KR20230158531A - 신규 crispr 효소, 방법, 시스템 및 그 용도 - Google Patents

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KR20230158531A
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베른트 제츠
루이스 바레라
데이비드 에이. 본
밍 쑨
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빔 테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본 발명은 핵산 표적화 및 조작을 위해 인간 세포에 최적화된 재조합적으로 조작된 신규 Cas9 효소를 제조하고 사용하기 위한 신규 시스템, 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명은 인간 세포에 사용하기 위해 코돈-최적화되고 재조합적으로 생성된 스트렙토코커스 콘스텔라투스(Streptococcus constellatus), 샤르펜(Sharpen) spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라(Veillonella parvula), 에자키엘라 페루엔시스(Ezakiella peruensis), 락토바실러스 퍼멘텀 균주(Lactobacillus fermentum strain) AF15-40LB 균주 및 펩토니필러스 sp. 마르세유(Peptoniphilus sp. Marseille)-P3761 박테리아로부터 신규 Cas9 효소의 발견에 기반한다. 일부 구현예에서, 신규 Cas9 효소는 염기 편집을 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 신규 조작된 Cas9 효소는 인간 질병을 치료하기 위해 사용된다.

Description

신규 CRISPR 효소, 방법, 시스템 및 그 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 모든 목적을 위해 전체적으로 본원에 참고로 통합되는 2021년 3월 23일에 출원된 미국 가특허 출원 일련번호 제63/164,798호의 우선권을 주장한다.
원핵생물의 일정한 간격으로 놓인 짧은 회문 반복부 집합(CRISPR) 및 CRISPR-연관 단백질(CRISPR-Cas) 시스템 유래의 효소가 진핵생물에서 사용하기 위해 재프로그래밍 가능한 매우 특이적인 게놈 편집 도구(tool)로서 활용되었다. 게놈 편집 및 절단 이외에, CRISPR-Cas9는 게놈 상의 특이적 부위에 이펙터 분자를 위치시키기 위해 사용될 수 있어, 다양한 메커니즘을 통한 유전적 및 후생적 조절과 전사적 조절을 가능하게 한다.
그러나, 다양한 게놈과 게놈 표적은 효과적인 유전자 조작을 위한 다양한 도구를 필요로 하고, 다양한 서열을 인식하고 표적으로 할 수 있는 신규 Cas 단백질을 발견하고 조작하여 CRISPR 도구상자를 확장해야 할 필요성이 여전히 남아 있다.
유전자를 녹아웃시키거나 유전자 발현을 변형시키기 위해 CRISPR-Cas9 시스템을 사용할 수 있지만, 특정 종류의 유전자 편집에는 유전자 내 단일 염기 편집과 같이 표적 유전자에 대한 정확한 변형이 필요하다. 이러한 정확한 변형은 여전히 기술적 과제로 남아 있고, 광범위한 표적 유전자에서 정확한 게놈 변형을 수행하기 위해 다양한 유전자 편집 도구키트를 필요로 한다.
발명의 요약
고유의 프로토스페이서 인접 모티프(PAM)에 대하여 특이성을 갖는 신규 Cas9 효소를 식별하여, 유전자 편집을 위해 이용가능한 도구를 확장할 수 있다. 본 발명은 특히 스트렙토코커스 콘스텔라투스(Streptococcus constellatus), 샤르페아(Sharpea) spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라(Veillonella parvula), 에자키엘라 페루엔시스(Ezakiella peruensis), 락토바실러스 퍼멘텀 균주(Lactobacillus fermentum strain) AF15-40LB 또는 펩토니필러스 sp. 마르세유(Peptoniphilus sp. Marseille)-P3761 박테리아로부터 단리된 조작된 비천연 발생한 신규 Cas9 효소를 제공한다. 본 발명은 특이적 PAM 서열을 인식하는 상이한 박테리아로부터 발견된 신규 Cas9 효소가 진핵 세포(예: 인간, 식물 등)에서 발현되도록 조작될 수 있다는 놀라운 발견에 부분적으로 기반한다. 따라서, 기술된 Cas9 효소 및 그 변이체는 진핵생물에서 기능한다. 여기에 제공된 예는 다양한 게놈 부위를 표적으로 하기 위해 다양한 PAM 인식 서열을 사용하여 인간 세포에서 조작된 비천연 Cas9 효소의 사용을 보여준다. 예를 들어, 스트렙토코커스 콘스텔라투스, 에자키엘라 페루엔시스 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761로부터 조작된 Cas9는 공통 PAM 서열 5'-NGG-3'을 인식한다. 샤르페아 spp. 단리물 RUG017로부터 단리된 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NAGHC-3'이다. 베일로넬라 파르불라로부터 단리된 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NRHRRH-3'으로 식별되었다. 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB로부터 단리된 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NNAAA-3'으로 식별되었다.(H=A, C 또는 T; R=A 또는 G).
일 측면에서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9, 샤르페아 Cas9, 베일로넬라 파르불라 Cas9, 에자키엘라 페루엔시스 Cas9, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9 또는 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9로부터 변형되는 조작된, 비천연 발생 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9 단백질은
MGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGED (서열번호 1)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 샤르페아 Cas9 단백질은
MAKNKDIRYSIGLDIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKL (서열번호 4)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 베일로넬라 파르불라 Cas9 단백질은 MSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLDIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIV (서열번호 8)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 에자키엘라 페루엔시스 Cas9 단백질은 MTKVKDYYIGLDIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKL (서열번호 14)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 Cas9 단백질은
MKEYHIGLDIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNL (서열번호 84)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9 단백질은
MEKKTNYTIGLDIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFED (서열번호 86)와 적어도 80% 서열 동일성을 가진다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9는 MPKKKRKVGGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 2)와 적어도 80% 서열 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 샤르페아 Cas9는
MPKKKRKVGAKNKDIRYSIGLDIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 5)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 베일로넬라 파르불라 Cas9는
MPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLDIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 9)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 에자키엘라 페루엔시스 Cas9는
MPKKKRKVGTKVKDYYIGLDIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 15)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9는
MPKKKRKVGKEYHIGLDIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 85)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9가
MPKKKRKVGEKKTNYTIGLDIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 87)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86에서 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개 또는 적어도 10개의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 돌연변이는 아미노산 치환이다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 닉카제 활성을 가진다.
일부 구현예에서, 야생형 SpCas9의 1개 이상의 아미노산 10, 12, 17, 762, 840, 854, 863, 982, 983, 984, 986, 987에 상응하는 아미노산 위치에서 닉카제 돌연변이를 포함하는 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 적어도 1개의 돌연변이가 불활성 Cas9(dCas9)를 초래한다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 PAM 상호작용, HNH 및/또는 RuvC 도메인에 적어도 1개의 아미노산 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 아미노산 위치에서 돌연변이는 SirCas9의 RuvC 도메인에서의 아미노산 14에 상응하는 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 아미노산 위치에서 돌연변이는 EpeCas9의 RuvC 도메인에서의 아미노산 12에 상응하는 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 아미노산 위치에서 돌연변이는 LfeCas9의 RuvC 도메인에서의 아미노산 9에 상응하는 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 아미노산 위치에서 돌연변이는 PmaCas9의 RuvC 도메인에서의 아미노산 12에 상응하는 Cas9 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함한다.
일 측면에서, 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 동일성을 갖는 Cas9 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질이 본원에 제공되고 상기 Cas9 단백질은 히스톤 데메틸라제, 전사 활성화인자 또는 데아미나제에 융합된다.
일부 구현예에서, 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 동일성을 갖는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 시토신 데아미나제 또는 아데노신 데아미나제에 융합된다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 아데노신 데아미나제에 융합되고
(a) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 20);
(b) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGAKNKDIRYSIGLAIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 6);
(c)
MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 10);
(d) MPKKKRKVSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 11);
(e)
MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 16);
(f) MPKKKRKVTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 17);
(g) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 88);
(h) MPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 89); 또는
(i)
MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 91);
(j) MPKKKRKVEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 92)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 시토신 데아미나제에 융합되고
(a) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 21);
(b)
MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 12);
(c) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 18);
(d) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 90);
(e)
MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 93); 또는
(f)
MPAAKRVKLDTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSPKKKRKVEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 94)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9 단백질은 5'-NGC-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 Cas9 단백질(예: SirCas9, VapCas9, EpeCas9, LfeCas9 또는 PmaCas9)은 5'-NGC-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 샤르페아 Cas9 단백질은 5'-NAGHC-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하고, H는 A, C 또는 T이다.
일부 구현예에서, 베일로넬라 파르불라 Cas9 단백질은 5'-NRHRRH-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하고, H는 아데닌, 시토신 또는 티민이고, R은 아데닌 또는 구아닌이다.
일부 구현예에서, 에자키엘라 페루엔시스 Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9 단백질은 5'-NNAAA-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식한다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질을 암호화하는 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 핵산은 포유동물 세포에서 발현되도록 코돈-최적화된다.
일부 구현예에서, 상기 핵산은 인간 세포에서 발현되도록 코돈-최적화된다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질을 포함하는 진핵 세포가 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 세포는 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 식물 세포이다.
일 측면에서, 세포를 본원에 기술된 바와 같은 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열의 파손을 유발할 수 있는, 진핵 세포에서 표적 핵산을 절단하는 방법이 제공된다.
일 측면에서, 세포를 본원에 기술된 바와 같은 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열의 파손을 유발할 수 있는, 진핵 세포에서 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법이 제공된다.
일 측면에서, 세포를 본원에 기술된 바와 같은 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 진핵 세포에서 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법이 제공된다.
일 측면에서, 세포를 본원에 기술된 바와 같은 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 진핵 세포에서 표적 핵산을 변형하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 불활성 Cas9(dCas9)이다.
일부 구현예에서, 상기 dCas9는 데아미나제에 융합된다.
일부 구현예에서, 상기 RNA 가이드는 crRNA 및 tracrRNA를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 RNA 가이드는 sgRNA를 포함한다.
일부 구현예에서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCUGUGCUGUUUAAACAACACAGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUACUCAAGCUUGCAAAAGCGUGCACCGAUUCGGUGCU-3' (서열번호 3)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 샤르페아 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGUUGUGUUAUUGAAAAAUAACACAACGAGUUAAAAUAAAGCUUAUGCUUAAAUGCCAGCUUUGCUGGUGUCAUUUAGAUGACUUUACUAAGGUUGCUUCGGCAACCUUUUU-3' (서열번호 7)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 베일로넬라 파르불라 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUAGUGUGAAAACAUUACGAGUUCAAAUACAAAUUAAUUUACAAUGCCUUCGGGCUGCCCGACGUAGGGCACCUACUCUCAAUUCUUCGGAAUUGAGUU-3' (서열번호 13)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 에자키엘라 페루엔시스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUUAUGUAAUUGAAAAAUUACAUGACGAGUUCAAAUAAAAAUUUAUUCAAACCGCCUAUUUAUAGGCCGCAGAUGUUCUGCAUUAUGCUUGCUAUUGCAAGCUU-3' (서열번호 19)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUCUUGGAUGAGUGUGAAAACACUCAUAGUCAAGAUCAAACGAGUGGUUUUCCACGAGUUAUUACUUUUGAGGUCUUAUAUGGCCCAUACAUAAAAAGGAGUCGGAAUUUCCGGCUCCUUUUCUU-3' (서열번호 95)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCCAUGUAGAAAUACAUUGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUAAUCAACUUGAAAAAGUGGCGCUGUUUCGGCGCUUU-3' (서열번호 96)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 crRNA는 약 16 내지 26개의 뉴클레오티드 길이의 가이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 crRNA는 18 내지 24개의 뉴클레오티드 길이의 가이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 표적 핵산에서의 파손은 단일 가닥 또는 이중 가닥의 파손이다.
일부 구현예에서, 표적 핵산에서의 파손은 단일 가닥의 파손이다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 상기 표적 핵산 서열의 두 가닥 모두를 절단하는 뉴클레아제이다. 일부 구현예에서, Cas9는 상기 표적 핵산 서열의 한 가닥을 절단하는 닉카제이다.
일부 구현예에서, 상기 표적 핵산은 5' 내지 프로토스페이서 인접 모티프(PAM)이다.
일부 구현예에서, 상기 Cas9는 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되고, 상기 가이드 RNA는 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 상기 진핵 세포는 인간 세포이다.
일부 구현예에서, 상기 프로모터 서열은 진핵 또는 바이러스의 프로모터이다.
일 측면에서, RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템이 본원에 제공되고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열에서의 파손을 유발할 수 있다.
일부 구현예에서, 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템이 본원에 제공되고, 상기 Cas 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열에서의 파손을 유발할 수 있다.
일 측면에서, RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템이 본원에 제공되고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 데아미나제에 융합되고, Cas 단백질 융합은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있다.
일부 구현예에서, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템은 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함한다.
일부 구현예에서, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템은 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 데아미나제에 융합되고, 상기 Cas 단백질 융합은 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 Cas9 단백질은 불활성 Cas9(dCas9)이다.
일 구현예에서, 상기 RNA 가이드는 crRNA 및 tracrRNA를 포함한다.
일 구현예에서, 상기 RNA 가이드는 sgRNA를 포함한다.
일 구현예에서, 상기 Cas 단백질은 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되고, 상기 가이드 RNA는 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결된다.
일 구현예에서, 상기 진핵 세포는 인간 세포이다.
일 구현예에서, 상기 프로모터 서열은 진핵 프로모터 서열이다.
일 구현예에서, 본원에 기술된 시스템을 암호화하는 핵산이 제공된다.
일 구현예에서, 본원에 기술된 시스템을 포함하는 벡터가 제공된다.
일 구현예에서, 상기 벡터는 플라스미드 벡터 또는 바이러스 벡터이다.
일 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 아데노 연관 바이러스(AAV) 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다.
일 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 AAV 벡터이다.
일 구현예에서, 1개 초과의 AAV 벡터는 상기 시스템을 패키징하기 위해 사용된다.
일 구현예에서, 장애 또는 질병 치료를 필요로 하는 대상체에서 장애 또는 질병을 치료하는 방법은 본원에 기술된 시스템을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 가이드 RNA는 병태 또는 질병과 연관된 표적 핵산의 적어도 10개 뉴클레오티드에 상보적이고; 상기 Cas 단백질은 상기 가이드 RNA와 연관되고; 상기 가이드 RNA는 상기 표적 핵산에 결합하고; 상기 Cas 단백질은 표적 핵산에서의 파손을 유발하고, 선택적으로 상기 Cas9는 데아미나제에 융합된 불활성 Cas9(dCas9)이고 상기 표적 핵산에서 하나 이상의 염기 편집을 초래하여, 상기 장애 또는 질병을 치료한다.
일부 구현예에서, 상기 가이드 RNA는 약 18 내지 24개의 뉴클레오티드에 상보적이다.
일부 구현예에서, 상기 가이드 RNA는 20개의 뉴클레오티드에 상보적이다.
일부 구현예에서, 상기 염기 편집기는 융합 단백질을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 염기 편집기는 아데노신 데아미나제 도메인 또는 시티딘 데아미나제 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드의 핵염기를 편집하는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 1개 이상의 가이드 RNA와의 복합체에서 염기와 폴리뉴클레오티드를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 염기 편집기는 아데노신 데아미나제 도메인을 포함하고, 상기 1개 이상의 가이드 RNA는 폴리뉴클레오티드에서 A·T에서 G·C로 변경을 이루도록 염기 편집기를 표적으로 한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드의 핵염기를 편집하는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 1개 이상의 가이드 RNA와의 복합체에서 염기 편집기와 폴리뉴클레오티드를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 염기 편집기는 시티딘 데아미나제 도메인을 포함하고, 상기 1개 이상의 가이드 RNA는 폴리뉴클레오티드에서 G·C에서 T·A로 변경을 이루도록 염기 편집기를 표적으로 한다.
일부 구현예에서, 상기 편집이 표적 폴리뉴클레오티드 서열에서 50% 미만의 삽입결실 형성을 초래한다.
일부 구현예에서, 상기 편집이 점 돌연변이를 발생시킨다.
정의
본 발명이 보다 쉽게 이해되도록, 일부 용어가 다음에서 먼저 정의된다. 다음 용어 및 다른 용어에 대한 추가 정의가 명세서 전반에 명시되어 있다.
부정관사(A 또는 An); 부정관사는 하나 또는 1개 초과의(즉, 적어도 하나의) 문법상 물품 객체를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, "하나의 요소"는 1개 요소 또는 1개보다 많은 요소를 의미한다.
대략 또는 약: 본원에서 사용될 때 용어 "대략" 또는 "약"은 1개 이상의 관심 값에 적용되는 경우에 명시된 참조 값과 유사한 값을 의미한다. 일부 구현예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 문맥에서 달리 명시하거나 달리 명백하지 않는 한, 명시된 참조 값의 한 방향으로(초과 또는 미만으로) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 이하 이내에 속하는 값의 범위를 의미한다(해당 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우는 예외).
연관된: 상기 용어가 본원에서 사용될 때 하나의 존재, 수치 및/또는 형태가 다른 것과 상관관계를 가지는 경우 2개의 사건 또는 단위체가 서로에 "연관된"다. 예를 들어, 특정 단위체(예: 폴리펩티드)는 그 존재, 수치 및/또는 형태가 질병, 장애 또는 병태의 발생률 및/또는 감수성과 상관관계를 가지는 경우(예: 관련 모집단 전체에 걸쳐) 특정 질병, 장애 또는 병태와 연관된 것으로 간주한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 단위체가 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하여 서로에 물리적으로 근접하게 유지되는 경우 서로에 물리적으로 "연관된"다. 일부 구현예에서, 서로에 물리적으로 연관된 2개 이상의 단위체는 서로 공유적으로 연결되며; 일부 구현예에서, 서로에 물리적으로 연관된 2개 이상의 단위체는 서로 공유적으로 연결되지 않지만 예를 들어 수소 결합, 반 데르 발스 상호작용, 소수성 상호작용, 자성 및 이들의 조합에 의해 비공유적으로 연관된다.
염기 편집기: "염기 편집기(BE)" 또는 "핵염기 편집기(NBE)"라 함은 폴리뉴클레오티드에 결합하고 핵염기 변형 활성을 갖는 작용제(agent)를 의미한다. 다양한 구현예에서, 염기 편집기는 핵염기 변형 폴리펩티드(예를 들어, 데아미나제) 및 가이드 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 가이드 RNA)와 함께 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인을 포함한다. 다양한 구현예에서, 작용제는 염기 편집 활성을 갖는 단백질 도메인, 즉 핵산 분자(예를 들어, DNA) 내에 염기(예를 들어, A, T, C, G 또는 U)를 변형시킬 수 있는 도메인을 포함하는 생체분자 복합체이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 DNA 결합 도메인은 데아미나제 도메인에 융합되거나 연결된다. 일 구현예에서, 작용제는 염기 편집 활성을 갖는 1개 이상의 도메인을 포함하는 융합 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 염기 편집 활성을 갖는 단백질 도메인은 가이드 RNA에 연결된다(예를 들어, 가이드 RNA 상의 RNA 결합 모티프 및 데아미나제에 융합된 RNA 결합 도메인을 통함). 일부 구현예에서, 염기 편집 활성을 갖는 도메인은 핵산 분자 내의 염기를 탈아미노화할 수 있다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 DNA 분자 내의 1개 이상의 염기를 탈아미노화할 수 있다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 DNA 내의 시토신(C) 또는 아데노신(A)을 탈아미노화할 수 있다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 DNA 내의 시토신(C)과 아데노신(A)을 탈아미노화할 수 있다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 시티딘 염기 편집기(CBE)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데노신 염기 편집기(ABE)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데노신 염기 편집기(ABE) 및 시티딘 염기 편집기(CBE)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데노신 데아미나제에 융합된 뉴클레아제-불활성 Cas9(dCas9)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 염기 절제 복구 억제제, 예를 들어 UGI 도메인, 또는 dISN 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 데아미나제 및 염기 절제 복구 억제제, 예컨대 UGI 또는 dISN 도메인에 융합된 Cas9 닉카제를 포함한다. 다른 구현예에서, 염기 편집기는 무염기 염기 편집기이다. 염기 편집기에 대한 상세한 설명은 국제 PCT 출원 PCT/2017/045381호(WO2018/027078호) 및 PCT/US2016/058344호(WO2017/070632호)에 기술되어 있으며, 이들 각각은 전체적으로 본원에 참고로 통합된다. 또한 Komor, A.C., 등, "Programmable editing of a target base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage" Nature 533, 420-424 (2016); Gaudelli, N.M., 등, "Programmable base editing of A·T to G·C in genomic DNA without DNA cleavage" Nature 551, 464-471 (2017); Komor, A.C., 등, "Improved base excision repair inhibition and bacteriophage Mu Gam protein yields C:G-to-T:A base editors with higher efficiency and product purity" Science Advances 3:eaao4774 (2017), 및 Rees, H.A., 등, "Base editing: precision chemistry on the genome and transcriptome of living cells." Nat Rev Genet. 2018 Dec;19(12):770-788. doi: 10.1038/s41576-018-0059-1을 참조하며, 이들 전체 내용은 본원에 참고로 통합된다.
염기 편집 활성: "염기 편집 활성"이라 함은 폴리뉴클레오티드 내의 염기를 화학적으로 변경시키는 작용을 의미한다. 일 구현예에서, 제1 염기는 제2 염기로 전환된다. 일 구현예에서, 염기 편집 활성은 시티딘 데아미나제 활성으로, 예를 들어 표적 C·G를 T·A로 전환시킨다. 또 다른 구현예에서, 염기 편집 활성은 아데노신 또는 아데닌 데아미나제 활성으로, 예를 들어 A·T를 G·C로 전환시킨다. 또 다른 구현예에서, 염기 편집 활성은 시토신 또는 시티딘 데아미나제 활성으로, 예를 들어 표적 C·G를 T·A로 전환시키고 아데노신 또는 아데닌 데아미나제 활성으로, 예를 들어 A·T를 G·C로 전환시킨다.
염기 편집기 시스템: 용어 "염기 편집기 시스템"은 표적 뉴클레오티드 서열의 핵염기를 편집하기 위한 시스템을 의미한다. 다양한 구현예에서, 염기 편집기(BE) 시스템은 (1) 표적 뉴클레오티드 서열에서 핵염기를 탈아미노화하기 위한 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인(예를 들어, Cas9), 데아미나제 도메인 및 시티딘 데아미나제 도메인; 및 (2) 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인과 함께 1개 이상의 가이드 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 가이드 RNA)를 포함한다. 다양한 구현예에서, 염기 편집기(BE) 시스템은 아데노신 데아미나제 또는 시티딘 데아미나제로부터 선택된 핵염기 편집기 도메인, 및 핵산 서열 특이적 결합 활성을 갖는 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 염기 편집기 시스템은 (1) 표적 뉴클레오티드 서열에서 1개 이상의 핵염기를 탈아미노화하기 위한 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 DNA 결합 도메인 및 데아미나제 도메인을 포함하는 염기 편집기(BE); 및 (2) 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 DNA 결합 도메인과 함께 1개 이상의 가이드 RNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인은 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 DNA 결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 시티딘 염기 편집기(CBE)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데닌 또는 아데노신 염기 편집기(ABE)이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데닌 또는 아데노신 염기 편집기(ABE) 또는 시티딘 염기 편집기(CBE)이다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인은 데아미나제 도메인과 비공유적으로 상호작용하거나 연관됨으로써 데아미나제 도메인을 표적 뉴클레오티드 서열에 대해 표적으로 할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 핵염기 편집 구성요소, 예를 들어 데아미나제 구성요소는 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오타이드 결합 도메인의 일부인 추가적인 이종 부분 또는 도메인과 상호작용할 수 있거나 연관될 수 있거나 복합체를 형성할 수 있는 추가적인 이종 부분 또는 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 폴리펩티드와 결합하거나, 상호작용하거나, 연관되거나, 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 폴리뉴클레오티드와 결합하거나, 상호작용하거나, 연관되거나, 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 가이드 폴리뉴클레오티드와 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 폴리펩티드 링커와 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 폴리뉴클레오티드 링커와 결합할 수 있다. 추가적인 이종 부분은 단백질 도메인일 수 있다. 일부 구현예에서, 추가적인 이종 부분은 K 상동체(KH) 도메인, MS2 코트 단백질 도메인, PP7 코트 단백질 도메인, SfMu Com 코트 단백질 도메인, 스테릴 알파 모티프, 텔로머라제 Ku 결합 모티프 및 Ku 단백질, 텔로머라제 Sm7 결합 모티프 및 Sm7 단백질, 또는 RNA 인식 모티프일 수 있다.
생물학적 활성; 본원에서 사용될 때 "생물학적 활성" 문구는 생물학적 시스템에서, 및 특히 유기체에서 활성을 갖는 임의의 작용제의 특징을 의미한다. 예를 들어, 유기체에 투여될 때 해당 유기체에 생물학적 효과를 갖는 작용제는 생물학적 활성인 것으로 간주된다. 특정 구현예에서, 펩티드가 생물학적 활성인 경우, 펩티드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 공유하는 펩티드 부분은 일반적으로 "생물학적 활성" 부분으로 지칭된다.
절단; 본원에서 사용될 때 절단은 본원에 기술된 CRISPR 시스템의 뉴클레아제에 의해 형성된 표적 핵산에서의 파손을 의미한다. 일부 구현예에서, 절단 사건은 이중 가닥 DNA의 파손이다. 일부 구현예에서, 절단 사건은 단일 가닥 DNA의 파손이다. 일부 구현예에서, 절단 사건은 단일 가닥 RNA의 파손이다. 일부 구현예에서, 절단 사건은 이중 가닥 RNA의 파손이다.
상보적: 본원에서 사용될 때 상보적은 왓슨-크릭 염기 쌍을 형성하여 A 염기가 T와 쌍을 이루고 C 염기가 G와 쌍을 이루거나 두 번째 핵산 가닥 상에서 염기와 비전형적인 염기 쌍을 형성하도록 하는 핵산 가닥을 의미한다. 즉, 이는 적절한 조건 하에서 서로 혼성화되는 핵산을 의미한다.
일정한 간격으로 놓인 짧은 회문 반복부 집합(CRISPR)-연관(Cas) 시스템: 본원에서 사용될 때 CRISPR-Cas9 시스템은 CRISPR 이펙터를 암호화하는 서열을 포함하는 CRISPR-이펙터, RNA 가이드, 및 CRISPR 유전자좌의 기타 서열 및 전사체의 발현에 수반되거나 그 활성을 지시하는 핵산 및/또는 단백질을 의미한다. 일부 구현예에서, CRISPR 시스템은 조작된 비천연 발생 CRISPR 시스템이다. 일부 구현예에서, CRISPR 시스템의 구성요소는 시스템의 1개 이상의 구성요소를 암호화하는 핵산(들)(예를 들어, 벡터), 단백질 형태의 구성요소(들) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
CRISPR 어레이: 본원에서 사용될 때 용어 "CRISPR 어레이"는 CRISPR 반복부, 및 첫 번째 CRISPR 반복부의 첫 번째 뉴클레오티드에서 시작하고 마지막(말단) CRISPR 반복부의 마지막 뉴클레오티드에서 끝나는 스페이서를 포함하는 핵산(예를 들어, DNA) 세그먼트를 의미한다. 일반적으로, CRISPR 어레이의 각 스페이서는 2개 반복부 사이에 위치한다. 본원에서 사용될 때 용어 "CRISPR 반복부" 또는 "CRISPR 직접 반복부" 또는 "직접 반복부"는 다수의 짧은 직접 반복 서열을 의미하며, 이는 CRISPR 어레이 내 서열 변이를 거의 또는 전혀 나타내지 않는다.
CRISPR-연관 단백질(Cas): 본원에서 사용될 때 용어 "CRISPR-연관 단백질", "CRISPR 이펙터", "이펙터" 또는 "CRISPR 효소"는 효소 활성을 수행하거나 RNA 가이드에 의해 지정된 핵산 상의 표적 부위에 결합하는 단백질을 의미한다. 다른 구현예에서, CRISPR 이펙터는 엔도뉴클레아제 활성, 닉카제 활성, 엑소뉴클레아제 활성, 트랜스포사제 활성 및/또는 절제 활성을 가진다. 일부 구현예에서, Cas는 고정밀 Cas이다. 일부 구현예에서, Cas는 고충실 Cas이다. 일부 구현예에서, Cas는 SuperFi-Cas이다. 일부 구현예에서, 고정밀, 고충실 및 SuperFi-Cas는 Bravo, J. 등 Structural basis for mismatch surveillance by CRISPR-Cas9 Nature, 603, March 2022에 기술된 바와 같다.
crRNA: 본원에서 사용될 때 용어 "CRISPR RNA" 또는 "crRNA"는 특정 핵산 서열을 표적으로 하기 위해 CRISPR 이펙터에 의해 사용되는 가이드 서열을 포함하는 RNA 분자를 의미한다. 일반적으로, crRNA는 표적 인식을 매개하는 서열과 tracrRNA와 이중구조를 형성하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, crRNA:tracrRNA 이중구조는 CRISPR 이펙터에 결합한다.
생체외: 본원에서 사용될 때 용어 "생체외"는 다세포 유기체 내부가 아닌 외부에서 성장한 세포 또는 조직에서 발생한 사건을 의미한다.
기능적 등가물 또는 유사체: 본원에서 사용될 때 용어 "기능적 등가물" 또는 "기능적 유사체"는 아미노산 서열의 기능적 유도체와 관련하여 원래 서열과 실질적으로 유사한 생물학적 활성(기능적 또는 구조적)을 유지하는 분자를 지칭한다. 기능적 유도체 또는 등가물은 천연 유도체일 수 있거나 합성으로 제조된다. 예시적인 기능적 유도체는 단백질의 생물학적 활성이 보존된다는 전제 하에 하나 이상의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가가 있는 아미노산 서열을 포함한다. 아미노산 치환은 바람직하게는 치환된 아미노산과 유사한 화학적-물리적 특성을 가진다. 바람직한 유사한 화학적-물리적 특성에는 전하, 부피, 소수성, 친수성 등의 유사성이 포함된다.
반감기: 본원에서 사용될 때 용어 "반감기"는 단백질 농도 또는 활성과 같은 양이 기간 시작 시에 측정된 값의 절반으로 떨어지는 데 필요한 시간이다.
개선하다, 증가하다 또는 낮추다: 본원에서 사용될 때 용어 "개선하다", "증가하다" 또는 "낮추다" 또는 문법적 동등어는 본원에 기술된 치료를 시작하기 전의 동일 개체에서 측정치 또는 본원에 기술된 치료를 받지 않은 대조 대상체(또는 다수의 대조 대상체)에서 측정치와 같은 기준선 측정치와 비교한 값을 나타낸다. "대조 대상체"는 치료받는 대상체와 동일 형태의 질병을 갖고 치료받는 대상체와 거의 동일한 연령을 갖는 대상체이다.
억제: 본원에서 사용될 때 용어 "억제", "억제하다" 및 "억제함"은 관심 단백질 또는 유전자의 활성 및/또는 발현을 감소시키거나 낮추는 프로세스 또는 방법을 의미한다. 전형적으로, 단백질 또는 유전자를 억제함은 본원에 기술되거나 당업계에서 인식된 하나 이상의 방법에 의해 측정될 때 단백질 또는 유전자의 발현 또는 관련 활성을 적어도 10% 이상, 예를 들어 20%, 30%, 40% 또는 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 낮추거나 발현 또는 관련 활성을 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배, 100배 초과하여 감소시킴을 의미한다.
혼성화: 본원에서 사용될 때 용어 "혼성화"는 둘 이상의 핵산이 두 핵산의 염기 사이에 왓슨-크릭 쌍에 의한 수소 결합, 후그스타인(Hoogstein) 결합 또는 다른 서열-특이적 결합을 통해 서로 결합하는 반응을 의미한다. 다른 서열과 혼성화할 수 있는 서열은 서열의 "상보"라고 하며, "상보적"이라고 하거나 "상보성"을 보인다고 한다.
삽입결실: 본원에서 사용될 때 용어 "삽입결실"은 핵산 서열에서 염기의 삽입 또는 결실을 의미한다. 이는 일반적으로 돌연변이를 초래하고, 유전적 변이의 일반적인 형태이다.
시험관내: 본원에서 사용될 때 용어 "시험관내"는 다세포 유기체 내에서가 아니라 인위적 환경, 예를 들어 시험관이나 반응 용기 내에서, 세포 배양물 등에서 발생하는 사건을 의미한다.
생체내: 본원에서 사용될 때 용어 "생체내"는 인간 및 비인간 동물과 같은 다세포 유기체 내에서 발생하는 사건을 의미한다. 세포 기반 시스템의 맥락에서, 상기 용어는 살아있는 세포 내(예를 들어 시험관내 시스템과 반대임)에서 발생하는 사건을 지칭하기 위해 사용될 수 있다.
링커: 용어 "링커"는 둘 이상의 단위체를 연결하기 위해 사용되는 임의의 수단, 단위체 또는 모이어티를 의미한다. 일부 구현예에서, 링커는 공유 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 비공유 링커이다. 공유 링커의 예에는 공유 결합, 또는 연결될 단백질 또는 도메인의 하나 이상에 공유적으로 부착된 링커 모이어티가 포함된다. 일부 구현예에서, 링커는 비공유 결합, 예를 들어 백금 원자와 같은 금속 중심을 통한 유기금속 결합이다. 연결은 영구적 또는 가역적일 수 있다. 공유 연결의 경우 카본산 유도체를 포함한 아미드 기, 에테르, 유기 및 무기 에스테르를 포함한 에스테르, 아미노, 우레탄, 요소 등과 같은 다양한 작용기가 사용될 수 있다. 연결을 제공하기 위해 도메인은 산화, 수산화, 치환, 환원 등에 의해 변형되어 커플링을 위한 부위를 제공할 수 있다. 접합 방법은 당업자에게 잘 알려져 있고, 본 발명에서 사용을 위해 포함된다. 링커 모이어티는 화학적 링커 모이어티, 또는 예를 들어 펩티드 링커 모이어티(링커 서열)를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. RNA-결합 도메인 및 이펙터 도메인의 기능을 유의하게 감소시키지 않는 변형이 바람직하다는 것이 이해될 것이다.
돌연변이: 본원에서 사용될 때 용어 "돌연변이"는 당업계에서 일반적인 의미를 가지며, 예를 들어 점 돌연변이, 치환, 삽입, 결실, 역위 및 결실을 포함한다.
올리고뉴클레오티드: 본원에서 사용될 때 용어 "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로 단일 또는 이중 가닥 DNA의 약 5 내지 약 100개 뉴클레오티드의 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 올리고뉴클레오티드는 "올리고머" 또는 "올리고"라고도 알려져 있고, 유전자로부터 단리될 수 있거나 화학적으로 합성될 수 있다.
PAM: 용어 'PAM' 또는 '프로토스페이서 인접 모티프'는 CRISPR-Cas9와 같이 CRISPR 시스템에 의해 절단하도록 표적이 되는 핵산 영역이 잇따르는 짧은 핵산 서열(일반적으로 2 내지 6개 염기쌍 길이)을 의미한다. PAM은 Cas 뉴클레아제가 절단하는 데 필요하고, 일반적으로 절단 부위의 3 내지 4개 뉴클레오티드 다운스트림에서 발견된다.
폴리펩티드; 본원에서 사용될 때 용어 "폴리펩티드"는 펩티드 결합을 통해 함께 연결된 일련의 아미노산 사슬을 의미한다. 이 용어는 임의의 길이의 아미노산 사슬을 지칭하기 위해 사용되지만, 당업자는 이 용어가 긴 사슬에 제한되지 않고 펩티드 결합을 통해 연결된 2개 아미노산을 포함하는 최소 사슬을 지칭할 수 있음을 이해할 것이다. 당업자에게 알려진 바와 같이, 폴리펩티드는 처리 및/또는 변형될 수 있다. 본원에서 사용될 때 용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 상호교환적으로 사용된다.
예방하다; 본원에서 사용될 때 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 질병, 장애 및/또는 병태의 발생과 관련하여 사용되는 경우 질병, 장애 및/또는 병태가 발생할 위험을 낮추는 것을 의미한다.
단백질; 본원에서 사용될 때 용어 "단백질"은 개별 단위체로 기능하는 1개 이상의 폴리펩티드를 의미한다. 단일 폴리펩티드가 개별 기능 단위체이고, 개별 기능 단위체를 형성하기 위해 다른 폴리펩티드와의 영구적인 또는 일시적인 물리적 연관을 필요로 하지 않는 경우, 용어 "폴리펩티드"와 "단백질"은 상호교환적으로 사용될 수 있다. 개별 기능 단위체가 서로 물리적으로 연관되는 1개보다 많은 폴리펩티드로 구성되는 경우, 용어 "단백질"은 물리적으로 커플링되어 개별 단위체로 함께 기능하는 다수의 폴리펩티드를 의미한다.
