KR20230144443A - MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 - Google Patents
MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230144443A KR20230144443A KR1020220100950A KR20220100950A KR20230144443A KR 20230144443 A KR20230144443 A KR 20230144443A KR 1020220100950 A KR1020220100950 A KR 1020220100950A KR 20220100950 A KR20220100950 A KR 20220100950A KR 20230144443 A KR20230144443 A KR 20230144443A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cancer
- bcl
- protein
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 107
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 101
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 55
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 51
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 102100021590 Bcl-2-like protein 10 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100023932 Bcl-2-like protein 2 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000971082 Homo sapiens Bcl-2-like protein 10 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000904691 Homo sapiens Bcl-2-like protein 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010918 connective tissue cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008006 pharynx cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 67
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 82
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 25
- 102000001765 Bcl-2-Like Protein 11 Human genes 0.000 description 24
- 108010040168 Bcl-2-Like Protein 11 Proteins 0.000 description 24
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 24
- 238000013461 design Methods 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 102220533507 Baculoviral IAP repeat-containing protein 1_G58E_mutation Human genes 0.000 description 9
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- 108010079882 Bax protein (53-86) Proteins 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- -1 polysulfonates Polymers 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical group N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100033189 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 2
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 101710101225 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035548 Protein Bop Human genes 0.000 description 2
- 108050008794 Protein Bop Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CUJRVFIICFDLGR-UHFFFAOYSA-N acetylacetonate Chemical compound CC(=O)[CH-]C(C)=O CUJRVFIICFDLGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229940121497 sintilimab Drugs 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 2
- 229950007213 spartalizumab Drugs 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- SXOUIMVOMIGLHO-AATRIKPKSA-N (E)-3-(indol-2-yl)acrylic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(/C=C/C(=O)O)=CC2=C1 SXOUIMVOMIGLHO-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACERFIHBIWMFOR-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[(1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)azaniumyl]propane-1-sulfonate Chemical compound OCC(C)(C)NCC(O)CS(O)(=O)=O ACERFIHBIWMFOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 2-naphthyloxyacetic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(OCC(=O)O)=CC=C21 RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-hydroxyethyl)azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)CS(O)(=O)=O XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNPKNHHFCKSMRV-UHFFFAOYSA-N 4-(cyclohexylamino)butane-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCCNC1CCCCC1 XNPKNHHFCKSMRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOJNFONOHINEFI-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]butane-1-sulfonic acid Chemical compound OCCN1CCN(CCCCS(O)(=O)=O)CC1 LOJNFONOHINEFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- VTOWJTPBPWTSMK-UHFFFAOYSA-N 4-morpholin-4-ylbutane-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCCN1CCOCC1 VTOWJTPBPWTSMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 description 1
- 101150035093 AMPD gene Proteins 0.000 description 1
- 102220509024 APC membrane recruitment protein 1_C30S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 1
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 102100035656 BCL2/adenovirus E1B 19 kDa protein-interacting protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108091007065 BIRCs Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008000 CHES buffer Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 101710156605 Diablo homolog, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 229920000896 Ethulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001859 Ethyl hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 101000803294 Homo sapiens BCL2/adenovirus E1B 19 kDa protein-interacting protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000871228 Homo sapiens Diablo IAP-binding mitochondrial protein Proteins 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000055031 Inhibitor of Apoptosis Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound NC(=O)CNCCS(O)(=O)=O DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCNC1CCCCC1 MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 102220493521 Sodium/calcium exchanger 3_C19S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220493377 Sodium/calcium exchanger 3_N16R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 208000034953 Twin anemia-polycythemia sequence Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- MIFGOLAMNLSLGH-QOKNQOGYSA-N Z-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F Chemical compound COC(=O)C[C@@H](C(=O)CF)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 MIFGOLAMNLSLGH-QOKNQOGYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 101150063416 add gene Proteins 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002547 anomalous effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 1
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950007712 camrelizumab Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 229920003086 cellulose ether Polymers 0.000 description 1
- 229940121420 cemiplimab Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M dimethylarsinate Chemical compound C[As](C)([O-])=O OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000019326 ethyl hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- PLVPPLCLBIEYEA-UHFFFAOYSA-N indoleacrylic acid Natural products C1=CC=C2C(C=CC(=O)O)=CNC2=C1 PLVPPLCLBIEYEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007916 intrasternal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H magnesium phosphate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[Mg+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000004137 magnesium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000157 magnesium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002261 magnesium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000010994 magnesium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000010280 mitochondria-mediated cell death Effects 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001143 noxa Toxicity 0.000 description 1
- 229960000572 olaparib Drugs 0.000 description 1
- FAQDUNYVKQKNLD-UHFFFAOYSA-N olaparib Chemical compound FC1=CC=C(CC2=C3[CH]C=CC=C3C(=O)N=N2)C=C1C(=O)N(CC1)CCN1C(=O)C1CC1 FAQDUNYVKQKNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229940127255 pan-caspase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000012857 repacking Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000020712 soy bean extract Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 229940121514 toripalimab Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
본 발명은 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 단백질은 다양한 암종에서 발현이 증가되는 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질인 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에, 특이적으로 결합하여 암의 예방 또는 치료에 유용하게 적용될 수 있다.
Description
본 발명은 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다.
아폽토시스(apoptosis, programmed-cell death)는 조직 항상성, 발달 및 손상된 세포의 제거에 필수적인 진화적으로 보존된 경로이다. 아폽토시스의 탈조절은 악성 종양, 신경퇴행성 장애, 면역계 질환 및 자가면역 질환을 포함하는 인간 질환에 기여한다.
BCL-2(B-cell lymphoma 2) 계열(family)의 단백질은 미토콘드리아가 매개하는 아폽토시스(apoptosis) 경로를 조절하여 궁극적으로 미토콘드리아에서 MOMP(mitochondrial outer membrane permeabilization, 미토콘드리아 외막 투과화)를 통해 사이토크롬 C(cytochrome C) 및 Smac/DIABLO(Second mitochondria-derived activator of caspase/Direct inhibitor of apoptosis-binding protein with low pI)와 같은 아폽토시스 유발(apoptogenic) 단백질을 세포질로 방출한다. BCL-2 계열 단백질에는 아폽토시스-유도(pro-apoptotic) 단백질 및 항-아폽토시스(anti-apoptotic) 단백질이 있으며, 아폽토시스의 진행 여부는 상기 아폽토시스-유도(pro-apoptotic) BCL-2 단백질 및 항-아폽토시스(anti-apoptotic) BCL-2 단백질의 페어링 정도에 의존한다.
암세포의 특징 중 하나는 아폽토시스를 회피하는 것으로, 아폽토시스를 회피함으로써 세포의 생존률이 높아지고 항암제에 대한 내성이 생길 수 있다. 많은 암세포는 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 상향조절하여 아폽토시스에 저항하기 때문에, 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 억제하는 것이 효과적인 암 치료 방법이 될 수 있다. 다만, 단일 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질 구성원만을 억제하는 것은 대부분 효과가 없는 것으로 입증된 바 있으며, 두 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 동시에 대상으로 하는 경우에 시너지 효과가 나타나 아폽토시스를 향상시킬 수 있는 것으로 알려져 있다.
한편, 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 억제하는 BH3-모방 소분자(BH3-mimicking small molecules)가 다양한 악성 종양에서 단일 또는 조합 약제로 투여되기 위하여 임상 조사중에 있으며, 이들 중 일부는 이미 임상 또는 전임상 단계에서 고형 종양 및 혈액 악성 종양의 치료에 가능성을 보여주었다. 다만, 이러한 BH3 모방체는 정상 세포와 암세포를 구별할 수 없어 암세포에서 뿐만 아니라 정상 세포에서도 BCL-2 계열 단백질을 억제하여 부작용의 위험이 있다. 복수의 BCL-2 계열 단백질을 억제하기 위하여 복수의 BH3 모방체를 사용할 경우, 그 부작용의 위험은 더 커질 것이다.
따라서, 부작용의 위험 없이 2 이상의 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질에 동시에 결합하여 암세포에서 아폽토시스를 유발하고, 이를 통하여 암을 치료할 수 있는 분자의 개발이 요구되는 실정이다.
본 발명자들은 2 이상의 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질에 동시에 결합하여 암세포에서 아폽토시스를 유발할 수 있는 분자를 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질을 개발하고, 이 단백질의 아폽토시스 유발 활성(apoptogenic activity)이 우수함을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 서열번호 3 의 아미노산 서열, 서열번호 4 의 아미노산 서열 및 서열번호 5 의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단백질을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자, 상기 핵산분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 이를 포함하는 분리된 숙주세포를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 단백질을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 제공한다.
본 발명자들은 2 이상의 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질에 동시에 결합하여 암세포에서 아폽토시스를 유발할 수 있는 분자를 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, MCL-1 및 BCL-xL에 동시에, 특이적으로 결합하는 단백질을 개발하고, 이 단백질의 아폽토시스 유발 활성(apoptogenic activity)이 우수함을 규명하였다.
BCL-2 계열 단백질들은 적어도 하나 이상의 BCL-2 상동 (BCL-2 homology; BH) 도메인을 가지며, 이들은 그 기능 및 BH 도메인 수에 따라 구별되는 다음 3 개의 그룹으로 분류된다: (i) BH1 내지 BH3까지를 포함하는 아폽토시스-유도(pro-apoptotic) 및 기공 형성 단백질(BAX, BAK 및 BOK) (ii) 아폽토시스-유도(pro-apoptotic) BH3-only 단백질(BIM, BID, BAD, PUMA, NOXA 및 BNIP3 등), 및 (iii) 3개 이상의 BH 도메인을 갖는 항-아폽토시스(anti-apoptotic) 단백질(BCL-2, BCL-B, BCL-W, BCL-xL, BFL-1(A1) 및 MCL-1 등). BH3-only 단백질은 직접적으로 BAX와 BAK에 결합하고 이들을 활성화함으로써, 또는 항-아폽토시스 BCL-2 단백질의 기능에 간섭함으로써 아폽토시스를 유도한다.
