KR20230111264A - 라임병에 사용하기 위한 dna 항체 작제물 - Google Patents

Abstract

본 명세서에서 보렐리아 항원에 대한 항체를 코딩하는 재조합 핵산 서열을 포함하는 조성물이 개시된다. 또한 대상체에게 상기 조성물을 투여함으로써 대상체에서 합성 항체를 생성하는 방법이 개시된다. 본 개시내용은 또한 상기 조성물 및 생서어 방법을 이용하여 대상체에서 라임병을 예방하고/하거나 치료하는 방법을 제공한다.

Description

라임병에 사용하기 위한 DNA 항체 작제물 {DNA ANTIBODY CONSTRUCTS FOR USE AGAINST LYME DISEASE}

관련 출원에 대한 상호 참고문헌

본 출원은 2016년 11월 7일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/418,468호에 대한 우선권 및 유익을 주장하며, 이 기초출원의 내용은 그의 전문이 본 명세서에 편입된다.

기술 분야

본 발명은 생체 내에서 하나 이상의 항-OspA 합성 항체 및 이의 기능성 단편을 생성하기 위한 재조합 핵산 서열을 포함하는 조성물, 및 상기 조성물을 투여함으로써 대상체에서 박테리아 감염을 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

라임병은 박테륨 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi)에 의해 야기되고, 감염된 익소디즈 스카풀라리스(Ixodes scapularis)(라임 진드기 또는 사슴 진드기라고도 함)의 물림을 통해 인간에게 전염된다. 현재, 치료 항체는 다중 질환의 치료용으로 승인된다. 불행하게도, 정제된 항체의 제조 및 전달은 비용이 엄청나다. 더 나아가, 항체 요법은 매주 내지 매달 재투여되어야 한다(만성 라임병이 발생할 환자의 위험을 예방하거나 또는 감소시키는 유효한 치료를 보장함에 있어서 도전적 고려 사항).

따라서, 보렐리아 부르그도르페리 감염 및 관련된 라임병을 예방하고/하거나 치료하는 개선된 치료에 대한 당업계의 필요가 있다. 본 발명은 이런 필요를 충족시킨다.

일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 합성 항체를 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이되, 핵산 분자는 a) 항-OspA 합성 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, 및 b) 항-OspA 합성 항체의 단편을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 절단 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열; b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산 서열; 및 c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산 서열의 단편으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는: a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 또는 서열번호 23의 핵산 서열에 대해 핵산 서열의 전체 길이에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 또는 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열; 및 c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 또는 서열번호 23으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편 중 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 가변 중쇄 영역을 코딩하는 서열은 a) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16 또는 서열번호 22의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열; b) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16 또는 서열번호 22의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, c) 서열번호 3, 서열번호 9, 서열번호 15 또는 서열번호 21의 뉴클레오타이드 서열, 및 d) 서열번호 3, 서열번호 9, 서열번호 15 또는 서열번호 21의 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 가변 경쇄 영역을 코딩하는 서열은: e) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 또는 서열번호 24의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열; f) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 또는 서열번호 24의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, g) 서열번호 5, 서열번호 11, 서열번호 17 또는 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열, 및 h) 서열번호 5, 서열번호 11, 서열번호 17 또는 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 2, 서열번호 8, 서열번호 14 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 4를 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 6을 포함하는 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 2를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 10을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 12를 포함하는 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 8을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 16을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 18을 포함하는 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 14를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 22를 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 24를 포함하는 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 20을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 26을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 27을 포함하는 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 25를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23 중 하나에 대해 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열은 리더 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 발현 벡터이다.

일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 합성 항체를 포함하는 아미노산 분자에 관한 것이되, 아미노산 분자는 항-OspA 합성 항체를 포함하는 아미노산, 및 항-OspA 합성 항체의 단편을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 절단 도메인을 추가로 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열; b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산 서열; 및 c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 아미노산의 아미노산 서열의 단편으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 포함한다. 일 실시형태에서, 가변 중쇄 영역을 포함하는 서열은 a) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16 또는 서열번호 22의 아미노산 서열; 및 b) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16 또는 서열번호 22의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 가변 경쇄 영역을 포함하는 서열은 c) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 또는 서열번호 24의 아미노산 서열; 및 d) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 또는 서열번호 24의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 2, 서열번호 8, 서열번호 14 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 4를 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 6을 포함하는 가변 경쇄 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 10을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 12를 포함하는 가변 경쇄 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 16을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 18을 포함하는 가변 경쇄 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 22를 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열번호 24를 포함하는 가변 경쇄 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 20에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 26을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열번호 27을 포함하는 가변 경쇄 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 아미노산 분자는 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 아미노산 서열은 리더 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 합성 항체를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이되, 핵산 분자는 a) 항-OspA 합성 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, 및 b) 항-OspA 합성 항체의 단편을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 합성 항체를 포함하는 아미노산 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이되, 아미노산 분자는 항-OspA 합성 항체를 포함하는 아미노산 서열, 및 항-OspA 합성 항체의 단편을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 대상체에서 질환을 예방하거나 또는 치료하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 대상체에게 하나 이상의 합성 항체를 코딩하는 핵산 분자를 투여하는 단계를 포함하되, 핵산 분자는 a) 항-OspA 합성 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, 및 b) 항-OspA 합성 항체의 단편을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나를 포함한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 대상체에게 핵산 분자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 대상체에게 하나 이상의 합성 항체를 포함하는 아미노산 분자를 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 질환을 예방하거나 또는 치료하는 방법에 관한 것이되, 아미노산 분자는 항-OspA 합성 항체를 포함하는 아미노산 서열, 및 항-OspA 합성 항체의 단편을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함한다.

일 실시형태에서, 질환은 보렐리아(Borrelia) 감염이다. 일 실시형태에서, 질환은 라임병이다.

일 실시형태에서, 상기 방법은 대상체에게 항생제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

도 1은 진드기 시험감염 분석에 대해 사용된 스케줄을 도시한 도면. 그룹 당5마리의 C3H 마우스를 진드기 시험감염 5일 전에 대조군 또는 시험 DNA 단클론성 항체(DMAb)로 면역화시켰다. 면역화 시 또는 진드기 시험감염 후 21일에 혈청을 수집하였다.
도 2는 제3일에 319-44 wt, 319-44 mod1, 또는 221-7 wt DMAb는 혈청 중에서 검출 가능한 수준의 항체를 제공하고, 그리고 319-44 wt DMAb에 의해 라임병으로부터의 60% 보호를 제공한 반면, 319-44 mod1 DMAb는 80% 보호를 제공한, 마우스의 면역화를 입증하는 실험 결과를 도시한다.
도 3은 라임 DMAb 시험감염 연구로부터의 결과를 도시한 도면. 319-44 wt, 319-44 mod1 또는 221-7 wt DMAb로 치료한 마우스는 제21일에 강한 항-인간 IgG 반응을 나타내었다.
도 4는 보렐리아 부르그도르페리에 대해 DMAb의 보렐리아살균 활성을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 모두 4가지의 DMab(319-44 mod1, 319-44 wt, 221-7 mod9 및 221-7 wt)는 보렐리아 부르그도르페리에 대해 보렐리아살균성이었다.
도 5는 제형화된 319-44 DMAb 투약량이 생체내에서 증가된 항체 수준을 야기한다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 결과는 C3H/HeNCrl 마우스, n = 5/그룹에서 인간 IgG의 수준을 도시한다. 제형화된 319-44mod1(300㎍ 용량) = 제7일에 대략 7㎍/㎖.
도 6A 내지 도 6C를 포함하는 도 6은 3개 줄로 배열된 최적화 전략이 221-7 mod 9의 증가된 생체내 발현을 야기한다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 도 6A는 실험에 대해 사용된 주사 및 분석 시간 과정을 도시한다. 도 6B는 제형화된 221-7 mod 9 DMAb가 비-제형화된 221-7 mod 9 DMAb보다 더 큰 항-인간 IgG 반응을 생성한다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 도 6C는 제형화된 221-7 mod 9 DMAb가 비-제형화된 221-7 mod 9 DMAb보다 더 큰 수준의 hisOspA를 가진다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면.
도 7A 내지 도 7B를 포함하는 도 7은 DMAb의 주사가 생체내 라임 항체의 생성을 초래하였다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 도 7A는 319-44 DMAb에 의한 주사, 그리고 더 적은 정도로 비-제형화된 221-7 wt DMAb가 주사 후 적어도 2일에 시작해서 벡터 단독(pVax)보다 더 큰 인간 IgG 반응을 생성하였다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면. 도 7B는 319-44 DMAb, 그리고 더 적은 정도로 비-제형화된 221-7 wt DMAb에 의한 주사가 pVax 단독보다 더 큰 수준의 hisOspA를 가진다는 것을 입증하는 실험 결과를 도시한 도면.
도 8은 다양한 DMAb로 면역화시킨 C3H 마우스에 대해 얻은 진드기 시험감염으로부터의 보호 백분율 그래프를 도시한 도면. 이는 도 2에서의 데이터의 그래프 표현이다.

본 발명은 항체를 코딩하는 재조합 핵산 서열, 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 조성물은 합성 항체의 생체내 발현 및 형성을 촉진시키기 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.

특히, 재조합 핵산 서열로부터 발현된 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드는 합성 항체 내에 어셈블링될 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는, 어셈블리가 항원을 결합시키고, 본 명세서 기술된 어셈블링되지 않은 항체와 비교하여 더욱 면역원성이고, 항원에 대한 면역 반응을 유발하거나 유도할 수 있는 합성 항체를 형성시키도록 서로 상호작용할 수 있다.

추가적으로, 이러한 합성 항체는 항원 유도 면역 반응에 반응하여 생성된 항체보다 대상체에서 더욱 신속하게 발생된다. 합성 항체는 소정 범위의 항원을 효과적으로 결합하고 중화시킬 수 있다. 합성 항체는 또한 효과적으로 질환에 대해 보호하고/하거나 질환으로부터 생존을 증진시킬 수 있다.

1. 정의

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 상충될 때, 정의를 포함하여 본 문서가 우선시 될 것이다. 바람직한 방법 및 물질이 하기에 기재되어 있지만, 본 명세서 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 평가에서 이용될 수 있다. 본 명세서에서 언급된 모든 공보, 특허출원, 특허 및 다른 참고문헌은 이들의 전문이 참고로 포함된다. 본 명세서 개시된 물질, 방법, 및 실시예는 단지 예시적인 것으로서, 제한하려는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "포함한다", "포함된다", "갖는", "갖는다", "수 있다", "함유한다" 및 이들의 변형예는 추가적인 행위 또는 구조의 가능성을 배제하지 않는 개방형 전이 어구, 용어 또는 단어로 의도된다. 문맥상 명백하게 달리 기술하지 않는 한, 단수 형태에는 복수 대상물이 포함된다. 본 개시는 또한 명시적으로 기술하는 지의 여부와는 관계없이, 본 명세서 제시된 실시형태 또는 요소를 "포함하는", "이로 구성된" 및 "본질적으로 이로 구성된" 다른 실시형태를 고려한다.

"항체"는 Fab, F(ab')2, Fd, 및 단일쇄 항체, 및 이들의 유도체를 포함하는 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE의 항체, 또는 단편, 이의 단편 또는 유도체를 의미할 수 있다. 항체는 원하는 에피토프 또는 이로부터 유래된 서열에 충분한 결합 특이성을 나타내는 포유류 혈청 샘플에서 단리된 항체, 다클론성 항체, 친화도 정제된 항체, 또는 이들의 혼합물일 수 있다.