참조: "참조" 단위체, 시스템, 양, 조건 설정 등은 테스트 단위체, 시스템, 양, 조건 설정 등이 본원에 기술된 바와 같이 비교되는 대상이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, "참조" 항체는 본원에 기술된 바와 같이 조작되지 않은 대조 항체이다.
RNA 가이드: 용어 RNA 가이드는 표적 핵산에 대해 본원에 기술된 단백질을 표적으로 하는 것을 촉진하는 RNA 분자를 의미한다. 예시적인 "RNA 가이드" 또는 "가이드 RNA"는 crRNA, 또는 동족 tracrRNA와 조합된 crRNA를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 후자는 독립적인 RNA이거나 링커를 사용하여 단일 RNA로 융합될 수 있다(sgRNA). 일부 구현예에서, RNA 가이드는 화학적 또는 생화학적 변형을 포함하도록 조작되고, 일부 구현예에서, RNA 가이드는 1개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
대상체: 본원에서 사용될 때 용어 "대상체"는 진단, 예후 또는 요법이 요구되는 임의의 대상체를 의미한다. 예를 들어, 대상체는 포유동물, 예를 들어 인간 또는 비인간 영장류(예컨대 유인원, 원숭이, 오랑우탄 또는 침팬지), 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 랫트, 마우스, 말, 소 또는 암소일 수 있다.
sgRNA: 용어 "sgRNA" 또는 "단일 가이드 RNA"는 (i) 가이드 서열(crRNA 서열) 및 (ii) Cas9 뉴클레아제-모집 서열(tracrRNA)을 함유하는 단일 가이드 RNA를 의미한다.
실질적 동일: "실질적 동일" 문구는 아미노산 또는 핵산 서열 간의 비교를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 당업자들이 인식하는 바와 같이 2개 서열이 상응하는 위치에 동일 잔기를 함유하는 경우 일반적으로 "실질적 동일"로 간주된다. 당업계에 잘 알려진 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은 뉴클레오티드 서열에 대한 BLASTN, 및 아미노산 서열에 대한 BLASTP, 갭 BLAST 및 PSI-BLAST와 같은 시판 컴퓨터 프로그램에서 이용 가능한 알고리즘을 포함하여 임의의 다양한 알고리즘을 사용하여 비교될 수 있다. 예시적인 이러한 프로그램은 Altschul, 등, Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, 등, Methods in Enzymology; Altschul 등, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis 등, Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener, 등, (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999에 기술되어 있다. 동일 서열을 식별하는 것 외에, 상기에서 언급한 프로그램은 일반적으로 동일성 정도에 대한 지표를 제공한다. 일부 구현예에서, 두 서열이 상응하는 잔기의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상이 잔기의 관련 구간에 걸쳐 동일한 경우 실질적 동일로 간주된다. 일부 구현예에서, 관련 구간은 완전 서열이다. 일부 구현예에서, 관련 구간은 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475 또는 500개 이상의 잔기이다.
표적 핵산: 본원에서 사용될 때 용어 "표적 핵산"은 CRISPR-Cas9 시스템이 결합되는 임의의 길이의 뉴클레오티드(올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드)인 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 또는 이들의 유사체를 의미한다. 표적 핵산은 암호화 또는 비암호화 영역을 포함하여 3차원 구조를 가질 수 있고, 엑손, 인트론, mRNA, tRNA, rRNA, siRNA, shRNA, miRNA, 리보자임, cDNA, 플라스미드, 벡터, 외인성 서열, 내인성 서열을 포함할 수 있다. 표적 핵산은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있고, 메틸화 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 표적 핵산은 비핵산 구성요소와 함께 배치될 수 있다. 표적 핵산은 단일-, 이중- 또는 다중-가닥의 DNA 또는 RNA, 게놈 DNA, cDNA, DNA-RNA 하이브리드, 또는 퓨린 및 피리미딘 염기를 포함하는 중합체, 또는 기타 천연, 화학적 또는 생화학적 변형된, 비천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기에 제한되지 않는다.
치료적 유효량: 본원에서 사용될 때 용어 "치료적 유효량"은 임의의 의학적 치료에 적용될 수 있는 합리적인 이익/위험 비로 치료 효과를 치료 대상체에게 부여하는 치료 분자(예를 들어 본원에 기술된 조작된 항체)의 양을 의미한다. 치료 효과는 객관적(즉, 일부 테스트 또는 마커에 의해 측정 가능함) 또는 주관적(즉, 대상체가 효과의 조짐 또는 느낌을 제공함)일 수 있다. 특히, "치료적 유효량"은 특정 질병 또는 병태를 치료, 개선 또는 예방하는 데 효과적이거나 예컨대 질병과 연관된 증상을 개선시키고/거나 질병 발병을 예방 또는 지연시키고/거나 질병 증상의 중증도 또는 빈도를 저감시킴으로써 감지 가능한 치료 또는 예방 효과를 나타내는 데 효과적인 치료 분자 또는 조성물의 양을 의미한다. 치료적 유효량은 다수의 단위 용량을 포함할 수 있는 용량 섭생법으로 투여될 수 있다. 임의의 특정 치료 분자의 경우, 치료적 유효량(및/또는 유효한 용량 섭생법 내의 적절한 단위 용량)은 예를 들어 투여 경로, 다른 약제와의 조합에 따라 달라질 수 있다. 또한, 임의의 특정 대상체를 위한 구체적인 치료적 유효량(및/또는 단위 용량)은 치료되는 장애 및 장애 중증도; 사용되는 구체적인 약제의 활성; 사용되는 구체적인 조성; 대상체의 연령, 체중, 전반적인 건강, 성별 및 식이요법; 사용되는 구체적인 치료 분자의 투여 시간, 투여 경로 및/또는 배설률 또는 대사율; 치료 기간; 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 요인을 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
tracrRNA: 본원에서 사용될 때 용어 "tracrRNA" 또는 "트랜스-활성화 crRNA"는 CRISPR-연관 단백질이 명시된 표적 핵산에 결합하는 데 필요한 구조를 형성하는 서열을 포함하는 RNA를 의미한다.
치료: 본원에서 사용될 때 용어 "치료"(또한 "치료하다" 또는 "치료함")는 특정 질병, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징의 발병을 부분적으로 또는 완전히 완화, 개선, 경감, 억제, 지연시키고/거나 중증도를 낮추고/거나 발생률을 낮추는 치료 분자(예를 들어, 본원에 기술된 CRISPR-Cas 치료 단백질 또는 시스템)의 임의의 투여를 의미한다. 이러한 치료는 관련 질병, 장애 및/또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질병, 장애 및/또는 병태의 초기 징후만을 나타내는 대상체에 대한 것일 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 이러한 치료는 관련 질병, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 규명된 징후를 나타내는 대상체에 대한 것일 수 있다.
도면은 설명 목적으로만 제공되고 제한을 위한 것이 아니다.
도 1a는 인간 코돈-최적화된 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas 9에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다. 도 1b는 인간 코돈-최적화된 샤르페아 spp. 단리물 RUG017 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다. 도 1c는 인간 코돈-최적화된 베일로넬라 파르불라 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다. 도 1d는 인간 코돈-최적화된 에자키엘라 페루엔시스에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다. 도 1e는 인간 코돈-최적화된 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다. 도 1f는 인간 코돈-최적화된 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761에 의해 인식되는 공통 PAM 모티프를 보여주는 그래프이다.
도 2a는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 스트렙토코커스 콘스텔라투스 ScoCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2a는 서열번호 3을 포함하는 sgRNA을 나타낸다. 도 2b는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 샤르페아 spp. 단리물 RUG017 SirCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2b는 서열번호 7을 포함하는 sgRNA을 나타낸다. 도 2c는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 베일로넬라 파르불라 VapCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2c는 서열번호 13을 포함하는 sgRNA을 나타낸다. 도 2d는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 에자키엘라 페루엔시스 EpeCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2d는 서열번호 19를 포함하는 sgRNA을 나타낸다. 도 2e는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB LfeCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2d는 서열번호 95을 포함하는 sgRNA을 나타낸다. 도 2f는 Geneious 소프트웨어를 사용하여 인간 코돈-최적화된 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 PmaCas9에 대한 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 보여주는 도면이다. 도 2d는 서열번호 96을 포함하는 sgRNA을 나타낸다.
도 3은 HEK293T 세포에서 인간 코돈-최적화된 ScoCas9의 생체외 절단 활성의 예시적인 결과를 보여주는 그래프이다. 그래프의 y축은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA를 사용하여 얻은 삽입결실 빈도를 보여준다(도 1a 참조).
도 4a는 아데닌 염기 편집기(ABE) 또는 시토신 염기 편집기(CBE)에 N-말단에서 융합된 ScoCas9 D10A 돌연변이체의 작제물을 보여주는 도면이다. 도 4b는 ScoCas9 D10A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 삽입결실 빈도 및 아데닌에서 구아닌 염기로(A에서 G로) 전환율의 결과를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 8)에 대해 도시되어 있다(도 1a 참조). 도 4c는 ScoCas9 D10A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 삽입결실 빈도 및 시토신에서 티민 염기로(C에서 T로) 전환율의 결과를 보여주는 그래프이다. C에서 T로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 C-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 8)에 대해 도시되어 있다(도 1a 참조).
도 5a는 WT SirCas9 및 아데닌 염기 편집기(ABE)에 N-말단에서 융합된 SirCas9 D14A 돌연변이체의 작제물을 보여주는 도면이다. 도 5b는 SirCas9 D14A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 삽입결실 빈도 및 A에서 G로 전환의 결과를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 9)에 대해 도시되어 있다(도 1b 참조).
도 6a는 WT VapCas9 및 아데닌 염기 편집기(ABE) 또는 시토신 염기 편집기(CBE)에 N-말단에서 융합된 VapCas9 D38A 돌연변이체를 보여주는 작제물의 도면이다. 도 6b는 염기결실 빈도, VapCas9 D38A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 전환 및 VapCas9 D38A의 N-말단에 융합된 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 C에서 T로 전환을 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 10)에 대해 도시되어 있다(도 1c 참조). C에서 T로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 C-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 10)에 대해 도시되어 있다(도 1c 참조).
도 7a는 VapCas9의 N-말단 또는 VapCas9의 C 말단에 융합된 ABE를 보여주는 작제물의 도면이다. 도 7b는 VapCas9의 N-말단에 융합된 ABE 및 C-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 전환의 비교를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 11)에 대해 도시되어 있다(도 1c 참조).
도 8a는 WT EpeCas9 및 ABE와 CBE에 N-말단에서 융합된 EpeCas9 D38A 돌연변이체를 보여주는 작제물의 도면이다. 도 8b는 삽입결실 빈도, EpeCas9 D38A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 전환 및 EpeCas9 D38A의 N-말단에 융합된 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 C에서 T로 전환의 결과를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 12)에 대해 도시되어 있다(도 1d 참조). C에서 T로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 C-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 12)에 대해 도시되어 있다(도 1d 참조).
도 9a는 WT LfeCas9 및 ABE와 CBE에 N-말단에서 융합된 LfeCas9 D9A 돌연변이체를 보여주는 도면이다. 도 9b는 LfeCas9를 사용한 삽입결실 빈도의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 9c는 LfeCas9 D9A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 ABE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 전환의 결과를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 13)에 대해 도시되어 있다(도 1e 참조). 도 9d는 LfeCas9 D9A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 C에서 T로 전환의 결과를 보여주는 그래프이다. C에서 T로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 C-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 13)에 대해 도시되어 있다(도 1e 참조).
도 10a는 WT PmaCas9 및 N-말단과 C-말단에서 ABE와 CBE에 융합된 PmaCas9 D12A 돌연변이체를 보여주는 도면이다. 도 10b는 PmaCas9 D12A 돌연변이체의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 ABE 또는 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 또는 C에서 T로 전환의 결과를 보여주는 그래프이다. A에서 G로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 A-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 14)에 대해 도시되어 있다(도 1f 참조). C에서 T로 전환율(y축)은 PAM 공통 모티프에 상응하는 서열에 인접한 C-풍부 게놈 테스트 부위를 표적으로 하는 다양한 가이드 RNA(x축; 표 14)에 대해 도시되어 있다(도 1f 참조).
도 11a는 2개의 ScoCas9-NGC 변이체인 ScoCas9-NGC-vl 및 ScoCas9-NGC-v2(x축)로 세포를 형질감염시킴으로써 측정한 삽입결실 빈도(y축; 삽입결실 빈도%)의 예시적인 결과를 보여주는 그래프이다. 미형질감염 세포 대조군도 표시된다.
도 11b는 NGC PAM 모티프를 인식하도록 조작된 ScoCas9-NGC 변이체인 ScoCas9-NGC-vl 및 ScoCas9-NGC-v2를 포함하는 A에서 G로 염기 편집기(ABE)로 형질감염된 HEK293T 세포(x축)에서 예시적인 A에서 G로 전환(y축; A에서 G로 전환%)을 보여주는 그래프이다. NGC를 인식하지 않는 ScoCas9-NGG 변이체는 A에서 G로 전환을 보여주지 않았다. SpyCas9-NGC 대조 벡터는 A에서 G로 편집을 보여주었다. 미형질감염 세포 대조군도 표시된다.
일정한 간격으로 놓인 짧은 회문 반복부 서열(CRISPR)은 박테리아와 고세균에서 적응형 면역 시스템으로 처음 발견된 후 살아있는 세포와 유기체에서 표적이 된 DNA 파손을 발생시키도록 조작되었다. 세포 DNA 복구 프로세스동안 다양한 DNA 변화가 도입될 수 있다. 다양한 확장성 CRISPR 도구상자를 사용하여 프로그래밍 가능한 게놈 편집, 후성유전체 편집 및 전사체 조절을 할 수 있다.
CRISPR-Cas 시스템은 Cas 유전자 조직과 구성요소 단백질의 서열 및 구조에 기반한 3가지 주요 유형(I, II 및 III)을 포함한다. 3가지 CRISPR 시스템 각각은 다음의 고유 Cas 유전자를 특징으로 한다: 유형 I에서 표적-열화성 뉴클레아제/헬리카제인 Cas3; 유형 II에서 RNA-결합 및 표적-열화성 뉴클레아제인 Cas9; 유형 III에서 다중 기능을 위한 대형 단백질인 Cas 10. 또한 3가지 CRISPR 유형은 연관된 이펙터 복합체에서 상이하다. 유형 I Cas 시스템은 캐스케이드 이펙터 복합체와 연관되고, 유형 II 이펙터 복합체는 단일 Cas9와 1개 이상의 RNA 분자로 이루어지고, 유형 III 간섭 복합체는 유형 III-A(DNA를 표적으로 하는 Csm 복합체)와 유형 III-B(RNA를 표적으로 하는 Cmr 복합체)로 더 나누어진다. Cas 단백질은 모든 CRISPR-Cas 시스템에서 이펙터 복합체의 중요 구성요소이다.
현재 게놈 편집 기술은 DNA 절단을 위한 단일-단백질 이펙터 뉴클레아제를 함유하는 클래스 II CRISPR-Cas 시스템에 초점을 두고 있으며, 구체적으로는 CRISPR RNA(crRNA)와 tracrRNA 둘 모두를 필요로 하고 HNH 및 RuvC 뉴클레아제 도메인 둘 모두를 함유하는 이중-RNA 가이드되는 뉴클레아제인 Cas9와, crRNA만을 필요로 하고 단일 RuvC 도메인을 함유하는 단일-RNA 가이드되는 뉴클레아제인 Cas 12a에 초점을 두고 있다.
본 발명의 다양한 측면은 다음 항에서 자세히 기술된다. 이러한 항의 사용은 본 발명을 제한하려는 것이 아니다. 각 항은 본 발명의 임의의 측면에 적용될 수 있다. 본 출원에서 "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다.
조작된 비천연 발생 Cas9 단백질
스트렙토코커스 콘스텔라투스(ScoCas9), 샤르페아 spp. 단리물 RUG017(SirCas9), 베일로넬라 파르불라(상호 교환적으로 사용되는 VapCas9 또는 VpaCas9), 에자키엘라 페루엔시스(EpeCas9), 락토바실러스 퍼멘텀(LfeCas9) 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761(PmaCas9) 박테리아에서 얻은 WT Cas9로부터 변형된 조작된 비천연 발생 Cas9 단백질이 본원에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 조작된 비천연 발생 Cas9 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 60%(예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, Cas9 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 80% 동일하다. 일부 구현예에서, Cas9 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 동일하다. 예시적인 Cas9 아미노산 서열은 아래 표 1에 제공된다.
표 1. 예시적인 Cas9 아미노산 서열
NLS(굵은 글씨)는 다른 NLS로 대체될 수 있다.
링커(밑줄)는 제거되거나 연장될 수 있다.
3xHA 태그(이탤릭체)는 다른 태그로 대체될 수 있다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86에 대하여 1개 이상의 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, Cas9 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86에 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개의 돌연변이를 포함한다. 다양한 돌연변이가 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 아미노산 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, Cas9의 2개 이상의 촉매 도메인(RuvC1, RuvCII, RuvCIII)이 돌연변이되어, 불활성 또는 핵산 절단 활성이 없는 "죽은" Cas9(dCas9)를 생성한다. 일부 구현예에서, 1개 이상의 돌연변이는 PAM 상호작용, HNH 및 또는 RuvC 도메인에 있다. 일부 구현예에서, Cas9는 비돌연변이 형태에 비해 DNA 절단 활성을 약 25%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.1%, 0.01% 이하로 낮추도록 돌연변이된다.
일부 구현예에서 Cas9의 닉카제-돌연변이체 버전이 제공된다. 일부 구현예에서, 닉카제 돌연변이체는 RuvC 및/또는 HNH 도메인에 1개 이상의 아미노산 치환을 가진다. 다양한 닉카제 돌연변이가 SpCas9(스트렙토코커스 피오게네스)와 관련하여 알려져 있으며, 예를 들어 야생형 SpCas9의 아미노산 위치 10, 12, 17, 762, 840, 854, 863, 982, 983, 984, 986, 987 중 하나 이상에 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, SpCas9의 D10A에 상응하는 아스파르트산에서 알라닌으로 치환은 닉카제 형성을 초래한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9는 닉카제 형성을 초래하는 1개 이상의 돌연변이를 가진다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9는 SpCas9의 아미노산 10, 12, 17, 762, 840, 854, 863, 982, 983, 984, 986, 987 중 하나 이상에 상응하는 아미노산 위치에 1개 이상의 돌연변이를 가진다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 ScoCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D10A)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 SirCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D14A)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VapCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D38A)(예를 들어 SpCas9의 D10A에 상응)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 EpeCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D12A)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 LfeCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D9A)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 PmaCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 알라닌으로 치환(D12A)이다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 ScoCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D10G)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 SirCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D14G)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VapCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D38G)이다(예를 들어 SpCas9의 D10G에 상응)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 EpeCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D12G)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 LfeCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D9A)이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 PmaCas9의 RuvC 도메인에서 아스파르트산에서 글리신으로 치환(D12G)이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 이러한 1개 이상의 돌연변이는 Cas9를 Cas9의 불활성 또는 "죽은" 버전(dCas9)으로 전환시킨다. 따라서, 일부 구현예에서, Cas9 단백질은 Cas9가 DNA 이중구조의 두 가닥을 모두 절단하는 능력을 억제하는 1개 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 가이드 RNA와 함께 공동발현될 때, 죽은 Cas9는 전사적 신장, RNA 폴리머라제 결합 또는 전사 인자 결합을 특이적으로 방해할 수 있는 DNA 인식 복합체를 발생시킨다. 일부 구현예에서, 죽은 Cas9는 특이적 핵산 표적 부위에 다양한 기능의 이펙터 단백질을 특이적으로 표적으로 하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 고충실 Cas9 변이체는 증강된 특이성을 포함하여 표적외(off-target) 절단을 최소화한다. 일부 구현예에서, 조작된 변이체, 예를 들어 주로 REC3 도메인 내에 돌연변이를 포함하고 보다 높은 특이성과 충실성을 달성하는 '초정확 Cas9'(SpyCas9에 상응하는 N692A, M694A, Q695A 및/또는 H698A 돌연변이) 및/또는 '고충실 Cas9'(SpyCas9에 상응하는 N467A, R661A, Q695A 및/또는 Q926A 돌연변이)가 사용된다. 고충실 변이체는 Cas9가 미스매치를 안정화시키고 표적외 DNA 절단을 낮추는 능력을 낮춘다. 일부 구현예에서, 특이성 증가는 표적내(on-target) 절단 효율을 약 100배 감소시킴을 동반한다. 일부 구현예에서, 야생형 Cas9에 필적하는 표적내 절단율을 유지하는 고충실 변이체인 SuperFi-Cas9가 사용된다. 일부 구현예에서, SuperFi-Cas9는 RuvC 루프에 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 gRNA-TS 이중구조의 후속 절단을 촉진하는 꼬인 형태의 형성을 억제한다. 일부 구현예에서, SpyCas9에 상응하는 Y1016, R1019, Y1010, Y1013, K1031, Q1027 및/또는 V1018 잔기는 예를 들어, 아스파르트산으로 돌연변이된다.(Bravo, J. 등 Structural basis for mismatch surveillance by CRISPR-Cas9 Nature, 603, March 2022).
조작된 비천연 발생 Cas9는 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96에서 Cas9 아미노 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 조작된 비천연 발생 Cas9는 인간 세포에 대해 코돈-최적화된(예를 들어, 발현, 안정성 등에 대해 코돈 최적화된) 핵산 분자에서 암호화된다.
핵 위치 신호(NLS) 및 링커가 있는 예시적인 Cas9 서열은 다음 표 2에 제공된다.
표 2. NLS 및 링커가 있는 예시적인 Cas9 서열
NLS(굵은 글씨)는 상이한 NLS로 대체될 수 있다.
링커(밑줄)는 제거되거나 연장될 수 있다.
일부 구현예에서, 조작된 비천연 발생 Cas9는 태그를 포함한다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 목적에 따라 다양한 태그가 Cas9 변이체(예를 들어, 3xHA 태그)에 융합될 수 있다.
다양한 종은 특정 유기체에서 해당 코돈에 대한 tRNA 종의 풍부함에 상응하는 메신저 RNA(mRNA) 내 코돈을 활용함으로써 mRNA의 번역 효율과 상관관계가 있는 코돈 편향(즉, 유기체에 의한 코돈 사용의 차이)을 나타낸다. 예를 들어 소프트웨어 사용에 의하는 것을 포함하여 당업계의 다양한 방법이 컴퓨터 최적화를 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화는 천연 아미노산 서열을 유지하면서 천연 서열의 적어도 1개의 코돈(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50개 이상의 코돈)을, 숙주 세포의 유전자에서 더 빈번하게 사용되거나 가장 빈번하게 사용되는 코돈으로 대체함으로써 관심 숙주 세포에서 증강되게 발현되도록 하기 위한 핵산 서열 변형을 의미한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9 단백질은 코돈 최적화된다. 이러한 유형의 최적화는 당업계에 알려져 있고, 동일 단백질을 암호화하면서 의도된 숙주 유기체 또는 세포의 코돈 선호를 모방하도록 외래-유래의 DNA 돌연변이를 수반한다. 따라서, 코돈은 변하지만, 암호화된 단백질은 변하지 않은 상태로 유지된다. 코돈 최적화는 가용성 단백질 수준을 향상시키고, 특정 종의 활성과 편집 효율을 증가시킨다. 또한 코돈 최적화는 번역 및 단백질 발현의 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 진핵 세포에서 발현되도록 코돈-최적화된다. 일부 구현예에서, Cas9 단백질은 인간 세포에서 발현되도록 코돈-최적화된다.
프로토스페이서 인접 모티브(PAM)
각 Cas 엔도뉴클레아제는 비표적화된, 즉, 상보적 DNA 가닥 상에 프로토스페이서 인접 모티프(PAM)로 알려진 특정 서열이 있는 경우에만 표적 서열에 결합한다. 다양한 박테리아 종으로부터 단리된 Cas 뉴클레아제는 상이한 PAM 서열을 인식한다. 예를 들어 SpCas9 뉴클레아제(스타필로코커스 피오게네스 유래)는 PAM 서열 5'-NGG-3'(여기서 "N"은 임의의 뉴클레오티드 염기일 수 있다)의 업스트림을 절단하고, SaCas9(스타필로코커스 아우레우스 유래)는 표적에서 PAM 서열 5'-NNGRR(N)-3'을 인식한다. 따라서, 상이한 Cas 단백질이 표적으로 할 수 있는 게놈 내 위치는 고유 PAM 서열의 위치에 의해 제한된다.
스트렙토코커스 콘스텔라투스 및 에자키엘라 페루엔시스 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 종으로부터 조작된 본원에 개시된 Cas9 단백질이 공통 PAM 서열 5'-NGG-3'를 인식한다. 스트렙토코커스 콘스텔라투스 및 에자키엘라 페루엔시스 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 종으로부터 조작된 본원에 개시된 Cas9 단백질이 공통 PAM 시퀀스 5'-NGG-3'를 인식한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 Cas9 단백질은 공통 PAM 서열 5'-NGC-3'을 인식하도록 조작된다. 예시적인 구현예가 아래에 기술되어 있고, 비제한적이어야 한다. 일부 구현예에서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 유래의 Cas9 단백질은 공통 PAM 서열 5'-NGC-3'을 인식하도록 조작된다. 일부 구현예에서, NGC PAM 변이체는 ScoCas9(서열번호 1)와 관련하여 D1117M, S118Q, E1201F, A1299R, D1309A, R1312E 및 T1314R(총칭하여 "MQFRAER"라 함)로부터 선택되거나 이에 상응하는 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, NGC PAM 변이체는 자연 발생 SpyCas9(서열번호 173)와 관련하여 D1135M, S1136Q, G1218K, E1219F, A1322R, D1332A, R1335E 및 T1337R(총칭하여 "MQKFRAER"라 함)로부터 선택되거나 이에 상응하는 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 유사하거나 상응하는 아미노산 치환이 SirCas9, VapCas9, EpeCas9, LfeCas9 또는 PmaCas9에 대해 이루어질 수 있다.
스트렙토코커스 피오게네스 Cas9(SpyCasP; GenBank: QSG91308.1)
MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDDYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD(서열번호 173).
일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9 단백질은 임의의 다른 PAM 서열과 결합하지 않거나 활성을 나타내지 않는다.
RNA 가이드
RNA 가이드는 표적 서열에 대해 상보성을 갖는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. RNA 가이드는 표적 핵산 서열과 혼성화하고, 표적 핵산에 대한 CRISPR 복합체의 서열-특이적 결합을 지시한다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 표적 핵산 서열에 대해 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보성을 가진다.
일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50 또는 75개 이상의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 18 내지 24개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 표적 핵산 서열에서 약 18 내지 24개의 뉴클레오티드에 상보적이다. 예를 들어, RNA 가이드는 표적 핵산 서열에서 약 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 18 내지 22개의 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 18 내지 21개의 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 18 내지 20개의 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 표적 핵산 서열에서 20개의 뉴클레오티드에 상보적이다.
RNA 가이드는 임의의 표적 서열을 표적으로 하기 위해 설계될 수 있다. 최적의 정렬은 Needleman-Wunsch 알고리즘, Smith-Waterman 알고리즘, Burrows-Wheeler 알고리즘, ClustlW, ClustlX, BLAST, Novoalign, SOAP, Maq 및 ELAND를 포함하여 임의의 서열 정렬 알고리즘을 사용하여 결정된다.
일부 구현예에서, RNA 가이드는 세포 게놈 내의 고유 표적 서열에 대해 표적된다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 PAM 서열이 결여되도록 설계된다. 일부 구현예에서, RNA 가이드 서열은 mFold 또는 Geneious를 포함하는 접힘 알고리즘을 사용하여 최적의 이차 구조를 갖도록 설계된다. 일부 구현예에서, RNA 가이드의 발현은 유도성 프로모터, 예를 들어 호르몬 유도성, 테트라사이클린 또는 독시사이클린 유도성, 아라비노스 유도성 또는 광유도성 프로모터 하에서 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서 CRISPR 시스템은 1개 이상의 RNA 가이드, 예를 들어 crRNA, tracrRNA 및/또는 sgRNA를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서 RNA 가이드는 crRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 tracrRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 sgRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, CRISPR 시스템은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 15개 이상의 RNA 가이드를 포함하는 다수 RNA 가이드를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA 가이드는 crRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, CRISPR 시스템은 2 내지 15개의 crRNA를 포함하는 다수 crRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, crRNA는 전구체 crRNA(pre-crRNA)이며, 이는 직접 반복 서열, 스페이서 서열 및 직접 반복 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, crRNA는 첨두절단된 직접 반복 서열을 포함하는 처리된 또는 성숙 crRNA이다.
일부 구현예에서, CRISPR 연관 단백질은 pre-crRNA를 절단하여, 처리된 또는 성숙 crRNA를 형성한다.
일부 구현예에서, CRISPR 연관 단백질은 성숙 crRNA와 복합체를 형성하고, 스페이서 서열은 표적 핵산 내 상보적 서열에 대해 복합체를 표적으로 한다. 일부 구현예에서, RNA 가이드는 표적 핵산에 적합한 조건 하에서 혼성화할 수 있는 스페이서 서열 및 직접 반복 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, crRNA의 스페이서 길이는 약 15 내지 50개의 뉴클레오티드 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 가이드의 스페이서 길이는 적어도 16개의 뉴클레오티드, 적어도 17개의 뉴클레오티드, 적어도 18개의 뉴클레오티드, 적어도 19개의 뉴클레오티드, 적어도 20개의 뉴클레오티드, 적어도 21개의 뉴클레오티드 또는 적어도 22개의 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 스페이서 길이는 15 내지 17개의 뉴클레오티드(예를 들어, 15, 16 또는 17개의 뉴클레오티드), 17 내지 20개의 뉴클레오티드(예를 들어, 17, 18, 19 또는 20개의 뉴클레오티드), 20 내지 24개의 뉴클레오티드(예를 들어, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 뉴클레오티드), 23 내지 25개의 뉴클레오티드(예를 들어, 23, 24 또는 25개의 뉴클레오티드), 24 내지 27개의 뉴클레오티드, 27 내지 30개의 뉴클레오티드, 30 내지 45개의 뉴클레오티드(예를 들어, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45개의 뉴클레오티드), 30 또는 35 내지 40개의 뉴클레오티드, 41 내지 45개의 뉴클레오티드, 45 내지 50개의 뉴클레오티드(예를 들어, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50개의 뉴클레오티드) 이상이다.
일부 구현예에서, RNA 가이드는 약 16 내지 26개의 뉴클레오티드 길이를 가지는 직접 반복(DR) 서열을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, DR은 약 16개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 17개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 18개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 19개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 20개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 21개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 22개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 23개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 24개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 25개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, DR은 약 26개의 뉴클레오티드 길이를 가진다.
일부 구현예에서, crRNA는 뉴클레오티드 가이드 서열 및 DR 서열을 포함한다. 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 18 내지 24개의 뉴클레오티드 길이를 가질 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 18개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 19개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 20개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 21개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 가이드 서열은 약 22개의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, crRNA는 약 22개 뉴클레오티드 길이의 뉴클레오티드 가이드 서열 및 약 22개의 뉴클레오티드 길이의 직접 반복부를 포함한다.
일부 구현예에서, crRNA 서열은, CRISPR-연관 단백질과 복합체를 형성할 수 있고 실질적인 뉴클레아제 활성 없이 특이적 표적에 결합할 수 있는 "죽은 crRNA", "죽은 가이드" 또는 "죽은 가이드 서열"로 변형될 수 있다.
일부 구현예에서, crRNA는 당 인산염 골격(backbone) 또는 염기에서 화학적으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, crRNA는 2'O-메틸, 2'-F 또는 잠긴 핵산을 사용하여 변형되어, 뉴클레아제 저항성 또는 염기쌍 짝짓기를 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, crRNA는 2-티오우리디엔 또는 N6-메틸아데노신과 같은 변형된 염기를 함유할 수 있다.
일부 구현예에서, crRNA는 다른 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 단백질, 태그, 염료 또는 폴리에틸렌 글리콜과 접합된다.
일부 구현예에서, crRNA는 3차원 구조로 인해 특이적 표적 분자에 결합할 수 있는 앱타머 또는 리보스위치 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 트랜스-활성화 RNA(tracrRNA)는 crRNA와 연관되어, Cas9 단백질과의 복합체 형성을 촉진한다. 일부 구현예에서, tracrRNA 서열은 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개 이상 또는 이를 초과하는 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, tracrRNA는 약 70개의 뉴클레오티드 길이를 가진다.
일부 구현예에서, tracrRNA 및 crRNA는 단일 가이드 RNA(sgRNA)라고 불리는 단일 전사체에 함유된다. 일부 구현예에서, sgRNA는 tracrRNA와 sgRNA 사이에 루프를 포함한다.
일부 구현예에서, 루프 형성 서열은 3, 4, 5개 이상의 뉴클레오티드 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 GAAA, AAAG, CAAA, AAAC, UUUU, UUAUAU, UUA, UUU 및/또는 AAUCA를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 GAAA를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 AAAG를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 CAAA를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 AAAC를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 AAUCA를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 UUUU를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 UUAUAU를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 UUA를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 UUU를 가진다. 일부 구현예에서, 루프는 서열 AAUCA를 가진다.
일부 구현예에서, tracrRNA 및 crRNA는 헤어핀 루프를 형성한다. 일부 구현예에서, sgRNA는 적어도 2개 이상의 헤어핀을 가진다. 일부 구현예에서, sgRNA는 2개, 3개, 4개 또는 5개의 헤어핀을 가진다.
일부 구현예에서, sgRNA는 6개의 뉴클레오티드를 포함하는 폴리T 서열을 포함하는 전사 종결 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sgRNA는 ScoCas9에 대해
5'-GUUUUAGAGCUGUGCUGUUUAAACAACACAGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUACUC (서열번호 3),
SirCas9에 대해 5'-
GUUUUAGAGUUGUGUUAUUGAAAAAUAACACAACGAGUUAAAAUAAAGCUUAUGCUUAAAUGCCAGCUUUGCUGGUGUCAUUUAGAUGACUUUACUAAGGUUGCUUCGGCAACCUUUUU-3' (서열번호 7),
VapCas9에 대해 5'-
GUUUGAGAGUAGUGUGAAAACAUUACGAGUUCAAAUACAAAUUAAUUUACAAUGCCUUCGGGCUGCCCGACGUAGGGCACCUACUCUCAAUUCUUCGGAAUUGAGUU-3' (서열번호 13),
EpeCas9에 대해 5'-
GUUUGAGAGUUAUGUAAUUGAAAAAUUACAUGACGAGUUCAAAUAAAAAUUUAUUCAAACCGCCUAUUUAUAGGCCGCAGAUGUUCUGCAUUAUGCUUGCUAUUGCAAGCUU-3' (서열번호 19),
LfeCas9에 대해 5'-
GUCUUGGAUGAGUGUGAAAACACUCAUAGUCAAGAUCAAACGAGUGGUUUUCCACGAGUUAUUACUUUUGAGGUCUUAUAUGGCCCAUACAUAAAAAGGAGUCGGAAUUUCCGGCUCCUUUUCUU-3' (서열번호 95) 및
PmaCas9에 대해 5'-
GUUUUAGAGCCAUGUAGAAAUACAUUGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUAAUCAACUUGAAAAAGUGGCGCUGUUUCGGCGCUUU-3' (서열번호 96)에 적어도 80% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
가이드 RNA는 Cas9의 5' 단부에 추가된다. 일부 구현예에서, sgRNA는 서열번호 3, 7, 13 19, 95 또는 96과 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, sgRNA는 서열번호 3, 7, 13, 19, 95 또는 96과 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, tracrRNA는 동일한 전사체에 crRNA 서열과 함께 함유되지 않은 별도의 전사체이다.
Cas9 융합 단백질
일부 구현예에서, Cas9 효소는 1개 이상의 이종 단백질 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, Cas9 효소는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 이상의 단백질 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, 이종 단백질 도메인은 Cas9 효소의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 이종 단백질 도메인은 Cas9 효소의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 이종 단백질 도메인은 Cas9 효소의 C-말단과 N-말단 사이에 내부적으로 융합된다. 일부 구현예에서, 내부 융합은 Cas9 RuvCI, RuvC II, RuvCIII, HNH, REC I 또는 PAM 상호작용 도메인 내에서 이루어진다.
