 내지 1,75mmol/L의 구아노신;　

10 내지 80mmol/L, 특히 20 내지 60mmol/L 또는 35 내지 45mmol/L의 염화나트륨;　

10 내지 50mmol/L, 특히 14 내지 50mmol/L 또는 25 내지 35mmol/L의 시트르산삼나트륨으로 구성되며;　

여기서, 나머지는 물이다.

상기 성분은 각각의 경우에 수화물로서도 사용될 수 있다. 이 성분은 일반적으로 용액에서 해리되기 위해 존재한다.　

농축액 또는 희석액, 특히 상기 첨가제 용액의 희석액도 마찬가지로 특허청구된다.

첨가제 용액은 바람직하게는 각각 22℃에서 7보다 큰, 바람직하게는 7.5보다 큰 pH, 특히 8 내지 9의 pH를 갖는다.

첨가제 용액의 오스몰 농도가 바람직하게는 260 내지 300mOsm/kg이다. 오스몰 농도의 측정은 어는점 강하법(삼투압계)을 통해 일어난다.　

RBC 농축액 및/또는 전혈과 같은 RBC 농축액의 출발 물질에 300 내지 200nm, 특히 280 내지 220nm, 바람직하게는 260 내지 240nm 범위의 자외선을 조사하는 단계(이하, 일반적으로 "자외선 조사" 또는 "자외선 조사된(UV-irradiated)"으로 지칭되기도 함)를 포함하는, 첨가제 용액으로 희석된 RBC 농축액을 제조하는 방법도 또한 본 발명의 주제이다.

다음 세 가지 설계에서, RBC 농축액을 제조하는 방법이

- 전혈 또는 희석된 전혈에 자외선을 조사하여, 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분을 첨가하여 이러한 방식으로 조사된 전혈로부터 RBC 농축액을 수득하는 단계;

또는　

- 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분을 포함하는 RBC 농축액을 자외선 조사하에 조사하는 단계로서, 상기 RBC 농축액이 바람직하게는 0.5 미만의 hct를 갖는 희석된 RBC 농축액이며 자외선 조사 후 0.5 이상의 hct로 농축되는, 단계;　

또는

- 자외선 조사 하에서 제2 첨가제 용액을 포함하는 희석된 RBC 농축액을 조사하는 단계로서, 상기 희석된 RBC 농축액이 바람직하게는 0.5 미만의 hct를 갖고, 자외선 조사 후 0.5 초과의 hct로 농축되고, 상기 제2 첨가제 용액이, 제2 첨가제 용액을 기준으로, 적어도 75중량% 초과 조사 후, 상기 첨가제 용액 또는 상기 첨가제 용액의 성분으로 대체되고, 바람직하게는 완전히 대체되는, 단계를 포함하고;

여기서, 자외선 조사는 각각의 경우에 300 내지 200nm, 특히 280 내지 220nm, 바람직하게는 260 내지 240nm의 파장에서 일어난다. 첨가제 용액의 성분이 첨가될 때, 이는 마치 첨가제 용액이 첨가된 것처럼 각각의 경우에 동일한 농도가 초래되도록 첨가된다는 것을 의미한다. 이 점에서, 이것은 첨가제 용액이 첨가된 경우와 동일하다.

따라서, 본 발명은 또한 상기 첨가제 용액을 함유하는, 0.1 내지 0.4, 바람직하게는 0.25 내지 0.35의 hct를 갖는 희석된 RBC 농축액, 특히 백혈구 고갈된 희석된 RBC 농축액에 관한 것이다. 희석된 RBC 농축액은, 예를 들어, 첨가제 용액에 의한 RBC 농축액의 1:2 희석으로부터 수득된다. hct가 0.5 미만인 RBC 농축액은 본원에서 "희석된 RBC 농축액"으로 지칭되기도 한다.

RBC 농축액은 바람직하게는 다음과 같이 포함하여 구성된다(L=리터):

적혈구 0.40 - 0.80 L/L, 특히 0.50 - 0.70 L/L

첨가제 용액 0.10 - 0.60 L/L, 특히 0.25 - 0.50 L/L

및 임의로

안정제 용액 0.0001 - 0.10 L/L, 특히 CPD 안정제 용액

인간 혈장 0.0001 - 0.2 L/L.

각각의 경우에 숫자의 합은 1 또는 1L/L 미만의 수치, 특히 1L/L의 수치로 합산된다.

전혈(WB)에 자외선 조사가 일어난 경우, RBC 농축액의 조성은 특히 다음을 포함하거나 이로 구성된다:

적혈구 0.5 - 0.7 L/L

첨가제 용액 0.27 - 0.48 L/L

CPD 안정제 용액 0.03 - 0.09 L/L

인간 혈장 0.025 - 0.15 L/L 또는 0.015 - 0.025 L/L

또는 RBC 농축액의 자외선 조사 후, 전혈(WB)에 자외선 조사가 일어나지 않은 경우, 다음을 포함하거나 이로 구성된다:

적혈구 0.5 - 0.7 L/L

첨가제 용액 0.27 - 0.49 L/L

CPD 안정제 용액 0.001 - 0.009 L/L 또는 0.001 - 0.014 L/L

인간 혈장 0.005 - 0.05 L/L

하나의 구현예에 따르면, 적절한 CPD 안정제 용액은 다음과 같이 함유하여 작제된다:

시트르산삼나트륨 이수화물 80 내지 100mmol/L, 특히 89.4mmol/L

시트르산 일수화물 13 내지 18mmol/L, 특히 15.6mmol/L

NaH₂PO₄ 이수화물 13 내지 19mmol/L, 특히 16.1mmol/L

D-글루코스 일수화물 115 내지 140mmol/L, 특히 128.7mmol/L

하나의 구현예에 따르면, CPD 안정제 용액은 전혈에 1:6.1 내지 1:8.1, 특히 1:7.14(각 경우 V/V)의 용적 비율로 첨가되고, 예를 들어, 전혈 450mL의 경우 CPD 안정제 용액 63mL 또는 500mL의 경우 CPD 안정제 용액 70mL가, 즉 첨가제 용액이 사용되기 전에 첨가된다. 재처리에 따라, CPD 안정제 용액의 상기 성분은 이어서 특정 농도로 RBC 농축액에 잔류한다.　

