KR20240012958A - Hdac 억제제를 포함하는 항비만용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 HDAC 억제제를 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에서 HDAC 11억제제인 FT895가 체중 및 간, 갈색 지방, 신장 주변 지방, 부고환 지방의 조직 중량을 효과적으로 감소시키고, AST, ALT, 트리글리세리드, 총 콜레스테롤 및 유리 지방산을 감소시킨다는 점을 확인하였다. 상기 FT895는 내당능 및 인슐린 저항성을 개선시키는 등 항비만 효능이 우수하여 비만 치료제 또는 건강기능식품에 활용할 수 있는 장점이 있다.

Description

HDAC 억제제를 포함하는 항비만용 조성물 {Composition for anti-obesity comprising HDAC inhibitor}

본 발명은 HDAC 억제제를 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것으로, 더 상세하기는 HDAC11 억제제인 FT895를 포함하는 비만증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 비만증 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.

최근 세계 각국에서 비만은 심각한 보건문제로 인식되고 있으며 우리나라 역시 세계화의 영향과 산업성장으로 인해 식생활을 포함한 생활습관의 불균형과 활동량 부족으로 비만 인구가 증가하는 것으로 보고되고 있다. 또한, 당뇨병, 암, 고혈압, 동맥경화와 같은 순환기계 질환 등 비만과 관련된 질환의 발병률도 증가하고 있으며, 주요 사망원인들 중의 하나로서 그 심각성은 점점 고조되고 있는 실정이다. 비만이 생기는 원인은 내분비계 및 인체 내 대사와 같은 유전적인 부분도 있지만, 직접적인 원인은 에너지 축적과 에너지 소비의 불균형 때문이다. 특히 동양인의 경우, 서양인에 비해 체질량 지수가 적어도 복부 비만이 심하여 고혈압, 당뇨병, 고지혈증과 같은 동맥 관련 질환으로 인한 합병증의 감수성이 높기 때문에 비만관리가 더욱 중요시 된다. 비만인에 있어 질병발생의 위험도는 정상인에 비해 고혈압의 경우에는 4배, 당뇨병의 경우 무려 10배나 높아지며, 사망률은 체중이 25% 과다일 때 39% 증가하는 것으로 보고 있다. 따라서, 비만의 예방 또는 치료를 위한 방법들의 개발이 시급히 요구되고 있다.

한편, 히스톤 데아세틸라제(histone deacetylases; HDAC)는 특히 세포 유전자 전사의 조절의 필수 부분인 프로모터 및 인핸서 영역에서 특정 히스톤 부위로부터 아세틸기의 제거를 촉매 작용하는 효소이다. HDAC는 또한 DNA-결합 단백질, 전사 인자, 신호 전달인자, DNA 복구 및 샤페론 단백질과 같은 비-히스톤 단백질의 아세틸화를 매개함으로써 간접적인 방식으로 유전자 발현을 조절한다. HDAC 억제제는 종양 세포의 후속적인 분화 또는 아폽토시스로 성장 정지를 유발하는 것으로 설명된 반면, 정상 세포는 영향을 받지 않는다. HDAC 억제제의 효능은 유방암, 전립선암, 폐암 및 위암, 신경아세포종 및 백혈병과 같은 다양한 암 유형의 동물 모델에서 입증되었다. 다만, HDAC 억제제의 항비만 효능에 대한 연구는 제한적인 실정이다.

이에, 항비만 효과가 우수한 HDAC 억제제를 개발하기 위해 예의노력한 결과, 특히 FT895가 고지방 식이를 섭취한 마우스의 체중 및 간, 갈색 지방, 신장 주변 지방, 부고환 지방의 조직 중량을 효과적으로 감소시키고, AST, ALT, 트리글리세리드, 총 콜레스테롤 및 유리 지방산을 감소시켰으며, 내당능 및 인슐린 저항성을 개선시키는 등 항비만 효능이 우수하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 HDAC 억제제를 포함하는 항비만용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 FT895를 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 FT895는 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 HDAC 11 억제제인 FT895는 체중 및 간, 갈색 지방, 신장 주변 지방, 부고환 지방의 조직 중량을 효과적으로 감소시키고, AST, ALT, 트리글리세리드, 총 콜레스테롤 및 유리 지방산을 감소시키며, 내당능 및 인슐린 저항성을 개선시키는 등 항비만 효능이 우수하다.

