KR20230131251A - 키나아제 억제제로서의 인돌 유도체 - Google Patents

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KR20230131251A
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크레이그 에이. 코번
다니엘 제이. 부자드
당게 비제이 쿠마르
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쥐비005 인코포레이티드
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Abstract

단백질 키나아제 억제제, 특히 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, 이를 포함하는 약학 조성물, 이의 제조 방법, 및 키나아제 기능과 관련된 질환, 장애 및 병태를 치료하거나 예방하기 위한 억제제의 용도가 본원에 개시된다. 특히, 본 발명은 CNS 침투성 BTK 억제제에 관한 것이다.

Description

키나아제 억제제로서의 인돌 유도체
본 발명은 일반적으로 단백질 키나아제 억제제, 특히 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, 이를 포함하는 약학 조성물, 이의 제조 방법, 및 키나아제 기능과 관련된 질환, 장애 및 병태를 치료하거나 예방하기 위한 상기 억제제의 용도에 관한 것이다.
단백질 키나아제는 진핵 세포에서의 세포내 및 막관통 신호전달 단백질의 큰 그룹이다. 이들 효소는 ATP로부터의 말단(감마) 포스페이트를 표적 단백질의 특정 아미노산 잔기에 전달하는 것을 담당한다. 표적 단백질 내의 특정 아미노산 잔기의 인산화는 이의 활성을 조절하여 세포 신호전달 및 대사에서 중대한 변화를 유도한다. 단백질 키나아제는 세포막, 사이토졸 및 세포소기관, 예컨대 핵에서 발견될 수 있으며, 대사, 세포 성장 및 분화, 세포 신호전달, 면역 반응의 조절, 및 세포사를 포함한 다수의 세포 기능을 매개하는 것을 담당한다. 세린 키나아제는 표적 단백질 내의 세린 또는 트레오닌 잔기를 특이적으로 인산화한다. 유사하게, 티로신 수용체 키나아제를 포함한 티로신 키나아제는 표적 단백질 내의 티로신 잔기를 인산화한다. 티로신 키나아제 패밀리는 TEC, SRC, ABL, JAK, CSK, FAK, SYK, FER, ACK, 및 수용체 티로신 키나아제 서브패밀리 - ERBB, FGFR, VEGFR, RET 및 EPH를 포함함 - 를 포함한다. 수용체 티로신 키나아제 슈퍼패밀리의 하위클래스 I은 ERBB 수용체를 포함하고, 다음 4개의 구성원을 포함한다: ErbB1(표피 성장 인자 수용체(EGFR)로도 불림), ErbB2, ErbB3 및 ErbB4를 포함한다.
키나아제는 건강 및 질환과 관련된 주요 생물학적 과정에 대한 제어를 발휘한다. 더욱이, 다양한 단백질 키나아제의 비정상적인 활성화 또는 과도한 발현은 양성 및 악성 증식을 특징으로 하는 다수의 질환 및 장애의 기전에 관여되어 있을 뿐만 아니라, 면역 시스템의 부적절한 활성화로부터 발생되는 질환에도 관여되어 있다. 따라서, 선택된 키나아제 또는 키나아제 패밀리의 억제제는 암, 혈관 질환, 자가면역 질환, 및 염증성 병태의 치료에 유용한 것으로 여겨지고 있으며, 이는 고형 종양, 혈액학적 악성종양, 혈전, 관절염, 이식편 대 숙주 질환, 홍반성 루푸스, 건선, 결장염, 회장염, 다발성 경화증, 포도막염, 관상 동맥 혈관병증, 전신 경화증, 죽상경화증, 천식, 이식 거부반응, 알레르기, 허혈, 피부근염, 천포창 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
Tec 키나아제는, 주로 그러나 비배타적으로, 조혈 기원의 세포에서 발현된 비수용체 티로신 키나아제들의 패밀리이다. Tec 패밀리는 TEC, 브루톤 티로신 키나아제(BTK), 유도성 T-세포 키나아제(ITK), 휴면 림프구 키나아제(티로신 단백질 키나아제에 대한 RLK/TXK), 및 골수-발현된 키나아제(BMX/ETK)를 포함한다.
BTK는 B-세포 발달 및 활성화의 B-세포 수용체 신호전달 및 조절에 있어서 중요하다. 인간에서 BTK를 인코딩하는 유전자의 돌연변이는 X-연관 무감마글로불린혈증으로 이어지는데, 이는 B-세포의 손상된 성숙, 면역글로불린 및 말초 B 세포의 감소된 수준, 및 감소된 T-세포 비의존성 면역 반응을 포함한 감소된 면역 기능을 특징으로 한다. BTK는 Src-패밀리 키나아제에 의해 활성화되고, PLC 감마를 인산화하여 B-세포 기능 및 생존에 영향을 미치게 된다. 추가적으로, BTK는 비만 세포, 대식세포 및 호중구의 세포 기능에 중요한데, 이는 BTK 억제가 염증, 골 장애, 및 알레르기성 질환을 포함한 이들 및 관련 세포에 의해 매개된 질환의 치료에 효과적임을 나타낸다. BTK 억제는 림프종 세포의 생존에 있어서도 중요한데, 이는 BTK의 억제가 림프종 및 다른 암의 치료에 유용함을 나타낸다. 이와 같이, BTK 및 관련 키나아제의 억제제는 항염증제로서뿐만 아니라 항암제로서도 큰 관심 대상이다. BTK는 혈소판 기능 및 혈전 형성에도 중요한데, 이는 BTK-선택적 억제제가 항혈전제로서도 유용함을 나타낸다. 추가로, BTK는 염증소체 활성화에 필요하고, BTK의 억제는 하기를 포함하는 염증소체-관련 장애의 치료에서 사용될 수 있다: 뇌졸중, 통풍, 2형 당뇨, 비만-유도 인슐린 저항성, 죽상경화증 및 머클-웰스 증후군. 게다가, BTK는 HIV 감염된 T-세포에서 발현되고, BTK 억제제에 의한 치료는 감염된 세포를 아폽토시스사(apoptotic death)에 대해 감작시키고 감소된 바이러스 생산을 유도한다. 따라서, BTK 억제제는 HIV-AIDS 및 다른 바이러스성 감염의 치료에 유용한 것으로 여겨진다.
따라서, 일반적으로 단백질 키나아제를 조절하는 화합물뿐만 아니라, 특정 단백질 키나아제, 예컨대 BTK를 조절하는 화합물, 이뿐만 아니라, 상기 조절로부터 이익을 얻게 될 질환, 장애 및 병태를 치료하기 위한 관련 조성물 및 방법에 대한 필요성이 존재한다.
일 양태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체가 제공된다:
[화학식 (I)]
상기 식에서,
는 또는 이고
RB는 -H 또는 -Me이고;
RC는 -CH=CH2, -C≡CH 또는 -C≡C-CH3이고;
RA는
이고, 상기 식에서
RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
RA2는 -H 또는 -F임.
일 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
일 실시형태에서, 단백질 키나아제의 조절 방법이 제공되며, 방법은 단백질 키나아제를 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 단백질 키나아제는 BTK이다.
일 실시형태에서, BTK 의존성 병태를 치료하는 방법이 제공되며, 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물의, 의약의 제조에 있어서의 용도가 제공된다.
달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 청구된 발명 요지가 속하는 기술 분야의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상세한 설명은 단지 예시적이고 설명적이며 청구된 임의의 발명 요지를 제한하지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 본 출원에서, 단수의 사용은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 복수를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는"뿐만 아니라 "포함하다", "포함한다", 및 "포함된"과 같은 다른 형태의 사용은 제한적이지 않다.
본 발명의 다양한 특징이 단일 실시형태의 맥락에서 기재될 수 있기는 하지만, 이러한 특징들은 또한 개별적으로 또는 임의의 적합한 조합으로 제공될 수 있다. 대조적으로, 본 발명이 명확성을 위해 별도의 실시형태들의 맥락에서 본원에서 설명될 수 있지만, 본 발명은 단일 실시형태로도 구현될 수 있다.
본 명세서에서 "일부 실시형태", "실시형태", "일 실시형태" 또는 "다른 실시형태"에 대한 언급은 이들 실시형태와 관련하여 설명된 특정 특징, 구조, 또는 특성이 본 발명의 적어도 일부 실시형태 내에 포함되지만 반드시 모든 실시형태에 포함되는 것은 아님을 의미한다.
본원에서 사용되는, 범위 및 양은 "약" 특정 값 또는 범위로 표현될 수 있다. '약'은 정확한 양도 포함한다. 따라서, "약 100 μL"는 "약 100 μL"를 의미하고, "100 μL"도 의미한다. 일부 실시형태에서, '약'은 그 값의 5% 이내를 의미한다. 따라서, "약 100 μL"는 95 내지 105 uL를 의미한다. 일반적으로, 용어 "약"은 실험 오차 이내에 있을 것으로 예상될 수 있는 양을 포함한다.
본원에서 사용되는, "알킬"은 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소 기를 의미한다. "저급 알킬"은 1 내지 8개의 탄소 원자, 일부 실시형태에서 1 내지 6개의 탄소 원자, 일부 실시형태에서 1 내지 4개의 탄소 원자, 일부 실시형태에서 1개 또는 2개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 기를 의미한다. 직쇄 저급 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, 및 n-옥틸 기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 분지형 저급 알킬 기의 예는 이소프로필, 이소-부틸, sec-부틸, t-부틸, 네오펜틸, 이소펜틸, 및 2,2-디메틸프로필 기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"알케닐" 기는 2개의 탄소 원자 사이에 적어도 하나의 이중 결합이 존재하는 것을 제외하고는, 상기 정의된 바와 같은 직쇄 및 분지쇄 및 사이클릭 알킬 기를 포함한다. 따라서, 알케닐 기는 2 내지 약 20개의 탄소 원자, 일반적으로 2 내지 12개의 탄소, 또는 일부 실시형태에서 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다. 예는 특히 -CH=CH2, -CH=CH(CH3), -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH(CH3), -C(CH2CH3)=CH2, -CH=CHCH2CH3, -CH=CH(CH2)2CH3, -CH=CH(CH2)3CH3, -CH=CH(CH2)4CH3, 비닐, 사이클로헥세닐, 사이클로펜테닐, 사이클로헥사디에닐, 부타디에닐, 펜타디에닐, 및 헥사디에닐을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"알키닐" 기는 2개의 탄소 원자 사이에 적어도 하나의 삼중 결합이 존재하는 것을 제외하고는, 직쇄 및 분지쇄 알킬 기를 포함한다. 따라서, 알키닐 기는 2 내지 약 20개의 탄소 원자, 일반적으로 2 내지 12개의 탄소, 또는 일부 실시형태에서 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다. 예는 특히 -C≡CH, -C≡C(CH3), -C≡C(CH2CH3), -CH2C≡CH, -CH2C≡C(CH3), 및 -CH2C≡C(CH2CH3)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는, "알킬렌"은 2가 알킬 기를 의미한다. 직쇄 저급 알킬렌 기의 예는 메틸렌(즉, -CH2-), 에틸렌(즉, -CH2CH2-), 프로필렌(즉, -CH2CH2CH2-), 및 부틸렌(즉, -CH2CH2CH2CH2-)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는, "헤테로알킬렌"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자, 예컨대 비제한적으로, N, O, S, 또는 P로 대체되는 알킬렌 기이다.
"알콕시"는 상기 정의된 바와 같은 알킬이 산소 원자에 의해 결합된 것(즉, -O-알킬)을 지칭한다. 저급 알콕시 기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, n-부톡시, 이소프로폭시, sec-부톡시, tert-부톡시 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "카르보사이클릭" 및 "카르보사이클"은 고리의 원자들이 탄소인 고리 구조를 나타낸다. 카르보사이클은 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭일 수 있다. 카르보사이클은 포화 고리와 불포화 고리 둘 모두를 포함한다. 카르보사이클은 사이클로알킬 기와 아릴 기 둘 모두를 포함한다. 일부 실시형태에서, 카르보사이클은 3 내지 8개의 고리 구성원을 갖는 반면, 다른 실시형태에서 고리 탄소 원자의 수는 4, 5, 6, 또는 7개이다. 반대로 구체적으로 나타내지 않는 한, 카르보사이클릭 고리는 N개만큼의 치환기로 치환될 수 있으며, 여기서 N은 예를 들어 알킬, 아미노, 히드록시, 시아노, 카르복시, 니트로, 티오, 알콕시, 및 할로겐 기를 갖는 카르보사이클릭 고리의 크기이다.
"사이클로알킬" 기는 고리 구조를 형성하는 알킬 기이며, 이는 치환 또는 비치환될 수 있다. 사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸 기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 사이클로알킬 기는 3 내지 8개의 고리 구성원을 갖는 반면, 다른 실시형태에서 고리 탄소 원자의 수는 3 내지 5, 3 내지 6, 또는 3 내지 7개의 범위이다. 사이클로알킬 기는 폴리사이클릭 사이클로알킬 기, 예컨대 비제한적으로, 노르보르닐, 아다만틸, 보르닐, 캄페닐, 이소캄페닐, 및 카레닐 기, 및 융합된 고리, 예컨대 비제한적으로, 데칼리닐 등을 추가로 포함한다. 사이클로알킬 기는 상기 정의된 바와 같은 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기로 치환되는 고리도 포함한다. 대표적인 치환된 사이클로알킬 기는 일치환 또는 1회 초과로 치환된, 예컨대 비제한적으로, 2,2-, 2,3-, 2,4- 2,5- 또는 2,6-이치환된 사이클로헥실 기 또는 일치환, 이치환, 또는 삼치환된 노르보르닐 또는 사이클로헵틸 기일 수 있으며, 이는 예를 들어 아미노, 히드록시, 시아노, 카르복시, 니트로, 티오, 알콕시, 및 할로겐 기로 치환될 수 있다.
"아릴" 기는 헤테로원자를 함유하지 않는 사이클릭 방향족 탄화수소이다. 따라서, 아릴 기는 페닐, 아줄레닐, 헵탈레닐, 바이페닐, 인다세닐, 플루오레닐, 페난트레닐, 트리페닐레닐, 피레닐, 나프타세닐, 크리세닐, 바이페닐레닐, 안트라세닐, 및 나프틸 기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 아릴 기는 기의 고리 부분에 6 내지 14개의 탄소를 함유한다. 용어 "아릴" 및 "아릴 기"는 반드시 모든 고리일 필요는 없이 적어도 하나의 고리가 방향족인 융합된 고리, 예컨대 융합된 방향족-지방족 고리 시스템(예를 들어, 인다닐, 테트라히드로나프틸 등)을 포함한다.
"카르보사이클알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 카르보사이클로 대체된 것을 지칭한다. 카르보사이클알킬 기의 예는 벤질 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는, "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릴" 기는 3개 이상의 고리 구성원을 함유하며, 이들 중 하나 이상이 헤테로원자, 예컨대 비제한적으로, N, O, S, 또는 P인 방향족 및 비방향족 고리 화합물(헤테로사이클릭 고리)을 포함한다. 본원에서 정의된 것과 같은 헤테로사이클 기는 적어도 하나의 고리 헤테로원자를 포함하는 헤테로아릴 기 또는 부분 또는 완전 포화 사이클릭 기일 수 있다. 일부 실시형태에서, 헤테로사이클 기는 3 내지 20개의 고리 구성원을 포함하는 반면, 다른 상기 기는 3 내지 15개의 고리 구성원을 갖는다. 적어도 하나의 고리는 헤테로원자를 함유하지만, 폴리사이클릭 시스템 내의 모든 고리가 헤테로원자를 함유할 필요는 없다. 예를 들어, 디옥솔라닐 고리 및 벤조디옥솔라닐 고리 시스템(메틸렌디옥시페닐 고리 시스템)은 둘 모두 본원에서의 의미 내에 있는 헤테로사이클 기이다. C2-헤테로아릴로 지정된 헤테로아릴 기는 2개의 탄소 원자 및 3개의 헤테로원자를 갖는 5원 고리, 2개의 탄소 원자 및 4개의 헤테로원자를 갖는 6원 고리 등일 수 있다. 마찬가지로, C4-헤테로사이클은 1개의 헤테로원자를 갖는 5원 고리, 2개의 헤테로원자를 갖는 6원 고리 등일 수 있다. 탄소 원자의 수와 헤테로원자의 수를 합하면 고리 원자의 총 수가 된다. 포화 헤테로사이클릭 고리는 불포화 탄소 원자를 함유하지 않는 헤테로사이클릭 고리를 지칭한다.
"헤테로아릴" 기는 5개 이상의 고리 구성원을 함유하며, 이들 중 하나 이상이 헤테로원자, 예컨대 비제한적으로, N, O, 및 S인 방향족 고리 화합물이다. C2-헤테로아릴로 지정된 헤테로아릴 기는 2개의 탄소 원자 및 3개의 헤테로원자를 갖는 5원 고리, 2개의 탄소 원자 및 4개의 헤테로원자를 갖는 6원 고리 등일 수 있다. 마찬가지로, C4-헤테로아릴은 1개의 헤테로원자를 갖는 5원 고리, 2개의 헤테로원자를 갖는 6원 고리 등일 수 있다. 탄소 원자의 수와 헤테로원자의 수를 합하면 고리 원자의 총 수가 된다. 헤테로아릴 기는 피롤릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 피리디닐, 티오페닐, 벤조티오페닐, 벤조푸라닐, 인돌릴, 아자인돌릴, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 아자벤즈이미다졸릴, 벤족사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 이미다조피리디닐, 이소옥사졸로피리디닐, 티아나프탈레닐, 퓨리닐, 잔티닐, 아데니닐, 구아니닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 및 퀴나졸리닐 기와 같은 기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "헤테로아릴" 및 "헤테로아릴 기"는 반드시 모든 고리일 필요는 없이 적어도 하나의 고리가 방향족인 것과 같은 융합된 고리 화합물을 포함하며, 이는 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 인돌릴 및 2,3-디히드로인돌릴을 포함한다.
"헤테로사이클알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 헤테로사이클로 대체된 것을 지칭한다. 헤테로사이클알킬 기의 예는 모르폴리노에틸 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"할로" 또는 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 지칭한다.
"할로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 할로겐으로 대체된 것을 지칭한다. 저급 할로알킬 기의 예는 -CF3, -CH2CF3 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"할로알콕시"는 상기 정의된 바와 같은 알콕시의 하나 이상의 수소 원자가 할로겐으로 대체된 것을 지칭한다. 저급 할로알콕시 기의 예는 -OCF3, -OCH2CF3 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"히드록시알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 -OH로 대체된 것을 지칭한다. 저급 히드록시알킬 기의 예는 -CH2OH, -CH2CH2OH 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는, 용어 "선택적으로 치환된"은 0개, 1개, 또는 그 이상의 치환기, 예컨대 0 내지 25개, 0 내지 20개, 0 내지 10개, 또는 0 내지 5개의 치환기를 갖는 기(예를 들어, 알킬, 카르보사이클, 또는 헤테로사이클)를 지칭한다. 치환기는 -ORa, -NRaRb, -S(O)2Ra 또는 -S(O)2ORa, 할로겐, 시아노, 알킬, 할로알킬, 알콕시, 카르보사이클, 헤테로사이클, 카르보사이클알킬, 또는 헤테로사이클알킬을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 여기서 각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로, H, 알킬, 할로알킬, 카르보사이클, 또는 헤테로사이클이거나, Ra와 Rb는 이들이 부착되어 있는 원자와 함께, 3 내지 8원 카르보사이클 또는 헤테로사이클을 형성한다.
"이성질체"는 특정 입체화학 또는 이성질체 형태가 구체적으로 지시되지 않는 한, 구조의 키랄, 부분입체이성질체 또는 라세미 형태 모두를 포함하도록 본원에서 사용된다. 상기 화합물은 임의의 풍부화도로, 도식으로부터 명백한 바와 같이 임의의 또는 모든 비대칭 원자에서 풍부화된 또는 분할된 광학 이성질체일 수 있다. 라세미 혼합물과 부분입체이성질체 혼합물 둘 모두뿐만 아니라, 개별 광학 이성질체들이 이의 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 파트너가 실질적으로 없도록 합성될 수 있으며, 이들 모두는 본 개시내용의 특정한 실시형태의 범주 내에 있다. 키랄 중심의 존재로부터 생성되는 이성질체는 "거울상이성질체"라고 불리는 한 쌍의 겹쳐질 수 없는 이성질체를 포함한다. 순수한 화합물의 단일 거울상이성질체들은 광학적으로 활성이다(즉, 이들은 평면 편광의 평면을 회전시킬 수 있으며, R 또는 S로 지정됨).
"단리된 광학 이성질체"는 동일한 화학식의 상응하는 광학 이성질체(들)로부터 실질적으로 정제된 화합물을 의미한다. 예를 들어, 단리된 이성질체는 적어도 약 80%, 적어도 80% 또는 적어도 85% 순수할 수 있다. 다른 실시형태에서, 단리된 이성질체는 중량 기준으로 적어도 90% 순수 또는 적어도 98% 순수, 또는 적어도 99% 순수하다.
"실질적으로 거울상이성질체적으로 또는 부분입체이성질체적으로" 순수하다는 것은, 하나의 거울상이성질체의 거울상이성질체 풍부화 또는 부분입체이성질체 풍부화의 수준이 다른 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체에 대해 적어도 약 80%이고, 보다 구체적으로는 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9%를 초과한다는 의미이다.
용어 "라세미체" 및 "라세미 혼합물"은 2개의 거울상이성질체의 등량 혼합물을 지칭한다. 라세미체는 그것이 광학적으로 활성이 아니기 때문에(즉, 이의 구성 거울상이성질체가 서로 상쇄시키기 때문에 어느 방향으로도 평면 편광을 회전시키지 않을 것이기 때문에) "(±)"로 표시된다.
"수화물"은 물 분자와 조합하여 존재하는 화합물이다. 조합은 1수화물 또는 2수화물과 같이 화학량론적 양의 물을 포함할 수 있거나, 랜덤한 양으로 물을 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는, 용어 "수화물"은 고체 형태를 지칭하며; 즉, 수용액 중 화합물은, 그것이 수화되어 있는 것일 수는 있지만, 본원에서 사용되는 용어의 수화물은 아니다.
"용매화물"은 물이 아닌 용매가 존재한다는 것을 제외하고는 수화물과 유사하다. 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올은 "알코올레이트"를 형성할 수 있으며, 이 역시 화학량론적 또는 비화학량론일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어, "용매화물"은 고체 형태를 지칭하며; 즉, 용매 용액 중 화합물은, 그것이 용매화되어 있는 것일 수는 있지만, 본원에서 사용되는 용어의 용매화물은 아니다.
"동위원소"는 동일한 수의 양성자를 갖지만 상이한 수의 중성자를 갖는 원자를 지칭하며, 화학식 (I)의 화합물의 동위원소체는 하나 이상의 원자가 그 원자의 동위원소로 대체된 임의의 상기 화합물을 포함한다. 예를 들어, 탄소의 가장 흔한 형태인 탄소 12는 6개의 양성자 및 6개의 중성자를 갖는 반면, 탄소 13은 6개의 양성자 및 7개의 중성자를 갖고, 탄소 14는 6개의 양성자 및 8개의 중성자를 갖는다. 수소는 2개의 안정한 동위원소, 중수소(1개의 양성자 및 1개의 중성자) 및 삼중수소(1개의 양성자 및 2개의 중성자)를 갖는다. 불소는 수개의 동위원소를 갖지만, 불소 19가 가장 수명이 길다. 따라서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 동위원소는 하나 이상의 탄소 12 원자가 탄소 13 및/또는 탄소 14 원자에 의해 대체되고/되거나 하나 이상의 수소 원자가 중수소 및/또는 삼중수소로 대체되고/되거나 하나 이상의 불소 원자가 불소 19에 의해 대체되는 화학식 (I)의 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"염"은 일반적으로 반대 이온과 조합된 이온 형태의 유기 화합물, 예컨대 카르복실산 또는 아민을 지칭한다. 예를 들어, 음이온 형태의 산과 양이온 사이에 형성된 염은 "산 부가 염"으로 지칭된다. 반대로, 양이온 형태의 염기와 음이온 사이에 형성된 염은 "염기 부가 염"으로 지칭된다.
용어 "약학적으로 허용가능한"은 인간의 소비에 대해 승인된 작용제를 지칭하고 일반적으로 비독성이다. 예를 들어, 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 비독성 무기 또는 유기 산 및/또는 염기 부가 염을 지칭한다(예를 들어, 문헌[Lit et al., Salt Selection for Basic Drugs, Int. J. Pharm., 33, 201-217, 1986] 참조)(본원에 참고로 포함됨).
본 개시내용의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 예를 들어 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 및 전이 금속 염을 포함한 금속 염, 예컨대 칼슘, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 및 아연 염을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 N,N'디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N-메틸글루카민), 및 프로카인과 같은 염기성 아민으로부터 제조된 유기 염도 포함한다.
약학적으로 허용가능한 산 부가 염은 무기 산으로부터 또는 유기 산으로부터 제조될 수 있다. 무기 산의 예는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 탄산, 황산, 및 인산을 포함한다. 적절한 유기 산은 유기 산의 지방족, 지환족, 방향족, 방향족 지방족, 헤테로사이클릭, 카르복실산, 및 설폰산 부류로부터 선택될 수 있으며, 이의 예는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 글루쿠론산, 말레산, 푸마르산, 피루브산, 아스파르트산, 글루탐산, 벤조산, 안트라닐산, 4-히드록시벤조산, 페닐아세트산, 만델산, 히푸르산, 말론산, 옥살산, 엠본산(파모산), 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 판토텐산, 트리플루오로메탄설폰산, 2-히드록시에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 설파닐산, 사이클로헥실아미노설폰산, 스테아르산, 알긴산, β-히드록시부티르산, 살리실산, 갈락타르산, 및 갈락투론산을 포함한다.
약학적으로 허용불가능한 염이 일반적으로 의약으로서 유용하지는 않지만, 상기 염은 예를 들어 본원에 기재된 화합물의 합성에서, 예를 들어 재결정화에 의한 그들의 정제에서 중간체로서 유용할 수 있다.
특정한 실시형태에서, 본 개시내용은 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께, 본원에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 이성질체, 라세미체, 수화물, 용매화물, 동위원소체, 또는 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 예를 들어, 활성 화합물은 통상 담체와 혼합되거나, 담체에 의해 희석되거나, 앰풀, 캡슐, 샤세, 종이, 또는 다른 용기의 형태일 수 있는 담체 내에 봉입될 것이다. 활성 화합물이 담체와 혼합될 때, 또는 담체가 희석제로서의 역할을 할 때, 이는 활성 화합물을 위한 비히클, 부형제, 또는 매질로서 작용하는 고체, 반고체, 또는 액체 물질일 수 있다. 활성 화합물은 예를 들어 샤셰 내에 함유된 과립상 고체 담체 상에 흡착될 수 있다. 적합한 담체의 일부 예는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리히드록시에톡실화 피마자유, 땅콩유, 올리브유, 젤라틴, 락토오스, 백토(terra alba), 수크로오스, 덱스트린, 탄산마그네슘, 당, 사이클로덱스트린, 아밀로오스, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 젤라틴, 한천, 펙틴, 아카시아, 스테아르산, 또는 셀룰로오스의 저급 알킬 에테르, 규산, 지방산, 지방산 아민, 지방산 모노글리세라이드 및 디글리세라이드, 펜타에리트리톨 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌, 히드록시메틸셀룰로오스, 및 폴리비닐피롤리돈이다. 유사하게, 담체 또는 희석제는 당업계에 알려진 임의의 지속 방출 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로 또는 왁스와 혼합된 상태로 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는, 용어 "약학 조성물"은 약학적으로 허용가능한 담체 - 이는 다른 첨가제도 포함할 수 있음 - 를 사용하여 제형화되고, 포유동물에서의 질환의 치료를 위한 치료 요법의 일부로서 정부 규제 기관의 승인 하에 제조되거나 판매되는 본원에 기재된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 이성질체, 라세미체, 수화물, 용매화물, 상동체 또는 염 중 하나 이상을 함유하는 조성물을 지칭한다. 약학 조성물은 예를 들어 단위 투여 형태(예를 들어, 정제, 캡슐, 당의정, 젤캡, 또는 시럽)로 경구 투여를 위해; 국소 투여를 위해(예를 들어, 크림, 젤, 로션, 또는 연고로서); 정맥내 투여를 위해(예를 들어, 미립자 색전이 없는 멸균 용액으로서, 정맥내 사용에 적합한 용매 시스템 중에서); 또는 본원에 기재된 임의의 다른 제형으로 제형화될 수 있다. 적합한 제형의 선택 및 제조를 위한 통상적인 절차 및 성분은 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)] 및 [The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 36 NF31), published in 2013]에 기재되어 있다.
다른 실시형태에서, 본원에 기재된 화합물의 조성물의 제조 방법이 제공되며, 방법은 본 개시내용의 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 사용하여 제형화하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 경구 투여에 적합하다. 일부 상기 실시형태에서, 방법은 조성물을 정제 또는 캡슐로 제형화하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 비경구 투여에 적합하다. 일부 상기 실시형태에서, 방법은 조성물을 동결건조시켜 동결건조된 제제를 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에서 사용되는, 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 개시된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 이성질체, 라세미체, 수화물, 용매화물, 상동체 또는 염 이외의 임의의 성분(예를 들어, 활성 화합물을 현탁시키거나 용해시킬 수 있는 담체)을 지칭하며, 환자에서 비독성 및 비염증성인 특성을 갖는다. 부형제는 예를 들어 접착방지제, 산화방지제, 결합제, 코팅, 압축 보조제, 붕해제, 염료(색소), 연화제, 유화제, 충전제(희석제), 필름 형성제 또는 코팅, 향료, 방향제, 활택제(유동 향상제), 윤활제, 방부제, 인쇄 잉크, 수착제, 현탁화제 또는 분산제, 감미제, 또는 수화수(water of hydration)를 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 부틸화 히드록시톨루엔(BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘(이염기성), 칼슘 스테아레이트, 크로스카르멜로오스, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로오스, 젤라틴, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 락토오스, 마그네슘 스테아레이트, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로오스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 예비젤라틴화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 셸락, 이산화규소, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 소듐 시트레이트, 소듐 전분 글리콜레이트, 소르비톨, 전분(옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로오스, 활석, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
제형은 활성 화합물과 유해하게 반응하지 않는 보조제와 혼합될 수 있다. 상기 첨가제는 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 삼투압에 영향을 미치게 하기 위한 염, 완충제 및/또는 착색 물질, 방부제, 감미제, 또는 향미제를 포함할 수 있다. 조성물은 필요하다면 멸균될 수도 있다.
