KR20230118153A - 천식의 치료를 위한 irak4 저해제로서의 n-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1-시클로헥실-2h-인다졸-5-카르복스아미드및 n-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1-시클로헥실-2h-인다졸-5-카르복스아미드 유도체 - Google Patents

천식의 치료를 위한 irak4 저해제로서의 n-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1-시클로헥실-2h-인다졸-5-카르복스아미드및 n-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1-시클로헥실-2h-인다졸-5-카르복스아미드 유도체 Download PDF

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KR20230118153A KR1020237023107A KR20237023107A KR20230118153A KR 20230118153 A KR20230118153 A KR 20230118153A KR 1020237023107 A KR1020237023107 A KR 1020237023107A KR 20237023107 A KR20237023107 A KR 20237023107A KR 20230118153 A KR20230118153 A KR 20230118153A
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이나 터스티게
스테판 쉬써
야펭 슈에
후이-팡 장
안나 잉그리드 크리스티나 버그렌
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아스트라제네카 아베
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Abstract

본 출원은, 예를 들어, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 암, 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료 방법에 사용하기 위한 IRAK4 저해제로서의 화학식 A의 화합물에 관한 것이며, 식 중, R1은 화학식 II 및 화학식 III으로부터 선택되고, R2는 화학식 IV, 화학식 V 및 화학식 VI으로부터 선택된다. 본 발명의 바람직한 화합물은, 예를 들어,
Figure pct00313
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1-시클로헥실-2H-인다졸-5-카르복스아미드, N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1-시클로헥실-2H-인다졸-5-카르복스아미드, N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일-2H- 인다졸-5-카르복스아미드 및 N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일-2H- 인다졸-5-카르복스아미드 유도체이다. 본 발명의 예시적인 화합물은, 예를 들어, N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-1- 아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(실시예 1)이다:
[화학식 A]

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

Description

천식의 치료를 위한 IRAK4 저해제로서의 N-(이미다조[1,2-B]피리다진-3-일)-1-시클로헥실-2H-인다졸-5-카르복스아미드 및 N-(피라졸로[1,5-A]피리미딘-3-일)-1-시클로헥실-2H-인다졸-5-카르복스아미드 유도체
본 명세서는 IRAK4를 저해하여 결과적으로 약제에서의 잠재적인 유용성을 갖는 화학적 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease: COPD), 암, 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에서의 IRAK4 저해제의 용도에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 상기 IRAK4 저해제의 제조에 관여된 공정 및 중간체 화합물 및 이를 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
인터류킨-1 수용체(IL-1R)-연관 키나제 4(IRAK4)는 면역 신호전달의 핵심 조절인자이다. IRAK4는 여러 세포 유형에 의해 발현되며, IL-1R, IL-18R 및 IL-33 수용체 ST2를 포함한 인터류킨-1(IL-1) 패밀리의 수용체 및 톨 유사 수용체(Toll-like receptor: TLR)로부터의 신호 전달을 매개한다. TLR은 지질다당류(LPS) 또는 미생물 RNA 또는 DNA와 같은 미생물로부터 유래된 리간드를 인식하고 반응하는 반면, IL-1 패밀리의 수용체는 TLR-활성화 세포(IL-1β 및 IL-18)에 의해 생산된 내인성 리간드에 의해서 또는 조직 손상(IL-1α 및 IL-33)에 의해서 활성화될 수 있다. 리간드에 의한 TLR 또는 IL-1 수용체의 활성화 시, 어댑터 단백질 골수 분화 1차 반응 88(MyD88)이 수용체에 동원되어 IRAK 패밀리(IRAK1, IRAK2 및 IRAK4)의 단백질과 함께, "미도솜(Myddosome)"이라고 하는 다량체 단백질 복합체를 형성한다. 미도솜은 핵 인자 κB(NF-κB) 및 미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK) 신호 전달 경로를 유도하는 신호전달 플랫폼으로 작용하여, 전사 인자 NF-κB, 활성화 단백질 1(AP1), c-AMP 반응 요소-결합 단백질(CREB) 및 인터페론 조절 인자 5(IRF5)의 활성화를 초래하여, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 전사를 유도한다. IRAK4가 결여된 마우스는 생존할 수 있지만 IL-1β, IL-18 및 LPS에 대한 염증성 사이토카인 반응이 결여되어 있다. IRAK4에서 기능 상실 돌연변이를 나타내는 인간은 면역손상 표현형을 나타내고, 그들의 면역 세포는 TLR 효능제 및 IL-1 수용체 리간드에 대해 제거된 사이토카인 반응을 나타낸다.
IRAK4는 MyD88과 중심에 위치된 키나제 도메인과의 상호작용을 매개하는 N-말단 사멸 도메인을 특징으로 한다. 미도솜 형성은 미도솜의 안정성 및 하류 신호전달을 조절하는 IRAK4 자동 인산화를 촉진한다. IRAK4의 키나제 활성은 키나제-사멸 IRAK4를 발현하는 넉인 마우스에서의 연구 및 소분자 IRAK4 키나제 저해제를 사용한 연구에서 밝혀진 바와 같이 TLR 및 IL-1R에 의한 사이토카인 유도에 필요하다.
염증 반응을 도출하는 데 있어서의 이의 중요한 역할을 고려할 때, IRAK4는 항염증 효과를 발휘하는 약물에 대한 표적이다.
천식 및 COPD(만성 폐쇄성 폐 질환)는 전 세계적으로 주요 미충족 의료 수요를 구성하는 만성 폐 질환이다. 천식 및 COPD는 비정상적인 사이토카인 방출, 조절 장애 면역 세포 활성화 및 기도 리모델링을 포함하는 만성 기도 염증을 특징으로 한다. 천식에서, 알레르기성, 바이러스성 및 박테리아성 손상과 같은 기도 손상은 병원체 연관 분자 패턴(PAMP)을 통해서 TLR 수용체를 활성화하고, IL-33 및 IL-1α를 포함한 알라민의 방출을 통해서 뿐만 아니라 염증소체(inflammasome) 활성화 시 방출되는 IL-1β에 의해서 IL-1R 및 ST2 수용체를 활성화한다. IL-1 패밀리의 TLR 및 수용체는 대식세포, 수지상 세포, 비만 세포, 단핵구 및 상피 세포를 포함하여 기도의 다수의 세포 유형에 존재하며, 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-8, GM-CSF, IL-5)을 방출하여 리간드에 반응하여, 기도 염증, 염증성 세포, 예컨대, 호중구 및 호산구의 동원, 기도 과민성 및 점액 생성을 유발한다. IRAK4 저해는 기도에서 이러한 염증 경로를 억제할 가능성이 있다. 천식 및 COPD 환자의 폐 샘플의 유전자 발현 분석은 중증 환자의 하위세트에서 IL-1R 및 TLR2/4 염증 경로와 연관된 유전자의 상향조절된 발현을 밝혀냈다. 본 발명자들의 최상의 지식으로는, IRAK4 저해제는 호흡기 질환 치료를 위해 임상에서 연구되지 않았지만, 여러 연구 그룹의 전임상 데이터에 따르면 IRAK4 조절 경로를 방해하면 천식 및 COPD 둘 다의 동물 모델에서 기도 염증이 약화된다. 예를 들어, 미도솜의 중심 성분인 MyD88이 결핍된 마우스는 IRAK2와 IRAK4 사이의 상호작용을 차단하는 소분자 모방체로 처리된 마우스와 마찬가지로 알레르겐 또는 IL-33에 의해 유도된 기도 염증으로부터 보호된다. 단클론성 항체로 IL-1β를 차단하면 스테로이드 내성 천식 마우스 모델에서 알레르겐과 박테리아에 의해 유도된 기도 염증을 억제하는 것을 발견하였다. 또한 알레르겐 시험감염 시점에 마우스를 IL-1R 길항제인 아나킨라로 치료하면 알레르기성 천식 마우스 모델에서 천식 유사 증상이 완화된다. 담배 연기에 대한 만성 노출은 COPD 발병의 주요 원인이다. 담배 연기에 노출된 마우스에서, IL-1 신호전달은 호중구 기도 염증을 매개하는 데 중추적이며, IL-1α, IL-1β 또는 IL-1R에 대한 항체로 IL-1 신호전달을 차단하면 담배 연기에 노출된 마우스에서 폐의 호중구 염증을 완화하고 박테리아- 또는 바이러스-유도된 악화를 감소시킬 수 있다. 종합하면, IRAK4 저해는 여러 질환 관련 신호전달 경로를 동시에 차단함으로써 염증성 호흡기 질환에서 광범위한 항염증 효과를 제공할 가능성이 있다.
미도솜의 중추적인 조절인자로서 IRAK4는 또한 IL-1R-, TLR- 또는 ST2-매개 기전에 의해 유도되는 다른 염증성 질환에서 유망한 치료 표적이다. 이전에 개시된 바와 같이, IRAK4는 류마티스 관절염 및 전신 홍반 루푸스(SLE)와 같은 자가면역 장애에서 역할을 한다(예를 들어, WO2017207386 및 WO2015150995 참조). SLE에서, 자가항체와 자가항원으로 구성된 면역복합체는 TLR 의존성 병리학적 신호전달을 유도할 수 있다. SLE 발병기전에서, IRAK4 저해는 형질세포양 수지상 세포에서 TLR7 및 TLR9 활성화에 의해 매개되는 타입 I 인터페론 및 전염증성 사이토카인의 방출을 차단하는 것으로 보고되었다. IRAK4의 키나제-사멸 돌연변이체를 발현하거나 IRAK4 키나제 저해제 화합물로 처리된 마우스는 실험적으로 유도된 관절염 및 루푸스에 내성이 있다(예를 들어, WO2017207386 참조). 류마티스 관절염 치료를 위한 아나킨라(IL-1 수용체 길항제)의 승인된 사용은 또한 이러한 질환에서 병원성 IL-1R 신호전달의 역할을 뒷받침한다. 쇼그렌 증후군에서, TLR은 PBMC(말초 혈액 단핵 세포) 및 타액선에서 상향조절되고, TLR 활성화는 인터페론 및 기타 염증성 사이토카인의 방출을 자극할 수 있는데, 이는 쇼그렌 발병기전과 관련된다는 것을 시사한다. MyD88 넉아웃 마우스는 또한 쇼그렌 증후군의 실험 마우스 모델에서 감소된 질환 발현을 나타낸다. 전신 경화증은 IL-1R, TLR4, TLR8 및 ST2-신호전달이 미세혈관 손상 및 섬유화를 비롯한 병원성 기전을 유도할 수 있는 심각한 자가면역 질환이다. 따라서 전신 경화증 치료로서의 IRAK4의 저해는 여러 질환 관련 경로를 동시에 차단할 것이다. 근염에서, IL-1α 및 IL-1β의 상승된 수준은 근육 조직 염증에 기여할 수 있다. 근염 환자는 또한 부분적으로 TLR7/9 활성화에 의해 유도될 수 있는 높은 타입 I 인터페론 유전자 시그니처를 특징으로 하며, IL-1R 신호전달의 관련성은 더 작은 기전의 임상 시험에서 아나킨라로 치료받은 근염 환자의 개선된 임상 결과에 의해 뒷받침되었다. IL-1R 경로의 중추적인 조절인자로서, IRAK4는 또한 통풍 치료에서 유망한 표적이다. 특징적으로 통풍 환자에서 형성되는 모노소듐 유레이트 결정은 염증소체의 활성화 및 IL-1β의 방출을 촉발할 수 있다. 항 IL-1β 단클론성 항체인 카나키누맙 또는 아나킨라 둘 다의 사용은 통풍 발적 치료에서 임상적 효능이 입증되었다. IL-1β 및 IL-33의 상승된 수준은 자궁내막증 환자에서도 발견되었다. 자궁내막증의 질환 과정에서 IRAK4의 중요성은 IRAK4 저해제의 경구 투여가 병변 형성을 억제한 마우스 모델에서 나타났다. MyD88 넉아웃 마우스는 또한 동일한 마우스 모델에서 자궁내막증 발병에 대해 보호되었다. IL-33/ST2 신호전달은 아토피성 피부염의 핵심 기전이며, 피부 염증, 상피 장벽 온전성 및 호산구 동원의 조절과 관련된다. IL-33은 MyD88-의존적 방식으로 마우스에서 습진 및 피부염을 유발할 수 있다. ST2 신호전달의 조절인자 및 미도솜의 중추적인 성분으로서, IRAK4 저해는 아토피성 피부염에서 병원성 IL-33/ST2 신호전달을 저해할 가능성이 있다. TLR7 및 IL-1R 매개 기전 둘 다는 건선에 관여하는 것으로 제안되었다. 이미퀴모드(TLR/8 효능제)는 MyD88-의존적 방식으로 마우스에서 건선 유사 질환을 유도할 수 있다. IL-1β는 건선 피부 병변에서 상향조절되며, IL-1β/IL-1R 축은 피부 염증에 기여하고, 건선 발병기전에서 TH17 세포로부터 방출되는 주요 사이토카인인 IL-17의 생산을 조절하는 것으로 제안되었다. IRAK4 키나제 활성은 생체내에서 TH17 분화 및 TH17-매개 질환의 조절에 필요한 것으로 추가로 밝혀졌다.
다수의 IRAK4 키나제 저해제가 알려져 있고, 주로 종양학 또는 염증성 질환에 사용하기 위해 개발되었다(예를 들어, WO2015150995, WO2017207386, WO2017009806, WO2016174183, WO2018234342 참조). 알려진 IRAK4 키나제 저해제 중에서 PF-06650833은 류마티스 관절염 치료를 위한 2상 임상 시험을 최근 완료하였다(NCT02996500에 대한 clinicaltrials.gov 항목 참조).
종합하면, IRAK4 저해제는 현재까지 이러한 저해제가 임상 용도로 승인되지 않았음에도 불구하고 다수의 질환 및 병태의 치료 가능성을 갖는다. 본 명세서의 목적은, 예를 들어, IRAK4-매개 경로의 활성화와 연관된 염증성 질환, 예컨대, 천식, COPD 및 만성 자가면역/자가염증성 질환의 치료에서 임상적 사용에 적합하게 만드는 물리화학적 및 선택성 프로파일을 갖는 새로운 IRAK4 저해제를 제공하는 것이다.
제1 양태에서, 본 명세서는 하기 화학식 A의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 A]
[식 중,
R1은 로부터 선택되고;
R2는 로부터 선택되고;
R3 및 R4는 각각 H, Me, Et, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6, CONMe2 또는 5-원 N-헤테로사이클, 예컨대, 1,2,3-트리아졸이고, Z는 H, Me, Et 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이거나;
Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
X는 OR7 및 NR8R9로부터 선택되고;
R5는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원 포화 N-헤테로사이클로부터 선택되고;
R7은 Me, Et, i-프로필, n-프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬기 또는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 4-, 5- 또는 6-원 고리이고;
R8 및 R9는 독립적으로 H, Me 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나 함께 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9의 선택적인 치환체는, 존재하는 경우, 독립적으로 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택됨].
제2 양태에서, 본 명세서는 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 I]
[식 중,
R1은 로부터 선택되고;
R2는 로부터 선택되고;
R3 및 R4는 각각 H, Me, Et, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6, CONMe2 또는 5-원 N-헤테로사이클, 예컨대, 1,2,3-트리아졸이고, Z는 H, Me, Et 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이거나;
Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
X는 OR7 및 NR8R9로부터 선택되고;
R5는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R7은 Me, Et, i-프로필, n-프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬기 또는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 4-, 5- 또는 6-원 고리이고;
R8 및 R9는 독립적으로 H, Me 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나 함께 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9의 선택적인 치환체는, 존재하는 경우, 독립적으로 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택됨].
본 명세서에서 화학식 I의 화합물의 언급은 화학식 I의 화합물을 언급하는 것뿐만 아니라 화학식 A의 화합물에 대한 언급을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서는 또한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 기재한다.
본 명세서는 또한 약제로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서는 또한 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서은 또한 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서은 또한 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서는 또한 암의 치료에 사용하기 위한, 예를 들어, BTK 저해제와 조합하여 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서는 또한 암의 치료에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다. 이러한 용도에서 화학식 I의 화합물은, 예를 들어, 혈액 악성종양의 치료를 위해서 단일요법으로서 또는 추가 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 치료될 혈액 악성종양은 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM), 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 중추 신경계 림프종(PCNSL), 비장 변연부 림프종(SMZL), 소림프구성 림프종(SLL), 백혈병(만성 림프구성 백혈병(CLL)) 및 의미 불명 단클론성 감마글로불린혈증(monoclonal gammopathy of undetermined significance: MGUS-IgM+)으로부터 선택될 수 있다. 추가로, 용도는 MYD88 돌연변이, B-세포 수용체(BCR) 돌연변이, 또는 MYD88 돌연변이와 BCR 돌연변이 둘 다를 갖는 혈액 악성종양의 치료를 위한 것일 수 있다. 화합물이 추가 치료제와 조합하여 사용되는 경우 제2 치료제는 BCR 저해제, 예컨대, BTK 저해제(예는 이브루티닙, 아칼라브루티닙, 자누브루티닙 또는 티라브루티닙), PI3Kd 저해제 및 SYK 저해제 또는 면역요법을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 명세서는 또한 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 기재하며, 예를 들어, 약제는 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)의 치료에서의 용도 또는 암의 치료에서의 용도 또는 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에서의 용도 또는 염증성 질환의 치료에서의 용도를 위한 것이다.
본 명세서는 또한 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 기재하며, 치료를 필요로 하는 환자는 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 암, 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선 또는 염증성 질환을 갖는다.
본 명세서는 또한 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 명세서의 추가 양태는 본 명세서를 읽음으로써 당업자에게 명백해질 것이다.
본 명세서는 하기 도면을 참조한다.
도 1. LPS-유도된 폐 염증의 급성 마우스 모델에서 실시예 89의 생체내 투여 반응. 실시예 89 화합물을 흡입용 LPS 시험감염(1 ㎎/㎖) 1시간 전에 마우스에게 경구 투여하였다. 시험감염 4시간 후, 동물을 죽이고, 기관지 폐포 세척액(bronchoalveolar lavage fluid)에서 방출된 IL-6 및 TNF-α의 수준을 측정하였다. 실시예 89는 IL-6 및 TNF-α의 수준을 용량-의존적 방식으로 감소시켰다. 개별 데이터 지점은 개별 동물을 나타내고, 막대는 각각의 군의 평균 값을 나타낸다. 군들 간의 통계학적 차이는 비히클군과 처리군을 비교하는 일원 분산분석(one-way ANOVA) 검정으로 계산하였다. **p<0.01, ***p<0.001. 따라서 생체내에서 염증성 사이토카인 및 TNF-α를 감소시키는 본 명세서에 따른 IRAK4 저해제의 능력을 확립하였다.
상기에 언급된 바와 같이, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 IRAK4 키나제의 강력한 저해제임을 발견하였다. 또한, 바람직한 화학식 I의 화합물은 다른 키나제보다 우수한 선택성을 나타내어, 표적외 효과 및 독성을 회피하는 프로파일을 제공한다. IRAK4 저해 활성 및 유해한 표적외 효과의 결여의 이러한 바람직한 조합은 약제에서 사용하기 위한 본 명세서의 화합물의 적합성을 나타낸다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다. 예를 들면, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 개시내용에 사용된 용어 중 대다수의 용어의 일반적인 사전을 숙련자에게 제공한다.
본 명세서가 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 용어가 아래에서 명시적으로 정의된다. 또한, 정의는 상세한 설명 전체에 걸쳐 적절하게 제시된다.
단위, 접두사 및 기호는 이의 국제 단위 체계(SI)에서 허용 형태로 표시된다. 수치 범위는 그 범위를 한정하는 수치를 포함한다.
용어 "약제학적 조성물"은 활성 성분의 생물학적 활성을 허용하기 위한 형태이고, 조성물이 투여될 대상체에 허용 불가능할 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 조성물은 멸균성일 수 있다. 본 명세서에 따른 약제학적 조성물은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 것이다.
"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위한" 또는 "완화하는" 또는 "완화하기 위한"과 같은 용어는 (1) 진단받은 병리적 병태 또는 장애를 치유하고/하거나, 둔화시키고/시키거나, 이의 증상을 경감시키고/시키거나 이의 진행을 중지시키는 치료적 조치 및 (2) 표적화된 병리적 병태 또는 장애를 예방하고/하거나 이의 발생을 둔화시키는 예방적 또는 방지적 조치 둘 다를 지칭한다. 따라서, 치료를 필요로 하는 대상체에는 이미 장애를 갖고 있거나 장애가 발병한 대상체; 장애를 갖기 쉬운 대상체; 및 장애가 방지되어야 하는 대상체가 포함된다. 특정 양태에서, 대상체는 환자가 예를 들어, 호흡기 질환의 증상으로부터의 완전한, 부분적인 또는 일시적인 경감을 나타내는 경우 본 개시내용의 방법에 따라서 호흡기 질환이 성공적으로 "치료된" 것이다.
용어 "대상체"는 특정 치료의 수신체가 되는, 비제한적으로 인간, 비-인간 영장류, 설치류 등을 포함하는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)을 나타낸다. 전형적으로, 용어 "대상체" 및 "환자"는 인간 대상체와 관련하여 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 이용된다.
본 명세서 및 상기에서 사용되는 바와 같이 기호 는 화학식 I의 화합물의 성분을 화합물의 다른 성분에 연결하는 부위를 나타내는 데 사용된다. 예시로 이를 설명하기 위해서, 화학식 I의 화합물이 하기에 명시된 R1 모티프를 갖는 경우, 화합물은 구조 A의 화합물일 것이다. 유사하게, 화학식 I의 화합물이 하기 R2 모티프를 갖는 경우, 화합물은 구조 B의 화합물일 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 및 분지쇄형 포화 탄화수소 라디칼 둘 다를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 듀테로알킬은 하나 이상의 수소, 선택적으로 모든 수소가 중수소 원자로 대체된 알킬기를 지칭한다. 용어 시클로알킬은 포화 환식 탄화수소를 지칭한다.
본 명세서에서, x 및 y가 정수인 Cx-Cy 알킬과 같은 용어에서 사용되는 접두어 Cx-Cy는 기에 존재하는 탄소 원자의 수치 범위를 나타낸다. 예를 들어, C1-C4 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, i-부틸 및 t-부틸을 포함하는 한편, C1-C3 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 및 i-프로필을 포함한다. C1-C4 알콕시기는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시 및 t-부톡시를 포함한다. C1-C3 알콕시기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시 및 i-프로폭시를 포함한다.
구체적으로 언급되지 않는 한, 원자 또는 기의 결합은 그 기의 임의의 적합한 원자일 수 있으며; 예를 들어, 프로필은 프로프-1-일 및 프로프-2-일을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 시클로알킬은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 환식 포화 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 따라서 C3-C6 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 알콕시는 알킬쇄에 연결된 산소 원자를 갖는 기를 지칭하고, 상기에 정의된 바와 같이, 알킬쇄는 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 및 분지쇄형 포화 탄화수소 라디칼 둘 다를 지칭한다. 따라서 C1-C3 알콕시는 메톡시, 에톡시, O n Pr 및 O i Pr기를 지칭한다.
본 명세서 및 위에서 기재된 바와 같이, R2 기는 R4 기로 치환될 수 있다. 이러한 경우 R4 기는 임의의 가능한 고리 탄소에 부착될 수 있지만, R4는 하기에 나타낸 바와 같은 인다졸 고리에 부착된 탄소 원자에 인접한 탄소 원자에 부착되는 것이 바람직하다.
본 명세서 및 상기에서 사용되는 바와 같이 용어 아세틸은 화학식 -C(O)Me의 기를 지칭한다. 본 명세서에서 N-아실화된 기의 언급은 작은 알킬 측쇄, 즉, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 측쇄 또는 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬을 갖는 아미드를 지칭하는 데 사용되며, 각각의 예에서 선택적인 치환체는 OH, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택되고, 바람직한 N-아실화된 기는 N-아세틸기, 즉, -NRC(O)Me 기이다.
본 명세서 및 위에서 기재된 바와 같이 화학식 I의 화합물은 합쳐져서 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하는 2개의 기인 Y 및 Z로 치환된 시클로헥실 고리일 수 있는 R2 기를 포함한다. 이러한 경우에 4-, 5- 또는 6-원 고리는 포화 탄화수소 고리 시스템이고, 선택적으로 1 또는 2개의 고리 탄소는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자로 대체된다. 2개의 고리 탄소가 헤테로원자로 대체되는 경우, 헤테로원자는 직접 결합되지 않고(즉, 헤테로원자는 비인접 고리 탄소를 대체하고) CH2기에 의해서 고리 내에서 분리되지도 않지만, 예를 들어, 카르보닐기에 의해서 결합되어 예를 들어, 카르보네이트 또는 카르바메이트 모티프를 전달할 수 있다. 탄화수소 고리는, Y와 Z가 합쳐져서 환식 아미드를 형성하는 경우에서와 같이 카르보닐기를 혼입할 수 있다. 바람직한 예에서, 4-, 5- 또는 6-원 고리는 환식 아미드 또는 카르바메이트, 예컨대, 피롤리딘-2-온, 옥사졸리딘-2-온, 피페리딘-2-온 및 1,3-옥사지난-2-온이다. 대안적으로, Y 기와 Z 기는 합쳐져서 질소에서 아실기로 치환된 아제티딘을 형성할 수 있다. 또한, 4-, 5- 또는 6-원 고리는 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택된 기로 치환될 수 있다. 이들 선택적인 치환체는 분자의 물리화학적 특성, 예컨대, 용해도를 조절하거나, 예를 들어, 다른 키나제에 비해서 IRAK4 키나제와의 상호작용을 추가로 최적화하여, 보다 강력하고 선택적인 IRAK4 키나제 저해제를 전달하기 위해서 이롭게 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 화학식 A의 화합물은 N(R5)COMe, N(Me)COR6 및 N(R5)COR6으로부터 선택될 수 있는 Y 기를 포함한다. 이러한 경우에, R6 기는 우레아 모이어티를 제공하기 위해서 헤테로사이클의 질소 원자를 통해 Y의 카르보닐 기에 연결된 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원 포화 N-헤테로사이클, 예를 들어, 피롤리딘 또는 피페리딘일 수 있다. 예를 들어, Y는 N(Me)COR6 기일 수 있고 여기서 R6은 하기에 나타낸 바와 같은 3-히드록시피롤리딘이다.
본 명세서 및 위에서 기재된 바와 같이 R7 기는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리일 수 있다. 의심을 피하기 위해서, "헤테로원자를 함유하는"은 고리의 원자 중 하나가 O 또는 N으로부터 선택된 헤테로원자일 것이라는 것을 의미한다. 이러한 예에서 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 포화 4-, 5- 또는 6-원 고리가 바람직하다. O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 바람직한 4-, 5- 또는 6-원 고리의 예는 아제티딘, 옥세탄, 테트라히드로푸란, 피롤리딘, 테트라히드로피란 및 피페리딘이다. 본 명세서 및 위에서 기재된 바와 같이 치환체 R8과 R9는 합쳐져서 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성할 수 있다. 추가 헤테로원자가 존재하는 경우, 헤테로원자는 N에 직접 결합되지 않고(즉, 고리 내의 헤테로원자는 인접하지 않고) CH2기에 의해서 분리되어 있지도 않다. 이러한 예에서 생성된 고리가 포화되는 것이 바람직하고, 예를 들어, 생성된 고리는 모르폴린 또는 피페라진 고리일 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 화학식 I의 화합물 및 특히 R2 기는 다양한 입체화학 형태로 존재할 수 있다. 청구범위는 화학식 I의 화합물의 모든 입체화학 형태를 포함하지만 IRAK4의 저해제로서 최고 활성을 갖는 화합물이 바람직하다는 것이 이해될 것이다. 화학식 I의 화합물은 임의의 상대 비율로 화학식 I의 화합물의 하나 이상의 다른 가능한 입체이성질체 형태의 존재 또는 부재 하에 제조, 단리 및/또는 공급될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 입체적 풍부(stereoenriched) 또는 입체적 순수(stereopure) 화합물의 제조는 당업계에 잘 알려진 유기 화학의 표준 기술에 의해, 예를 들어, 합성 동안 적절한 입체적 풍부 또는 입체적 순수 촉매를 사용, 입체적 풍부 또는 입체적 순수 출발 재료로부터의 합성에 의해, 및/또는 예를 들어, 키랄 크로마토그래피를 통해 입체이성질체의 라세미 또는 부분 풍부화 혼합물의 분할에 의해 수행될 수 있다.
예로서, 하기의 경우에, 치환체 R2는 1,3-치환된 시클로헥산올기이다. 이러한 시스템에서, 고리 상의 알코올 및 인다졸기의 상대(rel) 입체화학은 시스 또는 트랜스일 수 있고, 시스 이성질체 및 트랜스 이성질체 각각은 결과적으로 (히드록실기 및 인다졸기에 부착된 탄소의) 키랄 중심의 (R) 또는 (S) 배위를 반영하는 2개의 거울상이성질체 형태로 존재할 것이다. 본 명세서에 기재된 특정 경우에 화합물은 상대(rel) 입체화학 배열을 갖는 화합물의 이성질체 1 및 2로 지칭될 것이고, 따라서 rel-(1S, 3R)로 지칭되는 화합물의 경우에 2개의 가능한 이성질체는 동일한 상대 입체화학을 갖지만 서로의 거울상이성질체인 (1S,3R) 이성질체 및 (1R,3S) 이성질체이다. 따라서 시스 상대 입체화학을 갖는 하기 화합물에 대한 언급은 이러한 상대 입체화학을 갖는 2개의 가능한 화합물을 지칭한다. 본 명세서에서 알고 있는 상대 입체화학 및 결정되지 않은 절대 입체화학의 구조는 수식어 "또는 거울상이성질체"와 함께 단일 거울상이성질체로 도시된다.
본 명세서 및 위에서 기재된 바와 같이, 화학식 I의 화합물의 특정 성분은 선택적으로 치환된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 선택적으로 치환된은 화합물의 구조 요소가 하나 이상의 명시된 선택적인 치환체로 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있음을 의미한다. 선택적인 치환체가 Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 기중 하나 이상에 존재하는 예에서, 각각의 치환된 기당 0개, 1개 또는 2개의 치환체가 존재하고, 예를 들어, 0개 또는 1개의 치환체가 존재하는 것이 일반적으로 바람직하다. 2개의 히드록실 치환체가 존재하는 경우에 2개의 히드록실기는 동일한 탄소 원자에 부착되어 있지 않다는 것을 이해할 것이다. 선택적인 치환체가 F인 경우에 1개, 2개 또는 3개의 F 치환체가 존재하는 것이 바람직하고, 또한, 2개 또는 3개의 치환체가 존재하는 경우 이들은 동일한 탄소 원자에 직접 결합된다. 이러한 선택적인 치환체는 분자의 물리화학적 특성, 예컨대, 용해도를 조절하거나, 대사를 조절하거나, 예를 들어, 다른 키나제에 비해서 IRAK4 키나제와의 상호작용을 추가로 최적화하여, 보다 강력하고 선택적인 IRAK4 키나제 저해제를 전달하기 위해서 사용될 수 있다.
상기에서 주목되는 바와 같이, 제1 실시형태에서, 본 명세서는 하기 화학식 A의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 A]
[식 중,
R1은 로부터 선택되고;
R2는 로부터 선택되고;
R3 및 R4는 각각 H, Me, Et, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6, CONMe2 또는 5-원 N-헤테로사이클, 예컨대, 1,2,3-트리아졸이고, Z는 H, Me, Et 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이거나;
Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
X는 OR7 및 NR8R9로부터 선택되고;
R5는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원 포화 N-헤테로사이클로부터 선택되고;
R7은 Me, Et, i-프로필, n-프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬기 또는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 4-, 5- 또는 6-원 고리이고;
R8 및 R9는 독립적으로 H, Me 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나 함께 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9의 선택적인 치환체는, 존재하는 경우, 독립적으로 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택됨].
실시형태에서, 화학식 A의 화합물은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
[화학식 I]
[식 중,
R1은 로부터 선택되고;
R2는 로부터 선택되고;
R3 및 R4는 각각 H, Me, Et, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6, CONMe2 또는 5-원 N-헤테로사이클, 예컨대, 1,2,3-트리아졸이고, Z는 H, Me, Et 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이거나;
Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
X는 OR7 및 NR8R9로부터 선택되고;
R5는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
R7은 Me, Et, i-프로필, n-프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬기 또는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 4-, 5- 또는 6-원 고리이고;
R8 및 R9는 독립적으로 H, Me 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나 함께 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9의 선택적인 치환체는, 존재하는 경우, 독립적으로 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택됨].
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 Ia의 화합물이되, R2 기는 이고, Y 기와 Z 기는 합쳐져서 선택적으로 치환된 3-히드록시시클로부틸, N-아실화된 아제티딘, 피롤리딘-2-온, 1-알킬피롤리딘-2-온, 3-알킬옥사졸리딘-2-온, 1-알킬피페리딘-2-온 또는 3-알킬-1,3-옥사지난-2-온 고리인 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성한다.
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 Ib의 화합물이되, 식 중, R2 기는 이고, Y 기와 Z 기는 합쳐져서 3-히드록시시클로부틸, N-아세틸 아제티딘, 1-메틸피롤리딘-2-온, 3-메틸옥사졸리딘-2-온, 1-메틸피페리딘-2-온 및 3-메틸-1,3-옥사지난-2-온으로부터 선택된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성한다.
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 Ic의 화합물이되, R2 기는 이고, Y 기와 Z 기는 합쳐져서 하기로부터 선택된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성한다:
[식 중, 는 시클로헥실기에 대한 부착 부위를 나타내고, R10은 OH, C1-C3 알콕시, C(O)Me, NH2, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 Me 또는 C1-C6 알킬기임].
실시형태에서, 화학식 A의 화합물은 화학식 Ac의 화합물이되, R2 기는 이고, Y 기와 Z 기는 합쳐져서 인 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 는 시클로헥실기에 대한 부착 부위를 나타내고, R10은 OH, C1-C3 알콕시, C(O)Me, NH2, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 Me 또는 C1-C6 알킬기이다.
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 Id의 화합물이되, R2 기는 이고, Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6 및 CONMe2로부터 선택되고, Z는 H이다.
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 Ie의 화합물이되, R2 기는 이고, 선택적으로 R4는 H이다.
실시형태에서, 화학식 I 또는 화학식 A의 화합물은 화학식 If의 화합물이되, R2 기는 이고, 선택적으로 R3 및 R4는 메틸이다.
실시형태에서, 화학식 If의 화합물은 화학식 Ig의 화합물이되, R2 기는 하기로부터 선택된다:
.
실시형태에서, 화학식 If의 화합물은 화학식 Ih의 화합물이되, R2 기는 하기로부터 선택된다:
.
실시형태에서, 화학식 If의 화합물은 화학식 Ah의 화합물이되, R2 기는 하기로부터 선택된다:
.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig 또는 Ih 중 임의의 것의 화합물은 화학식 Ii의 화합물이되, R1은 이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ac 또는 Ah 중 임의의 것의 화합물은 화학식 Ai의 화합물이되, R1은 이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ac 또는 Ah 중 임의의 것의 화합물은 화학식 Aj의 화합물이되, R1은 이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig 또는 Ih 중 임의의 것의 화합물은 화학식 Ij의 화합물이되, R1은 이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii 또는 Ij의 화합물은 화학식 Ik의 화합물이되, X는 OR7이고, 선택적으로 R7은 OMe이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ac 또는 Ah 중 임의의 것의 화합물은 화학식 Ak의 화합물이되, X는 OR7이고, 선택적으로 R7은 OMe이다. 실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii 또는 Ij의 화합물은 화학식 Il의 화합물이되, X는 NR8R9이다.