본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되는 "항체 단편" 또는 "항체의 단편"은 항원-결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 온전한 항체의 일부를 나타낸다. 이 일부에는 온전한 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인(즉, 항체 아이소형에 따라 CH2, CH3, 또는 CH4)이 포함되지 않는다. 항체 단편의 예에는 비제한적으로 Fab 단편, Fab' 단편, Fab'-SH 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, Fv 단편, 디아바디(diabody), 단일쇄 Fv(scFv) 분자, 하나의 경쇄 가변 도메인만 함유하는 단일쇄 폴리펩타이드, 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 함유하는 단일쇄 폴리펩타이드, 하나의 중쇄 가변 영역만 함유하는 단일쇄 폴리펩타이드, 및 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 함유하는 단일쇄 폴리펩타이드가 포함된다.

"항원"은 숙주에서 면역 반응을 생성하는 능력을 갖는 단백질을 나타낸다. 항원은 항체에 의해 인식되고 이에 결합될 수 있다. 항원은 체내에서 또는 외부 환경에서 유래될 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "코딩 서열" 또는 "코딩 핵산"은 본 명세서에 나타낸 바와 같은 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산(RNA 또는 DNA 분자)을 의미할 수 있다. 코딩 서열은 핵산이 투여되는 개인 또는 포유류의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 촉진자 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호를 추가로 포함할 수 있다. 코딩 서열은 신호 펩타이드를 코딩하는 서열을 추가로 포함할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "상보체" 또는 "상보적인"은 핵산이 핵산 분자의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체 간 왓슨-크릭(예를 들어, A-T/U 및 C-G) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 염기쌍 형성을 의미할 수 있음을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "정전류"는 조직 또는 상기 조직을 정의하는 세포가 동일한 조직에 전달되는 전기 자극 기간에 걸쳐 수신하거나 경험하는 전류를 정의하기 위한 것이다. 전기 자극은 본 명세서 기재된 전기천공 장치로부터 전달된다. 상기 전류는 본 명세서 제공된 전기천공 장치가 피드백 요소, 바람직하게는 즉각적인 피드백을 가지므로, 전기 자극의 수명에 걸쳐 상기 조직에서 정전류량으로 유지된다. 피드백 요소는 자극 기간에 걸쳐 조직(또는 세포)의 저항을 측정하고, 전기천공장치가 그 전기 에너지 출력을 변경하도록(예컨대, 전압을 증가하도록) 유도하여 동일한 조직에서의 전류가 전기 자극 동안(마이크로초 수준) 그리고 자극 별로 변하지 않고 유지될 수 있다. 일부 실시형태에서, 피드백 요소는 컨트롤러를 포함한다.

본 명세서에서 이용되는 "전류 피드백" 또는 "피드백"은 상호 교환적으로 이용될 수 있고 제공된 전기천공 장치의 능동 반응을 의미할 수 있으며, 이는 전극 간에 조직에서 전류를 측정하는 단계 및 전류를 불변 수준으로 유지하기 위해 이에 따라 EP 장치에 의해 전달되는 에너지 출력을 변경하는 단계를 포함한다. 상기 불변 수준은 자극 순서 또는 전기 처리의 개시 전에 사용자에 의해 사전 설정된다. 내부 전기 회로가 전극 간에 조직내 전류를 연속적으로 모니터링하고 이 모니터링된 전류(또는 조직 내 전류)를 사전 설정된 전류와 비교하여 모니터링된 전류를 사전 설정된 수준으로 유지하기 위해 연속적으로 에너지-출력 조정을 수행할 수 있으므로, 피드백은 전기천공 장치의 전기천공 성분, 예를 들어, 컨트롤러에 의해 수행될 수 있다. 피드백 루프는 이것이 아날로그 폐쇄 루프 피드백이므로, 즉각적일 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "분산된 전류"는 본 명세서 기재된 전기천공 장치의 다양한 바늘 전극 어레이로부터 전달되는 전기적 전류 패턴을 의미할 수 있고, 여기서 이 패턴은 조직이 전기천공되는 임의의 영역 상에서 전기천공 관련된 열 스트레스의 발생을 최소화하거나 바람직하게 제거한다.

본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되는 "전기천공", "전기-투과화", 또는 "전기-역학 증강"("EP")은 생체막에서 미시적 경로(구멍)를 유도하기 위한 막관통 전기장 자극의 이용을 나타낼 수 있다; 이들의 존재는 생체분자, 예를 들어, 플라스미드, 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 약물, 이온, 및 물이 세포막의 한쪽에서 다른 쪽으로 이동할 수 있게 한다.

본 명세서에서 이용되는 "내인성 항체"는 체액성 면역 반응의 유도를 위해 유효 용량의 항원이 투여되는 대상체에서 생성되는 항체를 나타낼 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "피드백 메커니즘"은 소프트웨어 또는 하드웨어(또는 펌웨어)에 의해 수행되는 절차를 나타낼 수 있고, 이 절차는 본 발명의 값, 바람직하게는 전류로 원하는 조직의 임피던스를 (에너지 자극 전달 이전, 동안, 및/또는 이후) 수신하고 비교하며, 사전 설정된 값을 달성하기 위해 전달된 에너지 자극을 조정한다. 피드백 메커니즘은 아날로그 폐쇄 루프 회로에 의해 수행될 수 있다.

"단편"은 기능하고, 즉 원하는 표적에 결합할 수 있고, 전장 항체와 동일한 목적 효과를 갖는 항체의 폴리펩타이드 단편을 의미할 수 있다. 항체의 단편은 N 및/또는 C 말단에서 적어도 하나의 아미노산이 없는 것을 제외하고는 전장과 100% 동일할 수 있고, 각각의 경우 위치 1에 신호 펩타이드 및/또는 메티오닌을 갖거나 갖지 않는다. 단편은 부가된 임의의 이종성 신호 펩타이드를 제외하고, 특정한 전장 항체 길이의 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 백분율을 포함할 수 있다. 단편은 항체와 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 동일한 폴리펩타이드의 단편을 포함하며, 추가적으로 동일성 백분율 계산 시 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종성 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. 단편은 추가로 N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩타이드, 예를 들어, 면역글로불린 신호 펩타이드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩타이드는 항체의 단편에 연결될 수 있다.

항체를 코딩하는 핵산 서열의 단편은 5' 및/또는 3' 말단에서 적어도 하나의 뉴클레오타이드가 없는 것을 제외하고는 전장과 100% 동일할 수 있고, 각각의 경우 위치 1에 신호 펩타이드 및/또는 메티오닌을 코딩하는 서열을 갖거나 갖지 않는다. 단편은 부가된 임의의 이종성 신호 펩타이드를 제외하고, 특정한 전장 코딩 서열 길이의 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 백분율을 포함할 수 있다. 단편은 항체와 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 동일한 폴리펩타이드를 코딩하는 단편을 포함하고 선택적으로는 동일성 백분율 계산 시 포함되지 않는 N 말단 메티오닌 또는 이종성 신호 펩타이드를 코딩하는 서열을 추가로 포함할 수 있다. 단편은 추가로 N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩타이드, 예를 들어, 면역글로불린 신호 펩타이드, 예를 들어 IgE 또는 IgG 신호 펩타이드에 대한 코딩 서열을 포함할 수 있다. N 말단 메티오닌 및/또는 신호 펩타이드를 코딩하는 코딩 서열이 항체 서열의 단편에 연결될 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "유전적 작제물"은 단백질, 예를 들어, 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 RNA 분자를 나타낸다. 코딩 서열에는 핵산 분자가 투여되는 개인의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 촉진자 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호가 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "발현 가능한 형태"는 개인의 세포에 존재하는 경우, 코딩 서열이 발현되도록 단백질을 코딩하는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 필요한 조절 요소를 함유하는 유전자 작제물을 나타낸다.

둘 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서 본 명세서에서 이용되는 "동일한" 또는 "동일성"은 서열이 명시된 영역에 걸쳐 동일한 명시된 잔기 백분율을 가짐을 의미할 수 있다. 백분율은 두 서열을 최적 정렬하고, 명시된 영역에 걸쳐 두 서열을 비교하고, 두 서열에서 동일한 잔기가 나오는 위치의 수를 결정하여 매치된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 명시된 영역에서 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱해서 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 두 서열이 상이한 길이이거나 정렬로 하나 이상의 엇갈린 말단이 생성되고 명시된 비교 영역에 하나의 서열만 포함되는 경우, 단일 서열의 잔기는 계산의 분모에는 포함되지만 분자에는 포함되지 않는다. DNA 및 RNA를 비교하는 경우, 티민(T) 및 우라실(U)은 동등한 것으로 간주될 수 있다. 동일성은 수동으로 또는 BLAST 또는 BLAST 2.0과 같은 컴퓨터 서열 알고리즘을 이용하여 수행될 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "임피던스"는 피드백 메커니즘을 논의할 때 이용될 수 있고, 옴의 법칙에 따라 전류값으로 전환되어 사전 설정된 전류와의 비교를 가능케 할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "면역 반응"은 하나 이상의 핵산 및/또는 펩타이드의 도입에 반응하는 숙주의 면역계, 예를 들어, 포유류의 면역계 활성화를 의미할 수 있다. 면역 반응은 세포성 또는 체액성 반응의 형태 또는 둘 다일 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "핵산" 또는 "올리고뉴클레오타이드" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 서로 공유 연결된 적어도 2개의 뉴클레오타이드를 의미할 수 있다. 단일 가닥의 도시는 또한 상보성 가닥의 서열을 정의한다. 따라서 핵산은 또한 도시된 단일 가닥의 상보성 가닥을 포괄한다. 핵산의 여러 변이체가 주어진 핵산과 동일한 목적을 위해 이용될 수 있다. 따라서 핵산은 또한 실질적으로 동일한 핵산 및 이들의 상보체를 포괄한다. 단일 가닥은 엄격한 혼성화 조건 하에 표적 서열에 혼성화할 수 있는 프로브를 제공한다. 따라서 핵산은 또한 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화하는 프로브를 포괄한다.