투여 경로는 본 개시내용의 활성 화합물을 적절하거나 원하는 작용 부위에 효과적으로 수송하는 임의의 경로, 예컨대 경구, 비강, 폐, 협측, 피하, 피내, 경피, 또는 비경구, 예를 들어 직장, 데포, 피하, 정맥내, 요도내, 근육내, 비강내, 안과용 용액, 또는 연고일 수 있으며, 경구 경로가 바람직하다.
투여 형태는 일일 1회, 또는 일일 1회 초과, 예컨대 매일 2회 또는 3회 투여될 수 있다. 대안적으로, 투여 형태는 처방 의사에 의해 권고될 수 있는 것으로 확인되는 경우, 매일보다 덜 빈번하게, 예컨대 격일, 또는 매주 투여될 수 있다. 투여 요법은 예를 들어 치료하려는 적응증에 필요하거나 유용한 정도까지의 용량 적정을 포함하며, 이에 따라 환자의 신체가 치료에 적응하는 데 및/또는 치료와 관련된 원치 않는 부작용을 최소화하거나 피하는 데 적응할 수 있게 한다. 다른 투여 형태는 지연 또는 제어-방출 형태를 포함한다. 적합한 투여 요법 및/또는 형태는, 예를 들어, 본원에 참고로 포함된 Physicians' Desk Reference의 최신판에 제시된 것들을 포함한다.
본원에서 사용되는, 용어 "투여하는" 또는 "투여"는 화합물, 이를 포함하는 약학 조성물을 (예를 들어) 경구, 비경구(예를 들어, 정맥내), 또는 국소 투여를 포함한 임의의 허용가능한 수단 또는 경로에 의해 대상체에게 제공하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는, 용어 "치료"는 질환 또는 병리학적 상태의 징후 또는 증상을 개선하는 개입을 지칭한다. 본원에서 사용되는, 질환, 병리학적 상태 또는 증상과 관련하여 용어 "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은 치료의 임의의 관찰가능한 유익한 효과도 지칭한다. 유익한 효과는 예를 들어 취약한 대상체에서의 질환의 임상 증상의 지연된 개시, 질환의 일부 또는 모든 임상 증상의 중증도 감소, 질환의 더 느린 진행, 질환의 재발수의 감소, 대상체의 전반적인 건강 또는 웰빙의 개선에 의해, 또는 특정 질환에 특이적인 당업계에 잘 알려진 다른 파라미터에 의해 입증될 수 있다. 예방적 치료는 병리가 발생될 위험을 감소시킬 목적상, 질환의 징후를 나타내지 않거나 단지 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여되는 치료이다. 치료적 치료는 질환의 징후 및 증상이 발생된 후에 대상체에게 투여되는 치료이다.
본원에서 사용되는, 용어 "대상체"는 동물(예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간)을 지칭한다. 본원에 기재된 방법에 따라 치료될 대상체는 탈수초화, 불충분한 수초화, 또는 미엘린초의 발육저하를 수반하는 신경퇴행성 질환으로 진단된 사람, 예를 들어 다발성 경화증 또는 뇌성마비로 진단된 대상체, 또는 병태가 발병할 위험이 있는 사람일 수 있다. 진단은 당업계에 알려진 임의의 방법 또는 기술에 의해 수행될 수 있다. 당업자는 본 개시내용에 따라 치료될 대상체가 표준 검사를 받았을 수 있거나, 조사 없이, 질환 또는 병태와 관련된 하나 이상의 위험 인자의 존재로 인해 위험이 있는 것으로 확인되었을 수 있음을 이해할 것이다.
본원에서 사용되는, 용어 "유효량"은 지정된 작용제로 치료되는 대상체에서 원하는 효과를 달성하기에 충분한 상기 작용제의 양을 지칭한다. 이상적으로는, 작용제의 유효량은 대상체에서 실질적인 독성을 야기하지 않으면서 질환을 억제하거나 치료하기에 충분한 양이다. 작용제의 유효량은 치료되는 대상체, 고통의 중증도, 및 약학 조성물의 투여 방식에 의존할 것이다. 대상체에서 원하는 효과를 달성하기에 충분한 개시된 화합물의 유효량을 결정하는 방법은 본 개시내용을 고려하여 당업자에 의해 이해될 것이다.
본원에서 사용되는, 용어 "조절하다" 또는 "조절하는"은 하나 이상의 단백질 키나아제의 활성을 증가 또는 감소시키는 능력을 지칭한다. 따라서, 본 발명의 화합물은 단백질 키나아제를 본원에 기재된 화합물 또는 조성물 중 임의의 하나 이상과 접촉시킴으로써 단백질 키나아제를 조절하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물은 하나 이상의 단백질 키나아제의 억제제로서 작용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 화합물은 하나 이상의 단백질 키나아제의 활성을 자극하도록 작용할 수 있다. 추가의 실시형태에서, 본 발명의 화합물은 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 조절량을 투여함으로써 수용체의 조절을 필요로 하는 개체에서 단백질 키나아제의 활성을 조절하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는, 용어 "BTK-매개된" 또는 "BTK-조절된" 또는 "BTK-의존성" 질환 또는 장애는 BTK 또는 이의 돌연변이체가 역할을 하는 것으로 알려져 있는 임의의 질환 또는 다른 유해한 병태를 의미한다. 따라서, 본 출원의 다른 실시형태는 BTK 또는 이의 돌연변이체가 역할을 하는 것으로 알려져 있는 하나 이상의 질환을 치료하거나 이의 중증도를 감소시키는 것에 관한 것이다. 구체적으로, 본 출원은 증식성 장애 또는 자가면역 장애로부터 선택된 질환 또는 병태를 치료하거나 이의 중증도를 감소시키는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 본 출원에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
화합물
화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체가 본원에 개시된다:
[화학식 (I)]
상기 식에서,
는 또는 이고
RB는 -H 또는 -Me이고;
RC는 -CH=CH2, -C≡CH 또는 -C≡C-CH3이고;
RA는
이고, 상기 식에서
RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
RA2는 -H 또는 -F임.
일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (IA)의 구조를 갖는다:
[화학식 (IA)]
.
다른 실시형태에서, 화합물은 화학식 I-A-(S) 또는 I-A-(R)의 구조를 는다:
Figure pct00012
.
일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (IB)의 구조를 갖는다:
[화학식 (IB)]
.
다른 실시형태에서, 화합물은 화학식 I-B-(S) 또는 I-B-(R)의 구조를 갖는다:
Figure pct00014
.
일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (IC)의 구조를 갖는다:
[화학식 (IC)]
.
다른 실시형태에서, 화합물은 화학식 I-C-(S) 또는 I-C-(R)의 구조를 갖는다:
Figure pct00016
.
또 다른 실시형태에서, 화합물은 화학식 1-C-(1R,3S), 1-C-(1S,3R), 1-C-(1R,3R) 또는 1-C-(1S,3S)의 구조를 갖는다:
Figure pct00017
.
일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (ID)의 구조를 갖는다:
[화학식 (ID)]
.
다른 실시형태에서, 화합물은 화학식 1-D-(1R,3S), 1-D-(1S,3R), 1-D-(1R,3R) 또는 1-D-(1S,3S)의 구조를 갖는다:
Figure pct00019
.
일부 실시형태에서, RB는 H이다. 다른 실시형태에서, RB는 Me이다.
일부 실시형태에서, RC는 -CH=CH2이다. 다른 실시형태에서, RC는 -C≡C-CH3이다. 다른 실시형태에서, RC는 -C≡CH이다. 다른 실시형태에서, RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이다.
일부 실시형태에서, RA1은 -F이다. 다른 실시형태에서, RA1은 -Cl이다. 다른 실시형태에서, RA1은 -CH3이다. 다른 실시형태에서, RA1은 -CN이다. 다른 실시형태에서, RA1은 -F 또는 -Cl이다. 다른 실시형태에서, RA1은 -F, -Cl 또는 -CN이다. 다른 실시형태에서, RA1은 H이다.
일부 실시형태에서, RA2는 -H이다. 다른 실시형태에서, RA2는 -F이다.
일부 실시형태에서, RA1은 -Cl 또는 -CN이고; RC는 -C≡C-CH3이다. 일부 실시형태에서, RA1은 -Cl이고; RA2는 -H이고, RC는 -C≡C-CH3이다. 일부 실시형태에서, RA1은 -CN이고, RA2는 -F이고, RC는 -C≡C-CH3이다.
일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 염이다. 다른 실시형태에서, 염은 약학적으로 허용가능한 염이다. 일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 용매화물이다. 일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 수화물이다. 일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 이성질체이다. 일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 화합물은 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물의 동위원소체이다.
일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 이성질체의 혼합물로서 존재한다. 일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 이성질체의 50/50 혼합물로서 존재한다. 일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 이성질체의 혼합물로서 존재하고, 하나의 이성질체는 다른 이성질체보다 많은 양으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 라세미 혼합물로서 존재한다.
일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 단일 이성질체로서 존재한다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 시스-이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 트랜스-이성질체이다.
일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 단일 거울상이성질체로서 존재한다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 거울상이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 (1R, 3S) 이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 (1R, 3R) 이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 (1S, 3S) 이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이성질체는 (1S, 3R) 이성질체이다.
화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물도 본원에 제공된다.
추가로 단백질 키나아제를 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 단백질 키나아제의 억제 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시형태에서, 단백질 키나아제는 BTK이다.
이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 BTK 의존성 병태를 치료하는 방법도 본원에 제공된다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 혈전색전성 질환이다. 일부 실시형태에서, 자가면역 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 건선, 쇼그렌 증후군, 또는 전신 홍반성 루푸스이다. 일부 실시형태에서, 염증성 질환은 두드러기이다.
화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물의, 의약의 제조에 있어서의 용도도 본원에 제공된다. 일부 실시형태에서, 의약은 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 혈전색전성 질환의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 자가면역 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 건선, 쇼그렌 증후군, 또는 전신 홍반성 루푸스이다. 일부 실시형태에서, 염증성 질환은 두드러기이다.
일 실시형태에서, 표 1의 화합물의 구조를 갖는 화학식 (IA)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체가 제공된다.
[화학식 (IA)]
[표 1]
Figure pct00021
Figure pct00022
다른 실시형태에서, 표 2의 화합물의 구조를 갖는 화학식 (IB)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체가 제공된다.
[화학식 (IB)]
[표 2]
Figure pct00024
Figure pct00025
또 다른 실시형태에서, 표 3의 화합물의 구조를 갖는 화학식 (IC)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체가 제공된다.
[화학식 (IC)]
[표 3]
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
또 다른 실시형태에서, 표 4의 화합물의 구조를 갖는 화학식 (ID)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 또는 동위원소체가 제공된다.
[화학식 (ID)]
[표 4]
Figure pct00033
추가의 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염이다. 다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 용매화물이다.다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 수화물이다.다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 이성질체이다.다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 호변이성질체이다.다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 라세미체이다.다른 실시형태는 화학식 (I)의 화합물의 동위원소 형태이다.
추가의 실시형태는 화학식 (I)의 화합물, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이다.
질환
본원에 기재된 것은 단백질 키나아제를 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 단백질 키나아제의 억제 방법이다. 일부 실시형태에서, 단백질 키나아제는 BTK이다.
이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 BTK 의존성 병태를 치료하는 방법도 본원에 기재된다.
일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 혈전색전성 질환이다. 일부 실시형태에서, 자가면역 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 건선, 쇼그렌 증후군, 또는 전신 홍반성 루푸스이다. 일부 실시형태에서, 염증성 질환은 두드러기이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 암이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 자가면역 질환이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 염증성 질환이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 혈전색전성 질환이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 다발성 경화증이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 류마티스성 관절염이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 건선이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 쇼그렌 증후군이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 전신 홍반성 루푸스이다. 일부 실시형태에서, BTK 의존성 병태는 두드러기이다.
일부 실시형태는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물의, 의약의 제조에 있어서의 용도이다. 일부 실시형태에서, 의약은 암의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 자가면역 질환의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 염증성 질환의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 혈전색전성 질환의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 다발성 경화증의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 류마티스성 관절염의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 건선의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 쇼그렌 증후군의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 전신 홍반성 루푸스의 치료를 위한 것이다. 일부 실시형태에서, 의약은 두드러기의 치료를 위한 것이다.
따라서, BTK 활성의 억제는 알레르기성 장애 및/또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환을 치료하는 데 유용할 수 있으며, 이는 SLE, 류마티스성 관절염, 다발성 혈관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 중증 근무력증, 알레르기성 비염, 다발성 경화증(MS), 이식 거부반응, 1형 당뇨병, 막성 신장염, 염증성 장 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 갑상선염, 온난 응집소 질환, 에반스 증후군, 용혈성 요독 증후군/혈전성 혈소판 감소성 자반증, 유육종증, 쇼그렌 증후군, 말초 신경병증(예를 들어, 길랑-바레 증후군), 심상성 천포창, 및 천식을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
또한, BTK는 특정한 B 세포 암에서 B-세포 생존을 제어하는 데 역할을 하는 것으로 보고되었다. 예를 들어, BTK는 BCR-Abl-양성 B-세포 급성 림프아구성 백혈병 세포의 생존에 중요한 것으로 밝혀져 있다. 따라서, BTK 활성의 억제는 B-세포 림프종 및 백혈병의 치료에 유용할 수 있다.
본원에 기재된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 호변이성질체는 선택적으로 코르티코스테로이드, 비코르티코스테로이드, 면역억제제 및/또는 항염증제와 함께 상기 열거된 질환의 치료에 유용할 수 있다. 일 실시형태에서, 면역억제제는 인터페론 알파, 인터페론 감마, 사이클로포스파미드, 타크롤리무스, 마이코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 답손, 설파살라진, 아자티오프린, 항-CD20 작용제(예컨대, 리툭시맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 또는 벨투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 버전), 항-TNF알파 작용제(예컨대, 엔타너셉트, 인플릭시맙, 골리루맙, 아달리무맙, 또는 세르톨리주맙 페골, 이의 바이오시밀러 버전), 리간드 또는 이의 수용체에 대한 항-IL6 작용제(예컨대, 토실리주맙, 사릴루맙, 올로키주맙, 엘실리루맙, 또는 실툭시맙), 리간드 또는 이의 수용체에 대한 항-IL17 작용제(예컨대, 세쿠키누맙, 우스테키누맙, 브로달루맙, 또는 익세키주맙), 리간드 또는 이의 수용체에 대한 항-IL1 작용제(예컨대, 릴로나셉트, 카나키누맙, 또는 아나킨라), 리간드 또는 이의 수용체에 대한 항-IL2 작용제(예컨대, 바실릭시맙 또는 다클리주맙), 항-CD2 작용제, 예컨대 알레파셉트, 항-CD3 작용제, 예컨대 무로모납-cd3, 항-CD80/86 작용제, 예컨대 아바타셉트 또는 벨라타셉트, 항-스핑고신-1-포스페이트 수용체 작용제, 예컨대 핑골리모드, 항-C5 작용제, 예컨대 에쿨리주맙, 항-인테그린 알파4 작용제, 예컨대 나탈리주맙, 항-α4β7 작용제, 예컨대 베돌리주맙, 항-mTOR 작용제, 예컨대 시롤리무스 또는 에베롤리무스, 항-칼시뉴린 작용제, 예컨대 타크롤리무스, 및 항-BAFF/BlyS 작용제(예컨대, 벨리무맙, VAY736, 또는 블리시비모드), 레플루노미드 및 테리플루노미드로부터 선택된다. 바람직하게는, 면역억제제는 리툭시맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 또는 벨투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 버전이다.
화합물 합성
화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물이 당업자에게 알려진 표준 합성 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 화합물은 하기 반응식 1 내지 17에 설명된 일반적 합성 절차를 사용하여 합성될 수 있다.
화학식 (IA) 및 (1B)의 구조를 갖는 화합물은, 3-아미노 보호된 사이클로헥산-1-온 (i) 에서 개시하여, THF 및 N-페닐-비스(트리플루오로메탄설폰이미드) 중 LDA와 같은 강염기를 사용하여, 케톤을 에놀 트리플레이트 (ii)로 전환함으로써 반응식 1에 따라 합성될 수 있다. 이성질체 비닐 보로네이트 에스테르 (iii)으로의 전환은 (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)-팔라듐(II) 디클로라이드와 같은 팔라듐 촉매 및 비스(피나콜라토)디보론과 화합물 (ii)를 반응시킴으로써 달성될 수 있다. 중간체 (iv)는 아릴 할라이드와 비닐보로네이트 (iii) 사이의 팔라듐-촉매화 교차 커플링을 사용하여 형성될 수 있다. 생성물 (iv)는 탈보호되어 HATU 및 3차 아민 염기와 같은 아미드 결합 형성을 위한 표준 절차를 사용하여 아실화될 수 있는 아민 염 (v)를 제공할 수 있다. 대안적으로, 중간체 (iv)의 방향족 고리는 중간체 (vii)을 제공하기 위해 추가로 관능화될 수 있어, 상기 기재된 프로토콜을 사용하여 최종 표적 (ix)로 제조될 수 있다. 일부 경우에, 최종 표적은 목적하는 화합물의 단일 이성질체를 제공하기 위해 키랄 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
반응식 1: 화학식 (I)의 화합물의 제조를 위한 일반적 합성
Figure pct00034
보다 자세한 절차는 하기 개괄된다.
I 보호된 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-아민
아민 보호된 3-아미노사이클로헥산-1-온을 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드와 반응시켜 5-아미노 보호된 사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플레이트를 제공하고, 이후 반응식 2에 도시된 것과 같이 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란과의 반응에 의해 이를 아미노 보호된 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-아민으로 전환하였다.
반응식 2: 보호된 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-아민
II R A1 이 H 또는 Cl이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 H인 화학식 (IA)의 화합물(경로 1)
[화학식 (IA)]
4-브로모-5-플루오로-2-니트로벤조산(RA2가 H임) 또는 4-브로모-2,3-디플루오로-6-니트로벤조산(RA2가 F임)을 이소-프로페닐 마그네슘 브로마이드와의 반응에 의해 인돌로 전환한다. 산 기를 아미드화하고, 이후 4-브로모 인돌을 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-아민과 커플링한다. RA1을 선택적으로 NCS와 같은 클로린화제와의 반응에 의해 H 또는 Cl로 전환한다. 적절하게 임의의 아민 보호기를 제거하고, 아민을 반응식 3에 따라 최종 화학식 (IA)의 화합물을 제공하기 위해 RC-COOH와 반응시킨다.
반응식 3: 화학식 (IA)의 화합물, 경로 1
Figure pct00037
III R A1 이 H 또는 Cl이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 H인 화학식 (IA)의 화합물(경로 2)
대체 합성에서, 1,4-디브로모-2-플루오로벤젠(RA2가 H임) 또는 1,4-디브로모-2,3-디플루오로벤젠(RA2가 F임)을 6 위치에서 아미노화하고, 5 위치에서 요오드화한다. 프로핀과의 반응은 요오도를 프로피닐 유도체로 전환한 후, 고리화하여 인돌을 제공한다. 7-브로모를 카르복시로 전환한 후 아미드로 전환한다. 경로 1과 같이, 이후 4-브로모 인돌을 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-아민과 커플링한다. NCS와 같은 적절한 클로린화제와의 반응에 의해 RA1을 선택적으로 H 또는 Cl로부터 전환하고, 적절하게 임의의 보호기를 제거하고, 아민을 반응식 4에 따라 RC-COOH와 반응시켜 최종 화학식 (IA)의 화합물을 제공한다.
반응식 4: 화학식 (IA)의 화합물, 경로 3
Figure pct00038
IV R A1 이 Me이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 H인 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물
Figure pct00039
아민 보호된 (S)-3-아미노사이클로헥산-1-온을 소듐 비스(트리메틸실릴) 아미드(NAHMDS)의 존재 하에서 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드와 반응시켜 3- 및 5-아민 보호된 사이클로헥세닐 트리플레이트 이성질체의 혼합물을 제공한다. 이들을 활성화하고 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(RA2가 H임) 또는 4-브로모-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(RA2가 F임)과 커플링한다. 이후, 니트릴 기를 아미드로 전환하고, 필요에 따라 임의의 보호기의 제거 후, 아민을 RC-COOH와 반응시켜 반응식 5에 따라 최종 화합물의 혼합물을 제공한다. 키랄 크로마토그래피는 개별 이성질체를 제공한다.
반응식 5: 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물
Figure pct00040
V R A1 이 Me이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 H인 화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물
Figure pct00041
화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물을, 아민 보호된 (S)-3-아미노사이클로헥산-1-온 대신 아민 보호된 (R)-3-아미노사이클로헥산-1-온에서 개시하여, 상기 및 반응식 5에 기재된 바와 같이 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물과 유사한 방식으로 제조한다.
반응식 6: 화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물
VI R A1 이 Me이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 Me인 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물
Figure pct00043
상기 기재된 바와 같이, 활성화된 (S)-아민 보호된 사이클로헥센을 보호된 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(RA2가 H임) 또는 4-브로모-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴 (RA2가 F임)과 커플링한다. 메틸화 후, 인돌을 탈보호하고, 니트릴 기를 아미드로 전환한다. 필요에 따라 임의의 보호기의 제거 후, 아민을 RC-COOH와 반응시켜 반응식 7에 따라 최종 화합물의 혼합물을 제공한다. 키랄 크로마토그래피는 개별 이성질체를 제공한다.
반응식 7: RB가 Me인 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물
Figure pct00044
VII R A1 이 Me이고; R A2 가 H 또는 F이고, R B 가 Me인 화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물
Figure pct00045
RB가 Me인 화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물을, (S) 대신 (R) 이성질체로 개시하여, 상기 및 반응식 7에 기재된 바와 같이, RB가 Me인 화학식 I-A-(S) 또는 I-B-(S)의 화합물과 유사한 방식으로 제조한다.
반응식 8: RB가 Me인 화학식 I-A-(R) 또는 I-B-(R)의 화합물
Figure pct00046
VIII 화학식 I-C의 화합물
화학식 I-C의 화합물을 하기 반응식 9에 따라 제조한다. 3-아미노 보호된 사이클로헥산-1-온을 페닐 트리플이미드로 처리하여 3-OTf 사이클로헥센-1-아민을 제공한 후, 이를 활성화하고 RA 브로마이드와 커플링한다. 사이클로헥센을 사이클로헥산으로 환원시키고, 아미노 보호 기를 제거하고, RC 산을 이용한 처리에 의해 RC를 도입한다.
반응식 9: 화학식 (IC)의 화합물
Figure pct00047
RA1 기(예를 들어, 할로겐, CN)의 도입은 적절한 작용제로의 아민 보호된 3-RA-사이클로헥산-1-아민의 처리에 의해 발생하여 반응식 10에 따라 3-치환된 인돌을 제공할 수 있다.
반응식 10: RA1 치환기의 도입
Figure pct00048
반응식 11에 도시된 대체 경로에서, 활성화된 아미노-보호된 사이클로헥센을 RA 브로마이드와 커플링한 후, 사이클로헥산으로 환원, 아민 탈보호 및 RC 아미드 형성을 수행할 수 있다.
반응식 11: 화학식 (IC)의 화합물, 대체 합성 경로
Figure pct00049
화학식 I-C의 화합물을 반응식 12에 따라 초임계 유체 크로마토그래피(SFC), 키랄 HPLC 등과 같은 일반적 분리 기술에 의해 개별 이성질체로 분리할 수 있다.
반응식 12: 화학식 (IC)의 화합물: 이성질체의 분리
Figure pct00050
IX 화학식 I-D의 화합물
화학식 I-D의 화합물을 하기 반응식 13에 따라 제조한다. 3-아미노 보호된 사이클로펜탄-1-온을 페닐 트리플이미드로 처리하여 3-OTf 사이클로펜텐-1-아민을 제공한 후, 이를 활성화하고 RA 브로마이드와 커플링한다. 사이클로헥센을 사이클로헥산으로 환원시키고, 아미노 보호 기를 제거하고, RC 산을 이용한 처리에 의해 RC를 도입한다.
반응식 13: 화학식 (ID)의 화합물
Figure pct00051
RA1 기(예를 들어, 할로겐, CN)의 도입은 적절한 작용제로의 아민 보호된 3-RA-사이클로헥산-1-아민의 처리에 의해 발생하여 반응식 14에 따라 3-치환된 인돌을 제공할 수 있다.
반응식 14: RA1 치환기의 도입
Figure pct00052
반응식 15에 도시된 대체 경로에서, 활성화된 아미노-보호된 사이클로펜텐을 RA 브로마이드와 커플링한 후, 사이클로펜탄으로 환원, 아민 탈보호 및 RC 아미드 형성을 수행할 수 있다.
반응식 15: 화학식 (ID)의 화합물, 대체 합성 경로
Figure pct00053
인돌 고리 상의 7-카르복사미드 관능기의 도입은 예를 들어 파킨스 촉매([PtH{(PMe2O)2H}(PMe2OH)])로의 처리에 의해 니트릴 기의 전환으로 달성될 수 있다. H에서 메틸로의 RB의 전환을 메틸 요오다이드와 같은 메틸화제로의 처리에 의해 수행할 수 있으며, 이는 반응식 16을 참조한다.
반응식 16: 카르복사미드 형성 및 RB = Me의 도입
Figure pct00054
화학식 I-D의 화합물을 반응식 17에 따라 초임계 유체 크로마토그래피(SFC), 키랄 HPLC 등과 같은 일반적 분리 기술에 의해 개별 이성질체로 분리할 수 있다.
반응식 17: 화학식 (IC)의 화합물: 이성질체의 분리
Figure pct00055
본원에 기재된 반응, 공정 및 합성 방법은 하기 실험 섹션에 기재된 구체적인 조건으로 제한되지 않으며, 오히려 당업자에 대한 지침으로서 의도된다. 예를 들어, 반응은 필요한 변환(들)을 수행하기에 적합한 임의의 용매, 또는 다른 시약 중에서 수행될 수 있다. 일반적으로, 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도(즉, 동결 온도 내지 비등 온도 범위일 수 있는 온도)에서 반응물, 중간체 또는 생성물과 실질적으로 비반응성인 양성자성 또는 비양성자성 용매이다. 소정의 반응은 하나의 용매 또는 하나 초과의 용매의 혼합물 중 수행될 수 있다. 특정 반응에 따라, 반응 후 특정 후처리에 적합한 용매가 사용될 수 있다.
달리 지시되지 않는 한, 질량 분석(MS), 액체 크로마토그래피-질량 분석(LCMS), NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술, 및 약리학의 통상적인 방법이 사용된다. 예를 들어, 문헌[March's Advanced Organic Chemistry, 7th Edition, John Wiley and Sons, Inc (2013)]에 기재된 것들과 같은 표준 유기 화학 기술을 사용하여 화합물이 제조된다. 본원에 기재된 합성 변환을 위한 대안적인 반응 조건, 예컨대 용매, 반응 온도, 반응 시간의 변경뿐만 아니라, 상이한 화학 시약 및 다른 반응 조건이 사용될 수 있다. 필요에 따라, 적절한 보호기의 사용이 필요할 수 있다. 상기 기의 도입 및 절단은 문헌[Peter G. M. Wuts and Theodora W. Green, Protecting Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, Wiley-Interscience (2006)]에 기재된 표준 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 모든 개시 물질 및 시약은 상업적으로 이용가능하거나 용이하게 제조된다.
