KR20230137413A - 이중특이성 cs1-bcma car-t 세포 및 이의 응용 - Google Patents

이중특이성 cs1-bcma car-t 세포 및 이의 응용 Download PDF

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리안준 장
헹 메이
탕이 주
시옹보 첸
웨이 시옹
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우한 시안 메디컬 테크놀로지 코., 엘티디
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Abstract

본 발명은 이중특이성 CS1-BCMA CAR-T 세포 및 이의 응용을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 CS1 scFv와 BCMA scFv, 및 4-1BB 공동자극 도메인과 CD3 활성화 도메인을 포함하는 이중특이성 CAR를 제공한다. 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대해 현저한 살상 작용을 가지고, 표적 세포에 대해 IFN-γ를 분비할 수 있으며, 체내 시험에서 RPMI8226 이종이식 종양의 성장을 현저히 억제한다. 본 발명은 또한 상기 이중특이성 CAR-T 세포의 제조 방법 및 응용을 제공한다.

Description

이중특이성 CS1-BCMA CAR-T 세포 및 이의 응용
본 발명은 생명공학 분야에 관한 것으로, 보다 구체적으로 이중특이성 CS1-BCMA CAR-T 세포 및 이의 응용에 관한 것이다.
면역 요법은 매우 유망한 암 치료 방법으로 부상하고 있다. T 세포 또는 T 림프구는 면역 시스템의 효과적인 무기로 정상 세포에서 외래 항원 또는 비정상 세포(예를 들어, 암 세포 또는 감염 세포)를 지속적으로 찾을 수 있다. CAR(키메라 항원 수용체) 작제물을 사용한 T 세포의 유전적 변형은 종양 특이성 T 세포를 설계하는 가장 일반적인 방법이다. 종양 관련 항원(TAA)을 표적으로 하는 CAR-T 세포를 환자(입양 세포 전이 또는 ACT라고 함)에게 주입하는 것은 효과적인 면역 치료 방법을 나타낸다. 화학 요법 또는 항체에 비해, CAR-T 기술의 장점은 재프로그래밍된 조작된 T 세포가 환자에서 증식되고 지속(“살아있는 약물”)될 수 있는 것이다.
통상적으로, CAR는 N-말단에 위치하는 단클론 항체 유래 단일 사슬 가변 단편(scFv), 힌지 영역, 막횡단 도메인, 여러 세포내 공동자극 도메인((i)CD28, (ii)CD137(4-1BB), CD27 또는 기타 공동자극 도메인), 및 탠덤 CD3-zeta 활성화 도메인을 포함한다(도 1). CAR는 1세대(공동자극 도메인 없음)에서 2세대(하나의 공동자극 도메인 포함), 3세대(다수의 공동자극 도메인 포함)로 진화하였다. 다수의 공동자극 도메인을 갖는 CAR(즉, 소위 3세대 CAR)는 CAR-T 세포의 세포 독성을 강화하고 CAR-T 세포의 지속성을 현저히 개선하여 강화된 항종양 활성을 나타낼 수 있다.
현재, CAR-T 요법은 이상적인 치료 표적 결핍, 귀소 장애, 및 면역 억제 미세환경으로 인한 CAR-T 세포의 열악한 지속성 등을 비롯하여 고형 종양의 치료에서 여전히 많은 과제가 있다. 따라서, 본 분야는 또한 고형 종양을 위한 새로운 CAR-T 세포 및 치료 방법을 개발할 필요가 있다.
본 발명의 목적은 이중특이성 CS1-BCMA CAR-T 세포 및 이의 응용을 제공하는 것이다.
본 발명의 제1 양태에서, 이중특이성 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하며, 상기 키메라 항원 수용체의 구조는 하기 식 I로 표시되고,
L-scFv1-I-scFv2-H-TM-C-CD3ζ (I)
식에서,
각 “-”는 독립적으로 연결 펩티드 또는 펩티드 결합이며;
L은 선택적인 신호 펩티드 서열이고;
I는 플렉서블 링커이며;
H는 선택적인 힌지 영역이고;
TM은 막횡단 도메인이며;
C는 공동자극 신호 분자이고;
CD3ζ은 CD3ζ에서 유래된 세포질 신호 전달 서열이며;
scFv1 및 scFv2 중 하나는 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인이고, 다른 하나는 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 scFv1은 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인이고, 상기 scFv2는 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인의 구조는 하기 식 A 또는 식 B로 표시되고,
VH1-VL1 (A); VL1-VH1 (B)
식에서, VH1은 항-CS1 항체 중쇄 가변 영역이며; VL1은 항-CS1 항체 경쇄 가변 영역이고; “-”는 연결 펩티드 또는 펩티드 결합이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인의 구조는 식 A로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 VH1과 VL1은 플렉서블 링커(또는 연결 펩티드)를 통해 연결되고, 상기 플렉서블 링커(또는 연결 펩티드)는 1-4개의 연속적인 서열번호 6(GGGGS)으로 표시되는 서열이며, 바람직하게는 2-4개이고, 보다 바람직하게는 3-4개이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 항-CS1 항체 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되고, 상기 항-CS1 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인의 구조는 하기 식 C 또는 식 D로 표시되고,
VL2-VH2 (C); VH2-VL2 (D)
식에서, VL2는 항-BCMA 항체 경쇄 가변 영역이며; VH2는 항-BCMA 항체 중쇄 가변 영역이고; “-”는 연결 펩티드 또는 펩티드 결합이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인의 구조는 식 C로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 VL2와 VH2는 플렉서블 링커(또는 연결 펩티드)를 통해 연결되고, 상기 플렉서블 링커(또는 연결 펩티드)는 1-4개의 연속적인 서열번호 6(GGGGS)으로 표시되는 서열이며, 바람직하게는 2-4개이고, 보다 바람직하게는 3-4개이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 항-BCMA 항체 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4로 표시되고, 상기 항-BCMA 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 5로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 scFv1 및/또는 scFv2는 마우스 유래, 인간 유래, 인간 유래 및 마우스 유래 키메라, 또는 완전 인간화된 단일 사슬 항체 가변 영역 단편이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 플렉서블 링커 I의 서열은 2-6개, 바람직하게는 3-4개의 연속적인 서열번호 6(GGGGS)으로 표시되는 서열을 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 L은 CD8, CD28, GM-CSF, CD4, CD137, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 신호 펩티드이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 L은 CD8 유래 신호 펩티드이다.
다른 바람직한 예에서, L의 아미노산 서열은 서열번호 7로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 H는 CD8, CD28, CD137, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 힌지 영역이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 H는 CD8 유래 힌지 영역이다.
다른 바람직한 예에서, H의 아미노산 서열은 서열번호 8로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 TM은 CD28, CD3 epsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, GD2, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 막횡단 영역이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 TM은 CD28 유래 막횡단 영역이다.
다른 바람직한 예에서, TM의 서열은 서열번호 9로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 C는 OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD70, CD134, 4-1BB(CD137), PD1, Dap10, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), NKG2D, GITR, TLR2, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 공동자극 신호 분자이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 C는 4-1BB 유래 공동자극 신호 분자이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 4-1BB 유래 공동자극 신호 분자의 아미노산 서열은 서열번호 10으로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, CD3ζ의 아미노산 서열은 서열번호 11로 표시된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 키메라 항원 수용체의 아미노산 서열은 서열번호 3으로 표시된다.
본 발명의 제2 양태에서, 핵산 분자를 제공하며, 상기 핵산 분자는 본 발명의 제1 양태에 따른 키메라 항원 수용체(CAR)를 코딩한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 핵산 분자는 분리된 것이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 핵산 분자의 5' 말단은 프로모터 서열, 바람직하게는 MNDU3 프로모터를 더 포함한다.
본 발명의 제3 양태에서, 벡터를 제공하며, 상기 벡터는 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 벡터는 DNA, RNA, 플라스미드, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노 관련 바이러스 벡터(AAV), 레트로바이러스 벡터, 트랜스포존, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 벡터는 플라스미드, 바이러스 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 벡터는 바이러스 입자의 형태이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 렌티바이러스 벡터는 프로모터를 포함하고, 바람직하게는, 상기 프로모터는 MNDU3 프로모터, EF-1 alpha, CMV 프로모터, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 제4 양태에서, 숙주 세포를 제공하며, 상기 숙주 세포는 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터를 포함하거나 염색체에 외인성의 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자가 통합되거나 본 발명의 제1 양태에 따른 CAR를 발현한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 숙주 세포는 진핵 세포 및 원핵 세포를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 숙주 세포는 대장균을 포함한다.
본 발명의 제5 양태에서, 조작된 면역 세포를 제공하며, 상기 면역 세포는 본 발명의 제1 양태에 따른 CAR를 발현한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 세포는 분리된 세포이고, 및/또는 상기 세포는 유전자 조작된 세포이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 면역 세포는 인간 또는 비인간 포유동물(예를 들어, 쥐)에서 유래된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 세포는 T 세포, NK 세포를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 세포는 CAR-T 세포 또는 CAR-NK 세포이고, 바람직하게는 CAR-T 세포이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 면역 세포에서 CAR와 세포 자살 요소는 공동 발현된다.