실시형태에서, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 화학식 Ac 또는 Ah 중 임의의 것의 화합물은 화학식 A의 화합물이되, X는 NR8R9이다.
실시형태에서, 화학식 A의 화합물은 하기로부터 선택된다:
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1s,4s)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1s,4s)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
rel-2-((7R,8R)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 또는 rel-2-((7S,8S)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1, 2, 3 또는 4;
N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1R,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((1r,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((1s,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-(2-히드록시-N,2-디메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1r,3r)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1s,3s)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1r,4r)-4-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드
rel-2-((1S,2S,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,2R,3S)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1S,2R,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
rel-2-((5R,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2 및
rel-2-((5S,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2
또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
본 발명의 IRAK4 저해제는 Merck KGaA와 같은 상업적 공급업체로부터 또는 당업자의 공통된 일반 지식에 포함된 방법에 의해 입수 가능한, 쉽게 입수 가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 하기 반응식은 IRAK4 저해제의 합성을 위한 다양한 방법을 기재한다. 전형적이거나 바람직한 반응 조건이 합성을 위해 제공될 수 있지만, 당업자는 본 명세서에 기재되지 않은 유사체를 얻기 위해 이러한 조건의 변형을 제안할 수 있을 것이다. 따라서 하기에 제시된 반응식은 본 명세서의 화합물 합성을 위한 대표적인 방법이며, 이들은 어떤 식으로든 본 명세서의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 반응 순서를 변형하여 전체 합성을 변화시켜 합성의 상이한 합성 단계에서 분자의 상이한 위치에서의 변화를 허용할 수 있다.
정통한 독자는 하기 반응식에 기재된 화합물이 일부 경우에 위치이성질체와 입체이성질체의 혼합물로 얻어질 수 있으며, 이는 당업자에게 널리 공지된 실리카/C18 크로마토그래피, HPLC, SFC, 결정화 등과 같은 기술을 사용하여 상이한 합성 단계에서 분리될 수 있음을 인식할 것이다.
스캐폴드/빌딩 블록의 일반적인 합성:
반응식 1: Hal = 할라이드를 갖는 스캐폴드 I-6의 합성.
반응식 1에 나타낸 스캐폴드 I-6은 상업적으로 입수 가능한 2,4-디플루오로벤즈알데히드(I-1)로부터 제조될 수 있다. I-1을 표준 질화 조건을 사용하여, 예를 들어, 진한 황산과 진한 질산의 혼합물을 사용하거나, 예를 들어, WO2017/009798에 기재된 바와 같은 진한 질산을 사용하거나, 진한 황산과 질산칼륨의 혼합물을 사용하여 질화시켜 니트로 화합물 I-2를 제공할 수 있다. 승온에서 염기(예를 들어, DIPEA) 및 적합한 용매(예를 들어, DMF)의 존재 하에서 시클로프로판올로 I-2를 처리하여 이소프로필 에테르 I-3을 형성한다. 인다졸 I-4는 승온(예를 들어, 80℃)에서 적합한 용매에서 이를 히드라진과 반응시킴으로써 I-3으로부터 얻을 수 있다. 이어서, 니트로 화합물 I-4를 예를 들어, 에탄올/물 혼합물에서 Fe 및 염화암모늄으로 처리하여(대안적으로 H2 분위기 하에서 MeOH 중 탄소 상의 Pd(또는 탄소 상의 Pd(OH)2)가 사용될 수 있음) 환원시킴으로써 방향족 아민 I-5를 얻을 수 있다. 아민 I-5를 예를 들어, 적합한 용매(예를 들어, 아세토니트릴)에서 tert-부틸 니트레이트 및 브롬화구리(I)로 처리함으로써 상응하는 브로마이드 I-6(Hal = Br)으로 전환시킬 수 있다. 예를 들어, PMB-보호기로의 I-4의 인다졸 NH의 보호, 그 다음 니트로기의 환원 이후에 브로마이드의 도입 후 탈보호는 이러한 변형의 수율을 증가시킨다. 아민 I-5는 예를 들어, 물/아세트산에서 소듐 니트레이트 및 아이오딘화칼륨으로 처리에 의해서 상응하는 아이오다이드 I-6(Hal = I)로 전환될 수 있다.
반응식 2: 청구범위에 정의된 바와 같은 R1 및 R7 = -Me 또는 -시클로프로필을 갖는 빌딩 블록 II-4의 일반적인 합성.
할라이드 II-1(Hal = Br 또는 I)은 반응식 2에 도시된 바와 같이 빌딩 블록 II-4의 합성을 위한 출발 물질로 사용될 수 있다. 할라이드 II-1은 상업적으로 입수 가능하거나 상기 반응식 1에 기재된 단계를 사용하여 얻을 수 있다. II-1을 용매로서 알코올의 존재 하에서 CO 분위기(선택적으로 COware® 및 SilaCOgen®의 도움으로 동일계에서 생성됨) 하에서 Pd-촉매(예를 들어, Pd(dppf)Cl2)로 처리하여 에스테르 II-2(MeOH를 용매로 사용하는 경우, 여기서는 메틸 에스테르로 나타냄)를 수득한다. 예를 들어, 적합한 용매(예를 들어, 물)에서 수산화리튬 또는 수산화칼륨을 사용하여 에스테르를 후속 분해시켜 카르복실산 II-3을 수득한다. 아민 R1-NH2를 사용한 이러한 산 II-3의 아미드 형성을 염기(예를 들어, DIPEA) 및 용매로서 DMF 및/또는 THF의 존재 하에서 다양한 아미드 커플링 시약(예를 들어, HATU)을 사용하여 수행하여 원하는 빌딩 블록 II-4를 수득한다.
할라이드 II-1의 아미드 II-4로의 전환을 또한 아미노카르보닐화 반응을 사용하여 1단계 방식으로 수행할 수 있다. II-1(Hal = Br 또는 I)을 용매(예를 들어, CH3CN) 중에서 Pd-공급원(예를 들어, Pd(OAc)2) 및 적합한 리간드(예를 들어, 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판)와 함께 CO(선택적으로 동일계에서 생성됨) 분위기 하에서 염기(예를 들어, TEA) 및 아민 R1-NH2의 존재 하에서 교반하여 1단계로 아미드 II-4를 제공한다.
반응식 3: Hal = 할라이드(Br, I); R = R2(청구범위에 정의된 바와 같음) 또는 하기에 정의된 바와 같은 R2의 보호된 전구체; R7 = -Me 또는 -시클로프로필 등을 갖는 빌딩 블록 III-2의 일반적인 합성
반응식 3에 나타낸 인다졸 III-2는 승온에서 적합한 용매(예를 들어, DMF, THF, 디옥산, 자일렌, MeCN) 중에서 염기(K2CO3, Cs2CO3, NaHCO3, NaOH, KOH, Na t OBu, K t OBu, KOEt, KHMDS, DIPEA, 피리딘, TEA) 및 알킬화 시약 R-Y, 예를 들어, R2의 메실레이트, 토실레이트 또는 할라이드로 처리함으로써 화합물 III-1(상업적으로 입수 가능하거나 상기 반응식 1에 나타낸 합성에 의해 얻어짐)로부터 얻을 수 있다. 대안적으로, 알킬화는 화합물 III-1과 R2의 α,β-불포화 카르보닐 전구체의 마이클 반응에 의해 수행될 수 있다. R2가 이 합성 단계에 적합한 보호기에 의해 보호되어야 하는 작용기를 포함하는 경우, R2의 적합한 보호된 전구체가 사용되어야 한다. 또한, 반응식 3에 나타낸 바와 같은 알킬화 반응은 목표 화합물을 향한 합성에서 나중에 R2로 전환될 수 있는 R2의 적합한 전구체로 수행될 수 있다. 예를 들어, R2가 아민 또는 아미드 작용기를 함유하는 경우, 아민은 알킬화 반응 후에 절단되는 적합한 보호기(예를 들어, Boc)로 알킬화제에서 보호될 수 있다. 그 후, 아민은 알킬화되거나 아미드로 전환될 수 있다. R2가 알코올 작용기를 함유하는 경우, 이 작용기는 알킬화 반응의 반응 조건을 견디고 목표 화합물 합성의 나중 단계에서 절단되는 적합한 알코올 보호기로 보호될 수 있다. 보호기는 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Ed P.G.M. Wuts, Wiley, NY 2014, 5th Edition] 참조). 대안적으로, 알킬화제는 탈보호될 수 있고 당업자에게 공지된 합성 방법에 의한 합성의 나중 단계에서 목표 화합물의 원하는 아민/아미드/알코올 작용기로 전환될 수 있는 적합한 보호된 카르보닐 작용기의 형태로 아민/아미드/알코올 작용기의 전구체를 함유할 수 있다.
위에서 기재된 알킬화 반응에 사용된 반응 조건에 따라, N1 및 N2-위치이성질체의 혼합물을 얻을 수 있다. N1 이성질체는 예를 들어, 위에서 기재된 알킬화 반응 직후 또는 목표 화합물 합성의 나중 단계에서 칼럼 크로마토그래피에 의해서 N2 이성질체로부터 분리될 수 있다.
반응식 4: R = R2(청구범위에 정의된 바와 같음, 또는 반응식 3에 기재된 바와 같은 이의 적합하게 보호된 전구체; R7 = -Me, -시클로프로필 등)를 갖는 빌딩 블록 IV-2 및 IV-7의 일반적인 합성.
반응식 4는 N-2 인다졸 이성질체 IV-2 및 IV-7의 위치선택적 합성을 설명한다. 승온에서 적합한 용매(예를 들어, iPrOH)에서 IV-2의 합성을 위한 상업적으로 입수 가능한 출발 물질 IV-1을 아민 R-NH2로 처리한 후 트리-n-부틸포스핀을 첨가하면 IV-2가 형성된다. IV-7의 합성을 위한 출발 물질 IV-3은 상업적으로 입수 가능하거나(IV-3, R7 = Me, CAS 586412-86-4), 반응식 1(R7 = 시크로프로필)에 요약된 합성 순서에 나타낸 바와 같이 얻을 수 있다. 적합한 용매(예를 들어, EtOH)에서 벤즈알데하이드 IV-3을 아민 R-NH2로 처리하여 상응하는 이민을 형성한 다음, 조물질 이민 IV-4를 적합한 용매(예를 들어, DMF)에서 나트륨 아지드와 함께 교반함으로써 이환식 중간체 IV-5를 수득한다. IV-5의 니트로기를 환원(예를 들어, H2 분위기 하에서 탄소 상의 Pd(OH)2 사용)시켜 방향족 아민 IV-6을 수득한다. IV-6을 예를 들어, 아세트산에서 소듐 니트라이트 및 아이오딘화칼륨으로 후속 처리하여 상응하는 아이오도 화합물 IV-7을 생성한다.
화학식 I의 화합물의 일반적인 합성:
반응식 5: 화학식 I의 화합물의 일반적인 합성, 방법 1:
화학식 I의 화합물은 반응식 5에 나타낸 바와 같이 화합물 II-4(R7 = -Me, -시클로프로필 등; R1은 청구범위에 정의된 바와 같음)로부터 제조될 수 있다. 화합물 II-4를 제조하기 위한 반응 순서는 반응식 2에 제시되어 있다.
염기와 상용성인 용매에서 염기(예를 들어, KOH, KHMDS, Cs2CO3) 및 적합한 알킬화 시약 R-Y(Y = 메실레이트, 토실레이트, 할라이드, R = R2 또는 상기 반응식 3에 상기에서 정의한 바와 같이 R2의 적합한 보호된 전구체)로 처리하여 인다졸 II-4를 알킬화시킬 수 있다. R-Y(R = R2의 적합한 전구체)가 알킬화 반응에 사용되는 경우, 반응식 3에 기재된 단계는 R을 목표 화합물의 R2로 전환시키는 알킬화 후에 수행될 수 있다.
위에서 기재된 알킬화 반응에 사용된 반응 조건에 따라, N1 및 N2-위치이성질체의 혼합물을 얻을 수 있다. 예를 들어, 칼럼 크로마토그래피에 의해 N2 이성질체로부터 N1 이성질체를 분리시켜 화학식 I의 화합물을 얻을 수 있다.
반응식 6: 화학식 I의 화합물의 일반적인 합성, 방법 2:
화학식 I의 화합물을 제조하는 또 다른 방법이 반응식 6에 제시되어 있다. 이 경로에 적합한 출발 물질은 인다졸 III-2(Hal = 할라이드(Br, I); R = 청구범위에 정의된 바와 같은 R2 또는 반응식 3에 기재된 바와 같은 이의 적합한 전구체; R7 = -Me, -시클로프로필 등)이다. 할라이드 III-2는 반응식 3 및 4에 기재된 바와 같이 얻을 수 있고, 먼저 용매로서 알코올의 존재 하에서 CO 분위기(고압에서) 하에서 Pd-촉매(예를 들어, Pd(dppf)Cl2)로 처리하여 Me-에스테르 VI-1(MeOH를 용매로서 사용하는 경우 Me-에스테르 VI-1이 형성됨)을 수득할 수 있다. 예를 들어, 적합한 용매(예를 들어, 물)에서 수산화리튬 또는 수산화칼륨에 의해서 에스테르를 후속 분해시켜 카르복실산 VI-2를 수득한다. 다양한 아미드 커플링 시약(예를 들어, HATU, T3P)을 사용하여 목적하는 화학식 I의 화합물을 수득함으로써 아민 R1-NH2(R1은 청구범위에 정의된 바와 같음)을 사용한 이러한 산 VI-2의 아미드 형성을 수행할 수 있다.
반응식 6에 나타낸 반응 시퀀스가 화합물 III-2(R = R2의 보호된 전구체)에서 시작하는 경우, R을 R2로 전환시키기 위한 변환(반응식 3에 기재된 바와 같음)은 변환의 속성 및 반응 조건에서 그 순서의 중간체에 존재하는 작용기의 상용성에 따라서, 반응식 6에 나타낸 합성 순서의 상이한 단계에서 수행할 수 있다(당업자가 반응 순서를 결정할 수 있을 것임).
할라이드 III-2(R = R2)의 화학식 I의 화합물로의 전환은 또한 원 팟 아미노카르보닐화 프로토콜로 수행될 수 있다. III-2(R = R2)를 CO 분위기 하에서(승압에서) 염기(예를 들어, TEA) 및 커플링 아민 R1-NH2의 존재 하에서 용매(예를 들어, CH3CN)에서 Pd-공급원(예를 들어, Pd(OAc)2) 및 적합한 리간드(예를 들어, 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판 또는 디(아다만탄-1-일)부틸포스판)과 교반하여 1단계로 화학식 I의 화합물을 수득한다.
화합물 III-2(R = R2의 적합한 보호된 전구체)를 사용하여 아미노카르보닐화 반응을 수행하는 경우, R의 R2(반응식 3에 기재된 바와 같음)로의 변환을 반응식 6에 나타낸 아미노카르보닐화 반응 후에 수행하여 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다.
반응식 7: 화학식 I의 화합물의 일반적인 합성, 방법 3:
반응식 7은 합성의 마지막에 치환체 R7을 변화시켜 화학식 I의 화합물을 수득하는 방법을 나타낸다. 화합물 VII-1에서 시작하여 메톡시 에테르를 예를 들어, DCM 중 BBr3로 절단하여 페놀 VII-2를 수득할 수 있다. 알킬화 반응 또는 미츠노부 커플링으로의 VII-2와 알킬화 시약 R7-Y, 예를 들어, 메실레이트, 토실레이트 또는 할라이드 또는 알코올 R7-OH의 후속 반응으로 화학식 I의 화합물을 수득한다.
본 명세서의 실시형태에서 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 합성 방법, 화학식 I의 화합물의 합성에서의 중간체, 예를 들어, 본 명세서 및 위에서 기재된 방법 및 중간체가 제공된다.
실시형태에서, 상기에서 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 실시형태에서, 화학식 I의 화합물은 바람직하게는 단일 거울상이성질체 형태로 사용된다. 적은 불순물, 예를 들어, 최대 1 질량%의 다른 입체이성질체 형태가 선택적으로 존재할 수 있다. 약제학적 조성물은 IRAK4 키나제 저해가 본 명세서 및 위에서 상세하게 기재된 바와 같이 이로울 수 있는 병태의 치료를 위해서 사용될 수 있다.
실시형태에서 약제의 제조에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물이 제공되며, 선택적으로 약제는 IRAK4 키나제 저해가 본 명세서에 및 위에서 상세하게 기재된 바와 같이 이로울 수 있는 병태의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 것이다.
화학식 I의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 무정형 형태, 결정형 형태 또는 반결정형 형태로 제조되거나, 사용되거나, 공급될 수 있고, 임의의 주어진 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 수화물(예를 들어, 반수화물, 일수화물, 이수화물, 삼수화물 또는 다른 화학량론의 수화물) 및/또는 용매화된 형태를 포함하는, 하나 초과의 결정형 및/또는 다형성 형태로 형성되는 것이 가능할 수 있다. 본 명세서는 화학식 I의 화합물의 모든 이러한 고체 형태 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
본 명세서의 추가 실시형태에서 이하에서 '실시예' 섹션에 기술되는 방법에 의해 수득가능한 화학식 I의 화합물이 제공된다.
본 명세서는 본 화합물에서 생기는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자수를 갖지만, 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소로 표지된 화학식 I의 화합물은 일반적으로 당업자에게 알려진 통상적 기술에 의해 또는 이전에 이용된 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소 표지 시약을 사용하여 동반되는 실시예에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 산 부가염일 수 있다. 화학식 I의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 산 부가염, 예를 들어 무기 산 또는 유기 산에 의한 산 부가염일 수 있다. 본 명세서의 화합물은 유리 염기 화합물, 즉 비-염화 상태(non-salified state)로 제공될 수 있다.
화학식 I의 화합물의 추가의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 상기 인간 또는 동물 신체에 화학식 I의 화합물을 투여한 후 상기 인간 또는 동물 신체 내에서 형성되는 염일 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 공결정 고체 형태로서 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 약제학적으로 허용 가능한 공결정은 본 명세서의 양태를 형성함이 이해되어야 한다.
제약적 맥락에서 사용하기 위해, 다량의 다른 입체이성질체 형태가 존재하지 않으면서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 통상적으로 경구 경로를 통해 투여되지만, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하 또는 다른 주사가능한 방식, 협측, 직장, 질, 경피 및/또는 비강 경로 및/또는 흡입을 통한 것(활성 성분 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 또는 이러한 염의 용매화물을 포함하는 약제학적 제형의 형태로, 약제학적으로 허용 가능한 투여 형태로)이 가능할 수 있다. 치료될 장애 및 환자, 그리고 투여 경로에 따라, 조성물은 다양한 용량으로, 예를 들어 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎ 또는 100 ㎎ 내지 2,000 ㎎의 경구 용량으로 투여될 수 있다.
위에서 기재된 화학식 I의 화합물의 약제학적 제형은, 예를 들어, 비경구, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여용으로 제조될 수 있다.
위에서 기재된 화학식 I의 화합물의 약제학적 제형은 단위 투여 형태로 편리하게 투여될 수 있으며, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985)]에 기술된 바와 같은, 약제학적 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
경구 투여에 적합한 약제학적 제형은 하나 이상의 생리학적으로 상용성인 담체들 및/또는 부형제들을 포함할 수 있고 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 정제 및 캡슐은 결합제; 충전제; 윤활제; 및 계면활성제를 이용하여 제조될 수 있다. 액체 조성물은 현탁제; 유화제; 및 보존제와 같은 통상적인 첨가제를 함유할 수 있다. 액체 조성물은 단위 투여 형태를 제공하기 위해 예를 들어, 젤라틴에 캡슐화될 수 있다. 고체 경구 투여 형태는 정제, 투-피스(two-piece) 경질 쉘 캡슐 및 연질 탄성 젤라틴(SEG) 캡슐을 포함한다. 본 명세서에 따른 예시적인 경구 조성물은 화학식 I의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제가 투-피스 경질 쉘 캡슐 또는 연질 탄성 젤라틴(SEG) 캡슐에 충전된 것을 포함할 것이다.
추가 실시형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 약제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식 효과의 생성에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 방지 및/또는 치료에서 항침습제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식 효과의 생성을 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 방지 및/또는 치료에서 항침습제로 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
화학식 I의 화합물이 과증식성 질환 또는 고형 종양 질환을 특징으로 하는 병태의 치료 및 관련 치료 방법에 사용하기 위한 것 및 이러한 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 것인 실시형태에서, 바람직한 실시형태에서 질환은 흑색종이고, 추가로 브루톤 티로신 키나제 저해제와의 병용이 바람직하다는 것이 이해될 것이다.
본 명세서에서, 달리 언급되지 않는 한, 어구 "유효량"은 치료될 증상 및/또는 병태를 유의미하게 및 긍정적으로 변경시키기에(예를 들어, 긍정적인 임상적 반응을 제공하기에) 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 의미한다. 약제학적 조성물에 사용되는 활성 성분의 유효량은 치료될 특정 병태, 병태의 중증도, 치료 지속기간, 동시 요법의 특성, 이용되는 특정 활성 성분(들), 이용된 특정한 약제학적으로 허용 가능한 부형제(들)/담체(들), 및 주치의의 지식과 전문 지식 내에 있는 유사 요인에 따라 달라질 것이다. 유효량은 일반적으로 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎의 범위일 것이다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 본 명세서에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본 명세서에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 저해 효과를 제공하는 방법이 또한 제공되며, 본 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 선택적 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 본 명세서에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다. 이러한 경우에 선택적 저해 효과는, 시험관내에서 IRAK4 키나제 활성의 50% 저해를 달성하는 데 필요한 화학식 I의 화합물의 농도가 또 다른 키나제, 예를 들어, 저해되는 경우 독성 부작용을 생성하는 또 다른 키나제의 50% 저해를 달성하는 데 필요한 농도보다 10배, 100배 또는 1000배 또는 그 초과만큼 더 낮다는 것을 나타낸다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 선택적 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본 명세서에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시형태에 따르면, IRAK4 키나제에 대해 선택적 저해 효과를 제공하는 방법이 또한 제공되며, 본 방법은 본 명세서에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에는 IRAK4 키나제를 저해할 수 있는 화합물이 기재된다. 생화학적인 세포 기반 검정에서 본 명세서의 화합물은 강력한 IRAK4 키나제 저해제인 것으로 밝혀졌고, 따라서 IRAK4 키나제 활성에 의해서 매개되는 장애의 치료, 특히 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에 유용할 수 있다.
실시형태에서 호흡기 질환의 치료를 위한 화학식 I의 화합물의 용도가 제공되며, 선택적으로 호흡기 질환은 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이다.
실시형태에서 염증성 질환 또는 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료를 위한 화학식 I의 화합물의 용도가 제공된다.
실시형태에서 유효량의 화학식 I의 화합물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공되며, 환자는 호흡기 질환을 갖고, 선택적으로 호흡기 질환은 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이다.
실시형태에서 유효량의 화학식 I의 화합물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공되며, 환자는 염증성 질환 또는 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선을 갖는다.
본 명세서의 추가 양태에 따르면, IRAK4 키나제 활성에 의해서 매개되는 장애의 치료, 특히 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
하기 실시예는 본 발명의 성질이 완전히 이해될 수 있도록 제공됨이 이해될 것이다. 또한 하기 실시예가 어떠한 방식으로든 기재의 범주를 제한하려는 것이 아님이 이해될 것이다.
실시예
하기 약어를 사용하였다:
상기에 정의되지 않은 경우 분석 데이터에 대해서 사용된 약어는 당업계에서의 일반적인 사용과 일치한다(문헌[J Med Chem Standard Abbreviations and Acronyms] http://pubsapp.acs.org/paragonplus/submission/jmcmar/jmcmar_abbreviations.pdf? 참조).
하기에 제공된 화합물 명칭은 PerkinElmer ChemDraw Professional, Version 20.0.2.51을 사용하여 생성된다. 절대 입체화학에 관해서 불명확한 경우에, 가능한한 상대 입체화학이 명시된다.
중간체의 제조
중간체 Int I-1: 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드 의 합성
5-브로모-4-플루오로-2-니트로벤즈알데히드
0℃에서 진한 황산(25 ㎖) 중 발연 질산(12.0 ㎖, 0.3 ㏖)의 용액을 진한 황산(75 ㎖) 중 3-브로모-4-플루오로벤즈알데히드(19.3 g, 95.1 m㏖)에 적가하였다. 생성된 황색 용액을 서서히 rt까지 가온시키고, 4일 동안 교반하였다. 그 다음 반응 혼합물을 조각 낸 얼음에 붓고, 생성된 침전물을 여과로 수집하여 5-브로모-4-플루오로-2-니트로벤즈알데히드(22.6 g, 96%)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI-), [M-H]- = 245/247.
5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)
rt에서 MeOH(46 ㎖) 중의 소듐 메톡시드(10.9 g, 60.6 m㏖)를 MeOH(150 ㎖) 중 5-브로모-4-플루오로-2-니트로벤즈알데히드(10.0 g, 40.3 m㏖)에 첨가하였다. 16시간 동안 교반한 후 반응물을 물(300 ㎖)로 켄칭하고, 형성된 고체를 여과하고, 물(100 ㎖)로 세척하여 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(6.6 g, 63%)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.03 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.04 (s, 3H).
중간체 Int I-2: 6-시클로프로폭시-5-니트로-1 H -인다졸의 합성
2,4-디플루오로-5-니트로벤즈알데히드
N2 분위기 하의 0℃에서 황산(180 ㎖) 중 2,4-디플루오로벤즈알데히드(50.0 g, 351.9 m㏖)의 용액에 질산(15 M)(30.5 ㎖, 457.4 m㏖)과 황산(900 ㎖)의 혼합물을 1시간의 기간에 걸쳐서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 추가 3시간 동안 교반하고, 그 다음 혼합물을 얼음/물에 붓고, EtOAc(400 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 2,4-디플루오로-5-니트로벤즈알데히드(50.0 g, 76%)를 황색 오일로서 제공하였다.
4-시클로프로폭시-2-플루오로-5-니트로벤즈알데히드
DMF(25 ㎖) 중 2,4-디플루오로-5-니트로벤즈알데히드(20.0 g, 106.9 m㏖), 시클로프로판올(6.2 g, 106.9 m㏖) 및 DIPEA(37.3 ㎖, 213.8 m㏖)를 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 얼음/물(750 ㎖)에 붓고, EtOAc(350 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE/EtOAc(6:1)로 용리)로 정제시켜 조물질 4-시클로프로폭시-2-플루오로-5-니트로벤즈알데히드(12.0 g)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 226 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-5-니트로-1 H -인다졸(Int I-2)
4-시클로프로폭시-2-플루오로-5-니트로벤즈알데히드(37.0 g, 164.3 m㏖)를 EtOH(100 ㎖) 중 히드라진 수화물(물 중 80%)(32.9 g, 525.8 m㏖)에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켜 6-시클로프로폭시-5-니트로-1H-인다졸(34.0 g, 94%)을 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 220 [M+H]+.
중간체 Int I-3: 6-시클로프로폭시-5-아이오도-1 H -인다졸의 합성
6-시클로프로폭시-1 H -인다졸-5-아민
EtOH(100 ㎖)/물(100 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-5-니트로-1H-인다졸(Int I-2)(35.0 g, 159.7 m㏖) 및 NH4Cl(42.7 g, 798.4 m㏖)의 현탁액에 철(44.6 g, 798.4 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시키고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE/EtOAc(2:1)로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-아민(15.3 g, 51%)을 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 190 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-5-아이오도-1 H -인다졸(Int I-3)
0℃에서 아세트산(100 ㎖) 중의 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-아민(5.0 g, 26.4 m㏖)의 용액에 물(10 ㎖) 중 소듐 니트라이트(2.7 g, 39.6 m㏖)의 용액을 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 물(10 ㎖) 중 아이오딘화칼륨(8.8 g, 52.9 m㏖)의 용액을 적가하고, 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(400 ㎖)에 붓고, EtOAc(500 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE/EtOAc(2:1)로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-5-아이오도-1H-인다졸(4.0 g, 50%)을 적색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 12.95 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.94 - 4.02 (m, 1H), 0.61 - 0.95 (m, 4H). MS ESI, m/z = 301 [M+H]+.
중간체 Int I-4: 5-브로모-6-시클로프로폭시-1 H -인다졸의 합성
6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-5-니트로-1 H -인다졸
NaH(60 wt%)(2.6 g, 63.9 m㏖)를 DMF(20 ㎖) 중 1-(클로로메틸)-4-메톡시벤젠(7.5 g, 47.9 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-5-니트로-1H-인다졸(Int I-2)(7.0 g, 31.9 m㏖)에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(750 ㎖)에 붓고, EtOAc(1×400 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피(PE/EtOAc 2/1로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-5-니트로-1H-인다졸(6.0 g, 55%)을 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 340 [M+H]+ .
6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1 H -인다졸-5-아민
철(4.9 g, 88.4 m㏖)을 EtOH(20 ㎖) 및 물(20.00 ㎖) 중 NH4Cl(4.7 g, 88.4 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-5-니트로-1H-인다졸(6.0 g, 17.7 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시키고 그 다음 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(PE/EtOAc 2/1로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1H-인다졸-5-아민(4.8 g, 88%)을 적색 검으로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 310 [M+H]+.
5-브로모-6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1 H -인다졸
16℃에서 N2 분위기 하에서 브로민화구리(464 ㎎, 3.2 m㏖)를 MeCN(5 ㎖) 중 tert-부틸니트라이트(333 ㎎, 3.2 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1H-인다졸-5-아민(500 ㎎, 1.6 m㏖)에 20분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 물(400 ㎖)에 붓고, EtOAc(2×400 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/PE(1:3)로 용리)로 정제시켜 5-브로모-6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1H-인다졸(68 ㎎, 11%)을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 373/375 [M+H]+.
5-브로모-6-시클로프로폭시-1 H -인다졸(Int I-4)
TFA(3.0 ㎖, 39.0 m㏖)를 DCE(1 ㎖) 중 5-브로모-6-시클로프로폭시-1-(4-메톡시벤질)-1H-인다졸(400 ㎎, 1.1 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시키고, 그 다음 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피(물(5% NH4OH) 중의 0→100% MeCN로 용리)로 정제시켜 5-브로모-6-시클로프로폭시-1H-인다졸(156 ㎎, 58%)을 회색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 13.00 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 4.00 (tt, 1H), 0.83 - 0.92 (m, 2H), 0.70 - 0.80 (m, 2H). MS ESI, m/z = 253/255 [M+H]+.
중간체 Int I-5: 피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-아민의 합성
aq. NH3 용액(25%)(34.9 ㎖, 403.0 m㏖)을 EtOH(300 ㎖) 중 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민 (20.0 g, 80.6 m㏖)의 TFA염의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 50~90% EtOAc로 용리)로 정제시켜 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(9.9 g, 92%)을 주황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 135 [M+H]+.
중간체 Int II-1: N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-1 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
Pd(OAc)2(89 ㎎, 0.4 m㏖)를 탈기된 MeCN(30 ㎖) 중 TEA(3.7 ㎖, 26.4 m㏖), dppp(165 ㎎, 0.4 m㏖), 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(2.0 g, 8.8 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(1.3 g, 9.7 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 CO 분위기 하에서 4 bar에서 100℃에서 23시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시킨 후, 형성된 침전물을 여과로 수집하고, MeCN(2 ㎖)으로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(2.4 g, 87%)를 회색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 12.86 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.50 - 8.65 (m, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.01 - 8.12 (m, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.18 (dd, 1H), 4.18 (s, 3H). m/z (ESI+) [M+H]+ = 309.
중간체 Int II-2: 6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
메틸 6-메톡시-1 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(500 ㎖) 중의 Pd(dppf)Cl2(9.7 g, 13.2 m㏖), DIPEA(77 ㎖, 440.4 m㏖) 및 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(20.0 g, 88 m㏖)의 용액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 실리카로 여과하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0→30% EtOAc로 용리)로 정제시켜 메틸 6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복실레이트(8.0 g, 44%)를 갈색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 207.
6-메톡시-1 H -인다졸-5-카르복실산
N2 분위기 하에서 rt에서 물(5 ㎖) 중 LiOH(732 ㎎, 30.5 m㏖)를 MeOH(5 ㎖) 중 메틸 6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복실레이트(2.1 g, 10.2 m㏖)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하고, 그 다음 aq. HCl(0.1 M)로 산성화시켰다. 형성된 침전물을 여과로 수집하고, MeOH로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜 6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복실산(1.6 g, 80%)을 회색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 193.
6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)
rt에서 N2 분위기 하에서 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(7.3 g, 54.0 m㏖)을 THF(20 ㎖) 중 HATU(20.6 g, 54.0 m㏖), DIPEA(36 ㎖, 208.0 m㏖) 및 6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복실산(8.0 g, 42.0 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, 형성된 고체를 여과로 수집하고, 물(100 ㎖)로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(10.0 g)를 황색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 13.13 (s, 1H), 10.32 (s, 1H), 9.01 - 9.12 (m, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.53 - 8.56 (m, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.00 - 7.11 (m, 1H), 4.10 (s, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 309.
중간체 Int II-3: 6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
메틸 6-시클로프로폭시-1 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(30 ㎖) 중 5-브로모-6-시클로프로폭시-1H-인다졸(Int I-4)(5.5 g, 21.7 m㏖), DIPEA(2.1 g, 16.6 m㏖) 및 Pd(dppf)Cl2(15.9 g, 21.7 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 메틸 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-카르복실레이트(4.4 g, 87%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 233 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-1 H -인다졸-5-카르복실산
rt에서 MeOH(5 ㎖) 중 메틸 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-카르복실레이트(4.4 g, 19.0 m㏖)의 용액에 물(5 ㎖) 중 LiOH(1.4 g, 56.8 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 30℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(25 ㎖)로 희석시키고, EtOAc(10 ㎖×3)로 세척하였다. 수성층을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 4 내지 5로 산성화시키고, 형성된 침전물을 여과로 수집하여 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-카르복실산(2.7 g, 65%)을 얻었다. MS ESI, m/z = 219 [M+H]+.
6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)
rt에서 DMF(6 ㎖) 및 THF(54 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-1H-인다졸-5-카르복실산(5.5 g, 25.2 m㏖), HATU(14.4 g, 37.8 m㏖) 및 DIPEA(22.0 ㎖, 126.0 m㏖)의 용액에 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(5.1 g, 37.8 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(1 L)에 붓고, 형성된 침전물을 여과로 수집하였다. 고체를 MeOH(150 ㎖)에 현탁시키고, 그 다음 K2CO3(15 g)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 현탁액을 물(1 L)에 붓고, 여과하여 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(6.9 g, 81%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 13.14 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.97 - 9.17 (m, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.42 - 8.64 (m, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.95 - 7.10 (m, 1H), 4.17 - 4.39 (m, 1H), 1.06 - 0.90 (m, 2H), 0.90 - 1.20 (m, 2H). MS ESI, m/z = 335 [M+H]+.