실시예
하기 실시예는 단지 예시적인 목적으로만 제공되며, 본원에 제공된 청구범위의 범주를 제한하지 않는다. 본 발명의 바람직한 실시형태가 본원에 제시되어 있고 기재되어 있지만, 상기 실시형태가 단지 예로서 제공된다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 이제 당업자는, 본 발명을 벗어나지 않고서 많은 변형, 변경, 및 치환이 생각날 것이다. 본원에 기재된 본 발명의 실시형태에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는 데 사용될 수 있음이 이해되어야 한다. 하기 청구범위는 본 발명의 범주를 정의하고 이러한 청구범위 및 이의 균등물의 범주 내에 있는 방법 및 구조는 그것에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
실시예 1
하기의 합성
라세미 4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 1-A-( rac ))
(S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 1-A-( S ))
및
(R)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(1-A-( R ))
Figure pct00056
단계 1: 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복실산
기계적 교반기, 온도계, 추가 깔때기, 및 버블러가 장착된 5 L 4구 플라스크에 THF(1.1 L) 이후 4-브로모-5-플루오로-2-니트로벤조산(100.0 g, 0.379 몰, 1.0 eq.)을 채웠다. 생성된 용액을 5분 동안 N2로 플러싱하고, EtOH-드라이 아이스 배쓰에서 -70℃ 미만으로 냉각시켰다. 이소프로페닐마그네슘 브로마이드 용액(THF 중 0.5 M, 3.03 L, 1.52 몰, 4.0 eq.)을 적가하고, 첨가 중 내부 온도는 -65℃ 미만으로 유지하였다. 이후, 반응 혼합물을 -70℃에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 반응을 포화 NH4Cl 수용액(200 mL), 이후 시트르산 수용액(1 L, 20 중량%)을 첨가하여 켄칭하였다. 냉각조를 제거하고, 반응을 0℃ 초과로 가온하였다. EtOAc(1 L)를 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc(200 mL × 2)로 추출하고, 조합된 유기 추출물을 감압 하에서 농축하였다. 생성된 황색 잔류물을 EtOAc(1.5 L)에서 재용해시키고, 포화 NH4Cl 수용액(100 mL) 및 염수로 세척하고, MgSO4를 통해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 미정제 생성물을 실온(20℃)에서 16시간 동안 DCM(300 mL)으로 분쇄하였다. 생성물을 진공 여과에 의해 수집하고, 저온 DCM(20 mL)으로 세정하고, IR 램프 하에서 건조시켰다. 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복실산을 황갈색 고체로서 수득하였다(38.0 g, 0.140 몰, 37% 수율). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 13.36 (brs, 1H), 11.27 (s, 1H), 7.48 (d, J = 9.8 ㎐, 1H), 6.26 (dd, J = 2.3, 1.1 ㎐, 1H), 2.62 - 2.15 (m, 3H).
단계 2: 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복실산 아미드
DMF(440 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복실산(87.5 g, 0.322 몰, 1.0 eq.)의 용액을 얼음물 배쓰에서 0 내지 5℃로 냉각하였다. NH4Cl(34.4 g, 0.644 몰, 2.0 eq.)을 한 번에 첨가한 후 iPr2NEt(124.8 g, 0.966 몰, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 생성된 용액에 10분에 걸쳐 조금씩 고체 HATU(146.8 g, 0.386 몰, 1.2 eq.)를 첨가하였다. 반응은 약하게 발열성이었고, 내부 온도는 첨가 중 15℃ 미만으로 유지하였다. 이후, 냉각 배쓰를 제거하고, 반응을 실온에서 추가 2시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석은 반응 완료를 나타냈다. 갈색계열 반응 용액을 5 L 플라스크로 옮기고 얼음물(약 3 L)을 서서히 첨가하였다. 생성된 황갈색 침전물을 진공 여과에 의해 수집하고, 물(500 mL)로 세척하고, EtOAc(1.5 L)에서 재용해시키고, 이를 추가로 염수로 세척하고, MgSO4를 통해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 미정제 생성물을 실온에서 1시간 동안 DCM(200 mL)과 EtOAc(20 mL)의 혼합물로 분쇄하여, 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복실산 아미드를 건조 후의 황갈색 분말로서 수득하였다(73.2 g, 0.270몰, 84% 수율). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.29 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.61 (d, J = 10.4 ㎐, 1H), 7.59 (brs, 1H), 6.21 (dd, J = 2.3, 1.1 ㎐, 1H), 3.34 (s, 2H), 2.44 (d, J = 0.9 ㎐, 3H).
단계 3: 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트
Figure pct00059
THF(300 mL) 중 tert-부틸 (3-옥소사이클로헥실)카르바메이트(20.00 g, 93.76 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드(43.55 g, 121.91 mmol)의 용액에 N2 하에서 -78℃에서 LDA(THF 중 2 M, 103 mL, 206 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 염화암모늄 수용액(500 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(30.0 g)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, CDCl3) δ 5.83-5.71 (m, 1H), 4.68-4.36 (m, 1H), 4.06-3.85 (m, 1H), 2.79-2.61 (m, 1H), 2.39-2.19 (m, 3H), 1.90-1.76 (m, 1H), 1.68-1.55 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
단계 4: tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00060
디옥산(300 mL) 중 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(30.00 g, 86.87 mmol)와 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(22 g, 86.87 mmol)과 아세트산칼륨(25.58 g, 260.62 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(3.18 g, 4.34 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(500 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 생성된 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 15%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(8.5 g)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, CDCl3) δ 6.61-6.49 (m, 1H), 4.64-4.40 (m, 1H), 3.85-3.63 (m, 1H), 2.60-2.43 (m, 1H), 2.32-2.17 (m, 2H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.72-1.60 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.25 (s, 12H). ESI-MS [M+H-Boc]+ (C17H30BNO4)에 대한 계산치 224.24 실측치: 224.15.
단계 5: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00061
디옥산(80 mL) 및 물(20 mL) 중 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(6.56 g, 20.29 mmol)와 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(5 g, 18.44 mmol)와 탄산칼륨(7.65 g, 55.33 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(675 mg, 0.92 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(200 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(150 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 45%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(7.0 g)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.91 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.51-7.36 (m, 2H), 6.96-6.84 (m, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.84-5.77 (m, 1H), 3.76-3.56 (m, 1H), 2.44-2.24 (m, 7H), 1.93-1.81 (m, 1H), 1.65-1.45 (m, 1H), 1.40 (s, 9H). ESI-MS [M-H]- (C21H26FN3O3)에 대한 계산치 386.20 실측치 386.15
단계 6:tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일) 카르바메이트
Figure pct00062
DMF(50 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(7.0 g, 18.07 mmol)의 용액에 0℃에서 N-클로로석신이미드(2.65 g, 19.88 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(200 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 50%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일 -3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(7.0 g)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-tBu]+ (C21H25ClFN3O3)에 대한 계산치 366.16, 368.15 실측치: 366.30, 368.30.
단계 7: 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00063
tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(7 g, 16.59 mmol)와 염화수소(디옥산 중 4 M, 70 mL)의 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(6.0 g, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H17ClFN3O)에 대한 계산치 322.10, 324.10 실측치: 322.35, 324.35.
단계 8: 라세미 4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 1-A-(rac))
Figure pct00064
DMF(60 mL) 중 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(6.0 g, 16.75 mmol)의 혼합물에 HATU(7.64 g, 20.1 mmol), 부트-2-이노산(1.69 g, 20.1 mmol) 및 DIEA(10.82 g, 83.75 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(200 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(100 mL × 2) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 50%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(3.5 g)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.32 (s, 1H), 8.61-8.50 (m, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.55-7.52 (m, 2H), 5.60 (s, 1H), 4.14-3.93 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.35-2.22 (m, 4H), 1.94 (s, 3H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.68-1.47 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 388.11, 390.11, 실측치: 388.05, 390.05.
단계 9: (S)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 및 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 (화합물 1-A-(S) 및 1-A-(R))
Figure pct00065
4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(3.5 g, 9 mmol)를 하기 조건으로 Prep-SFC에 의해 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK AD-H, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: MeOH(0.1% 2 M NH3-MeOH); 유량: 70 mL/분; 구배: 30% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 220 nm;
체류 시간 = 3.69분
연황색 고체로서 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 (1.02 g, 40%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.32 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.60-7.48 (m, 2H), 5.61 (s, 1H), 4.14-3.93 (m, 1H), 2.45-2.20 (m, 7H), 2.05-1.80 (m, 4H), 1.70-1.45 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 388.11, 390.11, 실측치: 388.10, 390.10.
체류 시간 = 4.13분
회백색 고체로서 (S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 (1.13 g, 41%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.31 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.61-7.47 (m, 2H), 5.61 (s, 1H), 4.14-3.93 (m, 1H), 2.45-2.20 (m, 7H), 2.05-1.80 (m, 4H), 1.70-1.45 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 388.11, 390.11, 실측치: 388.10, 390.10.
실시예 2
하기의 합성
라세미 4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-( rac ))
(S)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-( S ))
및
(R)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-( R ))
Figure pct00066
단계 1: 1,4-디브로모-2,3-디플루오로-5-니트로벤젠
Figure pct00067
농축된 황산(200 mL) 중 1,4-디브로모-2,3-디플루오로벤젠(25.0 g, 91.95 mmol)의 용액에 0℃에서 질산칼륨(11.0 g, 108.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물(1 L)에 붓고, 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 여과 케이크를 물로 세척하고, 감압 하에서 건조시켜 1,4-디브로모-2,3-디플루오로-5-니트로벤젠(27.0 g)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 8.47 (dd, J = 6.0, 2.4 ㎐ 1H).
단계 2: 2,5-디브로모-3,4-디플루오로아닐린
Figure pct00068
아세트산(260 mL) 중 1,4-디브로모-2,3-디플루오로-5-니트로벤젠(27.0 g, 85.21 mmol)의 용액에 철 분말(47.6 g, 852.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 5시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 얼음물(500 mL)에 붓고, 재여과하였다. 여과 케이크를 물(300 mL)로 세척하고, 감압 하에서 건조시켜 2,5-디브로모-3,4-디플루오로아닐린(23.0 g, 94% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 6.88 (dd, J = 6.0, 2.4 ㎐ 1H), 5.74 (brs, 2H).
단계 3: 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-요오도아닐린
Figure pct00069
아세트산(250 mL) 중 2,5-디브로모-3,4-디플루오로아닐린(23.0 g, 80.17 mmol)의 용액에 N-요오도석신이미드(19.84 g, 88.18 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 후, 얼음물(500 mL)에 붓고, 여과하였다. 여과 케이크를 물(100 mL)로 세척하고, 감압 하에서 건조시켰다. 미정제 생성물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 5%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-요오도아닐린(30.0 g, 90%)을 회백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 5.63 (s, 2H). ESI-MS [M-H]- (C6H2Br2F2IN)에 대한 계산치 409.76, 411.75, 413.75 실측치: 409.75, 411.75, 413.70.
단계 4: 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-(프로프-1-인-1-일)아닐린
Figure pct00070
트리에틸아민(365 mL) 중 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-요오도아닐린(30.0 g, 72.68 mmol)과 구리(I) 요오다이드(2.77 g, 14.54 mmol)와 Pd(PPh3)2Cl2(5.12 g, 7.27 mmol)의 혼합물에 질소 하에서 프로프-1-인(THF 중 1 M, 364 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 4시간 동안 밀봉된 플라스크에서 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(300 ml)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(300 ml × 3)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-(프로프-1-인-1-일)아닐린(20.0 g, 84%)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 5.79 (s, 2H), 2.18 (s, 3H). ESI-MS [M-H]- (C9H5Br2F2N)에 대한 계산치 321.88, 323.87, 325.87 실측치: 322.00, 324.00, 326.00
단계 5: 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌
Figure pct00071
아세토니트릴(400 mL) 중 2,5-디브로모-3,4-디플루오로-6-(프로프-1-인-1-일)아닐린(20.0 g, 61.55 mmol)과 PdCl2(1.09 g, 6.15 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 3회 재충전한 후, 5시간 동안 85℃에서 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌(17.0 g, 85%)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 11.75 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 2.41 (s, 3H). ESI-MS [M-H]- (C9H5Br2F2N)에 대한 계산치 321.88, 323.87, 325.87 실측치: 321.80, 323.80, 325.80
단계 6: 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)-메틸)-1H-인돌
Figure pct00072
THF(200 mL) 중 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌(10.0 g, 30.77 mmol)의 교반된 용액에 수소화나트륨(1.60 g, 40.01 mmol, 60%)을 0℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 1시간 동안 교반 후, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드(7.70 g, 46.16 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 16시간 동안 25℃에서 교반하고, 물(200 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌(12.3 g, 87%)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 6.42 (s, 1H), 5.78 (s, 2H), 3.55 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 2.47 (s, 3H), 0.83 (t, J = 8.1 ㎐, 2H), -0.08 (s, 9H).
단계 7: 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르복실산
Figure pct00073
THF(130 mL) 중 4,7-디브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌(12.3 g, 27.03 mmol)의 용액에 -70℃에서 질소 하에서 n-부틸리튬(n-헥산 중 2.5 M, 13 mL, 32.5 mmol)을 첨가하였다. 이 온도에서 0.5시간 동안 그리고 0℃에서 0.5시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 -70℃로 냉각시키고, 30분 동안 이산화탄소로 버블링하였다. 1.5시간 동안 25℃에서 교반 후, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄(100 mL × 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르복실산(11.4 g, 미정제)을 황색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C16H20BrF2NO3Si)에 대한 계산치 418.04, 420.03 실측치: 417.95, 419.95.
단계 8: 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00074
DMF(100 mL) 중 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인돌-7-카르복실산(11.4 g, 27.12 mmol)과 염화암모늄(2.18 g, 40.68 mmol)의 교반된 혼합물에 0℃에서 HATU(12.38 g, 32.55 mmol) 및 DIPEA(17.53 g, 135.61 mmol)를 첨가하였다. 16시간 동안 25℃에서 교반 후, 반응 혼합물을 물(300 ml)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(300 ml × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(200 ml × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 50%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르복사미드(6.3 g, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 8.34 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.50 (s, 2H), 3.42 (t, J = 8.1 ㎐, 2H), 2.46 (s, 3H), 0.81 (t, J = 8.1 ㎐, 2H), -0.06 (s, 9H). ESI-MS [M+H]+ (C16H21BrF2N2O2Si)에 대한 계산치 419.05, 421.05 실측치: 419.20, 421.20
단계 9: 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00075
THF(60 mL) 중 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르복사미드(6.3 g, 15.02 mmol)와 TBAF(THF 중 1 M, 150 mL, 150.2 mmol)와 에탄-1,2-디아민(30 mL, 450.6 mmol)의 혼합물을 40시간 동안 75℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 2 M 염산으로 pH 4로 산성화하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물(100 mL)로 세척하고, 감압 하에서 건조시키여 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(3.5 g, 80%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 11.38 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 2.40 (s, 3H). ESI-MS [M+H]+ (C10H7BrF2N2O)에 대한 계산치 288.97, 290.97 실측치: 288.95, 290.95.
단계 10: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트
디옥산(16 mL) 및 물(4 mL) 중 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(1.5 g, 5.19 mmol)와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.84 g, 5.71 mmol)와 탄산칼륨(2.9 g, 20.76 mmol,)과 Pd(dppf)Cl2(378 mg, 0.519 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 90℃에서 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(60 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 30%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.6 g, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H25F2N3O3)에 대한 계산치 406.19 실측치: 406.20.
단계 11: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥스-3-엔-1-일) 카르바메이트
Figure pct00077
DMF(6 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(300 mg, 0.74 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 NCS(99 mg, 0.74 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하고, 물(30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 35%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일 -3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(270 mg, 83%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-tBu]+ (C21H24ClF2N3O3)에 대한 계산치 384.15, 386.15 실측치: 384.20, 386.20
단계 12: 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00078
MeOH(1 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(230 mg, 0.52 mmol)의 교반된 용액에 디옥산(3 mL) 중 4 M 염화수소를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반한 후, 진공 하에서 농축하여, 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(190 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H16ClF2N3O)에 대한 계산치 340.09, 342.09 실측치: 340.25, 342.25.
단계 13: 라세미 4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-(rac))
Figure pct00079
DMF(5 mL) 중 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(160 mg, 0.43 mmol)의 교반된 용액에 2-부티노산(36 mg, 0.43 mmol), HATU(210 mg, 0.55 mmol) 및 DIEA(275 mg, 2.13 mmol, 0.35 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 물(30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하여, 4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(120 mg, 69%)를 백색 고체로서 수득하였다: 컬럼: XBridge Prep C18 OBD 컬럼, 19 × 150 mm 5 um; 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 25 mL/분; 구배: 10분 내에 28% B → 43% B; 220 nm; RT1: 10.88분. ESI-MS [M+H]+ (C20H18ClF2N3O2)에 대한 계산치 406.11, 40811 실측치: 406.05, 408.05.
단계 14: (S)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-(S)) 및 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 2-A-(R))
Figure pct00080
4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(120 mg)를 하기 조건으로 키랄-Prep-HPLC에 의해 분리하였다: 컬럼: (R, R)-WHELK-O1-Kromasil, 2.12 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 24분 내에 30% B → 30% B; 220/254 nm.
체류 시간 = 17.654분
회백색 고체로서 (S)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(49.9 mg, 42% 수율). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 8.65-8.50 (m, 1H), 7.97-7.81 (m, 2H), 5.66 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 2.40-2.18 (m, 7H), 1.94 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.66-1.46 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H18ClF2N3O2)에 대한 계산치 406.11, 408.11 실측치: 406.10, 408 10.
체류 시간 = 20.658분