도 1은 실험 설계에 대한 개략도이다.
도 2는 식이 조절에 따른 C57BL/6J 마우스의 체중 증가 및 비히클(vehicle) DMSO, FT895 3mg/kg(F3) 및 FT895 5mg/kg(F5) 투여에 따른 마우스의 체중에 관한 것이다. 대조군 식이(control diet; CD) 마우스는 10% 지방을 함유한 정상적인 음식(chow) 식이를 섭취하였고, 고지방 식이(high fat diet; HFD) 마우스는 60% 지방을 함유한 식이(D12492; Research Diets Inc.)를 섭취하였다. 12주 후, 고지방 식이 마우스는 비만이 되었고 DMSO, F3 및 F5 투여에 따라 3개 실험군으로 분류하였다.
도 3은 C57BL/6J 마우스의 외형에 관한 것이다. C57BL/6J 마우스에 3주 동안 각각 DMSO, F3 또는 F5를 격일로 복강 내 주사하고, 이 후 마우스를 희생시킨 후 그 모습을 관찰하였다.
도 4는 C57BL/6J 마우스의 체중 변화에 관한 것이다. F3 및 F5는 고지방 식이(HFD)로 유발된 각 C57BL/6J 마우스의 비만을 감소시킨다. 각 고지방 식이 마우스의 체중은 주 3회 측정하였다.
도 5는 C57BL/6J 마우스의 내당능에 관한 것이다. F3 및 F5는 각각 고지방(HF)로 인한 내당능 장애를 개선시킨다. 혈당 수치를 평가하기 위해 각 C57BL/6J 마우스를 16시간 동안 금식시킨 다음 포도당(1g/kg)을 복강 내 주사하고, 혈당 수치는 표시된 시간에 측정하였다.
도 6은 C57BL/6J 마우스의 인슐린 저항성에 관한 것이다. F3 및 F5는 각각 고지방(HF)로 유발된 인슐린 저항성을 개선시킨다. 혈당 수치를 평가하기 위해 각 C57BL/6J 마우스를 6시간 동안 금식시킨 다음 인슐린(0.75 U/kg)을 복강 내 주사하고, 혈당 수치는 표시된 시간에 측정하였다.
도 7는 DMSO, F3 또는 F5는 투여에 따른 C57BL/6J 마우스의 아스파르테이트 아미노전달효소(Aspartate transaminase; AST) 및 알라닌 아미노전이효소(Alanine Aminotransferase; ALT) 함량 변화에 관한 것이다. F3 및 F5는 각각 C57BL/6J 마우스에서 고지방 식이(HFD)로 증가된 AST 및 ALT를 감소시킨다.
도 8은 DMSO, F3 또는 F5는 투여에 따른 C57BL/6J 마우스의 트리글리세리드(triglyceride), 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및 유리 지방산(free fatty acids) 함량 변화에 관한 것이다. F3 및 F5는 각각 C57BL/6J 마우스에서 고지방 식이(HFD)로 증가된 트리글리세리드, 총 콜레스테롤 및 유리 지방산을 감소시킨다.
도 9는 DMSO, F3 또는 F5 투여에 따른 C57BL/6J 마우스의 조직 중량(tissue weight) 변화를 촬영한 것이다. CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 분리된 간, 갈색 지방(B-지방), 신장 주변 지방(P-지방) 및 부고환 지방(E-지방)의 대표 사진 및 평균 중량(weight)을 나타낸다.
도 10은 DMSO, F3 또는 F5 투여에 따른 C57BL/6J 마우스의 조직 중량 변화에 관한 것이다. CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 측정한 분리된 간, 갈색 지방(B-지방), 서혜부 지방(I-지방) 및 부고환 지방(E-지방)의 평균 중량을 나타낸다.
도 11은 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 복부 MRI 스캔(관상 단면)에 관한 것이다. CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 대표적인 복부 MRI 스캔을 나타낸다.
도 12는 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 복부 MRI 스캔(축 단면)에 관한 것이다. CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 대표적인 복부 MRI 스캔을 나타낸다.
도 13은 CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 갈색 지방 조직에서 파라핀이 함유된 헤마톡실린(paraffin-embedded hematoxylin) 및 에오신 염색 부분(eosin-stained section)의 현미경 사진을 촬영한 것이다.
도 14는 CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 서혜부 지방 조직에서 파라핀이 함유된 헤마톡실린(paraffin-embedded hematoxylin) 및 에오신 염색 부분(eosin-stained section)의 현미경 사진을 촬영한 것이다.
도 15는 CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 부고환 지방 조직에서 파라핀이 함유된 헤마톡실린(paraffin-embedded hematoxylin) 및 에오신 염색 부분(eosin-stained section)의 현미경 사진을 촬영한 것이다.
도 16은 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 간 MRI 스캔(축 단면)에 관한 것이다. CD 및 HFD를 섭취한 마우스에 DMSO, F3 또는 F5 투여 후 촬영한 대표적인 간 MRI 스캔을 나타낸다.
도 17은 DMSO, F3 또는 F5 약물을 투여한 비만 마우스 부고환 백색지방(WAT) 에서 터모제닌(Thermogenin, UCP1)에 대해 면역조직화학적 분석을 한 결과에 관한 것이다. F3 및 F5 약물은 부고환 백색지방의 갈변을 유도한다.
도 18은 DMSO, F3 또는 F5 약물을 투여한 비만 마우스 서혜부 지방에서 터모제닌(Thermogenin, UCP1)에 대해 면역조직화학적 분석을 한 결과에 관한 것이다. F3 및 F5 약물은 서혜부 지방의 갈변을 유도한다.
도 19는 DMSO, F3 또는 F5 약물을 투여한 비만 마우스의 서혜부 지방에서 HDAC11에 대해 면역조직화학적 분석을 한 결과에 관한 것이다. F3 및 F5 약물은 HDAC11 활성을 억제하였다.
도 20은 DMSO, F3, F5 약물 및 다양한 HDAC 11 억제제를 투여한 비만 마우스의 HDAC11에 대해 면역조직화학적 분석을 한 결과에 관한 것이다. F3 및 F5 약물이 다른 HDAC11 억제제에 비해 HDAC11 활성을 효과적으로 억제하였다.
도 21은 DMSO, F3, F5 약물 및 다양한 HDAC 11 억제제를 투여한 비만 마우스의 TG에 대해 면역조직화학적 분석을 한 결과에 관한 것이다. F3 및 F5 약물이 다른 HDAC11 억제제에 비해 TG 활성을 효과적으로 억제하였다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명에서 항비만 효능을 지닌 HDAC11 억제제인 FT895의 유효성 평가를 위하여 하기와 같은 실험을 진행하였으며, 상기 실험은 고지방식이를 12주동안 급식하여 비만을 유도한 후 FT895를 3주간 복강으로 투여하여 항 비만 효능을 평가하였다. FT895는 하기 화학식 1로 표시된다. 상기 실험의 모든 규정은 ㈜케이엘에스바이오 실험동물 윤리위원회 내부 규정을 따랐다. 그 결과 비만 마우스에 대하여 F3 및 F5 약물은 항비만 효과를 나타내었다.

[화학식 1]

구체적으로, 순화기간 종료 후 고지방 식이로 비만을 12주간 유도하고 3주간 주3회 약물을 투여하여 체중변화 및 외형관찰, 당불내성(intraperitoneal glucose tolerance test; IPGTT), 인슐린 저항성(Intraperitoneal Insulin Tolerance Test; ipITT), 혈액분석, 조직의 무게 분석, 복부 MRI 촬영, 조직병리학적 검사, 면역염색 평가를 관찰하였으며, 그 결과는 다음과 같다.

1. 사망 개체는 관찰되지 않았다.

2. 일반증상 관찰 결과, 약물 투여 후 이상반응은 관찰되지 않았다.

3. 체중측정 결과, F3, F5 약물 처치에 의해 체중 감소가 관찰되었다.

4. 부검소견 관찰 결과, 육안적 이상소견은 관찰되지 않았다.

5. 당불내성(IPGTT) 시험 결과, F3, F5 처치군 마우스에서 효능이 관찰되었다.

6. 인슐린 저항성(IPITT) 시험 결과, F3, F5 처치군 마우스에서 인슐린 저항성 회복 효능이 관찰되었다.

7. 혈액 분석은 AST, ALT, TG, Total cholesterol, Free Fatty acid(FFA), Fasting Glucose 분석을 수행하였다. 그 결과 F3, F5 처치군 마우스에서 고지방에 의해 증가한 AST, ALT, TG가 감소하였으며, F3 약물 처치 마우스 군에서 Total cholesterol와 FFA가 감소됨이 관찰되었다.

8. 조직무게 분석 결과 약물처치에 따라 조직무게의 변화가 관찰되었다.

9. 복부 MRI 촬영 결과, 특히 F5 약물 처치한 마우스군의 복부 지방이 감소됨을 관찰하였다.

10. 지방조직병리학적 검사 결과, 정상마우스군에 비하여 고지방식이를 수행한 비만마우스에서는 Brown Fat, Inguinal Fat, Epididymal Fat 지방의 크기가 현저히 커졌으나 약물들 처치에 의해서 변화가 나타남이 관찰되었다. 특히 F5 약물 처치군 마우스에서 지방이 현저히 감소함이 관찰되었다.

11. 복부 MRI 촬영 결과, 정상 마우스군에 비하여 고지방식이를 수행한 비만 마우스에서는 간 조직에 지방간이 축적되었으나 약물처치에 의해서 병증이 완화됨을 확인하였으며 이는 조직병리학적 방법으로 재확인하였다.

12. 백색 지방조직에서 베이지화 분석을 위하여 UCP-1 염색을 수행하였다. 그 결과 F3, F5 약물을 처치한 마우스 군의 Inguinal Fat에서 UCP-1의 발현이 증가됨을 관찰하였다.

본 발명에서 본 발명에서 항비만 효능을 지닌 HDAC11 억제제인 FT895의 유효성 평가를 위해 추가적으로 다양한 HDAC11 억제제와 FT895를 비교하였다. 그 결과 비만 마우스에 대하여 F3, F5약물은 다른 HDAC 11억제제에 비해 우수한 항비만 효과를 나타내었다.

이에, 본 발명은 일 관점에서 FT895를 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg, 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 더 바람직하게는 1 mg/kg 내지 10 mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 지방조직은 지방저장을 주요 기능으로 하는 백색지방(white adipose tissue: WAT)과 지방 연소를 통한 발열을 주요 기능으로 하는 갈색지방(brown adipose tissue: BAT)으로 분류될 수 있다. 특정 외부 자극에 의해 백색지방이 갈색지방으로 변환될 수 있으며, 백색지방의 갈색화를 통한 비만 치료효과가 보고된 바 있다. 백색지방의 갈색지방화에 기여하는 지방세포(백색지방조직의 갈색지방세포)를 백색 지방 세포 및 갈색 지방세포와 구별 하여 베이지(beige) 지방세포라고 한다.

