KR20240019099A

KR20240019099A - 뇌 또는 cns로의 암 전이를 치료하기 위한 egfr 분해제

Info

Publication number: KR20240019099A
Application number: KR1020237041044A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 지. 나스베슈크; 마틴 더플레시스; 재 영 안; 알렉산더 더블유. 허드; 라이언 이. 마이클; 키엘 라자르스키; 얀케 리앙; 게오르그 예슈케; 안토니오 리치; 아니크 괴르글러; 다니엘 루허
Original assignee: 씨4 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2021-05-26
Filing date: 2022-05-26
Publication date: 2024-02-14
Also published as: TW202313025A; WO2022251539A3; BR112023024507A2; IL308182A; EP4347044A2; WO2022251539A2; AU2022280070A1; CA3174207A1

Abstract

본 발명은 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 단백질의 유비퀴틴화 및 후속 프로테아솜 분해를 통해 EGFR의 돌연변이 형태를 분해하는 화합물을 사용한, 뇌 또는 중추 신경계의 다른 영역으로 전이된 돌연변이 EGFR 매개 암의 치료를 제공한다. 본 발명은 또한 EGFR의 돌연변이 형태를 분해하는 본원의 화합물을 제2 항암제와 조합하여 포함하는, 이러한 암의 치료를 위한 유리한 약물 조합물을 제공한다.

Description

뇌 또는 CNS로의 암 전이를 치료하기 위한 EGFR 분해제

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2021년 5월 26일에 출원된 미국 가출원 제63/193,574호 및 2021년 10월 21일에 출원된 미국 가출원 제63/270,488호를 우선권 주장하며, 각각의 전문은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.

발명의 분야

발명의 배경

HER 패밀리 수용체 티로신 키나제는 세포 성장, 분화 및 생존의 매개자이다. 수용체 패밀리는 4개의 별개의 구성원, 즉 표피 성장 인자 수용체 (EGFR, ErbB1 또는 HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (ErbB3) 및 HER4 (ErbB4)를 포함한다. 리간드 결합 시, 수용체는 동종이량체 및 이종이량체를 형성하고, 내인성 티로신 키나제 활성의 후속 활성화는 수용체 자가-인산화 및 하류 신호전달 분자의 활성화를 유발한다 (Yarden, Y., Sliwkowski, MX. Untangling the ErbB signaling network. Nature Review Mol Cell Biol. 2001 Feb;2(2): 127-37). 이들 신호전달 분자는 세포 성장 및 증식을 촉진한다. 과다발현 또는 돌연변이에 의한 EGFR의 탈조절은 결장직장암, 췌장암, 신경교종, 두경부암 및 폐암, 특히 비소세포 폐암 (NSCLC)을 포함한 많은 유형의 인간 암에 연루되었다. 여러 EGFR 표적화제가 수년에 걸쳐 개발되었다 (Ciardiello, F., and Tortora, G. (2008). EGFR antagonists in cancer treatment. The New England Journal of Medicine 358, 1160-1174). 에를로티닙 (타르세바(TARCEVA)®) 게피티닙 (이레사(IRESSA)®)은 재발성 NSCLC의 치료를 위해 수많은 국가에서 승인된 EGFR 티로신 키나제의 1세대 가역적 억제제이다. 오시메르티닙 (타그리소(TAGRISSO)®)은 EGFR 티로신 키나제의 비가역적 억제제이고, NSCLC의 1차 치료를 위해 수많은 국가에서 승인되었다 (Soina et al., (2018) The New England Journal of Medicine 378, 113-125).

EGFR의 가장 흔한 체세포 돌연변이는 엑손 19 결실 및 엑손 21 아미노산 치환이다. 가장 우세한 엑손 19 결실은 델타 746-750이고, 우세한 엑손 21 아미노산 치환은 L858R이다 (Sharma SV, Bell DW, Settleman J, Haber DA. Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer. Nat Rev Cancer. 2007 Mar;7(3): 169-81).

치료 저항성은 종종 수용체의 ATP 결합 부위 내의 2차 T790M 돌연변이로 인해 1세대 EGFR 억제제 치료 후에 빈번하게 발생한다. 돌연변이체-선택적 비가역적 억제제인 오시메르티닙은 T790M 돌연변이체에 대해 고도로 활성이지만, 그의 효능은 오시메르티닙이 주요 공유 결합을 형성하는 시스테인 잔기인 C797S의 후천성 돌연변이에 의해 손상될 수 있다 (Thress, K. S. et al. Acquired EGFR C797S mutation mediates resistance to AZD9291 in non-small cell lung cancer harboring EGFR T790M. Nat. Med. 21, 560-562 (2015)). C797S 돌연변이는 왕(Wang) 등에 의해 T790M-표적화 EGFR 억제제에 대한 저항성에 대한 주요 메카니즘인 것으로 추가로 보고되었다 (Wang et al. EGFR C797S mutation mediates resistance to third-generation inhibitors in T790M-positive non-small cell lung cancer, J Hematol Oncol. 2016; 9: 59). 오시메르티닙에 대한 저항성을 유발하는 추가의 돌연변이는 양(Yang) 등에 의해, 예를 들어 L718Q가 기재되어 있다 (Yang et al., Investigating Novel Resistance Mechanisms to Third-Generation EGFR Tyrosine Kinase Inhibitor Osimertinib in Non-Small Cell Lung Cancer Patients, Clinical Cancer Research, DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2310). NSCLC 치료에서 EGFR^L858R-T790M 및 EGFR^{L858R-T790M-C797S} 저항성 돌연변이를 표적화하는 것을 포함하는 추가적인 돌연변이 표적화 전략이 또한 공지되어 있다 (Lu et al. Targeting EGFR^L858R-T790M and EGFR^{L858R-T790M-C797S} resistance mutations in NSCLC: Current developments in medicinal chemistry, Med Res Rev 2018; 1-32).

EGFR 억제제, 특히 EGFR 돌연변이체를 함유하는 T790M의 선택적 억제제의 추가의 예는 또한 WO 2014081718, WO 2014210354, WO 2018/115218, WO 2018220149, WO 2020002487, 및 문헌 [ZHOU et al., "Novel mutant-selective EGFR kinase inhibitors against EGFR T790M", NATURE, (20091224), vol. 462, no. 7276, doi:10.1038/nature08622, ISSN 0028-0836, pages 1070 - 1074]에 기재된 바 있다.

모든 승인된 EGFR 억제제는 키나제의 ATP 결합 부위를 표적화한다. ATP-경쟁적 EGFR 억제제에 대한 저항성을 유발하는 2차 돌연변이가 ATP 결합 부위에 위치하기 때문에, 예를 들어 약물-저항성 EGFR 돌연변이체의 고도로 선택적인 표적화를 통해 현행 요법에 대한 저항성을 극복하기 위해 상이하게 작용하는 새로운 치료제가 필요하다.

최근 연구는 알로스테릭 부위를 의도적으로 표적화하는 것이 돌연변이체-선택적 억제제를 유도할 수 있음을 시사한다 (Jia et al. Overcoming EGFR(T790M) and EGFR(C797S) resistance with mutant-selective allosteric inhibitors, June 2016, Nature 534, 129-132).

소분자에 의해 촉진된 표적화된 단백질 분해 분야가 집중적으로 연구되었다 (Collins et al., Biochem J, 2017, 474(7), 1127-47). 단백질 분해는 다양한 세포 기능에서 역할을 한다. 예를 들어, 신체는 세포의 건강 및 생산성을 유지하기 위해 단백질 분해를 사용하여 조절 단백질의 농도를 작은 펩티드로의 분해를 통해 조정한다.

세레블론은 다양한 다른 단백질을 유비퀴틴화하는 E3 유비퀴틴 리가제 복합체를 형성하는 단백질이다. 세레블론은 항암 탈리도미드 유사체에 대한 1차 표적으로 공지되어 있다. 세레블론의 보다 높은 발현은 암 요법에서 탈리도미드 유사체의 효율과 연관되었다.

화합물은 표적화된 유비퀴틴화의 유용한 조정제로서 기재되어 있으며, 예를 들어 WO 2013020557, WO 2013063560, WO 2013106643, WO/2013170147, WO 2016011906, 및 WO/2019183523에 기재된 화합물이 표적화된 유비퀴틴화에 사용될 수 있다. 표적화된 유비퀴틴화를 위한 추가의 조정제는 라녹 테라퓨틱스 (항저우) 캄파니 리미티드(Ranok Therapeutics (Hangzhou) Co. Ltd.)에 의해 WO 2020206608 및 WO 2020207396에 기재된 것; 아르비나스, 인크.(Arvinas, Inc.)에 의해 WO 2015160845, WO 2016149668, WO 2016197032, WO 2017011590, WO 2017030814, WO 2018144649, WO 2018226542, 및 WO 2019199816에 기재된 것; 다나-파버 캔서 인스티튜트(Dana-Farber Cancer Institute)에 의해 WO 2016105518, WO 2017007612, WO 2017024317, WO 2017024318, WO 2017117473, WO 2017117474, WO 2018148443, WO 2018148440, 및 WO 2019165229에 기재된 것; 키메라 테라퓨틱스(Kymera Therapeutics)에 의해 WO 2019/060742, WO 2019/140387, 및 WO 2020/01022에 기재된 것; 및 C4 테라퓨틱스, 인크.(C4 Therapeutics, Inc.)에 의해 WO 2017197036, WO 2017197046, WO 2017197051, WO 2017197055, WO 2018237026, WO 2019099868, WO 2019191112, WO 2019204353, WO 2019236483, WO 2020132561, WO 2020181232, 및 WO 2020210630에 기재된 것을 포함한다.

EGFR의 분해를 위한 일부 특이적 분자가 또한 기재되어 있으며, 예를 들어 다나-파버 캔서 인스티튜트에 의해 WO 2017185036에 EGFR 분해제가 기재되어 있다. 에프. 호프만-라-로슈(F. Hoffman-La-Roche)에 의해 WO 2019121562 및 WO 2019149922에 EGFR 분해제가 기재되어 있다. 아르비나스, 인크.에 의해 WO 2018119441에 EGFR 분해제가 기재되어 있다. 추가의 EGFR 분해제는 논문 [Jang et al., "Mutant-Selective Allosteric EGFR Degraders are Effective Against a Broad Range of Drug-Resistant Mutations", Angewandte Chemie, 59(34), 14481-489]에 기재된 바 있다.

이러한 노력에도 불구하고, EGFR 돌연변이 및/또는 과다발현을 나타내는 생명을 위협하는 암으로 인해, EGFR에 의해 매개되는 장애의 치료를 필요로 하는 숙주, 특히 인간에서 EGFR에 의해 매개되는 장애를 치료하기 위한 새로운 EGFR 조정제에 대한 필요가 남아있다.

발명의 개요

유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 뇌 또는 중추 신경계, 예를 들어 말초 신경계, 뇌 척수액, 척수, 연수막, 경막외강 및/또는 경막으로 전이된 EGFR 매개 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 암을 치료하는 방법이 제시된다. 화학식 I, II, III 및 IV의 화합물은 EGFR에 결합하는 표적화 리간드, E3 리가제 결합 부분 (전형적으로 세레블론 서브유닛을 통해), 및 표적화 리간드를 E3 리가제 결합 부분에 공유 연결하는 링커를 포함한다. 특정 실시양태에서, E3 리가제 결합 부분은 A 또는 A*의 모이어티이고, 링커는 L¹ 또는 L²의 모이어티이며, 분자의 나머지는 EGFR 표적화 리간드 부분이다.

EGFR 표적화 리간드는 알로스테릭 억제제일 수 있다. 분해 전의 알로스테릭 결합은 전통적인 EGFR 억제제, 공유 조정제, 및 심지어 비-알로스테릭 분해제에 비해 본 발명의 화합물의 사용에 이점을 가져온다. 본원에 기재된 알로스테릭 분해 화합물을 사용하는 이점의 비제한적 예는 돌연변이-EGFR에 대한 증가된 선택성, 증가된 촉매 활성, 개선된 효능, ATP-경쟁적 억제제에 대한 저항성을 극복하는 능력, 및/또는 보다 적은 부작용을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 알로스테릭 분해 화합물은 오시메르티닙 및/또는 에를로티닙에 대한 저항성을 부여하는 돌연변이, 예를 들어 활성 부위 시스테인을 또 다른 아미노산으로 대체하는 돌연변이를 갖는 EGFR에 효과적으로 결합하여 분해한다. 이들 이점 때문에, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이되고 오시메르티닙에 대한 저항성이 발생한 암을 치료하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 비소세포 폐암에 대한 2차 요법 또는 치료). 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 치료 나이브인 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 치료하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 비소세포 폐암에 대한 1차 요법 또는 치료). 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이되고 다차 요법에 대한 저항성이 발생한 암을 치료하는 데 사용될 수 있다 (예를 들어, 비소세포 폐암에 대한 3차 요법 또는 치료).

다른 실시양태에서, EGFR 표적화 리간드는 활성 부위 억제제일 수 있다.

특정 실시양태에서, 제공된 방법은 뇌 또는 CNS로 전이된 종양에서 EGFR을 선택적으로 분해하고, 돌연변이 또는 돌연변이의 조합, 예를 들어 T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 돌연변이; T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 2개의 돌연변이의 조합; 또는 T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 3개의 돌연변이의 조합을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 L858R-T790M, L858R-T790M-C797S, L858R, 또는 L858R-C797S 함유 EGFR 돌연변이체의 선택적 분해제를 이용한다.

특정 실시양태에서, 유효량의 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3, 화합물 4, 화합물 5, 화합물 6, 화합물 7, 화합물 8, 화합물 9, 화합물 10, 화합물 11 또는 화합물 12 또는 그의 제약상 허용되는 염을 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법이 제공된다. 이들 화합물은 알로스테릭 부위 결합 EGFR 분해제 (알로스테릭 EGFR 분해제)이다.

본원에 기재된 높은 농도의 알로스테릭 EGFR 분해제는 혈액 뇌 장벽을 가로지른다. 예를 들어 화합물 1을 포함한 본원에 기재된 화합물은 또한 고도로 선택적이며, 다른 비-EGFR 단백질을 인지가능하게 분해하지 않으면서 돌연변이 EGFR-L858R 단백질을 분해한다. 키놈 스크린에서 (실시예 60 및 도 13a 및 13b 참조), 본원에 기재된 화합물은 수백개의 단백질에 대해 무시할만한 결합을 가졌다. 추가로, 전반적인 단백질체학에서 유사하게 높은 선택성이 관찰되었다 (실시예 61 및 표 14 참조). 또한, 본원에 기재된 화합물은 IMID 화합물, 예컨대 레날리도미드 및 CC-885에 의해 분해되는 2종의 단백질인 SALL4 및 GSPT1의 분해에 대해 매우 낮은 활성을 갖는다 (도 7 및 도 8 참조). NCI-H1975 (EGFR-L858R-T790M) 및 NCI-H3255 (EGFR-L858R) 인간 폐암 세포주에서, 돌연변이 EGFR의 50%의 분해는 나노몰 농도의 알로스테릭 EGFR 분해제로 6시간에 달성되었다 (표 9A 참조). 또한, EGFR 인산화가 강력하게 억제된다 (표 10A 참조). 대조적으로, 본원에 기재된 알로스테릭 EGFR 분해제는 인간 야생형 EGFR 세포주 A431에서 10 μM의 농도까지 50% 분해에도, 포스포-EGFR 억제에도 도달하지 않았다. 본원에 기재된 알로스테릭 EGFR 분해제는 또한 L858R, L858R-C797S, L858R-T790M, 또는 L858R-T790M-C797S EGFR 돌연변이체를 포함하는 EGFR 변이체를 발현하는 조작된 BaF3 세포의 증식을 야생형 EGFR을 발현하는 BaF3 세포에서의 486 nM의 GI50과 비교하여 8 내지 16 nM 범위의 GI50 값으로 억제한다 (표 10B 참조).

화합물 1 또는 화합물 2의 경구 투여는 마우스에서 잘 허용된다. NCI-H1975 마우스 이종이식 모델에서 화합물 1로의 처리는 용량-의존성 활성 및 최대 90% 종양 퇴행을 유도하였다 (도 1 참조). 또한, 화합물 1의 단일 경구 투여 후에 돌연변이 EGFR의 최대 85%가 생체내에서 분해되었고, 포스포-EGFR은 >95% 감소되었다 (도 2a 및 2b 참조). 오시메르티닙 저항성의 조작된 BaF3 EGFR-L858R-T790M-C797S 동종이식편 마우스 모델에서, 화합물 1의 경구 투여는 최소 효능이 관찰된 오시메르티닙 치료와 대조적으로 60% 종양 퇴행을 유도하였다 (도 3 참조). 뇌 전이의 루시페라제 발현 NCI-H1975 두개내 모델에서, 화합물 1의 경구 투여는 종양 퇴행을 유도하였다 (도 5a 참조). 화합물 1의 경구 투여는 또한 경동맥내 실행을 사용한 두개내 모델에서 종양 퇴행을 유도하였다 (도 14 참조).

특정 실시양태에서, 알로스테릭 EGFR 분해제는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암의 치료를 위한 2차 요법으로서 투여되고, 예를 들어 알로스테릭 EGFR 분해제는 오시메르티닙으로부터 진행된 환자에게 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 알로스테릭 EGFR 분해제는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암의 치료를 위한 1차 요법으로서 투여된다. 다른 실시양태에서, 알로스테릭 EGFR 분해제는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암의 치료를 위한 3차 요법으로서 투여된다.

특정 실시양태에서, 알로스테릭 EGFR 분해제는 "αC-아웃" 입체형태의 조절 αC-나선의 치환에 의해 생성된 알로스테릭 부위에 결합한다. 이러한 실시양태에서, 알로스테릭 부위는 활성화 루프 돌연변이체, 예컨대 엑손 21 L858R 또는 L861Q에서 확대될 수 있지만, 야생형 EGFR에서 폐쇄된다. 이러한 메카니즘은 야생형에 비해 돌연변이체 선택성을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 알로스테릭 EGFR 분해제는 돌연변이 EGFR 단량체 및 이량체를 분해한다.

특정 측면에서, 본 발명은 유효량의 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 동위원소, N-옥시드 또는 입체이성질체를 투여하는 것을 포함하는, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 방법을 제공하며:

;

여기서

A는 고리계 AF 및 AG로부터 선택되고:

;

A¹은 하기로부터 선택되고:

i) -NH-, 및

ii) -O-;

A²는 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CR⁵²-;

A³은 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CR⁵³-;

A⁴는 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CR⁵⁴-;

A⁵는 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CR⁵⁵-;

R¹은 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐

iii) C_1-6-알킬;

R⁵²는 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) 시아노,

iv) C_1-6-알콕시,

v) 할로-C_1-6-알콕시,

vi) C_1-6-알킬,

vii) 할로-C_1-6-알킬,

viii) C_3-8-시클로알킬, 및

ix) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R⁵³, R⁵⁴ 및 R⁵⁵는 독립적으로 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) C_1-6-알킬,

iv) 할로-C_1-6-알킬,

v) C_3-8-시클로알킬, 및

vi) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R²는 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) C_1-6-알킬,

iv) 할로-C_1-6-알킬,

v) C_3-8-시클로알킬, 및

vi) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R³은 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) C_1-6-알킬,

iv) 할로-C_1-6-알킬,

v) C_3-8-시클로알킬, 및

vi) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R⁴ 및 R⁵는 H이거나;

또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 -(CH₂)_q-를 형성하고;

q는 1 또는 2이고;

R⁶은 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) 시아노,

iv) C_1-6-알콕시,

v) 할로-C_1-6-알콕시,

vi) C_1-6-알킬,

vii) 할로-C_1-6-알킬,

viii) C_3-8-시클로알킬, 및

ix) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R⁷은 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) 시아노,

iv) C_1-6-알킬,

v) 할로-C_1-6-알킬,

vi) C_3-8-시클로알킬, 및

vii) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R⁷⁰은 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) 시아노,

iv) C_1-6-알킬,

v) 할로-C_1-6-알킬,

vi) C_3-8-시클로알킬, 및

vii) 할로-C_3-8-시클로알킬;

R⁸은 H이고;

R⁹는 하기로부터 선택되고:

i) H, 및

ii) C_1-6-알킬;

L¹은

이고;

C는 부재하거나 또는 고리계 F, G 및 H로부터 선택되고:

;

Y¹은 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CH-;

Y²는 하기로부터 선택되고:

i) -N-, 및

ii) -CR¹⁶-;

R¹², R¹³, R¹⁴ 및 R¹⁵는 독립적으로 하기로부터 선택되고:

i) -H-,

ii) 할로겐, 및

iii) 히드록시-C_1-6-알킬;

R¹⁶은 하기로부터 선택되고:

i) -H-,

ii) 히드록시, 및

iii) 플루오로;

L³은 부재하거나 또는 하기로부터 선택되고:

i) -(CH₂)_m-C(O)-,

ii) -C(O)-(CH₂)_p-,

iii) -C(O)-C(O)-,

iv) -NR¹⁰-C(O)-,

v) -C(O)-NR¹⁰-,

vi) -C(O)O-,

vii) -CH₂-CF₂-CH₂-,

viii) -CH₂-,

ix)

,

x)

, 및

xi)

;

m은 0, 1 또는 2이고;

p는 0, 1, 2 또는 3이고;

R¹⁰은 하기로부터 선택되고:

i) H, 및

ii) C_1-6-알킬;

D는 고리계 I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, V, W 및 X로부터 선택되고, 모든 고리계는 R⁸⁰, R⁸¹ 및 R⁸²로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기에 의해 임의로 치환되고:

;

R⁸⁰, R⁸¹ 및 R⁸²는 독립적으로 하기로부터 선택되고:

i) 할로겐,

ii) 시아노,

iii) 히드록시,

iv) 히드록시-C_1-6-알킬,

v) C_1-6-알콕시,

vi) 할로-C_1-6-알콕시,

vii) C_1-6-알킬,

viii) 할로-C_1-6-알킬,

ix) C_3-8-시클로알킬, 및

x) 할로-C_3-8-시클로알킬;

L⁴는 부재하거나 또는 하기로부터 선택되고:

i) -NR¹¹-C(O)-,

ii) -CH₂-, 및

iii) -O-;

E는 고리계 Y, Z, AA, AB 및 AC로부터 선택되고:

;

L⁵는 부재하거나 또는

이고;

B는 고리계 AD 및 AE로부터 선택된다:

.

;

여기서

A'는 고리계 AF, AG 및 AH로부터 선택되고;

;

R¹'는 하기로부터 선택되고:

i) H,

ii) 할로겐,

iii) C_1-6-알킬

iv) 시아노,

v) C_1-6-알콕시,

vi) 할로-C_1-6-알콕시,

vii) C_1-6-알킬,

viii) 할로-C_1-6-알킬,

ix) C_3-8-시클로알킬, 및

x) 할로-C_3-8-시클로알킬;

나머지 가변기는 본원에 정의된 바와 같다.

다른 측면에서, 본 발명은 유효량의 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 동위원소, N-옥시드 또는 입체이성질체를 투여하는 것을 포함하는, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 방법을 제공하며:

;

여기서

A*는 하기로부터 선택되고:

;

B*는 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 아릴이고; 특정 실시양태에서 B*는

로부터 선택되고;

y는 0, 1, 2, 또는 3이고;

R³¹은 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고, 비사이클 상에 존재하는 어느 하나의 고리 상에 위치할 수 있고, 예를 들어

는

을 포함하고;

R³²는 수소, 할로겐 (F, Cl, Br 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 또는 할로-C_3-8-시클로알킬이고;

R³³은 수소, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 또는 할로-C_3-8-시클로알킬이고 디히드로피롤 또는 이미다졸 고리 상에 위치할 수 있고;

R³⁴는 각 경우에 독립적으로 H, F, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고;

R³⁵는 각 경우에 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, 및 C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;

또는 R³⁴ 및 R³⁵는 조합되어 -(CH₂)_q-를 형성하고;

R³⁶ 및 R³⁷은 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시 (예를 들어 F, Cl, 또는 Br), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬 (예를 들어 F, Cl, 또는 Br), C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;

또는 R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5- 또는 6-원 사이클을 형성하고;

R⁴²는 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고;

R⁹⁰은 H, C_1-6-알킬 또는 C_3-6-시클로알킬이고;

고리 G는 1 또는 2개의 R⁴² 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴, 예를 들어 1, 2 또는 3개의 N 헤테로원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로아릴 고리이고;

A²¹은 -NH-, -O-, -CH₂-, 또는 -NR¹⁰⁰-이고;

R¹⁰⁰은 알킬, 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이거나; 또는 원자가에 의해 허용되는 바와 같이 R¹⁰⁰은 R³⁷과 조합되어 5-8원 헤테로사이클 또는 5원 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

A³², A³³, A³⁴, 및 A³⁵는 독립적으로 -N- 및 -CR⁴²-로부터 선택되고;

A³⁶은 -N- 또는 -CR³⁵-이고;

L²는 A*와 이소인돌리논 또는 인다졸을 연결하는 2가 연결기 (링커), 예를 들어 비제한적으로 화학식 LI의 2가 연결기이고; 여기서 나머지 가변기는 본원에 정의된 바와 같다.

특정 실시양태에서, L²는 하기 화학식을 갖고:

;

여기서

X¹ 및 X²는 각 경우에 독립적으로 결합, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, 비사이클, 알킬, 지방족, 헤테로지방족, -NR²⁷-, -CR⁴⁰R⁴¹-, -O-, -C(O)-, -C(NR²⁷)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(O)₂- 및 -S-로부터 선택되고; 이들 각각의 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴 및 비사이클은 R⁴⁰으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 임의로 치환되고;

R²⁰, R²¹, R²², R²³, 및 R²⁴는 각 경우에 독립적으로 결합, 알킬, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -SO₂-, -S(O)-, -C(S)-, -C(O)NR²⁷-, -NR²⁷C(O)-, -O-, -S-, -NR²⁷-, 옥시알킬렌, -C(R⁴⁰R⁴⁰)-, -P(O)(OR²⁶)O-, -P(O)(OR²⁶)-, 비사이클, 알켄, 알킨, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로사이클, 지방족, 헤테로지방족, 헤테로아릴, 락트산, 글리콜산, 및 카르보사이클로 이루어진 군으로부터 선택되고; 이들 각각은 R⁴⁰으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 치환기로 임의로 치환되고;

R²⁶은 각 경우에 독립적으로 수소, 알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 알켄, 알킨, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 지방족 및 헤테로지방족으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R²⁷은 각 경우에 독립적으로 수소, 알킬, 지방족, 헤테로지방족, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)(지방족, 아릴, 헤테로지방족 또는 헤테로아릴), -C(O)O(지방족, 아릴, 헤테로지방족 또는 헤테로아릴), 알켄 및 알킨으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁴⁰은 각 경우에 독립적으로 수소, R²⁷, 알킬, 알켄, 알킨, 플루오로, 브로모, 클로로, 히드록실, 알콕시, 아지드, 아미노, 시아노, -NH(지방족, 알킬 포함), -N(지방족, 알킬 포함)₂, -NHSO₂(지방족, 알킬 포함), -N(지방족, 알킬 포함)SO₂알킬, -NHSO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -N(알킬)SO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -NHSO₂알케닐, -N(알킬)SO₂알케닐, -NHSO₂알키닐, -N(알킬)SO₂알키닐, 할로알킬, 지방족, 헤테로지방족, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 옥소 및 시클로알킬로부터 선택되고; 추가로, 원자가에 의해 허용되는 경우에, 동일한 탄소에 결합된 2개의 R⁴⁰ 기가 함께 연결되어 3-8원 스피로사이클을 형성할 수 있고;

R⁴¹은 지방족, 아릴, 헤테로아릴 또는 수소이다.

가변기, 치환기, 실시양태 및 이들 조합으로부터 생성된 방법의 모든 조합은 구체적으로 및 개별적으로 개시된 것으로 간주되며, 이러한 도시는 단지 공간의 편의를 위한 것이다.

특정 실시양태에서, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물은 EGFR의 알로스테릭 분해제이다. 예를 들어, 화합물은 EGFR, 예를 들어 돌연변이된 EGFR 상의 알로스테릭 부위에 결합한 다음, EGFR 단백질의 분해를 지시할 수 있다.

특정 실시양태에서, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물은 혈액 뇌 장벽을 가로지른다. 혈액 뇌 장벽을 횡단함으로써, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. EGFR-매개 암의 비제한적 예는 비소세포 폐암; 유방암, 예컨대 HER-2 양성 유방암, ER+ (에스트로겐 양성) 유방암, PR+ (프로게스테론 양성) 유방암 또는 삼중 음성 유방암; 두경부암; 교모세포종; 췌장암; 갑상선암; 성상세포종; 식도암; 자궁경부암; 활막 육종; 난소암; 간암; 방광암; 및 신장암을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 폐암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 비소세포 폐암이다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 소세포 폐암이다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 선암종이다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 편평 세포 폐암이다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 대세포 미분화 암종이다. 특정 실시양태에서, 폐암은 뇌 또는 CNS로 전이된 신경내분비 암종이다. 폐암의 추가의 예는 육종양 암종, 선편평상피 암종, 귀리-세포 암, 복합 소세포 암종, 폐 카르시노이드 종양, 중추 카르시노이드, 말초 카르시노이드, 타액선-유형 폐 암종, 중피종 및 종격 종양을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 유방암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 유방암은 HER-2 양성 유방암이다. 특정 실시양태에서, 유방암은 ER+ 유방암이다. 특정 실시양태에서, 유방암은 PR+ 유방암이다. 특정 실시양태에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 결장직장암 또는 직장암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 두경부암 또는 식도암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 췌장암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 갑상선암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 난소암, 자궁암, 또는 자궁경부암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 신장암, 간암 또는 방광암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 흑색종을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 신장암, 간암 또는 방광암을 치료하는 데 사용된다. 다른 실시양태에서, 화합물은 선암종, 결장직장 암종, 유방암, 삼중 음성 유방암, 신세포 암종, 원발성 뇌 종양, 성상세포종, 식도암 또는 활막 육종을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 EGFR-매개 장애, 예컨대 뇌 또는 CNS에서의 암을 치료하기에 충분한 농도로 혈액 뇌 장벽을 가로지르고, EGFR 억제제를 사용한 전통적인 치료에 비해 하나 이상의 이점을 가지고, 심지어 다수의 추가의 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 EGFR 분해 화합물은 a) 특정 경우에 저항성을 극복할 수 있고/거나; b) 단백질을 파괴하여, 화합물이 대사된 후에도 단백질의 재합성을 필요로 하게 함으로써 약물 효과의 동역학을 연장시켜 수 있고/거나; c) 특정 촉매 활성 또는 결합 사건보다는 오히려 한 번에 단백질의 모든 기능을 표적화할 수 있고/거나; d) 소분자가 촉매적으로 작용할 가능성으로 인해 억제제와 비교하여 증가된 효력을 가질 수 있다.

한 측면에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 야생형으로부터 돌연변이된다. EGFR 돌연변이에 대한 다수의 가능성이 있다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 엑손 18, 엑손 19, 엑손 20, 또는 엑손 21, 또는 그의 임의의 조합에서 발견된다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 위치 L858, E709, G719, C797, L861, T790, 또는 L718 또는 그의 임의의 조합에 존재한다. 특정 실시양태에서, 돌연변이는 L858R, T790M, L718Q, L792H, 및/또는 C797S 돌연변이 또는 그의 임의의 조합이다.

특정 측면에서, 암에서 비-공유결합 억제제 (게피티닙, 에를로티닙, 라파티닙 또는 반데타닙을 포함하나 이에 제한되지는 않음) 또는 공유결합 억제제 (예컨대 아파티닙, 오시메르티닙 또는 다코미티닙)일 수 있는 적어도 1종의 EGFR 억제제로의 치료 후에 1개 이상의 EGFR 돌연변이가 발생하였다. 또 다른 측면에서, 암에서 항체, 예컨대 세툭시맙, 파니투맙 또는 네시투맙으로의 치료 후에 1개 이상의 EGFR 돌연변이가 발생하였다. 또 다른 측면에서, 암은, 암이 EGFR 억제제 치료에 본질적으로 저항성이 되도록 하는 1개 이상의 EGFR 돌연변이 또는 비-EGFR 돌연변이, 예를 들어 체세포 엑손 20 삽입, 체세포 PIK3CA 돌연변이, PTEN 발현의 상실, MET 증폭, 또는 KRAS 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제1 세대 EGFR 억제제, 예컨대 에를로티닙, 게피티닙 및/또는 라파티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제2 세대 EGFR 억제제, 예컨대 아파티닙 및/또는 다코미티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제3 세대 EGFR 억제제, 예컨대 오시메르티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 암을 치료하는 데 사용된다.

일부 실시양태에서, 이환 조직 내의 돌연변이된 EGFR 단백질은 L858 돌연변이, 예를 들어 L858R을 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 하기 열거된 아미노산 부위 중 적어도 1개의 돌연변이 또는 그의 조합을 갖는다. 돌연변이는, 예를 들어 열거된 예시적인 돌연변이 중 하나로부터 선택될 수 있거나, 또는 상이한 돌연변이일 수 있다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 선택된 2개의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 선택된 3개의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 4개 이상의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 이들 실시양태 중 일부에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 S768I, L718V, L792H, L792V, G796S, G796C, G724S, 및/또는 G719A의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 프레임시프트 돌연변이, 예를 들어 짧은 프레임내 결실을 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 엑손 19 결실을 갖는다. 특정 실시양태에서, 엑손 19 결실은 아미노산 LREA (L747-A750)를 포함하는 결실이다. 특정 실시양태에서, 엑손 19 결실은 아미노산 ELREA (E746-A750)를 포함하는 결실이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 엑손 21에서 L858R 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 야생형 EGFR보다 돌연변이된 EGFR에 의해 유도된 장애에 대해 더 활성이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 1개 이상의 엑손 18 결실을 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 E709 돌연변이, 예를 들어 E709A, E709G, E709K 또는 E709V를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 L718 돌연변이, 예를 들어 L718Q를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 G719 돌연변이, 예를 들어 G719S, G719A, G719C 또는 G719D를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 1개 이상의 엑손 19 삽입 및/또는 1개 이상의 엑손 20 삽입을 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 S7681 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR L861Q 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 C797S 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-T790M 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-L718Q 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-L792H 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-C797S, 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-T790M-C797S 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

본 출원의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명으로부터 명백할 것이다.

따라서, 본 발명은 적어도 하기 특징을 포함한다:

(a) 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법;

(b) (a)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 방법;

(c) 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 갖는 치료를 필요로 하는 환자, 전형적으로 인간의 치료에서의 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도;

(d) (c)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 용도;

(e) 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 갖는 치료를 필요로 하는 환자, 전형적으로 인간의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염;

(f) (e)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 화합물;

(g) 뇌로 전이된 EGFR 매개 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 뇌로 전이된 돌연변이 EGFR 매개 암을 치료하는 방법;

(h) (g)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 방법;

(i) 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 갖는 치료를 필요로 하는 환자, 전형적으로 인간의 치료에서의 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도;

(j) (i)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 용도;

(k) 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 갖는 치료를 필요로 하는 환자, 전형적으로 인간의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염;

(l) (k)에 있어서, 환자가 또한 ATP 부위 결합 EGFR 억제제, 예를 들어 오시메르티닙을 투여받는 것인 화합물.

도 1a는 NCI-H1975 L858R-T790M NSCLC 이종이식 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1 또는 오시메르티닙의 생체내 효능을 입증하는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 1, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 기준 (BID)으로 경구 (PO) 투여하고, 오시메르티닙을 1일 1회 기준 (QD)으로 경구 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 mm³ 단위로 측정된 NCI-H1975 종양 부피이다. 실험 절차는 실시예 55에 제공된다.
도 1b는 NCI-H1975 NSCLC 이종이식 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1 또는 오시메르티닙의 체중에 대한 효과를 입증하는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 1, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 기준 (BID)으로 경구 (PO) 투여하고, 오시메르티닙을 1일 1회 기준 (QD)으로 경구 (PO) 투여하였다. 투여 14일 후에, 종양을 재성장에 대해 모니터링하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 % 단위로서 측정된 체중 변화이다. 실험 절차는 실시예 55에 제공된다.
도 2a 및 도 2b는 NCI-H1975 종양에서의 (a) 돌연변이 EGFR-L858R-T790M 및 (b) 포스포-EGFR의 상대적 단백질 발현의 그래프이다. BALB/c 누드 마우스에게 NCI-H1975 종양 세포를 주사하고, 화합물 1을 10, 25, 또는 50 mg/kg으로 단일 경구 (PO) 용량으로서 투여하고, 오시메르티닙을 25 mg/kg으로 경구 (PO) 투여하였다. x-축은 시간 단위로 측정된 시간이고, 단일 용량 투여 후의 시간을 나타내고, y-축은 알파-튜불린에 대해 정규화된 비히클 대조군에 대한 단백질의 퍼센트이다. 실험 절차는 실시예 56에 제공된다.
도 3a는 조작된 삼중 돌연변이 EGFR (L858R-T790M-C797S) BaF3 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1 또는 오시메르티닙의 생체내 효능을 입증하는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 1, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 모든 화합물을 화합물 1에 대해 1일 2회 기준 (BID) 및 오시메르티닙에 대해 1일 1회 기준 (QD)으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 mm³ 단위로 측정된 BaF3 종양 부피이다. 실험 절차는 실시예 57에 제공된다.
도 3b는 조작된 삼중 돌연변이 EGFR (L858R-T790M-C797S) BaF3 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1 또는 오시메르티닙의 체중에 대한 효과를 입증하는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 1, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 모든 화합물을 화합물 1에 대해 1일 2회 기준 (BID) 및 오시메르티닙에 대해 1일 1회 기준 (QD)으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 % 단위로 측정된 체중 변화이다. 실험 절차는 실시예 57에 제공된다.
도 4a는 조작된 삼중 돌연변이 EGFR (L858R-T790M-C797S) BaF3 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 2 및 오시메르티닙의 생체내 효능을 보여주는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 2, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 모든 화합물을 화합물 2에 대해 1일 2회 기준 (BID) 및 오시메르티닙에 대해 1일 1회 기준 (QD)으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 mm³ 단위로 측정된 BaF3 종양 부피이다. 실험 절차는 실시예 57에 제공된다.
도 4b는 조작된 삼중 돌연변이 EGFR (L858R-T790M-C797S) BaF3 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 2 및 오시메르티닙에 의해 유발된 체중의 변화를 보여주는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 용량 반응 (20, 50 및 100 mg/kg/일)의 화합물 2, 또는 25 mg/kg/일의 오시메르티닙으로 14일 동안 처리하였다. 모든 화합물을 화합물 2에 대해 1일 2회 기준 (BID) 및 오시메르티닙에 대해 1일 1회 기준 (QD)으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 퍼센트 단위의 체중 변화이다. 실험 절차는 실시예 57에 제공된다.
도 5a는 종양 세포를 전뇌에 두개내로 주사함으로써 확립된 두개내 NCI-H1975-루시페라제 발현 NSCLC 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1의 평균 생체내 효능이다. 마우스를 비히클 대조군, 100 mg/kg의 화합물 1로 14일 동안 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 (BID) 기준으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 광자/sx10⁶으로 측정된 NCI-H1975-luc BLI (총 생물발광 신호)이다. 실험 절차는 실시예 58에 제공된다.
도 5b는 종양 세포를 전뇌에 두개내로 주사함으로써 확립된 두개내 NCI-H1975-루시페라제 발현 NSCLC 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 치료에서의 화합물 1의 체중에 대한 평균 효과를 입증하는 선 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군 또는 100 mg/kg의 화합물 1로 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 (BID) 기준으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 체중의 % 변화이다. 실험 절차는 실시예 58에 제공된다.
도 6은 50 mg/kg의 단일 경구 투여 후 화합물 1의 평균 혈장 및 종양 농도 시간 프로파일의 선 그래프이다. 암컷 BALB/c 누드 마우스에게 NCI-H1975 (EGFR-L858R-T790M) 루시페라제-발현 세포를 두개내로 주사하고, 화합물 1의 단일 경구 용량을 투여하였다. 혈장 및 종양을 지시된 시점에 수거하고, 정량적 분석을 위해 LC/MS/MS 시스템에 주입하였다.
도 7은 레날리도미드와 비교하여 Sal-유사 단백질 4 (SALL4) 분해에 대한 화합물 1의 효과를 기재하는 용량-반응 곡선이다. x-축은 화합물 1 또는 레날리도미드의 농도 (nM)이고, y-축은 6시간 후에 남아있는 SALL4 (%)이다. 화합물 1은 10 μM까지 SALL4 단백질 수준에 대한 효과가 없었다. 실험 절차는 실시예 62에 제공된다.
도 8은 CC-885와 비교하여 G1에서 S로의 상 전이 1 (GSPT1) 분해에 대한 화합물 1의 효과를 기재하는 용량-반응 곡선이다. x-축은 화합물 1 또는 CC-885 IMiD의 농도 (nM)이고, y-축은 6시간 후에 남아있는 GSPT1 (%)이다. 화합물 1은 10 μM까지 GSPT1에 대해 유의한 효과를 갖지 않았다. 실험 절차는 실시예 63에 제공된다.
도 9는 X선 회절에 의해 확립된 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 밀도 지도이다. 이 결정 구조는 하기 화합물 1의 합성에서 논의된 바와 같이 화합물 1의 키랄성을 확립한다.
도 10은 X선 회절에 의해 확립된 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 밀도 지도이다. 이 결정 구조는 하기 화합물 1의 합성에서 논의된 바와 같이 화합물 1의 키랄성을 확립한다.
도 11은 X선 회절에 의해 확립된 tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트의 밀도 지도이다. 이 결정 구조는 하기 화합물 2의 합성에서 논의된 바와 같이 화합물 2의 키랄성을 확립한다.
도 12는 X선 회절에 의해 확립된 tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트의 결정 구조이다. 이 결정 구조는 하기 화합물 2의 합성에서 논의된 바와 같이 화합물 2의 키랄성을 확립한다.
도 13a 및 도 13b는 486개의 야생형 및 돌연변이체 인간 단백질 키나제의 패널로부터의 다양한 단백질에 대한 100 nM의 화합물 1의 결합 선택성을 보여주는 인간 키놈 계통수 결합 플롯이다. 각각의 키나제는 원으로 표시된다. 어두운색 및 밝은색 원은 각각 <50% 및 >50%의 퍼센트 결합이 남아있는 키나제를 나타낸다. 어두운 원의 크기는 보다 높은 친화도 결합을 나타낸다. 보다 작은 어두운 원은 EGFR-L858R이고, 보다 큰 어두운 원은 EGFR-L861Q이다. 실험 절차는 실시예 60에 제공된다.
도 14는 경동맥에 종양 세포를 주사함으로써 확립된 두개내 NCI-H1975-루시페라제 발현 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스에서의 화합물 1의 생체내 효능을 예시하는 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 100 mg/kg의 화합물 1로 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 (BID) 기준으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 NCI-H1975-LUC BLI (광자/s)이다. 실험 절차는 실시예 64에 제공된다.
도 15는 경동맥에 종양 세포를 주사함으로써 확립된 두개내 NCI-H1975-루시페라제 발현 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스에서의 생체내 체중 변화를 예시하는 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 100 mg/kg의 화합물 1로 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 (BID) 기준으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 체중의 % 변화이다. 실험 절차는 실시예 64에 제공된다.
도 16은 경동맥에 종양 세포를 주사함으로써 확립된 두개내 NCI-H1975-루시페라제 발현 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스의 생존 확률을 보여주는 그래프이다. 마우스를 비히클 대조군, 100 mg/kg의 화합물 1로 처리하였다. 화합물 1을 1일 2회 (BID) 기준으로 경구로 (PO) 투여하였다. x-축은 일 단위로 측정된 시간이고, y-축은 생존의 % 확률이다. 실험 절차는 실시예 64에 제공된다.
도 17은 L858R 돌연변이 EGFR의 상이한 결합 포켓에서 화합물 1의 알로스테릭 EGFR 결합 부분 및 오시메르티닙의 동시 결합을 보여주는 공결정 구조이다. 화합물 1의 알로스테릭 EGFR 결합 부분은 L858R 돌연변이에 가깝게 결합한다. 실험 절차는 실시예 66에 제공된다.
도 18a 및 도 18b는 고정화된 Btn-CRBN-DDB1 상에 주사된 1.5 μM

(18a) 또는 5 μM

(18b)와 혼합된 화합물 1의 SPR 센서그램이다. 각각의 센서그램에 상응하는 화합물 1의 농도를 키로 나타낸다. 얇은 흑색 선은 1:1 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델에 대한 피트를 나타내며, 각각의 적정 실험에 대한 최적-피트 파라미터는 그의 각각의 플롯에 열거되어 있다. 실험 절차는 실시예 68에 제공된다.
도 19는 H3255 (EGFR-L858R) 세포에서의 화합물 1-유도된 EGFR-L858R 분해 및 하류 신호전달에 대한 오시메르티닙의 효과를 보여주는 웨스턴 블롯이다. 실험 절차는 실시예 69에 제공된다.

발명의 상세한 설명

유비퀴틴 프로테아솜 경로 (UPP)를 통해 뇌 또는 CNS로 전이된 표피 성장 인자 수용체 단백질 (EGFR) 매개 암을 분해하는 화합물 및 그의 용도 및 제조가 제공된다. 본 발명은 EGFR에 결합하는 표적화 리간드, E3 리가제 결합 부분 (전형적으로 세레블론 서브유닛을 통해), 및 표적화 리간드를 E3 리가제 결합 부분에 공유 연결하는 링커를 포함하는 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 특정 실시양태에서, E3 리가제 결합 부분은 A 또는 A*의 모이어티이고, 링커는 L¹ 또는 L²의 모이어티이며, 분자의 나머지는 EGFR 표적화 리간드 부분이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 돌연변이 또는 돌연변이의 조합, 예를 들어 T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 돌연변이; T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 2개의 돌연변이의 조합; 또는 T790M, L858R 및 C797S로부터 선택된 2개의 돌연변이의 조합을 갖는 EGFR을 분해한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 L858R-T790M, L858R-T790M-C797S, L858R, 및/또는 L858R-C797S 함유 EGFR 돌연변이체의 선택적 분해제이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 적어도 1개의 공지된 EGFR 억제제에 비해 개선된 효능 및/또는 안전성 프로파일을 제공한다. 예를 들어, 본원에 기재된 분해제는 세레블론-매개 프로테아솜 분해의 촉매 분해 활성과 조합된 억제제 단독 단백질 결합 모이어티의 효율을 갖는다. 이는 신속하게 "작용으로 복귀"하고 촉매 기능을 반복할 수 있는 활성 모이어티에 의해 EGFR이 과다발현된 표적에 대한 신속한 활성을 제공한다. 이러한 방식으로, EGFR은 오시메르티닙과 같은 공유 자살 억제제로 행해진 바와 같이 신속하게 파괴되지만, 동시에 활성 약물을 파괴하지 않는다.

I. 정의

본 명세서에 사용된 일반적 용어의 하기 정의는 용어가 단독으로 또는 다른 기와 조합되어 나타나는지 여부에 관계없이 적용된다.

달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구범위를 비롯하여 본 출원에 사용된 하기 용어는 하기 주어진 정의를 갖는다. 본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다는 것에 주목해야 한다.

용어 "C_1-6-알콕시"는 화학식 -O-R'의 기를 나타내며, 여기서 R'는 C_1-6-알킬 기, 특히 C_1-3-알킬이다. C_1-6-알콕시 기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시 및 tert-부톡시를 포함한다. 특정한 예는 메톡시, 에톡시 및 이소프로폭시이다. 보다 특정한 예는 메톡시이다.

용어 "C_1-6-알킬"은 단독으로 또는 다른 기와 조합되어, 단일 또는 다중 분지를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄화수소 라디칼을 나타내며, 여기서 알킬 기는 일반적으로 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하고, 예를 들어 메틸 (Me), 에틸 (Et), 프로필, 이소프로필 (i-프로필), n-부틸, i-부틸 (이소부틸), 2-부틸 (sec-부틸), t-부틸 (tert-부틸), 이소펜틸, 2-에틸-프로필 (2-메틸-프로필), 1,2-디메틸-프로필 등이다. 특정 기는 메틸이다.

용어 "시아노"는 -C≡N 기를 나타낸다.

용어 "C_3-8-시클로알콕시"는 화학식 -O-R'의 기를 나타내며, 여기서 R'는 C_3-8-시클로알킬 기이다. 시클로알콕시 기의 예는 시클로프로폭시, 시클로부톡시, 시클로펜틸옥시, 시클로헥실옥시, 시클로헵틸옥시 및 시클로옥틸옥시를 포함한다. 특정한 예는 시클로프로폭시이다.

용어 "C_3-8-시클로알킬"은 3 내지 8개의 고리 탄소 원자의 1가 포화 모노시클릭 또는 비시클릭 탄화수소 기를 나타낸다. 비시클릭은 1 또는 2개의 탄소 원자를 공통으로 갖는 2개의 포화 카르보사이클로 이루어진 고리계를 의미한다. 모노시클릭 C_3-8-시클로알킬의 예는 시클로프로필, 시클로부타닐, 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 시클로헵틸이다. 비시클릭 C_3-8-시클로알킬의 예는 스피로[3.3]헵타닐이다. 특정한 모노시클릭 C_3-8-시클로알킬 기는 시클로프로필, 시클로부타닐이다. 보다 특정한 모노시클릭 C_3-8-시클로알킬 기는 시클로프로필을 포함한다.

용어 "할로-C_1-6-알콕시"는 C_1-6-알콕시 기의 수소 원자 중 적어도 1개가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_1-6-알콕시 기를 나타낸다. 용어 "퍼할로-C_1-6-알콕시"는 C_1-6-알콕시 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_1-6-알콕시 기를 나타낸다. 할로-C_1-6-알콕시의 예는 플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시, 플루오로에톡시, 디플루오로에톡시, 트리플루오로에톡시, 트리플루오로메틸에톡시, 트리플루오로디메틸에톡시 및 펜타플루오로에톡시를 포함한다. 특정한 할로-C_1-6-알콕시 기는 플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 디플루오로메톡시, 디플루오로에톡시, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로메틸에톡시 및 트리플루오로디메틸에톡시를 포함한다. 보다 특정한 예는 플루오로메톡시, 디플루오로메톡시 및 트리플루오로메톡시이다.

용어 "할로-C_1-6-알킬"은 C_1-6-알킬 기의 수소 원자 중 적어도 1개가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_1-6-알킬 기를 나타낸다. 용어 "퍼할로-C_1-6-알킬-C_1-6-알킬"은 알킬 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된-C_1-6-알킬-C_1-6-알킬 기를 나타낸다. 할로-C_1-6-알킬의 예는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸, 트리플루오로메틸에틸 및 펜타플루오로에틸을 포함한다. 특정한 할로-C_1-6-알킬 기는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 플루오로에틸, 트리플루오로에틸 및 디플루오로에틸을 포함한다. 보다 특정한 할로-C_1-6-알킬 기는 플루오로메틸을 포함한다.

용어 "할로-C_3-8-시클로알콕시"는 C_3-8-시클로알콕시 기의 수소 원자 중 적어도 1개가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_3-8-시클로알콕시 기를 나타낸다. 용어 "퍼할로-C_3-8-시클로알콕시"는 C_3-8-시클로알콕시 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_3-8-시클로알콕시 기를 나타낸다. 할로-C_3-8-시클로알콕시의 예는 플루오로시클로프로폭시, 플루오로시클로부톡시, 플루오로시클로펜틸옥시, 플루오로시클로헥실옥시, 플루오로시클로헵틸옥시, 디플루오로시클로프로폭시, 디플루오로시클로부톡시, 디플루오로시클로펜틸옥시, 디플루오로시클로헥실옥시 및 디플루오로시클로헵틸옥시를 포함한다.

용어 "할로-C_3-8-시클로알킬"은 C_3-8-시클로알킬 기의 수소 원자 중 적어도 1개가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된 C_3-8-시클로알킬 기를 나타낸다. 용어 "퍼할로-C_3-8-시클로알킬"은 알킬 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자에 의해 대체된-C_3-8-시클로알킬 기를 나타낸다. 할로-C_3-8-시클로알킬의 예는 플루오로시클로프로필, 플루오로시클로부타닐, 플루오로시클로펜틸, 플루오로시클로헥실, 플루오로시클로헵틸, 디플루오로시클로프로필, 디플루오로시클로부타닐, 디플루오로시클로펜틸, 디플루오로시클로헥실 또는 디플루오로시클로헵틸을 포함한다.

용어 "할로겐"은 단독으로 또는 다른 기와 조합되어 클로로 (Cl), 아이오도 (I), 플루오로 (F) 및 브로모 (Br)를 나타낸다. 구체적 기는 F 및 Cl이다.

용어 "히드록시"는 -OH 기를 나타낸다.

용어 "히드록시-C_1-6-알킬 알킬"은 C_1-6-알킬 알킬 기의 수소 원자 중 적어도 1개가 히드록시 기에 의해 대체된 C_1-6-알킬 알킬 기를 나타낸다. 히드록시-C_1-6-알킬의 예는 히드록시메틸, 히드록시에틸 및 히드록시프로필을 포함한다. 특정한 예는 히드록시메틸이다.

용어 "제약상 허용되는"은 일반적으로 안전하고, 비-독성이고, 생물학적으로도 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아니고, 수의학적 뿐만 아니라 인간 제약 용도에 허용되는 제약 조성물을 제조하는 데 유용한 물질의 속성을 나타낸다.

용어 "제약상 허용되는 염"은 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 염을 지칭한다. 무기 및 유기 산과의 적합한 염의 예는 아세트산, 시트르산, 포름산, 푸마르산, 염산, 락트산, 말레산, 말산, 메탄-술폰산, 질산, 인산, p-톨루엔술폰산, 숙신산, 황산 (황산), 타르타르산, 트리플루오로아세트산 등이나, 이에 제한되지는 않는다. 특정한 산은 포름산, 트리플루오로아세트산 및 염산이다. 특정 산은 트리플루오로아세트산이다.

용어 "제약상 허용되는 보조 물질"은 제제의 다른 성분과 상용성인 담체 및 보조 물질, 예컨대 희석제 또는 부형제를 지칭한다.

용어 "제약 조성물"은 명시된 성분을 미리 결정된 양 또는 비율로 포함하는 생성물, 뿐만 아니라 명시된 성분을 명시된 양으로 조합함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포괄한다. 특히, 이는 1종 이상의 활성 성분, 및 불활성 성분을 포함하는 임의적인 담체를 포함하는 생성물, 뿐만 아니라 성분 중 임의의 2종 이상의 조합, 복합체화 또는 응집으로부터, 또는 성분 중 1종 이상의 해리로부터, 또는 성분 중 1종 이상의 다른 유형의 반응 또는 상호작용으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포괄한다.

"치료 유효량"은 질환 상태를 치료하기 위해 대상체에 투여되는 경우에 질환 상태에 대한 이러한 치료를 실행하기에 충분한 화합물의 양을 의미한다. "치료 유효량"은 화합물, 치료될 질환 상태, 치료되는 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적 건강, 투여의 경로 및 형태, 담당 의학 또는 수의학 진료의의 판단, 및 다른 인자에 따라 달라질 것이다.

가변기를 언급할 때 용어 "본원에 정의된 바와 같은" 및 "본원에 기재된 바와 같은"은 가변기의 광범위한 정의 뿐만 아니라 특히, 보다 특히 및 가장 특히, 존재하는 경우에 정의를 참조로 포함한다.

화학 반응을 언급할 때 용어 "처리하는", "접촉시키는" 및 "반응시키는"은 지시된 및/또는 목적하는 생성물을 생성하기 위해 적절한 조건 하에 2종 이상의 시약을 첨가하거나 혼합하는 것을 의미한다. 지시된 및/또는 목적하는 생성물을 생성하는 반응은 반드시 처음에 첨가된 2종의 시약의 조합으로부터 직접 생성되는 것이 아닐 수 있으며, 즉 지시된 및/또는 목적하는 생성물의 형성에 궁극적으로 이르게 하는 혼합물 중에 생성되는 1종 이상의 중간체가 존재할 수 있다는 것을 인지해야 한다.

용어 "제약상 허용되는 부형제"는 치료 활성을 갖지 않고 비-독성인 임의의 성분, 예컨대 제약 제품의 제제화에 사용되는 붕해제, 결합제, 충전제, 용매, 완충제, 장성 작용제, 안정화제, 항산화제, 계면활성제 또는 윤활제를 나타낸다.

용어 "억제제"는 특정한 리간드와 특정한 수용체의 결합을 경쟁, 감소 또는 방지하거나, 또는 특정한 단백질의 기능을 감소 또는 방지하는 화합물을 나타낸다.