본 발명의 제6 양태에서, 제제를 제공하며, 상기 제제는 본 발명의 제1 양태에 따른 키메라 항원 수용체, 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자, 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터, 또는 본 발명의 제5 양태에 따른 면역 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 제제는 액체 제제이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 제제의 제형은 주사제이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 제제에서 상기 CAR-T 세포의 농도는 1×103-1×108개 세포/ml이고, 바람직하게는 1×104-1×107개 세포/ml이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 약학적 조성물은 또한 항종양을 위한 제2 활성 성분을 포함하고, 바람직하게는 제2 항체 또는 화학 요법제를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 화학 요법제는 도세탁셀, 카보플라틴, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 제7 양태에서, 본 발명의 제1 양태에 따른 키메라 항원 수용체, 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자, 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터, 또는 본 발명의 제5 양태에 따른 면역 세포, 또는 본 발명의 제6 양태에 따른 제제의 용도를 제공하며, 암 또는 종양의 예방 및/또는 치료를 위한 약물 또는 제제의 제조에 사용된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 종양은 혈액 종양, 고형 종양, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 혈액 종양은 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 고형 종양은 위암, 위암 복막전이, 간암, 백혈병, 신장 종양, 폐암, 소장암, 골암, 전립선암, 결직장암, 유방암, 대장암, 자궁경부암, 난소암, 림프종, 비인두암, 부신종양, 방광 종양, 비소세포폐암(NSCLC), 신경교종, 자궁내막암, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 예에서, 상기 종양은 CS1 및/또는 BCMA 양성 종양이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 CS1 및/또는 BCMA 양성 종양은 다발성 골육종을 포함한다.
본 발명의 제8 양태에서, 본 발명의 제4 양태에 따른 숙주 세포 또는 제5 양태에 따른 조작된 면역 세포를 제조하기 위한 키트를 제공하며, 상기 키트는 용기, 용기 내에 있는 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자, 또는 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터를 포함한다.
본 발명의 제9 양태에서, 조작된 면역 세포의 제조 방법을 제공하며, 상기 면역 세포는 본 발명의 제1 양태에 따른 CAR를 발현하고, 상기 방법은,
(a) 조작할 면역 세포를 제공하는 단계; 및
(b) 본 발명의 제2 양태에 따른 핵산 분자 또는 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터를 상기 면역 세포에 형질도입하여, 상기 조작된 면역 세포를 얻는 단계를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 조작된 면역 세포는 CAR-T 세포 또는 CAR-NK 세포이다.
다른 바람직한 예에서, 상기 방법은 얻은 조작된 면역 세포에 대해 기능 및 유효성 검출을 수행하는 단계를 더 포함한다.
본 발명의 제10 양태에서, 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료가 필요한 대상체에게 적당량의 본 발명의 제3 양태에 따른 벡터, 본 발명의 제5 양태에 따른 면역 세포, 또는 본 발명의 제6 양태에 따른 제제를 투여하는 단계를 포함한다.
다른 바람직한 예에서, 상기 질환은 암 또는 종양이다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명의 상기 각 기술특징과 하기(예를 들어, 실시예)에서 구체적으로 설명되는 각 기술특징 사이는 서로 조합되어, 새로운 또는 바람직한 기술적 해결수단을 구성할 수 있음을 이해해야 한다. 편폭에 한하여, 여기서 더 이상 일일이 설명하지 않는다.
본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대해 현저한 사멸 작용을 갖는다. 또한, 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대해 IFN-γ를 분비한다. 그리고, 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 체내 실험에서 RPMI8226 이종이식 종양의 성장을 유의하게 억제할 수 있다.
도 1은 CAR 구조를 보여준다. 여기서, 도면의 왼쪽은 1세대 CAR(공동자극 도메인 없음)이고, 중간은 2세대 CAR(하나의 공동자극 도메인 CD28 또는 4-BB)이며, 오른쪽은 3세대 CAR(2개 이상의 공동자극 도메인)이다.
도 2는 CS1 및 BCMA 항원의 서열을 보여준다.
도 3은 이중특이성 CS1-BCMA CAR 작제물 구조를 보여준다. 여기서, 2세대 CAR 구조 및 4-1BB 공동자극 도메인을 사용한다.
도 4는 본 발명의 일 바람직한 CAR 작제물의 서열 모식도를 보여준다.
도 5는 CAR 양성 세포의 백분율을 보여준다. 여기서, 마우스 FAB 항체 및 비오틴-PE 표지된 재조합 단백질을 이용하여 FACS를 통해 CAR+ 세포를 검출하며, FAB 항체는 >95%의 CAR+ 세포가 검출되었고, BCMA 단백질은 >80%의 BCMA+ ScFv 세포가 검출되었다.
도 6은 CS1-BCMA-CAR-T 세포의 발현 및 사멸 상황을 보여준다. 도 6의 A는 CHO-BCMA, CHO-CS1 및 Hela-CS1 세포가 BCMA 및 CS1 항원을 안정적으로 발현함을 보여준다. 여기서, CHO-BCMA 세포에서 동종형 및 BCMA 항체를 사용하여 FACS 검출을 수행하고, CHO-CS1 세포 및 Hela-CS1 세포에서 CS1 항체를 사용하여 FACS 검출을 수행하며, 동종형 Ab는 파란색으로 표지되고; CS1 및 BCMA Ab는 빨간색으로 표지된다. 도 6의 B는 CS1-BCMA-CAR-T 세포가 CHO-CS1 세포를 특이적으로 사멸시킴을 보여준다. 세포 독성 시험에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 CHO-CS1 세포를 사멸시킨다. 여기서, BCMA-CAR-T 세포 및 Mock CAR-T 세포는 음성 대조군으로 사용된다.
도 7은 CS1-BCMA-CAR-T 세포가 Hela-CS1 세포를 사멸시킴을 보여준다. 여기서, Mock CAR-T 세포 및 BCMA-CAR-T 세포는 음성 대조군으로 사용된다.
도 8은 CS1-BCMA-CAR-T 세포가 CHO-BCMA 세포를 사멸시킴을 보여준다. 세포 독성 시험에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 CHO-BCMA 표적 세포를 사멸시킨다. 여기서, BCMA-CAR-T 세포는 양성 대조군으로 사용되고, Mock CAR-T 세포는 음성 대조군으로 사용된다.
도 9는 CS1-BCMA-CAR-T 세포는 Hela-BCMA 세포에 대한 사멸 작용이 Hela 세포에 대한 사멸 작용보다 유의하게 강력함을 보여준다. 세포 독성 시험에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 Hela-BCMA 표적 세포를 사멸시킨다. BCMA-CAR-T 세포는 양성 대조군으로 사용되고, Mock CAR-T 세포는 음성 대조군으로 사용된다.
도 10은 CS1-BCMA-CAR-T 세포가 CHO-CS1 및 CHO-BCMA 표적 세포에 대해 고수준의 IFN-γ를 분비하고, CHO 세포에 대해 IFN-γ를 분비하지 않음을 보여준다. * p<0.05, Student's t 검정에 따라, CS1-BCMA-CAR-T 세포와 Mock CAR-T 세포를 비교한다.
도 11은 CS1-BCMA-CAR-T 세포가 Hela-CS1 세포 및 Hela-BCMA 세포에 대해 IFN-γ를 분비함을 보여준다. * p<0.05, Student's t 검정에 따라, CS1-BCMA-CAR-T 세포와 Mock CAR-T 세포를 비교한다.
도 12는 마우스 FAB 및 비오틴화된 재조합 BCMA 단백질을 사용하여 FACS 검출을 수행한 세 가지 상이한 공여체에서 유래된 CAR+ 세포의 검출 결과를 보여준다. 여기서, 도 12의 A는 공여체＃57의 FACS 검출 결과를 보여주고; 도 12의 B는 공여체＃890의 FACS 검출 결과를 보여주며; 도 12의 C는 공여체＃999의 FACS 검출 결과를 보여준다.
도 13은 3개의 공여체에서 유래된 CS1-BCMA-CAR-T 세포의 RTCA 분석 결과를 보여준다. 여기서, 도 13의 A는 공여체＃57의 RTCA 분석 결과를 보여주고; 도 13의 B는 공여체＃890의 RTCA 분석 결과를 보여주며; 도 13의 C는 공여체＃999의 RTCA 분석 결과를 보여준다.
도 14는 3개의 공여체에서 유래된 CS1-BCMA CAR-T 세포의 IFN-γ 분비 상황을 보여준다. 여기서, 도 14의 A는 공여체＃57(A)의 IFN-γ 분비 상황을 보여주고; 도 14의 B는 공여체＃890의 IFN-γ 분비 상황을 보여주며; 도 14의 C는 공여체＃999의 IFN-γ 분비 상황을 보여준다.
도 15는 CS1-BCMA-CAR-T 세포(PMC743)가 RPMI8226 종양 세포의 성장을 현저하게 억제함을 보여준다. PMC743 처리 마우스 대 대조 PBS 처리 마우스, p＜0.05.