회백색 고체로서 (R)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (S)-4-(5-(부트-2-인아미도) 사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(51.2 mg, 43%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.40 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.97-7.82 (m, 2H), 5.66 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.33-2.10 (m, 4H), 1.94 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.64-1.50 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H18ClF2N3O2)에 대한 계산치 406.11, 408.11 실측치: 406.10, 408 10.
실시예 3
하기의 합성
(S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 3-A-( S ))
및
(S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 3-B-( S ))
Figure pct00081
단계 1: (S)-5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 및
(S)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트
Figure pct00082
THF(150 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-옥소사이클로헥실)카르바메이트(10.0 g, 46.89 mmol)와 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(21.8 g, 60.95 mmol)의 혼합물에 -78℃에서 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(THF 중 2 M, 58.6 mL, 117.2 mmol)를 적가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(300 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(5%)로 용출하는 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, (S)-5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트와 (S)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(17.5 g, 미정제)의 혼합물을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 2:tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00083
디옥산(250 mL) 중 (S)-5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트와 (S)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(17.5 g, 미정제)와 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-디옥사보롤란)(12.9 g, 50.68 mmol)과 Pd(dppf)Cl2·DCM(4.14 g, 5.07 mmol)과 아세트산칼륨(14.92 g, 152.03 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(500 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(5%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(15.0 g, 미정제)의 혼합물을 무색 오일로서 제공하였다.
단계 3: tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00084
1,4-디옥산(30 mL) 및 물(8 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(3.1 g, 7.8 mmol)와 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(2.5 g, 9.36 mmol)과 Pd(dppf)Cl2·DCM(764 mg, 0.94 mmol)과 인산칼륨(3.88 g, 28.08 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하고, 3시간 동안 90℃에서 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(60 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(60 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(4.0 g, 미정제)의 혼합물을 갈색 오일로서 제공하였다.
ESI-MS [M-H]- (C22H26FN3O2)에 대한 계산치 382.20, 실측치: 382.20
단계 4 : tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00085
에탄올(40 mL) 및 물(10 mL) 중 tert-부틸 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(4.0 g, 미정제)의 혼합물에 파킨스 촉매(445 mg, 1.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 90℃에서 교반하고, 냉각시키고, 물(60 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(60 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(45%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(2.58 g)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS [M+H]+ (C22H28FN3O3)에 대한 계산치 402.21, 실측치: 402.35
단계 5: (S)-4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드 및 (S)-4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00086
tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(2.58 g, 6.43 mmol)와 염화수소(1,4-디옥산 중 4.0 M, 20 mL)의 혼합물을 1시간 동안 20℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (S)-4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드와 (S)-4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드 (2.15 g, 미정제)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C17H20FN3O)에 대한 계산치 302.16, 실측치: 302.15.
단계 6 : (S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 3-A-(S)) 및 (S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 3-B-(S))
Figure pct00087
DMF(30 mL) 중 (S)-4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드와 (S)-4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(2.15 g, 미정제)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(3.63 g, 9.55 mmol), 부트-2-이노산(642 mg, 7.64 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.11 g, 31.82 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(60 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(40 mL × 3) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(60%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 1.7 g의 혼합 이성질체를 수득하였다.
혼합물(1.7 g)을 하기 조건으로 Prep-SFC에 의해 분리하였다: 컬럼: GreenSep Basic, 3 × 15 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: IPA(0.5% 2 M NH3-MeOH); 유량: 80 mL/분; 구배: 40% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 220 nm.
체류 시간 = 5.3분 화합물 3-B-(S)
백색 고체로서 (S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(345 mg); 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.71 (s, 1H), 8.56 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.54-7.27 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 3.98 (s, 1H), 2.46-2.15 (m, 7H), 2.15-1.99 m, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.91-1.82 (m, 1H), 1.63-1.48 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H22FN3O2)에 대한 계산치 368.17, 실측치: 368.35.
체류 시간 = 6.32분 화합물 3-A-(S)
백색 고체로서 (S)-4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(825.2 mg). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.72 (s, 1H), 8.75 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.54-7.27 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 4.55-4.33 (m, 1H), 2.46-2.15 (m, 7H), 2.15-1.99 m, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.91-1.82 (m, 1H), 1.80-1.48 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H22FN3O2)에 대한 계산치 368.17, 실측치: 368.35.
실시예 4
하기의 합성
(S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(5-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 4-A-( S ))
및
(S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(3-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 4-B-( S ))
Figure pct00088
단계 1: 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르보니트릴
Figure pct00089
THF(10 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(1.00 g, 3.74 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에서 0℃에서 수소화나트륨(225 mg, 5.63 mmol, 60%)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반 후, 0℃에서 2-(클로로메톡시)에틸-트리메틸실란(1.25 g, 7.49 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(50 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(30 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(30 mL × 2) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르보니트릴(1.50 g, 미정제)을 갈색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 7.69 (d, J = 9.0 ㎐, 1H), 5.69 (s, 2H), 3.53 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 0.82 (t, J =7.8 ㎐, 2H), -0.10 (s, 9H).
단계 2: tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)-에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및
tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00090
THF(8 mL) 및 물(2 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-카르보니트릴(1.50 g, 3.77 mmol)과, tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트의 혼합물(실시예 3, 단계 2 참조; 1.46 g, 4.53 mmol)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2(276 mg, 0.38 mmol) 및 인산칼륨(2.40 g, 11.32 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, 질소로 3회 동안 재충전하고, 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(40 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)-에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(1.40 g, 72%)를 연황색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C28H40FN3O3Si)에 대한 계산치 512.28, 실측치: 512.20.
단계 3: tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트
Figure pct00091
DMF(15 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.30 g, 2.53 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에서 0℃에서 수소화나트륨(202 mg, 5.06 mmol, 60%)을 첨가하였다. 30분 동안 교반 후, 요오도메탄(1.08 g, 7.59 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(60 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 3) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 15%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트(1.10 g, 82%)의 혼합물을 연황색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C29H42FN3O3Si)에 대한 계산치 528.30, 실측치: 528.30.
단계 4: tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트
Figure pct00092
THF(10 mL) 중의 상기 단계 3으로부터의 혼합물(1.10 g, 2.08 mmol)의 용액에 25℃에서 TBAF(5.45 g, 20.84 mmol) 및 디에틸아민(3.05 g, 41.69 mmol)을 첨가하였다. 70℃에서 16시간 동안 교반 후, 냉각된 혼합물을 물(70 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 25%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트(340 mg, 41%)의 혼합물을 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C23H28FN3O3)에 대한 계산치 398.22, 실측치: 398.35.
단계 5: tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트 및 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트
Figure pct00093
에탄올(5 mL) 및 물(5 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(340 mg, 0.86 mmol)의 혼합물에 파킨스 촉매(18 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(30 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 60%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)(메틸)카르바메이트와 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)(메틸)카르바메이트(270 mg, 76%)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C23H30FN3O3)에 대한 계산치 416.23, 실측치: 416.25.
단계 6: (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(5-(메틸아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드 및 (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(3-(메틸아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00094
상기 단계 5로부터의 화합물(270 mg, 0.65 mmol)과 염화수소(1,4-디옥산 중 4 M, 5 mL)의 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여, (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(5-(메틸아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드와 (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(3-(메틸아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(240 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS [M+H]+ (C18H22FN3O)에 대한 계산치 316.17, 실측치: 316.15.
단계 7: (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(5-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 4-A-(S)) 및 (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(3-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 4-B-(S))
Figure pct00095
DMF(5 mL) 중 상기 6으로부터의 화합물(240 mg, 0.68 mmol)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(391 mg, 1.02 mmol), 부트-2-이노산(69 mg, 0.82 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(441 mg, 3.41 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(20 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(20 mL × 3) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하여, 혼합물을 수득하였다: 컬럼: XBridge Shield RP18 OBD 컬럼, 30 × 150 mm 5 um; 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1%NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 7분 내에 34% B → 54% B, 254 nm; RT: 6.95분.
혼합물을 하기 조건으로 Prep-SFC에 의해 추가로 분리하였다: 컬럼: CHIRAL ART Cellulose-SB, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.1% FA), 이동 상 B: EtOH; 유량: 20 mL/분; 구배: 25분 내에 10% B → 10% B; 254 nm.
체류 시간 = 34.34분 화합물 4-B-(S)
백색 고체로서 (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(3-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(19.6 mg, 7%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.72 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.53-7.31 (m, 2H), 5.62 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 4.79-4.46 (m, 1H), 3.10-3.05 (m, 1H), 2.79 (s, 2H), 2.69-2.55 (m, 0.6H), 2.45-2.30 (m, 5.4H), 2.24-2.10 (m, 3.5H), 2.08-1.96 (m, 3.5H), 1.95-1.68 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C22H24FN3O2)에 대한 계산치 382.19, 실측치: 382.10
체류 시간 = 40.95분 화합물 4-A-(S)
백색 고체로서 (S)-5-플루오로-2,3-디메틸-4-(5-(N-메틸부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-1H-인돌-7-카르복사미드(54.8 mg, 21%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.75 (d, J = 8.8 ㎐, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.53-7.31 (m, 2H), 5.52-5.30 (m, 1H), 5.21-5.02 (m, 1H), 3.10-3.05 (m, 1H), 2.81-2.70 (m, 2H), 2.45-2.23 (m, 4H), 2.29-2.19 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 3H), 2.09-2.01 (m, 3H), 1.97-1.63 (m,4H). ESI-MS [M+H]+ (C22H24FN3O2)에 대한 계산치 382.19, 실측치: 382.10
실시예 5
하기의 합성
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
(화합물 5-B-(rac))
(S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
(화합물 5-B-( S ))
및
(R)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
(화합물 5-B-( R ))
Figure pct00096
단계 1: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00097
디옥산(20 mL) 및 물(5 mL) 중 상기 실시예 3, 단계 2로부터의 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(1.00 g, 3.09 mmol)와 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(704 mg, 2.58 mmol)와 탄산칼륨(1.07 g, 7.73 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(189 mg, 0.26 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(60 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 15%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(700 mg, 70%)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.91 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.51-7.36 (m, 2H), 6.96-6.84 (m, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.84-5.77 (m, 1H), 3.76-3.56 (m, 1H), 2.44-2.24 (m, 7H), 1.93-1.81 (m, 1H), 1.65-1.45 (m, 1H), 1.40 (s, 9H). ESI-MS [M-H]- (C21H26FN3O3)에 대한 계산치 386.20 실측치 386.15
단계 2: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00098
DMF(10 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 및 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(350 mg, 0.90 mmol)의 용액에 0℃에서 N-클로로석신이미드(133 mg, 0.99 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 물(30 ml)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 ml × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(30 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 60%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(280 mg, 73%)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-tBu]+ (C21H25ClFN3O3)에 대한 계산치 366.16, 368.15 실측치: 366.00, 368.00.
단계 3: 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드 및 4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00099
tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(280 mg, 0.66 mmol)와 염화수소(디옥산 중 4 M, 6 mL)의 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드와 4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(200 mg, 미정제)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H17ClFN3O)에 대한 계산치 322.10, 324.10 실측치: 322.10, 324.10
단계 4: 4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 및 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00100
DMF(6 mL) 중 4-(5-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드와 4-(3-아미노사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(200 mg, 0.56 mmol)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(255 mg, 0.67 mmol), 부트-2-이노산(56 mg, 0.67 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(361 mg, 2.80 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 20℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(30 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(30 mL × 2) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다.
잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하였다: 컬럼: XBridge Prep OBD C18 컬럼 19 × 250 mm 5 um; 이동 상 A: 물(10 MMOL/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 25 mL/분; 구배: 10분 내에 33% B → 47% B; 220 nm.
4-(5-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 9.03분(85 mg, 39%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.32 (s, 1H), 8.61-8.50 (m, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.55-7.52 (m, 2H), 5.60 (s, 1H), 4.14-3.93 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.35-2.22 (m, 4H), 1.94 (s, 3H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.68-1.47 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 388.11, 390.11, 실측치: 388.10, 390.10.
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 9.65분(10.2 mg, 5%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.32 (s, 1H), 8.79-8.57 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.59-7.49 (m, 2H), 5.44 (s, 1H), 4.52-4.39 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.19-2.09 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.92-1.52 (m, 4H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN2O2)에 대한 계산치 388.11, 390.11, 실측치: 388.10, 390.10.
단계 5: 추정된 (S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 및 추정된 (R)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드의 제조
Figure pct00101
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 5-B-rac, 160 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC에 의해 분리하였다: 컬럼: (R,R)-WHELK-O1-Kromasil, 2.12 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: MTBE(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 12분 내에 10% B → 10% B; 220/254 nm.
(S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (R)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 7.31분(51.1 mg, 32%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.32 (s, 1H), 8.87-8.52 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.82-7.35 (m, 2H), 5.61 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 2.45-2.08 (m, 5H), 2.08-1.45 (m, 7H). ESI-MS [M-H]- (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 386.10, 388.11, 실측치: 386.10, 388.10
(R)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 (S)-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥스-1-엔-1-일)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 8.818분(52.1 mg, 33%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.31 (s, 1H), 8.87-8.52 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.82-7.35 (m, 2H), 5.61 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 2.45-2.08 (m, 5H), 2.08-1.45 (m, 7H). ESI-MS [M+H]+ (C20H19ClFN3O2)에 대한 계산치 386.10, 388.11 실측치: 386.10, 388.10
실시예 6
하기의 합성
라세미 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(rac)
