KR20240022574A - 유리한 항-hcv 조합 요법 - Google Patents

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KR20240022574A
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장-피에르 솜마도시
아델 무사
키스 엠. 피에트로파올로
시아오-지안 저우
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아테아 파마슈티컬즈, 인크.
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Abstract

화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 화합물 1-A) 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 상승작용적 제약 조합물, 뿐만 아니라 C형 간염 또는 C형 간염과 관련된 병태를 치료하기 위한 그의 용도, 뿐만 아니라 제약 조합물의 제조 방법: 1, 1-A, 2

Description

유리한 항-HCV 조합 요법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 6월 17일에 출원된 미국 가출원 번호 63/212,047의 이익을 주장한다. 본 출원의 전문은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 유리하고 상승작용적인 HCV 요법을 위한 특정 NS5B 폴리머라제 억제제 및 특정 NS5A 억제제의 제약 조합물이다.
C형 간염 (HCV)은 RNA 단일-가닥 바이러스이며, 헤파시바이러스(Hepacivirus) 속의 구성원이다. 모든 간 질환의 사례 중 대부분은 HCV에 의해 유발되는 것으로 추정된다. HCV 감염은 간경변증 및 간암으로 이어질 수 있고, 진행되도록 방치되면 간 이식이 필요할 수 있는 간부전으로 이어질 수 있다.
RNA 폴리머라제는 RNA 단일 가닥 바이러스에 대한 약물 개발을 위한 주요 표적이다. HCV 비-구조 단백질 NS5B RNA-의존성 RNA 폴리머라제는 바이러스 RNA 합성의 개시 및 촉매작용을 담당하는 주요 효소이다. NS5B 억제제의 2종의 주요 하위부류: 뉴클레오시드 유사체 및 비-뉴클레오시드 억제제 (NNI)가 존재한다. 뉴클레오시드 유사체는 폴리머라제에 대한 대안적 기질로서 작용하는 활성 트리포스페이트로 동화된다. 비-뉴클레오시드 억제제 (NNI)는 단백질 상의 알로스테릭 영역에 결합한다. 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제는 천연 폴리머라제 기질을 모방하고 쇄 종결제로서 작용한다. 이들은 RNA 전사의 개시 및 신생 RNA 쇄의 신장을 억제한다.
RNA 폴리머라제를 표적화하는 것에 더하여, 다른 RNA 바이러스 단백질도 또한 치료를 위해 표적화될 수 있다. 예를 들어, 치료 접근법을 위한 추가의 표적인 HCV 단백질은 NS3/4A (세린 프로테아제) 및 NS5A (HCV 레플리카제의 필수 성분이며 세포 경로에 대해 다양한 효과를 발휘하는 비-구조 단백질)이다.
2013년 12월에, 제1 뉴클레오시드 NS5B 폴리머라제 억제제 소포스부비르 (소발디(Sovaldi)®, 길리아드 사이언시스(Gilead Sciences))가 승인되었다. 소발디®는 간세포에 의해 수용되고, 세포내 활성화를 거쳐 활성 대사물, 2'-데옥시-2'-α-플루오로-β-C-메틸우리딘-5'-트리포스페이트를 제공하는 우리딘 포스포르아미데이트 전구약물이다.
소발디®는 인터페론의 공투여를 필요로 하지 않으면서 HCV 감염의 특정 유형을 치료하기 위한 안전성 및 효능이 입증된 제1 약물이다. 소발디®는 FDA 승인을 받은 획기적인 요법 지정을 갖는 제3 약물이다.
수많은 고정-용량 약물 조합물이 HCV의 치료를 위해 승인되었다. 2014년에, 미국 FDA는 만성 C형 간염 바이러스 유전자형 1 감염을 치료하기 위해 하르보니(Harvoni)® (레디파스비르, NS5A 억제제, 및 소포스부비르)를 승인하였다. 하르보니®는 만성 HCV 유전자형 1 감염을 치료하기 위해 승인된 제1 조합 환제이다. 이는 또한 인터페론 또는 리바비린의 투여를 필요로 하지 않는 제1 승인된 요법이다. 또한, FDA는 유전자형 1 HCV 감염을 갖는 성인을 위한 1일-1회, 모두 경구의, 인터페론 및 리바비린-무함유 치료로서 소포스부비르 (소발디®)와 조합된 시메프레비르 (올리시오(Olysio)™)를 승인하였다.
미국 FDA는 또한 2014년에, 다사부비르 (비-뉴클레오시드 NS5B 폴리머라제 억제제), 옴비타스비르 (NS5A 억제제), 파리타프레비르 (NS3/4A 억제제), 및 리토나비르를 함유하는 다중-환제 팩인, 아브비(AbbVie)의 비키라 팩(VIEKIRA Pak)™을 승인하였다. 비키라 팩™은 보상성 간경변증을 갖는 환자를 포함한 유전자형 1 HCV 감염 환자를 치료하기 위해 리바비린과 함께 또는 리바비린 없이 사용될 수 있다. 비키라 팩™은 인터페론 공동요법을 필요로 하지 않는다.
2015년 7월에, 미국 FDA는 각각 HCV 유전자형 4 및 HCV 유전자형 3의 치료를 위해 테크니비에(Technivie)™ 및 다클린자(Daklinza)™을 승인하였다. 테크니비에™ (옴비타스비르/파리타프레비르/리토나비르)는 반흔형성 및 간경변증이 없는 환자에서 HCV 유전자형 4의 치료를 위해 리바비린과 조합하여 사용하기 위한 것으로 승인되었고, 인터페론과의 공투여를 필요로 하지 않는 HCV-4 감염 환자를 위한 제1 옵션이다. 다클린자™는 HCV 유전자형 3 감염을 치료하기 위해 소발디®와 함께 사용하기 위한 것으로 승인되었다. 다클린자™는 인터페론 또는 리바비린의 공투여에 대한 필요 없이 HCV 유전자형 3을 치료하는 것에 대한 안전성 및 효능이 입증된 제1 약물이다. 2015년 10월에, 미국 FDA는 HCV 치료 비키라 팩 및 테크니비에가 주로 기저 진행성 간 질환을 갖는 환자에서 심각한 간 손상을 유발할 수 있다고 경고하였고, 라벨에 안전성에 대한 추가의 정보를 추가할 것을 요구하였다.
2017년 8월에, 마비레트(Mavyret)® (글레카프레비르/피브렌타스비르)가 HCV의 모든 주요 유전자형 (유전자형 1-6)을 갖는 환자의 치료를 위해 미국 FDA에 의해 승인되었다. 치료는 또한 간경변증을 갖지 않거나 또는 경도의 간경변증을 갖는 환자, 투석 중인 환자, 및 NS5A 또는 NS3/4A 억제제를 함유하는 요법으로 이전에 치료받았던 유전자형 1 감염을 갖는 환자에 대해 승인되었다. 마비레트®는 이전에 치료받지 않은 비-간경변성 환자에서 8-주 과정으로 복용된다. 2019년에, FDA는 보상성 간경변증을 갖고 이전에 치료받지 않은 환자에서의 8-주 과정을 승인하였다.
마비레트®와 함께, 엡클루사(Epclusa)®는 HCV 치료를 위한 또 다른 치료제이다. 엡클루사는 길리아드(Gilead)에 의해 개발되었고, 소포스부비르 (NS5B 억제제) 및 벨파타스비르 (NS5A 억제제)를 함유하는 고정-용량 조합 요법이다. 엡클루사®는 2016년에 HCV의 모든 주요 유전자형 (유전자형 1-6)의 만성 HCV 감염을 갖는 성인의 치료를 위해 승인되었고, 간경변증을 갖지 않거나 또는 보상성 간경변증을 갖는 환자에서 12-주 과정 동안 처방된다. 대상부전성 간경변증을 갖는 환자를 위해, 엡클루사®는 리바비린과의 조합 사용에 대해 승인되었다.
다른 승인된 HCV에 대한 요법은 리바비린 (레베톨(Rebetol)®), NS3/4A 텔라프레비르 (인시벡(Incivek)®, 버텍스(Vertex) 및 존슨 & 존슨(Johnson & Johnson)), 보세프레비르 (빅트렐리스(Victrelis)™, 머크(Merck)), 시메프레비르 (올리시오™, 존슨 & 존슨), 파리타프레비르 (아브비), 옴비타스비르 (아브비), 및 NNI 다사부비르 (ABT-333)와 함께 투여될 수 있는 인터페론 알파-2b 또는 PEG화 인터페론 알파-2b (페그인트론(Pegintron)®)를 포함한다.
HCV를 포함한 플라비비리다에(Flaviviridae)의 치료를 위한 뉴클레오시드 폴리머라제 억제제를 기재한 미국 특허 및 WO 출원은 아이데닉스 파마슈티칼스(Idenix Pharmaceuticals) (6,812,219; 6,914,054; 7,105,493; 7,138,376; 7,148,206; 7,157,441; 7,163,929; 7,169,766; 7,192,936; 7,365,057; 7,384,924; 7,456,155; 7,547,704; 7,582,618; 7,608,597; 7,608,600; 7,625,875; 7,635,689; 7,662,798; 7,824,851; 7,902,202; 7,932,240; 7,951,789; 8,193,372; 8,299,038; 8,343,937; 8,362,068; 8,507,460; 8,637,475; 8,674,085; 8,680,071; 8,691,788, 8,742,101, 8,951,985; 9,109,001; 9,243,025; US2016/0002281; US2013/0064794; WO/2015/095305; WO/2015/081133; WO/2015/061683; WO/2013/177219; WO/2013/039920; WO/2014/137930; WO/2014/052638; WO/2012/154321); 머크 (6,777,395; 7,105,499; 7,125,855; 7,202,224; 7,323,449; 7,339,054; 7,534,767; 7,632,821; 7,879,815; 8,071,568; 8,148,349; 8,470,834; 8,481,712; 8,541,434; 8,697,694; 8,715,638, 9,061,041; 9,156,872 및 WO/2013/009737); 에모리 유니버시티(Emory University) (6,348,587; 6,911,424; 7,307,065; 7,495,006; 7,662,938; 7,772,208; 8,114,994; 8,168,583; 8,609,627; US 2014/0212382; 및 WO2014/1244430); 길리아드 사이언시스/파마셋 인크.(Pharmasset Inc.) (7,842,672; 7,973,013; 8,008,264; 8,012,941; 8,012,942; 8,318,682; 8,324,179; 8,415,308; 8,455,451; 8,563,530; 8,841,275; 8,853,171; 8,871,785; 8,877,733; 8,889,159; 8,906,880; 8,912,321; 8,957,045; 8,957,046; 9,045,520; 9,085,573; 9,090,642; 및 9,139,604) 및 (6,908,924; 6,949,522; 7,094,770; 7,211,570; 7,429,572; 7,601,820; 7,638,502; 7,718,790; 7,772,208; RE42,015; 7,919,247; 7,964,580; 8,093,380; 8,114,997; 8,173,621; 8,334,270; 8,415,322; 8,481,713; 8,492,539; 8,551,973; 8,580,765; 8,618,076; 8,629,263; 8,633,309; 8,642,756; 8,716,262; 8,716,263; 8,735,345; 8,735,372; 8,735,569; 8,759,510 및 8,765,710); 호프만 라-로슈(Hoffman La-Roche) (6,660,721), 로슈 (6,784,166; 7,608,599, 7,608,601 및 8,071,567); 알리오스 바이오파마 인크.(Alios BioPharma Inc.) (8,895,723; 8,877,731; 8,871,737, 8,846,896, 8,772,474; 8,980,865; 9,012,427; US 2015/0105341; US 2015/0011497; US 2010/0249068; US2012/0070411; WO 2015/054465; WO 2014/209979; WO 2014/100505; WO 2014/100498; WO 2013/142159; WO 2013/142157; WO 2013/096680; WO 2013/088155; WO 2010/108135), 에난타 파마슈티칼스(Enanta Pharmaceuticals) (US 8,575,119; 8,846,638; 9,085,599; WO 2013/044030; WO 2012/125900), 바이오타(Biota) (7,268,119; 7,285,658; 7,713,941; 8,119,607; 8,415,309; 8,501,699 및 8,802,840), 바이오크리스트 파마슈티칼스(Biocryst Pharmaceuticals) (7,388,002; 7,429,571; 7,514,410; 7,560,434; 7,994,139; 8,133,870; 8,163,703; 8,242,085 및 8,440,813), 알라 켐, 엘엘씨(Alla Chem, LLC) (8,889,701 및 WO 2015/053662), 인히비텍스(Inhibitex) (8,759,318 및 WO/2012/092484), 얀센 프로덕츠(Janssen Products) (8,399,429; 8,431,588, 8,481,510, 8,552,021, 8,933,052; 9,006,29 및 9,012,428) 더 유니버시티 오브 조지아 파운데이션 (6,348,587; 7,307,065; 7,662,938; 8,168,583; 8,673,926, 8,816,074; 8,921,384 및 8,946,244), 알에프에스 파마, 엘엘씨(RFS Pharma, LLC) (8,895,531; 8,859,595; 8,815,829; 8,609,627; 7,560,550; US 2014/0066395; US 2014/0235566; US 2010/0279969; WO/2010/091386 및 WO 2012/158811) 유니버시티 칼리지 카디프 컨설턴츠 리미티드 (WO/2014/076490, WO 2010/081082; WO/2008/062206), 아킬리온 파마슈티칼스, 인크.(Achillion Pharmaceuticals, Inc.) (WO/2014/169278 및 WO 2014/169280), 코크리스탈 파마, 인크.(Cocrystal Pharma, Inc.) (US 9,173,893), 카톨리에케 유니베르시테이트 뢰번(Katholieke Universiteit Leuven) (WO 2015/158913), 카타바시스(Catabasis) (WO 2013/090420) 및 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타(the Regents of the University of Minnesota) (WO 2006/004637)가 출원한 것을 포함한다.
엘바스비르(Elbasvir)는 NS3/4A 프로테아제 억제제인 그라조프레비르(grazoprevir)와의 고정 용량 조합물의 성분으로서 2016년에 FDA에 의해 승인된 HCV NS5A 억제제이다. 나이브 및 이전에 치료받은 환자의 치료를 위해 조합물 (제파티에르(Zepatier)®)이 승인되었고, 통상의 과정은 12주이다. 그러나, 위치 28, 30, 31, 및/또는 93에서 돌연변이를 보유하는 HCV 유전자형 1a를 갖는 환자에서, 제파티에르®는 효과적이기 위해 리바비린과 함께 16주 동안 투여되어야 한다. 리바비린은 용혈성 빈혈 및 최기형성의 위험을 비롯하여 여러 FDA 박스형 경고를 보유한다.
루자스비르 (MK-8408)는 만성 HCV 감염의 치료에 대해 임상적으로 평가된 경구, 범 유전자형 NS5A 억제제이다. 루자스비르는 광범위한 HCV 유전자형, 및 Y93H, Q30R, L31V 및 Y93C 돌연변이를 갖는 HCV 유전자형 1을 비롯한 통상의 임상 돌연변이체에 걸쳐 HCV NS5A에 대해 피코몰 미만 내지 낮은 피코몰의 친화도를 갖는다. (Tong et al., "Discovery of Ruzasvir (MK-8408): A Potent, Pan-Genotype HCV NS5A Inhibitor with Optimized Activity against Common Resistance-Associated Polymorphisms" J. Med. Chem. 2017, 60, 290-306). 머크 앤드 캄파니(Merck and Company)에 양도된 WO 2014/110705 및 미국 특허 번호 9,555,038은 루자스비르, 루자스비르를 포함하는 제약 조성물 및 그의 사용 방법을 개시한다.
2015년에, 머크, 샤프 & 돔(Sharp & Dohme)은 다양한 HCV 유전자형을 갖는 환자에 대한 엘바스비르 또는 루자스비르와 조합된 그라조프레비르 및 우프리포스부비르의 효능을 결정하기 위한 임상 시험을 후원하였다. 이러한 3-약물 요법은 다양한 HCV 유전자형으로 감염된 환자의 85-100%에서 12주 후에 지속적인 바이러스 반응을 달성하였다. (예를 들어, NCT02332707, NCT02332720, 문헌 [Lawitz, E. "Safety and efficacy of a fixed-dose combination regimen of grazoprevir, ruzasvir and uprifosbuvir with or without ribavirin in participants with and without cirrhosis with chronic hepatitis C virus genotype 1, 2, or 3 infection (C-CREST-1 and C-CREST-2, part B): two randomized, phase 2, open-label trials" 2017, Lancet Gastroenterol Hepatol, doi:10.1016/S2468-1253(17)30163-2] 참조). 3-약물 요법의 한 성분인 그라조프레비르는 NS3/4A 프로테아제 억제제이다. 이러한 부류의 치료제는 약물-약물 상호작용 및 상승된 간 트랜스아미나제 수준을 유발할 수 있다.
2016년에, 머크는 NS3/4A 억제제가 없는 2-약물 요법으로 루자스비르 및 NS5B 억제제 우프리포스부비르의 II상 개방-표지 임상 시험을 개시하였다. 1일에 60 mg 루자스비르 및 450 mg 우프리포스부비르의 연구 용량에서, 조합물은 잘 허용되었지만 준최적 효능이 관찰되었고, 임상 시험은 종료되었다 (C-BREEZE 1; NCT02759315). 동일한 조합이지만 보다 높은 용량 (180 mg 루자스비르, 450 mg 우프리포스부비르)에서, HCV GT1, GT2, GT4, GT5 및 GT6으로 감염된 참가자에서 90% 초과의 지속적인 바이러스 반응이 달성되었다. 그러나, GT3으로 감염된 참가자에서의 반응은 단지 73.8%였다. 또한, 시험 참가자의 30% 초과는 약물-관련 유해 사건을 경험하였다 (C-BREEZE 2; NCT02956629; Lawitz, E. "Efficacy and Safety of Two-Drug Direct-Acting Antiviral Agent Regimen Ruzasvir 180 mg and Uprifosbuvir 450 mg for 12 Weeks in Adults with Chronic Hepatitis C Virus Genotype 1, 2, 3, 4, 5, or 6" 2019, J. Viral Hepat. 26, 9, 1127-1138). 제2의 보다 높은 용량 시험도 또한 종료되었다.
아테아 파마슈티칼스, 인크.(Atea Pharmaceuticals, Inc.)는 HCV의 치료를 위한 구조 β-D-2'-데옥시-2'-α-플루오로-2'-β-C-치환된-2-변형된-N6-(모노- 및 디-메틸) 퓨린 뉴클레오시드의 유리한 뉴클레오티드 포스포르아미데이트를 발견하였다. (미국 특허 번호 9,828,410; 10,000,523; 10,005,811; 10,239,911; 10,519,186; 10,815,266; 10,870,672; 10,870,673; 10,875,885; 10,894,804; 및 10,906,928 및 미국 출원 US 2021-0015841; US 2020-0179415). 특히, 이소프로필 ((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일) 메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트 헤미술페이트 (AT-527, 벰니포스부비르)는 높은 생체이용률, 표적 기관 선택성, 및 GT3을 포함한 HCV의 모든 유전자형에 대한 높은 효력과 같은 놀라운 이익을 갖는다 (WO2018/144640).
I상 시험의 다중용량 부문에서, 벰니포스부비르는 바이러스 로드를 비-간경변성 참가자에서 4.5 log10 IU/mL만큼 및 간경변성 참가자에서 4.6 log10 IU/mL만큼 감소시켰다. 간경변성 환자군에서, 이는 치료하기 어려운 GT3을 비롯하여 다양한 유전자형에 대해 동등하게 효과적이었다 (GT1b: 4.0, 4.0, 4.5; GT2: 5.0; GT3: 4.8, 5.2) (NCT03219957; Berliba, E. et al., "Safety, Pharmacokinetics, and Antiviral Activity of AT-527, a Novel Purine Nucleotide Prodrug, in Hepatitis C Virus-Infected Subjects with or without Cirrhosis" 2019, Antimicrob Agents Chemother, 63 (12): e01201-19).
벰니포스부비르 및 제1-세대 HCV NS5A 억제제 다클라타스비르의 조합 시험에서, 모든 10명의 대상체는 정량 하한치 미만의 HCV RNA에 도달하였다. 대상체의 90%가 치료 12주 후에 지속적인 검출불가능한 바이러스 로드 (SVR12)를 경험하였다. SVR12를 경험하지 않은 1명의 대상체는 일련의 저항성-연관 변이체 (NS5A: R30Q, NS5B: L159F/A218S/C316N)를 가졌다 (NCT04019717; Mungur, O. et al., "A combination of AT-527, a potent pan-genotypic guanosine nucleotide prodrug and daclatasvir was well-tolerated and effective in HCV-infected subjects", 2020, poster THU438 at The International Liver Congress meeting). 그러나, 이 시험은 종료되었다.
안전하고, 효과적이고, 내약성이 우수한 항-HCV 요법을 개발하는 것에 대한 강한 의료적 필요가 남아있다. 필요는 잠재적 약물 저항성으로 인해 강조된다. HCV RNA 폴리머라제는 게놈 전체에 걸친 잠재적 저항성 단일 및 이중 점 돌연변이의 생성 및 바이러스 유사종의 유지에 기여하는 높은 복제율을 나타낸다. 저항성 돌연변이는 거의 모든 단독요법으로의 치료 시에 시험관내 및 생체내 둘 다에서 확인되었다.
따라서 본 발명의 목적은 HCV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 화합물, 제약 조성물, 방법, 및 투여 형태를 제공하는 것이다.
본 발명은 숙주, 전형적으로 인간에서 C형 간염 감염을 치료하기 위한, 강력한 범-유전자형 NS5B 폴리머라제 억제제인 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, AT-527, 벰니포스부비르) 및 NS5A 억제제인 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염 (루자스비르, MK-8408)의 고도로 상승작용적인 조합물을 제공한다.
화합물 1은 이소프로필((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트이다:
화합물 1은 미국 특허 번호 9,828,410; 10,000,523; 10,005,811; 10,239,911; 10,815,266; 10,80,672; 10,870,673; 10,875,885; 및 아테아 파마슈티칼스에 양도된 PCT 출원 WO 2016/21276 및 WO 2019/200005에 이전에 기재되었다.
화합물 1의 헤미술페이트 염은 화합물 1-A로서 하기에 제시된다:
화합물 1-A는 미국 특허 번호 10,519,186; 10,906,928; 10,894,804; 및 아테아 파마슈티칼스에 양도된 PCT 출원 WO 2018/144640 및 WO 2019/200005에 개시되어 있다.
화합물 2는 루자스비르 (디메틸 N,N'-([(6S)-6-(2-시클로프로필-1,3-티아졸-5-일)-1-플루오로-6H-인돌로[1,2-c][1,3]벤족사진-3,10-디일]비스{1H-이미다졸-5,2-디일-(2S)-피롤리딘-2,1-디일[(2S)-3-메틸-1-옥소부탄-1,2-디일]})디카르바메이트)이다:
한 실시양태에서, 화합물 2는 무정형 고체이다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 2는 결정질 고체이다. 한 실시양태에서, 화합물 2는 그의 제약상 허용되는 염으로서 투여된다. 화합물 2는 WO 2014/110705 및 미국 특허 번호 9,555,038에 개시되어 있다.
NS5B 억제제 우프리포스부비르와 조합된 루자스비르의 이전 임상 시험은 효능의 결여로 인해 종료되었다. 이러한 배경 하에서, 화합물 1 (예를 들어, AT-527) 및 루자스비르의 조합물은 다중 용량으로 시험한 경우 고도로 상승작용적인 것으로 밝혀졌다 (실시예 30 및 도 34 참조). 각각의 조합 용량에서, 예상되는 상가적 항바이러스 보호를 실험적으로 관찰된 항바이러스 활성으로부터 차감하여 상승작용에 대한 양성 값, 상가작용에 대한 0 값 또는 길항작용에 대한 음성 값을 산출하였다. -50 내지 50 μM2 %의 상승작용 부피는 상가작용적인 것으로 간주되고, 50 내지 100 μM2 %는 약간의 상승작용을 나타내고, 100 μM2 % 초과의 부피는 고도로 상승작용적인 것으로 간주된다. 화합물 1 및 화합물 2의 조합물을 다양한 용량에서 평가하였고, 이는 높은 상승작용을 입증한다. 상승작용 대 각각의 화합물의 용량의 플롯이 도 34에 제시된다. 40 nM 화합물 1 및 0.008 nM 화합물 2에서, 상승작용 부피는 255 μM2 %이며, 이는 상승작용적 효과에 대한 컷오프의 5배 초과이고 고도로 상승작용적인 카테고리에 속한다.
별개의 메카니즘으로 함께 작용하는 2종의 항-HCV 작용제의 이러한 상승작용적 조합물은 전신으로, 예를 들어 경구로, 2개 이상의 개별 투여 형태 또는 조합된 투여 형태로서 제공될 수 있다. 개별적으로 투여되는 경우에, 의약은 숙주가 협동 생물학적 방식으로, 예를 들어 중첩 약동학, 혈장 및/또는 AUC 노출을 달성하는 방식으로 작용하는 둘 다의 활성제의 이익을 받는 방식으로 제공되어야 한다. 바이러스를 효과적으로 치료하는 것에 더하여, 조합 약물 요법은 약물 저항성의 출현을 제한하는 데 특히 유리하다.
하나의 비제한적 실시양태에서, 화합물 1은 헤미술페이트 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 이러한 고정 용량 조합물은 약 12주 또는 그 미만, 예를 들어 약 10주, 8주 또는 6주 이하 또는 그 미만 내에 지속적인 바이러스 반응을 달성하도록 의도된다. 바이러스를 효과적으로 치료하는 것에 더하여, 조합 약물 요법은 약물 저항성의 출현을 제한하는 데 도움이 된다.
본원에 기재된 투여 형태에서 활성 화합물의 중량은 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 화합물의 유리 형태 또는 염 형태에 대한 것이다. 예를 들어, 600 mg의 화합물 1-A는 550 mg의 화합물 1과 등가량이다.
전형적 실시양태에서, 화합물 1은 약 300 내지 1000 mg (염의 중량과 관련하여 또는 그와 관계없이), 보다 전형적으로 400 또는 500 내지 600 또는 800 mg, 또는 500 내지 750 mg의 투여량으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 화합물 1은 약 500 내지 약 1,500 mg의 투여량으로 투여된다. 한 예에서 550 mg의 화합물 1은 약 600 mg의 화합물 1-A의 투여량으로서 투여된다. 대안적 실시양태에서, 1,100 mg의 화합물 1은 약 1,200 mg의 화합물 1-A의 투여량으로서 투여된다.
전형적 실시양태에서, 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 투여 형태 중 예를 들어 적어도 60, 70, 75, 100, 125, 150, 180, 200, 225, 250, 270, 300, 350 또는 400 mg을 포함하나 이에 제한되지 않는, 약 20 내지 500 mg, 보다 전형적으로 40 내지 250 mg의 투여량으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 화합물 2는 약 적어도 90, 180, 270 또는 360 mg을 포함하는 투여 형태로 투여된다.
특정 실시양태에서, 조합물은 550 mg의 화합물 1-A 및 약 적어도 90, 180, 270 또는 360 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 180 mg)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 조합물은 1일 1회, 2회 또는 3회 제공된다.
조합 치료제는 건강관리 진료의에 의해 권장되는 바와 같이 1일 1회, 2회 또는 3회 또는 그 초과로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조합 치료제는 1일 1회 제공된다. 다른 실시양태에서, 조합 치료제는 1일 2회 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 조합 치료제는 1일 3회 제공된다.
특정 실시양태에서, 화합물 1-A는 1일에 600 mg의 고체 투여량으로 제공되고, 화합물 2는 180 mg/일의 조합 또는 개별 투여 형태로 제공되며, 이는 함께 1일 1, 2 또는 3회 주어질 수 있다.
다양한 측면에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 단일 투여 형태로 함께 제제화되거나 또는 여러 투여 형태로 제공된다 (예를 들어, 2개 이상의 투여량, 각각은 둘 다의 활성제를 갖거나, 또는 여기서 하나의 투여량은 하나의 활성제를 갖고 다른 투여량은 다른 활성제를 가짐). 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 개별 투여 형태로, 그러나 이들이 숙주에서 협동하여, 예를 들어 상승작용적으로 작용할 수 있는 방식으로 제공된다. 예를 들어, 개별 투여 형태는 활성제가 바이러스에 대해 함께 작용함을 나타내는 중첩 AUC 또는 다른 약동학적 파라미터가 존재하도록 투여될 수 있다.
본 발명의 한 측면에서, 화합물 1 및 화합물 2는 개별 환제로 제공되고, 거의 동일한 시간에, 또는 동시에, 1일에 걸쳐 투여된다.
화합물 1 (또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A) 및 화합물 2 (또는 그의 제약상 허용되는 염)의 조합물은 또한 관련 병태 예컨대 항-HCV 항체 양성 및 항원 양성 병태, 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (간세포성 암종 (HCC)), 간경변증, 만성 또는 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염 및 항-HCV-기반 피로를 치료하는 데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 최대 24주, 최대 12주, 최대 10주, 최대 8주, 최대 6주, 또는 최대 4주 동안 투여된다. 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 8주, 적어도 10주, 적어도 12주, 또는 적어도 24주 동안 투여된다. 특정 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 적어도 1일 1회 또는 격일로 투여된다. 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1일 2회 투여된다. 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1일 3회 또는 그 초과로 투여된다.
특정 실시양태에서, 환자는 비-간경변성이다. 특정 실시양태에서, 환자는 간경변성이다. 추가 실시양태에서, 간경변성 숙주는 보상성 간경변증을 갖는다. 대안적 실시양태에서, 간경변성 숙주는 대상부전성 간경변증을 갖는다. 한 실시양태에서, 숙주는 차일드-퍼 A 간경변증을 갖는다. 대안적 실시양태에서, 숙주는 차일드-퍼 B 또는 차일드-퍼 C 간경변증을 갖는다.
상기 조합물은 또한 소정 범위의 HCV 유전자형을 치료하는 데 사용될 수 있다. 각각 다중 하위유형을 갖는, HCV의 적어도 6종의 별개의 유전자형이 세계적으로 확인되었다. 유전자형 1-3은 전세계에 보편적이고, 유전자형 4, 5, 및 6은 지리적으로 보다 제한된다. 유전자형 4는 중동 및 아프리카에서 흔하다. 유전자형 5는 대부분 남아프리카에서 발견된다. 유전자형 6은 동남 아시아에 우세하게 존재한다. 미국에서 가장 흔한 유전자형은 유전자형 1이지만, 유전자형 및 하위유형을 규정하는 것은 치료 유형 및 지속기간에 도움이 될 수 있다. 예를 들어, 상이한 유전자형은 상이한 의약에 대해 상이하게 반응한다. 최적 치료 시간은 유전자형 감염에 따라 달라진다. 유전자형 내에서, 하위유형, 예컨대 유전자형 1a 및 유전자형 1b도 또한 치료에 상이하게 반응한다. 1종의 유형의 유전자형에 의한 감염은 상이한 유전자형에 의한 이후의 감염을 배제하지 않는다.