많은 암세포는 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 상향조절하여 아폽토시스에 저항하기 때문에, 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 억제하는 것이 효과적인 암 치료 방법이 될 수 있다. 다만, 단일 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질 구성원만을 억제하는 것은 대부분 효과가 없는 것으로 입증된 바 있으며, 두 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 동시에 대상으로 하는 경우에 시너지 효과가 나타나 아폽토시스를 향상시킬 수 있는 것으로 알려져 있다.
본 명세서에서 용어 "아미노산(amino acid)"은 단백질 분자의 가장 기본적인 구성 단위를 의미한다. 아미노산의 구조를 보면 탄소 원자 1개에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)가 붙어 있으며 여기에 수소와 R기가 연결되어 있다.
본 명세서에서, 용어 "단백질(protein)"은 “폴리펩타이드(polypeptide)”와 상호교환적으로 사용되며, 펩타이드 결합에 의해 공유적으로 연결된 아미노산 중합체를 지칭한다. 단백질은 적어도 2개의 아미노산을 함유해야 한다. 이러한 아미노산 잔기들의 중합체는 천연 또는 비천연 아미노산 잔기들을 함유할 수 있으며, 아미노산 잔기들의 펩타이드, 올리고펩타이드, 이량체, 삼량체 및 다량체, 전장 단백질 및 이의 단편을 포함하고, 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에서, “단백질”은 천연 또는 인공 단백질, 단백질 단편 및 단백질 유사체를 포함한다. 본 발명의 단백질은 당 업계에 공지된 합성 방법, 예를 들어 단백질을 발현하는 핵산분자를 포함하는 발현벡터를 숙주세포에 형질전환하여 재조합 단백질을 합성하거나, 고체상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)).
본 명세서에서, 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 이와 같은 것은, 당업자에게 통상적으로 공지되어 있는 의미와 동일한 것으로서, 단백질 또는 펩타이드의 제2 화학종과의 상호작용과 관련한 것으로, 상기 상호작용이 상기 화학종의 특정한 구조의 존재에 따라 변함을 의미한다. 즉, 상기 단백질 또는 펩타이드는 상기 제2 화학종의 특정 구조를 인식하여 결합하며, 생리적 조건 하에서 비교적 안정한 복합체를 형성한다. 특이적 결합은 적어도 약 1 x 10-6 M 이하(예컨대, 9 x 10-7 M, 8 x 10-7 M, 7 x 10-7 M, 6 x 10-7 M, 5 x 10-7 M, 4 x 10-7 M, 3 x 10-7 M, 2 x 10-7 M, 또는 1 x 10-7 M), 바람직하게는 1 x 10-7 M 이하(예컨대, 9 x 10-8 M, 8 x 10-8 M, 7 x 10-8 M, 6 x 10-8 M, 5 x 10-8 M, 4 x 10-8 M, 3 x 10-8 M, 2 x 10-8 M, 또는 1 x 10-8 M), 보다 바람직하게는 1 x 10-8 M 이하(예컨대, 9 x 10-9 M, 8 x 10-9 M, 7 x 10-9 M, 6 x 10-9 M, 5 x 10-9 M, 4 x 10-9 M, 3 x 10-9 M, 2 x 10-9 M, 또는 1 x 10-9 M)의 평형 해리 상수(예를 들어, 이보다 작은 KD는 보다 단단한 결합을 나타냄)로 특성화될 수 있다. 2 개의 분자가 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다.
본 명세서에서, 용어 "친화도(Affinity)"는 분자의 단일 결합 부위와 그 결합 파트너 사이의 비공유 상호 작용의 총합의 강도를 의미한다. 달리 명시하지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "결합 친화도(binding affinity)"은 결합 쌍의 구성원 간의 1:1 상호 작용을 반영하는 내인성(intrinsic) 결합 친화력을 나타낸다. 친화도는 일반적으로 해리 상수 (KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기술된 것들을 포함하여 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질은 항-아폽토시스(anti-apoptotic) BCL-2 계열 단백질(BCL-2 family protein)에 결합할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질은 MCL-1, BCL-xL BCL-2(B-cell lymphoma 2), BCL-B, BCL-W, BCL-xL(B-cell lymphoma-extra large) 및 BFL-1(A1)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 단백질일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질은 MCL-1(myeloid cell leukemia 1); 및 BCL-2(B-cell lymphoma 2), BCL-B, BCL-W, BCL-xL(B-cell lymphoma-extra large) 및 BFL-1(A1)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질(BCL-2 family protein)에 동시에 결합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질은 BCL-xL일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명자들은 MCL-1에 특이적으로 결합(150 pM의 KD)하며, 3-나선 번들 구조를 가진 기존의 단백질인 αMCL1에 4 번째 나선을 추가하여, MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질을 디자인하였다. 상기 αMCL1의 4 번째 나선에는 BCL-xL의 결합 부위가 존재한다. 본 명세서의 실시예에서 처음으로 디자인된 BCL-xL/MCL-1 결합 단백질은"4H_αBM_1"(서열번호 3) 로 명명하였다. 4H_αBM_1을 구조적 검증한 이후, 12번째 아미노산 잔기 Asp를 Ile로, 16번째 아미노산 잔기 Asn를 Arg로, 19번째 아미노산 잔기 Arg을 Thr로, 142번째 아미노산 잔기 Ala를 Glu로, 146번째 아미노산 잔기 Thr를 Arg로 치환하여, BCL-xL에 대한 친화도가 4H_αBM_1 보다 40 배 강한 "4H_αBM_2"(서열번호 4)를 추가적으로 디자인하였다. 이후 BCL-xL 결합 부위의 결합 특이성을 향상시키기 위하여, 143번째 아미노산 잔기 Ile를 Leu로 치환한 "4H_αBM_3"(서열번호 5)을 최종적으로 디자인하였으며, 상기 "4H_αBM_3"의 BCL-xL 결합 부위는 820 pM의 KD로 BCL-xL에 결합하고, MCL-1 결합 부위는 196 pM의 KD로 MCL-1에 결합하여, 높은 친화도를 나타냈다. 또한, 상기 "4H_αBM_3"의 BCL-xL 결합 부위는 또 다른 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질인 BCL-2(2.04 nM의 KD) 및 BCL-W(1.59 nM의 KD)에 대해서도 상당한 친화도를 보였다. 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질 BCL-B 및 BFL-1에 대해서는 각각 146 nM의 KD 및 16.4 nM의 KD를 나타냈다. 본 발명의 실시예에서, 상기 "4H_αBM_3"는 우수한 아폽토시스 유발(apoptogenic) 활성을 확인하였다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상술한 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질은 서열번호 5의 아미노산 서열의 12번째, 15번째, 16번째, 94번째, 97번째, 105번째, 136번째, 137번째, 139번째, 140번째, 143번째, 144번째, 146번째 내지 148번째, 150번째 내지 152번째, 154번째, 155번째, 157번째, 158번째, 161번째 및 162번째 아미노산 잔기에서 BCL-xL와 특이적인 결합을 형성하며, 서열번호 5의 아미노산 서열의 43번째, 46번째, 47번째, 49번째, 50번째, 51번째, 53번째 내지 55번째, 57번째 내지 59번째, 62번째, 65번째, 66번째, 100번째, 104번째, 108번째, 111번째, 114번째 아미노산 잔기에서 MCL-1과 특이적인 결합을 형성한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상술한 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질은 MCL-1 및 BCL-xL 각각의 세포질 도메인(cytoplasmic domain)에 존재하는 BH3-결합 그루브(BH3-binding groove)에 특이적으로 결합한다. MCL-1 및 BCL-xL은 막관통 도메인(transmembrane domain)을 제외하면 하나의 세포질 도메인으로 구성되어 있다. BCL-xL의 세포질 도메인은 서열번호 7의 BCL-xL의 아미노산 서열에서 1번째 아미노산 잔기부터 209번째 아미노산 잔기까지의 부분이며, MCL-1의 세포질 도메인은 서열번호 8의 MCL-1 아미노산 서열에서 171번째 아미노산 잔기부터 327번째 아미노산 잔기까지의 부분이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상술한 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질은 서열번호 7의 BCL-xL의 아미노산 서열에서 93번째, 96번째, 97번째, 100번째, 101번째, 104번째, 105번째, 108번째, 111번째 내지 113번째, 118번째, 121번째, 125번째, 126번째, 129번째, 130번째, 133번째, 136번째, 138번째, 139번째, 141번째, 142번째, 146번째, 및 193번째 내지 195번째 아미노산 잔기에서 BCL-xL와 특이적인 결합을 형성하며, 서열번호 8의 MCL-1의 아미노산 서열에서 216번째, 220번째, 223번째, 224번째, 226번째 내지 228번째, 231번째, 233번째 내지 235번째, 245번째, 248번째, 249번째, 252번째, 253번째, 256번째, 260번째 내지 263번째, 266번째, 267번째, 270번째, 318번째, 319번째 아미노산 잔기에서 MCL-1과 특이적인 결합을 형성한다.
본 발명의 단백질은 통상의 기술자가 인지하는 바와 같이, MCL-1 또는 상술한 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 범위 내에서 아미노산 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 단백질의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선시키기 위하여 단백질의 아미노산 서열에 변화를 줄 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어 단백질의 아미노산 서열 잔기의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다.
상기 변이체는 "실질적 유사성"을 가지는 것으로, 2개의 펩타이드 서열이 디폴트 갭 가중치를 사용하는 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해서와 같이 최적으로 정렬되는 경우에 적어도 약 90%의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 적어도 약 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유함을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 상이하다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예: 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R 기)를 갖는 또 다른 아미노산 잔기에 의해 치환된 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능성을 실질적으로 변화시키지 않는다.
이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 갖으며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.
변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스(hydropathic index)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소루이신(+4.5); 발린(+4.2); 루이신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글라이신(-0.4); 쓰레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5).
단백질의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에서 치환을 한다.
한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스팔테이트(+3.0± 1); 글루타메이트(+3.0± 1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글라이신(0); 쓰레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5 ± 1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 루이신(-1.8); 아이소루이신(-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4).