4-((시스)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(시스)
4-((트랜스)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(트랜스)
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(1R,3S)
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(1S,3R)
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(1R,3R)
및
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 6-(1S,3S)
Figure pct00102
단계 1: 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트와 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트의 혼합물
Figure pct00103
THF(75 mL) 중 tert-부틸 (3-옥소사이클로헥실)카르바메이트(5.00 g, 23.44 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드(10.89 g, 30.48 mmol)의 용액에 N2 하에서 -78℃에서 NaHMDS(THF 중 2 M, 26 mL, 52 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(150 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 10%)로 용출하는 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트와 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(7.0 g, 미정제)의 혼합물을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.83-5.71 (m, 1H), 4.68-4.36 (m, 1H), 4.06-3.85 (m, 1H), 2.79-2.61 (m, 1H), 2.39-2.19 (m, 3H), 1.90-1.76 (m, 1H), 1.68-1.55 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
단계 2: tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트의 혼합물
Figure pct00104
디옥산(90 mL) 중 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트와 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(6.00 g, 17.37 mmol)와 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(4.41 g, 17.4 mmol)과 아세트산칼륨(5.12 g, 52.1 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(635 mg, 0.87 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(200 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 15%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(3.26 g, 58%)의 혼합물을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, 클로로포름-d) δ 6.62-6.49 (m, 1H), 4.64-4.40 (m, 1H), 3.85-3.63 (m, 1H), 2.60-2.43 (m, 1H), 2.32-2.17 (m, 2H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.72-1.60 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.25 (s, 12H). ESI-MS [M+H-Boc]+ (C17H30BNO4)에 대한 계산치 224.24 실측치: 224.15.
단계 3: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트의 혼합물
Figure pct00105
디옥산(20 mL) 및 물(5.0 mL) 중 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(1.00 g, 3.09 mmol)와 4-브로모-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(704 mg, 2.58 mmol)와 탄산칼륨(1.07 g, 7.73 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(189 mg, 0.26 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(60 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 15%)로 용출하여 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트와 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(700 mg, 70%)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.91 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.51-7.36 (m, 2H), 6.96-6.84 (m, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.84-5.77 (m, 1H), 3.76-3.56 (m, 1H), 2.44-2.24 (m, 7H), 1.93-1.81 (m, 1H), 1.65-1.45 (m, 1H), 1.40 (s, 9H). ESI-MS [M-H]- (C21H26FN3O3)에 대한 계산치 386.20 실측치: 386.15
단계 4: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00106
메탄올(25 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(350 mg, 0.90 mmol)와 Pd/C(10%, 200 mg)의 혼합물을 수소(2 atm) 하에서 16시간 동안 25℃에서 교반하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(270 mg, 77%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H28FN3O3)에 대한 계산치 390.21 실측치: 390.15.
단계 5: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00107
DMF(7.0 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(270 mg, 0.70 mmol)의 혼합물에 0℃에서 N-클로로석신이미드(94 mg, 0.70 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 물(30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 60%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일 -3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥실)카르바메이트(220 mg, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C21H27ClFN3O3)에 대한 계산치 422.17, 424.17 실측치: 422.10, 424.10.
단계 6: 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(220 mg, 0.52 mmol)와 염화수소(디옥산 중 4 M, 7 mL)의 혼합물을 1시간 동안 20℃에서 교반하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(200 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H19ClFN3O)에 대한 계산치 324.12, 326.12 실측치: 324.10, 326.10
단계 7: 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00109
DMF(6.0 mL) 중 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(200 mg, 0.56 mmol)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(254 mg, 0.67 mmol), 부트-2-이노산(56 mg, 0.67 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(358 mg, 2.78 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(30 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 추출물을 물(30 mL × 2) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다.
단계 8: 4-(시스-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 및 4-(트랜스-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00110
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드를 하기 조건 하에서 HPLC에 의해 정제하였다: 컬럼: XBridge Prep OBD C18 컬럼 30 × 250 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(10 MMOL/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 25 mL/분; 구배: 7분 내에 35% B → 45% B; 220 nm. 4-(시스-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드.
화합물 6-(시스)
체류 시간 = 백색 고체로서 5.68분(100 mg, 46%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 8.53 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.57-7.42 (m, 2H), 4.19 (t, J = 9.2 ㎐, 1H), 4.05-3.96 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.07-1.82 (m, 7H), 1.78-1.65 (m, 2H), 1.63-1.50 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN3O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13, 실측치: 390.10, 392.10.
화합물 6-(트랜스)
체류 시간 = 백색 고체로서 6.80분(23.6 mg, 10%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 11.33 (s, 1H), 8.52 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.56-7.47 (m, 2H), 4.09-3.97 (m, 1H), 3.76-3.64 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.89-1.64 (m, 6H), 1.51-1.34 (m, 1H), 1.32-1.17 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN2O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13, 실측치: 390.10, 392.10.
단계 9A: 시스 이성질체의 분리:
Figure pct00111
4-(시스-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(90 mg)를 하기 조건 하에서 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 20 × 250 mm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 18분 내에 50% B → 50% B; 220/254 nm.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 8.691분(34.5 mg, 38%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.28 (s, 1H), 8.54 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.60-7.40 (m, 2H), 4.30-4.10 (m, 1H), 4.00 (s, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.10-1.80 (m, 7H), 1.78-1.48 (m, 4H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN3O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13 실측치: 390.10, 392.10.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 16.192분(34.1 mg, 38%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.29 (s, 1H), 8.54 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.60-7.40 (m, 2H), 4.30-4.10 (m, 1H), 4.01 (s, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.10-1.80 (m, 7H), 1.78-1.48 (m, 4H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN3O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13 실측치: 390.10, 392.10
단계 9B: 트랜스 이성질체의 분리:
Figure pct00112
4-(트랜스-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실]-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(250 mg)를 하기 조건으로 키랄-Prep-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 15분 내에 50% B → 50% B; 254/220 nm.
4-[(1S,3S)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-[(1R,3R)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 연황색 고체로서 7.327분(101.3 mg, 41%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.32 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.56-7.45 (m, 2H), 4.10-3.95 (m, 1H), 3.78-3.65 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.01-1.71 (m, 8H), 1.54-1.16 (m, 3H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN3O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13 실측치: 390.15, 392.15.
4-[(1R,3R)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-[(1S,3S)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5-플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 연황색 고체로서 12.317분(100.9 mg, 40%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.33 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.55-7.45 (m, 2H), 4.11-3.95 (m, 1H), 3.78-3.67 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.01-1.71 (m, 8H), 1.50-1.18 (m, 3H). ESI-MS [M+H]+ (C20H21ClFN3O2)에 대한 계산치 390.13, 392.13 실측치: 390.15, 392.15.
실시예 7
하기의 합성
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1R,3S))
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1S,3R))
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1R,3R))
및
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1S,3S))
Figure pct00113
단계 1: tert-부틸 (3-(3-브로모-7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00114
DMF(10 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(500 mg, 1.23 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 NBS(218 mg, 1.23 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 33%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(3-브로모-7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일) 사이클로헥실)카르바메이트(500 mg, 83%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-Boc]+ (C21H26BrF2N3O3)에 대한 계산치 386.11, 388.11 실측치: 386.00, 388.00.
단계 2: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00115
DMF(15 mL) 중 tert-부틸 (3-(3-브로모-7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(500 mg, 1.03 mmol)와 Zn(CN)2(499 mg, 1.03 mmol)와 Pd(PPh3)4(119 mg, 0.10 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 120℃에서 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(60 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 35%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(200 mg, 44%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-Boc]+ (C22H26F2N4O3)에 대한 계산치 333.20 실측치: 333.35
단계 3: 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00116
tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(200 mg, 0.462 mmol)와 염화수소(디옥산 중 4 M, 5 mL)의 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(170 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C17H18F2N4O)에 대한 계산치 333.14 실측치: 333.15.
단계 4: 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00117
DMF(5 mL) 중 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(150 mg, 0.406 mmol)의 용액에 2-부티노산(34 mg, 0.406 mmol), HATU(185 mg, 0.488 mmol) 및 DIEA(263 mg, 2.03 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(40 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC로 정제하여 4-(3-(부트-2-인아미도) 사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(130 mg, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다: 컬럼: YMC-Actus Triart C18, 30 mm × 150 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(50 mmol/L NH4HCO3), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 9분 내에 33% B → 53% B, 254 nm; RT: 7.27분. ESI-MS [M+H]+ (C21H20F2N4O2)에 대한 계산치 399.16 실측치: 399.20.
단계 5: 시스 및 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00118
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(130 mg)를 하기 조건으로 Prep-비키랄-SFC로 분리하였다:컬럼: Viridis BEH 2-에틸피리딘 Prep OBD, 3 × 15 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: MeOH(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC; 유량: 60 mL/분; 구배: 12% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 254 nm.
시스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-( 시스 ))
체류 시간 = 백색 고체로서 6.53분(70 mg, 54%).
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-( 트랜스 ))
체류 시간 = 백색 고체로서 10.55분(40 mg, 31%).
단계 6A: 시스 이성질체의 분리
Figure pct00119
시스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(70 mg)를 하기 조건 하에서 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 23분 내에 50% B → 50% B; 220/254 nm.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1R,3S)) 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 8.68분(28.9 mg, 41%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 12.11 (s, 1H), 8.33 (brs, 1H), 8.14-7.76 (m, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.28-1.90 (m, 5H), 1.89-1.70 (m, 4H), 1.69-1.47 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C21H20F2N4O2)에 대한 계산치 399.16 실측치: 399.15.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1S,3R)) 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 19.003분(29.4 mg, 42%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 12.11 (s, 1H), 8.33 (brs, 1H), 8.09-7.76 (m, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.29-1.92 (m, 5H), 1.90-1.68 (m, 4H), 1.69-1.51 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C21H20F2N4O2)에 대한 계산치 399.16 실측치: 399.15.
단계 6B: 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00120
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(40 mg)를 하기 조건 하에서 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 23분 내에 50% B → 50% B; 220/254 nm.
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1R,3R)) 또는 4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 7.036분(15 mg, 37%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 12.13 (s, 1H), 8.55 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 8.13-7.75 (m, 2H), 3.84-3.50 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.09-1.59 (m, 9H), 1.56-1.38 (m, 1H), 1.37-1.26 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H20F2N4O2)에 대한 계산치 399.16 실측치: 399.15.
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 7-(1S,3S)) 또는 4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-시아노-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 14.867분(14 mg). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 12.13 (s, 1H), 8.55 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 8.07-7.75 (m, 2H), 3.79-3.48 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.09-1.61 (m, 9H), 1.52-1.20 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C21H20F2N4O2)에 대한 계산치 399.16 실측치: 399.10.
실시예 8
하기의 합성
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
및
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
단계 1: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00122
아세토니트릴(20 mL) 및 DMSO(5 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(1.8 g, 4.42 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 Selectfluor II(1.27 g, 3.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(60 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC로 정제하여 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(510 mg, 27%)를 황색 고체로서 수득하였다: 컬럼: YMC-Actus Triart C18, 30 mm × 150 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 7분 내에 54% B → 74% B, 254 nm; RT: 6.53분. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.86 (d, J = 12.4 ㎐, 1H), 7.94-7.71 (m, 2H), 7.06-6.79 (m, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.65-3.50 (m, 1H), 2.36-2.25 (m, 3H), 1.98-1.65 (m, 6H), 1.60-1.47 (m, 2H), 1.42-1.32 (m, 9H). ESI-MS [M+H-Boc]+ (C21H26F3N3O3)에 대한 계산치 326.19 실측치: 326.10.
단계 2: 4-(3-아미노사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00123
MeOH(1 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(510 mg, 1.20 mmol)의 교반된 용액에 디옥산(6 mL) 중 4 M 염화수소를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(3-아미노사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(420 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H18F3N3O)에 대한 계산치 326.14 실측치: 326.10.
단계 3: 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00124
DMF(8 mL) 중 4-(3-아미노사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(420 mg, 1.16 mmol)의 교반된 용액에 2-부티노산(107 mg, 1.28 mmol), DIEA(750 mg, 5.80 mmol) 및 HATU(574 mg, 1.51 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 40 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하여, 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(300 mg, 66%)를 백색 고체로서 수득하였다: 컬럼: XBridge Prep OBD C18 컬럼, 30 × 150 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(50 mmol/L NH4HCO3), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 9분 내에 40% B → 60% B, 254 nm; RT: 7.8분. ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.35.
단계 4: 시스 및 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00125
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(300 mg)를 하기 조건으로 Prep-비키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: DAICEL DCpak P4VP, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: 아세토니트릴/MeOH = 4:1(0.1% 2 M NH3-MeOH); 유량: 50 mL/분; 구배: 35% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 254 nm.
시스 -4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(시스))
체류 시간 = 회백색 고체로서 3.97분(120 mg, 40%)
트랜스 -4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(트랜스))
체류 시간 = 회백색 고체로서 5.0분(120 mg, 40%).
ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.15.
단계 5A: 시스 이성질체의 분리
Figure pct00126
시스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(120 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 16분 내에 50% B → 50% B; 254/220 nm.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(1R,3S)) 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 5.332분(46.7 mg, 39%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.79 (s, 1H), 8.70 (d, J = 6.8 ㎐, 1H), 7.93-7.73 (m, 2H), 4.17-4.03 (m, 1H), 3.67-3.56 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.96-1.76 (m, 4H), 1.75-1.65 (m, 2H), 1.62-1.48 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.35.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(1S,3R)) 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 13.386분(48.5 mg, 40%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.87 (s, 1H), 8.70 (d, J = 6.8 ㎐, 1H), 7.97-7.70 (m, 2H), 4.17-4.02 (m, 1H), 3.61-3.56 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.97-1.75 (m, 4H), 1.74-1.65 (m, 2H), 1.63-1.48 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.15.