한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물은 HCV 유전자형 1, HCV 유전자형 2, HCV 유전자형 3, HCV 유전자형 4, HCV 유전자형 5 또는 HCV 유전자형 6을 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 1a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 1b를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 2a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 2b를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 3a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 3b를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 4a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 4d를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 5a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 6a를 치료하는 데 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 HCV 유전자형 6b, 6c, 6d, 6e, 6f, 6g, 6h, 6i, 6j, 6k, 6l, 6m, 6n, 6o, 6p, 6q, 6r, 6s, 6t, 또는 6u를 치료하는 데 사용된다.
본 발명은 또한 화합물 1-A가 무정형 또는 결정질 염의 형태일 수 있고, 독립적으로 화합물 2가 결정질 또는 무정형일 수 있는, 특정 조합물 및 투여 형태를 포함한다.
따라서, 본 발명은 적어도 하기 실시양태를 포함한다:
(a) 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효 항-HCV 조합물;
(b) 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물의 유효 고체 투여 형태;
(c) 화합물 1이 화합물 1-A인 실시양태 (a) 또는 (b);
(d) 제3 항-HCV 유효 작용제가 조합되어 사용되는 실시양태 (a)-(c);
(e) 제3 항-HCV 유효 작용제가 화합물 1, 화합물 1-A 또는 화합물 2와 상이한 메카니즘을 통해 작용하는 것인 실시양태 (d);
(f) 제약상 허용되는 부형제 중에 실시양태 (a)-(e) 중 어느 하나의 조합물을 포함하는 제약 조성물.
(g) 조합물이 조합된 제약 조성물 형태의 형태인 실시양태 (f);
(h) 조합물이 협동 방식으로의 사용을 위한, 각각의 활성제에 대한 개별 제약 투여 형태의 형태인 실시양태 (f);
(i) 경구 전달에 적합한 (f)-(h)의 제약 투여 형태;
(j) 환제, 정제 또는 겔 형태인 (i)의 투여 형태;
(k) 비경구 전달에 적합한 (f)-(h)의 제약 투여 형태;
(l) 정맥내 전달에 적합한 (f)-(h)의 제약 투여 형태;
(m) C형 간염 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 환자에서 C형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물의 용도;
(n) 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물이 제조에 사용되는 것을 특징으로 하는, C형 간염 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 환자에서 C형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 치료 용도를 위해 의도되는 의약을 제조하는 방법;
(o) C형 간염 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 환자에게 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물을 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염을 치료하는 방법;
(p) C형 간염 바이러스 감염의 치유를 필요로 하는 환자에게 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물을 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염을 치유하는 방법;
(q) C형 간염 바이러스 감염의 위험이 있는, 예방적 치료를 필요로 하는 환자에게 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물을 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염의 위험이 있는 환자를 예방적으로 치료하는 방법;
(r) 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (간세포성 암종 (HCC)), 간경변증, 만성 또는 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염 및 항-HCV-기반 피로로부터 선택된 C형 간염 바이러스 감염과 관련된 병태의 치료를 필요로 하는 환자에게 실시양태 (a)-(l) 중 어느 하나의 유효 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 C형 간염 바이러스 감염과 관련된 병태를 치료하는 방법;
(s) 환자가 간경변성인 실시양태 (m)-(r) 중 어느 것.
(t) 환자가 비-간경변성인 실시양태 (m)-(r) 중 어느 것.
(u) HCV 감염이 유전자형 1인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(v) HCV 감염이 유전자형 2인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(w) HCV 감염이 유전자형 3인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(x) HCV 감염이 유전자형 4인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(y) HCV 감염이 유전자형 5인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(z) HCV 감염이 유전자형 6인 실시양태 (m)-(t) 중 어느 것.
(aa) HCV 또는 HCV-관련 병태를 치료하는 데 사용하기 위한 (a)-(l)의 조합물.
본 발명에서, 화합물 1-A는 상승작용적 조합 요법에 결정질 형태로서 제공될 수 있거나, 또는 대안적으로 결정질 형태는 분무 건조 제조 절차에 사용될 수 있다. 도 1-15는 XRPD, DSC 및 TGA에 의한 화합물 1-A의 물리적 형태의 특징화를 도시한다. 화합물 1-A는 합성 및 가공을 용이하게 할 수 있는 결정질 형태로 단리될 수 있다.
화합물 1-A의 약동학은 조합 요법의 성공에 중요하다. 도 16은 화합물 1-A의 유리한 생체분포 특성을 도시한다. 화합물은 심장보다는, HCV 감염에 대한 표적 기관인 간에서 농축된다. 간 농도가 높기 때문에, 간 조합 요법에 유리하다.
마찬가지로, 도 17, 18, 및 21-23은 화합물 1-A 및 주요 대사물의 약동학적 특성을 도시한다. 화합물 1-A는 8시간 내에 대사되지만, 활성 대사물은 최대 24시간 동안 존재한다. 대사물이 존재하는 24시간의 기간 동안, HCV 바이러스 RNA의 억제가 관찰된다. 300 mg의 용량에서, 화합물 1-A 대사물의 혈장 농도는 HCV GT1b의 EC95보다 더 높다. 이들 약동학 및 약역학은 성공적인 조합 요법을 돕는다.
도 19 및 20은 화합물 1-A의 범 유전자형 효력을 입증한다. 이러한 조합 요법에서의 범-유전자형 활성은 저항성 HCV 돌연변이체의 발생을 방지할 수 있다.
도 25-31은 화합물 1을 투여한 간경변성 숙주에서의 화합물 1 대사물 및 HCV 바이러스 RNA 수준을 도시한다. 도 27은 숙주에서 화합물 1이 비-간경변성 환자에서와 같이 간경변성 환자에서 동등하게 효과적임을 강조한다. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염과 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물은 간경변성 및 비-간경변성 환자 둘 다에서 HCV를 치료하는 데 사용될 수 있다. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물은 경구 투여 형태로서 제제화될 수 있다. 도 32는 경구 투여용 정제를 제조할 수 있는 예시적인 공정을 도시한다. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 함께 조합되고, 체질되고, 블렌딩되고, 정제화되어 조합물이 경구 투여 형태로서 제공된다.
도 1a는 실시예 2 및 실시예 5에 기재된 바와 같은 특징화 목적을 위한 안정성 연구 전 샘플 1-1 (무정형 화합물 1), 1-2 (결정질 화합물 1), 및 1-3 (무정형 화합물 1-A)의 XRPD 회절도의 오버레이이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 1b는 실시예 2에 기재된 바와 같은 순도 결정을 위한 무정형 화합물 1 (샘플 1-1)의 HPLC 크로마토그래프이다. 샘플의 순도는 98.7%였다. x-축은 분 단위로 측정된 시간이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 2a는 실시예 2에 기재된 바와 같은 순도 결정을 위한 결정질 화합물 1 (샘플 1-2)의 HPLC 크로마토그래프이다. 샘플의 순도는 99.11%였다. x-축은 분 단위로 측정된 시간이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 2b는 실시예 2에 기재된 바와 같은 특징화 목적을 위한 임의의 안정성 연구 전 결정질 화합물 1 (샘플 1-2)의 DSC 및 TGA 그래프이다. x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다.
도 3은 실시예 2에 기재된 바와 같은 절대 입체화학을 보여주는 화합물 1의 X선 결정학 영상이다.
도 4a는 실시예 2 및 실시예 5에 기재된 바와 같은 25℃ 및 60% 상대 습도에서 14일 동안 저장한 후의 샘플 1-1 (무정형 화합물 1), 1-2 (결정질 화합물 1), 및 1-3 (무정형 화합물 1-A)의 XRPD 회절도의 오버레이이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 4b는 실시예 4에 기재된 바와 같은 25℃ 및 60% 상대 습도에서 7일 동안 저장한 후의 샘플 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 및 1-9의 XRPD 회절도의 오버레이이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 5a는 실시예 4에 기재된 바와 같은 25℃ 및 60% 상대 습도에서 14일 동안 저장한 후의 샘플 1-4, 1-6, 1-7, 및 1-9의 XRPD 회절도의 오버레이이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 5b는 실시예 5에 기재된 바와 같은 무정형 화합물 1-A (샘플 1-3)의 XRPD 패턴이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 6a는 실시예 5에 기재된 바와 같은 순도 결정을 위한 무정형 화합물 1-A (샘플 1-3)의 HPLC 크로마토그래프이다. 샘플의 순도는 99.6%였다. x-축은 분 단위로 측정된 시간이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 6b는 실시예 5에 기재된 바와 같은 특징화 목적을 위한 임의의 안정성 연구 전 무정형 화합물 1-A (샘플 1-3)에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다. x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다.
도 7a는 화합물 1-A의 결정화로부터 확인된 결정질 샘플 (샘플 2-2, 2-6, 및 2-7) 및 저 결정질 샘플 (샘플 2-3, 2-4, 2-5, 및 2-8)의 XRPD 회절도의 오버레이이다 (실시예 6). x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 7b는 화합물 1-A의 결정화로부터 확인된 무정형 샘플 (샘플 2-9, 2-10, 및 2-11)의 XRPD 회절도의 오버레이이다 (실시예 6). x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 8a는 25℃ 및 60% 상대 습도에서의 6일 저장 후 샘플 (샘플 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7 및 2-8)의 XRPD 회절도의 오버레이이다 (실시예 6). x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 8b는 샘플 2-2에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 9a는 샘플 2-3에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 9b는 샘플 2-4에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 10a는 샘플 2-5에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 10b는 샘플 2-6에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 11a는 샘플 2-7에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 11b는 샘플 2-8에 대한 DSC 및 TGA 그래프이다 (실시예 6). x-축은 ℃ 단위로 측정된 온도이고, 좌측 y-축은 (W/g) 단위로 측정된 열 유량이고, 우측 y-축은 퍼센트 단위로 측정된 중량이다. DSC 및 TGA 수집에 대한 실험 절차는 실시예 2에 주어진다.
도 12a는 실시예 7에 논의된 바와 같은 무정형 화합물 1-B (샘플 3-12)의 XRPD 패턴이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다. 사용된 용매에 관계 없이, 말로네이트 염의 어떠한 결정화도 관찰되지 않았다.
도 12b는 말로네이트 염과 함께 화합물 1의 시도된 결정화로부터 확인된 무정형 샘플 (샘플 3-6, 3-10, 3-11, 및 3-12)의 XRPD 회절도의 오버레이이다 (실시예 7). x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 13a는 실시예 7에 기재된 바와 같은 말로네이트 염과 함께 화합물 1의 시도된 결정화로부터의 샘플 3-12의 HPLC 크로마토그램이다. 샘플은 99.2% 순수하였다. x-축은 분 단위로 측정된 시간이고, y-축은 mAu 단위로 측정된 강도이다.
도 13b는 실시예 8에 기재된 바와 같은 화합물 1 (샘플 1-2)과 비교하여 LAG를 사용한 결정화로부터 수득된 고체 샘플 (샘플 4-13, 4-12, 4-9, 4-3, 및 4-1)의 XRPD 회절도의 오버레이이다. 모든 XRDP는 결정질 산 반대 이온의 패턴과 매칭되었고, 어떠한 추가의 피크도 없었다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 14a는 실시예 10에 기재된 바와 같은 결정질 화합물 1 (샘플 1-2)과 비교하여 결정화 용매로서 에틸 아세테이트를 사용한 것으로부터 수득된 샘플 (샘플 6-13, 6-12, 6-11, 6-10, 6-8, 6-7, 6-6, 6-5, 6-4, 및 6-2)의 XRPD 회절도의 오버레이이다. XRPD 패턴은 일반적으로, 약간의 차이를 나타낸 샘플 6-2, 6-4, 및 6-5를 제외하고, 화합물 1 패턴과 매칭되는 것으로 확인되었다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 14b는 실시예 9에 기재된 바와 같은 MEK 중에의 제2 용해 및 역용매 시클로헥산 및 파모산의 첨가 후 샘플 5-1의 XRPD 회절도의 오버레이이다. 파모산 중에서 결정화된 샘플 5-1은 숙성 후 고체였지만, XRPD 패턴은 파모산의 패턴과 매칭되었다.
도 15a는 실시예 10에 기재된 바와 같은 결정질 화합물 1 (샘플 1-2)과 비교하여 결정화 용매로서 에틸 아세테이트를 사용한 것으로부터 수득된 샘플 (샘플 6-5, 6-4, 및 6-2)의 XRPD 회절도의 오버레이이다. XRPD 패턴은 일반적으로, 약간의 차이를 나타낸 샘플 6-2, 6-4, 및 6-5를 제외하고, 화합물 1 패턴과 매칭되는 것으로 확인되었다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이고, 결정화에 사용된 산이 라벨링된다.
도 15b는 실시예 14에 기재된 바와 같은 화합물 1-A에 대한 XRPD 패턴이다. x-축은 도 단위로 측정된 2세타이고, y-축은 카운트 단위로 측정된 강도이다.
도 16a는 래트, 개, 및 원숭이의 간 및 심장에서의 활성 TP (대사물 1-6) 농도 수준의 그래프이다 (실시예 18). x-축은 각각의 종에 대해 mg/kg 단위로 측정된 투여량이고, y-축은 ng/g 단위로 측정된 활성 TP 농도이다.
도 16b는 화합물 1 또는 화합물 1-A의 단일 경구 용량의 4시간 후에 측정된 개 (n=2)의 간 및 심장에서의 활성 TP (대사물 1-6) 농도 수준의 그래프이다 (실시예 19). x-축은 mg/kg 단위로 측정된 각각의 화합물의 투여량이고, y-축은 ng/g 단위로 측정된 활성 TP 농도이다.
도 17은 투여 72시간 후까지 측정된, 화합물 1-A의 단일 500 mg/kg 경구 용량이 주어진 래트에서의 화합물 1 및 대사물 1-7의 혈장 프로파일이다 (실시예 20). x-축은 시 단위로 측정된 시간이고, y-축은 ng/mL 단위로 측정된 혈장 농도이다.
도 18은 투여 72시간 후까지 측정된, 30 mg, 100 mg, 또는 300 mg의 화합물 1-A의 단일 경구 용량이 주어진 원숭이에서의 화합물 1 및 대사물 1-7의 혈장 프로파일이다 (실시예 20). x-축은 시 단위로 측정된 시간이고, y-축은 ng/mL 단위로 측정된 혈장 농도이다.
도 19는 HCV 임상 분리주에 대한 소포스부비르 및 화합물 1의 nM 단위로 측정된 EC95 값의 그래프이다. 화합물 1에 대한 EC95 값은 소포스부비르보다 7-33배 더 낮다 (실시예 22). x-축은 유전자형으로 라벨링되고, y-축은 nM 단위로 측정된 EC95이다.
도 20은 HCV 유전자형 1a, 1b, 2a, 3a, 4a, 및 5a의 실험실 균주에 대한 소포스부비르 및 화합물 1의 nM 단위로 측정된 EC50 값의 그래프이다. 화합물 1은 유전자형 1-5에서 소포스부비르보다 대략 6-11배 더 강력하다 (실시예 22). x-축은 유전자형으로 라벨링되고, y-축은 nM 단위로 측정된 EC50이다.
도 21은 실시예 24에 기재된 바와 같은 연구의 파트 B의 모든 코호트에서의, 화합물 1-A의 단일 경구 용량의 투여 후 화합물 1의 평균 혈장 농도-시간 프로파일의 그래프이다. 화합물 1은 파트 B로부터의 모든 코호트에서 대략 8시간 내에 급속하게 흡수되고 신속하게 대사되었다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이고, y-축은 ng/mL 단위로 측정된 기하 평균 혈장 농도이다.
도 22는 실시예 24에 기재된 바와 같은 연구의 파트 B의 모든 코호트에서의, 화합물 1-A의 단일 경구 용량의 투여 후 대사물 1-7의 평균 혈장 농도-시간 프로파일의 그래프이다. 대사물 1-7은 파트 B로부터의 모든 코호트에서 지속되는 혈장 농도를 나타내었다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이고, y-축은 ng/mL 단위로 측정된 기하 평균 혈장 농도이다.
도 23a는 실시예 24에 기재된 바와 같은 1b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 23b는 실시예 24에 기재된 바와 같은 1b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 23c는 실시예 24에 기재된 바와 같은 1b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 23d는 실시예 24에 기재된 바와 같은 3b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 각각의 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 23e는 실시예 24에 기재된 바와 같은 3b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 각각의 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 23f는 실시예 24에 기재된 바와 같은 3b 코호트에 등록된 대상체의 개별 약동학적/약역학적 분석이다. 각각의 그래프는 혈장 대사물 1-7 노출 및 HCV RNA 감소 수준을 보여준다. 파선은 GT1b에 대한 EC95 값보다 더 큰 바이러스 반응을 지속시키는 데 요구되는 대사물 1-7의 최소 농도를 나타낸다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이다. 좌측 y-축은 ng/mL 단위로 측정된 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL 단위로 측정된 HCV RNA 감소이다.
도 24는 GT1, GT2, GT3, 및 GT4 HCV-감염된 환자의 임상 분리주에 대한 화합물 1 및 소포스부비르의 EC95 값의 그래프이다. 수평 파선 ()은 소포스부비르의 400 mg QD 용량 후 소포스부비르 뉴클레오시드의 정상-상태 최저 농도 (C24,ss)를 나타낸다. 수평 실선 ()은 화합물 1-A의 600 mg (화합물 1의 550 mg과 등가량) 후 대사물 1-7의 정상-상태 최저 농도 (C24,ss)를 나타낸다. 수평 점선 ()은 화합물 1-A의 450 mg (화합물 1의 400 mg과 등가량) 후 대사물 1-7의 정상-상태 최저 농도 (C24,ss)를 나타낸다. 실시예 25에 논의된 바와 같이, 화합물 1-A의 600 mg 및 450 mg 후 대사물 1-7의 예측된 정상-상태 최저 혈장 수준 (C24,ss)은 모든 시험된 임상 분리주에 대해 화합물 1의 시험관내 EC95를 초과한다. 소포스부비르의 정상 상태 최저 혈장 수준 (C24,ss)은 오직 GT2 임상 분리주에서만 EC95를 초과한다. x-축은 임상 분리주로 라벨링되고, x-축 아래의 표는 화합물 1 및 소포스부비르에 대한 EC95 값을 열거한다. y-축은 ng/mL 단위로 측정된 임상 분리주에 대한 EC95이다. EC95는 뉴클레오시드 당량으로 표현된다. 소포스부비르 및 화합물 1-A는 매일 투여되었다 (QD).
도 25는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1 92 mg, 275 mg, 368 mg 또는 550 mg과 등가량인 화합물 1-A의 단일 용량 후의 비-간경변성 GT1b HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화를 입증하는 그래프이다. x-축은 투여 후 측정된 시간이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화이다.
도 26은 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1-A의 7일 QD 투여 후의 비-간경변성 GT1b HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화를 입증하는 그래프이다. x-축은 제1-투여 후 측정된 일수이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화이다.
도 27은 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 투여 후의 비-간경변성 GT1 HCV 감염을 갖는 대상체, 비-간경변성 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체, 및 간경변성 GT1 또는 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화를 비교한 그래프이다. 그래프에 제시된 바와 같이, 간경변증 대상체는 비-간경변증 대상체와 유사한 평균 HCV RNA 변화를 나타내었다. x-축은 제1-투여 후 측정된 일수이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화이다.
도 28a는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 투여 후의 비-간경변성 GT1b HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 개별 HCV RNA 변화의 그래프이다. 수평 파선 ()은 정량 한계 (LOQ=15 IU/mL)이고, 대상체의 50%가 HCV RNA < LOQ를 달성하였다. x-축은 제1-투여 후 측정된 일수이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 HCV RNA 변화이다.
도 28b는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 투여 후의 비-간경변성 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 개별 HCV RNA 변화의 그래프이다. 수평 파선 ()은 정량 한계 (LOQ=15 IU/mL)이다. x-축은 제1-투여 후 측정된 일수이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 HCV RNA 변화이다.
도 28c는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 투여 후의 간경변성 GT1 또는 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에서의 기준선으로부터의 개별 HCV RNA 변화의 그래프이다. 수평 파선 ()은 정량 한계 (LOQ=15 IU/mL)이다. x-축은 제1-투여 후 측정된 일수이고, y-축은 log10 IU/mL로 측정된 기준선으로부터의 HCV RNA 변화이다.
도 29는 GT1/GT3 HCV-감염된 간경변성 및 비-간경변성 대상체에서의 대사물 1-7의 평균 혈장 농도-시간 프로파일이다. 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이, GT1-감염된 비-간경변성 대상체에게는 화합물 1 138 mg/d, 275 mg/d, 또는 550 mg/d QD와 등가량인 화합물 1-A가 주어졌고, GT3-감염된 비-간경변성 대상체에게는 화합물 1-A의 600 mg/d QD (화합물 1의 550 mg/d)가 주어졌고, GT1/GT3-감염된 간경변성 대상체에게는 화합물 1-A QD 600 mg (화합물 1의 550 mg/d)이 주어졌다. x-축은 시 단위로 측정된 시간이고, y-축은 ng/mL 단위로 측정된 평균 혈장 농도이다.
도 30a는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 비-간경변성 GT1b HCV 감염을 갖는 대상체에 대해 시간에 대한 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 후의 평균 대사물 1-7 혈장 농도 (좌측 y-축) 및 평균 HCV RNA 감소 (우측 y-축)를 플롯팅한 그래프이다. GT1b에서 화합물 1의 EC95는 수평 파선 ()으로 제시된다. 도트는 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준 (Cτ)을 나타내고, 도면에 제시된 바와 같이, (Cτ)는 연구된 모든 시점에서 일관되게 EC95 초과이다. 좌측 y-축은 ng/mL로 측정된 평균 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL로 측정된 550 mg의 화합물 1 QD 후의 HCV RNA 감소이고, x-축은 시 단위로 측정된 시간이다.
도 30b는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 비-간경변성 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에 대해 시간에 대한 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 후의 평균 대사물 1-7 혈장 농도 (좌측 y-축) 및 평균 HCV RNA 감소 (우측 y-축)를 플롯팅한 그래프이다. GT3에서 화합물 1의 EC95는 수평 파선 ()으로 제시된다. 도트는 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준 (Cτ)을 나타내고, 도면에 제시된 바와 같이, (Cτ)는 연구된 모든 시점에서 일관되게 EC95 초과이다. 좌측 y-축은 ng/mL로 측정된 평균 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL로 측정된 550 mg의 화합물 1 QD 후의 HCV RNA 감소이고, x-축은 시 단위로 측정된 시간이다.
도 30c는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 간경변성 GT1b HCV 감염을 갖는 대상체에 대해 시간에 대한 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) 후의 평균 대사물 1-7 혈장 농도 (좌측 y-축) 및 평균 HCV RNA 감소 (우측 y-축)를 플롯팅한 그래프이다. GT1b에서 화합물 1의 EC95는 수평 파선 ()으로 제시된다. 도트는 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준 (Cτ)을 나타내고, 도면에 제시된 바와 같이, (Cτ)는 연구된 모든 시점에서 일관되게 EC95 초과이다. 좌측 y-축은 ng/mL로 측정된 평균 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL로 측정된 550 mg의 화합물 1 QD 후의 HCV RNA 감소이고, x-축은 시 단위로 측정된 시간이다.
도 30d는 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이 간경변성 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에 대해 시간에 대한 화합물 1-A의 600 mg/일 QD (550 mg의 화합물 1과 등가량) QD 후의 평균 대사물 1-7 혈장 농도 (좌측 y-축) 및 평균 HCV RNA 감소 (우측 y-축)를 플롯팅한 그래프이다. GT1b에서 화합물 1의 EC95는 수평 파선 ()으로 제시된다. 도트는 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준 (Cτ)을 나타내고, 도면에 제시된 바와 같이, (Cτ)는 연구된 모든 시점에서 일관되게 EC95 초과이다. 좌측 y-축은 ng/mL로 측정된 평균 대사물 1-7 혈장 농도이고, 우측 y-축은 log10 IU/mL로 측정된 550 mg의 화합물 1 QD 후의 HCV RNA 감소이고, x-축은 시 단위로 측정된 시간이다.
도 31은 화합물 1-A의 QD 투여 후 비-간경변성 GT1b HCV 감염, 비-간경변성 GT3 HCV 감염, 간경변성 GT1b HCV 및 간경변성 GT3 HCV 감염을 갖는 대상체에 대해 제7일에 측정된 바와 같은 HCV RNA 감소를 대사물 1-7의 AUC에 대해 플롯팅한 Emax 모델이다. 실시예 26 및 27에 기재된 바와 같이, 비-간경변성 GT1b HCV를 갖는 대상체에게 138 mg/d, 275 mg/d, 또는 550 mg/d의 화합물 1과 등가량인 화합물 1-A의 다중 상승 용량을 7일 동안 QD 투여하였다. 비-간경변성 GT3을 갖는 대상체 및 간경변성 GT1/GT3 감염을 갖는 대상체에게 600 mg의 화합물 1-A (550 mg/d의 화합물 1과 등가량)를 7일 동안 QD 제공하였다. 138 mg/d, 275 mg/d, 또는 550 mg/d가 투여된 비-간경변성 GT1b HCV에 대한 95% CI 구간 범위가 제시된다. 모델은 2000 ng/mL x h 이상의 대사물 1-7 노출이 투여 7일 후에 적어도 4 log의 최대 바이러스 로드 감소를 발생시킬 것으로 예측한다. 모든 대상체는 대상체가 간경변증을 나타내는지 또는 비-간경변증을 나타내는지에 관계 없이, 550 mg의 화합물 1의 투여 후에 2000 ng/mL x h 초과의 대사물 1-7 노출을 달성할 수 있었다. x-축은 ng/mL x h로 측정된 대사물 1-7의 AUC이고, y-축은 log10 척도로 측정된 제7일의 HCV RNA 감소이다.
도 32는 실시예 28에 기재된 바와 같은 화합물 1-A의 50 mg 및 100 mg 정제의 제조 방법을 보여주는 흐름도이다. 단계 1에서, 미세결정질 셀룰로스, 화합물 1-A, 락토스 1수화물, 및 크로스카르멜로스 소듐은 600 μM 스크린을 통해 여과된다. 단계 2에서, 단계 1로부터의 내용물은 V-블렌더 내로 로딩되고, 25 rpm에서 5분 동안 혼합된다. 단계 3에서, 스테아르산마그네슘이 600 μM 스크린을 통해 여과된다. 단계 4에서, 스테아르산마그네슘은 단계 2로부터의 내용물 (미세결정질 셀룰로스, 화합물 1-A, 락토스 1수화물, 및 크로스카르멜로스 소듐)을 함유하는 V-블렌더 내로 로딩되고, 25 rpm에서 2분 동안 혼합된다. 이어서 통상의 블렌드는 50 mg 정제 및 100 mg 정제의 생성을 위해 나뉘어진다. 50 mg 정제를 생성하기 위해, 단계 4로부터의 블렌드는 6 mm 원형 표준 오목 도구에 의해 압축된다. 100 mg 정제를 생성하기 위해, 단계 4로부터의 블렌드는 8 mm 원형 표준 오목 도구에 의해 압축된다. 이어서 정제는 건조제가 담긴 PP 캡에 의해 유도-밀봉되는 HDPE 병 내로 포장된다.
도 33은 NS5B 폴리머라제 억제제 화합물 1-A 및 NS5A 억제제 화합물 2이다.
도 34는 화합물 1 및 화합물 2의 조합물이 상승작용적, 상가적 또는 길항적인 농도를 보여주는 3차원 조합 표면 플롯이다. 실시예 30에 기재된 바와 같이, 약물 조합물의 효과를 단독으로 시험한 경우의 2종의 화합물의 활성에 기초하여 계산한다. 예상되는 상가적 항바이러스 보호를 각각의 조합 농도에서 실험적으로 결정된 항바이러스 활성으로부터 차감하여 양성 값 (상승작용 또는 강화), 음성 값 (길항작용) 또는 0 (상가작용)을 산출한다. 조합 검정의 결과는 각각의 조합 농도에서 3차원으로 제시되며, 상가작용의 평면 위로 (상승작용) 또는 아래로 (길항작용) 연장된 활성 표면이 생성된다. 화합물 1 및 화합물 2의 조합물은 화합물 1 및 화합물 2 둘 다의 광범위한 농도에 걸쳐 상승작용적이다. 약 0.156에서 약 1까지 및 2.5에서 40 nM 또는 그 초과까지의 화합물 1에서, 상승작용이 관찰된다. 약 0.001 nM에서 약 0.008 nM까지의 화합물 2는 가장 큰 상승작용이 관찰되는 화합물 2의 범위이다.
본 발명은 숙주, 전형적으로 인간에서의 C형 간염 감염의 유리한 치료를 위한, 특정 NS5B 폴리머라제 억제제 및 특정 NS5A 억제제의 고도로 활성인 상승작용적 조합물을 제공한다.
이러한 조합 요법에 사용되는 항-HCV 화합물은 1) NS5B 억제제 이소프로필((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트 (화합물 1) 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 2) NS5A 억제제 루자스비르 (디메틸 N,N'-([(6S)-6-(2-시클로프로필-1,3-티아졸-5-일)-1-플루오로-6H-인돌로[1,2-c][1,3]벤족사진-3,10-디일]비스{1H-이미다졸-5,2-디일-(2S)-피롤리딘-2,1-디일[(2S)-3-메틸-1-옥소부탄-1,2-디일]})디카르바메이트) (화합물 2) 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 전형적 실시양태에서, 화합물 1은 헤미-술페이트 염 유도체 (화합물 1-A)로서 투여된다.
한 실시양태에서, 약물의 조합물은 고정-용량 투여 형태, 예컨대 환제 또는 정제로 투여된다. 대안적 실시양태에서, 2종의 화합물은 이를 필요로 하는 숙주가 표준 약동학에 의해 측정된 바와 같이 협동 방식으로 둘 다의 화합물의 이익을 받는 방식으로 투여된다.
화합물 1 및 화합물 1-A
화합물 1 (이소프로필((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트)은 미국 특허 번호 9,828,410; 10,000,523; 10,005,811; 및 10,239,911 및 아테아 파마슈티칼스에 양도된 PCT 출원 WO 2016/21276 및 WO 2019/200005에 이전에 기재되었다. 화합물 1의 합성은 하기 실시예 1에 기재되어 있다.
