KR20240000260A - 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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김찬식
박봉균
조규형
이익수
송수정
이혜진
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한국 한의학 연구원
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Abstract

본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물은 사삼 추출물 또는 감초 추출물 단독에 비해 눈물 분비량을 더 증가시키고, 각막의 왜곡 및 손상을 더 감소시키는 효과가 있으므로, 전안부 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물; 전안부 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물; 전안부질환의 예방 또는 개선용 의약외품; 사료 첨가제; 또는 수의학적 조성물;로서 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, ameliorating or treating anterior eye disease comprising mixed extract of Adenophorae Radix and Licorice as effective component}
본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
눈은 생활에 필요한 대부분의 정보를 받아들이는 중요한 감각기관이다. 눈의 앞 표면은 각막 또는 결막과 그 뒤에 이어진 공막으로 되어 있고, 중간은 홍채와 모양체, 그리고 맥락막으로 구성되며, 안쪽은 망막으로 이루어져 있다, 수정체와 유리체 및 안방수는 굴절 매질에 해당된다. 눈의 기능적 장애 또는 상실은 생활의 질을 떨어뜨리는 큰 요인의 하나가 되며, 노화, 질환 및 시력에 좋지 않은 영향을 줄 수 있는 기타 요인 때문에 눈의 건강을 유지하는 것이 중요해지고 있다.
전안부 질환은 안구 건조를 비롯한 각막, 결막 질환 등이 포함되며, 그 중에서 안구건조증(dry eye syndrome)은 눈물이 부족하거나 눈물이 지나치게 증발하거나 눈물 구성성분의 균형이 맞지 않아서, 안구 표면이 손상되고 눈이 시리고 자극감, 이물감, 건조감 같은 자극증상을 느끼게 되는 눈의 질환으로, 단순히 눈물부족이 아닌, 눈물과 안구표면(각막 및 결막)의 염증에 의한 안구의 불편감, 시력저하, 눈물 층의 불안정성을 유발하여 안구표면에 손상을 주어, 통증, 불규칙한 각막 표면, 흐리고 변동폭이 커진 시력 및 각막궤양 등의 발병 위험성이 크다. 그러나 이러한 발병기전은 아직 완전히 규명되지 않았으나, 염증세포의 침윤, 면역활성화 분자 및 접착분자발현 증가, Th1 및 Th17 반응, 세포사멸 마커 및 케모카인의 비정상적인 변화 등 염증이 중요한 역할을 한다는 연구결과가 보고되고 있다.
일반적으로 안구 건조증 치료를 위해서 칼륨과 안토시아닌이 풍부한 음식섭취를 권장하고 있고, 이외에도 케일, 키위, 사과 등의 과일섭취도 적극 권장하고 있다, 또한 인공눈물 점안, 눈물점을 막아 배출되는 눈물의 양을 조절하는 치료법을 사용하기도 한다. 그러나 안구건조증은 우리나라 성인의 20% 내외로 발생하는 흔한 질병으로, 특히 전 세계적인 기후 변화 특히 엘리뇨 현상으로 온도가 올라가고 있는 상황과 환경오염으로 인해 안구건조증 환자가 지속적으로 증가하고 있으나, 특별한 치료제 또는 기능성 식품이 없는 상황이다.
한편, 사삼은 높이가 70~120㎝ 사이이며, 꽃은 종 모양으로 7월과 9월 사이에 하늘색으로 핀다. 열매는 끝에 꽃받침이 달린 채로 익으며, 약재 형태는 방추형 또는 긴 원추형이며 구부러졌고 드물게는 가지뿌리가 있다. 사삼은 진액을 보충하여 폐를 윤택하게 하고 열을 식히며 담을 없애 만성적인 기침, 가래를 치료하는 중요한 약재이다. 따라서 폐가 건조하여 나오는 마른 기침과 몸이 허약해져서 발생하는 기침, 열병을 앓은 후에 생기는 갈증과 허열 등에 효과가 있다.
감초(Licorice)는 콩과에 속하는 다년생 초본인 유럽감초(Glycyrrhiza glabra)와 만주감초(G. uralensis) 및 기타 동속식물의 뿌리 및 뿌리줄기를 건조한 것으로서, 주성분으로는 트리테르펜사포닌(triterpen saponin)인 글리시리진(Glycyrrhizin)를 비롯하여 리퀴이리틴(liquiritin) 등의 플라보노이드계 화합물 등을 함유하고 있다. 약리작용으로는 부신피질호르몬 유사작용, 항위궤양 효능, 평활근이완 작용, 간기능 보호작용, 소염, 항알러지작용, 항바이러스 작용이 있다.
