KR20230174198A - Inhibition of anthracnose using Streptomyces murinus JS029 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 스트렙토마이세스 뮤리누스(Streptomyces murinus) JS029 균주(KACC 92370P)를 유효성분으로 함유하며, 본 발명의 탄저병 방제 방법은 JS029 균주의 포자 현탁액을 식물의 표면에 분무하는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명의 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속 진균에 대한 항진균용 조성물은 JS029 균주를 유효성분으로 함유한다.The composition for controlling anthracnose of the present invention contains Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) as an active ingredient, and the anthracnose control method of the present invention involves spraying a spore suspension of the JS029 strain on the surface of the plant. It is characterized by In addition, the antifungal composition against fungi of the genus Colletotrichum of the present invention contains strain JS029 as an active ingredient.
Description
본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스(Streptomyces murinus) JS029를 이용한 탄저병 억제에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주를 이용한 것으로서 탄저병을 효과적으로 방제할 수 있는 조성물 및 방법, 그리고 탄저병 유발 병원균인 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속 진균에 대한 우수한 항진균 활성을 나타낼 수 있는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to the inhibition of anthrax using Streptomyces murinus JS029. More specifically, the present invention uses the Streptomyces murinus JS029 strain to provide a composition and method that can effectively control anthrax, and that can exhibit excellent antifungal activity against fungi of the genus Colletotrichum , an anthrax-causing pathogen. It relates to a composition.
환경 오염에 대한 문제와 합성 화학 물질의 사용에 따른 인체에 대한 유해 가능성 문제 등으로 인해 농업 시스템은 점차 친환경적인 농작물 생산을 목표로 바뀌고 있으며, 이를 실현하기 위한 대안적인 기술에 대한 요구가 커지고 있다.Due to problems with environmental pollution and the possibility of harm to the human body due to the use of synthetic chemicals, agricultural systems are gradually changing to aim for eco-friendly crop production, and the demand for alternative technologies to achieve this is growing.
특히 친환경 농업을 위해서는 기존의 농약을 사용하지 않고 식물에 발생하는 질환, 예를 들어 식물 병원성 곰팡이의 감염에 따른 식물병으로부터 농작물을 보호하는 것이 반드시 필요하기 때문에, 이러한 효과를 나타낼 수 있는 천연자원의 개발은 특히나 중요하다.In particular, for eco-friendly agriculture, it is essential to protect crops from diseases that occur in plants, such as plant diseases caused by infection by plant pathogenic fungi, without using existing pesticides, so natural resources that can have this effect are needed. Development is especially important.
농작물에 질환을 유발하는 곰팡이로서, 스클레로티니아(Sclerotinia) 속, 로셀리니아(Rosellinia) 속, 푸사리움(Fusarium) 속, 알터나리아(Alternaria) 속, 보트라이티스(Botrytis) 속, 피티움(Pythium) 속, 라이족토니아(Rhizoctonia) 속 등의 다양한 곰팡이들이 알려져 있으며, 이들 각각은 다양한 기주 식물에 발생하여 썩음병, 마름병, 시들음병, 무늬병 등과 같은 심각한 질환을 유발하며, 결과적으로 중요한 농작물에 상당한 경제적 손상을 입힌다.Molds that cause diseases in crops include Sclerotinia , Rosellinia , Fusarium , Alternaria , Botrytis , and Pythium. A variety of fungi are known, including the genus Pythium and Rhizoctonia , each of which occurs on various host plants and causes serious diseases such as rot, blight, wilt, and leaf spot disease, and as a result, affects important crops. Cause significant economic damage.
이러한 문제를 해소하기 위한 것으로서, 본 발명자들은 앞서 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성을 갖는 신규 스트렙토마이세스 뮤리누스(Streptomyces murinus) JS029 균주를 발굴하고 이를 활용하는 방법을 연구하여 공개한 바 있으나(한국등록특허 제10-2606381호), 다른 수많은 식물병에 대비하기 위한 기술에 대한 요구는 여전히 존재한다.In order to solve this problem, the present inventors previously discovered a new Streptomyces murinus JS029 strain with antifungal activity against plant pathogenic fungi, studied and disclosed a method of utilizing it (registered in Korea) Patent No. 10-2606381), there is still a need for technology to prepare for numerous other plant diseases.
이에 본 발명자들은 상기 JS029 균주에 대한 추가 연구를 통해 다른 식물병에서의 활용 가능성에 대해 연구하였으며, 이의 결과 JS029 균주를 이용하여 기존에 밝혀진 식물병 방제 효과 이외에 다른 식물병의 방제에도 상당한 효과가 있음을 새롭게 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors studied the possibility of using the JS029 strain in other plant diseases through additional research. As a result, in addition to the previously revealed plant disease control effect using the JS029 strain, it was also significantly effective in controlling other plant diseases. was newly confirmed and the present invention was completed.
