KR20230123926A - Dlx2 벡터 - Google Patents
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Abstract
본 개시내용은 AAV 벡터, 조성물 및 AAV 벡터에서 Dlx2 암호화 서열의 사용에 의해 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키는 것에 관한 방법에 관한 것이다.
Description
관련 출원에 대한 상호참조
본 출원은 2020년 9월 29일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/084,927호, 및 2021년 9월 23일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/247,417호에 대한 우선권을 주장하며, 이의 내용은 이들의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
서열목록의 포함
19,859 바이트(MS-Windows®에서 측정)이고, 2021년 9월 27일자로 생성된 파일명 P34836WO00_SL.txt에 포함된 서열목록은 본 명세서와 함께 전자적으로 제출되며, 이의 전체가 참조에 의해 원용된다.
기술분야
본 개시내용은 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키기 위해 인간 Dlx2을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용하는 방법 및 조성물을 포함한다.
뉴런은 종종 사멸되거나 손상되고, 신경학적 병태를 갖는 대상체에서 또는 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계(PNS)에 대한 손상 후에 재생될 수 없다.
신경아교세포는 뇌 손상 또는 신경학적 병태와 같은 CNS 또는 PNS에 대한 손상 후에 반응성이 된다.
현재, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이용하여 신경학적 병태를 갖는 인간 대상체에서의 기능적 신규 뉴런을 재생하는 데 이용될 수 있는 방법은 없다.
일 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(human distal-less homeobox 2: hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, hDlx2 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(glial fibrillary acid protein: GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(elongation factor-1 alpha: EF1-α) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(cytomegalovirus: CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element: WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
일 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); (e) 및 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 Dlx2 단백질을 암호화하는 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 암호화 서열은 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 폴리아데닐화 신호 서열을 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위해 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하며, 암호화 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 폴리아데닐화 신호를 포함하는, 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함한다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하며, 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고, 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 전달을 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 전달하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하되, 여기서, AAV는 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 및 폴리아데닐화 신호 서열을 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하며, 벡터는 필요로 하는 대상체에서 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있다.
양상에서, 본 개시내용은 대상체에게 아데노-연관 바이러스(AAV)를 전달하는 단계를 포함하는, 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는, (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 필요로 하는 대상체에 대한 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함한다.
양상에서, 본 개시내용은 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, hDlx2 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 상기 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위해 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서 상기 AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 상기 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위해 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서 상기 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, 상기 AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하며, 상기 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, 상기 AAV는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고, 상기 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및 (c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
도 1A는 CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 1B는 EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 1C는 CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 1D는 EF-1α:Gfa681: Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 2A는 CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 2B는 EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 2C는 CE: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 2D는 EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 3A는 CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 3B는 EF-1α: Gfa2.2: Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 3C는 CE: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 3D는 EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 4는 U6:shRNA1:H1:shRNA2:7SK:shRNA3의 맵을 도시한다.
도 5A는 U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5B는 U6:shRNA: EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5C는 U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5D는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5E는 U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5F는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 6A는 U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6B는 U6:shRNA: EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6C는 U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6D는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6E는 U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6F는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 7은 생후 3일의 스프래그-돌리 래트 뇌로부터의 래트 성상세포 1차 배양물의 확립을 도시한다. 상단 좌측 패널은 GFAP 염색 세포의 영상을 제시한다. 상단 우측 패널은 SOX9 염색 세포의 영상을 제시한다. 하단 좌측 패널은 DAPI 염색 세포의 영상을 제시한다. 하단 우측 패널은 GFAP, SOX9 및 DAPI 염색 세포의 병합 영상을 제시한다.
도 8은 Dlx2 플라스미드 효율의 비교를 도시한다. 1차 래트 성상세포 세포는 P44(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40), P60(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:약칭된 키메라 인트론: WPRE:SV40) 및 P75(CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40) 중 하나로 형질감염된다. 상단 패널은 세포의 Dlx2 염색을 나타내고, 하단 패널은 세포의 합병된 Dlx2 및 DAPI 염색을 나타낸다.
도 9A 및 도 9B는 1차 래트 성상세포에의 AAV 입자 형질도입의 정량적 분석을 도시한다. 도 9A는 5×105 vg/세포, 2×105 vg/세포 및 5×104 vg/세포의 MOI에서의 AAV9-P12 (pGfa681:GFP) 및 AAV5-P7(pEF-1α:GFP)의 형질도입률 백분율을 제시한다. 도 9B는 2×104개의 세포/웰, 1.5×104개의 세포/웰, 1×104개의 세포/웰 및 5×103개의 세포/웰의 일련의 밀도에서 파종한 세포에서의 AAV9-P12(pGfa681:GFP)의 형질도입률 백분율을 제시하고, 100㎕의 배지 중 2㎕, 1㎕, 0.5㎕, 0.25㎕, 0.125㎕의 1×1013 vg/㎖ 바이러스의 일련의 양에서 바이러스로 감염된다.
도 10은 NXL-P104(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-bGHpA) 또는 NXL-P105(CE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 24시간 후에 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)로 면역염색한 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
도 11은 NXL-P133(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA), NXL-P137(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA) 또는 NXL-P131(EE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 24시간 후에 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)로 면역염색한 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
도 12는 AAV9-P133(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 6일 후 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)에 의해 면역염색된 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
서열의 간단한 설명
핵산 서열 및 아미노산 서열의 목록은 표 1에 제공된다.
[표 1]
도 1B는 EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 1C는 CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 1D는 EF-1α:Gfa681: Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 2A는 CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 2B는 EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 2C는 CE: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 2D는 EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 3A는 CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 3B는 EF-1α: Gfa2.2: Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 3C는 CE: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 3D는 EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 4는 U6:shRNA1:H1:shRNA2:7SK:shRNA3의 맵을 도시한다.
도 5A는 U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5B는 U6:shRNA: EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5C는 U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5D는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5E는 U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 5F는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40의 맵을 도시한다.
도 6A는 U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6B는 U6:shRNA: EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6C는 U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6D는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6E는 U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 6F는 U6:shRNA: EF-1α: Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH의 맵을 도시한다.
도 7은 생후 3일의 스프래그-돌리 래트 뇌로부터의 래트 성상세포 1차 배양물의 확립을 도시한다. 상단 좌측 패널은 GFAP 염색 세포의 영상을 제시한다. 상단 우측 패널은 SOX9 염색 세포의 영상을 제시한다. 하단 좌측 패널은 DAPI 염색 세포의 영상을 제시한다. 하단 우측 패널은 GFAP, SOX9 및 DAPI 염색 세포의 병합 영상을 제시한다.
도 8은 Dlx2 플라스미드 효율의 비교를 도시한다. 1차 래트 성상세포 세포는 P44(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40), P60(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:약칭된 키메라 인트론: WPRE:SV40) 및 P75(CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40) 중 하나로 형질감염된다. 상단 패널은 세포의 Dlx2 염색을 나타내고, 하단 패널은 세포의 합병된 Dlx2 및 DAPI 염색을 나타낸다.
도 9A 및 도 9B는 1차 래트 성상세포에의 AAV 입자 형질도입의 정량적 분석을 도시한다. 도 9A는 5×105 vg/세포, 2×105 vg/세포 및 5×104 vg/세포의 MOI에서의 AAV9-P12 (pGfa681:GFP) 및 AAV5-P7(pEF-1α:GFP)의 형질도입률 백분율을 제시한다. 도 9B는 2×104개의 세포/웰, 1.5×104개의 세포/웰, 1×104개의 세포/웰 및 5×103개의 세포/웰의 일련의 밀도에서 파종한 세포에서의 AAV9-P12(pGfa681:GFP)의 형질도입률 백분율을 제시하고, 100㎕의 배지 중 2㎕, 1㎕, 0.5㎕, 0.25㎕, 0.125㎕의 1×1013 vg/㎖ 바이러스의 일련의 양에서 바이러스로 감염된다.
도 10은 NXL-P104(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-bGHpA) 또는 NXL-P105(CE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 24시간 후에 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)로 면역염색한 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
도 11은 NXL-P133(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA), NXL-P137(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA) 또는 NXL-P131(EE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 24시간 후에 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)로 면역염색한 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
도 12는 AAV9-P133(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA)로 형질감염 6일 후 항-Dlx2 항체 및 DAPI(핵 염색)에 의해 면역염색된 래트 피질 성상세포(RCA)를 도시한다.
서열의 간단한 설명
핵산 서열 및 아미노산 서열의 목록은 표 1에 제공된다.
[표 1]
달리 정의되지 않는 한, 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시내용이 속하는 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 용어가 단수로 제공되는 경우, 본 발명자는 또한 복수의 해당 용어에 의해 기재되는 개시내용의 양상을 상정한다. 참조에 의해 원용되는 참고문헌에서 사용되는 용어 및 정의의 설명이 있는 경우에, 본 출원에서 사용되는 용어는 본 명세서에 제공된 정의를 가질 것이다. 사용되는 다른 기술적 용어는, 이들이 다양한 기술-전문 사전, 예를 들어, 문헌["The American Heritage® Science Dictionary" (Editors of the American Heritage Dictionaries, 2011, Houghton Mifflin Harcourt, Boston and New York), the "McGraw-Hill Dictionary of Scientific and Technical Terms" (6th edition, 2002, McGraw-Hill, New York), 또는 "Oxford Dictionary of Biology" (6th edition, 2008, Oxford University Press, Oxford and New York)]에 의해 예시되는 바와 같이 사용되는 당업계의 보통의 의미를 갖는다.
예를 들어, 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 비특허 간행물을 포함하는 본 명세서에 인용된 임의의 참고문헌은 이들의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
대안의 그룹화가 제시될 때, 대안의 그룹화를 구성하는 구성원의 임의의 및 모든 조합이 구체적으로 생각된다. 예를 들어, 항목이 A, B, C 및 D로 이루어진 군으로부터 선택된다면, 본 발명자들은 각각의 대안을 개별적으로(예를 들어, A 단독, B 단독 등)뿐만 아니라 A, B와 D; A와 C; B와 C 등과 같은 조합을 구체적으로 생각한다. "및/또는"이라는 용어는 둘 이상의 항목의 목록에서 사용될 때 단독으로 또는 다른 열거된 항목 중 어느 하나 이상과 조합하여 열거된 항목 중 어느 하나를 의미한다. 예를 들어, "A 및/또는 B"라는 표현은 A와 B 중 하나 또는 둘 다 - 즉, A 단독, B 단독 또는 A와 B의 조합 중 하나 또는 둘 다를 의미하는 것으로 의도된다. "A, B 및/또는 C"라는 표현은 A 단독, B 단독, C 단독, A와 B의 조합, A와 C의 조합, B와 C의 조합 또는 A, B와 C의 조합을 의미하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 수의 범위가 제공될 때, 범위는 범위의 끝뿐만 아니라 범위의 정해진 끝 사이의 임의의 수를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, "1과 10 사이"는 1과 10 사이의 임의의 수뿐만 아니라 숫자 1 및 숫자 10을 포함한다.
용어 "약"이 수에 대해 사용될 때, 이는 플러스 또는 마이너스 10%를 의미하는 것으로 이해된다. 예를 들어, "약 100"은 90 내지 110을 포함할 것이다.
본 명세서에 제공된 임의의 조성물 또는 벡터는 본 명세서에 제공된 임의의 방법과 함께 사용하기 위한 것으로 구체적으로 생각된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 방법 및 조성물은 벡터를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 염색체 DNA로부터 물리적으로 분리되는 원형, 이중가닥 DNA 분자를 지칭한다. 용어 "벡터"는 용어 "플라스미드"와 상호 호환적으로 사용될 수 있다는 것이 주목되어야 한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 벡터는 재조합 벡터이다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 벡터"는 재조합 핵산을 포함하는 벡터를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "재조합 핵산"은 이하로 제한하지 않고, 분자 클로닝과 같은 유전자 재조합 실험 방법에 의해 형성된 핵산 분자를 지칭한다. 재조합 벡터는, 이하로 제한하지 않고, 분자 클로닝과 같은 유전자 재조합 실험 방법에 의해 형성될 수 있다. 또한, 제한하는 일 없이, 당업자는 개개 뉴클레오타이드에 의해 또는 상이한 기존의 벡터로부터의 핵산 분자를 함께 스플라이싱함으로써 플라스미드 합성을 통해 드노보로 재조합 벡터를 생성할 수 있다.
아데노-연관 바이러스(AAV)는 인간 및 추가적인 영장류 종을 감염시키는 복제-결함, 비-외피 데펜도파보바이러스(Dependoparvovirus) 바이러스이다. AAV는 임의의 종에서 질환을 야기하는 것으로 알려져 있지 않지만, 이들은 약한 면역 반응을 야기할 수 있다. AAV는 분할 세포 및 휴지 세포를 감염시킬 수 있다. AAV는 AAVS1 좌위로 지칭되는 염색체 19(GenBank 수탁번호 AC010327.8의 뉴클레오타이드 7774 내지 11429)에서 부위 특이적인 인간 게놈에 안정적으로 통합되지만, 인간 게놈에서의 다른 좌위에서 무작위 통합이 가능하다.
AAV는 약 4700개 뉴클레오타이드 길이의 단일 가닥 DNA를 갖는 선형 게놈을 포함한다. AAV의 게놈은 또한 게놈의 각 단부에서 145개의 뉴클레오타이드-길이 역위 말단 반복(inverted terminal repeat: ITR)을 포함한다. ITR은 2개의 바이러스 게놈 rep(복제에 대해, 비구조적 단백질을 암호화) 및 cap(캡시드에 대해, 구조적 단백질을 암호화)에 측접한다. ITR은 AAV의 게놈 구조, 복제 및 패키징에 대한 시스-작용성 요소 요구 모두를 포함한다.
유전자 요법 접근에서 사용될 때, AAV 게놈 서열의 rep 및 cap 유전자는 제거되며, 두 AAV ITR 사이에 위치된 관심 DNA로 대체된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "AAV 벡터 작제물"은 두 AAV ITR 서열 사이에 삽입된 목적하는 서열을 포함하는 DNA 분자를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "AAV 벡터"는 DNA 벡터 작제물로 패키징된 AAV를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "AAV 벡터 혈청형"은 AAV 벡터의 캡시드 단백질 내의 변이를 주로 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "vg"는 AAV 역가 결정과 관련하여 바이러스 게놈을 지칭한다.
양상에서, AAV 벡터는 AAV 벡터 혈청형 1, AAV 벡터 혈청형 2, AAV 벡터 혈청형 3, AAV 벡터 혈청형 4, AAV 벡터 혈청형 5, AAV 벡터 혈청형 6, AAV 벡터 혈청형 7, AAV 벡터 혈청형 8, AAV 벡터 혈청형 9, AAV 벡터 혈청형 10, AAV 벡터 혈청형 11 및 AAV 벡터 혈청형 12로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 2, AAV 혈청형 5 및 AAV 혈청형 9로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 1이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 2이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 3이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 4이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 5이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 6이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 7이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 8이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 9이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 10이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 11이다. 일 양상에서, AAV 벡터는 AAV 혈청형 12이다.
양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 1 ITR, AAV 혈청형 2 ITR, AAV 혈청형 3 ITR, AAV 혈청형 4 ITR, AAV 혈청형 5 ITR, AAV 혈청형 6 ITR, AAV 혈청형 7 ITR, AAV 혈청형 8 ITR, AAV 혈청형 9 ITR, AAV 혈청형 10 ITR, AAV 혈청형 11 ITR 및 AAV 혈청형 12 ITR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 1 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 2 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 3 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 4 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 5 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 6 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 7 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 8 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 9 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 10 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 11 ITR이다. 일 양상에서, AAV 벡터 ITR은 AAV 혈청형 12 ITR이다.
양상에서, 적어도 하나의 AAV 벡터 ITR 핵산 서열은 서열번호 1 및 9로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 적어도 하나의 AAV 벡터 ITR 핵산 서열은 서열번호 1이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 AAV 벡터 ITR 핵산 서열은 서열번호 9이다.
양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 1에 대해 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9와 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, AAV ITR 핵산 서열은 서열번호 9에 대해 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
둘 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열에 관해 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "동일성 백분율" 또는 "동일한 백분율"은 (i) 비교창("정렬 가능한" 영역 또는 영역들)에 걸쳐 두 최적으로 정렬된 서열(뉴클레오타이드 또는 아미노산)을 비교하고, (ii) 매칭 위치 수를 얻기 위해 (뉴클레오타이드 서열에 대해) 동일한 핵산 염기 또는 (단백질 및 폴리펩타이드에 대해) 아미노산 잔기가 서열 둘 다에서 생기는 위치 수를 결정하고, (iii) 매칭된 위치의 수를 비교창에서 위치의 총 수로 나누고, 이어서, (iv) 이 몫에 100%를 곱하고 동일성 백분율을 얻음으로써 계산된다. "동일성 백분율"이 구체화된 특정 비교창 없이 참조 서열에 대해 계산된다면, 동일성 백분율은 정렬 영역에 대해 매칭된 위치의 수를 참조 서열의 총 길이로 나눔으로써 결정된다. 따라서, 본 출원의 목적을 위해, 두 서열(질의 및 대상)이 (이들의 정렬에서 갭을 허용하면서) 최적으로 정렬될 때, 질의 서열에 대한 "동일성 백분율"은 두 서열 사이의 동일한 위치 수를 이의 길이(또는 비교창)에 대한 질의 서열 위치의 총 수로 나누고, 이어서, 100%를 곱한 것과 동일하다.
서열 동일성의 백분율이 아미노산에 대해 사용될 때, 동일하지 않은 잔기 위치가 종종 보존적 아미노산 치환만큼 상이하며, 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예를 들어, 전하 또는 소수성)을 갖는 다른 아미노산 잔기를 치환하고, 따라서 분자의 기능적 특성을 변화시키지 않는다는 것이 인식된다. 보존적 치환에서 서열이 상이할 때, 치환의 보존적 특성을 보정하도록 서열 동일성 백분율은 위쪽으로 조정될 수 있다. 이러한 보존적 치환만큼 상이한 서열은 "서열 유사성" 또는 "유사성"을 갖는 것으로 언급된다.
이들의 동일성 백분율을 계산하기 위한 서열의 최적의 정렬을 위해, 둘 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 서열 동일성 또는 유사성을 비교하는 데 사용될 수 있는 다양한 쌍별 또는 다중 서열 정렬 알고리즘 및 프로그램, 예컨대, ClustalW 또는 Basic Local Alignment Search Tool®(BLAST™) 등은 당업계에 공지되어 있다. 다른 정렬 및 비교 방법은 당업계에 공지되어 있지만, 두 서열 사이의 정렬 및 동일성 백분율(상기 기재한 동일성 백분율 범위를 포함)은 ClustalW 알고리즘에 의해 결정될 수 있고, 예를 들어, 문헌[Chenna et al., "Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs," Nucleic Acids Research 31: 3497-3500 (2003); Thompson et al., "Clustal W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice," Nucleic Acids Research 22: 4673-4680 (1994); Larkin MA et al., "Clustal W and Clustal X version 2.0," Bioinformatics 23: 2947-48 (2007); 및 Altschul et al. "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)]을 참조하고, 이의 전문 및 개시내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
두 뉴클레오타이드 서열에 대해 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "상보성 백분율" 또는 "상보적 백분율"은 동일성 백분율의 개념과 유사하지만, 질의 및 대상 서열이 선형으로 배열되고 루프, 줄기 또는 헤어핀과 같은 2차 폴딩 구조 없이 최적으로 염기쌍을 형성할 때 대상 서열의 뉴클레오타이드에 최적으로 염기쌍을 형성하거나 혼성화되는 질의 서열의 뉴클레오타이드의 백분율을 지칭한다. 이러한 상보성 백분율은 두 DNA 가닥, 두 RNA 가닥 또는 DNA 가닥 및 RNA 가닥 사이에서 일 수 있다. "상보성 백분율"은 (i) 비교창에 대해 선형 및 완전히 연장된 배열(즉, 폴딩 또는 2차 구조 없음)에서 두 뉴클레오타이드 서열에 최적으로 염기쌍을 형성하거나 혼성화하고, (ii) 상보성 위치 수를 얻기 위해 비교창에 대해 두 서열 사이에서 염기쌍을 형성하는 위치 수를 결정하고, (iii) 상보성 위치의 수를 비교창에서 위치의 총 수로 나누고, 그리고 (iv) 두 서열 사이의 상보성 백분율을 수득하기 위해 이 몫에 100%를 곱함으로써 계산될 수 있다. 두 서열의 최적의 염기쌍은 수소 결합을 통해 G-C, A-T 및 A-U와 같은 뉴클레오타이드 염기의 알려진 짝짓기에 기반하여 결정될 수 있다. "상보성 백분율"이 특정 비교창을 명시하지 않고 참조 서열에 대해 계산된다면, 동일성 백분율은 두 선형 서열 사이의 상보성 위치 수를 참조 서열의 총 길이로 나눔으로써 결정된다. 따라서, 본 출원의 목적을 위해, 두 서열(질의 및 대상)이 (미스매치 또는 비-염기쌍 뉴클레오타이드를 허용하면서) 최적으로 염기를 형성할 때, 질의 서열에 대한 "상보성 백분율"은 두 서열 사이의 염기쌍 위치 수를 길이에 대한 질의 서열 내 위치의 총 수로 나누고, 이어서, 100%를 곱한 것과 동일하다.