글루코스와 시트르산삼나트륨이 또한 안정제 용액에 함유된다는 사실로 인해, CPD 안정제 용액이 사용되면 이의 비율이 RBC 농축액에서 그에 따라 증가한다. 그러나, 다른 안정제 용액을 사용하는 것도 가능하다.

하나의 구현예에 따르면, RBC 농축액은

10 내지 30mmol/L, 특히 14 내지 26mmol/L의 D-글루코스;

5 내지 12mmol/L, 특히 6 내지 10mmol/L의, 예를 들어, 이수화물로서의 인산수소나트륨;

0.3 내지 1.2mmol/L, 특히 0.5 내지 0.8mmol/L의 아데닌;

0.25 내지 0.9mmol/L, 특히 0.4 내지 0.7mmol/L의 구아노신;

8 내지 25mmol/L, 특히 11 내지 20mmol/L의 염화나트륨;

6 내지 18mmol/L, 특히 8 내지 16mmol/L의 시트르산삼나트륨;

및 임의로

0.01 내지 1mmol/L, 특히 0.02 내지 0.8mmol/L의, 예를 들어, 이수화물로서의 인산이수소나트륨;

0.01 내지 1mmol/L, 특히 0.02 내지 0.8mmol/L의, 예를 들어, 일수화물로서의 시트르산을 함유한다.

본 구현예는, 예를 들어, RBC 농축액이 본 발명에 따른 혈액 기증용 CPD 또는 CPDA-1 안정제 용액 및 첨가제 용액을 첨가하여 수득된 경우에 수득될 수 있고, 여기서 인산이수소나트륨 및 시트르산은 이어서 CPD 안정제 용액에 의해 도입된다.

따라서, 본 발명은 또한 RBC 농축액을 저장하기 위한 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분의 용도에 관한 것이다.

CPD 안정제 용액과 인간 혈장의 농도 차이는 첨가제 용액에 의한 EC의 희석 및 후속적 농축으로부터 발생한다. 농축 동안, 상청액의 일부가 제거되고, 따라서 원래 함유된 혈장 및 CPD 안정제 용액의 일부도 제거된다.

본 발명의 상세한 설명

하나의 구현예에 따르면, RBC 농축액은 개별 혈액 기증으로부터 단리되거나 기계적 성분채집술을 통해 개별 기증자로부터 수득된다. 제제의 용적은 일반적으로 약 200 내지 350mL 사이이다. 전혈 기증의 용적은 대부분 400 내지 500mL 사이의 범위이다. 제제는 일반적으로 전혈의 경우 약 4℃ 내지 37℃에서, RBC 농축액의 경우 4℃ +/- 2℃에서 각각 편평한 비닐 봉지에 저장한다.

백혈구 고갈은 전혈 수준에서, 즉 전혈을 처음 원심분리 전에, 또는 원심분리에 의해 수득된 RBC가 첨가제 용액에 현탁되고 희석되는 수준에서, 즉 RBC 농축액의 수준에서 수행될 수 있다. 일반적으로, 백혈구 고갈은 여과를 통해 발생한다. 성분채집술에 의해 적혈구를 수득하는 동안, 별도의 백혈구 고갈이 필요하지 않으며, 백혈구 고갈은 이미 여기에서 성분채집술의 일부로서 발생한다.　

하나의 설게에 따르면, 백혈구 고갈은, 예를 들어, 0.1 내지 0.4의 hct를 갖는, 본 발명에 따른 첨가제 용액으로 희석된 RBC 농축액에 대해 수행된다. 그런 다음, 자외선 조사가 백혈구 고갈 후 임의로 발생한 다음, 특히 0.5 내지 0.7의 hct로의 농축이 발생한다. 백혈구 고갈은 자외선 조사 전 또는 후에, 바람직하게는 조사 전에 발생할 수 있다.

자외선 조사는 전혈(WB)에, 즉 RBC 농축액의 생산 전 또는 RBC 농축액에 대해 발생할 수 있다. 자외선 처리된, 병원균 고갈된 RBC 농축액 및 임의로 백혈구 고갈된 RBC 농축액이 본 발명에 따른 첨가제 용액에서 생성물로서 수득된다.

RBC 농축액의 자외선 조사를 위한 출발 물질은, 예를 들어, 0.8 내지 1, 특히 0.8 내지 0.98 사이의 hct를 갖는 RBC 농축액이다. 하나의 구현예에 따르면, 이들은 본 발명에 따른 첨가제 용액에 의해 0.5 내지 0.7의 hct로 조정되고, 이 농도에서 자외선으로 조사되거나, 바람직하게는 추가 희석(희석된 RBC 농축액) 동안 조사된다. 본 출원의 관점에서, hct가 0.5 미만인 RBC 농축액은 희석된 RBC 농축액으로 지칭된다.

백혈구 고갈된 RBC 농축액은 또한 첨가제 용액에 의한 추가 희석으로, 예를 들어, 첨가제 용액에 의한 RBC 농축액의 1:2 희석으로부터 0.1 내지 0.4, 바람직하게는 0.25 내지 0.35의 hct(희석된 RBC 농축액)로 조정될 수 있다. 이러한 방식으로 희석된 RBC 농축액은 멸균 호스 연결을 통해 조사 백으로 옮겨지고, 격렬한 움직임하에 자외선으로 조사된다.

조사된 RBC 농축액은 빈 백으로 옮기고, 예를 들어, 원심분리 및 상청액 압착을 통해 0.5 내지 0.8, 특히 0.5 내지 0.7의 hct로 농축시킨다.　