단계 5B: 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00127
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(120 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 15분 내에 50% B → 50% B; 254/220 nm.
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(1R,3R)) 또는 4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 6.029분(46.7 mg, 39%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.89 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.95-7.73 (m, 2H), 3.69 (s, 1H), 3.31-3.25 (m, 1H), 2.31 (m, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.89-1.65 (m, 6H), 1.46-1.42 (m, 1H), 1.39-1.32(m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.15.
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 8-(1S,3S)) 또는 4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3,5,6-트리플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 9.994분(46.6 mg, 39%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.89 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.93-7.75 (m, 2H), 3.69 (s, 1H), 3.31-3.26 (m, 1H), 2.32 (m, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.89-1.66 (m, 6H), 1.50-1.35 (m, 1H), 1.34-1.26 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20F3N3O2)에 대한 계산치 392.15 실측치: 392.20.
실시예 9
하기의 합성
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 및
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00128
단계 1: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00129
디옥산(12 mL) 및 물(3 mL) 중 4-브로모-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(450 mg, 1.48 mmol)와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(528 mg, 1.63 mmol)와 탄산칼륨(616 mg, 4.45 mmol,)과 Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(121 mg, 0.148 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 90℃에서 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(60 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 34%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(560 mg, 89%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.76 (s, 1H), 7.91-7.59 (m, 2H), 7.14-6.81 (m, 1H), 5.70-5.44 (m, 1H), 4.25-3.51 (m, 1H), 2.44-2.00 (m, 9H), 1.99-1.46 (m, 3H), 1.38 (s, 9H). ESI-MS [M+H]+ (C22H27F2N3O3)에 대한 계산치 420.20 실측치: 420.35.
단계 2: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00130
에틸 아세테이트(30 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트(500 mg, 1.19 mmol)의 용액에 Pd/C(1 g, 10%)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소(2 atm) 하에서 25℃에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(53%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(490 mg, 97%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C22H29F2N3O3)에 대한 계산치 422.22 실측치: 422.20.
단계 3: 4-(3-아미노사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00131
tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(490 mg, 1.16 mmol)와 염화수소(디옥산 중 4 M, 6 mL)의 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(3-아미노사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(400 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C17H21F2N3O)에 대한 계산치 322.17 실측치: 322.15.
단계 4: 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00132
DMF(10 mL) 중 4-(3-아미노사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(400 mg, 1.16 mmol)와 2-부티노산(117 mg, 1.40 mmol)의 혼합물에 HATU(663 mg, 1.75 mmol), 및 DIEA(902 mg, 6.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(40 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(2 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(2 × 30 mL) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄 중 메탄올(0 내지 15%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(200 mg, 44%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H23F2N3O2)에 대한 계산치 388.18 실측치: 388.15.
단계 5 : 시스 및 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00133
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(200 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산/DCM = 3:1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 26분 내에 20% B → 20% B; 220/254 nm.
4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 체류 시간 = 백색 고체로서 10.291분(100 mg, 50%).
4-((3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 체류 시간 = 백색 고체로서 13.464분(80 mg, 40%).
단계 6A : 시스 이성질체의 분리
Figure pct00134
시스-4-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(100 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산/DCM = 3:1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 26분 내에 20% B → 20% B; 220/254 nm.
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 9-(1S,3S)) 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 10.291분(16.2 mg, 16%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.72 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 3.83-3.62 (m, 1H), 3.59-3.41 (m, 1H), 2.39-2.18 (m, 6H), 1.98-1.63 (m, 9H), 1.58-1.36 (m, 1H), 1.35-1.02 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H23F2N3O2)에 대한 계산치 388.18 실측치: 388.15.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 9-(1R,3S)) 또는 4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 13.464분(41.4 mg, 41%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.69 (s, 1H), 8.65 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.70 (t, J = 12.0 ㎐, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.05-1.53 (m, 11H). ESI-MS [M+H]+ (C21H23F2N3O2)에 대한 계산치 388.18 실측치: 388.15.
단계 6B : 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00135
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(80 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산/DCM = 3:1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 16분 내에 20% B → 20% B; 220/254 nm.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 9-(1S,3R)) 또는 4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 8.78분(28 mg, 34%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.69 (s, 1H), 8.65 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.70 (t, J = 12.0 ㎐, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.03-1.54 (m, 11H). ESI-MS [M+H]+ (C21H23F2N3O2)에 대한 계산치 388.18 실측치: 388.10.
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 9-(1R,3R)) 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5,6-디플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 14.032분(15.9 mg, 19%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.74 (s, 1H), 8.52 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 3.80-3.64 (m, 1H), 3.59-3.46 (m, 1H), 2.42-2.16 (m, 6H), 1.97-1.63 (m, 9H), 1.53-1.36 (m, 1H), 1.33-1.16 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H23F2N3O2)에 대한 계산치 388.18 실측치: 388.35.
실시예 10
하기의 합성
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
및
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00136
단계 1: tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실) 카르바메이트
Figure pct00137
에탄올(10 mL) 및 테트라히드로푸란(10 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(700 mg, 1.74 mmol)와 탄소 상의 10% 팔라듐(700 mg)의 혼합물을 수소(2 atm) 하에서 50℃에서 2일 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(40%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(650 mg, 92%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C22H30FN3O3)에 대한 계산치 404.23 실측치: 404.30.
단계 2: 4-((3S)-3-아미노사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00138
디클로로메탄(10 mL) 중 tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(250 mg, 0.61 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-((3S)-3-아미노사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(300 mg, 미정제)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C17H22FN3O)에 대한 계산치 304.18 실측치: 304.45.
단계 3: 4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00139
DMF(10 mL) 중 4-((3S)-3-아미노사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(300 mg, 미정제)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(412 mg, 1.08 mmol), 부트-2-이노산(72.5 mg, 0.86 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(464 mg, 3.59 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하여, 4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(140 mg, 61%, 2 단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다: 컬럼: XBridge Prep OBD C18 컬럼, 30 × 150 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(20 mmol/L NH4HCO3), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 7분 내에 30% B → 50% B, 254 nm; RT: 5.28분. ESI-MS [M+H]+ (C21H24FN3O2)에 대한 계산치 370.19 실측치: 370.15.
단계 5 : 이성질체의 분리
Figure pct00140
4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(140 mg)를 하기 조건으로 Prep-키랄-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 20분 내에 40% B → 40% B; 254 nm.
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 10.599분(25.2 mg, 18%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.68 (s, 1H), 8.49 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.53-7.28 (m, 2H), 3.86-3.64 (m, 1H), 3.60-3.42 (m, 1H), 2.44-2.22 (m, 6H), 1.93 (s, 3H), 1.89-1.68 (m, 6H), 1.56-1.37 (m, 1H), 1.35-1.15 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C21H24FN3O2)에 대한 계산치 370.19 실측치: 370.15.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 18.172분(47.4 mg, 33%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.65 (s, 1H), 8.63 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.48-7.25 (m, 2H), 4.09-3.96 (m, 1H), 3.86-3.60 (m, 1H), 2.40-2.27 (m, 6H), 2.08-1.81 (m, 7H), 1.80-1.47 (m, 4H). ESI-MS [M+H]+ (C21H24FN3O2)에 대한 계산치 370.19 실측치: 370.15.
실시예 11
하기의 합성
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
및
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00141
단계 1: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00142
디옥산(16 mL) 및 물(4 mL) 중 4-브로모-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(1.5 g, 5.19 mmol)와 tert-부틸 (3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.84 g, 5.71 mmol)와 탄산칼륨(2.9 g, 20.76 mmol,)과 Pd(dppf)Cl2(378 mg, 0.519 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 90℃에서 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물(60 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 30%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.6 g, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H25F2N3O3)에 대한 계산치 406.19 실측치: 406.20.
단계 2: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00143
메탄올(100 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트(1.6 g, 3.95 mmol)의 교반된 용액에 Pd/C(1.6 g, 10%)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소(2 atm) 하에서 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 35%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(1.5 g, 93%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H27F2N3O3)에 대한 계산치 408.20 실측치: 408.20.
단계 3: tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트
Figure pct00144
DMF(8 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(450 mg, 1.10 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 NCS(147 mg, 1.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 34%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(400 mg, 82%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H-tBu]+ (C21H26ClF2N3O3)에 대한 계산치 386.16, 388.16 실측치: 386.10, 388.10.
단계 4: 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드
Figure pct00145
메탄올(2 mL) 중 tert-부틸 (3-(7-카르바모일-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-4-일)사이클로헥실)카르바메이트(400 mg, 0.9 mmol)의 교반된 용액에 디옥산(5 mL) 중 4 M 염화수소를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(340 mg, 미정제)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H18ClF2N3O)에 대한 계산치 342.11, 344.11 실측치: 342.15, 344.15.
단계 5: 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00146
DMF(6 mL) 중 4-(3-아미노사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 히드로클로라이드(300 mg, 0.88 mmol)의 교반된 용액에 2-부티노산(74 mg, 0.88 mmol), HATU(401 mg, 1.06 mmol) 및 DIEA(581 mg, 4.4 mmol, 0.8 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(40 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4를 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄 중 메탄올(0 내지 34%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(300 mg, 84%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C20H20ClF2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.35, 410.35.
단계 6: 시스 및 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00147
4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(300 mg)를 하기 조건으로 Prep-HPLC로 분리하였다: 컬럼: XBridge Prep C18 OBD 컬럼, 19 × 150 mm 5 um; 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 25 mL/분; 구배: 7분 내에 38% B → 58% B; 220 nm.
시스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 (화합물 10-시스)
체류 시간 = 4.95분(150 mg, 50%)
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 (화합물 10-트랜스)
체류 시간 = 백색 고체로서 5.58분(130 mg, 43%).
ESI-MS [M+H]+ (C20H20ClF2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.10, 410.10.
단계 7A: 시스 이성질체의 분리
Figure pct00148
시스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(150 mg)를 하기 조건으로 키랄 Prep-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 18 mL/분; 구배: 19분 내에 50% B → 50% B; 220/254 nm.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 11-(1R,3S)) 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 6.88분(57.6 mg, 38%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.33 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 7.98-7.74 (m, 2H), 4.20 (t, J = 12.4 ㎐, 1H), 4.01 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.06 (d, J = 13.0 ㎐, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.95-1.49 (m, 7H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20ClF2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.30, 410.30.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 11-(1S,3R)) 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 16.692분(57.9 mg, 39%). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.33 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 7.97-7.75 (m, 2H), 4.18 (t, J = 12.6 ㎐, 1H), 4.01 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.06 (d, J = 13.0 ㎐, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.95-1.52 (m, 7H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20ClF2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.30, 410.30.
단계 7B: 트랜스 이성질체의 분리
Figure pct00149
트랜스-4-(3-(부트-2-인아미도)사이클로헥실)-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(130 mg)를 하기 조건으로 키랄 Prep-HPLC로 분리하였다: 컬럼: CHIRALPAK IG, 2 × 25 cm, 5 um; 이동 상 A: 헥산(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동 상 B: EtOH--HPLC; 유량: 18 mL/분; 구배: 15분 내에 50% B → 50% B; 220/254 nm.
4-[(1R,3R)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 11-(1R,3R)) 또는 4-[(1S,3S)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 7.396분(47.9 mg, 37%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.39 (s, 1H), 8.52 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.99-7.71 (m, 2H), 4.04 (t, J = 7.5 ㎐, 1H), 3.70 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.90-1.60 (m, 6H), 1.53-1.15 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20ClF2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.10, 410.10.
4-[(1S,3S)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 11-(1S,3S)) 또는 4-[(1R,3R)-3-(부트-2-이노일아미노)사이클로헥실]-3-클로로-5,6-디플루오로-2-메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 회백색 고체로서 12.384분(46.5 mg, 36%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.39 (s, 1H), 8.52 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.91-7.84 (m, 2H), 4.04 (t, J = 7.5 ㎐, 1H), 3.70 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.90-1.60 (m, 6H), 1.53-1.15 (m, 2H). ESI-MS [M+H]+ (C20H20Cl2N3O2)에 대한 계산치 408.12, 410.12 실측치: 408.15, 410.15.
실시예 12
하기의 합성
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
및
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드.
Figure pct00150
단계 1: (S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄 설포네이트
Figure pct00151
THF(20 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-옥소사이클로펜틸)카르바메이트(1 g, 5.02 mmol)와 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(2.33 g, 6.52 mmol)의 교반된 혼합물에 질소 분위기 하에서 -78℃에서 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(테트라히드로푸란 중 2 M, 7.53 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 그리고 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(60 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여 (S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(1.60 g, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C11H16F3NO5S)에 대한 계산치 330.07 실측치: 330.20.
단계 2: tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00152
1,4-디옥산(20 mL) 중 (S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(1.60 g, 미정제)와 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-디옥사보롤란)(1.59 g, 6.28 mmol)과 아세트산칼륨(1.42 g, 14.49 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(353 mg, 0.483 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 수회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 60 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(60 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 20%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(550 mg, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다.
단계 3: tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트
Figure pct00153
테트라히드로푸란(12 mL) 및 물(3 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(300 mg, 1.12 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(82.18 mg, 0.112 mmol)와 tert-부틸 (S)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(451.5 mg, 미정제)와 인산칼륨(715 mg, 3.37 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 60℃에서 8시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 40 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(550 mg, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C21H24FN3O2)에 대한 계산치 368.19 실측치: 368.15.
단계4: tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일) 카르바메이트
Figure pct00154
