KR20230143108A - Cd30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도 - Google Patents
Cd30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230143108A KR20230143108A KR1020230041676A KR20230041676A KR20230143108A KR 20230143108 A KR20230143108 A KR 20230143108A KR 1020230041676 A KR1020230041676 A KR 1020230041676A KR 20230041676 A KR20230041676 A KR 20230041676A KR 20230143108 A KR20230143108 A KR 20230143108A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- car
- cells
- human
- domain
- sequence
- Prior art date
Links
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 322
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 title claims abstract description 158
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 title claims abstract description 105
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 title claims abstract description 105
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 172
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 34
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 105
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 103
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 103
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 79
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 66
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 64
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 63
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 57
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 57
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 56
- -1 EGP-40 Proteins 0.000 claims description 40
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 37
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 32
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 32
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 30
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 claims description 25
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 claims description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 24
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 23
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 23
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 22
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 19
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 19
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims description 18
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims description 18
- 101001014668 Homo sapiens Glypican-3 Proteins 0.000 claims description 17
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 claims description 16
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 claims description 16
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 15
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 15
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 14
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 14
- 102100032530 Glypican-3 Human genes 0.000 claims description 13
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 claims description 6
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 102000016355 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108010092372 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 4
- 101150090209 HCST gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 101000945339 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100033630 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 claims description 4
- 102100024964 Neural cell adhesion molecule L1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 claims description 4
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 claims description 4
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 claims description 2
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 claims description 2
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 2
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101710088083 Glomulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 claims description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 claims description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 claims description 2
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001078143 Homo sapiens Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 claims description 2
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 claims description 2
- 101001008874 Homo sapiens Mast/stem cell growth factor receptor Kit Proteins 0.000 claims description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051490 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule L1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000610551 Homo sapiens Prominin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001136592 Homo sapiens Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000807561 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase receptor UFO Proteins 0.000 claims description 2
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 claims description 2
- 102100020793 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710112634 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010012255 Neural Cell Adhesion Molecule L1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023832 Prolyl endopeptidase FAP Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037236 Tyrosine-protein kinase receptor UFO Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 2
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 16
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 7
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 91
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 84
- 210000002203 alpha-beta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 71
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 71
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 71
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 53
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 52
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 48
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 39
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 39
- 102100025096 Mesothelin Human genes 0.000 description 37
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 37
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 36
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 31
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 31
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 31
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 31
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 30
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 28
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 28
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 26
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 25
- 101100166600 Homo sapiens CD28 gene Proteins 0.000 description 24
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 24
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 21
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 21
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 21
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 19
- 102000050327 human TNFRSF9 Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 16
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 16
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 16
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 229950001537 amatuximab Drugs 0.000 description 13
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 13
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 13
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 12
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 12
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 12
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 102000010956 Glypican Human genes 0.000 description 10
- 108050001154 Glypican Proteins 0.000 description 10
- 108050007237 Glypican-3 Proteins 0.000 description 10
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 10
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 9
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 9
- 101000589307 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 102000052554 human NCR3 Human genes 0.000 description 9
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 8
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 8
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 8
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 7
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 7
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 7
- 102000008889 TNF receptor-associated factor TRAF Human genes 0.000 description 6
- 108050000808 TNF receptor-associated factor TRAF Proteins 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 101710201161 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Proteins 0.000 description 5
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 101150058049 car gene Proteins 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 4
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 4
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 4
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 4
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 102000048373 human GPC3 Human genes 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 101100383038 Homo sapiens CD19 gene Proteins 0.000 description 3
- 101000633520 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Proteins 0.000 description 3
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000801255 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 3
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 3
- 102000048679 human NCR3LG1 Human genes 0.000 description 3
- 102000046935 human TNFRSF17 Human genes 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001042104 Homo sapiens Inducible T-cell costimulator Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102000000160 Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Peptides and Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010080432 Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Peptides and Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 102000043396 human ICOS Human genes 0.000 description 2
- 102000050320 human TNFRSF4 Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015936 AP-1 transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108050004195 AP-1 transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101001028730 Homo sapiens Transcription factor JunB Proteins 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 102000004398 TNF receptor-associated factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000920 TNF receptor-associated factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000000728 Thymus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100037168 Transcription factor JunB Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 201000009036 biliary tract cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020790 biliary tract neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N cholesteryl hemisuccinate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)CCC(O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008571 general function Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 201000009377 thymus cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- NRWCNEBHECBWRJ-UHFFFAOYSA-M trimethyl(propyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCC[N+](C)(C)C NRWCNEBHECBWRJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
- C12N15/625—DNA sequences coding for fusion proteins containing a sequence coding for a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Abstract
본 발명은 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 본 발명은 세포내 신호전달 도메인으로 CD30 도메인 중 TRAF가 결합하는 부위의 일부 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체를 사용하여 면역 효과기 세포의 증식 및 생존을 증가시킴으로써 항종양 효능 및 사이토카인 분비능을 높이는 효과가 있다.
Description
본 발명은 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도에 관한 것이다.
지난 수십 년 간 암을 치료하기 위한 방법으로 외과적 수술(surgery), 방사선 요법(radiation therapy), 화학요법(chemotherapy) 등이 개발되어 왔으나, 심각한 부작용이나 돌연변이에 의한 내성 등 한계점들이 드러났다. 최근에는 면역관문 억제제(immune checkpoint inhibitor), 면역세포 치료제(adoptive immune cell therapy) 등이 유망한 암 치료법으로 각광받고 있다.
키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)-T 세포 치료제는 체내의 세포독성 T 세포를 꺼내서 특정한 항원을 인식할 수 있는 CAR를 발현하도록 유전공학적으로 변형시켜 다시 넣어주는 치료법이다. 이를 통해, 주조직적합성 복합체(major histocompatibility complex, MHC)에 비제한적으로 암세포가 발현하는 항원을 인식하여 선택적으로 사멸시킬 수 있다. CAR은 특정 항원을 인식할 수 있는 단일쇄 가변 단편(single chain variable fragment, scFv), 연결 도메인(spacer domain), 막관통 도메인(transmembrane domain), T 세포의 활성 신호를 전달하는 세포내 신호전달 도메인(intracellular signaling domain)으로 구성된다.
1세대 CAR는 항원을 인식하는 scFv와 하나의 세포내 신호전달 도메인으로 구성되는데, 신호전달 도메인은 T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 주요 신호전달 사슬인 CD3 zeta 또는 활성 Fc 수용체의 신호전달 사슬 FcR-gamma가 사용되었다. 하지만 1세대 CAR-T 세포는 체내에서의 제한적인 증식 및 생존 능력으로 인해 임상에서의 효능이 부족했다. 이를 극복하기 위해 CD3 zeta에 CD28이나 4-1BB, ICOS, OX40, CD27과 같은 보조자극(costimulatory) 수용체의 신호전달 부위를 추가한 형태의 2세대 CAR, 그리고 서로 다른 종류의 두 보조자극 도메인을 조합한 3세대 CAR가 개발되었다. 2세대와 3세대 CAR는 생체 내에서 활발한 증식과 오랜 생존 능력을 통해 향상된 항암효과를 보였다. 또한, 고형암에 대한 효과를 보다 향상시키기 위해, 2세대 또는 3세대 CAR 기반에 T 세포의 활성에 도움을 주는 사이토카인이나 보조자극 리간드를 같이 발현하는 4세대 CAR, 인간 백혈구 항원(human leukocyte antigen, HLA) 또는 TCR 유전자를 억제하는 기술이 포함된 5세대 CAR 등이 계속 연구되고 있다.
CAR-T 세포의 효능을 향상시키기 위해, CAR를 구성하는 도메인들을 최적화하는 연구가 이루어지고 있는데, 특히 보조자극 도메인은 CAR-T 세포의 증식, 확장, 유지, 항종양 활성, 사이토카인 분비 등에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 사용되는 보조자극 도메인은 크게 CD28, ICOS(CD278)과 같은 Immunoglobulin(Ig) superfamily 와 4- 1BB(CD137), OX40(CD134), CD27을 포함하는 tumor necrosis factor receptor(TNFR) superfamily 가 있다. Ig superfamily 보조자극 도메인들은 phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)를 활성화시켜 protein kinase B(Akt)와 nuclear factor κB(NF-κB) 신호경로를 활성화시킨다. 반면 TNFR superfamily 보조자극 도메인들은 여러 종류의 TNF receptor associated factors(TRAFs)을 통해 NF-κB 신호경로를 활성화시킨다.
종래의 CAR-T 세포 치료제로서 인간 CD19를 표적으로 하는 CAR-T 세포 치료제가 급성림프구성백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL), 미만성거대 B 세포림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL), 비-호지킨림프종(non-hodgkin's lymphoma)과 같은 혈액암에 대해 인상적인 치료효과를 보였으나 고형암에 대해서는 효과가 부족하다. 이는 CAR-T 세포가 체내에서의 지속성(persistence)이 부족하고, 고형암까지 도달하기 어려우며(trafficking), 고형암은 면역억제적인 종양미세환경(tumor microenvironment)에 둘러싸여 있기 때문이다.
따라서, 고형암에 대해서도 우수한 치료적 효과를 위해 CAR-T 세포의 체내 증식 및 생존을 증가시킬 수 있는 전략이 필요하다.
1. Michel Sadelain et al, 2013, Cancer Discov 3(4):388-98.
2. Cheng Zhang et al, 2017, Biomark Res 5:22
3. Barbara Savoldo et al, 2011, J Clin Invest 121(5):1822-6
4. Claudia M Kowolik et al, 2006, Cancer Res 15;66(22):10995-1004
5. Adrienne H Long et al, 2015, Nat Med 21(6):581-90
6. Michael C Milone et al, 2009, Mol Ther 17(8):1453-64
7. Sonia Guedan et al, 2014, Blood 14;124(7):1070-80
8. Andreas A Hombach et al, 2012, Oncoimmunology 1;1(4):458-466
9. De-Gang Song, 2012, Blood 19;119(3):696-706
10. Lijun Zhao et al, 2019, Front Immunol 10: 2250
11. Renier J Brentjen et al, 2013, Sci Transl Med 20;5(177):177ra38
12. David L Porter et al, 2015, Sci Transl Me 2;7(303):303ra139
13. Stephan A Grupp et al, 2013, N Engl J Med 18;368(16):1509-1518
14. Jonathan H Esensten, 2016, Immunity 17;44(5):973-88
15. Robert Weinkove, 2019, Clin Transl Immunology 11;8(5):e1049
본 발명의 목적은 항종양 효능 및 사이토카인 분비능을 높일 수 있는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 표적 항원 결합 도메인; 막관통 도메인; SEQ ID NO: 44, 46, 48 및 50으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 C30 유래의 세포내 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 키메라 항원 수용체, 이를 인코딩하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 분리된 면역 효과기 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 면역 효과기 세포를 포함하는 항종양 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 치료적 유효량의 면역 효과기 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.
본 발명은 세포내 신호전달 도메인으로 CD30 도메인 중 TRAF가 결합하는 부위의 일부 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체를 사용하여 면역 효과기 세포의 증식 및 생존을 증가시킴으로써 항종양 효능 및 사이토카인 분비능을 높이는 효과가 있다.
도 1a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z, CD19-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 1b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937mock, U937CD19, IM-9, Raji에서의 인간 CD19 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 1c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 KHYG-1, NK-92, 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR(빨간색 영역)의 발현량을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 1d는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 KHYG-1, NK-92, 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 2a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔSYF-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 2b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 2c는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 2d는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔYF-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 2e는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔSYF-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 3a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-ICOS-z, CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z, CD19-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 3b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-ICOS-z, CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 3c는 본 발명의 실시예에 따른 Ig receptor family CD19-28-z, CD19-ICOS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 세포살해능과 함께 나타낸다.
도 3d는 본 발명의 실시예에 따른 TNFR family 인 CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 세포살해능과 함께 나타낸다.
도 3e는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포 및 감마델타 T 세포에서의 CD19 음성 U937mock 및 양성 U937CD19에 대한 E/T 비율 1에서의 사이토카인 INF-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B, perforin 의 분비량을 나타낸다.
도 4a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 4b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 4c는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 4d는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포 및 감마델타 T 세포에서의 CD19 음성 U937mock 및 양성 U937CD19에 대한 E/T 비율 1에서의 사이토카인 INF-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B, perforin의 분비량을 나타낸다.
도 5a는 본 발명의 실시예에 따른 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 5b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937, IM-9, Daudi 에서의 인간 BCMA 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 5c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 5d는 본 발명의 실시예에 따른 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 BCMA 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 6a는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 6b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 폐암 세포주 A549, Calu-1, NCI-H292, NCI-H460 에서의 인간 EpCAM 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 6c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 6d는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 EpCAM 양성 인간 폐암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 6e는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 6f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 6g는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 EpCAM 양성 인간 폐암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 7a는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 7b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 폐암 세포주 NCI-H292, A549, 인간 췌장암 세포주 AsPC-1, 인간 난소암 세포주 SKOV3에서의 인간 MSLN 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 7c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 7d는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 MSLN 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 7e는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 7f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 7g는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 MSLN 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 8a는 본 발명의 실시예에 따른 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 8b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 간암 세포주 HepG2, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, A549 에서의 인간 GPC3 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 8c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 8d는 본 발명의 실시예에 따른 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 GPC3 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 9a는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 9b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 췌장암 세포주 AsPC-1, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, Calu-1, 인간 두경부암 세포주 FaDu에서의 인간 PD-L1 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 9c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 9d는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 PD-L1 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 9e는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 9f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 9g는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 PD-L1 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 10a는 본 발명의 실시예에 따른 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 10b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937, Raji, K562, 인간 폐암 세포주 A549에서의 인간 B7-H6 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 10c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 10d는 본 발명의 실시예에 따른 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 B7-H6 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 11a-b는 인간 백혈병 세포주 NALM6를 이종이식한 동물 모델에서 CD30S와 기존 ICD(CD28, 4-1BB)간의 조합에 따른 2세대 CD19-CAR 발현 T세포의 치료적 항종양 결과를 도시한 것으로, 도 11a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR-αβ T세포 치료군의 시간 경과에 따른 종양 성장을 나타내고, 도 11b는 대조군과 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR-αβ T세포 치료군의 48일까지 마우스 생존율을 나타낸다. 종양 성장은 개별 마우스에서 생체 내 생물 발광 영상화를 통해 모니터링 되었고, 생물 발광의 평균 광도로 정량화 하였다.