핵산은 단일가닥 또는 이중가닥일 수도 있고, 또는 이중가닥 및 단일가닥 서열을 모두 일부 함유할 수도 있다. 핵산은 DNA, 게놈 및 cDNA 둘 다, RNA, 또는 하이브리드일 수 있고, 여기서 핵산은 데옥시리보- 및 리보-뉴클레오타이드의 조합 및 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 잔틴 하이포잔틴, 아이소시토신 및 아이소구아닌을 포함하는 염기의 조합을 함유할 수 있다. 핵산은 화학적 합성 방법에 의해 또는 재조합 방법에 의해 수득될 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "작동 가능하게 연결된"은 유전자의 발현이 이것이 공간적으로 연결된 촉진자의 제어 하에 있음을 의미할 수 있다. 촉진자는 그 제어 하 유전자의 5'(상류) 또는 3'(다운스트림)에 배치될 수 있다. 촉진자 및 유전자 간 거리는 촉진자가 유래된 유전자에서 이것이 제어하는 유전자 및 촉진자 간 거리와 대략 동일할 수 있다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 상기 거리의 변동은 촉진자 기능의 손실 없이 수용될 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "펩타이드", "단백질", 또는 "폴리펩타이드"는 아미노산의 연결된 서열을 의미할 수 있고, 천연, 합성, 또는 천연 및 합성의 변형 또는 조합일 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "촉진자"는 세포 내 핵산의 발현을 부여하거나, 활성화하거나, 증강시킬 수 있는 합성 또는 천연 유래 분자를 의미할 수 있다. 촉진자는 발현을 추가 증강시키고/시키거나 그 공간적 발현 및/또는 시간적 발현을 변경시키기 위해 하나 이상의 특정 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 촉진자는 또한 원위 인핸서 또는 억제 유전자 요소를 포함할 수 있고, 이는 전사 개시 부위에서 수천 개 염기쌍만큼 떨어져 배치될 수 있다. 촉진자는 바이러스, 박테리아, 진균, 식물, 곤충, 및 동물을 포함하는 원천에서 유래될 수 있다. 촉진자는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 기관에 대해, 발현이 일어나는 발생 단계에 대해, 또는 외부 자극, 예를 들어, 생리적 스트레스, 병원체, 금속 이온 또는 유도제에 반응하여 항상적으로 또는 차별적으로 유전자 성분의 발현을 조절할 수 있다. 촉진자의 대표예에는 박테리오파지 T7 촉진자, 박테리오파지 T3 촉진자, SP6 촉진자, lac 작동유전자-촉진자, tac 촉진자, SV40 후기 촉진자, SV40 조기 촉진자, RSV-LTR 촉진자, CMV IE 촉진자, SV40 조기 촉진자 또는 SV 40 후기 촉진자 및 CMV IE 촉진자가 포함된다.

"신호 펩타이드" 및 "리더 서열"은 본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되며, 본 명세서 나타낸 단백질의 아미노 말단에 연결될 수 있는 아미노산 서열을 나타낸다. 신호 펩타이드/리더 서열은 전형적으로 단백질의 위치선정을 지시한다. 본 명세서에서 이용된 신호 펩타이드/리더 서열은 바람직하게는 이것이 생산되는 세포로부터 단백질의 분비를 촉진한다. 신호 펩타이드/리더 서열은 종종 세포로부터의 분비 시, 종종 성숙 단백질로 불리는 단백질의 나머지로부터 절단된다. 신호 펩타이드/리더 서열은 단백질의 N 말단에 연결된다.

본 명세서에서 이용되는 "엄격한 혼성화 조건"은 제1 핵산 서열(예를 들어, 프로브)이 제2 핵산 서열(예를 들어, 표적)에, 예를 들어, 핵산의 복합 혼합물로 혼성화할 조건을 의미할 수 있다. 엄격한 조건은 서열 의존적이며, 상이한 상황에서 상이할 것이다. 엄격한 조건은 정의된 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열 용융점(T_m)보다 약 5 내지 10℃ 더 낮게 선택될 수 있다. T_m은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형 시(표적 서열이 과량으로 존재하므로, T_m에서 프로브의 50%가 평형 시 점유됨) 표적 서열에 혼성화하는 온도(정의된 이온 강도, pH 및 핵산 농도 하에)일 수 있다. 엄격한 조건은 염 농도가 약 1.0M 나트륨 이온 미만, 예를 들어, pH 7.0 내지 8.3에서 약 0.01 내지 1.0M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)이고 온도가 짧은 프로브(예컨대, 약 10 내지 50개 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 30℃이고 긴 프로브(예컨대, 약 50개 초과 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 60℃인 것들일 수 있다. 엄격한 조건은 또한 탈안정화제, 예를 들어, 폼아마이드의 첨가로 달성될 수 있다. 선택적 또는 특이적 혼성화를 위해, 양성 신호는 배경 혼성화의 적어도 2 내지 10배일 수 있다. 예시적인 엄격한 혼성화 조건에는 하기가 포함된다: 50% 폼아마이드, 5×SSC, 및 1% SDS, 42℃에서 항온처리하거나, 또는 5×SSC, 1% SDS, 65℃에서 항온처리하고, 65℃에서 0.2×SSC, 및 0.1% SDS 중에 세척.

본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되는 "대상체" 및 "환자"는 비제한적으로 포유류(예를 들어, 소, 돼지, 낙타, 라마, 말, 염소, 토끼, 양, 햄스터, 기니아피그, 고양이, 개, 래트 및 마우스, 비인간 영장류(예를 들어, 원숭이, 예를 들어, 게잡이 또는 붉은털 원숭이, 침팬지 등) 및 인간)를 포함하는 임의의 척추동물을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 또는 비-인간일 수 있다. 대상체 또는 환자는 다른 형태의 치료를 거치고 있을 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "실질적으로 상보적인"은 제1 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100개 또는 그 초과의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 영역에 걸쳐 제2 서열의 상보체에 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일함을, 또는 두 서열이 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화함을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "실질적으로 동일한"은 제1 서열이 제2 서열의 상보체에 실질적으로 상보적인 경우, 제1 및 제2 서열이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100개 또는 그 초과의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 영역에 걸쳐 또는 핵산에 대해 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%임을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "합성 항체"는 본 명세서에서 기재된 재조합 핵산 서열에 의해 코딩되고 대상체에서 생성되는 항체를 나타낸다.

본 명세서에서 이용되는 "치료" 또는 "치료하는"은 질환의 예방, 억제, 진압 또는 완전 제거 수단을 통한 대상체의 질환으로부터의 보호를 의미할 수 있다. 질환의 예방에는 질환의 개시 전에 대상체에 대한 본 발명의 백신 투여가 관여된다. 질환의 억제에는 질환의 유도 후 그러나 그 임상적 출현 전에 대상체에 대한 본 발명의 백신 투여가 관여된다. 질환의 진압에는 질환의 임상적 출현 후 대상체에 대한 본 발명의 백신 투여가 관여된다.

핵산에 대해 본 명세서에서 이용되는 "변이체"는 (i) 참조된 뉴클레오타이드 서열의 일부 또는 단편; (ii) 참조된 뉴클레오타이드 서열 또는 이들의 일부의 상보체; (iii) 참조된 핵산 또는 이들의 상보체와 실질적으로 동일한 핵산; 또는 (iv) 참조된 핵산, 이들의 상보체, 또는 이들과 실질적으로 동일한 서열에 엄격한 조건 하에 혼성화하는 핵산을 의미할 수 있다.

펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 "변이체"는 아미노산의 삽입, 결실, 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 상이하지만 적어도 하나의 생물학적 활성을 보유한다. 변이체는 또한 적어도 하나의 생물학적 활성을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 참조된 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환, 즉 유사한 특성(예를 들어, 친수성, 하전된 영역의 정도 및 분포)의 상이한 아미노산을 이용한 아미노산 대체는 당해 분야에서 전형적으로 작은 변화가 관여되는 것으로 인식된다. 이러한 작은 변화는, 부분적으로 당해 분야에서 이해되는 바와 같이 아미노산의 수치 지수를 고려하여 확인될 수 있다. 문헌[Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-132(1982)]. 아미노산의 수치 지수는 그 소수성 및 전하의 고려에 기반한다. 유사한 수치 지수의 아미노산이 치환되고 여전히 단백질 기능을 보유할 수 있음이 당해 분야에 공지되어 있다. 하나의 측면에서, ±2의 수치 지수를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 또한 생물학적 기능을 보유하는 단백질을 생성할 치환을 드러내기 위해 이용될 수 있다. 펩타이드의 맥락에서 아미노산의 친수성 고려는 항원성 및 면역원성과 잘 연관되는 것으로 보고된 유용한 척도인 해당 펩타이드의 가장 큰 국소 평균 친수성 계산을 허용한다(본 명세서 전체가 참고로 포함된 미국 특허 제4,554,101호). 당해 분야에서 이해되는 바와 같은, 유사한 친수성값을 갖는 아미노산의 치환은 생물학적 활성, 예를 들어 면역원성을 보유하는 펩타이드를 생성할 수 있다. 치환은 서로 ±2 내의 친수성 값을 갖는 아미노산으로 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성 값은 모두 아미노산의 특정 측쇄에 의해 영향을 받는다. 그 관찰과 일치하게, 생물학적 기능과 상용성인 아미노산 치환은 아미노산의 상대적 유사성, 특히 소수성, 친수성, 전하, 크기 및 다른 특성으로 드러나는 바와 같은 이들 아미노산의 측쇄에 근거하는 것으로 이해된다.

변이체는 전체 유전자 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 실질적으로 동일한 핵산 서열일 수 있다. 핵산 서열은 유전자 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일할 수 있다. 변이체는 아미노산 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 실질적으로 동일한 아미노산 서열일 수 있다. 아미노산 서열은 아미노산 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일할 수 있다.

본 명세서에서 이용되는 "벡터"는 복제 기원을 함유하는 핵산 서열을 의미할 수 있다. 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 DNA 또는 RNA 벡터일 수 있다. 벡터는 자가-복제 염색체외 벡터 또는 숙주 게놈 내로 통합되는 벡터일 수 있다.

본 명세서에서 수치 범위의 언급에 있어서, 동일한 정도의 정밀도를 갖는 그 사이의 각각의 개입 숫자가 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9의 범위에 있어서, 숫자 7 및 8은 6 및 9에 부가하여 고려되며, 범위 6.0 내지 7.0에 있어서, 숫자 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 및 7.0이 명시적으로 고려된다.

2. 조성물

본 발명은 항체, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩하는 재조합 핵산 서열을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 조성물은, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 경우, 대상체에서 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다. 합성 항체는 대상체에 존재하는 표적 분자(즉, 항원)에 결합할 수 있다. 이러한 결합은 항원을 중화시키거나, 다른 분자, 예를 들어 단백질 또는 핵산에 의한 항원의 인식을 차단하거나, 항원에 대한 면역 반응을 유발 또는 유도할 수 있다.

일 실시형태에서, 조성물은 합성 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 조성물은 제1 합성 항체를 코딩하는 제1 뉴클레오타이드 서열, 및 제2 합성 항체를 코딩하는 제2 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 분열 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 조성물은 합성 항체의 경쇄 및 중쇄 중 하나 이상을 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 경쇄 또는 중쇄 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 조성물은 합성 항체의 경쇄를 코딩하는 제1 핵산 분자 및 합성 항체의 중쇄를 코딩하는 제2 핵산 분자를 포함한다. 일 실시형태에서, 합성 항체의 경쇄를 코딩하는 핵산 서열은 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역 및 불변 중쇄 영역을 코딩하는 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 합성 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산 서열은 인간 카파 중쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역을 코딩하는 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 조성물은 합성 항체의 경쇄와 중쇄를 둘 다 코딩하는 단일 핵산 분자를 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 분자는 경쇄와 중쇄 리더 펩타이드를 둘 다 코딩하는 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 조성물은 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역, 퓨린 절단 부위, 'GSG' 링커, P2A 펩타이드, 인간 카파 중쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역을 코딩하는 단일 핵산 분자를 포함한다.

일 실시형태에서, 핵산 분자는 항-OspA 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 항-OspA 항체는 DMAb-319-44 mod1이다. 일 실시형태에서, DMAb-319-44 mod1 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 4 및 서열번호 6의 가변 VH 및 VL 영역을 각각 코딩하는 하나 이상의 코돈 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, DMAb-319-44 mod1 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 항-OspA 항체는 DMAb-319-44 wt이다. 일 실시형태에서, DMAb-319-44 wt 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 10 및 서열번호 12의 가변 가변 VH 및 VL 영역을 각각 코딩하는 하나 이상의 코돈 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, DMAb-319-44 wt 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 항-OspA 항체는 DMAb-221-7 mod9이다. 일 실시형태에서, DMAb-221-7 mod9 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 16 및 서열번호 18의 가변 VH 및 VL 영역을 각각 코딩하는 하나 이상의 코돈 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, DMAb-221-7 mod9 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 항-OspA 항체는 DMAb-221-7 wt이다. 일 실시형태에서, DMAb-221-7 wt 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 22 및 서열번호 24의 가변 VH 및 VL 영역을 각각 코딩하는 하나 이상의 코돈 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, DMAb-221-7 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 뮤린 DMAb-221-7 mod9 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 26 및 서열번호 27의 가변 VH 및 VL 영역을 각각 코딩하는 하나 이상의 코돈 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 뮤린 DMAb-221-7 mod9 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열을 코딩한다.