Cas9 단백질은 또 다른 단백질 도메인에 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 적합한 CRISPR 시스템은 Cas9 단백질 및 이종 단백질을 연결하는 링커 또는 스페이서를 함유한다. 아미노산 링커 또는 스페이서는 일반적으로 2개 단백질 모이어티 사이에 알파 나선과 같은 구조를 개재시키도록 또는 유연하도록 설계된다. 링커 또는 스페이서는 상대적으로 짧을 수 있거나 길 수 있다. 일반적으로 링커 또는 스페이서는 예를 들어 1 내지 100개(예: 1 내지 100개, 5 내지 100개, 10 내지 100개, 20 내지 100개 30 내지 100개, 40 내지 100개, 50 내지 100개, 60 내지 100개, 70 내지 100개, 80 내지 100개, 90 내지 100개, 5 내지 55개, 10 내지 50개, 10 내지 45개, 10 내지 40개, 10 내지 35개, 10 내지 30개, 10 내지 25개, 10 내지 20개) 아미노산 길이를 함유한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 스페이서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100개 아미노산 길이와 동일하거나 이보다 길다. 일반적으로 링커가 길수록 입체 장애가 감소할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 글리신과 세린 잔기의 혼합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 트레오닌, 프롤린 및/또는 알라닌 잔기를 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서 Cas9 단백질은 세포 위치 신호, 에피토프 태그, 리포터 유전자, 및 효소 활성, 후성적 변형 활성, RNA 절단 활성, 핵산 결합 활성, 전사 조절 활성을 갖는 단백질 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, Cas9 단백질은 핵 위치 서열(NLS), FLAG 태그, HIS 태그 및/또는 HA 태그에 융합된다.
적합한 융합 파트너에는 메틸트랜스퍼라제 활성, 데메틸라제 활성, 아세틸트랜스퍼라제 활성, 데아세틸라제 활성, 키나제 활성, 포스파타제 활성, 유비퀴틴 리가제 활성, 탈유비퀴틴화 활성, 아데닐화 활성, 데아데닐화 활성, SUMO화 활성, 탈SUMO화 활성, 리보실화 활성, 탈리보실화 활성, 미리스토일화 활성, 탈미리스토일화 활성, 인테그라제 활성, 트랜스포사제 활성, 재조합효소 활성, 폴리머라제 활성, 리가제 활성, 헬리카제 활성 또는 뉴클레아제 활성을 제공하는 폴리펩티드가 포함되지만 이에 국한되지는 않으며, 이들 중 임의의 것은 DNA 또는 DNA-연관 폴리펩티드(예: 히스톤 또는 DNA 결합 단백질)를 변형시킬 수 있다. 일부 구현예에서 Cas9 단백질은 히스톤 데메틸라제, 전사 활성화인자 또는 데아미나제에 융합된다.
추가의 적합한 융합 파트너에는 경계 요소(예: CTCF), 주변 동원을 제공하는 단백질 및 그의 단편(예: 라민(Lamin) A, 라민 B 등) 및 단백질 도킹 요소(예: FKBP/FRB, Pill/Abyl 등)가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
특정 구현예에서, Cas9는 예를 들어 염기 편집에 사용하기 위해 시티딘 또는 아데노신 데아미나제 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, Cas9는 아데닌 및 시토신 염기 편집기(ACBE 또는 CASE)에 융합되고, ACBE 또는 CABE는 Cas9 닉카제(nCas9)의 N- 및 C-말단에 TadA 이종이량체 및 활성화-유도된 시티딘 데아미나제(AID)를 융합시킴으로써 발생된다. 일부 구현예에서, ACBE 또는 CABE는 동일 표적 부위에서 C에서 T로 및 A에서 G로 염기 편집을 동시에 유도한다. Xie, J 등 ACBE, a new base editor for simultaneous C-to-T and A-to-G substitutions in mammalian systems. BMC Biology (18: 131), 2020)
일부 구현예에서, 용어 "시티딘 데아미나제" 및 "시토신 데아미나제"는 상호 교환하여 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 시티딘 데아미나제 도메인은 본원에 기술된 임의의 시티딘 데아미나제와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 시티딘 데아미나제 도메인은 시티딘 데아미나제 활성(예를 들어, C를 U로 전환)을 가진다. 특정 구현예에서, 아데노신 데아미나제 도메인은 본원에 기술된 임의의 아데노신 데아미나제와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제 도메인은 아데노신 데아미나제 활성(예를 들어, A를 I로 전환)을 가진다. 일부 구현예에서, 용어 "아데노신 데아미나제" 및 "아데닌 데아미나제"는 상호 교환하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 시티딘 데아미나제는 아포지질단백질 B mRNA 편집 복합체(APOBEC) 계열 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. APOBEC은 진화적으로 보존된 시티딘 데아미나제 계열이다. 이 계열의 구성원은 C에서 U로 편집하는 효소이다. APOBEC 유사 단백질의 N-말단 도메인은 촉매 도메인인 반면, C-말단 도메인은 유사촉매 도메인이다. 보다 구체적으로, 촉매 도메인은 아연 의존성 시티딘 데아미나제 도메인이고, 시티딘 탈아미노화에 중요하다. APOBEC 계열 구성원에는 APOBEC1, APOBEC2, APOBEC3A, APOBEC3B, APOBEC3C, APOBEC3D(현재 "APOBEC3E"는 이를 지칭함), APOBEC3F, APOBEC3G, APOBEC3H, APOBEC4 및 활성화-유도된(시티딘 또는 시토신) 데아미나제를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC1 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC2 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3A 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3B 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3C 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3D 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3E 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3F 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3G 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC3H 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 APOBEC4 데아미나제의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 활성화-유도된 데아미나제(AID)의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서 융합 단백질에 혼입된 데아미나제는 시티딘 데아미나제 1(CDA1)의 전부 또는 일부를 포함한다. 융합 단백질은 임의의 적합한 유기체(예를 들어, 인간 또는 랫트)로부터의 데아미나제를 포함할 수 있음이 인식되어야 한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 데아미나제 도메인은 인간, 침팬지, 고릴라, 원숭이, 소, 개, 랫트 또는 마우스에서 유래된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 데아미나제 도메인은 랫트(예를 들어, 랫트 APOBEC1)로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 데아미나제 도메인은 인간 APOBEC1이다. 일부 구현예에서, 데아미나제 도메인은 pmCDAl이다. 예시적인 시티딘 데아미나제의 서열이 아래에 제공된다.
pmCDA1 (페트로마이존 마리너스(Petromyzon marinus))
MTDAEYVRIHEKLDIYTFKKQFFNNKKSVSHRCYVLFELKRRGERRACFWGYAVNKPQSGTERGIHAEIFSIRKVEEYLRDNPGQFTINWYSSWSPCADCAEKILEWYNQELRGNGHTLKIWACKLYYEKNARNQIGLWNLRDNGVGLNVMVSEHYQCCRKIFIQSSHNQLNENRWLEKTLKRAEKRRSELSIMIQVKILHTTKSPAV (서열번호 22)
인간 AID:
MDSLLMNRRKFLYQFKNVRWAKGRRETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGYLRNKNGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGNPNLSLRIFTARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKAPV (서열번호 23)
인간 AID:
MDSLLMNRRKFLYQFKNVRWAKGRRETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGYLRNKNGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGNPNLSLRIFTARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENHERTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (밑줄: 핵 위치 서열; 이중 밑줄; 핵외 수송 신호) (서열번호 24)
마우스 AID:
MDSLLMKQKKFLYHFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSATSCSLDFGHLRNKSGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVAEFLRWNPNLSLRIFTARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIGIMTFKDYFYCWNTFVENRERTFKAWEGLHENSVRLTRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRMLGF (밑줄: 핵 위치 서열; 이중 밑줄: 핵외 수송 신호) (서열번호 25)
개 AID:
MDSLLMKQRKFLYHFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGHLRNKSGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGYPNLSLRIFAARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENREKTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (밑줄: 핵 위치 서열; 이중 밑줄: 핵외 수송 신호) (서열번호 26)
소 AID:
MDSLLKKQRQFLYQFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSPTSFSLDFGHLRNKAGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGYPNLSLRIFTARLYFCDKERKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENHERTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (밑줄: 핵 위치 서열; 이중 밑줄: 핵외 수송 신호) (서열번호 27)
랫트 AID:
MAVGSKPKAALVGPHWERERIWCFLCSTGLGTQQTGQTSRWLRPAATQDPVSPPRSLLMKQRKFLYHFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGYLRNKSGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGNPNLSLRIFTARLTGWGALPAGLMSPARPSDYFYCWNTFVENHERTFKAWEGLHENSVRLSRRLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (서열번호 28)
(밑줄: 핵 위치 서열; 이중 밑줄: 핵외 수송 신호)
clAID (카니스 루푸스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris)):
MDSLLMKQRKFLYHFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGHLRNKSGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGYPNLSLRIFAARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENREKTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (서열번호 29)
btAID (보스 타우루스(Bos taurus)):
MDSLLKKQRQFLYQFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSPTSFSLDFGHLRNKAGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGYPNLSLRIFTARLYFCDKERKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENHERTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (서열번호 30)
mAID (무스 무스쿨루스(Mis musculus)):
MDSLLMNRRKFLYQFKNVRWAKGRRETYLCYVVKRRDSATSFSLDFGYLRNKNGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVADFLRGNPNLSLRIFTARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIAIMTFKDYFYCWNTFVENHERTFKAWEGLHENSVRLSRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRTLGL (서열번호 31)
rAPOBEC-1 (라투스 노르베기커스(Rattus Norvegicus)):
MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLK (서열번호 32)
maAPOBEC-1 (메소크리세투스 아우라투스(Mesocricetus auratus)):
MSSETGPVVVDPTLRRRIEPHEFDAFFDQGELRKETCLLYEIRWGGRHNIWRHTGQNTSRHVEINFIEKFTSERYFYPSTRCSIVWFLSWSPCGECSKAITEFLSGHPNVTLFIYAARLYHHTDQRNRQGLRDLISRGVTIRIMTEQEYCYCWRNFVNYPPSNEVYWPRYPNLWMRLYALELYCIHLGLPPCLKIKRRHQYPLTFFRLNLQSCHYQRIPPHILWATGFI (서열번호 33)
ppAPOBEC-1 (퐁고 피그마에우스(Pongo pygmaeus)):
MTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWR (서열번호 34)
ocAPOBEC1 (오리코라그 쿠니쿨러스(Oryctolagus cuniculus)):
MASEKGPSNKDYTLRRRIEPWEFEVFFDPQELRKEACLLYEIKWGASSKTWRSSGKNTTNHVEVNFLEKLTSEGRLGPSTCCSITWFLSWSPCWECSMAIREFLSQHPGVTLIIFVARLFQHMDRRNRQGLKDLVTSGVTVRVMSVSEYCYCWENFVNYPPGKAAQWPRYPPRWMLMYALELYCIILGLPPCLKISRRHQKQLTFFSLTPQYCHYKMIPPYILLATGLLQPSVPWR (서열번호 35)
mdAPOBEC-1 (모노델피스 도메스티카(Monodelphis domestica)):
MNSKTGPSVGDATLRRRIKPWEFVAFFNPQELRKETCLLYEIKWGNQNIWRHSNQNTSQHAEINFMEKFTAERHFNSSVRCSITWFLSWSPCWECSKAIRKFLDHYPNVTLAIFISRLYWHMDQQHRQGLKELVHSGVTIQIMSYSEYHYCWRNFVDYPQGEEDYWPKYPYLWIMLYVLELHCIILGLPPCLKISGSHSNQLALFSLDLQDCHYQKIPYNVLVATGLVQPFVTWR (서열번호 36)
ppAPOBEC-2 (퐁고 피그마에우스):
MAQKEEAAAATEAASQNGEDLENLDDPEKLKELIELPPFEIVTGERLPANFFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEAQGKGGQVQASRGYLEDEHAAAHAEEAFFNTILPAFDPALRYNVTWYVSSSPCAACADRIIKTLSKTKNLRLLILVGRLFMWEELEIQDALKKLKEAGCKLRIMKPQDFEYVWQNFVEQEEGESKAFQPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 37)
btAPOBEC-2 (보스 타우루스):
MAQKEEAAAAAEPASQNGEEVENLEDPEKLKELIELPPFEIVTGERLPAHYFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEAQSKGGQVQASRGYLEDEHATNHAEEAFFNSIMPTFDPALRYMVTWYVSSSPCAACADRIVKTLNKTKNLRLLILVGRLFMWEEPEIQAALRKLKEAGCRLRIMKPQDFEYIWQNFVEQEEGESKAFEPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 38)
mAPOBEC-3-(1) (무스 무스쿨루스):
MQPQRLGPRAGMGPFCLGCSHRKCYSPIRNLISQETFKFHFKNLGYAKGRKDTFLCYEVTRKDCDSPVSLHHGVFKNKDNIHAEICFLYWFHDKVLKVLSPREEFKITWYMSWSPCFECAEQIVRFLATHHNLSLDIFSSRLYNVQDPETQQNLCRLVQEGAQVAAMDLYEFKKCWKKFVDNGGRRFRPWKRLLTNFRYQDSKLQEILRPCYISVPSSSSSTLSNICLTKGLPETRFWVEGRRMDPLSEEEFYSQFYNQRVKHLCYYHRMKPYLCYQLEQFNGQAPLKGCLLSEKGKQHAEILFLDKIRSMELSQVTITCYLTWSPCPNCAWQLAAFKRDRPDLILHIYTSRLYFHWKRPFQKGLCSLWQSGILVDVMDLPQFTDCWTNFVNPKRPFWPWKGLEIISRRTQRRLRRIKESWGLQDLVNDFGNLQLGPPMS (서열번호 39)
마우스 APOBEC-3-(2):
MGPFCLGCSHRKCYSPIRNLISQETFKFHFKNLGYAKGRKDTFLCYEVTRKDCDSPVSLHHGVFKNKDNIHAEICFLYWFHDKVLKVLSPREEFKITWYMSWSPCFECAEQIVRFLATHHNLSLDIFSSRLYNVQDPETQQNLCRLVQEGAQVAAMDLYEFKKCWKKFVDNGGRRFRPWKRLLTNFRYQDSKLQEILRPCYIPVPSSSSSTLSNICLTKGLPETRFCVEGRRMDPLSEEEFYSQFYNQRVKHLCYYHRMKPYLCYQLEQFNGQAPLKGCLLSEKGKQHAEILFLDKIRSMELSQVTITCYLTWSPCPNCAWQLAAFKRDRPDLILHIYTSRLYFHWKRPFQKGLCSLWQSGILVDVMDLPQFTDCWTNFVNPKRPFWPWKGLEIISRRTQRRLRRIKESWGLQDLVNDFGNLQLGPPMS (이탤릭체: 핵산 편집 도메인) (서열번호 40)
랫트 APOBEC-3:
MGPFCLGCSHRKCYSPIRNLISQETFKFHFKNRLRYAIDRKDTFLCYEVTRKDCDSPVSLHHGVFKNKDNIHAEICFLYWFHDKVLKVLSPREEFKITWYMSWSPCFECAEQVLRFLATHHNLSLDIFSSRLYNIRDPENQQNLCRLVQEGAQVAAMDLYEFKKCWKKFVDNGGRRFRPWKKLLTNFRYQDSKLQEILRPCYIPVPSSSSSTLSNICLTKGLPETRFCVERRRVHLLSEEEFYSQFYNQRVKHLCYYHGVKPYLCYQLEQFNGQAPLKGCLLSEKGKQHAEILFLDKIRSMELSQVIITCYLTWSPCPNCAWQLAAFKRDRPDLILHIYTSRLYFHWKRPFQKGLCSLWQSGILVDVMDLPQFTDCWTNFVNPKRPFWPWKGLEIISRRTQRRLHRIKESWGLQDLVNDFGNLQLGPPMS (이탤릭체: 핵산 편집 도메인) (서열번호 41)
hAPOBEC-3A (호모 사피엔스(Homo sapiens)):
MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGN (서열번호 42)
hAPOBEC-3F (호모 사피엔스):
MKPHFRNTVERMYRDTFSYNFYNRPILSRRNTVWLCYEVKTKGPSRPRLDAKIFRGQVYSQPEHHAEMCFLSWFCGNQLPAYKCFQITWFVSWTPCPDCVAKLAEFLAEHPNVTLTISAARLYYYWERDYRRALCRLSQAGARVKIMDDEEFAYCWENFVYSEGQPFMPWYKFDDNYAFLHRTLKEILRNPMEAMYPHIFYFHFKNLRKAYGRNESWLCFTMEVVKHHSPVSWKRGVFRNQVDPETHCHAERCFLSWFCDDILSPNTNYEVTWYTSWSPCPECAGEVAEFLARHSNVNLTIFTARLYYFWDTDYQEGLRSLSQEGASVEIMGYKDFKYCWENFVYNDDEPFKPWKGLKYNFLFLDSKLQEILE (서열번호 43)
레수스 마카쿠에 APOBEC-3G:
MVEPMDPRTFVSNFNNRPILSGLNTVWLCCEVKTKDPSGPPLDAKIFQGKVYSKAKYHPEMRFLRWFHKWRQLHHDQEYKVTWYVSWSPCTRCANSVATFLAKDPKVTLTIFVARLYYFWKPDYQQALRILCQKRGGPHATMKIMNYNEFQDCWNKFVDGRGKPFKPRNNLPKHYTLLQATLGELLRHLMDPGTFTSNFNNKPWVSGQHETYLCYKVERLHNDTWVPLNQHRGFLRNQAPNIHGFPKGRHAELCFLDLIPFWKLDGQQYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISNNEHVSLCIFAARIYDDQGRYQEGLRALHRDGAKIAMMNYSEFEYCWDTFVDRQGRPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAI (이탤릭체: 핵산 편집 도메인: 세포질 위치 신호) (서열번호 44)
침팬지 APOBEC-3G:
MKPHFRNPVERMYQDTFSDNFYNRPILSHRNTVWLCYEVKTKGPSRPPLDAKIFRGQVYSKLKYHPEMRFFHWFSKWRKLHRDQEYEVTWYISWSPCTKCTRDVATFLAEDPKVTLTIFVARLYYFWDPDYQEALRSLCQKRDGPRATMKIMNYDEFQHCWSKFVYSQRELFEPWNNLPKYYILLHIMLGEILRHSMDPPTFTSNFNNELWVRGRHETYLCYEVERLHNDTWVLLNQRRGFLCNQAPHKHGFLEGRHAELCFLDVIPFWKLDLHQDYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISNNKHVSLCIFAARIYDDQGRCQEGLRTLAKAGAKISIMTYSEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLEEHSQALSGRLRAILQNQGN (서열번호 45) (이탤릭체: 핵산 편집 도메인: 세포질 위치 신호)
녹색 원숭이 APOBEC-3G:
MNPQIRNMVEQMEPDIFVYYFNNRPILSGRNTVWLCYEVKTKDPSGPPLDANIFQGKLYPEAKDHPEMKFLHWFRKWRQLHRDQEYEVTWYVSWSPCTRCANSVATFLAEDPKVTLTIFVARLYYFWKPDYQQALRILCQERGGPHATMKIMNYNEFQHCWNEFVDGQGKPFKPRKNLPKHYTLLHATLGELLRHVMDPGTFTSNFNNKPWVSGQRETYLCYKVERSHNDTWVLLNQHRGFLRNQAPDRHGFPKGRHAELCFLDLIPFWKLDDQQYRVTCFTSWSPCFSCAQKMAKFISNNKHVSLCIFAARIYDDQGRCQEGLRTLHRDGAKIAVMNYSEFEYCWDTFVDRQGRPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAI (서열번호 46) (이탤릭체: 핵산 편집 도메인: 세포질 위치 신호)
인간 APOBEC-3G:
MKPHFRNTVERMYRDTFSYNFYNRPILSRRNTVWLCYEVKTKGPSRPPLDAKIFRGQVYSELKYHPEMRFFHWFSKWRKLHRDQEYEVTWYISWSPCTKCTRDMATFLAEDPKVTLTIFVARLYYFWDPDYQEALRSLCQKRDGPRATMKIMNYDEFQHCWSKFVYSQRELFEPWNNLPKYYILLHIMLGEILRHSMDPPTFTFNFNNEPWVRGRHETYLCYEVERMHNDTWVLLNQRRGFLCNQAPHKHGFLEGRHAELCFLDVIPFWKLDLDQDYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISKNKHVSLCIFTARIYDDQGRCQEGLRTLAEAGAKISIMTYSEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQDLSGRLRAILQNQEN (서열번호 47) (이탤릭체: 핵산 편집 도메인: 세포질 위치 신호)
인간 APOBEC-3F:
MKPHFRNTVERMYRDTFSYNFYNRPILSRRNTVWLCYEVKTKGPSRPRLDAKIFRGQVYSQPEHHAEMCFLSWFCGNQLPAYKCFQITWFVSWTPCPDCVAKLAEFLAEHPNVTLTISAARLYYYWERDYRRALCRLSQAGARVKIMDDEEFAYCWENFVYSEGQPFMPWYKFDDNYAFLHRTLKEILRNPMEAMYPHIFYFHFKNLRKAYGRNESWLCFTMEVVKHHSPVSWKRGVFRNQVDPETHCHAERCFLSWFCDDILSPNTNYEVTWYTSWSPCPECAGEVAEFLARHSNVNLTIFTARLYYFWDTDYQEGLRSLSQEGASVEIMGYKDFKYCWENFVYNDDEPFKPWKGLKYNFLFLDSKLQEILE (서열번호 48)(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
인간 APOBEC-3B:
MNPQIRNPMERMYRDTFYDNFENEPILYGRSYTWLCYEVKIKRGRSNLLWDTGVFRGQVYFKPQYHAEMCFLSWFCGNQLPAYKCFQITWFVSWTPCPDCVAKLAEFLSEHPNVTLTISAARLYYYWERDYRRALCRLSQAGARVTIMDYEEFAYCWENFVYNEGQQFMPWYKFDENYAFLHRTLKEILRYLMDPDTFTFNFNNDPLVLRRRQTYLCYEVERLDNGTWVLMDQHMGFLCNEAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFEYCWDTFVYRQGCPFQPWDGLEEHSQALSGRLRAILQNQGN (서열번호 49) (이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
랫트 APOBEC-3B:
MQPQGLGPNAGMGPVCLGCSHRRPYSPIRNPLKKLYQQTFYFHFKNVRYAWGRKNNFLCYEVNGMDCALPVPLRQGVFRKQGHIHAELCFIYWFHDKVLRVLSPMEEFKVTWYMSWSPCSKCAEQVARFLAAHRNLSLAIFSSRLYYYLRNPNYQQKLCRLIQEGVHVAAMDLPEFKKCWNKFVDNDGQPFRPWMRLRINFSFYDCKLQEIFSRMNLLREDVFYLQFNNSHRVKPVQNRYYRRKSYLCYQLERANGQEPLKGYLLYKKGEQHVEILFLEKMRSMELSQVRITCYLTWSPCPNCARQLAAFKKDHPDLILRIYTSRLYFWRKKFQKGLCTLWRSGIHVDVMDLPQFADCWTNFVNPQRPFRPWNELEKNSWRIQRRLRRIKESWGL (서열번호 50)
소 APOBEC-3B:
MDGWEVAFRSGTVLKAGVLGVSMTEGWAGSGHPGQGACVWTPGTRNTMNLLREVLFKQQFGNQPRVPAPYYRRKTYLCYQLKQRNDLTLDRGCFRNKKQRHAERFIDKINSLDLNPSQSYKIICYITWSPCPNCANELVNFITRNNHLKLEIFASRLYFHWIKSFKMGLQDLQNAGISVAVMTHTEFEDCWEQFVDNQSRPFQPWDKLEQYSASIRRRLQRILTAPI (서열번호 51)
침팬지 APOBEC-3B:
MNPQIRNPMEWMYQRTFYYNFENEPILYGRSYTWLCYEVKIRRGHSNLLWDTGVFRGQMYSQPEHHAEMCFLSWFCGNQLSAYKCFQITWFVSWTPCPDCVAKLAKFLAEHPNVTLTISAARLYYYWERDYRRALCRLSQAGARVKIMDDEEFAYCWENFVYNEGQPFMPWYKFDDNYAFLHRTLKEIIRHLMDPDTFTFNFNNDPLVLRRHQTYLCYEVERLDNGTWVLMDQHMGFLCNEAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGQVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFEYCWDTFVYRQGCPFQPWDGLEEHSQALSGRLRAILQVRASSLCMVPHRPPPPPQSPGPCLPLCSEPPLGSLLPTGRPAPSLPFLLTASFSFPPPASLPPLPSLSLSPGHLPVPSFHSLTSCSIQPPCSSRIRETEGWASVSKEGRDLG (서열번호 52)
인간 APOBEC-3C:
MNPQIRNPMKAMYPGTFYFQFKNLWEANDRNETWLCFTVEGIKRRSVVSWKTGVFRNQVDSETHCHAERCFLSWFCDDILSPNTKYQVTWYTSWSPCPDCAGEVAEFLARHSNVNLTIFTARLYYFQYPCYQEGLRSLSQEGVAVEIMDYEDFKYCWENFVYNDNEPFKPWKGLKTNFRLLKRRLRESLQ (서열번호 53)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
고릴라 APOBEC-3C
MNPQIRNPMKAMYPGTFYFQFKNLWEANDRNETWLCFTVEGIKRRSVVSWKTGVFRNQVDSETHCHAERCFLSWECDDILSPNTNYQVTWYTSWSPCPECAGEVAEFLARHSNVNLTIFTARLYYFQDTDYQEGLRSLSQEGVAVKIMDYKDFKYCWENFVYNDDEPFKPWKGLKYNFRFLKRRLQEILE (서열번호 54)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
인간 APOBEC-3A:
MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGN (서열번호 55)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
레수스 마카쿠에 APOBEC-3A:
MDGSPASRPRHLMDPNTFTFNFNNDLSVRGRHQTYLCYEVERLDNGTWVPMDERRGFLCNKAKNVPCGDYGCHVELRFLCEVPSWQLDPAQTYRVTWFISWSPCFRRGCAGQVRVFLQENKHVRLRIFAARIYDYDPLYQEALRTLRDAGAQVSIMTYEEFKHCWDTFVDRQGRPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGN (서열번호 56)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
소 APOBEC-3A:
MDEYTFTENFNNQGWPSKTYLCYEMERLDGDATIPLDEYKGFVRNKGLDQPEKPCHAELYFLGKIHSWNLDRNQHYRLTCFISWSPCYDCAQKLTTFLKENHHISLHILASRIYTHNRFGCHQSGLCELQAAGARITIMTFEDFKHCWETFVDHKGKPFQPWEGLNVKSQALCTELQAILKTQQN (서열번호 57)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
인간 APOBEC-3H:
MALLTAETFRLQFNNKRRLRRPYYPRKALLCYQLTPQNGSTPTRGYFENKKKCHAEICFINEIKSMGLDETQCYQVTCYLTWSPCSSCAWELVDFIKAHDHLNLGIFASRLYYHWCKPQQKGLRLLCGSQVPVEVMGFPKFADCWENFVDHEKPLSFNPYKMLEELDKNSRAIKRRLERIKIPGVRAQGRYMDILCDAEV (서열번호 58)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
레수스 마카쿠에 APOBEC-3H:
MALLTAKTFSLQFNNKRRVNKPYYPRKALLCYQLTPQNGSTPTRGHLKNKKKDHAEIRFINKIKSMGLDETQCYQVTCYLTWSPCPSCAGELVDFIKAHRHLNLRIFASRLYYHWRPNYQEGLLLLCGSQVPVEVMGLPEFTDCWENFVDHKEPPSFNPSEKLEELDKNSQAIKRRLERIKSRSVDVLENGLRSLQLGPVTPSSSIRNSR (서열번호 59)
인간 APOBEC-3D:
MNPQIRNPMERMYRDTFYDNFENEPILYGRSYTWLCYEVKIKRGRSNLLWDTGVFRGPVLPKRQSNHRQEVYFRFENHAEMCFLSWFCGNRLPANRRFQITWFVSWNPCLPCVVKVTKFLAEHPNVTLTISAARLYYYRDRDWRWVLLRLHKAGARVKIMDYEDFAYCWENFVCNEGQPFMPWYKFDDNYASLHRTLKEILRNPMEAMYPHIFYFHFKNLLKACGRNESWLCFTMEVTKHHSAVFRKRGVFRNQVDPETHCHAERCFLSWFCDDILSPNTNYEVTWYTSWSPCPECAGEVAEFLARHSNVNLTIFTARLCYFWDTDYQEGLCSLSQEGASVKIMGYKDFVSCWKNFVYSDDEPFKPWKGLQTNFRLLKRRLREILQ (서열번호 60)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
인간 APOBEC-1:
MTSEKGPSTGDPTLRRRIEPWEFDVFYDPRELRKEACLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERDFHPSMSCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSRHPGVTLVIYVARLFWHMDQQNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLTFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVAWR (서열번호 61)
마우스 APOBEC-1:
MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSVWRHTSQNTSNHVEVNFLEKFTTERYFRPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRHPYVTLFIYIARLYHHTDQRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQEYCYCWRNFVNYPPSNEAYWPRYPHLWVKLYVLELYCIILGLPPCLKILRRKQPQLTFFTITLQTCHYQRIPPHLLWATGLK (서열번호 62)
랫트 APOBEC-1:
MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLK (서열번호 63)
인간 APOBEC-2: MAQKEEAAVATEAASQNGEDLENLDDPEKLKELIELPPFEIVTGERLPANFFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEAQGKGGQVQASRGYLEDEHAAAHAEEAFFNTILPAFDPALRYNVTWYVSSSPCAACADRIIKTLSKTKNLRLLILVGRLFMWEEPEIQAALKKLKEAGCKLRIMKPQDFEYVWQNFVEQEEGESKAFQPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 64)
마우스 APOBEC-2:
MAQKEEAAEAAAPASQNGDDLENLEDPEKLKELIDLPPFEIVTGVRLPVNFFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEVQSKGGQAQATQGYLEDEHAGAHAEEAFFNTILPAFDPALKYNVTWYVSSSPCAACADRILKTLSKTKNLRLLILVSRLFMWEEPEVQAALKKLKEAGCKLRIMKPQDFEYIWQNFVEQEEGESKAFEPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 65)
랫트 APOBEC-2:
MAQKEEAAEAAAPASQNGDDLENLEDPEKLKELIDLPPFEIVTGVRLPVNFFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEAQSKGGQVQATQGYLEDEHAGAHAEEAFFNTILPAFDPALKYNVTWYVSSSPCAACADRILKTLSKTKNLRLLILVSRLFMWEEPEVQAALKKLKEAGCKLRIMKPQDFEYLWQNFVEQEEGESKAFEPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 66)
소 APOBEC-2:
MAQKEEAAAAAEPASQNGEEVENLEDPEKLKELIELPPFEIVTGERLPAHYFKFQFRNVEYSSGRNKTFLCYVVEAQSKGGQVQASRGYLEDEHATNHAEEAFFNSIMPTFDPALRYMVTWYVSSSPCAACADRIVKTLNKTKNLRLLILVGRLFMWEEPEIQAALRKLKEAGCRLRIMKPQDFEYIWQNFVEQEEGESKAFEPWEDIQENFLYYEEKLADILK (서열번호 67)
페트로마이존 마리너스 CDA1 (pmCDAl):
MTDAEYVRIHEKLDIYTFKKQFFNNKKSVSHRCYVLFELKRRGERRACFWGYAVNKPQSGTERGIHAEIFSIRKVEEYLRDNPGQFTINWYSSWSPCADCAEKILEWYNQELRGNGHTLKIWACKLYYEKNARNQIGLWNLRDNGVGLNVMVSEHYQCCRKIFIQSSHNQ LNENRWLEKTLKRAEKRRSELSFMIQVKILHTTKSPAV (서열번호 68)
인간 APOBEC3G D316R D317R:
MKPHFRNTVERMYRDTFSYNFYNRPILSRRNTVWLCYEVKTKGPSRPPLDAKIFRGQVYSELKYHPEMRFFHWFSKWRKLHRDQEYEVTWYISWSPCTKCTRDMATFLAEDPKVTLTIFVARLYYFWDPDYQEALRSLCQKRDGPRATMKFNYDEFQHCWSKFVYSQRELFEPWNNLPKYYILLHFMLGEILRHSMDPPTFTFNFNNEPWVRGRHETYLCYEVERMHNDTWVLLNQRRGFLCNQAPHKHGFLEGRHAELCFLDVIPFWKLDLDQDYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISKKHVSLCIFTARIYRRQGRCQEGLRTLAEAGAKISFTYSEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQDLSGRLRAILQNQEN (서열번호 69)
인간 APOBEC3G 사슬 A:
MDPPTFTFNFNNEPWWGRHETYLCYEVERMHNDTWVLLNQRRGFLCNQAPHKHGFLEGRHAELCFLDVIPFWKLDLDQDYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISKNKHVSLCIFTARIYDDQGRCQEGLRTLAEAGAKISFTYSEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLD EHSQDLSGRLRAILQ (서열번호 70)
인간 APOBEC3G 사슬 A D120R D121R:
MDPPTFTFNFNNEPWVRGRHETYLCYEVERMHNDTWVLLNQRRGFLCNQAPHKHGFLEGRHAELCFLDVIPFWKLDLDQDYRVTCFTSWSPCFSCAQEMAKFISKNKHVSLCIFTARIYRRQGRCQEGLRTLAEAGAKISFMTYSEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQDLSGRLRAILQ (서열번호 71)
hAPOBEC-4 (호모 사피엔스):
MEPIYEEYLANHGTIVKPYYWLSFSLDCSNCPYHIRTGEEARVSLTEFCQIFGFPYGTTFPQTKHLTFYELKTSSGSLVQKGHASSCTGNYIHPESMLFEMNGYLDSAIYNNDSIRHIILYSNNSPCNEANHCCISKMYNFLITYPGITLSIYFSQLYHTEMDFPASAWNREALRSLASLWPRVVLSPISGGIWHSVLHSFISGVSGSHVFQPILTGRALADRHNAYEINAITGVKPYFTDVLLQTKRNPNTKAQEALESYPLNNAFPGQFFQMPSGQLQPNLPPDLRAPVVFVLVPLRDLPPMHMGQNPNKPRNIVRHLNMPQMSFQETKDLGRLPTGRSVEIVEITEQFASSKEADEKKKKKGKK (서열번호 72)
mAPOBEC-4 (무스 무스쿨루스):
MDSLLMKQKKFLYHFKNVRWAKGRHETYLCYVVKRRDSATSCSLDFGHLRNKSGCHVELLFLRYISDWDLDPGRCYRVTWFTSWSPCYDCARHVAEFLRWNPNLSLRIFTARLYFCEDRKAEPEGLRRLHRAGVQIGIMTFKDYFYCWNTFVENRERTFKAWEGLHENSVRLTRQLRRILLPLYEVDDLRDAFRMLGF (서열번호 73)
rAPOBEC-4 (라투스 노르베기커스):
MEPLYEEYLTHSGTIVKPYYWLSVSLNCTNCPYHIRTGEEARVPYTEFHQTFGFPWSTYPQTKHLTFYELRSSSGNLIQKGLASNCTGSHTHPESMLFERDGYLDSLIFHDSNIRHIILYSNNSPCDEANHCCISKMYNFLMNYPEVTLSVFFSQLYHTENQFPTSAWNREALRGLASLWPQVTLSAISGGIWQSILETFVSGISEGLTAVRPFTAGRTLTDRYNAYEINCITEVKPYFTDALHSWQKENQDQKVWAASENQPLHNTTPAQWQPDMSQDCRTPAVFMLVPYRDLPPIHVNPSPQKPRTVVRHLNTLQLSASKVKALRKSPSGRPVKKEEARKGSTRSQEANETNKSKWKKQTLFIKSNICHLLEREQKKIGILSSWSV (서열번호 74)
mfAPOBEC-4 (마카카 퍼시쿨라리스(Macaca fascicularis)):
MEPTYEEYLANHGTIVKPYYWLSFSLDCSNCPYHIRTGEEARVSLTEFCQIFGFPYGTTYPQTKHLTFYELKTSSGSLVQKGHASSCTGNYIHPESMLFEMNGYLDSAIYNNDSIRHIILYCNNSPCNEANHCCISKVYNFLITYPGITLSIYFSQLYHTEMDFPASAWNREALRSLASLWPRVVLSPISGGIWHSVLHSFVSGVSGSHVFQPILTGRALTDRYNAYEINAITGVKPFFTDVLLHTKRNPNTKAQMALESYPLNNAFPGQSFQMTSGIPPDLRAPVVFVLLPLRDLPPMHMGQDPNKPRNIIRHLNMPQMSFQETKDLERLPTRRSVETVEITERFASSKQAEEKTKKKKGKK (서열번호 75)
pmCDA-1 (페트로마이존 마리너스):
MAGYECVRVSEKLDFDTFEFQFENLHYATERHRTYVIFDVKPQSAGGRSRRLWGYIINNPNVCHAELILMSMIDRHLESNPGVYAMTWYMSWSPCANCSSKLNPWLKNLLEEQGHTLTMHFSRIYDRDREGDHRGLRGLKHVSNSFRMGVVGRAEVKECLAEYVEASRRTLTWLDTTESMAAKMRRKLFCILVRCAGMRESGIPLHLFTLQTPLLSGRVVWWRV (서열번호 76)
pmCDA-2 (페트로마이존 마리너스):
MELREVVDCALASCVRHEPLSRVAFLRCFAAPSQKPRGTVILFYVEGAGRGVTGGHAVNYNKQGTSIHAEVLLLSAVRAALLRRRRCEDGEEATRGCTLHCYSTYSPCRDCVEYIQEFGASTGVRVVIHCCRLYELDVNRRRSEAEGVLRSLSRLGRDFRLMGPRDAIALLLGGRLANTADGESGASGNAWVTETNVVEPLVDMTGFGDEDLHAQVQRNKQIREAYANYASAVSLMLGELHVDPDKFPFLAEFLAQTSVEPSGTPRETRGRPRGASSRGPEIGRQRPADFERALGAYGLFLHPRIVSREADREEIKRDLIVVMRKHNYQGP (서열번호 77)
pmCDA-5 (페트로마이존 마리너스):
MAGDENVRVSEKLDFDTFEFQFENLHYATERHRTYVIFDVKPQSAGGRSRRLWGYIINNPNVCHAELILMSMIDRHLESNPGVYAMTWYMSWSPCANCSSKLNPWLKNLLEEQGHTLMMHFSRIYDRDREGDHRGLRGLKHVSNSFRMGVVGRAEVKECLAEYVEASRRTLTWLDTTESMAAKMRRKLFCILVRCAGMRESGMPLHLFT (서열번호 78)
yCD (사카로마이세스 세레비시아에):
MVTGGMASKWDQKGMDIAYEEAALGYKEGGVPIGGCLINNKDGSVLGRGHNMRFQKGSATLHGEISTLENCGRLEGKVYKDTTLYTTLSPCDMCTGAIIMYGIPRCVVGENVNFKSKGEKYLQTRGHEVVVVDDERCKKIMKQFIDERPQDWFEDIGE (서열번호 79)
rAPOBEC-1 (델타 177-186):
MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHILWATGLK (서열번호 80)
rAPOBEC-1 (델타 202-213):
MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWGGRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFLSRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSNEAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQHYQRLPPHILWATGLK (서열번호 81)
마우스 APOBEC-3:
MGPFCLGCSHRKCYSPIRNLISQETFKFHFKNLGYAKGRKDTFLCYEVTRKDCDSPVSLHHGVFKNKDNIHAEICFLYWFHDKVLKVLSPREEFKITWYMSWSPCFECAEQIVRFLATHHNLSLDIFSSRLYNVQDPETQQNLCRLVQEGAQVAAMDLYEFKKCWKKFVDNGGRRFRPWKRLLTNFRYQDSKLQEILRPCYIPVPSSSSSTLSNICLTKGLPETRFCVEGRRMDPLSEEEFYSQFYNQRVKHLCYYHRMKPYLCYQLEQFNGQAPLKGCLLSEKGKQHAEILFLDKIRSMELSQVTITCYLTWSPCPNCAWQLAAFKRDRPDLILHIYTSRLYFHWKRPFQKGLCSLWQSGILVDVMDLPQFTDCWTNFVNPKRPFWPWKGLEIISRRTQRRLRRIKESWGLQDLVNDFGNLQLGPPMS (서열번호 82)
(이탤릭체: 핵산 편집 도메인)
일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 아데노신 데아미나제 ADAR(예를 들어, ADAR1 또는 ADAR2)의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 아데노신 데아미나제 ADAT의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 다음 돌연변이 중 하나 이상을 포함하는 대장균(EcTadA) 유래의 ADAT의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다: D108N, A106V, D147Y, E155V, L84F, H123Y, I157F, 또는 또 다른 아데노신 데아미나제에서의 상응하는 돌연변이. 아데노신 데아미나제는 임의의 적합한 유기체(예를 들어, 대장균)로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 대장균, 스타필로코커스 아우레우스, 살모넬라 타이피, 쉬와넬라 푸트리파시엔스, 헤모필루스 인플루엔자, 카울로박터 크레센투스 또는 바실러스 서브틸리스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 대장균으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 아데닌 데아미나제는 본원에 제공된 임의의 돌연변이(예를 들어, ecTadA의 돌연변이)에 상응하는 1개 이상의 돌연변이를 포함하는 자연-발생 아데노신 데아미나제이다. 임의의 상동성 단백질에서 상응하는 잔기는 예를 들어 서열 정렬 및 상동성 잔기 결정에 의해 식별될 수 있다. 이에 따라, 본원에 기술된 임의의 돌연변이(예를 들어, ecTadA에서 식별된 임의의 돌연변이)에 상응하는 임의의 자연-발생 아데노신 데아미나제(예를 들어, ecTadA와 상동성을 가짐)에서 돌연변이가 발생될 수 있다. 특정 구현예에서, TadA는 그 전체가 본원에 참고로 포함된 PCT/US2017/045381호(WO2018/027078호)에 기술된 TadA 중 임의의 하나이다. 돌연변이는 표 3에 나타낸 바와 같이 단일 가닥 DNA 상에서 바람직한 아데노신 데아미나제 활성을 갖는 진화 및 선택 횟수(예를 들어, TadA*7.10 = 7세대 진화로부터 변이체 10)를 통해 식별되었다.
