KR20230154015A - 레트로바이러스 벡터 - Google Patents

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KR20230154015A
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스티븐 하이드
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아이피2아이피오 이노베이션스 리미티드
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Abstract

본 발명은 프로모터 및 이식 유전자를 포함하는, 레트로바이러스 유전자 전달 벡터, 특히 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 렌티바이러스 벡터에 관한 것이고; 그것을 제조하는 방법을 포함한다. 본 발명은 또한 특히 낭포성 섬유증(CF)과 같은 호흡기 질환의 치료를 위한 유전자 치료에서의 상기 벡터의 용도에 관한 것이다.

Description

레트로바이러스 벡터
본 발명은 레트로바이러스 유전자 전달 벡터, 특히 프로모터 및 이식유전자(transgene)를 포함하는, 호흡기 파라믹소바이러스(respiratory paramyxovirus)로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN: hemagglutinin-neuraminidase) 및 융합(F: fusion) 단백질로 위형화된(pseudotyped) 렌티바이러스 벡터, 및 그의 제조 방법에 관한 것이다.
레트로바이러스는 효소 역전사 효소(enzyme reverse transcriptase)를 암호화하는 RNA 바이러스(Retroviridae) 계열이다. 렌티바이러스는 Retroviridae과의 한 속(genus)으로, 긴 잠복기가 특징이다. 레트로바이러스, 특히 렌티바이러스는 상당한 양의 바이러스 RNA를 숙주 세포의 DNA 내에 전달할 수 있고, 레트로바이러스 중에서 비분열 세포(non-dividing cell)를 감염시킬 수 있는 독특한 능력을 갖고 있어, 유전자 전달 벡터의 가장 효율적인 방법 중 하나이다.
슈도타이핑(Pseudotyping)은 외래 바이러스 외피 단백질과 결합하여 바이러스 또는 바이러스 벡터를 생산하는 과정이다. 이와 같이, 외래 바이러스 외피 단백질은 숙주 친화성을 변경하거나 바이러스 입자의 안정성을 증가/감소시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 슈도타이핑(pseudotyping)을 통해 외피 단백질의 특성을 지정할 수 있다. 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터를 슈도타이핑하기 위해 자주 사용되는 단백질은 수포성 구내염 바이러스(VSV: Vesicular stomatitis virus)의 당단백질 G, 짧은 VSV-G이다.
렌티바이러스 벡터, 특히 HIV-1에서 파생된 벡터는 널리 연구되고 자주 사용되는 벡터이다. 렌티바이러스 벡터 백본의 진화와 재조합 DNA 분자(이식 유전자)를 표적 세포 내로 전달하는 바이러스의 능력으로 인해 많은 응용 분야에서 사용되었다. 바이러스 벡터의 두 가지 가능한 응용 분야는 체외 재조합 단백질 생산에서 유전자 치료 및 기능 유전자의 복원을 포함한다.
유전자 전달 벡터로 사용하기에 적합한 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터를 설계할 때, 한 가지 주요 요인은 벡터를 환자에게 가능한 한 안전하게 만드는 것이다. 두 번째 주요 요인은 개별 환자를 치료하는 것뿐만 아니라 치료의 혜택을 받을 수 있는 모든 환자를 위해 치료에 대한 더 넓은 임상 접근을 허용하기 위해 충분한 양의 벡터를 생산해야 할 필요성이다. 벡터 안전(vector safety)을 개선하는 수정은 종종 벡터 생산 중 수율 감소와 관련되기 때문에 이 두 요인은 충돌할 수 있다.
기도 상피(airway epithelium)로의 유전자 전달로부터 이점을 얻을 수 있는 임상 설정의 한 예는 낭포성 섬유증(CF: Cystic Fibrosis)의 치료이다. CF는 기도 상피 세포에서 염화물 채널(chloride channel) 역할을 하는 CFTR(CF transmembrane Conductance Regulator) 유전자의 돌연변이로 인해 발생하는 치명적인 유전 질환이다. CF는 재발성 흉부 감염(recurrent chest infection), 증가된 기도 분비물, 및 궁극적으로 호흡 부전(respiratory failure)을 특징으로 한다. 영국의 현재 사망 평균 연령은 약 25세이다. 대부분의 유전자형의 경우, 기본 결함을 대상으로 하는 치료법이 없고; 증상 완화를 위한 현재의 치료법은 매일 몇 시간의 자가-관리 요법이 필요하다. 소분자 약물과 달리 유전자 요법은 CFTR 돌연변이 클래스와 독립적이므로, 영향을 받는 모든 CF 개체에게 적용할 수 있다. 그러나, 현재까지 CF의 치료에 임상적으로 사용하도록 승인된 바이러스 벡터는 없고, 다른 질병, 특히 많은 다른 호흡기 질환에도 동일하게 적용된다.
환자 안전 및 수율 문제 외에도, 기도 상피로의 유전자 전달과 관련하여 통상적으로 관련된 다른 어려움이 있다.
기도 상피로의 유전자 전달 효율은 일반적으로 좋지 않은데, 이는 많은 바이러스 벡터에 대한 각각의 수용체가 주로 기도 상피의 기저외측 표면에 국한되는 것으로 보이기 때문이다. 이와 같이, 본 발명자들의 연구 이전에, 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine) 또는 에틸렌 글리콜 비스(2-아미노에틸 에테르)-N,N,N’N’-테트라아세트산과 같은 세제를 사용하여 기도를 변환하기 위해 상피 무결성을 파괴해야 하는 렌티바이러스 슈도타입의 사용은 패혈증의 위험 증가와 관련이 있어 왔다. 또한, 기존의 유전자 전달 벡터는 호흡기 점액층을 통과하기 어려워 유전자 전달 효율도 저하된다. 자가-재생 상피의 평생 치료에 필수적인 기존의 바이러스 벡터를 반복적으로 투여하는 능력은 환자의 적응 면역 반응으로 인해 성공적인 반복 투여를 방해하기 때문에 제한적이다.
임상 적용을 위한 벡터의 투여는 또 다른 적절한 요소이다. 따라서, 치료 효과를 위해서는 임상적으로 관련된 장치(예를 들어, 기관지경 및 분무기) 사용을 통한 바이러스 안정성이 유지되어야 한다.
따라서 상기 기술된 하나 이상의 문제를 피할 수 있는 유전자 치료 벡터가 필요하다. 특히, 본 발명의 목적은 슈도타이핑된 레트로바이러스 또는 렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생산하는 방법 및 상기 방법을 수행하기 위한 수단을 제공하는 것이고, 여기서 생성된 벡터는 안전하고 기도 상피를 통한 향상된 유전자 전달 효율에 적합하며, 임상적으로 관련된 규모로 생산된다.
발명의 요약
본 발명자들은 이전에 호흡기 파라믹소바이러스로(paramyxovirus)부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 렌티바이러스 벡터를 개발하였고, 이는 프로모터 및 이식 유전자를 포함한다. 일반적으로, 벡터의 백본은 SIV1 또는 아프리카 녹색 원숭이 SIV(SIV-AGM)와 같은 유인원 면역결핍 바이러스(SIV)에서 유래한다. 바람직하게는 본 발명의 바이러스 벡터의 백본은 SIV-AGM으로부터 유래한다. HN 및 F 단백질은 각각 시알산에 부착하고 표적 세포로의 벡터 진입을 위한 세포 융합을 매개하는 기능을 한다. 본 발명자들은 이 특이적으로 F/HN-슈도타이핑된 렌티바이러스 벡터가 기도 상피를 효율적으로 형질도입할 수 있고, 그 결과 기도 상피 세포의 제안된 수명을 초과하는 기간 동안 이식 유전자 발현이 지속됨을 발견하였다. 중요한 것은, 본 발명자들은 또한 재투여가 효능의 손실을 초래하지 않는다는 것을 발견하였다. 이들 특징은 본 발명의 벡터가 (i) 기도 세포 내에서; (ii) 기도의 내강(lumen) 내로 분비되고; 그리고 (iii) 순환계 내로 분비되는 치료 단백질을 발현하는데 사용함으로써 질병을 치료하기 위한 매력적인 후보가 되게 한다.
그러나, 이 렌티바이러스 벡터에는 잠재적인 안전성 문제가 있었다. 특히, 게놈 벡터와 그 생산에 사용된 GagPol 벡터 사이에는 상당한 정도의 서열 상동성(sequence homology)이 있었다. 이 서열 상동성은 복제 가능 렌티바이러스(RCL: replication competent lentivirus)가 제조 동안 또는 환자에게 투여된 후 임상 사용 중에 생성될 수 있다는 이론적 위험을 야기한다. 이는 환자에게 안전 위험을 나타낸다. 복제 가능 바이러스 입자 생성의 위험은 다른 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터에서도 문제가 된다.
이 위험을 완화하는 것이 바람직하지만, 그렇게 하는 것은 간단하지 않거나 적어도 허용할 수 없는 다른 단점을 유발하지 않고는 아니다. 특히, 제조 gag-pol 유전자의 코돈-최적화와 같은 RCL의 위험 감소를 목표로 하는 변형은 전형적으로 역가 또는 벡터의 수율에 부정적인 영향을 미친다는 것이 당업계에 확립되어 있다. 단일 환자를 치료하는 데 필요한 벡터의 역가가 크다는 점을 감안할 때, 이러한 수율 감소는 생산을 상업적으로 불가능하게 만들 가능성이 있다.
본 발명자들은 이제 처음으로 SIV로부터의 코돈-최적화된 gal-pol 유전자의 사용이 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 SIV 벡터의 제조된 역가에 부정적인 영향을 미치지 않고, 심지어 벡터의 역가를 증가시킬 수 있음을 입증하였다. 이는 정상적인 제조 조건(gag-pol 유전자가 아닌 벡터 게놈 플라스미드가 제한적일 때)에서 gag-pol 유전자의 코돈-최적화가 일반적으로 벡터 수율을 감소시킨다는 점을 감안하면 놀라운 일이다.
따라서, 본 발명자들은 부정적인 영향을 미치거나 벡터 역가를 증가시키지 않으면서 RCL의 위험이 감소된 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스, 특히 SIV와 같은 렌티바이러스 벡터의 생산 방법을 처음으로 제공하였다. 따라서, 본 발명의 방법은 상업적으로 바람직한 수율로 생산된 보다 안전한 벡터를 제공한다.
따라서, 본 발명은 호흡기 파라믹소바이러스로부터 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 생산하는 방법을 제공하고, 이는 프로모터 및 이식 유전자를 포함하며, 상기 방법은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자의 용도를 포함한다. 바람직하게는, 레트로바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이고, 선택적으로 렌티바이러스 벡터는 유인원 면역결핍 바이러스(SIV) 벡터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 벡터, 고양이 면역결핍 바이러스(FIV) 벡터, 말 감염성 빈혈 바이러스(EIAV) 벡터, 및 Visna/maedi 바이러스 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다. SIV 벡터를 생산하는 방법이 특히 바람직하다.
코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SIV gag-pol 유전자일 수 있다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 5와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 플라스미드에 포함될 수 있다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 플라스미드에 포함될 수 있다.
호흡기 파라믹소바이러스는 센다이 바이러스(Sendai virus)일 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가는: (a) 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가와 동등할 수 있거나; 또는 (b) 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가와 비교하여 증가된다. 선택적으로, 레트로바이러스 벡터의 역가는 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가보다 적어도 1.5배, 적어도 2배, 또는 적어도 2.5배 클 수 있다.
프로모터는 CMV(cytomegalovirus) 프로모터, EF1a(elongation factor 1a) 프로모터, 및 hCEF(hybrid human CMV enhancer/EF1a) 프로모터로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 바람직하게는 벡터는 하이브리드 인간 CMV 인핸서/EF1a(hCEF) 프로모터를 포함한다.
이식 유전자는: (a) 분비된 치료 단백질, 선택적으로 알파-1 항트립신(A1AT), 인자 VIII, 계면활성제 단백질 B(SFTPB), 인자 VII, 인자 IX, 인자 X, 인자 XI, 폰 빌레브란트 인자(von Willebrand Factor), 과립구 큰포식세포 집락자극인자(Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor(GM-CSF)) 및 감염원에 대한 단클론 항체; 또는 (b) CFTR, ABCA3, DNAH5, DNAH11, DNAI1, 및 DNAI2로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 이식 유전자는: (i) CFTR; (ii) A1AT; 또는 (iii) FVIII를 암호화한다.
특히 바람직한 구체예에서, 상기 방법은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하고, 여기서: (a) 프로모터는 hCEF 프로모터이고 이식 유전자는 CFTR을 암호화하고; (b) 프로모터는 hCEF 프로모터이고 이식 유전자는 A1AT를 암호화하고, 또는 (c) 프로모터는 hCEF 또는 CMV 프로모터이고 이식 유전자는 FVIII를 암호화한다.
본 발명의 방법은 다음 단계를 포함하거나 다음으로 구성될 수 있다: (a) 벡터 게놈 플라스미드, 바람직하게는 pGM830 및 pGM326 또는 본 명세서에 정의된 그의 변이체로부터 선택되는 것; (b) co-galpol 플라스미드, 바람직하게는 pGM691 또는 본 명세서에 정의된 그의 변이체; (c) Rev 플라스미드, 바람직하게는 pGM299 또는 본 명세서에 정의된 그의 변이체; (d) 융합(F) 단백질 플라스미드, 바람직하게는 pGM301 또는 본 명세서에 정의된 그의 변이체; 및 (e) 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 플라스미드, 바람직하게는 pGM303 또는 본 명세서에 정의된 그의 변이체. 벡터 게놈 플라스미드: co-gagpol 플라스미드: Rev 플라스미드: F 플라스미드: HN 플라스미드의 비율은 20:9:6:6:6일 수 있다.
상기 방법의 단계 (a)-(f)는 순차적으로 수행될 수 있다. 세포는 HEK293 세포(예를 들어 HEK293F 또는 HEK293T 세포) 또는 293T/17 세포일 수 있다. 뉴클레아제의 첨가는 채취 전 단계일 수 있다. 트립신의 첨가는 채취 후 단계일 수 있다. 정제 단계는 하나 이상의 크로마토그래피 단계를 포함할 수 있다.
벡터 게놈 플라스미드는 레트로바이러스 ORF의 수를 줄이기 위해 변형될 수 있다.
본 발명은 또한 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 포함하는 핵산을 제공하고, 상기 핵산은 SEQ ID NO: 1과 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는다. 바람직하게는 핵산은 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 본 발명의 핵산을 포함하는 플라스미드를 제공하고, 상기에서 선택적으로: (a) 플라스미드는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는 (b) 플라스미드는 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 선택적으로 플라스미드 내에서 핵산은 Gag 및 Pol 단백질의 발현을 유도하는 프로모터, 바람직하게는 CAG 프로모터에 작동 가능하게 연결된다.
본 발명은 또한 본 발명의 핵산 및/또는 본 발명의 플라스미드를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 추가로 본 발명의 방법에 의해 얻을 수 있는 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해 얻을 수 있는 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 질병 치료 방법을 제공한다. 치료될 질환은 폐 질환, 바람직하게는 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)일 수 있다.
도 1: pGM297로부터의 야생형(코돈-최적화되지 않은) gag-pol 유전자와 pGM691로부터의 본 발명의 예시적인 코돈-최적화된 gag-pol 유전자의 정렬을 도시하고, 야생형 서열에 대한 변화를 도시한다.
도 2: a-f는 본 발명의 벡터 생산에 사용되는 예시적인 플라스미드의 개략도를 도시한다. g는 본 발명에 따라 코돈-최적화될 수 있는 코돈-최적화되지 않은 gag-pol 플라스미드(pDNA2a, 특히 pGM297)를 도시한다.
도 3: 본 발명의 A1AT 벡터의 생산에 사용되는 예시적인 pDNA1 플라스미드의 개략도를 도시한다.
도 4: a-d는 본 발명의 FVIII 벡터의 생산에 사용되는 예시적인 pDNA1 플라스미드의 개략도를 도시한다.
도 5: a는 pDNA1 플라스미드 pGM326과 코돈-최적화되지 않은 pDNA2a 플라스미드 pGM297 사이의 상동성을 예시한다. b는 본 발명의 코돈-최적화되지 않은 pDNA2a 플라스미드 pGM297과 코돈-최적화된 pDNA2a 플라스미드 pGM691을 주해된(annotated) 2개 사이의 차이점과 비교한다. c DNA 매트릭스 상동성 플롯은 pGM297(가로축)과 pGM691(세로축)에 존재하는 DNA 서열 간의 상동성을 설명한다. 실선 대각선은 서열 상동성을 나타내고, 파선은 서열 동일성이 감소된 영역을 강조 표시하고; pGM691에서 gag 및 pol 유전자 코돈 최적화 영역에서 감소된 서열 동일성에 주목한다. 또한 pGM297에 존재하는 추가 서열(가로축에 표시된 번호로 대략 6000 내지 7000개의 염기에 위치함)에 주목한다 - 이는 pGM297에는 존재하지만 pGM691에는 존재하지 않는 RRE 영역이다. d pGM297(하단 DNA 서열) 및 pGM691(상단 DNA 서열)의 gag pol 영역의 ClustalW DNA 서열 정렬; 서열 상동성은 박스 안의 음영 영역으로 표시되고, 컨센서스 DNA 서열은 pGM691 및 pGM297 서열 목록 아래에 도시된다. (i) gag pol 슬립 영역, gag pol 유전자의 중복 부분, 및 (ii) 토끼 베타 글로빈 폴리 아데닐화 서열(RBG pA)에서 pGM297과 pGM691 서열 간의 완전한 DNA 상동성을 주목한다. 또한 pGM297에는 SIV RRE 서열이 함유되어 있지만 pGM691에는 없다. E는 pGM693 플라스미드 내의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자의 제한 지도(restriction map)를 도시한다.
도 6: a는 실험 설계(DOE) 조건하에서, 코돈-최적화된 pDNA2a 플라스미드 pGM691의 사용이 rSIV.F/HN hCEF-CFTR 벡터의 역가에서 관찰할 수 있는 증가를 초래했음을 도시한다. b는 코돈-최적화 pDNA2a 플라스미드 pGM691을 사용하여 수득한 rSIV.F/HN hCEF-CFTR 벡터 역가의 증가가 두 개의 상이한 실험 조건 세트에 걸쳐 나타남을 도시한다.
도 7: 코돈-최적화 pDNA2a 플라스미드 pGM691을 사용하여 수득한 rSIV.F/HN CMV-EGFP 벡터의 역가가 pDNA2a 플라스미드 pGM297에서 코돈-최적화되지 않은 gagpol을 사용하여 수득한 것보다 큼을 도시한다. 이는 F/HN 슈도타이핑된 벡터에서 코돈-최적화된 gagpol의 유리한 특성이 rSIV.F/HN hCEF-CFTR에 제한되지 않고, F/HN 슈도타이핑된 벡터에서 코돈-최적화된 gagpol을 사용하는 일반적인 특성임을 시사한다.
도 8: pGM326 벡터 게놈 플라스미드의 Partial Gag RRE cPPT hCEF 영역에 대한 선형 플라스미드 지도를 도시한다.
도 9: SIV ORF가 확인된 pGM326 벡터 게놈 플라스미드의 주해된 개략도를 도시한다. 특히, 189개 아미노산(aa) 중 하나, 250aa 중 하나인 두 개의 큰 ORF가 hCEF 프로모터 및 soCFTR2 이식 유전자의 업스트림에서 확인되었다.
도 10: 다른 동일한 조건(비-coGagPol 포함)에서 pGM326 벡터 게놈 플라스미드 및 변형된 pGM830 벡터 게놈 플라스미드가 HEK293T 세포(좌측 패널) 및 A549 세포(우측 패널) 모두에서 유사한 벡터 역가를 생성함을 도시한다.
도 11: coGagPol과 pGM326 또는 pGM830을 사용하여 다른 동일한 조건에서 생성된 벡터 역가를 도시하고, coGagPol이 pGM830과 결합될 때 증가된 벡터 역가에 대해 관찰 가능한 경향이 있다.
발명의 상세한 설명
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 명세서가 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)는 당업자에게 본 명세서에서 사용되는 많은 용어의 일반 사전을 제공한다. 용어의 의미와 범위는 명확해야 하지만; 잠재적 다의성이 있는 경우, 본 명세서에 제공된 정의가 사전 또는 외부 정의보다 우선한다. 본 발명은 본 명세서에 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 및 시약 등에 제한되지 않고 그 자체가 다양할 수 있음이 이해되어야 한다.
본 명세서는 본 명세서에 개시된 예시적인 방법 및 재료에 의해 제한되지 않고, 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 명세서의 구체예의 실행 또는 테스트에 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정한 구체예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명의 권리범위를 한정하려는 의도가 아니고, 본 발명은 특허청구범위에 의해서만 정의된다.
본 발명의 구체예에 대한 설명은 완전하거나 개시된 정확한 형태로 본 발명을 제한하려는 것이 아니다. 본 명세서의 특정 구체예 및 실시예는 설명의 목적으로 본 명세서에 기재되어 있지만, 관련 기술 분야의 숙련자가 인식하는 바와 같이, 명세서의 범위 내에서 다양한 등가 변형이 가능하다. 예를 들어, 방법 단계 또는 기능이 주어진 순서로 제공되는 반면, 대안적인 구체예는 다른 순서로 기능을 수행할 수 있거나, 기능이 실질적으로 동시에 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 명세서의 교시 내용은 적절하게 다른 절차 또는 방법에 적용될 수 있다. 본 명세서에 기술된 다양한 구체예는 조합되어 추가 구체예를 제공할 수 있다. 본 명세서의 측면은, 필요하다면, 본 명세서의 또 다른 구체예를 제공하기 위해 상기 참조 및 출원의 구성, 기능, 및 개념을 채용하도록 변형될 수 있다. 또한, 생물학적 기능적 동등성 고려로 인해, 종류 또는 양의 생물학적 또는 화학적 작용에 영향을 미치지 않으면서 단백질 구조에 약간의 변화를 줄 수 있다. 이러한 변경 및 기타 변경은 상세한 설명에 비추어 본 명세서에 대해 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변형은 첨부된 청구범위 내에 포함되도록 의도된다.
달리 표시되지 않는 한, 임의의 핵산 서열은 5'에서 3' 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 기록되고; 아미노산 서열은 각각 아미노에서 카르복시 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 기록된다.
본 명세서 제공된 제목은 본 명세서의 다양한 측면 또는 구체예의 제한이 아니다.
본 명세서에서, "~할 수 있는"이라는 용어는 동사와 함께 사용될 때, 해당 동사의 작용을 포함하거나 의미한다. 예를 들어, ”상호 작용할 수 있는"은 또한 상호 작용을 의미하고, "절단 가능할 수 있는"은 또한 절단을 의미하고, “결합할 수 있는"은 또한 결합을 의미하고, "특이적으로 표적화할 수 있는…"은 또한 특이적 표적을 의미한다.
용어의 다른 정의는 명세서 전반에 걸쳐 나타날 수 있다. 예시적인 구체예가 더 상세하게 설명되기 전에, 본 명세서가 설명된 특정 구체예에 제한되지 않고, 이와 같이 변경될 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 범위는 첨부된 특허청구범위에 의해서만 정의될 것이기 때문에, 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정 구체예를 설명하기 위한 것이고, 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다.
숫자 범위에는 범위를 정의하는 숫자가 포함된다. 값의 범위가 제공되는 경우, 문맥에서 달리 명시하지 않는 한, 하한 단위의 10분의 1까지 해당 범위의 상한과 하한 사이의 각 중간 값도 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 임의의 명시된 값 또는 명시된 범위의 중간 값과 임의의 다른 명시된 값 또는 해당 명시된 범위의 중간 값 사이의 각각의 더 작은 범위는 본 명세서 내에 포함된다. 이들 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 범위에 포함되거나 제외될 수 있고, 더 작은 범위에 어느 하나, 둘 다, 또는 둘 다 포함되지 않는 각각의 범위는 또한, 명시된 범위에서 임의로 특이적으로 배제된 제한에 따라, 본 명세서 내에 포함된다. 명시된 범위가 제한 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 포함된 제한 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 관사 “하나의”(“a" 및 “an")는 관사의 문법적 대상 중 하나 또는 둘 이상(예를 들어, 적어도 하나)을 의미할 수 있다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급하지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, "포함한다" 및 "포함되는"과 같은 다른 형태뿐만 아니라 "포함하는"이라는 용어의 사용은 제한되지 않는다.
"약"은 일반적으로 측정의 특성 또는 정밀도를 고려할 때 측정된 양에 대해 허용 가능한 오류 정도를 의미할 수 있다. 예시적인 오류 정도는 주어진 값 또는 값 범위의 20퍼센트(%) 이내, 일반적으로 10% 이내, 보다 일반적으로 5% 이내이다. 바람직하게는, 용어 "약"은 본 명세서에서 사용되는 수치의 플러스 또는 마이너스 (±) 5%, 바람직하게는 ±4%, ±3%, ±2%, ±1%, ±0.5%, ±0.1%로 이해되어야 한다.
용어 “구성되는(consisting of)”은 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물, 방법, 및 이들의 각각의 구성 요소를 의미하고, 이는 본 발명의 해당 설명에 인용되지 않은 임의의 요소를 배제한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)“은 주어진 발명에 필요한 요소를 의미한다. 이 용어는 해당 발명의 기본적이고 신규하거나 기능적인 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 요소(즉, 비활성 또는 면역원성이 없는 성분)의 존재를 허용한다.
하나 이상의 특징을 "포함하는" 것으로 본 명세서에 기재된 구체예는 또한 이러한 특징으로 "구성되는" 및/또는 "필수적으로 구성되는" 대응하는 구체예의 개시로서 간주될 수 있다.
농도, 양, 부피, 백분율, 및 기타 수치는 범위 형식으로 본 명세서에 표시될 수 있다. 또한 이러한 범위 형식은 편의와 간결성을 위해 사용되고 범위의 제한으로 명시적으로 언급된 수치 값을 포함할 뿐만 아니라 모든 개별 수치 또는 하위 범위가 명시적으로 언급된 것처럼 해당 범위 내에 포함된 모든 개별 수치 또는 하위 범위를 포함하는 것으로 해석되어야 함을 이해해야 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "벡터", "레트로바이러스 벡터”, 및 "레트로바이러스 F/HN 벡터"는 달리 명시되지 않는 한 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 의미하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 용어 "렌티바이러스 벡터" 및 "렌티바이러스 F/HN 벡터"는 달리 명시되지 않는 한 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 렌티바이러스 벡터를 의미하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 본 발명의 레트로바이러스 벡터에 관한 본 명세서의 모든 개시 내용은 본 발명의 렌티바이러스 벡터 및 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 SIV 벡터(본 명세서에서 SIV F/HN 또는 SIV-FHN으로도 지칭됨)에 동일하게 그리고 유보 없이 적용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "역가" 및 "수율"은 본 발명의 방법에 의해 생산된 렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 양을 의미하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 역가는 제조 효율성을 특징짓는 주요 벤치마크이고, 역가가 높을수록 일반적으로 더 많은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터가 제조됨을 나타낸다(예를 들어, 동일한 양의 시약 사용). 역가 또는 수율은, 표적 세포의 게놈 내에 통합된 벡터 게놈의 수(통합 역가)와 관련될 수 있고, 이는 "활성" 바이러스 입자의 척도, 즉 세포를 형질 도입할 수 있는 입자의 수이다. 형질 도입 단위(TU/mL 또는 TTU/mL라고도 함)는 특정 조직 배양/바이러스 희석 조건에서 형질 도입되는 숙주 세포 수의 생물학적 판독값이고, "활성" 바이러스 입자 수의 척도이다. (활성+비활성) 바이러스 입자의 총 수는, 테스트 용액에 얼마나 많은 Gag가 존재하는지 또는 테스트 용액에 얼마나 많은 바이러스 RNA 복제본이 있는지 측정하는 것과 같은, 임의의 적절한 수단을 사용하여 결정될 수도 있다. 그런 다음 렌티바이러스 입자가 2000개의 Gag 분자 또는 2개의 바이러스 RNA 분자를 포함한다고 가정한다. 총 입자 수와 형질 도입 역가/TU가 측정되면, 입자:감염 비율이 계산된다. 아미노산은 아미노산의 이름, 세 글자 약어 또는 한 글자 약어를 사용하여 본 명세서에서 언급된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되어 인접한 잔기의 알파-아미노 및 카르복실기 사이의 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 일련의 아미노산 잔기를 지정한다. 용어 "단백질" 및 “폴리펩티드"는, 크기나 기능에 관계없이, 변형된 아미노산(예를 들어, 인산화, 당화, 글리코실화 등) 및 아미노산 유사체를 포함하는 아미노산의 중합체를 의미한다. "단백질" 및 "폴리펩티드"는 상대적으로 큰 폴리펩티드와 관련하여 종종 사용되는 반면, 용어 "펩티드"는 종종 작은 폴리펩티드와 관련하여 사용되지만, 당업계에서 이들 용어의 사용은 중복된다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 유전자 산물 및 이의 단편을 언급할 때 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다. 따라서, 예시적인 폴리펩티드 또는 단백질은 유전자 산물, 자연 발생 단백질, 상동체, 오르토로그(orthologs), 파라로그(paralogs), 단편 및 기타 등가물, 변이체, 단편, 및 전술한 유사체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드", “핵산", 및 "핵산 서열"은 리보핵산, 데옥시리보핵산, 또는 그의 유사체의 단위를 포함하는 임의의 분자, 바람직하게는 중합체 분자를 의미한다. 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 단일 가닥 핵산은 변성 이중 가닥 DNA의 하나의 핵산 가닥일 수 있다. 또는, 임의의 이중 가닥 DNA에서 파생되지 않은 단일 가닥 핵산일 수 있다. 한 측면에서, 핵산은 DNA일 수 있다. 또 다른 측면에서, 핵산은 RNA일 수 있다. 적합한 핵산 분자는 게놈 DNA 또는 cDNA를 포함하는 DNA이다. 다른 적합한 핵산 분자는 siRNA, shRNA, 및 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 RNA이다. 용어 “이식 유전자" 및 "유전자"는 또한 상호 교환적으로 사용되고 두 용어 모두 표적 단백질을 암호화하는 단편 또는 변이체를 포함한다.
본 발명의 이식 유전자는 자연 발생 환경으로부터 제거된 핵산 서열, 재조합 또는 클로닝된 DNA 분리물, 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다.
본 발명의 아미노산 서열(들)의 경미한 변이가 본 발명의 아미노산 서열 또는 본 명세서에 정의된 이의 단편에 대해 적어도 60%, 적어도 70%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 가장 바람직하게는 적어도 97% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 유지한다면, 아미노산 서열(들)의 변이가 본 발명에 포함되는 것으로 고려된다. 용어 상동성은 본 명세서에서 동일성을 의미하기 위해 사용된다. 이와 같이, 본 발명의 아미노산 서열의 변이체 또는 유사체 서열은 치환(전형적으로 보존적 치환) 결실 또는 삽입에 기초하여 상이할 수 있다. 이러한 변이를 포함하는 단백질은 본 명세서에서 변이체라고 한다.
본 발명의 단백질은, 한 종의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존 위치에서 다른 종의 상응하는 잔기로 치환된, 변이체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 단백질 분자의 변이체는 본 발명에서 생산되고 사용될 수 있다. 단백질의 구조/특성-활성 관계[예를 들어, Wold, et al. Multivariate data analysis in chemistry. Chemometrics-Mathematics and Statistics in Chemistry (Ed.: B. Kowalski); D. Reidel Publishing Company, Dordrecht, Holland, 1984 (ISBN 90-277-1846-6 참조] 정량적 활성-특성 관계에 다변량 데이터 분석 기술을 적용하는 데 있어서 계산 화학의 선두에 따라 통계적 회귀, 패턴 인식, 및 분류와 같은 공지된 수학적 기법을 사용하여 유도할 수 있다[예를 들어, Norman et al. Applied Regression Analysis. Wiley-lnterscience; 3rd edition (April 1998) ISBN: 0471170828; Kandel, Abraham et al. Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis. Prentice Hall PTR, (May 11, 1995), ISBN: 0133418847; Krzanowski, Wojtek. Principles of Multivariate Analysis: A User's Perspective (Oxford Statistical Science Series, No 22 (Paper)). Oxford University Press; (December 2000), ISBN: 0198507089; Witten, Ian H. et al Data Mining: Practical Machine Learning Tools and Techniques with Java Implementations. Morgan Kaufmann; (October 11, 1999), ISBN:1558605525; Denison David G. T. (Editor) et al Bayesian Methods for Nonlinear Classification and Regression (Wiley Series in Probability and Statistics). John Wiley & Sons; (July 2002), ISBN: 0471490369; Ghose, Arup K. et al. Combinatorial Library Design and Evaluation Principles, Software, Tools, and Applications in Drug Discovery. ISBN: 0-8247-0487-8 참조]. 단백질의 특성은 단백질 서열, 기능, 및 3차원 구조의 경험적 및 이론적 모델(예를 들어, 가능한 접촉 잔기의 분석 또는 계산된 물리 화학적 특성)에서 파생될 수 있고 이러한 특성은 개별적으로 또는 조합하여 고려될 수 있다.
아미노산은 아미노산의 명명, 세 글자 약어, 또는 한 글자 약어를 사용하여 본 명세서에서 언급된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "단백질"은 단백질, 폴리펩티드, 및 펩티드를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노산 서열"은 용어 "폴리펩티드" 및/또는 용어 "단백질"과 동의어이다. 일부 경우에, 용어 "아미노산 서열"은 용어 "펩티드"와 동의어이다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 본 명세서 및 특허청구범위에서, 아미노산 잔기에 대한 통상의 한 글자 및 세 문자 코드가 사용될 수 있다. IUPACIUB JCBN(Joint Commission on Biochemical Nomenclature)에 따라 정의된 아미노산의 세 글자 코드이다. 유전자 코드의 축퇴(degeneracy)로 인해 폴리펩티드가 하나 이상의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다는 것도 이해된다.
비보존 위치의 아미노산 잔기는 보존적 또는 비보존적 잔기로 치환될 수 있다. 특히, 보존적 아미노산 대체가 고려된다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 또는 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 또는 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 또는 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 또는 히스티딘)을 포함하여, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 따라서, 폴리펩티드의 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리의 다른 아미노산으로 대체되면, 아미노산 치환은 보존적인 것으로 간주된다. 본 발명의 단백질에 보존적으로 변형된 변이체의 포함은 다른 형태의 변이체, 예를 들어 다형성 변이체, 종간 상동체, 및 대립 유전자를 배제하지 않는다.
"비보존적 아미노산 치환"은 (i) 전기 양성 측쇄를 갖는 잔기(예를 들어, Arg, His, 또는 Lys)가 전기 음성 잔기(예를 들어, Glu 또는 Asp)로 치환되거나, (ii) 친수성 잔기(예를 들어, Ser 또는 Thr)가 소수성 잔기(예를 들어, Ala, Leu, Ile, Phe, 또는 Val)로 치환되거나, (iii) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기로 치환되거나, 또는 (iv) 부피가 큰 소수성 또는 방향족 측쇄를 갖는 잔기(예를 들어, Val, His, Ile, 또는 Trp)가 더 작은 측쇄를 갖거나(예를 들어, Ala 또는 Ser) 측쇄가 없는 잔기(예를 들어, Gly)로 치환되는 것을 포함한다.
“삽입(insertions)” 또는 “결실(deletions)”은 일반적으로 약 1, 2, 또는 3개의 아미노산 범위이다. 허용되는 변이는 재조합 DNA 기술을 사용하여 단백질에 아미노산의 삽입 또는 결실을 체계적으로 도입하고 생성된 재조합 변이체의 활성을 분석하여 실험적으로 결정할 수 있다. 이는 숙련된 사람에게 일상적인 실험 이상을 요구하지 않는다.
폴리펩티드의 "단편"은 원래의 폴리펩티드의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 그 이상을 포함한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 당업계에 공지된 임의의 수단에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 많은 양의 폴리뉴클레오티드가 적합한 숙주 세포에서 복제에 의해 생산될 수 있다. 원하는 단편을 코딩하는 천연 또는 합성 DNA 단편은, 원핵 또는 진핵 세포에 도입 및 복제할 수 있는 재조합 핵산 구조, 일반적으로 DNA 구조 내에 통합될 것이다. 일반적으로 DNA 구조는, 효모 또는 박테리아와 같은 단세포 숙주에서 자율 복제(autonomous replication)에 적합할 것이지만, 배양된 곤충, 포유류, 식물, 또는 다른 진핵 세포주의 게놈으로의 도입 및 통합을 위해 의도될 수도 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 또한 화학적 합성, 예를 들어 포스포아미다이트(phosphoramidite) 방법 또는 트리-에스테르 방법에 의해 상업적으로 자동화된 올리고뉴클레오티드 합성기에서 수행될 수 있다. 이중 가닥 단편은 상보 가닥을 합성하고 적절한 조건에서 가닥을 함께 어닐링하거나 적절한 프라이머 서열과 함께 DNA 폴리머라제를 사용하여 상보 가닥을 추가함으로써 화학적 합성의 단일 가닥 생성물로부터 얻을 수 있다.
핵산 서열에 적용될 때, 본 발명의 맥락에서 용어 “단리된(isolated)”은 폴리뉴클레오티드 서열이 그의 천연 유전적 환경에서 제거되었고, 따라서 다른 이질적이거나 원치 않는 코딩 서열이 없으며(그러나 프로모터 및 터미네이터와 같은 자연 발생 5' 및 3' 비번역 영역을 포함할 수 있음), 유전적으로 조작된 단백질 생산 시스템 내에서 사용하기에 적합한 형태이다. 이러한 단리된 분자는 자연 환경에서 분리된 분자이다.
유전자 코드의 변성을 고려할 때, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 간에 상당한 서열 변이가 가능하다. 주어진 아미노산에 대한 모든 가능한 코돈을 포함하는 축퇴 코돈은 아래에 제시되어 있다:
아미노산(Amino Acid) 코돈(Codons) 동의코돈(Degenerate Codon)
Cys TGC TGT TGY
Ser AGC AGT TCA TCC TCG TCT WSN
Thr ACA ACC ACG ACT ACN
Pro CCA CCC CCG CCT CCN
Ala GCA GCC GCG GCT GCN
Gly GGA GGC GGG GGT GGN
Asn AAC AAT AAY
Asp GAC GAT GAY
Glu GAA GAG GAR
Gln CAA CAG CAR
His CAC CAT CAY
Arg AGA AGG CGA CGC CGG CGT MGN
Lys AAA AAG AAR
Met ATG ATG
Ile ATA ATC ATT ATH
Leu CTA CTC CTG CTT TTA TTG YTN
Val GTA GTC GTG GTT GTN
Phe TTC TTT TTY
Tyr TAC TAT TAY
Trp TGG TGG
Ter TAA TAG TGA TRR
Asn/ Asp RAY
Glu/ Gln SAR
Any NNN
당업자는 각 아미노산을 암호화하는 모든 가능한 코돈을 대표하는 축퇴 코돈을 결정할 때 유연성이 존재함을 이해할 것이다. 예를 들어, 축퇴 서열에 포함된 일부 폴리뉴클레오티드는 변이체 아미노산 서열을 암호화할 수 있지만, 당업자는 본 발명의 아미노산 서열을 참조하여 이러한 변이체 서열을 쉽게 확인할 수 있다.
"변이체" 핵산 서열은 참조 핵산 서열(또는 이의 단편)과 실질적 상동성 또는 실질적 유사성을 갖는다. 핵산 서열 또는 이의 단편은, 다른 핵산(또는 이의 상보 가닥)과 최적으로 정렬(적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실 포함)되었을 때, 뉴클레오티드 염기의 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 이상에서 뉴클레오티드 서열 동일성이 있는 경우, 참조 서열과 “실질적으로 상동”(또는 “실질적으로 동일”)이다. 핵산 서열의 상동성 결정 방법은 당업계에 공지되어 있다.
대안적으로, "변이체" 핵산 서열은, "변이체" 및 참조 서열이 엄격한(예를 들어, 매우 엄격한) 혼성화 조건 하에 혼성화할 수 있는 경우, 참조 서열(또는 이의 단편)과 실질적으로 상동성(또는 실질적으로 동일)이다. 핵산 서열 혼성화는, 염기 조성, 상보 가닥의 길이, 및 혼성화하는 핵산 사이의 뉴클레오티드 염기 불일치 수 외에도, 염 농도(예를 들어, NaCl), 온도, 또는 유기 용매와 같은 조건에 의해 영향을 받을 것이고, 이는 당업자에 의해 쉽게 이해될 것이다. 엄격한 온도 조건이 바람직하게 사용되고, 일반적으로 30℃ 초과, 전형적으로 37℃ 초과, 및 바람직하게는 45℃ 초과의 온도를 포함한다. 엄격한 염 조건은 일반적으로 1000mM 미만, 전형적으로 500mM 미만, 바람직하게는 200mM 미만이다. pH는 전형적으로 7.0에서 8.3 사이이다. 매개변수의 조합은 단일 매개변수보다 훨씬 더 중요하다.
핵산 백분율 서열 동일성을 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예로서, 핵산 서열 동일성을 평가할 때, 정의된 수의 연속 뉴클레오티드를 갖는 서열은 본 발명의 핵산 서열의 해당 부분으로부터의 핵산 서열(동일한 수의 연속 뉴클레오티드를 가짐)과 정렬될 수 있다. 핵산 백분율 서열 동일성을 결정하기 위한 당업계에 공지된 도구는 뉴클레오티드 BLAST(하기 기재됨)를 포함한다.
당업자는 상이한 종(species)이 "우선적 코돈 사용(preferential codon usage)“을 나타낸다는 것을 인식한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "우선적 코돈 사용"은 특정 종의 세포에서 가장 빈번하게 사용되는 코돈을 의미하고, 따라서 각 아미노산을 암호화하는 가능한 코돈 중 하나 또는 몇 개를 선호한다. 예를 들어, 아미노산 트레오닌(Thr)은 ACA, ACC, ACG, 또는 ACT에 의해 암호화될 수 있지만, 포유류 숙주 세포에서 ACC는 가장 일반적으로 사용되는 코돈이고; 다른 종에서는, 다른 코돈이 우선적일 수 있다. 특정 숙주 세포 종에 대한 우선적 코돈은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 본 발명의 폴리뉴클레오티드 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 내에 우선적 코돈 서열을 도입하면 특정 세포 유형 또는 종 내에서 단백질 번역을 보다 효율적으로 만들어 단백질 생산을 향상시킬 수 있다. 따라서, 본 발명에 따르면, gag-pol 유전자 이외에 임의의 핵산 서열이 숙주 또는 표적 세포에서의 발현을 위해 코돈-최적화될 수 있다. 특히, 벡터 게놈(또는 상응하는 플라스미드), REV 유전자(또는 상응하는 플라스미드), 융합 단백질(F) 유전자(또는 상응하는 플라스미드), 및/또는 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 유전자(또는 상응하는 플라스미드), 또는 이들의 임의의 조합은 코돈-최적화될 수 있다.