본 발명의 주된 목적은 기존에 공개된 JS029 균주의 새로운 활용성을 제시하면서 새로운 식물병 방제 기술을 제시하는 것으로서, 탄저병 방제용 조성물 및 탄저병 방제 방법을 제공하는데 있다.The main purpose of the present invention is to propose a new plant disease control technology while suggesting new utility of the previously disclosed JS029 strain, and to provide a composition for controlling anthracnose and a method for controlling anthracnose.
이에 따른 것으로서, 본 발명의 다른 목적은 탄저병 유발 병원균인 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속 진균에 대한 항진균용 조성물을 제공하는데 있다.Accordingly, another object of the present invention is to provide an antifungal composition against fungi of the genus Colletotrichum , an anthrax-causing pathogen.
일 양상에서, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스(Streptomyces murinus) JS029 균주(KACC 92370P)를 유효성분으로 함유하는 탄저병 방제용 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a composition for controlling anthrax containing Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) as an active ingredient.
다른 양상에서, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주(KACC 92370P)의 포자 현탁액을 식물의 표면에 분무하는 것을 특징으로 하는 탄저병 방제 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for controlling anthracnose, comprising spraying a spore suspension of Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) on the surface of a plant.
또 다른 양상에서, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주(KACC 92370P)를 유효성분으로 함유하는 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속 진균에 대한 항진균용 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides an antifungal composition against fungi of the genus Colletotrichum containing Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) as an active ingredient.
본 발명에 따르면 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주를 이용한 것으로서 탄저병을 효과적으로 방제할 수 있는 조성물 및 방법이 제공된다. 또한, 탄저병 유발 병원균인 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 우수한 항진균 활성을 나타낼 수 있는 조성물이 제공된다.According to the present invention, a composition and method that can effectively control anthrax using the Streptomyces murinus JS029 strain are provided. Additionally, a composition is provided that can exhibit excellent antifungal activity against fungi of the genus Coletotrichum, an anthrax-causing pathogen.
도 1은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주의 콜레토트리쿰 속 진균 억제 효과 확인 실험 결과를 나타낸 것이다. Control = 대조군; Tebuconazole = 화학 살진균제인 테부코나졸 처리군; S. murinus JS029 = JS029 포자 현탁액 처리군; C. scovillei 2022-JE-5 = 탄저병균으로서 콜레토트리쿰 스코빌레이를 사용; C. acutatum KACC 40689 = 탄저병균으로서 콜레토트리쿰 아쿠타툼을 사용; C. gloeosporioides KACC 40003 = 탄저병균으로서 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스 사용.
도 2는 탄저병균으로서 콜레토트리쿰 아쿠타툼을 사용한 JS029 균주의 탄저병 방제 효과 확인 실험 결과를 나타낸 것이다. Control(0.02% Tween 20) = 음성 대조군; 0.02% Tween 20 = 양성 대조군; Benomyl = 화학 살진균제를 적용한 비교군; S. murinus JS029 = JS029 포자 현탁액을 적용한 실험군; dpi = days post inoculation.
도 3은 탄저병균으로서 콜레토트리쿰 스코빌레이를 사용한 JS029 균주의 탄저병 방제 효과 확인 실험 결과를 나타낸 것이다. C. scovillei = 양성 대조군; S. murinus JS029 + C. scovillei = JS029 포자 현탁액을 적용한 실험군; dpi = days post inoculation.
도 4는 JS029 균주의 in vivo 탄저병 방제 효과 확인을 위해 청양 고추를 재배하는 장면을 나타낸 것이다.
도 5는 JS029 균주의 in vivo 탄저병 방제 효과 확인 실험 결과를 나타낸 것이다. Control(0.02% Tween 20) = 음성 대조군; 0.02% Tween 20 = 양성 대조군; Tebuconazole = 화학 살진균제를 적용한 비교군; S. murinus JS029 = JS029 포자 현탁액을 적용한 실험군; dpi = days post inoculation.Figure 1 shows the results of an experiment confirming the inhibitory effect of the Streptomyces murinus JS029 strain on fungi of the genus Coletotrichum. Control = control group; Tebuconazole = group treated with tebuconazole, a chemical fungicide; S. murinus JS029 = JS029 spore suspension treatment group; C. scovillei 2022-JE-5 = using Colletotrichum scovillei as the anthrax pathogen; C. acutatum KACC 40689 = using Colletotrichum acutatum as anthrax fungus; C. gloeosporioides KACC 40003 = Use of Coletotrichum gloeosporioides as anthrax pathogen.
Figure 2 shows the results of an experiment confirming the anthrax control effect of the JS029 strain using Colletotrichum acutatum as an anthrax bacteria. Control(0.02% Tween 20) = negative control; 0.02% Tween 20 = positive control; Benomyl = comparison group treated with chemical fungicide; S. murinus JS029 = experimental group to which JS029 spore suspension was applied; dpi = days post inoculation.