중간체 Int III-1: 1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
8-히드록시-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
0℃에서 MeOH(100 ㎖) 중 1-아자스피로[4.5]데칸-2,8-디온(4.5 g, 26.9 m㏖)에 NaBH4(2.0 g, 53.8 m㏖)를 한번에 첨가하고, 생성된 용액을 rt에서 교반하였다. 14시간 후 반응 혼합물을 EtOAc(50 ㎖)로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc로 용리)를 사용하여 정제시켜 8-히드록시-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(2.5 g, 55%)을 무색 오일로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 170.
2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트
rt에서 N2 분위기 하에서 TsCl(6.8 g, 35.8 m㏖)을 DCM(15 ㎖) 중 8-히드록시-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(2.8 g, 16.3 m㏖), DMAP(199 ㎎, 1.6 m㏖) 및 TEA(9.1 ㎖, 65.0 m㏖)의 용액에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 ㎖)로 켄칭하고, DCM(15 ㎖×3)으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 30~60% EtOAc로 용리)로 정제시켜 2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(2.00 g, 38%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.79 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 4.39 - 4.59 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.07 - 2.19 (m, 2H), 1.48 - 1.83 (m, 8H), 1.35 - 1.48 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 324.
1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-1)
0℃에서 N2 분위기 하에서 DMF(8 ㎖) 중 2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(1.9 g, 5.9 m㏖)의 용액에 NaH(60 wt.%)(352 ㎎, 8.8 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 아이오도메탄(1.5 ㎖, 23.5 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 추가로 6시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖)로 켄칭하였다. 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% NH4OH) 중 0~60% MeCN로 용리)로 직접 정제시켜 1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(1.8 g, 91%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (이성질체의 3:1 혼합물) δ 7.78 - 7.86 (m, 2H), 7.48 (d, 2H), 4.61 - 4.70/4.43 - 4.53 (m, 1H) (이성질체), 2.59/2.55 (s, 3H) (이성질체), 2.42 (s, 3H), 2.13 - 2.23 (m, 2H), 1.54 - 1.89 (m, 8H), 1.15 - 1.26/1.26 - 1.37 (m, 2H) (이성질체). m/z (ESI+), [M+H]+ = 338.
중간체 Int III-2: tert -부틸 7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트의 합성
DCM(15 ㎖) 중 tert-부틸 7-히드록시-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(2.0 g, 8.3 m㏖) 및 TEA(2.3 ㎖, 16.6 m㏖)에 MsCl(839 L, 10.8 m㏖)를 0℃에서 N2 분위기 하에서 첨가하고, 생성된 용액을 rt에서 교반하였다. 15시간 후 반응 혼합물을 물(150 ㎖)에 붓고, DCM(3×100 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하여 조물질 tert-부틸 7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(2.70 g)를 주황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 4.57 - 4.70 (m, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.16 (s, 3H), 1.71 - 1.90 (m, 4H), 1.51 - 1.66 (m, 4H), 1.38 (s, 9H). m/z (ESI+), [M-tBu+H]+ = 264.
중간체 Int III-3: 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
2-메틸-8,11-디옥사디스피로[3.2.4 7 .2 4 ]트리데칸-2-오
THF 중 메틸마그네슘 브로마이드의 용액(3 N, 10.0 ㎖, 30.0 m㏖)을 THF(50 ㎖) 중 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-온(2.0 g, 10.2 m㏖)에 -78℃에서 N2 분위기 하에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 -65℃에서 그리고 2시간 동안 -40℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 aq. 포화 NH4Cl 용액(50 ㎖)으로 켄칭시키고, rt까지 가온시키고, EtOAc(3×50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 30%→40% EtOAc로 용리)를 사용하여 정제시켜 2-메틸-8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-올(2.1 g, 97%)을 무색 오일로서 제공하였다.
2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-온
rt에서 N2 분위기 하에서 aq. HCl 용액(2 N, 20 ㎖, 40 m㏖)을 THF(20 ㎖) 중 2-메틸-8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-올(2.1 g, 9.9 m㏖)에 서서히 첨가하고, 2시간 동안 교반을 계속하였다. 혼합물을 aq. NaOH 용액(2 M)으로 pH 7로 중화시키고, EtOAc(3×100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(1×50 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜 조물질 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-온(1.7 g)을 무색 오일로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 169.
2-메틸스피로[3.5]노난-2,7-디올
rt에서 N2 분위기 하에서 NaBH4(37.8 ㎎, 1.0 m㏖)를 MeOH(3 ㎖) 중 조물질 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-온(84 ㎎)에 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 용매를 진공에서 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 50%→70% EtOAc로 용리)를 사용하여 정제시켜 2-메틸스피로[3.5]노난-2,7-디올(78 ㎎, 92%)을 무색 고체로서 제공하였다.
2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-3)
rt에서 N2 분위기 하에서 TsCl(4.0 g, 21.0 m㏖)을 DCM(50 ㎖) 중 2-메틸스피로[3.5]노난-2,7-디올(1.2 g, 7.1 m㏖), DMAP(172 ㎎, 1.4 m㏖) 및 TEA(4.9 ㎖, 35.2 m㏖)에 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 교반하였다. 16시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(50 ㎖)로 켄칭하고, DCM(2×50 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10%→50% EtOAc로 용리)을 사용하여 정제시켜 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일 4-메틸벤젠설포네이트(1.7 g, 74%)를 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.77 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 4.38 - 4.51 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 1.21 - 1.81 (m, 12H), 1.18 (s, 3H).
중간체 Int III-4: tert -부틸 6-메틸-7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트의 합성
-78℃에서 THF 중 1 M LiHMDS(157.0 ㎖, 157.0 m㏖)를 THF(100 ㎖)에 첨가하고, 그 다음 THF(300 ㎖) 중 tert-부틸 7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(18.8 g, 78.6 m㏖)의 용액을 30분의 기간에 걸쳐서 N2 분위기 하에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 아이오도메탄(22.3 g, 157.1 m㏖)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가 30분 동안 교반하고, 그 다음 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음 물(150 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(500 ㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 16~20% EtOAc로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 6-메틸-7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(9.5 g, 48%)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 3.83 (br. s, 2H), 3.53 (br. s, 2H), 2.40 - 2.49 (m, 2H), 2.06 - 2.22 (m, 3H), 1.72 - 1.83 (m, 1H), 1.47 - 1.57 (m, 1H), 1.39 (s, 9H), 0.88 (d, 3H). MS ESI, m/z = 239 [M-tBu+CH3CN+2H]+.
중간체 Int III-5 및 Int III-6: rac-tert -부틸 (6 R ,7 S )-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 및 rac-tert -부틸 (6 S ,7 S )-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트의 합성
rac-tert -부틸 (6 R ,7 S )-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2―카르복실레이트 및 rac-tert -부틸 (6 S ,7 S )-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2--카르복실레이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 MeOH(300 ㎖) 중 tert-부틸 6-메틸-7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-4)(19.5 g, 77.0 m㏖)의 용액에 NaBH4(5.8 g, 153.9 m㏖)를 40분의 기간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5시간 동안 rt까지 가온시켰다. 반응물을 염수(300 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(500 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피((1.): PE 중 25~30% EtOAc로 용리; (2.): PE 중 25% EtOAc로 용리)로 2회 정제시켜 rac-tert-부틸 (6R,7S)-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(13.6 g, 69%) 및 rac-tert-부틸 (6S,7S)-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.8 g, 9%)를 무색 고체로서 제공하였다. (6 R ,7 S )-이성질체: MS ESI, m/z = 200 [M-tBu+2H]+; (6 S ,7 S )-이성질체: MS ESI, m/z = 200 [M-tBu+2H]+.
rac-tert -부틸 (6 R ,7 S )-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-5)
rt에서 MsCl(7.7 ㎖, 98.7 m㏖)을 DCM(20 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (6R,7S)-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(4.2 g, 16.5 m㏖) 및 TEA(22.9 ㎖, 165 m㏖)의 용액에 15분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(25 ㎖×2)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 50→100% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-tert-부틸 (6R,7S)-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(3.5 g, 64%)를 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 4.64 - 4.68 (m, 1H), 3.41 - 3.61 (m, 4H), 3.16 (s, 3H), 1.94 - 2.02 (m, 1H), 1.52 - 1.82 (m, 5H), 1.38 (s, 10H), 0.88 - 0.97 (m, 3H).
rac-tert -부틸 (6 S ,7 S )-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-6)
0℃에서 N2 분위기 하에서 MsCl(0.55 ㎖, 7.1 m㏖)을 DCM(8 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (6S,7S)-7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.8 g, 7.1 m㏖) 및 TEA(983 ㎕, 7.1 m㏖)의 용액에 적가하였다. 생성된 용액을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 켄칭하고, DCM(15 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~60% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-tert-부틸 (6S,7S)-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.4 g, 60%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 667 [2M+H]+.
중간체 Int III-7: rac -(1 R ,3 R) -3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
0℃에서 TsCl(8.2 g, 42.0 m㏖)를 DCM(300 ㎖) 중 TEA(12.0 ㎖, 86.1 m㏖), DMAP(526 ㎎, 4.3 m㏖) 및 rac-(1R,3R)-시클로헥산-1,3-디올(5 ㎎, 43.0 m㏖)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 물(200 ㎖)로 켄칭하고, DCM(2×300 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(1×200 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0%→40% EtOAc로 용리)를 사용하여 정제시켜 rac-(1R,3R)-3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(5.0 g, 43%)를 연황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.77 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 4.68 - 4.80 (m, 1H), 4.59 (br. s, 1H), 3.70 - 3.81 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.20 - 1.73 (m, 8H).
중간체 Int III-8: (1 s ,4 s )-4-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
rt에서 N2 분위기 하에서 TsCl(33.2 g, 174.2 m㏖)을 DCM(300 ㎖) 중 tert-부틸 ((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)카르바메이트(15.0 g, 69.7 m㏖), DMAP(851 ㎎, 7.0 m㏖) 및 TEA(29.1 ㎖, 209.0 m㏖)의 용액에 5분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, DCM(500 ㎖)으로 희석시키고, 염수(150 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 (1s,4s)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(15.5 g, 60%)를 무색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.70 - 7.85 (m, 2H), 7.41 - 7.54 (m, 2H), 6.80 (d, 1H), 4.58 (s, 1H), 3.14 - 3.34 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.61 - 1.79 (m, 2H), 1.32 - 1.60 (m, 15H).
중간체 Int III-9: 4-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
rt에서 N2 분위기 하에서 TsCl(21.3 g, 111.5 m㏖)을 DCM(400 ㎖) 중 tert-부틸 (4-히드록시시클로헥실)카르바메이트(시스/트랜스 비 1:5)(20.0 g, 92.9 m㏖) 및 TEA(25.9 ㎖, 185.8 m㏖)의 용액에 5분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(400 ㎖)으로 희석시키고, 물(150 ㎖×2)로 세척하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10~25% EtOAc로 용리)로 정제시켜 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5)(26.0 g, 76%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (시스/트랜스-이성질체의 1:5 혼합물) δ 7.75 - 7.85 (m, 2H), 7.47 (d, 2H), 6.81/6.71 (d, 1H) (이성질체), 4.54 - 4.62/4.27 - 4.42 (m, 1H) (이성질체), 3.10 - 3.28 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.62 - 1.83 (m, 4H), 1.39 - 1.58 (m, 2H), 1.30 - 1.38 (m, 9H) (이성질체), 1.09 - 1.27 (m, 2H). MS ESI, m/z = 270 [M-Boc+2H]+.
중간체 Int III-10: 4-(( tert -부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
rt에서 아이오도메탄(3.8 g, 27.1 m㏖)을 DMF(50 ㎖) 중 NaH(60 wt.%)(812 ㎎, 20.3 m㏖) 및 (4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5)(Int III-9)(5.0 g, 13.5 m㏖)의 현탁액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 반응물을 물(100 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(100 ㎖×2)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100 ㎖×4)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 연황색 고체를 제공하였다. 고체를 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10~25% EtOAc로 용리)로 정제시켜 4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5)(2.5 g, 48%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.80 (d, 2H), 7.48 (d, 2H), 4.32 - 4.45 (m, 1H), 3.57 - 3.89 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.67 - 1.91 (m, 2H), 1.42 - 1.67 (m, 6H), 1.38 (s, 9H). MS ESI, m/z = 284 [M-Boc+2H]+.
중간체 Int III-11 및 Int III-12: rac -(7 R ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올 및 rac -(7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올의 합성
0℃에서 N2 분위기 하에서 MeOH(500 ㎖) 중 7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(50.0 g, 293.8 m㏖)의 용액에 NaBH4(22.3 g, 587.5 m㏖)를 20분의 기간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 16% EtOAc로 용리)로 직접 정제시켜 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(3.18 g, 6%) 및 rac-(7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(19.00 g, 38%)을 제공하였다. rac -(7 R ,8 S )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 4.27 (d, 1H), 3.75 - 3.9 (m, 4H), 3.51 - 3.6 (m, 1H), 1.44 - 1.78 (m, 5H), 1.25 - 1.44 (m, 2H), 0.86 (d, 3H). rac -(7 S ,8 S )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 4.45 (d, 1H), 3.75 - 3.89 (m, 4H), 2.89 - 3.05 (m, 1H), 1.27 - 1.77 (m, 6H), 1.19 (t, 1H), 0.90 (d, 3H).
중간체 Int III-13: rac -(7 R ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트의 합성
0℃에서 N2 분위기 하에서 MsCl(1.4 ㎖, 17.4 m㏖)을 DCM(50 ㎖) 중 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(Int III-11)(2.5 g, 14.5 m㏖) 및 TEA(6.1 ㎖, 43.6 m㏖)의 용액에 30분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 염수(100 ㎖)로 켄칭하고, DCM(100 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~20% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(2.1 g, 58%)를 갈색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 4.71 (br. s, 1H), 3.80 - 3.92 (m, 4H), 3.17 (s, 3H), 2.02 - 2.13 (m, 1H), 1.85 - 2.02 (m, 1H), 1.32 - 1.83 (m, 5H), 0.94 (d, 3H).
중간체 Int IV-1: (1 s ,4 s )-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-올의 합성
(1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
DCM(100 ㎖) 중 TsCl(8.2 g, 43.0 m㏖), TEA(8.7 g, 86.1 m㏖) 및 DMAP(591 ㎎, 4.8 m㏖)의 용액에 (1r,4r)-시클로헥산-1,4-디올(5.0 g, 43.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 20~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 (1R,4R)-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.1 g, 18%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.78 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 4.40 - 4.53 (m, 1H), 3.39 - 3.54 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.60 - 1.83 (m, 4H), 1.32 - 1.60 (m, 2H), 1.13 - 1.32 (m, 2H).
(1 s ,4 s )-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-1)
rt에서 DMF(30 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-5-아이오도-1H-인다졸(Int I-3)(300 ㎎, 1.0 m㏖) 및 KOH(224 ㎎, 4.0 m㏖)의 용액에 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(946 ㎎, 3.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, EtOAc(50 ㎖)로 희석시키고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 (1s,4s)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(115 ㎎, 25%)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 399 [M+H]+.
중간체 Int IV-2: (1 r ,4 r )-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-올의 합성
(1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
0℃에서 DCM(50 ㎖) 중 (1s,4s)-시클로헥산-1,4-디올(3.0 g, 25.8 m㏖), TEA(5.2 g, 51.7 m㏖) 및 DMAP(316 ㎎, 2.6 m㏖)의 용액에 TsCl(5.2 g, 27.1 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 ㎖)으로 희석시키고, 0.1N HCl(50 ㎖) 및 물(50 ㎖)로 순차적으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~60% EtOAc로 용리)로 정제시켜 (1s,4s)-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.2 g, 32%)를 무색 액체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 7.78 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 4.47 - 4.55 (m, 1H), 3.43 - 3.53 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.60 - 1.78 (m, 2H), 1.35 - 1.60 (m, 6H).
(1 r ,4 r )-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-2)
DMF(20 ㎖) 중 (1s,4s)-4-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(1.3 g, 4.7 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-5-아이오도-1H-인다졸(Int I-3)(350 ㎎, 1.2 m㏖)의 용액에 KOH(196 ㎎, 3.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 13시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, EtOAc(50 ㎖)로 희석시키고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 (1r,4r)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(110 ㎎, 24%)을 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 8.23 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.66 (br. s, 1H), 4.32 - 4.47 (m, 1H), 3.87 - 3.99 (m, 1H), 3.43 - 3.59 (m, 1H), 1.82 - 2.12 (m, 6H), 1.35 - 1.47 (m, 2H), 0.82 - 0.91 (m, 2H), 0.66 - 0.75 (m, 2H). MS ESI, m/z = 399 [M+H]+.
중간체 Int IV-3: rac -5-브로모-6-메톡시-2-((7 R ,8 R )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸의 합성
rt에서 DMF(40 ㎖) 중 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(1.5 g, 6.6 m㏖) 및 KOH(1.5 g, 26.4 m㏖)의 용액에 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(Int III-13)(2.0 g, 8.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(300 ㎖)로 희석시키고, 염수(150 ㎖×4)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(600 ㎎, 22%)을 갈색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 381/383 [M+H]+.
중간체 Int IV-4 및 Int IV-5: 5-브로모-6-메톡시-2-((7 R ,8 R )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸 및 5-브로모-6-메톡시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸의 합성
rac-5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(Int IV-3)(7.3 g, 19.2 m㏖)을 분취용 SFC(Chiralpak® IG, 5 ㎛ 50×250 ㎜; CO2(35℃, 100 bar)에서 50% MeOH(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 200 ㎖/분)로 분리하여 5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(3.1 g, 43%, 100%ee) 및 5-브로모-6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(3.0 g, 41%, 100%ee)을 둘 다 회색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 8.25 (d, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.13 (td, 1H), 3.87 - 3.99 (m, 4H), 3.87 (s, 3H), 2.26 - 2.43 (m, 1H), 2.19 (td, 1H), 1.75 - 1.99 (m, 3H), 1.68 (td, 1H), 1.46 (t, 1H), 0.52 (d, 3H). MS ESI, m/z = 381/383 [M+H]+.
중간체 Int IV-6 및 Int IV-7: (5 s, 8 s )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온 및 (5 r, 8 r )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온의 합성
2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트
0℃에서 MsCl(2.0 g, 17.6 m㏖)를 DCM(25 ㎖) 중 8-히드록시-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(1.9 g, 10.4 m㏖) 및 DIPEA(4.7 g, 36.3 m㏖)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt까지 가온시키고, 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음 냉각 aq. 절반 포화된 NaHCO3(30 ㎖)로 켄칭하고, DCM(50 ㎖×2)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM으로 용리)로 정제시켜 2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(3.1 g, 96%)를 주황색 오일로서 제공하였다.
(5 s, 8 s )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-6) 및 (5 r, 8 r )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-7)
75℃에서 THF(15 ㎖) 중 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(775 ㎎, 3.4 m㏖) 및 KOH(434 ㎎, 7.0 m㏖)의 용액에 2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(1.3 g, 5.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 75℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 rt까지 냉각시키고, 물로 켄칭하고, DCM(40 ㎖×4)으로 추출하고, 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 10 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하였다. 카트리지를 DCM/MeOH(1:1)(150 ㎖)로 세척하여 원치 않는 1H-인다졸 이성질체를 제거하고 그 다음 100 ㎖ 2 N NH3-MeOH 용액/DCM(1:1)으로 용리시키고 용매를 증발시킨 후 조 생성물을 제공하였다. 갈색 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc 그 다음 DCM 중 0~2% 2 N NH3-MeOH 용액으로 용리)로 추가로 정제시켜 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온을 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 SFC(Lux® Cellulose-3, 5 ㎛ 30 ㎜×250 ㎜; CO2(40℃, 130 bar)에서 20% EtOH(20 mM 디에틸아민)를 사용한 등용매; 120 ㎖/분)로 추가로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 (5s,8s)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(153 ㎎, 3%, 100%ee) 및 제2 용리 이성질체로서 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(153 ㎎, 3%, 99.2%ee)을 제공하였다. (5 s ,8 s )-이성질체: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.83 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.26 - 4.36 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.34 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.28 (s, 2H), 2.12 - 2.20 (m, 2H), 2.01 - 2.12 (m, 2H), 1.87 - 1.96 (m, 2H), 1.57 - 1.68 (m, 2H) MS ESI, m/z = 392/394 [M+H]+. (5 r ,8 r )-이성질체: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.85 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.29 - 4.41 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.18 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.41 (s, 2H), 2.18 - 2.26 (m, 2H), 1.96 - 2.09 (m, 2H), 1.85 - 1.95 (m, 2H), 1.57 - 1.69 (m, 2H). MS ESI, m/z = 392/394 [M+H]+.
중간체 Int IV-8: tert -부틸 ((1 r ,4 r )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(200 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)카르바메이트(10.5 g, 49.0 m㏖)의 용액에 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(12.7 g, 49.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 트리-n-부틸포스핀(29.7 g, 147.0 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 13시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 9 ~ 50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트(14.2 g, 68%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 424/426 [M+H]+.
중간체 Int V-1 및 Int V-2: N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 및 N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
rac -(3 R ,4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온
rt에서 N2 분위기 하에서 rac-5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(Int IV-3)(400 ㎎, 1.1 m㏖)을 THF(5 ㎖)/물(5 ㎖) 중 1.2 N HCl 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% TFA) 중 0~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-(3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온(330 ㎎, 93%)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 337/339 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int V-1) 및 N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int V-2)
MeCN(15 ㎖) 중 rac-(3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온(330 ㎎, 1.0 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(201 ㎎, 1.5 m㏖), Pd(OAc)2(22 ㎎, 0.1 m㏖), dppp(81 ㎎, 0.2 m㏖) 및 TEA(409 ㎕, 2.9 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 90℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 키랄 SFC(Chiralpak® AS-H, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; CO2(40℃, 70 bar)에서 45% i-PrOH(2 mM NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 40 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(220 ㎎, 34%, 71.2%ee) 및 제2 용리 이성질체로서 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 31%, 83.3%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.65 (dd, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.23 (dd, 1H), 4.61 - 4.76 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 2.64 - 2.79 (m, 1H), 2.52 - 2.60 (m, 1H), 2.23 - 2.49 (m, 5H), 0.65 (d, 3H). MS ESI, m/z = 419 [M+H]+.
중간체 Int V-3의 합성: N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
tert -부틸 ((1 r ,4 r )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
0℃에서 DMF(10 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트(Int IV-8)(990 ㎎, 2.3 m㏖)의 용액에 NaH(60 wt.%)(1.1 g, 28.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 아이오도메탄(662 ㎎, 4.7 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖)로 켄칭하고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(600 ㎎, 59%)를 흑색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 438/440 [M+H]+.
tert -부틸 ((1 r ,4 r )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
MeCN(20 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실) (메틸)카르바메이트(380 ㎎, 0.9 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민 (134 ㎎, 1.0 m㏖), Pd(OAc)2(44 ㎎, 0.2 m㏖), dppp(165 ㎎, 0.4 m㏖) 및 TEA(604 ㎕, 4.3 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(430 ㎎, 95%)를 적색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 4.34 - 4.61 (m, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.79 - 4.04 (m, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.12 - 2.33 (m, 2H), 1.92 - 2.12 (m, 2H), 1.62 - 1.92 (m, 4H), 1.42 (s, 9H). MS ESI, m/z = 520 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int V-3)
rt에서 N2 분위기 하에서 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일) 시클로헥실)(메틸)카르바메이트(430 ㎎, 0.8 m㏖)를 디옥산 중 2 N HCl(12 ㎖, 24.0 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 조물질 HCl염(300 ㎎)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.26 (s, 1H), 8.97 (dd, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.43 (dd, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.48 - 4.64 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.01 - 3.22 (m, 1H), 2.54 - 2.59 (m, 3H), 2.12 - 2.29 (m, 4H), 1.85 - 2.12 (m, 2H), 1.47 - 1.73 (m, 2H). MS ESI, m/z = 420 [M+H]+.
중간체 Int V-4: 6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
tert -부틸 ((1 r ,4 r )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 DMF(50 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트(Int IV-8)(4.2 g, 9.9 m㏖)의 용액에 NaH(60 wt.%)(792 ㎎, 19.8 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 rt에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 아이오도메탄(1.2 ㎖, 19.8 m㏖)을 첨가하였다. 13시간 동안 교반한 후, 반응물을 물(150 ㎖)로 켄칭하였다. 침전물을 여과하고, 물(150 ㎖)로 세척하고, 진공에서 건조시켜 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(4.4 g, 100%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 438/440 [M+H]+.
메틸 2-((1 r ,4 r )-4-(( tert -부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(125 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실) (메틸)카르바메이트(4.3 g, 9.8 m㏖), Pd(dppf)Cl2(714 ㎎, 1.0 m㏖) 및 TEA(13.6 ㎖, 97.6 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 30~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 메틸 2-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(3.8 g, 93%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 418 [M+H]+.
2-((1 r ,4 r )-4-(( tert -부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실산
rt에서 MeOH(50 ㎖)/물(25 ㎖) 중 메틸 2-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(2.9 g, 6.9 m㏖)의 용액에 NaOH(556 ㎎, 13.9 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 30℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 4 N HCl을 사용하여 pH 약 6으로 산성화시켰다. 침전물을 여과하고, 물(200 ㎖)로 세척하고, 진공에서 건조시켜 2-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(2.7 g, 95%)을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 404 [M+H]+.
tert -부틸 ((1 r ,4 r )-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(50 ㎖) 중 2-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(2.6 g, 6.4 m㏖) 및 DIPEA(3.4 ㎖, 19.3 m㏖)의 용액에 HATU(2.9 g, 7.7 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민의 HCl염(1.4 g, 8.4 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 13시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(100 ㎖)로 희석시키고, 여과하여 조물질 고체를 얻었다. 고체를 물(100 ㎖)로 세척하고, 그 다음 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~5% MeOH로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(3.3 g, 99%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 520 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(Int V-4)
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(40 ㎖) 중의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(3.3 g, 6.4 m㏖)의 용액에 디옥산 중 4 N HC(15.9 ㎖, 63.5 m㏖)l을 첨가하고, 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(2.9 g)을 연황색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. MS ESI, m/z = 420 [M+H]+.
중간체 Int V-5: 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-히드록시- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드의 합성
0℃에서 N2 분위기 하에서 BBr3(8.0 ㎖, 8.3 m㏖)를 DCM(15 ㎖) 중 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(실시예 21, 하기 참조)(380 ㎎, 0.8 m㏖)에 5분의 기간에 걸쳐서 적가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 교반하였다. 6시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, aq. 포화 NaHCO3 용액(10 ㎖)으로 켄칭하고, 염수(50 ㎖)로 희석시켰다. 혼합물을 EtOAc(2×50㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0%→25% MeCN으로 용리), 그 다음 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 9%→10% MeOH로 용리)를 사용하여 정제시켜 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-히드록시-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(170 mg, 46%)를 밝은 갈색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 11.69 (s, 1H), 11.62 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.60 (dd, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.00 (s, 1H), 4.33 - 4.53 (m, 1H), 3.92 (s, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.63 (s, 1H), 3.52 (s, 1H), 1.83 - 2.12 (m, 6H), 1.76/1.78 (s, 3H) (회전이성질체), 1.61 - 1.74 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 460.
실시예
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5 r ,8 r )-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 1)
8-아미노-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
1-아자스피로[4.5]데칸-2,8-디온(1.0 g, 6.0 m㏖)을 MeOH 중 4 N NH3(46.0 ㎖, 0.18 ㏖)와 혼합하고, rt에서 교반하였다. 1시간 후 생성된 용액을 -50℃에서 THF(20 ㎖) 중 NaBH4(256 ㎎, 6.8 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, rt까지 가온시켰다. 반응물을 물(10 ㎖)로 켄칭하고, 유기 용매를 진공에서 제거하였다. 그 다음, aq. 4 M NaOH 용액(40 ㎖) 및 염화나트륨(10 g)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 DCM(4×70 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하여 조물질 8-아미노-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(0.9 g)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다.
(5 r ,8 r )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
i-PrOH(25 ㎖) 중 조물질 8-아미노-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(600 mg)에 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(1.1 g, 2.2 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 교반하였다. 4시간 후, 트리-n-부틸포스핀(1.6 ㎖, 6.5 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 80℃에서 교반하였다. 그 다음 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 여과하였다. 수집한 고체를 헵탄(3×10 ㎖)으로 세척하고, 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제시키고, 250 ㎖ DCM/MeOH(1:1)로 세척하고, DCM/4 N NH3-MeOH 용액(1/1)으로 용리시켰다. 그 다음 단리된 고체를 i-PrOH를 사용하여 재결정화시켜 바람직하지 않은 (5s,8s)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온을 제거하였다. 여과물을 실리카겔 크로마토그래피(헵탄 중 50~100% EtOAc, 그 다음 EtOAc, 그 후 DCM 중 0~3% NH3-MeOH로 용리)로 추가로 정제시켜 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(320 ㎎, 39%)을 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 378/380.
(5 r ,8 r )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
0℃에서 DMF(5 ㎖)/THF(5 ㎖) 중 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(310 ㎎, 0.7 m㏖)의 교반 용액에 NaH(60 wt.%)(93 ㎎, 2.1 m㏖)를 첨가하였다. 20분 후, 메틸 아이오다이드(130 ㎕, 2.1 m㏖)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 밤새 교반하였다. 그 다음 반응 혼합물을 얼음 물(250 ㎖)로 켄칭하고, DCM(4×25 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기상을 진공에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM(300 ㎖), EtOAc(2 L), 그 다음 DCM(150 ㎖) 중 2% NH3-MeOH로 용리)를 사용하여 정제시켜 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(225 ㎎, 78%)을 베이지색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 392/394.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5 r ,8 r )-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 1)
메틸디페닐실란카르복실산(193 ㎎, 0.8 m㏖) 및 KF(46 ㎎, 0.8 m㏖)를 건조되고 N2-플러싱된 COware 기체 반응기의 챔버 A에 첨가하였다. 탈기된 무수 MeCN(2 ㎖) 중 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(116 ㎎, 0.3 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(121 ㎎, 0.9 m㏖), dppp(41 ㎎, 0.1 m㏖), Pd(OAc)2(27 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(223 ㎕, 1.6 m㏖)를 챔버 B에 첨가하였다. 그 다음, DMSO(350 ㎕)를 챔버 A에 첨가하고, 챔버 B를 85℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시켰다. 챔버 B 내의 반응물을 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하고, 생성된 잔류물을 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제시키고, DCM/MeOH(1/1; 200 ㎖)로 세척하고, MeOH(200 ㎖) 중 4 N NH3로 용리시켰다. 생성된 암갈색 고체를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc(2 L) 그 다음 DCM 중 0~3% NH3-MeOH로 용리)를 사용하여 추가로 정제시켜 주황색-황색 고체를 제공하였다. 주황색-황색 고체를 EtOAc(20 ㎖)로 분쇄하여 밝은 황색 고체를 제공하였고, 이것을 i-PrOH(3 ㎖)에서 밤새 슬러리화하였다. 슬러리 용액을 여과하고, 수집한 침전물을 i-PrOH(4×500 ㎕) 및 펜탄(3×1 ㎖)으로 세척하여 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(93 ㎎, 74%)를 밝은 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.65 (dd, 1H), 8.64 (d, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (dd, 1H), 4.49 - 4.61 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.28 (t, 2H), 2.07 - 2.18 (m, 4H), 1.94 - 2.03 (m, 4H), 1.53 - 1.59 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 474.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5 s ,8 s )-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 2)
1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-1)(1.4 g, 4.2 m㏖)에 DMF(15 ㎖), N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(1.3 g, 4.2 m㏖) 및 KOH(466 ㎎, 8.3 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 100℃에서 교반하였다. 12시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0%→100% MeCN으로 용리), 그 다음 키랄 HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB, 2×25 ㎜, 5 μm; 이동상 A: MTBE(MeOH 중 2 ㎜ NH3); 이동상 B: i-PrOH; 구배: 등용매 50% B, 21.5분 동안; 유량: 20 ㎖/분)를 사용하여 직접 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(28.0 ㎎, 1%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.75 (d, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.21 - 7.28 (m, 2H), 4.71 - 4.79 (m, 1H), 4.23 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.59 - 2.69 (m, 2H), 2.44 (t, 2H), 2.07 - 2.33 (m, 6H), 1.45 - 1.55 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 474.
2-((1 s ,4 s )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 3)
(1 r ,4 r )-4-히드록시- N , N -디메틸시클로헥산-1-카르복스아미드
rt에서 N2 분위기 하에서 HATU(9.5 g, 25.0 m㏖)를 DCM(30 ㎖) 중 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥산-1-카르복실산(3.0 g, 20.8 m㏖), 디메틸아민 히드로클로라이드(5.1 g, 62.5 m㏖) 및 DIPEA(14.5 ㎖, 83.0 m㏖)에 3시간의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, DCM(3×20 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물에 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0%→50% EtOAc로 용리)를 수행하여 조물질 (1r,4r)-4-히드록시-N,N-디메틸시클로헥산-1-카르복스아미드(2.1 g)를 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 172.
(1 r ,4 r )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 TsCl(8.4 g, 44.1 m㏖)을 DCM(20 ㎖) 중 TEA(7.3 ㎖, 52.4 m㏖), DMAP(214 ㎎, 1.8 m㏖) 및 조물질 (1r,4r)-4-히드록시-N,N-디메틸시클로헥산-1-카르복스아미드(2 g)에 적가하고, 생성된 용액을 rt에서 교반하였다. 11시간 후, 반응 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, DCM(3×10 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물에 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10%→20% EtOAc로 용리)를 수행하여 조물질 (1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.1 g)를 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 326.
2-((1 s ,4 s )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 3)
rt에서 N2 분위기 하에서 KOH(218 ㎎, 3.9 m㏖)를 DMF(6 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(300 ㎎, 1.0 m㏖) 및 조물질 (1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(950 ㎎)에 첨가하고, 생성된 용액을 100℃에서 교반하였다. 12시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 직접 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 10%→60% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XSelect CSH Prep C18 OBD 칼럼, 5 ㎛, 19 ㎜×150 ㎜; 이동상 A: 물(0.1% FA); 이동상 B: MeCN; 구배: 7분 동안 15%→27% B, 그 다음 2분 동안 27% B, 유량: 60 ㎖/분)를 수행하여 2-((1s,4s)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(40 ㎎, 9%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (t, 2H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.56 - 4.65 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 2.85 - 2.97 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 1.94 - 2.04 (m, 3H), 1.59 - 1.81(m, 6H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 462.
2-((1 r ,4 r )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 4)
(1 s ,4 s )-4-히드록시- N , N -디메틸시클로헥산카르복스아미드
rt에서 N2 분위기 하에서 HATU(9.5 g, 24.9 m㏖)를 DCM(30 ㎖) 중 DIPEA(14.5 ㎖, 83.2 m㏖), 디메틸아민×HCl(5.1 g, 62.4 m㏖) 및 (1s,4s)-4-히드록시시클로헥산카르복실산(3.0 g, 20.8 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, DCM(2×20 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0→80% EtOAc로 용리)로 정제시켜 조물질 (1s,4s)-4-히드록시-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드(3.5 g)를 황색 오일로서 제공하였다.