본 발명자는 광범위하고 심층적인 연구를 통해 처음으로 CS1 및 BCMA을 표적으로 하는 이중특이성 CAR를 예기치 않게 발견하였고, 상기 이중특이성 CAR는 CS1 scFv와 BCMA scFv, 및 4-1BB 공동자극 도메인과 CD3 활성화 도메인을 포함한다. 실험에 따르면, 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대한 사멸 작용이 현저하므로 표적 세포에 대해 IFN-γ를 분비하고 체내 실험에서 RPMI8226 이종이식 종양의 성장을 현저하게 억제할 수 있다. 이 기초상에서 본 발명을 완료하였다.
용어
본 발명을 보다 쉽게 이해할 수 있도록 먼저 특정 용어를 정의한다. 본 발명에 사용된 바와 같이, 본문에 달리 명시적으로 언급되지 않는 한 하기 용어 중 각각은 아래에 주어진 의미를 갖는다. 다른 정의는 본 발명 전체에 설명되어 있다.
용어 “약”은 당업자에 의해 결정된 특정 값 또는 구성된 허용 가능한 오차 범위 내의 값 또는 구성을 의미할 수 있고, 이는 값 또는 구성의 측량 또는 측정 방법에 의해 부분적으로 결정된다.
용어 “투여”는 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 어느 하나를 사용하여 본 발명의 제품을 피험자에게 물리적으로 도입하는 것을 의미하고, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 척수 또는 기타 비경구 투여 경로를 포함한다.
용어 “항체”(Ab)는 항원에 특이적으로 결합하고 이황화 결합을 통해 상호연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 면역글로불린 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 각각의 H 사슬은 중쇄 가변 영역(본문은 VH로 약칭함) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본문은 VL로 약칭함) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 불변 도메인 CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변 영역으로 더 세분될 수 있고, 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 더 보존적인 영역에 산재되어 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함하고, 아미노 말단에서 카르복실 말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다.
이해해야 할 것은, 본문에서 아미노산 명칭은 국제 일반 단일 영문자로 표시되고, 이에 대응되는 아미노산 명칭의 세 영문자 약어는 각각 Ala(A), Arg(R), Asn(N), Asp(D), Cys(C), Gln(Q), Glu(E), Gly(G), His(H), I1e(I), Leu(L), Lys(K), Met(M), Phe(F), Pro(P), Ser(S), Thr(T), Trp(W), Tyr(Y), Val(V)이다.
CS1 및 BCMA 항원
CS1(SLAM 패밀리 구성원 7, CD319) 및 BCMA(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 17) 단백질은 통상적으로 다발성 골수종에서 과발현된다.
다발성 골수종에서 높은 발현 백분율을 기반으로 2개의 표적은 모두 CAR-T 세포 치료에 사용된다.
도 2는 CS1 항원의 아미노산 서열(서열번호 12) 및 BCMA 항원의 아미노산 서열(서열번호 13)을 보여주고, 여기서 BCMA의 세포외 도메인(1-54aa) 및 CS1의 세포외 도메인(23-226aa)에 밑줄을 그었다.
키메라 항원 수용체(CAR)
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “CS1-BCMA-CAR”, “이중특이성 CAR”, “CS1-BCMA 이중특이성 CAR”는 동일한 의미를 가지고, 모두 본 발명의 제1 양태에서 제공되는 CS1 및 BCMA를 표적으로 하는 CAR를 의미한다. 구체적으로, 본 발명의 CS1-BCMA 이중특이성 CAR는 2개의 scFv, 4-1BB 공동자극 도메인 및 CD3 활성화 도메인으로 구성된다(도 3). 이중특이성 CAR에 포함된 BCMA scFv의 경우, 클론 4C8 BCMA에서 유래된 scFv(R. Berahovich 등. 신규 BCMA 단클론 항체 기반의 CAR-T 세포에 의한 다발성 골수종 세포 성장의 차단. Cancers (Basel) 10 (2018).)를 사용하고, 아미노산 서열은 서열번호 2로 표시된다. 이중특이성 CAR에 포함된 CS1 scFv의 경우, Promab에서 유래된 CS1 항체 7A8D5를 사용하고, 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시된다. 실험에 따르면, 상기 CS1 scFv는 단일 특이적 CAR의 형태로 CS1 양성 표적 세포에 대해서도 잘 작용한다.
CARs의 설계는 다음과 같은 과정을 거쳤다. 1세대 CAR에는 하나의 세포내 신호 구성요소 CD3ζ 또는 FcγRI 분자만 있고, 세포내에 하나의 활성화 도메인만 있기 때문에, 일시적인 T 세포 증식 및 적은 사이토카인 분비만 일으킬 수 있을 뿐 장기적인 T 세포 증식 신호 및 지속적인 체내 항종양 효능을 제공할 수 없으므로 임상 치료 효과가 좋지 않다. 2세대 CARs는 원래 구조의 기초상에서 CD28, 4-1BB, OX40, ICOS와 같은 하나의 공동자극 분자를 도입하고, 1세대 CARs에 비해 기능이 크게 향상되며, CAR-T 세포의 지속성 및 종양 세포에 대한 사멸 능력이 추가로 강화된다. 2세대 CARs의 기초상에서 CD27, CD134와 같은 일부 새로운 면역 공동자극 분자가 직렬 연결되어 3세대 및 4세대 CARs로 발전된다.
본 발명의 키메라 항원 수용체(CAR)는 2세대 CAR로 세포외 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 도메인을 포함한다. 세포외 도메인은 표적-특이적 결합 요소(항원 결합 도메인이라고도 함)를 포함한다. 세포내 도메인은 공동자극 신호 전달 영역 및 ζ 사슬 부분을 포함한다. 공동자극 신호 전달 영역은 공동자극 분자를 포함하는 세포내 도메인의 일부를 의미한다. 공동자극 분자는 항원 수용체 또는 이들의 리간드가 아닌 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응에 필요한 세포 표면 분자이다.
CAR의 세포외 도메인과 막횡단 도메인 사이 또는 CAR의 세포질 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커를 통합시킬 수 있다. 본문에 사용된 바와 같이, 용어 “링커”는 통상적으로 막횡단 도메인을 폴리펩티드 사슬의 세포외 도메인 또는 세포질 도메인에 연결시키는 작용을 하는 임의의 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 의미한다. 링커는 0-300개의 아미노산, 바람직하게는 2개 내지 100개의 아미노산 및 가장 바람직하게는 3개 내지 50개의 아미노산을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 바람직한 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 CAR의 세포외 도메인은 CS1 및 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인(CS1-BCMA scFv)을 포함한다. 본 발명의 CAR는 T 세포에서 발현될 때 항원 결합 특이성에 기반한 항원 인식을 수행할 수 있다. 연관 항원에 결합할 때 종양 세포에 영향을 미쳐 종양 세포가 성장하지 않고 이를 사멸시키거나 다른 방식으로 영향을 미치며, 환자의 종양 부담을 줄이거나 제거한다. 항원 결합 도메인은 바람직하게는 공동자극 분자 및 ζ 사슬 중 하나 이상에서 유래된 세포내 도메인에 융합된다.
본문에 사용된 바와 같이, “항원 결합 도메인”, “단일 사슬 항체 단편”은 모두 항원 결합 활성을 갖는 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 또는 단일 Fv 단편을 의미한다. Fv 항체는 항체 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역을 포함하지만 불변 영역은 없으며 모든 항원 결합 부위를 갖는 최소 항체 단편이다. 일반적으로, Fv 항체는 또한 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 포함하며 항원 결합에 필요한 구조를 형성할 수 있다. 항원 결합 도메인은 통상적으로 scFv(single-chain variable fragment)이다. scFv의 크기는 일반적으로 하나의 완전한 항체의 1/6이다. 단일 사슬 항체는 바람직하게는 하나의 뉴클레오티드 사슬에 의해 코딩된 하나의 아미노산 사슬 서열이다.
힌지 영역 및 막횡단 영역(막횡단 도메인)의 경우, CAR는 CAR의 세포외 도메인에 융합된 막횡단 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다. 일 실시형태에서, CAR의 도메인 중 하나와 자연적으로 연관된 막횡단 도메인을 사용한다. 일부 예에서, 막횡단 도메인을 선택하거나 아미노산 치환을 통해 변형시켜 이러한 도메인이 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 결합하는 것을 방지함으로써 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화할 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 종양 미세환경에서 CAR-T 세포의 생존 능력을 향상시키기 위해, 4-1BB를 공동자극 도메인으로 하여 CS1 및 BCMA를 표적으로 하는 2세대 CAR 벡터를 구축하고, 순차적으로 인간화된 CS1 항체의 단일 사슬 항체 서열, 인간화된 BCMA 항체의 단일 사슬 항체 서열의 세포내 영역 서열, 인간 4-1BB 세포내 영역 서열, 및 인간 CD3ζ 서열을 포함한다.
본 발명의 일 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 도 4에 도시된 바와 같다.
