KR20240004403A - 단백질-거대분자 접합체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

단백질-거대분자 접합체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 본 명세서에 정의된 바와 같은 단백질-거대분자 접합체, 방출 가능한 링커 및 거대분자를 제공한다. 개시된 접합체는 적어도 링커 특성, 링커-거대분자 모이어티의 수 및 상기 단백질-거대분자를 생성하는 제조 방법에 기초한 고유한 특성을 제공한다. 본 명세서에서는 또한 합성 방법 및 질환 및 장애의 치료에서의 접합체의 용도를 제공한다.

Description

단백질-거대분자 접합체 및 이의 사용 방법
[관련 출원의 상호 참조]
본 출원은 2021년 3월 29일에 제출된 미국 가출원 No. 63/167,419의 우선권을 주장하는 바, 해당 특허 출원의 모든 내용은 참조로서 본 명세서에 포함된다.
[서열 목록]
본 출원은 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출되고, .txt 형식의 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. 상기 .txt 파일은 2022년 3월 29일에 작성되고 크기가 약 ~1.5킬로바이트인 "CSPL_014_01WO_SeqList_ST25.txt"라는 파일명의 서열 목록을 포함한다. 해당 .txt 파일에 포함된 서열 목록은 본 명세서의 일부로, 그 모든 내용은 참조로서 본 명세서에 포함된다.
[기술분야]
본 개시내용은 기능성 링커를 이용하여 단백질-거대분자 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 개시내용은 생물학적 기능을 갖는 단백질을 전달하는 데 있어서 약동학 제어를 위해 설계된 신규한 접합체에 관한 것이다. 구체적으로, 본 개시내용은 원하는 단백질 방출 속도를 갖는 단백질-거대분자 접합체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 개시내용은 IL-2 모이어티(즉, 인간 IL-2와 유사한 적어도 일부 활성을 갖는 모이어티), 거대분자 및 하나 또는 복수의 링커를 갖는 접합체에 관한 것이다. 또한, 본 개시내용은 접합체 조성물, 접합체의 제조 방법, 접합체의 투여 방법 및 암 요법 분야에서 상기 접합체의 사용 방법에 관한 것이다.
많은 약물이 이의 효과를 제한하는 바람직하지 않은 약동학 파라미터로 인해 어려움을 겪는다. 대사 또는 배설을 통해 생리학적 구획으로부터 이러한 약물을 신속하게 제거하는 것은 짧은 반감기 및 표적에 대한 감소된 노출을 초래한다. 예를 들어, 자연 단백질을 기반으로 하는 치료 효능제는 효과적이고 지속적인 항종양 반응을 일으키는 데 도움이 될 수 있는 매력적인 면역 조절제이지만; 이들은 불량한 약동학(PK), 불량한 내약성 및 빈번한 용량 투여에 의해 악화될 수 있는 다면발현성 활성(pleiotropic activity)으로 인해 이상적인 약제가 아니다.
사이토카인 인터류킨-2(IL-2)는 IL-2 경로의 내인성 작용제이며 상세히 설명된 CD8+ T 세포(CD8 T) 및 NK 세포의 자극제이다. "알데스류킨(aldesleukin)"으로 알려진 IL-2 변이체를 사용하여 병원 환경에서 8시간마다 투여되는 고용량 IL-2 요법은 전이성 흑색종 및 신장 세포 암종의 치료를 위해 미국 식품의약국에 의해 1990년대에 승인되었고, 최대 25%의 지속적인 반응을 제공한다. 저친화도 IL-2 수용체 β γ 서브유닛(IL-2Rbg)을 발현하는 경향이 있는 CD8 T 세포 및 NK 세포를 활성화하기 위해서는 고용량의 IL-2가 필요하다. 고용량의 IL-2에 대한 필요성 증가는 이 단백질의 불량한 PK 프로파일로 인한 것이다. 고용량 알데스류킨은 면역계의 과활성화와 연관된 심각한 독성으로 인해 널리 사용되지 않는다. 이러한 독성 외에도, IL-2는 또한 조절 T 세포(Tregs)의 증식 및 활성화를 자극한다. 이러한 세포는 고친화도 이종삼량체 IL-2 수용체 α β γ 서브유닛(IL-2Rabg)을 구성적으로 발현한다. Treg 활성화는 면역 억제를 악화시켜, 의도된 항종양 반응을 잠재적으로 손상시킬 수 있다.
중합체 전구약물 및 중합체-약물 접합체는 치료 적용을 위한 약물의 효과를 개선할 수 있다. 중합체 접합된 약물은 일반적으로 연장된 반감기, 더 높은 안정성, 수용성, 더 낮은 면역원성과 항원성 및 조직 또는 세포에 대한 특이적 표적화를 나타낸다. 중합체는 약물, 단백질, 표적화 모이어티 및 영상화제의 전달을 위한 중합체 전구약물/거대분자 전구약물의 담체로 사용된다. 중합체 전구약물은 지속적인 기간 동안 중합체 사슬 분자로부터 더 작은 치료 약물 분자를 방출함으로써 치료 활성을 나타내는 약물 전달 시스템으로 간주될 수 있고, 이는 반감기, 생체이용률 및 이에 따라 연장된 약리학적 작용을 증가시킴으로써 약동학적 거동을 향상시킨다.
IL-2의 독성 문제 및 불량한 PK 특성을 해결하려는 시도에서, IL-2의 특정 접합체가 제안되었다. 예를 들어, 미국 특허 제4,766,106호, 제5,206,344호, 제5,089,261호, 제4,902,502호, 제9,861,705호 및 국제 특허 제WO2019/028419호 참조.
혈장 반감기를 연장시키고, 면역원성을 감소시키는 것 외에도, 페길화는 단백질 결합의 선택성을 제어할 수 있는 기회를 제공한다. 예를 들어, 페길화된 IL2 임상 후보인 NKTR-214는 IL-2-IL-2Rα 계면의 라이신 잔기에서 방출 가능한 링커(releasable linker)를 갖는 부위-특이적 페길화로 인해 IL-2 수용체 α-서브유닛(IL-2Rα)에 대한 감소된 결합을 나타낸다. IL-2 수용체 β-서브유닛(IL-2Rβ)에 대한 결합은 최소한의 영향을 받는다. 결과적으로, NKTR-214는 전임상 평가에서 IL2에 비해 CD8+ 종양-사멸 기억 효과기 T 세포의 증식을 증가시키고, 면역 억제 조절 T 세포의 증식을 감소시키며, 항종양 효능을 향상시킨다. 예를 들어, 미국 특허 제9,861,705호, 문헌 Clin. Cancer Res. 22, 680-690 (2016); PLOS ONE 12, e0179431 (2017) 참조.
링커 화학의 선택은 활성제의 절단 및 후속 방출에 대한 시공간 제어를 부여하기 때문에, 중합체-약물 접합체 치료제의 설계에서 중요하다. 링커 안정성이 충분하지 않으면, 접합된 약물은 조기 방출을 나타내어, 거대분자 담체의 이점을 무효화할 수 있다. 그러나, 불활성 중합체 전구약물의 경우, 불충분한 약물 방출은 치료 약물 수준보다 낮고, 결국은 최적보다 낮은 치료 효능을 초래할 수 있다. 따라서, 연장된 치료 효능을 제공하는 지속적인 약물 방출 프로파일이 매우 바람직하다.
일부 전구약물 분자는 pH-의존적 β 제거에 의해 생리학적 조건에서 활성 약물을 방출한다. 이러한 접근법은 접합체가 생리학적 pH에 노출될 때 유발되는 PEG 담체로부터 약물의 자발적인 1차 절단 속도를 활용한다. 이들의 절단 속도는 링커 상의 C-H 결합의 산성도에 의해 미리 결정되고; 산성도는 이온화 가능한 C-H에 연결된 전자-끌기기에 의해 차례로 제어된다. 예를 들어, 미국 특허 제6,504,005호, 제8,680,315호 및 국제 특허 제WO2004/089279호 참조.
이들의 광범위한 사용에도 불구하고, PEG 및 치료제에서 이의 후속 사용의 명백한 제한은 이의 비-생분해성에 있다. 현재, 승인된 페길화된 단백질 치료제는 대략 50kDa의 사구체 여과 역치에 가까운, ≤40kDa 분자량의 PEG를 사용한다. 증가된 분자량은 일반적으로 연장된 순환 시간을 제공하지만, 비-생분해성 PEG의 축적에 대한 우려는 중합체 분자량 및 결과적인 약동학의 최적화를 제한한다.
본 명세서에는 복수의 링커를 갖는 단백질 접합체의 일반적인 설계가 기재되어 있다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 거대분자를 더 포함한다. 본 개시내용의 고유한 링커는 예측 가능하고, 조정 가능한 방출 동역학을 갖는 약물 접합체의 구축을 가능하게 한다. 또한, 각각의 거대분자의 분자량은 신장 제거를 위해 바람직한 분자량 하에 제어될 수 있으며, 일부 실시형태에 있어서, 상기 분자량은 40~50kDa 미만이다. 단백질 상의 거대분자의 수(예를 들어, 본 개시내용에 기재된 접합체 중의 z, z1 및 z2)를 증가시킴으로써, 접합체의 총 분자량이 증가될 수 있고, 그에 따라 접합체의 순환 시간이 연장될 수 있다. 방출 가능한 링커 상에 조정 가능한 전자 끌기기를 사용하는 것 외에도, 활성 단백질의 방출 속도는 단백질 상의 거대분자(z) 수를 변경시킴으로써 추가로 제어되고, 최적화될 수 있다.
일반적으로, 하나의 단백질에 복수의 거대분자를 접합시키는 것은 어렵고, 효율적이지 않다. 본 발명자들은 복수의 기능성 링커를 갖는 단백질의 접합에 대한 일반적인 접근법을 구상한 후, 상기 링커와 거대분자를 반응시켜 단백질-[거대분자]z 접합체를 제공하였다. 이 기술은 입체 장애를 최소화하는 이점을 제공하므로 반응 효율이 향상된다. 또한, 합성 단계 및 정제 단계가 단순화되고, 비용이 저렴하다. 따라서, 이 기술은 중합체-단백질 치료제의 대규모 생산 및 제조에 상당한 이점을 제공한다.
본 개시내용은 화학식 (XIX), (XXIII), (XX), (XX-I), (XXIV), (XXV), (XXVI), (XXVII), (VII), (VII-A), (VII-A1), (VII-B), (VII-C), (VII-D), (XXVIII), (XXIX), (XXIX-I), (XXX), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), (XIII), (XIII-I), (XIII-A), (XIII-A-I), (XIII-A1), (XIII-A1-I), (XIII-B), (XIII-B-I), (XIII-B1), (XIII-B1-I), (XIII-C), (XIII-C-I), (XIII-C1), (XIII-C1-I), (XIII-D), (XIII-D-I), (XIII-D1), (XIII-D2), (XIII-D1-I), (XIII-D2-I), (XXXI), (XXXII), (XXXII-I), (XXXIII), (XXXIV), (XXXV), (XXXVI), (XXXVII), (XIV), (XV) 및 (XVI)로 표시되는 접합체, 예를 들어 실시예 25~43의 접합체("본 개시내용의 접합체"로 통칭함)와 같은 임의의 아속 및 이에 함유된 물질을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 적어도 하나의 방출 불가능한 링커를 포함한다. 제어 가능한 방출 속도를 갖는 접합체는 질환 치료를 위해 유용한 치료 도구를 제공할 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용에 기재된 접합체의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 방법은 스킴 I, II 또는 III에 개시된 단계를 포함한다. 따라서, 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 링커로 연결된 관련 생물학적 기능을 갖는 단백질 및 복수의 거대분자를 갖는 접합체를 제조하기 위한 접합 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합 방법은 기능성 링커를 사용한 단백질의 기능화, 그에 따른 거대분자에 대한 접합을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 사이토카인, 케모카인, 항체 및 펩티드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 수용성 중합체, PEG, 지질, 폴리시알산, 알부민 및 Fc를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 개시내용은 또한 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커("본 개시내용의 방출 가능한 링커"로 통칭됨)에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 신규한 기능성 방출 가능한 링커 및 이의 조성물, 치료 적용에서의 신규한 기능성 방출 가능한 링커의 이용 및 치료 방법에 관한 것이다. 여기서, 개시된 기술의 이점은 본 명세서에서 제공된 복수의 기능성 방출 가능한 링커로 단백질을 효율적으로 기능화시키는 능력이다. 그 다음, 거대분자에 대한 접합을 사용하여 고도로 기능화된 단백질의 약동학적 특성을 개선시킬 수 있다.
본 개시내용은 또한 방출 가능한 링커와 방출 불가능한 링커 모두를 이용하여 단백질과 거대분자를 연결하는 신규한 기술에 관한 것이다. 여기서, 개시된 기술의 이점은 방출 가능한 링커로 단백질 상의 특정 위치를 일시적으로 점유하는 능력이다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 방출 가능한 링커를 통해 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 방출 불가능한 링커를 통해 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 방출 불가능한 링커 및 방출 가능한 링커 모두를 통해 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 방출 불가능한 링커를 통해 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함하며, 이는 방출 불가능한 링커와 방출 가능한 링커 모두를 통해 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2의 접합체로부터 가수분해된다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시내용에 기재된 접합체의 전달 방법이 제공되며, 상기 방법은 IL-2의 잔기 및 수용성 중합체의 접합체로 구성된 조성물을 환자의 정맥내 또는 피하로 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 본 개시내용에 기재된 접합체의 전달 방법이 개시되며, 상기 방법은 암 환자에게 (a) IL-2의 잔기 및 하나 또는 복수의 수용성 중합체의 접합체를 포함하는 조성물; 및 (b) 유효량의 항-CTLA-4 항체 또는 유효량의 항-PD-1/PD-L1 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 유효량의 항-CTLA-4 항체는 CTLA-4 경로를 저해하는 양이다. 일부 실시형태에 있어서, 유효량의 항-PD-1/PD-L1 항체는 PD-1/PD-L1 경로를 저해하는 양이다. 명확성을 위해, 상기 방법에 따른 단계의 순서와 관련하여 달리 제시되지 않는 한, 상기 방법은 상기 단계의 순서에 제한되지 않으며, 단계 (a)는 단계 (b)를 수행하기 전에, 후에 또는 동시에 수행될 수 있다.
본 개시내용은 본 명세서에 정의된 바와 같은 단백질-거대분자 접합체, 방출 가능한 링커 및 거대분자를 제공한다. 개시된 접합체는 적어도 링커 특성, 링커-거대분자 모이어티의 수 및 상기 단백질-거대분자를 생성하는 제조 방법에 기초한 고유한 특성을 제공한다. 본 명세서에서는 또한 고유한 합성 방법 및 질환 및 장애의 치료에서의 접합체의 용도를 제공한다.
본 개시내용의 다른 실시형태는 하기 설명 및 청구범위에 제시된다.
도 1은 rIL-2의 아미노산 서열(서열번호 1)을 도시한다.
도 2는 실시예 25, 실시예 26 및 실시예 27에 대해 LC-MS에 의해 결정된 IL-2-(N3)x의 분포를 도시한다.
도 3A-3D는 실시예 31(도 3A), 실시예 38(도 3B), 실시예 39(도 3C) 및 실시예 40(도 3D)에 대해 LC-MS에 의해 결정된 IL-2-(N3)x의 분포를 도시한다.
도 4A-4B는 실시예 37(도 4A) 및 실시예 40(도 4B)에 대해 SDS-PAGE에 의해 결정된 평균 페길화 정도를 도시한다.
도 5A-5B는 rIL-2, 실시예 37 및 실시예 43의 CT26 동계 종양 모델 데이터를 도시한다.
도 6A-6B는 rIL-2, 실시예 37, 실시예 43, 실시예 29 및 실시예 31의 CT26 동계 종양 모델 데이터를 도시한다.
도 7A-7B는 rIL-2, 실시예 43, 실시예 35, 실시예 31 및 실시예 41의 CT26 동계 종양 모델 데이터를 도시한다.
도 8은 rIL-2, 실시예 43, 실시예 31 및 실시예 38의 MC38 동계 종양 모델 데이터를 도시한다.
정의:
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태를 기재하고 청구함에 있어서, 하기 용어는 하기에 기재된 정의에 따라 사용될 것이다.
본 명세서에서 사용된 용어는 단지 구체적인 실시형태를 기술하려는 목적이며, 제한하도록 의도되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 출원이 속한 기술 분야의 당업자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 출원의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 본 명세서에는 대표적인 방법 및 물질이 기재되어 있다.
오랜 특허법 규약에 따라, 단수 용어는 청구범위를 포함하여 본 출원에서 사용되는 경우 "하나 또는 복수"를 지칭한다. 따라서, 예를 들어, "담체"에 대한 언급은 하나 또는 복수의 담체, 2개 이상의 담체 등의 혼합물을 포함한다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위 내에서 사용된 성분, 반응 조건 등의 양을 표시하는 모든 수치는 모든 경우에서 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 지시되지 않는 한, 본명세서 및 청구범위에서 언급된 수치 파라미터는 본 출원을 통해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라 달라질수 있는 근사치이다.
용어 "본 개시내용의 화합물" 또는 "본 개시내용의 화합물(들)"은 본 명세서에 개시된 화학식으로 표시되는 화합물, 또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 이의 임의의 하위부류, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 용매화물 또는 수화물을 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 중간체는 본 개시내용의 화합물로서 고려된다.
본 개시내용의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하나 또는 복수의 비대칭 중심을 함유할 수 있으므로, 절대 입체화학 측면에서 (R)- 또는 (S)-로 정의되거나 아미노산의 경우 (D)- 또는 (L)-로 정의될 수 있는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 다른 입체이성질체 형태를 생성할 수 있다. 본 개시내용은 본 명세서에 구체적으로 표시되어 있든 없든, 본 개시내용은 이러한 모든 가능한 이성질체 뿐만 아니라 이의 라세미체 및 광학적으로 순수한 형태를 포함하는 것을 의미한다. 광학 활성인 (+) 및 (-), (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L)-이성질체는 키랄 합성단위체(chiral synthon) 또는 키랄 시약을 사용하여 제조될 수 있거나 또는 종래의 기술, 예를 들어, 크로마토그래피 및 분별 결정화를 사용하여 분할될 수 있다. 개별 거울상이성질체의 제조/분리를 위한 종래의 기술은 적합한 광학적으로 순수한 전구체로부터의 키랄 합성 또는 예를 들어, 키랄 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)를 사용한 라세메이트(또는 염 또는 유도체의 라세메이트)의 분할을 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물이 올레핀 이중 결합 또는 기하 비대칭인 다른 중심을 함유하는 경우, 달리 명시되지 않는 한, 그러한 화합물은 E 및 Z 기하 이성질체 둘 다를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, 모든 호변이성질체 형태가 더 포함되도록 의도된다.
"입체이성질체"는 동일한 결합에 의해 결합된 동일한 원자로 구성되지만 서로 교환 가능하지 않은 상이한 3차원 구조를 갖는 화합물을 지칭한다. 본 개시내용은 이의 다양한 입체이성질체 및 혼합물을 고려한다. 일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 사용된 바와 같은 "입체이성질체"는 거울상이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 부분입체이성질체 또는 2개 이상의 부분입체이성질체의 혼합물을 지칭한다.
"거울상이성질체"는 서로의 포개어지지 않는 거울상인 화합물의 2개의 입체이성질체를 지칭한다. 이러한 이성질체의 혼합물을 거울상이성질체 혼합물이라고 부를 수 있다.
거울상이성질체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세미체로 지칭되며, 이는 화학 반응 또는 공정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우 일어날 수 있다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학 활성이 없는 2개의 거울상이성질체 종의 동일몰량의 혼합물을 지칭한다. 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 화합물의 모든 입체이성질체를 포함한다.
"부분입체이성질체"는 2개 이상의 키랄 중심을 갖고, 분자들이 서로의 거울상이 아닌 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성질체는 상이한 물성, 예를 들어, 융점, 비등점, 스펙트럼 특성 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성질체의 혼합물은 고 분해능 분석 절차, 예컨대, 전기영동법 및 크로마토그래피 하에 분리될 수 있다.
용어 "위치이성질체"는 당업계에 알려져 있으며, 동일한 분자식을 갖지만 원자 연결 정도가 상이한 화합물을 지칭한다. 따라서, "위치선택적 공정"은 특정 위치이성질체의 형성이 다른 것보다 선호되는 것, 예를 들어, 반응이 특정 위치이성질체의 수율을 상당히 증가시키는 것이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "위치이성질체"는 단일 위치이성질체 또는 둘 이상의 위치이성질체의 혼합물을 지칭할 수 있다.
"호변이성질체"는 분자의 하나의 원자로부터 동일한 분자의 또 다른 원자로의 양성자 이동을 지칭한다. 본 개시내용은 임의의 상기 화합물의 호변이성질체를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물", "치료 조성물" 또는 "조성물"은 병용 요법에 사용하기 위해 적어도 2종의 치료 활성제를 포함하는 단일 투여 형태 또는 적어도 2종의 치료 활성제를 함께 또는 별개로 포함하는 투여 형태를 지칭한다. 예를 들어, 하나의 치료 활성제는 하나의 투여 형태로 제형화될 수 있고, 나머지 치료 활성제는 단일 또는 상이한 투여 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 하나의 치료 활성제는 고체 경구 투여 형태로 제형화될 수 있는 반면, 제2 활성 치료제는 비경구 투여를 위한 용액 투여 형태로 제형화될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 화학 명명 프로토콜 및 구조 다이어그램은 ACD/Name Version 9.07 소프트웨어프로그램, ChemDraw Ultra Version 11.0.1 및/또는 ChemDraw Ultra Version 14.0 소프트웨어 명명 프로그램(CambridgeSoft)을 사용한, I.U.P.A.C. 명명 시스템의 변형된 형태이다. 본 명세서에서 사용된 복잡한 화학 명칭의 경우, 치환기는 그것이 연결되는 기 앞에 명명된다. 예를 들어, 시클로프로필에틸은 시클로프로필 치환기를 갖는 에틸 골격을 포함한다. 하기에 기재된 것을 제외하고, 모든 결합은 본 명세서에서 화학 구조 다이어그램에서 식별되며, 일부 탄소 원자를 제외하고, 이는 원자가를 달성하기에 충분한 수소 원자에 결합된 것으로 가정된다.
용어 "조성물" 또는 "제형"은 물리적인 형태, 예컨대, 고체, 액체, 기체 또는 이들의 혼합물의 1종 이상의 물질을 나타낸다. 조성물의 일례는 약제학적 조성물, 즉, 의학적 치료와 관련되거나, 이를 위해 제조되거나 또는 이것에서 사용되는 조성물이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용 가능한"은 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 합리적인 이익/위험 비율을 가지며 인간 및 동물의 조직과 접촉되어 사용하기에 적합하고, 합리적인 의학적 판단의 범주 내에서의 의도된 사용에 효과적이라는 것을 의미한다.
"염"은 활성제의 유도체를 포함하고, 여기서 상기 활성제는 산 또는 염기 부가염을 제조함으로써 개질된다. 바람직하게는, 상기 염은 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 이러한 염은 약제학적으로 허용 가능한 산 부가염, 약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염, 약제학적으로 허용 가능한 금속염, 암모늄 및 알킬화 암모늄염을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 산 부가염은 무기산 뿐만 아니라 유기산의 염을 포함한다. 적합한 무기산의 대표적인 예는 염산, 브롬민화수소산, 아이오딘화수소산, 인산, 황산, 질산 등을 포함한다. 적합한 유기산의 대표적인 예는 폼산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 벤조산, 신남산, 시트르산, 퓨마르산, 글리콜산, 락트산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 옥살산, 피크르산, 피로글루콘산, 살리실산, 석신산, 메탄설폰산, 에탄설포 아스파트산(ethanesulfo aspartic), 스테아르산, 팔미트산, EDTA, 글리콜산, p-아미노벤조산, 글루탐산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 퍼클로레이트, 보레이트, 아세테이트, 벤조에이트, 하이드록시나프토에이트, 글리세로포스페이트, 케토글루타레이트 등을 포함한다. 염기 부가염은 에틸렌디아민, N-메틸-글루카민, 라이신, 아르기닌, 오르니틴, 콜린, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 프로카인, N-벤질페닐에틸아민, 디에틸아민, 피페라진, 트리스-(하이드록시메틸)-아미노메탄, 수산화테트라메틸암모늄, 트리에틸아민, 디벤질아민, 디페닐하이드록시메틸아민, 데하이드로아비에틸아민, N-에틸피페리딘, 벤질아민, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 에틸아민, 라이신 및 아르기닌 등과 같은 염기성 아미노산, 디시클로헥실아민 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 금속염의 예는 리튬염, 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염 등을 포함한다. 암모늄 및 알킬화된 암모늄염의 예는 암모늄, 메틸암모늄, 디메틸암모늄, 트리메틸암모늄, 에틸암모늄, 하이드록시에틸암모늄, 디에틸암모늄, 부틸암모늄, 테트라메틸암모늄염 등을 포함한다. 유기 염기의 예는 라이신, 아르기닌, 구아니딘, 디에탄올아민, 콜린 등을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 염 및 이의 제형의 제조를 위한 표준 방법은 당업계에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌["Remington: The Science and Practice of Pharmacy", A. Gennaro, ed., 20th edition, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA]을 비롯한 다양한 참고문헌에 개시되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "용매화물"은 용매화에 의해 형성된 착물(용매 분자와 본 개시내용의 활성제의 분자 또는 이온의 조성물), 또는 용질 이온 또는 분자(본 개시내용의 활성제)와 하나 또는 복수의 용매 분자로 이루어진 응집체를 의미한다. 본 개시내용에서, 바람직한 용매화물은 수화물이다. 수화물의 예는 반수화물, 일수화물, 이수화물, 삼수화물, 육수화물 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 당업자는, 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 또한 용매화물 형태로 존재할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 용매화물은 일반적으로 본 발명의 화합물 제조의 일부로서 수화를 통해 형성되거나 본 개시내용의 무수 화합물에 의한 수분의 자연적인 흡수를 통해 형성된다. 수화물을 비롯한 용매화물은 화학양론적 비율, 예를 들어, 용매화물당 또는 수화물 분자당 2개, 3개, 4개의 염 분자로 이루어질 수 있다. 또 다른 가능성은, 예를 들어, 2개의 염 분자가 3개, 5개, 7개의 용매 또는 수화물 분자에 관련된 화학양론적이다. 결정화를 위해 사용되는 용매, 예컨대, 알코올, 특히 메탄올 및 에탄올; 알데하이드; 케톤, 특히 아세톤; 에스터, 예를 들어, 에틸 아세테이트가 결정 격자 내에 포함될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 용매가 바람직하다.
용어 "부형제", "담체", 및 "비히클"은 본 출원 전체에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 본 개시내용의 화합물과 함께 투여되는 물질을 나타낸다.
"치료적 유효량"은, 질환 또는 다른 바람직하지 않은 의학적 병태를 치료하기 위해 환자에게 투여되는 경우, 질환 또는 병태와 관련하여 이러한 효과를 갖기에 충분한 화합물 또는 치료 활성제의 양을 의미한다. 상기 치료적 유효량은 선택된 화합물 또는 치료 활성제의 유형, 질환 또는 병태 및 이의 중증도 및 치료하고자 하는 환자의 연령, 체중 등에 따라서 달라질 것이다. 주어진 화합물 또는 치료 활성제의 치료적 유효량을 결정하는 것은 당업계의 통상의 기술 범위에 포함되고, 일상적인 실험을 넘어서는 것을 필요로 하지 않는다.
"치료"는 본 명세서에 사용된 바와 같이 포유동물, 바람직하게는 관심대상 질환 또는 병태를 갖는 인간에서의 관심대상 질환 또는 병태의 치료를 포괄하고, 질환 또는 병태를 저해하는 것, 즉, 이의 발달을 중단시키는 것; 질환 또는 병태를 완화시키는 것, 즉 질환 또는 병태의 퇴행을 유발하는 것; 또는 질환 또는 병태로부터 생성되는 증상을 완화시키는 것, 즉, 근원적인 질환 또는 병태를 해결하지 않고 통증을 완화시키는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "질환" 및 "병태"는 상호 교환 가능하게 사용될 수 있거나 또는 특정 질환 또는 병태가 공지된 원인 인자를 가질 수 없기 때문에(따라서 병인이 얻어지지 않음), 아직 질환 및 바람직하지 않은 병태 또는 증후군(여기서, 증상의 다소 특별한 종류는 의사에 의해 식별됨)인 것으로 간주되지 않았다는 점에서 상이할 수 있다.
본 개시내용은 또한 개시된 화합물의 생체내 대사 산물을 포함하는 것을 의미한다. 이러한 산물은 주로, 효소적 과정으로 인한, 예를 들어, 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 에스터화 등으로부터 생성될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 본 개시내용의 화합물을 이의 대사 산물을 수득하기에 충분한 시간 동안 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된 화합물을 포함한다. 이러한 생성물은 일반적으로는 방사성동위원소 표지된 본 개시내용의 화합물을 검출 가능한 용량으로 래트, 마우스, 기니피그, 원숭이와 같은 동물 또는 인간에게 투여하여, 대사가 일어나기 위한 충분한 시간을 허용하고, 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 샘플로부터 이의 전환 생성물을 분리시킴으로써 식별된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "대상체"는 인간, 비인간 영장류, 포유동물, 래트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등일 수 있다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본 명세서에서 예를 들어, 포유동물 대상체, 예컨대, 인간 대상체와 관련하여 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용된다.
대상체는 전립선암, 유방암, 난소암, 침샘 암종 또는 자궁내막암과 같은 암을 갖거나 이를 가질 위험이 있는 것으로 의심될 수 있거나 또는 여드름, 다모증, 탈모, 양성 전립선 비대증, 난소 낭종, 다낭성 난소 질환, 성조숙증, 척추 및 숨뇌근육 위축(spinal and bulbar muscular atrophy) 또는 노화 관련 황반 변성을 갖거나 이를 가질 위험이 있는 것으로 의심될 수 있다. 전립선암, 유방암, 난소암, 방광암, 췌장암, 간세포암, 침샘 암종 또는 자궁내막암과 같은 다양한 암에 대한 진단 방법 및 여드름, 다모증, 탈모, 양성 전립선 비대증, 난소 낭종, 다낭성 난소 질환, 성조숙증, 척추 및 숨뇌근육 위축 또는 노화 관련 황반 변성에 대한 진단 방법, 및 전립선암, 유방암, 난소암, 방광암, 췌장암, 간세포암, 침샘 암종 또는 자궁내막암과 같은 암에 대한 의학적 설명, 여드름, 다모증, 탈모, 양성 전립선 비대증, 난소 낭종, 다낭성 난소 질환, 성조숙증, 척추 및 숨뇌근육 위축 또는 노화 관련 황반 변성에 대한 진단 및 의학적 설명은 당업자에게 공지되어 있다.
"포유동물"은 인간, 및 실험 동물 및 애완 동물(예를 들어, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼)과 같은 가축, 및 야생동물과 같은 비가축 등을 포함한다.
"선택적인" 또는 "선택적으로"는 후술되는 사건 또는 상황이 일어날 수 있거나 일어나지 않을 수 있고, 그러한 기재는 상기 사건 또는 상황이 일어나는 예 및 일어나지 않는 예를 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, "선택적으로 치환된 아릴"은 상기 아릴기가 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있고, 그러한 기재는 치환된 아릴기 및 치환되지 않은 아릴기 둘 다를 포함한다는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 "PEG", "폴리에틸렌 글리콜" 및 "폴리(에틸렌 글리콜)"은 상호 호환적으로 사용되고, 임의의 비펩티드 수용성 폴리(에틸렌 옥사이드)를 포함한다. 일반적으로, 본 개시내용에 따라 사용하기 위한 PEG는 하기 구조 "-(OCH2CH2)n-"을 포함하고, 식에서, (n)은 2 내지 4000이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, PEG는 또한 예를 들어, 합성 변형 동안 말단 산소가 대체되는 지의 여부에 관계 없이 "-CH2CH2-O(CH2CH2O)n-CH2CH2-" 및 "-(OCH2CH2)nO-"를 포함한다. 본 명세서 및 청구범위 전체에서, 용어 "PEG"는 다양한 말단 또는 "말단-캡핑"기 등을 갖는 구조를 포함한다. 용어 "PEG"는 또한 대다수(50% 초과)의 -OCH2CH2-반복 서브유닛을 함유하는 중합체를 의미한다. 특정 형태와 관련하여, PEG는 "분지형", "선형", "갈래형(forked)", "다작용성" 등과 같이 아래에 더 자세히 설명되는 임의의 수의 다양한 분자량 및 구조 또는 기하학적 형상을 가질 수 있다.
용어 "말단-캡핑" 및 "말단 캡핑"은 말단-캡핑 모이어티를 갖는 중합체의 말단 또는 종점을 지칭하도록 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 일반적으로, 필수적이지는 않지만, 상기 말단-캡핑 모이어티는 하이드록시 또는 C1-20 알콕시기, 보다 바람직하게는 C1-10 알콕시기, 보다 더 바람직하게는 C1-5 알콕시기를 포함한다. 따라서, 말단-캡핑 모이어티의 예는 알콕시(예를 들어, 메톡시, 에톡시 및 벤질옥시) 뿐만 아니라 아릴, 헤테로아릴, 시클로, 헤테로시클로 등을 포함한다. 상기 말단-캡핑 모이어티가 중합체 내의 말단 단량체[예를 들어, CH3O(CH2CH2O)n- 및 CH3(OCH2CH2)n- 내의 말단-캡핑 모이어티 "메톡시"]의 하나 또는 복수의 원자를 포함할 수 있다는 것을 기억해야 한다. 또한, 상기 각각의 포화, 불포화, 치환 및 비치환 형태가 고려된다. 이 밖에, 상기 말단-캡핑기는 또한 실란일 수 있다. 상기 말단-캡핑기는 또한 바람직하게는 검출 가능한 표지를 포함할 수 있다. 상기 중합체가 검출 가능한 표지를 포함하는 말단-캡핑기를 갖는 경우, 상기 중합체 및/또는 상기 중합체가 커플링된 모이어티(예를 들어, 활성제)의 양 또는 위치는 적합한 검출기를 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 표지는 비제한적으로 형광제, 화학발광제, 효소 표지에 사용되는 모이어티, 비색제(예를 들어, 염료), 금속 이온, 방사성 모이어티 등을 포함한다. 적합한 검출기는 광도계, 필름, 분광계 등을 포함한다. 상기 말단-캡핑기는 또한 바람직하게는 인지질을 포함할 수 있다. 상기 중합체가 인지질을 포함하는 말단-캡핑기를 갖는 경우, 상기 중합체 및 생성된 접합체에 고유한 특성이 부여된다. 예시적인 인지질은 비제한적으로 포스파티딜콜린이라고 불리는 인지질의 부류로부터 선택된 것을 포함한다. 구체적인 인지질은 비제한적으로 디라우로일포스파티딜콜린, 디올레일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디스테로일포스파티딜콜린, 베헨오일포스파티딜콜린, 아라키도일포스파티딜콜린 및 레시틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함한다. 상기 말단-캡핑기는 표적화 모이어티를 더 포함하므로, 이러한 중합체- 및 이에 연결된 임의의 물질, 예를 들어, IL-2 모이어티-는 관심 영역에 우선적으로 위치 결정될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 중합체와 관련하여 "비-자연 발생"은 전체가 자연에서 발견되지 않는 중합체를 의미한다. 그러나 비-자연 발생 중합체는, 전체 중합체 구조가 자연에서 발견되지 않는 한, 자연 발생적인 하나 또는 복수의 단량체 또는 단량체의 모이어티를 함유할 수 있다.
"수용성 중합체"에서 용어 "수용성" 중합체는 실온에서 물 중에 가용성인 임의의 중합체이다. 일반적으로, 수용성 중합체는 여과 후 동일한 용액에 의해 투과된 광의 적어도 약 75%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%를 투과시킬 것이다. 중량을 기준으로, 수용성 중합체는 바람직하게는 수 중에 적어도 약 35%(중량 기준) 용해성, 보다 바람직하게는 수 중에 적어도 약 50%(중량 기준) 용해성, 보다 더 바람직하게는 수 중에 약 70%(중량 기준) 용해성, 보다 더 바람직하게는 수 중에 약 85%(중량 기준) 용해성일 것이다. 그러나, 수용성 중합체는 수 중에 약 95%(중량 기준) 용해성이거나 수 중에 완전히 용해성인 것이 가장 바람직하다.
수용성 중합체, 예컨대, PEG와 관련하여 분자량은 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량으로 표현될 수 있다. 달리 제시되지 않는 한, 본 명세서에서 분자량에 대한 모든 언급은 중량 평균 분자량을 지칭한다. 수 평균 분자량 및 중량 평균 분자량 모두 겔 투과 크로마토그래피 또는 기타 액체 크로마토그래피 기술을 사용하여 측정할 수 있다. 분자량 값을 측정하는 다른 방법, 예컨대, 말단기 분석을 사용하거나 집합적 특성(예를 들어, 빙점 내림, 비등점 상승 또는 삼투압)을 측정하여 수 평균 분자량을 결정하는 방법, 또는 광산란 기술, 초원심분리 또는 점도계를 사용하여 중량 평균 분자량을 결정하는 방법이 사용될 수도 있다. 본 개시내용의 중합체는 일반적으로 다분산성(즉, 중합체의 수 평균 분자량 및 중량 평균 분자량이 동일하지 않음)이므로, 바람직하게는 약 1.2 미만, 보다 바람직하게는 약 1.15 미만, 보다 더 바람직하게는 약 1.10 미만, 보다 더 바람직하게는 약 1.05 미만, 가장 바람직하게는 약 1.03 미만의 낮은 다분산성 값을 갖는다.
특정 작용기와 함께 사용될 때 용어 "활성", "반응성" 또는 "활성화된"은 또 다른 분자 상의 친전자체 또는 친핵체와 쉽게 반응하는 반응성 작용기를 지칭한다. 이는 반응하기 위해 강한 촉매가 필요하거나 매우 비실용적인 반응 조건이 필요한 기(즉, "비반응성" 또는 "불활성"기)와 대조적이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "작용기" 또는 이의 임의의 동의어는 이의 보호된 형태 뿐만 아니라 비보호된 형태를 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "전자 변경기(electron altering group)"는 그것이 연결된 모이어티의 전자 밀도를 변형시키는 임의의 원자 또는 작용기를 포함하는 것을 의미한다. 전자 변경기는 전자 밀도를 공여하는 전자 공여기(예를 들어, 아민, 하이드록시, 알콕시, 알킬) 및 전자 끌기기(예를 들어, 니트로, 시아노, 트리플루오로메틸)를 포함한다.
용어 "스페이서 모이어티", "결합" 및 "링커"는 상호연결 모이어티, 예컨대, 거대분자 모이어티 및 단백질의 말단 또는 단백질의 친전자체 또는 친핵체를 연결하는 데 선택적으로 사용되는 결합 또는 원자 또는 원자의 집합을 지칭하도록 본 명세서에서 사용된다. 상기 스페이서 모이어티는 가수분해적으로 안정적일 수 있거나 생리학적으로 가수분해성 또는 효소적으로 분해 가능한 결합을 포함할 수 있다. 문맥상 명백하게 달리 명시되지 않는 한, 스페이서 모이어티는 화합물의 임의의 두 원소 사이에 선택적으로 존재한다(예를 들어, 단백질 잔기 및 거대분자를 포함하는 제공된 접합체는 스페이서 모이어티를 통해 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다).
본 개시내용의 적합한 스페이서는 하나 또는 복수의 탄소 원자, 질소 원자, 황 원자, 인 원자, 산소 원자 및 이들의 조성물을 포함할 수 있는 링커를 포함하는 스페이서를 포함한다. 스페이서 모이어티는 1가, 2가, 3가 또는 다가일 수 있다. 적합한 스페이서 모이어티는 아미드, 2차아민, 카바메이트, 티오에터, 포스페이트, 포스포로티오에이트, 디티오기 및/또는 클릭 화학 생성물기를 포함할 수 있다. 구체적인 스페이서 모이어티의 비제한적인 예는 -O-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -OP(O)(OH)-, -OP(S)(OH)-, -C(S)-, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-, O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-[CH2]l-(OCH2CH2)m-, 2가 시클로알킬기, 2가 아릴, -O-, -S-, 2가 아미노산 잔기, -N(R3)-, 및 임의의 상기 기 중 2개 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함하고, 여기서 R3은 H, 또는 치환된 또는 비치환된 알킬, 치환된 또는 비치환된 알케닐, 치환된 또는 비치환된 알키닐, 치환된 또는 비치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 유기 기이고, (l)은 0 내지 6이며, (m)은 0 내지 20이다. 다른 구체적인 스페이서 모이어티는 -C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)- 및 -O-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-와 같은 구조를 가지며, 여기서 각각의 메틸렌 이후의 아래 첨자 값은 상기 구조에 함유된 메틸렌의 수를 나타내고, 예를 들어, (CH2)1-6은 상기 구조가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 메틸렌을 함유할 수 있다는 것을 의미한다. 일부 실시형태에 있어서, 2가 스페이서 모이어티는 -O-, -NH-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -OP(O)(OH)-, -OP(S)(OH)-, -C(S)-, -[CH2]1-6-, -O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -[CH2]0-6-O-(CH2CH2O)1-20-[CH2]0-6- 또는 -O-C(O)-NH-[CH2]0-6-(OCH2CH2)0-20-이다. 일부 실시형태에 있어서, 3가 스페이서 모이어티는 또는 이다. 일부 실시형태에 있어서, 1가 스페이서 모이어티는 일단이 할로겐 또는 수소로 말단-캡핑된 본 명세서에 개시된 임의의 2가 스페이서 모이어티, 또는 각각 독립적으로 양 말단이 할로겐 또는 수소로 말단-캡핑된 본 명세서에 개시된 임의의 3가 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, 1가 스페이서 모이어티는 알킬, 할로알킬(예를 들어, -CF3), 알콕시 또는 할로알콕시이다.
용어 "이중 기능성 링커"는 2개의 반응성 원자 또는 작용기를 갖는, 상기에 정의된 바와 같은 링커를 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 2개의 반응성 기는 상이한 반응성 모드를 갖는 상호 관련되지 않은 작용기이므로, 원하는 경우, 각각의 작용기는 서로 독립적으로 특정 순서로 반응할 수 있다. 당업자가 이해할 바와 같이, 본 명세서에 개시된 이중 기능성 링커를 사용하여 부위-특이적 반응을 수행하여 단백질-거대분자 접합체를 조립할 수 있다.
"아실"은 -C(=O)-알킬을 지칭한다.
"아미노"는 -NH2기를 지칭한다.
"시아노"는 CN기를 지칭한다.
"할로", "할라이드" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로, 플루오로 또는 요오도 기를 지칭한다.
"하이드록시"는 -OH기를 지칭한다.
"이미노"는 =NH 치환기를 지칭한다.
"니트로"는 -NO2기를 지칭한다.
"옥소"는 =O 치환기를 지칭한다.
"티오"는 =S 치환기를 지칭한다.
"머캅토"는 -SH기를 지칭한다.
수소는 H 또는 D이다.
"알킬" 또는 "알킬기"는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자 중 나머지에 연결된 완전히 포화된 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. 1 내지 20개의 임의의 수의 탄소 원자를 포함하는 알킬이 포함된다. 20개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C20 알킬이고, 10개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C10 알킬이며, 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C6 알킬이고, 5개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C5 알킬이다. C1-C5 알킬은 C5 알킬, C4 알킬, C3 알킬, C2 알킬 및 C1 알킬(즉, 메틸)을 포함한다. C1-C6 알킬은 C1-C5 알킬에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C6 알킬도 포함한다. C1-C10 알킬은 C1-C5 알킬 및 C1-C6 알킬에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C7, C8, C9 및 C10 알킬도 포함한다. 유사하게, C1-C12 알킬은 모든 상기 모이어티를 포함하지만, C11 및 C12 알킬도 포함한다. C1-C12 알킬의 비제한적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, sec-프로필, n-부틸, 아이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, tert-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실, n-운데실 및 n-도데실을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알킬은 선택적으로 치환될 수 있다. 용어 "저급 알킬"은 선형 또는 분지형일 수 있는 C1-C6 알킬, 예를 들어, 분지형 C3-C6 알킬을 지칭한다. 예시적인 알킬기는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 1-메틸부틸, 1-에틸프로필, 3-메틸펜틸 등을 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "알킬"은 시클로알킬 뿐만 아니라 시클로알킬렌-함유 알킬을 포함한다.
"알킬렌", "-알킬-" 또는 "알킬렌 사슬"은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 완전히 포화된 선형 또는 분지형의 2가 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. C1-C20 알킬렌의 비제한적인 예는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, n-부틸렌, 에텐일렌, 프로펜일렌, n-부텐일렌, 프로핀일렌, n-부틴일렌 등을 포함한다. 알킬렌 사슬은 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 연결되고 또한 단일 결합을 통해 기에 연결된다. 상기 분자의 나머지 및 기에 대한 알킬렌 사슬의 연결점은 상기 사슬 내의 하나의 탄소 또는 임의의 2개의 탄소를 통과할 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알킬렌 사슬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알케닐" 또는 "알케닐기"는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. 각각의 알케닐은 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 연결된다. 2 내지 20개의 임의의 수의 탄소 원자를 포함하는 알케닐이 포함된다. 20개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알케닐은 C2-C20 알케닐이고, 10개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알케닐은 C2-C10 알케닐이며, 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알케닐은 C2-C6 알케닐이고, 5개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알케닐은 C2-C5 알케닐이다. C2-C5 알케닐은 C5 알케닐, C4 알케닐, C3 알케닐 및 C2 알케닐을 포함한다. C2-C6 알케닐은 C2-C5 알케닐에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C6 알케닐도 포함한다. C2-C10 알케닐은 C2-C5 알케닐 및 C2-C6 알케닐에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C7, C8, C9 및 C10 알케닐도 포함한다. 유사하게, C2-C12 알케닐은 상기 모이어티 모두를 포함하지만, C11 및 C12 알케닐도 포함한다. C2-C12 알케닐의 비제한적인 예는 에텐일(비닐), 1-프로펜일, 2-프로펜일(알릴), 아이소프로펜일, 2-메틸-1-프로펜일, 1-부텐일, 2-부텐일, 3-부텐일, 1-펜텐일, 2-펜텐일, 3-펜텐일, 4-펜텐일, 1-헥센일, 2-헥센일, 3-헥센일, 4-헥센일, 5-헥센일, 1-헵텐일, 2-헵텐일, 3-헵텐일, 4-헵텐일, 5-헵텐일, 6-헵텐일, 1-옥텐일, 2-옥텐일, 3-옥텐일, 4-옥텐일, 5-옥텐일, 6-옥텐일, 7-옥텐일, 1-노넨일, 2-노넨일, 3-노넨일, 4-노넨일, 5-노넨일, 6-노넨일, 7-노넨일, 8-노넨일, 1-데센일, 2-데센일, 3-데센일, 4-데센일, 5-데센일, 6-데센일, 7-데센일, 8-데센일, 9-데센일, 1-운데센일, 2-운데센일, 3-운데센일, 4-운데센일, 5-운데센일, 6-운데센일, 7-운데센일, 8-운데센일, 9-운데센일, 10-운데센일, 1-도데센일, 2-도데센일, 3-도데센일, 4-도데센일, 5-도데센일, 6-도데센일, 7-도데센일, 8-도데센일, 9-도데센일, 10-도데센일 및 11-도데센일을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알케닐렌" 또는 "알케닐렌 사슬"은 2개 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 2가 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. C2-C20 알케닐렌의 비제한적인 예는 에틸리딘, 프로필리딘, 부틸리딘 등을 포함한다. 알케닐렌 사슬은 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 연결되고 또한 단일 결합을 통해 기에 연결된다. 상기 분자의 나머지 및 기에 대한 알케닐렌 사슬의 연결점은 상기 사슬 내의 하나의 탄소 또는 임의의 2개의 탄소를 통과할 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알케닐렌 사슬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알키닐" 또는 "알키닐기"는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. 각각 알키닐은 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 연결된다. 2 내지 20개의 임의의 수의 탄소 원자를 포함하는 알키닐이 포함된다. 20개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알키닐은 C2-C20 알키닐이고, 10개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알키닐은 C2-C10 알키닐이며, 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알키닐은 C2-C6 알키닐이고, 5개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알키닐은 C2-C5 알키닐이다. C2-C5 알키닐은 C5 알키닐, C4 알키닐, C3 알키닐 및 C2 알키닐을 포함한다. C2-C6 알키닐은 C2-C5 알키닐에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C6 알키닐도 포함한다. C2-C10 알키닐은 C2-C5 알키닐 및 C2-C6 알키닐에 대해 상기에 기재된 모든 모이어티를 포함하지만, C7, C8, C9 및 C10 알키닐도 포함한다. 유사하게, C2-C12 알키닐은 상기 모이어티 모두를 포함하지만, C11 및 C12 알키닐도 포함한다. C2-C12 알키닐의 비제한적인 예는 에틴일, 프로핀일, 부틴일, 펜틴일 등을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알키닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알키닐렌" 또는 "알키닐렌 사슬"은 2개 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 기를 지칭한다. C2-C20 알키닐렌의 비제한적인 예는 에틴일렌, 프로핀일렌 등을 포함한다. 알키닐렌 사슬은 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 연결되고 또한 단일 결합을 통해 기에 연결된다. 상기 분자의 나머지 및 기에 대한 알키닐렌 사슬의 연결점은 상기 사슬 내의 하나의 탄소 또는 임의의 2개의 탄소를 통과할 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알키닐렌 사슬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알콕시" 또는 "-O-알킬"은 화학식 ORa로 표시되는 기를 지칭하며, 여기서 Ra는 1 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 상기에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐 또는 알키닐을 지칭한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알콕시는 선택적으로 치환될 수 있다.
"알킬아미노"는 화학식 -NHRa 또는 -NRaRa로 표시되는 기를 지칭하며, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로, 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 상기에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐 또는 알키닐이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알킬아미노는 선택적으로 치환될 수 있다.
"알킬카르보닐"은 -C(=O)Ra 모이어티를 지칭하며, 여기서 Ra는 상기에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐 또는 알키닐이다. 알킬카르보닐의 비제한적인 예는 메틸 카르보닐("아세탈") 모이어티이다. 알킬카르보닐은 또한 "Cw-Cz 아실"로 지칭될 수 있고, 여기서 w 및 z는 상기에 정의된 바와 같은 Ra 내의 탄소 원자 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, "C1-C10 아실"은 상기에 정의된 바와 같은 알킬카르보닐을 지칭하며, 여기서 Ra는 상기에 정의된 바와 같은 C1-C10 알킬, C1-C10 알케닐 또는 C1-C10 알키닐이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 알킬카르보닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "아미노알킬"은 하나 또는 복수의 -NH2기로 치환된 알킬을 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 아미노알킬은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 -NH2기로 치환된다. 아미노알킬은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 또는 복수의 다른 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
"아릴"은 수소, 6 내지 18개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 탄화수소 고리 시스템 기를 지칭한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 아릴은 단환식, 이환식, 삼환식 또는 사환식 고리 시스템일 수 있고, 이는 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있다. 아릴은 아세안트릴렌, 아세나프틸렌, 아세펜안트릴렌, 안트라센, 아줄렌, 벤젠, 크리센, 플루오르안텐, 플루오렌, as-인다센, s-인다센, 인단, 인덴, 나프탈렌, 펜알렌, 펜안트렌, 플레이아덴, 피렌 및 벤조펜안트렌으로부터 유래된 아릴을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 용어 "아릴"은 선택적으로 치환된 아릴을 포함하는 것을 의미한다. 아릴은 나프틸에서와 같이 융합될 수 있거나 바이페닐에서와 같이 비융합될 수 있는 복수의 아릴 고리를 포함한다. 아릴 고리는 또한 하나 또는 복수의 환식 탄화수소, 헤테로아릴 또는 복소환식 고리와 융합되거나 융합되지 않을 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "아릴"은 헤테로아릴을 포함한다.
"아르알킬", "아릴알킬" 또는 "-알킬아릴"은 화학식 -Rb-Rc로 표시되는 기를 지칭하고, 여기서 Rb는 상기에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌이며, Rc는 상기에 정의된 바와 같은 하나 또는 복수의 아릴, 예를 들어, 벤질, 디페닐메틸 등이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 아르알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"알콕시"는 -OR기를 지칭하되, 식에서 R은 알킬 또는 치환된 알킬, 바람직하게는 C1-6 알킬(예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시 등)이다.
"카보사이클릴", "탄소환식 고리" 또는 "카보사이클"은 고리 구조를 지칭하고, 여기서 상기 고리를 형성하는 원자는 각각 탄소이다. 탄소환식 고리는 상기 고리 내에 3 내지 20개의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 탄소환식 고리는 아릴 및 시클로알킬을 포함한다. 시클로알케닐 및 시클로알키닐은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 카보사이클릴은 선택적으로 치환될 수 있다.
"시클로알킬"은 탄소 및 수소 원자 만으로 이루어진 안정적인 비방향족 단환식 또는 다환식의 완전히 포화된 탄화수소 기를 지칭하며, 이는 3 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 바람직하게는 3 내지 약 12개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 3 내지 약 8개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 연결된 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있다. 단환식 시클로알킬은 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸을 포함한다. 다환식 시클로알킬은 예를 들어, 아다만틸, 노보닐, 데칼린일, 7,7-디메틸-바이시클로[2.2.1]헵틸, 바이시클로[3.1.0]헥산, 옥타하이드로펜탈렌, 바이시클로[1.1.1]펜탄, 쿠반 등을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 시클로알킬은 선택적으로 치환될 수 있다. "시클로알킬렌"은 환식 고리 시스템 내의 임의의 2개의 탄소에서의 사슬의 결합에 의해 알킬 사슬 내에 삽입된 시클로알킬을 지칭한다.
"시클로알케닐"은 탄소 및 수소 원자 만으로 이루어지고, 하나 또는 복수의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 안정적인 비방향족 단환식 또는 다환식 탄화수소 기를 지칭하며, 이는 3 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 바람직하게는 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 연결된 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있다. 단환식 시클로알케닐은 예를 들어, 시클로펜텐일, 시클로헥센일, 시클로헵텐일, 시클로옥텐일 등을 포함한다. 다환식 시클로알케닐은 예를 들어, 바이시클로[2.2.1]헵트-2-엔일 등을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 시클로알케닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
"시클로알키닐"은 탄소 및 수소 원자 만으로 이루어지고, 하나 또는 복수의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 안정적인 비방향족 단환식 또는 다환식 탄화수소 기를 지칭하고, 이는 3 내지 20개의 탄소 원자를 갖고, 바람직하게는 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 연결된 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있다. 단환식 시클로알키닐은 예를 들어, 시클로헵틴일, 시클로옥틴일 등을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 시클로알키닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
"시클로알킬알킬" 또는 "-알킬시클로알킬"은 화학식 -Rb-Rd로 표시되는 기를 지칭하고, 여기서 Rb는 상기에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌, 또는 알키닐렌기이고, Rd는 상기에 정의된 바와 같은 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 시클로알킬알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"할로알킬"은 상기에 정의된 바와 같은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 할로기에 의해 치환된 상기에 정의된 바와 같은 알킬, 예를 들어, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리클로로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1,2-디플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 1,2-디브로모메틸 등을 지칭한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 할로알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
"할로알케닐"은 상기에 정의된 바와 같은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 할로기에 의해 치환된 상기에 정의된 바와 같은 알케닐, 예를 들어, 1-플루오로프로펜일, 1,1-디플루오로부텐일 등을 지칭한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 할로알케닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
"할로알키닐"은 상기에 정의된 바와 같은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 할로기에 의해 치환된 상기에 정의된 바와 같은 알키닐, 예를 들어, 1-플루오로프로핀일, 1-플루오로부틴일 등을 지칭한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 할로알케닐은 선택적으로 치환될 수 있다.
예를 들어, "치환된 알킬"에서와 같이 용어 "치환된"은 하나 또는 복수의 비간섭 치환기로 치환된 모이어티(예를 들어, 알킬)를 지칭하며, 이러한 치환기는 알킬, C3-8 시클로알킬, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸 등; 할로, 예를 들어, 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도; 시아노; 니트로; 알콕시, 저급 페닐; 치환된 페닐; 등을 비제한적으로 포함한다. "치환된 아릴"은 치환기로서 하나 또는 복수의 비간섭기를 갖는 아릴이다. 페닐 고리 상의 치환의 경우, 상기 치환기는 임의의 배향(즉, 오르토, 메타 또는 파라)으로 존재할 수 있다.
"비간섭 치환기"는 분자 내에 존재하는 경우 일반적으로 상기분자 내에 함유된 다른 작용기와 비반응성인 기이다. 비제한적인 예는 할로겐(F, Br, Cl, I), 알킬(예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 아이소프로필, 부틸, 아이소부틸, s-부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실, 아이소펜틸 등), 할로알킬(예를 들어, CF3, CHF2, CH2F 등), 시클로알킬(시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 등), 알콕시(-OR), 할로알콕시(예를 들어, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F 등), 아미노(예를 들어, -N(H)알킬, -N(알킬)2, -NH(시클로알킬), -NH(아릴) 등), 아미도(예를 들어, -NH(COR), 술포닐(예를 들어, -SO2R), 아실(예를 들어, -C(O)R, 시아노, 니트로, 페닐 및 헤테로아릴(예를 들어, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피리딜, 피리미딘일 등)을 포함하고, 식에서, R은 독립적으로 H, 알킬, 알콕시, 아미노 또는 아릴(예를 들어, 페닐)을 포함한다.
"헤테로사이클릴", "헤테로환식 고리" 또는 "헤테로사이클"은 2개 내지 12개의 탄소 원자 및 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자로 이루어진 안정적인 3- 내지 20-원의 비방향족 고리 기를 지칭한다. 헤테로사이클릴 또는 헤테로환식 고리는 하기에 정의된 바와 같은 헤테로아릴을 포함한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 헤테로사이클릴은 단환식, 이환식, 삼환식 또는 사환식 고리 시스템일 수 있고, 이는 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있으며; 헤테로사이클릴 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있고; 상기 질소 원자는 선택적으로 4차화될 수 있으며; 상기 헤테로사이클릴은 부분적으로 또는 완전히 포화될 수 있다. 이러한 헤테로사이클릴의 예는 디옥솔란일, 티엔일[1,3]디티안일, 데카하이드로아이소퀴놀릴, 이미다졸린일, 이미다졸린다이닐, 아이소티아졸리딘일, 아이속사졸리딘일, 몰폴린일, 옥타하이드로인돌릴, 옥타하이드로아이소인돌릴, 2-옥소피페라진일, 2-옥소피페리딘일, 2-옥소피롤리딘일, 옥사졸리딘일, 피페리딘일, 피페라진일, 4-피페리돈일, 피롤리딘일, 피라졸리딘일, 퀴뉴클리딘일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로퓨릴, 트리티안일, 테트라하이드로피란일, 티오몰폴린일, 티아몰폴린일, 1-옥소-티오몰폴린일 및 1,1-디옥소-티오몰폴린일을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 헤테로사이클릴은 선택적으로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, "치환된 헤테로사이클"은 비간섭 치환기로부터 형성된 하나 또는 복수의 측쇄를 갖는 헤테로사이클이다.
용어 "하이드록시알킬" 또는 "하이드록실알킬"은 하나 또는 복수의 하이드록실(-OH)기로 치환된 알킬을 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 하이드록시알킬은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 -OH기로 치환된다. 하이드록시알킬은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 또는 복수의 다른 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "하이드로카빌"은 지방족, 부분적으로 또는 완전히 불포화, 비환식, 환식 또는 방향족 또는 이들의 임의의 조합인지에 관계없이 1가 탄화수소 기를 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 하이드로카빌은 1 내지 40개 이상, 1 내지 30개 이상, 1 내지 20개 이상 또는 1 내지 10개 이상의 탄소 원자를 갖는다. 용어 "하이드로카빌렌"은 2가 하이드로카빌을 지칭한다. 하이드로카빌 또는 하이드로카빌렌은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 또는 복수의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로하이드로카빌"은 탄소 원자 중 하나 또는 복수가 산소, 황, 질소 및 인으로부터 선택된 헤테로원자에 의해서 각각 독립적으로 대체된 하이드로카빌을 지칭한다. 특정 실시형태에 있어서, 헤테로하이드로카빌은 1 내지 40개 이상, 1 내지 30개 이상, 1 내지 20개 이상 또는 1 내지 10개 이상의 탄소 원자 및 1 내지 10개 이상 또는 1 내지 5개 이상의 헤테로원자를 갖는다. 용어 "헤테로하이드로카빌렌"은 2가 하이드로카빌을 지칭한다. 헤테로하이드로카빌 및 헤테로하이드로카빌렌의 예는 비제한적으로 에틸렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 예컨대, (-CH2CH2O-)nH(1가 헤테로하이드로카빌) 및 (-CH2CH2O-)n(2가 헤테로하이드로카빌렌)(여기서 n은 1 내지 12 이상의 정수임), 프로필렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 모이어티, 예컨대, (-CH2CH2CH2O-)nH 및 (-CH2CH(CH3)O-)nH(1가 헤테로하이드로카빌기 및 (-CH2CH2CH2O-)n 및 (-CH2CH(CH3)O-)n(2가 헤테로하이드로카빌렌)(여기서 n은 1 내지 12 또는 그 이상의 정수임)을 포함한다. 헤테로하이드로카빌 또는 헤테로하이드로카빌렌은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 또는 복수의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
"N-헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 질소를 함유하는 상기에 정의된 바와 같은 헤테로사이클릴을 지칭하고, 여기서 분자의 나머지에 대한 헤테로사이클릴의 연결점은 상기 헤테로사이클릴 내의 질소 원자를 통과한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, N-헤테로사이클릴은 선택적으로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴알킬" 또는 "-알킬헤테로사이클릴"은 화학식 -Rb-Re로 표시되는 기를 지칭하며, 여기서 Rb는 상기에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌 사슬이고, Re는 상기에 정의된 바와 같은 헤테로사이클릴이며, 헤테로사이클릴이 질소-함유 헤테로사이클릴인 경우, 상기 헤테로사이클릴은 상기 질소 원자에서 알킬, 알케닐, 알키닐에 연결될 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 헤테로사이클릴은 선택적으로 치환될 수 있다.
"헤테로아릴"은 수소 원자, 1 내지 13개의 탄소 원자, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 바람직하게 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자 및 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 5- 내지 20-원의 고리 시스템 기를 지칭한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 헤테로아릴은 단환식, 이환식, 삼환식 또는 사환식 고리 시스템일 수 있고, 이는 융합 또는 브릿지된 고리 시스템을 포함할 수 있으며; 헤테로아릴 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있고; 상기 질소 원자는 선택적으로 4차화될 수 있다. 예는 아제핀일, 아크리딘일, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈인돌릴, 벤조다이옥솔릴, 벤조퓨란일, 벤조옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아다이아졸릴, 벤조[b][1,4]다이옥세핀일, 1,4-벤조다이옥산일, 벤조나프토퓨란일, 벤족사졸릴, 벤조다이옥솔릴, 벤조다이옥신일, 벤조피란일, 벤조피라노닐, 벤조퓨란일, 벤조퓨란오닐, 벤조티엔일(벤조티오페닐), 벤조트리아졸릴, 벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리딘일, 카바졸릴, 신놀린일, 디벤조퓨란일, 디벤조티오페닐, 퓨란일, 퓨라노닐, 아이소티아졸릴, 이미다졸릴, 인다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 아이소인돌릴, 인돌린일, 아이소인돌린일, 아이소퀴놀릴, 인돌리진일, 아이속사졸릴, 나프티리딘일, 옥사다이아졸릴, 2-옥소아제핀일, 옥사졸릴, 옥시란일, 1-옥사이도피리딘일, 1-옥사이도피리미딘일, 1-옥사이도피라진일, 1-옥사이도피리다진일, 1-페닐-1H-피롤릴, 펜아진일, 페노티아진일, 펜옥사진일, 프탈라진일, 프테리딘일, 퓨린일, 피롤릴, 피라졸릴, 피리딘일, 피라진일, 피리미딘일, 피리다진일, 퀴나졸린일, 퀴녹살린일, 퀴놀린일, 퀴뉴클리딘일, 아이소퀴놀린일, 테트라하이드로퀴놀린일, 티아졸릴, 티아다이아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 트리아진일 및 티오페닐(즉, 티엔일)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 헤테로아릴은 선택적으로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, "치환된 헤테로아릴"은 치환기로서 하나 또는 복수의 비간섭기를 갖는 헤테로아릴이다.
"N-헤테로아릴"은 적어도 하나의 질소를 함유하는 상기에 정의된 바와 같은 헤테로아릴을 지칭하고, 여기서 분자의 나머지에 대한 헤테로아릴의 연결점은 상기 헤테로아릴기 내의 질소 원자를 통과한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, N-헤테로아릴은 선택적으로 치환될 수 있다.
"헤테로아릴알킬" 또는 "-알킬시클로아릴"은 화학식 -Rb-Rf로 표시되는 기를 지칭하며, 여기서 Rb는 상기에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌 사슬이고, Rf는 상기에 정의된 바와 같은 헤테로아릴이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 헤테로아릴알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치환된"은 적어도 하나의 수소 원자가 본 명세서에서 제공된 목록에 있는 수소 원자 이외의 결합으로 대체된 임의의 상기 기(즉, 알킬, 알킬렌, 알케닐, 알케닐렌, 알키닐, 알키닐렌, 알콕시, 알킬아미노, 알킬카르보닐, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 카보사이클릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 시클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 및/또는 헤테로아릴알킬)을 의미한다. 치환기 목록이 포함되지 않은 경우, 치환기는 비제한적으로 F, Cl, Br 및 I와 같은 할로겐 원자; 하이드록실기, 알콕시기 및 에스터기와 같은 기 내의 산소 원자; 티올기, 티오알킬기, 설폰기, 술포닐기 및 설폭사이드기와 같은 기 내의 황 원자; 아민, 아미드, 알킬아민, 디알킬아민, 아릴아미노기, 알킬아릴아민, 디아릴아민, N-옥사이드, 이미드 및 엔아민과 같은 기 내의 질소 원자; 트리알킬실릴기, 디알킬아릴실릴기, 알킬디아릴실릴기 및 트리아릴실릴기와 같은 기 내의 규소 원자; 및 다양한 다른 기 내의 다른 헤테로원자일 수 있다. "치환된"은 또한 하나 또는 복수의 수소 원자가 헤테로원자, 예컨대, 옥소, 카르보닐, 카르복실 및 에스터 기 내의 산소; 및 이민, 옥심, 하이드라존 및 나이트릴과 같은 기 내의 질소에 대한 더 고차의 결합(예를 들어, 이중- 또는 삼중-결합)에 의해 대체된 임의의 상기 기를 의미한다. 예를 들어, "치환된"은 하나 또는 복수의 수소 원자가 할라이드, 시아노, 니트로, 하이드록실, 머캅토, 아미노, -ORg, -SRg, -NRhRi, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 하이드록시알킬, 아미노알킬, -알킬시클로알킬, -알킬헤테로사이클릴, -알킬아릴, -알킬헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, -C(=O)Rg, -C(=NRj)Rg, -S(=O)Rg, -S(=O)2Rg, -S(=O)2ORk, -C(=O)ORk, -OC(=O)Rg, -C(=O)NRhRi, -NRgC(=O)Rg, -S(=O)2NRhRi, -NRgS(=O)2Rg, -OC(=O)ORg, -OC(=O)NRhRi, -NRgC(=O)ORg, -NRgC(=O)NRhRi, -NRgC(=NRj)NRhRi, -P(=O)(Rg)2, -P(=O)(ORk)Rg, -P(=O)(ORk)2, -OP(=O)(Rg)2, -OP(=O)(ORk)Rg 및 -OP(=O)(ORk)2로 대체된 임의의 상기 기를 포함하고, 여기서 Rg의 각각의 존재는 수소, 알킬, 할로알킬, 하이드록시알킬, 아미노알킬, -알킬시클로알킬, -알킬헤테로사이클릴, -알킬아릴, -알킬헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴부터 독립적으로 선택되며; Rh 및 Ri의 각각의 존재는 수소, 알킬, 할로알킬, 하이드록시알킬, 아미노알킬, -알킬시클로알킬, -알킬헤테로사이클릴, -알킬아릴, -알킬헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되거나 또는 Rh과 Ri는 이들이 연결되는 질소 원자와 함께 헤테로환식 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고; Rj의 각각의 존재는 독립적으로 수소, -ORg, 알킬, 할로알킬, 하이드록시알킬, 아미노알킬, -알킬시클로알킬, -알킬헤테로사이클릴, -알킬아릴, -알킬헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며; Rk의 각각의 존재는 독립적으로 수소, W, 알킬, 할로알킬, 하이드록시알킬, 아미노알킬, -알킬시클로알킬, -알킬헤테로사이클릴, -알킬아릴, -알킬헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기서 W의 각각의 존재는 독립적으로 H+, Li+, Na+, K+, Cs+, Mg+2, Ca+2 또는 -+N(Rg)2RhRi이다.
"티오알킬"은 화학식 -SRa로 표시되는 기를 지칭하며, 여기서 Ra는 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 상기에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐 또는 알키닐이다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 제시되지 않는 한, 티오알킬은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 "유기 기"는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 및 치환된 아릴을 포함해야 한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 기호 ""(이하 "연결 결합 지점"으로 지칭될 수 있음)은 2개의 화학 엔티티 사이의 연결 지점인 결합을 나타내고, 이들 중 하나는 연결 결합 지점에 연결된 것으로 도시되어 있고, 이들 중 나머지는 연결 결합 지점에 연결되는 것으로 도시되어 있지 않다. 예를 들어, ""는 화학 엔티티 "XY"가 연결 결합 지점을 통해 또 다른 화학 엔티티에 결합되는 것을 나타낸다. 추가로, 도시되지 않은 화학 엔티티에 대한 구체적인 연결 지점은 추론에 의해 명시될 수 있다. 예를 들어, 화합물 CH3-R3(여기서 R3은 H 또는 ""임)은 R3이 "XY"인 경우, 연결 결합 지점은 R3이 CH3에 결합되는 것으로서 도시된 결합과 동일한 결합이라는 것을 의미한다.