용어 "반수 최대 억제 농도" (IC₅₀)는 시험관내에서 생물학적 과정의 50% 억제를 수득하는 데 요구되는 특정한 화합물의 농도를 나타낸다. IC₅₀ 값은 pIC₅₀ 값 (-log IC₅₀)으로 대수적으로 전환될 수 있으며, 여기서 보다 높은 값은 기하급수적으로 보다 큰 효력을 나타낸다. IC₅₀ 값은 절대 값이 아니라, 실험 조건, 예를 들어 사용된 농도에 따라 달라진다. IC₅₀ 값은 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식 (Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099)을 사용하여 절대 억제 상수 (K_i)로 전환될 수 있다.

용어 "방향족"은 문헌, 특히 문헌 [IUPAC - Compendium of Chemical Terminology, 2nd, A. D. McNaught & A. Wilkinson (Eds). Blackwell Scientific Publications, Oxford (1997)]에 정의된 바와 같은 방향족성의 통상적인 개념을 나타낸다.

키랄 탄소가 화학 구조에 존재할 때마다, 그 키랄 탄소와 회합된 모든 입체이성질체는 순수한 입체이성질체 뿐만 아니라 그의 혼합물같은 구조에 포괄되는 것으로 의도된다.

특정 실시양태에서, 동위원소가 본 발명의 화합물에 혼입된다. 이들 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 ²H, ³H,¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁸F, ³⁵S 및 ³⁶Cl을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 하나의 비제한적 실시양태에서, 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (예를 들어 ¹⁴C 사용), 반응 동역학 연구 (예를 들어 ²H 또는 ³H 사용), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분포 검정을 포함한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에 사용될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물에 존재하는 임의의 수소 원자는 ¹⁸F 원자로 치환될 수 있으며, 그러한 치환은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다.

하나의 비제한적 실시양태에서, 수소 원자의 중수소 원자로의 치환은 본원에 기재된 임의의 화합물에 제공될 수 있다. 예를 들어, 임의의 기가 메틸, 에틸 또는 메톡시이거나 또는 예를 들어 치환을 통해 이를 함유하는 경우에, 알킬 잔기는 중수소화될 수 있다 (비제한적 실시양태에서, CDH₂, CD₂H, CD_3,CH₂CD₃, CD₂CD₃, CHDCH₂D, CH₂CD₃, CHDCHD₂, OCDH₂, OCD₂H, 또는 OCD₃ 등). 특정의 다른 실시양태에서, 2개의 치환기가 조합되어 사이클을 형성하는 경우, 비치환된 탄소는 중수소화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 중수소는 생체내 화합물의 대사 동안 파괴되는 결합을 갖는 원자 상에 위치하거나, 또는 대사되는 결합으로부터 1, 2 또는 3개 원자 떨어져 존재한다 (예를 들어, 이는 α, β 또는 γ, 또는 1차, 2차 또는 3차 동위원소 효과로 지칭될 수 있음).

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 동위원소 표지된다. 특정 실시양태에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R²⁰, R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁶, R²⁷, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R⁴⁰, R⁴¹, R⁴², R⁵², R⁵³, R⁵⁴, R⁵⁵, R⁷⁰, R⁸⁰, R⁸¹, R⁸², R⁹⁰, 또는 R¹⁰⁰으로부터 독립적으로 선택된 적어도 1개의 R 기는 원자가에 의해 허용되는 바에 따라 1, 2개 또는 그 초과의 동위원소로 동위원소 표지된다. 특정 실시양태에서, 동위원소 표지는 중수소이다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 중수소는 생체내 화합물의 대사 동안 파괴되는 결합을 갖는 원자 상에 위치하거나, 또는 대사되는 결합으로부터 1, 2 또는 3개 원자 떨어져 존재한다 (예를 들어, 이는 α, β 또는 γ, 또는 1차, 2차 또는 3차 동위원소 효과로 지칭될 수 있음). 또 다른 실시양태에서, 동위원소 표지는 ¹³C이다. 다른 실시양태에서, 동위원소 표지는 ¹⁸F이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 용매 (물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있다. 따라서, 하나의 비제한적 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 화합물의 용매화 형태를 포함한다. 용어 "용매화물"은 본원에 기재된 화합물 (그의 염 포함)과 1종 이상의 용매 분자의 분자 복합체를 지칭한다. 용매의 비제한적 예는 물, 에탄올, 이소프로판올, 디메틸 술폭시드, 아세톤 및 다른 통상의 유기 용매이다.

특정 실시양태에서, "알케닐"은 쇄를 따라 안정한 지점에서 발생할 수 있는 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 지방족 탄화수소 기이다. 하나의 비제한적 실시양태에서, 알케닐은 2 내지 약 12개의 탄소 원자, 보다 일반적으로 2 내지 약 6개의 탄소 원자 또는 2 내지 약 4개의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 알케닐은 C₂, C₂-C₃, C₂-C₄, C₂-C₅, 또는 C₂-C₆이다. 특정 실시양태에서, 알케닐 라디칼의 예는 에테닐, 프로페닐, 알릴, 프로페닐, 부테닐 및 4-메틸부테닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 용어 "알케닐"은 또한 "시스" 및 "트랜스" 알케닐 기하구조, 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 알케닐 기하구조를 구현한다. 특정 실시양태에서, 용어 "알케닐"은 또한 적어도 1개의 불포화 지점을 갖는 시클로알킬 또는 카르보시클릭 기를 포괄한다.

특정 실시양태에서, "알키닐"은 쇄를 따라 임의의 안정한 지점에서 발생할 수 있는 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 분지형 또는 직쇄 지방족 탄화수소 기이다. 하나의 비제한적 실시양태에서, 알키닐은 2 내지 약 12개의 탄소 원자, 보다 일반적으로 2 내지 약 6개의 탄소 원자, 또는 2 내지 약 4개의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 알키닐은 C₂, C₂-C₃, C₂-C₄, C₂-C₅, 또는 C₂-C₆이다. 특정 실시양태에서, 알키닐의 예는 에티닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-펜티닐, 4-펜티닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 3-헥시닐, 4-헥시닐 및 5-헥시닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 용어 "알키닐"은 또한 적어도 1개의 삼중 결합 불포화 지점을 갖는 시클로알킬 또는 카르보시클릭 기를 포괄한다.

특정 실시양태에서, 용어 "CNS"는, 예를 들어 뇌, 뇌간, 말초 신경계, 뇌 척수액, 척수, 연수막, 경막외강, 미엘린, 시상, 시상하부, 뇌하수체, 해마, 소뇌, 대뇌, 중뇌, 교뇌, 전두엽, 측두엽 및/또는 경막을 포함한 중추 신경계의 성분을 지칭한다.

II. 화학식 I, II, III 및 IV의 화합물을 사용하여 EGFR 매개 장애를 치료하는 방법

본 발명은 화학식 I, II, III 및 IV의 화합물을 사용하는 방법을 제공한다.

E1: 특정 실시양태에서, 본 발명은 뇌, 중추 신경계, 말초 신경계, 뇌 척수액, 척수, 연수막, 경막외강 및/또는 경막으로 전이된 EGFR 매개 암을 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 화학식의 EGFR 분해 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 동위원소, N-옥시드, 입체이성질체를, 임의로 제약 조성물의 일부로서, 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고:

;

여기서

A*는 하기로부터 선택되고:

;

B*는 각각 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 아릴이고;

y는 0, 1, 2, 또는 3이고;

R³¹은 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고, 비사이클 상에 존재하는 어느 하나의 고리 상에 위치할 수 있고;

R³⁵는 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, 및 C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;

또는 R³⁴ 및 R³⁵는 조합되어 -(CH₂)_q-를 형성하고;

q는 1 또는 2이고;

R³⁶ 및 R³⁷은 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;

R⁹⁰은 H, C_1-6-알킬 또는 C_3-6-시클로알킬이고;

고리 G는 1 또는 2개의 R⁴² 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴이고;

A²¹은 -NH-, -O-, -CH₂-, 또는 -NR¹⁰⁰-이고;

A³⁶은 -N- 또는 -CR³⁵-이고;

L²는 A*와 이소인돌리논 또는 인다졸 중 어느 하나를 연결하는 2가 연결기이다.

E2: 실시양태 1에 있어서, EGFR 분해 화합물이 하기로부터 선택되거나 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E3: 실시양태 1에 있어서, EGFR 분해 화합물이 하기로부터 선택되거나 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E4: 실시양태 1-3 중 어느 하나에 있어서, R³³이 H인 방법.

E5: 실시양태 1-3 중 어느 하나에 있어서, R³³이 F인 방법.

E6: 실시양태 1-5 중 어느 하나에 있어서, y가 1인 방법.

E7: 실시양태 1-5 중 어느 하나에 있어서, y가 2인 방법.

E8: 실시양태 1-7 중 어느 하나에 있어서, 적어도 1개의 R³¹이 할로인 방법.

E9: 실시양태 1-7 중 어느 하나에 있어서, 적어도 1개의 R³¹이 F인 방법.

E10: 실시양태 1-3 중 어느 하나에 있어서, y가 0인 방법.

E11: 실시양태 1-9 중 어느 하나에 있어서, R³²가 H인 방법.

E12: 실시양태 1-9 중 어느 하나에 있어서, R³²가 F인 방법.

E13: 실시양태 1에 있어서, EGFR 분해 화합물이 하기로부터 선택된 것인 방법:

.

E14: 실시양태 1에 있어서, EGFR 분해 화합물이 하기로부터 선택된 것인 방법:

.

E15: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E16: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E17: 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, A³⁴가 CH인 방법.

E18: 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, A³⁴가 N인 방법.

E19: 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, A³⁴가 CR⁴²인 방법.

E20: 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, A³⁴가 CF인 방법.

E21: 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, A³⁵가 CH인 방법.

E22: 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, A³⁵가 N인 방법.

E23: 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, A³⁵가 CR⁴²인 방법.

E24: 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, A³⁵가 CF인 방법.

E25: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E26: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E27: 실시양태 25 또는 26에 있어서, A²¹이 NH인 방법.

E28: 실시양태 25 또는 26에 있어서, A²¹이 O인 방법.

E29: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E30: 실시양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, A³²가 CH인 방법.

E31: 실시양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, A³²가 N인 방법.

E32: 실시양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, A³²가 CR⁴²인 방법.

E33: 실시양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, A³²가 CF인 방법.

E34: 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, A³³이 CH인 방법.

E35: 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, A³³이 N인 방법.

E36: 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, A³³이 CR⁴²인 방법.

E37: 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, A³³이 CF인 방법.

E38: 실시양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, A*가 하기인 방법:

.

E39: 실시양태 38에 있어서, A²¹이 NH인 방법.

E40: 실시양태 38에 있어서, A²¹이 O인 방법.

E41: 실시양태 1-40 중 어느 하나에 있어서, R³⁴가 H인 방법.

E42: 실시양태 1-40 중 어느 하나에 있어서, R³⁴가 F인 방법.

E43: 실시양태 1-40 중 어느 하나에 있어서, R³⁴가 CH₃인 방법.

E44: 실시양태 1-43 중 어느 하나에 있어서, R³⁵가 H인 방법.

E45: 실시양태 1-43 중 어느 하나에 있어서, R³⁵가 F인 방법.

E46: 실시양태 1-43 중 어느 하나에 있어서, R³⁵가 CH₃인 방법.

E47: 실시양태 1-40 중 어느 하나에 있어서, R³⁴ 및 R³⁵가 조합되어 -CH₂-를 형성하는 것인 방법.

E48: 실시양태 1-47 중 어느 하나에 있어서, R³¹이 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 및 C_1-6-알킬로부터 선택된 것인 방법.

E49: 실시양태 1-47 중 어느 하나에 있어서, R⁴²가 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 및 C_1-6-알킬로부터 선택된 것인 방법.

E50: 실시양태 1-49 중 어느 하나에 있어서, B*가

인 방법.

E51: 실시양태 1-49 중 어느 하나에 있어서, B*가

인 방법.

E52: 실시양태 1-49 중 어느 하나에 있어서, B*가

인 방법.

E53: 실시양태 1-49 중 어느 하나에 있어서, B*가

인 방법.

E54: 실시양태 1-53 중 어느 하나에 있어서, L²가 하기 화학식을 갖는 것인 방법으로서:

;

여기서

R⁴⁰은 각 경우에 독립적으로 수소, R²⁷, 알킬, 알켄, 알킨, 플루오로, 브로모, 클로로, 히드록실, 알콕시, 아지드, 아미노, 시아노, -NH(지방족), -N(지방족)₂, -NHSO₂(지방족), -N(지방족)SO₂알킬, -NHSO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -N(알킬)SO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -NHSO₂알케닐, -N(알킬)SO₂알케닐, -NHSO₂알키닐, -N(알킬)SO₂알키닐, 할로알킬, 지방족, 헤테로지방족, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 옥소, 및 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 추가적으로, 원자가에 의해 허용되는 경우에, 동일한 탄소에 결합된 2개의 R⁴⁰ 기는 함께 연결되어 3-8원 스피로사이클을 형성할 수 있고;

R⁴¹은 지방족, 아릴, 헤테로아릴 또는 수소인 방법.

E55: 실시양태 1-54 중 어느 하나에 있어서, L²가 하기 화학식을 갖는 것인 방법:

.

E56: 실시양태 54 또는 55에 있어서, X¹이 결합인 방법.

E57: 실시양태 54 또는 55에 있어서, X¹이 헤테로사이클인 방법.

E58: 실시양태 54 또는 55에 있어서, X¹이 NR²인 방법.

E59: 실시양태 54 또는 55에 있어서, X¹이 C(O)인 방법.

E60: 실시양태 54 내지 59 중 어느 하나에 있어서, X²가 결합인 방법.

E61: 실시양태 54 내지 59 중 어느 하나에 있어서, X²가 헤테로사이클인 방법.

E62: 실시양태 54 내지 59 중 어느 하나에 있어서, X²가 NR²인 방법.

E63: 실시양태 54 내지 59 중 어느 하나에 있어서, X²가 C(O)인 방법.

E64: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 결합인 방법.

E65: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 CH₂인 방법.

E66: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 헤테로사이클인 방법.

E67: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 아릴인 방법.

E68: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 페닐인 방법.

E69: 실시양태 54 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R²⁰이 비사이클인 방법.

E70: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 결합인 방법.

E71: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 CH₂인 방법.

E72: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 헤테로사이클인 방법.

E73: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 아릴인 방법.

E74: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 페닐인 방법.

E75: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, R²¹이 비사이클인 방법.

E76: 실시양태 54에 있어서, L이 하기 화학식의 링커인 방법:

.

E77: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 결합인 방법.

E78: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 CH₂인 방법.

E79: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 헤테로사이클인 방법.

E80: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 아릴인 방법.

E81: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 페닐인 방법.

E82: 실시양태 54 내지 76 중 어느 하나에 있어서, R²²가 비사이클인 방법.

E83: 실시양태 54 내지 69 중 어느 하나에 있어서, L이 하기 화학식의 링커인 방법:

.

E84: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 결합인 방법.

E85: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 CH₂인 방법.

E86: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 헤테로사이클인 방법.

E87: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 아릴인 방법.

E88: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 페닐인 방법.

E89: 실시양태 54 내지 83 중 어느 하나에 있어서, R²³이 비사이클인 방법.

E90: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 결합인 방법.

E91: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 CH₂인 방법.

E92: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 헤테로사이클인 방법.

E93: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 아릴인 방법.

E94: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 페닐인 방법.

E95: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 비사이클인 방법.

E96: 실시양태 54 내지 89 중 어느 하나에 있어서, R²⁴가 C(O)인 방법.

E97: 실시양태 1-96 중 어느 하나에 있어서, 환자가 인간인 방법.

E98: 실시양태 1-97 중 어느 하나에 있어서, 암이 폐암인 방법.

E99: 실시양태 98에 있어서, 폐암이 비소세포 폐암인 방법.

E100: 실시양태 1-99 중 어느 하나에 있어서, 암이 적어도 하나의 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E101: 실시양태 1-100 중 어느 하나에 있어서, 암이 L858R 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E102: 실시양태 1-101 중 어느 하나에 있어서, 암이 T790M 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E103: 실시양태 1-102 중 어느 하나에 있어서, 암이 C797S 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E104: 실시양태 1-103 중 어느 하나에 있어서, 암이 L792H 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E105: 실시양태 1-104 중 어느 하나에 있어서, 암이 L718Q 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E106: 실시양태 1-105 중 어느 하나에 있어서, 암이 L858R-T790M 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E107: 실시양태 1-106 중 어느 하나에 있어서, 암이 L858R-T790M-C797S 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E108: 실시양태 1-107 중 어느 하나에 있어서, 암이 L858R-C797S 돌연변이를 갖는 EGFR 단백질을 갖는 것인 방법.

E109: 실시양태 1-108 중 어느 하나에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 투여되는 것인 방법.

E110: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 티로신 키나제 억제제인 방법.

E111: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 오시메르티닙인 방법.

E112: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 로실레티닙인 방법.

E113: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 아비티닙인 방법.

E114: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 라제르티닙인 방법.

E115: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 나자르티닙인 방법.

E116: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 EGFR의 돌연변이된 형태에 대한 항체인 방법.

E117: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 세툭시맙인 방법.

E118: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 파니투맙인 방법.

E119: 실시양태 109에 있어서, 추가의 EGFR 억제제가 네시투맙인 방법.

E120: 실시양태 1-119 중 어느 하나에 있어서, MET 억제제가 또한 투여되는 것인 방법.

E121: 실시양태 1-120 중 어느 하나에 있어서, 환자가 추가의 화학요법제를 받는 것인 방법.

E122: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E123: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E124: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E125: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E126: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E127: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E128: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E129: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E130: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E131: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E132: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E133: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이

또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

E134: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이 본원에 기재된 것인 방법.

E135: 실시양태 1-121 중 어느 하나에 있어서, EGFR 분해 화합물이 표 8, 표 9A 또는 표 9B에 기재된 것인 방법.

1. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

;

여기서

A*는 하기로부터 선택되고:

;

y는 0, 1, 2, 또는 3이고;

또는 R³⁴ 및 R³⁵는 조합되어 -(CH₂)_q-를 형성하고;

q는 1 또는 2이고;

R⁹⁰은 H, C_1-6-알킬 또는 C_3-6-시클로알킬이고;

A²¹은 -NH-, -O-, -CH₂-, 또는 -NR¹⁰⁰-이고;

A³⁶은 -N- 또는 -CR³⁵-이고;

2. 실시양태 1에 있어서, L²가 하기 화학식을 갖고:

;

여기서

R⁴¹은 지방족, 아릴, 헤테로아릴 또는 수소인 방법.

3. 실시양태 1에 있어서, 화합물이 표 9A 및 표 9B로부터 선택된 것인 방법.

4. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

5. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

6. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

7. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

8. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

9. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

10. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

11. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

12. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

13. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

14. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

15. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

16. 특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다:

.

17. 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, 환자가 인간인 방법.

18. 실시양태 1-17 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 돌연변이 EGFR에 의해 매개되는 것인 방법.

19. 실시양태 18에 있어서, 돌연변이 EGFR이 엑손 21 돌연변이를 갖는 것인 방법.

20. 실시양태 19에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R 돌연변이를 갖는 것인 방법.

21. 실시양태 19에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L861Q 돌연변이를 갖는 것인 방법.

22. 실시양태 18-21 중 어느 하나에 있어서, 돌연변이 EGFR이 T790M 돌연변이를 갖는 것인 방법.

23. 실시양태 18-22 중 어느 하나에 있어서, 돌연변이 EGFR이 C797S 돌연변이를 갖는 것인 방법.

24. 실시양태 18에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R 및 T790M 돌연변이를 갖는 것인 방법.

25. 실시양태 18에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R, T790M, 및 C797S 돌연변이를 갖는 것인 방법.

26. 실시양태 1-25 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 제약 조성물의 일부로서 투여되는 것인 방법.

27. 실시양태 1-26 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 경구로 투여되는 것인 방법.

28. 실시양태 1-26 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 비경구로 투여되는 것인 방법.

29. 실시양태 1-26 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 정맥내로 투여되는 것인 방법.

30. 실시양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 또한 그를 필요로 하는 환자에게 투여되는 것인 방법.

31. 실시양태 30에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 오시메르티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

32. 실시양태 30에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 나쿠오티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

33. 실시양태 30에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 마벨레르티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

34. 실시양태 30에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 스페브루티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

35. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 폐암인 방법.

36. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 비소세포 폐암인 방법.

37. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 소세포 폐암인 방법.

38. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 선암종인 방법.

39. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 편평 세포 폐암인 방법.

40. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 대세포 미분화 암종인 방법.

41. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 신경내분비 암종인 방법.

42. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 육종양 암종, 선편평상피 암종, 귀리-세포 암, 복합 소세포 암종, 폐 카르시노이드 종양, 중추 카르시노이드, 말초 카르시노이드, 타액선-유형 폐 암종, 중피종, 또는 종격 종양인 방법.

43. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 유방암인 방법.

44. 실시양태 43에 있어서, EGFR 매개 암이 HER-2 양성 유방암인 방법.

45. 실시양태 43 또는 44에 있어서, EGFR 매개 암이 ER+ 유방암인 방법.

46. 실시양태 43-45 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 PR+ 유방암인 방법.

47. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 삼중 음성 유방암인 방법.

48. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 결장직장암 또는 직장암인 방법.

49. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 두경부암 또는 식도암인 방법.

50. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 췌장암인 방법.

51. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 갑상선암인 방법.

52. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 난소암, 자궁암, 또는 자궁경부암인 방법.

53. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 신장암, 간암 또는 방광암인 방법.

54. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 흑색종인 방법.

55. 실시양태 1-54 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌로 전이된 것인 방법.

56. 실시양태 1-54 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 CNS로 전이된 것인 방법.

57. 실시양태 1-56 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 치료 나이브 EGFR 매개 암을 갖는 환자에게 투여되는 것인 방법.

58. 실시양태 1-56 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 재발성인 방법.

59. 실시양태 1-56 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 불응성인 방법.

60. 실시양태 1-56 중 어느 하나에 있어서, EGFR 매개 암이 재발성 및 불응성인 방법.

61. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 장애 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나의 장애)를 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 본원에 기재된 화합물 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나에 사용된 화합물)의 용도가 제공된다.

62. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 장애 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나의 장애)의 치료에서의 본원에 기재된 화합물 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나에 사용된 화합물)의 용도가 제공된다.

63. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 장애 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나의 장애)의 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 화합물 (예를 들어 실시양태 1-60 중 어느 하나에 사용된 화합물)이 제공된다.

본 발명의 추가의 실시양태

키랄성 실시양태

본원에 기재된 화합물은 예를 들어 분자의 E3 리가제 결합 모이어티 (예를 들어

)에 1개 이상의 입체중심, 링커에 1개 이상의 입체중심, 및/또는 EGFR 결합 리간드 모이어티 (예를 들어

)에 적어도 1개의 입체중심을 포함한 다중 입체중심 (예를 들어, 키랄 탄소 원자)을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 EGFR-분해 화합물은 입체화학에 관계없이 제공된다. 다른 실시양태에서, EGFR-분해 화합물은 R 및 S 입체화학의 거울상이성질체적으로 풍부한 (즉, 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 초과의 순도) 또는 심지어 실질적으로 순수한 형태 (약 95%, 98% 또는 99% 초과의 순도)로 존재하는 1개 이상의 키랄 탄소를 가질 수 있다. 특정 측면에서, EGFR-분해 화합물은 2개의 거울상이성질체적으로 풍부하고/거나 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는다. 본 출원의 한 하위-측면에서, 2개의 거울상이성질체적으로 풍부하고/거나 실질적으로 순수한 입체중심은 화합물 및 링커의 리가제-결합 모이어티에 위치하거나; 또는 대안적으로 링커에 2개가 존재한다. 또 다른 하위-측면에서, 3개의 거울상이성질체적으로 풍부하고/거나 실질적으로 순수한 입체중심이 존재하며, 1개는 화합물의 리가제-결합 모이어티 내에 있고 2개는 링커 내에 있다. 본 출원의 또 다른 하위-측면에서, 3개의 거울상이성질체적으로 풍부하고/거나 실질적으로 순수한 입체중심이 존재하며, 1개는 화합물의 리가제-결합 모이어티 내에 있고 2개는 링커 내에 있다. 또 다른 측면에서, 이러한 실시양태, 측면 또는 하위-측면들 중 임의의 것에서, 추가로, EGFR 결합 리간드 모이어티가 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 형태이다.

일부 실시양태에서, 아미드에 인접한 EGFR 결합 리간드 모이어티 내의 키랄 탄소가 사용 조건 하에 입체이성질체들 사이에서 쉽게 라세미화될 수 있고, 따라서 특정 실시양태에서, 입체화학 지정의 목적으로 간주되지 않는다는 것이 관찰되었다.

특정 실시양태에서, 하나의 입체중심은 R 배위이고, 존재하는 임의의 다른 것은 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다. 특정 실시양태에서, 하나의 입체중심은 S 배위이고, 존재하는 임의의 다른 것은 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다.

특정 실시양태에서, 하나의 입체중심은 R 배위이고, 존재하는 임의의 다른 것은 입체화학에 관계없이 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다. 특정 실시양태에서, 하나의 입체중심은 S 배위이고, 존재하는 임의의 다른 것은 입체화학에 관계없이 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다.

특정 실시양태에서, 하기 나타낸 바와 같이, E3 리가제 결합 모이어티에 1개의 입체중심이 존재하고 (EGFR 결합 리간드 모이어티에서의 입체중심은 무시함), 이는 R-배위에서 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다. 또 다른 실시양태에서, 하기 나타낸 바와 같이, E3 리가제 결합 모이어티에 1개의 입체중심이 존재하고 (EGFR 결합 리간드 모이어티에서의 입체중심은 무시함), 이는 S-배위에서 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다.

특정 실시양태에서,

는

이고, 여기서 R³⁴는 수소이다.

특정 실시양태에서,

는

이고, 여기서 R³⁴는 수소이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서, 링커 부분에 1개의 입체중심이 존재하고, 이는 R- 및 S-배위의 혼합물이다. 또 다른 실시양태에서, 링커 부분에 1개의 입체중심이 존재하고, 이는 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 R-배위이다. 또 다른 실시양태에서, 링커 부분에 1개의 입체중심이 존재하고, 이는 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 S-배위이다.

특정 실시양태에서, 링커는 키랄 중심을 갖는 1개 이상의 모이어티를 함유한다. 비제한적 예는 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 헤테로사이클, 예를 들어 질소에 대해 메타- 또는 오르토인 치환기 또는 메타- 또는 오르토-배위로 연결된 치환기를 갖는 피페리딘; 치환기를 갖거나 메타- 또는 오르토-배위로 연결된 피페라진; 치환기를 갖거나 갖지 않는 피롤리디논; 및 치환기를 갖거나 갖지 않는 피롤리딘을 포함한다.

적어도 1개의 키랄 중심을 갖는 링커 모이어티의 추가의 비제한적 예는 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 알킬; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 알켄; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 알킨; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 할로알킬; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 알콕시; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 지방족 기; 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 헤테로지방족 기; 및 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수한 입체중심을 갖는 시클로알킬을 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, 링커는

를 포함한다.

특정 실시양태에서, R 및 S의 혼합물인 EGFR 리간드 부분에 적어도 1개의 입체중심이 존재한다. 또 다른 실시양태에서, EGFR 리간드 부분에 적어도 1개의 입체중심이 존재하고, 이는 R-배위에서 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다. 또 다른 실시양태에서, EGFR 리간드 부분에 적어도 1개의 입체중심이 존재하고, 이는 S-배위에서 거울상이성질체적으로 풍부하거나 또는 실질적으로 순수하다.

특정 실시양태에서,

는

이고, 여기서 R³³은 수소이다.

특정 실시양태에서,

는

이고, 여기서 R³³은 수소이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

특정 실시양태에서,

는

이다.

알킬의 실시양태

특정 실시양태에서, "알킬"은 C₁-C₁₀알킬, C₁-C₉알킬, C₁-C₈알킬, C₁-C₇알킬, C₁-C₆알킬, C₁-C₅알킬, C₁-C₄알킬, C₁-C₃알킬, 또는 C₁-C₂알킬이다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 1개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 2개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 3개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 4개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 5개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "알킬"은 6개의 탄소를 갖는다.

"알킬"의 비제한적 예는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실을 포함한다.

"알킬"의 추가의 비제한적 예는 이소프로필, 이소부틸, 이소펜틸 및 이소헥실을 포함한다.

"알킬"의 추가의 비제한적 예는 sec-부틸, sec-펜틸, 및 sec-헥실을 포함한다.

"알킬"의 추가의 비제한적 예는 tert-부틸, tert-펜틸, 및 tert-헥실을 포함한다.

"알킬"의 추가의 비제한적 예는 네오펜틸, 3-펜틸 및 활성 펜틸을 포함한다.

대안적 실시양태에서, "알킬"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

시클로알킬의 실시양태

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 C₃-C₈시클로알킬, C₃-C₇시클로알킬, C₃-C₆시클로알킬, C₃-C₅시클로알킬, C₃-C₄시클로알킬, C₄-C₈시클로알킬, C₅-C₈시클로알킬, 또는 C₆-C₈시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 3개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 4개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 5개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 6개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 7개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 8개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 9개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "시클로알킬"은 10개의 탄소를 갖는다.

"시클로알킬"의 비제한적 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸 및 시클로데실을 포함한다.

대안적 실시양태에서, "시클로알킬"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

할로알킬의 실시양태

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 C₁-C₁₀할로알킬, C₁-C₉할로알킬, C₁-C₈할로알킬, C₁-C₇할로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₁-C₅할로알킬, C₁-C₄할로알킬, C₁-C₃할로알킬, 및 C₁-C₂할로알킬이다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 1개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 1개의 탄소 및 1개의 할로겐을 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 1개의 탄소 및 2개의 할로겐을 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 1개의 탄소 및 3개의 할로겐을 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 2개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 3개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 4개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 5개의 탄소를 갖는다.

특정 실시양태에서, "할로알킬"은 6개의 탄소를 갖는다.

"할로알킬"의 비제한적 예는

를 포함한다.

"할로알킬"의 추가의 비제한적 예는

를 포함한다.

"할로알킬"의 추가의 비제한적 예는

를 포함한다.

"할로알킬"의 추가의 비제한적 예는

를 포함한다.

헤테로사이클의 실시양태

특정 실시양태에서, "헤테로사이클"은 1개의 질소 및 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 고리를 지칭한다.

특정 실시양태에서, "헤테로사이클"은 1개의 질소 및 1개의 산소 및 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 고리를 지칭한다.

특정 실시양태에서, "헤테로사이클"은 2개의 질소 및 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 고리를 지칭한다.

특정 실시양태에서, "헤테로사이클"은 1개의 산소 및 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 고리를 지칭한다.

특정 실시양태에서, "헤테로사이클"은 1개의 황 및 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 고리를 지칭한다.

"헤테로사이클"의 비제한적 예는 아지리딘, 옥시란, 티이란, 아제티딘, 1,3-디아제티딘, 옥세탄 및 티에탄을 포함한다.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 피롤리딘, 3-피롤린, 2-피롤린, 피라졸리딘 및 이미다졸리딘을 포함한다.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 테트라히드로푸란, 1,3-디옥솔란, 테트라히드로티오펜, 1,2-옥사티올란 및 1,3-옥사티올란을 포함한다.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 피페리딘, 피페라진, 테트라히드로피란, 1,4-디옥산, 티안, 1,3-디티안, 1,4-디티안, 모르폴린 및 티오모르폴린을 포함한다.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 인돌린, 테트라히드로퀴놀린, 테트라히드로이소퀴놀린 및 디히드로벤조푸란을 포함하며, 여기서 각각의 기에 대한 부착 지점은 헤테로사이클 고리 상에 있다.

"헤테로사이클"의 비제한적 예는 또한 하기를 포함한다:

.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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"헤테로사이클"의 비제한적 예는 또한 하기를 포함한다:

.

"헤테로사이클"의 비제한적 예는 또한 하기를 포함한다:

.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

.

"헤테로사이클"의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

.

대안적 실시양태에서, "헤테로사이클"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

헤테로아릴의 실시양태

특정 실시양태에서 "헤테로아릴"은 1, 2, 3 또는 4개의 질소 원자를 함유하는 5원 방향족 기이다.

5원 "헤테로아릴" 기의 비제한적 예는 피롤, 푸란, 티오펜, 피라졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 이속사졸, 옥사졸, 옥사디아졸, 옥사트리아졸, 이소티아졸, 티아졸, 티아디아졸 및 티아트리아졸을 포함한다.

5원 "헤테로아릴" 기의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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특정 실시양태에서, "헤테로아릴"은 1, 2 또는 3개의 질소 원자를 함유하는 6원 방향족 기 (즉, 피리디닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 피리미디닐 및 피라지닐)이다.

1 또는 2개의 질소 원자를 갖는 6원 "헤테로아릴" 기의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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특정 실시양태에서 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1 또는 2개의 원자를 함유하는 9원 비시클릭 방향족 기이다.

비시클릭인 "헤테로아릴" 기의 비제한적 예는 인돌, 벤조푸란, 이소인돌, 인다졸, 벤즈이미다졸, 아자인돌, 아자인다졸, 퓨린, 이소벤조푸란, 벤조티오펜, 벤조이속사졸, 벤조이소티아졸, 벤조옥사졸 및 벤조티아졸을 포함한다.

비시클릭인 "헤테로아릴" 기의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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특정 실시양태에서 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1 또는 2개의 원자를 함유하는 10원 비시클릭 방향족 기이다.

비시클릭인 "헤테로아릴" 기의 비제한적 예는 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴녹살린, 프탈라진, 퀴나졸린, 신놀린 및 나프티리딘을 포함한다.

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대안적 실시양태에서, "헤테로아릴"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

아릴의 실시양태

특정 실시양태에서, 아릴은 페닐이다.

특정 실시양태에서, 아릴은 나프틸이다.

대안적 실시양태에서, "아릴"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

비사이클의 실시양태

용어 "비사이클"은 2개의 고리가 적어도 1개의 원자를 공통으로 공유하는 고리계를 지칭한다. 이들 고리는 스피로시클릭이거나 또는 함께 융합될 수 있고, 각각의 고리는 독립적으로 카르보사이클, 헤테로사이클, 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택된다. 비사이클 기의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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용어 "비사이클"이 2가 잔기, 예컨대 링커와 관련하여 사용되는 경우에, 부착 지점은 개별 고리 상에 또는 동일한 고리 상에 있을 수 있다. 특정 실시양태에서, 두 부착 지점은 동일한 고리 상에 있다. 특정 실시양태에서, 두 부착 지점은 상이한 고리 상에 있다. 2가 비사이클 기의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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2가 비사이클의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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대안적 실시양태에서, "비사이클"은 1, 2, 3 또는 4개의 R³¹ 치환기로 "임의로 치환된다".

임의적 치환기의 실시양태

가변기가 임의로 치환될 수 있는 특정 실시양태에서, 이는 치환되지 않는다.

가변기가 임의로 치환될 수 있는 특정 실시양태에서, 이는 1개의 치환기로 치환된다.

가변기가 임의로 치환될 수 있는 특정 실시양태에서, 이는 2개의 치환기로 치환된다.

가변기가 임의로 치환될 수 있는 특정 실시양태에서, 이는 3개의 치환기로 치환된다.

가변기가 임의로 치환될 수 있는 특정 실시양태에서, 이는 4개의 치환기로 치환된다.

하나의 대안적 실시양태에서, 안정한 분자를 형성하고 본 발명의 원하는 목적을 충족하는 임의의 적합한 기가 "치환된" 또는 "임의로 치환된" 위치 상에 존재할 수 있고, 예를 들어 할로겐 (독립적으로 F, Cl, Br 또는 I일 수 있음); 시아노; 히드록실; 니트로; 아지도; 알카노일 (예컨대, C₂-C₆ 알카노일 기); 카르복스아미드; 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴옥시, 예컨대 페녹시; 티오알킬 (1개 이상의 티오에테르 연결을 갖는 것 포함); 알킬술피닐; 알킬술포닐 기 (1개 이상의 술포닐 연결을 갖는 것 포함); 아미노알킬 기 (1개 초과의 N 원자를 갖는 기 포함); 아릴 (예를 들어, 페닐, 비페닐, 나프틸 등, 각각의 고리는 치환되거나 비치환됨); 아릴알킬 (예를 들어, 1 내지 3개의 별개의 또는 융합된 고리 및 6 내지 약 14 또는 18개의 고리 탄소 원자를 갖고, 벤질은 예시적인 아릴알킬 기임); 아릴알콕시 (예를 들어, 1 내지 3개의 별개의 또는 융합된 고리를 갖고, 벤질옥시는 예시적인 아릴알콕시 기임); 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로사이클 (1개 이상의 N, O 또는 S 원자를 갖는 1 내지 3개의 별개의 또는 융합된 고리를 가짐), 또는 헤테로아릴 (1개 이상의 N, O 또는 S 원자를 갖는 1 내지 3개의 별개의 또는 융합된 고리를 가짐), 예를 들어 쿠마리닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 푸라닐, 피롤릴, 티에닐, 티아졸릴, 트리아지닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 벤조푸라닐, 벤조티아졸릴, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 피페라지닐 및 피롤리디닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 기는, 예를 들어 히드록시, 알킬, 알콕시, 할로겐 및 아미노로 추가로 치환될 수 있다.

지방족 및 헤테로지방족의 실시양태

특정 실시양태에서, "지방족"은 포화 또는 불포화, 직쇄형, 분지형 또는 시클릭 탄화수소를 지칭한다. 이들 실시양태에서, 지방족은 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 및 시클로알키닐 모이어티를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 의도되며, 따라서 이들 정의 각각이 포함된다. 특정 실시양태에서, "지방족"은 1-20개의 탄소 원자를 갖는 지방족 기를 나타내는 데 사용된다. 지방족 쇄는, 예를 들어 단일-불포화, 이중-불포화, 삼중-불포화 또는 다중불포화, 또는 알키닐일 수 있다. 불포화 지방족 기는 시스 또는 트랜스 배위일 수 있다. 특정 실시양태에서, 지방족 기는 1 내지 약 12개의 탄소 원자, 보다 일반적으로 1 내지 약 6개의 탄소 원자 또는 1 내지 약 4개의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 지방족 기는 1 내지 약 8개의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 지방족 기는 C₁-C₂, C₁-C₃, C₁-C₄, C₁-C₅ 또는 C₁-C₆이다.본원에 사용된 명시된 범위는 독립적 종으로서 기재된 범위의 각각의 구성원을 갖는 지방족 기를 나타낸다. 예를 들어, 본원에 사용된 용어 C₁-C₆ 지방족은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기를 나타내고, 이들 각각은 독립적 종으로서 기재됨을 의미하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본원에 사용된 용어 C₁-C₄ 지방족은 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기를 나타내고, 이들 각각은 독립적 종으로서 기재됨을 의미하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 지방족 기는 안정한 모이어티의 형성을 유발하는 1개 이상의 관능기로 치환된다.

특정 실시양태에서, "헤테로지방족"은 쇄 내에 적어도 1개의 헤테로원자, 예를 들어 탄소 원자 대신에 아민, 카르보닐, 카르복시, 옥소, 티오, 포스페이트, 포스포네이트, 질소, 인, 규소 또는 붕소 원자를 함유하는 지방족 모이어티를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 유일한 헤테로원자는 질소이다. 특정 실시양태에서, 유일한 헤테로원자는 산소이다. 특정 실시양태에서, 유일한 헤테로원자는 황이다. 특정 실시양태에서, "헤테로지방족"은 본원에서 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알케닐 및 헤테로시클로알키닐 모이어티를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, "헤테로지방족"은 1-20개의 탄소 원자를 갖는 헤테로지방족 기 (시클릭, 비-시클릭, 치환된, 비치환된, 분지형 또는 비분지형)를 나타내는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 헤테로지방족 기는 안정한 모이어티를 형성하는 방식으로 임의로 치환된다. 헤테로지방족 모이어티의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 아미드, 폴리아미드, 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 티오에테르, 에테르, 알킬-헤테로사이클-알킬, -O-알킬-O-알킬, 알킬-O-할로알킬 등이다.

A 및 A*의 실시양태

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, A*는

이다.

특정 실시양태에서, R³⁴ 및 R³⁵는 조합되어 CH₂를 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁴는 H이다.

특정 실시양태에서, R³⁵는 H이다.

특정 실시양태에서, A¹은 NH이다.

특정 실시양태에서, A¹은 O이다.

특정 실시양태에서, A²¹은 NH이다.

특정 실시양태에서, A²¹은 O이다.

특정 실시양태에서, A²¹은 CH₂이다.

특정 실시양태에서, A²¹은 NR¹⁰⁰이다.

특정 실시양태에서, A³², A³³, A³⁴, 및 A³⁵는 각각 CH, C-할로겐, 및 CF로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, A³²는 CH이다.

특정 실시양태에서, A³²는 CF이다.

특정 실시양태에서, A³²는 CR⁴²이다.

특정 실시양태에서, A³²는 N이다.

특정 실시양태에서, A³³은 CH이다.

특정 실시양태에서, A³³은 CF이다.

특정 실시양태에서, A³³은 CR⁴²이다.

특정 실시양태에서, A³³은 N이다.

특정 실시양태에서, A³⁴는 CH이다.

특정 실시양태에서, A³⁴는 CF이다.

특정 실시양태에서, A³⁴는 CR⁴²이다.

특정 실시양태에서, A³⁴는 N이다.

특정 실시양태에서, A³⁵는 CH이다.

특정 실시양태에서, A³⁵는 CF이다.

특정 실시양태에서, A³⁵는 CR⁴²이다.

특정 실시양태에서, A³⁵는 N이다.

특정 실시양태에서, A³⁶은 N이다.

특정 실시양태에서, R⁹⁰은 수소이다.

특정 실시양태에서, R⁹⁰은 C₁-C₃ 알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁹⁰은 C_3-6-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁹⁰은 메틸이다.

특정 실시양태에서, A 또는 A*는

이다.

특정 실시양태에서, A 또는 A*는

이다.

특정 실시양태에서, A 또는 A*는

이다.

특정 실시양태에서, A 또는 A*는 하기로부터 선택된다:

.

B 및 B*의 실시양태

특정 실시양태에서, B 또는 B*는

이다.

특정 실시양태에서, B 또는 B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는 헤테로아릴이다.

특정 실시양태에서, B*는 1개의 R³¹ 기로 치환된 헤테로아릴이다.

특정 실시양태에서, B*는 아릴이다.

특정 실시양태에서, B*는 1개의 R³¹ 기로 치환된 아릴이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

특정 실시양태에서, B*는

이다.

y의 실시양태

특정 실시양태에서, y는 0이다.

특정 실시양태에서, y는 1이다.

특정 실시양태에서, y는 2이다.

특정 실시양태에서, y는 3이다.

R ³¹ 의 실시양태

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R³¹은 할로겐이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R³¹은 F이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R³¹은 Cl이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R³¹은 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R³¹은 할로-C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 할로겐이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 F이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 Cl이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 시아노이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 할로-C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, 1개의 R³¹은 할로-C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R³¹은 할로겐, C_1-6-알콕시, 및 C_1-6-알킬로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, R³¹은 F, Cl, 메톡시, 및 메틸로부터 선택된다.

R ³⁶ 및 R ³⁷ 의 실시양태

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5-원 사이클을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 6-원 사이클을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5-원 시클로알킬을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 6-원 시클로알킬을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5-원 헤테로아릴을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 6-원 헤테로아릴을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5-원 헤테로사이클을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 6-원 헤테로사이클을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 모르폴린을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 페닐을 형성한다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷을 조합함으로써 형성된 사이클은 치환되지 않는다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷을 조합함으로써 형성된 사이클은 1개의 R³¹ 치환기로 치환된다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷을 조합함으로써 형성된 사이클은 2개의 R³¹ 치환기로 치환된다.

특정 실시양태에서, R³⁶ 및 R³⁷을 조합함으로써 형성된 사이클은 3개의 R³¹ 치환기로 치환된다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 수소이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 할로겐이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 F이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 Cl이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 시아노이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 할로-C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 할로-C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 수소, 할로겐, C_1-6-알콕시, 및 C_1-6-알킬로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, R³⁶은 수소, F, Cl, 메톡시, 및 메틸로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 수소이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 할로겐이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 F이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 Cl이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 시아노이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 할로-C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 할로-C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 수소, 할로겐, C_1-6-알콕시, 및 C_1-6-알킬로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, R³⁷은 수소, F, Cl, 메톡시, 및 메틸로부터 선택된다.

R ⁴² 의 실시양태

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R⁴²는 할로겐이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R⁴²는 F이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R⁴²는 Cl이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R⁴²는 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, 적어도 1개의 R⁴²는 할로-C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 수소이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 할로겐이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 F이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 Cl이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 C_1-6-알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 시아노이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 할로-C_1-6-알콕시이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 할로-C_3-8-시클로알킬이다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 수소, 할로겐, C_1-6-알콕시, 및 C_1-6-알킬로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, R⁴²는 수소, F, Cl, 메톡시, 및 메틸로부터 선택된다.

고리 G의 실시양태

특정 실시양태에서, 고리 G는 1 또는 2개의 R⁴² 치환기로 임의로 치환된 5-원 헤테로아릴 고리이다.

특정 실시양태에서, 고리 G는 1 또는 2개의 R⁴² 치환기로 임의로 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다.

특정 실시양태에서, 고리 G는 하기로부터 선택된다:

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EGFR 표적화 리간드의 실시양태

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법에 사용하기 위한 화합물은 하기로부터 선택된다:

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화학식 III의 화합물

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화학식 IV의 화합물

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III. 본 발명에 사용하기 위한 추가의 화합물

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IV. 링커

링커 (L¹ 또는 L²) 또는 결합이 본원에 기재된 화합물에 포함된다. 링커는 E3 리가제 결합 부분을 EGFR 표적화 리간드에 부착시키는 화학적으로 안정한 2가 기이다. 본 발명에 따르면, 생성된 화합물이 안정한 보관 수명, 예를 들어 제약상 허용되는 투여 형태의 일부로서 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 6개월 또는 1년을 갖고, 그 자체가 제약상 허용되는 한, 본원에 기재된 바와 같은 임의의 목적하는 링커가 사용될 수 있다.

본원에 기재된 바와 같은 링커는 어느 방향으로든 사용될 수 있는데, 즉, 좌측 단부는 E3 리가제 결합 부분에 연결되고 우측 단부는 EGFR 표적화 리간드에 연결되거나, 또는 좌측 단부는 EGFR 표적화 리간드에 연결되고 우측 단부는 E3 리가제 결합 부분에 연결된다.

특정 실시양태에서, 링커는 결합이다.

특정 실시양태에서, 링커는 2 내지 14, 15, 16, 17, 18 또는 20개 또는 그 초과의 탄소 원자의 쇄를 가지며, 이들 중 1개 이상의 탄소는 헤테로원자, 예컨대 O, N, S 또는 P에 의해 대체될 수 있다.

특정 실시양태에서, 쇄는 쇄 내에 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접 원자를 갖는다. 예를 들어, 쇄는 인접하거나, 부분적으로 인접하거나 또는 인접하지 않을 수 있는 1개 이상의 에틸렌 글리콜 단위 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 에틸렌 글리콜 단위)를 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 쇄는 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알케닐 또는 알키닐, 지방족, 헤테로지방족, 시클로알킬 또는 헤테로사이클 치환기일 수 있는 분지를 가질 수 있는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 인접 쇄를 갖는다.

다른 실시양태에서, 링커는 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 락트산 및/또는 글리콜산 중 1종 이상을 포함하거나 또는 그로 구성될 수 있다. 락트산 분절은 글리콜산 분절보다 더 긴 반감기를 갖는 경향이 있다. 블록 및 랜덤 락트산-코-글리콜산 모이어티, 뿐만 아니라 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜은 제약상 허용되는 것으로 관련 기술분야에 공지되어 있고, 목적하는 반감기 및 친수성을 얻기 위해 변형 또는 배열될 수 있다. 특정 측면에서, 이들 단위는 적절한 약물 특성을 달성하기 위해 원하는 경우에 다른 모이어티, 예컨대 알킬, 헤테로지방족, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 시클로알킬 등을 포함한 지방족 모이어티와 플랭킹되거나 또는 그 사이에 배치될 수 있다.

특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된 링커이다:

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한 측면에서, 링커 (L²)는 화학식 LI, 화학식 LII, 화학식 LIII, 화학식 LIV, 화학식 LV, 화학식 LVI, 화학식 LVII, 화학식 LVIII, 화학식 IX 및 화학식 LX의 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된다:

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여기서 모든 가변기는 본원에 정의된 바와 같다.

특정 실시양태에서, 링커 (L²)는 하기로부터 선택된다:

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한 측면에서, 링커 (L²)는 화학식 LDI, 화학식 LDII, 화학식 LDIII, 화학식 LDIV, 화학식 LDV, 화학식 LDVI, 및 화학식 LDVII의 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된다:

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여기서 모든 가변기는 본원에 기재되어 있다.

다음은 본 발명에서 사용될 수 있는 링커의 비제한적 예이다. 이러한 상세설명에 기초하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 목적을 달성할 링커의 전체 범위를 사용하는 방법을 이해할 것이다.

특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, L²는 하기로부터 선택된다:

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R²⁰, R²¹, R²², R²³ 및 R²⁴의 모이어티의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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R²⁰, R²¹, R²², R²³ 및 R²⁴의 모이어티의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다:

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추가의 실시양태에서, 링커 (L²) 모이어티는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개의 에틸렌 글리콜 단위, 또는 임의로 치환된 O, N, S, P 또는 Si 원자가 산재된 임의로 치환된 알킬 기를 갖는 임의로 치환된 (폴리)에틸렌 글리콜이다.

특정 실시양태에서, 링커 (L²)는 아릴, 페닐, 벤질, 알킬, 알킬렌 또는 헤테로사이클 기로 플랭킹되거나, 치환되거나 또는 산재된다.

특정 실시양태에서, 링커 (L²)는 비대칭 또는 대칭일 수 있다.

특정 실시양태에서, 링커 (L²)는 비선형 쇄일 수 있고, 지방족 또는 방향족 또는 헤테로방향족 시클릭 모이어티일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 화합물의 임의의 실시양태에서, 링커 기는 본원에 기재된 바와 같은 임의의 적합한 모이어티일 수 있다.

특정 실시양태에서, 링커 (L²)는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

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특정 실시양태에서, 링커 (L²) 또는 그의 부분은 하기로부터 선택된다:

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V. 치료 방법

본원에 기재된 화합물은 치료를 필요로 하는 환자를 치료하거나 또는 EGFR에 의해 매개되는 임의의 장애를 치료하기 위한 유효량으로 사용될 수 있다.

본원에 기재된 또 다른 측면은 암의 치료 또는 예방을 위한 EGFR 억제가 필요한, 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물, 또는 용매화물, 또는 제약 조성물을 제공한다.

한 측면에서, 본원에 기재된 화합물은 EGFR 매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 야생형으로부터 돌연변이된다. EGFR 돌연변이에 대한 다수의 가능성이 있다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 엑손 18, 엑손 19, 엑손 20, 또는 엑손 21, 또는 그의 임의의 조합에서 발견된다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 위치 L858, E709, G719, C797, L861, T790, 또는 L718 또는 그의 임의의 조합에 존재한다. 특정 실시양태에서, 돌연변이는 L858R, T790 M, L718Q, L792H, 및/또는 C797S 돌연변이 또는 그의 임의의 조합이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제1 세대 EGFR 억제제 예컨대 에를로티닙, 게피티닙 및/또는 라파티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제2 세대 EGFR 억제제, 예컨대 아파티닙 및/또는 다코미티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제3 세대 EGFR 억제제, 예컨대 오시메르티닙에 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 암을 치료하는 데 사용된다.

한 측면에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 야생형으로부터 돌연변이된다. EGFR 돌연변이에 대한 다수의 가능성이 있다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 엑손 18, 엑손 19, 엑손 20, 또는 엑손 21, 또는 그의 임의의 조합에서 발견된다. 특정의 비제한적 실시양태에서, 돌연변이는 위치 L858, E709, G719, C797, L861, T790, 또는 L718 또는 그의 임의의 조합에 존재한다. 특정 실시양태에서 돌연변이는 L858R, T790M, L718Q, L792H, 및/또는 C797S 돌연변이 또는 그의 임의의 조합이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제1 세대 EGFR 억제제, 예컨대 에를로티닙, 게피티닙 및/또는 라파티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제2 세대 EGFR 억제제, 예컨대 아파티닙 및/또는 다코미티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 제3 세대 EGFR 억제제, 예컨대 오시메르티닙에 대해 저항성이거나 또는 그에 대한 저항성을 획득한 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR 매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 하기 열거된 아미노산 부위 중 적어도 하나의 돌연변이 또는 그의 조합을 갖는다. 돌연변이는, 예를 들어 열거된 예시적인 돌연변이 중 하나로부터 선택될 수 있거나, 또는 상이한 돌연변이일 수 있다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 선택된 2개의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 선택된 3개의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 4개 이상의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 이들 실시양태 중 일부에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L858R 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택될 수 있는 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 T790M 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 1개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 2개의 추가의 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 L718Q 돌연변이 및 상기 표로부터 임의로 선택된 3개의 추가의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암은 S768I, L718V, L792H, L792V, G796S, G796C, G724S, 및/또는 G719A의 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 프레임시프트 돌연변이, 예를 들어 짧은 프레임내 결실을 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 엑손 19 결실을 갖는다. 특정 실시양태에서, 엑손 19 결실은 아미노산 LREA (L747-A750)를 포함하는 결실이다. 특정 실시양태에서, 엑손 19 결실은 아미노산 ELREA (E746-A750)를 포함하는 결실이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 엑손 21에서 L858R 돌연변이를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애, 또는 E709 돌연변이, 예를 들어 E709A, E709G, E709K 또는 E709V를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 L718 돌연변이, 예를 들어 L718Q를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애, 또는 G719 돌연변이, 예를 들어 G719S, G719A, G719C 또는 G719D를 갖는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용되며, 여기서 EGFR은 1개 이상의 엑손 19 삽입 및/또는 1개 이상의 엑손 20 삽입을 갖는다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 S7681 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 S7681 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서의 L861Q 돌연변이 EGFR-매개 장애 또는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR L861Q 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 C797S 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서 L858R-T790M 돌연변이 EGFR-매개 장애를 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서 L858R-L718Q 돌연변이 EGFR-매개 장애를 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서 L858R-L792H 돌연변이 EGFR-매개 장애를 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS에서 L858R-C797S 돌연변이 EGFR-매개 장애를 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 L858R-C797S 돌연변이 EGFR-매개 암을 치료하는 데 사용된다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암은 혈액암이다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암은 급성 골수 백혈병 (AML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 림프모구성 T-세포 백혈병, 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 모발상-세포 백혈병, 만성 호중구성 백혈병 (CNL), 급성 림프모구성 T-세포 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 형질세포종, 면역모세포성 대세포 백혈병, 외투 세포 백혈병, 다발성 골수종, 거핵모구성 백혈병, 급성 거핵구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 혼합 계열 백혈병 (MLL), 적백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프모구성 T-세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, B 세포 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종, Myc 및 B-세포 백혈병 (BCL)2 및/또는 BCL6 재배열/과다발현 [이중- 및 삼중-히트 림프종], 골수이형성/골수증식성 신생물, 외투 세포 림프종, 예컨대 보르테조밉 저항성 외투 세포 림프종이다.

본원에 기재된 화합물로 치료될 수 있는, 뇌 또는 CNS로 전이된 추가의 EGFR 매개된 암은 폐암, 예컨대 소세포 폐암 (SCLC) 및 비소세포 폐암 (NSCLC), 유방암, 예컨대 염증성 유방암, ER-양성 유방암, 예컨대 타목시펜 저항성 ER-양성 유방암, 및 삼중 음성 유방암, 결장암, 정중선 암종, 간암, 신암, 전립선암, 예컨대 거세 저항성 전립선암 (CRPC), 뇌암, 예컨대 신경교종, 교모세포종, 신경모세포종, 및 수모세포종, 예컨대 MYC-증폭된 수모세포종, 결장직장암, 윌름스 종양, 유잉 육종, 횡문근육종, 상의세포종, 두경부암, 흑색종, 편평 세포 암종, 난소암, 췌장암, 예컨대 췌장관 선암종 (PDAC) 및 췌장 신경내분비 종양 (PanNET), 골육종, 골의 거대 세포 종양, 갑상선암, 방광암, 요로상피암, 외음부암, 자궁경부암, 자궁내막암, 중피종, 식도암, 타액선암, 위암, 비인두암, 협부암, 구강암, GIST (위장 기질 종양), NUT-정중선 암종, 고환암, 편평 세포 암종, 간세포성 암종 (HCC), MYCN 구동 고형 종양, 및 NUT 정중선 암종 (NMC)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

추가 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 골, 근육, 힘줄, 연골, 신경, 지방 또는 혈관의 육종이다.