병원균은 단파장 자외선(UV) 조사에 의해 혈액 제품에서 비활성화될 수 있는 것으로 공지되어 있다. 이는 혈액 제품이 300 내지 200의 파장(UVB 내지 UVC 범위)에서 자외선(UV) 조사를 거치고, 특히 280nm 내지 220nm, 특히 260 내지 240nm의 UVC 범위의 파장에서 조사를 거치는 본 발명의 방법에 따라 발생한다.

방사선 에너지는 전혈의 경우 바람직하게는 0.3 내지 10J/cm², 더 바람직하게는 2.5 내지 5.5J/cm², 특히 바람직하게는 3 내지 5J/cm²이고, 적혈구 농축액의 경우 바람직하게는 1.5 내지 4.5J/cm², 특히 바람직하게는 2 내지 4J/cm²(각각의 경우에 혈액 제품에 작용하는 방사선 에너지를 기준으로 함)이다. 조사 백과 같은 용기에 작용하는 방사선 에너지는 실제로 더 큰데, 이는 조사 백이 전형적으로 재료에 따라 관련 파장의 방사선 에너지를 흡수하기 때문이다.　

조사가 자외선을 흡수하는 매질을 통해 발생하면, 방사선 에너지는 그에 따라 증가한다. EVA(에틸렌 비닐 아세테이트)로 만든 조사 백은, 예를 들어, 방사선 에너지의 약 30 내지 40%를 흡수한다. 조사는 특히 2 내지 37℃의 혈액 제품의 온도에서 발생한다.　

자외선 조사를 위한 이러한 유형의 방법은, 예를 들어, WO 2007/076832 A1으로부터 공지되어 있으며, 본 발명에 따른 RBC 농축액에 적용된다. 이에 따르면, 제제, 즉 기증자 혈액(전혈) 및/또는 RBC 농축액은 조사 백에서 적절한 방식으로 이동되어 샘플의 일정한 순환이 용기에서 발생하도록 한다. 이에 따라 움직임이 매우 활발하게 일어나서 사용된 빛이 투과할 수 있을 정도로 얇은 층이 각각 액체 또는 현탁액 내의 일부 영역에서 형성된다. 이 움직임은 액체 또는 현탁액이 각각 백 내에서 효과적으로 혼합되도록 일어난다. 특히, 예를 들어, 다음과 같은 조건이 충족되면 두 가지 모두 실현된다:

　　1. 조사 백은 가요성이다.

　　2. 조사 백은 최대 충전 용적의 최대 40%, 특히 최대 30%, 특히 최대 15%까지 충전된다.

　　3. 백은, 예를 들어, 수평으로(앞뒤 방향으로 선형 또는 원형 또는 타원형으로) 및/또는 수직으로(흔들림) 격렬하게 움직인다.

동시에 발생하는 지속적인 혼합과 관련하여, 전체 제제(및 그 안에 함유된 병원균)가 궁극적으로 조사되고, 따라서 병원균이 감소된다.

조사 백은 오비탈 진탕기, 플랫폼 진탕기, 락킹 진탕기 또는 워블 진탕기에 의해 진탕시킬 수 있으며, 바람직하게는 전체 조사 시간의 적어도 4분의 3 동안 이동된다. 조사 백은 전형적으로 최대 5000mL의 용적을 갖는다. 조사 백이 한쪽에 배치된 경우, 조사 백의 높이는 조사 백이 놓이는 표면과 조사 백의 상부 표면과의 교차점 사이의 표면 법선에 따른 거리를 기준으로, 백 내용물과 접촉하는, 조사 백의 전체 상부 표면에 걸쳐 각각 움직임 또는 진탕 동안 및 이로 인해 지속적으로 변화한다.

조사 백은 자외선 투명 플라스틱 재료로 만들어진다. 적합한 플라스틱은, 예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트 및 필름 두께가, 예를 들어, 1mm 이하인, 특히 필름 두께가 0.5mm 미만인 폴리올레핀이다. 조사 백은 편평하게 형성되며, 바람직하게는 200 내지 320nm 범위에서 임의의 흡수 최대값을 갖지 않는다. 수평으로 충전된 상태에서, 조사 백은 단지 수 mm, 예를 들어, 10mm 미만, 특히 5mm 미만, 바람직하게는 심지어 3mm 미만의 두깨룰 가지며, 예를 들어, 최대 600mL의 샘플 용적을 수용하도록 의도된다. 그러나, 조사 백의 최대 용량(용적)은 그 안에 함유된 실제 샘플 용적보다, 바람직하게는 적어도 3배, 일반적으로 적어도 5배 또는 적어도 10배 더 크다. 예를 들어, 수평일 때 조사 백의 바닥 표면은 19 x 38cm이고 충전 용적은 500 내지 600mL이므로, 수평 및 휴지 상태에서 평균 충전 높이는 6.9 내지 8.3mm이다.

각 자외선 조사된 유닛은 바람직하게는 기증자까지 역 추적될 수 있다.

헤마토크릿(hct)은 혈액 내 세포 성분의 비율을 식별한다. 혈액 내 정상적인 hct 값은 남성의 경우 0.42 내지 0.5 사이이고, 여성의 경우 0.37 내지 0.45 사이이다. 현재의 경우, 이는 L/L로 지정된다. 적혈구가 생리적으로 혈액 세포 총 용적의 99%를 나타낸다는 사실로 인해, hct 값은 대략적으로 세포 용적의 비율에 상응한다.

hct는 비응고 혈액 샘플을 DIN 58933-1:1995-01에 따라 튜브에서 원심분리하여 결정된다. 이에 의해, 혈액의 응고는 EDTA(에틸렌디아민 테트라아세테이트) 또는 헤파린과 같은 항응고제를 첨가함으로써 방지된다. 혈장에서 분리되는 적혈구가 무거울수록, 적혈구 컬럼의 높이는 전체 혈액 컬럼과 관련하여 측정된다. 적혈구, 백혈구/혈소판 및 혈장 사이의 경계는 육안으로 확인할 수 있다. 백혈구 및/또는 혈소판 및 혈장이 이미 분리된 경우, 침전되는 고형체는 거의 전적으로 적혈구로 구성된다.