관심 있는 폴리뉴클레오티드의 "단편"은 상기 전장 폴리뉴클레오티드의 서열로부터 일련의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 관심 폴리뉴클레오티드의 "단편"은 상기 폴리뉴클레오티드의 서열로부터 적어도 30개의 연속적인 뉴클레오티드(예를 들어, 상기 폴리뉴클레오티드의 적어도 35, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 또는 1000개의 연속 핵산 잔기)를 포함할 수 있다(또는 이들로 구성될 수 있다). 단편은 적어도 하나의 항원 결정자를 포함할 수 있고/있거나 상응하는 관심 폴리펩티드의 적어도 하나의 항원 에피토프를 암호화할 수 있다. 전형적으로, 본 명세서에 정의된 바와 같은 단편은 전장 폴리뉴클레오티드와 동일한 기능을 유지한다.
용어 "감소하다", "감소된", “감소", 또는 "억제하다"는 모두 통계적으로 유의미한 양만큼의 감소를 의미하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 용어 "감소하다", “감소", 또는 “감소하다", 또는 "억제하다"는 전형적으로 기준 수준과 비교하여 적어도 10% 감소(예를 들어, 주어진 치료의 부재)를 의미하고 예를 들어 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "감소" 또는 "억제"는 기준 수준과 비교하여 완전한 억제 또는 감소를 포함한다. "완전한 억제"는 기준 수준과 비교하여 100% 억제(즉, 저지(abrogation))이다.
용어 "증가된", "증가하다", “강화하다", 또는 "활성화하다"는 모두 정적으로 상당한 양만큼의 증가를 의미하는 것으로 본 명세서에서 사용된다. 용어 "증가된", "증가하다", “강화하다", 또는 "활성화하다"는 기준 수준과 비교하여 적어도 25%, 적어도 50%의 증가, 예를 들어 기준 수준과 비교하여 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 100%, 또는 적어도 약 150%, 또는 적어도 약 200%, 또는 적어도 약 250%, 또는 그 이상 증가, 또는 기준 수준과 비교하여 적어도 약 1.5배, 또는 적어도 약 2배, 또는 적어도 약 2.5배, 또는 적어도 약 3배, 또는 적어도 약 4배 , 또는 적어도 약 5배, 또는 적어도 약 10배 증가, 또는 1.5배 내지 10배 또는 그 초과의 임의의 증가를 의미할 수 있다. 수율 또는 역가와 관련하여, "증가"는 그러한 수준에서 관찰 가능하거나 통계적으로 유의미한 증가이다.
용어 "개체", “대상", 및 "환자"는 진단, 예후, 질병 모니터링, 치료, 요법, 및/또는 요법 최적화가 요구되는 포유동물 대상을 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다. 포유동물은 (제한 없이) 인간, 비인간 영장류, 생쥐, 쥐, 개, 고양이, 말, 또는 소일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 개체, 대상, 또는 환자는 인간이다. "개체"는 성인, 청소년, 또는 유아일 수 있다. "개체"는 남성 또는 여성일 수 있다.
특정 질환에 대한 치료가 "필요한 대상"은 해당 질환을 갖고 있거나, 해당 질환을 갖는 것으로 진단되거나, 해당 질환이 발생할 위험이 있는 개체일 수 있다.
대상은 치료를 필요로 하는 질환 또는 그러한 질환과 관련된 하나 이상의 합병증 또는 증상으로 진단되거나 고통받는 것으로 확인되거나 그러한 질환과 관련된 하나 이상의 합병증 또는 증상을 갖는 것으로 이전에 진단되고, 선택적으로 본 명세서에 정의된 질환 또는 상기 질환과 관련된 하나 이상의 합병증 또는 증상에 대한 치료를 이미 받은 사람일 수 있다. 대안적으로, 대상은 또한 본 명세서에 정의된 질환 또는 상기 질환과 관련된 하나 이상의 증상 또는 합병증을 갖는 것으로 이전에 진단되지 않은 사람일 수 있다. 예를 들어, 대상은 질환에 대한 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 대상, 또는 상기 질환과 관련된 하나 이상의 증상 또는 합병증을 나타내는 대상 또는 위험 인자를 나타내지 않는 대상일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "건강한 개체"는 건강한 상태에 있는 개체 또는 개체 그룹, 예를 들어 질병의 증상을 나타내지 않고, 질병으로 진단되지 않았으며, 그리고/또는 질병(예를 들어, 낭포성 섬유증(CF) 또는 본 명세서에 기재된 임의의 다른 질병)이 발병할 가능성이 없는 개체를 의미한다. 바람직하게는 상기 건강한 개체(들)는 CF에 영향을 미치는 약물을 복용하지 않고 임의의 다른 질병으로 진단되지 않았다. 하나 이상의 건강한 개체는 테스트 개체와 비교하여 유사한 성별, 연령, 및/또는 체질량 지수(BMI)를 가질 수 있다. 의학에서 사용되는 표준 통계 방법을 적용하면 건강한 개체의 정상적인 표현 수준과 그러한 정상 수준에서 상당한 편차를 결정할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "대조군" 및 “기준 집단(reference population)“은 상호 교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "약학적으로 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전, 유럽 약전, 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 등재된 것을 의미한다.
본 명세서에서 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 개시를 위해서만 제공된다. 본 명세서의 어떤 것도 그러한 간행물이 본 명세서에 첨부된 청구범위에 대한 선행 기술을 구성한다는 것을 인정하는 것으로 해석해서는 안 된다.
본 발명의 다양한 방법과 관련된 개시는 다른 방법, 치료 용도 또는 방법, 데이터 저장 매체 또는 장치, 컴퓨터 프로그램 제품, 및 그 역으로도 동일하게 적용되도록 의도된다.
레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터
본 발명은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 작제물(construct)의 생산에 관한 것이다. 용어 "레트로바이러스"는 효소 역전사 효소를 암호화하는 레트로바이러스과(Retroviridae) RNA 바이러스 계열의 구성원을 의미한다. 용어 "렌티바이러스"는 레트로바이러스 계열을 의미한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 레트로바이러스의 예는 뮤린 백혈병 바이러스(MLV) 및 고양이 백혈병 바이러스(FLV)와 같은 감마레트로바이러스를 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 렌티바이러스의 예는 유인원 면역결핍 바이러스(SIV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 고양이 면역결핍 바이러스(FIV), 말 감염성 빈혈 바이러스(EIAV), 및 비스나/매디(Visna/maedi) 바이러스를 포함한다. 바람직하게는 본 발명은 렌티바이러스 벡터 및 이의 생산에 관한 것이다. 특히 바람직한 렌티바이러스 벡터는 SIV-AGM(원래의 아프리카 녹색 원숭이, Cercopithecus aethiops로부터 단리됨)과 같은 SIV 벡터(모든 균주 및 아형 포함)이다. 대안적으로 본 발명은 HIV 벡터에 관한 것이다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 전형적으로 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된다. 바람직하게는 호흡기 파라믹소바이러스는 센다이 바이러스(Sendai virus)(뮤린 파라인플루엔자 바이러스 1형)이다. 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는, 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(예를 들어, SIV로부터)의 사용이 벡터의 제조된 역가에 부정적인 영향을 미치지 않거나, 심지어 벡터의 역가를 증가시키지 않는다면, 다른 바이러스의 단백질로 슈도타이핑될 수 있다. 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 슈도타이핑하기 위해 사용될 수 있는 다른 단백질의 비제한적 예는 수포성 구내염 바이러스(G-VSV)의 G 당단백질 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 스파이크 단백질 또는 이의 변형된 형태를 포함하고; 예를 들어 영국 특허 출원 제2118685.3호 및 제2105278.2호에 기재된 것과 같이, 이들 각각은 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다. 따라서, 본 발명은, 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용하여, G-VSV로 슈도타이핑된 SIV 또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질로 슈도타이핑된 SIV의 생산에 관한 것일 수 있다.
본 발명에 따라 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 인테그라제-적격(IC: integrase-competent)일 수 있다. 대안적으로, 렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 인테그라제-결핍(ID: integrase-deficient)일 수 있다.
본 발명에 따라 생성된 것과 같은 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터는 형질 도입된 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고 오래 지속되는 발현을 유도하여, 줄기/전구 세포의 형질 도입에 적합하게 만든다. 폐에서는, 재생 능력을 갖는 여러 세포 유형이 전도성 기도(conducting airways) 및 폐포에서 특정 세포 계통을 유지하는 역할을 하는 것으로 확인되었다. 이에는 상기도(upper airways)의 기저 세포 및 점막하 샘관 세포(submucosal gland duct cells), 세기관지 기도(bronchiolar airways)의 곤봉상 세포(club cells) 및 신경 내분비 세포(neuroendocrine cells), 말단 세기관지(terminal bronchioles)의 세기관지 폐포 줄기 세포(bronchioalveolar stem cells), 및 폐포의 II형 폐포 세포(pneumocytes)가 포함된다. 따라서, 이론에 얽매이지 않고, 상기 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는, 하나 이상의 수명이 긴 기도 상피 세포 또는 상기도의 기저 세포 및 점막하 샘관 세포, 세기관지 기도의 곤봉상 세포 및 신경 내분비 세포, 말단 세기관지의 세기관지 폐포 줄기 세포, 및 폐포의 II형 폐포 세포와 같은 세포 유형에 이식 유전자를 도입함으로써 관심 이식 유전자의 장기간 유전자 발현(long term gene expression)을 야기한다.
따라서, 본 발명에 따라 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 장기간 유전자 발현을 달성하기 위해 폐(기도 및 호흡기 포함) 내에서 재생 가능성을 갖는 하나 이상의 세포 또는 세포주를 형질도입할 수 있다. 예를 들어, 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 상기도/호흡기에 있는 것과 같은 기저 세포를 형질 도입할 수 있다. 기저 세포는 손상 후 상피 유지 및 복구 과정에서 중심적인 역할을 한다. 또한, 기저 세포는 사람의 호흡기 상피를 따라 광범위하게 분포되어 있고, 상대적인 분포 범위는 30%(큰 기도)에서 6%(작은 기도)이다.
본 발명에 따라 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 환자에게 투여하기 전에 생체 외에서 단리되고 확장된 줄기/전구 세포를 형질 도입하는 데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따라 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 생체 내에서 폐(또는 기도/호흡기) 내의 세포를 형질 도입하는 데 사용된다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 기관지경, 분무기, 및 네뷸라이저(nebulisers)와 같은 임상적으로-관련된 전달 장치를 통과할 때 형질 도입 능력이 약간만 감소하면서 전단력에 대한 현저한 저항성을 나타낸다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 높은 수준의 이식 유전자 발현을 가능하게 하여, 높은 수준(치료 수준)의 치료 단백질 발현을 야기한다. 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 전형적으로 환자에게 투여될 때 이식 유전자의 높은 발현 수준을 제공한다. 높은 발현 및 치료적 발현이라는 용어는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다. 발현은 임의의 적절한 방법(정성적 또는 정량적, 바람직하게는 정량적) 및 임의의 적절한 측정 단위(예를 들어, ng/ml 또는 nM)로 주어진 농도로 측정할 수 있다.
관심 이식 유전자의 발현은 환자에서 상응하는 내인성(결함) 유전자의 발현과 관련하여 주어질 수 있다. 발현은 mRNA 또는 단백질 발현 측면에서 측정될 수 있다. 기능적 CFTR 유전자와 같은 본 발명의 이식 유전자의 발현은 내인성 유전자, 예를 들어 세포 당 mRNA 복제본 또는 임의의 다른 적절한 단위에 관한 내인성(기능 장애) CFTR 유전자와 관련하여 상대적으로 정량화될 수 있다.
본 발명의 이식 유전자 및/또는 암호화된 치료 단백질의 발현 수준은 적절한 경우 폐 조직, 상피 표면액(epithelial lining fluid), 및/또는 혈청/혈장에서 측정될 수 있다. 따라서 높은 및/또는 치료적 발현 수준은 폐, 상피 표면액, 및/또는 혈청/혈장 내 농도를 의미할 수 있다.
본 발명의 벡터에 포함된 이식 유전자는 발현을 용이하게 하기 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, 이식 유전자 서열은 유전자 발현을 촉진하기 위해 CpG-결핍(또는 CpG-fee) 및/또는 코돈-최적화된 형태일 수 있다. 이러한 방식으로 이식 유전자 서열을 변형시키는 표준 기술은 당업계에 공지되어 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 효율적인 기도 세포 흡수, 향상된 이식 유전자 발현을 나타내고, 반복 투여 시 효능의 손실을 겪지 않는다. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 과도한 면역 반응을 유도하지 않고 기도 세포에서 오래 지속되고, 반복 가능하며, 높은 수준의 발현을 생성할 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 장기간 이식 유전자 발현을 가능하게 하여, 치료 단백질의 장기간 발현을 초래한다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, "장기간 발현", "지속적인 발현(sustained expression)“, "오래 지속되는 발현”, 및 "지속적인 발현(persistent expression)“이라는 어구는 상호 교환적으로 사용된다. 본 발명에 따른 장기간 발현은 적어도 45일, 적어도 60일, 적어도 90일, 적어도 120일, 적어도 180일, 적어도 250일, 적어도 360일, 적어도 450일, 적어도 730일 이상 동안 바람직하게는 치료 수준에서 치료 유전자 및/또는 단백질의 발현을 의미한다. 바람직하게는 장기간 발현은 적어도 90일, 적어도 120일, 적어도 180일, 적어도 250일, 적어도 360일, 적어도 450일, 적어도 720일 이상, 보다 바람직하게는 적어도 360일, 적어도 450일, 적어도 720일 이상 동안의 발현을 의미한다. 이러한 장기간 발현은 반복 투여 또는 단일 투여에 의해 달성될 수 있다.
반복 투여는 1일 2회, 매일, 주 2회, 매주, 매월, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 6개월마다, 매년, 2년마다, 또는 그 이상 투여될 수 있다. 투약은 필요한 만큼, 예를 들어 적어도 6개월, 적어도 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 10년, 15년, 20년, 또는 그 이상 동안 치료될 환자의 평생 동안 계속될 수 있다.
레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 이식 유전자의 발현을 가능하게 하는 이식 유전자에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함한다. 전형적으로 프로모터는 하이브리드 인간 CMV 인핸서/EF1a(hCEF) 프로모터이다. 이 hCEF 프로모터는 hCEF 프로모터의 뉴클레오티드 570-709에 해당하는 인트론 및 뉴클레오티드 728-733에 해당하는 엑손이 없을 수 있다. 본 발명의 hCEF 프로모터 서열의 바람직한 예는 SEQ ID NO: 10에 의해 제공된다. 프로모터는 CMV 프로모터일 수 있다. CMV 프로모터 서열의 예는 SEQ ID NO: 11에 의해 제공된다. 프로모터는 인간 신장 인자(elongation factor) 1a(EF1a) 프로모터일 수 있다. EF1a 프로모터의 예는 SEQ ID NO: 12에 의해 제공된다. 이식 유전자 발현을 위한 다른 프로모터는 당업계에 공지되어 있고 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에 대한 이들의 적합성은 당업계에 공지된 통상적인 기술을 사용하여 결정된다. 다른 프로모터의 비제한적 예는 UbC 및 UCOE를 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 프로모터는 본 발명의 이식 유전자의 발현을 추가로 조절하도록 변형될 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에 포함된 프로모터는 치료 유전자의 발현 조절을 추가로 정제하기 위해 특이적으로 선택 및/또는 변형될 수 있다. 또한, 적합한 프로모터 및 이들의 변형을 위한 표준 기술은 당업계에 공지되어 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명에 사용하기에 적합한 다수의 적합한(CpG-무함유) 프로모터는 Pringle et al. (J. Mol. Med. Berl. 2012, 90(12): 1487-96)에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터(특히 SIV F/HN 벡터)는 CpG 디뉴클레오티드 함량이 낮거나 없는 hCEF 프로모터를 포함한다. hCEF 프로모터는 AG, TG, 또는 GT 중 어느 하나로 대체된 모든 CG 디뉴클레오티드를 가질 수 있다. 따라서, hCEF 프로모터는 CpG가 없을 수 있다. 본 발명의 CpG-무함유 hCEF 프로모터 서열의 바람직한 예는 SEQ ID NO: 10에 의해 제공된다. CpG 디뉴클레오티드의 부재는 특히 발현된 항원에 대한 면역 반응 또는 전달된 발현 작제물에 대한 염증 반응을 유도하는 것이 바람직하지 않은 상황에서 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 성능을 추가로 향상시킨다. CpG 디뉴클레오티드의 제거는, 특히 기도에 투여될 때, 작제물의 투여로 인해 발생할 수 있는 독감-유사 증상 및 염증의 발생을 감소시킨다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 변형되어 유전자 발현이 중단될 수 있다. 이러한 방식으로 벡터를 변형하기 위한 표준 기술은 당업계에 공지되어 있다. 비제한적인 예로서, Tet-반응성 프로모터가 널리 사용된다.
바람직하게는, 본 발명은 프로모터 및 이식 유전자를 포함하는 F/HN 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터, 특히 SIV F/HN 벡터에 관한 것이다. F/HN 슈도타이핑(pseudotyping)은 기도 상피의 세포를 표적으로 삼는 데 특히 효율적이고, 따라서 치료 적용을 위해 전형적으로 기도 상피의 세포를 포함하여 호흡기의 세포에 전달된다. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 기도, 호흡기, 또는 폐의 질병 또는 장애의 치료에 특히 적합하다. 전형적으로, 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 유전성 호흡기 질병의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 이러한 질병, 특히 기도, 호흡기, 또는 폐의 질병 또는 장애의 치료를 위해 치료적인 폴리펩티드 또는 단백질을 암호화하는 이식 유전자를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는: (i) 분비된 치료 단백질, 선택적으로 알파-1 항트립신(A1AT), 인자 VIII, 계면활성제 단백질 B(SFTPB), 인자 VII, 인자 IX, 인자 X, 인자 XI, 폰 빌레브란트 인자, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 및 감염원에 대한 단일클론 항체; 또는 (ii) CFTR, ABCA3, DNAH5, DNAH11, DNAI1, 및 DNAI2로부터 선택되는 단백질을 암호화하는 이식 유전자를 포함할 수 있다. 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에 포함될 수 있는 이식 유전자의 다른 예는 다른 계면활성제 결핍과 관련되거나 연관된 유전자를 포함한다.
바람직하게는, 이식 유전자는 CFTR을 암호화한다. CFTR cDNA의 예는 SEQ ID NO: 13에 의해 제공된다. 그의 변이체(본 명세서에 기재된 바와 같음), 특히 SEQ ID NO: 13에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%)를 갖는 변이체가 또한 포함된다.
이식 유전자는 A1AT를 암호화할 수 있다. A1AT 이식 유전자의 예는 SEQ ID NO: 14, 또는 SEQ ID NO: 15의 상보적 서열에 의해 제공된다. SEQ ID NO: 14는 인간 세포에서 번역을 향상시키기 위해 본 발명자들에 의해 이전에 설계된 코돈-최적화된 CpG 고갈된 A1AT 이식 유전자이다. 이러한 최적화는 유전자 발현을 최대 15배까지 향상시키는 것으로 나타났다. 변형되지 않은(야생형) A1AT 유전자 서열과 비교하여 번역을 향상시키는 동일한 기술적 효과를 갖는 동일한 서열(본 명세서에 정의된 바와 같음)의 변이체도 본 발명에 포함된다. 상기 A1AT 이식 유전자에 의해 암호화되는 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 16의 폴리펩티드로 예시될 수 있다. 그의 변이체(본 명세서에 기재된 바와 같음), 특히 SEQ ID NO: 14, 15, 또는 16에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%)를 갖는 변이체가 또한 포함된다.
이식 유전자는 FVIII를 암호화할 수 있다. FVIII 이식 유전자의 예는 SEQ ID NOs: 17 및 18, 또는 SEQ ID NO: 19 및 20의 각각의 상보적인 서열에 의해 제공된다. FVIII 이식 유전자에 의해 암호화되는 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 21 또는 22의 폴리펩티드로 예시될 수 있다. 그의 변이체(본 명세서에 기술된 바와 같음), 특히 SEQ ID NO: 17 내지 22중 임의의 하나에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%)를 갖는 변이체가 또한 포함된다.
본 발명의 이식 유전자는 DNAH5, DNAH11, DNAI1, 및 DNAI2 중 임의의 하나 이상 또는 다른 공지된 관련 유전자일 수 있다.
호흡기 상피가 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 전달을 위해 표적이 될 때, 이식 유전자는 A1AT, SFTPB, 또는 GM-CSF를 암호화할 수 있다. 이식 유전자는 감염원에 대한 단일클론 항체(mAb)를 암호화할 수 있다. 이식 유전자는 항-TNF 알파를 암호화할 수 있다. 이식 유전자는 염증, 면역, 또는 대사 질환과 관련된 치료 단백질을 암호화할 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 순환계 내로 분비되는 단백질 생산을 허용하기 위해 호흡기의 세포로 전달될 수 있다. 이러한 구체예에서, 이식 유전자는 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX, 인자 X, 인자 XI, 및/또는 폰 빌레브란트 인자를 암호화할 수 있다. 이러한 벡터는 질병, 특히 심혈관 질환 및 혈액 장애, 바람직하게는 혈우병과 같은 혈액 응고 결핍의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 이식 유전자는 리소좀 축적병(lysosomal storage disease)과 같은 염증, 면역, 또는 대사 질환과 관련된 감염원 또는 단백질에 대한 mAb를 암호화할 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 프로모터와 이식 유전자 사이에 인트론이 위치하지 않을 수 있다. 유사하게, 벡터 게놈(pDNA1) 플라스미드(예를 들어, 도 2a에 예시되고 SEQ ID NO: 3의 서열을 갖는 본 명세서에 기재된 바와 같은 pGM326)에서 프로모터와 이식 유전자 사이에 인트론이 없을 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구체예에서, 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 명세서에 기재된 것들을 포함하는 hCEF 프로모터 및 CFTR 이식 유전자를 포함한다. 선택적으로 상기 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 프로모터와 이식 유전자 사이에 인트론이 위치하지 않을 수 있다. 이러한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 CFTR 이식 유전자 및 프로모터를 운반하는 게놈 플라스미드를 사용하여 본 명세서에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구체예에서, 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 명세서에 기재된 것을 포함하는 hCEF 프로모터 및 A1AT 이식 유전자를 포함한다. 선택적으로 상기 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 프로모터와 이식 유전자 사이에 인트론이 위치하지 않을 수 있다. 이러한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 A1AT 이식 유전자 및 프로모터를 운반하는 게놈 플라스미드를 사용하여 본 명세서에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 구체예에서, 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 명세서에 기재된 것들을 포함하는 hCEF 또는 CMW 프로모터 및 FVIII 이식 유전자를 포함한다. 선택적으로 상기 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 프로모터와 이식 유전자 사이에 인트론이 위치하지 않을 수 있다. 이러한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 FVIII 이식 유전자 및 프로모터를 운반하는 게놈 플라스미드를 사용하여 본 명세서에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 이식 유전자를 포함한다. 이식 유전자는 유전자 산물(gene product), 예를 들어 단백질, 특히 치료 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다.
예를 들어, 한 구체예에서, CFTR, A1AT, 또는 FVIII를 암호화하는 핵산 서열은 각각 CFTR, A1AT, 또는 FVIII 핵산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%) 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하고(또는 이들로 구성되고), 그 예는 본 명세서에 기재되어 있다. 추가의 구체예에서, CFTR, A1AT, 또는 FVIII을 암호화하는 핵산 서열은 각각 CFTR, A1AT, 또는 FVIII 핵산 서열에 대해 적어도 95%(예를 들어, 적어도 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%) 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하고(또는 이들로 구성되고), 그 예는 본 명세서에 기재되어 있다. 한 구체예에서, CFTR을 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 13에 의해 제공되고, A1AT를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 14, 또는 SEQ ID NO: 15의 상보적 서열에 의해 제공되고/되거나 FVIII을 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 17 및 18, 또는 SEQ ID NO: 19 및 20의 각각의 상보적 서열 또는 이의 변이체에 의해 제공된다.
CFTR, A1AT, 또는 FVIII 이식 유전자의 아미노산 서열은 기능적 CFTR, A1AT, 또는 FVIII 폴리펩티드 서열 각각에 대해 적어도 95%(예를 들어, 적어도 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다(또는 이로 구성될 수 있다).
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 중심 폴리퓨린관(cPPT: central polypurine tract) 및/또는 우드척 간염 바이러스 전사 후 조절 요소(WPRE: Woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element)를 포함할 수 있다. 예시적인 WPRE 서열은 SEQ ID NO: 23에 의해 제공된다.
생성 방법
본 명세서에 기재된 바와 같이, 본 발명자들은 SIV로부터의 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하면 호흡기 파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합체(F) 단백질로 슈도타이핑된 SIV 벡터의 제조된 역가에 부정적인 영향을 미치지 않고 벡터의 역가가 증가할 수도 있다는 것을 처음으로 입증하였다. 또한, 본 발명자들은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용은 벡터 역가를 유지하거나 심지어 증가시키면서 본 명세서에 기재된 바와 같은 변형된 벡터 게놈 플라스미드의 사용과 추가로 조합될 수 있음을 추가로 보여주었다.
코돈 최적화는 암호화 유전자의 번역 효율을 높여 단백질 발현을 최대화하는 기술이다. 핵산 서열의 변형으로 번역 효율이 증가한다. 코돈 최적화는 당업계에서 일상적이고, 주어진 핵산 서열의 코돈-최적화 버전을 고안하는 것은 통상의 기술자의 일상적인 실행 범위 내에 있다. 그러나 간단하지 않은 것은 코돈 최적화가 다른 매개변수에 미치는 영향을 예측하는 것이다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 통상적인 상식은 정상적인 제조 조건하에서(gag-pol 유전자가 아닌 벡터 게놈 플라스미드가 제한적일 때) gag-pol 유전자의 코돈-최적화가 전형적으로 벡터 수율을 감소시킨다는 것을 교시한다.
따라서, 본 발명은 프로모터 및 이식 유전자를 포함하는 호흡기 파라믹소바이러스로부터 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자의 용도를 포함한다. 바람직하게는 상기 벡터는 렌티바이러스 벡터이고, 유인원 면역 결핍 바이러스(SIV) 벡터가 특히 바람직하다.
전형적으로 본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 생성되는 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터에 일치된다. 비제한적 예로서, 렌티바이러스 벡터가 HIV 벡터인 경우, 본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 HIV gag-pol 유전자이다. 비제한적 예로서, 렌티바이러스 벡터가 SIV 벡터인 경우, 본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SIV gag-pol 유전자이다.
바람직하게는 본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SIV gag-pol 유전자이다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 생성하도록 변형될 수 있는 예시적인 야생형 SIV gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 2에 주어진다. 본 발명의 예시적인 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(SEQ ID NO: 1)에 도달하기 위해 SEQ ID NO: 2의 야생형 gag-pol 유전자에 이루어진 변형은 도 1의 정렬에 도시되어 있다.
코돈-최적화에 더하여, 본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 다른 변형, 예를 들어 번역 슬립(translational slip)(번역이 한 영역에서 다른 영역으로 미끄러져 Gag와 Pol을 모두 생성할 수 있도록 함)을 포함할 수 있다. (i) 벡터 게놈 플라스미드와 GagPol 플라스미드 사이의 상동성이 감소되어 RCL 생성 위험을 최소화하고 (ii) 코돈 최적화 후에 RRE를 포함하지 않고 충분한 GagPol이 생성되는(이는 RCL 생성의 위험과 상동성을 더욱 감소시킨다) 경우, 코돈 사용의 임의의 적절한 변이가 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자에 사용될 수 있다.
본 발명의 생성 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 완전히(100%) 또는 부분적으로 코돈-최적화될 수 있다. 부분 코돈-최적화는 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 95%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 코돈 최적화를 포함한다.
바람직하게는, gag-pol 유전자 자체는 완전히 코돈-최적화되지만, 코돈-최적화되지 않은 서열의 비함유 영역(예를 들어, gag와 pol 유전자 사이)을 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, gag 및 pol 유전자 사이의 리딩 프레임의 번역 슬립을 유지하기 위해, 번역 슬립 서열 주변의 영역은 코돈-최적화되지 않을 수 있다(예를 들어, 정확한 번역 슬립 서열이 이 기능에 중요한 경우). 코돈-최적화된 gag-pol 유전자 내의 코돈-최적화되지 않은 번역 슬립 서열은 SEQ ID NO: 1에 예시되어 있다.
바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열 또는 그의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)를 포함하거나 이로 구성된다. 특히, 본 발명의 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96 SEQ ID NO: 1에 대해 %, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에서 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 번역 슬립을 포함하고, 따라서 단일의 통상적인 오픈 리딩 프레임(open reading frame)을 형성하지 않는다.
본 발명의 방법은 확장 가능한 GMP-호환 방법일 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법은 전형적으로 역가가 높은 정제된 F/HN 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성을 가능하게 한다. 전형적으로 본 발명의 방법은, 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가와 적어도 동등한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 생성한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “동등한(equivalent)”은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자의 사용이 상응하는 코돈-최적화되지 않은 gal-pol 유전자의 사용과 비교하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 유의하게 감소시키지 않도록 정의될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 방법은 상응하는 코돈-최적화되지 않은 gal-pol 유전자의 사용과 비교하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가보다 2배 이하, 1.5배 이하, 1.0배 이하, 0.5배 이하, 0.25배 이하, 또는 더 낮은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 생성한다. 용어 “동등한"은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가가 상응하는 코돈-최적화되지 않은 gal-pol 유전자를 사용하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가와 비교하여 통계적으로 변하지 않도록 정의될 수 있다(예를 들어, p<0.05, p<0.01).
바람직하게는, 본 발명의 방법은 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가와 비교하여 증가된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 생성한다. 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가는 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가보다 적어도 1.5배, 적어도 2배, 또는 적어도 2.5배 클 수 있다.
레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성은 전형적으로 벡터 생성에 필요한 요소(레트로바이러스/렌티바이러스 벡터의 게놈, Gag-Pol, Rev, F 및 HN)를 제공하는 하나 이상의 플라스미드를 사용한다. 단일 플라스미드에 여러 요소가 제공될 수 있다. 바람직하게는 각 요소는 각각의 벡터 게놈, Gag-Pol, Rev, F 및 HN에 대해 하나씩 5개의 플라스미드가 있도록 별도의 플라스미드에 제공된다.
대안적으로, 단일 플라스미드가 Gag-Pol 및 Rev 요소를 제공할 수 있고, 단일 플라스미드는 패키징 플라스미드(pDNA2)라고 할 수 있다. 나머지 요소(게놈, F 및 HN)는 별도의 플라스미드(각각 pDNA1, pDNA3a, pDNA3b)에 의해 제공될 수 있으므로, 4개의 플라스미드가 본 발명에 따른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성에 사용된다. 4개의 플라스미드 방법에서, pDNA1, pDNA3a, 및 pDNA3b는 5-플라스미드 방법과 관련하여 본 명세서에 기재된 바와 같을 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열(pGM691) 또는 그의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)를 포함하거나 이로 구성된 플라스미드에 포함된다. 특히, 본 발명의 방법에 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 플라스미드에 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에서 사용되는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 플라스미드에 포함된다. SEQ ID NO: 5(또는 이의 변이체)의 플라스미드에서: (i) SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 번역 슬립을 포함하고, 따라서 단일의 통상적인 오픈 리딩 프레임을 형성하지 않으며; (ii) SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 CAG 프로모터에 작동 가능하게 연결된다.
본 발명의 바람직한 5개의 플라스미드 방법에서, 벡터 게놈 플라스미드는, 이식 유전자를 포함하여 최종 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터 내로 패키징되는 모든 유전 물질을 암호화한다. 일반적으로 벡터 게놈 플라스미드에서 발견되는 유전 물질의 일부만이 바이러스에 머무르게 된다. 벡터 게놈 플라스미드는 본 명세서에서 "pDNA1"로 지정될 수 있고, 전형적으로 이식 유전자 및 이식 유전자 프로모터를 포함한다.
다른 4개의 플라스미드는 Gag-Pol, Rev, F 및 HN 단백질을 암호화하는 플라스미드를 제조하고 있다. 이러한 플라스미드는 각각 "pDNA2a", "pDNA2b", “pDNA3a", 및 "pDNA3b"로 지정될 수 있다.
특히 벡터의 안전성 프로파일을 추가로 개선하기 위해, 벡터 게놈 플라스미드(pDNA1)에 변형이 이루어질 수 있다. 본 명세서에 예시된 바와 같이, 그러한 변형은 pDNA1 서열로부터 바이러스, 특히 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) ORF를 제거하기 위해 pDNA1 서열을 변형하는 것을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법은 감소된 수의 비-이식 유전자 ORF를 포함하는 변형된 pDNA1을 사용할 수 있다. 상기 변형된 pDNA1은 플라스미드 서열의 임의의 영역 내의 변형을 포함할 수 있다. 특히, 변형된 pDNA1은: (i) 5'에서 3' ORF; (ii) ≥100 아미노산의 ORF; 및/또는 (iii) 이식 유전자의 업스트림 ORF 및/또는 이식유전자에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 제거하기 위한 변형을 포함할 수 있다. 변형된 pDNA1은 이식 유전자 이외의 ORF를 포함하지 않을 수 있지만, 이것이 필수적인 것은 아니다. 오히려, 변형된 pDNA1은 이식 유전자 이외의 ORF를 여전히 포함할 수 있지만, 그것이 유래된 변형되지 않은 pDNA1과 비교하여 감소된 수의 비-이식 유전자 ORF를 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 변형된 pDNA1은 상응하는 변형되지 않은 pDNA1과 비교하여 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 또는 그보다 더 적은 비-이식 유전자 ORF를 포함할 수 있다. 구체적인 예로서, pGM830(pGM326에서 유래)은 pGM326에 비해 2개 더 적은 비-이식 유전자 ORF를 포함한다. 변형된 pDNA1은 상응하는 변형되지 않은 pDNA1과 비교하여 적어도 1개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 또는 그 이상의 변형(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 또는 20개의 변형)을 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 변형된 pDNA1은 상응하는 변형되지 않은 pDNA1과 비교하여 약 1 내지 약 20개, 예컨대 약 5 내지 약 15개, 또는 약 5 내지 약 10개의 변형을 포함할 수 있다. 구체적인 예로서, pGM830(pGM326에서 유래)은 pGM326과 비교하여 7개의 변형을 포함한다.
본 명세서에 예시된 바와 같이, pGM380을 플라스미드 pDNA1로 사용하면, pDNA1 플라스미드가 pGM326이지만(도 11) 다른 모든 플라스미드 및 매개변수가 일정하게 유지되는 생성 방법과 비교하여 개선된 SIV 역가를 생성할 가능성이 있다. 즉, pGM830과 같은 변형된 pDNA1의 사용은 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하여 달성된 개선된 역가에 부정적인 영향을 미치지 않고, pGM691을 pDNA2a로 사용하여 제공되는 것과 같이 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하는 효과에 비해 잠재적으로 역가의 추가 개선을 제공할 수도 있다. 본 명세서에서 정의된 용어 "증가된 역가(increased titre)“는 코돈-최적화된 gal-pol 유전자 및 변형된 pDNA1을 모두 사용하는 본 발명의 방법에 동일하게 적용된다.
전형적으로, 렌티바이러스는 SIV1, 바람직하게는 SIV-AGM과 같은 SIV이다. F 및 HN 단백질은 호흡기 파라믹소바이러스, 바람직하게는 센다이 바이러스로부터 유래된다.
CFTR에 관한 특정 구체예에서, 5개의 플라스미드는 도 2a-2f에 의해 특성화되고, 따라서 pDNA1은 도 2a의 pGM326 플라스미드 또는 도 2b의 pGM830 플라스미드이고, pDNA2a는 도 2c의 pGM691 플라스미드이고, pDNA2b는 도 2d의 pGM299 플라스미드이고, pDNA3a는 도 2e의 pGM301 플라스미드이고 pDNA3b는 도 2f의 pGM303 플라스미드 또는 이들 플라스미드 중 임의의 변이체(본 명세서에 기재된 바와 같음)이다. 이 구체예에서, 레트로바이러스/렌티바이러스 벡터를 포함하는 최종 CFTR은 vGM195로 지칭될 수 있다(실시예 참조). pGM691 플라스미드 및 vGM195 벡터는 본 발명의 바람직한 구체예이다.
본 명세서에 예시된 바와 같이, pGM691을 플라스미드 pDNA2a로 사용하면 pDNA2a 플라스미드가 pGM297이지만(도 2g) 다른 모든 플라스미드 및 방법 매개변수가 일정하게 유지되는 생성 방법과 비교하여 개선된 SIV 역가를 생성할 가능성이 있다.
본 발명의 방법을 사용하여 A1AT를 생성하는 경우, 5개의 플라스미드는 도 3(따라서 플라스미드 pDNA1은 pGM407일 수 있음) 및 도 2c-f 모두(특정 CFTR 구체예에 대해 상기한 바와 같음), 또는 이들 플라스미드 중 임의의 변이체(본 명세서에 기재된 바와 같음)에 의해 특성화될 수 있다.
본 발명의 방법을 사용하여 FVIII를 생성하는 경우, 5개의 플라스미드는 도 4ad 중 하나(따라서 플라스미드 pDNA1은 pGM411, pGM412, pGM413, 또는 pGM414일 수 있음) 및 도 2c-f 모두, 또는 이들 플라스미드 중 임의의 변이체(본 명세서에 기재된 바와 같음)에 의해 특성화될 수 있다.
도 2a에 정의된 바와 같은 플라스미드는 SEQ ID NO: 3으로 표시되고; 도 2b에 정의된 바와 같은 플라스미드는 SEQ ID NO: 4로 표시되고; 도 2c에 정의된 바와 같은 플라스미드는 SEQ ID NO: 5로 표시되고; 도 2d에 정의된 바와 같은 플라스미드는 SEQ ID NO: 6으로 표시되고; 도 2e에 정의된 플라스미드는 SEQ ID NO: 7로 표시되고; 도 2f에 정의된 플라스미드는 SEQ ID NO: 8로 표시되고; 도 2g에 정의된 플라스미드는 SEQ ID NO: 9로 표시되고; 도 3에 정의된 플라스미드는 SEQ ID NO: 24로 표시되고 도 4a 내지 4d에 정의된 F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3, F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-co, 및/또는 F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-N6-co 플라스미드는 각각 SEQ ID NO: 25 내지 28로 표시된다. 이들 플라스미드의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)도 본 발명에 포함된다. 특히, SEQ ID NOs: 3 내지 9, 24 및 25 내지 28 중 어느 하나와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 또는 100%) 서열 동일성을 갖는 변이체가 포함된다.
본 발명의 5개 플라스미드 방법에서 5개 플라스미드 모두는 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 형성에 기여한다. 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 제조하는 동안, 벡터 게놈 플라스미드(pDNA1)는 바이러스 제조에 중요한 인핸서/프로모터, Psi, RRE, cPPT, mWPRE, SIN LTR, SV40 polyA(도 2a 또는 2b 참조)를 제공한다. pDNA1의 비제한적 예로서 pGM326 또는 pGM830을 사용하여, CMV 인핸서/프로모터, SV40 polyA, colE1 Ori, 및 KanR은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터(예를 들어, vGM195 또는 vGM244)의 제조에 관여하지만, 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에서는 발견되지 않는다. pGM326 또는 pGM830의 RRE, cPPT(central polypurine tract), hCEF, soCFTR2(이식 유전자), 및 mWPRE는 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에서 발견된다. SIN LTR(긴 말단 반복, SIN/IN 자체-불활성화) 및 Psi(패키징 신호)는 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에서 찾을 수 있다.
본 발명의 다른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 경우, 다른 벡터 게놈 플라스미드(pDNA1)의 상응하는 요소가, 제조에 필요하거나(그러나 최종 벡터에서는 발견되지 않음) 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에 존재한다.
pDNA3a 및 pDNA3b의 F 및 HN 단백질(바람직하게는 Sendai F 및 HN 단백질)은 최종 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터로 표적 세포를 감염시키는 데, 즉 환자의 상피 세포(전형적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 폐 또는 비강 세포)의 진입에 중요하다. pDNA2a 및 pDNA2b 플라스미드의 생성물은 바이러스 형질 도입, 즉 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) DNA를 숙주의 게놈 내에 삽입하는 데 중요하다. 프로모터, 조절 요소(예를 들어, WPRE), 및 이식 유전자는 표적 세포(들) 내에서 이식 유전자 발현에 중요하다.
본 발명의 방법은 다음 단계를 포함하거나 이로 구성될 수 있다: (a) 현탁액에서 세포를 성장시키고; (b) 하나 이상의 플라스미드로 세포를 형질 감염시키고; (c) 뉴클레아제를 첨가하고; (d) 렌티바이러스(예를 들어, SIV)를 채취하고; (e) 트립신을 첨가하고; 그리고 (f) 렌티바이러스(예를 들어, SIV)를 정제하는 단계.
이 방법은 본 명세서에 설명된 4- 또는 5-플라스미드 시스템을 사용할 수 있다. 따라서, 바람직한 5-플라스미드 방법의 경우, 하나 이상의 플라스미드는: 벡터 게놈 플라스미드 pDNA1; co-galpol 플라스미드, pDNA2a; Rev 플라스미드, pDNA2b; 융합(F) 단백질 플라스미드, pDNA3a; 및 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 플라스미드, pDNA3b를 포함하거나 이로 구성된다. pDNA1은 pGM326 및 pGM830, 바람직하게는 pGM830으로부터 선택될 수 있다. pDNA2a는 pGM691일 수 있다. pDNA2b는 pGM299일 수 있다. pDNA3a는 pGM301일 수 있다. pDNA3b는 pGM303일 수 있다. pDNA1, pDNA2a, pDNA2b, pDNA3a, 및 pDNA3b의 임의의 조합을 사용할 수 있다. 바람직하게는, pDNA1은 pGM326 또는 pGM830(pGM830이 특히 바람직함)이고; pDNA2a는 pGM691이고; pDNA2b는 pGM299이고; pDNA3a는 pGM301이고; pDNA3b는 pGM303이다. pGM830, pGM691, pGM299, pGM301, 및 pGM303을 사용하여 생성된 SIV 벡터는 vGM244로 지정된다. pGM326, pGM691, pGM299, pGM301, 및 pGM303을 사용하여 생성된 SIV 벡터는 vGM195로 지정된다.
벡터 게놈 플라스미드: co-gagpol 플라스미드: Rev 플라스미드: F 플라스미드: HN 플라스미드의 임의의 적절한 비율을 사용하여 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 추가로 최적화(증가)할 수 있다. 비제한적 예로서, 벡터 게놈 플라스미드: co-gagpol 플라스미드: Rev 플라스미드: F 플라스미드: HN 플라스미드의 비율은 10-40:-4-20:3-12:3-12:3-12, 전형적으로 15-20:7-11:4-8:4-8:4-8, 예를 들어 약 18-22:7-11:4-8:4-8:4-8, 19-21:8-10:5-7:5-7:5-7 범위일 수 있다. 바람직하게는 벡터 게놈 플라스미드: co-gagpol 플라스미드: Rev 플라스미드: F 플라스미드: HN 플라스미드의 비율은 약 20:9:6:6:6이다.
방법의 단계 (a)-(f)는 전형적으로 단계 (a)에서 시작하여 단계 (f)까지 연속적으로 순차적으로 수행된다. 방법은 하나 이상의 추가 단계, 예컨대 추가 정제 단계, 완충제 교환, 정제 후 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 농축, 및/또는 정제(또는 농축) 후 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 제형을 포함할 수 있다. 각 단계는 하나 이상의 하위 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 채취는 하나 이상의 단계 또는 하위 단계를 포함할 수 있고/있거나 정제는 하나 이상의 단계 또는 하위 단계를 포함할 수 있다.