용어 "폴리뉴클레오타이드", "핵산 서열" 또는 "핵산 분자"의 사용은 데옥시리보핵산(DNA)을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 대한 본 개시내용을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 예를 들어, 리보핵산(RNA) 분자가 또한 생각된다. 당업자는 폴리뉴클레오타이드 및 핵산 분자가 리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드와 데옥시리보뉴클레오타이드의 조합을 포함할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 이러한 데옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드는 천연 유래 분자와 합성 유사체를 둘 다 포함한다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 또한 단일 가닥 형태, 이중 가닥 형태, 헤어핀, 줄기-및-루프 구조 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 모든 형태의 서열을 포괄한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 핵산 분자는 DNA 분자이다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 핵산 분자는 RNA 분자이다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 핵산 분자는 단일 가닥이다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 핵산 분자는 이중가닥이다. 핵산 분자는 폴리펩타이드 또는 소형 RNA를 암호화한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "폴리펩타이드"는 적어도 2개의 공유 결합된 아미노산의 쇄를 지칭한다. 폴리펩타이드는 본 명세서에 제공된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 수 있다. 본 명세서에 제공된 단백질은 본 명세서에 제공된 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있다. 단백질은 본 명세서에 제공된 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "단백질"은 세포에 구조 또는 효소 활성을 제공할 수 있는 아미노산 잔기의 쇄를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "암호화 서열"은 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "CpG 부위" 또는 "CG 부위"는 사이토신 및 구아닌이 하나의 포스페이트기에 의해서만 분리되는 DNA 서열의 영역을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 "CG 섬"의 "CpG 섬"이라는 용어는 고빈도로 생기는 CpG 부위를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "코돈"은 3개의 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "코돈 최적화된"은 서열의 적어도 하나의 코돈을 숙주 세포 유전자에서 더 빈번하게 또는 가장 빈번하게 사용되는 코돈으로 대체하면서 본래의 아미노산 서열을 유지함으로써 관심의 숙주 세포에서 향상된 발현에 대해 변형된 암호를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "인핸서"는 회합된 전사 가능한 DNA 서열 또는 암호화 서열의 전사 및 발현, 적어도 특정 조직(들)에서, 발생 단계(들) 및/또는 조건(들)을 개시하고/하거나 보조하고/하거나, 영향을 미치고/미치거나, 야기하고/하거나 촉진시키도록 작동하는 DNA 서열의 영역을 지칭한다. 양상에서, 인핸서는 시스 인핸서이다. 일 양상에서, 인핸서는 트랜스 인핸서이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "CE"는 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터 인핸서 서열을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "EE"는 Ef1 알파 프로모터 인핸서 서열을 지칭한다.
인핸서 서열은 당업계에 잘 공지된 게놈 기법을 이용함으로써 확인될 수 있다. 비제한적 예는 리포터 유전자 및 차세대 서열분석 방법, 예컨대, 염색질 면역침전 서열분석(ChIP-seq), DNase I 과민성 서열분석(DNase-seq), 마이크로코커스 뉴클레아제 서열분석(MNase-seq), 조절 요소의 폼알데하이드-보조 단리 서열분석(FAIRE-seq) 및 트랜스포사제 접근 가능 염색질 서열분석에 대한 분석(ATAC-seq)의 사용을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "작동 가능하게 연결된"은, 프로모터 등이 적어도 특정 조직(들), 발생 단계(들) 및/또는 조건(들)에서 회합된 전사 가능한 DNA 서열 또는 암호화 서열의 전사 및 발현을 개시하고/하거나, 보조하고/하거나, 영향을 미치고/미치거나, 야기하고/하거나 촉진시키도록 작동하도록, 프로모터 또는 다른 조절 요소와 유전자(또는 이식유전자)의 회합된 전사 가능한 DNA 서열 또는 암호화 서열 사이의 기능성 결합을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "조절 요소"는 작동 가능하게 연결된 서열의 발현을 양성으로 또는 음성으로 조절하는 임의의 서열을 지칭한다. "조절 요소"는 세포에서 유전자 또는 전사 가능한 DNA 서열의 발현을 조절하거나 가능하게 하기 위한 적합하거나, 필요하거나 또는 바람직한 프로모터, 인핸서, 리더, 전사 개시 부위(TSS), 링커, 5' 및 3' 비번역 영역(UTR), 인트론, 폴리아데닐화 신호 및 종결 영역 또는 서열 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 추가적인 조절 요소(들)는 선택적일 수 있고, 유전자 또는 전사 가능한 DNA 서열의 발현을 향상시키거나 최적화하는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "p2A" 또는 "P2A"는 돼지 테스코바이러스-1(porcine teschovirus-1)로부터의 2A 자기-절단 펩타이드 서열을 지칭한다. 양상에서, 링커는 P2A 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "프로모터"는 RNA 중합효소 결합 부위, 전사 개시 부위, 및/또는 TATA 박스를 포함하고 회합된 전사 가능한 폴리뉴클레오타이드 서열 및/또는 유전자(또는 이식유전자)의 전사 및 발현을 보조하거나 촉진시키는 DNA 서열을 지칭한다. 프로모터는 합성에 의해 생성되거나, 변형되거나 또는 알려진 또는 천연 유래 프로모터 서열 또는 다른 프로모터 서열로부터 유래될 수 있다. 프로모터는 또한 둘 이상의 이종성 서열의 조합을 포함하는 키메라 프로모터를 포함할 수 있다. 따라서 본 출원의 프로모터는 조성물에서 유사하지만 공지되어 있거나 또는 본 명세서에 제공된 다른 프로모터(들)와 동일하지 않은 프로모터 서열의 변이체를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "인트론"은 mRNA 전구체로부터의 전령 RNA(mRNA) 성숙으로서 RNA 스플라이싱에 의해 제거되는 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, "mRNA" 또는 "전령 RNA"는 유전자의 유전자 서열에 대응하는 단일 가닥 RNA를 지칭한다.
mRNA의 발현은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. mRNA 발현을 측정하는 것의 비제한적인 예는 정량적 역전사효소 중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR), RNA 블롯(예를 들어, 노던 블롯) 및 RNA 서열분석을 포함한다. 발현의 차이는 절대 정량화 또는 상대 정량화로서 기재될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Livak and Schmittgen, Methods, 25:402-408 (2001)]을 참조한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 "게놈 편집" 또는 "유전자 편집"은 표적화된 편집 기법을 이용하는 게놈에서의 관심의 뉴클레오타이드 서열의 표적화된 돌연변이유발, 삽입, 결실, 역위, 치환 또는 전좌를 지칭한다. 관심 뉴클레오타이드 서열은 임의의 길이, 예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 25, 적어도 30, 적어도 35, 적어도 40, 적어도 45, 적어도 50, 적어도 75, 적어도 100, 적어도 250, 적어도 500, 적어도 1000, 적어도 2500, 적어도 5000, 적어도 10,000 또는 적어도 25,000개의 뉴클레오타이드를 가질 수 있다. 유전자 편집 기법의 비제한적 예는 짧은 간섭 RNA(siRNA) 기술, 짧은 헤어핀 RNA(shRNA) 기술, 마이크로RNA(miRNA) 기술, 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO) 기술 또는 CRISPR/CAS 기술이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "ASO" 또는 "안티센스 올리고뉴클레오타이드"는 세포 및 침묵 유전자 내에서 이들의 표적 RNA 서열에 결합하는 짧은, 단일 가닥 핵산이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "암호화 영역", "유전자 영역" 또는 "유전자"는 기능성 단위를 생성할 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 비제한적 예는 단백질 또는 비암호화 RNA 분자를 포함한다. "암호화 영역", "유전자" 또는 "유전자 영역"은 프로모터, 인핸서 서열, 리더 서열, 전사 개시 부위, 전사 중단 부위, 폴리아데닐화 부위, 하나 이상의 엑손, 하나 이상의 인트론, 5'-UTR, 3'-UTR 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
양상에서, 유전자 편집은 돌연변이체 헌팅턴(Htt) 응집물을 표적화한다. 일 양상에서 유전자 편집은 비-암호화 RNA 분자에 의한다. 비-암호화 RNA 분자의 비제한적 예는 마이크로RNA(miRNA), miRNA 전구체(pre-miRNA), 짧은 간섭 RNA(siRNA), 소형 RNA(18 내지 26개의 뉴클레오타이드 길이) 및 이를 암호화하는 전구체, 이질염색성 siRNA(hc-siRNA), 피위-상호작용RNA(Piwi-interacting RNA: piRNA), 헤어핀 이중가닥 RNA(헤어핀 dsRNA), 트랜스-작용성 siRNA(ta-siRNA), 천연 유래 안티센스 siRNA(nat-siRNA), CRISPR RNA(crRNA), tracer RNA(tracrRNA), 가이드 RNA(gRNA) 및 단일-가이드 RNA(sgRNA)를 포함한다. 일 양상에서, shRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, siRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, ASO는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, miRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, gRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, pre-miRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, 소형 RNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, hc-siRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, piRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, 헤어핀 dsRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, ta-siRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, nat-siRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, crRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, tracrRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, sgRNA는 Htt 유전자를 표적화한다. 일 양상에서, shRNA는 서열번호 15 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함한다. 일 양상에서, shRNA는 핵산 서열 서열번호 15를 포함한다. 일 양상에서, shRNA는 핵산 서열 서열번호 16을 포함한다. 일 양상에서, shRNA는 핵산 서열 서열번호 17을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "공여자 분자" 또는 "공여자 서열"은 게놈 내로의 부위 지정, 표적화된 삽입을 위해 선택된 핵산 서열로서 정의된다. 양상에서, 공여자 분자는 "공여자 서열"을 포함한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 표적화된 편집 기법은 하나 이상의, 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상 또는 다섯 이상의 공여자 분자 또는 공여자 서열을 포함한다. 본 명세서에 제공된 공여자 분자 또는 공여자 서열은 임의의 길이를 가질 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 공여자 분자 또는 공여자 서열은 2 내지 50,000, 2 내지 10,000, 2 내지 5000, 2 내지 1000, 2 내지 500, 2 내지 250, 2 내지 100, 2 내지 50, 2 내지 30, 15 내지 50, 15 내지 100, 15 내지 500, 15 내지 1000, 15 내지 5000, 18 내지 30, 18 내지 26, 20 내지 26, 20 내지 50, 20 내지 100, 20 내지 250, 20 내지 500, 20 내지 1000, 20 내지 5000 또는 20 내지 10,000개의 뉴클레오타이드 길이이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 "HTT"는 Htt 특이적 가이드 RNA(gRNA) 및/또는 공여자 서열을 지칭한다.
본 명세서에 제공된 부위-특이적 뉴클레아제는 표적화된 편집 기법의 부분으로서 사용될 수 있다. 부위-특이적 뉴클레아제의 비제한적 예는 메가뉴클레아제, 아연 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성체-유사 효과기 뉴클레아제(TALEN), RNA-가이드 뉴클레아제(예를 들어, Cas9 및 Cpf1), 재조합효소(이하로 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어, DNA 인식 모티프에 부착된 세린 재조합효소, DNA 인식 모티프에 부착된 타이로신 재조합효소), 트랜스포사제(이하로 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어, DNA 결합 도메인에 부착된 DNA 트랜스포사제) 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
부위-특이적 뉴클레아제, 예컨대, 메가뉴클레아제, ZFN, TALEN, 아르고노트 단백질(아르고노트 단백질의 비제한적 예는 써무스 써모필루스 아르고노트(Thermus thermophilus Argonaute: TtAgo), 파이로코커스 푸리오서스 아르고노트(Pyrococcus furiosus Argonaute: PfAgo), 나트로노박테리움 그레고리 아르고노트(Natronobacterium gregoryi Argonaute: NgAgo), 이들의 상동체 또는 이들의 변형된 형태)를 포함하고, Cas9 뉴클레아제(RNA-가이드 뉴클레아제의 비제한적 예는 Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9(Csn1 및 Csx12로도 알려짐), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY, 이들의 상동체 또는 이들의 변형된 형태를 포함함)는 이후에 자연적 과정에 의해 수선되는 게놈 서열의 표적 부위에서 이중-가닥 DNA 파손을 유도한다. 이어서, 절단 부위에서 서열 변형이 일어날 수 있고, 이는 유전자 붕괴 또는 핵산 서열의 통합을 초래하는 역위, 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 RNA-가이드 뉴클레아제는 Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9(Csn1 및 Csx12로도 알려짐), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY, 이들의 상동체 또는 이들의 변형된 형태로 이루어진 군으로부터 선택된다.
양상에서, 본 명세서에 기재된 표적화된 편집 기법은 RNA-가이드 뉴클레아제의 사용을 포함한다.
임의의 특정 과학 이론으로 제한되지는 않지만, CRISPR/CAS 뉴클레아제는 박테리아 및 고세균의 적응 면역계의 부분이며, 서열-의존적 방식으로 표적 DNA를 절단함으로써 바이러스와 같은 침윤성 핵산에 대해 이들을 보호한다. 면역은 CRISPR 좌위의 근위 단부에서 대략 20개의 뉴클레오타이드 길이 CRISPR 반복부(CRISPR 어레이) 사이의 스페이서로서 알려진 침윤성 DNA의 짧은 단편의 통합에 의해 획득된다. 잘 기재된 Cas 단백질은 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes)에서 클래스 2, II형 CRISPR/Cas 시스템의 부분인 Cas9 뉴클레아제(Csn1로도 알려짐)이다. 문헌[Makarova et al. Nature Reviews Microbiology (2015) doi: 10.1038/nrmicro3569]을 참조한다. Cas9는 이의 아미노 말단에서 RuvC-유사 뉴클레아제 도메인 및 단백질의 중간에 위치된 HNH-유사 뉴클레아제 도메인을 포함한다. Cas9 단백질은 또한 PAM-상호작용(PI) 도메인, 인식 엽(recognition lobe)(REC) 및 BH 도메인을 함유한다. 다른 II형 시스템인 Cpf1 뉴클레아제는 Cas9와 유사한 방식으로 작용하지만, Cpf1은 tracrRNA를 필요로 하지 않는다. 문헌[Cong et al. Science (2013) 339: 819-823; Zetsche et al., Cell (2015) doi: 10.1016/j.cell.2015.09.038]; 미국 특허 공개 제2014/0068797호; 미국 특허 공개 제2014/0273235호; 미국 특허 공개 제2015/0067922호; 미국 특허 제8,697,359호; 미국 특허 제8,771,945호; 미국 특허 제8,795,965호; 미국 특허 제8,865,406호; 미국 특허 제8,871,445호; 미국 특허 제8,889,356호; 미국 특허 제8,889,418호; 미국 특허 제8,895,308호; 및 미국 특허 제8,906,616호를 참조하며, 이들 각각은 본 명세서에서 전문이 참조에 의해 원용된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 Cas9 뉴클레아제 유전자, Htt 특이적 gRNA 및 공여자 서열을 포함한다. 양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 Cas9 뉴클레아제 유전자, Htt 특이적 gRNA 및 공여자 서열 및 Dlx2 유전자 서열을 포함한다. 양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 Cas9 뉴클레아제 유전자, Htt 특이적 shRNA 및 공여자 서열을 포함한다. 양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 Cas9 뉴클레아제 유전자, Htt 특이적 shRNA 및 공여자 서열 및 Dlx2 유전자 서열을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "신경아교" 또는 "신경아교세포"는 CNS 또는 PNS에서 비-뉴런 세포를 지칭한다. 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 희소돌기아교세포, 적어도 하나의 성상세포, 적어도 하나의 NG2 세포, 적어도 하나의 뇌실막 세포 및 적어도 하나의 미세아교세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 희소돌기아교세포이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 NG2 세포이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 뇌실막 세포이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 미세아교세포이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 반응성 성상세포이다. 일 양상에서, 적어도 하나의 성상세포는 적어도 하나의 반응성 성상세포이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "성상세포"는 뇌의 중요한 구성성분인 신경아교세포를 지칭한다. 성상세포는 시냅스 형성 및 가소성, 칼륨 완충, 영양분 공급, 신경 또는 신경교 전달자의 분비 및 흡수, 및 혈액-뇌 장벽의 유지와 같은 뉴런 기능을 지지하는 데 관련된다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "반응성 성상세포"는 손상 또는 질환 후 성상세포의 비정상 상태를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "NG2 세포" 또는 "폴리덴드로사이트(polydendrocyte)"는 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸(CSPG4) 및 혈소판-유래 성장 인자(PDGFRA)에 대한 알파 수용체를 발현시키는 신경아교세포를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "뉴런" 또는 "뉴런 세포"는 시냅스를 통해 다른 뉴런과 통신하는 전기적으로 흥분성인 세포를 지칭한다. 양상에서, 뉴런은 단극성 뉴런, 양극성 뉴런, 유사단극성 뉴런 및 다극성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 뉴런은 단극성 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 양극성 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 비유사단극성 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 양극성 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 감각 뉴런, 운동 뉴런 및 개재뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 뉴런은 감각 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 운동 뉴런이다. 일 양상에서, 뉴런은 개재뉴런이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "기능성 뉴런"은 생물학적 과정을 수행할 수 있는 뉴런을 지칭한다. 제한하는 일 없이, 생물학적 과정의 예는 화학적 및 전기적 시냅스를 통한 정보의 처리 및 전달 및 통신을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "글루타메이트 뉴런"은 글루타메이트를 생성하고 흥분성 시냅스를 확립하는 뉴런의 하위부류를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "흥분성 시냅스"는 시냅스전 뉴런에서 활동전위가 시냅스후 세포에서 생기는 활동전위의 확률을 증가시키는 시냅스를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "활동전위" 또는 "신경충격"은 축삭돌기 막을 가로지르는 전기 충격을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "축삭돌기" 또는 "신경섬유"는 활동전위를 전도하는 뉴런을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "GABA성(GABAergic) 뉴런"은 GABA를 생성하고 저해 시냅스를 확립하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "GABA" 또는 "감마-아미노뷰티르산"은 세포 내로의 음으로 하전된 염소 이온 또는 세포 밖으로의 양으로 하전된 칼륨 이온의 흐름을 가능하게 하도록 이온 통로를 개방하는 화합물을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "저해 시냅스"는 활동전위를 생성하기 위해 시냅스후 뉴런의 막 전위를 역치로부터 이동시키는 시냅스를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "도파민작동성 뉴런"은 도파민을 생성하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "도파민"은 신경전달물질의 유형을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "신경전달물질"은 신경전달을 활성화시키는 내인성 화학물질의 부류를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "신경전달"은 신경전달물질이 뉴런 말단의 축삭돌기에 의해 방출되는 과정을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "아세틸 콜린성 뉴런" 또는 "콜린성 뉴런"은 아세틸콜린을 분비하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "아세틸콜린"은 신경전달물질의 유형을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "세로토닌 작동성 뉴런"은 세로토닌을 합성하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "세로토닌"은 신경전달물질의 유형을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "에피네프린 작동성 뉴런"은 에피네프린을 신경전달물질로서 방출하는 뉴런을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "운동 뉴런"은 세포체가 운동 피질, 뇌줄기 또는 척수에 위치되고 축삭돌기가 척수에 대해 또는 척수 밖으로 돌출되고 근육 및 샘을 직접적 또는 간접적으로 제어하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 펩타이드성 뉴런은 작은 펩타이드 분자를 이들의 신경전달물질로서 이용하는 뉴런의 서브세트를 지칭한다.
양상에서, 뉴런은 기능성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 GABA성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 도파민작동성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 콜린성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 세로토닌 작동성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 에피네프린 작동성 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 운동 뉴런이다. 일 양상에서, 기능성 뉴런은 펩타이드성 뉴런이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "전환하는" 또는 "전환된"은 물리적 형태 및/또는 생물학적 기능을 상이한 물리적 형태 및/또는 상이한 생물학적 기능으로 변화시키는 세포 유형을 지칭한다. 양상에서, 본 개시내용은 적어도 하나의 신경아교세포의 적어도 하나의 뉴런으로의 전환을 제공한다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포의 적어도 하나의 뉴런으로의 전환은 CNS 또는 PNS에서 일어난다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포의 적어도 하나의 뉴런으로의 전환은 CNS에서 일어난다. 일 양상에서, 적어도 하나의 신경아교세포의 적어도 하나의 뉴런으로의 전환은 PNS에서 일어난다.
양상에서, 본 개시내용은 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, hDlx2 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
일 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 여기서, 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 Dlx2 단백질을 암호화하는 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 제공하고, 이를 포함하며, 암호화 서열은 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 폴리아데닐화 신호 서열을 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위해 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 또는 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하며, 암호화 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV 벡터는 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 폴리아데닐화 신호를 포함하는, 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함한다.
양상에서, AAV 벡터는 AAV 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 양상에서, AAV 벡터는 바이러스 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. AAV 단백질 및 바이러스 단백질의 비제한적 예는 rep 및 cap 단백질을 포함한다.
디스탈리스 호메오박스 2(Distal-less homeobox 2: Dlx2; TES1로도 지칭됨)는 Dlx 유전자 패밀리의 구성원이고, 전뇌 및 두개안면 발생에 어떤 역할을 하는 호메오박스 함유 유전자이다.
양상에서, Dlx2 서열은 인간 Dlx2(hDlx2) 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 침팬지 Dlx2 서열, 보노보 Dlx2 서열, 오랑우탄 Dlx2 서열, 고릴라 Dlx2 서열, 마카크 Dlx2 서열, 마모셋 Dlx2 서열, 카푸친 Dlx2 서열, 개코원숭이 Dlx2 서열, 긴팔원숭이 Dlx2 서열 및 여우원숭이 Dlx2 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 침팬지 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 보노보 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 오랑우탄 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 고릴라 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 마카크 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 마모셋 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 카푸친 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 개코원숭이 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 긴팔원숭이 Dlx2 서열이다. 일 양상에서, Dlx2 서열은 여우원숭이 Dlx2 서열이다.
양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, Dlx2 핵산 서열은 서열번호 6과 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 70% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 75% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 80% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 85% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 90% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 91% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 92% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 93% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 94% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 95% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 96% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 97% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 98% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 99% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 99.5% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 99.8% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 99.9% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다. 일 양상에서, 핵산 암호화 서열은 서열번호 10과 적어도 100% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 Dlx2 단백질을 암호화한다.
신경아교세포섬유 산성 단백질로도 지칭되는 신경아교세포섬유 산 단백질(GFAP)은 중추신경계에서 발현되고 세포소통 및 혈액-뇌 장벽의 기능화에서 어떤 역할을 하는 단백질의 III형 중간필라멘트 패밀리의 구성원이다.
양상에서, 프로모터는 GFAP 프로모터, Sox9 프로모터, S100b 프로모터, A1dh1l1 프로모터, 리포칼린 2 (Lcn2) 프로모터, 글루타민 합성효소 프로모터, Aquaporin-4(AQP4) 프로모터, 희소돌기아교세포 전사 인자(Olig2) 프로모터, 및 시냅신 프로모터, NG2 프로모터, 이온화된 칼슘 결합 어댑터 분자 1(Iba1) 프로모터, 분화 클러스터 86(CD86) 프로모터, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 알파(PDGFRA) 프로모터, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFRB) 프로모터, 신장인자 1-알파(EF1a) 프로모터, CAG 프로모터, 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터, 유비퀴틴 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 프로모터는 GFAP 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 Sox9 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 Lcn2 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 글루타민 합성효소 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 AQP4 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 Olig2 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 시냅신 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 Iba1 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 CD86 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 PDGFRA 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 PDGFRB 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 EF1a 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 CAG 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 CMV 프로모터이다. 일 양상에서, 프로모터는 유비퀴틴 프로모터이다. 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 U6, H1, 7SK 및 U1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 U6이다. 일 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 H1이다. 일 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 H1이다. 일 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 7SK이다. 일 양상에서, 유비퀴틴 프로모터는 U1이다. 일 양상에서, U6은 서열번호 17의 핵산 서열을 포함한다.
양상에서, GFAP 프로모터는 세포에서 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP)로 불리는 단백질의 성상세포-특이적 발현을 지시하는 프로모터이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 인간 GFAP(hGFAP) 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 Gfa681, Gfa1.6 및 hGFA2.2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 Gfa681이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 Gfa1.6이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 hGFA2.2이다. 일 양상에서, GFAP Gfa681은 서열번호 3이다. 일 양상에서, GFAP Gfa1.6은 서열번호 4이다. 일 양상에서, hGFa2.2는 서열번호 12이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 서열번호 3이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 서열번호 4이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 서열번호 12이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "pGfa681"은 681 bp 크기의 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터 절단 서열을 지칭한다. "pGfa681" 및 "Gfa681"은 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다.
일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 침팬지 GFAP 프로모터 서열, 보노보 GFAP 프로모터 서열, 오랑우탄 GFAP 프로모터 서열, 고릴라 GFAP 프로모터 서열, 마카크 GFAP 프로모터 서열, 마모셋 GFAP 프로모터 서열, 카푸친 GFAP 프로모터 서열, 개코원숭이 GFAP 프로모터 서열, 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 서열 및 여우원숭이 GFAP 프로모터 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 침팬지 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 보노보 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 오랑우탄 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 고릴라 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 마카크 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 마모셋 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 카푸친 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 개코원숭이 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 서열이다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 서열은 여우원숭이 GFAP 프로모터 서열이다.
양상에서, GFAP 프로모터 서열은 적어도 100개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터는 적어도 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 추가 양상에서, GFAP 프로모터는 적어도 1000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 양상에서, GFAP 프로모터는 적어도 1500개의 뉴클레오타이드를 포함한다.
프로모터 서열의 단편이 작동 가능하게 연결된 핵산 분자의 전사를 구동시키는 작용을 할 수 있다는 것이 인식된다. 예를 들어, 제한하는 일 없이, 1000개의 뉴클레오타이드 프로모터가 500개의 뉴클레오타이드로 절단되고, 500개의 뉴클레오타이드 단편이 전사를 유발할 수 있다면, 500개의 뉴클레오타이드 단편은 "기능성 단편"으로 지칭된다.
양상에서, 프로모터는 적어도 10개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 50개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 100개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 150개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 200개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 250개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 300개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 350개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 400개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 450개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 적어도 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 50개의 뉴클레오타이드 내지 7500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 50개의 뉴클레오타이드 내지 5000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 50개의 뉴클레오타이드 내지 2500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 50개의 뉴클레오타이드 내지 1000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 50개의 뉴클레오타이드 내지 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 10개의 뉴클레오타이드 내지 7500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 10개의 뉴클레오타이드 내지 5000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 10개의 뉴클레오타이드 내지 2500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 10개의 뉴클레오타이드 내지 1000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 프로모터는 10개의 뉴클레오타이드 내지 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다.
양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 70% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 75% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 85% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 91% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 92% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 93% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 94% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 95% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 96% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 97% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 98% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99.5% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99.8% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99.9% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다. 일 양상에서, GFAP 프로모터 핵산 서열은 서열번호 3, 4, 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열에 대해 100% 동일한 서열 및 이의 기능성 단편을 포함한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 핵산 서열은 코돈 최적화된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 핵산 서열은 CpG 부위 고갈된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "뇌"는 신경계의 중심으로서 작용하는 기관을 지칭한다. 양상에서, 뇌는 대뇌, 대뇌 피질, 소뇌 및/또는 뇌 줄기를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대뇌 피질"은 대뇌의 신경조직의 외층을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "선조체" 또는 "선상체"는 전뇌의 피질하 기저핵에서 뉴런의 클러스터를 지칭하고, 복부 선조체 및 등쪽 선조체를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "흑질"은 중간뇌의 피질하 기저핵에서 뉴런의 클러스터를 지칭하고, 치밀부 및 그물부분을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "전뇌"는 뇌의 가장 앞쪽 부분을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "피각"은 전뇌의 기저부에 있는 둥근 구조를 지칭하고, 등쪽 선조체의 구성성분이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "미상핵"은 전뇌의 기저부에 있는 구조를 지칭하고, 등쪽 선조체의 구성성분이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "피질하 기저핵"은 뇌의 대뇌반구에서의 뉴런의 클러스터를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "척수"는 운동 피질로부터 신체까지의 신경 신호의 전달에서 작용하는 구조를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "운동 피질"은 수의운동의 계획, 제어 및 실행에 관련된 대뇌 피질의 전두엽의 영역을 지칭한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 대뇌피질에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 선조체에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 등쪽 선조체에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 척수에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 피각에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 미상핵에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 뇌의 흑질에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시킨다.
신장인자-1 알파(EF-1 알파; eEF1a1로도 지칭됨)는 신장인자 1 복합체의 알파 서브유닛의 아이소폼이다. 복합체는 리보솜 효소까지의 아미노아실 tRNA의 효소 전달에 관련된다. EF-1 알파 아이소폼은 뇌, 태반, 폐, 간, 신장 및 췌장에서 발현된다.
양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 EF-1 알파 프로모터로부터의 인간 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 침팬지 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 보노보 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 오랑우탄 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 고릴라 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 마카크 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 마모셋 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 카푸친 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 개코원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열, 긴팔원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열 및 여우원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 침팬지 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 보노보 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 오랑우탄 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 고릴라 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 마카크 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 마모셋 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 카푸친 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 개코원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 긴팔원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열은 여우원숭이 EF-1 알파 프로모터로부터의 인핸서 서열이다.
양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2와 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, EF-1 알파 프로모터 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 2에 대해 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
거대세포바이러스(CMV)는 헤르페스 바이러스(Herpesvirale) 목의 바이러스 속이다.
양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 인간 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 침팬지 인핸서 서열, CMV로부터의 보노보 인핸서 서열, CMV로부터의 오랑우탄 인핸서 서열, CMV로부터의 고릴라 인핸서 서열, CMV로부터의 마카크 인핸서 서열, CMV로부터의 마모셋 인핸서 서열, CMV로부터의 카푸친 인핸서 서열, CMV로부터의 개코원숭이 인핸서 서열, CMV로부터의 긴팔원숭이 인핸서 서열 및 CMV로부터의 여우원숭이 인핸서 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 침팬지 CMV로부터의 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 보노보 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 오랑우탄 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 고릴라 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 마카크 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 마모셋 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 카푸친 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 개코원숭이 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 긴팔원숭이 인핸서 서열이다. 일 양상에서, CMV로부터의 인핸서 서열은 CMV로부터의 여우원숭이 인핸서 서열이다.
양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, CMV 핵산 서열로부터의 인핸서는 서열번호 11과 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, 인핸서는 EF1-α 프로모터로부터의 인핸서 및 CMV 인핸서로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 인핸서는 EF1-α 프로모터로부터 유래된다. 일 양상에서, 인핸서는 CMV 인핸서이다.
인트론은 스플라이소솜 인트론; 전달 RNA 인트론; 그룹 I 인트론; 그룹 II 인트론; 및 그룹 III 인트론을 포함하는 적어도 5가지 부류로 그룹화될 수 있다. 인트론은 합성에 의해 생성되거나, 변형되거나, 알려진 또는 천연 유래 인트론 서열 또는 다른 인트론 서열로부터 유래될 수 있다. 인트론은 또한 둘 이상의 이종성 서열의 조합을 포함하는 키메라 인트론을 포함할 수 있다. 따라서 본 출원의 인트론은 조성물에서 유사하지만 공지되어 있거나 또는 본 명세서에 제공된 다른 인트론(들)과 동일하지 않은 인트론 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 양상에서, 인트론은 적어도 10개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 50개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 100개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 150개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 200개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 250개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 300개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 350개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 400개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 450개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 적어도 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 50개의 뉴클레오타이드 내지 7500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 50개의 뉴클레오타이드 내지 5000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 50개의 뉴클레오타이드 내지 2500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 50개의 뉴클레오타이드 내지 1000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 50개의 뉴클레오타이드 내지 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 10개의 뉴클레오타이드 내지 7500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 10개의 뉴클레오타이드 내지 5000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 10개의 뉴클레오타이드 내지 2500개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 10개의 뉴클레오타이드 내지 1000개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일 양상에서, 인트론은 10개의 뉴클레오타이드 내지 500개의 뉴클레오타이드를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "CI"는 인간 β-글로빈 유전자 및 분지의 제1 인트론으로부터의 5'-공여자 부위 및 면역글로불린 유전자 중쇄 가변 영역의 인트론으로부터의 3'-수용자 부위로 구성된 키메라 인트론을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "CRGI"는 CAG 프로모터에서 유사한 토끼 베타-글로빈 및 닭 베타 액틴의 키메라 인트론을 지칭한다.
양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5이다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19이다.
양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 5와 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, 키메라 인트론은 CAG 프로모터(CRGI)에서 유사한 토끼 베타-글로빈 및 닭 베타 액틴의 키메라 인트론이다. 양상에서, CRGI 서열은 서열번호 19를 포함한다. 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, 키메라 인트론 핵산 서열은 서열번호 19와 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE)는 바이러스 벡터에서 전달된 유전자의 발현을 향상시키는 3차 구조를 생성하는 DNA 서열이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "WPRE"는 우드처크 간염 바이러스(WHV) 전사 후 조절 요소를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "oPRE"는 WPRE의 최적화된 형태를 지칭한다.
양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7이다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18이다.
양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 7과 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, WPRE 핵산 서열은 서열번호 18과 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
SV40 폴리아데닐화 신호 서열(SV40 폴리A; 유인원 바이러스 40 폴리A; 및 폴리A로도 지칭됨)은 전사를 종결시킬 수 있고 전령 RNA(mRNA)의 3' 단부에 폴리A 꼬리를 첨가할 수 있는 DNA 서열이다.
hGH 폴리아데닐화 신호 서열(hGH 폴리A로도 지칭됨)은 전사를 종결시킬 수 있고 전령 RNA(mRNA)의 3' 단부에 폴리A 꼬리를 첨가할 수 있는 DNA 서열이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "SV40pA"는 SV40 바이러스의 폴리 A 신호를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "bGHpA"는 소 성장 호르몬의 폴리 A 신호를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "폴리A 꼬리"는 핵염기 아데닌만을 함유하는 RNA의 신장부를 지칭한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 AAV 벡터 작제물로부터 전사된 RNA 분자는 폴리A 꼬리를 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 2개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 10개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 50개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 100개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 150개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 200개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 적어도 250개의 아데닌을 포함한다. 일 양상에서, 폴리A 꼬리는 50개의 아데닌 내지 300개의 아데닌을 포함한다.
양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 99.8% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, SV40 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 8과 적어도 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 130% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 135% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 99.13% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, hGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 13에 대해 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 70% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 75% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 80% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 85% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 90% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 91% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 92% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 93% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 94% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 95% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 96% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 97% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 98% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 99.5% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 99.13% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20과 적어도 99.9% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다. 일 양상에서, bGH 폴리아데닐화 신호 핵산 서열은 서열번호 20에 대해 100% 동일한 서열, 또는 이의 보체를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "중추신경계" 또는 "CNS"는 양쪽 대칭 동물의 뇌 및 척수를 지칭한다. CNS는 또한 망막, 시신경, 후신경 및 후각상피를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "말초신경계" 또는 "PNS"는 망막, 시신경, 후신경 및 후각상피를 제외하고, 뇌 및 척수 밖의 신경 및 신경절을 지칭한다. 양상에서, 말초신경계는 체성신경계 및 자율신경계로 나누어진다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "체성신경계"는 신체 움직임의 자발적 제어와 연관된 PNS의 부분을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "자율신경계"는 내부 기관의 기능을 조절하는 PNS의 부분을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "GFAP 양성"은 당업계의 기법 표준을 이용하여 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP)의 검출 가능한 단백질 축적 또는 GFAP mRNA 발현의 검출 가능한 축적을 갖는 세포. 일 양상에서, 신경아교세포는 GFAP 양성이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "검출 가능한"은 확인 가능한 단백질 또는 mRNA 축적을 지칭한다.
단백질 축적은 항체를 이용하여 확인될 수 있다. 단백질 축적을 측정하는 것의 비제한적 예는 웨스턴 블롯, 효소결합면역흡착측정법(ELISA), 면역침강법 및 면역형광법을 포함한다. 본 명세서에 제공된 항체는 다클론성 항체 또는 단클론성 항체일 수 있다. 본 명세서에 제공된 단백질에 대해 특이적 결합 친화도를 갖는 항체는 당업계에 잘 공지된 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 미량정량판과 같은 고체 지지체에 부착될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "감염다중도" 및 "MOI"는 감염 동안 세포마다 첨가되는 비리온의 수를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "비리온"은 숙주 세포 밖의 바이러스의 감염 형태를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "신경학적 병태"는 중추신경계 또는 말초신경계의 장애, 질병, 아픔, 손상 또는 질환을 지칭한다. 신경학적 병태의 비제한적 예는 문헌[Neurological Disorders: course and treatment, 2nd Edition (2002)(Academic Press Inc.) 및 Christopher Goetz, Textbook of Clinical Neurology, 3rd Edition (2007)(Saunders)]에서 찾을 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "손상"은 중추신경계 또는 말초신경계에 대한 손상을 지칭한다.
일 양상에서, 신경학적 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈(global ischemia), 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 알츠하이머병이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 파킨슨병이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 ALS이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 헌팅턴병이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌전증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 신체 손상이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌졸중이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 허혈성 뇌졸중이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 출혈성 뇌졸중이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌동맥류이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 외상성 뇌 손상이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌진탕이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 종양이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 염증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 감염이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 운동실조이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌 위축이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 척수 위축증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 다발성 경화증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 외상성 척수 손상이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증)이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 전뇌허혈이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 저산소성 허혈뇌병증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 색전증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 섬유연골 색전증 척수병증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 혈전증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 신장병증이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 만성 염증성 질환이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 뇌수막염이다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 대뇌정맥동혈전증이다.
양상에서, 신경학적 병태는 CNS에 대한 또는 PNS에 대한 손상을 포함한다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 CNS에 대한 손상을 포함한다. 일 양상에서, 신경학적 병태는 PNS에 대한 손상을 포함한다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하며, 서열은 (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노 연관 바이러스(AAV) 주사를 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 주사하는 단계를 포함하는, 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고, 암호화 서열은, (a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; (c) 서열번호 5 또는 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론; (d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다.
양상에서, 본 개시내용은 아데노-연관 바이러스(AAV) 전달을 필요로 하는 대상체에게 아데노-연관 바이러스를 전달하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는 (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 폴리아데닐화 신호 서열을 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하며, 여기서, 벡터는 필요로 하는 대상체에서 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있다.
양상에서, 본 개시내용은 대상체에게 아데노-연관 바이러스(AAV)를 전달하는 단계를 포함하는, 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법을 제공하고, 이를 포함하며, 여기서, AAV는, (a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터; (b) 인핸서; (c) 키메라 인트론; (d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및 (e) 필요로 하는 대상체에 대한 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킨다.
신경성 분화 1(NeuroD1; β2로도 지칭됨)은 E-박스로 알려진 DNA 서열을 포함하는 유전자의 전사를 활성화시키기 위해 다른 bHLH 단백질과 이형이량체를 형성하는 염기성 헬릭스-루프-헬릭스(bHLH) 전사 인자이다.
아카에트-스쿠트(Achaete-scute) 패밀리 BHLH 전사 인자 1(Ascl1; ASH1, HASH1, MASH-1 및 bHLHa46으로도 지칭됨)은 전사 인자의 염기성 헬릭스-루프-헬릭스 패밀리의 구성원을 암호화하고 뉴런 수용 및 분화에서 어떤 역할을 하는 유전자이다.
인슐린 유전자 인핸서 단백질(ISL1; ISL LIM 호메오박스-1 및 ISLET1로도 알려짐)은 2개의 N-말단의 LIM 도메인 및 1개의 C-말단의 호메오도메인을 함유하는 전사 인자를 암호화하는 유전자이다. 암호화된 단백질은 췌장 랑게르한스섬의 배발생에서 어떤 역할을 한다.
LIM-호메오박스 3(LHX3; LIM3 및 CPHD3으로도 알려짐) 유전자는 독특한 시스테인-풍부 아연-결합 도메인(LIM 도메인)을 갖는 단백질 패밀리로부터의 단백질에 대해 암호화한다.
헌팅턴(Htt; 헌팅턴병 유전자로도 알려짐) 유전자는 헌팅턴 단백질을 암호화한다. 야생형은 6 내지 35개의 글루타민 잔기를 함유하고, 돌연변이된 Htt는 36개 초과의 글루타민 잔기를 함유한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 본 개시내용에 따른 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 제2 전사 인자 암호화 서열을 포함하는 제2 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 제2 전사 인자 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 일 양상에서, 제2 전사 인자는 NeuroD1, Ascl1, ISL1 및 LHX3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 제2 전사 인자는 NeuroD1이다. 일 양상에서, 제2 전사 인자는 Ascl1이다. 일 양상에서, 제2 전사 인자는 ISL1이다. 일 양상에서, 제2 전사 인자는 LHX3이다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 제2 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 제2 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다.
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 shRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 shRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 shRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 shRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 shRNA 서열 표적화 Htt 및 제3 shRNA 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 shRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 shRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 shRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 shRNA 서열 표적화 Htt, 제2 shRNA 서열 표적화 Htt 및 제3 shRNA 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 shRNA 서열 표적화 Htt, 제2 shRNA 서열 표적화 Htt, 및 제3 shRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 사용한다.
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 ASO 서열 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 ASO 서열 표적화 Htt 및 제2 ASO 서열 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 ASO 서열 표적화 Htt, 제2 ASO 서열 표적화 Htt, 및 제3 ASO 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 사용한다.
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 siRNA 서열 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 siRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 siRNA 서열 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 siRNA 서열 표적화 Htt, 제2 siRNA 서열 표적화 Htt 및 제3 siRNA 표적화 Htt와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다.
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 miRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 miRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 miRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 miRNA 서열 표적화 Htt, 제2 miRNA 서열 표적화 Htt 및 제3 miRNA 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 사용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 miRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 miRNA 서열 표적화 Htt 및 제2 miRNA 서열 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 miRNA 서열 표적화 Htt, 제2 miRNA 서열 표적화 Htt 및 제3 miRNA 표적화 Htt를 포함하는 AAV 벡터를 이용한다.
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 gRNA 서열 표적화 Htt 및 CAS 뉴클레아제를 포함하는 AAV 벡터와 조합한 Dlx2 암호화 서열을 포함하는 AAV 벡터를 이용한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 방법은 Dlx2 암호화 서열 및 gRNA 서열 표적화 Htt 및 CAS 뉴클레아제를 포함하는 AAV 벡터를 이용한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터는 NeuN, 더블코르틴(DCX), β3-튜불린, (신경필라멘트 200) NF-200, (미세소관-결합 단백질 2) MAP2, 이온화된 칼슘 결합 어댑터 분자(Iba1)의 전사 수준 및 단백질 수준을 평가함으로써 기능성에 대해 측정된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "NeuN" 또는 "Fox-3" 또는 "Rbfox2" 또는 "헥사리보뉴클레오타이드 결합 단백질-3"은 예쁜꼬마선충에서의 성-결정 유전자의 단백질 산물에 상동체이고 뉴런 핵 항원인 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "DCX" 또는 "배가(doubling)" 또는 "리센세팔린-X(lissencephalin-X)"는 배아 및 성인 피질 구조에서의 뉴런 전구체 세포 및 미숙 뉴런에 의해 발현되는 미세소관-결합 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "β3-튜불린" 또는 "클래스 III β-튜불린" 또는 "β-튜불린 III"은 뉴런에서 발견된 튜불린의 미세소관 요소를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "NF-200"은 뉴런의 세포질에서 발견되는 IV형 중간 필라멘트인 단백질 부류를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "MAP2"는 미세소관-결합 단백질 패밀리에 속하고 뉴런 발생 동안 뉴런 형태를 결정하고 안정화시키는 역할을 하는 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "Iba1"은 미세아교세포 대식세포-특이적 칼슘 결합 단백질을 지칭한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 방법은 유전자 편집 기법과 조합하여 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킨다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 돌연변이체 Htt를 표적화한다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 siRNA, miRNA, ASO 및 CRISPR/CAS로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 siRNA이다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 miRNA이다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 ASO이다. 일 양상에서, 유전자 편집 기법은 CRISPR/CAS이다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 조성물은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 조성물은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킨다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "포유류"는 포유강으로 분류된 임의의 종을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "인간"은 호모 사피엔스(Homo sapiens)를 지칭한다. 양상에서, 인간은 신경장애를 갖는다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "살아있는 인간"은 심장, 호흡 및 뇌 활동을 갖는 인간을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "비-인간 영장류"는 호모 사피엔스가 아닌 영장류 목으로 분류된 임의의 종 또는 하위종을 지칭한다. 비-인간 영장류의 비제한적 예는 침팬지, 보노보, 오랑우탄, 고릴라, 마카크, 마모셋, 카푸친, 개코원숭이, 긴팔원숭이 및 여우원숭이를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "전달하는" 또는 "전달"은 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물로 포유류를 치료하는 것을 지칭한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되도록 제형화된다. 일 양상에서, 전달하는 것은 국소 전달을 포함한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 국소 전달을 위해 제형화된다. 일 양상에서, 전달하는 것은 전신 전달을 포함한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 전신 전달을 위해 제형화된다. 일 양상에서, 전달은 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 주사하는 것을 포함한다. 일 양상에서, 전달하는 것은 복강내, 근육내, 정맥내, 척추강내, 대뇌내, 두개내, 뇌의 측뇌실내, 소뇌연수조내, 유리체내, 망막하 내, 뇌실질내, 비강내 또는 경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 전달은 복강내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 근육내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 정맥내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 척추강내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 대뇌내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 두개내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 뇌의 측뇌실내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 소뇌연수조내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 유리체내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 망막하 내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 뇌실질내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 비강내 전달을 포함한다. 일 양상에서, 전달은 경구 투여를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "주사하는"은 압력 하에서 그리고 힘에 의해 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물을 전달하는 것을 지칭한다. 비제한적 예로서, 주사하는 것은 주사기 및 바늘의 사용을 포함할 수 있다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 뇌에 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 대뇌 피질에 주사된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 척수 또는 대상체에게 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 선조체에 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 등쪽 선조체에 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 피각에 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 미상핵에 주사된다. 일 양상에서, AAV 벡터 또는 조성물은 대상체의 흑질에 주사된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 뇌에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 뇌에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 대뇌 피질에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 대뇌 피질에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 척수에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 척수에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 선조체에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 선조체에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 등쪽 선조체에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 등쪽 선조체에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 피각에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 피각에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 미상핵에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 미상핵에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 주사 부위에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 주사 부위에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 흑질에서 약 1% 내지 약 100% 확산된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터 또는 조성물은 피각에서 약 1% 내지 약 10%, 1% 내지 약 20%, 1% 내지 약 30%, 10% 내지 약 20%, 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 확산된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "AAV 입자"는 세포에 이의 핵산 게놈을 전달하는 AAV 바이러스의 패키징된 캡시드 형태를 지칭한다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터에 의해 암호화된 AAV 입자를 포함하는 조성물은 1010 AAV 입자/㎖ 내지 1014 AAV 입자/㎖의 농도로 주사된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터에 의해 암호화된 AAV 입자를 포함하는 조성물은 1010개의 AAV 입자/㎖ 내지 1011개의 AAV 입자/㎖, 1010개의 AAV 입자/㎖ 내지 1012개의 AAV 입자/㎖, 1010개의 AAV 입자/㎖ 내지 1013개의 AAV 입자/㎖, 1011개의 AAV 입자/㎖ 내지 1012개의 AAV 입자/㎖, 1011개의 AAV 입자/㎖ 내지 1013개의 AAV 입자/㎖, 1011개의 AAV 입자/㎖ 내지 1014개의 AAV 입자/㎖, 1012개의 AAV 입자/㎖ 내지 1013개의 AAV 입자/㎖, 1012개의 AAV 입자/㎖ 내지 1014 AAV 입자/㎖ 또는 1013개의 AAV 입자/㎖ 내지 1014 AAV 입자/㎖의 농도로 주사된다.
양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터에 의해 암호화된 AAV 입자를 포함하는 조성물은 10㎕ 내지 1000㎕의 용적으로 주사된다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 벡터에 의해 암호화된 AAV 입자를 포함하는 조성물은 10㎕ 내지 100㎕, 10㎕ 내지 200㎕, 10㎕ 내지 300㎕, 100㎕ 내지 200㎕, 100㎕ 내지 300㎕, 100㎕ 내지 400㎕, 200㎕ 내지 300㎕, 200㎕ 내지 400㎕, 200㎕ 내지 500㎕, 300㎕ 내지 400㎕, 300㎕ 내지 500㎕, 300㎕ 내지 600㎕, 400㎕ 내지 500㎕, 400㎕ 내지 600㎕, 400㎕ 내지 700㎕, 500㎕ 내지 600㎕, 500㎕ 내지 700㎕, 500㎕ 내지 800㎕, 600㎕ 내지 700㎕, 600㎕ 내지 800㎕, 600㎕ 내지 900㎕, 700㎕ 내지 800㎕, 700㎕ 내지 900㎕, 700㎕ 내지 1000㎕, 800㎕ 내지 900㎕, 800㎕ 내지 1000㎕, 또는 900㎕ 내지 1000㎕의 용적으로 주사된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 임의의 동물 대상체를 지칭한다. 동물 대상체의 비제한적 예는 인간, 실험실 동물(예를 들어, 영장류, 래트, 마우스), 가축 (예를 들어, 소, 양, 염소, 돼지, 칠면조, 닭) 및 반려동물(예를 들어, 개, 고양이, 설치류 등)을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 "필요로 하는 대상체"는 신경학적 병태를 갖는 대상체를 지칭한다. 양상에서, 필요로 하는 대상체는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈, 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경학적 병태를 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 알츠하이머병을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 파킨슨병을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 ALS를 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 헌팅턴병을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌전증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 신체 손상을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌졸중을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 허혈성 뇌졸중을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 출혈성 뇌졸중을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌동맥류를 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 외상성 뇌 손상을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌진탕을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 종양을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 염증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 감염을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 운동실조를 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌 위축을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 척수 위축증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 다발성 경화증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 외상성 척수 손상을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증)을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 전뇌허혈을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 저산소성 허혈뇌병증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 색전증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 섬유연골 색전증 척수병증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 혈전증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 신장병증을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 만성 염증성 질환을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 뇌수막염을 갖는다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 대뇌정맥동혈전증을 갖는다.
양상에서, 필요로 하는 대상체는 포유류이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 인간이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 비-인간 영장류이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 침팬지, 보노보, 오랑우탄, 고릴라, 마카크, 마모셋, 카푸친, 개코원숭이, 긴팔원숭이 및 여우원숭이로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 침팬지이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 보노보이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 오랑우탄이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 고릴라이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 마카크이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 마모셋이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 카푸친이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 개코원숭이이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 긴팔원숭이이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 여우원숭이이다.
일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 수컷이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 암컷이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 젠더 뉴트럴(gender neutral)이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 미숙 신생아이다. 일 양상에서, 미숙 신생아는 임신 36주차 전에 태어난다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 신생아이다. 일 양상에서, 신생아는 약 2개월령 미만이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 신생아이다. 일 양상에서, 신생아는 약 1개월령 미만이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 영아이다. 일 양상에서, 영아는 2개월령 내지 24개월령이다. 일 양상에서, 영아는 2개월 내지 3개월, 2개월 내지 4개월, 2개월 내지 5개월, 3개월 내지 4개월, 3개월 내지 5개월, 3개월 내지 6개월, 4개월 내지 5개월, 4개월 내지 6개월, 4개월 내지 7개월, 5개월 내지 6개월, 5개월 내지 7개월, 5개월 내지 8개월, 6개월 내지 7개월, 6개월 내지 8개월, 6개월 내지 9개월, 7개월 내지 8개월, 7개월 내지 9개월, 7개월 내지 10개월, 8개월 내지 9개월, 8개월 내지 10개월, 8개월 내지 11개월, 9개월 내지 10개월, 9개월 내지 11개월, 9개월 내지 12개월, 10개월 내지 11개월, 10개월 내지 12개월, 10개월 내지 13개월, 11개월 내지 12개월, 11개월 내지 13개월, 11개월 내지 14개월, 12개월 내지 13개월, 12개월 내지 14개월, 12개월 내지 15개월, 13개월 내지 14개월, 13개월 내지 15개월, 13개월 내지 16개월, 14개월 내지 15개월, 14개월 내지 16개월, 14개월 내지 17개월, 15개월 내지 16개월, 15개월 내지 17개월, 15개월 내지 18개월, 16개월 내지 17개월, 16개월 내지 18개월, 16개월 내지 19개월, 17개월 내지 18개월, 17개월 내지 19개월, 17개월 내지 20개월, 18개월 내지 19개월, 18개월 내지 20개월, 18개월 내지 21개월, 19개월 내지 20개월, 19개월 내지 21개월, 19개월 내지 22개월, 20개월 내지 21개월, 20개월 내지 22개월, 20개월 내지 23개월, 21개월 내지 22개월, 21개월 내지 23개월, 21개월 내지 24개월, 22개월 내지 23개월, 22개월 내지 24개월 및 23개월 내지 24개월령이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 유아이다. 일 양상에서, 유아는 1세 내지 4세이다. 일 양상에서, 유아는 1세 내지 2세, 1세 내지 3세, 1세 내지 4세, 2세 내지 3세, 2세 내지 4세, 및 3세 내지 4세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 어린 아동이다. 일 양상에서, 어린 아동은 2세 내지 5세이다. 일 양상에서, 어린 아동은 2세 내지 3세, 2세 내지 4세, 2세 내지 5세, 3세 내지 4세, 3세 내지 5세 및 4세 내지 5세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 아동이다. 일 양상에서, 아동은 6세 내지 12세이다. 일 양상에서, 아동은 6세 내지 7세, 6세 내지 8세, 6세 내지 9세, 7세 내지 8세, 7세 내지 9세, 7세 내지 10세, 8세 내지 9세, 8세 내지 10세, 8세 내지 11세, 9세 내지 10세, 9세 내지 11세, 9세 내지 12세, 10세 내지 11세, 10세 내지 12세 및 11세 내지 12세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 청소년이다. 일 양상에서, 청소년은 13세 내지 19세이다. 일 양상에서, 청소년은 13세 내지 14세, 13세 내지 15세, 13세 내지 16세, 14세 내지 15세, 14세 내지 16세, 14세 내지 17세, 15세 내지 16세, 15세 내지 17세, 15세 내지 18세, 16세 내지 17세, 16세 내지 18세, 16세 내지 19세, 17세 내지 18세, 17세 내지 19세 및 18세 내지 19세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 소아과 대상체이다. 일 양상에서, 소아과 대상체는 1일령 내지 18세이다. 일 양상에서, 소아과 대상체는 1일령 내지 1세, 1일령 내지 2세, 1일령 내지 3세, 1세 내지 2세, 1세 내지 3세, 1세 내지 4세, 2세 내지 3세, 2세 내지 4세, 2세 내지 5세, 3세 내지 4세, 3세 내지 5세, 3세 내지 6세, 4세 내지 5세, 4세 내지 6세, 4세 내지 7세, 5세 내지 6세, 5세 내지 7세, 5세 내지 8세, 6세 내지 7세, 6세 내지 8세, 6세 내지 9세, 7세 내지 8세, 7세 내지 9세, 7세 내지 10세, 8세 내지 9세, 8세 내지 10세, 8세 내지 11세, 9세 내지 10세, 9세 내지 11세, 9세 내지 12세, 10세 내지 11세, 10세 내지 12세, 10세 내지 13세, 11세 내지 12세, 11세 내지 13세, 11세 내지 14세, 12세 내지 13세, 12세 내지 14세, 12세 내지 15세, 13세 내지 14세, 13세 내지 15세, 13세 내지 16세, 14세 내지 15세, 14세 내지 16세, 14세 내지 17세, 15세 내지 16세, 15세 내지 17세, 15세 내지 18세, 16세 내지 17세, 16세 내지 18세 및 17세 내지 18세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 노인병 대상체이다. 일 양상에서, 노인병 대상체는 65세 내지 95세 이상이다. 일 양상에서, 노인병 대상체는 65세 내지 70세, 65세 내지 75세, 65세 내지 80세, 70세 내지 75세, 70세 내지 80세, 70세 내지 85세, 75세 내지 80세, 75세 내지 85세, 75세 내지 90세, 80세 내지 85세, 80세 내지 90세, 80세 내지 95세, 85세 내지 90세 및 85세 내지 95세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 성인이다. 일 양상에서, 성인 대상체는 20세 내지 95세 이상이다. 일 양상에서, 성인 대상체는 20세 내지 25세, 20세 내지 30세, 20세 내지 35세, 25세 내지 30세, 25세 내지 35세, 25세 내지 40세, 30세 내지 35세, 30세 내지 40세, 30세 내지 45세, 35세 내지 40세, 35세 내지 45세, 35세 내지 50세, 40세 내지 45세, 40세 내지 50세, 40세 내지 55세, 45세 내지 50세, 45세 내지 55세, 45세 내지 60세, 50세 내지 55세, 50세 내지 60세, 50세 내지 65세, 55세 내지 60세, 55세 내지 65세, 55세 내지 70세, 60세 내지 65세, 60세 내지 70세, 60세 내지 75세, 65세 내지 70세, 65세 내지 75세, 65세 내지 80세, 70세 내지 75세, 70세 내지 80세, 70세 내지 85세, 75세 내지 80세, 75세 내지 85세, 75세 내지 90세, 80세 내지 85세, 80세 내지 90세, 80세 내지 95세, 85세 내지 90세 및 85세 내지 95세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 1세 내지 5세, 2세 내지 10세, 3세 내지 18세, 21세 내지 50세, 21세 내지 40세, 21세 내지 30세, 50세 내지 90세, 60세 내지 90세, 70세 내지 90세, 60세 내지 80세 또는 65세 내지 75세이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 초기 노인 대상체(65 내지 74세)이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 중기 노인 대상체(75 내지 84세)이다. 일 양상에서, 필요로 하는 대상체는 노인 대상체(85세 초과)이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "유속"은 AAV 벡터 또는 조성물의 전달 속도를 지칭한다. 양상에서, 유속은 0.1㎕/분 내지 5.0㎕/분이다. 일 양상에서, 유속은 0.1㎕/분 내지 0.2㎕/분, 0.1㎕/분 내지 0.3㎕/분, 0.1㎕/분 내지 0.4㎕/분, 0.2㎕/분 내지 0.3㎕/분, 0.2㎕/분 내지 0.4㎕/분, 0.2㎕/분 내지 0.5㎕/분, 0.3㎕/분 내지 0.4㎕/분, 0.3㎕/분 내지 0.5㎕/분, 0.3㎕/분 내지 0.6㎕/분, 0.4㎕/분 내지 0.5㎕/분, 0.4㎕/분 내지 0.6㎕/분, 0.4㎕/분 내지 0.7㎕/분, 0.5㎕/분 내지 0.6㎕/분, 0.5㎕/분 내지 0.7㎕/분, 0.5㎕/분 내지 0.8㎕/분, 0.6㎕/분 내지 0.7㎕/분, 0.6㎕/분 내지 0.8㎕/분, 0.6㎕/분 내지 0.9㎕/분, 0.7㎕/분 내지 0.8㎕/분, 0.7㎕/분 내지 0.9㎕/분, 0.7㎕/분 내지 1.0㎕/분, 0.8㎕/분 내지 0.9㎕/분, 0.8㎕/분 내지 1.0㎕/분, 0.8㎕/분 내지 1.1㎕/분, 0.9㎕/분 내지 1.0㎕/분, 0.9㎕/분 내지 1.1㎕/분, 0.9㎕/분 내지 1.2㎕/분, 1.0㎕/분 내지 1.1㎕/분, 1.0㎕/분 내지 1.2㎕/분, 1.0㎕/분 내지 1.3㎕/분, 1.1㎕/분 내지 1.2㎕/분, 1.1㎕/분 내지 1.3㎕/분, 1.1㎕/분 내지 1.4㎕/분, 1.2㎕/분 내지 1.3㎕/분, 1.2㎕/분 내지 1.4㎕/분, 1.2㎕/분 내지 1.5㎕/분, 1.3㎕/분 내지 1.4㎕/분, 1.3㎕/분 내지 1.5㎕/분, 1.3㎕/분 내지 1.6㎕/분, 1.4㎕/분 내지 1.5㎕/분, 1.4㎕/분 내지 1.6㎕/분, 1.4㎕/분 내지 1.7㎕/분, 1.5㎕/분 내지 1.6㎕/분, 1.5㎕/분 내지 1.7㎕/분, 1.5㎕/분 내지 1.8㎕/분, 1.6㎕/분 내지 1.7㎕/분, 1.6㎕/분 내지 1.8㎕/분, 1.6㎕/분 내지 1.9㎕/분, 1.7㎕/분 내지 1.8㎕/분, 1.7㎕/분 내지 1.9㎕/분, 1.7㎕/분 내지 2.0㎕/분, 1.8㎕/분 내지 1.9㎕/분, 1.8㎕/분 내지 2.0㎕/분, 1.8㎕/분 내지 2.1㎕/분, 1.9㎕/분 내지 2.0㎕/분, 1.9㎕/분 내지 2.1㎕/분, 1.9㎕/분 내지 2.2㎕/분, 2.0㎕/분 내지 2.1㎕/분, 2.0㎕/분 내지 2.2㎕/분, 2.0㎕/분 내지 2.3㎕/분, 2.1㎕/분 내지 2.2㎕/분, 2.1㎕/분 내지 2.3㎕/분, 2.1㎕/분 내지 2.4㎕/분, 2.2㎕/분 내지 2.3㎕/분, 2.2㎕/분 내지 2.4㎕/분, 2.2㎕/분 내지 2.5㎕/분, 2.3㎕/분 내지 2.4㎕/분, 2.3㎕/분 내지 2.5㎕/분, 2.3㎕/분 내지 2.6㎕/분, 2.4㎕/분 내지 2.5㎕/분, 2.4㎕/분 내지 2.6㎕/분, 2.4㎕/분 내지 2.7㎕/분, 2.5㎕/분 내지 2.6㎕/분, 2.5㎕/분 내지 2.7㎕/분, 2.5㎕/분 내지 2.8㎕/분, 2.6㎕/분 내지 2.7㎕/분, 2.6㎕/분 내지 2.8㎕/분, 2.6㎕/분 내지 2.9㎕/분, 2.7㎕/분 내지 2.8㎕/분, 2.7㎕/분 내지 2.9㎕/분, 2.7㎕/분 내지 3.0㎕/분, 2.8㎕/분 내지 2.9㎕/분, 2.8㎕/분 내지 3.0㎕/분, 2.8㎕/분 내지 3.1㎕/분, 2.9㎕/분 내지 3.0㎕/분, 2.9㎕/분 내지 3.1㎕/분, 2.9㎕/분 내지 3.2㎕/분, 3.0㎕/분 내지 3.1㎕/분, 3.0㎕/분 내지 3.2㎕/분, 3.0㎕/분 내지 3.3㎕/분, 3.1㎕/분 내지 3.2㎕/분, 3.1㎕/분 내지 3.3㎕/분, 3.1㎕/분 내지 3.4㎕/분, 3.2㎕/분 내지 3.3㎕/분, 3.2㎕/분 내지 3.4㎕/분, 3.2㎕/분 내지 3.5㎕/분, 3.3㎕/분 내지 3.4㎕/분, 3.3㎕/분 내지 3.5㎕/분, 3.3㎕/분 내지 3.6㎕/분, 3.4㎕/분 내지 3.5㎕/분, 3.4㎕/분 내지 3.6㎕/분, 3.4㎕/분 내지 3.7㎕/분, 3.5㎕/분 내지 3.6㎕/분, 3.5㎕/분 내지 3.7㎕/분, 3.5㎕/분 내지 3.8㎕/분, 3.6㎕/분 내지 3.7㎕/분, 3.6㎕/분 내지 3.8㎕/분, 3.6㎕/분 내지 3.9㎕/분, 3.7㎕/분 내지 3.8㎕/분, 3.7㎕/분 내지 3.9㎕/분, 3.7㎕/분 내지 4.0㎕/분, 3.8㎕/분 내지 3.9㎕/분, 3.8㎕/분 내지 4.0㎕/분, 3.8㎕/분 내지 4.1㎕/분, 3.9㎕/분 내지 4.0㎕/분, 3.9㎕/분 내지 4.1㎕/분, 3.9㎕/분 내지 4.2㎕/분, 4.0㎕/분 내지 4.1㎕/분, 4.0㎕/분 내지 4.2㎕/분, 4.0㎕/분 내지 4.3㎕/분, 4.1㎕/분 내지 4.2㎕/분, 4.1㎕/분 내지 4.3㎕/분, 4.1㎕/분 내지 4.4㎕/분, 4.2㎕/분 내지 4.3㎕/분, 4.2㎕/분 내지 4.4㎕/분, 4.2㎕/분 내지 4.5㎕/분, 4.3㎕/분 내지 4.4㎕/분, 4.3㎕/분 내지 4.5㎕/분, 4.3㎕/분 내지 4.6㎕/분, 4.4㎕/분 내지 4.5㎕/분, 4.4㎕/분 내지 4.6㎕/분, 4.4㎕/분 내지 4.7㎕/분, 4.5㎕/분 내지 4.6㎕/분, 4.5㎕/분 내지 4.7㎕/분, 4.5㎕/분 내지 4.8㎕/분, 4.6㎕/분 내지 4.7㎕/분, 4.6㎕/분 내지 4.8㎕/분, 4.6㎕/분 내지 4.9㎕/분, 4.7㎕/분 내지 4.8㎕/분, 4.7㎕/분 내지 4.9㎕/분, 4.7㎕/분 내지 5.0㎕/분, 4.8㎕/분 내지 4.9㎕/분, 4.8㎕/분 내지 5.0㎕/분, 또는 4.9㎕/분 내지 5.0㎕/분이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "치료적 유효 용량" 또는 "약제학적 활성 용량"은 신경학적 병태를 치료하는 데 효과적인 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물의 양을 지칭한다. 양상에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제공될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 비독성 용매, 분산제, 부형제, 아쥬반트 또는 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물과 혼합되는 다른 물질을 지칭한다.
약제학적으로 허용 가능한 담체의 비제한적 예는 액체(예를 들어, 식염수), 겔, 나노입자, 엑소좀, 지질 소포, 또는 고체 형태의 희석제, 아쥬반트, 부형제 또는 내산성 캡슐화 성분을 포함한다. 적합한 희석제 및 부형제의 비제한적 예는 약제학적 등급의 생리 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등 및 이들의 조합물을 포함한다. 양상에서, 치료적 유효 용량은 습윤제 또는 유화제, 안정제 또는 pH 완충제와 같은 보조 물질을 함유한다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물은 대상체에게 주사된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물은 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 약 1% 내지 약 5%, 약 5% 내지 약 10%, 약 10% 내지 약 15%, 약 15% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 25%, 약 25% 내지 약 30%, 약 30% 내지 약 35%, 약 40 내지 약 45%, 약 50% 내지 약 55%, 약 1% 내지 약 95%, 약 2% 내지 약 95%, 약 5% 내지 약 95%, 약 10% 내지 약 95%, 약 15% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 95%, 약 25% 내지 약 95%, 약 30% 내지 약 95%, 약 35% 내지 약 95%, 약 40% 내지 약 95%, 약 45% 내지 약 95%, 약 50% 내지 약 95%, 약 55% 내지 약 95%, 약 60% 내지 약 95%, 약 65% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 95%, 약 45% 내지 약 95%, 약 80% 내지 약 95%, 또는 약 85% 내지 약 95%의 본 명세서에 제공된 바와 같은 AAV 입자 또는 조성물을 함유한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 적어도 2일 또는 주 연속 동안 적어도 1일 1회 또는 적어도 1주 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15일 또는 주 연속 동안 적어도 1일 1회 또는 적어도 1주 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 연속 동안 적어도 1일 1회 또는 적어도 1주 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 최대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 또는 주 연속 동안 적어도 1일 1회 또는 적어도 1주 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 또는 개월 연속 동안 적어도 1일 1회 또는 적어도 1주 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되며, 대상체의 전체 수명 또는 무한한 기간 동안 만성적으로 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 또는 년 연속 동안 적어도 1회 투여된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 2년 연속, 3년 연속 또는 5년 연속 동안 1년에 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 2년 연속 동안 1년에 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 3년 연속 동안 1년에 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 5년 연속 동안 1년에 1회 이를 필요로 하는 대상체에게 전달된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "관해", "치유" 또는 "치유율"은 치료적 유효 용량에 반응한 신경학적 병태를 치유하거나 이의 관해 또는 완전한 해결을 얻는 이를 필요로 하는 대상체의 백분율을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "반응률"은 치료적 유효 용량에 긍정적으로 반응하는(예를 들어, 하나 이상의 증상의 감소된 중증도 또는 빈도) 이를 필요로 하는 대상체의 백분율을 지칭한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 적어도 약 50%의 신경학적 병태의 관해, 치유, 반응률 또는 치유율을 달성한다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 하나 이상의 신경학적 병태 증상을 제거하거나, 감소시키거나, 늦추거나, 지연시킨다. 신경학적 병태 증상의 비제한적 예는 진전, 느린 움직임(운동완서), 강직성 근육, 자세손상 및 균형, 자율 운동 상실, 발성 변화, 손발저림 및 글쓰기 변화를 포함한다. 일 양상에서, 신경학적 병태 증상은 움직임 증상이다. 움직임 증상의 비제한적 예는 불수의운동의 손상 또는 수의운동의 손상을 포함한다. 일 양상에서, 신경학적 병태 증상은 인지 증상이다. 인지 증상의 비제한적 예는 소근육 운동 기능, 진전, 발작, 무도병, 근육긴장이상, 이상운동증, 느린 또는 비정상적 안구 운동, 보행장애, 자세손상, 균형 장애, 발화 곤란, 연하 곤란, 조직화 곤란, 우선순위 지정의 곤란, 작업 집중의 곤란, 유연성 결여, 충동 조절 결여, 감정 폭발, 자신의 행동 및/또는 능력에 대한 인식 결여, 생각 처리가 늦음, 새로운 정보 학습의 곤란을 포함한다.
양상에서, 신경학적 병태 증상은 정신 의학적 증상이다. 정신 의학적 증상의 비제한적 예는 우울증, 이노성, 슬픔 또는 무감각증, 사회적 위축, 불면증, 피로, 에너지 결여, 강박 장애, 조증, 양극성 장애 및 체중감소를 포함한다. 일 양상에서, 신경학적 병태 증상은 적어도 하나의 손상된 혈관이다. 일 양상에서, 신경학적 병태 증상은 손상된 혈액뇌장벽(BBB)이다. 일 양상에서, 신경학적 병태 증상은 손상된 혈류이다. 신경학적 병태 증상의 제거, 감소, 늦춤 또는 지연을 평가하기 위한 시험의 비제한적 예는 통합 헌팅턴병 등급 척도(UHDRS) 점수, UHDRS 총 기능 용량(TFC), UHDRS 기능성 평가, UHDRS 보행 점수, UHDRS 총 운동 점수(TMS), 해밀턴 우울증 척도(HAM-D), 콜럼비아 자살 심각도 평가 척도(C-SSRS), 몬트리올 인지평가(MoCA), 수정 랭킨 척도(mRS), 미국 국립보건원 뇌졸중 척도(NIHSS) 및 바델 지수(BI), 일어서서 걷기 검사(TUG), 체도크 팔 및 손 활동 목록(Chedoke Arm and Hand Activity Inventory: CAHAI), 기호숫자 모덜리티 검사(Symbol Digit Modalities Test), 통제 단어 연상 검사, 자기공명영상화(MRI), 기능성 자기 공명 영상(fMRI), 및 양전자 방출 단층촬영(PET) 스캐닝을 포함한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 약 10% 내지 약 99% 이상의 신경학적 병태의 관해, 치유, 반응률 또는 치유율을 달성한다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 10% 내지 100%, 예컨대, 10% 내지 15%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 15% 내지 20%, 15% 내지 25 %, 15% 내지 30%, 20% 내지 25%, 20% 내지 30%, 20% 내지 35%, 25% 내지 30%, 25% 내지 35%, 25% 내지 40%, 30% 내지 35%, 30% 내지 40%, 35% 내지 45%, 35% 내지 50%, 40% 내지 45%, 40% 내지 50%, 40% 내지 55%, 45% 내지 50%, 45% 내지 55%, 45% 내지 60%, 50% 내지 55%, 50% 내지 60%, 50% 내지 65%, 55% 내지 60%, 55% 내지 65%, 55% 내지 70%, 60% 내지 65%, 60% 내지 70%, 60% 내지 75%, 65% 내지 70%, 65% 내지 75%, 65% 내지 80%, 70% 내지 75%, 70% 내지 80%, 70% 내지 85%, 75% 내지 80%, 75% 내지 85%, 75% 내지 90%, 80% 내지 85%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 85% 내지 90%, 85% 내지 95%, 85% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100% 또는 95% 내지 100%의 신경학적 병태의 관해, 치유, 반응률 또는 치유율을 달성한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 10% 내지 100%, 예컨대, 10% 내지 약 15%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 15% 내지 20%, 15% 내지 25 %, 15% 내지 30%, 20% 내지 25%, 20% 내지 30%, 20% 내지 35%, 25 내지 30%, 25% 내지 35%, 25% 내지 40%, 30% 내지 35%, 30% 내지 40%, 35% 내지 45%, 35% 내지 50%, 40% 내지 45%, 40% 내지 50%, 40% 내지 55%, 45% 내지 50%, 45% 내지 55%, 45% 내지 60%, 50% 내지 55%, 50% 내지 60%, 50% 내지 65%, 55% 내지 60%, 55% 내지 65%, 55% 내지 70%, 60% 내지 65%, 60% 내지 70%, 60% 내지 75%, 65% 내지 70%, 65% 내지 75%, 65% 내지 80%, 70% 내지 75%, 70% 내지 80%, 70% 내지 85%, 75% 내지 80%, 75% 내지 85%, 75% 내지 90%, 80% 내지 85%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 85% 내지 90%, 85% 내지 95%, 85% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100%, 또는 95% 내지 100%의 하나 이상의 신경학적 병태 증상을 제거하거나, 감소시키거나, 늦추거나, 지연시킨다.
양상에서, 신경학적 병태 증상은 치료일, 치료 후 1일, 치료 후 3개월, 치료 후 6개월, 치료 후 1년 및 치료 후 매년 평가된다.
양상에서, 신경학적 병태 증상은 치료 후 1일 내지 치료 후 7일에 평가된다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1일 내지 치료 후 2일, 치료 후 1일 내지 치료 후 3일, 치료 후 1일 내지 치료 후 4일, 치료 후 2일 내지 치료 후 3일, 치료 후 2일 내지 치료 후 4일, 치료 후 2일 내지 치료 후 5일, 치료 후 3일 내지 치료 후 4일, 치료 후 3일 내지 치료 후 5일, 치료 후 3일 내지 치료 후 6일, 치료 후 4일 내지 치료 후 5일, 치료 후 4일 내지 치료 후 6일, 치료 후 4일 내지 치료 후 7일, 치료 후 5일 내지 치료 후 6일, 치료 후 5일 내지 치료 후 7일, 또는 치료 후 6일 내지 치료 후 7일에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1주 내지 치료 후 4주에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1주 내지 치료 후 2주, 치료 후 1주 내지 치료 후 3주, 치료 후 1주 내지 치료 후 4주, 치료 후 2주 내지 치료 후 3주, 치료 후 2주 내지 치료 후 4주 또는 치료 후 3주 내지 치료 후 4주에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1개월 내지 치료 후 12개월에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1개월 내지 치료 후 2개월, 치료 후 1개월 내지 치료 후 3개월, 치료 후 1개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 3개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 12개월, 치료 후 10개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 10개월 내지 치료 후 12개월 또는 치료 후 11개월 내지 치료 후 12개월에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1년 내지 치료 후 약 20년에 평가될 수 있다. 일 양상에서 증상은 치료 후 1년 내지 치료 후 5년, 치료 후 1년 내지 치료 후 10년, 치료 후 1년 내지 치료 후 15년, 치료 후 5년 내지 치료 후 10년, 치료 후 5년 내지 치료 후 15년, 치료 후 5년 내지 치료 후 20년, 치료 후 10년 내지 치료 후 15년, 치료 후 10년 내지 치료 후 20년 또는 치료 후 15년 내지 치료 후 20년에 평가될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "생존율"은 신경학적 병태의 진단 후 주어진 기간 후에 여전히 살아있는 처리군의 대상체 코호트를 지칭한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 약 10% 내지 99% 이상의 증가된 생존율을 달성한다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 10% 내지 100%, 예컨대, 10% 내지 15%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 15% 내지 20%, 15% 내지 25%, 15% 내지 30%, 20% 내지 25%, 20% 내지 30%, 20% 내지 35%, 25% 내지 30%, 25% 내지 35%, 25% 내지 40%, 30% 내지 35%, 30% 내지 40%, 35% 내지 45%, 35% 내지 50%, 40% 내지 45%, 40% 내지 50%, 40% 내지 55%, 45% 내지 50%, 45% 내지 55%, 45% 내지 60%, 50% 내지 55%, 50% 내지 60%, 50% 내지 65%, 55% 내지 60%, 55% 내지 65%, 55% 내지 70%, 60% 내지 65%, 60% 내지 70%, 60% 내지 75%, 65% 내지 70%, 65% 내지 75%, 65% 내지 80%, 70% 내지 75%, 70% 내지 80%, 70% 내지 85%, 75% 내지 80%, 75% 내지 85%, 75% 내지 90%, 80% 내지 85%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 85% 내지 90%, 85% 내지 95%, 85% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100% 또는 95% 내지 100%의 생존율 증가를 달성한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "기대 수명"은 대상체가 생존하는 것으로 예상되는 기간을 지칭한다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 기대 수명을 약 10% 내지 99% 이상 증가시킨다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 기대 수명을 10% 내지 100%, 예컨대, 10% 내지 15%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 15% 내지 20%, 15% 내지 25%, 15% 내지 30%, 20% 내지 25%, 20% 내지 30%, 20% 내지 35%, 25% 내지 30%, 25% 내지 35%, 25% 내지 40%, 30% 내지 35%, 30% 내지 40%, 35% 내지 45%, 35% 내지 50%, 40% 내지 45%, 40% 내지 50%, 40% 내지 55%, 45% 내지 50%, 45% 내지 55%, 45% 내지 60%, 50% 내지 55%, 50% 내지 60%, 50% 내지 65%, 55% 내지 60%, 55% 내지 65%, 55% 내지 70%, 60% 내지 65%, 60% 내지 70%, 60% 내지 75%, 65% 내지 70%, 65% 내지 75%, 65% 내지 80%, 70% 내지 75%, 70% 내지 80%, 70% 내지 85%, 75% 내지 80%, 75% 내지 85%, 75% 내지 90%, 80% 내지 85%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 85% 내지 90%, 85% 내지 95%, 85% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100% 또는 95% 내지 100% 증가시킨다.
양상에서, 치료적 유효 용량은 필요로 하는 대상체의 뇌에서의 위축증의 양을 약 10% 내지 99% 이상 감소시킨다. 일 양상에서, 치료적 유효 용량은 필요로 하는 대상체의 뇌에서의 위축증의 양을 10% 내지 100%, 예컨대, 10% 내지 15%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 15% 내지 20%, 15% 내지 25%, 15% 내지 30%, 20% 내지 25%, 20% 내지 30%, 20% 내지 35%, 25% 내지 30%, 25% 내지 35%, 25% 내지 40%, 30% 내지 35%, 30% 내지 40%, 35% 내지 45%, 35% 내지 50%, 40% 내지 45%, 40% 내지 50%, 40% 내지 55%, 45% 내지 50%, 45% 내지 55%, 45% 내지 60%, 50% 내지 55%, 50% 내지 60%, 50% 내지 65%, 55% 내지 60%, 55% 내지 65%, 55% 내지 70%, 60% 내지 65%, 60% 내지 70%, 60% 내지 75%, 65% 내지 70%, 65% 내지 75%, 65% 내지 80%, 70% 내지 75%, 70% 내지 80%, 70% 내지 85%, 75% 내지 80%, 75% 내지 85%, 75% 내지 90%, 80% 내지 85%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 85% 내지 90%, 85% 내지 95%, 85% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100% 또는 95% 내지 100% 감소시킨다.
양상에서, 필요로 하는 대상체의 뇌에서의 위축증의 양은 치료일, 치료 후 1일, 치료 후 3개월, 치료 후 6개월, 치료 후 1년 및 치료 후 매년 평가된다.
양상에서, 필요로 하는 대상체의 뇌에서의 위축증의 양은 치료 후 1일 내지 치료 후 7일에 평가된다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1일 내지 치료 후 2일, 치료 후 1일 내지 치료 후 3일, 치료 후 1일 내지 치료 후 4일, 치료 후 2일 내지 치료 후 3일, 치료 후 2일 내지 치료 후 4일, 치료 후 2일 내지 치료 후 5일, 치료 후 3일 내지 치료 후 4일, 치료 후 3일 내지 치료 후 5일, 치료 후 3일 내지 치료 후 6일, 치료 후 4일 내지 치료 후 5일, 치료 후 4일 내지 치료 후 6일, 치료 후 4일 내지 치료 후 7일, 치료 후 5일 내지 치료 후 6일, 치료 후 5일 내지 치료 후 7일, 또는 치료 후 6일 내지 치료 후 7일에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1주 내지 치료 후 4주에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1주 내지 치료 후 2주, 치료 후 1주 내지 치료 후 3주, 치료 후 1주 내지 치료 후 4주, 치료 후 2주 내지 치료 후 3주, 치료 후 2주 내지 치료 후 4주 또는 치료 후 3주 내지 치료 후 4주에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1개월 내지 치료 후 12개월에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1개월 내지 치료 후 2개월, 치료 후 1개월 내지 치료 후 3개월, 치료 후 1개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 3개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 2개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 4개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 3개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 5개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 4개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 6개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 5개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 7개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 6개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 8개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 7개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 9개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 8개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 10개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 9개월 내지 치료 후 12개월, 치료 후 10개월 내지 치료 후 11개월, 치료 후 10개월 내지 치료 후 12개월 또는 치료 후 11개월 내지 치료 후 12개월에 평가될 수 있다. 일 양상에서, 증상은 치료 후 1년 내지 치료 후 약 20년에 평가될 수 있다. 일 양상에서 증상은 치료 후 1년 내지 치료 후 5년, 치료 후 1년 내지 치료 후 10년, 치료 후 1년 내지 치료 후 15년, 치료 후 5년 내지 치료 후 10년, 치료 후 5년 내지 치료 후 15년, 치료 후 5년 내지 치료 후 20년, 치료 후 10년 내지 치료 후 15년, 치료 후 10년 내지 치료 후 20년 또는 치료 후 15년 내지 치료 후 20년에 평가될 수 있다.
필요로 하는 대상체의 뇌에서의 위축증의 양을 평가하기 위한 시험의 비제한적 예는 Nissle 염색, MRI, fMRI 및 PET 스캐닝을 포함한다.
본 개시내용은 바람직한 실시형태를 참조로 하여 기재되었지만, 당업자는 본 개시내용의 범주로부터 벗어나는 일 없이 특정 상황을 적합하게 하기 위해 다양한 변화가 이루어질 수 있고 균등물이 이의 요소를 대체할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 개시내용은 본 개시내용을 수행하기 위해 상정된 최고의 방식으로서 개시된 특정 실시형태로 제한되지 않지만, 본 개시내용이 첨부하는 청구범위의 범주 및 사상에 속하는 모든 실시형태를 포함한다는 것이 의도된다.
본 명세서에 제시된 실시예는 본 개시내용의 여러 실시형태를 예시하지만, 본 개시내용의 범주를 임의의 방식으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예
실시예 1.
AAV 벡터 작제물
12개의 AAV 벡터 작제물:
EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40(P44)(도 1B),
EF-1α:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:SV40(도 2B),
EF-1α:GFA2.2:Dlx2:WPRE:SV40(도 3B),
EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH(도 1D),
EF-1α:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:hGH(도 2D),
EF-1α:GFA2.2:Dlx2:WPRE:hGh(도 4D),
CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40(P75)(도 1A),
CE:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:SV40(도 2A),
CE:GFA2.2:Dlx2:WPRE:SV40(도 3A),
CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH(도 1C),
CE:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:hGH(도 2C),
CE:GFA2.2:Dlx2:WPRE:hGH(도 3D),
EF-1α:Gfa681:Dlx2: WPRE:SV40(P60)을 작제한다.
모두 12개의 벡터 작제물은 복제기점, 카나마이신 내성 유전자 및 골격으로서 lacZ 유전자를 갖는 다중 클로닝 부위(MSC)를 함유하는 pUC 기반 벡터 작제물인 pHSG-299(Takara, 캘리포니아주 마운틴뷰 소재)를 이용한다.
발현 카세트의 5' 단부는 758-뉴클레오타이드 GFAP 프로모터(Gfa681; 서열번호 3), 1667-뉴클레오타이드 GFAP 프로모터(Gfa1.6; 서열번호 4) 또는 2214-뉴클레오타이드 GFAP 프로모터(GFA2.2 서열번호 12) 중 하나에 대해 5'에 위치된 인간 신장인자-1 알파 프로모터로부터의 인핸서(EF-1 알파 인핸서; 서열번호 2) 또는 거대세포 바이러스 인핸서(CMV 인핸서; 서열번호 11)이다.
인핸서/GFAP 프로모터 다음에(예를 들어, 3'), 여러 추가적인 서열을 5'에서 3' 방향으로, 키메라 인트론(서열번호 5 또는 서열번호 19); 인간 Dlx2 암호화 서열(hDlx2; 서열번호 6); 및 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE; 서열번호 7 또는 서열번호 18)를 포함하는 발현 카세트에 도입한다. 이들 서열은 SV40 폴리(A) 신호(서열번호 8) 또는 hGH 폴리(A) 신호(서열번호 13)에 모두 작동 가능하게 연결된다. 인핸서, GFAP 프로모터, 키메라 인트론, hDlx2 암호화 서열, WPRE 및 폴리(A) 신호는 2개의 AAV ITR 서열에 측접된다.
실시예 2.
AAV 바이러스 생성
12개의 플라스미드 각각을 재조합 AAV 바이러스 입자를 생성하기 위해 Rep-Cap 플라스미드(AAV rep 및 cap 유전자의 발현을 유도하는 프로모터를 포함하는 플라스미드) 및 헬퍼 플라스미드((아데노바이러스의) E2A, E4 및 VA RNA의 발현을 유도하는 프로포터를 포함하는 플라스미드)와 함께 폴리에틸렌이민을 이용하여 293AAV 세포에 공동형질감염시켰다. (Cell Biolabs, Inc.)
형질감염 세포를 스크레이핑하고, 형질감염 후 72시간에 원심분리시켰다. 세포 펠릿을 냉동시키고, 드라이아이스/에탄올 혼합물에 두어서 해동시킨 후에, 37℃ 수욕에 두었다. 냉동/해동 주기를 3회의 추가 시간으로 반복한다. AAV 용해물을 불연속 이오딕사놀 구배로 1시간 동안 350,00g에서 초원심분리에 의해 정제한다(예를 들어, 세포 파편을 제거함). 바이러스-함유층을 수집하고, 이어서, Millipore Amicon 초원심분리 필터를 이용함으로써 원심분리시킨다. 이어서, 프라이머 증폭 ITR 영역 또는 유전자/발현 카세트 특이적 서열을 이용하여 qPCR에 의해 바이러스 역가를 결정한다.
실시예 3. 성상세포 배양물
인간 피질 성상세포(HA1800; ScienCell Research Laboratories, Inc., 캘리포니아주 칼스베드 소재)를 이들이 90% 이상의 합류일 때 계대배양한다. 계대배양을 위해, TrypLE™ Select(Invitrogen, 캘리포니아주 칼스베드 소재)를 이용하여 세포를 트립신처리하고, 5분 동안 200×g에서 원심분리시키고, 이어서, DMEM/F12(Gibco); 10% 소태아 혈청(Gibco); 페니실린/스트렙토마이신(Gibco); 3.5mM 글루코스(Sigma-Aldrich); B27(Gibco); 10ng/㎖ 표피 성장 인자(Invitrogen); 및 10ng/㎖ 섬유아세포 성장인자 2(Invitrogen)를 포함하는 배지에서 재현탁 및 플레이팅한다. 성상세포를 24-웰 플레이트(BD Biosciences)에서 커버슬립당 대략 20,000개 세포의 밀도로 폴리-D-라이신(Sigma-Aldrich) 코팅 커버슬립(12㎜) 상에서 배양시킨다.
래트 1차 성상세포(스프래그 돌리 래트 피질 또는 선조체로부터 단리)를 DMEM/F12(Gibco); 10% 소태아 혈청(Gibco), 페니실린/스트렙토마이신(Gibco); 3.5mM 글루코스(Gibco)를 포함하는 배지에서 배양시킨다.
모든 세포를 5% 이산화탄소와 함께 습한 공기에서 37℃에서 유지한다.
실시예 4. 성상세포 세포 배양물에서의 AAV 벡터의 시험(시험관내)
실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV를 사용하여 실시예 3의 인간 피질 성상세포 및 래트 1차 성상세포를 1010개의 입자/㎖ 및 1014개의 입자/㎖의 농도 범위로 감염시킨다. 세포 감염의 24시간 후에, 배양물 배지를 DMEM/F12(Gibco); N2 보충물(Gibco); 및 20ng/㎖ 뇌-유래 신경영양인자(Invitrogen)를 포함하는 분화 배지로 대체한다. 분화 배지를 4일마다 세포 배양물에 첨가한다. 문헌[Song et al., Nature, 417:39-44(2002)]을 참조한다.
세포 배양물에서 빈 공간은 추가적인 인간 성상세포로 채워서 성상세포로서 전환된 뉴런의 기능적 발생을 지지하거나 또는 래트 1차 성상세포를 뉴런으로 전환시킨다.
실시예 5. AAV 벡터 효력의 시험
실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV를 사용하여 실시예 3으로부터의 인간 피질 성상세포 및 래트 1차 성상세포(또는 다른 뇌 영역 또는 척수로부터의 성상세포)를 1010개의 입자/㎖ 내지 1014개의 입자/㎖의 농도 범위에서 4 내지 7의 계대수로 감염시킨다. qPCR, 효소-결합 면역흡착(ELISA) 및 웨스턴 블롯을 수행하여 Dlx2 전사체 및 단백질 수준의 발현을 결정하였다.
NeuN, 더블코르틴(DCX), β3-튜불린, NF-200 및 MAP2의 발현을 qPCR, ELISA, 웨스턴 블롯 및 면역염색에 의해 평가하여 재조합 AAV의 기능적 산출을 결정한다.
실시예 6. AAV 벡터 적정 및 감염률의 시험
정제한 AAV 벡터를 DNaseI로 처리하여 나머지 플라스미드 오염을 제거한다. 100배, 500배, 2500배 및 12500배에서 일련의 AAV 벡터 희석을 수행한다. 연속 희석에 의해 표준 곡선을 생성하기 위해 AAV 플라스미드 골격을 희석시킨다. 플라스미드를 104, 105, 106, 107 및 108개의 분자/㎕로 희석시킨다. qPCR을 희석된 AAV 벡터 및 희석된 AAV 플라스미드 상에서 수행한다. 사용한 프라이머는 ITR 영역(정방향 ITR 프라이머, 5'-GGAACCCCTAGTGATGGAGTT, 역방향 ITR 프라이머, 5'-CGGCCTCAGTGAGCGA)에 대한 것이다. qPCR 믹스는 10㎕ Universal SYBR Master Mix 2×, 2㎕의 5μM 정방향 ITR 프라이머, 2㎕의 5μM 역방향 ITR 프라이머, 5㎕의 시험 샘플 또는 희석 표준물 및 1㎕ H2O를 포함한다. qPCR 프로그램은 10분 동안 95℃ 다음에 40주기의 15초 동안 95℃, 30초 동안 60℃ 다음에 용융 곡선이 이어진다. qPCR 사이클러 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석한다. AAV 샘플의 물리적 역가(바이러스 게놈(vg)/㎖)를 표준 곡선에 기반하여 계산한다.
미국 미생물 보존센터(ATCC; 버지니아주 매너서스 소재)로부터의 표준 프로토콜을 이용하여 수행한 50% 조직 배양 감염 용량(TCID50) 분석을 이용함으로써 AAV 벡터 감염률을 시험한다.
실시예 7. AAV 용량 범위의 시험(생체내)
실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV를 운동 피질에 양쪽 두개내 주사에 의해 C57/BL6 마우스에 주사한다. 각각의 AAV를 1㎕의 용적으로 1×1011, 3×1011, 1×1012, 3×1012, 1×1012, 3×1012, 1×1013 바이러스 게놈/㎖의 투약량으로 주사한다. 각 투약량을 주사 후 4일, 20일 및 60일에 평가하여, 세포 및 조직 수준에서 최적 유효 용량(OED), 최대 허용 용량(MTD) 및 최소 유효 용량(MED)을 결정한다. 시점당 3마리의 마우스가 있다. Dlx2, GFAP, NeuN 및 Iba1의 면역염색을 통한 성상세포-대-뉴런 전환 효율 및 잠재적 독성 평가에 의해 OED, MTD 및 MED를 결정한다. 제1 용량 범위가 OED, MTD 및 MED를 결정하는 데 충분하지 않다면, 제2 투약 범위를 1㎕의 용적에서 1×1010 GC/㎖ 내지 1×1014 바이러스 게놈/㎖로 수행한다.
실시예 8. 인간 대상체에서의 AAV 벡터 시험(생체내)
실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV를 사용하여 인간 뇌 또는 척수 성상세포를 생체내에서 감염시킨다. 신경학적 병태를 갖는 인간 대상체의 뇌 또는 척수에 10㎕ 내지 1000㎕ 범위의 용적으로 재조합 AAV를 1010개의 입자/㎖ 및 1014개의 입자/㎖의 농도 범위에서 주사한다. MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합, 및 거동 메트릭스(behavioral metrics)를 포함하는 인간 대상체의 신경학적 병태 증상, 뇌 영상을 주사 전, 주사 동안 및 주사 후에 관찰한다. 주사 후 첫 달까지 주사 후 관찰을 1주 1회 수행한다. 주사 후 첫 달 후에, 다음 11개월 동안 1개월에 1회 관찰을 수행하고, 바이러스 주사 후 2년까지 연장할 수 있다.
실시예 9. 비-인간 영장류에서의 용량 척도 분석
실시예 7로부터의 뇌 조직 발현 Dlx2의 용적을 벡터 게놈 수로 나눈다(㎣/벡터 게놈). 비-인간 영장류에서 치료할 특정 뇌 영역의 용적(㎣)을 계산하고, 벡터 게놈의 용량 범위는 실시예 7에서 얻은 감염 비율에 따른다. 용량 범위 연구는 실시예 7에서와 같이 수행하고, OED, MTD 및 MED는 Dlx2, GFAP, NeuN 및 Iba1의 면역염색을 통한 성상세포-대-뉴런 전환 효율 및 잠재적 독성의 평가에 의해 결정한다.
실시예 10. 헌팅턴병을 갖는 치료를 필요로 하는 대상체의 치료(생체내)
헌팅턴병을 갖는 대상체를 실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV로 치료한다. 대상체의 신경학적 증상은 불수의운동, 예컨대, 무도병 움직임, 통제되지 않는 자세, 기분 변화, 수면 장애, 발성 변화, 연하 곤란 및 인지 기능, 예컨대, 학습 및 기억의 결손을 포함한다. 신경학적 병태를 갖는 인간 대상체의 선조체(피각 및 미상핵)에 10㎕ 내지 1000㎕ 범위의 용적으로 재조합 AAV를 1010개의 입자/㎖ 및 1014개의 입자/㎖의 농도 범위에서 주사한다. MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합, 및 거동 메트릭스를 포함하는 인간 대상체의 신경학적 병태 증상, 뇌 영상을 주사 전, 주사 동안 및 주사 후에 관찰한다. 주사 후 첫 달까지 주사 후 관찰을 1주 1회 수행한다. 주사 후 첫 달 후에, 다음 11개월 동안 1개월에 1회 관찰을 수행하고, 바이러스 주사 후 2년까지 연장할 수 있다.
실시예 11. Htt 유전자 발현의 넉다운을 위해 shRNA와 결합된 신경아교세포를 뉴런으로 직접 전환시키는 조합 접근법
Htt 유전자에 상보성인 표적 서열을 확인한다. Htt 유전자를 표적화하기 위해 shRNA를 설계한다. Dlx2 및 표적 shRNA를 AAV 벡터 작제물(hU6::Htt shRNA-hGFAP::hDlx2)에 패키징하고(도 5A 내지 도 6F), 재조합 AAV를 실시예 2에 기재한 바와 같이 생성한다. 재조합 AAV를 돌연변이체 Htt 유전자를 갖는 마우스의 선조체에 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) 재조합 AAV(hU6::Htt shRNA-hGFAP::hDlx2)를 받는 그룹 중에서 비교한다(도 5A 내지 도6F).
대안적으로, 표적 shRNA를 AAV 벡터 작제물(hU6::hHtt shRNA)에 패키징하고, 다른 재조합 AAV를 실시예 2에 기재한 바와 같이 생성한다. 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 두 재조합 AAV를 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV 단독을 받는 그룹, 및 (iii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV와 조합한 재조합 AAV(hU6::hHtt shRNA)를 받는 그룹 중에서 비교한다.
실시예 12. Htt 유전자 발현의 CRISPR/CAS 유전자 편과 결합된 신경아교세포를 뉴런으로 직접 전환시키는 조합 접근법
Htt 유전자에 상보성인 표적 서열을 확인한다. Htt 유전자를 표적화하기 위해 가이드 RNA(gRNA) 서열을 설계한다. Htt 유전자의 CAG 반복부의 수를 36 미만으로 변형시키도록 공여자 서열을 설계한다. Cas9 뉴클레아제, Htt 특이적 gRNA 및 공여자 서열을 AAV 벡터 작제물(AAV-Cas9-HTT)에 패키징한다. 실시예 2에서 기재한 바와 같이 재조합 AAV를 생성한다.
재조합 AAV(AAV-Cas9-Htt)를 실시예 2로부터의 재조합 AAV와 동시에 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 돌연변이체 Htt 유전자 편집과 신경아교-대-뉴런 전환 사이의 상승 효과를 확인하기 위해 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 갖는 재조합 AAV-Cas9-HTT를 받는 그룹 중에서 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 비교한다. 실시예 2로부터의 재조합 AAV-Cas9-HTT 및 재조합 AAV를 동시에 또는 상이한 시간에 주사할 수 있다.
대안적으로, Dlx2, 링커(P2A), Cas9 뉴클레아제, Htt 특이적 gRNA 및 공여자 서열을 AAV 벡터 작제물(AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT)에 패키징한다. 실시예 2에서 기재한 바와 같이 재조합 AAV를 생성한다. 재조합 AAV(AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT)를 실시예 2로부터의 재조합 AAV와 동시에 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 돌연변이체 Htt 유전자 편집과 신경아교-대-뉴런 전환 사이의 상승 효과를 확인하기 위해 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 갖는 재조합 AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT를 받는 그룹 중에서 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 비교한다.
실시예 13. Htt 유전자 발현의 넉다운을 위해 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)와 결합된 신경아교세포를 뉴런으로 직접 전환시키는 조합 접근법
Htt 유전자에 상보성인 표적 서열을 확인한다. Htt 유전자 발현을 넉다운 시키기 위해 ASO를 설계하고 합성한다. 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 Htt ASO와 함께 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) Htt ASO와 함께 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹 중에서 비교한다.
실시예 14. Htt 유전자 발현의 넉다운을 위해 siRNA와 결합된 신경아교세포를 뉴런으로 직접 전환시키는 조합 접근법
Htt 유전자에 상보성인 표적 서열을 확인한다. Htt 유전자 발현을 넉다운 시키기 위해 siRNA를 설계하고 합성한다. 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 Htt siRNA와 함께 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) Htt siRNA와 함께 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹 중에서 비교한다.
실시예 15. Htt 유전자 발현의 넉다운을 위해 miRNA와 결합된 신경아교세포를 뉴런으로 직접 전환시키는 조합 접근법
Htt 유전자 발현을 조절하는 miRNA를 확인한다. NeuroD1, Dlx2 및 miRNA를 AAV 벡터(CAG::Htt miRNA-hGFAP::hDlx2)에 패키징하고, 재조합 AAV를 실시예 2에 기재한 바와 같이 생성한다. 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 재조합 AAV를 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV를 받는 그룹, 및 (iii) 재조합 AAV(CAG::Htt miRNA-hGFAP::hDlx2)를 받는 그룹 중에서 비교한다.
대안적으로, 표적 miRNA를 AAV 벡터에 패키징하고(CAG::hHtt miRNA), 재조합 AAV를 실시예 2에 기재한 바와 같이 생성한다. 돌연변이체 Htt를 갖는 마우스의 선조체에 재조합 AAV를 주사한다. 치료를 받는 마우스를 거동 메트릭스, 예컨대, 좁은 통로, 개방장 실험, 꽉 쥐기, 마우스 체중, 및 악력 및 MRI, PET 스캔 또는 MRI와 PET의 조합을 포함하는 뇌 영상화에 대해 시험한다. 거동 시험 결과 및 뇌 영상화를 (i) 처리를 받지 않는 그룹, (ii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV 단독을 받는 그룹, 및 (iii) 실시예 2로부터의 재조합 AAV와 조합한 재조합 AAV(CAG::hHtt miRNA)를 받는 그룹 중에서 비교한다.
실시예 16. 래트 성상세포 1차 배양물의 성공적인 확립
생후 3일의 스프래그-돌리 래트 뇌로부터 피질 및 선조체 조직을 단리시킨다. 조직을 파파인으로 처리하여 단세포 현탁액을 생성하고, 폴리-D-라이신으로 코팅한 플라스크에 파종한다. 세포를 GFAP 항체 및 SOX9 항체로 면역염색한다. 세포를 DAPI 항체로 대비염색한다. (계대 6에서) 95% 초과의 세포는 GFAP 및 SOX9 염색에 의해 확인된 성상세포이다(도 7). 가장 좌측 패널은 GFAP 염색 세포의 영상을 제시한다. 중앙 좌측 패널은 SOX9 염색 세포의 영상을 제시한다. 중앙 우측 패널은 DAPI 염색 세포의 영상을 제시한다. 가장 우측 패널은 GFAP, SOX9 및 DAPI 염색 세포의 병합 영상을 제시한다.
실시예 17. 플라스미드로 형질감염한 성상세포에서의 Dlx2 발현
1차 래트 성상세포를 파종하고, 발현 벡터 P44(EE:pGfa681:CI:Dlx2:WPRE:SV40), P60(EE:pGfa681:Dlx2:WPRE:SV40), P75(CE:pGfa681:CI:Dlx2:WPRE:SV40)로 실시예 2에 기재한 바와 같이 형질감염시킨다. 항-Dlx2 항체 다음에 형광 염료 접합된 2차 항체로 면역염색함으로써 Dlx2 단백질 발현을 시각화하고, 형광 현미경을 이용하여 영상을 포착한다. (도 8; 상단 패널은 세포의 Dlx2 염색을 나타내고, 하단 패널은 세포의 합병된 Dlx2 및 DAPI 염색을 나타낸다).
실시예 18. 1차 래트 성상세포 내로 AAV 바이러스 입자의 형질도입의 정량적 분석.
바이러스 입자 AAV9-P12(pGfa681:GFP) 및 AAV5-P7(pEF-1α:GFP)가 있는 24-웰 플레이트 또는 96-웰 플레이트에서 파종한 1차 래트 성상세포에 실시예 2의 방법으로부터 얻은 재조합 AAV를 형질도입한다. 트립신처리에 의해 감염 7일 후에 세포를 채취한다. 세포를 고정시키고, 세척하고 PBS에서 현탁시킨다. 모든 세포와 비교되는 GFP 양성 세포를 계수하기 위해 유세포분석을 이용하여 바이러스 형질도입률을 분석한다(도 9A-9B). 도 9A는 5×105 vg/세포, 2×105 vg/세포 및 5×104 vg/세포의 MOI에서의 AAV9-P12(pGfa681:GFP) 및 AAV5-P7(pEF-1α:GFP)의 형질도입률 백분율을 제시한다. 도 9B는 2×104개의 세포/웰, 1.5×104개의 세포/웰, 1×104개의 세포/웰 및 5×103개의 세포/웰의 일련의 밀도에서 96 웰 플레이트에 파종한 세포에서의 AAV 바이러스 입자의 형질도입률을 나타내고, 100㎕의 배지에서 2㎕, 1㎕, 0.5㎕, 0.25㎕, 0.125㎕의 1×1013 vg/㎖ 바이러스의 일련의 양으로 바이러스로 감염시킨다.
실시예 19. Dlx2의 시험관내 이식유전자 발현
벡터 : 래트 피질 성상세포(RAC)의 형질감염을 통해 벡터를 시험한다. 추가적으로, 선택 벡터를 이용하여 AAV를 생성하고, 형질도입을 통해 시험관내에서 시험한다: NXL-P44: EE-pGfa681-CI-Dlx2-WPRE-SV40pA
NXL-P104 및 NXL-P105 작제물은 이들 세포에서의 양성 Dlx2 염색에 의해 입증되는 바와 같이 배양된 RAC의 형질감염 24시간 후에 Dlx2의 발현을 유도하는 데 효과적이다(도 10). NXL-P133, NXL-P137 및 NXL-P131 작제물은 이들 세포에서의 양성 Dlx2 염색에 의해 입증되는 바와 같이 배양된 RAC의 형질감염 24시간 후에 Dlx2의 발현을 유도하는 데 효과적이다(도 11). AAV9-P133(NLX-P133에 의해 생성된 AAV)은 이들 세포에서 양성 Dlx2 염색에 의해 입증되는 바와 같이 이런 바이러스로 배양 RAC를 형질도입한 후 Dlx2의 발현을 유도하는 데 효과적이다(도 12).
본 개시내용의 조성물 및 방법에서의 다양한 추가적인 변형 및 개선은 당업자에게 분명할 것이다. 다음의 비제한적 실시형태를 상정한다:
1.
서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 hDlx2 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스.
2.
서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터.
3.
Dlx2 단백질을 암호화하는 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a)
신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
인핸서;
(c)
키메라 인트론;
(d)
우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
폴리아데닐화 신호 서열
을 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터.
4.
인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 상기 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물.
5.
인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물.
6.
치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는,
(a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 인핸서;
(c) 키메라 인트론;
(d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는, 조성물.
7.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터가 AAV 혈청형 2, AAV 혈청형 5 및 AAV 혈청형 9로 이루어진 군으로부터 선택되는, AAV 벡터 또는 조성물.
8.
실시형태 7에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 2인, AAV 벡터 또는 조성물.
9.
실시형태 7에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 5인, AAV 벡터 또는 조성물.
10.
실시형태 7에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 9인, AAV 벡터 또는 조성물.
11.
실시형태 4 또는 5에 있어서, 상기 신경아교세포는 반응성 성상세포인, 조성물.
12.
실시형태 4 또는 5에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
13.
실시형태 4 또는 5에 있어서, 상기 인간은 신경학적 병태를 갖는, 조성물.
14.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 Dlx2가 인간 Dlx2(hDlx2)인, AAV 벡터 또는 조성물.
15.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 Dlx2는 침팬지 Dlx2, 보노보 Dlx2, 오랑우탄 Dlx2, 고릴라 Dlx2, 마카크 Dlx2, 마모셋 Dlx2, 카푸친 Dlx2, 개코원숭이 Dlx2, 긴팔원숭이 Dlx2 및 여우원숭이 Dlx2로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
16.
실시형태 14에 있어서, 상기 hDlx2는 서열번호 10과 적어도 80% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
17.
실시형태 14에 있어서, 상기 hDlx2 암호화 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
18.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 인간 GFAP(hGFAP) 프로모터인, AAV 벡터 또는 조성물.
19.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 침팬지 GFAP 프로모터, 보노보 GFAP 프로모터, 오랑우탄 GFAP 프로모터, 고릴라 GFAP 프로모터, 마카크 GFAP 프로모터, 마모셋 GFAP 프로모터, 카푸친 GFAP 프로모터, 개코원숭이 GFAP 프로모터, 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 및 여우원숭이 GFAP 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
20.
실시형태 18에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 3과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
21.
실시형태 18에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 4와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
22.
실시형태 18에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 12와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
23.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 인핸서는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 및 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
24.
실시형태 23에 있어서, 상기 EF1-α는 서열번호 2와 적어도 80% 동일한 핵산 서열 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
25.
실시형태 23에 있어서, 상기 CMV 인핸서는 서열번호 11과 적어도 80% 동일한 핵산 서열 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
26.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 키메라 인트론은 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
27.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 WPRE는 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
28.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호 및 hGH 폴리아데닐화 신호 및 bGH 폴리아데닐화 신호로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
29.
실시형태 28에 있어서, 상기 SV40 폴리아데닐화 신호는 서열번호 8과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
30.
실시형태 28에 있어서, 상기 hGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 13과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
31.
실시형태 28에 있어서, 상기 bGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 20과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
32.
실시형태 3 또는 실시형태 6에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 단백질 서열을 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
33.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 2 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
34.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 5 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
35.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 9 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
36.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 1과 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
37.
실시형태 1 내지 3 또는 실시형태 4 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
38.
실시형태 6에 있어서, 상기 필요로 하는 대상체는 포유류인, 조성물.
39.
실시형태 38에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 조성물.
40.
실시형태 38에 있어서, 상기 포유류는 비-인간 영장류인, 조성물.
41.
실시형태 6에 있어서, 상기 필요로 하는 대상체는 신경학적 병태를 갖는, 조성물.
42.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 상기 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에 대한 손상을 포함하는, 조성물.
43.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 CNS에 대한 손상을 포함하는, 조성물.
44.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈, 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
45.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병인, 조성물.
46.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 파킨슨병인, 조성물.
47.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 ALS인, 조성물.
48.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 헌팅턴병인, 조성물.
49.
실시형태 13 또는 41에 있어서, 상기 신경학적 병태는 뇌졸중인, 조성물.
50.
실시형태 49에 있어서, 상기 뇌졸중은 허혈성 뇌졸중인, 조성물.
51.
실시형태 49에 있어서, 상기 뇌졸중은 출혈성 뇌졸중인, 조성물.
52.
실시형태 41에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 조성물.
53.
실시형태 52에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포 및 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
54.
실시형태 52에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포인, 조성물.
55.
실시형태 54에 있어서, 상기 성상세포는 반응성 성상세포인, 조성물.
56.
실시형태 52에 있어서, 상기 신경아교세포는 GFAP 양성인, 조성물.
57.
실시형태 52에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 조성물.
58.
실시형태 52에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
59.
실시형태 58에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런인, 조성물.
60.
실시형태 6에 있어서, 상기 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되도록 제형화되는, 조성물.
61.
실시형태 60에 있어서, 상기 조성물은 국소 전달용으로 제형화되는, 조성물.
62.
실시형태 61에 있어서, 상기 조성물은 전신 전달용으로 제형화되는, 조성물.
63.
실시형태 60 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 복강내, 근육내, 정맥내, 척추강내, 대뇌내, 두개내, 뇌의 측뇌실내, 소뇌연수조내, 유리체내, 망막하 내, 뇌실질내, 비강내 또는 경구 투여를 통한 전달용으로 제형화된, 조성물.
64.
실시형태 6의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 전달하는 단계를 포함하는 방법.
65.
실시형태 64에 있어서, 상기 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되도록 제형화되는, 방법.
66.
실시형태 64에 있어서, 상기 전달하는 단계는 국소 투여를 포함하는, 방법.
67.
실시형태 64에 있어서, 상기 전달하는 단계는 전신 투여를 포함하는, 방법.
68.
실시형태 64 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 전달하는 단계는 복강내, 근육내, 정맥내, 척추강내, 대뇌내, 두개내, 뇌의 측뇌실내, 소뇌연수조내, 유리체내, 망막하 내, 뇌실질내, 비강내 또는 경구 투여를 포함하는, 방법.
69.
살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고, 상기 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법.
70.
살아있는 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c)
서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d)
서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법.
71.
신경아교세포의 뉴런으로의 전환을 필요로 하는 대상체에서 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 상기 필요로 하는 대상체에게 전달하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는,
(a)
신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
인핸서;
(c)
키메라 인트론;
(d)
우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
및 폴리아데닐화 신호 서열
을 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고,
상기 벡터는 상기 필요로 하는 대상체에서 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 방법.
72.
신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 상기 대상체에게 전달하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는,
(a)
신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
인핸서;
(c)
키메라 인트론;
(d)
우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e)
상기 필요로 하는 대상체 대한 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하는, 방법.
73.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 2, AAV 혈청형 5 및 AAV 혈청형 9로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
74.
실시형태 73에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 2인, 방법.
75.
실시형태 73에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 5인, 방법.
76.
실시형태 73에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 9인, 방법.
77.
실시형태 69 또는 70에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런인, 방법.
78.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 Dlx2는 인간 Dlx2(hDlx2)인, 방법.
79.
실시형태 71 또는 실시형태 72에 있어서, 상기 Dlx2는 침팬지 Dlx2, 보노보 Dlx2, 오랑우탄 Dlx2, 고릴라 Dlx2, 마카크 Dlx2, 마모셋 Dlx2, 카푸친 Dlx2, 개코원숭이 Dlx2, 긴팔원숭이 Dlx2 및 여우원숭이 Dlx2로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
80.
실시형태 78에 있어서, 상기 hDlx2는 서열번호 10과 적어도 80% 동일 또는 유사한 아미노산 서열을 암호화하는 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
81.
실시형태 78에 있어서, 상기 hDlx2 암호화 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
82.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 인간 GFAP(hGFAP) 프로모터인, 방법.
83.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 침팬지 GFAP 프로모터, 보노보 GFAP 프로모터, 오랑우탄 GFAP 프로모터, 고릴라 GFAP 프로모터, 마카크 GFAP 프로모터, 마모셋 GFAP 프로모터, 카푸친 GFAP 프로모터, 개코원숭이 GFAP 프로모터, 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 및 여우원숭이 GFAP 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
84.
실시형태 82에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 3과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
85.
실시형태 83에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 4와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
86.
실시형태 82에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 12와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
87.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 인핸서는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 및 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
88.
실시형태 87에 있어서, 상기 EF1-α는 서열번호 2와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
89.
실시형태 87에 있어서, 상기 CMV 인핸서는 서열번호 11과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
90.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 키메라 인트론은 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
91.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 WPRE는 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
92.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호 및 hGH 폴리아데닐화 신호로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
93.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 SV40 폴리아데닐화 신호는 서열번호 8과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
94.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 hGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 13과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
95.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 bGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 20과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
96.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 벡터는 AAV 단백질 서열을 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 방법.
97.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 2 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
98.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 5 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
99.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 9 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
100.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 벡터는 서열번호 1과 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, 방법.
101.
실시형태 69 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 벡터는 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, 방법.
102.
실시형태 69에 있어서, 상기 전환시키는 단계는 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에서 일어나는, 방법.
103.
실시형태 71에 있어서, 상기 전환시키는 단계는 CNS에서 일어나는, 방법.
104.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 필요로 하는 대상체는 포유류인, 방법.
105.
실시형태 104에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 방법.
106.
실시형태 104에 있어서, 상기 포유류는 비-인간 영장류인, 방법.
107.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 전달하는 단계는 국소 투여를 포함하는, 방법.
108.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 전달하는 단계는 전신 투여를 포함하는, 방법.
109.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 전달하는 단계는 복강내 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 척추강내 투여, 대뇌내 투여, 두개내 투여, 뇌의 측뇌실내 투여, 소뇌연수조내 투여, 유리체내 투여, 망막하 내 투여, 뇌실질내 투여, 비강내 투여 및 경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택된 투여를 포함하는, 방법.
110.
실시형태 69 또는 70에 있어서, 상기 주사하는 단계는 복강내 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사, 척추강내 주사, 대뇌내 주사, 두개내 주사, 뇌의 측뇌실내 주사, 소뇌연수조내 주사, 유리체내 주사, 망막하 내 주사, 뇌실질내 주사, 비강내 주사 및 경구 주사로 이루어진 군으로부터 선택된 주사를 포함하는, 방법.
111.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 상기 전달하는 단계는 주사를 포함하는, 방법.
112.
실시형태 69, 70 또는 111 중 어느 하나에 있어서, 상기 주사는 1010개의 입자/㎖ 내지 1014개의 입자/㎖의 농도에서 수행되는, 방법.
113.
실시형태 112에 있어서, 상기 주사는 0.1㎕/분 내지 5.0㎕/분의 유속을 더 포함하는, 방법.
114.
실시형태 71에 있어서, 상기 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 성상세포 및 적어도 하나의 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
115.
실시형태 69에 있어서, 상기 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 성상세포인, 방법.
116.
실시형태 114 또는 115에 있어서, 상기 적어도 하나의 성상세포는 반응성 성상세포인, 방법.
117.
실시형태 1에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 방법.
118.
실시형태 69, 70 및 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
119.
실시형태 71에 있어서, 상기 대상체는 상기 전달하기 전의 상기 대상체와 비교할 때 적어도 하나의 신경학적 병태 증상의 개선을 나타내는, 방법.
120.
실시형태 119에 있어서, 상기 개선은 상기 전달하는 단계의 1년 이내에 측정된, 방법.
121.
실시형태 69, 70 또는 111 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체의 뇌에 상기 AAV 벡터를 직접 주사하는 것을 포함하는, 방법.
122.
실시형태 69 또는 70 중 어느 하나에 있어서, 상기 전환은 상기 뇌의 대뇌 피질에서 이루어지는, 방법.
123.
실시형태 69, 70 또는 111 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체의 척수에 상기 AAV 벡터를 직접 주사하는 것을 포함하는, 방법.
124.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 상기 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에 대한 손상을 포함하는, 방법.
125.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈, 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
126.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병인, 방법.
127.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 파킨슨병인, 방법.
128.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 ALS인, 방법.
129.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 헌팅턴병인, 방법.
130.
실시형태 72에 있어서, 상기 신경학적 병태는 뇌졸중인, 방법.
131.
실시형태 130에 있어서, 상기 뇌졸중은 허혈성 뇌졸중인, 방법.
132.
실시형태 130에 있어서, 상기 뇌졸중은 출혈성 뇌졸중인, 방법.
133.
실시형태 72에 있어서, 상기 방법은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 방법.
134.
실시형태 133에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포 및 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
135.
실시형태 132에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포인, 방법.
136.
실시형태 135에 있어서, 상기 성상세포는 반응성 성상세포인, 방법.
137.
실시형태 133에 있어서, 상기 신경아교세포는 GFAP 양성인, 방법.
138.
실시형태 133에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 방법.
139.
실시형태 138에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
140.
실시형태 69 또는 70에 있어서, 치료적 유효 용량의 상기 AAV가 상기 대상체에 주사되는, 방법.
141.
실시형태 71 또는 72에 있어서, 치료적 유효 용량의 상기 AAV가 상기 대상체에 전달되는, 방법.
142.
실시형태 140 또는 141에 있어서, 상기 치료적 유효 용량은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여되는, 방법.
143.
서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 hDlx2 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스.
144.
서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터.
145.
인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 상기 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물.
146.
인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물.
147.
살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법.
148.
살아있는 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 암호화 서열은,
(a)
서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b)
서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c)
서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법.
SEQUENCE LISTING
<110> NEUEXCELL THERAPEUTICS INC
<120> DLX2 VECTOR
<130> P34836WO00
<140>
<141>
<150> 63/247,417
<151> 2021-09-23
<150> 63/084,927
<151> 2020-09-29
<160> 21
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 128
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 1
tgcaggcagc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgccc gggcgtcggg cgacctttgg 60
tcgcccggcc tcagtgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtggccaact ccatcactag 120
gggttcct 128
<210> 2
<211> 153
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 2
tgcaaagatg gataaagttt taaacagaga ggaatctttg cagctaatgg accttctagg 60
tcttgaaagg agtgggaatt ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 120
cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gca 153
<210> 3
<211> 686
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 3
ctagtaacat atcctggtgt ggagtagggg acgctgctct gacagaggct cgggggcctg 60
agctggctct gtgagctggg gaggaggcag acagccaggc cttgtctgca agcagacctg 120
gcagcattgg gctggccgcc ccccagggcc tcctcttcat gcccagtgaa tgactcacct 180
tggcacagac acaatgttcg gggtgggcac agtgcctgct tcccgccgca ccccagcccc 240
cctcaaatgc cttccgagaa gcccattgag cagggggctt gcattgcacc ccagcctgac 300
agcctggcat cttgggataa aagcagcaca gccccctagg ggctgccctt gctgtgtggc 360
gccaccggcg gtggagaaca aggctctatt cagcctgtgc ccaggaaagg ggatcagggg 420
atgcccaggc atggacagtg ggtggcaggg ggggagagga gggctgtctg cttcccagaa 480
gtccaaggac acaaatgggt gaggggagag ctctccccat agctgggctg cggcccaacc 540
ccaccccctc aggctatgcc agggggtgtt gccaggggca cccgggcatc gccagtctag 600
cccactcctt cataaagccc tcgcatccca ggagcgagca gagccagagc aggttggaga 660
ggagacgcat cacctccgct gctcgc 686
<210> 4
<211> 1667
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 4
ctgcaagcag acctggcagc attgggctgg ccgcccccca gggcctcctc ttcatgccca 60
gtgaatgact caccttggca cagacacaat gttcggggtg ggcacagtgc ctgcttcccg 120
ccgcacccca gcccccctca aatgccttcc gagaagccca ttgagtaggg ggcttgcatt 180
gcaccccagc ctgacagcct ggcatcttgg gataaaagca gcacagcccc ctaggggctg 240
cccttgctgt gtggcgccac cggcggtgga gaacaaggct ctattcagcc tgtgcccagg 300
aaaggggatc aggggatgcc caggcatgga cagtgggtgg caggggggga gaggagggct 360
gtctgcttcc cagaagtcca aggacacaaa tgggtgaggg gactgggcag ggttctgacc 420
ctgtgggacc agagtggagg gcgtagatgg acctgaagtc tccagggaca acagggccca 480
ggtctcaggc tcctagttgg gcccagtggc tccagcgttt ccaaacccat ccatccccag 540
aggttcttcc catctctcca ggctgatgtg tgggaactcg aggaaataaa tctccagtgg 600
gagacggagg ggtggccagg gaaacggggc gctgcaggaa taaagacgag ccagcacagc 660
cagctcatgc gtaacggctt tgtggagctg tcaaggcctg gtctctggga gagaggcaca 720
gggaggccag acaaggaagg ggtgacctgg agggacagat ccaggggcta aagtcctgat 780
aaggcaagag agtgccggcc ccctcttgcc ctatcaggac ctccactgcc acatagaggc 840
catgattgac ccttagacaa agggctggtg tccaatccca gcccccagcc ccagaactcc 900
agggaatgaa tgggcagaga gcaggaatgt gggacatctg tgttcaaggg aaggactcca 960
ggagtctgct gggaatgagg cctagtagga aatgaggtgg cccttgaggg tacagaacag 1020
gttcattctt cgccaaattc ccagcacctt gcaggcactt acagctgagt gagataatgc 1080
ctgggttatg aaatcaaaaa gttggaaagc aggtcagagg tcatctggta cagcccttcc 1140
ttcccttttt tttttttttt ttttgtgaga caaggtctct ctctgttgcc caggctggag 1200
tggcgcaaac acagctcact gcagcctcaa cctactgggc tcaagcaatc ctccagcctc 1260
agcctcccaa agtgctggga ttacaagcat gagccacccc actcagccct ttccttcctt 1320
tttaattgat gcataataat tgtaagtatt catcatggtc caaccaaccc tttcttgacc 1380
caccttccta gagagagggt cctcttgatt cagcggtcag ggccccagac ccatggtctg 1440
gctccaggta ccacctgcct catgcaggag ttggcgtgcc caggaagctc tgcctctggg 1500
cacagtgacc tcagtggggt gaggggagct ctccccatag ctgggctgcg gcccaacccc 1560
accccctcag gctatgccag ggggtgttgc caggggcacc cgggcatcgc cagtctagcc 1620
cactccttca taaagccctc gcatcccagg agcgagcaga gccagag 1667
<210> 5
<211> 133
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 5
gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat agaaactggg cttgtcgaga 60
cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc ttactgacat ccactttgcc 120
tttctctcca cag 133
<210> 6
<211> 987
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
atgactggag tctttgacag tctagtggct gatatgcact cgacccagat cgccgcctcc 60
agcacgtacc accagcacca gcagcccccg agcggcggcg gcgccggccc gggtggcaac 120
agcagcagca gcagcagcct ccacaagccc caggagtcgc ccacccttcc ggtgtccacc 180
gccaccgaca gcagctacta caccaaccag cagcacccgg cgggcggcgg cggcggcggg 240
ggctcgccct acgcgcacat gggttcctac cagtaccaag ccagcggcct caacaacgtc 300
ccttactccg ccaagagcag ctatgacctg ggctacaccg ccgcctacac ctcctacgct 360
ccctatggaa ccagttcgtc cccagccaac aacgagcctg agaaggagga ccttgagcct 420
gaaattcgga tagtgaacgg gaagccaaag aaagtccgga aaccccgcac catctactcc 480
agtttccagc tggcggctct tcagcggcgt ttccaaaaga ctcaatactt ggccttgccg 540
gagcgagccg agctggcggc ctctctgggc ctcacccaga ctcaggtcaa aatctggttc 600
cagaaccgcc ggtccaagtt caagaagatg tggaaaagtg gtgagatccc ctcggagcag 660
caccctgggg ccagcgcttc tccaccttgt gcttcgccgc cagtctcagc gccggcctcc 720
tgggactttg gtgtgccgca gcggatggcg ggcggcggtg gtccgggcag tggcggcagc 780
ggcgccggca gctcgggctc cagcccgagc agcgcggcct cggcttttct gggcaactac 840
ccctggtacc accagacctc gggatccgcc tcacacctgc aggccacggc gccgctgctg 900
caccccactc agaccccgca gccgcatcac caccaccacc atcacggcgg cgggggcgcc 960
ccggtgagcg cggggacgat tttctga 987
<210> 7
<211> 589
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 7
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589
<210> 8
<211> 251
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 8
cgatccaccg gatctagata actgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta 60
cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt 120
gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca 180
aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc 240
aatgtatctt a 251
<210> 9
<211> 139
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 9
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag ctgcctgca 139
<210> 10
<211> 328
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Thr Gly Val Phe Asp Ser Leu Val Ala Asp Met His Ser Thr Gln
1 5 10 15
Ile Ala Ala Ser Ser Thr Tyr His Gln His Gln Gln Pro Pro Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Ala Gly Pro Gly Gly Asn Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu His
35 40 45
Lys Pro Gln Glu Ser Pro Thr Leu Pro Val Ser Thr Ala Thr Asp Ser
50 55 60
Ser Tyr Tyr Thr Asn Gln Gln His Pro Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ser Pro Tyr Ala His Met Gly Ser Tyr Gln Tyr Gln Ala Ser Gly
85 90 95
Leu Asn Asn Val Pro Tyr Ser Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Leu Gly Tyr
100 105 110
Thr Ala Ala Tyr Thr Ser Tyr Ala Pro Tyr Gly Thr Ser Ser Ser Pro
115 120 125
Ala Asn Asn Glu Pro Glu Lys Glu Asp Leu Glu Pro Glu Ile Arg Ile
130 135 140
Val Asn Gly Lys Pro Lys Lys Val Arg Lys Pro Arg Thr Ile Tyr Ser
145 150 155 160
Ser Phe Gln Leu Ala Ala Leu Gln Arg Arg Phe Gln Lys Thr Gln Tyr
165 170 175
Leu Ala Leu Pro Glu Arg Ala Glu Leu Ala Ala Ser Leu Gly Leu Thr
180 185 190
Gln Thr Gln Val Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Ser Lys Phe Lys
195 200 205
Lys Met Trp Lys Ser Gly Glu Ile Pro Ser Glu Gln His Pro Gly Ala
210 215 220
Ser Ala Ser Pro Pro Cys Ala Ser Pro Pro Val Ser Ala Pro Ala Ser
225 230 235 240
Trp Asp Phe Gly Val Pro Gln Arg Met Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Ser Gly Ala Gly Ser Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ser Ala
260 265 270
Ala Ser Ala Phe Leu Gly Asn Tyr Pro Trp Tyr His Gln Thr Ser Gly
275 280 285
Ser Ala Ser His Leu Gln Ala Thr Ala Pro Leu Leu His Pro Thr Gln
290 295 300
Thr Pro Gln Pro His His His His His His His Gly Gly Gly Gly Ala
305 310 315 320
Pro Val Ser Ala Gly Thr Ile Phe
325
<210> 11
<211> 380
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 11
gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc 60
catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca 120
acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga 180
ctttccattg acgtcaatgg gtggactatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc 240
aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct 300
ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat 360
tagtcatcgc tattaccatg 380
<210> 12
<211> 2214
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
cgcgtcccac ctccctctct gtgctgggac tcacagaggg agacctcagg aggcagtctg 60
tccatcacat gtccaaatgc agagcatacc ctgggctggg cgcagtggcg cacaactgta 120
attccagcac tttgggaggc tgatgtggaa ggatcacttg agcccagaag ttctagacca 180
gcctgggcaa catggcaaga ccctatctct acaaaaaaag ttaaaaaatc agccacgtgt 240
ggtgacacac acctgtagtc ccagctattc aggaggctga ggtgagggga tcacttaagg 300
ctgggaggtt gaggctgcag tgagtcgtgg ttgcgccact gcactccagc ctgggcaaca 360
gtgagaccct gtctcaaaag acaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaagaaca tatcctggtg 420
tggagtaggg gacgctgctc tgacagaggc tcgggggcct gagctggctc tgtgagctgg 480
ggaggaggca gacagccagg ccttgtctgc aagcagacct ggcagcattg ggctggccgc 540
cccccagggc ctcctcttca tgcccagtga atgactcacc ttggcacaga cacaatgttc 600
ggggtgggca cagtgcctgc ttcccgccgc accccagccc ccctcaaatg ccttccgaga 660
agcccattga gcagggggct tgcattgcac cccagcctga cagcctggca tcttgggata 720
aaagcagcac agccccctag gggctgccct tgctgtgtgg cgccaccggc ggtggagaac 780
aaggctctat tcagcctgtg cccaggaaag gggatcaggg gatgcccagg catggacagt 840
gggtggcagg gggggagagg agggctgtct gcttcccaga agtccaagga cacaaatggg 900
tgaggggact gggcagggtt ctgaccctgt gggaccagag tggagggcgt agatggacct 960
gaagtctcca gggacaacag ggcccaggtc tcaggctcct agttgggccc agtggctcca 1020
gcgtttccaa acccatccat ccccagaggt tcttcccatc tctccaggct gatgtgtggg 1080
aactcgagga aataaatctc cagtgggaga cggaggggtg gccagggaaa cggggcgctg 1140
caggaataaa gacgagccag cacagccagc tcatgtgtaa cggctttgtg gagctgtcaa 1200
ggcctggtct ctgggagaga ggcacaggga ggccagacaa ggaaggggtg acctggaggg 1260
acagatccag gggctaaagt cctgataagg caagagagtg ccggccccct cttgccctat 1320
caggacctcc actgccacat agaggccatg attgaccctt agacaaaggg ctggtgtcca 1380
atcccagccc ccagccccag aactccaggg aatgaatggg cagagagcag gaatgtggga 1440
catctgtgtt caagggaagg actccaggag tctgctggga atgaggccta gtaggaaatg 1500
aggtggccct tgagggtaca gaacaggttc attcttcgcc aaattcccag caccttgcag 1560
gcacttacag ctgagtgaga taatgcctgg gttatgaaat caaaaagttg gaaagcaggt 1620
cagaggtcat ctggtacagc ccttccttcc cttttttttt tttttttttt gtgagacaag 1680
gtctctctct gttgcccagg ctggagtggc gcaaacacag ctcactgcag cctcaaccta 1740
ctgggctcaa gcaatcctcc agcctcagcc tcccaaagtg ctgggattac aagcatgagc 1800
caccccactc agccctttcc ttccttttta attgatgcat aataattgta agtattcatc 1860
atggtccaac caaccctttc ttgacccacc ttcctagaga gagggtcctc ttgcttcagc 1920
ggtcagggcc ccagacccat ggtctggctc caggtaccac ctgcctcatg caggagttgg 1980
cgtgcccagg aagctctgcc tctgggcaca gtgacctcag tggggtgagg ggagctctcc 2040
ccatagctgg gctgcggccc aaccccaccc cctcaggcta tgccaggggg tgttgccagg 2100
ggcacccggg catcgccagt ctagcccact ccttcataaa gccctcgcat cccaggagcg 2160
agcagagcca gagcaggttg gagaggagac gcatcacctc cgctgctcgc cggg 2214
<210> 13
<211> 477
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca 60
gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc 120
ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca 180
acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg 240
ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg 300
ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg 360
ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct 420
tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtcctt 477
<210> 14
<211> 241
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 14
gtcctttcca caagatatat aaacccaaga aatcgaaata ctttcaagtt acggtaagca 60
tatgatagtc cattttaaaa cataatttta aaactgcaaa ctacccaaga aattattact 120
ttctacgtca cgtattttgt actaatatct ttgtgtttac agtcaaatta attctaatta 180
tctctctaac agccttgtat cgtatatgca aatatgaagg aatcatggga aataggccct 240
c 241
<210> 15
<211> 58
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 15
ccggtggttc agttacgggt taattctcga gaattaaccc gtaactgaac catttttg 58
<210> 16
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 16
ccggcagtta cgggttaatt aatacctgac ccatattaat taacccgtaa ctgctttttg 60
<210> 17
<211> 57
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 17
ccggtgttgc cgcagcatca ctaatctcga gattagtgat gctgcggcaa cattttg 57
<210> 18
<211> 581
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 18
gagcatctta ccgccattta tacccatatt tgttctgttt ttcttgattt gggtatacat 60
ttaaatgtta ataaaacaaa atggtggggc aatcatttac atttttaggg atatgtaatt 120
actagttcag gtgtattgcc acaagacaaa catgttaaga aactttcccg ttatttacgc 180
tctgttcctg ttaatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tgatattctt 240
aactatgttg ctccttttac gctgtgtgga tatgctgctt tatagcctct gtatctagct 300
attgcttccc gtacggcttt cgttttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt 360
ttagaggagt tgtggcccgt tgtccgtcaa cgtggcgtgg tgtgctctgt gtttgctgac 420
gcaaccccca ctggctgggg cattgccacc acctgtcaac tcctttctgg gactttcgct 480
ttccccctcc cgatcgccac ggcagaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca 540
ggggctaggt tgctgggcac tgataattcc gtggtgttgt c 581
<210> 19
<211> 1062
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 19
ggagtcgctg cgttgccttc gccccgtgcc ccgctccgcg ccgcctcgcg ccgcccgccc 60
cggctctgac tgaccgcgtt actcccacag gtgagcgggc gggacggccc ttctccctcc 120
gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag 180
ccttaaaggg ctccgggagg gcctttgtgc gggggggagc ggctcggggg gtgcgtgcgt 240
gtgtgtgtgc gtggggagcg ccgcgtgcgg cccgcgctgc ccggcggctg tgagcgctgc 300
gggcgcggcg cggggctttg tgcgctccgc gtgtgcgcga ggggagcgcg ggccgggggc 360
ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 420
tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctggcaccc 480
ccctccccga gttgctgagc acggcccggc ttcgggtgcg gggctccgtg cggggcgtgg 540
cgcggggctc gccgtgccgg gcggggggtg gcggcaggtg ggggtgccgg gcggggcggg 600
gccgcctcgg gccggggagg gctcggggga ggggcgcggc ggccccggag cgccggcggc 660
tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag 720
ggacttcctt tgtcccaaat ctggcggagc cgaaatctgg gaggcgccgc cgcaccccct 780
ctagcgggcg cgggcgaagc ggtgcggcgc cggcaggaag gaaatgggcg gggagggcct 840
tcgtgcgtcg ccgcgccgcc gtccccttct ccatctccag cctcggggct gccgcagggg 900
gacggctgcc ttcggggggg acggggcagg gcggggttcg gcttctggcg tgtgaccggc 960
ggctttagag cctctgctaa ccatgttcat gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc 1020
aacgtgctgg ttgttgtgct gtctcatcat tttggcaaag at 1062
<210> 20
<211> 208
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 20
ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60
tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120
tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180
gggaagagaa tagcaggcat gctgggga 208
<210> 21
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 21
ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60
ggacct 66
Claims (148)
- 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(human distal-less homeobox 2: hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 hDlx2 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(glial fibrillary acidic protein: GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(elongation factor-1 alpha: EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(cytomegalovirus: CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element: WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스. - 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터. - Dlx2 단백질을 암호화하는 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 인핸서;
(c) 키메라 인트론;
(d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 폴리아데닐화 신호 서열
을 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터. - 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 상기 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물. - 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물. - 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는,
(a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 인핸서;
(c) 키메라 인트론;
(d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는, 조성물. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터가 AAV 혈청형 2, AAV 혈청형 5 및 AAV 혈청형 9로 이루어진 군으로부터 선택되는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 2인, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 5인, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 9인, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제4항 내지 제5항에 있어서, 상기 신경아교세포는 반응성 성상세포인, 조성물.
- 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성(GABAergic) 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
- 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 인간은 신경학적 병태를 갖는, 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 Dlx2가 인간 Dlx2(hDlx2)인, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 Dlx2는 침팬지 Dlx2, 보노보 Dlx2, 오랑우탄 Dlx2, 고릴라 Dlx2, 마카크 Dlx2, 마모셋 Dlx2, 카푸친 Dlx2, 개코원숭이 Dlx2, 긴팔원숭이 Dlx2 및 여우원숭이 Dlx2로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제14항에 있어서, 상기 hDlx2는 서열번호 10과 적어도 80% 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제14항에 있어서, 상기 hDlx2 암호화 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 인간 GFAP(hGFAP) 프로모터인, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 침팬지 GFAP 프로모터, 보노보 GFAP 프로모터, 오랑우탄 GFAP 프로모터, 고릴라 GFAP 프로모터, 마카크 GFAP 프로모터, 마모셋 GFAP 프로모터, 카푸친 GFAP 프로모터, 개코원숭이 GFAP 프로모터, 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 및 여우원숭이 GFAP 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 3과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 4와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 12와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 인핸서는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 및 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제23항에 있어서, 상기 EF1-α는 서열번호 2와 적어도 80% 동일한 핵산 서열 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제23항에 있어서, 상기 CMV 인핸서는 서열번호 11과 적어도 80% 동일한 핵산 서열 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 키메라 인트론은 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 WPRE는 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, hGH 폴리아데닐화 신호 및 bGH 폴리아데닐화 신호로 이루어진 군으로부터 선택된, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제28항에 있어서, 상기 SV40 폴리아데닐화 신호는 서열번호 8과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제28항에 있어서, 상기 hGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 13과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제28항에 있어서, 상기 bGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 20과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제3항 또는 제6항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 단백질 서열을 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 2 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 5 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV 혈청형 9 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, AAV 벡터 또는 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 치료를 필요로 하는 대상체는 포유류인, 조성물.
- 제38항에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 조성물.
- 제38항에 있어서, 상기 포유류는 비인간 영장류인, 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 치료를 필요로 하는 대상체는 신경학적 병태를 갖는, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 상기 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에 대한 손상을 포함하는, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 CNS에 대한 손상을 포함하는, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈(global ischemia), 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병인, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 파킨슨병인, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 ALS인, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 헌팅턴병인, 조성물.
- 제13항 또는 제41항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 뇌졸중인, 조성물.
- 제49항에 있어서, 상기 뇌졸중은 허혈성 뇌졸중인, 조성물.
- 제49항에 있어서, 상기 뇌졸중은 출혈성 뇌졸중인, 조성물.
- 제41항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포 및 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포인, 조성물.
- 제54항에 있어서, 상기 성상세포는 반응성 성상세포인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 신경아교세포는 GFAP 양성인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
- 제58항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런인, 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되도록 제형화되는, 조성물.
- 제60항에 있어서, 상기 조성물은 국소 전달용으로 제형화되는, 조성물.
- 제61항에 있어서, 상기 조성물은 전신 전달용으로 제형화되는, 조성물.
- 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 복강내, 근육내, 정맥내, 척추강내, 대뇌내, 두개내, 뇌의 측뇌실내, 소뇌연수조내, 유리체내, 망막하 내, 뇌실질내, 비강내 또는 경구 투여를 통한 전달용으로 제형화된, 조성물.
- 제6항의 조성물을 상기 치료를 필요로 하는 대상체에게 전달하는 단계를 포함하는 방법.
- 제64항에 있어서, 상기 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 전달되도록 제형화되는, 방법.
- 제64항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 국소 투여를 포함하는, 방법.
- 제64항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 전신 투여를 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 복강내, 근육내, 정맥내, 척추강내, 대뇌내, 두개내, 뇌의 측뇌실내, 소뇌연수조내, 유리체내, 망막하 내, 뇌실질내, 비강내 또는 경구 투여를 포함하는, 방법.
- 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법. - 살아있는 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서;
(c) 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 키메라 인트론;
(d) 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법. - 신경아교세포의 뉴런으로의 전환을 필요로 하는 대상체에서 신경아교세포를 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 상기 필요로 하는 대상체에게 전달하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는,
(a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 인핸서;
(c) 키메라 인트론;
(d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 및 폴리아데닐화 신호 서열
을 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하고,
상기 벡터는 상기 필요로 하는 대상체에서 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 방법. - 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 상기 대상체에게 전달하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는,
(a) 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 인핸서;
(c) 키메라 인트론;
(d) 우드처크 간염 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE); 및
(e) 상기 필요로 하는 대상체 대한 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 발현 제어 요소에 작동 가능하게 연결된 디스탈리스 호메오박스 2(Dlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하는, 방법. - 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 2, AAV 혈청형 5 및 AAV 혈청형 9로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제73항에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 2인, 방법.
- 제73항에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 5인, 방법.
- 제73항에 있어서, 상기 AAV는 AAV 혈청형 9인, 방법.
- 제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런인, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 Dlx2는 인간 Dlx2(hDlx2)인, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 Dlx2는 침팬지 Dlx2, 보노보 Dlx2, 오랑우탄 Dlx2, 고릴라 Dlx2, 마카크 Dlx2, 마모셋 Dlx2, 카푸친 Dlx2, 개코원숭이 Dlx2, 긴팔원숭이 Dlx2 및 여우원숭이 Dlx2로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제78항에 있어서, 상기 hDlx2는 서열번호 10과 적어도 80% 동일 또는 유사한 아미노산 서열을 암호화하는 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제78항에 있어서, 상기 hDlx2 암호화 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 인간 GFAP(hGFAP) 프로모터인, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 GFAP 프로모터는 침팬지 GFAP 프로모터, 보노보 GFAP 프로모터, 오랑우탄 GFAP 프로모터, 고릴라 GFAP 프로모터, 마카크 GFAP 프로모터, 마모셋 GFAP 프로모터, 카푸친 GFAP 프로모터, 개코원숭이 GFAP 프로모터, 긴팔원숭이 GFAP 프로모터 및 여우원숭이 GFAP 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제82항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 3과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제83항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 4와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제82항에 있어서, 상기 hGFAP 프로모터는 서열번호 12와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 인핸서는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 및 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제87항에 있어서, 상기 EF1-α는 서열번호 2와 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제87항에 있어서, 상기 CMV 인핸서는 서열번호 11과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 키메라 인트론은 서열번호 5 및 19로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 WPRE는 서열번호 7 및 18로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, hGH 폴리아데닐화 신호로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 SV40 폴리아데닐화 신호는 서열번호 8과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 hGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 13과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 bGH 폴리아데닐화 신호는 서열번호 20과 적어도 80% 동일한 핵산 서열, 또는 이의 보체를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 벡터는 AAV 단백질 서열을 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 2 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 5 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 AAV 혈청형 9 역위 말단 반복(ITR)을 포함하는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 서열번호 1과 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 서열번호 9와 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 ITR 핵산 서열을 포함하는, 방법.
- 제69항에 있어서, 상기 전환시키는 단계는 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에서 일어나는, 방법.
- 제71항에 있어서, 상기 전환시키는 단계는 CNS에서 일어나는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 필요로 하는 대상체는 포유류인, 방법.
- 제104항에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 방법.
- 제104항에 있어서, 상기 포유류는 비-인간 영장류인, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 국소 투여를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 전신 투여를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 복강내 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 척추강내 투여, 대뇌내 투여, 두개내 투여, 뇌의 측뇌실내 투여, 소뇌연수조내 투여, 유리체내 투여, 망막하 내 투여, 뇌실질내 투여, 비강내 투여 및 경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택된 투여를 포함하는, 방법.
- 제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 주사하는 단계는 복강내 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사, 척추강내 주사, 대뇌내 주사, 두개내 주사, 뇌의 측뇌실내 주사, 소뇌연수조내 주사, 유리체내 주사, 망막하 내 주사, 뇌실질내 주사, 비강내 주사 및 경구 주사로 이루어진 군으로부터 선택된 주사를 포함하는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 전달하는 단계는 주사를 포함하는, 방법.
- 제69항, 제70항 및 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 주사는 1010개의 입자/㎖ 내지 1014개의 입자/㎖의 농도에서 수행되는, 방법.
- 제112항에 있어서, 상기 주사는 0.1㎕/분 내지 5.0㎕/분의 유속을 더 포함하는, 방법.
- 제71항에 있어서, 상기 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 성상세포 및 적어도 하나의 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제69항에 있어서, 상기 적어도 하나의 신경아교세포는 적어도 하나의 성상세포인, 방법.
- 제114항 또는 제115항에 있어서, 상기 적어도 하나의 성상세포는 반응성 성상세포인, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 방법.
- 제69항, 제70항 및 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제71항에 있어서, 상기 대상체는 상기 전달하기 전의 상기 대상체와 비교할 때 적어도 하나의 신경학적 병태 증상의 개선을 나타내는, 방법.
- 제119항에 있어서, 상기 개선은 상기 전달하기 1년 이내에 측정된, 방법.
- 제69항, 제70항 또는 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체의 뇌에 상기 AAV 벡터를 직접 주사하는 것을 포함하는, 방법.
- 제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 전환은 상기 뇌의 대뇌 피질에서 이루어지는, 방법.
- 제69항 또는 제70항 또는 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체의 척수에 상기 AAV 벡터를 직접 주사하는 것을 포함하는, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 상기 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계에 대한 손상을 포함하는, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 헌팅턴병, 뇌전증, 신체 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 외상성 뇌 손상, 뇌진탕, 종양, 염증, 감염, 운동실조, 뇌 위축, 척수 위축증, 다발성 경화증, 외상성 척수 손상, 허혈성 또는 출혈성 척수병증(척수병증), 전뇌허혈, 저산소성 허혈뇌병증, 색전증, 섬유연골 색전증 척수병증, 혈전증, 신장병증, 만성 염증성 질환, 뇌수막염 및 대뇌정맥동혈전증으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 알츠하이머병인, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 파킨슨병인, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 ALS인, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 헌팅턴병인, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 신경학적 병태는 뇌졸중인, 방법.
- 제130항에 있어서, 상기 뇌졸중은 허혈성 뇌졸중인, 방법.
- 제130항에 있어서, 상기 뇌졸중은 출혈성 뇌졸중인, 방법.
- 제72항에 있어서, 상기 방법은 적어도 하나의 신경아교세포를 뉴런으로 전환시킬 수 있는, 방법.
- 제133항에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포 및 NG2 세포로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제132항에 있어서, 상기 신경아교세포는 성상세포인, 방법.
- 제135항에 있어서, 상기 성상세포는 반응성 성상세포인, 방법.
- 제133항에 있어서, 상기 신경아교세포는 GFAP 양성인, 방법.
- 제133항에 있어서, 상기 뉴런은 기능성 뉴런인, 방법.
- 제138항에 있어서, 상기 기능성 뉴런은 글루타메이트 뉴런, GABA성 뉴런, 도파민작동성 뉴런, 콜린성 뉴런, 세로토닌 작동성 뉴런, 에피네프린 작동성 뉴런, 운동 뉴런 및 펩타이드성 뉴런으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
- 제69항 또는 제70항에 있어서, 치료적 유효 용량의 상기 AAV 벡터가 상기 대상체에 주사되는, 방법.
- 제71항 또는 제72항에 있어서, 치료적 유효 용량의 상기 AAV가 상기 대상체에 전달되는, 방법.
- 제140항 또는 제141항에 있어서, 상기 치료적 유효 용량은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여되는, 방법.
- 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 hDlx2 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스. - 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 암호화 서열을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터로서, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF1-α) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 아데노-연관 바이러스 벡터. - 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하고, 상기 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물. - 인간에서 신경아교세포를 기능성 뉴런으로 전환시키기 위한 아데노-연관-바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 조성물로서, 상기 AAV 벡터는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 조성물. - 살아있는 인간의 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 6의 핵산 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된, 방법. - 살아있는 뇌에서 반응성 성상세포를 기능성 뉴런으로 전환시키는 방법으로서, 아데노-연관 바이러스(AAV)를 이를 필요로 하는 대상체에게 주사하는 단계를 포함하되, 상기 AAV는 서열번호 10의 아미노산 암호화 서열을 포함하는 인간 디스탈리스 호메오박스 2(hDlx2) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 벡터 작제물을 포함하되, 상기 암호화 서열은,
(a) 서열번호 3, 4 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 인간 신경아교세포섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터;
(b) 서열번호 2의 핵산 서열을 포함하는 인간 신장인자-1 알파(EF-1 알파) 프로모터로부터의 인핸서 또는 서열번호 11의 핵산 서열을 포함하는 거대세포 바이러스(CMV) 인핸서; 및
(c) 서열번호 8의 핵산 서열을 포함하는 SV40 폴리아데닐화 신호, 서열번호 13의 핵산 서열을 포함하는 hGH 폴리아데닐화 신호 또는 서열번호 20의 핵산 서열을 포함하는 bGH 폴리아데닐화 신호
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| CN101772580B (zh) * | 2007-05-29 | 2015-11-25 | 克里斯多佛·B·里德 | 专能细胞群的生产和使用方法 |
| US9708414B2 (en) * | 2011-11-18 | 2017-07-18 | UNIVERSITé LAVAL | Methods and products for increasing frataxin levels and uses thereof |
| WO2014003553A1 (en) * | 2012-06-27 | 2014-01-03 | Arthrogen B.V. | Combination for treating an inflammatory disorder |
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| MA41346A (fr) * | 2015-01-12 | 2017-11-21 | Juno Therapeutics Inc | Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée |
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