Figure 3 shows the results of an experiment confirming the anthrax control effect of the JS029 strain using Colletotrichum scobilei as an anthrax bacteria. C. scovillei = positive control; S. murinus JS029 + C. scovillei = experimental group to which JS029 spore suspension was applied; dpi = days post inoculation.
Figure 4 shows a scene of growing Cheongyang peppers to confirm the in vivo anthracnose control effect of the JS029 strain.
Figure 5 shows the results of an experiment confirming the in vivo anthrax control effect of strain JS029. Control(0.02% Tween 20) = negative control; 0.02% Tween 20 = positive control; Tebuconazole = comparison group treated with chemical fungicide; S. murinus JS029 = experimental group to which JS029 spore suspension was applied; dpi = days post inoculation.
본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스(Streptomyces murinus) JS029 균주(KACC 92370P)에 대한 추가 연구를 통해 밝혀진 것으로서, 이 균주가 탄저병 유발 병원균인 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속 진균에 대한 생장 억제 효과를 나타내어 탄저병을 방제할 수 있다는 새로운 연구 결과를 바탕으로 한다.The present invention was discovered through additional research on Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P), which showed a growth inhibitory effect on fungi of the genus Colletotrichum , an anthrax-causing pathogen. It is based on new research results showing that anthrax can be controlled.
본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주(KACC 92370P)를 유효성분으로 함유하는 탄저병 방제용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for controlling anthracnose containing Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) as an active ingredient.
JS029 균주는 농촌진흥청 국립농업과학원 미생물은행(Korean Agricultural Culture Collection, KACC)으로부터 입수할 수 있다. 이 균주의 수탁번호는 KACC 92370P이다. 또한, 이 균주에 대한 구체적인 사항에 대해 한국등록특허 제10-2606381호를 참고할 수 있다(이들의 내용 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용됨).Strain JS029 can be obtained from the Microbial Bank (Korean Agricultural Culture Collection, KACC) of the National Institute of Agricultural Science, Rural Development Administration. The accession number of this strain is KACC 92370P. Additionally, for specific details about this strain, reference may be made to Korean Patent No. 10-2606381 (the entire contents of which are incorporated herein by reference).
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주를 다양한 형태, 예를 들어 현탁액(예를 들어, 포자 또는 배양체의 현탁액), 건조물(예를 들어, 포자 또는 배양체의 동결건조물) 등의 형태로 포함할 수 있다. 본 발명의 기대 효과를 위해 바람직하게는, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주를 포자의 형태로 포함하며, 보다 바람직하게는 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 포자 현탁액이다.The composition for controlling anthrax of the present invention may contain the JS029 strain in various forms, such as a suspension (e.g., a suspension of spores or cultures), a dried product (e.g., a freeze-dried product of spores or cultures), etc. there is. For the expected effects of the present invention, preferably, the composition for controlling anthrax of the present invention contains strain JS029 in the form of spores, and more preferably, the composition for controlling anthrax of the present invention is a spore suspension.
JS029 균주의 포자는 JS029 균주를 고체 배양하여 수득할 수 있다. 고체 배양을 위한 고체 배지로는 스트렙토마이세스 속의 미생물 배양에 통상적으로 사용되는 고체 배지, 예를 들어 PDA(potato dextrose agar) 배지를 사용할 수 있으며, 비용의 측면을 고려하여 보리를 삶거나 쪄서 만든 보리밥을 고체 배지로 사용할 수 있다.Spores of the JS029 strain can be obtained by solid culturing the JS029 strain. As a solid medium for solid culture, a solid medium commonly used for culturing microorganisms of the Streptomyces genus, for example, PDA (potato dextrose agar) medium, can be used. In consideration of cost, barley rice made by boiling or steaming barley is used. Can be used as a solid medium.
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 조성물 중 JS029 균주를 다양한 함량으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물 중 JS029 균주를, 예를 들어 건조 중량을 기준으로, 0.01 내지 100중량%로 포함할 수 있으나, 이로 제한되지 않는다.The composition for controlling anthrax of the present invention may include strain JS029 in various amounts. For example, the composition may include, for example, 0.01 to 100% by weight of strain JS029, based on dry weight, but is not limited thereto.