실험 부분

UVC 조사된 혈액 제제의 품질에 대한 첨가제 용액 UG65의 영향뿐만 아니라 자외선 조사를 통한 혈액 제제의 병원균 비활성화의 효과.

성분의 생산

전혈 기증(450 내지 500mL)은 이후 총체적으로 전혈 기증으로 지칭되는 70mL의 항응고제 CPD(0일)에서 수집하였고, 실온에서 밤새 저장했다. 물 이외에, 항응고제 CPD는 다음 성분을 함유했다:

mmol/

시트르산삼나트륨 이수화물 89.4

시트르산 일수화물 15.6

NaH₂PO₄ 이수화물 16.1

D-글루코스 일수화물 128.7

1일째에, 전혈을 병원균 비활성화 실험에 직접 사용하거나, RBC 농축액으로 추가 처리했다. 이 목적을 위해, 적혈구를 통상적인 백 원심분리기에서 원심분리하고 압착 기계를 사용하여 자동 성분 분리 후 "건조" RBC 농축액으로 수득한 다음, 각각의 지정된 첨가제 용액(110mL)에 현탁시켰다. 백혈구의 고갈은 전혈 수준에서 여과("전혈 여과")에 의해 발생하거나, RBC 농축액의 고갈(원심분리 후 여과 및 압착)은 백혈구 고갈 필터에 의해 발생한다.　

첨가제 용액 UG65의 조성:

수용액은 다음 성분을 함유한다:

22.7mmol/L 인산수소이나트륨 이수화물

1.85mmol/L 아데닌

51.6mmol/L D-글루코스 일수화물

1.44mmol/L 구아노신

40mmol/L 염화나트륨

28.4mmol/L 시트르산삼나트륨 이수화물

나머지 물　

첨가제 용액 SAG-M의 조성:

수용액은 다음 성분을 함유한다:

1.25mmol/L 아데닌

45.4mmol/L D-글루코스 일수화물

28.8mmol/L D-만니톨

150mmol/L 염화나트륨

나머지 물

자외선 조사를 통한 병원균 비활성화

전혈(520 - 570mL) 또는 첨가제 용액으로 희석된 RBC 농축액(600mL, hct 약 0.3)을 자외선 투과성 백(EVA로 만든 19 x 38cm 바닥 표면)에 충전시키고, 자외선 조사 시스템(Macotronic UV)에서 각각 4.5J/cm²(EC) 또는 6J/cm²(WB)의 UVC 선량으로 UVC 광(254nm)을 조사하는 동시에 진탕시켰다(300rpm).

이어서, 0.5 내지 0.7의 hct를 갖는 통상적인 RBC 농축액은 원심분리 및 자동 분리를 통해 전혈 또는 희석된 RBC 농축액으로부터 수득하였다.

조사된 에너지와 관련된 정보는 조사 백의 외부에 작용한다. 약 50 내지 75%, 현재의 경우 조사된 에너지의 약 60%가 조사 백을 관통한다. 조사 백은 위와 아래에서 조사했다.

품질 매개변수(parameter)의 결정

용혈률[%]은 총 함량 대비 RBC 농축액의 상청액에 있는 유리 헤모글로빈의 백분율로 정의된다.

용혈(%) = ((100-헤마토크릿^*100) x 상청액 중 유리 헤모글로빈/총 헤모글로빈).

hct는 헤마토크릿 원심분리기(헤마토크릿 210, Hettich)에 의해 결정했다. 상청액 중 유리 헤모글로빈은 Harboe에 따른 3-파장 방법에 의해 광도계로 결정했다(참조: M. Harboe, A method for determination of hemoglobin in plasma by near-ultraviolet spectrophotometry. Scand J Clin Lab Invest, 1959. 11(1): p. 66-70). 총 헤모글로빈은 혈액학 기계(XS1000i 또는 XN550, Sysmex)에 의해 측정했다.　

글루코스 및 락테이트 농도의 결정은 혈액 가스 분석기 ABL90 FLEX(방사계)를 사용하여 발생했다. 적혈구의 ATP 함량은 시판되는 키트 ATP 헥소키나제 FS(DiaSys Greiner)에 의해 측정했다. pH는 22℃에서 통상적인 pH 측정기를 사용하여 결정했다. 용적은 RBC 농축액의 비중을 고려하여 칭량함으로써 결정했다.

도 1은 저장 기간에 걸쳐 용혈률을 일 단위의 시간 함수로 나타낸다.
도 2는 저장 기간에 걸쳐 UG65에서 UVC 조사되고 UV65에서 저장된 RBC 농축액의 글루코스 농도의 감소를 나타낸다.
도 3은 저장 기간에 걸쳐 UG65에서 UVC 조사되고 UV65에서 저장된 RBC 농축액의 락테이트 농도의 증가를 나타낸다.　
도 4는 NaCl, SAG-M 또는 UG65의 존재하에 조사된 후 UG65에 저장된 UVC 조사된 RBC 농축액의 용혈 속도를 명시한다.
도 5는 NaCl, SAG-M 또는 UG65의 존재하에 조사된 후 UG65에 저장된 UVC 조사된 RBC 농축액의 ATP 함량을 명시한다.
도 6은 동일한 첨가제 용액에서 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 과정에서 용혈률을 나타낸다.
도 7은 동일한 첨가제 용액으로 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 종료시(5주째) ATP 함량을 각각 나타낸다.
도 8은 동일한 첨가제 용액으로 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 종료시(5주째) 글루코스 함량을 각각 나타낸다.
도 9는 동일한 첨가제 용액으로 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 종료시(5주째) 락테이트 함량을 각각 나타낸다.
도 10은 UG65 및 SAG-M에 저장된, UVC 조사된 전혈로부터 수득된 RBCC의 저장 과정에서의 용혈률을 나타낸다.
도 11은 저장 종료시(4주째) ATP 함량을 각각 나타낸다.
도 12는 저장 종료시(4주째) 글루코스 각각 함량을 나타낸다.
도 13은 저장 종료시(4주째) 락테이트 각각 함량을 나타낸다.
도 14는 UG65 및 PAGGS-M에서 저장된, UVC 조사된 전혈로부터 제조된 RBCC의 저장 과정에서 용혈률을 나타낸다.
도 15는 저장 종료시(4주째) ATP 함량을 나타낸다.
도 16은 저장 종료시(4주째) 글루코스 함량을 나타낸다.
도 17은 저장 종료시(4주째) 락테이트 함량을 나타낸다.