추가적으로, CS1-BCMA-CAR 서열을 카나마이신 내성 유전자를 갖는 2세대 렌티바이러스 작제물의 MNDU3 프로모터 아래에 배치하여 CS1-BCMA-CAR를 발현하는 렌티바이러스 벡터를 구축한다. 293 T 세포를 이용하여 렌티바이러스를 생성하고 T 세포를 형질도입하여 CS1-BCMA-CAR-T 세포를 제조하며, 구체적인 방법은 일반 방법 부분을 참조바란다.
벡터
원하는 분자를 코딩하는 핵산 서열은 본 분야에 공지된 재조합 방법을 이용하여 얻을 수 있고, 예를 들어 유전자를 발현하는 세포에서 라이브러리를 스크리닝하거나, 상기 유전자를 포함하는 공지된 벡터에서 상기 유전자를 얻거나, 표준 기술을 이용하여 상기 유전자를 포함하는 세포 및 조직에서 직접 분리한다. 선택적으로, 관심 있는 유전자는 합성되어 생산될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 카세트가 삽입된 벡터를 제공한다. 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스 유래의 벡터는 유전자 변형의 장기적이고 안정적인 통합과 딸 세포에서의 증식을 허용하기 때문에 장기 유전자 전달을 구현하기 위한 적합한 비히클이다. 렌티바이러스 벡터는 간 세포와 같은 비증식 세포를 형질도입할 수 있기 때문에 마우스 백혈병 바이러스와 같은 발암성 레트로바이러스 유래의 벡터를 초과하는 장점을 갖는다. 이들은 또한 면역원성이 낮은 장점을 갖는다.
간단히 요약하면, 통상적으로 본 발명의 발현 카세트 또는 핵산 서열을 프로모터에 작동 가능하게 연결하고 발현 벡터에 도입할 수 있다. 상기 벡터는 진핵 세포에서 복제 및 통합에 적합하다. 전형적인 클로닝 벡터는 원하는 핵산 서열의 발현을 조절하는 데 사용될 수 있는 전사 및 번역 터미네이터, 초기 서열 및 프로모터를 포함한다.
본 발명의 발현 작제물은 또한 표준 유전자 전달 방법을 이용하여 핵산 면역 및 유전자 요법에 사용될 수 있다. 유전자 전달 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어 미국 특허번호 5,399,346, 5,580,859, 5,589,466을 참조할 수 있고, 전문은 참조로서 인용된다. 다른 실시형태에서, 본 발명은 유전자 요법 벡터를 제공한다.
상기 핵산은 다양한 유형의 벡터로 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 상기 핵산은 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하지만 이에 한정되지 않는 이러한 벡터로 클로닝될 수 있다. 관심 있는 특정 벡터는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생산 벡터 및 시퀀싱 벡터를 포함한다.
추가적으로, 발현 벡터는 바이러스 벡터 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 본 분야에 공지되어 있고 예를 들어 Sambrook 등(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York) 및 다른 바이러스학 및 분자생물학 매뉴얼에 기재되어 있다. 벡터로 사용될 수 있는 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스 및 렌티바이러스를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 통상적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 작용하는 복제 기점, 프로모터 서열, 편리한 제한 효소 부위 및 하나 이상의 선택 가능한 마커를 포함한다(예를 들어, WO01/96584; WO01/29058; 및 미국 특허번호 6,326,193).
포유동물 세포로 유전자를 전이하기 위한 많은 바이러스 기반 시스템이 개발되었다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위한 편리한 플랫폼을 제공한다. 본 분야에 공지된 기술을 이용하여 선택된 유전자를 벡터에 삽입하고 레트로바이러스 입자로 패키징할 수 있다. 상기 재조합 바이러스는 추후 분리되어 체내 또는 탈체 대상 세포로 전달될 수 있다. 많은 레트로바이러스 시스템은 본 분야에 공지되어 있다. 일부 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터를 사용한다. 많은 아데노바이러스 벡터는 본 분야에 공지되어 있다. 일 실시형태에서, 렌티바이러스 벡터를 사용한다.
인핸서와 같은 추가 프로모터 요소는 전사 개시 빈도를 조절할 수 있다. 통상적으로, 최근에 많은 프로모터가 개시 부위 다운스트림의 기능적 요소도 포함하는 것으로 나타났지만 이들은 개시 부위 업스트림의 30-110bp 영역에 위치한다. 프로모터 요소 간의 간격은 요소가 다른 하나에 대해 뒤집히거나 이동할 때 프로모터 기능을 유지하기 위해 종종 유연하다. 티미딘 키나아제(tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 간의 간격은 활성이 감소되기 전에 50bp 증가될 수 있다. 프로모터에 따라, 전사를 시작하기 위해 단일 요소가 협력하거나 독립적으로 작용할 수 있는 것으로 나타난다.
적합한 프로모터의 일 예는 즉시 초기 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터 서열이다. 상기 프로모터 서열은 이에 작동 가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현을 유도할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 적합한 프로모터의 다른 예는 연장 성장 인자-1α(EF-1α)이다. 그러나, 다른 구성적 프로모터 서열을 사용할 수도 있는 바, 유인원 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방암 바이러스(MMTV), 인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 긴 말단 반복(LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 즉시 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스 프로모터, 및 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헴 프로모터 및 크레아틴 키나아제 프로모터와 같지만 이에 한정되지 않는 인간 유전자 프로모터를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 추가적으로, 본 발명은 구성적 프로모터의 응용에 한정되어서는 아니 된다. 유도성 프로모터도 본 발명의 일부로 고려된다. 유도성 프로모터의 사용은 이러한 발현을 원할 때 유도성 프로모터를 작동 가능하게 연결하는 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 켜거나, 발현을 원하지 않을 때 발현을 오프할 수 있는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는 메탈로티오네인 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터 및 테트라사이클린 프로모터를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
CAR 폴리펩티드 또는 이의 일부 발현을 평가하기 위해, 세포에 도입된 발현 벡터는 바이러스 벡터를 통해 형질감염 또는 감염된 세포 집단에서 발현 세포를 동정 및 선택하기 위해 선택 가능한 마커 유전자 또는 리포터 유전자 중 어느 하나 또는 둘을 포함할 수도 있다. 다른 측면에서, 선택 가능한 마커는 별도의 DNA 세그먼트에 운반되어 공동형질감염 절차에 사용될 수 있다. 선택 가능한 마커 및 리포터 유전자의 플랭크는 숙주 세포에서 발현하기 위해 적절한 조절 서열을 가질 수 있다. 유용한 선택 가능한 마커는 예를 들어 neo와 같은 항생제 내성 유전자를 포함한다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염된 세포를 동정하고 조절 서열의 기능성을 평가하는 데 사용된다. 통상적으로, 리포터 유전자는 수용체 유기체 또는 조직에 존재하지 않거나 수용체 유기체 또는 조직에 의해 발현되고, 폴리펩티드를 코딩하는 유전자이되, 상기 폴리펩티드의 발현은 효소 활성과 같은 일부 용이하게 검출 가능한 특성에 의해 명확하게 표시된다. DNA가 수용체 세포에 도입된 후, 리포터 유전자의 발현은 적합한 시간에 측정된다. 적합한 리포터 유전자는 루시퍼라제, β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제, 분비된 알칼리포스파타제 또는 녹색 형광 단백질을 코딩하는 유전자를 포함할 수 있다(예를 들어, Ui-Tei 등, 2000 FEBS Letters 479:79-82). 적합한 발현 시스템은 공지되어 있고 공지된 기술을 이용하여 제조되거나 상업적으로 획득될 수 있다. 통상적으로, 가장 높은 수준의 리포터 유전자 발현을 나타내는 최소 5개의 플랭크 영역을 갖는 작제물은 프로모터로 동정된다. 이러한 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결될 수 있고 프로모터-구동 전사를 조절하는 시약의 능력을 평가하는 데 사용될 수 있다.
유전자를 세포에 도입하고 유전자를 세포에 발현시키는 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 발현 벡터의 내용에서, 벡터는 본 분야의 임의의 방법을 통해 포유동물, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포와 같은 숙주 세포에 쉽게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단을 통해 숙주 세포로 전이될 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 리포펙션, 입자충격, 미세주입, 전기천공 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포의 생산 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어 Sambrook 등(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)을 참조할 수 있다. 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 바람직한 방법은 인산칼슘 형질감염이다.
관심 있는 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 생물학적 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터, 특히 레트로바이러스 벡터는 인간과 같은 포유동물 세포에 유전자를 삽입하는 가장 광범위하게 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순포진바이러스 I, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스 등에서 유래될 수 있다. 예를 들어 미국 특허번호 5,350,674 및 5,585,362를 참조할 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 화학적 수단은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로스피어, 비드와 같은 콜로이드 분산 시스템; 및 수중유 에멀젼, 미셀, 혼합 미셀 및 리포솜을 포함하는 지질 기반 시스템을 포함한다. 시험관내 및 체내 전달 비히클(delivery vehicle)로 사용되는 예시적인 콜로이드 시스템은 리포솜(예를 들어, 인공 막소포)이다.