도 1b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937mock, U937CD19, IM-9, Raji에서의 인간 CD19 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 1c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 KHYG-1, NK-92, 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR(빨간색 영역)의 발현량을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 1d는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 KHYG-1, NK-92, 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 2a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔSYF-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 2b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 2c는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 2d는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔYF-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 2e는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-30S-z, CD19-30ΔSYN-z, CD19-30ΔSYF-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 3a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-ICOS-z, CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z, CD19-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 3b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-z, CD19-ICOS-z, CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 3c는 본 발명의 실시예에 따른 Ig receptor family CD19-28-z, CD19-ICOS-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 세포살해능과 함께 나타낸다.
도 3d는 본 발명의 실시예에 따른 TNFR family 인 CD19-4-1BB-z, CD19-OX40-z, CD19-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 세포살해능과 함께 나타낸다.
도 3e는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포 및 감마델타 T 세포에서의 CD19 음성 U937mock 및 양성 U937CD19에 대한 E/T 비율 1에서의 사이토카인 INF-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B, perforin 의 분비량을 나타낸다.
도 4a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 4b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 4c는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CD19 양성 및 음성 인간 혈액암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 4d는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z, CD19-30S-27-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포 및 감마델타 T 세포에서의 CD19 음성 U937mock 및 양성 U937CD19에 대한 E/T 비율 1에서의 사이토카인 INF-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B, perforin의 분비량을 나타낸다.
도 5a는 본 발명의 실시예에 따른 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 5b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937, IM-9, Daudi 에서의 인간 BCMA 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 5c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 5d는 본 발명의 실시예에 따른 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 BCMA 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 6a는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 6b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 폐암 세포주 A549, Calu-1, NCI-H292, NCI-H460 에서의 인간 EpCAM 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 6c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 6d는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 EpCAM 양성 인간 폐암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 6e는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 6f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 6g는 본 발명의 실시예에 따른 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 EpCAM 양성 인간 폐암 세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 7a는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 7b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 폐암 세포주 NCI-H292, A549, 인간 췌장암 세포주 AsPC-1, 인간 난소암 세포주 SKOV3에서의 인간 MSLN 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(isotype, 회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 7c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 7d는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 MSLN 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 7e는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 7f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 7g는 본 발명의 실시예에 따른 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 MSLN 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 8a는 본 발명의 실시예에 따른 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 8b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 간암 세포주 HepG2, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, A549 에서의 인간 GPC3 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 8c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 8d는 본 발명의 실시예에 따른 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 GPC3 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 9a는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 9b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 췌장암 세포주 AsPC-1, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, Calu-1, 인간 두경부암 세포주 FaDu에서의 인간 PD-L1 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 9c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 9d는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 PD-L1 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 9e는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 9f는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 9g는 본 발명의 실시예에 따른 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR가 도입된 감마델타 T 세포에서의 각각의 PD-L1 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 10a는 본 발명의 실시예에 따른 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR 구조의 모식도를 나타낸다.
도 10b는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 인간 혈액암 세포주 U937, Raji, K562, 인간 폐암 세포주 A549에서의 인간 B7-H6 항원(빨간색 영역)의 발현량을 아이소타입(회색 영역)을 기준으로 나타낸다.
도 10c는 본 발명의 실시예에 따른 유세포 분석을 통해 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 CAR의 발현량(빨간색 영역)을 CAR를 도입하지 않은 그룹(NT, 파란색 영역) 기준으로 나타낸다.
도 10d는 본 발명의 실시예에 따른 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T, 감마델타 T 세포에서의 각각의 B7-H6 양성 및 음성 인간 암세포주에 대한 여러 E/T 비율에서의 세포살해능을 나타낸다.
도 11a-b는 인간 백혈병 세포주 NALM6를 이종이식한 동물 모델에서 CD30S와 기존 ICD(CD28, 4-1BB)간의 조합에 따른 2세대 CD19-CAR 발현 T세포의 치료적 항종양 결과를 도시한 것으로, 도 11a는 본 발명의 실시예에 따른 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR-αβ T세포 치료군의 시간 경과에 따른 종양 성장을 나타내고, 도 11b는 대조군과 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR-αβ T세포 치료군의 48일까지 마우스 생존율을 나타낸다. 종양 성장은 개별 마우스에서 생체 내 생물 발광 영상화를 통해 모니터링 되었고, 생물 발광의 평균 광도로 정량화 하였다.
이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 표적 항원 결합 도메인; 막관통 도메인; SEQ ID NO: 44, 46, 48 및 50으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 C30 유래의 세포내 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체에 관한 것이다.
본 발명은 CD30 도메인 중 TRAF(TNF receptor-associated factor)가 결합하는 부위의 일부 서열을 세포내 신호전달 도메인으로 포함하는 키메라 항원 수용체를 제공하는 것을 특징으로 한다.
상기 CD30은 120 kD 크기의 막관통 당단백질 수용체로, TNFR(tumor necrosis factor receptor) family 중 하나이며, T 세포와 B 세포에서 발현된다. CD30이 활성화되면 TNFR associated factor(TRAF1, 2, 5)를 끌어들여서 NF-kB 또는 MAPK 신호 경로를 통해 JUNB 또는 AP-1 전사인자를 활성화시킨다. 이를 통해 T 세포의 증식 및 생존이 증가할 뿐만 아니라 표현형도 메모리(memory) 형태로 분화된다. 따라서, 본 발명자들은 TRAF에 의해 전달되는 신호를 사용함으로써 면역 효과기 세포, 특히 CAR-T 세포의 증식 및 생존을 증가시키고자 CD30 도메인 중 TRAF가 결합하는 부위(도메인 1, 2, 3)을 중심으로 여러 형태의 CD30 도메인(CD30L, CD30M, CD30Mmut, CD30M, CD30S)을 제작한 결과, 도메인 2+3의 539-595 a.a.의 57 a.a. 부위, 또는 544-588 a.a.를 키메라 항원 수용체의 세포내 신호전달 도메인으로 사용하였을 때 항종양 효능 및 사이토카인 분비능이 향상됨을 확인하였다.
본 발명의 키메라 항원 수용체의 상기 세포내 신호전달 도메인은 도메인 2+3의 539-595 a.a. 또는 544-588 a.a. 부위 외에도 특정 아미노산, YMNM 또는 YMFM을 추가로 포함하는 CD30ΔS, 즉, 544-588 a.a. + YMNM 또는 YMFM를 사용한다. 이들 아미노산 서열은 야생형 CD30에는 존재하지 않는 서열로서, phosphoinositide 3-kinase 결합부위 서열이며, 일 구체예에 따르면, CD30의 도메인 2+3의 539-595 a.a. 또는 544-588 a.a. 부위만을 키메라 항원 수용체에 사용하는 경우와 비교하여, 면역 효과기 세포의 항종양 효능 및 사이토카인 분비능이 유사했다.
따라서, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 CD30S의 도메인 2+3의 539-595 a.a. 부위 또는 544-588 a.a. 부위 또는 544-588 a.a. + YMNM 또는 YMFM의 서열을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 사용함으로써 면역 효과기 세포의 항종양 효능 및 사이토카인 분비능을 현저히 높이는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서, 용어 "키메라 항원 수용체, CAR"는 일반적으로 항원 및 하나 이상의 세포 내 도메인과 결합하는 능력을 갖는 세포외 도메인을 함유하는 융합 단백질을 지칭한다. 키메라 항원 수용체는 항원(예를 들어, 표면 항원, 종양 관련 항원 등) 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. CAR는 표적 항원 특이성에 기초하여 T 세포 수용체-활성화 세포 내 도메인과 조합될 수 있다. 유전자가 변형된 CAR-발현 T 세포는 표적 항원-발현 악성 세포를 특이적으로 식별하고 제거할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "표적 항원 결합 도메인"은 일반적으로 항원 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 도메인을 지칭한다. 예를 들어, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편일 수 있다.
본 발명에서, 용어 "결합 도메인(binding domain)"은 "세포외 도메인(extracellular domain)", "세포외 결합 도메인(extracellular binding domain)", "항원-특이적 결합 도메인(antigenspecific binding domain)" 및 "세포외 항원-특이적 결합 도메인(extracellular antigen-specific biding domain)"은 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 CAR 도메인 또는 단편을 지칭한다.
상기 표적 항원은 혈액암 또는 고형암에서 발현되는 표면 항원 또는 종양 관련 항원일 수 있으며, 예컨대, 항원은 CD19, MUC16, MUC1, CAIX, CEA, CDS, CD7, CD10, CD20, CD22, CD30, CD33, CD34, CD38, CD41, CD44, CD49f, CD56, CD74, CD133, CD138, BCMA, PD-1, NKp30, 사이토메갈로바이러스(CMV) 감염된 세포 항원, EGP-2, EGP-40, EpCAM, Erb-B2, Erb-B3, Erb-B4, FBP, 태아 아세틸콜린 수용체, 폴레이트 수용체-α, GD2, GD3, HER-2, hTERT, IL-13R-α2, κ-경쇄, KDR, LeY, L1 세포 부착 분자, MAGE-A1, 메소텔린, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, 암태아 항원(h5T4), PSCA, PSMA, ROR1, TAG-72, VEGF-R2, WT-1, CD24, CD47, EGFR, CD123, GPC3, CD117, Claudin18.2, cMET, EphA2, CLL-1, CD171, AXL, ROR2, FAP 또는 CD5 등으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 단클론 항체(monoclonal antibody)일 수 있다. 본 발명에서, 용어 "단클론 항체(monoclonal antibody)"는 모노클로날 항체 또는 단일클론 항체라고도 불리며, 단일 항체 형성세포가 생성하는 항체로, 1차 구조(아미노산 배열)가 균일한 특징이 있다. 오직 하나의 항원 결정기만을 인식하며, 일반적으로 암세포와 항체생산세포를 융합한 하이브리도마(hybridoma cell)을 배양하여 생산되지만, 확보된 항체 유전자 서열을 이용하여 다른 재조합 단백질 발현 숙주세포를 이용하여 생산할 수도 있다.
본 발명에서, 용어 "항체"는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 항체 분자의 단편도 사용될 수 있다. 항체 분자의 단편이란 적어도 펩타이드 태그(에피토프) 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며 scFv, Fab, F(ab'), F(ab')2, 단일 도메인(single domain) 등을 포함한다.
항체 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 첫 번째 불변 영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C 말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 부위(hinge region)를 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 부위의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각으로 Fv 단편을 생성하는 재조합 기술은 국제공개 특허 WO 88/10649, WO 88/106630, WO 88/07085, WO 88/07086 및 WO 88/09344에 개시되어 있다. 이중쇄 Fv(dsFv)는 디설파이드 결합으로 중쇄 가변부위와 경쇄 가변부위가 연결되어 있고 단쇄 Fv(scFv)는 일반적으로 펩타이드 링커를 통하여 중쇄의 가변 영역과 경쇄의 가변 영역이 공유 결합으로 연결되어 있다. 이러한 항체 단편은 단백질 가수 분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')2 단편을 얻을 수 있다). 바람직하게는 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "인간화 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 소유하고 및/또는 본원에서 개시된 바와 같은 인간 항체를 만들기 위한 기술 중에서 한 가지를 이용하여 만들어진 항체이다. 인간화 항체의 이러한 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 특정적으로 배제한다.
또한, 본 발명에 포함된 단백질, 폴리펩타이드 및/또는 아미노산 서열은 적어도 단백질 또는 폴리펩타이드와 동일하거나 유사한 기능을 갖는 기능성 변이체(functional variants) 또는 상동체를 포함하는 것으로 이해되어야한다.
본 발명에서, 기능적 변이체(functional variants)는 상기 단백질 및/또는 폴리펩타이드의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산을 치환, 결실 또는 첨가함으로써 수득되는 단백질 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 예를 들어, 기능적 변이체(functional variants)는 1에서 30, 1에서 20 또는 1에서 10 또는 1, 2, 3, 4 또는 5와 같은 하나 이상의 아미노산의 치환, 결실 및/또는 삽입으로 인해 상이한 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 기능적 변이체(functional variants)는 변형되지 않은 단백질 또는 폴리펩타이드(치환, 결실 또는 첨가)의 생물학적 특성을 실질적으로 유지시킬 수 있다. 예를 들어, 기능적 변이체(functional variants)는 원래 단백질 또는 폴리펩타이드의 생물학적 활성 (항원 결합 능력과 같은)의 적어도 60 %, 70 %, 80 %, 90 % 또는 100 %로 유지될 수 있다.
본 발명에서, 상동체는 상기 단백질 및/또는 폴리펩타이드와 아미노산 서열 상동성이 약 85 % 이상(예컨대, 약 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상)인 단백질 또는 폴리펩타이드(예를 들어 BCMA 또는 이의 단편과 특이적으로 결합할 수 있는 항체)일 수 있다.
본 발명에서, 상동성은 일반적으로 둘 이상의 서열 사이의 유사성, 유사성 또는 상관성을 지칭한다.