화합물 1-A는 아테아 파마슈티칼스에 양도된 US 2018-0215776 및 PCT 출원 WO 2018/144640 및 WO 2019/200005에 이전에 개시되었다. 화합물 1-A (이소프로필((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 헤미-술페이트 염)의 합성은 하기 실시예 4에 기재되어 있다. 한 실시양태에서, 화합물 1-A는 그의 제약상 허용되는 조성물 또는 고체 투여 형태로 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 1-A는 무정형 고체이다. 한 실시양태에서, 화합물 1-A는 결정질 고체이다. 도 1-15는 XRPD, DSC 및 TGA에 의한 화합물 1-A의 물리적 형태의 특징화를 도시한다.
상기 기재된 바와 같이, 화합물 1-A는 HCV에 감염된 환자에 대해 1b/2a상 임상 시험을 완료하였다. 다중 파트 연구는 건강한 대상체, 비-간경변성 HCV-감염된 환자 및 간경변성 HCV-감염된 환자에서 화합물 1-A의 단일 및 다중 용량의 효과를 평가하였다. 화합물 1-A는 시험된 모든 HCV-감염된 코호트에 투여한 경우 유의한 항바이러스 감소를 유도하였다. 화합물 1-A를 7일의 과정에 걸쳐 1일 1회 (QD) 투여하였고, 강력한 항바이러스 활성이 관찰되었다. 화합물 1-A가 600 mg QD로 주어진 (550 mg의 화합물 1과 등가량) 비-간경변성 HCV-감염된 환자에서, 평균 최대 HCV RNA 감소는 HCV GT1-감염된 환자에서 4.4 log10 IU/mL였고, HCV GT3-감염된 환자에서 4.6 log10 IU/mL였다. 항바이러스 감소에 대한 화합물 1-A의 효과는 또한 치료하기 어려운 간경변성 환자로 확장되었다. CPA 간경변증을 갖는 HCV GT1 또는 HCV GT3-감염된 환자의 코호트에서, 평균 최대 HCV RNA 감소는 7일 동안 QD로 투여된 경우 4.4 log10 IU/mL였다 (Zhou, X. et al., "AT-527, a pan-genotypic purine nucleotide prodrug, exhibits potent antiviral activity in subjects with chronic hepatitis C" presented at The International Liver Congress 2018; April 13, 2018; Paris, France). 도 25-31은 화합물 1을 투여한 간경변성 환자에서의 화합물 1 대사물 및 HCV 바이러스 RNA 수준을 도시한다. 도 27은 화합물 1이 비-간경변성 환자에서와 같이 간경변성 환자에서 동등하게 효과적임을 강조한다.
달리 명시되지 않는 한, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어, 화합물 1-A는 β-D-배위로 제공된다. 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A는 β-L-배위로 제공될 수 있다. 화합물 1의 포스포르아미데이트 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A는 R 또는 S 키랄 인 유도체 또는 라세미 또는 부분입체이성질체 혼합물을 포함한 그의 혼합물로서 제공될 수 있다. 이들 입체배위의 모든 조합은 본원에 기재된 본 발명의 대안적 실시양태이다.
이들 대안적 배위는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
.
추가의 대안적 구성은 하기를 포함한다:
.
한 실시양태에서, 상기 입체이성질체 중 임의의 것 또는 그의 제약상 허용되는 염은 본원의 본 발명의 임의의 측면에서 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염으로서 사용된다. 또 다른 실시양태에서 상기 입체이성질체 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염은 본원의 본 발명의 임의의 측면에서 화합물 1-A로서 사용된다.
대안적 실시양태에서, 화합물 1-A는 화합물 예시에 기재된 구체적 포스포르아미데이트 이외의 포스포르아미데이트의 헤미술페이트 염으로서 제공된다.
또 다른 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화합물 예시에 기재된 구체적 포스포르아미데이트 이외의 포스포르아미데이트로서 제공된다. 폭넓은 범위의 포스포르아미데이트가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 이는 본원에 기재된 바와 같은 활성 화합물을 제공하기 위해 목적하는 바와 같이 선택될 수 있다. 예를 들어, 화합물 1의 포스포르아미데이트 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 A의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
여기서:
R7은 수소, C1-6알킬 (메틸, 에틸, 프로필, 및 이소프로필 포함), C3-7시클로알킬, 또는 아릴 (페닐 및 나프틸 포함)이고;
R8은 수소 또는 C1-6알킬 (메틸, 에틸, 프로필 및 이소프로필 포함)이고;
R9a 및 R9b는 수소, C1-6알킬 (메틸, 에틸, 프로필, 및 이소프로필 포함), 또는 C3-7시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R10은 수소, C1-6알킬 (메틸, 에틸, 프로필, 및 이소프로필 포함), C1-6할로알킬, 또는 C3-7시클로알킬이다.
대안적 비제한적 실시양태에서, 본 발명은 옥살레이트 염 (화합물 1-B), HCl 염 (화합물 1-C), 또는 술페이트 염 (화합물 1-D)으로서의 화합물 1을 포함한다.
화합물 1 및 화합물 1-A의 대사는 5'-모노포스페이트의 생산 및 N6-메틸-2,6-디아미노퓨린 염기 (1-3)의 후속 동화작용을 수반하고, 이는 ((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-옥소-1,6-디히드로-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메틸 디히드로겐 포스페이트 (1-4)를 5'-모노포스페이트로서 생성한다. 이어서 모노포스페이트는 활성 트리포스페이트 종: 5'-트리포스페이트 (1-6)로 추가로 동화된다. 5'-트리포스페이트는 추가로 대사되어 2-아미노-9-((2R,3R,4R,5R)-3-플루오로-4-히드록시-5-(히드록시메틸)-3-메틸테트라히드로푸란-2-일)-1,9-디히드로-6H-퓨린-6-온 (1-7)을 생성할 수 있다. 도 17-24는 화합물 1-A 및 주요 대사물의 약동학적 특성을 도시한다. 화합물 1-A는 8시간 내에 대사되지만, 활성 대사물은 최대 24시간 동안 존재한다. 대사물이 존재하는 24시간의 기간 동안, HCV 바이러스 RNA의 억제가 관찰된다. 300 mg의 용량에서, 화합물 1-A 대사물의 혈장 농도는 HCV GT1b의 EC95보다 더 높다. 도 16은 화합물 1-A의 유리한 생체분포 특성을 도시한다. 화합물은 심장보다는, HCV 감염에 대한 표적 기관인 간에서 농축된다. 간 농도가 높기 때문에, 보다 낮은 용량이 사용될 수 있다. 효과는 종 특이적이지 않고, 3종의 상이한 전임상 종에서 관찰되었다. 도 24는 다양한 HCV 유전자형에 대한 화합물 1 및 소포스부비르에 대한 EC95의 비교를 보여준다. 소포스부비르는 유전자형에 기초하여 가변적 EC95를 갖고, 화합물 1에 대한 EC95는 유전자형에 기초한 변동을 거의 갖지 않는다.
대안적으로, 5'-모노포스페이트 1-2가 대사되어 퓨린 염기 1-8을 생성할 수 있다. 이소프로필((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-3-히드록시-4-메틸테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트에 대한 대사 경로가 반응식 1에 예시된다.
반응식 1
아테아 파마슈티칼스, 인크.는 미국 특허 번호 9,828,410; 10,000,523; 10,005,811; 10,239,911, 10,815,266; 10,870,672; 10,870;673; 10,870,885; 10,519,186; 10,906,928; 10,894,804; 및 PCT 출원 번호 WO 2016/144918; WO 2018/048937; WO 2018/013937; 및 WO 2018/144640에서 HCV의 치료를 위한 β-D-2'-데옥시-2'-α-플루오로-2'-β-C-치환된-2-변형된-N6-(모노- 및 디-메틸) 퓨린 뉴클레오티드를 개시하였다. 아테아는 또한 미국 특허 번호 10,202,412 및 PCT 출원 번호 WO 2018/009623에서 파라믹소바이러스 및 오르토믹소바이러스 감염의 치료를 위한 β-D-2'-데옥시-2'-치환된-4'-치환된-2-N6-치환된-6-아미노퓨린 뉴클레오티드를 개시하였다.
화합물 2
화합물 2는 머크 앤드 캄파니에 양도된 WO 2014/110705 및 미국 특허 번호 9,555,038에 개시되어 있다. 한 실시양태에서, 화합물 2는 그의 제약상 허용되는 염으로서 투여된다. 한 실시양태에서, 화합물 2의 고체 형태가 사용된다. 한 실시양태에서, 화합물 2의 고체 형태는 결정질 고체이다.
루자스비르 (디메틸 N,N'-([(6S)-6-(2-시클로프로필-1,3-티아졸-5-일)-1-플루오로-6H-인돌로[1,2-c][1,3]벤족사진-3,10-디일]비스{1H-이미다졸-5,2-디일-(2S)-피롤리딘-2,1-디일[(2S)-3-메틸-1-옥소부탄-1,2-디일]})디카르바메이트, 화합물 2)의 합성은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 화합물 2를 합성하는 데 사용될 수 있는 합성 방법의 비제한적 예는 실시예 29에 제시되고 머크에 양도된 WO 2016/196932에서 보고된 것을 포함한다.
정의
본 발명의 문맥에 사용된 용어 "D-배위"는 비자연 발생 뉴클레오시드 또는 "L" 배위와는 대조적으로 당 모이어티의 천연 배위를 모방하는 주요 배위를 지칭한다. 용어 "β" 또는 "β 아노머"는 뉴클레오시드 염기가 뉴클레오시드 유사체 내에서 푸라노스 모이어티의 평면 위에 배위된 (배치된) 것인 뉴클레오시드 유사체와 관련하여 사용된다.
용어 "공투여하다" 및 "공투여" 또는 조합 요법은 본 발명에 따른 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염을 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여하는 것을 기재하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 적어도 1종의 다른 활성제, 예를 들어 적절한 경우에 적어도 1종의 추가의 항-HCV 작용제와 함께 투여된다. 공투여의 시기는 환자를 치료하는 의학 전문가에 의해 가장 잘 결정된다. 때때로, 작용제는 동시에 또는 적어도 처리된 환자에서 2종의 약물의 중첩 약리학적 효과를 가능하게 하는 방식으로 투여되는 것이 바람직하다. 대안적으로, 조합 요법을 위해 선택된 약물은 환자에게 상이한 시간에 투여될 수 있다. 물론, 1종 초과의 바이러스 또는 다른 감염 또는 다른 병태가 존재하는 경우, 본 발명의 화합물은 필요에 따라 다른 감염 또는 병태를 치료하기 위한 다른 작용제와 조합될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "숙주"는 세포주 및 동물, 및 전형적으로 인간을 포함한, HCV 바이러스가 복제될 수 있는 단세포 또는 다세포 유기체를 지칭한다. 용어 숙주는 구체적으로, 본원에 기재된 조합물로 치료될 수 있는 감염된 세포, HCV 게놈의 전부 또는 일부로 형질감염된 세포, 및 HCV 게놈 또는 그의 일부를 보유하는 동물, 특히 영장류 (침팬지 포함) 및 인간을 지칭한다. 중첩 약동학을 갖는 투여 요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 본 발명의 대부분의 동물 적용에서, 숙주는 인간 환자이다. 그러나, 특정 적응증에서는, 수의학적 적용이 본 발명에 의해 명백히 예상된다 (예컨대 침팬지). 숙주는 예를 들어 바이러스의 숙주가 될 수 있는 소, 말, 조류, 개, 고양이 등일 수 있다.
"제약상 허용되는 염"은 모 화합물이 과도한 독성 없이 그의 무기 및 유기, 산 또는 염기 부가염으로 변형된 개시된 화합물의 유도체이다. 본 발명의 화합물의 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 갖는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대 Na, Ca, Mg 또는 K 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시킴으로써, 또는 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 중에서 또는 유기 용매 중에서, 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 수행된다. 일반적으로, 실행가능한 경우에, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질이 전형적이다. 본 발명의 화합물의 염은 임의로 용매화물의 형태로 제공될 수 있다.
제약상 허용되는 염의 예는 염기성 잔기, 예컨대 아민의 무기 또는 유기 산 염; 산성 잔기, 예컨대 카르복실산의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 과도하게 독성이 아닌 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 염 및 4급 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 통상적인 산 염은 무기 산 예컨대 염산, 브로민화수소산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등으로부터 유도된 것; 및 유기 산 예컨대 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 메실산, 에실산, 베실산, 술파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이세티온산, HOOC-(CH2)n-COOH (여기서 n은 0-4임) 등으로부터 제조된 염, 또는 동일한 반대이온을 생성하는 상이한 산을 사용하여 제조된 염을 포함한다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., p. 1418 (1985)]에서 찾아볼 수 있다.
화합물은 목적하는 결과를 전달하는 임의의 몰비로 전달될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 몰 당량 미만의 반대 이온을 가지고, 예컨대 헤미-술페이트 염의 형태로 제공될 수 있다. 대안적으로, 화합물은 몰 당량 초과의 반대 이온을 가지고, 예컨대 디-술페이트 염의 형태로 제공될 수 있다. 화합물 대 반대 이온의 몰비의 비제한적 예는 1:0.25, 1:0.5, 1:1 및 1:2를 포함한다.
동위원소 치환
본 발명은 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물을 포함하며, 여기서 화합물 중 하나 또는 둘 다는 동위원소의 천연 존재비 초과, 즉 풍부한 양의 원자의 목적하는 동위원소 치환을 갖는다. 동위원소는, 원자 번호가 동일하지만 질량수가 상이한, 즉 양성자의 수가 동일하지만 중성자의 수가 상이한 원자이다. 일반적 예로서 및 비제한적으로, 수소의 동위원소, 예를 들어 중수소 (2H) 및 삼중수소 (3H)가 기재된 구조 내의 어느 곳에서나 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 탄소의 동위원소, 예를 들어 13C 및 14C가 사용될 수 있다. 바람직한 동위원소 치환은 약물의 성능을 개선시키기 위해 분자 상의 1개 이상의 위치에서의 수소의 중수소로의 치환이다. 중수소는 대사 동안의 결합 파손 위치에서 (α-중수소 동역학적 동위원소 효과) 또는 결합 파손 부위 옆 또는 근처에서 (β-중수소 동역학적 동위원소 효과) 결합될 수 있다. 아킬리온 파마슈티칼스, 인크.(Achillion Pharmaceuticals, Inc.) (WO/2014/169278 및 WO/2014/169280)는 그의 약동학 또는 약역학을 개선시키기 위한, 예컨대 분자의 5-위치에서의 뉴클레오티드의 중수소화를 기재한다.
동위원소 예컨대 중수소로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 생성된 특정의 치료 이점, 예컨대 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 제공할 수 있다. 대사 파손 부위에서의 수소의 중수소로의 치환은 그러한 결합에서 대사 속도를 감소시키거나, 또는 대사를 제거할 수 있다. 수소 원자가 존재할 수 있는 화합물의 임의의 위치에서, 수소 원자는 경수소 (1H), 중수소 (2H) 및 삼중수소 (3H)를 포함한 수소의 임의의 동위원소일 수 있다. 따라서, 화합물에 대한 본원의 언급은 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 모든 잠재적 동위원소 형태를 포괄한다.
용어 "동위원소-표지된" 유사체는 "중수소화 유사체", "13C-표지된 유사체" 또는 "중수소화/13C-표지된 유사체"인 유사체를 지칭한다. 용어 "중수소화 유사체"는 H-동위원소, 즉 수소/경수소 (1H)가 H-동위원소, 즉 중수소 (2H)에 의해 치환된 본원에 기재된 화합물을 의미한다. 중수소 치환은 부분 또는 완전 치환일 수 있다. 부분 중수소 치환은 적어도 1개의 수소가 적어도 1개의 중수소에 의해 치환된 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 동위원소는 임의의 관심 위치에서 동위원소가 90, 95 또는 99% 또는 그 초과로 풍부화된다. 일부 실시양태에서, 이는 목적하는 위치에서 90, 95 또는 99% 풍부화된 중수소이다. 달리 나타내지 않는 한, 중수소화는 선택된 위치에서 적어도 80%이다. 뉴클레오시드의 중수소화는 목적하는 결과를 제공하는 임의의 대체가능한 수소에서 일어날 수 있다.
치료 방법
본원에 사용된 치료는 HCV 바이러스에 감염되거나 감염될 수 있는 숙주, 예를 들어 인간에게 유효량의 본 발명의 조합물을 투여하는 것을 지칭한다. 한 실시양태에서, 치료 방법은 HCV 바이러스에 감염되거나 감염될 수 있는 숙주, 예를 들어 인간에게 유효량의 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 방법은 HCV 바이러스에 감염되거나 감염될 수 있는 숙주, 예를 들어 인간에게 화합물 1-A 및 화합물 2를 투여하는 것을 포함한다.
용어 "예방적" 또는 방지적은, 사용되는 경우에, 바이러스 장애의 발생을 방지하거나 또는 그의 발생 가능성을 감소시키기 위한 본 발명의 조합물의 투여를 지칭한다. 대안적 실시양태에서, 본 발명은 치료 및 예방적 또는 방지적 요법을 포함한다. 한 실시양태에서, 조합물은 C형 간염 바이러스 감염에 노출되어 감염의 위험이 있는 숙주에게 투여된다.
본 발명은 유효량의 화합물 1 (예컨대 1-A) 및 화합물 2의 상승작용적 조합물을 투여함으로써, 약물 저항성 및 다중약물 저항성 형태의 HCV 및 관련 질환 상태, 병태, 또는 HCV 감염의 합병증, 예컨대 간경변증 및 관련 간독성, 뿐만 아니라 HCV 감염에 속발성인 다른 병태, 예컨대 특히 허약, 식욕 상실, 체중 감소, 유방 비대 (특히 남성에서), 발진 (특히 손바닥 상에서), 혈액 응고 곤란, 피부 상의 거미-유사 혈관, 혼란, 혼수 (뇌병증), 복강내액 (복수)의 축적, 식도 정맥류, 문맥 고혈압, 신부전, 비장 비대, 혈액 세포의 감소, 빈혈, 혈소판감소증, 황달, 및 간세포성 암을 포함한 C형 간염 바이러스를 치료하는 방법을 포함한다. 방법은 유효량의 본원에 기재된 조합물을, 임의로 적어도 1종의 추가의 생물활성제, 예를 들어 추가의 항-HCV 작용제와 조합하여, 추가로 임의로 제약상 허용되는 담체 첨가제 및/또는 부형제와 조합하여 이를 필요로 하는 숙주, 전형적으로 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서 방법은 HCV 감염의 위험이 있는 환자에게 유효량의 본 발명의 조합물을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같은 조합물은 제약상 허용되는 담체, 첨가제 또는 부형제와 함께, 임의로 제3 항-HCV 작용제와 조합되어 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 간염-관련 간 이식 후에 새로운 기관을 보호하기 위해 환자에게 투여될 수 있다.
조합 요법 및 투여 형태는 또한 HCV 바이러스 노출과 관련되거나 또는 그의 결과로서 발생하는 병태를 치료하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 활성 화합물은 HCV 항체 양성- 및 HCV 항원-양성 병태, 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (예를 들어, 간세포성 암종), 간경변증, 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염, 및 항-HCV-기반 피로를 치료하는 데 사용될 수 있다. 조합물은 또한 항-HCV 항체- 또는 항원-양성이거나 또는 C형 간염에 노출된 개체에서 임상 질병의 진행을 예방하거나 제한하기 위해 예방적으로 사용될 수 있다.
제약 조성물 및 투여 형태
화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여는 다른 투여 경로 중에서, 경구, 국소, 비경구, 근육내, 정맥내, 피하, 경피 (이는 침투 증진제를 포함할 수 있음), 협측 및 좌제 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 목적하는 형태를 사용하여 수행될 수 있다. 한 실시양태에서, 활성 화합물 또는 화합물의 조합물은 관련 기술분야에 널리 공지되고 하기 추가로 기재된 고체 투여 형태로 제공된다. 장용 코팅 경구 정제가 또한 경구 투여 경로에 대한 화합물의 생체이용률을 증진시키는 데 사용될 수 있다. 가장 유효한 투여 형태는 선택된 특정한 작용제의 생체이용률/약동학뿐만 아니라 환자에서의 질환의 중증도에 좌우될 것이다. 경구 투여 형태가 투여의 용이성 및 기대되는 유리한 환자 순응도로 인해 특히 바람직하다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 조성물은 항-HCV 바이러스 유효량의 각각의 개별적인 또는 조합된 형태의 본원에 기재된 바와 같은 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을, 임의로 제약상 허용되는 담체, 첨가제 또는 부형제와 조합하여, 추가로 임의로 적어도 1종의 다른 활성 화합물과 조합하여 또는 교대로 포함한다.
한 실시양태에서, 조합물은 제약상 허용되는 담체 중의 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 고체 투여 형태를 포함한다. 이러한 제약 조성물은 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염 둘 다를 함유할 수 있거나, 또는 대안적으로 화합물은 숙주가 표준 약동학에 의해 측정된 바와 같이 협동 방식으로 둘 다의 화합물의 이익을 제공받는 방식으로 투여되는 개별 투여 형태로 존재할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 치료 유효량이 치료될 감염 또는 병태, 그의 중증도, 사용될 치료 요법, 사용되는 작용제의 약동학, 뿐만 아니라 치료될 환자 또는 대상체 (동물 또는 인간)에 따라 달라질 것이며, 이러한 치료량은 담당 의사 또는 전문가에 의해 결정될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체와의 1종 이상의 혼합물로서 제제화될 수 있다. 일반적으로, 1종 이상의 제약 조성물을 경구로-투여가능한 형태, 특히 1종 이상의 고체 투여 형태, 예컨대 환제 또는 정제로 투여하는 것이 바람직하다. 특정 제제는 비경구, 정맥내, 근육내, 국소, 경피, 협측, 피하, 좌제, 또는 비강내 스프레이를 포함한 다른 경로를 통해 투여될 수 있다. 정맥내 및 근육내 제제는 종종 멸균 염수 중에서 투여된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 제제가 물 또는 다른 비히클 중에 보다 가용성이 되도록 제제를 변형시킬 수 있고, 이는 예를 들어 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙한 부차적 변형 (염 제제화, 에스테르화 등)에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 또한, 환자에서 최대의 유익한 효과를 위해 본 발명의 화합물의 약동학을 관리하기 위해 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 경로 및 투여 요법을 변형시키는 것도 통상의 기술자의 기술 내에 있다.
특정 제약 투여 형태에서, 아실화 (아세틸화 또는 다른 것), 및 에테르 (알킬 및 관련) 유도체, 포스페이트 에스테르, 티오포스포르아미데이트, 포스포르아미데이트, 및 본 발명의 화합물의 다양한 염 형태를 포함한 화합물의 전구약물 형태가 목적하는 효과를 달성하기 위해 사용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 숙주 유기체 또는 환자 내의 표적화된 부위로의 활성 화합물의 전달을 용이하게 하기 위해 본 발명의 화합물을 전구약물 형태로 용이하게 변형시키는 방법을 인식할 것이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 적용가능한 경우에, 화합물의 의도된 효과를 최대화하기 위해 숙주 유기체 또는 환자 내의 표적화된 부위로 본 발명의 화합물을 전달하는 데 있어서 전구약물 형태의 유리한 약동학적 파라미터를 이용할 것이다.
본 개시내용에 언급된 양은 전형적으로 유리 형태 (즉, 비-염, 수화물 또는 용매화물 형태)를 지칭한다. 전형적으로 본원에 기재된 값은 유리-형태 등가량, 즉 유리 형태가 투여되는 것과 같은 양을 나타낸다. 염이 투여되는 경우에, 양은 염과 유리 형태 사이의 분자량 비의 함수로 계산될 필요가 있다.
본 발명에 따른 치료 활성 제제 내에 포함된 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양은, 예를 들어 HCV 감염을 치료하거나, HCV 감염의 가능성을 감소시키거나, 또는 HCV 또는 HCV에 속발성으로 발생하는 질환 상태, 병태 및/또는 합병증을 포함한 그의 속발성 효과의 억제, 감소 및/또는 제거를 위한, 본 발명에 따른 목적하는 결과를 달성하기 위한 유효량이다. 일반적으로, 제약 투여 형태 중 본 발명의 화합물의 치료 유효량은, 예를 들어 1일에 약 0.001 mg/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 화합물 1 또는 화합물 1-A는, 예를 들어 환자에서의 작용제의 약동학에 따라, 1일에 약 0.1 mg/환자 kg 내지 약 15 mg/환자 kg 범위의 양으로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 550 mg의 화합물 1인 600 mg의 화합물 1-A가 투여 형태로 제공된다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1 mg 내지 약 2000 mg, 약 10 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염에 더하여, 단위 투여 형태로 약 1 mg 내지 약 2000 mg, 약 10 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg, 약 200 mg 내지 약 600 mg, 약 300 mg 내지 약 500 mg, 또는 약 400 mg 내지 약 450 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A를 함유하는 투여 형태이다.
대안적 실시양태에서, 제약 조성물은 약 100 mg 내지 약 800 mg, 약 150 mg 내지 약 200 mg, 약 250 내지 약 300 mg, 또는 약 350 내지 약 400 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염에 더하여, 단위 투여 형태로 약 500 mg 내지 약 600 mg, 약 550 mg 내지 약 750 mg, 약 600 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 1,000 mg 내지 약 1,300 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A를 함유하는 투여 형태이다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 최대 약 10, 약 50, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 325, 약 350, 약 375, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 625, 약 650, 약 675, 약 700, 약 725, 약 750, 약 775, 약 800, 약 825, 약 850, 약 875, 약 900, 약 925, 약 950, 약 975, 또는 약 1000 mg 또는 그 초과의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A를 단위 투여 형태로 함유하는 투여 형태, 예를 들어 고체 투여 형태이다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 최대 약 10, 약 50, 약 60, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 325, 약 350, 약 375, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 625, 약 650, 약 675, 약 700, 약 725, 약 750, 약 775, 약 800, 약 825, 약 850, 약 875, 약 900, 약 925, 약 950, 약 975, 또는 약 1000 mg 또는 그 초과의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 투여 형태, 예를 들어 고체 투여 형태이다.
대안적 실시양태에서, 제약 조성물은 최대 약 90, 약 180, 약 270 또는 약 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 투여 형태, 예를 들어 고체 투여 형태이다.
한 실시양태에서, 최대 약 800 mg, 최대 약 700 mg, 최대 약 600 mg, 최대 약 550 mg, 최대 약 500 mg, 최대 약 400 mg, 최대 약 300 mg, 최대 약 200 mg, 또는 최대 약 100 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A 및 최대 약 360 mg, 최대 약 270 mg, 최대 약 180 mg, 최대 약 145 mg, 최대 약 130 mg, 최대 약 125 mg, 최대 약 110 mg, 최대 약 100 mg, 최대 약 90 mg, 최대 약 75 mg, 최대 약 70 mg, 최대 약 65 mg, 최대 약 60 mg, 최대 약 55 mg, 최대 약 50 mg, 최대 약 45 mg, 최대 약 40 mg, 최대 약 35 mg, 최대 약 30 mg, 최대 약 25 mg, 최대 약 20 mg, 최대 약 15 mg, 최대 약 10 mg, 또는 최대 약 5 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 고체 투여 형태가 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 1회 투여된다.
한 실시양태에서, 적어도 약 100 mg, 적어도 약 200 mg, 적어도 약 300 mg, 적어도 약 400 mg, 적어도 약 500 mg, 적어도 약 550 mg, 적어도 약 600 mg, 적어도 약 700 mg, 적어도 약 750 mg, 또는 적어도 약 1,100 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A 및 적어도 약 5 mg, 적어도 약 10 mg, 적어도 약 15 mg, 적어도 약 20 mg, 적어도 약 25 mg, 적어도 약 30 mg, 적어도 약 35 mg, 적어도 약 40 mg, 적어도 약 45 mg, 적어도 약 50 mg, 적어도 약 55 mg, 적어도 약 60 mg, 적어도 약 65 mg, 적어도 약 70 mg, 적어도 약 75 mg, 적어도 약 90 mg, 적어도 약 100 mg, 적어도 약 110 mg, 적어도 약 125 mg, 적어도 약 130 mg, 적어도 약 145 mg, 적어도 약 180 mg, 적어도 약 270 mg, 적어도 약 360 mg, 적어도 약 400 mg 또는 적어도 약 500 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 고체 투여 형태가 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 1회 투여된다.
대안적 실시양태에서, 최대 약 1,100, 최대 약 750 mg, 또는 최대 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A 및 최대 약 360 mg, 최대 약 270 mg, 최대 약 180 mg, 최대 약 90 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 고체 투여 형태가 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 1회 투여된다.
대안적 실시양태에서, 적어도 약 500 mg, 적어도 약 550 mg, 적어도 약 750 mg, 또는 적어도 약 1,100 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A 및 적어도 약 90 mg, 적어도 약 180 mg, 적어도 약 270 mg, 적어도 약 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 고체 투여 형태가 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 2회 투여된다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 600 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 90, 180, 270 또는 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 600 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 180 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 600 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 270 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 600 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 750 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 180 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 750 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 270 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 750 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 1,200 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 180 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 1,200 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 270 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 최대 약 1,200 mg의 화합물 1-A 및 최대 약 360 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 단일 정제로서 투여된다.
대안적으로, 화합물 1-A 또는 등가량의 화합물 1의 고체 투여 형태는 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 개별 고체 투여 형태와 조합되어 투여될 수 있다. 이러한 조합물은 건강관리 제공자의 지시에 따라 1일 1회, 2회, 3회 또는 최대 4회 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물 1-A 또는 화합물 1은 화합물 2와 개별 스케줄로 투여된다. 예를 들어, 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A는 1일 2회 투여될 수 있는 한편, 화합물 2는 단지 1일 1회 투여되거나, 또는 그 반대일 수 있고: 화합물 2는 1일 다수회 투여될 수 있는 한편, 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A는 단지 1일 1회 투여된다.
한 실시양태에서, 최대 약 800 mg, 최대 약 700 mg, 최대 약 600 mg, 최대 약 500 mg, 최대 약 400 mg, 최대 약 300 mg, 최대 약 200 mg, 또는 최대 약 100 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A를 함유하는 고체 투여 형태는 1일 1회 투여되고, 최대 약 145 mg, 최대 약 130 mg, 최대 약 125 mg, 최대 약 110 mg, 최대 약 100 mg, 최대 약 90 mg, 최대 약 75 mg, 최대 약 70 mg, 최대 약 65 mg, 최대 약 60 mg, 최대 약 55 mg, 최대 약 50 mg, 최대 약 45 mg, 최대 약 40 mg, 최대 약 35 mg, 최대 약 30 mg, 최대 약 25 mg, 최대 약 20 mg, 최대 약 15 mg, 최대 약 10 mg, 또는 최대 약 5 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 개별 고체 투여 형태는 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 1회 투여된다.
한 실시양태에서, 적어도 약 100 mg, 적어도 약 200 mg, 적어도 약 300 mg, 적어도 약 400 mg, 적어도 약 500 mg, 적어도 약 600 mg, 적어도 약 700 mg, 또는 적어도 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 화합물 1-A를 함유하는 고체 투여 형태는 1일 1회 투여되고, 적어도 약 5 mg, 적어도 약 10 mg, 적어도 약 15 mg, 적어도 약 20 mg, 적어도 약 25 mg, 적어도 약 30 mg, 적어도 약 35 mg, 적어도 약 40 mg, 적어도 약 45 mg, 적어도 약 50 mg, 적어도 약 55 mg, 적어도 약 60 mg, 적어도 약 65 mg, 적어도 약 70 mg, 적어도 약 75 mg, 적어도 약 80 mg, 적어도 약 90 mg, 적어도 약 100 mg, 적어도 약 110 mg, 적어도 약 125 mg, 적어도 약 130 mg, 또는 적어도 약 145 mg의 화합물 2 또는 등가량의 화합물 2의 제약상 허용되는 염을 함유하는 개별 고체 투여 형태는 HCV의 치료를 위해 이를 필요로 하는 숙주에게 1일 1회 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조합물은 이를 필요로 하는 숙주에게 (2종의 활성제의 개별 투여량으로서 또는 2종의 활성 화합물의 조합 투여량으로서)
(1) 단일 투여 형태;
(2) 2개의 투여 형태;
(3) 3개 이상의 투여 형태;
(4) 2개의 투여 형태를 포함하는 키트;
(5) 3개 이상의 투여 형태를 포함하는 키트
로서 투여되며;
여기서 실시양태 (1)-(5) 각각의 투여 형태는 하기를 포함한다.
(a) 약 500 또는 550 mg 내지 약 1100 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(b) 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(c) 약 550 내지 약 650 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(d) 약 500 내지 약 750 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(e) 약 1,000 내지 약 1,300 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(f) 적어도 약 600 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(g) 적어도 약 750 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(h) 적어도 약 1,100 mg의 화합물 1-A 및 유효량의 화합물 2;
(i) 화합물 2가 약 60 mg 내지 약 500 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(j) 화합물 2가 약 90 mg 내지 약 360 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(k) 화합물 2가 약 250 mg 내지 약 300 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(l) 화합물 2가 약 350 mg 내지 약 400 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(m) 화합물 2가 적어도 약 90 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(n) 화합물 2가 적어도 약 180 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(o) 화합물 2가 적어도 약 270 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(p) 화합물 2가 적어도 약 360 mg으로 존재하는 실시양태 (a)-(h) 중 어느 하나;
(q) 투여 형태가 1일에 1회 투여되는 실시양태 (1)-(5) 및 (a)-(h) 중 어느 하나;
(r) 투여 형태가 1일에 2회 투여되는 실시양태 (1)-(5) 및 (a)-(h) 중 어느 하나;
(s) 투여 형태가 1일에 3회 이상 투여되는 실시양태 (1)-(5) 및 (a)-(h) 중 어느 하나;
(t) 투여 형태가 경구 투여되는 실시양태 (1)-(5) 및 (a)-(s) 중 어느 하나;
(u) 숙주가 인간인 실시양태 (1)-(5) 및 (a)-(t) 중 어느 하나.
대안적 실시양태에서, 화합물 1의 약 0.15 nM 내지 약 1 nM의 혈장 농도를 발생시키는 화합물 1의 양이 이를 필요로 하는 숙주에게 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물 1의 약 0.25 내지 약 40 nM의 혈장 농도를 발생시키는 화합물 1의 양이 이를 필요로 하는 숙주에게 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물 1의 약 40 내지 약 200 nM의 혈장 농도를 발생시키는 화합물 1의 양이 이를 필요로 하는 숙주에게 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물 2의 약 0.001 nM 내지 약 0.008 nM의 혈장 농도를 발생시키는 화합물 1의 양이 이를 필요로 하는 숙주에게 제공될 수 있다.
본 발명의 조합물의 화합물은 종종 경구로 투여되지만, 비경구로, 국소로, 또는 좌제 형태로, 뿐만 아니라 비강내로, 비강 스프레이로서 또는 본원에 달리 기재된 바와 같이 투여될 수 있다. 보다 일반적으로, 이들 화합물은 1개 이상의 정제, 캡슐, 주사, 정맥내 제제, 현탁액, 액체, 에멀젼, 임플란트, 입자, 구체, 크림, 연고, 좌제, 흡입가능한 형태, 경피 형태, 협측, 설하, 국소, 겔, 점막 등으로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 조합물은 최대 24주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 12주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 10주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 8주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 6주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 4주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 4주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 6주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 8주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 10주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 12주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 24주 동안 적어도 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 최대 24주, 12주, 최대 10주, 최대 8주, 최대 6주, 또는 최대 4주 동안 적어도 격일로 투여된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 8주, 적어도 10주, 적어도 12주, 또는 적어도 24주 동안 적어도 격일로 투여된다.
본 발명의 목적상, 본 발명에 따른 조성물의 예방 또는 방지 유효량은 치료 유효량에 대해 상기 제시된 것과 동일한 농도 범위 내에 속하며, 통상적으로 치료 유효량과 동일하다.
본 발명에 따른 제약 조성물을 제조하기 위해, 치료 유효량의 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들어 화합물 1-A, 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 통상적인 제약 배합 기술에 따라 제약상 허용되는 담체와 친밀하게 혼합하여 용량을 생성할 수 있다. 담체는 투여, 예를 들어 경구 또는 비경구 투여에 바람직한 제조의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 경구 투여 형태의 제약 조성물의 제조에서, 통상의 제약 매질 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 따라서, 액체 경구 제제 예컨대 현탁액, 엘릭시르, 및 용액의 경우, 물, 글리콜, 오일, 알콜, 향미제, 보존제, 착색제 등을 포함한 적합한 담체 및 첨가제가 사용될 수 있다. 고체 경구 제제 예컨대 분말, 정제, 캡슐의 경우, 및 고체 제제 예컨대 좌제의 경우, 전분, 당 담체, 예컨대 덱스트로스, 매니폴드, 락토스, 및 관련 담체, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등을 포함한 적합한 담체 및 첨가제가 사용될 수 있다. 원하는 경우에, 정제 또는 캡슐은 표준 기술에 의해 장용-코팅 또는 지속 방출될 수 있다. 이들 투여 형태의 사용은 환자에서 화합물의 생체이용률을 유의하게 증진시킬 수 있다.
비경구 제제의 경우, 담체는 통상적으로 멸균수 또는 수성 염화나트륨 용액을 포함할 것이나, 분산을 보조하는 것을 포함한 다른 성분이 또한 포함될 수 있다. 물론, 멸균수가 사용되어야 하고 멸균으로 유지되어야 하는 경우에, 조성물 및 담체는 또한 멸균되어야 한다. 주사가능한 현탁액이 또한 제조될 수 있고, 이 경우에 적절한 액체 담체, 현탁화제 등이 사용될 수 있다.
리포솜 현탁액 (바이러스 항원에 대해 표적화된 리포솜 포함)이 또한 제약상 허용되는 담체를 생성하기 위해 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 이는 본 발명에 따른 뉴클레오시드 화합물의 유리 뉴클레오시드, 아실/알킬 뉴클레오시드 또는 포스페이트 에스테르 전구약물 형태의 전달에 적절할 수 있다.
본 발명에 따른 전형적 실시양태에서, 제약 조성물은 HCV 감염 또는 HCV의 속발성 질환 상태, 병태 또는 합병증을 치료, 예방 또는 지연시키는 데 사용된다.
고체 투여 형태
본 발명의 한 측면은 활성 화합물 (개별적 또는 조합된 것) 또는 그의 제약상 허용되는 염의 고정 투여 형태이며, 임의로 조합된 고정-투여 형태이다.
화합물 중 어느 하나 또는 둘 다는 결정질 또는 비-결정질 형태로 제공될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이들은 개별 또는 동일한 경구 투여 형태, 예를 들어 겔캡, 고체 형태, 분무-건조 분산물, 정제, 캡슐 또는 다른 환제의 형태로 제공된다.
한 실시양태에서, 고정 용량 조합물은 제약상 허용되는 염 중 적어도 하나의 화합물 또는 둘 다의 화합물, 어느 하나의 분무 건조 고체 분산물을 포함하고, 조성물은 경구 전달에 적합하다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, 고정 용량 조합물은 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 화합물은 분무 건조 고체 분산물이다.
또 다른 실시양태에서, 고정 용량 조합물은 화합물 중 적어도 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염의 과립형 층상 고체 분산물이고, 조성물은 경구 전달에 적합하다. 경구 전달을 위한 고체 투여 형태를 제조하는 예시적인 방법은 도 32에서 찾아볼 수 있다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, 고정 용량 조합물은 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 과립형 층상 고체 분산물이다. 특정 실시양태에서, 분무 건조 분산물 또는 과립형 층상 고체 분산물 성분은 결정질 화합물 1-A를 사용하여 제조된다. 대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 제약상 허용되는 염, 예를 들어, 화합물 1-A, 또는 화합물 2 또는 제약상 허용되는 화합물은 무정형 화합물로서 전달될 수 있다.
다른 실시양태에서, 고체 분산물은 또한 코포비돈, 폴록사머 및 HPMC-AS로부터 선택된 적어도 1종의 부형제를 함유한다. 한 실시양태에서, 폴록사머는 폴록사머 407, 또는 폴록사머 407을 포함할 수 있는 폴록사머의 혼합물이다. 한 실시양태에서, HPMC-AS는 HPMC-AS-L이다.
다른 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염으로부터 제조된 고정 용량 조성물은 또한 하기 부형제 중 1종 이상을 포함한다: 포스포글리세리드; 포스파티딜콜린; 디팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC); 디올레일포스파티딜 에탄올아민 (DOPE); 디올레일옥시프로필트리에틸암모늄 (DOTMA); 디올레오일포스파티딜콜린; 콜레스테롤; 콜레스테롤 에스테르; 디아실글리세롤; 디아실글리세롤숙시네이트; 디포스파티딜 글리세롤 (DPPG); 헥산데칸올; 지방 알콜 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르; 표면 활성 지방산, 예컨대 팔미트산 또는 올레산; 지방산; 지방산 모노글리세리드; 지방산 디글리세리드; 지방산 아미드; 소르비탄 트리올레에이트 (스팬(Span)®85) 글리코콜레이트; 소르비탄 모노라우레이트 (스팬®20); 폴리소르베이트 20 (트윈(Tween)®20); 폴리소르베이트 60 (트윈®60); 폴리소르베이트 65 (트윈®65); 폴리소르베이트 80 (트윈®80); 폴리소르베이트 85 (트윈®85); 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트; 서팩틴; 폴록사머; 소르비탄 지방산 에스테르 예컨대 소르비탄 트리올레에이트; 레시틴; 리소레시틴; 포스파티딜세린; 포스파티딜이노시톨; 스핑고미엘린; 포스파티딜에탄올아민 (세팔린); 카르디올리핀; 포스파티드산; 세레브로시드; 디세틸포스페이트; 디팔미토일포스파티딜글리세롤; 스테아릴아민; 도데실아민; 헥사데실-아민; 아세틸 팔미테이트; 글리세롤 리시놀레에이트; 헥사데실 스테아레이트; 이소프로필 미리스테이트; 틸록사폴; 폴리(에틸렌 글리콜)5000-포스파티딜에탄올아민; 폴리(에틸렌 글리콜)400-모노스테아레이트; 인지질; 높은 계면활성제 특성을 갖는 합성 및/또는 천연 세제; 데옥시콜레이트; 시클로덱스트린; 카오트로픽 염; 이온 쌍형성 작용제; 글루코스, 프룩토스, 갈락토스, 리보스, 락토스, 수크로스, 말토스, 트레할로스, 셀비오스, 만노스, 크실로스, 아라비노스, 글루쿠론산, 갈락토론산, 만누론산, 글루코사민, 갈락토사민 및 뉴람산; 풀루란, 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 규화 미세결정질 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC), 히드록시셀룰로스 (HC), 메틸셀룰로스 (MC), 덱스트란, 시클로덱스트란, 글리코겐, 히드록시에틸전분, 카라기난, 글리콘, 아밀로스, 키토산, N,O-카르복실메틸키토산, 알긴 및 알긴산, 전분, 키틴, 이눌린, 곤약, 글루코만난, 푸스툴란, 헤파린, 히알루론산, 커들란, 및 크산탄, 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 에리트리톨, 말티톨, 및 락티톨, 플루로닉 중합체, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트 (예를 들어, 폴리(1,3-디옥산-2온)), 폴리무수물 (예를 들어, 폴리(세바스산 무수물)), 폴리프로필푸메레이트, 폴리아미드 (예를 들어 폴리카프로락탐), 폴리아세탈, 폴리에테르, 폴리에스테르 (예를 들어, 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 폴리락티드-코-글리콜리드, 폴리카프로락톤, 폴리히드록시산 (예를 들어, 폴리((β-히드록시알카노에이트))), 폴리(오르토에스테르), 폴리시아노아크릴레이트, 폴리비닐 알콜, 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리우레아, 폴리스티렌, 및 폴리아민, 폴리리신, 폴리리신-PEG 공중합체, 및 폴리(에틸렌이민), 폴리(에틸렌 이민)-PEG 공중합체, 글리세롤 모노카프릴로카프레이트, 프로필렌 글리콜, 비타민 E TPGS (또한 d-α-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트로도 공지됨), 젤라틴, 이산화티타늄, 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC), 히드록시프로필 셀룰로스 (HPC), 메틸 셀룰로스 (MC), 에틸렌 옥시드 및 프로필렌 옥시드의 블록 공중합체 (PEO/PPO), 폴리에틸렌글리콜 (PEG), 소듐 카르복시메틸셀룰로스 (NaCMC), 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로스 아세테이트 숙시네이트 (HPMCAS).
다른 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염으로부터 제조된 고정 용량 조성물은 또한 하기 계면활성제 중 1종 이상을 포함한다: 폴리옥시에틸렌 글리콜, 폴리옥시프로필렌 글리콜, 데실 글루코시드, 라우릴 글루코시드, 옥틸 글루코시드, 폴리옥시에틸렌 글리콜 옥틸페놀, 트리톤 X-100, 글리세롤 알킬 에스테르, 글리세릴 라우레이트, 코카미드 MEA, 코카미드 DEA, 도데실디메틸아민 옥시드, 및 폴록사머. 폴록사머의 예는 폴록사머 188, 237, 338 및 407을 포함한다. 이들 폴록사머는 상표명 플루로닉(Pluronic)® (뉴저지주 마운트 올리브 소재의 바스프(BASF)로부터 입수가능함) 하에 입수가능하고, 각각 플루로닉® F-68, F-87, F-108 및 F-127에 상응한다. 폴록사머 188 (플루로닉® F-68에 상응함)은 약 7,000 내지 약 10,000 Da, 또는 약 8,000 내지 약 9,000 Da, 또는 약 8,400 Da의 평균 분자 질량을 갖는 블록 공중합체이다. 폴록사머 237 (플루로닉® F-87에 상응함)은 약 6,000 내지 약 9,000 Da, 또는 약 6,500 내지 약 8,000 Da, 또는 약 7,700 Da의 평균 분자 질량을 갖는 블록 공중합체이다. 폴록사머 338 (플루로닉® F-108에 상응함)은 약 12,000 내지 약 18,000 Da, 또는 약 13,000 내지 약 15,000 Da, 또는 약 14,600 Da의 평균 분자 질량을 갖는 블록 공중합체이다. 폴록사머 407 (플루로닉® F-127에 상응함)은 약 10,000 내지 약 15,000 Da, 또는 약 12,000 내지 약 14,000 Da, 또는 약 12,000 내지 약 13,000 Da, 또는 약 12,600 Da의 평균 분자 질량을 갖는, 약 E101 P56 E101 내지 약 E106 P70 E106, 또는 약 E101 P56E101, 또는 약 E106 P70 E106 비의 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 삼블록 공중합체이다.
또 다른 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염으로부터 제조된 고정 용량 조성물은 또한 하기 계면활성제 중 1종 이상을 포함한다: 폴리비닐 아세테이트, 콜산 나트륨 염, 디옥틸 술포숙시네이트 나트륨, 헥사데실트리메틸 브로민화암모늄, 사포닌, 당 에스테르, 트리톤 X 시리즈, 소르비탄 트리올레에이트, 소르비탄 모노-올레에이트, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트, 올레일 폴리옥시에틸렌 (2) 에테르, 스테아릴 폴리옥시에틸렌 (2) 에테르, 라우릴 폴리옥시에틸렌 (4) 에테르, 옥시에틸렌 및 옥시프로필렌의 블록 공중합체, 디에틸렌 글리콜 디올레에이트, 테트라히드로푸르푸릴 올레에이트, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 글리세릴 모노올레에이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 모노리시놀레에이트, 세틸 알콜, 스테아릴 알콜, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드, 올리브 오일, 글리세릴 모노라우레이트, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 및 해바라기씨 오일.
대안적 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염으로부터 제조된 고정 용량 조성물은 용매 또는 건식 과립화에 이어서 임의로 압축 또는 압착, 분무 건조, 나노-현탁 가공, 고온 용융 압출, 압출/구형화, 성형, 구형화, 층형성 (예를 들어, 분무 층형성 현탁액 또는 용액) 등을 포함하는 방법에 의해 제조된다. 이러한 기술의 예는 적절한 펀치 및 다이를 사용하는 직접 압축 (예를 들어, 여기서 펀치 및 다이는 적합한 정제화 프레스에 장착됨); 과립으로 건조될 습윤 입자를 형성하기 위한 적합한 과립화 장비, 예컨대 고전단 과립화기를 사용하는 습식 과립화; 과립화에 이은 적절한 펀치 및 다이를 사용하는 압축 (여기서 펀치 및 다이는 적합한 정제화 프레스에 장착됨); 목적하는 길이로 절단되거나 중력 및 마멸 하에 길이로 파단될 원통형 압출물을 형성하기 위한 습윤 덩어리의 압출; 압출물이 구형 입자로 원형화되고 구형화에 의해 치밀화되는 압출/구형화; 컨벤션 팬 또는 부르스터 칼럼과 같은 기술을 사용하는 불활성 코어 상의 현탁액 또는 용액의 분무 층형성; 압축 유닛에 장착된 적합한 금형을 사용하는 사출 또는 압축 성형 등을 포함한다.
예시적인 붕해제는 알긴산, 카르복시메틸셀룰로스 칼슘, 카르복시메틸셀룰로스 소듐, 가교된 소듐 카르복시메틸셀룰로스 (소듐 크로스카르멜로스), 분말화 셀룰로스, 키토산, 크로스카르멜로스 소듐, 크로스포비돈, 구아 검, 저 치환된 히드록시프로필 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 알긴산나트륨, 소듐 스타치 글리콜레이트, 부분적으로 예비젤라틴화 전분, 예비젤라틴화 전분, 전분, 소듐 카르복시메틸 스타치 등 또는 그의 조합을 포함한다.
예시적인 윤활제는 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 수소화 피마자 오일, 경질 미네랄 오일, 소듐 라우릴 술페이트, 마그네슘 라우릴 술페이트, 소듐 스테아릴 푸마레이트, 스테아르산, 스테아르산아연, 이산화규소, 콜로이드성 이산화규소, 실리카로 처리된 디메틸디클로로실란, 활석, 또는 그의 조합을 포함한다.
본원에 기재된 투여 형태 코어는 코팅되어 코팅된 정제를 생성할 수 있다. 투여 형태 코어는 기능성 또는 비-기능성 코팅, 또는 기능성 및 비-기능성 코팅의 조합으로 코팅될 수 있다. "기능성 코팅"은 전체 조성물의 방출 특성을 변형시키는 정제 코팅, 예를 들어 지속-방출 또는 지연-방출 코팅을 포함한다. "비-기능성 코팅"은 기능성 코팅이 아닌 코팅, 예를 들어 화장 코팅을 포함한다. 비-기능성 코팅은 코팅의 초기 용해, 수화, 천공 등으로 인해 활성제의 방출에 일부 영향을 미칠 수 있지만, 비-코팅된 조성물과 유의한 편차가 있는 것으로 간주되지는 않을 것이다. 비-기능성 코팅은 또한 활성 제약 성분을 포함하는 비코팅된 조성물의 맛을 차폐할 수 있다. 코팅은 광 차단 물질, 광 흡수 물질, 또는 광 차단 물질 및 광 흡수 물질을 포함할 수 있다.
예시적인 폴리메타크릴레이트는 아크릴산 및 메타크릴산 에스테르의 공중합체, 예컨대 a. 아미노메타크릴레이트 공중합체 USP/NF, 예컨대 폴리(부틸 메타크릴레이트, (2-디메틸 아미노에틸)메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트) 1:2:1 (예를 들어, 유드라짓(EUDRAGIT) E 100, 유드라짓 EPO 및 유드라짓 E 12.5; CAS 번호 24938-16-7); b. 폴리(메타크릴산, 에틸 아크릴레이트) 1:1 (예를 들어, 유드라짓 L30 D-55, 유드라짓 L100-55, 이스트아크릴(EASTACRYL) 30D, 콜리코트(KOLLICOAT) MAE 30D 및 30DP; CAS 번호 25212-88-8); c. 폴리(메타크릴산, 메틸 메타크릴레이트) 1:1 (예를 들어, 유드라짓 L 100, 유드라짓 L 12.5 및 12.5 P; 또한 메타크릴산 공중합체, 유형 A NF로도 공지됨; CAS 번호 25806-15-1); d. 폴리(메타크릴산, 메틸 메타크릴레이트) 1:2 (예를 들어, 유드라짓 S 100, 유드라짓 S 12.5 및 12.5P; CAS 번호 25086-15-1); e. 폴리(메틸 아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산) 7:3:1 (예를 들어, 유드라짓 FS 30 D; CAS 번호 26936-24-3); f. 폴리(에틸 아크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 트리메틸암모니오에틸 메타크릴레이트 클로라이드) 1:2:0.2 또는 1:2:0.1 (예를 들어, 유드라짓 RL 100, RL PO, RL 30 D, RL 12.5, RS 100, RS PO, RS 30 D, 또는 RS 12.5; CAS 번호 33434-24-1); g. 폴리(에틸 아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트) 2:1 (예를 들어, 유드라짓 NE 30 D, 유드라짓 NE 40D, 유드라짓 NM 30D; CAS 번호 9010-88-2) 등, 또는 그의 조합을 포함한다.
적합한 알킬셀룰로스는, 예를 들어 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스 등, 또는 그의 조합을 포함한다. 예시적인 수계 에틸셀룰로스 코팅은 펜실베니아주 필라델피아 소재의 FMC로부터 입수가능한, 소듐 라우릴 술페이트 및 세틸 알콜을 추가로 함유하는 30% 분산액인 아쿠아코트(AQUACOAT); 펜실베니아주 웨스트 포인트 소재의 컬러콘(Colorcon)으로부터 입수가능한, 안정화제 또는 다른 코팅 성분 (예를 들어, 암모늄 올레에이트, 디부틸 세바케이트, 콜로이드성 무수 실리카, 중쇄 트리글리세리드 등)을 추가로 함유하는 25% 분산액인 슈릴리즈(SURELEASE); 미시간주 미들랜드 소재의 아쿠알론(Aqualon) 또는 다우 케미칼 캄파니(Dow Chemical Co) (에토셀(Ethocel))로부터 입수가능한 에틸 셀룰로스를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 다른 알킬 셀룰로스 중합체를 비롯한 다른 셀룰로스 중합체가 에틸셀룰로스의 일부 또는 전부를 대체할 수 있음을 인지할 것이다.
기능성 코팅을 제조하는 데 사용될 수 있는 다른 적합한 물질은 히드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 숙시네이트 (HPMCAS); 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 (CAP); 폴리비닐아세테이트 프탈레이트; 중성 또는 합성 왁스, 지방 알콜 (예컨대 라우릴, 미리스틸, 스테아릴, 세틸 또는 특히 세토스테아릴 알콜), 지방산 에스테르, 지방산 글리세리드 (모노-, 디-, 및 트리-글리세리드)를 포함한 지방산, 수소화된 지방, 탄화수소, 노르말 왁스, 스테아르산, 스테아릴 알콜, 탄화수소 백본을 갖는 소수성 및 친수성 물질, 또는 그의 조합을 포함한다. 적합한 왁스는 밀랍, 글리코왁스, 피마자 왁스, 카르나우바 왁스, 미세결정질 왁스, 칸데릴라, 및 왁스-유사 물질, 예를 들어 실온에서 통상적으로 고체이고 약 30℃ 내지 약 100℃의 융점을 갖는 물질, 또는 그의 조합을 포함한다.
다른 실시양태에서, 기능성 코팅은 소화성 장쇄 (예를 들어, C8-C50, 특히 C12-C40), 치환 또는 비치환된 탄화수소, 예컨대 지방산, 지방 알콜, 지방산의 글리세릴 에스테르, 미네랄 및 식물성 오일, 왁스, 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 약 25℃ 내지 약 90℃의 융점을 갖는 탄화수소가 사용될 수 있다. 구체적으로, 장쇄 탄화수소 물질, 지방 (지방족) 알콜이 사용될 수 있다.
코팅은 추가의 제약상 허용되는 부형제, 예컨대 가소제, 안정화제, 수용성 성분 (예를 들어, 세공 형성제), 점착방지제 (예를 들어, 활석), 계면활성제 등, 또는 그의 조합을 임의로 함유할 수 있다.
기능성 코팅은 기능성 코팅의 방출 특성에 영향을 미치는 방출-조절제를 포함할 수 있다. 방출-조절제는, 예를 들어 세공-형성제 또는 매트릭스 파괴제로서 기능할 수 있다. 방출-조절제는 유기 또는 무기일 수 있고, 사용 환경에서 코팅으로부터 용해, 추출 또는 침출될 수 있는 물질을 포함한다. 방출-조절제는 셀룰로스 에테르 및 다른 셀룰로스, 예컨대 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 프탈레이트; 포비돈; 폴리비닐 알콜; 아크릴 중합체, 예컨대 위 가용성 유드라짓 FS 30D, pH 민감성 유드라짓 L30D 55, L 100, S 100, 또는 L 100-55; 또는 그의 조합을 포함한 1종 이상의 친수성 중합체를 포함할 수 있다. 다른 예시적인 방출-조절제는 포비돈; 사카라이드 (예를 들어, 락토스, 등); 금속 스테아레이트; 무기 염 (예를 들어, 이염기성 인산칼슘, 염화나트륨, 등); 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 1450, 등); 당 알콜 (예를 들어, 소르비톨, 만니톨, 등); 알칼리 알킬 술페이트 (예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트); 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 (예를 들어, 폴리소르베이트); 또는 그의 조합을 포함한다. 예시적인 매트릭스 파괴제는 수불용성 유기 또는 무기 물질을 포함한다. 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 예컨대 에틸셀룰로스, 셀룰로스 에스테르, 예컨대 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트 및 셀룰로스 아세테이트 프로피오네이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는 유기 중합체; 및 전분이 매트릭스 파괴제로서 기능할 수 있다. 무기 파괴제의 예는 많은 칼슘 염, 예컨대 모노-, 디- 및 트리 칼슘 포스페이트; 실리카 및 활석을 포함한다.
코팅은 코팅의 물리적 특성을 개선시키기 위해 가소제를 임의로 함유할 수 있다. 예를 들어, 에틸셀룰로스는 비교적 높은 유리 전이 온도를 갖고 통상의 코팅 조건 하에 가요성 필름을 형성하지 않기 때문에, 코팅 물질로서 에틸셀룰로스를 사용하기 전에 그에 가소제를 첨가하는 것이 유리할 수 있다. 일반적으로, 코팅 용액에 포함되는 가소제의 양은 중합체의 농도에 기초하며, 예를 들어 중합체에 따라 약 1% 내지 약 200%일 수 있지만, 가장 흔하게는 중합체의 약 1 중량% 내지 약 100 중량%이다. 그러나, 가소제의 농도는 상용 실험에 의해 결정될 수 있다.
에틸셀룰로스 및 다른 셀룰로스를 위한 가소제의 예는 디부틸 세바케이트, 디에틸 프탈레이트, 트리에틸 시트레이트, 트리부틸 시트레이트, 트리아세틴, 또는 그의 조합과 같은 가소제를 포함하지만, 다른 수불용성 가소제 (예컨대 아세틸화 모노글리세리드, 프탈레이트 에스테르, 피마자 오일 등)가 사용될 수 있는 것이 가능하다.
아크릴 중합체를 위한 가소제의 예는 시트르산 에스테르, 예컨대 트리에틸 시트레이트 NF, 트리부틸 시트레이트, 디부틸 프탈레이트, 1,2-프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디에틸 프탈레이트, 피마자 오일, 트리아세틴, 또는 그의 조합을 포함하지만, 다른 가소제 (예컨대 아세틸화 모노글리세리드, 프탈레이트 에스테르, 피마자 오일 등)가 사용될 수 있는 것이 가능하다.
적합한 방법을 사용하여 코팅 물질을 투여 형태 코어의 표면에 적용할 수 있다. 단순 또는 복합 코아세르베이션, 계면 중합, 액체 건조, 열 및 이온성 겔화, 분무 건조, 분무 냉각, 유동층 코팅, 팬 코팅, 또는 정전기 증착과 같은 공정이 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 임의적인 중간 코팅이 투여 형태 코어와 외부 코팅 사이에 사용된다. 이러한 중간 코팅은 외부 코팅에 사용되는 물질로부터 코어 서브유닛의 활성제 또는 다른 성분을 보호하거나 또는 다른 특성을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 중간 코팅은 전형적으로 수용성 필름 형성 중합체를 포함한다. 이러한 중간 코팅은 필름 형성 중합체 예컨대 히드록시에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 젤라틴, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 옥시드 등, 또는 그의 조합; 및 가소제를 포함할 수 있다. 가소제를 사용하여 취성을 감소시키고 인장 강도 및 탄성을 증가시킬 수 있다. 예시적인 가소제는 폴리에틸렌 글리콜 프로필렌 글리콜 및 글리세린을 포함한다.