(1 s ,4 s )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
rt에서 N2 분위기 하에서 TEA(7.3 ㎖, 52.6 m㏖)를 DCM(30 ㎖) 중 DMAP(214 ㎎, 1.8 m㏖), (1s,4s)-4-히드록시-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드(3.0 g, 17.0 m㏖) 및 TsCl(6.7 g, 35 m㏖)에 3시간의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, DCM(3 x 25 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0→20% EtOAc로 용리)로 정제시켜 (1s,4s)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.1 g, 37%)를 황색 오일로서 제공하였다. m/z (ESI+) [M+H]+ = 326.
2-((1 r ,4 r )-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 4)
rt에서 N2 분위기 하에서 KOH(80 ㎎, 1.4 m㏖)를 DMF(10 ㎖) 중 (1s,4s)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(348 ㎎, 1.1 m㏖) 및 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(110 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 100℃에서 12시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시킨 후, 혼합물을 물(10 ㎖)에 부었다. 수성상을 EtOAc(3×20 ㎖)로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0%→30% EtOAc로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(Xselect CSH 플루오로 페닐 OBD 칼럼, 5 ㎛ 실리카, 30×150 ㎜, 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 20% B→30% B)로 정제시켜 2-((1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(10 ㎎, 17%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.61 - 8.67 (m, 1H), 8.59 (s, 2H), 8.14 - 8.18 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.18 - 7.27 (m, 2H), 4.48 - 4.54 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.70 - 2.80 (m, 1H), 2.16 - 2.20 (m, 2H), 1.99 - 2.05 (m, 2H), 1.84 - 1.88 (m, 2H), 1.58 - 1.65 (m, 2H). m/z (ESI+) [M+H]+ = 462.
2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 5) 및 이성질체 2(실시예 6)
Cs2CO3(793 ㎎, 2.4 m㏖)를 DMF(15 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(300 ㎎, 1.0 m㏖) 및 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-3)(631 ㎎, 2.0 m㏖)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 85℃에서 N2 분위기 하에서 교반하였다. 5시간 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 직접 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0%→100% MeCN으로 용리), 그 다음 2회의 분취용 HPLC로 정제하여((제1 분취용 HPLC: XBridge Prep OBD C18, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 7분 동안 28% B→48% B; 유량: 60 ㎖/분)(제2 분취용 HPLC: Chiralpak ID-2, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 이동상 A: MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH); 이동상 B: MeOH; 구배: 14분 동안 등용매 50% B; 유량: 16 ㎖/분)) 2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(25 ㎎, 6%, 100%ee) 및 2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(23 ㎎, 5%, 99.5%ee)을, 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.33 - 4.52 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 1.71 - 2.05 (m, 10H), 1.43 - 1.61 (m, 2H), 1.26 (s, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 461.
2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 7) 및 2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 8)
(1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실 메탄설포네이트
0℃에서 MsCl(1.9 ㎖, 23.7 m㏖)을 DCM(200 ㎖) 중 (1s,4s)-시클로헥산-1,4-디올(2.5 g, 21.5 m㏖) 및 TEA(6.0 ㎖, 43.0 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(20 ㎖)에 붓고, 수성층을 DCM(1×20 ㎖)으로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(PE: EtOAc 50%→100%로 용리)로 정제시켜 조물질 (1s,4s)-4-히드록시시클로헥실 메탄설포네이트(2.9 g)를 무색 고체로서 제공하였다.
2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 7) 및 2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 8)
Cs2CO3(1.8 g, 5.7 m㏖)를 DMF(20 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(350 ㎎, 1.1 m㏖) 및 조물질 (1s,4s)-4-히드록시시클로헥실 메탄설포네이트(1.3 g)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0→100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 2-(4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 트랜스- 및 시스-이성질체의 혼합물을 연황색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 SFC(Chiralpak IH, 2.0×25 ㎝, 5 ㎛; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH(8 m㏖/L NH3-MeOH); 유량: 40 ㎖/분; 구배: 40% B)로 분리시켜 제1 용리 2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(4 ㎎, 1%) 및 제2 용리 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(12 ㎎, 3%)를 둘 다 밝은 황색 고체로서 제공하였다. (1 s ,4 s )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.06 (s, 1H), 8.49 - 8.70 (m, 3H), 8.13 - 8.20 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.17 - 7.31 (m, 2H), 4.39 - 4.62 (m, 2H), 4.13 (s, 3H), 3.85 - 3.92 (m, 1H), 2.21 - 2.38 (m, 2H), 1.56 - 1.98 (m, 6H). m/z (ESI+) [M+H]+ = 407. (1 r ,4 r )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.61 - 8.67 (m, 1H), 8.55 - 8.60 (m, 2H), 8.12 - 8.19 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.18 - 7.29 (m, 2H), 4.70 - 4.78 (m, 1H), 4.41 - 4.53 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.72 - 3.47 (m, 1H), 1.88 - 2.18 (m, 6H), 1.39-1.49 (m, 2H). m/z (ESI+) [M+H]+ = 407.
rel -2-((1 S ,3 R )-3-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 9) 및 이성질체 2 (실시예 10)
N2 분위기 하에서 DMF(10 ㎖) 중 rac-(1R,3R)-3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-7) (351 ㎎, 1.3 m㏖) 및 Cs2CO3(423 ㎎, 1.3 m㏖)에 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(400 ㎎, 1.3 m㏖)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 교반하였다. 5시간 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 직접 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0%→100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 7분 동안 16% B→36% B; 유량: 60 ㎖/분) 및 키랄 분취용 HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB, 4.6×100 ㎜, 3 ㎛; 이동상 A: (MeOH 중 MTBE +0.5% 2 N NH3), 이동상 B: i-PrOH; 구배: 25분 동안 등용매 30% B; 유량: 18 ㎖/분)를 수행하여 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(16 ㎎, 3%, 99%ee) 및 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(17 ㎎, 3%, 98.7%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.86 (d, 1H), 4.46 - 4.57 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.56 - 3.67 (m, 1H), 2.27 - 2.37 (m, 1H), 2.01 - 2.09 (m, 1H), 1.67 - 1.95 (m, 4H), 1.39 - 1.48 (m, 1H), 1.12 - 1.26 (m, 1H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 407. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.86 (d, 1H), 4.46 - 4.57 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.55 - 3.67 (m, 1H), 2.25 - 2.37 (m, 1H), 2.02 - 2.12 (m, 1H), 1.65 - 1.95 (m, 4H), 1.32 - 1.53 (m, 1H), 1.12 - 1.26 (m, 1H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 407.
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 11) 및 이성질체 2(실시예 12)
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(8 ㎖) 중 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)(450 ㎎, 1.5 m㏖) 및 1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-1)(985 ㎎, 2.9 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(1.4 g, 4.4 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~40% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® Shield RP18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 9분 동안 물(0.1% FA) 중 22 ~ 32% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 키랄 분취용 HPLC(YMC CHIRAL ART Cellulose-SB 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 9분 동안 MeOH 중 50% 헥산/DCM(75/25, 0.5% 2M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 분리시켜 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(55 ㎎, 8%, 100%ee) 및 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(32 ㎎, 5%, 99.8%ee)를 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 3:7 혼합물) δ 10.32 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (br. s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.46/8.45 (s, 1H) (회전이성질체), 8.16 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.70 - 4.80 (m, 1H), 4.15 (s, 3H), 2.72 (s, 3H), 2.29 (t, 2H), 1.92 - 2.21 (m, 8H), 1.51 - 1.61 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 474. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:7 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.49/8.48 (s, 1H) (회전이성질체), 7.25 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.48 - 4.60 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.28 (t, 2H), 2.08 - 2.18 (m, 4H), 1.93 - 2.04 (m, 4H), 1.52 - 1.60 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 474.
rel -2-((1 S ,3 R )-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 13) 및 이성질체 2 (실시예 14)
rt에서 N2 분위기 하에서 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)(400 ㎎, 1.3 m㏖)를 DMF(15 ㎖) 중 Cs2CO3(1.3 g, 3.9 m㏖) 및 rac-(1R,3R)-3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-7)(702 ㎎, 2.6 m㏖)의 슬러리에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 농축시키고, 먼저 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05%NH4OH) 중 0→100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18, 30×150 ㎜, 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 21% B→30% B)로 직접 정제시켜 목적하는 위치이성질체 rac-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB 칼럼, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 이동상 A: MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH), 이동상 B: i-PrOH; 유량: 20 ㎖/분; 14분 동안 등용매 50% B)로 분리시켜 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(26 ㎎, 5%, 99%ee) 및 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(26 ㎎, 5%, 99%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.05 - 9.12 (m, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 - 8.57 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.00 - 7.10 (m, 1H), 4.82 - 4.86 (m, 1H), 4.45 - 4.55 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.55 - 3.67 (m, 1H), 2.25 - 2.34 (m, 1H), 2.00 - 2.11 (m, 1H), 1.68 - 1.95 (m, 4H), 1.40 - 1.51 (m, 1H), 1.13 - 1.26 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 407. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.05 - 9.10 (m, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 - 8.56 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.01 - 7.10 (m, 1H), 4.45 - 4.55 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.56 - 3.67 (m, 1H), 2.28 - 2.32 (m, 1H), 2.00 - 2.10 (m, 1H), 1.87 - 1.92 (m, 1H), 1.67 - 1.87 (m, 3H), 1.36 - 1.50 (m, 1H), 1.12 - 1.26 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 407.
6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 15) 및 이성질체 2(실시예 16)
rt에서 DMF(15 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(330 ㎎, 1.0 m㏖) 및 2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일 4-메틸벤젠설포네이트(Int III-3)(480 ㎎, 1.5 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(643 ㎎, 2.0 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH C18 OBD, 5 ㎛, 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 35~55% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 키랄-HPLC(Chiralpak® IE 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; MeOH 중 50% 헥산/DCM(75/25, 10 mM NH3-MeOH)을 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 분리시켜 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(37 ㎎, 9%, 100%ee) 및 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(38 ㎎, 9%, 95.8%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.46 - 8.63 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.34 - 4.49 (m, 1H), 4.15 - 4.26 (m, 1H), 1.67 - 2.08 (m, 10H), 1.37 - 1.67 (m, 2H), 1.27 (s, 3H), 1.03 - 1.12 (m, 2H). 0.92 - 1.03 (m, 2H). MS ESI, m/z = 487 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 R ,3 S )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 17) 및 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 18)
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 S )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 19) 및 이성질체 2(실시예 20)
3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 TsCl(17.2 g, 90.4 m㏖)을 DCM(100 ㎖) 중 시클로헥산-1,3-디올(10.0 g, 86.1 m㏖), DMAP(1.1 g, 8.6 m㏖) 및 TEA(36.0 ㎖, 258.3 m㏖)의 용액에 5분의 기간에 걸쳐 서서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 염수(100 ㎖)로 켄칭하고, DCM(100 ㎖×2)으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 25~30% EtOAc로 용리)로 정제시켜 3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(8.0 g, 34%)를 황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 271 [M+H]+.
rac -6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 및 rac -6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 S )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
rt에서 DMF(20 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(500 ㎎, 1.5 m㏖) 및 3-히드록시시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(1.2 g, 4.5 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(1.5 g, 4.5 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH OBD C18, 5 ㎛ 30 ㎜×150 ㎜; 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 24-34% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 직접 정제시켜 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(31 ㎎, 5%) 및 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(110 ㎎, 17%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다.
6-시클로프로폭시-2-((1 R ,3 S )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 17) 및 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 18)
rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(31 ㎎, 0.1 m㏖)를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® ID, 5 ㎛ 30×250 ㎜; 30분 동안 EtOH 중 80% 헥산/DCM(75/25, 10 mM NH3-MeOH)을 사용한 등용매; 45 ㎖/분)로 분리시켜 6-시클로프로폭시-2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(6 ㎎, 20%, 99.9%ee) 및 6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(10 ㎎, 33%, 99.5%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. (1 R ,3 S) -이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.55 (dd, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.45 - 4.62 (m, 1H), 4.18 - 4.28 (m, 1H), 3.53 - 3.69 (m, 1H), 2.24 - 2.29 (m, 1H), 1.98 - 2.12 (m, 1H), 1.69 - 1.96 (m, 4H), 1.31 - 1.53 (m, 1H), 1.10 - 1.31 (m, 1H), 0.93 - 1.10 (m, 4H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+. (1 S ,3 R) -이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.49 - 8.58 (m, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.43 - 4.60 (m, 1H), 4.16 - 4.28 (m, 1H), 3.54 - 3.68 (m, 1H), 2.24 - 2.38 (m, 1H), 1.98 - 2.14 (m, 1H), 1.64 - 1.98 (m, 4H), 1.30 - 1.54 (m, 1H), 1.12 - 1.30 (m, 1H), 0.89 - 1.12 (m, 4H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+.
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 S )-3-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 19) 및 이성질체 2(실시예 20)
rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(110 ㎎, 0.3 m㏖)를 분취용 키랄 HPLC(YMC CHIRAL ART Cellulose-SB 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 17분 이내에 EtOH 중 90% 헥산/DCM(75/25, 10 mM NH3-MeOH)을 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 분리시켜 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(37 ㎎, 34%, 100%ee) 및 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(22 ㎎, 20%, 98%ee) - 이성질체 2 둘 다를 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.55 (dd, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.74 - 4.88 (m, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.17 - 4.27 (m, 1H), 4.10 - 4.17 (m, 1H), 2.00 - 2.16 (m, 3H), 1.75 - 2.00 (m, 2H), 1.53 - 1.75 (m, 2H), 1.42 - 1.53 (m, 1H), 0.94 - 1.12 (m, 4H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.55 (dd, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.70 - 4.88 (m, 1H), 4.16 - 4.26 (m, 1H), 4.08 - 4.16 (m, 1H), 1.99 - 2.17 (m, 3H), 1.76 - 1.99 (m, 2H), 1.56 - 1.76 (m, 2H), 1.38 - 1.56 (m, 1H), 0.93 - 1.12 (m, 4H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+.
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 21)
tert -부틸 7-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
rt에서 DMF(20 ㎖) 중 조물질 tert-부틸 7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-2)(1.5 g, 4.5 m㏖) 및 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(700 ㎎, 2.3 m㏖)에 KOH(255 ㎎, 4.5 m㏖)를 2분의 기간에 걸쳐서 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(150 ㎖)에 붓고, EtOAc(3×100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하여 황색 고체를 제공하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0→80% MeCN으로 용리)를 사용하여 정제시켜 조물질 tert-부틸 7-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(280 ㎎)를 수득하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(4 ㎖) 중 조물질 tert-부틸 7-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(280 ㎎)에 TFA(1.0 ㎖, 13.0 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 용매를 진공에서 제거하고, 생성된 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(5% NH4OH) 중 0→80% MeCN으로 용리)를 사용하여 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(60 mg, 26%)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 432.
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 21)
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(1 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(350 ㎎, 0.8 m㏖) 및 TEA(452 ㎕, 3.2 m㏖)에 아세트산 무수물(0.2 ㎖, 1.6 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 교반한 후, 용매를 진공에서 제거하여 황색 고체를 제공하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 60%→70% MeCN으로 용리)를 사용하여 정제시켜 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(400 ㎎, 99%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 8.69 (s, 1H), 8.55 - 8.58 (m, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.52 - 4.55 (m, 1H), 4.21 (s, 3H), 4.06 (s, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.69 (s, 1H), 1.95 - 2.28 (m, 6H), 1.89/1.91 (s, 3H) (회전이성질체), 1.74 - 1.87 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 474.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 22)
(1 r ,4 r )-4-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
rt에서 N2 분위기 하에서 TsCl(5.3 g, 27.8 m㏖)을 DCM(30 ㎖) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)카르바메이트(5.0 g, 23.2 m㏖) 및 TEA(6.5 ㎖, 46.6 m㏖)에 5분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 물(50 ㎖)에 붓고, DCM(2×75 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 적색 오일을 DCM(50 ㎖)에 용해시키고, 실리카 패드로 여과하였다. 실리카 패드를 DCM(500 ㎖)으로 세척하고, 용매를 진공에서 제거하여 조물질 (1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(4.5 g)를 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다
(1 r ,4 r )-4-(( tert -부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트
rt에서 DMF(10 ㎖) 중의 조물질 (1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(4.5 g) 및 NaH(60 wt.%)(731 ㎎, 18.3 m㏖)에 아이오도메탄(6.9 g, 48.6 m㏖)을 적가하고, 생성된 혼합물을 60℃에서 교반하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(20 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(3×25 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 30%→60% MeCN으로 용리)를 사용하여 정제시켜 조물질 (1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.4 g)를 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다.
tert -부틸 ((1 s ,4 s )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
DMF(10 ㎖) 중 조물질 (1r,4r)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(2.4 g) 및 KOH(182 ㎎, 3.2 m㏖)에 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-1)(500 ㎎, 1.6 m㏖)를 첨가하고, 생성된 용액을 100℃에서 교반하였다. 12시간 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 20%→100% MeCN으로 용리)를 사용하여 직접 정제시켜 조물질 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(0.6 g)를 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 520.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 s ,4 s )-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
1,4-디옥산(6 ㎖) 중 조물질 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(0.6 g)에 aq. HCl 용액(12 N, 1 ㎖, 12.0 m㏖)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2시간 후, 용매를 진공에서 제거하여 조물질 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl(0.5 g)염을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 420.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 22)
rt에서 조물질 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(0.5 g)에 DCM(1 ㎖) 중 아세트산 무수물(0.2 ㎖, 1.7 m㏖) 및 TEA(0.6 ㎖, 4.4 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 rt에서 교반하였다. 5분 후, 추가 아세트산 무수물(0.2 ㎖, 1.7 m㏖)을 첨가하고, 교반을 1시간 동안 계속하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18, 30Х250, 5 ㎛; 이동상 A: 물(0.05%NH4OH); 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 27% B→47% B)를 사용하여 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(21.5 ㎎, 4%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:2 혼합물) δ 11.06 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.40 - 4.49 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.75 - 3.86 (m, 1H), 2.68 (s, 2H), 2.55 (s, 1H), 1.99 - 2.15 (m, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.96 (s, 2H), 1.63 - 1.88 (m, 3H), 1.52 - 1.63 (m, 1H), 1.38 - 1.47 (m, 1H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 462.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 23)
rt에서 조물질 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-3)(390 ㎎)을 DCM(5 ㎖) 중 TEA(477 ㎕, 3.4 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 아세트산 무수물(121 ㎕, 1.3 m㏖)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, 반응물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 농축시켜 조 생성물을 황색 오일로서 제공하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18, 30×250, 5 ㎛; 이동상 A: 물(0.05% NH4OH), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 27% B→47% B)로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(62 ㎎, 16%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) (회전이성질체의 2:3 혼합물) δ 8.69 - 8.73 (m, 1H), 8.55 - 8.61 (m, 1H), 8.45 - 8.49 (m, 1H), 8.13 (m, 1H), 7.99 - 8.06 (m,1H), 7.21 - 7.26 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.45 - 4.62/3.87 - 3.97 (m, 2H) (회전이성질체), 4.22/4.21 (s, 3H) (회전이성질체), 2.99/2.88 (s,3H) (회전이성질체), 2.30 - 2.40 (m, 2H), 2.06 - 2.25 (m, 5H), 1.81 - 2.01 (m, 4H).
6-메톡시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 24) 및 6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 25)
tert -부틸 4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실(메틸)카르바메이트
N2 분위기 하에서 Cs2CO3(3.2 g, 9.7 m㏖)를 DMF(40 ㎖) 중의 4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5)(Int III-10)(2.5 g, 6.5 m㏖) 및 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)(1.0 g, 3.2 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시키고, 플래시 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0→70% MeCN으로 용리)로 먼저 직접 정제시키고, 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 40% B→60% B)로 정제시켜 tert-부틸 4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실(메틸)카르바메이트(270 ㎎, 16%, 시스/트랜스 비 5:1)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 520.
6-메톡시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
TFA(2 ㎖, 3.0 m㏖)를 DCM(4 ㎖) 중의 tert-부틸 (4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실(메틸)카르바메이트(150 ㎎, 0.3 m㏖; 시스/트랜스 비 5:1)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, aq. 포화 NaHCO3로 염기성화시켰다. 유기층을 염수(3×50 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에서 증발시켜 6-메톡시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(120 ㎎, 99%; 시스/트랜스 비 5:1)을 제공하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 420.
6-메톡시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 24) 및 6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 25)
아세트산 무수물(58 ㎎, 0.6 m㏖)을 DCM(3 ㎖) 중 TEA(120 ㎕, 1.1 m㏖) 및 6-메톡시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(120 ㎎, 0.3 m㏖)(시스/트랜스 비 5:1)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 먼저 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0→70% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 m㏖/L NH4HCO3 + 0.1% NH4OH), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 16% B→36% B)로 정제시켜 6-메톡시-2-(4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(시스/트랜스 비 5:1)를 주황색 고체로서 제공하였다. 두 이성질체를 키랄 분취용 HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB 칼럼, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 용리 구배 EtOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH); 유량: 20 ㎖/분; 13분에 걸쳐서)로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(90 ㎎, 68%, 100%ee) 및 제2 용리 이성질체로서 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(20 ㎎, 15%, 100%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. (1 s ,4 s )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.37 (s, 1H), 9.05 - 9.12 (m, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.53 - 8.57 (m, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.00 - 7.11 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.39 - 4.54/3.74 - 3.88 (m, 1H) (회전이성질체), 4.08 (s, 3H), 2.54 - 2.72 (m, 5H), 1.92 - 2.20 (m, 5H), 1.52 - 1.90 (m, 3H), 1.38 - 1.50 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 462. (1 r ,4 r )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.01 - 9.11 (m, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.52 - 8.63 (m, 2H), 8.46 - 8.49 (m, 1H), 7.19 - 7.24 (m, 1H), 6.99 - 7.09 (m, 1H), 4.36 - 4.59/3.70 - 3.90 (m, 3H) (회전이성질체), 4.07 (s, 3H), 2.90 (s, 2H), 2.70 (s, 1H), 2.31 - 1.93 (m, 7H), 1.59 - 1.92 (m, 4H). m/z (ES+), [M+H]+ = 462.
2-((1 r ,4 r )-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 26) 및 2-((1 s ,4 s )-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 27)
tert -부틸 (4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(15 ㎖) 중의 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)(500 ㎎, 1.6 m㏖) 및 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5) (Int III-9)(1.5 g, 4.1 m㏖)의 현탁액에 Cs2CO3(1.6 g, 4.9 m㏖)를 2분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(1% NH4OH) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 tert-부틸 (4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트(시스/트랜스 비 7:1)(280 ㎎, 34%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 506 [M+H]+.
2-(4-아미노시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(20 ㎖) 중 tert-부틸 (4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)카르바메이트(시스/트랜스 비 7:1))(280 ㎎, 0.6 m㏖)의 용액에 디옥산 중 4 N HCl(1.4 ㎖, 5.6 m㏖)을 2분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 반응 혼합물을 동안 2시간 동안 교반하고, 그 다음 그것을 감압 하에서 농축시켜 조물질 2-(4-아미노시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(시스/트랜스 비 7:1))(270 ㎎, 약 90 wt.%)의 HCl염을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 406 [M+H]+.
2-((1 r ,4 r )-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 26) 및 2-((1 s ,4 s )-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 27)
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(4 ㎖) 중의 조물질 2-(4-아미노시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(시스/트랜스 비 7:1)(90 wt.%)(270 ㎎) 및 TEA(250 ㎕, 1.8 m㏖)의 HCl염의 용액에 4-브로모부타노일 클로라이드(227 ㎎, 1.2 m㏖)를 2분의 기간에 걸쳐서 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~90% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® Shield RP18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 8분 동안 물(0.05% NH4OH) 중 26 ~ 34% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1r,4r)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(8 ㎎, 3%)(그 다음 이 물질을 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 및 0.1% NH4OH) 중 35~50% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 다시 정제시킴), 및 2-((1s,4s)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(52 ㎎, 20%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. (1 r ,4 r )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 - 8.59 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.42 - 4.56 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.60 - 3.74 (m, 1H), 2.10 - 2.23 (m, 2H), 1.89 - 2.06 (m, 4H), 1.33 - 1.61 (m, 3H), 0.58 - 0.74 (m, 4H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+. (1 s ,4 s )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.46 - 4.60 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.87 - 4.00 (m, 1H), 2.25 - 2.39 (m, 2H), 1.89 - 2.10 (m, 2H), 1.58 - 1.87 (m, 5H), 0.56 - 0.76 (m, 4H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+.
rel- 2-((6 R ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 28) 및 이성질체 2(실시예 29)
rel- 2-((6 S ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 30) 및 이성질체 2(실시예 31)
rac - tert -부틸 (6 R ,7 R )-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
rt에서 DMF(10 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(500 ㎎, 1.5 m㏖) 및 rac-tert-부틸 (6R,7S)-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-5)(748 ㎎, 2.2 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(1.5 g, 4.5 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 80~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 조물질 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(400 ㎎)를 제공하였다. MS ESI, m/z = 572 [M+H]+.
rac -6-시클로프로폭시-2-((6 R ,7 R )-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(8 ㎖) 중 조물질 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(400 ㎎)의 용액에 TFA(2.0 ㎖, 26.0 m㏖)를 적가하고, 생성된 용액을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 조물질 rac-6-시클로프로폭시-2-((6R,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(350 ㎎)의 TFA염을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 472 [M+H]+.
rel- 2-((6 R ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 28) 및 이성질체 2(실시예 29)
0℃에서 N2 분위기 하에서 DCM(5 ㎖) 중 조물질 rac-6-시클로프로폭시-2-((6R,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(350 ㎎) 및 TEA(250 ㎕, 1.8 m㏖)의 용액에 아세틸 클로라이드(110 ㎎, 1.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(Waters SunFire® C18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(0.1% FA) 중 35~45% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분) 그 다음 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IA 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 27분 동안 EtOH 중 25% MTBE(2 mM NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 15 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(15 ㎎, 5%, 100%ee) 및 rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(15 ㎎, 5%, 99.7%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.30 (s, 1H), 9.07 (d, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.54/7.52 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.16 - 4.24 (m, 1H), 4.05 - 4.16 (m, 1H), 3.97/3.80 (s, 2H) (회전이성질체), 3.68/3.53 (s, 2H) (회전이성질체), 2.06 - 2.17 (m, 1H), 1.88 - 2.06 (m, 4H), 1.80/1.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.60 - 1.72 (m, 1H), 1.42 (t, 1H), 1.03 - 1.11 (m, 2H), 0.93 - 1.03 (m, 2H), 0.59 (br. d, 3H). MS ESI, m/z = 514 [M+H]+.
rac - tert -부틸 (6 S ,7 R )-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
N2 분위기 하에서 rt에서 DMF(6 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(600 ㎎, 1.8 m㏖) 및 rac-tert-부틸 (6S,7S)-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-6)(1.1 g, 3.2 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(1.8 g, 5.4 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 95℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피((0.05% FA) 중 0~100% MeOH로 용리)로 직접 정제시켜 조물질 rac-tert-부틸 (6S,7R)-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(900 ㎎)를 황색 고체로서 제공하였고, 이것은 약 30%의 N1-이성질체를 함유하였다. MS ESI, m/z = 572 [M+H]+.
rac -6-시클로프로폭시-2-((6 S ,7 R )-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(5 ㎖) 중 조물질 rac-tert-부틸 (6S,7R)-7-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(900 ㎎)(30% N1-이성질체 함유)의 용액에 TFA(243 ㎖, 31.5 m㏖)를 N2 분위기 하에서 적가하고, 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 조물질 rac-6-시클로프로폭시-2-((6S,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(710 ㎎)을 황색 고체로서 제공하였고, 이것은 약간의 N1-이성질체를 함유한다. MS ESI, m/z = 472 [M+H]+.
rel- 2-((6 S ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 30) 및 이성질체 2(실시예 31)
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(5 ㎖) 중 조물질 rac-6-시클로프로폭시-2-((6S,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(700 ㎎) 및 TEA(833 ㎕, 6.0 m㏖)의 용액에 아세틸 클로라이드(188 ㎎, 2.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% TFA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(100 ㎎)를 제공하였고, 이것을 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 30~50% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시키고, 그 다음 분취용 키랄 HPLC(YMC CHIRAL ART Cellulose-SB 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; EtOH 중 50% 헥산/DCM(75/25, 10 mM NH3-MeOH)을 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 분리시켜 rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(30 ㎎, 4%, 99.5%ee) 및 rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(30 ㎎, 4%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.50 - 8.59 (m, 3H), 7.53 (d, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.68 (br. s, 1H), 4.24 (br. s, 1H), 3.82 - 3.93 (m, 2H), 3.56 - 3.67 (m, 2H), 2.30 - 2.42 (m, 1H), 1.90 - 2.30 (m, 4H), 1.69 - 1.83 (m, 5H), 1.03 - 1.12 (m, 2H), 0.92 - 1.03 (m, 2H), 0.52 - 0.67 (m, 3H). MS ESI, m/z = 514 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 32) 및 6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 33)
tert -부틸 (4-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
DMF(30 ㎖) 중 4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)시클로헥실 4-메틸벤젠설포네이트(시스/트랜스 비 1:5)(Int III-10)(2.3 g, 6.0 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(1.0 g, 3.0 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(2.9 g, 9.0 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH OBD C18 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 및 0.1% NH4OH) 중 47 ~ 67% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 tert-부틸 (4-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸) 카르바메이트(시스/트랜스 비 5:1)(180 ㎎, 11%)를 주황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 546 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(6 ㎖) 중 tert-부틸 (4-(6-시클로프로폭시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(시스/트랜스 비 5:1)(150 ㎎, 0.3 m㏖)의 용액에 TFA(3.0 ㎖, 38.9 m㏖)를 적가하고, 생성된 용액을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 조물질 6-시클로프로폭시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(시스/트랜스 비 5:1)(130 ㎎, 94 wt.%)을 제공하였다. 조 생성물을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 446 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 32) 및 6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 33)
rt에서 DCM(5 ㎖) 중 조물질 6-시클로프로폭시-2-(4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(시스/트랜스 비 5:1)(120 ㎎, 94 wt.%) 및 TEA(150 ㎕, 1.1 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(55 ㎎, 0.5 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-(4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 주황색 고체로서 제공하였다. 고체를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® ID-2, 5 ㎛ 20×250 ㎜; MeOH 중 70% 헥산/DCM(3/1, 0.5% 2 N NH3-MeOH 용액)을 사용한 등용매; 유량: 20 ㎖/분)로 분리시켜 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(90 ㎎, 63%, 99.9%ee) 및 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(20 ㎎, 14%, 99.0%ee)를 제공하였다. (1 s ,4 s )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.34 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.50 - 8.65 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.63 - 4.78 (m, 1H), 4.38 - 4.54 / 3.72 - 3.90 (m, 1H) (회전이성질체), 4.17 - 4.30 (m, 1H), 2.54 - 2.77 (m, 2H), 2.55 / 2.69 (s, 3H) (회전이성질체), 1.91 - 2.22 (m, 2H), 1.97 / 2.08 (s, 3H) (회전이성질체), 1.38 - 1.89 (m, 4H), 1.04 - 1.13 (m, 2H), 0.94 - 1.04 (m, 2H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+. (1 r ,4 r )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.34 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.76 (s, 1H), 8. 49 - 8.67 (m, 3H), 7.44 - 7.57 (m, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.46 - 4.61 (m, 1H), 4.36 - 4.46 / 3.71 - 3.87 (m, 1H) (회전이성질체), 4.17 - 4.30 (m, 1H), 2.74 / 2.87 (s, 3H) (회전이성질체), 2.16 - 2.33 (m, 2H), 2.01 / 2.10 (s, 3H) (회전이성질체), 1.93 - 2.16 (m, 2H), 1.65 - 1.93 (m, 4H), 1.02 - 1.13 (m, 2H), 0.92 - 1.02 (m, 2H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 S ,2 S ,4 R* )-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 34) 및 이성질체 2(실시예 35)
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 R ,2 R ,4 R* )-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 36) 및 이성질체 2(실시예 37)
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(5 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-1)(100 ㎎, 0.2 m㏖) 및 1 M 메틸아민-MeOH 용액(1.2 ㎖, 1.2 m㏖)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드(101 ㎎, 0.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~40% MeCN으로 용리)로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(90 ㎎, 87%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 434 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 S ,2 S ,4 R* )-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 34) 및 이성질체 2(실시예 35)
DCM(2 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(80 ㎎, 0.2 m㏖) 및 TEA(103 ㎕, 0.7 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(38 ㎎, 0.4 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~60% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH C18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 10분 동안 물(0.1% FA) 중 50~65% MeCN을 사용한 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(45 ㎎)를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IF, 5 ㎛ 20×250 ㎜; 28분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH 용액)를 사용한 등용매; 유량: 15 ㎖/분)로 분리시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(11mg, 12%, 99.9%ee) 및 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(20 ㎎, 22%, 99.9%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1.2:1 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.60 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.42 - 4.59/3.78 - 3.96 (m, 1H) (회전이성질체), 4.06 - 4.22 (m, 4H), 2.86/2.73 (s, 3H) (회전이성질체), 1.92 - 2.39 (m, 6H), 1.41 - 1.90 (m, 4H), 0.52 - 0.66 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 3:2 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.51 - 4.76/3.90 - 4.08 (m, 1H) (회전이성질체), 4.31 - 4.48 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 2.59 - 2.99 (m, 4H), 2.24 - 2.40 (m, 1H), 1.74 - 2.24 (m, 6H), 1.26 - 1.74 (m, 2H), 0.92 - 1.20 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCM(2 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-2)(120 ㎎, 0.3 m㏖) 및 2M 메틸아민-MeOH 용액(717 ㎕, 1.4 m㏖)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드(122 ㎎, 0.6 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~20% MeCN으로 용리)로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(100 ㎎, 80%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 434 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1 R ,2 R ,4 R* )-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 36) 및 이성질체 2(실시예 37)
DCM(2 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(90 ㎎, 0.2 m㏖) 및 TEA(116 ㎕, 0.8 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(42 ㎎, 0.4 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~50% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH C18 OBD, 5 ㎛ 19×250 ㎜; 10분 동안 물(10 mM NH4HCO3 및 0.1% NH4OH) 중 50~60% MeCN을 사용한 용리 구배; 25 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(62 ㎎)를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IF, 5 ㎛ 20×250 ㎜; 18분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH 용액)를 사용한 등용매; 유량: 15 ㎖/분)로 분리시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(25 ㎎, 25%, 100%ee) 및 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(20 ㎎, 20%, 99.8%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1.6:1 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.63 (d, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.51 - 4.74/3.89 - 4.08 (m, 1H) (회전이성질체), 4.31 - 4.48 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 2.60 - 2.94 (m, 4H), 1.76 - 2.42 (m, 7H), 1.25 - 1.73 (m, 2H), 0.91 - 1.20 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1.2:1 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.53 - 8.73 (m, 3H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.16 - 7.35 (m, 2H), 4.44 - 4.57/3.81 - 3.95 (m, 1H) (회전이성질체), 4.03 - 4.27 (m, 4H), 2.86/2.72 (s, 3H) (회전이성질체), 1.93 - 2.40 (m, 6H), 1.42 - 1.93 (m, 4H), 0.41 - 0.73 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 S ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 38) 및 이성질체 2(실시예 39)
rel -2-((1 S ,2 S ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 40) 및 이성질체 2(실시예 41)
rac -6-메톡시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2-인다졸-5-카르복스아미드
N2 분위기 하에서 DMF(10 ㎖) 중 6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-2)(1.1 g, 3.6 m㏖) 및 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(Int III-13)(1.8 g, 7.1 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(3.5 g, 10.7 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(50 ㎖)에 붓고, EtOAc(25 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(Waters Xbridge® Shield RP18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 9분 동안 물(0.1% FA) 중 30~40% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2-인다졸-5-카르복스아미드(700 ㎎, 42%)를 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 463.
rac -6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
rt에서 N2 분위기 하에서 1,4-디옥산(2 ㎖) 중 rac-6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(300 ㎎, 0.7 m㏖)의 용액에 aq. 3 N HCl(2.7 ㎖, 8.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. 진한 NH4OH 용액으로 염기성화시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(1% FA) 중 20~50% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 rac-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 74%)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 419.
rel -2-((1 S ,2 S ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 38) 및 이성질체 2(실시예 39)
rel -2-((1 S ,2 S ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 40) 및 이성질체 2(실시예 41)
N2 분위기 하에서 MeOH(5 ㎖) 중 rac-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 0.5 m㏖)의 용액에 NaBH4(36 ㎎, 1.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 켄칭하고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA 중 0~50% MeCN으로 용리))로 직접 정제시켜 rac-2-((1S,2S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 이 혼합물을 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® ID-2, 5 ㎛ 20×250 ㎜; MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)/MeOH, 60/40을 사용한 등용매; 유량: 16 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 rel-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(7 ㎎, 4%, 100%ee) 및 rel-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(56 ㎎, 28%, 99.9%ee)를 제2 용리 이성질체로서 제공하였다. 다음 2개의 화합물이 제3 이성질체 및 제4 이성질체로서 용리되었지만 순도가 낮아서 제2 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IE, 5 ㎛ 20×250 ㎜; MTBE(2 mM NH3-MeOH 용액)/MeOH, 50/50을 사용한 등용매; 유량: 20 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(36 ㎎, 18%, 99.9%ee) 및 rel-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(6 ㎎, 3%, 99.6%ee)를 황색 고체로서 제공하였다.
rel -(1 S ,2 S ,4 R )- 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.01 - 4.12 (m, 4H), 3.96 (br. s, 1H), 2.52 - 2.59 (m, 1H), 2.31 - 2.47 (m, 1H), 1.78 - 1.89 (m, 2H), 1.67 - 1.77 (m, 1H), 1.55 - 1.65 (m, 1H), 1.28 - 1.40 (m, 1H), 0.54 (d, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 421.
rel -(1 S ,2 S ,4 S )- 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.01 - 4.11 (m, 4H), 3.55 - 3.67 (m, 1H), 2.11 - 2.24 (m, 1H), 1.88 - 2.10 (m, 4H), 1.29 - 1.45 (m, 1H), 1.16 (q, 1H), 0.57 (d, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 421.
rel -(1 S ,2 S ,4 S )- 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.00 - 4.14 (m, 4H), 3.56 - 3.67 (m, 1H), 2.11 - 2.26 (m, 1H), 1.89 - 2.11 (m, 4H), 1.30 - 1.45 (m, 1H), 1.16 (q, 1H), 0.57 (d, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 421.
rel -(1 S ,2 S ,4 R )- 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.03 - 4.12 (m, 4H), 3.92 - 3.99 (m, 1H), 2.52 - 2.59 (m, 1H), 2.34 - 2.47 (m, 1H), 1.78 - 1.89 (m, 2H), 1.68 - 1.77 (m, 1H), 1.55 - 1.67 (m, 1H), 1.25 - 1.40 (m, 1H), 0.54 (d, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 421.