본 발명은 다른 관점에서, FT895를 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg, 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 더 바람직하게는 1 mg/kg 내지 10 mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 용어 “약학적 조성물(pharmaceutical composition)”은 본 발명의 HDAC 억제제와 희석제 또는 담체와 같은 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 혼합물을 의미한다. 약학적 조성물은 치료 용도를 위한 조성물뿐만 아니라 화장품 조성물을 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 그 필요에 따라 대상체에게 투여하는 방법이 제공되어 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 조성물은 인간에게 투여할 수 있다.

본 발명에 있어서, 약학적 조성물의 설명은 원칙적으로 인간에게 투여하기 위한 약학적 조성물에 관한 것이지만, 통상의 기술자는 이러한 조성물이 일반적으로 모든 종류의 동물에게 투여하기 적합함을 이해하게 될 것이다. 다양한 동물에게 투여하기 위한 약학적 조성물의 변형을 잘 이해하고, 숙련된 수의학 약리학자는 필요하다면 단순히 통상적인 실험으로 이러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다.

본 발명에 있어서, 약학적 조성물은 약리학 분야에 알려져 있거나 이후 내용에서 전개되는 임의의 방법에 의해 제조될 수도 있다. 일반적으로, 이러한 정제용 방법은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 연관시키는 단계를 포함하고, 이어서 필요하거나 원하는 경우 생성물을 원하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 성형 및/또는 포장하는 단계를 포함한다.

본 발명에 있어서, 약학적 조성물은 단일 단위 용량 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로서 제조, 포장, 및/또는 포장하지 않은 채로 판매될 수도 있다. "단위 용량"은 사전 설정된 양의 활성 성분을 포함하는 약학적 조성물의 개별적인 양이다. 활성 성분의 양은 대상체에게 투여되는 활성 성분의 투여량 및/또는 그러한 투여량의 편리한 분획 예컨대 예를 들어 투여량의 1/2 또는 1/3과 일반적으로 동일하다.

본 발명에 있어서, 약학적 조성물 내 활성 성분, 제약상 허용되는 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분의 상대량은 치료 대상체의 동일성, 크기, 및/또는 장애에 따라 그리고 조성물이 투여되는 경로에 따라 변할 것이다. 예로서, 조성물은 0.1％ 내지 100％ (w/w) 활성 성분을 포함할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 제약상 허용되는 부형제는 특정한 투여 형태 목적에 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 희석제, 또는 다른 액체 비히클, 분산액 또는 현탁 보조제, 표면 활성제, 등장화제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 고체 결합제, 윤활제 등을 포함한다. 레밍턴(Remington)의 문헌[The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams ＆ Wilkins, Baltimore, MD, 2006]은 약학적 조성물 조제에 사용된 다양한 부형제 및 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시한다. 임의의 통상적인 담체 배지가 예컨대 임의의 원하지 않는 생물학적 효과를 제공하거나 다르게는 약학적 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용함으로써 물질 또는 그 유도체와 공존할 수 없는 것을 제외하고, 그 용도는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려한다. 제약상 허용되는 부형제는 적어도 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％ 순수하다.

상기 부형제는 인간 및 수의학적 용도에서 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국식품의 약품국에 의해 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 제약 등급이다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전(EP)의 표준을 충족한다.

일부 실시예에서, 부형제는 인간 및 수의학적 용도에서 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국식품의 약품국에 의해 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 제약 등급이다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전(EP)의 표준을 충족한다.

약학적 조성물의 제조에 사용된 제약상 허용되는 부형제는 불활성 희석제, 분산제 및/또는 과립화제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 붕해제, 결합제, 보존제, 완충제, 윤활제, 및/또는 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

이러한 부형제는 임의로 본 발명의 제제에 포함될 수도 있다. 부형제 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스, 착색제, 코팅제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제는 조제사의 판단에 따라 조성물에 존재할 수 있다.

예시적인 희석제는 탄산칼슘, 탄산나트륨, 인산칼슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 칼슘 히드로겐 포스페이트, 인산나트륨 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 염화나트륨, 건조 전분, 옥수수 전분, 분말형 당, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 과립화제 및/또는 분산제는 감자 전분, 옥수수 전분, 타피오카 전분, 소듐 스타치 글리콜레이트, 점토, 알긴산, 구아 검, 시트러스 펄프, 한천, 벤토나이트, 셀룰로스 및 목재 생성물, 천연 스폰지, 양이온-교환 수지, 탄산칼슘, 규산염, 탄산나트륨, 가교-결합형 폴리(비닐-피롤리돈) (크로스포비돈), 소듐 카르복시메틸전분 (소듐 스타치 글리콜레이트), 카르복시메틸 셀룰로스, 가교-결합형 소듐 카르복시메틸 셀룰로스 (크로스카르멜로스), 메틸셀룰로스, 예비젤라틴화 전분 (전분 1500), 미세결정질 전분, 수불용성 전분, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로스, 규산알루미늄마그네슘 (비검), 소듐 라우릴 술페이트, 4급 암모늄 화합물, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 표면 활성제 및/또는 유화제는 천연 유화제 (예를 들어 아카시아, 한천, 알긴산, 알긴산나트륨, 트라가칸트, 촌드럭스(chondrux), 콜레스테롤, 크산탄, 펙틴, 젤라틴, 난황, 카세인, 양모 지방, 콜레스테롤, 왁스, 및 레시틴), 콜로이드성 점토 (예를 들어 벤토나이트 [규산알루미늄] 및 비검 [규산알루미늄마그네슘]), 장쇄 아미노산 유도체, 고분자량 알콜 (예를 들어 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 올레일 알콜, 트리아세틴 모노스테아레이트, 에틸렌 글리콜 디스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리비닐 알콜), 카르보머 (예를 들어 카르복시 폴리메틸렌, 폴리아크릴산, 아크릴산 중합체, 및 카르복시비닐 중합체), 카라기난, 셀룰로스 유도체 (예를 들어 카르복시메틸셀룰로스 소듐, 분말화 셀룰로스, 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스), 소르비탄 지방산 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 [트윈 20], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 [트윈 60], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 [트윈 80], 소르비탄 모노팔미테이트 [스팬 40], 소르비탄 모노스테아레이트 [스팬 60], 소르비탄 트리스테아레이트 [스팬 65], 글리세릴 모노올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트 [스팬80]), 폴리옥시에틸렌 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트 [미르즈 45], 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일, 폴리에톡실화 피마자 오일, 폴리옥시메틸렌 스테아레이트, 및 솔루톨), 수크로스 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르 (예를 들어 크레모포르), 폴리옥시에틸렌 에테르, (예를 들어 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르 [브리즈 30]), 폴리(비닐-피롤리돈), 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 올레산나트륨, 칼륨 올레에이트, 에틸 올레에이트, 올레산, 에틸 라우레이, 소듐 라우릴 술페이트, 플루로닉 F 68, 폴록사머 188, 세트리모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤즈알코늄클로라이드, 도큐세이트 소듐, 및/또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 결합제는 전분 (예를 들어 옥수수 전분 및 전분 페이스트); 젤라틴; 당 (예를 들어 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 덱스트린, 당밀, 락토스, 락티톨, 만니톨); 천연 및 합성 검 (예를 들어 아카시아, 알긴산나트륨, 아이리쉬 모스의 추출물, 판워 검, 섀티 검, 이사폴 후스크스의 점액, 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐-피롤리돈), 규산알루미늄마그네슘 (비검), 및 라치 아라보갈락탄); 알기네이트; 폴리에틸렌 옥시드; 폴리에틸렌 글리콜; 무기 칼슘 염; 규산; 폴리메타크릴레이트; 왁스; 물; 알콜; 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 보존제는 항산화제, 킬레이트화제, 항미생물 보존제, 항진균 보존제, 알콜 보존제, 산성 보존제, 및 다른 보존제를 포함할 수도 있다. 예시적인 항산화제는 알파 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 모노티오글리세롤, 메타중아황산칼륨, 프로피온산, 프로필 갈레이트, 아스코르브산나트륨, 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 및 아황산나트륨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 시트르산 1수화물, 이나트륨 에데테이트, 이칼륨 에데테이트, 에데트산, 푸마르산, 말산, 인산, 소듐 에데테이트, 타르타르산, 및 트리소듐 에데테이트를 포함한다. 예시적인 항미생물 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 벤질 알콜, 브로노폴, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로크실레놀, 크레졸, 에틸 알콜, 글리세린, 헥세티딘, 이미드우레아, 페놀, 페녹시에탄올, 페닐에틸 알콜, 페닐질산수은 (phenylmercuric nitrate), 프로필렌 글리콜, 및 티메로살을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 항진균 보존제는 부틸 파라벤, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤조산, 히드록시벤조산, 칼륨 벤조에이트, 소르브산칼륨, 벤조산나트륨, 프로피온산나트륨, 및 소르브산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 알콜 보존제는 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 페놀, 페놀계 화합물, 비스페놀, 클로로부탄올, 히드록시벤조에이트, 및 페닐에틸 알콜을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 산성 보존제는 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로틴, 시트르산, 아세트산, 데히드로아세트산, 아스코르브산, 소르브산, 및 피트산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 보존제는 토코페롤, 토코페롤 아세테이트, 데테록시메 메실레이트, 세트리미드, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔드 (BHT), 에틸렌디아민, 소듐 라우릴 술페이트 (SLS), 소듐 라우릴 에테르 술페이트 (SLES), 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 칼륨 술파이트, 메타중아황산칼륨, 글리단트 플러스, 페노닙, 메틸파라벤, 저몰 115, 게르마벤 II, 네올론, 카톤, 및 에욱실을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시예에서, 보존제는 항-산화제이다. 다른 실시예에서, 보존제는 킬레이트화제이다.