친수성 값을 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 친수성 값 차이를 나타내는 아미노산 사이에서 치환을 한다.
분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H. Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질은 상술한 아미노산 서열에 대하여 소폭의 변화, 즉, 3차 구조 및 단백질의 기능에 거의 영향을 미치지 않는 변형을 포함하는 단백질을 포함한다. 따라서 어떤 구현예의 경우 상술한 서열과 일치하지 않더라도 적어도 100%, 93%, 95%, 96%, 97%, 또는 98% 이상의 유사성을 가질 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상술한 본 발명의 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질에 아폽토시스 유발 활성(apoptogenic activity)을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 융합될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 아폽토시스 유발 활성을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상술한 본 발명의 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합될 수 있다. 보다 구체적으로는 N-말단 또는 C-말단에, 가장 구체적으로는 C-말단에 융합되어 연결될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 아폽토시스 유발 활성을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 서열번호 9의 아미노산 서열 또는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 실시예에서, 4H_αBM_3에 BIM BH3 서열(서열번호 9) 또는 BIM의 CTS(C-terminal sequence)(서열번호 10)을 융합한 경우, 아폽토시스 유발 활성이 증가됨을 확인할 수 있었다. 상기 BIM BH3은 BAX/BAK를 직접 활성화하고, 상기 BIM의 CTS는 미토콘드리아 표적 서열로서 BIM이 항-아폽토시스 BCL-2 단백질의 작용 부위인 미토콘드리아 외막으로 이동하는 것을 촉진하여 아폽토시스를 촉진하며, 따라서 상술한 본 발명의 단백질에 융합되는 경우 그 유발 활성을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다.
본 명세서에서, 용어 "핵산(nucleic acids)"은 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 상술한 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열인 것으로 충분하며, 어느 특정 뉴클레오타이드 서열에 한정되지 않는다는 것은 당업자에게 자명하다. 따라서, 본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 6의 뉴클레오타이드 서열일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
이는 뉴클레오티드 서열의 변이가 발생하더라도 변이된 뉴클레오타이드 서열을 단백질로 발현하면 단백질 서열에서 변화를 가져오지 않는 경우도 있기 때문이다. 이를 코돈의 축퇴성이라고 한다. 따라서 상기 뉴클레오타이드 서열은 기능적으로 균등한 코돈 또는 동일한 아미노산을 인코딩하는 코돈 (예를 들어, 코돈의 축퇴성에 의해, 아르기닌 또는 세린에 대한 코돈은 여섯 개이다), 또는 생물학적으로 균등한 아미노산을 인코딩하는 코돈을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 복합체를 인코딩하는 핵산 분자는 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 적어도 60% 이상의 상동성(예컨대, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 또는 69%), 보다 바람직하게는 적어도 70% 이상의 상동성(예컨대, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 또는 79%), 보다 더 바람직하게는 적어도 80% 이상(예컨대, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 또는 89%)의 상동성, 가장 바람직하게는 90% 이상(예컨대, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%)의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 상기 70% 이상 100% 이하의 모든 정수 및 이 사이의 소수는 % 상동성과 관련하여 본 발명의 범위 내에 포함된다.
서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. 얼라인먼트에 대한 다양한 방법 및 알고리즘은 Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482(1981); Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443(1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31(1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44(1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3(1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90(1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65(1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31(1994)에 개시되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10(1990))은 NBCI(National Center for Biological Information) 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다. BLAST는 ncbi 웹사이트의 BLAST 페이지를 통하여 접속 가능하다. 이 프로그램을 이용한 서열 상동성 비교 방법은 ncbi 웹사이트의 BLAST help 페이지에서 확인할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 재조합 벡터를 포함하는, 분리된 숙주세포를 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 벡터는 상술한 본 발명의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열과 작동적으로 결합(operatively linked) 된다.
본 명세서에서 용어 "작동적으로 결합(operatively linked)"은 핵산 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 핵산 서열사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 핵산 서열의 전사 및/또는 해독(translation)을 조절하게 된다.
본 발명의 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook, et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예컨대, pLλ 프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, T7 프로모터, tac 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주세포로서 E. coli가 이용되는 경우, E. coli 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위(Yanofsky, C., J. Bacteriol., 158:1018-1024(1984)) 그리고 파아지 λ의 좌향 프로모터(pLλ 프로모터, Herskowitz, I. and Hagen, D., Ann. Rev. Genet., 14:399-445(1980))가 조절 부위로서 이용될 수 있다.
한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드(예: pJK hTx, pCDFduet, pCW57.1, pSK349, pSC101, ColE1, pBR322, pUC8/9, pHC79, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지(예: λgt·λ4B, λ-Charon, λΔz1 및 M13 등) 또는 바이러스(예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
본 발명의 벡터는 그로부터 발현되는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위하여, 다른 서열과 융합될 수도 있다. 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG(IBI, USA) 및 6x His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 있다. 상기 정제를 위한 추가적인 서열 때문에, 숙주에서 발현된 단백질은 친화성 크로마토그래피를 통하여 신속하고, 용이하게 정제된다.
본 발명의 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.
한편, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
선택적으로, 상기 벡터는 리포터 분자(예: 루시퍼라아제 및 -글루쿠로니다아제)를 코딩하는 유전자를 추가적으로 운반할 수 있다.
본 발명의 벡터를 안정하게 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주세포는 당업계에 공지되어있는 어떠한 숙주세포도 이용할 수 있으며, 예컨대, E. coli Origami2, E. coli JM109, E. coli BL21(DE3), E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, E. coli Lemo(DE3)와 같은 E.coli 균주, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있다.
또한, 본 발명의 벡터를 진핵 세포에 형질전환시키는 경우에는 숙주세포로서, 이스트(Saccharomyce cerevisiae), 곤충 세포 및 동물 세포(예컨대, CHO 세포주(Chinese hamster ovary), W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, 3T3, RIN 및 MDCK 세포주) 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 상기 벡터를 형질전환시키는 숙주세포는 E. coli이다. 본 발명의 보다 구체적인 구현예에 있어서, 본 발명의 상기 벡터를 형질전환시키는 숙주세포는 E. coli Lemo(DE3)이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 벡터를 숙주세포 내로 운반하는 방법은, 숙주세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법(Cohen, S.N. et al., Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114(1973)), 하나한 방법(Cohen, S.N. et al., Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114(1973); 및 Hanahan, D., J. Mol. Biol., 166:557-580(1983)) 및 전기 천공 방법(Dower, W.J. et al., Nucleic. Acids Res., 16:6127-6145(1988)) 등에 의해 실시될 수 있다. 또한, 숙주세포가 진핵 세포인 경우에는, 미세 주입법(Capecchi, M.R., Cell, 22:479(1980)), 칼슘 포스페이트 침전법(Graham, F.L. et al., Virology, 52:456(1973)), 전기 천공법(Neumann, E. et al., EMBO J., 1:841(1982)), 리포좀-매개 형질감염법(Wong, T.K. et al., Gene, 10:87(1980)), DEAE-덱스트란 처리법(Gopal, Mol. Cell Biol., 5:1188-1190(1985)), 및 유전자 밤바드먼트(Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 87:9568-9572(1990)) 등에 의해 벡터를 숙주세포 내로 주입할 수 있다.
본 발명에서 숙주세포 내로 주입된 재조합 벡터는 숙주세포 내에서 재조합된 본 발명의 단백질을 발현할 수 있으며, 이러한 경우에는 다량의 단백질을 얻게 된다. 예를 들어, 상기 발현 벡터가 lac 프로모터를 포함하는 경우에는 숙주세포에 IPTG를 처리하여 유전자 발현을 유도할 수 있다.
형질전환된 숙주세포의 배양은 공지된 숙주세포 배양 방법 또는 이를 변형한 방법으로 행할 수 있다. 예를 들어, 숙주세포가 대장균(E.coli)인 경우 형질전환 숙주세포의 배양을 위한 배지는 대장균이 효율적으로 이용할 수 있는 탄소원, 질소원, 무기염 등을 포함한다면 천연 배지 또는 합성 배지를 사용할 수 있다. 사용될 수 있는 탄소원은 글루코오스, 프럭토오스, 수크로오스와 같은 탄수화물; 녹말, 녹말의 가수분해물; 아세트산 및 프로피온산과 같은 유기산; 에탄올, 프로판올, 글리세롤과 같은 알코올 등을 포함한다. 질소원은 암모니아; 염화암모늄, 암모늄설페이트, 암모늄아세테이트 및 암모늄포스페이트와 같은 무기산 또는 유기산의 암모늄염; 펩톤, 고기추출물(meat extract), 이스트추출물, 옥수수 침지액, 카제인 가수분해물, 대두추출물, 대두가수분해물; 다양한 발효된 세포 및 이들의 분해물 등을 포함한다. 무기염은 포타슘디하이드로젠 포스페이트, 다이포타슘하이드로젠 포스페이트, 마그네슘 포스페이트, 마그네슘 설페이트, 소디엄 클로라이드, 망간 설페이트, 구리 설페이트, 칼슘 카보네이트 등을 포함한다.