일 실시형태에서, 항-OspA 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23으로부터 선택된 서열을 포함한다.

본 발명의 조성물은 OspA 단백질을 발현시키는 박테륨으로부터의 박테리아 활성화 관련된 임의의 질환, 장애 또는 병태에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 조성물은 박테리아 감염에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 조성물은 보렐리아 종 감염에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 조성물은 라임병에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다.

합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 항원에 결합함으로써 합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환의 생존을 촉진시킬 수 있다. 합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환의 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 생존을 제공할 수 있다.

조성물은 대상체에 대한 조성물 투여의 적어도 약 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 20시간, 25시간, 30시간, 35시간, 40시간, 45시간, 50시간 또는 60시간 내에 대상체에서 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다. 조성물은 대상체에 대한 조성물 투여의 적어도 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 10일 내에 대상체에서 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다. 조성물은 대상체에 대한 조성물 투여의 약 1시간 내지 약 6일, 약 1시간 내지 약 5일, 약 1시간 내지 약 4일, 약 1시간 내지 약 3일, 약 1시간 내지 약 2일, 약 1시간 내지 약 1일, 약 1시간 내지 약 72시간, 약 1시간 내지 약 60시간, 약 1시간 내지 약 48시간, 약 1시간 내지 약 36시간, 약 1시간 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 12시간 또는 약 1시간 내지 약 6시간 내에 대상체에서 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다.

조성물은, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 경우, 체액성 면역 반응을 유도하기 위해 항원이 투여된 대상체에서 내인성 항체의 생성보다 더 신속하게 대상체에서 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다. 조성물은 체액성 면역 반응을 유도하기 위해 항원이 투여된 대상체에서 내인성 항체 생성의 적어도 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 10일 전에 합성 항체의 생성을 일으킬 수 있다.

본 발명의 조성물은 조성물이 질환 또는 사망을 유도하지 않으므로 안전하고; 질환을 보호하며; 투여 용이성, 적은 부작용, 생물학적 안정성 및 낮은 용량 별 비용을 제공하는 것과 같이 효과적인 조성물에 요구되는 특징을 가질 수 있다.

3. 재조합 핵산 서열

전술한 바와 같이, 조성물은 재조합 핵산 서열을 포함할 수 있다. 재조합 핵산 서열은 항체, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩할 수 있다. 항체는 하기에서 보다 상세히 기재된다.

재조합 핵산 서열은 이종성 핵산 서열일 수 있다. 재조합 핵산 서열에는 적어도 하나의 이종성 핵산 서열 또는 하나 이상의 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다.

재조합 핵산 서열은 최적화된 핵산 서열일 수 있다. 이러한 최적화는 항체의 면역원성을 증가시키거나 변경할 수 있다. 최적화는 또한 전사 및/또는 번역을 개선할 수 있다. 최적화에는 하기 중 하나 이상이 포함될 수 있다: 전사를 증가시키기 위한 낮은 GC 함량의 리더 서열; mRNA 안정성 및 코돈 최적화; 증가된 번역을 위한 코작 서열(예를 들어, GCC ACC)의 부가; 신호 펩타이드를 코딩하는 면역글로불린(Ig) 리더 서열의 부가; 내부 IRES 서열의 부가 및 시스-작용 서열 모티프(즉 내부 TATA 박스)가 작용 가능한 범위까지의 제거.

재조합 핵산 서열 작제물

재조합 핵산 서열에는 하나 이상의 재조합 핵산 서열 작제물이 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 성분이 포함될 수 있고, 이는 하기에서 보다 상세히 기재된다.

재조합 핵산 서열 작제물에는 중쇄 폴리펩타이드, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에는 경쇄 폴리펩타이드, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에는 또한 프로테아제 또는 펩티다제 절단 부위를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물은 또한 내부 리보솜 유입 부위(internal ribosome entry site: IRES)를 코딩하는 이종성 핵산 서열을 포함할 수 있다. IRES는 바이러스 IRES 또는 진핵생물 IRES 중 하나일 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물은 하나 이상의 리더 서열을 포함할 수 있으며, 여기서, 각 리더 서열은 신호 펩타이드를 코딩한다. 재조합 핵산 서열 작제물은 하나 이상의 촉진자, 하나 이상의 인트론, 하나 이상의 전사 종결 영역, 하나 이상의 개시 코돈, 하나 이상의 종결 또는 정지 코돈, 및/또는 하나 이상의 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물은 또한, 하나 이상의 링커 또는 태그 서열을 포함할 수 있다. 태그 서열은 헤마글루티닌(HA) 태그를 코딩할 수 있다.

(1) 중쇄 폴리펩타이드

재조합 핵산 서열 작제물에는 중쇄 폴리펩타이드, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩하는 이종성 핵산이 포함될 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드에는 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 적어도 하나의 불변 중쇄(CH) 영역이 포함될 수 있다. 적어도 하나의 불변 중쇄 영역에는 불변 중쇄 영역 1(CH1), 불변 중쇄 영역 2(CH2), 및 불변 중쇄 영역 3(CH3), 및/또는 힌지 영역이 포함될 수 있다.

일부 실시형태에서, 중쇄 폴리펩타이드에는 VH 영역 및 CH1 영역이 포함될 수 있다. 다른 실시형태에서, 중쇄 폴리펩타이드에는 VH 영역, CH1 영역, 힌지 영역, CH2 영역, 및 CH3 영역이 포함될 수 있다.

중쇄 폴리펩타이드에는 상보성 결정 영역(complementarity determining region: "CDR") 세트가 포함될 수 있다. CDR 세트는 VH 영역의 3개의 초가변 영역을 함유할 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드의 N-말단에서 시작하여, 이들 CDR은 각각 "CDR1", "CDR2", 및 "CDR3"으로 표시된다. 중쇄 폴리펩타이드의 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 항원의 결합 또는 인식에 기여할 수 있다.

(2) 경쇄 폴리펩타이드

재조합 핵산 서열 작제물에는 경쇄 폴리펩타이드, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 경쇄 폴리펩타이드에는 가변 경쇄(VL) 영역 및/또는 불변 경쇄(CL) 영역이 포함될 수 있다.

경쇄 폴리펩타이드에는 상보성 결정 영역("CDR") 세트가 포함될 수 있다. CDR 세트는 VL 영역의 3개의 초가변 영역을 함유할 수 있다. 경쇄 폴리펩타이드의 N-말단에서 시작하여, 이들 CDR은 각각 "CDR1", "CDR2", 및 "CDR3"으로 표시된다. 경쇄 폴리펩타이드의 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 항원의 결합 또는 인식에 기여할 수 있다.

(3) 프로테아제 절단 부위

재조합 핵산 서열 작제물에는 프로테아제 절단 부위를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 프로테아제 절단 부위는 프로테아제 또는 펩티다제에 의해 인식될 수 있다. 프로테아제는 엔도펩티다제 또는 엔도 프로테아제, 예를 들어 비제한적으로 퓨린, 엘라스타제, HtrA, 칼파인, 트립신, 키모트립신, 트립신, 및 펩신일 수 있다. 프로테아제는 퓨린일 수 있다. 다른 실시형태에서, 프로테아제는 세린 프로테아제, 트레오닌 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 아스파르테이트 프로테아제, 메탈로프로테아제, 글루탐산 프로테아제, 또는 내부 펩타이드 결합을 절단하는(즉, N-말단 또는 C-말단 펩타이드 결합을 절단하지 않는) 임의의 프로테아제일 수 있다.

프로테아제 절단 부위에는 절단 효율을 촉진시키거나 증가시키는 하나 이상의 아미노산 서열이 포함될 수 있다. 하나 이상의 아미노산 서열은 별도의 폴리펩타이드를 형성 또는 생성하는 효율을 촉진하거나 증가시킬 수 있다. 하나 이상의 아미노산 서열에는 2A 펩타이드 서열이 포함될 수 있다.

(4) 링커 서열

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 링커 서열이 포함될 수 있다. 링커 서열은 본 명세서 기재된 하나 이상의 성분을 공간적으로 분리하거나 연결할 수 있다. 다른 실시형태에서, 링커 서열은 두 개 이상의 폴리펩타이드를 공간적으로 분리하거나 연결하는 아미노산 서열을 코딩할 수 있다.

(5) 촉진자

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 촉진자가 포함될 수 있다. 하나 이상의 촉진자는 유전자 발현을 유도하고 유전자 발현을 조절할 수 있는 임의의 촉진자일 수 있다. 이러한 촉진자는 DNA 의존적 RNA 폴리머라제를 통해 전사에 필요한 시스-작용 서열 요소이다. 유전자 발현을 지시하기 위해 이용된 촉진자의 선택은 구체적 용도에 의존한다. 촉진자는 이것이 그 천연 설정에서 전사 개시 부위로부터 유래되므로, 재조합 핵산 서열 작제물에서 전사 개시로부터 대략 동일한 거리에 배치될 수 있다. 그러나 상기 거리의 변동이 촉진자의 기능의 손실 없이 수용될 수 있다.

촉진자는 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 촉진자는 진핵 세포에서 발현에 효과적으로 나타난 촉진자일 수 있다. 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 촉진자는 CMV 촉진자, 원숭이 바이러스 40(SV40)에서 유래된 촉진자, 예를 들어, SV40 조기 촉진자 및 SV40 후기 촉진자, 마우스 유방암 바이러스(MMTV) 촉진자, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 촉진자, 예를 들어, 소 면역결핍 바이러스(BIV) 긴 말단 반복서열(LTR) 촉진자, 몰로니 바이러스 촉진자, 조류 백혈증 바이러스(ALV) 촉진자, 사이토메갈로바이러스(CMV) 촉진자, 예를 들어, CMV 최조기 촉진자, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 촉진자, 또는 라우스 육종 바이러스(RSV) 촉진자일 수 있다. 촉진자는 또한 인간 유전자, 예를 들어, 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 인간 폴리헤드린, 또는 인간 메탈로티오나인에서 유래된 촉진자일 수 있다.

촉진자는 구성적 촉진자 또는 숙주 세포가 일부 특정 외부 자극에 노출되는 경우에만 전사를 개시하는 유도 가능한 촉진자일 수 있다. 다세포 개체의 경우, 촉진자는 또한 특정 조직 또는 기관 또는 발달 단계에 특이적일 수 있다. 촉진자는 또한 천연 또는 합성의 조직 특이적 촉진자, 예를 들어, 근육 또는 피부 특이적 촉진자일 수 있다. 이러한 촉진자의 예는 미국 특허출원 공개 번호 US20040175727호에 기재되며, 그 내용은 전문이 본 명세서 포함된다.

촉진자는 인핸서와 연관될 수 있다. 인핸서는 코딩 서열의 상류에 배치될 수 있다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 바이러스 인핸서, 예를 들어, CMV, FMDV, RSV 또는 EBV 유래의 인핸서일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 기능 증강은 미국 특허 제5,593,972호, 제5,962,428호, 및 WO94/016737호에 기재되며, 각각의 내용은 전체가 참고로 포함된다.