일 실시형태에서, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주 이외에 JS029 균주와 같은 종에 속하는 다른 균주를 포함하지 않는다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주 이외에 JS029 균주와 같은 속에 속하는 다른 균주를 포함하지 않는다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주 이외에 다른 미생물을 포함하지 않는다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주 이외에 다른 탄저병 방제 물질을 포함하지 않는다. 이때 다른 탄저병 방제 물질은 기존에 탄저병 방제 효과가 알려진 JS029 균주 이외의 물질을 의미한다.In one embodiment, the composition for controlling anthrax of the present invention does not contain any other strains belonging to the same species as the JS029 strain other than the JS029 strain. In another embodiment, the composition for controlling anthrax of the present invention does not contain any other strains belonging to the same genus as the JS029 strain other than the JS029 strain. In another embodiment, the composition for controlling anthrax of the present invention does not contain any microorganisms other than the JS029 strain. In another embodiment, the composition for controlling anthrax of the present invention does not contain any anthracnose control substances other than the JS029 strain. At this time, other anthrax control substances refer to substances other than the JS029 strain, whose anthrax control effects are previously known.
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 JS029 균주 이외에 첨가제, 예를 들어 완충제, 희석제, 부형제 등의 식물병 방제 제제로의 제제화에 통상적으로 포함되는 첨가제를 더 포함할 수 있다.In addition to the JS029 strain, the composition for controlling anthracnose of the present invention may further include additives commonly included in the formulation of plant disease control preparations, such as buffers, diluents, and excipients.
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 콜레토트리쿰 속 진균에 의해 감염되어 탄저병이 발생할 수 있는 모든 식물의 탄저병 방제용 조성물일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 고추, 딸기, 사과 또는 포도의 탄저병 방제용 조성물일 수 있다.The composition for controlling anthracnose of the present invention may be a composition for controlling anthracnose in all plants that can cause anthracnose by being infected by fungi of the genus Coletotrichum. For example, the composition for controlling anthracnose of the present invention may be a composition for controlling anthracnose of peppers, strawberries, apples, or grapes.
본 발명의 탄저병 방제용 조성물은 예를 들어 대상 식물을 재배하는 공간에 분사하거나 식물의 표면에 직접 분사하는 등의 다양한 방식으로 사용될 수 있으나, 이로 제한되지 않는다. 통상의 기술자라면 본 명세서에 제시된 JS029 균주의 탄저병 방제 효과 등을 바탕으로 조성물의 상태, 대상의 상태, 목적하는 효과 등에 따라 적절히 변경하여 적용할 수 있을 것이다.The composition for controlling anthracnose of the present invention can be used in various ways, for example, by spraying it in a space where target plants are grown or spraying it directly on the surface of the plant, but is not limited to this. A person skilled in the art would be able to apply the composition by appropriately changing it depending on the state of the composition, the state of the target, the desired effect, etc., based on the anthrax control effect of the JS029 strain presented in this specification.
또한, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주(KACC 92370P)의 포자 현탁액을 식물의 표면에 분무하는 것을 특징으로 하는 탄저병 방제 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for controlling anthracnose, characterized in that a spore suspension of Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) is sprayed on the surface of a plant.
이에 따르면 보다 효과적으로 탄저병을 방제할 수 있다.According to this, anthrax can be controlled more effectively.
JS029 균주의 포자 현탁액은 위에서 설명한 바와 같은 JS029 균주의 포자 형성을 위한 고체 배양 후, 예를 들어 포자가 형성된 배지에 물 또는 완충액을 첨가하고 멸균된 솜이나 거즈로 배지 표면을 문질러 포자가 물 또는 완충액에 현탁되도록 하는 방법 혹은 포자가 형성된 배지를 건조 및 분쇄하고 물 또는 완충액에 첨가한 다음 필터로 여과하는 방법으로 수득할 수 있다.The spore suspension of the JS029 strain is prepared after solid culture for spore formation of the JS029 strain as described above, for example, by adding water or a buffer solution to the medium in which the spores were formed and rubbing the surface of the medium with sterilized cotton or gauze so that the spores are in the water or buffer solution. It can be obtained by suspending it in or by drying and pulverizing the medium in which spores are formed, adding it to water or a buffer solution, and then filtering it through a filter.
포자 현탁액의 분무는 기존에 농약 등을 살포하는 통상의 방법을 사용하여 수행할 수 있으며, 통상의 기술자라면 상황에 따라 적절한 방법을 선택하여 적용할 수 있을 것이다.Spraying of the spore suspension can be performed using conventional methods of spraying pesticides, etc., and a person skilled in the art will be able to select and apply an appropriate method depending on the situation.
바람직하게는 식물의 표면이 포자 현탁액으로 충분히 적셔질 수 있도록 포자 현탁액을 분무하는 것이 바람직하며, 이를 위해 예를 들어 고추를 대상으로 하는 경우 고추 1개 당 300 내지 1000㎕를 사용하는 수준으로 분무할 수 있다.Preferably, it is desirable to spray the spore suspension so that the surface of the plant can be sufficiently wetted with the spore suspension. For this purpose, for example, when targeting peppers, spray at a level of 300 to 1000 ㎕ per pepper. You can.