비-바이러스 전달 시스템을 사용하는 경우, 예시적인 전달 비히클은 리포솜이다. 핵산을 숙주 세포(시험관내, 탈체(ex vivo) 또는 체내)에 도입하기 위해 지질 제제의 사용을 고려한다. 다른 측면에서, 상기 핵산은 지질과 연관될 수 있다. 지질과 연관된 핵산은 리포솜의 수성 내부로 패키징되어, 리포솜의 지질 이중층 내에 분산되고, 리포솜 및 올리고뉴클레오티드 모두와 연관된 링커 분자를 통해 리포솜에 부착되어, 리포솜에 포획되고, 리포솜과 복합되며, 지질을 포함하는 용액에 분산되어, 지질과 혼합되고, 지질과 회합되며, 현탁액으로서 지질에 포함되고, 미셀에 포함되거나 미셀과 복합되거나, 또는 다른 방식으로 지질과 연관된다. 조성물과 연관된 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터는 용액 중 임의의 구체적인 구조에 한정되지 않는다. 예를 들어, 이들은 미셀로서 이분자층 구조에 존재하거나 또는 “붕괴된(collapsed)” 구조를 가질 수 있다. 이들은 또한 단순히 용액에 분산되어, 크기 또는 형상이 균일하지 않은 집합체를 형성할 수 있다. 지질은 자연 발생 또는 합성 지질일 수 있는 지방 물질이다. 예를 들어, 지질은 세포질, 및 지방산, 알코올류, 아민류, 아미노알코올류 및 알데히드류와 같은 장쇄 지방족 탄화수소 및 이들의 유도체를 포함하는 상기 화합물에서 자연적으로 발생하는 지방 방울을 포함한다.
본 발명의 일 바람직한 실시형태에서, 상기 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
제제
본 발명은 본 발명의 CAR-T 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제제를 제공한다. 일 실시형태에서, 상기 제제는 액체 제제이다. 바람직하게는, 상기 제제는 주사제이다. 바람직하게는, 상기 제제에서 상기 CAR-T 세포의 농도는 1×103-1×108개 세포/ml이고, 보다 바람직하게는 1×104-1×107개 세포/ml이다.
일 실시형태에서, 상기 제제는 중성 완충식염수, 황산염 완충식염수와 같은 완충액; 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨과 같은 탄수화물; 단백질; 글리신과 같은 폴리펩티드 또는 아미노산; 항산화제; EDTA 또는 글루타티온과 같은 킬레이트제; 좌제(예를 들어, 수산화알루미늄); 및 방부제를 포함할 수 있다. 본 발명의 제제는 바람직하게는 정맥내 투여용으로 조제된다.
치료 용도
본 발명은 본 발명의 카세트를 코딩하는 렌티바이러스 벡터(LV)에 의해 형질도입된 세포(예를 들어, T 세포)의 치료 용도를 포함한다. 형질도입된 T 세포는 종양 세포의 마커 CS1 및 BCMA를 표적으로 하고 상승적으로 T 세포를 활성화하며 T 세포 면역 반응을 유도하여 종양 세포에 대한 사멸 효율을 크게 향상시킬 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 포유동물의 표적 세포 집단 또는 조직에 대한 T 세포-매개 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 포유동물에게 본 발명의 CAR-T 세포를 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 환자의 자가 T 세포(또는 이종 공여체)를 분리하고 활성화하며 유전자 변형을 수행하여 CAR-T 세포를 생산한 다음 동일한 환자의 체내에 주입하는 세포 요법을 포함한다. 이러한 방식으로 이식편대숙주병에 걸릴 확률은 극히 낮고 항원은 MHC 제한이 없는 방식으로 T 세포에 의해 인식된다. 또한, CAR-T는 상기 항원을 발현하는 모든 암을 치료할 수 있다. 항체 요법과 달리, CAR-T 세포는 체내에서 복제될 수 있어 지속적인 종양 제어를 유도할 수 있는 장기 지속성을 생성할 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명의 CAR-T 세포는 견고한 체내 T 세포 확장을 겪을 수 있고 연장된 시간의 양을 지속할 수 있다. 또한, CAR 매개 면역 반응은 입양 면역 요법 단계의 일부일 수 있고, 여기서 CAR-변형 T 세포는 CAR의 항원 결합 도메인에 특이적인 면역 반응을 유도한다. 예를 들어, CS1 및 BCMA에 대한 CAR-T 세포는 CS1 및/또는 BCMA 양성 세포에 대한 특이적 면역 반응을 유도한다.
본문에 공개되는 데이터는 MNDU3 프로모터, CS1-BCMA scFv, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 신호 전달 도메인을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 구체적으로 공개하지만, 본 발명은 작제물 구성 부분의 각각의 임의의 수의 변화를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
치료 가능한 암은 혈관화되지 않거나 기본적으로 혈관화되지 않은 종양, 및 혈관화된 종양을 포함한다. 암은 비고형 종양(예를 들어, 백혈병 및 림프종과 같은 혈액학적 종양)을 포함하거나 고형 종양을 포함할 수 있다. 본 발명의 CAR로 치료되는 암의 유형은 암, 아세포종 및 육종, 및 일부 백혈병 또는 림프성 악성 종양, 양성 및 악성 종양, 및 육종, 암 및 흑색종과 같은 악성 종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 또한 성인 종양/암 및 소아 종양/암을 포함한다.
혈액학적 암은 혈액 또는 골수 암이다. 혈액학적(또는 혈행성) 암의 예는 급성 백혈병(예를 들어 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 골수모세포성, 전골수구성, 골수단핵구성, 단핵구성 및 적백혈병), 만성 백혈병(예를 들어 만성 골수성(과립구성) 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병), 진성 적혈구 증가증, 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종(지연 및 고급 형태), 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄 질환, 골수형성이상증후군, 모발 세포 백혈병 및 척수형성부전증을 포함하는 백혈병을 포함한다.
고형 종양은 통상적으로 낭종 또는 체액 영역을 포함하지 않는 비정상적인 조직 덩어리이다. 고형 종양은 양성 또는 악성일 수 있다. 상이한 유형의 고형 종양은 이들을 형성하는 세포 유형으로 명명된다(예를 들어 육종, 암 및 림프종). 육종 및 암과 같은 고형 종양의 예는 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 중피종, 림프성 악성 종양, 췌장암 및 난소암을 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 치료 가능한 암은 다발성 골육종과 같은 CS1 및/또는 BCMA 양성 종양이다.
본 발명의 CAR-변형 T 세포는 포유동물의 탈체 면역 및/또는 체내 요법에 대한 백신 유형으로도 사용될 수 있다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.
탈체 면역의 경우, i) 세포 확장, ii) CAR를 코딩하는 핵산을 세포에 도입, 및/또는 iii) 세포 동결보존 중 적어도 하나는 세포를 포유동물에게 투여하기 전에 시험관내에서 발생한다.
탈체 절차는 본 분야에 공지되어 있고, 아래에서 더 자세히 논의된다. 간단히 말해서, 세포는 포유동물(바람직하게는, 인간)로부터 분리되고 본문에 공개된 CAR를 발현하는 벡터로 유전적으로 변형(즉, 시험관내 형질도입 또는 형질감염)된다. CAR-변형 세포는 치료적 이점을 제공하기 위해 포유동물 수용자에게 투여될 수 있다. 포유동물 수용자는 인간일 수 있고, CAR-변형 세포는 수용자에 대해 자가 유래일 수 있다. 선택적으로, 세포는 수용자에 대해 동종이계 유전자, 동계 유전자(syngeneic) 또는 이종일 수 있다.
탈체 면역을 위해 세포 기반 백신을 사용하는 것 외에, 본 발명은 또한 환자의 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위해 체내 면역을 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
본 발명은 필요한 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 CAR-변형 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 종양의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 CAR-변형 T 세포는 단독으로 투여되거나 약학적 조성물로서 희석제 및/또는 IL-2, IL-17 또는 다른 사이토카인 또는 세포 집단과 같은 다른 성분과 병용될 수 있다. 간단히 말해서, 본 발명의 약학적 조성물은 본문에 따른 표적 세포 집단을 포함할 수 있고, 하나 이상의 약학적 또는 생리학적으로 허용 가능한 벡터, 희석제 또는 부형제와 조합될 수 있다. 이러한 조성물은 중성 완충식염수, 황산염 완충식염수와 같은 완충액; 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨과 같은 탄수화물; 단백질; 글리신과 같은 폴리펩티드 또는 아미노산; 항산화제; EDTA 또는 글루타티온과 같은 킬레이트제; 좌제(예를 들어, 수산화알루미늄); 및 방부제를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 바람직하게는 정맥내 투여용으로 조제된다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료(또는 예방)할 질환에 적합한 방식으로 투여될 수 있다. 적절한 용량은 임상 시험에 의해 결정될 수 있지만 투여량 및 빈도는 환자의 병증, 환자의 질환의 유형 및 중증도와 같은 요인에 따라 결정된다.