실험 1

UG65에서 UVC 조사되고 UG65에 저장된 RBC 농축액의 품질 매개변수

첨가제 용액 UG65 중 RBC 농축액(n=9)에 UVC 조사하고, 상기 기재된 바와 같이 다시 농축시켰다. 이어서, 약 0.6의 hct를 갖는 완성된 RBC 농축액을 4 ± 2℃에서 저장하고, 시험관내 품질을 결정하기 위한 샘플을 매주 수집했다.

결과

UVC 조사된 RBC 농축액은 0.59 내지 0.64의 hct를 가졌고, 따라서 유럽 평의회 가이드라인에 상응했다. 용혈률은 저장 기간 동안 증가했다. 그러나, 저장 36일째에 9개 RBC 농축액 모두 0.8% 이하의 용혈률을 나타냈고, 따라서 유럽 평의회 가이드라인의 품질 요건을 충족했다.

UVC 조사된 RBC 농축액의 pH 값은 2일째에 7.14 ± 0.06이었고, 저장 기간에 걸쳐 36일째에 6.54 ± 0.05로 감소했다. 이와 병행하여, RBC 농축액의 글루코스 함량은 37.8 ± 1.6에서 23.7 ± 1.9로 감소했고, 락테이트 농도는 6.9 ± 0.6에서 30.4 ± 1.6으로 증가했다.

도 1은 저장 기간에 걸쳐 용혈률을 일 단위의 시간 함수로 나타낸다.

도 2는 저장 기간에 걸쳐 UG65에서 UVC 조사되고 UV65에서 저장된 RBC 농축액의 글루코스 농도의 감소를 나타내고, 도 3은 UG65에서 UVC 조사되고 UV65에서 저장된 RBC 농축액의 락테이트 농도의 증가를 나타낸다.　

값은 각각의 경우에 9개 샘플의 평균으로 지정된다.

새로 개발된 첨가제가 UVC 조사된 RBC 농축액을 양호한 품질로 생산하는 데 적합한 것으로 밝혀졌다.　

실험 2:

첨가제 용액 UG65에 후속 저장과 함께 UVC 조사 동안 상이한 첨가제 용액의 영향

4개의 건조 RBC 농축액을 풀링하고 다시 나누었다. RBC 농축액을 110mL의 UG65에 현탁시키고, 백혈구 고갈을 위해 여과시켰다(UVC 조사 없이 처리되지 않은 대조군).　

나머지 3개의 RBC 농축액의 경우, 풀링된 RBC 농축액을 각각의 경우 110mL의 등장성 식염수 용액(NaCl 0.9%)에, 110mL의 첨가제 용액 SAG-M 및 110mL의 첨가제 용액 UG65와 함께 현탁시키고, 여과한 다음, 각각의 동일한 첨가제 용액으로 약 0.3의 hct로 희석시켰다. UVC 조사는 4.5J/cm²의 UVC 선량으로 상기 지정된 바와 같이 발생했다. 이어서, UVC 조사된 RBC 농축액을 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 모든 적혈구를 각각 첨가제 용액 UG65에 다시 현탁시켰다. 첨가제 용액 UG65에 RBC 농축액의 저장은 4±2℃에서 발생하였고, 시험관내 품질을 결정하기 위한 샘플은 매주 수집했다.

결과

도 4에 나타낸 바와 같이, 조사되지 않은 대조군과 비교하여 UVC 조사는 증가된 용혈률을 유도했다. 용혈률은 RBC가 NaCl 또는 SAG-M의 존재하에 조사되었을 때 가장 높았다. UVC 조사된 RBC 농축액의 최고 품질은 첨가제 용액 UG65가 조사 동안 이미 존재한 경우에 달성되었다.

RBC의 에너지 상태에 대한 매개변수로서 ATP 함량도 마찬가지로 UVC 조사에 의해 영향을 받았다. 저장 종료시 ATP 함량은 RBC가 UG65의 존재하에 조사된 경우 가장 높았다(도 5). NaCl 또는 SAG-M의 존재하에 RBC 농축액의 조사는 조사되지 않은 대조군과 비교하여 ATP 함량의 감소를 유도했다.

도 4는 용혈 속도를 명시하고, 도 5는 NaCl, SAG-M 또는 UG65의 존재하에 조사된 후 UG65에 저장된 UVC 조사된 RBC 농축액의 ATP 함량을 명시한다. UG65에서 UVC 조사 없이 저장된 EC는 대조군 역할을 했다.

이는 UVC 조사 동안 첨가제 용액 UG65로 RBC 농축액을 희석하면 적혈구의 품질에 긍정적인 영향을 미친다는 일련의 실험에 따른다. 새로 개발된 첨가제 용액은 식염수 용액 또는 통상적인 첨가제 용액과 같은 다른 가능한 희석 용액에 비해 이점을 제공한다.

실험 3:

통상적인 첨가제 용액 SAG-M에서 조사되고 저장된 RBC 농축액과 비교하여 첨가제 용액 UG65에서 조사되고 저장된 UVC 처리된 RBC 농축액의 품질 비교

"건조" RBC 농축액(헤마토크릿 > 0.8)은 상기 기재된 바와 같이 수득하였다. 두 개의 건조 RBC 농축액을 풀링시키고, 다시 나눈 다음, 110mL의 시판되는 첨가제 용액 SAG-M(대조군)에 한 번, 110mL의 새로 개발된 첨가제 용액 UG65(테스트)에 한 번 현탁시켰다. 백혈구의 고갈은 통상적인 백혈구 고갈 필터를 사용하여 이러한 RBC 농축액의 여과에 의해 발생하였다. 여과 후, 각 RBC 농축액을 동일한 양의 각 첨가제 용액(w/w)과 혼합했다. 희석된 RBC 농축액 600g을 UVC 투과성 조사 백으로 옮겼다. UVC 조사는 상기 기재된 바와 같이 발생했다. 이어서, 통상적인 RBC 농축액은 원심분리 및 자동 분리에 의해 희석된 RBC 농축액으로부터 수득하였다. 완성된 RBC 농축액(n=3, 테스트 및 대조군)을 4 ± 2℃에서 저장하고, 시험관내 품질을 결정하기 위한 샘플을 매주 수집했다.