본 발명에서, 용어 "막관통 도메인(transmembrane domain)"은 일반적으로 세포막을 통과하고 세포내 신호전달 도메인에 연결되어 신호전달의 역할을 하는 CAR의 도메인을 지칭한다. 상기 막관통 도메인은 표적 항원 결합 도메인의 C-말단과 세포내 신호전달 도메인의 N-말단 사이에 연결되며, CD8, 4-1BB, CD27, CD28, CD30, 0X40, CD3e, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 및 ICOS(CD278)로 구성된 군에서 선택된 TCR 공동 수용체 또는 T 세포 보조자극분자의 막관통 도메인 또는 이들로부터 유래하는 것일 수 있다. 구체적으로, CD28의 막관통 도메인을 사용할 수 있다.
상기 표적 항원 결합 도메인의 C-말단 및 막관통 도메인의 N-말단 사이에는 힌지 부위(hinge region)가 연결될 수 있으며, 상기 힌지 부위는 CD8α 또는 CD28 유래인 것을 사용할 수 있다. 상기 "힌지 부위(hinge region)"는 일반적으로 항원-결합 영역과 면역 세포 Fc 수용체 (FcR)-결합영역 사이의 연결 영역을 지칭한다.
본 발명에서, 용어 "세포내 신호전달 도메인(intracellular signal transduction domain)"은 일반적으로 세포 내부에 위치하고 신호를 전달할 수 있는 도메인을 지칭한다. 본 발명은 CD30의 TRAF가 결합하는 부위 중 도메인 2+3의 539-595 a.a. 부위 또는 이의 결실 부위인 544-588 a.a. 뿐만 아니라 544-588 a.a.에 특정 아미노산, YMNM 또는 YMFM을 추가로 포함하는 CD30S를 세포내 신호전달 도메인으로 사용할 수 있다. 더 구체적으로, SEQ ID NO: 44, 46, 48 또는 50의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 키메라 항원 수용체는 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), 0X40, CD40, ICOS, LFA-1(lymphocyte function-associated antigen-1), CD2, CD7, NKG2C, CD83, Dap10, GITR, OX40L, Myd88-CD40 및 KIR2DS2로 구성된 군에서 선택된 세포내 신호전달 도메인(또는 보조자극 도메인)을 더 포함하여 3세대 키메라 항원 수용체로 사용될 수 있다.
본 발명의 키메라 항원 수용체의 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인은 CD3ζ 유래의 154-492의 뉴클레오타이드(NCBI NM_198053.2)에 해당하는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 가질 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 표적 항원 결합 도메인의 N-말단에 신호 펩타이드(signal peptide)를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 "신호 펩타이드(signal peptide)"는 일반적으로 단백질 전달을 안내하기 위한 펩타이드 사슬을 지칭한다. 신호 펩타이드는 GM-CSF 수용체 신호 서열, CD8α 신호 서열, 면역글로불린 중쇄 신호 서열, PD-1 신호 서열, NKp30 신호 서열 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 신호 펩타이드; 표적 항원 결합 도메인; 힌지 도메인; 막관통 도메인; CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인이 순차적으로 연결된 2세대 키메라 항원 수용체일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따르면, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 신호 펩타이드; 표적 항원 결합 도메인; 힌지 도메인; 막관통 도메인; CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인; CD27, CD28, 4-1BB(CD137), 0X40, CD40, ICOS, LFA-1(lymphocyte function-associated antigen-1), CD2, CD7, NKG2C, CD83, Dap10, GITR, OX40L, Myd88-CD40 및 KIR2DS2로 구성된 군에서 선택된 세포내 신호전달 도메인(보조자극 도메인); 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인이 순차적으로 연결된 3세대 키메라 항원 수용체일 수 있다.
본 발명은 또한 상기 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다.
상기 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자는 신호 펩타이드; 표적 항원 결합 도메인; 힌지 도메인; 막관통 도메인; CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인을 각각 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
상기 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자는 신호 펩타이드; 표적 항원 결합 도메인; 힌지 도메인; 막관통 도메인; CD27, CD28, 4-1BB(CD137), 0X40, CD40, ICOS, LFA-1(lymphocyte function-associated antigen-1), CD2, CD7, NKG2C, CD83, Dap10, GITR, OX40L, Myd88-CD40 및 KIR2DS2로 구성된 군에서 선택된 세포내 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인을 각각 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인은 SEQ ID NO: 47 또는 49의 염기 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 일반적으로 임의의 길이로 분리된 핵산 분자, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드, 또는 그의 유사체를 지칭한다. 예컨대, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 (1) 중합효소 연쇄반응(PCR) 증폭과 같은 in vitro 증폭; (2) 클로닝 및 재조합; (3) 절단(digestion) 및 젤 전기영동 분리와 같은 정제; (4) 화학 합성과 같은 합성을 통해 제조될 수 있으며, 바람직하게 분리된 폴리뉴클레오타이드는 재조합 DNA 기술에 의해 제조된다. 본 발명에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하기 위한 핵산은 합성 올리고뉴클레오타이드의 제한 단편 조작(restriction fragment operation) 또는 SOE PCR의 적용을 포함하지만 이에 제한하지 않고, 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본 발명에서, 용어 "벡터(expression vector)"는 적당한 숙주세포 내에서 목적 유전자가 발현할 수 있도록 프로모터 등의 필수적인 조절 요소를 포함하는 유전자 제조물이다. 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스(retroviral) 벡터 및 렌티바이러스(lentiviral) 벡터 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다. 적당한 숙주로 형질전환되면, 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다.
또한, 벡터는 코딩 영역이 적합한 숙주에서 정확하게 발현될 수 있게 하는 발현 조절 요소를 포함할 수 있다. 이러한 조절 요소는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 부위(ribosome-binding site), 인핸서(enhancer) 및 유전자 전사 또는 mRNA 번역을 조절하기 위한 다른 조절 요소를 포함할 수 있다. 발현 조절 서열의 특정 구조는 종 또는 세포 유형의 기능에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 TATA 박스(box), 캡핑된(capped) 서열, CAAT 서열 등과 같은 전사 개시 및 번역 개시에 각각 참여하는 5' 비-전사 서열, 및 5' 또는 3' 비-번역 서열을 함유한다. 예를 들어, 5' 비-전사 발현 조절 서열은 기능적으로 연결된 핵산을 전사 및 조절하기 위한 프로모터 서열을 포함할 수 있는 프로모터 영역을 포함할 수 있다.
상기 프로모터는 표적 항원 결합 도메인의 발현을 유도하도록 작동 가능하게 연결되어 있으며 여기서, "작동 가능하게 연결된(operably linked)"은 일반적 기능을 수행하도록 핵산 발현조절 서열과 목적하는 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결되어 있는 것을 말한다. 재조합 벡터와의 작동적 연결은 당해 기술분야에서 잘 알려진 유전자 재조합 기술을 이용하여 제조할 수 있으며, 부위-특이적 DNA 절단 및 연결은 당해 기술분야에서 일반적으로 알려진 효소 등을 사용한다.
유전자를 세포 내로 도입하고 발현시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 발현 벡터와 관련하여, 벡터는 관련 기술분야의 임의의 방법에 의해 숙주 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적, 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포 내로 옮겨질 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 리포펙션, 입자 충격, 미세주사, 전기천공 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생산하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al, 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY]을 참조한다.
숙주 세포 내로 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위한 생물학적 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터, 및 특히 레트로바이러스 벡터는 유전자를 포유동물, 예를 들어 인간 세포 내로 삽입하기 위해 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순 포진 바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.
숙주 세포 내로 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위한 화학적 수단은 콜로이드성 분산액 시스템, 예컨대 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로구체, 비드, 및 수중유 에멀젼, 미셀, 혼합된 미셀, 및 리포솜을 비롯한 지질-기반 시스템을 포함한다. 시험관 내 및 생체 내에서 전달 비히클로서 사용하기 위한 예시적인 콜로이드성 시스템은 리포솜 (예를 들어, 인공 막 소포)이다. 핵산의 최신 기술의 표적화된 전달, 예컨대 표적화된 나노입자 또는 다른 적합한 마이크로미터-미만 크기의 전달 시스템을 사용한 폴리뉴클레오티드의 전달을 위한 다른 방법이 이용 가능하다.
비-바이러스 전달 시스템이 이용되는 경우에, 예시적인 전달 비히클은 리포솜이다. 지질 제제의 사용은 숙주세포 내로의 핵산의 도입(시험관 내, 생체 외 또는 생체 내)을 위해 고려된다. 또 다른 측면에서, 핵산은 지질과 회합될 수 있다. 지질과 회합된 핵산은 리포솜의 수성 내부에 캡슐화되거나, 리포솜의 지질 이중층 내에 점재되거나, 리포솜 및 올리고뉴클레오타이드 둘 다와 회합된 연결 분자를 통해 리포솜에 부착되거나, 리포솜 내에 포획되거나, 리포솜과 복합체화되거나, 지질 함유 용액 중에 분산되거나, 지질과 혼합되거나, 지질과 조합되거나, 지질 내에 현탁액으로서 함유되거나, 미셀과 함께 함유 또는 복합체화되거나, 또는 지질과 달리 회합될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 회합 조성물은 용액 중의 임의의 특정한 구조로 제한되지 않는다.
본 발명은 또한 상기 키메라 항원 수용체, 이를 인코딩하는 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 면역 효과기 세포에 관한 것이다.
상기 면역 효과기 세포는 포유동물 유래 세포일 수 있으며, 바람직하게는, αβ T 세포, γδ T 세포, NK 세포(KHYG-1, NK-92 세포주 포함), NK T 세포 또는 대식세포 등일 수 있다.
상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 면역 효과기 세포는 본 발명의 CAR 벡터를 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포 또는 NK 세포 내로 도입시켜 제조할 수 있다.
구체적으로, CAR 벡터는 전기천공법, 리포펙타민(lipofectamine 2000, Invitrogen) 등과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 면역 효과기 세포에 플라스미드를 전기천공법에 의해 도입하여 CAR의 장기적이고 안정적인 발현을 보장할 수 있다.
키메라 항원 수용체를 발현하는 면역 효과기 세포를 제조하기 위한 면역 효과기 세포는 대상체로부터 수득할 수 있으며, 상기 "대상체"는 면역 반응이 도출될 수 있는 살아있는 유기체 (예를 들어, 포유동물)를 포함한다. 대상체의 예는 인간, 개, 고양이, 마우스, 래트, 및 그의 형질전환체를 포함한다. T 세포는 말초혈 단핵구 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양을 비롯한 수많은 공급원으로부터 수득될 수 있다.
상기 T 세포는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 많은 기술, 예를 들면, 피콜(Ficoll)?? 분리를 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 혈액으로부터 세포는 분리반출술에 의해 수득되며, 분리반출술 생성물은 전형적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포를 비롯한 림프구, 다른 유핵 백혈구, 적혈구, 및 혈소판을 함유한다.
분리반출술에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하고 세포를 후속 프로세싱 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배지에 두기 위해 세척될 수 있다. T 세포는 적혈구를 용해시키고, 예를 들어 퍼콜(PERCOLL)?? 구배를 통한 원심분리에 의해 또는 역류 원심 분리에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 말초혈 림프구로부터 단리된다.
본 발명은 또한 상기 면역 효과기 세포를 포함하는 항종양 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체가 도입된 면역 효과기 세포들은 CD19 양성 혈액암 세포주, BCMA 양성 세포주, EpCAM 고형암 세포주, 메소텔린 양성 고형암 세포주, GPC3 양성 고형암 세포주, PD-L1 양성 고형암 세포주, B7-H6 양성 세포주 등에 대한 특이적인 세포 살해능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 키메라 항원 수용체가 도입된 면역 효과기 세포는 혈액암 또는 고형암 치료에 사용할 수 있다.
상기 고형암은 폐암, 대장암, 전립선암, 갑상선암, 유방암, 뇌암, 두경부암, 식도암, 피부암, 흑색종, 망막모세포종, 흉선암, 위암, 결장암, 간암, 난소암, 자궁암, 방광암, 직장암, 담낭암, 담도암 또는 췌장암일 수 있다. 또한, 상기 혈액암은 림프종, 백혈병 또는 다발성 골수종일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있고, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소 투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 제형은 상술한 약학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를들어, 경구 투여 시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릴시르, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조될 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 막 투과성을 향상시킬 수 있는 계면활성제를 포함할 수 있다. 이러한 계면활성제는 스테로이드에서 유도된 것이거나 N-[1-(2,3-디올레오일)프로필-N,N,N-트리메틸암모늄클로라이드(DOTMA) 등의 양이온성 지질, 또는 콜레스테롤 헤미숙시네이트, 포스파티딜 글리세롤 등의 각종 화합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 약학적 조성물은 상기한 약리학적 또는 생리학적 성분과 함께 투여되거나 순차적으로 투여될 수 있으며, 또한 추가의 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 이러한 투여는 단일 또는 다중 투여일 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 대상체에게 본 발명의 약학적 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 본 발명의 약학적 조성물은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양, 즉 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양인 치료상 유효량으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자 등에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 1~10,000㎎/㎏/일의 양으로 투여할 수 있으며, 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수 회에 나누어 투여할 수도 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "대상체"는 상기 약학적 조성물을 투여하여 경감, 억제 또는 치료될 수 있는 상태 또는 질환을 앓고 있거나 그러한 위험이 있는 포유동물을 의미하며, 바람직하게 사람을 의미한다.
따라서, 본 발명은 또한 치료적 유효량의 면역 효과기 세포를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.
상기 면역 효과기 세포는 종양 항원이 발현되는 암을 치료하기 위해 약학적으로 효과적인 양으로 투여될 수 있다. 질환 종류, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 투여 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
상기 대상체는 본 발명의 약학적 조성물의 투여 대상과 같다.