사삼 또는 감초 관련 기술로는 한국등록특허 제2056926호에 사삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제2212158호에 감초 추출물을 포함하는 망막 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있으나, 아직까지 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물이 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물은 사삼 추출물 또는 감초 추출물 단독에 비해 눈물 분비량을 더 증가시키고, 각막의 왜곡 및 손상을 더 감소시키는 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 의약외품을 제공한다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제를 제공한다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물은 사삼 추출물 또는 감초 추출물 단독에 비해 눈물 분비량을 더 증가시키고, 각막의 왜곡 및 손상을 더 감소시키는 효과가 있다.
도 1은 동물 모델의 눈물샘을 제거하여 건성안을 유발시킨 후, 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물의 투여에 따른 랫트의 눈물 분비량 변화를 확인한 결과이다. #은 정상군(NOR) 대비 건성안 유발군(DED)의 눈물 분비량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.05이며, ***는 건성안 유발군(DED)에 비해 사삼 추출물을 경구투여한 비교군 및 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물을 경구투여한 실험군의 눈물 분비량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이다. $는 사삼 추출물 투여군 대비 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물의 투여군의 눈물 분비량이 더 증가하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 2는 동물 모델의 눈물샘을 제거하여 건성안을 유발시키기 전 3일 동안 사삼 추출물, 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물을 경구 투여하고 건성안을 유발시킨 후, 사삼 및 감초 혼합 추출물을 5일 동안 추가 투여하여 랫트의 각막의 왜곡 정도를 촬영한 사진(A) 및 이를 정량한 그래프(B)이다. DED는 눈물샘 제거에 의한 건성안 유발군이며, 사삼 250은 건성 안 유발 전 3일 동안, 건성 안 유발 후 5일 동안 250mg/kg/day의 사삼 추출물을 경구투여한 비교군이고, 사삼+감초(9:1)은 본 발명에 따른 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군이다. #은 정상군(NOR) 대비 건성안 유발군(DED)의 눈물샘 왜곡 정도가 유의미하게 증가하였다는 것으로 p<0.05이다. ***은 건성안 유발군 대비 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군의 눈물샘 왜곡 정도가 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.001이다. $은 사삼 추출물 투여군 대비 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군의 눈물샘 왜곡 정도가 유의미하게 더 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 3은 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여에 따른 랫트의 각막 손상 정도를 측정한 사진(A) 및 각막 손상에 따른 각막의 염색 정도(corneal staining score)를 나타낸 그래프(B)이다. DED는 눈물샘 제거에 의한 건성안 유발군, 사삼 250은 건성안 유발 전, 후에 사삼 추출물을 250mg/kg/day 경구투여한 비교군이다. #는 정상군(NOR) 대비 건성안 유발군(DED)의 각막 손상이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.05이며, ***는 건성안 유발군(DED) 대비 사삼 추출물 투여군 및 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군의 각막 손상이 통계적으로 유의미하게 감소했다는 것으로, p<0.001이다. $은 사삼 추출물 투여군 대비 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군의 각막손상이 유의미하게 더 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 4는 사삼 및 감초 혼합 추출물의 결막세포 보호효과를 확인한 결과이다. ARE는 사삼 추출물 단독 처리군이고, GUE는 감초 추출물 단독처리군이다. CTL은 음성대조군으로, 아무것도 처리하지 않은 것이다. #은 고 삼투압에 의해 결막세포 독성이 유의미하게 발생하였다는 것으로, p<0.05이고, *은 9:1 및 8:2의 혼합비로 혼합한 사삼 및 감초 혼합 추출물이 통계적으로 유의미하게 세포 보호 효과가 있다는 것으로, p<0.05이다.
도 5는 염화나트륨(NaCl)에 의한 고삼투압 유발 후, 사삼 및 감초 혼합 추출물의 처리에 따른 염증지표 인자인 TNF-α(A), IL-1β(B), MMP9(C) 및 IL-17(D) mRNA 발현량 감소를 확인한 결과이다. CTL은 음성대조군으로, 아무것도 처리하지 않은 것이다. #은 고삼투압에 의해 염증지표 인자의 발현량이 증가하였다는 것으로 p<0.05이고, *은 9:1의 사삼 및 감초 혼합 추출물 처리군의 염증지표 인자 발현량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 전안부 질환은 안구건조증 또는 건성각결막염인 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 사삼 및 감초 혼합 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:
(1) 사삼 및 감초 혼합물에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
(2) 단계 (1)에서 획득한, 사삼 및 감초 혼합 추출물을 여과하는 단계; 및
(3) 단계 (2)에서 여과한, 사삼 및 감초 혼합 추출물을 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.