상기 배양은 통상적으로 진탕배양 또는 회전기에 의한 회전에 의한 것과 같은 호기성 조건하에서 행한다. 배양 온도는 바람직하게는 10℃ 내지 40℃의 범위에서 행하고, 배양시간은 일반적으로 5 시간 내지 7 일간 행한다. 배지의 pH는 배양 중에서 바람직하게는 3.0 내지 9.0의 범위를 유지한다. 배지의 pH는 무기 또는 유기산, 알칼리 용액, 우레아, 칼슘 카보네이트, 암모니아 등으로 조절할 수 있다. 배양 중에는 필요한 경우 재조합 벡터의 유지 및 발현을 위해 암피실린, 스트렙토마이신, 클로람페니콜, 카나마이신 및 테트라사이클린과 같은 항생제를 첨가할 수 있다. 유도(induction) 가능한 프로모터를 갖는 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주세포를 배양하는 경우 필요하다면 배지에 적합한 유도제(inducer)를 첨가할 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터가 lac 프로모터를 함유하는 경우 IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)를 첨가하고, trp 프로모터를 포함하는 경우 인돌아크릴산(indoleacrylic acid)을 배지에 첨가할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단백질을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상술한 본 발명의 단백질을 유효성분으로 이용하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 명세서에서, 용어 "암"은 세포가 정상적인 성장 한계를 무시하고 분열 및 성장하는 공격적(aggressive) 특성, 주위 조직에 침투하는 침투적(invasive) 특성, 및 체내의 다른 부위로 퍼지는 전이적(metastatic) 특성을 갖는 세포에 의한 질병을 총칭한다. 본 명세서에서, "암"은 원발암, 재발암, 내성암을 포함하고, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 명세서에서 "원발암"은 통상의 암을 뜻하며, "재발암"은 통상의 암 치료 후 재발생된 암을 뜻하고, "내성암"은 상기 암 치료에 대하여 극히 낮은 감수성을 나타내어, 상기 치료에 의해 증세가 호전, 완화, 경감 또는 치료증상을 나타내지 않는 암을 의미한다. 여기서, 통상의 암 치료는 수술, 화학치료, 방사선치료, 호르몬 치료, 생물학적 치료, 면역치료 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, "전이암"은 특정 부위에서 발생한 원발암 또는 재발암이 다른 부위로 전이된 것을 의미한다.
많은 암종에서 암세포는 항-아폽토시스 BLC-2 계열 단백질을 과발현하여 아폽토시스를 회피하고 지속적으로 성장하므로, 본 발명의 단백질을 유효성분으로 이용하는 본 발명의 약제학적 조성물은 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 단백질은 아폽토시스를 촉진하여 암세포의 사멸을 유도하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 암은 비호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma), 호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma), 급성 골수성 백혈병 (acute-myeloid leukemia), 급성 림프구성 백혈병 (acute-lymphoid leukemia), 다발성 골수종 (multiple myeloma), 경부암(head and neck cancer), 폐암, 비소세포폐암, 교모세포종(glioblastoma), 식도암, 위암, 대장암, 직장암, 결장암, 구강암, 인두암, 후두암, 췌장암, 유방암, 자궁 경부암, 자궁 내막체암, 난소암, 악성 흑색종 (melanoma), 전립선암, 고환암, 방광암, 신장암, 간암, 췌장암, 골암, 결합 조직암, 피부암, 뇌암, 갑상선암 및 중피종 (mesothelioma)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 또는 희석제를 추가적으로 포함할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은 제제가 멸균이고 발열원(pyrogen)이 없는 것이다. 적절한 약제학적 담체는 약제학 분야에서 잘 알려져 있다. 상기 담체(들)은 본 발명의 유효성분의 효능에 악영향을 미치지 않고 그의 수용자(recipient)에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능(acceptable)"해야 한다. 전형적으로, 상기 담체는 멸균되고 발열원이 없는 물 또는 식염수일 것이다; 그러나, 다른 허용가능한 담체가 사용될 수 있다. 따라서, "약제학적으로 허용가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)" 및 "약제학적으로 허용가능한 부형제(pharmaceutically acceptable excipient)"는 단순히 담체로서 작용하도록 의도된, 즉, 그 자체의 생물학적 활성을 갖는 것으로 의도되지 않는, 제제의 일부를 형성하는데 사용된 화합물(들)을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제는 일반적으로 안전하고, 무독성이다. 본 명세서에 사용된 것과 같은 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제는 1 이상의 담체 및/또는 부형제를 모두 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비 톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
부형제는 하나 이상의 탄수화물, 폴리머, 지질 및 미네랄일 수 있다. 탄수화물의 예는 락토스, 수크로스, 만니톨, 및 시클로덱스트린을 포함하고, 이것은 예를 들여, 동결건조를 가능하게 하기 위해 조성물에 첨가된다. 폴리머의 예는 전분, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 에틸히드록시에틸 셀룰로스, 알기네이트, 카라기난, 히알루론산 및 그의 유도체, 폴리아크릴산, 폴리술포네이트, 폴리에틸렌글리콜/폴리에틸렌 옥시드, 폴리에틸렌옥시드/폴리프로필렌 옥시드 코폴리머, 상이한 가수분해도(degree of hydrolysis)의 폴리비닐알콜/폴리비닐아세테이트, 및 모든 상이한 분자량의 폴리비닐피롤리돈이고, 이들은 예를 들어, 점도 조절을 위해, 접착을 이루기 위해, 또는 화학적 및 단백질 분해성 분해로부터 지질을 보호하기 위해 상기 조성물에 첨가된다. 지질의 예는 지방산, 인지질, 인산, 모노-, 다이-, 및 트리글리세리드, 세라마이드, 모든 상이한 아실 사슬 길이 및 포화의 스핑고지질 및 당지질, 달걀 레시틴, 콩 레시틴, 수소화된 달걀 및 콩 레시틴이고, 이들은 폴리머에 대한 이유와 유사한 이유로 조성물에 첨가된다. 미네랄의 예는 탈크, 산화마그네슘, 산화아연 및 산화티타늄이고, 이들은 액체 축적의 감소 또는 유리한 색소 특성과 같은 이점을 수득하기 위해 상기 조성물에 첨가된다.
희석제(diluent)는 약제학적 제조에서 펩타이드를 희석할 목적을 갖는 수성 또는 비-수성 용액을 의미하는 것으로 의도된다. 희석제는 하나 이상의 식염수(saline), 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올 또는 (홍화유, 옥수수유, 땅콩 기름, 면실유 또는 참기름과 같은) 오일일 수 있다.
희석제는 또한 완충액으로서 기능할 수 있다. 용어 "완충액(buffer)"은 pH를 안정화하는 목적을 갖는 산-염기 혼합물을 함유하는 수성 용액을 의미하는 것으로 의도된다. 완충액의 예는 Trizma, Bicine, Tricine, MOPS, MOPSO, MOBS, Tris, Hepes, HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르타레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 예컨대 정맥내 투여, 피하 투여, 근육 투여, 복강 내 투여, 척수강 내 투여, 뇌내 투여, 흉골내 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.0001-100 mg/kg이다. 본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량"은 상술한 질환을 예방 또는 치료하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "예방"은 질환 또는 질환 상태의 방지 또는 보호적인 치료를 의미한다. 본 명세서에서 용어 "치료"는 질환 상태의 감소, 억제, 진정 또는 근절을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 좌제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 상술한 유효성분 이외에 다른 약제학적 활성 약제 및 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 상기 "조합"은 동시 또는 병용투여로 표현될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 화학치료, 방사선 치료, 종양-표적 치료, 보조 치료, 면역치료 또는 수술에 의해 암을 치료하는 다른 방법과 조합하여 추가로 사용될 수 있다.
상술한 본 발명의 약제학적 조성물과 조합하여 사용될 수 있는 치료제로는 당업계에 공지된 1 이상의 화학치료제(예컨대 아스파라기나제, 부설판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴), 1 이상의 표적치료제(예컨대 베바시주맙(bevacizumab), 올라파립(olaparib), PD-1/PD-L1 특이적인 면역 관문 억제제(예컨대 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 세미플리맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 티슬레리주맙, 스파르탈리주맙(PDR001), 세트렐리맙(JNJ-63723283), 토리팔리맙(JS001), 캄렐리주맙(SHR-1210), 신틸리맙(IBI308), AB122(GLS-010), AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, BMS936559, JTX-4014, BGB-108, SHR-1210, MEDI4736, FAZ053, BCD-100, KN035, CS1001, BAT1306, LZM009, AK105, HLX10, SHR-1316, CBT-502(TQB2450), A167(KL-A167), STI-A101(ZKAB001), CK-301, BGB-A333, MSB-2311, HLX20, TSR-042, 또는 LY3300054)가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 단백질을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물을 치료가 필요한 대상체(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.
본 발명의 치료방법의 대상 질병인 상기 암은 약제학적 조성물의 치료 대상 질환과 관련하여 정의한 것과 같다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 대상체는 포유동물 또는 인간이다.
본 발명의 암의 치료방법은 상술한 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 방법이므로, 중복되는 내용에 대해서는 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명은 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 단백질은 다양한 암종에서 발현이 증가되는 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질인 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에, 특이적으로 결합하여 암의 예방 또는 치료에 유용하게 적용될 수 있다.
도 1a는 4H_αMCL1를 컴퓨터를 이용하여 설계하는 과정을 나타낸 것이다.
도 1b는 BCL-xL-BIM BH3 구조의 BIM BH3 서열을 4H_αMCL1의 네번째 나선에 접목(engraft)하는 과정을 나타낸 것이다.
도 2a는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 통한 BCL-xL/MCL-1 결합 단백질의 모델 스크리닝, 선택, KD 측정을 나타낸 것이다.
도 2b는 크기배제 크로마토그래 결과를 나타낸 것이다.
도 2c는 4H_αBM_1-BCL-xL의 결정구조를 나타낸 것이다. BCL-xL이 BCL-xL 결합 부위 및 MCL-1 결합 부위 모두에 결합하며(왼쪽), 결정된 구조는 디자인된 모델과 1.062 Å의 Cα RMSD로 밀접하게 중첩되었다(가운데). 오른쪽 그림은 보존된 핫스팟 잔기를 나타낸 것이다.
도 2d는 BCL-xL의 나선 α2와 α3에 일어난 형태적 변화를 나타낸 것이다.
도 3a는 BCL-xL의 나선 α2 및 α3과의 국소(local) 상호작용을 최적화하기 위한 서열 디자인 과정을 나타낸 것이다.
도 3b는 서열 디자인 후 선택된 3개 모델의 SPR 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3c는 4H_αBM_2-BCL-xL의 결정 구조를 나타낸 것이다. BCL-xL이 BCL-xL 결합 부위 및 MCL-1 결합 부위 모두에 결합하며(왼쪽), BCL-xL 나선 α2 및 α3을 포함한 모든 영역(region)에서 디자인된 모델과 0.409 Å의 Cα RMSD로 밀접하게 중첩하였다(가운데). 오른쪽 그림은 BCL-xL의 나선 α2 및 α3와 4H_aBM_2의 상호작용을 나타낸 것이다.