에탄올(10 mL) 및 물(10 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(550 mg, 미정제)의 혼합물에 파킨스 촉매(63 mg, 0.148 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(60 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여, tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(110 mg, 25%, 2 단계에 걸침)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.57-7.35 (m, 2H), 7.23-7.05 (m, 1H), 5.69-5.51 (m, 1H), 4.84-4.55 (m, 1H), 2.73-2.52 (m, 2H), 2.43-2.35 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.87-1.74 (m, 1H), 1.41 (s, 9H). ESI-MS [M+H]+ (C21H26FN3O3)에 대한 계산치 388.20 실측치: 388.15.
단계 5: tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸) 카르바메이트
Figure pct00155
에탄올(5 mL) 및 테트라히드로푸란(5 mL) 중 tert-부틸 (S)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(110 mg, 0.28 mmol)와 탄소 상의 10% 팔라듐(100 mg)의 혼합물을 수소(2 내지 3 atm) 하에서 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸)카르바메이트(100 mg, 91%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H28FN3O3)에 대한 계산치 390.21 실측치: 390.40.
단계 6: 4-((3S)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00156
디클로로메탄(10 mL) 중 tert-부틸 ((1S)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸)카르바메이트(100 mg, 0.26 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-((3S)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(130 mg, 미정제)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H20FN3O)에 대한 계산치 290.16, 실측치: 290.15.
단계 7: 4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00157
DMF(10 mL) 중 4-((3S)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(130 mg, 미정제)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(185 mg, 0.483 mmol), 부트-2-이노산(32.5 mg, 0.386 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(208 mg, 1.61 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(30 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(30 mL × 2) 및 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 미정제 생성물을 하기 조건 하에서 실온에서 6.50분 용출된 Prep-HPLC로 정제하여, 4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(50 mg)를 수득하였다: 컬럼: 컬럼: YMC-Actus Triart C18, 30 mm × 150 mm, 5 um; 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: 아세토니트릴; 유량: 60 mL/분; 구배: 7분 내에 36% B → 56% B, 254 nm.
단계 8: 이성질체의 분리
Figure pct00158
4-((3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(50 mg)를 하기 조건 하에서 추가로 Prep-비키랄-SFC로 분리하였다: 컬럼: DAICEL DCpak P4VP, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: MeOH(0.5% 2 M NH3-MeOH)-HPLC; 유량: 50 mL/분; 구배: 40% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 254 nm.
4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 3.88분(15.8 mg, 31%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 10.66 (s, 1H), 8.68 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.49-7.27 (m, 2H), 4.35-4.08 (m, 1H), 4.03-3.81 (m, 1H), 2.38-2.23 (m, 6H), 2.21-2.08 (m, 1H), 2.06-1.80 (m, 7H), 1.79-1.61 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H22FN3O2)에 대한 계산치 356.17 실측치: 356.10.
4-((1S,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1R,3S)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 4.93분(6.4 mg, 12%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6) δ 10.66 (s, 1H), 8.67 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.53-7.23 (m, 2H), 4.41-4.28 (m, 1H), 4.16-4.04 (m, 1H), 2.42-2.24 (m, 6H), 2.18-2.02 (m, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.92-1.77 (m, 2H), 1.71-1.53 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H22FN3O2)에 대한 계산치 356.17 실측치: 356.10.
실시예 13
하기의 합성
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
및
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
단계 1: (R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄 설포네이트
Figure pct00160
THF(15 mL) 중 tert-부틸 (R)-(3-옥소사이클로펜틸)카르바메이트(1.0 g, 5.02 mmol)와 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(2.33 g, 6.52 mmol)의 교반된 혼합물에 질소 분위기 하에서 -78℃에서 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(테트라히드로푸란 중 2 M, 7.53 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 그리고 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(60 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여 (R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(1.50 g, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C11H16F3NO5S)에 대한 계산치 330.07 실측치: 330.15.
단계 2: tert-부틸 (R)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트.
Figure pct00161
1,4-디옥산(20 mL) 중 (R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄설포네이트(1.50 g, 미정제)와 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-디옥사보롤란)(1.38 g, 5.43 mmol)과 아세트산칼륨(1.33 g, 13.58 mmol)과 Pd(dppf)Cl2(331 mg, 0.452 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 수회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 80 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(0 내지 20%)로 용출하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, tert-부틸 (R)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(650 mg, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 7.08-6.86 (m, 1H), 6.28-6.14 (m, 1H), 4.68-4.38 (m, 1H), 2.32-2.06 (m, 2H), 1.60-1.41 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.24-1.20 (m, 12H).
단계 3: tert-부틸 (R)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트.
Figure pct00162
테트라히드로푸란(16 mL) 및 물(4 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르보니트릴(300 mg, 1.12 mmol), Pd(dppf)Cl2(82.18 mg, 0.112 mmol)와 tert-부틸 (R)-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(451 mg, 미정제)와 인산칼륨(715 mg, 3.37 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 5회 재충전하였다. 반응 혼합물을 질소 하에서 60℃에서 8시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여, tert-부틸 (R)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(600 mg, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다. ESI-MS [M-H]- (C21H24FN3O2)에 대한 계산치 368.19 실측치: 368.25.
단계 4: tert-부틸 (R)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트.
Figure pct00163
에탄올(15 mL) 및 물(15 mL) 중 tert-부틸 (R)-(3-(7-시아노-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(600 mg, 미정제)의 혼합물에 파킨스 촉매(69 mg, 0.162 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(80 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨을 통해 건조시키고, 진공 하에서 농축하여, tert-부틸 (R)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(280 mg, 64%, 2 단계에 걸침)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.62-7.34 (m, 2H), 7.25-7.01 (m, 1H), 5.72-5.48 (m, 1H), 4.85-4.49 (m, 1H), 2.80-2.53 (m, 2H), 2.43-2.21 (m, 4H), 2.07 (s, 3H), 1.90-1.74 (m, 1H), 1.40 (s, 9H). ESI-MS [M+H]+ (C21H26FN3O3)에 대한 계산치 388.20 실측치: 388.35.
단계 5: tert-부틸 ((1R)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸) 카르바메이트.
Figure pct00164
에탄올(10 mL) 및 테트라히드로푸란(10 mL) 중 tert-부틸 (R)-(3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트(280 mg, 0.722 mmol)와 탄소 상의 10% 팔라듐(300 mg)의 혼합물을 수소(2 내지 3 atm) 하에서 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 ((1R)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸)카르바메이트(270 mg, 96%)를 황색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C21H28FN3O3)에 대한 계산치 390.21 실측치: 390.40.
단계 6: 4-((3R)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트.
Figure pct00165
디클로로메탄(10 mL) 중 tert-부틸 ((1R)-3-(7-카르바모일-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-4-일)사이클로펜틸)카르바메이트(270 mg, 0.693 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축하여, 4-((3R)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(350 mg, 미정제)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI-MS [M+H]+ (C16H20FN3O)에 대한 계산치 290.16, 실측치: 290.10.
단계 7: 4-((3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
Figure pct00166
DMF(10 mL) 중 4-((3R)-3-아미노사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트(350 mg, 미정제)의 혼합물에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(497 mg, 1.30 mmol), 부트-2-이노산(87.5 mg, 1.04 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(560 mg, 4.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(50 mL × 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물(50 mL × 2) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨을 통해 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다.
잔류물을 하기 조건으로 Prep-HPLC로 정제하여, 4-((3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(140 mg, 57%, 2 단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다: 컬럼: Xselect CSH OBD 컬럼 30 × 150 mm, 5 um, 이동 상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3 + 0.1% NH3.H2O), 이동 상 B: ACN; 유량: 60 mL/분; 구배: 7분 내 25% B → 51% B; 220 nm; RT1: 6.37분. ESI-MS [M+H]+ (C20H22FN3O2)에 대한 계산치 356.17, 실측치: 356.10.
단계 8: 이성질체의 분리
Figure pct00167
4-((3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(140 mg)를 하기 조건으로 Prep-비키랄-SFC로 분리하였다: 컬럼: DAICEL DCpak P4VP, 2 × 25 cm, 5 μm; 이동 상 A: CO2, 이동 상 B: MeOH (0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC; 유량: 50 mL/분; 구배: 38% B; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 bar; 254 nm.
4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드 또는 4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 13-(1R,3R))
체류 시간 = 백색 고체로서 4.35분(56.7 mg, 40%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.66 (s, 1H), 8.68 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.48-7.28 (m, 2H), 4.26-4.04 (m, 1H), 4.01-3.82 (m, 1H), 2.39-2.25 (m, 6H), 2.22-2.06 (m, 1H), 2.05-1.81 (m, 7H), 1.80-1.66 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H22FN3O2)에 대한 계산치 356.17 실측치: 356.10.
4-((1R,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드(화합물 13-(1R,3R)) 또는 4-((1S,3R)-3-(부트-2-인아미도)사이클로펜틸)-5-플루오로-2,3-디메틸-1H-인돌-7-카르복사미드
체류 시간 = 백색 고체로서 5.57분(37.0 mg, 26%). 1H NMR (300 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 10.66 (s, 1H), 8.67 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.49-7.25 (m, 2H), 4.41-4.27 (m, 1H), 4.19-4.01 (m, 1H), 2.41-2.28 (m, 6H), 2.22-2.01 (m, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.92-1.74 (m, 2H), 1.71-1.51 (m, 1H). ESI-MS [M+H]+ (C20H22FN3O2)에 대한 계산치 356.17 실측치: 356.15.
실시예 14
BTK IC 50
DMSO 중 화합물(시험 또는 대조)의 용액을 원하는 농도로 제조하고, TECAN EVO200을 사용하여 384pp-플레이트 내에서 3배 희석으로 11개의 농도로 연속 희석시켰다. 20 nL의 스톡을 Echo550을 사용하여 384 플레이트에 전달하였다. DMSO를 비히클 대조군으로서 사용하였다.
2개의 개별 용액을 제조하였다: MgCl2(10 mM), Brij-35(0.01%), DTT(2 mM), BSA(0.05%), EGTA(1 mM), HEPE(pH 7.5)(50 mM), FLPeptide(6 uM) 및 ATP(4 mM)를 함유하는 ATP 용액; 및 MgCl2(10 mM), Brij-35(0.01%), DTT(2 mM), BSA(0.05%), EGTA(1 mM), HEPE(pH 7.5)(50 mM) 및 BTK(2.67 nM)를 함유하는 BTK 용액. (BTK는 Carna로부터 입수하고; FLPeptide2는 PerkinElmer로부터 입수하고, 이브루티닙은 Selleck으로부터 입수하였다.) 5 uL의 ATP 용액을 각 웰에 첨가한 후, 15 uL의 BTK 용액을 첨가하여 반응을 개시하였다. MgCl2(10 mM), Brij-35(0.01%), DTT(2 mM), BSA(0.05%), EGTA(1 mM), HEPE(pH 7.5)(50 mM), FLPeptide(1.5 uM), ATP(1 mM) 및 BTK(2 nM)를 함유하는 각 웰의 최종 부피가 20 uL임에 유의한다. 플레이트를 실온에서 90분 동안 인큐베이션한 후, 정지 완충액(75 uL, 0.5 M EDTA를 함유함)을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 각 웰로부터의 샘플을 EZ 판독기를 사용하여 분석하였다.
하기 식에 따라 판독 전환비(CR)를 사용하여 % 잔류 활성을 계산하였다:
Figure pct00168
XLFit(식 201)를 사용하여, 상부와 하부 둘 모두를 부동(floating)함으로써 IC50을 계산하였다.
실시예 1 내지 13에 기재된 화합물에 대한 BTK IC50 값은 표 5에 제공되며, 여기서:
"A"는 1 nM 미만의 IC50을 나타내고;
"B"는 1 내지 10 nM의 IC50을 나타내고;
"C"는 10 nM 초과의 IC50을 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00169
실시예 15
라모스(RAMOS) B 세포에서 BTK 활성을 결정하기 위한 검정
검정 전날에, 라모스 B 세포를 플레이팅 배지(1% FBS 및 1 × 페니실린-스트렙토마이신을 함유하는 RPMI1640 배지) 중에 플레이팅하였다. 검정 당일에, FLIRP Calcium 6 검정 키트의 매뉴얼에 따라 2x 염료 용액을 제조하였다: 염료를 검정 완충액(1x HBSS 중 20 mM HEPES, pH 7.4)으로 희석시키고; 프로베네시드를 첨가하여 최종 농도가 5 mM가 되게 하고; 1 내지 2분 동안 격렬하게 볼텍싱한다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 펠렛을 플레이팅 배지 중에 재현탁시켰다. 계수 후, 세포를 플레이팅 배지 중에 3 × 106개/ml의 밀도로 재현탁시켰다. 등부피의 2X 염료 용액을 세포 현탁액에 첨가하였다. 이후, 세포를 384-웰 폴리-D-리신 코팅된 플레이트 내로 20 μl/웰로 플레이팅하였다. 플레이트를 1000 rpm으로 3분 동안 원심분리한 후, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션한 후, 25℃에서 추가 15분 인큐베이션하였다. 화합물을 희석 완충액(1X HBSS 중 20 mM HEPES 및 0.1% BSA, pH 7.4) 중에 3X 농도로 제조하였다. 연속 희석된 화합물을 Echo 550(Labcyte)을 사용하여 소스 플레이트(source plate)로부터 384-웰 화합물 플레이트로 옮겼다. 20 μl/웰의 화합물 희석 완충액을 화합물 플레이트에 첨가하고, 2분 동안 플레이트 셰이커 상에서 혼합하였다. 4X EC80의 항-IgM(Jackson ImmunoResearch)을 희석 완충액 중에 제조하고, 20 μl/웰을 새로운 384-웰 화합물 플레이트에 첨가하였다. 암실에서 25℃에서 60분 인큐베이션 후; 세포 플레이트, 4X EC80의 항-IgM이 함유된 화합물 플레이트 및 FLIPR 팁을 FLIPR(Molecular Devices) 내로 넣었다. 10 ul/웰의 4X EC80 항-IgM을 FLIPR에 의해 세포 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 1초 간격으로 160초 동안 판독하였다. 실시예 1 내지 13에 기재된 화합물에 대한 라모스 활성과 관련된 IC50 값은 10 nM 미만이다.
실시예 16
BTK 불활성화율을 결정하기 위한 검정
본 실시예는 인간 및 마우스 혈액 또는 마우스 뇌 용해물에서 비오티닐화된 공유결합 억제제를 사용하는 BTK 활성 부위 프로브 기반 검정을 이용하였다.
실험 절차
인간 및 전혈 화합물 처리 및 용해
인간 전혈은 StemExpress(캘리포니아주 스톡턴 소재)에서 얻었고, 수집 후 대략 24시간이 경과한 실험의 시점까지 주변 온도에서 유지하였다.
1. 10x 용해 완충액(Cell Signaling Technology, #9083S, 매사추세츠주 댄버스 소재), 분자 생물학 등급 물, 100x 홀트 프로테아제 및 포스파타아제 억제제 칵테일(ThermoFisher, #78440, 매사추세츠주 월텀 소재) 및 BTK 활성 부위 프로브(최종: 0.4 μM)를 사용하여 1x 용해 완충액을 제조하였다. 이는 각 실험일자에 신선하게 제조되었다.
2. 시점 수집(timepoint collection)을 위한 제조에 있어서 V-바텀 플레이트(Greiner Bio-One, #651261, 노스캐롤라이나주 몬로 소재) 내 모든 웰에 30 μL 부피로 용해 완충액을 첨가하였다.
3. 화합물을 100% DMSO 중 10 mM의 스톡으로 재구성하고, 2배 연속 희석으로 희석하여 DMSO에서 8-포인트 곡선을 생성했으며, 이때 마지막 포인트는 DMSO 단독이다.
4. DMSO를 일정하게(최종 0.03% DMSO) 유지하도록, 299 μL 1x PBS로의 1 μL의 제조된 DMSO 적정을 사용하여 작업 10x 희석 연속물을 생성하였다.
5. 신규 96-웰 v-바텀 플레이트의 웰 당 225 μL의 부피로 전혈을 첨가하였다.
6. 화합물 처리를 위해, PBS 중 25 μL의 10x 희석 연속물을 225 μL 전혈에 첨가한 후, 아래위로 짧게 2회 피펫팅하였다.
7. 이후, 플레이트를 플라스틱 뚜껑으로 덮고, 37℃에서 5분, 10분, 15분, 30분, 60분 동안 인큐베이션하였다.
8. 각 시점에서, 30 μL의 화합물 또는 DMSO(비히클) 처리된 혈액을 각 컬럼에서 뽑아내어, BTK 활성 부위 프로브가 보충된 30 μL의 용해 완충액을 함유한 사전로딩된 수집 플레이트에 첨가하였다. 이후, 샘플을 아래위로 짧게 2회 피펫팅하여 혼합하였다.
9. 플레이트를 수집하고, 용해된 샘플을 진탕하고, 실온에서 60분 동안 회전기에서 밀봉 필름으로 덮었다. 이들 샘플은 ELISA를 통한 검출을 위해 신선하게 사용되었고, 반복이 필요한 경우 잔류 샘플을 -80℃에서 동결시켰다.
ELISA를 사용하는 미점유 BTK의 양 결정
1. 샘플이 용해되는 동안 모든 스트렙타비딘 사전 코팅 플레이트(R&D Systems, #CP004, 미네소타주 미니애폴리스 소재)를 실온으로 만들었다.
2. 검정 완충액 1, 1x PBS + 0.05% Tween 20 + 1% BSA를 제조하고, 여과하고, 사용되지 않는 경우 4℃에서 보관하였다.
3. 검정 완충액 1을 사용하여, 검정 완충액 + 1x 프로테아제/포스파타아제 억제제 칵테일(PIC)을 모든 샘플에 필요한 양으로 제조하였다.
4. 90 μL/웰 부피의 PIC + 검정 완충액을 혈액 샘플용 ELISA 플레이트에 첨가하였다.
5. 50 μL/웰 부피의 PIC + 검정 완충액을 뇌 샘플용 ELISA 플레이트에 첨가하였다.
6. 용해된 혈액 샘플(10 μL)을 ELISA 플레이트에 첨가하였다.
7. 용해된 뇌 샘플(50 μL)을 ELISA 플레이트에 첨가하였다.
8. 샘플을 총 100 μL/웰에 대해 ELISA 플레이트에 이중으로 로딩하고, 플레이트에 밤새 4℃에서 유지하고 밀봉하였다.
9. 다음날, 플레이트를 플레이트 세척기를 사용하여 250 μL/웰에서 1x 세척 완충액(1x PBS + 0.05% Tween 20)으로 3회 세척하였다.
10. 각 시점에 모든 액체를 제거하기 위해 플레이트를 뒤집고, 잔류 액체를 제거하기 위해 깨끗한 종이 타월로 닦았다.
11. 검정 완충액 2를 제조하고(1x PBS + 0.05% Tween 20 + 0.5% BSA), 사용되지 않는 경우 4℃에서 유지하였다.
12. 1차 항체 α-BTK(클론 D3H5, Cell Signaling Technology #8547S 매사추세츠주 댄버스 소재)를 검정 완충액 2에서 1:500으로 희석하였다.
13. 희석된 α-BTK 항체를 100 μL/웰로 첨가하였다.
14. 플레이트를 접착 필름으로 덮고, 실온에서 90분 동안 인큐베이션하였다.
15. 플레이트를 플레이트 세척기를 사용하여 250 μL/웰에서 1X 세척 완충액으로 3회 세척하였다.
16. 각 시점에 모든 액체를 제거하기 위해 플레이트를 뒤집고, 잔류 액체를 제거하기 위해 깨끗한 종이 타월로 닦았다.
17. 검출 항체(Jackson Immuno Research, #711-005-152)를 검정 완충액 2를 이용하여 1:2,500로 희석하였다.
18. 희석된 항체를 100 μL/웰로 첨가하였다.
19. 플레이트를 접착 필름으로 덮고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다.
20. 플레이트를 플레이트 세척기를 사용하여 250 μL/웰에서 1x 세척 완충액으로 3회 세척하였다.
21. 각 시점에 모든 액체를 제거하기 위해 플레이트를 뒤집고, 잔류 액체를 제거하기 위해 깨끗한 종이 타월로 닦았다.
22. 예열된 TMB 기질(ThermoFisher, #34029)을 100 μL/웰로 플레이트에 첨가하였다.
23. 플레이트를 암실에서 3 내지 5분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
24. 50 μL/웰 2N 황산(H2SO4)(R&D Systems, #DY994)을 첨가함으로써 반응을 중지하였다.
25. 플레이트를 450 nm 및 570 nm 파장(보정 파장)에서 Pherastar 플레이트 판독기(BMG, 독일 소재)로 판독하였다.
데이터 분석
GraphPad Prism을 사용하여, 원시 흡광도 데이터를 농도(y축, nM)에 대한 시간(x축, 분)으로 플롯팅하고, One Phase Decay 모델(Y = (Y0 - Plateau)*exp(-K*X) + Plateau)에 피팅하였다. 각 농도의 최적 맞춤 값을 이 모델로 계산하고, K(억제에 대한 속도 상수, k obs )로서 GraphPad에 의해 제공된 결과 표 요약에 보고하였다.
이후, 다시 Prism에서, 화합물의 각 농도에 대한 속도 상수(k obs)를 화합물 농도에 대해 다시 플롯팅하고, 쌍곡선 방정식(Michaelis-Menten 모델)에 피팅하였다. 이 모델을 사용하여, Vmax (k inact ) 및 Km(K i )에 대한 최적 맞춤 값을 취하여 공식 (k inact /K i )*10,000에 의해 전혈에서 불활성화의 2차 비율 상수를 결정하는 데 사용하고, 이후 이는 계산된 BTK 불활성화율 상수(k inact /K i )10-4 nM-1분-1(및 반복 측정의 경우 평균)으로 표시된다.
계산된 BTK 불활성화율 상수는 언급된 화합물에 대해 표 6에 제공되며, 여기서:
"A"는 5 nM 미만의 Kinact/Ki를 나타내고;
"B"는 5 내지 10 nM의 Kinact/Ki를 나타내고;
"C"는 10 nM 초과의 Kinact/Ki를 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00170
실시예 17
B 세포에서 BTK의 억제를 결정하기 위한 검정
B 세포에서 BTK의 억제 효과를 연구하기 위해, 인간 전혈(hWB)의 밤새 자극 후 림프구 활성화 마커인 CD69(Cluster of Differentiation 69)의 상향조절을 측정하였다.
시험 물품(TA)의 10 mM 스톡을 DMSO에서 2 mM로 희석한 후 DMSO에서 8개의 후속적인 1:4 연속 희석을 수행하였다. 이후, 연속 희석된 화합물을 검정 배지(RPMI + 1% HI-FBS)에서 단계적으로(1:10 및 1:5) 추가 희석하여, 9-포인트 용량-반응 곡선(DRC)을 생성하는 데 사용된 4x 작업 농도를 생성하였다.
전날 수집된 NaHep hWB를 검정 배지에서 1:1(v/v)로 희석하고, 주변 웰을 제외한 편평한 바닥 96-웰 플레이트의 각 웰에 희석된 hWB 70 μL를 첨가하였다. 각 플레이트에 대해, 비히클을 함유하는 25 μL의 검정 배지를 비자극(Bkg) 및 자극(Veh) 제어 조건에 대해 지정된 3중 웰에 첨가하여 0.5%(v/v) 최종 DMSO를 달성하였다. 이후, TA의 25 μL의 4x 작업 농도를 0.5% DMSO(v/v)에서 0.153 내지 10,000 nM 범위의 최종 농도로 3중 웰에 첨가하였다. 1시간 전처리 후, 5 μL의 20x 항 IgD-덱스트란을 첨가하여, B 세포 자극을 위한 1 ng/mL의 최종 농도를 유도하였다(및 등부피의 배지를 비자극 대조 웰에 첨가함). 혼합 후, 플레이트를 가습, 5% CO2, 37℃ 인큐베이터로 밤새(약 18시간) 이동시켰다. 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 위한 표면 염색은 항체의 마스터 믹스(1 μL/웰의 BV421 항-CD19, FITC 항-CD45, PE 항-CD69, PerCP/Cy5.5 항-CD3) + 0.5 μL/웰의 eFluor 506 고정가능 생존 염료를 첨가함으로써 달성되었다. 혼합 후, 샘플을 RBC 용해 및 고정을 위한 딥-웰 96-웰 플레이트로 1x의 조합 완충액을 사용하여 옮겼다. 플레이트를 300x g에서 5분 동안 원심분리하고, 상청액을 흡인하고, 펠렛화된 세포를 Attune NxT 유세포 분석기에서 획득하기 전에 600 μL의 FACS 완충액에 재현탁시켰다. FACS 분석을 위해, 생존 CD45+ WBC 세포는 CD19+ B 세포의 추가 조사에 대해 게이팅되었고, 이 모집단 내의 CD69+ 사건의 백분율을 화합물의 각 농도에 대해 보고하였다.
억제% 계산은 하기 방정식으로 원시 값을 치환하여 결정되었다:
.
이 방정식에서, 0% 억제는 Veh에 해당하는 TA에 의한 반응 수준인 반면, 100% 억제는 각 검정에 대해 별도로 정의된 Bkg와 동등한 TA에 의한 반응 수준으로 정의된다. 억제성 DRC는 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 비선형, 4-파라미터, 가변 기울기 곡선-피팅 함수를 사용하여 TA의 각 농도에서 3중 값으로부터 생성되었다.
이 실험에 의해, 하기 표 7에 열거된 TA로의 hWB의 생체외 전처리는 각각 35 nM 미만의 평균 IC50으로의 CD69 상향조절에 의해 측정된 바와 같이 B 세포 활성화의 억제를 제공하였다.
[표 7]
Figure pct00172
본 명세서에서 언급되고/되거나, 출원 데이터 시트에 열거된 모든 미국 특허, 미국 특허출원공개, 미국 특허출원, 외국 특허, 외국 특허출원 및 비특허 간행물은 그 전체 내용이 본원에 참고로 포함된다. 이를 위해, 본 출원은 2021년 1월 12일 자로 출원된 미국 임시 출원 제63/136,594호에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원은 그 전체 내용이 본원에 참고로 포함된다.