결과

생산 후, 테스트 및 대조군 RBC 농축액은 용적, hct 및 유닛당 헤모글로빈에 대해 필적할 만한 값을 가졌다(표 1).

[표 1]

RBC 농축액의 가장 중요한 품질 매개변수로서, UG65에서 UVC 조사되고 저장된 RBC 농축액의 용혈률은 통상적인 첨가제 용액 SAG-M에서 UVC 조사되고 저장된 RBC 농축액과 비교하여 현저히 낮았다(도 6). 저장 과정에서, 모든 추가 품질 매개변수는 또한 대조군과 테스트 RBC 농축액 사이에 유의한 차이를 나타냈다(도 7-9).

도 6은 동일한 첨가제 용액에서 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 과정에서 용혈률을 나타낸다.

도 7은 동일한 첨가제 용액으로 UVC 조사되고 저장된 RBCC의 저장 종료시(5주째) ATP 함량을, 도 8은 글루코스 함량을, 도 9는 락테이트 함량을 각각 나타낸다.

저장 과정에서, 새로 개발된 첨가제 용액 UG65의 중요한 이점은 RBC 농축액의 UVC 조사에 대해 명백해졌다. UG65에서 UVC 조사되고 UG65에서 저장된 RBC 농축액은 통상적인 첨가제 용액 SAG-M에서의 것들의 품질에 비해 우수했다.

실험 4

전혈 수준에서 UVC 조사 후 RBC 농축액의 품질, 첨가제 용액 UG65와 통상적인 첨가제 용액 SAG-M의 비교

전혈 기증(약 570mL)은 상기 기재된 바와 같이 UVC로 조사한 후, 압착 기계에 의한 자동 성분 분리에 의해 "건조" RBC 농축액(헤마토크릿 > 0.8)으로 수득하였다. 두 개의 건조 RBC 농축액을 풀링하고, 다시 분리한 다음, 110mL의 시판되는 첨가제 용액 SAG-M(대조군)에 한 번, 110mL의 새로 개발된 용액 UG65(테스트)에 한 번 현탁시켰다. 백혈구의 고갈은 시판되는 백혈구 고갈 필터에 의한 이러한 RBC 농축액의 여과에 의해 발생했다. 이어서, RBC 농축액(n=4, 테스트 및 대조군)을 4 ± 2℃에서 저장하고, 시험관내 품질을 결정하기 위한 샘플을 매주 수집했다.

결과

생산 후, 테스트 및 대조군 RBC 농축액은 용적, hct 및 유닛당 헤모글로빈에 대해 필적할 만한 값을 가졌다(표 2).

[표 2]

RBC 농축액의 가장 중요한 품질 매개변수로서, UG65에서 UVC 조사된 전혈로부터 수득된 RBC 농축액의 용혈률은 통상적인 첨가제 용액 SAG-M에서 UVC 조사된 전혈로부터 수득된 RBC 농축액에 비해 현저히 낮았다(도 10). 저장 과정에서, 추가 품질 매개변수도 대조군과 테스트 RBC 농축액 사이에 유의한 차이를 나타냈다(도 11 내지 13).

도 10은 UG65 및 SAG-M에 저장된, UVC 조사된 전혈로부터 수득된 RBCC의 저장 과정에서의 용혈률을 나타낸다.

도 11은 저장 종료시(4주째) ATP 함량을, 도 12는 글루코스 함량을, 도 13은 락테이트 함량을 각각 나타낸다.

저장 과정에서, 새로 개발된 첨가제 용액 UG65의 중요한 이점은 UVC 조사된 전혈로부터 RBC 농축액의 생산에 대해 명백해졌다. UG65에서 UVC 조사된 전혈로부터 RBC 농축액의 품질은 통상적인 첨가제 용액 SAG-M에서의 것들보다 우수하다.

실험 5

박테리아 비활성화　

박테리아 균주 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae)(PEI-B-P-08-01), 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens)(PEI-B-P-56) 및 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)(PEI-B-P-77)를 CASA 부용에서 증식시키고, 인간 혈청 알부민과 혼합하고, 사용할 때까지 냉동 저장했다(참조: U. Gravemann, et al., Bacterial inactivation of platelet concentrates with the THERAFLEX UV-Platelets pathogen inactivation system. Transfusion, 2019. 59(4): p. 1324-1332.). 전혈 또는 약 0.3의 hct를 갖는 희석된 RBC 농축액을 약 1 x 10⁶ KBE/mL의 박테리아 현탁액(사용된 각 박테리아에 대해 n=3)으로 스파이킹한 후, UVC 광을 조사하고 진탕시켰다. 이어서, 통상적인 RBC 농축액을 희석된 RBC 농축액 또는 전혈로부터 제조했다. 샘플을 상이한 시점에 수집하고, 박테리아 역가는 한천 플레이트에 플레이팅하여 결정했다.　

결과

박테리아는 RBC 농축액(표 3)뿐만 아니라 전혈(표 4)에서 4 내지 6 로그 수준 사이의 로그 감소 인자로 용량 의존적 방식으로 비활성화시켰다. 실험은 이 방법의 박테리아 비활성화 효율성을 입증한다.