도 3d는 BCL-xL의 BIM BH3 또는 4H_aBM_2와의 인터페이스(interface)를 나타낸 것이다.
도 3e는 4H_αBM_2-MCL-1 및 αMCL1-MCL-1의 구조적 정렬(structural alignment)을 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 3f는 4H_αBM_2(I54E/G58E)과 MCL-1의 상호작용을 나타낸 것이다. 4H_αBM_2와 MCL-1 결합 부위에 I54E/G58E 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다(왼쪽). 4H_αBM_2(I54E/G58E)와 MCL-1의 결합 친화도를 SPR로 측정한 것이다(오른쪽).
도 4a는 4H_αBM_2의 MCL-1 결합 부위에 I54E/G58E 돌연변이를, BCL-xL 결합 부위에 I143L 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다.
도 4b는 BCL-xL 결합 부위에 I143L 돌연변이를 도입한 경우 BCL-xL 결합에 영향을 미치지 않고 MCL-1에 입체 장애를 도입할 수 있음을 나타낸 것이다.
도 4c는 SPR을 통하여 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질에 대한 결합 친화도를 측정한 것을 나타낸 것이다.
도 4d는 MCL-1 결합 부위와 MCL-2의 상호작용을 나타낸 것이다. 원래 MCL-1 결합 부위가 동일한 효능을 유지하는지 여부를 관찰하기 위하여 4H_αBM_3에 L147E 및 G151E 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다(왼쪽). 4H_αBM_3(L147E/G151E)의 MCL-1에 대한 결합 친화도를 SPR로 측정한 것이다(오른쪽).
도 5a는 K562, HCT-116, SW620, MEWO 및 A375 암 세포주의 세포 생존능 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5b 및 도 5c는 세포 독성을 알아보기 위한 웨스턴 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 1b는 BCL-xL-BIM BH3 구조의 BIM BH3 서열을 4H_αMCL1의 네번째 나선에 접목(engraft)하는 과정을 나타낸 것이다.
도 2a는 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 통한 BCL-xL/MCL-1 결합 단백질의 모델 스크리닝, 선택, KD 측정을 나타낸 것이다.
도 2b는 크기배제 크로마토그래 결과를 나타낸 것이다.
도 2c는 4H_αBM_1-BCL-xL의 결정구조를 나타낸 것이다. BCL-xL이 BCL-xL 결합 부위 및 MCL-1 결합 부위 모두에 결합하며(왼쪽), 결정된 구조는 디자인된 모델과 1.062 Å의 Cα RMSD로 밀접하게 중첩되었다(가운데). 오른쪽 그림은 보존된 핫스팟 잔기를 나타낸 것이다.
도 2d는 BCL-xL의 나선 α2와 α3에 일어난 형태적 변화를 나타낸 것이다.
도 3a는 BCL-xL의 나선 α2 및 α3과의 국소(local) 상호작용을 최적화하기 위한 서열 디자인 과정을 나타낸 것이다.
도 3b는 서열 디자인 후 선택된 3개 모델의 SPR 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3c는 4H_αBM_2-BCL-xL의 결정 구조를 나타낸 것이다. BCL-xL이 BCL-xL 결합 부위 및 MCL-1 결합 부위 모두에 결합하며(왼쪽), BCL-xL 나선 α2 및 α3을 포함한 모든 영역(region)에서 디자인된 모델과 0.409 Å의 Cα RMSD로 밀접하게 중첩하였다(가운데). 오른쪽 그림은 BCL-xL의 나선 α2 및 α3와 4H_aBM_2의 상호작용을 나타낸 것이다.
도 3d는 BCL-xL의 BIM BH3 또는 4H_aBM_2와의 인터페이스(interface)를 나타낸 것이다.
도 3e는 4H_αBM_2-MCL-1 및 αMCL1-MCL-1의 구조적 정렬(structural alignment)을 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 3f는 4H_αBM_2(I54E/G58E)과 MCL-1의 상호작용을 나타낸 것이다. 4H_αBM_2와 MCL-1 결합 부위에 I54E/G58E 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다(왼쪽). 4H_αBM_2(I54E/G58E)와 MCL-1의 결합 친화도를 SPR로 측정한 것이다(오른쪽).
도 4a는 4H_αBM_2의 MCL-1 결합 부위에 I54E/G58E 돌연변이를, BCL-xL 결합 부위에 I143L 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다.
도 4b는 BCL-xL 결합 부위에 I143L 돌연변이를 도입한 경우 BCL-xL 결합에 영향을 미치지 않고 MCL-1에 입체 장애를 도입할 수 있음을 나타낸 것이다.
도 4c는 SPR을 통하여 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질에 대한 결합 친화도를 측정한 것을 나타낸 것이다.
도 4d는 MCL-1 결합 부위와 MCL-2의 상호작용을 나타낸 것이다. 원래 MCL-1 결합 부위가 동일한 효능을 유지하는지 여부를 관찰하기 위하여 4H_αBM_3에 L147E 및 G151E 돌연변이를 도입한 모식도를 나타낸 것이다(왼쪽). 4H_αBM_3(L147E/G151E)의 MCL-1에 대한 결합 친화도를 SPR로 측정한 것이다(오른쪽).
도 5a는 K562, HCT-116, SW620, MEWO 및 A375 암 세포주의 세포 생존능 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5b 및 도 5c는 세포 독성을 알아보기 위한 웨스턴 블롯 분석 결과를 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
<실험재료 및 실험방법>
1. 컴퓨터를 이용한 디자인(Computational design)
단백질을 디자인하기 위하여 Rosetta software를 사용하였고, αMCL1에 추가될 네번째 나선 세트를 생성하기 위하여 BundleGridSampler mover를 사용하였다. 그 후, 모델을 시각적으로 검사하고 αMCL1 표면과 각 4번째 나선의 6 Å 이내 영역에 대한 인터페이스 디자인을 생성하였다. 총 에너지 점수(total energy score), △△G, 인터페이스 모양 상보성interface shape complementarity) 및 시각적 검사를 통하여 200 개의 디자인된 모델 중 1 개를 선택하였다. Remodel mover를 이용하여 네번째 나선 세트를 αMCL1의 C-말단에 연결하였으며, FastDesign mover를 사용하여 네번째 나선의 서열 디자인 및 네번째 나선과 αMCL1의 인터페이스 서열 디자인을 수행하였다. BIM BH3 펩타이드와 복합체를 이루는 BCL-xL의 결정 구조(PDB entry: 3FLD)를 이용하여 핫스팟 잔기(hotspot residues)로 지정된 7 개의 잔기가 있는 네 번째 나선에 BH3 서열을 모티프 그래프팅(motif grafting)하였다. 이러한 핫스팟 잔기를 제외하고, BCL-xL의 8.3 Å 내의 4-나선 번들(four-helix bundle)의 모든 잔기에 대하여 서열 디자인을 수행하였다. 총 에너지 점수(total energy score), △△G, 인터페이스 모양 상보성interface shape complementarity) 및 시각적 검사를 통하여 총 500 개의 디자인된 모델 중 8 개를 선택하였다. 디자인의 두 번째 라운드에서 BCL-xL과 복합체를 이루는 4H_αBM_1의 결정 구조가 서열 최적화에 사용되었으며, 6 개의 잔기만 변경될 수 있었다.
2. 단백질 발현, 정제 및 크기배제 크로마토그래피(Protein expression, purification, and size-exclusion chromatography)
디자인된 단백질을 인코딩하는 DNA 단편을 합성하였고(IDT), E. coli 또는 포유동물 세포에서 발현시키기 위하여 각각 pJK hTx 또는 pCW57.1 벡터에 클로닝하였다. BCL-2 계열 단백질들도 pJK hTx 벡터를 이용하여 발현하였다. BCL-2 계열 단백질 컨스트럭트로는 BCL-2 (1-34:chimeric loop:92-203), BCL-B (1-177;C30S/C138S), BCL-W (1-164), BCL-xL (1-44:85-209), BFL-1 (1-151;C4S/C19S), MCL-1 (172-321)가 있었다. BCL-2 계열 단백질의 비오틴화를 위하여, 비오틴화 서열(GLNDIFEAQKIEWHE)을 포함하는 BCL-2 단백질을 사용하여 pCDFduet 벡터에서 BirA를 발현시켰다. 단백질은 TB 배지에서 성장한 E.coli Lemo(DE3) 균주에서 18℃에서 발현시켰다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 재현탁하고, 초음파처리에 의해 용해시켰다. 상등액을 pre-equilibrated Co-NTA resin (Thermo Fisher Scientific)에 로딩하였고, 결합된 단백질을 100 mM NaCl, 20 mM Tris (pH 7.5) 및 150 mM 이미다졸을 포함하는 완충 용액으로 용출시켰다. 용출된 단백질을 HiLoad 26/60 Superdex 75 column (GE Healthcare)을 사용한 크기배제 크로마토그래피를 통하여 추가 정제하였다. 정성적 결합 분석을 위하여 정제된 단백질을 Superdex 75 Increase 10/300 GL column (GE Healthcare)에 로딩하였고, 크기 마커 단백질의 용출을 기반으로 단백질 복합체의 겉보기 질량(apparent mass)을 추정하였다.