Claims (37)

  1. 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    [화학식 (I)]

    상기 식에서:
    는 또는 이고
    RB는 -H 또는 -Me이고;
    RC는 -CH=CH2, -C≡CH 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 -H 또는 -F임.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (IA)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    [화학식 (IA)]

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  3. 제1항에 있어서, 화학식 I-A-(S) 또는 I-A-(R)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    Figure pct00180

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  4. 제1항에 있어서, 화학식 (IB)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    [화학식 (IB)]

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  5. 제1항에 있어서, 화학식 I-B-(S) 또는 I-B-(R)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    Figure pct00184

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  6. 제1항에 있어서, 화학식 (IC)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    [화학식 (IC)]

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  7. 제1항에 있어서, 화학식 I-C-(S) 또는 I-C-(R)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    Figure pct00188

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  8. 제1항에 있어서, 화학식 1-C-(1R,3S), 1-C-(1S,3R), 1-C-(1R,3R) 또는 1-C-(1S,3S)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    Figure pct00190

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  9. 제1항에 있어서, 화학식 (ID)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    [화학식 (ID)]

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  10. 제1항에 있어서, 화학식 1-D-(1R,3S), 1-D-(1S,3R), 1-D-(1R,3R) 또는 1-D-(1S,3S)의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:
    Figure pct00194

    상기 식에서,
    RB는 H 또는 Me이고;
    RC는 -CH=CH2 또는 -C≡C-CH3이고;
    RA는
    이고, 상기 식에서
    RA1은 -H, -F, -Cl, -CH3, 또는 -CN이고;
    RA2는 H 또는 F임.
  11. 제1항에 있어서, RB는 H인, 화합물.
  12. 제1항에 있어서, RB는 Me인, 화합물.
  13. 제1항에 있어서, RC는 -CH=CH2인, 화합물.
  14. 제1항에 있어서, RC는 -C≡C-CH3인, 화합물.
  15. 제1항에 있어서, RA1은 -Cl, -F, -CH3 또는 -CN인, 화합물.
  16. 제1항에 있어서, RA1은 -Cl인, 화합물.
  17. 제1항에 있어서, RA2는 -H인, 화합물.
  18. 제1항에 있어서, RA2는 -F인, 화합물.
  19. 제1항에 있어서,
    RA1은 -Cl이고;
    RA2는 -H이고;
    RC는 -C≡C-CH3인, 화합물.
  20. 제1항에 있어서,
    RA1은 -CN이고;
    RA2는 -F이고;
    RC는 -C≡C-CH3인, 화합물.
  21. 제2항, 제4항, 제6항 또는 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    RA1은 -Cl, -CH3이고;
    RA2는 -H 또는 -F이고;
    RB는 -H 또는 -Me이고;
    RC는 -C≡C-CH3인, 화합물.
  22. 표 1, 또는 표 2, 또는 표 3, 또는 표 4에 열거된 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체.
  23. 하기 구조 중 하나를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:


    또는 .
  24. 하기 구조 중 하나를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:

    또는 .
  25. 하기 구조 중 하나를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체:

    또는 .
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체 또는 동위원소체, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  28. 단백질 키나아제의 억제 방법으로서, 단백질 키나아제를 유효량의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 억제 방법.
  29. 제28항에 있어서, 단백질 키나아제는 BTK인, 억제 방법.
  30. BTK 의존성 병태의 치료 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법.
  31. 제30항에 있어서, BTK 의존성 병태는 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 혈전색전성 질환인, 치료 방법.
  32. 제31항에 있어서, 자가면역 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 건선, 쇼그렌 증후군, 또는 전신 홍반성 루푸스인, 치료 방법.
  33. 제26항에 있어서, 염증성 질환은 두드러기인, 치료 방법.
  34. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 이성질체, 호변이성질체, 라세미체, 동위원소체, 또는 약학 조성물의, 의약의 제조에 있어서의 용도.
  35. 제34항에 있어서, 의약은 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 혈전색전성 질환의 치료를 위한 것인, 용도.
  36. 제35항에 있어서, 자가면역 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 건선, 쇼그렌 증후군, 또는 전신 홍반성 루푸스인, 용도.
  37. 제35항에 있어서, 염증성 질환은 두드러기인, 용도.
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