본 발명의 탄저병 방제 방법은 콜레토트리쿰 속 진균에 의해 감염되어 탄저병이 발생할 수 있는 모든 식물의 탄저병 방제에 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 탄저병 방제 방법은 고추, 딸기, 사과 또는 포도의 탄저병 방제에 사용할 수 있다.The anthracnose control method of the present invention can be used to control anthracnose in all plants that can cause anthracnose by being infected by fungi of the genus Coletotrichum. For example, the anthracnose control method of the present invention can be used to control anthracnose in peppers, strawberries, apples, or grapes.
또한, 본 발명은 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 균주(KACC 92370P)를 유효성분으로 함유하는 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 항진균용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antifungal composition against fungi of the genus Coletotrichum containing Streptomyces murinus JS029 strain (KACC 92370P) as an active ingredient.
본 발명의 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 항진균용 조성물 또한 상기 탄저병 방제용 조성물에서와 같이 JS029 균주를 다양한 형태로 포함할 수 있다. 본 발명의 기대 효과를 위해 바람직하게는, 본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주를 포자의 형태로 포함하며, 보다 바람직하게는 본 발명의 항진균용 조성물은 포자 현탁액이다.The antifungal composition against fungi of the genus Coletotrichum of the present invention may also contain the JS029 strain in various forms, as in the composition for controlling anthracnose. For the expected effects of the present invention, preferably, the antifungal composition of the present invention contains the JS029 strain in the form of spores, and more preferably, the antifungal composition of the present invention is a spore suspension.
본 발명의 항진균용 조성물은 조성물 중 JS029 균주를 다양한 함량으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물 중 JS029 균주를, 예를 들어 건조 중량을 기준으로, 0.01 내지 100중량%로 포함할 수 있으나, 이로 제한되지 않는다.The antifungal composition of the present invention may contain the JS029 strain in various amounts. For example, the composition may include, for example, 0.01 to 100% by weight of strain JS029, based on dry weight, but is not limited thereto.
일 실시형태에서, 본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주 이외에 JS029 균주와 같은 종에 속하는 다른 균주를 포함하지 않는다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주 이외에 JS029 균주와 같은 속에 속하는 다른 균주를 포함하지 않는다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주 이외에 다른 미생물을 포함하지 않는다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주 이외에 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 다른 항진균성 물질을 포함하지 않는다. 이때 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 다른 항진균성 물질은 기존에 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 항진균 효과가 알려진 JS029 균주 이외의 물질을 의미한다.In one embodiment, the antifungal composition of the present invention does not contain any other strains belonging to the same species as the JS029 strain other than the JS029 strain. In another embodiment, the antifungal composition of the present invention does not contain any other strains belonging to the same genus as the JS029 strain other than the JS029 strain. In another embodiment, the antifungal composition of the present invention does not contain any microorganisms other than the JS029 strain. In another embodiment, the antifungal composition of the present invention does not contain any other antifungal substances against fungi of the genus Coletotrichum other than the JS029 strain. At this time, other antifungal substances against fungi of the genus Colletotrichum refer to substances other than strain JS029, which has previously known antifungal effects against fungi of the genus Colletotrichum.
본 발명의 항진균용 조성물은 JS029 균주 이외에 첨가제, 예를 들어 완충제, 희석제, 부형제 등의 항균 제제로의 제제화에 통상적으로 포함되는 첨가제를 더 포함할 수 있다.In addition to the JS029 strain, the antifungal composition of the present invention may further include additives commonly included in the formulation of antibacterial agents, such as buffers, diluents, and excipients.
본 발명의 항진균용 조성물은 콜레토트리쿰 속에 속하는 다양한 진균에 대한 항진균용 조성물일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항진균용 조성물은 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 스코빌레이(C. scovillei) 또는 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(C. gloeosporioides)에 대한 항진균용 조성물일 수 있다.The antifungal composition of the present invention may be an antifungal composition against various fungi belonging to the genus Colletotrichum. For example, the antifungal composition of the present invention is effective against Colletotrichum acutatum , C. scovillei , or C. gloeosporioides . It may be an antifungal composition.
본 발명의 항진균용 조성물은 예를 들어 대상(항진균 효과가 발휘되도록 하고자 하는 대상)의 표면에 분사하거나 대상과 혼합하거나 대상과 함께 포장하는 등의 다양한 방식으로 사용될 수 있으나, 이로 제한되지 않는다. 통상의 기술자라면 본 명세서에 제시된 항진균 활성 등을 바탕으로 조성물의 상태, 대상의 상태, 목적하는 효과 등에 따라 적절히 변경하여 적용할 수 있을 것이다.The antifungal composition of the present invention can be used in various ways, such as spraying on the surface of the object (the object for which the antifungal effect is to be exerted), mixing with the object, or packaging with the object, but is not limited thereto. A person skilled in the art would be able to apply the composition by making appropriate changes depending on the state of the composition, the state of the target, the desired effect, etc., based on the antifungal activity presented in this specification.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. Since these examples are merely for illustrating the present invention, the scope of the present invention is not to be construed as limited by these examples.