상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물이지만 이에 한정하지 않는다. 상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 사삼 및 감초 혼합물 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 1~10배 첨가하는 것이다. 추출온도는 60~100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 추출시간은 1~48시간인 것이 바람직하며, 1~24시간이 더욱 바람직하고, 5시간이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 방법에 있어서, 단계 (3)의 농축은 진공 회전 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 동결건조이나 이에 한정하지 않는다.
본 발명에서 사용되는 용어, '분획물'은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다. 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 사삼 및 감초 혼합물을 추출하여 얻은 사삼 및 감초 혼합 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 분획물은 사삼 및 감초 혼합 추출물의 헥산 분획물, 에틸 아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물일 수 있다. 상기 분획물은 각각 조성물의 총 중량에 대하여 0.01~100중량%, 보다 구체적으로 1~80중량%로 포함될 수 있다. 본 발명에서, 사삼 및 감초 혼합 추출물의 용매 분획물은 사삼 및 감초 혼합 추출물을 물로 현탁한 후 n-헥산(n-hexane), 에틸 아세테이트(EtOAc) 또는 n-부탄올(n-BuOH)과 같은 비극성 용매를 사용하여 분획함으로써 극성 용매 분획물과 비극성 용매 분획물을 각각 수득할 수 있다. 본 발명에서, 구체적인 일 양태로서 용매 분획물로는 물 분획물, n-헥산 분획물, 에틸 아세테이트 분획물 또는 n-부탄올 분획물이 제공된다. 본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexane), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다.
본 발명에서 '안구건조증(dry eye syndrome)'은 눈물샘의 염증 및 각막의 탈신경화에 의하여 눈물 분비가 억제되거나 마이봄선의 기능부전(Meibomian gland dysfunction) 또는 눈꺼풀의 기능 이상에 따른 비정상적인 눈물 증발 등에 의하여 발생하는 질환일 수 있고, 상기 안구건조증에 의해 눈물이 과다건조되어 각막의 상처로 나타나는 각막 또는 결막의 상피 장애일 수 있다. '건성각결막염(keratoconjunctivitis sicca)'은 안구건조증 등의 누액 분비저하로 생기는 눈병이다.
본 발명에서 '예방'은 본 발명에 따른 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물의 투여로 전안부 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 '개선' 또는 '치료'는 본 발명에 따른 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물의 투여로 상기 전안부 질환의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.
상기 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물은 눈물 분비량을 증가시키거나, 각막 형태 변화를 억제하는 것이 특징이고, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 성분들 이외에 항산화제, 완충액, 정균제, 희석제, 계면활성제, 결합제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 전안부 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 점안 투여, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피 패치투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장 내 투여 등의 경로를 통해 투여될 수 있고, 바람직하게는 경구투여 또는 점안 투여의 경로를 통해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 제조될 수 있다. 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 카라멜, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 중에서 선택된 어느 하나의 형태일 수 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 즉, 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 상기의 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토스, 슈크로스와 같은 이당류, 덱스트린, 사이클로 덱스트린과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 크게 중요하지 않지만, 본 발명의 조성물 100g에 대하여, 0.01~0.04g인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.02~0.03g을 포함하는 것이지만 이에 한정하지 않는다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 의약외품에 관한 것이다.
본 발명에서 용어, '의약외품'은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미한다. 또한, 상기 의약외품은 피부 외용제를 포함한다.
본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 피부 외용제는 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 경구 투여 또는 점안 투여를 위한 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제에 관한 것이다.
본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 의한 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제, 점안제 (eye drop) 등의 형태일 수 있다.
본 발명에 의한 수의학적 조성물은 그 용도에 따라 상기 추출물을 유효한 양, 또는 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 유효한 양은 동물의 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 추출물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
실시예 1. 사삼 및 감초 혼합 추출물의 제조
9:1의 중량비로 혼합한 사삼 및 감초 혼합물에 5배량의 정제수를 가하여 95℃에서 5시간 동안 추출 후 추출액을 100호 체를 이용하여 여과하였다. 감압농축기를 이용하여 60℃ 이하에서 감압농축한 후에 동결건조기를 이용하여 동결건조하여 사삼 및 감초 혼합 추출물을 제조하였다.