이하, 본 발명에 따르는 실시예 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 제시된 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
<실시예 1> 키메라 항원 수용체의 제조
(인간 세포주)
인간 다발성 골수종 세포주 IM-9, 인간 림프종 세포주 U937mock, U937CD19, 인간 버킷림프종 세포주 Raji, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, NCI-H460, 인간 췌장암 세포주 AsPC-1은 10% FBS를 포함하는 RPMI-1640 (Gibco, Grand Island, NY, USA)에서 배양되었다. 인간 간암 세포주 HepG2, 인간 폐암 세포주 A549, Calu-1, 인간 두경부암 세포주 FaDu는 10% FBS를 포함하는 DMEM(Gibco)에서 유지되었다. 인간 난소암 세포주 SKOV3는 10% FBS를 포함하는 McCoy(Gibco)에서 유지되었다. 자연살해세포주인 KHYG-1과 NK-92는 10% FBS와 인터류킨-2(IL-2) 300 U/ml이 포함된 RPMI-1640에서 유지되었다. 알파베타 T 세포는 10% FBS와 IL-2 500 U/ml이 포함된 RPMI-1640에서 유지되었다. 감마델타 T 세포는 10% FBS와 IL-2 1000 U/ml이 포함된 RPMI-1640에서 배양되었다.
(인간 알파베타 T 세포 및 감마델타 T 세포 배양)
*알파베타 T 세포 배양을 위해 항-CD3 항체(2 ㎍/ml), 항-CD28 항체(2 ㎍/ml)가 부착된 배양 접시에 말초혈 단핵구 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)를 인터류킨rleukin, IL)-2 300 U/ml 이 포함된 RPMI-1640 (10% FBS)을 넣어 37℃ 세포배양기에서 7일간 배양하였다. 2-3일 마다 새로운 배양액으로 계대배양하였다. 7일째에 알파베타 T 세포의 수를 측정하여 10% dimethyl sulfoxide(DMSO)와 90% fetal bovine serum(FBS)로 이루어진 동결액으로 동결시켰다.
감마델타 T 세포를 배양하기 위해, 말초혈 단핵구 세포에 졸레드론산 5 μM 과 IL-2 500 U/ml이 포함된 배양액을 넣어 37℃ 세포배양기에서 7일간 배양하였다. 2-3일 마다 새로운 배양액으로 계대배양하였다. 7일째에 감마델타 T 세포의 수를 계산한 후, 120 Gy 세기의 X-선이 조사된 지지세포(feeder cell)를 감마델타 T 세포:지지세포(feeder cell) 비율 2:1로 하여 7일 동안 함께 배양하였다. 14일 동안 배양된 감마델타 T 세포는 세포 수를 측정하여 상기와 같은 동결액으로 동결시켰다.
(플라스미드)
- CD19 scFv
신호 서열(GM-CSF receptor signal sequence) 및 FMC63 항-CD19 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH), CD28의 힌지 및 막관통 도메인; CD8α의 힌지 및 막관통 도메인; CD28의 힌지 및 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, CD30과 CD30의 다양한 돌연변이체, 4-1BB, CD27, ICOS, OX40 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 이들은 PCR(overlapping extension by PCR)을 이용하여 다양한 조합으로 조립되었다. 양 말단에 XhoI 및 EcoRV, NotI 서열을 연결하여 증폭한 PCR 결과물은 pCI 벡터(pCI Mammalian Expression vector, Promega E1731)의 XhoI 및 NotI 사이트에 삽입(fusion cloning, ligation) 되었다. PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- BCMA
신호 서열(GM-CSF receptor signal sequence) 및 Bb2121 항-BCMA 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH), CD28의 힌지, 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- EpCAM
scFv 신호 서열(CD8α signal sequence) 및 VB4-845 항-EpCAM 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH), CD8α의 힌지 및 막관통 도메인; CD28의 힌지 및 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호 전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- Mesothelin
scFv 신호 서열(GM-CSF receptor signal sequence) 및 MORAb-009 항- Mesothelin 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중 쇄 가변(VH), CD8α의 힌지 및 막관통 도메인; CD28의 힌지 및 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포 내 신호전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- Glypican-3
면역글로불린 중쇄(immunoglobulin heavy-chain) 신호 서열 및 GC33 항-Glypican-3 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH), CD28의 힌지, 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- PD-1 ECD
PD-1의 신호 서열 및 세포외 도메인, 힌지, CD28의 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다. 상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
- NKp30
NKp30의 신호 서열 및 세포외 도메인, 힌지, CD28의 막관통 도메인; 세포내 신호전달 도메인; CD28, 4-1BB, CD30의 돌연변이체 및 CD3ζ(CD3z)의 세포내 신호 전달 도메인은 각각 인공적으로 합성되었다.
상기 CD19 scFv에서와 같이, PCR을 이용하여 조립되고, pCI 벡터에 삽입되었으며, PCR 결과물은 시퀀싱으로 확인되었다.
상술한 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)는 표 1 내지 13에 나열하였으며, 이들의 서열은 표 14에 나열하였다. 모든 CAR의 도메인들은 서로 직렬로(in tandem) 연결된 것이며, 또한 in frame으로 연결된 것이다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 |
| CD19-28S-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD28 | CD28 | CD28 | CD3ζ |
| CD19-30L-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD8α | CD28 | CD30L | CD3ζ |
| CD19-30M-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD8α | CD28 | CD30M | CD3ζ |
| CD19-30MMut-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD8α | CD28 | CD30MMut | CD3ζ |
| CD19-30ΔM-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD8α | CD28 | CD30ΔM | CD3ζ |
| CD19-30S-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | CD8α | CD28 | CD30S | CD3ζ |
표 1에 도시된, CD19-28-z는 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 뉴클레오타이드(nt), NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); FMC63 항-CD19 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH)(KR10-2019-7034220/WO2018/200496 JS scFv); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 및 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
CD19-30L-z는 인간 CD8α 유래의 힌지(412-546 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001768)와 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인(1219-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)을 사용한 점을 제외하고 CD19-28-z와 동일하다.
CD19-30M-z는 인간 CD8α 유래의 힌지(412-546 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001768)와 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1501-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-z와 동일하다.
CD19-30MMut-z는 인간 CD8α 유래의 힌지(412-546 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001768)와 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1501-1785 nt의 521 아미노산 K→Q, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-z와 동일하다.
CD19-30ΔM-z는 인간 CD8α 유래의 힌지(412-546 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001768)와 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1501-1614, 1678-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-z와 동일하다.
CD19-30S-z는 인간 CD8α 유래의 힌지(412-546 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001768)와 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 |
| CD19-30S-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| CD19-30ΔS-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30ΔS | CD3ζ |
| CD19-30ΔSYN-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30ΔSYN | CD3ζ |
| CD19-30ΔSYF-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30ΔSYF | CD3ζ |
표 2에 도시된 CD19-30S-z는 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 nt, NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); FMC63 항-CD19 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH)(KR10-2019-7034220/WO2018/200496 JS scFv); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 및 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
CD19-30ΔS-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1630-1764 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 표 2의 CD19-30S-z와 같다.
CD19-30ΔSYN-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(CD30의 1630-1764 nt)에 CD28 세포내 신호전달 도메인 일부인 YMNM(16 a.a.)부위가 결합된 도메인을 사용한 점을 제외하고 표 2의 CD19-30S-z와 같다.
CD19-30ΔSYF-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(CD30의 1630-1764 nt)에 CD28 세포내 신호전달 도메인 일부인 YMFM(16 a.a.) 부위가 결합된 도메인을 사용한 점을 제외하고 표 2의 CD19-30S-z와 같다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | |
| CD19-30S-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ | |
| CD19-28-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD3ζ | |
| CD19-4-1BB-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ | |
| CD19-27-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD27 | CD3ζ | |
| CD19-ICOS-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | ICOS | CD3ζ | |
| CD19-OX40-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | OX40 | CD3ζ | |
CD19-28-z와 CD19-30S-z는 상기와 같은 방법으로 제작되었다. CD19-4-1BB-z는 제1 세포내 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 CD19-30S-z와 동일하다.
CD19-27-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD27 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-780 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001242.4)를 사용한 점을 제외하고 CD19-30S-z와 동일하다.
CD19-ICOS-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 ICOS 유래의 세포내 신호전달 도메인(484-597 nt, NCBI Reference Sequence: NM_012092.2)를 사용한 점을 제외하고 CD19-30S-z와 동일하다.
CD19-OX40-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 OX40 유래의 세포내 신호전달 도메인(706-831 nt, NCBI Reference Sequence: NM_003327.2)를 사용한 점을 제외하고 CD19-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| CD19-28-BB-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| CD19-30S-BB-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
| CD19-28-30S-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| CD19-30S-ICOS-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | ICOS | CD3ζ |
| CD19-30S-CD27-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | CD27 | CD3ζ |
| CD19-30S-OX40-z | GM-CSF rec | FMC63 anti-CD19 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | OX40 | CD3ζ |
CD19-28-BB-z는 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 nt, NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); FMC63 항-CD19 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH)(KR10-2019-7034220/WO2018/200496 JS scFv); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 및 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인 (154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
CD19-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 보조자극 도메인(제2 신호전달 도메인)으로, 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-BB-z와 동일하다.
CD19-28-30S-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2), 보조자극 도메인(제2 신호전달 도메인)으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-BB-z와 동일하다.
CD19-30S-ICOS-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 보조자극 도메인(제2 신호전달 도메인)으로, 인간 ICOS 유래의 세포내 신호전달 도메인(484-597 nt, NCBI Reference Sequence: NM_012092.2)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-BB-z와 동일하다.
CD19-30S-CD27-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 보조자극 도메인(제2 신호전달 도메인)으로, 인간 CD27 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-780 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001242.4) 를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-BB-z와 동일하다.
CD19-30S-OX40-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 보조자극 도메인(제2 신호전달 도메인)으로, 인간 OX40 유래의 세포내 신호전달 도메인(706-831 nt, NCBI Reference Sequence: NM_003327.2)를 사용한 점을 제외하고 CD19-28-BB-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| BCMA-28-30S-z | GM-CSF rec | Anti-BCMA02 | CD28 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| BCMA-28-BB-z | GM-CSF rec | Anti-BCMA02 | CD28 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| BCMA-30S-BB-z | GM-CSF rec | Anti-BCMA02 | CD28 | CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
BCMA-28-30S-z는 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 nt, NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); Bb2121 항-BCMA 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH) 영역(KR10-2021-7003369/WO2020/014333); 인간 CD28 유래의 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인 (154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
BCMA-28-BB-z는 제2 신호전달 도메인(보조자극 도메인)으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 BCMA-28-30S-z와 동일하다.
BCMA-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인(보조자극 도메인)으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)을 사용한 점을 제외하고 BCMA-28-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 |
| EpCAM-28-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD3ζ |
| EpCAM-BB-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| EpCAM-30S-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| EpCAM-28TM | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | - | - |
EpCAM-28-z는 인간 CD8α의 신호 서열 도메인(1-63 nt, NCBI Reference Sequence ID: NM_001768.5); 최적화 VB4-845 항-EpCAM 항체의 경쇄 가변(VL) 영역(PCT/CA2008/001680); 및 중쇄 가변(VH) 영역(PCT/CA2008/001680); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
EpCAM-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 EpCAM-28-z와 동일하다.
EpCAM-30S-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 EpCAM-28-z와 동일하다.
EpCAM-28TM은 제1 신호전달 도메인과 제2 신호전달 도메인을 포함하지 않는 점을 제외하고 EpCAM-28-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| EpCAM-28-30S-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| EpCAM-28-BB-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| EpCAM-30S-BB-z | CD8α | VB4-845 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
EpCAM-28-30S-z는 인간 CD8α의 신호 서열 도메인(1-63 nt, NCBI Reference Sequence ID: NM_001768.5); 최적화 VB4-845 항-EpCAM 항체의 경쇄 가변(VL) 영역(PCT/CA2008/001680); 및 중쇄 가변(VH) 영역(PCT/CA2008/001680); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
EpCAM-28-BB-z는 제2 신호전달 도메인(보조자극 도메인)으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 EpCAM-28-30S-z와 동일하다.
EpCAM-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인(보조자극 도메인)으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 EpCAM-28-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 |
| MSLN(MOR)-28-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD3ζ |
| MSLN(MOR)-BB-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| MSLN(MOR)-30S-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
MSLN(MOR)-28-z는 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 nt, NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); MORAb-009 항-Mesothelin 항체의 중쇄 가변(VH) 영역(amatuximab, chimeric monoclonal antibody; gamma1 heavy chain, 1-119) 및 경쇄 가변(VL) 영역 (amatuximab, chimeric monoclonal antibody; kappa light chain 1-106); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
MSLN(MOR)-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 MSLN(MOR)-28-z와 동일하다.
MSLN(MOR)-30S-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)를 사용한 점을 제외하고 MSLN(MOR)-28-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | 링커 | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| MSLN(MOR)-28-30S-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| MSLN(MOR)-28-BB-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| MSLN(MOR)-30S-BB-z | GM-CSF rec | MORAb-009 | (G4S)3 | CD28 | CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
MSLN(MOR)-28-30S-z은 인간 GM-CSF receptor의 신호 서열 도메인(1-66 nt, NCBI Reference Sequence ID: 001161531.2); MORAb-009 항-Mesothelin 항체의 중쇄 가변(VH) 영역(amatuximab, chimeric monoclonal antibody; gamma1 heavy chain, 1-119) 및 경쇄 가변(VL) 영역 (amatuximab, chimeric monoclonal antibody; kappa light chain 1-106); 인간 CD28 유래의 힌지(340-456 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2) 및 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
MSLN(MOR)-28-BB-z은 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137 (4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)을 사용한 점을 제외하고 MSLN(MOR)-28-30S-z와 동일하다.