표 3.TadA 변이체의 유전자형
일부 구현예에서, TadA는 단량체 또는 이량체(예를 들어, 야생형 대장균 TadA의 이종이량체 및 조작된 TadA 변이체)로 제공된다. 일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 아래 표 4에 나타낸 바와 같은 8세대 TadA* 8 변이체이다.
표 4: TadA8* 아데노신 데아미나제 변이체
일부 구현예에서, 아데노신 데아미나제는 다음으로부터 선택된 아미노산 위치에서의 변경을 함유하는 9세대 TadA*9 변이체이다: 아래 참조 서열에 표시된 TadA 변이체의 21, 23, 25, 38, 51, 54, 70, 71, 72, 72, 94, 124, 133, 138, 139, 146 및 158:
일 구현예에서, 아데노신 데아미나제 변이체는 다음으로부터 선택된 2개 이상의 아미노산 위치에서 변경을 함유한다: 상기 TadA 참조 서열의 21, 23, 25, 38, 51, 54, 70, 71, 72, 94, 124, 133, 138, 139, 146 및 158. 또 다른 구현예에서, 아데노신 데아미나제 변이체는 다음으로부터 선택된 1개 이상(예를 들어, 2, 3, 4개)의 변경을 함유한다: 서열번호 1의 R21N, R23H, E25F, N38G, L51W, P54C, M70V, Q71M, N72K, Y73S, M94V, P124W, T133K, D139L, D139M, C146R 및 A158K. 다른 구현예에서, 아데노신 데아미나제 변이체는 다음 변경 중 1개 이상을 추가로 함유한다: Y147T, Y147R, Q154S, Y123H 및 Q154R. 또 다른 구현예에서, 아데노신 데아미나제 변이체는 다음으로부터 선택된 상기 TadA 참조 서열에 대한 변경의 조합을 함유한다: E25F + V82S + Y123H, T133K + Y147R + Q154R; E25F + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; L51W + V82S + Y123H + C146R + Y147R + Q154R; Y73S + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; P54C + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; N38G + V82T + Y123H + Y147R + Q154R; N72K + V82S + Y123H + D139L + Y147R + Q154R; E25F + V82S + Y123H + D139M + Y147R + Q154R; Q71M + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; E25F + V82S + Y123H + T133K + Y147R + Q154R; E25F + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + P124W + Y147R + Q154R; L51W + V82S + Y123H + C146R + Y147R + Q154R; P54C + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; Y73S + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; N38G + V82T + Y123H + Y147R + Q154R; R23H + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; R21N + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + Y147R + Q154R + A158K; N72K + V82S + Y123H + D139L + Y147R + Q154R; E25F + V82S + Y123H + D139M + Y147R + Q154R; M70V + V82S + M94V + Y123H + Y147R + Q154R; Q71M + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; E25F + I76Y+ V82S + Y123H + Y147R + Q154R; I76Y + V82T + Y123H + Y147R + Q154R; N38G + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; R23H + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; P54C + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; R21N + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; I76Y + V82S + Y123H + D138M + Y147R + Q154R; Y72S + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; E25F + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; I76Y + V82T + Y123H + Y147R + Q154R; N38G + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; R23H + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; P54C + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; R21N + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; I76Y + V82S + Y123H + D138M + Y147R + Q154R; Y72S + I76Y + V82S + Y123H + Y147R + Q154R; 및 V82S + Q154R; N72K V82S + Y123H + Y147R + Q154R; Q71M_V82S + Y123H + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + T133K + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + T133K + Y147R + Q154R + A158K; M70V +Q71M +N72K +V82S + Y123H + Y147R + Q154R; N72K V82S + Y123H + Y147R + Q154R; Q71M_V82S + Y123H + Y147R + Q154R; M70V +V82S + M94V + Y123H + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + T133K + Y147R + Q154R; V82S + Y123H + T133K + Y147R + Q154R + A158K; 및 M70V +Q71M +N72K +V82S + Y123H + Y147R + Q154R. 일부 구현예에서, 데아미나제 또는 다른 폴리펩티드 서열에는 예를 들어 융합 단백질의 구성요소로서 포함될 때 메티오닌이 결여되어 있다. 이는 위치 번호를 변경시킬 수 있다. 그러나, 당업자는 이러한 상응하는 돌연변이가 동일 돌연변이, 예를 들어 Y73S 및 Y72S 및 D139M 및 D138M을 의미함을 이해할 것이다.
일부 구현예에서, Cas9는 SV40 대형 T 항원의 NLS, 뉴클레오플라스민, c-myc, hRNPA1 M9, 임포틴-알파의 IBB 도메인, 근종 T 단백질의 NLS, 인간 p53, c-abl IV, 인플루엔자 바이러스 NS1, 간염 바이러스 델타 항원, 마우스 Mxl, 인간 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제, 스테로이드 호르몬 수용체(인간) 글루코코르티코이드를 포함하는 핵 위치 서열에 융합된다.
일부 구현예에서, Cas9 단백질은 헤마글루티닌(HA) 태그, 히스티딘(His) 태그, FLAG 태그, Myc 태그, V5 태그, VSV-G 태그, SNAP 태그, 티오레독신(Trx) 태그를 포함하지만 이에 국한되지 않는 에피토프 태그에 융합된다.
일부 구현예에서 Cas9는 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST), 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP), 클로람페니콜 트랜스퍼라제(CAT), HcRed, DsRed, 시안색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 및 청색 형광 단백질, 증강된 버전 또는 초접힘 녹색 형광 단백질(GFP)를 비롯한 GFP뿐만 아니라 기타 변형된 리포터 유전자 버전을 포함하지만 이에 국한되지 않는 리포터 유전자에 융합된다.
일부 구현예에서, 조작된 Cas9 단백질의 혈청 반감기는 이종 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민 단백질, 트랜스페린 단백질, 인간 IgG 및/또는 시알릴화 펩티드, 예컨대 카복시-말단 펩티드(융모성성선자극호르몬 β 사슬의 CTP)와의 융합에 의해 증가된다.
일부 구현예에서, 조작된 Cas9 단백질의 혈청 반감기는 제미닌, 유비퀴틴, FKBP12-L106P 및/또는 디히드로폴레이트 환원효소를 포함하지만 이에 국한되지 않는 불안정화 도메인과의 융합에 의해 감소된다.
증가된 또는 감소된 안정성을 제공하는 적합한 융합 파트너는 데그론 서열을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 데그론은 이들이 일부에 해당하는 단백질의 안정성을 제어하는 아미노산 서열임을 당업자라면 쉽게 이해한다. 예를 들어, 데그론 서열을 포함하는 단백질의 안정성은 데그론 서열에 의해 적어도 부분적으로 제어된다. 일부 경우에, 적합한 데그론은 데그론이 실험 제어와 무관하게 단백질 안정성에 영향을 주도록 하는 구성요소이다(즉, 데그론은 약물 유도성, 온도 유도성 등이 아니다) 일부 경우에, 데그론은 변이체 Cas9 폴리펩티드가 원하는 조건에 따라 "켜짐"(즉, 안정함) 또는 "꺼짐(즉, 불안정함, 열화됨)으로 될 수 있도록 변이체 Cas9 폴리펩티드에 조절가능한 안정성을 제공한다. 예를 들어, 데그론이 온도 민감성 데그론인 경우, 변이체 Cas9 폴리펩티드는 역치 온도(예를 들어, 42℃, 41℃, 40℃, 39℃, 38℃, 37℃, 36℃, 35℃, 34℃, 33℃, 32℃, 31℃, 30℃ 등) 미만에서 기능적일 수 있지만(즉, "켜짐", 안정함), 임계 온도를 초과하는 온도에서는 비기능적일 수 있다(예: "꺼짐, 열화됨). 또 다른 예로서, 데그론이 약물 유도성 데그론인 경우, 약물의 존재 또는 부재는 단백질을 "꺼짐(즉, 불안정) 상태에서 "켜짐"(즉, 안정) 상태로 전환할 수 있거나 또는 그 반대일 수 있다. 예시적인 약물 유도성 데그론은 FKBP12 단백질로부터 유래된다. 데그론의 안정성은 데그론에 결합하는 소분자의 존재 또는 부재에 의해 조절된다.
적합한 데그론의 예는 Shield-1, DHFR, 옥신 및/또는 온도에 의해 조절되는 데그론을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 적합한 데그론의 비제한적인 예는 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Dohmen 등, Science, 1994. 263(5151): p. 1273-1276: Heat-inducible degron: a method for constructing temperature-sensitive mutants; Schoeber 등, Am J Physiol Renal Physiol. 2009 Jan;296(l):F204-l l: Conditional fast expression and function of multimeric TRPV5 channels using Shield-1; Chu 등, Bioorg Med Chem Lett. 2008 Nov 15;18(22):5941-4: Recent progress with FKBP-derived destabilizing domains; Kanemaki, Pflugers Arch. 2012 Dec 28: Frontiers of protein expression control with conditional degrons; Yang 등, Mol Cell. 2012 Nov 30;48(4):487-8: Titivated for destruction: the methyl degron; Barbour 등, Biosci Rep. 2013 Jan 18;33(1).: Characterization of the bipartite degron that regulates ubiquitin-independent degradation of thymidylate synthase; 및 Greussing 등, J Vis Exp. 2012 Nov 10;(69): Monitoring of ubiquitin-proteasome activity in living cells using a Degron (dgn)-destabilized green fluorescent protein (GFP)-based reporter protein; 이들 모두는 전체적으로 본원에 참고로 통합된다).
예시적인 데그론 서열은 세포와 동물 모두에서 잘 특징규명되었고 테스트되었다. 따라서 죽은 Cas9를 데그론 서열에 융합시키면 "조정 가능"하고 "유도성"인 죽은 Cas9 폴리펩티드를 생성시킨다.
본원에 기술된 임의의 융합 파트너는 임의의 바람직한 조합으로 사용될 수 있다. 이 점을 설명하기 위한 하나의 비제한적 예로서, Cas9 융합 단백질은 검출을 위한 YFP 서열, 안정성을 위한 데그론 서열 및 표적 DNA의 전사를 증가시키기 위한 전사 활성화인자 서열을 포함할 수 있다. 또한 dCas9 융합 단백질에서 사용될 수 있는 융합 파트너의 수는 제한되지 않는다. 일부 경우에, Cas9 융합 단백질은 1개 이상(예를 들어 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상 또는 5개 이상)의 이종 서열을 포함한다.
표적 핵산
표적 핵산은 단일 가닥, 이중 가닥 또는 다중 가닥의 DNA 또는 RNA인 DNA 분자, RNA 분자, 게놈 DNA, cDNA, DNA-RNA 혼성, 또는 퓨린 및 피리미딘 염기 또는 기타 천연, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된, 비천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기인 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 또는 이들의 유사체를 포함하는 중합체이다. 표적 핵산은 3차원 구조를 가질 수 있고, 암호화 또는 비암호화 영역을 포함할 수 있으며, 엑손, 인트론, mRNA, tRNA, rRNA, siRNA, shRNA, miRNA, 리보자임, cDNA, 플라스미드, 벡터, 외인성 서열, 내인성 서열을 포함할 수 있다. 표적 핵산은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있고, 메틸화 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 핵산은 비핵산 구성요소와 함께 산재될 수 있다.
표적 핵산은 CRISPR-Cas9 시스템에 의해 인식되고, Cas9에 결합한다. 일부 구현예에서, 이는 Cas9의 결합으로 인해 변형되거나, 절단되거나, 변경 발현을 가진다. 표적 핵산은 특이적인 인식가능한 PAM 모티프, 예를 들어 5'-NGG-3', 5'-NGC-3', 5'-NAGHC-3', 5'-NRHRRH-3' 또는 5'-NNAAA-3'(H=A, C 또는 T; R=A 또는 G)를 함유한다.
재조합 유전자 기술
본 개시내용에 따르면, 당업계 기술 내에 이용된 통상적인 분자 생물학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술이 있을 수 있다. 이러한 기술은 문헌에 기술되어 있다(예를 들어 Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (D. N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. (1985)); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds. (1984)); Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed. (1986)); Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F. M. Ausubel 등 (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994) 참조.
본원에 기술된 조작된 Cas9 효소와 같이 폴리펩티드를 암호화하는 핵산과 같은 유전자의 재조합 발현은 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 함유하는 발현 벡터의 작제를 포함할 수 있다. 일단 폴리뉴클레오티드가 얻어지면, 폴리펩티드 생성을 위한 벡터는 당업계에 알려진 기술을 사용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있다. 폴리펩티드 암호화 서열 및 적절한 전사 및 번역 조절 신호를 함유하는 발현 벡터를 작제하기 위해 공지 방법이 사용될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다.
발현 벡터는 통상적인 기술에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있고, 그 다음, 형질감염된 세포는 통상적인 기술에 의해 배양되어 폴리펩티드를 생성할 수 있다.
일부 구현예에서, DNA-표적 RNA 및/또는 Cas9 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 조절 요소, 예를 들어 프로모터와 같은 전사 조절 요소에 작동가능하게 연결된다. 전사 조절 요소는 진핵 세포, 예를 들어 포유동물 세포; 또는 원핵 세포(예를 들어, 박테리아 또는 고세균 세포)에서 기능적일 수 있다. 일부 구현예에서, 진핵 세포는 인간 세포이다. 일부 구현예에서, DNA-표적 RNA 및/또는 신규 Cas9 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 원핵 세포 및 진핵 세포 모두에서 암호화된 뉴클레오티드 서열의 발현을 허용하는 다수의 조절 요소에 작동가능하게 연결된다.
프로모터는 구성요소적으로 활성인 프로모터(즉, 활성/"켜짐" 상태에서 구성요소인 프로모터)일 수 있고, 유도성 프로모터(즉, 외부 자극, 예를 들어 특정 온도, 화합물 또는 단백질의 존재에 의해 조절되는 활성/"켜짐" 또는 불활성/"꺼짐" 상태를 갖는 프로모터)일 수 있고, 공간적으로 제한된 프로모터(즉, 전사 조절 요소, 인핸서 등)(예: 조직 특이적 프로모터, 세포 유형 특이적 프로모터 등)일 수 있고, 일시적으로 제한된 프로모터일 수 있다(즉, 프로모터는 배아 발달의 특정 단계 동안 또는 생물학적 프로세스의 특정 단계, 예를 들어 마우스의 모낭 주기 동안 "켜짐" 상태 또는 "꺼짐" 상태에 있다).
적합한 프로모터는 바이러스로부터 유래될 수 있고 따라서 바이러스 프로모터로 지칭될 수 있거나, 원핵생물 또는 진핵생물 유기체를 포함하는 임의의 유기체로부터 유래될 수 있다. 임의의 RNA 폴리머라제(예를 들어, pol I, pol II, pol III)에 의한 발현을 구동시키기 위해 적합한 프로모터가 사용될 수 있다. 예시적인 프로모터는 SV40 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스 긴 말단 반복(LTR) 프로모터; 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(Ad MLP); 단순 포진 바이러스(HSV) 프로모터, 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, 예컨대 CMV 즉시 초기(immediate early) 프로모터 영역(CMVIE), 육종 바이러스(RSV) 프로모터, 인간 U6 소형 핵 프로모터(U6)(Miyagishi 등, Nature Biotechnology 20, 497-500 (2002)), 증강된 U6 프로모터(예를 들어, Xia 등, Nucleic Acids Res. 2003 Sep 1,31(17)) 및/또는 인간 HI 프로모터(HI)를 포함하지만, 이에 국한되지 않는다.
유도성 프로모터의 예는 T7 RNA 폴리머라제 프로모터, T3 RNA 폴리머라제 프로모터, 이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)-조절된 프로모터, 락토스 유도된 프로모터, 열 충격 프로모터, 테트라사이클린-조절된 프로모터(예: Tet-켜짐, Tet-꺼짐 등), 스테로이드-조절된 프로모터, 금속-조절된 프로모터, 에스트로겐 수용체-조절된 프로모터 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 따라서 유도성 프로모터는 독시사이클린, RNA 폴리머라제, 예를 들어 T7 RNA 폴리머라제, 에스트로겐 수용체 및/또는 에스트로겐 수용체 융합을 포함하지만 이에 국한되지 않는 분자에 의해 조절될 수 있다.
일부 구현예에서, 프로모터는 공간적으로 제한된 프로모터(즉, 세포 유형 특이적 프로모터, 조직 특이적 프로모터 등)이어서, 다세포 유기체에서 프로모터는 특정 세포의 하위세트에서 활성(즉, "켜짐")이다. 또한 공간적으로 제한된 프로모터는 인핸서, 전사 조절 요소, 조절 서열 등으로도 지칭될 수 있다. 임의의 편의적인 공간적으로 제한된 프로모터가 사용될 수 있고, 적합한 프로모터(예를 들어, 뇌 특이적 프로모터, 뉴런 하위세트에서 발현을 구동시키는 프로모터, 생식계열에서 발현을 구동시키는 프로모터, 폐에서 발현을 구동시키는 프로모터, 근육에서 발현을 구동시키는 프로모터, 췌장 섬 세포에서 발현을 구동시키는 프로모터 등)의 선택은 유기체에 따라 달라진다. 따라서 공간적으로 제한된 프로모터는 유기체에 따라 광범위한 상이한 조직 및 세포 유형에서 대상체 부위-특이적 폴리펩티드를 암호화하는 핵산의 발현을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 또한 일부 공간적으로 제한된 프로모터는 배아 발달의 특정 단계 동안 또는 생물학적 프로세스의 특정 단계(예를 들어 모낭 주기) 동안 프로모터가 "켜짐" 상태 또는 "꺼짐" 상태에 있도록 일시적으로 제한된다.
예시 목적으로, 공간적으로 제한된 프로모터의 예는 뉴런-특이적 프로모터, 지방세포-특이적 프로모터, 심근세포-특이적 프로모터, 평활근-특이적 프로모터, 광수용체-특이적 프로모터 등을 포함하지만 이제 국한되지는 않는다. 뉴런-특이적이고 공간적으로 제한된 프로모터는 뉴런-특이적 에놀라제(NSE) 프로모터, 방향족 아미노산 데카복실라제(AADC) 프로모터, 신경필라멘트 프로모터, 시냅신 프로모터, thy-1 프로모터, 세로토닌 수용체 프로모터, 티로신 하이드록실라제 프로모터(TH), GnRH 프로모터, L7 프로모터, DNMT 프로모터, 엔케팔린 프로모터, 미엘린 염기성 단백질(MBP) 프로모터, Ca2+-칼모듈린-의존성 단백질 키나제 II-알파(CamKIIa) 프로모터 및/또는 CMV 인핸서/혈소판-유래된 성장 인자-β 프로모터를 포함하지만 이제 국한되지는 않는다.
지방세포-특이적이고 공간적으로 제한된 프로모터는 aP2 유전자 프로모터/인핸서, 예를 들어 인간 aP2 유전자의 -5.4kb 내지 +21bp 영역, 글루코스 수송체-4(GLUT4) 프로모터, 지방산 트랜스로카제(FAT/CD36) 프로모터, 스테아로일-CoA 불포화효소-1(SCD1) 프로모터, 렙틴 프로모터 및 아디포넥틴 프로모터, 아디프신 프로모터 및/또는 레지스틴 프로모터를 포함하지만, 이에 국한되지는 않는다.
심근세포-특이적이고 공간적으로 제한된 프로모터는 다음 유전자로부터 유래된 조절 서열을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다: 미오신 경쇄-2, a-미오신 중쇄, AE3, 심장 트로포닌 C 및/또는 심장 액틴.
평활근-특이적이고 공간적으로 제한된 프로모터는 SM22a 프로모터, 스무델린 프로모터 및/또는 a-평활근 액틴 프로모터를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.
광수용체-특이적이고 공간적으로 제한된 프로모터는 로돕신 프로모터, 로돕신 키나제 프로모터, 베타 포스포디에스테라제 유전자 프로모터, 색소성 망막염 유전자 프로모터, 광수용기간 레티노이드-결합 단백질(IRBP) 유전자 인핸서 및/또는 IRBP 유전자 프로모터를 포함하지만, 이에 국한되지는 않는다.
CRISPR-Cas9의 유전자 편집 사용
본원에 기술된 CRISPR-Cas9 시스템은 유전자 침묵 사건 또는 원하는 표적 유전자 발현의 발현 변경(예를 들면, 증가 또는 감소)을 초래할 수 있는 유전자 편집을 위해 사용될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR-Cas9 시스템은 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법에서 사용된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR-Cas9 시스템은 원하는 표적 세포에서 표적 핵산을 변형하는 방법에서 사용된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 유전자 발현에서 원하는 변형을 유발하기 위한 진핵 세포 내 표적 핵산의 부위-특이적 변형 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템을 제공하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열에서 파손을 유발할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템을 제공하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 데아미나제에 융합하고, 상기 Cas 단백질 융합은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있다.
일부 구현예에서, 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하고 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 동일성을 갖는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포를, 본원에 기술된 Cas9 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하는, 진핵 세포 내 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법으로, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열에서 파손을 유발할 수 있는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포를, 본원에 기술된 Cas9 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하는, 진핵 세포 내 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법으로, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포를, 본원에 기술된 Cas9 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하는, 진핵 세포 내 표적 핵산을 변형하는 방법으로, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고, 상기 Cas 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는 방법을 제공한다.
따라서, 일부 구현예에서, Cas 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일성을 가진다. 일부 구현예에서, Cas 단백질은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 동일하다.
CRISPR-Cas9 시스템 및 방법에서 사용하기에 적합한 가이드 RNA, Cas9 돌연변이 및 융합 단백질은 본 개시내용 전반에 걸쳐 기술된 바와 같다.
일 측면에서, 방법은 CRISPR-Cas9를 표적 핵산에 결합시키고 표적 핵산 절단을 달성하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 시스템은 이중 가닥의 파손을 도입함으로써 표적 DNA 또는 RNA 이중구조를 절단한다. 일부 구현예에서 CRISPR-Cas9 시스템은 단일 가닥의 파손 또는 틈(nick)을 도입함으로써 표적 DNA 또는 RNA를 절단한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 부위-특이적 방식으로 표적 DNA를 변형하는 이펙터를 갖는 융합 단백질을 포함하며, 변형 활성에는 메틸트랜스퍼라제 활성, 데메틸라제 활성, 아세틸트랜스퍼라제 활성, 데아세틸라제 활성, 키나제 활성, 포스파타제 활성, 유비퀴틴 리가제 활성, 탈유비퀴틴화 활성, 아데닐화 활성, 탈아데닐화 활성, SUMO화 활성, 탈SUMO화 활성, 리보실화 활성, 탈리보실화 활성, 미리스토일화 활성, 탈미리스토일화 활성, 인테그라제 활성, 트랜스포사제 활성, 재조합효소 활성, 폴리머라제 활성, 리가제 활성, 헬리카제 활성 또는 뉴클레아제 활성이 포함되고, 이들 중 임의의 것은 DNA 또는 DNA-연관 폴리펩티드(예를 들어, 히스톤 또는 DNA 결합 단백질)를 변형시킬 수 있다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 아데노신 또는 시토신 염기를 변형시킬 수 있고 부위-특이적 염기 편집기로 기능할 수 있는 데아미나제 효소를 포함하여 뉴클레오티드 염기를 화학적으로 변형시킴으로써 DNA 서열을 편집할 수 있는 효소를 갖는 융합 단백질을 포함한다. 예를 들어, 일반적으로 RNA를 기질로 사용하는 APOBEC1 시티딘 데아미나제는 Cas9에 융합될 때 단일 가닥 및 이중 가닥의 DNA에 표적이 되어 시티딘을 유리딘으로 직접 전환시킬 수 있고, ADAR 효소는 아데노신을 이노신으로 탈아미노화한다. 따라서 데아미나제를 사용하는 '염기 편집'은 하나의 표적 DNA 염기를 다른 염기로 프로그래밍 가능한 전환을 가능하게 한다. 다양한 염기 편집기가 당업계에 알려져 있고, 본원에 기술된 방법 및 시스템에서 사용될 수 있다. 예시적인 염기 편집기는 예를 들어 Rees and Liu Nature Review Genetics, 2018, 19(12): 770-788에 기술되어 있고, 그 내용이 본원에 통합된다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9 효소(ScoCas9, SirCas9, VapCas9, EpeCas9, LfeCas9, PmaCas9)는 핵염기 편집기의 구성요소이다. 일부 구현예에서, 염기 편집기는 아데닌 데아미나제 TadA8 또는 TadA9이다.
일부 구현예에서, 염기 편집은 침묵 유전자에 정지 코돈 도입을 초래한다. 일부 구현예에서, 염기 편집은 아미노산 서열 변경에 의해 단백질 기능 변경을 초래한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 히스톤과의 융합에 의한 표적 DNA의 후성적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 시스템은 판독기, 기록기 또는 지우개(eraser) 단백질과 같은 후성적 변형 효소와의 융합에 의한 표적 DNA의 후성적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 시스템은 표적 DNA의 선택된 영역에서 히스톤 변형 패턴을 변경시키는 히스톤 변형 효소와의 융합을 포함한다. 히스톤 변형은 메틸화, 아세틸화, 유비퀴틴화, 인산화를 포함하는 많은 상이한 방식으로 그리고 많은 상이한 조합으로 발생하여 DNA의 구조적 변화를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 히스톤 변형은 전사 억제 또는 활성화를 초래한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 전사 활성화인자 단백질 또는 전사 억제인자 단백질, 소분자/약물-반응성 전사 조절인자, 유도성 전사 조절인자와의 융합을 통해 전사를 증가시키거나 감소시킴으로써 표적 DNA의 전사를 조절한다. 일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 시스템은 결합으로 유전자 발현의 증가 또는 감소를 초래하는 표적 암호화 mRNA(즉, 단백질 암호화 유전자)의 발현을 조절하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 프로모터 또는 인핸서와 같은 유전자 조절 요소를 편집함으로써 유전자 조절을 조절하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 tRNA, rRNA, snoRNA, siRNA, miRNA 및 긴 ncRNA를 포함하는 표적 비암호화 RNA의 발현을 조절하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 염색질 루프 구조의 표적화된 조작을 위해 사용된다. 조절 게놈 영역 사이의 염색질 루프의 표적화된 조작은, 내인성 염색질 구조를 조종하고 새로운 인핸서-프로모터 연결 형성이 유전적 결함을 극복하게 하거나 비정상적인 인핸서-프로모터 연결을 억제하도록 하는 수단을 제공한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9는 살아있는 세포 영상화를 위해 사용된다. 형광 표지된 Cas9는 동원체 및 텔로미어와 같은 반복적인 게놈 영역을 표적으로 하여 세포 주기 전반에 걸쳐 천연 염색질 유전자좌를 추적하고, 3D 핵 공간에서 전사적 활성 및 불활성 영역의 차등적 위치를 결정한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 유익한 임상 변이체 또는 억제 돌연변이의 삽입에 의한 병원성 돌연변이 교정을 위해 사용된다.
핵염기 편집기
Cas9를 포함하는 폴리뉴클레오티드의 표적 뉴클레오티드 서열을 편집, 변형 또는 변경하기 위한 신규 염기 편집기 또는 핵염기 편집기가 본원에 개시된다. 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인(예를 들어, Cas9) 및 핵염기 편집 도메인(예를 들어, 아데노신 데아미나제)을 포함하는 핵염기 편집기 또는 염기 편집기가 본원에 기술된다. 폴리뉴클레오티드 프로그래밍 가능한 뉴클레오티드 결합 도메인(예를 들어, Cas9)은 결합된 가이드 폴리뉴클레오티드(예를 들어, gRNA)와 함께 있을 때 표적 폴리뉴클레오티드 서열에 특이적으로 결합할 수 있고(즉, 결합된 가이드 핵산의 염기와 표적 폴리뉴클레오티드 서열의 염기 사이의 상보적 염기 쌍 형성을 통해), 그에 의해 편집하고자 하는 표적 핵산 서열에 염기 편집기를 위치시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 폴리뉴클레오티드 서열은 단일 가닥의 DNA 또는 이중 가닥의 DNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 폴리뉴클레오티드 서열은 RNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 폴리뉴클레오티드 서열은 DNA-RNA 혼성을 포함한다. 인간 질병과 연관하여 알려진 유전자 변이의 대부분은 점 돌연변이이므로, 정확한 점 돌연변이를 보다 효율적이고 깔끔하게 만들 수 있는 방법이 필요하다. 본원에 제공된 염기 편집 시스템은 이중 가닥 DNA 파손을 발생시키지 않고 공여체 DNA 주형을 요구하지 않고 과도한 확률론적 삽입 및 결실을 유도하지 않으면서 게놈 편집을 제공하는 신규 방법을 제공한다.
본원에 제공된 염기 편집기는 유의한 비율의 삽입결실을 발생시키지 않으면서 특정 뉴클레오티드 염기를 변형시킬 수 있다. 본원에서 사용될 때 용어 "삽입결실(들)"은 핵산 내 뉴클레오티드 염기의 삽입 또는 결실을 의미한다. 이러한 삽입 또는 결실은 유전자의 암호화 영역 내의 프레임 이동 돌연변이를 이끌 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 뉴클레오티드 서열에서 다수의 삽입 또는 결실(즉, 삽입결실)을 발생시키지 않으면서 핵산 내 특정 뉴클레오티드를 효율적으로 변형(예를 들어, 돌연변이 또는 탈아미노화)시키는 염기 편집기를 발생시키는 것이 바람직하다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 염기 편집기는 삽입결실 대비 의도한 변형(예를 들어 점 돌연변이 또는 탈아미노화) 비율을 더 크게 생성시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 염기 편집기 시스템은 표적 폴리뉴클레오티드 서열에서 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0.9% 미만, 0.8% 미만, 0.7% 미만, 0.6% 미만, 0.5% 미만, 0.4% 미만, 0.3% 미만, 0.2% 미만, 0.1% 미만, 0.09% 미만, 0.08% 미만, 0.07% 미만, 0.06% 미만, 0.05% 미만, 0.04% 미만, 0.03% 미만, 0.02% 미만 또는 0.01% 미만의 삽입결실 형성을 초래한다.
본 개시내용의 일부 측면은 본원에 제공된 임의의 염기 편집기가 의도하지 않은 점 돌연변이와 같은 상당 수의 의도하지 않은 돌연변이를 발생시키는 것없이 핵산(예를 들어 대상체의 게놈 내 핵산)에서 점 돌연변이와 같은 의도된 돌연변이를 효율적으로 발생시킬 수 있다는 인식에 기반한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 염기 편집기는 의도된 돌연변이를 적어도 0.01%(즉, 적어도 0.01% 염기 편집 효율) 발생시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 염기 편집기는 의도된 돌연변이를 적어도 0.01%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%를 발생시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 염기 편집기는 1:1보다 큰, 의도된 점 돌연변이 대 삽입결실의 비율을 발생시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 염기 편집기는 적어도 1.5:1, 적어도 2:1, 적어도 2.5:1, 적어도 3:1, 적어도 3.5:1, 적어도 4:1, 적어도 4.5:1, 적어도 5:1, 적어도 5.5:1, 적어도 6:1, 적어도 6.5:1, 적어도 7:1, 적어도 7.5:1, 적어도 8:1, 적어도 8.5:1, 적어도 9:1, 적어도 10:1, 적어도 11:1, 적어도 12:1, 적어도 13:1, 적어도 14:1, 적어도 15:1, 적어도 20:1, 적어도 25:1, 적어도 30:1, 적어도 40:1, 적어도 50:1, 적어도 100:1, 적어도 200:1, 적어도 300:1, 적어도 400:1, 적어도 500:1, 적어도 600:1, 적어도 700:1, 적어도 800:1, 적어도 900:1 또는 적어도 1000:1 이상의 의도된 점 돌연변이 대 삽입결실의 비율을 발생시킬 수 있다.
의도된 돌연변이 및 삽입결실의 수는 예를 들어 국제 PCT 출원 제PCT/2017/045381호(WO2018/027078호) 및 PCT/US2016/058344호(WO2017/070632호); Komor, A.C., 등, "Programmable editing of a target base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage" Nature 533, 420-424 (2016); Gaudelli, N.M., 등, "Programmable base editing of A·T to G·C in genomic DNA without DNA cleavage" Nature 551, 464-471 (2017); 및 Komor, A.C., 등, "Improved base excision repair inhibition and bacteriophage Mu Gam protein yields C:G-to-T:A base editors with higher efficiency and product purity" Science Advances 3:eaao4774 (2017)에 기술된 바와 같은 임의의 적합한 방법을 사용하여 결정될 수 있으며, 이들 문헌의 전체 내용은 여기서 참고로 통합된다.