임의의 적절한 세포 유형은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하기 위해 하나 이상의 플라스미드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 5-플라스미드)로 형질 감염될 수 있다. 전형적으로 포유 동물 세포, 특히 인간 세포주가 사용된다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 세포의 비제한적 예는 HEK293 세포(예를 들어, HEK293F 또는 HEK293T 세포) 및 293T/17 세포이다. 바이러스 생성에 적합한 상업적 세포주 또한 쉽게 구할 수 있다(예를 들어, Gibco Viral Production Cells - Catalogue Number A35347 from ThermoFisher Scientific).
세포는 무혈청 배지를 포함하여 동물-성분이 없는 배지에서 성장할 수 있다. 세포는 인간 성분을 함유하는 배지에서 성장할 수 있다. 세포는 합성적으로 생성된 성분을 포함하거나 이로 구성된 정의된 배지에서 성장할 수 있다.
임의의 적절한 형질 감염 수단이 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적절한 형질 감염 수단의 선택은 당업자의 통상적인 실행 범위 내에 있다. 비제한적 예로서, 형질 감염은 PEIProTM, Lipofectamine2000™, 또는 Lipofectamine3000TM을 사용하여 수행할 수 있다.
임의의 적절한 뉴클레아제가 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적절한 뉴클레아제의 선택은 당업자의 통상적인 실행 범위 내에 있다. 전형적으로 뉴클레아제는 엔도뉴클레아제이다. 비제한적 예로서, 뉴클레아제는 Benzonase® 또는 Denarase®일 수 있다. 뉴클레아제의 첨가는 채취 전 단계 또는 채취 후 단계 또는 채취 단계 사이에 있을 수 있다.
트립신 활성은 바람직하게는 TrypLE Select™와 같은 동물성 기원이 없는 재조합 효소에 의해 제공될 수 있다. 트립신의 첨가는 채취 전 단계 또는 채취 후 단계 또는 채취 단계 사이에 있을 수 있다.
임의의 적절한 정제 수단을 사용하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 정제할 수 있다. 적합한 정제 단계의 비제한적 예는 심층/말단 여과(end filtration), 접선 유동 여과(TFF: tangential flow filtration), 및 크로마토그래피를 포함한다. 정제 단계는 전형적으로 적어도 하나의 크로마토그래피 단계를 포함한다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 크로마토그래피 단계의 비제한적 예는 혼합-모드 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피를 포함한다. 용출(Elution)은 염 구배를 사용하거나 사용하지 않고, 바람직하게는 사용하지 않고 수행할 수 있다.
이 방법은 본 명세서에 기재된 CFTR, A1AT, 및/또는 FVIII 유전자를 포함하는 것과 같은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 임의의 상기 언급된 유전자 또는 상기 언급된 단백질을 암호화하는 유전자를 포함한다.
본 발명의 방법은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 제공하기 위해 사용되는 도 2a-2f, 도 3, 및/또는 도 4a-4d에 의해 제공되는 하나 이상의 특정 플라스미드 작제물의 임의의 조합을 사용할 수 있다. 특히, 도 2c-2f의 플라스미드 작제물이 바람직하게는 도 2b, 도 2a, 도 3, 또는 도 4a-4d의 플라스미드와 함께 사용되고, 도 2b의 플라스미드가 특히 바람직하다.
본 발명은 또한 코돈-최적화된 SIV gag-pol 유전자를 제공한다. 이들 코돈-최적화된 SIV gag-pol 유전자는 전형적으로 본 발명의 방법에 사용하기에 적합하다. 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열 또는 그의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)를 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 특히, 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 포함하는 핵산을 제공하고, 상기 핵산은 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는다. 특히 바람직한 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 핵산을 제공한다. 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(예를 들어, SIV gag-pol 유전자)는 전형적으로 gag-pol 단백질의 발현을 용이하게 하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 이식 유전자에 대한 프로모터와 관련하여 본 명세서에 기재된 것을 포함하여 임의의 적합한 프로모터가 사용될 수 있다. 바람직하게는, 프로모터는 예시된 pGM691 플라스미드에 사용된 바와 같은 CAG 프로모터이다. 예시적인 CAG 프로모터는 SEQ ID NO: 29에 제시되어 있다. SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 번역 슬립을 포함하고, 따라서 단일의 통상적인 오픈 리딩 프레임을 형성하지 않는다.
본 발명은 또한 본 발명의 코돈-최적화된 SIV gag-pol 유전자를 포함하는 플라스미드, 즉 본 발명의 코돈-최적화된 SIV gag-pol 유전자를 포함하는 pDNA2a를 제공한다. 이들 플라스미드는 전형적으로 본 발명의 방법에 사용하기에 적합하다. 본 발명의 (pDNA2a) 플라스미드는 SEQ ID NO: 5(pGM691)의 핵산 서열 또는 그의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)를 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 특히, 본 발명의 (pDNA2a) 플라스미드는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 (pDNA2a) 플라스미드는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 코돈-최적화된 SIV gag-pol 유전자(본 명세서에 정의된 바와 같음), 특히 SEQ ID NO: 1을 포함하거나 이로 구성된 핵산 서열 또는 그의 변이체(본 명세서에 정의된 바와 같음)를 포함하는 플라스미드를 제공한다. 상기 플라스미드는 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 SEQ ID NO: 5에 대해 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 특히 바람직한 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 플라스미드를 제공한다. SEQ ID NO: 5(또는 이의 변이체)의 플라스미드에서: (i) SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 번역 슬립을 포함하고, 따라서 단일의 통상적인 오픈 리딩 프레임을 형성하지 않으며; (ii) SEQ ID NO: 1의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자는 CAG 프로모터(예를 들어, 본 명세서에 예시됨)에 작동 가능하게 연결된다.
코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성되는 핵산) 및 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드는, 고역가(high titre) F/HN 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성을 가능하게 하므로, 본 발명의 방법을 사용하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성에 유리하다. 전형적으로 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성된 핵산) 및 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드는 본 명세서에 기재된 바와 같이 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가와 적어도 동등한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 생성하는 데 사용될 수 있다.
바람직하게는, 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성되는 핵산) 및 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드는 본 명세서에 기재된 바와 같이 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생산된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가와 비교하여 증가된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 역가의 생성을 가능하게 한다.
본 발명은 또한 (i) 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터, (ii) 본 발명의 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성된 핵산); 및/또는 (iii) 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드; 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 전형적으로 숙주 세포는 포유 동물 세포, 특히 인간 세포 또는 세포주이다. 숙주 세포의 비제한적 예는 HEK293 세포(HEK293F 또는 HEK293T 세포와 같은) 및 293T/17 세포를 포함한다. 바이러스 생성에 적합한 상업용 세포주 또한 쉽게 구할 수 있다(본 명세서에 설명된 대로).
본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해, 또는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산)를 사용하여 얻을 수 있는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터, 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포를 제공한다.
전형적으로 본 발명의 방법에 의해, 또는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산)를 사용하여 얻을 수 있는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터, 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포는 고역가에서 생성된다. 역가는 본 명세서에 정의된 변환 단위(transducing unit)로 측정할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 본 발명의 방법은 전형적으로 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법과 동등하거나 더 높은 역가로 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성한다. 따라서, 본 발명의 방법에 의해, 또는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산), 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포를 사용하여 얻을 수 있는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 선택적으로 적어도 약 2.5x106 TU/mL, 적어도 약 3.0x106 TU/mL, 적어도 약 3.1x106 TU/mL, 적어도 약 3.2x106 TU/mL, 적어도 약 3.3x106 TU/mL¸ 적어도 약 3.4x106 TU/mL, 적어도 약 3.5x106 TU/mL, 적어도 약 3.6x106 TU/mL, 적어도 약 3.7x106 TU/mL, 적어도 약 3.8x106 TU/mL, 적어도 약 3.9x106 TU/mL, 적어도 약 4.0x106 TU/mL, 또는 그 이상의 역가일 수 있다. 바람직하게는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 적어도 약 3.0x106 TU/mL, 또는 적어도 약 3.5x106 TU/mL의 역가에서 생성된다.
역가가 높은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 생성은 생성된 벡터 산물에 다른 바람직한 특성을 부여할 수 있다. 예를 들어, 이론에 얽매이지 않고, TFF와 같은 방법에 의해 집중적으로 농축할 필요 없이 고역가로 생성하면, 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(및 선택적으로 변형된 벡터 게놈 플라스미드)를 사용하지 않고 상응하는 방법으로 생성하는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터보다 더 높은 품질의 벡터 산물이 되는데, 그 이유는 벡터가 바이러스 입자와 그들의 RNA 화물을 손상시킬 수 있는 전단력에 덜 노출되기 때문인 것으로 이해된다.
본 발명은 또한 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산), 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포의 사용을 포함하는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 역가를 증가시키는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 역가를 증가시키는 상기 방법은 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성되는 핵산)의 비-코돈-최적화된 버전, 또는 상기 비-코돈 최적화된 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드 또는 숙주 세포를 사용하는 상응하는 방법과 비교하여 역가를 적어도 1.5배, 적어도 2배, 또는 적어도 2.5배, 또는 그 이상 증가시킬 수 있다. 대안적으로, 본 발명에 따른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 증가시키는 상기 방법은 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성되는 핵산)의 비-코돈-최적화된 버전, 또는 상기 비-코돈 최적화된 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드 또는 숙주 세포를 사용하는 상응하는 방법과 비교하여 역가를 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 100%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 또는 그 이상 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 증가시키는 방법은 역가를 (a) 적어도 1.5배 또는 적어도 2배; 및/또는 (b) 적어도 약 25%, 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 100%만큼 증가시킬 수 있다. 전형적으로 상응하는 방법은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이를 포함하거나 이로 구성되는 핵산), 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포의 사용을 제외하고는 본 발명의 방법과 동일하다. 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하는 방법에 관한 본 명세서의 모든 개시는 동일하게 그리고 유보 없이 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 증가시키는 방법에 적용된다.
본 발명은 또한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 역가를 증가시키기 위한 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산), 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포의 용도를 제공한다. 상기 용도는 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산)의 상응하는 비-코돈-최적화된 버전, 또는 상기 비-코돈 최적화된 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드 또는 숙주 세포의 용도와 비교하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 역가를 적어도 1.5배, 적어도 2배, 또는 적어도 2.5배, 또는 그 이상 증가시킬 수 있다. 대안적으로, 상기 용도는 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산)의 상응하는 비-코돈-최적화된 버전, 또는 상기 비-코돈 최적화된 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드 또는 숙주 세포의 용도와 비교하여 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 100%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 또는 그 이상 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 상기 용도는 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 역가를 (a) 적어도 1.5배 또는 적어도 2배; 및/또는 (b) 적어도 약 25%, 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 100% 증가시킨다. 전형적으로 상응하는 용도는 코돈-최적화된 gag-pol 유전자(또는 이들을 포함하거나 이로 구성되는 핵산), 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포의 용도를 제외하고는 본 발명의 방법과 동일하다. 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 생성하는 방법에 관한 본 명세서의 모든 개시는 본 발명에 따른 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어 SIV) 벡터의 역가를 증가시키기 위해 코돈-최적화된 gag-pol 유전자, 상기 유전자 또는 핵산을 포함하는 플라스미드, 또는 본 발명의 숙주 세포의 용도에 동일하게 유보 없이 적용된다. 변형된 벡터 게놈 플라스미드(감소된 바이러스 ORF 포함)와 함께 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하면 안전성 및/또는 벡터 역가 측면에서 추가 이점을 제공할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 증가된 벡터 수율은 코돈-최적화된 gag-pol 유전자만을 사용하거나 변형된 벡터 게놈 플라스미드와 함께 사용하여 달성될 수 있다. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용하는 방법의 맥락에서 증가된 벡터 역가와 관련된 본 명세서의 모든 개시는 본 발명의 변형된 벡터 게놈 플라스미드와 함께 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 사용하는 방법 및 이러한 방법에 의해 생성된 벡터에 동일하게 그리고 제한 없이 적용된다.
치료 적응증(Therapeutic Indications)
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 효율적인 유전자 전달을 통해 더 높고 지속적인 유전자 발현을 가능하게 한다. 본 발명의 F/HN-슈도타이핑된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는: (i) 상피 완전성(epithelial integrity)의 파괴 없이 기도 형질 도입; (ii) 지속적인 유전자 발현; (iii) 만성 독성(chronic toxicity)의 결여; 및 (iv) 효율적인 반복 투여가 가능하다. 바람직하게는 치료-유효 수준에서 장기간/지속적인 안정한 유전자 발현은 본 발명의 벡터의 반복 용량을 사용하여 달성될 수 있다. 대안적으로, 원하는 장기 발현을 달성하기 위해 단일 용량을 사용할 수 있다.
따라서, 유리하게는, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 유전자 치료에 사용될 수 있다. 예로서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 효율적인 기도 세포 흡수 특성은 이들을 호흡기 질환 치료에 매우 적합하게 만든다. 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 또한 치료 단백질의 분비를 촉진하기 위한 유전자 치료 방법에 사용될 수 있다. 추가 예로서, 본 발명은 호흡기 또는 순환계의 내강 내로의 치료 단백질의 분비를 제공한다. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 투여 및 기도 세포에 의한 그의 흡수는, 폐(또는 코 또는 기도)를 “공장”으로 사용하여, 분비되어 치료 효과를 이끌어내기 위해 관심 있는 세포/조직으로 이동할 수 있는 치료 수준에서 일반 순환계로 들어가는, 치료 단백질을 생성할 수 있게 할 수 있다. 세포 내 단백질 또는 막 단백질과 달리, 이러한 분비 단백질의 생성은, 형질 도입되는 특정 질병 표적 세포에 의존하지 않고, 이는 상당한 이점이며 높은 수준의 단백질 발현을 달성한다. 따라서, 심혈관 질환 및 혈액 장애, 특히 혈액 응고 결핍증과 같은 호흡기 질환이 아닌 다른 질환도 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터에 의해 치료될 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 질병 조정(correction)을 위한 이식 유전자를 제공함으로써 질병을 효과적으로 치료할 수 있다. 예를 들어, 근본적인 돌연변이(underlying mutation)와 관계없이, CF 환자의 폐 질환을 개선하거나 예방하기 위해, CFTR 유전자의 기능적 복제본을 삽입한다. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는, 전형적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 CFTR 이식 유전자를 사용한 유전자 요법에 의해, 낭포성 섬유증(CF)을 치료하는 데 사용될 수 있다.
또 다른 예로서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 알파-1 항트립신(A1AT) 결핍을 치료하기 위해, 전형적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 A1AT 이식 유전자를 사용한 유전자 요법에 의해 사용될 수 있다. A1AT는 주로 간에서 생성된 후 폐로 전달되는 분비형 항프로테아제이고, 소량은 폐 자체에서도 생성된다. A1AT의 주요 기능은 호중구 엘라스타제에 결합하여 중화/억제하는 것이다. 본 발명에 따른 A1AT를 이용한 유전자 요법은, CF 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)과 같은 다른 폐 질환뿐만 아니라 A1AT 결핍 환자와 관련이 있고, 표적 조직(폐/비강 상피)에서 안정적이고 오래 지속되는 발현, 투여 용이성, 및 무제한 가용성을 제공하여 기존의 효소 대체 요법(enzyme replacement therapy)(A1AT가 인간 혈액에서 단리되어 매주 정맥 주사됨)에서 직면하는 일부 문제를 극복할 수 있는 기회를 제공한다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 사용한 형질 도입은 재조합 단백질을 순환계뿐만 아니라 폐의 내강 내로 분비하도록 유도할 수 있다. 이의 한 가지 이점은 치료용 단백질이 간질(interstitium)에 도달한다는 것이다. 따라서 A1AT 유전자 치료는 제1형 및 제2형 당뇨병, 급성 심근 경색, 허혈성 심장 질환, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 이식 거부, 이식편 대 숙주(GvH) 질환, 다발성 경화증, 간 질환, 간경화, 맥관염, 및 박테리아 및/또는 바이러스 감염과 같은 감염을 포함하는 비제한적 예와 같은 다른 질병 적응증에도 유익할 수 있다.
A1AT는 예를 들어 당뇨병, 이식편 대 숙주 질환 및 염증성 장 질환의 전-임상 모델에서 수많은 다른 항-염증 및 조직-보호 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 형질 도입 후 폐 및/또는 코에서 A1AT의 생성은 이들 적응증을 포함하여 보다 광범위하게 적용될 수 있다.
본 발명에 따른 분비 단백질의 유전자 요법으로 치료될 수 있는 질병의 다른 예는 심혈관 질환 및 혈액 장애, 특히 혈우병(A, B 또는 C), 폰빌레브란트병, 및 인자 VII 결핍과 같은 혈액 응고 결핍증을 포함한다.
치료할 질병 또는 장애의 다른 예에는 원발성 섬모 운동 이상증(PCD), 급성 폐 손상, 계면활성 단백질 B(SFTB) 결핍, 폐포 단백질증(PAP: Pulmonary Alveolar Proteinosis), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 및/또는 리소좀 저장 질환과 같은 염증성, 감염성, 면역, 또는 대사 질환이 있다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 대상에게 투여하는 방법을 포함하는, 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 전형적으로 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 발명의 방법을 사용하여 생성된다. 본 명세서에 기재된 임의의 질병은 본 발명에 따라 치료될 수 있다. 특히, 본 발명은 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 사용하여 폐 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 치료할 질병은 만성 질병일 수 있다. 바람직하게는, CF를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명은 또한 질병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 제공한다. 전형적으로 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 발명의 방법을 사용하여 생성된다. 본 명세서에 기재된 임의의 질병은 본 발명에 따라 치료될 수 있다. 특히, 본 발명은 폐 질환을 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 제공한다. 치료할 질병은 만성 질환일 수 있다. 바람직하게는, CF 치료에 사용하기 위한 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터가 제공된다.
본 발명은 또한 질병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서 본 명세서에 기재된 바와 같은 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 용도를 제공한다. 전형적으로 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 본 발명의 방법을 사용하여 생성된다. 본 명세서에 기재된 임의의 질병은 본 발명에 따라 치료될 수 있다. 특히, 본 발명은 폐 질환을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 용도를 제공한다. 치료할 질병은 만성 질환일 수 있다. 바람직하게는, CF를 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에서 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 용도가 제공된다.
제형 및 투여
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 원하는 치료 효과를 달성하기에 적절한 투여량으로 투여될 수 있다. 적절한 투여량은 임상의 또는 기타 의사가 표준 기술을 사용하여 정상적인 연구 과정 내에서 결정할 수 있다. 적합한 투여량의 비제한적 예는 1x108 형질 도입 단위(TU), 1x109 TU, 1x1010 TU, 1x1011 TU 이상을 포함한다.
본 발명은 또한 상기 기재된 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 약학적으로 허용되는 담체의 비제한적 예는 물, 식염수, 및 인산염-완충 식염수를 포함한다. 그러나 일부 구체예에서, 조성물은 동결 건조된 형태이고, 이 경우 소 혈청 알부민(BSA)과 같은 안정제를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 장기(long-term) 저장을 용이하게 하기 위해, 티오메르살(thiomersal) 또는 아지드화나트륨(sodium azide)과 같은 방부제와 함께 조성물을 제형화하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 임의의 적절한 경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물(상기 기재된 바와 같음)을 대상의 호흡계로 향하게 하는 것이 바람직할 수 있다. 호흡기의 감염 부위로의 치료/예방 조성물 또는 약제의 효율적인 전달은 예를 들어 에어로졸(예를 들어, 비강 스프레이)로서 경구 또는 비강 내 투여에 의해 또는 카테터에 의해 달성될 수 있다. 전형적으로 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 임상적으로 관련된 분무기, 흡입기(정량 흡입기 포함), 카테터, 및 에어로졸 등에서 안정하다.
본 발명의 일부 구체예에서 코는 다음 이유 중 적어도 하나 때문에 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 사용하는 치료 단백질에 대한 바람직한 생산 부위이다: (i) 염증 세포 및 가래와 같은 세포 외 장벽이 코에서 덜 두드러짐; (ii) 벡터 투여 용이성; (iii) 더 적은 양의 벡터가 필요함; 및 (iv) 윤리적 고려 사항. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터를 사용한 비강 상피 세포의 형질 도입은 관심 있는 치료 이식 유전자의 효율적이고(높은 수준) 오래 지속되는 발현을 초래할 수 있다. 따라서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 비강 투여가 바람직할 수 있다.
비강 내 투여를 위한 제형은 비강 액적 또는 비강 분무제의 형태일 수 있다. 비강 내 제형은 500-4000㎛, 1000-3000㎛, 또는 100-1000㎛와 같은 100-5000㎛ 범위의 대략적인 직경을 갖는 액적을 포함할 수 있다. 대안적으로, 부피 면에서, 액적은 약 0.001-100μl, 예를 들어 0.1-50μl 또는 1.0-25μl, 또는 예를 들어 0.001-1μl 범위일 수 있다.
에어로졸 제형은 분말, 현탁액, 또는 용액의 형태를 취할 수 있다. 에어로졸 입자의 크기는 에어로졸의 전달 능력과 관련이 있다. 더 작은 입자는 더 큰 입자보다 폐포를 향해 호흡기 아래로 더 멀리 이동할 수 있다. 일 구체예에서, 에어로졸 입자는 기관지, 세기관지, 및 폐포의 전체 길이를 따라 전달을 용이하게 하는 직경 분포를 갖는다. 대안적으로, 입자 크기 분포는 호흡기의 특정 부분, 예를 들어 폐포를 표적으로 하도록 선택될 수 있다. 약제의 에어로졸 전달의 경우, 입자는 약 0.1-50㎛, 바람직하게는 1-25㎛, 더 바람직하게는 1-5㎛ 범위의 직경을 가질 수 있다.
에어로졸 입자는 분무기(예를 들어, 입을 통해) 또는 비강 스프레이를 사용하여 전달하기 위한 것일 수 있다. 에어로졸 제형은 선택적으로 분사제 및/또는 압축 가스(propellant)를 함유할 수 있다.
약학적 에어로졸의 제형은 당업자에게 일상적이고, 예를 들어 Sciarra, J. in Remington's Pharmaceutical Sciences (supra)를 참조한다. 제제는 용액 에어로졸, 건조 분말의 분산액 또는 현탁 에어로졸, 에멀젼 또는 반고체 제제로 제형화될 수 있다. 에어로졸은 당업자에게 공지된 임의의 압축 가스 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 에어로졸은 예를 들어 비강 흡입에 의해 상기도, 또는 하기도 또는 둘 모두에 적용될 수 있다. 약제가 전달되는 폐 부분은 장애에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 벡터를 포함하는 조성물은, 특히 비강 내 전달이 사용될 경우, 습윤제를 포함할 수 있다. 이는 점막의 건조를 줄이거나 예방하고 점막의 자극을 예방하는 데 도움이 될 수 있다. 적합한 습윤제는 예를 들어 소르비톨, 미네랄 오일, 식물성 오일, 및 글리세롤; 진정제(soothing agent); 멤브레인 컨디셔너; 감미료; 및 이들의 조합을 포함한다. 조성물은 계면활성제를 포함할 수 있다. 적합한 계면활성제는 비이온성, 음이온성, 및 양이온성 계면활성제를 포함한다. 사용될 수 있는 계면활성제의 예는 예를 들어 소르비톨 무수물의 지방산 부분 에스테르의 폴리옥시에틸렌 유도체, 예를 들어 트윈 80, 폴리옥실 40 스테아레이트, 폴리옥시 에틸렌 50 스테아레이트, 푸시에이트(fusieates), 담즙산염(bile salt), 및 옥톡시놀을 포함한다.
경우에 따라 초기 투여 후 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터의 후속 투여가 수행될 수 있다. 예를 들어, 투여는 최초 투여 후 적어도 1주, 2주, 1개월, 2개월, 6개월, 1년, 또는 그 이상이 될 수 있다. 일부 예에서, 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 적어도 1주에 1회, 2주에 1회, 1개월에 1회, 2개월마다, 6개월마다, 매년, 또는 더 긴 간격으로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 6개월마다, 보다 바람직하게는 매년 투여한다. 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 예를 들어 이전 투여 효과가 감소하는 시기에 따라 지정된 간격으로 투여될 수 있다.
본 발명의 임의의 2 이상의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 개별적으로, 순차적으로, 또는 동시에 투여될 수 있다. 따라서 적어도 하나의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터가 본 발명의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터인, 2개의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터 또는 그 이상의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터가 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여될 수 있고 특히 본 발명의 2개 이상의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터가 이러한 방식으로 투여될 수 있다. 2개의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 동일하거나 상이한 조성물로 투여될 수 있다. 바람직한 예에서, 2개의 레트로바이러스/렌티바이러스(예를 들어, SIV) 벡터는 동일한 조성물로 전달될 수 있다.
서열 상동성(SEQUENCE HOMOLOGY)
전체적 방법, 국소적 방법, 및 혼성 방법, 예를 들어 세그먼트 접근 방법(segment approach method)을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 다양한 서열 정렬 방법을 사용하여 백분율 동일성을 결정할 수 있다. 백분율 동일성을 결정하기 위한 프로토콜은 당업자의 범위 내에서 일상적인 절차이다. 전체적 방법은 분자의 처음부터 끝까지 서열을 정렬하고 개별 잔기 쌍의 점수를 합산하고 갭 페널티를 부과하여 최상의 정렬을 결정한다. 비제한적 방법은 예를 들어 CLUSTAL W를 포함하고, 예를 들어 Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position- Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)를 참조하고; 그리고 반복 정제를 포함하고, 예를 들어 Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein. Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. MoI. Biol. 823-838 (1996)를 참조한다. 국소적 방법은 모든 입력 서열에서 공유하는 하나 이상의 보존된 모티프를 식별하여 서열을 정렬한다. 비제한적 방법은 예를 들어 Match-box(예를 들어, Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501 -509 (1992) 참조); Gibbs 샘플링(예를 들어, C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131 ) Science 208-214 (1993) 참조); Align-M(예를 들어, Ivo Van WaIIe et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics:1428-1435 (2004) 참조)을 포함한다.
따라서, 백분율 서열 동일성은 통상적인 방법에 의해 결정된다. 예를 들어, Altschul et al., Bull. Math. Bio. 48: 603-16, 1986 and Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-19, 1992를 참조한다. 간략하게, 2개의 아미노산 서열은 10의 갭 오프닝 페널티, 1의 갭 확장 페널티, 하기에 표시된 대로 Henikoff 및 Henikoff(ibid.)의 "blosum 62" 스코어링 매트릭스를 사용하여 정렬 점수를 최적화하도록 정렬된다(아미노산은 표준 한 문자 코드로 표시됨).
2 이상의 핵산 또는 아미노산 서열 사이의 "백분율 서열 동일성(percent sequence identity)“은 서열이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다. 따라서, % 동일성은 동일한 뉴클레오티드/아미노산의 수를 총 뉴클레오티드/아미노산 수로 나누고 100을 곱하여 계산할 수 있다. % 서열 동일성의 계산은 또한 갭의 수 및, 2 이상의 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입될 필요가 있는 각 갭의 길이를 고려할 수 있다. 서열 비교 및 2 이상의 서열 사이의 백분율 동일성의 결정은 당업자에게 친숙할 BLAST와 같은 특정 수학적 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다.
서열 동일성을 결정하기 위한 정렬 점수
A R N D C Q E G H I L K M F P S T W Y V
A 4
R -1 5
N -2 0 6
D -2 -2 1 6
C 0 -3 -3 -3 9
Q -1 1 0 0 -3 5
E -1 0 0 2 -4 2 5
G 0 -2 0 -1 -3 -2 -2 6
H -2 0 1 -1 -3 0 0 -2 8
I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3 4
L -1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3 2 4
K -1 2 0 -1 -3 1 1 -2 -1 -3 -2 5
M -1 -1 -2 -3 -1 0 -2 -3 -2 1 2 -1 5
F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1 0 0 -3 0 6
P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4 7
S 1 -1 1 0 -1 0 0 0 -1 -2 -2 0 -1 -2 -1 4
T 0 -1 0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1 5
W -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1 -4 -3 -2 11
Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3 2 -1 -1 -2 -1 3 -3 -2 -2 2 7
V 0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3 3 1 -2 1 -1 -2 -2 0 -3 -1 4
백분율 동일성은 다음과 같이 계산된다:
동일한 일치의 총 수
__________________________________________ x 100
[더 긴 서열의 길이 + 두 서열을 정렬하기 위해 더 긴 서열 내에 도입된 갭의 수]
실질적으로 상동인 폴리펩티드는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 첨가를 갖는 것으로 특징지어진다. 이러한 변화는 바람직하게는 미미한 성질, 즉 폴리펩티드의 폴딩(folding) 또는 활성에 유의미한 영향을 미치지 않는 보존적 아미노산 치환(본 명세서에 기재된 바와 같음) 및 기타 치환; 전형적으로 1개 내지 약 30개 아미노산의 작은 결실; 및 아미노-말단 메티오닌 잔기, 최대 약 20-25 잔기의 작은 링커 펩티드 또는 친화성 태그와 같은 작은 아미노- 또는 카르복실-말단 연장이다.
20개의 표준 아미노산 외에도, 비표준 아미노산(예를 들어, 4-히드록시프롤린, 6-N-메틸 라이신, 2-아미노이소부티르산, 이소발린, 및 α-메틸 세린)이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 대체할 수 있다. 제한된 수의 비보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 암호화되지 않은 아미노산, 및 비천연 아미노산이 폴리펩티드 아미노산 잔기를 대체할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 또한 비천연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
비천연 발생 아미노산에는 트랜스-3-메틸프롤린, 2,4-메타노-프롤린, 시스-4-히드록시프롤린, 트랜스-4-히드록시-프롤린, N-메틸글리신, 알로-트레오닌, 메틸-트레오닌, 히드록시-에틸시스테인, 히드록시에틸호모-시스테인, 니트로-글루타민, 호모글루타민, 피페콜산, tert-류신, 노르발린, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐-알라닌, 4-아자페닐-알라닌, 및 4-플루오로페닐알라닌이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 비천연 발생 아미노산 잔기를 단백질 내에 혼입시키기 위한 여러 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 넌센스 돌연변이가 화학적으로 아미노아실화된 억제자 tRNA를 사용하여 억제되는, 시험관 내 시스템이 사용될 수 있다. 아미노산을 합성하고 tRNA를 아미노아실화하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 넌센스 돌연변이를 함유하는 플라스미드의 전사 및 번역은 E. coli S30 추출물과 상업적으로 이용 가능한 효소 및 기타 시약을 포함하는 무세포 시스템에서 수행된다. 단백질은 크로마토그래피로 정제된다. 예를 들어, Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993; and Chung et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10145-9, 1993)를 참조한다. 두 번째 방법에서, 번역은 돌연변이된 mRNA 및 화학적으로 아미노아실화된 억제자 tRNA의 미세 주입(microinjection)에 의해 Xenopus 난모 세포(oocytes)에서 수행된다(Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996). 세 번째 방법 내에서, 대장균 세포는 대체될 천연 아미노산(예를 들어, 페닐알라닌)의 부재 및 원하는 비천연 발생 아미노산(들)(예를 들어, 2- 아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐알라닌, 또는 4-플루오로페닐알라닌)의 존재하에 배양된다. 비천연 발생 아미노산은 천연 대응물 대신에 폴리펩티드 내에 통합된다. Koide et al., Biochem. 33:7470-6, 1994를 참조한다. 천연 발생 아미노산 잔기는 시험관 내 화학적 변형에 의해 비천연 발생 종으로 전환될 수 있다. 화학적 변형은 치환 범위를 추가로 확장하기 위해 부위-지정 돌연변이 유발(site-directed mutagenesis)과 조합될 수 있다(Wynn and Richards, Protein Sci. 2:395-403, 1993).
제한된 수의 비보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 암호화되지 않는 아미노산, 비-천연 발생 아미노산, 및 비천연 아미노산이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 대체할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드의 필수 아미노산은, 부위-지정 돌연변이 유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이 유발과 같은, 당업계에 공지된 절차에 따라 확인될 수 있다(Cunningham and Wells, Science 244: 1081-5, 1989). 생물학적 상호 작용 부위는, 추정되는 접촉 부위 아미노산의 돌연변이와 함께, 핵 자기 공명, 결정학, 전자 회절, 또는 광친화성 라벨링과 같은 기술에 의해 결정되는 구조의 물리적 분석에 의해 결정될 수도 있다. 예를 들어, de Vos et al., Science 255:306-12, 1992; Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899-904, 1992; Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59-64, 1992를 참조한다. 필수 아미노산의 본질은 또한 본 발명의 폴리펩티드의 관련 성분(예를 들어, 전위 또는 프로테아제 성분)과의 상동성 분석으로부터 추론될 수 있다.
다중 아미노산 치환은 Reidhaar-Olson 및 Sauer(Science 241:53-7, 1988) 또는 Bowie 및 Sauer(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989)에 의해 개시된 것과 같은 공지된 돌연변이 유발 및 스크리닝 방법을 사용하여 이루어지고 시험될 수 있다.
간략하게, 이들 저자는 폴리펩티드에서 2 이상의 위치를 동시에 무작위화하고, 기능적 폴리펩티드를 선택한 다음, 각 위치에서 허용 가능한 치환의 스펙트럼을 결정하기 위해 돌연변이화된 폴리펩티드를 시퀀싱하는 방법을 개시한다. 사용될 수 있는 다른 방법에는 파지 디스플레이(예를 들어, Lowman et al., Biochem. 30:10832-7, 1991; Ladner et al., U.S. Patent No. 5,223,409; Huse, WIPO Publication WO 92/06204) 및 영역-지정 돌연변이 유발(Derbyshire et al., Gene 46:145, 1986; Ner et al., DNA 7:127, 1988)이 포함된다.
다중 아미노산 치환은 Reidhaar-Olson 및 Sauer(Science 241:53-7, 1988) 또는 Bowie 및 Sauer(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989)에 의해 개시된 것과 같은 공지된 돌연변이 유발 및 스크리닝 방법을 사용하여 이루어지고 시험될 수 있다.
간략하게, 이들 저자는 폴리펩티드에서 2 이상의 위치를 동시에 무작위화하고, 기능적 폴리펩티드를 선택한 다음, 각 위치에서 허용 가능한 치환의 스펙트럼을 결정하기 위해 돌연변이화된 폴리펩티드를 시퀀싱하는 방법을 개시한다. 사용될 수 있는 다른 방법에는 파지 디스플레이(예를 들어, Lowman et al., Biochem. 30:10832-7, 1991; Ladner et al., U.S. Patent No. 5,223,409; Huse, WIPO Publication WO 92/06204) 및 영역-지정 돌연변이 유발(Derbyshire et al., Gene 46:145, 1986; Ner et al., DNA 7:127, 1988)이 포함된다.
실시예
이제 본 발명을 하기 실시예를 참조하여 설명한다. 이들은 본 발명의 범위를 제한하지 않고, 당업자는 본 발명의 범위 내에서 적합한 등가물이 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 실시예는 본 발명의 구성 요소로 간주될 수 있고, 본 명세서에 기재된 개별 측면은 독립적으로 또는 임의의 조합으로 개시된 것으로 간주될 수 있다.
실시예 1 - 플라스미드 pGM691 작제(Plasmid pGM691 construction)
pGM326의 벡터 게놈 플라스미드(pDNA1)와 pGM297의 GagPol 플라스미드(pDNA2a)의 비교를 수행하였다. 도 5a에 도시된 바와 같이, pGM326의 부분적인 gagpol 뉴클레오티드 서열과 pGM297의 비-코돈 최적화된 gagpol 서열 사이에 상당한 상동성이 존재한다.
변형된 pDNA2a 플라스미드는 (i) pGM326의 부분적인 gagpol 뉴클레오티드 서열과 pGM297의 비-코돈 최적화된 gagpol 서열 사이의 상동성을 감소시키고; (ii) 증가된 gagpol 단백질 발현을 위해 gagpol 유전자를 코돈-최적화하고; (iii) 제조 또는 임상 사용 중에 복제-가능 렌티바이러스(RCL) 생성의 이론적 위험을 줄이고; 그리고 (iv) Rev에 대한 gagpol 발현 의존성을 제거하도록 설계되었다. pGM297과 변형된 pDNA2a(pGM691)의 비교가 도 5b-5d에 도시되어 있고, 변경 사항이 주해되어 있다.
pGM691은 제한 효소 XhoI, EcoRV, 및 BglII로 pGM297을 분해하여 4583bp, 3662bp, 및 1641bp의 DNA 단편을 수득함으로써 생성되었다. 플라스미드 복제 기점 및 CBA 프로모터 인트론을 함유하는 4583bp 단편을 정제하고 보유하였다. 플라스미드 pGM693은 GeneArt/LifeTechnologies에서 DNA 합성을 통해 제조하였다. pGM693은 궁극적으로 pGM691에서 발견되는 코돈 최적화된 GagPol 서열을 포함하는 4481bp XhoI 내지 BglII DNA 단편을 포함하도록 발명자들에 의해 설계되었다. pGM693을 XhoI 및 BglII로 분해하여 4481bp, 1236bp, 및 1048bp의 DNA 단편을 얻었다. 코돈 최적화된 GagPol 서열을 함유하는 4481bp 단편을 정제하고 보유하였다(도 5e 참조). 2개의 보유된 DNA 단편을 DNA 리가제로 결찰하고 결찰된 DNA의 결과 혼합물을 E. coli Stbl3 세포로 형질 전환시켰고; 복제할 수 있는 플라스미드를 함유하는 세포가 카나마이신(kanamycin)에 대한 저항성에 의해 선택되었다. 카나마이신 내성, 형질 전환된 Stbl3 세포의 잘-분리된 개별 콜로니를 선택하고 확장시켰다. 생성된 클론의 DNA 제한 분석은 예상되는 DNA 구조를 갖는 다수의 클론을 식별하였고; 하나는 유보되어(reserved) pGM691로 명명되었다.
실시예 2 - rSIV.F/HN 벡터 hCEF-CFTR의 생성
hCEF 프로모터의 전사 조절(transcriptional control)하에 CFTR 이식 유전자를 포함하는 벡터 게놈 pGM326은 pGM297 GagPol 또는 pGM691 coGagPol을 사용하여 제공되는 생성 수율을 평가하기 위해 두 가지 실험 설계(DoE) 연구에 사용되었다.
각 DoE 연구에서 사용된 각 구성 요소의 저농도, 중앙 농도, 및 고농도를 포함하는 광범위한 조건이 사용되었다:
기능(Function) 코드(Code) Low Centre High
Genome pGM326 0.2 1.1 2
(co)GagPol pGM297 or GM691 0.1 0.55 1
Rev pGM299 0.1 0.55 1
F pGM301 0.1 0.55 1
HN pGM303 0.1 0.55 1
형질감염 시약(Transfection Reagent) 리포펙타민(Lipofectamine) 2000 4 7 10
형질 감염 시약의 단위는 μL/mL이고, 다른 모든 시약의 경우 μg/mL이다.
대부분의 조건과 6개의 반복 중심점에 대해 준비된 중복 벡터 스톡과 함께 3-수준 부분 요인 설계를 사용하였다. 전체적으로, pGM297 GagPol 및 pGM691 coGagPol에 대해 동일한 조건을 사용하여 31개의 벡터 스톡을 제조하였다.
벡터 스톡의 희석액으로 293T 세포를 형질 도입한 후 정량적 PCR을 통해 형질 도입된 세포에서 벡터 특이적 및 게놈 특이적 DNA 서열의 비율을 검출하여 결정된 통합 형질 도입 단위 역가(TU/mL)를 도 6a에 도시하였다(복제 벡터 스톡은 점으로 표시되고, 선은 동일한 조건을 나타낸다).
DOE 실험에 이어서, hCEF 프로모터의 전사 조절하에 CFTR 이식 유전자를 포함하는 벡터 게놈 pGM326을 사용하여, 지시된 바와 같이 pGM297 GagPol 또는 pGM691 coGagPol을 사용하여 rSIV.F/HN 벡터 스톡을 3회 제조하였다.
모든 제조에 대해, Rev, F 및 HN은 각각 pGM299, pGM301, 및 pGM303에서 제공되었다. 사용된 벡터 게놈:GagPol:Rev:F:HN의 DNA 질량비는 모든 경우에 20:9:6:6:6이었다. 조건 A 및 B의 경우, 사용된 총 DNA 수준은 각각 2.2μg/mL 및 1.8μg/mL이다. 조건 A 및 B의 경우, 사용된 총 Lipofectamine 2000 수준은 각각 7μL/mL 및 8μL/mL이었다.
벡터 스톡의 희석물과 함께 293T 세포의 형질 도입 후 정량적 PCR을 통해 형질 도입된 세포에서 게놈 특이적 DNA 서열에 특이적인 벡터의 비율에 의해 결정된 통합 형질 도입 단위 역가(TU/mL)가 플롯된다(개별 벡터 스톡은 점으로 표시되고, 선은 그룹 중앙값을 나타낸다).
pGM691에 의해 제공되는 coGagPol을 사용한 벡터 수율은 조건 A에서 ~2.3배 더 높고 조건 B에서 ~1.5배 더 높은 것으로 관찰되었다(도 6b). 따라서, pGM691을 pDNA2a로 사용하면 사용된 다른 배양 조건과 관계없이 SIV 바이러스 역가가 눈에 띄게 증가하였다. gagpol 유전자의 코돈-최적화가 렌티바이러스 역가의 감소와 관련이 있다고 보고하는 여러 독립적인 발표된 연구가 있기 때문에, 이는 놀라운 것이다.
실시예 3 - rSIV.F/HN CMV-EGFP의 생성
벡터 역가를 유지하거나 증가시키는 코돈-최적화된 gagpol의 능력이 특정 rSIV.F/HN 작제물(rSIV.F/HN hCEF-CFTR)로 제한되는지 여부를 조사하기 위해, 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된 상이한 이식 유전자를 생성하기 위해 플라스미드를 사용하여 실험을 수행하였다.
HEK293T, Freestyle 293F (Life Technologies, Paisley, UK), 및 293T/17 세포(CRL-11268; ATCC, Manassas, VA)를 10% 태아 소 혈청을 함유하는 Dulbecco's minimal Eagle's medium (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 유지하고 페니실린(100U/ml) 및 스트렙토마이신(100μg/ml) 또는 Freestyle™ 293 Expression Medium (Life Technologies) 배지로 보충하였다.