예시적인 완충제는 시트레이트 완충 용액, 아세테이트 완충 용액, 포스페이트 완충제 용액, 염화암모늄, 탄산칼슘, 염화칼슘, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, D-글루콘산, 글리세로인산칼슘, 락트산칼슘, 프로판산, 칼슘 레불리네이트, 펜탄산, 이염기성 인산칼슘, 인산, 삼염기성 인산칼슘, 수산화칼슘 포스페이트, 아세트산칼륨, 염화칼륨, 글루콘산칼륨, 칼륨 혼합물, 이염기성 인산칼륨, 일염기성 인산칼륨, 인산칼륨 혼합물, 아세트산나트륨, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 락트산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 일염기성 인산나트륨, 인산나트륨 혼합물, 트로메타민, 수산화마그네슘, 수산화알루미늄, 알긴산, 피로겐-자유수, 등장성 염수, 링거(Ringer's) 용액, 에틸 알콜, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 윤활제는 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산, 실리카, 활석, 맥아, 글리세릴 베하네이트, 수소화 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 마그네슘 라우릴 술페이트, 소듐 라우릴 술페이트, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 오일은 아몬드, 살구 커넬, 아보카도, 바바수야자, 베르가모트, 흑색 커런트 종자, 보리지, 케이드, 카모마일, 카놀라, 카라웨이, 카르나우바, 카스토르, 시나몬, 코코아 버터, 코코넛, 대구 간, 커피, 옥수수, 목화 종자, 에뮤, 유칼립투스, 달맞이꽃, 생선, 아마 씨, 게라니올, 호박, 포도 종자, 개암, 히솝, 이소프로필 미리스테이트, 호호바, 쿠쿠이 넛, 라반딘, 라벤더, 레몬, 리트세아 쿠베바, 마카데미아 넛, 아욱, 망고 종자, 메도우폼 종자, 밍크, 넛멕, 올리브, 오렌지색의 오렌지색 라피, 팜, 팜핵, 복숭아 커넬, 땅콩, 양귀비 종자, 호박 종자, 평지씨, 쌀겨, 로즈마리, 홍화, 샌달우드, 사스쿠아나, 세이보리, 산자나무, 참깨, 시어 버터, 실리콘, 대두, 해바라기, 티트리, 엉겅퀴, 쓰바키, 베티버, 호두, 및 밀 배아 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 오일은 부틸 스테아레이트, 카프릴산 트리글리세리드, 카프르산 트리글리세리드, 시클로메티콘, 디에틸 세바케이트, 디메티콘 360, 이소프로필 미리스테이트, 미네랄 오일, 옥틸도데칸올, 올레일 알콜, 실리콘 오일, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

경구 및 비경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 활성 성분 외에, 액체 투여 형태는 본 기술분야에 공동으로 사용된 불활성 희석제 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 싹, 올리브, 아주까리, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸르푸릴 알콜, 소르비탄의 폴리에틸렌 글리콜 및 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 포함할 수도 있다. 불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 아주반트 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 실시예에서, 본 발명의 HDAC 억제제는 가용화제 예컨대 크레모포르, 알콜, 오일, 변성 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 시클로덱스트린, 중합체, 및 이들의 조합과 혼합된다.

경구 투여를 위한 고체 투여 형태는 캡슐, 정제, 환제, 분말, 및 과립을 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 성분은 하나 이상의 불활성 제약상 허용되는 부형제 또는 담체 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘 및/또는 a) 충전제 또는 증량제 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 및 규산, b) 결합제 예컨대, 예를 들어, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리디논, 수크로스, 및 아카시아, c) 함습제 예컨대 글리세롤, d) 붕해제 예컨대 한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 규산염, 및 탄산나트륨, e) 용해 지연제 예컨대 파라핀, f) 흡수 촉진제 예컨대 4급 암모늄 화합물, g) 습윤제 예컨대, 예를 들어, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트, h) 흡수제 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토, 및 i) 윤활제 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 및 이들의 혼합물과 혼합되어 있다.

캡슐의 경우, 정제 및 환제, 투여 형태는 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 그러한 부형제로서 사용하는 연질 및 경질-충전된 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 채택될 수도 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제, 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘 예컨대 장용 코팅 및 제약 조제 분야에 잘 알려진 다른 코팅과 함께 제조될 수 있다. 이들은 임의로 불투명화제를 포함할 수도 있고, 활성 성분만을, 또는 우선적으로, 장관의 특정 부분, 임의로는 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 유사한 유형의 고체 조성물은 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 그러한 부형제로서 사용하는 연질 및 경질-충전된 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 채택될 수도 있다.

활성 성분은 상술한 하나 이상의 부형제와 함께 마이크로-캡슐화된 형태일 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제, 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘 예컨대 장용 코팅, 방출 제어 코팅 및 제약 조제 분야에 잘 알려진 다른 코팅과 함께 제조될 수 있다. 이러한 고체 투여 형태에서 활성 성분은 하나 이상의 불활성 희석제 예컨대 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합될 수도 있다. 이러한 투여 형태는 보통 실시에서처럼 불화성 희석제가 아닌 추가 물질, 예를 들어, 정제 윤활제 및 다른 정제 보조제 예컨대 스테아르산마그네슘 및 미세결정질 셀룰로스를 포함할 수 있다. 캡슐의 경우, 정제 및 환제, 투여 형태는 완충제를 포함할 수도 있다. 이들은 임의로 불투명화제를 포함할 수도 있고, 활성 성분만을, 또는 우선적으로, 장관의 특정 부분, 임의로는 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다.