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,2 S ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 42) 및 이성질체 2(실시예 43)
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,2 S ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 44) 및 이성질체 2(실시예 45)
rac -6-시클로프로폭시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)- 2H -인다졸-5-카르복스아미드
DMF(30 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(1.4 g, 4.2 m㏖) 및 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일 메탄설포네이트(Int III-13)(1.1 g, 8.4 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(2.9 g, 9.0 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 95℃에서 3시간 동안 교반하고, rt까지 냉각시킨 후 EtOAc(500 ㎖)로 희석시키고, 염수(100 ㎖×3)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 SFC(DAICEL DCpak® P4VP, 5 ㎛ 30 ㎜×250 ㎜; CO2(35℃, 70 bar)에서 30% DCM/MeOH(50/50, 0.1% 2M NH3-MEOH)를 사용한 등용매; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-6-시클로프로폭시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(440 ㎎, 22%)를 주황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 489 [M+H]+.
rac -6-시클로프로폭시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
THF(5 ㎖) 및 물(5 ㎖) 중 rac-6-시클로프로폭시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(400 ㎎, 0.8 m㏖)의 용액에 진한 aq. HCl(2.0 ㎖, 24.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~60% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 SFC (YMC CHIRAL ART Amylose-C Neo 5 ㎛ 30 ㎜×250 ㎜; CO2(35℃, 78 bar)에서 60% MeOH/MeCN(50/50, 0.1% 2M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(196 ㎎, 54%)를 주황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 445 [M+H]+.
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,2 S ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 42) 및 이성질체 2(실시예 43)
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,2 S ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 44) 및 이성질체 2(실시예 45)
N2 분위기 하에서 MeOH(5 ㎖) 중 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(180 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 NaBH4(31 ㎎, 0.8 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(1 ㎖)로 켄칭하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~50% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 주황색 고체로서 제공하였다. 고체를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IA 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; MeOH 중 80% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 17 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(8 ㎎, 4%, 98.9%ee), 제2 용리 이성질체로서 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(7 ㎎, 4%, 98.4%ee), 제3 용리 이성질체로서 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(40 ㎎, 22%, 99.6%ee) 그리고 제4 이성질체로서 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(30 ㎎, 17%, 99.5%ee)를 제공하였고, 모두 황색 고체였다.
rel -(1 S ,2 S ,4 R )-이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.48 - 8.61 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.16 - 4.27 (m, 1H), 4.10 (td, 1H), 3.96 (br. s, 1H), 2.24 - 2.47 (m, 2H), 1.77 - 1.90 (m, 2H), 1.50 - 1.77 (m, 2H), 1.28 - 1.42 (m, 1H), 0.93 - 1.15 (m, 4H), 0.55 (d, 3H). MS ESI, m/z = 447 [M+H]+.
rel -(1 S ,2 S ,4 R )-이성질체 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (d, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.48 - 8.64 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.22 (br. s, 1H), 4.01 - 4.15 (m, 1H), 3.96 (br. s, 1H), 2.22 - 2.46 (m, 2H), 1.77 - 1.92 (m, 2H), 1.50 - 1.77 (m, 2H), 1.27 - 1.45 (m, 1H), 0.92 - 1.15 (m, 4H), 0.55 (d, 3H). MS ESI, m/z = 447 [M+H]+.
rel -(1 S ,2 S ,4 S )-이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.30 (s, 1H), 9.06 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.48 - 8.65 (m, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.04 (dd, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.15 - 4.25 (m, 1H), 4.02 - 4.15 (m, 1H), 3.54 - 3.69 (m, 1H), ), 1.87 - 2.30 (m, 5H), 1.29 - 1.50 (m, 1H), 1.11 - 1.29 (m, 1H), 0.92 - 1.11 (m, 4H), 0.58 (d, 3H). MS ESI, m/z = 447 [M+H]+.
rel -(1 S ,2 S ,4 S )-이성질체 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.30 (s, 1H), 9.02 - 9.11 (m, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.48 - 8.65 (m, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.10 - 7.00 (m, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.15 - 4.25 (m, 1H), 4.02 - 4.15 (m, 1H), 3.54 - 3.69 (m, 1H), 1.87 - 2.30 (m, 5H), 1.27 - 1.50 (m, 1H), 1.11 - 1.27 (m, 1H), 0.92 - 1.11 (m, 4H), 0.58 (d, 3H). MS ESI, m/z = 447 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 46) 및 이성질체 2(실시예 47)
8,11-디옥사디스피로[3.2.4 7 .2 4 ]트리데칸-2-올
0℃에서 N2 분위기 하에서 MeOH(50 ㎖) 중 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-온(3.0 g, 15.3 m㏖)의 용액에 NaBH4(867 ㎎, 22.9 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-올(3.0 g, 99%)을 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 4.80 - 4.90 (m, 1H), 3.98 - 4.11 (m, 1H), 3.83 (s, 4H), 2.02 - 2.15 (m, 2H), 1.40 - 1.55 (m, 10H).
8,11-디옥사디스피로[3.2.4 7 .2 4 ]트리데칸-2-일 4-니트로벤조에이트
0℃에서 4-니트로벤조일 클로라이드(3.7 g, 19.7 m㏖)를 DCM(50 ㎖) 중 TEA(5.3 ㎖, 37.8 m㏖) 및 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-올(3.0 g, 15.1 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 20~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 조물질 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-일 4-니트로벤조에이트(6.0 g, 75 wt.%)를 제공하였다. MS ESI, m/z = 348 [M+H]+.
7-옥소스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트
THF(40 ㎖) 중 조물질 8,11-디옥사디스피로[3.2.47.24]트리데칸-2-일 4-니트로벤조에이트(75 wt.%)(6.0 g)의 용액에 2 N HCl(40.0 ㎖, 80.0 m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 ㎖)로 희석시키고, 물(100 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켜 7-옥소스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트(3.5 g, 50%)를 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.36 (d, 2H), 8.22 (d, 2H), 5.15 - 5.36 (m, 1H), 2.52 - 2.61 (m, 2H), 2.17 - 2.43 (m, 4H), 2.04 - 2.17 (m, 2H), 1.82 - 2.00 (m, 4H).
7-히드록시스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(60 ㎖) 중 7-옥소스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트(3.4 g, 11.2 m㏖)의 용액에 NaBH4(848 ㎎, 22.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(250 ㎖)로 희석시키고, 물(75 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 7-히드록시스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트(2.0 g, 58%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.34 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 5.18 (p, 1H), 4.42 (d, 1H), 3.34 - 3.50 (m, 2H), 2.19 - 2.46 (m, 2H), 1.89 (td, 2H), 1.50 - 1.78 (m, 4H), 1.06 - 1.50 (m, 4H).
7-(토실옥시)스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트
TsCl(2.8 g, 14.7 m㏖)를 DCM(50 ㎖) 중 7-히드록시스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트(1.8 g, 5.9 m㏖), DMAP(72 ㎎, 0.6 m㏖) 및 TEA(2.5 ㎖, 17.7 m㏖)의 용액에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 DCM(100 ㎖)으로 희석시키고, 0.1N HCl(75 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~30% EtOAc로 용리)로 정제시켜 7-(토실옥시)스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트 (1.20 g, 44%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.34 (d, 2H), 8.14 (d, 2H), 7.80 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 5.16 (p, 1H), 4.41 - 4.59 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.24 - 2.42 (m, 2H), 1.83 - 1.95 (m, 2H), 1.60 - 1.71 (m, 4H), 1.38 - 1.60 (m, 4H).
6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 46) , 이성질체 2(실시예 47)
rt에서 DMF(20 ㎖) 중 7-(토실옥시)스피로[3.5]노난-2-일 4-니트로벤조에이트(1.2 g, 2.6 m㏖) 및 6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-인다졸-5-카르복스아미드(Int II-3)(350 ㎎, 1.1 m㏖)의 용액에 Cs2CO3(1.0 g, 3.1 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 Cs2CO3(314 ㎎, 1.0 m㏖) 및 MeOH(20 ㎖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동안 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였고, 이것은 약간의 N1-위치이성질체를 함유하였다. 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(70 ㎎)를 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH OBD C18 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 및 0.1% NH4OH) 중 30~40% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시키고, 그 다음 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IF, 20×250 ㎜, 5 ㎛; MTBE/MeOH(0.1% 2 N NH3-MeOH), 80/20을 사용한 등용매; 유량: 14 ㎖/분)로 분리시켜 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(12 ㎎, 9%, 100%ee) 및 6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(9 ㎎, 7%, 99%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.32 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.50 - 8.60 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.92 (d, 1H), 4.33 - 4.52 (m, 1H), 4.18 - 4.27 (m, 1H), 4.06 - 4.18 (m, 1H), 2.24 - 2.39 (m, 1H), 1.82 - 2.15 (m, 5H), 1.42 - 1.82 (m, 6H), 1.02 - 1.10 (m, 2H), 0.93 - 1.02 (m, 2H). MS ESI, m/z = 473 [M+H]+.
2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 48) 및 이성질체 2(실시예 49)
5-브로모-6-메톡시-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(30 ㎖) 중 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(3.3 g, 12.7 m㏖)의 용액에 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민(2.0 g, 12.7 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(12.9 g, 63.6 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 13시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 10~100% EtOAc로 용리)로 정제시켜 조물질 5-브로모-6-메톡시-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸을 황색 고체(8.2 g, 41 wt.%)로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 367/369 [M+H]+.
4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-온
rt에서 THF(50 ㎖) 중 조물질 5-브로모-6-메톡시-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(41 wt.%)(8.2 g)의 용액에 물 중 4 N HCl(22.9 ㎖, 91.6 m㏖)을 첨가하고, 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. 혼합물을 2 N NaOH로 중화시키고, EtOAc(150 ㎖Х3)로 추출하였다. 합한 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(3/1, 100 ㎖)로부터 결정화시켜 4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(3.0 g, 100%)을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 323/325 [M+H]+.
4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올
N2 분위기 하에서 -20℃에서 THF(120 ㎖) 중 4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(700 ㎎, 2.2 m㏖)의 용액에 THF 중 3 N 메틸마그네슘 브로마이드(4.3 ㎖, 13.0 m㏖)를 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 aq. 포화 NH4Cl(5 ㎖)로 켄칭하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(730 ㎎, 99%)을 갈색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
메틸 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(25 ㎖) 중 4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(730 ㎎, 2.2 m㏖), Pd(dppf)Cl2(157 ㎎, 0.2 m㏖) 및 DIPEA(2.3 ml, 12.9 m㏖)의 혼합물을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 메틸 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(635 ㎎, 93%)를 갈색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 319 [M+H]+.
2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실산
N2 분위기 하에서 MeOH(20 ㎖) 중 메틸 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(635 ㎎, 2.0 m㏖)의 현탁액에 물(20 ㎖) 중 LiOH(155 ㎎, 6.5 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 N HCl로 중화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(600 ㎎, 99%)을 갈색 검으로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 305 [M+H]+.
2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 48) 및 이성질체 2(실시예 49)
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(20 ㎖) 중 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(100 ㎎, 0.3 m㏖) 및 HATU(150 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 DIPEA(230 ㎕, 1.3 m㏖)를 첨가하고, 그 다음 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(53 ㎎, 0.4 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 19시간 동안 교반하였다. 조물질을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리), 그 다음 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® ID, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 12분 동안 DCM/MeOH(1:1) 중 20% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 직접 정제시켜 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(11 ㎎, 8%, 100%ee) 및 2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 -이성질체 2(7 ㎎, 5%, 99.9%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.61 - 8.67 (m, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.14 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 4.34 - 4.48 (m, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.12 (s, 3H), 2.18 - 2.35 (m, 2H), 1.82 - 1.94 (m, 2H), 1.62 - 1.76 (m, 2H), 1.44 - 1.6 (m, 2H), 1.17 (s, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.60 - 8.68 (m, 2H), 8.57 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.21 (ddd, 1H), 4.44 - 4.56 (m, 2H), 4.11 (s, 3H), 1.98 - 2.12 (m, 4H), 1.53 - 1.73 (m, 4H), 1.23 (s, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 50) 및 이성질체 2(실시예 51)
rac -2-((1 S ,3 S )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 52) 및 이성질체 2(실시예 53)
3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-온
rt에서 1,4-디옥산(1 L) 중 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(5.0 g, 22.0 m㏖) 및 시클로헥스-2-엔-1-온(16.9 g, 176.2 m㏖)의 용액에 K2CO3(9.13 g, 66.06 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(1 L)로 켄칭하고, EtOAc(500 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 황색 오일로서 농축시켰다. 오일을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~60% EtOAc로 용리)로 정제시켜 3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(1.6 g, 22%)을 무색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 323/324.
3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올
-40℃에서 THF(30 ㎖) 중 3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(2.0 g, 6.2 m㏖)의 용액에 THF 중 1 M 메틸 마그네슘 브로마이드(24.8 ㎖, 24.8 m㏖)를 10분의 기간에 걸쳐서 N2 분위기 하에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(10 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(2.0 g, 95%)을 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 339/341.
rac -메틸 2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실레이트 및 rac -메틸 2-((1 S ,3 S )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(30 ㎖) 중 3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(2.0 g, 5.9 m㏖), DIPEA(5.1 ㎖, 29.5 m㏖) 및 Pd(dppf)Cl2(648 ㎎, 0.9 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 30~60% EtOAc로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH C18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 10분 동안 물(0.1% FA) 중 20~45% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rac-메틸 2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(550 ㎎, 29%) 및 rac-메틸 2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(800 ㎎, 43%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 319.
rac -2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실산
rt에서 MeOH(2 ㎖) 중 rac-메틸 2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(500 ㎎, 1.6 m㏖)의 용액에 물(2 ㎖) 중 LiOH(113 ㎎, 4.7 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 4 내지 5로 산성화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 40~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(400 ㎎, 84%)을 무색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+), [M+H]+ = 305.
rel -2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 (실시예 50) 및 이성질체 2(실시예 51)
DMF(3 ㎖) 중 rac-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(200 ㎎, 0.7 m㏖), HATU(300 ㎎, 0.8 m㏖) 및 DIPEA(574 ㎕, 3.3 m㏖)의 용액에 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(141 ㎎, 1.1 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05%FA) 중 10→60% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak IA, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 이동상 A: Hex/DCM(2:1, 0.5% 2 N NH3-MeOH), 이동상 B: MeOH; 유량: 20 ㎖/분; 구배: 12분 동안 50% B)로 직접 정제시켜 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(44 ㎎, 16%, 100%ee) 및 rel-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 2(42 ㎎, 15%, 98.4%ee)를 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 - 8.58 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.51 - 4.61 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 1.93 - 2.12 (m, 3H), 1.72 - 1.87 (m, 2H), 1.58 - 1.67 (m, 1H), 1.38 - 1.55 (m, 2H), 1.24 (s, 3H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 421.
rac -2-((1 S ,3 S )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복실산
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(6 ㎖) 중 rac-메틸 2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실레이트(800 ㎎, 2.5 m㏖)의 용액에 물(6 ㎖) 중 LiOH(181 ㎎, 7.5 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 4 내지 5로 산성화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 30~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(600 ㎎, 78%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 305 [M+H]+.
rac -2-((1 S ,3 S )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 52) 및 이성질체 2(실시예 53)
N2 분위기 하에서 THF(15 ㎖) 중 rac-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복실산(200 ㎎, 0.7 m㏖), HATU(300 ㎎, 0.8 m㏖) 및 DIPEA(574 ㎕, 3.3 m㏖)의 용액을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(132 ㎎, 1.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과로 수집하여 rac-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® ID-2, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 25분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH 용액)를 사용한 등용매; 17 ㎖/분)로 분리시켜 rel-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(40 ㎎, 19%, 99.8%ee) 및 rel-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(48 ㎎, 23%, 99.8%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 - 8.59 (m, 2H), 8.46 (d, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.64 - 4.83 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 1.87 - 2.13 (m, 3H), 1.71 - 1.87 (m, 2H), 1.55 - 1.71 (m, 2H), 1.27 - 1.43 (m, 1H), 1.20 (s, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 - 8.57 (m, 2H), 8.46 (d, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.68 - 4.79 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.04 - 2.12 (m, 1H), 1.98 - 2.04 (m, 1H), 1.92 (t, 1H), 1.70 - 1.87 (m, 2H), 1.55 - 1.69 (m, 2H), 1.29 - 1.40 (m, 1H), 1.20 (s, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 54) 및 이성질체 2(실시예 55)
3-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-온
rt에서 1,4-디옥산(500 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-5-아이오도-1H-인다졸(Int I-3) (3.0 g, 10.0 m㏖) 및 시클로헥스-2-엔-1-온(7.7 g, 80.0 m㏖)의 용액에 K2CO3(4.1 g, 30.0 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(100 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(300 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 3-(5-아이오도-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(980 ㎎, 25%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 397 [M+H]+.
3-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올
rt에서 N2 분위기 하에서 THF(10 ㎖) 중 3-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-온(800 ㎎, 2.0 m㏖)의 용액에 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드(8.1 ㎖, 8.1 m㏖)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(20 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(50 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 30~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 조물질 3-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(720 ㎎)을 무색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. MS ESI, m/z = 413 [M+H]+.
rac -메틸 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(100 ㎖) 중 조물질 3-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)-1-메틸시클로헥산-1-올(720 ㎎), DIPEA(1.5 ㎖, 8.7 m㏖) 및 Pd(dppf)Cl2(128 ㎎, 0.2 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 C18-플래시 크로마토그래피(PE 중 0~60% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® Shield RP18 OBD, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(0.1% FA) 중 30~40% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rac-메틸 6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(240 ㎎, 40%)를 제공하였다. MS ESI, m/z = 345 [M+H]+.
rac -6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실산
MeOH(2 ㎖) 중 rac-메틸 6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(180 ㎎, 0.5 m㏖)의 용액에 물(2 ㎖) 중 LiOH(38 ㎎, 1.6 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 4 내지 5로 산성화시켰다. 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.5% FA) 중 0~60% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(160 ㎎, 93%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 331 [M+H]+.
rel- 6-시클로프로폭시-2-((1 S ,3 R )-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 54) 및 이성질체 2(실시예 55)
N2 분위기 하에서 THF(10 ㎖) 중 rac-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(100 ㎎, 0.3 m㏖), HATU(115 ㎎, 0.3 m㏖) 및 DIPEA(53 ㎕, 0.3 m㏖)의 용액에 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(41 ㎎, 0.3 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(1 ㎖)로 켄칭하였다. 혼합물을 분취용 키랄-HPLC(Chiralpak® IA, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 50 ㎖/분)로 직접 정제시켜 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(42 ㎎, 42%, 100%ee) 및 rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(46 ㎎, 46%, 100%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.31 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.55 (dd, 1H), 5.53 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.50 - 4.64 (m, 1H), 4.19 - 4.25 (m, 1H), 1.94 - 2.11 (m, 3H), 1.72 - 1.86 (m, 2H), 1.63 (br. d, 1H), 1.37 - 1.56 (m, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.01 - 1.11 (m, 2H), 0.93 - 1.03 (m, 2H). MS ESI, m/z = 447 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 56)
메틸 6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(20 ㎖) 중 (1s,4s)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-1)(110 ㎎, 0.3 m㏖), TEA(115 ㎕, 0.8 m㏖) 및 Pd(dppf)Cl2 - CH2Cl2 (226 ㎎, 0.3 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeOH로 용리)로 정제시켜 메틸 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(67 ㎎, 73%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 331 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실산
MeOH(1 ㎖) 및 물(0.5 ㎖) 중 NaOH(35 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 메틸 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(57 ㎎, 0.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 약 6으로 산성화시키고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 조물질 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(64 ㎎, 86 wt.%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 317 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 56)
DMF(5 ㎖) 중 조물질 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(86 wt.%)(54 ㎎), DIPEA(119 ㎕, 0.7 m㏖), HOBt(5 ㎎, 0.03 m㏖) 및 HATU(97 ㎎, 0.3 m㏖)의 용액에 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5) (46 ㎎, 0.34 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 ㎖)로 희석시키고, 물(25 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리) 및 추가로 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH C18 OBD 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 27 ~ 34% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(20 ㎎, 27%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.32 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.49 - 8.58 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.52 (d, 1H), 4.42 - 4.51 (m, 1H), 4.18 - 4.27 (m, 1H), 3.85 - 3.94 (m, 1H), 2.24 - 2.39 (m, 2H), 1.82 - 1.92 (m, 2H), 1.72 - 1.82 (m, 2H), 1.58 - 1.72 (m, 2H), 1.03 - 1.13 (m, 2H), 0.94 - 1.03 (m, 2H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 57)
메틸 6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(10 ㎖) 중 (1r,4r)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-2)(110 ㎎, 0.3 m㏖), TEA(115 ㎕, 0.8 m㏖) 및 Pd(dppf)Cl2 - CH2Cl2(45 ㎎, 0.1 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 13시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeOH로 용리)로 직접 정제시켜 메틸 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(80 ㎎, 88%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 331 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실산
MeOH(1 ㎖) 중 메틸 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(70 ㎎, 0.2 m㏖)의 용액에 물(1 ㎖) 중 NaOH(34 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2 N HCl을 사용하여 pH 5 내지 6으로 조정하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(45 ㎎, 67%)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 317 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 57)
DMF(5 ㎖) 중 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(40 ㎎, 0.1 m㏖), 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민의 TFA염(62 ㎎, 0.3 m㏖), HOBt(4 ㎎, 0.03 m㏖) 및 HATU(72 ㎎, 0.2 m㏖)의 용액에 DIPEA(66 ㎕, 0.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 ㎖)로 희석시키고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 유기층을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리) 및 추가로 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH C18 OBD 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 24~32% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(12 ㎎, 22%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.30 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.04 (dd, 1H), 4.72 (d, 1H), 4.41 - 4.55 (m, 1H), 4.15 - 4.25 (m, 1H), 3.48 - 3.63 (m, 1H), 2.04 - 2.16 (m, 2H), 1.89 - 2.04 (m, 4H), 1.30 - 1.51 (m, 2H), 0.93 - 1.10 (m, 4H). MS ESI, m/z = 433 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 58)
( R )-1-(((1 r ,4 R )-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(10 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(300 ㎎, 0.7 m㏖) 및 TEA(200 ㎎, 2.0 m㏖)의 용액에 (R)-1-클로로-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(149 ㎎, 1.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH(2 ㎖)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 정제시켜 (R)-1-(((1r,4R)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(320 ㎎, 91%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 534 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 58)
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(10 ㎖)/물(5 ㎖) 중 (R)-1-(((1r,4R)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(300 ㎎, 0.6 m㏖)의 용액에 NaOH(68 ㎎, 1.7 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 8분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 12 ~ 42% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 직접 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(265 ㎎, 96%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 5:6 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.53 - 8.59 (m, 2H), 8.48/8.47 (s, 1H) (회전이성질체), 7.22/7.20 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.93/4.74 (d, 1H) (회전이성질체), 4.34 - 4.58/3.93 - 4.02 (m, 3H) (회전이성질체), 4.06 (s, 3H), 2.91/2.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.62 - 2.27 (m, 8H), 1.22/1.18 (d, 3H) (회전이성질체). MS ESI, m/z = 492 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 59)
( S )-1-(((1 r ,4 S )-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(8 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(130 ㎎, 0.3 m㏖) 및 TEA(87 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 (S)-1-클로로-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(64 ㎎, 0.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH(2 ㎖)로 켄칭하고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 (S)-1-(((1r,4S)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(152 ㎎, 100%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 534 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 59)
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(5 ㎖)/물(2.5 ㎖) 중 (S)-1-(((1r,4S)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(145 ㎎, 0.3 m㏖)의 용액에 NaOH(22 ㎎, 0.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 희석시키고, 형성된 침전물을 여과로 수집하였다. 고체를 아세토니트릴(2 ㎖) 및 물(5 ㎖)로 순차적으로 세척하고, 그 다음 진공에서 건조시켜 2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(118 ㎎, 88%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 - 8.59 (m, 2H), 8.48/8.47 (s, 1H) (회전이성질체), 7.22/7.20 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.93/4.75 (d, 1H) (회전이성질체), 4.45 - 4.57/3.93 - 4.03 (m, 2H) (회전이성질체), 4.34 - 4.45 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.91/2.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.62 - 2.28 (m, 8H), 1.22/1.18 (d, 3H) (회전이성질체). MS ESI, m/z = 492 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 R ,2 R ,4 R *)-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 60) 및 이성질체 2(실시예 61)
6-메톡시-2-((1 S ,2 S ,4 R *)-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 62) 및 이성질체 2(실시예 63)
메틸 6-메톡시-2-((7 R ,8 R )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(10 ㎖) 중 5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(Int IV-4)(380 ㎎, 1.0 m㏖), Pd(dppf)Cl2 - CH2Cl2(163 ㎎, 0.2 m㏖) 및 TEA(695 ㎕, 5.0 m㏖)의 혼합물을 CO 분위기에서 15 atm 및 110℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH)중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 메틸 6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(350 ㎎, 97%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 361 [M+H]+.
메틸 6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
THF(5 ㎖)/물(5 ㎖) 중 메틸 6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(340 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 aq. HCl(12 N)(2.0 ㎖, 24.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 aq. 포화 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc(200 ㎖)로 희석시키고, 물(100 ㎖×2)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 메틸 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(290 ㎎, 97%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 317 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2 H -인다졸-5-카르복실산
MeOH(5 ㎖)/물(2.5 ㎖) 중 메틸 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(285 ㎎, 0.9 m㏖)의 현탁액에 NaOH(144 ㎎, 3.6 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 2 N HCl을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(270 ㎎, 99%)을 무색 검으로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 303 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
N2 분위기 하에서 DMF(5 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산(265 ㎎, 0.9 m㏖) 및 HATU(367 ㎎, 1.0 m㏖)의 용액에 DIPEA(612 ㎕, 3.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(176 ㎎, 1.3 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.1% NH4OH))로 직접 정제시켜 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(230 ㎎, 63%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 419 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 R ,2 R )-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCE(5 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(105 ㎎, 0.3 m㏖) 및 메탄아민(MeOH 중 31 wt.%)(126 ㎎, 1.3 m㏖)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드(106 ㎎, 0.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(100 ㎎, 92%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 434 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 R ,2 R ,4 R *)-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 60) 및 이성질체 2(실시예 61)
DCM(2 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(95 ㎎, 0.2 m㏖) 및 TEA(122 ㎕, 0.9 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(45 ㎎, 0.4 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IH, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 7.5분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 분리시켜 6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(20 ㎎, 19%, 99.9%ee) 및 6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 2(68 ㎎, 65%, 100%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 2:3 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.56/8.53 (s, 1H)(회전이성질체), 8.54 (dd, 1H), 8.47/8.46 (s, 1H)(회전이성질체), 7.24/7.21 (s, 1H)(회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.45 - 4.59/3.8 - 3.93 (m, 1H) (회전이성질체), 4.08 - 4.18 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.86/2.73 (s, 3H) (회전이성질체), 1.97 - 2.38 (m, 6H), 1.43 - 1.89 (m, 4H), 0.53 - 0.65 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.63/4.02 (br. s, 1H) (회전이성질체), 4.38 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.65 - 2.93 (m, 3H), 1.26 - 2.39 (m, 10H), 0.94 - 1.21 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+.
메틸 6-메톡시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(60 ㎖) 중 5-브로모-6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(Int IV-5)(1.0 g, 2.6 m㏖), Pd(dppf)Cl2(384 ㎎, 0.5 m㏖) 및 DIPEA(2.3 ㎖, 13.1 m㏖)의 혼합물을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 110℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 메틸 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(860 ㎎, 91%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 361 [M+H]+.
6-메톡시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복실산
N2 분위기 하에서 MeOH(6 ㎖) 중 메틸 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(850 ㎎, 2.4 m㏖)의 현탁액에 물(6 ㎖) 중 LiOH(169 ㎎, 7.1 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.1 N HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 제공하였다. 32%의 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복실산을 함유하는 조물질 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실산(720 ㎎)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 347 [M+H]+.