MSLN(MOR)-30S-BB-z은 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)을 사용한 점을 제외하고 MSLN(MOR)-28-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | scFv | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| GPC3-28-30S-z | immunoglobulin heavy-chain | GC33 | CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| GPC3-28-BB-z | immunoglobulin heavy-chain | GC33 | CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| GPC3-30S-BB-z | immunoglobulin heavy-chain | GC33 | CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
GPC3-28-30S-z는 인간 면역글로불린 중쇄(immunoglobulin heavy-chain)의 신호 서열 도메인(1-57 nt, GenBank ID: AAC18316.1); GC33 항-GPC3 항체의 경쇄 가변(VL) 영역 및 중쇄 가변(VH) 영역(US2017/0281683); 인간 CD28 유래의 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
GPC3-28-BB-z는 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 GPC3-28-30S-z와 동일하다.
GPC3-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 GPC3-28-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | ECD | TM | 신호-1 | 신호-2 |
| PD-1-28-z | PD-1 | PD-1 | PD-1 5aa+CD28 | CD28 | CD3ζ |
| PD-1-BB-z | PD-1 | PD-1 | PD-1 5aa+CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| PD-1-30S-z | PD-1 | PD-1 | PD-1 5aa+CD28 | CD30S | CD3ζ |
| PD-1-28TM | PD-1 | PD-1 | PD-1 5aa+CD28 | - | - |
PD-1-28-z는 인간 PD-1의 신호서열 도메인(1-60 nt, NCBI Reference Sequence: NM_005018.2); 인간 PD-1의 세포외 도메인(61-510 nt, NCBI Reference Sequence: NM_005018.2); 인간 PD-1의 막관통 도메인(511-525 nt, NCBI Reference Sequence: NM_005018.2); 인간 CD28 유래의 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
PD-1-4-1BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전 달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 PD-1-28-z와 동일하다.
PD-1-30S-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3)을 사용한 점을 제외하고 PD-1-28-z와 동일하다.
PD-1-28TM은 제1 신호전달 도메인 및 제2 신호전달 도메인이 없는 것을 제외하고 PD-1-28-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | ECD | 힌지 | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| PD-1-28-30S-z | PD-1 | PD-1 | CD28 | PD-1 5aa +CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| PD-1-28-BB-z | PD-1 | PD-1 | CD28 | PD-1 5aa +CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| PD-1-30S-BB-z | PD-1 | PD-1 | CD28 | PD-1 5aa +CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
PD-1-28-30S-z는 인간 PD-1의 신호서열 도메인(1-60 nt, NCBI Reference Sequence:NM_005018.2); 인간 PD-1의 세포외 도메인(61-510 nt, NCBI Reference Sequence: NM_005018.2); 인간 PD-1의 막관통 도메인(511-525 nt, NCBI Reference Sequence: NM_005018.2); 인간 CD28 유래의 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포 내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
PD-1-28-BB-z는 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 PD-1-28-30S-z와 동일하다.
PD-1-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 PD-1-28-30S-z와 동일하다.
| 약칭 | 신호 서열 | ECD | TM | 신호-1 | 신호-2 | 신호-3 |
| NKp30-28-30S-z | NKp30 | NKp30 | NKp30 5aa+CD28 | CD28 | CD30S | CD3ζ |
| NKp30-28-BB-z | NKp30 | NKp30 | NKp30 5aa+CD28 | CD28 | 4-1BB | CD3ζ |
| NKp30-30S-BB-z | NKp30 | NKp30 | NKp30 5aa+CD28 | CD30S | 4-1BB | CD3ζ |
NKp30-28-30S-z는 인간 NKp30의 신호 서열 도메인 (1-54 nt, NCBI Reference Sequence ID: NM_147130.1); 인간 NKp30의 세포외 도메인(55-405 nt, NCBI Reference Sequence NM_147130.1); 인간 NKp30 유래의 막관통 도메인(406-420 nt, NCBI Reference Sequence: NM_147130.1); 인간 CD28 유래의 막관통 도메인(457-537 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인(538-660 nt, NCBI Reference Sequence: NM_006139.2); 인간 CD30 유래의 세포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3); 인간 CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(154-492 nt, 50th_Q deletion, NCBI Reference Sequence: NM_198053.2, 코돈 최적화)과 종결코돈 TAA가 연결된 것이다.
NKp30-28-BB-z는 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)을 사용한 점을 제외하고 NKp30-28-30S-z와 동일하다.
NKp30-30S-BB-z는 제1 신호전달 도메인으로 인간 CD30 유래의 세 포내 신호전달 도메인의 잘린 돌연변이체(1615-1785 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001243.3), 제2 신호전달 도메인으로 인간 CD137(4-1BB) 유래의 세포내 신호전달 도메인(640-765 nt, NCBI Reference Sequence: NM_001561.4, 코돈 최적화)를 사용한 점을 제외하고 NKp30-28-30S-z와 동일하다.
| 서열 번호 |
서열이름 | 서열에 대한 설명 |
| 1 | GM-SCF rec LS nucleotide | 인간 GM-CSF 수용체 신호 서열 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 2 | GM-SCF rec LS amino acid | 인간 GM-CSF 수용체 신호 서열 도메인의 아미노산 서열 |
| 3 | CD19 VL nucleotide | CD19 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 4 | CD19 VL amino acid | CD19 단일쇄 단편 가변- 경쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 5 | Linker nucleotide | CD19 VL과 CD19 VH를 연결하는 링커의 뉴클레오타이드 서열 |
| 6 | Linker amino acid | CD19 VL과 CD19 VH를 연결하는 링커의 아미노산 서열 |
| 7 | CD19 VH nucleotide | CD19 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 8 | CD19 VH amino acid | CD19 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 9 | Linker nucleotide | CD19 scFv와 힌지를 연결하는 링커의 뉴클레오타이드 서열 (gcggccgca) |
| 10 | Linker amino acid | CD19 scFv와 힌지를 연결하는 링커의 아미노산 서열(AAA) |
| 11 | CD28 Hinge nucleotide | CD28 유래의 연결 도메인(Spacer Domain)의 뉴클레오타이드 서열 |
| 12 | CD28 Hinge amino acid | CD28 유래의 연결 도메인의 아미노산 서열 |
| 13 | CD28 TM nucleotide | CD28 유래의 막관통 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 14 | CD28 TM amino acid | CD28 유래의 막관통 도메인의 아미노산 서열 |
| 15 | CD28 ICD nucleotide | CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 16 | CD28 ICD amino acid | CD28 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 17 | CD3z nucleotide | CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(Δ301-303)의 뉴클레오타이드 서열 |
| 18 | CD3z amino acid | CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(Δ101)의 아미노산 서열 |
| 19 | CD19-28-z nucleotide | CD19-28-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 20 | CD19-28-z amino acid | CD19-28-z CAR 의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 21 | CD8α Hinge nucleotide | CD8α 유래의 연결 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 22 | CD8α Hinge amino acid | CD8α 유래의 연결 도메인의 아미노산 서열 |
| 23 | CD30L ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 189aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 24 | CD30L ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 189aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 25 | CD3z nucleotide | CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(Δ301-303)의 코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열 |
| 26 | CD3z amino acid | CD3z 유래의 세포내 신호전달 도메인(Δ101)의 코돈 최적화된 아미노산 서열 |
| 27 | CD19-30L-z nucleotide | CD19-30L-z CAR의 뉴클레오타이드 서열 (hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-CD30L ICD-CD3 zeta) |
| 28 | CD19-30L-z amino acid | CD19-30L-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-CD30L ICD-CD3 zeta) |
| 29 | RSK nucleotide | CD28 유래 3개 아미노산의 뉴클레오타이드 서열(aggagcaag) |
| 30 | RSK amino acid | CD28 유래 3개 아미노산의 서열(RSK) |
| 31 | CD30M ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 95aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 32 | CD30M ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 95aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 33 | CD19-30M-z nucleotide | CD19-30M-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-CD30M ICD-CD3 zeta) |
| 34 | CD19-30M-z amino acid | CD19-30M-z CAR 의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-CD30M ICD-CD3 zeta) |
| 35 | CD30Mmut ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 95aa, 521_KQ) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 36 | CD30Mmut ICDamino acid | CD30(TNFRSF8, 95aa, 521_KQ) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 37 | CD19-30Mmut-z nucleotide | CD19-30Mmut-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-CD30Mmut ICD-CD3 zeta) |
| 38 | CD19-30Mmut-z amino acid | CD19-30Mmut-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-CD30Mmut ICD-CD3 zeta) |
| 39 | CD30ΔM ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 73aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 40 | CD30ΔM ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 73aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 41 | CD19-30ΔM-z nucleotide | CD19-30ΔM -z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-ΔCD30M ICD-CD3 zeta) |
| 42 | CD19-30ΔM-z amino acid | CD19-30ΔM -z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8α Hinge-CD28 TM-RSK-ΔCD30M ICD-CD3 zeta) |
| 43 | CD30S ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 57aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 44 | CD30S ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 57aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 45 | CD30ΔS ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 45aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 46 | CD30ΔS ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 45aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 47 | CD30ΔSYN ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 45aa), CD28 (YMNM, 16aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 48 | CD30ΔSYN ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 45aa), CD28 (YMNM, 16aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 49 | CD30ΔSYF ICD nucleotide | CD30(TNFRSF8, 45aa), CD28(YMFM, 16aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 50 | CD30ΔSYF ICD amino acid | CD30(TNFRSF8, 45aa), CD28(YMFM, 16aa) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 51 | CD19-30S-z nucleotide | CD19-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열 (hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8a Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 52 | CD19-30S-z amino acid | CD19-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-linker-CD19 VH-AAA-CD8a Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 53 | (G4S)3 linker nucleotide | CD19 VL과 CD19 VH를 연결하는 링커의 뉴클레오타이드 서열 |
| 54 | (G4S)3 linker amino acid | CD19 VL과 CD19 VH를 연결하는 링커의 아미노산 서열 |
| 55 | CD19-30S-z nucleotide | CD19-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열 (hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 56 | CD19-30S-z amino acid | CD19-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 57 | CD19-CD30ΔS-z nucleotide | CD19-CD30ΔS-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS ICD-CD3 zeta) |
| 58 | CD19-CD30ΔS-z amino acid | CD19-CD30ΔS-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS ICD-CD3 zeta) |
| 59 | CD19-CD30ΔSYN-z nucleotide | CD19-CD30ΔS YN-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS YN ICD-CD3 zeta) |
| 60 | CD19-CD30ΔSYN-z amino acid | CD19-CD30ΔS YN-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS YN ICD-CD3 zeta) |
| 61 | CD19-CD30ΔSYF-z nucleotide | CD19-CD30ΔS YF-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS YF ICD-CD3 zeta) |
| 62 | CD19-CD30ΔSYF-z amino acid | CD19-CD30ΔS YF-z Chimeric Antigen Receptor의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30ΔS YF ICD-CD3 zeta) |
| 63 | CD19-28-z nucleotide | CD19-28-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 64 | CD19-28-z amino acid | CD19-28-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 65 | 4-1BB(CD137) ICD nucleotide | 4-1BB(CD137, TNFRSF9) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열 |
| 66 | 4-1BB(CD137) ICDamino acid | 4-1BB(CD137, TNFRSF9) 유래의 세포내 신호전달 도메인의 코돈 최적화된 아미노산 서열 |
| 67 | CD19-BB-z nucleotide | CD19-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 68 | CD19-BB-z amino acid | CD19-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 69 | CD27 ICD nucleotide | CD27 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 70 | CD27 ICD amino acid | CD27 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 71 | hCD19-27-z nucleotide | CD19-27-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD27 ICD-CD3 zeta) |
| 72 | hCD19-27-Z amino acid | CD19-27-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD27 ICD-CD3 zeta) |
| 73 | ICOS ICD nucleotide | ICOS 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 74 | ICOS ICD amino acid | ICOS 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 75 | hCD19-ICOS-z nucleotide | CD19-ICOS-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-ICOS ICD-CD3 zeta) |
| 76 | hCD19-ICOS-zamino acid | CD19-ICOS-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-ICOS ICD-CD3 zeta) |
| 77 | OX40 ICD nucleotide | OX40 유래의 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 78 | OX40 ICD amino acid | OX40 유래의 세포내 신호전달 도메인의 아미노산 서열 |
| 79 | hCD19-OX40-z nucleotide | CD19-OX40-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-OX40 ICD-CD3 zeta) |
| 80 | hCD19-OX40-zamino acid | CD19-OX40-z CAR의 아미노산 서열 (hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-OX40 ICD-CD3 zeta) |
| 81 | hCD19-28-BB-z nucleotide | CD19-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 82 | hCD19-28-BB-zamino acid | CD19-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 83 | hCD19-30S-BB-z nucleotide | CD19-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 84 | hCD19-30S-BB-zamino acid | CD19-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 85 | hCD19-28-30S-z nucleotide | CD19-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28-CD30S-CD3 zeta) |