조합 및 대체 요법
약물 저항성은 때때로 바이러스 복제에 사용되는 효소를 코딩하는 유전자의 돌연변이에 의해 발생한다. HCV 감염에 대한 조합 요법의 효능은 조합 요법에 추가의 화합물을 첨가하는 것에 의해 연장, 증대 또는 회복될 수 있다. 이러한 추가의 조합 요법은 주요 조합의 것과 상이한 돌연변이를 유도하거나 또는 상이한 경로를 통해 작용하는 또 다른, 및 아마도 심지어 2 또는 3종의 다른 항바이러스 화합물과 함께 또는 교대로 투여될 수 있다. 대안적으로, 약동학, 생체분포, 반감기, 또는 조합의 다른 파라미터는 이러한 조합 요법 (이는 협동이 고려되는 경우에 교대 요법을 포함할 수 있음)에 의해 변경될 수 있다.
본 발명은 선택된 NS5B 억제제를 NS5A 억제제와 함께 투여함으로써 HCV 또는 HCV 감염과 연관된 장애를 치료하기 위한 유리한 조합 요법을 이미 제공한다. 추가의 치료 효과는 공동-제제화되거나 또는 개별적으로 제공되는 제3, 제4 또는 심지어 제5 활성제를 첨가하는 것에 의해 달성될 수 있다.
화합물 1 및 화합물 1-A가 NS5B 폴리머라제 억제제이고 화합물 2가 NS5A 억제제이기 때문에, 화합물 1 및 화합물 2를 예를 들어 하기와 조합하여 숙주에게 투여하는 것이 유용할 수 있다.
(1) 프로테아제 억제제, 예컨대 NS3/4A 프로테아제 억제제;
(2) 또 다른 NS5A 억제제;
(3) 또 다른 NS5B 폴리머라제 억제제;
(4) NS5B 비-기질 억제제;
(5) PEG화될 수 있거나 또는 달리 변형될 수 있는 인터페론 알파-2a, 및/또는 리바비린;
(6) 비-기질-기반 억제제;
(7) 헬리카제 억제제;
(8) 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드 (S-ODN);
(9) 압타머;
(10) 뉴클레아제-저항성 리보자임;
(11) iRNA, 마이크로RNA 및 SiRNA 포함;
(12) 바이러스에 대한 항체, 부분 항체 또는 도메인 항체, 또는
(13) 숙주 항체 반응을 유도하는 바이러스 항원 또는 부분 항원.
본 발명의 조합물과 추가로 조합되어 또는 교대로 투여될 수 있는 추가의 항-HCV 작용제의 비제한적 예는 하기를 포함한다.
(i) 프로테아제 억제제 예컨대 텔라프레비르 (인시벡®), 보세프레비르 (빅트렐리스™), 시메프레비르 (올리시오™), 파리타프레비르 (ABT-450), 글레카프레비르 (ABT-493), 리토나비르 (노르비르(Norvir)), ACH-2684, AZD-7295, BMS-791325, 다노프레비르, 필리부비르, GS-9256, GS-9451, MK-5172, 세트로부비르, 소바프레비르, 테고부비르, VX-135, VX-222, ALS-220, 및 복실라프레비르.
(ii) NS5A 억제제 예컨대 ACH-2928, ACH-3102, IDX-719, 다클라타스비르, 레디파스비르, 벨파타스비르 (엡클루사(Epclusa)), 엘바스비르 (MK-8742), 그라조프레비르 (MK-5172), 및 옴비타스비르 (ABT-267);
(iii) NS5B 억제제 예컨대 AZD-7295, 클레미졸, 다사부비르 (엑스비에라(Exviera)), ITX-5061, PPI-461, PPI-688, 소포스부비르 (소발디®), MK-3682, 및 메리시타빈;
(iv) NS5B 억제제 예컨대 ABT-333, 및 MBX-700;
(v) 항체 예컨대 GS-6624;
(vi) 조합 약물 예컨대 하르보니 (레디파스비르/소포스부비르); 비에키라 팍 (옴비타스비르/파리타프레비르/리토나비르/다사부비르); 비에키락스 (옴비타스비르/파리타프레비르/리토나비르); G/P (파리타프레비르 및 글레카프레비르); 테크니비에™ (옴비타스비르/파리타프레비르/리토나비르), 엡클루사 (소포스부비르/벨파타스비르), 제파티에르 (엘바스비르 및 그라조프레비르), 마비레트 (글레카프레비르 및 피브렌타스비르), 및 보세비 (소포스부비르, 벨파타스비르, 및 복실라프레비르).
조합물이 간암 또는 간경변증으로 이어지는 진행성 C형 간염 바이러스를 치료하기 위해 투여되는 경우에, 한 실시양태에서, 화합물은 예를 들어 문헌 [Andrew Zhu in "New Agents on the Horizon in Hepatocellular Carcinoma" Therapeutic Advances in Medical Oncology, V 5(1), January 2013, 41-50]에 기재된 바와 같이 간세포성 암종 (HCC)을 치료하기 위해 전형적으로 사용되는 또 다른 약물과 조합되어 또는 그와 교대로 투여될 수 있다. 숙주가 HCC를 앓고 있거나 그의 위험이 있는 경우에 조합 요법에 적합한 화합물의 예는 항혈관신생제, 수니티닙, 브리바닙, 리니파닙, 라무시루맙, 베바시주맙, 세디라닙, 파조파닙, TSU-68, 렌바티닙, EGFR에 대한 항체, mTor 억제제, MEK 억제제, 및 히스톤 데아세틸라제 억제제, 카페시타빈, 시스플라틴, 카르보플라틴, 독소루비신, 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 이리노테칸, 옥살리플라틴, 토포테칸, 및 다른 토포이소머라제를 포함한다.
일반적 방법
1H, 19F 및 31P NMR 스펙트럼을 400 MHz 푸리에 변환 브루커 분광계 상에 기록하였다. 스펙트럼은 달리 언급되지 않는 한 DMSO-d6에서 수득하였다. 스핀 다중도는 기호 s (단일선), d (이중선), t (삼중선), m (다중선) 및 br (넓음)로 나타내어진다. 커플링 상수 (J)는 Hz로 보고된다. 반응을 일반적으로 건조 질소 분위기 하에 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) 무수 용매를 사용하여 수행하였다. 모든 통상의 화학물질은 상업적 공급원으로부터 구입하였다.
하기 약어가 실시예에 사용된다:
BID: 1일 2회
DCM: 디클로로메탄
EtOAc: 에틸 아세테이트
EtOH: 에탄올
GT: 유전자형
HPLC: 고압 액체 크로마토그래피
LD: 로딩 용량
NaOH: 수산화나트륨
Na2SO4: 황산나트륨 (무수)
MeOH: 메탄올
Na2SO4: 황산나트륨
NH4Cl: 염화암모늄
PE: 석유 에테르
실리카 겔 (230 내지 400 메쉬, 흡착제)
t-BuMgCl: t-부틸 염화마그네슘
THF: 테트라히드로푸란 (THF), 무수
TP: 트리포스페이트
실시예 1. 화합물 1 및 화합물 1-A의 합성
파트 A: (2R,3R,4R,5R)-5-(2-아미노-6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-4-플루오로-2-(히드록시메틸)-4-메틸테트라히드로푸란-3-올 (1-7)의 합성
단계 1에서, 화합물 1-1을 DCM 중에 용해시키고, 반응물을 10℃로 냉각시킨 후, 벤질 클로로포르메이트를 첨가하고, 이어서 NEt3을 첨가한다. 반응물이 실온으로 가온되도록 하고, 12-14시간 동안 교반한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-2를 단리한다. 단계 2에서, 화합물 1-2를 아세토니트릴 중에 용해시키고, -15 내지 5℃로 냉각시킨 후, 모르포 DAST를 첨가한다. 반응물이 6시간 동안 교반되도록 한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-3을 단리한다. 단계 3에서, 화합물 1-3을 톨루엔 중에 용해시키고, 반응물을 0 -10℃로 냉각시킨 후, 적색 Al를 첨가한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-4를 히드록실 위치에서 (R)-입체화학을 갖는 부분입체이성질체로서 단리한다. 단계 4에서, 화합물 1-4를 아세토니트릴에 용해시키고, -15 내지 5℃로 냉각시킨 후, CBr4 및 PPh3을 첨가한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-5를 단리한다. 단계 5에서, 화합물 1-5를 아세토니트릴 중에 용해시키고, t-BuOH, t-BuOK 및 6-클로로-9H-퓨린-2-아민을 첨가한다. 반응물을 40 - 50℃로 가열한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-6을 단리한다. 단계 6에서, 화합물 1-6을 MeOH 중에 용해시키고, MeNH2를 첨가한다. 반응물을 20 - 30℃로 가열한다. 적절한 후처리 및 정제 조건 후에, 화합물 1-7을 단리한다.
파트 B: 이소프로필 (히드록시(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 디히드로퀴닌 염 (1-12)의 합성
페닐 디클로로포스페이트 (1-8, 150 g, 1.0 eq.)를 이소프로필 아세테이트 1300 mL에 첨가하였다. 용액을 -10℃ ± 5℃로 냉각시킨 다음, 벤질 알콜 (1-9, 80.6 g, 1.05 eq.) 및 Et3N (86.3 g, 1.2 eq.)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 -10 ± 5℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응의 종점을 TLC에 의해 모니터링하였다.
L-알라닌 이소프로필 에스테르 히드로클로라이드 (1-10, 125 g, 1.05 eq.) 및 Et3N (152 g, 2.1 eq.)을 -10℃ ± 5℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -10℃ ± 5℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응의 종점을 TLC에 의해 모니터링하였다.
반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 이소프로필 아세테이트 20 mL로 세척하였다. 여과물을 1N HCl, 물, 및 수성 중탄산나트륨으로 세척하였다. 분리된 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시킨 다음, 진공 하에 40℃-50℃에서 농축 건조시켜 조 생성물 1-11 240 g을 부분입체이성질체 혼합물 (대략, 1:1)로서 수득하였다. (연황색 오일; 수율: 89.6% mol/mol; HPLC 순도: 83.4 면적%; HPLC 검정: 86.2% w/w). 생성물은 약 6%-7% 잔류 벤질 알콜을 함유하였다. 조 1-4를 직접 후속 단계에 사용하였다.
화합물 1-11 (135 g, 1.0 eq., 86.2% 검정) 및 퀴닌 (100 g, 1.0 eq.)을 i-PrOH 650 mL에 첨가하였다. 5% Pd/C (19.2g, KF에 의한 60% 물)를 첨가한 후, 닫힌 시스템 내에서 수소 백을 사용하여 20℃ -25℃에서 8시간 동안 수소화를 수행하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물을 부흐너 깔때기를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 용매를 제거하였다.
상기 잔류물에, TBME 300 mL를 첨가하였다. 혼합물을 진공 하에 40℃-45℃에서 농축시켜 용매를 제거한 다음, 이 단계를 추가의 300 mL의 MTBE로 반복하였다. 상기에 MTBE 600 mL를 첨가하고, 혼합물을 40℃-45℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 0℃-5℃에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MTBE 100 mL로 세척하였다. 케이크를 45℃에서 16시간 동안 진공 없이 건조시켜 이소프로필 (히드록시(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 디히드로퀴닌 염 (1-12, 백색 고체; 수율: 69.5% mol/mol; HPLC 순도: 97.91%) 152 g을 수득하였다.
파트 C: 화합물 1의 합성
이소프로필 (히드록시(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 디히드로퀴닌 염 (1-12, 5.9 g, 1.5 eq.), 화합물 1-7 (2.0 g, 1.0 eq.), DIPEA (0.83 g, 1.0 eq.), 및 HATU (3.65 g, 1.5 eq.)를 디클로로메탄 100 mL에 첨가하였다. 혼합물을 40℃로 가열하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC 및 HPLC에 의해 모니터링하였다.
반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1N 염산 (100 mL x 2), 물 (100 mL x 2), 및 5% 수성 중탄산나트륨 (15 mL x 1)으로 세척하였다. 분리된 유기 상을 무수 황산나트륨 2 g으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 40℃-45℃에서 농축시켜 황색 오일을 수득하였다.
이소프로필 아세테이트 (10 mL)를 첨가하였다. 교반한 후, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 이어서, 이소프로필 아세테이트 25 mL를 첨가하였다. 혼합물을 45℃로 가열하여 투명한 용액을 수득하였다.
실온에서 2시간 동안 교반한 후, 고체 침전물을 여과하고, 진공 없이 45℃에서 15시간 동안 건조시켜 조 화합물 1 2.0 g (수율: 53.8% mol/mol; HPLC 순도: 93.1 면적% (반대 Rp-배위를 갖는 화합물 3.7% 함유)을 수득하였다.
조 화합물 1 (2.0 g) 및 이소프로필 아세테이트 15 mL의 혼합물을 80℃-85℃로 가열하여 용액을 수득하였다. 용액을 20℃-25℃로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과하고, 이소프로필 아세테이트 (1 mL)로 세척하고, 진공 없이 50℃에서 16시간 동안 건조시켜 화합물 1 1.7 g (수율: 45.7% mol/mol; HPLC 순도: 98.99%)을 수득하였다. 1H NMR, 19F NMR, 및 31P NMR 스펙트럼으로 화합물 1의 구조를 확인하였다.
실시예 2. 무정형 및 결정질 화합물 1의 특징화
무정형 화합물 1 및 결정질 화합물 1을 처음에 XRPD, 1H NMR, 및 HPLC에 의해 분석하였다. 둘 다의 화합물에 대한 XRPD 패턴을 도 1a에 제시하고, 순도를 결정하기 위한 HPLC 트레이스를 각각 도 1b 및 2a에 제시한다. 표 1은 결정질 화합물 1의 XRPD로부터의 피크의 목록이고, 표 2는 HPLC 트레이스로부터의 상대 체류 시간 (RTT)의 목록이다. 무정형 화합물 1은 98.61% 순수하였고, 결정질 화합물 1은 99.11% 순수하였다. 둘 다의 화합물은 백색 고체였다. 도 2b는 결정질 화합물 1의 TGA 및 DSC 그래프이다. 결정질 화합물 1의 경우에, 흡열은 88.6℃에서 관찰되었고, 80 - 110℃에서 7.8% 질량 손실이 존재하였다.
화합물 1의 샘플을 EtOAc/헥산으로부터 재결정화하고, ORTEP로 도시하였다. 화합물 1의 절대 구조를 단결정의 재결정화에 의해 확인하였다. 도 3은 화합물 1의 ORTEP 도면이다. 결정 데이터 및 측정 데이터를 표 3에 제시한다. X선 결정학에 기초한 화합물 1의 절대 입체화학을 하기 제시한다:
.
DSC 데이터를 50 위치 오토-샘플러가 장착된 TA 기기 Q2000 상에서 수집하였다. 열 용량에 대한 보정은 사파이어를 사용하여 수행하였고, 에너지 및 온도에 대한 보정은 공인된 인듐을 사용하여 수행하였다. 핀-홀 알루미늄 팬 내에서 전형적으로 대략 3 mg의 각 샘플을 25℃에서 200℃까지 10℃/분으로 가열하였다. 샘플에 대해 50 ml/분의 건조 질소 퍼징을 유지시켰다. 기기 제어 소프트웨어는 어드밴티지 포 큐 시리즈(Advantage for Q Series) v2.8.0.394 및 써멀 어드밴티지(Thermal Advantage) v5.5.3이었고, 데이터는 유니버셜 어낼러시스(Universal Analysis) v4.5A를 사용하여 분석하였다.
TGA 데이터는 16 위치 오토-샘플러가 장착된 TA 기기 Q500 TGA 상에서 수집하였다. 기기는 공인된 알루멜 및 니켈을 사용하여 온도 보정되었다. 전형적으로 각각의 샘플의 5 - 10 mg을 사전-칭량한 알루미늄 DSC 팬에 로딩하고, 주위 온도에서 350℃까지 10℃/분으로 가열하였다. 샘플에 대해 60 ml/분의 질소 퍼징을 유지시켰다. 기기 제어 소프트웨어는 어드밴티지 포 큐 시리즈 v2.5.0.256 및 써멀 어드밴티지 v5.5.3이었고, 데이터는 유니버셜 어낼러시스 v4.5를 사용하여 분석하였다.
무정형 화합물 1 (1-1):
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.01 - 1.15 (m, 9 H), 1.21 (d, J=7.20 Hz, 3 H), 2.75　3.08 (m, 3 H), 3.71 - 3.87 (m, 1 H), 4.02 - 4.13 (m, 1 H), 4.22 - 4.53 (m, 3 H), 4.81 (s, 1 H), 5.69 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H)
결정질 화합물 1 (1-2):
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.16 (m, 16 H), 1.21 (d, J=7.07 Hz, 3 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.08 (s, 2 H), 3.79 (br d, J=7.07 Hz, 1 H), 4.08 (br d, J=7.58 Hz, 1 H), 4.17 - 4.55 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.78 (br s, 1 H), 5.91 - 6.15 (m, 4 H), 7.10 - 7.26 (m, 3 H), 7.26 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H)
표 1. 결정질 화합물 1에 대한 피크 목록
표 2. 무정형 화합물 1 및 결정질 화합물 1의 HPLC 크로마토그래프로부터의 상대 체류 시간
표 3. 화합물 1의 결정 및 데이터 측정
이러한 초기 특징화에 이어 25℃ / 60% 상대 습도 (RH)에서 14일 동안 저장하였고, 7 및 14일 후에 HPLC 및 XRPD에 의해 분석하였다. 도 4a는 25℃ / 60% (RH)에서의 14일 후 XRPD이다. 무정형 화합물 1 (샘플 1-1)은 저 결정질인 상태로 남은 반면에, 결정질 화합물 1 (샘플 1-2)은 그의 결정화도를 유지하였지만, 둘 다의 화합물은 25℃ / 60% (RH)에서의 14일 후에 안정하였다.
실시예 3. 옥살레이트 염 화합물 1-B의 형성
먼저, 옥살산 염을 용매 (5 vol, 100 μL)와 혼합하고, 임의의 용액이 실온에서 증발되게 함으로써 화합물 1의 옥살레이트 염, 화합물 1-B를 형성하였다. 임의의 현탁액을 3시간 동안 숙성시켰고 (실온 - 50℃), 결정화도에 접근하였다.
표 4는 화합물 1-B의 제조에 사용된 상이한 용매를 보여준다. 2종 (시클로헥산 및 n-헵탄)을 제외한 모든 용매는 결정질 생성물을 제공하였다. 화합물 1-B의 높은 결정화도 및 용해도에도 불구하고, 옥살레이트 염은 신장 결석의 잠재적 형성으로 인해 임상 개발용으로 허용되지 않았고, 화합물 1의 다른 염을 연구하였다.
표 4. 옥살레이트 화합물 1-B의 형성
실시예 4. 무정형 화합물 1의 염 화합물
옥살레이트 염 화합물 1-B (실시예 3)는 신장 결석을 형성하는 그의 잠재력으로 인해 임상 시험에서 추진될 수 없기 때문에, 표 5에 열거된 반대 이온을 사용하여 화합물 1의 무정형 염을 형성하였다. 화합물 1을 t-부탄올 (20 vol, 6 ml) 중에 용해시키고, 용액을 산 반대-이온으로 처리하였다 (0.5 당량의 술페이트를 갖는 샘플 1-9를 제외하고, 각각의 샘플의 경우 1 당량). 이어서 샘플을 동결시켰고, 용매를 동결건조에 의해 제거하였다. 샘플 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 및 1-9 중의 잔류 고체를 초기에 XRPD 및 HPLC에 의해 분석하였다.
표 5. 무정형 염 형성 세부사항
모든 샘플에 대해 1H NMR 스펙트럼을 취하였다.
샘플 1-4, HCl (1:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.93 - 1.39 (m, 16 H), 2.97 (br s, 2 H), 3.70 - 3.88 (m, 1 H), 4.10 (br s, 1 H), 4.18 - 4.49 (m, 3 H), 4.70 - 4.88 (m, 1 H), 5.71 - 5.94 (m, 1 H), 6.07 (br d, J=19.07 Hz, 2 H), 7.14 - 7.27 (m, 3 H), 7.29 - 7.44 (m, 2 H), 7.83 - 8.19 (m, 1 H)
샘플 1-5, 황산 (1:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.38 (m, 15 H), 2.96 (br s, 2 H), 4.06 - 4.18 (m, 1 H), 4.19 - 4.49 (m, 3 H), 4.66 - 4.91 (m, 1 H), 5.70 - 5.95 (m, 1 H), 5.96 - 6.16 (m, 2 H), 7.10 - 7.27 (m, 3 H), 7.30 - 7.43 (m, 2 H), 7.88 - 8.19 (m, 1 H)
샘플 1-6, 푸마르산 (1:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.95 - 1.31 (m, 21 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.20 Hz, 1 H), 4.01 - 4.13 (m, 1 H), 4.16 - 4.23 (m, 1 H), 4.16 - 4.24 (m, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.18 - 4.23 (m, 1 H), 4.24 - 4.52 (m, 1 H), 4.24 - 4.52 (m, 1 H), 4.24 - 4.49 (m, 1 H), 4.72 - 4.88 (m, 1 H), 5.68 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 6.63 (s, 1 H), 6.61 - 6.66 (m, 1 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.45 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H), 13.16 (br s, 2 H)
샘플 1-7, 벤조산 (1:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.96 - 1.30 (m, 15 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.07 Hz, 1 H), 4.07 (br s, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.25 - 4.52 (m, 3 H), 4.81 (s, 1 H), 5.71 - 5.85 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.08 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.43 (m, 3 H), 7.45 - 7.57 (m, 2 H), 7.63 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.95 (dd, J=8.27, 1.33 Hz, 2 H), 12.98 (br s, 1 H)
샘플 1-8, 숙신산 (1:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 - 1.28 (m, 15 H), 2.42 (s, 5 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.57 - 3.62 (m, 1 H), 3.70 - 3.86 (m, 1 H), 4.02 - 4.14 (m, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.24 - 4.51 (m, 3 H), 4.70 - 4.88 (m, 1 H), 5.69 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H), 11.95 - 12.58 (m, 2 H)
샘플 1-9, 황산 (0.5:1) 염:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.02 - 1.31 (m, 15 H), 2.94 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.20 Hz, 2 H), 4.09 (br s, 1 H), 4.22 - 4.48 (m, 3 H), 4.72 - 4.90 (m, 1 H), 5.71 - 5.92 (m, 1 H), 6.07 (br d, J=19.07 Hz, 2 H), 7.12 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.44 (m, 2 H), 7.75 - 8.19 (m, 1 H).
이어서 샘플을 25℃ / 60% 상대 습도 (RH)에서의 14일 동안의 저장에 적용하였고, 7일 후 (도 4b) 및 14일 후 (도 5a)에 HPLC 및 XRPD에 의해 분석하였다. 모든 제조된 염은 무정형인 상태로 남았고, 관찰내용을 표 6에 제시한다. 모노 술페이트 (샘플 1-5) 및 숙시네이트 염 (샘플 1-8)은 연구 과정 동안 물리적으로 불안정하고 조해되거나, 또는 검이 되는 것으로 확인되었다. 푸마레이트 (샘플 1-6) 및 벤조에이트 염 (샘플 1-7)은 둘 다 유리질 고체인 것으로 확인되었다. HCl 염 (샘플 1-4)은 그의 물리적 외관을 유지하는 것으로 확인되었다. 놀랍게도, 헤미-술페이트 염 (샘플 1-9)은 또한, 점착성 검인 모노-술페이트 화합물 (샘플 1-5)과 대조적으로, 그의 물리적 외관을 백색 고체로서 유지하였다. 결과를 표 6에 제시한다. 모노 HCl 염 (샘플 1-4) 및 헤미-술페이트 염 (샘플 1-9)은 25℃ / 60% 상대 습도 (RH)에서의 2주 저장 후, 물리적으로 및 화학적으로 안정한 것으로 확인되었다. 둘 다의 염은 2주 넘게 안정하였지만, HCl 염은 흡습성이어서, 장기간 저장 또는 사용에 대해 헤미-술페이트 염과 비교하여 덜 유용하기 때문에 헤미-술페이트 염이 HCl 염보다 뛰어나다.
표 6. 25℃ / 60% RH에서의 7일 및 14일 후 샘플의 안정성
실시예 5. 무정형 화합물 1-A의 특징화
무정형 화합물 1-A를 처음에 XRPD, 1H NMR, DSC, TGA 및 HPLC에 의해 분석하였다. 무정형 화합물 1-A에 대한 XRPD 패턴을 무정형 화합물 1 및 결정질 화합물 1과 오버레이한 것을 도 1a에 제시하고, 무정형 화합물 1-A 단독의 XRPD 패턴을 도 5b에 제시한다. 표 7은 도 5b에 제시된 XRPD 패턴으로부터의 피크 목록이다. 순도를 결정하기 위한 HPLC 트레이스는 도 6a에 제시한다. 표 8은 도 6a에 제시된 HPLC 트레이스로부터의 상대 체류 시간 (RTT)의 목록이다. 무정형 화합물 1-A는 99.68% 순수하였다. 도 6b는 무정형 화합물 1-A의 TGA 및 DSC 그래프이다. TGA 및 DSC 실험에 대한 실험 세부사항은 실시예 2에 제공된다.
표 7. 무정형 화합물 1-A에 대한 피크 목록
표 8. 무정형 화합물 1-A의 HPLC 크로마토그램
무정형 화합물 1-A:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.93 - 1.29 (m, 13 H), 2.94 (br s, 3 H), 3.79 (td, J=10.04, 7.07 Hz, 2 H), 4.05 - 4.19 (m, 1 H), 4.19 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.71 - 5.94 (m, 1 H), 5.97 - 6.16 (m, 2 H), 7.14 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.44 (m, 2 H), 7.82 - 8.09 (m, 1 H)
실시예 6. 무정형 화합물 1-A의 결정화
헤미-술페이트 염이 표 6에 제시된 바와 같이 14-일 안정성 연구 후에 고체로 유지되는 것으로 확인되었기 때문에, 11종의 상이한 용매를 사용하여 결정화 조건을 연구하는 예비 시험을 수행하였다. 무정형 화합물 1-A를 5 부피의 용매 중에 25℃에서 현탁시켰다 (샘플 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10, 및 2-11). 자유 유동하지 않는 그러한 샘플 (2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 및 2-10)에, 추가의 5 부피의 용매를 첨가하였다. 이어서, 1일 후에 투명한 용액인 것으로 관찰되어 주위 조건 하에 증발되도록 한 샘플 2-1을 제외하고, 샘플을 25 - 50℃ (온도 사이에서 1℃/분 및 각각의 온도에서 4시간)에서 6일 동안 숙성시켰다. 결과를 표 9에 제시한다. 결정질 패턴은 이소부탄올 (샘플 2-1), 아세톤 (샘플 2-2), EtOAc (샘플 2-6), 및 iPrOAc (샘플 2-7)에 의한 결정화로부터 생성되었다. MEK (샘플 2-4) 및 MIBK (샘플 2-5)에 의한 결정화로부터 2종의 저 결정질 샘플이 또한 확인되었다. XRPD 패턴을 도 7a에 제시한다.
표 9. 화합물 1-A의 결정화 조건
25℃ / 60% 상대 습도 (RH)에서의 6일 저장 후 7종의 샘플 (샘플 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7 및 2-8)을 DSC, TGA, 1H NMR 및 IC에 의해 (표 10, 도 8a, 도 8b, 도 9a, 도 9b, 도 10a, 도 10b, 도 11a, 및 도 11b) 뿐만 아니라 XRPD에 의해 분석하였다 (모든 샘플은 안정성에 따라 결정질 / 저 결정질로 유지됨). 모든 샘플은 대략 절반의 술페이트의 당량을 보유하였지만, 상대적으로 많은 양의 잔류 용매를 함유하였다. 무정형 샘플 2-9, 2-10, 및 2-11의 X선 회절도의 오버레이를 도 7b에 제시한다.
표 10. 결정질 화합물 1-A 샘플의 특징화
모든 샘플에 대해 1H NMR 스펙트럼을 취하여 하기에 열거하였다.
샘플 2-2:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.83 (d, J=6.69 Hz, 7 H), 0.99 - 1.26 (m, 14 H), 1.61 (dt, J=13.26, 6.63 Hz, 1 H), 3.73 - 3.87 (m, 2 H), 4.03 - 4.18 (m, 1 H), 4.18 - 4.51 (m, 4 H), 4.66 - 4.92 (m, 1 H), 4.70 - 4.90 (m, 1 H), 4.72 - 4.88 (m, 1 H), 5.81 (br s, 1 H), 5.93 - 6.11 (m, 2 H), 7.10 - 7.26 (m, 3 H), 7.14 - 7.26 (m, 1 H), 7.30 - 7.41 (m, 2 H), 7.94 (br s, 1 H)
샘플 2-3:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.00 - 1.26 (m, 13 H), 2.09 (s, 3 H), 3.74 - 3.87 (m, 2 H), 4.10 (br d, J=7.70 Hz, 1 H), 4.22 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.28 Hz, 1 H), 5.71 - 5.90 (m, 1 H), 5.96 - 6.15 (m, 2 H), 7.12 - 7.26 (m, 3 H), 7.31 - 7.41 (m, 2 H), 7.79 - 8.07 (m, 1 H)
샘플 2-4:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.91 (t, J=7.33 Hz, 3 H), 1.01 - 1.28 (m, 13 H), 2.08 (s, 2 H), 3.72 - 3.89 (m, 2 H), 4.10 (br d, J=8.08 Hz, 1 H), 4.23 - 4.47 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.69 - 5.89 (m, 1 H), 5.94 - 6.13 (m, 2 H), 7.14 - 7.25 (m, 3 H), 7.32 - 7.41 (m, 2 H), 7.79 - 8.11 (m, 1 H)
샘플 2-5:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.86 (d, J=6.69 Hz, 1 H), 0.98 - 1.33 (m, 13 H), 2.02 - 2.09 (m, 1 H), 4.03 - 4.17 (m, 1 H), 4.22 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.81 (br s, 1 H), 5.93 - 6.15 (m, 2 H), 7.11 - 7.27 (m, 3 H), 7.31 - 7.41 (m, 2 H), 7.77 - 8.21 (m, 1 H)
샘플 2-6:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 - 1.28 (m, 15 H), 2.00 (s, 3 H), 3.99 - 4.14 (m, 3 H), 4.21 - 4.49 (m, 3 H), 4.81 (quin, J=6.22 Hz, 1 H), 5.82 (br s, 1 H), 5.93 - 6.14 (m, 2 H), 7.11 - 7.26 (m, 3 H), 7.29 - 7.42 (m, 2 H), 7.79 - 8.17 (m, 1 H)
샘플 2-7:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.92 - 1.28 (m, 17 H), 1.97 (s, 2 H), 4.04 - 4.16 (m, 1 H), 4.20 - 4.51 (m, 3 H), 4.71 - 4.93 (m, 2 H), 5.82 (br s, 1 H), 5.95 - 6.14 (m, 2 H), 7.11 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.43 (m, 2 H), 7.75 - 8.21 (m, 1 H)
샘플 2-8:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.81 - 1.11 (m, 13 H), 1.19 (s, 1 H), 1.53 - 1.66 (m, 1 H), 3.87 - 4.01 (m, 1 H), 4.06 - 4.32 (m, 3 H), 4.64 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.55 - 5.75 (m, 1 H), 5.77 - 5.97 (m, 2 H), 6.94 - 7.10 (m, 3 H), 7.13 - 7.26 (m, 2 H), 7.66 - 7.96 (m, 1 H)
실시예 7. 무정형 말로네이트 염 (화합물 1-B)의 결정화 실패
실시예 3에 제시된 바와 같이, 화합물 1에 대한 적절한 염을 결정할 때 결정질 옥살레이트 염이 확인되었지만, 옥살레이트 염 화합물 1-B는 신장 결석을 유발하는 그의 잠재력으로 인해 임상 시험에서 추진될 수 없었다. 따라서, 헤미-술페이트 염의 경우에서와 동일한 11종의 용매를 사용하여 화학적으로 관련된 말로네이트 염 (화합물 1-E)의 결정화를 시도하였다. 화합물 1 (12 x 50 mg, 샘플 3-1, 3-2, 3-3, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10, 3-11, 및 3-12)을 t-부탄올 (20 vol) 중에 용해시키고, 이어서 용액을 1 당량의 말론산 원액 (THF 중 1 M)으로 처리하였다. 이어서 샘플을 동결시켰고, 용매를 동결건조에 의해 제거하였다. 샘플 3-1, 3-2, 3-3, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10, 및 3-11에, 관련 용매 (5 부피)를 실온에서 첨가하였다. 임의의 생성된 용액이 주위 조건 하에 증발되게 하는 한편, 검 또는 고체를 25 - 50℃ (온도 사이에서 1℃/분 및 각각의 온도에서 4시간)에서 5일 동안 숙성시켰다. 고체를 XRPD에 의해 분석하였지만 (도 12b), 모든 샘플은 검을 형성하거나, 또는 무정형인 것으로 확인되었다 (도 12b). 결과를 표 11에 제시한다. 1개의 고체 (무정형) 샘플 (3-12)을 1H NMR 및 HPLC에 의해 분석하였고, 약 1 당량의 말론산 (피크 중첩) 뿐만 아니라 0.6 eq. t-BuOH를 함유하는 것으로 확인되었다. 화합물은 99.2% 순수하였다 (도 13a). 도 12a는 샘플 3-12의 XRDP이고, 도 13a는 샘플 3-12의 HPLC 크로마토그래프이다.