본 발명에 있어서, 상기 HDAC 억제제의 국소 및/또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 및/또는 패치를 포함할 수도 있다. 일반적으로, 활성 성분은 멸균 장애하에서 제약상 허용되는 담체 및/또는 임의의 필요한 보존제 및/또는 요구될 수도 있는 완충제와 혼합되어 있다. 추가로, 본 발명은 흔히 활성 성분의 몸체로의 제어된 전달을 제공하는 추가 장점을 갖는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 투여 형태는 예를 들어 활성 성분을 적당한 배지에 융해 및/또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 대안으로 또는 추가로, 비율 제어 막을 제공하고/거나 활성 성분을 중합체 매트릭스 및/또는 겔에 분산시킴으로써 비율이 제어될 수도 있다.

국소 투여를 위한 제제는 액체 및/또는 세미 액체 제제 예컨대 도찰제, 로션, 수중유 및/또는 유중수 에멀젼 예컨대 크림, 연고/또는 페이스트, 및/또는 용액 및/또는 현탁액을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 활성 성분의 농축이 용매 내 활성 성분의 용해도 한계만큼 높을 수도 있지만, 국소-투여가능한 제제는 예를 들어 약 1％ 내지 약 10％ (w/w) 활성 성분을 포함할 수도 있다. 국소 투여를 위한 제제는 본원에서 기술한 하나 이상의 추가 성분을 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명에 있어서, HDAC 억제제는 전형적으로 쉬운 투여 및 균일한 투여를 위하여 투여 단위 형태로 제조된다. 그러나 본 발명의 조성물의 총 일일 용법은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 담당의에 의해 결정될 것임을 이해하게 될 것이다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정한 치료 유효 용량 수준은 질환, 장애, 또는 치료 중인 장애 및 장애의 심각도를 포함하는 다양한 인자; 채택된 특정 활성 성분의 활성; 채택된 특정 조성물; 대상체의 나이, 체중, 전반적인 건강, 성별 및 다이어트; 채택된 특정 활성 성분의 투여 시간, 투여 경로, 및 배설율; 치료 기간; 채택된 특정 활성 성분과 조합하거나 동시에 사용한 약물; 및 의료 분야에 잘 알려진 인자 등에 좌우될 것이다.

본 발명의 HDAC 억제제를 포함하는 약학적 조성물은 임의의 경로로 투여될 수도 있다. 일부 실시예에서, HDAC 억제제를 포함하는 약학적 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 척수강내, 피하, 뇌실내, 경피, 피내, 직장, 질내, 복강내, 국소(분말, 연고, 크림, 및/또는 액적에 의함), 점막, 코, 입, 경장, 설하; 기관내 점적주입, 기관지 점적주입, 및/또는 흡입; 및/또는 경구 스프레이, 비강 스프레이, 및/또는 에어로졸을 포함하는 다양한 경로에 의해 투여된다. 구체적으로 고려되는 경로는 침투성 정맥내 주사, 혈액 및/또는 림프 공급을 통한 국부 투여, 및/또는 환부 부위에 대한 직접 투여이다. 일반적으로 투여의 가장 적합한 경로는 작용제의 특성(예를 들어, 위장관의 환경에서의 안정성), 및 대상체의 장애(예를 들어 대상체가 경구 투여를 참을 수 있는지 여부)를 포함하는 다양한 인자에 좌우될 것이다. 현재 경구 및/또는 비강 스프레이 및/또는 에어로졸 경로가 치료제를 폐 및/또는 호흡기계에 직접 전달하기 위하여 가장 공통으로 이용되고 있다. 그러나 본 발명은 약물 전달 분야에서의 진전을 고려하는 임의의 적절한 경로에 의한 본 발명에 따른 약학적 조성물의 전달을 포함한다.

특정 실시예에서, 본 발명의 HDAC 억제제를 포함하는 약학적 조성물은 매일 대상체 체중의 약 0.001 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg을 하루에 1회 이상 전달하기 충분한 투여량 수준으로 투여하여 원하는 치료 효과를 얻을 수도 있다. 목적 투여량은 하루에 세 번, 하루에 두 번, 하루마다, 이틀마다, 삼일마다, 매주마다, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 전달될 수도 있다. 특정 실시양태에서, 목적 투여량은 다중 투여(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 회 이상의 투여)를 통해 전달될 수도 있다.

본 발명에 있어서, 용량 범위는 성인에게 제공된 약학적 조성물의 투여에 대한 가이던스를 제공함을 이해하게 될 것이다. 예를 들어 어린이 또는 청소년에게 투여되는 양은 전문의 또는 본 기술분야의 숙련자에 의해 결정될 수 있고, 성인에게 투여되는 것보다 적거나 동일할 수 있다. 유효량을 달성하는 데 요구되는 본 발명에 따른 펩타이드의 정확한 양은 예를 들어 대상체의 종, 나이, 및 전반적인 장애, 부작용 또는 장애의 심각도, 특성 화합물의 동일성, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 다를 것이다.

본 발명에 있어서 HDAC 억제제를 포함하는 약학적 조성물은 조합 요법으로 사용될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 조합 요법에 사용되기 위한 치료의 특정한 조합(치료제 또는 절차)은 달성될 목적 치료 효과 및 목적 치료제 및/또는 절차의 적합성을 고려할 것이다.

본 발명의 약학적 조성물은 단독으로 또는 하나 이상의 치료 활성제와 조합하여 투여될 수 있다. "조합"의 경우, 다음 전달 방법이 본 발명의 범위에 속하긴 하지만, 작용제가 꼭 동일한 시간에 투여되어야 하고/하거나 같이 전달되기 위해 제형화되어야 한다는 것을 시사하도록 의도되진 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적 치료제 또는 의료 절차와 동시에, 그보다 먼저, 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각 작용제는 그 작용제에 대해 정해진 투여량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다. 추가로, 본 발명은 신체 내에서 그의 생체이용률을 개선시키고, 그의 대사를 감소 및/또는 수정하고, 그의 분비를 억제하고, 및/또는 그의 분포를 수정할 수 있는 작용제와 조합하여 본 발명의 약학적 조성물을 전달하는 것을 아우른다. 이 조합에서 사용되는 본 발명의 HDAC 억제제 및 치료 활성제는 단일 조성물로 같이 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있다는 것이 더 이해될 것이다.

조합 요법에 사용되는 특정한 조합은 달성될 목적 치료 효과 및/또는 본 발명의 펩타이드를 포함하는 절차 및/또는 치료 활성제의 적합성을 고려할 것이다. 사용되는 조합은 동일한 장애에 대해 목적 효과를 달성할 수 있고(예를 들어, 본 발명의 HDAC 억제제는 동일한 장애를 치료하는 데 사용되는 또 다른 치료 활성제와 병용하여 투여될 수 있다), 및/또는 이것들은 상이한 효과를 달성할 수 있다(예를 들어, 임의의 부작용 제어)는 것이 이해될 것이다.

본 발명에 있어서, "치료 활성제"는 장애를 치료, 예방, 지연, 환원 또는 개선시키기 위한 의약으로서 사용되는 임의의 물질을 가리키고, 예방적 및 치유적 치료를 포함하는, 치료에 사용되는 물질을 가리킨다.

일부 실시예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 하나 이상의 증상 또는 비만증 특징을 치료, 경감, 개선, 완화시키고, 그 개시를 지연시키고, 그 진행을 억제시키고, 그 중증도를 감소시키고, 및/또는 그 발생률을 감소시키는 데 유용한 임의의 치료 활성제 또는 절차 (예를 들어, 수술, 방사선 요법)와 조합하여 투여될 수 있다.