“면역학적 유효량”, “항종양 유효량”, “종양-억제 유효량” 또는 “치료량”이 언급될 때, 투여될 본 발명의 조성물의 정확한 양은 환자(대상체)의 연령, 중량, 종양 크기, 감염 또는 전이 정도 및 병증의 개체 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 통상적으로, 본문에 기재된 T 세포를 포함하는 약학적 조성물은 104 내지 109개 세포/kg 체중의 용량, 바람직하게는 105 내지 106개 세포/kg 체중의 용량(그러한 범위 내의 모든 정수 값 포함)으로 투여될 수 있는 것으로 언급될 수 있다. T 세포 조성물도 이러한 용량으로 여러 회 투여될 수 있다. 세포는 면역 요법에서 공지된 주입 기술(예를 들어 Rosenberg 등, NewEng.J. of Med.319:1676, 1988)을 사용하여 투여될 수 있다. 구체적인 환자에 대한 최적의 용량 및 치료 방법은 환자의 질환 징후를 모니터링하고 이에 따라 치료를 조절함으로써 의학 분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
대상체에 대한 조성물의 투여는 스프레이, 주사, 연하, 주입, 삽입 또는 이식을 포함하는 임의의 편리한 수단으로 수행될 수 있다. 본문에 기재된 조성물은 피하, 피내, 종양내, 결절내, 척수내, 근육내, 정맥내(i.v.) 주사 또는 복막내로 환자에게 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명의 T 세포 조성물은 피내 또는 피하 주사를 통해 환자에게 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 T 세포 조성물은 바람직하게는 i.v. 주사를 통해 투여된다. T 세포의 조성물은 종양, 림프절 또는 감염 부위에 직접 주입될 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 본문에 기재된 방법 또는 T 세포를 치료적 수준으로 확장하는 본 분야에 공지된 다른 방법을 이용하여 활성화 및 확장된 세포는 임의의 개수의 관련 치료 방식과 결합(예를 들어, 이전에, 동시에 또는 이후에)되어 환자에게 투여될 수 있으며, 상기 치료 방식은 항바이러스 요법, 시도포비르 및 인터루킨-2, 시타라빈(ARA-C로도 알려짐)과 같은 시약 또는 MS 환자를 위한 나탈리주맙 치료 또는 건선 환자를 위한 에팔리주맙 치료 또는 PML 환자를 위한 다른 치료를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 추가적인 실시형태에서, 본 발명의 T 세포는 화학 요법, 방사선, 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 미코페놀레이트 모페틸 및 FK506과 같은 면역 억제제, 항체 또는 다른 면역 치료제와 함께 사용될 수 있다. 추가적인 실시형태에서, 본 발명의 세포 조성물은 골수 이식, 플루다라빈과 같은 화학요법제의 사용, 외부 방사선 치료(XRT), 사이클로포스파미드와 결합(예를 들어, 이전에, 동시에 또는 이후에)되어 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 대상체는 고용량 화학 요법의 표준 치료에 이어 말초 혈액 줄기 세포 이식을 받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 이식 후, 대상체는 본 발명의 확장된 중간엽 줄기세포를 주입받았다. 일 추가적인 실시형태에서, 확장된 세포는 외과 수술 전 또는 외과 수술 후에 투여된다.
환자에게 투여되는 상기 치료량은 치료되는 병증의 정확한 특성 및 치료되는 수용자에 따라 달라진다. 인간에 대한 투여량의 비율은 본 분야에서 허용되는 관행에 따라 구현될 수 있다. 통상적으로, 각 치료 또는 각 치료 과정마다 예를 들어 정맥 주입을 통해 1×106개 내지 1×1010개의 본 발명의 T 세포(CAR-T 세포),를 환자에게 투여할 수 있다.
본 발명의 주요 장점은 다음과 같다.
(a) 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대해 현저한 사멸 작용을 갖는다.
(b) 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 CS1 양성 표적 세포 및 BCMA 양성 표적 세포에 대해 IFN-γ를 분비한다.
(c) 본 발명의 이중특이성 CAR-T 세포는 체내 실험에서 RPMI8226 이종이식 종양의 성장을 유의하게 억제할 수 있다.
이하, 구체적인 실시예를 결부하여 본 발명을 더 설명한다. 이러한 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아님을 이해해야 한다. 하기 실시예에서 구체적인 조건을 제시하지 않은 실험 방법은 통상적으로 Sambrook 등, 분자 클로닝: 실험실 매뉴얼(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)에서 기재된 조건과 같은 일반적인 조건을 따르거나, 또는 제조업체에서 권장하는 조건을 따른다. 다른 설명이 없는 한, 백분율 및 분량은 중량백분율 및 중량부이다.
일반 재료 및 방법:
1. 전혈로부터 말초 혈액 단핵구(PBMC)의 분리
단일 또는 다중 공여체(필요한 혈액량에 따라)에서 수집된 전혈(Stanford Hospital Blood Center, Stanford, CA)을 10mL의 헤파린 진공 용기(Becton Dickinson에서 구입)에 첨가한다. 50ml의 원추형 원심분리관(PBS, pH 7.4, Ca2+/Mg2+ 없음)에서, 약 10ml의 항응고 전혈과 멸균 인산 완충액(PBS)을 혼합하고, 총 부피는 20ml이다. 희석된 혈장/Ficoll 인터페이스에서 말초 혈액 단핵구(PBMC)를 함유하는 세포층을 조심스럽게 흡인하여 임의의 Ficoll 흡인을 피하고, PBS로 2회 세척하며, 실온, 200xg에서 10분 동안 원심분리한다. 혈구 계수기로 세포를 계수한다. PBMC를 CAR-T 배지(AIM V-AlbuMAX(BSA)(Life Technologies Corporation)로 1회 세척하고, CAR-T 배지에는 5% AB 혈청과 1.25ug/mL 암포테리신 B(Gemini Bioproducts, Woodland, CA), 100U/mL 페니실린, 및 100ug/mL 스트렙토마이신)이 함유된다. 세포를 후속 실험에 직접 사용하거나 -80℃에서 동결보존한다.
2. T 세포 활성화
인간 인터루킨 2(huIL-2)(Invitrogen)를 첨가하지 않은 경우, 분리된 세포(1xPBS(pH7.4)로 세척, Ca2+/Mg2+ 없음)를 CAR-T 배지(AIM V-AlbuMAX(BSA)(Life Technologies Corporation)로 1회 세척하고, CAR-T 배지에는 5% AB 혈청과 1.25ug/mL 암포테리신 B(Gemini Bioproducts, Woodland, CA), 100U mL 페니실린, 및 100ug/mL 스트렙토마이신)이 함유되며, 세포 농도는 5x105 세포/mL로 세포를 300U/mL huIL 2가 함유된 CAR-T 배지에 재현탁하고, 최종 농도는 5x105 세포/mL이다. 1: 1의 CD3-CD28 자기 비드 세포 비율로 PBMC를 활성화한다.
3. T 세포 형질도입 및 증폭
PBMC 활성화 후, 세포를 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양한다. 웰당 1x106개 세포를 함유하고, 5x106개의 렌티바이러스 및 2μL/mL의 Transplus 배지(Alstem, Richmond, CA)를 첨가한다(최종 희석도 1: 500). 바이러스를 반복적으로 첨가하기 전에, 세포를 24시간 동안 더 배양한다. 300U/mL의 IL-2를 함유하는 신선한 배지의 지속적인 존재하에, 세포를 12-14일(총 배양 시간은 필요한 CAR-T 세포의 최종 수에 따라 결정됨) 동안 배양한다. 2-3일마다 세포 농도를 분석하고, 동시에 세포 현탁액을 1x106 세포/mL로 희석하기 위해 배지를 첨가한다.
3. CAR 양성 세포의 FACS 검출
세포를 세척하고 FACS 완충액(0.1% 아지드화나트륨 및 0.4% BSA를 함유하는 인산 완충액(PBS))에 현탁한다. 세포를 분취량(1x106개)으로 나눈다. Fc 수용체는 얼음 위에서 표준 염소 IgG(Life Technologies Corporation)로 10분 동안 차단한다. 비오틴 표지된 다클론성 염소 항 마우스 F(ab)2 항체(Life Technologies)를 사용하여 CS1을 검출한다. BCMA-비오틴 표지된 재조합 단백질은 BCMA+ CAR 세포의 검출에 사용된다. 비오틴 표지된 정상 다클론성 염소 IgG 항체(Life Technologies Corporation)는 동종형 대조군으로 사용된다. (1:200 희석, 반응 부피 100μl). 세포를 4℃에서 25분 동안 배양하고, FACS 완충액으로 1회 세척한 다음, FACS 완충액에 현탁한다. 각 튜브에 1:1000으로 희석된 표준 마우스 IgG(Invitrogen) 100μl를 첨가하여 차단하고, 얼음 위에서 10분 동안 배양한다. 그런 다음 세포를 FACS 완충액으로 세척하고 100 μl의 FACS 완충액에 재현탁한다. 그런 다음 세포를 피코에리트린(PE) 표지된 스트렙트아비딘(BD Pharmingen, San Diego, CA) 및 알로피코시아닌(APC) 표지된 CD3(eBiocience, San Diego, CA)으로 염색한다.