일부 구현예에서, 삽입결실 빈도를 계산하기 위해, 삽입결실이 발생할 수 있는 양쪽 허용범위의 측면에 위치한 2개의 10-bp 서열의 정확한 매치에 대하여 서열분석 판독을 스캐닝한다. 정확한 매치가 없으면 이 판독은 분석에서 제외된다. 이 삽입결실 허용범위의 길이가 참조 서열과 정확히 매치되는 경우 판독은 삽입결실을 함유하지 않은 것으로 분류된다. 삽입결실 허용범위가 참조 서열보다 2개 초과 염기만큼 길거나 짧은 경우 이 염기서열 판독은 각각 삽입 또는 결실로 분류된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 염기 편집기는 핵산 영역에서 삽입결실 형성을 제한할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 영역은 염기 편집기에 의해 표적화된 뉴클레오티드 또는 염기 편집기에 의해 표적화된 뉴클레오티드의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 뉴클레오티드 내 영역이다.
표적 뉴클레오티드 영역에서 형성된 삽입결실의 수는 핵산(예를 들어, 세포 게놈 내 핵산)이 염기 편집기에 노출되는 시간의 양에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 삽입결실의 수 또는 비율은 표적 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 세포 게놈 내 핵산)을 염기 편집기에 노출시킨 후 적어도 1시간, 적어도 2시간, 적어도 6시간, 적어도 12시간, 적어도 24시간, 적어도 36시간, 적어도 48시간, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 7일, 적어도 10일 또는 적어도 14일에 결정된다. 본원에 기술된 염기 편집기의 특징은 임의의 융합 단백질, 또는 본원에 제공된 융합 단백질을 사용하는 방법에 적용될 수 있음을 이해해야 한다.
치료적 적용분야
본원에 기술된 CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 다양한 치료적 적용분야를 가질 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 장애 또는 질병 치료를 필요로 하는 대상체에서 장애 또는 질병을 치료하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 Cas9를 포함하는 CRISPR-Cas9 시스템을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 가이드 RNA는 병태 또는 질병과 연관된 표적 핵산의 적어도 10개의 뉴클레오티드에 상보적이고; 상기 Cas 단백질은 상기 가이드 RNA와 연관되고; 상기 가이드 RNA는 표적 핵산에 결합하고; 상기 Cas 단백질은 표적 핵산의 파손을 유발하고, 선택적으로 상기 Cas9는 데아미나제에 융합된 불활성 Cas9(dCas9)이고 표적 핵산에서 1개 이상의 염기 편집을 초래하여 상기 장애 또는 질병을 치료한다.
일부 구현예에서, CRISPR-Cas9 방법 또는 시스템은 다양한 질병 및 장애, 예를 들어 유전 장애(예를 들어 단일유전 질병), 뉴클레아제 활성에 의해 치료될 수 있는 질병 및 다양한 암 등을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 (예를 들어, 하나 이상의 핵산 잔기를 삽입, 결실 또는 돌연변이시킴으로써) 표적 핵산을 변형시키기 위해 표적 핵산을 편집하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서 본원에 기술된 CRISPR 시스템은 바람직한 핵산 서열을 포함하는 외인성 공여체 주형 핵산(예를 들어, DNA 분자 또는 RNA 분자)을 포함한다. 본원에 기술된 CRISPR 시스템으로 유도된 절단 사건이 해결될 때 세포의 분자 기구는 절단 사건의 복구 및/또는 해결에서 외인성 공여체 주형 핵산을 활용한다. 대안적으로, 세포의 분자 기구는 절단 사건의 복구 및/또는 해결에서 내인성 주형을 활용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR 시스템은 표적 핵산을 변경시키기 위해 사용되어 삽입, 결실 및/또는 점 돌연변이를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 삽입은 무흔적 삽입(즉, 절단 사건이 해결될 때 표적 핵산 내로 의도된 핵산 서열 삽입으로 인해 추가의 의도하지 않은 핵산 서열이 없음)이다. 공여체 주형 핵산은 이중 가닥 또는 단일 가닥의 핵산 분자(예를 들어, DNA 또는 RNA)일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 핵염기 편집기를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 Cas9 단백질은 핵염기 편집 활성을 갖는 폴리펩티드에 융합된다.
일 측면에서, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 RNA, 독성 RNA 및/또는 돌연변이된 RNA(예를 들어, 스플라이싱 결함 또는 첨두절단)의 과발현으로 유발된 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 또한 다양한 질병을 유발하는 RNA-의존적 기능에 영향을 주는 트랜스-작용(trans-acting) 돌연변이를 표적으로 할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 또한 스플라이싱 결함 및 질병을 유발할 수 있는 시스-작용(cis-acting) 스플라이싱 코드를 파손시키는 돌연변이를 표적으로 하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 특히 RNA 바이러스에 대항하는 항바이러스 활성을 위해 추가로 사용될 수 있다. CRISPR-연관 단백질은 바이러스 RNA 서열을 표적으로 하기 위해 선택된 적합한 RNA 가이드를 사용하여 바이러스 RNA를 표적으로 할 수 있다.
본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 또한 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에서 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 CRISPR-연관 단백질은 비정상적인(예를 들어, 점 돌연변이를 포함하거나 선택적 스플라이싱된) RNA 분자를 표적으로 하는 crRNA에 의해 프로그래밍될 수 있고, 암세포에서 발견되어 암세포에서 세포사를 유도할 수 있다(예를 들어, 아포톱시스를 통해).
또한, 본원에 기술된 CRISPR 방법 또는 시스템은 대상체의 감염성 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 CRISPR-연관 단백질은 감염원 세포에서 세포사를 표적으로 하고 유도하기 위해 감염원(예: 박테리아, 바이러스, 기생충 또는 원생동물)에 의해 발현되는 RNA 분자를 표적으로 하는 crRNA에 의해 프로그래밍될 수 있다. CRISPR 시스템은 세포내 감염원이 숙주 대상체의 세포를 감염시키는 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 감염원 유전자에 의해 암호화된 RNA 분자를 표적으로 하는 CRISPR-연관 단백질을 프로그래밍함으로써 감염원에 감염된 세포가 표적이 될 수 있고 세포사가 유도될 수 있다.
또한, 시험관 내 RNA 감지 검정이 사용되어 특정 RNA 기질을 검출할 수 있다. CRISPR-연관 단백질은 살아있는 세포에서 RNA-기반 감지를 위해 사용될 수 있다. 적용분야의 예에는 예를 들어 질병-특이적 RNA 감지에 의한 진단이 있다.
폴리뉴클레오티드 서열을 표적 DNA 서열 내로 삽입하는 것이 바람직한 적용분야에서, 삽입될 공여체 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 또한 세포에 제공된다. "공여체 서열" 또는 "공여체 폴리뉴클레오티드"라 함은 부위-특이적 변형 폴리펩티드에 의해 유도된 절단 부위에 삽입되는 핵산 서열을 의미한다. 공여체 폴리뉴클레오티드는 상기 공여체 폴리뉴클레오티드와 상기 공여체 폴리뉴클레오티드가 상동성을 구비한 대상인 게놈 서열과의 사이에 상동성-기반 복구를 뒷받침하기 위해 절단 부위에서 게놈 서열에 대해 충분한 상동성, 예컨대 절단 부위에서, 예컨대 절단 부위의 약 50개 이하의 염기 내에, 예컨대 약 30개 염기 내에, 약 15개 염기 내에, 약 10개 염기 내에, 약 5개 염기 내의 측면에 위치하거나 절단 부위의 바로 측면에 위치하는 뉴클레오티드 서열에 대해 예를 들어 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상동성을 함유한다. 공여체와 게놈 서열 사이의 서열 상동성의 대략 25, 50, 100 또는 200개의 뉴클레오티드, 또는 200개 초과의 뉴클레오티드(또는 10 내지 200개 이상의 뉴클레오티드의 임의의 적분 값)는 상동성-기반 복구를 뒷받침한다. 공여체 서열은 임의의 길이, 예컨대 10개 이상의 뉴클레오티드, 50개 이상의 뉴클레오티드, 100개 이상의 뉴클레오티드, 250개 이상의 뉴클레오티드, 500개 이상의 뉴클레오티드, 1000개 이상의 뉴클레오티드, 5000개 이상의 뉴클레오티드 등일 수 있다.
공여체 서열은 일반적으로 이것이 대체하는 게놈 서열과 동일하지 않다. 오히려, 상동성-기반 복구를 뒷받침하기에 충분한 상동성이 존재하는 한, 공여체 서열은 게놈 서열과 관련하여 적어도 1개 이상의 단일 염기 변화, 삽입, 결실, 역위 또는 재배열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 공여체 서열은 2개의 상동성 영역이 측면에 위치하는 비-상동성 서열을 포함하여, 표적 DNA 영역과 2개의 측면에 위치하는 서열 사이의 상동성-기반 복구는 표적 영역에 비-상동성 서열의 삽입을 초래한다. 또한 공여체 서열은, 관심 DNA 영역에 상동성이 아니고 관심 DNA 영역 내로 삽입되도록 의도되지 않은 서열을 함유하는 벡터 골격을 포함할 수 있다. 일반적으로, 공여체 서열의 상동성 영역(들)은 재조합이 요구되는 게놈 서열에 대해 적어도 50% 서열 동일성을 가진다. 특정 구현예에서, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9% 서열 동일성이 존재한다. 공여체 폴리뉴클레오티드의 길이에 따라 1% 내지 100%의 임의의 값의 서열 동일성이 존재할 수 있다.
공여체 서열은 게놈 서열과 비교할 때 특정 서열 차이, 예를 들어 제한 부위, 뉴클레오티드 다형성, 선택 가능한 마커(예: 약물 저항성 유전자, 형광 단백질, 효소 등) 등을 포함할 수 있으며, 이들은 예를 들어 절단 부위에 공여체 서열의 성공적 삽입을 평가하기 위해 사용될 수 있거나 일부 경우에 다른 목적(예: 표적으로 하는 게놈 유전자좌에서 발현을 보여줌)을 위해 사용될 수 있다. 일부 경우에, 암호화 영역에 위치하는 경우 이러한 뉴클레오티드 서열 차이는 아미노산 서열을 변화시키지 않거나 침묵 아미노산을 변화시킨다(즉, 단백질의 구조나 기능에 영향을 주지 않는 변화). 대안적으로, 이들 서열 차이는 마커 서열의 제거를 위해 나중에 활성화될 수 있는 FLP, loxP 서열 등과 같은 측면에 위치하는 재조합 서열을 포함할 수 있다.
공여체 서열은 단일 가닥 DNA, 단일 가닥 RNA, 이중 가닥 DNA 또는 이중 가닥 RNA로서 세포에 제공될 수 있다. 이는 선형 또는 원형 형태로 세포에 도입될 수 있다. 선형 형태로 도입되는 경우, 공여체 서열의 말단은 당업계에 알려진 방법으로 (예를 들어, 핵산외 분해로부터) 보호될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 디데옥시뉴클레오티드 잔기가 선형 분자의 3' 말단에 추가되고/되거나 자기-상보적 올리고뉴클레오티드가 한쪽 또는 양쪽 말단에 결찰된다. 외인성 폴리뉴클레오티드를 분해로부터 보호하기 위한 추가 방법은 말단 아미노기(들)의 추가 및 예를 들어 포스포로티오에이트, 포스포 아미데이트 및 O-메틸 리보스 또는 데옥시리보스 잔기와 같은 변형된 뉴클레오티드간 연결의 사용을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 선형 공여체 서열의 말단을 보호하는 대안으로서, 재조합에 영향을 주지 않으면서 열화될 수 있는 상동성 영역 외부에 추가 길이의 서열이 포함될 수 있다. 공여체 서열은 예를 들어 복제 기원, 프로모터 및 항생제 저항성을 암호화하는 유전자와 같은 추가 서열을 갖는 벡터 분자의 일부로서 세포 내로 도입될 수 있다. 더욱이, 공여체 서열은 네이키드(naked) 핵산으로, 리포좀 또는 폴록사머와 같은 작용제와 복합화된 핵산으로 도입될 수 있거나, DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산에 대해 전술한 바와같이 바이러스(예를 들어, 아데노바이러스, AAV)에 의해 전달될 수 있다.
상기에 기술된 방법에 따라, 관심 DNA 영역은 생체외에서 절단되고 변형, 즉 "유전적으로 변형"될 수 있다. 일부 구현예에서, 선택 가능한 마커가 관심 DNA 영역 내로 삽입된 경우, 세포 집단은 유전적으로 변형된 세포를 나머지 집단으로부터 분리시킴으로써 유전 변형을 포함하는 세포로 풍부해질 수 있다. 풍부해지기 전, "유전적으로 변형된" 세포는 세포 집단의 단지 약 1% 이상(예를 들어, 2% 이상, 3% 이상, 4% 이상, 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 15% 이상 또는 20% 이상)을 구성할 수 있다. "유전적으로 변형된" 세포의 분리는 사용된 선택 가능한 마커에 적합한 임의의 편리한 분리 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 형광 마커가 삽입된 경우에 형광 활성화된 세포 분류를 통해 세포가 분리될 수 있는 반면, 세포 표면 마커가 삽입된 경우에는 친화도 분리 기술, 예를 들어 자기 분리, 친화도 크로마토그래피, 고체 매트릭스에 부착된 친화성 시약을 사용한 "패닝(panning)" 또는 기타 편리한 기술에 의해 세포가 이종 집단으로부터 분리될 수 있다. 정확한 분리를 제공하는 기술에는 다중 색상 채널, 예각 및 둔각 광산란 감지 채널, 임피던스 채널 등과 같이 다양한 수준의 정교함을 가질 수 있는 형광 활성화 세포 분류기가 포함된다. 죽은 세포와 연관된 염료(예를 들어, 요오드화 프로피듐)를 사용함으로써 세포를 죽은 세포에 대해 선택할 수 있다. 유전적으로 변형된 세포의 생존 가능성에 지나치게 해를 가하지 않는 임의의 기술이 사용될 수 있다. 변형된 DNA를 포함하는 세포가 매우 풍부한 세포 조성물은 이러한 방식으로 달성된다. "매우 풍부한"이라 함은 유전적으로 변형된 세포가 세포 조성물의 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 예를 들어 세포 조성물의 약 95% 이상 또는 98% 이상임을 의미한다. 즉, 조성물은 유전적으로 변형된 세포의 실질적으로 순수한 조성물일 수 있다.
본원에 기술된 방법에 의해 생산된 유전적으로 변형된 세포는 즉시 사용될 수 있다. 대안적으로, 세포는 액체 질소 온도에서 동결될 수 있고 장기간 보관되고 해동되고 재사용될 수 있다. 이러한 경우, 세포는 일반적으로 10% 디메틸술폭시드(DMSO), 50% 혈청, 40% 완충 배지, 또는 이러한 동결 온도에서 세포를 보존하기 위해 당업계에서 통상적으로 사용되는 일부 다른 용액에서 동결되고, 동결된 배양 세포를 해동하기 위해 당업계에 일반적으로 알려진 방식으로 해동된다.
유전적으로 변형된 세포는 다양한 배양 조건 하에 시험관내에서 배양될 수 있다. 세포는 배양을 통해 확장될 수 있다, 즉, 증식을 촉진하는 조건 하에서 성장할 수 있다. 배양 배지는 액체 또는 반고체, 예를 들어 한천, 메틸셀룰로오스 등을 함유하는 것일 수 있다. 세포 집단은 송아지 태아 혈청(약 5 내지 10%), L-글루타민, 티올, 특히 2-머캅토에탄올 및 항생제, 예를 들어 페니실린과 스트렙토마이신으로 보충된 Iscove의 변형 DMEM 또는 RPMI 1640과 같은 적절한 영양 배지에 현탁될 수 있다. 배양물에는 조절 T 세포가 반응하는 성장 인자가 함유될 수 있다. 본원에 정의된 성장 인자는 막횡단 수용체에 대한 특정 효과를 통해 배양물 또는 비손상 조직에서 세포의 생존, 성장 및/또는 분화를 촉진할 수 있는 분자이다. 성장 인자는 폴리펩티드 및 비폴리펩티드 인자를 포함한다.
이러한 방식으로 유전적으로 변형된 세포는 예를 들어 질병을 치료하기 위한 유전자 요법과 같은 목적을 위해 또는 항바이러스제, 항병원체 또는 항암 치료제로서, 농업에서 유전적으로 변형된 유기체의 생산을 위해 또는 생물학적 연구를 위해 대상체에게 이식될 수 있다. 대상체는 신생아, 청소년 또는 성인일 수 있다. 포유동물 대상체가 특히 흥미롭다. 본 방법으로 치료될 수 있는 포유동물 종은 개와 고양이; 말; 소; 양 등과 영장류, 특히 인간을 포함한다. 동물 모델, 특히 작은 포유동물(예를 들어, 마우스, 랫트, 기니피그, 햄스터, 토류목(예: 토끼) 등)은 실험적 연구를 위해 사용될 수 있다.
세포는 단독으로 또는 적합한 기질 또는 매트릭스와 함께 대상체에게 제공되어, 예를 들어 세포가 이식되는 조직에서의 성장 및/또는 조직화를 뒷받침할 수 있다. 일반적으로 적어도 1x103개 세포, 예를 들어 5x103개 세포, 1x104개 세포, 5x104개 세포, 1x105개 세포, 1x106개 세포 이상이 투여된다. 세포는 비경구, 피하, 정맥내, 두개내, 척수내, 안구내 또는 척수액 경로 중 임의의 경로를 통해 대상체에게 도입될 수 있다. 세포는 주사, 카테터 등에 의해 도입될 수 있다. 또한 세포는 유전자이식 동물(예: 유전자이식 마우스)을 발생시킬 목적으로 배아(예: 배반포) 내에 도입될 수 있다.
대상체에 대한 치료 투여 횟수는 다를 수 있다. 유전적으로 변형된 세포를 대상체에게 도입하는 것은 일회성 사건일 수 있지만; 특정 상황에서 이러한 치료는 제한된 기간 동안 개선을 끌어낼 수 있으며 지속적인 반복 치료를 필요로 할 수 있다. 다른 상황에서, 효과가 관찰되기 전에 유전적으로 변형된 세포의 여러 번 투여가 필요할 수 있다. 정확한 프로토콜은 질병 또는 병태, 질병 단계 및 치료되는 개별 대상체의 매개변수에 따라 달라진다.
본 발명의 다른 측면에서, DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드가 사용되어, 예를 들어 질병을 치료하기 위한 유전자 요법과 같은 목적으로 또는 항바이러스제, 항병원체 또는 항암 치료제로서, 농업에서 유전적으로 변형된 유기체의 생산을 위해 또는 생물학적 연구를 위해 생체 내 세포 DNA를 변형시킨다. 이들 생체내 구현예에서, DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드는 개체에 직접 투여된다. DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드는 펩티드, 소분자 및 핵산을 대상체에게 투여하기 위해 당업계에 잘 알려진 임의의 다수의 방법에 의해 투여될 수 있다. DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드는 다양한 제형 내에 통합될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드는 적절한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 조합하여 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다.
약제학적 제조물은 약제학적으로 허용 가능한 비히클에 존재하는 하나 이상의 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물이다. "약제학적으로 허용 가능한 비히클"은 인간과 같은 포유동물에 대한 사용을 위해 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 등재된 비히클일 수 있다. 용어 "비히클"은 본 발명의 화합물이 포유동물에 투여하기 위해 함께 제형화되는 희석제, 아쥬반트, 부형제 또는 담체를 의미한다. 이러한 약제학적 비히클은 지질, 예를 들어 리포솜, 예를 들어 리포솜 덴드리머; 액체, 예컨대 물 및, 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일을 포함한 오일, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등, 식염수; 아카시아검, 젤라틴, 전분 페이스트, 활석, 케라틴, 콜로이드성 실리카, 요소 등일 수 있다. 또한, 보조제, 안정제, 증점제, 윤활제 및 착색제가 사용될 수 있다. 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 산제, 과립, 연고, 용제, 좌제, 주사제, 흡입제, 겔, 소구체 및 에어로졸과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제조물 내에 제형화될 수 있다. 이와 같이, DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드의 투여는 경구, 협측, 직장, 비경구, 복강내, 피내, 경피, 기관내, 안구내 등 투여를 포함하는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 활성 작용제는 투여 후 전신용일 수 있거나 국소 투여, 벽내 투여, 또는 이식 부위에서 활성 용량을 유지하는 작용을 하는 이식 장치의 사용에 의해 국소화될 수 있다. 활성 작용제는 즉각적인 활성을 위해 제형화될 수 있거나 서방용으로 제형화될 수 있다.
일부 병태, 특히 중추신경계 병태의 경우, 혈액뇌장벽(BBB)을 통과하는 작용제를 제형화해야 할 수 있다. 혈액뇌장벽(BBB)을 통과하는 약물 전달의 한 가지 전략은 만니톨이나 류코트리엔과 같은 삼투압 수단에 의해 또는 브라디키닌과 같은 혈관활성 서브스턴스를 사용함으로써 생화학적으로 BBB 저해를 수반하는 것이다. 뇌 종양에 대해 특정 작용제를 표적으로 하기 위해 BBB 개구를 사용할 가능성 또한 선택안이다. BBB 저해제는 조성물이 혈관내 주사에 의해 투여될 때 본 발명의 치료 조성물과 함께 투여될 수 있다. BBB를 통과시키는 다른 전략은 Caveolin-1 매개 세포투과이동(trancytosis), 글루코스 및 아미노산 담체와 같은 담체-매개된 수송체, 인슐린 또는 트랜스페린에 대한 수용체-매개된 세포투과이동, 및 p-당단백질과 같은 활성 유출 수송체를 포함하는 내인성 수송체 시스템의 사용을 수반할 수 있다. 또한 활성 수송 모이어티는 혈관의 내피 벽을 가로지르는 수송을 촉진하기 위해 본 발명에서 사용하기 위한 치료 화합물에 접합될 수 있다.
대안적으로, BBB 뒤에 치료제의 약물 전달은 국소 전달에 의해, 예를 들어 척수강내 전달에 의해 이루어질 수 있다.
일반적으로, 유효량의 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 생체외 방법과 관련하여 상기에서 검토된 바와 같이, 생체내 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드의 유효량 또는 유효 용량은 음성 대조군, 예컨대 빈 벡터 또는 관련 없는 폴리펩티드와 접촉된 세포와 비교하여 2개 상동성 서열 사이에서 관찰된 재조합 양을 2배 이상의 증가하도록 유도하는 양이다. 재조합 양은 예를 들어 상기에 기재되고 당업계에 알려진 임의의 편리한 방법으로 측정할 수 있다. 투여될 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드의 유효량 또는 유효 용량의 계산은 당업계의 기술 범위 내에 있고 당업자에게는 일상적이다. 투여될 최종 양은 투여 경로 및 치료될 장애 또는 병태의 특성에 따라 달라진다.
특정한 환자에게 제공되는 유효량은 다양한 요인에 따라 달라지며, 그 중 일부는 환자마다 다르다. 유능한 임상의는 필요에 따라 질병 병태를 중단시키거나 진행을 역전시키기 위해 환자에게 투여할 치료제의 유효량을 결정할 수 있다. LD50 동물 데이터 및 작용제에 대해 이용 가능한 다른 정보를 활용하여, 임상의는 투여 경로에 따라 개인에 대해 최대 안전 용량을 결정할 수 있다. 예를 들어, 치료 조성물이 투여되는 체액강이 큰 경우, 정맥내 투여 용량은 척수강내 투여 용량보다 많을 수 있다. 유사하게, 신체에서 빠르게 제거되는 조성물은 치료 농도를 유지하기 위해 더 높은 용량으로 또는 반복되는 용량으로 투여될 수 있다. 유능한 임상의는 통상의 기술을 활용하여 일상적인 임상 시험 과정에서 특정 치료제의 용량을 최적화할 수 있다.
의약에 혼입시키기 위해, DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드를 적합한 상업적 공급원으로부터 얻을 수 있다. 일반적인 제안으로서, 용량당 비경구로 투여되는 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드의 총 약제학적 유효량은 용량 반응 곡선으로 측정될 수 있는 범위 내에 있다.
DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드에 기반한 요법, 즉 치료적 투여를 위해 사용될 DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드의 제조물은 무균이어야 한다. 멸균 여과막(예: 0.2μm 막)을 통한 여과를 통해 무균이 쉽게 달성된다. 치료 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 정맥 주사액 백 또는 피하 주사 바늘이 관통할 수 있는 마개가 있는 바이알 내에 놓인다. DNA-표적 RNA 및/또는 부위-특이적 변형 폴리펩티드 및/또는 공여체 폴리뉴클레오티드에 기반한 요법은 단위 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉 앰플 또는 바이알에 수용액으로 또는 재구성을 위한 동결건조 제형으로 보관될 수 있다. 동결건조 제형의 예로서, 10mL 바이알에 멸균-여과된 1%(w/v) 화합물 수용액 5ml를 채우고, 생성된 혼합물은 동결건조된다. 주입 용액은 정균 주사용수를 사용하여 동결건조된 화합물을 재구성함으로써 제조된다.
약제학적 조성물은 동물 또는 인간 투여를 위한 약제학적 조성물을 제형화하기 위해 흔히 사용되는 비히클로 정의되는 약제학적으로 허용 가능한 무독성 희석제 담체를 원하는 제형에 따라 포함할 수 있다. 희석제는 조합의 생물학적 활성에 영향을 주지 않도록 선택된다. 이러한 희석제의 예는 증류수, 완충수, 생리식염수, PBS, 링거 용액, 덱스트로스 용액 및 행크 용액이다. 또한, 약제학적 조성물 또는 제형은 다른 담체, 아쥬반트 또는 비독성, 비치료적, 비면역원성 안정제, 부형제 등을 포함할 수 있다. 또한 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 습윤제 및 청정제와 같은 생리학적 조건에 근접시키는 추가적인 서브스턴스를 포함할 수 있다.
또한 조성물은 예를 들어 항산화제와 같은 다양한 안정제 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물이 폴리펩티드를 포함할 때, 폴리펩티드는 폴리펩티드의 생체내 안정성을 증강시키거나 그렇지 않으면 약리학적 특성을 증강시키는(예를 들어, 폴리펩티드의 반감기를 증가시키고 그의 독성을 낮추고 용해도 또는 흡수를 증강시키는) 잘 알려진 다양한 화합물과 복합체를 형성할 수 있다. 이러한 변형제 또는 복합화 작용제의 예는 황산염, 글루콘산염, 시트르산염 및 인산염을 포함한다. 또한 조성물의 핵산 또는 폴리펩티드는 생체내 속성을 증강시키는 분자와 복합체를 형성할 수 있다. 이러한 분자는 예를 들어 탄수화물, 폴리아민, 아미노산, 기타 펩티드, 이온(예: 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간) 및 지질을 포함한다.
약제학적 조성물은 예방적 및/또는 요법적 치료를 위해 투여될 수 있다. 예를 들어 LD50(집단의 50%에서 치사가 이루어지는 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료적으로 유효한 용량) 결정을 포함하여 활성 성분의 독성 및 요법적 효능은 세포 배양물 및/또는 실험 동물에서 표준 약학 절차에 따라 결정될 수 있다. 독성 및 요법 효과 사이의 용량 비는 치료 계수이고, LD50/ED50 비로 표현될 수 있다. 큰 치료 계수를 나타내는 요법이 바람직하다.
세포 배양물 및/또는 동물 연구에서 얻은 데이터는 인간을 위한 투여량 범위를 제형화하기 위해 사용될 수 있다. 활성 성분의 투여량은 일반적으로 낮은 독성과 함께 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 투여량은 이용되는 투여 형태 및 활용되는 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다를 수 있다.
약제학적 조성물을 제형화하기 위해 사용되는 구성성분은 바람직하게는 고순도이고 잠재적으로 유해한 오염물질을 실질적으로 갖지 않는다(예를 들어, 적어도 국민 식품(NF) 등급, 일반적으로 최소한 분석 등급, 더 일반적으로는 최소한 약제 등급). 더욱이, 생체내 사용으로 의도된 조성물은 일반적으로 무균이다. 주어진 화합물이 사용 전에 합성되어야 하는 경우, 생성된 생성물은 일반적으로 임의의 잠재적 독성 작용제, 특히 합성 또는 정제 프로세스 동안에 존재할 수 있는 임의의 내독소를 실질적으로 갖지 않는다. 또한 비경구 투여를 위한 조성물은 무균이고 실질적으로 등장성이며 GMP 조건 하에서 제조된다.
전달 시스템
본원에 기술된 CRISPR 시스템 또는 이의 구성요소, 이의 핵산 분자, 및/또는 이의 구성요소를 암호화하거나 제공하는 핵산 분자, CRISPR-연관 단백질, 또는 RNA 가이드는 벡터, 예를 들어 플라스미드 및 전달 벡터와 같은 다양한 전달 시스템에 의해 전달될 수 있다. 예시적인 구현예가 아래에 기술된다. CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 기술된 핵염기 편집기를 포함하는 Cas9를 포함)은 바이러스 벡터에 함유된 핵산 상에서 암호화될 수 있다. 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 아데노바이러스, 레트로바이러스 및 아데노-연관 바이러스(AAV)를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 적용분야에 기반하여 선택될 수 있다. 예를 들어, AAV는 약한 면역원성으로 인해 생체내 유전자 전달을 위해 흔히 사용된다. 아데노바이러스는 이들이 유도하는 강력한 면역원성 반응 때문에 흔히 백신으로 사용된다. 바이러스 벡터의 패키징 용량은 벡터 내로 패키징될 수 있는 염기 편집기의 크기를 제한할 수 있다. 예를 들어, AAV의 패키징 용량은 2개의 145 염기 역위 말단 반복(ITR)을 포함하여 ~4.5kb이다.
AAV는 파보바이러스 계열에 속하는 작은 단일 가닥의 DNA 의존성 바이러스이다. 4.7kb 야생형(wt) AAV 게놈은 4개의 복제 단백질과 3개의 캡시드 단백질을 각각 암호화하는 2개의 유전자로 구성되고, 각 측면에는 145bp 역위 말단 반복(ITR)이 측면에 위치해 있다. 비리온은 차등 스플라이싱(Vpl) 및 선택적 번역 시작 부위(각각 Vp2 및 Vp3)를 제외하고 동일한 개방형 판독 프레임에서 1:1:10 비율로 생성된 3개의 캡시드 단백질인 Vpl, Vp2 및 Vp3로 구성된다. Vp3은 비리온에서 가장 풍부한 하위단위체이고 바이러스 향성을 정의하며 세포 표면에서 수용체 인식에 참여한다. 바이러스 감염성에서 기능하는 포스포리파제 도메인은 Vpl의 독특한 N 말단에서 식별되었다.
wt AAV와 유사하게, 재조합 AAV(rAAV)는 시스-작용 145-bp ITR을 활용하여 벡터 이식유전자 카세트의 측면에 위치하고 외래 DNA 패키징을 위해 최대 4.5kb를 제공한다. 감염에 이어, rAAV는 본 발명의 융합 단백질을 발현할 수 있고, 숙주 게놈 내로 통합되지 않으면서 머리에서 꼬리(head-to tail) 동일연쇄서열에 에피좀으로 존재함으로써 지속될 수 있다. 시험관내 및 생체내에서 이 시스템을 사용하는 rAAV 성공의 많은 예가 있지만, 유전자의 암호화 서열 길이가 크기가 wt AAV 게놈과 동일하거나 이보다 클 때 제한된 패키징 용량은 AAV-매개 유전자 전달의 사용을 제한하였다.
AAV 벡터의 작은 패키징 용량으로 인해 이 크기를 초과하는 다수의 유전자 전달 및/또는 큰 생리학적 조절 요소의 사용이 어려워진다. 이러한 어려움은 예를 들어 전달될 단백질(들)을 2개 이상의 단편으로 나눔으로써 해결될 수 있고, 상기 N-말단 단편은 분할된 인테인-N에 융합되고 C-말단 단편은 분할된 인테인-C에 융합된다. 그 다음, 이들 단편은 2개 이상의 AAV 벡터 내로 패키징된다. 본원에서 사용될 때 "인테인"은 측면에 위치한 N-말단 및 C-말단 엑스테인(예를 들어, 연결될 단편)을 결찰시키는 자가-스플라이싱 단백질 인트론(예를 들어, 펩티드)을 의미한다. 이종 단백질 단편을 연결하기 위한 특정 인테인의 사용이 예를 들어 Wood 등, J. Biol. Chem. 289(21); 14512-9 (2014)에 기술되어 있다. 예를 들어, 분리된 단백질 단편에 융합될 때 인테인 IntN과 IntC는 서로를 인식하고, 스스로 스플라이싱되고, 이들이 융합된 단백질 단편의 측면에 위치한 N- 및 C-말단 엑스테인을 동시에 결찰시켜, 2개 단백질 단편으로부터 전장 단백질을 재구성한다. 다른 적합한 인테인은 당업자에게 명백할 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CRISPR 시스템은 다양한 길이를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 단백질 단편은 2개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 단백질 단편은 약 5개 아미노산 내지 약 500개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 단백질 단편은 약 20개 아미노산 내지 약 200개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 일부 구현예에서, 단백질 단편은 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산 범위의 길이를 가진다. 다른 길이의 적합한 단백질 단편이 당업자에게 명백할 것이다.
일부 구현예에서, 뉴클레아제(예를 들어, Cas9)의 일부 또는 단편은 인테인에 융합된다. 뉴클레아제는 인테인의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 일부 또는 단편은 인테인에 융합되고 AAV 캡시드 단백질에 융합된다. 인테인, 뉴클레아제 및 캡시드 단백질은 임의의 배열(예를 들어, 뉴클레아제-인테인-캡시드, 인테인-뉴클레아제-캡시드, 캡시드-인테인-뉴클레아제 등)로 함께 융합될 수 있다. 일부 구현예에서, 인테인의 N-말단은 융합 단백질의 C-말단에 융합되고, 인테인의 C-말단은 AAV 캡시드 단백질의 N-말단에 융합된다.
일 구현예에서, 이중 AAV 벡터는 큰 이식유전자 발현 카세트를 2개의 별도 반쪽(5' 및 3' 말단, 또는 머리와 꼬리)으로 분할함으로써 발생되고, 상기 카세트의 각 반쪽은 단일 AAV 벡터(< 5kb)에 패키징된다. 그 다음, 전장 이식유전자 발현 카세트의 재조립은 이중 AAV 벡터 둘 모두에 의한 동일 세포의 동시 감염 이후 다음에 의해 달성된다: (1) 5'와 3' 게놈 사이의 상동성 재조합(HR)(이중 AAV 중첩 벡터); (2) 5' 및 3' 게놈의 ITR-매개의 꼬리에서 머리로 연쇄동일서열화(이중 AAV 트랜스-스플라이싱 벡터); 또는 (3) 이들 두 메커니즘의 조합(이중 AAV 하이브리드 벡터). 생체내 이중 AAV 벡터의 사용으로 인해 전장 단백질이 발현된다. 이중 AAV 벡터 플랫폼의 사용은 >4.7kb 크기의 이식유전자에 대한 효율적이고 실행 가능한 유전자 전달 전략을 나타낸다.
본원에 기술된 Cas9를 포함하는 CRISPR 시스템을 설계하기 위해 개시된 전략은 바이러스 벡터 내로 패키징될 수 있는 CRISPR 시스템의 발생에 유용할 수 있다. 염기 편집기 전달을 위해 RNA 또는 DNA 바이러스 기반 시스템을 사용하는 것은 배양물 또는 숙주에서 바이러스를 특정 세포에 대해 표적으로 하고 바이러스 페이로드를 핵 또는 숙주 세포 게놈에 전달하기 위해 고도로 진화된 프로세스를 활용한다. 바이러스 벡터는 배양물의 세포, 환자(생체 내)에게 직접 투여할 수 있거나 시험관내 세포를 치료하기 위해 사용될 수 있고, 변형된 세포는 선택적으로 환자(생체외)에게 투여될 수 있다. 종래의 바이러스 기반 시스템은 유전자 전달을 위한 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 및 단순 포진 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 레트로바이러스, 렌티바이러스 및 아데노 연관 바이러스 유전자 전달 방법을 사용하여 숙주 게놈 내 통합이 가능하여, 종종 삽입된 이식유전자의 장기 발현을 초래한다. 또한, 많은 상이한 세포 유형과 표적 조직에서 높은 형질도입 효율이 관찰되었다.