본 발명에 있어서, 건강기능식품은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 본 발명의 HDAC 억제제를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 본 발명의 HDAC 억제제를 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 HDAC 억제제를 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 HDAC 억제제와 비만증 예방 또는 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

본 발명에 있어서, HDAC 억제제를 건강음료로 이용하는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

본 발명에 있어서, HDAC 억제제는 비만증 예방 또는 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 비만증 예방 또는 개선 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 건강기능식품용 조성물은 HDAC 억제제와 함께 비만증에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 외에 본 발명의 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않은 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명한 것이다.

[실시예]

실험재료 및 방법

(실시예 1-1) 실험 물질

모든 실험에서 단국대 약대에서 제조한 F3: FT895 3mg/kg, F5: FT895 5mg/kg을 사용하였다.

(실시예 1-2) 실험계 선정

Gemparmatech (GPT)에서 생산된 SPF(Specific Pathogen Free) C57BL/6j 마우스를 ㈜두열바이오텍에서 구입하였다. C57BL/6j 마우스는 비만질환 시험에 널리 사용되고 있다.

입수시 마우스의 성별, 동물수, 주령은 수컷, 90마리 6주령이였으며, 질환유도 및 시험물질 투여시 성별, 동물수, 주령은 수컷, 60마리 20주령이였다. 반입시 동물의 외관 검사를 실시하고 개체식별법에 따라 꼬리에 표기하였다. 7일의 순화기간을 거쳐 해당 동물실로 이동하며, 매일 1회 일반증상을 관찰하였다. 순화기간 종료일에 일반증상을 확인하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.

동물실험은 도 1과 같이 설계하였다.

(실시예 1-3) 실험 마우스 개체 및 사육상자 식별

순화기간 중에는 입수시에 동물의 꼬리에 청색 유성펜을 이용하여 개체표시를 하고, 사육상자에는 순화기간 개체식별카드를 부착하였다. 관찰기간 중에도 유성펜을 이용하여 동물의 꼬리부위에 개체표시를 하고, 사육상자에는 개체식별카드를 부착하였다.

(실시예 1-4) 실험 마우스의 고지방 식이에 의한 체중 증가 및 군분리

고지방식이 12주 후, 일반증상 및 체중증가에 이상이 없는 동물을 선정하여 체중을 기준으로 군을 분리하였다. 고지방식이 군은 정상식이 군에 비해 유의적으로 체중이 증가하였으며 군간 체중의 차이가 없도록 군 분리하였다(도 2, 표 1 및 표2). 군 설정 후 잔여동물은 시험계로부터 제외시켰다.

실험 마우스의 체중

Group	Control Diet	High Fat diet	High Fat + F3	High Fat + F5
평균값	28.41±0.40	45.28±1.02	46.41±0.79	46.34±0.97

Control diet vs High Fat Diet: *P<0.05

실험 마우스의 군분리

Group

Weight

0주

1주

2주

3 주

4주

5주

6주

7주

8주

9주

10주

11주

Control Diet

22.6± 0.31

24.2± 0.30

25.0±0.36

25.8±0.40

26.3±0.40

26.6±0.41

27.1±0.44

27.3±0.45

27.7±0.45

28.2±0.45

28.2±0.43

28.6±0.44

High Fat Diet

22.2± 0.12

25.8±0.16 *

27.7±0.20 *

29.7±0.24 *

31.7±0.27 *

33.9±0.31 *

36.7±0.35 *

38.9±0.41 *

40.9±0.47 *

42.5±0.50 *

43.8±0.37 *

44.6±0.39 *

Control diet vs High Fat Diet: *P<0.05

(실시예 1-5) 실험 마우스의 질환유도

개체에 고지방 사료식이를 12주간 급이 시켜 Diets induced obesity (DIO) 비만 모델을 확립하였다.

(실시예 1-6) 실험 마우스의 사육환경 조건

실험 마우스의 사육환경 조건은 하기 표 3과 같다.

실험 마우스의 사육환경 조건

사육조건	SPF (Specific Pathogen Free)
사육상자	Polysulfone, 369Lx215Wx185H(mm)
사육밀도	검역·순화기간 3마리, 시험기간 2-3마리
사육온도	평균 22.2℃
상대습도	평균 46.3%
환기횟수	10 ~ 20회/시간
조명시간	12시간/일, 명조건 12시간(07:00~19:00), 암조건 12시간(19:00~07:00)

(실시예 1-7) 실험 마우스의 사료 및 음수

Research Diet에서 제조된 사료(60%kcal high fat diet, D12492)를 급이기에 넣어 자유섭취 하였다. 공급원에서 사료의 '성분분석 성적서'를 검토하여 결과에 영향을 줄만한 요인이 없음을 확인하였다. 또한, 카본필터, 미세여과장치 및 자외선 살균으로 소독한 상수도를 음수병에 넣고 자유섭취하도록 하였다. 수질검사는 '먹는 물 수질검사'에 따라 실시하였다.

(실시예 1-8) 실험 마우스에 실험 물질 투여

실험 마우스에 실험 물질을 투여하기 위하여 Intraperitoneal (IP) injection을 수행하였고 실험기준에 따라 선택하였다. 3주동안 매주 1회씩 실험 물질을 체중을 기준으로 syringe를 이용하여 복강에 Intraperitoneal (IP) 투여하였다.

(실시예 1-9) 실험 마우스의 군 구성

실험 마우스의 군 구성은 하기 표 4와 같다.

실험 마우스의 군 구성

Groups	Animal number	Sex	Treat Dose concent. (Vol.)
G1 ( DMSO, 정상식이)	10	male	200ul,
G2 ( DMSO, 60%kcal HFD)	10		200ul,
G3 ( F3 (3 mg/kg), 60%kcal HFD)	10		200ul, 3 mg/kg
G4 ( F5 (5 mg/kg), 60%kcal HFD)	10		200ul, 5 mg/kg

(실시예 1-10) 실험 마우스 관찰 및 검사항목

모든 동물에 대하여 부검일까지 매일 1회 이상 일반증상을 관찰하였다. 든 동물에 대하여 비만 유도시 매주 1회 체중을 측정하였고, 약물 투여시 첫 투여일(Day 1)과 매주 3회씩 측정하였다.

채혈은 하루 전 절식을 실시한 후 부검시 심장에서 혈액을 채집하였고 채집된 혈액은 헤파린이 들어있는 tube에 담아 원심분리하여 개체정보가 기재된 1.5mL micro tube에 300ul 이상씩 담아 -80℃ 이하 냉동 보관을 하였다.

실험종료일에 모든 생존동물을 CO₂를 이용하여 흡입 마취시킨 후 개복하여 후대정맥 및 복대동맥을 절단하는 방법으로 방혈치사 시켜 육안적으로 모든 장기를 검사하였으며, 지방, 간을 적출하여 포름알데히드(Formaldehyde)에 고정하였다.

조직병리학적 검사 및 Insulin Tolerance Test (ITT), Glucose Tolerance Test (GTT) 측정을 수행하였다. 6시간 동안 절식시킨 후 인슐린 (Insulin, 0.75U/kg) 복강 투여한 후 ITT를 측정하였으며, 16시간 동안 절식시킨 후 포도당 (glucose, 1g/kg)을 복강 투여한 후 IPGTT를 측정하였다. 혈당치는 Insulin 주사 후 0, 15, 30, 60분 또는 포도당 주사 후 0, 15, 30, 60, 90, 120 min 후 꼬리정맥에서 채혈하여 혈당을 측정하였다.

혈액 검체는 원심분리 (3,000 rpm, 4℃, 10 min)하여 혈장을 분리한 후, 생화학분석장비 (Hitachi 7020)를 이용하여 Total Cholesterol, TG, AST, ALT, 공복 혈당 측정을 수행함으로써 혈중 마커를 분석하였다.