6-메톡시-2-((7 S ,8 S )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(10 ㎖) 중 조물질 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복실산(710 ㎎) 및 DIPEA(1.4 ㎖, 8.2 m㏖)의 용액에 HATU(935 ㎎, 2.5 m㏖)를 첨가하고, 그 다음 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민 (412 ㎎, 3.1 m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 조물질을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(640 ㎎, 68%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 463 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-옥소시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
THF(8 ㎖) 중 6-메톡시-2-((7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(630 ㎎, 1.4 m㏖)의 현탁액에 2.4 N HCl(10.0 ㎖, 24.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. 포화 NaHCO3로 중화시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(570 ㎎, 100%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 419 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 S ,2 S )-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
DCE(6 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 0.5 m㏖) 및 메탄아민(MeOH 중 30 wt.%)(495 ㎎, 4.8 m㏖)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드(203 ㎎, 1.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(170 ㎎, 82%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 434 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 S ,2 S ,4 R *)-2-메틸-4-( N -메틸아세트아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 62) 및 이성질체 2(실시예 63)
DCM(5 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(160 ㎎, 0.4 m㏖) 및 TEA(257 ㎕, 1.9 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(94 ㎎, 0.9 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IH, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 14분 동안 MeOH 중 80% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 분리시켜 6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(17 ㎎, 10%, 99.4%ee) 및 6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(59 ㎎, 34%, 99.9%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 3:4 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.56/8.53 (s, 1H) (회전이성질체), 8.54 (dd, 1H), 8.47/8.46 (s, 1H) (회전이성질체), 7.24/7.21 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.45 - 4.56/3.82 - 3.93 (m, 1H) (회전이성질체), 4.08 - 4.18 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.86/2.73 (s, 3H) (회전이성질체), 1.94 - 2.39 (m, 6H), 1.44 - 1.87 (m, 4H), 0.54 - 0.65 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 2:3 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.63/4.02 (br. s, 1H) (회전이성질체), 4.38 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.61 - 2.93 (m, 3H), 1.25 - 2.43 (m, 10H), 0.95 - 1.17 (m, 3H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+.
rel -2-((6 S ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 64) 및 이성질체 2(실시예 65)
tert -부틸 7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 NaBH4(388 ㎎, 10.3 m㏖)를 5분의 기간에 걸쳐서 MeOH(20 ㎖) 중 tert-부틸 6-메틸-7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-4)(1.3 g, 5.1 m㏖)의 용액에 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 직접 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 30→40% EtOAc로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.2 g, 92%)(시스/트랜스 1:2)를 황색 오일로서 제공하였다.
tert -부틸 6-메틸-7-(메틸설포닐옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 MsCl(1.6 g, 14.1 m㏖)을 5분의 기간에 걸쳐서 DCM(25 ㎖) 중 TEA(2.6 ㎖, 18.8 m㏖) 및 tert-부틸 7-히드록시-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.2 g, 4.7 m㏖) (시스/트랜스 1:2)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 ㎖)로 켄칭하고, DCM(100 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 조물질 tert-부틸 6-메틸-7-(메틸설포닐옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.5 g)(주로 트랜스 이성질체임)를 황색 오일로서 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
rac - tert -부틸 (6 S ,7 R )-7-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
rt에서 KOH(1.2 g, 22.0 m㏖)를 DMF(20 ㎖) 중 조물질 tert-부틸 6-메틸-7-(메틸설포닐옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(1.5 g)(주로 이성질체임) 및 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(1.0 g, 4.4 m㏖)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 수성층을 EtOAc(100 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100 ㎖×2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 20→30% EtOAc로 용리)로 정제시켜, 조물질 rac-(6S,7R)-tert-부틸 7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(400 ㎎)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+) [M-tBu]+ = 408/410.
rac -5-브로모-6-메톡시-2-((6 S ,7 R )-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2 H -인다졸
0℃에서 N2 분위기 하에서 TFA(4 ㎖)를 DCM(20 ㎖) 중 조물질 rac-(6S,7R)-tert-부틸 7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(400 ㎎)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조물질 rac-5-브로모-6-메톡시-2-((6S,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸의 TFA염(500 ㎎)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 364/366 [M+H]+.
rac -1-((6 S ,7 R )-7-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-일)에타논
0℃에서 N2 분위기 하에서 아세틸 클로라이드(223 ㎕, 3.1 m㏖)를 DCM(10 ㎖) 중 조물질 rac-5-브로모-6-메톡시-2-((6S,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸의 TFA염(500 ㎎) 및 TEA(1.5 ㎖, 10.5 m㏖)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, 수성층을 DCM(50 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50 ㎖×2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% HCOOH) 중 50~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-1-((6S,7R)-7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-일)에타논 (190 ㎎, 45%)을 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+) [M+H]+ = 406, 408.
rel -2-((6 S ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 64) 및 이성질체 2(실시예 65)
Pd(OAc)2(9 ㎎, 0.04 m㏖)를 MeCN (10 ㎖) 중 dppp(41 ㎎, 0.1 m㏖), TEA(123 ㎕, 0.9 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민 (174 ㎎, 1.3 m㏖) 및 rac-1-((6S,7R)-7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-일)에탄-1-온(180 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 CO 분위기 하에서 15 atm에서 교반하였다. 조 생성물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% HCOOH) 중 50%→55% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켰다. 그 다음 얻은 물질을 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 20% B→47% B)로 정제시켜 rac-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 키랄 분취용 SFC(CelluCoat 칼럼, 250×30 ㎜, 5 ㎛, 120 bar 및 40℃에서 CO2에서 이동상 30% MeOH 사용, 유량 100 ㎖/분)로 분리시켜 rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(37 ㎎, 21%, 100%ee) 및 rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(34 ㎎, 19%, 100%ee)를 제공하였다. 두 이성질체를 검으로서 수집하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) (회전이성질체의 3:4 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.55 - 8.61 (m, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.30/7.29 (s, 1H) (회전이성질체), 7.22 (dd, 1H), 4.65 - 4.74 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.83 - 3.93 (m, 2H), 3.55 - 3.65 (m, 2H), 1.93 - 2.41 (m, 5H), 1.77 (br. s, 3H), 1.67 - 1.76 (m, 2H), 0.57/0.56 (d, 3H) (회전이성질체). m/z (ESI+) [M+H]+ = 488.
rel -2-((6 R ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 66) 및 이성질체 2(실시예 67)
rac - tert -부틸 (6 R ,7 R )-7-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
0℃에서 N2 분위기 하에서 KOH(1.4 g, 25.0 m㏖)를 THF(50 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (6R,7S)-6-메틸-7-((메틸설포닐)옥시)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(Int III-5) (3.0 g, 9.0 m㏖) 및 5-브로모-6-메톡시-1H-인다졸(1.9 g, 8.2 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(100 ㎖)로 희석시키고, EtOAc(2×75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 오일을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 50→90% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(0.5 g, 13%)를 황색 고체로서 제공하였다. m/z (ESI+) [M+H]+ = 464/466.
rac - tert -부틸 (6 R ,7 R )-7-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트
CO 분위기 하에서 15 atm 및 90℃에서 MeCN(8 ㎖) 중 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민 (255 ㎎, 1.9 m㏖), dppp (82 ㎎, 0.2 m㏖), Pd(OAc)2 (44 ㎎, 0.2 m㏖), TEA(588 ㎎, 5.8 m㏖) 및 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(450 ㎎, 1.0 m㏖)의 용액을 12시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 40→90% MeCN으로 용리)로 정제시켜 조물질 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(450 ㎎)를 황색 오일로서 제공하였다. m/z (ESI+) [M+H]+ = 546.
rac - N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((6 R ,7 R )-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
조물질 rac-tert-부틸 (6R,7R)-7-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(450 ㎎)에 DCM(4 ㎖) 중 TFA(2 ㎖, 26.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조물질 rac-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((6R,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(350 ㎎)을 황색 오일로서 제공하였다. 생성물을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. m/z (ESI+) [M+H]+ = 446.
rel -2-((6 R ,7 R )-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 66) 및 이성질체 2(실시예 67)
rt에서 조물질 rac-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((6R,7R)-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 TFA염(350 ㎎)을 DCM(8 ㎖) 중 TEA(195 ㎎, 1.9 m㏖)에 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 5분 동안 교반하고, 그 다음 아세트산 무수물(99 ㎎, 1.0 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(5 ㎖)로 켄칭하고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 20→100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체를 키랄 분취용 HPLC(CHIRALPAK IF, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 이동상 A: MTBE(2 mM NH3-MeOH), 이동상 B: MeOH; 유량: 17 ㎖/분; 등용매 50% B 18분 동안)로 분리시켜 rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(95 ㎎, 30%, 100%ee) 및 이성질체 2를 제공하였고, 그 후 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 30×150 ㎜, 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH), 이동상 B: MeCN; 유량: 60 ㎖/분; 구배: 7분 동안 20% B→40% B)로 두 번째로 정제시켜 rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(66 ㎎, 21%, 99%ee)를 수득하였다. 두 이성질체를 황색 고체로서 수집하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 11.04 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.580/8.577 (s, 1H) (회전이성질체), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.06 - 4.17 (m, 1H), 3.93 - 4.01/3.65 - 3.73 (m, 2H) (회전이성질체), 3.80/3.53 (s, 2H) (회전이성질체), 2.06 - 2.19 (m, 1H), 1.90 - 2.05 (m, 4H), 1.80/1.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.60 - 1.73 (m, 1H), 1.38 - 1.49 (m, 1H), 0.60/0.58 (d, 3H) (회전이성질체). m/z (ESI+) [M+H]+ = 488. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (d, 1H), 8.55 - 8.61 (m, 2H), 8.15 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.05 - 4.17 (m, 1H), 3.92 - 4.00/3.65 - 3.72 (m, 2H) (회전이성질체), 3.79/3.52 (s, 2H) (회전이성질체), 2.05 - 2.20 (m, 1H), 1.89 - 2.05 (m, 4H), 1.79/1.76 (s, 3H) (회전이성질체), 1.61 - 1.72 (m, 1H), 1.42 (t, 1H), 0.59/0.57 (s, 3H) (회전이성질체). m/z (ESI+) [M+H]+ = 488.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5 s ,8 s )-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 68)
메틸디페닐실란카르복실산(95 ㎎, 0.4 m㏖) 및 KF(23 ㎎, 0.4 m㏖)를 건조되고 N2-플러싱된 COware 기체 반응기의 챔버 A에 첨가하였다. 탈기된 무수 MeCN(1 ㎖) 중 (5s,8s)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-6) (35 ㎎, 0.3 m㏖), dppp(14 ㎎, 0.03 m㏖), Pd(OAc)2(7 ㎎, 0.03 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(80 ㎎, 0.6 m㏖) 및 DIPEA(138 ㎕, 0.8 m㏖)를 챔버 B에 첨가하였다. 그 다음, DMSO(350 ㎕)를 챔버 A에 첨가하고, 챔버 B를 85℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시켰다. 챔버 B 내의 반응물을 aq. 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시키고, DCM(30 ㎖)에 용해시키고, 5 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하였다. 카트리지를 DCM/MeOH(1:1; 100 ㎖)으로 세척하고, 그 다음 DCM/4 N NH3-MeOH 용액(1:1; 100 ㎖)으로, 그 다음 2 N NH3-MeOH 용액(100 ㎖)으로 용리시켜 암황색 고체를 제공하였다. 고체를 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~2.5% 2 N NH3-MeOH 용액으로 용리)로 정제시켜 황색 고체를 제공하였다. 고체를 현탁시키고, MeCN(2 ㎖)에서 rt에서 48시간 동안 교반하였다. 그 다음 현탁액을 여과하고, 얼음 냉각된 MeCN(500 ㎕×2)으로 세척하여 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(36 ㎎, 58%)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11.25 (s, 1H), 8.83 (d, 1H), 8.35 - 8.44 (m, 2H), 8.10 (d, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.02 (dd, 1H), 4.36 - 4.46 (m, 1H), 4.19 (s, 3H), 3.38 (s, 2H), 2.89 (s, 3H), 2.33 (s, 2H), 2.20 - 2.28 (m, 2H), 2.06 - 2.17 (m, 2H), 1.97 (d, 2H), 1.68 (td, 2H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+.
N-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5 r, 8 r )-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 69)
메틸디페닐실란카르복실산(88 ㎎, 0.4 m㏖) 및 KF(21 ㎎, 0.4 m㏖)를 건조되고 N2-플러싱된 COware 기체 반응기의 챔버 A에 첨가하였다. 탈기된 무수 MeCN(1 ㎖) 중 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-7)(49 ㎎, 0.1 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(27 ㎎, 0.2 m㏖), dppp(13 ㎎, 0.03 m㏖), Pd(OAc)2(7 ㎎, 0.03 m㏖) 및 DIPEA(127 ㎕, 0.7 m㏖)를 챔버 B에 첨가하였다. 그 다음, DMSO(200 ㎕)를 챔버 A에 첨가하고, 챔버 B를 85℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시켰다. 챔버 B 내의 반응물을 aq. 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시키고, DCM(30 ㎖)에 용해시키고, 5 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하였다. 로딩된 SCX2 카트리지를 DCM/MeOH(1:1; 100 ㎖)로 세척하고, 그 다음 DCM/4 N NH3-MeOH 용액(1:1; 100 ㎖), 이후에 2 N NH3-MeOH 용액(100 ㎖)으로 용리시켜 암황색 고체를 제공하였다. 고체를 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~2.5% 2 N NH3-MeOH 용액으로 용리)로 정제시켜 황색 고체를 제공하였고, 이것을 MeCN(3 ㎖)에 현탁시키고 rt에서 48시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 얼음 냉각된 MeCN(500 ㎕×2)으로 세척하여 고체를 제공하였다. 고체를 15 ㎖의 끓는 MeCN에 용해시키고, 45℃에서 감압 하에서 5 ㎖까지 서서히 농축시켜 현탁액을 제공하였고, 이것을 rt에서 밤새 유지시켰다. 현탁액을 여과하고, 잔류물을 얼음 냉각된 MeCN(500 ㎕×2)으로 세척하여 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(46 ㎎, 90%)를 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11.28 (s, 1H), 8.8 - 8.84 (m, 1H), 8.47 (dd, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.12 (dd, 1H), 4.40 (tt, 1H), 4.19 (s, 3H), 3.20 (s, 2H), 2.87 (t, 3H), 2.44 (s, 2H), 2.22 - 2.30 (m, 2H), 2.04 - 2.15 (m, 2H), 1.91 - 1.98 (m, 2H), 1.65 (td, 2H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+.
rel -2-((5 R ,7 R ,8 R )-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 또는 rel -2-((5 R ,7 S ,8 S )-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 70), 이성질체 2(실시예 71), 이성질체 3(실시예 72) 및 이성질체 4(실시예 73)
tert -부틸 7-메틸-8-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트
THF(150 ㎖) 중 tert-부틸 8-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(15.0 g, 59.2 m㏖)의 용액에 THF 중 1 M LiHMDS(118.5 ㎖, 118.5 m㏖)를 -78℃에서 N2 분위기 하에서 20분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 아이오도메탄(7.4 ㎖, 118.5 m㏖)을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt까지 가온시키고, 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응물을 aq. 포화 NH4Cl 용액(300 ㎖)으로 켄칭하고, EtOAc(250 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 5~20% EtOAc로 용리)로 정제시켜 tert-부틸 7-메틸-8-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(6.6 g, 42%)를 황색 반고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 212 [M-tBu]+.
rac - tert -부틸 (5 R ,7 R ,8 S )-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac - tert -부틸 (5 R ,7 S ,8 R )-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트의 혼합물
0℃에서 N2 분위기 하에서 THF(70 ㎖) 중 tert-부틸 7-메틸-8-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(5.0 g, 18.7 m㏖)의 용액에 THF 중 2 M 리튬 트리-sec-부틸보로히드리드(18.7 ㎖, 37.4 m㏖)를 1분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아세톤(20 ㎖)으로 켄칭하고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 25~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-tert-부틸 (5R,7R,8S)-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8R)-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(4.8 g, 95%)의 혼합물을 연황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 214 [M-tBu]+.
rac-tert -부틸 (5 R, 7 R ,8 R )-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert -부틸 (5 R, 7 S ,8 S )-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트의 혼합물
0℃에서 N2 분위기 하에서 THF(60 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (5R,7R,8S)-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8R)-7,8-디히드록시-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(3.4 g, 12.6 m㏖), 트리페닐포스핀(6.6 g, 25.2 m㏖) 및 이소인돌린-1,3-디온(2.8 g, 18.9 m㏖)의 혼합물의 용액에 DIAD(4.9 ㎖, 25.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 45℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 염수(200 ㎖)에 붓고, EtOAc(250 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM으로 용리)로 정제시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.05% NH4OH))로 추가로 정제시켜 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(1.9 g, 37%)의 혼합물을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 384 [M-tBu+CH3CN]+.
rac - tert -부틸 (5 R ,7 R ,8 R )-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac - tert -부틸 (5 R ,7 S ,8 S )-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트의 혼합물
EtOH(30 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트 및 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(1.9 g, 4.6 m㏖)의 혼합물의 용액에 히드라진 수화물(물 중 80%)(2.9 g, 46.4 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM으로 용리)로 정제시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 추가로 정제시켜 표제 화합물의 포르메이트염을 제공하였다. 포르메이트를 물(50 ㎖)에 용해시키고, aq. 포화 NaHCO3 용액으로 pH 9로 염기성화시키고, 그 다음 EtOAc(100 ㎖×2) 및 클로로포름(100 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(380 ㎎, 31%)의 혼합물을 연황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 269 [M+H]+.
rac - tert -부틸 (5 R ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac - tert -부틸 (5 R ,7 S ,8 S )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트의 혼합물
i-PrOH(15 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-아미노-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(360 ㎎, 1.3 m㏖)의 혼합물의 용액에 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(384 ㎎, 1.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 30℃까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(814 ㎎, 4.0 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 N2 분위기 하에서 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트(440 ㎎, 69%)의 혼합물을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 478/480 [M+H]+.
rac -(5 R ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac -(5 R ,7 S ,8 S )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 혼합물
디옥산(4 ㎖) 중 rac-tert-부틸 (5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트와 rac-tert-부틸 (5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트의 혼합물(410 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 디옥산 중 4 N HCl(2.0 ㎖, 8.0 m㏖)을 첨가하고, 생성된 용액을 rt에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 HCl염의 조물질 혼합물(354 ㎎)을 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. MS ESI, m/z = 378/380 [M+H]+.
rac -(5 R ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac -(5 R ,7 S ,8 S )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 혼합물
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(10 ㎖) 중 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-7-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 HCl염의 조물질 혼합물(354 ㎎, 0.9 m㏖), 아세트산(51 ㎎, 0.9 m㏖) 및 aq. 포름알데히드 용액(40 wt.%)(674 ㎎, 8.3 m㏖)에 소듐 트리아세톡시보로히드리드(362 ㎎, 1.7 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(2% NH4OH) 중 0~100% MeOH로 용리)로 직접 정제시켜 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 혼합물(335 ㎎, 100%)을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 392/394 [M+H]+.
rac -(5 R ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온과 rac -(5 R ,7 S ,8 S )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온의 혼합물
THF(25 ㎖) 중 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸의 혼합물(310 ㎎, 0.8 m㏖)의 용액에 아이오딘 용액(1.5 g, 5.9 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖) 중 중탄산나트륨(664 ㎎, 7.9 m㏖)을 첨가하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 rt에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 색상이 연한 황색으로 변할 때까지 반응물을 aq. 포화 Na2SO3 용액으로 켄칭하고, 그 다음 DCM(200 ㎖)으로 추출하였다. 유기층을 염수(100 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH 플루오로-페닐 OBD, 5㎛ 30×150 ㎜; 12분 동안 물(0.1% FA) 중 32 ~ 42% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 40%의 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-1-온을 함유하는 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온)의 혼합물(120 ㎎)을 연황색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 분리시키지 않고 사용하였다.
rel -2-((5 R ,7 R ,8 R )-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 또는 rel -2-((5 R ,7 S ,8 S )-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 70), 이성질체 2(실시예 71), 이성질체 3(실시예 72) 및 이성질체 4(실시예 73)
MeCN(15 ㎖) 중 40%의 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-1-온을 함유하는 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온과 rac-(5R,7S,8S)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2,7-디메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온)의 혼합물(115 ㎎), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(80mg, 0.6 m㏖), Pd(OAc)2(14 ㎎, 0.06 m㏖), dppp(41 ㎎, 0.1 m㏖) 및 DIPEA(183 ㎎, 1.4 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 40%의 2-(2,7-디메틸-1-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 함유하는 rel-2-((5R,7R,8R)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드와 rel-2-((5R,7S,8S)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 내지 4의 혼합물을 제공하였다. 목적하는 생성물을 부산물로부터 분리시키고, 3회의 연속적인 키랄 분취용 HPLC 실시(1차 실행: Chiralpak® IA, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; EtOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분; 2차 및 3차 실행: Chiralpak® ID, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 16분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 분리시켜 다음 4개의 이성질체를 연황색 고체로서 제공하였다: 이성질체 1(7 ㎎, 5%), 이성질체 2(7 ㎎, 5%), 이성질체 3(5 ㎎, 3%) 및 이성질체 4(5 ㎎, 3%). 이성질체 1과 2는 서로의 거울상이성질체여서, 두 이성질체에 대해서 얻은 LCMS/1H NMR은 동일하며; 이성질체 3과 이성질체 4는 서로의 거울상이성질체여서 두 이성질체에 대해서 얻은 LCMS/1H NMR은 동일하다. 이성질체 1/이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.06 - 4.17 (m, 4H), 3.14 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.34 (s, 2H), 2.04 - 2.27 (m, 2H), 1.87 - 1.98 (m, 1H), 1.72 - 1.83 (m, 2H), 1.54 - 1.66 (m, 1H), 1.34 (t, 1H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+. 이성질체 3/이성질체 4: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.07 - 4.17 (m, 4H), 3.38 (s, 2H), 2.76 (s, 3H), 2.06 - 2.28 (m, 4H), 1.86 - 1.96 (m, 1H), 1.76 - 1.86 (m, 2H), 1.51 - 1.63 (m, 1H), 1.33 (t, 1H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 74) 및 이성질체 2(실시예 75)
(4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올
rt에서 i-PrOH(20 ㎖) 중 (4-아미노시클로헥실)메탄올(2.0 g, 15.5 m㏖)의 용액에 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(4.0 g, 15.5 m㏖)를 N2 분위기 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(15.7 g, 77.4 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 20~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 황색 오일을 수득하였다. 그 다음 오일을 EtOAc(2 ㎖)/PE(12 ㎖)로부터 결정화시켜 (4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올(900 ㎎, 17%)을 무색 고체로서 제공하였다. 결정화로부터의 여과물을 감압 하에서 농축시켜 (4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올(5.0 g, 47 wt.%)을 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
(4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)메틸 카르바메이트
0℃에서 DCM(20 ㎖) 중 조물질 (4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올(47 wt.%) (4.9 g)의 용액에 2,2,2-트리클로로아세틸 이소시아네이트(1.5 g, 8.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, MeOH 및 K2CO3(94 ㎎, 0.7 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(20 ㎖)로 켄칭하고, DCM(20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/펜탄(3/1)(20 ㎖)으로부터 결정화시켜 (4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메틸 카르바메이트(2.5 g, 96%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 382/384 [M+H]+.
8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
N2 분위기 하에서 rt에서 DCM(150 ㎖) 중 산화마그네슘(728 ㎎, 18.1 m㏖), [아세틸옥시(페닐)-λ3-아이오다닐] 아세테이트(3.5 g, 11.0 m㏖) 및 (4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메틸 카르바메이트(1.5 g, 3.9 m㏖)의 용액에 로듐(II) 아세테이트(347 ㎎, 0.8 m㏖)를 3분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 용액을 40℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 물(100 ㎖)에 붓고, DCM(200 ㎖×2)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH C18 OBD, 5㎛ 30×150 ㎜; 8분 동안 물(0.05% TFA) 중 34~35% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(340 ㎎, 23%)을 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 380/382 [M+H]+.
8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
rt에서 N2 분위기 하에서 아이오도메탄(134 ㎎, 1.0 m㏖)을 DMF(6 ㎖) 중 NaH(60 wt.%)(19 ㎎, 0.5 m㏖) 및 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(120 ㎎, 0.3 m㏖)의 현탁액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 aq. 포화 NH4Cl 용액(5 ㎖)으로 켄칭하고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(70 ㎎, 56%)을 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 380/382 [M+H]+.
N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 74) 및 이성질체 2(실시예 75)
CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 MeCN(10 ㎖) 중 8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(124 ㎎, 0.3 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(121 ㎎, 0.9 m㏖), Pd(OAc)2(14 ㎎, 0.06 m㏖), dppp(41 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(438 ㎕, 3.2 m㏖)의 현탁액을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~90% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 8분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 30~60% MeOH로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 황색 고체로서 제공하였다. 고체를 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IF, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 26분 동안 EtOH 중 50% MTBE(0.5% 2M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 13.0 ㎖/분)로 분리시켜 rel-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(7 ㎎, 4%, 100%ee) 및 rel-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(1 ㎎, 1%, 98.9%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.65 - 4.73 (m, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 2.51 - 2.58 (m, 2H), 1.93 - 2.15 (m, 4H), 1.53 (d, 2H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.62 - 8.66 (m, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.48 - 4.61 (m, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.12 (s, 3H), 2.72 (s, 3H), 2.18 (s, 2H), 1.95 - 2.09 (m, 4H), 1.66 - 1.76 (m, 2H). MS ESI, m/z = 476 [M+H]+.
rel -2-((1 R ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 76), 이성질체 2(실시예 77)
rel -2-((1 S ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 78) 및 이성질체 2(실시예 79)
rac -(3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온
aq. HCl(12 N)(10.0 ㎖, 120.0 m㏖)을 THF(10 ㎖) 및 물(10 ㎖)에 첨가하고, 그 다음 rac-(7R,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(Int III-11)(3.1 g, 18.0 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 pH를 30 wt.% aq. NH4OH 용액을 사용하여 pH 5 내지 6으로 조정하고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-(3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온(2.1 g, 91%)을 황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 170 [M+CH3CN+H]+.
rac -(1 S ,2 R, 4 R )-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac -(1 S ,2 R, 4 S )-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올의 혼합물
rt에서 N2 분위기 하에서 DCE(40 ㎖) 중 rac-(3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온(2.0 g, 15.6 m㏖)의 용액에 페닐메탄아민(2.0 g, 18.7 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 소듐 트리아세톡시보로히드리드(9.9 g, 46.8 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(15 ㎖)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-(1S,2R,4R)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(2.10 g, 61%)의 혼합물을 갈색 고체로서 제공하였다.
rac -(1 S ,2 R, 4 R )-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac -(1 S ,2 R, 4 S )-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올의 혼합물
N2 분위기 하에서 MeOH(30 ㎖) 중 rac-(1S,2R,4R)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(2.0 g, 9.1 m㏖)의 혼합물의 용액에 탄소 상의 Pd(OH)2(20 wt.%)(640 ㎎, 0.9 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 수소 하에서 2 atm에서 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔로 여과하고, 실리카겔 케이크를 MeOH(30 ㎖)로 세척하였다. 합한 MeOH 용액을 감압 하에서 농축시켜 rac-(1S,2R,4R)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올의 조물질 혼합물(1.20 g, 90 wt.%)을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다
rac -(1 S ,2 R, 4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac -(1 S ,2 R, 4 S )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올의 혼합물
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(20 ㎖) 중 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(2.2 g, 8.4 m㏖)의 용액에 rac-(1S,2R,4R)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올(90 wt.%)의 조물질 혼합물(1.0 g)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(5.6 g, 27.9 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~50% MeOH로 용리)로 정제시켜 rac-(1S,2R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(5.0 g, 45 wt.%)의 조물질 혼합물을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
rac -2-((1 R ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드와 rac -2-((1 S ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드의 혼합물
MeCN(80 ㎖) 중 rac-(1S,2R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1S,2R,4S)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올의 조물질 혼합물(45 wt.%)(5.0 g), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(978 ㎎, 7.3 m㏖), Pd(OAc)2(291 ㎎, 1.3 m㏖), dppp(1.1 g, 2.7 m㏖) 및 TEA(2.8 ㎖, 19.9 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 10 atm 및 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~100% EtOAc로 용리)로 정제시키고, 분취용 SFC (DAICEL DCpak® P4VP, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; CO2에서 35% MeOH(2 mM NH3-MeOH)을 사용한 등용매(35℃, 100 bar))로 추가로 정제시켜 rac-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드와 rac-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 혼합물(600 ㎎, 22%)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rac -2-((1 R ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 및 rac -2-((1 S ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드
rac-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드와 rac-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 혼합물(600 ㎎, 1.4 m㏖)을 키랄 분취용 SFC(Chiralpak® IH, 5 ㎛ 30×250 ㎜; CO2에서 32% MeOH(2 mM NH3-MeOH)를 사용한 등용매(35℃, 100 bar); 70 ㎖/분)로 분리시켜 rac-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 33%) 및 rac-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(220 ㎎, 37%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다.
rel -2-((1 R ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 76) 및 이성질체 2(실시예 77)
rac-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 0.5 m㏖)를 추가로 분리시키고, 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IA, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 23분 동안 EtOH 중 50% 헥산/DCM(75/25, 0.5% 2M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 18.0 ㎖/분) 및 비키랄 분취용 HPLC(이성질체 1의 경우: Waters XSelect CSH C18 OBD, 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(0.1% FA); 중 22 ~ 26% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(40 ㎎, 20%, 100%ee) 및 rel-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(40 ㎎, 20%, 100%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.58 (br. s, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.36 - 4.62 (m, 2H), 4.12 (s, 3H), 3.66 (s, 1H), 2.11 - 2.27 (m, 1H), 2.00 (q, 1H), 1.80 - 1.93 (m, 2H), 1.56 - 1.80 (m, 3H), 0.96 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,3 R ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 78) 및 이성질체 2(실시예 79)
rac-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(200 ㎎, 0.5 m㏖)를 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® ID-2, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 19분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 추가로 분리시켜 rel-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(80 ㎎, 40%, 98.2%ee) 및 rel-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(80 ㎎, 40%, 97.9%ee) 둘 다를 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 4.68 (tt, 1H), 4.60 (br. s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.71 (dt, 1H), 1.92 - 2.20 (m, 5H), 1.57 - 1.76 (m, 2H), 1.00 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.61 (br. s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.63 - 4.73 (m, 1H), 4.60 (d, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.67 - 3.76 (m, 1H), 1.92 - 2.21 (m, 5H), 1.58 - 1.75 (m, 2H), 1.00 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,3 S ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 80) 및 이성질체 2(실시예 81)
rel -2-((1 R ,3 S ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 82) 및 이성질체 2(실시예 83)
rac -(3 S ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온
aq. HCl(12 N)(8.0 ㎖, 96.0 m㏖)을 THF(8 ㎖) 및 물(8 ㎖)에 첨가하고, 그 다음 rac-(7S,8S)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올(Int III-12)(2.0 g, 11.6 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물의 pH를 30 wt.% aq. NH4OH 용액을 사용하여 pH 5 내지 6으로 조정하고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-(3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온(1.3 g, 89%)을 황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 211 [M+2CH3CN+H]+.
rac -(1 S ,2 S, 4 S )-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올 및 rac -(1 S ,2 S, 4 R )-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올
rt에서 N2 분위기 하에서 DCE (50 ㎖) 중 rac-(3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥산-1-온(1.3 g, 10.1 m㏖)의 용액에 페닐메탄아민(1.3 g, 12.2 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 소듐 트리아세톡시보로히드리드(6.6 g, 30.4 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(10 ㎖)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 30~60% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-(1S,2S,4S)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(200 ㎎, 9%) 및 rac-(1S,2S,4R)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(700 ㎎, 32%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 220 [M+H]+.
rac -(1 S ,2 S ,4 S )-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올
N2 분위기 하에서 MeOH(20 ㎖) 중 rac-(1S,2S,4S)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(180 ㎎, 0.8 m㏖)의 용액에 탄소 상의 Pd(OH)2(20 wt.%)(175 ㎎, 0.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 수소 하에서 1 내지 2 atm에서 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔로 여과하고, 실리카겔 케이크를 MeOH(100 ㎖)로 세척하였다. 합한 MeOH 용액을 감압 하에서 농축시켜 rac-(1S,2S,4S)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올(100 ㎎, 94%)을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 130 [M+H]+.
rac -(1 S ,2 S ,4 S )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(20 ㎖) 중 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(242 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 rac-(1S,2S,4S)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올(100 ㎎, 0.8 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(626 ㎎, 3.1 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~80% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 rac-(1S,2S,4S)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(200 ㎎, 76%)을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,3 S ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 80) 및 이성질체 2(실시예 81)
MeCN(50 ㎖) 중 rac-(1S,2S,4S)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(200 ㎎, 0.3 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(40 ㎎, 0.3 m㏖), Pd(OAc)2(14 ㎎, 0.06 m㏖), dppp(41 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(164 ㎕, 1.2 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 10 atm 및 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~80% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 rac-2-((1S,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IA, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 11분 동안 DCM/MeOH(1:1) 중 10% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 추가로 분리시켜 rel-2-((1S,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(16 ㎎, 13%, 100%ee) 및 rel-2-((1S,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(16 ㎎, 13%, 100%ee)를; 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.54 - 8.59 (m, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.66 (d, 1H), 4.46 - 4.59 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.02 - 3.14 (m, 1H), 2.02 - 2.16 (m, 2H), 1.96 (td, 2H), 1.70 (q, 1H), 1.37 - 1.58 (m, 2H), 1.01 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rac -(1 S ,2 S ,4 R )-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올
N2 분위기 하에서 MeOH(20 ㎖) 중 rac-(1S,2S,4R)-4-(벤질아미노)-2-메틸시클로헥산-1-올(600 ㎎, 2.7 m㏖)의 용액에 탄소 상의 Pd(OH)2(20 wt.%)(582 ㎎, 0.6 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 수소 하에서 1 내지 2 atm에서 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔로 여과하고, 실리카겔 케이크를 MeOH(100 ㎖)로 세척하였다. 합한 MeOH 용액을 감압 하에서 농축시켜 조물질 rac-(1S,2S,4R)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올(400 ㎎)을 황색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 130 [M+H]+.
rac -(1 S ,2 S ,4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(30 ㎖) 중 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(740 ㎎, 2.9 m㏖)의 용액에 rac-(1S,2S,4R)-4-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올(380 ㎎, 2.6 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 후 트리-n-부틸포스핀(1.6 g, 7.8 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~80% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 rac-(1S,2S,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(600 ㎎, 68%)을 갈색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
rel -2-((1 R ,3 S ,4 S )-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 이성질체 1(실시예 82) 및 이성질체 2(실시예 83)
MeCN(55 ㎖) 중 rac-(1S,2S,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(580 ㎎, 1.7 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(257 ㎎, 1.9 m㏖), Pd(OAc)2(67 ㎎, 0.3 m㏖), dppp (288 ㎎, 0.7 m㏖) 및 TEA(994 ㎕, 7.1 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 10 atm 및 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~80% 아세토니트릴로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 19×250 ㎜; 11분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 22 ~ 32% MeCN으로의 용리 구배; 25 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rac-2-((1R,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IE, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 27분 동안 DCM/MeOH(1:1)중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분) 및 비키랄 분취용 HPLC(이성질체 1의 경우: Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 18 ~ 48% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1R,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(13 ㎎, 1%, 98.5%ee) 및 rel-2-((1R,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(19 ㎎, 3%, 99.6%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.61 - 4.70 (m, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.13 (s, 3H), 2.44 - 2.49 (m, 1H), 2.35 - 2.48 (m, 1H), 1.84 - 1.94 (m, 1H), 1.72 - 1.82 (m, 2H), 1.63 - 1.70 (m, 1H), 1.47 - 1.56 (m, 1H), 1.01 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.59 - 4.70 (m, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.30 - 3.37 (m, 1H), 2.45 - 2.50 (m, 1H), 2.35 - 2.48 (m, 1H), 1.83 - 1.95 (m, 1H), 1.71 - 1.83 (m, 2H), 1.61 - 1.71 (m, 1H), 1.47 - 1.56 (m, 1H), 1.01 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
6-시클로프로폭시-2-((1 r ,4 r )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 84)
(1r,4r)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-2)(80 ㎎, 0.2 m㏖) 및 Pd(OAc)2(5 ㎎, 0.02 m㏖)을 MeCN(10 ㎖) 중 TEA(61 ㎎, 0.6 m㏖), dppp(17 ㎎, 0.04 m㏖), 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(54 ㎎, 0.4 m㏖)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 15 atm CO 분위기에서 90℃에서 교반하였다. 12시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 직접 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0%→100% MeCN으로 용리)를 수행하고, 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 10분 동안 25% B→30% B; 유량: 60 ㎖/분)를 수행하여 6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(17 ㎎, 20%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.91 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.19 (dd, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.38 - 4.55 (m, 1H), 4.16 - 4.28 (m, 1H), 3.48 - 3.62 (m, 1H), 1.84 - 2.23 (m, 6H), 1.30 - 1.53 (m, 2H), 0.94 - 1.18 (m, 4H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 433.
6-시클로프로폭시-2-((1 s ,4 s )-4-히드록시시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 85)
MeCN(5 ㎖) 중 조물질 (1s,4s)-4-(6-시클로프로폭시-5-아이오도-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-올(Int IV-1)(70 ㎎, 0.2 m㏖), dppp(7 ㎎, 0.02 m㏖), TEA(98 L, 0.7 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(54 ㎎, 0.4 m㏖)에 Pd(OAc)2(5 ㎎, 0.02 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 15 atm CO 분위기에서 90℃에서 교반하였다. 12시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0%→100% MeCN으로 용리)를 사용하여 정제시켜 6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(7 ㎎, 9%)를 연황색 고체 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.94 (s, 1H), 8.65 (dd, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.43 - 4.59 (m, 2H), 4.20 - 4.29 (m, 1H), 3.86 - 3.93 (m, 1H), 2.22 - 2.39 (m, 2H), 1.72 - 1.95 (m, 4H), 1.57 - 1.72 (m, 2H), 1.07 - 1.15 (m, 2H), 0.97 - 1.07 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 433.