샘플 3-12:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.81 - 1.11 (m, 13 H), 1.19 (s, 1 H), 1.53 - 1.66 (m, 1 H), 3.87 - 4.01 (m, 1 H), 4.06 - 4.32 (m, 3 H), 4.64 (quin, J=6.25 Hz, 1 H), 5.55 - 5.75 (m, 1 H), 5.77 - 5.97 (m, 2 H), 6.94 - 7.10 (m, 3 H), 7.13 - 7.26 (m, 2 H), 7.66 - 7.96 (m, 1 H)
표 11. 무정형 말로네이트 염 화합물 1-E의 결정화 조건
*실온에서 증발됨
실시예 8. 액체 보조 분쇄 (LAG)를 사용한 알맞은 염 형성의 실패
표 12의 14종의 산성 반대 이온을 사용하여 헤미-술페이트 외의 적절한 염을 결정하기 위한 액체 보조 분쇄 (LAG) 연구를 수행하였다.
표 12. LAG 결정화에 사용된 반대-이온 원액
화합물 1 (30 mg)을, 2개의 3 mm 볼 베어링을 갖는 HPLC 바이알에 넣었다. 물질을 용매 (15 μl 에탄올, 샘플 4-1, 4-2, 4-3, 4-4, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10, 4-11, 4-12, 4-13, 및 4-14)로 습윤시키고, 1 당량의 산 반대-이온을 첨가하였다. 이어서 샘플을 오토맥시온(Automaxion) 어댑터가 달린 프리치 밀링 시스템을 사용하여 650 rpm에서 2시간 동안 분쇄하였다. 분쇄 후 샘플의 대부분은 투명한 검인 것으로 확인되었고, 추가로 분석하지 않았다 (표 13). 고체를 함유하는 것으로 관찰된 것을 XRPD에 의해 분석하고, 모든 경우에서, 수득된 패턴은 추가의 피크가 없는 결정질 산 반대 이온의 것과 매칭되는 것으로 확인되었다 (도 13b).
표 13. 화합물 1의 LAG으로부터의 관찰 및 XRPD 결과
실시예 9. 메틸 에틸 케톤 (MEK)을 사용한 알맞은 염 형성 수득의 실패
다음으로 용매로서 메틸 에틸 케톤 (MEK)을 사용하여 헤미-술페이트 염 외의 적절한 염을 연구하였다. 표 12의 14종의 산성 반대 이온을 사용하여, 화합물 1 (50 mg)을 MEK (20 vol) 중에 실온에서 용해시킴으로써 연구를 수행하였다. 용액을 1 당량의 선택된 반대-이온으로 처리하였다 (표 12). 이어서 샘플을 0.1℃/분으로 5℃로 냉각시키고, 이 온도에서 밤새 교반하였다. 모든 샘플이 주위 조건 하에 증발되도록 하고, 관찰되는 임의의 고체를 XRPD에 의해 분석하였다. 이러한 증발은 주로 검을 생성하였고, 스테아르산 (샘플 4-12) 및 팔미트산 (샘플 5-13)에 의한 샘플이 그 예외로, 이는 유리질 용매를 제공하였다. 이들 고체는 XRPD에 의하면 무정형이었지만, 염의 결정질 형태는 수득되지 않았다. 결과를 표 14에 제시한다.
표 14. MEK (20 부피) 중 화합물 1의 용해로부터의 결과
원액은 산 첨가 전에 제조함
*샘플을 XRPD에 의해 분석하였고, 무정형 패턴 플러스 산 반대 이온으로부터의 피크가 주어짐
모든 샘플이 무정형이었기 때문에, 모든 샘플을 MEK (5 vol) 중에 재용해시키고, 시클로헥산을 실온에서 첨가한 다음 (20 vol 역용매), 25℃에서 1시간 교반하였다. 이어서 샘플을 50 - 5℃ (온도 사이에서 1℃/분, 각각의 온도에서 4시간)에서 2일 동안 숙성시킨 후 사이클을 추가의 4일 동안 50 - 25℃로 변화시켰다. 숙성 후 샘플을 육안으로 관찰하였다. 결과를 표 15에 제시한다. 숙성 후, 5-1 (파모산에 의함)을 제외한 모든 샘플은 검인 것으로 확인되었다. 황색 고체인 샘플 5-1을 XRPD에 의해 분석하였고, 패턴은 파모산의 공지된 형태와 매칭되는 것으로 확인되었고 (도 14b), 따라서 염의 어떠한 결정질 형태도 수득되지 않았다.
표 15. MEK (5 부피) 및 역용매 중 화합물 1의 용해로부터의 결과
**샘플을 XRPD에 의해 분석하였고, 패턴은 파모산의 공지된 형태와 매칭됨 (추가의 피크 없음)
실시예 10. 에틸 아세테이트를 사용한 알맞은 염 형성 수득의 실패
다음으로 에틸 아세테이트를 사용하여 헤미-술페이트 염 외의 적절한 염을 연구하였다. 표 12의 14종의 산성 반대 이온을 사용하여, 화합물 1 (50 mg)을 에틸 아세테이트 (20 vol) 중에 50℃에서 용해시켜 연구를 수행하였다. 용액을 선택된 반대-이온 1 당량으로 처리하였다 (표 12). 이어서 샘플을 0.1℃/분으로 5℃로 냉각시키고, 이 온도에서 4일 동안 교반하였다. 용액을 주위 조건 하에 증발되게 하는 한편 임의의 고체를 XRPD에 의해 분석하였다. 에틸 아세테이트를 사용한 결정화로부터의 결과를 표 16에 제시한다. MEK가 용매였던 실시예 8과 대조적으로, 대부분의 샘플은 산:화합물 혼합물의 냉각 후 현탁액인 것으로 관찰되었다 (용액인 것은 주위 조건 하에 증발되게 함). 그러나, XRPD 회절도는 일반적으로 결정질 화합물 1에 매칭되는 것으로 확인되었다. 샘플 6-2, 6-4, 및 6-5는 일부 약간의 차이를 갖는다 (도 14a 및 도 15a). 염의 결정질 형태는 수득되지 않았다.
표 16. EtOAc (20 부피) 중 화합물 1 용해로부터의 결과
실시예 11. HPLC에 의한 화학적 순도 결정
실시예 2 및 실시예 4의 순도 분석을 표 17에 제시된 방법을 사용하여, 다이오드 어레이 검출기가 장착된 애질런트 HP1100 시리즈 시스템 상에서 켐스테이션 소프트웨어 vB.04.03을 사용하여 수행하였다.
표 17. 화학적 순도 결정을 위한 HPLC 방법
실시예 12. X선 분말 회절 (XRPD) 기술
실시예 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 및 9의 XRPD 패턴을 Cu Kα 방사선 (45 kV, 40 mA)을 사용하여 패널리티컬 엠피리언(PANalytical Empyrean) 회절계 상에 투과 기하구조로 수집하였다. 포커싱 거울과 함께 0.5° 슬릿, 4 mm 마스크 및 0.4 라드 솔러(Soller) 슬릿이 입사 빔 상에서 사용되었다. 회절된 빔 상에 위치시킨 PIXcel3D 검출기에 수광 슬릿 및 0.04 라드 솔러 슬릿을 피팅하였다. 기기는 매주 기준으로 규소 분말을 사용하여 성능 체크하였다. 데이터 수집을 위해 사용된 소프트웨어는 엑스퍼트 데이터 콜렉터 (X'Pert Data Collector) v. 5.3이고, 데이터는 디프락 플러스 에바(Diffrac Plus EVA) v. 15.0.0.0 또는 하이스코어 플러스(Highscore Plus) v. 4.5를 사용하여 분석하고 제공하였다. 샘플은 금속 또는 밀리포어(Millipore) 96 웰-플레이트에서 투과 모드로 제조하고 분석하였다. 금속 웰-플레이트 상의 금속 시트 사이에 X선 투명 필름을 사용하였고, 분말 (대략 1-2 mg)을 제공받은 대로 사용하였다. 밀리포어 플레이트는 여과 전 가벼운 진공 하에 소량의 현탁액을 플레이트에 직접 첨가함으로써 현탁액으로부터 고체를 단리하고 분석하기 위해 사용되었다.
금속 플레이트를 위한 스캔 모드는 측각 스캔 축을 사용한 반면에, 밀리포어 플레이트를 위해서는 2θ 스캔을 활용하였다. 성능 체크는 규소 분말 (금속 웰-플레이트)을 사용하여 수행하였다. 데이터 수집의 세부사항은, 각도 범위 2.5 내지 32.0° 2θ, 스텝 크기 0.0130° 2θ, 및 총 수집 시간 2.07분이었다.
샘플을 또한 Cu Kα 방사선 (40 kV, 40 mA), θ - 2θ 측각기, 및 V4의 발산을 사용한 브루커 D8회절계, 및 수광 슬릿, Ge 단색기 및 링스아이(Lynxeye) 검출기 상에서 수집하였다. 공인된 강옥 표준물 (NIST 1976)을 사용하여 기기를 성능 체크하였다. 데이터 수집을 위해 사용된 소프트웨어는 디프락플러스 XRD 커맨더 v2.6.1이고, 데이터는 디프락 플러스 에바 v15.0.0.0을 사용하여 분석하고 제공하였다.
샘플을 제공받은 대로의 분말을 사용하여 편평한 플레이트 시편으로서 주위 조건 하에 구동하였다. 샘플을 연마된, 제로-배경 (510) 실리콘 웨이퍼 내의 절단된 공간 내로 조심스럽게 패킹하였다. 샘플을 분석 동안 그 자체의 평면에서 회전시켰다. 데이터 수집의 세부사항은, 각도 범위 2 내지 42° 2θ, 스텝 크기 0.05° 2θ, 및 수집 시간 0.5 s/스텝이었다.
실시예 13. 무정형 화합물 1-A의 합성
250 mL 플라스크에 MeOH (151 mL)를 채우고, 용액을 0-5℃로 냉각시켰다. H2SO4의 진한 용액을 10분에 걸쳐 적가하였다. 분리형 플라스크에 화합물 1 (151 g) 및 아세톤 (910 mL)을 채우고, H2SO4/MeOH 용액을 25-30℃에서 2.5시간에 걸쳐 적가하였다. 다량의 고체가 침전되었다. 용액을 25-30℃에서 12-15시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, MeOH/아세톤 (25 mL/150 mL)으로 세척하고, 진공 하에 55-60℃에서 건조시켜 화합물 1-A (121 g, 74%)를 수득하였다.
1H NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (br, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H ), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.73 (s, 2H), 6.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.00 (dd, J = 12.0, 8.0 Hz, 1H), 5.81(br, 1H), 4.84-4.73 (m, 1H), 4.44-4.28 (m, 3H), 4.10 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.85-3.74 (m, 1H), 2.95 (s, 3H), 1.21 (s, J = 4.0 Hz, 3H), 1.15-1.10 (m, 9H).
화합물 1-A에 대한 분석 방법: 워터스 엑스테라 페닐 5μm 4.6*250mm 칼럼이 장착된 애질런트 1100 HPLC 시스템을 사용하여 하기 조건으로 화합물 1-A의 순도를 수득하였다: 1 mL/분 유량, 254 nm에서 판독, 30℃ 칼럼 온도, 10 μL 주입 부피, 및 30분 실행 시간. 샘플을 ACN:물 (90:10, v/v) 중에 용해시켰다. 분리를 위한 구배 방법을 하기에 제시한다. 화합물 1-A의 Rt (분)는 대략 12.0분이었다.
실시예 14. 화합물 1-A의 특징화
화합물 1-A를 육안, 1H NMR, 13C NMR, 19F NMR, MS, HPLC, 및 XRPD에 의해 추가로 특징화하였다 (도 15b). GC에 의해 잔류 용매가 측정되었다. 물 함량은 칼 피셔 적정에 의해 측정하였고, 물 함량은 단지 0.70%였다. 데이터를 표 18에 요약한다.
표 18. 화합물 1-A의 추가의 특징화 데이터의 요약
실시예 15. 화합물 1 및 화합물 1-A의 용해도
화합물 1 및 화합물 1-A를 둘 다, 인공 위액 (SGF), 공복 상태의 인공 위액 (FaSSIF), 및 섭식 상태의 인공 위액 (FeSSIF)을 포함하는 생체관련 시험 매질에서 용해도에 대해 시험하였다. 화합물 1에 대한 결과를 표 19에 제시하고, 화합물 1-A에 대한 결과를 표 20에 제시한다. 샘플을 실온 (20 - 25℃)에서 교반하였다. 화합물 1-A는 물에서 2시간째에 화합물 1보다 40-배를 초과하여 더 가용성이었고, 24시간째에 25-배를 초과하여 더 가용성이었다. SGF 조건에서, 화합물 1-A는, 24시간째의 화합물 1의 용해도 15.6 mg/mL와 비교하여, 동일한 시점에 84.2 mg/mL의 용해도를 가졌다. 화합물 1-A는 또한 SGF 조건에서 2시간째에 화합물 1보다 더 가용성이었고, 화합물 1을 사용하여 48시간째 시험은 수행하지 않았지만, 심지어 48시간 후에도 시험을 가능하게 하도록 충분히 가용성이었다.
표 19. 화합물 1 용해도 시험 결과
*샘플은 투명한 것으로 보였지만, 단지 1.5 mg/mL의 용해도가 달성되었다. 추가 조사 시, 점착성 필름이 교반 막대 상에 형성된 것으로 나타났다. 화합물 1 활성 제약 성분은 완전한 용해를 위해 긴 초음파처리 시간을 필요로 하는 표준 제조 동안 희석제 (90% 물/10% 아세토니트릴) 중에 점착성 볼을 형성했다.
표 20. 화합물 1-A 용해도 시험 결과
실시예 16. 화합물 1-A의 화학적 안정성
화합물 1-A를 25 및 40℃에서 6개월의 시간 주기에 걸쳐 유기물 순도, 물 함량, 1H NMR, DSC, 및 라만 IR을 모니터링함으로써 화학적 안정성에 대해 시험하였다. 연구를 위한 용기 밀폐 시스템은 파우치 상에 제약 적층 필름 및 2개의 층 사이에 건조제 실리카 겔을 갖는 조합 의약 밸브 백이었다. 화합물 1-A (1 g)를 각각의 용기 내에서 측정하였다. 이어서 백을 25℃/60%RH (상대 습도) 및 40℃/75%RH (상대 습도)에서 저장하였다. 유기물 순도, 물 함량, 1H NMR, DSC 및 라만을 시간 0, 제1개월, 제2개월, 제3개월 및 제6개월에 측정하였다.
워터스 엑스테라 페닐, 5μm, 4.6x250mm 칼럼이 장착된 시마즈 LC-20AD 시스템을 사용하여 하기 조건으로 화합물 1-A의 순도를 수득하였다: 1 mL/분 유량, 254 nm에서 판독, 35℃ 칼럼 온도, 및 10 μL 주입 부피. 샘플을 아세토니트릴 - 물 (90:10) (v/v) 중에 용해시켰다. 구배 방법을 하기에 제시한다.
화합물 1-A (250 mg)의 물 함량은 칼 피셔 적정 방법을 사용하여 물 적정 장치에 의해 결정하였다.
결과를 표 21 및 표 22에 제시한다. 화합물 1-A를 25 및 40℃에서 6개월 동안 저장한 경우에, 분해 속도는 최소였다. 3개월째에, 화합물 1-A는 25℃ 조건에서 99.75% 퍼센트 순수하였고, 40℃ 조건에서 99.58% 순수하였다. 6개월째에, 화합물 1-A는 여전히 25℃ 조건에서 99.74% 순수하였고, 40℃ 조건에서 99.30% 순수하였다. 25℃에서, 분해 생성물의 퍼센트는 제0일에 0.03%에서 6개월에 0.08%로 증가하였다. 40℃에서, 분해 생성물의 퍼센트는 0.03%에서 0.39%로 증가하였다. 6개월 과정에 걸쳐, 물의 퍼센트는 25℃에서 대략 0.6% 증가하였고, 40℃에서 대략 0.7% 증가하였다.
화합물 1-A의 1, 2, 3, 및 6개월째의 1H NMR, 라만, 및 DSC에 의한 특징화는 둘 다의 온도 조건에서 제0일째의 화합물 1-A의 특징화와 동일하였고 (표 22), 이는 화합물 1-A의 장기 안정성을 강조한다.
표 21. 25 및 40℃에서 6개월에 걸친 화합물 1-A 분해 속도
표 22. 분해 연구 동안 화합물 1-A의 특징화
불순물 및 물 수준을 결정하기 위해 화합물 1-A의 추가의 화학적 안정성 연구를 측정하였다. 3가지 조건을 시험하였다: 6-개월 시간 기간에 걸친 가속 안정성 (40 ± 2℃ / 75 ± 5% RH), 9-개월 기간에 걸친 주위 안정성 (25 ± 2℃ / 60 ± 5% RH), 및 9-개월 시간 기간에 걸친 냉장온도 조건 하에서의 안정성 (5 ± 3℃). 가속 안정성, 주위 안정성, 및 냉장온도 조건에 대한 결과를 각각 표 23, 표 24, 및 표 25에 제시한다. 이들 연구의 결과에 기초하면, 화합물 1-A는 매우 화학적으로 안정하다.
가속 안정성 연구 (표 23)에서, 화합물 1-A를 측정한 각각의 시점 (제1개월, 제3개월, 및 제6개월)에, 화합물 1-A의 외관은 항상 백색 고체였고, IR은 표준 참조물과 매칭되었다. 6개월 후, 총 관련 물질 1 불순물은 단지 0.08%였고, 관련 물질 2 및 이성질체는 검출되지 않았다.
표 23. 화합물 1-A의 가속 안정성 (40 ± 2℃ / 75 ± 5% RH)
N.D.: 검출되지 않음.
9개월 동안 외관, IR, 물 및 불순물 수준을 측정한 주위 안정성 연구에서, 화합물 1-A의 외관은 항상 백색 고체였고, IR은 항상 참조 샘플과 상응하였다. 결과 (표 24)는 화합물 1-A가 얼마나 화학적으로 안정한지를 강조한다. 9개월 후, 샘플 중 물의 백분율은 단지 0.20%였고, 총 관련 물질 1 불순물은 단지 0.02%였다. 가속 안정성 연구와 유사하게, 관련 물질 2 및 화합물 1-A의 임의의 이성질체는 검출되지 않았다.
표 24. 화합물 1-A의 주위 안정성 (25 ± 2℃ / 60 ± 5% RH)
N.D.: 검출되지 않음
냉장온도 조건 하에 안정성을 측정한 결과를 표 25에 제시한다. 심지어 9개월 후에 검출된 유일한 불순물은 관련 물질 1 및 물로부터의 것이었다. 9개월 후 물 함량은 0.32%였고, 관련 물질 1의 총 불순물은 단지 샘플의 0.01%였다. 화합물 1-A는 냉장온도 조건 하에 매우 화학적으로 안정하였다.
표 25. 화합물 1-A의 냉장온도 조건 (5 ± 3℃) 하에서의 안정성
N.D.: 검출되지 않음
실시예 17. 화합물 1-A의 단일 경구 용량 후 대사물의 혈장 수준
화합물 1-A의 단일 경구 용량을 래트, 개, 및 원숭이에게 투여하고, 반응식 1에 제시된 특정 대사물의 혈장 수준을 측정하였다.
화합물 1-A의 화합물 1 및 대사물 1-7로의 전환이 표 26에 제시되고, 대사물 1-8 및 대사물 1-2에 대한 결과가 표 27에 제시된다. 래트에서, 낮은 수준의 화합물 1 노출이 관찰되었지만, 활성 트리포스페이트 (대사물 1-6)의 뉴클레오시드 대사물인 대사물 1-7의 높은 수준이 관찰되었다. 원숭이에서, 화합물 1의 대략 용량-비례 노출이 측정되었다. 개에서, 간에서의 1차 통과 대사 클리어런스를 나타내는 과-비례 화합물 1 노출이 측정되었다. 연구 전체에 걸쳐, 원숭이에서보다 (고용량 군에서 1/5) 개에서 (고용량 군에서 5/5) 유의하게 더 많은 구토가 관찰되었다.
표 26. 화합물 1-A의 단일 경구 용량 후 화합물 1 및 대사물 1-7의 혈장 수준
종당 용량당 3마리의 수컷; *용량 제제: a물 중 0.5% CMC, 0.5% 트윈 80; b캡슐 내 분말
표 27. 화합물 1-A의 단일 경구 용량 후 대사물 1-8 및 1-2의 혈장 수준
종당 용량당 3마리의 수컷; *용량 제제: a물 중 0.5% CMC, 0.5% 트윈 80; b캡슐 내 분말
실시예 18. 화합물 1-A 경구 용량 후 활성 트리포스페이트의 조직 노출
화합물 1-A의 활성 트리포스페이트 (TP) (대사물 1-6)의 심장 및 간 조직 수준을 화합물 1-A의 경구 용량의 4시간 후에 측정하였다. 간 및 심장의 샘플을 화합물 1-A의 단일 용량의 4시간 후에 수득하고, 급속-동결시키고, 균질화하고, 활성 TP의 세포내 수준에 대해 LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 조직 수준을 도 16a에 제시된 바와 같이 래트, 개, 및 원숭이에서 측정하였다. 높은 수준의 활성 TP가 시험된 모든 종의 간에서 측정되었다. 1차 통과 간 대사의 포화로 인해 상대적으로 낮은 수준의 활성 TP가 개의 심장에서 측정되었고, 정량화불가능한 수준의 TP가 래트 및 원숭이 심장에서 측정되었으며, 이는 활성 TP의 간-특이적 형성을 나타낸다. 제시되지 않았지만, 화합물 1 투여와 비교하여, 화합물 1-A 투여는 TP 분포를 개선시켰다.
실시예 19. 개에서의 화합물 1 및 화합물 1-A의 약리학적 비교
화합물 1 및 화합물 1-A를 투여한 개의 직접-대면 비교를 수행하였다. 연구는 화합물 1 (25 mg/kg) 및 화합물 1-A (30 mg/kg)를 투여한 후 4시간까지 화합물 1 및 대사물 1-7 (반응식 1로부터의 것)의 혈장 수준을 측정하였고 (표 28), 대사물 1-7의 AUC(0-4hr)는 화합물 1과 비교하여 화합물 1-A에서 2배 더 컸다. 화합물 1 및 대사물 1-7에 대한 용량-정규화된 노출을 표 28에 제시한다. 화합물 1, 대사물 1-7, 및 화합물 1 + 대사물 1-7 합산에 대한 AUC(0-4hr) 값은 화합물 1-A를 투여한 후에 더 컸다.
표 28. 화합물 1 및 화합물 1-A의 투여 후 혈장 수준의 비교
aAUC(0-4hr) 값은 25 mg/kg의 용량으로 정규화됨
간/심장 비 트리포스페이트 농도는, 표 29에 제시된 바와 같이, 화합물 1-A를 투여하는 것이 화합물 1과 비교하여 간으로의 트리포스페이트의 선택적 전달을 증가시킨다는 것을 나타낸다. 심장에서 측정된 화합물 1의 투여 후 활성 구아닌 대사물 (1-6)의 AUC(0-4hr)는 174 μM*hr이었고, 한편 심장에서 측정된 화합물 1-A의 투여 후 활성 구아닌 대사물 (1-6)의 AUC(0-4hr)는 28 μM*hr이었다. 화합물 1-A의 경우의 간/심장 비는, 화합물 1의 경우의 간/심장 비 3.1과 비교하여, 20이었다.
표 29. 화합물 1 및 화합물 1-A의 투여 후 간 및 심장 노출의 비교
a활성 TP 농도 (1-6; 반응식 1)는 25 mg/kg의 용량으로 정규화됨
b보정 곡선의 정량 하한치 미만으로 외삽됨
화합물 1과 비교하여 화합물 1-A를 투여한 경우 심장에 비해 간에 대한 증가된 선택성의 효과가 또한 도 16b에 제시된다. 화합물 1-A의 투여량 (30 mg/kg) 후 활성 트리포스페이트의 심장 및 간 조직 수준을 화합물 1의 투여량 (25 mg/kg) 후 활성 트리포스페이트의 조직 수준과 비교하였다. 활성 TP의 농도는 화합물 1 및 화합물 1-A 둘 다의 경우에 심장보다 간에서 더 높았지만, 활성 TP는 화합물 1과 비교하여 화합물 1-A를 투여한 경우에 심장에 비해 간에 대해 보다 선택적이었다.
실시예 20. 래트 및 원숭이에서의 화합물 1-A 대사물의 혈장 프로파일
수컷 스프라그-돌리 래트 및 시노몰구스 원숭이 (용량 군당 3마리의 동물)에게 화합물 1-A의 단일 경구 용량을 제공하였다. 디클로르보스로 처리된 혈액 샘플로부터 제조된 혈장의 분취물을 LC-MS/MS에 의해 화합물 1 및 대사물 1-7 (반응식 1에 제시된 화합물 1-A의 활성 트리포스페이트의 뉴클레오시드 대사물)의 농도에 대해 분석하였고, 윈논린(WinNonlin)을 사용하여 약동학적 파라미터를 결정하였다. 래트에서의 단일 500 mg/kg 용량에 대한 결과를 도 17에 제시하고, 원숭이에서의 단일 30, 100 또는 300 mg/kg 용량에 대한 결과를 도 18에 제시한다. 결과를 또한 표 30에 요약한다.
화합물 1-A의 활성 트리포스페이트 (TP)의 뉴클레오시드 대사물인 대사물 1-7의 높은 혈장 수준은, 래트 혈액에서의 화합물 1의 짧은 반감기 (<2분)로 인해 매우 낮은 혈장 농도의 모 뉴클레오티드 전구약물이 관찰된 래트에서조차도, 높은 수준의 TP가 형성되었음을 나타낸다. 대사물 1-7의 지속적인 혈장 수준은 TP의 긴 반감기를 반영한다.
원숭이에서, 화합물 1의 혈장 노출 (AUC)은 대략적으로 용량-비례하였지만, 대사물 1-7 노출은, 모 약물 및 활성 TP의 뉴클레오시드 대사물 둘 다에 대한 AUC 값이 시험한 최고 용량 (300 mg/kg)까지 계속해서 증가하였더라도, 다소 덜 용량-비례하였다.
래트 및 원숭이에서의 화합물 1-A의 경구 투여는 대사물 1-7 (화합물 1-A의 세포내 활성 트리포스페이트의 뉴클레오시드 대사물)에 대한 높은, 용량-의존성 혈장 노출을 생성하였고; 대사물 1-7 노출은, 이들 종에서의 활성 TP의 실질적인 형성을 반영하여, 시험된 최고 용량까지 계속해서 증가하였다.
표 30. 화합물 1-A의 단일 경구 용량 후 화합물 1 및 1-7의 혈장 수준
용량 제제: a물 중 0.5% CMC, 0.5% 트윈 80; b캡슐 내 분말
실시예 21. 미토콘드리아 완전성에 대한 화합물 1 및 화합물 1-A의 활성 트리포스페이트의 효과
인간 미토콘드리아 RNA 폴리머라제에 의한 화합물 1 및 화합물 1-A의 활성 트리포스페이트 (TP), 대사물 1-6 (반응식 1)의 혼입의 상대 효율을 소포스부비르의 활성 TP 및 INX-189의 활성 TP의 상대 효율과 비교하였다. 화합물 1 및 화합물 1-A는 그의 활성 트리포스페이트가 소포스부비르의 트리포스페이트의 효율과 유사한 효율로 인간 미토콘드리아 RNA 폴리머라제에 의해 거의 혼입되지 않았기 때문에 미토콘드리아 완전성에 영향을 미치지 않을 것이고; INX-189의 트리포스페이트의 혼입의 상대 효율은 최대 55-배 더 컸다. 결과를 표 31에 제시한다. 인간 미토콘드리아 RNA-의존성 RNA 폴리머라제 (POLRMT)에 의한 이들 유사체의 혼입은 문헌 [Arnold et al., (Sensitivity of Mitochondrial Transcription and Resistance of RNA Polymerase II Dependent Nuclear Transcription to Antiviral Ribonucleotides. PLoS Pathog., 2012, 8, e1003030)]에 따라 결정하였다.