비만 동물모델의 내장지방 축적을 조사하기 위하여 Magnetic resonance imaging (MRI)로 동물의 지방축적을 조사하였다.

백색 지방조직에서 베이지화 분석을 위해, 백색지방, 갈색지방 및 서해부 지방 조직의 H&E 염색을 수행하였고, UCP-1, HDAC11 및 HDAC3에 대한 면역조직화학적 분석을 수행하였으며, 지방조직내 대식세포 침윤(F4/80)을 조사하였다.

통계처리

모든 시험의 결과는 평균치와 표준편차를 사용하여 나타내며, 각 군간의 비교는 GraphPad Prism 6.0 (GraphPad software, San Diego, CA)를 사용하여 ANOVA분석을 수행하며 유의성이 인정된 경우 사후검정은 Bonferroni로 수행하였다. 군 간을 비교하여 5%의 유의수준에서 유의성을 검증하였다.

실험 마우스의 사망률

사망 개체는 발견되지 않았다(표 5).

실험 마우스의 사망률

Group	No. of animals	Day after injection									Mortality (dead/total)
		0	2	4	8	10	12	14	16	18
Control Diet	10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0% (0/10)
High Fat Diet	10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0% (0/10)
High Fat Diet + F3	10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0% (0/10)
High Fat Diet + F5	10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0% (0/10)

실험 마우스의 일반증상 관찰

실험 마우스의 실험 물질에 의한 이상증상이 발견되지 않았다(표 6).

실험 마우스의 임상증상(Clinical Signs)

Group

No. of animals

Day after injection

0

2

4

8

10

12

14

16

18

Control Diet

10

N

N

N

N

N

N

N

N

N

High Fat Diet

10

N

N

N

N

N

N

N

N

N

High Fat Diet + F3

10

N

N

N

N

N

N

N

N

N

High Fat Diet + F5

10

N

N

N

N

N

N

N

N

N

실험 마우스에 실험 물질 투여로 인한 외형 관찰 및 체중 변화

마우스 외형 조사 결과, 시험물질에 의한 항비만 효과가 관찰되었다(도 3).

또한, F3, F5약물을 처리한 실험 마우스에서 유의적인 체중 변화가 관찰되었다(도 4 및 표 7)

실험 마우스의 체중 변화

Group	0 Day	2 Day	4 Day	8 Day	10 Day	12 Day	14 Day	16 Day	18 Day
Control diet	28.7±0.45	28.6±0.40	28.2±0.45	28.7±0.44	28.6±0.47	28.6±0.47	28.0±0.44	28.7±0.52	28.6±0.48
High Fat Diet	46.0±1.25	46.8±1.29	46.1±1.28	46.5±1.24	47.0±1.22	46.6±1.24	46.0±1.19	46.6±1.28	46.9±1.30
High Fat Diet + F3	46.4±0.79	44.4±0.72	42.9±1.10	43.7±0.71	43.8±0.79 *	43.3±0.72 *	42.6±0.70 *	42.2±0.67 *	42.2±0.63 *
High Fat Diet + F5	46.3±0.97	45.1±1.02	44.1±1.06	43.9±1.13	43.7±1.16	43.0±1.08 *	42.0±1.11 *	42.2±1.18 *	41.6±1.13 *

High Fat Diet vs Drug treated groups: *P<0.05

실험 마우스에 실험 물질 투여로 인한 내당능 및 인슐린 저항성 변화

Glucose Tolerance Test 분석 결과, F3, F5 약물 처치 실험 마우스에서 약물 효능이 관찰되었다(도 5 및 표 8).

당부하검사(Glucose Tolerance Test) 결과

	Time (min)
Group	0	15	30	60	90	120
Control Diet	175±4.4	305.4±7.12	301±6.35	211.2±5.18	198.2±2.55	153.76±1.65
High Fat Diet	253±11.50	493.8±17.84	534±21.76	460.6±11.63	374.6±12.54	279.68±23.85
High Fat Diet + F3	210.2±6.24 *	403.6±25.60 *	406.8±19.18 *	326.8±29.82 *	282±19.06 *	201.92±11.92 *
High Fat Diet + F5	209.6±8.92 *	420±25.87	397.4±18.38 *	338.6±20.00 *	263±16.12 *	178±10.98 *

High Fat Diet vs Drug treated groups: *P<0.05

Insulin Tolerance Test 분석 결과, F3 및 F5 약물 처치 마우스 군에서 약물 효능이 관찰되었다(도 6 및 표 9).

인슐린 내성검사(Insulin Tolerance Test) 결과

	Time (min)
Group	0	15	30	60
Control Diet	177.2±3.89	150.6±2.38	114.6±1.72	105.4±1.17
High Fat Diet	295.2±3.35	266.6±5.70	166.8±5.10	135.4±5.27
High Fat Diet + F3	248±9.75 *	148.8±10.23 *	112.6±2.16 *	93.2±5.27 *
High Fat Diet + F5	255.2±4.36 *	187.6±16.47 *	143.6±8.70	106.2±13.33

High Fat Diet vs Drug treated groups : *P<0.05

실험 마우스의 혈액분석

혈액 분석은 아스파르테이트 아미노전달효소(Aspartate transaminase; AST), 알라닌 아미노전이효소(Alanine Aminotransferase; ALT), 트리글리세리드(triglyceride; TG), 총 콜레스테롤(Total cholesterol), 유리 지방산(free fatty acids; FFA), Fasting Glucose 분석을 수행하였다.

그 결과, F3 및 F5 처리한 군에서 고지방에 의한 AST, ALT, TG가 감소하였으며, F3, F5 약물 처치 마우스군에서는 Total cholesterol, FFA가 감소됨이 관찰되었다(도 7-8, 표 10).

실험 마우스의 혈액 검사 결과

Group	AST	ALT	TG	T.Chol	FFA
Control Diet	73.33±3.95	19±0.68	71±0.85	99.66±1.74	865.66±25.71
High Fat Diet	263.33±42.80	89.66±16.34	111.83±4.13	196.33±10.92	1001.33±50.06
High Fat Diet + F3	80.33±6.07 *	54±11.71	70.66±4.86 *	108.33±7.06 *	715.33±14.75 *
High Fat Diet + F5	101.33±19.23 *	51.66±4.11 *	73±1.61 *	101±4.55 *	703.33±26.43 *

High Fat Diet vs Drug treated groups: *P<0.05

실험 마우스 조직의 외형과 무게 분석 결과

조직무게 분석 결과, 약물처치에 따라 조직무게의 유의적인 변화가 관찰되었다(도 9-10, 표 11).

실험 마우스 조직 무게

Group	Liver	Brown Fat	Epididymal Fat	Inguinal Fat
Control Diet	0.95±0.02	0.11±0.005	0.42±0.03	0.21±0.06
High Fat Diet	1.82±0.12	0.37±0.02	2.41±0.13	1.66±0.10
High Fat Diet + F3	1.47±0.05 *	0.21±0.01 *	2.26±0.10	0.86±0.11 *
High Fat Diet + F5	1.54±0.09 *	0.27±0.008 *	1.93±0.12 *	0.94±0.14 *

High Fat Diet vs Drug treated groups: *P<0.05

실험 마우스의 복부 MRI 분석

복부 MRI 촬영 결과, 특히 F5 약물을 처치한 마우스군의 복부 지방이 감소됨을 관찰하였다(도 11 및 12).