"융합된"은 본 개시내용의 화합물 내에 존재하는 고리 구조에 융합된 본 명세서에 기재된 임의의 고리 구조를 지칭한다. 상기 융합된 고리가 헤테로사이클릴 고리 또는 헤테로아릴 고리인 경우, 융합된 헤테로사이클릴 고리 또는 융합된 헤테로아릴 고리의 부분이 되는 존재하는 고리 구조 상의 임의의 탄소 원자는 질소 원자로 대체될 수 있다.
"친전자체" 및 "친전자성 기"는 친핵체와 반응할 수 있는 친전자성 중심(즉, 전자를 끌어당기는 중심)을 갖는 이온성일 수 있는 이온 또는 원자 또는 원자 집합을 지칭한다.
"친핵체" 및 "친핵성 기"는 친전자체와 반응할 수 있는 친핵체 중심(즉, 친전자체를 끌어당기는 중심)을 갖는 이온성일 수 있는 이온 또는 원자 또는 원자 집합을 지칭한다.
"생리학적으로 절단 가능한" 또는 "가수분해 가능한" 또는 "분해 가능한" 결합은 생리학적 조건 하에 물과 반응하는(즉, 가수분해되는) 결합이다. 수 중에서 가수분해되는 결합의 경향은 2개의 중심 원자를 연결하는 일반적인 유형의 결합 뿐만 아니라 이러한 중심 원자에 연결된 치환기에 따라 달라진다. 적절한 가수분해적으로 불안정적이거나 약한 결합은 카바메이트, 카르복실레이트 에스터, 포스페이트 에스터, 무수물, 아세탈, 케탈, 아실옥시알킬 에터, 이민, 오르토에스터, 펩티드 및 올리고뉴클레오타이드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
"방출 가능한 링커"는 단백질을 거대분자와 연결하는 링커를 지칭한다. 가수분해, 효소적 과정, 촉매적 과정 또는 다른 것을 통해 거대분자가 방출되어 접합되지 않은 단백질 모이어티가 생성된다. 특정 실시형태에 있어서, 방출 가능한 링커는 생체내에서 일어나는 전술한 과정에 의해 거대분자를 방출한다.
"효소적으로 분해 가능한 결합"은 하나 또는 복수의 효소에 의해 분해되는 결합을 의미한다.
"가수분해적으로 안정적인" 결합은 화학 결합, 일반적으로 공유 결합을 지칭하며, 이는 수 중에서 실질적으로 안정적이고, 즉, 생리학적 조건 하에 연장된 시간 기간에 걸쳐 임의의 인지 가능한 정도로 가수분해를 겪지 않는다. 가수분해적으로 안정적인 결합의 예는 탄소-탄소 결합(예를 들어, 지방족 사슬), 탄소-황 결합, 에틸에터, 아미드, 카바메이트 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 가수분해적으로 안정적인 결합은 생리학적 조건 하에 하루에 약 1 내지 2% 미만의 가수분해 속도를 나타내는 것이다. 대표적인 화학 결합의 가수분해 속도는 대부분의 표준 화학 교과서에서 찾을 수 있다.
"약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체"는 본 개시내용의 조성물에 선택적으로 포함될 수 있고, 환자에게 유의한 유해 독성 효과를 유발하지 않는 부형제를 지칭한다. "약리학적 유효량", "생리학적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 혈류 또는 표적 조직에서 원하는 수준의 접합체(또는 상응하는 비접합된 단백질)를 제공하는 데 필요한 단백질-거대분자 접합체의 양을 의미하도록 상호 호환적으로 사용된다. 정확한 양은 다양한 인자, 예를 들어, 특정 단백질, 치료용 조성물의 성분 및 물성, 의도된 환자 집단, 개별 환자 고려 사항 등에 의존할 것이며, 본 명세서에서 제공된 정보에 기초하여 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "IL-2 모이어티"는 인간 IL-2 활성을 갖는 모이어티를 지칭한다. IL-2 모이어티는 또한 중합체성 시약과의 반응에 적합한 하나 또는 복수의 친전자성 기 또는 친핵성 기를 가질 것이다. 또한, "IL-2 모이어티"라는 용어는 접합 전의 IL-2 모이어티 및 접합 후의 IL-2 모이어티 잔기 둘 다를 포함한다. 하기에 더 상세히 설명되는 바와 같이, 당업자는 임의의 주어진 모이어티가 IL-2 활성을 갖는지 여부를 결정할 수 있다. 도 1의 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질은 IL-2 모이어티 뿐만 아니라 이에 실질적으로 상동성인 임의의 단백질 또는 폴리펩티드이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-2 모이어티"는 예를 들어, 부위 지향 돌연변이 유발 또는 돌연변이를 통해 우연히 변형된 이러한 단백질을 포함한다. 이들 용어는 또한 1 내지 6개의 다른 글리코실화 부위를 갖는 유사체, 단백질의 카르복시 말단에 적어도 하나의 다른 아미노산을 갖는 유사체(여기서 다른 아미노산(들)은 적어도 하나의 글리코실화 부위를 포함함), 및 적어도 하나의 글리코실화 부위를 포함하는 아미노산 서열을 갖는 유사체를 포함한다. 이 용어는 자연 및 재조합 방식으로 생성된 모이어티 둘 다를 포함한다.
"실질적으로 상동성"이라는 용어는 특정 대상 서열, 예를 들어, 돌연변이체 서열이 하나 또는 복수의 치환, 결실 또는 추가에 의해 참조 서열과 달라지는 것을 의미하며, 이의 순 효과는 참조 서열과 대상 서열 사이의 부정적인 기능성 비유사성을 초래하지 않는다. 본 개시내용의 목적을 위해, 80% 초과(더 바람직하게는 85% 초과, 보다 더 바람직하게는 90% 초과, 가장 바람직하게는 95% 초과)의 상동성, 동등한 생물학적 활성(반드시 동등한 강도의 생물학적 활성은 아닐 수 있음) 및 동등한 발현 특성을 갖는 서열은 실질적으로 상동성인 것으로 간주된다. 상동성을 결정하기 위해, 성숙한 서열의 절단은 무시되어야 한다.
"단편"이라는 용어는 IL-2 모이어티의 일부 또는 단편의 아미노산 서열을 갖고, IL-2의 생물학적 활성을 갖는 임의의 단백질 또는 폴리펩티드를 의미한다. 단편은 IL-2 모이어티의 단백질 분해에 의해 생산된 단백질 또는 폴리펩티드 뿐만 아니라 당업계에서 일상적인 방법에 의한 화학적 합성에 의해 생산된 단백질 또는 폴리펩티드를 포함한다.
용어 "환자"는 활성제(예를 들어, 접합체)의 투여에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 병태를 앓고 있거나 이러한 병태에 취약한 살아있는 유기체를 지칭하며, 인간 및 동물 둘 다를 포함한다.
"선택적인" 또는 "선택적으로"는 후술되는 상황이 일어날 수 있거나 일어나지 않을 수 있음을 의미하므로, 이러한 기재에는 이러한 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우가 포함된다.
"실질적으로"는 거의 전체적으로 또는 완전히, 예를 들어, 조건의 50% 초과, 51% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 90% 이상 및 95% 이상 중 하나 또는 복수를 충족함을 의미한다.
펩티드 내의 아미노산 잔기는 다음과 같이 약칭된다: 페닐알라닌은 Phe 또는 F이고; 류신은 Leu 또는 L이고; 아이소류신은 lie 또는 I이고; 메티오닌은 Met 또는 M이고; 발린은 Val 또는 V이고; 세린은 Ser 또는 S이고; 프롤린은 Pro 또는 P이고; 트레오닌은 Thr 또는 T이고; 알라닌은 Ala 또는 A이고; 타이로신은 Tyr 또는 Y이고; 히스티딘은 His 또는 H이고; 글루타민은 Gln 또는 Q이고; 아스파라긴은 Asn 또는 N이고; 라이신은 Lys 또는 K이고; 아스파트산은 Asp 또는 D이고; 글루탐산은 Glu 또는 E이고; 시스테인은 Cys 또는 C이고; 트립토판은 Trp 또는 W이고; 아르기닌은 Arg 또는 R이고; 글리신은 Gly 또는 G이다.
본 개시내용은 하나 또는 복수의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 본 개시내용의 모든 약제학적으로 허용 가능한 동위원소 표지된 화합물을 포함한다. 본 개시내용의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대, 2H 및 3H, 탄소의 동위원소, 예컨대, 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대, 36Cl, 플루오린의 동위원소, 예컨대, 18F, 아이오딘의 동위원소, 예컨대, 123I 및 125I, 질소의 동위원소, 예컨대, 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대, 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대, 32P 및 황의 동위원소, 예컨대, 35S를 포함한다.
본 개시내용의 특정 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어, 방사성 동위원소를 혼입한 것은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉, 3H 및 탄소-14, 즉, 14C는 혼입이 용이하고 감지 수단이 존재한다는 점에서 이러한 목적에 특히 유용하다.
무거운 동위원소, 예컨대, 중수소, 즉, 2H로의 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구 사항 감소로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있으므로, 일부 상황에서는 바람직할 수 있다.
양전자 방출 동위원소, 예컨대, 11C, 18F, 15O 및 13N으로의 치환은 기질 수용체 점유를 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(Positron Emission Topography: PET) 연구에서 유용할 수 있다.
본 개시내용의 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있다.
용어 "이의 거울상이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 2종 이상의 부분입체이성질체의 혼합물, 호변이성질체, 2종 이상의 호변이성질체의 혼합물, 위치이성질체, 2종 이상의 위치이성질체의 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물"은 "(i) 여기에 언급된 화합물의 거울상이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 2종 이상의 부분입체이성질체의 혼합물, 호변이성질체, 2종 이상의 호변이성질체의 혼합물, 위치이성질체, 2종 이상의 위치이성질체의 혼합물 또는 동위원소 변이체; (ii) 여기에 언급된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물; 또는 (iii) 여기에 언급된 화합물의 거울상이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 2종 이상의 부분입체이성질체의 혼합물, 호변이성질체, 2종 이상의 호변이성질체의 혼합물, 위치이성질체, 2종 이상의 위치이성질체의 혼합물 또는 동위원소 변이체의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 또는 전구약물"이라는 어구와 동일한 의미를 갖는다.
제조 방법
본 개시내용은 치료제로의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여되는 경우 치료용 단백질 작용제의 전달 속도를 제어하기 위한 단백질-[거대분자]z 접합체의 제조 방법을 제공한다. 본 개시내용의 방법을 통해 제조된 접합체는 링커의 방출 속도 및 거대분자의 수에 의해 제어되는, 지속된 기간에 걸쳐 치료제를 전달하는 수단을 제공한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 하기 스킴 (I)을 사용하여 단백질-거대분자 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다:
(스킴 I)
상기 식에서 x는 1~25의 정수이고;
y는 0~24의 정수이며;
z는 1~25의 정수이고;
x=y+z이며;
각각의 L은 독립적으로 링커이고;
FG0은 활성 단백질 작용제의 친핵성기와 반응하여 카바메이트 결합, 아미드 결합, 티올 브릿지 등을 포함하는 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 FG3과 반응할 수 있는 작용기이고;
FG3은 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 FG2와 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일 양태에서, 본 개시내용은 하기 스킴 (II) 또는 스킴 (III)을 사용하여 단백질-거대분자 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다:
(스킴 II)
(스킴 III)
상기 식에서,
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 RL은 독립적으로 방출 가능한 링커이고;
각각의 SL은 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
FG4 및 FG5는 각각 독립적으로 활성 단백질 작용제의 친핵성기와 반응하여 카바메이트 결합, 아미드 결합, 티올 브릿지 등을 포함하는 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
FG2는 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG3과 반응할 수 있는 작용기이며;
FG3은 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG2와 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이며;
거대분자1 및 거대분자2는 각각 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
스킴 I에서, x, y 또는 z가 2 이상인 경우, 괄호 내의 각 기는 단백질에 직접 결합한다. 스킴 II 및 스킴 III에서, z1 또는 z2가 2 이상인 경우, 괄호 내의 각 기는 단백질에 직접 결합한다.
일 실시형태에 있어서, 사이토카인은 GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α 또는 TNF-β를 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 사이토카인은 M-CSF, G-CSF, GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, IL-38, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, TNF-β 또는 CXL10이다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2이다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 IL-2는 서열번호 1과 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다.
상기 케모카인은 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-24, MCP-5, CXCL76, I-309(CCL1), BCA1(CXCL13), MIG, SDF-1/PBSF, IP-10, I-TAC, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, 에오탁신-1, 에오탁신-2, GCP-2, Gro-α, Gro-β, Gro-γ, LARC(CCL20), ELC(CCL19), SLC(CCL21), ENA-78, PBP, TECK(CCL25), CTACK(CCL27), MEC, XCL1, XCL2, HCC-1, HCC-2, HCC-3 또는 HCC-4를 포함한다.
상기 항체는 앤지오포이에틴 2, AXL, ACVR2B, 앤지오포이에틴 3, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, 아밀로이드 A 단백질, β-아밀로이드, AOC3, BAFF, BAFF-R, B7-H3, BCMAC, A-125(이미테이션), C5, CA-125, CCL11(에오탁신-1), CEA, CSF1R, CD2, CD3, CD4, CD6, CD15, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD54, CD56, CD70, CD74, CD97B, CD125, D134, CD147, CD152, CD154, CD279, CD221, C24 항원, CD276, CD278, CD319, 클로스트리디엄 디피실(clostridium difficile), 클라우딘 18 아이소폼 2, CSF1R, CEACAM5, CSF2, 탄산무수화효소 9, CLDN18.2, 심장 마이오신, CCR4, CGRP, 응고 인자 III, c-Met, CTLA-4, DPP4, DR5, DLL3, DLL4, 다비가트란(Dabigatran), EpCAM, 에볼라바이러스 당단백질, 엔도글린(Endoglin), 에피시알린(episialin), EPHA3, c-Met, FGFR2, 피브린 II β 사슬, FGF 23, 폴레이트 수용체 1, GMCSF, GD2 강글리오사이드, GDF-8, GCGR, 젤라티나제 B, 글리피칸 3, GPNMB, GMCSF 수용체 α-사슬, 칼리크레인, KIR2D, ICAM-1, ICOS, IGF1, IGF2, IGF-1 수용체, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4Rα, IL-5, IL-6, IL-6 R, IL-9, IL-12, IL-13, IL-15, IL17A, IL17F, IL-20, IL-22, IL-23, IL-31, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 인테그린 α4β7, 안터페론 α/β 수용체, 인플루엔자 A 헤마글루티닌, ILGF2, HER1, HER2, HER3, HHGFR, HGF, HLA-DR, B형 간염 표면 항원, HNGF, Hsp90, HGFR, L-셀렉틴, 루이스-Y 항원, LYPD3, LOXL2, LIV-1, MUC1, MCP-1, MSLN, 메소텔린, MIF, MCAM, NCA-90, NCA-90 노치 1, 넥틴-4, PCDP1, PD-L1, PD-1, PCSK9, PTK7, PCDC1, 포스파티딜세린, RANKL, RTN4, 레서스 인자, ROR1, SLAMF7, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) α 독소, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 2성분 류코시딘, SOST, 셀렉틴 P, SLITRK6, SDC1, TFPI, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, TNF-α, TWEAK 수용체, TNFRSF8, TYRP1, 타우 단백질, TAG-72, TSLP, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TGF-β, TAG-72, TRAP, TIGIT, 테나신 C, OX-40, VEGF-A, VWF, VEGFR1 또는 VEGFR2 중 하나 또는 복수를 표적으로 한다.
펩티드는 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1), 엑센딘-2, 엑센딘-3, 엑센딘-4, 심방 나트륨이뇨 인자(atrial natriuretic factor: ANF), 그렐린, 바소프레신, 성장 호르몬, 성장 호르몬-방출 호르몬(GHRH), RC-3095, 소마토스타틴, 봄베신, PCK-3145, Phe-His-Ser-Cys-Asn(PHSCN), IGFl, B형 나트륨뇨 펩티드, 펩티드 YY(PYY), 인터페론, 트롬보스폰딘, 앤지오포이에틴, 칼시토닌, 성선자극호르몬 방출호르몬, 히루딘, 글루카곤, 항-TNF-α, 섬유아세포 성장인자, 과립구 집락 자극 인자, 오비네피타이드, 뇌하수체 갑상선 호르몬(pituitary thyroid hormone: PTH), 류프롤라이드, 세르모렐린, 프라모렐린, 네시리타이드, 로티갑타이드, 실렌기타이드, MBP-8298, AL-108, 엔푸비르타이드, 티말파신, 답타마이신, HLFI-II, 락토페린, 델미타이드, 글루타티온, T-세포 에피토프 PR1, 프로테아제-3 펩티드 1-11, B-세포 에피토프 P3, 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(lutenizing hormone-releasing hormone: LHRH), 물질 P, 뉴로키닌 A, 뉴로키닌 B, CCK-8, 류신 엔케팔린 및 메티오닌 엔케팔린을 비롯한 엔케팔린, 더마셉틴, [des-Ala20, Gln34]-더마셉틴, 계면활성제-연관 항미생물성 음이온성 펩티드, 아피다에신 IA; 아피다에신 IB; OV-2; 1025, 아세틸-부착소 펩티드(1025-1044) 아미드; 테로마신(49-63); 펙시가난(MSI-78); 인돌리시딘; 아펠린-15(63-77); CFPIO(71-85); 탄저병 관련 치사 인자(LF) 저해제; 박텐신; C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 2; C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 3; 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 4; NS4A-NS4B C형 간염 바이러스(NS3 프로테아제 저해제 I); HIV-1, HIV-2 프로테아제 기질; 항-FM 펩티드; Bak-BH3; Bax BH3 펩티드(55-74)(야생형); Bid BH3-r8; CTT(젤라티나제 저해제); E75(Her-2/neu)(369-377); GRP78 결합 키메라 펩티드 모티프; p53(17-26); EGFR2/KDR 길항제; 콜리벨린 AGA-(C8R) HNGl 7(휴마닌 유도체); 활성-의존성 신경영양 인자(Activity-Dependent Neurotrophic Factor: ADNF); β-분비효소 저해제 I; β-분비효소 저해제 2; ch[β]-아밀로이드(30-16); 휴마넌(Humanun: HN) sHNG, [Glyl4]-HN, [Glyl 4]-휴마닌; 안지오텐신 전환 효소 저해제(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor: BPP); 레닌 저해제 III; 아넥신 I(ANXA-I; Ac2-12); 항염증성 펩티드 I; 항염증 펩티드 2; 항염증성 아펠린 12; [D-Phel2, Leul4]-봄베신; 안테나페디아(Antennapedia) 펩티드(산)(페네트라틴); 안테네페디아(Antennepedia) 리더 펩티드(CT); 마스토파란(Mastoparan); 설페이트화된 [Thr28, Nle31]-콜레시스토키닌(25-33); 노시셉틴(1-13)(아미드); 섬유소용해 저해 인자; γ 피브리노겐(377-395); 제닌; 오베스타틴(인간); [His1, Lys6]-GHRP(GHRP-6); [Ala5[β]-Ala8]-뉴로키닌 A(4-10); 뉴로메딘 B; 뉴로메딘 C; 뉴로메딘 N; 활성-의존성 신경영양 인자(ADNF-14); 아세탈린 I(오피오이드 수용체 길항제 I); 아세탈린 2(오피오이드 수용체 길항제 2); 아세탈린 3(오피오이드 수용체 길항제 3); ACTH(1-39)(인간); ACTH(7-38)(인간); 소바진; 지질동성 호르몬(Adipokinetic Hormone)(풀무치(Locusta Migratoria)); 미리스토일화된 ADP-리보실화 인자 6, myr-ARF6(2-13); PAMP(1-20)(프로아드레노메둘린(1-20) 인간); AGRP(25-51); 아밀린(8-37)(인간); 앤지오텐신 I(인간); 앤지오텐신 II(인간); 압스타틴(아미노펩티다제 P 저해제); 브레비닌-I; 마가이닌 I; RL-37; LL-37(항미생물 펩티드)(인간); 세크로핀 A; 항산화 펩티드 A; 항산화 펩티드 B; L-카모신; BcI 9-2; NPVF; 신경펩티드 AF(hNPAF)(인간); Bax BH3 펩티드(55-74); bFGF 저해성 펩티드; bFGF 저해성 펩티드 II; 브래디키닌; [Des-Argl OJ-HOE 140; 카스파제 I 저해제 II; 카스파제 I 저해제 VIII; Smac N7 단백질(MEKl 유래 펩티드 저해제 I; hBD-1([β]-데펜신-1)(인간); hBD3([β]-데펜신-3)(인간); hBD-4([β]-데펜신-4)(인간); HNP-I(데펜신 인간 호중구 펩티드 I); HNP-2(데펜신 인간 호중구 펩티드-2 디노핀 A(1-17)); 엔도몰핀-I; [β]-엔돌핀(인간, 돼지); 엔도텔린 2(인간); 피브리노겐 결합 저해제 펩티드; 시클로(-GRGDSP); TP508(트롬빈-유래 펩티드); 갈라닌(인간); GIP(인간); 가스트린 방출 펩티드(인간); 가스트린-1(인간); 그렐린(인간); PDGF-BB 펩티드; [D-Lys3]-GHRP-6; HCV 코어 단백질(1-20); a3Bl 인테그린 펩티드 단편(325)(아미드); 라미닌 펜타펩티드(아미드) Mel-아노트로핀-증강 인자(Mel-anotropin-Potentiating Factor: MPF); VA-[β]-MSH, 리포트로핀-Y(프로오피오멜라노코르틴(Proopiomelanocortin)-유래); 심방 나트륨이뇨 펩티드(1-28)(인간); 바소나트린 펩티드(1-27); [Ala5, B-Ala8]-뉴로키닌 A(4-10); 뉴로메딘 L(NKA); Ac-(Leu28, 31)-신경펩티드 Y(24-26); 알리테신; 뇌 신경펩티드 II; [D-tyrll]-뉴로텐신; IKKy NEMO 결합 도메인(NBD) 저해성 펩티드; PTD-p50(NLS) 저해성 펩티드; 오렉신 A(소, 인간, 마우스, 래트); 오렉신 B(인간); 아쿠아포린-2(254-267)(인간 판크레아스타틴(Pancreastatin))(37-52); 췌장 폴리펩티드(인간); 신경펩티드; 펩티드 YY(3-36)(인간); 하이드록시메틸-피토켈라틴 2; PACAP(I -27)(아미드, 인간, 소, 래트); 프로락틴 방출 펩티드(1-31)(인간); 살루신-α; 살루신-β; 사포신 C22; 세크레틴(인간); L-셀렉틴; 엔도키닌 A/B; 엔도키닌 C(인간); 엔도키닌 D(인간); 트롬빈 수용체(42-48) 작용제(인간); LSKL(트롬보스폰딘의 저해제); 티로트로핀 방출 호르몬(Thyrotropin Releasing Hormone: TRH); P55-TNFR 단편; 유로텐신 II(인간); VIP(인간, 돼지, 래트); VIP 길항제; 헬로더민; 엑세나타이드; ZPlO(AVEOOIOO); 프람리니타이드; AC162352(PYY)(3-36); PYY; 오비네피타이드; 글루카곤; GRP; 그렐린(GHRP6); 류프롤라이드; 히스트렐린; 옥시토신; 아토시반(RWJ22164); 서모렐린; 네시리타이드; 비발리루딘(Hirulog); 이카티반트; 아비프타딘; 로티갭타이드(ZP123, GAP486); 실렌지타이드(EMD-121924, RGD 펩티드); AlbuBNP; BN-054; 앤지오텐신 II; MBP-8298; 펩티드 류신 아르기닌; 지코노타이드; AL-208; AL-108; 카베티콘; 트리펩티드; SAL; 콜리벤; 휴마닌; ADNF-14; VIP(혈관작용 장 펩티드); 티말파신; 바시트라신; 그라미디신; 펙시가난(MSI-78); Pl 13; PAC-113; SCV-07; HLFl-Il(락토페린); DAPTA; TRI-1144; 트리트릅티신(Tritrpticin); 항-플라민 2; 가텍스(테두글루타이드, ALX-0600); 스티무박스(L-BLP25); 크리살린(TP508); 멜라노난 II; 스판타이드 II; 세룰레타이드; 신칼라이드; 펜타가스틴; 세크레틴; 엔도스타틴 펩티드; E-셀렉틴; HER2; IL-6; IL-8; IL-10; PDGF; 트롬보스폰딘; uPA (I); uPA (2); VEGF; VEGF (2); 펜타펩티드-3; XXLRR; β-아밀로이드 원섬유발생(Beta-Amyloid Fibrillogenesis); 엔도몰핀-2; TIP 39(결절누두(Tuberoinfundibular) 신경펩티드); PACAP(1-38)(아미드, 인간, 소, 래트); TGFB 활성화 펩티드; 인슐린 감작 인자(ISF402); 전환 성장 인자 BI 펩티드(TGF-B1); 캐룰레인 방출 인자; IELLQAR(8-branchMAPS); 티가포타이드 PK3145; 고세렐린; 아바렐릭스; 세트로렐릭스; 가니렐릭스; 데가렐릭스(트립토렐린); 바루시반(FE 200440); 프랄모렐린; 옥트레오타이드; 엡티피바타이드; 네타미프타이드(INN-00835); 답타마이신; 스판타이드 II; 델미타이드(RDP-58); AL-209; 엔푸버타이드; IDR-I; 헥사펩티드-6; 인슐린-A 사슬; 란레오타이드; 헥사[rho]엡타이드-3; 인슐린 B-사슬; 글라긴-A 사슬; 글라긴-B 사슬; 인슐린-리스프로 B-사슬 유사체; 인슐린-아스파트 B-사슬 유사체; 인슐린-글루리신 B 사슬 유사체; 인슐린-데터머(Determir) B 사슬 유사체; 소마토스타틴 종양 저해 유사체; 판크레아스타틴(37-52); 혈관작용 장 펩티드 단편(KKYL-NH2); 및 디놀핀 A를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용에 사용하기에 적합한 단백질의 예는 면역독소 SSlP, 아데노신 데아미나제, 아르기나제 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
상기 거대분자는 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 6 내지 약 26개 탄소 원자를 포함하는 지방산, 및 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(N-아크릴로일몰폴린), 폴리(알콕시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스터), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(트리에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스터), 폴리(옥사졸린), 폴리(에톡실화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리포스파젠, 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(당류), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에터), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 아밀로스, 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산(HA) 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 헤파린, 헤파란 설페이트(HS), 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분(HES), 폴리시알산(PSA) 및 다른 탄수화물계 중합체, 자일란 및 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
상기 거대분자는 또한 알부민, 트랜스페린, 트랜스티레틴, 면역글로불린, XTEN 펩티드, 글리신-풍부 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
특정 실시형태에 있어서, 링커 L은 방출 가능한 링커(RL)의 잔기이다. 특정 실시형태에 있어서, 링커 L은 방출 불가능한 링커(SL)의 잔기이다.
일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 2 이상이다. 특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 3 이상이다. 특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 4 이상이다. 특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 5 이상이다. 특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 6 이상이다. 특정 실시형태에 있어서, x 또는 z는 6보다 크다.
특정 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 10의 정수이고; z2는 1 내지 3의 정수이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 5의 정수이고; z2는 1이다.
특정 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 제조 방법은 단백질과 다중 기능성 링커의 접합을 포함하는 제1 단계에 관한 것이다. 링커의 작은 크기로 인해, 이러한 접합 과정은 단백질과 거대분자를 직접 접합시키는 것에 비해 더 효율적이고 더 많은 경우의 접합을 달성할 수 있을 것으로 기대된다. 또한 본 명세서에 기재된 바와 같이, 개시된 방법의 제2 단계는 링커를 거대분자와 높은 효율로 연결하도록 설계된 클릭 화학 반응을 수반할 수 있다. 특정 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 이 방법은 입체 장애를 최소화하여 반응 효율을 향상시킬 수 있는 이점을 제공하는 것으로 여겨진다. 또한, 이러한 합성 및 정제 단계가 간단하고, 저비용이기 때문에, 이 방법은 중합체-단백질 치료제의 대규모 생산 및 제조에 상당한 이점을 제공한다. 먼저 접합될 링커의 크기가 작으므로 이러한 접합 기술의 또 다른 이점은 큰 거대분자를 통한 직접 접합과 비교하여 단백질에서 상이한 접합 사이트를 차지할 가능성이 있다는 점이다. 이는 단백질-거대분자 접합체의 생물학적 특성을 변경할 가능성을 제공한다.
기능성 방출 가능한 링커
본 개시내용에 기재된 접합체는 기능성 방출 가능한 링커로부터 유래될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 이중 기능성 방출 가능한 링커이다. 일 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 단일 기능성 방출 가능한 링커이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(I)
상기 식에서,
X1은 제1 스페이서 모이어티이고;
X2는 제2 스페이서 모이어티이며;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고;
a는 0 내지 4의 정수이며;
b는 1 내지 3의 정수이고;
c는 0 내지 1의 정수이며;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합과 같은 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, c가 2 이상인 경우, 대괄호 내의 각각의 FG2는 X1에 직접 결합하는 바, 즉 c가 1이면, X1은 2가 제1 스페이서 모이어티이고, c가 2이면, X1은 3가 제1 스페이서 모이어티이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-5 알킬, 치환된 C1-5 알킬, C2-6 알케닐, 치환된 C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 치환된 C2-6 알키닐, 페닐 또는 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-5 알킬 또는 치환된 C1-5 알킬이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), 치환된 -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), 치환된 -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), 치환된 -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), C1-5 알콕시, 치환된 C1-5 알콕시, C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 치환된 C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴, 또는 치환된 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 4이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, b는 1 또는 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 3이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, 일부 실시형태에 있어서, c는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, c는 1이다.
화학식 (I)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (I) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 기능성 방출 가능한 링커가 제공되며:
(I-B); (I-C)
상기 식에서, 각각의 X1은 제1 스페이서 모이어티거나 FG1에 연결되지 않은 경우, X1은 수소일 수도 있으며; X2는 제2 스페이서 모이어티이고; R1, R2, [Re]a, FG1 및 FG2는 상기에 정의된 바와 같다.
화학식 (I), (I-B) 또는 (I-C)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다. 화학식 (I-B)의 일 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (I-B-1)")이다. 화학식 (I-C)의 일 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (I-C-1)")이다.
화학식 (I), (I-B) 또는 (I-C)의 특정 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 하기 구조 중 하나를 갖는다:
(화학식 (I-B-2)); 또는 .
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (XVIII)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(XVIII)
상기 식에서,
X1은 스페이서 모이어티이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
a는 0 내지 4의 정수이고;
c는 2이며;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
각각의 FG2는 독립적으로 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
화학식 (XVIII)의 일부 실시형태에 있어서, 대괄호 내의 각각의 FG2는 X1에 직접 결합하는 바, 즉 X1은 3가 스페이서 모이어티이다.
화학식 (XVIII)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (XVIII-1)")이다.
화학식 (XVIII)의 특정 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 하기 구조 중 하나를 갖는다:
또는
.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (XXI)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(XXI)
상기 식에서,
X는 스페이서 모이어티거나 수소이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
a는 0 내지 4의 정수이고;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
화학식 (XXI)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (XXI-1)")이다.
화학식 (XXI)의 특정 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 하기 구조를 갖는다.
(XXI-2)
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (XXII)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(XXII)
상기 식에서,
X1은 스페이서 모이어티이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
a는 0 내지 4의 정수이고;
Y1은 O 또는 S이며;
Y2는 O 또는 S이고;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
FG2는 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
화학식 (XXII)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0이고; R1은 수소이며; R2는 수소이고; Y1은 O이며; Y2는 O("화학식 (XXII-1)")이다.
화학식 (XXII)의 특정 실시형태에 있어서, 상기 기능성 방출 가능한 링커는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, n은 1~10의 정수이다("화학식 (XXII-2)")이다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (II)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(II)
상기 식에서,
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
존재하는 경우, Re1은 각각 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, Re2는 각각 독립적으로 제2 전자 변경기이고;
X2는 제2 스페이서 모이어티이며;
존재하는 경우, X3은 각각 독립적으로 제3 스페이서 모이어티이고;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합과 같은 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
화학식 (II)의 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-5 알킬, 치환된 C1-5 알킬, C2-6 알케닐, 치환된 C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 치환된 C2-6 알키닐, 페닐 또는 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-5 알킬 또는 치환된 C1-5 알킬이다.
화학식 (II)의 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 할로알킬(예를 들어, -CF3, --CHF2, -CH2F, -CH2F), -OC1-5 알킬, -O-할로알킬(예를 들어, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, -OCH2F), -NH(C1-5 알킬), -NHCO(C1-5 알킬), -NHSO2(C1-5 알킬), -CONH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(C1-5 알킬)이다. 특정 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (II)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (II)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (II-1)")이다.
다른 예시적인 기능성 링커는 하기 화학식 (II-A) 또는 (II-B)에 속하며:
(II-A);
상기 식에서, Re는 수소, 또는 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이다. 특정 실시형태에 있어서, Re는 수소 또는 플루오로이다.
(II-B)
US20060293499A1에 기재된 절차에 따라 방출 가능한 결합을 제공하는 이러한 시약을 제조할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (III)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(III)
상기 식에서,
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
존재하는 경우, Re1은 각각 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, Re2는 각각 독립적으로 제2 전자 변경기이고;
Rp는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
X2는 스페이서 모이어티이고;
존재하는 경우, X3은 각각 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
Y1은 O 또는 S이고;
Y2는 O 또는 S이며;
Y3은 O 또는 S이고;
FG2는 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
FG4는 활성제의 아미노기와 반응하여 아미드 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
화학식 (III)의 일부 실시형태에 있어서, R1, R2 및 Rp는 각각 독립적으로 C1-5 알킬, 치환된 C1-5 알킬, C2-6 알케닐, 치환된 C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 치환된 C2-6 알키닐, 페닐 또는 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-5 알킬 또는 치환된 C1-5 알킬이다.
화학식 (III)의 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 할로알킬(예를 들어, -CF3, --CHF2, -CH2F, -CH2F), -OC1-5 알킬, -O-할로알킬(예를 들어, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, -OCH2F), -NH(C1-5 알킬), -NHCO(C1-5 알킬), -NHSO2(C1-5 알킬), -CONH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(C1-5 알킬)이다. 특정 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (III)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (III)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3("화학식 (III-1)")이다.
예시적인 기능성 방출 가능한 링커는 하기 화학식 (III-A)에 속하며:
(III-A)
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (IV)로 표시되는 기능성 방출 가능한 링커: 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(IV)
상기 식에서,
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R4는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
c는 0 내지 4의 정수이며;
존재하는 경우, Re1은 각각 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, Re2는 각각 독립적으로 제2 전자 변경기이며;
Rd는 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬 또는 시클로알킬, 치환된 알킬 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 또는 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
X2는 스페이서 모이어티이며;
존재하는 경우, X3은 각각 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
Y1은 O 또는 S이며;
Y2는 O 또는 S이고;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합과 같은 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
FG2는 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
화학식 (IV)의 일부 실시형태에 있어서, R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 C1-5 알킬, 치환된 C1-5 알킬, C2-6 알케닐, 치환된 C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 치환된 C2-6 알키닐, 페닐 또는 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에 있어서, R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 C1-5 알킬 또는 치환된 C1-5 알킬이다.
화학식 (IV)의 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 할로알킬(예를 들어, -CF3, --CHF2, -CH2F, -CH2F), -OC1-5 알킬, -O-할로알킬(예를 들어, -OCF3, --OCHF2, -OCH2F, -OCH2F), -NH(C1-5 알킬), -NHCO(C1-5 알킬), -NHSO2(C1-5 알킬), -CONH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(C1-5 알킬)이다. 특정 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (IV)의 일부 실시형태에 있어서, Rd는 니트로, 시아노, 할로겐, -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), 치환된 -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), 치환된 -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), 치환된 -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), C1-5 알콕시, 치환된 C1-5 알콕시, C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 치환된 C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴, 또는 치환된 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴이다.
화학식 (IV)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (III) 및 화학식 (IV)로 표시되는 것과 같은 방출 가능한 링커를 사용하는 이점은 지속적인 약물 방출 및 최종적으로 연장된 치료 효능을 제공하는 개선된 안정성에 대한 가능성이다. 따라서, 본 개시내용에 기재된 링커는 선행 기술의 링커보다 우수한 중합체-단백질 치료제에 안정성 및 저장 이점을 제공한다.
화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXII), (XXII-1), (II), (II-1), (III), (III-1) 또는 (IV)의 일부 실시형태에 있어서, FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합을 형성할 수 있는 작용기("RL-1"로 통칭함)이다. 일부 실시형태에 있어서, FG1은 이다.
화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXII), (XXII-1), (II), (II-1), (III), (III-1) 또는 (IV) 또는 RL-1의 일부 실시형태에 있어서, FG2는 아지드, 알키닐 또는 시클로알키닐("RL-2"로 통칭함)이다.
화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXII), (XXII-1), (II), (II-1), (III), (III-1) 또는 (IV) 또는 RL-1 또는 RL-2의 일부 실시형태에 있어서, 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)("RL-3"으로 통칭함)이다.
방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약
본 개시내용은 또한 방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약으로부터 유도될 수 있는 접합체에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (V)로 표시되는 방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체에 관한 것이며:
(V)
상기 식에서,
POLY1은 제1 수용성 중합체이고;
POLY2는 제2 수용성 중합체이며;
X1은 제1 스페이서 모이어티이고;
X2는 제2 스페이서 모이어티이며;
Y1은 O 또는 S이고;
Y2는 O 또는 S이며;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
R4는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1은 0 내지 3의 정수이고;
a2는 0 내지 3의 정수이며;
c는 0 내지 4의 정수이고;
존재하는 경우, Re1은 각각 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, Re2는 각각 독립적으로 제2 전자 변경기이고;
Rd는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬 또는 시클로알킬, 치환된 알킬 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이며;
FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합과 같은 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, R3, R4, Re1, Re2 및 Rd는 상기 화학식 (IV)에 정의된 바와 같다.
화학식 (V)의 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 동일한 전자 변경기이다. 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 상이한 전자 변경기이다.
화학식 (V)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (V)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다. 예시적인 중합체성 시약은 하기 화학식 (V-A)에 속하며:
,
(V-A)
상기 식에서, n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고, 예를 들어, 4, 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500(이들 사이의 모든 범위 및 값 포함)이다.
2개의 방출 가능한 결합을 갖는 다른 중합체성 시약은 하기 화학식 (VI) 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 또는 동위원소 변이체를 포함하며:
(VI)
상기 식에서,
POLY1은 제1 수용성 중합체이고;
POLY2는 제2 수용성 중합체이며;
X1은 제1 스페이서 모이어티이고;
X2는 제2 스페이서 모이어티이며;
Y1은 O 또는 S이고;
Y2는 O 또는 S이며;
Y3은 O 또는 S이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
a1은 0~3의 정수이며;
a2는 0~3의 정수이고;
존재하는 경우, Re1은 각각 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, Re2는 각각 독립적으로 제2 전자 변경기이고;
Rp는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
FG4는 활성제의 아미노기와 반응하여 아미드 결합과 같은 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
화학식 (VI)의 일부 실시형태에 있어서, R1, R2 및 Rp는 각각 독립적으로 C1-5 알킬, 치환된 C1-5 알킬, C2-6 알케닐, 치환된 C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 치환된 C2-6 알키닐, 페닐 또는 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에 있어서, R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 C1-5 알킬 또는 치환된 C1-5 알킬이다.
화학식 (VI)의 일부 실시형태에 있어서, Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), 치환된 -CONH(C1-5 알킬) 또는 -CONH(페닐), -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), 치환된 -SO2NH(C1-5 알킬) 또는 -SO2NH(페닐), -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), 치환된 -SO2(C1-5 알킬) 또는 -SO2(페닐), C1-5 알콕시, 치환된 C1-5 알콕시, C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 치환된 C1-5 알킬 또는 C-3-6 시클로알킬, 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴 또는 치환된 페닐 또는 5- 내지 6-원 헤테로아릴이다.
화학식 (VI)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (VI)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
예시적인 중합체성 시약은 하기 화학식 (VI-A)에 속하며:
(VI-A)
상기 식에서, n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고, 예를 들어, 4, 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500(이들 사이의 모든 범위 및 값 포함)이다.
단백질-링커 접합체
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 하나 또는 복수의 링커를 통해 공유 결합으로 연결된 단백질의 잔기를 포함하는 접합체를 제공하되, 여기서 상기 접합체는 하기 화학식 (XIX)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
단백질-(L)z
(XIX)
상기 식에서,
z는 1 내지 25의 정수이고;
각각의 L은 독립적으로 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XIX)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이며 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이고 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 접합체는 스킴 (I)의 단계 1로부터 합성된 생성물일 수 있다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 링커는 방출 불가능한 링커이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 링커는 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 방출 가능한 링커는 본 명세서에 개시된 기능성 방출 가능한 링커(예를 들어, 화학식 (I), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (IV), 화학식 (XXI) 또는 화학식 (XXII)로 표시되는 링커)의 유도체이다. 일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 링커를 통해 공유 결합으로 연결된 단백질의 잔기를 포함하는 접합체를 제공하되, 여기서 상기 접합체는 하기 화학식 (XXIII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(L2)z2-단백질-(L1)z1
(XXIII)
상기 식에서,
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커이고;
각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXIII)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, L2가 단백질에 접합되기 전에 L1을 단백질에 접합시킨다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이고, L2가 IL-2에 접합되기 전에 L1을 IL-2에 접합시킨다.
화학식 (XXIII)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, L1이 단백질에 접합되기 전에 L2를 단백질에 접합시킨다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이고, L1이 IL-2에 접합되기 전에 L2를 IL-2에 접합시킨다.
특정 실시형태에 있어서, 링커 L, L1 또는 L2는 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기 FG2를 포함한다.
특정 실시형태에 있어서, 링커 L, L1 또는 L2는 단백질 내 잔기의 아민기에 공유 결합으로 연결된다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 잔기는 라이신이다. 특정 실시형태에 있어서, 단백질에 연결된 상이한 수의 링커가 함유된 접합체의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다.
화학식 (XXIII)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 바와 같이, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
단백질에 접합된, 기능성 방출 가능한 결합을 제공하는 시약을 사용하여 형성된 예시적인 접합체는 하기 화학식 (VII)로 표시되는 구조를 포함하며:
(VII)
상기 식에서,
각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
존재하는 경우, 각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고;
a는 0 내지 5의 정수이며;
b는 0 내지 3의 정수이고;
c는 0 내지 2의 정수이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (VII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
z가 2 이상인 경우, 대괄호 내의 각 기는 단백질에 직접 결합한다. c가 2 이상인 경우, 대괄호 내의 각각의 FG2에 직접 결합하는 바, 즉 c가 1이면, X1은 2가 제1 스페이서 모이어티이고, c가 2이면 X1은 3가 제1 스페이서 모이어티이다. 이는 본 출원에 개시된 다른 화학식에 적용된다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2 및 Re는 상기 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
화학식 (VII)의 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 4이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 5이다.
화학식 (VII)의 일부 실시형태에 있어서, b는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, b는 3이다.
화학식 (VII)의 일부 실시형태에 있어서, c는 0 또는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, c는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, c는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, c는 2이다.
화학식 (VII)의 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이다.
당업자는 본 명세서에 기재된 a, b, c 및 z에 대한 값 및 범위가 본 개시내용의 접합체를 제공하도록 임의의 방식으로 조합될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고, b는 0 또는 1이며, c는 0 또는 1이고, z는 1 내지 25의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, b는 1이며, c는 1이고 z는 1 내지 25의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, b는 0이며, c는 1이고 z는 1 내지 25의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, b는 1이며, c는 0이고 z는 1 내지 25의 정수이다. 이들 및 복수의 다른 조합이 본 개시내용에서 고려된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (VII) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (VII-A), (VII-B), (VII-C) 또는 (VII-D)로 고려되며,
(VII-A);
(VII-B);
(VII-C); 또는
(VII-D),
상기 식에서, X1은 제1 스페이서 모이어티거나 적어도 하나의 FG2에 연결되지 않은 경우, X1은 수소일 수도 있으며; X2는 제2 스페이서 모이어티이고; R1, R2, Re, a, z, Y1, Y2, FG2 및 단백질은 상기 화학식 (VII)에 정의된 바와 같다.
화학식 (VII), (VII-A), (VII-B), (VII-C) 또는 (VII-D)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
다른 예시적인 접합체는 하기 구조 (VII-A1)를 가지며:
(VII-A1)
상기 구조에서, 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고; z는 1~25의 정수이며; 단백질에 연결된 각각의 "-NH-"(예컨대, 화학식 (VII-A1)에 나타낸 바와 같음)는 단백질에 각각 연결된 하나 또는 복수의 링커를 나타낸다. 특정 실시형태에 있어서, a는 1 내지 2의 정수이고; Re는 4-F, 4-Cl, 4-CF3, 2,4-디플루오로 또는 2-CF3-4-F에 의해 치환된다.
다른 예시적인 접합체는 하기 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체를 가지며:
;
;
; 또는
;
상기 식에서, z는 1 내지 25의 정수이다.
단백질에 접합된, 기능성 방출 가능한 결합을 제공하는 시약을 사용하여 형성된 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XXVIII)로 표시되는 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하며:
(XXVIII)
상기 식에서,
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXVIII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XXVIII)의 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 4이다.
화학식 (XXVIII)의 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이다.
당업자는 본 명세서에 기재된 a 및 z에 대한 값 및 범위가 본 개시내용의 접합체를 제공하도록 임의의 방식으로 조합될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고, z는 1 내지 25의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고 z는 1 내지 25의 정수이다. 이들 및 복수의 다른 조합이 본 개시내용에서 고려된다.
일부 실시형태에 있어서, Y1은 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y2는 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y1 및 Y2는 O이다. 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이다. 일부 실시형태에 있어서, Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다. 일부 실시형태에 있어서, X는 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다.
화학식 (XXVIII)의 특정 실시형태에 있어서, 다른 예시적인 접합체는 하기 구조 중 하나를 갖는다:
.
단백질에 접합된, 방출 가능한 결합과 방출 불가능한 결합을 모두 제공하는 시약을 사용하여 형성된 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XXIX)로 표시되는 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하며:
(XXIX)
상기 식에서,
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고;
a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
Y1, Y2 및 Y3은 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXIX)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XXIX-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하며:
(XXIX-I)
상기 식에서,
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXIX-I)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XXIX)의 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 4이다.
화학식 (XXIX)의 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 3의 정수이다.
화학식 (XXIX) 또는 (XXIX-I)의 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 3이다.
당업자는 본 명세서에 기재된 a, z1 및 z2에 대한 값 및 범위가 본 개시내용의 접합체를 제공하도록 임의의 방식으로 조합될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고, z1은 1이며, z2는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, z1은 1이며 z2는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, z1은 1이며 z2는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고, z1은 1이며 z2는 1 내지 5의 정수이다. 이들 및 복수의 다른 조합이 본 개시내용에서 고려된다.
일부 실시형태에 있어서, Y1은 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y2는 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y3은 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y1, Y2 및 Y3은 O이다. 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이다. 일부 실시형태에 있어서, Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (XXIX) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조로 고려된다:
.
일부 실시형태에 있어서, 화학식 (XXIX-I)로 표시되는 접합체는 하기 구조를 갖는다:
.
단백질에 접합된, 이중 기능성 방출 가능한 결합을 제공하는 시약을 사용하여 형성된 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XXX)로 표시되는 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하며:
(XXX)
상기 식에서,
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXX)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XXX)의 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 2이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 4이다.
화학식 (XXX)의 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 3의 정수이다.
당업자는 본 명세서에 기재된 a 및 z에 대한 값 및 범위가 본 개시내용의 접합체를 제공하도록 임의의 방식으로 조합될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고 z2는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 1이고 z2는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이고 z2는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, a는 0이고 z는 1 내지 5의 정수이다. 이들 및 복수의 다른 조합이 본 개시내용에서 고려된다.
일부 실시형태에 있어서, Y1은 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y2는 O이다. 일부 실시형태에 있어서, Y1 및 Y2는 O이다. 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이다. 일부 실시형태에 있어서, R1 및 R2는 수소이다. 일부 실시형태에 있어서, Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다. 일부 실시형태에 있어서, X1은 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다.
일부 실시형태에 있어서, a는 0이고; z는 1 내지 10의 정수이며; R1은 수소이고; R2는 수소이며; Y1은 O이고; Y2는 O이다.
기능성 방출 가능한 결합을 제공하는 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (VIII)로 표시되는 구조를 포함하며:
(VIII)
상기 식에서,
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
각각의 b1은 1이며;
각각의 b2는 독립적으로 0 내지 1의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이며;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 FG2는 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (VIII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (VI)에 정의된 바와 같다.
화학식 (VIII)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (VIII) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (VIII-A)로 고려된다:
(VIII-A).
방출 가능한 결합을 제공하는 2종의 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (IX)로 표시되는 구조를 포함하며:
(IX)
상기 식에서,
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
각각의 b1은 1이며;
각각의 b2는 독립적으로 0 내지 1의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이며;
각각의 Rp는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (IX)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Rp, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (VI)에 정의된 바와 같다.
화학식 (IX)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (IX) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (IX-A)로 표시된다:
(IX-A).
방출 가능한 결합을 제공하는 2종의 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (X)로 표시되는 구조를 포함하며:
(X)
상기 식에서,
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R3은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
각각의 b1은 1이며;
각각의 b2는 독립적으로 0 내지 1의 정수이고;
각각의 c는 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이고;
각각의 Rd는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬 또는 시클로알킬, 치환된 알킬 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이며;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y4는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (X)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, R3, R4, Rd, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (IV)에 정의된 바와 같다.
본 명세서에 개시된 화학식의 특정 실시형태에 있어서, z는 1 내지 22, 1 내지 20, 1 내지 18, 1 내지 15, 1 내지 12, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 5 또는 1 내지 3의 정수이고, 여기서 z는 단백질에 접합된 방출 가능한 링커의 수를 나타낸다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
일부 실시형태에 있어서, z1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1, 2, 3, 4 또는 5이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1, 2 또는 3이다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 따른 접합체 중 어느 하나를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체 중 복수를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 20, 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 7, 1 내지 약 6, 1 내지 약 5, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z1의 평균값은 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 6, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z2의 평균값은 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 더 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 기재된 적어도 하나의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체의 혼합물은 상이한 z 및/또는 y를 갖는 복수의 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; z가 8인 접합체; z가 9인 접합체; 및/또는 z가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; 및/또는 z가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; 및/또는 z가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; 및/또는 z가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체 및/또는 z가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; y가 8인 접합체; y가 9인 접합체; 및/또는 y가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; 및/또는 y가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; 및/또는 y가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; 및/또는 y가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체 및/또는 y가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; z1이 8인 접합체; z1이 9인 접합체; 및/또는 z1이 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; 및/또는 z1이 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; 및/또는 z1이 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; 및/또는 z1이 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; 및/또는 z1이 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; z2가 3인 접합체; z2가 4인 접합체; 및/또는 z2가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; 및/또는 z2가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체 및/또는 z2가 2인 접합체를 포함한다.
단백질-거대분자 접합체
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, 단백질-거대분자 접합체를 제공하며, 상기 접합체는 단백질, 적어도 하나의 링커 및 적어도 하나의 거대분자를 포함하고, 여기서 상기 단백질은 링커를 통해 각각의 거대분자에 공유 결합으로 연결되며, 여기서 상기 거대분자는 선형 또는 분지형 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 적어도 하나의 링커는 2개 이상의 링커이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 불가능한 링커를 포함한다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 가능한 링커를 포함한다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 불가능한 링커 및 하나의 방출 가능한 링커를 포함한다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 불가능한 링커 및 1개 내지 8개의 방출 가능한 링커를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 바와 같이, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