6-메톡시-2-((5 r ,8 r )-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 86)
메틸디페닐실란카르복실산(84 ㎎, 0.4 m㏖) 및 KF(20 ㎎, 0.4 m㏖)를 건조되고 N2-플러싱된 COware 기체 반응기의 챔버 A에 첨가하였다. 탈기된 무수 MeCN(1.5 ㎖) 중 (5r,8r)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-7) (47 ㎎, 0.1 m㏖), 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(35 ㎎, 0.2 m㏖), dppp(12 ㎎, 0.03 m㏖), Pd(OAc)2(7 ㎎, 0.03 m㏖) 및 DIPEA(122 ㎕, 0.7 m㏖)를 챔버 B에 첨가하였다. 그 다음, DMSO(200 ㎕)를 챔버 A에 첨가하고, 챔버 B를 85℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시켰다. 챔버 B 내의 반응물을 aq. 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시키고, DCM(30 ㎖)에 용해시키고, 5 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하였다. 카트리지를 DCM/MeOH(1:1; 100 ㎖)로 세척하고, 그 다음 4 N NH3-MeOH 용액(100 ㎖)으로 용리시켜 암갈색 고체를 제공하였다. 갈색 고체를 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~2.5% 2 N NH3-MeOH 용액으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH C18 OBD, 5 ㎛ 19 ㎜×150 ㎜; 물/MeCN(95/5; 0.2% 26 wt.% NH4OH) 중 10~31% MeCN으로 용리, 20분 이내; 유량: 19 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 황색 고체를 제공하였다. 고체를 DCM에 용해시키고, 5 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하고, 로딩된 카트리지를 물(20 ㎖) 및 MeOH(50 ㎖)로 세척하여 부산물을 제거하였고, 그 다음 MeOH/DCM(1:1; 100 ㎖) 중 20 ㎖ 2 N NH3 용액으로 용리시켜 6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(14 ㎎, 25%)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.46 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.60 (dd, 1H), 8.40 (dd, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.79 (dd, 1H), 4.39 (tt, 1H), 4.16 (s, 3H), 3.20 (s, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.44 (s, 2H), 2.22 - 2.32 (m, 2H), 2.04 - 2.15 (m, 2H), 1.89 - 1.98 (m, 2H), 1.61 - 1.69 (m, 2H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+.
6-메톡시-2-((5 s ,8 s )-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 87)
메틸디페닐실란카르복실산(95 ㎎, 0.4 m㏖) 및 KF(23 ㎎, 0.4 m㏖)를 건조되고 N2-플러싱된 COware 기체 반응기의 챔버 A에 첨가하였다. 탈기된 무수 MeCN(1 ㎖) 중 (5s,8s)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸-2-아자스피로[4.5]데칸-3-온(Int IV-6)(52 ㎎, 0.13 m㏖), 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민(Int I-5)(39 ㎎, 0.3 m㏖), dppp(14 ㎎, 0.03 m㏖), Pd(OAc)2(7 ㎎, 0.03 m㏖) 및 DIPEA(138 ㎕, 0.8 m㏖)를 챔버 B에 첨가하였다. 그 다음, DMSO(350 ㎕)를 챔버 A에 첨가하고, 챔버 B를 85℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시켰다. 챔버 B 내의 반응물을 aq. 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시키고, DCM(30 ㎖)에 용해시키고, 5 g Isolute®SCX2 교환 카트리지에 로딩하였다. 카트리지를 DCM/MeOH(1:1; 100 ㎖)로 세척하고, 그 다음 4 N NH3-MeOH 용액(100 ㎖)으로 용리시켜 암갈색 고체를 제공하였다. 고체를 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~2.5% 2 N NH3-MeOH 용액으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters XBridge BEH C18 OBD, 5 ㎛ 19 ㎜×150 ㎜; 물/MeCN(95/5; 0.2% 26 wt.% aq. NH4OH) 중 5-35% MeCN으로 용리, pH 10, 20분 이내; 유량: 19 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(3 ㎎, 5%)를 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.45 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.80 (d, 1H), 8.61 (dd, 1H), 8.41 (dd, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.80 (dd, 1H), 4.41 (tt, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 2.88 (d, 3H), 2.3 - 2.35 (m, 2H), 2.2 - 2.27 (m, 2H), 2.14 (qd, 2H), 1.94 - 1.99 (m, 2H), 1.67 (td, 2H). MS ESI, m/z = 474 [M+H]+.
2-((1 R ,2 R ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 88) 및 2-((1 R ,2 R ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 89)
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(10 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-2)(180 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 NaBH4(33 ㎎, 0.9 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~60% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 2-((1R,2R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 갈색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 키랄-HPLC(Chiralpak® ID 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 19분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 40 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체 2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(15 ㎎, 8%) 및 제2 용리 이성질체 2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(105 ㎎, 50%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. (1 R ,2 R ,4 S )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.07 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (dd, 1H), 4.58 (d, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.03 - 4.15 (m, 1H), 3.93 - 4.01 (m, 1H), 2.25 - 2.46 (m, 2H), 1.55 - 1.90 (m, 4H), 1.29 - 1.42 (m, 1H), 0.54 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. (1 R ,2 R ,4 R )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.16 (dd, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.74 (d, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.02 - 4.11 (m, 1H), 3.54 - 3.71 (m, 1H), 2.10 - 2.26 (m, 1H), 1.86 - 2.10 (m, 4H), 1.28 - 1.48 (m, 1H), 1.09 - 1.26 (m, 1H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
2-((1 S ,2 S ,4 R )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 90) 및 2-((1 S ,2 S ,4 S )-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 91)
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(10 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S)-2-메틸-4-옥소시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-1)(180 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 NaBH4(33 ㎎, 0.9 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~70% MeCN으로 용리)로 정제시켜 2-((1S,2S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 갈색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 키랄-HPLC(Chiralpak® IA 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; MeOH 중 50% MTBE(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체 2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(23 ㎎, 13%) 및 제2 용리 이성질체 2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(120 ㎎, 67%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. (1 S ,2 S ,4 R )-이성질체: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.06 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.57 (d, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.02 - 4.12 (m, 1H), 3.96 (s, 1H), 2.30 - 2.58 (m, 2H), 1.77 - 1.89 (m, 2H), 1.68 - 1.77 (m, 1H), 1.55 - 1.68 (m, 1H), 1.30 - 1.40 (m, 1H), 0.54 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. (1 S ,2 S ,4 S )-이성질체: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.63 (dd, 1H), 8.57 (s, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.73 (d, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.03 - 4.11 (m, 1H), 3.54 - 3.68 (m, 1H), 2.20 - 2.30 (m, 1H), 1.85 - 2.10 (m, 4H), 1.29 - 1.46 (m, 1H), 1.08 - 1.25 (m, 1H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
2-((1 R ,2 R ,4 S )-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 92) 및 2-((1 R ,2 R ,4 R )-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 93)
rac -(7 R ,8 R )- N -벤질-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민
N2 분위기 하에서 톨루엔(50 ㎖) 중 7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온(3.0 g, 17.6 m㏖) 및 페닐메탄아민(2.8 g, 26.4 m㏖)의 용액에 4-메틸벤젠설폰산 일수화물(335 ㎎, 1.8 m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 120℃에서 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켜 조물질 이민 중간체를 제공하였다. -60℃에서 N2 분위기 하에서 MeOH(60 ㎖) 중 이민의 용액에 NaBH4(0.6 g, 15.8 m㏖)를 5분의 기간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 서서히 rt까지 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 조물질 생성물 용액의 5개의 배취를 위에서 기재된 바와 같이 동시에 제조하고, 합한 후 정제시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, EtOAc(500 ㎖)로 용해시키고, 염수(300 ㎖×3)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4HCO3) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 rac-(7R,8R)-N-벤질-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민(8.1 g, 35%)을 주황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 262 [M+H]+.
rac -(7 R ,8 R )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민
N2 분위기 하에서 MeOH(100 ㎖) 중 rac-(7R,8R)-N-벤질-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민(8.1 g, 31.0 m㏖)의 용액에 탄소 상의 Pd(OH)2(20 wt.%)(872 ㎎, 1.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 수소 하에서 2 atm에서 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 셀라이트 케이크를 MeOH(150 ㎖)로 세척하였다. 합한 MeOH 용액을 감압 하에서 농축시켜 조물질 rac-(7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민(5.0 g)을 갈색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다.
5-브로모-6-메톡시-2-((7 R ,8 R )-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2 H -인다졸
rt에서 N2 분위기 하에서 i-PrOH(200 ㎖) 중 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(Int I-1)(10.6 g, 40.9 m㏖)의 용액에 조물질 rac-(7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-아민(7.0 g)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 rt까지 냉각시키고, 그 다음 트리-n-부틸포스핀(41.4 g, 204.4 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~10% MeOH로 용리)로 정제시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.05% NH4OH))로 추가로 정제시켜 rac-5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸을 황색 고체로서 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 SFC(Chiralpak® IG, 5 ㎛ 50×250 ㎜; CO2에서 50% MeOH(0.1% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매(35℃, 100 bar))로 정제시켜 5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(3.0 g, 19%, 100%ee)을 회색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 8.25 (d, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.13 (td, 1H), 3.87 - 3.99 (m, 4H), 3.87 (s, 3H), 2.26 - 2.43 (m, 1H), 2.19 (td, 1H), 1.75 - 1.96 (m, 3H), 1.68 (td, 1H), 1.46 (t, 1H), 0.52 (d, 3H). MS ESI, m/z = 381/383 [M+H]+.
(3 R ,4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온
rt에서 N2 분위기 하에서 THF(5 ㎖) 중 5-브로모-6-메톡시-2-((7R,8R)-7-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸(185 ㎎, 0.5 m㏖)의 용액에 aq. 4 N HCl(5 ㎖, 20.0 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. NH4OH 용액을 사용하여 pH 약 7로 중화시키고, 그 다음 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~50% EtOAc로 용리)로 정제시켜 (3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온(160 ㎎, 98%)을 황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 337/339 [M+H]+.
(3 R ,4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1,3-디메틸시클로헥산-1-올
0℃에서 N2 분위기 하에서 THF(3 ㎖) 중 (3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온(120 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 THF 중 3 N 메틸마그네슘 브로마이드(178 ㎕, 0.5 m㏖)를 2분의 기간에 걸쳐서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(1 ㎖)로 켄칭하고, C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 (3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,3-디메틸시클로헥산-1-올(80 ㎎, 64%)을 황색 오일로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 353/355 [M+H]+.
2-((1 R ,2 R ,4 S )-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 92) 및 2-((1 R ,2 R ,4 R )-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 93)
MeCN(5 ㎖) 중 (3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,3-디메틸시클로헥산-1-올(80 ㎎, 0.2 m㏖), 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(92 ㎎, 0.7 m㏖), Pd(OAc)2(10 ㎎, 0.05 m㏖), dppp(37 ㎎, 0.09 m㏖) 및 TEA(158 ㎕, 1.1 m㏖)의 현탁액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 90℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 2-((1R,2R)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 무색 액체로서 제공하였다. 이 물질을 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH C18 OBD, 5 ㎛ 30 ㎜×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 23 ~ 43% MeCN로 용리; 유량: 60 ㎖/분)로 분리시켜 2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(7 ㎎, 7%) 및 2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(20 ㎎, 20%)를, 둘 다 연황색 고체로서 제공하였다. (1 R ,2 R ,4 S )-이성질체: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.02 - 4.10 (m, 1H), 2.12 - 2.25 (m, 1H), 1.99 - 2.12 (m, 1H), 1.85 - 1.97 (m, 1H), 1.53 - 1.77 (m, 3H), 1.32 - 1.43 (m, 1H), 1.30 (s, 3H), 0.55 (d, 3H). MS ESI, m/z = 435 [M+H]+. (1 R ,2 R ,4 R )-이성질체: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11.22 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.35 - 8.4 (m, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.96 (dd, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.99 (dd, 1H), 4.19 (s, 3H), 3.94 (td, 1H), 2.53 - 2.63 (m, 1H), 2.48 (qd, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.81 - 1.94 (m, 2H), 1.63 (m, 1H), 1.35 - 1.38 (m, 1H), 1.34 (s, 3H), 0.70 (d, 3H). MS ESI, m/z = 435 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 94)
( S )-1-(((1 r ,4 S )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트
DCM(7 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(IntV-3)(140 ㎎, 0.3 m㏖) 및 TEA(171 ㎕, 1.2 m㏖)의 용액에 (S)-1-클로로-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(69 ㎎, 0.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖)로 켄칭하고, DCM(20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1%TFA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 (S)-1-(((1r,4S)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(52 ㎎, 32%)를 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 534 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 94)
THF(1.5 ㎖)/물(1.5 ㎖) 중 (S)-1-(((1r,4S)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(41 ㎎, 0.1 m㏖)의 용액에 LiOH(13 ㎎, 0.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH 플루오로-페닐 OBD, 5㎛ 19×250 ㎜; 10분 동안 물(0.1% FA) 중 30~45% MeCN으로의 용리 구배; 25 ㎖/분)로 정제시켜 2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 및 2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(85:15)의 혼합물(6 ㎎, 15%)을 황색 고체로서 제공하였다. 이 단계에서의 라세미화의 원인은 알려져 있지 않다. MS ESI, m/z = 492 [M+H]+. 목적하는 생성물의 추가 분리 및 정제는 하기 실시예 95에 기재되어 있다.
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 95)
( R )-1-(((1 r ,4 R )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트
DCM(7 ㎖) 중 조물질 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-3)(130 ㎎, 0.3 m㏖) 및 TEA(159 ㎕, 1.1 m㏖)의 용액에 (R)-1-클로로-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(64 ㎎, 0.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(10 ㎖)로 켄칭하고, DCM(20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 (R)-1-(((1r,4R)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(92 ㎎, 61%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 534 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-2-히드록시- N -메틸프로판아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 95)
THF(2.5 ㎖)/물(2.5 ㎖) 중 (R)-1-(((1r,4R)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(75 ㎎, 0.1 m㏖)의 용액에 LiOH(24 ㎎, 1.0 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(15 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(25 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 11 ~ 44% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드와 2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 혼합물(85:15)(27 ㎎, 39%)을 황색 고체로서 제공하였다. 이 단계에서의 라세미화의 원인은 알려져 있지 않다. 혼합물을 실시예 94에서 얻은 생성물 혼합물과 합하고, 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IA, 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 20분 동안 MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20.0 ㎖/분)로 분리시켜 2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(4 ㎎, 100%ee) 및 2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(13 ㎎, 99.8%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다.
2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(실시예 94): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)(회전이성질체의 4:5 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.56 - 8.67 (m, 3H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.18 - 7.30 (m, 2H), 4.94/4.76 (d, 1H) (회전이성질체), 4.33 - 4.59/3.92 - 4.03 (m, 3H) (회전이성질체), 4.12 (s, 3H), 2.91/2.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.60 - 2.27 (m, 8H), 1.22/1.18 (d, 3H) (회전이성질체). MS ESI, m/z = 492 [M+H]+.
2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(실시예 95): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 4:5 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.52 - 8.68 (m, 3H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.17 - 7.31 (m, 2H), 4.81 (br. s, 1H), 4.34 - 4.59/3.91 - 4.05 (m, 3H) (회전이성질체), 4.12 (s, 3H), 2.91/2.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.60 - 2.28 (m, 8H), 1.22/1.18 (d, 3H) (회전이성질체). MS ESI, m/z = 492 [M+H]+.
6-메톡시-2-((1 r ,4 r )-4-( N -메틸시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 96)
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(2 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(50 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(50 ㎕, 0.4 m㏖)의 용액에 시클로프로판카르보닐 클로라이드(25 ㎎, 0.2 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 MeOH(0.5 ㎖)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.05% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(29 ㎎, 54%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 2:3 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 - 8.59 (m, 2H), 8.48/8.47 (s, 1H) (회전이성질체), 7.23/7.20 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 4.46 - 4.58 (m, 1H), 4.36 - 4.46/4.19 - 4.30 (m, 1H) (회전이성질체), 4.06 (s, 3H), 3.04/2.77 (s, 3H) (회전이성질체), 1.72 - 2.28 (m, 8H), 1.58 - 1.71 (m, 1H), 0.60 - 0.84 (m, 4H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-((1 r ,3 R )-3-히드록시- N -메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 97)
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(6 ㎖) 중 (1r,3r)-3-히드록시시클로부탄-1-카르복실산(78 ㎎, 0.7 m㏖) 및 DIPEA(253 ㎕, 1.5 m㏖)의 용액에 HATU(220 ㎎, 0.6 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 10분 동안 교반하고, 그 다음 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(220 ㎎, 0.48 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 10~41% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((1r,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(182 ㎎, 73%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 4:5 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.52 - 8.59 (m, 2H), 8.48/8.47 (s, 1H) (회전이성질체), 7.23/7.21 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 5.08/5.06 (d, 1H) (회전이성질체), 4.44 - 4.54 (m, 1H), 4.36 - 4.44/3.54 - 3.64 (m, 1H) (회전이성질체), 4.08 - 4.18 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.23 - 3.30/3.10 - 3.21 (m, 1H) (회전이성질체), 2.75/2.74 (s, 3H) (회전이성질체), 2.29 - 2.42 (m, 2H), 2.15 - 2.25 (m, 2H), 1.96 - 2.14 (m, 4H), 1.6 - 1.94 (m, 4H). MS ESI, m/z = 518 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-((1 s ,3 S )-3-히드록시- N -메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 98)
rt에서 N2 분위기 하에서 DMF(6 ㎖) 중 (1s,3s)-3-히드록시시클로부탄-1-카르복실산(78 ㎎, 0.7 m㏖) 및 DIPEA(253 ㎕, 1.5 m㏖)의 용액에 HATU(220 ㎎, 0.6 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 10분 동안 교반하고, 그 다음 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(220 ㎎, 0.5 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~80% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 10~41% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((1s,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(178 ㎎, 71%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 - 8.60 (m, 2H), 8.48/8.47 (s, 1H) (회전이성질체), 7.22/7.20 (s, 1H) (회전이성질체), 7.05 (dd, 1H), 5.02 - 5.09 (m, 1H), 4.43 - 4.55 (m, 1H), 4.34 - 4.43/3.67 - 3.79 (m, 1H) (회전이성질체), 4.06 (s, 3H), 3.92 - 4.04 (m, 1H), 2.76 - 2.88 (m, 2H), 2.65 - 2.76/2.30 - 2.43 (m, 4H) (회전이성질체), 2.15 - 2.26 (m, 2H), 1.59 - 2.14 (m, 8H). MS ESI, m/z = 518 [M+H]+.
2-((1 r ,4 r )-4-(2-히드록시- N ,2-디메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 99)
1-(((1 r ,4 r )-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일카르바모일)-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일 아세테이트
rt에서 N2 분위기 하에서 DCM(10 ㎖) 중 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 HCl염(Int V-4)(230 ㎎, 0.5 m㏖) 및 TEA(153 ㎎, 1.5 m㏖)의 용액에 1-클로로-2-메틸-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(125 ㎎, 0.8 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 MeOH(2 ㎖)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켜 고체를 얻었다. 고체를 물(25 ㎖), 그 다음 PE/EtOAc(10:1)(44 ㎖)로 세척하여 1-(((1r,4r)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(265 ㎎, 96%)를 황색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MS ESI, m/z = 548 [M+H]+.
2-((1 r ,4 r )-4-(2-히드록시- N ,2-디메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 99)
rt에서 N2 분위기 하에서 MeOH(10 ㎖)/물(5 ㎖) 중 1-(((1r,4r)-4-(6-메톡시-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일카르바모일)-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)아미노)-2-메틸-1-옥소프로판-2-일 아세테이트(250 ㎎, 0.5 m㏖)의 현탁액에 NaOH(55 ㎎, 1.4 m㏖)를 첨가하고, 그 다음 DCM(1 ㎖)을 첨가하여 불용성 고체를 용해시켰다. 생성된 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축시키고, MeOH/DMF(2 ㎖/3 ㎖)에 재용해시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 30~45% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 2-((1r,4r)-4-(2-히드록시-N,2-디메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(215 ㎎, 93%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 2:3 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 5.43/5.32 (s, 1H) (회전이성질체), 4.69 - 4.93/4.28 - 4.43 (m, 1H) (회전이성질체), 4.43 - 4.58 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.16/2.71 (s, 3H) (회전이성질체), 2.14 - 2.27 (m, 2H), 1.96 - 2.11 (m, 2H), 1.59 - 1.95 (m, 4H), 1.35 (s, 6H). MS ESI, m/z = 506 [M+H]+.
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-((1 r ,3 r )-3-메톡시시클로부톡시)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드( 실시예 100)
1,4-디옥산(3 ㎖) 중 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-히드록시-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-5)(20 ㎎, 0.04 m㏖), (1s,3s)-3-메톡시시클로부탄-1-올(45 ㎎, 0.4 m㏖), 트리페닐포스핀(23 ㎎, 0.1 m㏖) 및 DIAD(42 ㎕, 0.2 m㏖)의 혼합물을 마이크로파 하에서 140℃에서 교반하였다. 2시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 직접 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0%→50% MeCN으로 용리))를 수행하고, 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep C18 OBD, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1%NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 7분 동안 22% B→42% B; 유량: 60 ㎖/분)를 수행하여 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1r,3r)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(8 ㎎, 34%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 11.13 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.62 (dd, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.21 (dd, 1H), 6.97/6.99 (s, 1H) (회전이성질체), 5.14 - 5.27 (m, 1H), 4.42 - 4.56 (m, 1H), 4.20 - 4.35 (m, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.63 (s, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.23 (s, 3H), 2.71 - 2.83 (m, 2H), 2.57 - 2.68 (m, 2H), 1.86 - 2.10 (m, 6H), 1.76/1.78 (s, 3H) (회전이성질체), 1.59 - 1.74 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 544.
2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-((1 s ,3 s )-3-메톡시시클로부톡시)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드( 실시예 101)
1,4-디옥산(3 ㎖) 중 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-히드록시-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(Int V-5)(20 ㎎, 0.04 m㏖), (1r,3r)-3-메톡시시클로부탄-1-올(18 ㎎, 0.2 m㏖), 트리페닐포스핀(46 ㎎, 0.2 m㏖) 및 DIAD(34 ㎕, 0.2 m㏖)의 혼합물을 마이크로파 하에서 140℃에서 교반하였다. 1시간 후 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0%→40% MeCN으로 용리)를 수행하고, 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Shield RP18 OBD, 30×150 ㎜, 5 ㎛; 이동상 A: 물(0.05% NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 8분 동안 28% B→36% B; 유량: 60 ㎖/분) 및 분취용 키랄 HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB S-5 ㎛, 2×25 ㎝, 5 m; 이동상 A: MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH); 이동상 B: EtOH; 구배: 27분 동안 등용매 30% B; 유량: 18 ㎖/분)를 수행하여 2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1s,3s)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(10 ㎎, 42%, 100%ee)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 1:1 혼합물) δ 11.18 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.57 (dd, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.08/7.09 (s, 1H) (회전이성질체), 4.74 - 4.84 (m, 1H), 4.40 - 4.58 (m, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.63 (s, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.02 - 3.17 (m, 2H), 2.34 - 2.45 (m, 2H), 1.85 - 2.15 (m, 6H), 1.76/1.78 (s, 3H) (회전이성질체), 1.62 - 1.74 (m, 2H). m/z (ESI+), [M+H]+ = 544.
2-((1 r ,4 r )-4-(1 H -1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 102)
2-((1 r ,4 r )-4-(2 H -1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 103)
(1 s ,4 s )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실 메탄설포네이트
N2 하에서 0℃에서 MsCl(288 ㎕, 3.7 m㏖)를 디클로로메탄(50 ㎖) 중 2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(실시예 7)(300 ㎎, 0.7 m㏖) 및 TEA(617 ㎕, 4.4 m㏖)의 용액에 2분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 30℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 ㎖)로 켄칭하고, DCM(25 ㎖×2)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중 0~10% MeOH로 용리)로 정제시켜 (1s,4s)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실 메탄설포네이트(260 ㎎, 73%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.05 (s, 1H), 8.61 - 8.70 (m, 2H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.95 - 5.04 (m, 1H), 4.55 - 4.69 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 1.98 - 2.34 (m, 6H), 1.80 - 1.98 (m, 2H). MS ESI, m/z = 485 [M+H]+.
2-((1 r ,4 r )-4-(1 H -1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 102)
2-((1 r ,4 r )-4-(2 H -1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 103)
DMF(10 ㎖) 중 1H-1,2,3-트리아졸(285 ㎎, 4.1 m㏖) 및 Cs2CO3(403 ㎎, 1.2 m㏖)의 현탁액에 (1s,4s)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실 메탄설포네이트(200 ㎎, 0.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% 포름산) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 7분 동안 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 27 ~ 47% MeCN, 그 다음 추가 3분 동안 47 ~ 95%로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1r,4r)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(11 ㎎, 6%) 및 2-((1r,4r)-4-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(26 ㎎, 14%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 2-((1r,4r)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.05 (s, 1H), 8.62 - 8.67 (m, 2H), 8.61 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.62 - 4.79 (m, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.26 - 2.38 (m, 4H), 2.05 - 2.26 (m, 4H). MS ESI, m/z = 458 [M+H]+. 2-((1r,4r)-4-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.81 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.63 - 4.78 (m, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.26 - 2.37 (m, 4H), 2.02 - 2.26 (m, 4H). MS ESI, m/z = 458 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 S ,3 R )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 104) 및 이성질체 2(실시예 105)
rac -(1 R ,2 S ,3 S )-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올
25℃에서 N2 하에서 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(75 ㎎, 0.29 m㏖)를 i-PrOH(5 ㎖) 중 rac-(1R,2S,3S)-3-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올 히드로클로라이드(45 ㎎, 0.27 m㏖)(문헌[Cao, Hai Thuong et al. Synthesis 2011, 20, 3297-3300]의 방법에 따라서 제조됨) 및 TEA(121 ㎕, 0.87 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 트리-n-부틸포스핀(213 ㎕, 0.87 m㏖)을 반응에 첨가하고, 생성된 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA 함유) 중 0~100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 33 ~ 53% MeCN; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-(1R,2S,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(130 ㎎, 100%, 73% wt. 순도)을, 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.86 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.56 (q, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.87 (dt, 1H), 3.49 (d, 1H), 2.32 (s, 1H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 3H), 1.60 - 1.49 (m, 2H), 0.80 (d, 3H). MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 S ,3 R )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 104) 및 이성질체 2(실시예 105)
MeCN(8 ㎖) 중 Pd(OAc)2(9.2 ㎎, 0.04 m㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판(33.8 ㎎, 0.08 m㏖), TEA(286 ㎕, 2.05 m㏖), rac-(1R,2S,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(120 ㎎, 0.21 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(83 ㎎, 0.62 m㏖)의 용액을 CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(Waters Xbridge® BEH OBD C18, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 16 ~ 46% MeCN; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-2-((1S,2S,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IA, 2×25 ㎝, 5 ㎛; MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH)(1:1)를 사용한 등용매 용리; 20 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1S,2S,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(10 ㎎, 11%, 98.7%ee) 및 rel-2-((1S,2S,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(11 ㎎, 13%, 95.7%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 두 생성물에 대해서 얻은 1H NMR 및 MS는 동일하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 8.69 - 8.52 (m, 3H), 8.15 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.99 - 4.73 (m, 1H), 4.63 (dd, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.91 - 3.73 (m, 1H), 2.65 - 2.56 (m, 1H), 2.23 - 2.01 (m, 1H), 1.99 - 1.80 (m, 2H), 1.55 (d, 1H), 1.45 (q, 2H), 0.52 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 R ,3 S )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 106) 및 이성질체 2(실시예 107)
rel -2-((1 S ,2 R ,3 R )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 108) 및 이성질체 2(실시예 109)
rac -(1 S ,2 R ,3 S )-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 및 rel -(1 R ,2 R ,3 S )-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 1 및 이성질체 2
25℃에서 N2 하에서 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(180 ㎎, 0.69 m㏖)를 i-PrOH(5 ㎖) 중 rac (1R,2R,3S)-3-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올 히드로클로라이드와 rac-(1S,2R,3S)-3-아미노-2-메틸시클로헥산-1-올 히드로클로라이드(89 ㎎, 0.69 m㏖)의 혼합물(문헌[Cao, Hai Thuong et al. Synthesis 2011, 20, 3297-3300]의 방법에 따라서 제조) 및 TEA(289 ㎕, 2.08 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 트리-n-부틸포스핀(512 ㎕, 0.87 m㏖)을 첨가하고, 생성된 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA 함유) 중 0→100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18 칼럼, 5 ㎛ 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 43 ~ 73% MeOH; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rac-(1S,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올과 rac-(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올의 혼합물을 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IC 2×25 ㎝, 5 ㎛; 헥산(0.5% 2 N NH3-MeOH) 중 MeOH 15%를 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rac-(1S,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(35 ㎎, 15%), rel-(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 1(27 ㎎, 11%, 98%ee) 및 rel-(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 2(20 ㎎, 9%, 99%ee)을, 모두 연황색 고체로서 제공하였다. rac -(1 S ,2 R ,3 S )-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.82 (dt, 2H), 7.07 (d, 1H), 4.33 (td, 1H), 4.09 (s, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 3H), 2.45 - 2.22 (m, 1H), 2.18 - 2.03 (m, 2H), 2.01 - 1.81 (m, 3H), 1.79 - 1.64 (m, 1H), 0.70 (dt, 3H). MS ESI, m/z =339/341[M+H]+. rel -(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 1 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.87 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.10 - 3.80 (m, 4H), 3.47 - 3.31 (m, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 3H), 1.96 (q, 1H), 1.70 (s, 1H), 1.59 - 1.45 (m, 2H), 0.82 (dd, 3H). MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+. rel -(1 R ,2 R ,3 S )-3-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 2 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.87 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.10 - 3.80 (m, 4H), 3.40 (s, 1H), 2.10 (tt, 3H), 1.96 (t, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.50 (d, 2H), 0.81 (d, 3H). MS ESI, m/z = 339/341 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 R ,3 S )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 106) 및 이성질체 2(실시예 107)
CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 MeCN(6 ㎖) 중 Pd(OAc)2(2.6 ㎎, 11 μ㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판(9.0 ㎎, 0.02 m㏖), TEA(76 ㎕, 2.05 m㏖), rac-(1S,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올(32 ㎎, 0.05 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(22 ㎎, 0.16 m㏖)의 용액을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리)로 정제시켜 rac-2-((1S,2R,3S)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드를 제공하였다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IA 2×25 ㎝, 5 ㎛; EtOH(1:1) 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매 용리; 18 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1S,2R,3S)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(3 ㎎, 14%, 99.7%ee) 및 rel-2-((1S,2R,3S)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(3.9 ㎎, 18%, 100%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.69 (d, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.87 (s, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H), 2.04 - 1.93 (m, 2H), 1.89 - 1.72 (m, 2H), 1.66 - 1.47 (m, 2H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.69 (d, 1H), 4.42 (td, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.87 (s, 1H), 2.15 (t, 1H), 1.96 (dd, 2H), 1.82 (dd, 2H), 1.56 (q, 2H), 0.57 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 R ,3 R )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 108)
일산화탄소 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 MeCN(8 ㎖) 중 Pd(OAc)2(1.9 ㎎, 8.55 μ㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판(7.1 ㎎, 0.02 m㏖), TEA(60 ㎕, 0.43 m㏖), rel-(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 1(25 ㎎, 0.04 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(17.2 ㎎, 0.13 m㏖)의 용액을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0→100% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS, 30 ㎜×150 ㎜, 5 ㎛; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 12~45% MeCN; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1S,2R,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(2.9 ㎎, 16%)을 연황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.57 (s, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.80 (d, 1H), 4.22 - 4.08 (m, 4H), 3.28 - 3.14 (m, 1H), 2.08 - 1.86 (m, 4H), 1.83 - 1.74 (m, 1H), 1.52 - 1.27 (m, 2H), 0.63 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
rel -2-((1 S ,2 R ,3 R )-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(실시예 109)
CO 분위기 하에서 15 atm 및 100℃에서 MeCN(6 ㎖) 중 Pd(OAc)2(1.3 ㎎, 5.81 μ㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판 (4.8 ㎎, 0.01 m㏖), TEA(41 ㎕, 0.29 m㏖), rel-(1R,2R,3S)-3-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-2-메틸시클로헥산-1-올 - 이성질체 2(17 ㎎, 0.03 m㏖) 및 이미다조[1,2-b]피리다진-3-아민(11.7 ㎎, 0.09 m㏖)의 용액을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0→100% MeCN으로 용리)로 정제시키고, 그 다음 분취용 HPLC(Waters Xbridge® OBD C18, 5 ㎛, 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 15~45% MeCN; 60 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((1S,2R,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(5.3 ㎎, 43%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.79 (d, 1H), 4.20 - 4.08 (m, 4H), 3.25 - 3.07 (m, 1H), 2.06 - 1.86 (m, 4H), 1.80 (d, 1H), 1.56 - 1.29 (m, 2H), 0.63 (d, 3H). MS ESI, m/z = 421 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-3-히드록시- N -메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 110)
HATU(89 ㎎, 0.23 m㏖)를 DMF(6 ㎖) 중 DIPEA(103 ㎕, 0.59 m㏖), (S)-3-히드록시부탄산(20.4 ㎎, 0.20 m㏖) 및 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(Int V-4)(70 ㎎, 0.13 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.1% NH4.OH)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS 5 ㎛, 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 9 ~ 42% MeCN; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(37 ㎎, 55.7%)를, 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.34 (s, 1H), 9.09 - 9.01 (m, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.58 - 8.49 (m, 2H), 8.46 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.62 (d, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 1.5H), 4.04 (s, 4H),3.92 - 3.81 (m, 0.5H) 2.79 (d, 3H), 2.46 - 2.25 (m, 2H), 2.24 - 1.95 (m, 4H), 1.92 - 1.56 (m, 4H), 1.18 - 1.02 (m, 3H). MS ESI, m/z = 506 [M+H]+
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-3-히드록시- N -메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 111)
HATU(96 ㎎, 0.25 m㏖)를 DMF(6 ㎖) 중 DIPEA(110 ㎕, 0.63 m㏖), (R)-3-히드록시부탄산(21.8 ㎎, 0.21 m㏖) 및 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(Int V-4)(70 ㎎, 0.14 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4.OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시키고, 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS, 5 ㎛, 30×150 ㎜; 용리 구배: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 9 ~ 42% MeCN; 60 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드(53 ㎎, 74.5%)를, 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.58 - 8.52 (m, 2H), 8.48 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.67 - 4.59 (m, 1H), 4.56 - 4.41 (m, 1.5H), 4.10 - 3.97 (m, 4H), 3.96 - 3.86 (m, 0.5H), 2.81 (d, 3H), 2.48 - 2.29 (m, 2H), 2.25 - 1.96 (m, 4H), 1.93 - 1.60 (m, 4H), 1.16 - 1.07 (m, 3H). MS ESI, m/z = 506 [M+H]+
rel -2-((1 R ,4 r )-4-((1 R ,3 R )-3-히드록시- N -메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 112) 및 이성질체 2(실시예 113)
HATU(163 ㎎, 0.43 m㏖)를 DMF(6 ㎖) 중 DIEA(188 ㎕, 1.08 m㏖), rac-(1R,3R)-3-히드록시시클로펜탄-1-카르복실산(46.5 ㎎, 0.36 m㏖) 및 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(Int V-4)(150 ㎎, 0.33 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0→100% MeCN으로 용리)로 정제시켰다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak® IF, 2×25 ㎝, 5 ㎛; 22분 동안 MeOH 60% 중 MTBE 40%(0.5% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매 용리; 18 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(45 ㎎, 26%) 및 rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(44 ㎎, 25%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.60 - 8.52 (m, 2H), 8.47 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.06 (dd,1H), 4.48 (dd, 1.5H), 4.19 (dq, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.92 (q, 0.5H), 3.30 (m, 0.5H), 3.22 (m, 0.5.H), 2.82 (d, 3H), 2.16 (d, 3H), 2.08 - 1.87 (m, 3H), 1.87 - 1.6 (m, 7H).1.51 (m,1H). MS ESI, m/z = 532 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.35 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.60 - 8.52 (m, 2H), 8.52 - 8.43 (m, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.55 (m, 1.5H), 4.22 - 4.15 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.95 (d, 0.5H) 3.31 (d, 0.5H) 3.21 (d, 0.5H), 2.82 (d, 3H), 2.16 (d. 3H), 2.11 - 1.88 (m, 3H), 1.89 - 1.61 (m, 7H), 1.5 (m, 1H). MS ESI, m/z = 532 [M+H]+.
rel -2-((1 R ,4 r )-4-((1 R ,3 S )-3-히드록시- N -메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 114) 및 이성질체 2(실시예 115)
HATU(163 ㎎, 0.43 m㏖)를 DMF(10 ㎖) 중 DIPEA(188 ㎕, 1.08 m㏖), rac-(1R,3S)-3-히드록시시클로펜탄-1-카르복실산(46.5 ㎎, 0.36 m㏖) 및 6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(Int V-4)(150 mg, 0.33 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0→100% MeCN으로 용리)로 정제시켰다. 이 물질을 키랄 분취용 HPLC(Chiral Art Cellulose SB, 2×25 ㎝, 5 ㎛; MTBE 70%(0.5% 2 N NH3-MeOH)/30%(DCM-MeOH, 1:1)를 사용한 등용매 용리; 20 ㎖/분)로 추가로 정제시켜 rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(22 ㎎, 12%) 및 rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(18 ㎎, 10%)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.59 - 8.54 (m, 2H), 8.49 - 8.45 (m, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.06 (dd, 1H), 4.55 (m, 1.5H), 4.06 (s, 4H), 3.97 (m, 0.5H), 3.21 - 3.01 (m, 1H), 2.82 (d, 3H), 2.31 - 2.10 (m, 3H), 2.06 - 1.89 (m, 3H), 1.88 (m, 4H), 1.64 (m.4H). MS ESI, m/z = 532 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 10.36 (s, 1H), 9.08 (dd, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.59 - 8.54 (m, 2H), 8.48 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.06(dd, 1H), 4.52 (m, 1.5H), 4.06 (s, 4H), 3.91 (m. 0.5H), 3.00 (t, 1H), 2.82 (d, 3H), 2.18 (q, 3H), 2.09 - 1.88 (m, 3H), 1.87 (m, 4H), 1.61 (m, 4H). MS ESI, m/z = 532 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-3-히드록시- N -메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 116) 및 2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-3-히드록시- N -메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 117)
4-니트로페닐 ((1 r ,4 r )-4-(5-(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트
0℃에서 N2 하에서 4-니트로페닐 카르보노클로리데이트(177 ㎎, 0.88 m㏖)를 DCM(1 ㎖) 중 N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(메틸아미노)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(Int V-3)(200 ㎎, 0.44 m㏖), TEA(245 ㎕, 1.75 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 rt에서 15시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 그 다음 물(30 ㎖) 및 MeOH(5 ㎖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과로 수집하고, 물(25 ㎖)로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜 4-니트로페닐 ((1r,4r)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(260 ㎎, 100%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) (회전이성질체의 혼합물) δ 11.05 (s, 1H), 8.67 - 8.60 (m, 2H), 8.59 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 7.29 - 7.18 (m, 2H), 4.61 - 4.45 (m, 1H), 4.25 - 3.99 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.01 and 2.91 (s, 3H), 2.32 - 2.20 (m, 2H), 2.16 - 2.03 (m, 2H), 2.01 - 1.82 (m, 4H). MS ESI, m/z = 585 [M+H]+.