[실시예][Example]
실시예 1. 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029 포자 현탁액 제조Example 1. Preparation of Streptomyces murinus JS029 spore suspension
먼저, 스트렙토마이세스 뮤리누스 JS029를 PDA(potato dextrose agar) 배지에 접종하고 25℃에서 7일 동안 배양하여 전배양체를 준비하였다.First, Streptomyces murinus JS029 was inoculated into PDA (potato dextrose agar) medium and cultured at 25°C for 7 days to prepare precultures.
500㎖ 삼각플라스크에 보리(100g)와 증류수(100㎖)를 담고 고압멸균기(autoclave)에서 1시간 동안 121℃로 고압 가열하여 본배양의 배지로 사용하기 위한 보리밥을 준비한 다음 여기에 상기 준비된 전배양체를 접종하고 25℃에서 7일 동안 배양(본배양)하였다.Barley (100 g) and distilled water (100 ml) were placed in a 500 ml Erlenmeyer flask and heated under high pressure to 121°C for 1 hour in an autoclave to prepare barley rice for use as a medium for the main culture. Then, the prepared pre-culture was added thereto. were inoculated and cultured (main culture) at 25°C for 7 days.
본배양으로 수득된 배양체를 60℃ 건조기에서 24시간 동안 건조한 후 분쇄기로 분말화하였다.The cultures obtained from the main culture were dried in a dryer at 60°C for 24 hours and then powdered with a grinder.
이렇게 수득된 본배양체 분말 1g에 10㎖의 멸균 증류수(또는 0.02% Tween 20)를 첨가하고 1분 동안 볼텍싱(vortexing)한 다음 미라클로스(miracloth)로 여과하여 포자 현탁액을 제조하였다.To 1 g of the main culture powder thus obtained, 10 ml of sterilized distilled water (or 0.02% Tween 20) was added, vortexed for 1 minute, and then filtered through miracloth to prepare a spore suspension.
실시예 2. JS029 균주의 콜레토트리쿰 속 진균 억제 효과 확인Example 2. Confirmation of the fungal inhibition effect of the JS029 strain in the Coletotrichum genus
탄저병균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 스코빌레이(C. scovillei) 및 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(C. gloeosporioides)를 V8 배지에 접종한 뒤 25℃에서 5일 동안 배양하였다. 실험에 사용하기 위해, 5㎜ 코르크 보러(cork borer)로 가장자리를 펀칭하여 플러그(plug)를 만든 뒤, V8 배지 함유 90㎜ 페트리디쉬의 중앙에 치상하였다. 중앙에 치상된 병원균 플러그로부터 30㎜ 떨어진 곳에 6㎜ 페이퍼 디스크 3개를 배치한 다음, 여기에 상기 실시예 1에서 준비한 JS029 포자 현탁액 10㎕를 접종하였다. 대조군으로는 멸균 증류수 10㎕를 분주하였고, 비교를 위해 JS029 포자 현탁액 대신 화학 살진균제인 테부코나졸(tebuconazole)을 분주하였다. 이후 25℃에서 배양하여 대조군 페트리디시(90㎜)에 접종한 병원균의 균사가 페이퍼 디스크 가까이 도달했을 때, JS029 포자 현탁액을 적용한 페트리디시에서 균사 억제 효과를 측정하였다. 균사 억제 효과 측정을 위해 탄저병균과 JS029 사이의 저지대를 측정하는 방법을 사용하였다. 모든 실험은 3반복으로 수행하였으며, 최소한 2번 이상의 독립적 실험을 수행하였다.The anthrax bacteria Colletotrichum acutatum , C. scovillei , and C. gloeosporioides were inoculated into V8 medium and incubated at 25°C. Cultured for 5 days. To use in the experiment, a plug was made by punching the edge with a 5mm cork borer and then placed in the center of a 90mm Petri dish containing V8 medium. Three 6 mm paper disks were placed 30 mm away from the pathogen plug placed in the center, and then 10 μl of the JS029 spore suspension prepared in Example 1 was inoculated into them. As a control group, 10㎕ of sterilized distilled water was dispensed, and for comparison, tebuconazole, a chemical fungicide, was dispensed instead of JS029 spore suspension. Afterwards, when the hyphae of the pathogen inoculated into the control Petri dish (90 mm) by culturing at 25°C reached close to the paper disk, the mycelial inhibition effect was measured in the Petri dish to which the JS029 spore suspension was applied. To measure the mycelial inhibition effect, a method of measuring the low area between anthrax bacteria and JS029 was used. All experiments were performed in triplicate, and at least two independent experiments were performed.