표 31. 인간 미토콘드리아 RNA 폴리머라제에 의해 평가된 뉴클레오티드 유사체에 대한 동역학적 파라미터
*상대 효율 = (Kpol/Kd,app)유사체 뉴클레오티드 / (Kpol/Kd,app)천연 뉴클레오티드
실시예 22. NS5B 서열을 함유하는 레플리콘에 대한 화합물 1의 활성
6종의 실험실 참조 균주 (GT1a, 1b, 2a, 3a, 4a 및 5a) (도 19) 및 8종의 HCV 환자 혈장 샘플 (GT1a, 1b, 2a, 2b, 3a-1, 3a-2, 4a 및 4d) (도 20)로부터 유래된 다양한 HCV 유전자형으로부터의 NS5B 서열을 함유하는 한 패널의 레플리콘을 사용하여 화합물 1 및 소포스부비르의 효력을 결정하였다.
화합물 1은 HCV의 임상 및 실험실 균주에 대해 소포스부비르보다 더 강력하였다. 화합물 1은 야생형 임상 분리주에 대해 EC95 < 80 nM로 시험관내 강력한 범-유전자형 항바이러스 활성을 나타내었고, 이는 소포스부비르보다 4- 내지 14-배 더 강력하였다. 도 20에 제시된 바와 같이, 화합물 1에 대한 EC95 값은 시험된 모든 HCV 유전자형의 임상 분리주에 대해 소포스부비르보다 7-33배 더 낮았다. HCV 유전자형 1-5의 실험실 균주에 대해, 화합물 1에 대한 EC50 값은 소포스부비르보다 6-11배 더 낮았다 (도 19).
실시예 23. 건강한 지원자 (파트 A) 및 GT1-HCV 감염된 환자 (파트 B)에서의 화합물 1-A의 단일 상승 용량 (SAD) 연구
화합물 1-A를 건강한 대상체에서의 그의 안전성, 내약성, 및 약동학을 측정하기 위해 단일 상승 용량 (SAD) 연구에서 시험하였다 (파트 A). 파트 A는 무작위, 이중-맹검, 위약-대조 SAD 연구였다. 파트 A의 건강한 대상체에게 공복 상태에서 화합물 1-A 또는 위약의 단일 용량을 제공하였다. 대상체는 제-1일에서 제6일까지 클리닉에 머물렀다.
각각의 코호트에서의 투여는 2명의 대상체 (1 활성:1 위약)가, 코호트의 나머지에의 투여 전에, 투여 후 48시간 동안 평가되도록 교차시켰다. 각각의 코호트에게 화합물 1-A를 오름차순으로 제공하였다. 순차적 코호트의 투여는 이전 코호트의 이용가능한 안전성 데이터 (제5일까지) 및 혈장 약동학적 데이터 (24시간까지)의 검토에 기초하여 이루어졌다.
용량 증량은 이들 데이터의 만족스러운 검토 후에 진행되었다. 약동학적 데이터 및 안전성 데이터가 이전 코호트에서 생성되었기 때문에, 코호트 3a-4a에서 평가된 용량은 100 mg 이하의 증분만큼 조정되었다. 파트 A에서 평가된 전체 최대 용량은 800 mg을 초과하지 않았다. 파트 A에 대한 투여 요법을 표 32에 제시한다.
표 32. 연구의 파트 A에서의 화합물 1-A 투여에 대한 투여 요법
*임상 용량은 화합물 1-A와 관련하여, 괄호 안의 대략적 화합물 1 염기 등가량과 함께 표현된다
연구의 파트 A 부분의 건강한 지원자는 18 내지 65세의 남성 및 여성 대상체였다. 연구 맹검상태 보존을 위해 활성 및 위약 수용자를 각각의 파트 A 코호트 내로 풀링하였다.
화합물 1-A를 또한, GT1-HCV 감염된 환자에서의 그의 안전성, 내약성, 약동학적, 및 항바이러스 활성을 측정하기 위해 단일 상승 용량 (SAD) 연구에서 시험하였다 (파트 B). 파트 B의 대상체에게 공복 상태에서 화합물 1-A의 단일 용량을 제공하였다. 환자는 제-1일에서 제6일까지 클리닉에 머물렀다.
파트 B는 파트 A의 코호트 3a로부터의 안전성 (제5일까지) 및 혈장 약동학적 (24시간까지) 데이터 검토 후에 개시하였다. 후속 파트 B 코호트 등록 전에 파트 B의 제1 코호트 (코호트 1b)에 대해 이용가능한 안전성 데이터 (제5일까지) 및 약동학적 데이터 (24시간까지)를 검토하였다. 후속 파트 B 코호트에는, 파트 A에서의 각각의 용량으로부터의 이용가능한 안전성 및 약동학적 데이터뿐만 아니라 이전 파트 B 코호트로부터의 이용가능한 안전성 (제5일까지)의 검토 후에만 투여하였다.
HCV-감염된 환자에서의 600 mg까지의 용량 증량은 이들 데이터의 만족스러운 검토 후에 진행되었다. 파트 B에 대한 투여 요법을 표 33에 제시한다.
표 33. 연구의 파트 B에서의 화합물 1-A에 대한 투여 요법
*임상 용량은 화합물 1-A와 관련하여, 괄호 안의 대략적 화합물 1 염기 등가량과 함께 표현된다
HCV에 감염된 환자는 바이러스 로드가 ≥ 5 log10 IU/mL인, 치료-나이브, 비-간경변성 GT1-감염된 대상체였다.
파트 A 또는 파트 B에서 어떠한 심각한 유해 사건도 기록되지 않았고, 어떠한 조기 중단도 필요하지 않았다. 모든 유해 효과는 강도면에서 경도 내지 중등도였고, 실험실 파라미터, 활력 징후, 및 ECG를 포함하여 어떠한 용량-관련 패턴도 명백하지 않았다.
실시예 24. 화합물 1-A의 단일 상승 용량 (SAD) 연구의 결과
화합물 1-A의 단일 용량 후 화합물 1 및 뉴클레오시드 대사물 1-7의 약동학을 측정하였다. 화합물 1-A의 600 mg 용량 후 HCV-감염된 환자에서의 대사물 1-7의 C24 최저 혈장 농도 (C24h)는 25.8 ng/mL였고, 이는 화합물 1-A의 300 mg 용량 후 혈장 농도 용량의 2배를 초과하였다. 대사물 1-7 (반응식 1에 제시됨)은 활성 종인 세포내 포스페이트 대사물 1-4, 대사물 1-5, 및 대사물 1-6의 탈인산화를 통해서만 생성될 수 있다. 따라서, 대사물 1-7은 활성 종의 대용물로 간주될 수 있다. 모든 코호트에 대한 약동학적 데이터를 표 34 및 표 35에 제시한다. 중앙값 (범위)을 보고한 Tmax를 제외하고, 값은 평균 ± SD로서 보고된다. 약동학적 파라미터는 건강한 자와 HCV-감염된 환자에서 대등하였다.
표 34. 건강한 지원자에서의 화합물 1-A의 단일 용량의 투여 후 화합물 1 및 대사물 1-7의 인간 약동학
*24-시간 프로파일에 기초함.
표 35. GT1-HCV 감염된 환자에서의 화합물 1-A의 투여 후 화합물 1 및 대사물 1-7의 인간 약동학
*24-시간 프로파일에 기초함.
화합물 1 및 대사물 1-7의 평균 혈장 농도-시간 프로파일을 또한 연구의 파트 A 및 파트 B의 모든 코호트에 대해 계산하였다. 도 21은 화합물 1-A의 단일 용량 후의 화합물 1의 평균 혈장-농도이고, 도 22는 화합물 1-A의 단일 용량 후의 대사물 1-7의 평균 혈장-농도이다. 도 21에 제시된 바와 같이, 화합물 1은 파트 B로부터의 모든 코호트에서 급속하게 흡수되었고, 신속하고/광범위하게 대사되었다. 도 22에 제시된 바와 같이, 대사물 1-7은 주요 대사물이었고, 지속적인 혈장 농도를 나타내었다. 화합물 1의 혈장 노출은 용량-관련된 한편, 대사물 1-7의 노출은 용량-비례하였다.
파트 B의 HCV-감염된 대상체에 대해, 화합물 1-A의 투여 전, 투여 동안, 및 투여 후에 HCV RNA 정량화의 측정을 수행하였다. 검증된 상업적 검정을 사용하는 것을 통해 혈장 HCV RNA 결정을 수행하였다. 기준선은 제-1일 및 제1일 (투여전)의 평균으로서 정의하였다. 화합물 1-A의 단일 300 mg 용량 (화합물 1의 270 mg과 등가량)은 GT1b-HCV 감염된 대상체에서 유의한 항바이러스 활성을 발생시켰다. 단일 300 mg 용량 후, 투여 24시간 후의 평균 최대 HCV RNA 감소는 1.7 log10 IU/mL였고, 이는 GT1a HCV-감염된 대상체에서의 400 mg의 소포스부비르 단독요법 1일 후 -2 log10 IU/mL 감소와 비교되었다. 단일 100 mg 용량 후, 투여 24시간 후의 평균 최대 HCV RNA 감소는 0.8 log10 IU/mL였다. 단일 400 mg 용량 후의 평균 최대 HCV RNA 감소는 2.2 log10 IU/mL였다. 연구의 파트 B로부터의 개별 대상체에 대한 개별 약동학적/약역학적 분석을 도 23a-23f에 제시한다. 대사물 1-7 농도를 HCV RNA 감소 농도에 대해 플롯팅하였고, 도 23a-23f에 제시된 바와 같이, 혈장 HCV RNA 감소는 혈장 대사물 1-7 노출과 상관되었다. 바이러스 반응은, GT1b에 대해, EC95 값을 초과하는 대사물 1-7 혈장 농도에 의해 지속되었다. 혈장 농도와 HCV RNA 감소 수준 사이의 상관관계는, 보다 높은 용량의 화합물 1-A에 의해 보다 현저한 반응이 달성가능할 것임을 나타낸다.
실시예 25. 대사물 1-7의 예측된 정상-상태 최저 수준은 HCV GT 1-4의 임상 분리주에 대한 화합물 1 EC95 값을 초과한다
도 24에 제시된 바와 같이, 인간에서 화합물 1-A 투여 후 (600 mg QD (550 mg 유리 염기 등가량) 및 450 mg QD (400 mg 유리 염기 등가량)) 대사물 1-7의 정상-상태 최저 혈장 수준 (C24,ss)이 예측되었고, 이를 모든 시험된 임상 분리주에 걸쳐 화합물 1의 EC95와 시험관내 비교하여 정상 상태 혈장 농도가 EC95보다 일관되게 더 높은지, 임의의 또는 모든 시험된 임상 분리주에 대해 생체내 높은 효능을 발생시킬 것인지 결정하였다. 화합물 1에 대한 EC95는 화합물 1-A의 EC95와 동일하다. 화합물 1-A가 효과적이기 위해서는, 대사물 1-7의 정상-상태 최저 혈장 수준이 EC95를 초과해야 한다.
도 24에 제시된 바와 같이, 모든 시험된 임상 분리주에 대한 화합물 1-A의 EC95는 대략 18 내지 24 nM 범위였다.
도 24에 제시된 바와 같이, 인간에서 450 mg QD (400 mg 유리 염기 등가량) 용량의 화합물 1-A는 대략 40 ng/mL의 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)를 제공한다. 인간에서 600 mg QD 용량 (550 mg 유리 염기 등가량)의 화합물 1-A는 대략 50ng/mL의 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)를 제공한다.
따라서, 대용물 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 농도는 모든 시험된 임상 분리주 (심지어 치료가 어려운 GT3a)에 대해 EC95의 거의 2배이고, 이는 뛰어난 성능을 나타낸다.
대조적으로, 표준 관리 뉴클레오티드 소포스부비르의 EC95는 모든 시험된 HCV 임상 분리주에 걸쳐 50 내지 265 nM 범위이고, EC95는 400 mg의 상업적 투여량에서 오직 2종의 분리주, GT2a 및 GT2b에 대해서만 예측된 정상 상태 농도보다 더 낮다. 소포스부비르의 400 mg의 상업적 투여량에 대한 EC95는 다른 임상 분리주, GT1a, GT1b, GT3a, GT4a, 및 GT4d의 경우 예측된 정상 상태 농도보다 더 높다.
화합물 1-A 450 mg 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)를 300 mg 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)를 사용하여 예측하였다. 300 mg에서의 평균 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)는 26.4 ng/mL였고, 따라서 26.4*450/300=39.6 ng/mL로 계산된다.
600 mg 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)는 3가지 접근법을 사용하여 예측하였다: 1) 600 mg 제1일 C24 평균은 25.8 ng/mL였고, 60% 증가는 정상 상태에 도달한 것으로 가정됨. 따라서 25.8*1.6=41.3 ng/mL로 계산됨; 2) 400 mg 제1일 C24 평균은 22.5 ng/mL였고, 60% 증가는 정상 상태에 도달한 것으로 가정됨. 용량 비례 PK를 고려하면, 22.5*1.6*600/400=54 ng/mL로 계산됨; 3) 300 mg 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)는 26.4 ng/mL였고, 비례 PK가 가정됨. 따라서 26.4*2=52.8 ng/mL로 계산됨. 600 mg 정상 상태 최저 혈장 농도 (C24,ss)는 3개의 데이터 포인트의 평균이다 ((41.3+54+52.8)/3=49.3 ng/mL). 단일 용량 후 C24와 비교하여 정상 상태에서 C24에서 일반적으로 약 60% 증가가 존재한다.
도 24에서 효능 및 약동학적 정상 상태 파라미터를 비교한 데이터는 C형 간염의 치료를 위한 화합물 1-A의 예상외의 치료상 중요성을 분명하게 입증한다. 실제로, 화합물 1-A의 투여 후 예측된 정상-상태 혈장 수준은 시험된 모든 유전자형에 대해 EC95보다 적어도 2-배 더 높은 것으로 예측되고, GT2에 대해서는 3- 내지 5-배 더 강력하다. 이러한 데이터는 화합물 1-A가 인간에서 강력한 범-유전자형 항바이러스 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 도 24에 제시된 바와 같이, GT1, GT3, 및 GT4에 대한 소포스부비르의 EC95는 100 ng/mL 초과이다. 따라서 놀랍게도, 화합물 1-A는 유사한 투여 형태의 소포스부비르에 의해 달성되는 정상-상태 최저 농도 (대략 100 ng/mL)보다 더 낮은 정상-상태 최저 농도 (40-50 ng/mL)를 전달하는 투여 형태에서 HCV에 대해 활성이다.
실시예 26. 화합물 1-A의 안전성/내약성, 약동학 (PK), 및 항바이러스 활성을 평가하기 위한 3-파트 연구
화합물 1-A를 사용하여 안전성/내약성, 약동학 (PK), 및 항바이러스 활성을 평가하기 위해 3-파트 연구를 수행하였다. 3개의 파트는 하기를 포함하였다: 1) NC (비-간경변성) GT1 HCV-감염된 환자에서의 7일 동안 1일 1회 (QD) 최대 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 다중 용량 투여 (파트 C); 2) NC GT3 HCV-감염된 환자에서의 7일 동안 QD 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 투여 (파트 D); 및 3) GT1, GT2 또는 GT3 HCV 감염을 갖는 차일드-퍼 A (CPA) 간경변성 환자의 코호트에서의 7일 동안 QD 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 투여 (파트 E). 용량은 화합물 1-A 염 기준으로 투여하였다. 유리 염기 화합물 1 등가량은 종종 괄호 안에 주어진다.
파트 C는 3개의 코호트로 나뉜 무작위, 이중-맹검, 위약-대조 MAD 연구였다. 대상체에게 공복 상태에서 7일 동안 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 화합물 1-A 또는 위약을 제공하였다. 용량 증량은 데이터의 만족스러운 검토 후에만 진행하였다. 파트 D 및 파트 E는 환자가 공복 상태에서 7일 동안 600 mg의 화합물 1-A의 용량 (550 mg의 화합물 1과 등가량)을 제공받는 개방-표지 연구였다.
HCV-감염된 환자는 HCV RNA ≥ 5 log10 IU/mL로, 치료-나이브였다. HCV RNA를 LLQ 15 IU/mL인 코바스(COBAS)® 앰플리프렙 택맨(AmpliPrep TaqMAN)® v2.0을 사용하여 정량화하였다. 혈장 약물 수준을 LC-MS/MS를 사용하여 측정하였다. 기준선 HCV RNA는 500 mg의 화합물 1-A를 투여받는 환자의 모든 코호트에서 평균 >6 log였다. 간경변증은 선행 간 생검 또는 피브로스캔에 의해 > 12.5 kPa로 확인되었다. 평균 기준선 피브로스캔은 파트 C, 파트 D 및 파트 E에서 600 mg 등가량의 화합물 1-A를 투여받은 환자에서 각각 6.3, 6.8 및 17.6 kPa였다. 등록된 대상체의 평균 연령은 비-간경변성 GT1b 600 mg 용량 코호트, 비-간경변성 GT3 코호트 및 간경변성 코호트에서 각각 44, 39 및 56세였다.
파트 A 및 파트 B는 이전에 수행되었고, WO 2018/144640에 기재되어 있다. 파트 A 및 파트 B는 단일 상승 용량 (SAD) 연구였다. 파트 A에서, 건강한 대상체에게 최대 400 mg의 화합물 1-A (367 mg의 화합물 1과 등가량)를 제공하고, 파트 B에서, GT1 NC HCV-감염된 대상체에게 최대 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 단일 용량을 제공하였다.
실시예 27. 화합물 1-A의 연구 결과
심각한 유해 사건 (AE), 용량-제한 독성 또는 조기 중단은 보고되지 않았다. 화합물 1-A는 7일 동안 시험된 최고 용량 (600 mg 염 형태)까지 잘 허용되었다. 관찰된 유일한 패턴은 위약과 비교하여 화합물 1-A를 제공받은 대상체에서의 보다 높은 주로 저등급의 지질 이상 발생률 (콜레스테롤 및 트리글리세리드 증가)이었다. 그러나, 이러한 관찰은 HCV-감염된 대상체에서 DAA 요법의 개시 시 HCV 클리어런스와 함께 지질의 급속한 증가를 보여준, 이전에 공개된 데이터와 일치한다. 또한, 간 손상을 시사하는 발견은 없었다. ALT/AST 값은 화합물 1-A를 제공받은 대상체에서 치료 기간 동안 시간 경과에 따라 감소하였다. 마지막으로, AE, 실험실 파라미터, ECG 및 활력 징후의 분석 시 다른 임상적으로 관련된 용량-관련 패턴은 존재하지 않았다.
파트 B에서, 화합물 1 92 mg, 275 mg, 368 mg 또는 550 mg과 등가량인 화합물 1-A의 단일 용량을 투여 코호트로 분리된 비-간경변성 GT1b HCV-감염된 대상체에게 투여하여 (각각의 코호트는 n=3) HCV RNA의 평균 최대 감소를 결정하였고, 그 결과를 도 25 및 표 36에 제시한다. 비-간경변성 GT1b HCV-감염된 대상체 (n=3)에게 투여된 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 단일 용량은 이 코호트에서 2.3 log10 IU/mL의 평균 최대 HCV RNA 감소를 발생시켰고, 2.1, 2.3 및 2.6 log10 IU/mL의 개별 최대 HCV RNA 감소를 발생시켰다.
표 36. 화합물 1-A의 단일 용량 후 GT1b HCV 환자에서의 기준선으로부터의 HCV RNA 변화
파트 C에서는, 용량-관련 항바이러스 활성이 투여 7일 후에 관찰되었고, 비-간경변성 GT1b HCV-감염된 대상체 (n=6)에서 평균 최대 HCV RNA 감소는 최대 4.4 log10 IU/mL였다. 대상체의 50%는 HCV RNA < LOQ를 달성하였다. 도 26은 위약, 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 화합물 2를 1일 1회 (QD) 제공받은 대상체에서의 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화의 그래프이다. 평균 최대 감소는 150 mg, 300 mg, 또는 600 mg의 화합물 1-A를 1일 1회 (QD) 제공받은 3개의 코호트에서 투여 7일 후에 관찰되었다.
파트 D에서는, 비-간경변성 GT3 HCV-감염된 대상체 (n=6)에서 강력한 항바이러스 활성이 관찰되었고, 평균 최대 HCV RNA 감소는 4.5 log10 IU/mL였다. 평균 HCV RNA 감소는 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)의 제1 용량 후에 2.4 log10 IU/mL였고, 1명의 대상체는 제1 용량 후 4일 내에 HCV RNA < LOQ를 달성하였다.
파트 E의 CPA 간경변성 HCV-감염된 대상체에서의 항바이러스 활성은 비-간경변성 GT1b 및 GT3 코호트와 유사하였다. 파트 E에서, 간경변성 HCV 감염 환자의 평균 최대 HCV RNA 감소는 4.6 log10 IU/mL였다. 이들 집단에서 기준선으로부터의 평균 HCV RNA 변화를 도 27에 제시한다. 비교를 위해, 상승 용량 코호트 (파트 C, 비-간경변성 GT1b HCV-감염 환자)에 대한 곡선을 도 26에 제시하고, 모든 600 mg QD 코호트 (파트 C/D/E)에 대한 곡선을 도 27에 포함시켰다. 각각의 코호트에서 관찰된 대사물 1-7 항바이러스 활성을 표 39A, 표 39B 및 표 39C에 요약한다.
파트 C, 파트 D, 및 파트 E에 대한 평균 최대 HCV RNA 변화를 표 37에 제시한다. 도 28a-28c는 파트 C로부터의 GT1 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체, 파트 D로부터의 GT3 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체, 및 파트 E로부터의 GT1/GT2/GT3 HCV를 갖는 간경변성 대상체의 평균 최대 감소를 비교한 그래프이다. 투여 7일 후의 평균 최대 감소는 대상체가 GT1 또는 GT3 HCV에 감염되었는지에 관계 없이, 그리고 대상체가 간경변성 또는 비-간경변성인지에 관계 없이 대상체에 대해 유사하였다. 모든 이들 코호트 중에서의 항바이러스 활성의 요약을 표 37 및 표 38에 제시한다. 간경변성 대상체에서 극심한 초기 바이러스 반응이 관찰되었고, 이는 처음 24시간 내에 GT1 및 GT3 HCV 대상체에 대해 각각 2.4 및 2.2 log10 HCV RNA 감소로 이어졌다. 600 mg QD 용량의 대사물 1-7을 제공받은 5명의 대상체 (파트 C에서 3명의 대상체 (50%) 및 파트 D 및 E에서 각각 1명의 대상체 (17%))는 연구에서 정량 하한치 미만의 HCV RNA 수준을 달성하였다.
표 37. 파트 B, 파트 C, 파트 D, 및 파트 E에서의 최대 HCV RNA 변화
*95% C.I.
표 38. 화합물 1-A 600 mg에 대한 파트 C, 파트 D 및 파트 E에서의 화합물 1-A의 항바이러스 활성의 요약
화합물 1-A의 유리 염기인 화합물 1은 신속하게 잘 흡수되었고, 추정되는 흡수 분율은 소변 회수에 기초하면 대략 50%였다. 공복 상태에서 7일 동안 반복된 QD 투여 후, 화합물 1은 급속하게 흡수되고, 이어서 신속하게 대사 활성화되었다.
파트 C에서 7일 동안 매일 투여 후, 화합물 1은 짧은 반감기를 나타내었고, 시간 경과에 따라 축적되지 않았다. 화합물 1의 혈장 노출은 150 mg에서 300 mg까지는 용량 비례보다 약간 더 컸고, 그 후 대부분 용량 비례하였다. 대사물 1-7의 혈장 피크 및 총 노출은 150에서 300 mg까지는 용량 비례하였고, 300 mg에서 600 mg까지는 용량 비례 미만이었지만, 대사물 1-7의 최저 수준은 연구된 용량 범위에서 대부분 용량 비례하였다. 대사물 1-7 최저 수준에 기초하면, 정상 상태 PK는 본질적으로 제3 또는 제4 용량 후에 도달되었다. 대사물 1-7의 형성은 투여 후 대략 6시간에 피크에 도달하였고, 대사물 1-7은 긴 반감기 (~13-30시간)를 나타내었으며, 이는 1일 1회 (QD) 투여를 지지한다. 긴 반감기는 정상 상태에 도달 시 목적하는 보다 높은 대사물 1-7 최저 (50%-60%)를 발생시켰다. (활성 트리포스페이트 1-6은 세포를 떠나지 않기 때문에 혈장에서 측정가능하지 않고, 따라서 혈장에서 측정가능한 1-7이 트리포스페이트 1-6에 대한 대용물로서 작용하며 세포내 활성 트리포스페이트를 반영함).
대사물 1-7 농도의 정상 상태는 NC 대상체에서 제3일 또는 제4일째에 간경변증을 갖는 대상체에서 제5일째에 도달되었다. 전반적으로, 경도의 간 장애는 혈장 노출에 기초하면 화합물 1-A의 PK에 유의하게 영향을 미치지 않았다. 대사물 1-7의 전체 및 최저 노출에 대한 음식물 영향은 관찰되지 않았다.
도 29는 화합물 1 138 mg/d QD와 등가량인 화합물 1-A를 제공받은 GT1 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체, 화합물 1 275 mg/d QD와 등가량인 화합물 1-A를 제공받은 GT1 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체, 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)를 제공받은 GT3 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체, 및 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)를 제공받은 GT1 또는 GT3 HCV 감염을 갖는 간경변성 대상체를 비교한, 정상 상태에서의 대사물 1-7의 평균 혈장 농도-시간 프로파일의 그래프이다. 대사물 1-7의 혈장 수준을 LC-MS/MS를 사용하여 측정하였다.
표 39A, 39B, 및 39C는 연구에 등록된 대상체의 평균 PK 결과를 보여준다. 표 39A-39C 및 도 29에 제시된 바와 같이, 대사물 1-7의 PK는 비-간경변성 및 간경변성 대상체에서 유사하다.
표 39A. 제1일 및 정상 상태 (SS)에서의 화합물 1 및 대사물 1-7에 대한 Cmax 및 Tmax
표 39B. 제1일 및 정상 상태 (SS)에서의 화합물 1 및 대사물 1-7에 대한 AUC 및 T1/2
#화합물 1의 경우 AUCinf 및 대사물 1-7의 경우 AUCτ
표 39C. 제1일 및 정상 상태 (SS)에서의 화합물 1 및 대사물 1-7에 대한 C24h
*C24는 단지 대사물 1-7에 대해서만 보고되었고; 정상 상태에서의 C24는 72, 96, 120, 144 및 168시간에서의 C24의 평균이었다.
도 30a-30d는 GT1 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체 (도 30a), GT3 HCV 감염을 갖는 비-간경변성 대상체 (도 30b), GT1 HCV 감염을 갖는 간경변성 대상체 (도 30c) 및 GT3 HCV 감염을 갖는 간경변성 대상체 (도 30d)의 PK/PD 분석이다. 좌측 y-축은 평균 대사물 1-7 농도이고, 우측 y-축은 평균 HCV RNA 감소이다. 수평 파선 (----)은 화합물 1의 EC95 값을 나타내고, 점은 600 mg의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량) 후 대사물 1-7의 정상-상태 혈장 최저 수준인 Cτ를 나타낸다. 도 30a-30d에 제시된 바와 같이, 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준은 비-간경변성 및 간경변성 대상체에서 HCV GT1 및 GT3을 억제하는 데 있어서 화합물 1의 EC95를 일관되게 초과한다. 간경변성 환자에서 대사물 1-7의 정상 상태 혈장 최저 수준은 45.7 ng/mL이고, HCV GT1, GT2 및 GT3에서의 화합물 1의 EC95는 각각 대략 21.7 ng/mL, 11.6 ng/mL 및 17.5 ng/mL 등가량의 대사물 1-7이다. 도 30a-30d는 또한 항바이러스 활성이 혈장 노출과 상관됨을 입증한다.
대사물 1-7의 AUC를 HCV RNA 감소에 대해 플롯팅하여 생성한 Emax 모델을 사용하여, ≥ 2000 ng/mL x h의 대사물 1-7 노출이 화합물 1-A의 QD 투여 7일 후에 적어도 4 log 단위의 최대 바이러스 로드 감소를 발생시킬 것임을 예측하였다 (도 31). 600 mg 용량의 화합물 1-A (550 mg의 화합물 1과 등가량)는 비-간경변성 및 간경변성 대상체에서 일관되게 이 역치에 도달하며, 이는 550 mg QD의 화합물 1 (600 mg의 화합물 1-A와 등가량)이 최대 바이러스-로드 감소를 발생시킬 것임을 입증한다.
실시예 28. 제제 설명 및 화합물 1-A의 제조
화합물 1-A 정제 (50 mg 및 100 mg)에 대한 대표적인 비제한적 배치 포뮬러를 표 40에 제시한다. 통상의 블렌드로부터 도 32에 제시된 바와 같이 직접 압축 공정을 사용하여 정제를 생성하였다.
표 40. 50 mg 및 100 mg 화합물 1-A 정제의 제제화
화합물 1-A를 검정 그 자체에 기초하여 조정하였고, 조정은 미세결정질 셀룰로스의 백분율로 이루어졌다. 화합물 1-A 및 부형제 (미세결정질 셀룰로스, 락토스 1수화물, 및 크로스카르멜로스 소듐)를 스크리닝하고, V-블렌더 (PK 블렌드마스터, 0.5L 보울)에 넣고, 25 rpm에서 5분 동안 혼합하였다. 이어서 스테아르산마그네슘을 스크리닝하고, 첨가하고, 블렌드를 추가로 2분 동안 혼합하였다. 통상의 블렌드를 50 mg 및 100 mg 정제를 생성하는 데 사용하기 위해 나누었다. 이어서 윤활화한 블렌드를 단일 펀치 연구용 정제 프레스 (코르쉬 XP1) 및 중력 분말 공급기를 사용하여 10개 정제/분의 속도로 압축하였다. 원형 표준 오목 6 mm 도구 및 3.5 kN 강도를 사용하여 50 mg 정제를 생성하였다. 100 mg 정제는 8 mm 원형 표준 오목 도구 및 3.9-4.2 kN 강도를 사용하여 생성하였다. 50 mg 및 100 mg 정제의 세부사항을 표 41에 제시한다.
표 41. 화합물 1-A의 50 mg 및 100 mg 정제의 세부사항
상기 기재된 바와 같이 생성된 50 mg 및 100 mg 정제를 3가지 조건: 5℃ (냉장온도), 25℃/60% RH (주위), 및 40℃/75% RH (가속) 하에서의 6개월 안정성 연구에 적용하였다. 50 mg 및 100 mg 정제 둘 다는 시험된 모든 3가지 조건 하에 화학적으로 안정하였다.