[표 3]

[표 4]

실험 6

바이러스 비활성화

EMCV(균주 EMC, ATCC VR129B), 신드비스 바이러스(균주 Ar339, ATCC VR-68) 및 VSV(균주 인디아나(Indiana), ATCC VR-158)를 증식시키고, Vero 세포(신장 조직의 아프리카 녹색 원숭이 세포주, ATCC, Bio Whittaker No. BE76-108B)에서 적정했다. 배양 및 적정은 문헌[Mohr et al. (H. Mohr et al., A novel approach to pathogen reduction in platelet concentrates using short-wave ultraviolet light. Transfusion, 2009. 49(12): p. 2612-24)]에 기재된 바와 같이 발생했다.

전혈 또는 약 0.3의 hct를 갖는 첨가제 용액 UG65으로 희석된 RBC 농축액은 바이러스 현탁액(10% v/v, 각각 사용된 바이러스에 대해 n=3)을 스파이킹한 후, 충격을 가하는 동안 UVC 광을 조사했다. 이어서, 통상적인 RBC 농축액을 희석된 RBC 농축액 또는 전혈로부터 제조했다. 샘플을 상이한 시점에 수집하고, 바이러스 역가를 종점 적정에 의해 결정했다. 검출 한계에 도달시, 큰 용적 플레이팅을 종점 적정 대신 적용했다.

바이러스는 RBC 농축액(표 5)뿐만 아니라 전혈(표 6)에서 3 내지 5 로그 수준의 로그 감소 인자를 사용하여 용량 의존적 방식으로 비활성화했다. 실험은 방법의 바이러스 비활성화 효율성을 입증한다.

[표 5]

[표 6]

실험 7

전혈 수준에서 UVC 조사 후 RBC 농축액의 품질, 첨가제 용액 UG65와 첨가제 용액 PAGGS-M의 비교

두 개의 전혈 기증(각각의 경우, 약 500mL의 전혈 + 70mL의 CPD 안정제 용액)을 풀링하고, 다시 나누었다. 전혈 유닛을 상기 기재된 바와 같이 UVC로 조사한 후, 압착 기계에 의한 자동 성분 분리에 의해 "건조" PBC 농축액(헤마토크릿 > 0.8)으로 처리했다.

두 개의 건조 RBC 농축액을 풀링하고, 다시 분리한 다음, 상기 기재된 바와 같이 110mL의 시판되는 첨가제 용액 PAGGS-M(대조군, 상기 추가로 기재된 바와 같은 조성물)에 한 번, 110mL의 새로 개발된 용액 UG65(테스트)에 한 번 현탁시켰다. 백혈구의 고갈은 통상적인 백혈구 고갈 필터에 의한 이러한 RBC 농축액의 여과에 의해 발생했다. 이어서, RBC 농축액(n=4, 테스트 및 대조군)을 4 ± 2℃에서 저장하였고, 시험관내 품질을 결정하기 위한 샘플을 매주 수집했다. 동일한 양의 CPD를 사용하는 경우, 본 발명에 따라 첨가된 첨가제인 RBC 농축액은 만니톨을 갖지 않았고, 인산수소이나트륨 및 시트르산삼나트륨의 함량은 CPD 이외에 PAGGS-M이 또한 함유된 것들과 비교하여 본 발명에 따른 PBC 농축액에서 유의하게 더 높았다는 점에서 각각의 경우에 적어도 그들의 조성이 상이하다.

[표 7]

[표 8]

결과

생산 후, 테스트 및 대조군 RBC 농축액은 용적, hct 및 유닛당 헤모글로빈에 대해 필적할 만한 값을 가졌다(표 9).

[표 9]

RBC 농축액의 가장 중요한 품질 매개변수로서, UG65에서 UVC 조사된 전혈로부터 제조된 RBC 농축액의 용혈률은 통상적인 첨가제 용액 PAGGS-M에서 UVC 조사된 전혈로부터 제조된 RBC 농축액에 비해 현저히 낮았다(도 14). 저장 과정에서, 추가의 품질 매개변수는 또한 대조군과 테스트 RBC 농축액 사이에 유의한 차이를 나타냈다(도 15 내지 17).

도 14는 UG65 및 PAGGS-M에서 저장된, UVC 조사된 전혈로부터 제조된 RBCC의 저장 과정에서 용혈률을 나타낸다.

도 15는 저장 종료시(4주째) ATP 함량을, 도 16은 글루코스 함량을, 도 17은 락테이트 함량을 각각 나타낸다.

저장 과정에서, 새로 개발된 첨가제 용액 UG65의 중요한 이점은 UVC 조사된 전혈로부터 RBC 농축액의 제조를 위해 분명해졌다. UG65에서 UVC 조사된 전혈로부터의 RBC 농축액의 품질은 첨가제 용액 PAGGS-M에서의 것들보다 우수하다.