SeV-F/HN-슈도타이핑된 SIV 벡터는: pDNA1(pGM311; CMV 프로모터의 전사 조절하에 EGFP 이식 유전자를 포함함)이 렌티바이러스 벡터 mRNA를 암호화하고; pDNA2a(pGM691; 도 2c)는 SIV Gag 및 Pol 단백질을 암호화하고; pDNA2b(pGM299: 도 2d)는 SIV Rev 단백질을 암호화하고; pDNA3a(pGM301; 도 2e)는 센다이 바이러스-유래 Fct4 단백질을 암호화하고[Kobayashi et al., 2003 J. Virol. 77:2607]; 그리고 pDNA3b(pGM303; 도 2f)는 센다이 바이러스-유래 SIVct+HN을 암호화하는[Kobayashi et al., 2003 J. Virol. 77:2607] complexed with PEIpro (Polyplus, Illkirch, France); 특성을 갖는 5개의 플라스미드의 혼합물로 FreeStyleTM 293 Expression Medium에서 배양된 HEK293T 또는 293T/17 세포를 형질 감염시켜 생성되었다. 세포 배양 배지는 부티르산 나트륨으로 형질 감염 후 12-24일에 보충되었다. 부티르산 나트륨은 히스톤 데아세틸라제를 억제하여 벡터 생성을 자극하여 5개의 플라스미드에 의해 암호화되는 SIV 및 센다이 바이러스 융합 단백질 구성 요소의 발현을 증가시킨다. 세포 배양 배지는 형질 감염 후 44-52시간 및/또는 68-76시간에 5 단위/mL 벤조나아제 뉴클레아제(Merck Millipore, Nottingham, UK)로 보충되었다. SIV 벡터를 함유하는 배양 상등액은 형질 감염 후 68-76.5시간에 채취하고 0.45μm 멤브레인을 통해 여과하여 정화하였다. SIV 벡터는 TrypLE Select™로 분해 처리된다. 이어서, SIV 벡터를 추가로 정제하고 음이온-교환 크로마토그래피 및 접선 흐름 여과에 의해 농축하였다.
표시된 대로 pGM297 GagPol 또는 pGM691 coGagPol을 사용하여 rSIV.F/HN 벡터 스톡을 3중으로 한다. 사용된 벡터 게놈:GagPol:Rev:F:HN의 DNA 질량비는 모든 경우에 20:9:6:6:6이었다.
벡터 스톡을 희석하여 293T 세포를 형질 도입한 후 유세포 분석을 통해 EGFP 양성 세포를 검출하여 결정한 기능적 형질 도입 단위 역가(FTU/mL)를 도 7에 표시하였다(개별 벡터 스톡은 점으로 표시됨, 선은 그룹 중앙값을 의미). 실시예 2의 rSIV.F/HN hCEF-CFTR 작제물의 경우, pGM691에 의해 제공되는 coGagPol을 사용한 rSIV.F/HN CMV-EGFP 벡터 수율은 pGM297의 코돈-최적화되지 않은 gagpol을 사용한 경우보다 ~1.6배 더 높은 것으로 관찰되었다. 이는 벡터 역가를 유지하거나 증가시키는 코돈-최적화된 gagpol의 능력이 특정 rSIV.F/HN hCEF-CFTR 작제물에 제한되지 않고, 오히려 coGagPol의 사용과 일반적으로 연관된 기능임을 시사한다.
실시예 3 - 벡터 게놈 플라스미드 내 온전한 SIV ORF 수 감소
하나 이상의 구성 플라스미드에 대한 추가 변형은 최종 벡터 생성물의 안전성을 더욱 향상시켜, 추가적인 임상적 이점을 제공할 수 있다.
본 발명자들은 구성 플라스미드의 서열을 검토하고 벡터 게놈 플라스미드 pGM326 내에서 몇 가지 중요 영역을 확인하였다. 특히, pGM326 부분 Gag RRE cPPT hCEF 영역은 다음을 포함한다:
·개시 코돈(ATG) 77개;
·길이가 아미노산 10개 이상인 ORF 32개
·5'에서 3' 방향의 큰 ORF 2개
o p17 매트릭스 및 p24 캡시드의 일부를 암호화하는 벡터 게놈(Gag/RRE 융합)에서 most 5' ATG의 189개 아미노산
o RRE 내부의 ATG에서 250개의 아미노산(RRE/cPPT/hCEF 융합)
이는 도 8에 설명되어 있다. 2개의 큰 ORF(도 9 참조)가 특히 중요하였다.
이와 같이, 본 발명자들은 개선된 안전성을 위해 온전한 SIV ORF의 수를 감소시키기 위한(및 특히 이들 2개의 큰 ORF를 제거하기 위한) 추가적인 변형의 조합을 갖는 변형된 버전의 pGM326 플라스미드를 설계하였다. 변형은 hCEF 프로모터 및 CFTR 이식 유전자(soCFTR2)의 상류에 있는 2개의 큰 ORF에 생기게 된다. 변경 사항은 다음과 같다:
·6개의 ATG 제거(3xATG-ATTG, 1xATG-TTG, 2xATG-AAG)
·1개의 정지 삽입(TCC-TAAA)
·변경된 부분 Gag와 RRE 사이의 제한 부위 1개(EcoRI GAATTC - GCCTGCAGG SbfI)
생성된 벡터 게놈 플라스미드는 도 2b에 도시된 바와 같이 SEQ ID NO: 4의 서열을 갖는 pGM830이다.
동일한 생산 프로토콜에서 pGM326 또는 pGM830 벡터 게놈 플라스미드를 사용하여 벡터 역가를 비교한 결과 pGM830의 사용이 HEK293T 및 A549 세포 모두를 사용하는 pGM326에 필적하는 역가를 제공한다는 것을 입증하였고(도 10 참조), 이는 역가에 악영향을 미치지 않고 개선된 안전성 프로파일이 달성될 수 있음을 나타낸다.
실시예 4 - coGagPol과 변형된 벡터 게놈 플라스미드의 조합은 벡터 역가를 유지하거나 심지어 증가시킨다
실시예 2에 보고된 실험은 놀랍게도 예상되는 수율 감소보다는 coGagPol을 사용한 SIV.F/HN hCEF-CFTR의 생성이 벡터 역가를 유지하거나 심지어 증가시키는 경향이 있음을 입증하였다. 실시예 3에 보고된 실험은 벡터 역가에 악영향을 미치지 않으면서, 벡터 게놈 플라스미드를 변형함으로써 벡터의 안전성 프로파일에 대한 추가적인 개선이 달성될 수 있음을 입증하였다.
이후, pGM830 벡터 게놈 플라스미드의 사용과 coGagPol의 사용을 결합한 추가 실험을 수행하여, 이 두 가지 안전-관련 변형을 결합하고 벡터 역가를 유지할 수 있는지 여부를 조사하였다.
도 11에 예시된 바와 같이, 발명자들은 놀랍게도 coGagPol의 사용이 변형된 벡터 게놈 플라스미드(pGM830)의 사용과 조합될 수 있을 뿐만 아니라 이 조합이 벡터 역가를 증가시키는 관찰 가능한 경향을 제공한다는 것을 발견하였다.
이는 변형된 벡터 게놈 플라스미드와 coGagPol의 사용을 조합함으로써 더 개선된 안전성 프로파일을 갖는 벡터가 얻어질 수 있을 뿐만 아니라, 놀랍게도 이는 rSIV.F/HN hCEF-이식 유전자 역가를 유지하거나 심지어 증가시키면서 달성될 수 있음을 시사한다.
서열 정보
서열의 핵심
SEQ ID NO: 1 코돈-최적화된 SIV gal-pol 핵산 서열
SEQ ID NO: 2 야생형 SIV gag-pol 핵산 서열
SEQ ID NO: 3 도 2a에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA1 pGM326)
SEQ ID NO: 4 도 2b에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA1 pGM830)
SEQ ID NO: 5 도 2c에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2a pGM691)
SEQ ID NO: 6 도 2d에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2b pGM299)
SEQ ID NO: 7 도 2e에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA3a pGM301)
SEQ ID NO: 8 도 2f에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA3b pGM303)
SEQ ID NO: 9 도 2g에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2a pGM297)
SEQ ID NO: 10 예시된 hCEF 프로모터
SEQ ID NO: 11 예시된 CMV 프로모터
SEQ ID NO: 12 예시된 EF1a 프로모터
SEQ ID NO: 13 예시된 CFTR 이식 유전자(soCFTR2)
SEQ ID NO: 14 예시된 A1AT 이식 유전자
SEQ ID NO: 15 예시된 A1AT 이식 유전자에 대한 상보 가닥
SEQ ID NO: 16 예시된 A1A1 폴리펩티드
SEQ ID NO: 17 예시된 FVIII 이식 유전자(N6)
SEQ ID NO: 18 예시된 FVIII 이식 유전자(V3)
SEQ ID NO: 19 예시된 FVIII 이식 유전자(N6)에 대한 상보 가닥
SEQ ID NO: 20 예시된 FVIII 이식 유전자(V3)에 대한 상보 가닥
SEQ ID NO: 21 예시된 FVIII 폴리펩티드(N6)
SEQ ID NO: 22 예시된 FVIII 폴리펩티드(V3)
SEQ ID NO: 23 예시된 WPRE 성분(mWPRE)
SEQ ID NO: 24 도 3에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-hCEF-soA1AT 플라스미드(pDNA1 pGM407)
SEQ ID NO: 25 도 4a에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3 플라스미드(pDNA1 pGM411)
SEQ ID NO: 26 도 4b에 정의된 F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3 플라스미드(pDNA1 pGM413)
SEQ ID NO: 27 도 4c에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-co 플라스미드(pDNA1 pGM412)
SEQ ID NO: 28 도 4d에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-N6-co 플라스미드(pDNA1 pGM414)
SEQ ID NO: 29 예시된 CAG 프로모터
서열
SEQ ID NO: 1 코돈-최적화된 SIV gal-pol 핵산 서열(pGM691로부터)
길이: 4391; 분자 유형: DNA; 기능 위치(Features Location)/한정자(Qualifiers): 소스(source), 1..4391; mol_type, 기타 DNA; 코돈-최적화된 SIV gal-pol 핵산 서열(pGM691로부터); 유기체, 합성 구조물
ATGGGAGCTGCCACATCTGCCCTGAATAGACGGCAGCTGGACCAGTTCGAGAAGATCAGACTGCGGCCCAACGGCAAGAAGAAGTACCAGATCAAGCACCTGATCTGGGCCGGCAAAGAGATGGAAAGATTCGGCCTGCACGAGCGGCTGCTGGAAACCGAGGAAGGCTGCAAGAGAATTATCGAGGTGCTGTACCCTCTGGAACCTACCGGCTCTGAGGGCCTGAAGTCCCTGTTCAATCTCGTGTGCGTGCTGTACTGCCTGCACAAAGAACAGAAAGTGAAGGACACCGAAGAGGCCGTGGCCACAGTTAGACAGCACTGCCACCTGGTGGAAAAAGAGAAGTCCGCCACAGAGACAAGCAGCGGCCAGAAGAAGAACGACAAGGGAATTGCTGCCCCTCCTGGCGGCAGCCAGAATTTTCCTGCTCAGCAGCAGGGAAACGCCTGGGTGCACGTTCCACTGAGCCCTAGAACACTGAATGCCTGGGTCAAAGCCGTGGAAGAGAAGAAGTTTGGCGCCGAGATCGTGCCCATGTTCCAGGCTCTGTCTGAGGGCTGCACCCCTTACGACATCAACCAGATGCTGAACGTGCTGGGAGATCACCAGGGCGCTCTGCAGATCGTGAAAGAGATCATCAACGAAGAGGCTGCCCAGTGGGACGTGACACATCCATTGCCTGCTGGACCTCTGCCAGCCGGACAACTGAGAGATCCTAGAGGCTCTGATATCGCCGGCACCACCAGCTCTGTGCAAGAGCAGCTGGAATGGATCTACACCGCCAATCCTAGAGTGGACGTGGGCGCCATCTACAGAAGATGGATCATCCTGGGCCTGCAGAAATGCGTGAAGATGTACAACCCCGTGTCCGTGCTGGACATCAGACAGGGACCCAAAGAGCCCTTCAAGGACTACGTGGACCGGTTCTATAAGGCCATTAGAGCCGAGCAGGCCAGCGGCGAAGTGAAGCAGTGGATGACAGAGAGCCTGCTGATCCAGAACGCCAATCCAGACTGCAAAGTGATCCTGAAAGGCCTGGGCATGCACCCCACACTGGAAGAGATGCTGACAGCCTGTCAAGGCGTTGGCGGCCCTTCTTACAAAGCCAAAGTGATGGCCGAGATGATGCAGACCATGCAGAACCAGAACATGGTGCAGCAAGGCGGCCCTAAGAGACAGAGGCCTCCTCTGAGATGCTACAACTGCGGCAAGTTCGGCCACATGCAGAGACAGTGTCCTGAGCCTAGGAAAACAAAATGTCTAAAGTGTGGAAAATTGGGACACCTAGCAAAAGACTGCAGGGGACAGGTGAATTTTTTAGGGTATGGACGGTGGATGGGGGCAAAACCGAGAAATTTTCCCGCCGCTACTCTTGGAGCGGAACCGAGTGCGCCTCCTCCACCGAGCGGCACCACCCCATACGACCCAGCAAAGAAGCTCCTGCAGCAATATGCAGAGAAAGGGAAACAACTGAGGGAGCAAAAGAGGAATCCACCGGCAATGAATCCGGATTGGACCGAGGGATATTCTTTGAACTCCCTCTTTGGAGAAGACCAATAAAGACCGTGTACATCGAGGGCGTGCCCATCAAGGCTCTGCTGGATACAGGCGCCGACGACACCATCATCAAAGAGAACGACCTGCAGCTGAGCGGCCCTTGGAGGCCTAAGATCATTGGAGGAATCGGCGGAGGCCTGAACGTCAAAGAGTACAACGACCGGGAAGTGAAGATCGAGGACAAGATCCTGAGGGGCACAATCCTGCTGGGCGCCACACCTATCAACATCATCGGCAGAAATCTGCTGGCCCCTGCCGGCGCTAGACTGGTTATGGGACAGCTCTCTGAGAAGATCCCCGTGACACCCGTGAAGCTGAAAGAAGGCGCTAGAGGACCTTGTGTGCGACAGTGGCCTCTGAGCAAAGAGAAGATTGAGGCCCTGCAAGAAATCTGTAGCCAGCTGGAACAAGAGGGCAAGATCAGCAGAGTTGGCGGCGAGAACGCCTACAATACCCCTATCTTCTGCATCAAGAAAAAGGACAAGAGCCAGTGGCGGATGCTGGTGGACTTTAGAGAGCTGAACAAGGCTACCCAGGACTTCTTCGAGGTGCAGCTGGGAATTCCTCATCCTGCCGGCCTGCGGAAGATGAGACAGATCACAGTGCTGGATGTGGGCGACGCCTACTACAGCATCCCTCTGGACCCCAACTTCAGAAAGTACACCGCCTTCACAATCCCCACCGTGAACAATCAAGGCCCTGGCATCAGATACCAGTTCAACTGCCTGCCTCAAGGCTGGAAGGGCAGCCCCACCATTTTTCAGAATACCGCCGCCAGCATCCTGGAAGAAATCAAGAGAAACCTGCCTGCTCTGACCATCGTGCAGTACATGGACGATCTGTGGGTCGGAAGCCAAGAGAATGAGCACACCCACGACAAGCTGGTGGAACAGCTGAGAACAAAGCTGCAGGCCTGGGGCCTCGAAACCCCTGAGAAGAAGGTGCAGAAAGAACCTCCTTACGAGTGGATGGGCTACAAGCTGTGGCCTCACAAGTGGGAGCTGAGCCGGATTCAGCTCGAAGAGAAGGACGAGTGGACCGTGAACGACATCCAGAAACTCGTGGGCAAGCTGAATTGGGCAGCCCAGCTGTATCCCGGCCTGAGGACCAAGAACATCTGCAAGCTGATCCGGGGAAAGAAGAACCTGCTGGAACTGGTCACATGGACACCTGAGGCCGAGGCCGAATATGCCGAGAATGCCGAAATCCTGAAAACCGAGCAAGAGGGGACCTACTACAAGCCTGGCATTCCAATCAGAGCTGCCGTGCAGAAACTGGAAGGCGGCCAGTGGTCCTACCAGTTTAAGCAAGAAGGCCAGGTCCTGAAAGTGGGCAAGTACACCAAGCAGAAGAACACCCACACCAACGAGCTGAGGACACTGGCTGGCCTGGTCCAGAAAATCTGCAAAGAGGCCCTGGTCATTTGGGGCATCCTGCCTGTTCTGGAACTGCCCATTGAGCGGGAAGTGTGGGAACAGTGGTGGGCCGATTACTGGCAAGTGTCTTGGATCCCCGAGTGGGACTTCGTGTCTACCCCTCCTCTGCTGAAACTGTGGTACACCCTGACAAAAGAGCCCATTCCTAAAGAGGACGTCTACTACGTTGACGGCGCCTGCAACCGGAACTCCAAAGAAGGCAAGGCCGGCTACATCAGCCAGTACGGCAAGCAGAGAGTGGAAACCCTGGAAAACACCACCAACCAGCAGGCCGAGCTGACCGCCATTAAGATGGCCCTGGAAGATAGCGGCCCCAATGTGAACATCGTGACCGACTCTCAGTACGCCATGGGAATCCTGACAGCCCAGCCTACACAGAGCGATAGCCCTCTGGTTGAGCAGATCATTGCCCTGATGATTCAGAAGCAGCAAATCTACCTGCAGTGGGTGCCCGCTCACAAAGGCATCGGCGGAAACGAAGAGATCGATAAGCTGGTGTCCAAGGGAATCAGACGGGTGCTGTTCCTGGAAAAGATTGAAGAGGCCCAAGAGGAACACGAGCGCTACCACAACAACTGGAAGAATCTGGCCGACACCTACGGACTGCCCCAGATCGTGGCCAAAGAAATCGTGGCTATGTGCCCCAAGTGTCAGATCAAGGGCGAACCTGTGCACGGCCAAGTGGATGCTTCTCCTGGCACATGGCAGATGGACTGTACCCACCTGGAAGGCAAAGTGGTCATCGTGGCTGTGCACGTGGCCTCCGGCTTTATTGAGGCCGAAGTGATCCCCAGAGAGACAGGCAAAGAAACCGCCAAGTTCCTGCTGAAGATCCTGTCCAGATGGCCCATCACACAGCTGCACACCGACAACGGCCCTAACTTCACATCTCAAGAGGTGGCCGCCATCTGTTGGTGGGGAAAGATTGAGCACACAACCGGCATTCCCTACAATCCACAGAGCCAGGGCAGCATCGAGTCCATGAACAAGCAGCTCAAAGAGATTATCGGCAAGATCCGGGACGACTGCCAGTACACAGAAACAGCCGTGCTGATGGCCTGTCACATCCACAACTTCAAGCGGAAAGGCGGCATCGGAGGACAGACATCTGCCGAGAGACTGATCAATATCATCACCACTCAGCTGGAAATCCAGCACCTCCAGACCAAGATCCAGAAGATTCTGAACTTCCGGGTGTACTACCGCGAGGGCAGAGATCCTGTTTGGAAAGGCCCAGCACAGCTGATCTGGAAAGGCGAAGGTGCCGTGGTGCTGAAGGATGGCTCTGATCTGAAGGTGGTGCCCAGACGGAAGGCCAAGATTATCAAGGATTACGAGCCCAAACAGCGCGTGGGCAATGAAGGCGACGTTGAGGGCACAAGAGGCAGCGACAATTGA
SEQ ID NO: 2 야생형 SIV gag-pol 핵산 서열(pGM297로부터)
길이: 4391; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..4391; mol_type, 할당되지 않은 DNA; 유기체, 유인원 면역결핍 바이러스
ATGGGGGCGGCTACCTCAGCACTAAATAGGAGACAATTAGACCAATTTGAGAAAATACGACTTCGCCCGAACGGAAAGAAAAAGTACCAAATTAAACATTTAATATGGGCAGGCAAGGAGATGGAGCGCTTCGGCCTCCATGAGAGGTTGTTGGAGACAGAGGAGGGGTGTAAAAGAATCATAGAAGTCCTCTACCCCCTAGAACCAACAGGATCGGAGGGCTTAAAAAGTCTGTTCAATCTTGTGTGCGTACTATATTGCTTGCACAAGGAACAGAAAGTGAAAGACACAGAGGAAGCAGTAGCAACAGTAAGACAACACTGCCATCTAGTGGAAAAAGAAAAAAGTGCAACAGAGACATCTAGTGGACAAAAGAAAAATGACAAGGGAATAGCAGCGCCACCTGGTGGCAGTCAGAATTTTCCAGCGCAACAACAAGGAAATGCCTGGGTACATGTACCCTTGTCACCGCGCACCTTAAATGCGTGGGTAAAAGCAGTAGAGGAGAAAAAATTTGGAGCAGAAATAGTACCCATGTTTCAAGCCCTATCAGAAGGCTGCACACCCTATGACATTAATCAGATGCTTAATGTGCTAGGAGATCATCAAGGGGCATTACAAATAGTGAAAGAGATCATTAATGAAGAAGCAGCCCAGTGGGATGTAACACACCCACTACCCGCAGGACCCCTACCAGCAGGACAGCTCAGGGACCCTCGCGGCTCAGATATAGCAGGGACCACCAGCTCAGTACAAGAACAGTTAGAATGGATCTATACTGCTAACCCCCGGGTAGATGTAGGTGCCATCTACCGGAGATGGATTATTCTAGGACTTCAAAAGTGTGTCAAAATGTACAACCCAGTATCAGTCCTAGACATTAGGCAGGGACCTAAAGAGCCCTTCAAGGATTATGTGGACAGATTTTACAAGGCAATTAGAGCAGAACAAGCCTCAGGGGAAGTGAAACAATGGATGACAGAATCATTACTCATTCAAAATGCTAATCCAGATTGTAAGGTCATCCTGAAGGGCCTAGGAATGCACCCCACCCTTGAAGAAATGTTAACGGCTTGTCAGGGGGTAGGAGGCCCAAGCTACAAAGCAAAAGTAATGGCAGAAATGATGCAGACCATGCAAAATCAAAACATGGTGCAGCAGGGAGGTCCAAAAAGACAAAGACCCCCACTAAGATGTTATAATTGTGGAAAATTTGGCCATATGCAAAGACAATGTCCGGAACCAAGGAAAACAAAATGTCTAAAGTGTGGAAAATTGGGACACCTAGCAAAAGACTGCAGGGGACAGGTGAATTTTTTAGGGTATGGACGGTGGATGGGGGCAAAACCGAGAAATTTTCCCGCCGCTACTCTTGGAGCGGAACCGAGTGCGCCTCCTCCACCGAGCGGCACCACCCCATACGACCCAGCAAAGAAGCTCCTGCAGCAATATGCAGAGAAAGGGAAACAACTGAGGGAGCAAAAGAGGAATCCACCGGCAATGAATCCGGATTGGACCGAGGGATATTCTTTGAACTCCCTCTTTGGAGAAGACCAATAAAGACAGTGTATATAGAAGGGGTCCCCATTAAGGCACTGCTAGACACAGGGGCAGATGACACCATAATTAAAGAAAATGATTTACAATTATCAGGTCCATGGAGACCCAAAATTATAGGGGGCATAGGAGGAGGCCTTAATGTAAAAGAATATAACGACAGGGAAGTAAAAATAGAAGATAAAATTTTGAGAGGAACAATATTGTTAGGAGCAACTCCCATTAATATAATAGGTAGAAATTTGCTGGCCCCGGCAGGTGCCCGGTTAGTAATGGGACAATTATCAGAAAAAATTCCTGTCACACCTGTCAAATTGAAGGAAGGGGCTCGGGGACCCTGTGTAAGACAATGGCCTCTCTCTAAAGAGAAGATTGAAGCTTTACAGGAAATATGTTCCCAATTAGAGCAGGAAGGAAAAATCAGTAGAGTAGGAGGAGAAAATGCATACAATACCCCAATATTTTGCATAAAGAAGAAGGACAAATCCCAGTGGAGGATGCTAGTAGACTTTAGAGAGTTAAATAAGGCAACCCAAGATTTCTTTGAAGTGCAATTAGGGATACCCCACCCAGCAGGATTAAGAAAGATGAGACAGATAACAGTTTTAGATGTAGGAGACGCCTATTATTCCATACCATTGGATCCAAATTTTAGGAAATATACTGCTTTTACTATTCCCACAGTGAATAATCAGGGACCCGGGATTAGGTATCAATTCAACTGTCTCCCGCAAGGGTGGAAAGGATCTCCTACAATCTTCCAAAATACAGCAGCATCCATTTTGGAGGAGATAAAAAGAAACTTGCCAGCACTAACCATTGTACAATACATGGATGATTTATGGGTAGGTTCTCAAGAAAATGAACACACCCATGACAAATTAGTAGAACAGTTAAGAACAAAATTACAAGCCTGGGGCTTAGAAACCCCAGAAAAGAAGGTGCAAAAAGAACCACCTTATGAGTGGATGGGATACAAACTTTGGCCTCACAAATGGGAACTAAGCAGAATACAACTGGAGGAAAAAGATGAATGGACTGTCAATGACATCCAGAAGTTAGTTGGGAAACTAAATTGGGCAGCACAATTGTATCCAGGTCTTAGGACCAAGAATATATGCAAGTTAATTAGAGGAAAGAAAAATCTGTTAGAGCTAGTGACTTGGACACCTGAGGCAGAAGCTGAATATGCAGAAAATGCAGAGATTCTTAAAACAGAACAGGAAGGAACCTATTACAAACCAGGAATACCTATTAGGGCAGCAGTACAGAAATTGGAAGGAGGACAGTGGAGTTACCAATTCAAACAAGAAGGACAAGTCTTGAAAGTAGGAAAATACACCAAGCAAAAGAACACCCATACAAATGAACTTCGCACATTAGCTGGTTTAGTGCAGAAGATTTGCAAAGAAGCTCTAGTTATTTGGGGGATATTACCAGTTCTAGAACTCCCGATAGAAAGAGAGGTATGGGAACAATGGTGGGCGGATTACTGGCAGGTAAGCTGGATTCCCGAATGGGATTTTGTCAGCACCCCACCTTTGCTCAAACTATGGTACACATTAACAAAAGAACCCATACCCAAGGAGGACGTTTACTATGTAGATGGAGCATGCAACAGAAATTCAAAAGAAGGAAAAGCAGGATACATCTCACAATACGGAAAACAGAGAGTAGAAACATTAGAAAACACTACCAATCAGCAAGCAGAATTAACAGCTATAAAAATGGCTTTGGAAGACAGTGGGCCTAATGTGAACATAGTAACAGACTCTCAATATGCAATGGGAATTTTGACAGCACAACCCACACAAAGTGATTCACCATTAGTAGAGCAAATTATAGCCTTAATGATACAAAAGCAACAAATATATTTGCAGTGGGTACCAGCACATAAAGGAATAGGAGGAAATGAGGAGATAGATAAATTAGTGAGTAAAGGCATTAGAAGAGTTTTATTCTTAGAAAAAATAGAAGAAGCTCAAGAAGAGCATGAAAGATATCATAATAATTGGAAAAACCTAGCAGATACATATGGGCTTCCACAAATAGTAGCAAAAGAGATAGTGGCCATGTGTCCAAAATGTCAGATAAAGGGAGAACCAGTGCATGGACAAGTGGATGCCTCACCTGGAACATGGCAGATGGATTGTACTCATCTAGAAGGAAAAGTAGTCATAGTTGCGGTCCATGTAGCCAGTGGATTCATAGAAGCAGAAGTCATACCTAGGGAAACAGGAAAAGAAACGGCAAAGTTTCTATTAAAAATACTGAGTAGATGGCCTATAACACAGTTACACACAGACAATGGGCCTAACTTTACCTCCCAAGAAGTGGCAGCAATATGTTGGTGGGGAAAAATTGAACATACAACAGGTATACCATATAACCCCCAATCTCAAGGATCAATAGAAAGCATGAACAAACAATTAAAAGAGATAATTGGGAAAATAAGAGATGATTGCCAATATACAGAGACAGCAGTACTGATGGCTTGCCATATTCACAATTTTAAAAGAAAGGGAGGAATAGGGGGACAGACTTCAGCAGAGAGACTAATTAATATAATAACAACACAATTAGAAATACAACATTTACAAACCAAAATTCAAAAAATTTTAAATTTTAGAGTCTACTACAGAGAAGGGAGAGACCCTGTGTGGAAAGGACCAGCACAATTAATCTGGAAAGGGGAAGGAGCAGTGGTCCTCAAGGACGGAAGTGACCTAAAGGTTGTACCAAGAAGGAAAGCTAAAATTATTAAGGATTATGAACCCAAACAAAGAGTGGGTAATGAGGGTGACGTGGAAGGTACCAGGGGATCTGATAACTAA
SEQ ID NO: 3 도 2a에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA1 pGM326)
길이: 10528; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..10528; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM326; 유기체, 합성 구조물
GGTACCTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCATTGGTTATATAGCATAAATCAATATTGGCTATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACCGCCATGTTGGCATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTGCGATCGCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGCTGGCTTGTAACTCAGTCTCTTACTAGGAGACCAGCTTGAGCCTGGGTGTTCGCTGGTTAGCCTAACCTGGTTGGCCACCAGGGGTAAGGACTCCTTGGCTTAGAAAGCTAATAAACTTGCCTGCATTAGAGCTTATCTGAGTCAAGTGTCCTCATTGACGCCTCACTCTCTTGAACGGGAATCTTCCTTACTGGGTTCTCTCTCTGACCCAGGCGAGAGAAACTCCAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAGTGAGAGTGTAGGCACGTACAGCTGAGAAGGCGTCGGACGCGAAGGAAGCGCGGGGTGCGACGCGACCAAGAAGGAGACTTGGTGAGTAGGCTTCTCGAGTGCCGGGAAAAAGCTCGAGCCTAGTTAGAGGACTAGGAGAGGCCGTAGCCGTAACTACTCTGGGCAAGTAGGGCAGGCGGTGGGTACGCAATGGGGGCGGCTACCTCAGCACTAAATAGGAGACAATTAGACCAATTTGAGAAAATACGACTTCGCCCGAACGGAAAGAAAAAGTACCAAATTAAACATTTAATATGGGCAGGCAAGGAGATGGAGCGCTTCGGCCTCCATGAGAGGTTGTTGGAGACAGAGGAGGGGTGTAAAAGAATCATAGAAGTCCTCTACCCCCTAGAACCAACAGGATCGGAGGGCTTAAAAAGTCTGTTCAATCTTGTGTGCGTGCTATATTGCTTGCACAAGGAACAGAAAGTGAAAGACACAGAGGAAGCAGTAGCAACAGTAAGACAACACTGCCATCTAGTGGAAAAAGAAAAAAGTGCAACAGAGACATCTAGTGGACAAAAGAAAAATGACAAGGGAATAGCAGCGCCACCTGGTGGCAGTCAGAATTTTCCAGCGCAACAACAAGGAAATGCCTGGGTACATGTACCCTTGTCACCGCGCACCTTAAATGCGTGGGTAAAAGCAGTAGAGGAGAAAAAATTTGGAGCAGAAATAGTACCCATGTTTCAAGCCCTATCGAATTCCCGTTTGTGCTAGGGTTCTTAGGCTTCTTGGGGGCTGCTGGAACTGCAATGGGAGCAGCGGCGACAGCCCTGACGGTCCAGTCTCAGCATTTGCTTGCTGGGATACTGCAGCAGCAGAAGAATCTGCTGGCGGCTGTGGAGGCTCAACAGCAGATGTTGAAGCTGACCATTTGGGGTGTTAAAAACCTCAATGCCCGCGTCACAGCCCTTGAGAAGTACCTAGAGGATCAGGCACGACTAAACTCCTGGGGGTGCGCATGGAAACAAGTATGTCATACCACAGTGGAGTGGCCCTGGACAAATCGGACTCCGGATTGGCAAAATATGACTTGGTTGGAGTGGGAAAGACAAATAGCTGATTTGGAAAGCAACATTACGAGACAATTAGTGAAGGCTAGAGAACAAGAGGAAAAGAATCTAGATGCCTATCAGAAGTTAACTAGTTGGTCAGATTTCTGGTCTTGGTTCGATTTCTCAAAATGGCTTAACATTTTAAAAATGGGATTTTTAGTAATAGTAGGAATAATAGGGTTAAGATTACTTTACACAGTATATGGATGTATAGTGAGGGTTAGGCAGGGATATGTTCCTCTATCTCCACAGATCCATATCCGCGGCAATTTTAAAAGAAAGGGAGGAATAGGGGGACAGACTTCAGCAGAGAGACTAATTAATATAATAACAACACAATTAGAAATACAACATTTACAAACCAAAATTCAAAAAATTTTAAATTTTAGAGCCGCGGAGATCTGTTACATAACTTATGGTAAATGGCCTGCCTGGCTGACTGCCCAATGACCCCTGCCCAATGATGTCAATAATGATGTATGTTCCCATGTAATGCCAATAGGGACTTTCCATTGATGTCAATGGGTGGAGTATTTATGGTAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTATGCCCCCTATTGATGTCAATGATGGTAAATGGCCTGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTATGTATTAGTCATTGCTATTACCATGGGAATTCACTAGTGGAGAAGAGCATGCTTGAGGGCTGAGTGCCCCTCAGTGGGCAGAGAGCACATGGCCCACAGTCCCTGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTGGGCAATTGAACTGGTGCCTAGAGAAGGTGGGGCTTGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTGGTGTACTGGCTCCACCTTTTTCCCCAGGGTGGGGGAGAACCATATATAAGTGCAGTAGTCTCTGTGAACATTCAAGCTTCTGCCTTCTCCCTCCTGTGAGTTTGCTAGCCACCATGCAGAGAAGCCCTCTGGAGAAGGCCTCTGTGGTGAGCAAGCTGTTCTTCAGCTGGACCAGGCCCATCCTGAGGAAGGGCTACAGGCAGAGACTGGAGCTGTCTGACATCTACCAGATCCCCTCTGTGGACTCTGCTGACAACCTGTCTGAGAAGCTGGAGAGGGAGTGGGATAGAGAGCTGGCCAGCAAGAAGAACCCCAAGCTGATCAATGCCCTGAGGAGATGCTTCTTCTGGAGATTCATGTTCTATGGCATCTTCCTGTACCTGGGGGAAGTGACCAAGGCTGTGCAGCCTCTGCTGCTGGGCAGAATCATTGCCAGCTATGACCCTGACAACAAGGAGGAGAGGAGCATTGCCATCTACCTGGGCATTGGCCTGTGCCTGCTGTTCATTGTGAGGACCCTGCTGCTGCACCCTGCCATCTTTGGCCTGCACCACATTGGCATGCAGATGAGGATTGCCATGTTCAGCCTGATCTACAAGAAAACCCTGAAGCTGTCCAGCAGAGTGCTGGACAAGATCAGCATTGGCCAGCTGGTGAGCCTGCTGAGCAACAACCTGAACAAGTTTGATGAGGGCCTGGCCCTGGCCCACTTTGTGTGGATTGCCCCTCTGCAGGTGGCCCTGCTGATGGGCCTGATTTGGGAGCTGCTGCAGGCCTCTGCCTTTTGTGGCCTGGGCTTCCTGATTGTGCTGGCCCTGTTTCAGGCTGGCCTGGGCAGGATGATGATGAAGTACAGGGACCAGAGGGCAGGCAAGATCAGTGAGAGGCTGGTGATCACCTCTGAGATGATTGAGAACATCCAGTCTGTGAAGGCCTACTGTTGGGAGGAAGCTATGGAGAAGATGATTGAAAACCTGAGGCAGACAGAGCTGAAGCTGACCAGGAAGGCTGCCTATGTGAGATACTTCAACAGCTCTGCCTTCTTCTTCTCTGGCTTCTTTGTGGTGTTCCTGTCTGTGCTGCCCTATGCCCTGATCAAGGGGATCATCCTGAGAAAGATTTTCACCACCATCAGCTTCTGCATTGTGCTGAGGATGGCTGTGACCAGACAGTTCCCCTGGGCTGTGCAGACCTGGTATGACAGCCTGGGGGCCATCAACAAGATCCAGGACTTCCTGCAGAAGCAGGAGTACAAGACCCTGGAGTACAACCTGACCACCACAGAAGTGGTGATGGAGAATGTGACAGCCTTCTGGGAGGAGGGCTTTGGGGAGCTGTTTGAGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACAGAAAGACCAGCAATGGGGATGACTCCCTGTTCTTCTCCAACTTCTCCCTGCTGGGCACACCTGTGCTGAAGGACATCAACTTCAAGATTGAGAGGGGGCAGCTGCTGGCTGTGGCTGGATCTACAGGGGCTGGCAAGACCAGCCTGCTGATGATGATCATGGGGGAGCTGGAGCCTTCTGAGGGCAAGATCAAGCACTCTGGCAGGATCAGCTTTTGCAGCCAGTTCAGCTGGATCATGCCTGGCACCATCAAGGAGAACATCATCTTTGGAGTGAGCTATGATGAGTACAGATACAGGAGTGTGATCAAGGCCTGCCAGCTGGAGGAGGACATCAGCAAGTTTGCTGAGAAGGACAACATTGTGCTGGGGGAGGGAGGCATTACACTGTCTGGGGGCCAGAGAGCCAGAATCAGCCTGGCCAGGGCTGTGTACAAGGATGCTGACCTGTACCTGCTGGACTCCCCCTTTGGCTACCTGGATGTGCTGACAGAGAAGGAGATTTTTGAGAGCTGTGTGTGCAAGCTGATGGCCAACAAGACCAGAATCCTGGTGACCAGCAAGATGGAGCACCTGAAGAAGGCTGACAAGATCCTGATCCTGCATGAGGGCAGCAGCTACTTCTATGGGACCTTCTCTGAGCTGCAGAACCTGCAGCCTGACTTCAGCTCTAAGCTGATGG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SEQ ID NO: 4 도 2b에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA1 pGM830)
길이: 10536; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..10536; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM830; 유기체, 합성 구조물
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SEQ ID NO: 5 도 2c에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2a pGM691)
길이: 9064; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..9064; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM691; 유기체, 합성 구조물
ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGCTCGAGCCACCATGGGAGCTGCCACATCTGCCCTGAATAGACGGCAGCTGGACCAGTTCGAGAAGATCAGACTGCGGCCCAACGGCAAGAAGAAGTACCAGATCAAGCACCTGATCTGGGCCGGCAAAGAGATGGAAAGATTCGGCCTGCACGAGCGGCTGCTGGAAACCGAGGAAGGCTGCAAGAGAATTATCGAGGTGCTGTACCCTCTGGAACCTACCGGCTCTGAGGGCCTGAAGTCCCTGTTCAATCTCGTGTGCGTGCTGTACTGCCTGCACAAAGAACAGAAAGTGAAGGACACCGAAGAGGCCGTGGCCACAGTTAGACAGCACTGCCACCTGGTGGAAAAAGAGAAGTCCGCCACAGAGACAAGCAGCGGCCAGAAGAAGAACGACAAGGGAATTGCTGCCCCTCCTGGCGGCAGCCAGAATTTTCCTGCTCAGCAGCAGGGAAACGCCTGGGTGCACGTTCCACTGAGCCCTAGAACACTGAATGCCTGGGTCAAAGCCGTGGAAGAGAAGAAGTTTGGCGCCGAGATCGTGCCCATGTTCCAGGCTCTGTCTGAGGGCTGCACCCCTTACGACATCAACCAGATGCTGAACGTGCTGGGAGATCACCAGGGCGCTCTGCAGATCGTGAAAGAGATCATCAACGAAGAGGCTGCCCAGTGGGACGTGACACATCCATTGCCTGCTGGACCTCTGCCAGCCGGACAACTGAGAGATCCTAGAGGCTCTGATATCGCCGGCACCACCAGCTCTGTGCAAGAGCAGCTGGAATGGATCTACACCGCCAATCCTAGAGTGGACGTGGGCGCCATCTACAGAAGATGGATCATCCTGGGCCTGCAGAAATGCGTGAAGATGTACAACCCCGTGTCCGTGCTGGACATCAGACAGGGACCCAAAGAGCCCTTCAAGGACTACGTGGACCGGTTCTATAAGGCCATTAGAGCCGAGCAGGCCAGCGGCGAAGTGAAGCAGTGGATGACAGAGAGCCTGCTGATCCAGAACGCCAATCCAGACTGCAAAGTGATCCTGAAAGGCCTGGGCATGCACCCCACACTGGAAGAGATGCTGACAGCCTGTCAAGGCGTTGGCGGCCCTTCTTACAAAGCCAAAGTGATGGCCGAGATGATGCAGACCATGCAGAACCAGAACATGGTGCAGCAAGGCGGCCCTAAGAGACAGAGGCCTCCTCTGAGATGCTACAACTGCGGCAAGTTCGGCCACATGCAGAGACAGTGTCCTGAGCCTAGGAAAACAAAATGTCTAAAGTGTGGAAAATTGGGACACCTAGCAAAAGACTGCAGGGGACAGGTGAATTTTTTAGGGTATGGACGGTGGATGGGGGCAAAACCGAGAAATTTTCCCGCCGCTACTCTTGGAGCGGAACCGAGTGCGCCTCCTCCACCGAGCGGCACCACCCCATACGACCCAGCAAAGAAGCTCCTGCAGCAATATGCAGAGAAAGGGAAACAACTGAGGGAGCAAAAGAGGAATCCACCGGCAATGAATCCGGATTGGACCGAGGGATATTCTTTGAACTCCCTCTTTGGAGAAGACCAATAAAGACCGTGTACATCGAGGGCGTGCCCATCAAGGCTCTGCTGGATACAGGCGCCGACGACACCATCATCAAAGAGAACGACCTGCAGCTGAGCGGCCCTTGGAGGCCTAAGATCATTGGAGGAATCGGCGGAGGCCTGAACGTCAAAGAGTACAACGACCGGGAAGTGAAGATCGAGGACAAGATCCTGAGGGGCACAATCCTGCTGGGCGCCACACCTATCAACATCATCGGCAGAAATCTGCTGGCCCCTGCCGGCGCTAGACTGGTTATGGGACAGCTCTCTGAGAAGATCCCCGTGACACCCGTGAAGCTGAAAGAAGGCGCTAGAGGACCTTGTGTGCGACAGTGGCCTCTGAGCAAAGAGAAGATTGAGGCCCTGCAAGAAATCTGTAGCCAGCTGGAACAAGAGGGCAAGATCAGCAGAGTTGGCGGCGAGAACGCCTACAATACCCCTATCTTCTGCATCAAGAAAAAGGACAAGAGCCAGTGGCGGATGCTGGTGGACTTTAGAGAGCTGAACAAGGCTACCCAGGACTTCTTCGAGGTGCAGCTGGGAATTCCTCATCCTGCCGGCCTGCGGAAGATGAGACAGATCACAGTGCTGGATGTGGGCGACGCCTACTACAGCATCCCTCTGGACCCCAACTTCAGAAAGTACACCGCCTTCACAATCCCCACCGTGAACAATCAAGGCCCTGGCATCAGATACCAGTTCAACTGCCTGCCTCAAGGCTGGAAGGGCAGCCCCACCATTTTTCAGAATACCGCCGCCAGCATCCTGGAAGAAATCAAGAGAAACCTGCCTGCTCTGACCATCGTGCAGTACATGGACGATCTGTGGGTCGGAAGCCAAGAGAATGAGCACACCCACGACAAGCTGGTGGAACAGCTGAGAACAAAGCTGCAGGCCTGGGGCCTCGAAACCCCTGAGAAGAAGGTGCAGAAAGAACCTCCTTACGAGTGGATGGGCTACAAGCTGTGGCCTCACAAGTGGGAGCTGAGCCGGATTCAGCTCGAAGAGAAGGACGAGTGGACCGTGAACGACATCCAGAAACTCGTGGGCAAGCTGAATTGGGCAGCCCAGCTGTATCCCGGCCTGAGGACCAAGAACATCTGCAAGCTGATCCGGGGAAAGAAGAACCTGCTGGAACTGGTCACATGGACACCTGAGGCCGAGGCCGAATATGCCGAGAATGCCGAAATCCTGAAAACCGAGCAAGAGGGGACCTACTACAAGCCTGGCATTCCAATCAGAGCTGCCGTGCAGAAACTGGAAGGCGGCCAGTGGTCCTACCAGTTTAAGCAAGAAGGCCAGGTCCTGAAAGTGGGCAAGTACACCAAGCAGAAGAACACCCACACCAACGAGCTGAGGACACTGGCTGGCCTGGTCCAGAAAATCTGCAAAGAGGCCCTGGTCATTTGGGGCATCCTGCCTGTTCTGGAACTGCCCATTGAGCGGGAAGTGTGGGAACAGTGGTGGGCCGATTACTGGCAAGTGTCTTGGATCCCCGAGTGGGACTTCGTGTCTACCCCTCCTCTGCTGAAACTGTGGTACACCCTGACAAAAGAGCCCATTCCTAAAGAGGACGTCTACTACGTTGACGGCGCCTGCAACCGGAACTCCAAAGAAGGCAAGGCCGGCTACATCAGCCAGTACGGCAAGCAGAGAGTGGAAACCCTGGAAAACACCACCAACCAGCA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SEQ ID NO: 6 도 2d에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2b pGM299)
길이: 3384; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..3384; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM299; 유기체, 합성 구조물
TCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCATTGGTTATATAGCATAAATCAATATTGGCTATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACCGCCATGTTGGCATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCACTAGAAGCTTTATTGCGGTAGTTTATCACAGTTAAATTGCTAACGCAGTCAGTGCTTCTGACACAACAGTCTCGAACTTAAGCTGCAGAAGTTGGTCGTGAGGCACTGGGCAGGTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGTTCAATTACAGCTCTTAAGGCTAGAGTACTTAATACGACTCACTATAGGCTAGCCTCGAGAATTCGATTATGCCCCTAGGACCAGAAGAAAGAAGATTGCTTCGCTTGATTTGGCTCCTTTACAGCACCAATCCATATCCACCAAGTGGGGAAGGGACGGCCAGACAACGCCGACGAGCCAGGAGAAGGTGGAGACAACAGCAGGATCAAATTAGAGTCTTGGTAGAAAGACTCCAAGAGCAGGTGTATGCAGTTGACCGCCTGGCTGACGAGGCTCAACACTTGGCTATACAACAGTTGCCTGACCCTCCTCATTCAGCTTAGAATCACTAGTGAATTCACGCGTGGTACCTCTAGAGTCGACCCGGGCGGCCGCTTCGAGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGATGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTAAAATCGATAAGGATCCGTCGACCAATTGTTGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCTTGCTCTAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGATTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAGCTGTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGGCTCGACAGATCT
SEQ ID NO: 7 도 2e에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA3a pGM301)
길이: 6264; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..6264; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM301; 유기체, 합성 구조물
ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCGATTGCCATGGCAACATATATCCAGAGAGTACAGTGCATCTCAACATCACTACTGGTTGTTCTCACCACATTGGTCTCGTGTCAGATTCCCAGGGATAGGCTCTCTAACATAGGGGTCATAGTCGATGAAGGGAAATCACTGAAGATAGCTGGATCCCACGAATCGAGGTACATAGTACTGAGTCTAGTTCCGGGGGTAGACTTTGAGAATGGGTGCGGAACAGCCCAGGTTATCCAGTACAAGAGCCTACTGAACAGGCTGTTAATCCCATTGAGGGATGCCTTAGATCTTCAGGAGGCTCTGATAACTGTCACCAATGATACGACACAAAATGCCGGTGCTCCCCAGTCGAGATTCTTCGGTGCTGTGATTGGTACTATCGCACTTGGAGTGGCGACATCAGCACAAATCACCGCAGGGATTGCACTAGCCGAAGCGAGGGAGGCCAAAAGAGACATAGCGCTCATCAAAGAATCGATGACAAAAACACACAAGTCTATAGAACTGCTGCAAAACGCTGTGGGGGAACAAATTCTTGCTCTAAAGACACTCCAGGATTTCGTGAATGATGAGATCAAACCCGCAATAAGCGAATTAGGCTGTGAGACTGCTGCCTTAAGACTGGGTATAAAATTGACACAGCATTACTCCGAGCTGTTAACTGCGTTCGGCTCGAATTTCGGAACCATCGGAGAGAAGAGCCTCACGCTGCAGGCGCTGTCTTCACTTTACTCTGCTAACATTACTGAGATTATGACCACAATCAGGACAGGGCAGTCTAACATCTATGATGTCATTTATACAGAACAGATCAAAGGAACGGTGATAGATGTGGATCTAGAGAGATACATGGTCACCCTGTCTGTGAAGATCCCTATTCTTTCTGAAGTCCCAGGTGTGCTCATACACAAGGCATCATCTATTTCTTACAACATAGACGGGGAGGAATGGTATGTGACTGTCCCCAGCCATATACTCAGTCGTGCTTCTTTCTTAGGGGGTGCAGACATAACCGATTGTGTTGAGTCCAGATTGACCTATATATGCCCCAGGGATCCCGCACAACTGATACCTGACAGCCAGCAAAAGTGTATCCTGGGGGACACAACAAGGTGTCCTGTCACAAAAGTTGTGGACAGCCTTATCCCCAAGTTTGCTTTTGTGAATGGGGGCGTTGTTGCTAACTGCATAGCATCCACATGTACCTGCGGGACAGGCCGAAGACCAATCAGTCAGGATCGCTCTAAAGGTGTAGTATTCCTAACCCATGACAACTGTGGTCTTATAGGTGTCAATGGGGTAGAATTGTATGCTAACCGGAGAGGGCACGATGCCACTTGGGGGGTCCAGAACTTGACAGTCGGTCCTGCAATTGCTATCAGACCCGTTGATATTTCTCTCAACCTTGCTGATGCTACGAATTTCTTGCAAGACTCTAAGGCTGAGCTTGAGAAAGCACGGAAAATCCTCTCGGAGGTAGGTAGATGGTACAACTCAAGAGAGACTGTGATTACGATCATAGTAGTTATGGTCGTAATATTGGTGGTCATTATAGTGATCATCATCGTGCTTTATAGACTCAGAAGGTGAAATCACTAGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGCAGCCCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAACAGCTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTTCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACATCAGAGATTTTGAGACACAACAATTGGTCGAC