(6) 인트론

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 인트론이 포함될 수 있다. 각각의 인트론에는 기능적 스플라이스 공여체 및 수신체 부위가 포함될 수 있다. 인트론에는 스플라이싱 인핸서가 포함될 수 있다. 인트론에는 효율적인 스플라이싱을 위해 필요한 하나 이상의 신호가 포함될 수 있다.

(7) 전사 종결 영역

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 전사 종결 영역이 포함될 수 있다. 전사 종결 영역은 효율적인 종결을 제공하기 위해 코딩 서열의 다운스트림일 수 있다. 전사 종결 영역은 전술한 촉진자와 동일한 유전자에서 수득될 수도 있고, 또는 하나 이상의 상이한 유전자에서 수득될 수도 있다.

(8) 개시 코돈

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 개시 코돈이 포함될 수 있다. 개시 코돈은 코딩 서열의 상류에 배치될 수 있다. 개시 코돈은 코딩 서열과 같은 틀에 있을 수 있다. 개시 코돈은 효율적인 번역 개시를 위해 필요한 하나 이상의 신호, 예를 들어 비제한적으로 리보솜 결합 부위에 연합될 수 있다.

(9) 종결 코돈

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 종결 또는 정지 코돈이 포함될 수 있다. 종결 코돈은 코딩 서열의 다운스트림일 수 있다. 종결 코돈은 코딩 서열과 같은 틀에 있을 수 있다. 종결 코돈은 효율적인 번역 종결을 위해 필요한 하나 이상의 신호에 연합될 수 있다.

(10) 폴리아데닐화 신호

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 폴리아데닐화 신호가 포함될 수 있다. 폴리아데닐화 신호에는 전사체의 효율적인 폴리아데닐화를 위해 필요한 하나 이상의 신호가 포함될 수 있다. 폴리아데닐화 신호는 코딩 서열의 다운스트림에 배치될 수 있다. 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, LTR 폴리아데닐화 신호, 소 성장 호르몬(bGH) 폴리아데닐화 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리아데닐화 신호, 또는 인간 β-글로빈 폴리아데닐화 신호일 수 있다. SV40 폴리아데닐화 신호는 pCEP4 플라스미드(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)로부터의 폴리아데닐화 신호일 수 있다.

(11) 리더 서열

재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 리더 서열이 포함될 수 있다. 리더 서열은 신호 펩타이드를 코딩할 수 있다. 신호 펩타이드는 면역글로불린(Ig) 신호 펩타이드, 예를 들어 비제한적으로 IgG 신호 펩타이드 및 IgE 신호 펩타이드일 수 있다.

재조합 핵산 서열 작제물의 배열

전술한 바와 같이, 재조합 핵산 서열에는 하나 이상의 재조합 핵산 서열 작제물이 포함될 수 있으며, 여기서 각각의 재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 성분이 포함될 수 있다. 하나 이상의 성분이 상기에 상세히 기재된다. 재조합 핵산 서열 작제물에 포함되는 경우, 하나 이상의 성분은 서로에 대해 임의의 순서로 배열될 수 있다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 성분은 아래 기재된 바와 같이 재조합 핵산 서열 작제물에 배열될 수 있다.

(12) 배열 1

하나의 배열에서, 제1 재조합 핵산 서열 작제물에는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있고, 제2 재조합 핵산 서열 작제물에는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 제1 재조합 핵산 서열은 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16, 및 서열번호 22 중 하나에 대해 적어도 95% 상동성으로 아미노산 서열을 갖는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩한다. 일 실시형태에서, 제1 재조합 핵산 서열은 서열번호 3, 서열번호 9, 서열번호 15, 서열번호 21에 대해 적어도 95% 상동성인 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 제2 재조합 핵산 서열은 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 및 서열번호 24 중 하나에 대해 적어도 95% 상동성으로 아미노산 서열을 갖는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩한다. 일 실시형태에서, 제2 재조합 핵산 서열은 서열번호 5, 서열번호 11, 서열번호 17, 서열번호 23에 대해 적어도 95% 상동성으로 핵산 서열을 포함한다.

제1 재조합 핵산 서열 작제물은 벡터에 배치될 수 있다. 제2 재조합 핵산 서열 작제물은 제2 또는 별도의 벡터에 배치될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물의 벡터 내로의 배치는 하기에서 보다 상세히 기재된다.

제1 재조합 핵산 서열 작제물에는 또한 촉진자, 인트론, 전사 종결 영역, 개시 코돈, 종결 코돈, 및/또는 폴리아데닐화 신호가 포함될 수 있다. 제1 재조합 핵산 서열 작제물에는 추가로 리더 서열이 포함될 수 있고, 여기서 리더 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치된다. 따라서 리더 서열에 의해 코딩된 신호 펩타이드는 중쇄 폴리펩타이드에 펩타이드 결합에 의해 연결될 수 있다.

제2 재조합 핵산 서열 작제물에는 또한 촉진자, 개시 코돈, 종결 코돈, 및 폴리아데닐화 신호가 포함될 수 있다. 제2 재조합 핵산 서열 작제물에는 추가로 리더 서열이 포함될 수 있고, 여기서 리더 서열은 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치된다. 따라서 리더 서열에 의해 코딩된 신호 펩타이드는 경쇄 폴리펩타이드에 펩타이드 결합에 의해 연결될 수 있다.

따라서 배열 1의 하나의 예에는 VH 및 CH1이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 제1 벡터(및 이에 따른 제1 재조합 핵산 서열 작제물), 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 벡터(및 이에 따른 제2 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있다. 배열 1의 제2 예에는 VH, CH1, 힌지 영역, CH2, 및 CH3이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 제1 벡터(및 이에 따른 제1 재조합 핵산 서열 작제물), 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 벡터(및 이에 따른 제2 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있다.

(13) 배열 2

제2 배열에서, 재조합 핵산 서열 작제물에는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열은 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치될 수 있다. 대안적으로, 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치될 수 있다.

재조합 핵산 서열 작제물은 하기에서 보다 상세히 기재되는 바와 같이 벡터에 배치될 수 있다.

재조합 핵산 서열 작제물에는 프로테아제 절단 부위 및/또는 링커 서열을 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에 포함되는 경우, 프로테아제 절단 부위를 코딩하는 이종성 핵산 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치될 수 있다. 따라서 프로테아제 절단 부위는 발현 시 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 다른 폴리펩타이드로의 분리를 허용한다. 다른 실시형태에서, 링커 서열이 재조합 핵산 서열 작제물에 포함되는 경우, 링커 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치될 수 있다.

재조합 핵산 서열 작제물에는 또한 촉진자, 인트론, 전사 종결 영역, 개시 코돈, 종결 코돈, 및/또는 폴리아데닐화 신호가 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 촉진자가 포함될 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물에는 하나의 촉진자가 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열에 연관될 수 있고 제2 촉진자가 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열에 연관될 수 있도록 두 촉진자가 포함될 수 있다. 다른 실시형태에서, 재조합 핵산 서열 작제물에는 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열에 연관된 하나의 촉진자가 포함될 수 있다.

재조합 핵산 서열 작제물에는 2개의 리더 서열이 추가로 포함될 수 있고, 여기서 제1 리더 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치되고 제2 리더 서열은 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열의 상류(또는 5')에 배치된다. 따라서 제1 리더 서열에 의해 코딩된 제1 신호 펩타이드가 중쇄 폴리펩타이드에 펩타이드 결합에 의해 연결될 수 있고, 제2 리더 서열에 의해 코딩된 제2 신호 펩타이드가 경쇄 폴리펩타이드에 펩타이드 결합에 의해 연결될 수 있다.

따라서 배열 2의 하나의 예에는 VH 및 CH1이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 벡터(및 이에 따른 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있고, 여기서 링커 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치된다.

배열 2의 제2 예에는 VH 및 CH1이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 벡터(및 이에 따른 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있고, 여기서 프로테아제 절단 부위를 코딩하는 이종성 핵산 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치된다.

배열 2의 제3 예에는 VH, CH1, 힌지 영역, CH2, 및 CH3이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 벡터(및 이에 따른 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있고, 여기서 링커 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치된다.

배열 2의 제4 예에는 VH, CH1, 힌지 영역, CH2, 및 CH3이 포함되는 중쇄 폴리펩타이드 및 VL 및 CL이 포함되는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 벡터(및 이에 따른 재조합 핵산 서열 작제물)가 포함될 수 있고, 여기서 프로테아제 절단 부위를 코딩하는 이종성 핵산 서열은 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 간에 배치된다.

재조합 핵산 서열 작제물로부터의 발현

전술한 바와 같이, 재조합 핵산 서열 작제물에는 하나 이상의 성분 가운데, 중쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 코딩하는 이종성 핵산 서열이 포함될 수 있다. 따라서 재조합 핵산 서열 작제물은 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드의 발현을 촉진할 수 있다.

전술한 바와 같은 배열 1이 이용되는 경우, 제1 재조합 핵산 서열 작제물은 중쇄 폴리펩타이드의 발현을 촉진할 수 있고, 제2 재조합 핵산 서열 작제물은 경쇄 폴리펩타이드의 발현을 촉진할 수 있다. 전술한 바와 같은 배열 2가 이용되는 경우, 재조합 핵산 서열 작제물은 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 발현을 촉진할 수 있다.

예를 들어, 비제한적으로 세포, 개체 또는 포유류에서의 발현 시, 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 합성 항체로 조립될 수 있다. 특히, 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 조립으로 항원에 결합할 수 있는 합성 항체가 생성되도록 서로 상호작용할 수 있다. 다른 실시형태에서, 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 조립으로 본 명세서 기재된 바와 같이 조립되지 않은 항체에 비해 더 면역원성이 높은 합성 항체를 생성하도록 서로 상호작용할 수 있다. 다른 실시형태에서, 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 조립으로 항원에 대해 면역 반응을 야기하거나 유도할 수 있는 합성 항체를 생성하도록 서로 상호작용할 수 있다.

벡터

전술한 재조합 핵산 서열 작제물은 하나 이상의 벡터에 배치될 수 있다. 하나 이상의 벡터는 복제 기원을 함유할 수 있다. 하나 이상의 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 하나 이상의 벡터는 자가 복제 염색체외 벡터, 또는 숙주 게놈 내로 통합되는 벡터일 수 있다.

벡터는 플라스미드, 발현 벡터, 재조합 바이러스, 임의의 형태의 재조합 "네이키드 DNA" 벡터, 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. "벡터"는 세포를 감염, 형질주입, 일시적으로 또는 영구적으로 형질도입할 수 있는 핵산을 포함한다. 벡터가 네이키드 핵산, 또는 단백질 또는 지질과 복합화된 핵산일 수 있다는 것이 인지될 것이다. 벡터는 선택적으로, 바이러스 또는 박테리아 핵산 및/또는 단백질, 및/또는 막(예를 들어, 세포막, 바이러스 지질 외피 등)을 포함한다. 벡터는 레플리콘(예를 들어, RNA 레플리콘, 박테리오파지)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않으며, 여기에 DNA의 단편이 부착되고 복제될 수 있다. 이에 따라, 벡터는 RNA, 자율 자가-복제 원형 또는 선형 DNA 또는 RNA(예를 들어, 플라스미드, 바이러스, 등, 미국 특허 제5,217,879호 참조)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않고, 발현 및 비-발현 플라스미드 둘 모두를 포함한다. 일부 실시형태에서, 벡터는 선형 DNA, 효소 DNA 또는 합성 DNA를 포함한다. 재조합 미생물 또는 세포 배양물이 "발현 벡터"를 숙주화하는 것으로 기술되는 경우에, 이는 염색체외 원형 및 선형 DNA 및 숙주 염색체(들) 내에 도입된 DNA 둘 모두를 포함한다. 벡터가 숙주 세포에 의해 유지되는 경우에, 벡터는 자율 구조(autonomous structure)로서 유사분열 동안 세포에 의해 안정적으로 복제될 수 있거나 숙주 게놈 내에 도입된다.