실험 마우스의 지방 조직 분석 결과

지방조직 병리학적 검사 결과, 정상 마우스 군에 비하여 고지방식이를 수행한 비만 마우스 군에서는 Brown Fat, Inguinal Fat, Epididymal Fat 등 지방의 크기가 커졌으나 약물을 처치한 마우스 군에서는 무게 변화가 나타남이 관찰되었다. 특히 F5 약물을 처치한 마우스 군에서 지방이 현저히 감소함이 관찰되었다 (도 13-15).

실험 마우스의 간 MRI 및 조직 분석 결과

복부 MRI 촬영 결과, 정상 마우스 군에 비하여 고지방식이를 수행한 비만 마우스에서는 간 조직에 지방간이 축적되었으나, 약물을 처치한 마우스 군에서는 지방간 병증이 완화됨을 확인하였으며 이는 조직병리학적 방법으로 재확인하였다(도 16).

실험 마우스의 백색 지방조직에서 베이지화 분석 결과

백색지방조직에서 베이지화 분석을 위하여 UCP-1 염색을 수행하였다.

그 결과 F3, F5 약물을 처치한 마우스 군의 Inguinal Fat에서 UCP-1의 발현이 증가됨을 관찰하였다(도 17-18).

HDAC11 면역염색 수행 결과

In vivo에서 처치한 약물의 활성을 확인하기 위하여 HDAC11 면역염색을 수행하였다. 그 결과, F3와 F5 약물을 처치한 마우스 군에서는 HDAC11의 활성이 감소가 관찰되었다 (도 19).

즉, 비만 마우스에서 F3, F5약물을 각각을 처치한 마우스 군에서 항 비만 효과를 확인하였다.

다양한 실험 물질들의 HDAC 11 억제 효과

HDAC4 활성 저해물질을 스크리닝하기 위하여 GBSA 보유 소재 중 FDA 승인물질(이하, FDA) 1,920종과 임상진입 약물(이하, Clinical) 2,560종 등 총 4,480종의 물질에 대하여 10 μM 농도로 HDAC 활성 스크리닝을 실시하였다. 그 결과, HDAC 11억제제를 Cyclizine 2HCl, Voxtalisib, Silver sulfadiazine, 1,4-Naphthoquinone, FT895 를 선정하였고, 그 중 지방분화에 효과가 가장 좋은 FT895의 항비만 효과를 조사하였다.

본 실험에서 다음과 같은 실험재료를 사용하였다: Selleckchem에서 구입한 Cyclizine 2HCl, Voxtalisib (XL765, SAR245409) 및 Silver sulfadiazine, Sigma-Aldrich에서 구입한 1,4-Naphthoquinone, medchemexpress(MCE)에서 구입한 FT895, Fluorogenic HDAC11 Assay Kit(BPS Bioscience, 50687), 384 black clear bottom plate(Greiner, 781091), 384 V bottom plate(Greiner, 781280), 96 black clear bottom plate(Greiner, 655090), 96 V bottom plate(Greiner, 655801), Reservoir(Corning, 4870), Envision(Perkin Elmer)

상기 실험 물질들(Cyclizine 2HCl, Voxtalisib (XL765, SAR245409), Silver sulfadiazine, 1,4-Naphthoquinone, FT895)의 HDAC11 활성 측정하였다. 실험 물질들을 assay buffer에 최종 농도가 50 μM (final 농도 10μM 의 5X)이 되도록 희석한다. 대조물질인 TSA (Test inhibitor)도 시료와 동일하게 15 ㎕ buffer에 희석하여 준비한다. 희석된 약물을 2 ㎕를 384 well black bottom plate 에 분주한다. HDAC11 enzyme을 384 well plate에 10 ng/well이 되도록 assay buffer에 희석한 후 각 well에 4 ㎕씩 넣는다. Substrate (Fluorogenic HDAC substrate class 2A)를 assay buffer에 최종 농도가 2 μM이 되도록 희석하고, 각 well에 4 ㎕씩 넣어 37℃에서 30분간 반응시킨다. Microplate reader인 Envision 에서 Excitation 355 ㎚/ Emission 460 ㎚에서 형광을 측정하여 전체 Plate의 Blank 값으로 하여 최종 형광 값에서 제하여 준다. HDAC Developer (2x)를 동량인 10 ㎕ 넣고 상온에서 15분 동안 반응시켜준다. Excitation 355 ㎚/ Emission 460 ㎚에서 형광을 측정하여 blank 값을 빼주고, %inhibition을 계산하였다.

그 결과, Cyclizine 2HCl, Voxtalisib (XL765, SAR245409), Silver sulfadiazine, 1,4-Naphthoquinone, FT895 약물이 모두 in vitro에서 HDAC 11 억제 효과를 나타냈다. 그 중 Voxtalisib (XL765, SAR245409), FT895 약물이 현저하게 HDAC 11억제 효능이 있음을 알 수 있었다. 즉, FT895의 HDAC 11억제를 통한 항비만 효과가 현저하게 우수하다는 것을 나타낸다.

FT895의 지방세포 분화 억제 효과

3T3-L1 fibroblasts는 지방세포로 분화 가능한 세포주로 American Type Culture Collection(ATCC, Rockville, USA)에서 구입하였다. 분양 후 5-10 passage 배양 후 질소 탱크에 저장하였고 필요시마다 꺼내 다시 5-20 passage 내에서 배양한 세포를 사용하였다. 3T3-L1 세포배양은 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM; Gemini, USA)에 10% fetal bovine serum(Gemini, USA)을 섞어서 사용하였다. 지방의 분화 정도는 3T3-L1 세포에 분화배지인 [1 mg/l insulin(Eli Lilly, USA), 120 mg/l 3-isobutyl-1-methylxanthine(IBMX; Sigma, USA), and 0.1 mg/l dexamethasone(DEX; Sigma, USA)]를 첨가하여 48시간 배양 후 인슐린만 있는 배지로 교환 후 48 시간 배양 후 10% FBS DMEM 배지로 교환하여 완전한 지방세포로 분화시켰다. 분화의 정도를 확인하기 위하여 분화가 끝난 지방세포를 BODIPY 493/503 (493 excitation wavelength/ 503 emission wavelength)으로 염색 후 confocal microscope (Zeiss LSM 710, )으로 확인하였다. 이러한 지방세포 분화과정 중 분화유도 배지 첨가시 HDAC 11억제제를 Cyclizine 2HCl 2.5 uM, Voxtalisib 1uM, Silver sulfadiazine 2.5 uM, 1,4-Naphthoquinone 1uM, FT895 2.5uM 함께 처리하여 지방 분화 정도를 조사하였다.

그 결과, Voxtalisib 1uM, Silver sulfadiazine 2.5 uM, 1,4-Naphthoquinone 1uM, FT895 2.5uM를 처리한 경우 3T3-L1 adipocyte의 분화가 감소하는 현상을 확인 할 수 있었다. 특히 FT895의 3T3-L1 adipocyte 지방분화 억제 효과가 가장 우수하였다.

Claims (10)

1. FT895를 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
5. 제 1항에 있어서,
   상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
6. FT895를 유효성분으로 포함하는 비만증 예방 및 개선용 건강기능식품.
   
7. 제 6항에 있어서,
   상기 FT895는 0.01 mg/kg 내지 10² mg/kg의 중량비(w/w)로 포함하는 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.
   
8. 제 6항에 있어서,
   상기 FT895는 총 콜레스테롤(Total cholesterol) 및/또는 유리지방산(Free Fatty acid)를 감소시키는 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.
   
9. 제 6항에 있어서,
   상기 FT895는 복부지방, 갈색 지방(Brown Fat), 서혜부 지방(Inguinal Fat), 부고환 지방(Epididymal Fat) 및 지방간으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 지방을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.
   
10. 제 6항에 있어서,
    상기 FT895는 백색 지방조직에서 베이지화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.