2-((1 S ,4 r )-4-(( S )-3-히드록시- N -메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 116)
25℃에서 질소 하에서 (S)-피롤리딘-3-올(26.6 ㎎, 0.30 m㏖)을 DMF(3 ㎖) 중 4-니트로페닐 ((1r,4r)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(110 ㎎, 0.15 m㏖), TEA(106 ㎕, 0.76 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS, 5 ㎛, 30×150 ㎜; 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 10~43% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(35 ㎎, 43%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (d, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.86 (d, 1H), 4.57 - 4.41 (m, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.77 - 3.62 (m, 1H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 3.29 - 3.19 (m, 1H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.27 -2.15 (m, 2H), 2.10 - 1.94 (m, 2H), 1.89 - 1.77 (m, 4H), 1.77-1.66 (m, 2H). MS ESI, m/z = 533 [M+H]+.
2-((1 R ,4 r )-4-(( R )-3-히드록시- N -메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드(실시예 117)
25℃에서 N2 하에서 (R)-피롤리딘-3-올(9.66 ㎎, 0.11 m㏖)을 DMF(3 ㎖) 중 4-니트로페닐 ((1r,4r)-4-(5-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일카르바모일)-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)(메틸)카르바메이트(40 ㎎, 0.06 m㏖), TEA(39 ㎕, 0.28 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 그 다음 분취용 HPLC(YMC-Actus Triart C18 ExRS, 5 ㎛, 30×150 ㎜; 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH) 중 10~43% MeCN으로의 용리 구배; 60 ㎖/분)로 정제시켜 2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드(20 ㎎, 68%)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.59 (d, 2H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.86 (d, 1H), 4.55 - 4.39 (m, 1H), 4.27 - 4.16 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.77 - 3.61 (m, 1H), 3.52 - 3.40 (m, 2H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.12 - 2.97 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 2.13 - 1.94 (m, 2H), 1.90 - 1.77 (m, 4H), 1.77-1.62 (m, 2H). MS ESI, m/z = 533 [M+H]+.
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)- N -(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 118) 및 이성질체 2(실시예 119)
메틸 1-아미노-4-(벤질아미노)시클로헥산-1-카르복실레이트
N2 하에서 0℃에서 MeOH(28 ㎖) 중 메틸 1-아미노-4-옥소시클로헥산-1-카르복실레이트(1.5 g, 8.8 m㏖) 및 페닐메탄아민(1.1 g, 10.5 m㏖)의 용액에 소듐 시아노보로히드리드(826 ㎎, 13.1 m㏖)를 3분에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 C18 플래시 크로마토그래피(물(2% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 메틸 1-아미노-4-(벤질아미노)시클로헥산-1-카르복실레이트(1.4 g, 61%)를 무색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) (이성질체의 1:2 혼합물) δ 7.35 - 7.24 (m, 4H), 7.24 - 7.15 (m, 1H), 3.70/3.67 (s, 2H) (이성질체), 3.61/3.59 (s, 3H) (이성질체), 2.45 - 2.30 (m, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 1H), 1.84 - 1.73 (m, 1H), 1.67 - 1.41 (m, 5H), 1.28 - 0.99 (m, 1H). MS ESI, m/z = 263 [M+H]+.
메틸 1,4-디아미노시클로헥산-1-카르복실레이트
N2 하에서 MeOH(16 ㎖) 중 메틸 1-아미노-4-(벤질아미노)시클로헥산-1-카르복실레이트(300 ㎎, 1.1 m㏖)의 용액에 탄소 상의 Pd(OH)2(20 wt.%)(60 ㎎, 0.4 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 25℃에서 수소 하에서 1 atm에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 셀라이트 케이크를 MeOH(100 ㎖)로 세척하였다. 합한 MeOH 용액을 감압 하에서 농축시켜 메틸 1,4-디아미노시클로헥산-1-카르복실레이트(120 ㎎, 61%)를 무색 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. MS ESI, m/z = 173 [M+H]+.
메틸 1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥산-1-카르복실레이트
25℃에서 N2 하에서 5-브로모-4-메톡시-2-니트로벤즈알데히드(1.3 g, 4.9 m㏖)를 i-PrOH(32 ㎖) 중 메틸 1,4-디아미노시클로헥산-1-카르복실레이트(890 ㎎, 5.2 m㏖) 및 TEA(2 ㎖, 14.8 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하고, 실온까지 냉각시키고, 그 다음 트리-n-부틸포스핀(3.6 ㎖, 14.8 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18 플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 메틸 1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-카르복실레이트(650 ㎎, 35%)를 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 382/384 (1:1) [M+H]+.
(1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올
0℃에서 N2 하에서 THF(30 ㎖) 중 메틸 1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥산-1-카르복실레이트(630 ㎎, 1.7 m㏖)의 용액에 리튬 알루미늄 히드리드(94 ㎎, 2.5 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 THF(50 ㎖) 중 Na2SO4·10H2O의 현탁액에 붓고, 그 다음 셀라이트로 여과하였다. 셀라이트 케이크를 THF(500 ㎖)로 세척하였다. 합한 여과물을 감압 하에서 농축시켜 (1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올(440 ㎎, 75%)을 연황색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 직접 사용하였다. MS ESI, m/z = 354/356 (1:1) [M+H]+.
N -(4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로헥실)-2-클로로아세트아미드
0℃에서 N2 하에서 2-클로로아세틸 클로라이드(140 ㎎, 1.3 m㏖)를 2분에 걸쳐서 DCM(4.5 ㎖) 및 aq.NaOH(2 N)(4.5 ㎖, 2.3 m㏖) 중 (1-아미노-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)시클로헥실)메탄올(400 ㎎, 1.1 m㏖)의 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)에 붓고, DCM(20 ㎖×3)으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.1% NH4OH))로 정제시켜 N-(4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로헥실)-2-클로로아세트아미드(120 ㎎, 25%)를 연황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 430/432 (1:1) [M+H]+.
9-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온
0℃에서 N2 하에서 포타슘 tert-부톡시드(177 ㎎, 1.6 m㏖)를 THF(10 ㎖) 중 N-(4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로헥실)-2-클로로아세트아미드(170 ㎎, 0.4 m㏖)의 용액에 2분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. 포화 NH4Cl 용액(10 ㎖)에 붓고, EtOAc(50 ㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 9-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온(105 ㎎, 68%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 394/396 (1:1) [M+H]+.
9-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1-메틸-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온
0℃에서 N2 하에서 수소화나트륨(60 wt.%)(14 ㎎, 0.4 m㏖)를 DMF(6 ㎖) 중 9-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온(95 ㎎, 0.2 m㏖)의 용액에 2분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 아이오도메탄(103 ㎎, 0.7 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. 포화 NH4Cl 용액(10 ㎖)으로 켄칭하고, EtOAc(50 ㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 9-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온(85 ㎎, 86%)을 무색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 408/410 (1:1) [M+H]+.
메틸 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2 H -인다졸-5-카르복실레이트
MeOH(10 ㎖) 중 9-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1-메틸-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-2-온(85 ㎎, 0.2 m㏖), Pd(dppf)Cl2 - CH2Cl2 (17 ㎎, 0.02 m㏖) 및 TEA(290 ㎕, 2.1 m㏖)의 혼합물을 CO 분위기 하에서 15 atm에서 밀봉된 용기에서 100℃에서 15시간 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물 중 0~100% MeCN으로 용리(0.1% NH4OH))로 정제시켜 메틸 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(75 ㎎, 93%)를 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 388 [M+H]+.
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2 H -인다졸-5-카르복실산
수산화리튬(20 ㎎, 0.8 m㏖)을 THF(3 ㎖)/물(3 ㎖) 중 메틸 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2H-인다졸-5-카르복실레이트(65 ㎎, 0.2 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2 N HCl을 사용하여 pH 6으로 조정하였다. 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 직접 정제시켜 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2H-인다졸-5-카르복실산(50 ㎎, 80%)을 황색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z = 374 [M+H]+.
6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)- N -(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 118) 및 이성질체 2(실시예 119)
피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-아민의 HCl염(23 ㎎, 0.1 m㏖)을 DMF(3 ㎖) 중 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-2H-인다졸-5-카르복실산(45 ㎎, 0.1 m㏖), HATU(55 ㎎, 0.1 m㏖) 및 DIPEA(63 ㎕, 0.4 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% MeCN으로 용리)로 정제시켜 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드의 이성질체의 혼합물을 황색 고체로서 제공하였다. 이 혼합물을 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IA 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; MeOH 중 50% MTBE(0.5% 2 N NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 24분에 걸쳐서, 20 ㎖/분)로 분리시켜 제1 용리 이성질체로서 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(19 ㎎, 32%, 100%ee) 및 제2 용리 이성질체로서 6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(3 ㎎, 5%, 99.5%ee)를, 둘 다 무색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.35 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.75 - 4.68 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 4.07 (s, 2H), 3.91 (s, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.41 - 2.34 (m, 2H), 2.22 - 2.04 (m, 4H), 1.63 - 1.55 (m, 2H). MS ESI, m/z = 490 [M+H]+. 이성질체 2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6δ 10.34 (s, 1H), 9.07 (dd, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.68 - 4.56 (m, 1H), 4.08 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.98 (s, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.20 - 1.94 (m, 6H), 1.81 (br. d, 2H). MS ESI, m/z = 490 [M+H]+.
rel -2-((5 R ,7 R ,8 R )-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 120) 및 이성질체 2(실시예 121)
rel -2-((5 S ,7 R ,8 R )-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 122) 및 이성질체 2(실시예 123)
rac -3-브로모- N -((3 R ,4 R )-4-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)- N -메틸프로판아미드
-78℃에서 밀봉된 용기 내에서 THF(2 M) 중 메탄아민(34.1 ㎖, 68.2 m㏖)을 톨루엔(100 ㎖) 중 rac-(3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥산-1-온(Int V-1의 합성에 기재된 바와 같이 합성)(2.3g, 6.8 m㏖)의 용액에 5분에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 용액을 rt까지 가온시키고, 110℃에서 2.5시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 THF(100 ㎖)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 중탄산나트륨(859 ㎎, 10.2 m㏖) 및 3-브로모프로파노일 클로라이드(1.2 g, 6.8 m㏖)를 반응 혼합물에 첨가하고, 이것을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. 포화 NH4Cl(25 ㎖)로 켄칭하고, EtOAc(150 ㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 무색 오일을 수득하였다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(PE 중 0~60% EtOAc로 용리)로 정제시켜 rac-3-브로모-N-((3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-N-메틸프로판아미드(850 ㎎, 26%)를 적색 고체로서 제공하였다. MS ESI, m/z =484/486/485(1:2:1) [M+H]+.
rac -(5 R ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온 및 rac -(5 S ,7 R ,8 R )-8-(5-브로모-6-메톡시-2 H -인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온
톨루엔(60 ㎖) 중 rac-3-브로모-N-((3R,4R)-4-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-3-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-N-메틸프로판아미드(450 ㎎, 0.9 m㏖)의 용액에 MeCN(1㎖) 및 톨루엔(15 ㎖) 중 트리부틸스타난(810 ㎎, 2.8 m㏖) 및 AIBN(76 ㎎, 0.5 m㏖)의 용액을 20분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 80℃에서 6시간 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 C18 플래시 크로마토그래피(물(0.05% FA) 중 0~100% MeCN으로 용리), 그 다음 분취용 HPLC(XBridge Prep OBD C18, 30×150 ㎜ 5 ㎛; 이동상 A: 물(10 mM NH4HCO3 + 0.1% NH4OH); 이동상 B: MeCN; 구배: 10분 동안 34% B→44% B, 그 다음 10분 동안 44% B에서의 등용매; 유량: 60 ㎖/분)로 정제시켜 제1 용리 혼합물로서 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(26 ㎎, 7%) 및 제2 용리 혼합물로서 rac-(5S,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(26 ㎎, 7%)을, 둘 다 연황색 고체로서 제공하였다. rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.84 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.05 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.79 (td, 1H), 2.77 (s, 3H), 2.48 - 2.23 (m, 4H), 2.15 - 2.03 (m, 3H), 1.88 (td, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 3H), 0.67 (d, 3H). MS ESI, m/z = 406/408 [M+H]+. rac-(5S,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.85 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.00 - 3.84 (m, 5H), 3.21 (s, 3H), 2.80 - 2.64 (m, 1H), 2.63 - 2.47 (m, 2H), 2.42 (t, 2H), 2.26 - 2.04 (m, 3H), 1.96 - 1.71 (m, 3H), 1.49 (dd, 1H), 0.71 (d, 3H). MS ESI, m/z = 406/408 [M+H]+.
rel -2-((5 R ,7 R ,8 R )-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 120) 및 이성질체 2(실시예 121)
rel -2-((5 S ,7 R ,8 R )-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)- N -(이미다조[1,2- b ]피리다진-3-일)-6-메톡시-2 H -인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(실시예 122) 및 이성질체 2(실시예 123)
MeCN(10 ㎖) 중 rac-(5R,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(26 ㎎, 0.1 m㏖), Pd(OAc)2(29 ㎎, 0.1 m㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판(26 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(89 ㎕, 0.6 m㏖)의 현탁액을 밀봉된 용기에서 100℃에서 15시간 동안 CO 분위기 하에서 15 atm에서 가열시켰다. rt까지 냉각시킨 후, 추가의 Pd(OAc)2(29 ㎎, 0.1 m㏖), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판(26 ㎎, 0.1 m㏖) 및 TEA(89 ㎕, 0.6 m㏖)를 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 100℃에서 밀봉된 용기에서 CO 분위기 하에서 15 atm에서 추가 15시간 동안 다시 가열시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리), 그 다음 분취용 키랄 HPLC(Chiralpak® IA 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 10분에 걸쳐서 MeOH/DCM(1/1) 중 50% MTBE(0.5% 2 M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((5R,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(5 ㎎, 16%; 97.2%ee) 및 rel-2-((5R,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(4 ㎎, 13%; 99.5%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1과 2는 서로에 대한 거울상이성질체여서, 두 이성질체에 대해서 얻어진 LCMS/1H NMR은 동일하다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (dd, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.21 - 4.13 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.41 - 2.26 (m, 3H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.09 - 1.89 (m, 4H), 1.71 (t, 1H), 1.61 - 1.50 (m, 2H), 0.59 (d, 3H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+.
rac-(5S,7R,8R)-8-(5-브로모-6-메톡시-2H-인다졸-2-일)-1,7-디메틸-1-아자스피로[4.5]데칸-2-온(26 ㎎, 0.1 m㏖)을 위에서 기재된 반응 조건에 적용하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 C18-플래시 크로마토그래피(물(0.1% NH4OH) 중 0~100% 아세토니트릴로 용리), 그 다음 분취용 키랄 HPLC(YMC Chiral ART Cellulose-SB 5 ㎛ 20 ㎜×250 ㎜; 18분에 걸쳐서 에탄올 중 50% MTBE(0.5% 2 M NH3-MeOH)를 사용한 등용매; 20 ㎖/분)로 정제시켜 rel-2-((5S,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1(4 ㎎, 13%, 99.9%ee) 및 rel-2-((5S,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 2(4 ㎎, 13%, 98.6%ee)를 둘 다 황색 고체로서 제공하였다. 이성질체 1과 2는 서로에 대한 거울상이성질체여서, 두 이성질체에 대해서 얻어진 LCMS/1H NMR은 동일하다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.67 - 8.61 (m, 2H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 4.26 (dt, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.75 - 2.54 (m, 1H), 2.53 - 2.36 (m, 1H), 2.27 (t, 2H), 2.16 - 1.92 (m, 3H), 1.89 - 1.70 (m, 3H), 1.53 (t, 1H), 0.62 (d, 3H). MS ESI, m/z = 488 [M+H]+.
IRAK4 효소 검정에서 IRAK4 저해제 화합물의 효력
IRAK4에 대한 화합물의 저해 활성을 질량 분석법 판독을 사용하여 효소 검정으로 결정하였다. 최대 농도가 1 μM 또는 10 μM인 10개 지점 절반-log 화합물 농도 반응 곡선을 Echo 655(Labcyte Inc)를 사용하여 DMSO 중에 용해되고 384웰 검정 플레이트(Greiner #781280)에 첨가된 화합물 스톡 10 mM로부터 생성시켰다. 검정 플레이트에, 검정 완충액(50 mM Tris-HCl pH 7.4, 10 mM MgCl, 5 mM 글루타티온, 0.01% BSA, 3 mM ATP)에 0.2 nM의 최종 농도로 희석된 인간 재조합 IRAK4 단백질(Life Technologies #PV4002) 10 ㎕를 첨가하였다. 효소를 화합물과 함께 실온에서 15분 동안 인큐베이션시킨 후, 펩티드 기질(KKARFSRFAGSSPSQSSMVAR, Innovagen 맞춤 합성, DMSO 중 10 mM)을 Echo 655(Labcyte Inc)를 사용하여 각각의 웰에 10 μM의 최종 농도로 첨가하였다. 실온에서 2시간 후, 반응물을 90 ㎕의 0.4% 포름산(Merck #33015)으로 중단시켰다. 비인산화된 펩티드 및 인산환된 펩티드를 Waters TQ-S 질량 분석계 상의 LC-MS/MS로 측정하였다. TargetLynx 소프트웨어를 사용하여 피크를 적분하고, 인산화된 펩티드와 비인산화된 펩티드 간의 비율을 계산하였다. 곡선을 피팅하고, Genedata Screener 15(Genedata AG)에서 화합물 효력을 결정하였다. 제시된 데이터는 적어도 n=2의 기하 평균이거나, *로 표시된 바와 같이 단일 실험으로부터 얻은 것이다.
IRAK4 인산화 세포 검정
TLR 또는 IL-1R 리간드에 의하 IRAK4의 활성화는 IRAK4 자가 인산화로 이어지는데, 이것은 IRAK4 키나제 저해제에 의해서 방지될 수 있다. IRAK4 자가 인산화에 대한 IRAK4 저해제 화합물의 효과를 세포 효력의 척도로서 IL-1β-자극된 Karpas-299 세포에서 평가하였다. Karpas-299 세포를 10% FBS(Gibco #10270)를 함유하는 RPMI 1640 (Gibco 61870-010)에서 배양하였다. Echo 655(Labcyte Inc)를 사용하여 화합물이 다양한 농도(30 μM의 최종 최대 농도를 사용한 10개 지점 절반 log 용량 반응)로 첨가된 폴리-D-리신 코팅된 384웰 플레이트(Corning #356663)에서 세포를 웰당 2×104개 세포로 플레이팅하였다. 세포를 원심분리시키고(250 g, 4분), 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시키고, 그 다음 37℃에서 10분 동안 22.7 ng/㎖ 재조합 IL-1β(R&D Systems, #201-LB-025)로 자극하고, 그 다음 4% 파람포름알데히드에서 10분 동안 고정화시키고, 얼음-냉각된 70% MeOH에서 30분 동안 투과화시켰다. 세포를 BlueWasher(BlueCatBio) 상에서 인산염 완충 식염수(PBS)로 2회 세척하고, 그 다음 10% FBS 함유 PBS로 20분 동안 차단하였다. 차단 용액을 BlueWasher로 제거하고, 세포를 0.05% Tween-20을 함유한 차단 완충액에서 1시간 동안 항-pIRAK4(Thr345/Ser346)(CST, #11927, 1:400)로 염색하고, 그 다음 BlueWasher 상에서 0.05% Tween-20 함유 PBS로 2회 세척하고, 그 후 0.05% Tween-20 함유 차단 완충액에서 30분 동안 Alexa 647-접합된 2차 항-토끼 IgG 항체(CST, #4414, 1:2,000) 및 Hoechst 33342(Sigma, 1:2,000)로 염색하였다. 마지막으로, 세포를 0.05% Tween-20 함유 PBS로 2회 세척하고, 적절한 필터를 사용하여 10X 에어 대물렌즈가 있는 ImageXpress Micro(Molecular Devices)에서 영상화하였다. 영상을 Columbus(PerkinElmer)에서 분석하고, 2차 항체로부터 세포당 형광 강도를 정량화하였다. 정량화된 데이터를 Genedata Screener 15(Genedata AG)에서 분석하였다. 이러한 검정에서 얻은 결과를 표 1에 제시하고, 세포에서 IRAK4를 저해하는 본 명세서의 화합물의 능력을 입증한다. IC50 값은 적어도 2회 실험의 기하 평균이다.
인간 THP-1 단핵구 세포주에서 IL-1β-유도된 사이토카인 방출에 대한 IRAK4 저해제의 효과
THP-1 세포를 10% FBS(Gibco 10270-106), 1 mM Na-피루베이트(Gibco 11360-070) 및 100 U/㎖ 페니실린-스트렙토마이신(Gibco 15140-122) 함유 RPMI 1640(Gibco 72400-021)에서 배양하였다. Echo 655(Labcyte Inc)를 사용하여 화합물이 다양한 농도(10 μM의 최종 최대 농도를 사용한 10개 지점 절반 log 용량 반응)로 첨가된 384웰 Echo 인증 플레이트(Labcyte PPT-0200)에서 세포를 웰당 5×104개 세포로 플레이팅하였다. 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션시키고, 그 다음 재조합 IL-1β(R&D Systems 201-LB-025/CF)를 1.8 ng/㎖의 최종 농도로 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 18시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 250x g에서 4분 동안 원심분리시키고, 그 다음 Echo 655 상에서 어쿠스틱 디스펜싱을 사용하여 1.6 ㎕의 세포 상청액을 백색 저부피 384웰 플레이트(Greiner #784075)로 옮겼다. 다음으로, 200 nL의 억셉터 비드(5 ㎎/㎖) 및 비오티닐화 항-IL-8 항체(500 nM)를 어쿠스틱 디스펜싱을 사용하여 첨가하였다(비드 및 항체는 PerkinElmer I8 AlphaLISA 검출 키트, AL224C로부터 유래하였음). 플레이트를 밀봉하고, 약하게 원심분리시키고, 그 다음 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, 200 nL의 도너 비드 용액(5 ㎎/㎖)을 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 약하게 원심분리시키고, 그 다음 1시간 동안 인큐베이션시키고, 그 다음 Envision 플레이트 판독기에서 판독하여 THP1 세포에서 IL-1β 자극 후 방출된 IL-8의 양의 50%를 감소시키는 데 필요한 IRAK4 저해제의 농도를 결정한다(표 2). 정량화된 데이터를 Genedata Screener 15(Genedata AG)에서 분석하였다. 제시된 데이터는 적어도 n=2의 기하 평균이거나, *로 표시된 바와 같이 단일 실험으로부터 얻은 것이다.
인간 PBMC에서 LPS- 및 IL-1β-유도된 사이토카인 방출에 대한 IRAK4 저해제의 시험관내 효과
인간 1차 면역 세포에서 질환 관련 경로의 차단에 대한 IRAK4 저해제의 효과 및 효력을 평가하기 위해서, 본 발명자들은 인간 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)를 LPS(TLR4 효능제) 또는 IL-1β(IL-1R 리간드)로 자극하였고, 전염증성 사이토카인 IL-6 및 TNF-α의 방출을 측정하였다. 간략히 말해서, PBMC를 LymphoPrep 밀도 구배를 사용하여 건강한 개체가 기증한 인간 혈액으로부터 단리시키고, 96웰 배양 플레이트에서 200,000개 세포/웰(LPS 검정의 경우) 또는 300,000개 세포/웰(IL-1β 검정의 경우)의 밀도로 플레이팅하였다. 세포를 1시간 동안 IRAK4 저해제 또는 비히클(DMSO)의 연속 희석물과 함께 인큐베이션시킨 후, 세포를 0.11 ng/㎖ LPS(이. 콜라이(E. coli))로부터 유래) 또는 1 ng/㎖ 재조합 인간 IL-1β로 자극하였다. 4시간의 LPS 자극 및 20시간의 IL-1β 자극 후, 상청액을 수집하고, 전염증성 사이토카인 TNF-α, IL-8 및 IL-6의 수준을 Mesoscale Discovery(MSD) 멀티플렉스 검정에 의해서 측정하였다. 용량 반응 곡선을 플로팅하고, GraphPad Prism 8을 사용한 4-매개변수 곡선 피팅을 사용하여 IC50 값을 계산하였다(표 3 참조). 본 명세서에 따른 IRAK4 저해제는 전염증성 사이토카인 방출 및 TNF-α의 저해에서 상당히 활성이라는 것이 입증되었다.
LPS-유도 기도 염증의 마우스 모델에서 IRAK4 저해의 생체내 효과
TLR은 기도에서 미생물 및 알레르겐의 제1 센서로서 작용하고, 신속한 염증 반응을 매개할 수 있다. 흡입용 LPS 시험감염의 마우스 모델을 사용하여 급성 TLR4-유도 기도 염증 과정에서 IRAK4 저해의 효과를 연구하였다. 간략히 말해서, 9주령의 C57Bl/6NCrl 암컷 마우스에게 5, 15 및 50 ㎎/kg의 시험 화합물(실시예 89) 또는 비히클 단독(물 중 5% DMSO, 95% SBE-B-CD(30% w/v))을 경구 투여에 의해서 투여하였다. 0.5시간 후, 동물을 식염수 중 1 ㎎/㎖ LPS(Sigma L2630으로부터의 이. 콜라이 0111:B4) 또는 식염수 단독의 에어로졸에 대한 전신 노출에 의해서 0.5시간 동안 6 L/분의 압축 공기 유량으로 시험감염시켰다. 노출 후, 박스를 환기시키고, 동물을 하우징 케이지로 복귀시켰다. 4시간 후, 동물을 0.3 ㎖의 펜토바르비탈(100 ㎎/㎖)의 단일 복강내 주사로 마취시키고, 수동 기관지폐포 세척(bronchoalveolar lavage: BAL)을 1 ㎖의 PBS를 사용하여 전체 폐에서 수행하였다. 수집된 BAL 유체(BALF)를 300 x g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리시키고, 상청액을 수집하고, -80℃에서 저장하였다. 전염증성 사이토카인의 수준을 MSD 멀티플렉스 검정을 사용하여 BALF 상청액에서 측정하였고, 20마리의 마우스를 사용한 LPS/비히클군을 제외하고는 처리군당 8마리의 마우스를 사용하였다. 상이한 처리군에서 BALF 상청액 중의 IL-6 및 TNF-α의 수준을 도 1에 나타낸다. 실시예 89는 흡입용 LPS 시험감염 시 IL-6 및 TNF-α의 수준을 용량-의존적 방식으로 감소시켰다.

Claims (16)

  1. 하기 화학식 A의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염,
    [화학식 A]

    [식 중,
    R1은 로부터 선택되고;
    R2는 로부터 선택되고;
    R3 및 R4는 각각 H, Me, Et, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    Y는 N(Me)COMe, N(R5)COMe, N(Me)COR6, N(R5)COR6, CONMe2 또는 5-원 N-헤테로사이클, 예컨대, 1,2,3-트리아졸이고, Z는 H, Me, Et 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이거나;
    Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
    X는 OR7 및 NR8R9로부터 선택되고;
    R5는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬 및 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬로부터 선택되고;
    R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원 포화 N-헤테로사이클로부터 선택되고;
    R7은 Me, Et, i-프로필, n-프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬기 또는 O 및 N으로부터 선택된 헤테로원자를 함유하는 4-, 5- 또는 6-원 고리이고;
    R8 및 R9는 독립적으로 H, Me 및 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나 함께 선택적으로 치환된 C3-C6 시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택된 추가 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하고;
    Z, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9의 선택적인 치환체는, 존재하는 경우, 독립적으로 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로부터 선택됨].
  2. 제1항에 있어서, Y와 Z는 합쳐져서 선택적으로 치환된 3-히드록시시클로부틸, N-아실화된 아제티딘, 피롤리딘-2-온, 1-알킬피롤리딘-2-온, 3-알킬옥사졸리딘-2-온, 1-알킬피페리딘-2-온 또는 3-알킬-1,3-옥사지난-2-온으로부터 선택된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하는, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, Y와 Z는 합쳐져서 3-히드록시시클로부틸, N-아실 아제티딘, 1-메틸피롤리딘-2-온, 3-메틸옥사졸리딘-2-온, 1-메틸피페리딘-2-온 및 3-메틸-1,3-옥사지난-2-온으로부터 선택된 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하는, 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Y와 Z가 합쳐져서 4-, 5- 또는 6-원 고리를 형성하는 예에서, 고리는 하기로부터 선택되고,

    는 시클로헥실 고리에 대한 부착 부위를 나타내고, R10은 OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, C(O)Me, 아미노, NHMe, NMe2, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 Me 또는 C1-C6 알킬기인, 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R2는 이되, 선택적으로 R3 및 R4는 메틸인, 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R2는 이되, 선택적으로 Y는 N(Me)COMe이고, Z는 H인, 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 인, 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, X는 OR7인, 화합물.
  9. 제1항에 있어서, 하기로부터 선택되는, 화학식 A의 화합물:
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1s,4s)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시-2-메틸스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1s,4s)-4-(시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-6-시클로프로폭시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도) 시클로헥실)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-(2-히드록시스피로[3.5]노난-7-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    2-(4-히드록시-4-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-6-시클로프로폭시-2-((1S,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((1R,2R,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-메톡시-2-((1S,2S,4R*)-2-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((6S,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((6R,7R)-2-아세틸-6-메틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-2-((7R,8R)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 또는 rel-2-((7S,8S)-2,7-디메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1, 2, 3 또는 4;
    N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1R,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,3R,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1R,3S,4S)-4-히드록시-3-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    6-시클로프로폭시-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-시클로프로폭시-2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((5r,8r)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((5s,8s)-2-메틸-3-옥소-2-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1S,2S,4R)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1S,2S,4S)-4-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,2R,4S)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,2R,4R)-4-히드록시-2,4-디메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1S,4r)-4-((S)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((R)-2-히드록시-N-메틸프로판아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-((1r,4r)-4-(N-메틸시클로프로판카르복스아미도)시클로헥실)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((1r,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((1s,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로부탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-(2-히드록시-N,2-디메틸프로판아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1r,3r)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-(2-아세틸-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-((1s,3s)-3-메톡시시클로부톡시)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1r,4r)-4-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-2-((1S,2S,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,2R,3S)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1S,2R,3R)-3-히드록시-2-메틸시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸부탄아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3R)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((1R,4r)-4-((1R,3S)-3-히드록시-N-메틸시클로펜탄-1-카르복스아미도)시클로헥실)-6-메톡시-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    2-((1S,4r)-4-((S)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    2-((1R,4r)-4-((R)-3-히드록시-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미도)시클로헥실)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드;
    6-메톡시-2-(1-메틸-2-옥소-4-옥사-1-아자스피로[5.5]운데칸-9-일)-N-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    rel-2-((5R,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2; 및
    rel-2-((5S,7R,8R)-1,7-디메틸-2-옥소-1-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-N-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-6-메톡시-2H-인다졸-5-카르복스아미드 - 이성질체 1 또는 이성질체 2;
    또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 A의 화합물 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 것인, 화학식 A의 화합물.
  12. 제11항에 있어서, 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease: COPD), 암, 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료에 사용하기 위한 것인, 화합물.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약제의 제조에 사용하기 위한 것이되, 선택적으로 상기 약제는 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 암, 염증성 질환 및 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선의 치료를 위한 것인, 화합물.
  14. IRAK4의 저해가 유익한 질환 또는 병태의 치료 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 치료를 필요로 하는 환자는 호흡기 질환, 예컨대, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 암, 염증성 질환 또는 자가염증성/자가면역 질환, 예컨대, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 근염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증, 통풍, 자궁내막증, 아토피 피부염 및 건선을 갖는 환자인, 방법.
  16. 제11항 또는 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 사용, 약제 또는 치료는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM), 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 중추 신경계 림프종(PCNSL), 비장 변연부 림프종(SMZL), 소림프구성 림프종(SLL), 백혈병(만성 림프구성 백혈병(CLL)) 및 의미 불명 단클론성 감마글로불린혈증(monoclonal gammopathy of undetermined significance: MGUS-IgM+)으로부터 선택되는 혈액 악성종양에 대한 것인, 화합물 또는 치료 방법.
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