SEQ ID NO: 8 도 2f에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA3b pGM303)
길이: 6522; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..6522; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM303; 유기체, 합성 구조물
ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCCTCGAGCATGTGGTCTGAGTTAAAAATCAGGAGCAACGACGGAGGTGAAGGACCAGAGGACGCCAACGACCCCCGGGGAAAGGGGGTGCAACACATCCATATCCAGCCATCTCTACCTGTTTATGGACAGAGGGTTAGGGATGGTGATAGGGGCAAACGTGACTCGTACTGGTCTACTTCTCCTAGTGGTAGCACCACAAAACCAGCATCAGGTTGGGAGAGGTCAAGTAAAGCCGACACATGGTTGCTGATTCTCTCATTCACCCAGTGGGCTTTGTCAATTGCCACAGTGATCATCTGTATCATAATTTCTGCTAGACAAGGGTATAGTATGAAAGAGTACTCAATGACTGTAGAGGCATTGAACATGAGCAGCAGGGAGGTGAAAGAGTCACTTACCAGTCTAATAAGGCAAGAGGTTATAGCAAGGGCTGTCAACATTCAGAGCTCTGTGCAAACCGGAATCCCAGTCTTGTTGAACAAAAACAGCAGGGATGTCATCCAGATGATTGATAAGTCGTGCAGCAGACAAGAGCTCACTCAGCACTGTGAGAGTACGATCGCAGTCCACCATGCCGATGGAATTGCCCCACTTGAGCCACATAGTTTCTGGAGATGCCCTGTCGGAGAACCGTATCTTAGCTCAGATCCTGAAATCTCATTGCTGCCTGGTCCGAGCTTGTTATCTGGTTCTACAACGATCTCTGGATGTGTTAGGCTCCCTTCACTCTCAATTGGCGAGGCAATCTATGCCTATTCATCAAATCTCATTACACAAGGTTGTGCTGACATAGGGAAATCATATCAGGTCCTGCAGCTAGGGTACATATCACTCAATTCAGATATGTTCCCTGATCTTAACCCCGTAGTGTCCCACACTTATGACATCAACGACAATCGGAAATCATGCTCTGTGGTGGCAACCGGGACTAGGGGTTATCAGCTTTGCTCCATGCCGACTGTAGACGAAAGAACCGACTACTCTAGTGATGGTATTGAGGATCTGGTCCTTGATGTCCTGGATCTCAAAGGGAGAACTAAGTCTCACCGGTATCGCAACAGCGAGGTAGATCTTGATCACCCGTTCTCTGCACTATACCCCAGTGTAGGCAACGGCATTGCAACAGAAGGCTCATTGATATTTCTTGGGTATGGTGGACTAACCACCCCTCTGCAGGGTGATACAAAATGTAGGACCCAAGGATGCCAACAGGTGTCGCAAGACACATGCAATGAGGCTCTGAAAATTACATGGCTAGGAGGGAAACAGGTGGTCAGCGTGATCATCCAGGTCAATGACTATCTCTCAGAGAGGCCAAAGATAAGAGTCACAACCATTCCAATCACTCAAAACTATCTCGGGGCGGAAGGTAGATTATTAAAATTGGGTGATCGGGTGTACATCTATACAAGATCATCAGGCTGGCACTCTCAACTGCAGATAGGAGTACTTGATGTCAGCCACCCTTTGACTATCAACTGGACACCTCATGAAGCCTTGTCTAGACCAGGAAATAAAGAGTGCAATTGGTACAATAAGTGTCCGAAGGAATGCATATCAGGCGTATACACTGATGCTTATCCATTGTCCCCTGATGCAGCTAACGTCGCTACCGTCACGCTATATGCCAATACATCGCGTGTCAACCCAACAATCATGTATTCTAACACTACTAACATTATAAATATGTTAAGGATAAAGGATGTTCAATTAGAGGCTGCATATACCACGACATCGTGTATCACGCATTTTGGTAAAGGCTACTGCTTTCACATCATCGAGATCAATCAGAAGAGCCTGAATACCTTACAGCCGATGCTCTTTAAGACTAGCATCCCTAAATTATGCAAGGCCGAGTCTTAAGCGGCCGCGCATGCGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCTATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGCAGCCCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAACAGCTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTTCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACATCAGAGATTTTGAGACACAACAATTGGTCGAC
SEQ ID NO: 9 도 2g에 정의된 바와 같은 플라스미드(pDNA2a pGM297)
길이: 9886; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..9886; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM297; 유기체, 합성 구조물
ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGCTCGAGACTAGTGACTTGGTGAGTAGGCTTCGAGCCTAGTTAGAGGACTAGGAGAGGCCGTAGCCGTAACTACTCTGGGCAAGTAGGGCAGGCGGTGGGTACGCAATGGGGGCGGCTACCTCAGCACTAAATAGGAGACAATTAGACCAATTTGAGAAAATACGACTTCGCCCGAACGGAAAGAAAAAGTACCAAATTAAACATTTAATATGGGCAGGCAAGGAGATGGAGCGCTTCGGCCTCCATGAGAGGTTGTTGGAGACAGAGGAGGGGTGTAAAAGAATCATAGAAGTCCTCTACCCCCTAGAACCAACAGGATCGGAGGGCTTAAAAAGTCTGTTCAATCTTGTGTGCGTACTATATTGCTTGCACAAGGAACAGAAAGTGAAAGACACAGAGGAAGCAGTAGCAACAGTAAGACAACACTGCCATCTAGTGGAAAAAGAAAAAAGTGCAACAGAGACATCTAGTGGACAAAAGAAAAATGACAAGGGAATAGCAGCGCCACCTGGTGGCAGTCAGAATTTTCCAGCGCAACAACAAGGAAATGCCTGGGTACATGTACCCTTGTCACCGCGCACCTTAAATGCGTGGGTAAAAGCAGTAGAGGAGAAAAAATTTGGAGCAGAAATAGTACCCATGTTTCAAGCCCTATCAGAAGGCTGCACACCCTATGACATTAATCAGATGCTTAATGTGCTAGGAGATCATCAAGGGGCATTACAAATAGTGAAAGAGATCATTAATGAAGAAGCAGCCCAGTGGGATGTAACACACCCACTACCCGCAGGACCCCTACCAGCAGGACAGCTCAGGGACCCTCGCGGCTCAGATATAGCAGGGACCACCAGCTCAGTACAAGAACAGTTAGAATGGATCTATACTGCTAACCCCCGGGTAGATGTAGGTGCCATCTACCGGAGATGGATTATTCTAGGACTTCAAAAGTGTGTCAAAATGTACAACCCAGTATCAGTCCTAGACATTAGGCAGGGACCTAAAGAGCCCTTCAAGGATTATGTGGACAGATTTTACAAGGCAATTAGAGCAGAACAAGCCTCAGGGGAAGTGAAACAATGGATGACAGAATCATTACTCATTCAAAATGCTAATCCAGATTGTAAGGTCATCCTGAAGGGCCTAGGAATGCACCCCACCCTTGAAGAAATGTTAACGGCTTGTCAGGGGGTAGGAGGCCCAAGCTACAAAGCAAAAGTAATGGCAGAAATGATGCAGACCATGCAAAATCAAAACATGGTGCAGCAGGGAGGTCCAAAAAGACAAAGACCCCCACTAAGATGTTATAATTGTGGAAAATTTGGCCATATGCAAAGACAATGTCCGGAACCAAGGAAAACAAAATGTCTAAAGTGTGGAAAATTGGGACACCTAGCAAAAGACTGCAGGGGACAGGTGAATTTTTTAGGGTATGGACGGTGGATGGGGGCAAAACCGAGAAATTTTCCCGCCGCTACTCTTGGAGCGGAACCGAGTGCGCCTCCTCCACCGAGCGGCACCACCCCATACGACCCAGCAAAGAAGCTCCTGCAGCAATATGCAGAGAAAGGGAAACAACTGAGGGAGCAAAAGAGGAATCCACCGGCAATGAATCCGGATTGGACCGAGGGATATTCTTTGAACTCCCTCTTTGGAGAAGACCAATAAAGACAGTGTATATAGAAGGGGTCCCCATTAAGGCACTGCTAGACACAGGGGCAGATGACACCATAATTAAAGAAAATGATTTACAATTATCAGGTCCATGGAGACCCAAAATTATAGGGGGCATAGGAGGAGGCCTTAATGTAAAAGAATATAACGACAGGGAAGTAAAAATAGAAGATAAAATTTTGAGAGGAACAATATTGTTAGGAGCAACTCCCATTAATATAATAGGTAGAAATTTGCTGGCCCCGGCAGGTGCCCGGTTAGTAATGGGACAATTATCAGAAAAAATTCCTGTCACACCTGTCAAATTGAAGGAAGGGGCTCGGGGACCCTGTGTAAGACAATGGCCTCTCTCTAAAGAGAAGATTGAAGCTTTACAGGAAATATGTTCCCAATTAGAGCAGGAAGGAAAAATCAGTAGAGTAGGAGGAGAAAATGCATACAATACCCCAATATTTTGCATAAAGAAGAAGGACAAATCCCAGTGGAGGATGCTAGTAGACTTTAGAGAGTTAAATAAGGCAACCCAAGATTTCTTTGAAGTGCAATTAGGGATACCCCACCCAGCAGGATTAAGAAAGATGAGACAGATAACAGTTTTAGATGTAGGAGACGCCTATTATTCCATACCATTGGATCCAAATTTTAGGAAATATACTGCTTTTACTATTCCCACAGTGAATAATCAGGGACCCGGGATTAGGTATCAATTCAACTGTCTCCCGCAAGGGTGGAAAGGATCTCCTACAATCTTCCAAAATACAGCAGCATCCATTTTGGAGGAGATAAAAAGAAACTTGCCAGCACTAACCATTGTACAATACATGGATGATTTATGGGTAGGTTCTCAAGAAAATGAACACACCCATGACAAATTAGTAGAACAGTTAAGAACAAAATTACAAGCCTGGGGCTTAGAAACCCCAGAAAAGAAGGTGCAAAAAGAACCACCTTATGAGTGGATGGGATACAAACTTTGGCCTCACAAATGGGAACTAAGCAGAATACAACTGGAGGAAAAAGATGAATGGACTGTCAATGACATCCAGAAGTTAGTTGGGAAACTAAATTGGGCAGCACAATTGTATCCAGGTCTTAGGACCAAGAATATATGCAAGTTAATTAGAGGAAAGAAAAATCTGTTAGAGCTAGTGACTTGGACACCTGAGGCAGAAGCTGAATATGCAGAAAATGCAGAGATTCTTAAAACAGAACAGGAAGGAACCTATTACAAACCAGGAATACCTATTAGGGCAGCAGTACAGAAATTGGAAGGAGGACAGTGGAGTTACCAATTCAAACAAGAAGGACAAGTCTTGAAAGTAGGAAAATACACCAAGCAAAAGAACACCCATACAAATGAACTTCGCACATTAGCTGGTTTAGTGCAGAAGATTTGCAAAGAAGCTCTAGTTATTTGGGGGATATTACCAGTTCTAGAACTCCCGATAGAAAGAGAGGTATGGGAACAATGGTGGGCGGATTACTGGCAGGTAAGCTGGATTCCCGAATGGGATTTTGTCAGCACCCCACCTTTGCTCAAACTATGGTACACATTAACAAAAGAACCCATACCCAAGGAGGACGTTTACTATGTAGATGGAGCATGCAACAGAAATTCAAAAGAAGGAAAAGCAGGATACATCTCACAATACGGAAAACAGAGAGTAGAAACATTAGAAAACACTACCAATCAGCAAGCAGAATTAACAGCTATAAAAATGGCTTTGGAAGACAGTGGGCCTAATGTGAACATAGTAACAGACTCTCAATATGCAATGGGAATTTTGACAGCACAACCCACACAAAGTGATTCACCATTAGTAGAGCAAATTATAGCCTTAATGATACAAAAGCAACAAATATATTTGCAGTGGGTACCAGCACATAAAGGAATAGGAGGAAATGAGGAGATAGATAAATTAGTGAGTAAAGGCATTAGAAGAGTTTTATTCTTAGAAAAAATAGAAGAAGCTCAAGAAGAGCATGAAAGATATCATAATAATTGGAAAAACCTAGCAGATACATATGGGCTTCCACAAATAGTAGCAAAAGAGATAGTGGCCATGTGTCCAAAATGTCAGATAAAGGGAGAACCAGTGCATGGACAAGTGGATGCCTCACCTGGAACATGGCAGATGGATTGTACTCATCTAGAAGGAAAAGTAGTCATAGTTGCGGTCCATGTAGCCAGTGGATTCATAGAAGCAGAAGTCATACCTAGGGAAACAGGAAAAGAAACGGCAAAGTTTCTATTAAAAATACTGAGTAGATGGCCTATAACACAGTTACACACAGACAATGGGCCTAACTTTACCTCCCAAGAAGTGGCAGCAATATGTTGGTGGGGAAAAATTGAACATACAACAGGTATACCATATAACCCCCAATCTCAAGGATCAATAGAAAGCATGAACAAACAATTAAAAGAGATAATTGGGAAAATAAGAGATGATTGCCAATATACAGAGACAGCAGTACTGATGGCTTGCCATATTCACAATTTTAAAAGAAAGGGAGGAATAGGGGGACAGACTTCAGCAGAGAGACTAATTAATATAATAACAACACAATTAGAAATACAACATTTACAAACCAAAATTCAAAAAATTTTAAATTTTAGAGTCTACTACAGAGAAGGGAGAGACCCTGTGTGGAAAGGACCAGCACAATTAATCTGGAAAGGGGAAGGAGCAGTGGTCCTCAAGGACGGAAGTGACCTAAAGGTTGTACCAAGAAGGAAAGCTAAAATTATTAAGGATTATGAACCCAAACAAAGAGTGGGTAATGAGGGTGACGTGGAAGGTACCAGGGGATCTGATAACTAAATGGCAGGGAATAGTCAGATATTGGATGAGACAAAGAAATTTGAAATGGAACTATTATATGCATCAGCTGGCGGCCGCGAATTCACTAGTGATTCCCGTTTGTGCTAGGGTTCTTAGGCTTCTTGGGGGCTGCTGGAACTGCAATGGGAGCAGCGGCGACAGCCCTGACGGTCCAGTCTCAGCATTTGCTTGCTGGGATACTGCAGCAGCAGAAGAATCTGCTGGCGGCTGTGGAGGCTCAACAGCAGATGTTGAAGCTGACCATTTGGGGTGTTAAAAACCTCAATGCCCGCGTCACAGCCCTTGAGAAGTACCTAGAGGATCAGGCACGACTAAACTCCTGGGGGTGCGCATGGAAACAAGTATGTCATACCACAGTGGAGTGGCCCTGGACAAATCGGACTCCGGATTGGCAAAATATGACTTGGTTGGAGTGGGAAAGACAAATAGCTGATTTGGAAAGCAACATTACGAGACAATTAGTGAAGGCTAGAGAACAAGAGGAAAAGAATCTAGATGCCTATCAGAAGTTAACTAGTTGGTCAGATTTCTGGTCTTGGTTCGATTTCTCAAAATGGCTTAACATTTTAAAAATGGGATTTTTAGTAATAGTAGGAATAATAGGGTTAAGATTACTTTACACAGTATATGGATGTATAGTGAGGGTTAGGCAGGGATATGTTCCTCTATCTCCACAGATCCATATCCAATCGAATTCCCGCGGCCGCAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGCAGCCCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAACAGCTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTTCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACATCAGAGATTTTGAGACACAACAATTGGTCGAC
SEQ ID NO: 10 예시된 hCEF 프로모터
길이: 574; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..574; mol_type, 기타 DNA; 참고, hCEF 프로모터; 유기체, 합성 구조물
1 AGATCTGTTA CATAACTTAT GGTAAATGGC CTGCCTGGCT GACTGCCCAA TGACCCCTGC
61 CCAATGATGT CAATAATGAT GTATGTTCCC ATGTAATGCC AATAGGGACT TTCCATTGAT
121 GTCAATGGGT GGAGTATTTA TGGTAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT
181 GCCAAGTATG CCCCCTATTG ATGTCAATGA TGGTAAATGG CCTGCCTGGC ATTATGCCCA
241 GTACATGACC TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TATGTATTAG TCATTGCTAT
301 TACCATGGGA ATTCACTAGT GGAGAAGAGC ATGCTTGAGG GCTGAGTGCC CCTCAGTGGG
361 CAGAGAGCAC ATGGCCCACA GTCCCTGAGA AGTTGGGGGG AGGGGTGGGC AATTGAACTG
421 GTGCCTAGAG AAGGTGGGGC TTGGGTAAAC TGGGAAAGTG ATGTGGTGTA CTGGCTCCAC
481 CTTTTTCCCC AGGGTGGGGG AGAACCATAT ATAAGTGCAG TAGTCTCTGT GAACATTCAA
541 GCTTCTGCCT TCTCCCTCCT GTGAGTTTGC TAGC
SEQ ID NO: 11 예시된 CMV 프로모터
길이: 873; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..873; mol_type, 할당되지 않은 DNA; 유기체, 인간 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus)
CCGCGGAGATCTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCATTGGTTATATAGCATAAATCAATATTGGCT ATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACC GCCATGTTGGCATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCA TATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCC CATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGT GGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATT GACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTT GGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCG TGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGG CACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGC GTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCACTAGAAGCTTTATTGC GGTAGTTTATCACAGTTAAATTGCTAACGCAGTCAGTGCTTCTGACACAACAGTCTCGAACTTAAGCTGC AGAAGTTGGTCGTGAGGCACTGGGCAGGCTAGC
SEQ ID NO: 12 예시된 EF1a 프로모터
길이: 395; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..395; mol_type, 할당되지 않은 DNA; 유기체, 호모 사피엔스
AGATCCATATCCGCGGCAATTTTAAAAGAAAGGGAGGAATAGGGGGACAGACTTCAGCAGAGAGACTAATTAATATAATAACAACACAATTAGAAATACAACATTTACAAACCAAAATTCAAAAAATTTTAAATTTTAGAGCCGCGGAGATCCCGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGCTAGC
SEQ ID NO: 13 예시된 CFTR 이식 유전자(soCFTR2)
길이: 4459; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..4459; mol_type, 기타 DNA, 참고, soCFTR2; 유기체, 합성 구조물
1 GCTAGCCACC ATGCAGAGAA GCCCTCTGGA GAAGGCCTCT GTGGTGAGCA AGCTGTTCTT
61 CAGCTGGACC AGGCCCATCC TGAGGAAGGG CTACAGGCAG AGACTGGAGC TGTCTGACAT
121 CTACCAGATC CCCTCTGTGG ACTCTGCTGA CAACCTGTCT GAGAAGCTGG AGAGGGAGTG
181 GGATAGAGAG CTGGCCAGCA AGAAGAACCC CAAGCTGATC AATGCCCTGA GGAGATGCTT
241 CTTCTGGAGA TTCATGTTCT ATGGCATCTT CCTGTACCTG GGGGAAGTGA CCAAGGCTGT
301 GCAGCCTCTG CTGCTGGGCA GAATCATTGC CAGCTATGAC CCTGACAACA AGGAGGAGAG
361 GAGCATTGCC ATCTACCTGG GCATTGGCCT GTGCCTGCTG TTCATTGTGA GGACCCTGCT
421 GCTGCACCCT GCCATCTTTG GCCTGCACCA CATTGGCATG CAGATGAGGA TTGCCATGTT
481 CAGCCTGATC TACAAGAAAA CCCTGAAGCT GTCCAGCAGA GTGCTGGACA AGATCAGCAT
541 TGGCCAGCTG GTGAGCCTGC TGAGCAACAA CCTGAACAAG TTTGATGAGG GCCTGGCCCT
601 GGCCCACTTT GTGTGGATTG CCCCTCTGCA GGTGGCCCTG CTGATGGGCC TGATTTGGGA
661 GCTGCTGCAG GCCTCTGCCT TTTGTGGCCT GGGCTTCCTG ATTGTGCTGG CCCTGTTTCA
721 GGCTGGCCTG GGCAGGATGA TGATGAAGTA CAGGGACCAG AGGGCAGGCA AGATCAGTGA
781 GAGGCTGGTG ATCACCTCTG AGATGATTGA GAACATCCAG TCTGTGAAGG CCTACTGTTG
841 GGAGGAAGCT ATGGAGAAGA TGATTGAAAA CCTGAGGCAG ACAGAGCTGA AGCTGACCAG
901 GAAGGCTGCC TATGTGAGAT ACTTCAACAG CTCTGCCTTC TTCTTCTCTG GCTTCTTTGT
961 GGTGTTCCTG TCTGTGCTGC CCTATGCCCT GATCAAGGGG ATCATCCTGA GAAAGATTTT
1021 CACCACCATC AGCTTCTGCA TTGTGCTGAG GATGGCTGTG ACCAGACAGT TCCCCTGGGC
1081 TGTGCAGACC TGGTATGACA GCCTGGGGGC CATCAACAAG ATCCAGGACT TCCTGCAGAA
1141 GCAGGAGTAC AAGACCCTGG AGTACAACCT GACCACCACA GAAGTGGTGA TGGAGAATGT
1201 GACAGCCTTC TGGGAGGAGG GCTTTGGGGA GCTGTTTGAG AAGGCCAAGC AGAACAACAA
1261 CAACAGAAAG ACCAGCAATG GGGATGACTC CCTGTTCTTC TCCAACTTCT CCCTGCTGGG
1321 CACACCTGTG CTGAAGGACA TCAACTTCAA GATTGAGAGG GGGCAGCTGC TGGCTGTGGC
1381 TGGATCTACA GGGGCTGGCA AGACCAGCCT GCTGATGATG ATCATGGGGG AGCTGGAGCC
1441 TTCTGAGGGC AAGATCAAGC ACTCTGGCAG GATCAGCTTT TGCAGCCAGT TCAGCTGGAT
1501 CATGCCTGGC ACCATCAAGG AGAACATCAT CTTTGGAGTG AGCTATGATG AGTACAGATA
1561 CAGGAGTGTG ATCAAGGCCT GCCAGCTGGA GGAGGACATC AGCAAGTTTG CTGAGAAGGA
1621 CAACATTGTG CTGGGGGAGG GAGGCATTAC ACTGTCTGGG GGCCAGAGAG CCAGAATCAG
1681 CCTGGCCAGG GCTGTGTACA AGGATGCTGA CCTGTACCTG CTGGACTCCC CCTTTGGCTA
1741 CCTGGATGTG CTGACAGAGA AGGAGATTTT TGAGAGCTGT GTGTGCAAGC TGATGGCCAA
1801 CAAGACCAGA ATCCTGGTGA CCAGCAAGAT GGAGCACCTG AAGAAGGCTG ACAAGATCCT
1861 GATCCTGCAT GAGGGCAGCA GCTACTTCTA TGGGACCTTC TCTGAGCTGC AGAACCTGCA
1921 GCCTGACTTC AGCTCTAAGC TGATGGGCTG TGACAGCTTT GACCAGTTCT CTGCTGAGAG
1981 GAGGAACAGC ATCCTGACAG AGACCCTGCA CAGATTCAGC CTGGAGGGAG ATGCCCCTGT
2041 GAGCTGGACA GAGACCAAGA AGCAGAGCTT CAAGCAGACA GGGGAGTTTG GGGAGAAGAG
2101 GAAGAACTCC ATCCTGAACC CCATCAACAG CATCAGGAAG TTCAGCATTG TGCAGAAAAC
2161 CCCCCTGCAG ATGAATGGCA TTGAGGAAGA TTCTGATGAG CCCCTGGAGA GGAGACTGAG
2221 CCTGGTGCCT GATTCTGAGC AGGGAGAGGC CATCCTGCCT AGGATCTCTG TGATCAGCAC
2281 AGGCCCTACA CTGCAGGCCA GAAGGAGGCA GTCTGTGCTG AACCTGATGA CCCACTCTGT
2341 GAACCAGGGC CAGAACATCC ACAGGAAAAC CACAGCCTCC ACCAGGAAAG TGAGCCTGGC
2401 CCCTCAGGCC AATCTGACAG AGCTGGACAT CTACAGCAGG AGGCTGTCTC AGGAGACAGG
2461 CCTGGAGATT TCTGAGGAGA TCAATGAGGA GGACCTGAAA GAGTGCTTCT TTGATGACAT
2521 GGAGAGCATC CCTGCTGTGA CCACCTGGAA CACCTACCTG AGATACATCA CAGTGCACAA
2581 GAGCCTGATC TTTGTGCTGA TCTGGTGCCT GGTGATCTTC CTGGCTGAAG TGGCTGCCTC
2641 TCTGGTGGTG CTGTGGCTGC TGGGAAACAC CCCACTGCAG GACAAGGGCA ACAGCACCCA
2701 CAGCAGGAAC AACAGCTATG CTGTGATCAT CACCTCCACC TCCAGCTACT ATGTGTTCTA
2761 CATCTATGTG GGAGTGGCTG ATACCCTGCT GGCTATGGGC TTCTTTAGAG GCCTGCCCCT
2821 GGTGCACACA CTGATCACAG TGAGCAAGAT CCTCCACCAC AAGATGCTGC ACTCTGTGCT
2881 GCAGGCTCCT ATGAGCACCC TGAATACCCT GAAGGCTGGG GGCATCCTGA ACAGATTCTC
2941 CAAGGATATT GCCATCCTGG ATGACCTGCT GCCTCTCACC ATCTTTGACT TCATCCAGCT
3001 GCTGCTGATT GTGATTGGGG CCATTGCTGT GGTGGCAGTG CTGCAGCCCT ACATCTTTGT
3061 GGCCACAGTG CCTGTGATTG TGGCCTTCAT CATGCTGAGG GCCTACTTTC TGCAGACCTC
3121 CCAGCAGCTG AAGCAGCTGG AGTCTGAGGG CAGAAGCCCC ATCTTCACCC ACCTGGTGAC
3181 AAGCCTGAAG GGCCTGTGGA CCCTGAGAGC CTTTGGCAGG CAGCCCTACT TTGAGACCCT
3241 GTTCCACAAG GCCCTGAACC TGCACACAGC CAACTGGTTC CTCTACCTGT CCACCCTGAG
3301 ATGGTTCCAG ATGAGAATTG AGATGATCTT TGTCATCTTC TTCATTGCTG TGACCTTCAT
3361 CAGCATTCTG ACCACAGGAG AGGGAGAGGG CAGAGTGGGC ATTATCCTGA CCCTGGCCAT
3421 GAACATCATG AGCACACTGC AGTGGGCAGT GAACAGCAGC ATTGATGTGG ACAGCCTGAT
3481 GAGGAGTGTG AGCAGAGTGT TCAAGTTCAT TGATATGCCC ACAGAGGGCA AGCCTACCAA
3541 GAGCACCAAG CCCTACAAGA ATGGCCAGCT GAGCAAAGTG ATGATCATTG AGAACAGCCA
3601 TGTGAAGAAG GATGATATCT GGCCCAGTGG AGGCCAGATG ACAGTGAAGG ACCTGACAGC
3661 CAAGTACACA GAGGGGGGCA ATGCTATCCT GGAGAACATC TCCTTCAGCA TCTCCCCTGG
3721 CCAGAGAGTG GGACTGCTGG GAAGAACAGG CTCTGGCAAG TCTACCCTGC TGTCTGCCTT
3781 CCTGAGGCTG CTGAACACAG AGGGAGAGAT CCAGATTGAT GGAGTGTCCT GGGACAGCAT
3841 CACACTGCAG CAGTGGAGGA AGGCCTTTGG TGTGATCCCC CAGAAAGTGT TCATCTTCAG
3901 TGGCACCTTC AGGAAGAACC TGGACCCCTA TGAGCAGTGG TCTGACCAGG AGATTTGGAA
3961 AGTGGCTGAT GAAGTGGGCC TGAGAAGTGT GATTGAGCAG TTCCCTGGCA AGCTGGACTT
4021 TGTCCTGGTG GATGGGGGCT GTGTGCTGAG CCATGGCCAC AAGCAGCTGA TGTGCCTGGC
4081 CAGATCAGTG CTGAGCAAGG CCAAGATCCT GCTGCTGGAT GAGCCTTCTG CCCACCTGGA
4141 TCCTGTGACC TACCAGATCA TCAGGAGGAC CCTCAAGCAG GCCTTTGCTG ACTGCACAGT
4201 CATCCTGTGT GAGCACAGGA TTGAGGCCAT GCTGGAGTGC CAGCAGTTCC TGGTGATTGA
4261 GGAGAACAAA GTGAGGCAGT ATGACAGCAT CCAGAAGCTG CTGAATGAGA GGAGCCTGTT
4321 CAGGCAGGCC ATCAGCCCCT CTGATAGAGT GAAGCTGTTC CCCCACAGGA ACAGCTCCAA
4381 GTGCAAGAGC AAGCCCCAGA TTGCTGCCCT GAAGGAGGAG ACAGAGGAGG AAGTGCAGGA
4441 CACCAGGCTG TGAGGGCCC
SEQ ID NO: 14 예시된 A1AT 이식 유전자
길이: 1257; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..1257; mol_type, 기타 DNA; 참고, sohAAT 유기체, 합성 구조물
ATGCCCAGCTCTGTGTCCTGGGGCATTCTGCTGCTGGCTGGCCTGTGCTGTCTGGTGCCTGTGTCCCTGG CTGAGGACCCTCAGGGGGATGCTGCCCAGAAAACAGACACCTCCCACCATGACCAGGACCACCCCACCTT CAACAAGATCACCCCCAACCTGGCAGAGTTTGCCTTCAGCCTGTACAGACAGCTGGCCCACCAGAGCAAC AGCACCAACATCTTTTTCAGCCCTGTGTCCATTGCCACAGCCTTTGCCATGCTGAGCCTGGGCACCAAGG CTGACACCCATGATGAGATCCTGGAAGGCCTGAACTTCAACCTGACAGAGATCCCTGAGGCCCAGATCCA TGAGGGCTTCCAGGAACTGCTGAGAACCCTGAACCAGCCAGACAGCCAGCTGCAGCTGACAACAGGCAAT GGGCTGTTCCTGTCTGAGGGCCTGAAGCTGGTGGACAAGTTTCTGGAAGATGTGAAGAAGCTGTACCACT CTGAGGCCTTCACAGTGAACTTTGGGGACACAGAAGAGGCCAAGAAACAGATCAATGACTATGTGGAAAA GGGCACCCAGGGCAAGATTGTGGACCTTGTGAAAGAGCTGGACAGGGACACTGTGTTTGCCCTTGTGAAC TACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGAGGCCCTTTGAAGTGAAGGACACTGAGGAAGAGGACTTCCATG TGGACCAAGTGACCACAGTGAAGGTGCCAATGATGAAGAGACTGGGGATGTTCAATATCCAGCACTGCAA GAAACTGAGCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAGTACCTGGGCAATGCTACAGCCATATTCTTTCTGCCTGAT GAGGGCAAGCTGCAGCACCTGGAAAATGAGCTGACCCATGACATCATCACCAAATTTCTGGAAAATGAGG ACAGAAGATCTGCCAGCCTGCATCTGCCCAAGCTGAGCATCACAGGCACATATGACCTGAAGTCTGTGCT GGGACAGCTGGGAATCACCAAGGTGTTCAGCAATGGGGCAGACCTGAGTGGAGTGACAGAGGAAGCCCCT CTGAAGCTGTCCAAGGCTGTGCACAAGGCAGTGCTGACCATTGATGAGAAGGGCACAGAGGCTGCTGGGG CCATGTTTCTGGAAGCCATCCCCATGTCCATCCCCCCAGAAGTGAAGTTCAACAAGCCCTTTGTGTTCCT GATGATTGAGCAGAACACCAAGAGCCCCCTGTTCATGGGCAAGGTTGTGAACCCCACCCAGAAATGA
SEQ ID NO: 15 예시된 A1AT 이식 유전자에 대한 상보 가닥
길이: 1257; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..1257; mol_type, 기타 DNA; 참고, sohAAT 상보 가닥; 유기체, 합성 구조물
TACGGGTCGAGACACAGGACCCCGTAAGACGACGACCGACCGGACACGACAGACCACGGACACAGGGACC GACTCCTGGGAGTCCCCCTACGACGGGTCTTTTGTCTGTGGAGGGTGGTACTGGTCCTGGTGGGGTGGAA GTTGTTCTAGTGGGGGTTGGACCGTCTCAAACGGAAGTCGGACATGTCTGTCGACCGGGTGGTCTCGTTG TCGTGGTTGTAGAAAAAGTCGGGACACAGGTAACGGTGTCGGAAACGGTACGACTCGGACCCGTGGTTCC GACTGTGGGTACTACTCTAGGACCTTCCGGACTTGAAGTTGGACTGTCTCTAGGGACTCCGGGTCTAGGT ACTCCCGAAGGTCCTTGACGACTCTTGGGACTTGGTCGGTCTGTCGGTCGACGTCGACTGTTGTCCGTTA CCCGACAAGGACAGACTCCCGGACTTCGACCACCTGTTCAAAGACCTTCTACACTTCTTCGACATGGTGA GACTCCGGAAGTGTCACTTGAAACCCCTGTGTCTTCTCCGGTTCTTTGTCTAGTTACTGATACACCTTTT CCCGTGGGTCCCGTTCTAACACCTGGAACACTTTCTCGACCTGTCCCTGTGACACAAACGGGAACACTTG ATGTAGAAGAAGTTCCCGTTCACCCTCTCCGGGAAACTTCACTTCCTGTGACTCCTTCTCCTGAAGGTAC ACCTGGTTCACTGGTGTCACTTCCACGGTTACTACTTCTCTGACCCCTACAAGTTATAGGTCGTGACGTT CTTTGACTCGTCGACCCACGACGACTACTTCATGGACCCGTTACGATGTCGGTATAAGAAAGACGGACTA CTCCCGTTCGACGTCGTGGACCTTTTACTCGACTGGGTACTGTAGTAGTGGTTTAAAGACCTTTTACTCC TGTCTTCTAGACGGTCGGACGTAGACGGGTTCGACTCGTAGTGTCCGTGTATACTGGACTTCAGACACGA CCCTGTCGACCCTTAGTGGTTCCACAAGTCGTTACCCCGTCTGGACTCACCTCACTGTCTCCTTCGGGGA GACTTCGACAGGTTCCGACACGTGTTCCGTCACGACTGGTAACTACTCTTCCCGTGTCTCCGACGACCCC GGTACAAAGACCTTCGGTAGGGGTACAGGTAGGGGGGTCTTCACTTCAAGTTGTTCGGGAAACACAAGGA CTACTAACTCGTCTTGTGGTTCTCGGGGGACAAGTACCCGTTCCAACACTTGGGGTGGGTCTTTACT
SEQ ID NO: 16 예시된 A1AT 폴리펩티드
길이: 419; 분자 유형: AA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..419; MOL_TYPE, 단백질; 유기체, 호모 사피엔스
AEDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFAEDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFAFSLYRQLAHQSNSTNIFFSPVSIATAFAMLSLGTKADTHDEILEGLNFNLTEIPEAQIHEGFQELLRTLNQPDSQLQLTTGNGLFLSEGLKLVDKFLEDVKKLYHSEAFTVNFGDTEEAKKQINDYVEKGTQGKIVDLVKELDRDTVFALVNYIFFKGKWERPFEVKDTEEEDFHVDQVTTVKVPMMKRLGMFNIQHCKKLSSWVLLMKYLGNATAIFFLPDEGKLQHLENELTHDIITKFLENEDRRSASLHLPKLSITGTYDLKSVLGQLGITKVFSNGADLSGVTEEAPLKLSKAVHKAVLTIDEKGTEAAGAMFLEAIPMSIPPEVKFNKPFVFLMIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK
SEQ ID NO: 17 예시된 FVIII 이식 유전자(N6)
길이: 5013; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..5013; mol_type, 기타 DNA; 참고, 코돈-최적화된 FVIII 이식 유전자(N6); 유기체, 합성 구조물
ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGAT ACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGC CAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTT GTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCA CCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCT GCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGG GAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATG GCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCT GAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACC CTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACA GCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGT GAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGC ACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCA GCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCT GTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAG GAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGA TGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCA CCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCC CCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGA AGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCAT CCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGG CCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGG TGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGA GGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGG GACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACC AGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGAC TGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGC AACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGG CCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTT CAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGC ATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCC TGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGC CTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAACAGCAGGCACCCCAGCACC AGGCAGAAGCAGTTCAATGCCACCACCATCCCTGAGAATGACATAGAGAAGACAGACCCATGGTTTGCCC ACCGGACCCCCATGCCCAAGATCCAGAATGTGAGCAGCTCTGACCTGCTGATGCTGCTGAGGCAGAGCCC CACCCCCCATGGCCTGAGCCTGTCTGACCTGCAGGAGGCCAAGTATGAAACCTTCTCTGATGACCCCAGC CCTGGGGCCATTGACAGCAACAACAGCCTGTCTGAGATGACCCACTTCAGGCCCCAGCTGCACCACTCTG GGGACATGGTGTTCACCCCTGAGTCTGGCCTGCAGCTGAGGCTGAATGAGAAGCTGGGCACCACTGCTGC CACTGAGCTGAAGAAGCTGGACTTCAAAGTCTCCAGCACCAGCAACAACCTGATCAGCACCATCCCCTCT GACAACCTGGCTGCTGGCACTGACAACACCAGCAGCCTGGGCCCCCCCAGCATGCCTGTGCACTATGACA GCCAGCTGGACACCACCCTGTTTGGCAAGAAGAGCAGCCCCCTGACTGAGTCTGGGGGCCCCCTGAGCCT GTCTGAGGAGAACAATGACAGCAAGCTGCTGGAGTCTGGCCTGATGAACAGCCAGGAGAGCAGCTGGGGC AAGAATGTGAGCAGCAGGGAGATCACCAGGACCACCCTGCAGTCTGACCAGGAGGAGATTGACTATGATG ACACCATCTCTGTGGAGATGAAGAAGGAGGACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAG GAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGC AGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCC AGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCT GGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCC TACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACT TTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGA GTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATT GGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGT TTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTG CAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAAT GGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGA GCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGA GGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAG GCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGG TGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGC CTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGG AGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGA CCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGG CAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGC TCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACT ACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGG CATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACC TGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACC CCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAA GAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACC CTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACA GCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCT GAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGA
SEQ ID NO: 18 예시된 FVIII 이식 유전자(V3)
길이: 4425; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..4425; mol_type, 기타 DNA; 참고, 코돈-최적화된 FVIII 이식 유전자(V3); 유기체, 합성 구조물
ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGAT ACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGC CAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTT GTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCA CCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCT GCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGG GAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATG GCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCT GAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACC CTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACA GCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGT GAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGC ACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCA GCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCT GTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAG GAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGA TGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCA CCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCC CCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGA AGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCAT CCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGG CCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGG TGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGA GGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGG GACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACC AGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGAC TGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGC AACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGG CCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTT CAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGC ATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCC TGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGC CTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAATGCCACTAATGTGTCTAAC AACAGCAACACCAGCAATGACAGCAATGTGTCTCCCCCAGTGCTGAAGAGGCACCAGAGGGAGATCACCA GGACCACCCTGCAGTCTGACCAGGAGGAGATTGACTATGATGACACCATCTCTGTGGAGATGAAGAAGGA GGACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTAC TTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGG CCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCA GCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAG GACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCT ATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTA CTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTC TCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACA CCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGA AACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAG GACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCC TGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAG CATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTG TACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGA TTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCT GGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCC AAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCA AGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAG CCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAAC AGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACC CCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGA GCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCC CAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACC TGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCA GAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAG GAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGG TGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATA CCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCC CAGGACCTGTACTGA
SEQ ID NO: 19 예시된 FVIII 이식 유전자(N6)에 대한 상보 가닥
길이: 5013; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..5013; mol_type, 기타 DNA; 코돈-최적화된 FVIII 이식 유전자(N6) 상보 가닥; 유기체, 합성 구조물
TACGTCTAACTCGACTCGTGGACGAAGAAGGACACGGACGACTCCAAGACGAAGAGACGGTGGTCCTCTA
TGATGGACCCCCGACACCTCGACTCGACCCTGATGTACGTCAGACTGGACCCCCTCGACGGACACCTACG
GTCCAAGGGGGGGTCTCACGGGTTCTCGAAGGGGAAGTTGTGGAGACACCACATGTTCTTCTGGGACAAA
CACCTCAAGTGACTGGTGGACAAGTTGTAACGGTTCGGGTCCGGGGGGACCTACCCGGACGACCCGGGGT
GGTAGGTCCGACTCCACATACTGTGACACCACTAGTGGGACTTCTTGTACCGGTCGGTGGGACACTCGGA
CGTACGACACCCCCACTCGATGACCTTCCGGAGACTCCCCCGACTCATACTACTGGTCTGGTCGGTCTCC
CTCTTCCTCCTACTGTTCCACAAGGGACCCCCGTCGGTGTGGATACACACCGTCCACGACTTCCTCTTAC
CGGGGTACCGGAGACTGGGGGACACGGACTGGATGTCGATGGACTCGGTACACCTGGACCACTTCCTGGA
CTTGAGACCGGACTAACCCCGGGACGACCACACGTCCCTCCCGTCGGACCGGTTCCTCTTCTGGGTCTGG
GACGTGTTCAAGTAGGACGACAAACGACACAAACTACTCCCGTTCTCGACCGTGAGACTTTGGTTCTTGT
CGGACTACGTCCTGTCCCTACGACGGAGACGGTCCCGGACCGGGTTCTACGTGTGACACTTACCGATACA
CTTGTCCTCGGACGGACCGGACTAACCGACGGTGTCCTTCAGACACATGACCGTACACTAACCGTACCCG
TGGTGGGGACTCCACGTGTCGTAGAAGGACCTCCCGGTGTGGAAGGACCAGTCCTTGGTGTCCGTCCGGT
CGGACCTCTAGTCGGGGTAGTGGAAGGACTGACGGGTCTGGGACGACTACCTGGACCCGGTCAAGGACGA
CAAGACGGTGTAGTCGTCGGTGGTCGTACTACCGTACCTCCGGATACACTTCCACCTGTCGACGGGACTC
CTCGGGGTCGACTCCTACTTCTTGTTACTCCTCCGACTCCTGATACTACTACTGGACTGACTGAGACTCT
ACCTACACCACTCCAAACTACTACTGTTGTCGGGGTCGAAGTAGGTCTAGTCCAGACACCGGTTCTTCGT
GGGGTTCTGGACCCACGTGATGTAACGACGACTCCTCCTCCTGACCCTGATACGGGGGGACCACGACCGG
GGACTACTGTCCTCGATGTTCTCGGTCATGGACTTGTTACCGGGGGTCTCCTAACCGTCCTTCATGTTCT
TCCAGTCCAAGTACCGGATGTGACTACTTTGGAAGTTCTGGTCCCTCCGGTAGGTCGTACTCAGACCGTA
GGACCCGGGGGACGACATACCCCTCCACCCCCTGTGGGACGACTAGTAGAAGTTCTTGGTCCGGTCGTCC
GGGATGTTGTAGATGGGGGTACCGTAGTGACTACACTCCGGGGACATGTCGTCCTCCGACGGGTTCCCCC
ACTTCGTGGACTTCCTGAAGGGGTAGGACGGACCCCTCTAGAAGTTCATGTTCACCTGACACTGACACCT
CCTACCGGGGTGGTTCAGACTGGGGTCCACGGACTGGTCTATGATGTCGTCGAAACACTTGTACCTCTCC
CTGGACCGGAGACCGGACTAACCGGGGGACGACTAGACGATGTTCCTCAGACACCTGGTCTCCCCGTTGG
TCTAGTACAGACTGTTCTCCTTACACTAGGACAAGAGACACAAACTACTCTTGTCCTCGACCATGGACTG
ACTCTTGTAGGTCTCCAAGGACGGGTTGGGACGACCCCACGTCGACCTCCTGGGACTCAAGGTCCGGTCG
TTGTAGTACGTGTCGTAGTTACCGATACACAAACTGTCGGACGTCGACAGACACACGGACGTACTCCACC
GGATGACCATGTAGGACTCGTAACCCCGGGTCTGACTGAAGGACAGACACAAGAAGAGACCGATGTGGAA
GTTCGTGTTCTACCACATACTCCTGTGGGACTGGGACAAGGGGAAGAGACCCCTCTGACACAAGTACTCG
TACCTCTTGGGACCGGACACCTAAGACCCGACGGTGTTGAGACTGAAGTCCTTGTCCCCGTACTGACGGG
ACGACTTTCAGAGGTCGACACTGTTCTTGTGACCCCTGATGATACTCCTGTCGATACTCCTGTAGAGACG
GATGGACGACTCGTTCTTGTTACGGTAACTCGGGTCCTCGAAGTCGGTCTTGTCGTCCGTGGGGTCGTGG
TCCGTCTTCGTCAAGTTACGGTGGTGGTAGGGACTCTTACTGTATCTCTTCTGTCTGGGTACCAAACGGG
TGGCCTGGGGGTACGGGTTCTAGGTCTTACACTCGTCGAGACTGGACGACTACGACGACTCCGTCTCGGG
GTGGGGGGTACCGGACTCGGACAGACTGGACGTCCTCCGGTTCATACTTTGGAAGAGACTACTGGGGTCG
GGACCCCGGTAACTGTCGTTGTTGTCGGACAGACTCTACTGGGTGAAGTCCGGGGTCGACGTGGTGAGAC
CCCTGTACCACAAGTGGGGACTCAGACCGGACGTCGACTCCGACTTACTCTTCGACCCGTGGTGACGACG
GTGACTCGACTTCTTCGACCTGAAGTTTCAGAGGTCGTGGTCGTTGTTGGACTAGTCGTGGTAGGGGAGA
CTGTTGGACCGACGACCGTGACTGTTGTGGTCGTCGGACCCGGGGGGGTCGTACGGACACGTGATACTGT
CGGTCGACCTGTGGTGGGACAAACCGTTCTTCTCGTCGGGGGACTGACTCAGACCCCCGGGGGACTCGGA
CAGACTCCTCTTGTTACTGTCGTTCGACGACCTCAGACCGGACTACTTGTCGGTCCTCTCGTCGACCCCG
TTCTTACACTCGTCGTCCCTCTAGTGGTCCTGGTGGGACGTCAGACTGGTCCTCCTCTAACTGATACTAC
TGTGGTAGAGACACCTCTACTTCTTCCTCCTGAAACTGTAGATGCTGCTCCTGCTCTTGGTCTCGGGGTC
CTCGAAGGTCTTCTTCTGGTCCGTGATGAAGTAACGACGACACCTCTCCGACACCCTGATACCGTACTCG
TCGTCGGGGGTACACGACTCCTTGTCCCGGGTCAGACCGAGACACGGGGTCAAGTTCTTCCACCACAAGG
TCCTCAAGTGACTACCGTCGAAGTGGGTCGGGGACATGTCTCCCCTCGACTTACTCGTGGACCCGGACGA
CCCGGGGATGTAGTCCCGACTCCACCTCCTGTTGTAGTACCACTGGAAGTCCTTGGTCCGGTCGTCCGGG
ATGTCGAAGATGTCGTCGGACTAGTCGATACTCCTCCTGGTCTCCGTCCCCCGACTCGGGTCCTTCTTGA
AACACTTCGGGTTACTTTGGTTCTGGATGAAGACCTTCCACGTCGTGGTGTACCGGGGGTGGTTCCTACT
CAAACTGACGTTCCGGACCCGGATGAAGAGACTACACCTGGACCTCTTCCTACACGTGAGACCGGACTAA
CCGGGGGACGACCACACGGTGTGGTTGTGGGACTTGGGACGGGTACCGTCCGTCCACTGACACGTCCTCA
AACGGGACAAGAAGTGGTAGAAACTACTTTGGTTCTCGACCATGAAGTGACTCTTGTACCTCTCCTTGAC
GTCCCGGGGGACGTTGTAGGTCTACCTCCTGGGGTGGAAGTTCCTCTTGATGTCCAAGGTACGGTAGTTA
CCGATGTAGTACCTGTGGGACGGACCGGACCACTACCGGGTCCTGGTCTCCTAGTCCACCATGGACGACT
CGTACCCGTCGTTACTCTTGTAGGTGTCGTAGGTGAAGAGACCGGTACACAAGTGACACTCCTTCTTCCT
CCTCATGTTCTACCGGGACATGTTGGACATGGGACCCCACAAACTCTGACACCTCTACGACGGGTCGTTC
CGACCGTAGACCTCCCACCTCACGGACTAACCCCTCGTGGACGTACGACCGTACTCGTGGGACAAGGACC
ACATGTCGTTGTTCACGGTCTGGGGGGACCCGTACCGGAGACCGGTGTAGTCCCTGAAGGTCTAGTGACG
GAGACCGGTCATACCGGTCACCCGGGGGTTCGACCGGTCCGACGTGATGAGACCGTCGTAGTTACGGACC
TCGTGGTTCCTCGGGAAGTCGACCTAGTTCCACCTGGACGACCGGGGGTACTAGTAGGTACCGTAGTTCT
GGGTCCCCCGGTCCGTCTTCAAGTCGTCGGACATGTAGTCGGTCAAGTAGTAGTACATGTCGGACCTACC
GTTCTTCACCGTCTGGATGTCCCCGTTGTCGTGACCGTGGGACTACCACAAGAAACCGTTACACCTGTCG
AGACCGTAGTTCGTGTTGTAGAAGTTGGGGGGGTAGTAACGGTCTATGTAGTCCGACGTGGGGTGGGTGA
TGTCGTAGTCCTCGTGGGACTCCTACCTCGACTACCCGACACTGGACTTGTCGACGTCGTACGGGGACCC
GTACCTCTCGTTCCGGTAGAGACTACGGGTCTAGTGACGGTCGTCGATGAAGTGGTTGTACAAACGGTGG
ACCTCGGGGTCGTTCCGGTCCGACGTGGACGTCCCGTCCTCGTTACGGACCTCCGGGGTCCAGTTGTTGG
GGTTCCTCACCGACGTCCACCTGAAGGTCTTCTGGTACTTCCACTGACCCCACTGGTGGGTCCCCCACTT
CTCGGACGACTGGTCGTACATACACTTCCTCAAGGACTAGTCGTCGTCGGTCCTACCGGTGGTCACCTGG
GACAAGAAGGTCTTACCGTTCCACTTCCACAAGGTCCCGTTGGTCCTGTCGAAGTGGGGACACCACTTGT
CGGACCTGGGGGGGGACGACTGGTCTATGGACTCCTAAGTGGGGGTCTCGACCCACGTGGTCTAACGGGA
CTCCTACCTCCACGACCCGACACTCCGGGTCCTGGACATGACT
SEQ ID NO: 20 예시된 FVIII 이식 유전자(V3)에 대한 상보 가닥
길이: 4425; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..4425; mol_type, 기타 DNA; 코돈-최적화된 FVIII 이식 유전자(V3) 상보 가닥; 유기체, 합성 구조물
TACGTCTAACTCGACTCGTGGACGAAGAAGGACACGGACGACTCCAAGACGAAGAGACGGTGGTCCTCTA TGATGGACCCCCGACACCTCGACTCGACCCTGATGTACGTCAGACTGGACCCCCTCGACGGACACCTACG GTCCAAGGGGGGGTCTCACGGGTTCTCGAAGGGGAAGTTGTGGAGACACCACATGTTCTTCTGGGACAAA CACCTCAAGTGACTGGTGGACAAGTTGTAACGGTTCGGGTCCGGGGGGACCTACCCGGACGACCCGGGGT GGTAGGTCCGACTCCACATACTGTGACACCACTAGTGGGACTTCTTGTACCGGTCGGTGGGACACTCGGA CGTACGACACCCCCACTCGATGACCTTCCGGAGACTCCCCCGACTCATACTACTGGTCTGGTCGGTCTCC CTCTTCCTCCTACTGTTCCACAAGGGACCCCCGTCGGTGTGGATACACACCGTCCACGACTTCCTCTTAC CGGGGTACCGGAGACTGGGGGACACGGACTGGATGTCGATGGACTCGGTACACCTGGACCACTTCCTGGA CTTGAGACCGGACTAACCCCGGGACGACCACACGTCCCTCCCGTCGGACCGGTTCCTCTTCTGGGTCTGG GACGTGTTCAAGTAGGACGACAAACGACACAAACTACTCCCGTTCTCGACCGTGAGACTTTGGTTCTTGT CGGACTACGTCCTGTCCCTACGACGGAGACGGTCCCGGACCGGGTTCTACGTGTGACACTTACCGATACA CTTGTCCTCGGACGGACCGGACTAACCGACGGTGTCCTTCAGACACATGACCGTACACTAACCGTACCCG TGGTGGGGACTCCACGTGTCGTAGAAGGACCTCCCGGTGTGGAAGGACCAGTCCTTGGTGTCCGTCCGGT CGGACCTCTAGTCGGGGTAGTGGAAGGACTGACGGGTCTGGGACGACTACCTGGACCCGGTCAAGGACGA CAAGACGGTGTAGTCGTCGGTGGTCGTACTACCGTACCTCCGGATACACTTCCACCTGTCGACGGGACTC CTCGGGGTCGACTCCTACTTCTTGTTACTCCTCCGACTCCTGATACTACTACTGGACTGACTGAGACTCT ACCTACACCACTCCAAACTACTACTGTTGTCGGGGTCGAAGTAGGTCTAGTCCAGACACCGGTTCTTCGT GGGGTTCTGGACCCACGTGATGTAACGACGACTCCTCCTCCTGACCCTGATACGGGGGGACCACGACCGG GGACTACTGTCCTCGATGTTCTCGGTCATGGACTTGTTACCGGGGGTCTCCTAACCGTCCTTCATGTTCT TCCAGTCCAAGTACCGGATGTGACTACTTTGGAAGTTCTGGTCCCTCCGGTAGGTCGTACTCAGACCGTA GGACCCGGGGGACGACATACCCCTCCACCCCCTGTGGGACGACTAGTAGAAGTTCTTGGTCCGGTCGTCC GGGATGTTGTAGATGGGGGTACCGTAGTGACTACACTCCGGGGACATGTCGTCCTCCGACGGGTTCCCCC ACTTCGTGGACTTCCTGAAGGGGTAGGACGGACCCCTCTAGAAGTTCATGTTCACCTGACACTGACACCT CCTACCGGGGTGGTTCAGACTGGGGTCCACGGACTGGTCTATGATGTCGTCGAAACACTTGTACCTCTCC CTGGACCGGAGACCGGACTAACCGGGGGACGACTAGACGATGTTCCTCAGACACCTGGTCTCCCCGTTGG TCTAGTACAGACTGTTCTCCTTACACTAGGACAAGAGACACAAACTACTCTTGTCCTCGACCATGGACTG ACTCTTGTAGGTCTCCAAGGACGGGTTGGGACGACCCCACGTCGACCTCCTGGGACTCAAGGTCCGGTCG TTGTAGTACGTGTCGTAGTTACCGATACACAAACTGTCGGACGTCGACAGACACACGGACGTACTCCACC GGATGACCATGTAGGACTCGTAACCCCGGGTCTGACTGAAGGACAGACACAAGAAGAGACCGATGTGGAA GTTCGTGTTCTACCACATACTCCTGTGGGACTGGGACAAGGGGAAGAGACCCCTCTGACACAAGTACTCG TACCTCTTGGGACCGGACACCTAAGACCCGACGGTGTTGAGACTGAAGTCCTTGTCCCCGTACTGACGGG ACGACTTTCAGAGGTCGACACTGTTCTTGTGACCCCTGATGATACTCCTGTCGATACTCCTGTAGAGACG GATGGACGACTCGTTCTTGTTACGGTAACTCGGGTCCTCGAAGTCGGTCTTACGGTGATTACACAGATTG TTGTCGTTGTGGTCGTTACTGTCGTTACACAGAGGGGGTCACGACTTCTCCGTGGTCTCCCTCTAGTGGT CCTGGTGGGACGTCAGACTGGTCCTCCTCTAACTGATACTACTGTGGTAGAGACACCTCTACTTCTTCCT CCTGAAACTGTAGATGCTGCTCCTGCTCTTGGTCTCGGGGTCCTCGAAGGTCTTCTTCTGGTCCGTGATG AAGTAACGACGACACCTCTCCGACACCCTGATACCGTACTCGTCGTCGGGGGTACACGACTCCTTGTCCC GGGTCAGACCGAGACACGGGGTCAAGTTCTTCCACCACAAGGTCCTCAAGTGACTACCGTCGAAGTGGGT CGGGGACATGTCTCCCCTCGACTTACTCGTGGACCCGGACGACCCGGGGATGTAGTCCCGACTCCACCTC CTGTTGTAGTACCACTGGAAGTCCTTGGTCCGGTCGTCCGGGATGTCGAAGATGTCGTCGGACTAGTCGA TACTCCTCCTGGTCTCCGTCCCCCGACTCGGGTCCTTCTTGAAACACTTCGGGTTACTTTGGTTCTGGAT GAAGACCTTCCACGTCGTGGTGTACCGGGGGTGGTTCCTACTCAAACTGACGTTCCGGACCCGGATGAAG AGACTACACCTGGACCTCTTCCTACACGTGAGACCGGACTAACCGGGGGACGACCACACGGTGTGGTTGT GGGACTTGGGACGGGTACCGTCCGTCCACTGACACGTCCTCAAACGGGACAAGAAGTGGTAGAAACTACT TTGGTTCTCGACCATGAAGTGACTCTTGTACCTCTCCTTGACGTCCCGGGGGACGTTGTAGGTCTACCTC CTGGGGTGGAAGTTCCTCTTGATGTCCAAGGTACGGTAGTTACCGATGTAGTACCTGTGGGACGGACCGG ACCACTACCGGGTCCTGGTCTCCTAGTCCACCATGGACGACTCGTACCCGTCGTTACTCTTGTAGGTGTC GTAGGTGAAGAGACCGGTACACAAGTGACACTCCTTCTTCCTCCTCATGTTCTACCGGGACATGTTGGAC ATGGGACCCCACAAACTCTGACACCTCTACGACGGGTCGTTCCGACCGTAGACCTCCCACCTCACGGACT AACCCCTCGTGGACGTACGACCGTACTCGTGGGACAAGGACCACATGTCGTTGTTCACGGTCTGGGGGGA CCCGTACCGGAGACCGGTGTAGTCCCTGAAGGTCTAGTGACGGAGACCGGTCATACCGGTCACCCGGGGG TTCGACCGGTCCGACGTGATGAGACCGTCGTAGTTACGGACCTCGTGGTTCCTCGGGAAGTCGACCTAGT TCCACCTGGACGACCGGGGGTACTAGTAGGTACCGTAGTTCTGGGTCCCCCGGTCCGTCTTCAAGTCGTC GGACATGTAGTCGGTCAAGTAGTAGTACATGTCGGACCTACCGTTCTTCACCGTCTGGATGTCCCCGTTG TCGTGACCGTGGGACTACCACAAGAAACCGTTACACCTGTCGAGACCGTAGTTCGTGTTGTAGAAGTTGG GGGGGTAGTAACGGTCTATGTAGTCCGACGTGGGGTGGGTGATGTCGTAGTCCTCGTGGGACTCCTACCT CGACTACCCGACACTGGACTTGTCGACGTCGTACGGGGACCCGTACCTCTCGTTCCGGTAGAGACTACGG GTCTAGTGACGGTCGTCGATGAAGTGGTTGTACAAACGGTGGACCTCGGGGTCGTTCCGGTCCGACGTGG ACGTCCCGTCCTCGTTACGGACCTCCGGGGTCCAGTTGTTGGGGTTCCTCACCGACGTCCACCTGAAGGT CTTCTGGTACTTCCACTGACCCCACTGGTGGGTCCCCCACTTCTCGGACGACTGGTCGTACATACACTTC CTCAAGGACTAGTCGTCGTCGGTCCTACCGGTGGTCACCTGGGACAAGAAGGTCTTACCGTTCCACTTCC ACAAGGTCCCGTTGGTCCTGTCGAAGTGGGGACACCACTTGTCGGACCTGGGGGGGGACGACTGGTCTAT GGACTCCTAAGTGGGGGTCTCGACCCACGTGGTCTAACGGGACTCCTACCTCCACGACCCGACACTCCGG GTCCTGGACATGACT
SEQ ID NO: 21 예시된 FVIII 폴리펩티드(N6)
길이: 1670; 분자 유형: AA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..1670; MOL_TYPE, 단백질; 유기체, 호모 사피엔스
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLRLNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY
SEQ ID NO: 22 예시된 FVIII 폴리펩티드(V3)
길이: 1474; 분자 유형: AA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..1474; MOL_TYPE, 단백질; 유기체, 호모 사피엔스
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLF
VEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQR
EKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQT
LHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMG
TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPE
EPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLA
PDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASR
PYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMER
DLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQAS
NIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMS
MENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNATNVSN
NSNTSNDSNVSPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHY
FIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVE
DNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYF
SDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQME
DPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNL
YPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAP
KLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGN
STGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDA
QITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVK
EFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEA
QDLY
SEQ ID NO: 23 예시된 WPRE 성분(mWPRE)
길이: 600; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..600; mol_type, 할당되지 않은 DNA; 유기체, Woodchuck 간염 바이러스
1 GGGCCCAATC AACCTCTGGA TTACAAAATT TGTGAAAGAT TGACTGGTAT TCTTAACTAT
61 GTTGCTCCTT TTACGCTATG TGGATACGCT GCTTTAATGC CTTTGTATCA TGCTATTGCT
121 TCCCGTATGG CTTTCATTTT CTCCTCCTTG TATAAATCCT GGTTGCTGTC TCTTTATGAG
181 GAGTTGTGGC CCGTTGTCAG GCAACGTGGC GTGGTGTGCA CTGTGTTTGC TGACGCAACC
241 CCCACTGGTT GGGGCATTGC CACCACCTGT CAGCTCCTTT CCGGGACTTT CGCTTTCCCC
301 CTCCCTATTG CCACGGCGGA ACTCATCGCC GCCTGCCTTG CCCGCTGCTG GACAGGGGCT
361 CGGCTGTTGG GCACTGACAA TTCCGTGGTG TTGTCGGGGA AATCATCGTC CTTTCCTTGG
421 CTGCTCGCCT GTGTTGCCAC CTGGATTCTG CGCGGGACGT CCTTCTGCTA CGTCCCTTCG
481 GCCCTCAATC CAGCGGACCT TCCTTCCCGC GGCCTGCTGC CGGCTCTGCG GCCTCTTCCG
541 CGTCTTCGCC TTCGCCCTCA GACGAGTCGG ATCTCCCTTT GGGCCGCCTC CCCGCAAGCT
SEQ ID NO: 24 도 3에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-hCEF-soA1AT 플라스미드(pDNA1 pGM407)
길이: 7349; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..7349; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM407; 유기체, 합성 구조물
1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
61 TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTTGGGCAAG TAGGGCAGGC GGTGGGTACG CAATGGGGGC GGCTACCTCA
1201 GCACTAAATA GGAGACAATT AGACCAATTT GAGAAAATAC GACTTCGCCC GAACGGAAAG
1261 AAAAAGTACC AAATTAAACA TTTAATATGG GCAGGCAAGG AGATGGAGCG CTTCGGCCTC
1321 CATGAGAGGT TGTTGGAGAC AGAGGAGGGG TGTAAAAGAA TCATAGAAGT CCTCTACCCC
1381 CTAGAACCAA CAGGATCGGA GGGCTTAAAA AGTCTGTTCA ATCTTGTGTG CGTGCTATAT
1441 TGCTTGCACA AGGAACAGAA AGTGAAAGAC ACAGAGGAAG CAGTAGCAAC AGTAAGACAA
1501 CACTGCCATC TAGTGGAAAA AGAAAAAAGT GCAACAGAGA CATCTAGTGG ACAAAAGAAA
1561 AATGACAAGG GAATAGCAGC GCCACCTGGT GGCAGTCAGA ATTTTCCAGC GCAACAACAA
1621 GGAAATGCCT GGGTACATGT ACCCTTGTCA CCGCGCACCT TAAATGCGTG GGTAAAAGCA
1681 GTAGAGGAGA AAAAATTTGG AGCAGAAATA GTACCCATTT TTTTGTTTCA AGCCCTATCG
1741 AATTCCCGTT TGTGCTAGGG TTCTTAGGCT TCTTGGGGGC TGCTGGAACT GCAATGGGAG
1801 CAGCGGCGAC AGCCCTGACG GTCCAGTCTC AGCATTTGCT TGCTGGGATA CTGCAGCAGC
1861 AGAAGAATCT GCTGGCGGCT GTGGAGGCTC AACAGCAGAT GTTGAAGCTG ACCATTTGGG
1921 GTGTTAAAAA CCTCAATGCC CGCGTCACAG CCCTTGAGAA GTACCTAGAG GATCAGGCAC
1981 GACTAAACTC CTGGGGGTGC GCATGGAAAC AAGTATGTCA TACCACAGTG GAGTGGCCCT
2041 GGACAAATCG GACTCCGGAT TGGCAAAATA TGACTTGGTT GGAGTGGGAA AGACAAATAG
2101 CTGATTTGGA AAGCAACATT ACGAGACAAT TAGTGAAGGC TAGAGAACAA GAGGAAAAGA
2161 ATCTAGATGC CTATCAGAAG TTAACTAGTT GGTCAGATTT CTGGTCTTGG TTCGATTTCT
2221 CAAAATGGCT TAACATTTTA AAAATGGGAT TTTTAGTAAT AGTAGGAATA ATAGGGTTAA
2281 GATTACTTTA CACAGTATAT GGATGTATAG TGAGGGTTAG GCAGGGATAT GTTCCTCTAT
2341 CTCCACAGAT CCATATCCGC GGCAATTTTA AAAGAAAGGG AGGAATAGGG GGACAGACTT
2401 CAGCAGAGAG ACTAATTAAT ATAATAACAA CACAATTAGA AATACAACAT TTACAAACCA
2461 AAATTCAAAA AATTTTAAAT TTTAGAGCCG CGGAGATCTG TTACATAACT TATGGTAAAT
2521 GGCCTGCCTG GCTGACTGCC CAATGACCCC TGCCCAATGA TGTCAATAAT GATGTATGTT
2581 CCCATGTAAT GCCAATAGGG ACTTTCCATT GATGTCAATG GGTGGAGTAT TTATGGTAAC
2641 TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA TATGCCAAGT ATGCCCCCTA TTGATGTCAA
2701 TGATGGTAAA TGGCCTGCCT GGCATTATGC CCAGTACATG ACCTTATGGG ACTTTCCTAC
2761 TTGGCAGTAC ATCTATGTAT TAGTCATTGC TATTACCATG GGAATTCACT AGTGGAGAAG
2821 AGCATGCTTG AGGGCTGAGT GCCCCTCAGT GGGCAGAGAG CACATGGCCC ACAGTCCCTG
2881 AGAAGTTGGG GGGAGGGGTG GGCAATTGAA CTGGTGCCTA GAGAAGGTGG GGCTTGGGTA
2941 AACTGGGAAA GTGATGTGGT GTACTGGCTC CACCTTTTTC CCCAGGGTGG GGGAGAACCA
3001 TATATAAGTG CAGTAGTCTC TGTGAACATT CAAGCTTCTG CCTTCTCCCT CCTGTGAGTT
3061 TGCTAGCCAC CATGCCCAGC TCTGTGTCCT GGGGCATTCT GCTGCTGGCT GGCCTGTGCT
3121 GTCTGGTGCC TGTGTCCCTG GCTGAGGACC CTCAGGGGGA TGCTGCCCAG AAAACAGACA
3181 CCTCCCACCA TGACCAGGAC CACCCCACCT TCAACAAGAT CACCCCCAAC CTGGCAGAGT
3241 TTGCCTTCAG CCTGTACAGA CAGCTGGCCC ACCAGAGCAA CAGCACCAAC ATCTTTTTCA
3301 GCCCTGTGTC CATTGCCACA GCCTTTGCCA TGCTGAGCCT GGGCACCAAG GCTGACACCC
3361 ATGATGAGAT CCTGGAAGGC CTGAACTTCA ACCTGACAGA GATCCCTGAG GCCCAGATCC
3421 ATGAGGGCTT CCAGGAACTG CTGAGAACCC TGAACCAGCC AGACAGCCAG CTGCAGCTGA
3481 CAACAGGCAA TGGGCTGTTC CTGTCTGAGG GCCTGAAGCT GGTGGACAAG TTTCTGGAAG
3541 ATGTGAAGAA GCTGTACCAC TCTGAGGCCT TCACAGTGAA CTTTGGGGAC ACAGAAGAGG
3601 CCAAGAAACA GATCAATGAC TATGTGGAAA AGGGCACCCA GGGCAAGATT GTGGACCTTG
3661 TGAAAGAGCT GGACAGGGAC ACTGTGTTTG CCCTTGTGAA CTACATCTTC TTCAAGGGCA
3721 AGTGGGAGAG GCCCTTTGAA GTGAAGGACA CTGAGGAAGA GGACTTCCAT GTGGACCAAG
3781 TGACCACAGT GAAGGTGCCA ATGATGAAGA GACTGGGGAT GTTCAATATC CAGCACTGCA
3841 AGAAACTGAG CAGCTGGGTG CTGCTGATGA AGTACCTGGG CAATGCTACA GCCATATTCT
3901 TTCTGCCTGA TGAGGGCAAG CTGCAGCACC TGGAAAATGA GCTGACCCAT GACATCATCA
3961 CCAAATTTCT GGAAAATGAG GACAGAAGAT CTGCCAGCCT GCATCTGCCC AAGCTGAGCA
4021 TCACAGGCAC ATATGACCTG AAGTCTGTGC TGGGACAGCT GGGAATCACC AAGGTGTTCA
4081 GCAATGGGGC AGACCTGAGT GGAGTGACAG AGGAAGCCCC TCTGAAGCTG TCCAAGGCTG
4141 TGCACAAGGC AGTGCTGACC ATTGATGAGA AGGGCACAGA GGCTGCTGGG GCCATGTTTC
4201 TGGAAGCCAT CCCCATGTCC ATCCCCCCAG AAGTGAAGTT CAACAAGCCC TTTGTGTTCC
4261 TGATGATTGA GCAGAACACC AAGAGCCCCC TGTTCATGGG CAAGGTTGTG AACCCCACCC
4321 AGAAATGAGG GCCCAATCAA CCTCTGGATT ACAAAATTTG TGAAAGATTG ACTGGTATTC
4381 TTAACTATGT TGCTCCTTTT ACGCTATGTG GATACGCTGC TTTAATGCCT TTGTATCATG
4441 CTATTGCTTC CCGTATGGCT TTCATTTTCT CCTCCTTGTA TAAATCCTGG TTGCTGTCTC
4501 TTTATGAGGA GTTGTGGCCC GTTGTCAGGC AACGTGGCGT GGTGTGCACT GTGTTTGCTG
4561 ACGCAACCCC CACTGGTTGG GGCATTGCCA CCACCTGTCA GCTCCTTTCC GGGACTTTCG
4621 CTTTCCCCCT CCCTATTGCC ACGGCGGAAC TCATCGCCGC CTGCCTTGCC CGCTGCTGGA
4681 CAGGGGCTCG GCTGTTGGGC ACTGACAATT CCGTGGTGTT GTCGGGGAAA TCATCGTCCT
4741 TTCCTTGGCT GCTCGCCTGT GTTGCCACCT GGATTCTGCG CGGGACGTCC TTCTGCTACG
4801 TCCCTTCGGC CCTCAATCCA GCGGACCTTC CTTCCCGCGG CCTGCTGCCG GCTCTGCGGC
4861 CTCTTCCGCG TCTTCGCCTT CGCCCTCAGA CGAGTCGGAT CTCCCTTTGG GCCGCCTCCC
4921 CGCAAGCTTC GCACTTTTTA AAAGAAAAGG GAGGACTGGA TGGGATTTAT TACTCCGATA
4981 GGACGCTGGC TTGTAACTCA GTCTCTTACT AGGAGACCAG CTTGAGCCTG GGTGTTCGCT
5041 GGTTAGCCTA ACCTGGTTGG CCACCAGGGG TAAGGACTCC TTGGCTTAGA AAGCTAATAA
5101 ACTTGCCTGC ATTAGAGCTC TTACGCGTCC CGGGCTCGAG ATCCGCATCT CAATTAGTCA
5161 GCAACCATAG TCCCGCCCCT AACTCCGCCC ATCCCGCCCC TAACTCCGCC CAGTTCCGCC
5221 CATTCTCCGC CCCATGGCTG ACTAATTTTT TTTATTTATG CAGAGGCCGA GGCCGCCTCG
5281 GCCTCTGAGC TATTCCAGAA GTAGTGAGGA GGCTTTTTTG GAGGCCTAGG CTTTTGCAAA
5341 AAGCTAACTT GTTTATTGCA GCTTATAATG GTTACAAATA AAGCAATAGC ATCACAAATT
5401 TCACAAATAA AGCATTTTTT TCACTGCATT CTAGTTGTGG TTTGTCCAAA CTCATCAATG
5461 TATCTTATCA TGTCTGTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT
5521 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA
5581 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC
5641 CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA AAAATCGACG
5701 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT TTCCCCCTGG
5761 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT
5821 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT
5881 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG
5941 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT TATCGCCACT
6001 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG CTACAGAGTT
6061 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT
6121 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC
6181 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC
6241 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG AAAACTCACG
6301 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC TTTTAAATTA
6361 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTAGAA
6421 AAACTCATCG AGCATCAAAT GAAACTGCAA TTTATTCATA TCAGGATTAT CAATACCATA
6481 TTTTTGAAAA AGCCGTTTCT GTAATGAAGG AGAAAACTCA CCGAGGCAGT TCCATAGGAT
6541 GGCAAGATCC TGGTATCGGT CTGCGATTCC GACTCGTCCA ACATCAATAC AACCTATTAA
6601 TTTCCCCTCG TCAAAAATAA GGTTATCAAG TGAGAAATCA CCATGAGTGA CGACTGAATC
6661 CGGTGAGAAT GGCAACAGCT TATGCATTTC TTTCCAGACT TGTTCAACAG GCCAGCCATT
6721 ACGCTCGTCA TCAAAATCAC TCGCATCAAC CAAACCGTTA TTCATTCGTG ATTGCGCCTG
6781 AGCGAGACGA AATACGCGAT CGCTGTTAAA AGGACAATTA CAAACAGGAA TCGAATGCAA
6841 CCGGCGCAGG AACACTGCCA GCGCATCAAC AATATTTTCA CCTGAATCAG GATATTCTTC
6901 TAATACCTGG AATGCTGTTT TTCCGGGGAT CGCAGTGGTG AGTAACCATG CATCATCAGG
6961 AGTACGGATA AAATGCTTGA TGGTCGGAAG AGGCATAAAT TCCGTCAGCC AGTTTAGTCT
7021 GACCATCTCA TCTGTAACAT CATTGGCAAC GCTACCTTTG CCATGTTTCA GAAACAACTC
7081 TGGCGCATCG GGCTTCCCAT ACAATCGATA GATTGTCGCA CCTGATTGCC CGACATTATC
7141 GCGAGCCCAT TTATACCCAT ATAAATCAGC ATCCATGTTG GAATTTAATC GCGGCCTAGA
7201 GCAAGACGTT TCCCGTTGAA TATGGCTCAT AACACCCCTT GTATTACTGT TTATGTAAGC
7261 AGACAGTTTT ATTGTTCATG ATGATATATT TTTATCTTGT GCAATGTAAC ATCAGAGATT
7321 TTGAGACACA ACAATTGGTC GACGGATCC
SEQ ID NO: 25 도 4a에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3 플라스미드(pDNA1 pGM411)
길이: 10812; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..10812; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM411; 유기체, 합성 구조물
1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
61 TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC AATGGGGGCG GCTACCTCAG
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA TCTTGTGTGC GTGCTATATT
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA GAGGATCAGG CACGACTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA ATAATAGGGT TAAGATTACT
2281 TTACACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA TATGTTCCTC TATCTCCACA
2341 GATCCATATC CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA CATTTACAAA CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTCAATATTG GCCATTAGCC ATATTATTCA
2521 TTGGTTATAT AGCATAAATC AATATTGGCT ATTGGCCATT GCATACGTTG TATCTATATC
2581 ATAATATGTA CATTTATATT GGCTCATGTC CAATATGACC GCCATGTTGG CATTGATTAT
2641 TGACTAGTTA TTAATAGTAA TCAATTACGG GGTCATTAGT TCATAGCCCA TATATGGAGT
2701 TCCGCGTTAC ATAACTTACG GTAAATGGCC CGCCTGGCTG ACCGCCCAAC GACCCCCGCC
2761 CATTGACGTC AATAATGACG TATGTTCCCA TAGTAACGCC AATAGGGACT TTCCATTGAC
2821 GTCAATGGGT GGAGTATTTA CGGTAAACTG CCCACTTGGC AGTACATCAA GTGTATCATA
2881 TGCCAAGTCC GCCCCCTATT GACGTCAATG ACGGTAAATG GCCCGCCTGG CATTATGCCC
2941 AGTACATGAC CTTACGGGAC TTTCCTACTT GGCAGTACAT CTACGTATTA GTCATCGCTA
3001 TTACCATGGT GATGCGGTTT TGGCAGTACA CCAATGGGCG TGGATAGCGG TTTGACTCAC
3061 GGGGATTTCC AAGTCTCCAC CCCATTGACG TCAATGGGAG TTTGTTTTGG CACCAAAATC
3121 AACGGGACTT TCCAAAATGT CGTAATAACC CCGCCCCGTT GACGCAAATG GGCGGTAGGC
3181 GTGTACGGTG GGAGGTCTAT ATAAGCAGAG CTCGTTTAGT GAACCGTCAG ATCACTAGAA
3241 GCTTTATTGC GGTAGTTTAT CACAGTTAAA TTGCTAACGC AGTCAGTGCT TCTGACACAA
3301 CAGTCTCGAA CTTAAGCTGC AGAAGTTGGT CGTGAGGCAC TGGGCAGGCT AGCCACCAAT
3361 GCAGATTGAG CTGAGCACCT GCTTCTTCCT GTGCCTGCTG AGGTTCTGCT TCTCTGCCAC
3421 CAGGAGATAC TACCTGGGGG CTGTGGAGCT GAGCTGGGAC TACATGCAGT CTGACCTGGG
3481 GGAGCTGCCT GTGGATGCCA GGTTCCCCCC CAGAGTGCCC AAGAGCTTCC CCTTCAACAC
3541 CTCTGTGGTG TACAAGAAGA CCCTGTTTGT GGAGTTCACT GACCACCTGT TCAACATTGC
3601 CAAGCCCAGG CCCCCCTGGA TGGGCCTGCT GGGCCCCACC ATCCAGGCTG AGGTGTATGA
3661 CACTGTGGTG ATCACCCTGA AGAACATGGC CAGCCACCCT GTGAGCCTGC ATGCTGTGGG
3721 GGTGAGCTAC TGGAAGGCCT CTGAGGGGGC TGAGTATGAT GACCAGACCA GCCAGAGGGA
3781 GAAGGAGGAT GACAAGGTGT TCCCTGGGGG CAGCCACACC TATGTGTGGC AGGTGCTGAA
3841 GGAGAATGGC CCCATGGCCT CTGACCCCCT GTGCCTGACC TACAGCTACC TGAGCCATGT
3901 GGACCTGGTG AAGGACCTGA ACTCTGGCCT GATTGGGGCC CTGCTGGTGT GCAGGGAGGG
3961 CAGCCTGGCC AAGGAGAAGA CCCAGACCCT GCACAAGTTC ATCCTGCTGT TTGCTGTGTT
4021 TGATGAGGGC AAGAGCTGGC ACTCTGAAAC CAAGAACAGC CTGATGCAGG ACAGGGATGC
4081 TGCCTCTGCC AGGGCCTGGC CCAAGATGCA CACTGTGAAT GGCTATGTGA ACAGGAGCCT
4141 GCCTGGCCTG ATTGGCTGCC ACAGGAAGTC TGTGTACTGG CATGTGATTG GCATGGGCAC
4201 CACCCCTGAG GTGCACAGCA TCTTCCTGGA GGGCCACACC TTCCTGGTCA GGAACCACAG
4261 GCAGGCCAGC CTGGAGATCA GCCCCATCAC CTTCCTGACT GCCCAGACCC TGCTGATGGA
4321 CCTGGGCCAG TTCCTGCTGT TCTGCCACAT CAGCAGCCAC CAGCATGATG GCATGGAGGC
4381 CTATGTGAAG GTGGACAGCT GCCCTGAGGA GCCCCAGCTG AGGATGAAGA ACAATGAGGA
4441 GGCTGAGGAC TATGATGATG ACCTGACTGA CTCTGAGATG GATGTGGTGA GGTTTGATGA
4501 TGACAACAGC CCCAGCTTCA TCCAGATCAG GTCTGTGGCC AAGAAGCACC CCAAGACCTG
4561 GGTGCACTAC ATTGCTGCTG AGGAGGAGGA CTGGGACTAT GCCCCCCTGG TGCTGGCCCC
4621 TGATGACAGG AGCTACAAGA GCCAGTACCT GAACAATGGC CCCCAGAGGA TTGGCAGGAA
4681 GTACAAGAAG GTCAGGTTCA TGGCCTACAC TGATGAAACC TTCAAGACCA GGGAGGCCAT
4741 CCAGCATGAG TCTGGCATCC TGGGCCCCCT GCTGTATGGG GAGGTGGGGG ACACCCTGCT
4801 GATCATCTTC AAGAACCAGG CCAGCAGGCC CTACAACATC TACCCCCATG GCATCACTGA
4861 TGTGAGGCCC CTGTACAGCA GGAGGCTGCC CAAGGGGGTG AAGCACCTGA AGGACTTCCC
4921 CATCCTGCCT GGGGAGATCT TCAAGTACAA GTGGACTGTG ACTGTGGAGG ATGGCCCCAC
4981 CAAGTCTGAC CCCAGGTGCC TGACCAGATA CTACAGCAGC TTTGTGAACA TGGAGAGGGA
5041 CCTGGCCTCT GGCCTGATTG GCCCCCTGCT GATCTGCTAC AAGGAGTCTG TGGACCAGAG