| 86 | hCD19-28-30S-Zamino acid | CD19-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28-CD30S-CD3 zeta) |
| 87 | hCD19-30S-ICOS-Z nucleotide | CD19-30S-ICOS-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-ICOS ICD-CD3 zeta) |
| 88 | hCD19-30S-ICOS-Zamino acid | CD19-30S-ICOS-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD30S-RSK-CD27 ICD-CD3 zeta) |
| 89 | hCD19-30S-27-Z nucleotide | CD19-30S-27-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD27 ICD-CD3 zeta) |
| 90 | hCD19-30S-27-Zamino acid | CD19-30S-27-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD27 ICD-CD3 zeta) |
| 91 | hCD19-30S-OX40-Z nucleotide | CD19-30S-OX40-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-OX40 ICD-CD3 zeta) |
| 92 | hCD19-30S-OX40-Zamino acid | CD19-30S-27-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-CD19 VL-(G4S)3 linker-CD19 VH-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-OX40 ICD-CD3 zeta) |
| 93 | CD8α LS nucleotide | 인간 CD8α 신호 서열 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 94 | CD8α LS amino acid | 인간 CD8α 신호 서열 도메인의 아미노산 서열 |
| 95 | EpCAM VL nucleotide | EpCAM 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 96 | EpCAM VL amino acid | EpCAM 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 97 | EpCAM VH nucleotide | EpCAM 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 98 | EpCAM VH amino acid | EpCAM 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 99 | EpCAM-28-z nucleotide | EpCAM-28-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 100 | EpCAM-28-z amino acid | EpCAM-28-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 101 | EpCAM-BB-z nucleotide | EpCAM-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 102 | EpCAM-BB-z amino acid | EpCAM-BB-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 103 | EpCAM-30S-z nucleotide | EpCAM-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 104 | EpCAM-30S-z amino acid | EpCAM-30S-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 105 | EpCAM-28TM nucleotide | EpCAM-28TM의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-AA) |
| 106 | EpCAM-28TM amino acid | EpCAM-28TM의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker- EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-AA) |
| 107 | EpCAM-28-30S-z nucleotide | EpCAM-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 108 | EpCAM-28-30S-zamino acid | EpCAM-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 109 | EpCAM-28-BB-z nucleotide | EpCAM-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 110 | EpCAM-28-BB-zamino acid | EpCAM-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 111 | EpCAM-30S-BB-z nucleotide | EpCAM-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 112 | EpCAM-30S-BB-zamino acid | EpCAM-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hCD8a LS-EpCAM VL-(G4S)3 linker-EpCAM VH-CD28 Hinge-CD28 TM- RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 113 | PD-1 LS nucleotide | 인간 PD-1 유래 신호서열 뉴클레오타이드 서열 |
| 114 | PD-1 LS amino acid | 인간 PD-1 유래 신호서열 아미노산 서열 |
| 115 | PD-1 ECD nucleotide | 인간 PD-1 유래 세포외 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 116 | PD-1 ECD amino acid | 인간 PD-1 유래 세포외 도메인의 아미노산 서열 |
| 117 | PD-1 TM nucleotide | 인간 PD-1 유래 막관통 도메인의 뉴클레오타이드 서열 15bp |
| 118 | PD-1 TM amino acid | 인간 PD-1 유래 막관통 도메인의 아미노산 서열 5aa |
| 119 | PD-1-28-z nucleotide | PD-1-28-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 120 | PD-1-28-z amino acid | PD-1-28-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 121 | PD-1-BB-z nucleotide | PD-1-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 122 | PD-1-BB-z amino acid | PD-1-BB-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 123 | PD-1-30S-z nucleotide | PD-1-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 124 | PD-1-30S-z amino acid | PD-1-30S-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 125 | PD-1-28TM nucleotide | PD-1-28TM의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-AA) |
| 126 | PD-1-28TM amino acid | PD-1-28TM의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-AA) |
| 127 | PD-1-28-30S-z nucleotide | PD-1-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 128 | PD-1-28-30S-zamino acid | PD-1-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 129 | PD-1-28-BB-z nucleotide | PD-1-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 130 | PD-1-28-BB-zamino acid | PD-1-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 131 | PD-1-30S-BB-z nucleotide | PD-1-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS-hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 132 | PD-1-30S-BB-zamino acid | PD-1-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hPD-1 LS-hPD-1 LS- hPD1TM5aa-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 133 | MSLN(MOR) VH nucleotide | Mesothelin 단일쇄 가변- 중쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 134 | MSLN(MOR) VHamino acid | Mesothelin 단일쇄 단편 가변 - 중쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 135 | MSLN(MOR) VL nucleotide | Mesothelin 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 136 | MSLN(MOR) VLamino acid | Mesothelin 단일쇄 단편 가변 -경쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 137 | hMSLN(MOR)-28-znucleotide | hMSLN(MOR)-28-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 138 | hMSLN(MOR)-28-zamino acid | hMSLN(MOR)-28-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD3 zeta) |
| 139 | hMSLN(MOR)-BB-znucleotide | hMSLN(MOR)-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 140 | hMSLN(MOR)-BB-zamino acid | hMSLN(MOR)-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 141 | hMSLN(MOR)-30S-znucleotide | hMSLN(MOR)-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 142 | hMSLN(MOR)-30S-zamino acid | hMSLN(MOR)-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM- RSK-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 143 | hMSLN(MOR)-28-30S-znucleotide | hMSLN(MOR)-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 144 | hMSLN(MOR)-28-30S-z amino acid | hMSLN(MOR)-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 145 | hMSLN(MOR)-28-BB-znucleotide | hMSLN(MOR)-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 146 | hMSLN(MOR)-28-BB-zamino acid | hMSLN(MOR)-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker-MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 147 | hMSLN(MOR)-30S-BB-znucleotide | hMSLN(MOR)-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 148 | hMSLN(MOR)-30S-BB-zamino acid | hMSLN(MOR)-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-MSLN(MOR) VH-(G4S)3 linker- MSLN(MOR) VL-CD28 hinge-CD28TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 149 | NKp30 LS nucleotide | 인간 NKp30 유래 신호서열(Leader sequence) 뉴클레오타이드 서열 |
| 150 | NKp30 LS amino acid | 인간 NKp30 유래 신호서열 아미노산 서열 |
| 151 | NKp30 ECD nucleotide | 인간 NKp30 유래 세포외 도메인의 뉴클레오타이드 서열 |
| 152 | NKp30 ECD amino acid | 인간 NKp30 유래 세포외 도메인의 아미노산 서열 |
| 153 | NKp30 TM nucleotide | 인간 NKp30 유래 막관통 도메인의 뉴클레오타이드 서열 15bp |
| 154 | NKp30 TM amino acid | 인간 NKp30 유래 막관통 도메인의 아미노산 서열 5aa |
| 155 | NKp30-28-30S-z nucleotide | NKp30-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 156 | NKp30-28-30S-z amino acid | NKp30-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 157 | NKp30-28-BB-z nucleotide | NKp30-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 158 | NKp30-28-BB-zamino acid | NKp30-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 159 | NKp30-30S-BB-z nucleotide | NKp30-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 160 | NKp30-30S-BB-zamino acid | NKp30-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hNKp30 LS-hNKp30 ECD-hNKp30 TM 5aa-CD28TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 161 | Ig LS nucleotide | 인간 면역글로불린 중쇄 유래의 신호 서열(leader sequence)의 뉴클레오타이드 서열 |
| 162 | Ig LS amino acid | 인간 면역글로불린 중쇄 유래의 신호 서열의 아미노산 서열 |
| 163 | GPC3 VH nucleotide | Glypican3 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 164 | GPC3 VH amino acid | Glypican3 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 165 | GPC3 VL nucleotide | Glypican3 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 166 | GPC3 VL amino acid | Glypican3 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 167 | GPC3-28-30S-znucleotide | GPC3-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(immunoglobulin heavy-chain LS-Glypican3 VH-(G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 168 | GPC3-28-30S-zamino acid | GPC3-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(immunoglobulin heavy-chain LS-Glypican3 VH-(G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 169 | GPC3-28-BB-znucleotide | GPC3-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(immunoglobulin heavy-chain LS-Glypican3 VH-(G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 170 | GPC3-28-BB-zamino acid | GPC3-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(immunoglobulin heavy-chain LS -Glypican3 VH- (G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 171 | GPC3-30S-BB-znucleotide | GPC3-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(immunoglobulin heavy-chain LS -Glypican3 VH- (G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 172 | GPC3-30S-BB-zamino acid | GPC3-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(immunoglobulin heavy-chain LS -Glypican3 VH- (G4S)3 linker- Glypican3 VL-AAA-CD28 hinge-CD28TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 173 | BCMA VH nucleotide | BCMA 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 174 | BCMA VH amino acid | BCMA 단일쇄 단편 가변-중쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 175 | BCMA VL nucleotide | BCMA 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 뉴클레오타이드 서열 |
| 176 | BCMA VL amino acid | BCMA 단일쇄 단편 가변-경쇄 가변의 아미노산 서열 |
| 177 | BCMA-28-30S-z nucleotide | BCMA-28-30S-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 178 | BCMA-28-30S-z amino acid | BCMA-28-30S-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-CD30S ICD-CD3 zeta) |
| 179 | BCMA-28-BB-z nucleotide | BCMA-28-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 180 | BCMA-28-BB-z amino acid | BCMA-28-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-CD28 ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 181 | BCMA-30S-BB-z nucleotide | BCMA-30S-BB-z CAR의 뉴클레오타이드 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
| 182 | BCMA-30S-BB-z amino acid | BCMA-30S-BB-z CAR의 아미노산 서열(hGMCSF rec LS-BCMA VH-(G4S)3 linker-BCMA VL-AAA-CD28 Hinge-CD28 TM-RSK-CD30S ICD-4-1BB ICD-CD3 zeta) |
(mRNA 합성)
MN NucleoBond Xtra Midi Plus Endotoxin free 키트를 사용하여 상기의 플라스미드 벡터를 증폭하였다. 증폭한 플라스미드 벡터는 제한효소를 이용하여 선형화하였다. 선형화 된 플라스미드를 주형으로 mRNA를 시험관내 전사(In Vitro Transcription)를 통해 생산하였다. MEGAscript® Kit(AM1330, AMBION)를 이용하여 Transcription 과정을 진행한후 DNase 처리하였고 Poly(A) Tailing kit(AM1350, AMBION)를 이용한 3'polyA tailing을 통해 mRNA를 최종 생산하였다. mRNA를 40㎍/tube로 분주 후 nanodrop 장비와 tapestation 장비를 이용하여 농도와 품질을 확인하였다. mRNA 생성물은 -80℃에서 보관 후 CAR evaluation에 사용하였다.
(유전자 전달 (전기천공법))
KHYG-1 세포, NK-92 세포에 CAR 유전자를 도입하기 위해, 1Х107 개의 세포를 1500 rpm 에서 3 분간 원심분리 한다. 원심분리가 끝나면 배양액 opti-MEM 300 ㎕로 재부유한다. 세포에 CAR mRNA 40 ㎍ 을 넣고 200 V, 2 ms, 1 회의 조건으로 전기천공법을 실시하였다. 알파베타 T 세포, 감마델타 T 세포는 상기와 같은 수의 세포에 40 ㎍ mRNA를 380 V, 1 ms, 1 회의 조건으로 CAR 유전자를 도입하였다.
(CAR 발현 검출)
NK-92, KHYG-1, 알파베타 T 세포, 감마델타 T 세포에 도입된 항-CD19 CAR, 항-EpCAM CAR를 검출하기 위해 4% bovine serum albumin(BSA) 완충액을 사용하여 세척한 후, Protein L 또는 인간 Fab 항체를 사용하여 30 분간 염색하였다. 반응시간이 끝나면 4% BSA 완충액으로 세척한 후 2% PFA 용액으로 고정하였다. Protein L 로 염색한 그룹은 Streptavidin-PE 항체를 사용하여 25 분간 더 염색한 후, 4% BSA 완충액으로 세척 및 2% PFA 용액으로 고정하였다. 항-BCMA CAR, 항-MSLN CAR, 항-GPC3 CAR의 검출은 쥐 Fab 항체를 사용하여 상기와 같은 방법으로 염색하였다. PD-1 CAR의 검출은 인간 항-PD-1 항체를 사용하였다. 또한, NKp30 CAR는 인간 항-NKp30 항체를 사용하였다. 염색된 세포들의 발현비율은 aurora(Cytek) 장비를 사용하여 측정되었다.
(루시퍼레이즈 (luciferease) 기반 세포독성)
루시퍼레이즈 유전자가 도입된 표적 세포들을 96-well 플레이트에 50 ul 가 되도록 1Х104 cells/well 로 넣었다. CAR 유전자가 도입된 효과 세포는 다양한 E/T (effector-to-target) 비율로 50 ㎕ 넣고, 37℃ 세포배양기에서 반응하였다. 4 시간 반응 후, Bright-Glo 용액을 100 ㎕ 넣고 500 rpm으로 2 분간 진탕배양 하였다. 배양이 끝나면 반응 용액을 파이펫으로 잘 섞어주고, 100 ㎕를 흰색 불투명 96-well 에 옮긴 후 마이크로 플레이트 리더기로 파장 및 파장에서 형광 값을 측정하였다. 세포독성은 다음과 같이 계산되었다: percent specific lysis = 100-target with effector/only target x 100.
(사이토카인)
표적세포들은 120 Gy X-선을 조사한 후, 96-well 플레이트에 100 ㎕가 되도록 1Х105 cells/well 로 넣었다. E/T 비율이 1 이 되도록, CAR 유전자가 도입된 효과 세포 역시 1Х105 cells/well 로 넣어주었다. 37℃ 세포배양기에서 24 시간 동안 반응시킨 후, 플레이트를 1500 rpm 에서 5 분간 원심분리 하고, 150 ㎕의 상층액을 수집하였다. 인간 CD8/NK multi-analyte flow assay 키트(BioLegend, SD, USA)의 실험 방법에 따라 분비된 사이토카인의 양을 측정하였다.
<실험예 1> 다양한 형태의 CD30 도메인을 보조자극 도메인으로 사용하는 CAR를 발현하는 여러 면역세포의 CD19 음성 및 양성 혈액암 세포주에 대한 세포독성 평가
면역세포의 항종양 효능을 증가시켜줄 수 있는 보조자극 도메인으로서 최적의 CD30 도메인을 찾기 위해, 상기 실시예 플라스미드를 표 1 에 언급된 구조로 인간 CD19 항원을 표적으로 하면서 CD30 도메인을 포함하는 2세대 CAR를 제작하였다(도 1a). 제작된 2세대 CAR는 다음과 같다: CD19-30L-z(CD30 서열의 1219-1785 nt), CD19-30M-z(CD30 서열의 1501-1785 nt), CD19-30Mmut-z(CD30 서열의 1501-1785 nt 중 521 번 아미노산 리신을 글루타민으로 변경, 521 K→Q), CD19-30ΔM-z(CD30 서열의 1501-1785 nt 중 Δ1615-1677 nt 결실, D1615-1677), CD19-30S-z(CD30 서열의 1615-1785 nt).
