KR20230113979A

KR20230113979A - 택란 추출물을 포함하는 신경염증 질환 또는 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20230113979A
Application number: KR1020220009901A
Authority: KR
Inventors: 최동국; 최상규
Original assignee: 건국대학교 글로컬산학협력단
Priority date: 2022-01-24
Filing date: 2022-01-24
Publication date: 2023-08-01

Abstract

본 발명은 택란 추출물을 포함하는 신경염증 질환 또는 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 신경염증 억제, 기억력 및 인지기능 개선 효능을 가지는 택란 추출물을 포함하는 신경염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물, 및 택란 추출물을 포함하는 기억력 및 인지기능 개선용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 택란 추출물은 LPS로 자극된 미세아교세포에서 유발된 염증반응을 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 스코폴라민으로 기억력 손상이 유도된 마우스를 이용한 수중 미로 실험(Morris water maze test)에서 기억력 증진 효능, 및 뇌 해마에서 BDNF-CREB 경로 활성화 및 신경염증 억제 효능을 보이는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 택란 추출물은 신경염증 질환, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 건강기능식품에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

택란 추출물을 포함하는 신경염증 질환 또는 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 조성물{A composition for the prevention or treatment of neuroinflammatory disease or cognitive dysfunction comprising Lycopi Herba extract}

본 발명은 택란 추출물을 포함하는 신경염증 질환 또는 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 신경염증 억제, 기억력 및 인지기능 개선 효능을 가지는 택란 추출물을 포함하는 신경염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물, 및 택란 추출물을 포함하는 기억력 및 인지기능 개선용 조성물에 관한 것이다.

최근 노인 인구의 증가 등에 따라 치매와 같은 퇴행성 뇌질환 환자가 급증하여, 치매 등으로 인해 저하된 인지기능 및 학습기능을 개선시키고 향상시키는 다양한 치료전략을 수립하여 효과적인 약물을 개발하고자 하는 노력이 시도되고 있다. 현재까지 개발된 기억력 개선 약물들에는 아세틸콜린 전구체(acetylcholine precursor), 수용체 활성제(Receptor agonist), 아세틸콜린 분해 억제제(Acetylcholine esterase inhibitor) 등이 있다. 그러나 아직까지 퇴행성 뇌질환의 근본적인 발병 원인을 치료할 수 있는 치료제는 개발되어 있지 않으며, 일반적인 치료제로서 사용 가능한 것으로는 아세틸콜린 분해 억제제인 화이자사의 아리셉트(Aricept), 노바티스사의 엑셀론(Exelon), 그리고 얀센사의 레미닐(Reminyl)과 최근에 미국 FDA로부터 허가를 받은 NMDA 수용체(N-methyl-D- aspartate receptor)의 길항제 기전의 룬드벡사의 에빅사(Ebixa: Memantine)가 있다. 그러나 아세틸콜린 분해 억제제의 경우, 단지 일부 환자의 경우에서 일시적인 증세 완화 효과를 보이며, 그 약효가 오래 지속되지 못하므로 근본적인 치료 효과를 기대하기는 어려운 것으로 알려져 있다. 이 외에도 인지기능 장애의 특성상 약물의 장기 복용을 요하게 되는데, 상기 의약품들의 경우 간 독성, 구토, 식욕감퇴를 비롯한 여러 가지 부작용을 수반하는 등의 문제점이 있다. 따라서 인지기능 장애의 진행 과정을 막아 줄 수 있는 새로운 치료제의 개발이 시급한 과제가 되고 있다. 이를 위해서 많은 다국적 제약회사들이 이 분야에 대한 연구 개발에 막대한 투자를 하고 있으며 특히 알츠하이머 질환의 근본적인 발병 원인으로 추정되고 있는 40여 개의 아미노산으로 구성된 베타 아밀로이드(β-amyloid)의 생성량을 감소시키는 베타 또는 감마 시크리테아제(secretase) 저해제의 개발이 그 주종을 이루고 있다.

최근 한의학계에서도 인지기능 장애를 수반하는 알츠하이머 치료제로서 한약 처방에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 이러한 연구를 통해, 원지, 석창포, 조구등, 홍삼, 현삼 등의 단미제와 총명탕, 천왕보심단, 귀비탕, 등의 처방이 알츠하이머 질환의 치료에 일정한 효과가 있는 것이 밝혀졌으나, 아직까지 택란의 인지기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료 효과에 대해서는 알려진 바 없다.

택란(lycopi herba)은 다년생 초본식물로서 꿀풀과 식물 지과아묘(地瓜兒苗)의 경엽 (莖葉)을 건조한 것이다. 전초는 정유, 글루코시드, 탄닌, 나무진, 플라보노이드 배당체, 페놀류, 아미노산, 유기산, 사포닌, 포도당, 갈락토오스, 리코포스(lycopose), 수크로스(sucrose), 라피노스(raffinose), 스타키오스 (stachyose), 과당 등으로 구성되어 있으며 과실은 포도당, 갈락토오스, 리코포스(lycopose), 수크로스(sucrose), 라피노스(raffinose), 스타키오스(stachyose) 등이 주성분을 이루고 있다.

택란의 전초는 강심작용을 나타내는 것으로 알려져 있으며 맛은 쓰고 매우며 성질은 약간 온(溫)한데 혈(血)을 잘 순환하게 하고 소변이 잘 나오게 하는 효능이 있다. 또한, 월경폐지, 징가(徵痂 (복중 경결)), 산후 울체복통(瘀滯腹痛), 신면부종(身面浮腫), 타박상, 금창(金瘡), 부스럼 등의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

종래에 택란 추출물의 산전산후부종 예방 또는 개선 효과에 대해서 공개된 바 있으나(생약혼합물의 추출물을 포함하는 산전산후부종 예방 또는 개선용 건강기능식품, 한국등록특허 제 1479096호), 택란 추출물의 신경 염증 또는 인지기능 장애 예방, 치료, 또는 개선 효과에 대해서는 공개된 바가 없다.

본 발명자들은 최근 현대인들에게서 발병이 높아지고 있는, 알츠하이머병과 같은 퇴행성 뇌질환 등과 같은 질환들의 발병 및 악화를 효과적으로 억제할 수 있고, 이를 치료하기 위한 부작용이 없는 안전한 약물로서, 섭취 시에도 인체에 독성을 나타내지 않는 물질을 이용한 새로운 인지기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료제를 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 택란 추출물이 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide)로 처리한 미세아교세포(microglial cell)의 염증매개인자 생성을 억제하고, 또한 스코폴라민으로 유도한 인지장애 동물모델에서 인지능력 및 기억력 개선 효과가 있음을 밝혀내어, 이를 인지기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료 용도로 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발의 다른 목적은 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 택란 추출을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지기능 장애의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.

상술한 목적을 달성하기 위해,

본 발명은 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는, 신경염증 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 용매로 추출될 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 전체 조성물에 10 내지 100μg/mL의 농도로 포함될 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 로즈마린산(Rosemarinic acid), 루테올린(Luteolin) 또는 단삼(Danshensu)을 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성을 억제하여 신경 염증을 조절할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 IL-6 및 TNF-α를 포함하는 염증성 사이토카인(cytokines) 생성을 억제 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 p38, JNK 및 ERK 인산화 억제를 통해 MAPK(mitogen-activated protein kinases) 경로를 억제할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 IκB-α 인산화를 억제하여 NF-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)의 활성을 억제할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 신경염증 질환은 다발성 경화증, 신경모세포종, 허혈성 뇌졸중, 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 루게릭 질환, 헌팅턴 질환, 크로이츠펠트야콥병, 외상 후 스트레스 장애, 우울증, 정신분열증 또는 근위축성측색경화증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.

상술한 다른 목적을 달성하기 위해,

본 발명은, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 뇌의 해마(hippocampus)에서 NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성을 억제하여 기억력 및 인지기능 장애를 개선시킬 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 택란 추출물은 뇌의 해마에서 BDNF(Brain-derived neurotrophic facor) 발현 및 CREB(cAMP responsive element binding protein) 인산화를 활성화시켜 기억력 및 인지기능 장애를 개선시킬 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 인지 기능 장애는 경도인지장애, 주의력 결핍장애(ADHD), 우울증, 알츠하이머병, 뇌혈관성 치매, 노인성 치매, 픽(pick)병 및 크루츠펠트-야곱(Creutzfeldt-jakob)병으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 택란 추출물은 LPS로 자극된 미세아교세포에서 유발된 염증반응을 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 스코폴라민으로 기억력 손상이 유도된 마우스를 이용한 수중 미로 실험(Morris water maze test)에서 기억력 증진 효능, 및 뇌 해마에서 BDNF-CREB 경로 활성화 및 신경염증 억제 효능을 보이는 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 택란 추출물은 신경염증 질환, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 건강기능식품에 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, NO 생성 억제 효능(A) 및 세포 독성(B)을 나타낸 데이터이다. 각 도면에서 LH는 택란 추출물은 인도메타신(indomethacin)은 양성대조군을 의미한다.
도 2는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, iNOS, COX-2의 단백질 발현정도(A) 및 각 단백질양을 정량화하여 β-actin에 대한 상대적 발현량(B 및 C)을 나타낸 데이터이다.
도 3은 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, iNOS, COX-2의 mRNA 발현정도(A) 및 각 mRNA 증폭산물의 양을 정량화하여 GAPDH에 대한 상대적 발현량(B 및 C)을 나타낸 데이터이다.
도 4는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, IL-6 (A) 및 TNF-α(B)의 생성정도를 측정한 데이터이다.
도 5는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, ERK, JNK 및 p38의 인산화 정도를 나타낸 데이터이다. A는 웨스턴 블랏 데이터이며, B는 p38의 인산화 정도를 p38 단백질량에 대해 상대적으로 나타낸 데이터이다.
도 6은 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에 택란 추출물을 농도별로 처리하였을 때, IκB-α 인산화 정도를 나타낸 데이터이다. A는 웨스턴 블랏 데이터이며, B는 IκB-α의 인산화 정도를 IκB-α 단백질량에 대해 상대적으로 나타낸 데이터이다.
도 7은 스코폴라민으로 기억력을 손상시킨 마우스에 택란 추출물을 처리하였을 때, 수중 미로 실험(Morris water maze test) 결과를 나타낸 데이터이다. 각 도면에서 LH는 택란 추출물을 Tac(tacrine)은 양성대조군을 의미한다.
도 8은 스코폴라민으로 기억력을 손상시킨 마우스에 택란 추출물을 처리하였을 때, 뇌의 해마(hippocampus)에서 BDNF(Brain-derived neurotrophic facor) 단백질 발현량 및 CREB(cAMP responsive element binding protein) 인산화 정도 나타낸 데이터이다. A는 웨스턴 블랏 데이터이며, B는 β-actin에 대한 CREB의 상대적 발현량을, C는 CREB 단백질 발현량에 대한 CREB 인산화 정도를, D는 β-actin에 대한 BDNF의 상대적 발현량을 나타낸 데이터이다.
도 9는 스코폴라민으로 기억력을 손상시킨 마우스에 택란 추출물을 처리하였을 때, 뇌의 해마에서 iNOS, COX-2의 단백질 발현정도(A) 및 각 단백질양을 정량화하여 β-actin에 대한 상대적 발현량(B 및 C)을 나타낸 데이터이다.
도 10은 택란 추출물에 포함된 유효성분인 로즈마린산(Rosemarinic acid)(A), 루테올린(Luteolin)(B) 및 단삼(Danshensu)(C)을 농도별로 처리하였을 때, NO 생성 억제 정도를 확인한 데이터이다.
도 11은 택란 추출물에 포함된 유효성분인 로즈마린산(Rosemarinic acid)(A), 루테올린(Luteolin)(B) 및 단삼(Danshensu)(C)을 농도별로 처리하였을 때, 세포 독성 정도를 확인한 데이터이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

신경염증 질환 예방 또는 치료용 조성물

본 발명은 일관점에서, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 다른 일관점에서, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 "택란(Lycopi Herba)"은 꿀풀과(Labiatae) 식물인 쉽싸리(Lycopus lucidus Turcz.)의 꽃이 피기 전의 지상부로서, "호란, 용조 또는 호포"로도 호칭된다.

상기 택란은 주로 산과 들의 습한 곳에서 서식하며, 여름철 꽃이 피는 시기에 전초를 베어 햇볕에서 말려 사용한다. 상기 택란은 냄새가 없고 맛은 쓰고 매우며 성질은 약간 따뜻하며, 산후 복통과 부종, 월경 장애, 상처, 타박상, 부스럼 등의 치료에 사용되어 왔다. 그러나, 상기 택란이 신경염증 또는 인지기능개선 효과 또는 관련한 작용 기전이나 효능은 현재까지 알려진 바 없다. 본 발명자들은 신경염증 개선 효과를 연구하던 중, 택란 추출물에 신경염증 및 인지기능 개선 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 명세서에서, 택란(lycopi herba) 추출물은 택란의 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질 및 종자 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미한다. 바람직하게는 택란의 전초로부터 얻은 추출물을 의미한다.

본 발명의 택란(Lycopi Herba) 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으며, 바람직하게는 정제수(또는 물), 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글라이콜 및 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매를 사용하여 추출되며, 보다 바람직하게는 에탄올을 사용하여 추출된다. 다만, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 택란 추출물은,

1) NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성 억제;

2) IL-6 및 TNF-α를 포함하는 염증성 사이토카인(cytokines) 생성 억제;

3) p38, JNK 및 ERK 인산화 억제를 통한 MAPK(mitogen-activated protein kinases) 경로 억제;

4) IκB-α 인산화 억제를 통한 NF-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)의 활성 억제를 통해 신경염증을 조절하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 구체적인 일구현예에서, BV-2 미세아교세포에 다양한 농도의 택란 추출물을 전처리 한 후 LPS로 자극 시켰을 때, 염증 매개인자인 NO, iNOS(inducible nitric oxide synthase) 및 COX-2(cyclooxygenase-2) 생성 억제정도를 확인하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 택란 추출물은 세포독성 없이 농도의존적으로 NO 발생을 억제하는 것을 확인하였으며, 도 2 및 도 3에 나타난 바와 같이, NOS 및 COX-2 mRNA 및 단백질 발현 수준을 억제하는 것을 확인하였다.

택란 추출물 0 ~ 100 ㎍/㎖ 농도에서 세포독성을 보이지는 않았으나, 200 ㎍/㎖의 농도에서는 독성을 보이는 것으로 확인되었으므로, 본 발명의 택란 추출물을 전체 조성물에 10 내지 100 ㎍/㎖의 농도로 포함하는 것이 바람직하다. 10 ㎍/㎖ 미만의 농도로 택란 추출물을 포함하는 경우 신경 염증 예방 또는 치료 효과가 미미할 수 있으며, 100 ㎍/㎖농도를 초과하여 택란 추출물을 포함하는 경우, 세포 독성이 나타날 수 있다.

본 발명의 구체적인 다른 일구현예에서, 택란 추출물에 의한 염증성 사이토카인(cytokines) 생성 억제 효능, MAPK 경로 억제 효능 및 NF-κB의 활성 억제 효능을 확인한 결과, 본 발명의 택란 추출물은 IL-6 및 TNF-α을 포함하는 염증성 사이토카인의 생성 억제(도 4), p38, JNK 및 ERK 인산화 억제를 통해 MAPK 경로 억제(도 5), 및 IκB-α 인산화 억제를 통해 NF-κB의 활성을 억제하여, 신경염증을 억제 또는 완화 시키는 것을 확인하였다.

본 발명의 구체적인 또 다른 일구현예에서, 본 발명의 택란 추출물에 포함된 단일 성분 중에서 신경염증을 조절하는 유효성분을 확인하기 위해, 택란에 높은 함량으로 포함된 것으로 알려진 로즈마린산(Rosemarinic acid), 루테올린(Luteolin) 및 단삼(Danshensu)의 NO 발생 억제 효능을 확인하였다. 그 결과, 도 10 및 도 11에 나타난 바와 같이, 루테올린이 NO 발생에 영향을 주는 것을 확인하였다.

본 발명에서 "신경염증 질환"은 중추신경계의 신경세포에 퇴행성 변화가 나타나면서 여러 가지 증상을 유발하는 질환 등을 총칭하며, 본 발명에 따른 대표적인 신경염증 질환에는 다발성 경화증, 신경모세포종, 허혈성 뇌졸중, 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 루게릭 질환, 헌팅턴 질환, 크로이츠펠트야콥병, 외상 후 스트레스 장애, 우울증, 정신분열증 또는 근위축성측색경화증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.

기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 조성물

본 발명은 또 다른 일관점에서, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 일관점에서, 택란 추출물을 유효성분으로 포함하는 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 택란 또는 택란 추출물은 상술한 바와 같으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 용매로 추출될 수 있으며, 더 바람직하게는 에탄올을 사용하여 추출될 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 택란 추출물은 뇌의 해마(hippocampus)에서 NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성을 억제하여 기억력 및 인지기능 장애를 개선시키거나, 뇌의 해마에서 BDNF 발현 및 CREB 인산화를 활성화 시켜 기억력 및 인지기능 장애를 개선시킬 수 있다.

본 발명의 구체적인 일구현예에서, 택란 추출물의 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료에 대한 효과를 확인하기 위해, 스코폴라민에 의해 유발된 인지 장애 질환 동물모델에 택란 추출물을 투여하였다.

스코폴라민으로 기억력을 손상시킨 마우스에 택란 추출물을 처리하여 수중 미로 실험을 수행한 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 스코폴라민을 투여하였을 때, 목표 지점까지 도달하는데 걸리는 시간이 증가한 반면, 택란 추출물 투여군의 경우, 목표 지점 도달시간이 현저하게 감소되는 것을 확인하였다.

또한, 스코폴라민으로 기억력을 손상시킨 마우스에 택란 추출물을 처리한 후, 뇌의 해마에서 pCREB 및 BDNF 발현이 현저하게 증가되었으며(도 8), iNOS, COX-2의 단백질 발현이 감소(도 9)된 것을 확인하였다.

즉, 본 발명의 택란 추출물은 인지기능 장애 개선, 예방 또는 치료에 효과적임을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 인지 기능 장애는 경도인지장애, 주의력 결핍장애(ADHD), 우울증, 알츠하이머병, 뇌혈관성 치매, 노인성 치매, 픽(pick)병 및 크루츠펠트-야곱(Creutzfeldt-jakob)병으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 각각의 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등이 있다. 상기 약학 조성물을 제제화나 제형화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 약학 조성물을 제공하는 것을의미한다. 본 발명은 약학 조성물은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양, 즉 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양인 치료상 유효량으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자 등에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 구강, 심장내, 골수내, 경막내, 경피, 장관, 피하, 설하 또는 국소 투여할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 약학 조성물은 1 ~ 10,000㎎/㎏/일의 양으로 투여할 수 있으며, 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수 회에 나누어 투여할 수도 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 건강기능식품, 식품 첨가제 또는 식이보조제로 사용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 식품 첨가제로 사용할 경우, 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 사용되는 등 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

또한 상기 건강기능식품 조성물의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 변경될 수 있다. 구체적인 예로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 추출물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하여 장기간 섭취할 경우에는 상기 범위 이하의 양으로 첨가될 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으나, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료로 제조될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드; 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐 등의 합성 감미제 등이 사용될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 ~ 10중량%, 바람직하 게는 0.01~0.1중량%로 포함된다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있으며, 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함 할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기의 첨가제 비율은 크게 제한되지는 않으나, 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 ~ 0.1중량% 범위내로 포함되는 것이 바람직하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.

이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

택란 추출물의 NO 발생 억제 효과 및 세포 생존율 확인

1-1 : 택란 추출물 제조

택란 추출물의 제조를 위하여 한국식물추출물은행에서 시료를 분양받았으며　이 약은 쉽싸리(Lycopus lucidus Turczaininov)의 꽃이 피기 전의 지상부이다. 추출에는 95.0 % 에탄올(Ethyl alcohol)을 이용하여 추출하였다.

1-2 : NO 발생 억제 정도 확인

택란 추출물 농도에 따른 NO 발생 억제 정도를 확인하기 위해, BV-2 미세아교세포 세포에서 아질산염(NO) 발생 억제 효능을 확인하였다.

BV-2 미세아교세포 세포는 한국 세포주 은행(Korean cell line bank)으로부터 구입하였으며, 5% FBS(Fetal bovine serum) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium; Gibco/Invitrogen; 미국) 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

먼저, BV2 미아세교세포를 각 웰당 2.5 × 10⁴ cells/웰이 되도록 24-웰 플레이트에 분주한 다음, 상기 실시예 1-1에서 제조한 택란 추출물(12.5, 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖)과 양성대조군인 인도메타신(indomethacin, 25 ㎍/㎖)을 각각 1시간 동안 처리한 다음, 신경염증 유발 인자인 LPS(200 ng/㎖)를 23시간 동안 처리하였다.

아질산염(NO)의 측정은 그리스(Griess) 시약을 이용한 NO 어세이 키트(NO assay kit; Abcam)를 사용하였으며, 측정 방법은 키트의 사용설명서에 따라 진행하였다. LPS 처리 23시간 후에 흡광도 측정을 위해 96 웰 플레이트로 세포배양액 100 ㎕씩 채취한 다음, 그리스 시약 100 ㎕씩 혼합한 후 10분간 반응시키고 540 nm의 흡광도에서 관찰하였으며, 농도는 표준곡선(standard curve)을 이용하여 최종 확인하였다.

1-3 : 세포 생존율 측정

BV-2에 대한 택란 추출물의 세포생존률을 확인하기위해, MTT assay를 진행하였다.

먼저, BV2 미아세교세포를 각 웰당 2.5 × 10⁴ cells/웰이 되도록 24-웰 플레이트에 분주한 다음, 상기 실시예 1-1에서 제조한 택란 추출물(12.5, 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖)과 양성대조군인 인도메타신(25 ㎍/㎖)을 각각 1시간 동안 처리한 다음, 신경염증 유발 인자인 LPS(200 ng/㎖)를 23시간 동안 처리하였다.

23시간 후에 상등액을 제거한 다음, MTT시약(80 ㎍/㎖)을 20 ㎕씩 각 웰에 첨가한 다음, 암조건 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. MTT 시약이 포함된 배지를 제거하고, DMSO 400 ㎕를 각 웰에 첨가하여 세포내 포르마잔(formazan)을 용해시켰다. 흡광도 측정을 위해 96웰 플레이트로 200 ㎕씩 옮긴 후, 552 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 택란 추출물(LH) 농도 의존적으로 NO 발생을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였으며(도 1A), 택란 추출물 200 ㎍/㎖ 농도를 제외하고는 택란 추출물에 의한 세포 독성은 나타나지 않는 것을 확인하였다.

택란 추출물에 의한 iNOS 및 COX-2 생성 억제 효과

2-1 : iNOS 및 COX-2 mRNA 발현 수준 확인

본 발명에서는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에서 iNOS 및 COX-2 생성에 대한 택란 추출물의 억제 효과를 확인하고자 하였다.

BV-2 미세아교세포를 각 웰당 3.5 × 10⁵ cells/웰 이 되도록 6-웰 플레이트에 분주하여 하룻밤 동안 배양한 다음, 상기 실시예 1-1에서 제조한 택란 추출물(12.5, 25, 50 ㎍/㎖)과 양성대조군인 인도메타신(25 ㎍/㎖)을 각각 1시간 동안 처리한 다음, 신경염증 유발 인자인 LPS(200 ng/㎖)를 20시간 동안 처리하였다.

LPS 처리 후, 세포에 TRIzol 시약((Invitrogen Life Technologies, 미국)을 사용하여 전체 RNA를 분리하였다. Superscript™III 키트(Invitrogen)를 사용하여 총 RNA 2.5 ㎍을 역전사시킨 다음, 공지된 방법에 따라 특정 프라이머(표 1)를 사용하여 cDNA를 PCR로 증폭시켰다.

PCR 프라이머 서열

gene	프라이머 서열(5'-3')	서열번호
iNOS	F: 5'- GAG GTA CTC AGC GTG CTC CA-3'	1
iNOS	R: 5'-AGG GAG GAA AGG GAG AGA GG-3'	2
COX-2	F: 5'-TGA GTG GTA GCC AGC AAA GC-3'	3
COX-2	R: 5'-CTG CAG TCC AGG TTC ATG G-3'	4
GAPDH	F: 5'-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3'	5
GAPDH	R: 5'-CCA CCA CCC TGT TGC TGT AG-3'	6

PCR은 변성(94 ℃, 5분), 증폭 20 ~ 28 사이클(94 ℃에서 30초, 50 ~ 57 ℃ 에서 1분 및 72 ℃에서 1분) 및 연장(72 ℃에서 5분)으로 수행하였으며, PCR 증폭물은 1% 아가로스겔을 사용하여 분석하였다. GAPDH mRNA는 샘플 로딩 및 mRNA 무결성(integrity)에 대한 내부 컨트롤의 역할을 수행한다. 정량화를 위해 젤을 촬영하고 각 밴드에 대한 픽셀 강도를 이미지 J(Image J, NIH)를 이용하여 결정한 다음, 각 인자에 대한 mRNA 발현 정도를 GAPDH mRNA 밴드 강도를 이용하여 정규화하였다.

2-2 : iNOS 및 COX-2 단백질 발현 수준 확인

BV-2 미세아교세포는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 세포를 배양였다.

세포는 PBS를 이용하여 두번 세척한 다음, 세포 펠렛을 모으고, PRO-PREP™ Protein Extraction Solution로 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질은 Bradford Protein assay를 통해 정량하였으며, 정량한 단백질은 10% SDS-PAGE 겔로 전기영동 후 PVDF막(polyvinylidenediuoride membranes ; Millipore, Bedford, 미국)으로 트랜스퍼 시켰다.

비특이적 결합을 막기 위해 트랜스퍼한 PVDF 막을 5% 탈지방유가 포함된 PBS를 이용하여 1시간 동안 반응시킨 다음, 1차 항체인 항-iNOS 항체, 항-COX-2 항체및 항-β-actin 항체를 처리하여 4℃에서 24시간 동안 반응 시켰다. 그 다음, PBS로 3회 이상 세척한 후, 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase; HRP)가 부착된 2차 항체(anti-mouse 및 anti-rabbit IgG)를 처리하여 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 멤브레인은 western HRP substrate 및 및 ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Science, 미국)을 통해 시각화하였다.

그 결과, 도 2 및 도 3에 나타난 바와 같이, 택란 추출물 농도 의존적으로 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에서 iNOS 및 COX-2 mRNA 및 단백질 발현 수준이 억제되는 것을 확인하였다.

택란 추출물에 의한 염증성 사이토카인 생성 억제 효과

본 발명에서는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에서 염증성 사이토카인 생성에 대한 택란 추출물의 억제 효과를 확인하고자 하였다.

먼저, BV-2 미세아교세포를 각 웰당 3.5 × 10⁵ cells/웰 이 되도록 6-웰 플레이트에 분주하여 하룻밤 동안 배양한 다음, 상기 실시예 1-1에서 제조한 택란 추출물(12.5, 25, 50 ㎍/㎖)과 양성대조군인 인도메타신(25 ㎍/㎖)을 각각 1시간 동안 처리한 다음, LPS(200 ng/㎖)를 20시간(IL-6) 또는 6시간(TNF-α) 동안 처리하였다.

LPS 처리 후, 상등액을 채취하여 ELISA(mouse enzyme-linked immunosorbent assay) 키트(R&D Systems, Minneapolis, 미국)를 이용하여 IL-6와 TNF-α의 생성 정도를 확인하였다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, LPS 자극에 의해 생성이 증가된 IL-6 및 TNF-α가 택란 농도 의존적으로 생성이 억제되는 것을 확인하였으며, 양성대조군인 인도메타신이 비해 사이토카인 생성 억제 효능이 우수한 것을 확인하였다.

택란 추출물에 의한 염증 반응 신호전달 억제 효과

4-1 : MAPK 신호전달 경로 억제

본 발명에서는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에서 택란 추출물에 의해 MAPK 신호전달 경로가 억제되는지 확인하기 위해, ERK, JNK, p38의 인산화 정도를 확인하였다.

BV-2 미세아교세포를 각 웰당 5.5 × 10⁵ cells/웰 이 되도록 6-웰 플레이트에 분주하여 하룻밤 동안 배양한 다음, 상기 실시예 1-1에서 제조한 택란 추출물(12.5, 25, 50 ㎍/㎖)과 양성대조군인 인도메타신(25 ㎍/㎖)을 각각 1시간 동안 처리한 다음, LPS(200 ng/㎖)를 15분 동안 처리한 후, 상기 실시예 2-2와 동일한 방법을 단백질을 분리하였다.

1차 항체로, 항-JNK 항체, 항-p-JNK 항체, 항-p38, 항-p-p38 항체, 항-ERK 항체, 항-p-ERK 항체 및 항-β-actin 항체를 처리하여 4℃에서 48시간 동안 반응 시켰다. 그 다음, PBS로 3회 이상 세척한 다음, 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase; HRP)가 부착된 2차 항체(anti-mouse 및 anti-rabbit IgG)를 처리하여 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 멤브레인은 western HRP substrate 및 및 ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Science, 미국)을 통해 시각화하였다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 택란 추출물 농도 의존적으로 p38, JNK 및 ERK, 특히 p38의 인산화가 억제되는 것을 확인하였다. 이는 택란 추출물에 의해 MAPK 신호전달 경로가 억제되고 이로 인해 신경염증이 억제되는 것을 의미한다.

4-2 : NF-κB 활성화 억제

본 발명에서는 LPS-자극된 BV-2 미세아교세포에서 택란 추출물에 의해 NF-κB 활성화가 억제되는지 확인하기 위해, IκB-α 인산화 정도를 확인하였다.

상기 실시예 4-1과 동일한 방법으로 세포를 배양한 뒤, 단백질을 분리하고, 1차항체로 항-IκBα항체 및 항-p-IκBα항체 및 항-β-actin 항체를 이용하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 택란 추출물 농도 의존적으로 IκB-α의 인산화가 억제되는 것을 확인하였으며, 이는 택란 추출물에 의해 NF-κB 활성화가 억제되었다는 것을 의미한다.

스코폴라민-동물모델에서 택란 추출물의 기억력/인지기능 개선 효능 확인

본 발명에서는 택란 추출물의 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료에 대한 효과를 확인하기 위해, 스코폴라민(scopolamine)에 의해 유발된 인지 장애 질환 동물모델(알츠하이머 모델)에 택란 추출물을 경구투여하였다.

5-1 : 동물 준비 및 처리

수컷 C57BL/6 마우스(25 g, 8주령)는 대한바이오링크에서 구입하였다. 이들을 5개의 그룹으로 나누어 표준조건 하에서 1주 순화하였으며 이후 실험에 사용되었다 (온도 22±2 ℃, 습도 55±5 %, 12 h-명/암 사이클, 음식/물 자유식). 모든 실험은 실험동물관리기준(NIH publication No. 85-23, revised 1985)의 가이드라인과 건국대학교 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)에 따라 수행하였다. 마우스는 6마리씩 5개의 그룹으로 나누었으며, 마우스에 투여한 택란 추출물 및 스코폴라민은 생리식염수에 녹여 사용하였다.

1) saline (식염수처리군, 음성대조군),

2) 스코폴라민(Scopolamine) 2 mg/kg 처리군

3) 스코폴라민(Scopolamine) 2 mg/kg + 택란 추출물 50 mg/kg 처리군

4) 스코폴라민(Scopolamine) 2 mg/kg + 택란 추출물 100 mg/kg 처리군

5) 스코폴라민(Scopolamine) 2 mg/kg + 타크린(tacrine) 10mg/kg 처리군(양성대조군)

5-2 : 수중 미로 실험(Morris water maze test)

일주일간 C57BL/6 마우스에게 택란 추출물(50mg/kg, 100 mg/kg)와 타크린(10mg/kg)을 경구투여 하였다. 수중 미로 실험전에 마우스 트레이닝을 3회(각 트레이닝당 각각의 마우스에게 첫번째에는 2분, 2번째에는 1분을 주었고, 트레이닝 시작과 끝에 목표지점(goal) 위치를 인지시켰다) 진행하였다. 수중 미로 실험 당일 마우스 각각에 스코폴라민(2mg/kg)를 주사하여 단기기억상실을 30분 동안 유도하였으며, 마우스가 목표지점에 도달하는데 걸리는 시간을 측정하였다.

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 스코포라민에 의한 기억장애로 늘어난 목표지점 도달 시간이 택란 추출물 처리에 의해 감소한 것을 확인하였다.

스코폴라민-동물모델에서 택란 추출물의 기억력 개선 작용 기작 확인

본 발명에서는 스코폴라민-동물모델에서 택란 추출물의 기억력 개선 작용 기작을 확인하고자 하였다.