상기 단백질-거대분자 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 단백질, 적어도 하나의 링커 및 적어도 하나의 거대분자를 포함하고, 여기서 상기 단백질은 링커를 통해 각각의 거대분자에 공유 결합으로 연결되며, 여기서 상기 거대분자는 선형 또는 분지형 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이고, 여기서 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이다. 특정 실시형태에 있어서, 각각의 상기 링커는 방출 가능한 링커이다. 특정 실시형태에 있어서, 하나 또는 복수의 거대분자는 하나 또는 복수의 링커를 통해 상기 단백질에 공유 결합으로 연결된다. 특정 실시형태에 있어서, 8개 이상의 거대분자는 8개 이상의 링커를 통해 상기 단백질에 공유 결합으로 연결된다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 링커를 통해 상기 단백질 내 잔기의 아민기에 공유 결합으로 연결된다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 잔기는 라이신이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 상기 단백질에 연결된 상이한 수의 거대분자를 포함하는 접합체의 혼합물이다.
상기 단백질-거대분자 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 링커를 통해 상기 단백질 내 잔기의 아민기에 공유 결합으로 연결된다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 잔기는 라이신이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 방출 가능한 링커를 통해 단백질에 연결되고, 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 20,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다.
복수의 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다. 이는 약 6 내지 약 26개 탄소 원자를 포함하는 지방산, 및 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(N-아크릴로일몰폴린), 폴리(알콕시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스터), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(트리에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스터), 폴리(옥사졸린), 폴리(에톡실화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리포스파젠, 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(당류), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에터), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 아밀로스, 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산(HA) 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 헤파린, 헤파란 설페이트(HS), 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분(HES), 폴리시알산(PSA) 및 다른 탄수화물계 중합체, 자일란 및 알부민, 트랜스페린, 트랜스티레틴, 면역글로불린, XTEN 펩티드의 공중합체, 글리신-풍부 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체 중 하나와 같은 임의의 화합물을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 수용성 중합체이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 수용성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜)의 중합체이다. 특정 실시형태에 있어서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 하이드록시, 알콕시, 치환된 알콕시, 알켄옥시, 치환된 알켄옥시, 알킨옥시, 치환된 알킨옥시, 아릴옥시 및 치환된 아릴옥시로 이루어진 군으로부터 선택된 말단-캡핑 모이어티로 말단-캡핑된다.
상기 수용성 중합체의 경우, 상기 수용성 중합체는 비독성, 비-자연 발생 및 생체적합성이다. 생체적합성과 관련하여, 물질은, 생체 조직(예를 들어, 환자에게 투여)과 관련하여 그 물질 단독 또는 또 다른 물질(예를 들어, 활성제, 예컨대, IL-2 모이어티)의 사용과 연관된 유익한 효과가 임상의, 예를 들어, 의사가 평가한 임의의 유해한 효과보다 큰 경우에 생체적합성이라고 간주된다. 비-면역원성과 관련하여, 물질은, 생체내에서 그 물질의 의도된 사용이 바람직하지 않은 면역 반응(예를 들어, 항체의 형성)을 생성하지 않거나 또는 면역 반응이 생성되어 이러한 반응이 임상의가 평가하여 임상적으로 유의하거나 중요하다고 간주되지 않는 경우에 비-면역원성이라고 간주된다. 비펩티드 수용성 중합체는 생체적합성이고, 비-면역원성인 것이 특히 바람직하다.
이 밖에, 상기 중합체는 일반적으로 2 내지 약 300개의 말단을 갖는 것을 특징으로 한다. 이러한 중합체의 예는 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리(프로필렌 글리콜)("PPG"), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 등, 폴리(에톡실화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리비닐피롤리돈), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 다당류), 폴리(a-하이드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린("POZ")(이는 국제 특허 제WO 2008/106186호에 기재됨), 폴리(N-아크릴로일몰폴린) 및 임의의 상기 조합을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
상기 수용성 중합체는 특정 구조에 제한되지 않고, 선형(예를 들어, 말단-캡핑된, 예를 들어, 알콕시 PEG 또는 이작용성 PEG), 분지형 또는 다중-아암형(multi-armed)(예를 들어, 갈래형 PEG 또는 폴리올 코어에 연결된 PEG), 수지상(또는 별형) 구조일 수 있고, 각각은 하나 또는 복수의 분해 가능한 결합이 있거나 없다. 이 밖에, 상기 수용성 중합체의 내부 구조는 임의의 수의 상이한 반복 패턴으로 조직화될 수 있고, 단독중합체, 교대 공중합체, 랜덤 공중합체, 블록 공중합체, 교대 삼중중합체, 랜덤 삼중중합체 및 블록 삼중중합체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
활성화된 PEG 및 다른 활성화된 수용성 중합체(즉, 중합체성 시약)는 상기 단백질 상의 원하는 부위에 커플링시키기에 적절한 적합한 활성화 기로 활성화된다. 따라서, 중합체성 시약은 단백질 모이어티와의 반응을 위한 반응성 기를 가질 것이다. 이들 중합체를 활성 모이어티에 접합시키기 위한 대표적인 중합체성 시약 및 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 문헌[Zalipsky, S., et al., "Use of Functionalized Poly(Ethylene Glycols) for Modification of Polypeptides" in Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, J. M. Harris, Plenus Press, New York (1992), and in Zalipsky (1995) Advanced Drug Reviews 16:157-182]에 추가로 기재되어 있다. 단백질 모이어티에 커플링시키기에 적합한 예시적인 활성화 기는 하이드록실, 말레이미드, 에스터, 아세탈, 케탈, 아민, 카르복실, 알데하이드, 알데하이드 수화물, 케톤, 알케닐 케톤, 티온, 티올, 비닐 설폰, 하이드라진 등을 포함한다.
일반적으로, 상기 접합체 내의 상기 수용성 중합체의 중량 평균 분자량은 약 100달톤 내지 약 150,000달톤이다. 그러나 예시적인 범위는 약 500달톤 내지 20,000달톤 미만 범위, 약 20,000달톤 내지 85,000달톤 미만 범위, 약 85,000달톤 내지 약 100,000달톤 범위, 5,000달톤 초과 내지 약 100,000달톤 범위, 약 6,000달톤 내지 약 90,000달톤 범위, 약 10,000달톤 내지 약 85,000달톤 범위, 10,000달톤 초과 내지 약 85,000달톤 범위, 약 20,000달톤 내지 약 85,000달톤 범위, 약 53,000달톤 내지 약 85,000달톤 범위, 약 25,000달톤 내지 약 120,000달톤 범위, 약 29,000달톤 내지 약 120,000달톤 범위, 약 35,000달톤 내지 약 120,000달톤 범위 및 약 40,000달톤 내지 약 120,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 포함한다. 임의의 주어진 수용성 중합체의 경우, 이들 범위 중 하나 또는 복수의 분자량을 갖는 PEG가 바람직하다.
예시적인 수용성 중합체의 중량 평균 분자량은 약 100달톤, 약 200달톤, 약 300달톤, 약 400달톤, 약 500달톤, 약 600달톤, 약 700달톤, 약 750달톤, 약 800달톤, 약 900달톤, 약 1,000달톤, 약 1,500달톤, 약 2,000달톤, 약 2,200달톤, 약 2,500달톤, 약 3,000달톤, 약 4,000달톤, 약 4,400달톤, 약 4,500달톤, 약 5,000달톤, 약 5,500달톤, 약 6,000달톤, 약 7,000달톤, 약 7,500달톤, 약 8,000달톤, 약 9,000달톤, 약 10,000달톤, 약 11,000달톤, 약 12,000달톤, 약 13,000달톤, 약 14,000달톤, 약 15,000달톤, 약 16,000달톤, 약 18,000달톤, 약 20,000달톤, 약 22,500달톤, 약 25,000달톤, 약 30,000달톤, 약 35,000달톤, 약 40,000달톤, 약 45,000달톤, 약 50,000달톤, 약 55,000달톤, 약 60,000달톤, 약 65,000달톤, 약 70,000달톤 및 약 75,000달톤을 포함한다. 임의의 상기 총 분자량을 갖는 수용성 중합체의 분지형 형태(예를 들어, 2개의 20,000달톤 중합체로 구성된 분지형의 40,000달톤의 수용성 중합체)를 사용할 수도 있다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 수용성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜)이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 약 100,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 20,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 20,000달톤 내지 85,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 85,000달톤 내지 약 100,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 10,000달톤 내지 30,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 거대분자는 약 17,000달톤 또는 약 20,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 500달톤 내지 약 100,000달톤, 약 500달톤 내지 약 20,000달톤, 약 20,000달톤 내지 약 85,000달톤, 약 85,000달톤 내지 약 100,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 10,000달톤 내지 약 30,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 17,000달톤 또는 약 20,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는다.
상기 중합체로서 사용되는 경우, PEG는 일반적으로 일정한 수의 (OCH2CH2) 단량체[또는 (CH2CH2O) 단량체, PEG의 정의 방법에 의해 결정됨]를 포함할 것이다. 설명의 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 반복 단위의 수는 "(OCH2CH2)n" 의 아래 첨자 "n"으로 표시된다. 따라서, (n)의 값은 일반적으로 2 내지 약 3400, 약 100 내지 약 2300, 약 100 내지 약 2270, 약 136 내지 약 2050, 약 225 내지 약 1930, 약 450 내지 약 1930, 약 1200 내지 약 1930, 약 568 내지 약 2727, 약 660 내지 약 2730, 약 795 내지 약 2730, 약 795 내지 약 2730, 약 909 내지 약 2730 및 약 1,200 내지 약 1,900 중 하나 또는 복수 내에 있다. 분자량이 알려진 임의의 주어진 중합체에 대해, 상기 중합체의 총 중량 평균 분자량을 반복 단량체의 분자량으로 나눔으로써 반복 단위의 수(즉, "n")를 결정할 수 있다.
본 개시내용에 사용하기에 특히 바람직한 한 중합체는 말단-캡핑된 중합체, 즉, 저급 C1-6 알콕시기(하이드록실기도 사용될 수 있음)와 같은 상대적으로 불활성인 기로 말단-캡핑된 적어도 하나의 말단을 갖는 중합체이다. 예를 들어, 상기 중합체가 PEG인 경우, 메톡시-PEG(일반적으로 mPEG라고 지칭됨)를 사용하는 것이 바람직한데, 이는 상기 중합체의 한 말단이 메톡시(-OCH3)기이고 다른 말단은 하이드록실기 또는 선택적으로 화학적으로 변형될 수 있는 다른 작용기인 PEG의 선형 형태이다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 일 형태에서, 유리 또는 결합된 PEG는 하이드록실기로 각각의 말단이 말단-캡핑된 선형 중합체이다.
HO-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH,
상기 식에서, (n)은 일반적으로 0 내지 약 4,000 범위이다.
상기 중합체, α-, ω-디하이드록실폴리(에틸렌 글리콜)은 HO-PEG-OH로서 간략한 형태로 표현될 수 있고, 여기서 -PEG-라는 기호는 하기 구조 단위를 표현할 수 있다:
-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-,
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 PEG의 또 다른 유형은 메톡시-PEG-OH 또는 간단히 mPEG-OH인데, 이는 하나의 말단이 상대적으로 불활성인 메톡시기이고, 다른 말단이 하이드록실기이다. mPEG-OH의 구조는 하기에 제공되어 있다.
CH3O-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 PEG의 또 다른 유형은 메톡시-PEG-NH2 또는 간단히 mPEG-NH2인데, 이는 하나의 말단이 상대적으로 불활성인 메톡시기이고, 다른 말단이 아미노기이다. mPEG-NH2의 구조는 하기에 제공되어 있다.
CH3O-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-NH2
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 PEG의 또 다른 유형은 메톡시-PEG-CO2H 또는 간단히 mPEG-CO2H인데, 이는 하나의 말단이 상대적으로 불활성인 메톡시기이고, 다른 말단이 카르복실기이다. mPEG-CO2H의 구조는 하기에 제공되어 있다.
CH3O-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-CO2H
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 PEG의 또 다른 유형은 메톡시-PEG-N3 또는 간단히 mPEG-N3인데, 이는 하나의 말단이 상대적으로 불활성인 메톡시기이고, 다른 말단이 아지드기이다. mPEG-N3의 구조는 하기에 제공되어 있다.
CH3O-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-N3
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 유용한 PEG의 또 다른 유형은 메톡시-PEG-DBCO 또는 간단히 mPEG-DBCO인데, 이는 하나의 말단이 상대적으로 불활성인 메톡시기이고, 다른 말단이 디벤조시클로옥틴(DBCO)기이다. mPEG-DBCO의 구조의 일례는 하기에 제공되어 있다.
상기 식에서, (n)은 상기에 정의된 바와 같다.
다중-아암형 또는 분지형 PEG 분자, 예컨대, 미국 특허 제5,932,462호에 기재된 것이 또한 PEG 중합체로서 사용될 수 있다. 예를 들어, PEG는 하기 구조를 가질 수 있다:
상기 식에서,
polya 및 polyb는 PEG 골격(동일하거나 상이함), 예컨대, 메톡시 폴리(에틸렌 글리콜)이고; R'는 비반응성 모이어티, 예컨대, H, 메틸 또는 PEG 골격이며; P 및 Q는 비반응성 결합이다.
또한, PEG는 갈래형 PEG를 포함할 수 있다. 갈래형 PEG의 예는 하기 구조로 표현된다:
상기 식에서, X는 하나 또는 복수의 원자의 스페이서 모이어티이고, 각각의 Z는 정의된 길이의 원자 사슬에 의해 CH에 연결된 활성화된 말단기이다. 국제 특허 출원 공개 제WO 99/45964호에는 본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에서 사용할 수 있는 다양한 갈래형 PEG 구조가 개시되어 있다. Z 작용기를 분지형 탄소 원자에 연결하는 원자 사슬은 테더링 기로서 작용하고, 예를 들어 알킬 사슬, 에터 사슬, 에스터 사슬, 아미드 사슬 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.
PEG 중합체는 PEG 사슬의 말단이 아니라 PEG의 길이를 따라 공유 결합으로 연결된 카르복실기와 같은 반응성 기를 갖는 펜던트 PEG 분자를 포함할 수 있다. 펜던트 반응성 기는 알킬렌기와 같은 스페이서 모이어티를 통해 또는 직접적으로 PEG에 연결될 수 있다.
중합체 골격 내의 분해 가능한 결합 및/또는 단백질 모이어티에 대한 분해 가능한 결합으로서 유용한 일부 가수분해 분해 가능한 결합은 에스터 결합, 카보네이트 결합; 예를 들어, 아민과 알데하이드의 반응으로부터 생성된 이민 결합(예를 들어, 문헌[Ouchi et al. (1997) Polymer Preprints 38(1):582-3] 참조); 예를 들어, 알코올과 포스페이트기를 반응시켜 형성된 포스페이트 에스터 결합; 하이드라자이드와 알데하이드의 반응에 의해 일반적으로 형성되는 하이드라존 결합; 알데하이드와 알코올 사이의 반응에 의해 일반적으로 형성되는 아세탈 결합; 예를 들어, 폼에이트와 알코올 사이의 반응에 의해 형성되는 오르토에스터 결합; 예를 들어, 중합체, 예컨대, PEG의 말단에서 아민기 및 또 다른 PEG 사슬의 카르복실기에 의해 형성된 아미드 결합; 예를 들어 PEG와 말단 아이소사이아네이트기 및 PEG 알코올의 반응으로부터 형성된 카바메이트 결합; 예를 들어, 중합체, 예컨대, PEG의 말단에서 아민기 및 펩티드의 카르복실기에 의해 형성된 펩티드 결합; 및 예를 들어, 중합체의 말단에서 포스포르아미다이트기 및 올리고뉴클레오타이드의 5' 하이드록실기에 의해 형성된 올리고뉴클레오타이드 결합을 포함한다.
접합체의 이러한 선택적 특징, 즉, 중합체 사슬 또는 단백질 모이어티로의 하나 또는 복수의 분해 가능한 결합의 도입은 투여 시 접합체의 최종적인 원하는 약리학적 특성에 대한 다른 제어를 제공할 수 있다. 예를 들어, 크고 상대적으로 불활성인 접합체(즉, 하나 또는 복수의 고분자량 PEG 사슬이 연결됨, 예를 들어, 하나 또는 복수의 PEG 사슬은 약 10,000 초과의 분자량을 가짐, 상기 접합체는 본질적으로 생물학적 활성을 갖지 않음)가 투여될 수 있고, 이것은 방출되어 원래 PEG 사슬의 일부를 보유하는 생물학적 활성 접합체를 생성시킨다. 이러한 방식으로, 상기 접합체의 특성은 시간 경과에 따른 접합체의 생물학적 활성의 균형을 맞추기 위해 보다 효과적으로 맞춤화될 수 있다.
접합체와 결합된 수용성 중합체는 "방출 가능"할 수 있다. 즉, 수용성 중합체는 (가수분해, 효소적 과정, 촉매적 과정 등을 통해) 방출되어, 비접합된 단백질 모이어티를 생성시킨다. 일부 예에서, 방출 가능한 중합체는 수용성 중합체의 어떠한 단편도 남기지 않고 생체내에서 단백질 모이어티로부터 분리된다. 다른 예에서, 방출 가능한 중합체는 생체내에서 단백질 모이어티로부터 분리되어 수용성 중합체로부터 상대적으로 작은 단편(예를 들어, 석신에이트 태그)을 남긴다. 예시적인 절단 가능한 중합체는 카바메이트 결합을 통해 단백질 모이어티에 연결되는 중합체를 포함한다.
당업자는 수용성 중합체에 관한 상기 논의가 결코 완전하지 않고, 단지 예시적이며, 상기에 기재된 품질을 갖는 모든 중합체 물질이 고려된다는 것을 인식할 것이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "중합체성 시약"은 일반적으로 수용성 중합체 모이어티 및 작용기를 포함할 수 있는 전체 분자를 지칭한다.
상기에 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 접합체는 단백질 모이어티에 공유 결합으로 연결된 복수의 수용성 중합체를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, 단백질 모이어티에 공유 결합으로 연결된 복수의 수용성 중합체는 동일하다. 일부 실시형태에 있어서, 단백질 모이어티에 공유 결합으로 연결된 복수의 수용성 중합체 중 적어도 하나는 상이하다. 일반적으로, 임의의 주어진 접합체에 대해, 단백질 활성을 갖는 하나 또는 복수의 모이어티에 공유 결합으로 연결된 하나 또는 복수의 수용성 중합체가 존재할 것이다. 일부 예에서, 상기 접합체는 단백질 모이어티에 개별적으로 연결된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개 또는 그 이상의 수용성 중합체를 가질 수 있다. 임의의 주어진 수용성 중합체는 단백질 모이어티의 아미노산에, 또는 단백질 모이어티가 (예를 들어) 당단백질인 경우, 상기 단백질 모이어티의 탄수화물에 공유 결합으로 연결될 수 있다. 탄수화물에 대한 연결은 예를 들어, 시알산-아지드 화학을 사용하는 대사 기능화[문헌[Luchansky et al. (2004) Biochemistry 43(38): 12358-123661] 또는 알데하이드기의 도입을 촉진하기 위한 글리시돌의 사용과 같은 다른 적합한 접근법[문헌[Heldt et al. (2007) European Journal of Organic Chemistry 32:5429-5433]]을 사용하여 수행될 수 있다.
상기 단백질 모이어티 및 상기 중합체 내의 특정 결합은 복수의 인자에 의해 결정된다. 이러한 인자는 예를 들어, 사용된 특정 결합 화학, 특정 단백질 모이어티, 상기 단백질 모이어티 내의 사용 가능한 작용기(링커, 중합체에 대한 연결 또는 적합한 연결 부위로의 전환), 상기 단백질 모이어티 내의 다른 반응성 작용기의 존재 등을 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체는 전구약물일 수 있으며, 이는 상기 중합체와 상기 단백질 모이어티 사이의 결합이 방출 가능하여 모 모이어티가 방출될 수 있음을 의미한다. 본 개시내용에 기재된 방출 가능한 링커와는 별개로, 다른 예시적인 방출 가능한 결합은 카르복실레이트 에스터, 포스페이트 에스터, 티올 에스터, 무수물, 아세탈, 케탈, 아실옥시알킬 에터, 이민, 오르토에스터, 펩티드 및 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 이러한 결합은 단백질 모이어티(예를 들어, 단백질의 카르복실기 C 말단, 또는 단백질 내에 함유된 세린 또는 트레오닌과 같은 아미노산의 측쇄 하이드록실기, 또는 탄수화물 내의 유사한 작용기)의 적절한 변형에 의해 및/또는 당업계에서 일반적으로 사용되는 커플링 방법을 사용하여 중합체성 시약에 의해 쉽게 제조될 수 있다. 그러나, 가장 바람직한 것은 적합하게 활성화된 중합체와 단백질 모이어티 내에 함유된 비-변형된 작용기의 반응에 의해 쉽게 형성되는 방출 가능한 결합이다.
대안적으로, 가수분해적으로 안정적인 결합, 예컨대, 아미드, 우레탄(카바메이트로도 알려짐), 아민, 티오에터(설파이드로도 알려짐), 또는 우레아(카바마이드로도 알려짐) 결합이 단백질 모이어트를 커플링시키기 위한 결합으로서 사용될 수 있다. 바람직한 가수분해적으로 안정적인 결합은 아미드이다. 한 접근법에서, 활성화된 에스터를 함유하는 수용성 중합체는 단백질 모이어티 상의 아민기와 반응하여 아미드 결합을 생성할 수 있다. 또 다른 바람직한 가수분해적으로 안정적인 연결은 티올 브릿지이다.
(비접합된 단백질 모이어티와 상반되게) 상기 접합체는 측정 가능한 단백질 활성을 보유할 수 있거나 보유할 수 없다. 즉, 본 개시내용에 따른 중합체-단백질 접합체는 비변형된 모 단백질 모이어티의 생물학적 활성의 약 0.1%, 약 0.5%, 약 1%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 55% 또는 약 100%를 포함하는, 약 0.1% 내지 약 100% 중 임의의 범위를 보유할 것이다. 일부 예에서, 상기 중합체-단백질 접합체는 비변형된 모 단백질 모이어티의 100% 초과의 생물학적 활성을 가질 수 있다. 바람직하게는, 단백질 활성이 거의 또는 전혀 없는 접합체는 중합체를 단백질에 연결하는 가수분해 가능한 결합을 함유하여, 상기 접합체의 활성 부족(또는 상대적으로 부족)에 관계없이, 활성 모 분자(또는 이의 유도체)가 상기 가수분해 가능한 결합의 수성-유도된 절단 시에 방출된다. 이러한 활성은 특정 단백질의 알려진 활성에 따라 적합한 생체내 또는 시험관내 모델을 사용하여 결정할 수 있다.
단백질을 중합체에 커플링시키는 가수분해적으로 안정적인 결합을 보유하는 접합체의 경우, 상기 접합체는 일반적으로 측정 가능한 생물학적 활성을 보유할 것이다. 예를 들어, 이러한 접합체는 일반적으로 비접합된 단백질에 비해 적어도 약 2%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 100%, 및 105% 초과(적합한 모델, 예컨대, 당업계에 널리 공지된 것으로 측정되는 경우) 중 하나 또는 복수를 충족시키는 생물학적 활성을 갖는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, 가수분해적으로 안정적인 결합(예를 들어, 아미드 결합, 티올 브릿지)을 갖는 접합체는 비변형된 모 단백질의 적어도 어느 정도의 생물학적 활성을 가질 것이다.
링커를 통한 단백질과 수용성 중합체 사이의 연결은 상기 링커와 상기 중합체 사이에 개재 원자가 없는 직접적이거나, 상기 링커와 상기 중합체 사이에 하나 또는 복수의 원자가 있는 간접적일 수 있다. 간접적인 연결과 관련하여, "스페이서 모이어티"는 결합의 잔기와 수용성 중합체 사이의 링커 역할을 할 수 있다. 스페이서 모이어티를 구성하는 하나 또는 복수의 원자는 탄소 원자, 질소 원자, 황 원자, 산소 원자 중 하나 또는 복수 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 스페이서 모이어티는 아미드, 2차 아민, 카바메이트, 티오에터, 디티오기 및/또는 클릭 화학 생성물기를 포함할 수 있다. 구체적인 스페이서 모이어티의 비제한적인 예는 -O-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -C(S)-, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-, O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-[CH2]l-(OCH2CH2)m-, 2가 시클로알킬기, -O-, -S-, 아미노산, -N(R3)-, 및 임의의 상기 기 중 2종 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함하며, 여기서 R3은 H, 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 유기 기이고, (l)은 0 내지 6이며, (m)은 0 내지 20이다. 다른 구체적인 스페이서 모이어티는 -C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)- 및 -O-C(O)-NH-(CH2)1-6-NH-C(O)-와 같은 구조를 가지며, 여기서 각각의 메틸렌 이후의 아래 첨자 값은 상기 구조에 함유된 메틸렌의 수를 나타내고, 예를 들어, (CH2)1-6은 상기 구조가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 메틸렌을 함유할 수 있다는 것을 의미한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -O-, -NH-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -OP(O)(OH)-, -OP(S)(OH)-, -C(S)-, -[CH2]1-6-, -O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -[CH2]0-6-O-(CH2CH2O)1-20-[CH2]0-6- 또는 -O-C(O)-NH-[CH2]0-6-(OCH2CH2)0-20-이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -[CH2]4-6-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2- 또는 -CH2-O-(CH2CH2O)4-6-[CH2]2-이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -[CH2]5-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2- 또는 -CH2-O-(CH2CH2O)5-[CH2]2-이다. 일부 실시형태에 있어서, 3가 스페이서 모이어티는
또는 이다.
또한, 임의의 상기 스페이서 모이어티는 1 내지 20개의 에틸렌 옥사이드 단량체 단위를 포함하는 에틸렌 옥사이드 올리고머 사슬[즉, -(CH2CH2O)1-20]을 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 에틸렌 옥사이드 올리고머 사슬은 상기 스페이서 모이어티 앞 또는 뒤에 존재할 수 있고, 선택적으로는 2개 이상의 원자로 구성된 스페이서 모이어티의 임의의 2개의 원자 사이에 존재할 수 있다. 또한, 상기 올리고머가 중합체 모이어티에 인접한 경우, 올리고머 사슬은 상기 스페이서 모이어티의 일부로 간주되지 않으며 상기 중합체 모이어티의 연장만을 나타낸다.
일반적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XX)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
단백질-(L-거대분자)z
(XX)
상기 식에서,
z는 1 내지 25의 정수이고;
각각의 L은 독립적으로 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
각각의 거대분자는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XX-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(FG2-L)y-단백질-(L-거대분자)z
(XX-I)
상기 식에서,
z는 1 내지 25의 정수이고;
y는 0 내지 24의 정수이며;
각각의 L은 독립적으로 링커이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
각각의 거대분자는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
화학식 (XX) 또는 (XX-I)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이며 상기 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이고 상기 단백질은 IL-2이다.
접합체 화학식 (XX) 또는 (XX-I)의 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이고; L은 방출 불가능한 링커이며; 화학식 (XIX)로 표시되는 접합체와 적합한 거대분자의 클릭 화학 반응으로부터 접합체가 생성되며, 여기서 화학식 (XIX)로 표시되는 접합체 중 L은 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기 FG2를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 링커 L은 본 개시내용의 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, L은 하나 또는 복수의 방출 불가능한 링커이거나 및/또는 하나 또는 복수의 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 방출 가능한 링커는 본 개시내용의 기능성 방출 가능한 링커(예를 들어, 화학식 (I), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (IV), 화학식 (XVIII), 화학식 (XXI) 또는 화학식 (XXII)로 표시되는 링커) 및/또는 방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약(예를 들어, 화학식 (V) 또는 화학식 (VI))으로부터 유래된다. 일부 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커이다.
일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이다.
일부 실시형태에 있어서, z가 2 이상인 경우, 상기 단백질에 연결된 각각의 L-거대분자는 동일하다. 일부 실시형태에 있어서, z가 2 이상인 경우, 상기 단백질에 연결된 적어도 하나의 L-거대분자는 상이하다. 일부 실시형태에 있어서, z가 2 이상인 경우, 상기 단백질에 연결된 각각의 L-거대분자는 상이하다.
일부 실시형태에 있어서, z는 1 내지 5의 정수이고; L은 방출 불가능한 링커이며; 화학식 (XIX)로 표시되는 접합체와 적합한 거대분자의 클릭 화학 반응으로부터 접합체가 생성된다.
(XX-I)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 5의 정수이다.
(XX-I)의 접합체의 일부 실시형태에 있어서, FG2는 아지드이다. 일부 실시형태에 있어서, FG2는 알키닐이다. 일부 실시형태에 있어서, FG2는 시클로알키닐이다. 일부 실시형태에 있어서, 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)이다.
단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXIV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(거대분자2-L2)z2-단백질-(L1)z1
(XXIV)
상기 식에서,
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기가 없고;
각각의 L2는 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(FG2-L2)z2-단백질-(L1-거대분자1)z1
(XXV)
상기 식에서,
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이고;
각각의 L2는 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이며;
각각의 거대분자1은 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXVI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(거대분자2-L2)z2-단백질-(L1-거대분자1)z1
(XXVI)
상기 식에서,
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커이고;
각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
각각의 거대분자1은 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이며;
각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
화학식 (XXVI)의 일부 실시형태에 있어서, 화학식 (XXV)의 접합체와 적합한 거대분자의 클릭 화학 반응으로부터 접합체가 생성된다.
화학식 (XXIV), (XXV) 또는 (XXVI)의 일부 실시형태에 있어서, 각각의 L1은 방출 가능한 링커이고 각각의 L2는 방출 불가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 각각의 L1은 방출 가능한 링커이고 각각의 L2는 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 각각의 L1은 방출 불가능한 링커이며 각각의 L2는 방출 가능한 링커이다.
일부 실시형태에 있어서, 화학식 (XXIV), 화학식 (XXV) 및 화학식 (XXVI)로 표시되는 단백질-거대분자 접합체를 가수분해하여 단백질-거대분자 접합체를 생성하고, 이는 화학식 (XXVII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(거대분자2-L2)z2-단백질
(XXVII)
상기 식에서,
z2는 1 내지 5의 정수이고;
각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이다.
화학식 (XXIV), (XXV), (XXVI) 및 (XXVII)의 일부 실시형태에 있어서, 링커 L1 및 L2는 본 개시내용에 기재된 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 방출 가능한 링커는 본 개시내용의 기능성 방출 가능한 링커(예를 들어, 화학식 (I), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (IV), 화학식 (XVIII), 화학식 (XXI) 또는 화학식 (XXII)로 표시되는 링커) 및/또는 방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약(예를 들어, 화학식 (V) 또는 화학식 (VI))으로부터 유래된다.
일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 20의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 5의 정수이다.
일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 4의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 3의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1 내지 2의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, z2는 1이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 2이다. 일부 실시형태에 있어서, z1은 3이다.
일부 실시형태에 있어서, 단백질에 연결의 거대분자1 및 거대분자2는 동일하다. 일부 실시형태에 있어서, 단백질에 연결의 거대분자1 및 거대분자2는 상이하다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 따른 접합체 중 어느 하나를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체 중 복수를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 20, 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 7, 1 내지 약 6, 1 내지 약 5, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z1의 평균값은 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 6, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z2의 평균값은 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 더 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 기재된 적어도 하나의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체의 혼합물은 상이한 z 및/또는 y를 갖는 복수의 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; z가 8인 접합체; z가 9인 접합체; 및/또는 z가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; 및/또는 z가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; 및/또는 z가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; 및/또는 z가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체 및/또는 z가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; y가 8인 접합체; y가 9인 접합체; 및/또는 y가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; 및/또는 y가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; 및/또는 y가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; 및/또는 y가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체 및/또는 y가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; z1이 8인 접합체; z1이 9인 접합체; 및/또는 z1이 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; 및/또는 z1이 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; 및/또는 z1이 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; 및/또는 z1이 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; 및/또는 z1이 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; z2가 3인 접합체; z2가 4인 접합체; 및/또는 z2가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; 및/또는 z2가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체 및/또는 z2가 2인 접합체를 포함한다.
하기 구조는 화학식 XX으로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체를 포함한다:
상기 식에서,
각각의 n은 독립적으로 2 내지 4000의 정수이고;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 RL은 독립적으로 방출 가능한 링커이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, RL은 본 개시내용에 기재된 방출 가능한 링커이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 방출 가능한 링커는 본 명세서에 개시된 기능성 방출 가능한 링커(예를 들어, 화학식 (I), 화학식 (II), 화학식 (III) 또는 화학식 (IV)의 링커) 또는 방출 가능한 링커를 갖는 중합체성 시약(예를 들어, 화학식 (V) 또는 화학식 (VI))으로부터 유래된다.
또 다른 양태에서, 하기 구조는 하기 화학식 XX으로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체를 포함하며:
상기 식에서,
각각의 n은 독립적으로 2 내지 4000의 정수이고;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 RL1은 독립적으로 제1 방출 가능한 링커이고;
각각의 RL2는 독립적으로 제2 방출 가능한 링커이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
상기 식에서, 상기 수용성 중합체가 분지형인 본 개시내용의 예시적인 접합체는 상기 수용성 중합체가 하기 구조에 포함되는 경우를 포함한다:
상기 식에서, Y=O 및 NH이고; 각각의 (n)은 독립적으로 2 내지 4000, 예를 들어, 2, 4, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 또는 4000의 값을 갖는 정수(이들 사이의 모든 값 및 범위 포함)이다.
상기 식에서, 상기 수용성 중합체가 분지형인 본 개시내용의 예시적인 접합체는 상기 수용성 중합체가 하기 구조에 포함되는 경우를 포함한다:
상기 식에서, 각각의 (n)은 독립적으로 2 내지 4000, 예를 들어, 2, 4, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 또는 4000의 값을 갖는 정수(이들 사이의 모든 값 및 범위 포함)이다.
방출 가능한 결합을 제공하는 2개의 중합체성 시약을 사용하여 형성된 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XI)로 표시되는 구조를 포함하며:
(XI)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 제1 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 제2 수용성 중합체이며;
각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y4는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R3은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 a1은 독립적으로 0 내지 3의 정수이고;
각각의 a2는 독립적으로 0 내지 3의 정수이며;
각각의 c는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이며;
각각의 Rd는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬 또는 시클로알킬, 치환된 알킬 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XI)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, R3, R4, Re1, Re2 및 Rd는 상기 화학식 (IV)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XI)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XI)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
예시적인 접합체는 하기 구조 (XI-A)를 가지며:
(XI-A)
상기 식에서, n은 각각 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고 z는 1 내지 25의 정수이다.
방출 가능한 결합을 제공하는 2종의 중합체성 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XII)로 표시되는 구조를 포함하며:
(XII)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 제1 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 제2 수용성 중합체이며;
각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 a1은 독립적으로 0~3의 정수이며;
각각의 a2는 독립적으로 0~3의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이며;
각각의 Rp는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Re1, Re2 및 Rp는 상기 화학식 (VI)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XII)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XII)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
예시적인 접합체는 하기 구조 (XII-A)를 가지며:
(XII-A)
상기 식에서, n은 각각 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고 z는 1 내지 25의 정수이다.
클릭 화학 및 적합한 중합체성 시약을 사용하여 형성된 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XIII)로 표시되는 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XIII)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 제1 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 제2 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
인접한 c가 1 또는 2인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
인접한 c가 0인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 수소 또는 -X-FG2이며;
존재하는 경우, 각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이고;
각각의 T1은 독립적으로 제1 트리아졸 작용기이며;
각각의 T2는 독립적으로 제2 트리아졸 작용기이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이며;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
각각의 a는 독립적으로 0 내지 5의 정수이고;
각각의 b는 독립적으로 0 내지 3의 정수이며;
각각의 c는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XIII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XIII-I)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 제1 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 제2 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
인접한 c가 1 또는 2인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
인접한 c가 0인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 수소 또는 -X-FG2이며;
존재하는 경우, 각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이고;
각각의 T1은 독립적으로 제1 트리아졸 작용기이며;
각각의 T2는 독립적으로 제2 트리아졸 작용기이고;
R1은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
R2는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
Re는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이며;
상기 식에서,
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
a는 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이고;
b는 각각 독립적으로 0 내지 3의 정수이며;
c는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
각각의 y는 독립적으로 0 내지 24의 정수이고;
Y1은 각각 독립적으로 O 또는 S이며;
Y2는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XIII-I)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Re, a, b, c 및 z는 상기 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XIII) 또는 (XIII-I)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XIII) 또는 (XIII-I)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (XIII) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (XIII-A), (XIII-B), (XIII-C) 또는 (XIII-D)로 고려되며:
(XIII-A);
(XIII-B);
(XIII-C); 또는
(XIII-D)
상기 식에서, 각각의 X1은 제1 스페이서 모이어티이고; X2는 제2 스페이서 모이어티이며; POLY1, POLY2, T1, T2, R1, R2, Re, a, z, Y1, Y2 및 단백질은 상기에 정의된 바와 같다.
화학식 (XIII-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-A-I)에 따른 구조를 가지며:
.
(XIII-A-I)
화학식 (XIII), (XIII-I), (XIII-A), (XIII-B), (XIII-C), (XIII-D) 또는 (XIII-A-I)의 특정 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
다른 예시적인 접합체는 하기 구조 (XIII-A1)를 가지며:
(XIII-A1)
상기 식에서, Re는 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고; n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이며; z는 1 내지 25의 정수이고; 단백질에 연결된 각각의 "-NH-"(예컨대, 화학식 (XIII-A1)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며 단백질에 개별적으로 연결된 하나 또는 복수의 중합체를 나타낸다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-A1-I)에 따른 구조를 가지며:
(XIII-A1-I)
상기 식에서,
각각의 a는 독립적으로 1 내지 2의 정수이고;
각각의 Re는 독립적으로 4-F, 4-Cl, 4-CF3, 2,4-디플루오로 또는 2-CF3-4-F로 치환되며;
각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
y는 0 내지 24의 정수이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XIII-A1-I)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XIII-A1) 또는 (XIII-A1-I)의 특정 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 1 내지 2의 정수이고; 각각의 Re는 독립적으로 4-F, 4-Cl, 4-CF3, 2,4-디플루오로 또는 2-CF3-4-F에 의해 치환된다. 특정 실시형태에 있어서, 각각의 a는 1이고; 각각의 Re는 독립적으로 4-Cl 또는 2-CF3-4-F이며; 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z는 1 내지 10의 정수이며; y는 0 내지 10의 정수이고; 단백질은 IL-2이며; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 1이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 3이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 6이다.
화학식 (XIII-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-B-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함한다:
.
(XIII-B-I)
화학식 (XIII-I) 또는 (XIII-B-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XIII-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-C-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함한다:
.
(XIII-C-I)
화학식 (XIII-I) 또는 (XIII-C-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XIII-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-D-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함한다:
.
(XIII-D-I)
화학식 (XIII-I) 또는 (XIII-D-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
다른 예시적인 접합체는 하기 (XIII-B1), (XIII-C1), (XIII-D1) 또는 (XIII-D2)에 따른 구조를 가지며:
(XIII-B1);
(XIII-C1);
(XIII-D1); 또는
(XIII-D2)
상기 식에서,
n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
-NH-는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 또는 (XIII-D2-I)에 따른 구조를 가지며:
(XIII-B1-I);
(XIII-C1-I);
(XIII-D1-I); 또는
(XIII-D2-I)
상기 식에서,
각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
y는 0 내지 24의 정수이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 또는 (XIII-D2-I)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XIII-B-I) 또는 (XIII-B1-I)의 특정 실시형태에 있어서, z는 1 내지 10의 정수이고; y는 0 내지 10의 정수이며; 단백질은 IL-2이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 6이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 3이다. 일부 실시형태에 있어서, z는 1이다.
화학식 (XIII-B1) 또는 (XIII-B1-I)의 특정 실시형태에 있어서, n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z는 1 내지 10의 정수이며; 단백질은 IL-2이고; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 1이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 3이다. 특정 실시형태에 있어서, z는 6이다.
화학식 (XIII-C), (XIII-C-I), (XIII-D) 또는 (XIII-D-I)의 특정 실시형태에 있어서, a는 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re는 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XIII-I), (XIII-A-I), (XIII-B-I), (XIII-C-I), (XIII-D-I), (XIII-A1-I), (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 또는 (XIII-D2-I)의 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 15의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 10의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시형태에 있어서, y는 1 내지 5의 정수이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXI)
상기 식에서,
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
Y1, Y2 및 Y3은 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXI)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXI)의 일부 실시형태에 있어서, POLY2는 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다.
화학식 (XXXI)의 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1 및 X2는 상이한 스페이서 모이어티이다.
특정 실시형태에 있어서, 각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; Y1, Y2 및 Y3은 O이며; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이고; 각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XXXI) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z1은 1 내지 20의 정수이며; z2는 1 내지 5의 정수이고; 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 10의 정수이며; z2는 1 내지 3의 정수이고; 단백질은 IL-2이며; 단백질에 연결의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 IL-2 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 3 내지 4의 정수이고; z2는 1이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXII)
상기 식에서,
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (XXXII-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 가지며:
(XXXII-I)
상기 식에서,
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
y는 1 내지 5의 정수이며;
z2는 1 내지 5의 정수이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXII-I)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXII) 또는 (XXXII-I)의 일부 실시형태에 있어서, POLY2는 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 화학식 (XXXII) 또는 (XXXII-I)의 일부 실시형태에 있어서, X2는 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 특정 실시형태에 있어서, Y3은 O이다.
화학식 (XXXII) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z2는 1 내지 3의 정수이며; 단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z2는 1이고; 단백질은 IL-2이며; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XXXII-I)로 표시되는 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서,
각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
y는 1 내지 3의 정수이며;
z2는 1 내지 3의 정수이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXIII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXIII)
상기 식에서,
각각의 X1은 스페이서 모이어티이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 T1은 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXIII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXIII)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1은 본 명세서에 기재된 수용성-중합체로부터 선택된다. 화학식 (XXXIII)의 일부 실시형태에 있어서, X1은 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 특정 실시형태에 있어서, a는 0이고; z는 1 내지 10의 정수이며; R1은 수소이고; R2는 수소이며; Y1은 O이고; Y2는 O이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXIV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXIV)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이며;
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXIV)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXIV)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XXXIV)의 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고; Y1, Y2 및 Y3은 각각 O이다.
화학식 (XXXIV) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z1은 1 내지 10의 정수이며; z2는 1 내지 3의 정수이고; 단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 4이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XXXIV)로 표시되는 접합체로부터 가수분해된 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXV)
상기 식에서,
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXV)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다.
화학식 (XXXV)의 일부 실시형태에 있어서, POLY3은 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다.
화학식 (XXXV)의 일부 실시형태에 있어서, X3은 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다.
특정 실시형태에 있어서, Y3은 O이고; z2는 1 내지 3의 정수이다.
화학식 (XXXV) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; 단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXVI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXVI)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
z1은 1 내지 20의 정수이며;
z2는 1 내지 5의 정수이고;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이고;
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXVI)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXVI)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1 및 POLY2는 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XXXVI)의 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고; Y1, Y2 및 Y3은 O이다.
화학식 (XXXVI) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z1은 1 내지 10의 정수이며; z2는 1 내지 3의 정수이고; 단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 4의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
또 다른 양태에서, 화학식 (XX)로 표시되는 예시적인 단백질-거대분자 접합체는 하기 화학식 (XXXVII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하며:
(XXXVII)
상기 식에서,
각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z1은 1 내지 20의 정수이고;
z2는 1 내지 5의 정수이며;
존재하는 경우, Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이며;
각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 T는 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XXXVII)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
화학식 (XXXVII)의 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY1, POLY2 및 POLY3은 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XXXVII)의 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X1, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고; Y1, Y2 및 Y3은 각각 O이다.
화학식 (XXXVII) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 구조를 가지며:
상기 식에서, 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z1은 1 내지 10의 정수이며; z2는 1 내지 3의 정수이고; 단백질에 연결된 각각의 -NH-(상기 화학식에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이다. 특정 실시형태에 있어서, z1은 1 내지 4의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기이다.
클릭 화학 및 적합한 중합체성 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XIV)로 표시되는 구조를 포함하며:
(XIV)
상기 식에서,
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이며;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
각각의 T3은 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XIV)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (VI)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XIV)의 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XIV)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (XIV)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XIV) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (XIV-A)로 고려되며:
(XIV-A)
상기 식에서, n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z는 1 내지 25의 정수이며; -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이다.
클릭 화학 및 적합한 중합체성 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XV)로 표시되는 구조를 포함하며:
(XV)
상기 식에서,
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
z는 1 내지 25의 정수이며;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이고;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이며;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
각각의 Rp는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 T3은 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XV)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이고;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, Rp, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (VI)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XV)의 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XV)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
화학식 (XV)의 특정 실시형태에 있어서, a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이고; Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이다.
화학식 (XV) 내에서, 보다 정의된 구조를 갖는 접합체는 하기 화학식 (XV-A)로 표시되며:
(XV-A)
상기 식에서, n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z는 1 내지 25의 정수이며, -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이다.
클릭 화학 및 적합한 중합체성 시약을 사용하여 형성된 다른 예시적인 접합체는 하기 화학식 (XVI)로 표시되는 구조를 포함하며:
(XVI)
상기 식에서,
각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
각각의 R3은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
b1은 1이며;
b2는 0 내지 1의 정수이고;
각각의 c는 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
z는 1 내지 25의 정수이고;
존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 제1 전자 변경기이며;
존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 제2 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이고;
각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐(예를 들어, 디벤조시클로옥틴(DBCO))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이다.
각각의 Rd는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬 또는 시클로알킬, 치환된 알킬 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴, 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
존재하는 경우, 각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
각각의 T3은 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
각각의 Y4는 독립적으로 O 또는 S이고;
단백질에 연결된 각각의 -NH-(예컨대, 화학식 (XVI)에 나타낸 바와 같음)는 단백질 내 잔기의 아민기이며;
단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이다.
일부 실시형태에 있어서, R1, R2, R3, R4, Rd, Re1 및 Re2는 상기 화학식 (IV)에 정의된 바와 같다.
화학식 (XVI)의 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 수용성 중합체로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 동일한 수용성 중합체이다. 일부 실시형태에 있어서, POLY2 및 POLY3은 상이한 수용성 중합체이다.
화학식 (XVI)의 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 각각 독립적으로 본 명세서에 기재된 스페이서 모이어티로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 동일한 스페이서 모이어티이다. 일부 실시형태에 있어서, X2 및 X3은 상이한 스페이서 모이어티이다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)이다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 선형 또는 분지형 수용성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜)의 중합체이다.
본 명세서에 기재된 접합체 중 어느 하나의 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -O-, -NH-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -OP(O)(OH)-, -OP(S)(OH)-, -C(S)-, -[CH2]1-6-, -O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -[CH2]0-6-O-(CH2CH2O)1-20-[CH2]0-6- 또는 -O-C(O)-NH-[CH2]0-6-(OCH2CH2)0-20-이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -[CH2]4-6-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2- 또는 -CH2-O-(CH2CH2O)4-6-[CH2]2-이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는 -[CH2]5-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2- 또는 -CH2-O-(CH2CH2O)5-[CH2]2-이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 스페이서 모이어티는
또는 이다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 단백질은 사이토카인이다. 상기 사이토카인은 GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α 또는 TNF-β를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 사이토카인은 M-CSF, G-CSF, GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, IL-38, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, TNF-β 또는 CXL10이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 IL-2는 서열번호 1과 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 단백질은 케모카인이다. 상기 케모카인은 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-24, MCP-5, CXCL76, I-309(CCL1), BCA1(CXCL13), MIG, SDF-1/PBSF, IP-10, I-TAC, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, 에오탁신-1, 에오탁신-2, GCP-2, Gro-α, Gro-β, Gro-γ, LARC(CCL20), ELC(CCL19), SLC(CCL21), ENA-78, PBP, TECK(CCL25), CTACK(CCL27), MEC, XCL1, XCL2, HCC-1, HCC-2, HCC-3 또는 HCC-4를 포함한다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 단백질은 항체이다. 상기 항체는 앤지오포이에틴 2, AXL, ACVR2B, 앤지오포이에틴 3, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, 아밀로이드 A 단백질, β-아밀로이드, AOC3, BAFF, BAFF-R, B7-H3, BCMAC, A-125(이미테이션), C5, CA-125, CCL11(에오탁신-1), CEA, CSF1R, CD2, CD3, CD4, CD6, CD15, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD54, CD56, CD70, CD74, CD97B, CD125, D134, CD147, CD152, CD154, CD279, CD221, C242 항원, CD276, CD278, CD319, 클로스트리디엄 디피실(clostridium difficile), 클라우딘 18 아이소폼 2, CSF1R, CEACAM5, CSF2, 탄산무수화효소 9, CLDN18.2, 심장 마이오신, CCR4, CGRP, 응고 인자 III, c-Met, CTLA-4, DPP4, DR5, DLL3, DLL4, 다비가트란(Dabigatran), EpCAM, 에볼라바이러스 당단백질, 엔도글린(Endoglin), 에피시알린(episialin), EPHA3, c-Met, FGFR2, 피브린 II β 사슬, FGF 23, 폴레이트 수용체 1, GMCSF, GD2 강글리오사이드, GDF-8, GCGR, 젤라티나제 B, 글리피칸 3, GPNMB, GMCSF 수용체 α-사슬, 칼리크레인, KIR2D, ICAM-1, ICOS, IGF1, IGF2, IGF-1 수용체, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4Rα, IL-5, IL-6, IL-6 R, IL-9, IL-12, IL-13, IL17A, IL17F, IL-20, IL-22, IL-23, IL-31, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 인테그린 α4β7, 안터페론 α/β 수용체, 인플루엔자 A 헤마글루티닌, ILGF2, HER1, HER2, HER3, HHGFR, HGF, HLA-DR, B형 간염 표면 항원, HNGF, Hsp90, HGFR, L-셀렉틴, 루이스-Y 항원, LYPD3, LOXL2, LIV-1, MUC1, MCP-1, MSLN, 메소텔린, MIF, MCAM, NCA-90, NCA-90 노치 1, 넥틴-4, PCDP1, PD-L1, PD-1, PCSK9, PTK7, PCDC1, 포스파티딜세린, RANKL, RTN4, 레서스 인자, ROR1, SLAMF7, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) α 독소, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 2성분 류코시딘, SOST, 셀렉틴 P, SLITRK6, SDC1, TFPI, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, TNF-α, TWEAK 수용체, TNFRSF8, TYRP1, 타우 단백질, TAG-72, TSLP, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TGF-β, TAG-72, TRAP, TIGIT, 테나신 C, OX-40, VEGF-A, VWF, VEGFR1 또는 VEGFR2 중 하나 또는 복수를 표적으로 할 수 있다.