이의 결과, 도 1과 같이, JS029가 탄저병균인 콜레토트리쿰 속 진균에 대한 매우 우수한 억제 효과가 있음을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 1, it was confirmed that JS029 has a very excellent inhibitory effect on fungi of the genus Coletotrichum, an anthrax pathogen.
실시예 3. JS029 균주의 탄저병 방제 효과 확인Example 3. Confirmation of anthrax control effect of strain JS029
3-1. 병원균 준비3-1. Pathogen preparation
탄저병균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 및 콜레토트리쿰 스코빌레이를 V8 배지에 접종하고 25℃에서 5 내지 7일 동안 배양한 다음, 멸균 증류수 또는 0.025% Tween 20 용액을 이용하여 포자 현탁액(약 1x105개 포자/㎖)을 제조하였다.The anthrax bacteria, Colletotrichum acutatum and Colletotrichum scobilei, were inoculated into V8 medium, cultured at 25°C for 5 to 7 days, and then spore suspension (approximately 1x10) using sterilized distilled water or 0.025% Tween 20 solution. 5 spores/ml) were prepared.
3-2. 3-2. in vitroin vitro 실험 Experiment
기주로 사용할 고추(열매)를 물로 세척하고 건조한 후, 상기 실시예 1에서 준비한 JS029 포자 현탁액(약 400㎕)을 분무하고 건조하였으며, 대조군으로는 멸균 증류수(약 400㎕)를 분무하고 건조하였다. 또한, 비교를 위해 JS029 포자 현탁액 대신 화학 살진균제인 베노밀(benomyl) 또는 테부코나졸(tebuconazole)을 분무하고 건조하였다.After washing the pepper (fruit) to be used as a host with water and drying, the JS029 spore suspension (about 400 μl) prepared in Example 1 was sprayed and dried. As a control, sterilized distilled water (about 400 μl) was sprayed and dried. Additionally, for comparison, chemical fungicides benomyl or tebuconazole were sprayed and dried instead of the JS029 spore suspension.
음성 대조군(negative control)으로서, 상기와 같이 표면 세척 및 멸균 증류수를 분무 건조한 대조군 고추에 멸균 증류수 20㎕를 1.5㎝ 간격으로 3곳에 접종하였고, 양성 대조군(positive control)의 경우 상기 대조군 고추에 멸균 증류수 대신 병원균 포자 현탁액 20㎕를 접종하였고, 실험군의 경우 상기와 같이 표면 세척 및 JS029 포자 현탁액을 분무 건조한 고추에 병원균 포자 현탁액을 접종하였다. 또한 비교군의 경우 상기와 같이 표면 세척 및 화학 살진균제를 분무 건조한 고추에 병원균 포자 현탁액을 접종하였다.As a negative control, 20 ㎕ of sterilized distilled water was inoculated at 3 locations at 1.5 cm intervals on the control peppers that had been surface washed and spray-dried with sterilized distilled water as described above. For the positive control, the control peppers were inoculated with sterilized distilled water. Instead, 20㎕ of the pathogen spore suspension was inoculated, and in the experimental group, the pathogen spore suspension was inoculated into peppers that had been surface-washed and spray-dried with the JS029 spore suspension as above. Additionally, in the case of the comparison group, a suspension of pathogen spores was inoculated into peppers that were surface washed and spray-dried with a chemical fungicide as described above.
상기와 같이 처리가 완료된 고추를 습실이 유지된 상태(100% RH)의 폴리프로필렌 용기(17.5x10㎝)에 넣어 25℃의 인큐베이터에 두었다. 약 10일 후 결과를 관찰하였으며, 병반 면적을 측정하여 저지 효과를 검정하였다. 모든 실험은 3반복으로 수행하였으며, 최소한 2번 이상의 독립적 실험을 수행하였다.The peppers that had been treated as described above were placed in a polypropylene container (17.5x10 cm) maintained in a humid environment (100% RH) and placed in an incubator at 25°C. The results were observed after about 10 days, and the inhibition effect was tested by measuring the lesion area. All experiments were performed in triplicate, and at least two independent experiments were performed.
이의 결과, 도 2 및 도 3과 같이, JS029 또는 화학 살진균제를 처리하지 않은 경우 고추에서 병원균이 생장하여 탄저병이 발생(양성 대조군인 도 2의 '0.02% Tween 20' 및 도 3의 'C. scovillei' 항목 참조)한 반면, JS029를 처리한 경우, 화학 살진균제를 처리한 경우와 같이 병원균의 생장이 억제되어 탄저병의 발생이 억제(실험군인 도 2의 'S. murinus JS029' 및 도 3의 'S. murinus JS029 + C. scovillei' 항목 참조)되는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Figures 2 and 3, when JS029 or a chemical fungicide was not treated, pathogens grew in peppers and anthracnose occurred (positive controls, '0.02% Tween 20' in Figure 2 and ' C ' in Figure 3. scovillei ' section), on the other hand, when JS029 was treated, the growth of the pathogen was suppressed, as in the case of treatment with a chemical fungicide, and the occurrence of anthracnose was suppressed (the experimental group, ' S. murinus JS029' in Figure 2 and Figure 3). It was found to be ' S. murinus JS029 + C. scovillei '.