하나 이상의 벡터는 이종성 발현 작제물일 수 있고, 이는 일반적으로 표적 세포 내로 특정 유전자를 도입하기 위해 이용되는 플라스미드이다. 일단 발현 벡터가 세포 내로 들어가면, 재조합 핵산 서열 작제물에 의해 코딩되는 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드가 세포-전사 및 번역 기전 리보솜 복합체에 의해 생성된다. 하나 이상의 벡터는 다량의 안정한 메신저 RNA, 그리고 이에 따라 단백질을 발현할 수 있다.

(14) 발현 벡터

하나 이상의 벡터는 원형 플라스미드 또는 선행 핵산일 수 있다. 원형 플라스미드 및 선형 핵산은 적절한 대상체 세포에서 특정 뉴클레오타이드 서열의 발현을 지시할 수 있다. 재조합 핵산 서열 작제물을 포함하는 하나 이상의 벡터는 키메라일 수 있다, 즉 그 성분의 적어도 하나가 그 다른 성분의 적어도 하나에 대해 이종성이다.

(15) 플라스미드

하나 이상의 벡터는 플라스미드일 수 있다. 플라스미드는 재조합 핵산 서열 작제물로 세포를 형질주입하기 위해 유용할 수 있다. 플라스미드는 대상체 내로 재조합 핵산 서열 작제물을 도입하는데 유용할 수 있다. 플라스미드는 또한 조절 서열을 포함할 수 있고, 이는 플라스미드가 투여되는 세포에서 유전자 발현에 매우 적합할 수 있다.

플라스미드는 또한 염색체외로 플라스미드를 유지하고 세포에서 복수의 플라스미드 사본을 생산하기 위해 포유류 복제 기원을 포함할 수 있다. 플라스미드는 Invitrogen(캘리포니아주 샌디에이고 소재)의 pVAX1, pCEP4 또는 pREP4일 수 있고, 이는 엡스타인 바 바이러스 복제 기원 및 핵 항원 EBNA-1 코딩 영역을 포함할 수 있고, 이는 통합 없이 고사본 에피솜 복제를 생산할 수 있다. 플라스미드 골격은 pAV0242일 수 있다. 플라스미드는 복제 결함 아데노바이러스 유형 5(Ad5) 플라스미드일 수 있다.

플라스미드는 pSE420(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있고, 이는 대장균(E.coli)에서의 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 플라스미드는 또한 pYES2(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있으며, 이는 효모의 사카로마이세스 세레비시애 균주에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 플라스미드는 또한 MAXBAC™ 완전 배큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있고, 이는 곤충 세포에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 플라스미드는 또한 pcDNAI 또는 pcDNA3(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있고, 이는 포유류 세포, 예를 들어, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다.

(16) RNA

일 실시형태에서, 핵산은 RNA 분자이다. 일 실시형태에서, RNA 분자는 본 명세서에 기재된 DNA 서열로부터 전사된다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, RNA 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23. 또 다른 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27, 또는 이의 변이체 또는 이의 단편 중 적어도 하나에 대해 적어도 90% 상동성으로 DNA 서열에 의해 코딩된다. 이에 따라, 일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 DMAb를 코딩하는 RNA 분자를 제공한다. RNA는 플러스-가닥일 수 있다. 이에 따라, 일부 실시형태에서, RNA 분자는 임의의 개재 복제 단계, 예를 들어, 역전사를 필요로 하지 않으면서 세포에 의해 번역될 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자는 5' 캡(예를 들어, 7-메틸구아노신)을 가질 수 있다. 이러한 캡은 RNA의 생체내 번역을 향상시킬 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자의 5' 뉴클레오타이드는 5' 트리포스페이트 기를 가질 수 있다. 캡핑된 RNA에서, 이러한 것은 5'-대-5' 브리지를 통해 7-메틸구아노신에 연결될 수 있다. RNA 분자는 3' 폴리-A 테일을 가질 수 있다. 이는 또한, 이의 3' 말단 부근에 폴리-A 폴리머라제 인식 서열(예를 들어, AAUAAA)을 포함할 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자는 단일-가닥일 수 있다. 본 발명에 유용한 RNA 분자는 합성 RNA를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, RNA 분자는 네이키드 RNA 분자이다. 일 실시형태에서, RNA 분자는 벡터 내에 포함된다.

일 실시형태에서, RNA는 5' 및 3' UTR을 가진다. 일 실시형태에서, 5' UTR은 길이가 0 내지 3000개의 뉴클레오타이드이다. 코딩 영역에 첨가될 5' 및 3' UTR 서열의 길이는 UTR의 상이한 영역으로 어닐링되는 PCR에 대한 프라이머 설계를 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는 상이한 방법에 의해 변경될 수 있다. 이 접근을 이용하여, 당업자는 전사된 RNA의 형질감염 후 최적의 번역 효율을 달성하는 데 필요한 5' 및 3' UTR 길이를 변형시킬 수 있다.

5' 및 3' UTR은 관심 대상의 유전자에 대한 천연 유래, 내인성 5' 및 3' UTR일 수 있다. 대안적으로, 관심 대상의 유전자에 대해 내인성이 아닌 UTR 서열은 UTR 서열을 정방향 및 역방향 프라이머 내로 혼입함으로써 또는 주형의 임의의 다른 변형에 의해 첨가될 수 있다. 관심 대상의 유전자에 대해 내인성이 아닌 UTR 서열의 사용은 RNA의 안정성 및/또는 번역 효율을 변형시키는 데 유용할 수 있다. 예를 들어, 3' UTR 서열에서 AU-풍부 요소가 RNA의 안정성을 감소시킬 수 있다는 것은 알려져 있다. 따라서, 3' UTR는 당업계에 잘 공지된 UTR의 특성에 기반하여 전사된 RNA의 안정성을 증가시키도록 선택되거나 또는 설계될 수 있다.

일 실시형태에서, 5' UTR은 내인성 유전자의 코작 서열을 함유할 수 있다. 대안적으로, 관심 대상의 유전자에 대해 내인성이 아닌 5' UTR이 상기 기재한 바와 같은 PCR에 의해 첨가될 때, 공통 코작 서열은 5' UTR 서열을 첨가함으로써 재설계될 수 있다. 코작 서열은 일부 RNA 전사체의 번역 효율을 증가시킬 수 있지만, 모든 RNA에 대해 효율적인 번역을 가능하게 하는데 필요한 것으로 나타나지 않는다. 다수의 RNA에 대해 코작 서열에 대한 필요는 당업계에 공지되어 있다. 다른 실시형태에서, 5' UTR은 RNA 게놈이 세포에서 안정성인 RNA 바이러스로부터 유래될 수 있다. 다른 실시형태에서, 다양한 뉴클레오타이드 유사체는 RNA의 엑소뉴클레아제 분해를 지연시키기 위해 3' 또는 5' UTR에서 사용될 수 있다.

일 실시형태에서, RNA는 리보솜 결합, 번역 개시 및 세포에서 RNA의 안정성을 결정하는 5' 말단 및 3' 폴리(A) 꼬리 둘 다에 캡을 가진다.

일 실시형태에서, RNA는 뉴클레오사이드-변형 RNA이다. 뉴클레오사이드-변형 RNA는 예를 들어, 증가된 안정성, 선천성 면역이 낮음 또는 없음 및 증강된 번역을 포함하는, 비변형 RNA 이상으로 특정 이점을 가진다.

(17) 원형 및 선형 벡터

하나 이상의 벡터는 원형 플라스미드일 수 있고, 이는 세포 게놈 내로의 통합에 의해 표적 세포를 형질전환시키거나 염색체외(예를 들어, 복제 기원이 있는 자가 복제 플라스미드)로 존재할 수 있다. 벡터는 pVAX, pcDNA3.0, 또는 provax, 또는 재조합 핵산 서열 작제물에 의해 코딩된 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.

또한 선형 핵산, 또는 선형 발현 카세트("LEC")가 본 명세서 제공되며, 이는 전기천공을 통해 대상체에 효율적으로 전달되고 핵산 서열 작제물에 의해 코딩된 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 발현할 수 있다. LEC는 임의의 인산염 골격이 없는 임의의 선형 DNA일 수 있다. LEC는 임의의 항생제 내성 유전자 및/또는 인산염 골격을 함유하지 않을 수 있다. LEC는 원하는 유전자 발현에 관련되지 않은 다른 핵산 서열을 함유하지 않을 수 있다.

LEC는 선형화될 수 있는 임의의 플라스미드에서 유래될 수 있다. 플라스미드는 재조합 핵산 서열 작제물에 의해 코딩된 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 발현할 수 있다. 플라스미드는 pNP(푸에르토 리코/34) 또는 pM2(뉴 칼레도니아/99)일 수 있다. 플라스미드는 WLV009, pVAX, pcDNA3.0, 또는 provax, 또는 재조합 핵산 서열 작제물에 의해 코딩된 중쇄 폴리펩타이드 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.

LEC는 pcrM2일 수 있다. LEC는 pcrNP일 수 있다. pcrNP 및 pcrMR은 각각 pNP(푸에르토 리코/34) 및 pM2(뉴 칼레도니아/99)에서 유래될 수 있다.

(18) 바이러스 벡터

일 실시형태에서, 세포에 본 발명의 핵산을 전달할 수 있는 바이러스 벡터가 본 명세서 제공된다. 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al. (2001), 및 Ausubel et al. (1997)]에 그리고 다른 바이러스학 및 분자 생물학 매뉴얼에 기술되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 렌티바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 복제 기능의 기원, 촉진자 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위, 및 하나 이상의 선택 가능한 마커를 함유한다(예를 들어, WO 01/96584호; WO 01/29058호; 및 미국 특허 제6,326,193호). 바이러스 벡터, 및 특히 레트로바이러스 벡터는 포유동물, 예를 들어 인간 세포에 유전자를 삽입하기 위한 가장 널리 사용된 방법이 된다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 I, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스, 등으로부터 유도될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,350,674호 및 제5,585,362호 참조).

(19) 벡터의 제조방법

재조합 핵산 서열 작제물이 배치된 하나 이상의 벡터의 제조 방법이 본 명세서 제공된다. 최종 서브클로닝 단계 후, 벡터는 당해 분야에 공지된 방법을 이용하여 대규모 발효 탱크에서 세포 배양에 접종하기 위해 이용될 수 있다.

다른 실시형태에서, 최종 서브클로닝 단계 후, 벡터는 하나 이상의 전기천공(EP) 장치와 함께 이용될 수 있다. EP 장치는 하기에서 보다 상세히 기재된다.