상기 CAR mRNA를 자연살해세포주인 KHYG-1와 NK-92 뿐만 아니라 알파베타 T 세포, 감마델타 T 세포에 도입하여, 다양한 면역세포에서의 발현 및 항종양 효능을 확인하였다.
모든 면역세포에서 CD19-28-z 와 CD19-30L-z, CD19-30S-z 는 높은 수준으로 발현되었으나 CD19-30M-z, CD19-30Mmut-z, CD19-30ΔM-z 는 거의 발현되지 않았다(도 1c).
CD19 음성 및 양성 혈액암 세포주들에 대한 세포독성 효능 평가에서는 CD19-28-z 와 CD19-30S-z 만이 CD19 양성 암세포주를 특이적으로 살해하였다(도 1d).
따라서, 본 발명자들은 CD30S를 최적의 보조자극 도메인으로 선정하여 후속 실험을 진행하였다.
<실험예 2> 변형된 형태의 CD30S 도메인을 보조자극 도메인으로 사용하는 CAR를 발현하는 여러 면역세포의 CD19 음성 및 양성 혈액암 세포주에 대한 세포독성 평가
상기 실험에서 다양한 형태의 CD30 도메인을 포함하는 CAR 구조 중에서 CD30S를 포함하는 CAR 구조만 다양한 면역세포에서 안정적으로 발현되었고, 우수한 항종양 효능을 나타냈다. 본 발명자들은 향후 CD30S 도메인을 이용한 3세대 CAR 형태나 인터류킨, 케모카인 수용체 등과의 조합을 보다 용이하게 하기 위해, CD30S 도메인을 보다 작은 형태인 CD30ΔS로 제작한 후 항종양 효능을 평가하였다. 도 2a와 같이, CD19-28-z, CD19-30L-z, CD19-30S-z, CD19-CD30ΔS-z(CD30 서열의 1630-1764 nt) mRNA를 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 전기천공법을 통해 도입시킨 후 CD19 양성 및 음성 암세포주에 대한 세포독성 효능을 평가하였다.
CD19-28-z와 CD19-30S-z는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포 모두에서 안정적으로 발현하였으며 높은 세포사멸능을 나타냈다. CD19-CD30ΔS-z는 알파베타 T 세포에 비해 감마델타 T 세포에서는 발현이 비교적 낮았지만, 두 세포 모두 CD19 양성 혈액암 세포를 효과적으로 사멸시켰다(도 2b 및 2c).
다음으로는, CD30ΔS 도메인의 기능을 더욱 향상시키기 위해, 기존의 보조자극 도메인 CD28과 ICOS가 각각 가지고 있는 phosphoinositide 3-kinase 결합부위 YMNM, YMFM을 CD30ΔS에 추가한 후 항종양 효능을 평가하였다. CD19-28-z, CD19-30S-z, CD19-CD30ΔSYN-z (CD30 서열의 1630-1764 nt와 CD28 서열의 562-609 nt 연결), CD19-CD30ΔSYF-z(CD30 서열의 1630-1764 nt와 CD28 서열의 562-609 nt 중 193 번의 아스파라긴이 페닐알라닌으로 변경된 형태의 연결, N→F) mRNA를 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 도입시켰다.
CD19- CD30ΔSYN-z, CD19-CD30ΔSYF-z CAR 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었으며, 기존의 CD19-28-z, CD19-30S-z CAR가 도입된 T 세포들과 유사한 세포독성 효능이 확인되었다(도 2d 및 2e).
<실험예 3> CD30S 또는 기존 세포내 신호전달 도메인을 보조자극 도메인으로 사용하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 CD19 음성 및 양성 혈액암 세포주에 대한 세포독성 및 사이토카인 분비능 비교
CD30S 또는 기존 ICD(CD28, 4-1BB, CD27, ICOS, OX40)를 보조자극 도메인으로 사용하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포가 특이적으로 암세포를 사멸하는지 확인하기 위해, CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-27-z, CD19-ICOS-z, CD19-OX40-z, CD19-30S-z CAR mRNA를 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 전기천공법을 통해 도입시켰다(도 3a).
CD19-ICOS-z, CD19-OX40-z를 제외한 나머지 CAR 들은 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었다. CD19 양성 암세포주 U937CD19, IM-9, Raji 에 대해 CD19-30S-z CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포 모두 기존 ICD를 포함하는 CAR를 발현하는 세포들과 유사한 세포독성 효능이 확인되었다. 반면, 상기 CAR들은 CD19 음성 세포주 U937mock에 대해서는 CAR 유전자가 도입되지 않은 그룹 (NT)와 유사한 정도로, 세포살해능을 거의 나타내지 않았다(도 3b 내지 3d).
또한 상기의 항-CD19 2세대 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포를 각각 CD19 양성 U937CD19와 음성 U937mock 과 함께 배양한 후 분비된 사이토카인 IFN-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B, perforin 의 양을 측정하였다.
알파베타 T 세포에서는 상기 사이토카인을 CD19-30S-z CAR는 CD19-28-z 보다 적게, CD19-4-1BB-z 와 비슷한 양을 분비하였다. 반면 감마델타 T 세포에서 CD19 양성 세포주에 대해 CD19-30S-z CAR는 CD19-28-z 보다는 적고 CD19-4-1BB-z보다는 많은 양의 IFN-γ, TNF-α를 분비하였다. CD19-30S-z는 CD19-28-z와 유사한 정도로 granzyme A, granzyme B, perforin을 분비하였다(도 3e).
<실험예 4> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 3세대 형태의 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 CD19 음성 및 양성 혈액암 세포주에 대한 세포독성 및 사이토카인 분비능 비교
두 개의 보조자극 도메인 중 하나는 CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하면서 다른 하나는 기존 ICD(CD28, 4-1BB, CD27, ICOS, OX40)를 보조자극 도메인으로 사용하는 3세대 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포가 항원 특이적으로 반응하는지 확인하기 위해, 상기 실시예 플라스미드에 언급된 구조로 CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-27-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z mRNA를 제작하였다(도 4a).
전기천공법을 이용하여 상기 항-CD19 3세대 CAR mRNA를 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 도입시켰고, 모든 CAR 들이 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었다(도 4b).
또한, CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 CAR(CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z, CD19-30S-27-z, CD19-30S-ICOS-z, CD19-30S-OX40-z)들은 기존 CD19-28-BB-z와 유사하게 CD19 양성 세포주 U937CD19, IM-9, Raji 에 대한 특이적인 세포 살해능이 확인되었다. 반면, CD19 음성 세포주 U937mock에 대해서는 세포 살해능을 보이지 않았다(도 4c).
또한, CD19-28-BB-z, CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포를 각각 U937mock, U937CD19과 함께 배양한 후 분비된 사이토카인의 양을 측정하였다.
알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포 모두에서 CD19 양성 U937CD19에 대해 CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 CD19-30S-BB-z, CD19-28-30S-z CAR가 CD19-28-BB-z 보다 많은 양의 IFN-γ, TNF-α, granzyme A, granzyme B 를 분비하였다(도 4d).
<실험예 5> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 BCMA 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 감마델타 T 세포의 인간 혈액암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 혈액암에서 발현되는 BCMA를 표적으로 하는 CAR 에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z mRNA를 합성하였다(도 5a). 또한, 인간 혈액암 세포주 U937, IM-9, Daudi에서의 인간 BCMA 발현을 측정하였다. U937에서는 BCMA가 발현되지 않았고, IM-9 과 Daudi에서는 BCMA 가 발현되었다(도 5b).
BCMA-28-BB-z, BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z mRNA를 전기천공법을 이용하여 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다. CD30S를 포함하는 BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z는 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었으나, BCMA-28-BB-z는 매우 낮게 발현되었다(도 5c). BCMA-30S-BB-z, BCMA-28-30S-z를 발현하는 감마델타 T 세포는 BCMA 양성 세포주 IM-9과 Daudi에 대해 높은 세포 살해능을 나타내었고, BCMA 음성 세포주 U937 에 대해서는 세포 살해능을 보이지 않았다(도 5d).
<실험예 6> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 EpCAM 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 인간 고형암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 고형암에서 발현되는 EpCAM을 표적으로 하는 CAR 에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예 플라스미드에 언급된 구조로 EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM mRNA를 합성하였다. 또한, 인간 폐암 세포주 A549, Calu-1, NCI-H292, NCI-H460에서의 인간 EpCAM 발현을 측정하였다. 폐암 세포주 A549, Calu-1, NCI-H292, NCI-H460에서 EpCAM이 70% 이상으로 발현되었다. EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM mRNA를 전기천공법을 이용하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다(도 6a).
EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z, EpCAM-28TM 키메라 항원 수용체 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 높게 발현되었다(도 6B). EpCAM-28-z, EpCAM-4-1BB-z, EpCAM-30S-z를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포 모두 EpCAM을 발현하는 폐암 세포주에 대해 유사한 세포 살해능이 평가된 반면, CAR를 도입하지 않은 그룹 (NT)과 EpCAM-28TM을 도입한 그룹은 세포 살해능이 나타나지 않았다(도 6c 및 6d).
또한, EpCAM을 표적으로 하는 3세대 CAR에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z mRNA를 합성하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다(도 6e).
EpCAM-28-BB-z, EpCAM-30S-BB-z, EpCAM-28-30S-z 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었다(도 6f). 상기 EpCAM 3세대 CAR가 도입된 알파베타 T 세포는 A549, Calu-1, NCI-H292, NCI-H460에 대한 우수한 세포독성 효능이 평가되었다. 감마델타 T 세포에서 역시 상기 EpCAM CAR 들이 EpCAM 양성 폐암 세포주를 효과적으로 살해하였다(도 6g).
<실험예 7> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 메소텔린 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 인간 고형암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 고형암에서 발현되는 메소텔린을 표적으로 하는 CAR에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 인간 폐암 세포주 A549, NCI-H292, 인간 췌장암 세포주 AsPC-1, 인간 난소암 세포주 SKOV3에서의 인간 메소텔린 발현을 측정하였다. 폐암 세포주 NCI-H292와 췌장암 세포주 AsPC-1 에서는 메소텔린이 높게 발현되었고, 폐암 세포주 A549 와 난소암 세포주 SKOV3 에서는 적게 발현되었다(도 7b). 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z mRNA를 합성하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다(도 7a).
상기의 항-메소텔린 2세대 CAR 들은 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 높은 수준으로 발현되었다(도 7c). MSLN-28-z 와 MSLN-4-1BB-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포가 메소텔린 양성 NCI-H292, AsPC-1에 대해서만 세포독성 효능이 확인되었다. MSLN-30S-z CAR가 도입된 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포는 MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z CAR 보다는 조금 낮은 세포독성 효능이 평가되었다. MSLN-28-z, MSLN-4-1BB-z, MSLN-30S-z CAR 모두 메소텔린을 발현하는 세포주에만 특이적으로 세포독성 효능을 나타내는 것을 확인하였다(도 7d).
또한, 메소텔린을 표적으로 하는 3세대 CAR에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예 플라스미드에 언급된 구조로 MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z mRNA를 합성한 후 전기천공법을 이용하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다(도 7e). MSLN-28-BB-z, MSLN-30S-BB-z, MSLN-28-30S-z CAR 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 높게 발현되었다(도 7f). NT 그룹을 제외한 나머지 MSLN-CAR 알파베타 T 세포의 경우 NCI-H292 에 대해서만 세포 살해능을 나타내었고, AsPC-1, SKOV3, A549 에 대해서는 세포 살해능을 나타내지 않았다. 감마델타 T 세포에서는 상기 항-메소텔린 3세대 CAR 들이 메소텔린을 높게 발현하는 NCI-H292 와 AsPC-1 만을 선택적으로 살해하였다(도 7g).
<실험예 8> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 GPC3 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 감마델타 T 세포의 인간 고형암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 고형암에서 발현되는 GPC3 를 표적으로 하는 CAR 에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z mRNA를 합성하였다(도 8a). 인간 간암 세포주 HepG2, 인간 폐암 세포주 NCI-H292, A549 에서의 인간 GPC3 발현을 측정하였다. GPC3는 간암 세포주 HepG2 에서는 발현하였으나, 폐암 세포주 NCI-H292 와 A549 에서는 발현하지 않았다(도 8b).
GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z mRNA는 전기천공법을 이용하여 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다. GPC3-28- BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR 모두 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었다(도 8c). GPC3-28-BB-z, GPC3-30S-BB-z, GPC3-28-30S-z CAR를 발현하는 감마델타 T 세포는 GPC3 양성 세포주 HepG2에 대해서만 특이적인 세포 살해능이 확인되었으며, 음성 세포주 NCI-H292 와 A549 에서는 살해능을 나타내지 않았다(도 8d).
<실험예 9> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 PD-L1 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 인간 고형암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 고형암에서 발현되는 PD-L1을 표적으로 하는 CAR에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM mRNA를 합성하였다(도 9a). 폐암 세포주 NCI-H292, Calu-1, 췌장암 세포주 AsPC-1, 두경부암 세포주 FaDu 에서의 인간 PD-L1 발현을 측정하였다. 모든 세포주에서 PD-L1 이 높게 발현하였다(도 9b). PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM mRNA를 전기천공법을 이용하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다. PD-1-28-z, PD-1-4- 1BB-z, PD-1-30S-z, PD-1-28TM CAR 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 높게 발현되었다(도 9c). 알파베타 T 세포의 경우 NT 와 PD-1-28TM CAR T 세포를 제외한 CAR 들은 NCI-H292 와 Calu-1 에 대해서만 세포 살해능을 나타냈다. 반면 감마델타 T 세포에서는 상기의 CAR(PD-1-28-z, PD-1-4-1BB-z, PD-1-30S-z)들이 NCI-H292, Calu-1, FaDu 를 선택적으로 살해하였다. 모든 PD-1 CAR는 PD-L1 양성 세포주인 AsPC-1 에 대해서는 살해능을 나타내지 않았다(도 9d).