5101 GGGCAACCAG ATCATGTCTG ACAAGAGGAA TGTGATCCTG TTCTCTGTGT TTGATGAGAA
5161 CAGGAGCTGG TACCTGACTG AGAACATCCA GAGGTTCCTG CCCAACCCTG CTGGGGTGCA
5221 GCTGGAGGAC CCTGAGTTCC AGGCCAGCAA CATCATGCAC AGCATCAATG GCTATGTGTT
5281 TGACAGCCTG CAGCTGTCTG TGTGCCTGCA TGAGGTGGCC TACTGGTACA TCCTGAGCAT
5341 TGGGGCCCAG ACTGACTTCC TGTCTGTGTT CTTCTCTGGC TACACCTTCA AGCACAAGAT
5401 GGTGTATGAG GACACCCTGA CCCTGTTCCC CTTCTCTGGG GAGACTGTGT TCATGAGCAT
5461 GGAGAACCCT GGCCTGTGGA TTCTGGGCTG CCACAACTCT GACTTCAGGA ACAGGGGCAT
5521 GACTGCCCTG CTGAAAGTCT CCAGCTGTGA CAAGAACACT GGGGACTACT ATGAGGACAG
5581 CTATGAGGAC ATCTCTGCCT ACCTGCTGAG CAAGAACAAT GCCATTGAGC CCAGGAGCTT
5641 CAGCCAGAAT GCCACTAATG TGTCTAACAA CAGCAACACC AGCAATGACA GCAATGTGTC
5701 TCCCCCAGTG CTGAAGAGGC ACCAGAGGGA GATCACCAGG ACCACCCTGC AGTCTGACCA
5761 GGAGGAGATT GACTATGATG ACACCATCTC TGTGGAGATG AAGAAGGAGG ACTTTGACAT
5821 CTACGACGAG GACGAGAACC AGAGCCCCAG GAGCTTCCAG AAGAAGACCA GGCACTACTT
5881 CATTGCTGCT GTGGAGAGGC TGTGGGACTA TGGCATGAGC AGCAGCCCCC ATGTGCTGAG
5941 GAACAGGGCC CAGTCTGGCT CTGTGCCCCA GTTCAAGAAG GTGGTGTTCC AGGAGTTCAC
6001 TGATGGCAGC TTCACCCAGC CCCTGTACAG AGGGGAGCTG AATGAGCACC TGGGCCTGCT
6061 GGGCCCCTAC ATCAGGGCTG AGGTGGAGGA CAACATCATG GTGACCTTCA GGAACCAGGC
6121 CAGCAGGCCC TACAGCTTCT ACAGCAGCCT GATCAGCTAT GAGGAGGACC AGAGGCAGGG
6181 GGCTGAGCCC AGGAAGAACT TTGTGAAGCC CAATGAAACC AAGACCTACT TCTGGAAGGT
6241 GCAGCACCAC ATGGCCCCCA CCAAGGATGA GTTTGACTGC AAGGCCTGGG CCTACTTCTC
6301 TGATGTGGAC CTGGAGAAGG ATGTGCACTC TGGCCTGATT GGCCCCCTGC TGGTGTGCCA
6361 CACCAACACC CTGAACCCTG CCCATGGCAG GCAGGTGACT GTGCAGGAGT TTGCCCTGTT
6421 CTTCACCATC TTTGATGAAA CCAAGAGCTG GTACTTCACT GAGAACATGG AGAGGAACTG
6481 CAGGGCCCCC TGCAACATCC AGATGGAGGA CCCCACCTTC AAGGAGAACT ACAGGTTCCA
6541 TGCCATCAAT GGCTACATCA TGGACACCCT GCCTGGCCTG GTGATGGCCC AGGACCAGAG
6601 GATCAGGTGG TACCTGCTGA GCATGGGCAG CAATGAGAAC ATCCACAGCA TCCACTTCTC
6661 TGGCCATGTG TTCACTGTGA GGAAGAAGGA GGAGTACAAG ATGGCCCTGT ACAACCTGTA
6721 CCCTGGGGTG TTTGAGACTG TGGAGATGCT GCCCAGCAAG GCTGGCATCT GGAGGGTGGA
6781 GTGCCTGATT GGGGAGCACC TGCATGCTGG CATGAGCACC CTGTTCCTGG TGTACAGCAA
6841 CAAGTGCCAG ACCCCCCTGG GCATGGCCTC TGGCCACATC AGGGACTTCC AGATCACTGC
6901 CTCTGGCCAG TATGGCCAGT GGGCCCCCAA GCTGGCCAGG CTGCACTACT CTGGCAGCAT
6961 CAATGCCTGG AGCACCAAGG AGCCCTTCAG CTGGATCAAG GTGGACCTGC TGGCCCCCAT
7021 GATCATCCAT GGCATCAAGA CCCAGGGGGC CAGGCAGAAG TTCAGCAGCC TGTACATCAG
7081 CCAGTTCATC ATCATGTACA GCCTGGATGG CAAGAAGTGG CAGACCTACA GGGGCAACAG
7141 CACTGGCACC CTGATGGTGT TCTTTGGCAA TGTGGACAGC TCTGGCATCA AGCACAACAT
7201 CTTCAACCCC CCCATCATTG CCAGATACAT CAGGCTGCAC CCCACCCACT ACAGCATCAG
7261 GAGCACCCTG AGGATGGAGC TGATGGGCTG TGACCTGAAC AGCTGCAGCA TGCCCCTGGG
7321 CATGGAGAGC AAGGCCATCT CTGATGCCCA GATCACTGCC AGCAGCTACT TCACCAACAT
7381 GTTTGCCACC TGGAGCCCCA GCAAGGCCAG GCTGCACCTG CAGGGCAGGA GCAATGCCTG
7441 GAGGCCCCAG GTCAACAACC CCAAGGAGTG GCTGCAGGTG GACTTCCAGA AGACCATGAA
7501 GGTGACTGGG GTGACCACCC AGGGGGTGAA GAGCCTGCTG ACCAGCATGT ATGTGAAGGA
7561 GTTCCTGATC AGCAGCAGCC AGGATGGCCA CCAGTGGACC CTGTTCTTCC AGAATGGCAA
7621 GGTGAAGGTG TTCCAGGGCA ACCAGGACAG CTTCACCCCT GTGGTGAACA GCCTGGACCC
7681 CCCCCTGCTG ACCAGATACC TGAGGATTCA CCCCCAGAGC TGGGTGCACC AGATTGCCCT
7741 GAGGATGGAG GTGCTGGGCT GTGAGGCCCA GGACCTGTAC TGAGCGGCCG CGGGCCCAAT
7801 CAACCTCTGG ATTACAAAAT TTGTGAAAGA TTGACTGGTA TTCTTAACTA TGTTGCTCCT
7861 TTTACGCTAT GTGGATACGC TGCTTTAATG CCTTTGTATC ATGCTATTGC TTCCCGTATG
7921 GCTTTCATTT TCTCCTCCTT GTATAAATCC TGGTTGCTGT CTCTTTATGA GGAGTTGTGG
7981 CCCGTTGTCA GGCAACGTGG CGTGGTGTGC ACTGTGTTTG CTGACGCAAC CCCCACTGGT
8041 TGGGGCATTG CCACCACCTG TCAGCTCCTT TCCGGGACTT TCGCTTTCCC CCTCCCTATT
8101 GCCACGGCGG AACTCATCGC CGCCTGCCTT GCCCGCTGCT GGACAGGGGC TCGGCTGTTG
8161 GGCACTGACA ATTCCGTGGT GTTGTCGGGG AAATCATCGT CCTTTCCTTG GCTGCTCGCC
8221 TGTGTTGCCA CCTGGATTCT GCGCGGGACG TCCTTCTGCT ACGTCCCTTC GGCCCTCAAT
8281 CCAGCGGACC TTCCTTCCCG CGGCCTGCTG CCGGCTCTGC GGCCTCTTCC GCGTCTTCGC
8341 CTTCGCCCTC AGACGAGTCG GATCTCCCTT TGGGCCGCCT CCCCGCAAGC TTCGCACTTT
8401 TTAAAAGAAA AGGGAGGACT GGATGGGATT TATTACTCCG ATAGGACGCT GGCTTGTAAC
8461 TCAGTCTCTT ACTAGGAGAC CAGCTTGAGC CTGGGTGTTC GCTGGTTAGC CTAACCTGGT
8521 TGGCCACCAG GGGTAAGGAC TCCTTGGCTT AGAAAGCTAA TAAACTTGCC TGCATTAGAG
8581 CTCTTACGCG TCCCGGGCTC GAGATCCGCA TCTCAATTAG TCAGCAACCA TAGTCCCGCC
8641 CCTAACTCCG CCCATCCCGC CCCTAACTCC GCCCAGTTCC GCCCATTCTC CGCCCCATGG
8701 CTGACTAATT TTTTTTATTT ATGCAGAGGC CGAGGCCGCC TCGGCCTCTG AGCTATTCCA
8761 GAAGTAGTGA GGAGGCTTTT TTGGAGGCCT AGGCTTTTGC AAAAAGCTAA CTTGTTTATT
8821 GCAGCTTATA ATGGTTACAA ATAAAGCAAT AGCATCACAA ATTTCACAAA TAAAGCATTT
8881 TTTTCACTGC ATTCTAGTTG TGGTTTGTCC AAACTCATCA ATGTATCTTA TCATGTCTGT
8941 CCGCTTCCTC GCTCACTGAC TCGCTGCGCT CGGTCGTTCG GCTGCGGCGA GCGGTATCAG
9001 CTCACTCAAA GGCGGTAATA CGGTTATCCA CAGAATCAGG GGATAACGCA GGAAAGAACA
9061 TGTGAGCAAA AGGCCAGCAA AAGGCCAGGA ACCGTAAAAA GGCCGCGTTG CTGGCGTTTT
9121 TCCATAGGCT CCGCCCCCCT GACGAGCATC ACAAAAATCG ACGCTCAAGT CAGAGGTGGC
9181 GAAACCCGAC AGGACTATAA AGATACCAGG CGTTTCCCCC TGGAAGCTCC CTCGTGCGCT
9241 CTCCTGTTCC GACCCTGCCG CTTACCGGAT ACCTGTCCGC CTTTCTCCCT TCGGGAAGCG
9301 TGGCGCTTTC TCATAGCTCA CGCTGTAGGT ATCTCAGTTC GGTGTAGGTC GTTCGCTCCA
9361 AGCTGGGCTG TGTGCACGAA CCCCCCGTTC AGCCCGACCG CTGCGCCTTA TCCGGTAACT
9421 ATCGTCTTGA GTCCAACCCG GTAAGACACG ACTTATCGCC ACTGGCAGCA GCCACTGGTA
9481 ACAGGATTAG CAGAGCGAGG TATGTAGGCG GTGCTACAGA GTTCTTGAAG TGGTGGCCTA
9541 ACTACGGCTA CACTAGAAGA ACAGTATTTG GTATCTGCGC TCTGCTGAAG CCAGTTACCT
9601 TCGGAAAAAG AGTTGGTAGC TCTTGATCCG GCAAACAAAC CACCGCTGGT AGCGGTGGTT
9661 TTTTTGTTTG CAAGCAGCAG ATTACGCGCA GAAAAAAAGG ATCTCAAGAA GATCCTTTGA
9721 TCTTTTCTAC GGGGTCTGAC GCTCAGTGGA ACGAAAACTC ACGTTAAGGG ATTTTGGTCA
9781 TGAGATTATC AAAAAGGATC TTCACCTAGA TCCTTTTAAA TTAAAAATGA AGTTTTAAAT
9841 CAATCTAAAG TATATATGAG TAAACTTGGT CTGACAGTTA GAAAAACTCA TCGAGCATCA
9901 AATGAAACTG CAATTTATTC ATATCAGGAT TATCAATACC ATATTTTTGA AAAAGCCGTT
9961 TCTGTAATGA AGGAGAAAAC TCACCGAGGC AGTTCCATAG GATGGCAAGA TCCTGGTATC
10021 GGTCTGCGAT TCCGACTCGT CCAACATCAA TACAACCTAT TAATTTCCCC TCGTCAAAAA
10081 TAAGGTTATC AAGTGAGAAA TCACCATGAG TGACGACTGA ATCCGGTGAG AATGGCAACA
10141 GCTTATGCAT TTCTTTCCAG ACTTGTTCAA CAGGCCAGCC ATTACGCTCG TCATCAAAAT
10201 CACTCGCATC AACCAAACCG TTATTCATTC GTGATTGCGC CTGAGCGAGA CGAAATACGC
10261 GATCGCTGTT AAAAGGACAA TTACAAACAG GAATCGAATG CAACCGGCGC AGGAACACTG
10321 CCAGCGCATC AACAATATTT TCACCTGAAT CAGGATATTC TTCTAATACC TGGAATGCTG
10381 TTTTTCCGGG GATCGCAGTG GTGAGTAACC ATGCATCATC AGGAGTACGG ATAAAATGCT
10441 TGATGGTCGG AAGAGGCATA AATTCCGTCA GCCAGTTTAG TCTGACCATC TCATCTGTAA
10501 CATCATTGGC AACGCTACCT TTGCCATGTT TCAGAAACAA CTCTGGCGCA TCGGGCTTCC
10561 CATACAATCG ATAGATTGTC GCACCTGATT GCCCGACATT ATCGCGAGCC CATTTATACC
10621 CATATAAATC AGCATCCATG TTGGAATTTA ATCGCGGCCT AGAGCAAGAC GTTTCCCGTT
10681 GAATATGGCT CATAACACCC CTTGTATTAC TGTTTATGTA AGCAGACAGT TTTATTGTTC
10741 ATGATGATAT ATTTTTATCT TGTGCAATGT AACATCAGAG ATTTTGAGAC ACAACAATTG
10801 GTCGACGGAT CC
SEQ ID NO: 26 도 4b에 정의된 F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3 플라스미드(pDNA1 pGM413)
길이: 10519; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..10519; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM413; 유기체, 합성 구조물
1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
61 TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC AATGGGGGCG GCTACCTCAG
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA TCTTGTGTGC GTGCTATATT
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA GAGGATCAGG CACGACTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA ATAATAGGGT TAAGATTACT
2281 TTACACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA TATGTTCCTC TATCTCCACA
2341 GATCCATATC CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA CATTTACAAA CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTGTTACATA ACTTATGGTA AATGGCCTGC
2521 CTGGCTGACT GCCCAATGAC CCCTGCCCAA TGATGTCAAT AATGATGTAT GTTCCCATGT
2581 AATGCCAATA GGGACTTTCC ATTGATGTCA ATGGGTGGAG TATTTATGGT AACTGCCCAC
2641 TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTATGCCCC CTATTGATGT CAATGATGGT
2701 AAATGGCCTG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT GGGACTTTCC TACTTGGCAG
2761 TACATCTATG TATTAGTCAT TGCTATTACC ATGGGAATTC ACTAGTGGAG AAGAGCATGC
2821 TTGAGGGCTG AGTGCCCCTC AGTGGGCAGA GAGCACATGG CCCACAGTCC CTGAGAAGTT
2881 GGGGGGAGGG GTGGGCAATT GAACTGGTGC CTAGAGAAGG TGGGGCTTGG GTAAACTGGG
2941 AAAGTGATGT GGTGTACTGG CTCCACCTTT TTCCCCAGGG TGGGGGAGAA CCATATATAA
3001 GTGCAGTAGT CTCTGTGAAC ATTCAAGCTT CTGCCTTCTC CCTCCTGTGA GTTTGCTAGC
3061 CACCAATGCA GATTGAGCTG AGCACCTGCT TCTTCCTGTG CCTGCTGAGG TTCTGCTTCT
3121 CTGCCACCAG GAGATACTAC CTGGGGGCTG TGGAGCTGAG CTGGGACTAC ATGCAGTCTG
3181 ACCTGGGGGA GCTGCCTGTG GATGCCAGGT TCCCCCCCAG AGTGCCCAAG AGCTTCCCCT
3241 TCAACACCTC TGTGGTGTAC AAGAAGACCC TGTTTGTGGA GTTCACTGAC CACCTGTTCA
3301 ACATTGCCAA GCCCAGGCCC CCCTGGATGG GCCTGCTGGG CCCCACCATC CAGGCTGAGG
3361 TGTATGACAC TGTGGTGATC ACCCTGAAGA ACATGGCCAG CCACCCTGTG AGCCTGCATG
3421 CTGTGGGGGT GAGCTACTGG AAGGCCTCTG AGGGGGCTGA GTATGATGAC CAGACCAGCC
3481 AGAGGGAGAA GGAGGATGAC AAGGTGTTCC CTGGGGGCAG CCACACCTAT GTGTGGCAGG
3541 TGCTGAAGGA GAATGGCCCC ATGGCCTCTG ACCCCCTGTG CCTGACCTAC AGCTACCTGA
3601 GCCATGTGGA CCTGGTGAAG GACCTGAACT CTGGCCTGAT TGGGGCCCTG CTGGTGTGCA
3661 GGGAGGGCAG CCTGGCCAAG GAGAAGACCC AGACCCTGCA CAAGTTCATC CTGCTGTTTG
3721 CTGTGTTTGA TGAGGGCAAG AGCTGGCACT CTGAAACCAA GAACAGCCTG ATGCAGGACA
3781 GGGATGCTGC CTCTGCCAGG GCCTGGCCCA AGATGCACAC TGTGAATGGC TATGTGAACA
3841 GGAGCCTGCC TGGCCTGATT GGCTGCCACA GGAAGTCTGT GTACTGGCAT GTGATTGGCA
3901 TGGGCACCAC CCCTGAGGTG CACAGCATCT TCCTGGAGGG CCACACCTTC CTGGTCAGGA
3961 ACCACAGGCA GGCCAGCCTG GAGATCAGCC CCATCACCTT CCTGACTGCC CAGACCCTGC
4021 TGATGGACCT GGGCCAGTTC CTGCTGTTCT GCCACATCAG CAGCCACCAG CATGATGGCA
4081 TGGAGGCCTA TGTGAAGGTG GACAGCTGCC CTGAGGAGCC CCAGCTGAGG ATGAAGAACA
4141 ATGAGGAGGC TGAGGACTAT GATGATGACC TGACTGACTC TGAGATGGAT GTGGTGAGGT
4201 TTGATGATGA CAACAGCCCC AGCTTCATCC AGATCAGGTC TGTGGCCAAG AAGCACCCCA
4261 AGACCTGGGT GCACTACATT GCTGCTGAGG AGGAGGACTG GGACTATGCC CCCCTGGTGC
4321 TGGCCCCTGA TGACAGGAGC TACAAGAGCC AGTACCTGAA CAATGGCCCC CAGAGGATTG
4381 GCAGGAAGTA CAAGAAGGTC AGGTTCATGG CCTACACTGA TGAAACCTTC AAGACCAGGG
4441 AGGCCATCCA GCATGAGTCT GGCATCCTGG GCCCCCTGCT GTATGGGGAG GTGGGGGACA
4501 CCCTGCTGAT CATCTTCAAG AACCAGGCCA GCAGGCCCTA CAACATCTAC CCCCATGGCA
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4621 ACTTCCCCAT CCTGCCTGGG GAGATCTTCA AGTACAAGTG GACTGTGACT GTGGAGGATG
4681 GCCCCACCAA GTCTGACCCC AGGTGCCTGA CCAGATACTA CAGCAGCTTT GTGAACATGG
4741 AGAGGGACCT GGCCTCTGGC CTGATTGGCC CCCTGCTGAT CTGCTACAAG GAGTCTGTGG
4801 ACCAGAGGGG CAACCAGATC ATGTCTGACA AGAGGAATGT GATCCTGTTC TCTGTGTTTG
4861 ATGAGAACAG GAGCTGGTAC CTGACTGAGA ACATCCAGAG GTTCCTGCCC AACCCTGCTG
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4981 ATGTGTTTGA CAGCCTGCAG CTGTCTGTGT GCCTGCATGA GGTGGCCTAC TGGTACATCC
5041 TGAGCATTGG GGCCCAGACT GACTTCCTGT CTGTGTTCTT CTCTGGCTAC ACCTTCAAGC
5101 ACAAGATGGT GTATGAGGAC ACCCTGACCC TGTTCCCCTT CTCTGGGGAG ACTGTGTTCA
5161 TGAGCATGGA GAACCCTGGC CTGTGGATTC TGGGCTGCCA CAACTCTGAC TTCAGGAACA
5221 GGGGCATGAC TGCCCTGCTG AAAGTCTCCA GCTGTGACAA GAACACTGGG GACTACTATG
5281 AGGACAGCTA TGAGGACATC TCTGCCTACC TGCTGAGCAA GAACAATGCC ATTGAGCCCA
5341 GGAGCTTCAG CCAGAATGCC ACTAATGTGT CTAACAACAG CAACACCAGC AATGACAGCA
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5581 ACTACTTCAT TGCTGCTGTG GAGAGGCTGT GGGACTATGG CATGAGCAGC AGCCCCCATG
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5761 GCCTGCTGGG CCCCTACATC AGGGCTGAGG TGGAGGACAA CATCATGGTG ACCTTCAGGA
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7381 TGGACCCCCC CCTGCTGACC AGATACCTGA GGATTCACCC CCAGAGCTGG GTGCACCAGA
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9721 TGGTATCGGT CTGCGATTCC GACTCGTCCA ACATCAATAC AACCTATTAA TTTCCCCTCG
9781 TCAAAAATAA GGTTATCAAG TGAGAAATCA CCATGAGTGA CGACTGAATC CGGTGAGAAT
9841 GGCAACAGCT TATGCATTTC TTTCCAGACT TGTTCAACAG GCCAGCCATT ACGCTCGTCA
9901 TCAAAATCAC TCGCATCAAC CAAACCGTTA TTCATTCGTG ATTGCGCCTG AGCGAGACGA
9961 AATACGCGAT CGCTGTTAAA AGGACAATTA CAAACAGGAA TCGAATGCAA CCGGCGCAGG
10021 AACACTGCCA GCGCATCAAC AATATTTTCA CCTGAATCAG GATATTCTTC TAATACCTGG
10081 AATGCTGTTT TTCCGGGGAT CGCAGTGGTG AGTAACCATG CATCATCAGG AGTACGGATA
10141 AAATGCTTGA TGGTCGGAAG AGGCATAAAT TCCGTCAGCC AGTTTAGTCT GACCATCTCA
10201 TCTGTAACAT CATTGGCAAC GCTACCTTTG CCATGTTTCA GAAACAACTC TGGCGCATCG
10261 GGCTTCCCAT ACAATCGATA GATTGTCGCA CCTGATTGCC CGACATTATC GCGAGCCCAT
10321 TTATACCCAT ATAAATCAGC ATCCATGTTG GAATTTAATC GCGGCCTAGA GCAAGACGTT
10381 TCCCGTTGAA TATGGCTCAT AACACCCCTT GTATTACTGT TTATGTAAGC AGACAGTTTT
10441 ATTGTTCATG ATGATATATT TTTATCTTGT GCAATGTAAC ATCAGAGATT TTGAGACACA
10501 ACAATTGGTC GACGGATCC
SEQ ID NO: 27 도 4c에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-co 플라스미드(pDNA1 pGM412)
길이: 11400; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..11400; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM412; 유기체, 합성 구조물
1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
61 TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC AATGGGGGCG GCTACCTCAG
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA TCTTGTGTGC GTGCTATATT
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA GAGGATCAGG CACGACTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA ATAATAGGGT TAAGATTACT
2281 TTACACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA TATGTTCCTC TATCTCCACA
2341 GATCCATATC CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA CATTTACAAA CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTCAATATTG GCCATTAGCC ATATTATTCA
2521 TTGGTTATAT AGCATAAATC AATATTGGCT ATTGGCCATT GCATACGTTG TATCTATATC
2581 ATAATATGTA CATTTATATT GGCTCATGTC CAATATGACC GCCATGTTGG CATTGATTAT
2641 TGACTAGTTA TTAATAGTAA TCAATTACGG GGTCATTAGT TCATAGCCCA TATATGGAGT
2701 TCCGCGTTAC ATAACTTACG GTAAATGGCC CGCCTGGCTG ACCGCCCAAC GACCCCCGCC
2761 CATTGACGTC AATAATGACG TATGTTCCCA TAGTAACGCC AATAGGGACT TTCCATTGAC
2821 GTCAATGGGT GGAGTATTTA CGGTAAACTG CCCACTTGGC AGTACATCAA GTGTATCATA
2881 TGCCAAGTCC GCCCCCTATT GACGTCAATG ACGGTAAATG GCCCGCCTGG CATTATGCCC
2941 AGTACATGAC CTTACGGGAC TTTCCTACTT GGCAGTACAT CTACGTATTA GTCATCGCTA
3001 TTACCATGGT GATGCGGTTT TGGCAGTACA CCAATGGGCG TGGATAGCGG TTTGACTCAC
3061 GGGGATTTCC AAGTCTCCAC CCCATTGACG TCAATGGGAG TTTGTTTTGG CACCAAAATC
3121 AACGGGACTT TCCAAAATGT CGTAATAACC CCGCCCCGTT GACGCAAATG GGCGGTAGGC
3181 GTGTACGGTG GGAGGTCTAT ATAAGCAGAG CTCGTTTAGT GAACCGTCAG ATCACTAGAA
3241 GCTTTATTGC GGTAGTTTAT CACAGTTAAA TTGCTAACGC AGTCAGTGCT TCTGACACAA
3301 CAGTCTCGAA CTTAAGCTGC AGAAGTTGGT CGTGAGGCAC TGGGCAGGCT AGCCACCAAT
3361 GCAGATTGAG CTGAGCACCT GCTTCTTCCT GTGCCTGCTG AGGTTCTGCT TCTCTGCCAC
3421 CAGGAGATAC TACCTGGGGG CTGTGGAGCT GAGCTGGGAC TACATGCAGT CTGACCTGGG
3481 GGAGCTGCCT GTGGATGCCA GGTTCCCCCC CAGAGTGCCC AAGAGCTTCC CCTTCAACAC
3541 CTCTGTGGTG TACAAGAAGA CCCTGTTTGT GGAGTTCACT GACCACCTGT TCAACATTGC
3601 CAAGCCCAGG CCCCCCTGGA TGGGCCTGCT GGGCCCCACC ATCCAGGCTG AGGTGTATGA
3661 CACTGTGGTG ATCACCCTGA AGAACATGGC CAGCCACCCT GTGAGCCTGC ATGCTGTGGG
3721 GGTGAGCTAC TGGAAGGCCT CTGAGGGGGC TGAGTATGAT GACCAGACCA GCCAGAGGGA
3781 GAAGGAGGAT GACAAGGTGT TCCCTGGGGG CAGCCACACC TATGTGTGGC AGGTGCTGAA
3841 GGAGAATGGC CCCATGGCCT CTGACCCCCT GTGCCTGACC TACAGCTACC TGAGCCATGT
3901 GGACCTGGTG AAGGACCTGA ACTCTGGCCT GATTGGGGCC CTGCTGGTGT GCAGGGAGGG
3961 CAGCCTGGCC AAGGAGAAGA CCCAGACCCT GCACAAGTTC ATCCTGCTGT TTGCTGTGTT
4021 TGATGAGGGC AAGAGCTGGC ACTCTGAAAC CAAGAACAGC CTGATGCAGG ACAGGGATGC
4081 TGCCTCTGCC AGGGCCTGGC CCAAGATGCA CACTGTGAAT GGCTATGTGA ACAGGAGCCT
4141 GCCTGGCCTG ATTGGCTGCC ACAGGAAGTC TGTGTACTGG CATGTGATTG GCATGGGCAC
4201 CACCCCTGAG GTGCACAGCA TCTTCCTGGA GGGCCACACC TTCCTGGTCA GGAACCACAG
4261 GCAGGCCAGC CTGGAGATCA GCCCCATCAC CTTCCTGACT GCCCAGACCC TGCTGATGGA
4321 CCTGGGCCAG TTCCTGCTGT TCTGCCACAT CAGCAGCCAC CAGCATGATG GCATGGAGGC
4381 CTATGTGAAG GTGGACAGCT GCCCTGAGGA GCCCCAGCTG AGGATGAAGA ACAATGAGGA
4441 GGCTGAGGAC TATGATGATG ACCTGACTGA CTCTGAGATG GATGTGGTGA GGTTTGATGA
4501 TGACAACAGC CCCAGCTTCA TCCAGATCAG GTCTGTGGCC AAGAAGCACC CCAAGACCTG
4561 GGTGCACTAC ATTGCTGCTG AGGAGGAGGA CTGGGACTAT GCCCCCCTGG TGCTGGCCCC
4621 TGATGACAGG AGCTACAAGA GCCAGTACCT GAACAATGGC CCCCAGAGGA TTGGCAGGAA
4681 GTACAAGAAG GTCAGGTTCA TGGCCTACAC TGATGAAACC TTCAAGACCA GGGAGGCCAT
4741 CCAGCATGAG TCTGGCATCC TGGGCCCCCT GCTGTATGGG GAGGTGGGGG ACACCCTGCT
4801 GATCATCTTC AAGAACCAGG CCAGCAGGCC CTACAACATC TACCCCCATG GCATCACTGA
4861 TGTGAGGCCC CTGTACAGCA GGAGGCTGCC CAAGGGGGTG AAGCACCTGA AGGACTTCCC
4921 CATCCTGCCT GGGGAGATCT TCAAGTACAA GTGGACTGTG ACTGTGGAGG ATGGCCCCAC
4981 CAAGTCTGAC CCCAGGTGCC TGACCAGATA CTACAGCAGC TTTGTGAACA TGGAGAGGGA
5041 CCTGGCCTCT GGCCTGATTG GCCCCCTGCT GATCTGCTAC AAGGAGTCTG TGGACCAGAG
5101 GGGCAACCAG ATCATGTCTG ACAAGAGGAA TGTGATCCTG TTCTCTGTGT TTGATGAGAA
5161 CAGGAGCTGG TACCTGACTG AGAACATCCA GAGGTTCCTG CCCAACCCTG CTGGGGTGCA
5221 GCTGGAGGAC CCTGAGTTCC AGGCCAGCAA CATCATGCAC AGCATCAATG GCTATGTGTT
5281 TGACAGCCTG CAGCTGTCTG TGTGCCTGCA TGAGGTGGCC TACTGGTACA TCCTGAGCAT
5341 TGGGGCCCAG ACTGACTTCC TGTCTGTGTT CTTCTCTGGC TACACCTTCA AGCACAAGAT
5401 GGTGTATGAG GACACCCTGA CCCTGTTCCC CTTCTCTGGG GAGACTGTGT TCATGAGCAT
5461 GGAGAACCCT GGCCTGTGGA TTCTGGGCTG CCACAACTCT GACTTCAGGA ACAGGGGCAT
5521 GACTGCCCTG CTGAAAGTCT CCAGCTGTGA CAAGAACACT GGGGACTACT ATGAGGACAG
5581 CTATGAGGAC ATCTCTGCCT ACCTGCTGAG CAAGAACAAT GCCATTGAGC CCAGGAGCTT
5641 CAGCCAGAAC AGCAGGCACC CCAGCACCAG GCAGAAGCAG TTCAATGCCA CCACCATCCC
5701 TGAGAATGAC ATAGAGAAGA CAGACCCATG GTTTGCCCAC CGGACCCCCA TGCCCAAGAT
5761 CCAGAATGTG AGCAGCTCTG ACCTGCTGAT GCTGCTGAGG CAGAGCCCCA CCCCCCATGG
5821 CCTGAGCCTG TCTGACCTGC AGGAGGCCAA GTATGAAACC TTCTCTGATG ACCCCAGCCC
5881 TGGGGCCATT GACAGCAACA ACAGCCTGTC TGAGATGACC CACTTCAGGC CCCAGCTGCA
5941 CCACTCTGGG GACATGGTGT TCACCCCTGA GTCTGGCCTG CAGCTGAGGC TGAATGAGAA
6001 GCTGGGCACC ACTGCTGCCA CTGAGCTGAA GAAGCTGGAC TTCAAAGTCT CCAGCACCAG
6061 CAACAACCTG ATCAGCACCA TCCCCTCTGA CAACCTGGCT GCTGGCACTG ACAACACCAG
6121 CAGCCTGGGC CCCCCCAGCA TGCCTGTGCA CTATGACAGC CAGCTGGACA CCACCCTGTT
6181 TGGCAAGAAG AGCAGCCCCC TGACTGAGTC TGGGGGCCCC CTGAGCCTGT CTGAGGAGAA
6241 CAATGACAGC AAGCTGCTGG AGTCTGGCCT GATGAACAGC CAGGAGAGCA GCTGGGGCAA
6301 GAATGTGAGC AGCAGGGAGA TCACCAGGAC CACCCTGCAG TCTGACCAGG AGGAGATTGA
6361 CTATGATGAC ACCATCTCTG TGGAGATGAA GAAGGAGGAC TTTGACATCT ACGACGAGGA
6421 CGAGAACCAG AGCCCCAGGA GCTTCCAGAA GAAGACCAGG CACTACTTCA TTGCTGCTGT
6481 GGAGAGGCTG TGGGACTATG GCATGAGCAG CAGCCCCCAT GTGCTGAGGA ACAGGGCCCA
6541 GTCTGGCTCT GTGCCCCAGT TCAAGAAGGT GGTGTTCCAG GAGTTCACTG ATGGCAGCTT
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6661 CAGGGCTGAG GTGGAGGACA ACATCATGGT GACCTTCAGG AACCAGGCCA GCAGGCCCTA
6721 CAGCTTCTAC AGCAGCCTGA TCAGCTATGA GGAGGACCAG AGGCAGGGGG CTGAGCCCAG
6781 GAAGAACTTT GTGAAGCCCA ATGAAACCAA GACCTACTTC TGGAAGGTGC AGCACCACAT
6841 GGCCCCCACC AAGGATGAGT TTGACTGCAA GGCCTGGGCC TACTTCTCTG ATGTGGACCT
6901 GGAGAAGGAT GTGCACTCTG GCCTGATTGG CCCCCTGCTG GTGTGCCACA CCAACACCCT
6961 GAACCCTGCC CATGGCAGGC AGGTGACTGT GCAGGAGTTT GCCCTGTTCT TCACCATCTT
7021 TGATGAAACC AAGAGCTGGT ACTTCACTGA GAACATGGAG AGGAACTGCA GGGCCCCCTG
7081 CAACATCCAG ATGGAGGACC CCACCTTCAA GGAGAACTAC AGGTTCCATG CCATCAATGG
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7201 CCTGCTGAGC ATGGGCAGCA ATGAGAACAT CCACAGCATC CACTTCTCTG GCCATGTGTT
7261 CACTGTGAGG AAGAAGGAGG AGTACAAGAT GGCCCTGTAC AACCTGTACC CTGGGGTGTT
7321 TGAGACTGTG GAGATGCTGC CCAGCAAGGC TGGCATCTGG AGGGTGGAGT GCCTGATTGG
7381 GGAGCACCTG CATGCTGGCA TGAGCACCCT GTTCCTGGTG TACAGCAACA AGTGCCAGAC
7441 CCCCCTGGGC ATGGCCTCTG GCCACATCAG GGACTTCCAG ATCACTGCCT CTGGCCAGTA
7501 TGGCCAGTGG GCCCCCAAGC TGGCCAGGCT GCACTACTCT GGCAGCATCA ATGCCTGGAG
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7621 CATCAAGACC CAGGGGGCCA GGCAGAAGTT CAGCAGCCTG TACATCAGCC AGTTCATCAT
7681 CATGTACAGC CTGGATGGCA AGAAGTGGCA GACCTACAGG GGCAACAGCA CTGGCACCCT
7741 GATGGTGTTC TTTGGCAATG TGGACAGCTC TGGCATCAAG CACAACATCT TCAACCCCCC
7801 CATCATTGCC AGATACATCA GGCTGCACCC CACCCACTAC AGCATCAGGA GCACCCTGAG
7861 GATGGAGCTG ATGGGCTGTG ACCTGAACAG CTGCAGCATG CCCCTGGGCA TGGAGAGCAA
7921 GGCCATCTCT GATGCCCAGA TCACTGCCAG CAGCTACTTC ACCAACATGT TTGCCACCTG
7981 GAGCCCCAGC AAGGCCAGGC TGCACCTGCA GGGCAGGAGC AATGCCTGGA GGCCCCAGGT
8041 CAACAACCCC AAGGAGTGGC TGCAGGTGGA CTTCCAGAAG ACCATGAAGG TGACTGGGGT
8101 GACCACCCAG GGGGTGAAGA GCCTGCTGAC CAGCATGTAT GTGAAGGAGT TCCTGATCAG
8161 CAGCAGCCAG GATGGCCACC AGTGGACCCT GTTCTTCCAG AATGGCAAGG TGAAGGTGTT
8221 CCAGGGCAAC CAGGACAGCT TCACCCCTGT GGTGAACAGC CTGGACCCCC CCCTGCTGAC
8281 CAGATACCTG AGGATTCACC CCCAGAGCTG GGTGCACCAG ATTGCCCTGA GGATGGAGGT
8341 GCTGGGCTGT GAGGCCCAGG ACCTGTACTG AGCGGCCGCG GGCCCAATCA ACCTCTGGAT
8401 TACAAAATTT GTGAAAGATT GACTGGTATT CTTAACTATG TTGCTCCTTT TACGCTATGT
8461 GGATACGCTG CTTTAATGCC TTTGTATCAT GCTATTGCTT CCCGTATGGC TTTCATTTTC
8521 TCCTCCTTGT ATAAATCCTG GTTGCTGTCT CTTTATGAGG AGTTGTGGCC CGTTGTCAGG
8581 CAACGTGGCG TGGTGTGCAC TGTGTTTGCT GACGCAACCC CCACTGGTTG GGGCATTGCC
8641 ACCACCTGTC AGCTCCTTTC CGGGACTTTC GCTTTCCCCC TCCCTATTGC CACGGCGGAA
8701 CTCATCGCCG CCTGCCTTGC CCGCTGCTGG ACAGGGGCTC GGCTGTTGGG CACTGACAAT
8761 TCCGTGGTGT TGTCGGGGAA ATCATCGTCC TTTCCTTGGC TGCTCGCCTG TGTTGCCACC
8821 TGGATTCTGC GCGGGACGTC CTTCTGCTAC GTCCCTTCGG CCCTCAATCC AGCGGACCTT
8881 CCTTCCCGCG GCCTGCTGCC GGCTCTGCGG CCTCTTCCGC GTCTTCGCCT TCGCCCTCAG
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9001 GGAGGACTGG ATGGGATTTA TTACTCCGAT AGGACGCTGG CTTGTAACTC AGTCTCTTAC
9061 TAGGAGACCA GCTTGAGCCT GGGTGTTCGC TGGTTAGCCT AACCTGGTTG GCCACCAGGG
9121 GTAAGGACTC CTTGGCTTAG AAAGCTAATA AACTTGCCTG CATTAGAGCT CTTACGCGTC
9181 CCGGGCTCGA GATCCGCATC TCAATTAGTC AGCAACCATA GTCCCGCCCC TAACTCCGCC
9241 CATCCCGCCC CTAACTCCGC CCAGTTCCGC CCATTCTCCG CCCCATGGCT GACTAATTTT
9301 TTTTATTTAT GCAGAGGCCG AGGCCGCCTC GGCCTCTGAG CTATTCCAGA AGTAGTGAGG
9361 AGGCTTTTTT GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA AAAGCTAACT TGTTTATTGC AGCTTATAAT
9421 GGTTACAAAT AAAGCAATAG CATCACAAAT TTCACAAATA AAGCATTTTT TTCACTGCAT
9481 TCTAGTTGTG GTTTGTCCAA ACTCATCAAT GTATCTTATC ATGTCTGTCC GCTTCCTCGC
9541 TCACTGACTC GCTGCGCTCG GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG
9601 CGGTAATACG GTTATCCACA GAATCAGGGG ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG
9661 GCCAGCAAAA GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC CATAGGCTCC
9721 GCCCCCCTGA CGAGCATCAC AAAAATCGAC GCTCAAGTCA GAGGTGGCGA AACCCGACAG
9781 GACTATAAAG ATACCAGGCG TTTCCCCCTG GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA
9841 CCCTGCCGCT TACCGGATAC CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC
9901 ATAGCTCACG CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG
9961 TGCACGAACC CCCCGTTCAG CCCGACCGCT GCGCCTTATC CGGTAACTAT CGTCTTGAGT
10021 CCAACCCGGT AAGACACGAC TTATCGCCAC TGGCAGCAGC CACTGGTAAC AGGATTAGCA
10081 GAGCGAGGTA TGTAGGCGGT GCTACAGAGT TCTTGAAGTG GTGGCCTAAC TACGGCTACA
10141 CTAGAAGAAC AGTATTTGGT ATCTGCGCTC TGCTGAAGCC AGTTACCTTC GGAAAAAGAG
10201 TTGGTAGCTC TTGATCCGGC AAACAAACCA CCGCTGGTAG CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA
10261 AGCAGCAGAT TACGCGCAGA AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA TCCTTTGATC TTTTCTACGG
10321 GGTCTGACGC TCAGTGGAAC GAAAACTCAC GTTAAGGGAT TTTGGTCATG AGATTATCAA
10381 AAAGGATCTT CACCTAGATC CTTTTAAATT AAAAATGAAG TTTTAAATCA ATCTAAAGTA
10441 TATATGAGTA AACTTGGTCT GACAGTTAGA AAAACTCATC GAGCATCAAA TGAAACTGCA
10501 ATTTATTCAT ATCAGGATTA TCAATACCAT ATTTTTGAAA AAGCCGTTTC TGTAATGAAG
10561 GAGAAAACTC ACCGAGGCAG TTCCATAGGA TGGCAAGATC CTGGTATCGG TCTGCGATTC
10621 CGACTCGTCC AACATCAATA CAACCTATTA ATTTCCCCTC GTCAAAAATA AGGTTATCAA
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SEQ ID NO: 28 도 4d에 정의된 바와 같은 F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-N6-co 플라스미드(pDNA1 pGM414)
길이: 11108; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..11108; mol_type, 기타 DNA; 참고, pGM414; 유기체, 합성 구조물
1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
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721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
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1921 AAAACCTCAA TGCCCGCGTC ACAGCCCTTG AGAAGTACCT AGAGGATCAG GCACGACTAA
1981 ACTCCTGGGG GTGCGCATGG AAACAAGTAT GTCATACCAC AGTGGAGTGG CCCTGGACAA
2041 ATCGGACTCC GGATTGGCAA AATATGACTT GGTTGGAGTG GGAAAGACAA ATAGCTGATT
2101 TGGAAAGCAA CATTACGAGA CAATTAGTGA AGGCTAGAGA ACAAGAGGAA AAGAATCTAG
2161 ATGCCTATCA GAAGTTAACT AGTTGGTCAG ATTTCTGGTC TTGGTTCGAT TTCTCAAAAT
2221 GGCTTAACAT TTTAAAAATG GGATTTTTAG TAATAGTAGG AATAATAGGG TTAAGATTAC
2281 TTTACACAGT ATATGGATGT ATAGTGAGGG TTAGGCAGGG ATATGTTCCT CTATCTCCAC
2341 AGATCCATAT CCGCGGCAAT TTTAAAAGAA AGGGAGGAAT AGGGGGACAG ACTTCAGCAG
2401 AGAGACTAAT TAATATAATA ACAACACAAT TAGAAATACA ACATTTACAA ACCAAAATTC
2461 AAAAAATTTT AAATTTTAGA GCCGCGGAGA TCTGTTACAT AACTTATGGT AAATGGCCTG
2521 CCTGGCTGAC TGCCCAATGA CCCCTGCCCA ATGATGTCAA TAATGATGTA TGTTCCCATG
2581 TAATGCCAAT AGGGACTTTC CATTGATGTC AATGGGTGGA GTATTTATGG TAACTGCCCA
2641 CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTATGCCC CCTATTGATG TCAATGATGG
2701 TAAATGGCCT GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC CTACTTGGCA
2761 GTACATCTAT GTATTAGTCA TTGCTATTAC CATGGGAATT CACTAGTGGA GAAGAGCATG
2821 CTTGAGGGCT GAGTGCCCCT CAGTGGGCAG AGAGCACATG GCCCACAGTC CCTGAGAAGT
2881 TGGGGGGAGG GGTGGGCAAT TGAACTGGTG CCTAGAGAAG GTGGGGCTTG GGTAAACTGG
2941 GAAAGTGATG TGGTGTACTG GCTCCACCTT TTTCCCCAGG GTGGGGGAGA ACCATATATA
3001 AGTGCAGTAG TCTCTGTGAA CATTCAAGCT TCTGCCTTCT CCCTCCTGTG AGTTTGCTAG
3061 CCACCAATGC AGATTGAGCT GAGCACCTGC TTCTTCCTGT GCCTGCTGAG GTTCTGCTTC
3121 TCTGCCACCA GGAGATACTA CCTGGGGGCT GTGGAGCTGA GCTGGGACTA CATGCAGTCT
3181 GACCTGGGGG AGCTGCCTGT GGATGCCAGG TTCCCCCCCA GAGTGCCCAA GAGCTTCCCC
3241 TTCAACACCT CTGTGGTGTA CAAGAAGACC CTGTTTGTGG AGTTCACTGA CCACCTGTTC
3301 AACATTGCCA AGCCCAGGCC CCCCTGGATG GGCCTGCTGG GCCCCACCAT CCAGGCTGAG
3361 GTGTATGACA CTGTGGTGAT CACCCTGAAG AACATGGCCA GCCACCCTGT GAGCCTGCAT
3421 GCTGTGGGGG TGAGCTACTG GAAGGCCTCT GAGGGGGCTG AGTATGATGA CCAGACCAGC
3481 CAGAGGGAGA AGGAGGATGA CAAGGTGTTC CCTGGGGGCA GCCACACCTA TGTGTGGCAG
3541 GTGCTGAAGG AGAATGGCCC CATGGCCTCT GACCCCCTGT GCCTGACCTA CAGCTACCTG
3601 AGCCATGTGG ACCTGGTGAA GGACCTGAAC TCTGGCCTGA TTGGGGCCCT GCTGGTGTGC
3661 AGGGAGGGCA GCCTGGCCAA GGAGAAGACC CAGACCCTGC ACAAGTTCAT CCTGCTGTTT
3721 GCTGTGTTTG ATGAGGGCAA GAGCTGGCAC TCTGAAACCA AGAACAGCCT GATGCAGGAC
3781 AGGGATGCTG CCTCTGCCAG GGCCTGGCCC AAGATGCACA CTGTGAATGG CTATGTGAAC
3841 AGGAGCCTGC CTGGCCTGAT TGGCTGCCAC AGGAAGTCTG TGTACTGGCA TGTGATTGGC
3901 ATGGGCACCA CCCCTGAGGT GCACAGCATC TTCCTGGAGG GCCACACCTT CCTGGTCAGG