추가 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 연부 조직 육종, 골 육종 또는 골육종이다.

추가 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 혈관육종, 섬유육종, 지방육종, 평활근육종, 카포시 육종, 골육종, 위장 기질 종양, 활막 육종, 다형성 육종, 연골육종, 유잉 육종, 세망 세포 육종, 수막육종, 포도상 육종, 횡문근육종 또는 배아성 횡문근육종이다.

특정 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 골, 근육, 힘줄, 연골, 신경, 지방 또는 혈관 육종이다.

추가 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 다발성 골수종이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 암, 특히 비소세포 폐암을 앓고 있는 차세대 서열분석 (NGS)에 의해 결정된 바와 같은 EGFR 활성화 돌연변이를 갖는 환자에서 EGFR 활성화 돌연변이 상태를 결정한 다음, 상기 환자에게 본원에 기재된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치유적 및/또는 예방적 치료에서 의약으로서 사용된다.

다른 실시양태에서, 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 폐암, 결장암, 유방암, 전립선암, 간암, 췌장암, 뇌암, 신장암, 난소암, 위암, 피부암, 골암, 위암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 간세포성 암종, 유두상 신세포 암종, 두경부 편평 세포 암종, 백혈병, 림프종, 골수종, 고형 종양, 혈액암 또는 고형 암으로부터 선택된다.

용어 "암"은 악성 신생물성 세포의 증식에 의해 유발된 임의의 암, 예컨대 종양, 신생물, 암종, 육종, 백혈병, 림프종 등을 지칭한다. 예를 들어, 암은 중피종, 백혈병 및 림프종 예컨대 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 비피부 말초 T-세포 림프종, 인간 T-세포 백혈병 바이러스 (HTLV)와 연관된 림프종 예컨대 성인 T-세포 백혈병/림프종 (ATLL), B-세포 림프종, 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 급성 골수 백혈병, 림프종, 및 다발성 골수종, 비-호지킨 림프종, 급성 림프성 백혈병 (ALL), 만성 림프성 백혈병 (CLL), 호지킨 림프종, 버킷 림프종, 성인 T-세포 백혈병 림프종, 급성-골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 또는 간세포성 암종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가의 예는 골수이형성 증후군, 소아기 고형 종양 예컨대 뇌 종양, 신경모세포종, 망막모세포종, 윌름스 종양, 골 종양, 및 연부-조직 육종, 성인의 통상적인 고형 종양 예컨대 두경부암, 예컨대 경구암, 후두암, 비인두암 및 식도암, 비뇨생식기암, 예컨대 전립선암, 방광암, 신장암, 자궁암, 난소암, 고환암, 폐암, 예컨대 소세포암 및 비소세포암, 유방암, 췌장암, 흑색종 및 다른 피부암, 위암, 뇌 종양, 골린 증후군과 관련된 종양, 예컨대 수모세포종 또는 수막종, 및 간암을 포함한다.

암의 추가의 예시적인 형태는 골격근 또는 평활근의 암, 위암, 소장암, 직장 암종, 타액선암, 자궁내막암, 부신암, 항문암, 직장암, 부갑상선암 및 뇌하수체암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본원에 기재된 화합물이 예방, 치료 및 연구에 유용할 수 있는 추가의 암은, 예를 들어 결장 암종, 가족성 선종성 폴립증 암종 및 유전성 비-폴립증 결장직장암 또는 흑색종이다. 추가로, 암은 구순 암종, 후두 암종, 하인두 암종, 설 암종, 타액선 암종, 위 암종, 선암종, 갑상선암 (수질 및 유두상 갑상선 암종), 신암종, 신장 실질 암종, 자궁경부 암종, 자궁체부 암종, 자궁내막 암종, 융모막 암종, 고환 암종, 비뇨기 암종, 흑색종, 뇌 종양, 예컨대 교모세포종, 성상세포종, 수막종, 수모세포종 및 말초 신경외배엽 종양, 담낭 암종, 기관지 암종, 다발성 골수종, 기저세포암종, 기형종, 망막모세포종, 맥락막 흑색종, 정상피종, 횡문근육종, 두개인두종, 골육종, 연골육종, 근육종, 지방육종, 섬유육종, 유잉 육종 및 형질세포종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 출원의 한 측면에서, 본 출원은 본원에 개시된 다양한 유형의 암을 포함하나 이에 제한되지는 않는 암의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 화합물의 용도를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 뇌 또는 CNS로 전이된 암, 예컨대 결장직장암, 갑상선암, 유방암 및 폐암; 및 골수증식성 장애, 예컨대 진성 다혈구혈증, 혈소판혈증, 골수섬유증을 동반한 골수 화생, 만성 골수 백혈병, 만성 골수단핵구성 백혈병, 과다호산구성 증후군, 소아 골수단핵구성 백혈병 및 전신 비만 세포 질환을 치료하는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물은 조혈 장애, 특히 급성-골수 백혈병 (AML), 만성-골수 백혈병 (CML), 급성-전골수구성 백혈병 및 급성 림프구성 백혈병 (ALL)을 치료하는 데 유용하다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 그의 상응하는 제약상 허용되는 염 또는 본원에 기재된 바와 같은 동위원소 유도체는 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 갖는 숙주, 예를 들어 인간을 치료하는 데 유효량으로 사용될 수 있으며, 여기서 뇌 또는 CNS로 전이된 암은 림프종 또는 림프구성 또는 골수구성 증식 장애 또는 이상으로부터 선택된다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 화합물은 호지킨 림프종 또는 비-호지킨 림프종을 앓고 있는 숙주에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 숙주는 비-호지킨 림프종, 예컨대 비제한적으로 AIDS-관련 림프종; 역형성 대세포 림프종; 혈관면역모세포성 림프종; 모구성 NK-세포 림프종; 버킷 림프종; 버킷-유사 림프종 (소형 비-분할 세포 림프종); 미만성 소분할 세포 림프종 (DSCCL); 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종; 피부 T-세포 림프종; 미만성 대 B-세포 림프종; 장병증-유형 T-세포 림프종; 여포성 림프종; 간비장 감마-델타 T-세포 림프종; 림프모구성 림프종; 외투 세포 림프종; 변연부 림프종; 비강 T-세포 림프종; 소아 림프종; 말초 T-세포 림프종; 원발성 중추 신경계 림프종; T-세포 백혈병; 형질전환된 림프종; 치료-관련 T-세포 림프종; 랑게르한스 세포 조직구증; 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 앓고 있을 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 또는 그의 상응하는 제약상 허용되는 염 또는 본원에 기재된 바와 같은 동위원소 유도체는 호지킨 림프종, 예컨대 비제한적으로 결절성 경화성 전형적 호지킨 림프종 (CHL); 혼합 세포충실성 CHL; 림프구-고갈성 CHL; 림프구-충만성 CHL; 림프구 우세형 호지킨 림프종; 또는 결절성 림프구 우세형 HL로부터 선택된 뇌 또는 CNS로 전이된 암을 갖는 환자, 예를 들어 인간을 치료하기 위한 유효량으로 사용될 수 있다.

본 출원은 세포 증식성 장애, 예컨대 증식증, 이형성증 및 전암성 병변의 치료 또는 예방을 추가로 포함한다. 이형성증은 병리학자에 의해 생검에서 인식가능한 전암성 병변의 초기 형태이다. 화합물은 상기 증식증, 이형성증 또는 전암성 병변이 계속 확장되거나 또는 암성이 되는 것을 예방하기 위한 목적으로 투여될 수 있다. 전암성 병변의 예는 피부, 식도 조직, 유방 및 자궁경부 상피내 조직에서 발생할 수 있다.

EGFR 단백질의 분해제로서, 본 출원의 화합물 및 조성물은 또한 생물학적 샘플에서 유용하다. 본 출원의 한 측면은 생물학적 샘플을 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 생물학적 샘플에서 단백질 활성을 억제하는 방법이다. 본원에 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 세포 배양물 또는 그의 추출물; 포유동물로부터 수득된 생검 물질 또는 그의 추출물; 및 혈액, 타액, 소변, 분변, 정액, 눈물 또는 다른 체액 또는 그의 추출물을 포함하나 이에 제한되지 않는 시험관내 또는 생체외 샘플을 의미한다. 생물학적 샘플 중 단백질 활성의 억제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 목적에 유용하다. 이러한 목적의 예는 수혈, 기관 이식 및 생물학적 표본 저장을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

본 출원의 또 다른 측면은 생물학적 및 병리학적 현상에서의 EGFR 단백질의 연구; 이러한 단백질에 의해 매개되는 세포내 신호 전달 경로의 연구; 및 신규 단백질 억제제의 비교 평가이다. 이러한 용도의 예는 생물학적 검정, 예컨대 효소 검정 및 세포-기재의 검정을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

상기에 따라, 본 출원은 상기 기재된 임의의 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물, 또는 용매화물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 상기 기재된 임의의 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 상기 용도 중 임의의 것에 대하여, 필요한 투여량은 투여 방식, 치료될 특정한 상태 및 목적하는 효과에 따라 달라질 것이다.

VI. 조합 요법

본원에 기재된 개시된 화합물은 본원에 기재된 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는 뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR-매개 암을 갖는 환자, 예컨대 인간을 치료하기 위해 단독으로 또는 본원에 기재된 또 다른 화합물 또는 또 다른 생물활성제 또는 제2 치료제와 조합되어 유효량으로 사용될 수 있다.

용어 "생물활성제"는 요법의 목적하는 결과를 달성하기 위해 본원에 기재된 화합물과 조합하여 또는 교대로 사용될 수 있는, 본 발명에 따른 선택된 화합물 이외의 다른 작용제를 기재하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 및 생물활성제는 이들이 중첩 기간 동안 생체내 활성인, 예를 들어 시간-기간 중첩 Cmax, Tmax, AUC 또는 또 다른 약동학적 파라미터를 갖는 방식으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 중첩 약동학적 파라미터를 갖지 않지만 하나가 다른 것의 치료 효능에 치료 영향을 미치는 본원에 기재된 화합물 및 생물활성제가 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

이러한 실시양태의 한 측면에서, 생물활성제는, 비제한적 예로서, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, PD-L2 억제제, CTLA-4 억제제, LAG-3 억제제, TIM-3 억제제, T-세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자 (VISTA) 억제제, 소분자, 펩티드, 뉴클레오티드 또는 다른 억제제를 포함한 체크포인트 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 면역 조정제이다. 특정 측면에서, 면역 조정제는 항체, 예컨대 모노클로날 항체이다.

PD-1 수용체에 결합함으로써 PD-1 및 PD-L1의 상호작용을 차단하고, 차례로 면역 억제를 억제하는 PD-1 억제제는, 예를 들어 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®), 피딜리주맙, AMP-224 (아스트라제네카(AstraZeneca) 및 메드이뮨(MedImmune)), PF-06801591 (화이자(Pfizer)), MEDI0680 (아스트라제네카), PDR001 (노파르티스(Novartis)), REGN2810 (레게네론(Regeneron)), SHR-12-1 (지앙수 헝루이 메디슨 캄파니(Jiangsu Hengrui Medicine Company) 및 인사이트 코포레이션(Incyte Corporation)), TSR-042 (글락소스미스클라인 피엘씨(GlaxoSmithKline plc)), 및 PD-L1/VISTA 억제제 CA-170 (큐리스 인크.(Curis Inc.))을 포함한다. PD-L1 수용체에 결합함으로써 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 차단하고, 차례로 면역 억제를 억제하는 PD-L1 억제제는, 예를 들어 아테졸리주맙 (테센트릭(TECENTRIQ)®), 두르발루맙 (아스트라제네카 및 메드이뮨), KN035 (알파맙 캄파니 리미티드(Alphamab Co. Ltd.)), 및 BMS-936559 (브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb))를 포함한다. CTLA-4에 결합하고 면역 억제를 억제하는 CTLA-4 체크포인트 억제제는 이필리무맙, 트레멜리무맙 (아스트라제네카 및 메드이뮨), AGEN1884 및 AGEN2041 (아제누스(Agenus))을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. LAG-3 체크포인트 억제제는 BMS-986016 (브리스톨-마이어스 스큅), GSK2831781 (글락소스미스클라인 피엘씨), IMP321 (프리마 바이오메드(Prima BioMed)), LAG525 (노파르티스), 및 이중 PD-1 및 LAG-3 억제제 MGD013 (마크로제닉스(MacroGenics))을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. TIM-3 억제제의 예는 TSR-022 (글락소스미스클라인 피엘씨)이다.

특정 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 니볼루맙(옵디보®); 펨브롤리주맙(키트루다®); 및 피딜리주맙/CT-011, MPDL3280A/RG7446; MEDI4736; MSB0010718C; BMS 936559, PDL2/Ig 융합 단백질, 예컨대 AMP 224 또는 B7-H3의 억제제 (예를 들어, MGA271), B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG 3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, B-7 패밀리 리간드 또는 그의 조합으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 중 1종은 여성 생식기계의 비정상적 조직, 예컨대 유방암, 난소암, 자궁내막암 또는 자궁암의 치료를 위한 유효량으로, SERM (선택적 에스트로겐 수용체 조정제), SERD (선택적 에스트로겐 수용체 분해제), 완전 에스트로겐 수용체 분해제 또는 부분 또는 완전 에스트로겐 길항제 또는 효능제의 또 다른 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 에스트로겐 억제제의 유효량과 조합하여 또는 교대로 투여될 수 있다. 부분 항에스트로겐제 예컨대 랄록시펜 및 타목시펜은 자궁 성장의 에스트로겐-유사 자극을 포함한 일부 에스트로겐-유사 효과, 및 또한 일부 경우에 종양 성장을 실제로 자극하는 유방암 진행 동안의 에스트로겐-유사 작용을 보유한다. 대조적으로, 완전 항에스트로겐제인 풀베스트란트는 자궁에 대한 에스트로겐-유사 작용이 없으며, 타목시펜-저항성 종양에 효과적이다.

항에스트로겐 화합물의 비제한적 예는 WO 2014/19176 (아스트라 제네카에 양도됨), WO 2013/090921, WO 2014/203129, WO 2014/203132 및 US2013/0178445 (올레마 파마슈티칼스(Olema Pharmaceuticals)에 양도됨), 및 미국 특허 번호 9,078,871, 8,853,423 및 8,703,810, 뿐만 아니라 US 2015/0005286, WO 2014/205136 및 WO 2014/205138에 제공된다.

항에스트로겐 화합물의 추가의 비제한적 예는 SERM 예컨대 아노르드린, 바제독시펜, 브로파레스트리올, 클로로트리아니센, 클로미펜 시트레이트, 시클로페닐, 라소폭시펜, 오르멜록시펜, 랄록시펜, 타목시펜, 토레미펜 및 풀베스트란트; 아로마타제 억제제 예컨대 아미노글루테티미드, 테스토락톤, 아나스트로졸, 엑세메스탄, 파드로졸, 포르메스탄 및 레트로졸; 및 항고나도트로핀 예컨대 류프로렐린, 세트로렐릭스, 알릴에스트레놀, 클로르마디논 아세테이트, 시프로테론 아세테이트, 델마디논 아세테이트, 디드로게스테론, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 노메게스트롤 아세테이트, 노르에티스테론 아세테이트, 프로게스테론 및 스피로노락톤을 포함한다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 다른 에스트로겐 리간드는 미국 특허 번호 4,418,068; 5,478,847; 5,393,763; 및 5,457,117, WO 2011/156518, 미국 특허 번호 8,455,534 및 8,299,112, 미국 특허 번호 9,078,871; 8,853,423; 8,703,810; US 2015/0005286; 및 WO 2014/205138, US 2016/0175289, US 2015/0258080, WO 2014/191726, WO 2012/084711; WO 2002/013802; WO 2002/004418; WO 2002/003992; WO 2002/003991; WO 2002/003990; WO 2002/003989; WO 2002/003988; WO 2002/003986; WO 2002/003977; WO 2002/003976; WO 2002/003975; WO 2006/078834; US 6821989; US 2002/0128276; US 6777424; US 2002/0016340; US 6326392; US 6756401; US 2002/0013327; US 6512002; US 6632834; US 2001/0056099; US 6583170; US 6479535; WO 1999/024027; US 6005102; EP 0802184; US 5998402; US 5780497, US 5880137, WO 2012/048058 및 WO 2007/087684에 기재되어 있다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물은 남성 생식기계의 비정상적 조직, 예컨대 전립선암 또는 고환암의 치료를 위한 유효량으로, 선택적 안드로겐 수용체 조정제, 선택적 안드로겐 수용체 분해제, 완전 안드로겐 수용체 분해제, 또는 부분 또는 완전 안드로겐 길항제의 또 다른 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 안드로겐 (예컨대, 테스토스테론) 억제제의 유효량과 조합하여 또는 교대하여 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 전립선암 또는 고환암은 안드로겐-저항성이다.

항안드로겐 화합물의 비제한적 예는 WO 2011/156518 및 미국 특허 번호 8,455,534 및 8,299,112에서 제공된다. 항안드로겐 화합물의 추가의 비제한적 예는 엔잘루타미드, 아팔루타미드, 시프로테론 아세테이트, 클로르마디논 아세테이트, 스피로노락톤, 칸레논, 드로스피레논, 케토코나졸, 토필루타미드, 아비라테론 아세테이트 및 시메티딘을 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 ALK 억제제이다. ALK 억제제의 예는 크리조티닙, 알렉티닙, 세리티닙, TAE684 (NVP-TAE684), GSK1838705A, AZD3463, ASP3026, PF-06463922, 엔트렉티닙 (RXDX-101), 및 AP26113을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 HER-2 억제제이다. HER-2 억제제의 예는 트라스투주맙, 라파티닙, 아도-트라스투주맙 엠탄신 및 페르투주맙을 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 CD20 억제제이다. CD20 억제제의 예는 오비누투주맙 (가지바(GAZYVA)®), 리툭시맙 (리툭산(RITUXAN)®), 파투무맙, 이브리투모맙, 토시투모맙 및 오크렐리주맙을 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 JAK3 억제제이다. JAK3 억제제의 예는 타소시티닙을 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 BCL-2 억제제이다. BCL-2 억제제의 예는 베네토클락스, ABT-199 (4-[4-[[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일]메틸]피페라진-1-일]-N-[[3-니트로-4-[[(테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸]아미노]페닐]술포닐]-2-[(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시]벤즈아미드), ABT-737 (4-[4-[[2-(4-클로로페닐)페닐]메틸]피페라진-1-일]-N-[4-[[(2R)-4-(디메틸아미노)-1-페닐술파닐부탄-2-일]아미노]-3-니트로페닐]술포닐벤즈아미드) (나비토클락스), ABT-263 ((R)-4-(4-((4'-클로로-4,4-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)피페라진-1-일)-N-((4-((4-모르폴리노-1-(페닐티오)부탄-2-일)아미노)-3((트리플루오로메틸)술포닐)페닐)술포닐)벤즈아미드), GX15-070 (오바토클락스 메실레이트, (2Z)-2-[(5Z)-5-[(3,5-디메틸-1H-피롤-2-일)메틸리덴]-4-메톡시피롤-2-일리덴]인돌; 메탄술폰산))), 2-메톡시-안티마이신 A3, YC137 (4-(4,9-디옥소-4,9-디히드로나프토[2,3-d]티아졸-2-일아미노)-페닐 에스테르), 포고신, 에틸 2-아미노-6-브로모-4-(1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸)-4H-크로멘-3-카르복실레이트, 닐로티닙-d3, TW-37 (N-[4-[[2-(1,1-디메틸에틸)페닐]술포닐]페닐]-2,3,4-트리히드록시-5-[[2-(1-메틸에틸)페닐]메틸]벤즈아미드), 아포고시폴론 (ApoG2), HA14-1, AT101, 사부토클락스, 감보그산 또는 G3139 (오블리메르센)를 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 키나제 억제제이다. 특정 실시양태에서, 키나제 억제제는 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3K) 억제제, 브루톤 티로신 키나제 (BTK) 억제제, 또는 비장 티로신 키나제 (Syk) 억제제 또는 그의 조합으로부터 선택된다.

PI3 키나제 억제제의 예는 워트만닌, 데메톡시비리딘, 페리포신, 이델라리십, 픽틸리십, 팔로미드 529, ZSTK474, PWT33597, CUDC-907, 및 AEZS-136, 두벨리십, GS-9820, BKM120, GDC-0032 (타셀리십), (2-[4-[2-(2-이소프로필-5-메틸-1,2,4-트리아졸-3-일)-5,6-디히드로이미다조[1,2-d][1,4]벤족사제핀-9-일]피라졸-1-일]-2-메틸프로판아미드), MLN-1117 ((2R)-1-페녹시-2-부타닐 히드로겐 (S)-메틸포스포네이트; 또는 메틸(옥소) {[(2R)-1-페녹시-2-부타닐]옥시}포스포늄)), BYL-719 ((2S)-N1-[4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸에틸)-4-피리디닐]-2-티아졸릴]-1,2-피롤리딘디카르복스아미드), GSK2126458 (2,4-디플루오로-N-{2-(메틸옥시)-5-[4-(4-피리다지닐)-6-퀴놀리닐]-3-피리디닐}벤젠술폰아미드) (오미팔리십), TGX-221 ((±)-7-메틸-2-(모르폴린-4-일)-9-(1-페닐아미노에틸)-피리도[1,2-a]-피리미딘-4-온), GSK2636771 (2-메틸-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤질)-6-모르폴리노-1H-벤조[d]이미다졸-4-카르복실산 디히드로클로라이드), KIN-193 ((R)-2-((1-(7-메틸-2-모르폴리노-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-9-일)에틸)아미노)벤조산), TGR-1202/RP5264, GS-9820 ((S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모히드록시프로판-1-온), GS-1101 (5-플루오로-3-페닐-2-([S)]-1-[9H-퓨린-6-일아미노]-프로필)-3H-퀴나졸린-4-온), AMG-319, GSK-2269557, SAR245409 (N-(4-(N-(3-((3,5-디메톡시페닐)아미노)퀴녹살린-2-일)술파모일)페닐)-3-메톡시-4-메틸벤즈아미드), BAY80-6946 (2-아미노-N-(7-메톡시-8-(3-모르폴리노프로폭시)-2,3-디히드로이미다조[1,2-c]퀴나즈), AS 252424 (5-[1-[5-(4-플루오로-2-히드록시-페닐)-푸란-2-일]-메트-(Z)-일리덴]-티아졸리딘-2,4-디온), CZ 24832 (5-(2-아미노-8-플루오로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)-N-tert-부틸피리딘-3-술폰아미드), 부파를리십 (5-[2,6-디(4-모르폴리닐)-4-피리미디닐]-4-(트리플루오로메틸)-2-피리딘아민), GDC-0941 (2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸술포닐)-1-피페라지닐]메틸]-4-(4-모르폴리닐)티에노[3,2-d]피리미딘), GDC-0980 ((S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온 (또한 RG7422로도 공지됨)), SF1126 ((8S,14S,17S)-14-(카르복시메틸)-8-(3-구아니디노프로필)-17-(히드록시메틸)-3,6,9,12,15-펜타옥소-1-(4-(4-옥소-8-페닐-4H-크로멘-2-일)모르폴리노-4-윰)-2-옥사-7,10,13,16-테트라아자옥타데칸-18-오에이트), PF-05212384 (N-[4-[[4-(디메틸아미노)-1-피페리디닐]카르보닐]페닐]-N'-[4-(4,6-디-4-모르폴리닐-1,3,5-트리아진-2-일)페닐]우레아) (게다톨리십), LY3023414, BEZ235 (2-메틸-2-{4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디히드로-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐}프로판니트릴) (닥톨리십), XL-765 (N-(3-(N-(3-(3,5-디메톡시페닐아미노)퀴녹살린-2-일)술파모일)페닐)-3-메톡시-4-메틸벤즈아미드), 및 GSK1059615 (5-[[4-(4-피리디닐)-6-퀴놀리닐]메틸렌]-2,4-티아졸리덴디온), PX886 ([(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[비스(프로프-2-에닐)아미노]메틸리덴]-5-히드록시-9-(메톡시메틸)-9a,11a-디메틸-1,4,7-트리옥소-2,3,3a,9,10,11-헥사히드로인데노[4,5h]이소크로멘-10-일]아세테이트 (또한 소놀리십으로도 공지됨)), LY294002, AZD8186, PF-4989216, 필라랄리십, GNE-317, PI-3065, PI-103, NU7441 (KU-57788), HS 173, VS-5584 (SB2343), CZC24832, TG100-115, A66, YM201636, CAY10505, PIK-75, PIK-93, AS-605240, BGT226 (NVP-BGT226), AZD6482, 복스탈리십, 알펠리십, IC-87114, TGI100713, CH5132799, PKI-402, 코판리십 (BAY 80-6946), XL 147, PIK-90, PIK-293, PIK-294, 3-MA (3-메틸아데닌), AS-252424, AS-604850, 아피톨리십 (GDC-0980; RG7422)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

BTK 억제제의 예는 이브루티닙 (PCI-32765로도 공지됨) (임브루비카(IMBRUVICA)®) (1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시-페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로프-2-엔-1-온), 디아닐리노피리미딘계 억제제, 예컨대 AVL-101 및 AVL-291/292 (N-(3-((5-플루오로-2-((4-(2-메톡시에톡시)페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드) (아빌라 테라퓨틱스(Avila Therapeutics)) (그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 공개 번호 2011/0117073 참조), 다사티닙 ([N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-(6-(4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일)-2-메틸피리미딘-4-일아미노)티아졸-5-카르복스아미드], LFM-A13 (알파-시아노-베타-히드록시-베타-메틸-N-(2,5-디브로모페닐)프로펜아미드), GDC-0834 ([R-N-(3-(6-(4-(1,4-디메틸-3-옥소피페라진-2-일)페닐아미노)-4-메틸-5-옥소-4,5-디히드로피라진-2-일)-2-메틸페닐)-4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜-2-카르복스아미드], CGI-560 4-(tert-부틸)-N-(3-(8-(페닐아미노)이미다조[1,2-a]피라진-6-일)페닐)벤즈아미드, CGI-1746 (4-(tert-부틸)-N-(2-메틸-3-(4-메틸-6-((4-(모르폴린-4-카르보닐)페닐)아미노)-5-옥소-4,5-디히드로피라진-2-일)페닐)벤즈아미드), CNX-774 (4-(4-((4-((3-아크릴아미도페닐)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)아미노)페녹시)-N-메틸피콜린아미드), CTA056 (7-벤질-1-(3-(피페리딘-1-일)프로필)-2-(4-(피리딘-4-일)페닐)-1H-이미다조[4,5-g]퀴녹살린-6(5H)-온), GDC-0834 ((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-디메틸-3-옥소피페라진-2-일)페닐)아미노)-4-메틸-5-옥소-4,5-디히드로피라진-2-일)-2-메틸페닐)-4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜-2-카르복스아미드), GDC-0837 ((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-디메틸-3-옥소피페라진-2-일)페닐)아미노)-4-메틸-5-옥소-4,5-디히드로피라진-2-일)-2-메틸페닐)-4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜-2-카르복스아미드), HM-71224, ACP-196, ONO-4059 (오노 파마슈티칼스(Ono Pharmaceuticals)), PRT062607 (4-((3-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)페닐)아미노)-2-(((1R,2S)-2-아미노시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드), QL-47 (1-(1-아크릴로일인돌린-6-일)-9-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)벤조[h][1,6]나프티리딘-2(1H)-온), 및 RN486 (6-시클로프로필-8-플루오로-2-(2-히드록시메틸-3-{1-메틸-5-[5-(4-메틸-피페라진-1-일)-피리딘-2-일아미노]-6-옥소-1,6-디히드로-피리딘-3-일}-페닐)-2H-이소퀴놀린-1-온), 및 BTK 활성을 억제할 수 있는 다른 분자, 예를 들어 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Akinleye et ah, Journal of Hematology & Oncology, 2013, 6:59]에 개시된 이들 BTK 억제제를 포함한다.

Syk 억제제는 세르둘라티닙 (4-(시클로프로필아미노)-2-((4-(4-(에틸술포닐)피페라진-1-일)페닐)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드), 엔토스플레티닙 (6-(1H-인다졸-6-일)-N-(4-모르폴리노페닐)이미다조[1,2-a]피라진-8-아민), 포스타마티닙 ([6-({5-플루오로-2-[(3,4,5-트리메톡시페닐)아미노]-4-피리미디닐}아미노)-2,2-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-4H-피리도[3,2-b][1,4]옥사진-4-일]메틸 디히드로겐 포스페이트), 포스타마티닙 이나트륨 염 (소듐 (6-((5-플루오로-2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)-2,2-디메틸-3-옥소-2H-피리도[3,2-b][1,4]옥사진-4(3H)-일)메틸 포스페이트), BAY 61-3606 (2-(7-(3,4-디메톡시페닐)-이미다조[1,2-c]피리미딘-5-일아미노)-니코틴아미드 HCl), RO9021 (6-[(1R,2S)-2-아미노-시클로헥실아미노]-4-(5,6-디메틸-피리딘-2-일아미노)-피리다진-3-카르복실산 아미드), 이마티닙 (글리벡; 4-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-N-(4-메틸-3-{[4-(피리딘-3-일)피리미딘-2-일]아미노}페닐)벤즈아미드), 스타우로스포린, GSK143 (2-(((3R,4R)-3-아미노테트라히드로-2H-피란-4-일)아미노)-4-(p-톨릴아미노)피리미딘-5-카르복스아미드), PP2 (1-(tert-부틸)-3-(4-클로로페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민), PRT-060318 (2-(((1R,2S)-2-아미노시클로헥실)아미노)-4-(m-톨릴아미노)피리미딘-5-카르복스아미드), PRT-062607 (4-((3-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)페닐)아미노)-2-(((1R,2S)-2-아미노시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드), R112 (3,3'-((5-플루오로피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일))디페놀), R348 (3-에틸-4-메틸피리딘), R406 (6-((5-플루오로-2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)아미노)-2,2-디메틸-2H-피리도[3,2-b][1,4]옥사진-3(4H)-온), 피세아타놀 (3-히드록시레스베라톨), YM193306 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조), 7-아자인돌, 피세아타놀, ER-27319 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 화합물 D (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), PRT060318 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 루테올린 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 아피게닌 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 퀘르세틴 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 피세틴 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 미리세틴 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨), 모린 (문헌 [Singh et al. Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643] 참조, 그 전문이 본원에 포함됨)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 MEK 억제제이다. MEK 억제제는 널리 공지되어 있고, 예를 들어 트라메티닙/GSK1120212 (N-(3-{3-시클로프로필-5-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-6,8-디메틸-2,4,7-트리옥소-3,4,6,7-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-1(2H-일}페닐)아세트아미드), 셀루메티닙 (6-(4-브로모-2-클로로아닐리노)-7-플루오로-N-(2-히드록시에톡시)-3-메틸벤즈이미다졸-5-카르복스아미드), 피마세르팁/AS703026/MSC 1935369 ((S)-N-(2,3-디히드록시프로필)-3-((2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노)이소니코틴아미드), XL-518/GDC-0973 (1-({3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]페닐}카르보닐)-3-[(2S)-피페리딘-2-일]아제티딘-3-올), 레파메티닙/BAY869766/RDEAl 19 (N-(3,4-디플루오로-2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-6-메톡시페닐)-1-(2,3-디히드록시프로필)시클로프로판-1-술폰아미드), PD-0325901 (N-[(2R)-2,3-디히드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-벤즈아미드), TAK733 ((R)-3-(2,3-디히드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온), MEK162/ARRY438162 (5-[(4-브로모-2-플루오로페닐)아미노]-4-플루오로-N-(2-히드록시에톡시)-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카르복스아미드), R05126766 (3-[[3-플루오로-2-(메틸술파모일아미노)-4-피리딜]메틸]-4-메틸-7-피리미딘-2-일옥시크로멘-2-온), WX-554, R04987655/CH4987655 (3,4-디플루오로-2-((2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-5-((3-옥소-1,2-옥사지난-2일)메틸)벤즈아미드), 또는 AZD8330 (2-((2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-카르복스아미드), U0126-EtOH, PD184352 (CI-1040), GDC-0623, BI-847325, 코비메티닙, PD98059, BIX 02189, BIX 02188, 비니메티닙, SL-327, TAK-733, PD318088을 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 Raf 억제제이다. Raf 억제제는 공지되어 있고, 예를 들어 베무라페닙 (N-[3-[[5-(4-클로로페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일]카르보닐]-2,4-디플루오로페닐]-1-프로판술폰아미드), 소라페닙 토실레이트 (4-[4-[[4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐]카르바모일아미노]페녹시]-N-메틸피리딘-2-카르복스아미드;4-메틸벤젠술포네이트), AZ628 (3-(2-시아노프로판-2-일)-N-(4-메틸-3-(3-메틸-4-옥소-3,4-디히드로퀴나졸린-6-일아미노)페닐)벤즈아미드), NVP-BHG712 (4-메틸-3-(1-메틸-6-(피리딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일아미노)-N-(3-(트리플루오로메틸)페닐)벤즈아미드), RAF-265 (1-메틸-5-[2-[5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일]피리딘-4-일]옥시-N-[4-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈이미다졸-2-아민), 2-브로모알디신 (2-브로모-6,7-디히드로-1H,5H-피롤로[2,3-c]아제핀-4,8-디온), Raf 키나제 억제제 IV (2-클로로-5-(2-페닐-5-(피리딘-4-일)-1H-이미다졸-4-일)페놀), 소라페닙 N-옥시드 (4-[4-[[[[4-클로로-3(트리플루오로메틸)페닐]아미노]카르보닐]아미노]페녹시]-N-메틸-2피리딘카르복스아미드 1-옥시드), PLX-4720, 다브라페닙 (GSK2118436), GDC-0879, RAF265, AZ 628, SB590885, ZM336372, GW5074, TAK-632, CEP-32496, LY3009120 및 GX818 (엔코라페닙 (브라프토비(BRAFTOVI)®).

특정 실시양태에서, 생물활성제는 EGFR 억제제, 예를 들어 게피티닙 (이레사(IRESSA)®), 라파티닙 (타이커브(TYKERB)®), 오시메르티닙 (타그리소(TAGRISSO)®), 네라티닙 (네르링스(NERLYNX)®), 반데타닙 (카프렐사(CAPRELSA)®), 다코미티닙 (비짐프로(VIZIMPRO)®), 로실레티닙 (제가프리(XEGAFRI)™), 아파티닙 (글로트리프(GLOTRIF)®, 글로트리프(GIOTRIFF)™, 아파닉스(AFANIX)™), 라제르티닙, 또는 나자르팁이다.

EGFR 억제제의 추가의 예는 로실레티닙 (CO-1686), 올무티닙 (올리타(Olita)), 나쿠오티닙 (ASP8273), 나자르티닙 (EGF816), PF-06747775, 이코티닙 (BPI-2009), 네라티닙 (HKI-272; PB272); 아비티닙 (AC0010), EAI045, 타를록소티닙 (TH-4000; PR-610), PF-06459988 (화이자), 테세바티닙 (XL647; EXEL-7647; KD-019), 트랜스티닙, WZ-3146, WZ8040, CNX-2006, 다코미티닙 (PF-00299804; 화이자), 브리가티닙 (알룬브리그(Alunbrig)), 로를라티닙, 및 PF-06747775 (PF7775)를 포함한다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 제1-세대 EGFR 억제제 예컨대 에를로티닙, 게피티닙, 또는 라파티닙이다. 특정 실시양태에서, 생물활성제는 제2-세대 EGFR 억제제 예컨대 아파티닙 및/또는 다코미티닙이다. 특정 실시양태에서, 생물활성제는 제3-세대 EGFR 억제제, 예컨대 오시메르티닙이다.

특정 측면에서, 화합물 1은 EGFR 또는 돌연변이 EGFR의 ATP-부위 결합 억제제와 조합되어 투여된다. EGFR의 ATP-부위 결합 억제제의 비제한적 예는 오시메르티닙, 나쿠오티닙, 마벨레르티닙, 스페브루티닙 및 AZ5104를 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 오시메르티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 나쿠오티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 마벨레르티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 스페브루티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 AZ5104와 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 로실레티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 아비티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 라제르티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 나자르티닙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 EGFR 항체, 예를 들어 세툭시맙, 파니투맙 또는 네시투맙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 세툭시맙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 파니투맙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 네시투맙과 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 c-MET 억제제, 예를 들어 크리조티닙 (잘코리(Xalkori), 크리조닉스(Crizonix)), 테포티닙 (XL880, EXEL-2880, GSK1363089, GSK089) 또는 티반티닙 (ARQ197)이다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 AKT 억제제, 예컨대 비제한적으로, MK-2206, GSK690693, 페리포신, (KRX-0401), GDC-0068, 트리시리빈, AZD5363, 호노키올, PF-04691502 및 밀테포신, FLT-3 억제제, 예컨대 비제한적으로, P406, 도비티닙, 퀴자르티닙 (AC220), 아무바티닙 (MP-470), 탄두티닙 (MLN518), ENMD-2076 및 KW-2449, 또는 그의 조합이다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 mTOR 억제제이다. mTOR 억제제의 예는 라파마이신 및 그의 유사체, 에베롤리무스 (아피니토르), 템시롤리무스, 리다포롤리무스, 시롤리무스, 및 데포롤리무스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 RAS 억제제이다. RAS 억제제의 예는 레올리신 및 siG12D LODER을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 HSP 억제제이다. HSP 억제제는 겔다나마이신 또는 17-N-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신 (17AAG) 및 라디시콜을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

추가의 생물활성 화합물은, 예를 들어 에베롤리무스, 트라벡테딘, 아브락산, TLK 286, AV-299, DN-101, 파조파닙, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, 엔자스타우린, 반데타닙, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, FLT-3 억제제, VEGFR 억제제, 오로라 키나제 억제제, PIK-1 조정제, HDAC 억제제, c-MET 억제제, PARP 억제제, Cdk 억제제, IGFR-TK 억제제, 항-HGF 항체, 국소 부착 키나제 억제제, Map 키나제 키나제 (mek) 억제제, VEGF 트랩 항체, 페메트렉세드, 파니투무맙, 암루비신, 오레고보맙, Lep-etu, 놀라트렉세드, azd2171, 바타불린, 오파투무맙, 자놀리무맙, 에도테카린, 테트란드린, 루비테칸, 테스밀리펜, 오블리메르센, 티실리무맙, 이필리무맙, 고시폴, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, 실렌기티드, 기마테칸, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR₁KRX-0402, 루칸톤, LY317615, 뉴라디압, 비테스판, Rta 744, Sdx 102, 탈람파넬, 아트라센탄, Xr 311, 로미뎁신, ADS-100380, 수니티닙, 5-플루오로우라실, 보리노스타트, 에토포시드, 겜시타빈, 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 5'-데옥시-5-플루오로우리딘, 빈크리스틴, 테모졸로미드, ZK-304709, 셀리시클립; PD0325901, AZD-6244, 카페시타빈, L-글루탐산, N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-, 이나트륨 염, 7수화물, 캄프토테신, PEG-표지된 이리노테칸, 타목시펜, 토레미펜 시트레이트, 아나스트라졸, 엑세메스탄, 레트로졸, DES(디에틸스틸베스트롤), 에스트라디올, 에스트로겐, 결합형 에스트로겐, 베바시주맙, IMC-1C11, CHIR-258); 3-[5-(메틸술포닐피페라딘메틸)-인돌릴-퀴놀론, 바탈라닙, AG-013736, AVE-0005, 고세렐린 아세테이트, 류프롤리드 아세테이트, 트립토렐린 파모에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 메게스트롤 아세테이트, 랄록시펜, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드, 메게스트롤 아세테이트, CP-724714; TAK-165, HKI-272, 라파타닙, 카네르티닙, ABX-EGF 항체, 에르비툭스, EKB-569, PKI-166, GW-572016, 이오나파르닙, BMS-214662, 티피파르닙; 아미포스틴, NVP-LAQ824, 수베로일 아닐리드 히드록삼산, 발프로산, 트리코스타틴 A, FK-228, SU11248, 소라페닙, KRN951, 아미노글루테티미드, 암사크린, 아나그렐리드, L-아스파라기나제, 바실루스 칼메트-게랭 (BCG) 백신, 아드리아마이신, 블레오마이신, 부세렐린, 부술판, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로드로네이트, 시프로테론, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 디에틸스틸베스트롤, 에피루비신, 플루다라빈, 플루드로코르티손, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 글리벡, 겜시타빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙, 류프롤리드, 레바미솔, 로무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 6-메르캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론, 닐루타미드, 옥트레오티드, 옥살리플라틴, 파미드로네이트, 펜토스타틴, 플리카마이신, 포르피머, 프로카르바진, 랄티트렉세드, 리툭시맙, 스트렙토조신, 테니포시드, 테스토스테론, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 트레티노인, 빈데신, 13-시스-레티노산, 페닐알라닌 머스타드, 우라실 머스타드, 에스트라무스틴, 알트레타민, 플록수리딘, 5-데옥시우리딘, 시토신 아라비노시드, 6-메르캅토퓨린, 데옥시코포르마이신, 칼시트리올, 발루비신, 미트라마이신, 빈블라스틴, 비노렐빈, 토포테칸, 라족신, 마리마스타트, COL-3, 네오바스타트, BMS-275291, 스쿠알라민, 엔도스타틴, SU5416, SU6668, EMD121974, 인터류킨-12, IM862, 안지오스타틴, 비탁신, 드롤록시펜, 이독시펜, 스피로노락톤, 피나스테리드, 시메티딘, 트라스투주맙, 데니류킨 디프티톡스, 게피티닙, 보르테조밉, 파클리탁셀, 크레모포르-유리 파클리탁셀, 도세탁셀, 에피틸론 B, BMS-247550, BMS-310705, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 피펜독시펜, ERA-923, 아르족시펜, 풀베스트란트, 아콜비펜, 라소폭시펜, 이독시펜, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, 토포테칸, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, 라파마이신, 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신, 템시롤리무스, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, 워트만닌, ZM336372, L-779,450, PEG-필그라스팀, 다르베포에틴, 에리트로포이에틴, 과립구 콜로니-자극 인자, 졸렌드로네이트, 프레드니손, 세툭시맙, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자, 히스트렐린, PEG화 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2a, PEG화 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-2b, 아자시티딘, PEG-L-아스파라기나제, 레날리도미드, 겜투주맙, 히드로코르티손, 인터류킨-11, 덱스라족산, 알렘투주맙, 올-트랜스레티노산, 케토코나졸, 인터류킨-2, 메게스트롤, 면역 글로불린, 질소 머스타드, 메틸프레드니솔론, 이브리투모맙 티욱세탄, 안드로겐, 데시타빈, 헥사메틸멜라민, 벡사로텐, 토시투모맙, 삼산화비소, 코르티손, 에티드로네이트, 미토탄, 시클로스포린, 리포솜 다우노루비신, 에드위나-아스파라기나제, 스트론튬 89, 카소피탄트, 네투피탄트, NK-1 수용체 길항제, 팔로노세트론, 아프레피탄트, 디펜히드라민, 히드록시진, 메토클로프라미드, 로라제팜, 알프라졸람, 할로페리돌, 드로페리돌, 드로나비놀, 덱사메타손, 메틸프레드니솔론, 프로클로르페라진, 그라니세트론, 온단세트론, 돌라세트론, 트로피세트론, 페그필그라스팀, 에리트로포이에틴, 에포에틴 알파, 다르베포에틴 알파 및 그의 혼합물을 포함한다.

특정 실시양태에서, 화합물은 이포스파미드와 조합되어 투여된다.

특정 실시양태에서, 생물활성제는 이마티닙 메실레이트 (글리백(Gleevac)®), 다사티닙 (스프리셀(Sprycel)®), 닐로티닙 (타시그나(Tasigna)®), 보수티닙 (보술리프(Bosulif)®), 트라스투주맙 (헤르셉틴(Herceptin)®), 트라스투주맙-DM1, 페르투주맙 (페르제타(Perjeta)TM), 라파티닙 (타이커브®), 게피티닙 (이레사®), 에를로티닙 (타르세바®), 세툭시맙 (에르비툭스®), 파니투무맙 (벡티빅스(Vectibix)®), 반데타닙 (카프렐사(Caprelsa)®), 베무라페닙 (젤보라프(Zelboraf)®), 보리노스타트 (졸린자(Zolinza)®), 로미뎁신 (이스토닥스(Istodax)®), 벡사로텐 (타그레틴(Tagretin)®), 알리트레티노인 (판레틴(Panretin)®), 트레티노인 (베사노이드(Vesanoid)®), 카르필조밉 (키프롤리스(Kyprolis)TM), 프랄라트렉세이트 (폴로틴(Folotyn)®), 베바시주맙 (아바스틴(Avastin)®), 지브-아플리베르셉트 (잘트랩(Zaltrap)®), 소라페닙 (넥사바르(Nexavar)®), 수니티닙 (수텐트(Sutent)®), 파조파닙 (보트리엔트(Votrient)®), 레고라페닙 (스티바르가(Stivarga)®) 및 카보잔티닙 (코메트리크(Cometriq)™)으로부터 선택되나, 이에 제한되지는 않는다.

특정 측면에서, 생물활성제는 항염증제, 화학요법제, 방사선요법제, 추가의 치료제, 또는 면역억제제이다.

적합한 화학요법 생물활성제는 방사성 분자, 세포독소 또는 세포독성제로도 지칭되며 세포의 생존율에 유해한 임의의 작용제를 포함하는 독소, 및 화학요법 화합물을 함유하는 리포솜 또는 다른 소포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일반적 항암 제약 작용제는 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin)®) 또는 리포솜 빈크리스틴 (마르퀴보(Marqibo)®), 다우노루비신 (다우노마이신 또는 세루비딘(Cerubidine)®) 또는 독소루비신 (아드리아마이신(Adriamycin)®), 시타라빈 (시토신 아라비노시드, ara-C 또는 시토사르(Cytosar)®), L-아스파라기나제 (엘스파르(Elspar)®) 또는 PEG-L-아스파라기나제 (페가스파르가제 또는 온카스파르®), 에토포시드 (VP-16), 테니포시드 (부몬(Vumon)®), 6-메르캅토퓨린 (6-MP 또는 퓨린톨(Purinethol)®), 메토트렉세이트, 시클로포스파미드 (시톡산(Cytoxan)®), 프레드니손, 덱사메타손 (데카드론), 이마티닙 (글리벡(Gleevec)®), 다사티닙 (스프리셀®), 닐로티닙 (타시그나®), 보수티닙 (보술리프®) 및 포나티닙 (이클루식(Iclusig)™)을 포함한다.

추가의 적합한 화학요법제의 예는 1-데히드로테스토스테론, 5-플루오로우라실 데카르바진, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 알데스류킨, 알킬화제, 알로퓨리놀 소듐, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 안트라마이신 (AMC)), 항유사분열제, 시스-디클로로디아민 백금 (II) (DDP) 시스플라틴), 디아미노 디클로로 백금, 안트라시클린, 항생제, 항대사물, 아스파라기나제, BCG 라이브 (방광내), 베타메타손 인산나트륨 및 베타메타손 아세테이트, 비칼루타미드, 블레오마이신 술페이트, 부술판, 칼슘 류코우오린, 칼리케아미신, 카페시타빈, 카르보플라틴, 로무스틴 (CCNU), 카르무스틴 (BSNU), 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 콜키신, 결합형 에스트로겐, 시클로포스파미드, 시클로포스파미드, 시타라빈, 시타라빈, 시토칼라신 B, 시톡산, 다카르바진, 닥티노마이신, 닥티노마이신 (이전에 악티노마이신), 다우니루비신 HCL, 다우노루비신 시트레이트, 데니류킨 디프티톡스, 덱스라족산, 디브로모만니톨, 디히드록시 안트라신 디온, 도세탁셀, 돌라세트론 메실레이트, 독소루비신 HCL, 드로나비놀, 이. 콜라이 L-아스파라기나제, 에메틴, 에포에틴-α, 에르위니아 L-아스파라기나제, 에스테르화 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라무스틴 포스페이트 소듐, 브로민화에티듐, 에티닐 에스트라디올, 에티드로네이트, 에토포시드 시트로로룸 인자, 에토포시드 포스페이트, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로우라실, 플루타미드, 폴린산, 겜시타빈 HCL, 글루코코르티코이드, 고세렐린 아세테이트, 그라미시딘 D, 그라니세트론 HCL, 히드록시우레아, 이다루비신 HCL, 이포스파미드, 인터페론 α-2b, 이리노테칸 HCL, 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔 HCL, 리도카인, 로무스틴, 메이탄시노이드, 메클로레타민 HCL, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란 HCL, 메르캅티퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미트라마이신, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 닐루타미드, 옥트레오티드 아세테이트, 온단세트론 HCL, 파클리탁셀, 파미드로네이트 이나트륨, 펜토스타틴, 필로카르핀 HCL, 플리마이신, 카르무스틴 임플란트를 갖는 폴리페프로산 20, 포르피머 소듐, 프로카인, 프로카르바진 HCL, 프로프라놀롤, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 스트렙토조토신, 타목시펜, 탁솔, 테니포시드, 테노포시드, 테스토락톤, 테트라카인, 티오에파 클로람부실, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸 HCL, 토레미펜 시트레이트, 트라스투주맙, 트레티노인, 발루비신, 빈블라스틴 술페이트, 빈크리스틴 술페이트, 및 비노렐빈 타르트레이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 화학요법제 (예를 들어, 세포독성제 또는 암의 치료에 유용한 다른 화학적 화합물)와 조합되어 투여된다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 항대사물, 폴산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착물, 안트라센디온 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 억제제, 아드레노코르티코스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐 및 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체를 포함한다. 또한, 5-플루오로우라실 (5-FU), 류코보린 (LV), 이레노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀 및 도세탁셀이 포함된다. 화학요법제의 비제한적 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벡비신, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감말 및 칼리케아미신 오메갈 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem. Inti. Ed Engl. 33:183-186 (1994)] 참조); 다이네미신, 예컨대 다이네미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모미시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신® (독소루비신, 예컨대 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (제이에이에스 내추럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 탁솔® (파클리탁셀; 브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지, 프린스턴, NJ), 아브락산®, 파클리탁셀의 크레모포르-유리 알부민-조작된 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샴버그), 및 탁소테레(TAXOTERE)® 도세탁셀 (롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 엉또니); 클로란부실; 겜자르(GEMZAR)® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 배위 착물 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)®, 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (예를 들어, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 임의의 상기한 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 2종 이상의 화학요법제가 본원에 기재된 화합물과 조합되어 투여될 칵테일에 사용될 수 있다. 조합 화학요법의 적합한 투여 요법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 조합 투여 요법은 문헌 [Saltz et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 18:233a (1999) and Douillard et al., Lancet 355(9209): 1041 -1047 (2000)]에 기재되어 있다.

본원에 개시된 화합물과 조합하여 투여될 수 있는 추가의 치료제는 베바시주맙, 수티닙, 소라페닙, 2-메톡시에스트라디올 또는 2ME2, 피나수네이트, 바탈라닙, 반데타닙, 아플리베르셉트, 볼로식시맙, 에타라시주맙 (MEDI-522), 실렌기티드, 세툭시맙, 파니투무맙, 게피티닙, 트라스투주맙, 도비티닙, 피기투무맙, 아타시셉트, 리툭시맙, 알렘투주맙, 알데스류킨, 아틀리주맙, 토실리주맙, 템시롤리무스, 에베롤리무스, 루카투무맙, 다세투주맙, HLL1, huN901-DM1, 아티프리모드, 나탈리주맙, 보르테조밉, 카르필조밉, 마리조밉, 타네스피마이신, 사퀴나비르 메실레이트, 리토나비르, 넬피나비르 메실레이트, 인디나비르 술페이트, 벨리노스타트, 파노비노스타트, 마파투무맙, 렉사투무맙, 둘라네르민, ABT-737, 오블리메르센, 플리티뎁신, 탈마피모드, P276-00, 엔자스타우린, 티피파르닙, 페리포신, 이마티닙, 다사티닙, 레날리도미드, 탈리도미드, 심바스타틴, 셀레콕시브, 바제독시펜, AZD4547, 릴로투무맙, 옥살리플라틴 (엘록사틴), PD0332991, 리보시클립 (LEE011), 아메바시클립 (LY2835219), HDM201, 풀베스트란트 (파슬로덱스), 엑세메스탄 (아로마신), PIM447, 룩솔리티닙 (INC424), BGJ398, 네시투무맙, 페메트렉세드 (알림타), 및 라무시루맙 (IMC-1121B)을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 추가의 요법은 모노클로날 항체 (MAb)이다. 일부 MAb는 암 세포를 파괴하는 면역 반응을 자극한다. B 세포에 의해 자연적으로 생산된 항체와 유사하게, 이들 MAb는 암 세포 표면을 "코팅"하여, 면역계에 의한 그의 파괴를 촉발할 수 있다. 예를 들어, 베바시주맙은 종양 혈관의 발생을 촉진하는 종양의 미세환경에서 종양 세포 및 다른 세포에 의해 분비되는 단백질인 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)를 표적화한다. 베바시주맙과 결합 시에, VEGF는 그의 세포 수용체와 상호작용할 수 없어서, 새로운 혈관의 성장으로 이어지는 신호전달을 막는다. 세포 표면 성장 인자 수용체와 결합하는 mAb는 표적화된 수용체가 그의 정상적인 성장-촉진 신호를 보내는 것을 막는다. 이들은 또한 종양 세포가 파괴되도록 아폽토시스를 촉발하고 면역계를 활성화시킬 수 있다.

본 발명의 한 측면에서, 생물활성제는 면역억제제이다. 면역억제제는 칼시뉴린 억제제, 예를 들어 시클로스포린 또는 아스코마이신, 예를 들어 시클로스포린 A (네오랄(NEORAL)®), FK506 (타크롤리무스), 피메크롤리무스, mTOR 억제제, 예를 들어 라파마이신 또는 그의 유도체, 예를 들어 시롤리무스 (라파뮨(RAPAMUNE)®), 에베롤리무스 (세르티칸(Certican)®), 템시롤리무스, 조타롤리무스, 비올리무스-7, 비올리무스-9, 라파로그, 예를 들어 리다포롤리무스, 아자티오프린, 캄파트 1H, S1P 수용체 조정제, 예를 들어 핑골리모드 또는 그의 유사체, 항 IL-8 항체, 미코페놀산 또는 그의 염, 예를 들어 나트륨 염, 또는 그의 전구약물, 예를 들어 미코페놀레이트 모페틸 (셀셉트(CELLCEPT)®), OKT3 (오르토클론(ORTHOCLONE) OKT3®), 프레드니손, 아트감(ATGAM)®, 티모글로불린(THYMOGLOBULIN)®, 브레퀴나르 소듐, OKT4, T10B9.A-3A, 33B3.1, 15-데옥시스페르구알린, 트레스페리무스, 레플루노미드 아라바(Leflunomide ARAVA)®, CTLAI-Ig, 항-CD25, 항-IL2R, 바실릭시맙 (시뮬렉트(SIMULECT)®), 다클리주맙 (제나팍스(ZENAPAX)®), 미조르빈, 메토트렉세이트, 덱사메타손, ISAtx-247, SDZ ASM 981 (피메크롤리무스, 엘리델(Elidel)®), CTLA4lg (아바타셉트), 벨라타셉트, LFA3lg, 에타네르셉트 (이뮤넥스(Immunex)에 의해 엔브렐(Enbrel)®로서 판매됨), 아달리무맙 (휴미라(Humira)®), 인플릭시맙 (레미케이드(Remicade)®), 항-LFA-1 항체, 나탈리주맙 (안테그렌(Antegren)®), 엔리모맙, 가빌리모맙, 항흉선세포 이뮤노글로불린, 시플리주맙, 알레파셉트 에팔리주맙, 펜타사, 메살라진, 아사콜, 코데인 포스페이트, 베노릴레이트, 펜부펜, 나프로신, 디클로페낙, 에토돌락 및 인도메타신, 아스피린 및 이부프로펜일 수 있다.

