KR20230121684A - 세포 외 소포체 분리용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 폴리에틸렌글리콜을 포함하는 세포 외 소포체 분리용 조성물 및 상기 조성물을 이용하여 세포 외 소포체를 분리하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 폴리에틸렌글리콜을 포함하는 세포 외 소포체 분리용 조성물 및 상기 조성물을 이용하여 세포 외 소포체를 분리하는 방법에 관한 것이다.
세포 외 소포체는 다양한 생물학적 활성을 보이는 물질을 포함하고 있으며, 유래된 세포 종류, 상태, 세포 외 소포체의 분리 방법에 따라 구성 성분이 다르다. 또한, 세포 외 소포체에서 공통적으로 검출되는 구성 성분도 있지만, 세포 종류에 따라 특이적으로 검출되는 구성 성분도 존재한다. 이러한 성분들의 존재 여부를 이용하여 바이오마커로 활용하거나 생리적/병리적 기능을 수행하는 것을 이용하여 치료제로 활용할 수 있다.
또한, 세포 외 소포체는 살아있는 세포가 아니기 때문에 오래 보관하고 운송할 수 있고, 분열하지 않기 때문에 종양 발생 우려가 낮으며, 면역원성이 낮고 세포와 동일한 수준의 막 위상(membrane topology)을 갖고 있어 세포막을 통해 약물을 표적 세포로 전달할 수 있다.
그러나, 자연적으로 분비되는 세포 외 소포체의 양은 제한적이기 때문에, 이를 효율적으로 분리하는 기술이 필요하다. 세포 외 소포체를 분리하는 방법으로 초원심분리(ultracentrifugation; UC)가 널리 사용되고 있으며, 염을 이용하거나 pH에 의존한 시약을 이용하여 세포 외 소포체를 분리하기도 하지만, 대체로 세포 외 소포체의 수득율 또는 회수율이 낮은 한계가 있다. 또한, 생체시료나 체액 내 환경, 예를 들어 사람에 따라 다른 혈장 내 염분 농도 등에 따라 세포 외 소포체의 수득율 변화가 큰 문제 역시 존재한다.
이에, 시료로부터 세포 외 소포체를 효율적으로 분리하면서도 시료 내 염분 변화 등에 대해서도 안정적인 분리가 가능하도록 하는 기술의 연구 개발이 요구되고 있다.
본 발명의 목적은 폴리에틸렌글리콜을 포함하는 세포 외 소포체 분리용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 세포 외 소포체 분리용 조성물을 이용하여 시료로부터 세포 외 소포체를 분리하는 방법을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 측면은 폴리에틸렌글리콜을 5.0 내지 9.5 %(v/v)의 농도로 포함하는, 세포 외 소포체 분리용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서, '세포 외 소포체(Extracellular vesicle)'는 세포 간 정보교환을 위해 모든 세포들이 외부 환경으로 분비하는 나노 크기의 소포체로서, 단백질, 지질, 핵산, 대사물질 등 생물학적 활성을 보이는 다양한 물질들을 포함한다. 이러한 세포 외 소포체의 양은 제한적인 바, 본 발명에서는 세포 외 소포체의 분리 효율을 높이면서도 안정적으로 분리할 수 있도록 하였다.
본 발명에서, '폴리에틸렌글리콜(Polyethylen glycol, PEG)'은 산화에틸렌과 물의 중합물로서 분자량이 200~9,500으로 알려져 있으며, PEG 뒤에 붙은 숫자는 중합된 산화에틸렌의 평균 분자량이다.
구체적으로, 본 발명에서 상기 폴리에틸렌글리콜의 포함된 산화에틸렌의 평균 분자량은 3350 내지 10000인 것일 수 있으며, 더욱 구체적으로, 폴리에틸렌글리콜 3350, 6000, 8000 및 10000으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명 일 실시예에서는 폴리에틸렌글리콜의 종류 및 함량을 달리하여 혈장 및 세포 배양액으로부터 세포 외 소포체를 분리하였으며, 폴리에틸렌글리콜이 5.0 내지 9.5 %(v/v)의 농도로 포함될 경우, 혈장 및 세포 배양액 모두에서 세포 외 소포체의 분리 효율이 높게 나타남을 확인하였다.
또한 구체적으로, 상기 조성물은 알코올을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 알코올은 아이소프로판올 또는 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 구체적으로, 상기 알코올은 30 %(v/v) 이하의 농도로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명 일 실시예에서는 알코올이 포함된 경우 포함되지 않은 경우에 비해 PEG 종류에 관계없이 현저히 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득됨을 확인하였으며, 알코올 첨가를 통해 세포 외 소포체의 분리 효율이 증가할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 상기 세포 외 소포체 분리용 조성물은 대상 시료 내의 염도 변화에도 세포 외 소포체가 안정적으로 분리될 수 있도록 할 수 있다. 질환에 따라 사람의 혈액 내의 염분 농도가 달라질 수 있으며, 혈장 내 염분 변화에 따라 세포 외 소포체 분리 효율이 달라진다.
본 발명 일 실시예에서는 본 발명의 조성물을 이용한 경우 기존 제품 대비 혈장 내 염분 농도에 따른 변동이 작아 세포 외 소포체가 안정적으로 수득되고, 이로 인하여 세포 외 소포체 내의 RNA 수준 역시 현저히 높은 것을 확인하였다. 이에 따라, 본 발명 조성물은 시료 내의 염도 변화에도 세포 외 소포체를 안정적으로 분리할 수 있도록 함으로써 시료 내 환경에 따른 세포 외 소포체 수득율 차이를 줄일 수 있다.
구체적으로, 상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 세포간액 또는 소변 시료일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 세포 외 소포체를 포함하거나, 포함할 것으로 예상되는 시료이면 모두 포함될 수 있다.
본 발명의 다른 일 측면은 상기 세포 외 소포체 분리용 조성물을 시료와 혼합하는 단계를 포함하는, 시료로부터 세포 외 소포체를 분리하는 방법에 관한 것이다.
상기 시료에서 세포 외 소포체를 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며, 공지의 공정에 본 발명의 조성물을 추가하거나, 본 발명의 조성물만을 단독으로 적용할 수 있다. 본 발명의 조성물이 적용되는 형태는 필요에 따라 변경될 수 있다. 구체적으로, 세포 외 소포체를 분리하기 위한 과정에 특징적으로 본 발명의 조성물을 적용할 수 있다.
본 발명 조성물을 이용하여 시료로부터 세포 외 소포체를 분리 효율을 높이고, 대상 시료 내의 염도 변화에도 세포 외 소포체가 안정적으로 분리될 수 있도록 할 수 있다. 특히, 기존 기술 대비 본 발명의 조성물을 이용할 경우 높은 세포 외 소포체 분리 효율로 인하여 적은 양의 시료에서도 높은 효율로 세포 외 소포체를 수득할 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 PEG의 함량에 따른 혈장으로부터 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 PEG의 함량에 따른 세포 배양액으로부터 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 알코올의 함량에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 염도 변화에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다(A. 비교예 1; B. 본 발명 조성물).
도 5는 본 발명 조성물 및 기존 제품 비교예 1, 2를 통해 세포 외 소포체가 분리된 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 PEG의 함량에 따른 세포 배양액으로부터 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 알코올의 함량에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 염도 변화에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인한 결과를 나타낸 것이다(A. 비교예 1; B. 본 발명 조성물).
도 5는 본 발명 조성물 및 기존 제품 비교예 1, 2를 통해 세포 외 소포체가 분리된 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 세포 외 소포체 분리용 조성물의 제조
하기 표 1 내지 4와 같이 각 성분을 혼합하여 세포 외 소포체 분리용 조성물을 제조하였다. 구체적으로, 용액 총량에 대하여 5.0~9.5 중량%의 폴리에틸렌글리콜(Polyethylen glycol, PEG) 및 0~30 %(v/v)의 알코올을 혼합하고, 혈장의 염분 농도를 저해하지 않는 수준으로 0.1 중량% 미만의 염화나트륨(sodium chloride), 0.002 % 미만의 염화칼륨(potassium chloride), 0.014 중량% 미만의 인산나트륨(sodium phosphate), 0.002 중량% 미만의 인산칼륨(potassium phosphate)을 혼합하여 제조하였다. PEG mix는 PEG 3350, 6000 및 8000을 1 : 1 : 1~40의 중량비로 혼합한 것이다.
*PEG mix는 PEG 3350, 6000 및 8000을 1 : 1 : 1~40의 중량비로 혼합한 것이다.
실험예 1. PEG 함량에 따른 세포 외 소포체 분리 효율 확인
상기 제조예를 통해 제조된 실시예 1 내지 17 조성물의 세포 외 소포체 분리 효율을 확인하였다.
1-1. 혈장으로부터의 세포 외 소포체 분리
혈장으로부터 세포 외 소포체를 분리함에 있어, 침전법 방식의 분리 정제 방법을 이용하였다. 구체적으로, 사람의 혈장이 100 μl씩 분주된 1.5 ml 튜브에 각각 50 μl의 1X PBS를 첨가하여 볼텍싱(vortexing)으로 섞어주었다. 여기에 실시예 1 내지 17의 조성물을 각각의 튜브에 첨가한 후 각 볼텍싱으로 섞어 혼합하였다. 각 혼합물이 담긴 튜브들을 상온에서 10 분간 정치한 후 12,300 x g로 10 분간 원심분리 하였다. 상층액을 모두 제거한 이후 남은 세포 외 소포체 침전물을 1 ml의 1X PBS로 현탁하고 나노입자추적분석법(Nanoparticle tracking analysis, NTA)을 이용하여 농도를 측정하였다. 나노입자추적분석법은 Particle Metrix사의 TWIN ZetaView를 사용하여 동사의 매뉴얼을 기반으로 수행하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 PEG 3350의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 각각 5.8x1010, 4.6 x1010, 6.6 x1010, 5.6 x1010 particles/ml로 나타났으며, PEG 6000의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 각각 4.3x1010, 5.3 x1010, 4.4 x1010, 4.7 x1010 particles/ml로 나타남을 확인하였다. 또한, PEG 8000의 함량이 각각 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 6.3x1010, 6.1 x1010, 3.5 x1010, 2.8 x1010 particles/ml로 나타났으며, PEG 10000의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 3.7x1010, 2.9 x1010, 2.8 x1010, 5.7x1010 particles/ml로 나타남을 확인하였다. 또한, PEG mix를 사용하였을 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 5.4x1010 particles/ml로 나타남을 확인하였다. 상기와 같이 본 발명의 조성물에서 폴리에틸렌글리콜이 5.0 내지 9.5 %(v/v)의 농도로 포함될 경우, 세포 외 소포체의 분리 효율이 높게 나타남을 확인하였다.
1-2. 세포 배양액으로부터의 세포 외 소포체 분리
대표적인 세포 배양액으로 잘 알려진 DMEM(Cytiva, Cat No. SH30284.01) 배양액에 이미 농도를 알고 있는 세포 외 소포체를 혼합한 후, PEG의 종류 및 농도를 달리하여 적용하여 세포 외 소포체를 분리하였다. 최초 배양액에 혼합된 세포 외 소포체의 농도를 기준으로 분리된 세포 외 소포체의 농도를 확인하여 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인하였다.
구체적으로, 1 ml 튜브에 500 μl의 DMEM, 2 X 1011 particle/ml의 우유에서 추출한 세포 외 소포체 50 μl(1 X 1010 particles)를 넣어주고 혼합하였다. 이 튜브에 실시예 1 내지 17의 PEG 3350, 6000, 8000, 10000 및 PEG mix가 포함된 세포외 소포체 용액들을 최종 혼합 농도가 5.0, 6.5, 8.0, 9.5%가 되도록 넣어준 후 최종 부피가 1 ml이 되도록 증류수를 첨가하고 vortexing하여 혼합하였다. 상온에서 2 시간 동안 정치한 후 12,300 x g의 속도로 10 분 동안 원심분리하고, 상층액을 제거하였다. 세포외 소포체 침전물을 1 ml의 1X PBS로 현탁하고 나노입자추적분석법(Nanoparticle tracking analysis, NTA)을 이용하여 농도를 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 PEG 3350의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때의 세포 외 소포체의 농도는 3.6x108, 4.4 x108, 4.0 x108, 4.3 x108 particles/ml이었다. PEG 6000의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때의 세포 외 소포체의 농도는 5.2x108, 5.8 x108, 7.8 x108, 8.7 x108 particles/ml이었다. PEG 8000의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때의 세포 외 소포체의 농도는 4.7x108, 7.8x108, 1.1 x109, 1.0 x109 particles/ml이었다. PEG 10000의 함량이 5%, 6.5%, 8.0%, 9.5% 일 때의 세포 외 소포체의 농도는 5.1x108, 7.4 x108, 9.1 x108, 1.2x109 particles/ml이었다. 또한, PEG mix를 사용하였을 때 수득된 세포 외 소포체의 농도는 1.5x109 particles/ml로 나타남을 확인하였다. 따라서 PEG의 종류에 따라 최적의 효과를 보이는 농도는 다양하며 PEG가 5-9.5% 정도로 포함되었을 경우 세포 배양액내의 세포 외 소포체 역시 효율적으로 분리되는 것을 확인하였다.
실험예 2. 알코올 함량에 따른 세포 외 소포체 분리 효율 확인
알코올 함량에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인하였다. 구체적으로, 1.5 ml 튜브에 333 μl의 DMEM 세포배양액을 넣고 여기에 1.0X1010개의 세포 외 소포체를 혼합한 시료를 생성하였다. 여기에 상기 표 2 내지 표 4에 정리된 실시예 18 내지 59의 조성물을 가하고, 상기 실험예 1에서와 동일한 방식으로 세포 외 세포체를 침전시켜 수득하고, 수득된 세포 외 세포체의 수를 측정하여 분리 효율을 확인하였다.
그 결과, 도 3 및 표 6에 나타난 바와 같이, PEG 6000이 포함된 세포 외 소포체 분리 용액에 아이소프로판올(IPA)이 포함된 경우, 포함되지 않은 경우에 비해 최대 약 136배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득되었으며, 에탄올(EtOH)이 포함된 경우 최대 약 86배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득됨을 확인하였다.
PEG 8000이 포함된 세포 외 소포체 분리 용액에 아이소프로판올이 포함된 경우, 포함되지 않은 경우에 비해 최대 약 168배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득되었으며, 에탄올이 포함된 경우 최대 약 90배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득됨을 확인하였다.
또한, PEG 혼합물(PEG mix)이 포함된 세포 외 소포체 분리 용액에 아이소프로판올이 포함된 경우, 포함되지 않은 경우에 비해 최대 약 46 배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득되었으며, 에탄올이 포함된 경우 최대 약 30 배 높은 수준의 세포 외 소포체가 수득됨을 확인하였다.
상기와 같은 결과를 통해, 알코올이 포함될 경우 세포 외 소포체의 분리 효율이 증가할 수 있음을 확인하였다.
실험예 3. 염도 변화에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율 확인
사람의 혈액의 염분 농도는 식습관이나 질병에 따라 변화하고 이는 고혈압과 관련된 심혈관 질환으로 인한 사망률을 증가하였다고 알려져 있다. 다양한 질병을 앓고 있는 환자의 혈장에 존재하는 세포 외 소포체를 추출할 경우 혈장의 염분 변화에 의해 세포 외 소포체 분리의 효율성이 달라진다. 이에, 혈장에 포함된 염분 농도에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인하였다.
구체적으로, 본 발명 실시예 6의 조성물을 이용하여 상기 실험예 1에서와 동일한 방식을 이용하여, 서로 다른 농도의 NaCl을 가함으로써 염분 농도가 서로 다른 혈장 시료 각 100 μl로부터 세포 외 소포체를 침전시켜 분리하였다. 이후 수득된 세포 외 소포체에 제노헬릭스의 XENO-EVARI kit (Cat no. 9366-EVARI)를 이용하여 세포 외 소포체로부터 RNA를 추출하였다. 이후 XENO-Q Kit (XENOHELIX, cat. No.93661000)과 hsa-miR-92a-3p를 탐지할 수 있는 센서 DNA를 사용하여 cDNA를 합성하고 qPCR을 통해서 유전자의 발현양을 비교하였다. 여기서 사용된 센서 DNA의 서열은 하기 표 7에 나타난 바와 같으며, 또한, qPCR 수행시 이용된 프라이머 서열은 하기 표 8에 나타난 바와 같다.
또한, 비교예 1로서 기존 제품인 I사의 Total Exosome Isolation kit(cat. No.4484450)를 이용하였으며, 이를 이용한 실험 방법은 함께 제공되는 프로토콜 및 매뉴얼에 따라 수행하였다.
우선 상기 기존 제품을 이용하여 혈장 내 염분 농도에 따른 세포 외 소포체의 분리 효율을 확인하였으며, 그 결과, 도 4A에 나타난 바와 같이 혈장 내 염분 농도에 따라 hsa-miR-92a-3p의 발현이 7.03배까지 차이가 날 수 있음을 확인하였다.
또한, NaCl을 가하지 않은 경우, 기존 제품 대비 본 발명 조성물을 이용하였을 때 hsa-miR-92a-3p 유전자의 발현양이 최대 4.72배 높게 나타남을 확인하였으며, 도 4B에 나타난 바와 같이, 0 내지 288.4 mM의 NaCl이 추가된 조건에서는 hsa-miR-92a-3p의 발현양이 0.97 내지 1.48 배 증가하여, 혈장 내 염분 농도에 따른 변동이 기존 제품에 비해 현저히 작은 것을 확인하였다.
즉, 본 발명 조성물을 이용한 경우 염분 농도 변화에도 세포 외 소포체의 분리 효율이 기존 제품 대비 안정적으로 유지됨에 따라, 동일한 방식으로 RNA를 추출하더라도 세포 외 소포체의 수득율 차이로 인하여 기존 제품 대비 현저히 높은 수준의 RNA를 얻을 수 있다.
실험예 4. 기존 기술 대비 본 발명 조성물의 세포 외 소포체 분리 효율 증가 확인
본 발명 조성물을 이용한 경우, 기존 기술 대비 세포 외 소포체 분리 효율이 증가됨을 추가로 확인하였다. 동일한 혈장 100 μl가 분주된 3개의 튜브를 준비하고 본 발명 실시예 6의 조성물, 비교예 1(I사의 Total Exosome Isolation Kit (cat. No. 4484450)), 비교예 2(S사의 ExoQuick solution(cat. No. EXOQ5A-1)), 를 이용하여 세포 외 소포체를 각각 분리하였다. 본 발명 조성물의 경우 상기 실험예 1에서와 동일한 방식을 이용하였으며, S사 및 I사의 경우 각 회사에서 제공하는 프로토콜에 따라 수행하였다. 분리한 각 세포 외 소포체를 나노입자추적분석법(NTA, Nanoparticle Tracking Analysis)을 이용하여 크기 및 입자수를 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 본 발명 조성물을 이용하여 분리한 세포 외 소포체의 경우 평균 크기가 105.9 nm이며 93 nm 크기의 EV가 가장 많이 분포하는 것을 확인하였다. 비교예 1의 경우 세포 외 소포체의 평균 크기는 104.9 nm이며 엑소좀 외에도 다양한 크기의 세포 외 소포체가 분리하였다. 비교예 2의 경우 세포 외 소포체의 평균 크기는 112.8 nm이며 84 nm사이즈의 EV가 가장 많이 존재하나 200 nm 이상의 마이크로비지클(microvesicle) 및 최대 578 nm의 온코좀(oncosomes) 또는 apoptotic bodies와 같은 거대 비지클(vesicle)도 포함되어 있는 것을 확인하였다.
또한, 표 9에 나타난 바와 같이, 추출된 세포 외 소포체의 농도(입자수)의 경우, 본 발명 조성물을 이용한 경우 용액 1 ml 당 4.82 X 1010 개의 입자가 존재하였으며, 비교예 1의 경우 용액 1 ml 당 1.08 X 1010 개, 비교예 2의 경우 3.43 X 1010 개의 입자가 존재하는 것을 확인하였다.
이로부터 본 발명의 조성물을 이용하여 세포 외 소포체를 분리하는 경우, 기존 제품 대비 4.46 배까지 고효율로 세포 외 소포체를 수득할 수 있음을 확인하였다.
이는 본 발명의 조성물을 이용할 경우, 동일 시료 내에서 분리될 수 있는 세포 외 소포체의 양이 증가되는 바, 높은 분리 효율로 인하여 기존에 비해 시료의 양이 적더라도 세포 외 소포체 및 이의 RNA의 검출 효율 역시 증가될 수 있음을 나타내는 것이다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (9)
- 폴리에틸렌글리콜을 5.0 내지 9.5 %(v/v)의 농도로 포함하는, 세포 외 소포체 분리용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 폴리에틸렌글리콜에 포함된 산화에틸렌의 평균 분자량은 3350 내지 10000인 것인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 폴리에틸렌글리콜은 폴리에틸렌글리콜 3350, 6000, 8000 및10000으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 알코올을 추가로 포함하는 것인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 알코올은 아이소프로판올 또는 에탄올인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 알코올은 30 %(v/v) 이하의 농도로 포함되는 것인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 대상 시료 내의 염도 변화에도 세포 외 소포체가 안정적으로 분리될 수 있도록 하는 것인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제7항에 있어서,
상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 세포간액 또는 소변 시료인, 세포 외 소포체 분리용 조성물. - 제1항의 조성물을 시료와 혼합하는 단계를 포함하는, 시료로부터 세포 외 소포체를 분리하는 방법.
Applications Claiming Priority (2)
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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KR20220164446A (ko) | 2021-06-04 | 2022-12-13 | 기초과학연구원 | 염 분별 침전을 이용한 세포외 소포체 분리 방법 |
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2023
- 2023-02-09 KR KR1020230017186A patent/KR20230121684A/ko unknown
Patent Citations (1)
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