3. 결정화 및 구조 결정(Crystallization and structure determination)
4H_αBM_1(서열번호 3) 또는 4H_αBM_2(서열번호 4)를 BCL-xL와 혼합하고, 생성된 복합체를 HiLoad 26/60 Superdex 75 column(GE Healthcare)를 이용한 크기배제 크로마토그래피로 분리하였다. MCL-1에 결합한 4H_αBM_2도 동일한 방법으로 정제하였다. 20℃에서 현수식 증기확산법(hanging-drop vapor diffusion method)으로 결정을 얻었다. 4H_αBM_1-BCL-xL의 결정은 복합체 (52.3mg/ml)를 4% PEG 3,000(w/v) 및 0.1 M 아세트산나트륨(pH 4.5)이 포함된 침전 용액과 혼합하여 얻었다. 4H_αBM_2-BCL-xL의 결정은 복합체(55 mg/ml)를 10% PEG 10,000 (w/v) 및 0.1 M 아세트산나트륨(pH 4.5)이 포함된 침전 용액과 혼합하여 얻었다. 4H_αBM_2-MCL-1의 결정은 복합체(23.5 mg/ml)를 12% PEG 6,000 (w/v), 0.1 M 염화마그네슘 및 0.1 M ADA (pH 6.5)가 포함된 침전 용액과 혼합하여 얻었다. 결정들을 동결보호제 용액에 잠시 담갔다. 동결보호제 용액은 4H_αBM_1-BCL-xL 및 4H_αBM_2-MCL-1 결정의 경우에는 17.5% 에틸렌 글라이콜을 추가적으로, 또는 4H_αBM_2-BCL-xL의 경우에는 17% 에틸렌 글라이콜을 추가적으로 포함하는 저장용액과 동일한 것이었다. X-선 회절 데이터세트는 대한민국 포항가속기연구소(Pohang Accelerator Laboratory)의 빔라인(beamline) 5C에서 수집하였다. 4H_αBM_1-BCL-xL 복합체의 구조는 단일 이상 분산법(single anomalous dispersion method)에 의해 결정되었다. 그 후, PHENIX software suit를 이용하여 전자 밀도 및 구조 교정(structure refinement)에 대한 자동 모델 구축을 수행하였다. 4H_αBM_2-BCL-xL 및 4H_αBM_2-MCL-1 복합체의 구조는 각각의 디자인 모델을 검색 모델로 사용하여 분자 교체(molecular replacement)를 통해 결정한 다음 PHENIX를 사용하여 구조 교정을 수행하였다. COOT 및 PHENIX 프로그램을 사용하여 수동 모델 구축 및 교정의 반복적인 라운드를 수행하였다. 모든 구조는 PYMOL software를 사용하여 설명되었다. 결정학적 데이터 통계는 표 1에 나타내었다.
4. 표면 플라즈몬 공명(Surface plasmon resonance, SPR)
SPR 데이터를 8 K device (GE Healthcare)로 수집하였다. Series S Biotin CAPture kit (GE Healthcare)를 이용하여 비오틴화된 항-아폽토시스 BCL-2 단백질을 고정하였고, 모든 실험은 HBS-EP + 용액(10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% Surfactant P20; GE Healthcare) 내에서 수행되었다. 비오틴화된 항-아폽토시스 BCL-2 단백질은 반응 단위가 100에 도달할 때까지 CAP 칩에 고정되었다. 연속적으로 희석된 분석물을 30 ㎕/분의 유속으로 주입하였다. 분석물은 단일 농도 실험을 위해 20 nM에서 사용하였다. 8 K evaluation software (GE Healthcare)를 사용하여 해리 상수(KD) 및 운동 매개변수(ka 및 kd)를 추정하였다.
5. 세포 배양(Cell culture)
HEK293T, A375, MEWO, SW620, HCT-116 및 K562 세포주는 항생제-항진균 용액 및 10% FBS가 보충된 DMEM에서 유지하였다. 모든 세포주를 37℃에서 5% CO2를 포함하는 가습 배양기에서 배양하였다.
6. 렌티바이러스 생성 및 감염
pCW57.1 렌티바이러스 벡터를 3xFLAG-태깅된 단백질을 클로닝하고 렌티바이러스를 생성하기 위해 사용하였다. T25 플라스크에서 성장한 HEK293T 세포를 Lipo-fectamine 3000 (GE Healthcare)를 이용하여 각 제조사의 지침에 따라 2.7 μg의 pCW57.1, 1.4 μg의 pRSV- REV, 1.9 μg의 pMD2.G 및 2.9 μg의 pMDL g/p RRE 벡터(각각 Addgene #41393, #12253, #12259, and #12251)로 형질감염시켰다. 바이러스 상층액을 수확하고 형질감염 72시간 후에 0.45 μm 폴리에테르설폰 필터를 사용하여 여과하였다. 바이러스가 포함된 상층액은 즉시 사용하거나 -80℃에서 분액(aliquot)으로 보관하였다. A375, MEWO, SW620, HCT-116 및 K562 세포를 8 ㎍/ml 폴리브렌과 함께 각 바이러스 상층액으로 감염시켰다. 그 후 37℃에서 48 시간 인큐베이션하고 2 ㎍/ml 퓨로마이신(puromycin) 처리에 의해 감염된 풀을 선택하였다. 퓨로마이신-내성 풀을 2 ㎍/ml 독시사이클린(doxycycline)의 유무에 따른 세포 생존능 분석 및 웨스턴 블롯 분석에 사용하였다.
7. 세포 생존능 분석(Cell viability assay)
세포 생존능을 WST-1(Roche) 시약을 사용하여 제조사의 지침에 따라 분석하였다. 성공적으로 형질도입된 세포주를 100㎕ 배양 배지에서 웰당 5000개 세포로 96-웰 플레이트에 접종하였다. 24 시간 동안 인큐베이션한 후, 2 ㎍/ml 독시사이클린을 배양 배지에 첨가하여 단백질 발현을 유도하였다. BIM의 발현에는 1/100배 낮은 농도의 독시사이클린을 사용하였다. 12 시간 인큐베이션 후 WST-1 시약을 첨가하였으며, Spark 10 M microplate reader (Tecan)을 사용하여 450 nm 및 690 nm에서 흡광도를 측정하였다.
8. 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)
독시사이클린 처리 12 시간 후에 세포를 수확하였고 protease inhibitor cocktail(Quartett)과 phosphatase inhibitor cocktail (Sigma)이 보충된 RIPA 완충액(Thermo Fisher Scientific)에서 용해하였다. BIM 검출을 위하여, 범-카스페이스 억제제(pan-caspase inhibitor) Z- VAD-FMK (MedChemExpress)를 독시사이클린 첨가 30 분 전에 첨가하였다. 그 후 세포 용해물을 얼음 위에서 1 시간 동안 인큐베이션하고 4℃에서 30 분 동안 15,000 g에서 원심분리하였다. 전체 세포 용해물의 총 단백질 농도를 BCA 단백질 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 측정하였다. 동일한 양의 용해물을 SDS-PAGE 겔에서 분리하고 PVDF 막으로 옮겼다. 이를 1차 항체와 함께 4℃에서 오버나이트 인큐베이션하였고, TBS-T로 3 회 세척하고 2차 항체와 함께 실온에서 1 시간 인큐베이션하였다. ECL Western Blotting Substrate (Thermo Fisher Scientific)로 화학발광(Chemiluminescence)을 생성하고 ChemiDoc MP (Bio-Rad)를 사용하여 검출하였다. Image Lab (Bio-Rad)을 사용하여 모든 이미지를 분석하였다. 웨스턴 블롯에 사용된 항체는 다음과 같다: anti-FLAG (Sigma, F1804), anti-BCL-xL (Abcam, ab32370), anti-MCL-1 (Abcam, ab32087), anti-γ-H2A.X (Abcam, ab81299), anti- PARP (Abcam, 191217), anti-β-actin (Abcam, ab6276), HRP-conjugated anti-rabbit IgG (Abcam, ab205718), and HRP- conjugated anti-mouse IgG (Abcam, ab6728).
<실시예 1> 컴퓨터를 이용한
BCL-xL/MCL-1 결합 단백질의 디자인
(Computational design of a BCL-xL/MCL-1 binding protein)
3-나선 번들 구조를 가진 단백질인 αMCL1(서열번호 1)로 시작하여 MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질을 디자인하였다. αMCL1는 de novo 디자인된 단백질로, MCL-1에 특이적으로, 강하게 결합하며, 해리 상수(KD)는 150 pM이다. 이 단백질은 MCL-1과의 상호작용을 담당하는 두 번째 나선에 BH3 유사 모티프를 가지고 있다. 이는 αMCL1-MCL-1 공결정 구조(PDB entry: 5JSB)에서 분명히 확인된다. 이러한 분자간 상호작용의 주요 부위 외에도 다른 두 나선도 MCL-1 결합에 기여하여 특이성을 향상시킨다. α-나선 구축(a-helix building), 루프 모델링(loop modeling), 인터페이스 서열 디자인 및 Rosetta software suite를 이용하여 총 200 개의 4-나선 번들을 생성하였다(도 1a). Rosetta 총 원자 에너지값(all atom energy values) 및 시각적 검사를 기반으로 추가 실험을 위한 1 개의 모델을 선택하고, 4H_αMCL1(서열번호 2)로 지정하였다.
4H_αMCL1를 BIM BH3 펩타이드에 결합된 BCL-xL의 결정 구조를 접목(engraft)하기 위한 템플릿(template)으로 사용하였다. 네 번째 나선에 대하여, BIM의 고도로 보존된 7 개의 BH3 잔기(즉, Ile148, Ala149, Leu152, Ile155, Gly156, Asp157 및 Phe159)를 유지하기 위하여 '핫스팟' 옵션이 있는 Rosetta의 motif grafting protocol을 사용하였다. 그 후, 출력된 모델을 대상으로 BCL-xL에서 8.3 Å - 10 Å 이내의 임의의 잔기(핫스판 잔기 제외)가 변경될 수 있고 BCL-xL에서 8.3 Å - 10 Å 이내의 잔기는 리패킹(repacking)에 제한되는 추가적 서열 디자인을 수행하였다. 500 개의 모델을 다음의 필터링 기준에 따라 평가하였다: Rosetta 총 원자 에너지 < -660, 인터페이스 모양 상보성(interface shape complementarity) > 0.62, buried unsatisfied polar atoms ≤ 3(도 1b). 모티프의 접목이 일반적으로 높은 성공률로 이루어짐을 고려하여, 시각적 검사를 통하여 8 개의 디자인을 선정하였다. 그 후 실험적 검증을 위하여 모두를 클로닝하고 E. coli에서 생산하였다.