또한, PD-L1을 표적으로 하는 3세대 CAR에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z mRNA를 합성한 후 전기천공법을 이용하여 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다(도 9e). PD-1-28-BB-z, PD-1-30S-BB-z, PD-1-28-30S-z CAR 모두 감마델타 T 세포에서 높게 발현되었다(도 9f). PD-1 2세대 CAR 가 도입된 감마델타 T 세포의 세포독성 실험결과와 유사하게 상기 PD-1 3세대 CAR가 도입된 감마델타 T 세포는 NCI-H292, Calu-1, FaDu를 선택적으로 살해하였으며, AsPC-1에 대해서는 살해능을 나타내지 않았다(도 9g).
<실험예 10> CD30S를 보조자극 도메인으로 사용하는 인간 B7-H6 항원을 표적으로 하는 CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포의 인간 고형암 세포주에 대한 세포독성 평가
인간 고형암에서 발현되는 B7-H6을 표적으로 하는 CAR 에서의 CD30S 보조자극 도메인의 효능을 평가하기 위해, 상기 실시예에서 언급된 플라스미드 구조로 NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z mRNA를 합성하였다(도 10a). 인간 림프종 세포주 U937, K562, 인간 버킷림프종 세포주 Raji, 인간 폐암 세포주에서의 인간 B7-H6 발현을 측정하였다. A549 에서는 B7-H6 가 발현되지 않았고, U937, Raji, K562 에서는 B7-H6 가 70% 이상 발현되었다(도 10b).
NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z mRNA 는 전기천공법을 이용하여 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에 각각 도입시켰다. NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28-30S-z CAR 모두 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포에서 안정적으로 발현되었다(도 10c). NKp30-28-BB-z, NKp30-30S-BB-z, NKp30-28- 30S-z CAR를 발현하는 알파베타 T 세포와 감마델타 T 세포 모두 B7-H6 양성 세포주 U937, Raji, K562 에 대해 특이적인 세포 살해능이 확인되었으며, 음성 세포주 A549 에서는 살해능을 나타내지 않았다(도 10d).
<실험예 11> 인간 백혈병 세포주 NALM6를 이종이식한 동물모델에서 CD30S와 기존 ICD(CD28, 4-1BB)간의 조합에 따른 2세대 CD19-CAR 발현 T세포의 치료적 항종양효과
2세대 CD19-CAR 발현 T세포의 항종양능 평가 및 실험 방법은 다음과 같다.
(마우스, 세포주)
6 주령된 암컷 NOG(NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1sug/JicKoat) 마우스는 Koatech inc.(Pyeongtaek, Kyunggi)에서 구입하였고, 무균 조건 하에서 가톨릭대학교 동물실험실에서 사육하였다. 동물 연구의 모든 과정은 서울 가톨릭대학교(Approval number: CUMS-2022-0285-02) 의과대학 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)에서 제공받은 설치류 실험에 대한 가이드라인 및 정책, 실험동물의 관리 및 이용에 대한 가이드, 실험동물 복지법에 따라 수행되었다. NALM6 세포는 American Type Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입하였으며 모든 세포주는 제조사의 권장에 따라 배양되었다.
(치료적 항종양 효과의 평가)
생체 내에서 치료 효과를 평가하기 위해, 마우스 꼬리에 1x106 NALM-6-luc-thy1.1 세포를 정맥투여 후 7일째에 1x107 CD19-CAR-αβ T세포를 1회 정맥 투여하였다. 세포치료 받지 않은 마우스(No Treat)를 대조군으로 포함시켰다. 종양 성장은 개별 마우스에서 생체 내 생물 발광 영상화의 시간경과에 의해 모니터링되었고 고정된 시간에 동물 체중을 측정하여 체중이 20% 이상 감소한 마우스는 승인된 실험동물계획서에 따라 안락사시켰다.
IVIS Lumina XRMS(생체 내 발광 생물 이미징)을 사용하여 전체 동물에서 생물 발광을 검출하여 시간 경과에 따라 종양 성장을 모니터링하였다. Luciferin(Promega, P1043)을 멸균 생리식염수를 사용하여 15 mg/mL로 준비하고 -80℃ 냉동고에 보관하여 사용시 37℃로 녹여서 사용하였다. 생물 발광을 확인하기 위해, 마우스는 luciferin 3 mg/200 ㎕을 복강내 주사를 받고 7-8 분의 반응시간 동안 대기하였다. 반응시간이 끝난 마우스는 빛이 새지 않는 챔버에서 생물 발광을 측정하며 노즈 콘 이소플루오란 산소전달 장치를 통해 전체 이미징 과정 동안 마취를 유지하였다. 종양 성장 이미지 분석은 개별 마우스에서 생체 내 생물 발광의 평균 광도로 정량화하여 평가하였다.
도 11a-b에 도시된 바와 같이, 인간 백혈병 세포주 NALM6를 이종이식한 동물모델을 확립하여 CD19를 표적으로 하는 CD30S 또는 기존 보조자극 도메인으로 사용하는 2세대 CAR가 형질도입된 αβ T세포 치료제의 생체내 효능을 평가한 결과, CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CD19-30S-z CAR-αβ T세포의 항종양 효과는 형질도입 되지 않은 αβ T세포 치료제와 비교하여 종양성장이 지연되고 생존력이 증가하는 치료적 이점을 나타내었다. 그 중 CD19-30S-z CAR-αβ T세포 치료군이 CD19-28-z, CD19-4-1BB-z, CAR-αβ T세포 치료군보다 실질적으로 더 높은 항종양 효과를 가졌으며 이때, 유의한 독성은 관찰되지 않았다.
Claims (12)
- 표적 항원 결합 도메인;
막관통 도메인;
SEQ ID NO: 44, 46, 48 및 50으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 C30 유래의 세포내 신호전달 도메인; 및
CD3ζ 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
표적 항원 결합 도메인은 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 포함하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
표적 항원은 CD19, MUC16, MUC1, CAIX, CEA, CDS, CD7, CD10, CD20, CD22, CD30, CD33, CD34, CD38, CD41, CD44, CD49f, CD56, CD74, CD133, CD138, BCMA, PD-1, NKp30, 사이토메갈로바이러스(CMV) 감염된 세포 항원, EGP-2, EGP-40, EpCAM, Erb-B2, Erb-B3, Erb-B4, FBP, 태아 아세틸콜린 수용체, 폴레이트 수용체-α, GD2, GD3, HER-2, hTERT, IL-13R-α2, κ-경쇄, KDR, LeY, L1 세포 부착 분자, MAGE-A1, 메소텔린, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, 암태아 항원(h5T4), PSCA, PSMA, ROR1, TAG-72, VEGF-R2, WT-1, CD24, CD47, EGFR, CD123, GPC3, CD117, Claudin18.2, cMET, EphA2, CLL-1, CD171, AXL, ROR2, FAP 및 CD5로 구성된 군에서 선택되는, 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
막관통 도메인은 CD8, 4-1BB, CD27, CD28, CD30, 0X40, CD3e, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 및 ICOS(CD278)로 구성된 군에서 선택된 TCR 공동 수용체 또는 T 세포 보조자극분자의 막관통 도메인 또는 이들로부터 유래하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
키메라 항원 수용체는 표적 항원 결합 도메인의 C-말단 및 막관통 도메인의 N-말단 사이에 힌지 부위(hinge region)를 더 포함하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
키메라 항원 수용체는 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), 0X40, CD40, ICOS, LFA-1(lymphocyte function-associated antigen-1), CD2, CD7, NKG2C, CD83, Dap10, GITR, OX40L, Myd88-CD40 및 KIR2DS2로 구성된 군에서 선택된 세포내 신호전달 도메인을 더 포함하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항에 있어서,
키메라 항원 수용체는 표적 항원 결합 도메인의 N-말단에 신호 펩타이드를 더 포함하되, 상기 신호 펩타이드는 GM-CSF 수용체 신호 서열, CD8α 신호 서열, 면역글로불린 중쇄 신호 서열, PD-1 신호 서열 및 NKp30 신호 서열로 구성된 군에서 선택되는, 키메라 항원 수용체. - 제1항의 키메라 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자.
- 제7항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
- 제1항의 키메라 항원 수용체, 제8항의 핵산 분자 또는 제9항의 벡터를 포함하는 분리된 면역 효과기 세포.
- 제10항에 있어서,
면역 효과기 세포는 αβ T 세포, γδ T 세포, NK 세포, NK T 세포 또는 대식세포인 면역 효과기 세포. - 제10항의 면역 효과기 세포를 포함하는 항종양 조성물.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20220039648 | 2022-03-30 | ||
| KR1020220039648 | 2022-03-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230143108A true KR20230143108A (ko) | 2023-10-11 |
Family
ID=88203179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020230041676A KR20230143108A (ko) | 2022-03-30 | 2023-03-30 | Cd30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20230143108A (ko) |
| WO (1) | WO2023191526A1 (ko) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190194617A1 (en) * | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Cell Design Labs, Inc. | Single- and multi-chain chimeric antigen receptors |
| CA3087476A1 (en) * | 2018-01-10 | 2019-07-18 | The General Hospital Corporation | Immune cells expressing a chimeric antigen receptor |
| CN109651511B (zh) * | 2018-12-26 | 2020-06-09 | 广州百暨基因科技有限公司 | 一种靶向bcma的嵌合抗原受体及其应用 |
| CN114286825A (zh) * | 2019-07-24 | 2022-04-05 | 优瑞科生物技术公司 | 嵌合抗原受体t细胞及其用途 |
| CN111748043B (zh) * | 2020-07-03 | 2022-09-02 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种嵌合抗原受体及其应用 |
-
2023
- 2023-03-30 WO PCT/KR2023/004241 patent/WO2023191526A1/ko unknown
- 2023-03-30 KR KR1020230041676A patent/KR20230143108A/ko unknown
Non-Patent Citations (15)
| Title |
|---|
| 1. Michel Sadelain et al, 2013, Cancer Discov 3(4):388-98. |
| 10. Lijun Zhao et al, 2019, Front Immunol 10: 2250 |
| 11. Renier J Brentjen et al, 2013, Sci Transl Med 20;5(177):177ra38 |
| 12. David L Porter et al, 2015, Sci Transl Me 2;7(303):303ra139 |
| 13. Stephan A Grupp et al, 2013, N Engl J Med 18;368(16):1509-1518 |
| 14. Jonathan H Esensten, 2016, Immunity 17;44(5):973-88 |
| 15. Robert Weinkove, 2019, Clin Transl Immunology 11;8(5):e1049 |
| 2. Cheng Zhang et al, 2017, Biomark Res 5:22 |
| 3. Barbara Savoldo et al, 2011, J Clin Invest 121(5):1822-6 |
| 4. Claudia M Kowolik et al, 2006, Cancer Res 15;66(22):10995-1004 |
| 5. Adrienne H Long et al, 2015, Nat Med 21(6):581-90 |
| 6. Michael C Milone et al, 2009, Mol Ther 17(8):1453-64 |
| 7. Sonia Guedan et al, 2014, Blood 14;124(7):1070-80 |
| 8. Andreas A Hombach et al, 2012, Oncoimmunology 1;1(4):458-466 |
| 9. De-Gang Song, 2012, Blood 19;119(3):696-706 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023191526A1 (ko) | 2023-10-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230250150A1 (en) | Chimeric antigen receptors based on alternative signal 1 domains | |
| US10736918B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| AU2017366739B2 (en) | Synthetic immune receptors and methods of use thereof | |
| JP2021036867A (ja) | 導入遺伝子の遺伝子タグおよびその使用方法 | |
| US20170296623A1 (en) | INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR OR N-CAR) EXPRESSING NON-T CELL TRANSDUCTION DOMAIN | |
| US20200113940A1 (en) | Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment | |
| US20210038646A1 (en) | Chimeric antigen receptors targeting the tumor microenvironment | |
| JP2020513754A (ja) | がん治療用に操作されたｔ細胞 | |
| EP3875484A1 (en) | Cll1-targeting antibody and application thereof | |
| US11439665B2 (en) | Combined chimeric antigen receptor targeting CD19 and CD20 and application thereof | |
| CA3111706A1 (en) | Chimeric receptor polypeptides in combination with trans metabolism molecules modulating intracellular lactate concentrations and therapeutic uses thereof | |
| US20210054086A1 (en) | Immune cells expressing a chimeric antigen receptor | |
| BR112021001694A2 (pt) | polipeptídeos do receptor de antígeno quimérico em combinação com moléculas de metabolismo trans que modulam o ciclo de krebs e seus usos terapêuticos | |
| US20210261646A1 (en) | Chimeric receptors in combination with trans metabolism molecules enhancing glucose import and therapeutic uses thereof | |
| US20210322473A1 (en) | Modified t cells and methods of their use | |
| CA3056115A1 (en) | Chimeric antigen receptors targeting cd37 | |
| WO2020018708A1 (en) | Compositions and methods for treatment of t cell malignancies | |
| EP4151653A1 (en) | Cd22-targeted chimeric antigen receptor, preparation method therefor and application thereof | |
| WO2022064397A1 (en) | Methods and compositions of car-expressing natural killer cells with bispecific antigen-binding molecules as cancer therapeutic agents | |
| KR20230143108A (ko) | Cd30 유래의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이들의 용도 | |
| NZ745376B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| NZ745374B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| NZ745372B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| NZ738636B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| NZ745375B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy |