KR20230115786A - 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 - Google Patents
마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230115786A KR20230115786A KR1020220012666A KR20220012666A KR20230115786A KR 20230115786 A KR20230115786 A KR 20230115786A KR 1020220012666 A KR1020220012666 A KR 1020220012666A KR 20220012666 A KR20220012666 A KR 20220012666A KR 20230115786 A KR20230115786 A KR 20230115786A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- antler
- derived
- seq
- genetic marker
- marok
- Prior art date
Links
- 210000003056 antler Anatomy 0.000 title claims abstract description 77
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 46
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 241000283026 Cervus elaphus Species 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 73
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 39
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 claims description 29
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 19
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 19
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 15
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 241000974009 Cervus canadensis Species 0.000 claims description 3
- 241000283007 Cervus nippon Species 0.000 claims description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 claims description 2
- 208000017580 chronic wasting disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 101150087323 COI gene Proteins 0.000 description 55
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 10
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 10
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 10
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 10
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 108050004212 Cytochrome c oxidase subunit I Proteins 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 102000015884 Cytochrome c oxidase subunit I Human genes 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 3
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000023308 Acca Species 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007861 thermal asymmetric interlaced PCR Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical group COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- -1 Eclipse Chemical compound 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000205156 Pyrococcus furiosus Species 0.000 description 1
- 101150071661 SLC25A20 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000205188 Thermococcus Species 0.000 description 1
- 241000589500 Thermus aquaticus Species 0.000 description 1
- 241000589498 Thermus filiformis Species 0.000 description 1
- 241000589499 Thermus thermophilus Species 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 101150102633 cact gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000007849 hot-start PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007862 touchdown PCR Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 마록 유래 녹용을 판별하는 데 유용하게 사용될 수 있는 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커, 상기 마커를 이용한 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트, 조성물, 키트, 및 판별 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면 광록병에 노출되지 않은 마록 유래 녹용을 쉽고 정확하게 판별할 수 있으며, 이로써 광록병에 노출되지 않은 녹용을 판별하기 위해 소요되는 비용 및 시간을 최소화할 수 있고, 수요자에게 우수한 품질의 녹용을 안정적으로 제공할 수 있다.
본 발명에 따르면 광록병에 노출되지 않은 마록 유래 녹용을 쉽고 정확하게 판별할 수 있으며, 이로써 광록병에 노출되지 않은 녹용을 판별하기 위해 소요되는 비용 및 시간을 최소화할 수 있고, 수요자에게 우수한 품질의 녹용을 안정적으로 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 및 이를 이용한 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트, 조성물, 키트 및 판별 방법에 관한 것이다.
녹용(Cervus elaphus Linne)은 숫사슴의 갓 자란 뿔을 채취 가공하여 건조한 것을 일컫는다. 사슴의 뿔은 봄에 자라기 시작하여 약 4개월 동안 성장하여 부드운 털로 둘러 쌓인 녹용을 만들며, 표면의 털이 거칠어지면 서서히 벗겨지기 시작하여 녹각으로 변화된다. 사슴의 뿔은 이렇게 녹용과 녹각 두 가지로 불리는데 녹용과 녹각은 그 효능과 성상 면에서 많은 차이가 있어 과거부터 녹용이 주요 효능물질로 다뤄졌다. 동의보감 등의 고문헌에 따르면, 녹용은 강장, 생장발육 촉진, 보혈, 조혈, 오장육부의 항진, 심부전증 치료 등 많은 약리적 효능을 가지는 것으로 알려져 있다.
녹용으로 식용가능한 기원종은 사슴속의 마록(Cervus elaphus), 대록(Cervus canadensis), 매화록(Cervus nippon)이 있다. 그런데 사슴의 사육 조건, 기후, 영양적 요소 등에 따라 그 종이 다양해 구분이 어려울 뿐만 아니라, 녹용은 대부분 절편과 같은 형태로 유통되므로 육안으로 출처를 식별하는 것은 불가능하다.
한편, 광록병 또는 사슴 광우병이라고도 불리는, 만성소모성질환(CWD, Chronic Wasting Disease)이 국내에 수입된 캐나다산 녹용에서 발견되었고, 이에 따라 광록병에 노출되지 않은 뉴질랜드산의 녹용인 마록을 용이하고 정확하게 검출함으로써 수요자에게 우수한 품질의 녹용을 안정적으로 제공할 필요성이 존재하였다.
본 발명자는 광록병에 노출되지 않은 뉴질랜드산 마록을 판별할 수 있는 방법에 대해 연구하였고, 바코드 유전자인 COI(Cytochrome c oxidase subunit I)에서 마록을 대록 또는 매화록과 구별할 수 있는 단일염기다형성(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)을 찾아냈으며, 이로부터 마록 유래 녹용에 특이적인 프라이머 및 프로브를 설계하여 마록을 검출할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 마록 유래 녹용을 판별할 수 있는 유전자 마커, 조성물, 프라이머 세트, 또는 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 마록 유래 녹용을 판별할 수 있는 유전자 마커, 조성물, 프라이머 세트, 또는 키트를 사용하여 마록 유래 녹용을 판별하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 양태는 서열번호 1의 염기 서열의 219번째 및 220번째 단일염기다형성(SNP) 위치를 포함하는 8개 이상의 연속적인 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 상기 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드;로 구성되는 군에서 선택되는 적어도 하나를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 유전자 마커를 제공한다.
본 발명의 다른 양태는 상기 유전자 마커를 증폭하기 위한 프라이머 쌍을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트를 제공한다.
본 발명의 다른 양태는 상기 프라이머 세트를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 PCR 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 양태는 상기 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트 또는 상기 마록 유래 녹용의 판별용 PCR 조성물을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 키트를 제공한다.
본 발명의 다른 양태는 1) 녹용 시료로부터 유래한 주형 DNA와 상기 프라이머 세트를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 2) 상기 혼합 결과물을 PCR 증폭시켜 증폭 산물을 형성하는 단계;를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별 방법을 제공한다.
본 발명의 COI 유전자의 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커, 상기 유전자 마커를 이용한 프라이머 세트, 조성물, 키트 및 이를 사용한 판별 방법에 따르면 마록 유래 녹용을 판별할 수 있고, 구체적으로 마록을 대록 또는 매화록과 쉽게 구별할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따르면 광록병에 노출되지 않은 마록 유래 녹용을 쉽고 정확하게 판별할 수 있으며, 이로써 광록병에 노출되지 않은 녹용을 판별하기 위해 소요되는 비용 및 시간을 최소화할 수 있고, 수요자에게 우수한 품질의 녹용을 안정적으로 제공할 수 있다.
도 1은 녹용 COI 유전자의 염기 서열 분석을 통해 마록, 대록 및 매화록 종 사이에 구별이 가능한 것을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 실시예의 프라이머 세트를 이용하여 실시간(real-time) PCR 분석 결과 CeEL1 마커에서는 마록이 특이적으로 검출되고, CeNC1 마커에서는 대록 또는 매화록이 특이적으로 검출되는 것을 확인한 결과이다. CeCom 마커는 공용 증폭을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 유전자 마커에 대한 표적 염기 서열 프로파일에서 서열 혼재 현상이 거의 없음을 보여주는 서열분석 결과이다.
도 4는 본 발명의 실시예의 프라이머 세트를 이용하여 HRM-PCR 분석으로 마록과 대록 또는 매화록을 구별하기 위한 소정의 Pre-Melt 및 Post-Melt 온도 범위를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 마록과 대록 또는 매화록을 HRM-PCR 분석에 의해 구별할 수 있음을 보여주는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예의 프라이머 세트를 이용하여 실시간(real-time) PCR 분석 결과 CeEL1 마커에서는 마록이 특이적으로 검출되고, CeNC1 마커에서는 대록 또는 매화록이 특이적으로 검출되는 것을 확인한 결과이다. CeCom 마커는 공용 증폭을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 유전자 마커에 대한 표적 염기 서열 프로파일에서 서열 혼재 현상이 거의 없음을 보여주는 서열분석 결과이다.
도 4는 본 발명의 실시예의 프라이머 세트를 이용하여 HRM-PCR 분석으로 마록과 대록 또는 매화록을 구별하기 위한 소정의 Pre-Melt 및 Post-Melt 온도 범위를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 마록과 대록 또는 매화록을 HRM-PCR 분석에 의해 구별할 수 있음을 보여주는 그래프이다.
먼저, 본 발명에서 사용된 용어를 설명한다.
본 명세서에서 용어, "뉴클레오티드"는 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재하는 디옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드이며, 다르게 특별하게 언급되어 있지 않은 한 자연의 뉴클레오티드의 유사체를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "상보적(complementary)"은 소정의 어닐링 또는 혼성화 조건 하에서 프라이머 또는 프로브가 타겟 핵산 서열에 선택적으로 혼성화할 정도로 충분히 상보적인 것을 의미하며, 실질적으로 상보적(substantially complementary) 및 완전히 상보적(perfectly complementary)인 것을 모두 포괄하는 의미를 가지며, 바람직하게는 완전히 상보적인 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "특이적"은 녹용의 대록 또는 매화록에는 결합하지 않고 마록 유래 녹용에만 특이적으로 결합하는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 하기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하는 것을 허용하도록 설계된다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 따라 결정될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "프로브"는 특정 뉴클레오티드 서열에 혼성화될 수 있는 디옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드를 포함하는 자연 또는 변형되는 모노머 또는 결합을 갖는 선형의 올리고머를 의미한다. 바람직하게는, 프로브는 혼성화에서의 최대 효율을 위하여 단일가닥이다. 프로브는 바람직하게는 디옥시리보뉴클레오티드이다. 본 발명에 이용되는 프로브로서, 상기 SNP를 포함하는 서열에 완전하게(perfectly) 상보적인 서열이 이용될 수 있으나, 특이적 혼성화를 방해하지 않는 범위 내에서 실질적으로(substantially) 상보적인 서열이 이용될 수도 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "PCR"은 표적 핵산을 주형으로 사용하고, 상기 표적 핵산에 특이적인 프라이머를 사용하여, 변성, 어닐링 및 연장 반응의 과정을 반복함으로써 표적 핵산을 증폭하는 과정을 의미한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 마록 유래 녹용을 대록 또는 매화록 유래 녹용과 구별하기 위한 유전자 마커로서 서열번호 1의 염기 서열로 구성되고, 단일염기다형성(SNP)을 갖는, 마록 유래 녹용의 판별용 유전자 마커를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명의 유전자 마커는 서열번호 1의 염기 서열의 1번째 내지 584번째 폴리뉴클레오티드, 바람직하게는 168번째 내지 259번째 폴리뉴클레오티드, 더 바람직하게는 170번째 내지 233번째 폴리뉴클레오티드의 일부로서 SNP 위치인 219번째 및/또는 220번째 뉴클레오티드를 포함하는 8개 내지 150개, 예컨대 8개 내지 120개, 바람직하게는 8개 내지 95개, 8개 내지 60개, 18개 내지 50개, 18개 내지 30개, 또는 18개 내지 24개의 연속된 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 유전자 마커는 서열번호 1의 염기 서열의 170 내지 233번째 연속된 뉴클레오티드로 이루어지는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
본 발명의 SNP는 표현형에 직접적인 영향을 미치는 매우 안정적인 유전자 마커이다. 본 발명의 SNP 마커를 마록 유래 녹용을 판별하는 데 사용할 수 있는 것은 바코드 유전자인 녹용의 COI 유전자에서 서열번호 1로 표시되는 염기 서열 중 SNP 변이 위치인 219번째 또는 220번째 염기가 C로 다르게 나타나는 것에 근거한 것이다. 예를 들어, 서열번호 1의 219번째 또는 220번째 염기에 해당하는 SNP는 C 또는 T로 염기다형성을 나타내는데, 이 SNP에서 C를 갖는 종은 마록으로, T를 갖는 종은 대록 또는 매화록으로 판단할 수 있다.
본 발명은 상기 서열번호 1의 서열에서 각 SNP 위치의 염기 변이체에 관한 것이나, 이러한 SNP 염기 변이가 이중 가닥의 gDNA(게놈 DNA)에서 발견되는 경우, 상기 뉴클레오티드 서열에 대해 상보적인 폴리뉴클레오티드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 따라서 상보적인 폴리뉴클레오티드 서열에서 SNP 위치의 염기도 상보적인 염기가 된다. 이러한 측면에서, 본 명세서에 제시된 모든 서열은, 특별한 언급이 없는 한, 게놈 DNA의 센스 가닥에 있는 서열을 기준으로 한 것이다.
또한, 본 발명은 단일염기다형성을 갖는 상기 유전자 마커를 이용하여 마록 유래 녹용을 판별할 수 있는 단일염기다형성 마커 조성물, 프라이머 세트, 조성물, 키트를 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 유전자 마커에 상보적인 서열을 가지고, 상기 유전자 마커에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트를 제공한다.
본 발명에 있어서, 프라이머 쌍은 각각 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드 및 그 상보적인 염기 서열에 결합하여 마록 유래 녹용의 판별용 유전자 마커를 증폭할 수 있는 임의의 폴리뉴클레오티드 서열을 비제한적으로 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명의 프라이머 쌍은 서열번호 1 또는 그의 일부인 유전자 마커를 증폭하기 위한 서열번호 2의 염기 서열로 구성된 제1 프라이머; 및 서열번호 3의 염기 서열로 구성된 제2 프라이머;를 포함할 수 있다.
본 발명에서 이용되는 프라이머는 표적 유전자 마커에 인접한 영역의 DNA 서열에 상보적인 혼성화 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 프라이머는 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 작용을 할 수 있는 충분한 상보성을 가질 수 있는 것이면 본 발명에 적용할 수 있으므로, 프라이머는 주형인 뉴클레오티드 서열에 완벽하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없다. 또한 본 발명의 프라이머는 마록의 특이적 검출에 영향을 주지 않는 범위 내에서 변형(예: 부가, 결실, 치환)될 수 있다. 예를 들면, 상기 프라이머는 각 프라이머의 서열 길이에 따라, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 서열 내의 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상의 연속 뉴클레오타이드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
본 발명에서 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오타이드는 또한 뉴클레오타이드 유사체(analogue), 예를 들면 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩타이드 핵산(peptide nucleic acid)을 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent)을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트 또는 상기 마록 유래 녹용의 판별용 조성물을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 키트를 제공한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 상기 마록 유래 녹용의 판별용 조성물 또는 상기 키트는 프로브를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다.
한 구현예에서, 본 발명의 프로브는 서열번호 4의 프로브를 포함할 수 있다. 상기 프로브는 해당 유전자 마커의 SNP 위치에서 마록, 대록 및 매화록 종에 따른 서로 다른 염기를 특이적으로 검출하기 위한 것이다. 예컨대, 상기 서열번호 4의 프로브는 그 서열 내에 서열번호 1의 SNP 위치인 219번째 및 220번째 염기에 대응하는 염기로서 마록을 검출하기 위한 "C"를 포함한다. 따라서, 본 기술분야의 통상의 기술자라면, 서열번호 1의 SNP 위치인 219번째 및 220번째 염기에 대응하는 염기(즉, "C")를 포함하는 한, 서열번호 1의 유전자 마커에 대한 프로브는 서열번호 4와 상이할 수 있음을 알 수 있을 것이다.
한 구현예에서, 상기 프로브는 혼성화 특이성이 손상되지 않는 범위 내에서 적절히 변형될 수 있다. 예를 들면, 리포터 또는 퀀쳐가 프로브의 말단에 부착될 수 있다.
상기 프로브의 5' 말단에는 리포터로서 Fam이 부착되어 있을 수 있고, 형광을 나타내는 다른 형광 물질이 부착될 수 있으며, 이에 한정되지 아니한다. 예를 들면, 상기 리포터는 Hex, Fam, 플루오레신, 플루오레신 클로로트리아지닐, 로다민 그린, 로다민 레드, 테트라메틸로다민, FITC, 오레곤 그린, 알렉사 플루오로, ROX, 텍사스 레드, TET, TRITC, TAMRA, 시아닌 계열 염료, 및 씨아디카르보시아닌 염료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
상기 프로브의 3' 말단에는 퀀쳐로서 블랙홀 퀀쳐-1(Black Hole Quencher-1, BHQ-1)이 부착되어 있을 수 있고, 퀀쳐로서 사용될 수 있는 다른 물질이 부착될 수 있으며, 이에 한정되지 아니한다. 예를 들면, 상기 퀀쳐는 BHQ-2, BH3-3, ROX(carboxy-X-rhodamine), 답실(Dabcyl), TAMRA, Eclipse, DDQ, QSY, 블랙베리 퀀쳐(Blackberry Quencher), Qxl, 아이오와 블랙(Iowa black) FQ, 아이오와 블랙 RQ 및 IRDye QC-1로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
또한, 본 발명에 사용된 프로브에는 마이너 그루브(minor groove)에 결합하는 MGB와 유사한 ZNA도 3' 말단에 결합될 수 있다.
본 발명의 키트는 상기한 성분 이외에도, 다른 성분들을 추가적으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 키트가 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우에는, 본 발명의 키트는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대 완충액, DNA 중합효소 (예컨대, Thermus aquaticus(Taq), Thermus thermophilus(Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus (Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징으로 제작될 수 있다.
또한, 본 발명은 1) 녹용 시료로부터 유래한 주형 DNA와 상기 프라이머 세트를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 2) 상기 혼합 결과물을 PCR 증폭시키는 단계;를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별 방법을 제공한다.
상기 PCR은 표적 핵산을 주형으로 사용하고, 상기 표적 핵산에 특이적인 프라이머를 사용하여, 변성, 어닐링 및 연장 반응의 과정을 반복함으로써 표적 핵산을 증폭하는 과정을 의미하는 것으로, 가장 잘 알려진 핵산 증폭 방법이다. 그의 많은 변형과 응용들이 개발되어 있으며, 예를 들면 PCR의 특이성 또는 민감성을 증진시키기 위해 전통적인 PCR 절차를 변형시켜 터치다운(touchdown) PCR, 핫 스타트(hot start) PCR, 네스티드(nested) PCR 및 부스터(booster) PCR 등이 있다. 또한, 실시간 PCR, 분별 디스플레이 PCR(differential display PCR, DD-PCR), cDNA 말단의 신속 증폭(rapid amplification of cDNA ends, RACE), 멀티플렉스 PCR, 인버스 중합효소 연쇄반응(inverse polymerase chain reaction, IPCR), 벡토레트(vectorette) PCR 및 TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)이 특정한 응용을 위해 사용될 수 있다.
상기 PCR을 실시할 때, 반응 용기에 반응에 필요한 성분들이 과량으로 제공될 수 있다. 증폭 반응에 필요한 성분들의 과량은, 증폭 반응이 성분의 농도에 실질적으로 제한되지 않는 정도의 양을 의미한다. Mg2+와 같은 조인자, dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP를 소망하는 증폭 정도가 달성될 수 있을 정도로 반응 혼합물에 제공될 수 있다. 증폭 반응에 이용되는 모든 효소들은 동일한 반응 조건에서 활성 상태일 수 있다. 완충액은 모든 효소들이 최적의 반응 조건에 근접하도록 제조되어 첨가될 수 있다.
상기 방법은 상기 단계 2) 후에 상기 증폭 산물을 검출 또는 정량하는 단계;를 추가로 포함할 수 있다. 상기 증폭 산물의 검출 또는 정량은 DNA 칩, 겔 전기영동, HRM(high resolution melting) 분석, 방사선 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
HRM 분석 기술은 핵산 서열에서의 변이를 확인하기 위해 사용된 상대적으로 새로운 포스트 PCR 분석 방법이다. 이 방법은 PCR 해리곡선(melting curve)에서 작은 차이를 감지하는 것을 기초로 한다. 이것은 PCR 기기와 연결되어 사용된 염료(표지 물질)를 갖는 dsDNA의 온도에 따른 해리 정도의 차이를 HRM 분석을 위해, 특이적으로 고안된 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고 처리한다.
또한, 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용하여 수행될 수 있다.
또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5'-말단에 형광 물질을 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다.
또한, 방사성 측정 방법은 PCR 수행시 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사성 측정기구, 예를 들면, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다.
본 발명의 한 실시예에서, 서열번호 2 및 서열번호 3의 프라이머 및 서열번호 4의 프로브를 이용하고, 마록, 대록, 매화록에서 각각 분리된 DNA를 주형으로 하여 실시간 PCR로 상기 프라이머 및 프로브의 특이성을 확인하였을 때, 다른 병원균에는 특이성을 나타내지 않고, 마록에만 특이성을 나타낸다(도 2 참조).
본 발명의 다른 실시예에서, 서열번호 2 및 서열번호 3의 프라이머 쌍을 이용하여 HRM-PCR 분석에 의해 마록을 대록, 매화록으로부터 구별할 수 있었다(도 5 참조).
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 녹용 시료로부터 DNA 추출
본 발명에 사용한 녹용 시료의 구입 경로, 원산지 등에 관한 정보는 아래 표 1에 나타낸다. DNA 추출 키트(BioD HiQ Stool DNA/RNA 키트(ref P0019R), Qiagen QIAamp PowerFecal Pro DNA 키트(ref 51804), 또는 MN NucleoSpin Soil(ref 740780))를 이용해 녹용 시료 내의 DNA를 분리하였다.
| 시료번호 | 구입경로 | 원산지 |
| CE18A001 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE18A002 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE18A003 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19A001 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19A002 | 강원도 농장(대록) | 국내 |
| CE19A003 | 강원도 농장(대록) | 국내 |
| CE19A004 | 강원도 농장(대록) | 국내 |
| CE19A005 | 강원도 농장(매화록) | 국내 |
| CE19A006 | 강원도 농장(매화록) | 국내 |
| CE19B001 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19B002 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19B003 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19C001 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
| CE19C002 | 한국인삼공사 수입(마록) | 뉴질랜드 |
실시예 2. 녹용 COI 유전자 염기 서열 분석
Genbank(www.ncbi.nlm.nih.gov) 및 BOLD 시스템(www.boldsystems.org)으로부터 마록, 대록, 및 매화록의 COI 유전자에 대한 표준 염기 서열을 입수하였고, 서열정보는 표 2에 나타냈다.
실시예 1에서 추출한 녹용 시료의 DNA에서 COI 유전자를 증폭하기 위하여 VF1d (5'-TTCTCAACCAACCACAARGAYATYGG-3')(서열번호 57) 및 VR1d (5'-TAGACTTCTGGGTGGCCRAARAAYCA-3')(서열번호 58)를 사용하여 PCR 하였다 (Ivanova et al., 2006). PCR을 위한 반응액 조성은 추출한 주형 DNA 20 ng, dNTPs 0.2 mM, MgCl2 2.0 mM, 0.5 μM의 서열번호 2의 정방향 프라미어 및 서열번호 3의 역방향 프라이머 각각을 혼합하였다. DNA 폴리머라제 1 유닛(unit)을 혼합하여 최종 용량은 20 ㎕가 되도록 증류수를 첨가하였다. PCR은 ABI7500Fast(Applied Biosystems)를 이용하여 초기변성을 위해 95℃에서 3분간 진행한 후, 95℃ 10초, 59℃ 20초, 70℃ 30초의 연속된 증폭단계를 35회 반복하였다. 마지막으로 최종 신장단계로 72℃ 5분간 반응하였다. DNA 증폭 결과를 확인하기 위해서 증폭된 유전자 5 ㎕를 DNA 염색약 1 ㎕와 섞어 1.0~1.5% 아가로즈 겔에 로딩하여 전기영동법으로 분리한 후, 분리된 겔에 UV를 비추어 DNA의 상태를 확인하였다.
COI 유전자의 PCR 산물을 PCR 산물 정제 키트(Multiscreen filter plate, Millipore Corp.)를 사용하여 정제한 후, BigDye(R) 터미네이터 v3.1 사이클 시퀀싱 키트(Applied Biosystems)로 반응하여 ABI PRISM 3730XL 분석기(96 capillary type, Applied Biosystems)로 분석하였다 (Macrogen, Korea). 염기 서열 분석 결과 생성된 ab1 파일을 벡터 NTI 어드밴스 10(Invitrogen)의 콘티그익스프레스(ContigExpress)에서 염기 서열 크로마토그램 확인 및 서열 수정을 진행하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타냈으며, 확인된 염기 서열은 AlignX에서 표준 염기 서열과 함께 다중 서열 정렬(Multiple Sequence Alignment)을 수행하여 그 결과를 도 1에 나타내었다.
| COI (cytochrome c oxidase subunit I) | 서열번호 | |
| 마록 (Cervus elaphus) |
EU835707 | 11 |
| EU835708 | 12 | |
| EU835709 | 13 | |
| FJ392289 | 14 | |
| FJ402869 | 15 | |
| FJ958331 | 16 | |
| JF443224 | 17 | |
| KF317906 | 18 | |
| KF317914 | 19 | |
| KJ205546 | 20 | |
| KJ205547 | 21 | |
| KJ205549 | 22 | |
| KJ205550 | 23 | |
| KJ205551 | 24 | |
| KJ205552 | 25 | |
| KJ205553 | 26 | |
| KJ205557 | 27 | |
| 대록 (Cervus canadensis) |
JF443209 | 28 |
| JF443210 | 29 | |
| JF443211 | 30 | |
| JF443212 | 31 | |
| JF443213 | 32 | |
| JF443214 | 33 | |
| JF443215 | 34 | |
| JF443216 | 35 | |
| JF443217 | 36 | |
| JF443218 | 37 | |
| JF443219 | 38 | |
| JF443220 | 39 | |
| JF443221 | 40 | |
| JF443222 | 41 | |
| JF443223 | 42 | |
| 매화록 (Cervus nippon) |
EU835713 | 43 |
| EU835715 | 44 | |
| GQ329013 | 45 | |
| GQ329015 | 46 | |
| JF700149 | 47 | |
| JF700150 | 48 | |
| KF317911 | 49 | |
| KF509968 | 50 | |
| KF509971 | 51 | |
| KJ205535 | 52 | |
| KJ205538 | 53 | |
| KM047655 | 54 | |
| KM047660 | 55 | |
| KM047665 | 56 |
| 서열번호 | 서열목록(5'->3') | 크기(nucleotide) | Allele 마록-대록-매화록 |
| 1 | gaactgggccaacctggtactctacttggagatgaccaaatttataatgttatcgtaaccgcacatgcattcgtaataattttctttatagttatgccaattataattggaggatttggtaattgactagttcccctaataattggcgccccagacatagcatttcctcgaataaacaatataagcttttgactcctccctccttctttcttactact [CC/TT] tagcatcatctatagttgaagctggcgcaggaacaggctgaactgtatatccccctctagctggcaacttagctcatgcaggggcttcagtagacctgactattttttctttacacttagcaggcgtctcctcaattctaggggccattaactttattacaacaattatcaatataaaaccccctgccatatcacaatatcaaacccctctatttgtgtgatccgtattagtcactgctgtactactacttctctcactccctgtactagcagccggaattacaatactattaacagaccgaaacttaaatacaaccttctttgacccagcaggaggcggagatcctattctatatcaacactt |
584 | (219번째 위치) (C)-(T)-(T) (220번째 위치) (C)-(T)-(T) |
실시예 3. 프라이머 제작
실시예 2의 녹용 COI 유전자 염기 서열 분석을 통해 선정된 마록 유래 녹용의 SNP 위치를 포함하는 서열번호 1의 유전자 마커를 증폭시키는 프라이머 쌍과 특이적으로 검출할 수 있는 프로브를 설계하였다. 상기 프라이머 쌍의 염기 서열을 표 4에 나타냈다.
| 프라이머 | 염기 서열 | 서열번호 | 서열번호 1의 해당위치 | 형광표식 | |
| CeEl1 | 정방향 | TTTGACTCCTCCCTCCTTCTT | 2 | 188-208 | |
| 역방향 | CCTGCGCCAGCTTCAACT | 3 | 234-251 | ||
| 프로브 | CTTACTACT CC TAGCATCA | 4 | 210-228 | FAM | |
| CeNC1 | 정방향 | TTCTGACTCCTCCCTCCTTCTT | 5 | 187-208 | |
| 역방향 | CCTGCGCCAGCTTCAACT | 6 | 234-251 | ||
| 프로브 | CTTACTACT TT TAGCATCA | 7 | 210-228 | HEX | |
| CeCom | 정방향 | TGATCCGTATTAGTCACTGCTG | 8 | 439-460 | |
| 역방향 | GAATAGGATCTCCGCCTCCT | 9 | 552-571 | ||
| 프로브 | CACTCCCTGTACTAGCAGCCGGA | 10 | 476-498 | FAM | |
실시예 4. 실시간 PCR에 의한 마록 판별 방법
상기 실시예 1에서 수득된 녹용 시료의 DNA를 실시간 PCR을 위한 주형으로 사용하였다. 상기 실시예 3에서 설계한 표 3의 프라이머 쌍 및 프로브를 이용해 PCR 산물을 수득하였다.
실시간 PCR을 위한 반응액 조성은 추출한 주형 DNA 20 ng, qPCRBIO 프로브 믹스, 50 nM ROX, 0.5 μM의 서열번호 2의 정방향 프라미어 및 서열번호 3의 역방향 프라이머, 0.25 μM의 서열번호 4의 프로브 각각을 혼합하여 최종 용량은 20 ㎕가 되도록 증류수를 첨가하였다. PCR은 ABI7500Fast(Applied Biosystems)를 이용하여 초기변성을 위해 95℃에서 3분간 진행한 후, 95℃ 10초, 60℃ 30초의 연속된 증폭단계를 40회 반복하였다. 실시간 PCR 소프트웨어(7500 Software v2.0.6, Applied Biosystems)에서 각 반응 별로 FAM, HEX 파장의 신호 검출 여부를 확인하여 그 결과를 도 2에 나타냈다.
그 결과, 실시예 3에서 설계한 CeEL1, CeNC1, 및 CeCom 프라이머 쌍은 각각 마록(CeEL1), 대록 또는 매화록(CeNC1), 및 이들 모두(CeCom)를 특이적으로 증폭함을 확인하였고, 이에 따라 CeEL1의 프라이머 쌍은 마록을 대록이나 매화록으로부터 쉽게 판별할 수 있는 프라이머 쌍임을 확인하였다.
실시예 5. HRM 분석에 의한 마록 판별 방법
서열분석 결과에 따르면, 서열번호 1로 기재되는 녹용 COI 유전자의 219번째와 220번째 SNP 위치에 대한 표적 염기 서열 프로파일에서 서열 혼재 현상이 거의 없는 것으로 나타나 HRM 분석이 가능할 것으로 예상되었다(도 3).
이를 구체적으로 확인하기 위하여, 먼저 상기 실시예 3에서 도출된 마록을 특이적으로 증폭하는 CeEL1 프라이머 쌍을 이용해 실시간 PCR을 수행하여 HRM 분석을 위한 조건을 결정하였다. Eco 48 리얼-타임 PCR(PCRmax)을 이용한 PCR 조건은 95℃ 10초 후 60℃ 30초를 40 사이클 반복했으며, 멜팅 조건은 55℃에서 95℃로 1초에 0.1℃씩 증가시키면서 형광신호를 측정하였다. 리얼-타임 PCR 소프트웨어(EcoStudy Software v5.2.16, PCRmax)를 이용한 CeEL1 프라이머 쌍의 HRM 분석 조건은 다음과 같다(도 4 참조):
Pre-Melt Start Tm : 72.1, Pre-Melt End Tm : 73.1,
Post-Melt Start Tm : 80.0, Post-Melt End Tm : 81.0.
다음으로, 상기 실시예 3에서 도출된 마록을 특이적으로 증폭하는 CeEL1 프라이머 쌍을 이용해 표준품 및 시료에 대해 실시간 PCR을 수행하였고, 상기 결정된 Pre-Melt 및 Post-Melt 온도 범위에 대해 HRM 분석을 수행하였다. 이때, HRM 분석을 위한 형광표식으로는 Syber 그린을 사용하였다.
그 결과, 본 발명의 실시예 3에서 설계된 CeEL1 프라이머 쌍을 이용한 실시간 PCR 생성물은 상기 결정된 Pre-Melt 및 Post-Melt 온도 범위에서 마록과 대록 또는 매화록 시료에 대한 용해 곡선이 명확하게 분리되었고, 이를 통해 HRM 분석에 의해서도 실시예 3의 프라이머 쌍을 사용하여 마록을 쉽게 판별할 수 있음을 확인하였다(도 5).
<110> KOREA GINSENG CORP.
<120> Genetic Marker Having Single Nucleotide Polymorphism For
Distinguishing Antler derived from Cervus elaphus
<130> 2020-DPA-3945
<160> 58
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 584
<212> DNA
<213> Cervus elaphus
<220>
<221> allele
<222> (219)..(220)
<223> y is t or c
<400> 1
gaactgggcc aacctggtac tctacttgga gatgaccaaa tttataatgt tatcgtaacc 60
gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttatgccaa ttataattgg aggatttggt 120
aattgactag ttcccctaat aattggcgcc ccagacatag catttcctcg aataaacaat 180
ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactactyy tagcatcatc tatagttgaa 240
gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt agctcatgca 300
ggggcttcag tagacctgac tattttttct ttacacttag caggcgtctc ctcaattcta 360
ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat atcacaatat 420
caaacccctc tatttgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact tctctcactc 480
cctgtactag cagccggaat tacaatacta ttaacagacc gaaacttaaa tacaaccttc 540
tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac actt 584
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> forward primer for SEQ ID NO: 1
<400> 2
tttgactcct ccctccttct t 21
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> reverse primer for SEQ ID NO: 1
<400> 3
cctgcgccag cttcaact 18
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> probe for SEQ ID NO: 1
<400> 4
cttactactc ctagcatca 19
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> forward primer of CeNC1
<400> 5
ttctgactcc tccctccttc tt 22
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> reverse primer of CeNC1
<400> 6
cctgcgccag cttcaact 18
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> probe of CeNC1
<400> 7
cttactactt ttagcatca 19
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> forward primer of CeCom
<400> 8
tgatccgtat tagtcactgc tg 22
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> reverse primer of CeCom
<400> 9
gaataggatc tccgcctcct 20
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> probe of CeCom
<400> 10
cactccctgt actagcagcc gga 23
<210> 11
<211> 677
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of EU835707
<400> 11
aaccataaag atatcggtac tctgtaccta ttatttggtg cctgagcagg catggtagga 60
acagccttaa gcctactgat tcgcgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 120
gaccaaattt acaatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 180
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 240
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac ttctccctcc ttctttctta 300
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 360
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acttgactat tttctcttta 420
cacttagcag gcgtctcttc aattctaggg gccattaact ttattacaac gattatcaat 480
ataaaacccc ctgccatgtc acaatatcaa actcccctat ttgtgtgatc cgtattagtc 540
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtgctagcag ccggaattac aatactatta 600
acagaccgaa acttaaatac aactttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 660
tatcaacact tattctg 677
<210> 12
<211> 677
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of EU835708
<400> 12
aaccataaag atatcggtac tctgtaccta ttatttggtg cctgagcagg catggtagga 60
acagccttaa gcctactgat tcgcgccgaa ctgggccaac ctggtgctct acttggagac 120
gaccaaattt acaatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 180
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 240
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 300
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 360
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acttgactat tttctcttta 420
cacttagcag gcgtctcttc aattctaggg gccattaact ttattacaac gattatcaat 480
ataaaacccc ctgccatgtc acaatatcaa acccccctat ttgtgtgatc cgtattagtc 540
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtgctagcag ccggaattac aatactatta 600
acagaccgaa acttaaatac aactttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 660
tatcaacact tattctg 677
<210> 13
<211> 677
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of EU835709
<400> 13
aaccataaag atatcggtac tctgtaccta ttatttggtg cctgagcagg catggtagga 60
acagccttaa gcctactgat tcgcgccgaa ctgggccaac ctggtgctct acttggagac 120
gaccaaattt acaatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 180
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 240
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 300
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 360
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acttgactat tttctcttta 420
cacttagcag gcgtctcttc aattctaggg gccattaact ttattacaac gattatcaat 480
ataaaacccc ctgccatgtc acaatatcaa acccccctat ttgtgtgatc cgtattagtc 540
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtgctagcag ccggaattac aatactatta 600
acagaccgaa acttaaatac aactttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 660
tatcaacact tattctg 677
<210> 14
<211> 781
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of FJ392289
<400> 14
aaccgctgat tattttcaac caaccataaa gatatcggta ctctgtatct attatttggt 60
gcctgagcag gcatagtagg gacagcctta agcctactga ttcgtgccga actgggccaa 120
cctggtactc tacttggaga tgaccaaatt tataatgtta tcgtaaccgc acatgcattc 180
gtaataattt tctttatagt tatgccaatt ataattggag gatttggtaa ttgactagtt 240
cccctaataa ttggcgcccc agacatagca tttcctcgaa taaacaatat aagcttttga 300
ctcctccctc cttctttctt actactccta gcatcatcta tagttgaagc tggcgcagga 360
acaggctgaa ctgtataccc ccctctagct ggcaacttag ctcatgcagg ggcttcagta 420
gacctgacta ttttttcttt acacttagca ggcgtctcct caattctagg ggccattaac 480
tttattacaa caattatcaa tataaaaccc cctgccatat cacaatatca aactcctcta 540
tttgtgtgat ccgtattagt cactgctgta ctactacttc tctcactccc tgtactagca 600
gccggaatta caatactatt aacagaccga aacttaaata caaccttctt tgacccagca 660
ggaggcggag atcctattct atatcaacac ttgttctgat tctttggcca ccctgaagta 720
tatatcctta ttctacccgg ctttggtata atctcccaca tcgtaacata ctattcagga 780
a 781
<210> 15
<211> 781
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of FJ402869
<400> 15
aaccgctgat tattttcaac caaccataaa gatatcggta ctctgtatct attatttggt 60
gcctgagcag gcatagtagg gacagcctta agcctactga ttcgtgccga actgggccaa 120
cctggtactc tacttggaga tgaccaaatt tataatgtta tcgtaaccgc acatgcattc 180
gtaataattt tctttatagt tatgccaatt ataattggag gatttggtaa ttgactagtt 240
cccctaataa ttggcgcccc agacatagca tttcctcgaa taaacaatat aagcttttga 300
ctcctccctc cttctttctt actactccta gcatcatcta tagttgaagc tggcgcagga 360
acaggctgaa ctgtataccc ccctctagct ggcaacttag ctcatgcagg ggcttcagta 420
gacctgacta ttttttcttt acacttagca ggcgtctcct caattctagg ggccattaac 480
tttattacaa caattatcaa tataaaaccc cctgccatat cacaatatca aactcctcta 540
tttgtgtgat ccgtattagt cactgctgta ctactacttc tctcactccc tgtactagca 600
gccggaatta caatactatt aacagaccga aacttaaata caaccttctt tgacccagca 660
ggaggcggag atcctattct atatcaacac ttgttctgat tctttggcca ccctgaagta 720
tatatcctta ttctacccgg ctttggtata atctcccaca tcgtaacata ctattcagga 780
a 781
<210> 16
<211> 730
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of FJ958331
<400> 16
ccaaccataa agatatcggt actctgtacc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag 60
ggacagcctt aagcctactg attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctacttggag 120
atgaccaaat ttataatgtt atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag 180
ttatgccaat tataattgga ggatttggta attgactagt tcccctaata attggcgccc 240
cagacatagc atttcctcga ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct 300
tactactcct agcatcatct atagttgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatatc 360
cccctctagc tggcaactta gctcatgcag gggcttcagt agacttgacc attttttctt 420
tacacttagc aggcgtctcc tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatca 480
atataaaacc ccctgccata tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattgg 540
tcactgctgt actactactt ctctcactcc ctgtactagc agccggaatt acaatactat 600
taacagaccg aaacttaaat acaaccttct ttgacccagc aggaggcgga gatcctattc 660
tatatcaaca cttgttctga ttctttggtc accctgaagt atatatcctt attctacccg 720
gctttggtat 730
<210> 17
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of FJF443224
<400> 17
actctgtatc tattatttgg tgcctgngca ggcatagtag ggacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctacttggag atgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttatgccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggcgccc cagacatagc atttcctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactcct agcatcatct 300
atagttgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatatc cccctctagc tggcaactta 360
gctcatgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttagc aggcgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatca atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaactcctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agccggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaaccttct ttgacccagc aggaggcgga gatcctattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 18
<211> 669
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KF317906
<400> 18
ctattatttg gtgcctgagc aggcatagta gggacagcct taagcctact gattcgtgcc 60
gaactgggcc aacctggtac tctacttgga gatgaccaaa tttataatgt tatcgtaacc 120
gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttatgccaa ttataattgg aggatttggt 180
aattgactag ttcccctaat aattggcgcc ccagacatag catttcctcg aataaacaat 240
ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactactcc tagcatcatc tatagttgaa 300
gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt agctcatgca 360
ggggcttcag tagacctgac tattttttct ttacacttag caggcgtctc ctcaattcta 420
ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat atcacaatat 480
caaacccctc tatttgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact tctctcactc 540
cctgtactag cagccggaat tacaatacta ttaacagacc gaaacttaaa tacaaccttc 600
tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttctg attctttggc 660
caccctgaa 669
<210> 19
<211> 666
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KF317914
<400> 19
ctattatttg gtgcctgagc aggcatagta gggacagcct taagcctact gattcgtgcc 60
gaactgggcc aacctggtac tctacttgga gatgaccaaa tttataatgt tatcgtaacc 120
gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttatgccaa ttataattgg aggatttggt 180
aattgactag ttcccctaat aattggcgcc ccagacatag catttcctcg aataaacaat 240
ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactactcc tagcatcatc tatagttgaa 300
gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt agctcatgca 360
ggggcttcag tagacctgac tattttttct ttacacttag caggcgtctc ctcaattcta 420
ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat atcacaatat 480
caaactcctc tatttgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact tctctcactc 540
cctgtactag cagccggaat tacaatacta ttaacagacc gaaacttaaa tacaaccttc 600
tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttctg attctttggc 660
caccct 666
<210> 20
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205546
<400> 20
aaagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 21
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205547
<400> 21
aaagccttaa gcctactgat tcgcgccgaa ctgggccaac ctggtgctct acttggagac 60
gaccaaattt acaatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acttgactat tttctcttta 360
cacttagcag gcgtctcttc aattctaggg gccattaact ttattacaac gattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatgtc acaatatcaa acccccctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtgctagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aactttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 22
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205549
<400> 22
gacgccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 23
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205550
<400> 23
gcagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 24
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205551
<400> 24
gcagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 25
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205552
<400> 25
gaagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aacctttttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 26
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205553
<400> 26
gaagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 27
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205557
<400> 27
gaagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct acttggagat 60
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
atgccaatta taattggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggcgcccca 180
gacatagcat ttcctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctactcctag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcatgcaggg gcttcagtag acctgactat tttttcttta 360
cacttagcag gcgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat ttgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 540
acagaccgaa acttaaatac aaccttcttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 28
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443209
<400> 28
actctgtatc tattatttgn tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 29
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443210
<400> 29
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 30
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443211
<400> 30
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 31
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443212
<400> 31
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 32
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443213
<400> 32
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 33
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443214
<400> 33
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacggaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 34
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443215
<400> 34
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca catgttc 657
<210> 35
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443216
<400> 35
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 36
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443217
<400> 36
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 37
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443218
<400> 37
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 38
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443219
<400> 38
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 39
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443220
<400> 39
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 40
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443221
<400> 40
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 41
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443222
<400> 41
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacggaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 42
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF443223
<400> 42
actctgtatc tattatttgg tgcctgagca ggcatagtag gaacagcctt aagcctactg 60
attcgtgccg aactgggcca acctggtact ctgcttggag acgaccaaat ttataatgtt 120
atcgtaaccg cacatgcatt cgtaataatt ttctttatag ttataccaat tataattgga 180
ggatttggta attgactagt tcccctaata attggtgccc cagacatagc attccctcga 240
ataaacaata taagcttttg actcctccct ccttctttct tactactttt agcatcatct 300
ataattgaag ctggcgcagg aacaggctga actgtatacc cccctctagc tggcaactta 360
gctcacgcag gggcttcagt agacctgact attttttctt tacacttggc aggtgtctcc 420
tcaattctag gggccattaa ctttattaca acaattatta atataaaacc ccctgccata 480
tcacaatatc aaacccctct atttgtgtga tccgtattag tcactgctgt actactactt 540
ctctcactcc ctgtactagc agctggaatt acaatactat taacagaccg aaacttaaat 600
acaacctttt ttgacccagc aggaggcgga gatcccattc tatatcaaca cttgttc 657
<210> 43
<211> 677
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of EU835713
<400> 43
aatcataaag acattggtac tctgtatcta ctgtttggtg cctgagcagg catagtagga 60
acagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ccggtactct gcttggagat 120
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 180
ataccaatta taattggagg atttggtaat tgactagtcc ccctaataat tggtgcccca 240
gacatagcat tccctcgaat aaataatata agcttctgac tcctccctcc ttctttctta 300
ctacttttag catcatccat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 360
cctctagctg gcaacttagc tcacgcaggg gcttcagtag acctgaccat tttttcttta 420
cacttagcag gtgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 480
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat tcgtgtgatc cgtattagtc 540
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaattac aatactatta 600
acagaccgaa acctaaatac aacctttttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 660
tatcaacact tgttctg 677
<210> 44
<211> 677
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of EU835715
<400> 44
aatcataaag acattggtac tctgtatcta ctgtttggtg cctgagcagg catagtagga 60
acagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ccggtactct gcttggagat 120
gaccaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 180
ataccaatta taattggagg atttggtaat tgactagtcc ccctaataat tggtgcccca 240
gacatagcat tccctcgaat aaataatata agcttctgac tcctccctcc ttctttctta 300
ctacttttag catcatccat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 360
cctctagctg gcaacttagc tcacgcaggg gcttcagtag acctgaccat tttttcttta 420
cacttagcag gtgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 480
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat tcgtgtgatc cgtattagtc 540
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ctggaattac aatactatta 600
acagaccgaa acctaaatac aacctttttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 660
tatcaacact tgttctg 677
<210> 45
<211> 658
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of GQ329013
<400> 45
tactctgtat ctactgtttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact 60
gattcgtgcc gaactgggcc aacccggtac tctgcttgga gatgaccaaa tttataatgt 120
tatcgtaacc gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataattgg 180
aggatttggt aattgactag tccccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg 240
aataaataat ataagcttct gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc 300
catagttgaa gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt 360
agctcacgca ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttag caggtgtctc 420
ctcaattcta ggggccatta actttattac aacaattatc aatacaaaac cccctgccat 480
atcacaatat caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact 540
tctctcactc cctgtactag cagccggaat tacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa 600
tacaaccttt tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttc 658
<210> 46
<211> 658
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of GQ329015
<400> 46
tactctgtat ctactatttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact 60
gattcgtgcc gaactgggcc aacctggtac tctgcttgga gatgatcaaa tttataatgt 120
tatcgtaacc gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataatcgg 180
aggatttggt aattgactag ttcccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg 240
aataaacaat ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc 300
tatagttgaa gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt 360
agctcacgca ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttgg caggtgtctc 420
ctcaattcta ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat 480
atcacaatat caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact 540
tctctcactc cctgtactag cagccggaat cacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa 600
tacaaccttt tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttc 658
<210> 47
<211> 658
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF700149
<400> 47
tactctgtat ctactatttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact 60
gattcgtgcc gaactgggcc aacctggtac tctgcttgga gatgatcaaa tttataatgt 120
tatcgtaacc gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataatcgg 180
aggatttggt aattgactag ttcccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg 240
aataaacaat ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc 300
tatagttgaa gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt 360
agctcacgca ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttgg caggtgtctc 420
ctcaattcta ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat 480
atcacaatat caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact 540
tctctcactc cctgtactag cagccggaat cacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa 600
tacaaccttt tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttc 658
<210> 48
<211> 658
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of JF700150
<400> 48
tactctgtat ctactatttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact 60
gattcgtgcc gaactgggcc aacctggtac tctgcttgga gatgatcaaa tttataatgt 120
tatcgtaacc gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataatcgg 180
aggatttggt aattgactag ttcccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg 240
aataaacaat ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc 300
tatagttgaa gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt 360
agctcacgca ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttgg caggtgtctc 420
ctcaattcta ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat 480
atcacaatat caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact 540
tctctcactc cctgtactag cagccggaat cacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa 600
tacaaccttt tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttc 658
<210> 49
<211> 669
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KF317911
<400> 49
ctactatttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact gattcgtgcc 60
gaactgggcc aacctggtac tctgcttgga gatgatcaaa tttataatgt tatcgtaacc 120
gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataatcgg aggatttggt 180
aattgactag ttcccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg aataaacaat 240
ataagctttt gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc tatagttgaa 300
gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt agctcacgca 360
ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttgg caggtgtctc ctcaattcta 420
ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat atcacaatat 480
caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact tctctcactc 540
cctgtactag cagccggaat cacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa tacaaccttt 600
tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttctg attctttggc 660
caccctgaa 669
<210> 50
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KF509968
<400> 50
ggtactctgt atctactgtt tggtgcctga gcaggcatag taggaacagc cttaagccta 60
ctgattcgtg ccgaactggg ccaacccggt actctgcttg gagatgacca aatttataat 120
gttatcgtaa ccgcacatgc attcgtaata attttcttta tagttatacc aattataatt 180
ggaggatttg gtaattgact agtcccccta ataattggtg ccccagacat agcattccct 240
cgaataaata atataagctt ctgactcctc cctccttctt tcttactact tttagcatca 300
tccatagttg aagctggcgc aggaacaggc tgaactgtat atccccctct agctggcaac 360
ttagctcacg caggggcttc agtagacctg accatttttt ctttacactt agcaggtgtc 420
tcctcaattc taggggccat taactttatt acaacaatta tcaatataaa accccctgcc 480
atatcacaat atcaaacccc tctattcgtg tgatccgtat tagtcactgc tgtactacta 540
cttctctcac tccctgtact agcagccgga attacaatac tattaacaga ccgaaaccta 600
aatacaacct tttttgaccc agcaggaggc ggagatccta ttctatatca acacttgttc 660
tgattctttg gtcaccccga agtt 684
<210> 51
<211> 658
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KF509971
<400> 51
tactctgtat ctactgtttg gtgcctgagc aggcatagta ggaacagcct taagcctact 60
gattcgtgcc gaactgggcc aacccggtac tctgcttgga gatgaccaaa tttataatgt 120
tatcgtaacc gcacatgcat tcgtaataat tttctttata gttataccaa ttataattgg 180
aggatttggt aattgactag tccccctaat aattggtgcc ccagacatag cattccctcg 240
aataaataat ataagcttct gactcctccc tccttctttc ttactacttt tagcatcatc 300
catagttgaa gctggcgcag gaacaggctg aactgtatat ccccctctag ctggcaactt 360
agctcacgca ggggcttcag tagacctgac cattttttct ttacacttag caggtgtctc 420
ctcaattcta ggggccatta actttattac aacaattatc aatataaaac cccctgccat 480
atcacaatat caaacccctc tattcgtgtg atccgtatta gtcactgctg tactactact 540
tctctcactc cctgtactag cagccggaat tacaatacta ttaacagacc gaaacctaaa 600
tacaaccttt tttgacccag caggaggcgg agatcctatt ctatatcaac acttgttc 658
<210> 52
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205535
<400> 52
acagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct gcttggagat 60
gatcaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
ataccaatta taatcggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 180
gacatagcat tccctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctacttttag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcacgcaggg gcttcagtag acctgaccat tttttcttta 360
cacttggcag gtgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat tcgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaatcac aatactatta 540
acagaccgaa acctaaatac aacctttttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 53
<211> 618
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KJ205538
<400> 53
acagccttaa gcctactgat tcgtgccgaa ctgggccaac ctggtactct gcttggagat 60
gatcaaattt ataatgttat cgtaaccgca catgcattcg taataatttt ctttatagtt 120
ataccaatta taatcggagg atttggtaat tgactagttc ccctaataat tggtgcccca 180
gacatagcat tccctcgaat aaacaatata agcttttgac tcctccctcc ttctttctta 240
ctacttttag catcatctat agttgaagct ggcgcaggaa caggctgaac tgtatatccc 300
cctctagctg gcaacttagc tcacgcaggg gcttcagtag acctgaccat tttttcttta 360
cacttggcag gtgtctcctc aattctaggg gccattaact ttattacaac aattatcaat 420
ataaaacccc ctgccatatc acaatatcaa acccctctat tcgtgtgatc cgtattagtc 480
actgctgtac tactacttct ctcactccct gtactagcag ccggaatcac aatactatta 540
acagaccgaa acctaaatac aacctttttt gacccagcag gaggcggaga tcctattcta 600
tatcaacact tattctga 618
<210> 54
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KM047655
<400> 54
ggtactctgt atctactatt tggtgcctga gcaggcatag taggaacagc cttaagccta 60
ctgattcgtg ccgaactggg ccaacccggt actctgcttg gagatgacca aatttataat 120
gttatcgtaa ccgcacatgc atttgtaata attttcttta tagttatacc aattataatt 180
ggaggatttg gtaattgact agttccccta ataattggtg ccccagacat agcattccct 240
cgaataaata atataagctt ttgactcctc cctccttctt tcttactact tttagcatca 300
tctatagttg aagctggcgc aggaacaggc tgaactgtat atccccctct agctggcaac 360
ttagctcacg caggggcttc agtagacctg accatttttt ctttacactt agcaggtgtc 420
tcctcaattc taggggccat taactttatt acaacaatta tcaatataaa accccctgcc 480
atatcacaat atcaaacccc tttattcgtg tgatccgtat tagtcactgc tgtactacta 540
cttctctcac tccctgtact agcagccgga attacaatac tattaacaga ccgaaaccta 600
aatacaacct tttttgaccc agcaggaggc ggagatccta ttctatatca acacttgttc 660
tgattctttg gccaccctga agtatatatc cttattctac cc 702
<210> 55
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KM047660
<400> 55
ggtactctgt atctactatt tggtgcctga gcaggcatag taggaacagc cttaagccta 60
ctgattcgtg ccgaactggg ccaacccggt actctgcttg gagatgacca aatttataat 120
gttatcgtaa ccgcacatgc atttgtaata attttcttta tagttatacc aattataatt 180
ggaggatttg gtaattgact agttccccta ataattggtg ccccagacat agcattccct 240
cgaataaata atataagctt ttgactcctc cctccttctt tcttactact tttagcatca 300
tctatagttg aagctggcgc aggaacaggc tgaactgtat atccccctct agctggcaac 360
ttagctcacg caggggcttc agtagacctg accatttttt ctttacactt agcaggtgtc 420
tcctcaattc taggggccat taactttatt acaacaatta tcaatataaa accccctgcc 480
atatcacaat atcaaacccc tttattcgtg tgatccgtat tagtcactgc tgtactacta 540
cttctctcac tccctgtact agcagccgga attacaatac tattaacaga ccgaaaccta 600
aatacaacct tttttgaccc agcaggaggc ggagatccta ttctatatca acacttgttc 660
tgattctttg gccaccctga agtatatatc cttattctac cc 702
<210> 56
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COI gene of KM047665
<400> 56
ggtactctgt atctactatt tggtgcctga gcaggcatag taggaacagc cttaagccta 60
ctgattcgtg ccgaactggg ccaacccggt actctgcttg gagatgacca aatttataat 120
gttatcgtaa ccgcacatgc atttgtaata attttcttta tagttatacc aattataatt 180
ggaggatttg gtaattgact agttccccta ataattggtg ccccagacat agcattccct 240
cgaataaata atataagctt ttgactcctc cctccttctt tcttactact tttagcatca 300
tctatagttg aagctggcgc aggaacaggc tgaactgtat atccccctct agctggcaac 360
ttagctcacg caggggcttc agtagacctg accatttttt ctttacactt agcaggtgtc 420
tcctcaattc taggggccat taactttatt acaacaatta tcaatataaa accccctgcc 480
atatcacaat atcaaacccc tttattcgtg tgatccgtat tagtcactgc tgtactacta 540
cttctctcac tccctgtact agcagccgga attacaatac tattaacaga ccgaaaccta 600
aatacaacct tttttgaccc agcaggaggc ggagatccta ttctatatca acacttgttc 660
tgattctttg gccaccctga agtatatatc cttattctac cc 702
<210> 57
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VF1d forward primer
<400> 57
ttctcaacca accacaarga yatygg 26
<210> 58
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VR1d reverse primer
<400> 58
tagacttctg ggtggccraa raayca 26
Claims (15)
- 서열번호 1의 염기 서열의 219번째 및 220번째 단일염기다형성(SNP) 위치를 포함하는 8개 이상의 연속적인 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 상기 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드;로 구성되는 군에서 선택되는 적어도 하나를 포함하는 마록(Cervus elaphus) 유래 녹용의 판별용 유전자 마커.
- 청구항 1에 있어서,
상기 유전자 마커는 마록 유래 녹용을 대록(Cervus canadensis) 또는 매화록(Cervus nippon) 유래 녹용과 구별하기 위한 것인 유전자 마커. - 청구항 1에 있어서,
서열번호 1의 염기 서열의 SNP 위치인 219번째 및 220번째 뉴클레오티드를 포함하는 8개 내지 95개의 연속된 폴리뉴클레오티드인 유전자 마커. - 청구항 1에 있어서,
서열번호 1의 염기 서열의 SNP 위치인 219번째 및 220번째 뉴클레오티드를 포함하는 18개 내지 24개의 연속된 폴리뉴클레오티드인 유전자 마커. - 청구항 1에 있어서,
서열번호 1의 염기 서열의 170번째 내지 233번째 위치의 연속된 뉴클레오티드로 이루어지는 폴리뉴클레오티드인 유전자 마커. - 청구항 2에 있어서,
서열번호 1의 염기 서열의 SNP 위치인 219번째 및 220번째 염기가 각각 마록은 C이고 대록 및 매화록은 T인 유전자 마커. - 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항의 유전자 마커를 증폭하기 위한 프라이머 쌍을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트.
- 청구항 7에 있어서,
상기 프라이머 쌍은 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드 및 그 상보적인 염기 서열에 결합하여 상기 유전자 마커를 증폭할 수 있는 프라이머 세트. - 청구항 8에 있어서,
상기 프라이머 세트는 서열번호 1의 염기 서열의 219번째 및 220번째 SNP 위치를 포함하는 유전자 마커를 증폭하기 위한 서열번호 2의 염기 서열로 구성된 제1 프라이머 및 서열번호 3의 염기 서열로 구성된 제2 프라이머의 쌍을 포함하는 프라이머 세트. - 청구항 7의 프라이머 세트를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 PCR 조성물.
- 청구항 7의 마록 유래 녹용의 판별용 프라이머 세트 또는 청구항 10의 마록 유래 녹용의 판별용 PCR 조성물을 포함하는 마록 유래 녹용의 판별용 키트.
- 청구항 11에 있어서,
서열번호 4의 프로브를 추가로 포함하는 키트. - 청구항 12에 있어서,
상기 프로브의 5' 말단에 리포터(Reporter)가 부착되어 있거나, 상기 프로브의 3' 말단에 퀀쳐(Quencher)가 부착되어 있는 키트. - 1) 녹용 시료로부터 유래한 주형 DNA와 청구항 7의 프라이머 세트를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
2) 상기 혼합 결과물을 PCR 증폭시켜 증폭 산물을 형성하는 단계;를 포함하는 마록 유래 녹용의 판별 방법. - 청구항 14에 있어서,
3) 상기 증폭 산물을 검출 또는 정량하는 단계;를 추가로 포함하는 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220012666A KR20230115786A (ko) | 2022-01-27 | 2022-01-27 | 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220012666A KR20230115786A (ko) | 2022-01-27 | 2022-01-27 | 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230115786A true KR20230115786A (ko) | 2023-08-03 |
Family
ID=87568115
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220012666A KR20230115786A (ko) | 2022-01-27 | 2022-01-27 | 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20230115786A (ko) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100670851B1 (ko) | 2005-07-06 | 2007-01-19 | 한국 한의학 연구원 | 붉은 사슴, 일본 사슴, 엘크 및 순록의 유전자에 특이적인프라이머 및 상기 프라이머를 이용하여 녹용 품종을식별하는 방법 |
-
2022
- 2022-01-27 KR KR1020220012666A patent/KR20230115786A/ko unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100670851B1 (ko) | 2005-07-06 | 2007-01-19 | 한국 한의학 연구원 | 붉은 사슴, 일본 사슴, 엘크 및 순록의 유전자에 특이적인프라이머 및 상기 프라이머를 이용하여 녹용 품종을식별하는 방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2633071B1 (en) | Compositions of toehold primer duplexes and methods of use | |
| JP5509075B2 (ja) | 核酸増幅のコントロールの検出方法およびその用途 | |
| JP2019532628A (ja) | マルチプレックスｐｃｒの実施方法 | |
| JP5637850B2 (ja) | 標的核酸配列の増幅方法、それを用いた変異の検出方法、および、それに用いる試薬 | |
| KR101649179B1 (ko) | 표적 서열의 증폭 방법, 다형 검출 방법 및 그것에 사용하는 시약 | |
| KR102108737B1 (ko) | Snp를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 소의 육색 판별용 조성물 | |
| EP4317455A1 (en) | Target nucleic acid amplification method using guide probe and clamping probe and composition for amplifying target nucleic acid comprising same | |
| KR101785687B1 (ko) | 다중 증폭 이중 시그널 증폭에 의한 타겟 핵산 서열의 검출 방법 | |
| KR20230115786A (ko) | 마록 유래 녹용을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 | |
| US20220119882A1 (en) | Single-stranded nucleic acid for real-time detection of genetic variation of single target gene and detection method using the same | |
| JP2003510011A (ja) | カップル性ポリメラーゼ連鎖反応−制限エンドヌクレアーゼ消化−リガーゼ検出反応法 | |
| KR101355914B1 (ko) | 한우 및 수입우 판별에 유용한 단일염기다형성마커 및 이의 용도 | |
| US10844441B2 (en) | Penta e polymorphisms for human identification | |
| CN111334562A (zh) | 一种含有修饰引物的核酸扩增方法和试剂盒 | |
| KR20230100952A (ko) | 황정을 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 | |
| US20230098408A1 (en) | Single nucleic acid for real-time detection for snp analysis of apoe gene and detection method using the same | |
| JP5860667B2 (ja) | Ｅｇｆｒエクソン２１ｌ８５８ｒ遺伝子多型検出用プライマーセット及びその用途 | |
| EP4155418A1 (en) | Single nucleic acid for real-time detection for snp analysis of apoe gene and detection method using the same | |
| KR20180033911A (ko) | 표적 핵산 또는 유전적 변이를 다중 검출하는 방법 | |
| KR101492989B1 (ko) | Hrm 분석기술을 이용한 배추작물의 내서성 연관 pcr 프라이머 세트 | |
| KR20230100950A (ko) | 배암차즈기를 판별하기 위한 단일염기다형성을 갖는 유전자 마커 | |
| JP7241634B2 (ja) | ヒトｂｒａｆのｖ６００変異検出用プローブ及びヒトｂｒａｆのｖ６００変異の検出方法 | |
| KR101472940B1 (ko) | Ｅｇｆｒ 유전자 다형 검출용 프로브 및 그 용도 | |
| JP2018088883A (ja) | 上皮成長因子受容体遺伝子変異の検出方法 | |
| JP4650420B2 (ja) | 塩基判定方法及び塩基判定用キット |