<실시예 2> BCL-xL/MCL-1 결합 단백질의 생화학적 및 구조적 검증(Biochemical and structural validation of the BCL-xL/MCL-1 binders) - 4H_αBM_1의 디자인
추가 실험을 위해 선택한 8 개 디자인 중 5 개는 용해도가 높았고 균질하게 정제할 수 있었다. 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance, SPR)을 사용하여 BCL-xL에 대한 결합을 평가하고, 가장 결합이 강한 디자인(D81)을 선택하고 "4H_αBM_1(서열번호 3)"로 지정하였다(도 2a). 선택된 디자인의 다양한 농도로 SPR을 수행하여 해리 상수(KD)를 8.57 nM으로 측정하였다(도 2a). 크기배제 크로마토그래피를 이용하여 이 단백질이 MCL-1에만 결합할 수 있을 뿐만 아니라 BCL-xL과 MCL-1에 동시에 결합할 수 있음을 확인하였다. 이로써 4H_αBM_1는 MCL-1 결합 부위가 손상되지 않았으며 BCL-xL과 MCL-1이 입체 장애(steric hinderance) 없이 동시에 결합할 수 있음을 알 수 있었다(도 2b).
그 후, 4H_αBM_1-BCL-xL의 결정 구조를 결정하였다(표 1). αMCL1은 BCL-xL에 대한 친화도가 낮기 때문에(KD = 340 μM) 4H_αBM_1과 BCL-xL이 1:1 복합체를 형성할 것으로 예상하였으나, 결정 구조에서 BCL-xL은 MCL-1 결합 부위와 설계된 BCL-xL 결합 부위 모두에 결합하였다. 이는 결정화 동안 고농도의 단백질이 사용되었기 때문이거나 결정 패킹 상호작용(crystal packing interactions)이 BCL-xL과 MCL-1 결합 부위의 결합을 촉진하기 때문일 수 있다. 결정된 구조는 디자인된 모델과 1.062 Å의 Cα RMSD(root mean square deviation, 평균 제곱근 편차)로 밀접하게 중첩되어 4H_αBM_1 설계가 대체로 정확했음을 확인할 수 있었다(도 2c). 한편, 디자인된 모델에서는 BCL-xL 나선 α2와 α3에 형태적 변화(conformational change)가 있었는데, 원래 형태와 비교하여 나선 α2의 1턴 확장(one-turn extension)과 나선 α3의 느슨한 나선 경향(loosened helical propensity)이 관찰되었다(도 2d). 변경된 BCL-xL 부분이 주요 결정 패킹 상호작용에 관여하지 않는 점에 비추어 볼 때, 이 형태적 변화는 4H_αBM_1과 보다 유리한 상호작용을 형성하기 위한 것으로 보인다. 유사한 구조가 BH3 펩타이드에 결합된 BCL-xL의 다른 결정 구조에서도 발견되며, 이는 BCL-xL의 이 부분이 상황에 따라 두 가지 대체 형태 중 하나를 채택한다는 것을 암시한다.
<실시예 3> 4H_αBM_1-BCL-xL의 결정 구조를 기반으로 한 추가적 디자인(Further computational design based on the crystal structure of 4H_αBM_1-BCL-xL) - 4H_αBM_2의 디자인
변경된 형태가 4H_αBM_1에 결합하는 데 더 에너지적으로 유리하다면, 서열 디자인 단계에서의 BCL-xL 나선 α2 및 α3 근처 아미노산 샘플링은 유효하지 않게 된다. 결정 구조를 템플릿으로 이용하여, 두 나선의 8 Å 내에 속하는 6 개의 선택된 잔기 Asp12, Ala15, Asn16, Arg19, Ala142 및 Thr146의 서열 디자인을 통해 α2 및 α3과의 국소(local) 상호작용을 최적화하고자 하였다(도 3a). 상술한 기준을 사용하여 생성된 모델 50 개 중 3 개를 선택하였고 BCL-xL에 대한 결합 친화도를 추정하였다. 4H_αBM_1과 비교하여 세 가지 디자인 모두 단일 분석 물질 농도에서 SPR 분석에서 향상된 결합 친화도를 나타냈다(도 3b). 가장 큰 결합 친화도를 나타낸 모델은 12번째 아미노산 잔기 Asp가 Ile로, 16번째 아미노산 잔기 Asn이 Arg로, 19번째 아미노산 잔기 Arg이 Thr로, 142번째 아미노산 잔기 Ala이 Glu로, 146번째 아미노산 잔기 Thr이 Arg로 치환된 모델이었으며, 이를 "4H_αBM_2" (서열번호 4)로 지정하였다. 4H_αBM_2의 BCL-xL에 대한 KD가 0.21 nM이었으며, 이는 4H_αBM_1(KD = 8.57 nM)보다 40 배 더 강한 결합을 나타낸다.
이후, 4H_αBM_2-BCL-xL의 결정 구조를 결정하였다(표 1). 4H_αBM_2BCL-xL의 경우에도, 결정 구조는 4H_αBM_2와 BCL-xL 사이의 1:2 복합체를 나타내며 BCL-xL 나선 α2 및 α3을 포함한 모든 영역(region)에서 디자인된 모델과 0.409 Å의 Cα RMSD로 밀접하게 일치하였다(도 3c). 결정 구조를 통하여 D12I, N16R 및 T146R 치환이 분자간 상호작용을 개선함을 알 수 있었다. Ile12는 BCL-xL의 Ala104 및 Phe105와 소수성 상호작용을 형성하는 반면, Arg16은 BCL-xL 나선 α2의 끝에서 Ala104의 백본(backbone) 산소와 정전기적 상호작용을 형성한다. 특히, 4H_αBM_2의 Arg146의 경우, 아미노기는 BCL-xL의 Gln111과 수소결합을 하고, 그것의 b, c, d 탄소 원자는 BCL-xL의 Phe105와 밀접하게 접촉함을 통하여 정전기적 상호작용뿐만 아니라 지방족 부분과의 소수성 상호작용에 기여한다(도 3c).
결정 구조에서 BCL-xL의 용매 접근 가능한 표면의 1511 Å2는 4H_αBM_2에 묻힌다. 이 영역은 우리의 디자인에 사용된 템플릿 구조에서 BH3 펩타이드에 의해 묻힌 BCL-xL 표면의 1160 Å2보다 훨씬 더 넓은 영역이다(PDB entry: 3FDL). 이 더 넓은 영역은 4H_αBM_2의 네 번째 나선의 BH3 유사 모티프와 BCL-xL 사이의 주요 상호 작용뿐만 아니라 첫번째 및 세번째 나선이 제공하는 추가 상호 작용으로 인한 것으로 보인다(도 3d). 이러한 추가 상호작용은 BCL-xL에 대한 4H_αBM_2의 결합 친화도(KD 0.21 nM)가 BCL-xL에 대한 36-mer BIM BH3 펩타이드의 결합 친화도(KD 6.67 nM)보다 훨씬 높은 이유를 설명할 수 있을 것이다.
4H_αBM_2-MCL-1의 결정 구조 역시 결정하였다(도 3e, 표 1). 4H_αBM_2-BCL-xL 복합체와 달리 두 단백질 사이에 1:1 이종이량체를 나타냈으며, 이것은 새로 디자인된 BCL-xL 결합 부위가 MCL-1에 대한 친화도가 더 낮다는 것을 나타낸다. 4H_αBM_2-MCL-1 및 αMCL1-MCL-1(PDB entry: 5JSB)의 구조적 정렬(structural alignment)을 수행한 결과, Cα RMSD이 0.984 Å로, 디자인된 모델이 αMCL1의 3-나선 번들 구조에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다(도 3e).
<실시예 4> 디자인된 결합 부위의 항-아폽토시스 BCL-2 단백질에 대한 친화도(The afnity of the designed binding site for anti-apoptotic BCL-2 proteins) 측정 및 4H_αBM_3의 디자인
원래 αMCL1의 MCL-1 결합 부위는 0.15 nM의 KD로 MCL-1에 대해 매우 특이적이며, 다른 항-아폽토시스 BCL-2 단백질에 대한 친화도는 훨씬 낮다(KD >10 μM). 새로 디자인된 4H_αBM_2의 BCL-xL 결합 부위의 특이성을 평가하기 위해 우리는 먼저 두 번째 α-나선의 MCL-1 결합 부위에 I54E 및 G58E 돌연변이를 도입하였다(도 3f). 이러한 보존된 잔기의 돌연변이는 일반적으로 항-아폽토시스 BCL-2 단백질에 대한 결합을 방지한다. 따라서 생성된 돌연변이 단백질인 4H_αBM_2(I54E/G58E)는 네 번째 α-나선의 새로 디자인된 BCL-xL 결합 부위를 통해서만 항-아폽토시스 BCL-2 단백질과 상호작용할 수 있어야 한다. MCL-1 결합 부위와 달리, 새로 디자인된 BCL-xL 결합 부위는 MCL-1과 상당히 높은 친화도(19.2 nM의 KD)로 결합하였다(도 3f). 결합 특이성을 향상시키기 위하여, 4H_αBM_2-BCL-xL 복합체에서 MCL-1의 구조적 중첩(structural superposition)을 조사하였다. 그 결과, Ile143 핫스팟 잔기를 류신으로 변경하는 경우 BCL-xL 결합에 영향을 미치지 않고 MCL-1에 입체 장애를 도입할 수 있음을 확인하였다. 이 I143L 돌연변이를 포함하는 4H_αBM_2(I143L/I54E/G58E)를 생성하고 6 개의 서로 다른 항-아폽토시스 BCL-2 단백질(즉, BCL-2, BCL-B, BCL-W, BCL-xL, BFL-1 (A1) 및 MCL-1)과의 상호 작용을 측정하였다(도 4c). 그 결과, 예상대로 4H_αBM_2(I143L/I54E/G58E)는 BCL-xL에 대하여 피코몰 범위의 친화도를 유지하면서 MCL-1에 대해 7 배 감소된 친화도(133 nM의 KD)를 나타냈다(도 4c). 이 변이체는 BCL-2(2.04 nM의 KD) 및 BCL-W(1.59 nM의 KD)에 대해 상당히 높은 친화도를 보였고, 이는 BCL-xL과 두 단백질의 높은 서열 상동성을 반영한다. 반면, 변이체는 BCL-B(146 nM의 KD)와 BFL-1(16.4 nM의 KD)에 대해서는 훨씬 낮은 친화도를 보였다. 이 특이성이 강화된 디자인 4H_αBM_2(I143L)를 "4H_αBM_3"(서열번호 5)으로 지정하였다. MCL-1이 BCL-xL 결합 부위에 결합하는 것을 방지하기 위하여 4H_αBM_3에 L147E 및 G151E 돌연변이를 도입하고 원래 MCL-1 결합 부위가 동일한 효능을 유지하는지 여부를 관찰하였다(도 4d). 이 돌연변이체 4H_αBM_3(L147E/G151E)은 MCL-1(196 pM의 KD)에 강하게 결합하였으며, 이는 αMCL1(150 pM의 KD)의 친화도와 유사하였다(도 4d).