3961 AACCACAGGC AGGCCAGCCT GGAGATCAGC CCCATCACCT TCCTGACTGC CCAGACCCTG
4021 CTGATGGACC TGGGCCAGTT CCTGCTGTTC TGCCACATCA GCAGCCACCA GCATGATGGC
4081 ATGGAGGCCT ATGTGAAGGT GGACAGCTGC CCTGAGGAGC CCCAGCTGAG GATGAAGAAC
4141 AATGAGGAGG CTGAGGACTA TGATGATGAC CTGACTGACT CTGAGATGGA TGTGGTGAGG
4201 TTTGATGATG ACAACAGCCC CAGCTTCATC CAGATCAGGT CTGTGGCCAA GAAGCACCCC
4261 AAGACCTGGG TGCACTACAT TGCTGCTGAG GAGGAGGACT GGGACTATGC CCCCCTGGTG
4321 CTGGCCCCTG ATGACAGGAG CTACAAGAGC CAGTACCTGA ACAATGGCCC CCAGAGGATT
4381 GGCAGGAAGT ACAAGAAGGT CAGGTTCATG GCCTACACTG ATGAAACCTT CAAGACCAGG
4441 GAGGCCATCC AGCATGAGTC TGGCATCCTG GGCCCCCTGC TGTATGGGGA GGTGGGGGAC
4501 ACCCTGCTGA TCATCTTCAA GAACCAGGCC AGCAGGCCCT ACAACATCTA CCCCCATGGC
4561 ATCACTGATG TGAGGCCCCT GTACAGCAGG AGGCTGCCCA AGGGGGTGAA GCACCTGAAG
4621 GACTTCCCCA TCCTGCCTGG GGAGATCTTC AAGTACAAGT GGACTGTGAC TGTGGAGGAT
4681 GGCCCCACCA AGTCTGACCC CAGGTGCCTG ACCAGATACT ACAGCAGCTT TGTGAACATG
4741 GAGAGGGACC TGGCCTCTGG CCTGATTGGC CCCCTGCTGA TCTGCTACAA GGAGTCTGTG
4801 GACCAGAGGG GCAACCAGAT CATGTCTGAC AAGAGGAATG TGATCCTGTT CTCTGTGTTT
4861 GATGAGAACA GGAGCTGGTA CCTGACTGAG AACATCCAGA GGTTCCTGCC CAACCCTGCT
4921 GGGGTGCAGC TGGAGGACCC TGAGTTCCAG GCCAGCAACA TCATGCACAG CATCAATGGC
4981 TATGTGTTTG ACAGCCTGCA GCTGTCTGTG TGCCTGCATG AGGTGGCCTA CTGGTACATC
5041 CTGAGCATTG GGGCCCAGAC TGACTTCCTG TCTGTGTTCT TCTCTGGCTA CACCTTCAAG
5101 CACAAGATGG TGTATGAGGA CACCCTGACC CTGTTCCCCT TCTCTGGGGA GACTGTGTTC
5161 ATGAGCATGG AGAACCCTGG CCTGTGGATT CTGGGCTGCC ACAACTCTGA CTTCAGGAAC
5221 AGGGGCATGA CTGCCCTGCT GAAAGTCTCC AGCTGTGACA AGAACACTGG GGACTACTAT
5281 GAGGACAGCT ATGAGGACAT CTCTGCCTAC CTGCTGAGCA AGAACAATGC CATTGAGCCC
5341 AGGAGCTTCA GCCAGAACAG CAGGCACCCC AGCACCAGGC AGAAGCAGTT CAATGCCACC
5401 ACCATCCCTG AGAATGACAT AGAGAAGACA GACCCATGGT TTGCCCACCG GACCCCCATG
5461 CCCAAGATCC AGAATGTGAG CAGCTCTGAC CTGCTGATGC TGCTGAGGCA GAGCCCCACC
5521 CCCCATGGCC TGAGCCTGTC TGACCTGCAG GAGGCCAAGT ATGAAACCTT CTCTGATGAC
5581 CCCAGCCCTG GGGCCATTGA CAGCAACAAC AGCCTGTCTG AGATGACCCA CTTCAGGCCC
5641 CAGCTGCACC ACTCTGGGGA CATGGTGTTC ACCCCTGAGT CTGGCCTGCA GCTGAGGCTG
5701 AATGAGAAGC TGGGCACCAC TGCTGCCACT GAGCTGAAGA AGCTGGACTT CAAAGTCTCC
5761 AGCACCAGCA ACAACCTGAT CAGCACCATC CCCTCTGACA ACCTGGCTGC TGGCACTGAC
5821 AACACCAGCA GCCTGGGCCC CCCCAGCATG CCTGTGCACT ATGACAGCCA GCTGGACACC
5881 ACCCTGTTTG GCAAGAAGAG CAGCCCCCTG ACTGAGTCTG GGGGCCCCCT GAGCCTGTCT
5941 GAGGAGAACA ATGACAGCAA GCTGCTGGAG TCTGGCCTGA TGAACAGCCA GGAGAGCAGC
6001 TGGGGCAAGA ATGTGAGCAG CAGGGAGATC ACCAGGACCA CCCTGCAGTC TGACCAGGAG
6061 GAGATTGACT ATGATGACAC CATCTCTGTG GAGATGAAGA AGGAGGACTT TGACATCTAC
6121 GACGAGGACG AGAACCAGAG CCCCAGGAGC TTCCAGAAGA AGACCAGGCA CTACTTCATT
6181 GCTGCTGTGG AGAGGCTGTG GGACTATGGC ATGAGCAGCA GCCCCCATGT GCTGAGGAAC
6241 AGGGCCCAGT CTGGCTCTGT GCCCCAGTTC AAGAAGGTGG TGTTCCAGGA GTTCACTGAT
6301 GGCAGCTTCA CCCAGCCCCT GTACAGAGGG GAGCTGAATG AGCACCTGGG CCTGCTGGGC
6361 CCCTACATCA GGGCTGAGGT GGAGGACAAC ATCATGGTGA CCTTCAGGAA CCAGGCCAGC
6421 AGGCCCTACA GCTTCTACAG CAGCCTGATC AGCTATGAGG AGGACCAGAG GCAGGGGGCT
6481 GAGCCCAGGA AGAACTTTGT GAAGCCCAAT GAAACCAAGA CCTACTTCTG GAAGGTGCAG
6541 CACCACATGG CCCCCACCAA GGATGAGTTT GACTGCAAGG CCTGGGCCTA CTTCTCTGAT
6601 GTGGACCTGG AGAAGGATGT GCACTCTGGC CTGATTGGCC CCCTGCTGGT GTGCCACACC
6661 AACACCCTGA ACCCTGCCCA TGGCAGGCAG GTGACTGTGC AGGAGTTTGC CCTGTTCTTC
6721 ACCATCTTTG ATGAAACCAA GAGCTGGTAC TTCACTGAGA ACATGGAGAG GAACTGCAGG
6781 GCCCCCTGCA ACATCCAGAT GGAGGACCCC ACCTTCAAGG AGAACTACAG GTTCCATGCC
6841 ATCAATGGCT ACATCATGGA CACCCTGCCT GGCCTGGTGA TGGCCCAGGA CCAGAGGATC
6901 AGGTGGTACC TGCTGAGCAT GGGCAGCAAT GAGAACATCC ACAGCATCCA CTTCTCTGGC
6961 CATGTGTTCA CTGTGAGGAA GAAGGAGGAG TACAAGATGG CCCTGTACAA CCTGTACCCT
7021 GGGGTGTTTG AGACTGTGGA GATGCTGCCC AGCAAGGCTG GCATCTGGAG GGTGGAGTGC
7081 CTGATTGGGG AGCACCTGCA TGCTGGCATG AGCACCCTGT TCCTGGTGTA CAGCAACAAG
7141 TGCCAGACCC CCCTGGGCAT GGCCTCTGGC CACATCAGGG ACTTCCAGAT CACTGCCTCT
7201 GGCCAGTATG GCCAGTGGGC CCCCAAGCTG GCCAGGCTGC ACTACTCTGG CAGCATCAAT
7261 GCCTGGAGCA CCAAGGAGCC CTTCAGCTGG ATCAAGGTGG ACCTGCTGGC CCCCATGATC
7321 ATCCATGGCA TCAAGACCCA GGGGGCCAGG CAGAAGTTCA GCAGCCTGTA CATCAGCCAG
7381 TTCATCATCA TGTACAGCCT GGATGGCAAG AAGTGGCAGA CCTACAGGGG CAACAGCACT
7441 GGCACCCTGA TGGTGTTCTT TGGCAATGTG GACAGCTCTG GCATCAAGCA CAACATCTTC
7501 AACCCCCCCA TCATTGCCAG ATACATCAGG CTGCACCCCA CCCACTACAG CATCAGGAGC
7561 ACCCTGAGGA TGGAGCTGAT GGGCTGTGAC CTGAACAGCT GCAGCATGCC CCTGGGCATG
7621 GAGAGCAAGG CCATCTCTGA TGCCCAGATC ACTGCCAGCA GCTACTTCAC CAACATGTTT
7681 GCCACCTGGA GCCCCAGCAA GGCCAGGCTG CACCTGCAGG GCAGGAGCAA TGCCTGGAGG
7741 CCCCAGGTCA ACAACCCCAA GGAGTGGCTG CAGGTGGACT TCCAGAAGAC CATGAAGGTG
7801 ACTGGGGTGA CCACCCAGGG GGTGAAGAGC CTGCTGACCA GCATGTATGT GAAGGAGTTC
7861 CTGATCAGCA GCAGCCAGGA TGGCCACCAG TGGACCCTGT TCTTCCAGAA TGGCAAGGTG
7921 AAGGTGTTCC AGGGCAACCA GGACAGCTTC ACCCCTGTGG TGAACAGCCT GGACCCCCCC
7981 CTGCTGACCA GATACCTGAG GATTCACCCC CAGAGCTGGG TGCACCAGAT TGCCCTGAGG
8041 ATGGAGGTGC TGGGCTGTGA GGCCCAGGAC CTGTACTGAG CGGCCGCGGG CCCAATCAAC
8101 CTCTGGATTA CAAAATTTGT GAAAGATTGA CTGGTATTCT TAACTATGTT GCTCCTTTTA
8161 CGCTATGTGG ATACGCTGCT TTAATGCCTT TGTATCATGC TATTGCTTCC CGTATGGCTT
8221 TCATTTTCTC CTCCTTGTAT AAATCCTGGT TGCTGTCTCT TTATGAGGAG TTGTGGCCCG
8281 TTGTCAGGCA ACGTGGCGTG GTGTGCACTG TGTTTGCTGA CGCAACCCCC ACTGGTTGGG
8341 GCATTGCCAC CACCTGTCAG CTCCTTTCCG GGACTTTCGC TTTCCCCCTC CCTATTGCCA
8401 CGGCGGAACT CATCGCCGCC TGCCTTGCCC GCTGCTGGAC AGGGGCTCGG CTGTTGGGCA
8461 CTGACAATTC CGTGGTGTTG TCGGGGAAAT CATCGTCCTT TCCTTGGCTG CTCGCCTGTG
8521 TTGCCACCTG GATTCTGCGC GGGACGTCCT TCTGCTACGT CCCTTCGGCC CTCAATCCAG
8581 CGGACCTTCC TTCCCGCGGC CTGCTGCCGG CTCTGCGGCC TCTTCCGCGT CTTCGCCTTC
8641 GCCCTCAGAC GAGTCGGATC TCCCTTTGGG CCGCCTCCCC GCAAGCTTCG CACTTTTTAA
8701 AAGAAAAGGG AGGACTGGAT GGGATTTATT ACTCCGATAG GACGCTGGCT TGTAACTCAG
8761 TCTCTTACTA GGAGACCAGC TTGAGCCTGG GTGTTCGCTG GTTAGCCTAA CCTGGTTGGC
8821 CACCAGGGGT AAGGACTCCT TGGCTTAGAA AGCTAATAAA CTTGCCTGCA TTAGAGCTCT
8881 TACGCGTCCC GGGCTCGAGA TCCGCATCTC AATTAGTCAG CAACCATAGT CCCGCCCCTA
8941 ACTCCGCCCA TCCCGCCCCT AACTCCGCCC AGTTCCGCCC ATTCTCCGCC CCATGGCTGA
9001 CTAATTTTTT TTATTTATGC AGAGGCCGAG GCCGCCTCGG CCTCTGAGCT ATTCCAGAAG
9061 TAGTGAGGAG GCTTTTTTGG AGGCCTAGGC TTTTGCAAAA AGCTAACTTG TTTATTGCAG
9121 CTTATAATGG TTACAAATAA AGCAATAGCA TCACAAATTT CACAAATAAA GCATTTTTTT
9181 CACTGCATTC TAGTTGTGGT TTGTCCAAAC TCATCAATGT ATCTTATCAT GTCTGTCCGC
9241 TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA
9301 CTCAAAGGCG GTAATACGGT TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA AGAACATGTG
9361 AGCAAAAGGC CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA
9421 TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA GGTGGCGAAA
9481 CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC
9541 TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC
9601 GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT
9661 GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG
9721 TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG
9781 GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC TTGAAGTGGT GGCCTAACTA
9841 CGGCTACACT AGAAGAACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG
9901 AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT
9961 TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT
10021 TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATGAG
10081 ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA AAATGAAGTT TTAAATCAAT
10141 CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA CAGTTAGAAA AACTCATCGA GCATCAAATG
10201 AAACTGCAAT TTATTCATAT CAGGATTATC AATACCATAT TTTTGAAAAA GCCGTTTCTG
10261 TAATGAAGGA GAAAACTCAC CGAGGCAGTT CCATAGGATG GCAAGATCCT GGTATCGGTC
10321 TGCGATTCCG ACTCGTCCAA CATCAATACA ACCTATTAAT TTCCCCTCGT CAAAAATAAG
10381 GTTATCAAGT GAGAAATCAC CATGAGTGAC GACTGAATCC GGTGAGAATG GCAACAGCTT
10441 ATGCATTTCT TTCCAGACTT GTTCAACAGG CCAGCCATTA CGCTCGTCAT CAAAATCACT
10501 CGCATCAACC AAACCGTTAT TCATTCGTGA TTGCGCCTGA GCGAGACGAA ATACGCGATC
10561 GCTGTTAAAA GGACAATTAC AAACAGGAAT CGAATGCAAC CGGCGCAGGA ACACTGCCAG
10621 CGCATCAACA ATATTTTCAC CTGAATCAGG ATATTCTTCT AATACCTGGA ATGCTGTTTT
10681 TCCGGGGATC GCAGTGGTGA GTAACCATGC ATCATCAGGA GTACGGATAA AATGCTTGAT
10741 GGTCGGAAGA GGCATAAATT CCGTCAGCCA GTTTAGTCTG ACCATCTCAT CTGTAACATC
10801 ATTGGCAACG CTACCTTTGC CATGTTTCAG AAACAACTCT GGCGCATCGG GCTTCCCATA
10861 CAATCGATAG ATTGTCGCAC CTGATTGCCC GACATTATCG CGAGCCCATT TATACCCATA
10921 TAAATCAGCA TCCATGTTGG AATTTAATCG CGGCCTAGAG CAAGACGTTT CCCGTTGAAT
10981 ATGGCTCATA ACACCCCTTG TATTACTGTT TATGTAAGCA GACAGTTTTA TTGTTCATGA
11041 TGATATATTT TTATCTTGTG CAATGTAACA TCAGAGATTT TGAGACACAA CAATTGGTCG
11101 ACGGATCC
SEQ ID NO: 29 예시된 CAG 프로모터
길이: 1738; 분자 유형: DNA; 기능 위치/한정자: 소스, 1..1738; mol_type, 기타 DNA; 참고, CAG 프로모터; 유기체, 합성 구조물
ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGCTCGAGCCACC
SEQUENCE LISTING <110> IP2IPO Innovations Limited <120> RETROVIRAL VECTORS <130> P68229WO <160> 29 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 4391 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> codon-optimised SIV gal-pol nucleic acid sequence (from pGM691) <400> 1 atgggagctg ccacatctgc cctgaataga cggcagctgg accagttcga gaagatcaga 60 ctgcggccca acggcaagaa gaagtaccag atcaagcacc tgatctgggc cggcaaagag 120 atggaaagat tcggcctgca cgagcggctg ctggaaaccg aggaaggctg caagagaatt 180 atcgaggtgc tgtaccctct ggaacctacc ggctctgagg gcctgaagtc cctgttcaat 240 ctcgtgtgcg tgctgtactg cctgcacaaa gaacagaaag tgaaggacac cgaagaggcc 300 gtggccacag ttagacagca ctgccacctg gtggaaaaag agaagtccgc cacagagaca 360 agcagcggcc agaagaagaa cgacaaggga attgctgccc ctcctggcgg cagccagaat 420 tttcctgctc agcagcaggg aaacgcctgg gtgcacgttc cactgagccc tagaacactg 480 aatgcctggg tcaaagccgt ggaagagaag aagtttggcg ccgagatcgt gcccatgttc 540 caggctctgt ctgagggctg caccccttac gacatcaacc agatgctgaa cgtgctggga 600 gatcaccagg gcgctctgca gatcgtgaaa gagatcatca acgaagaggc tgcccagtgg 660 gacgtgacac atccattgcc tgctggacct ctgccagccg gacaactgag agatcctaga 720 ggctctgata tcgccggcac caccagctct gtgcaagagc agctggaatg gatctacacc 780 gccaatccta gagtggacgt gggcgccatc tacagaagat ggatcatcct gggcctgcag 840 aaatgcgtga agatgtacaa ccccgtgtcc gtgctggaca tcagacaggg acccaaagag 900 cccttcaagg actacgtgga ccggttctat aaggccatta gagccgagca ggccagcggc 960 gaagtgaagc agtggatgac agagagcctg ctgatccaga acgccaatcc agactgcaaa 1020 gtgatcctga aaggcctggg catgcacccc acactggaag agatgctgac agcctgtcaa 1080 ggcgttggcg gcccttctta caaagccaaa gtgatggccg agatgatgca gaccatgcag 1140 aaccagaaca tggtgcagca aggcggccct aagagacaga ggcctcctct gagatgctac 1200 aactgcggca agttcggcca catgcagaga cagtgtcctg agcctaggaa aacaaaatgt 1260 ctaaagtgtg gaaaattggg acacctagca aaagactgca ggggacaggt gaatttttta 1320 gggtatggac ggtggatggg ggcaaaaccg agaaattttc ccgccgctac tcttggagcg 1380 gaaccgagtg cgcctcctcc accgagcggc accaccccat acgacccagc aaagaagctc 1440 ctgcagcaat atgcagagaa agggaaacaa ctgagggagc aaaagaggaa tccaccggca 1500 atgaatccgg attggaccga gggatattct ttgaactccc tctttggaga agaccaataa 1560 agaccgtgta catcgagggc gtgcccatca aggctctgct ggatacaggc gccgacgaca 1620 ccatcatcaa agagaacgac ctgcagctga gcggcccttg gaggcctaag atcattggag 1680 gaatcggcgg aggcctgaac gtcaaagagt acaacgaccg ggaagtgaag atcgaggaca 1740 agatcctgag gggcacaatc ctgctgggcg ccacacctat caacatcatc ggcagaaatc 1800 tgctggcccc tgccggcgct agactggtta tgggacagct ctctgagaag atccccgtga 1860 cacccgtgaa gctgaaagaa ggcgctagag gaccttgtgt gcgacagtgg cctctgagca 1920 aagagaagat tgaggccctg caagaaatct gtagccagct ggaacaagag ggcaagatca 1980 gcagagttgg cggcgagaac gcctacaata cccctatctt ctgcatcaag aaaaaggaca 2040 agagccagtg gcggatgctg gtggacttta gagagctgaa caaggctacc caggacttct 2100 tcgaggtgca gctgggaatt cctcatcctg ccggcctgcg gaagatgaga cagatcacag 2160 tgctggatgt gggcgacgcc tactacagca tccctctgga ccccaacttc agaaagtaca 2220 ccgccttcac aatccccacc gtgaacaatc aaggccctgg catcagatac cagttcaact 2280 gcctgcctca aggctggaag ggcagcccca ccatttttca gaataccgcc gccagcatcc 2340 tggaagaaat caagagaaac ctgcctgctc tgaccatcgt gcagtacatg gacgatctgt 2400 gggtcggaag ccaagagaat gagcacaccc acgacaagct ggtggaacag ctgagaacaa 2460 agctgcaggc ctggggcctc gaaacccctg agaagaaggt gcagaaagaa cctccttacg 2520 agtggatggg ctacaagctg tggcctcaca agtgggagct gagccggatt cagctcgaag 2580 agaaggacga gtggaccgtg aacgacatcc agaaactcgt gggcaagctg aattgggcag 2640 cccagctgta tcccggcctg aggaccaaga acatctgcaa gctgatccgg ggaaagaaga 2700 acctgctgga actggtcaca tggacacctg aggccgaggc cgaatatgcc gagaatgccg 2760 aaatcctgaa aaccgagcaa gaggggacct actacaagcc tggcattcca atcagagctg 2820 ccgtgcagaa actggaaggc ggccagtggt cctaccagtt taagcaagaa ggccaggtcc 2880 tgaaagtggg caagtacacc aagcagaaga acacccacac caacgagctg aggacactgg 2940 ctggcctggt ccagaaaatc tgcaaagagg ccctggtcat ttggggcatc ctgcctgttc 3000 tggaactgcc cattgagcgg gaagtgtggg aacagtggtg ggccgattac tggcaagtgt 3060 cttggatccc cgagtgggac ttcgtgtcta cccctcctct gctgaaactg tggtacaccc 3120 tgacaaaaga gcccattcct aaagaggacg tctactacgt tgacggcgcc tgcaaccgga 3180 actccaaaga aggcaaggcc ggctacatca gccagtacgg caagcagaga gtggaaaccc 3240 tggaaaacac caccaaccag caggccgagc tgaccgccat taagatggcc ctggaagata 3300 gcggccccaa tgtgaacatc gtgaccgact ctcagtacgc catgggaatc ctgacagccc 3360 agcctacaca gagcgatagc cctctggttg agcagatcat tgccctgatg attcagaagc 3420 agcaaatcta cctgcagtgg gtgcccgctc acaaaggcat cggcggaaac gaagagatcg 3480 ataagctggt gtccaaggga atcagacggg tgctgttcct ggaaaagatt gaagaggccc 3540 aagaggaaca cgagcgctac cacaacaact ggaagaatct ggccgacacc tacggactgc 3600 cccagatcgt ggccaaagaa atcgtggcta tgtgccccaa gtgtcagatc aagggcgaac 3660 ctgtgcacgg ccaagtggat gcttctcctg gcacatggca gatggactgt acccacctgg 3720 aaggcaaagt ggtcatcgtg gctgtgcacg tggcctccgg ctttattgag gccgaagtga 3780 tccccagaga gacaggcaaa gaaaccgcca agttcctgct gaagatcctg tccagatggc 3840 ccatcacaca gctgcacacc gacaacggcc ctaacttcac atctcaagag gtggccgcca 3900 tctgttggtg gggaaagatt gagcacacaa ccggcattcc ctacaatcca cagagccagg 3960 gcagcatcga gtccatgaac aagcagctca aagagattat 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ctgatggacc tgggccagtt cctgctgttc tgccacatca gcagccacca gcatgatggc 4080 atggaggcct atgtgaaggt ggacagctgc cctgaggagc cccagctgag gatgaagaac 4140 aatgaggagg ctgaggacta tgatgatgac ctgactgact ctgagatgga tgtggtgagg 4200 tttgatgatg acaacagccc cagcttcatc cagatcaggt ctgtggccaa gaagcacccc 4260 aagacctggg tgcactacat tgctgctgag gaggaggact gggactatgc ccccctggtg 4320 ctggcccctg atgacaggag ctacaagagc cagtacctga acaatggccc ccagaggatt 4380 ggcaggaagt acaagaaggt caggttcatg gcctacactg atgaaacctt caagaccagg 4440 gaggccatcc agcatgagtc tggcatcctg ggccccctgc tgtatgggga ggtgggggac 4500 accctgctga tcatcttcaa gaaccaggcc agcaggccct acaacatcta cccccatggc 4560 atcactgatg tgaggcccct gtacagcagg aggctgccca agggggtgaa gcacctgaag 4620 gacttcccca tcctgcctgg ggagatcttc aagtacaagt ggactgtgac tgtggaggat 4680 ggccccacca agtctgaccc caggtgcctg accagatact acagcagctt tgtgaacatg 4740 gagagggacc tggcctctgg cctgattggc cccctgctga tctgctacaa ggagtctgtg 4800 gaccagaggg gcaaccagat catgtctgac aagaggaatg tgatcctgtt ctctgtgttt 4860 gatgagaaca ggagctggta cctgactgag aacatccaga ggttcctgcc caaccctgct 4920 ggggtgcagc tggaggaccc tgagttccag gccagcaaca tcatgcacag catcaatggc 4980 tatgtgtttg acagcctgca gctgtctgtg tgcctgcatg aggtggccta ctggtacatc 5040 ctgagcattg gggcccagac tgacttcctg tctgtgttct tctctggcta caccttcaag 5100 cacaagatgg tgtatgagga caccctgacc ctgttcccct tctctgggga gactgtgttc 5160 atgagcatgg agaaccctgg cctgtggatt ctgggctgcc acaactctga cttcaggaac 5220 aggggcatga ctgccctgct gaaagtctcc agctgtgaca agaacactgg ggactactat 5280 gaggacagct atgaggacat ctctgcctac ctgctgagca agaacaatgc cattgagccc 5340 aggagcttca gccagaacag caggcacccc agcaccaggc agaagcagtt caatgccacc 5400 accatccctg agaatgacat agagaagaca gacccatggt ttgcccaccg gacccccatg 5460 cccaagatcc agaatgtgag cagctctgac ctgctgatgc tgctgaggca gagccccacc 5520 ccccatggcc tgagcctgtc tgacctgcag gaggccaagt atgaaacctt ctctgatgac 5580 cccagccctg gggccattga cagcaacaac agcctgtctg agatgaccca cttcaggccc 5640 cagctgcacc actctgggga catggtgttc acccctgagt ctggcctgca gctgaggctg 5700 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caccacatgg cccccaccaa ggatgagttt gactgcaagg cctgggccta cttctctgat 6600 gtggacctgg agaaggatgt gcactctggc ctgattggcc ccctgctggt gtgccacacc 6660 aacaccctga accctgccca tggcaggcag gtgactgtgc aggagtttgc cctgttcttc 6720 accatctttg atgaaaccaa gagctggtac ttcactgaga acatggagag gaactgcagg 6780 gccccctgca acatccagat ggaggacccc accttcaagg agaactacag gttccatgcc 6840 atcaatggct acatcatgga caccctgcct ggcctggtga tggcccagga ccagaggatc 6900 aggtggtacc tgctgagcat gggcagcaat gagaacatcc acagcatcca cttctctggc 6960 catgtgttca ctgtgaggaa gaaggaggag tacaagatgg ccctgtacaa cctgtaccct 7020 ggggtgtttg agactgtgga gatgctgccc agcaaggctg gcatctggag ggtggagtgc 7080 ctgattgggg agcacctgca tgctggcatg agcaccctgt tcctggtgta cagcaacaag 7140 tgccagaccc ccctgggcat ggcctctggc cacatcaggg acttccagat cactgcctct 7200 ggccagtatg gccagtgggc ccccaagctg gccaggctgc actactctgg cagcatcaat 7260 gcctggagca ccaaggagcc cttcagctgg atcaaggtgg acctgctggc ccccatgatc 7320 atccatggca tcaagaccca gggggccagg cagaagttca gcagcctgta catcagccag 7380 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tcattttctc ctccttgtat aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg 8280 ttgtcaggca acgtggcgtg gtgtgcactg tgtttgctga cgcaaccccc actggttggg 8340 gcattgccac cacctgtcag ctcctttccg ggactttcgc tttccccctc cctattgcca 8400 cggcggaact catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca 8460 ctgacaattc cgtggtgttg tcggggaaat catcgtcctt tccttggctg ctcgcctgtg 8520 ttgccacctg gattctgcgc gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag 8580 cggaccttcc ttcccgcggc ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc 8640 gccctcagac gagtcggatc tccctttggg ccgcctcccc gcaagcttcg cactttttaa 8700 aagaaaaggg aggactggat gggatttatt actccgatag gacgctggct tgtaactcag 8760 tctcttacta ggagaccagc ttgagcctgg gtgttcgctg gttagcctaa cctggttggc 8820 caccaggggt aaggactcct tggcttagaa agctaataaa cttgcctgca ttagagctct 8880 tacgcgtccc gggctcgaga tccgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta 8940 actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga 9000 ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag 9060 tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctaacttg tttattgcag 9120 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt 9180 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtccgc 9240 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 9300 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 9360 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca 9420 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa 9480 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc 9540 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 9600 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct 9660 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 9720 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 9780 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 9840 cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 9900 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10740 ggtcggaaga ggcataaatt ccgtcagcca gtttagtctg accatctcat ctgtaacatc 10800 attggcaacg ctacctttgc catgtttcag aaacaactct ggcgcatcgg gcttcccata 10860 caatcgatag attgtcgcac ctgattgccc gacattatcg cgagcccatt tatacccata 10920 taaatcagca tccatgttgg aatttaatcg cggcctagag caagacgttt cccgttgaat 10980 atggctcata acaccccttg tattactgtt tatgtaagca gacagtttta ttgttcatga 11040 tgatatattt ttatcttgtg caatgtaaca tcagagattt tgagacacaa caattggtcg 11100 acggatcc 11108 <210> 29 <211> 1738 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAG promoter <400> 29 attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 60 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 120 acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt 180 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 240 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 300 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 360 tcatcgctat taccatggtc gaggtgagcc ccacgttctg cttcactctc cccatctccc 420 ccccctcccc acccccaatt ttgtatttat ttatttttta attattttgt gcagcgatgg 480 gggcgggggg gggggggggg cgcgcgccag gcggggcggg gcggggcgag gggcggggcg 540 gggcgaggcg gagaggtgcg gcggcagcca atcagagcgg cgcgctccga aagtttcctt 600 ttatggcgag gcggcggcgg cggcggccct ataaaaagcg aagcgcgcgg cgggcgggag 660 tcgctgcgcg ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc 720 ggctctgact gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg 780 gctgtaatta gcgcttggtt taatgacggc ttgtttcttt tctgtggctg cgtgaaagcc 840 ttgaggggct ccgggagggc cctttgtgcg gggggagcgg ctcggggggt gcgtgcgtgt 900 gtgtgtgcgt ggggagcgcc gcgtgcggct ccgcgctgcc cggcggctgt gagcgctgcg 960 ggcgcggcgc ggggctttgt gcgctccgca gtgtgcgcga ggggagcgcg gccgggggcg 1020 gtgccccgcg gtgcgggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 1080 tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgt cggtcgggct gcaacccccc ctgcaccccc 1140 ctccccgagt tgctgagcac ggcccggctt cgggtgcggg gctccgtacg gggcgtggcg 1200 cggggctcgc cgtgccgggc ggggggtggc ggcaggtggg ggtgccgggc ggggcggggc 1260 cgcctcgggc cggggagggc tcgggggagg ggcgcggcgg cccccggagc gccggcggct 1320 gtcgaggcgc ggcgagccgc agccattgcc ttttatggta atcgtgcgag agggcgcagg 1380 gacttccttt gtcccaaatc tgtgcggagc cgaaatctgg gaggcgccgc cgcaccccct 1440 ctagcgggcg cggggcgaag cggtgcggcg ccggcaggaa ggaaatgggc ggggagggcc 1500 ttcgtgcgtc gccgcgccgc cgtccccttc tccctctcca gcctcggggc tgtccgcggg 1560 gggacggctg ccttcggggg ggacggggca gggcggggtt cggcttctgg cgtgtgaccg 1620 gcggctctag agcctctgct aaccatgttc atgccttctt ctttttccta cagctcctgg 1680 gcaacgtgct ggttattgtg ctgtctcatc attttggcaa agaattgctc gagccacc 1738

Claims (33)

  1. 프로모터 및 이식 유전자(transgene)를 포함하는, 호흡기 파라믹소바이러스(respiratory paramyxovirus)로부터 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN: hemagglutinin-neuraminidase) 및 융합(F: fusion) 단백질로 슈도타이핑된(pseudotyped) 레트로바이러스 벡터를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은 코돈-최적화된(codon-optimised) gag-pol 유전자의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 레트로바이러스 벡터가 렌티바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 렌티바이러스 벡터가 유인원 면역결핍 바이러스(SIV) 벡터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 벡터, 고양이 면역결핍 바이러스(FIV) 벡터, 말 감염성 빈혈 바이러스(EIAV) 벡터, 및 비스나/매디(Visna/maedi) 바이러스 벡터로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 렌티바이러스 벡터가 SIV 벡터인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자가 SIV gag-pol 유전자인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자가 SEQ ID NO: 1과 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자가 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자가 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되는 플라스미드에 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 코돈-최적화된 gag-pol 유전자가 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되는 플라스미드에 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 호흡기 파라믹소바이러스가 센다이(Sendai) 바이러스인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가(titre)가:
    a) 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가와 동등하고; 또는
    b) 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가와 비교하여 증가하는;
    것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 레트로바이러스 벡터의 역가가 코돈-최적화된 gal-pol 유전자를 사용하지 않는 상응하는 방법에 의해 생성된 레트로바이러스 벡터의 역가보다 적어도 2배, 또는 적어도 2.5배 큰 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프로모터가 CMV(cytomegalovirus) 프로모터, EF1a(elongation factor 1a) 프로모터, 및 hCEF(hybrid human CMV enhancer/EF1a) 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터가 하이브리드 인간 CMV 인핸서/EF1a(hCEF) 프로모터를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 유전자가:
    a) 분비된 치료 단백질, 선택적으로 알파-1 항트립신(A1AT), 인자 VIII, 계면활성제 단백질 B(SFTPB), 인자 VII, 인자 IX, 인자 X, 인자 XI, 폰 빌레브란트 인자, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 및 감염원에 대한 단일클론 항체; 또는
    b) CFTR, ABCA3, DNAH5, DNAH11, DNAI1, 및 DNAI2;
    로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 유전자가:
    a) CFTR;
    b) A1AT; 또는
    c) FVIII;
    를 암호화하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서:
    a) 상기 프로모터가 hCEF 프로모터이고 상기 이식 유전자가 CFTR을 암호화하고;
    b) 상기 프로모터가 hCEF 프로모터이고 상기 이식 유전자가 A1AT를 암호화하고; 또는
    c) 상기 프로모터가 hCEF 또는 CMV 프로모터이고 상기 이식 유전자가 FVIII를 암호화하는;
    것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이:
    a) 현탁액에서 세포를 성장시키고;
    b) 하나 이상의 플라스미드로 세포를 형질 감염시키고;
    c) 뉴클레아제를 첨가하고;
    d) 렌티바이러스를 채취하고;
    e) 트립신을 첨가하고; 그리고
    f) 정제하는;
    단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 하나 이상의 플라스미드가:
    a) 바람직하게는 pGM830 및 pGM326으로부터 선택되는 벡터 게놈 플라스미드;
    b) co-galpol 플라스미드, 바람직하게는 pGM691;
    c) Rev 플라스미드, 바람직하게는 pGM299;
    d) 융합(F) 단백질 플라스미드, 바람직하게는 pGM301; 및
    e) 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 플라스미드, 바람직하게는 pGM303;
    을 포함하거나 이들만으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 벡터 게놈 플라스미드:co-gagpol 플라스미드:Rev 플라스미드:F 플라스미드:HN 플라스미드의 비율이 20:9:6:6:6인 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (a)-(f)가 순차적으로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 HEK293T 또는 293T/17 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레아제의 첨가가 채취-전 단계인 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 트립신의 첨가가 채취-후 단계인 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제18항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정제 단계가 크로마토그래피 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터 게놈 플라스미드가 레트로바이러스 ORF의 수를 감소시키도록 변형된 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 코돈-최적화된 gag-pol 유전자를 포함하는 핵산으로서, 상기 핵산이 SEQ ID NO: 1과 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 것을 특징으로 하는 핵산.
  28. 제27항에 있어서, SEQ ID NO: 1의 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되는 것을 특징으로 하는 핵산.
  29. 제27항 또는 제28항에 정의된 바와 같은 핵산을 포함하는 플라스미드로서, 선택적으로:
    a) 상기 플라스미드가 SEQ ID NO: 5에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되고; 또는
    b) 상기 플라스미드가 SEQ ID NO: 5의 핵산 서열을 포함하거나 그 핵산 서열만으로 구성되는;
    것을 특징으로 하는 플라스미드.
  30. 제27항 또는 제28항에 정의된 핵산 및/또는 제29항에 정의된 플라스미드를 포함하는 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  31. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 정의된 방법에 의해 수득 가능한 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터.
  32. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 정의된 방법에 의해 수득 가능한 호흡기 파라믹소바이러스로부터의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 단백질로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 질병 치료 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 질병이 폐 질환, 바람직하게는 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
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