냉장온도 조건 (5℃) 하에, 50 mg 및 100 mg 정제는 둘 다 T=0에서 T=6개월까지 외관상 변화되지 않고 백색 고체로 유지되었다. 6-개월 연구 내내, 50 mg 정제 또는 100 mg 정제에 대해 0.05%를 초과하는 불순물은 보고되지 않았다. 6개월 후 물 함량은 또한 둘 다의 정제에 대해 3.0 % w/w 미만이었다. 정제를 주위 조건 (25℃/60% RH)에 적용한 경우에 유사한 결과가 보고되었고; 0.05%를 초과하는 불순물은 둘 다의 정제에 대해 6개월 내내 보고되지 않았고, 물 함량은 6-개월 지점에 3.0 % w/w를 초과하지 않았다. 정제를 가속 조건 (40℃/75% RH)에 적용한 경우, 50 mg 및 100 mg 정제의 외관은 백색, 원형 정제에서 변화되지 않았다. 3개월 후에 1종의 불순물이 보고되었지만, 불순물은 단지 0.09%였다. 제2 불순물이 6개월 후에 보고되었지만, 총 불순물 백분율은 50 mg 및 100 mg 정제 둘 다에 대해 단지 0.21%였다. 물 함량은 50 mg 정제의 경우 6개월째에 3.4 % w/w였고, 100 mg 정제의 경우 3.2 % w/w였다.
별개의 연구에서, 주위 조건 (25℃/60% RH)에서 화합물 1-A의 50 mg 및 100 mg 정제의 안정성을 9개월에 걸쳐 측정하였다. 50 mg 및 100 mg 정제의 외관은 9개월의 과정에 걸쳐 백색 원형 정제에서 변화되지 않았다. 50 mg 정제에서의 불순물은 9개월 후 0.10% 미만이었고, 100 mg 정제에서의 불순물은 0.05% 미만이었다. 50 mg 정제 및 100 mg 정제의 물 함량은 9개월 후 단지, 각각 2.7 % w/w 및 2.6 % w/w였다.
실시예 29: 화합물 2의 합성
화합물 2-9의 합성
250 mL 둥근 바닥 플라스크에 3-클로로-5-플루오로페놀 (화합물 2-1) 및 2-(2-브로모-5-클로로페닐)아세트산 (화합물 2-2 20.02 g, 80.0 mmol)을 첨가하고, TfOH (91 mL)와 혼합하고, 질소 분위기 하에 60℃로 가열하였다. 이 온도에서 16시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙/수조에서 냉각시킨 이소프로판올 (500 mL)에 20분의 기간에 걸쳐 부었다. 생성된 슬러리를 10분에 걸쳐 첨가한 물 (125 mL)로 희석하였다. 빙/수조에서 30분 동안 숙성시킨 후, 혼합물을 여과하고, 수집된 고체를 4:1 이소프로판올/물 (50 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 건조시켜 화합물 2-3 (20.14 g, 53.3 mmol, 80% 수율)을 수득하였다.
화합물 2-3 (2.03 g, 5.37 mmol)을 2-메틸테트라히드로푸란 (20.3 mL, 10 부피)에 녹이고, 이 용액에 메탄올 중 암모니아 (7N 11.51 mL, 81 mmol, 15 eq.)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 16시간 동안 숙성시킨 다음, 용매 25 mL의 제거에 의해 농축시키고, 슬러리를 톨루엔 (70 mL)으로 처리하였다. 이어서, 생성된 용액을 재증류시켜 추가로 35 mL의 용매를 제거하고, 20 부피의 톨루엔 중 화합물 2-5의 최종 용액을 달성하였다. 이 용액을 추가 정제 없이 사용하였다.
공기 응축기가 구비된 1 L 둥근 바닥 플라스크에 화합물 2-5 (25 g, 163 mmol), 4-메톡시아닐린 (22.1 g, 180 mmol), 및 이소프로판올 (250 mL)을 채웠다. 생성된 슬러리를 50℃로 가온하고, 3.5시간 동안 교반하였고, 그 시간 동안 침전물이 형성되었다. 생성된 슬러리를 0℃로 냉각시키고, 1시간 동안 숙성시키고, 여과하였다. 플라스크 및 패드를 0℃ 이소프로판올 (84 mL)로 2회 헹구고, 고체를 진공 오븐에서 50℃에서 일정한 중량으로 건조시켜 화합물 2-6 (39.0 g, 93% 수율)을 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 8.77 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.26 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J=8.8 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.45 (m, 1H), 1.19 (m, 2H), 1.05 (m, 2H)―이민 기하구조는 결정되지 않았고, 편의상 (E)로 도시됨.
자기 교반막대, 온도 프로브 및 질소 유입구가 구비된 3구 둥근 바닥 플라스크에 화합물 2-6 (7.54 g, 29.2 mmol)을 채우고, 톨루엔 중 화합물 2-4의 용액 (5.72 wt%, 174.8 g, 26.5 mmol)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 고체가 용해될 때까지 실온에서 교반되도록 하고, 생성된 용액을 빙/수조를 사용하여 냉각시켰다. 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 TFA (2.45 mL, 31.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액이 실온으로 가온됨에 따라 이를 빙/수조에서 16시간 동안 교반되도록 하였다. 생성된 슬러리를 여과하고, 플라스크 및 패드를 톨루엔 (27 mL)으로 세척하고, 유기 용액을 수성 NaHCO3 (4 wt%, 54 mL) 및 물 (54 mL)로 세척하였다. 유기 층을 진공 하에 ~25 mL로 농축시키고, 이소프로판올 (110 mL)로 희석하고, 진공 하에 ~50 mL 총 부피로 농축시켰다. 생성된 슬러리를 40℃로 가온하고, 물 (10 mL, 30분에 걸쳐 첨가함)로 희석하고, 0℃에서 1시간 동안 숙성시키고, 여과하였다. 플라스크 및 패드를 4:1 이소프로판올/물 (25 mL)로 세척하고, 고체를 진공 오븐에서 50℃에서 일정한 중량으로 건조시켜 화합물 2-7 (10.1 g, 74% 수율)을 수득하였다.
100 mL 둥근 바닥 플라스크에 들은 Pd(OAc)2 (219 mg, 0.98 mmol) 및 (R)-퀴녹스P* (화합물 2-8) (343 mg, 1.03 mmol)의 용액에 탈기된 톨루엔 (45 mL)을 첨가하였다. 용액을 진공 하 배기 및 질소 재충전의 3회 사이클에 적용한 다음, 5분 동안 표면 상에서 질소로 퍼징하였다. 이어서, 촉매 용액을 20℃에서 2시간 동안 숙성되도록 하였다. 이어서, 오버헤드 교반기가 장착된 1 L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 화합물 2-7 (25 g, 48.8 mmol) 및 K3PO4 (41.4 g, 195 mmol) 및 톨루엔 (700 mL)을 채웠다. 혼합물을 진공 배기 및 질소 재충전의 3회 사이클에 적용한 다음, 5분 동안 표면 상에서 질소로 퍼징하였다. 이어서, 탈기수 (0.88 mL, 48.8 mmol)를 적가한 후, 사전 제조한 촉매 용액을 첨가하고, 생성된 반응물을 50-55℃로 가열하고, 이 온도에서 11시간 동안 교반하였다. 반응 시간의 처음 6시간 동안, 추가의 물 (5.28 mL, 293 mmol)을 매시간 6개의 동일한 부분으로 첨가하였다. 50-55℃에서 총 11시간 후, 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 물 75 mL 및 50% w/v KOH (~9N) 5 mL를 채웠다. 수성 층을 덜어내고, 유기 층을 물 100 mL로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 화합물 2-9를 수득하였다.
하기 조건 하에 SFC를 사용하여 ee를 결정하였다:
칼럼: 키랄셀 OJ-3; 4.6 mmx150 mm; 3 μm 입자 크기
온도: 40℃.
압력: 200 bar
개질제: 25 mM 이소부틸 아민이 첨가된 IPA
유량: 3.0 mL·분
조건: 5분에 걸쳐 1% 개질제/99% CO2에서 40% 개질제/60% CO2, 40% 개질제에서 1분 유지
정제된 화합물 2-9의 경우: (23 mg, 90% 수율, 91% ee).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 7.663 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 7.407 (d, J=0.4 Hz, 1H), 7.200 (dd, J=2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.092 (d, J=0.4 8.4 Hz, 1H), 7.048-7.039 (m, 2H), 6.958-6.910 (m, 2H), 2.194-2.153 (m, 1H), 1.275-1.075 (m, 2H), 1.018-0.991 (m, 2H).
조 생성물 화합물 2-9를 45℃에서 톨루엔 약 50 mL 및 iPAC 128 mL 중에 용해시켰다. (S)-캄포르술폰산 (10.8 g, 46.4 mmol)을 45℃에서 2.5시간에 걸쳐 3 부분으로 첨가하였다. 이를 실온으로 냉각시키고, 추가의 (S)-캄포르술폰산 (0.57 g, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 숙성시킨 다음, 여과하였다. 고체를 50 ml 1/2.5 톨루엔/이소프로필 아세테이트에 이어서 50 ml 이소프로필 아세테이트로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 27.1 g의 화합물 2-9를 캄포르술폰산 염으로서 96 내지 >99% ee로 수득하였다.
화합물 2의 합성
오버헤드 교반기를 갖는 500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 질소 하에 화합물 2-9 ((S)-CSA 염, 10.0 g, 또는 등가량의 유리 염기), 비스(피나콜레이토)디보론 (8.50 g), 아세트산칼륨 (8.78 g), 및 5-클로로인돌 (0.46 g)을 채웠다. 탈기된 2-Me-THF (130 mL) 및 물 (0.54 mL)을 첨가하였다. 분리 용기에 질소 하에 아세트산팔라듐 (0.067 g) 및 Xphos (2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐) (0.293 g) 및 탈기된 2-Me-THF (20 mL)를 채우고, 혼합물을 30분 동안 교반되도록 한 다음, 플라스크에 화합물 2-9를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 75℃로 가열하고, 이 온도에서 1시간 동안 또는 완전한 전환까지 숙성되도록 한 다음, 실온으로 냉각되도록 하였다. 물 (30 mL)을 혼합물에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 10% 염수 (30 mL)로 세척한 다음, 쿠노-3-탄소 (1.0 g)로 약 15시간 동안 처리하였다. 혼합물을 셀라이트-패드를 통해 여과하여 탄소를 제거하였다. 용액을 진공 하에 약 대략 35 mL 혼합물로 농축시켰다. 시드 결정을 첨가하여 결정화를 개시하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 숙성되도록 한 후, 아세토니트릴 (105 mL)을 천천히 첨가하였다. 생성된 슬러리를 여과하고, 수집된 고체를 아세토니트릴/2-Me-THF의 혼합물 (3:7, 30 mL)로 세척한 다음, 질소 스트림 중에서 건조시켜 화합물 2-10을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz), 8.23 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.23 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.18 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.39 (s, 6H), 1.37 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.06-1.02 (m, 4H), 1.01-0.95 (m, 4H).
고압 용기에 화합물 2-10 (10.0 g, 16.28 mmol, 1.0 eq.), 화합물 2-11 (11.5 g, 2.15 eq.), 2-Me-THF (90 mL) 및 K2CO3 (98 mL, 1 M, 6 eq.)을 채웠다. 용기를 탈기시켰다. 제2 반응 용기에 Pd(OAc)2 (0.11 g, 3%) 및 Xphos (0.58 g, 7.5%)를 채운 다음, 탈기하고, 이어서 탈기된 2-Me-THF (20 mL)를 첨가하였다. 생성된 촉매/리간드 슬러리를 질소 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 숙성되게 하였다. 이어서, 이를 화합물 2-11을 함유하는 반응 용기로 옮기고, 탈기된 2-Me-THF (10 mL)로 헹구었다. 생성된 반응 혼합물을 다시 탈기하고, 반응 용기를 밀봉하고, >99.5% 전환에 도달할 때까지 85 내지 90℃로 약 8시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 유기 층을 10% NaCl 용액 (18 mL) 및 3% NaCl 용액 (18 mL)으로 순차적으로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 진공 하에 농축시키고, 증류를 통해 공비 건조시켜 조 생성물 (14.66 g)을 수득하였다.
2-Me-THF (135 mL) 중 조 생성물 (14.66 g)을 MeOH (19.4 mL) 중 트리-n-부틸포스핀 (2.32 mL)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하고, 이어서 2-Me-THF (3.87 mL) 중에 용해된 (S)-만델산 (0.94 g)의 용액을 첨가하였다. 70℃에서 수시간 동안 숙성시킨 후, 반응 혼합물을 60℃로 냉각시키고, 2-Me-THF (12.58 mL) 중 (S)-만델산 (3.06 g)의 또 다른 부분을 첨가하였다. 배치를 만델레이트 염 화합물 2-12로 시딩하였다. 2-Me-THF (22.25 mL) 중 S-만델산 (35.41 g)의 마지막 부분을 60℃에서 4시간에 걸쳐 채웠다. 반응 혼합물을 8시간에 걸쳐 20℃로 서서히 냉각시키고, 20℃에서 1시간 동안 숙성시켰다. 슬러리를 여과하고, 2-Me-THF (2 중량% (S)-만델산 함유)로 헹구었다. 수집된 고체를 60℃에서 건조시켜 비스-만델레이트 염 화합물 2-12를 고체 (18.74 g)로서 수득하였다.
비스-만델레이트 염 화합물 2-12 (6 g)를 에틸 아세테이트 (48 mL) 및 물 (25.7 mL)과 혼합하였다. 2상 혼합물에 2M 탄산칼륨 용액 (6 mL, 2.5 당량)을 10분에 걸쳐 첨가하였고, 그 동안 2상 용액이 생성되었다. 하부 수성 층을 제거하고, 유기 층을 8% 염수 용액 (30 mL) 및 물 (2x30 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 증류를 통해 공비 건조시켰다 (최종 용액 부피=30 mL). 헵탄 (66 mL)을 불활성 플라스크에 채웠다. 생성물을 함유하는 에틸 아세테이트 스트림을 2시간의 기간에 걸쳐 헵탄에 첨가하였다. 추가로 2시간 동안 숙성시킨 후, 생성물 슬러리를 여과하고, 습윤 필터 케이크를 헵탄 (10.8 mL) 및 EtOAc (2 mL)의 혼합물로 세척하였다. 고체를 진공 하에 약 15시간 동안 60℃에서 건조시켜 화합물 2를 유리 염기로서 수득하였다. (4.40 g, MS: M+H 947.4047).
1H NMR (d6-DMSO, 500 MHz) δ (ppm) 8.30 (s, 1 H), 8.22 (br s, 1 H), 8.10 (br s, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.78 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 7.67-7.65 (m, 2 H), 7.52 (br s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.31-7.28 (m, 2 H), 7.19 (d, J=3.2 Hz, 1 H), 5.16 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 5.14 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 4.15-4.11 (m, 2 H), 3.91-3.81 (m, 4 H), 3.55 (s, 6 H), 2.45-2.36 (m, 2 H), 2.26 (m, 1 H), 2.20-2.13 (m, 2 H), 2.13-2.06 (m, 2 H), 2.06-2.00 (m, 4 H), 0.99 (m, 2 H), 0.85-0.77 (m, 14 H).
13C NMR (d6-DMSO, 126 MHz) δ (ppm) 175.20, 171.21, 171.15, 158.61 (d, J=251.0 Hz), 156.95, 156.94, 150.05, 149.54 (d, J=7.3 Hz), 148.88, 141.37, 133.88, 133.00, 131.11, 130.68, 129.14, 128.78, 125.35, 121.40, 120.38, 118.15, 117.01, 114.18, 111.04, 110.75, 107.30 (d, J=23.4 Hz), 106.67 (d, J=18.2 Hz), 102.94 (d, J=8.6 Hz), 78.46, 57.95, 57.93, 53.06, 52.91, 51.51, 47.16, 47.11, 31.02, 30.95, 29.08, 24.80, 24.75, 19.35, 19.32, 17.74, 13.88, 11.17, 11.05.
실시예 30: 화합물 1 및 화합물 2의 상승작용적 항-HCV 활성
세포 배양 - 리포터 세포주 Huh-luc/neo-ET는 반딧불이 루시페라제 유전자-유비퀴틴-네오마이신 포스포트랜스퍼라제 융합 단백질을 함유하는 지속적으로 복제하는 13sgluc-ubi-neo/NS3-3'/ET 레플리콘, 및 ET 조직 배양 적응 돌연변이 (E1202G, T1208I 및 K1846T)를 함유하는 EMCV IRES 구동 NS3-5B HCV 코딩 서열을 보유한다. Huh-luc/neo-ET의 스톡 배양물을 10% FCS, 2 mM 글루타민, 페니실린 (100 IU/ml)/스트렙토마이신 (100 μg/ml) 및 1 X 비필수 아미노산 플러스 1 mg/ml G418로 보충된 DMEM 중에서 배양하는 것에 의해 확장시켰다. 세포를 1:4로 분할하고, 동일한 배지 플러스 250 μg/ml G418에서 2 계대 동안 배양하였다. 세포를 트립신으로 처리하고, 트리판 블루로 염색하여 열거하고, 96-웰 조직 배양 플레이트에 웰당 세포 배양 밀도 7.5 x 103개 세포로 시딩하고, 37℃ 5% CO2에서 24시간 동안 인큐베이션하였다.
화합물 첨가 - 24시간 인큐베이션 후, 배지를 제거하고, 동일한 배지 마이너스 G418 플러스 희석된 시험 화합물로 삼중으로 대체하였다. 각각의 플레이트 내의 6개의 웰에 비-처리 대조군으로서 배지 단독을 제공하였다. 세포를 37℃ 5% CO2에서 추가로 72시간 인큐베이션한 다음, 루시페라제 종점에 의해 항-HCV 활성을 측정하였다. XTT 염색에 의한 세포 독성의 평가를 위해 이중 플레이트를 병행 처리하고 인큐베이션하였다.
세포 생존율 - 처리된 세포로부터의 세포 배양 단층을 72시간 인큐베이션 후에 테트라졸륨 염료 XTT (2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5-술포페닐)-5-[(페닐아미노)카르보닐]-2H-테트라졸륨 히드록시드)로 염색하여 화합물의 존재 하에 Huh-luc/neo-ET 리포터 세포주의 세포 생존율을 평가하였다. 세포를 테트라졸륨 염료 XTT로 염색하였다. XTT-테트라졸륨은 대사적 활성 세포의 미토콘드리아 효소에 의해 가용성 포르마잔 생성물로 대사되며, 이는 항바이러스 시험 물질에 의한 바이러스-유도된 세포 사멸의 억제의 신속한 정량 분석을 가능하게 하였다. XTT 용액을 RPMI1640 중 1 mg/ml의 스톡으로서 매일 제조하였다. 페나진 메토술페이트 (PMS) 용액을 PBS 중 0.15 mg/ml로 제조하고, 암실에서 -20℃에서 저장하였다. XTT/PMS 스톡은 사용 직전에 XTT 용액 ml당 PMS 40 μl를 첨가하여 제조하였다. 50 마이크로리터의 XTT/PMS를 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 4시간 동안 재인큐베이션하였다. 플레이트를 접착 플레이트 실러로 밀봉하고, 부드럽게 진탕시키거나 수회 뒤집어 가용성 포르마잔 생성물을 혼합하고, 분광광도계로 450/650 nm에서 몰레큘라 디바이시스 Vmax 플레이트 판독기를 사용하여 판독하였다.
바이러스 복제의 측정 - 브라이트라이트 플러스 발광 리포터 유전자 키트를 제조업체의 지침 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 코네티컷주 쉘튼)에 따라 사용하여 레플리콘 검정 시스템으로부터의 HCV 복제를 72시간 인큐베이션 후에 루시페라제 활성에 의해 측정하였다. 간략하게, 1개의 바이알의 브라이트라이트 플러스 동결건조된 기질을 10 ml의 브라이트라이트 재구성 완충제 중에 가용화시키고, 뒤집어서 부드럽게 혼합하였다. 실온에서 5분 인큐베이션 후, 브라이트라이트 플러스 시약을 웰당 100 μL로 96 웰 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 접착 필름으로 밀봉하고, 실온에서 대략 10분 동안 인큐베이션하여 세포를 용해시켰다. 웰 내용물을 백색 96-웰 플레이트로 옮기고, 왈락 1450 마이크로베타 트리룩스(Wallac 1450 Microbeta Trilux) 액체 섬광 계수기를 사용하여 15분 내에 발광을 측정하였다. 데이터를 단일 농도 평가를 위해 50% 바이러스 억제 농도 (EC50)의 결정을 위해 맞춤형 마이크로소프트 엑셀 2010 스프레드시트에 입력하였다.
조합 요법 검정
화합물 2를 상기 기재된 항-HCV 검정에서 0.008 nM의 고-시험 농도 및 9가지 농도의 화합물 1과 조합된 4가지의 연속 2배 희석물을 사용하여 평가하였다. 목적하는 농도의 4배 (4x)의 각각의 화합물 50 마이크로리터를 항바이러스 검정에서 세포를 함유하는 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 첨가하였다. 50 마이크로리터의 검정 배지를 웰에 첨가하였고, 여기서 시험 화합물을 단일 화합물로서 항바이러스 활성에 대해 평가하였다.
데이터 분석 - 미가공 데이터를 소프트맥스 프로(Softmax Pro)로부터 수집하고, 프리차드(Prichard) 및 시프만 맥시너지 II(Shipman MacSynergy II) 소프트웨어 템플릿 (Prichard et al., 1993. Antiviral Research 14: 181-206)으로 불러들였다. 약물 조합물의 효과를 단독으로 시험한 경우의 2종의 화합물의 활성에 기초하여 계산하였다. 예상되는 상가적 항바이러스 보호를 각각의 조합 농도에서 실험적으로 결정된 항바이러스 활성으로부터 차감하여 양성 값 (상승작용 또는 강화), 음성 값 (길항작용) 또는 0 (상가작용)을 산출하였다. 조합 검정의 결과는 각각의 조합 농도에서 3차원으로 제시되며, 상가작용의 평면 위로 (상승작용) 또는 아래로 (길항작용) 연장된 활성 표면이 생성된다. 표면의 부피를 계산하고, 95% 신뢰 구간에서 계산된 상승작용 부피 (μM2%)로서 표현하였다.
이들 연구를 위해, 상승작용은 95% 신뢰 구간에서 50 μM2 % 초과의 상승작용 부피를 생성하는 약물 조합물로서 정의되었다. 약간 상승작용적 활성 및 고도로 상승작용적 활성은 각각 50 내지 100 μM2% 및 > 100 μM2%의 상승작용 부피를 생성하는 것으로 정의되었다. -50 내지 50 μM2%의 상승작용 부피는 상가작용적인 것으로 간주되고, -50 μM2% 미만의 상승작용 부피는 길항작용적인 것으로 간주된다.
항-HCV 조합 요법 평가: 화합물 2를 화합물 1과 조합하여 Huh-luc/neo-ET 레플리콘 세포에서의 HCV 복제의 억제에 대해 평가하였다. 각각의 2-약물 조합물에 대해 각각의 농도에서 예상되는 상기 바이러스 복제 억제의 퍼센트를 95%, 99% 및 99.9% 신뢰 구간에서 계산하였다. 95% 신뢰 값에서 수득된 데이터를 3차원적으로 플롯팅하고, 상승작용 부피를 계산하였다. 95% 신뢰에서의 조합물에 대한 상승작용 부피를 하기 표 42에 요약하였다.
표 42: 조합물 항-HCV 활성 평가
HCV 레플리콘 검정의 결과는 조합물 항바이러스 검정에 사용된 농도 범위 내에서, 20 및 40 nM의 화합물 1이 0.004 및 0.008 nM의 농도의 화합물 2와 상승작용적 상호작용을 생성하였다는 것을 입증한다. 길항적 또는 상승작용적 독성 상호작용은 평가된 농도에서 관찰되지 않았다.
본 명세서는 본 발명의 실시양태와 관련하여 기재되었다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 하기 청구범위에 제시된 바와 같은 본 발명의 범주를 벗어나지 않으면서 다양한 변형 및 변화가 이루어질 수 있다는 것을 인지한다. 따라서, 본 명세서는 제한적 관점이 아니라 예시적 관점으로 간주되어야 하며, 모든 이러한 변형은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims (86)

  1. HCV 또는 C형 간염 감염으로 인한 병태의 치료를 필요로 하는 숙주에서 HCV 또는 C형 간염 감염으로 인한 병태를 치료하는 방법으로서, 유효량의 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염을

    유효량의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여하는 것을 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 화합물 1이 화합물 1-A인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제3 항-HCV 유효 작용제가 조합되어 사용되는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 제3 항-HCV 유효 작용제가 프로테아제 억제제, 또 다른 NS5A 억제제, 또 다른 NS5B 억제제, NS5B 비-기질 억제제, 인터페론 알파-2a, 리바비린 및 비-기질-기반 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 프로테아제 억제제가 NS3/4A 프로테아제 억제제인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 경구로 투여되는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 비경구로 투여되는 것인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 조합물이 정맥내로 투여되는 것인 방법.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, C형 간염 감염으로 인한 병태가 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (간세포성 암종 (HCC)), 간경변증, 만성 또는 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염 및 항-HCV-기반 피로로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 약 90 내지 약 360 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 180 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 간경변성인 방법.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 비-간경변성인 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 1일에 1회 투여되는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 1일에 2회 투여되는 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 최대 12주 동안 투여되는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 최대 8주 동안 투여되는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 최대 6주 동안 투여되는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주가 인간인 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 1인 방법.
  23. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 2인 방법.
  24. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 3인 방법.
  25. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 4인 방법.
  26. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 5인 방법.
  27. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 감염이 유전자형 6인 방법.
  28. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, HCV가 저항성 연관 돌연변이체인 방법.
  29. HCV 또는 C형 간염 감염으로 인한 병태의 치료를 필요로 하는 숙주에서 HCV 또는 C형 간염 감염으로 인한 병태를 치료하는 데 사용하기 위한,
    유효량의 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염이

    유효량의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합된 조합물.
  30. 제29항에 있어서, 화합물 1이 화합물 1-A인 조합물.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 제3 항-HCV 유효 작용제를 포함하는 조합물.
  32. 제31항에 있어서, 제3 항-HCV 유효 작용제가 프로테아제 억제제, 또 다른 NS5A 억제제, 또 다른 NS5B 억제제, NS5B 비-기질 억제제, 인터페론 알파-2a, 리바비린 및 비-기질-기반 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조합물.
  33. 제32항에 있어서, 프로테아제 억제제가 NS3/4A 프로테아제 억제제인 조합물.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 경구로 투여되는 조합물.
  35. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 비경구로 투여되는 조합물.
  36. 제35항에 있어서, 정맥내로 투여되는 조합물.
  37. 제29항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, C형 간염 감염으로 인한 병태가 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (간세포성 암종 (HCC)), 간경변증, 만성 또는 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염 및 항-HCV-기반 피로로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조합물.
  38. 제29항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  39. 제29항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  40. 제29항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 약 90 내지 약 360 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  41. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 180 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  42. HCV 또는 HCV 감염으로 인한 병태를 치료하기 위한 의약의 제조에서의
    화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염

    및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물의 용도.
  43. 제42항에 있어서, 화합물 1이 화합물 1-A인 용도.
    .
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 제3 항-HCV 유효 작용제가 프로테아제 억제제, 또 다른 NS5A 억제제, 또 다른 NS5B 억제제, NS5B 비-기질 억제제, 인터페론 알파-2a, 리바비린 및 비-기질-기반 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
  45. 제44항에 있어서, 프로테아제 억제제가 NS3/4A 프로테아제 억제제인 용도.
  46. 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 경구로 투여되는 것인 용도.
  47. 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 비경구로 투여되는 것인 용도.
  48. 제47항에 있어서, 조합물이 정맥내로 투여되는 것인 용도.
  49. 제42항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, C형 간염 감염으로 인한 병태가 바이러스-기반 만성 간 염증, 진행성 C형 간염으로 인한 간암 (간세포성 암종 (HCC)), 간경변증, 만성 또는 급성 C형 간염, 전격성 C형 간염, 만성 지속성 C형 간염 및 항-HCV-기반 피로로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
  50. 제42항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  51. 제42항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  52. 제42항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 약 90 내지 약 360 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  53. 제42항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 180 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  54. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.

  55. 제54항에 있어서, 조합물이 단일 투여 형태로 투여되는 것인 제약 조성물.
  56. 제54항에 있어서, 조합물이 2개 이상의 투여 형태로 투여되는 것인 제약 조성물.
  57. 제56항에 있어서, 조합물 중 1개의 투여 형태가 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하고, 조합물 중 제2 투여 형태가 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 제약 조성물.
  58. 제56항에 있어서, 둘 다의 투여 형태가 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 제약 조성물.
  59. 제54항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  60. 제54항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  61. 제54항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 150 내지 200 mg의 화합물 2 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  62. 제54항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 180 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  63. 제54항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 경구 전달에 적합한 투여 형태인 제약 조성물.
  64. 제54항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 비경구 전달에 적합한 제제인 제약 조성물.
  65. 제64항에 있어서, 정맥내 전달에 적합한 제제인 제약 조성물.
  66. 제54항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  67. 제66항에 있어서, 담체가 윤활제, 과립화제, 결합제, 붕해제, 당 담체 또는 전분인 제약 조성물.
  68. 제67항에 있어서, 담체가 만니톨, 미세결정질 셀룰로스, 콜로이드성 이산화규소, 크로스카르멜로스 소듐, 스테아르산마그네슘, 및 규화 미세결정질 셀룰로스로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  69. 제63항 및 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 환제, 정제 또는 캡슐의 형태인 제약 조성물.
  70. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효 투여 형태 및 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효 투여 형태를 포함하는, HCV의 치료를 필요로 하는 환자에서 HCV를 치료하기 위한 키트.
  71. 제70항에 있어서, 화합물 1의 제약상 허용되는 염이 화합물 1-A인 키트.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서, 약 100 mg 내지 약 800 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 키트.
  73. 제70항 또는 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 550 mg의 화합물 1 또는 등가량의 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 키트.
  74. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 약 150 mg 내지 약 200 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 키트.
  75. 제70항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 180 mg의 화합물 2 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 키트.
  76. 제70항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 2개의 투여 형태로 제공되는 것인 키트.
  77. 제70항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 조합물이 3개 이상의 투여 형태로 제공되는 것인 키트.
  78. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 90 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  79. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 270 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  80. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 360 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 방법.
  81. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 90 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  82. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 270 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  83. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 360 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.
  84. 제42항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 90 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  85. 제42항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 270 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
  86. 제42항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 360 mg의 화합물 2 또는 제약상 허용되는 염이 투여되는 것인 용도.
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