<실시예 5>
4H_αBM_3의 아폽토시스 유도 활성(Proapoptotic activity of 4H_aBM_3) 평가
4H_αBM_3의 아폽토시스 유발(apoptogenic) 활성을 평가하기 위한 세포 생존능 실험을 수행하였다. 렌티바이러스를 사용하여 K562, HCT-116, SW620, MEWO 및 A375 암 세포주에서 4H_αBM_3을 발현하였다. 또한, 4H_αBM_3 외에도 4H_αBM_3의 C-말단에 BIM BH3 서열(서열번호 9) 또는 BIM의 C-말단 서열(C-terminal sequence, CTS)(서열번호 10)이 각각 융합된 4H_αBM_3_BH3 및 4H_αBM_3_CTS 컨스트럭트를 제작하였다. BIM BH3는 BAX/BAK를 직접 활성화하며, BIM의 CTS는 미토콘드리아 표적 서열로 BIM이 항-아폽토시스 BCL-2 단백질의 작용 부위인 미토콘드리아 외막으로 이동하는 것을 촉진한다. 따라서, 두 컨스트럭트가 H_αBM_3의 아폽토시스 유발 효능을 향상시킬 수 있을 것으로 예상하였다.
실험 결과, 빈 벡터(empty vector) 음성 대조군은 어떤 세포주에서도 세포 사멸을 유도하지 않았으며, 각각 MCL-1 또는 BCL-xL만을 표적으로 하는 αMCL1 또는 4H_αBM_3(I54E/G58E)을 발현시킨 경우에도 아폽토시스가 유도되지 않았다. 대조적으로, 4H_αBM_3(MCL-1 및 BCL-xL 모두를 표적화)의 발현은 세포 생존율의 명백한 감소를 유도하였다(K562: 61 %, HCT-116: 79 %, SW620: 35 %, MEWO: 53 % 및 A375: 22 %). 특히, 4H_αBM_3_BH3 및 4H_αBM_3_CTS는 세포 생존율을 더욱 감소시켜(4H_αBM_3_BH3은 K562: 38 %, HCT-116: 56 %, SW620: 23 %, MEWO: 32 % 및 A375: 11 %, 4H_αBM_3_CTS은 K562: 33 %, HCT-116: 50 %, SW620: 27 %, MEWO: 33 % 및 A375: 11 %), 융합된 서열이 4H_αBM_3의 아폽토시스 유발 활성을 향상시킨다는 것을 확인할 수 있었다(도 5a).
다음으로, 우리는 4H_αBM_3, 4H_αBM_3_BH3 및 4H_αBM_3_CTS의 세포독성 활성이 전장 인간 BIM보다 더 강한지 여부를 확인하기 위한 실험을 진행하였다. BIM은 강한 세포독성을 나타냈지만 초기 발현 수준이 너무 높으므로 유사한 수준의 단백질 발현을 유도하기 위해 1/100배 저농도의 독시사이클린을 사용하였다(도 5a 및 도 5b). 발현 수준을 조절한 실험 결과, 4H_αBM_3, 4H_αBM_3-BH3 및 4H_αBM_3-CTS가 모두 전장 인간 BIM보다 더 강한 세포독성을 나타낸다는 것을 확인할 수 있었다(도 5a 및 도 5b). 이 더 높은 세포 독성은 4H_αBM_3의 MCL-1 및 BCL-xL에 대한 결합 친화도가 인간 BIM BH3의 결합 친화도의 8 배 이상으로 강함을 반영하는 것으로 보인다. 우리가 관찰한 세포 사멸은 카스페이스 기질 PARP의 절단과 세포 사멸 마커 γ-H2A.X의 발현으로 확인하였으므로, 아폽토시스에 의한 것일 가능성이 가장 크다(도 5c).
상기 실험을 통하여, 4H_αBM_3, 4H_αBM_3_BH3 및 4H_αBM_3_CTS은 전장 인간 BIM보다 MCL-1 및 BCL-xL에 강하게 결합하여 아폽토시스를 유발함을 알 수 있었다.
Claims (12)
- 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질은 항-아폽토시스(anti-apoptotic) BCL-2 계열 단백질(BCL-2 family protein)에 결합하는 것인, 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질은 MCL-1(myeloid cell leukemia 1); 및 BCL-2(B-cell lymphoma 2), BCL-B, BCL-W, BCL-xL(B-cell lymphoma-extra large) 및 BFL-1(A1)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질(BCL-2 family protein)에 동시에 결합하는 것인, 단백질.
- 제3항에 있어서, 상기 항-아폽토시스 BCL-2 계열 단백질은 BCL-xL인, 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질에 아폽토시스 유발 활성(apoptogenic activity)을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 융합된 것인, 단백질.
- 제5항에 있어서, 상기 아폽토시스 유발 활성을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 상기 서열번호 3의 아미노산 서열, 서열번호 4의 아미노산 서열 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질의 C-말단에 융합된 것이고, 상기 아폽토시스 활성을 증가시키는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 9의 아미노산 서열 또는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단백질.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
- 제7항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터.
- 제8항의 재조합 벡터를 포함하는, 분리된 숙주세포.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 단백질을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
- 제10항에 있어서, 상기 단백질은 아폽토시스를 촉진하여 암세포의 사멸을 유도하는 것인, 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
- 제10항에 있어서, 상기 암은 비호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma), 호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma), 급성 골수성 백혈병 (acute-myeloid leukemia), 급성 림프구성 백혈병 (acute-lymphoid leukemia), 다발성 골수종 (multiple myeloma), 경부암(head and neck cancer), 폐암, 비소세포폐암, 교모세포종(glioblastoma), 식도암, 위암, 대장암, 직장암, 결장암, 구강암, 인두암, 후두암, 췌장암, 유방암, 자궁 경부암, 자궁 내막체암, 난소암, 악성 흑색종 (melanoma), 전립선암, 고환암, 방광암, 신장암, 간암, 췌장암, 골암, 결합 조직암, 피부암, 뇌암, 갑상선암 및 중피종 (mesothelioma)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/KR2022/015234 WO2023195588A1 (ko) | 2022-04-06 | 2022-10-11 | Mcl-1 및 bcl-xl에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020220043052 | 2022-04-06 | ||
KR20220043052 | 2022-04-06 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20230144443A true KR20230144443A (ko) | 2023-10-16 |
Family
ID=88506360
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020220100950A KR20230144443A (ko) | 2022-04-06 | 2022-08-11 | MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20230144443A (ko) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101692705B1 (ko) | 2008-12-05 | 2017-01-04 | 애브비 인코포레이티드 | 암 및 면역 질환의 치료를 위한 Bcl2선택적 아폽토시스-유도제로서의 설폰아미드 유도체 |
-
2022
- 2022-08-11 KR KR1020220100950A patent/KR20230144443A/ko unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101692705B1 (ko) | 2008-12-05 | 2017-01-04 | 애브비 인코포레이티드 | 암 및 면역 질환의 치료를 위한 Bcl2선택적 아폽토시스-유도제로서의 설폰아미드 유도체 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ren et al. | How HIV-1 Nef hijacks the AP-2 clathrin adaptor to downregulate CD4 | |
AU784845B2 (en) | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway | |
AU2013351096B2 (en) | Binding proteins comprising at least two repeat domains against HER2 | |
US8278413B2 (en) | Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway | |
ES2279981T3 (es) | Proteinas quimericas activantes de colectina-complemento. | |
Schatz-Jakobsen et al. | Structural and functional characterization of human and murine C5a anaphylatoxins | |
Noble et al. | The X-ray structure of human calbindin-D28K: An improved model | |
CA3186268A1 (en) | Inhibitors of cbl autoinhibition and related methods | |
EP1869185B1 (en) | Conjugate comprising p21 protein for the treatment of cancer | |
KR20230144443A (ko) | MCL-1 및 BCL-xL에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 | |
WO2023195588A1 (ko) | Mcl-1 및 bcl-xl에 동시에 결합하는 단백질 및 이의 용도 | |
US20110230421A1 (en) | Fusion proteins of apoptin-protein transduction domain of carboxyl-terminus of ec-sod | |
US11566045B2 (en) | Tumor targeting polypeptide and method of use thereof | |
US20230090247A1 (en) | Molecules targeting ras protein | |
CN113121702A (zh) | 用于胞内递送分子的多聚化递送系统 | |
KR102496784B1 (ko) | Cep55-tex14 단백질 결정 및 그 용도 | |
US20150266922A1 (en) | DPP8 and DPP9 Peptide Inhibitors | |
US20140005119A1 (en) | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE ACTIVITY OF P110a MUTANT PROTEINS | |
KR101542891B1 (ko) | Akt에 의해 활성화되어 암세포를 선별 사멸시키는 신규 BIM BH3 돌연변이 펩타이드 | |
WO2021091871A1 (en) | High affinity and dual-specificity peptide antagonists of mdm2 and mdmx for p53 activation | |
Villiers et al. | 22. Engineering of an HB-EGF Inhibitor from the Diphtheria Toxin Receptor–Binding Domain for the Treatment of HB-EGF-Related Diseases | |
WO2013028527A1 (en) | Compositions and methods for treating cancer | |
AU2012203529A1 (en) | Cell-Permeable Peptide Inhibitors of the JNK Signal Transduction Pathway |