레트로바이러스의 향성은 외래 외피 단백질을 혼입함으로써 변경될 수 있으며, 표적 세포의 잠재적인 표적 집단을 확장할 수 있다. 렌티바이러스 벡터는, 비분할 세포를 형질도입하거나 감염시킬 수 있고 일반적으로 높은 바이러스 역가를 생성할 수 있는 레트로바이러스 벡터이다. 따라서 레트로바이러스 유전자 전달 시스템의 선택은 표적 조직에 따라 달라진다. 레트로바이러스 벡터는 최대 6 내지 10kb의 외래 서열에 대한 패키징 용량을 갖는 시스-작용 긴 말단 반복으로 구성된다. 최소 시스-작용 LTR은 벡터의 복제 및 패키징에 충분하고, 이는 이후 영구적인 이식유전자 발현을 제공하기 위해 치료 유전자를 표적 세포 내로 통합하기 위해 사용된다. 널리 사용되는 레트로바이러스 벡터는 쥣과 백혈병 바이러스(MuLV), 긴팔원숭이 백혈병 바이러스(GaLV), 유인원 면역 결핍 바이러스(SIV), 인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 및 이들의 조합에 기반한 것을 포함한다(예를 들어 Buchscher 등, J. Virol. 66:2731-2739 (1992); Johann 등, J. Virol. 66:1635-1640 (1992); Sommnerfelt 등, Virol. 176:58-59 (1990); Wilson 등, J. Virol. 63:2374-2378 (1989); Miller 등, J. Virol. 65:2220-2224 (1991); PCT/US94/05700 참조).
레트로바이러스 벡터, 특히 렌티바이러스 벡터는 표적 세포 내로 효율적인 통합을 위해 주어진 길이보다 작은 폴리뉴클레오티드 서열을 필요로 할 수 있다. 예를 들어, 9kb보다 큰 길이의 레트로바이러스 벡터는 더 작은 길이의 레트로바이러스 벡터에 비해 낮은 바이러스 역가를 초래할 수 있다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 개시된 Cas9 포함)은 레트로바이러스 벡터를 통한 표적 세포 내로 효율적인 패키징 및 전달이 가능하도록 하는 충분한 크기를 가진다. 일부 경우에 Cas9는 가이드 핵산 및/또는 표적화 가능한 뉴클레아제 시스템의 다른 구성요소와 함께 발현될 때에도 효율적인 패키징 및 전달을 허용하도록 하는 크기를 가진다.
일시적 발현이 바람직한 적용분야에서 아데노바이러스 기반 시스템이 사용될 수 있다. 아데노바이러스 기반 벡터는 많은 세포 유형에서 매우 높은 형질도입 효율을 가질 수 있고, 세포 분열을 필요로 하지 않는다. 이러한 벡터를 사용하면 높은 역가와 발현 수준이 얻어졌다. 이 벡터는 비교적 단순한 시스템에서 다량으로 생산될 수 있다. 또한 아데노 연관 바이러스("AAV") 벡터가 사용되어, 예를 들어 핵산 및 펩티드의 시험관내 생산을 위해 그리고 생체내 및 생체외 유전자 치료 절차를 위해 표적 핵산으로 세포를 형질도입할 수 있다(예를 들어, West 등, Virology 160:38-47 (1987); 미국 특허 제4,797,368호; WO 93/24641호; Kotin, Human Gene Therapy 5:793-801 (1994); Muzyczka, J. Clin. Invest. 94:1351 (1994) 참조. 재조합 AAV 벡터의 작제는 미국 특허 제5,173,414호; Tratschin 등, Mol. Cell. Biol. 5:3251-3260 (1985); Tratschin, 등, Mol. Cell. Biol. 4:2072-2081 (1984); Hermonat & Muzyczka, PNAS 81:6466-6470 (1984); 및 Samulski 등, J. Virol. 63:03822-3828 (1989)을 포함하여 다수의 출판물에 기술되어 있다.
따라서 본원에 기술된 CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 개시된 Cas9 포함)은 바이러스 벡터와 함께 전달될 수 있다. 염기 편집기 시스템의 하나 이상의 구성 요소는 하나 이상의 바이러스 벡터 상에서 암호화될 수 있다. 예를 들어, 염기 편집기와 가이드 핵산은 단일 바이러스 벡터 상에서 암호화될 수 있다. 다른 경우에 염기 편집기와 가이드 핵산이 상이한 바이러스 벡터 상에서 암호화된다. 어느 한 경우에, 염기 편집기 및 가이드 핵산은 각각 프로모터 및 터미네이터에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
바이러스 벡터 상에서 암호화되는 구성요소의 조합은 선택된 바이러스 벡터의 운반대상(cargo) 크기 제약에 의해 결정될 수 있다.
염기 편집기의 비바이러스 전달
CRISPR에 대한 비바이러스 전달 접근법도 사용할 수 있다. 비바이러스 핵산 벡터의 하나의 중요한 범주는 유기 또는 무기일 수 있는 나노입자이다. 나노입자는 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 적합한 나노입자 설계를 사용하여 게놈 편집 시스템 구성요소 또는 이러한 구성요소를 암호화하는 핵산을 전달할 수 있다. 예를 들어, 유기(예를 들어, 지질 및/또는 중합체) 나노입자는 본 개시내용의 특정 구현예에서 전달 비히클로서 사용하기에 적합할 수 있다. 나노입자 제형 및/또는 유전자 전달에 사용하기 위한 예시적인 지질은 표 5(아래)에 나와 있다.
표 5
표 6에는 유전자 전달 및/또는 나노입자 제형에 사용하기 위한 예시적인 중합체가 열거되어 있다.
표 6
표 7은 본원에 기술된 Cas9를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 대한 전달 방법을 요약한다.
표 7
또 다른 측면에서, 게놈 편집 시스템 구성요소 또는 이러한 구성요소를 암호화하는 핵산, 예를 들어 생물학적 활성을 갖는 폴리펩티드(예를 들어 핵염기 편집기)에 선택적으로 융합되는 Cas9 또는 이의 변이체와 같은 핵산 결합 단백질, 및 관심 게놈 핵산 서열을 표적으로 하는 gRNA의 전달은 리보핵단백질(RNP)을 세포에 전달함으로써 달성될 수 있다. RNP는 표적으로 하는 gRNA와 복합체를 형성하는 핵산 결합 단백질, 예를 들어 Cas9를 포함한다. RNP는 공지 방법, 예컨대 전기영동천공, 핵감염 또는 예를 들어 Zuris, J.A. 등, 2015, Nat. Biotechnology, 33(1):73-8에 보고된 바와 같은 양이온성 지질-매개 방법을 사용하여 세포에 전달될 수 있다. RNP는 CRISPR 염기 편집 시스템에서 사용하기에, 특히 일차 세포와 같이 형질감염이 어려운 세포에 유리한다. 또한, RNP는 특히 CRISPR 플라스미드에 사용될 수 있는 진핵생물 프로모터, 예를들어 CMV 또는 EF1A가 잘 발현되지 않을 때 세포 내 단백질 발현에서 발생할 수 있는 어려움을 완화시킬 수도 있다. 유리하게, RNP의 사용은 외래 DNA를 세포 내로 전달할 것을 요구하지 않는다. 더욱이, 핵산 결합 단백질과 gRNA 복합체를 포함하는 RNP는 시간이 지남에 따라 열화되기 때문에 RNP 사용에는 표적외 효과를 제한할 가능성이 있다. 플라스미드 기반 기술과 유사한 방식으로 RNP를 사용하여 결합 단백질(예: Cas9 변이체)을 전달하고 상동성 기반 복구(HDR)를 지시할 수 있다.
CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 기술된 Cas9 포함)을 구동시키기 위해 사용되는 프로모터는 AAV ITR을 포함할 수 있다. 이는 벡터에서 공간을 차지할 수 있는 추가 프로모터 요소를 필요로 하지 않기 때문에 유리할 수 있다. 추가적인 여유 공간은 가이드 핵산 또는 선택 가능한 마커와 같은 추가적인 요소의 발현을 구동하기 위해 사용될 수 있다. ITR 활성은 상대적으로 약하므로, 이는 선택된 뉴클레아제의 과발현으로 인한 잠재적 독성을 낮추기 위해 사용될 수 있다.
임의의 적합한 프로모터를 사용하여 Cas9 및 적절한 경우 가이드 핵산의 발현을 구동시킬 수 있다. 유비쿼터스 발현의 경우, 사용될 수 있는 프로모터는 CMV, CAG, CBh, PGK, SV40, 페리틴 중쇄 또는 경쇄 등을 포함한다. 뇌 또는 기타 CNS 세포 발현의 경우, 적합한 프로모터는 다음을 포함할 수 있다: 모든 뉴런의 경우 시냅신1, 흥분성 뉴런의 경우 CaMKII알파, GABA성 뉴런의 경우 GAD67 또는 GAD65 또는 VGAT 등을 포함할 수 있다. 간 세포 발현의 경우, 적합한 프로모터는 알부민 프로모터를 포함한다. 폐 세포 발현의 경우, 적합한 프로모터는 SP-B를 포함할 수 있다. 내피 세포의 경우, 적합한 프로모터는 ICAM을 포함할 수 있다. 조혈 세포의 경우, 적합한 프로모터는 IFN베타 또는 CD45를 포함할 수 있다. 조골세포의 경우, 적합한 프로모터는 OG-2를 포함할 수 있다.
일부 경우에, 본 개시내용의 Cas9는 별개의 프로모터가 동일 핵산 분자 내에서 염기 편집기 및 상용가능한 가이드 핵산의 발현을 구동할 수 있도록 하는 충분히 작은 크기를 가진다. 예를 들어, 벡터 또는 바이러스 벡터는 염기 편집기를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 프로모터 및 가이드 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 프로모터를 포함할 수 있다.
가이드 핵산의 발현을 구동시키기 위해 사용되는 프로모터는 다음을 포함할 수 있다: U6와 같은 Pol III 프로모터 또는 Pol II 프로모터의 HI Use 및 gRNA 아데노 연관 바이러스(AAV)를 발현시키기 위한 인트론 카세트.
1개 이상의 가이드 핵산이 있거나 없는 본원에 기술된 Cas9는 아데노 연관 바이러스(AAV), 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 기타 플라스미드 또는 바이러스 벡터 유형을 사용하여, 특히 예를 들어 미국 특허 제8,454,972호(아데노바이러스에 대한 제형, 용량), 미국 특허 제8,404,658호(AAV에 대한 제형, 용량) 및 미국 특허 제5,846,946호(DNA 플라스미드에 대한 제형, 용량) 및 렌티바이러스, AAV 및 아데노바이러스를 수반하는 임상 시험 및 상기 임상 시험에 관한 출판물의 제형 및 용량을 사용하여 전달될 수 있다. 예를 들어, AAV의 경우 투여 경로, 제형 및 용량은 미국 특허 제8,454,972호 및 AAV를 수반하는 임상 시험에서와 같을 수 있다. 아데노바이러스의 경우, 투여 경로, 제형 및 용량은 미국 특허 제8,404,658호 및 아데노바이러스를 수반하는 임상 시험에서와 같을 수 있다. 플라스미드 전달의 경우, 투여 경로, 제형 및 용량은 미국 특허 제5,846,946호 및 플라스미드를 수반하는 임상 시험에서와 같을 수 있다. 용량은 평균 70kg 개체(성인 남성 인간)을 기준으로 하거나 이에 따라 추정될 수 있고, 상이한 체중 및 종의 환자, 대상체, 포유동물에 대해 조정될 수 있다. 투여 빈도는 연령, 성별, 전반적인 건강 상태, 환자 또는 대상체의 기타 병태, 및 해결되는 구체적인 병태 또는 증상을 포함한 일반적인 요인에 따라 의료 또는 가축병 담당자(예: 의사, 수의사)의 범위 내에 있다. 바이러스 벡터는 관심 조직에 주사될 수 있다. 세포-유형 특이적 염기 편집의 경우, 염기 편집기 및 선택적 가이드 핵산의 발현은 세포-유형 특이적 프로모터에 의해 구동될 수 있다.
생체내 전달의 경우, AAV는 다른 바이러스 벡터보다 유리할 수 있다. 일부 경우에 AAV가 낮은 독성을 허용하는데, 이는 면역 반응을 활성화시킬 수 있는 세포 입자의 초원심분리를 필요로 하지 않는 정제 방법 때문일 수 있다. 일부 경우에, AAV가 숙주 게놈 내로 통합되지 않기 때문에 삽입 돌연변이를 유발할 낮은 가능성을 가질 수 있다.
AAV는 4.5 또는 4.75Kb의 패키징 제한을 가진다. 4.5 또는 4.75Kb보다 큰 작제물은 유의하게 낮아진 바이러스 생성을 이끌 수 있다. 예를 들어 SpCas9는 상당히 크고 유전자 자체가 4.1Kb를 초과하므로 AAV 내로 채워지기가 어렵다. 따라서, 본 개시내용의 구현예는 종래의 Cas9보다 더 짧은 길이를 가지는 개시된 Cas9를 활용하는 것을 포함한다.
AAV는 AAV1, AAV2, AAV5 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 표적으로 될 세포와 관련하여 AAV 유형을 선택할 수 있다: 예를 들어, 뇌 또는 신경 세포를 표적으로 하기 위해 AAV 혈청형 1, 2, 5 또는 혼성 캡시드 AAV1, AAV2, AAV5 또는 이들의 임의의 조합을 선택할 수 있고; 심장 조직을 표적으로 하기 위해 AAV4를 선택할 수 있다. AAV8은 간으로의 전달에 유용한다. 이들 세포에 관한 특정 AAV 혈청형의 도표는 Grimm, D. 등, J. Virol. 82: 5887-5911 (2008))에서 찾을 수 있다.
렌티바이러스는 유사분열 및 유사분열 후 세포 모두에서 유전자를 감염시키고 발현시키는 능력을 가지는 복합 레트로바이러스이다. 가장 흔히 알려진 렌티바이러스는 인간 면역결핍 바이러스(HIV)로, 이는 다른 바이러스의 외피 당단백질을 사용하여 광범위한 세포 유형을 표적으로 한다.
렌티바이러스는 다음과 같이 제조될 수 있다. pCasES10(렌티바이러스 전달 플라스미드 골격을 함유함)을 클로닝한 후, 낮은 계대(p=5)의 HEK293FT를 T-75 플라스크에서 10% 소 태아 혈청이 있고 항생제가 없는 DMEM에 형질감염 전날 50% 컨플루언스까지 씨딩했다. 20시간 후, 배지를 OptiMEM(무혈청) 배지로 교체하고 4시간 후에 형질감염을 수행했다. 세포는 10μg의 렌티바이러스 전달 플라스미드(pCasES10) 및 다음 패키징 플라스미드로 형질감염된다: 5μg의 pMD2.G(VSV-g 슈도타입) 및 7.5μg의 psPAX2(gag/pol/rev/tat). 형질감염은 양이온성 지질 전달제(50μl의 리포펙타민 2000 및 100ul 플러스 시약)가 있는 4mL OptiMEM에서 수행할 수 있다. 6시간 후, 배지를 10% 소 태아 혈청이 있는 무항생제 DMEM으로 교체한다. 이들 방법은 세포 배양 동안에 혈청을 사용하지만, 무혈청 방법이 바람직하다.
렌티바이러스는 다음과 같이 정제될 수 있다. 48시간 후에 바이러스 상등액이 수확된다. 먼저 상등액에서 잔해물을 제거하고 0.45μm 저단백질 결합(PVDF) 필터를 통해 여과한다. 그 다음, 이들은 초원심분리기에서 24,000rpm으로 2시간 동안 회전된다. 바이러스 펠릿을 4℃에서 하룻밤 동안 50μl의 DMEM에 재현탁한다. 그 다음, 이를 분취하고 즉시 -80℃에서 냉동한다.
또 다른 구현예에서, 말 감염성 빈혈 바이러스(EIAV)에 기반한 최소 비영장류 렌티바이러스 벡터도 고려된다. 또 다른 구현예에서, 망막하 주사를 통해 전달될 것으로 고려되는, 혈관신생억제 단백질 엔도스타틴 및 안지오스타틴을 발현하는 말 감염성 빈혈 바이러스 기반 렌티바이러스 유전자 요법 벡터인 RetinoStat®. 또 다른 구현예에서, 자가-불활성화 렌티바이러스 벡터의 사용이 고려된다.
시스템의 임의의 RNA, 예를 들어 가이드 RNA 또는 Cas9-암호화 mRNA는 RNA 형태로 전달될 수 있다. Cas9 암호화 mRNA는 시험관내 전사를 사용하여 발생될 수 있다. 예를 들어, Cas9 mRNA는 다음 요소를 함유하는 PCR 카세트를 사용하여 합성될 수 있다: T7 프로모터, 선택적 코작(kozak) 서열(GCCACC), 뉴클레아제 서열 및 3' UTR, 예컨대 베타 글로빈-폴리A 꼬리의 3' UTR. 카세트는 T7 폴리머라제에 의한 전사를 위해 사용될 수 있다. 가이드 폴리뉴클레오티드(예를 들어, gRNA)는 또한 T7 프로모터, 이어서 서열 "GG" 및 가이드 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 카세트로부터 시험관내 전사를 사용하여 전사될 수 있다.
발현을 증강시키고 독성 가능성을 낮추기 위해 Cas9 서열 및/또는 가이드 핵산은 예를 들어 슈도-U 또는 5-메틸-C를 사용하여 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드를 포함하도록 변형될 수 있다.
일부 구현예의 개시내용은 세포 또는 유기체를 변형시키는 방법을 이해한다. 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 세포는 포유동물 세포일 수 있다. 포유동물 세포는 인간이 아닌 영장류, 소, 돼지, 설치류 또는 마우스 세포일 수 있다. 본 개시내용의 염기 편집기, 조성물 및 방법에 의해 세포에 도입되는 변형은 항체, 전분, 알코올 또는 기타 원하는 세포 배출물과 같은 생물학적 생성물의 향상된 생산을 위해 세포 및 세포 자손이 변경되도록 하는 것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 의해 세포에 도입되는 변형은 생산된 생물학적 생성물을 변화시키는 변경을 세포 및 세포 자손이 포함하도록 하는 것일 수 있다.
시스템은 하나 이상의 상이한 벡터를 포함할 수 있다. 일 측면에서, Cas9는 원하는 세포 유형, 우선적으로는 진핵 세포, 바람직하게는 포유동물 세포 또는 인간 세포에서 발현되도록 코돈 최적화된다.
일반적으로, 코돈 최적화는 천연 서열의 적어도 1개의 코돈(예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50개 이상의 코돈)을, 천연 아미노산 서열을 유지하면서 해당 숙주 세포의 유전자에서 더 빈번하게 또는 가장 빈번하게 사용되는 코돈으로 대체함으로써 관심 숙주 세포에서의 증강된 발현을 위해 핵산 서열을 변형시키는 프로세스를 의미한다. 다양한 종은 특정 아미노산의 일부 코돈에 대해 특정 편향을 나타낸다. 코돈 편향(유기체 간의 코돈 용도의 차이)은 특히 번역되는 코돈의 특성 및 특정 전달 RNA(tRNA) 분자의 가용성에 따라 달라지는 것으로 생각되는 메신저 RNA(mRNA)의 번역 효율성과 종종 관련된다. 세포에서 선택된 tRNA의 우세는 일반적으로 펩티드 합성에서 가장 빈번하게 사용되는 코돈을 반영한 것이다. 따라서, 유전자는 코돈 최적화에 기반하여 주어진 유기체에서 최적의 유전자 발현을 위해 맞춤형으로 될 수 있다. 코돈 용도 표는 예를 들어 www.kazusa.orjp/codon/(2002년 7월 9일 방문)에서 입수 가능한 "코돈 용도 데이터베이스(Codon Usage Database)"에서 쉽게 입수 가능할 수 있으며, 이들 표는 다양한 방식으로 각색될 수 있다. Nakamura, Y., 등 "Codon usage tabulated from the international DNA sequence databases: status for the year 2000" Nucl. Acids Res. 28:292 (2000) 참조. 특정 숙주 세포에서 발현을 위해 특정 서열을 코돈 최적화하기 위한 컴퓨터 알고리즘, 예를 들어 Gene Forge(Aptagen; Jacobus, PA)도 입수 가능한다. 일부 구현예에서, 조작된 뉴클레아제를 암호화하는 서열에서의 1개 이상의 코돈(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50개 이상 또는 모든 코돈)은 특정 아미노산에 대해 가장 빈번하게 사용되는 코돈에 해당한다.
패키징 세포는 일반적으로 숙주 세포를 감염시킬 수 있는 바이러스 입자를 형성하기 위해 사용된다. 이러한 세포는 아데노바이러스를 패키징하는 293 세포, 및 레트로바이러스를 패키징하는 psi.2 세포 또는 PA317 세포를 포함한다. 유전자 요법에 사용되는 바이러스 벡터는 일반적으로 핵산 벡터를 바이러스 입자 내로 패키징하는 세포주를 생성시킴으로써 발생된다. 벡터는 일반적으로 패키징 및 후속적인 숙주 내로의 통합에 필요한 최소 바이러스 서열을 함유하며, 다른 바이러스 서열은 발현될 폴리뉴클레오티드(들)를 위한 발현 카세트로 대체된다. 누락된 바이러스 기능은 일반적으로 패키징 세포주에 의해 트랜스에서 공급된다. 예를 들어, 유전자 요법에서 사용되는 AAV 벡터는 일반적으로 패키징 및 숙주 게놈 내로의 통합에 필요한 AAV 게놈으로부터의 ITR 서열만을 보유한다. 바이러스 DNA는 다른 AAV 유전자를 암호화하는 헬퍼 플라스미드, 즉 rep 및 cap을 함유하지만 ITR 서열은 결여된 세포주에 패키징될 수 있다. 세포주는 헬퍼로서 아데노바이러스에 의해 감염될 수도 있다. 헬퍼 바이러스는 AAV 벡터의 복제와 헬퍼 플라스미드로부터 AAV 유전자 발현을 촉진할 수 있다. 일부 경우에서 헬퍼 플라스미드는 ITR 서열 결여로 인해 상당한 양으로 패키징되지 않는다. 아데노바이러스에 의한 오염은 예를 들어 열처리에 의해 낮아질 수 있으며, 아데노바이러스는 AAV보다 열처리에 더 민감하다.
약제학적 조성물
본 개시내용의 다른 측면은 CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 개시된 Cas9 포함)을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 사용될 때 용어 "약제학적 조성물"은 약제학적 용도로 제형화된 조성물을 의미한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 추가적인 작용제(예를 들어, 특이적 전달용, 반감기 증가 또는 기타 요법적 화합물)를 포함한다.
본원에서 사용될 때 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약제학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제조 보조제(예: 윤활제, 활석 마그네슘, 칼슘 또는 아연 스테아레이트 또는 스테아르산), 또는 신체의 한 부위(예: 전달 부위)에서 다른 부위(예: 신체의 기관, 조직 또는 일부)로 화합물을 운반하거나 수송하는 데 관여하는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 제형의 다른 성분과 상용성이 있고 대상체의 조직에 해를 가하지 않는다는 의미에서 "허용 가능"하다(예를 들어, 생리학적으로 상용성, 무균성, 생리학적 pH 등).
약제학적으로 허용 가능한 담체로서 작용할 수 있는 물질의 일부 비제한적인 예는 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토오스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카복시메틸 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; (4) 분말 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트 및 활석; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대 낙화생유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG); (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 마그네슘 하이드록사이드 및 알루미늄 하이드록사이드; (15) 알긴산; (16) 발열원이 없는 물; (17) 등장성 식염수; (18) 링거 용액; (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카보네이트 및/또는 폴리무수물; (22) 증량제, 예컨대 폴리펩티드 및 아미노산 (23) 혈청 알코올, 예컨대 에탄올; 및 (23) 약제학적 제형에 이용되는 기타 무독성 상용성 물질. 습윤제, 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제, 향료, 보존제 및 항산화제도 제형에 존재할 수 있다. "부형제", "담체", "약제학적으로 허용 가능한 담체", "비히클" 등과 같은 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
약제학적 조성물은 약 5.0 내지 약 8.0 범위와 같은 생리학적 pH를 반영하는 사전 결정된 수준에서 제형의 pH를 유지하기 위해 하나 이상의 pH 완충 화합물을 포함할 수 있다. 수성 액체 제형에 사용되는 pH 완충 화합물은 아미노산 또는 아미노산 혼합물, 예컨대 히스티딘 또는 히스티딘과 글리신과 같은 아미노산의 혼합물일 수 있다. 대안적으로, pH 완충 화합물은 바람직하게는 제형의 pH를 사전 결정된 수준, 예컨대 약 5.0 내지 약 8.0 범위로 유지하고 칼슘 이온을 킬레이트화하지 않는 제형이다. 이러한 pH 완충 화합물의 예시적인 예는 이미다졸 및 아세테이트 이온을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. pH 완충 화합물은 제형의 pH를 사전 결정된 수준으로 유지하기 위해 적합한 임의의 양으로 존재할 수 있다.
또한 약제학적 조성물은 하나 이상의 삼투성 조절제, 즉 제형의 삼투 특성(예를 들어 긴장성, 삼투질농도 및/또는 삼투압)을 수령자 개체의 혈류 및 혈액 세포에 허용 가능한 수준으로 조절하는 화합물을 함유할 수 있다. 삼투성 조절제는 칼슘 이온을 킬레이트화하지 않는 작용제일 수 있다. 삼투성 조절제는 제형의 삼투 특성을 조절하는, 당업자에게 알려져 있거나 이용가능한 임의의 화합물일 수 있다. 당업자는 본 발명의 제형에 사용하기 위한 주어진 삼투성 조절제의 적합성을 실증적으로 결정할 수 있다. 삼투성 조절제의 적합한 유형의 예시적인 예는 다음을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다: 염, 예컨대 염화나트륨 및 아세트산나트륨; 당, 수크로스, 덱스트로스 및 만니톨; 아미노산, 예컨대 글리신; 및 이들 작용제 및/또는 작용제 유형의 하나 이상의 혼합물. 삼투성 조절제(들)는 제형의 삼투 특성을 조절하기에 충분한 임의의 농도로 존재할 수 있다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 예를 들어 유전자 편집을 위해 대상체에게 전달하기 위해 제형화된다. 본원에 기술된 약제학적 조성물을 투여하는 적합한 경로는 국소, 피하, 경피, 피내, 병변내, 관절내, 복강내, 방광내, 점막경유, 치은, 치아내, 와우내, 고막경유, 기관내, 경막외, 척수강내, 근육내, 정맥내, 혈관내, 골내, 눈주위, 종양내, 뇌내 및 뇌실내 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 질병이 있는 부위에 국소 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 주사에 의해, 카테터에 의해, 좌제에 의해 또는 다공성, 비다공성 또는 젤라틴성 물질로 이루어지고 실라스틱 멤브레인과 같은 멤브레인 또는 섬유를 포함하는 임플란트에 의해 대상체에게 투여된다.
다른 구현예에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 방출 조절 시스템으로 전달된다. 일 구현예에서, 펌프가 사용될 수 있다(예를 들어, Langer, 1990, Science 249: 1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald 등, 1980, Surgery 88:507; Saudek 등, 1989, N. Engl. J. Med. 321:574 참조). 또 다른 구현예에서는 중합체 물질이 사용될 수 있다. (예를 들어, Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 참조. 또한 Levy 등, 1985, Science 228: 190; During 등, 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et ah, 1989, J. Neurosurg. 71: 105 참조.) 다른 방출 조절 시스템은 예를 들어 전술한 Langer에서 검토된다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 대상체, 예를 들어 인간에게 정맥내 또는 피하 투여하도록 적합화된 조성물로서 통상적인 절차에 따라 제형화된다. 일부 구현예에서, 주사 투여를 위한 약제학적 조성물은 가용화제 및 주사 부위의 통증을 완화시키는 리그노카인과 같은 국소마취제로서 무균 등장성으로 사용되는 용액이다. 일반적으로, 성분은 개별적으로 공급되거나 단위 투여 형태로 혼합되어, 예를 들어 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 봉지와 같이 완전 밀봉 용기에 담긴 건조 동결건조 분말 또는 물이 없는 농축물로서 공급된다. 약제가 주입에 의해 투여되는 경우, 무균의 의약품 등급 물이나 식염수를 함유하는 주입병(infusion bottle)과 함께 제공될 수 있다. 약제학적 조성물이 주사로 투여되는 경우, 투여 전에 성분이 혼합될 수 있도록 무균 주사용수 또는 식염수의 앰플이 제공될 수 있다.
전신 투여를 위한 약제학적 조성물은 액체, 예를 들어 무균 식염수, 젖산 링거액 또는 행크액일 수 있다. 또한, 약제학적 조성물은 고체 형태일 수 있으며, 사용 직전에 재용해되거나 현탁될 수 있다. 동결건조된 형태도 고려된다. 약제학적 조성물은 비경구 투여에도 적합한 리포솜 또는 미세결정과 같이 지질 입자 또는 소포 내에 함유될 수 있다. 조성물이 입자 내에 함유되어 있는 한, 입자는 단층 또는 다층과 같은 임의의 적합한 구조일 수 있다. 화합물은, 융합성 지질 디올레오일포스파티딜에탄올아민(DOPE), 낮은 수준(5 내지 10mol%)의 양이온성 지질을 함유하고 폴리에틸렌글리콜(PEG) 코팅에 의해 안정화되는 "안정화된 플라스미드-지질 입자"(SPLP)에 포획될 수 있다(Zhang Y. P. et ah, Gene Ther. 1999, 6: 1438-47). N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄메틸설페이트 또는 "DOTAP"와 같은 양으로 하전된 지질이 이러한 입자 및 소포에 특히 바람직하다. 이러한 지질 입자의 제조는 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,880,635호; 제4,906,477호; 제4,911,928호; 제4,917,951호; 제4,920,016호; 및 제4,921,757호를 참고하고, 이들 각각은 본원에 참고로 통합된다.
본원에 기술된 약제학적 조성물은 예를 들어 단위 용량으로 투여되거나 포장될 수 있다. 본 개시내용의 약제학적 조성물과 관련하여 사용될 때 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로 적합하게 물리적으로 구분된 단위를 의미하며, 각 단위는 필요한 희석제; 즉, 담체 또는 비히클과 연관되어 원하는 치료 효과를 생성시키도록 계산된 사전 결정된 양의 활성 물질을 함유한다.
추가로, 약제학적 조성물은 (a) 동결건조 형태의 본 발명의 화합물을 함유하는 용기 및 (b) (본 발명의 동결건조 화합물의 재구성 또는 희석을 위해 사용되는 무균의) 약제학적으로 허용 가능한 희석제를 함유하는 제2 용기를 포함하는 약제학적 키트로 제공될 수 있다. 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 규정한 양식의 안내문이 이러한 용기(들)과 선택적으로 연관될 수 있고, 이 안내문은 인간 투여용의 제조, 사용 또는 판매에 대한 기관 승인을 반영한다.
또 다른 측면에서, 상기에 기술된 질병 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 포함된다. 일부 구현예에서, 제조 물품은 용기와 라벨을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기 및 시험관을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 본원에 기술된 질병을 치료하는 데 효과적인 조성물을 보유하고, 무균 접근 포트를 가질 수 있다. 예를 들어, 용기는 정맥 주사액 백 또는 피하 주사 바늘이 관통될 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있다. 조성물 중 활성제는 본 발명의 화합물이다. 일부 구현예에서, 용기 상에 있거나 용기와 연관된 라벨은 조성물이 선택된 질병을 치료하기 위해 사용됨을 나타낸다. 제조 물품은 인산염 완충 식염수, 링거액 또는 덱스트로스 용액과 같이 약제학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 사용 설명서가 있는 포장 인서트를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, CRISPR 시스템(예를 들어, 본원에 기술된 Cas9 포함)은 약제학적 조성물의 일부로서 제공된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 제공된 임의의 융합 단백질(예를 들어, LubCas9를 포함하는 본원에 기술된 핵염기 편집기 포함)을 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 제공된 임의의 복합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 gRNA 및 양이온성 지질과의 복합체를 형성하는 RNA-가이드 뉴클레아제(예를 들어, Cas9)를 포함하는 리보핵단백질 복합체를 포함한다. 일부 구현예에서 약제학적 조성물은 gRNA, 핵산 프로그래밍 가능한 DNA 결합 단백질, 양이온성 지질 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료적 활성 서브스턴스를 선택적으로 포함할 수 있다.
키트
일 측면에서, 본 발명은 상기 방법 및 조성물에 개시된 요소 중 임의의 하나 이상을 함유하는 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 벡터 시스템 및 키트 사용을 위한 설명서를 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터 시스템은 가이드 서열을 삽입하기 위한 하나 이상의 삽입 부위를 포함하며, 상기 가이드 서열은 발현될 때 진핵 세포의 표적 서열에 대하여 CRISPR 복합체의 서열-특이적 결합을 지시하고, 상기 CRISPR 복합체는 (1) 표적 서열에 혼성화된 가이드 서열 및 (2) tracr 서열에 혼성화되는 서열과 복합체를 형성하는 CRISPR 효소; 및/또는 (b) 핵 위치 서열을 포함하는 상기 CRISPR 효소를 암호화하는 효소-암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 제2 조절 요소를 포함한다. 요소는 개별적으로 또는 조합하여 제공될 수 있으며, 바이알, 병 또는 튜브와 같은 임의의 적합한 용기에서 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 하나 이상의 언어, 예를 들어 1개 초과의 언어로 작성된 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 핵염기 편집기를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 키트는 본원에 기술된 Cas9 효소(ScoCas9, SirCas9, VapCas9, EpeCas9, LfeCas9, PmaCas9)를 포함하는 핵염기 편집기를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 본원에 기술된 요소 중 하나 이상을 활용하는 프로세스에서 사용하기 위한 하나 이상의 시약을 포함한다. 시약은 임의의 적합한 용기에 제공될 수 있다. 예를 들어, 키트는 하나 이상의 반응 또는 저장 완충제를 제공할 수 있다. 시약은 특정 분석에 사용할 수 있는 형태로 또는 사용 전에 하나 이상의 다른 구성성분의 추가를 필요로 하는 형태(예: 농축물 또는 동결건조 형태)로 제공될 수 있다. 완충제는 탄산나트륨 완충제, 중탄산나트륨 완충제, 붕산염 완충제, 트리스 완충제, MOPS 완충제, HEPES 완충제 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 국한되지 않는 임의의 완충제일 수 있다. 일부 구현예에서, 완충제는 알칼리성이다. 일부 구현예에서, 완충제는 약 7 내지 약 10의 pH를 가진다. 일부 구현예에서, 키트는 가이드 서열과 조절 요소를 작동 가능하게 연결하기 위해 벡터 내로 삽입하기 위한 가이드 서열에 상응하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 상동성 재조합 주형 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본원에 언급된 모든 출판물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고 문헌은 전체적으로 참고로 통합된다. 또한, 물질, 방법 및 실시예는 예시일 뿐이고 제한하려는 의도는 아니다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 테스트에서 사용될 수 있으며, 적합한 방법 및 물질이 본원에 기술되어 있다.
실시예
다음 실시예는 본 발명을 제조하고 실시하는 바람직한 방식 중 일부를 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 단지 예시를 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아닌 것으로 이해되어야 한다.
실시예 1. 신규 Cas9 효소 스크리닝, 신규 Cas9 효소의 발견 및 최적화
이 실시예는 신규 Cas9 효소를 발견하기 위한 스크리닝을 기술한다. 본원에 기술된 바와 같이, 이 스크리닝을 사용하여 스트렙토코커스 콘스텔라투스, 샤르페아 spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라, 에자키엘라 페루엔시스, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 박테리아 유래의 신규 Cas9 효소를 단리하고 최적화하였다.
신규 PAM 서열을 인식하는 신규 Cas9 효소를 발견하기 위한 검색에서 생물정보학 스크리닝을 사용하여 추가 효소를 검색하여서 CRISPR 표적 범위를 확장하였다. 스크리닝은 S. 파오게네스, S. 아우레우스, S. 써모필러스 및 F. 노비시다의 Cas9의 씨드 서열을 활용했다. BLAST 적중(hit)을 고려하기 위해 e-값 임계값이 le-6인 BLAST의 tblastn 변형을 사용하여 생물정보학을 수행했다. 즉, 테스트를 위해 선택된 유전자좌는 다른 종의 Cas9 단백질의 존재 하에서 완전하게 유지되는 유전자좌이었다. CRISPR 어레이 내에 3개보다 많은 스페이서를 갖고 Cas9의 1kb 내인성 서열 5'보다 크고 CRISPR 어레이의 300nt 3'보다 큰 유전자좌를 선택하였다. 이 접근법을 사용하여, 신규 Cas 효소는 인간 세포에서 발현되도록 최적화된 코돈 및 상이한 박테리아 종으로부터 식별하였다. 그 다음, 신규 조작된 Cas9 효소를 재조합에 의해 생성하였고 테스트하였다.
실시예 2. 스트렙토코커스 콘스텔라투스, 샤르페아 spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라, 에자키엘라 페루엔시스, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 박테리아 유래 신규 Cas9 효소에 대한 3'PAM 공통 모티프 식별
이 실시예는 스트렙토코커스 콘스텔라투스, 샤르페아 spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라, 에자키엘라 페루엔시스, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 균주로부터 최초 단리된 인간 코돈-최적화된 Cas9에 대한 프로토스페이서 인접 모티프(PAM) 서열의 식별을 예시한다.