본 개시내용에 기재된 접합체의 일부 실시형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 단백질은 치료용 펩티드이다. 펩티드는 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1), 엑센딘-2, 엑센딘-3, 엑센딘-4, 심방 나트륨이뇨 인자(ANF), 그렐린, 바소프레신, 성장 호르몬, 성장 호르몬-방출 호르몬(GHRH), RC-3095, 소마토스타틴, 봄베신, PCK-3145, Phe-His-Ser-Cys-Asn(PHSCN), IGFl, B형 나트륨뇨 펩티드, 펩티드 YY(PYY), 인터페론, 트롬보스폰딘, 앤지오포이에틴, 칼시토닌, 성선자극호르몬 방출호르몬, 히루딘, 글루카곤, 항-TNF-α, 섬유아세포 성장인자, 과립구 집락 자극 인자, 오비네피타이드, 뇌하수체 갑상선 호르몬(PTH), 류프롤라이드, 세르모렐린, 프라모렐린, 네시리타이드, 로티갑타이드, 실렌기타이드, MBP-8298, AL-108, 엔푸비르타이드, 티말파신, 답타마이신, HLFI-II, 락토페린, 델미타이드, 글루타티온, T-세포 에피토프 PR1, 프로테아제-3 펩티드 1-11, B-세포 에피토프 P3, 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH), 물질 P, 뉴로키닌 A, 뉴로키닌 B, CCK-8, 류신 엔케팔린 및 메티오닌 엔케팔린을 비롯한 엔케팔린, 더마셉틴, [des-Ala20, Gln34]-더마셉틴, 계면활성제-연관 항미생물성 음이온성 펩티드, 아피다에신 IA; 아피다에신 IB; OV-2; 1025, 아세틸-부착소 펩티드(1025-1044) 아미드; 테로마신(49-63); 펙시가난(MSI-78); 인돌리시딘; 아펠린-15(63-77); CFPIO(71-85); 탄저병 관련 치사 인자(LF) 저해제; 박텐신; C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 2; C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 3; 간염 바이러스 NS3 프로테아제 저해제 4; NS4A-NS4B C형 간염 바이러스(NS3 프로테아제 저해제 I); HIV-1, HIV-2 프로테아제 기질; 항-FM 펩티드; Bak-BH3; Bax BH3 펩티드(55-74)(야생형); Bid BH3-r8; CTT(젤라티나제 저해제); E75(Her-2/neu)(369-377); GRP78 결합 키메라 펩티드 모티프; p53(17-26); EGFR2/KDR 길항제; 콜리벨린 AGA-(C8R) HNGl 7(휴마닌 유도체); 활성-의존성 신경영양 인자(ADNF); β-분비효소 저해제 I; β-분비 효소 저해제 2; ch[β]-아밀로이드(30-16); 휴마넌(Humanun: HN) sHNG, [Glyl4]-HN, [Glyl 4]-휴마닌; 안지오텐신 전환 효소 저해제(BPP); 레닌 저해제 III; 아넥신 I(ANXA-I; Ac2-12); 항염증성 펩티드 I; 항염증 펩티드 2; 항염증성 아펠린 12; [D-Phel2, Leul4]-봄베신; 안테나페디아 펩티드(산)(페네트라틴); 안테네페디아(Antennepedia) 리더 펩티드(CT); 마스토파란(Mastoparan); 설페이트화된 [Thr28, Nle31]-콜레시스토키닌(25-33); 노시셉틴(1-13)(아미드); 섬유소용해 저해 인자; γ 피브리노겐(377-395); 제닌; 오베스타틴(인간); [His1, Lys6]-GHRP(GHRP-6); [Ala5[β]-Ala8]-뉴로키닌 A(4-10); 뉴로메딘 B; 뉴로메딘 C; 뉴로메딘 N; 활성-의존성 신경영양 인자(ADNF-14); 아세탈린 I(오피오이드 수용체 길항제 I); 아세탈린 2(오피오이드 수용체 길항제 2); 아세탈린 3(오피오이드 수용체 길항제 3); ACTH(1-39)(인간); ACTH(7-38)(인간); 소바진; 지질동성 호르몬(풀무치); 미리스토일화된 ADP-리보실화 인자 6, myr-ARF6(2-13); PAMP(1-20)(프로아드레노메둘린(1-20) 인간); AGRP(25-51); 아밀린(8-37)(인간); 앤지오텐신 I(인간); 앤지오텐신 II(인간); 압스타틴(아미노펩티다제 P 저해제); 브레비닌-I; 마가이닌 I; RL-37; LL-37(항미생물 펩티드)(인간); 세크로핀 A; 항산화 펩티드 A; 항산화 펩티드 B; L-카모신; BcI 9-2; NPVF; 신경펩티드 AF(hNPAF)(인간); Bax BH3 펩티드(55-74); bFGF 저해성 펩티드; bFGF 저해성 펩티드 II; 브래디키닌; [Des-Argl OJ-HOE 140; 카스파제 I 저해제 II; 카스파제 I 저해제 VIII; Smac N7 단백질(MEKl 유래 펩티드 저해제 I; hBD-1([β]-데펜신-1)(인간); hBD3([β]-데펜신-3)(인간); hBD-4([β]-데펜신-4)(인간); HNP-I(데펜신 인간 호중구 펩티드 I); HNP-2(데펜신 인간 호중구 펩티드-2 디노핀 A(1-17)); 엔도몰핀-I; [β]-엔돌핀(인간, 돼지); 엔도텔린 2(인간); 피브리노겐 결합 저해제 펩티드; 시클로(-GRGDSP); TP508(트롬빈-유래 펩티드); 갈라닌(인간); GIP(인간); 가스트린 방출 펩티드(인간); 가스트린-1(인간); 그렐린(인간); PDGF-BB 펩티드; [D-Lys3]-GHRP-6; HCV 코어 단백질(1-20); a3Bl 인테그린 펩티드 단편(325)(아미드); 라미닌 펜타펩티드(아미드) Mel-아노트로핀-증강 인자(MPF); VA-[β]-MSH, 리포트로핀-Y(프로오피오멜라노코르틴-유래); 심방 나트륨이뇨 펩티드(1-28)(인간); 바소나트린 펩티드(1-27); [Ala5, B-Ala8]-뉴로키닌 A(4-10); 뉴로메딘 L(NKA); Ac-(Leu28, 31)-신경펩티드 Y(24-26); 알리테신; 뇌 신경펩티드 II; [D-tyrll]-뉴로텐신; IKKy NEMO 결합 도메인(NBD) 저해성 펩티드; PTD-p50(NLS) 저해성 펩티드; 오렉신 A(소, 인간, 마우스, 래트); 오렉신 B(인간); 아쿠아포린-2(254-267)(인간 판크레아스타틴)(37-52); 췌장 폴리펩티드(인간); 신경펩티드; 펩티드 YY(3-36)(인간); 하이드록시메틸-피토켈라틴 2; PACAP(I -27)(아미드, 인간, 소, 래트); 프로락틴 방출 펩티드(1-31)(인간); 살루신-α; 살루신-β; 사포신 C22; 세크레틴(인간); L-셀렉틴; 엔도키닌 A/B; 엔도키닌 C(인간); 엔도키닌 D(인간); 트롬빈 수용체(42-48) 작용제(인간); LSKL(트롬보스폰딘의 저해제); 티로트로핀 방출 호르몬(TRH); P55-TNFR 단편; 유로텐신 II(인간); VIP(인간, 돼지, 래트); VIP 길항제; 헬로더민; 엑세나타이드; ZPlO(AVEOOIOO); 프람리니타이드; AC162352(PYY)(3-36); PYY; 오비네피타이드; 글루카곤; GRP; 그렐린(GHRP6); 류프롤라이드; 히스트렐린; 옥시토신; 아토시반(RWJ22164); 서모렐린; 네시리타이드; 비발리루딘(Hirulog); 이카티반트; 아비프타딘; 로티갭타이드(ZP123, GAP486); 실렌지타이드(EMD-121924, RGD 펩티드); AlbuBNP; BN-054; 앤지오텐신 II; MBP-8298; 펩티드 류신 아르기닌; 지코노타이드; AL-208; AL-108; 카베티콘; 트리펩티드; SAL; 콜리벤; 휴마닌; ADNF-14; VIP(혈관작용 장 펩티드); 티말파신; 바시트라신; 그라미디신; 펙시가난(MSI-78); Pl 13; PAC-113; SCV-07; HLFl-Il(락토페린); DAPTA; TRI-1144; 트리트릅티신(Tritrpticin); 항-플라민 2; 가텍스(테두글루타이드, ALX-0600); 스티무박스(L-BLP25); 크리살린(TP508); 멜라노난 II; 스판타이드 II; 세룰레타이드; 신칼라이드; 펜타가스틴; 세크레틴; 엔도스타틴 펩티드; E-셀렉틴; HER2; IL-6; IL-8; IL-10; PDGF; 트롬보스폰딘; uPA (I); uPA (2); VEGF; VEGF (2); 펜타펩티드-3; XXLRR; β-아밀로이드 원섬유발생; 엔도몰핀-2; TIP 39(결절누두 신경펩티드); PACAP(1-38)(아미드, 인간, 소, 래트); TGFB 활성화 펩티드; 인슐린 감작 인자(ISF402); 전환 성장 인자 BI 펩티드(TGF-B1); 캐룰레인 방출 인자; IELLQAR(8-branchMAPS); 티가포타이드 PK3145; 고세렐린; 아바렐릭스; 세트로렐릭스; 가니렐릭스; 데가렐릭스(트립토렐린); 바루시반(FE 200440); 프랄모렐린; 옥트레오타이드; 엡티피바타이드; 네타미프타이드(INN-00835); 답타마이신; 스판타이드 II; 델미타이드(RDP-58); AL-209; 엔푸버타이드; IDR-I; 헥사펩티드-6; 인슐린-A 사슬; 란레오타이드; 헥사[rho]엡타이드-3; 인슐린 B-사슬; 글라긴-A 사슬; 글라긴-B 사슬; 인슐린-리스프로 B-사슬 유사체; 인슐린-아스파트 B-사슬 유사체; 인슐린-글루리신 B 사슬 유사체; 인슐린-데터머 B 사슬 유사체; 소마토스타틴 종양 저해 유사체; 판크레아스타틴(37-52); 혈관작용 장 펩티드 단편(KKYL-NH2); 및 디놀핀 A를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용에 사용하기에 적합한 단백질의 예는 면역독소 SSlP, 아데노신 데아미나제, 아르기나제 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 따른 접합체 중 어느 하나를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체 중 복수를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 20, 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 7, 1 내지 약 6, 1 내지 약 5, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z1의 평균값은 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 6, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z2의 평균값은 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 더 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 본 개시내용에 기재된 적어도 하나의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체의 혼합물은 상이한 z 및/또는 y를 갖는 복수의 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 화학식 (XX), (XX-I), (XXIX), (XXIX-I), (XXXII), (XXXII-I), (XIII), (XIII-I), (XIII-A), (XIII-B), (XIII-C), (XIII-D), (XIII-A1), (XIII-B1), (XIII-C1), (XIII-D1), (XIII-D2), (XIII-A-I), (XIII-B-I), (XIII-C-I), (XIII-D-I), (XIII-A1-I), (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 및/또는 (XIII-D2-I)로부터 선택된다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; z가 8인 접합체; z가 9인 접합체; 및/또는 z가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; 및/또는 z가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; z가 6인 접합체; z가 7인 접합체; 및/또는 z가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; 및/또는 z가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; 및/또는 z가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체 및/또는 z가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; y가 8인 접합체; y가 9인 접합체; 및/또는 y가 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; 및/또는 y가 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 4인 접합체; y가 5인 접합체; y가 6인 접합체; y가 7인 접합체; 및/또는 y가 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; y가 3인 접합체; y가 4인 접합체; 및/또는 y가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체; y가 2인 접합체; 및/또는 y가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 y가 1인 접합체 및/또는 y가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; z1이 8인 접합체; z1이 9인 접합체; 및/또는 z1이 10인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; 및/또는 z1이 6인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 4인 접합체; z1이 5인 접합체; z1이 6인 접합체; z1이 7인 접합체; 및/또는 z1이 8인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; z1이 3인 접합체; z1이 4인 접합체; 및/또는 z1이 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; z1이 2인 접합체; 및/또는 z1이 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z1이 1인 접합체; 및/또는 z1이 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; z2가 3인 접합체; z2가 4인 접합체; 및/또는 z2가 5인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체; z2가 2인 접합체; 및/또는 z2가 3인 접합체를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 접합체의 혼합물은 z2가 1인 접합체 및/또는 z2가 2인 접합체를 포함한다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 조성물에 관한 것으로, 화학식 (XX), (XX-I), (XXIX), (XXIX-I), (XXXII), (XXXII-I), (XIII), (XIII-I), (XIII-A), (XIII-B), (XIII-C), (XIII-D), (XIII-A1), (XIII-B1), (XIII-C1), (XIII-D1), (XIII-D2), (XIII-A-I), (XIII-B-I), (XIII-C-I), (XIII-D-I), (XIII-A1-I), (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 및/또는 (XIII-D2-I)로 표시되는 접합체 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 조성물은 화학식 (XX), (XX-I), (XXIX), (XXIX-I), (XXXII), (XXXII-I), (XIII), (XIII-I), (XIII-A), (XIII-B), (XIII-C), (XIII-D), (XIII-A1), (XIII-B1), (XIII-C1), (XIII-D1), (XIII-D2), (XIII-A-I), (XIII-B-I), (XIII-C-I), (XIII-D-I), (XIII-A1-I), (XIII-B1-I), (XIII-C1-I), (XIII-D1-I) 및/또는 (XIII-D2-I)로 표시되는 복수의 접합체를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 20, 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 7, 1 내지 약 6, 1 내지 약 5, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z1의 평균값은 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 6, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z2의 평균값은 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 더 포함한다.
IL-2-거대분자 접합체
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태로 돌아가 보다 구체적인 단백질-거대분자 접합체가 제공되며, 이 접합체는 링커를 통해 다중 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함한다. 본 개시내용의 접합체는 하기 특징 중 하나 또는 복수를 가질 것이다.
IL-2 모이어티
상기와 같이, 접합체는 일반적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커를 통해 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 공유 결합으로 연결된 IL-2 모이어티의 잔기를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-2 모이어티"는 접합 전의 IL-2 모이어티 뿐만 아니라 수용성 중합체에 연결된 후의 IL-2 모이어티를 지칭할 것이다. 그러나, 원래 IL-2 모이어티가 수용성 중합체에 연결되는 경우, IL-2 모이어티는 상기 중합체(들)에 대한 결합과 연관된 하나 또는 복수의 공유 결합의 존재로 인해 약간 변경된다. 종종, 또 다른 분자에 연결된 IL-2 모이어티의 이러한 약간 변경된 형태를 IL-2 모이어티의 "잔기"라고 지칭한다.
상기 IL-2 모이어티는 비-재조합 방법 및 재조합 방법으로부터 유래될 수 있고, 본 개시내용은 이와 관련하여 제한되지 않는다. 또한, IL-2 모이어티는 인간 공급원, 동물 공급원 및 식물 공급원으로부터 유래될 수 있다.
비-재조합 접근법 및 재조합 접근법으로 얻어진 임의의 IL-2 모이어티가 본 명세서에 기재된 접합체를 제조하는 데 IL-2 모이어티로서 사용될 수 있다.
IL-2 활성을 갖는 단백질을 발현하는 데 사용되는 시스템에 따라, IL-2 모이어티는 글리코실화되지 않거나 글리코실화될 수 있고, 둘 중 하나가 사용될 수 있다. 즉, IL-2 모이어티는 글리코실화되지 않거나 IL-2 모이어티는 글리코실화될 수 있다. 본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 있어서, IL-2 부분은 글리코실화되지 않는다.
IL-2 모이어티는 아미노산의 측쇄 내의 원자에 대한 중합체의 용이하게 연결을 제공하기 위해, 바람직하게는 하나 또는 복수의 아미노산 잔기, 예컨대, 라이신, 시스테인, 히스티딘 및/또는 아르기닌을 포함 및/또는 치환하도록 변형될 수 있다. IL-2 모이어티의 치환의 예는 미국 특허 제5,206,344호에 기재되어 있다. 또한, IL-2 모이어티는 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. IL-2 모이어티의 비-자연 발생 아미노산 잔기를 치환시키는 예는 국제 공개 제WO 2019/028419호에 기재되어 있다. 아미노산 잔기 및 비-자연 발생 아미노산 잔기를 부가하는 기술은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 문헌[J. March, Advanced Organic IL-2mistry: Reactions Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992)] 참조.
또한, IL-2 모이어티는 작용기의 연결을 포함하도록 유리하게 변형될 수 있다(작용기-함유 아미노산 잔기의 부가를 통한 것 제외). 예를 들어, IL-2 모이어티는 티올기를 포함하도록 변형될 수 있다. 또한, IL-2 모이어티는 N-말단 α 탄소를 포함하도록 변형될 수 있다. 또한, IL-2 모이어티는 하나 또는 복수의 탄수화물 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 또한, IL-2 모이어티는 알데하이드기를 포함하도록 변형될 수 있다. 또한, IL-2 모이어티는 케톤기를 포함하도록 변형될 수 있다. 본 개시내용의 특정 실시형태에 있어서, IL-2 모이어티는 티올기, N말단 α 탄소, 탄수화물, 알데하이드기 및 케톤기 중 하나 또는 복수를 포함하도록 변형되지 않는 것이 바람직하다.
예시적인 IL-2 모이어티는 문헌 및 예를 들어, 미국 특허 제5,116,943호, 제5,153,310호, 제5,635,597호, 제7,101,965호 및 제7,567,215호 및 미국 특허 출원 공개 제2010/0036097호 및 제2004/0175337호에 기재되어 있다. 바람직한 IL-2 모이어티는 도 1에 상응하는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 경우, IL-2 모이어티는 "단량체" 형태일 수 있으며, 여기서 상응하는 펩티드의 단일 발현은 구별되는 단위로 조직화된다. 다른 예에서, IL-2 모이어티는 "이량체"(예를 들어, 재조합 IL-2의 이량체)의 형태일 수 있고, 여기서 단백질의 2개의 단량체 형태는 (예를 들어, 이황화 결합에 의해) 서로 결합된다. 예를 들어, 재조합 인간 IL-2의 이량체의 맥락에서, 상기 이량체는 각각의 단량체의 Cys 125 잔기로부터 형성된 이황화 결합에 의해 서로 결합된 2개의 단량체 형태일 수 있다.
또한, IL-2의 전구체 형태가 IL-2 모이어티로 사용될 수 있다. 임의의 전술한 서열의 절단된 버전, 혼성 변이체 및 펩티드 모방체가 또한 IL-2 모이어티로 작용할 수 있다. 적어도 어느 정도의 IL-2 활성을 유지하는 임의의 전술한 생물학적 활성 단편, 결실 변이체, 치환 변이체 또는 부가 변이체가 또한 IL-2 모이어티로서 작용할 수 있다.
임의의 주어진 펩티드 또는 단백질 모이어티에 대해, 그 모이어티가 IL-2 활성을 갖는지 여부를 결정하는 것이 가능하다. 시험관내 IL-2 활성을 결정하기 위한 다양한 방법이 당업계에 기재되어 있다. 예시적인 접근 방식은 하기 실험에서 기재된 CTLL-2 세포 증식 측정이다. 예시적인 접근 방식은 문헌[Moreau et al. (1995) Mol. Immunol. 32:1047-1056)]에 기재되어 있다. IL-2 기능을 평가하기 위해 전기측정법, 분광광도법, 크로마토그래피 및 방사측정법을 포함하는 당업계에 공지된 다른 방법도 사용될 수 있다.
본 개시내용에 따른 보다 구체적인 예시적 접합체를 기재할 것이다. 일반적으로, 이러한 IL-2 모이어티는 도 1에 제공된 서열과 유사한 아미노산 서열을 (적어도 부분적으로) 공유할 것으로 예상된다. 따라서, 도 1의 서열 내의 특정 위치 또는 원자에 대한 참조가 이루어지지만, 이러한 참조는 단지 편의를 위한 것이며, 당업자는 IL-2 활성을 갖는 다른 모이어티 내의 해당 위치 또는 원자를 쉽게 결정할 수 있을 것이다. 특히, 천연 인간 IL-2에 대해 본 명세서에서 제공된 설명은 임의의 상기 단편, 결실 변이체, 치환 변이체 또는 부가 변이체에 일반적으로 적용 가능하다.
접합체 조립
IL-2 모이어티 상의 아미노기는 IL-2 모이어티와 수용성 중합체 사이의 연결점을 제공한다. 도 1에 제공된 아미노산 서열을 사용하는 경우, 접합에 사용될 수 있는 -아미노산을 각각 갖는 여러 개의 라이신 잔기가 있음이 분명하다. 또한, 임의의 단백질의 N-말단 아민이 또한 연결점으로 작용할 수 있다.
IL-2 모이어티의 이용 가능한 아민과 공유 방출 가능한 결합을 형성하는 데 유용한 적합한 시약의 많은 예가 있다. 상응하는 접합체와 함께 비제한적인 특정 예가 하기 표 1에 제공되어 있다. 표에서, 변수 "n"은 반복 단량체 단위의 수를 나타내고, z는 1 내지 25의 정수이며, "-NH-IL-2"는 중합체성 시약 또는 링커에 접합된 후 IL-2 모이어티에 개별적으로 연결되는 하나 또는 복수의 수용성 중합체 또는 IL-2 모이어티에 개별적으로 연결되는 하나 또는 복수의 링커를 형성한 후 IL-2 모이어티의 잔기를 나타낸다. 표 1에 제시된 각각의 중합체 부분[예를 들어, (OCH2CH2)n 또는 (CH2CH2O)n]의 말단은 "CH3"기이지만, 다른 기(예컨대, H 및 벤질)로 이를 대체할 수 있다.
IL-2 모이어티의 아미노기에 대한 시약의 접합은 다양한 기술에 의해 달성할 수 있다. 한 접근법에서, IL-2 모이어티는 석신이미딜 유도체(또는 다른 활성화된 에스터기, 여기서 이들 대안적인 활성화된 에스터기-함유 시약에 대해 기재된 것과 유사한 접근법이 사용될 수 있음)로 기능화된 커플링제에 접합될 수 있다. 이러한 접근법에서, 석신이미딜 유도체를 보유하는 시약은 pH 7 내지 9.0의 수성 매질에서 IL-2 모이어티에 연결될 수 있지만, 상이한 반응 조건(예를 들어, 낮은 pH, 예컨대, 6 내지 7 또는 상이한 온도 및/또는 15℃ 미만)을 사용하면 IL-2 모이어티 상의 다른 위치에 시약이 연결될 수 있다.
IL-2 상에 다중 아미노 부위가 존재하기 때문에, 개시된 커플링제를 사용한 IL-2 모이어티의 하나 또는 복수의 기능화는 과량 당량의 시약을 사용하여 달성할 수 있다. IL-2 모이어티의 다중 아미노기와 접합시키기 위해서는 매우 높은 당량의 중합체성 시약(예를 들어, 100당량)이 필요하다. 기능성 링커 시약의 활용은 IL-2 모이어티의 높은 기능화를 보다 효율적으로 달성할 수 있다.
기능성 링커 시약은 일반적으로 석신이미딜 유도체 및 클릭 화학에 적합한 반응성 기를 보유할 수 있다. NHS 커플링을 통한 IL-2 모이어티의 아미노기에 대한 기능성 시약의 접합은 IL-2 모이어티의 많은 수의 기능화를 달성할 수 있다. 그 후, 적합한 중합체성 시약을 사용한 클릭 화학 반응이 고도로 중합체적으로 유도체화된 IL2를 제공할 수 있다. 상응하는 접합체와 함께 비제한적인 특정 예가 하기 표 2에 제공되어 있다. 표에서, 변수 (n)은 반복 단량체 단위의 수를 나타내고, z는 1 내지 25의 정수이며, "-NH-IL-2"는 하나 또는 복수의 수용성 중합체가 개별적으로 연결된 IL-2의 잔기를 나타낸다. 표 2에 제시된 각각의 중합체 부분[예를 들어, (OCH2CH2)n 또는 (CH2CH2O)n]의 말단은 "CH3"기이지만, 다른 기(예컨대, H 및 벤질)로 이를 대체할 수 있다.
클릭 화학이 부위-특이적 페길화에 사용된다. 부위-특이적 페길화는 아지드-함유 비-자연 아미노산, 즉, 호모아지도알라닌을 알킨-PEG 분자와의 부위-특이적 접합을 허용하는 재조합 단백질에 혼입함으로써 달성된다.
Cu-촉매 클릭 반응의 주요 단점 중 하나는 Cu(II) 뿐만 아니라 고독성 Cu(I)가 필요하다는 것이다. 소량의 구리라도 단백질, 특히 GFP와 같은 형광성 단백질을 손상시킬 수 있다. 또한, 환원제, 리간드 및 무산소 조건의 존재가 필요할 수 있다.
단백질 생존력을 유지하면서 Cu-촉매 클릭 반응과 유사한 효율로 부위-특이적 페길화를 달성하는 방법은 8원 고리의 균주가 4℃ 또는 실온에서 촉매의 부재 하에 아지드와의 반응이 일어나도록 하는 시클로옥틴의 도입이다. 소위 DBCO라고 하는 다이벤질시클로옥틴은 반응성 시클로옥틴 계열에 속한다.
DBCO-PEG 분자는 온화한 반응 조건 하에 아지드-함유 단백질의 Cu-무함유 페길화를 허용한다. 상응하게, 아지드 잔기에 대한 PEG 분자의 공유 결합으로 연결은 클릭 화학의 유전된 선택성으로 인해 효율적이고 고도로 부위-특이적이다.
다중 아지드 기능화된 IL-2(IL-2-링커 접합체)를 고효율로 다중 페길화된 접합체(IL-2-고분자 접합체)로 전환하기 위해 클릭-페길화를 사용하였다. 아지드와 비대칭 1,2-이치환된 알킨, 예컨대, DBCO 사이에 클릭 반응이 일어날 때, 당업자는 2개의 위치이성질체 화합물이 생성물로서 수득될 수 있음을 이해할 것이다. 위치 이성질체의 차이점은 형성되는 C-N 결합의 위치에 있다.
상이한 시약과 IL-2 모이어티의 아미노기를 접합하여 링커가 혼합된 IL-2 접합체를 생성할 수 있다. 하기에서는 비제한적인 구체적 예를 제공한다. 변수 "n"은 반복되는 단량체 단위의 수를 나타내고, z는 1 내지 5의 정수이며, "-NH-IL-2"는 중합체성 시약 또는 링커에 접합되어 IL-2 모이어티의 하나 또는 복수의 수용성 중합체에 개별적으로 연결된 후 IL-2 모이어티의 잔기, 또는 IL-2 모이어티에 개별적으로 연결된 하나 또는 복수의 링커를 나타낸다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된다:
;
;
;
; 또는
.
본 명세서에 기재된 바와 같은 스킴 I, 스킴 II 및 스킴 III 전략을 사용한 IL-2의 페길화는 IL-2Ra보다 IL-2Rb에 대한 결합 선호도 우월성을 나타내는 일부 페길화된 IL-2 접합체를 생성한다. 이는 PBMC 면역 프로파일링 측정에 의해 뒷받침되며, 대조군 IL-2 및 종래의 PEG 시약 페길화 방법으로부터 생성된 페길화된 IL-2와 비교하여, 상기 측정은 T 조정 세포 증식보다 이펙터 T 세포 증식에 대한 선호도를 보여준다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 스킴 I 전략을 사용한 IL-2의 페길화는 IL-2에 연결된 다양한 수의 링커 및 페길화 중합체의 혼합물을 갖는 페길화된 IL-2 접합체를 생성할 수 있다. 하기에서는 비제한적인 구체적 예를 제공한다. 변수 "n"은 반복되는 단량체 단위의 수를 나타내고, z는 1 내지 8의 정수이며, y는 1 내지 8의 정수이고, "-NH-IL-2"는 링커에 접합되어 IL-2 모이어티에 개별적으로 연결된 하나 또는 복수의 링커를 형성한 후 IL-2 모이어티의 잔기를 나타낸다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된다:
;
; 또는 .
IL-2 모이어티 내에 포함된 티올기는 수용성 중합체의 효과적인 연결 부위로 사용될 수 있다. IL-2 모이어티 내에는 용매 접근 가능한 이황화물이 존재한다. 일반적으로, 이는 단백질의 구조나 기능보다는 단백질의 안정성에 기여한다. Bioconjugate Chem. 2007, 18, 6176에 보고된 바와 같이, 시스테인 티올을 방출하는 접근 가능한 천연 디설파이드 결합의 약한 환원은 비스(티올)-특이 시약을 사용한 페길화로 이어질 수 있다. 이는 PEG가 연결된 2개의 시스테인 티올의 가교를 초래한다.
티올 브릿지를 사용하여 페길화된 본 개시내용에 따른 대표적인 접합체는 하기 화학식 (XVII) 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 위치이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함할 수 있으며:
(XVII)
상기 식에서, X는 스페이서 모이어티이고, POLY는 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며, "-S-"는 IL-2 모이어티 내 잔기의 티오기이다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 수용성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜)이다.
중합체성 시약의 경우, 본 명세서 및 다른 곳에서 기재된 것은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나 상업적으로 입수 가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 또한, 중합체성 시약을 제조하는 방법은 문헌에 설명되어 있다.
클릭 화학
접합체의 특정 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 접합체, 링커 및 화학식은 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 클릭 화학은 1,2,3-트리아졸을 형성하기 위한 아지드와 알킨 사이의 1,3-쌍극성 고리화 첨가 또는 [3+2] 고리화 첨가를 지칭한다. 용어 "1,3-쌍극성 고리화 첨가" 및 "[3+2] 고리화 첨가"는 또한 아지드와 시클로옥틴 사이의 "구리-무함유" 1,3-쌍극성 고리화 첨가를 포함한다.
따라서, 달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에서 임의의 트리아졸 화합물의 설명은 화합물의 위치이성질체 뿐만 아니라 이의 혼합물을 포함하는 것을 의미한다.
예를 들어, 아지드 및 알킨의 [3+2] 고리화 첨가는 다음과 같이 2개의 위치이성질체 트리아졸을 생성할 수 있다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 알킨은 변형된(strained) 시클로알키닐 또는 헤테로시클로알키닐이고, 상기 고리화 첨가 반응은 촉매의 존재 또는 부재 하에 수행될 수 있다. 특정 실시형태에 있어서, 예를 들어, 상기 고리화 첨가 반응은 당업계에서 "무금속 클릭 화학"으로 공지되어 있는 변형-촉진 아지드-알킨 고리화 첨가(strain-promoted azide-alkyne cycloaddition: SPAAC)라고 불리는 반응에 의해 자발적으로 발생할 수 있다. 특정 실시형태에 있어서, 변형된 사이클로알키닐 또는 헤테로시클로알키닐은 본 명세서에 기재된 바와 같다.
이러한 무촉매 [3+2] 고리화 첨가는 본 개시내용의 접합체를 형성하기 위해 본 명세서에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 알킨은 단지 예로서, 8원 고리 구조와 같은 고리 변형에 의해 활성화될 수 있으며, 이러한 알킨 고리에 전자-끌기기를 추가하거나, 루이스산, 예컨대, Au(l) 또는 Au(lll)의 첨가에 의해 알킨이 활성화될 수 있다. 고리 변형에 의해 활성화된 알킨이 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Agard et al., J. Am. Chem. Soc, 2004, 126 (46):15046-15047]에 기재된 시클로옥틴 및 디플루오로시클로옥틴, 문헌[Boon et al., WO2009/067663 A1 (2009)]에 기재된 디벤조시클로옥틴 및 문헌[Debets et al., Chem. Comm., 2010, 46:97-99]에 기재된 아자-디벤조시클로옥틴.
특정 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 개시내용의 접합체는 알킨기를 포함하는 기능화된 거대분자를 아지드기를 포함하는 기능화된 단백질과 반응시켜 본 명세서에 기재된 바와 같은 접합체를 형성함으로써 수득될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 기능화된 단백질은 활성화된 알킨 모이어티를 가질 수 있고, 기능화된 거대분자는 아지드 모이어티를 가질 수 있다.
특정 실시형태에 있어서, 상기 기능화된 거대분자는 기능화된 PEG이다. 특정 실시형태에 있어서, 기능화된 단백질은 기능화된 IL-2이다. 특정 실시형태에 있어서, 기능화된 IL-2 내의 아지드는 기능화된 PEG 내의 알킨과 반응하여 트리아졸 모이어티를 형성한다(예를 들어, 1,3-쌍극성 고리화 첨가를 통해). 특정 실시형태에 있어서, 기능화된 PEG 내의 아자이드는 기능화된 IL-2 내의 알킨과 반응하여 트리아졸 모이어티를 형성한다.
특정 실시형태에 있어서, 본 개시내용에 기재된 클릭 화학 생성물기는 트리아졸기를 포함한다.
특정 실시형태에 있어서, 클릭 화학 생성물기는 ; ; ; ; ; ; 및 로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 화합물, 접합체 및 화학식의 특정 실시형태에 있어서, T는
; ; ; ; ; ; 또는 로부터 선택된다.
트리아졸 작용기 (T)를 포함하는 본 명세서에 개시된 화합물, 접합체 및 화학식의 특정 실시형태에 있어서, 상기 트리아졸 작용기는 위치이성질체의 혼합물로서 존재하여, 화합물 또는 접합체를 생성시켜, 위치이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 의 구조는 ; 및 와 같은 구조의 위치이성질체의 혼합물을 나타낸다.
본 명세서에서 제공된 접합체가 산성 또는 염기성 모이어티를 함유하는 경우, 이는 또한 약제학적으로 허용 가능한 염으로서 제공될 수 있다. 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19; Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, 2nd ed.; Stahl and Wermuth Eds.; John Wiley & Sons, 2011] 참조. 특정 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 용매화물이다. 특정 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 수화물이다.
본 명세서에서 제공된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조에 사용하기에 적합한 산은 아세트산, 2,2-다이클로로아세트산, 아실화된 아미노산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산, L-아스파트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 붕산, (+)-캄포르산, 캄포르설폰산, (+)-(1S)-캄포르-10-설폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 신남산, 시트르산, 사이클람산, 시클로헥산설팜산, 도데실황산, 에탄-1,2-다이설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시-에탄설폰산, 폼산, 푸마르산, 갈락타르산, 겐티스산, 글루코헵톤산, D-글루콘산, D-글루쿠론산, L-글루탐산, α-옥소글루타르산, 글리콜산, 히푸르산, 브로민화수소산, 염화수소산, 아이오딘화수소산, (+)-L-락트산, (±)-DL-락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, (-)-L-말산, 말론산, (±)-DL-만델산, 메탄설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 나프탈렌-1,5-다이설폰산, 1-하이드록시-2-나프토산, 니코틴산, 질산, 올레산, 오로트산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 과염소산, 인산, L-피로글루탐산, 사카린산, 살리실산, 4-아미노-살리실산, 세바스산, 스테아르산, 석신산, 황산, 타닌산, (+)-L-타타르산, 티오사이안산, p-톨루엔설폰산, 운데실렌산 및 발레르산을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 제공된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조에 사용하기에 적합한 염기는 무기 염기, 예컨대, 수산화마그네슘, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 수산화아연 또는 수산화나트륨; 및 유기 염기, 예컨대, 1차, 2차, 3차 및 4차, 지방족 및 방향족 아민, 예컨대, 비제한적으로 L-아르기닌, 벤에타민, 벤자틴, 콜린, 데아놀, 다이에탄올아민, 다이에틸아민, 디메틸아민, 다이프로필아민, 다이아이소프로필아민, 2-(다이에틸아미노)-에탄올, 에탄올아민, 에틸아민, 에틸렌다이아민, 아이소프로필아민, N-메틸-글루카민, 하이드라바민, 1H-이미다졸, L-라이신, 몰폴린, 4-(2-하이드록시에틸)-몰폴린, 메틸아민, 피페리딘, 피페라진, 프로필아민, 피롤리딘, 1-(2-하이드록시에틸)-피롤리딘, 피리딘, 퀴누클리딘, 퀴놀린, 아이소퀴놀린, 트리에탄올아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, N-메틸-D-글루카민, 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판다이올 및 트로메타민을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 제공된 접합체는 또한 전구약물로서 제공될 수 있고, 이는 화합물의 기능성 유도체이며, 생체내에서 모 화합물로 쉽게 전환 가능하다. 전구약물이 종종 유용한데, 그 이유는 일부 상황에서 이들이 모 화합물보다 투여가 용이할 수 있기 때문이다. 예를 들어, 이들은 경구 투여에 의해 생체 이용 가능하지만 모 화합물은 그렇지 않다. 전구약물은 또한 모 화합물에 비해 약제학적 조성물에서 향상된 용해도를 가질 수 있다. 전구약물은 효소적 과정 및 대사 가수분해를 포함한 다양한 기전에 의해 모 약물로 전환될 수 있다.
약제학적 조성물
상기 접합체는 일반적으로 조성물의 일부이다. 일반적으로, 상기 조성물은 복수의 접합체를 포함한다. 특정 실시형태에 있어서, 각각의 접합체는 동일한 단백질로 구성된다(즉, 전체 조성물 중에서, 단 하나의 유형의 단백질이 발견된다). 또한, 조성물은 복수의 접합체를 포함할 수 있으며, 여기서 임의의 주어진 접합체는 2개 이상의 상이한 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로 구성된다(즉, 전체 조성물 중에서 2개 이상의 상이한 단백질이 발견된다). 다른 실시형태에 있어서, 상기 조성물 내의 실질적으로 모든 접합체(예를 들어, 조성물 중의 복수의 접합체의 85% 이상)는 각각 동일한 단백질을 포함한다. 보다 구체적으로, 상기 단백질은 IL-2이다.
상기 조성물은 단일 접합체 종(예를 들어, 모노페길화된 접합체, 여기서 단일 중합체가 상기 조성물 중의 실질적으로 모든 접합체에 대해 동일한 위치에 연결됨) 또는 접합체 종의 혼합물(예를 들어, 모노페길화된 접합체의 혼합물(여기서 중합체의 연결은 상이한 부위에서 일어남) 및/또는 모노페길화된, 다이페길화된, 트리페길화된 및 다중 페길화된 접합체의 혼합물에서 발생)을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 또한 임의의 주어진 단백질에 연결된 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 그 이상의 중합체를 갖는 다른 접합체를 포함할 수 있다. 또한, 본 개시내용은 상기 조성물이 복수의 접합체를 포함하는 경우를 포함하고, 각각의 접합체는 하나의 단백질에 공유 결합으로 연결된 하나의 수용성 중합체를 포함할 뿐만 아니라, 조성물은 하나의 단백질에 공유 결합으로 연결된 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 그 이상의 수용성 중합체를 포함한다. 보다 구체적으로, 상기 단백질은 IL-2이다.
상기 조성물 중의 접합체와 비교하여, 상기 조성물은 하기 특징 중 하나 또는 복수를 일반적으로 충족할 것이다: 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 10개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 9개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 8개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 7개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 6개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 5개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 4개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 3개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 2개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 85%가 상기 단백질에 연결된 1개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 10개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 9개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 8개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 7개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 6개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 5개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 4개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 3개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 2개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 95%가 상기 단백질에 연결된 1개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 10개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 9개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 8개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 7개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 6개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 부착된 1 내지 5개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 4개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 3개의 중합체를 가질 것이며; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1 내지 2개의 중합체를 가질 것이고; 상기 조성물 중의 접합체의 적어도 약 99%가 상기 단백질에 연결된 1개의 중합체를 가질 것이다. 중합체 범위, 예를 들어 "x 내지 y의 중합체"에 대한 언급은 x 내지 y(이들 값 포함)의 중합체의 수를 고려하는 것으로 이해된다(즉, 예를 들어 "1 내지 3개의 중합체"는 1개의 중합체, 2개의 중합체 및 3개의 중합체를 고려하고, "1 내지 2개의 중합체"는 1개의 중합체 및 2개의 중합체를 고려하는 등). 보다 구체적으로, 단백질은 IL-2이다.
임의의 주어진 모이어티에 대한 원하는 중합체 수의 제어는 적절한 중합체성 시약, 중합체성 시약 대 단백질의 비율, 온도, pH 조건 및 접합 반응의 다른 양태을 선택함으로써 달성할 수 있다. 또한, 바람직하지 않은 접합체의 감소 또는 제거는 정제 수단을 통해 달성할 수 있다.
예를 들어, 중합체-단백질 모이어티 접합체를 정제하여 상이한 접합된 종을 수득/분리할 수 있다. 구체적으로, 생성물 혼합물을 정제시켜 IL-2 모이어티당 평균 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상의 PEG를 얻을 수 있다. 최종 접합체 반응 혼합물의 정제를 위한 전략은 예를 들어, 사용된 중합체성 시약의 분자량, 특정 단백질, 원하는 투여요법 및 개별 접합체(들)의 잔류 활성 및 생체내 특성을 포함하는 복수의 인자에 의해 결정될 것이다.
필요한 경우, 상이한 분자량을 갖는 접합체가 겔 여과 크로마토그래피 및/또는 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 분리될 수 있다. 즉, 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 상이한 분자량(여기서, 차이는 수용성 중합체 부분의 평균 분자량에 본질적으로 대응됨)에 기초하여 상이한 수의 중합체-대-단백질 모이어티 비율(예를 들어, 1량체, 2량체, 3량체 등, 여기서 "1량체"는 단백질 모이어티당 1개의 중합체를 나타내고, "2량체"는 단백질 모이어티당 2개의 중합체를 나타내는 등)를 분별시킨다. 예를 들어, 15,000달톤의 단백질이 약 20,000달톤의 분자량을 갖는 중합체성 시약에 무작위로 접합되는 예시적인 반응에서, 생성된 반응 혼합물은 비변형된 단백질(약 15,000달톤의 분자량을 가짐), 모노페길화된 단백질(약 35,000달톤의 분자량을 가짐), 다이페길화된 단백질(약 55,000달톤의 분자량을 가짐) 등을 함유할 수 있다.
이러한 접근법이 PEG 및 상이한 분자량을 갖는 다른 중합체-단백질 접합체를 분리시키는 데 사용될 수 있지만, 이러한 접근법은 일반적으로 단백질 내의 상이한 중합체 연결 부위를 갖는 위치 아이소폼을 분리시키는 데 효과적이지 않다. 예를 들어, 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 PEG 1량체, 2량체, 3량체 등의 혼합물로부터 서로를 분리시킬 수 있지만, 회수된 접합체 조성물 각각은 단백질 내의 상이한 반응성 기(예를 들어, 라이신 잔기)에 연결된 PEG(들)를 함유할 수 있다.
구체적인 겔 여과 컬럼의 선택은 원하는 분별 범위에 따라 달라질 것이다. 용리는 일반적으로 적합한 완충제, 예컨대, 포스페이트, 아세테이트 등을 사용하여 수행된다. 수집된 분획은 복수의 상이한 방법, 예를 들어, (i) 단백질 내용물에 대한 280㎚에서의 흡광도, (ii) 표준품으로서 소 혈청 알부민(BSA)을 사용한 염료-기반 단백질 분석, (iii) PEG 함량에 대한 아이오딘 시험(문헌[Sims et al. (1980) Anal. BioIL-2m, 107:60-63]), (iv) 나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동법(SDS PAGE), 이어서 아이오딘화 바륨으로 염색 및 (v) 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석할 수 있다.
위치 아이소폼의 분리는 적합한 컬럼(예를 들어, C18 컬럼 또는 C3 컬럼)을 사용하는 역상-고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)를 사용하는 역상 크로마토그래피 또는 이온 교환 컬럼을 사용하는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 수행된다. 두 접근법 모두 동일한 분자량(즉, 위치 아이소폼)을 갖는 중합체-활성제 이성질체를 분리하는 데 사용할 수 있다.
IL-2-중합체 접합체의 경우, 상기 조성물은 바람직하게는 IL-2 활성을 갖지 않는 단백질이 실질적으로 존재하지 않는다. 또한, 상기 조성물은 바람직하게는 다른 모든 비공유 결합으로 연결된 수용성 중합체가 실질적으로 존재하지 않는다. 그러나, 일부 상황에서, 상기 조성물은 중합체-IL-2 모이어티 접합체 및 비접합된 IL-2 모이어티의 혼합물을 함유할 수 있다.
일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체의 혼합물을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 본 개시내용에 기재된 접합체 중 복수를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 20, 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 7, 1 내지 약 6, 1 내지 약 5, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z1의 평균값은 1 내지 약 15, 1 내지 약 10, 1 내지 약 8, 1 내지 약 6, 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물의 일부 실시형태에 있어서, 복수의 접합체의 z2의 평균값은 1 내지 약 4, 1 내지 약 3 또는 1 내지 약 2이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 더 포함한다.
선택적으로, 본 개시내용에 기재된 조성물은 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 더 포함한다. 원하는 경우, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 접합체에 첨가하여 조성물을 형성할 수 있다.
예시적인 부형제는 탄수화물, 무기 염, 항미생물제, 항산화제, 계면활성제, 완충제, 산, 염기, 아미노산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 비제한적으로 포함한다.
탄수화물, 예컨대, 당, 유도체화 당, 예컨대, 알디톨, 알돈산, 에스터화된 당 및/또는 당 중합체가 부형제로서 존재할 수 있다. 구체적인 탄수화물 부형제는 예를 들어, 단당류, 예컨대, 프럭토스, 말토스, 갈락토스, 글루코스, D-만노스, 소르보스 등; 이당류, 예컨대, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 셀로비오스 등; 다당류, 예컨대, 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등; 및 알디톨, 예컨대, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨, 솔비톨(글루시톨), 피라노실 솔비톨, 미오이노시톨, 시클로덱스트린 등을 포함한다.
부형제는 무기 염 또는 완충제, 예컨대, 시트르산, 염화나트륨, 염화칼륨, 황산나트륨, 질산칼륨, 인산이수소나트륨, 인산이나트륨 및 이들의 조성물을 더 포함할 수 있다.
상기 조성물은 미생물 성장을 방지하거나 억제하기 위한 항미생물제를 더 포함할 수 있다. 본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 적합한 항미생물제의 비제한적인 예는 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 벤질 알코올, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸 알코올, 페닐수은 나이트레이트, 티메로살 및 이들의 조성물을 포함한다.
항산화제가 또한 상기 조성물에 존재할 수 있다. 항산화제는 산화를 방지하여, 접합체 또는 제제의 다른 성분의 열화를 방지하는 데 사용된다. 본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태에 사용하기에 적합한 항산화제는 예를 들어, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시톨루엔, 차아인산, 모노티오글리세롤, 프로필 갈레이트, 중아황산나트륨, 나트륨 폼알데하이드 설폭실레이트, 메타중아황산나트륨 및 이들의 조성물을 포함한다.
계면활성제가 부형제로서 존재할 수 있다. 예시적인 계면활성제는 폴리솔베이트, 예컨대, "Tween 20" 및 "Tween 80" 및 플루로닉, 예컨대, F68 및 F88; 솔비탄 에스터; 지질, 예컨대, 인지질, 예컨대, 레시틴 및 기타 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민(비록 바람직하게는 리포솜 형태가 아님), 지방산 및 지방 에스터; 스테로이드, 예컨대, 콜레스테롤; 및 IL-2화제(IL-2lating agent), 예컨대, EDTA, 아연 및 기타 적합한 양이온을 포함한다.
산 또는 염기가 상기 조성물에 부형제로서 존재할 수 있다. 사용될 수 있는 산의 비제한적인 예는 염산, 아세트산, 인산, 시트르산, 말산, 락트산, 폼산, 트리클로로아세트산, 질산, 과염소산, 인산, 황산, 푸마르산 및 이들의 조성물로 이루어진 군으로부터 선택된 산을 포함한다. 적합한 염기의 예는 비제한적으로 수산화나트륨, 아세트산나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼륨, 아세트산암모늄, 아세트산칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨, 폼산나트륨, 황산나트륨, 황산칼륨, 푸마르산칼륨 및 이들의 조성물로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 포함한다.
하나 또는 복수의 아미노산이 본 명세서에 기재된 조성물에 부형제로서 존재할 수 있다. 이와 관련하여 예시적인 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 글리신을 포함한다.
상기 조성물 중의 접합체(즉, 활성제와 중합체성 시약 사이에 형성된 접합체)의 양은 복수의 인자에 따라 달라질 것이지만, 상기 조성물이 단위 용량 용기(예를 들어, 바이알)에 저장되는 경우 최적으로 치료적 유효 용량으로 존재할 것이다. 또한, 약제학적 제제는 주사기에 존재할 수 있다. 치료적 유효 용량은 어느 양이 임상적으로 원하는 종점을 생성시키는지 결정하기 위해 증가하는 양의 접합체를 반복적으로 투여함으로써 실험적으로 결정될 수 있다.
상기 조성물 중 임의의 개별 부형제의 양은 부형제의 활성 및 상기 조성물의 특정 요구에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 개별 부형제의 최적량은 일상적인 실험을 통해, 즉, 다양한 양의 부형제(낮은 값 내지 높은 값 범위)를 함유하는 조성물을 준비하고, 안정성 및 다른 매개변수를 조사한 다음, 유의한 유해 효과 없이 최적의 성능이 달성되는 범위를 결정함으로써 결정된다.
그러나, 일반적으로, 부형제는 부형제의 중량 기준으로 약 1중량% 내지 약 99중량%, 바람직하게는 약 5중량% 내지 약 98중량%, 보다 바람직하게는 약 15 내지 약 95 중량%의 양으로 상기 조성물에 존재할 것이고, 30중량% 미만의 농도가 가장 바람직하다.
다른 부형제와 함께 이러한 상기 약제학적 부형제는 문헌["Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19th ed., Williams & Williams, (1995), the "Physician's Desk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998) 및 Kibbe, A.H., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Edition, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., 2000]에 기재되어 있다.
치료 방법
상기 접합체 및 이의 조성물은 상기 접합체의 투여에 의해 치유되거나 예방될 수 있는 임의의 병태를 치료하는 데 사용될 수 있다. 당업자는 특정 접합체가 효과적으로 치료할 수 있는 병태를 인식한다. 예를 들어, 상기 접합체는 암, 감염성 질환(예를 들어, 바이러스성) 및/또는 자가면역 질환을 치료하기 위해 단독으로 또는 다른 약물요법과 조합하여 사용될 수 있다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 상기 대상체에게 본 명세서에 개시된 접합체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 암은 혈액암이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 혈액암은 다발성 골수종, 림프종 또는 백혈병이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병, 비호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 암은 고형 종양 암이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 고형 종양 암은 신세포 암종, 흑색종, 유방암 또는 방광암이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 흑색종은 전이성 흑색종이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 암은 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포암, 기저 세포암, 선암종, 땀샘암, 피지선암, 유두암, 유두선암종, 낭선암, 수질암, 기관지암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막암, 정액종, 배아암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비소세포폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 속귀신경집종(acoustic neuroma), 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 비호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된 IL-2로 치료될 수 있는 암이다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 감염성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 감염성 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 상기 대상체에게 본 명세서에 개시된 접합체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 감염성 질환은 바이러스성 질환이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 바이러스성 질환은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염 또는 C형 간염 바이러스(HCV) 감염이다. 일부 실시형태에 있어서, 감염성 질환은 HIV 감염이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 감염성 질환은 HCV 감염이다.
일부 실시형태에 있어서, 본 개시내용은 자가면역 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 감염성 질환 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 상기 대상체에게 본 명세서에 개시된 접합체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 홍반성 루푸스, 염증성 장 질환(IBD) 또는 아토피성 피부염이다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 류마티스 관절염은 소아 류마티스 관절염이다.
특정 실시형태에 있어서, 환자는 신세포 암종, 전이성 흑색종, C형 간염 바이러스(HCV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 급성 골수성 백혈병, 비호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 소아 류마티스 관절염, 아토피 피부염, 유방암 및 방광암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 앓고 있다.
바람직하게는, 상기 접합체는 또 다른 활성제의 투여 전, 투여와 동시에 또는 투여 후에 환자에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 상승작용적 선천 면역 반응 및 적응 면역 반응을 생성시키기 위해 항종양 항원 항체와 조합될 수 있다. 일부 실시형태에 있어서, 상기 접합체는 항체-의존성 세포 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity: ADCC) 기능을 통해 항종양 활성을 갖는 항종양 항체와 조합될 수 있다. 본 개시내용에 기재된 상기 PEG-IL-2 접합체는 CD8+ T-세포를 자극할 수 있다. CD8+ T-세포의 자극은 직접적인 종양 사멸의 이점 뿐만 아니라 호중구 활성을 촉진시키는 것으로 공지된 IFNγ와 같은 사이토카인의 방출을 통해 항체-의존성 세포 독성(ADCC)에 대한 다형핵 호중구(polymorphonuclear neutrophil: PMNs)의 조정을 제공한다(문헌[Pelletier et al., J. Leukoc. Biol. 2010; 88:1163-1170]). PEG-IL-2 접합체와 ADCC 기능을 갖는 항종양 항체의 병용 요법이 이러한 항체의 항종양 활성을 잠재적으로 향상시킬 수 있다.
제형/투여
투여를 필요로 하는 환자에게 투여되는 본 명세서에 개시된 접합체 및 조성물은 모든 유형의 제형, 특히, 주사에 적합한 제형, 예를 들어, 액체 뿐만 아니라 재구성될 수 있는 분말 또는 동결건조물을 포괄하는 것을 의미한다. 주사 전에 고체 조성물을 재구성하기 위한 적합한 희석제의 예는 주사용 정균수, 수 중의 덱스트로스 5%, 인산염 완충 식염수, 링거 용액, 식염수, 멸균수, 탈이온수 및 이들의 조성물을 포함한다. 액체 약제학적 조성물과 관련하여, 용액 및 현탁액이 고려된다.
본 개시내용의 하나 또는 복수의 실시형태의 조성물은 반드시는 아니지만 일반적으로 주사를 통해 투여되므로, 일반적으로 투여 직전에 액체 용액 또는 현탁액이다. 약제학적 제제는 또한 시럽, 크림, 연고, 정제, 분말 등과 같은 다른 형태를 취할 수 있다. 다른 투여 경로, 예컨대, 폐, 직장, 경피, 경점막, 경구, 척추강내, 종양내, 종양주위, 복강내, 피하, 동맥내 등이 더 포함된다.
본 개시내용은 또한 접합체로의 치료에 반응성인 병태를 앓고 있는 환자에게 본 명세서에서 제공된 바와 같은 접합체를 투여하는 방법을 제공한다. 이 방법은 일반적으로 주사를 통해 치료적 유효량의 접합체(바람직하게는 약제학적 조성물의 일부로 제공됨)를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 이전에 기재된 바와 같이, 상기 접합체는 (예를 들어, 근육내, 피하 및 비경구로) 주사될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 제형 유형은 즉시 주사 용액, 사용 전 용매와 조합하기 위한 건조 분말, 즉시 주사용 현탁액, 사용 전에 비히클과 조합하기 위한 무수 불용성 조성물 및 투여 전 희석용 에멀션 및 액체 농축물을 포함한다.
상기 접합체를 투여하는 방법(바람직하게는 약제학적 조성물의 일부로서 제공됨)은 상기 접합체를 특정 영역에 위치 결정시키기 위해 선택적으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 접합체를 포함하는 액체, 겔 및 고체 제형은 질환이 있는 영역(예컨대, 종양, 종양 근처, 염증 영역 및 염증 영역 근처)에 외과적으로 이식될 수 있다. 편리하게는, 목적하는 위치가 접합체에 더 잘 노출되도록 하기 위해 기관 및 조직을 영상화할 수도 있다.
투여될 실제 용량은 대상체의 연령, 체중 및 일반적인 병태 뿐만 아니라 치료될 병태의 중증도, 의료 전문가의 판단 및 투여될 접합체에 따라 달라질 것이다. 치료적 유효량은 당업자에게 공지되어 있고/있거나 관련 참고 문헌 및 문헌에 기재되어 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 약 0.001㎎ 내지 100㎎ 범위, 바람직하게는 0.01㎎/일 내지 75㎎/일의 용량, 보다 바람직하게는 0.10㎎/일 내지 50㎎/일의 용량일 것이다. 주어진 용량은 예를 들어, 질환의 증상이 감소되고/되거나 완전히 제거될 때까지 주기적으로 투여될 수 있다.
임의의 주어진 접합체의 단위 투여량(바람직하게는, 약제학적 제제의 일부로서 제공됨)은 임상의의 판단, 환자의 필요 등에 따라 다양한 투여 스케줄로 투여될 수 있다. 특정 투여 스케줄은 당업자에게 공지되어 있거나, 일상적인 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 예시적인 투여 스케줄은 비제한적으로 매일 1회, 매주 3회, 매주 2회, 매주 1회, 3주마다 1회, 매월 2회, 매월 1회 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일단 임상적 종말점이 달성되면, 조성물의 투여가 중단된다.
본 개시내용이 이의 바람직한 구체적인 실시형태와 관련하여 기재되었지만, 상기 설명 뿐만 아니라 하기 실시예는 본 개시내용의 범주를 제한하지 않고 예시하도록 의도된다는 것이 이해되어야 한다. 본 개시내용의 범주 내의 다른 양태, 이점 및 변형은 본 개시내용이 속한 기술 분야의 당업자에게 명백할 것이다.
본 명세서에 언급된 모든 논문, 책, 특허 및 기타 간행물은 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
실험
본 개시내용의 실시는 달리 명시되지 않는 한, 당업계의 기술 범위내에 있는 유기 합성, 생화학, 단백질 정제 등의 통상적인 기술을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 완전히 설명되어 있다. 예를 들어, 상기 문헌[J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992)] 참조.
하기 실시예에서, 사용된 수치(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력하였지만, 일부 실험 오류 및 편차를 고려해야 한다. 달리 제시되지 않는 한, 온도는 섭씨 온도이며, 압력은 해수면에서 대기압 또는 그 근처이다. 모든 시약은 달리 제시되지 않는 한 시그마-알드리치사(Sigma-Aldrich) 또는 써모 피셔사이언티픽사(Thermo Fisher Scientific)에서 상업적으로 얻는다. 생성된 모든 NMR은 300 또는 400㎒ NMR 분광계에서 얻는다. 모든 처리는 유리 또는 유리-라이닝된 용기에서 수행되며, 금속-함유 용기 또는 장비와의 접촉이 회피된다.
물질: 달리 명시되지 않는 한, 모든 유기 용매 및 시약(무수 CH2Cl2, 2-프로판올, 아세톤, NMM 및 DBCO-아민)은 시그마-알드리치사에서 구매하고, 제공된 그대로 사용하였다. PyClockK는 Novabiochem®에서 구매하였다. 15kDa, 17kDa 및 20kDa Y-PEG-NHS 시약은 젠켐 테크놀로지사(JenKem Technology USA)에서 구매하여, 제공된 그대로 사용하였다. DL-디티오트레이톨(DTT)은 멜포드사(Melford)에서 구매하였고, 사용하기 전에 세포 배양 등급수(지이 헬쓰케어사(GE Healthcare))에서 0.1M 용액을 제조하였다. 완충제 제조를 위한 물질은 써모 피셔 사이언티픽사, 머크사(Merck) 및 시그마-알드리치사에서 공급 받았고, 제공된 그대로 사용하였다. PBS, pH 7.4는 2M NaOH(VWR)를 사용한 pH 조정에 의해 DPBS(시그마-알드리치사)로부터 제조하였다. 다른 모든 물질은 VWR, 시그마-알드리치사, 지이 헬쓰케어사, 써모 피셔 사이언티픽사, 코닝사(Corning) 하니웰사(Hoeywell), 머크사 또는 싸이티바사(Cytiva)에서 구매하였고, 제공된 그대로 사용하였다.
제제 완충액: 10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH 9.1로 조정된 5% 트레할로스.
이들 실시예에서 언급된 모든 전구체 중합체성 시약은 달리 명시되지 않는 한 상업적으로 입수 가능하다. IL-2("rIL-2")의 동결건조 분말은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에 대응된다.
IL-2-PEG 접합체의 질량 및 몰량을 IL-2 양에 기초하여 계산하였다.
SDS-PAGE 분석
샘플을 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis: SDS-PAGE)에 의해 분석한다. 샘플을 준비하고, 겔에 로딩하고, 제조사가 설명한 대로 전기영동법을 수행한다.
크기 배제 크로마토그래피
크기 배제 크로마토그래피 방법을 사용하여 제조된 PEG-rIL-2 접합체를 정제시킨다. 정제 과정에 대한 세부 사항을 하기에 기재한다.
RP-HPLC 분석
샘플을 HPLC 시스템 상에서 수행되는 역상 크로마토그래피(reversed-phase chromatography: RP-HPLC) 분석에 의해 분석한다. 분석적 RP-HPLC 분석을 ACE Excel 2superC18 컬럼(치수: 75Х2.1㎜ id, 입자 크기 2㎛)이 있는 Dionex 2 UPLC 시스템에서 수행하였다. 10분에 걸쳐 완충액 A(94.95% H2O, 5.0% MeCN, 0.05% TFA) 중의 0~100% 완충액 B(99.95% MeCN, 0.05% TFA)의 선형 구배를 0.8㎖/분의 유속으로 사용하였다. 샘플 로딩은 10㎍이었다.
실시예 1
7-아지도-1-((4-플루오로페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(8)
6-아지도헥산-1-올(2)의 제조:
H2O(750mL) 중의 6-클로로헥산-1-올(75g, 0.549mol, 1.0eq) 용액에 NaN3(97.5g, 1.50mol, 2.73eq)을 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켜 조 화합물 2(75g, 95%)를 제공하였다.
6-아지도헥산알(3)의 제조:
0℃에서, 3개의 분획으로 DCM/H2O(750ml/75ml) 중의 화합물 2(75g, 0.523mol, 1.0eq), TEMPO(817mg, 5.23mmol, 0.01eq) 및 NaHCO3(52.7g, 0.628mol, 1.2eq) 용액에 TCCA(45g, 0.194mol, 0.37eq)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 여과하고 물로 희석하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켜 조 화합물 3(70g, 94%)을 제공하였다.
(4-플루오로페닐)(메틸)술판(5)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 DMF(250ml) 중의 화합물 4(30g, 0.234mol, 1.0eq) 용액에 MeI(40g, 0.281mol, 1.2eq) 및 K2CO3(97g, 0.702mol, 3.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 5% LiCl(aq.)로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 5(45g, 100%)를 제공하였다.
1-플루오로-4-(메틸술포닐)벤젠(6)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 THF/H2O(450ml/450ml) 중의 화합물 5(45g, 0.317mol, 1.0eq) 용액에 옥손(oxone)(487g, 0.792mol, 2.5eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 여과하고, 물로 희석하였으며, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 염수로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 6(35g, 63%)을 제공하였다.
7-아지도-1-((4-플루오로페닐)술포닐)헵탄-2-올(7)의 제조:
-78℃에서, 무수 THF(200mL) 중의 화합물 6(20g, 0.115mol, 1.0eq) 용액에 n-BuLi(헥산 중의 2.5M 용액, 60ml, 0.149mol, 1.3eq)을 적가하였다. 냉각욕을 제거하고, 혼합물을 0℃까지 가열시켰다. 30분 동안 교반한 후, -78℃에서 화합물 3(21g, 0.149mol, 1.3eq)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 상기 혼합물을 가열시켰다. 그 다음, 상기 혼합물을 NH4Cl의 포화 수용액에 첨가하고(혼합물이 투명해짐) 에틸 아세테이트로 추출하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7(26g, 71%)을 제공하였다.
7-아지도-1-((4-플루오로페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(8)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 무수 THF(200mL) 중의 화합물 7(15g, 47.62mmol, 1.0eq) 및 트리포스젠(24g, 80.95mmol, 1.7eq) 교반 용액에 피리딘(7.5g, 95.24mmol, 2.0eq)을 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 무수 THF(100mL)에 용해시키고, NHS(16.4g, 0.143mol, 3.0eq) 및 피리딘(11.3g, 0.143mmol, 3.0eq)으로 순차적으로 처리하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(100mL)에 용해시키고 0.1N HCl, 물, 포화 NaHCO3 수용액 및 염수로 세척하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8(12g, 55%)을 고체로 제공하였다. 1 H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.95-7.92 (m, 2H), 7.46 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 5.10-5.09 (m, 1H), 4.04-3.97 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 15.2, 2.0 Hz, 1H), 3.27-3.24 (m, 2H), 2.77 (s, 4H), 1.65-1.64 (m, 2H), 1.44-1.42 (m, 2H), 1.23-1.22 (m, 4H).
실시예 2
7-아지도-1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(13)
메틸(4-(트리플루오로메틸)페닐)술판(10)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 DMF(200mL) 중의 화합물 9(24.5g, 0.138mol, 1.0eq) 용액에 MeI(23.4g, 0.165mol, 1.2eq) 및 K2CO3(57g, 0.413mol, 3.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 5% LiCl(aq.)로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 10(24g, 90%)을 제공하였다.
1-(메틸술포닐)-4-(트리플루오로메틸)벤젠(11)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 THF/H2O(200ml/200ml) 중의 화합물 10(24g, 0.125mol, 1.0eq) 용액에 옥손(171g, 0.264mol, 2.1eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 여과하고, 물로 희석하였으며, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 염수로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 11(30.6g, 100%)을 제공하였다.
7-아지도-1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-올(12)의 제조:
-78℃에서, 무수 THF(150ml) 중의 화합물 11(15g, 66.96mmol, 1.0eq) 용액에 n-BuLi(헥산 중의 2.5M 용액, 35ml, 87.05mmol, 1.3eq)을 적가하였다. 냉각욕을 제거하고, 혼합물을 0℃까지 가열시켰다. 30분 동안 교반한 후, -78℃에서 화합물 3(12.5g, 87.05mmol, 1.3eq)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 상기 혼합물을 가열시켰다. 그 다음, 상기 혼합물을 NH4Cl의 포화 수용액에 첨가하고(혼합물이 투명해짐) 에틸 아세테이트로 추출하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 불순한 화합물 12(19g, 77%)를 제공하였다.
7-아지도-1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(13)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 무수 THF(200mL) 중의 화합물 12(19g, 52.05mmol, 1.0eq) 및 트리포스젠(26.3g, 88.49mmol, 1.7eq) 교반 용액에 피리딘(8ml, 0.104mol, 2.0eq)을 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 무수 THF(100mL)에 용해시키고, NHS(17.95g, 0.156mol, 3.0eq) 및 피리딘(12.5mL, 0.156mmol, 3.0eq)으로 순차적으로 처리하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(100mL)에 용해시키고 0.1N HCl, 물, 포화 NaHCO3 수용액 및 염수로 세척하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 13(12.5g, 47%)을 고체로 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.16-5.15 (m, 1H), 4.16-4.09 (m, 1H), 3.95-3.92 (m, 1H), 3.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.77 (s, 4H), 1.66-1.65 (m, 2H), 1.44-1.42 (m, 2H), 1.24-1.23 (m, 4H).
실시예 3
7-아지도-1-((4-클로로페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(18)
(4-클로로페닐)(메틸)술판(15)의 제조
실온에서, 질소 분위기 하에 DMF(250ml) 중의 화합물 14(30g, 0.207mol, 1.0eq) 용액에 MeI(35.3g, 0.249mol, 1.2eq) 및 K2CO3(85.8g, 0.622mol, 3.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 5% LiCl(aq.)로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 15(44g, 100%)를 주황색 오일로 제공하였다. TLC: PE: EA=10:1, Rf (14)=0.5, Rf (15)=0.7.
1-클로로-4-(메틸술포닐)벤젠(16)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 THF/H2O(400mL/400mL) 중의 화합물 15(60g, 0.380mol, 1.0eq) 용액에 옥손(583g, 0.948mol, 2.5eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 여과하고, 물로 희석하였으며, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 염수로 유기층을 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 16(57.8g, 80%)을 백색 고체로 제공하였다.
7-아지도-1-((4-클로로페닐)술포닐)헵탄-2-올(17)의 제조:
-78℃에서, 무수 THF(300mL) 중의 화합물 16(20g, 0.105mol, 1.0eq) 용액에 n-BuLi(헥산 중의 2.5M 용액, 55mL, 0.137mol, 1.3eq)를 적가하였다. 냉각욕을 제거하고, 혼합물을 0℃까지 가열시켰다. 30분 동안 교반한 후, -78℃에서 화합물 3(19g, 0.137mol, 1.3eq)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 상기 혼합물을 가열시켰다. 그 다음, 상기 혼합물을 NH4Cl의 포화 수용액에 첨가하고(혼합물이 투명해짐) 에틸 아세테이트로 추출하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 17(26g, 74%)을 황색 고체로 제공하였다.