4. 세포 독성 측정(실시간 세포 독성 측정)
ACEA를 사용하고, 제조업체의 조작 지침에 따라 세포 독성 측정을 수행한다.
5. ELISA
ELISA키트를 사용하여 IFN-γ 사이토카인을 검출하고, 제조업체의 조작 지침에 따라 실험을 수행한다.
실시예 1 CS1 ScFv 및 BCMA scFv를 발현하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
이중특이성 CS1-BCMA scFv 단편, 41BB 공동자극 도메인 및 CD3 zeta 활성화 도메인을 CAR에 삽입하고, CAR 렌티바이러스를 T 세포에 형질도입하였다. 결과에 따르면, CS1-BCMA-CAR 세포는 시험관내에서 효율적으로 증폭한다.
동일한 방법을 사용하여 scFv 및 TF 태그를 포함하지 않는 CAR를 구축하고, 이를 Mock CA로 명명하며, 세포 독성 및 사이토카인 측정에서 음성 대조군으로 사용하였다.
마우스 FAB 항체 및 비오틴 표지된 BCMA재조합 단백질을 이용하고, FACS를 통해 CS1-BCMA-CAR 양성 세포를 검출하였다.
결과는 도 5에 도시된 바와 같고, MNDU3 프로모터를 이용하여 CAR를 발현하는 렌티바이러스를 구축하고, 세포 형질도입 산물에 높은 비율의 CAR 양성 세포가 함유되어 있다.
본 실시예에서 얻은 CAR 양성 세포를 PMC743으로 명명하고 후속 실험에 사용하였다.
실시예 2 CHO-CS1 세포 및 Hela-CS1 세포를 사멸하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
CS1-BCMA CAR-T 세포(PMC743)를 각각 CHO-CS1 세포, Hela-CS1 세포(CS1 양성, CS1 항원의 안정적인 형질감염 세포), 및 CHO 세포(CS1 음성)와 공동배양하였다. BCMA-41BB-CD3-CAR-T 세포(PMC744) 및 Mock CAR-T 세포를 대조군으로 사용하였다. 동결보존된 이펙터 세포와 표적 세포의 비율(E:T)은 20:1 및 40:1이다. 배양 시간은 24시간이다.
BCMA 및 CS1 항체를 사용한 CHO-BCMA 및 CHO-CS1 염색은 도 6의 A에 도시된 바와 같다.
공동배양 24시간 후, XCelligence 시스템을 사용하여 CS1-BCMA-CAR-T 세포 및 표적 세포주에 대해 실시간 세포 독성 측정을 수행하였다.
결과에 따르면, CS1-BCMA-41BB-CD3 CAR-T 세포(PMC743)는 CHO-CS1 세포를 사멸할 수 있고, BCMA-41BB-CD3-CAR-T 세포(PMC744) 및 Mock CAR-T 세포(도 6의 B)는 CHO-CS1 세포를 사멸할 수 없다.
Hela-CS1로 동일한 측정을 수행하며, 결과에 따르면, PMC743은 Hela-CS1 세포를 사멸할 수 있고, 단일 특이적 BCMA CAR-T 세포는 Hela-CS1 세포를 사멸할 수 없다(도 7).
실시예 3 CHO-BCMA 세포 및 Hela-BCMA 세포를 특이적으로 사멸하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
실시예 2와 유사한 방법을 사용하고, BCMA를 안정적으로 발현하는 CHO 및 Hela 세포주에 대해 동일한 측정을 수행하였다.
결과에 따르면, BCMA-CAR-T 세포와 유사하고, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 BCMA 양성 표적 세포를 특이적으로 사멸한다(도 8).
Hela-BCMA 표적 세포(BCMA 항원의 안정적인 형질도입)로 검출하고, 결과에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 이에 대해 높은 사멸 활성을 갖는다(도 9).
실시예 4 CS1 양성 세포에 대해 높은 수준의 IFN-γ를 분비하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
CS1-BCMA-CAR-T 세포와 표적 세포를 공동배양하고, 상층액을 수집하며, 조작 절차에 따라 Fisher 키트를 사용하여 ELISA 분석을 수행하였다.
결과에 따르면, CS1-BCMA CAR-T 세포와 CHO-CS1, CHO-BCMA(도 10) 및 Hela-CS1, Hela-BCMA 세포(도 11)를 공동배양한 후, 높은 수준의 IFN-γ 분비를 검출하였다. 상기 결과에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 CS1 및 BCMA 양성 표적 세포를 특이적으로 표적화할 수 있고 고도의 특이성을 갖는다.
실시예 5 공여체에서 유래된 PBMC를 사용한 CS1-BCMA-CAR-T 세포의 제조
3개의 공여체에서 유래된 PBMC를 사용하여 PMC743 CAR의 형질도입을 수행하고, 3개의 공여체 번호는 각각 ＃57, ＃890 및 ＃999이다. 단일 특이적 BCMA-CAR-T 세포 및 CS1-CAR-T 세포를 대조군으로 사용하였다.
3개의 공여체에서 유래된 CAR-T 세포를 증폭하여 높은 발현 수준의 CAR 양성 세포를 얻었다(도 12).
마우스 F(ab)2 항체로 검출하고, 공여체＃57의 PMC743 CAR+ 세포 비율은 >70%이며, 비오틴화된 BCMA 재조합 단백질로 검출하고, 상기 비율은 28%이며; 단일 BCMA CAR-T 세포의 결과는 유사하고, 여기서 mFAB 항체 검출 비율은 57%이며, BCMA 단백질 검출 비율은 30%이고; 마우스 F(ab)2 항체로 검출하며, CS1 CAR-T 세포는 68%의 CAR+ 세포를 가지고, 대조 T 세포는 음성이다(도 12의 A).
공여체＃890에서 PMC743 CAR를 형질도입하며, 결과에 따르면, mFAB에 의해 검출된 CAR+ 세포의 비율은 81%이고, BCMA 단백질 검출 비율은 42%이다(도 12의 B). 공여체＃890 기반의 BCMA CAR 및 CS1 CAR의 형질도입도 유사한 데이터를 얻고, 약 80% CAR+ 세포를 함유하였다.
공여체＃999 기반의 PMC743 CAR의 형질도입도 높은 비율의 CAR+ 세포가 관찰되었다(도 12의 C).
상기 결과에 따르면, 본 발명의 PMC743 CAR는 효율적으로 형질도입하여 CAR+ 세포를 높은 비율로 발현할 수 있다.
실시예 6 CS1 양성 세포를 특이적으로 사멸하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
실시예 5에서 제조된 3개의 공여체에서 유래된 PBMC의 CS1-BCMA CAR-T 세포를 이용하여 사멸 활성 검출을 수행하였다. 유사한 방법을 사용하여 단일 특이적 CS1-CAR-T 세포 및 BCMA-CAR-T 세포를 제조하고, 이를 대조군으로 사용하였다. CHO-BCMA 및 CHO-CS1을 표적 세포로 사용하고, 실시예 2와 유사한 방법을 사용하여 세포 독성 측정을 수행하였다.
결과에 따르면, CS1-BCMA CAR-T 세포는 BCMA 양성 및 CS1 양성 세포를 동시에 사멸할 수 있다(도 13). CS1-BCMA 세포의 사멸 작용은 CHO-BCMA 세포에 대한 BCMA-CAR-T 세포의 사멸 작용과 유사하고, CHO-CS1 세포에 대한 동일한 공여체에서 유래된 CS1-CAR-T 세포의 사멸 작용과도 유사하거나 약간 낮다. CS1-CAR-T 세포는 CHO-BCMA 세포를 사멸하지 않고 BCMA-CAR-T 세포는 CHO-CS1 세포를 사멸하지 않기 때문에, 각 CAR-T 세포의 사멸은 특이성을 갖는다.
실시예 4와 유사한 방법을 사용하여 IFN-γ 분비 수준을 검출하였다.
결과에 따르면, CS-1-BCMA-CAR-T 세포는 CS1 양성 및 BCMA 양성 세포에 대해 높은 수준의 IFN-γ를 분비한다(도 14). CHO-BCMA 세포에서, CS-1-BCMA-CAR-T 세포의 IFN-γ 분비는 Mock CAR-T 세포보다 유의하게 높고, 단일 특이적 BCMA-CAR-T 세포보다 높다.
IL-6의 분비 상황을 추가로 분석하였다. CRS safe CAR-T 세포의 경우, 3개의 공여체의 IL-6 수준은 가장 낮다.
실시예 7 체내 실험에서 RPMI8226 이종이식 종양의 성장을 현저히 차단하는 CS1-BCMA-CAR-T 세포
다발성 골수종 RPMI8226 이종이식 종양 모델을 사용하여 CS1-BCMA-CAR-T 세포의 체내 사멸 상황을 분석하였다.
NSG마우스에 2×106개의 RPMI8226-루시퍼라제 양성 세포(ATCC, CCL-155TM)를 정맥 주사하고, 다음날 1×107개의 CS1-BCMA-CAR-T 세포를 정맥 주사하였다.