시험관내 PAM 식별 분석을 사용하여 PAM 서열 인식에 대해 인간 코돈-최적화된 Cas9를 테스트하였다. 무작위 PAM 서열을 구비한 플라스미드 라이브러리를 상이한 박테리아에서 단리된 Cas9와 함께 항온처리했다. 절단되지 않은 플라스미드를 정제하고 서열 분석하여, 절단된 특정 PAM 모티프를 식별했다. 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NGG-3'으로 식별되었다(도 1a). 샤르페아 spp. 단리물 RUG017 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NAGHC-3'으로 식별되었다(도 1b). 베일로넬라 파르불라 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NRHRRH-3'(H=A, C 또는 T; R=A 또는 G)로 식별되었다(도 1c). 에자키엘라 페루엔시스 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NGG-3'으로 식별되었다(도 1d). 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NNAAA-3'으로 식별되었다(도 1e). 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9에 의해 인식되는 공통 PAM 서열은 5'-NGG-3'으로 식별되었다(도 1f).
실시예 3. 스트렙토코커스 콘스텔라투스, 샤르페아 spp. 단리물 RUG017, 베일로넬라 파르불라, 에자키엘라 페루엔시스, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB 및 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 박테리아 유래 신규 Cas9 효소에 대한 sgRNA의 RNA 접힘 구조의 예측
이 실시예는 신규 Cas9 효소와 함께 사용하기 위한 crRNA 및 tracrRNA를 포함하는 예시적인 sgRNA의 예측된 RNA 접힘 구조를 입증한다.
Cas9 Crispr 유전자좌를 이종적으로 발현하는 대장균 균주로부터 유래된 RNA 상에서 소형 RNA 서열분석을 수행했다. 즉, 먼저 트리아졸에 대장균을 재현탁시킨 후 1분 주기로 3회 동안 균질화기에서 지르코니아/실리카 비드를 사용하여 박테리아를 균질화함으로써 정지상 박테리아로부터 RNA를 단리했다. 균질화된 샘플로부터 전체 RNA를 정제하고, DNAse를 처리하고, T4 폴리뉴클레오티드 키나제로 3' 탈인산화시키고, rRNA를 제거했다. rRNA가 고갈된 RNA로부터 RNA 라이브러리를 제조하고 소형 RNA에 대해 크기를 선택했다.
RNA 서열분석을 위해 전사체는 대장균 폴리(A) 폴리머라제 꼬리를 가진 폴리-A였으며, T4 RNA 리가제 1을 사용하여 5' RNA 어댑터와 결찰되었고, 역전사한 다음 바코드 프라이머로 cDNA를 PCR 증폭하고, MiSeq 상에서 서열분석했다. 각 샘플의 판독값은 연관된 바코드를 기반으로 식별했고, BWA를 사용하여 참조 서열에 대해 정렬시켰다. Picard 도구를 사용하여 전사체 서열을 추출하기 위해 쌍을 이룬 정렬을 사용했고, Geneious 소프트웨어를 사용하여 서열을 분석했다.
RNA 접힘은 Geneious 11.1.2 소프트웨어로부터의 예측을 기반으로 했다. 단일 sgRNA 전사체는 부위-특이적 Cas9 활성을 안내하기 위해 필요한 이중 RNA 구조를 모방하면서 crRNA를 tracrRNA에 융합시킨다. 스트렙토코커스 콘스텔라투스로부터의 ScoCas9와 함께 사용하기 위한 키메라 sgRNA에 대해 예측된 RNA 접힘 구조가 도 2a에 도시되어 있고, 샤르페아 spp. 단리물 RUG017로부터의 SirCas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA가 도 2b에 도시되어 있고, 베일로넬라 파르불라로부터의 VasCas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA가 도 2c에 도시되어 있고, 에자키엘라 페루엔시스로부터의 EpeCas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA가 도 2d에 도시되어 있고, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB로부터의 LfeCas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA가 도 2e에 도시되어 있고, 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761로부터의 PmaCas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA가 도 2f에 도시되어 있다.
실시예 4. HEK293T 세포에서 WT ScoCas9에 의한 생체외 절단 활성
이 실시예는 HEK293T 세포에서 스트렙토코커스 콘스텔라투스로부터 WT ScoCas9에 의한 생체외 핵산 절단 활성을 예시한다.
HEK293T 세포를 96웰 플레이트에 플레이팅했다. 플레이팅 후 24시간에 Cas9 및 가이드 RNA를 함유하는 발현 벡터(표 10)로 세포를 형질감염시켰다. 형질감염 후 72시간에 세포를 수확하고 전체 DNA를 추출했다.
HEK293T 세포에서 삽입결실 패턴을 특징규명하기 위해 심층 서열분석을 수행했다. 즉, Illumina 어댑터 및 표적 앰플리콘에 대한 고유 바코드를 추가하는 2회 PCR을 사용하여 예시적인 표적(표 8)을 증폭했다. PCR 산물을 2% 겔 상에서 실행하고 겔을 추출했다. 샘플을 모으고(pooled), 정량화하고, cDNA 라이브러리를 제조하고, MiSeq 상에서 서열분석했다. 삽입결실 빈도는 심층 서열분석에 의해 결정했다(도 3).
표 8. 예시적인 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
데이터는 WT ScoCas9가 2 내지 32% 삽입결실 빈도를 달성했음을 보여주었다. 가이드 RNA 2와 9는 30%를 초과하는 삽입결실 돌연변이를 초래한 반면, 가이드 RNA 11은 약 2%의 삽입결실 돌연변이를 초래했다.
실시예 5. 아데닌 염기 편집기(ABE) 또는 시티딘 염기 편집기(CBE)의 N-말단 융합 이 있는 Cas9 효소에 의한 염기 편집
이 실시예는 아데닌 염기 편집기(ABE) 또는 시티딘 염기 편집기(CBE)에 융합된 Cas9 효소의 염기 전환 효율을 예시한다.
즉, 96웰당 25,000개의 HEK293T 세포를 플레이팅했다. 100ng의 Cas9 발현 플라스미드 및 100ng의 가이드 발현 플라스미드를 플레이팅 후 24시간에 형질감염시켰다. 형질감염 후 5일에 세포를 수확하고 DNA를 추출했다.
HEK293T 세포에서 A에서 G로 전환 또는 C에서 T로 전환을 특징규명하기 위해 심층 서열분석을 수행했다. Illumina 어댑터 및 표적 앰플리콘에 대한 고유 바코드를 추가하는 2회 PCR 영역을 사용하여 예시적인 표적을 증폭했다. PCR 산물을 2% 겔 상에서 실행하고 겔을 추출했다. 샘플을 모으고, 정량화하고, cDNA 라이브러리를 제조하고, MiSeq 상에서 서열분석했다. N-말단 및 C-말단 TadA8 융합 작제물에 대한 심층 서열분석으로 A에서 G로 전환율을 결정했다. N-말단 및 C-말단 ppAPOBEC1 융합 작제물에 대한 심층 서열분석으로 C에서 T로의 전환율을 결정했다.
도 4a는 ABE 또는 CBE에 N-말단에서 융합된 ScoCas9 작제물의 개요를 보여준다. 표 9는 ScoCas9와 함께 사용되는 가이드 RNA 서열을 보여준다. 도 4b는 인간 세포주(HEK293T)에서 게놈 부위에 관한 아데닌 염기 편집기(ABE)에 대한 ScoCas9의 N-말단 융합으로 달성된 삽입결실 돌연변이 및 표적화된 아데닌에서 구아닌으로 전환율의 그래프를 보여준다(도 4b). 도 4c는 인간 세포주(HEK293T)에서 게놈 부위에 관한 시티딘 염기 편집기에 대한 ScoCas9의 N-말단 융합으로 달성된 삽입결실 돌연변이 및 표적화된 시토신에서 티민으로 전환율의 그래프를 보여준다(도 4c).
표 9. ScoCas9와 함께 사용되는 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
도 5a는 WT SirCas9뿐만 아니라 ABE에 N-말단에서 융합된 SirCas9("D14A" 돌연변이체)의 작제물의 개략도를 보여준다. 표 10은 SirCas9와 함께 사용되는 예시적인 NAGMC 가이드 RNA 서열을 보여준다. 도 5b는 인간 세포주(HEK293T)에서 게놈 부위에 관한 아데닌 염기 편집기(ABE)에 대한 SirCas9의 N-말단 융합으로 달성된 삽입결실 돌연변이 및 표적화된 아데닌에서 구아닌으로 전환율의 그래프를 보여준다(도 5b).
표 10. SirCa9와 함께 사용되는 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
도 6a는 WT VapCas9뿐만 아니라 ABE 또는 CBE에 N-말단에서 융합된 VapCas9("D38A" 돌연변이체)를 보여주는 작제물의 개략도를 보여준다. 표 11은 VapCas9와 함께 사용되는 예시적인 NRHRRH[여기서 H는 아데닌, 시토신 또는 티민이고, R은 아데닌 또는 구아닌임] 가이드 RNA 서열을 보여준다. 도 6b는 인간 세포주(HEK293T)에서 게놈 부위에 관한 아데닌 염기 편집기(ABE)에 대한 VapCas9의 N-말단 융합으로 달성된 삽입결실 돌연변이 및 표적화된 아데닌에서 구아닌으로 전환율뿐만 아니라 시티딘 염기 편집기(CBE)에 대한 VapCas9의 N-말단 융합으로 달성된 표적화된 시토신에서 티민으로 전환율의 그래프를 보여준다(도 6b).
표 11. VapCas9와 함께 사용하기 위한 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
도 7a는 VapCas9에 대한 ABE의 N-말단 융합 및 ABE의 C-말단 융합을 보여주는 작제물의 개략도를 보여준다. 도 7b는 아데닌 염기 편집기(ABE)에 대한 N-말단 융합 및 C-말단 융합으로 달성된 표적화된 아데닌에서 구아닌으로 전환율의 그래프를 보여준다.
도 8a는 EpeCas9에 대한 ABE 및 CBE의 N-말단 융합을 보여주는 작제물의 개략도를 보여준다. 표 12는 EpeCas9와 함께 사용되는 예시적인 가이드 RNA 서열을 보여준다. 도 8b는 삽입결실 돌연변이 그래프, ABE에 대한 N-말단 융합으로 달성된 표적화된 아데닌에서 티민으로 전환율 및 CBE에 대한 N-말단 융합으로 달성된 표적화된 시토신에서 티민으로 전환율의 그래프를 보여준다.
표 12. EpeCas9와 함께 사용하기 위한 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
도 9a는 WT LfeCas9 및 ABE와 CBE에 N-말단에서 융합된 LfeCas9 D9A 돌연변이체를 보여주는 작제물의 개략도를 보여준다. 표 13은 LfeCas9와 함께 사용되는 예시적인 가이드 RNA 서열을 보여준다. 도 9b는 LfeCas9를 사용하여 달성된 삽입결실 돌연변이 빈도의 결과를 보여주는 그래프를 보여준다. 도 9c는 아데닌 염기 편집기에 대한 LfeCas9의 N-말단 융합으로 달성된 표적화된 아데닌에서 구아닌으로 전환 그래프를 보여준다. 도 9d는 LfeCas9 D9A 돌연변이체의 N-말단에 융합된 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 표적화된 시토신에서 티민으로 전환 그래프를 보여준다.
표 13. LfeCas9와 함께 사용하기 위한 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
도 10a는 WT PmaCas9 및 ABE와 CBE에 N-말단과 C-말단에서 융합된 PmaCas9 D12A 돌연변이체를 보여주는 작제물의 개략도를 보여준다. 도 10b는 PmaCas9 D12A 돌연변이체의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 ABE 또는 CBE를 포함하는 염기 편집기를 사용하여 달성된 A에서 G로 또는 C에서 T로 전환 결과를 보여주는 그래프를 보여준다.
표 14. PmaCas9와 함께 사용하기 위한 가이드 RNA 서열 및 PAM 서열
표 15는 염기 편집 기능을 위한 예시적인 Cas9 아데노신 또는 아데닌 및 시토신 또는 시티딘 염기 편집기에 대한 서열을 개시한다.
표 15. 예시적인 Cas9 아데노신 또는 아데닌 및 시토신 또는 시티딘 염기 편집기의 서열
링커(밑줄, 이탤릭체나 굵은 글씨 없음)
TadA8(ABE) 또는 ppABOBECl(CBE)(이탤릭체 및 밑줄)
닉카제 돌연변이: ScoCas9에서의 D10A 돌연변이, SirCas9에서의 D14A 돌연변이, VapCas9에서의 D38A, EpeCas9에서의 D12A, LfeCas9에서의 D9A, PmaCas9에서의 D12A(굵은 글씨 및 이탤릭체) 2xUGI(굵은 글씨, 이탤릭체 및 밑줄)
3xHA 태그(이탤릭체)는 다른 태그로 대체 가능하다.
실시예 6. 조작된 스트렙토코커스 콘스텔라투스 (ScoCas9) NGC PAM 변이체
이 실시예는 NGC PAM 변이체를 인식하는 ScoCas9 변이체의 조작을 보여준다.
즉, NGC PAM 인식에 대한 아미노산 치환을 함유하는 ScoCas9-NGC-v1 및 NGC PAM 인식에 대한 아미노산 치환과 SpyCas9 활성을 증강시키는 추가 아미노산 치환을 함유하는 ScoCas9-NGC-v2라는 2가지 변이체를 조작했다. S. 피오게네스 SpyCas9와 S. 콘스텔라투스 ScoCas9 간의 구조적 비교를 통해 아미노산 잔기를 식별했다. ScoCas9-NGC-v1의 아미노산 서열(서열번호 95)은 야생형 ScoCas9 서열로부터 다음 돌연변이를 포함했다: D1117M, S118Q, E1201F, A1299R, D1309A, R1312E, T1314R. ScoCas9-NGC-v2의 아미노산 서열(서열번호 96)은 야생형 ScoCas9 서열로부터 다음 돌연변이를 포함했다: S409I, R655L, D1117M, S118Q, E1201F, A1299R, D1309A, R1312E, T1314R.
NLS(이탤릭체 굵은 글씨)
링커(밑줄있는 굵은 글씨)
렌티바이러스 매개 삽입에 의해 HEK293T 세포의 게놈 내로 무작위 통합되고 뉴클레아제 및 염기 편집 활성에 대해 테스트된 게놈 유전자좌를 표적으로 하기 위해 ScoCas9-NGC 변이체를 사용했다.
즉, HEK293T 세포를 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 플레이팅 후 24시간에 ScoCas9-NGC 변이체 및 가이드 RNA 서열 ATCGACAAGAAAGGGACTGA(서열번호 97)를 함유하는 발현 벡터로 세포를 형질감염시켰다. ScoCas9 변이체는 예시적인 NGC 3' PAM 서열인 AGC를 인식했다. 형질감염 후 72시간에 세포를 수확하고 전체 DNA를 추출했다.
HEK293T 세포 내 삽입결실 패턴을 특징규명하기 위해 심층 서열분석을 수행했다. Illumina 어댑터 및 표적 앰플리콘에 대한 고유 바코드를 추가하는 2회 PCR을 사용하여 예시적인 표적을 증폭했다. PCR 산물을 2% 겔 상에서 실행하고, 겔을 추출했다. 샘플을 모으고, 정량화하고, cDNA 라이브러리를 제조하고, MiSeq 상에서 서열분석했다. 삽입결실 빈도는 형질감염 후 4일에 심층 서열분석으로 결정했다.
결과는 ScoCas9-NGC 변이체 둘 모두의 뉴클레아제 활성을 보여주었다. ScoCas9-NGC-v1 및 ScoCas9-NGC-v2를 사용하여 약 20 내지 35%의 삽입결실 빈도를 달성했다(도 11a).
ABE 염기 편집기를 사용하여 ScoCas9-NGC 변이체의 융합이 작제되었다.
링커(밑줄있는 굵은 글씨)
TadA8(ABE)(이탤릭체)
NLS(굵은 이탤릭체)
HEK293T 세포에서 A에서 G로 전환을 특징규명하기 위해 심층 서열분석을 또한 수행했다(도 11b). 아데닌에서 구아닌으로(A에서 G로) 전환은 형질감염 후 4일에 NGS로 측정하였다. 결과는 ABE-nScoCas9-NGC 변이체 둘 모두에 의한 염기 편집 활동을 보여주었다. 변이체 둘 모두는 약 20 내지 30%의 A에서 G로 전환을 보여주었다. NGG를 인식하는 ScoCas9를 음성 대조군으로 사용했고 염기 편집을 나타내지 않았다. SpyCas9를 양성 대조군으로 사용했고 약 40%의 A에서 G로 전환을 보여주었다.
전반적으로, 결과는 NGC PAM 서열을 인식하도록 조작된 ScoCas9 변이체가 뉴클레아제 및 염기 편집 활동을 수행할 수 있음을 보여주었다.
균등물 및 범위
당업자는 단지 통상 실험을 사용하여 본원에 기술된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 균등물을 인식하거나 식별할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기 설명에 국한되는 것이 아니며, 다음의 청구범위에 기재된 바와 같다.
SEQUENCE LISTING <110> BEAM THERAPEUTICS INC. <120> NOVEL CRISPR ENZYMES, METHODS, SYSTEMS AND USES THEREOF <130> BEM-004WO1 <140> PCT/US2022/021523 <141> 2022-03-23 <150> 63/164,798 <151> 2021-03-23 <160> 182 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1345 <212> PRT <213> Streptococcus constellatus <400> 1 Met Gly Lys Pro Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val 1 5 10 15 Gly Trp Ala Val Val Thr Asp Asp Tyr Lys Val Pro Ala Lys Lys Met 20 25 30 Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Lys Gln Ser Ile Lys Lys Asn Leu Leu 35 40 45 Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu 50 55 60 Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Leu Arg 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Thr Gly Glu Met Asn Lys Val Asp Glu Asn 85 90 95 Phe Phe Gln Arg Leu Asp Asp Ser Phe Leu Val Asp Glu Asp Lys Arg 100 105 110 Gly Glu His His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Ala Ala Glu Val Lys Tyr 115 120 125 His Asp Asp Phe Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Arg His Leu Ala Asp 130 135 140 Thr Ser Lys Lys Ala Asp Leu Arg Leu Val Tyr Leu Ala Leu Ala His 145 150 155 160 Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Tyr Glu Gly Asp Leu Lys Ala 165 170 175 Glu Asn Thr Asp Val Gln Ala Leu Phe Lys Asp Phe Val Glu Glu Tyr 180 185 190 Asp Lys Thr Ile Glu Glu Ser His Leu Ser Glu Ile Thr Val Asp Ala 195 200 205 Leu Ser Ile Leu Thr Glu Lys Val Ser Lys Ser Ser Arg Leu Glu Asn 210 215 220 Leu Ile Ala His Tyr Pro Thr Glu Lys Lys Asn Thr Leu Phe Gly Asn 225 230 235 240 Leu Ile Ala Leu Ser Leu Asp Leu His Pro Asn Phe Lys Thr Asn Phe 245 250 255 Gln Leu Ser Glu Asp Ala Lys Leu Gln Phe Ser Lys Asp Thr Tyr Glu 260 265 270 Glu Asp Leu Glu Gly Phe Leu Gly Glu Val Gly Asp Glu Tyr Ala Asp 275 280 285 Leu Phe Ala Ser Ala Lys Asn Leu Tyr Asp Ala Ile Leu Leu Ser Gly 290 295 300 Ile Leu Thr Val Asp Asp Asn Ser Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser 305 310 315 320 Met Val Lys Arg Tyr Glu Glu His Gln Lys Asp Leu Lys Lys Leu Lys 325 330 335 Asp Phe Ile Lys Val Asn Ala Pro Asp Gln Tyr Asn Ala Ile Phe Lys 340 345 350 Asp Lys Asn Lys Lys Gly Tyr Ala Ser Tyr Ile Glu Ser Gly Val Lys 355 360 365 Gln Asp Glu Phe Tyr Lys Tyr Leu Lys Gly Ile Leu Leu Lys Ile Asn 370 375 380 Gly Ser Gly Asp Phe Leu Asp Lys Ile Asp Arg Glu Asp Phe Leu Arg 385 390 395 400 Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu 405 410 415 Gln Glu Met His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Gly Glu His Tyr Pro Phe 420 425 430 Leu Lys Glu Asn Gln Asp Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile 435 440 445 Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Lys Gly Ser Arg Phe Ala Trp 450 455 460 Ala Glu Tyr Lys Ala Asp Glu Lys Ile Thr Pro Trp Asn Phe Asp Asp 465 470 475 480 Ile Leu Asp Lys Glu Lys Ser Ala Glu Lys Phe Ile Thr Arg Met Thr 485 490 495 Leu Asn Asp Leu Tyr Leu Pro Glu Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser 500 505 510 Pro Leu Tyr Glu Ala Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys 515 520 525 Tyr Val Asn Glu Gln Gly Glu Ala Lys Phe Phe Asp Thr Asn Met Lys 530 535 540 Gln Glu Ile Phe Asp His Val Phe Lys Glu Asn Arg Lys Val Thr Lys 545 550 555 560 Asp Lys Leu Leu Asn Tyr Leu Asn Lys Glu Phe Glu Glu Phe Arg Ile 565 570 575 Val Asn Leu Thr Gly Leu Asp Lys Glu Asn Lys Ala Phe Asn Ser Ser 580 585 590 Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Arg Lys Ile Leu Asp Lys Ser Phe Leu 595 600 605 Asp Asp Lys Ala Asn Glu Lys Thr Ile Glu Asp Ile Ile Gln Thr Leu 610 615 620 Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Arg Gln Arg Leu Gln Lys Tyr 625 630 635 640 Ser Asp Ile Phe Thr Lys Ala Gln Leu Lys Lys Leu Glu Arg Arg His 645 650 655 Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Tyr Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg 660 665 670 Asn Lys Glu Asn Lys Lys Thr Ile Leu Asp Tyr Leu Ile Asp Asp Gly 675 680 685 Tyr Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile Asn Asp Asp Ala Leu Ser 690 695 700 Phe Lys Glu Glu Ile Ala Arg Ala Gln Ile Ile Asp Asp Val Asp Asp 705 710 715 720 Ile Ala Asn Val Val His Asp Leu Pro Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys 725 730 735 Gly Ile Leu Gln Ser Val Lys Ile Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met 740 745 750 Gly His Asn Pro Ala Asn Ile Ile Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln 755 760 765 Thr Thr Asp Lys Gly Arg Arg Asn Ser Gln Gln Arg Leu Lys Leu Leu 770 775 780 Gln Asp Ser Leu Lys Asn Leu Asp Asn Pro Val Asn Ile Lys Asn Val 785 790 795 800 Glu Asn Gln Gln Leu Gln Asn Asp Arg Leu Phe Leu Tyr Tyr Ile Gln 805 810 815 Asn Gly Lys Asp Met Tyr Thr Gly Glu Thr Leu Asp Ile Asn Asn Leu 820 825 830 Ser Gln Tyr Asp Ile Asp His Ile Ile Pro Gln Ala Phe Ile Lys Asp 835 840 845 Asn Ser Leu Asp Asn Arg Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly 850 855 860 Lys Ser Asp Asp Val Pro Ser Ile Glu Val Val His Glu Met Lys Ser 865 870 875 880 Phe Trp Ser Lys Leu Leu Ser Val Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe 885 890 895 Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Thr Glu Glu Asp Lys 900 905 910 Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys 915 920 925 His Val Ala Gln Ile Leu Asp Glu Arg Phe Asn Thr Glu Phe Asp Gly 930 935 940 Asn Lys Arg Arg Ile Arg Asn Val Lys Ile Ile Thr Leu Lys Ser Asn 945 950 955 960 Leu Val Ser Asn Phe Arg Lys Glu Phe Glu Leu Tyr Lys Val Arg Glu 965 970 975 Ile Asn Asp Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val 980 985 990 Gly Asn Ala Leu Leu Leu Lys Tyr Pro Gln Leu Glu Pro Glu Phe Val 995 1000 1005 Tyr Gly Glu Tyr Pro Lys Tyr Asn Ser Tyr Arg Ser Arg Lys Ser 1010 1015 1020 Ala Thr Glu Lys Phe Leu Phe Tyr Ser Asn Ile Leu Arg Phe Phe 1025 1030 1035 Lys Lys Glu Asp Ile Gln Thr Asn Glu Asp Gly Glu Ile Ala Trp 1040 1045 1050 Asn Lys Glu Lys His Ile Lys Ile Leu Arg Lys Val Leu Ser Tyr 1055 1060 1065 Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Glu Gln Thr Gly Gly 1070 1075 1080 Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Gly Glu Ser Asp Lys Leu 1085 1090 1095 Ile Pro Arg Lys Thr Lys Asn Ser Tyr Trp Asp Pro Lys Lys Tyr 1100 1105 1110 Gly Gly Phe Asp Ser Pro Val Val Ala Tyr Ser Ile Leu Val Phe 1115 1120 1125 Ala Asp Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Arg Lys Val Gln 1130 1135 1140 Asp Met Val Gly Ile Thr Ile Met Glu Lys Lys Arg Phe Glu Lys 1145 1150 1155 Asn Pro Val Asp Phe Leu Glu Gln Arg Gly Tyr Arg Asn Val Arg 1160 1165 1170 Leu Glu Lys Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu 1175 1180 1185 Glu Asn Lys Arg Arg Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Glu Leu Gln 1190 1195 1200 Lys Gly Asn Glu Leu Val Ile Pro Gln Arg Phe Thr Thr Leu Leu 1205 1210 1215 Tyr His Ser Tyr Arg Ile Glu Lys Asp Tyr Glu Pro Glu His Arg 1220 1225 1230 Glu Tyr Val Glu Lys His Lys Asp Glu Phe Lys Glu Leu Leu Glu 1235 1240 1245 Tyr Ile Ser Val Phe Ser Arg Lys Tyr Val Leu Ala Asp Asn Asn 1250 1255 1260 Leu Thr Lys Ile Glu Met Leu Phe Ser Lys Asn Lys Asp Ala Glu 1265 1270 1275 Val Ser Ser Leu Ala Lys Ser Phe Ile Ser Leu Leu Thr Phe Thr 1280 1285 1290 Ala Phe Gly Ala Pro Ala Ala Phe Asn Phe Phe Gly Glu Asn Ile 1295 1300 1305 Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Val Thr Glu Cys Leu Asn Ala Thr 1310 1315 1320 Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp 1325 1330 1335 Leu Ser Lys Leu Gly Glu Asp 1340 1345 <210> 2 <211> 1399 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Met Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Gly Gly Lys Pro Tyr Ser Ile Gly 1 5 10 15 Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Val Thr Asp Asp 20 25 30 Tyr Lys Val Pro Ala Lys Lys Met Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Lys 35 40 45 Gln Ser Ile Lys Lys Asn Leu Leu Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly 50 55 60 Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr 65 70 75 80 Thr Arg Arg Lys Asn Arg Leu Arg Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Thr Gly 85 90 95 Glu Met Asn Lys Val Asp Glu Asn Phe Phe Gln Arg Leu Asp Asp Ser 100 105 110 Phe Leu Val Asp Glu Asp Lys Arg Gly Glu His His Pro Ile Phe Gly 115 120 125 Asn Ile Ala Ala Glu Val Lys Tyr His Asp Asp Phe Pro Thr Ile Tyr 130 135 140 His Leu Arg Arg His Leu Ala Asp Thr Ser Lys Lys Ala Asp Leu Arg 145 150 155 160 Leu Val Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe 165 170 175 Leu Tyr Glu Gly Asp Leu Lys Ala Glu Asn Thr Asp Val Gln Ala Leu 180 185 190 Phe Lys Asp Phe Val Glu Glu Tyr Asp Lys Thr Ile Glu Glu Ser His 195 200 205 Leu Ser Glu Ile Thr Val Asp Ala Leu Ser Ile Leu Thr Glu Lys Val 210 215 220 Ser Lys Ser Ser Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala His Tyr Pro Thr Glu 225 230 235 240 Lys Lys Asn Thr Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Asp Leu 245 250 255 His Pro Asn Phe Lys Thr Asn Phe Gln Leu Ser Glu Asp Ala Lys Leu 260 265 270 Gln Phe Ser Lys Asp Thr Tyr Glu Glu Asp Leu Glu Gly Phe Leu Gly 275 280 285 Glu Val Gly Asp Glu Tyr Ala Asp Leu Phe Ala Ser Ala Lys Asn Leu 290 295 300 Tyr Asp Ala Ile Leu Leu Ser Gly Ile Leu Thr Val Asp Asp Asn Ser 305 310 315 320 Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Val Lys Arg Tyr Glu Glu His 325 330 335 Gln Lys Asp Leu Lys Lys Leu Lys Asp Phe Ile Lys Val Asn Ala Pro 340 345 350 Asp Gln Tyr Asn Ala Ile Phe Lys Asp Lys Asn Lys Lys Gly Tyr Ala 355 360 365 Ser Tyr Ile Glu Ser Gly Val Lys Gln Asp Glu Phe Tyr Lys Tyr Leu 370 375 380 Lys Gly Ile Leu Leu Lys Ile Asn Gly Ser Gly Asp Phe Leu Asp Lys 385 390 395 400 Ile Asp Arg Glu Asp Phe Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly 405 410 415 Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gln Glu Met His Ala Ile Leu Arg 420 425 430 Arg Gln Gly Glu His Tyr Pro Phe Leu Lys Glu Asn Gln Asp Lys Ile 435 440 445 Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala 450 455 460 Arg Lys Gly Ser Arg Phe Ala Trp Ala Glu Tyr Lys Ala Asp Glu Lys 465 470 475 480 Ile Thr Pro Trp Asn Phe Asp Asp Ile Leu Asp Lys Glu Lys Ser Ala 485 490 495 Glu Lys Phe Ile Thr Arg Met Thr Leu Asn Asp Leu Tyr Leu Pro Glu 500 505 510 Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Pro Leu Tyr Glu Ala Phe Thr Val 515 520 525 Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Asn Glu Gln Gly Glu Ala 530 535 540 Lys Phe Phe Asp Thr Asn Met Lys Gln Glu Ile Phe Asp His Val Phe 545 550 555 560 Lys Glu Asn Arg Lys Val Thr Lys Asp Lys Leu Leu Asn Tyr Leu Asn 565 570 575 Lys Glu Phe Glu Glu Phe Arg Ile Val Asn Leu Thr Gly Leu Asp Lys 580 585 590 Glu Asn Lys Ala Phe Asn Ser Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Arg 595 600 605 Lys Ile Leu Asp Lys Ser Phe Leu Asp Asp Lys Ala Asn Glu Lys Thr 610 615 620 Ile Glu Asp Ile Ile Gln Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met 625 630 635 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<213> Rattus norvegicus <400> 32 Met Ser Ser Glu Thr Gly Pro Val Ala Val Asp Pro Thr Leu Arg Arg 1 5 10 15 Arg Ile Glu Pro His Glu Phe Glu Val Phe Phe Asp Pro Arg Glu Leu 20 25 30 Arg Lys Glu Thr Cys Leu Leu Tyr Glu Ile Asn Trp Gly Gly Arg His 35 40 45 Ser Ile Trp Arg His Thr Ser Gln Asn Thr Asn Lys His Val Glu Val 50 55 60 Asn Phe Ile Glu Lys Phe Thr Thr Glu Arg Tyr Phe Cys Pro Asn Thr 65 70 75 80 Arg Cys Ser Ile Thr Trp Phe Leu Ser Trp Ser Pro Cys Gly Glu Cys 85 90 95 Ser Arg Ala Ile Thr Glu Phe Leu Ser Arg Tyr Pro His Val Thr Leu 100 105 110 Phe Ile Tyr Ile Ala Arg Leu Tyr His His Ala Asp Pro Arg Asn Arg 115 120 125 Gln Gly Leu Arg Asp Leu Ile Ser Ser Gly Val Thr Ile Gln Ile Met 130 135 140 Thr Glu Gln Glu Ser Gly Tyr Cys Trp Arg Asn Phe Val Asn Tyr Ser 145 150 155 160 Pro Ser Asn Glu Ala His Trp Pro Arg Tyr Pro His Leu Trp Val Arg 165 170 175 Leu Tyr Val Leu Glu Leu Tyr Cys Ile Ile Leu Gly Leu Pro Pro Cys 180 185 190 Leu Asn Ile Leu Arg Arg Lys Gln Pro Gln Leu Thr Phe Phe Thr Ile 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Synthetic oligonucleotide <400> 99 gtcccaaata tgtagctgtt 20 <210> 100 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 100 gctcccatca catcaaccgg 20 <210> 101 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 101 gatgtcacct ccaatgacta 20 <210> 102 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 102 gttgaagatg aagcccagag 20 <210> 103 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 103 gccaacacca accagaactt 20 <210> 104 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 104 tgctgcacac agcaggcctt 20 <210> 105 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 160 cctgtaaagg aaactggaac 20 <210> 161 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 161 tacatgaagc aactccagtc 20 <210> 162 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 162 aaactccccc cacccccttt 20 <210> 163 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 163 gagttgggtt tggtgctcaa 20 <210> 164 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 164 gcgggccagc ctgaatagct 20 <210> 165 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 165 gaaacaatga taacaagacc 20 <210> 166 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 166 gtggcccctg tgcccagccc 20 <210> 167 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 167 gtcccaaata tgtagctgtt 20 <210> 168 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 168 gctcccatca catcaaccgg 20 <210> 169 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 169 gatgtcacct ccaatgacta 20 <210> 170 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 170 gttgaagatg aagcccagag 20 <210> 171 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 171 gccaacacca accagaactt 20 <210> 172 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 172 tgctgcacac agcaggcctt 20 <210> 173 <211> 1368 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 173 Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val 1 5 10 15 Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Asp Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe 20 25 30 Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile 35 40 45 Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu 50 55 60 Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser 85 90 95 Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys 100 105 110 His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr 115 120 125 His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp 130 135 140 Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His 145 150 155 160 Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro 165 170 175 Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu 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agugugaaaa cacucauagu caagaucaaa cgagugguuu uccacgaguu 60 auuacuuuug aggucuuaua uggcccauac auaaaaagga gucggaauuu ccggcuccuu 120 uucuuuuu 128

Claims (86)

  1. 스트렙토코커스 콘스텔라투스(Streptococcus constellatus) Cas9, 샤르페아(Sharpea) Cas9, 베일로넬라 파르불라(Veillonella parvula) Cas9, 에자키엘라 페루엔시스(Ezakiella peruensis) Cas9, 락토바실러스 퍼멘텀 균주(Lactobacillus fermentum strain) AF15-40LB Cas9 또는 펩토니필러스 sp. 마르세유(Peptoniphilus sp. Marseille)-P3761 Cas9로부터 변형되는 조작된, 비천연 발생 Cas9 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9는
    MGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGED (서열번호 1)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  3. 제1항에 있어서, 상기 샤르페아 Cas9는
    MAKNKDIRYSIGLDIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKL (서열번호 4)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  4. 제1항에 있어서, 상기 베일로넬라 파르불라 Cas9는 MSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLDIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIV (서열번호 8)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  5. 제1항에 있어서, 상기 에자키엘라 페루엔시스 Cas9는 MTKVKDYYIGLDIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKL (서열번호 14)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  6. 제1항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9는
    MKEYHIGLDIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNL (서열번호 84)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  7. 제1항에 있어서, 상기 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9는
    MEKKTNYTIGLDIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFED (서열번호 86)와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는, Cas9 단백질.
  8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 Cas9 단백질.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 Cas9 단백질.
  10. 제9항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9는
    MPKKKRKVGGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 2)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
    [청구항 10b]
    제9항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9는
    MPKKKRKVGMGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFMQPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKFLQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPRAFNFFGENIARKEYRSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGEGADKRTADGSEFESPKKKRKV (서열번호 95)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
    [청구항 10c]
    제9항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9는
    MPKKKRKVGMGKPYSIGLDIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGIIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERLHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFMQPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKFLQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPRAFNFFGENIARKEYRSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGEGADKRTADGSEFESPKKKRKV (서열번호 96)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  11. 제9항에 있어서, 상기 샤르페아 Cas9가
    MPKKKRKVGAKNKDIRYSIGLDIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 5)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  12. 제9항에 있어서, 상기 베일로넬라 파르불라 Cas9는
    MPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLDIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 9)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas 단백질.
  13. 제9항에 있어서, 상기 에자키엘라 페루엔시스 Cas9는
    MPKKKRKVGTKVKDYYIGLDIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 15) (D12A 돌연변이체는 굵은 글씨)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  14. 제9항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9는
    MPKKKRKVGKEYHIGLDIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 85)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  15. 제9항에 있어서, 상기 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9가
    MPKKKRKVGEKKTNYTIGLDIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 87)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Cas9 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86에서 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 또는 적어도 10개의 돌연변이를 포함하는, Cas9 단백질.
  17. 제16항에 있어서, 상기 돌연변이는 아미노산 치환인, Cas9 단백질.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Cas9 단백질이 닉카제 활성을 갖는, Cas9 단백질.