일부 실시양태에서, 생물활성제는 암 치료에 사용되는 생물제제 예컨대 시토카인 (예를 들어, 인터페론 또는 인터류킨 (예를 들어, IL-2))인 치료제이다. 일부 실시양태에서, 생물제제는 항혈관신생제, 예컨대 항-VEGF 작용제, 예를 들어 베바시주맙 (아바스틴®)이다. 일부 실시양태에서, 생물제제는 이뮤노글로불린-기반 생물제제, 예를 들어 항암 반응을 자극하는 표적에 대해 효능작용하거나 또는 암에 중요한 항원에 대해 길항작용하는 모노클로날 항체 (예를 들어, 인간화 항체, 완전 인간 항체, Fc 융합 단백질 또는 그의 기능적 단편)이다. 이러한 작용제는 리툭산(RITUXAN)® (리툭시맙); 제나팍스(ZENAPAX)® (다클리주맙); 시뮬렉트(SIMULECT)® (바실릭시맙); 시나기스(SYNAGIS)® (팔리비주맙); 레미케이드(REMICADE)® (인플릭시맙); 헤르셉틴(HERCEPTIN)® (트라스투주맙); 밀로타르그(MYLOTARG)® (겜투주맙 오조가미신); 캄파트(CAMPATH)® (알렘투주맙); 제발린(ZEVALIN)® (이브리투모맙 티욱세탄); 휴미라(HUMIRA)® (아달리무맙); 졸레어(XOLAIR)® (오말리주맙); 벡사르(BEXXAR)® (토시투모맙-I-131); 랍티바(RAPTIVA)® (에팔리주맙); 에르비툭스(ERBITUX)® (세툭시맙); 아바스틴(AVASTIN)® (베바시주맙); 티사브리(TYSABRI)® (나탈리주맙); 악템라(ACTEMRA)® (토실리주맙); 벡티빅스(VECTIBIX)® (파니투무맙); 루센티스(LUCENTIS)® (라니비주맙); 소우리스(SOURIS)® (에쿨리주맙); 심지아(CIMZIA)® (세르톨리주맙 페골); 심포니(SIMPONI)® (골리무맙); 일라리스(ILARIS)® (카나키누맙); 스텔라라(STELARA)® (우스테키누맙); 아제라(ARZERRA)® (오파투무맙); 프롤리아(PROLIA)® (데노수맙); 누막스(NUMAX)® (모타비주맙); 아브트락스(ABTHRAX)® (락시바쿠맙); 벤리스타(BENLYSTA)® (벨리무맙); 예르보이(YERVOY)® (이필리무맙); 애드세트리스(ADCETRIS)® (브렌툭시맙 베도틴); 페르제타(PERJETA)® (페르투주맙); 카드실라(KADCYLA)® (아도-트라스투주맙 엠탄신); 및 가지바(GAZYVA)® (오비누투주맙)를 포함한다. 또한, 항체-약물 접합체가 포함된다.

조합 요법은 비-약물 치료인 치료제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 방사선 요법, 동결요법, 온열요법 및/또는 종양 조직의 외과적 절제에 더하여 투여될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "조합하여" 투여되는 화합물은 치료 주기에서 상이한 시간에 또는 상이한 날에 2종의 화합물의 동시 투여 또는 투여를 지칭할 수 있다.

특정 실시양태에서, 제1 및 제2 치료제는 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여된다. 제1 치료제는 제2 치료제의 투여 직전 또는 직후, 최대 1시간, 최대 2시간, 최대 3시간, 최대 4시간, 최대 5시간, 최대 6시간, 최대 7시간, 최대 8시간, 최대 9시간, 최대 10시간, 최대 11시간, 최대 12시간, 최대 13시간, 최대 14시간, 최대 16시간, 최대 17시간, 최대 18시간, 최대 19시간, 최대 20시간, 최대 21시간, 최대 22시간, 최대 23시간, 최대 24시간 또는 최대 1-7, 1-14, 1-21 또는 1-30일 전 또는 후에 투여될 수 있다.

특정 실시양태에서, 제2 치료제는 본원에 기재된 화합물과 상이한 투여 스케줄로 투여된다. 예를 들어, 제2 치료제는 치료 주기당 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일의 치료 휴일을 가질 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제1 치료제는 치료 휴일을 갖는다. 예를 들어, 제1 치료제는 치료 주기당 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일의 치료 휴일을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 치료제 둘 다는 치료 휴일을 갖는다.

VII. 제약 조성물

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 치료 활성 물질로서, 예를 들어 제약 제제의 형태로 사용될 수 있다. 제약 제제는 경구로, 예를 들어 정제, 코팅된 정제, 당의정, 경질 및 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 화합물은 비경구로, 예를 들어 정맥내 투여에 의해 투여된다. 그러나, 투여는 또한 직장으로, 예를 들어 좌제의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들어 주사 용액의 형태로 수행될 수 있다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 제약 제제의 제조를 위해 제약상 불활성, 무기 또는 유기 담체와 함께 가공될 수 있다. 락토스, 옥수수 전분 또는 그의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 그의 염 등은, 예를 들어 정제, 코팅 정제, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐을 위한 담체로서 사용될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐에 적합한 담체는, 예를 들어 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이다. 그러나, 활성 물질의 성질에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우에는 통상적으로 담체가 요구되지 않는다. 용액 및 시럽의 제조에 적합한 담체는, 예를 들어 물, 폴리올, 글리세롤, 식물성 오일 등이다. 좌제에 적합한 담체는, 예를 들어 천연 또는 경화 오일, 왁스, 지방, 반액체 또는 액체 폴리올 등이다.

또한, 제약 제제는 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향미제, 삼투압 변화를 위한 염, 완충제, 차폐제 또는 항산화제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 또 다른 치료상 가치있는 물질을 함유할 수 있다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 치료상 불활성 담체를 함유하는 의약은 또한 본 발명에 의해, 화학식 I, II, III 또는 IV의 1종 이상의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 원하는 경우에 1종 이상의 다른 치료상 가치있는 물질을 생약 투여 형태로 1종 이상의 치료상 불활성 담체와 합하는 것을 포함하는 그의 제조 방법으로서 제공된다.

투여량은 넓은 한계 내에서 다양할 수 있으며, 물론 각각의 특정한 경우에 개별 요건에 따라 조정되어야 할 것이다. 경구 투여의 경우에, 성인에 대한 투여량은 1일에 약 0.01 mg 내지 약 1000 mg의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 상응하는 양으로 달라질 수 있다. 1일 투여량은 단일 용량 또는 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 또한 상한치는 이것이 명시되어 있는 것으로 여겨질 때는 초과될 수도 있다.

하기 실시예는 본 발명을 제한하지 않으면서 본 발명을 예시하지만, 단지 그의 대표로서 제공된다. 제약 제제는 편리하게는 약 1-500 mg, 특히 1-100 mg의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 함유한다. 본 발명에 따른 조성물의 예는 하기와 같다:

특정 실시양태에서 제약 조성물은 단위 투여 형태 중에 약 0.1 mg 내지 약 2000 mg, 약 10 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 200 mg 내지 약 600 mg의 활성 화합물 및 임의로 약 0.1 mg 내지 약 2000 mg, 약 10 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 200 mg 내지 약 600 mg의 추가의 활성제를 함유하는 투여 형태로 존재한다. 예는 적어도 0.1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 또는 750 mg의 활성 화합물, 또는 그의 염을 갖는 투여 형태이다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시되거나 기재된 바와 같이 사용된 화합물은 1일 1회 (QD), 1일 2회 (BID), 또는 1일 3회 (TID) 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시되거나 기재된 바와 같이 사용된 화합물은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 11일, 적어도 12일, 적어도 13일, 적어도 14일, 적어도 15일, 적어도 16일, 적어도 17일, 적어도 18일, 적어도 19일, 적어도 20일, 적어도 21일, 적어도 22일, 적어도 23일, 적어도 24일, 적어도 25일, 적어도 26일, 적어도 27일, 적어도 28일, 적어도 29일, 적어도 30일, 적어도 31일, 적어도 35일, 적어도 45일, 적어도 60일, 적어도 75일, 적어도 90일, 적어도 120일, 적어도 150일, 적어도 180일, 또는 그 초과 동안 적어도 1일 1회 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회 또는 1일 4회 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 경구로 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 경구로 1일 2회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 경구로 1일 3회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 경구로 1일 4회 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 정맥내로 1일 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 정맥내로 1일 2회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 정맥내로 1일 3회 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 정맥내로 1일 4회 투여된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 치료 주기 사이에 치료 휴지기를 포함하여 투여된다. 예를 들어 화합물은 치료 주기당 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일의 치료 휴일을 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, 치료를 시작하기 위해 부하 용량이 투여된다. 예를 들어, 화합물은 치료 주기에서 나머지 치료일보다 치료의 제1일에 약 1.5x, 약 2x, 약 2.5x, 약 3x, 약 3.5x, 약 4x, 약 4.5x, 약 5x, 약 5.5x, 약 6x, 약 6.5x, 약 7x, 약 7.5x, 약 8x, 약 8.5x, 약 9x, 약 9.5x, 또는 약 10x 더 높은 용량으로 투여될 수 있다. 추가의 예시적인 부하 용량은 치료 주기에서 나머지 치료일보다 치료의 제1 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10일에 약 1.5x, 약 2x, 약 2.5x, 약 3x, 약 3.5x, 약 4x, 약 4.5x, 약 5x, 약 5.5x, 약 6x, 약 6.5x, 약 7x, 약 7.5x, 약 8x, 약 8.5x, 약 9x, 약 9.5x, 또는 약 10x 더 높은 용량을 포함한다.

제약 조성물은 또한 활성 화합물 및 추가의 활성제를 소정 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 제약 조성물은 약 0.5:1, 약 1:1, 약 2:1, 약 3:1 또는 약 1.5:1 내지 약 4:1의 몰비의 항염증제 또는 면역억제제를 함유할 수 있다.

이들 조성물은 목적하는 결과를 달성하는 임의의 양의 활성 화합물, 예를 들어 0.1 내지 99 중량% (wt.%)의 화합물 및 통상적으로 적어도 약 5 중량%의 화합물을 함유할 수 있다. 일부 실시양태는 약 25 중량% 내지 약 50 중량% 또는 약 5 중량% 내지 약 75 중량%의 화합물을 함유한다.

조성물의 제약상 또는 치료 유효량은 환자에게 전달될 것이다. 정확한 유효량은 환자마다 달라질 것이고, 종, 연령, 대상체의 크기와 건강, 치료될 상태의 성질 및 정도, 치료 의사의 권고, 및 투여를 위해 선택된 치료제 또는 치료제의 조합에 따라 달라질 것이다. 주어진 상황에 대한 유효량은 상용 실험에 의해 결정될 수 있다. 본 개시내용의 목적상, 치료량은 예를 들어 적어도 1회의 용량으로 약 0.01 mg/kg 내지 약 250 mg/kg 체중, 보다 전형적으로 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위일 수 있다. 대상체는 해당 장애의 징후, 증상 또는 원인을 감소 및/또는 완화시키거나, 또는 생물계의 임의의 다른 목적하는 변경을 초래하는 데 요구되는 만큼의 많은 용량으로 투여될 수 있다. 원하는 경우에, 제제는 활성 성분의 지속 또는 제어 방출 투여에 적합한 장용 코팅과 함께 제조될 수 있다.

특정 실시양태에서, 용량은 약 0.01-100 mg/환자 체중 kg 범위이고, 예를 들어 약 0.01 mg/kg, 약 0.05 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 또는 약 100 mg/kg이다.

제약 제제는 바람직하게는 단위 투여 형태로 존재한다. 이러한 형태에서, 제제는 적절한 양의 활성 성분을 함유하는 단위 용량으로 세분된다. 단위 투여 형태는 포장된 제제, 분리된 양의 제제를 함유하는 패키지, 예컨대 패킹된 정제, 캡슐, 및 바이알 또는 앰플 내의 분말일 수 있다. 또한, 단위 투여 형태는 캡슐, 정제, 카쉐 또는 로젠지 자체일 수 있거나, 적절한 수의 이들 중 어느 것의 패킹된 형태일 수 있다.

특정 실시양태에서, 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 투여된다. 제약상 허용되는 염의 비제한적 예는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 및 발레레이트 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘, 뿐만 아니라 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민 및 에틸아민을 포함하나 이에 제한되지는 않는 비독성 암모늄, 4급 암모늄 및 아민 양이온을 포함한다.

따라서, 본 개시내용의 조성물은 경구 (협측 및 설하 포함), 직장, 비강, 국소, 경피, 폐, 질 또는 비경구 (근육내, 동맥내, 척수강내, 피하 및 정맥내 포함), 주사, 흡입 또는 스프레이, 대동맥내, 두개내, 피하, 복강내, 피하에 적합한 것을 포함하는 제약 제제로서, 또는 통상적인 제약상 허용되는 담체를 함유하는 다른 투여 수단에 의해 투여될 수 있다. 전형적인 투여 방식은 고통의 정도에 따라 조정될 수 있는 편리한 1일 투여 요법을 사용하는 경구, 국소 또는 정맥내이다.

의도된 투여 방식에 따라, 제약 조성물은 고체, 반고체 또는 액체 투여 형태, 예컨대, 예를 들어 정제, 좌제, 환제, 캡슐, 분말, 액체, 시럽, 현탁액, 크림, 연고, 로션, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸, 발포체, 또는 오일, 주사 또는 주입 용액, 경피 패치, 피하 패치, 흡입 제제, 의료 장치, 좌제, 협측, 또는 설하 제제, 비경구 제제, 또는 안과용 용액 등의 형태, 바람직하게는 정확한 투여량의 단일 투여에 적합한 단위 투여 형태일 수 있다.

일부 투여 형태, 예컨대 정제 및 캡슐은 활성 성분의 적절한 양, 예를 들어 원하는 목적을 달성하기 위한 유효량을 함유하는 적합하게 사이징된 단위 용량으로 세분된다. 조성물은 유효량의 선택된 약물을 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함할 것이고, 또한, 다른 제약 작용제, 아주반트, 희석제, 완충제 등을 포함할 수 있다.

담체는 부형제 및 희석제를 포함하고, 치료될 환자에 대한 투여에 적합하도록 충분히 높은 순도 및 충분히 낮은 독성을 가져야 한다. 담체는 불활성일 수 있거나 또는 그 자체로 제약 이익을 보유할 수 있다. 화합물과 함께 사용되는 담체의 양은 화합물의 단위 용량 당 투여를 위한 물질의 실제 양을 제공하기에 충분하다.

담체의 부류는 아주반트, 결합제, 완충제, 착색제, 희석제, 붕해제, 부형제, 유화제, 향미제, 겔, 활택제, 윤활제, 보존제, 안정화제, 계면활성제, 가용화제, 정제화제, 습윤제 또는 고체화 물질을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

일부 담체는 1종 초과의 부류로 열거될 수 있으며, 예를 들어 식물성 오일은 일부 제제에서는 윤활제로서 및 다른 제제에서는 희석제로서 사용될 수 있다.

예시적인 제약상 허용되는 담체는 당, 전분, 셀룰로스, 분말화 트라가칸트, 맥아, 젤라틴; 활석, 석유 젤리, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알콜, 경피 증진제 및 식물성 오일을 포함한다. 본원에 기재된 화합물의 활성을 실질적으로 방해하지 않는 임의의 활성제가 제약 조성물에 포함될 수 있다.

일부 부형제는 액체, 예컨대 물, 염수, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 히알루론산, 에탄올 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 화합물은 요법의 목표에 따라 목적하는 바와 같이, 예를 들어 고체, 액체, 분무 건조된 물질, 마이크로입자, 나노입자, 제어 방출 시스템 등의 형태로 제공될 수 있다. 비-액체 제제에 적합한 부형제는 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 제약상 허용되는 부형제 및 염에 대한 자세한 논의는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)]에서 이용가능하다.

추가로, 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, 생물학적 완충 물질, 계면활성제 등이 이러한 비히클 중에 존재할 수 있다. 생물학적 완충제는 약리학상 허용되고, 원하는 pH, 즉, 생리학상 허용되는 범위의 pH를 갖는 제제를 제공하는 임의의 용액일 수 있다. 완충제 용액의 예는 염수, 포스페이트 완충 염수, 트리스 완충 염수, 행크 완충 염수 등을 포함한다.

고체 조성물의 경우, 통상적인 비독성 고체 담체는 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 등을 포함한다. 액체 제약상 투여가능한 조성물은 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 활성 화합물 및 임의의 제약 아주반트를 부형제, 예컨대 예를 들어 물, 염수, 수성 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 중에 용해, 분산시키는 등에 따라서 용액 또는 현탁액을 형성함으로써 제조될 수 있다. 원하는 경우에, 투여될 제약 조성물은 또한 미량의 비독성 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등, 예를 들어 아세트산나트륨, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 아세트산나트륨, 트리에탄올아민 올레에이트 등을 함유할 수 있다. 이러한 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 이러한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있거나, 명백할 것이고; 예를 들어, 상기 언급된 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences]을 참조한다.

또 다른 실시양태에서, 중합체 예컨대: 다가양이온 (키토산 및 그의 4급 암모늄 유도체, 폴리-L-아르기닌, 아미노화 젤라틴); 다가음이온 (N-카르복시메틸 키토산, 폴리-아크릴산); 및 티올화 중합체 (카르복시메틸 셀룰로스-시스테인, 폴리카르보필-시스테인, 키토산-티오부틸아미딘, 키토산-티오글리콜산, 키토산-글루타티온 접합체)를 포함하는 침투 증진제 부형제의 용도가 제공된다.

특정 실시양태에서, 부형제는 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘 (이염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카르멜로스, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 예비젤라틴화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 시트르산나트륨, 소듐 스타치 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 수크로스, 활석, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 크실리톨로부터 선택된다.

제약 조성물/조합물은 경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 경구 투여의 경우, 조성물은 일반적으로 정제, 캡슐, 연질 젤 캡슐의 형식을 취할 것이거나, 또는 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 또는 시럽일 수 있다. 정제 및 캡슐은 전형적인 경구 투여 형태이다. 경구 사용을 위한 정제 및 캡슐은 1종 이상의 통상적으로 사용되는 담체, 예컨대 락토스 및 옥수수 전분을 포함할 수 있다. 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘이 또한 전형적으로 첨가된다. 전형적으로, 본 개시내용의 조성물은 비-독성이고, 제약상 허용되는, 경구 불활성 담체, 예컨대 락토스, 전분, 수크로스, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 스테아르산마그네슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 만니톨, 소르비톨 등과 조합될 수 있다. 더욱이, 원하거나 필요한 경우에, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 착색제가 또한 혼합물 내에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당 예컨대 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검 예컨대 아카시아, 트라가칸트 또는 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 포함한다. 이들 투여 형태에 사용되는 윤활제는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제는 비제한적으로 전분, 메틸 셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 크산탄 검 등을 포함한다.

액체 현탁액이 사용되는 경우, 활성제는 임의의 비-독성이고, 제약상 허용되는 경구 불활성 담체, 예컨대 에탄올, 글리세롤, 물 등, 및 유화제 및 현탁화제와 조합될 수 있다. 원하는 경우에, 향미제, 착색제 및/또는 감미제가 또한 첨가될 수 있다. 본원에서의 경구 제제 내로 혼입되는 다른 임의의 성분은 보존제, 현탁화제, 증점제 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

안구 전달의 경우, 화합물은, 원하는 경우에, 예를 들어 유리체내, 기질내, 전방내, 테논낭하, 망막하, 안구-후, 안구주위, 맥락막상, 결막, 결막하, 상공막, 안구주위, 경공막, 안구후, 후공막근접, 각막주위 또는 누관 주사를 통해, 또는 점액, 뮤신 또는 점막 장벽을 통해, 즉시 또는 제어 방출 방식으로 또는 안구 장치를 통해 투여될 수 있다.

비경구 제제는 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전 액체 중 가용화 또는 현탁에 적합한 고체 형태로서, 또는 에멀젼으로서 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 전형적으로, 멸균 주사가능한 현탁액은 적합한 담체, 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하는 관련 기술분야에 공지된 기술에 따라 제제화된다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 허용가능한 비독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한 멸균 고정 오일, 지방 에스테르 또는 폴리올은 통상적으로 용매 또는 현탁화 매질로서 사용된다. 또한 비경구 투여는 일정한 수준의 투여량이 유지되도록 느린 방출 또는 지속 방출 시스템의 사용을 수반할 수 있다.

비경구 투여는 관절내, 정맥내, 근육내, 피내, 복강내 및 피하 경로를 포함하고, 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 및 제제가 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 등장성 멸균 주사 용액, 및 현탁화제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성의 멸균 현탁액을 포함한다. 특정 비경구 경로를 통한 투여는 멸균 시린지 또는 일부 다른 기계적 장치 예컨대 연속 주입 시스템에 의해 추진되는 바늘 또는 카테터를 통해 본 개시내용의 제제를 환자의 신체 내로 도입하는 것을 수반할 수 있다. 본 개시내용에 의해 제공된 제제는 비경구 투여를 위한 관련 기술분야에서 인지되는 시린지, 주사기, 펌프 또는 임의의 다른 장치를 사용하여 투여될 수 있다.

비경구 투여를 위한 본 개시내용에 따른 제제는 멸균 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액 또는 에멀젼을 포함한다. 비-수성 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일 및 옥수수 오일, 젤라틴 및 주사가능한 유기 에스테르 예컨대 에틸 올레에이트이다. 이러한 투여 형태는 또한 아주반트 예컨대, 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 이들은, 예를 들어 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해, 멸균제를 조성물에 혼입함으로써, 조성물을 조사함으로써, 또는 조성물을 가열함으로써 멸균될 수 있다. 이들은 또한 사용 직전에 멸균수 또는 일부 다른 멸균 주사가능한 매질을 사용하여 제조될 수 있다.

멸균 주사가능한 용액은 필요량의 본 개시내용의 1종 이상의 화합물을 필요에 따라 상기에 열거된 다양한 다른 성분과 함께 적절한 용매에 혼입시킨 후, 여과 멸균함으로써 제조된다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분을 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 전형적인 제조 방법은 활성 성분 플러스 그의 사전에 멸균-여과된 용액으로부터의 임의의 추가의 목적하는 성분의 분말을 생성하는 진공-건조 및 동결-건조 기술이다. 따라서, 예를 들어 주사에 의한 투여에 적합한 비경구 조성물은 1.5 중량%의 활성 성분을 10 부피%의 프로필렌 글리콜 및 물 중에서 교반함으로써 제조될 수 있다. 용액은 염화나트륨으로 등장성으로 만들어지고, 멸균된다.

대안적으로, 본 개시내용의 제약 조성물은 직장 투여를 위한 좌제 형태로 투여될 수 있다. 이들은 상기 작용제를 실온에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체여서 직장 내에서 용융되어 약물을 방출하는 적합한 비자극성 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

본 개시내용의 제약 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 제약 제제 기술분야에 널리 공지된 기술에 따라 제조되고, 벤질 알콜 또는 다른 적합한 보존제, 생체이용률을 증진시키기 위한 흡수 촉진제, 추진제 예컨대 플루오로카본 또는 질소, 및/또는 다른 통상적인 가용화제 또는 분산제를 사용하여 염수 중 용액으로서 제조될 수 있다.

협측 투여를 위한 제제는 정제, 로젠지, 겔 등을 포함한다. 대안적으로, 협측 투여는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 경점막 전달 시스템을 사용하여 수행될 수 있다. 본 개시내용의 화합물은 또한 통상의 경피 약물 전달 시스템, 즉 경피 "패치"를 사용하여 피부 또는 점막 조직을 통해 전달될 수 있고, 여기서 작용제는 신체 표면에 부착되는 약물 전달 장치로서 역할을 하는 적층 구조 내에 전형적으로 함유된다. 이러한 구조에서, 약물 조성물은 전형적으로 상부 백킹 층 밑에 놓인 층 또는 "저장소"에 함유된다. 적층 장치는 단일 저장소를 함유할 수 있거나, 또는 다중 저장소를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 저장소는 약물 전달 동안 시스템을 피부에 부착시키는 역할을 하는 제약상 허용되는 접촉 접착제 물질의 중합체 매트릭스를 포함한다. 적합한 피부 접촉 접착제 물질의 예는 폴리에틸렌, 폴리실록산, 폴리이소부틸렌, 폴리아크릴레이트, 폴리우레탄 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

대안적으로, 약물-함유 저장소 및 피부 접촉 접착제는 분리되고 구분되는 층으로서 존재하고, 접착제는 저장소 밑에 놓이며, 저장소는 이 경우에 상기 기재된 바와 같은 중합체 매트릭스일 수 있거나, 또는 이는 액체 또는 겔 저장소일 수 있거나, 일부 다른 형태를 취할 수 있다. 이들 적층체 중 장치의 상부 표면 역할을 하는 백킹 층은 적층 구조의 주요 구조적 요소로서 기능하고, 장치에 상당한 가요성을 제공한다. 백킹 층으로 선택된 물질은 존재하는 활성제 및 임의의 다른 물질에 실질적으로 불투과성이어야 한다.

본 개시내용의 조성물은 특히 호흡기도에 대해, 및 비강내 투여를 포함하여 에어로졸 투여를 위해 제제화될 수 있다. 화합물은 예를 들어 일반적으로 작은 입자 크기, 예를 들어 5 마이크로미터 이하 정도의 입자 크기를 가질 수 있다. 이러한 입자 크기는 관련 기술분야에 공지된 수단에 의해, 예를 들어 마이크로화에 의해 수득될 수 있다. 활성 성분은 적합한 추진제, 예컨대 클로로플루오로카본 (CFC), 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 또는 디클로로테트라플루오로에탄, 또는 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체와 함께 가압 팩 내에 제공된다. 에어로졸은 편리하게는 또한 계면활성제 예컨대 레시틴을 함유할 수 있다. 약물의 용량은 계량 밸브에 의해 제어될 수 있다.

대안적으로, 활성 성분은 건조 분말, 예를 들어 적합한 분말 베이스, 예컨대 락토스, 전분, 전분 유도체, 예컨대 히드록시프로필메틸 셀룰로스 및 폴리비닐피롤리딘 (PVP) 중의 화합물의 분말 믹스의 형태로 제공될 수 있다. 분말 담체는 비강에서 겔을 형성할 것이다. 분말 조성물은 단위 투여 형태, 예를 들어 캡슐 또는 카트리지, 예를 들어 젤라틴 또는 분말이 흡입기에 의해 투여될 수 있는 블리스터 팩으로 제공될 수 있다.

직장 투여에 적합한 제제는 전형적으로 단위 용량 좌제로 제공된다. 이들은 활성 화합물을 1종 이상의 통상적인 고체 담체, 예를 들어 코코아 버터와 혼합한 다음, 생성된 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다.

특정 실시양태에서, 제약 조성물은 상기 정의된 투여 방식을 사용하는 피부에의 국소 적용에 적합하다.

특정 실시양태에서, 경피 투여에 적합한 제약 조성물은 장기간 동안 수용자의 표피와 밀접한 접촉을 유지하도록 적합화된 별개의 패치로서 제공될 수 있다. 경피 투여에 적합한 제제는 또한 이온영동에 의해 전달될 수 있고 (예를 들어, 문헌 [Pharmaceutical Research 3 (6):318 (1986)] 참조), 전형적으로 활성 화합물의 임의로 완충된 수용액의 형태를 취한다.

특정 실시양태에서, 미세바늘 패치 또는 장치는 생물학적 조직, 특히 피부를 가로질러 또는 그 내로 약물을 전달하기 위해 제공된다. 미세바늘 패치 또는 장치는 조직에 대한 손상, 통증 또는 자극을 최소로 하거나 전혀 하지 않으면서, 피부 또는 다른 조직 장벽을 가로질러 또는 그 내로 임상적으로 관련된 속도로 약물을 전달하도록 한다.

폐로의 투여에 적합한 제제는 폭넓은 범위의 수동적 호흡 구동 및 능동적 동력 구동 단일/-다중 용량 건조 분말 흡입기 (DPI)에 의해 전달될 수 있다. 호흡 전달에 가장 통상적으로 사용되는 장치는 네뷸라이저, 계량-용량 흡입기 및 건조 분말 흡입기를 포함한다. 제트 네뷸라이저, 초음파 네뷸라이저 및 진동 메쉬 네뷸라이저를 포함한 여러 유형의 네뷸라이저가 이용가능하다. 적합한 폐 전달 장치의 선택은 파라미터, 예컨대 약물의 성질 및 그의 제제, 작용 부위, 및 폐의 병리생리상태에 좌우된다.

특정 실시양태에서, 경구 제제가 제공된다.

실시예 A

하기 조성의 정제를 통상적인 방식으로 제조한다:

표 1: 가능한 정제 조성

제조 절차

1. 성분 1, 2, 3 및 4를 혼합하고, 정제수와 함께 과립화한다.

2. 과립을 50℃에서 건조시킨다.

3. 과립을 적합한 밀링 장비를 통해 통과시킨다.

4. 성분 5를 첨가하고, 3분 동안 혼합하고; 적합한 프레스 상에서 압축한다.

실시예 B-1

하기 조성의 캡슐을 제조한다:

표 2: 가능한 캡슐 성분 조성

제조 절차

1. 성분 1, 2 및 3을 적합한 혼합기에서 30분 동안 혼합한다.

2. 성분 4 및 5를 첨가하고, 3분 동안 혼합한다.

3. 적합한 캡슐에 충전한다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물, 락토스 및 옥수수 전분을 먼저 혼합기에서 혼합한 다음, 분쇄기에서 혼합한다. 혼합물을 혼합기로 복귀시키고; 활석을 여기에 첨가하고, 완전히 혼합한다. 혼합물을 적합한 캡슐, 예를 들어 경질 젤라틴 캡슐에 기계로 충전한다.

실시예 B-2

하기 조성의 연질 젤라틴 캡슐을 제조한다:

표 3: 가능한 연질 젤라틴 캡슐 성분 조성

표 4: 가능한 연질 젤라틴 캡슐 조성

제조 절차

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 다른 성분의 따뜻한 용융물에 용해시키고, 혼합물을 적절한 크기의 연질 젤라틴 캡슐에 충전한다. 충전된 연질 젤라틴 캡슐은 통상의 절차에 따라 처리된다.

실시예 C

하기 조성의 좌제를 제조한다:

표 5: 가능한 좌제 조성

제조 절차

좌제 덩어리를 유리 또는 강철 용기에서 용융시키고, 완전히 혼합하고, 45℃로 냉각시킨다. 그 후, 미분된 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 여기에 첨가하고, 완전히 분산될 때까지 교반한다. 혼합물을 적합한 크기의 좌제 금형에 붓고, 냉각되도록 둔 다음; 좌제를 금형으로부터 제거하고, 왁스지 또는 금속 호일에 개별적으로 패킹한다.

실시예 D

하기 조성의 주사 용액을 제조한다:

표 6: 가능한 주사 용액 조성

제조 절차

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 폴리에틸렌 글리콜 400 및 주사용수의 혼합물 (부분)에 용해시킨다. pH를 아세트산에 의해 5.0으로 조정한다. 잔류량의 물을 첨가하여 부피를 1.0 ml로 조정한다. 용액을 여과하고, 적절한 오버리지를 사용하여 바이알에 충전하고, 멸균한다.

실시예 E

하기 조성물의 사쉐를 제조한다:

표 7: 가능한 사쉐 조성

제조 절차

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 락토스, 미세결정질 셀룰로스 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로스와 혼합하고, 물 중 폴리비닐피롤리돈의 혼합물과 과립화한다. 과립을 스테아르산마그네슘 및 향미 첨가제와 혼합하고, 사쉐에 충전한다.

VIII. 약리학적 시험

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 가치있는 약리학적 특성을 보유한다. 화합물을 하기 주어진 시험에 따라 조사하였다.

물질

NCI-H1975 (EGFR 이형접합 L858R-T790M 돌연변이를 보유함) 및 NCI-H3255 (EGFR 이형접합 L858R 돌연변이를 보유함)를 각각 ATCC 및 NCI로부터 구입하였다. NCI-H1975+CS (EGFR 이형접합 L858R-T790M-C797S 돌연변이를 보유함)를 CRISPR 기술을 사용하여 생성하여 호리즌 디스커버리(Horizon Discovery)에 의해 추가의 C797S 돌연변이를 도입하였다. A431 (EGFR 야생형 보유)은 ATCC로부터 구입하였다. RPMI 1640 비-페놀 레드 배지 및 소 태아 혈청 (FBS)을 깁코 (미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드)로부터 구입하였다. 세포 배양 플라스크 및 384-웰 마이크로플레이트를 VWR (미국 펜실베니아주 래드너)로부터 획득하였다. 인산화된 (pY1068) EGFR 및 총 EGFR (EGFR 돌연변이체 세포주 및 EGFR 야생형 세포주에 대해 각각 L858R-특이적 검출 항체 및 범-EGFR 항체를 사용함) HTRF 검정 키트를 시스바이오(Cisbio) (미국 매사추세츠주 베드포드)로부터 구입하였다.

EGFR 억제 및 분해 분석

총 EGFR (L858R-특이적 또는 범-EGFR 검출) HTRF 검정 키트를 사용하여 FRET 신호의 정량화를 기초로 L858R 돌연변이 또는 야생형을 함유하는 EGFR 단백질의 분해를 결정하였다. 포스포-EGFR (pEGFR) 억제는 pY1068 EGFR HTRF 검정 키트를 사용하여 FRET 신호의 정량화에 기초하여 결정하였다. 별개의 검정 플레이트에서, 시험 화합물을 384-웰 플레이트에 10 μM의 최고 농도로 11 포인트, 반 로그 적정으로 이중으로 첨가하였다. 각각의 검정을 위해, 하기 표 8에서 각각의 세포주에 대해 지시된 세포 밀도로 검정 배지 (RPMI 1640 비-페놀 레드 배지 + 10% FBS) 중에 현탁된 세포 12.5 uL를 다중-채널 피펫을 사용하여 이중 농도 범위의 시험 화합물 및 DMSO 대조군을 함유하는 384-웰 저부피 백색 HTRF 마이크로플레이트에 분배하였다. 플레이트를 5% CO2 하에 37℃에서 6시간 동안 유지한 다음, 검정되는 세포주 및 EGFR 돌연변이체에 따라 포스포 EGFR 또는 총 EGFR HTRF 검출 항체와 함께 인큐베이션하였다. 시험 화합물의 부재 하에 처리된 세포는 음성 대조군이었다. 모든 시약을 함유하지만 세포는 함유하지 않는 웰에 의해 양성 대조군을 설정하였다. FRET 신호를 엔비전(EnVision)™ 다중표지 판독기 (퍼킨엘머(PerkinElmer), 미국 캘리포니아주 산타 클라라) 상에서 획득하였다. 50% 분해 및 억제를 달성하는 화합물 농도를 각각 DC50 및 IC50으로 보고하였다.

표 8. EGFR 돌연변이체 암 세포주: EGFR 돌연변이체, 공급원 판매업체, 실험적 시딩 밀도.

표 9A: EGFR 돌연변이 단백질 분해의 효력

표 9B

상기 표에서, ***는 <50 nM이고; **는 50-150 nM이고; *는 >150 nM이다.

표 10A 인간 암 세포주의 분해

표 10B EGFR 변이체를 발현하는 Ba/F3 세포주의 성장 억제

IX. 합성 방법

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있고, 따라서 라세미체, 라세미 혼합물, 단일 거울상이성질체, 부분입체이성질체 혼합물 및 개별 부분입체이성질체로서 나타날 수 있다. 분자 상의 다양한 치환기의 성질에 따라 추가의 비대칭 중심이 존재할 수 있다. 각각의 이러한 비대칭 중심은 독립적으로 2종의 광학 이성질체를 생성할 것이고, 혼합물로의 및 순수하거나 부분적으로 정제된 화합물로서의 모든 가능한 광학 이성질체 및 부분입체이성질체가 본 발명 내에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명은 이들 화합물의 모든 이러한 이성질체 형태를 포괄하는 것으로 의도된다. 이들 부분입체이성질체의 독립적 합성 또는 그의 크로마토그래피 분리는 본원에 개시된 방법론의 적절한 변형에 의해 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 달성될 수 있다. 그의 절대 입체화학은, 필요한 경우에, 공지된 절대 배위의 비대칭 중심을 함유하는 시약을 사용하여 유도체화된 결정질 생성물 또는 결정질 중간체의 X선 결정학에 의해 결정될 수 있다. 원하는 경우에, 화합물의 라세미 혼합물을 개별 거울상이성질체가 단리되도록 분리할 수 있다. 분리는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법, 예컨대 화합물의 라세미 혼합물을 거울상이성질체적으로 순수한 화합물에 커플링시켜 부분입체이성질체 혼합물을 형성한 후, 개별 부분입체이성질체를 표준 방법, 예컨대 분별 결정화 또는 크로마토그래피에 의해 분리함으로써 수행될 수 있다.

광학적으로 순수한 거울상이성질체가 제공되는 실시양태에서, 광학적으로 순수한 거울상이성질체는 화합물이 > 90 중량%의 목적하는 이성질체, 특히 > 95 중량%의 목적하는 이성질체, 또는 보다 특히 > 99 중량%의 목적하는 이성질체를 함유함을 의미하며, 상기 중량 퍼센트는 화합물의 이성질체(들)의 총 중량을 기준으로 한다. 키랄적으로 순수한 또는 키랄적으로 풍부한 화합물은 키랄적으로 선택적인 합성 또는 거울상이성질체의 분리에 의해 제조될 수 있다. 거울상이성질체의 분리는 최종 생성물 상에서 또는 대안적으로 적합한 중간체 상에서 수행될 수 있다.

화학식 I의 화합물의 제조는 하기 반응식에 보다 상세하게 추가로 기재된다.

일반적으로 말해서, 화학식 I의 화합물을 합성하는 데 사용되는 단계의 순서는 또한 특정 경우에 변형될 수 있다.

화학식 II의 화합물의 제조는 하기 반응식에 보다 상세히 추가로 기재된다.

일반적으로 말해서, 화학식 I의 화합물을 합성하는 데 사용되는 단계의 순서는 또한 특정 경우에 변형될 수 있다. 특정 경우에, 화학식 I 또는 화학식 II에 대해 제시된 단계의 순서는 화학식 III 및 화학식 IV의 화합물의 합성에 적용되거나 변형될 수 있다.

화합물의 단리 및 정제

본원에 기재된 화합물 및 중간체의 단리 및 정제는, 원하는 경우에, 임의의 적합한 분리 또는 정제 절차, 예컨대 예를 들어 여과, 추출, 결정화, 칼럼 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피, 후층 크로마토그래피, 정제용 저압 또는 고압 액체 크로마토그래피, 또는 이들 절차의 조합에 의해 수행될 수 있다. 적합한 분리 및 단리 절차의 구체적 예시는 하기 본원의 제조예 및 실시예를 참조할 수 있다. 그러나, 다른 동등한 분리 또는 단리 절차가 물론 또한 사용될 수 있다. 화학식 I, II, III 또는 IV의 키랄 화합물의 라세미 혼합물은 키랄 HPLC를 사용하여 분리될 수 있다. 키랄 합성 중간체의 라세미 혼합물은 또한 키랄 HPLC를 사용하여 분리될 수 있다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 염

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물이 염기성인 경우에, 이들은 상응하는 산 부가염으로 전환될 수 있다. 전환은 적어도 화학량론적 양의 적절한 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등, 및 유기 산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 살리실산 등으로 처리함으로써 달성된다. 특정 염은 푸마레이트이다. 전형적으로, 유리 염기를 불활성 유기 용매, 예컨대 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 에탄올 또는 메탄올 등에 용해시키고, 산을 유사한 용매에 첨가한다. 온도를 0℃ 내지 50℃에서 유지한다. 생성된 염은 자발적으로 침전되거나 또는 덜 극성인 용매를 사용하여 용액으로부터 배출될 수 있다.

그의 제조법이 실시예에 기재되지 않는 한, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 뿐만 아니라 모든 중간체 생성물은 유사한 방법에 따라 또는 본원에 제시된 방법에 따라 제조될 수 있다. 출발 물질은 상업적으로 입수가능하거나, 관련 기술분야에 공지되어 있거나, 또는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 또는 그와 유사하게 제조될 수 있다.

본 발명에서 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물은 관능기에서 유도체화되어 생체내에서 모 화합물로 다시 전환될 수 있는 유도체를 제공할 수 있는 것으로 인지될 것이다.

X. 실험 절차

약어

합성 실시예

하기 실시예는 본 발명의 예시를 위해 제공된다. 이들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안되며, 단지 그를 대표하는 것으로 간주되어야 한다.

중간체

반응식 1:

일반적 절차 - A

디옥산 (3 mL) 중 1-1 (1 mmol) 및 1-2 (2 mmol)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (2 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 밀봉된 튜브에서 70-110℃에서 24시간 동안 가열하여 1-3을 생성하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카, 구배: 디클로로메탄 중 0-3% 메탄올)에 의해 정제하여 1-3을 수득하였다.

중간체 tert-부틸 4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-카르복실레이트

tert-부틸 4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-카르복실레이트를 일반적 절차 A (N,N-디이소프로필에틸아민/디옥산)에 따라 tert-부틸 4-(4-아미노페닐)-1-피페리딘카르복실레이트 (CAS# 170011-57-1)로부터 합성하였다. 수율-45%; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.75 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.16 Hz, 2H), 6.60 (d, J = 7.88 Hz, 2H), 5.64 (d, J = 6.96 Hz, 1H), 4.28-4.24 (m, 1H), 4.07-4.00 (m, 2H ), 2.79-2.64 (m, 4H), 2.53-2.48 (m, 2H), 2.11-2.05 (m, 1H), 1.89-1.81 (m, 1H), 1.71-1.64 (m, 2H0, 1.40-1.34 (m, 10H); LC MS: ES+ 386.3.

중간체 3-((3-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드

tert-부틸 4-(3-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-카르복실레이트를 일반적 절차 A에 따라 tert-부틸 4-[3-아미노페닐]-1-피페리딘카르복실레이트 (CAS# 387827-19-2)로부터 합성하였다. 수율: 25% LCMS (ESI+): 388.2 (M+H)

중간체 3-((6-(피페리딘-4-일)피리딘-3-일)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드

tert-부틸 4-(5-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 일반적 절차에 따라 tert-부틸 4-(5-아미노피리딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트 (CAS# 885693-48-1)로부터 합성하였다: 수율: 14%, LCMS (ESI+): 389.2 (M+H).

반응식 2:

일반 절차 B:

실온에서 메탄올 (0.1 M) 중에 용해시킨 2-1에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켜 2-2를 수득하였다.

중간체 3-((4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드

3-((4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드를 일반적 절차 (일반적 절차 - B)에 따라 tert-부틸 4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-카르복실레이트로부터 합성하였다. 수율-88%; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.80 (s, 1H), 8.84 (brs, 1H), 8.77 (brs, 1H), 6.95 (d, J = 8.44 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 8.48 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 11.4, 4.72 Hz, 1H), 3.35-3.29 (m, 2H), 2.99-2.91 (m, 2H), 2.71-2.53 (m, 3H), 2.10-2.05 (m, 1H), 1.89-1.71 (m, 5H); LC MS: ES+ 288.2.

3-((3-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드를 일반적 절차 B에 따라 tert-부틸 4-(3-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-카르복실레이트로부터 합성하였다. 수율: 76% ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.80 (s, 1H), 9.00 (br.s, 1H), 8.85 (br. S, 1H), 1.02 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.57-6.55 (m, 2H), 6.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 11.2 Hz, 4.6 Hz, 1H), 3.45-3.39 (m, 2H), 2.80-2.65 (m, 2H), 2.79-2.67 (m, 2H), 2.61-2.53 (M, 1H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.94-1.80 (m, 5H). LCMS (ESI+): 288.2 (M+H).

3-((6-(피페리딘-4-일)피리딘-3-일)아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드를 일반적 절차 B에 따라 tert-부틸 4-(5-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트로부터 합성하였다. 수율: 83%, LCMS (ESI+): 289.0 (M+H).

키랄 SFC 분리에 의한 중간체 tert-부틸 4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트의 합성

tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (4 g, 10.32 mmol)를 키랄 SFC에 의해 분리하여 2 세트의 분획을 수득하였다.

하기 정제용 규모 SFC 방법을 사용하여 거울상이성질체를 분리하였다:

칼럼: 키랄팩(Chiralpak) ID (250 x 21 mm) 5 um

유량: 35 g/분

이동상: 45% CO2 + 55% 이소프로필 알콜

ABPR: 100 bar

온도: 35℃

보다 먼저 용리된 분획을 동결건조시켜 tert-부틸 4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.44 g, 3.70 mmol, 35.88% 수율, 99.66% 거울상이성질체 과잉률, 키랄 SFC Rt = 4.31분)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.77 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.1 Hz, 2H), 6.60 (d, J=8.2 Hz, 2H), 5.68-5.66 (m, 1H), 4.29-4.23 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 2H), 2.78-2.54 (m, 5H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.89-1.83 (m, 1H), 1.69-1.66 (m, 2H), 1.40-1.36 (m 11H).

이후 분획을 동결건조시켜 tert-부틸 4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.56 g, 3.95 mmol, 38.24% 수율, 98.06% 거울상이성질체 과잉률, 키랄 SFC Rt = 5.96분)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.77 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.60 (d, J=8.3 Hz, 2H), 5.68-5.66 (m, 1H), 4.29-4.23 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 2H), 2.78-2.58 (m, 5H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.87-1.83 (m, 1H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.40-1.35 (m 11H).

2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 및 2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염의 합성

tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트

DMF (20 mL) 중 3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 (2.0 g, 6.96 mmol)의 교반 용액에 트리에틸 아민 (3.52 g, 34.80 mmol, 4.85 mL)에 이어서 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (1.49 g, 7.66 mmol, 1.12 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (75 mL)을 첨가하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 30% 에틸 아세테이트-석유 에테르를 사용하여 정제하여 tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (1.40 g, 3.36 mmol, 48.33% 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다.

tert-부틸 (S)-2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 및 tert-부틸 (R)-2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]을 수득하기 위한 SFC 분리 조건

라세미 중간체 tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (1.40 g, 3.36 mmol)를 키랄 SFC 방법을 사용하여 키랄셀 OD-H 칼럼 (250 mm x 30 mm; 5 마이크로미터)을 사용하여 40% 이소프로필 알콜/CO2 (유량: 3 ml/분; 유출구 압력: 100 bar)로 용리시키면서 분해하였다. 제1 용리 세트의 분획을 감압 하에 증발시켜 tert-부틸 (S)-2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (500 mg, 36% 수율, Rt = 3.36분, 96.22% 순도, >99% 거울상이성질체 과잉률)를 수득하였다. 제2 세트의 분획을 감압 하에 증발시켜 tert-부틸 (R)-2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 500 mg (500 mg, 36% 수율, Rt = 4.84분, 순도 96.22%, 99.04% 거울상이성질체 과잉률)을 수득하였다. LCMS 제1 용리 (m/z: 402.4 [M+H]), LCMS 제2 용리 (m/z: 402.2 [M+H]).

2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (500 mg, 1.25 mmol)를 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (12.26 g, 107.51 mmol, 8 mL)을 0℃에서 적가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 물질을 메탄올:MTBE 혼합물 (1:4)로 연화처리하고, 고체를 수집하고, 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켜 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 (600 mg, 1.24 mmol, 99.6% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 346.1 (M+H)

2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산:트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (500.00 mg, 1.25 mmol)를 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염과 유사한 방식으로 처리하여 2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 (600 mg, 1.24 mmol, 99.63% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 346.1 (M+H)

중간체 3-(3-플루오로-4-피페리딘-4-일-페닐아미노)-피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 합성

단계-1: 4-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조

탄산나트륨 (6.14 g, 57.89 mmol, 2.43 mL)을 물 (12 mL), THF (60 mL) 및 메탄올 (24 mL) 중 4-브로모-3-플루오로-아닐린 (5.00 g, 26.3 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (8.95 g, 29.0 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 플라스크를 아르곤으로 완전히 퍼징하였다. PdCl₂(dppf).디클로로메탄 (430 mg, 526 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 질소로 탈기한 다음, 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (15% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (6.1 g, 20.9 mmol, 79% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS: ESI+ 293 (M+Hs)

단계-2: 4-[4-(2,6-비스-벤질옥시-피리딘-3-일아미노)-2-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

탄산세슘 (19.73 g, 60.54 mmol)을 t-BuOH (60 mL) 중 tert-부틸 4-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5.9 g, 20.2 mmol) 및 2,6-디벤질옥시-3-아이오도-피리딘 (9.26 g, 22.2 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd₂(dba)₃ (924 mg, 1.01 mmol), Ruphos (942 mg, 2.02 mmol)를 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (15% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5.9 g, 10.1 mmol, 50% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS: ES+ 582 (M+H⁺)

단계-3: 4-[4-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일아미노)-2-플루오로-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

10% Pd-C (50% 습윤, 4.6 g)를 에틸 아세테이트 (40 mL) 중 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (4.6 g, 7.91 mmol)의 교반된 질소-탈기된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 풍선 압력 하에 주위 온도에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 작은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 여과물을 감압 하에 증발시키고, 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (2.6 g, 6.41 mmol, 81% 수율)를 청색 고체로서 수득하였다. LCMS: ES+ 406 (M+H⁺).

단계-4: 3-(3-플루오로-4-피페리딘-4-일-페닐아미노)-피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 제조

디옥산-HCl (4 M, 30 mL, 130 mmol)을 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.3 g, 3.21 mmol)에 10℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 에테르로 연화처리하고, 동결건조시켜 3-[3-플루오로-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 (840 mg, 2.73 mmol, 85.25% 수율)을 녹색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 306 (M+H⁺). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.79 (s, 1H), 9.00 (br s, 1H), 8.85-8.83 (m, 1H), 6.96-6.91 (m, 1H), 6.50-6.45 (m, 2H), 4.34-4.30 (m, 1H), 3.32-3.29 (m, 2H), 2.98-2.93 (m, 3H), 2.77-2.69 (m, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.08-2.05 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 5H).

3-(2-플루오로-4-피페리딘-4-일-페닐아미노)-피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 중간체 합성

단계-1: 4-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

탄산나트륨 (6.14 g, 57.89 mmol)을 물 (12 mL), THF (60 mL) 및 메탄올 (24 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-아닐린 (5.00 g, 26.3 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (8.95 g, 29.0 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, PdCl₂(dppf).디클로로메탄 (430 mg, 526 μmol)을 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (15% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (6.1 g, 20.9 mmol, 79% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 293 (M+H⁺).

단계-2: 4-[4-(2,6-비스-벤질옥시-피리딘-3-일아미노)-3-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

탄산세슘 (19.73 g, 60.54 mmol)을 t-BuOH (60 mL) 중 tert-부틸 4-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5.9 g, 20.2 mmol) 및 2,6-디벤질옥시-3-아이오도-피리딘 (9.26 g, 22.2 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd₂(dba)₃ (924 mg, 1.01 mmol) 및 RuPhos (942 mg, 2.02 mmol)를 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (10% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5.9 g, 10.1 mmol, 50% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 582 (M+H⁺).

단계-3: 4-[4-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일아미노)-3-플루오로-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

10% Pd-C (50% 습윤, 4.6 g)를 에틸 아세테이트 (40 mL) 중 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (4.6 g, 7.91 mmol)의 교반 탈기된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 풍선 압력 하에 주위 온도에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 여과물을 감압 하에 증발시키고, 칼럼 크로마토그래피 (40% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (2.6 g, 6.41 mmol, 81% 수율)를 청색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 406 (M+H⁺).

단계-4: 3-(2-플루오로-4-피페리딘-4-일-페닐아미노)피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 제조

디옥산 HCl (4 M, 10 mL, 40 mmol)을 10℃에서 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.3 g, 3.21 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 에테르로 연화처리하고, 동결건조시켜 3-[2-플루오로-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (840 mg, 2.73 mmol, 85% 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 306 (M+H⁺). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.82 (s, 1H), 8.85 (br s, 1H), 8.69-8.68 (m, 1H), 6.92-6.89 (m, 1H), 6.83-6.77 (m, 2H), 4.40-4.36 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 2H), 2.98-2.90 (m, 2H), 2.76-2.71 (m, 2H), 2.58-2.56 (m, 1H), 2.05-1.73 (m, 6H).

(S)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드 및 (R)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드의 합성

단계 1: 키랄 분리로 tert-부틸 4-(4-(((3S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 4-(4-(((3R)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트를 수득함

키랄 SFC에 의한 라세미 tert-부틸 4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (5.96 g)의 분리를 하기 방법을 사용하여 수행하였다.

칼럼: 키랄셀 OJ-H (250 x 21 mm), 5 um 실리카

유량: 70 mL/분

이동상: 65% CO2 + 35% 이소프로필 알콜

ABPR: 100 bar

온도: 35℃

SFC 분리로 2 세트의 분획을 수득하였다. 보다 먼저 용리된 분획을 동결건조시켜 tert-부틸 4-(4-(((3S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (2.51 g, 42% 수율, >99% 거울상이성질체 과잉률, 키랄 SFC 체류 시간 = 0.91분)를 수득하였다.

이후 용리 분획을 동결건조시켜 tert-부틸 4-(4-(((3R)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (2.69 g, 45% 수율, 99.6% 거울상이성질체 과잉률, 키랄 SFC 체류 시간 = 1.26분)를 수득하였다.

2종의 단리된 이성질체의 체류 시간 및 거울상이성질체 과잉률을 하기 조건을 사용하여 분석용 키랄 SFC에 의해 결정하였다:

칼럼: 키랄셀 OJ-H (100 x 4.6 mm)

유량: 4 mL/분

압력: 100 bar

온도: 40℃

단계 2: (S)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드의 합성

(S)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드를 일반적 절차 B를 사용하여 tert-부틸 4-(4-(((3S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트로부터 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 306.3 [M+H⁺]

단계 3: (R)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드의 합성

(R)-4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘 히드로클로라이드를 일반적 절차 B를 사용하여 tert-부틸 4-(4-(((3S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트로부터 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 306.3 (M+H⁺)

중간체: 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세트산

단계-1: tert-부틸 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세테이트의 제조

3-브로모피페리딘-2,6-디온 (13.9 g, 72.4 mmol)에 이어서 중탄산나트륨 (12.2 g, 145 mmol)을 밀봉된 튜브에서 DMF (80 mL) 중 tert-부틸 2-(4-아미노페닐)아세테이트 (10.0 g, 48.3 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (35% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세테이트 (7.5 g, 23.6 mmol, 49% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 319 (M+H⁺)

단계-2: 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세트산의 제조

TFA (8.47 mL, 110 mmol)를 0℃에서 디클로로메탄 (45 mL) 중 tert-부틸 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세테이트 (3.5 g, 10.99 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, MTBE로 연화처리하고, 동결건조시켜 2-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]아세트산 (2.9 g, 10.9 mmol, 99% 수율)을 회색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 263 (M+H⁺). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.79 (s, 1H), 6.97 (d, J=8.36 Hz, 2H), 6.63 (d, J=8.36 Hz, 2H), 4.32-4.28 (m, 1H), 3.37 (s, 2H), 2.78-2.71 (m, 1H), 2.61-2.54 (m, 1H), 2.13-2.07 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 1H)

중간체: 1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온의 합성

단계-1: 6-브로모-1-메틸-인다졸-3-아민의 제조:

수소화나트륨 (오일 중 60%, 2.38 g, 59.4 mmol)을 DMF (150 mL) 중 6-브로모-1H-인다졸-3-아민 (7 g, 33.0 mmol, 439 μL)의 교반 용액에 0℃에서 조금씩 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반하였다. 아이오도메탄 (5.15 g, 36.3 mmol, 2.26 mL)을 냉각 하에 적가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (50% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 6-브로모-1-메틸-인다졸-3-아민 (4.2 g, 18.6 mmol, 56% 수율)을 수득하였다. LC MS: ES+ 227 (M+H⁺)

단계-2: 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)아미노]프로파노에이트의 제조:

에틸 아크릴레이트 (14.0 g, 139 mmol)를 80℃에서 6-브로모-1-메틸-인다졸-3-아민 (4.2 g, 18.6 mmol), [DBU][Lac] (주위 온도에서 16시간 동안 교반하면서 DBU와 락트산의 등몰 혼합물을 혼합함으로써 제조됨, 2.09 g, 14.9 mmol)의 혼합물에 5일에 걸쳐 5 부분으로 (각각 2.8 g) 첨가하였다. 완결된 후 (LCMS), 반응 혼합물을 차아염소산나트륨 (30% 수성, 5 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 합한 유기부를 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (50% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)아미노]프로파노에이트 (2.9 g, 8.89 mmol, 48% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 327 (M+H⁺).

단계-3: 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-시아노-아미노]프로파노에이트의 제조:

무수 아세트산나트륨 (1.46 g, 17.8 mmol)에 이어서 브로민화시아노겐 (1.41 g, 13.3 mmol)을 주위 온도에서 에탄올 (40 mL) 중 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)아미노]프로파노에이트 (2.9 g, 8.89 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류 하에 48시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 합한 유기부를 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (45% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-시아노-아미노]프로파노에이트 (1.65 g, 4.70 mmol, 53% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 352 (M+H⁺).

단계-4: 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-카르바모일-아미노]프로파노에이트의 제조:

(1E)-아세트알데히드 옥심 (1.01 g, 17.1 mmol)에 이어서 염화인듐 (III) (126 mg, 569 μmol)을 주위 온도에서 톨루엔 (60 mL) 중 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-시아노-아미노]프로파노에이트 (2 g, 5.69 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기부를 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (60% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-카르바모일-아미노]프로파노에이트 (1.4 g, 3.79 mmol, 67% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 370 (M+H⁺).

단계-5: 1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온의 제조

트리톤-B (메탄올 중 40%, 2.4 mL, 5.69 mmol)를 MeCN (70 mL) 중 에틸 3-[(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)-카르바모일-아미노]프로파노에이트 (1.40 g, 3.79 mmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (30% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (910 mg, 2.81 mmol, 74% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 324 (M+H⁺). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.60 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.26-7.23 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.93 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.76 (t, J=6.6 Hz, 2H).

1-(1-메틸-6-(피페리딘-4-일)-1H-인다졸-3-일)디히드로피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 히드로클로라이드의 제조

단계 1: tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트

1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (1.25 g, 3.87 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (2.39 g, 7.74 mmol)의 용액을 N₂로 10분 동안 버블링하였다. 이어서, 플루오린화세슘 (1.18 g, 7.74 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (566 mg, 774 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트/실리카 겔을 통해 여과하였다. 에틸 아세테이트로 세척한 후, 여과물을 물로 희석하고, 층을 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정상 크로마토그래피 (헥산 중 5-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.04 g, 2.44 mmol, 63% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 426.3 (M+H⁺)

단계 2: tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]피페리딘-1-카르복실레이트

팔라듐 (탄소 상 10%, 유형 487, 건조, 1.08 g, 1.02 mmol)을 메탄올 (30 mL) 중 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.44 g, 3.38 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 주위 온도에서 교반하였다. 24시간 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 디클로로메탄/메탄올의 혼합물 (1:1)로 세척하고, 진공 하에 농축시켜 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.42 g, 3.32 mmol, 98% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 372.3 (M - tert-부틸 + H⁺).

단계 3: 1-(1-메틸-6-(피페리딘-4-일)-1H-인다졸-3-일)디히드로피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 히드로클로라이드

1-(1-메틸-6-(피페리딘-4-일)-1H-인다졸-3-일)디히드로피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 히드로클로라이드를 tert-부톡시카르보닐 보호기 탈보호를 위한 일반적 방법 B를 사용하여 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트로부터 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 328.1 (M+H⁺).

1-((4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-2,4-디온 히드로클로라이드의 합성

단계-1: 3-시아노-3-(4-아이오도-페닐아미노)-시클로부탄 카르복실산 메틸 에스테르의 제조:

4-아이오도아닐린 (13.2 g, 60.1 mmol)에 이어서 트리메틸실릴 시아나이드 (10.8 g, 109 mmol, 13.7 mL)를 메탄올 (270 mL) 중 메틸 3-옥소시클로부탄카르복실레이트 (7 g, 54.6 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (5-10% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 메틸 3-시아노-3-(4-아이오도아닐리노)시클로부탄카르복실레이트 (15.2 g, 42.7 mmol, 78% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS ES+ 357 (M+H⁺)

단계-2: 3-카르바모일-3-(4-아이오도-페닐아미노)-시클로부탄 카르복실산 메틸 에스테르의 제조:

아세트알데히드 옥심 (4.98 g, 84.2 mmol)에 이어서 염화인듐 (62.1 mg, 281 μmol)을 주위 온도에서 톨루엔 (120 mL) 중 메틸 3-시아노-3-(4-아이오도아닐리노) 시클로부탄카르복실레이트 (10 g, 28.1 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 이에 따라 형성된 침전물을 여과하고, 톨루엔:에테르 (1:1)로 세척하고, 건조시켜 메틸 3-카르바모일-3-(4-아이오도아닐리노) 시클로부탄카르복실레이트 (8.4 g, 22.5 mmol, 80% 수율)를 수득하였다. 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS (ESI+): 375 (M+H⁺)

단계-3: 1-(4-아이오도-페닐아미노)-3-아자-비시클로[3.1.1]헵탄-2,4-디온의 제조:

포타슘 tert-부톡시드 (4.62 g, 41.2 mmol)를 0℃에서 THF (150 mL) 중 메틸 3-[2-아미노-1-(4-아이오도아닐리노)-2-옥소-에틸]시클로부탄카르복실레이트 (8 g, 20.6 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M 시트르산 용액으로 중화시키고, pH~6으로 조정하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (40% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 5-(4-아이오도아닐리노)-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-2,4-디온 (2.9 g, 8.48 mmol, 41% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 343 (M+H⁺)

단계-4: 4-[4-(2,4-디옥소-3-아자-비시클로[3.1.1]헵트-1-일아미노)-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

탄산나트륨 (1.98 g, 18.7 mmol)을 DMF (32 mL) 및 물 (8 mL) 중 5-(4-아이오도아닐리노)-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-2,4-디온 (2.9 g, 8.48 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5.24 g, 17.0 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 반응물을 아르곤으로 탈기하였다. Pd(dppf)Cl₂ (692 mg, 848 μmol)을 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (5-10% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,4-디옥소-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-5-일)아미노]페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.91 g, 4.81 mmol, 57% 수율)를 수득하였다. LCMS ES+ 398 (M+H⁺)

단계-5: 4-[4-(2,4-디옥소-3-아자-비시클로[3.1.1]헵트-1-일아미노)-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조:

10% Pd-C (50% 습윤, 1 g)를 에탄올 (20 mL) 중 tert-부틸 4-[4-[(2,4-디옥소-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-5-일)아미노]페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.91 g, 4.81 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 완결된 후 (LCMS에 의해 확인함), 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (60-70% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,4-디옥소-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-5-일)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.4 g, 3.50 mmol, 73% 수율)를 수득하였다. LCMS ES+ 400 (M+H⁺)

단계-6: 5-(4-피페리딘-4-일-페닐아미노)-3-아자-비시클로 [3.1.1] 헵탄-2,4-디온 히드로클로라이드의 제조

디옥산 HCl (4 M, 15 mL, 60 mmol)을 tert-부틸 4-[4-[(2,4-디옥소-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-5-일)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.4 g, 3.50 mmol)에 10℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 에테르로 연화처리하고, 동결건조시켜 5-[4-(4-피페리딜)아닐리노]-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-2,4-디온 히드로클로라이드 (1.08 g, 3.34 mmol, 95% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS ES+ 300 (M+H⁺), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.72 (s, 1H), 8.95 (br s, 1H), 8.81-8.79 (m, 1H), 6.90 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.44 (d, J=8.16 Hz, 2H), 3.32-3.29 (m, 2H), 2.95-2.91 (m, 3H), 2.73-2.62 (m, 3H), 2.49 (br m, 2H), 1.85-1.72 (m, 4H).

3-[3-(디플루오로메틸)-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 합성

단계-1: 1-브로모-2-디플루오로메틸-4-니트로-벤젠의 합성:

DAST (24.13 mL, 182.60 mmol)를 디클로로메탄 (350 mL) 중 2-브로모-5-니트로-벤즈알데히드 (7 g, 30.4 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 10% NaHCO₃ 용액으로 염기성화시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 1-브로모-2-(디플루오로메틸)-4-니트로-벤젠 (6 g, 23.8 mmol, 78% 수율)을 수득하였다.

단계-2: 4-브로모-3-디플루오로메틸-페닐아민의 합성:

염화암모늄 (12.7 g, 238 mmol) 및 아연 (15.6 g, 238 mmol)을 주위 온도에서 THF (70 mL) 및 에탄올 (70 mL) 중 1-브로모-2-(디플루오로메틸)-4-니트로-벤젠 (6.0 g, 23.8 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (40% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 4-브로모-3-(디플루오로메틸) 아닐린 (3.95 g, 17.8 mmol, 75% 수율)을 수득하였다. LC MS: ES+ 221 (M+H⁺).

단계-3: 4-(4-아미노-2-디플루오로메틸-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성:

탄산나트륨 (3.06 g, 28.82 mmol)을 THF (20 mL), 메탄올 (10 mL) 및 물 (10 mL) 중 4-브로모-3-(디플루오로메틸)아닐린 (3.2 g, 14.4 mmol) 및 tert-부틸 4-메틸-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3.08 g, 15.9 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 혼합물을 아르곤으로 완전히 퍼징하였다. PdCl₂(dppf).디클로로메탄 (2.35 g, 2.88 mmol)을 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (20% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-아미노-2-(디플루오로메틸)페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (2.24 g, 6.91 mmol, 48% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 325 (M+H⁺).

단계-4: 4-[4-(2,6-비스-벤질옥시-피리딘-3-일아미노)-2-디플루오로메틸-페닐]-3,6-디히드로-2H 피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성:

탄산세슘 (5.12 g, 15.72 mmol)을 tert 부탄올 (40 mL) 중 tert-부틸 4-[4-아미노-2-(디플루오로메틸)페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.7 g, 5.24 mmol) 및 2,6-디벤질옥시-3-아이오도-피리딘 (2.41 g, 5.77 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd₂(dba)₃ (96 mg, 1.05 mmol), Ruphos (978 mg, 2.10 mmol)를 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (25% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-(디플루오로메틸)페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (1.23 g, 2.00 mmol, 38% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 614 (M+H⁺).

단계-5: 4-[2-디플루오로메틸-4-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일아미노)-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성

10% Pd-C (50% 습윤, 2 g)를 에틸 아세테이트 (15 mL) 중 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-(디플루오로메틸)페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (2 g, 3.26 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[2-(디플루오로메틸)-4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (880 mg, 1.99 mmol, 61% 수율)를 담청색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 438 (M+H⁺). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.77 (s, 1H), 7.26-6.98 (m, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.77 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.03 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.34 (bs, 1H), 4.06-4.03 (m, 2H), 2.90-2.70 (m, 4H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.09-2.06 (m, 1H), 1.91-1.87 (m, 1H), 1.61-1.59 (m, 2H), 1.51-1.46 (m, 2H), 1.41 (s, 9H).

단계 6: 3-[3-(디플루오로메틸)-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 합성

tert-부틸 4-[2-(디플루오로메틸)-4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (191 mg, 436.59 μmol)를 메탄올 (3 mL) 중에 용해시키고, 염화수소 용액 (디옥산 중 4.0 M, 1.09 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였고, 반응이 완결되었다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 3-[3-(디플루오로메틸)-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (145 mg, 388 μmol, 89% 수율)를 고밀도 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): Rt = 0.954분, MS (ESI+): 338.3 (M+H⁺).

5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(4-피페리딜)벤조니트릴 히드로클로라이드의 합성

단계-1: 4-(4-아미노-2-시아노-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성:

DMF (60 mL) 중 5-아미노-2-브로모-벤조니트릴 (5 g, 25.38 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (11.77 g, 38.06 mmol)의 교반 용액에 플루오린화세슘 (7.71 g, 50.75 mmol, 1.87 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 아르곤으로 탈기하였다. PdCl₂(dppf).디클로로메탄 (4.14 g, 5.08 mmol)을 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (20% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(4-아미노-2-시아노-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (4.3 g, 14.36 mmol, 56.60% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 300 (M+H).

단계-2: 4-[4-(2,6-비스-벤질옥시-피리딘-3-일아미노)-2-시아노-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성

t-BuOH (50 mL) 중 tert-부틸 4-(4-아미노-2-시아노-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 10.02 mmol) 및 2,6-디벤질옥시-3-아이오도-피리딘 (4.60 g, 11.02 mmol)의 교반 용액에, 탄산세슘 (9.80 g, 30.06 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd₂(dba)₃ (458.83 mg, 501.06 μmol), RuPhos (467.62 mg, 1.00 mmol)를 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (25% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[2-시아노-4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 5.10 mmol, 50.85% 수율)를 수득하였다. LC MS: ES+ 589 (M+H).

단계-3: 4-[2-시아노-4-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일아미노)-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성

에틸 아세테이트 (60 mL) 중 tert-부틸 4-[2-시아노-4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 5.10 mmol)의 탈기된 용액에, 10% Pd-C (50% 습윤, 3 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 수소 하에 풍선 압력에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[2-시아노-4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1.1 g, 2.65 mmol, 52.07% 수율)를 연녹색 고체로서 수득하였다. LCMS: ES+ 413 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 7.20 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.96 (t, J=8.7 Hz, 2H), 6.26 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.43-4.37 (m, 1H), 4.09-4.06 (m, 2H), 2.87-2.69 (m, 4H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.10-2.06 (m, 1H), 1.92-1.87 (m, 1H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.57-1.46 (m, 2H), 1.41 (s, 9H).

단계-4:

tert-부틸 4-[2-시아노-4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (120 mg, 290.92 μmol)를 메탄올 혼합물 (3 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 염화수소 용액 4.0 M (4 M, 727.31 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였고, 반응이 완결되었다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(4-피페리딜)벤조니트릴 히드로클로라이드 (107 mg, 277.51 μmol, 95% 수율)를 고밀도 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 313.2 (M+H)

3-[3-메틸-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 합성

단계-1: 4-(4-아미노-2-메틸-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성:

THF (60 mL), 물 (12 mL) 및 메탄올 (24 mL) 중 4-브로모-3-메틸-아닐린 (5 g, 26.87 mmol) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (9.14 g, 29.56 mmol)의 교반 용액에 탄산나트륨 (6.27 g, 59.12 mmol)을 첨가하고, 아르곤으로 완전히 퍼징하였다. PdCl2(dppf).CH₂Cl₂ (438.94 mg, 537.49 μmol)을 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (15% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(4-아미노-2-메틸-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5 g, 17.34 mmol, 64.51% 수율)를 고밀도 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 289 (M+H).

단계-2: 4-[4-(2,6-비스-벤질옥시-피리딘-3-일아미노)-2-메틸-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성:

t-BuOH (80 mL) 중 tert-부틸 4-(4-아미노-2-메틸-페닐)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (5 g, 17.34 mmol) 및 2,6-디벤질옥시-3-아이오도-피리딘 (7.96 g, 19.07 mmol)의 교반 용액에, 탄산세슘 (16.95 g, 52.01 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd₂(dba)₃ (793.83 mg, 866.90 μmol), RuPhos (809.04 mg, 1.73 mmol)를 불활성 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (25% 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-메틸-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 5.19 mmol, 29.95% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 578 (M+H⁺).

단계-3: 4-[4-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일아미노)-2-메틸-페닐]-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 합성

에틸 아세테이트 (60 mL) 중 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2-메틸-페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 5.19 mmol)의 탈기된 용액에 10% Pd-C (50% 습윤, 3 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 수소 분위기 하에 풍선 압력에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-메틸-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (1020 mg, 2.53 mmol, 48.78% 수율)를 연청색 고체로서 수득하였다. LC MS: ES+ 402 (M+H).

단계 4: 3-[3-메틸-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드의 합성

tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-메틸-페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (180 mg, 448.32 μmol)를 메탄올 (3 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 염화수소 용액 4.0 M (4 M, 1.12 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였고, 반응이 완결되었다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 3-[3-메틸-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (145 mg, 429.19 μmol, 95.73% 수율)를 고밀도 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 302.3 (M+H).

4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘 히드로클로라이드의 합성

단계 1: tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트의 합성

N,N-디에틸에탄아민 (3.23 g, 31.9 mmol, 4.44 mL)에 이어서 트리플루오로메틸술폰산 무수물 (4.50 g, 15.9 mmol, 2.68 mL)을 디클로로메탄 (25 mL) 중 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-옥소-피페리딘-1-카르복실레이트 (2.5 g, 10.6 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 수성 NaHCO₃으로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 4:1 헥산:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (1.2 g, 2.29 mmol, 21% 수율)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 6.59 (s, 1H), 4.29 (q, J = 4.3Hz, 2H), 4.04 (t, J = 11.0Hz, 2H), 1.51 (s, 9H).

단계 2: 1-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온

아세트산칼륨 (911 mg, 9.28 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (113 mg, 155 μmol)을 디옥산 (15 mL) 중 1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (1.0 g, 3.09 mmol) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (1.18 g, 4.64 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (1.1 g, 2.97 mmol, 96% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 371 (M+H).

단계 3: tert-부틸 4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트

탄산나트륨 (485 mg, 4.57 mmol)을 디옥산 (10 mL) 및 물 (2.5 mL) 중 1-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (677 mg, 1.83 mmol) 및 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (560 mg, 1.52 mmol)의 용액에 첨가하고, 용매를 N₂ 기체로 10분 동안 폭기하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 (II) 디클로라이드 (111 mg, 152 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 냉각시키고, 물/에틸 아세테이트로 희석하였다. 추출 후, 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (480 mg, 1.04 mmol, 68% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 462.2 (M+H)

단계 4: tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트

탄소 상 팔라듐, 10% (유형 487, 건조, 331 mg, 311 μmol)을 메탄올 (10.3 mL) 중 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (478 mg, 1.04 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 주위 온도에서 교반하였다. 24시간 후, 수소 풍선을 제거하고, 혼합물을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고, 슬러리를 추가로 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 디클로로메탄/메탄올 (3:1)의 용액을 사용하여 세척하고, 농축시켜 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 (450 mg, 94% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 408.2 (M - tert-부틸 + H).

단계 5: 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘 히드로클로라이드

4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘 히드로클로라이드를 tert-부톡시카르보닐 기의 제거를 위한 일반적 방법 B를 사용하여 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트로부터 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 354.2 (M+H)

tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 및 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2의 합성

단계 1: tert-부틸 4-(4-니트로페닐)-3-옥소-피페리딘-1-카르복실레이트의 합성

tert-부틸 3-히드록시-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (19.5 g, 60.5 mmol) (CAS# 1232788-17-8)를 디클로로메탄 (200 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 데스-마르틴 퍼아이오디난 (38.5 g, 90.7 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 초기 첨가 동안 내부 온도는 0에서 2.2℃로 증가하였다. 반응 용액을 그 온도에서 2시간 동안 교반하고, 온도를 주위 온도로 서서히 상승시키면서 교반을 계속하였다. 17시간 후, 반응 용액은 약간의 용매 증발로 인해 슬러리가 되었다. 디클로로메탄 (100 mL)을 첨가하고, 이어서 데스-마르틴 퍼아이오디난 (8.3 g, 19.6 mmol)을 16℃에서 첨가하고, 반응물을 17시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 4℃로 다시 냉각시켰다. 포화 NaHCO₃ 용액 (250 mL)을 조심스럽게 첨가하고, 이어서 물 175 mL에 용해된 티오황산나트륨 5수화물 (13.8 g, 48.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄 (150 mL)으로 희석하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 제거하고, 케이크를 디클로로메탄 (75 mL x 3)으로 세척하였다. 여과물을 층으로 분리하고, 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 4-(4-니트로페닐)-3-옥소-피페리딘-1-카르복실레이트 (19.4 g, 60.5 mmol, 정량적 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 354.1 (M+Na)/221.0 (M-Boc+H).

단계 2: tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트의 합성

tert-부틸 4-(4-니트로페닐)-3-옥소-피페리딘-1-카르복실레이트 (3.78 g, 11.8 mmol)를 디클로로메탄 (40 mL) 중에 용해시키고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. DAST (3.80 g, 23.6 mmol, 3.12 mL)를 시린지를 통해 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 천천히 가온하면서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 -1.3℃로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO₃ (100 mL)를 첨가 깔때기를 통해 조심스럽게 첨가하였다 (발열). 첨가 동안 내부 온도를 18℃ 미만으로 유지하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (80 mL)로 희석하고, 주위 온도로 가온하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (80 mL)로 세척하였다. 합한 유기부를 수성 18% NaCl 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (구배: 헥산 중 10-30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (2.50 g, 62% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 280.2 (M-tert-부틸+H) / 243.1 (M-Boc+H).

단계 3: 키랄 분리로 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 및 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2를 수득함

라세미 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (2.49 g)를 하기 조건 하에 키랄 SFC 분리에 적용하였다:

칼럼: 키랄팩 IC-H 21 x 250 mm

이동상: 이산화탄소 중 10% 2-프로판올.

유속: 70 ml/분

검출: 220 nm UV

압력: 100 bar

제1 용리 세트의 분획을 감압 하에 증발시켜 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (800 mg, 32% 수율, Rt = 1.74분, >99% 거울상이성질체 과잉률)을 수득하였다. LCMS: 280.2 (M-tBu+H) / 243.1 (M- Boc +H).

제2 용리 세트의 분획을 감압 하에 증발시켜 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (800 mg, 32% 수율, Rt = 2.31분, 99.6% 거울상이성질체 과잉률)를 수득하였다. LCMS 280.2 (M-tert-부틸 +H) / 243.1 (M- Boc +H).

정제된 거울상이성질체의 거울상이성질체 과잉률을 하기 분석용 SFC 방법을 사용하여 결정하였다.

칼럼: 키랄팩 IC-H 4.6 x 100 mm

이동상: 이산화탄소 중 10% 이소-프로판올

유량: 4 mL/분

압력: 100 bar

3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 1의 합성

단계 1: tert-부틸-4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1

tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (0.8 g, 2.34 mmol)을 에탄올 (12 mL) 중에 용해시키고, 용액을 질소로 탈기하였다. 이어서, 탄소 상 팔라듐, 10%, 유형 E101 NE/W (125 mg, 1.17 mmol)를 첨가하였다. 질소 커플로 다시 탈기한 후, 반응 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (12 mL x 3)로 세척하고, 여과물을 농축시켜 tert-부틸-4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (722 mg, 98% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 257 (M-tBu+H)

단계 2: tert-부틸 (4S)-4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1

아세토니트릴 (3.5 mL)을 바이알 내의 tert-부틸 4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (520 mg, 1.66 mmol), 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (478 mg, 2.49 mmol) 및 NaHCO₃ (418 mg, 4.98 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃로 45시간 동안 가열하였다. 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (92 mg, 0.28 당량) 및 NaHCO₃ (110 mg, 0.78 당량)를 첨가하고, 가열을 추가로 72시간 동안 계속하고, 이 시점에, 반응물을 주위 온도로 냉각시키고, 물 (18 mL)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반한 다음, 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물 (10 mL x 3)에 이어서 9:1 헥산:에틸 아세테이트 (5 mL x 3)로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (577 mg, 78% 수율)을 녹색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 446 (M+Na)

단계 3: 3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 1

tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 1 (300 mg, 709 μmol)을 디클로로메탄 (3.4 mL) 중에 용해시키고, 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 850 μL, 3.4 mmol)를 교반 하에 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 농축시켜 3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 1을 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 324 (M+H).

3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 2의 합성

단계 1: tert-부틸-4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2의 합성

tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로페닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (800 mg, 2.34 mmol)를 에탄올 (12 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 배기시키고, 질소로 2회 재충전하였다. 이어서, 탄소 상 팔라듐, 10%, 유형 E101 NE/W (124.35 mg, 1.17 mmol)를 첨가하였다. 배기시키고 질소로 2회 더 재충전한 후, 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 수소화 (H2 풍선)에 적용하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트 케이크를 에틸 아세테이트 (12 mL x 3)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 진공 하에 추가로 건조시켜 정치 시 반고체 (유성); tert-부틸-4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (724 mg, 94% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 257.1 (M-tBu+H)

단계 2: 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2의 합성

바이알에 tert-부틸 4-(4-아미노페닐)-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (721.54 mg, 2.31 mmol), 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (665.32 mg, 3.47 mmol), 및 중탄산나트륨 (582.19 mg, 6.93 mmol, 269.53 μL)을 첨가하였다. 아세토니트릴 (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃ (블록 온도)로 밤새 가온하였다. 48시간 후, 추가량의 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (129 mg, 0.28 당량), NaHCO₃ (129 mg, 0.66 당량)를 첨가하였다. 추가로 72시간 후, 주위 온도로 냉각시켰다. 물 (25 mL)을 천천히 첨가하였다. 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 고체를 수집하였다. 물 (12 mL x 3), 9:1 헥산:에틸 아세테이트 (5 mL x 2)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (838 mg, 81.4% 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 446.4 (M+Na)

단계 3: 3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 2의 합성

tert-부틸 4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트, 이성질체 2 (300 mg, 708.5 μmol)를 디클로로메탄 (3.4 mL) 중에 용해시키고, 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 850 μL, 3.4 mmol)를 교반 하에 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 증발 건조시켜 3-[4-[3,3-디플루오로-4-피페리딜]아닐리노]피페리딘-2,6-디온 디히드로클로라이드, 이성질체 2를 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 324.1 (M+H)

2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산의 합성

단계 1: tert-부틸 2-[4-히드록시-1-[4-니트로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-피페리딜]아세테이트

리튬 디이소프로필아미드 (THF 중 0.7 M, 54 mL, 37.82 mmol)를 건조 THF (40 ml) 중 tert-부틸 아세테이트 (1.76 g, 15.1 mmol, 2.04 mL)의 교반 용액에 -78℃에서 10분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. THF (20 ml) 중에 용해시킨 1-[4-니트로-2-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-4-온 (4.36 g, 15.1 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 -78℃에서 수성 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 혼합물을 주위 온도로 가온하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS (ESI-): m/z 403.1 [M-H⁺].

단계 2: tert-부틸 2-[1-[4-아미노-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

에틸 아세테이트 (40 mL) 중 tert-부틸 2-[4-히드록시-1-[4-니트로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-피페리딜]아세테이트 (2 g, 4.95 mmol)의 교반 용액을 질소로 5분 동안 퍼징하였다. Pd/C, 건조 기준으로 10% (1.05 g, 9.89 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (풍선) 하에 두었다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄:에틸 아세테이트 혼합물 (1:1, 500 mL)로 플러싱함으로써 셀라이트 층을 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 갈색빛 고체를 수득하였으며, 이를 디클로로메탄 (20 mL) 중에 용해시키고, 실리카 상에서 감압 하에 건조 패킹하였다. 화합물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:석유 에테르를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 순수한 적갈색 고체 tert-부틸 2-[1-[4-아미노-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.1 g, 1.96 mmol, 40% 수율)를 수득하였다. LCMS (m/z: 375.2 (M+H⁺)).

단계 3: tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

DMF (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-아미노-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.1 g, 2.94 mmol) 및 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (846.21 mg, 4.41 mmol)의 교반 용액에 중탄산나트륨 (740.45 mg, 8.81 mmol)을 실온에서 첨가하고, 10분 후에 반응물의 온도를 60℃로 상승시키고, 반응을 약 12시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 빙냉수 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2*100 mL)로 추출하고, 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피를 사용하여 석유 에테르 중 10%에서 100% 에틸 아세테이트 용리액 구배를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (300 mg, 468.45 μmol, 16% 수율)를 갈색빛-녹색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 486.2 (M+H⁺).

단계 4: 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산의 합성

디클로로메탄 (3 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (620 mg, 1.28 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 0℃에서 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 0.32 mL, 6.39 mmol)를 적가하고, 이것을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증류시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하고, 디에틸 에테르를 경사분리한 다음, 건조시켜 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-(트리플루오로메틸)페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 (345 mg, 661 μmol, 52% 수율)을 녹색 고체로서 수득하였다. LCMS (m/z: 430.1 (M+H))

tert-부틸 2-브로모아세테이트를 사용한 중간체의 알킬화를 위한 일반적 절차 C: tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트의 합성

3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (1 g, 3.09 mmol)를 N,N-디메틸아세트아미드 (15 mL) 중에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (1.60 g, 12.4 mmol, 2.15 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, tert-부틸 2-브로모아세테이트 (663 mg, 3.40 mmol, 498 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (0.84 g, 2.09 mmol, 68% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 402.2 (M+H⁺)

하기 화합물을 3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드로부터 tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트의 합성에 사용된 바와 같이 일반적 절차 C를 사용하여 합성하였다.

중간체의 tert-부틸 에스테르 절단을 위한 일반적 절차 D: 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트를 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고, TFA (1.61 mL, 20.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였고, 반응이 완결되었다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 -78℃로 동결시키고, 고진공에 적용하고, 해동시켜 고밀도 고체를 수득하였다. 고체를 메탄올:디클로로메탄 (1:4) 중에 재용해시키고, 침전물이 형성될 때까지 MTBE를 적가하였다. 현탁액을 초음파처리하고, 고체를 흡인 하에 여과하였다. 녹색 고체를 여과에 의해 수집하여 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (0.95 g, 2.07 mmol, 97% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 346.4 (M+H⁺)

하기 중간체를 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 합성을 위한 일반적 절차 D를 사용하여 적절한 출발 물질로부터 합성하였다.

중간체 (S)-2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세트산에 대한 거울상이성질체 과잉률을 하기 SFC 방법을 사용하여 >99.9% ee (Rt = 2.11분)에서 측정하였다:

칼럼: 룩스(Lux) A1

용리액: CO₂ 중 0.5% 이소프로필 아민을 갖는 50% 이소프로판올 (등용매)

압력: 100 bar

온도: 35℃

실행 시간: 7분

중간체 (R)-2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세트산에 대한 거울상이성질체 과잉률을 하기 SFC 방법을 사용하여 98% ee (Rt = 3.93분)에서 측정하였다:

칼럼: 룩스(Lux) A1

압력: 100 bar

온도: 35℃

실행 시간: 7분

일반적 절차 E: 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드의 합성

tert-부틸 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (228 mg, 568 μmol)를 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시키고, 1,4 디옥산 중 4 M 염산 (8 mmol, 2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 연화처리한 다음, 여과하여 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (210 mg, 428 μmol)를 회색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 345 (M+H⁺).

하기 중간체를 적절한 출발 물질로부터 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 합성을 위한 상기 일반적 절차 E를 사용하여 합성하였다.

중간체: 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드의 합성

단계 1: tert-부틸 (S)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)피롤리딘-1-카르복실레이트

포타슘 에틸 말로네이트 (85.8 g, 504 mmol)를 THF (1400 mL) 중 염화마그네슘 (31.0 g, 325 mmol)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 가열하였다. 분리형 플라스크에서, (2S)-1-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-2-카르복실산 (70.0 g, 325 mmol)을 THF (1400 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 냉각시키고, 카르보닐 디이미다졸 (81.7 g, 504 mmol)을 20분의 기간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 가열된 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 활성화된 에스테르 용액을 20분의 기간에 걸쳐 적가하고, 반응 혼합물을 20시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 증류에 의해 제거하여 농후한 백색 반고체를 수득하였다. 이 잔류물을 반포화 중황산칼륨 용액에 용해시키고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 NaHCO₃ 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 담갈색 투명한 오일을 수득하였다. 이 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (10% 에틸 아세테이트:석유 에테르)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (76 g, 213 mmol, 66% 수율)를 무색 투명한 오일로서 수득하였다. LCMS: (ESI-) (m/z: 284.0 [M-1]).

단계 2: 에틸 3-옥소-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 히드로클로라이드

tert-부틸 (2S)-2-(3-에톡시-3-옥소-프로파노일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (67.4 g, 236 mmol)를 2 L RBF 중 에틸 아세테이트 (70 mL) 중에 용해시켰다. 염화수소 (디옥산 중 4 M, 207 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류 오일을 MTBE (200 mL)와 함께 밤새 교반하였다. MTBE 상청액을 경사분리하고, MTBE 상청액을 폐기하고, 잔류물을 감압 하에 농축시켜 에틸 3-옥소-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 히드로클로라이드 (52.4 g, 228 mmol, 97%)를 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (m/z: 186.1 [M+H⁺])

단계 3: 에틸 2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

티오시안산칼륨 (23.3 g, 240 mmol, 12.3 mL)을 에탄올 (250 mL) 중 에틸 3-옥소-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 히드로클로라이드 (50.6 g, 228.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 불균질 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (500 mL) 중에 용해시켰다. 포화 수성 NaHCO₃ (500 mL)를 혼합물에 첨가하고, 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축시킨 다음, 500 mL MTBE와 혼합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하여 에틸 2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (47.1 g, 208 mmol, 91% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (m/z: 227.1 [M+H])

단계 4: 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-아세테이트

3구 2 L RBF에 라니 니켈®2800, H2O 중 슬러리, 활성 촉매 (51.00 g, 595.27 mmol)를 채우고, EtOH (100 mL)로 헹구었다. 에탄올 층을 폐기하였다. EtOH (400 mL) 중 에틸 2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (51 g, 225.37 mmol)의 슬러리를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOH로 세척하였다. 여과물을 농축시켜 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-아세테이트를 갈색 오일 (45.6 g, 235 mmol, 정량적 수율)로서 수득하였다. LCMS (ESI+): m/z: 194.9 [M+1]

단계 5: 에틸 (2Z)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트

에탄올 (100 mL) 중 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (20 g, 102.97 mmol)의 용액에 에탄올 중 소듐 에톡시드, 21% w/w (21.02 g, 308.91 mmol, 24.22 mL)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 이어서 이 온도에서 이소아밀 니트라이트 (41 mL, 309 mmol)를 적가하고, 3시간 후, 추가의 이소아밀 니트라이트 (27 mL, 206 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 천천히 실온에 도달하도록 하고, 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 에탄올 (80 ml)로 희석하였다. 반응 혼합물을 pH 시험지를 사용하여 pH 6이 수득될 때까지 0℃에서 메탄올 중 4 M 염산을 적가하여 중화시켰다. 혼합물은 담황색 현탁액으로 변화하였다. 고체를 흡인 하에 여과하고, 에탄올 (2회)로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 물로 희석하고, 디클로로메탄으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 농축시켜 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트 (17.2 g, 67.16 mmol, 65.22% 수율)를 갈색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS (ESI+) m/z 224.0 (M+H).

단계 6: 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 히드로클로라이드 및 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드

에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트 (30.40 g, 136.18 mmol)를 질소 하에 기계적 교반 하에 2 L 3구 둥근-바닥 플라스크에서 아세트산 (300 mL) 중에 용해시켰다. 아연 (26.72 g, 408.55 mmol, 3.74 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 추가의 아세트산으로 세척하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 갈색 조 잔류물을 수득하였다. 별도의 반응 용기에서, 에탄올 (125 mL)을 3구 500 mL 둥근-바닥 플라스크에서 0℃로 냉각시켰다. 내부 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 아세틸 클로라이드 (28.14 g, 358.43 mmol, 21.81 mL)를 적가하였다. 용액을 15분 동안 교반하였다. 조 잔류물을 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 150 mL 아세토니트릴 중에 용해시키고, 150 mL H₂O를 첨가하였다. 백색 침전물이 형성되었고, 혼합물을 여과하였다. 필터 케이크에 의해 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 히드로클로라이드 (2.77 g, 11.3 mmol, 8.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.54 (s, 3H), 7.65 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.57 - 4.10 (m, 2H), 4.01 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.75 (h, J = 8.4 Hz, 2H), 2.55 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS (ESI+): m/z 210.1 [M+H]. 모액을 농축시키고, IPA (3 x)와 공비혼합하여 목적 생성물의 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드 형태 (32.7 g, 116.4 mmol, 86% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): m/z 210.1 [M+H]. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.93 (s, 4H), 8.56 (s, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.45 - 4.05 (m, 5H), 3.06 - 2.69 (m, 3H), 2.58 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 4H).

중간체: 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트의 합성

에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드 (4.02 g, 12.62 mmol)를 DMF (36 mL) 중에 용해시켰다. 메틸 2-(브로모메틸)-3-플루오로-5-아이오도-벤조에이트 (3.81 g, 10.22 mmol)를 첨가하고, 이어서 N-에틸-N-이소프로필-프로판-2-아민 (6.52 g, 50.47 mmol, 8.79 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 갈색 오일을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트 (2.03 g, 4.33 mmol, 34.29% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 470.2 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.04 - 7.82 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.60 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.06 (m, 3H), 3.98 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 2.92 - 2.71 (m, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 3H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H).

중간체: 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트의 합성

에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드 (6.2 g, 21.97 mmol))를 DMF (55 mL) 중에 용해시켰다. 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로-벤조에이트 (5.73 g, 17.58 mmol)를 첨가하고, 이어서 N-에틸-N-이소프로필-프로판-2-아민 (11.36 g, 87.89 mmol, 15.31 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수 (2 x)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 갈색 오일을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (3.2 g, 7.58 mmol, 34.49% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 422.0 / 424.0 (M+H, Br 패턴)

실시예 1. 5-[2-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]이소인돌린-5-일]에티닐]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]피리딘-2-카르복스아미드의 합성

단계 1: tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트

tert-부틸 4-(4-아미노페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (CAS 170011-57-1) (798 mg, 2.89 mmol)를 아세토니트릴 10 ml 중에 용해시켰다. 중탄산나트륨 (485 mg, 5.77 mmol, 2 당량)을 첨가하고, 이어서 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (CAS 62595-74-8) (610 mg, 3.18 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이솔루트(isolute)® 상에 흡착시키고, 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 30:70에서 100:0 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (850 mg, 76% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 359.4 (([M-tBu+H]⁺).

단계 2: (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드

tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (850 mg, 2.19 mmol) 및 염산 (디옥산 중 4 M) (5.48 ml, 21.9 mmol, 10 당량)을 빙조에서 0-5℃에서 메탄올 10 ml와 합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 목적 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (818 mg, 정량적, 순도 = 87%)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 286.1 ([M+H]⁺).

단계 3: tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트

N,N-디메틸포름아미드 4.0 ml 중 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (200 mg, 0.618 mmol), tert-부틸 2-브로모아세테이트 (CAS 5292-43-3) (157 mg, 0.119 ml, 0.803 mmol, 1.3 당량) 및 휘니그 염기 (399 mg, 0.539 ml, 3.09 mmol, 5 당량)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 50:50에서 100:0 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (164 mg, 66% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 402.2 ([M+H]⁺).

단계 4: 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세테이트

tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (164 mg, 0.408 mmol)를 디클로로메탄 3.0 ml와 합하였다. 트리플루오로아세트산 (1.48 g, 1 ml, 13 mmol, 31.8 당량)을 0-5℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 고진공 하에 건조시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 목적 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세테이트 (정량적 수율)를 밝은 청색 발포체로서 수득하였다. MS: m/e = 346.2 ([M+H]⁺).

실시예 1B. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페라진-1-일)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드, 화합물 10

단계 1: 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-아세테이트

1,4-디옥산 200 ml 중에 용해시킨 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (CAS 869113-97-3) (20.0 g, 102.97 mmol)의 용액에 이산화셀레늄 (22.85 g, 205.94 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 석유 에테르:에틸 아세테이트 2:1에서 에틸 아세테이트:에탄올 10:1 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-아세테이트 (정량적 수율)를 담갈색 오일로서 수득하였다. MS: m/e = 209.1 ([M+H]⁺).

단계 2: 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트

에탄올 145 ml 중에 용해시킨 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-아세테이트 (17.5 g, 84.05 mmol)의 용액에 실온에서 히드록실아민 히드로클로라이드 (6.42 g, 92.45 mmol, 1.1 당량) 및 아세트산나트륨 (13.79 g, 168.1 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 물로 추출하고, 에탄올/THF/에틸 아세테이트 1:1:8의 혼합물로 5회 추출하였다. 유기 층을 농축 건조시켰다. 목적 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트 (15 g, 80% 수율)를 황색 고체로서 수득하였고, MS: m/e = 224.1 ([M+H]⁺), 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.

단계 3: 에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

에탄올 225 ml 및 THF 120 ml 중에 용해시킨 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-히드록시이미노-아세테이트 (15.0 g, 67.2 mmol)의 용액에 실온에서 Pd/C (30.0 g, 67.2 mmol, 1 당량, 10%)를 첨가하였다. 혼합물을 H₂로 45℃에서 24시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 목적 에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (정량적 수율)를 갈색 오일로서 수득하였고, MS: m/e = 210.1 ([M+H]⁺), 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.

단계 4: 에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 히드로클로라이드

HCl/EtOH (300 ml, 1200 mmol, 14.5 당량, 2.5 mol/L) 중 에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (15.0 g, 82.79 mmol)의 용액을 25℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 25℃ 미만에서 농축시켜 잔류물을 갈색 오일로서 수득하였다. 아세토니트릴 150 ml를 잔류물에 첨가하고, 침전된 황색 고체를 수집하고, 진공 하에 25℃ 미만에서 건조시켜 목적 에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 히드로클로라이드 (정량적 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 210.1 ([M+H]⁺).

단계 5: 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로-벤조에이트

메틸 5-브로모-3-플루오로-2-메틸벤조에이트 (CAS 2090424-20-5) (5.91 g, 23.9 mmol)를 100 ml 트리플루오로톨루엔 중에 용해시키고, N-브로모숙신이미드 (4.26 g, 23.9 mmol, 1 당량) 및 AIBN (393 mg, 2.39 mmol, 0.1 당량)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물로 추출하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 0:100에서 50:50 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로-벤조에이트 (7.29 g, 94% 수율)를 담황색 액체로서 수득하였다. MS: m/e = 326.8 ([M+H]⁺).

단계 6: 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

에틸 (2RS)-2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 히드로클로라이드 (4.15 g, 16.9 mmol, 1 당량)를 N,N-디메틸포름아미드 35 ml 중에 용해시켰다. 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로-벤조에이트 (5.0 g, 15.3mmol) 및 트리에틸아민 (10.7 ml, 76.7 mmol, 5 당량)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 추출하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 추출하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄:메탄올 100:0에서 90:10 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (2.6 g, 40% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 422.1/424.1 ([M+H]⁺).

단계 7: tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (56 mg, 0.133 mmol) 및 (4-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)페닐)보론산 (CAS 457613-78-4) (41 mg, 0.133 mmol, 1.0 당량)을 1,2-디메톡시에탄 1.0 ml 및 2 M 수성 Na₂CO₃-용액 (0.199 ml, 0.398 mmol, 3.0 당량) 중에 용해시켰다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (0) (15 mg, 0.0133 mmol, 0.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 에틸 아세테이트 및 포화 NaHCO3-용액으로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 5:95에서 100:0 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (48 mg, 60% 수율)를 담갈색 오일로서 수득하였다. MS: m/e = 604.4 ([M+H]⁺).

단계 8: tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (48 mg, 0.0795 mmol)를 에탄올 11 ml와 합하여 담황색 용액을 수득하였다. LiOH (물 중 1 M) (0.0954 ml, 0.0954 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에탄올에 녹이고, 진공 하에 농축시킨 다음, N,N-디메틸포름아미드 7.0 ml 중에 용해시켰다. 티아졸-2-아민 (9.55 mg, 0.0954 mmol, 1.2 당량) 및 휘니그 염기 (0.0694 ml, 0.398 mmol, 5 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (36.3 mg, 0.0954 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 포화 NaHCO₃-용액으로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄:메탄올 100:0에서 90:10 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (22 mg, 42% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. MS: m/e = 658.3 ([M+H]⁺).

단계 9: (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (26 mg, 0.0395 mmol)를 디클로로메탄 0.5 ml 및 메탄올 0.25 ml 중에 용해시켰다. HCl (디옥산 중 4 M) (0.099 ml, 0.395 mmol, 10 당량)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃-용액으로 추출하고, 디클로로메탄으로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 목적 (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (22 mg, 99.8% 수율)를 담황색 오일로서 수득하였다. MS: m/e = 558.2 ([M+H]⁺).

단계 10: tert-부틸 2-[4-[4-[7-플루오로-3-옥소-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-일]아세테이트

표제 화합물을 (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (CAS 5292-43-3)로부터 출발하여 실시예 1, 단계 3에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 황색 오일로서 수득하였다.

실시예 2. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 1)

단계 1: 1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)피페리딘-4-온

N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 피페리딘-4-온 (15.0 g, 151.31 mmol), 1,2-디플루오로-4-니트로-벤젠 (24.07 g, 151.31 mmol, 16.72 mL)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (78.22 g, 605.26 mmol, 105.42 mL)을 첨가하고, 110℃에서 14시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 냉수 (150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 염수 용액 (150 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)피페리딘-4-온 (21 g, 77.93 mmol, 51.50% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS, m/z: 238.9 [M+H]⁺

단계 2: tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 합성

리튬 디이소프로필아미드 (2 M, 12.59 mL)를 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 tert-부틸 아세테이트 (1.76 g, 15.11 mmol, 2.03 mL)의 교반 용액에 -78℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 45분 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (15 mL) 중에 용해시킨 1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)피페리딘-4-온 (3 g, 12.59 mmol)을 여기에 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (100-200 메쉬) 칼럼 크로마토그래피 (용리액으로서 석유 에테르 중 30%에서 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (2.7 g, 7.01 mmol, 55.66% 수율)를 담황색 점착성 고체로서 수득하였다. LCMS: 355.1 (M+H)⁺

단계 3: tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

에탄올 (10 mL) 및 물 (2 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.5 g, 4.23 mmol)의 용액에 철 분말 (1.18 g, 21.16 mmol, 150.37 μL) 및 염화암모늄 (679.26 mg, 12.70 mmol, 443.96 μL)을 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (60 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (20 mL), 수성 중탄산나트륨 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 70% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.2 g, 3.44 mmol, 81.28% 수율)를 갈색 점착성 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 325.1 [M+H], ¹H NMR (DMSO-d₆) 8.02-7.89 (m, 2H), 7.23-7.05 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.55-3.43 (m, 2H), 3.22-3.19 (m, 2H), 2.36 (s, 2H), 1.88-1.64 (m, 3H), 1.41 (s, 9H).

단계 4: tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1 g, 3.08 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 25 ml 밀봉 튜브에서 중탄산나트륨 (517.94 mg, 6.17 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 60℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 2회 세척하고, 여과물을 감압 하에 35℃에서 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 칼럼 (100-200 메쉬) 상에서 석유 에테르 중 65-70% 에틸 아세테이트 중 화합물을 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켜 목적 화합물 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (760 mg, 1.67 mmol, 54.11% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 436.0 [M+H], ¹H NMR (DMSO-d₆): 10.79 (s, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 6.52 (dd, J = 13.6 Hz, 3.6 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 3.7 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.30-4.19 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 4H), 2.78-2.51 (m, 3H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.95-1.63 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).

단계 5: tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

라세미 혼합물 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (2 g, 4.59 mmol)를 키랄 SFC에 의해 분해하였다. 샘플 2.0 g을 아세토니트릴 22.0 mL 중에 용해시켰다.

SFC 분리 조건: 칼럼: 룩스 A1 [250*10 mm, 5-마이크로미터 입자 크기]; 이동상: CO₂: 이소프로판올 (45:55); 유량: 12 g/분; 사이클 시간: 11.0분; 배압: 100 bar UV 수집, 파장: 254 nm; 부피: 주입당 0.4 mL;

분획의 제1 용리 세트를 압력 하에 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (850 mg, 1.84 mmol, 40.04% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.77 (s, 1H), 6.83 (t, J = 12.00 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.29-4.12 (m, 1H), 2.91-2.79 (m, 5H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.16-2.02 (m, 1H), 1.89-1.69 (m, 3H), 1.65 (d, J = 16.80 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H), 키랄 SFC에 의해 99.18%ee (Rt = 2.33분), 비광회전: -46.2° [α]²⁰ _D

분획의 제2 용리 세트를 압력 하에 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (530 mg, 1.17 mmol, 25.52% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.78 (s, 1H), 6.84 (t, J = 13.20 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 2.92-2.77 (m, 5H), 2.73-2.63 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.18-2.03 (m, 1H), 1.87-1.73 (m, 3H), 1.64 (d, J = 18.00 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 키랄 SFC에 의해 99.13%ee (Rt = 4.92분), 비광회전: +46.8° [α]²⁰ _D

절대 배위 화합물 1

화합물 1의 절대 배위는 세레블론 단백질 구축물과의 공-결정의 X선 회절에 의해 중간체 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 절대 배위를 확립함으로써 확립하였다. 최종 화합물 1의 입체화학적 완전성을 HPLC 키랄 크로마토그래피에 의해 확립하였다. 글루타르이미드 키랄 중심의 라세미화는 관찰되지 않았다.

X선 결정학에 의한 중간체 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 절대 배위 결정

X선 결정학에 의한 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트의 절대 배위를 세레블론 (CRBN) 단백질 구축물과의 공-결정화에 이어서 계내 결합된 단백질 및 소분자 둘 다의 X선 회절을 통해 초고해상도로정의하였다. 구조 해상도는 1 Å이었다. 생성된 구조는 밀도 지도와 함께 및 밀도 지도 없이 도 8 및 도 9에 제시된다.

단계 6: 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드

0℃에서 디클로로메탄 (15 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (600 mg, 1.38 mmol)의 교반 용액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M 용액, 1.72 mL, 6.89 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 (2 x 10 mL)로 2회 연화처리하였다. 고체 잔류물을 회전 진공 하에 건조시켜 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (610 mg, 1.09 mmol, 78.96% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H]+, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.03 (bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.70 (d, J = 15.20 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 11.40, 6.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.60, 4.40 Hz, 1H), 3.88-3.65 (m, 5H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 1H), 2.46 (s, 2H), 2.33 (bs, 2H), 2.10-2.08 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 2H).

단계 7: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로-[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (270 mg, 394.92 μmol) 및 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (197.07 mg, 473.91 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중에서 혼합하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (357.29 mg, 2.76 mmol, 481.52 μL)을 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 프로필포스폰산 무수물 용액 (에틸 아세테이트 중 50 중량%, 176 μL, 188.49 mg, 592.39 μmol)을 0℃에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼 (100 g); 30분에 걸쳐 물 (0.1% 아세트산암모늄) 중 아세토니트릴 중 0%에서 50%, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 1 (143.5 mg, 150.39 μmol, 38.08% 수율)을 회백색 고체 화합물로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 931.3 [M+H], ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 12.60 - 12.33 (s, 1H), 10.79 (br s, 1H), 7.77 - 7.59 (m, 5H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.59 - 6.47 (m, 3H), 6.42 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.78 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84 - 4.74 (m, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 3.93 (m, 8H), 2.93 - 2.66 (m, 6H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.47 (br d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.22 (s, 2H), 2.09 (td, J = 4.4, 8.0 Hz, 1H), 1.90 - 1.71 (m, 3H), 1.68 - 1.57 (m, 2H).

실시예 3. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 2)

단계 1: 1-[6-[(4R)-3,3-디플루오로-4-피페리딜]-1-메틸-인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 히드로클로라이드

tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 (중간체 Z1, 325 mg, 701.22 μmol)를 1,4-디옥산:메탄올 혼합물 (1:1, 3 mL) 중에 용해시키고, 염화수소 용액 (1,4-디옥산 중 4.0 M, 3.51 mL, 14 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 고체 잔류물을 고진공에 적용하여 1-[6-[(4R)-3,3-디플루오로-4-피페리딜]-1-메틸-인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 히드로클로라이드 (280 mg, 665.30 μmol, 94.88% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 364.1 (M+H)

단계 2: tert-부틸 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세테이트

1-[6-[(4R)-3,3-디플루오로-4-피페리딜]-1-메틸-인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 히드로클로라이드 (285 mg, 784.34 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (304.11 mg, 2.35 mmol, 409.85 μL)을 DMAc (0.5 mL) 중에서 혼합하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. tert-부틸 2-브로모아세테이트 (168.29 mg, 862.78 μmol, 126.53 μL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 23℃로 4시간 동안 가온하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 포화) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 디클로로메탄 중 0%에서 10% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켜 tert-부틸 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세테이트 (330 mg, 656.54 μmol, 83.71% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 478.2 (M+H) / 422.2 (M-t-Bu+H)

단계 3: 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세테이트 (330 mg, 691.09 μmol)를 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (1.42 g, 12.44 mmol, 958.39 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (20 mL)에 교반 하에 0-5℃에서 첨가하였다. 생성된 현탁액을 2분 동안 교반하였다. 현탁액을 원심분리용 바이알로 옮기고, 현탁액을 2400 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액 용매를 경사분리하고 폐기하였다. 메틸 tert-부틸 에테르 (20 mL)를 고체에 첨가하고, 생성된 현탁액을 2분 동안 교반하였다. 현탁액을 원심분리용 바이알로 옮기고, 현탁액을 2400 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액 용매를 경사분리하고 폐기하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 증발시키고, 고체를 고진공에 1시간 동안 적용하여 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (150 mg, 274.55 μmol, 39.73% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 422.2 (M+H)

단계 4: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (240 mg, 351.04 μmol) 및 2-[(4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (147.93 mg, 351.04 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (272.22 mg, 2.11 mmol, 366.87 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (133.48 mg, 351.04 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 4℃에서 16시간 동안 냉각시켰다. 물 (300 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 100 g C18 칼럼에 주입하고, 물 (+ 0.1% 트리플루오로아세트산) 중 0%에서 100% 아세토니트릴 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 모으고, 20:80 iPrOH:클로로포름과 중탄산나트륨 (수성, 포화) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 고체를 70:30 아세토니트릴:물 중에 용해시키고, 초음파처리하여 가용화시키고, 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 2 (150 mg, 151.07 μmol, 43.04% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 973.2 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.45 (s, 1H), 10.50 (s, 1H), 7.67 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.55 - 7.45 (m, 3H), 7.40 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.06 (s, 1H), 4.75 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.14 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 7H), 3.92 (s, 4H), 3.85 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.16 (qd, J = 14.9, 14.3, 7.1 Hz, 5H), 2.92 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.69 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 2.65 - 2.45 (m, 2H), 2.41 - 2.30 (m, 1H), 2.28 - 2.11 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H).

화합물 2의 절대 배위

화합물 2의 절대 배위는 소뇌 단백질 구축물과의 공-결정의 X선 회절에 의해 중간체 tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트의 절대 배위를 결정함으로써 확립하였다.

키랄 SFC 분리에 의한 tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 및 tert-부틸 (4S)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

라세미 tert-부틸 4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카르복실레이트를 하기 조건 하에 SFC 분리를 사용하여 분해하였다:

샘플 중량: 5.06 g

칼럼: 키랄셀 OD-H 21 x 250 mm

이동상: CO2 중 20% 2-프로판올

유량: 70 mL/분

샘플: 매 1 g의 샘플을 25 mL의 에탄올 및 25 mL의 디클로로메탄 중에 용해시켰다.

주입: 1 mL

검출: 220 nm

제1 용리 세트의 분획을 수집하고, 하기 분석 조건을 사용하여 증발시켜 tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 (2.21 g, 43% 수율, 100%ee)를 수득하였다. SFC 체류 시간: 3.18분 (초임계 CO₂ 중 25% 이소-프로판올, OD-H 4.6 x 100 mm, 40℃ 4 mL/분, 100 psi, 5 μL (에탄올) 주입), LCMS: 464 (M+H)

tert-부틸 (4R)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트의 절대 배위를 세레블론 (CRBN) 단백질 구축물과의 공-결정화에 이어서 계내 결합된 단백질 및 소분자 둘 다의 X선 회절을 통해 초고해상도로 정의하였다. 구조 해상도는 1 Å이었다. 구조는 도 10 및 도 11에서 밀도 지도 오버레이와 함께 및 밀도 지도 오버레이 없이 제시된다.

제2 용리 세트의 분획을 수집하고, 하기 분석 조건을 사용하여 증발시켜 tert-부틸 (4S)-4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 (2.21 g, 43% 수율, 100%ee)를 수득하였다. 체류 시간: 4.07분 (초임계 CO_{2 중 25% 이소-프로판올,}OD-H 4.6 x 100 mm, 40℃ 4 mL/분, 100 psi, 5 μL (에탄올) 주입), LCMS: 464 (M+H).

실시예 4. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 3)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (47.26 mg, 365.67 μmol, 63.69 μL)을 0℃에서 DMF (0.8 mL) 중 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-5-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (43.53 mg, 95.07 μmol)의 용액에 첨가하였다. HATU (30.59 mg, 80.45 μmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, DMF (0.4 mL) 중에 용해시킨 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 트리플루오로아세트산 염 (50 mg, 73.13 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 물 중 0%에서 100% 아세토니트릴 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 화합물 3 (30.3 mg, 29 μmol, 41% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 973.2 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.44 (s, 1H), 10.48 (s, 1H), 7.67 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 3H), 7.41 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.51 - 6.46 (m, 2H), 6.08 (s, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.15 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.06 - 3.94 (m, 6H), 3.96 - 3.88 (m, 5H), 3.85 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.19 - 3.07 (m, 4H), 2.92 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 3H), 2.65 - 2.55 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.43 - 2.33 (m, 3H), 2.20 (dd, J = 27.1, 14.4 Hz, 1H), 1.77 (m, 1H).

실시예 5. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드, 이성질체 1 (화합물 4)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (56.71 mg, 438.81 μmol, 76.43 μL)을 DMF (0.8 mL) 중 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 이성질체 1 (47.67 mg, 114.09 μmol) (47.67 mg, 114.09 μmol)의 용액에 첨가하였다. HATU (36.71 mg, 96.54 μmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 10분 동안 교반하였다. DMF (0.4 ml) 중에 용해시킨 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 트리플루오로아세트산 염 (60 mg, 87.76 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 물 중 0%에서 100% 아세토니트릴 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 증발시키고, 고체를 아세토니트릴:물 혼합물 (1:1, 2 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 4 (19.2 mg, 20.37 μmol, 23.2%)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 933.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.30 (ddd, J = 12.0, 7.5, 4.8 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 6H), 3.21 - 3.08 (m, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 2H), 2.88 - 2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.44 (m, 4H), 2.42 - 2.30 (m, 1H), 2.16 - 1.97 (m, 2H), 1.89 (tt, J = 12.1, 6.2 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 13.1 Hz, 1H).

실시예 6. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-(2-피리딜)아세트아미드 (화합물 5)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (53.06 mg, 410.55 μmol, 71.51 μL)을 DMF (0.5 mL) 중 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (45.11 mg, 98.53 μmol) (55.64 mg, 82.11 μmol)에 첨가하였다. HATU (34.34 mg, 90.32 μmol)를 0℃에서 첨가하고, 주위 온도에서 10분 동안 교반하였다. DMF (0.4 ml) 중 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드; 트리플루오로아세트산 염을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 물 중 0%에서 100% 아세토니트릴 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 중탄산나트륨 (수성, 수성)으로 중화시키고, 수성 혼합물을 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하여 화합물 5 (47.3 mg, 48.42 μmol, 58.98% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 967.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.96 (s, 1H), 10.61 (s, 1H), 8.38 (dd, J = 5.3, 1.9 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (ddd, J = 8.8, 7.3, 2.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 2H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.21 - 7.14 (m, 2H), 6.64 - 6.59 (m, 2H), 6.26 (s, 1H), 4.86 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.28 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.10 (d, J = 5.9 Hz, 4H), 4.08 - 4.02 (m, 4H), 3.98 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.33 - 3.21 (m, 4H), 3.06 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.91 - 2.79 (m, 3H), 2.78 - 2.68 (m, 1H), 2.64 - 2.46 (m, 2H), 2.41 - 2.27 (m, 1H), 1.91 (d, J = 12.5 Hz, 1H).

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 화합물 6의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(피페라진-1-일메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 디히드로클로라이드 (60 mg, 93.08 μmol, 022) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 (42.76 mg, 93.08 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (60.15 mg, 465.41 μmol, 81.06 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (46.01 mg, 121.01 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 수성 NaHCO₃ (약 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 철저히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 6 (10.5 mg, 11.21 μmol, 12.05% 수율, 96% 순도)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 899.4 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.53 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.98 - 7.70 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.37 (s, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.64 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.41 - 4.16 (m, 2H), 4.15 - 3.87 (m, 3H), 3.74 - 3.52 (m, 4H), 3.47 (s, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.88 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 2.84 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.48 - 2.19 (m, 4H), 2.22 - 1.94 (m, 3H), 1.95 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 2H), 1.63 - 1.42 (m, 1H).

실시예 7. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-피리딜]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 11)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (75 mg, 126.24 μmol) 및 2-[4-[5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-피리딜]-1-피페리딜]아세트산 비스(트리플루오로아세트산) 염 (79.77 mg, 138.87 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (81.58 mg, 631.21 μmol, 109.94 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (62.40 mg, 164.11 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (60 mL)로 중화시키고, 이소프로판올:클로로포름 혼합물 (1:4)로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 디클로로메탄 중 조 잔류물을 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 화합물을 아세토니트릴:물 혼합물 중에 현탁시키고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 11 (35 mg, 39.11 μmol, 30.98% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 886.6 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.97 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.33 (ddd, J = 12.2, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.11 - 3.85 (m, 2H), 3.70 (d, J = 58.2 Hz, 4H), 3.21 (s, 4H), 2.93 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.85 - 2.65 (m, 2H), 2.67 - 2.52 (m, 1H), 2.49 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.90 (qd, J = 12.3, 4.7 Hz, 1H), 1.84 - 1.48 (m, 4H).

실시예 8. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 12)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (51.85 mg, 87.28 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (50 mg, 104.73 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (56.40 mg, 436.39 μmol, 76.01 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (43.14 mg, 113.46 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 포화 수성 중탄산나트륨 (60 mL)으로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 1 mL 물 + 1 mL 아세토니트릴을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 12 (20 mg, 21.48 μmol, 24.62% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 903.7 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.51 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.93 - 7.63 (m, 4H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 6.98 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.58 - 6.32 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.30 (td, J = 7.5, 3.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.85 - 3.45 (m, 4H), 3.25 (d, J = 34.8 Hz, 6H), 2.93 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.65 (m, 2H), 2.64 - 2.51 (m, 2H), 2.47 (m, 1H), 2.18 - 1.97 (m, 3H), 1.95 - 1.76 (m, 1H), 1.66 (m, 4H).

실시예 9. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 13)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (48.5 mg, 81.64 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (46.77 mg, 97.96 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (52.75 mg, 408.18 μmol, 71.10 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (40.35 mg, 106.13 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA)). 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (60 mL)로 중화시키고, 이소프로판올:클로로포름 혼합물 (1:4)로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 화합물을 물:아세토니트릴 혼합물 (1 mL:1 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 13 (15.5 mg, 16.65 μmol, 20.40% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+) : 903.6 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.78 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.94 (dd, J = 13.3, 1.9 Hz, 1H), 6.84 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.38 (dd, J = 7.9, 2.4 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.35 (ddd, J = 12.6, 7.9, 5.2 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.10 - 3.88 (m, 2H), 3.69 (d, J = 54.2 Hz, 4H), 3.26 (d, J = 31.5 Hz, 6H), 2.93 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.69 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.50 - 2.25 (m, 2H), 2.25 - 1.88 (m, 4H), 1.73 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 1.58 (q, J = 12.1 Hz, 2H).

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드와 산의 커플링을 위한 일반적 절차 A1

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (1 당량) 및 적절한 산 중간체 (1.2 당량)를 DMF (0.2 M) 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (5 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (1.3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 수성 NaHCO3으로 중화시키고, 이소프로판올:클로로포름 (1:4) 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 화합물을 아세토니트릴:물 혼합물 중에 현탁시키고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드와 산의 커플링을 위한 일반적 절차 B1

DMAc (0.2 M) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (1 당량) 및 적절한 산 중간체 (1.2 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (34.77 mg, 268.99 μmol, 46.85 μL) 및 (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트 (57.60 mg, 134.50 μmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시키고, 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 하기 조건 하에 정제하였다: 칼럼: 애질런트(Agilent) 정제용 C18 (50*21.2 mm, 5 μm). 용리액 혼합물: 물:아세토니트릴 중 10 mM 아세트산암모늄. 순수한 분획을 동결건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.

산을 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-1-옥소-6-(4-(피페리딘-4-일)페닐)이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드에 커플링시키는 일반적 절차:

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-1-옥소-6-(4-(피페리딘-4-일)페닐)이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (1 당량) 및 적절한 산 중간체 (1.2 당량)를 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (5 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (1.3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA)). 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 (1:1) 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 10. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 31)

단계 1: tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트

100-mL 둥근 바닥 플라스크에서, 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (3.1 g, 7.34 mmol) 및 tert-부틸 4-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트 (4.00 g, 9.91 mmol)를 디옥산 (44 mL) 중에 용해시키고, Pd(dppf)Cl_2.CH₂Cl₂ (299.77 mg, 367.08 μmol) 및 tBuXPhos (463.44 mg, 734.17 μmol)를 첨가하고, 이어서 물 (11 mL) 중에 용해시킨 탄산나트륨 (1.71 g, 16.15 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소로 탈기하였다. 반응물을 질소 유입구가 장착된 격막으로 캡핑하고, 가열 블록 상에서 80℃에서 5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 유기 층을 수성 층 뿐만 아니라 고체 침전물로부터 분리하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트 (3.6 g, 5.82 mmol, 79.26% 수율)를 연오렌지색 발포체로서 수득하였다. LCMS: 619.4 (M+H)

단계 2: [2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]

수산화리튬 (1 M, 5.82 mL)을 에탄올 (25 ml) 중 tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트 (3.6 g, 5.82 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 벤젠 중에 현탁시키고, 증발시켰다. 잔류물을 고진공에 적용하여 [2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (3.47 g, 정량적 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 590.9 (M+H)

단계 3: tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트

[2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (3.47 g, 5.82 mmol) 및 티아졸-2-아민 (640.73 mg, 6.40 mmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (3.01 g, 23.27 mmol, 4.05 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (2.88 g, 7.56 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 포화 수성 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하였다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (24 g, 디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 4.46 mmol, 77% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 673.2 (M+H)

단계 4: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드

tert-부틸 4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피페리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 4.46 mmol)를 1,4-디옥산 (10 mL) 및 메탄올 (10 mL) 중에 용해시켰다. 염화수소 용액 (1,4-디옥산 중 4.0 M, 8 mL, 32 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (3.2 g, 5.25 mmol, 정량적 수율)를 고밀도 고체로서 수득하였다.

단계 5: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (100 mg, 164.17 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 (98.05 mg, 213.43 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (106.09 mg, 820.87 μmol, 142.98 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (81.15 mg, 213.43 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 빙조에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 이소프로판올:클로로포름 혼합물 (1:4)로 2회 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 100% 디클로로메탄으로 플러싱한 24 g 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 구배를 사용하여 20분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 31 (62 mg, 68.20 μmol, 41% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 900.7 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.53 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.74 (m, 3H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.08 (m, 2H), 7.00 - 6.93 (m, 2H), 6.66 - 6.59 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.74 (dq, J = 8.1, 3.9 Hz, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 2H), 3.99 (dddd, J = 11.2, 8.2, 6.3, 3.1 Hz, 2H), 3.89 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 3.31 - 3.10 (m, 3H), 2.91 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.75 (ddt, J = 23.3, 11.9, 5.7 Hz, 2H), 2.63 - 2.44 (m, 4H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.16 - 2.00 (m, 4H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.86 (qd, J = 12.2, 4.8 Hz, 1H), 1.77 - 1.64 (m, 3H), 1.57 (q, J = 12.2 Hz, 3H).

실시예 11. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 32)의 합성

화합물 32를 2-[4-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 대신에 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염을 사용하고, 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드와 동일한 절차를 사용하여 47% 수율로 제조하였다. LCMS (ESI+): 900.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.77 - 4.68 (m, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.08 - 3.95 (s, 2H), 3.95 - 3.83 (m, 2H), 3.52 - 3.08 (m, 4H), 2.92 (m, 2H), 2.83 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.42 (m, 4H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.18 - 2.02 (m, 4H), 1.99 - 1.79 (m, 2H), 1.79 - 1.65 (m, 3H), 1.63-1.50 (m, 3H).

실시예 12. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 33)의 합성

화합물 33을 2-[4-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 대신에 2-[4-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염을 사용하고, 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드와 동일한 절차를 사용하여 36% 수율로 제조하였다. (54 mg, 59.40 μmol, 36.18% 수율). LCMS (ESI+): 900.6 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.73 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.96 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 2H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.46 (m, 1H), 3.33 - 3.10 (m, 3H), 2.91 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 2.82 - 2.66 (m, 3H), 2.62 - 2.42 (m, 3H), 2.33 (dd, J = 3.8, 1.9 Hz, 1H), 2.17 - 2.01 (m, 4H), 1.88 (ddd, J = 20.1, 15.0, 9.8 Hz, 2H), 1.77 - 1.64 (m, 3H), 1.64 - 1.49 (m, 3H).

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 A

화합물을 실시예 10, 단계 5의 합성에 사용된 방법을 사용하여 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드로부터 합성하였다.

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 B

DMF (0.1 M) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (1 당량) 및 산 중간체 (1.1 당량)의 용액에 주위 온도에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (5 당량)에 이어서 HATU (1.3 당량)를 첨가하였다. 반응물을 주위 온도에서 16시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고, 디클로로메탄 중 10% 메탄올 (50 ml)로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 역상 칼럼 상에서 물 중 40-50% 아세토니트릴 (0.1% TFA 상 개질제 함유) 중 화합물로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 동결건조시켜 고체를 수득하였으며, 이를 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 정제 방법: 칼럼: 조르박스 익스텐드(Zorbax Extend) C18 (50 x 4.6 mm) 5 μm, 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄, 이동상 B: 아세토니트릴. 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 13. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-3-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 34)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 A에 따라 52% 수율로 합성하였다.

LCMS (ESI+) 918.7 (M+H)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.82 - 7.70 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.49 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.00 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 3.7 Hz, 1H), 4.31 (td, J = 7.4, 3.8 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 3.30 - 3.08 (m, 3H), 2.92 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.66 (m, 2H), 2.62 - 2.41 (m, 3H), 2.15 - 2.02 (m, 5H), 1.88 - 1.79 (m, 1H), 1.87 (qd, J = 12.3, 4.6 Hz, 3H), 1.74 - 1.59 (m, 6H), 1.59 - 1.47 (m, 1H).

실시예 14. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 35)의 합성

LCMS (ESI+) 918.7 (M+H)

실시예 15. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 36)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 A에 따라 30% 수율로 합성하였다.

LCMS (ESI+) 901.5 (M+H)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.98 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.98 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.78 - 4.69 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 12.2, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.06 - 3.84 (m, 4H), 3.45 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.31 - 3.07 (m, 2H), 2.91 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.42 (m, 6H), 2.17 - 2.01 (m, 4H), 2.00 - 1.83 (m, 2H), 1.82 - 1.60 (m, 5H), 1.60 - 1.47 (m, 1H).

실시예 16. 2-(6-(4-((1-(2-(4-(2-시아노-4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 37)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 A에 따라 46% 수율로 합성하였다.

LCMS (ESI+) 925.5 (M+H)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.82 - 7.71 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.97 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.25 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.78 - 4.70 (m, 1H), 4.40 (ddd, J = 12.3, 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.00 (ddt, J = 10.5, 7.5, 4.6 Hz, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 2H), 3.46 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 3.30 - 3.13 (m, 3H), 2.96 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 3H), 2.64 - 2.45 (m, 3H), 2.20 - 2.02 (m, 4H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.70 (s, 5H), 1.55 (d, J = 8.8 Hz, 1H).

실시예 17. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4-디옥소-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄-1-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 38)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드의 산 중간체로의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 B에 따라 4.47% 수율로 합성하였다.

LCMS (ESI+) 912.2 (M+H)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.53 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 1.2, 12.4 Hz, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 4.82 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.77-4.68 (m, 1H), 4.24 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.97-3.88 (m, 2H), 3.28-3.27 (m, 3H), 2.97-2.81 (m, 4H), 2.80-2.71 (m, 3H), 2.15-2.01 (m, 4H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.75-1.61 (m, 4H), 1.61-1.49 (m, 4H).

실시예 18. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 39)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드와 산 중간체의 아미드 커플링을 위한 일반적 방법 B에 따라 39% 수율로 합성하였다.

LCMS (ESI+) 919.0 (M+H)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 12.56 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.80-7.73 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.47-6.43 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84-4.74 (m, 2H), 4.31-4.22 (m, 2H), 4.03-3.97 (m, 4H), 3.48-3.41 (m, 1H), 3.34-3.12 (m, 3H), 2.92-2.88 (m, 2H), 2.78-2.67 (m, 2H), 2.61-2.54 (m, 3H), 2.11-2.06 (m, 4H), 1.92-1.86 (m, 3H), 1.76-1.51 (m, 7H).

실시예 19. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 40)의 합성

단계 1: 에틸 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세테이트

디클로로메탄 (1 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜옥시)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (58 mg, 95.22 μmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (24.09 mg, 238.05 μmol, 33.18 μL) 및 에틸 2-클로로-2-옥소-아세테이트 (14.30 mg, 104.74 μmol, 11.72 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 클로로포름/이소프로판올 (4:1) 및 NaHCO₃ (수성)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 혼합물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올 용리액 구배를 사용하여 정제하여 에틸 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세테이트 (37 mg, 55.00 μmol, 58% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 673.2 (M+H).

단계 2: 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세트산 리튬 염

에탄올 (0.5 mL) 중 에틸 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(2-티에닐아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세테이트 (37 mg, 55.08 μmol)의 용액에 수산화리튬 (1 M 수용액, 61 μmol, 61 μL)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발 건조시켜 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세트산 리튬 염 (35.9 mg, 55.08 μmol, 정량적 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 645.2 (M+H).

단계 3: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-아세틸]-4-피페리딜]옥시]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]-1-피페리딜]-2-옥소-아세트산 리튬 염 (35.9 mg, 55.08 μmol) 및 3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온; 히드로클로라이드 (21.40 mg, 66.09 μmol)를 DMF (0.5 mL) 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (35.59 mg, 275.39 μmol, 47.97 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (27.23 mg, 71.60 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA)). 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 이소프로판올:클로로포름 혼합물 (1:4)로 2회 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시킨 다음, 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 (1 mL) 아세토니트릴을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 40 (25.7 mg, 27.84 μmol, 50% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 914.3 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.57 (s, 1H), 10.82 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 3H), 7.67 (s, 1H), 7.55 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.68 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 2H), 6.22 (s, 1H), 5.75 (dd, J = 7.5, 3.6 Hz, 1H), 4.94 - 4.79 (m, 2H), 4.48 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 2H), 4.13 - 3.99 (m, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 1H), 3.64 (t, J = 14.8 Hz, 2H), 3.57 - 3.34 (m, 3H), 3.28 (t, J = 13.3 Hz, 1H), 2.92 - 2.68 (m, 4H), 2.68 - 2.57 (m, 3H), 2.21 - 2.01 (m, 3H), 1.99 - 1.81 (m, 3H), 1.81 - 1.65 (m, 2H), 1.53 (dd, J = 15.6, 7.9 Hz, 2H).

실시예 20. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피롤리딘-3-일]옥시페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 41)의 합성

단계 1: tert-부틸 4-(4-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소에틸)-7-플루오로-3-옥소이소인돌린-5-일)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트

tert-부틸 (3R)-3-(4-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소에틸)-7-플루오로-3-옥소이소인돌린-5-일)페녹시)피롤리딘-1-카르복실레이트를 실시예 10, 단계 1에 사용된 절차를 사용하여 에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소이소인돌린-2-일)아세테이트 및 tert-부틸 (R)-3-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페녹시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (Cas# 1383793-73-4)로부터 43% 수율로 제조하였다. LCMS (ESI+): 605.3 (M+H)

단계 2: 2-[6-[4-[(3R)-1-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-3-일]옥시페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산

THF (3 mL) 및 메탄올 (3 mL) 및 물 (3 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피롤리딘-1-카르복실레이트 (600 mg, 992.28 μmol)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 1수화물 (41.64 mg, 992.28 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 농축시켰다. 조 잔류물을 5 ml 물 중에 용해시키고, KHSO₄ 염 (pH 1-2)을 사용하여 산성화시켰다. 용액을 여과하여 고체 화합물 2-[6-[4-[(3R)-1-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-3-일]옥시페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산 (450 mg, 522 μmol, 53% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 577.0 (M+H).

단계 3: (3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피롤리딘-1-카르복실레이트

DMF (2 mL) 중 2-[6-[4-[(3R)-1-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-3-일]옥시페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산 (200 mg, 346.85 μmol)의 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필 에틸 아민 (224.14 mg, 1.73 mmol, 302.08 μL) 및 에틸 아세테이트 중 프로필포스폰산 무수물, 50% 용액 (220.72 mg, 693.70 μmol)을 첨가하였다. 15분 후, 티아졸-2-아민 (34.73 mg, 346.85 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 첨가하여 침전을 수득하였다. 침전물을 여과에 의해 수집한 다음, 디클로로메탄 중에 용해시키고, 용액을 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해, 생성물을 3% 메탄올/디클로로메탄에서 용리시키면서 정제하였다. 적절한 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 (3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피롤리딘-1-카르복실레이트 (110 mg, 111.9 μmol, 32% 수율)를 수득하였다. LMCS (ESI+): 659.2 (M+H).

단계 4: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-[(3R)-피롤리딘-3-일]옥시페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드

디클로로메탄 (1.5 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페녹시]피롤리딘-1-카르복실레이트 (150 mg, 227.71 μmol)의 용액에 0℃에서 염화수소 용액 (디옥산 중 4.0 M, 426 μL, 1.71 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 고체 잔류물을 디에틸 에테르로 세척하여 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-[(3R)-피롤리딘-3-일]옥시페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (140 mg, 174.1 μmol, 76.5% 수율)를 수득하였다. LCMS m/z 559.2 (M+H)

단계 5: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피롤리딘-3-일]옥시페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

DMF (1 mL) 중 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 (63.84 mg, 138.97 μmol)의 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필 에틸 아민 (119.45 mg, 924.24 μmol, 160.99 μL) 및 COMU (118.75 mg, 277.27 μmol)를 첨가하였다. 15분 후, 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-[(3R)-피롤리딘-3-일]옥시페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (110 mg, 184.85 μmol)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 물 5 ml를 반응 혼합물에 첨가하였고, 고체 침전물이 형성되었다. 고체를 여과에 의해 수집한 다음, 디클로로메탄 중에 용해시키고, 용액을 농축시켰다. 조 물질을 역상 C-18 크로마토그래피 (물 및 아세토니트릴 중 0.1% 아세트산암모늄 0-100%)에 의해 정제하였다. 분획을 동결건조시켜 화합물 41을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 887.0 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 12.53 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.80-7.77 (m, 4H), 7.64 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.11-7.02 (m, 2H), 6.97-6.95 (m, 1H), 6.91-6.87 (m, 1H), 6.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.72-5.65 (m, 1H), 5.23-5.13 (m, 1H), 4.82 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.44-4.24 (m, 2H), 4.04-3.92 (m, 2H), 3.90-3.61 (m, 3H), 3.61-3.45 (m, 2H), 3.61-3.45 (m, 4H), 3.11-2.88 (m, 2H), 2.90-2.85 (m, 1H), 2.71-2.67 (m, 2H), 2.65-2.58 (m, 2H), 2.12-2.42 (m, 4H), 1.85-1.78 (m, 1H), 1.72-1.64 (m, 2H)

실시예 21. (2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 43)의 합성

단계 1: tert-부틸 (2S,4R)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-4-플루오로피롤리딘-1-카르복실레이트

tert-부틸 (2S,4R)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-4-플루오로피롤리딘-1-카르복실레이트를 중간체 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드, 단계 1에 사용된 것과 유사한 절차를 사용하여 tert-부틸 (2S,4R)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-피롤리딘-1-카르복실레이트 대신에 (2S,4R)-1-(tert-부톡시카르보닐)-4-플루오로피롤리딘-2-카르복실산 (CAS# 203866-14-2)을 사용하여 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 304.1 (M+H)

단계 2: 에틸 3-((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)-3-옥소프로파노에이트, 트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 (2S,4R)-2-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-4-플루오로피롤리딘-1-카르복실레이트 (11 g, 36 mmol)를 디클로로메탄 (150 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (50 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 2시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 증발시켜 에틸 3-((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)-3-옥소프로파노에이트, 트리플루오로아세트산 염 (7.36 g, 36 mmol, 정량적 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 204.1 (M+H).

단계 3: 에틸 (R)-2-(6-플루오로-3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

에틸 (R)-2-(6-플루오로-3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트를 중간체 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드, 단계 3에 사용된 것과 유사한 절차를 사용하여 에틸 3-((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)-3-옥소프로파노에이트, 트리플루오로아세트산 염으로부터 88% 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 245.1 (M+H)

단계 4: 에틸 (R)-2-(6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

에틸 (R)-2-(6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트를 중간체 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드, 단계 4의 합성에 사용된 것과 유사한 절차를 사용하여 47% 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z = 213 [M+H⁺], ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃: 7.51 (br. s, 1H), 5.79 (d, J = 51 Hz, 1H), 4.30-4.09 (m, 4H), 3.59 (br, s, 2H), 3.25-3.02 (m, 2H), 1.28 (t, J= 6.7 Hz, 3H).

단계 5: 에틸 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-히드록시이미노-아세테이트

에틸 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-히드록시이미노-아세테이트를 중간체 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드, 단계 5에 사용된 것과 유사한 절차를 사용하여 에틸 (R)-2-(6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트로부터 77.5% 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 242.1 (M+H⁺)

단계 6: 에틸 2-아미노-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세테이트

에틸 2-아미노-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세테이트 디히드로클로라이드를 중간체 에틸 2-아미노-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 디히드로클로라이드, 단계 6에 사용된 것과 유사한 절차를 사용하여 에틸 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-히드록시이미노-아세테이트로부터 29% 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 228.1 (M+H).

단계 7: 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트

에틸 2-아미노-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세테이트;디히드로클로라이드 (3.9 g, 4.02 mmol)를 DMF (10 mL) 중에 용해시켰다. 메틸 2-(브로모메틸)-3-플루오로-5-아이오도-벤조에이트 (1.20 g, 3.22 mmol)를 첨가하고, 이어서 N-에틸-N-이소프로필-프로판-2-아민 (2.08 g, 16.08 mmol, 2.80 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 단리시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 25% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 에틸 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트 (951 mg, 1.95 mmol, 48.55% 수율)를 수득하였다. LCMS: 1.253분, MS (ESI+): 488 (M+H)

단계 8: tert-부틸 4-[4-[2-[2-에톡시-1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

에틸 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트 (951 mg, 1.95 mmol) 및 tert-부틸 4-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (833.70 mg, 2.15 mmol)를 물 (2.5 mL) 및 1,4-디옥산 (7.5 mL) 중에서 혼합하였다. Pd(dppf)Cl₂ (99.97 mg, 136.63 μmol) 및 탄산칼륨 (269.75 mg, 1.95 mmol, 117.80 μL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 초음파처리 하에 질소로 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 tert-부틸 4-[4-[2-[2-에톡시-1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (436 mg, 701.33 μmol, 35.93% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 622.2 (M+H) / 522 (M-Boc+H)

단계 9: [2-[6-[4-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세틸]옥시리튬

tert-부틸 4-[4-[2-[2-에톡시-1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (435 mg, 699.73 μmol)를 에탄올 (5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 수산화리튬, 1 M (1 M, 699.73 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 조 잔류물을 벤젠 0.5 mL를 함유하는 디클로로메탄 중에 용해시키고, 감압 하에 증발시킨 다음, 고진공에 적용하여 [2-[6-[4-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세틸]옥시리튬 (410 mg, 683.84 μmol, 97.73% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 594.2 (M+H, 유리 산).

단계 10: tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-2-[1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

[2-[6-[4-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]아세틸]옥시리튬 (410 mg, 683.84 μmol) 및 티아졸-2-아민 (82.18 mg, 820.61 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (265.15 mg, 2.05 mmol, 357.34 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (312.02 mg, 820.61 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-2-[1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (315 mg, 419.54 μmol, 61.35% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 676.2 (M+H).

단계 11: 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드;히드로클로라이드

단계 11: (2RS)-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 염

디클로로메탄 (0.5 ml) 중 tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 37 μmol)의 용액에 디옥산 중 HCl 4 M (46.2 μl, 185 μmol, 당량: 5)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 조 (2RS)-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 염 (22.6 mg, 36.9 μmol, 99.7%)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e= 576.4 ([M+H]⁺).

단계 12: 2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)아세트산 히드로클로라이드

에틸 아세테이트 (8 ml) 중 tert-부틸 2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)아세테이트 (543 mg, 1.35 mmol, 당량: 1)의 용액에 실온에서 1,4-디옥산 중 4 M 염화수소 용액 (6.3 g, 6 ml, 24 mmol, 당량: 17.7)을 첨가하고, 교반을 주말 동안 계속하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)피페리딘-1-일)아세트산 히드로클로라이드 (537 mg, 1.27 mmol, 93.6% 수율)를 담적색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 346.2 ([M+H]⁺).

단계 13: (2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

실시예 1에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 표제 화합물인 화합물 43을 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 903.7 ([M+H]⁺).

실시예 22. 2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 44)의 합성

단계 1: 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드

tert-부틸 4-[4-[7-플루오로-2-[1-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (315 mg, 466.15 μmol)를 메탄올 (3 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 염화수소 용액 4.0 M (4 M, 5.6 mmol, 1.40 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였고, 반응이 완결되었다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (237 mg, 387.20 μmol, 83.06% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 576.2 (M+H)

단계 2: 2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (63 mg, 102.93 μmol) 및 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 (51.59 mg, 108.07 μmol)을 DMAc (0.6 mL) 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (66.51 mg, 514.63 μmol, 89.64 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (50.88 mg, 133.80 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 가온하면서 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 0%에서 100% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고; 고체 물질을 아세토니트릴:물 (1:1) 중에 용해시키고, 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 44 (22 mg, 23.41 μmol, 22.74% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 921.2 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.56 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.89 - 7.72 (m, 2H), 7.68 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.49 (dd, J = 3.6, 2.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 3.6, 1.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.98 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.56 - 6.31 (m, 2H), 6.17 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 51.1 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 17.6, 6.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.16 (m, 4H), 4.08 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.26 - 3.18 (m, 2H), 3.19 - 3.09 (m, 3H), 3.01 - 2.83 (m, 2H), 2.82 - 2.52 (m, 2H), 2.26 - 2.01 (m, 4H), 1.85 (qd, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H), 1.65 (m, 4H).

실시예 23. 2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 45)의 합성

2-[(6R)-6-플루오로-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일]-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (120 mg, 196.05 μmol) 및 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-3a,7a-디히드로인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (83.10 mg, 196.05 μmol)을 DMF (1.2 mL) 중에서 혼합하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (170.74 μL, 980.24 μmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (96.91 mg, 254.86 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 가온하면서 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 물 (+0.1% TFA) 중 0%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 수성 포화 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 화합물 45 (49 mg, 50.92 μmol, 25.97% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 943.3 (M+H⁺), LCMS (ESI-): 941.1 (M-H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.55 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 7.99 - 7.61 (m, 5H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.04 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.95 - 5.66 (m, 1H), 4.86 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.47 - 4.07 (m, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.90 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 3.29 - 3.08 (m, 4H), 3.13 - 2.84 (m, 3H), 2.75 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.72 - 2.55 (m, 1H), 2.18 (t, J = 10.9 Hz, 2H), 1.97 - 1.55 (m, 4H).

실시예 24. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 47)의 합성

단계 1: tert-부틸 6-(4-브로모페닐)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

1-브로모-4-아이오도-벤젠 (9.06 g, 32.01 mmol) 및 tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 헤미옥살레이트 (6.49 g, 13.34 mmol)를 톨루엔 (48 mL) 중에 현탁시키고, 반응 혼합물을 질소 스트림으로 탈기하였다. 소듐 tert-부톡시드 (12.82 g, 133.39 mmol)를 첨가하고, 고체가 대부분 용해되고 용액이 균질해질 때까지 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 초음파처리하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 (II) 디클로라이드 (1.95 g, 2.67 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 용액을 에틸 아세테이트로 세척하면서 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0%에서 50% 에틸 아세테이트 용리액 구배를 사용하여 정제하여 tert-부틸 6-(4-브로모페닐)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (6.25 g, 17.69 mmol, 66.32% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 353 / 355 (M+H, Br 패턴), ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.11 (s, 4H), 3.96 (s, 4H), 1.47 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 6-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

1,4-디옥산 (48 mL) 중 tert-부틸 6-(4-브로모페닐)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (6.2 g, 17.55 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (5.79 g, 22.82 mmol), 및 아세트산칼륨 (5.17 g, 52.65 mmol, 3.29 mL)의 용액에 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 (II) 디클로라이드 디클로로메탄 (716.65 mg, 877.56 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0%에서 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (6.32 g, 15.79 mmol, 89.95% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+) : MS (ESI+) : 400.3 / 401.3 / 402.3 (M+H, 붕소 패턴); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.03 (s, 4H), 3.96 (s, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.26 (s, 12H).

단계 3: tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트 (1.57 g, 3.35 mmol) 및 tert-부틸 6-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (1.74 g, 4.35 mmol)를 디옥산 (10 mL) 중에 용해시키고, tBuXPhos (422.40 mg, 669.16 μmol)를 첨가하고, 이어서 물 (2.5 mL) 중에 용해시킨 탄산나트륨 (780.16 mg, 7.36 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 (II) 디클로라이드 (293.69 mg, 401.49 μmol)를 첨가하였다. 반응물을 밀봉하고, 가열 블록 상에서 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (1.8 g, 2.92 mmol, 87.38% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 616.2 (M+H)

단계 4: [2-[6-[4-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬

단계 5: tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

티아졸-2-아민 (106.29 mg, 1.06 mmol) 및 [2-[6-[4-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (600 mg, 1.01 mmol)을 DMAc (5 mL) 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (522.56 mg, 4.04 mmol, 704.26 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (499.65 mg, 1.31 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃으로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-20% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (630 mg, 940.63 μmol, 93.06% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 670.3 (M+H).

단계 6: 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (86 mg, 128.40 μmol)를 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (585.64 mg, 5.14 mmol, 395.70 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 교반 하에 MTBE (10 mL)에 적가하였다. 침전물을 침강되도록 하고, 상청액을 경사분리하고, 폐기하였다. 생성된 고체를 고진공에 적용하여 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (107 mg, 134.14 μmol, 정량적 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 564.2 (M+H)

단계 6B: 2-[6-[4-(2-아세틸-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드의 합성

화합물 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (27 mg, 39.49 μmol, TFA 염) 및 아세트산 (5.93 mg, 98.73 μmol, 5.65 μL)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, DIPEA (25.52 mg, 197.46 μmol, 34.39 μL) 및 HATU (18.02 mg, 47.39 μmol)를 혼합물에 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물을 역상 칼럼 크로마토그래피 (50 g C18 칼럼, 용리액으로서 물 + 0.1% TFA 중 0%에서 100% 아세토니트릴)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 수성 포화 중탄산나트륨 용액 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 이어서, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (24 g 실리카 겔, EtOAc 중 0-20% MeOH)에 의해 정제하여 2-[6-[4-(2-아세틸-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (10.2 mg, 16.59 μmol, 42.01% 수율)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.51 (s, 1H), 7.73 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.66 - 7.62 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.68 - 6.38 (m, 2H), 6.14 (s, 1H), 4.79 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 4.21 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.14 - 3.85 (m, 8H), 2.88 - 2.69 (m, 1H), 2.58 - 2.37 (m, 1H), 1.75 (s, 3H). LCMS (ES⁺): m/z 612.2 [M + H]⁺.

단계 7: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (113 mg, 165.28 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 (91.12 mg, 198.34 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (106.81 mg, 826.42 μmol, 143.94 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (81.70 mg, 214.87 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA)). 목적 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시킨 다음, 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 4 mL 물 + 4 mL 아세토니트릴을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 47 (56 mg, 59.31 μmol, 35.88% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 897.4 (M+H), LCMS (ESI-): 895.3 (M-H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.44 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.42 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.47 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.08 (s, 1H), 5.57 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.36 (s, 2H), 4.30 - 4.07 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.96 (s, 6H), 3.91 (m, 1H), 2.92 (s, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.76 - 2.58 (m, 2H), 2.56 - 2.46 (m, 1H), 2.01 (m, 3H), 1.80 (m, 1H), 1.55 (m, 4H).

실시예 25. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 48)의 합성

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 트리플루오로아세트산 (40 mg, 58.51 μmol) 및 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 (33.52 mg, 70.21 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (37.81 mg, 292.54 μmol, 50.95 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (28.92 mg, 76.06 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% can (+0.1% TFA)). 목적 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 2회 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시킨 다음, 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 48 (27.9 mg, 30.19 μmol, 51.59% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+) : 915.3 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.51 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.74 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.50 - 6.34 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.43 (s, 2H), 4.30 (ddd, J = 12.1, 7.7, 4.8 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.08 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 2H), 3.16 - 2.83 (m, 4H), 2.83 - 2.64 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 1H), 2.22 - 1.97 (m, 3H), 1.86 (qd, J = 12.0, 4.5 Hz, 1H), 1.65 (s, 4H).

실시예 26. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 49)의 합성

2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (52.89 mg, 125.36 μmol)를 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (40.50 mg, 313.40 μmol, 54.59 μL)을 반응 혼합물에 첨가하였다. HATU (35.75 mg, 94.02 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 10분 동안 교반하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 비스 트리플루오로아세트산 염 (50 mg, 62.68 μmol, 062)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 0%에서 100% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 수성) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 증발시켜 화합물 49 (35 mg, 37.35 μmol, 59.59% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 937.2 (M+H), LCMS (ESI-): 935.2 (M-H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.45 (s, 1H), 10.46 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.08 (s, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.15 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.97 - 3.91 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.84 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.03 - 2.79 (m, 4H), 2.68 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 2.60 - 2.45 (m, 1H), 2.38 - 2.25 (m, 1H), 2.19 - 2.02 (m, 2H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 1.73 (s, 5H).

실시예 27. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드, 이성질체 2 (화합물 52)의 합성

화합물 52를 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)페닐)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드와 동일한 절차를 사용하여 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 이성질체 1 대신에 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드, 이성질체 2를 사용하여 19.5%로 합성하였다. LCMS (ESI+): 933.4 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.30 (ddd, J = 12.0, 7.6, 4.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 6H), 3.23 - 3.07 (m, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 2H), 2.88 - 2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.44 (m, 4H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.16 - 1.97 (m, 2H), 1.88 (qd, J = 12.2, 4.8 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 13.3 Hz, 1H).

실시예 28. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-(2-피리딜)아세트아미드 (화합물 53)의 합성

단계 1: tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(2-피리딜아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

DMF (3 mL) 중 1-옥시도피리딘-1-윰-2-아민 (43.67 mg, 396.58 μmol) 및 [2-[6-[4-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (214 mg, 360.53 μmol)의 용액에 주위 온도에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (186.38 mg, 1.44 mmol, 251.18 μL) 및 HATU (178.21 mg, 468.69 μmol)를 첨가하였다. 15분 후, 테트라히드록시디보론 (96.96 mg, 1.08 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물:염수 혼합물 (1:1)로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (24 그램, 디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(2-피리딜아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (175 mg, 263.66 μmol, 73.13% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 664.3 (M+H) / 608.3 (M-tBu+H)

단계 2: 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드, 비스-트리플루오로아세트산 염

tert-부틸 6-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(2-피리딜아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (120 mg, 180.79 μmol)를 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산 (278 μL, 3.61 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 압력 하에 증발시키고, 동결시키고, 고진공에 적용하여 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드, 비스-트리플루오로아세트산 염 (144 mg, 181.89 μmol, 정량적 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 564.3 (M+H)

단계 3: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-(2-피리딜)아세트아미드

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드 비스-트리플루오로아세트산 염 (111 mg, 163.80 μmol) 및 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 염 (93.84 mg, 196.56 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (105.85 mg, 819.01 μmol, 142.65 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (80.97 mg, 212.94 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA) 용리액 구배를 사용하는 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다. 목적 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름으로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 53 (4 mg, 4.18 μmol, 2.55% 수율, 95% 순도)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 909.4 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 10.71 (s, 2H), 8.37 - 8.09 (m, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.31 (m, 7H), 7.05 (dd, J = 7.3, 4.8 Hz, 1H), 6.92 (q, J = 11.4, 10.2 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.43 - 6.21 (m, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.23 (dt, J = 12.2, 6.8 Hz, 1H), 4.14 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.96 (s, 4H), 3.95 - 3.77 (m, 1H), 3.11 - 2.46 (m, 4H), 2.20 - 1.87 (m, 2H), 1.88 - 1.24 (m, 7H).

실시예 29. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-(2-피리딜)아세트아미드 (화합물 54)의 합성

2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (28.61 mg, 67.87 μmol)를 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (22.04 mg, 170.53 μmol, 29.70 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (19.45 mg, 51.16 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드, 비스 트리플루오로아세트산 염 (27 mg, 34.11 μmol)을 1 부분으로 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼에 주입하고, 0%에서 100% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% TFA 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 분획을 중탄산나트륨 (수성, 수성)으로 중화시키고, 수성 혼합물을 이소프로판올:클로로포름 혼합물 (1:4)로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하여 화합물 54 (16 mg, 16.33 μmol, 47.87% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 931.3 (M+H), LCMS (ESI-): 929.3 (M-H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.88 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 8.32 (ddd, J = 4.9, 1.9, 0.9 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.87 - 7.75 (m, 1H), 7.74 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.12 (ddd, J = 7.4, 4.9, 1.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 6.68 - 6.36 (m, 2H), 6.19 (s, 1H), 4.79 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.21 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 4.01 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.90 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.18 - 2.87 (m, 4H), 2.87 - 2.70 (m, 3H), 2.70 - 2.57 (m, 1H), 2.59 - 2.50 (m, 5H), 2.31 - 2.08 (m, 2H), 1.92 - 1.60 (m, 4H).

실시예 30. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 58)의 합성

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(피페라진-1-일메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 디히드로클로라이드 (48 mg, 74.47 μmol) 및 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (42.66 mg, 89.36 μmol)을 DMF (0.5 mL) 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (57.74 mg, 446.80 μmol, 77.82 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (36.81 mg, 96.81 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 (+0.1% TFA) 중 5%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% TFA)). 순수한 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 2회 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 1 mL 물 + 1 mL 아세토니트릴을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 58 (19.2 mg, 20.73 μmol, 27.84% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 917.2 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.53 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.81 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.50 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.00 (td, J = 14.1, 11.6, 6.5 Hz, 2H), 3.58 (d, J = 13.2 Hz, 5H), 3.47 (s, 3H), 3.14 (s, 2H), 2.88 (d, J = 10.9 Hz, 3H), 2.83 - 2.41 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.16 - 1.99 (m, 4H), 1.87 (ddd, J = 25.0, 12.1, 4.1 Hz, 1H), 1.72 - 1.51 (m, 4H).

실시예 31. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-에틸]피페라진-1-일]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 59)의 합성

단계 1: tert-부틸 2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페라진-1-일]아세테이트

DMAc (1 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(피페라진-1-일메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 디히드로클로라이드 (109.5 mg, 160.78 μmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (72.73 mg, 562.73 μmol, 98.02 μL) 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (34.50 mg, 176.86 μmol, 25.94 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 교반하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 클로로포름/이소프로판올 (4:1)로 희석하고, 수성 중탄산나트륨을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 혼합물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페라진-1-일]아세테이트 (64 mg, 93.32 μmol, 58% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 686.3 (M+H)

단계 3: N2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-에틸]피페라진-1-일]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페라진-1-일]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (78.79 mg, 91.86 μmol) 및 (3S)-3-[3-플루오로-4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온; 히드로클로라이드 (37.68 mg, 110.23 μmol)를 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (83.10 mg, 643.00 μmol, 112.00 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (45.40 mg, 119.41 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 RP C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (12분에 걸쳐 물 +0.1% TFA 중 5%에서 100% 아세토니트릴). 목적 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물 X2로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 1 mL 물 + 1 mL 아세토니트릴을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 59 (45 mg, 48.58 μmol, 52.89% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 917.3 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 2H), 7.76 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.45 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 6.03 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.83 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 2H), 4.16 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 2H), 3.59 - 3.46 (m, 3H), 3.44 - 3.23 (m, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 2H), 2.88 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.82 - 2.36 (m, 10H), 2.14 - 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.81 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 4H), 1.42 (m, 1H).

실시예 32. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 60)의 합성

단계 1: tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트

에틸 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)아세테이트 (400 mg, 852.43 μmol) 및 tert-부틸 4-[[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트 (461.86 mg, 1.15 mmol)를 디옥산 (4.8 mL) 중에 용해시키고, tBuXPhos (53.81 mg, 85.24 μmol)를 첨가하고, 이어서 물 (1.2 mL) 중에 용해시킨 탄산나트륨 (198.77 mg, 1.88 mmol, 78.56 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd(dppf)Cl₂ (31.18 mg, 42.62 μmol)을 첨가하였다. 반응물을 밀봉하고, 가열 블록 상에서 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0-20% 메탄올)에 의해 재정제하여 tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트 (380 mg, 616.16 μmol, 72.28% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 617.3 (M+H)

단계 2: [2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬

에탄올 (2.8 mL) 중 tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트 (380 mg, 616.16 μmol)의 용액에 수산화리튬 (1 M 수용액, 678 μmol, 678 μL)을 첨가하고, 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켜 [2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (366 mg, 616 μmol)을 황색 고체로서 정량적 수율로 수득하였다. LCMS (ESI+): 589.2 (M+H)

단계 3: tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트

[2-[6-[4-[(1-tert-부톡시카르보닐-4-피페리딜)메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (366.37 mg, 616.16 μmol) 및 티아졸-2-아민 (64.79 mg, 646.97 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (318.53 mg, 2.46 mmol, 429.29 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (304.57 mg, 801.01 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃-용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트 (250 mg, 372.69 μmol, 60.49% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 671.2 (M+H).

단계 4: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드

tert-부틸 4-[[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]메틸]피페리딘-1-카르복실레이트 (250 mg, 372.69 μmol)를 메탄올 (3 mL) 중에 용해시키고, 염화수소 용액 (디옥산 중 4.0 M, 652.67 μL, 2.62 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켰다. 물질을 고진공에 적용하고, -78℃로 동결시키고, 해동시켜 고밀도 고체를 수득하였다. 조 물질을 이스코(ISCO) 칼럼 (디클로로메탄:메탄올 = 100:0 → 50:50)에 의해 정제하여 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (157 mg, 258.59 μmol, 69.38% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 571.2 (M+H)

단계 5: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]메틸]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-[4-(4-피페리딜메틸)페닐]이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 히드로클로라이드 (47 mg, 77.41 μmol) 및 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (44.35 mg, 92.89 μmol)을 DMF 중에서 혼합하고, 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (50.02 mg, 387.06 μmol, 67.42 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, HATU (38.26 mg, 100.64 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 4-5 방울의 TFA로 산성화시키고, 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g C18) 상에 직접 주입하였다 (5%에서 100% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% TFA). 목적 분획을 수성 수성 NaHCO₃ (대략 60 mL)로 중화시키고, 1:4 이소프로판올:클로로포름 혼합물로 2회 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 고체를 수득하였다. 고체를 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 8 mL 바이알로 옮기고, 감압 하에 증발시켰다. 물 (1 mL) 및 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 완전히 초음파처리하고, 볼텍싱하고, 다시 초음파처리하였다. 현탁액을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 60 (44.9 mg, 48.52 μmol, 62.68% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 916.3 (M+H), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.78 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.50 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.83 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.29 (m, 2H), 4.25 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.12 - 3.93 (m, 3H), 3.21 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.10 - 2.84 (m, 4H), 2.82 - 2.66 (m, 3H), 2.65 - 2.54 (m, 6H), 2.07 (d, J = 10.7 Hz, 3H), 1.94 - 1.78 (m, 2H), 1.75 - 1.54 (m, 6H), 1.30 - 1.13 (m, 2H), 1.02 (m, 1H).

실시예 33. (2RS)-2-[4,7-디클로로-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 61)의 합성

단계 1: 4-브로모-3,6-디클로로-2-플루오로벤즈알데히드

테트라히드로푸란 (70 ml) 중 1-브로모-2,5-디클로로-3-플루오로벤젠 (CAS 202865-57-4) (9.414 g, 38.6 mmol)의 용액을 드라이 아이스/아세톤 조에서 냉각시켰다. THF 중 LDA, 2 mol/l (21.2 ml, 42.5 mmol, 당량: 1.1)를 첨가하고, 혼합물을 -75℃에서 20분 동안 교반하였다. N,N-디메틸포름아미드 (2.82 g, 2.99 ml, 38.6 mmol, 당량: 1)를 적가하고, 1시간 동안 교반하였다. 디에틸에테르 중 아세트산의 용액 (1:1, 10 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 4-브로모-3,6-디클로로-2-플루오로벤즈알데히드 (11.3 g, 41.6 mmol, > 100%)를 담황색 고체로서 수득하였다. 화합물을 후속 단계에 추가 정제없이 사용하였다.

단계 2: 6-브로모-4,7-디클로로-1H-인다졸

디옥산 (50 ml) 중 4-브로모-3,6-디클로로-2-플루오로벤즈알데히드 (실시예 33, 단계 1) (10.5 g, 38.6 mmol)의 용액에 히드라진 수화물 (CAS 10217-52-4) (3.86 g, 3.78 ml, 77.2 mmol, 당량: 2.0)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 히드라진 수화물 (3.86 g, 3.78 ml, 77.2 mmol, 당량: 2.0)을 첨가하고, 혼합물을 70℃로 7시간 동안 가온하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 물을 첨가하고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하였다. 고체에 소량의 아세토니트릴을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 소량의 아세토니트릴로 세척하고, 건조시켜 6-브로모-4,7-디클로로-1H-인다졸 (7.84 g, 29.5 mmol, 76.4%)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e= 267.0 ([M+H]⁺).

단계 3: 에틸 2-(6-브로모-4,7-디클로로-2H-인다졸-2-일)아세테이트

N,N-디메틸아세트아미드 (11.5 ml) 중 6-브로모-4,7-디클로로-1H-인다졸 (실시예 33, 단계 2) (7.84 g, 29.5 mmol) 및 에틸 2-브로모아세테이트 (CAS 105-36-2) (9.85 g, 6.53 ml, 59 mmol, 당량: 2)의 혼합물을 100℃로 25시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 얼음을 첨가하고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하였다. 조 물질을 비등 에탄올 중에 용해시켰다. 냉각시킨 후, 고체를 여과하고, 에탄올로 세척하고, 건조시켜, 에틸 2-(6-브로모-4,7-디클로로-2H-인다졸-2-일)아세테이트 (7.511 g, 21.3 mmol, 70.9%)를 수득하였다. MS: m/e= 267.0 ([M+H]⁺).

단계 4: tert-부틸 (2S)-2-[(2RS)-2-(6-브로모-4,7-클로로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트

테트라히드로푸란 (25 ml) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-프롤린 (CAS 15761-39-4) (4.93 g, 22.9 mmol, 당량: 1.55)의 용액을 빙조에서 냉각시켰다. 카르보닐디이미다졸 (3.71 g, 22.9 mmol, 당량: 1.55)을 첨가하였다. 냉각 조를 제거하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하여 용액 A를 수득하였다. 테트라히드로푸란 (7.5 ml) 중 에틸 2-(6-브로모-4,7-디클로로-2H-인다졸-2-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 3) (5.2 g, 14.8 mmol, 당량: 1)의 용액을 -75℃로 냉각시켰다. THF 중 LDA, 2 mol/l (11.4 ml, 22.9 mmol, 당량: 1.55)를 5분 내에 적가하였다. 혼합물을 -75℃에서 30분 동안 교반하였다. 용액 A를 5분 내에 적가하였다. 혼합물을 냉각 조에서 실온으로 밤새 가온되도록 하였다. 포화 수성 NH₄Cl-용액을 첨가한 후, 혼합물을 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축 건조시켜 tert-부틸 (2S)-2-[(2RS)-2-(6-브로모-4,7-클로로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (10.06 g >100%)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS: m/e= 550.2 ([M+H]⁺).

단계 5: 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

HCl, 디옥산 중 4 M (31.9 ml) 중 tert-부틸 (2S)-2-[(2RS)-2-(6-브로모-6,7-클로로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 4) (10 g, 18.2 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 에탄올 (87.5 ml) 중에 용해시키고, 티오시안산칼륨 (2.35 g, 24.2 mmol, 당량: 1.33) 및 HCl, 에탄올 중 0.5 M (36.4 ml, 18.2 mmol, 당량: 1)을 첨가하고, 36시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 건조시켜 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (8.534 g, 17.4 mmol, 95.6%)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS: m/e= 491.1 ([M+H]⁺).

단계 6: 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

40℃에서 AcOH (32.2 ml) 중 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 5) (8.53 g, 17.4 mmol)의 용액. 실온으로 냉각시킨 후, 과산화수소 35% (6.76 g, 6.09 ml, 69.6 mmol, 당량: 4)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 과량의 과산화수소는 포화 아황산나트륨 용액의 첨가에 의해 파괴되었다. 약간의 물 (모든 염을 용해시키기에 충분한 정도) 및 에틸아세테이트를 첨가한 후, 고체 탄산나트륨을 조심스럽게 첨가하여 혼합물을 pH 9로 만들었다. 혼합물을 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 크로마토그래피 (SiO₂, 헵탄 중 0-100% 에틸아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (3.21 g, 6.67 mmol, 40.3%)를 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e= 457.1 ([M+H]⁺).

단계 7: tert-부틸 4-[4-[4,7-디클로로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]인다졸-6-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

(2RS)-2-(6-브로모-4,7-디클로로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 6) (200 mg, 437 μmol) 및 (4-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)페닐)보론산 (CAS 457613-78-4) (401 mg, 1.31 mmol, 당량: 3)을 톨루엔 (5.3 ml)과 혼합하고, 초음파 처리 하에 혼합물을 통해 아르곤을 버블링하여 탈기하였다. [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II) (31.9 mg, 43.7 μmol, 당량: 0.1)을 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 115℃에서 40분 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸아세테이트로 희석하고, 반-농축 진한 탄산나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 에틸아세테이트 중 0%에서 100% 에틸아세테이트:메탄올 3:2)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[4-[4,7-디클로로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]인다졸-6-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (191.5 mg, 29.9 mmol, 63.1%)를 담갈색 고체로서 수득하였다. MS: m/e= 639.5 ([M+H]⁺).

단계 8: tert-부틸 4-[4-[4,7-디클로로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트

tert-부틸 4-[4-[4,7-디클로로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]인다졸-6-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 7) (190 mg, 0.297 mmol)를 THF 3 ml 중에 용해시켰다. LiOH (물 중 1 M) (0.45 ml, 0.446 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 N,N-디메틸포름아미드 3 ml 중에 용해시켰다. 티아졸-2-아민 (36 mg, 0.356 mmol, 1.2 당량) 및 휘니그 염기 (0.156 ml, 0.89 mmol, 3 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (136 mg, 0.356 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:메탄올 100:0에서 70:30 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물 (94 mg, 44% 수율)을 밝은 갈색 고체로 수득하였다. MS: m/e = 691.5 ([M+H]⁺).

단계 9: (2RS)-2-[4,7-디클로로-6-(4-피페라진-1-일페닐)인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 염

tert-부틸 4-[4-[4,7-디클로로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]페닐]피페라진-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 9) (92 mg, 0.133 mmol) 및 HCl (디옥산 중 4 M) (1.7 ml, 6.63 mmol, 50 당량)을 디클로로메탄 3 ml 및 메탄올 1.8 ml와 합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 목적 생성물 (93 mg, 정량적)을 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 591.4 ([M+H]⁺).

단계 10: tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트

단계 11: (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드

tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 10) (850 mg, 2.19 mmol) 및 HCl (디옥산 중 4 M) (5.48 ml, 21.9 mmol, 10 당량)을 빙조에서 0-5℃에서 메탄올 10 ml와 합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 목적 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (818 mg, 정량적, 순도 = 87%)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 286.1 ([M+H]⁺).

단계 12: tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트

N,N-디메틸포름아미드 4.0 ml 중 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (실시예 33, 단계 11) (200 mg, 0.618 mmol), tert-부틸 2-브로모아세테이트 (CAS 5292-43-3) (157 mg, 0.119 ml, 0.803 mmol, 1.3 당량) 및 휘니그 염기 (399 mg, 0.539 ml, 3.09 mmol, 5 당량)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 50:50에서 100:0 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (164 mg, 66% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 402.2 ([M+H]⁺).

단계 13: 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 염

에틸 아세테이트 (8 ml) 중 tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (실시예 33, 단계 12) (543 mg, 1.35 mmol, 당량: 1)의 용액에 실온에서 1,4-디옥산 중 4 M 염화수소 용액 (6.3 g, 6 ml, 24 mmol, 당량: 17.7)을 첨가하고, 교반을 주말 동안 계속하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 목적 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 (537 mg, 1.27 mmol, 93.6% 수율)을 담적색 고체로서 수득하였다. MS: m/e= 346.2 ([M+H]⁺).

단계 14: (2RS)-2-[4,7-디클로로-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드

(2RS)-2-[4,7-디클로로-6-(4-피페라진-1-일페닐)인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 염 (실시예 33, 단계 9) (50 mg, 0.08 mmol) 및 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 염 (실시예 33, 단계 13) (30 mg, 0.08 mmol, 1.0 당량)을 N,N-디메틸포름아미드 0.5 ml 중에 용해시켰다. 휘니그 염기 (0.07 ml, 0.4 mmol, 5 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (45 mg, 0.12 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃-용액으로 추출하고, 디클로로메탄:메탄올의 혼합물 (9:1)로 3회 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄:메탄올 100:0에서 80:20 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 61 (17 mg, 23% 수율)을 회백색 고체로 수득하였다. MS: m/e = 920.5 ([M+H]⁺).

실시예 34. (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-[6-[4-[4-옥소-4-[4-[1-옥소-2-[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]이소인돌린-4-일]옥시-1-피페리딜]부틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 62)의 합성

단계 1: 에틸 2-(6-브로모-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)아세테이트

표제 화합물을 6-브로모-7-플루오로-1H-인다졸로부터 출발하여 실시예 1, 단계 3에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 302.9 (M+H⁺).

단계 2: tert-부틸 (2S)-2-[(2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트

표제 화합물을 에틸 2-(6-브로모-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 1)로부터 출발하여 실시예 33, 단계 4에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 498.2/500.2 ([M+H]⁺) Br 동위원소.

단계 3: 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

표제 화합물을 tert-부틸 (2S)-2-[(2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 2)로부터 출발하여 실시예 33, 단계 5에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담황색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 439.2/441.2 ([M+H]⁺ 브로모 동위원소).

단계 4: 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

표제 화합물을 (2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 3)로부터 출발하여 실시예 33, 단계 6에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담갈색 무정형 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 407.2/409.2 ([M+H]⁺) 브로모 동위원소.

단계 5: tert-부틸 4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트

표제 화합물을 에틸 (2RS)-2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (실시예 33, 단계 4)로부터 출발하여 실시예 33, 단계 7에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담갈색 무정형 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 590.5 ([M+H]⁺).

단계 6: tert-부틸 4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트

표제 화합물을 tert-부틸 4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 5) 및 티아졸-2-아민으로부터 출발하여 실시예 33, 단계 8에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담갈색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 644.4 ([M+H]⁺).

단계 7: (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

표제 화합물을 tert-부틸 4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (실시예 33, 단계 6)로부터 출발하여 실시예 33, 단계 9에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 담갈색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 544.4 ([M+H]⁺).

단계 8: tert-부틸 4-[4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-일]부타노에이트

(2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (실시예 33, 단계 7) (50 mg, 0.092 mmol) 및 휘니그 염기 (0.080 ml, 0.046 mmol, 5 당량)를 N,N-디메틸포름아미드 1.0 ml 중에 용해시켰다. tert-부틸 4-브로모부타노에이트 (CAS 110661-91-1) (33 mg, 0.024 ml, 0.147 mmol, 1.6 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 추출하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄:메탄올 100:0에서 95:5 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물 (43 mg, 68% 수율)을 담갈색 오일로서 수득하였다.

단계 9: (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-[6-[4-[4-옥소-4-[4-[1-옥소-2-[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]이소인돌린-4-일]옥시-1-피페리딜]부틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

tert-부틸 4-[4-[5-[7-플루오로-2-[(1RS)-1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-일]부타노에이트 (실시예 33, 단계 8) (43 mg, 0.062 mmol)를 디클로로메탄 0.3 ml 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (148 mg, 0.10 ml, 1.3 mmol, 20 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물 및 (3RS)-3-[1-옥소-4-(4-피페리딜옥시)이소인돌린-2-일]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (CAS 1061605-57-9) (25 mg, 0.065 mmol, 1 당량)를 N,N-디메틸포름아미드 0.6 ml 중에 용해시켰다. 휘니그 염기 (0.11 ml, 0.62 mmol, 10 당량)를 첨가하고, 이어서 TBTU (22 mg, 0.069 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 추출하고, 디클로로메탄:메탄올의 혼합물 (9:1)로 3회 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 아미노-실리카 겔 칼럼 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄:메탄올 100:0에서 95:5 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 62 (30 mg, 50% 수율)를 회백색 포말체로서 수득하였다. MS: m/e = 955.6 ([M+H]⁺).

실시예 35. (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드의 합성

tert-부틸 4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]피페리딘-1-카르복실레이트 (실시예 35, 단계 1) (850 mg, 2.19 mmol) 및 HCl (디옥산 중 4 M) (5.48 ml, 21.9 mmol, 10 당량)을 빙조에서 0-5℃에서 메탄올 10 ml와 합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 목적 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (818 mg, 정량적, 순도 = 87%)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 286.1 ([M+H]⁺).

N,N-디메틸포름아미드 4.0 ml 중 (3RS)-3-[4-(4-피페리딜)아닐리노]피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (실시예 35, 단계 2) (200 mg, 0.618 mmol), tert-부틸 2-브로모아세테이트 (CAS 5292-43-3) (157 mg, 0.119 ml, 0.803 mmol, 1.3 당량) 및 휘니그 염기 (399 mg, 0.539 ml, 3.09 mmol, 5 당량)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트:헵탄 50:50에서 100:0 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (164 mg, 66% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 402.2 ([M+H]⁺).

단계 4: 2-[4-[4-[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드

에틸 아세테이트 8.0 ml 중 tert-부틸 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세테이트 (실시예 35, 단계 3) (543 mg, 1.35 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4 M) (6.3 g, 6 ml, 24 mmol, 17.7 당량)을 실온에서 첨가하고, 교반을 72시간 동안 계속하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 고진공 하에 건조시켰다. 목적 2-[4-[4-[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (정량적 수율)를 담적색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 346.2 ([M+H]⁺).

단계 5: (2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

(2RS)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[7-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (실시예 34, 단계 7) 및 2-[4-[4-[(3RS)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (실시예 35, 단계 4)로부터 출발하여 실시예 1, 단계 14에 기재된 것과 유사한 화학을 사용하여 표제 화합물인 화합물 63을 연회색 고체로서 수득하였다. MS: m/e = 871.7 ([M+H]⁺).

실시예 36. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 화합물 64의 합성

단계 1: 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)아세테이트

N,N-디메틸포름아미드 (170 mL) 중 6-브로모-4-플루오로-1H-인다졸 (15.0 g, 69.76 mmol) 및 에틸 2-브로모아세테이트 (46.60 g, 279.04 mmol, 30.86 mL)를 100℃에서 35시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 분쇄된 얼음에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 10% 중탄산나트륨 용액, 염수로 세척하고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (10-30% 에틸 아세테이트:석유 에테르)에 의해 정제하여 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)아세테이트 (11 g, 30.69 mmol, 44% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 303.0 [M+H], ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.66 (s, 1H0, 7.77 (s, 1H), 7.08 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.18 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 6.9 Hz, 3H).

단계 2: tert-부틸 2-[2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트

에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)아세테이트 (10 g, 33.21 mmol)를 테트라히드로푸란 (100 mL) 중에 용해시키고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 0.7 M, 142 mL, 99.63 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이때 황색 침전물이 관찰되었다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 별도의 용기에서, N-(tert-부톡시카르보닐)-L-프롤린을 테트라히드로푸란 (100 mL) 중에 용해시키고, 1,1'-카르보닐디이미다졸 (8.08 g, 49.82 mmol)을 교반 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. N-(tert-부톡시카르보닐)-L-프롤린/1,1'-카르보닐디이미다졸 반응 혼합물을 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)아세테이트 및 리튬 디이소프로필아미드가 들은 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, 실온에서 30시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (250 mL x 2)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (8 g, 14.45 mmol, 44% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): m/z 498.0 / 500.0 [M+H, Br 패턴]

단계 3: 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-옥소-3-피롤리딘-2-일-프로파노에이트 히드로클로라이드

tert-부틸 2-[2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-에톡시-3-옥소-프로파노일]피롤리딘-1-카르복실레이트 (16 g, 32.11 mmol)를 디클로로메탄 (160 mL) 중에 용해시키고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. HCl (디옥산 중 4.0 M, 32.1 mL, 128.43 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 9시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켜 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-옥소-3-피롤리딘-2-일-프로파노에이트 히드로클로라이드 (13.5 g, 23.29 mmol, 72.55% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 398.0 / 400.1 (M+H, Br 패턴).

단계 4: 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

티오시안산칼륨 (2.47 g, 25.43 mmol, 1.31 mL)을 물 (75 mL) 및 tert-부틸 알콜 (24.5 mL) 중 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-3-옥소-3-[피롤리딘-2-일]프로파노에이트 (6.75 g, 16.95 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃로 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄 중 10% 메탄올 용액으로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (2.9 g, 6.40 mmol, 38% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) M/z: 439.0 / 441.0 [M+H, Br 패턴], ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.11 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.11 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.31-4.19 (m, 2H), 3.81-3.69 (m, 2H), 2.62-2.80 (m, 2H), 2.49-2.39 (m, 2H), 1.20 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

단계 5: 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트

에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(3-티옥소-2,5,6,7-테트라히드로피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (5.9 g, 13.43 mmol)를 아세트산 (56 mL) 및 물 (19 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 -10℃로 냉각시켰다. 질소 분위기 하에, 과산화수소 (27% w/w 수성 안정화된 용액, 1.37 g, 40.29 mmol, 1.25 mL)을 적가하였다. 반응물을 -10℃에서 100분 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (4.1 g, 7.65 mmol, 69% 수율)를 갈색 검으로서 수득하였다. LCMS (ESI+) M/z: 407 [M+H])

단계 6: 2-[6-[6-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산

100-mL 밀봉된 튜브에서, 에틸 2-(6-브로모-4-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (2.2 g, 5.40 mmol) 및 tert-부틸 4-[5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (2.52 g, 6.48 mmol)를 디옥산 (32 mL) 및 물 (8 mL) 중에 용해시켰다. 탄산나트륨 (1.15 g, 10.80 mmol, 452.64 μL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 질소로 5분 동안 퍼징하였다. 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) (379.29 mg, 540.23 μmol)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 튜브를 밀봉하였다. 반응물을 가열 블록에서 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 1%에서 5% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-4-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 1.36 mmol, 25.2% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 590.0 [M+H]

단계 7: 2-[6-[6-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산

tert-부틸 4-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-4-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (1.1 g, 1.87 mmol)를 에탄올 (8 mL), 테트라히드로푸란 (8 mL), 및 물 (8 mL) 중에 용해시켰다. 수산화리튬 1수화물, 98% (156.56 mg, 3.73 mmol)를 주위 온도에서 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 5시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 중황산칼륨 용액을 사용하여 pH 5-6으로 조정하고, 혼합물을 10% 메탄올-디클로로메탄 (100 ml x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 고체를 에테르 중에서 교반하고, 에테르 층을 경사분리하고, 폐기하고, 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 화합물 2-[6-[6-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산 (0.75 g, 1.07 mmol, 57% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 561.9 (M+H).

단계 8: tert-부틸 4-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-4-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트

N,N-디메틸포름아미드 (7 mL) 중 2-[6-[6-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세트산 (0.2 g, 356.12 μmol)의 교반 용액에 카르보닐디이미다졸 (115.49 mg, 712.24 μmol)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 티아졸-2-아민 (46.36 mg, 462.96 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 3%에서 8% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-4-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (0.16 g, 245 μmol, 69% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 644.2 (M+H).

단계 9: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 0.5 mL, 2.0 mmol)를 0℃에서 디클로로메탄 (8 mL) 중 tert-부틸 4-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-4-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]피페라진-1-카르복실레이트 (0.15 g, 233.02 μmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물 온도를 실온으로 천천히 상승시키고, 추가로 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 디에틸 에테르 (15 mL)를 고체 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 에테르 층을 경사분리하고, 폐기하였다. 고체를 진공 하에 건조시켜 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (0.13 g, 221.9 μmol, 95.2% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): m/z 544.2 (M+H).

단계 10: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

N,N-디이소프로필에틸아민 (189.17 μL, 140.37 mg, 1.09 mmol)을 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (90 mg, 155.15 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (56.38 mg, 141.00 μmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. COMU (99.67 mg, 232.73 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 역상 실리카 겔 크로마토그래피 (C18, 0:100에서 100:0 아세토니트릴:물 중 0.1% 아세트산암모늄)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 풀링하고, 동결시키고, 동결건조시켰다. 잔류물을 추가로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. (정제 방법: 칼럼: 엑스-브리지 C8 (50X4.6 mm), 3.5 μm; 이동상 A: 밀리-q 물 중 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 아세토니트릴)에 의해 정제하여 화합물 64 (26 mg, 29.04 μmol, 19% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (m/z: 889.2, [M+H]), ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.01 - 12.66 (br. S, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.39 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.61 - 6.26 (m, 2H), 6.00 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.30 (dt, J = 11.8, 6.2 Hz, 1H), 4.14 - 3.90 (m, 2H), 3.68 (d, J = 30.0 Hz, 5H), 3.58 (s, 4H), 3.22 (s, 2H), 2.94 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.89 - 2.65 (m, 1H), 2.58 (m, 4H), 2.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.66 (s, 5H).

실시예 37. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 65)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (151.51 mg, 1.17 mmol, 204.19 μL)을 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (0.085 g, 146.53 μmol) 및 2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]페닐]-1-피페리딜]아세트산 트리플루오로아세트산 (50.61 mg, 110.16 μmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하였다. COMU (94.12 mg, 219.80 μmol)를 첨가하고, 온도를 실온으로 천천히 상승시키고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 역상 칼럼 (C18)에 의해 물 (0.1% TFA) 중 10에서 50% 아세토니트릴 (0.1% TFA) 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 분획을 동결건조시켜 건조 고체를 수득하였다. 10% 중탄산나트륨 용액을 첨가하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (x2)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 동결건조시켜 화합물 65 (10 mg, 9.84 μmol, 6.7% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 871.1 [M+H], ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.83 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 8.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 12.2, 1.1 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 11.7, 8.6 Hz, 3H), 6.71 (s, 1H), 6.61 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.27 (dt, J = 11.9, 6.7 Hz, 1H), 4.13 - 3.91 (m, 2H), 3.62 (q, J = 31.7, 26.3 Hz, 9H), 3.22 (s, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.85 - 2.69 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 2H), 2.52 (s, 4H), 2.20 - 2.01 (m, 2H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.78 - 1.47 (m, 3H).

실시예 38. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-피리딜]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 66)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (151.51 mg, 1.17 mmol, 204.19 μL)을 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (0.085 g, 146.53 μmol) 및 2-[4-[5-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-피리딜]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (50.76 mg, 110.24 μmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하였다. COMU (94.12 mg, 219.80 μmol)를 이어서 첨가하고, 온도를 실온으로 천천히 상승시켰다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 역상 칼럼 (C18)에 의해 물 (0.1% TFA) 중 10에서 50% 아세토니트릴 (0.1% TFA) 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 분획을 동결건조시켰다. 잔류물을 추가로 정제용 HPLC (정제 방법: 칼럼: 엑스브리지 C8 (4.6 x 50 mm), 3.5 μm; 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 아세토니트릴)에 의해 정제하여 화합물 66 (15.5 mg, 16.85 μmol, 11.50% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): m/z 872.1 [M+H]; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.85 (br. s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.08 - 7.84 (m, 2H), 7.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.08 (m, 2H), 7.05 - 6.79 (m, 3H), 6.69 (s, 1H), 5.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.33 (dt, J = 12.5, 6.0 Hz, 1H), 4.14 - 3.92 (m, 2H), 3.85 - 3.44 (m, 8H), 3.21 (s, 2H), 2.93 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.87 - 2.52 (m, 2H), 2.50 - 2.40 (m, 4H), 2.17 - 2.00 (m, 3H), 2.00 - 1.38 (m, 5H).

실시예 39. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 67)의 합성

N,N-디이소프로필에틸아민 (133.68 mg, 1.03 mmol, 180.16 μL)을 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-6-(6-피페라진-1-일-3-피리딜)인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (0.075 g, 129.29 μmol) 및 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (71.03 mg, 142.22 μmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하였다. COMU (83.06 mg, 193.94 μmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응물을 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 역상 실리카 겔 크로마토그래피 (C18, 물:아세토니트릴 중 1:1 0.1% 아세트산암모늄)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 동결건조시켜 화합물 67 (38.4 mg, 41.11 μmol, 32% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI-): m/z 909.3 [M-H]. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.82 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 7.61 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.29 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 12.2, 1.1 Hz, 1H), 7.13 - 7.02 (m, 1H), 6.99 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.09 - 3.98 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.91 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.71 (d, J = 29.0 Hz, 4H), 3.60 (s, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.01 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 2.89 - 2.71 (m, 3H), 2.67 - 2.53 (m, 2H), 2.27 - 2.12 (m, 2H), 1.89 - 1.68 (m, 4H).

실시예 40. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 69)

단계 1: tert-부틸 6-(5-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소에틸)-7-플루오로-2H-인다졸-6-일)피리딘-2-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트의 합성

50-mL 밀봉된 튜브에서, 1,4-디옥산 (8 mL) 중 에틸 2-(6-브로모-7-플루오로-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (0.83 g, 2.04 mmol) 및 [6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]보론산 (780.59 mg, 2.45 mmol)에 물 (2 ml) 중 탄산나트륨 (540.05 mg, 5.10 mmol, 213.46 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 10분 동안 탈기하였다. [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II), 디클로로메탄과의 착물 (166.43 mg, 203.81 μmol) 및 2-디-tert-부틸포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (86.55 mg, 203.81 μmol)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 질소로 5분 동안 추가로 탈기하였다. 튜브를 밀봉하고, 가열 블록에서 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 이를 수성 층으로부터 분리하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]-헵탄-2-카르복실레이트 (0.43 g, 630.35 μmol, 30.93% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 602.3 [M+H]⁺

단계 2: 리튬 2-(6-(6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트의 합성

에탄올 (3 mL) 및 테트라히드로푸란 (3 mL) 중 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (0.42 g, 698.06 μmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 수산화리튬 (1 M 수성, 0.9 mL, 907.47 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 고체를 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 추가로 연화처리하고, 경사분리하고, 건조시켜 리튬 2-(6-(6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세테이트 (0.38 g, 529.13 μmol, 93.9% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 574.3 [M+H]⁺

단계 3: tert-부틸 6-(5-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸)-7-플루오로-2H-인다졸-6-일)피리딘-2-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

N,N-디메틸포름아미드 (8 mL) 중 [2-[6-[6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (0.37 g, 638.43 μmol)의 교반 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (495.07 mg, 3.83 mmol, 667.21 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로-포스페이트 (364.12 mg, 957.64 μmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 티아졸-2-아민 (95.90 mg, 957.64 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 빙냉수를 첨가하고, 수득된 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 공기 스트림에 의해 건조시켰다. 조 고체 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 (디클로로메탄 중 0-8% 메탄올)를 사용하여 정제하여 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (0.23 g, 323.74 μmol, 50.71% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 656.3 [M+H]⁺.

단계 4: 2-(6-(6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드, 트리플루오로아세트산의 합성

디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-인다졸-6-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (0.12 g, 183.00 μmol)의 교반 용액에 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시킨 트리플루오로아세트산 (83.46 mg, 731.99 μmol, 56.39 μL)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물의 온도를 주위 온도로 천천히 상승시키고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, -40℃에서 디에틸 에테르로 연화처리하고, 경사분리하여 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 556.2 [M+H]⁺.

단계 5: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2-플루오로페닐)피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-7-플루오로-2H-인다졸-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드

0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 2-[4-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]아세트산; 히드로클로라이드 (48.84 mg, 122.14 μmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (138.96 mg, 1.08 mmol, 187.28 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (76.65 mg, 201.60 μmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (0.09 g, 134.40 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g) 상에 직접 주입하면서 용리시켰다 (15분에 걸쳐 0%에서 60% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% 아세트산암모늄, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 69 (60 mg, 64.82 μmol, 48.23% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 899.3 [M-H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ : δ 12.81 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.33 (t, J = Hz, 2H), 7.79 (d, J = 10.00 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 8.60, 6.80 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 8.40 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.53 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.48 (m, 2H), 6.01 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.31-4.30 (m, 1H), 4.16-4.14 (m, 4H), 4.09 (s, 2H), 4.02 (m, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.92-2.89 (m, 2H), 2.68-2.84 (m, 2H), 2.52-2.60 (m, 4H), 2.07-2.10 (m, 3H), 1.88 (m, 1H), 1.69-1.65 (m, 4H).

실시예 41. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 70)

단계 1: tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트

트리에틸아민 (3.23 g, 31.9 mmol, 4.44 mL)을 0℃에서 디클로로메탄 (25 mL) 중 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-옥소-피페리딘-1-카르복실레이트 (2.5 g, 10.6 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 트리플루오로메틸술폰산 무수물 (4.50 g, 15.9 mmol, 2.68 mL)을 반응 혼합물에 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 수성 중탄산나트륨으로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 4:1 헥산:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (1.2 g, 2.29 mmol, 21% 수율)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 6.59 (s, 1H), 4.29 (q, J = 4.3 Hz, 2H), 4.04 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H).

아세트산칼륨 (911 mg, 9.28 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (113 mg, 155 μmol)을 1,4-디옥산 (15 mL) 중 1-(6-브로모-1-메틸-인다졸-3-일)헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (1.0 g, 3.09 mmol) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (1.18 g, 4.64 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 1-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (1.1 g, 2.97 mmol, 96% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+): 371 (M+H).

탄산나트륨 (485 mg, 4.57 mmol)을 1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (2.5 mL) 중 1-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 (677 mg, 1.83 mmol) 및 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸술포닐옥시)-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (560 mg, 1.52 mmol)의 용액에 첨가하고, 용매를 N₂기체로 10분 동안 폭기하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 (II) 디클로라이드 (111 mg, 152 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물/에틸 아세테이트로 희석하였다. 추출 후, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (100% 헥산에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (480 mg, 1.04 mmol, 68% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 462.2 (M+H)

탄소 상 팔라듐, 10% (유형 487, 건조) (331 mg, 311 μmol)을 메탄올 (10.3 mL) 중 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-2,6-디히드로피리딘-1-카르복실레이트 (478 mg, 1.04 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 수소 풍선 분위기 하에 주위 온도에서 24시간 동안 교반하였다. 수소 풍선을 제거하고, 혼합물을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고, 슬러리를 추가로 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 디클로로메탄/메탄올 (3:1)의 용액을 사용하여 세척하고, 농축시켜 tert-부틸 4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르복실레이트 (450 mg, 94% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+): 408.2 (M - tert-부틸 + H).

단계 6: tert-부틸 2-(4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세테이트

1-(6-(3,3-디플루오로피페리딘-4-일)-1-메틸-1H-인다졸-3-일)디히드로피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 히드로클로라이드 (1.75 g, 4.38 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (15 mL) 중에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (3.43 mL, 2.55 g, 19.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, tert-부틸 2-브로모아세테이트 (770 μL, 1.02 g, 5.25 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-(4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세테이트 (1.90 g, 3.97 mmol, 90.6%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 478.3 (M+H)⁺

단계 7: 2-(4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세트산, 트리플루오로아세트산 염

디클로로메탄 (5 mL) 중 tert-부틸 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세테이트 (100 mg, 209.42 μmol)의 교반 용액에 트리플루오로아세트산 (1.48 g, 1.0 mL, 12.98 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (90 mg, 155.00 μmol, 74.01% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 422.2 (M+H)⁺

단계 8: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (48.45 mg, 90.50 μmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (108.08 mg, 836.26 μmol, 145.66 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b] 피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (39.75 mg, 104.53 μmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (70 mg, 104.53 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g) 상에 직접 주입하면서 용리시켰다 (30분에 걸쳐 0%에서 60% 아세토니트릴 / 물 + 0.1% 아세트산암모늄, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 70 (41 mg, 42.08 μmol, 40.25% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 959.3 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ : δ 12.85 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 8.34 (dd, J = 9.60, 2.80 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.58 (d, J = 6.00 Hz, 2H), 7.52-7.51 (m, 1H), 7.29 (bs, 1H), 7.14-7.09 (m, 2H), 6.72 (bs, 1H), 6.55 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.16-4.12 (m, 6H), 4.04-4.02 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.93 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 3.26-3.23 (m, 4H), 3.01-2.98 (m, 1H), 2.84-2.83 (m, 1H), 2.76 (t, J Hz, 2H), 2.52-2.51 (m, 2H), 2.50-2.40 (m, 2H), 2.33-2.30 (m, 1H), 1.89-1.81 (m, 1H) (양성자 신호는 물 가려짐으로 인해 관찰될 수 없음).

실시예 42. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 71)

단계 1: 1-(3-플루오로-4-니트로페닐)피페리딘-4-온.

N,N-디메틸포름아미드 (80 mL) 중 피페리딘-4-온 (13 g, 131.14 mmol), 2,4-디플루오로-1-니트로-벤젠 (20.86 g, 131.14 mmol, 14.39 mL)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (67.80 g, 524.56 mmol, 91.37 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 가열 블록에서 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 냉수 (150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 염수 용액 (150 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 40% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 1-(3-플루오로-4-니트로페닐)피페리딘-4-온 (9.0 g, 36.65 mmol, 27.95% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 239.1 [M+H]⁺.

단계 2: tert-부틸 2-[1-(3-플루오로-4-니트로페닐)-4-히드록시-4-피페리딜] 아세테이트

둥근 바닥 플라스크에 테트라히드로푸란 (150 mL) 중 tert-부틸 아세테이트 (4.39 g, 37.78 mmol, 5.09 mL)를 채우고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 2 M 용액, 75.56 mmol, 38 mL)를 15분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (50 ml) 중 1-(3-플루오로-4-니트로-페닐) 피페리딘-4-온 (9.00 g, 37.78 mmol)을 반응 혼합물에 -78℃에서 첨가하고, 동일한 반응 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 천천히 가온하였다. 반응 혼합물을 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (600 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 사용하여 석유 에테르 중 0-50% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-(3-플루오로-4-니트로페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (11.91 g, 29.56 mmol, 77.28% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 355.1 [M+H]⁺.

단계 3: tert-부틸 2-[1-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트.

둥근 바닥 플라스크에 물 (4 mL), 에탄올 (20 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(3-플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (11.91 g, 33.62 mmol)를 채우고, Fe 분말 (9.39 g, 168.11 mmol, 1.19 mL), 염화암모늄 (5.40 g, 100.87 mmol, 3.53 mL)을 첨가하고, 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (80 mL), 중탄산나트륨 용액 (60 mL) 및 염수 (60 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 70% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (8.5 g, 24.63 mmol, 73.26% 수율)를 갈색빛 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 325.2 [M+H]⁺.

단계 4: tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

밀봉된 튜브에서, N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-3-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (4.50 g, 13.87 mmol)의 용액에 중탄산나트륨 (4.08 g, 48.55 mmol, 1.89 mL) 및 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (6.66 g, 34.68 mmol)을 첨가하였다. 반응 튜브를 밀봉하고, 가열 블록에서 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (200 ml)를 사용하여 추출하고, 염수 용액 (50 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 수집하고, 감압 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피를 사용하여 석유 에테르 중 0에서 70% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (5 g, 10.22 mmol, 73.66% 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 436.3 [M+H]⁺

단계 5: 2-(1-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일) 아미노)-3-플루오로페닐)-4 히드록시피페리딘-4-일) 아세트산; 히드로클로라이드

질소 하에 0℃에서 디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (300 mg, 688.88 μmol)의 교반 용액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 1.38 mL, 201.15 mg, 5.51 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 고체 잔류물을 수득하였다. 고체 잔류물을 디에틸 에테르 중에서 10분 동안 교반하고, 경사분리하고, 건조시켜 2-(1-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일) 아미노)-3-플루오로페닐)-4 히드록시피페리딘-4-일) 아세트산; 히드로클로라이드 (250.0 mg, 581.95 μmol, 84.48% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 380.1 [M+H]⁺

단계 6: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-3-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (43.47 mg, 104.53 μmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (108.08 mg, 836.26 μmol, 145.66 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로-포스페이트 (59.62 mg, 156.80 μmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (0.07 g, 104.53 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g) 상에 직접 주입하고, 30분에 걸쳐 물 중 0%에서 60% 아세토니트릴 (+0.1% 아세트산암모늄)로 용리시킨 다음, 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배로 용리시켰다. 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 생성물 화합물 71 (45 mg, 48.19 μmol, 46.10% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 917.3 [M+H]⁺; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆: δ 12.80 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.33-8.32 (m, 2H), 7.79 (d, J = 9.20 Hz, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 1.60, Hz, 1H), 6.74-6.73 (m, 3H), 6.59 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 6.00 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.31-4.26 (m, 1H), 4.15 (s, 4H), 4.09 (s, 2H), 4.04-4.02 (m, 2H), 3.18-3.15 (m, 2H), 2.95-2.93 (m, 2H), 2.84-2.76 (m, 2H), 2.52-2.51 (m, 2H), 2.22 (s, 2H), 2.09-2.08 (m, 1H), 1.98-1.97 (m, 1H), 1.75-1.73 (m, 2H), 1.64-1.61 (m, 2H) (물 가려짐).

실시예 43. 단계 1: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-7-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (100 mg, 149.33 μmol) 및 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (56.65 mg, 136.24 μmol)의 혼합물에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (57.90 mg, 447.99 μmol, 78.03 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로-포스페이트 (85.17 mg, 224.00 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (50 g)에 직접 주입하면서 용리시켰다 (30분에 걸쳐 물 중 0%에서 55% 아세토니트릴 (+0.1% 아세트산암모늄)로 용리시킨 다음, 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 74 (37.01 mg, 37.12 μmol, 24.86% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 915.3 [M-H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.81 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.33 (d, J = 4.80 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 4.80 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.12 (d, J = 1.60 Hz, 1H), 6.52-6.41 (m, 3H), 5.78 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.40 (s, 2H), 4.29-4.20 (m, 1H), 4.09 (bs, 4H), 4.02 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.00 (bs, 2H), 2.90-2.56 (m, 12H), 2.33 (s, 2H), 2.12-2.01 (m, 1H), 1.90-1.71 (m, 3H), 1.69-1.56 (m, 1H) (물 가려짐).

실시예 44. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 75)

단계 1: tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

라세미 혼합물 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (2 g, 4.59 mmol)를 키랄 SFC에 의해 분해하였다. tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 2.0 g을 아세토니트릴 22.0 ml 중에 용해시켰다. SFC 분리 조건: 칼럼: 룩스 A1 [250 x 10 mm, 5-마이크로미터 입자 크기]; 이동상: CO₂: 이소프로판올 (45:55); 유량: 12 g/분; 사이클 시간: 11.0분; 배압: 100 bar UV 수집, 파장: 254 nm; 부피: 주입당 0.4 ml;

제1 용리 세트의 분획을 압력 하에 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (850 mg, 1.84 mmol, 40.04% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.77 (s, 1H), 6.83 (t, J = 12.00 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.29-4.12 (m, 1H), 2.91-2.79 (m, 5H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.16-2.02 (m, 1H), 1.89-1.69 (m, 3H), 1.65 (d, J = 16.80 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H), 99.18%ee, 키랄 SFC에 의함 (Rt = 2.33 분), 비광회전: -46.2° [α]²⁰ _D

제2 용리 세트의 분획을 압력 하에 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (530 mg, 1.17 mmol, 25.52% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 436.0 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.78 (s, 1H), 6.84 (t, J = 13.20 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 2.92-2.77 (m, 5H), 2.73-2.63 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.18-2.03 (m, 1H), 1.87-1.73 (m, 3H), 1.64 (d, J = 18.00 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 99.13%ee, 키랄 SFC에 의함 (Rt = 4.92 분), 비광회전: +46.8° [α]²⁰ _D

단계 2: 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드

0℃에서 디클로로메탄 (15 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (600 mg, 1.38 mmol)의 교반 용액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M 용액, 1.72 mL, 6.89 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 (2 x 10 ml)로 2회 연화처리하였다. 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (610 mg, 1.09 mmol, 78.96% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H]⁺, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.03 (bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.70 (d, J = 15.20 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 11.40, 6.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.60, 4.40 Hz, 1H), 3.88-3.65 (m, 5H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 1H), 2.46 (s, 2H), 2.33 (bs, 2H), 2.10-2.08 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 2H).

단계 3: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (29.34 mg, 70.56 μmol)의 교반 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (69.48 mg, 537.59 μmol, 93.64 μL)을 첨가하였다. 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로-포스페이트 (38.33 mg, 100.80 μmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (45 mg, 67.20 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (120 g) 상에 직접 주입하였다 (45분에 걸쳐 물 중 0%에서 60% 아세토니트릴 (+0.1% 아세트산암모늄), 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 생성물 화합물 75 (38 mg, 40.98 μmol, 60.99% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 917.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) : δ 12.83 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.95 (dd, J = 8.80, 2.40 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 11.20 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.16 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.50 (d, J = 9.20 Hz, 2H), 6.45 (d, J = Hz, 1H), 5.79 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.29-4.21 (m, 1H), 4.14 (s, 4H), 4.12 (s, 2H), 4.09 (m, 2H), 2.85 (m, 7H), 2.51 (m, 2H), 2.22 (s, 2H), 2.09 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.62 (br d, J = 12.8 Hz, 2H).

실시예 45. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-인다졸-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 77)

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-인다졸-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (300 mg, 448.66 μmol) 및 2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (223.88 mg, 538.39 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (2.5 mL) 중에서 혼합하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (347.91 mg, 2.69 mmol, 468.89 μL)을 첨가하였다. HATU (221.77 mg, 583.25 μmol)를 첨가하고, 실온으로 가온하면서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 정제를 위해 C-18 칼럼 (100 g) 상에 직접 주입하였다 (30분에 걸쳐 0-45%의 아세토니트릴 / 물 + 0.1% 아세트산암모늄, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 합하고, 동결건조시켜 화합물 77 (102 mg, 108.41 μmol, 24.16% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 916.8 [M+H]⁺, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.81 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.40 Hz, 3H), 7.49 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 7.11 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.68-6.62 (m, 1H), 6.55-6.48 (m, 3H), 6.43-6.41 (m, 1H), 5.78 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.41-4.37 (m, 2H), 4.27-4.24 (m, 1H), 4.09-4.01 (m, 8H), 2.92-2.83 (m, 5H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.61-2.52 (m, 4H), 2.34-2.33 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 1H), 1.90-1.84 (m, 1H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.63 (s, 2H).

실시예 46. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 화합물 83

단계 1: 1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)피페리딘-4-온

테트라히드로푸란 (25 mL) 중 tert-부틸 아세테이트 (1.76 g, 15.11 mmol, 2.03 mL)의 교반 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 2 M, 12.59 mL)를 -78℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 45분 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (15 mL) 중에 용해시킨 1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)피페리딘-4-온 (3 g, 12.59 mmol)을 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (100-200 메쉬) 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 석유 에테르 중 30%에서 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (2.7 g, 7.01 mmol, 55.66% 수율)를 담황색 점착성 고체로서 수득하였다. LCMS (355.1 (M+H)+)

에탄올 (10 mL) 및 물 (2 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.5 g, 4.23 mmol)의 용액에 철 분말 (1.18 g, 21.16 mmol, 150.37 μL) 및 염화암모늄 (679.26 mg, 12.70 mmol, 443.96 μL)을 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (60 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (20 mL), 수성 중탄산나트륨 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 70% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.2 g, 3.44 mmol, 81.28% 수율)를 갈색 점착성 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 325.1 [M+H], ¹H NMR (DMSO-d₆) 8.02-7.89 (m, 2H), 7.23-7.05 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.55-3.43 (m, 2H), 3.22-3.19 (m, 2H), 2.36 (s, 2H), 1.88-1.64 (m, 3H), 1.41 (s, 9H).

N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1 g, 3.08 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 25 mL 밀봉된 튜브에서 중탄산나트륨 (517.94 mg, 6.17 mmol, 239.79 μL)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 60℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 2회 세척하고, 여과물을 감압 하에 35℃에서 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 칼럼 (100-200 메쉬) 상에서 65-70% 에틸 아세테이트:석유 에테르로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (760 mg, 1.67 mmol, 54.11% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z: 436.0 [M+H]. ¹H NMR (DMSO-d₆): 10.79 (s, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 6.52 (dd, J = 13.6 Hz, 3.6 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 3.7 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.30-4.19 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 4H), 2.78-2.51 (m, 3H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.95-1.63 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).

단계 5: 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드

디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1.0 g, 2.30 mmol)의 교반 용액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 400 mmol, 10 mL)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (900 mg, 2.16 mmol, 93.89% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z 380.2 (M+H)⁺.

단계 6: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]피페라진-1-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

둥근 바닥 플라스크에 들은 N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (115.49 mg, 277.73 μmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (195.79 mg, 1.51 mmol, 263.87 μL)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 1-[(1-(시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)-디메틸아미노-모르폴리노)] 우로늄 헥사플루오로포스페이트(324.39 mg, 757.45 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[4-플루오로-1-옥소-6-(4-피페라진-1-일페닐)이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 히드로클로라이드 (150 mg, 252.48 μmol)를 첨가하였다. 반응을 0℃에서 약 40분 동안 계속하였다. 냉수를 반응 혼합물에 첨가하고, 고체를 침전시키고, 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 흡인 하에 건조시켰다. 침전물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 정제 조건: 칼럼: 애질런트 C18 (50*21.2 mm), 5 마이크로미터 입자 크기. 이동상: 물:아세토니트릴 중 10 mM 아세트산암모늄. 수집된 순수한 분획을 동결건조시켜 화합물 83을 연황색 고체 (47 mg, 51.00 μmol, 20.20% 수율)로서 수득하였다. LCMS (m/z:917.3 (M-1)) ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.53 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.79-7.69 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.80 Hz, 2H), 6.86 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 2.40, 14.80 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 6.00, Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.78 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.83 (t, J = 17.60 Hz, 2H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02-3.96 (m, 2H), 3.73-3.68 (m, 4H), 3.44-3.34 (m, 2H), 3.44-3.23 (m, 5H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.78-2.67 (m, 2H), 2.58-2.52 (m, 3H), 2.13-2.02 (m, 1H), 1.89-1.65 (m, 5H).

실시예 47. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-1-피페리딜]-2-옥소-에틸]-4-피페리딜]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 85)

N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중 2-[4-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-1-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (130 mg, 199.65 μmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (129.01 mg, 998.23 μmol, 173.87 μL) 및 1-[(1-(시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)-디메틸아미노-모르폴리노)] 우로늄 헥사플루오로포스페이트(171.01 mg, 399.30 μmol)를 0°C에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 1-[1-메틸-6-(4-피페리딜)인다졸-3-일]헥사히드로피리미딘-2,4-디온 히드로클로라이드 (72.64 mg, 199.65 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 물 및 아세토니트릴 중 0.1% 아세트산암모늄 0-100%)에 의해 정제하였다. 화합물을 함유하는 분획을 동결시키고, 동결건조시켰다. 잔류물을 칼럼: 조르박스 익스텐드 C18 (50 x 4.6 mm) 5 μm, 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄, 이동상 B: 아세토니트릴을 사용하여 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 동결건조시켜 화합물 85 (4.81 mg, 5.07 μmol, 2.54% 수율)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 분석에 적용하였다. LCMS (ESI+): 924.3(M+H); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 12.50 (s, 1H), 10.55 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.83 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.61-4.53 (m, 1H), 4.27-4.22 (m, 2H), 4.01-3.91 (m, 7H), 3.34-3.17 (m, 3H), 3.00-2.97 (m, 5H), 2.78-2.75 (m, 4H), 2.33-2.17 (m, 3H), 1.91-1.70 (m, 9H).

실시예 48. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-에틸]-1-피페리딜]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 86)

단계 1: 메틸 2-(1-(4-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸)-7-플루오로-3-옥소이소인돌린-5-일)페닐)피페리딘-4-일)아세테이트

무수 톨루엔 (5 mL) 및 물 (1.5 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (400 mg, 764.35 μmol) 및 메틸 2-[1-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]-4-피페리딜]아세테이트 (411.91 mg, 1.15 mmol)의 잘 교반된 용액이 들은 100 mL 밀봉된 튜브에 질소 분위기 하에 주위 온도에서 아세트산칼륨 (225.04 mg, 2.29 mmol, 143.34 μL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N₂로 10분 동안 탈기하였다. 비스(트리-tert-부틸포스핀) 팔라듐 (0) (78.12 mg, 152.87 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 95℃에서 64시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 조 잔류물을 디에틸 에테르로 연화처리하여 메틸 2-[1-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-4-피페리딜]아세테이트 (205 mg, 295 μmol, 42.7% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 629.2 [M+H]⁺.

단계 2: 2-[1-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-4-피페리딜]아세트산

테트라히드로푸란 (2 mL) 및 메탄올 (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 메틸 2-[1-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-4-피페리딜]아세테이트 (200 mg, 318.11 μmol)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (1 M 수용액, 318 μL, 318.11 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 물질을 수득하였으며, 이를 추가로 물 5 mL 중에 용해시키고, 수성 중황산나트륨 (pH 5-6)을 사용하여 산성화시켰다. 침전된 고체를 여과하여 2-[1-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-4-피페리딜]아세트산 (150 mg, 244.03 μmol, 39.9% 수율)을 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 615.2 [M+H]⁺.

단계 3: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-1-피페리딜]-2-옥소-에틸]-1-피페리딜]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 2-[1-[4-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]페닐]-4-피페리딜]아세트산 (150 mg, 244.03 μmol)의 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (157.69 mg, 1.22 mmol, 212.52 μL) 및 1-[(1-(시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)-디메틸아미노-모르폴리노)] 우로늄 헥사플루오로포스페이트 (209.02 mg, 488.05 μmol)를 첨가하였다. 3-[3-플루오로-4-(4-피페리딜) 아닐리노] 피페리딘-2,6-디온 히드로클로라이드 (74.51 mg, 218.00 μmol)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 조 물질을 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 물 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산 0-100%)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조시켰다. 잔류물을 역상 정제용 HPLC에 의해 칼럼: 조르박스 익스텐드 C18 (50 x 4.6 mm), 5 μm, (이동상 A: 밀리-q 물 중 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 아세토니트릴)을 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 86 (4.57 mg, 5.04 μmol, 2.06% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 902.3 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.61 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.73 (d, J = 10.80 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.80 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J = 6.40 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.44 (d, J = 4.00 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.04 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 17.20 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.33 (d, J = 16.00 Hz, 1H), 4.20-3.99 (m, 3H), 3.81 (d, J = 12.00 Hz, 2H), 3.11 (t, J = 13.20 Hz, 1H), 2.87 (t, J = 10.40 Hz, 1H), 2.79-2.71 (m, 4H), 2.68-2.61 (m, 3H), 2.33 (d, J = 6.80 Hz, 2H), 2.09-2.07 (m, 1H), 1.92-1.90 (m, 2H), 1.88-1.71 (m, 5H), 1.68-1.32 (m, 2H), 1.31-1.24 (m, 3H).

실시예 49. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드 (화합물 87)

단계 1: tert-부틸 6-(5-브로모-2-피리딜)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

디메틸술폭시드 (10 mL) 중 tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (1.69 g, 8.52 mmol)의 교반 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (5.51 g, 42.62 mmol, 7.42 mL) 및 5-브로모-2-플루오로-피리딘 (1.5 g, 8.52 mmol, 877.19 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 분쇄 얼음에서 켄칭하였다. 고체가 침전되었고, 이를 여과하고, 건조시켜 tert-부틸 6-(5-브로모-2-피리딜)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (1.5 g, 4.14 mmol, 48.57% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (m/z: 356.1 [M+1]).

단계 2: [6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]보론산

밀봉된 튜브에서 1,4-디옥산 (7 mL) 중 tert-부틸 6-(5-브로모-2-피리딜)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (650 mg, 1.83 mmol)의 교반 용액에 반응 혼합물에 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (698.93 mg, 2.75 mmol)에 이어서 아세트산칼륨 (360.16 mg, 3.67 mmol, 229.40 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 20분 동안 탈기한 다음, Pd(dppf)₂Cl₂.CH₂Cl₂ (449.52 mg, 550.47 μmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 질소로 10분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 가열 블록 상에서 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 증발시켜 [6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]보론산 (810 mg, 1.14 mmol, 62.17% 수율)을 수득하였으며, 이를 분석에 적용하였다. LCMS 데이터 (m/z: 320.2 [M+1]).

단계 3: tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트

1,4-디옥산 (8 mL) 및 물 (2 mL) 중 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(4-플루오로-6-아이오도-1-옥소-이소인돌린-2-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (350 mg, 668.80 μmol) 및 [6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]보론산 (298.84 mg, 936.33 μmol)의 용액을 질소로 15분 동안 탈기하였다. 탄산나트륨 (212.66 mg, 2.01 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II), 디클로로메탄과의 착물 (87.02 mg, 106.55 μmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 질소 기체로 5분 동안 퍼징하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 고체를 여과하고, 고체를 물로 세척하고, 건조시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0-7% 디클로로메탄 및 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (160 mg, 224.60 μmol, 34% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z 671.3 (M+H)⁺.

단계 4: [2-[6-[6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬

에탄올 (3.2 mL) 중 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-에톡시-2-옥소-에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (440 mg, 713.50 μmol)의 용액에 수산화리튬 수용액 (1 M, 784.85 μL)을 첨가하고, 22℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 증발시켜 [2-[6-[6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (420 mg, 698 μmol, 98% 수율)을 수득하였다. LCMS : 598.2 (M+H).

단계 5: tert-부틸 6-(6-(2-(1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸)-7-플루오로-3-옥소이소인돌린-5-일)피리딘-3-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (2.5 mL) 중 [2-[6-[6-(2-tert-부톡시카르보닐-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일)-3-피리딜]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)아세틸]옥시리튬 (400.00 mg, 672.77 μmol) 및 2-티아졸 아민 (87.58 mg, 874.59 μmol)의 잘 교반된 용액이 들은 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 질소 분위기 하에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (542.95 mg, 672.77 μmol, 117.18 μL)을 첨가하였다. 프로필포스폰산 무수물 용액 (에틸 아세테이트 중 50 중량%) (521 μL, 874.59 μmol)을 0℃에서 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 빙냉수를 첨가하고, 침전된 고체를 여과하고, 감압 하에 건조시켜 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (290 mg, 380.47 μmol, 56.55% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 671.3 [M+H]⁺.

단계 6: 2-(6-(6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드의 합성

디클로로메탄 (3.0 mL) 중 tert-부틸 6-[5-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]-2-피리딜]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (280.00 mg, 417.44 μmol)의 잘 교반된 용액이 들은 25 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 트리플루오로아세트산 (475.97 mg, 4.17 mmol, 321.60 μL)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였으며, 디클로로메탄과 공증류시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하고, 경사분리하여 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (270 mg, 345.06 μmol, 82.66% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 571.2 [M+H]⁺.

단계 7: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-디옥소테트라히드로피리미딘-1(2H)-일)-1-메틸-1H-인다졸-6-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)아세틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)피리딘-3-일)-4-플루오로-1-옥소이소인돌린-2-일)-N-(티아졸-2-일)아세트아미드의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 2-[6-[6-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-3-피리딜]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드; 2,2,2-트리플루오로아세트산 (120 mg, 175.27 μmol), 및 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산; 2,2,2-트리플루오로아세트산 (80.25 mg, 175.27 μmol)의 잘 교반된 용액이 들은 10 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 N,N-디이소프로필에틸아민 (113.26 mg, 876.34 μmol, 152.64 μL)을 0℃에서 첨가하였다. 프로필포스폰산 무수물 용액 (에틸 아세테이트 중 50 중량%) (139.42 mg, 438.17 μmol)을 동일한 온도에서 반응 혼합물에 첨가하고, 실온으로 1시간 동안 가온하면서 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (100 g) 상에 직접 주입하면서 용리시켰다 (30분에 걸쳐 아세토니트릴 0% - 50% / 물 + 0.1% 아세트산암모늄, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 87 (48 mg, 48.95 μmol, 27.93% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 975.3[M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.53 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 8.54 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.60, 2.40 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.81 (d, J = 18.00 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.25-4.15 (m, 6H), 4.12 (s, 2H), 4.02-4.00 (m, 5H), 3.93 (t, J = 6.80 Hz, 3H), 3.21 (d, J = 8.40 Hz, 4H), 3.01-2.98 (m, 1H), 2.78 (t, J = 6.40 Hz, 4H), 2.51-2.50 (m, 2H), 2.35-2.30 (m, 1H), 1.89-1.80 (m, 1H).

실시예 50. 5-[2-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]에티닐]-N-[1-[2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세틸]-4-피페리딜]피리딘-2-카르복스아미드 (화합물 88)

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 5-[2-[2-[1-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-옥소-2-(티아졸-2-일아미노)에틸]-7-플루오로-3-옥소-이소인돌린-5-일]에티닐]-N-(4-피페리딜)피리딘-2-카르복스아미드 히드로클로라이드 (100 mg, 151.25 μmol) 및 2-[4-[3-(2,4-디옥소헥사히드로피리미딘-1-일)-1-메틸-인다졸-6-일]-3,3-디플루오로-1-피페리딜]아세트산, 트리플루오로아세트산 염 (80.98 mg, 151.25 μmol)의 교반 용액을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (117.29 mg, 907.51 μmol, 158.07 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 이어서 프로판포스폰산 무수물 (N,N-디메틸포름아미드 중 50%) (96.25 mg, 302.50 μmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼 (100 g)에 직접 주입하여 정제하였다 (30분에 걸쳐 아세토니트릴 중 0-50%, 물 (0.1% 아세트산암모늄)에 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 합하고, 동결건조시켜 화합물 88 (93 mg, 89.01 μmol, 58.85% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z 1028.3 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.58 (s, 1H), 8.84 (dd, J = 8.40, 30.00 Hz, 2H), 8.24-8.22 (m, 1H), 8.13-8.10 (m, 1H), 7.85-7.80 (m, 2H), 7.61-7.49 (m, 4H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 4.86 (d, J = 18.00 Hz, 1H), 4.40-4.38 (m, 1H), 4.28 (d, J = 18.40 Hz, 1H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.98-3.91 (m, 7H), 3.47 (d, J = 13.20 Hz, 2H), 3.28-3.12 (m, 3H), 3.02-2.99 (m, 1H), 2.78-2.73 (m, 4H), 2.68-2.65 (m, 2H), 2.51-2.50 (m, 2H), 2.36-2.18 (m, 1H), 1.92-1.45 (m, 6H).

실시예 51. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]-아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 98)

단계 1: 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산

0℃에서 디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (530 mg, 1.22 mmol)의 교반 용액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 1.52 mL, 6.09 mmol)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반되도록 하였다. 휘발성 물질을 회전 증발에 의해 제거하였다. 수득된 잔류물을 디에틸 에테르 (2 X 10 mL)로 2회 연화처리하였다. 고체 잔류물을 회전 진공 하에 건조시켜 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 (470 mg, 928.08 μmol, 76.26% 수율)을 청색빛 회색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.01(bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.70 (d, J = 15.60 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 12.00, 4.40 Hz, 2H), 3.79-3.61 (m, 2H), 3.41-3.38 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.30-2.19 (m, 2H), 2.09-2.06 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 3H).

단계 2: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 2,2,2-트리플루오로아세트산 (220 mg, 321.79 μmol), 및 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산; 히드로클로라이드 (160.58 mg, 386.15 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에서 혼합하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (207.95 mg, 1.61 mmol, 280.25 μL)을 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 프로필 포스폰산 무수물 용액 (에틸 아세테이트 중 50 중량%, 204.77 mg, 643.58 μmol)을 0℃에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (100 g) 상에 직접 주입하면서 용리시켰다 (30분에 걸쳐 0%에서 50% 아세토니트릴 + 0.1% 아세트산암모늄 / 물, 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 98 (88.39 mg, 93.64 μmol, 29.10% 수율)을 회백색 고체 화합물로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 931.3 [M+H]. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.58 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75-7.70 (m, 2H), 7.65 (d, J = 8.80 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 8.40 Hz, 2H), 6.50 (dd, J = 2.40, 14.80 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 2.40, 8.80 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.78 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.82-4.76 (m, 2H), 4.39 (bs, 2H), 4.26-4.20 (m, 2H), 4.09 (bs, 2H), 4.05-3.96 (m, 6H), 2.90-2.82 (m, 4H), 2.77-2.68 (m, 3H), 2.23 (bs, 2H), 2.14-2.01 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 1H), 1.80-1.72 (m, 3H), 1.67-1.56 (m, 2H). (양성자 신호는 물 가려짐으로 인해 관찰되지 않음)

실시예 52. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-(2-피리딜)아세트아미드 (화합물 99)

2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (110 mg, 264.52 μmol) 및 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-(2-피리딜)아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (179.25 mg, 264.52 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 혼합하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민 (170.93 mg, 1.32 mmol, 230.37 μL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (110.64 mg, 290.98 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 g C18 칼럼 상에 주입하고, 물 중 0%에서 100% 아세토니트릴 (+0.1% 트리플루오로아세트산) 물 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 (수성, 포화) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 에틸 아세테이트 중 0%에서 20% 메탄올)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 감압 하에 증발시켜 화합물 99 (80 mg, 83.89 μmol, 31.71% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI+) : 925.3 (M+H) / 463.4 (M/2+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.83 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 8.25 (ddd, J = 4.9, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.7, 7.4, 2.0 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.62 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.42 (m, 3H), 7.05 (ddd, J = 7.4, 4.9, 1.1 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 10.0, 8.7 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.43 (dd, J = 15.1, 2.6 Hz, 1H), 6.34 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.23 - 4.09 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 6H), 2.96 - 2.57 (m, 4H), 2.57 - 2.45 (m, 2H), 2.15 (s, 2H), 2.08 - 1.91 (m, 1H), 1.92 - 1.64 (m, 3H), 1.55 (d, J = 12.4 Hz, 2H).

실시예 53. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)-아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵트-안-6-일]-페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드 (화합물 103)

단계 1: tert-부틸 2-[1-(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

DMSO (50 mL) 중 tert-부틸 2-(4-히드록시-4-피페리딜) 아세테이트 (6.69 g, 31.06 mmol) 및 1,2,3-트리플루오로-5-니트로-벤젠 (5 g, 28.24 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (10.95 g, 84.71 mmol, 14.75 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (200 mL)에 부었다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 정제 없이 고진공 하에 건조시켜 tert-부틸 2-[1-(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (10.5 g, 24.81 mmol, 87.88% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 7.95 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 4.66 (s, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 2H), 3.25 ( d, J = 12.8 Hz, 2H), 2.37 (s, 2H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.41 - 1.40 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 2-(1-(4-아미노-2,6-디플루오로페닐)-4-히드록시피페리딘-4-일) 아세테이트

에틸 아세테이트 (100 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (10 g, 26.86 mmol)의 용액에 N₂ 분위기 하에 목탄 상 팔라듐, 10% (6.00 g, 4.94 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고, H₂로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H₂ (15Psi) 하에 25℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 tert-부틸 2-(1-(4-아미노-2,6-디플루오로페닐)-4-히드록시피페리딘-4-일) 아세테이트 (9.1 g, 25.24 mmol, 94.02% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 6.16 - 6.06 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.17 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.70 - 2.62 (m, 2H), 2.32 (s, 2H), 1.74 - 1.65 (m, 2H), 1.58 (br d, J = 12.4 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H).

단계 3: tert-부틸 2-(1-(4-((2,6-비스(벤질옥시)피리딘-3-일)아미노)-2,6-디플루오로페닐)-4-히드록시피페리딘-4-일)아세테이트

1,4-디옥산 (360 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (8.7 g, 25.41 mmol), 2,6-디벤질옥시-3-브로모-피리딘 (12.47 g, 33.68 mmol) 및 CS₂CO₃ (27.41 g, 76.23 mmol)의 교반 용액, 반응 혼합물을 질소로 15분 동안 탈기하였다. Xphos (1.34 g, 2.54 mmol) 및 Pd₂(dba)₃ (2.57 g, 2.54 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 질소로 5분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 물로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (200 x 2 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (12.75 g, 19.17 mmol, 75.5% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 632.2 [M + H]⁺, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 7.61 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 - 7.27 (m, 10H), 6.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.28 - 6.21 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 3.23 (t, J = 10.4 Hz, 2H), 2.76 - 2.68 (m, 2H), 2.33 (s, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 2H), 1.64 - 1.57 (m, 2H), 1.41 (s, 9H).

단계 4: tert-부틸 2-(1-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2,6-디플루오로페닐)-4-히드록시피페리딘-4-일)아세테이트

1,4-디옥산 (850 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디벤질옥시-3-피리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (12.75 g, 20.18 mmol)의 용액에 Pd/C (8.29 g, 68.24 mmol)를 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고, H₂로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 25℃에서 H₂ (15 Psi) 하에 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 모액을 진공 하에 농축시켜 tert-부틸 2-(1-(4-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)아미노)-2,6-디플루오로페닐)-4-히드록시피페리딘-4-일)아세테이트 (8.5 g, 16.49 mmol, 81.72% 수율)를 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 454.1 [M + H]⁺, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 10.80 (s, 1H), 6.30 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 6.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.44 - 4.39 (m, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.71 - 2.65 (m, 1H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 2.33 (s, 2H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)

단계 5: 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드

디클로로메탄 (2 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (200 mg, 441.04 μmol)의 교반 용액을 0℃에서 냉각시키고, 염화수소 (1,4-디옥산 중 4 M, 1.1 mL, 4.41 mmol)를 반응 혼합물에 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 수득된 고체를 디에틸 에테르 (30 mL)로 세척하여 조 고체 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (182 mg, 394.97 μmol, 89.56% 수율)를 수득하였다. 이 조 화합물을 후속 단계에 정제 없이 사용하였다. LCMS m/z: 398.1 [M+1]

단계 6: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]-페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2,6-디플루오로-페닐]-4-피페리딜]아세트산 히드로클로라이드 (98.81 mg, 227.76 μmol)의 용액에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (128.55 mg, 994.63 μmol, 173.25 μL)을 첨가하였다. 1-[(1-(시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)-디메틸아미노-모르폴리노)] 우로늄 헥사플루오로포스페이트 (159.74 mg, 372.98 μmol)를 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 10분 후, 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (170 mg, 248.66 μmol)을 동일한 온도에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 정제를 위해 C18 칼럼 (60 g) 상에 직접 주입하면서 용리시켰다 (30분에 걸쳐 물 중 아세토니트릴 0%에서 70% (+ 0.1% 아세트산암모늄), 이어서 100% 아세토니트릴로의 가파른 구배). 순수한 분획을 동결시키고, 동결건조시켜 화합물 103 (25.05 mg, 25.48 μmol, 10.25% 수율)을 회백색 고체 화합물로서 수득하였다. LCMS (ESI+): 949.3 [M+H]. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.53 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (d, J = 10.80 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.40 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 8.80 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 12.40 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.80 (d, J = 17.60 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.38-4.27 (m, 1H), 4.22 (d, J = 17.60 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 4.03-3.96 (m, 7H), 3.30-3.21 (m, 3H), 2.78-2.67 (m, 5H), 2.22 (s, 2H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.89-1.79 (m, 1H), 1.71-1.69 (m, 2H), 1.59-1.56 (m, 2H).

실시예 54. 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 이성질체 1 (화합물 173)

단계 1: 1,2-디플루오로-4-메톡시-5-니트로-벤젠

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 4,5-디플루오로-2-니트로-페놀 (500 mg, 2.86 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1.18 g, 8.57 mmol, 517.04 μL) 및 아이오도메탄 (1.22 g, 8.57 mmol, 533.33 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (20 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기 상을 물 (3 x 20 mL)에 이어서 염수 (3 x 20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 1,2-디플루오로-4-메톡시-5-니트로-벤젠 (550 mg, 2.91 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 8.23 (dd, J = 8.4, 10.0 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 6.8, 12.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H).

단계 2: tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 1,2-디플루오로-4-메톡시-5-니트로-벤젠 (550 mg, 2.91 mmol)의 용액에 tert-부틸 2-(4-히드록시-4-피페리딜)아세테이트 (626 mg, 2.91 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (645.54 mg, 4.99 mmol, 0.87 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 25℃로 냉각시킨 후, 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (20 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기 상을 물 (3 x 20 mL)에 이어서 염수 (3 x 20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1 g, 2.47 mmol, 85% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 385.1 [M + H]⁺

단계 3: tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

에탄올 (10 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1 g, 2.60 mmol)의 용액에 질소 하에 탄소 중 팔라듐, 10% (100 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 (15 psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에탄올 (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (1 g, 2.60 mmol, >98% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 355.1 [M + H]⁺

단계 4: tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트

아세토니트릴 (2 mL) 중 tert-부틸 2-[1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시-페닐)-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (200 mg, 564.31 μmol) 및 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (217 mg, 1.13 mmol)의 용액에 중탄산나트륨 (142 mg, 1.69 mmol, 65.74 μL) 및 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (21 mg, 56.85 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 25℃로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1에서 1/4)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (200 mg, 421.04 μmol, 75% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 466.2 [M + H]⁺

단계 5: tert-부틸 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트, 이성질체 1 및 tert-부틸 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트, 이성질체 2

라세미 tert-부틸 2-[1-[4-[(2,6-디옥소-3-피페리딜)아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트를 키랄 SFC (이소프로판올 조건, 칼럼: 페노메넥스-셀룰로스-2 (250 mm x 30 mm, 10 μm); B%: 50%-50%; 4.0분, 25분)에 의해 분리하여 2 세트의 분획을 수득하였다. 제1 용리 세트의 분획을 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트, 이성질체 1 (100 mg, 212.67 μmol, 50% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다 (LCMS (ESI): m/z 466.1 [M+H] ⁺). 제2 세트의 분획을 증발시켜 tert-부틸 2-[1-[4-[[(3R)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트 (70 mg, 148.87 μmol, 35% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다 (LCMS (ESI): m/z 466.1 [M+H]⁺).

단계 6: 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산, 이성질체 1

디클로로메탄 (1.5 mL) 중 tert-부틸 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세테이트, 이성질체 1 (100 mg, 214.82 μmol)의 용액에 염산 (12 M, 0.1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 35℃에서 농축시켜 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산, 히드로클로라이드 (92 mg, 196.02 μmol, 91% 수율, HCl 염)를 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 410.1 [M + H]+

단계 7: 2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세틸]-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-6-일]페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 이성질체 1

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 2-[1-[4-[[2,6-디옥소-3-피페리딜]아미노]-2-플루오로-5-메톡시-페닐]-4-히드록시-4-피페리딜]아세트산, 이성질체 1, 히드로클로라이드 (92 mg, 206.34 μmol)의 용액에 0℃에서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (192.92 mg, 1.49 mmol, 260.00 μL) 및 에틸 아세테이트 중 프로필포스폰산 무수물, 50% (132 mg, 207.43 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, 2-[6-[4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)페닐]-4-플루오로-1-옥소-이소인돌린-2-일]-2-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-1-일)-N-티아졸-2-일-아세트아미드, 트리플루오로아세트산 염 (113 mg, 165.28 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 역상 칼럼 (유량: 40 mL/분; 구배: 28분에 걸쳐 물 중 5-51% 아세토니트릴; 칼럼: I.D. 31 mm x H 140 mm, 웰치 얼티메이트 Xb C18 20-40 μm; 120Å)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 화합물 173 (51.97 mg, 53.54 μmol, 26% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z 961.3 [M + H]⁺, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 12.50 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.70 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.50 (m, 3H), 6.14 (s, 1H), 5.07 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.83 - 4.74 (m, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.28 - 4.18 (m, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.04 - 3.92 (m, 6H), 3.79 (s, 3H), 3.23 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.00 - 2.91 (m, 2H), 2.91 - 2.82 (m, 2H), 2.82 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.72 (m, 2H), 2.56 (s, 1H), 2.43 (s, 1H), 2.23 (s, 2H), 2.17 - 2.08 (m, 1H), 1.98 - 1.84 (m, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.63 (d, J = 12.4 Hz, 2H).

실시예 55. 비소세포 폐암에서의 화합물 1의 효능

화합물 1은 시험관내 및 생체내에서 활성인 EGFR L858R의 강력하고 선택적인 분해제이다. 화합물 1은 EGFR에서의 저항성-유발 2차 돌연변이가 없는 EGFR L858R 구동 NSCLC의 모델에서, 및 2차 저항성 돌연변이 (예컨대 T790M 및 C797S)를 보유하는 유사한 모델에서 단일 작용제로서 활성이다. 화합물 1은 전선(front-line) 세팅에서 EGFR L858R 구동 NSCLC에서 활성일 수 있고 EGFR 억제제에 의해 관찰된 저항성-유발 2차 EGFR 돌연변이의 출현을 회피할 수 있을 뿐만 아니라 EGFR 억제제에 대한 저항성의 세팅에서도 그러하다.

비소세포 폐암 (NSCLC) 세포주-유래 이종이식편 (NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M)에서의 화합물 1 생체내 효능을 3가지 상이한 농도: 20 mg/kg/일, 50 mg/kg/일, 및 100 mg/kg/일에서 평가하였다. 화합물 1을 BID (1일 2회) 경구로 (PO) 투여하였다. 화합물 1의 효능을 오시메르티닙 (25 mg/kg/일로 투여됨)과 비교하였다. NCI-H1975의 결과는 도 1에 제시된다. 표 11은 각각의 용량에 대한 실험의 통계적 유의성을 기재한다. 모든 20, 50 및 100 mg/kg의 화합물 1로의 처리는 감소된 종양 부피를 생성하였다.

표 11. 비히클과 비교한 화합물 1의 통계적 유의성

NCI-H1975 세포에 대해, 이종이식편 연구를 NCI-H1975 NSCLC 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스에서 수행하였다. 암컷 누드 마우스의 우측 측복부에 0.1 mL의 PBS 중 5 x 10⁶개의 종양 세포를 피하 접종하였다. 종양 부피를 캘리퍼를 사용하여 2차원으로 매주 2회 측정하고, 부피 (mm³)를 하기 식을 사용하여 계산하였다: V = 0.5 a x b², 여기서 a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경 (mm)임. 종양이 181 mm³의 평균 종양 부피에 도달하면 (이식 후 13일), 동물을 무작위로 6개의 군으로 나누고, 각각의 처리군에서 대략 동일한 평균 종양 크기가 되도록 계층화하였다. 처리는 제0일에 181 mm³의 평균 종양 부피 (MTV)를 갖는 확립된 피하 NCI-H1975 종양으로 시작하였다.

모든 작용제를 NCI-H1975 종양을 보유하는 마우스에게 제0일에 투여하고, 14일 동안 매일 (오시메르티닙) 또는 1일 2회 (화합물 1) PO 투여하였다. 화합물 1을 20, 50, 또는 100 mg/kg/일로 투여하고, ddH2O 중 PEG400 (20% v/v) + 80% v/v SBECD (25% w/v) 중에 제제화하였다. 오시메르티닙을 25 mg/kg/일로 투여하고, 1% 트윈 80 중에 제제화하였다. 체중 및 MTV를 2x 매주 스케줄로 측정하였다. 일원 ANOVA를 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 데이터는 MTV ± SEM으로 표현된다.

실시예 56. 화합물 1은 비소세포 폐암 생체내 모델에서 강력한 EGFR-L858R 분해 및 포스포-EGFR 억제를 입증한다

화합물 1을 NCI-H1975 종양을 갖는 암컷 BALB/c 누드 마우스에게 10, 25 또는 50 mg/kg으로 단일 경구 (PO) 용량으로서 투여하였다. 4시간, 6시간 또는 12시간에 종양을 수거하고, 돌연변이 EGFR-L858R 및 포스포-EGFR의 단백질 발현을 웨스턴 블롯에 의해 측정하였다. 화합물 1은 4, 6 및 12시간에 강력한 EGFR 분해 및 포스포-EGFR 억제를 나타낸다.

이종이식편 연구를 NCI-H1975 NSCLC 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스에서 수행하였다. 암컷 누드 마우스의 우측 측복부에 0.1 mL의 PBS 중 5 x 10⁶개의 종양 세포를 피하 접종하였다. 종양 부피를 캘리퍼를 사용하여 2차원으로 매주 2회 측정하고, 부피 (mm³)를 하기 식을 사용하여 계산하였다: V = 0.5 a x b², 여기서 a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경 (mm)임. 종양이 363 mm³의 평균 부피에 도달하면, 동물을 단일 용량 연구를 위해 3개의 군으로 무작위로 나누었다.

모든 작용제를 NCI-H1975 종양을 보유하는 마우스에게 제0일에 단일 경구 (PO) 용량으로서 투여하였다. 화합물 1을 10, 25, 또는 50 mg/kg으로 투여하고, ddH2O 중 PEG400 (20% v/v) + 80% v/v SBECD (25% w/v) 중에 제제화하였으며, 이를 또한 비히클 대조군으로서 사용하였다. 오시메르티닙을 25 mg/kg으로 투여하고, 1% 트윈 80 중에 제제화하였다. 비히클 군의 경우, 3마리의 마우스를 희생시키고, 종양을 단일 투여 6시간 후에 수거하였다. 화합물 1 10 mg/kg 및 25 mg/kg 군의 마우스를 단일 투여 후 6- 및 12-시간에 샘플링하였고, 50 mg/kg 군은 단일 투여 후 4-, 6- 및 12-시간에 샘플링하였다. 오시메르티닙 25 mg/kg 군의 마우스를 단일 투여 후 4-, 6- 및 24-시간에 샘플링하였다. 샘플링된 각 시점마다 3개의 종양을 수집하였다. 이어서, 종양을 기계적으로 균질화하고, RIPA 완충제 (시그마 알드리치)를 사용하여 단백질을 추출하였다. 단백질 농도를 피어스(Pierce)™ BCA 단백질 검정 키트를 사용하여 정량화하고, 샘플을 환원시킨 다음, 동일한 단백질 양을 분석을 위해 웨스턴 블롯 겔 상에 로딩하였다. 종양을 EGFR 수용체 L858R 돌연변이체 특이적 (CST, 3197) 또는 포스포-EGFR 수용체 Tyr1068 (CST, 2234) 발현에 대해 분석하였다. 이미지 스튜디오(Image Studio) 소프트웨어를 사용한 데이터 분석을 위해 개별 밴드의 강도를 측정하였다. 단백질 발현을 참조 단백질인 알파-튜불린과 관련하여 정량화하여, 총 단백질 농도를 제어하였다. 이어서, 데이터를 비히클 대조군 샘플과 비교하여 화합물 1 처리된 샘플에서의 표적의 양에 대해 정규화하였다. 데이터는 비히클 대조군에 존재하는 표적의 퍼센트로서 나타내어지고, 총 단백질에 대해 정규화된다. 오차 막대는 ± SEM 값을 나타낸다.

실시예 57. 삼중 돌연변이 EGFR 모델에서의 화합물 1의 효능

조작된 삼중 돌연변이 EGFR (L858R-T790M-C797S) BaF3 종양에서의 화합물 1 및 화합물 2 효능을 3가지 상이한 농도: 20 mg/kg/일, 50 mg/kg/일, 및 100 mg/kg/일에서 평가하였다. 각각의 화합물을 BID (1일 2회) 경구로 (PO) 투여하였다. 화합물 1 및 화합물 2의 효능을 오시메르티닙 (25 mg/kg/일로 경구 투여됨)과 비교하였다. BaF3 종양에서의 화합물 1에 대한 결과는 도 3에 제시된다. 표 12는 각각의 용량에 대한 실험의 통계적 유의성을 기재한다. 모든 20, 50 및 100 mg/kg의 화합물 1로의 처리는 감소된 종양 부피를 생성하였다.

표 12. 비히클과 비교한 화합물 1의 통계적 유의성

BaF3 종양에서의 화합물 2 투여의 결과는 도 4a 및 도 4b에 제시된다. 모든 20, 50 및 100 mg/kg의 화합물 2로의 처리는 감소된 종양 부피를 생성하였다.

BaF3 (EGFR-L858R-T790M-C797S) 세포에 대해, 동종이식편 연구를 BaF3 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 누드 마우스에서 수행하였다. 암컷 누드 마우스의 우측 측복부에 0.1 mL의 PBS 중 10 x 10⁶개의 종양 세포를 피하 접종하였다. 종양 부피를 캘리퍼를 사용하여 2차원으로 매주 2회 측정하고, 부피 (mm³)를 하기 식을 사용하여 계산하였다: V = 0.5 a x b², 여기서 a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경 (mm)임. 종양이 108 mm³의 평균 종양 부피에 도달하면 (이식 후 6일), 동물을 무작위로 6개의 군으로 나누고, 각각의 처리군에서 대략 동일한 평균 종양 크기가 되도록 계층화하였다. 처리는 제0일에 108 mm³의 평균 종양 부피 (MTV)를 갖는 확립된 피하 BaF3 종양으로 시작하였다.

모든 작용제를 BaF3 종양을 보유하는 마우스에게 제0일에 투여하고, 14일 동안 매일 (오시메르티닙) 또는 1일 2회 (화합물 1 및 화합물 2) PO 투여하였다. 화합물 1 및 화합물 2를 20, 50, 또는 100 mg/kg/일로 투여하고, ddH2O 중 PEG400 (20% v/v) + 80% v/v SBECD (25% w/v) 중에 제제화하였다. 오시메르티닙을 25 mg/kg/일로 투여하고, 1% 트윈 80 중에 제제화하였다. 체중 및 MTV를 2x 매주 스케줄로 측정하였다. 일원 ANOVA에 이어 던넷 다중 비교 검정을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 데이터는 MTV ± SEM으로 표현된다.

실시예 58. 화합물 1은 종양 세포의 두개내 주사에 의해 확립된 NCI-H1975-Luc 두개내 종양 모델에서 신속한 종양 퇴행을 입증한다

종양 세포를 마우스 전뇌에 두개내로 주사함으로써 확립된 NCI-H1975-루시페라제 발현 두개내 종양 모델에서의 화합물 1 효능을 2가지 상이한 농도: 100 mg/kg/일에서 평가하였다. 화합물 1을 BID (1일 2회) 경구로 (PO) 투여하였다. 군당 8마리의 마우스를 사용하였다. 두개내 종양 모델에서의 결과는 도 5a에 제시된다. 표 13은 각각의 용량에 대한 실험의 통계적 유의성을 기재한다. 두 용량 수준 100 mg/kg/일의 화합물 1로의 처리는 감소된 종양 부피를 생성하였다.

표 13. 비히클과 비교한 화합물 1의 통계적 유의성

2 μL RPMI-1640 배지에 현탁된 2 x 10⁵개 루시페라제-발현 NCI-H1975-luc 종양 세포를 암컷 BALB/c 누드 마우스의 우측 전뇌에 주사하였다. 종양 성장을 영상화 분석을 사용하여 모니터링하였다. 마우스에 15 mg/mL의 D-루시페린을 복강내 주사하고, 1-2% 이소플루란 흡입으로 마취시켰다. 루시페린 주사 10분 후에, 마우스를 IVIS 루미나(Lumina) III (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))을 사용하여 영상화하고, 총 생물발광 신호 (BLI, 광자/s)를 관심 영역 (ROI)에서 측정하였다. ROI로부터의 BLI를 정량화하고, 종양 부담의 지표로서 사용하였다. 종양 세포 접종 7일 후, 마우스를 27 x 10⁶개 광자/s의 평균 BLI를 갖는 8개의 군으로 무작위화하였다. 모든 작용제를 제8일에 NCI-H1975-luc 뇌 종양을 보유하는 마우스에게 투여하였다. 화합물 1을 100 mg/kg으로 경구로 (PO) 투여하고, ddH2O 중 PEG400 (20% v/v) + 80% v/v SBECD (20% w/v) 중에 제제화하였으며, 이를 또한 비히클 대조군으로서 사용하였다. 화합물 1을 BID (1일 2회) 투여하였다. 체중 및 MTV를 2x 매주 스케줄로 측정하였다. 만-휘트니 U 검정을 사용하여 통계적 분석을 계산하였다. 데이터는 생물발광 신호 (광자/s)로서 표현된다. 생성된 데이터는 도 5a 및 도 5b에 제시된다.

실시예 59. Ba/F3 EGFR 세포 생존율 검정

물질

RPMI 1640 배지, 세포 배양 플라스크, 및 384-웰 마이크로플레이트를 VWR (미국 펜실베니아주 래드너)로부터 구입하였다. 소 태아 혈청 (FBS)은 라이프 테크놀로지스 (미국 캘리포니아주 칼스배드)로부터 구입하였고, 셀타이터-글로®는 프로메가 (미국 위스콘신주 매디슨)로부터 구입하였다. Ba/F3 모 세포주를 크라운바이오(CrownBio) (캘리포니아주 산타 클라라)로부터 구입하였다. EGFR 돌연변이 L858R, L858R-T790M, L858R-C797S, 및 L858R-T790M-C797S를 이소적으로 발현하는 BaF3 세포주는 크라운바이오로부터 구입하였고, EGFR 돌연변이 L858R-L718Q, L858R-T790M-L718Q, L858R-L792H, 및 L858R-T790M-L792H는 시그노시스(Signosis) (캘리포니아주 산타 클라라)로부터 구입하였다.

방법

세포 생존율을 셀타이터-글로® 검정 (프로메가, 미국 위스콘신주 매디슨)을 사용하여 ATP의 정량화에 기초하여 평가하였다. 세포 생존율에 대한 화합물의 효과를 결정하기 위해, 모든 Ba/F3 세포주를 RPMI 1640 + 10% FBS를 사용하여 384-웰 플레이트에서 2000개 세포/웰의 세포 밀도로 플레이팅하고, 10 mM로 설정된 최고 용량으로 72시간 동안 이중으로 10-포인트 반-로그의 일련의 희석물을 사용하여 관심 화합물로 처리하였다. 이어서, 셀타이터-글로® 시약을 첨가하고, 발광 신호를 엔비전™ 멀티모드 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머, 캘리포니아주 산타 클라라)를 사용하여 측정하였다. 데이터 정규화를 위해, 시간 = 72시간에서 시험 화합물로 비처리된 세포를 100% (72시간 후 최대 세포 성장과 동등함)로 설정하고; 시간 = 0시간에서 시험 화합물로 비처리된 세포를 0% (세포증식억제와 동등함)로 설정하고; 배지-단독 웰을 -100% (완전한 세포독성과 동등함)로 설정하였다. % 생존율은 동일한 마이크로타이터 플레이트 상에서 양성 및 DMSO 처리된 음성 대조군으로 신호를 정규화함으로써 결정하였다. 세포 성장의 반수-최대 억제 (GI50)는 피팅된 곡선이 50%를 넘은 곳으로부터 계산되는 반면, 반수-최대 치사 용량 (LD50)은 피팅된 곡선이 -50%를 넘은 곳으로부터 계산된다.

실시예 60. 키놈 선택성 검정 실험

화합물 1의 키놈-전반 결합 선택성을 유로핀스 디스커버엑스(Eurofins DiscoverX) (미국 캘리포니아주 프리몬트)에서 키놈스캔 스캔맥스 검정을 통해 평가하였다. 화합물을 468종의 키나제의 다양한 패널에 대해 100 nM에서 시험하였다. 원의 크기를 컷오프로서 % 대조군의 <50%를 사용하여 디스커버엑스 트리스팟을 이용하여 키나제 계통수 상에 맵핑하였다.

대부분의 검정을 위해, 키나제-태그부착된 T7 파지 균주를 BL21 균주로부터 유래된 이. 콜라이 숙주에서 24-웰 블록에서 병행 성장시켰다. 이. 콜라이를 대수기로 성장시키고, 동결된 원액으로부터의 T7 파지 (감염 다중도 = 0.4)로 감염시키고, 용해될 때까지 (90-150분) 32℃에서 진탕시키면서 인큐베이션하였다. 용해물을 원심분리하고 (6,000 x g), 여과하여 (0.2 μm) 세포 파편을 제거하였다. 나머지 키나제를 HEK-293 세포에서 생산하고, 후속적으로 qPCR 검출을 위해 DNA로 태그부착하였다. 스트렙타비딘-코팅된 자기 비드를 실온에서 30분 동안 비오티닐화 소분자 리간드로 처리하여 키나제 검정을 위한 친화성 수지를 생성하였다. 리간드된 비드를 과량의 비오틴으로 차단하고, 차단 완충제 (시블록(SeaBlock) (피어스(Pierce)), 1% BSA, 0.05% 트윈(Tween) 20, 1 mM DTT)로 세척하여 미결합 리간드를 제거하고, 비-특이적 파지 결합을 감소시켰다. 1x 결합 완충제 (20% 시블록, 0.17x PBS, 0.05% 트윈 20, 6 mM DTT) 중에서 키나제, 리간드된 친화성 비드 및 시험 화합물을 합하여 결합 반응을 조립하였다. 시험 화합물을 100% DMSO 중 40x 원액으로서 제조하고, 직접 검정으로 희석하였다. 모든 반응은 폴리프로필렌 384-웰 플레이트에서 0.02 ml의 최종 부피로 수행하였다. 검정 플레이트를 1시간 동안 진탕시키면서 실온에서 인큐베이션하고, 친화성 비드를 세척 완충제 (1x PBS, 0.05% 트윈 20)로 세척하였다. 이어서, 비드를 용리 완충제 (1x PBS, 0.05% 트윈 20, 0.5 μM 비-비오티닐화 친화성 리간드) 중에 재현탁시키고, 30분 동안 진탕시키면서 실온에서 인큐베이션하였다. 용리액 중 키나제 농도를 qPCR에 의해 측정하였다. 생성된 데이터는 도 13a 및 도 13b에 제시된다.

실시예 61. A431 및 NCI-H1975 세포주에서의 화합물 1에 대한 전반적 프로테옴 실험

각각의 세포주를 DMSO 또는 화합물 1 (최종 농도 300 nM)로 5% CO₂ 하에 37℃의 인큐베이터에서 6시간 동안 이중으로 처리하였다. 6시간 인큐베이션 후에, 세포를 수거하고, PBS로 2회 세척하고, 액체 질소 중에서 급속 동결시켰다. 샘플을 용해 완충제 [8 M 우레아, 50 mM HEPS (pH 8.5), 50 mM NaCl, 1x 프로테아제 억제제 칵테일] 중에 재현탁시키고, 5분의 총 초음파처리 시간 동안 30초 온 및 30초 오프로 설정된 펄스에서 85% 진폭으로 4℃에서 초음파처리에 의해 용해시켰다. 용해물을 4℃에서 10분 동안 최대 속도로 원심분리하고, 상청액을 수집하고, 실온에서 1시간 동안 5 mM TCEP로 환원시킨 다음, 시스테인 잔기를 15 mM 아이오도아세트아미드 (실온, 암실, 30분)로 알킬화시켰다. 단백질 내용물을 메탄올-클로로포름 침전 및 후속 빙냉 아세톤 세척에 의해 추출하였다. 단백질 펠릿을 8 M 우레아, 50 mM HEPES (pH 8.5) 완충제 중에 재현탁시키고, 단백질 농도를 BCA 검정에 의해 측정하였다. 이어서, 샘플을 50 mM HEPES (pH 8.5)를 사용하여 4 M 우레아로 희석하고, 37℃에서 1시간 동안 엔도프로테이나제 Lys-C로 1/100 효소/단백질 비로 소화시켰다. 이어서, 혼합물을 50 mM HEPES (pH 8.5)를 사용하여 1 M 우레아로 희석하고, 트립신을 1/100 효소/단백질 비로 첨가하였다. 반응물을 37℃에서 밤새 인큐베이션하고, 5% (v/v)의 최종 농도로 포름산을 사용한 산성화에 의해 정지시켰다. 펩티드를 C18 셉팩 고체-상 추출 카트리지를 사용하여 정제하고, 스피드백 시스템을 사용하여 완전히 건조시켰다.

펩티드 탠덤 질량 태그 (TMT) 표지를 위해, 샘플당 100 μg의 펩티드를 200 mM HEPES (pH 8.5), 30% 아세토니트릴 (ACN) 및 특이적 TMT 시약 중 1 μg/μl 농도로 제조하였다. 실온에서 1시간 인큐베이션한 후, 반응물을 0.3% 히드록실아민으로 15분 동안 켄칭하고, 동등하게 혼합하였다. 혼합된 샘플을 C18 셉팩 고체-상 추출 카트리지를 사용하여 탈염시키고, 스피드백에서 완전히 건조시켰다. 건조된 펩티드를 5% ACN, 10 mM NH₄HCO₃ pH 8 중에 재현탁시키고, 3.5 μm 엑스브리지 펩티드 BEH C18 칼럼이 장착된 HPLC를 사용하여 염기성 pH 역상 크로마토그래피에서 분획화하였다. 96개의 분획을 수집하고, 이를 12개의 샘플로 통합하고, SepPAK C18 카트리지를 사용하여 탈염시킨 다음, 진공 원심분리를 통해 건조시켰다. 이어서, 샘플을 LC-MS/MS/MS 분석을 위해 16 μL의 5% 포름산 중에 재구성하였다.

각각의 샘플 6 μL를 오비트랩 퓨전 루모스 트리비드(Orbitrap Fusion Lumos Tribid) 질량 분광계에 커플링된 EASY-nLC 1200 LC 펌프에 탑재된 EASY-스프레이(Spray) C18 칼럼 (2 μm 입자 크기, 500 mm 길이 x 75 μm ID)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 펩티드를 3개의 섹션 (300분 동안 5 내지 25% ACN, 120분 동안 25-40% ACN, 및 30분 동안 95% ACN)으로 분할된 450분 구배를 사용하여 300 nL/분의 유량으로 분리하였다. 펩티드를 MS2 단편화를 위한 CID 및 TMT 리포터 이온 방출을 위한 동기 전구체 선택 기반 MS3 (SPS-MS3) 단편화를 위한 HCD를 사용하여 데이터 의존성 방법으로 수집하였다. 질량 분광계로부터 수득된 모든 데이터 파일을 하버드 의과 대학(Harvard Medical School)의 스티브 지지(Steve Gygi) 교수의 실험실에 의해 개발된 SEQUEST-기반 소프트웨어를 사용하여 가공하였다. 간략하게, 질량 스펙트럼을 역순으로 모든 단백질 서열 뿐만 아니라 공지된 오염물로 구성된 데이터베이스와 연결된 인간 비-중복 유니프롯 단백질 데이터베이스에 대해 검색하였다. 모든 SEQUEST 검색에서, 전구체 이온 저항성은 가변적 변형으로서 메티오닌 산화 (+15.9949 Da) 및 시스테인 카르바미도메틸화 (+57.0215 Da)를 포함하여 25 ppm으로 설정되었다. 리신 잔기 및 펩티드 N-말단 상의 TMT 태그 (+229.1629 Da)를 정적 변형으로서 설정하였다. 선형 판별 분석을 사용하여 펩티드-스펙트럼 매치 (PSM)를 수행하고, 2% 오류 발견율 (FDR)로 조정하였다. TMT 리포터 이온 강도는 각각에 대한 신호-대-잡음 비를 추출함으로써 정량화하였다. 이어서, 펩티드를 4% FDR 표적을 사용하여 단백질 군으로 붕괴시켰다. 생성된 데이터를 하기에 요약하였다:

표 14 프로테옴-범위 분해 선택성

* p-값 <0.001

⁺아마도 EGFR 억제의 생물학적 효과로 인함; 유사한 변화가 오시메르티닙 치료 시에 관찰됨

실시예 62. SALL4 분해

레날리도미드를 포함한 IKZF1/IKZF3 분해제의 IMiD® 부류에 의해 유도된 최기형성에 관련된 단백질인 Sal-유사 단백질 4 (SALL4)를 분해하는 화합물 1의 능력을 평가하기 위해 구체적 연구를 수행하였다 (Matyskiela et al., Crystal structure of the SALL4-pomalidomide-cereblon-DDB1 complex, Nature Structural and Molecular Biology, (2020) 27, 319-322). KELLY 세포에서의 SALL4의 내인성 발현을 CRISPR-Cas9를 사용하여 KELLY 세포주 (DSMZ ACC355)에 C-말단 HiBiT 태그를 첨가함으로써 결정하였다. 간략하게, 시험 화합물을 384-웰 플레이트에 10 μM의 최고 농도로 11 포인트, 반 로그 적정으로 이중으로 첨가하였다. HiBiT-태그부착된 SALL4를 발현하는 KELLY 세포를 384-웰 플레이트에 10% FBS 및 2 mM 피루베이트를 함유하는 RPMI 배지 중에 웰당 6000개 세포의 세포 밀도로 시딩하였다. 시험 화합물의 부재 하에 처리된 세포는 음성 대조군이었고, 배지만을 함유하는 웰은 양성 대조군이었다. 화합물 처리 후, 세포를 5% CO2 하에 37℃에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 나노-글로(Nano-Glo)™ HiBiT 용해 검정 시스템 (프로메가(Promega), N3050)을 사용하여 HiBiT 신호를 결정하고, 발광을 엔비전(EnVision)™ 다중표지 판독기 (퍼킨엘머, 미국 캘리포니아주 산타 클라라) 상에서 획득하였다. 남아있는 SALL4 (%)를 동일한 마이크로타이터 플레이트 상에서 양성 및 음성 대조군으로 신호를 정규화함으로써 결정하였다. 도 7의 데이터는 평균 ± SD로 표현된다. 곡선 피트 및 IC₅₀ 결정을 4 파라미터 회귀 분석에 의해 수행하였다.

실시예 63. GSPT1 분해

일부 소뇌 E3 리가제 조정제는 표현형적으로 관련된 오프-타겟 효과에 대한 잠재력을 갖는 G1에서 S로의 기 전이 1, GSPT1의 분해를 촉진하는 것으로 제시된 바 있다. 293T 세포에서의 GSPT1의 내인성 발현을 CRISPR-Cas9를 사용하여 293T 세포주 (ATCC CRL-3216)에 N-말단 HiBiT 태그를 첨가함으로써 결정하였다. 간략하게, 시험 화합물을 384-웰 플레이트에 10 μM의 최고 농도로 11 포인트, 반 로그 적정으로 이중으로 첨가하였다. HiBiT-태그부착된 GSPT1을 발현하는 293T 세포를 384-웰 플레이트에 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지 중에 웰당 6000개 세포의 세포 밀도로 시딩하였다. 시험 화합물의 부재 하에 처리된 세포는 음성 대조군이었고, 배지만을 함유하는 웰은 양성 대조군이었다. 화합물 처리 후, 세포를 5% CO2 하에 37℃에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 나노-글로(Nano-Glo)™ HiBiT 용해 검정 시스템 (프로메가(Promega), N3050)을 사용하여 HiBiT 신호를 결정하고, 발광을 엔비전(EnVision)™ 다중표지 판독기 (퍼킨엘머, 미국 캘리포니아주 산타 클라라) 상에서 획득하였다. 남아있는 GSPT1 (%)을 동일한 마이크로타이터 플레이트 상에서 양성 및 음성 대조군으로 신호를 정규화함으로써 결정하였다. 도 8의 데이터는 평균 ± SD로 표현된다. 곡선 피트 및 IC50 결정을 4 파라미터 회귀 분석에 의해 수행하였다.

실시예 64. 화합물 1 처리에 의한 종양 세포의 카로이드내 동맥 주사에 의해 확립된 NCI-H1975-Luc 두개내 종양 모델에서의 체중, 생물발광 신호 및 생존율의 측정

암컷 BALB/c 누드 마우스에 종양 발생을 위해 NCI-H1975-luc 세포 (100 μL PBS 중 1 x 10⁵개)를 경동맥내 주사에 의해 접종하였다. 종양 성장을 영상화 분석을 사용하여 모니터링하였다. 종양-보유 마우스를 칭량하고, 루시페린을 150 mg/kg의 용량으로 복강내로 주사하고, 산소 및 이소플루란의 혼합 기체로 마취시켰다. 루시페린 주사 10분 후에, 마우스를 IVIS 루미나 III 기계를 사용하여 영상화하고, 총 생물발광 신호 (BLI, 광자/s)를 관심 영역 (ROI)에서 측정하였다. ROI로부터의 BLI를 정량화하고, 종양 부담의 지표로서 사용하였다. 종양 세포 접종 20일 후, 마우스를 1.08 x 10⁶개 광자/s의 평균 BLI를 갖는 6개의 군으로 무작위화하였다. 화합물 1을 50 mg/kg으로 1일 2회 경구로 (PO) 투여하고, 비히클 대조군으로서 또한 사용된 이중 증류된 H₂Om 중 20% PEG400 + 80% (25% SBECD, "술포부틸에테르-β-시클로덱스트린")로 제제화하였다. 체중 및 MTV를 2x 매주 스케줄로 측정하였다. 생존 데이터를 또한 측정하고, 중앙 생존 기간 ± SEM으로 나타낸다.

실시예 65. 실시예66 공-결정화 연구에서 사용된 EGFR-L858R 단백질 발현 및 정제

돌연변이체 2xStrepII-TEV-EGFR (L858R/V948R) 단백질, 잔기 696-1022를 Sf9 곤충 세포에서 발현시켰다. 발현 2일 후, 4.8 L의 Sf9 세포를 수거한 다음, 1 mM MgCl₂, 뉴클레아제, 및 완전 프로테아제 억제제 정제 (로슈)와 혼합된 용해 완충제 (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 500 mM NaCl, 10% 글리세롤, 1 mM TCEP, 1 mM PMSF) 중에 재현탁시켰다. 용해물을 균질화하고, 용해시키고, 4℃에서 유지하면서 16,000 rpm에서 60분 동안 원심분리하였다. 상청액을 스트렙-탁틴®XT 비드와 함께 인큐베이션하고, 완충제 A (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 500 mM NaCl, 10% 글리세롤, 1 mM TCEP, 및 1 mM PMSF)로 광범위하게 세척하였다. 2xStrepII-TEV-EGFR (L858R/V948R) 단백질을 완충제 A 플러스 75 mM 비오틴으로 용리시켰다. 풀링된 용리 분획을 His-TEV 프로테아제와 함께 밤새 인큐베이션하였으며, 여기서 완전한 소화가 관찰되었다. 혼합물을 HisTrap 엑셀 (시티바(Cytiva)) Ni 세파로스 칼럼 상에 로딩함으로써 역 Ni-친화도에 적용하여 His-TEV 프로테아제를 제거하였다. 칼럼을 완충제 A로 세척하고, 통과액을 수집하였다. 절단된 물질을 농축시키고, SEC 완충제 (25 mM 트리스-HCl pH 8.0, 100 mM NaCl, 10% 글리세롤 및 1 mM TCEP)를 사용하여 하이로드 16/600 슈퍼덱스 200 pg 크기 배제 칼럼 상에 로딩하였다. 크로마토그램으로부터 단일 피크가 관찰되었다. 이 피크로부터의 분획을 풀링하고, 생성된 정제된 단백질을 6.3 mg/mL로 농축시키고, -80℃에서 급속 동결시켰다.

실시예 66. 화합물 1 및 오시메르티닙의 EGFR 결합 부분과 EGFR-L858R 단백질의 공결정화

농축된 EGFR (L858R/V948R) (6.3 mg/mL)을 얼음 상에서 60분 동안 2배 과량의 오시메르티닙에 이어서 1.5배 과량의 화합물 1의 알로스테릭 EGFR 결합 부분과 함께 인큐베이션하였다. 100 nL의 단백질-소분자 용액을 100 mM MES pH 6.5 및 25% PEG MME 2K를 함유하는 50 nL의 저장소 용액과 조합함으로써 20℃에서 시팅 드롭 증기 확산 방법을 사용하여 결정을 성장시켰다. 8일 후, 결정을 동결보호제로서 20% 에틸렌 글리콜로 수거하고, 액체 질소 중에서 급속 동결시켰다.

데이터를 NSLSii FMX 빔라인 17-ID-2에서 단결정으로부터 수집하고, DIALS를 사용하여 가공하였다. 문헌 [Winter, G.; Waterman, D. G.; Parkhurst, J. M.; Brewster, A. S.; Gildea, R. J.; Gerstel, M.; Fuentes-Montero, L.; Vollmar, M.; Michels-Clark, T.; Young, I. D.; Sauter, N. K.; Evans, G. DIALS: Implementation and Evaluation of a New Integration Package. Acta Crystallogr Sect D Struct Biology 2018, 74 (2), 85-97]을 참조한다. 분자 대체 검색 모델 PDB ID: 7JXP를 갖는 CCP4 스위트에서 페이저MR(PhaserMR)을 사용하여 단백질 복합체 구조를 해석하였다. 페이저MR 방법에 대해서는 문헌 [McCoy, A. J.; Grosse-Kunstleve, R. W.; Adams, P. D.; Winn, M. D.; Storoni, L. C.; Read, R. J. Phaser Crystallographic Software. J Appl Crystallogr 2007, 40 (4), 658-674]을 참조한다. 쿠트(Coot)에서의 모델 구축의 반복 라운드를 사용하여 구조를 정밀화한 후, Refmac5를 사용하여 정밀화하였다. 쿠트 방법에서의 모델 구축에 대해서는 문헌 [Emsley, P.; Cowtan, K. Coot: Model-Building Tools for Molecular Graphics. Acta Crystallogr Sect D Biological Crystallogr 2004, 60 (12), 2126-2132]을 참조한다. Refmac5 방법에 대해서는 문헌 [Winn, M. D.; Ballard, C. C.; Cowtan, K. D.; Dodson, E. J.; Emsley, P.; Evans, P. R.; Keegan, R. M.; Krissinel, E. B.; Leslie, A. G. W.; McCoy, A.; McNicholas, S. J.; Murshudov, G. N.; Pannu, N. S.; Potterton, E. A.; Powell, H. R.; Read, R. J.; Vagin, A.; Wilson, K. S. Overview of the CCP4 Suite and Current Developments. Acta Crystallogr Sect D Biological Crystallogr 2011, 67 (4), 235-242]을 참조한다. 검색 모델에 대해서는 PDB ID: 7JXP를 참조한다 (문헌 [Beyett, T. S.; To, C.; Heppner, D. E.; Rana, J. K.; Schmoker, A. M.; Jang, J.; Clercq, D. J. H. D.; Gomez, G.; Scott, D. A.; Gray, N. S.; Jaenne, P. A.; Eck, M. J. Molecular Basis for Cooperative Binding and Synergy of ATP-Site and Allosteric EGFR Inhibitors. Nat Commun 2022, 13 (1), 2530] 참조).

본 실험에 사용된 화합물 1의 EGFR 결합 부분은 하기 구조이다:

실시예 67. 시차 주사 형광측정법 (DSF)

EGFR (L858R)의 열 안정성을 시차 주사 형광측정법을 사용하여 측정하였다. 단백질을 DMSO와 함께 완충제 (100 mM HEPES pH 7.5 및 150 mM NaCl) 중에서 10 μM로 인큐베이션하여 단백질 단독의 안정성을 결정하였다. 또한, 단백질 (10 μM)을 각각의 화합물 (100 μM)과 개별적으로, 또는 조합으로, 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 단백질 안정성을 4x 시프로(SYPRO)™ 오렌지 염료 (써모 피셔)의 존재 하에 열 용융에 적합화된 ViiA7 실시간 PCR 시스템 (써모 피셔)을 사용하여 측정하였다. 20 μL의 반응을 마이크로앰프 옵티칼 384-웰 반응 플레이트 (어플라이드 바이오시스템즈)를 사용하여 사중으로 실행하였다. 온도를 25℃에서 99℃로 0.5℃ 간격으로 증가시키고, 형광 강도를 측정하였다. 사내 곡선 피팅 분석 소프트웨어를 사용하여 각각의 반응에서 단백질의 열 융점 (T_M)을 계산하였다.

DSF 표: 아포 단백질 (+DMSO; T_M = 45.4℃)과 비교한 열 안정성의 변화를 계산하고, ΔT_M (℃)으로서 보고하였다. 분해제 화합물 1 및 오시메르티닙 단독은 각각 5.8℃ 및 10.6℃의 안정화 효과를 나타냈다. 그러나, 조합 시 이들의 효과는 ΔT_M = 14.6℃를 산출하여 상가적이었으며, 이는 이들이 둘 다 EGFR에 동시에 관여할 수 있음을 시사한다.

실시예 68. 오시메르티닙의 존재 및 부재 하에서의 EGFR^L858R:화합물 1: CRBN-DDB1 3원 복합체 형성을 평가하기 위한 SPR 검정

단백질 & 시약

DDB1 (잔기 4-1143) (CRBN-DDB1) 및 EGFR^L858R (잔기 696-1022) 단백질과 복합체화된 CRBN (N-말단 Avi-태그를 갖는 잔기 1-442)을 각각 하이 파이브 (써모 피셔 사이언티픽) 및 Sf9 곤충 세포에서 재조합적으로 발현시키고, 후속적으로 정제하였다. 이어서, CRBN-DDB1 단백질 복합체를 비오티닐화하였다 (Btn-CRBN-DDB1). 오시메르티닙 및 화합물 1을 위한 원액을 DMSO 중 10 mM로 제조하였다. 이어서, DMSO로 희석하여 화합물 1의 100x 작업 원액을 1 μM, 3.16 μM, 10 μM, 31.6 μM 및 100 μM로 제조하였다.

SPR 실험

모든 SPR 실험은 구동 완충제 (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, 0.05% 트윈-20, 1% DMSO) 중에서 25℃에서 평형화된 비오틴-태그 포획 (BTC) 센서 칩을 갖는 브루커(Bruker) 시에라(Sierra) SPR-32 프로 기기를 사용하여 수행하였다. 모든 단계에 대한 유량은 달리 명시되지 않는 한 30 μL/분이다. Btn-CRBN-DDB1 단백질을 구동 완충제 중에 150 μg/mL로 희석하고, 예비-컨디셔닝된 BTC 센서의 2개의 센서 스팟 상에 60초 동안 7.5 μL/분의 유량으로 주입하여, 화합물 1 플러스 아포 형태의 EGFR^L858R (

) 또는 오시메르티닙 결합된 형태 (

) 각각으로 수행된 실험에 대해 3240 RU 및 2455 RU의 최종 반응을 달성하였다. 이어서, 센서 표면을 구동 완충제의 5회의 300초 주사로 평형화시켰다.

하기 상술된 바와 같이 가변 농도의 화합물 1 (또는 참조를 위한 등가 부피의 DMSO) 및 고정 농도의

또는

중 어느 하나를 사용하여 분석물 샘플을 제조하였다.

단백질을 먼저 0.5 mL 제바(Zeba) 스핀 탈염 칼럼 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fischer Scientific))을 제조업체의 지침에 따라 사용하여 샘플 로딩 완충제 (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, 0.05% 트윈-20) 내로 탈염시켰다. 이어서, 280 nm에서의 흡광도에 의해 단백질 농도를 측정하였다 (ε₂₈₀ = 52370 M^-1cm^-1). 먼저 탈염된

을 샘플 로딩 완충제로 1.52 μM 작업 원액으로 희석한 후, 1:99 (화합물 1:

) 부피 비로 상기 열거된 100x 화합물 1 작업 원액 중 하나와 (또는 등가 부피의 DMSO와) 혼합하여 1.5 μM의 최종 농도 및 0 nM, 10 nM, 31.6 nM, 100 nM, 316 nM 또는 1000 nM의 최종 화합물 1 농도를 갖는 6개의 샘플을 생성함으로써 + 화합물 1 분석물 샘플을 제조하였다.

+ 화합물 1 샘플을 제조하기 위해, 탈염된 및 오시메르티닙을 먼저 샘플 로딩 완충제 중에 5.05 μM 및 10.1 μM의 각각의 농도로 희석하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하여 을 생산하였다. 그 후, 을 1:99 (화합물 1: ) 부피 비로 상기 열거된 100x 화합물 1 작업 원액 중 하나와 (또는 등가 부피의 DMSO와) 혼합하여 5.0 μM의 최종 농도 및 0 nM, 10 nM, 31.6 nM, 100 nM, 316 nM 또는 1000 nM의 최종 화합물 1 농도를 갖는 6개의 샘플을 생성하였다.

분석물 샘플을 화합물 1 농도의 증가하는 순서로 주입하였으며, 각각의 주입 사이클은 160초 주사 기간에 이어서 320초의 해리 기간으로 구성되었다. 오시메르티닙 첨가의 결과로서 + 화합물 1 샘플에 존재하는 과량의 DMSO로부터 생성된 벌크 용매 효과를 설명하기 위해, 0.9%, 1.0%, 1.1%, 1.2%, 또는 1.3% DMSO를 함유하는 샘플 로딩 완충제를 주입함으로써 5회의 30초 용매 보정 주입을 수행하였다.

데이터 분석

모든 SPR 실험을 시에라 애널라이저 3.4.5를 사용하여 처리 및 분석하였다. 분석물 센서그램은 고정화된 Btn-CRBN-DDB1이 없는 BTC 센서 스팟 뿐만 아니라 0 nM 화합물 1을 사용한 참조 주입 둘 다를 이중 참조하였다. + 화합물 1 센서그램을 또한 소프트웨어의 용매 보정 특색 및 상기 기재된 5회의 DMSO 용매 보정 주입을 사용하여 용매 보정하였다. 이어서, 내장된 1:1 랭뮤어 결합 모델을 사용하여

+ 화합물 1 또는 + 화합물 1 적정 실험에서 모든 화합물 1 농도에 대한 SPR 센서그램을 전반적으로 피팅하였다. 국소 파라미터 (R_min)를 주입 기간 동안 잔류 벌크 이동을 설명하기 위해 플로팅하였다. 연속 분석물 주입 시 기준선 드리프트 및 기준선 오프셋의 후속 에볼루션으로 인해, 단지 해리 기간의 초기 40초만이 데이터 피팅에 포함되었다. 생성된 데이터는 도 18a 및 18b에 제시된다.

실시예 69. 화합물 1 및 오시메르티닙의 조합물에 대한 웨스턴 블롯 실험

NCI-H3255 세포주를 제조한 다음, 1,500 nM 오시메르티닙의 존재 또는 부재 하에 0, 15, 50, 150, 500 또는 1,500 nM의 화합물 1과 함께 6시간 동안 인큐베이션하였다. 화합물 보유 용액을 0.1% 최종 농도의 DMSO를 달성하도록 제제화하였다. 웨스턴 블롯 영상 (도 19)에 제시된 바와 같이, 화합물 1은 오시메르티닙의 존재 및 부재 하에 EGFR-L858R을 효율적으로 분해하고 포스포-EGFR 및 포스포-ERK를 억제하였다. 웨스턴 블롯에 사용된 항체는 하기 판매업체로부터 구입하였다: EGFR-L858R 특이적 항체 (CST 3197), pY1068 EGFR (CST 2234), pERK (CST 4370), ERK (CST 4695), 빈쿨린 (밀리포어 05-386).

본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 지시된 것처럼 본원에 참조로 포함된다.

상기 본 발명은 이해의 명료함을 위해 예시 및 예로서 다소 상세하게 기재되었지만, 첨부된 청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 취지 또는 범주로부터 벗어나지 않으면서 특정 변화 및 변형이 이에 대해 이루어질 수 있음은 본 발명의 교시의 관점에서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이다. 또한, 관련 기술분야의 통상의 기술자라면, 단지 상용 실험을 사용하여 본원에 기재된 구체적 실시양태 및 방법에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 출원의 범주에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims

뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고:
;
여기서
A*는 하기로부터 선택되고:
;
B*는 각각 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 아릴이고;
y는 0, 1, 2, 또는 3이고;
R³¹은 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고, 비사이클 상에 존재하는 어느 하나의 고리 상에 위치할 수 있고;
R³²는 수소, 할로겐 (F, Cl, Br 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 또는 할로-C_3-8-시클로알킬이고;
R³³은 수소, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 또는 할로-C_3-8-시클로알킬이고 디히드로피롤 또는 이미다졸 고리 상에 위치할 수 있고;
R³⁴는 각 경우에 독립적으로 H, F, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고;
R³⁵는 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, 및 C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;
또는 R³⁴ 및 R³⁵는 조합되어 -(CH₂)_q-를 형성하고;
q는 1 또는 2이고;
R³⁶ 및 R³⁷은 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되거나;
또는 R³⁶ 및 R³⁷은 함께 조합되어 1, 2 또는 3개의 R³¹ 치환기로 임의로 치환된 5- 또는 6-원 사이클을 형성하고;
R⁹⁰은 H, C_1-6-알킬 또는 C_3-6-시클로알킬이고;
고리 G는 1 또는 2개의 R⁴² 치환기로 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
A²¹은 -NH-, -O-, -CH₂-, 또는 -NR¹⁰⁰-이고;
R¹⁰⁰은 알킬, 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이거나; 또는 원자가에 의해 허용되는 바와 같이 R¹⁰⁰은 R³⁷과 조합되어 5-8원 헤테로사이클 또는 5원 헤테로아릴을 형성할 수 있고;
A³², A³³, A³⁴, 및 A³⁵는 독립적으로 -N- 및 -CR⁴²-로부터 선택되고;
R⁴²는 각 경우에 독립적으로 H, 할로겐 (F, Cl, Br, 또는 I), 시아노, C_1-6-알콕시, 할로-C_1-6-알콕시, C_1-6-알킬, 할로-C_1-6-알킬, C_3-8-시클로알킬, 및 할로-C_3-8-시클로알킬로부터 선택되고;
A³⁶은 -N- 또는 -CR³⁵-이고;
L²는 A*와 이소인돌리논 또는 인다졸 중 어느 하나를 연결하는 2가 연결기인 방법.
제1항에 있어서, L²가 하기 화학식을 갖고:
;
여기서
X¹ 및 X²가 각 경우에 독립적으로 결합, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, 비사이클, 알킬, 지방족, 헤테로지방족, -NR²⁷-, -CR⁴⁰R⁴¹-, -O-, -C(O)-, -C(NR²⁷)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(O)₂- 및 -S-로부터 선택되고; 이들 각각의 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴 및 비사이클은 R⁴⁰으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
R²⁰, R²¹, R²², R²³, 및 R²⁴가 각 경우에 독립적으로 결합, 알킬, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -SO₂-, -S(O)-, -C(S)-, -C(O)NR²⁷-, -NR²⁷C(O)-, -O-, -S-, -NR²⁷-, 옥시알킬렌, -C(R⁴⁰R⁴⁰)-, -P(O)(OR²⁶)O-, -P(O)(OR²⁶)-, 비사이클, 알켄, 알킨, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로사이클, 지방족, 헤테로지방족, 헤테로아릴, 락트산, 글리콜산, 및 카르보사이클로 이루어진 군으로부터 선택되고; 이들 각각은 R⁴⁰으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
R²⁶이 각 경우에 독립적으로 수소, 알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 알켄, 알킨, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 지방족 및 헤테로지방족으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R²⁷이 각 경우에 독립적으로 수소, 알킬, 지방족, 헤테로지방족, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)(지방족, 아릴, 헤테로지방족 또는 헤테로아릴), -C(O)O(지방족, 아릴, 헤테로지방족 또는 헤테로아릴), 알켄 및 알킨으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁴⁰이 각 경우에 독립적으로 수소, R²⁷, 알킬, 알켄, 알킨, 플루오로, 브로모, 클로로, 히드록실, 알콕시, 아지드, 아미노, 시아노, -NH(지방족), -N(지방족)₂, -NHSO₂(지방족), -N(지방족)SO₂알킬, -NHSO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -N(알킬)SO₂(아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클), -NHSO₂알케닐, -N(알킬)SO₂알케닐, -NHSO₂알키닐, -N(알킬)SO₂알키닐, 할로알킬, 지방족, 헤테로지방족, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 옥소, 및 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 추가적으로, 원자가에 의해 허용되는 경우에, 동일한 탄소에 결합된 2개의 R⁴⁰ 기는 함께 연결되어 3-8원 스피로사이클을 형성할 수 있고;
R⁴¹이 지방족, 아릴, 헤테로아릴 또는 수소인 방법.
제1항에 있어서, 화합물이 표 9A 및 표 9B로부터 선택된 것인 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법:

.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
뇌 또는 CNS로 전이된 EGFR 매개 암을 치료하는 방법으로서, 유효량의 하기 구조의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인간인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 돌연변이 EGFR에 의해 매개되는 것인 방법.
제18항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 엑손 21 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제19항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제19항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L861Q 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 T790M 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 C797S 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제18항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R 및 T790M 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제18항에 있어서, 돌연변이 EGFR이 L858R, T790M, 및 C797S 돌연변이를 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 제약 조성물의 일부로서 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 경구로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 비경구로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 정맥내로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 또한 그를 필요로 하는 환자에게 투여되는 것인 방법.
제30항에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 오시메르티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제30항에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 나쿠오티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제30항에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 마벨레르티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제30항에 있어서, ATP 부위 결합 EGFR 리간드가 스페브루티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 폐암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 비소세포 폐암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 소세포 폐암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 선암종인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 편평 세포 폐암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 대세포 미분화 암종인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 신경내분비 암종인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 육종양 암종, 선편평상피 암종, 귀리-세포 암, 복합 소세포 암종, 폐 카르시노이드 종양, 중추 카르시노이드, 말초 카르시노이드, 타액선-유형 폐 암종, 중피종, 또는 종격 종양인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 유방암인 방법.
제43항에 있어서, EGFR 매개 암이 HER-2 양성 유방암인 방법.
제43항 또는 제44항에 있어서, EGFR 매개 암이 ER+ 유방암인 방법.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 PR+ 유방암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 삼중 음성 유방암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 결장직장암 또는 직장암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 두경부암 또는 식도암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 췌장암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 갑상선암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 난소암, 자궁암, 또는 자궁경부암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 신장암, 간암 또는 방광암인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌 또는 CNS로 전이된 흑색종인 방법.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 뇌로 전이된 것인 방법.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 CNS로 전이된 것인 방법.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 치료 나이브 EGFR 매개 암을 갖는 환자에게 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 재발성인 방법.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 불응성인 방법.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 매개 암이 재발성 및 불응성인 방법.