6-1 : CREB 인산화(pCREB) 및 BDNF 발현 정도 확인

먼저, 상기 실시예 5의 마우스를 희생시켜 뇌를 적출하고 해마(Hippocampus) 조직을 분리한 후, 공지된 단백질 분리 방법을 이용하여 단백질을 수득하였으며, 상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 웨스턴 블랏을 통해 pCREB 및 BDNF 발현 정도를 측정하였다.

그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이, 택란 추출물 투여에 의해 pCREB 및 BDNF 발현이 현저하게 개선되는 것을 확인하였다. 이는 택란 추출물에 의해 BDNF-CREB 경로가 활성화 되어 인지기능이 개선된다는 것을 의미한다.

6-2 : 신경염증 억제 효능 확인

상기 실시예 6-2에서 분리한 단백질을 이용하여 실시예 2-2와 동일한 방법으로 iNOS 및 COX-2 단백질 발현 정도를 확인하였다.

그 결과, 도 9에 나타난 바와 같이, 스코폴라민 투여에 의해 발현이 증가된 iNOS 및 COX-2 단백질은, 택란 추출물에 의해 발현이 현저하게 감소된 것을 확인하였다. 즉, 본 실험에 따라 본 발명의 택란 추출물은 기억력 및 인지기능 장애의 개선, 예방 또는 치료에 효과적임을 알 수 있다.

택란 추출물 내 신경염증 억제 물질 확인

본 발명에서는 택란 추출물에 포함된 단일 성분 중에서 어떤 성분이 신경염증을 조절하는지 확인하기 위해, 택란에 높은 함량으로 포함된 것으로 알려진 로즈마린산(Rosemarinic acid), 루테올린(Luteolin) 및 단삼(Danshensu)의 NO 발생 억제 효능 및 세포 독성 정도를 확인하였다.

상기 실시예 1-2 및 실시예 1-3과 동일한 방법으로 실험을 수행하였으며, 로즈마린산, 루테올린 및 단삼은 각각 2.5 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖ 및 10 ㎍/㎖ 농도로 처리하였다.

그 결과, 도 10 및 도 11에 나타난 바와 같이, 3가지 성분 모두 세포 독성은 관찰되지 않았으며, 로즈마린산 및 단삼에 비해 루테올린의 NO 발생 억제 효능이 우수한 것으로 확인되었다.

<110> GLOCAL Industry-Academic Cooperation Foundation Konkuk University <120> A composition for the prevention or treatment of neuroinflammatory disease or cognitive dysfunction comprising Lycopi Herba extract <130> PDPC214434 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS_forward primer <400> 1 gaggtactca gcgtgctcca 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS_reverse primer <400> 2 agggaggaaa gggagagagg 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2_forward primer <400> 3 tgagtggtag ccagcaaagc 20 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2_reverse primer <400> 4 ctgcagtcca ggttcatgg 19 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_forward primer <400> 5 accacagtcc atgccatcac 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_reverse primer <400> 6 ccaccaccct gttgctgtag 20

Claims

택란(lycopi herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 택란 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 택란 추출물은 로즈마린산(Rosemarinic acid), 루테올린(Luteolin) 또는 단삼(Danshensu)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 택란 추출물은 전체 조성물에 10 내지 100 ㎍/㎖ 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 택란 추출물은
1) NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성 억제;
2) IL-6 및 TNF-α를 포함하는 염증성 사이토카인(cytokines) 생성 억제;
3) p38, JNK 및 ERK 인산화 억제를 통한 MAPK(mitogen-activated protein kinases) 경로 억제;
4) IκB-α 인산화 억제를 통한 NF-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)의 활성 억제를 통해 신경염증을 조절하는 것을 특징으로 하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 신경염증 질환은 다발성 경화증, 신경모세포종, 허혈성 뇌졸중, 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 루게릭 질환, 헌팅턴 질환, 크로이츠펠트야콥병, 외상 후 스트레스 장애, 우울증, 정신분열증 또는 근위축성측색경화증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
택란 추출물을 유효성분으로 포함하는, 신경염증 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물.
택란 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 택란 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 택란 추출물은 로즈마린산(Rosemarinic acid), 루테올린(Luteolin) 또는 단삼(Danshensu)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, , 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 택란 추출물은 전체 조성물에 10 내지 100 ㎍/㎖ 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 택란 추출물은 뇌의 해마(hippocampus)에서 NO, iNOS 및 COX-2를 포함하는 염증반응 매개인자(inflammatory mediators) 생성을 억제하거나, BDNF 발현 및 CREB 인산화를 활성화 시켜 기억력 및 인지기능 장애를 개선시킬 수 있는 것을 특징으로 하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 인지 기능 장애는 경도인지장애, 주의력 결핍장애(ADHD), 우울증, 알츠하이머병, 뇌혈관성 치매, 노인성 치매, 픽(pick)병 및 크루츠펠트-야곱(Creutzfeldt-jakob)병으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
택란 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기억력 및 인지 기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물.