3-3. 3-3. in vivoin vivo 실험 Experiment
큰청양고추 품종을 하우스에 정식하고 60일 이상 재배하여 실험에 사용하였다. 병원균으로는 콜레토트리쿰 스코빌레이를 사용하였다.The large Cheongyang pepper variety was planted in the house and grown for more than 60 days before being used in the experiment. Colletotrichum scobilei was used as the pathogen.
포자 현탁액 제조에 사용한 0.02% Tween 20을 처리한 음성 대조군, 0.02% Tween 20을 처리하고 병원균을 감염시킨 양성 대조군, 화학 살진균제인 테부코나졸을 처리하고 병원균을 감염시킨 비교군 및 JS029 포자 현탁액을 처리하고 병원균을 감염시킨 실험군으로 구분하여 재배하였다(도 4).A negative control group treated with 0.02% Tween 20 used to prepare the spore suspension, a positive control group treated with 0.02% Tween 20 and infected with the pathogen, a comparison group treated with the chemical fungicide tebuconazole and infected with the pathogen, and the JS029 spore suspension. They were divided into experimental groups treated and infected with pathogens and cultivated (Figure 4).
병원균 감염은 고추 식물 당 50㎖의 병원균 포자 현탁액을 고르게 접종하는 방법으로 수행하였다. 화학 살진균제 처리는 테부코나졸을 권장 사용량(10㎖/20ℓ) 희석액으로 1개의 고추 식물당 150㎖을 고르게 분무하는 방법으로 수행하였고, 3일 후 병원균 감염을 수행하였다. JS029 포자 현탁액 처리는 1개의 고추 식물당 JS029 포자 현탁액 150㎖을 고르게 분무하는 방법으로 수행하였고, 3일 후 병원균 감염을 수행하였다.Pathogen infection was performed by evenly inoculating 50 ml of pathogen spore suspension per pepper plant. Chemical fungicide treatment was performed by evenly spraying 150 ml of tebuconazole per pepper plant at a dilution of the recommended dosage (10 ml/20 liters), and infection with pathogens was performed 3 days later. JS029 spore suspension treatment was performed by evenly spraying 150 ml of JS029 spore suspension per pepper plant, and pathogen infection was performed 3 days later.
처리가 완료된 고추 식물은 접종 10일 후 1개 고추 식물의 모든 고추 열매를 수거하여 고추 총 개수 대비 발병 고추의 개수로 발병율을 판별하였다.For the treated pepper plants, 10 days after inoculation, all pepper fruits from one pepper plant were collected, and the incidence rate was determined based on the number of infected peppers compared to the total number of peppers.
이의 결과, 도 5와 같이, JS029 또는 화학 살진균제를 처리하지 않은 경우 고추에서 병원균이 생장하여 탄저병이 발생(양성 대조군인 '0.02% Tween 20' 항목 참조)한 반면, JS029를 처리한 경우, 화학 살진균제를 처리한 경우와 같이 병원균의 생장이 억제되어 탄저병의 발생이 억제(실험군인 'S. murinus JS029' 항목 참조)되는 것으로 나타났다. 또한, JS029를 처리한 고추의 발병률은 6.9%로 화학 살진균제를 처리한 고추의 발병률인 9.2%에 비해 낮은 발병률을 보였으며, 이를 방제가로 계산하였을 때, JS029 처리군은 92.7%, 화학 살진균제 처리군은 88.1%로 JS029 처리군이 화학 살진균제 처리군에 비해 높은 방제가를 나타냈다.As a result, as shown in Figure 5, when JS029 or chemical fungicide was not treated, pathogens grew in peppers and anthracnose occurred (see '0.02% Tween 20', a positive control), whereas when JS029 was treated, chemical As in the case of treatment with fungicide, the growth of pathogens was suppressed and the occurrence of anthrax was suppressed (see the experimental group ' S. murinus JS029'). In addition, the incidence rate of peppers treated with JS029 was 6.9%, which was lower than the incidence rate of 9.2% in peppers treated with chemical fungicides. When this was calculated as the control value, the JS029 treatment group was 92.7%, and the chemical fungicide treatment group was 92.7%. The fungicide treatment group was 88.1%, and the JS029 treatment group showed a higher control value than the chemical fungicide treatment group.
Claims (8)
The method of claim 6, wherein the fungus of the genus Colletotrichum is Colletotrichum acutatum, C. scovillei , or C. gloeosporioides . Phosphorus, antifungal composition against fungi of the genus Coletotrichum.
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