Claims

물과 함께 적어도 다음 성분을 포함하는 첨가제 용액:
12 내지 50mmol/L의 인산수소이나트륨;
0.1 내지 3.5mmol/L의 아데닌;
10 내지 90mmol/L의 D-글루코스;
0.1 내지 3mmol/L의 구아노신;　
10 내지 80mmol/L의 염화나트륨; 및
10 내지 50mmol/L의 시트르산삼나트륨.
제1항에 있어서, 상기 인산수소이나트륨, 아데닌, D-글루코스, 구아노신, 염화나트륨 및/또는 시트르산삼나트륨의 농도가 각각 개별적으로 또는 함께 다음과 같은, 첨가제 용액:
17 내지 50mmol/L, 특히 20 내지 25mmol/L의 인산수소이나트륨;
1.5 내지 2.5mmol/L의 아데닌;
45 내지 55mmol/L의 D-글루코스;
1.25 내지 1.75mmol/L의 구아노신;　
20 내지 60mmol/L의 염화나트륨, 특히 35 내지 45mmol/L의 염화나트륨;　
14 내지 50mmol/L, 특히 25 내지 35mmol/L의 시트르산삼나트륨.
제1항 또는 제2항 중 적어도 어느 하나의 항에 있어서, 상기 첨가제 용액이 명시된 농도의 명시된 성분으로 구성되고, 나머지가 각각 물인, 첨가제 용액.
제1항 내지 제3항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 첨가제 용액이 각각 22℃에서 7보다 큰, 바람직하게는 7.5보다 큰 pH, 특히 8 내지 9의 pH를 갖는, 첨가제 용액.
제1항 내지 제4항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 첨가제 용액의 오스몰 농도(osmolality)가 260 내지 300mOsm/kg인, 첨가제 용액.
제1항 내지 제5항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 첨가제 용액이 만니톨 및/또는 소르비톨을 포함하지 않는, 첨가제 용액.
제1항 내지 제6항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 물에 의한 첨가제 용액의 희석액의 농축액.
적혈구 및 제1항 내지 제6항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분 또는 제7항에 따른 희석액의 농축액을 포함하는 적혈구(Red blood cell; RBC) 농축액.
제8항에 있어서, 상기 RBC 농축액이
0.40 내지 0.80L/L, 바람직하게는 0.50 내지 0.70L/L의 적혈구 및
0.10 내지 0.60L/L의 첨가제 용액, 바람직하게는 0.25 내지 0.50L/L의 첨가제 용액을 포함하고,
여기서, 각각의 경우에 L/L 단위의 용적에 의한 비율의 합이 1 또는 1L/L 미만의 수치로 합산되는, RBC 농축액.
제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 RBC 농축액이
0.0001 내지 0.1L/L의 안정제 용액, 특히 CPD 안정제 용액 및/또는
0.0001 내지 0.2L/L의 인간 혈장을 추가로 포함하는, RBC 농축액.
제8항 내지 제10항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 자외선 조사된 적혈구를 포함하는, RBC 농축액.
제8항 내지 제11항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 전혈 단계에서 자외선 조사된 적혈구를 포함하는, RBC 농축액.
제8항 내지 제12항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 희석된 RBC 농축액의 단계에서 자외선(UV radiation)이 조사된 적혈구를 포함하고, 상기 희석액이 제1항 내지 제5항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액을 포함하고, 희석된 RBC 농축액이 바람직하게는 0.5 미만의 hct를 갖고, 자외선 조사 후에 농축되는, RBC 농축액.
제8항 내지 제13항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 자외선 조사가 300 내지 200nm, 특히 280 내지 220nm, 바람직하게는 260 내지 240nm의 파장에서 수행되는, RBC 농축액.
제8항 내지 제14항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 0.4 내지 0.8, 특히 0.5 내지 0.7의 hct를 갖는, RBC 농축액.　
제8항 내지 제15항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 만니톨 또는 소르비톨을 포함하지 않는, RBC 농축액.
제8항 내지 제16항 중 적어도 어느 한 항에 있어서,
10 내지 30mmol/L, 특히 14 내지 26mmol/L의 D-글루코스;
5 내지 12mmol/L, 특히 6 내지 10mmol/L의 인산수소이나트륨;　
0.3 내지 1.2mmol/L, 특히 0.5 내지 0.8mmol/L의 아데닌;
0.25 내지 0.9mmol/L, 특히 0.4 내지 0.7mmol/L의 구아노신;
8 내지 25mmol/L, 특히 11 내지 20mmol/L의 염화나트륨;
6 내지 18mmol/L, 특히 8 내지 16mmol/L의 시트르산삼나트륨;
및 임의로
0.01 내지 1mmol/L, 특히 0.02 내지 0.8mmol/L의 인산이수소나트륨;
0.01 내지 1mmol/L, 특히 0.02 내지 0.8mmol/L의 시트르산을 갖는, RBC 농축액.
제8항 내지 제17항 중 적어도 어느 한 항에 있어서, 0.6mmol/L 미만, 특히 0.5mmol/L 미만의 인산이수소나트륨을 갖는, RBC 농축액.
적혈구(RBC) 농축액을 제조하는 방법으로서, 상기 방법이
- 전혈 또는 희석된 전혈에 자외선을 조사하여, 각각 제1항 내지 제7항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분을 첨가함으로써 이렇게 조사된 전혈로부터 RBC 농축액을 수득하는 단계;
또는　
- 각각 제1항 내지 제7항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분을 포함하는, RBC 농축액을 자외선 조사하에 조사하는 단계로서, 상기 RBC 농축액이 바람직하게는 0.5 미만의 hct를 갖는 희석된 RBC 농축액이며 자외선 조사 후 0.5 이상의 hct로 농축되는, 단계;　
또는
- 자외선 조사 하에서 제2 첨가제 용액을 포함하는 희석된 RBC 농축액을 조사하는 단계로서, 상기 희석된 RBC 농축액이 바람직하게는 0.5 미만의 hct를 갖고, 자외선 조사 후 0.5 초과의 hct로 농축되고, 상기 제2 첨가제 용액이, 제2 첨가제 용액을 기준으로, 적어도 75중량% 초과 조사 후, 각각 제1항 내지 제7항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분으로 적어도 부분적으로 대체되고, 바람직하게는 본질적으로 완전히 대체되는, 단계를 포함하고;
여기서, 상기 자외선 조사가 각각의 경우에 300 내지 200nm, 특히 280 내지 220nm, 바람직하게는 260 내지 240nm의 파장에서 수행되는, RBC 농축액을 제조하는 방법.　
제19항에 있어서, 상기 RBC 농축액이 제8항 내지 제18항 중 적어도 어느 한 항에 따라 추가로 특성화되는, RBC 농축액의 제조 방법.
첨가제 용액으로 희석된 적혈구(RBC) 농축액의 제조 방법으로서, 각각 제1항 내지 제6항 중 적어도 어느 한 항에 따른 상기 첨가제 용액 또는 상기 첨가제 용액의 농축액이 바람직하게는 0.5 이상의 hct를 갖는 것이 RBC 농축액에 첨가되는, 제조 방법.
적혈구(RBC) 농축액, 바람직하게는 제8항 내지 제18항 중 적어도 어느 한 항에 따른 RBC 농축액을 저장하기 위한, 각각 제1항 내지 제6항 중 적어도 어느 한 항에 따른 첨가제 용액 또는 첨가제 용액의 성분의 용도.