하나 이상의 벡터는 공지된 장치 및 기법의 조합을 이용하여 제형화되거나 제조될 수 있지만, 바람직하게는 2007년 5월 23일자로 출원된, 라이센스 받고 공동 계류 중인 미국 가출원 제60/939,792호에 기재된 플라스미드 제조 기법을 이용하여 제조된다. 일부 예에서, 본 명세서 기재된 DNA 플라스미드는 10㎎/㎖ 이상의 농도로 제형화될 수 있다. 제조 기법에는 또한 미국 출원 제60/939792호에 기재된 것에 더하여, 2007년 7월 3일자로 허여된 라이센스 받은 특허, 미국 특허 제7,238,522호에 기재된 것들을 포함하는 당업자에게 일반적으로 공지된 다양한 장치 및 프로토콜이 포함되거나 도입된다. 상기 인용된 출원 및 특허인, 미국 출원 제60/939,792호 및 미국 특허 제7,238,522호는 각각 이들의 전문이 본 명세서 포함된다.

4. 항체

전술한 바와 같이, 재조합 핵산 서열은 항체, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩할 수 있다. 항체는 항원에 결합하거나 이와 반응할 수 있고, 이는 하기에서 보다 상세히 기재된다.

항체는 CDR에 대한 지지를 제공하고 서로에 대해 CDR의 공간적 관계를 정의하는 중쇄 및 경쇄 틀("FR") 세트 사이에 각각 배치된 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역("CDR") 세트를 포함할 수 있다. CDR 세트는 중쇄 또는 경쇄 V 영역의 3개의 초가변 영역을 함유할 수 있다. 중쇄 또는 경쇄의 N-말단에서 시작하여, 이들 영역은 각각 "CDR1", "CDR2" 및 "CDR3"으로 표시된다. 따라서 항원-결합 부위에는 중쇄 또는 경쇄 V 영역 각각으로부터의 CDR 세트를 포함하는 6개의 CDR이 포함될 수 있다.

단백분해 효소 파파인은 우선적으로 IgG 분자를 절단하여 몇몇 단편을 생성하며, 그 중 둘(F(ab) 단편)은 각각 온전한 항원-결합 부위가 포함되는 공유 이종이량체를 포함한다. 효소 펩신은 IgG 분자를 절단하여 F(ab')₂ 단편을 포함하는 몇몇 단편을 제공할 수 있고, 이는 두 항원-결합 부위를 모두 포함한다. 따라서 항체는 Fab 또는 F(ab')₂일 수 있다. Fab에는 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드가 포함될 수 있다. Fab의 중쇄 폴리펩타이드에는 VH 영역 및 CH1 영역이 포함될 수 있다. Fab의 경쇄에는 VL 영역 및 CL 영역이 포함될 수 있다.

항체는 면역글로불린(Ig)일 수 있다. Ig는, 예를 들어 IgA, IgM, IgD, IgE, 및 IgG일 수 있다. 면역글로불린에는 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드가 포함될 수 있다. 면역글로불린의 중쇄 폴리펩타이드에는 VH 영역, CH1 영역, 힌지 영역, CH2 영역, 및 CH3 영역이 포함될 수 있다. 면역글로불린의 경쇄 폴리펩타이드에는 VL 영역 및 CL 영역이 포함될 수 있다.

항체는 다클론성 또는 단클론성 항체일 수 있다. 항체는 키메라 항체, 단일쇄 항체, 친화도 성숙된 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 또는 완전 인간 항체일 수 있다. 인간화된 항체는 비인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 틀 영역을 갖고 원하는 항원에 결합하는 비인간 종으로부터의 항체일 수 있다.

항체는 하기에서 더욱 상세히 기술되는 바와 같은 이중특이적 항체일 수 있다. 항체는 또한 하기에 더욱 상세히 기술되는 바와 같은 이중기능성 항체일 수 있다.

전술한 바와 같이, 항체는 대상체에 조성물의 투여 시에 대상체에서 생성될 수 있다. 항체는 대상체 내에 반감기를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 대상체 내에서 이의 반감기를 연장하거나 단축시키기 위해 변형될 수 있다. 이러한 변형은 하기에서 더욱 상세히 기술된다.

항체는 하기에서 더욱 상세히 기술되는 바와 같이 탈푸코실화될 수 있다.

일 실시형태에서, 항체는 보렐리아 종 항원에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 OspA에 결합한다.

항체는 하기에서 더욱 상세히 기술되는 바와 같이 항원과 관련된 질환의 항체-의존 향상(ADE)을 감소 또는 예방하기 위해 변형될 수 있다.

이중특이적 항체

재조합 핵산 서열은 이중특이적 항체, 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩할 수 있다. 이중특이적 항체는 2개의 항원, 예를 들어, 하기에서 더욱 상세히 기술되는 항원들 중 2개와 결합 또는 반응할 수 있다. 이중특이적 항체는 본 명세서 기술된 항체 중 2개의 단편으로 이루어질 수 있으며, 이에 의해, 이중 특이적 항체를 2개의 요망되는 표적 분자와 결합 또는 반응시킬 수 있으며, 이는 하기에서 더욱 상세히 기술되는 항원, 수용체를 위한 리간드를 포함하는 리간드, 수용체 상의 리간드-결합 부위를 포함하는 수용체, 리간드-수용체 복합물, 및 마커, 예를 들어 암 마커를 포함할 수 있다.

본 발명은 특히 유리한 특성, 예컨대 생산성, 안정성, 결합 친화도, 생물학적 활성, 특정 T 세포의 특이적 표적화, 표적화 효율 및 감소된 독성을 갖는, 제1 표적에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위 및 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위를 포함하는 신규한 이중특이적 항체를 제공한다. 일부 예에서, 이중특이적 항체가 있되, 이중특이적 항체는 고친화도로 제1 표적에 결합하고 그리고 저친화도로 제2 표적에 결합한다. 다른 예에서, 이중특이적 항체가 있되, 이중특이적 항체는 저친화도로 제1 표적에 결합하고 그리고 고친화도로 제2 표적에 결합한다. 다른 예에서, 이중특이적 항체가 있되, 이중특이적 항체는 목적으로 하는 친화도로 제1 표적에 결합하고 그리고 요망되는 친화도로 제2 표적에 결합한다.

일 실시형태에서, 이중특이적 항체는 a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및 b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 제2 중쇄 및 제2 경쇄를 포함하는 2가 항체이다.

본 발명에 따른 이중특이적 항체 분자는 임의의 목적으로 하는 특이성의 2개의 결합 부위를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 결합 부위 중 하나는 종양 관련 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, Fab 단편에 포함된 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 특이적인 결합 부위이다. 일부 실시형태에서, 단일쇄 Fv 단편에 포함된 결합 부위는 OspA 항원과 같은 보렐리아 종 항원에 특이적인 결합 부위이다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 분자의 결합 부위 중 하나는 T-세포 특이적 수용체 분자 및/또는 자연 살해 세포(NK 세포) 특이적 수용체 분자에 결합할 수 있다. T-세포 특이적 수용체는 T 세포가 항원-제시 세포 또는 APC로 불리는 다른 세포에 의해 제시된 에피토프/항원에 결합하고 그리고 추가적인 신호가 존재한다면, 이런 항원에 의해 활성화되고 반응하도록 허용하는, 소위 "T-세포 수용체"(TCR)이다. T 세포 수용체는 천연 유래 면역글로불린의 Fab 단편과 유사한 것으로 알려져 있다. 이는 일반적으로 α- 및 β-쇄를 포함하는 1가이고, 일부 실시형태에서, γ-쇄 및 δ-쇄를 포함한다(상기 참조). 따라서, 일부 실시형태에서 TCR은 TCR(알파/베타)이고, 일부 실시형태에서, 이는 TCR(감마/델타)이다. T 세포 수용체는 CD3 T-세포 공수용체와 복합체를 형성한다. CD3은 단백질 복합체이고, 4개의 별개의 쇄로 구성된다. 포유류에서, 복합체는 CD3γ 쇄, CD36 쇄 및 2개의 CD3E 쇄를 함유한다. 이들 쇄는 T 림프구에서 활성화 신호를 생성하기 위해 T 세포 수용체(TCR) 및 ζ-쇄로서 알려진 분자와 회합된다. 따라서, 일부 실시형태에서, T-세포 특이적 수용체는 CD3 T-세포 공수용체이다. 일부 실시형태에서, T-세포 특이적 수용체는 또한 T 세포 상에서 발현되는 단백질인 CD28이다. CD28은 T 세포 활성화에 필요한 공자극 신호를 제공할 수 있다. CD28은 T-세포 증식 및 생존, 사이토카인 생성, 및 T-헬퍼 2형 발생에서 중요한 역할을 한다. 또한 T-세포 특이적 수용체의 추가적인 예는 Ox40로도 칭해지는 CD134이다. CD134/OX40은 활성화 다음에 24 내지 72시간 후에 발현되고, 2차 공자극 분자를 정하도록 취해질 수 있다. T-세포 수용체의 다른 예는 항원 제시 세포(APC) 상에서 4-1 BB-리간드에 결합할 수 있는 4-1 BB이고, 이에 의해 T 세포에 대한 공자극 신호가 생성된다. T-세포 상에서 주로 발견되는 수용체의 다른 예는 낮은 수준으로 B 세포 상에서 또한 발견되는 CD5이다. T 세포 기능을 변형시키는 수용체의 추가적인 예는 다른 세포의 표면 상에서 발현되는 Fas-리간드에 의해 세포자멸사 신호전달을 매개하는, Fas 수용체로서도 알려진 CD95이다. 남아있는 T 림프구에서 TCR/CD3-유도 신호전달 경로를 조절하는 CD95가 보고되었다.

NK 세포 특이적 수용체 분자의 예는 저친화도 Fc 수용체 및 NKG2D인 CD16이다. T 세포와 자연 살해(NK) 세포 둘 다의 표면 상에 존재하는 수용체 분자의 예는 CD2이고, CD2-슈퍼패밀리의 추가적인 구성원이다. CD2는 T 및 NK 세포 상에서 공자극 분자로서 작용할 수 있다.

일부 실시형태에서, 항체 분자의 제1 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합하고, 제2 결합 부위는 T 세포 특이적 수용체 분자 및/또는 자연 살해(NK) 세포 특이적 수용체 분자에 결합한다.

일부 실시형태에서, 항체 분자의 제1 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합하고, 제2 결합 부위는 T 세포 특이적 수용체 분자 및/또는 자연 살해(NK) 세포 특이적 수용체 분자에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체 분자의 제1 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합하고, 제2 결합 부위는 CD3 중 하나, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5 및 CD95에 결합한다.

일부 실시형태에서, 항체 분자의 제1 결합 부위는 T 세포 특이적 수용체 분자 및/또는 자연 살해(NK) 세포 특이적 수용체 분자에 결합하고, 제2 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체의 제1 결합 부위는 T 세포 특이적 수용체 분자 및/또는 자연 살해(NK) 세포 특이적 수용체 분자에 결합하고, 제2 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체의 제1 결합 부위는 CD3 중 하나, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5 및 CD95에 결합하고, 제2 결합 부위는 보렐리아 종 항원에 결합한다. 일 실시형태에서, 보렐리아 종은 OspA이다.

이중기능성 항체

재조합 핵산 서열은 이중기능성 항체, 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩할 수 있다. 이중기능성 항체는 하기에 기술된 항체와 결합 또는 반응할 수 있다. 이중기능성 항체는 또한, 항원의 인식 및 항원에 대한 결합을 넘어서 항체에 대한 추가적인 기능성을 부여하기 위해 변형될 수 있다. 이러한 변형은 인자 H 또는 이의 단편에 대한 커플링을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 인자 H는 상보체 활성화의 가용성 조절제이고, 이에 따라, 상보체-매개 용해(CML)를 통해 면역 반응에 기여할 수 있다.