결과에 따르면, CS1-BCMA-CAR-T 세포는 종양의 성장을 유의하게 지연시켰고, 대조군과 비교하여, p<0.05이다(도 15).
본 발명에서 언급된 모든 문헌은 한 편의 문헌이 별도로 참조로서 인용되는 바와 같이 본 발명에서 참조로서 인용된다. 이 밖에, 본 발명의 상기 교시 내용을 열독한 후, 당업자는 본 발명에 대해 다양한 변동 또는 수정을 진행할 수 있고, 이러한 등가 형태는 마찬가지로 본 발명의 특허청구범위에 의해 한정되는 범위에 속함을 이해해야 한다.
본 발명에 관한 서열 및 관련 정보는 다음과 같다.
서열 번호 서열 명칭 구체적인 서열
1 항-CS1 항체 중쇄 가변 영역 VQLQQSGPEVVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAIHWVKQSHAKSLEWIGVINTYNGNTNYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCTRTGYYYGPSHYFDYWGQGTTLTVSS
2 항-CS1 항체 경쇄 가변 영역 DIVLTQSPASLTVSLGQRATMSCRASKSVSTSGYSYVHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSASGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIKR
3 키메라 항원 수용체 VQLQQSGPEVVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAIHWVKQSHAKSLEWIGVINTYNGNTNYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCTRTGYYYGPSHYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLTVSLGQRATMSCRASKSVSTSGYSYVHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSASGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYIIPYNDATKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARYNYDGYFDVWGAGTTVTVSSLEKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFASDKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPF M RPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
4 항-BCMA 항체 중쇄 가변 영역 QVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYIIPYNDATKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARYNYDGYFDVWGAGTTVTVSS
5 항-BCMA 항체 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPPTFGGGTKLEIK
6 연결 펩티드 GGGGS
7 신호 펩티드 MALPVTALLLPLALLLHAARP
8 힌지 영역 KTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFASD
9 막횡단 영역 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
10 공동자극 신호 분자 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
11 CD3ζ RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
12 CS1 항원 MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAASGPVKELVGSVGGAVTFPLKSKVKQVDSIVWTFNTTPLVTIQPEGGTIIVTQNRNRERVDFPDGGYSLKLSKLKKNDSGIYYVGIYSSSLQQPSTQEYVLHVYEHLSKPKVTMGLQSNKNGTCVTNLTCCMEHGEEDVIYTWKALGQAANESHNGSILPISWRWGESDMTFICVARNPVSRNFSSPILARKLCEGAADDPDSSMVLLCLLLVPLLLSLFVLGLFLWFLKRERQEEYIEEKKRVDICRETPNICPHSGENTEYDTIPHTNRTILKEDPANTVYSTVEIPKKMENPHSLLTMPDTPRLFAYENVI
13 BCMA 항원 MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAVFVLMFLLRKINSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDSDHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR
Sequence listing <110> WUHAN SIAN MEDICAL TECHNOLOGY CO.,LTD <120> BISPECIFIC CS1-BCMA CAR-T CELL AND APPLICATION THEREOF <130> P2021-3587 <150> CN2021101295645 <151> 2021-01-29 <160> 13 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CS1 antibody heavy chain variable region <400> 1 Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Arg Pro Gly Val Ser 1 5 10 15 Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ala 20 25 30 Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 50 55 60 Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Pro Ser His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-CS1 antibody light chain variable 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Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys 115 120 125 Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe 130 135 140 Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys 145 150 155 160 Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu 165 170 175 Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg 180

Claims (12)

  1. 이중특이성 키메라 항원 수용체(CAR)로서,
    상기 키메라 항원 수용체의 구조는 하기 식 I로 표시되고,
    L-scFv1-I-scFv2-H-TM-C-CD3ζ (I)
    식에서,
    각 “-”는 독립적으로 연결 펩티드 또는 펩티드 결합이며;
    L은 선택적인 신호 펩티드 서열이고;
    I는 플렉서블 링커이며;
    H는 선택적인 힌지 영역이고;
    TM은 막횡단 도메인이며;
    C는 공동자극 신호 분자이고;
    CD3ζ은 CD3ζ에서 유래된 세포질 신호 전달 서열이며;
    scFv1 및 scFv2 중 하나는 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인이고, 다른 하나는 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인인 것을 특징으로 하는 이중특이성 키메라 항원 수용체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 scFv1은 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인이고, 상기 scFv2는 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인인 것을 특징으로 하는 이중특이성 키메라 항원 수용체.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 CS1을 표적으로 하는 항원 결합 도메인(scFv1)의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되고, 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2로 표시되며; 및/또는
    상기 BCMA를 표적으로 하는 항원 결합 도메인(scFv1)의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4로 표시되고, 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 5로 표시되는 것을 특징으로 하는 이중특이성 키메라 항원 수용체.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 이중특이성 키메라 항원 수용체의 아미노산 서열은 서열번호 3으로 표시되는 것을 특징으로 하는 이중특이성 키메라 항원 수용체.
  5. 핵산 분자로서,
    상기 핵산 분자는 제1항에 따른 이중특이성 키메라 항원 수용체를 코딩하는 것을 특징으로 하는 핵산 분자.
  6. 벡터로서,
    상기 벡터는 제5항에 따른 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 벡터.
  7. 조작된 면역 세포로서,
    상기 면역 세포는 제1항에 따른 이중특이성 키메라 항원 수용체를 발현하는 것을 특징으로 하는 조작된 면역 세포.
  8. 제제로서,
    상기 제제는 제1항에 따른 이중특이성 키메라 항원 수용체, 제5항에 따른 핵산 분자, 제6항에 따른 벡터, 또는 제7항에 따른 면역 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 제제.
  9. 제1항에 따른 이중특이성 키메라 항원 수용체, 제5항에 따른 핵산 분자, 제6항에 따른 벡터, 또는 제7항에 따른 면역 세포의 용도로서,
    암 또는 종양의 예방 및/또는 치료를 위한 약물 또는 제제의 제조에 사용되는 것을 특징으로 하는 용도.
  10. 조작된 면역 세포의 제조 방법으로서,
    상기 면역 세포는 제1항에 따른 이중특이성 키메라 항원 수용체를 발현하고, 상기 방법은,
    (a) 조작할 면역 세포를 제공하는 단계; 및
    (b) 제5항에 따른 핵산 분자 또는 제6항에 따른 벡터를 상기 면역 세포에 형질도입하여, 상기 조작된 면역 세포를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 질환의 치료 방법으로서,
    치료가 필요한 대상체에게 적당량의 제6항에 따른 벡터, 제7항에 따른 면역 세포, 또는 제8항에 따른 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 질환은 암 또는 종양인 것을 특징으로 하는 방법.


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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112778427B (zh) * 2021-01-29 2022-03-15 武汉思安医疗技术有限公司 双特异性cs1-bcma car-t细胞及其应用
CN115491358A (zh) * 2021-06-17 2022-12-20 复星凯特生物科技有限公司 一种靶向b7-h3和folr1双打靶点car t的制备及应用
CN115521917A (zh) * 2021-06-25 2022-12-27 南京北恒生物科技有限公司 工程化免疫细胞及其用途
CN113651893B (zh) * 2021-08-12 2023-08-01 上海生物制品研究所有限责任公司 联合her2和meso双靶点car-t载体及其构建方法和在癌症中的应用
CN116410331B (zh) * 2021-12-31 2024-01-30 合源生物科技(天津)有限公司 靶向cs1的嵌合抗原受体、靶向bcma/cs1的双特异性嵌合抗原受体及其应用
CN116789859B (zh) * 2023-06-29 2024-02-23 徐州医科大学 一种用于评价bcma靶向car-t细胞药效的靶细胞及其应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017222593A1 (en) * 2016-06-24 2017-12-28 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof
CA2990177A1 (en) * 2015-06-25 2016-12-29 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof
US20190135894A1 (en) * 2015-06-25 2019-05-09 iCell Gene Therapeuticics LLC COMPOUND CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (cCAR) TARGETING MULTIPLE ANTIGENS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
US11173179B2 (en) * 2015-06-25 2021-11-16 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptor (CAR) targeting multiple antigens, compositions and methods of use thereof
CN105384825B (zh) * 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
US20190338015A1 (en) * 2016-10-19 2019-11-07 Cellectis Cell death inducing chimeric antigen receptors
WO2018237022A1 (en) * 2017-06-21 2018-12-27 Icell Gene Therapeutics Llc CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARs), COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
US10561686B2 (en) * 2018-01-12 2020-02-18 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
EP3773630A1 (en) * 2018-04-03 2021-02-17 Promab Biotechnologies, Inc. Bcma-car-t cells
CA3103610A1 (en) * 2018-06-12 2019-12-19 The Regents Of The University Of California Single-chain bispecific chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN109575143B (zh) * 2018-12-29 2022-06-17 博生吉医药科技(苏州)有限公司 双特异性cd20-cd19-car及其应用
CN112778427B (zh) * 2021-01-29 2022-03-15 武汉思安医疗技术有限公司 双特异性cs1-bcma car-t细胞及其应用

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