한편, 비교군으로 사용한 사삼 추출물 및 감초 추출물도 사삼 및 감초 혼합 추출물과 동일한 방법으로 추출하여 사용하였다.
실시예 2. 눈물 분비량 측정
[동물 모델 및 약물 투여]
그룹별 약물 투여량
그룹 약물 농도
정상군 -
건성안 유도군 -
사삼 추출물 투여군 250mg/kg/day
사삼+감초(9:1) 추출물 투여군 250mg/kg/day(225+25)
사삼 및 감초 혼합 추출물을 3일 동안 경구 투여한 후, 눈물샘을 제거하고, 5일 동안 사삼 및 감초 혼합 추출물을 경구 투여하였다. 이후, 실험동물을 마취하고 PRT(Phenol Red Thread) 테스트를 실험동물 양쪽 안구 하안검 외안각 부위에 1분 동안 방치하여 제거한 후 붉은 색으로 변한 부분의 길이를 mm 단위로 측정하였다.
그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물을 투여한 군의 눈물 분비량이 눈물샘을 제거한 안구건조증 유발군(DED)에 비해 증가한 것을 확인하였다. 또한, 비교군인 사삼 추출물 투여군에 비해서도 눈물 분비량이 더 증가하였다. 그러나, 또 다른 비교군인 감초 추출물 투여군의 눈물 분비량은 눈물샘을 제거한 안구건조증 유발군(DED)에 비해 유의성 있게 증가하지 않았다.
실시예 3. 각막 형태 변화 측정
눈물샘 제거 후 5일 동안 사삼 및 감초 혼합 추출물을 경구 투여한 후, 실험동물을 마취하고 각막 상피에 세극등 현미경(SZ51, Olympus, Tokyo, Japan)의 ring-shape light로부터의 링 모양의 빛의 반사선을 투사하고 반사된 선을 DP21 디지털 카메라(Olympus, Tokyo, Japan)로 촬영하였다.
그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 건성안 유발군(DED)은 정상군(NOR)에 비해 링이 인식되지 않는 심한 왜곡을 보였으나, 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군은 링의 왜곡면이 감소하였으며, 비교군인 사삼 추출물 투여군에 대비해서도 왜곡면이 더 감소한 것을 확인하였다.
실시예 4. 각막 염색을 통한 각막 손상 정도 측정
눈물샘 제거 후 5일 동안 사삼 및 감초 혼합 추출물을 경구투여한 후, 각막의 손상 정도를 측정하기 위해 3% Lissamine Green B (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA)를 눈의 하부 외측 부위에 점안한 후, 수 초 동안 몇 번 눈을 깜박이게 한 후, 염색 정도를 DP21 디지털 카메라(Olympus, Tokyo, Japan)로 촬영하였다. 각막의 염색 정도는 1~4 등급으로 나누었다.
각막의 염색 정도에 따른 0~4 등급의 판단기준
등급 판단기준
0 염색 없음
1 각막 1/4 부분 염색됨
2 각막 2/4 부분 염색됨
3 각막 3/4 부분 염색됨
4 각막 4/4 부분 염색됨
그 결과, 도 4에 개시한 바와 같이 건성안 유발군(DED)은 정상군(NOR)에 비해 각막이 손상되어 염색이 심하게 이루어졌으나, 본 발명의 사삼 및 감초 혼합 추출물 투여군은 건성안 유발군(DED)에 비해 각막 손상이 유의적으로 회복됨을 알 수 있었고, 비교군인 사삼 추출물 투여군에 대비해서도 손상 정도가 더 감소한 것을 확인하였다.
실시예 5. 세포배양 및 사삼 및 감초 혼합 추출물의 결막세포 보호효과 확인
인간결막상피세포인 HConEpiC 세포는 ATCC에서 구입하였으며, 2mM L-글루타민, 100㎍/㎖의 스트렙토마이신,100IU/㎖의 페니실린 및 10% FBS가 포함된 RPMI 1640 배지로 5% CO2, 37℃ 조건에서 배양하였다. 계대배양은 0.125% 트립신이 포함된 0.01M EDTA를 이용하여 수행하였다. 다양한 비율의 사삼 및 감초 혼합추출물의 세포독성을 측정하기 위해, HConEpiC 세포를 2×104 cells/웰로 96웰 배양 플레이트에 접종 후, 528 mOsM의 NaCl 농도 처리 및 다양한 혼합비를 갖는 250㎍/㎖ 농도의 사삼 및 감초 혼합추출물을 24시간 동안 처리하였다.