    [청구항 18b]
    제18항에 있어서, 아미노산 위치에서의 닉카제 돌연변이가 야생형 SpCas9의 1개 이상의 아미노산 10, 12, 17, 762, 840, 854, 863, 982, 983, 984, 986, 987에 상응하는, Cas9 단백질.
  19. 제16항에 있어서, 적어도 1개의 돌연변이가 불활성 Cas9(dCas9)를 초래하는, Cas9 단백질.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 PAM 상호작용, HNH 및/또는 RuvC 도메인에 적어도 1개의 아미노산 돌연변이를 포함하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20b]
    제20항에 있어서, 아미노산 위치에서의 돌연변이는 SirCas9의 RuvC 도메인에서 아미노산 14에 상응하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20c]
    제20항에 있어서, 아미노산 위치에서의 돌연변이는 EpeCas9의 RuvC 도메인에서 아미노산 12에 상응하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20d]
    제20항에 있어서, 아미노산 위치에서의 돌연변이는 LfeCas9의 RuvC 도메인에서 아미노산 9에 상응하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20e]
    제20항에 있어서, 아미노산 위치에서의 돌연변이는 PmaCas9의 RuvC 도메인에서 아미노산 12에 상응하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20f]
    제20항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 초정밀 Cas9인, Cas9 단백질.
    [청구항 20g]
    제20항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 SpyCas9(서열번호 173)에 관하여 N692A, M694A, Q695A 및/또는 H698A에 상응하는 돌연변이를 포함하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20h]
    제20항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 고충실 Cas9인, Cas9 단백질.
    [청구항 20i]
    제20항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 SpyCas9(서열번호 173)에 관하여 N467A, R661A, Q695A 및/또는 Q926A에 상응하는 돌연변이를 포함하는, Cas9 단백질.
    [청구항 20j]
    제20항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 SuperFi-Cas9인, Cas9 단백질.
    [청구항 20k]
    제20항에 있어서, SpyCas9에 상응하는 Y1016, R1019, Y1010, Y1013, K1031, Q1027 및/또는 VI018 잔기가 아스파르트산으로 돌연변이되는, Cas9 단백질.
  21. 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 동일성을 갖는 Cas9 단백질을 포함하고, 상기 Cas9 단백질은 히스톤 데메틸라제, 전사 활성화인자 또는 데아미나제에 융합되는, 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질.
    [청구항 21b]
    제21항에 있어서, 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는 조작된 비천연 발생 Cas9 융합 단백질.
    [청구항 21c]
    제22항에 있어서, 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 동일성을 갖는 조작된 비-천연 발생 Cas9 융합 단백질.
  22. 제21항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 시토신 데아미나제 또는 아데노신 데아미나제에 융합되는, Cas9 단백질.
  23. 제22항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 아데노신 데아미나제에 융합되고
    (a) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 20);
    (b) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGAKNKDIRYSIGLAIGTNSVGWAVMDEHYELLKKGNHHMWGSRLFDAAEPAATRRASRSIRRRYNKRRERIRLLRDLLGDMVMEVDPTFFIRLLNVSFLDEEDKQKNLGNDYKDNYNLFIEKDFNDKTYYDKYPTIYHLRKELCENKEKADPRLIYLALHHIVKYRGNFLKEGQSFAKVYEDIEEKLDNTLKKFMSLNDLDNLFVDNDINSMITVLSKIYQRSKKADDLLKIMNPTKEERAAYKEFTKALVGLKFNVSKMILAQEVKKDDKDIELDFSNVDYDSTVDGLQAELGEYIEFIEMLHSINSWVELQDILGNNSTISAAMVERYEEHKNDLRVLKKVIREELPDKYNEVFREDNPKLHNYLGYIKYPKNTPVEEFYEYIKRLLAKVDTGEAREILERIDLEKFMLKQNSRTNGSIPYQMQKDEMIQIIDNQSVYYPQLKENREKLISILEFRIPYYFGPLNTHSEFAWIKKFEDKQKERILPWNYDQIVDIDATAEGFIERMQNTGTYFPDKPVMAKNSLTVSKFEVLNELNKIRINGKLIPVETKKELLSDLFMKNKTITDKKLKDWLVTHQYYDTNEELKIEGYQKDLQFSTSLAPWIDFTKIFGEINASNYQLIEKIIYDISIFEDKKILKRRLKKVYQLDDLLVDKILKLNYTGWSRLSEKLLTGIKSKNSKETILSILENSNMNLMEIINDESLGFKQIIEESNKKDIEGPFRYDEVKKLAGSPAIKRGIWQALLVVQEITKFMKHEPSHIYIEFAREEQEKVRTESRIAKLQKIYKDLNLQTKEDQLVYESLKKEDAKKKIDTDALYLYYLQMGKSMYSGKPLDIDKLSTYHIDHILPRSLIKDDSLDNRVLVLPKENEWKLDSETVPFEIRNKMMGFWQKLHENGLMSNKKFFSLIRTDFNEKDKKRFINRQLVETRQIIKNVAVIINDHYTNTNVVTVRAELSHQFRERYKIYKNRDLNDLHHAHDAYIACILGQFIHQNFGNMDVNMIYGQYKKNYKKDVQEHNNYGFILNSMNHIHFNDDNSVIWDPSYIGKIKSCFCYKDVYVTKKLEQNDAKLFDLTILPSDKNSENGVTKAKIPVNKYRKDVNKYGGFSGDAPIMLAIEADKGKKHVRQVIAFPLRLKNYNDEERIKFIEKEKNLKNVKILTEVKKNQLILINHQYFFITGTNELVNATQLKLSAKNTKNLFNLVDANKHNKLESIDDANFNEVIQELICKLQEPIYSRYNSIGKEFEDSYEKINAVTKQDKLYIIEYLIAIMSAKATQGYIKPELAREIGTNGKNKGRIKSFTIDLNKTTFISTSVTGLFSKKYKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 6);
    (c)
    MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 10);
    (d) MPKKKRKVSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 11);
    (e)
    MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 16);
    (f) MPKKKRKVTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 17);
    (g) MPAAKRVKLDGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDGSSGSETPGTSESATPESSGPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 88);
    (h) MPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLKRPAATKKAGQAKKKKSGSETPGTSESATPESSGSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDPAAKRVKLDGSYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 89); 또는
    (i)
    MSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYSTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFMQPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKFLQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPRAFNFFGENIARKEYRSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGEGADKRTADGSEFESPKKKRKV (서열번호 98);
    (j)
    MSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLYDATLYSTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHHPGMNHRVEITEGILADECAALLCRFFRMPRRVFNAQKKAQSSTDSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGIIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERLHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFMQPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKFLQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPRAFNFFGENIARKEYRSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGEGADKRTADGSEFESPKKKRKV (서열번호 99)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  24. 제22항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 시토신 데아미나제에 융합되고
    (a) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGGKPYSIGLAIGTNSVGWAVVTDDYKVPAKKMKVLGNTDKQSIKKNLLGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRLRYLQEIFTGEMNKVDENFFQRLDDSFLVDEDKRGEHHPIFGNIAAEVKYHDDFPTIYHLRRHLADTSKKADLRLVYLALAHMIKFRGHFLYEGDLKAENTDVQALFKDFVEEYDKTIEESHLSEITVDALSILTEKVSKSSRLENLIAHYPTEKKNTLFGNLIALSLDLHPNFKTNFQLSEDAKLQFSKDTYEEDLEGFLGEVGDEYADLFASAKNLYDAILLSGILTVDDNSTKAPLSASMVKRYEEHQKDLKKLKDFIKVNAPDQYNAIFKDKNKKGYASYIESGVKQDEFYKYLKGILLKINGSGDFLDKIDREDFLRKQRTFDNGSIPHQIHLQEMHAILRRQGEHYPFLKENQDKIEKILTFRIPYYVGPLARKGSRFAWAEYKADEKITPWNFDDILDKEKSAEKFITRMTLNDLYLPEEKVLPKHSPLYEAFTVYNELTKVKYVNEQGEAKFFDTNMKQEIFDHVFKENRKVTKDKLLNYLNKEFEEFRIVNLTGLDKENKAFNSSLGTYHDLRKILDKSFLDDKANEKTIEDIIQTLTLFEDREMIRQRLQKYSDIFTKAQLKKLERRHYTGWGRLSYKLINGIRNKENKKTILDYLIDDGYANRNFMQLINDDALSFKEEIARAQIIDDVDDIANVVHDLPGSPAIKKGILQSVKIVDELVKVMGHNPANIIIEMARENQTTDKGRRNSQQRLKLLQDSLKNLDNPVNIKNVENQQLQNDRLFLYYIQNGKDMYTGETLDINNLSQYDIDHIIPQAFIKDNSLDNRVLTRSDKNRGKSDDVPSIEVVHEMKSFWSKLLSVKLITQRKFDNLTKAERGGLTEEDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDERFNTEFDGNKRRIRNVKIITLKSNLVSNFRKEFELYKVREINDYHHAHDAYLNAVVGNALLLKYPQLEPEFVYGEYPKYNSYRSRKSATEKFLFYSNILRFFKKEDIQTNEDGEIAWNKEKHIKILRKVLSYPQVNIVKKTEEQTGGFSKESILPKGESDKLIPRKTKNSYWDPKKYGGFDSPVVAYSILVFADVEKGKSKKLRKVQDMVGITIMEKKRFEKNPVDFLEQRGYRNVRLEKIIKLPKYSLFELENKRRRLLASAKELQKGNELVIPQRFTTLLYHSYRIEKDYEPEHREYVEKHKDEFKELLEYISVFSRKYVLADNNLTKIEMLFSKNKDAEVSSLAKSFISLLTFTAFGAPAAFNFFGENIDRKRYTSVTECLNATLIHQSITGLYETRIDLSKLGEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 21);
    (b)
    MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGSIINFQRRGLMETQASNQLISSHLKGYPIKDYFVGLAIGTSSVGWAVTNKAYELLKFRSHKMWGSRLFDEGESAVARRGFRSMRRRLERRKLRLKLLEELFADAMAQVDPTFFMRLRESKYHYEDKTTGHSSKHILFIDKNYNDQDYFKEYPTVYHLRSELMKSGTDDIRKLFLAVHHILKYRGNFLYEGATFDSNASTLDDVIKQALENITFNCFDCNSAISSIGQILMEAGKTKSDKAKAIEHLVDTYIATDTVDTSSKTQKDQVKEDKKRLKAFANLVLGLNASLIDLFGSVEELEEDLKKLQITGDTYDDKRDELAKAWSDEIYIIDDCKSVYDAIILLSIKEPGLTISESKVKAFNKHKDDLAILKSLLKSDRSIYNTMFKVDEKGLHNYVHYIKQGRTEETSCNREDFYKYTKKIVEGLSDSKDKEYILSQIELQILLPLQRIKDNGVIPYQLHLEELKAILAKCGPKFPFLNEVADGFSVAEKLIKMLEFRIPYYVGPLNTHHNVDNGGFAWAVRKASGRVTPWNFDDKIDREKSAAAFIKNLTNKCTYLLGEDVLPKSSLLYSEFMLLNELNNVRIDGKPLEKVVKEHLIEAVFKQDHKKMTKNRIEQFLKDNGYISETHKHEITGLDGEIKNDLASYRDMVRILGDGFDRSMAEEIITDITIFGESKKMLRETLRKKFASCLDDEAIKKLTKLRYRDWGRLSQKLLNGIEGCDKAGDGTPETIIILMRNFSYNLMELLGDKFSFMERIQEINAKLTEGQIVNPHDIIDDLALSPAVKRAVWQALRIVDEVAHIKKALPARIFVEVTRSNKNEKKKKDSRQKRLSDLYAAIKKDDVLLNGLNNEIFGELKSSLAKYDDAALRSKKLYLYYTQMGRCAYTGEIIELSLLNTDNYDIDHIYPRSLTKDDSFDNLVLCKRTANAQKSDAYPISEEIQKTQKPFWTFLKQQGLISERKYERLTRITPLTADDLSGFIARQLVETNQSVKAATTLLRRLYPGVDVVFVKAENVTDFRHDNNFIKVRSLNHHHHAKDAYLNIVVGNVYHERFTRNFRAFFKKNGANRTYNLAKMFNYDVNCTNAKDGKAWDVKTSMDTVKKMMDSNDVRVTKRLLEQTGALADATIYKATVAGKAKDGAYIGMKTKSSVFADVSKYGGMTKIKNAYSIIVQYTGKKGEVIKEIVPLPIYLTNRNTTDQDLINYVASIIPQAKDISIIYGKLCINQLVKVNGFYYYLGGKTNSKFCIDNAIQVIVSNEWIPYLKVLEKFNNMRKDNKDLKANVVSTRALDNKHTIEVRIVEEKNIEFFDYLVSKLKMPIYQKMKGNKAAELSEKGYGLFKKMSLEEQSIHLIELLNLLTNQKTTFEVKPLGITASRSTVGSKISNQDEFKVINESITGLYSNEVTIVGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 12);
    (c) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGTKVKDYYIGLAIGTSSVGWAVTDEAYNVLKFNSKKMWGVRLFDDAKTAEERRGQRGARRRLDRKKERLSLLQDFFAEEVAKVDPNFFLRLDNSDLYMEDKDQKLKSKYTLFNDKDFKDKNFHKKYPTIHHLLMDLIEDDSKKDIRLVYLACHYLLKNRGHFIFEGQKFDTKSSFENSLNELKVHLNDEYGLDLEFDNENLINILTDPKLNKTAKKKELKSVIGDTKFLKAVSAIMIGSSQKLVDLFENPEDFDDSAIKSVDFSTTSFDDKYSDYELALGDKIALVNILKEIYDSSILENLLKEADKSKDGNKYISNAFVKKYNKHGQDLKEFKRLVRQYHKSAYFDIFRSEKVNDNYVSYTKSSISNNKRVKANKFTDQEAFYKFAKKHLETIKYKINKVNGSKADLELIDGMLRDMEFKNFMPKIKSSDNGVIPYQLKLMELNKILENQSKHHEFLNVSDEYGSVCDKIASIMEFRIPYYVGPLNPNSKYAWIKKQKDSEITPWNFKDVVDLDSSREEFIDSLIGRCTYLKDEKVLPKASLLYNEYMVLNELNNLKLNDLPITEEMKKKIFDQLFKTRKKVTLKAVANLLKKEFNINGEILLSGTDGDFKQGLNSYNDFKAIVGDKVDSDDYRDKIEEIIKLIVLYGDDKSYLQKKIKAGYGKYFTDSEIKKMAGLNYKDWGRLSKKLLTGLEGANKITGERGSIIHFMREYNLNLMELMSASFTFTEEIQKLNPVDDRKLSYEMVDELYLSPSVKRMLWQSLRIVDEIKNIMGTDSKKIFIEMARGKEEVKARKESRKNQLLKFYKDGKKAFISEIGEERYSYLLSEIEGEEENKFRWDNLYLYYTQLGRCMYSLEPIDISELSSKNIYDQDHIYPKSKIYDDSIENRVLVKKDLNSKKGNSYPIPDEILNKNCYAYWKILYDKGLIGQKKYTRLTRRTGFTDDELVQFISRQIVETRQATKETANLLKTICKNSEIVYSKAENASRFRQEFDIVKCRAVNDLHHMHDAYINIIVGNVYNTKFTKDPMNFVKKQEKARSYNLENMFKYDVKRGGYTAWIADDEKGTVKNASIKRIRKELEGTNYRFTRMNYIESGALFNATLQRKNKGSRPLKDKGPKSSIEKYGGYTNINKACFAVLDIKSKNKIERKLMPVEREIYAKQKNDKKLSDEIFSKYLKDRFGIEDYRVVYPVVKMRTLLKIDGSYYFITGGSDKTLELRSALQLILPKKNEWAIKQIDKSSENDYLTIERIQDLTEELVYNTFDIIVNKFKTSVFKKSFLNLFQDDKIENIDFKFKSMDFKEKCKTLLMLVKAIRASGVRQDLKSIDLKSDYGRLSSKTNNIGNYQEFKIINQSITGLFENEVDLLKLGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 18);
    (d) MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGKEYHIGLAIGTSSIGWAVTDSQFKLMRIKGKTAIGVRLFEEGKTAAERRTFRTTRRRLKRRKWRLHYLDEIFAPHLQEVDENFLRRLKQSNIHPEDPAKNQAFIGKLLFPDLLKKNERGYPTLIKMRDELPVEQRAHYPVTNIYKLREAMINEDRQFDLREVYLAVHHIVKYRGHFLNNASVDKFKVGRIDFDKSFNVLNEAYEELQNGEGSFTIEPSKVEKIGQLLLDTKMRKLDRQKAVAKLLEVKVADKEETKRNKQIATAMSKLVLGYKADFATVAMANGNEWKIDLSSETSEDEIEKFREELSDAQNDILTEITSLFSQIMLNEIVPNGMSISESMMDRYWTHERQLAEVKEYLATQPASARKEFDQVYNKYIGQAPKEKGFDLEKGLKKILSKKENWKEIDELLKAGDFLPKQRTSANGVIPHQMHQQELDRIIEKQAKYYPWLATENPATGERDRHQAKYELDQLVSFRIPYYVGPLVTPEVQKATSGAKFAWAKRKEDGEITPWNLWDKIDRAESAEAFIKRMTVKDTYLLNEDVLPANSLLYQKYNVLNELNNVRVNGRRLSVGIKQDIYTELFKKKKTVKAGDVASLVMAKTRGVNKPSVEGLSDPKKFNSNLATYLDLKSIVGDKVDDNRYQMDLENIIEWRSVFEDGEIFADKLTEVEWLTDEQRSALVKKRYKGWGRLSKKLLTGIVDENGQRIIDLMWNTDQNFMQIVNQPVFKEQIDQLNQKAITNDGMTLRERVESVLDDAYTSPQNKKAIWQVVRVVEDIVKAVGNAPKSISIEFARNEGNKGEITRSRRTQLQKLFEDQAHELVKDTSLTEELEKAPDLSDRYYFYFTQGGKDMYTGDPINFDEISTKYDIDHILPQSFVKDDSLDNRVLVSRAENNKKSDRVPAKLYAAKMKPYWNQLLKQGLITQRKFENLTMDVDQTIKYRSLGFVKRQLVETRQVIKLTANILGSMYQEAGTDIIETRAGLTKQLREEFDLPKVREVNDYHHAVDAYLTTFAGQYLNRRYPKLRSFFVYGEYMKFKHGSDLKLRNFNFFHELMEGDKSQGKVVDQQTGELITTRDEVADYFDWVINLKVMLISNETYEETGKYFDASHESSSLYLKNQNKKSKLVVPLKNKLQPEYYGAYTGITQGYMVILKLLDKKGGFGVYRIPRYAADILNKCHDEVAYRNKIAEIISSDPRAPKSFEVVVPRVLKGTFLVDGEEKFILSSYRYKVNATQLILPVSDIKLIQDNFKALKKLNVEMQTKKLIEIYDNILRQVDKYYKLYDINKFRAKLHDGRSKFVELDDFGQDASKEKVIIKILRGLHFGSDLQNLKEIGFGTTPLGQFQVSEAGIRLSNTAFIIFKSPTGLFNRKLYLKNLGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 90);
    (e)
    MPAAKRVKLDTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRLKSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSPKKKRKVGEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDGKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLYPYDVPDYAYPYDVPDYAY (서열번호 93);
    (f)
    MPAAKRVKLDTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSTNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTAYDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKMLSGGSGGSGGSPKKKRKVEKKTNYTIGLAIGTDSVGWAVVKDDLELVKKRMKVLGNTETNYIKKNLWGSLLFESGQTAKDRRLKRVARRRYERRRNRLTELQKIFAPAIDEVDENFFFRLNESFLVPEDKAFSKNPIFGTLGEDKTYYKTYPTIYHLRQHLADSEEKADVRLIYLALAHMIKYRGHFLIEGKLDTEHIAINENLEQFFESYNALFSEEPIELRKEELIAIENILREKNSRTVKEKRITSFLKDIGRANKQSPMMAFITLIVGKKAKFKAAFNLEEEISLNLTDDSYDENLEILLNTIGSDFADLFDHAQRVYNAVELAGILSGDVKNTHAKLSAQMVAMYERHKEQLKEYKSFIKANLPDQYDMTFVAPKDAQKKDLKGYAGYIDGNMSQDSFYKFVKDQLKEVPGSEKFLDSIEKEDFLRKQRSFYNGVIPNQVHLAEMEAILDRQENYYPWLKENREKIISLLTFRIPYYVGPLADGQSEFAWLERKSDEKIKPWNFSDVVDLDRSAEKFIEQLIGRDTYLPDEYVLPKKSLIYQKYMVFNELTKIAYLDERQKRMNLSSVEKKEIFETLFKKRSKVTEKQLVKFFENYLQIDNPTIFGIEDAFNADYSTYVELAKVPGMKSMMDDPDNEDLMEEIVKILTVFEDRKMRRKQLEKYKERLSPEQIKELAKKHYTGWGRLSKKLLVGIRDKETQKTILDYLVEDDNHSGGRQHLNRNLMQLINDDRLSFKKTIAELQMIDPSADLYAQVQEIAGSPAIKKGILLGLKIVDEIIRVMGEKPENIVIEMARENQTTARGKALSKRREAKIKEGLAALGSSLLKENLPGNADLSQRKIYLYYTQNGKDIYLDEPLDFDRLSQYDEDHIIPQSFTVDNSLDNLVLTNSSQNRGNKKDDVPSLEVVNRQLAYWRSLKDAGLMTQRKFDNLTKAMRGGLTDKDRERFIQRQLVETRQITKNVAKLLDMRLNDKKDEAGNKIRETNIVLLKSAMASEFRKMFRLYKVRELNDYHHAHDAYLNAAIAINLLALYPYMADDFVYGEFRYKKKPQAEKATYEKLRQWNLIKRFGEKQLFTPDHEDCWNKERDIKTIKKVMGYRQVNVVKKAEERTGMLFKETINGKTNKGSRIPIKKDLDPSKYGGYIEEKMAYYAVISYEDKKKKPGKTIVGISIMDKKEFEYDSISYLGKLGFSNPVVQIILKNYSLIAYPDGRRRYITGATKTTKGKVELQKANQIAMEQDLVNFIYHLKNYDEISHPESYAFVQSHTDYFDRLFDSIEHYTRRFLDAETNINRLRRIYEEEKKKDPVDIEALVASFIELLKLTSAGAPADFIFMGEAISRRRYNSMTGLFDGQVIYQSLTGLYETRMRFEDKRPAATKKAGQAKKKKGSSGGSSGGSSGSETPGTSESATPESSGGSSGGSTSEKGPSTGDPTLRRRIESWEFDVFYDPRELRKETCLLYEIKWGMSRKIWRSSGKNTTNHVEVNFIKKFTSERRFHSSISCSITWFLSWSPCWECSQAIREFLSQHPGVTLVIYVARLFWHMDQRNRQGLRDLVNSGVTIQIMRASEYYHCWRNFVNYPPGDEAHWPQYPPLWMMLYALELHCIILSLPPCLKISRRWQNHLAFFRLHLQNCHYQTIPPHILLATGLIHPSVTWRYPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA (서열번호 94)와 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는, Cas9 단백질.
  25. 제2항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하는, Cas9 단백질.
  26. 제3항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NAGHC-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하고, H는 아데닌, 시토신 또는 티민인, Cas9 단백질.
  27. 제4항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NRHRRH-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하고, H는 아데닌, 시토신 또는 티민이고, R은 아데닌 또는 구아닌인, Cas9 단백질.
  28. 제5항 또는 제7항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하는, Cas9 단백질.
  29. 제6항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NNAAA-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하는, Cas9 단백질.
    [청구항 29b]
    제10b항 또는 제10c항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 5'-NGG-3'을 포함하는 PAM 서열을 인식하는, Cas9 단백질.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 Cas9 단백질을 암호화하는 핵산.
  31. 제30항에 있어서, 상기 핵산은 포유동물 세포에서 발현되도록 코돈-최적화되는, 핵산.
  32. 제31항에 있어서, 상기 핵산은 인간 세포에서 발현되도록 코돈-최적화되는, 핵산.
  33. 제29항의 Cas9 단백질을 포함하는 진핵 세포.
  34. 제33항에 있어서, 상기 세포는 인간 세포인, 진핵 세포.
  35. 진핵 세포에서 표적 핵산을 절단하는 방법으로,
    상기 세포를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고,
    상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열의 파손을 유발할 수 있는, 방법.
  36. 진핵 세포에서 표적 핵산의 발현을 변경(altering)하는 방법으로,
    상기 세포를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고,
    상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열의 파손을 유발할 수 있는, 방법.
  37. 진핵 세포에서 표적 핵산의 발현을 변경하는 방법으로,
    상기 세포를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고,
    상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 방법.
  38. 진핵 세포에서 표적 핵산을 변형하는 방법으로,
    상기 세포를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 Cas9, 및 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 상기 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하고,
    상기 Cas9 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 불활성 Cas9(dCas9)인, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 dCas9는 데아미나제에 융합되는, 방법.
  41. 제35항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA 가이드는 crRNA 및 tracrRNA를 포함하는, 방법.
  42. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA 가이드는 sgRNA를 포함하는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCUGUGCUGUUUAAACAACACAGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUACUCAAGCUUGCAAAAGCGUGCACCGAUUCGGUGCU-3' (서열번호 3)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  44. 제42항에 있어서, 샤르페아 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGUUGUGUUAUUGAAAAAUAACACAACGAGUUAAAAUAAAGCUUAUGCUUAAAUGCCAGCUUUGCUGGUGUCAUUUAGAUGACUUUACUAAGGUUGCUUCGGCAACCUUUUU-3' (서열번호 7)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  45. 제42항에 있어서, 베일로넬라 파르불라 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUAGUGUGAAAACAUUACGAGUUCAAAUACAAAUUAAUUUACAAUGCCUUCGGGCUGCCCGACGUAGGGCACCUACUCUCAAUUCUUCGGAAUUGAGUU-3' (서열번호 13)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  46. 제42항에 있어서, 에자키엘라 페루엔시스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUUAUGUAAUUGAAAAAUUACAUGACGAGUUCAAAUAAAAAUUUAUUCAAACCGCCUAUUUAUAGGCCGCAGAUGUUCUGCAUUAUGCUUGCUAUUGCAAGCUU-3' (서열번호 19)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  47. 제42항에 있어서, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUCUUGGAUGAGUGUGAAAACACUCAUAGUCAAGAUCAAACGAGUGGUUUUCCACGAGUUAUUACUUUUGAGGUCUUAUAUGGCCCAUACAUAAAAAGGAGUCGGAAUUUCCGGCUCCUUUUCUU-3' (서열번호 95)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  48. 제42항에 있어서, 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCCAUGUAGAAAUACAUUGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUAAUCAACUUGAAAAAGUGGCGCUGUUUCGGCGCUUU-3' (서열번호 96)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 방법.
  49. 제41항에 있어서, 상기 crRNA는 약 16 내지 26개의 뉴클레오티드 길이의 가이드 서열을 포함하는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 crRNA는 18 내지 24개의 뉴클레오티드 길이의 가이드 서열을 포함하는, 방법.
  51. 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 표적 핵산의 파손은 단일 가닥 또는 이중 가닥의 파손인, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 표적 핵산의 파손은 단일 가닥의 파손인, 방법.
  53. 제34항 또는 제35항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 상기 표적 핵산 서열의 두 가닥 모두를 절단하는 뉴클레아제이거나, 상기 표적 핵산 서열의 한 가닥을 절단하는 닉카제인, 방법.
  54. 제34항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 핵산은 5' 내지 프로토스페이서 인접 모티프(PAM) 서열인, 방법.
  55. 제34항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Cas9가 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되고, 상기 가이드 RNA가 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 진핵 세포는 인간 세포인, 방법.
  57. 제55항에 있어서, 상기 프로모터 서열은 진핵 또는 바이러스의 프로모터인, 방법.
  58. 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템으로,
    RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산으로, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하는 것인, 상기 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및
    코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질로, 서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖고, 상기 Cas 단백질은 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열에서 파손을 유발할 수 있는 것인, 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질
    을 포함하는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
    [청구항 58b]
    제58항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질은 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
    [청구항 58c]
    제59항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질은 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 서열 동일성을 갖고, 상기 Cas 단백질은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열의 파손을 유발할 수 있는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
  59. 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템으로,
    RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산으로, 상기 RNA 가이드는 직접 반복 서열, 및 표적 핵산에 혼성화할 수 있는 스페이서 서열을 포함하는 것인, 상기 RNA 가이드 또는 상기 RNA 가이드를 암호화하는 핵산; 및
    서열번호 1, 4, 8, 14, 84 또는 86과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질을 포함하고,
    상기 Cas 단백질은 데아미나제에 융합되고, Cas 단백질 융합은 상기 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
    [청구항 59b]
    제59항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질은 핵 위치 서열(NLS) 및/또는 FLAG, HIS 또는 HA 태그를 추가로 포함하는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
    [청구항 59c]
    제59b항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 CRISPR-연관(Cas) 단백질은 서열번호 2, 5, 9, 15, 85, 87, 95 또는 96과 적어도 80% 서열 동일성을 갖고, 상기 Cas 단백질은 데아미나제에 융합되고, Cas 단백질 융합은 RNA 가이드에 결합할 수 있고, 상기 RNA 가이드에 상보적인 표적 핵산 서열을 편집할 수 있는, 조작된 비천연 발생 CRISPR-Cas 시스템.
  60. 제59항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 불활성 Cas9(dCas9)인, 시스템.
  61. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA 가이드는 crRNA 및 tracrRNA를 포함하는, 시스템.
  62. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA 가이드는 sgRNA를 포함하는, 시스템.
  63. 제62항에 있어서, 스트렙토코커스 콘스텔라투스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCUGUGCUGUUUAAACAACACAGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUACUCAAGCUUGCAAAAGCGUGCACCGAUUCGGUGCU-3' (서열번호 3)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  64. 제62항에 있어서, 샤르페아 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGUUGUGUUAUUGAAAAAUAACACAACGAGUUAAAAUAAAGCUUAUGCUUAAAUGCCAGCUUUGCUGGUGUCAUUUAGAUGACUUUACUAAGGUUGCUUCGGCAACCUUUUU-3' (서열번호 7)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  65. 제62항에 있어서, 베일로넬라 파르불라 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUAGUGUGAAAACAUUACGAGUUCAAAUACAAAUUAAUUUACAAUGCCUUCGGGCUGCCCGACGUAGGGCACCUACUCUCAAUUCUUCGGAAUUGAGUU-3' (서열번호 13)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  66. 제62항에 있어서, 에자키엘라 페루엔시스 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUGAGAGUUAUGUAAUUGAAAAAUUACAUGACGAGUUCAAAUAAAAAUUUAUUCAAACCGCCUAUUUAUAGGCCGCAGAUGUUCUGCAUUAUGCUUGCUAUUGCAAGCUU-3' (서열번호 19)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  67. 제62항에 있어서, 락토바실러스 퍼멘텀 균주 AF15-40LB Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUCUUGGAUGAGUGUGAAAACACUCAUAGUCAAGAUCAAACGAGUGGUUUUCCACGAGUUAUUACUUUUGAGGUCUUAUAUGGCCCAUACAUAAAAAGGAGUCGGAAUUUCCGGCUCCUUUUCUU-3' (서열번호 95)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  68. 제62항에 있어서, 펩토니필러스 sp. 마르세유-P3761 Cas9와 함께 사용하기 위한 sgRNA는 5'-GUUUUAGAGCCAUGUAGAAAUACAUUGCAAGUUAAAAUAAGGCUUUGUCCGUAAUCAACUUGAAAAAGUGGCGCUGUUUCGGCGCUUU-3' (서열번호 96)와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 스캐폴드를 포함하는, 시스템.
  69. 제58항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Cas 단백질은 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되고, 상기 가이드 RNA는 진핵 세포에서 발현되도록 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되는, 시스템.
  70. 제69항에 있어서, 상기 진핵 세포는 인간 세포인, 시스템.
  71. 제70항에 있어서, 상기 프로모터 서열은 진핵 프로모터 서열인, 시스템.
  72. 제58항 내지 제71항 중 어느 한 항의 시스템을 암호화하는 핵산.
  73. 제58항 내지 제72항 중 어느 한 항의 시스템을 포함하는 벡터.
  74. 제73항에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드 벡터 또는 바이러스 벡터인, 벡터.
  75. 제74항에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 아데노 연관 바이러스(AAV) 벡터 또는 렌티바이러스 벡터인, 벡터.
  76. 제75항에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 AAV 벡터인, 벡터.
  77. 제76항에 있어서, 1개 초과의 AAV 벡터는 제59항 내지 제71항 중 어느 한 항의 시스템을 패키징하기 위해 사용되는, 벡터.
  78. 장애 또는 질병 치료를 필요로 하는 대상체에서 장애 또는 질병을 치료하는 방법으로, 상기 방법은 제58항 내지 제71항 중 어느 한 항의 시스템을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    상기 가이드 RNA는 병태 또는 질병과 연관된 표적 핵산의 적어도 10개 뉴클레오티드에 상보적이고;
    상기 Cas 단백질은 상기 가이드 RNA와 연관되고;
    상기 가이드 RNA는 상기 표적 핵산에 결합하고;
    상기 Cas 단백질은 표적 핵산의 파손을 유발하고, 선택적으로 상기 Cas9는 데아미나제에 융합된 불활성 Cas9(dCas9)이고 상기 표적 핵산에서 1개 이상의 염기 편집을 초래하여 상기 장애 또는 질병을 치료하는, 방법.
  79. 제78항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 약 18 내지 24개의 뉴클레오티드에 상보적인, 방법.
  80. 제79항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 20개의 뉴클레오티드에 상보적인, 방법.
  81. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 포함하는 염기 편집기.
  82. 제81항에 있어서, 아데노신 데아미나제 도메인 또는 시티딘 데아미나제 도메인을 포함하는 염기 편집기.
    [청구항 82b]
    제81항에 있어서, 아데노신 데아미나제 도메인 및 시티딘 데아미나제 도메인을 포함하는 염기 편집기.
  83. 폴리뉴클레오티드의 핵염기를 편집하는 방법으로, 상기 방법은 1개 이상의 가이드 RNA와의 복합체에서 제81항의 염기 편집기와 상기 폴리뉴클레오티드를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 염기 편집기는 아데노신 데아미나제 도메인을 포함하고, 상기 1개 이상의 가이드 RNA는 상기 폴리뉴클레오티드에서 A·T에서 G·C로 변경을 이루도록 염기 편집기를 표적으로 하는, 방법.
  84. 폴리뉴클레오티드의 핵염기를 편집하는 방법으로, 상기 방법은 1개 이상의 가이드 RNA와의 복합체에서 제81항의 염기 편집기와 상기 폴리뉴클레오티드를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 염기 편집기는 시티딘 데아미나제 도메인을 포함하고, 상기 1개 이상의 가이드 RNA는 상기 폴리뉴클레오티드에서 G·C에서 T·A로 변경을 이루도록 염기 편집기를 표적으로 하는, 방법.
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 상기 편집이 표적 폴리뉴클레오티드 서열에서 50% 미만의 삽입결실 형성을 초래하는, 방법.
  86. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 편집이 점 돌연변이를 발생시키는, 방법.
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Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4880635B1 (en) 1984-08-08 1996-07-02 Liposome Company Dehydrated liposomes
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US4921757A (en) 1985-04-26 1990-05-01 Massachusetts Institute Of Technology System for delayed and pulsed release of biologically active substances
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH0825869B2 (ja) 1987-02-09 1996-03-13 株式会社ビタミン研究所 抗腫瘍剤包埋リポソ−ム製剤
US4911928A (en) 1987-03-13 1990-03-27 Micro-Pak, Inc. Paucilamellar lipid vesicles
US4917951A (en) 1987-07-28 1990-04-17 Micro-Pak, Inc. Lipid vesicles formed of surfactants and steroids
US5173414A (en) 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
US5846946A (en) 1996-06-14 1998-12-08 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Compositions and methods for administering Borrelia DNA
ATE527281T1 (de) 2004-07-16 2011-10-15 Us Gov Health & Human Serv Impfstoffe gegen aids umfassend cmv/r nucleinsäurekonstrukte
NZ587060A (en) 2007-12-31 2012-09-28 Nanocor Therapeutics Inc Rna interference for the treatment of heart failure
US9405700B2 (en) 2010-11-04 2016-08-02 Sonics, Inc. Methods and apparatus for virtualization in an integrated circuit
CN105139759B (zh) 2015-09-18 2017-10-10 京东方科技集团股份有限公司 一种拼接屏
IL294014B2 (en) 2015-10-23 2024-07-01 Harvard College Nucleobase editors and their uses
IL308426A (en) 2016-08-03 2024-01-01 Harvard College Adenosine nuclear base editors and their uses
US11898179B2 (en) * 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US20220307001A1 (en) * 2018-02-27 2022-09-29 President And Fellows Of Harvard College Evolved cas9 variants and uses thereof

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