7-아지도-1-((4-클로로페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(18)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 무수 THF(500mL) 중의 화합물 17(31g, 93.42mmol, 1.0eq) 및 트리포스젠(47g, 0.159mol, 1.7eq) 교반 용액에 피리딘(15mL, 0.187mol, 2.0eq)을 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 무수 THF(500mL)에 용해시키고, NHS(32g, 0.280mol, 3.0eq) 및 피리딘(22mL, 0.280mmol, 3.0eq)으로 순차적으로 처리하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(300mL)에 용해시키고 0.1N HCl, 물, 포화 NaHCO3 수용액 및 염수로 세척하였다. 무수 Na2SO4로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 18(26g, 59%)을 고체로 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.11-5.10 (m, 1H), 4.06-4.00 (m, 1H), 3.86 (dd, J = 15.6, 2.4 Hz, 1H), 3.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.77 (s, 4H), 1.66-1.62 (m, 2H), 1.45-1.42 (m, 2H), 1.23-1.22 (m, 4H).
실시예 4
7-아지도-1-((2,4-디플루오로페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(19)
실시예 1과 유사한 제조 절차로 2,4-디플루오로티오페놀을 사용하여 실시예 4를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 - 7.94 (m, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 7.05 - 6.97 (m, 1H), 5.24 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 15.2, 8.4 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 15.2, 3.4 Hz, 1H), 3.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.80 (s, 4H), 1.79 (s, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 2H), 1.43 - 1.33 (m, 4H).
실시예 5
7-아지도-1-((4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(20)
실시예 1과 유사한 제조 절차로 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)티오페놀을 사용하여 실시예 5를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.46 (m, 1H), 5.36 - 5.26 (m, 1H), 3.79 (dd, J = 15.2, 8.8 Hz, 1H), 3.47 (dd, J = 15.2, 3.2 Hz, 1H), 3.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.81 (s, 4H), 1.83 - 1.70 (m, 2H), 1.61 - 1.52 (m, 2H), 1.45 - 1.34 (m, 4H).
실시예 6
(2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(24)
N2,N7-비스(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2,7-디카르복스아미드(23)의 제조
9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2,7-디카르복실산(82.5mg, 0.24mmol)을 무수 피리딘(1.0ml)에 용해시키고, 실온에서 상기 용액에 HATU(273.8mg, 0.72mmol) 및 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아민(117.1mg, 0.54mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. HPLC, 0~70% MeCN/H2O(0.1% 포름산 함유)로 생성물을 정제하여 화합물 23(47.4mg, 30%)을 제공하였다. LCMS: m/z 685 (M+1)+.
(2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(24)의 제조:
화합물 23(47.4mg, 0.069mmol)을 DCM(0.2ml)에 용해시키고, 실온, N2 하에 DSC(35.47mg, 0.14mmol) 및 피리딘(16.7μL, 0.21mmol)으로 처리하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반한 후, DCM로 희석하고 1N HCl 및 염수로 세척하였다. Na2SO4로 유기상을 건조시키고 농축시켰다. HPLC, MeCN/H2O(0.1% TFA 함유)로 잔류물을 정제하여 원하는 생성물 24(31.7mg, 56%, 담황색 오일)를 제공하였다. LCMS: m/z 826 (M+1)+.
실시예 7
(2-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(31)
메틸 9H-플루오렌-2-카르복실레이트(26)의 제조:
MeOH(890ml) 중의 화합물 25, 2-브로모-9H-플루오렌(128g, 522mmol), 트리에틸아민 TEA(106g, 1.04mol, 145ml) 및 Pd(dppf)Cl2(38.2g, 52.2mmol) 혼합물을 탈기시키고, CO(50Psi)로 3회 퍼징한 후, 80℃에서, N2 분위기 하에 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1)는 새로운 스팟(Rf=0.42)이 형성되었음을 나타내었다. 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1 내지 10/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 26(120g, 조 생성물)을 백색 고체로 제공하였다.
9H-플루오렌-2-카르복실산(27)의 제조:
MeOH(840ml) 중의 화합물 26(120g, 535mmol)의 혼합물에 NaOH(2M)를 첨가한 후, 혼합물을 20℃, N2 분위기에서 5시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1)는 출발 물질이 완전히 소모되고 새로운 스팟(Rf=0.01)이 형성되었음을 나타내었다. 상기 용액에 물(50mL)을 첨가한 후, EtOAc(100mL)로 추출하였다. 3M HCl로 수성상을 pH 3으로 조정한 후, 이를 EtOAc(100mL)로 추출하였다. 유기상을 감압 하에 농축시켜 화합물 27(40.0g, 190mmol, 35.6% 수율)을 황색 고체로 제공하였다.
9-포르밀-9H-플루오렌-2-카르복실산(28)의 제조:
DMF(196ml) 중의 화합물 27(6.00g, 28.5mmol)의 혼합물에 에틸 포르메이트(276g, 3.73mol) 및 t-BuOK(25.6g, 228mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 25℃로 2.5시간 동안 냉각시켰다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=0/1)는 출발 물질이 완전히 소모되고 새로운 스팟(Rf=0.48)이 형성되었음을 나타내었다. 1M HCl로 용액을 pH 3으로 조정하였다. 그 다음, EtOAc(50.0mL)로 혼합물을 추출하였다. 유기상을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 28(7.00g, 조 생성물)을 갈색 고체로 제공하였다.
9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2-카르복실산(29)의 제조:
MeOH(42.0ml) 중의 화합물 28(7.00g, 29.4mmol)의 혼합물에 NaBH4(2.78g, 73.5mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징한 후, N2 분위기 하에 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS(생성물: RT=0.863min)는 원하는 화합물의 MS를 나타내었다. 상기 용액에 물(120mL)을 첨가한 후, EtOAc(100mL)로 추출하였다. 1M HCl로 수성상을 pH 3으로 조정한 후, 이를 EtOAc(100mL)로 추출하였다. 유기상을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 29(4.00g, 16.7mmol, 56.7% 수율)를 황색 고체로 제공하였다.
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2-카르복스아미드(30)의 제조:
25℃에서, DMF(7.00ml) 중의 화합물 29(1.00g, 4.16mmol) 및 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아민(908mg, 4.16mmol) 용액에 HOBt(619mg, 4.58mmol), EDCl(878mg, 4.58mmol) 및 DIPEA(1.24g, 9.57mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS(생성물: RT=1.002min)는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타내었다. 물(10.0mL)로 반응 혼합물을 희석하고, EtOAc(10.0mLХ2)로 추출하였다. 합한 유기상을 물(10.0mLХ2) 및 염수(10.0mL)로 세척하였다. 유기상을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Welch Xtimate C18 250*50mm*10um; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 18%~48%, 26min)로 잔류물을 정제하여 화합물 30(1.40g, 3.17mmol, 76.2% 수율, 99.8% 순도)을 황색 오일로 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.10 (s, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 3H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.46 - 7.34 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 4.18 - 4이다.08 (m, 2H), 4.02 - 3이다.92 (m, 1H), 3.76 - 3이다.56 (m, 14H), 3.32 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.37 (s, 1H); LC-MS: m/z 441.1 (M+1)+.
(2-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(31)의 제조:
DCM(5ml) 중의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온(0.5g, 1eq) 용액을 -30℃까지 냉각시켰다. 상기 용액에 트리클로로메틸 클로로포르메이트(860mg, 1eq)를 적가한 후, -30℃에서 DIPEA(561mg, 1eq)를 적가하였다. 혼합물을 0℃까지 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 25℃까지 가열하고 계속해서 6시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=0/1, Rf=0.3)는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하여 여액(2,5-디옥소피롤리딘-1-일 클로로포르메이트의 DCM 용액)을 제공하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
0℃에서, DCM(1ml) 중의 화합물 30(0.1g, 1eq) 및 Py(17.96mg, 1eq) 용액에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 클로로포르메이트(10eq, 이전 단계로부터의 DCM 용액)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS(출발 물질: RT=0.992min, 생성물: RT=1.059min)는 3.71%의 출발 물질이 남아 있고 40.2%의 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 물(2.0mL)로 반응물을 켄칭한 후, 포화 시트르산 수용액으로 pH를 6으로 조정하였다. DCM(2mLХ2)로 혼합물을 추출하였다. 합한 유기층을 염수(5.0ml)로 세척한 후, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Welch Ultimate AQ-C18 150*30mm*5um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 30%~60%, 12min)로 잔류물을 정제하였다. 분취용-HPLC로 정제한 후, 분획을 동결건조시켜 화합물 31을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS: m/z 582.2 (M+1)+.
실시예 8
(2-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-7-플루오로-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(39)
2-플루오로-7-요오도-9H-플루오렌(33)의 제조:
CH3COOH(408ml), H2SO4(9.60ml) 및 H2O(19.2ml) 중의 2-플루오로-9H-플루오렌 32(24.4g, 132mmol), I2(14.1g, 55.6mmol) 및 KIO3(7.08g, 33.1mmol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. HPLC(생성물: RT=3.515min)는 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. EtOAc(50.0mL)로 수용액을 추출하였다. H2O(20.0mL), 염수(10.0mL)로 유기층을 세척하고, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 33(38.0g, 123mmol, 92.6% 수율)을 갈색 고체로 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD): 7.87 (s, 1H), 7.70-7.67 (m, 2H), 7.48-7.46 (m, 1H), 7.27-7.22 (m, 1H), 7.17-7.09 (m, 1H), 3.86 (s, 2H).
메틸 7-플루오로-9H-플루오렌-2-카르복실레이트(34)의 제조:
MeOH(200mL) 중의 화합물 33(38.0g, 123mmol), TEA(31.0g, 306mmol), Pd(dppf)Cl2(8.97g, 12.3mmol)의 혼합물을 탈기시키고, CO(50Psi)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO 분위기 하에 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1)는 출발 물질이 완전히 소모되고 새로운 스팟(Rf=0.40)이 형성되었음을 나타내었다. 감압 하에 용액을 농축시켜 화합물 34(40.0g, 조 생성물)을 갈색 고체로 제공하였다.
7-플루오로-9H-플루오렌-2-카르복실산(35)의 제조:
MeOH(280mL) 중의 화합물 34(40.0g, 165mmol)의 혼합물에 NaOH(2M, 206mL, 2.5eq) 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃, N2 분위기에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=0/1)는 출발 물질이 완전히 소모되고 새로운 스팟(Rf=0.03)이 형성되었음을 나타내었다. 반응 용액에 H2O(150mL)를 첨가하였다. 그 다음, EtOAc(250mL)로 추출하였다. 수층을 분리하고, 1M HCl로 pH를 3으로 조정하였다. EtOAc(200mL)로 추출하였다. 염수(20.0mL)로 유기층을 세척하고, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 35(33.0g, 145mmol, 87.6% 수율)을 갈색 고체로 제공하였다.
7-플루오로-9-포르밀-9H-플루오렌-2-카르복실산(36)의 제조:
DMF(210mL) 중의 화합물 35(33.0g, 145mmol)의 혼합물에 에틸 포르메이트(507g, 6.84mol)를 첨가하였다. 그 다음, t-BuOK(130g, 1.16mol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 2.5시간 동안 25℃까지 냉각시켰다. LCMS(생성물: RT=0.889)는 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 반응 용액에 물(150mL)을 첨가하고, EtOAc(500mL)로 추출하였다. 1M HCl로 수성상을 pH 3으로 조정한 후, 이를 EtOAc(500mL)로 추출하였다. 염수(120mL)로 유기층을 세척하고, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 36(30.0g, 조 생성물)을 황색 고체로 제공하였다.
7-플루오로-9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2-카르복실산(37)의 제조:
MeOH(210mL) 중의 화합물 36(30.0g, 117mmol)의 혼합물에 NaBH4(31.0g, 820mmol)를 첨가한 후, 혼합물을 25℃, N2 분위기에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS(생성물: RT=0.906min)는 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 반응 용액에 물(150mL)을 첨가하고, EtOAc(450mL)로 추출하였다. 1M HCl로 수성상을 pH 3으로 조정하였다. 그 다음, EtOAc(300mL)로 추출하였다. 염수(120mL)로 유기층을 세척하고, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 37(35.0g, 조 생성물)을 황색 고체로 제공하였다.
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-7-플루오로-9-(하이드록시메틸)-9H-플루오렌-2-카르복스아미드(38)의 제조:
DMF(14.0ml) 중의 화합물 37(2.00g, 7.74mmol), HOBt(1.15g, 8.52mmol), EDCl(1.63g, 8.52mmol) 및 DIPEA(2.50g, 19.4mmol)의 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음, 상기 혼합물에 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에틸아민(1.86g, 8.52mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS(생성물: RT=1.171min)는 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 물(20mL)로 반응 용액을 희석하고, EtOAc(20mL)로 추출하였다. 염수(20.0mL)로 유기층을 세척하고, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 15%~53%, 25min)로 조 생성물을 정제하여 화합물 38(1.00g, 2.12mmol, 48.7% 수율, 97.4% 순도)을 황색 오일로 제공하였다. 1H NMR: (400 MHz CDCl3): δ 8.07 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 2H), 7.35 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 1H), 7.18 - 7.08 (m, 1H), 7.02 (s, 1H), 4.16 - 3이다.96 (m, 3H), 3.76 - 3이다.56 (m, 14H), 3.33 (t, J = 4이다.8 Hz, 2H); LC-MS: m/z 459.1 (M+1)+.
(2-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메틸(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(39)의 제조:
0℃에서, DCM(1mL) 중의 화합물 38(0.1g, 1eq) 용액에 화합물 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 클로로포르메이트(10eq, DCM 용액)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS(출발 물질: RT=1.026min, 생성물: RT=1.084min)는 6.33%의 출발 물질이 남아 있고 28.3%의 원하는 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 포화 시트르산 수용액으로 반응 혼합물을 pH 6으로 조정하였다. DCM(2mLХ2)로 혼합물을 추출하였다. 합한 유기층을 염수(5.0ml)로 세척한 후, 분리시켰으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 200*40mm*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 25%~55%, 10min)로 잔류물을 정제하였다. 분취용-HPLC로 정제한 후, 용액을 동결건조시켜 화합물 39를 무색 오일로 제공하였다. LC-MS: m/z 600.2 (M+1)+.
실시예 9
2,5-디옥소피롤리딘-1-일N-(2-아세톡시에틸)-N-(2-((((2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에틸)글리시네이트(44)
tert-부틸 N-(2-아세톡시에틸)-N-(2-아미노에틸)글리시네이트(41)의 제조:
실온에서, 에틸 아세테이트(0.6ml) 중의 tert-부틸 N-(2-아세톡시에틸)-N-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)에틸)글리시네이트 40(75.0mg, 0.19mmol, 1.0eq) 용액에 Pd/C(40mg, 10%, 무수)를 첨가하였다. H2로 반응 혼합물을 3회 교체하였다. 그 다음, 혼합물을 H2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1H NMR 및 TLC로 반응을 모니터링하였다. (PE:EA=1:1)화합물 40: Rf=0.3; 화합물 41: Rf=0.05. 셀라이트 패드로 반응 용액을 여과하였다. 유기층을 농축시켜 생성물 41(48.4mg, 98%)을 담황색 오일로 제공하였다.
N-(2-아세톡시에틸)-N-(2-((((2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)-에톡시)에톡시)-에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에틸)글리신(43)의 제조:
상기에서 제조된 화합물 41을 EtOAc(0.6mL)에 재용해시켰다. 여기에 DCM(1mL) 중의 화합물 24(161.0mg, 0.19mmol) 용액을 첨가한 후, 피리딘(20μL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, LCMS로 모니터링하였다. 반응물에 EtOAc(5mL)를 첨가하고 1N HCl(2mL)로 세척하였으며, Na2SO4로 유기상을 건조시키고 여과하였다. 그 다음, 진공 하에 용매를 제거하였다.
조 생성물 42에 HCO2H(4mL)를 첨가하고 3시간 동안 60℃까지 가열시켰다. HPLC, 10~100% MeCN/H2O(0.1% TFA)로 생성물을 정제하여 원하는 화합물 43(31.4mg, 3단계에 걸쳐 18%)을 제공하였다.
2,5-디옥소피롤리딘-1-일N-(2-아세톡시에틸)-N-(2-((((2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-아미노)에틸)글리시네이트(44)의 제조:
화합물 43(9.7mg, 0.011mmol)을 DCM(0.037mL)에 용해시키고, 0℃에서, DCM(0.04mL) 중의 HOSu(2.56mg, 0.022mmol) 및 DCC(4.54mg, 0.022mmol) 용액으로 처리하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 여과하고 농축시켰다. 3~5배 부피의 Et2O를 첨가하여 용액이 탁해지고, 탁해진 용액을 원심분리하였다. 상층의 투명 용액을 따라내고, Et2O(2Х)로 바닥의 오일상 고체를 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 화합물 44(7.2mg, 65%)를 얻었다. LCMS: 1012 (M+1)+; HPLC 96% (UV254); 1H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 8.09 (p, J = 0.7 Hz, 2H), 7.84 (td, J = 8.3, 1.1 Hz, 4H), 6.92 (s, 3H), 4.43 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.31 (m, 1H), 4.16 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.79 - 3.55 (m, 47H), 3.38 - 3.24 (m, 8H), 3.00 - 2이다.78 (m, 11H), 2.01 (s, 3H).
실시예 10
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(52)
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-(메틸술포닐)벤즈아미드(48)의 제조:
DMF(15mL) 중의 화합물 47(1.0g, 5.0mmol) 용액에 화합물 22(1.3g, 6.0mmol), HATU(2.47g, 6.5mmol) 및 TEA(1.01g, 10.0mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 에틸 아세테이트 및 물로 용해시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3Х20mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였으며, 회전 증발을 통해 농축시켰다. 얻은 잔류물을 을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 48(900mg)을 황색 오일로 제공하였다.
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-((2-하이드록시-5-메톡시펜틸)술포닐)벤즈아미드(50)의 제조:
-78℃, N2 하에 무수 THF(30ml) 중의 화합물 48(400mg, 1mmol) 및 화합물 49(560mg, 5.5mmol) 용액에 KHMDS(5.5ml, 5.5mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 NH4Cl 수용액으로 반응 혼합물을 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3Х20mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였으며, 회전 증발을 통해 농축시켰다. CH2Cl2 중의 2% CH3OH 용액으로 용리하고, 얻은 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 50(168mg)을 황색 오일로 제공하였다.
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-카르바모일)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(51)의 제조:
무수 THF(5ml) 중의 화합물 50(100mg, 0.2mmol) 및 트리포스젠(89mg, 0.3mmol) 용액에 피리딘(64mg, 0.8mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 그 다음, 회전 증발을 통해 여과 및 농축하였다. 얻은 잔류물을 을 다음 단계에서 사용하였다.
무수 THF(5mL) 중의 얻은 잔류물을 (117mg, 0.2mmol) 및 HOSu(69mg, 0.6mmol) 용액에 피리딘(64mg, 0.8mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3Х10mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였으며, 회전 증발을 통해 농축시켰다. 얻은 잔류물을 분취용 TLC(CH2Cl2:CH3OH=30:1)로 정제하여 화합물 51(55mg)을 무색 오일로 제공하였다.
LCMS: m/z 644.25 [M+1].
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 8.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 (br s, 1H), 5.30 - 5.24 (m, 1H), 3.77 - 3.55 (m, 15H), 3.45 - 3.31 (m, 5H), 3.27 (s, 3H), 2.81 (s, 4H), 1.94 - 1.78 (m, 2H), 1.66 - 1.58 (m, 2H).
실시예 11
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(61)
메틸 5-((4-메톡시벤질)티오)-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트(54)의 제조:
디옥산(50mL) 중의 화합물 52(5.0g, 17.66mmol, 1.0eq), 화합물 53(4.09g, 26.5mmol, 1.5eq), Pd2(dba)3(1.62g, 1.76mmol, 0.1eq), Xant-phose(2.04g, 3.52mmol, 0.2eq) 및 DIEA(6.84g, 52.99mol, 3.0eq) 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻은 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 셀라이트 패드로 여과하였다. 여액을 농축시키고, 잔류물을 EtOAc(100mL)에 용해시켰다. 물(100mL)로 혼합물을 세척하고, EtOAc(100mlХ3)로 추출하였으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=100/1 내지 80/1 내지 50/1)로 정제하여 화합물 54(6.2g, 98%)를 담황색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=10/1, UV, Rf(화합물 52)=0.80, Rf(화합물 54)=0.60.
LC-MS: 379.10 [M+23]+.
메틸 5-머캅토-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트(55)의 제조:
마이크로웨이브를 통해 120℃에서 TFA(15ml) 중의 화합물 54(1.0g, 2.80mmol, 1.0eq) 및 TES(0.98g, 8.42mmol, 3.0eq) 용액을 1시간 동안 실행시켰다. 얻은 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 얼음물(20mL)에 붓고, 중탄산나트륨 수용액으로 혼합물을 pH=7~8로 조정하였다. EtOAc(30mLХ3)로 혼합물을 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 55(800mg)를 회색 오일로 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
TLC: PE/EA=5:1, UV, Rf(화합물 54)=0.80, Rf(화합물 55)=0.30.
메틸 5-(메틸티오)-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트(56)의 제조:
0℃에서, MeCN(50mL) 중의 화합물 55(4.8g, 20.32mmol, 1.0eq) 용액에 K2CO3(8.5g, 60.96mmol, 3.0eq) 및 CH3I(14.4g, 101.6mmol, 5.0eq)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 얻은 혼합물에 물을 첨가하고 EtOAc(50mLХ3)로 추출하였으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔(PE) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 56(4.0g, 78%)을 황색 고체로 제공하였다.
TLC: PE/EA=5:1, UV, Rf(화합물 55)=0.30, Rf(화합물 56)=0.85.
LC-MS: 251.00 [M+1]+.
메틸 5-(메틸술포닐)-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트(57)의 제조:
0℃에서, DCM(50mL) 중의 화합물 56(4.7g, 18.78mmol, 1.0eq) 용액에 m-CPBA(19.5g, 112.68mmol, 6.0eq)를 분획으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 용액으로 반응 혼합물을 켄칭하였다. DCM(50mLХ3)으로 혼합물을 추출하고, NaCl 용액(100mLХ3)으로 세척하였으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=100/1 내지 50/1 내지 20/1 내지 10/1)로 정제하여 화합물 57(2.97g, 56%)을 백색 고체로 제공하였다.
TLC: PE/EA=5:1, UV, Rf(화합물 56)=0.85, Rf(화합물 57)=0.10.
메틸 5-((2-하이드록시-5-메톡시펜틸)술포닐)-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트(58)의 제조:
-78℃에서, THF(10ml) 중의 화합물 57(0.9g, 3.543mmol, 1.0eq) 및 4-메톡시부탄알(0.724mg, 7.086mmol, 2.0eq) 용액에 KHMDS(5.4ml, 5.315mmol, 1.5eq)를 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 0℃에서, NH4Cl 수용액으로 반응물을 켄칭하고, EtOAc(30mlХ3)로 추출하였다. 포화 NaCl 용액(100mLХ3)으로 유기상을 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=20/1 내지 5/1 내지 2/1)로 정제하여 화합물 58(520mg, 40%)을 황색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=2:1, UV, Rf(화합물 57)=0.60, Rf(화합물 58)=0.20.
LC-MS: 385.10 [M+1]+.
5-((2-하이드록시-5-메톡시펜틸)술포닐)-2-(트리플루오로메틸)벤조산(59)의 제조:
0℃에서, MeOH/THF=1/1(6ml) 중의 화합물 58(510mg, 1.327mmol, 1.0eq) 용액에 5% LiOH(63.6mg, 2.654mmol, 2.0eq)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1N HCl로 반응 혼합물을 pH 2로 조정하였다. EtOAc(20mlХ3)로 혼합물을 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 59(505mg, 조 생성물, 100%)를 황색 오일로 제공하였다.
LC-MS: 393.10 [M+23]+.
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-5-((2-하이드록시-5-메톡시펜틸)술포닐)-2-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(60)의 제조:
DMF(12ml) 중의 화합물 59(1.0g, 3.24mmol, 1.0eq), 화합물 22(0.849g, 3.89mmol, 1.2eq), HATU(1.6g, 4.21mmol, 1.3eq) 및 TEA(0.982g, 9.72mol, 3.0eq) 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(30mlХ3)로 추출하였다. NaCl의 수용액(50mLХ3)으로 유기상을 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=20/1 내지 10/1 내지 5/1 내지 2/1 내지 1/1) 및 분취용 TLC로 잔류물을 정제하여 화합물 60(520mg, 34%)을 담황색 오일로 제공하였다.
LC-MS: 571.35 [M+1]+.
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(61)의 제조:
0℃에서, THF(3ml) 중의 화합물 60(0.3g, 0.5258mmol, 1.0eq) 용액에 분획으로 피리딘(0.166g, 2.103mmol, 4.0eq) 및 트리포스젠(0.39g, 1.3145mmol, 2.5eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 THF(3mL)에 용해시켰다. 0℃에서, 혼합물에 분획으로 피리딘(0.166g, 2.103mmol, 4.0eq) 및 HOSU(0.182g, 1.5774mmol, 3.0eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 물로 반응 혼합물을 켄칭하고, EtOAc(20mLХ3)로 추출하였다. Na2SO4로 유기상을 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 분취용-HPLC(0.1% HCOOH)로 잔류물을 정제하였다. EtOAc로 용리 용액을 추출하였다. Na2SO4로 유기상을 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 61(150mg, 40%)을 무색 오일로 제공하였다.
LC-MS: 712.35[M+1]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.31 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 6.3 Hz, 8H), 3.59 (q, J = 5.0 Hz, 6H), 3.36 (dt, J = 18.4, 5.4 Hz, 4H), 3.29 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.83 (s, 4H), 1.90 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.65 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
실시예 12
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-4-클로로페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(68)
메틸 2-클로로-5-(메틸티오)벤조에이트(63)의 제조:
실온에서, 화합물 62(10.0g, 49.53mmol, 1.0eq), CH3I(7.73g, 54.48mmol, 1.1eq) 용액에 K2CO3(7.5g, 54.48mmol, 1.1eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 얻은 혼합물에 물(200mL) 및 EtOAc(200mL)를 첨가하였다. 유기층을 분리하고, 5% LiCl 수용액으로 5회 세척하였으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 63(11.0g, 조 생성물)을 황색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=3/1, UV, Rf(화합물 62)=0.05, Rf(화합물 63)=0.85.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.61 (d, J = 2이다.3 Hz, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.48 (s, 3H).
메틸 2-클로로-5-(메틸술포닐)벤조에이트(64)의 제조:
0℃에서, DCM(60mL) 중의 화합물 63(6.0g, 27.78mmol, 1.0eq) 용액에 분획으로 m-CPBA(28.7g, 166.67mmol, 6.0eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 수용액으로 반응 혼합물을 켄칭하고, DCM(100mLХ3)으로 추출하였으며, NaCl 수용액(100mLХ3)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=40/1 내지 20/1 내지 3/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 64(5.6g, 81%)를 백색 고체로 제공하였다.
TLC: PE/EA=3/1, UV, Rf(화합물 63)=0.85, Rf(화합물 64)=0.45.
1HNMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.39 (d, J = 2이다.4 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.07 (s, 3H).
2-클로로-5-(메틸술포닐)벤조산(65)의 제조:
0℃에서, MeOH/THF=1/1(6ml) 중의 화합물 64(2.5g, 1.327mmol, 1.0eq) 용액에 5% LiOH 수용액(63.6mg, 2.654mmol, 2.0eq)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1N HCl로 반응물을 pH=3~4로 조정하고, 농축하였다. EtOAc(20mlХ3)로 수성상을 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 65(2.1g, 조 생성물)를 담황색 고체로 제공하였다.
TLC: PE/EA=3:1, UV, Rf(화합물 64)=0.45, Rf(화합물 65)=0.05.
1HNMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.36 (d, J = 2이다.3 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H).
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-2-클로로-5-(메틸술포닐)벤즈아미드(66)의 제조:
DMF(8ml) 중의 화합물 65(879mg, 3.74mmol, 1.0eq), 화합물 22(900mg, 4.12mmol, 1.1eq), HATU(1.85g, 4.87mmol, 1.3eq) 및 TEA(1.14g, 11.24mol, 3.0eq)의 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(20mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(30mLХ3)로 추출하였으며, NaCl 수용액(50mLХ3)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=100/1 내지 10/1 내지 5/1 내지 2/1 내지 1/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 66(995mg, 61%)을 무색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=0:1, UV, Rf(화합물 65)=0.25, Rf(화합물 66)=0.55.
1HNMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.04-7.96 (m, 2H), 7.73 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.70-3.53 (m, 14H), 3.33 (s, 2H), 3.15 (s, 3H).
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-2-클로로-5-((2-하이드록시-5-메톡시펜틸)술포닐)벤즈아미드(67)의 제조:
-78℃에서, THF(7ml) 중의 화합물 66(700mg, 1.609mmol, 1.0eq) 및 4-메톡시부탄알(657mg, 6.44mmol, 4.0eq) 용액에 KHMDS(5.4ml, 5.315mmol, 1.5eq)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 0℃에서, NH4Cl 수용액으로 반응물을 켄칭하고, 에틸 아세테이트(30mLХ3)로 추출하였으며, NaCl 수용액(100mLХ3)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=20/1 내지 5/1 내지 2/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 67(205mg, 25%)을 담황색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=0:1, UV, Rf(화합물 66)=0.55, Rf(화합물 67)=0.50.
1HNMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.01-7.92 (m, 2H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.16-4.01 (m, 2H), 3.72-3.53 (m, 12H), 3.42-3.35 (m, 3H), 3.31-3.25 (m, 5H), 1.73-1.39 (m, 4H).
1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-4-클로로페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(68)의 제조:
0℃에서, THF(2mL) 중의 화합물 67(200mg, 0.372mmol, 1.0eq) 용액에 분획으로 피리딘(117.5mg, 1.49mmol, 4.0eq) 및 트리포스젠(221mg, 0.744mmol, 2.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 THF(3mL)에 용해시켰다. 0℃에서, 혼합물에 분획으로 피리딘(117.5mg, 1.49mmol, 4.0eq) 및 HOSU(128mg, 1.12mmol, 3.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 물로 반응 혼합물을 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20mLХ3)로 추출하였으며, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 분취용-HPLC(0.1% HCOOH)로 잔류물을 정제시키고, 에틸 아세테이트로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 화합물 68(101mg, 27%)을 담황색 오일로 제공하였다.
TLC: PE/EA=0/1, UV, Rf(화합물 67)=0.50, Rf(화합물 68)=0.55.
LC-MS: 678.25 [M+1]+.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 7.94-7.86 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.29 (s, 1H), 3.74-3.52 (m, 15H), 3.44-3.31 (m, 5H), 3.28 (s, 3H), 2.82 (s, 4H), 1.87 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 1.61 (s, 2H).
실시예 13
7-((3-(2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-카르바졸-9-일)프로필)아미노)-7-옥소-1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(82)
tert-부틸 6-하이드록시헥사노에이트(70)의 제조:
t-BuOH(600ml) 중의 화합물 69(100g, 876mmol) 및 t-BuOK(108g, 964mmol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징한 후, 혼합물을 120℃, N2 분위기에서 2.5시간 동안 교반하였다. TLC(플레이트 1, 디클로로메탄/메탄올=10/1, 화합물 69, Rf=0.60, 화합물 70 Rf=0.50)는 화합물 69가 완전히 소모되고 새로운 스팟이 형성되었음을 나타내었다. 반응은 TLC에 따라 순수하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄(600mL)과 물(1.20L) 사이에 분배시켰다. 유기상을 분리하고, 염수(300ml)로 세척하였으며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하여 화합물 70(127g, 77.2% 수율)을 황색 오일로 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.66-3.63 (m, 2H), 2.25-2.21 (m, 2H), 1.66-1.57 (m, 5H), 1.44 (s, 9H), 1.40-1.39 (m, 2H).
tert-부틸 6-옥소헥사노에이트(71)의 제조:
DCM(400ml) 중의 화합물 70(64.0g, 340mmol) 용액에 Dess-Martin 시약(159g, 374mmol, 116ml)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(플레이트 1, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 70 Rf=0.40, 화합물 71 Rf=0.50)는 화합물 70이 완전히 소모되었음을 나타내었다. NaHCO3 수용액(200mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭하고, DCM(100mLХ3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 1/1, 플레이트 2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 71 Rf=0.50)로 잔류물을 정제하여 화합물 71(26.8g, 42.3% 수율)을 황색 오일로 제공하였다.
1 H NMR: (400 MHz CDCl3) δ ppm 2.44-2.21 (m, 4H), 1.65-1.60 (m, 4H), 1.43 (s, 9H).
tert-부틸 6-하이드록시-7-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵타노에이트(72)의 제조:
THF(30.0ml) 중의 화합물 11(7.15g, 31.9mmol) 용액에 n-BuLi(2.5M, 11.60ml)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, -78℃에서, THF(5.00ml) 중의 화합물 71(5.40g, 29.0mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. TLC(플레이트 1, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 71 Rf=0.70, 화합물 72 Rf=0.40)는 화합물 71이 완전히 소모되었음을 나타내었다. NH4Cl 수용액(50.0mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭한 후, EtOAc(20.0mLХ3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30.0mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=30/1 내지 1/1, 플레이트 2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 72 Rf=0.40)로 잔류물을 정제하여 화합물 72(8.57g, 72.0% 수율)를 황색 고체로 제공하였다.
1 H NMR: (400 MHz CDCl3) δ ppm 8.10-8.08 (d, J = 8.4Hz, 2H), 7.88-7.86 (d, J = 8Hz, 2H), 4.21-4.20 (m, 1H), 3.31-3.16 (m, 3H), 2.23-2.18 (m, 2H), 1.61-1.35 (m, 15H).
6-하이드록시-7-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄산(73)의 제조:
화합물 72(1.00g, 2.44mmol)를 마이크로웨이브 튜브 중의 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로-2-프로판올(15.0ml)에 첨가하였다. 밀봉 튜브를 마이크로웨이브에서 1시간 동안 110℃에서 가열하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 72: Rf=0.5, 화합물 73: Rf=0.2)는 화합물 72가 완전히 소모되었음을 나타내었다. 상기 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 조 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하여 화합물 73(0.860g, 2.43mmol, 99.6% 수율)을 황색 검으로 제공하였다.
1 H NMR: (400 MHz DMSO) δ ppm 11.93 (s, 1H), 8.00-8.13 (m, 4H), 5.11-5.17 (m, 1H), 4.85 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.43-3.48 (m, 2H), 2.16 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.33-1.46 (m, 6H).
디메틸 2-니트로-[1,1'-비페닐]-4,4'-디카르복실레이트(75)의 제조:
H2SO4(330ml) 중의 화합물 74(33.0g, 122mmol) 용액을 -5℃까지 냉각시키고, 1시간에 걸쳐 교반하면서 HNO3(13.8g, 127mmol, 9.85ml, 58% 순도)와 H2SO4(22.8g, 232mmol, 12.4mL)의 혼합물을 적가하는 동시에, 온도를 -5~0℃로 유지하였다. 그 다음, 혼합물을 -5~0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1, 생성물 Rf=0.50)는 화합물 74(Rf=0.60)가 소모되어 더 큰 극성을 갖는 새로운 주요 스폿이 형성되었음을 나타내었다. 물(300mL)로 혼합물을 희석하고, 에틸 아세테이트(50.0mLХ2)로 추출하였다. 염수(50.0mL) 및 중탄산나트륨 용액(100mL)으로 추출물을 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1 내지 0/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 75(16.0g, 50.6mmol, 41.4% 수율, 99.6% 순도)를 백색 고체로 제공하였다.
1 H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ 8.57 (s, 1H), 8.31 - 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 - 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 - 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 - 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.96 (s, 3H).
디메틸 9H-카르바졸-2,7-디카르복실레이트(76)의 제조:
1,2-디클로로벤젠(112ml) 중의 화합물 75(20g, 63.4mmol), PPh3(41.6g, 159mmol)의 혼합물을 25℃에서 탈기시키고, N2로 3회 퍼징한 후, 혼합물을 210℃, N2 분위기에서 1.5시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 화합물 75: Rf=0.43)는 화합물 75가 완전히 소모되고 새로운 주요 스팟이 형성되었음을 나타내었다. 반응은 TLC에 따라 순수하였다. 반응물을 25℃까지 냉각시키고, 메탄올(200mL)을 첨가하였다. 15분 후, 얻은 고체 현탁액을 여과하고 수집하여 화합물 76(12.0g, 42.4mmol, 66.8% 수율)을 회색 고체로 제공하였다.
1 H NMR: (400 MHz, DMSO)δ 11.81 (s, 1H), 8.33 (d, J = 4이다.2 Hz, 2H), 8.17 (s, 2H), 7.82 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.91 (s, 6H).
디메틸 9-(3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로필)-9H-카르바졸-2,7-디카르복실레이트(77)의 제조:
0℃에서, DMF(80.0ml) 중의 NaH(2.30g, 57.6mmol, 60% 순도) 용액에 화합물 76(13.6g, 48.0mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, tert-부틸 N-(3-브로모프로필)카바메이트(22.9g, 96.0mmol)를 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1, 화합물 76: Rf=0.2, 생성물:Rf=0.7)는 화합물 76이 완전히 소모되었음을 나타내었다. NH4Cl(100mL) 수용액으로 반응 혼합물을 희석하고 EtOAc(150mLХ2)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 1/1)로 잔류물을 정제하여 화합물 77(16.4g, 37.2mmol, 77.6% 수율)을 황색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, DMSO) δ 8.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.31 (s, 2H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.03 (t, J = 4이다.8 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.74 (s, 6H), 2.99-3.00 (m, 2H), 1.87-1.98 (m, 2H), 1.22-1.36 (m, 9H).
9-(3-((부톡시카르보닐)아미노)프로필)-9H-카르바졸-2,7-디카르복실산(78)의 제조:
THF(30.0mL), MeOH(30.0mL) 및 H2O(10.0mL) 중의 화합물 77(8.00g, 18.2mmol)과 NaOH(2.18g, 54.5mmol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징한 후, 혼합물을 80℃, N2 분위기에서 12시간 동안 교반하였다. TLC(디클로로메탄/메탄올=10/1, 화합물 77: Rf=0.8)은 화합물 77이 완전히 소모되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 100ml 얼음물에 조심스럽게 붓고, 1N HCl로 pH=4로 희석하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 20.0mL 물로 필터 케이크를 세척하였으며, 진공에서 건조시켰다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하여 화합물 78(5.00g, 12.1mmol, 66.8% 수율)을 담황색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, CDCl3) δ 13.01 (s, 2H), 8.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.25 (s, 2H), 7.85 (q, J = 8.0 Hz, 2H), 4.56 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.97-3.00 (m, 2H), 1.89-1.99 (m, 2H), 1.37 (m, 8H).
tert-부틸 (3-(2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-카르바졸-9-일)프로필)카바메이트(79)의 제조:
DMF(50.0ml) 중의 화합물 78(5.00g, 12.1mmol) 용액에 HATU(11.5g, 30.3mmol), DIPEA(6.27g, 48.5mmol) 및 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에틸아민(5.29g, 24.3mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS는 원하는 검출 MS를 갖는 새로운 피크(화합물 79: Rt=0.752min)를 나타내었다. 물(90.0mL)로 반응 혼합물을 희석하고 2-Me-THF(50.0mLХ2)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(50.0mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 역상 HPLC(0.1% NH4HCO3 조건)로 조 생성물을 정제하여 화합물 79(4.00g, 4.92mmol, 40.6% 수율)를 백색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, DMSO) δ 8.68 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 8.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.19 (s, 2H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.03 (t, J = 4이다.8 Hz, 2H), 4.53 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.54-3.65 (m, 26H), 3.40-3.41 (m, 4H), 3.38-3.40 (m, 2H), 3.03-3.05 (m, 2H), 1.99-2.02 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).
9-(3-아미노프로필)-N2,N7-비스(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-9H-카르바졸-2,7-디카르복스아미드(80)의 제조:
DCM(25.0mL) 중의 화합물 79(3.00g, 3.69mmol) 용액에 HCl/MeOH(5.00mL)를 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(디클로로메탄/메탄올=10/1, 화합물 79: Rf=0.6, 화합물 80: Rf=0.05)는 화합물 79가 완전히 소모되었음을 나타내었다. 상기 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하여 화합물 80(2.70g, 3.60mmol, 97.7% 수율, HCl 염)을 황색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, DMSO) δ 8.78 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.36 (s, 2H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.05 (s, 3H), 7.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.63 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.65-3.60 (m, 17H), 3.50-3.56 (m, 5H), 3.36-3.37 (m, 5H), 2.88-2.91 (m, 2H), 2.14-2.18 (m, 2H).
N2,N7-비스(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-9-(3-(6-하이드록시-7-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄아미도)프로필)-9H-카르바졸-2,7-디카르복스아미드(81)의 제조:
DCM(15.0ml) 중의 화합물 80(1.80g, 2.40mmol, HCl), 화합물 73(851mg, 2.40mmol), HOBt(487mg, 3.60mmol), EDCI(691mg, 3.60mmol) 및 Et3N(2.19g, 21.6mmol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징한 후, 혼합물을 25℃, N2 분위기에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 원하는 검출 MS를 갖는 새로운 피크(화합물 81: Rt=1.21min)를 나타내었다. 물(30.0mL)로 반응 혼합물을 희석하고, EtOAc(20.0mLХ3)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30.0mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Xtimate C18 10u 250mmХ80mm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 35%~65%, 21min)로 잔류물을 정제하여 화합물 81(1.00g, 953umol, 39.7% 수율)을 담황색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, DMSO) δ 8.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.20 (s, 2H), 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.92-7.93 (m, 1H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.89 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.93 (s, 1H), 3.56-3.67 (m, 30H), 3.40-3.42 (m, 5H), 3.15-3.16 (m, 2H), 2.01-2.11 (m, 4H), 1.27-1.51 (m, 7H).
7-((3-(2,7-비스((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)-9H-카르바졸-9-일)프로필)아미노)-7-옥소-1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(82)의 제조:
0℃에서, ACN(6.00ml) 중의 화합물 81(500mg, 477umol) 및 N,N'-디숙신이미딜 카보네이트(977mg, 3.81mmol) 용액에 피리딘(188mg, 2.38mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 원하는 검출 MS를 갖는 새로운 피크(생성물:Rt=2.26min)를 나타내었다. 물(20.0mL)로 반응 혼합물을 희석하고, DCM(10.0mLХ5)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(20.0mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 제공하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 250Х50mmХ10um; 이동상: [물(0.04% HCl)-ACN]; B%: 50%~70%, 10min)로 잔류물을 정제하여 화합물 82(0.102g, 79.4umol, 16.7% 수율, 92.7% 순도)를 황색 고체로 제공하였다.
1 HNMR: (400 MHz, DMSO) δ 8.6 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.13-8.17 (m,4H), 8.01-8.11 (m, 3H), 7.96 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.16-5.18 (m, 1H), 4.49 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.91-4.12 (m, 13H), 3.55-3.59 (m, 14H), 4.49-4.53 (m, 4H), 3.34-3.36 (m, 4H), 3.09-3.10 (m, 2H), 2.79 (s, 4H), 1.97-2.06 (m, 4H), 1.61-1.68 (m, 2H), 1.42-1.44 (m, 2H), 1.23-1.25 (m, 2H).
HPLC: 체류 시간: 2.632min, 면적 백분율: 92.0%.
LCMS: 체류 시간: 2.630min, M+H+=1190.4.
실시예 14
7-아지도-1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바모일)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(86)
N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-(메틸술포닐)벤즈아미드(84)의 제조:
디메틸포름아미드(40ml) 중의 화합물 83(2.0g, 10mmol, 1.0eq) 및 화합물 22(2.18g, 10mmol, 1.0eq) 용액에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(4.56g, 12mmol, 1.2eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.0g, 20mmol, 2.0eq)을 첨가하였다. 실온에서 혼합물을 밤새 교반하였다. LCMS 및 TLC로 반응을 모니터링하였다. 물(50mL)로 혼합물을 희석하고, 에틸 아세테이트(5Х150mL)로 추출하였으며, 염수(100mL)로 세척하였다. 황산나트륨으로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄: 메탄올, 97:3)로 잔류물을 정제하여 화합물 84(2.5g, 63%)를 제공하였다.
TLC: 디클로로메탄: 메탄올=10: 1, UV 254nm, I2에 의한 발색, R f : (화합물 83 )=0.3; R f : (화합물 84 )=0.5.
3-((7-아지도-2-하이드록시헵틸)술포닐)-N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)벤즈아미드(85)의 제조:
-78℃에서, 테트라하이드로푸란(30ml) 중의 화합물 84(2.0g, 5.0mmol, 1.0eq) 용액에 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드(1.0M, 15mL, 15mmol, 3.0eq)를 천천히 첨가하였다. 그 다음, 화합물 3(2.1g, 15mmol, 3.0eq)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC로 반응을 모니터링하였다. 그 다음, 포화 염화암모늄 수용액(30mL)으로 혼합물을 켄칭하고, 에틸 아세테이트(2Х30mL)로 추출하였다. 염수(20mL)로 유기층을 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄: 메탄올, 97:3)로 잔류물을 정제하여 화합물 85(400mg, 15%)를 제공하였다.
TLC: 디클로로메탄: 메탄올=10: 1, UV 254nm, R f : ( 화합물 84 )=0.5; R f : ( 화합물 85 )=0.5.
7-아지도-1-((3-((2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-에톡시)에틸)카르바모일)페닐)술포닐)헵탄-2-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(86)의 제조:
테트라하이드로푸란(4mL) 중의 화합물 85(400mg, 0.74mmol, 1.0eq)의 혼합물에 트리포스젠(372mg, 1.25mmol, 1.7eq) 및 피리딘(117mg, 1.48mmol, 2.0eq)을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여액에 피리딘(117mg, 1.48mmol, 2.0eq) 및 N-하이드록시숙신이미드(176mg, 0.89mmol, 1.2eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 에틸 아세테이트(3Х5mL)로 혼합물을 추출하고, 염수(5mL)로 세척하였다. 그 다음, 황산나트륨으로 유기층을 건조시키고, 여과시켰으며, 감압 하에 농축시켰다. 분취용-HPLC로 잔류물을 정제하여 화합물 86(270mg, 54%)을 무색 오일로 제공하였다.
LCMS: [M+1]+=683.
1 HNMR (400 MHz, CD 3 OD): δ 8.32 (s, 1H), 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 3.59-3.66 (m, 16H), 3.37-3.32 (m, 2H), 3.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.81 (s, 4H), 1.79 (s, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.39 (s, 4H).
실시예 15
1-아지도-12-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-13-옥소-19-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-3,6,9-트리옥사-12-아자노나데칸-18-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(89)
N,N-비스(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-6-하이드록시-7-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)헵탄아미드(88)의 제조:
디메틸포름아미드(3mL) 중의 화합물 73(102mg, 0.3mmol, 1.2eq) 용액에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(136mg, 0.76mmol, 1.5eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(124mg, 0.96mmol, 4.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 그 다음, 상기 혼합물에 화합물 87(100mg, 0.24mmol, 1.0eq)을 첨가하고 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC로 반응을 모니터링하였다. 물(10mL)로 혼합물을 희석하고, 에틸 아세테이트(5Х10mL)로 추출하였으며, 염수(10mL)로 세척하였다. 황산나트륨으로 유기층을 건조시키고, 여과시켰으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄: 메탄올, 98:2)로 잔류물을 정제하여 화합물 88(50mg, 28%)을 제공하였다.
TLC: 디클로로메탄: 메탄올=10: 1, UV 254nm, I2에 의한 발색, R f : ( 화합물 87 )=0.5; R f : ( 화합물 88 )=0.4.
1-아지도-12-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-13-옥소-19-((4-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-3,6,9-트리옥사-12-아자노나데칸-18-일(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(89)의 제조:
테트라하이드로푸란(4ml) 중의 화합물 88(400mg, 0.53mmol, 1.0eq)의 혼합물에 트리포스젠(267mg, 0.9mmol, 1.7eq) 및 피리딘(84mg, 1.06mmol, 2.0eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여액에 피리딘(84mg, 1.06mmol, 2.0eq) 및 N-하이드록시숙신이미드(73mg, 0.64mmol, 1.2eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 에틸 아세테이트(3Х5mL)로 혼합물을 추출하고, 염수(5mL)로 세척하였다. 그 다음, 황산나트륨으로 혼합물을 건조시키고, 여과시켰으며, 감압 하에 농축시켰다. 분취용-HPLC로 잔류물을 정제하여 화합물 89(85mg, 18%)를 오일로 제공하였다.
LCMS: [M+1]+=897.
1 HNMR (400 MHz, CD 3 OD): δ 8.15-8.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.96-7.94 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.27 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 3.73 (m, 1H), 3.59-3.61 (m, 26H), 3.35 (m, 6H), 2.81 (s, 4H), 3.46-3.42 (m, 2H), 1.79-1.77 (m, 2H), 1.58 (m, 2H) and 1이다.39-1.37 (m, 2H).
실시예 16
2,5-디옥소피롤리딘-1-일(1-((4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일)카보네이트(94)
(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)(메틸)술판(91)의 제조:
아세토니트릴(100mL) 중의 화합물 90(5.0g, 27.9mmol, 1.0eq), 이소아밀 니트리트(4.9g, 41.9mmol, 1.5eq) 및 1,2-디메틸디술판(37.0g, 391mmol, 14.0eq)의 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 1N HCl 용액에 붓고, 에틸 아세테이트(100mLХ3)로 추출하였다. 포화 염화나트륨 용액(200mL)으로 유기층을 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르: 에틸 아세테이트, 100:1~50:1)로 잔류물을 정제하여 화합물 91(2.5g, 43%)을 갈색 오일로 제공하였다.
4-플루오로-1-(메틸술포닐)-2-(트리플루오로메틸)벤젠(92)의 제조:
0℃에서, 질소 분위기 하에 디클로로메탄(100mL) 중의 화합물 91(2.5g, 11.9mmol, 1.0eq) 용액에 3-클로로퍼벤조산(6.4g, 29.8mmol, 2.5eq)을 첨가하였다. 실온에서 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 혼합물을 포화 아황산나트륨 용액(300mL)에 붓고, 디클로로메탄(300mLХ3)으로 추출하였다. 포화 염화나트륨 용액(200mL)으로 유기층을 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰으며, 감압 하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르: 에틸 아세테이트, 100:1~10:1)로 잔류물을 정제하여 화합물 92(1.2g, 42%)를 갈색 고체로 제공하였다.
1-((4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-올(93)의 제조:
-78℃에서, 질소 분위기 하에 무수 테트라하이드로푸란(30mL) 중의 화합물 92(1.6g, 6.6mmol, 1.0eq) 용액에 n-부틸 리튬(2.0M, 4.3mL, 8.6mmol, 1.3eq)을 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, -78℃에서, 무수 테트라하이드로푸란(6mL) 중의 화합물 49(878mg, 8.6mmol, 1.3eq) 용액을 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석은 원하는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 그 다음, 얼음물(180mL)로 혼합물을 켄칭하고, 에틸 아세테이트(180mLХ3)로 추출하였다. 무수 황산나트륨으로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 93(1.0g, 44%)을 제공하였다.
2,5-디옥소피롤리딘-1-일(1-((4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)술포닐)-5-메톡시펜트-2-일)카보네이트(94)의 제조:
실온에서, 질소 분위기 하에 무수 테트라하이드로푸란(15ml) 중의 화합물 93(900mg, 2.35mmol, 1.0eq) 및 트리포스젠(1.19g, 4.0mmol, 1.7eq)의 교반 용액에 피리딘(371.3mg, 4.7mmol, 2.0eq)을 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 무수 테트라하이드로푸란(15mL)에 용해시키고, N-하이드록시숙신이미드(811mg, 7.05mmol, 3.0eq) 및 피리딘(556.9mg, 7.05mmol, 3.0eq)으로 순차적으로 처리하였다. 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액에 부었다. 에틸 아세테이트로 잔류물을 추출하고 염수로 세척하였다. 무수 황산나트륨으로 유기층을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 분취용-HPLC로 잔류물을 정제하여 화합물 94(450mg, 40%)를 백색 고체로 제공하였다. LCMS: [M+1] = 486; 1HNMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.38-8.35 (m, 1H), 7.82-7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.68-7.64 (m, 1H), 5.35-5.33 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.96-3.90 (m, 1H), 3.79-3.75 (m, 1H), 3.39 (m, 3H), 3.30 (s, 3H), 2.83 (s, 4H), 1.83 (m, 2H) and 1이다.63-1.61 (m, 2H).
실시예 17
mPEG2-Fmoc-20K-NHS
US20060293499A1로부터의 수정된 문헌 절차에 따라 실시예 17의 mPEG2-Fmoc-20K-NHS PEG 시약을 생성하였다. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 8.57 (m, 2H), 8.22 (m, 1H), 8.08-7.99 (m, 4H), 6.44 (s, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.54 (m, 1H), 3.51 (br, 1800H), 2.82 (s, 4H). HPLC: 순도 95.9%; GPC: 순도 92.3%; MALDI/GPC: 21922Da.
실시예 18
4-(23-아지도-4-옥소-6,9,12,15,18,21-헥실옥시-3-아자트리코사노일아미도)벤질(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(101)
tert-부틸 [(4-하이드록시메틸-페닐아미노카르보닐)-메틸]-카바메이트(97)의 제조:
DMF(20mL) 중의 화합물 95, Boc 글리신(3.0g, 17.125mmol, 1eq) 용액에 화합물 96, (4-아미노-페닐)-메탄올(2.52g, 20.550mmol, 1.2eq), EDCI. HCl(6.5g, 34.250mmol, 2eq) 및 HOBt(4.62g, 34.250mmol, 2eq)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물에 DIPEA(8.9mL, 51.375mmol, 3eq), DMAP(4.18g, 34.250mmol, 2eq)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 생성물 질량이 m/Z=281.10임을 나타내는 LCMS로 생성물의 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 얻은 조 생성물을 DCM 중 MeOH의 구배(1 내지 3%)를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 97을 1.82g, 38% 수율로 제공하였다.
TLC: MeOH/DCM=5/95: R f (화합물 97)=0.6, R f (화합물 96)=0.4
화합물 97의 LCMS: 281.10 (M+H)+.
2-아미노-N-(4-하이드록시메틸-페닐)-아세트아미드(98)의 제조:
DCM(10mL) 중의 화합물 97, tert-부틸 [(4-하이드록시메틸-페닐아미노카르보닐)-메틸]카바메이트(1.11g, 3.959mmol) 용액에 TFA(5.5mL)를 첨가하고, 얻은 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS로 반응 완료를 확인하였다. Et3N을 pH=8.0이 될 때까지 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 반응 혼합물을 농축하여 조 화합물 98을 592mg, 83% 수율로 제공하여, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-아지도-에톡시)-에톡시]-에톡시}-에톡시)-에톡시]-에톡시}-N-[(4-하이드록시메틸-페닐아미노카르보닐)-메틸]-아세트아미드(100)의 제조:
DCM(10mL) 중의 화합물 99, {2-[2-(2-{2-[2-(2-아지도-에톡시)-에톡시]-에톡시}-에톡시)-에톡시]-에톡시}-아세트산(360mg, 0.9852mmol, 1eq) 용액에 화합물 98, 2-아미노-N-(4-하이드록시메틸-페닐)-아세트아미드(433mg, 1.4779mmol, 1.5eq) 및 HOBt(4.62g, 34.250mmol, 2eq)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물에 DIPEA(0.7ml, 3.9408mmol, 4eq)를 첨가하여 투명 용액이 형성되고, 상기 투명 용액은 다시 침전을 생성하였다. 불균질 용액을 0℃까지 냉각하고 EDCI.HCl(227mg, 1.1822mmol, 1.2eq)을 첨가하였으며, 반응 혼합물을 실온으로 가열하고, 5시간 동안 교반하였다. 생성물 질량이 m/Z=527.85임을 나타낸 LCMS로 생성물의 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 얻은 조 생성물을 DCM 중 MeOH의 구배(1 내지 5%)를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 100을 389mg, 75% 수율로 제공하였다.
TLC: MeOH/DCM=5/95: R f (화합물 100)=0.6, R f (화합물 98)=0.3
화합물 100의 LCMS: 527.85 (M+H)+
4-(23-아지도-4-옥소-6,9,12,15,18,21-헥실옥시-3-아자트리코사노일아미도)벤질(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)카보네이트(101)의 제조:
실온에서, 무수 ACN(5ml) 중의 화합물 100, 2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-아지도-에톡시)-에톡시]-에톡시}-에톡시)-에톡시]-에톡시}-N-[(4-하이드록시메틸-페닐아미노카르보닐)-메틸]-아세트아미드(529mg, 1.002mmol, 1eq) 용액에 DSC(514mg, 2.0054mmol, 2eq)를 첨가한 후, 피리딘(162μL, 2.0054mmol, 2eq)을 첨가하였다. 반응물을 5시간 동안 교반하였다. 생성물 질량이 m/Z=668.80임을 나타낸 LCMS로 생성물의 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 얻은 조 생성물을 DCM 중 ACN의 구배(0 내지 100%)를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 101을 285mg, 42% 수율로 제공하였다. 화합물 101의 LCMS: 668.80 (M+H)+. 1 H NMR (300 MHz, 아세톤-d6) δ 9.32 (br.s, 1H), 7.90 (br.s, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.35 (s, 2H), 4.13 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.78 - 3.57 (m, 22H), 3.36-3.39 (m, 2H), 2.88 (s, 4H) ppm.
실시예 19
mPEG2-Fmoc-Bn-20K-NHS
US20060293499A1 및 Bioconjugate Chemistry 2003, 14, 395-403로부터의 수정된 문헌 절차에 따라 실시예 19의 mPEG2-Fmoc-Bn-20K-NHS를 생성하였다. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 9.14 (br, 1H), 8.56 (m, 2H), 8.25-8.17 (m, 2H), 8.04-7.97 (m, 4H), 7.44 (m, 2H), 7.33 (m, 2H), 5.77 (s, 2H), 4.69 (m, 2H), 4.46 (m, 1H), 3.51 (br, 1800H), 2.81 (s, 4H).
HPLC: 순도 94.7%; GPC: 순도 91.2%; MALDI/GPC: 21048Da.
실시예 20
20kDa Y-PEG-DBCO
테프론 코팅된 자기 교반 막대가 장착된 건조한 둥근 바닥 플라스크에 20kDa Y-PEG-NHS(1.08g, 50.0μmol, 1.0당량) 및 PyClocK(0.033g, 60.0μmol, 1.2당량)를 첨가하였다. 플라스크를 고무 격막으로 밀봉하고 불활성 아르곤 분위기에 두었다. 무수 CH2Cl2(5.0ml)를 첨가한 후, N-메틸모르폴린(6.10μL, 55.0μmol, 1.1당량)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. DBCO-아민(0.028mg, 100μmol, 2.0당량)을 고체로서 한 번에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 유리 피펫에 흡입시켜 격렬하게 교반하면서 2-프로판올(100mL)에 적가하였다. 백색 침전물(PEG 물질)을 얻고, 얻은 현탁액을 4℃까지 냉각시켜 여과(진공 여과)하였으며, 빙냉한 2-프로판올(3Х50mL)로 세척하였다. 분리된 침전물을 미리 칭량된 falcon 튜브(Х2)로 옮기고, 뜨거운(40℃) 아세톤(90mL)에 용해시켰다. 용액을 빙욕에서 15분 동안 냉각시켜 PEG 물질의 침전을 일으켰다. 원심분리(10500rpm, 20min, 4℃)로 현탁액을 펠렛으로 침전시키고 상청액을 조심스럽게 버렸다. 침전 펠렛을 신선하고 뜨거운 아세톤(40℃)에 재용해시키고, 빙욕에서 냉각시켜 침전을 일으켜 다음 단계 원심분리/디캔팅을 수행하였다. 이 과정을 총 4회 반복하였다. 진공에서 침전 펠렛을 건조시켰다. 분리된 백색 고체, 질량=1.08g(99%). RP-HPLC 체류 시간=6.9min.
실시예 21
15kDa Y-PEG-DBCO
테프론 코팅된 자기 교반 막대가 장착된 건조한 둥근 바닥 플라스크에 15kDa Y-PEG-NHS(1.13g, 74.9μmol, 1.0당량) 및 PyClocK(0.082g, 148μmol, 2.0당량)를 첨가하였다. 플라스크를 고무 격막으로 밀봉하고 불활성 아르곤 분위기에 두었다. 무수 CH2Cl2(18mL)를 첨가한 후, N-메틸모르폴린(18μL, 164μmol, 2.2당량)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. CH2Cl2(2mL) 중의 DBCO-아민(52mg, 188μmol, 2.5당량) 용액을 N-메틸모르폴린(18μL, 164μmol, 2.2당량)과 함께 한 번에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 추가로 교반하였다. 조 반응 혼합물을 진공에서 농축한 후, 뜨거운 2-프로판올(120mL)을 흡수하였다. 얻은 용액을 빙욕에서 냉각시켜 침전물을 형성하였다. 분리된 침전물을 미리 칭량된 falcon 튜브(Х3)에 옮기고, 원심분리(12000rpm, 30min, -3℃)로 침전물을 침강시켰다. 침전을 2-프로판올(120mL)로 1회 반복하고 아세톤(3Х120mL)으로 3회 반복하였다. 침전 펠렛을 진공에서 건조시켰다. 분리된 백색 고체, 질량=995mg(88%). RP-HPLC 체류 시간=6.9min.
실시예 22
17kDa Y-PEG-DBCO
테프론 코팅된 자기 교반 막대가 장착된 건조한 둥근 바닥 플라스크에 17kDa Y-PEG-NHS(1.0g, 57.2μmol, 1.0당량) 및 CH2Cl2(18.0mL)를 첨가하였다. 플라스크를 고무 격막으로 밀봉하고 불활성 아르곤 분위기에 두었다. DBCO-아민(40mg, 145μmol, 2.5당량)을 첨가한 후, N-메틸모르폴린(19μL, 173μmol, 3.0당량)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 진공에서 농축한 후, 뜨거운 아세톤(90mL)을 흡수하였다. 얻은 용액을 빙욕에서 30분 동안 냉각시켜 침전물을 형성하고, 원심분리(11000rpm, 30min, -8℃)로 침전물을 침강시켰다. 용매를 디캔팅하고, 침전 과정을 2-프로판올(90mL)로 1회 반복하고 아세톤(2Х90mL)으로 2회 반복하였다. 얻은 고체를 진공에서 건조시켰다. 분리된 백색 고체, 질량=910mg(91%). RP-HPLC 체류 시간=6.7min.
실시예 23
7.5kDa PEG-DBCO
7.5kDa PEG-DBCO 시약은 JenKem Technology USA에서 구입하였다. HPLC: 순도 98.0%; GPC: 순도 99.1%; MALDI: 7481Da.
실시예 24
rIL-2의 제조:
도 1에 도시된, 상기 폴리펩티드를 코딩하는 IL-2 유전자를 pET(T7) 발현 벡터 중 하나에 클로닝하였다. 대장균(E. coli)BL21 균주(DE3)에서 상기 단백질을 발현하였다. IL-2 단백질을 봉입체로서 대장균(E. coli)에서 발현하였다. 발효 후, 원심분리를 통해 세포를 수거하였다. 세균 펠렛을 향후 균질화를 위해 -80℃에서 저장하였다. 동결 펠렛을 세척 완충액(50mM Tris, 5mM EDTA, pH 8.0)에 재현탁하고 13860Хg에서 30분 동안 원심분리하였다. 펠릿을 균질화 완충액(50mM Tris, 5mM EDTA, 1mM PMSF, pH 8.0)에 재현탁하고 미세유동화기(Microfluidics로부터 유래됨, Newton, Massachusetts, USA의 M-l 10P)로 4℃에서 1회 균질화하였다. 세척 완충액에서 균질액을 다시 세척하였다. 완충액은 50mM Tris, 5mM EDTA, 2% Triton X-100, pH 8.0; 50mM Tris, 5mM EDTA, 1% 데옥시콜산나트륨, pH 8.0; 50mM Tris, 5mM EDTA, 1M NaCl, pH 8.0;을 순차적으로 사용하고, 봉입체 펠렛을 3회 세척하였다. 세척 후, 조 IL-2 봉입체를 얻었다.
조 IL-2 봉입체를 6M 구아니딘, 2mM EDTA, 100mM Tris, 50mM 디티오트레이톨(DTT)에 용해시켰다. 50℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, H2O를 첨가하여 구아니딘 농도를 4.8M으로 감소시켰다. 13860Хg에서 1시간 동안 원심분리 후, H2O를 첨가하여 상청액을 3.5M 구아니딘 농도로 희석하였다. 100% 아세트산으로 pH를 5.0으로 조정하였다. 혼합물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션하고, 13860Хg에서 1시간 동안 원심분리하였다. 펠렛을 3.5M 구아니딘, 5mM DTT, 20mM 아세테이트, pH 5.0 완충액에 재현탁하고 13860Хg에서 1시간 동안 원심분리하였다. 상기 펠렛(IL-2 봉입체)을 재차 세척하였다.
깨끗하고 감소된 IL-2 봉입체를 6M 구아니딘, 0.1mM CuCl2, 100mM Tris pH 8 완충액에 용해시키고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 리폴딩된 IL-2를 13860Хg에서 60분 동안 원심분리하여 침전물을 제거하였다. Pellicon XL TFF 멤브레인 시스템(Millipore Corporation, USA)으로 상청액을 농축하였다.
리폴딩되고 농축된 IL-2를 Sephacryl S-100 HR 수지로 채워진 BPG 컬럼(GE Healthcare Bio-Sciences AB, Uppsala Sweden)에 로딩하였다. 러닝 완충액은 2M 구아니딘, 20mM Tris pH 8이고, 유속은 25mL/min이었다. IL-2 단량체 피크 모이어티를 혼합하였다. 이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC 크로마토그래피)와 같은 다른 적합한 정제 방법을 사용할 수도 있음에 유의해야 한다.
4℃에서, Pellicon XL TFF 멤브레인 시스템(Millipore Corporation, USA)을 사용하여 IL-2 단량체 모이어티 혼합물을 약 1~2mg/mL로 농축하였다. 농축된 IL-2 단량체 용액을 제제 완충액의 여러 회 변경을 통해 최종 제제 완충액(10mM 아세트산-Na, 5% 트레할로스, pH 4.5)으로 투석하여 구아니딘 농도를 0.1mM 미만으로 감소시켰다. 제형화된 IL-2 용액을 0.22μm 필터를 통과시켜 멸균하고 향후 사용을 위해 -80℃에 보관하였다.
실시예 25
실시예 1의 rIL-2를 사용한 NHS 접합
[rIL-2]-[F-Ph-SO 2 -N 3 ] x 생성
접합 전에 100mM 붕산나트륨(pH 8)으로 IL-2를 3.09mg/ml로 희석하였다.
화합물 8(4.4mg)을 DMF(0.885ml)에 용해시켜 4.97mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. rIL-2(10mg, 3.24mL) 바이알에 화합물 8(1.79mg, 360μL, 6eq)을 첨가하고, 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 [rIL-2]-[F-Ph-SO2-N3]x로서 기능화된 IL-2 물질의 분포를 결정하였다.
도 2는 LC-MS에 의해 결정된 바와 같이, [rIL-2]-[F-Ph-SO2-N3]x의 분포가 6 주위에 집중되어 있음을 도시한다.
실시예 26
실시예 2의 rIL-2를 사용한 NHS 접합
[rIL-2]-[CF 3 -Ph-SO 2 -N 3 ] x 생성:
접합 전에 100mM 붕산나트륨(pH 8)으로 IL-2를 3.09mg/ml로 희석하였다.
화합물 13(7.5mg)을 DMF(0.816mL)에 용해시켜 9.19mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. rIL-2(10mg, 3.24ml) 바이알에 화합물 13(3.31mg, 360μL, 10eq.)을 첨가하고, 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 [rIL-2]-[CF3-Ph-SO2-N3]x로서 기능화된 IL-2 물질의 분포를 결정하였다.
도 2는 LC-MS에 의해 결정된 바와 같이, [rIL-2]-[CF3-Ph-SO2-N3]x의 분포가 6 주의에 집중되어 있음을 도시한다.
실시예 27
실시예 3의 rIL-2를 사용한 NHS 접합
[rIL-2]-[Cl-Ph-SO 2 -N 3 ] x 생성:
접합 전에 100mM 붕산나트륨(pH 8)으로 IL-2를 3.09mg/ml로 희석하였다. 화합물 18(5.0mg)을 DMF(0.971mL)에 용해시켜 5.15mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. rIL-2(10mg, 3.24mL) 바이알에 화합물 8(1.85mg, 360μL, 6eq)을 첨가하고, 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 [rIL-2]-[Cl-Ph-SO2-N3]x로서 기능화된 IL-2 물질의 분포를 결정하였다.
도 2는 LC-MS에 의해 결정된 바와 같이, [rIL-2]-[Cl-Ph-SO2-N3]x 분포 형성이 5 주위에 집중되어 있음을 도시한다.
실시예 28
[17K mPEG-(Cl-Ph-SO 2 )]-[rIL-2]
실시예 3의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=1)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.1로 조정하고, 접합을 위해 IL-2를 준비하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.1mg/mL).
10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스로 제제 완충액을 제조하고, 0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 9.1로 조정하였다.
실시예 3(6.0mg)을 DMF(120μL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 제제 완충액, pH 9.1(619μL)로 IL-2(5.0mg, 0.327μmol, 2.38mL)를 희석하고 실시예 3(0.39mg, 0.828μmol, 7.83μL, 2.5eq) 및 DMF(326μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하여 1.9의 작은 링커 수 x를 달성하였다.
[rIL-2]-[Cl-Ph-SO2-N3]x(5.0mg, 0.327μmol, 3.33mL)에 17kDa Y-PEG-DBCO(86.5mg, 4.90μmol, 15eq) 및 제제 완충액, pH 9.1(1.67mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(750μL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, 3단계 SEC-CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 5mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 10부피의 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 샘플을 희석하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 3mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 28을 [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]-[rIL-2](0.33mg, 6.6% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 29
[17K mPEG-(Cl-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]
실시예 3의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.1로 조정하고, 접합을 위해 IL-2를 준비하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(1.75mg/mL).
10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스로 제제 완충액을 제조하고, 0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 9.1로 조정하였다.
실시예 3(4.1mg)을 DMF(410μL)에 용해시켜 10mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 제제 완충액, pH 9.1(343μL)로 IL-2(12.0mg, 0.784μmol, 6.86mL)를 희석하고 실시예 3(1.85mg, 3.91μmol, 185.4μL, 5.0eq) 및 DMF(615μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하여 4.16의 작은 링커 수 x를 달성하였다.
[rIL-2]-[Cl-Ph-SO2-N3]x(12.0mg, 0.784μmol, 6.00mL)에 17kDa Y-PEG-DBCO(207mg, 11.7μmol, 15eq) 및 제제 완충액, pH 9.1(4.00mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(1.80mL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 29를 [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]z-[rIL-2](10.5mg, 88% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 2.7인 것으로 나타났다.
실시예 30
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )]-[rIL-2]
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=1)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.1로 조정하고, 접합을 위해 IL-2를 준비하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(1.79mg/mL).
10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스로 제제 완충액을 제조하고, 0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 9.1로 조정하였다.
실시예 12(71mg)를 DMF(1.42mL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 제제 완충액, pH 9.1(82.7μL)로 IL-2(2.0mg, 0.131μmol, 1.12mL)를 희석하고 실시예 12(0.44mg, 0.649μmol, 8.86μL, 5.0eq) 및 DMF(124.5μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하여 2.4의 작은 링커 수 x를 달성하였다.
[rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x(2.0mg, 0.131μmol, 1.33ml)에 17kDa Y-PEG-DBCO(34.6mg, 1.96μmol, 15eq) 및 제제 완충액, pH 9.1(667μl)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(300μL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, 3단계 SEC-CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 5mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 10부피의 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 샘플을 희석하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 3mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 30을 [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]-[rIL-2](40μg, 2% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 31
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]-6
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.1로 조정하고, 접합을 위해 IL-2를 준비하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(1.68mg/mL).
10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스로 제제 완충액을 제조하고, 0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 9.1로 조정하였다.
실시예 12(71mg)를 DMF(1.42mL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 제제 완충액, pH 9.1(57.1μL)로 IL-2(12.0mg, 0.784μmol, 7.14mL)를 희석하고 실시예 12(13.3mg, 19.6μmol, 266μL, 25eq) 및 DMF(534μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 얻은 [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x의 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하되, 여기서, X의 평균 수는 도 3A(m/z 스펙트럼, 4.1-5.8min)에 도시된 바와 같이 5.94로 결정되었다.
[rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x(12.0mg, 0.784μmol, 8.00mL)에 17kDa Y-PEG-DBCO(207mg, 11.7μmol, 15eq) 및 제제 완충액, pH 9.1(4.00mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(1.80mL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 31을 [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-6(7.2mg, 60% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 2.7인 것으로 나타났다.
실시예 32
[20K 분지형-mPEG]-[rIL-2]
실시예 17 및 20kDa 분지형-PEG-NHS를 사용한 rIL-2의 페길화
P100 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0으로 교환하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.51mg/mL).
IL-2(5.0mg, 0.327μmol, 1.99mL)에 실시예 17(108mg, 4.91μmol, 15eq), 100mM 붕산나트륨, pH 9(1.76mL) 및 2mM HCl(713μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 4.3인 것으로 나타났다. 20kDa 분지형-PEG-NHS(163mg, 8.17μmol, 25eq) 및 100mM 붕산나트륨, pH 9(4.87mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 22℃에서 1시간 동안 계속해서 더 인큐베이션하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 4.5인 것으로 나타났다. 2M 아세트산(1.5mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 켄칭된 반응 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0 완충액으로 교환한 후, 절단 가능한 PEG를 37℃에서 18시간 동안 가수분해하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.1인 것으로 나타났다. 조 반응물을 3단계 SEC-CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 1mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 샘플 완충액을 CEX 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 교환하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 1mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 32를 [20K 분지형-mPEG]-[rIL-2](0.274mg, 5.5% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 33
[20K Y-mPEG-T 1 ]-[rIL-2]
실시예 17, 화합물 45 및 실시예 20을 사용한 rIL-2의 페길화
P100 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0으로 교환하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.51mg/mL).
IL-2(5.0mg, 0.327μmol, 1.99mL)에 실시예 17(108mg, 4.91μmol, 15eq), 100mM 붕산나트륨, pH 9(1.76mL) 및 2mM HCl(713μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 3.8인 것으로 나타났다. 화합물 45(7.5mg)를 MeCN(1.50mL)에 용해시켜 5.0mg/mL 용액을 제공하였다. 상기 반응물에 화합물 45(0.6mg, 1.30μmol, 121μL, 4.0eq) 및 MeCN(130μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 반응물에 실시예 20을 20kDa Y-PEG-DBCO(71mg, 3.26μmol, 10eq)로서 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 3.8인 것으로 나타났다. 2M 아세트산(750μL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 켄칭된 반응 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0 완충액으로 교환한 후, 절단 가능한 PEG를 37℃에서 18시간 동안 가수분해하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.1인 것으로 나타났다. 조 반응물을 3단계 SEC-CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 1mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 샘플 완충액을 CEX 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 교환하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 1mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 33을 [20K Y-mPEG-T1]-[rIL-2](0.217mg, 4.3% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 34
[20K Y-mPEG-T 2 ]-[rIL-2]
실시예 17, 화합물 45 및 실시예 20을 사용한 rIL-2의 페길화
P100 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0으로 교환하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.51mg/mL).
IL-2(10.0mg, 0.654μmol, 3.98mL)에 실시예 17(14.3mg, 0.650μmol, 1.0eq), 100mM 붕산나트륨, pH 9(3.52mL) 및 2mM HCl(2.43mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC로 정제하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 0.8인 것으로 나타났다. HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
IL-2-(PEG)1을 함유하는 모이어티를 UF/DF(30kDa MWCO PES)로 농축하고 겔 여과(P50컬럼) 완충액을 사용하여 100mM 붕산나트륨, pH 9 완충액으로 교환하였다. 화합물 45(7.5mg)을 MeCN(1.50mL)에 용해시켜 5.0mg/mL 용액을 제공하였다. IL-2-(PEG)1(3.2mg, 0.209μmol, 1.52mL)에 화합물 45(0.39mg, 0.843μmol, 78μL, 4.0eq)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 반응물에 20kDa Y-PEG-DBCO(45.5mg, 2.09μmol, 10eq)를 첨가하고, 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 더 인큐베이션하였다. 접합체의 SDS- 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.4인 것으로 나타났다. 2M 아세트산(480μL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 켄칭된 반응 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0 완충액으로 교환한 후, 절단 가능한 PEG를 37℃에서 18시간 동안 가수분해하였다. SDS-PAGE로 반응물을 분석하였다. 겔 여과(P50)로 조 반응 완충액을 CEX 완충액 A로 교환한 후, 2단계 CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 1mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 샘플 완충액을 CEX 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 교환하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 1mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 34를 [20K Y-mPEG-T2]-[rIL-2](0.147mg, 1.5% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 35
[20K Y-mPEG-T 3 ]-[rIL-2]
화합물 45 및 실시예 20을 사용한 rIL-2의 페길화
P100 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0으로 교환하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.08mg/mL).
화합물 45(7.5mg)를 MeCN(1.50mL)에 용해시켜 5.0mg/mL 용액을 제공하였다. IL-2(7.0mg, 0.458μmol, 3.37mL)에 화합물 45(0.63mg, 1.36μmol, 127μL, 3.0eq), 100mM 붕산나트륨, pH 9(3.28mL) 및 MeCN(223μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 반응물에 20kDa Y-PEG-DBCO인 실시예 20(99.5mg, 4.57μmol, 10eq) 및 100mM 붕산나트륨, pH 9(7.92mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 더 인큐베이션하였다. 2M 아세트산(2.1mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, 조 반응물을 3단계 SEC-CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG) 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 샘플을 등용매 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX 정제: 1mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 IL-2-(PEG) 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 샘플 완충액을 CEX 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 교환하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 1mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 35를 [20K Y-mPEG-T3]-[rIL-2](0.7mg, 10% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 36
[20K Y-mPEG-T 4 ]-[rIL-2]
실시예 16, 화합물 45 및 실시예 20을 사용한 rIL-2의 페길화
P100 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 8.0(20mM EDTA, 0.05% SDS)으로 교환하였다. UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.08mg/mL).
실시예 16(5.0mg)을 MeCN(539μL)에 용해시켜 9.27mg/mL 용액을 제공하였다. IL-2(7.0mg, 0.458μmol, 3.37mL)에 실시예 16(1.8mg, 3.71μmol, 192μL, 8.0eq), 100mM 붕산나트륨, pH 8.0(20mM EDTA, 0.05% SDS)(1.88mL) 및 MeCN(158μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 화합물 45(5.0mg)를 MeCN(517μL)에 용해시켜 9.67mg/mL 용액을 제공하였다. 상기 반응물에 화합물 45(1.7mg, 3.68μmol, 175μl, 8.0eq) 및 MeCN(175μL)를 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 반응물에 20kDa Y-PEG-DBCO(99.6mg, 4.58μmol, 10eq) 및 100mM 붕산나트륨, pH 8.0(20mM EDTA, 0.05% SDS)(6.9mL)을 첨가하였다. 반응물을 혼합하여 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 2M 아세트산(2.1mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 켄칭된 반응 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0 완충액으로 교환한 후, 절단 가능한 링커를 37℃에서 24시간 동안 가수분해하였다. 반응물을 SDS-PAGE로 분석하였다. 가수분해 생성물 완충액을 CEX 완충액 A로 교환하고 계면활성제를 제거하였다. 제조업체의 지침에 따라, 4mL Pierce 세제 제거 컬럼을 사용하여 조 반응 혼합물에서 SDS를 제거하였다. 1mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 조 반응물을 정제하였다. 로딩 전에, 샘플 완충액을 CEX 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 교환하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 1mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 36을 [20K Y-mPEG-T4]-[rIL-2](0.61mg, 8.7% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.0인 것으로 나타났다.
실시예 37
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=6)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, IL-2를 접합을 위해 준비해 두었다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.0mg/mL).
실시예 12(200mg)를 DMF(4.0mL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(1.8mL)로 IL-2(18.0mg, 1.17μmol, 9.0mL)를 희석하고 실시예 12(39.89mg, 58.83μmol, 797.76μL, 50eq) 및 DMF(402μL)를 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 얻은 [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x의 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하되, 여기서, X의 평균 수는 8로 결정되었다.
[rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x(18.0mg, 1.17μmol, 12.00ml)에 17kDa Y-PEG-DBCO(1.24g, 70.59μmol, 60eq) 및 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(6.0mL)을 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고, 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(2.7mL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼을 사용하여 SEC 크로마토그래피로 정제하였다. 먼저, Vivaspin20, 30kDa MWCO PES를 사용하여 조 샘플을 12mL 미만의 부피로 농축한 후, 2mL/min의 유속으로 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)을 사용하여 등용매 용리하였다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다. 혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 37을 [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2](12mg, 66% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석은 도 4A에 도시된 바와 같이(SEC 정제 후, SDS-PAGE(3-8% Tris-아세트산 염)) PEG: IL-2의 비율이 5.4(즉, 평균값 z=5.4)인 것으로 나타났다. 도 4A에서, 레인1은 HiMark 단백질 표준품이고, 레인2는 반응 혼합물이며, 레인3은 최종 IL-2-PEG 접합체이다.
실시예 38
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]-4
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, IL-2(100mg)를 접합을 위해 준비해 두었다. 얻은 IL-2 용액을 농도가 1.6mg/mLAmicron(10kDa, 15mL)보다 커질 때까지 Amicron(10kDa, 15mL)으로 농축하였다. 농도를 Nanodrop 2000으로 정량화하였다(1.631mg/mL).
실시예 12(160mg)를 DMF에 용해시켜 50mg/mL(73.73mM)의 시약 용액을 제공하였다. 농축된 IL-2(75.0mg, 4.9μmol, 45.984mL) 완충 용액에 30Х몰 과량의 실시예 12(30eq, 1.990mL)를 첨가하였다. 다른 접합 완충액(0.568mL)을 첨가하여 반응 농도를 1.4-1.5mg/Ml의 IL-2로 제조하였다. DMF(3.181mL)를 첨가하여 10%의 유기용매를 제조하였다. 반응물을 22℃의 인큐베이터-진탕기에 30분 동안 두되, 회전 속도는 60rpm이었다. 얻은 [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x 중의 링커 기능화를 LC-MS로 분석하되, 여기서 x의 평균 수는 도 3B에 도시된 바와 같이 4.32로 결정되었다.
충분한 17kDa Y-PEG-DBCO(3958.7mg)를 칭량한 후, 접합 완충액(15.83mL)에 250mg/mL(14.71mM)의 PEG 농도에 도달할 때까지 용해시켰다. [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x 용액에 40Х몰 과량의 PEG(13.308mL)를 첨가하였다. 다른 접합 완충액(9.968mL)을 첨가하여 반응물 중의 IL-2 농도가 1.0mg/mL이 되도록 제조하였다. 반응물을 22℃의 인큐베이터-진탕기에 30분 동안 더 두되, 회전 속도는 60rpm이었다. pH가 4.0에 도달할 때까지 반응에 첨가된 10-20%(v/v)의 2M 아세트산으로 반응물을 켄칭하였다.
Amicon(30kDa, 15mL)으로 반응 용액을 6mL 또는 16mL 미만으로 농축시켰다. 농축된 샘플을 S200 컬럼(HiLoad SuperdexTM 200pg, 16/600, 120mL 또는 HiLoad SuperdexTM 200pg, 26/600, 320mL)으로 정제하였다. S200 완충액은 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 150mM NaCl이다. S200 프로파일에 따라 몇몇 모이어티 및 조 용액을 제출하여 SDS-PAGE를 수행하고, 요오드 염색 및 쿠마시 브릴리어트 블루 염색 SDS-PAGE를 통해 접합 효율 및 순도를 체크하였다. SDS-PAGE 결과에 따라, 고순도 모이어티를 혼합하고 Amicon(30kDa, 15mL)을 통해 최종 생성물로 농축하였다. 최종 생성물을 멸균 및 여과(0.22μm 멤브레인)하였다. 제제 완충액은 50mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5이다.
BCA 방법을 통해 실시예 38을 [17k mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-4(4.54mg/mL, 22.11mg, 30% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 3.33(즉, 평균값 z=3.33)인 것으로 나타났다.
실시예 39
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]-5
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, IL-2를 접합을 위해 준비해 두었다. 얻은 IL-2 용액을 농도가 1.6mg/mL보다 커질 때까지 Amicron(10kDa, 15mL)로 농축하였다. 농도를 Nanodrop 2000으로 정량화하였다(2.219mg/mL).
실시예 12를 DMF에 용해시켜 50mg/mL(73.73mM)의 시약 용액을 제공하였다. 농축된 IL-2(5.0mg, 0.33μmol, 2.253mL) 완충 용액에 35Х몰 과량의 실시예 12(35eq, 11.416μmol, 0.155mL)를 첨가하였다. 다른 접합 완충액(0.747mL)을 첨가하여 반응 농도를 1.4-1.5mg/mL로 제조하였다. DMF(0.179mL)를 첨가하여 10%의 유기용매를 제조하였다. 반응물을 22℃의 인큐베이터-진탕기에 30분 동안 두되, 회전 속도는 60rpm이었다. 얻은 [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x 중의 IL-2의 링커 기능화를 LC-MS로 분석하되, 여기서, X의 평균 수는 도 3C에 도시된 바와 같이 5.08로 결정되었다.
충분한 17kDa Y-PEG-DBCO(273mg)를 칭량한 후, 접합 완충액(1.09mL)에 250mg/mL(14.71mM)의 PEG 농도에 도달할 때까지 용해시켰다. [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x 용액에 45Х몰 과량의 PEG(0.998mL)를 첨가하였다. 다른 접합 완충액(0.669mL)을 첨가하여 반응물 중의 IL-2 농도가 1.0mg/mL이 되도록 제조하였다. 반응물을 22℃의 인큐베이터-진탕기에 30분 동안 더 두되, 회전 속도는 60rpm이었다. pH가 4.0에 도달할 때까지 반응에 첨가된 10-20%(v/v)의 2M 아세트산으로 반응물을 켄칭하였다.
Amicon(30kDa, 15mL)으로 반응 용액을 1mL 미만으로 농축시켰다. 농축된 샘플을 S200 컬럼(HiLoad SuperdexTM Increase, 10/300, 24mL)으로 정제하였다. S200 완충액은 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 150mM NaCl이다. S200 프로파일에 따라 몇몇 모이어티 및 조 용액을 제출하여 SDS-PAGE를 수행하고, 요오드 염색 및 쿠마시 브릴리어트 블루 염색 SDS-PAGE를 통해 접합 효율 및 순도를 체크하였다. SDS-PAGE 결과에 따라, 고순도 모이어티를 혼합하고 Amicon(30kDa, 15mL)을 통해 최종 생성물로 농축하였다. 최종 생성물을 멸균 및 여과(0.22μm 멤브레인)하였다. 제제 완충액은 50mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5이다.
BCA 방법을 통해 실시예 39를 [17k mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-4(2.32mg/mL, 1.5mg, 30% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 3.55(즉, 평균값 z=3.55)인 것으로 나타났다.
실시예 40
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]-8
실시예 12의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, 10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스 중의 IL-2 용액을 제조하여 접합에 사용하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)를 통해 4.5mg/mL로 농축하고, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 농도를 정량화하였다.
실시예 12의 스톡 용액(200.0mg)을 DMF(4.0mL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(9.44mL)으로 IL-2(25.0mg, 1.63μmol, 5.56mL)를 희석하고 실시예 12(66.48mg, 98.0μmol, 1.33mL, 60eq) 및 DMF(337μL)를 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 얻은 [rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x의 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하되, 여기서 x의 평균 수는 도 3D에 도시된 바와 같이 8.5로 결정되었다.
[rIL-2]-[Cl,CONH-Ph-SO2-N3]x(25.0mg, 1.63μmol, 16.67mL)에 17kDa Y-PEG-DBCO(864.6mg, 48.9μmol, 30eq) 및 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(8.33mL)을 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고, 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(3.75mL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼을 사용하여 SEC로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 조 샘플을 등용매 용리하였다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetectTM 기기를 사용하여 IR로 실시예 40을 [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-8(12.48mg, 50% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석은도 4B에 도시된 바와 같이(SEC 정제 후, SDS-PAGE(3-8% Tris-아세트산 염)) PEG: IL-2의 비율이 2.7(즉, 평균값 z=2.7)인 것으로 나타났다.
실시예 41
[17K mPEG-(F,CF 3 -Ph-SO 2 )] z -[rIL-2]
실시예 5의 rIL-2를 사용한 NHS 접합 및 17kDa Y-PEG-DBCO(z=3)를 사용한 클릭-페길화
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, IL-2를 접합을 위해 준비해 두었다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(2.0mg/mL).
실시예 5(23.0mg)를 DMF(460μL)에 용해시켜 50mg/mL의 시약 용액을 제공하였다. 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(1.24mL)으로 IL-2(42.0mg, 2.74μmol, 21.0mL)를 희석하고 실시예 5(12.96mg, 24.71μmol, 2.47ml, 9.0eq)를 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 30분 후, 반응물을 LC-MS로 분석하여 얻은 [rIL-2]-[F,CF3-Ph-SO2-N3]x의 평균 IL-2 기능화 정도를 결정하되, 여기서 x의 평균 수는 5.3으로 결정되었다.
[rIL-2]-[F,CF3-Ph-SO2-N3]x(42.0mg, 2.74μmol, 24.71mL)에 17kDa Y-PEG-DBCO(968.31mg, 54.90μmol, 20eq) 및 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(10.29mL)을 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고, 22℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(5.25mL)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, 2단계 CEX-SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
CEX: 5mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 조 IL-2-(PEG)z 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 10부피의 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 샘플을 희석하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 3mL/min의 유속으로 용리시켰다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼으로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 먼저, Vivaspin20, 30kDa MWCO PES를 사용하여 조 샘플을 12mL 미만의 부피로 농축한 후, 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 등용매 용리하였다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 41을 [17K mPEG-(F,CF3-Ph-SO2)]z-[rIL-2](21mg, 50% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 3.1(즉, z=3)인 것으로 나타났다.
실시예 42
[20K Y-mPEG]-[rIL-2]
20kDa Y-mPEG-NHS를 사용한 rIL-2의 페길화
P50 탈염 컬럼을 사용하여 IL-2 완충액을 100mM 붕산나트륨, pH 9.0으로 교환하였다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 정량화하였다(1.68mg/mL).
20kDa Y-PEG-NHS 시약(52.2mg)을 DMF(1.04mL)에 용해시켜 50mg/mL 용액을 제공하였다. 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(80.95μL)으로 IL-2(17.0mg, 1.1μmol, 10.12mL)를 희석하고 20kDa Y-PEG-NHS(44.44mg, 2.2μmol, 889.9μL, 2.0eq) 및 DMF(244.4μL)를 첨가하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고, 22℃에서 2시간 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산(150μL 산: 1mL 샘플 부피의 비율)으로 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC 크로마토그래피로 분리시키고, 이어서 CEX 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼을 사용하여 SEC로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 조 샘플을 등용매 용리하였다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
CEX: 5mL Macrocap SP 컬럼을 사용하여 CEX로 조 IL-2-(PEG)z 샘플을 정제하였다. 로딩 전에, 10부피의 완충액 A(50mM 아세트산나트륨, pH 4)로 샘플을 희석하였다. 샘플을 완충액 A에서 컬럼에 결합시키고, 30컬럼 부피의 완충액 B(50mM 아세트산나트륨, pH 4, 1M NaCl)의 구배를 사용하여 3mL/min의 유속으로 용리시켰다. 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고, 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 42를 [20K Y-mPEG]-[rIL-2](4.4mg, 26% 수율)로 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 1.1인 것으로 나타났다.
실시예 43
PEG 시약 46을 사용한 rIL-2의 페길화
US20060293499A1로부터의 문헌 절차에 따라 PEG 시약 46을 생성하였다.
0.5M 붕산나트륨(pH 9.8)을 사용하여 pH를 pH 9.0으로 조정하고, 10mM 아세트산나트륨, pH 4.5, 5% 트레할로스 중의 IL-2 용액을 접합을 위해 준비해 두었다. 얻은 IL-2 용액을 UF/DF(Vivaspin20, 5kDa MWCO PES)를 통해 2.51mg/mL로 농축한 후, Nanodrop 2000 분광광도계를 사용하여 UV-A280으로 농도를 정량화하였다.
PEG 시약 46(2.006g)을 2mM HCl(6.67mL)에 용해시켜 300mg/mL 시약 용액을 제공하였다. 반응 완충액인 100mM 붕산나트륨, pH 9.0(6.67mL) 및 PEG 시약 46(2.006g, 91μmol, 71.64μL, 35.0eq)으로 IL-2(40mg, 2.6μmol, 15.94mL)를 희석하였다. 반응물을 부드럽게 와동시키고, 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 2M 아세트산으로 용액의 pH가 pH 4.0에 도달할 때까지 켄칭하였다. 켄칭된 반응물을 SDS-PAGE로 분석한 후, SEC 크로마토그래피로 정제하였다.
SEC 정제: HiLoad 26/600 Superdex 200 pg 컬럼을 사용하여 SEC로 조 IL-2-(PEG)z 생성물을 정제하였다. 50mM 아세트산나트륨, pH 4.5(150mM NaCl)를 사용하여 2mL/min의 유속으로 조 샘플을 등용매 용리하였다. 상기 방법으로 수집된 모이어티를 SDS-PAGE로 분석하고 고순도 모이어티를 혼합하였다.
혼합된 모이어티를 UF/DF(Vivaspin20, 30kDa MWCO PES)로 농축하고, 최종적으로 멸균 및 여과하였다(0.22μm PVDF).
DirectDetect 기기를 사용하여 IR로 실시예 43(18.9mg, 47% 수율)을 정량화하였다. 접합체의 SDS-PAGE 분석에서는 PEG: IL-2의 비율이 5.8인 것으로 나타났다.
실시예 44
예시적인 rIL-2-[PEG] z 접합체의 활성
알데스류킨(대조군), 실시예 28-37 및 실시예 42의 활성을 CTLL-2 세포를 사용하여 세포 증식 측정으로 평가하였다.
37℃에서 5% CO2 분위기 하에 CTLL-2 세포(마우스 세포독성 T 림프구 세포주)를 10% 소태아 혈청 및 10% IL-2 배양 보충제(ConA(콘카나발린-A) 함유 T-STIMTM)가 보충된 완전 RPMI 1640 배지에서 유지시켰다. 세포를 세포가 분열 전에 2 내지 3Х105개 세포/㎖의 세포 밀도에 도달할 때까지 현탁 배양시켰다.
활성 측정의 경우, 마지막 분열 3 내지 4일 후에, 세포를 둘베코 인산염 완충 식염수로 3회 세척하였다. 그 다음 세포를 T-STIMTM이 없는 보충 배지에 약 5Х105개 세포/㎖의 세포 밀도로 재현탁시키고, 96웰 백색 벽 투명 바닥 마이크로플레이트에 90㎕/웰로 플레이팅하였다. 또한 인큐베이션 과정 동안 접합체의 방출을 최소화하기 위해, pH 6.7 내지 7로 조정된 보충 배지(T-STIMTM 없음)를 사용하여 실험을 수행하였다. 그 다음, T-STIM™이 없는 보충 배지에 희석된 10μl의 10X 농도의 시험 화합물을 첨가하였다. 세포를 37℃에서 5% CO2 분위기에서 48시간 동안 인큐베이션시켰다. 48시간 인큐베이션 후, CCK8 시약을 첨가하고(20㎕/웰), 37℃에서, 5% CO2에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음 플레이트를 Molecular devices Spectra Max i3X를 사용하여 450nM 및 630nM에서 판독하였다.
방출된 IL-2 및 방출되지 않은 접합체의 활성을 시험하였다. 시험 화합물을 산성 조건(10mM 아세트산나트륨 완충액, pH 4) 하에서 저장하여 접합을 안정화시켰다. 접합체의 활성을 시험하기 위해, 샘플을 측정 약 1시간 전에 저장 배지에서 보충 배지로 희석시켰다. 방출된 IL-2의 활성을 시험하기 위해, 방출 가능한 접합체를 100mM(최종 농도) 중탄산나트륨 완충액, pH 9로 10배 희석시키고, 측정 시작 전 8시간 동안 37℃에서 사전 인큐베이션시켰다.
세포 증식에 대한 EC50 값(최대 반응의 50%를 나타내는 데 필요한 시험 화합물의 농도)을 GraphPad's Prism 5.01 소프트웨어를 사용하여 용량-반응 곡선의 비-선형 회귀 분석으로부터 얻었다.
IL-2 및 접합체의 활성을 세포 증식 측정을 사용하여 측정하고, 결과의 요약을 하기 표 3A 및 표 3B에 나타내었다. 모든 시험 물품은 용량-의존적 방식으로 CTLL-2 세포의 성장을 유도하였다. 표 3B에 나타낸 바와 같이, IL-2의 방출을 유도하는 조건 하에서 실시예 29, 31, 37-38 및 41로부터의 접합체를 사전 인큐베이션시킨 후, 활성은 회복되었다. 이들 접합체로부터 방출된 IL-2는 대조군 IL-2에 상대적인 효능을 나타내었다.
실시예 45
페길화된 IL-2와 인간 IL-2 수용체 서브유닛의 생화학적 상호 작용
표면 플라스몬 공명(SPR)을 사용하여 Biacore T200에서 페길화된 IL-2 화합물과 인간 IL-2 수용체 서브유닛의 상호 작용 동역학을 측정하되, 센서 칩은 표준 아민 화학을 사용하여 ~9000RU 항-인간 IgG에 커플링된 CM5이다.
IL-2Rα에 대한 결합 동력학을 측정하는 경우, 하기 칩을 사용하여 제조하였다. 0.1% BSA를 포함하는 HBS-P+러닝 완충액에서 인간 IgGl Fc-융합 IL-2 Rα(Sino Biological #10165-H02H)를 1μg/mL로 희석하고 10μL/min으로 ~235RU로 포획하였다.
IL-2Rβ에 대한 결합 동력학을 측정하는 경우, 하기 칩을 사용하여 측정하였다. 0.1% BSA를 포함하는 HBS-P+러닝 완충액에서 인간 IgGl Fc-융합 IL-2 Rβ(Sino Biological #10696-H02H)를 1μg/mL로 희석하고 10μL/min으로 ~235RU로 포획하였다.
IL-2Rαβ 복합체에 대한 결합 동력학을 측정하는 경우, 일부 칩을 사용하여 제조하였다. 인간 IL-2Rα-Fc 및 IL2-Rβ-Fc를 각각 1μg/mL로 사전 혼합하고 ~440RU로 포획하였다.
Biacore T200 SPR 기기를 사용하여 2μM 대조군 IL-2 및 실시예 28-36 및 실시예 42에서 출발하는 3배 희석 시리즈로 이러한 표면을 검출하였다. 결합을 측정할 수 있도록 시험 샘플을 90초 동안 주입한 후, 해리를 측정하기 위해 완충액(세척)만 100초 동안 주입하였다.
표 4는 각 IL-2 수용체 서브유닛에 결합하는 IL-2 및 PEG-IL-2의 KD를 요약한 것이다. 시험된 모든 접합체는 rIL-2 대조군과 유사(1-3배)한 결합 친화도로 IL-2Rβ에 결합하는 능력을 유지하였다. 반대로, 별도의 rIL-2와 비교하여, 접합체와 IL-2Rα의 결합은 추가로 감소되었는 바, 결합 친화도는 4~9배 감소되었다. 상이한 페길화 처리는 IL-2Rα에 비해 IL-2Rβ와의 결합에 대한 선호도가 상이한 다양한 PEG-IL-2를 제공하였다(실행 2). 대조군 rIL-2와 비교하여, 실시예 33은 IL-2Rα에 대해 7배 낮은 결합 친화도, IL-2Rβ에 대해 유사한 결합 친화도, 및 IL-2Rαβ에 대해 10배 낮은 결합을 나타내었다.
스킴 1로 표시되는 2단계 페길화 방법으로 실시예 35를 합성한 반면, 기존의 PEG 시약을 사용하여 페길화 방법으로 실시예 42를 합성하였다. 실시예 35 및 실시예 42의 수용체 결합 활성과 비교하여(시험 4), 실시예 35는 실시예 42보다 추가로 감소된 IL-2Rα 결합을 나타냄을 입증하였다. 따라서, 스킴 1의 방법에 의한 IL-2 페길화는 기존 방법에 의한 IL-2 페길화와 비교하여 IL-2Rα에 대한 결합이 감소된다.
IL-2 및 PEG-IL-2와 각 IL-2 수용체 서브유닛 표면의 상호 작용에 대한 동역학적 파라미터
시험 화합물 IL-2Rα KD(μM) IL-2Rβ KD(μM) IL-2Rαβ KD(μM)
실행 1
실시예 24: rIL-2 대조군 0.0246 0.872 0.00668
실시예 28: [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]-[rIL-2] 0.138 2.34 0.0755
실시예 29: [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]z-[rIL-2] 0.882 - 0.241
실시예 30:
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]-[rIL-2]		 0.13 2.75 0.054
실시예 31:
[17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-6		 0.816 - 0.267
실행 2
실시예 24: rIL-2 대조군 0.0249 0.977 0.00601
실시예 32: [20K 분지형-mPEG]-[rIL-2] 0.204 1.96 0.098
실시예 33: [20K Y-mPEG-T1]-[rIL-2] 0.221 2.50 0.0701
실시예 34: [20K Y-mPEG-T2]-[rIL-2] 0.168 0.634 0.0581
실시예 35: [20K Y-mPEG-T3]-[rIL-2] 0.184 1.02 0.0888
실행 3
실시예 24: rIL-2 대조군 0.0155 0.511 0.00326
실시예 36: [20K Y-mPEG-T4]-[rIL-2] 0.0559 0.462 0.0423
실행 4
실시예 24: rIL-2 대조군 0.0127 - 0.00271
실시예 29: [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]z-[rIL-2] 1.11 - 0.308
실시예 31: [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-6 0.888 - 0.461
실시예 35: [20K Y-mPEG-T3]-[rIL-2] 0.706 - 0.183
실시예 42: [20K Y-mPEG]-[rIL-2] 0.307 - 0.107
실시예 46
1차 인간 백혈구 환원 시스템(LRS)-유래 PBMC 샘플 중의 생체외 면역 응답 프로파일링
시험 화합물이 1차 면역 세포 하위 집단의 활성화에 어떻게 영향을 미치는지 확인하기 위해 다색 유세포 분석기를 사용하여 인간 LRS 유래 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플에서 림프구 활성화의 농도-반응 프로파일링을 수행하였다.
LRS는 혈액 수집 당일에 얻어졌고 PBMC는 피콜 밀도 구배 프로토콜을 사용하여 추출되었다. PBMC를 10% 소 태아 혈청 및 1% Pen-Strep 글루타민이 보충된 RPMI에 재현탁시켰다. 자극 전에 PBMC를 37℃에서 30분 동안 배양하였다.
모든 화합물에 대해 5배 희석에 의한 12점 용량 곡선을 생성하였다. 최고 용량은 30μg/mL이었다. PBS w/0.1% BSA에서 희석하고 10Х의 스톡 용액으로서 용량 곡선을 추가하였다. 45분 동안 인큐베이션한 후, 샘플을 고정하고, 항체 염색으로 전사 인자 STAT5의 인산화된 형태(pTATA5)를 검출하였으며, 표면 마커를 검출하여 특이적 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포 하위 집단에서 pSTAT5의 형성을 추적하였다.
투과화 전(pre-perm) 그룹 CD3, CD25, CD8, CD56, CD16, CD4, Dump(CD14), Dump(CD19) 및 CD127로 샘플을 염색하였다. 염색제를 30분 동안 인큐베이션한 후 헹구었다. 그 다음 스트렙타비딘 BV421(Biolegend cat#405225)을 첨가하고 20분 동안 인큐베이션하였다. 스트렙타비딘을 세척해 버리고 샘플을 MeOH로 투과화하였으며, 투과화(post-perm)된 그룹을 FOXP3, STAT5, Dump(CD15)로 염색하였다. 염색제를 60분 동안 인큐베이션한 후, 헹구어 버리고 유세포 분석기로 분석하였다.
상이한 T 및 NK 세포 하위 집단의 활성화에 대해 농도-반응 방식으로 유세포 분석 데이터를 분석하여 시험 화합물 처리 후 pSTAT5 축적을 판독하여다. pSTAT5의 중간값 형광 강도를 용량 곡선 생성에 사용하였다. 농도-반응 곡선에 따라 NK 세포, Treg 세포, CD8+ T 세포의 EC50값을 계산하였다.
NK 및 효과기 T 세포 집단에서, PEG-IL-2 접합체는 대조군 rIL-2에 비해 감소된 효능을 나타냈으며, pSTAT5 생산에 대한 EC50값은 대조군 rIL-2의 6~27배 이내였다(실행 1 및 2). Treg 하위 집단에서, 대조군 IL-2와 비교하여, PEG-IL-2의 pSTAT5 유도 EC50값은 9~51배 증가하였다. 시험된 PEG-IL-2 접합체의 경우, 표 5에서 CD8/Treg 비율에 나타난 바와 같이, Treg에서 감소된 효능은 NK 및 효과기 T 세포에서 감소된 효능보다 높았다. 특정 위치에서 IL-2의 페길화는 IL-2 수용체의 작용을 허용하고, 상이한 페길화 방법은 Treg에 비해 효과기 T 세포 자극에 대한 선호도가 상이한 다양한 PEG-IL-2를 제공한다. 대조군 rIL-2의 CD8/Treg 928 비율과 비교하여, 실시예 33은 CD8/Treg의 비율이 432임을 나타냈는데, 이는 Treg보다 CD8 및 NK 세포에 대한 선호도를 나타낸다.
실시예 35 및 실시예 42의 pSTAT5 활성과 비교하여(시험 3), 2단계 페길화 방법에 의해 제조된 실시예 35는 569의 CD8/Treg의 비율로 Treg 세포보다 자극성 CD8 T 및 NK 세포에 대해 더 높은 선호도를 보인 것으로 나타났다. 반면, 기존 PEG 시약의 페길화 방법에 의해 제조된 실시예 42는 1208의 CD8/Treg 비율로 Treg 세포보다 자극성 CD8 T 및 NK 세포에 대한 선호도가 낮은 것으로 나타났다. 따라서, 스킴 1의 방법에 의한 IL-2 페길화는 기존 방법에 의한 IL-2 페길화와 비교하여, Treg 세포보다 CD8 T 및 NK 세포에 대한 자극이 더 우선적임을 나타내었다.
인간 LRS 샘플에서 IL-2 및 PEG-IL-2 접합체에 반응을 일으키는 pSTAT5 신호 전달의 용량 반응 EC50(EC50, ng/mL)
시험 화합물 CD8+ T 세포 NK 세포 Treg 세포 CD8/Treg의 비율
실행 1
실시예 24: rIL-2 대조군 37.10 9.34 0.04 928
실시예 28: [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]-[rIL-2] 796.82 140.88 1.46 546
실시예 30: [17K mPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]-[rIL-2] 244.70 60.04 0.36 680
실시예 32: [20K 분지형-mPEG]-[rIL-2] 491.04 104.74 0.84 584
실시예 33: [20K Y-mPEG-T1]-[rIL-2] 788.28 159.86 1.93 408
실시예 34: [20K Y-mPEG-T2]-[rIL-2] 565.81 89.28 1.31 432
실시예 35: [20K Y-mPEG-T3]-[rIL-2] 988.17 188.43 2.06 480
실행 2
실시예 24: rIL-2 대조군 78.50 22.02 0.26 302
실시예 36: [20K Y-mPEG-T4]-[rIL-2] 575.99 136.60 2.43 237
실행 3
실시예 24: rIL-2 대조군 37.48 4.01 0.02 1874
실시예 29: [17K mPEG-(Cl-Ph-SO2)]z-[rIL-2] 4132.07 1020.46 5.45 758
실시예 31: [17KmPEG-(Cl,CONH-Ph-SO2)]z-[rIL-2]-6 14060.81 1008.18 6.79 2070
실시예 35: [20K Y-mPEG-T3]-[rIL-2] 6500.88 309.44 11.41 569
실시예 42: [20K Y-mPEG]-[rIL-2] 2416.22 161.95 2.00 1208
실시예 47
피하 CT26 마우스 대장암 동계 모델의 효능 연구
0.1ml PBS 중의 5Х105개 CT26 세포를 7~10주령 동계 암컷 BALB/c 마우스의 오른쪽 앞 옆구리 부위에 각각 피하 이식하였다. 종양을 감지할 수 있는 크기, 즉 80~110cu mm로 성장시킨 후, 설계된 대로 무작위화하고 그룹화하였다(n=8). 표 6-8에 나타낸 바와 같이 다양한 투여 농도 및 투여 요법으로 마우스에게 시험 화합물, 즉 rIL-2, rIL-2-중합체 접합체 또는 비히클을 투여하였다. 체중 및 종양 부피를 주당 3회 측정하였다. 30일보다 오래된 종양이 없는 마우스의 왼쪽 앞 옆구리에 0.1ml PBS 중의 CT26 종양 세포(5Х105)로 다시 유발시켰다. 재유발된 종양 성장을 적어도 42일 동안 관찰하였다.
도 5A 및 5B의 군 배정 상황
군 시험 화합물 투여 농도(mg/kg) 투여 경로 용량
1 비히클 - IV qwХ3
2 rIL-2 대조군 2 IP b.i.d.Х5, 2 사이클
3 실시예 37 1 IV qwХ3
4 실시예 43 1 IV qwХ3
참고: "b.i.dХ5"는 총 5일 동안 1일 2회, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일에 2사이클의 투여를 의미하고; "qwХ4"는 주당 1회, 총 4 사이클을 의미한다. 비히클은 10mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5 완충액이다.
도 6A 및 6B의 군 배정 상황
군 시험 화합물 투여 농도(mg/kg) 투여 경로 용량
1 비히클 - IV qwХ4
2 rIL-2 대조군 3(제1 사이클)2(제2 사이클) IP b.i.d.Х5, 2 사이클
3 실시예 37 3 IV qwХ4
4 실시예 37 6 IV qwХ4
5 실시예 43 3 IV qwХ4
6 실시예 43 6 IV qwХ2
7 실시예 29 3 IV qwХ4
8 실시예 29 6 IV qwХ4
9 실시예 31 3 IV qwХ4
10 실시예 31 6 IV qwХ4
참고: "b.i.dХ5"는 총 5일 동안 1일 2회, 1, 2, 3, 4, 5일 7일, 8일, 9일, 10일에 2 사이클의 투여를 의미하고; "qwХ4"는 주당 1회, 총 4 사이클을 의미한다. 비히클은 10mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5 완충액이다.
도 7A 및 7B의 군 배정 상황
군 시험 화합물 투여 농도(mg/kg) 투여 경로 용량
1 비히클 - IV qwХ4
2 rIL-2 대조군 2 IP b.i.d.Х5, 2 사이클
3 실시예 43 3 IV qwХ4
4 실시예 43 5 IV qwХ4
5 실시예 35 3 IV qwХ4
6 실시예 31 6 IV qwХ4
7 실시예 31 8 IV qwХ4
8 실시예 31 3 IV b.i.w
9 실시예 31 4 IV b.i.w
10 실시예 41 4 IV qwХ4
11 실시예 41 6 IV qwХ4
12 실시예 41 8 IV qwХ4
참고: "b.i.dХ5"는 총 5일 동안 1일 2회, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일에 2사이클의 투여를 의미하고; "qwХ4"는 주당 1회, 총 4 사이클을 의미한다. "b.i.w"는 주당 2회를 의미한다. 비히클은 10mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5 완충액이다.
도 5A-7B는 rIL-2 및 rIL-2-중합체 접합체를 다양한 투여 요법으로 투여한 후 종양 성장 억제를 제공한다. 상이한 처리군에 대한 종양 성장 억제(TGI), 완전 반응(CR) 비율, 독성 및 유발 결과를 표 9-11에 나타내었다. 종양 성장 억제; TGI%=1-ΔT/ΔC)Х100이고; Ti 및 Ci는 측정 당일 처리군 및 비히클군의 평균 종양 부피이며; T0 및 C0는 0일차 처리군 및 비히클군의 평균 종양 부피이다.
도 5A 및 5B의 종양 억제제 결과
군 시험 화합물 투여(mg/kg) TGI
(19일차) 		CR 독성 재유발
2 rIL-2 대조군 2 61.76% 1/8 0/8 1/1
3 실시예 37 1 30.44% 0/8 0/8 -
4 실시예 43 1 52.37% 0/8 0/8 -
참고: CR은 종양이 없는 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 독성은 사망 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 재유발 결과는 종양이 없는 최종 마우스 수/재유발된 마우스 수로 보고된다.
도 6A 및 6B의 종양 성장 억제 데이터
군 시험 화합물 투여(mg/kg) TGI
(15일차) 		CR 독성 재유발
2 rIL-2 대조군 3, 2 95.71%
(8일차)		 0/8 8/8 -
3 실시예 37 3 88.09% 5/8 0/8 5/5
4 실시예 37 6 95.27% 6/8 1/8 6/6
5 실시예 43 3 76.03% 3/8 0/8 3/3
6 실시예 43 6 101.82% - 8/8 -
7 실시예 29 3 87.28% 5/8 0/8 5/5
8 실시예 29 6 92.83% 6/8 0/8 6/6
9 실시예 31 3 89.69% 5/8 0/8 5/5
10 실시예 31 6 84.10% 6/8 0/8 6/6
참고: CR은 종양이 없는 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 독성은 사망 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 재유발 결과는 종양이 없는 최종 마우스 수/재유발된 마우스 수로 보고된다.
도 7A 및 7B의 종양 성장 억제 데이터
군 시험 화합물 투여(mg/kg) TGI
(17일차) 		CR 독성 재유발
2 rIL-2 대조군 2 102.41% 1/8 7/8 1/1
3 실시예 43 3 85.72% 2/8 2/8 2/2
4 실시예 43 5 96.98% 4/8 0/8 4/4
5 실시예 35 3 95.41% 5/8 0/8 5/5
6 실시예 31 6 98.93% 7/8 0/8 7/7
7 실시예 31 8 100.82% 8/8 0/8 8/8
8 실시예 31 3 89.10%(8일차) 0/8 8/8 -
9 실시예 31 4 103.83%
(8일차)		 0/8 8/8 -
10 실시예 41 4 83.18% 2/8 0/8 2/2
11 실시예 41 6 95.46% 2/8 1/8 2/2
12 실시예 41 8 89.02% 3/8 0/8 3/3
참고: CR은 종양이 없는 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 독성은 사망 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 재유발 결과는 종양이 없는 최종 마우스 수/재유발된 마우스 수로 보고된다.
이러한 결과는 평가된 rIL-2-중합체 접합체가 2 또는 3mg/kg b.i.d. 용량으로 2 사이클 동안 투여된 rIL-2보다 낮은 용량에서 더 나은 효능을 입증했음을 나타낸다. 실시예 29, 31, 35, 37 및 41은 모두 rIL-2보다 훨씬 우수한 효능 및 더 낮은 독성을 나타내었다. 실시예 31은 마우스 모델에 8mg/kg qw 용량으로 투여 시 뚜렷한 독성 없이 100% CR을 나타냄을 입증한다. 용량을 줄여 주당 2회 용량으로 투여 시, 치명적인 독성이 관찰되었다.
생체내 모델에서 실시예 37과 실시예 43을 비교하면, 2단계 페길화 방법으로 합성된 실시예 37이 더 높은 효능과 더 낮은 독성을 나타내는 것으로 입증되었다(표 10). 실시예 37은 3mg/kg 용량으로 62.5% CR을 제공하였다. 반면 기존 PEG 시약의 페길화 방법으로 합성된 실시예 43은 3mg/kg 용량으로 단지 37.5% CR을 제공하였다. 6mg/kg 용량에서 실시예 43은 모든 마우스에게 치명적인 반면, 실시예 37은 내약성이 좋고 75% CR의 효능을 제공하였다. 따라서, 스킴 1의 방법에 의해 페길화된 IL-2는 기존 PEG 방법에 의해 페길화된 IL-2보다 더 나은 치료의 창, 더 높은 효능 및 더 낮은 독성을 나타내었다.
이들 치료가 지속적인 종양 특이적 T 세포 응답을 유도할 수 있는지 연구하기 위해, 모든 치유된 마우스가 적어도 한달 동안 종양이 없을 때 CT26 세포로 이러한 처리군으로부터의 모든 치유된 마우스에 종양을 재유발하였다. 재유발 후, 치유된 마우스는 종양이 없는 상태로 42일 동안 유지되었다.
실시예 48
피하 MC38 마우스 대장암 동계 모델의 효능 연구
0.1ml PBS 중의 1Х106개 MC38 세포를 7~10주령 동계 암컷 C57BL/6 마우스의 오른쪽 앞 옆구리 부위에 각각 피하 이식하였다. 종양을 감지할 수 있는 크기, 즉 80~100cu mm로 성장시킨 후, 설계된 대로 무작위화하고 그룹화하였다(n=8). 표 12에 나타낸 바와 같이 다양한 투여 농도 및 투여 요법으로 마우스에게 시험 화합물, 즉 rIL-2, rIL-2-중합체 접합체 또는 비히클을 투여하였다. 체중 및 종양 부피를 주당 3회 측정하였다.
도 8의 군 배정 상황
군 시험 화합물 투여 농도(mg/kg) 투여 경로 용량
1 비히클 - IV qwХ4
2 rIL-2 대조군 2 IP b.i.d.Х5, 2 사이클
3 실시예 43 1 IV qwХ4
4 실시예 43 3 IV qwХ4
5 실시예 43 6 IV qwХ4
6 실시예 31 1 IV qwХ4
7 실시예 31 3 IV qwХ4
8 실시예 31 6 IV qwХ4
9 실시예 38 1 IV qwХ4
10 실시예 38 3 IV qwХ4
11 실시예 38 6 IV qwХ4
참고: "b.i.dХ5"는 총 5일 동안 1일 2회, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일에 2사이클의 투여를 의미하고; "qwХ4"는 주당 1회, 총 4 사이클을 의미한다. 비히클은 10mM 아세트산나트륨, 150mM NaCl, pH 4.5 완충액이다.
도 8은 rIL-2 및 rIL-2-중합체 접합체를 다양한 투여 요법으로 투여한 후 종양 성장 억제를 제공한다. 상이한 처리군에 대한 종양 성장 억제(TGI), 완전 반응(CR) 비율, 독성 및 유발 결과를 표 13에 나타내고; TGI%=1-ΔT/ΔC)Х100이며; Ti 및 Ci는 측정 당일 처리군 및 비히클군의 평균 종양 부피이고; T0 및 C0는 0일차 처리군 및 비히클군의 평균 종양 부피이다.
도 8의 종양 성장 억제 데이터
군 시험 화합물 투여(mg/kg) TGI(15일차) CR(38일차) 독성
2 rIL-2 대조군 2 100.75% 1/8 7/8
3 실시예 43 1 77.17% 1/8 0/8
4 실시예 43 3 98.41% 6/8 1/8
5 실시예 43 6 101.99% 2/8 6/8
6 실시예 31 1 73.86% 0/8 0/8
7 실시예 31 3 98.32% 7/8 0/8
8 실시예 31 6 100.86% 8/8 0/8
9 실시예 38 1 78.13% 1/8 0/8
10 실시예 38 3 98.97% 8/8 0/8
11 실시예 38 6 91.84% 4/8 0/8
11 실시예 38 6 91.84% 4/8 0/8
참고: CR은 종양이 없는 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다. 독성은 사망 마우스 수/치료된 마우스 수로 보고된다.
이러한 결과는 2단계 페길화 방법으로 합성된 평가된 rIL-2-중합체 접합체가 rIL-2 및 기존 PEG 시약의 접합에 의해 제조된 참조 PEG-IL2 접합체보다 더 나은 효능 및 더 낮은 독성을 입증했음을 나타낸다. 실시예 31 및 실시예 38은 각각 6mg/kg 및 3mg/kg으로 100% CR을 달성하였다. 또한, 작은 링커를 사용하는 IL-2의 기능화 수는 효능에 미치게 된다. 실시예 31(x 평균값 =6인 작은 링커로 기능화됨)과 실시예 38(x 평균값 =4인 작은 링커로 기능화됨)의 효능을 비교하면, 실시예 38은 1mg/kg 및 3mg/kg의 저용량에서 더 효과적이다. 실시예 31은 더 나은 용량 반응을 보였고 6mg/kg의 고용량에서 더 나은 효능을 나타내는 것으로 입증되었다.
관련 내용의 상호 참조
본 명세서에 인용된 모든 참고문헌, 논문, 간행물, 특허, 특허 개시물 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 전체 내용은 본 명세서에 참조로서 포함된다. 그러나 여기에 인용된 임의의 참고문헌, 논문, 간행물, 특허, 특허 개시물 및 특허 출원에 대한 언급은 전 세계 어느 국가에서나 유효한 선행 기술을 구성하거나 일반 지식의 일부를 구성한다는 인정이나 암시로 간주되어서는 안된다.
SEQUENCE LISTING <110> OD Therapeutics Limited <120> PROTEIN-MACROMOLECULE CONJUGATES AND METHODS OF USE THEREOF <130> PN219577BXYY <150> US 63/167,419 <151> 2021-03-29 <150> PCT/US2022/022328 <151> 2022-03-29 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> rIL-2 <400> 1 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130