혼합추출물의 세포 보호효과를 확인하기 위해 살아있는 세포의 미토콘드리아 활성을 나타내는 CCK-8(Cell counting kit-8) 분석으로 확인하였다. 10㎕의 반응용액을 첨가하여 암반응 시킨 후, 4시간 안에 450nm에서 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 OD 값을 측정하였다.
그 결과, 528 mOsM의 NaCl(고 삼투압) 의해 HConEpiC 세포 독성이 확인되었으며, 9:1 및 8:2의 사삼 및 감초 혼합 추출물을 처리한 군에서는 유의미하게 결막 상피세포 보호 효과가 있는 것으로 나타났다.
실시예 6. 염화나트륨(NaCl)에 의한 고삼투압 유발 후, 사삼 및 감초 혼합 추출물의 항염 효과 확인
60Φ cell plate에 5×105 cells/㎖로 분주하여 하루 동안 안정화시킨 후 528 mOsM의 NaCl과 9:1 비율의 사삼 감초 혼합추출물 농도 10, 100, 250㎍/㎖을 24시간 동안 처리하였다. 1×Buffered Saline)로 2회 세척 후, RNeasy Plus Mini Kit(QIAGEN,Hilden, Germany)을 이용하여 인간결막세포에서 RNA를 추출한 후, iScript cDNA Synthesis Kit(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA)를 이용하여 상기 추출한 1㎍의 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 SYBR Green Supermix(Bio-Rad Laboratories, Inc.), 프라이머(IL-1β, TNF-α, MMP9, IL-17 및 GAPDH)를 이용하여 Realtime PCR을 수행하였다.
인간결막세포에서 사삼 및 감초 혼합추출물의 항염효과를 확인하기 위한 유전자 증폭용 프라이머 서열
프라이머 서열(5'->3') 서열번호
Human IL-1β Forward 5'-AATCTGTACCTGTCCTGCGTGTT-3' 1
Reverse 5'-TGGGTAATTTTTGGGATCTACACTCT-3' 2
Human TNF-α Forward 5'-TTCTCCTTCCTGCTTGTG-3' 3
Reverse 5'-CTGAGTGTGAGTGTCTGG-3' 4
Human MMP9 Forward 5'-GGGACGCAGACATCGTCATC-3' 5
Reverse 5'-TCGTCATCGTCGAAATGGGC-3' 6
Human IL-17 Forward 5'-CGGACTGTGATGGTCAAC-3' 7
Reverse 5'-CAAGGTGAGGTGGATCGGTT-3' 8
Human GAPDH Forward 5'-CCAGCCGAGCCACATCGCTC-3' 9
Reverse 5'-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3' 10
그 결과, 정상세포군(Control)에 비해 NaCl를 처리한 군의 IL-1β, TNF-α, MMP9 및 IL-17 mRNA 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였고, NaCl 처리한 군에 비해 사삼 및 감초 혼합추출물 처리군에서 각 유전자의 mRNA 발현량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다.
<110> Korea Institute of Oriental Medicine <120> Composition for preventing, ameliorating or treating anterior eye disease comprising mixed extract of Adenophorae Radix and Licorice as effective component <130> PN22138 <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1b-F <400> 1 aatctgtacc tgtcctgcgt gtt 23 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1b-R <400> 2 tgggtaattt ttgggatcta cactct 26 <210> 3 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNFa-F <400> 3 ttctccttcc tgcttgtg 18 <210> 4 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNFaR <400> 4 ctgagtgtga gtgtctgg 18 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9-F <400> 5 gggacgcaga catcgtcatc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9-R <400> 6 tcgtcatcgt cgaaatgggc 20 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17-F <400> 7 cggactgtga tggtcaac 18 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17-R <400> 8 caaggtgagg tggatcggtt 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH-F <400> 9 ccagccgagc cacatcgctc 20 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH-R <400> 10 atgagcccca gccttctcca t 21

Claims (9)

  1. 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 포함하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 사삼 및 감초 혼합 추출물의 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 전안부질환은 안구건조증 또는 건성각결막염인 것을 특징으로 하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물; 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 의약외품.
  8. 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제.
  9. 사삼 및 감초 혼합 추출물; 또는 이의 분획물;을 유효성분으로 함유하는 전안부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물.
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