Claims (135)

  1. 적어도 하나의 링커에 공유 결합으로 연결된 단백질을 포함하는 접합체로서,
    하기 화학식 (XIX)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    단백질-(L)z
    (XIX)
    상기 식에서,
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    각각의 L은 독립적으로 링커이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  2. 제1항에 있어서,
    a) 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이고; 및/또는
    b) 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커인 접합체.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커인 접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXIII)에 따른 구조, 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (L2)z2-단백질-(L1)z1
    (XXIII)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커이며;
    각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커 L, L1 또는 L2는 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기 FG2를 포함하는 접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커는 상기 단백질 내 잔기의 아민기에 공유 결합으로 연결되는 접합체.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 잔기는 라이신인 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 혼합물을 포함하는 조성물.
  9. 단백질, 적어도 하나의 링커 및 적어도 하나의 거대분자를 포함하는 접합체로서,
    상기 단백질은 링커를 통해 각각의 거대분자에 공유 결합으로 연결되고, 상기 거대분자는 선형 또는 분지형 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  10. 제9항에 있어서,
    a) 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커이거나;
    b) 각각의 상기 링커는 방출 가능한 링커이거나; 또는
    c) 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커인 접합체.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    2개 이상의 링커를 포함하는 접합체.
  12. 제11항에 있어서,
    a) 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 불가능한 링커를 포함하거나;
    b) 상기 2개 이상의 링커는 적어도 하나의 방출 가능한 링커를 포함하거나; 또는
    c) 상기 2개 이상의 링커는 1개 내지 8개의 방출 가능한 링커 및 1개 내지 3개의 방출 불가능한 링커를 포함하는 접합체.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커인 접합체.
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 거대분자는 폴리(에틸렌 글리콜)의 중합체인 접합체.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 폴리(에틸렌 글리콜)을 하이드록시, 알콕시, 치환된 알콕시, 알케닐옥시, 치환된 알케닐옥시, 알키닐옥시, 치환된 알키닐옥시, 아릴옥시 및 치환된 아릴옥시로부터 선택된 말단-캡핑 모이어티로 말단-캡핑하는 접합체.
  16. 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 약 100,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖거나;
    b) 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 20,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖거나;
    c) 상기 거대분자는 약 20,000달톤 내지 85,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖거나; 또는
    d) 상기 거대분자는 약 85,000달톤 내지 약 100,000달톤 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 접합체.
  17. 제9항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 상기 링커를 통해 상기 단백질 내 잔기의 아민기에 공유 결합으로 연결되는 접합체.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 잔기는 라이신인 접합체.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 거대분자는 방출 가능한 링커를 통해 단백질에 연결되고, 상기 거대분자는 약 500달톤 내지 20,000달톤 미만 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 접합체.
  20. 제9항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 하나 또는 복수의 거대분자가 하나 또는 복수의 링커를 통해 상기 단백질에 연결되거나; 또는
    b) 8개 이상의 거대분자가 8개 이상의 링커를 통해 상기 단백질에 연결되는 접합체.
  21. 제9항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XX-I)에 따른 구조, 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (FG2-L)y-단백질-(L-거대분자)z
    (XX-I)
    상기 식에서,
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    y는 0 내지 24의 정수이고;
    각각의 L은 독립적으로 링커이며;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이며;
    각각의 거대분자는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  22. 제21항에 있어서,
    a) 적어도 하나의 링커는 방출 불가능한 링커이고; 및/또는
    b) 적어도 하나의 링커는 방출 가능한 링커인 접합체.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서,
    z는 1 내지 5의 정수이고;
    L은 방출 불가능한 링커인 접합체.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 접합체는 제1항에 따른 접합체와 적합한 거대분자의 클릭 화학 반응으로부터 생성되되, 제1항에 따른 접합체 중 L은 각각 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기 FG2를 포함하는 접합체.
  25. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXIV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (거대분자2-L2)z2-단백질-(L1)z1
    (XXIV)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기가 없고;
    각각의 L2는 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  26. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXV)에 따른 구조, 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (FG2-L2)z2-단백질-(L1-거대분자1)z1
    (XXV)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이며;
    각각의 L2는 독립적으로 방출 가능한 링커 또는 방출 불가능한 링커이고;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    각각의 거대분자1은 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서,
    a) 각각의 L1은 방출 가능한 링커이고 각각의 L2는 방출 불가능한 링커이거나;
    b) 각각의 L1은 방출 가능한 링커이고 각각의 L2는 방출 가능한 링커이거나; 또는
    c) 각각의 L1은 방출 불가능한 링커이고 각각의 L2는 방출 가능한 링커인 접합체.
  28. 제9항 내지 제20항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXVI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (거대분자2-L2)z2-단백질-(L1-거대분자1)z1
    (XXVI)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 L1은 독립적으로 방출 가능한 링커이고;
    각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    각각의 거대분자1은 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드이며;
    각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  29. 제28항에 있어서,
    상기 접합체는 제26항에 따른 접합체와 적합한 거대분자의 클릭 화학 반응으로부터 생성되는 접합체.
  30. 제9항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 가수분해로부터 생성되며, 하기 화학식 (XXVII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 또는 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;
    (거대분자2-L2)z2-단백질
    (XXVII)
    상기 식에서
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 L2는 독립적으로 방출 불가능한 링커이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    각각의 거대분자2는 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 접합체.
  31. 조성물로서,
    제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 혼합물을 포함하는 조성물.
  32. 제1항 내지 제3항 및 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 복수의 접합체를 포함하는 조성물로서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 8 사이인 조성물.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 4 사이인 조성물.
  34. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXVIII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하되;

    (XXVIII)
    상기 식에서,
    각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  35. 제34항에 있어서,
    a는 0 내지 2의 정수이고;
    Y1 및 Y2는 각각 O이며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖는 접합체.
  37. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXIX)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하되;

    (XXIX)
    상기 식에서,
    각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 독립적으로 O 또는 S이며;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  38. 제37항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 O이며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖는 접합체.
  40. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXIX-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체를 포함하되;

    (XXIX-I)
    상기 식에서,
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  41. 제40항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖는 접합체.
  42. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XIII-I)
    상기 식에서,
    각각의 POLY1은 독립적으로 제1 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 POLY2는 독립적으로 제2 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
    인접한 c가 1 또는 2인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 제1 스페이서 모이어티이고;
    인접한 c가 0인 경우, 각각의 X1은 독립적으로 수소 또는 -X-FG2이며;
    존재하는 경우, 각각의 X2는 독립적으로 제2 스페이서 모이어티이고;
    각각의 T1은 독립적으로 제1 트리아졸 작용기이며;
    각각의 T2는 독립적으로 제2 트리아졸 작용기이고;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이거나; 또는 -X-FG2이며;
    각각의 X는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이며;
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 5의 정수이고;
    각각의 b는 독립적으로 0 내지 3의 정수이며;
    각각의 c는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    y는 0 내지 24의 정수이고;
    각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  43. 제42항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-A-I)에 따른 구조를 포함하는 접합체.

    (XIII-A-I)
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  45. 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-A1-I)에 따른 구조를 포함하되,

    (XIII-A1-I)
    상기 식에서,
    각각의 a는 독립적으로 1 내지 2의 정수이고;
    각각의 Re는 독립적으로 4-F, 4-Cl, 4-CF3, 2,4-디플루오로 또는 2-CF3-4-F로 치환되며;
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    y는 0 내지 24의 정수이며;
    z는 1 내지 25의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  46. 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    각각의 a는 1이고; 각각의 Re는 독립적으로 4-Cl 또는 2-CF3-4-F로 치환되며; 각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z는 1 내지 10의 정수이며; y는 0 내지 10의 정수이고; 단백질은 IL-2인 접합체.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    z는 1, 3 또는 6인 접합체.
  48. 제42항 내지 제47항 중 어느 한 항에 따른 다수의 접합체를 포함하는 조성물로서,
    상기 다수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 8 사이인 조성물.
  49. 제48항에 있어서,
    상기 다수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 4 사이인 조성물.
  50. 제42항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-B-I)에 따른 구조를 포함하는 접합체.

    (XIII-B-I)
  51. 제51항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-B1-I)에 따른 구조를 포함하되,

    (XIII-B1-I)
    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    y는 0 내지 24의 정수이며;
    z는 1 내지 25의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    z는 1 내지 10의 정수이고; y는 0 내지 10의 정수이며; 단백질은 IL-2인 접합체.
  54. 제50항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    z는 1, 3 또는 6인 접합체.
  55. 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 따른 복수의 접합체를 포함하는 조성물로서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 8 사이인 조성물.
  56. 제55항에 있어서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 4 사이인 조성물.
  57. 제42항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-C-I)에 따른 구조를 포함하는 접합체.

    (XIII-C-I)
  58. 제57항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-C1-I)에 따른 구조를 포함하되,

    (XIII-C1-I)
    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    y는 0 내지 24의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  60. 제42항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-D-I)에 따른 구조를 포함하는 접합체.

    (XIII-D-I)
  61. 제60항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  62. 제60항 또는 제61항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XIII-D1-I) 또는 (XIII-D2-I)에 따른 구조를 포함하되,

    (XIII-D1-I) 또는

    (XIII-D2-I);
    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z는 1 내지 25의 정수이며;
    y는 0 내지 24의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  63. 제57항 내지 제62항 중 어느 한 항에 따른 복수의 접합체를 포함하는 조성물로서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 8 사이인 조성물.
  64. 제63항에 있어서,
    상기 복수의 접합체의 z의 평균값은 1 내지 약 4 사이인 조성물.
  65. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXI)
    상기 식에서,
    각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티거나 수소이고;
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이고;
    각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
    z1은 1 내지 20의 정수이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  66. 제65항에 있어서,
    각각의 a는 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 O이며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 접합체.
  67. 제65항 또는 제66항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  68. 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    z1은 1 내지 10의 정수이고; z2는 1 내지 3의 정수이며; 단백질은 IL-2인 접합체.
  69. 제65항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    z1은 3 내지 4의 정수이고; z2는 1인 접합체.
  70. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXII)
    상기 식에서,
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  71. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXII-I)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXII-I)
    상기 식에서,
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 T2는 독립적으로 트리아졸 작용기이며;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    y는 1 내지 5의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서,
    각각의 Y3은 O인 접합체.
  73. 제70항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z2는 1 내지 3의 정수이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  74. 제71항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    y는 1 내지 3의 정수이며;
    z2는 1 내지 3의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  75. 제73항 또는 제74항에 있어서,
    z2는 1이고, 단백질은 IL-2인 접합체.
  76. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXIV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXIV)
    상기 식에서,
    각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
    각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
    z1은 1 내지 20의 정수이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이고;
    존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이며;
    각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이며;
    각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  77. 제76항에 있어서,
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 O인 접합체.
  78. 제76항 또는 제77항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z1은 1 내지 10의 정수이며;
    z2는 1 내지 3의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  79. 제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    z1은 4이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2인 접합체.
  80. 제9항 내지 제30항 및 제76항 중 어느 한 항에 따른 접합체로부터 가수분해된 접합체로서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXV)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXV)
    상기 식에서,
    각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 Y3은 O 또는 S이며;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  81. 제80항에 있어서,
    Y3은 O이고; z2는 1 내지 3의 정수인 접합체.
  82. 제80항 또는 제81항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2이고; 상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 IL-2 내 잔기의 아민기인 접합체.
  83. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXVI)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXVI)
    상기 식에서,
    각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이며;
    존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이고;
    각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 Y1은 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 Y2는 독립적으로 O 또는 S이며;
    각각의 Y3은 독립적으로 O 또는 S이고;
    각각의 FG2는 독립적으로 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이고;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  84. 제83항에 있어서,
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 O인 접합체.
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z1은 1 내지 10의 정수이며;
    z2는 1 내지 3의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  86. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    z1은 1 내지 4의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2인 접합체.
  87. 제9항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 화학식 (XXXVII)에 따른 구조 또는 이의 입체이성질체, 위치이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물, 이의 동위원소 변이체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함하되;

    (XXXVII)
    상기 식에서,
    각각의 POLY1은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 POLY2는 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이며;
    각각의 POLY3은 독립적으로 선형 또는 분지형 수용성 중합체이고;
    각각의 R1은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    각각의 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 4의 정수이며;
    z1은 1 내지 20의 정수이고;
    z2는 1 내지 5의 정수이며;
    존재하는 경우, 각각의 Re1은 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제1 전자 변경기이고;
    존재하는 경우, 각각의 Re2는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 제2 전자 변경기이며;
    각각의 X1은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 X2는 독립적으로 스페이서 모이어티이며;
    각각의 X3은 독립적으로 스페이서 모이어티이고;
    각각의 Y1은 O 또는 S이며;
    각각의 Y2는 O 또는 S이고;
    각각의 Y3은 O 또는 S이며;
    각각의 T는 독립적으로 트리아졸 작용기이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  88. 제87항에 있어서,
    a1 및 a2는 각각 독립적으로 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    Re1 및 Re2는 각각 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3이고;
    Y1, Y2 및 Y3은 각각 O인 접합체.
  89. 제87항 또는 제88항에 있어서,
    상기 접합체는 하기 구조를 갖되,

    상기 식에서,
    각각의 n은 독립적으로 4 내지 1500의 정수이고;
    z1은 1 내지 10의 정수이며;
    z2는 1 내지 3의 정수이고;
    상기 단백질에 연결된 각각의 -NH-는 상기 단백질 내 잔기의 아민기인 접합체.
  90. 제87항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서,
    z1은 1 내지 4의 정수이고; z2는 1이며; 단백질은 IL-2인 접합체.
  91. 제5항 내지 제7항, 제21항 내지 제24항, 제26항, 제27항, 제37항, 제38항, 제40항, 제42항 내지 제44항, 제71항, 제72항, 제83항 및 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)인 접합체.
  92. 제1항 내지 제7항, 제9항 내지 제30항, 제34항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항, 제57항 내지 제62항 및 제65항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 접합체.
  93. 제92항에 있어서,
    상기 사이토카인은 M-CSF, G-CSF, GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, IL-38, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, TNF-β 또는 CXL10인 접합체.
  94. 제92항 또는 제93항에 있어서,
    상기 사이토카인은 IL-2인 접합체.
  95. 제93항 또는 제94항에 있어서,
    상기 IL-2는 서열번호 1과 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 포함하는 접합체.
  96. 제92항에 있어서,
    상기 케모카인은 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-24, MCP-5, CXCL76, I-309(CCL1), BCA1(CXCL13), MIG, SDF-1/PBSF, IP-10, I-TAC, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, 에오탁신-1, 에오탁신-2, GCP-2, Gro-α, Gro-β, Gro-γ, LARC(CCL20), ELC(CCL19), SLC(CCL21), ENA-78, PBP, TECK(CCL25), CTACK(CCL27), MEC, XCL1, XCL2, HCC-1, HCC-2, HCC-3 또는 HCC-4인 접합체.
  97. 제92항에 있어서,
    상기 항체는 앤지오포이에틴 2, AXL, ACVR2B, 앤지오포이에틴 3, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, 아밀로이드 A 단백질, β-아밀로이드, AOC3, BAFF, BAFF-R, B7-H3, BCMAC, A-125(이미테이션), C5, CA-125, CCL11(에오탁신-1), CEA, CSF1R, CD2, CD3, CD4, CD6, CD15, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD54, CD56, CD70, CD74, CD97B, CD125, D134, CD147, CD152, CD154, CD279, CD221, C242 항원, CD276, CD278, CD319, 클로스트리디엄 디피실(clostridium difficile), 클라우딘 18 아이소폼 2, CSF1R, CEACAM5, CSF2, 탄산무수화효소 9, CLDN18.2, 심장 마이오신, CCR4, CGRP, 응고 인자 III, c-Met, CTLA-4, DPP4, DR5, DLL3, DLL4, 다비가트란(Dabigatran), EpCAM, 에볼라바이러스 당단백질, 엔도글린(Endoglin), 에피시알린(episialin), EPHA3, c-Met, FGFR2, 피브린 II β 사슬, FGF 23, 폴레이트 수용체 1, GMCSF, GD2 강글리오사이드, GDF-8, GCGR, 젤라티나제 B, 글리피칸 3, GPNMB, GMCSF 수용체 α-사슬, 칼리크레인, KIR2D, ICAM-1, ICOS, IGF1, IGF2, IGF-1 수용체, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4Rα, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-9, IL-12, IL-13, IL17A, IL17F, IL-20, IL-22, IL-23, IL-31, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 인테그린 α4β7, 안터페론 α/β 수용체, 인플루엔자 A 헤마글루티닌, ILGF2, HER1, HER2, HER3, HHGFR, HGF, HLA-DR, B형 간염 표면 항원, HNGF, Hsp90, HGFR, L-셀렉틴, 루이스-Y 항원, LYPD3, LOXL2, LIV-1, MUC1, MCP-1, MSLN, 메소텔린, MIF, MCAM, NCA-90, NCA-90 노치 1, 넥틴-4, PCDP1, PD-L1, PD-1, PCSK9, PTK7, PCDC1, 포스파티딜세린, RANKL, RTN4, 레서스 인자, ROR1, SLAMF7, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) α 독소, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 2성분 류코시딘, SOST, 셀렉틴 P, SLITRK6, SDC1, TFPI, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, TNF-α, TWEAK 수용체, TNFRSF8, TYRP1, 타우 단백질, TAG-72, TSLP, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TGF-β, TAG-72, TRAP, TIGIT, 테나신 C, OX-40, VEGF-A, VWF, VEGFR1 또는 VEGFR2 중 하나 또는 복수를 표적으로 하는 접합체.
  98. 제34항, 제35항, 제37항, 제38항, 제40항, 제42-44항, 제46항, 제47항, 제50항, 제51항, 제53항, 제54항, 제57항, 제58항, 제65항, 제66항, 제68항 내지 제72항, 제76항, 제77항, 제79항 내지 제81항, 제83항, 제84항, 제86항 내지 제88항 및 제90항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서 모이어티는 -O-, -NH-, -S-, -S-S-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -OP(O)(OH)-, -OP(S)(OH)-, -C(S)-, -[CH2]1-6-, -O-CH2-, -CH2-O-, -O-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-O-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-, -C(O)-O-CH2-, -CH2-C(O)-O-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-O-CH2-, -C(O)-O-CH2-CH2-, -NH-C(O)-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -C(O)-NH-CH2-, -C(O)-NH-CH2-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-, -O-C(O)-NH-CH2-CH2-, -NH-CH2-, -NH-CH2-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-CH2-NH-CH2-, -C(O)-CH2-, -C(O)-CH2-CH2-, -CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-CH2-CH2-, -CH2-CH2-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-, -CH2-CH2-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH2-, -[CH2]0-6-O-(CH2CH2O)1-20-[CH2]0-6- 또는 -O-C(O)-NH-[CH2]0-6-(OCH2CH2)0-20-인 접합체.
  99. 제42항, 제60항 및 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서 모이어티는 또는 인 접합체.
  100. 제9항 내지 제30항, 제42항 내지 제44항, 제46항, 제47항, 제50항, 제51항, 제53항, 제54항, 제57항, 제78항, 제60항, 제61항, 제65항, 제66항, 제68항 내지 제72항, 제76항, 제77항, 제79항 내지 제81항, 제83항, 제84항, 제86항 내지 제88항 및 제90항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 선형 또는 분지형 수용성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜)의 중합체인 접합체.
  101. 하기 화학식 (XXI)에 따른 구조를 갖는 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체로서,

    (XXI)
    상기 식에서,
    X는 스페이서 모이어티거나 수소이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
    a는 0 내지 4의 정수이고;
    FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기인 방출 가능한 링커.
  102. 제101항에 있어서,
    a는 0 내지 2의 정수이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, Me 또는 Et이며;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, -CF3, -CONHMe, -SO2NHMe, -OMe, -NHMe, -NHAc, -NHSO2Me 또는 -OCF3인 방출 가능한 링커.
  103. 제101항 또는 제102항에 있어서,
    상기 방출 가능한 링커는 하기 구조를 갖는 방출 가능한 링커.
  104. 하기 화학식 (XXII)에 따른 구조를 갖는 방출 가능한 링커 또는 이의 입체이성질체, 호변이성질체 또는 혼합물 또는 이의 동위원소 변이체로서,

    (XXII)
    상기 식에서,
    X1은 스페이서 모이어티이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이며;
    R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴이고;
    각각의 Re는 독립적으로 니트로, 시아노, 할로겐, 아미드, 치환된 아미드, 설폰, 치환된 설폰, 설폰아미드, 치환된 설폰아미드, 알콕시, 치환된 알콕시, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴로부터 선택된 전자 변경기이며;
    a는 0 내지 4의 정수이고;
    Y1은 O 또는 S이며;
    Y2는 O 또는 S이고;
    FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 방출 가능한 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
    FG2는 클릭 화학을 통해 반응할 수 있는 작용기인 방출 가능한 링커.
  105. 제104항에 있어서,
    a는 0이고; R1은 수소이며; R2는 수소이고; Y1은 O이며; Y2는 O인 방출 가능한 링커.
  106. 제104항 또는 제105항에 있어서,
    상기 방출 가능한 링커는 하기 구조를 가지며:

    상기 구조에서, n은 1 내지 10의 정수인 방출 가능한 링커.
  107. 제101항, 제102항, 제104항 및 제105항 중 어느 한 항에 있어서,
    FG1은 활성제의 아미노기와 반응하여 카바메이트 결합을 형성할 수 있는 작용기인 방출 가능한 링커.
  108. 제107항에 있어서,
    FG1은 인 방출 가능한 링커.
  109. 제104항, 제105항, 제107항 및 제108항 중 어느 한 항에 있어서,
    FG2는 아지드, 알키닐 또는 시클로알키닐인 방출 가능한 링커.
  110. 제109항에 있어서,
    상기 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)인 방출 가능한
  111. 스킴 (II)에 따른 단백질-거대분자 접합체의 제조 방법으로서,

    (스킴 II)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 RL은 독립적으로 방출 가능한 링커이며;
    각각의 SL은 독립적으로 방출 불가능한 링커이고;
    FG4 및 FG5는 각각 독립적으로 활성 단백질 시약의 친핵성 기와 반응하여 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
    FG2는 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG3과 반응할 수 있는 작용기이고;
    FG3은 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG2와 반응할 수 있는 작용기이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    거대분자1 및 거대분자2는 각각 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 방법.
  112. 스킴 (III)에 따른 단백질-거대분자 접합체의 제조 방법으로서,

    (스킴 III)
    상기 식에서,
    z1은 1 내지 20의 정수이며;
    z2는 1 내지 5의 정수이고;
    각각의 RL은 독립적으로 방출 가능한 링커이며;
    각각의 SL은 독립적으로 방출 불가능한 링커이고;
    FG4 및 FG5는 각각 독립적으로 활성 단백질 시약의 친핵성 기와 반응하여 결합을 형성할 수 있는 작용기이며;
    FG2는 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG3과 반응할 수 있는 작용기이고;
    FG3은 아지드, 알키닐 및 시클로알키닐로부터 선택된, 클릭 화학을 통해 FG2와 반응할 수 있는 작용기이며;
    단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드이고;
    거대분자1 및 거대분자2는 각각 독립적으로 수용성 중합체, 지질, 단백질 또는 폴리펩티드인 방법.
  113. 제111항 또는 제112항에 있어서,
    a) z1은 1 내지 10의 정수이고; z2는 1 내지 3의 정수이거나; 또는
    b) z1은 1 내지 5의 정수이고; z2는 1인 방법.
  114. 제111항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방출 가능한 링커는 화학식 (I), (I-B), (I-B-1), (I-B-2), (I-C), (I-C-1), (XVIII), (XVIII-1), (XXI), (XXI-1), (XXI-2), (XXII), (XXII-1), (XXII-2), (II), (II-1), (II-A), (III), (III-1) 또는 (IV); RL-1; RL-2; 또는 RL-3으로 표시되는 방출 가능한 링커인 방법.
  115. 제111항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질은 케모카인, 케모카인 길항제, 사이토카인, 사이토카인 길항제, 항체 또는 치료용 펩티드인 방법.
  116. 제115항에 있어서,
    상기 사이토카인은 M-CSF, G-CSF, GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, IL-38, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, TNF-β 또는 CXL10인 방법.
  117. 제115항 또는 제116항에 있어서,
    상기 사이토카인은 IL-2인 방법.
  118. 제116항 또는 제117항에 있어서,
    상기 IL-2는 서열번호 1과 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 포함하는 방법.
  119. 제115항에 있어서,
    상기 케모카인은 MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-24, MCP-5, CXCL76, I-309(CCL1), BCA1(CXCL13), MIG, SDF-1/PBSF, IP-10, I-TAC, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, 에오탁신-1, 에오탁신-2, GCP-2, Gro-α, Gro-β, Gro-γ, LARC(CCL20), ELC(CCL19), SLC(CCL21), ENA-78, PBP, TECK(CCL25), CTACK(CCL27), MEC, XCL1, XCL2, HCC-1, HCC-2, HCC-3 또는 HCC-4인 방법.
  120. 제115항에 있어서,
    상기 항체는 앤지오포이에틴 2, AXL, ACVR2B, 앤지오포이에틴 3, 액티빈 수용체-유사 키나제 1, 아밀로이드 A 단백질, β-아밀로이드, AOC3, BAFF, BAFF-R, B7-H3, BCMAC, A-125(이미테이션), C5, CA-125, CCL11(에오탁신-1), CEA, CSF1R, CD2, CD3, CD4, CD6, CD15, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD54, CD56, CD70, CD74, CD97B, CD125, D134, CD147, CD152, CD154, CD279, CD221, C242 항원, CD276, CD278, CD319, 클로스트리디엄 디피실(clostridium difficile), 클라우딘 18 아이소폼 2, CSF1R, CEACAM5, CSF2, 탄산무수화효소 9, CLDN18.2, 심장 마이오신, CCR4, CGRP, 응고 인자 III, c-Met, CTLA-4, DPP4, DR5, DLL3, DLL4, 다비가트란(Dabigatran), EpCAM, 에볼라바이러스 당단백질, 엔도글린(Endoglin), 에피시알린(episialin), EPHA3, c-Met, FGFR2, 피브린 II β 사슬, FGF 23, 폴레이트 수용체 1, GMCSF, GD2 강글리오사이드, GDF-8, GCGR, 젤라티나제 B, 글리피칸 3, GPNMB, GMCSF 수용체 α-사슬, 칼리크레인, KIR2D, ICAM-1, ICOS, IGF1, IGF2, IGF-1 수용체, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4Rα, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-9, IL-12, IL-13, IL17A, IL17F, IL-20, IL-22, IL-23, IL-31, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 인테그린 α4β7, 안터페론 α/β 수용체, 인플루엔자 A 헤마글루티닌, ILGF2, HER1, HER2, HER3, HHGFR, HGF, HLA-DR, B형 간염 표면 항원, HNGF, Hsp90, HGFR, L-셀렉틴, 루이스-Y 항원, LYPD3, LOXL2, LIV-1, MUC1, MCP-1, MSLN, 메소텔린, MIF, MCAM, NCA-90, NCA-90 노치 1, 넥틴-4, PCDP1, PD-L1, PD-1, PCSK9, PTK7, PCDC1, 포스파티딜세린, RANKL, RTN4, 레서스 인자, ROR1, SLAMF7, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) α 독소, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 2성분 류코시딘, SOST, 셀렉틴 P, SLITRK6, SDC1, TFPI, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, TNF-α, TWEAK 수용체, TNFRSF8, TYRP1, 타우 단백질, TAG-72, TSLP, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TGF-β, TAG-72, TRAP, TIGIT, 테나신 C, OX-40, VEGF-A, VWF, VEGFR1 또는 VEGFR2 중 하나 또는 복수를 표적으로 하는 방법.
  121. 제111항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    거대분자, 거대분자1 및 거대분자2는 각각 독립적으로 약 6 내지 약 26개 탄소 원자를 포함하는 지방산이고, 상기 중합체 중 하나는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(N-아크릴로일몰폴린), 폴리(알콕시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스터), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(트리에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스터), 폴리(옥사졸린), 폴리(에톡실화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리포스파젠, 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(당류), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에터), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 아밀로스, 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산(HA) 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 헤파린, 헤파란 설페이트(HS), 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분(HES), 폴리시알산(PSA) 및 다른 탄수화물계 중합체, 자일란 및 알부민, 트랜스페린, 트랜스티레틴, 면역글로불린, XTEN 펩티드의 공중합체, 글리신-풍부 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체로부터 선택되는 방법.
  122. 제111항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시클로알키닐은 디벤조시클로옥틴(DBCO)인 방법.
  123. 약제학적 조성물로서,
    제1항 내지 제7항, 제9항 내지 제30항, 제34항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항, 제57항 내지 제62항 및 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 접합체, 및 하나 또는 복수의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  124. 약제학적 조성물로서,
    제1항 내지 제7항, 제9항 내지 제30항, 제34항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항, 제57항 내지 제62항 및 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 복수의 접합체 및 하나 또는 복수의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  125. 약제학적 조성물로서,
    제21항 내지 제24항, 제42항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항 및 제57항 내지 제62항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물.
  126. 제125항에 있어서,
    상기 조성물은 제21항 내지 제24항, 제42항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항 및 제57항 내지 제62항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 혼합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  127. 제126항에 있어서,
    상기 접합체의 혼합물은 상이한 z 및/또는 y를 갖는 복수의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물.
  128. 제127항에 있어서,
    상기 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; z가 3인 접합체; z가 4인 접합체; z가 5인 접합체; 및/또는 z가 6인 접합체를 포함하는 약제학적 조성물.
  129. 제126항 또는 제127항에 있어서,
    상기 접합체의 혼합물은 z가 1인 접합체; z가 2인 접합체; 및/또는 z가 3인 접합체를 포함하는 약제학적 조성물.
  130. 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서,
    제8항, 제31항 내지 제33항, 제48항, 제49항, 제55항, 제56항, 제63항, 제64항 및 제123항 내지 제129항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물 또는 제1항 내지 제7항, 제9항 내지 제30항, 제34항 내지 제47항, 제50항 내지 제54항, 제57항 내지 제62항 및 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 접합체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  131. 제130항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 암, 감염 또는 자가면역 질환인 방법.
  132. 제130항 또는 제131항에 있어서,
    다른 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
  133. 제132항에 있어서,
    상기 다른 치료제는 항체인 방법.
  134. 제133항에 있어서,
    상기 항체는 항-종양 항원 항체인 방법.
  135. 제134항에 있어서,
    상기 항-종양 항원 항체는 ADCC 기능을 통해 활성을 갖는 방법.
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