항체 반감기의 연장

위에서 기술된 바와 같이, 항체는 대상체에서 항체의 반감기를 연장하거나 단축시키기 위해 변형될 수 있다. 변형은 대상체의 혈청에서 항체의 반감기를 연장하거나 단축시킬 수 있다.

변형은 항체의 불변 영역에 존재할 수 있다. 변형은 하나 이상의 아미노산 치환을 함유하지 않는 항체의 반감기와 비교하여 항체의 반감기를 연장하는 항체의 불변 영역에서의 하나 이상의 아미노산 치환일 수 있다. 변형은 하나 이상의 아미노산 치환을 함유하지 않는 항체의 반감기와 비교하여 항체의 반감기를 연장하는 항체의 CH2 도메인에서의 하나 이상의 아미노산 치환일 수 있다.

일부 실시형태에서, 불변 영역에서의 하나 이상의 아미노산 치환은 불변 영역에서의 메티오닌 잔기를 티로신 잔기로, 불변 영역에서의 세린 잔기를 트레오닌 잔기로, 불변 영역에서의 트레오닌 잔기를 글루타메이트 잔기로, 또는 이들의 임의의 조합으로 대체하는 것을 포함할 수 있으며, 이에 의해 항체의 반감기를 연장할 수 있다.

다른 실시형태에서, 불변 영역에서의 하나 이상의 아미노산 치환은 CH2 도메인에서의 메티오닌을 티로신 잔기로, CH2 도메인에서의 세린 잔기를 트레오닌 잔기로, CH2 도메인에서의 트레오닌 잔기를 글루타메이트 잔기로, 또는 이들의 임의의 조합으로 대체하는 것을 포함할 수 있으며, 이에 의해, 항체의 반감기를 연장할 수 있다.

탈푸코실화

재조합 핵산 서열은 푸코실화되지 않은 항체(즉, 탈푸코실화 항체 또는 비-푸코실화 항체), 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이들의 조합을 코딩할 수 있다. 푸코실화는 분자에 당 푸코스의 첨가, 예를 들어, N-글리칸, O-글리칸 및 인지질에 푸코스의 부착을 포함한다. 이에 따라, 탈푸코실화된 항체에서, 푸코스는 불변 영역의 탄수화물 사슬에 부착되지 않는다. 또한, 이러한 푸코실화의 결여는 푸코실화된 항체와 비교하여 항체에 의해 FcγRIIIa 결합 및 항체 지향 세포 독성(ADCC) 활성을 개선시킬 수 있다. 이에 따라, 비-푸코실화된 항체는 푸코실화된 항체와 비교하여 증가된 ADCC 활성을 나타낼 수 있다.

항체는 항체의 푸코실화를 예방 또는 억제하기 위해 변형될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 변형된 항체는 비변형된 항체와 비교하여 증가된 ADCC 활성을 나타낼 수 있다. 변형은 중쇄, 경쇄, 또는 이들의 조합에서 이루어질 수 있다. 변형은 중쇄에서의 하나 이상의 아미노산 치환, 경쇄에서의 하나 이상의 아미노산 치환, 또는 이들의 조합일 수 있다.

a. 감소된 ADE 반응

항체는 항원과 관련된 질환의 항체-의존 향상(ADE)을 감소 또는 예방하기 위해 변형될 수 있지만, 여전히 항원을 중화시킨다.

일부 실시형태에서, 항체는 FcγR1a에 대한 항체의 결합을 감소 또는 예방하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하기 위해 변형될 수 있다. 하나 이상의 아미노산 치환은 항체의 불변 영역에 존재할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 치환은 항체의 불변 영역에서 류신 잔기를 알라닌 잔기로 대체하는 것을 포함할 수 있으며, 즉, 또한, 본 명세서에서 LA, LA 돌연변이 또는 LA 치환으로서 알려져 있다. 하나 이상의 아미노산 치환은 항체의 불변 영역에서, 2개의 류신 잔기를 각각 알라닌 잔기로 대체하는 것을 포함할 수 있고, 이는 또한, 본 명세서에서 LALA, LALA 돌연변이, 또는 LALA 치환으로서 알려져 있다. LALA 치환의 존재는 FcγR1a에 대한 결합으로부터 항체를 예방 또는 차단할 수 있으며, 이에 따라, 변형된 항체는 항원과 관련된 질환의 ADE를 향상 또는 야기시키지 않지만, 여전히 항원을 중화시킨다.

5. 항원

합성 항체는 항원 또는 이의 단편 또는 변이체에 대한 것이다. 항원은 핵산 서열, 아미노산 서열, 또는 다당류 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 다당류는 핵산 코딩된 다당류일 수 있다.

항원은 박테륨으로부터 유래될 수 있다. 항원은 박테리아 감염과 관련될 수 있다. 일 실시형태에서, 항원은 박테리아 발병인자일 수 있다.

일 실시형태에서, 본 발명의 합성 항체는 2 이상의 항원을 표적화한다. 일 실시형태에서, 이중특이적 항체의 적어도 하나의 항원은 본 명세서에 기재된 항원으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 2 이상의 항원은 본 명세서에 기재된 항원으로부터 선택된다.

박테리아 항원

박테리아 항원은 박테리아 항원 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 박테륨은 스피로헤타 문으로부터 유래될 수 있다. 박테륨은 질환 원인 박테륨일 수 있다. 박테륨은 보렐리아 종 박테륨일 수 있다. 박테륨은 보렐리아 부르그도르페리, 보렐리아 루시타니애(Borrelia lusitaniae), 보렐리아 아프젤리(Borrelia afzelii), 보렐리아 비세티(Borrelia bissettii), 보렐리엘라 바바리엔시스(Borreliella bavariensis), 보렐리아 칠렌시스(Borrelia chilensis), 보렐리아 가리니(Borrelia garinii), 보렐리아 발라시아나(Borrelia valaisiana), 보렐리아 스피엘마니(Borrelia spielmanii), 및 보렐리아 피란덴시스(Borrelia finlandensis)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 하나 이상의 보렐리아 종 박테륨일 수 있다.

박테리아 항원은 보렐리아 종 항원 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체일 수 있다. 보렐리아 종 항원은 보렐리아 종이 복제 또는 생존하도록 허용하는 박테리아 생성물로부터 유래될 수 있다. 보렐리아 종이 복제 또는 생존하도록 허용하는 박테리아 생성물은 구조적 성분, 효소 및 독소를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 생성물은 지방단백질, 외부 표면 단백질, 척추동물 숙주 내에서 감염도 또는 지속성에 필요한 생성물, 및 운동성 및 주화성에 연루된 생성물 중 하나일 수 있다.

일 실시형태에서, 항원은 지방단백질(예를 들어, BptA)이다. 일 실시형태에서, 항원은 외부 표면 단백질(예를 들어, OspA, OspB 및 OspC)이다. 일 실시형태에서, 항원은 척추동물 숙주 내에서 감염도 또는 지속성에 필요한 생성물이다(예를 들어, PncA, DbpA, DbpB, Bgp, P66 및 VlsE)이다.

6. 조성물의 부형제 및 다른 성분

조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 기능적 분자, 예를 들어, 운반체, 담체, 또는 희석제일 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 형질주입 촉진제일 수 있고, 여기에는 표면 활성제, 예를 들어, 면역 자극 복합체(immune-stimulating complexes: ISCOMS), 프로인트 불완전 보강제, LPS 유사체, 예를 들어, 모노포스포릴 지질 A, 무라밀 펩타이드, 퀴논 유사체, 소포체, 예를 들어, 스쿠알렌 및 스쿠알렌, 히알루론산, 지질, 리포좀, 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 다중 음이온, 다중 양이온, 또는 나노입자, 또는 다른 공지된 형질주입 촉진제가 포함될 수 있다.

형질주입 촉진제는 다중 음이온, 다중 양이온, 예를 들어, 폴리-L-글루타메이트(LGS), 또는 지질이다. 형질주입 촉진제는 폴리-L-글루타메이트이고, 폴리-L-글루타메이트는 6㎎/㎖ 미만의 농도로 조성물에 존재할 수 있다. 형질주입 촉진제에는 또한 표면 활성제, 예를 들어, 면역-자극 복합체(ISCOMS), 프로인트 불완전 보강제, LPS 유사체, 예를 들어, 모노포스포릴 지질 A, 무라밀 펩타이드, 퀴논 유사체 및 소포체, 예를 들어, 스쿠알렌 및 스쿠알렌이 포함될 수 있고, 히알루론산이 또한 조성물과 함께 투여되어 이용될 수 있다. 조성물에는 또한 형질주입 촉진제, 예를 들어, 지질, 리포좀, 예를 들어, 레시틴 리포좀 또는 당해 분야에 공지된 다른 리포좀, 예를 들어, DNA-리포좀 혼합물(예를 들어 WO9324640 참고), 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 다중 음이온, 다중 양이온, 또는 나노입자, 또는 다른 공지된 형질주입 촉진제가 포함될 수 있다. 형질주입 촉진제는 다중 음이온, 다중 양이온, 예를 들어, 폴리-L-글루타메이트(LGS), 또는 지질이다. 백신 중 형질주입 제제의 농도는 4㎎/㎖ 미만, 2㎎/㎖ 미만, 1㎎/㎖ 미만, 0.750㎎/㎖ 미만, 0.500㎎/㎖ 미만, 0.250㎎/㎖ 미만, 0.100㎎/㎖ 미만, 0.050㎎/㎖ 미만, 또는 0.010㎎/㎖ 미만이다.

조성물은 전문이 참고로 도입되는 1994년 4월 1일자로 출원된 미국 일련번호 제021,579호에 기재된 바와 같은 유전적 촉진제를 추가로 포함할 수 있다.

조성물은 약 1나노그램 내지 100밀리그램; 약 1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 또는 바람직하게는 약 0.1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 또는 보다 바람직하게는 약 1밀리그램 내지 약 2밀리그램인 양으로 DNA를 포함할 수 있다. 일부 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은 약 5나노그램 내지 약 1000마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부 바람직한 실시형태에서, 조성물은 약 10나노그램 내지 약 800마이크로그램의 DNA를 함유할 수 있다. 일부 바람직한 실시형태에서, 조성물은 약 0.1 내지 약 500마이크로그램의 DNA를 함유할 수 있다. 일부 바람직한 실시형태에서, 조성물은 약 1 내지 약 350마이크로그램의 DNA를 함유할 수 있다. 일부 바람직한 실시형태에서, 조성물은 약 25 내지 약 250마이크로그램, 약 100 내지 약 200마이크로그램, 약 1나노그램 내지 100밀리그램; 약 1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 약 0.1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 약 1밀리그램 내지 약 2밀리그램, 약 5나노그램 내지 약 1000마이크로그램, 약 10나노그램 내지 약 800마이크로그램, 약 0.1 내지 약 500마이크로그램, 약 1 내지 약 350마이크로그램, 약 25 내지 약 250마이크로그램, 약 100 내지 약 200마이크로그램의 DNA를 함유할 수 있다.

조성물은 사용될 투여 경로에 따라 제형화될 수 있다. 주사 가능한 약학 조성물은 멸균이며, 발열원이 없고 입자가 없을 수 있다. 등장성 제형물 또는 용액이 이용될 수 있다. 등장성을 위한 첨가제에는 나트륨 클로라이드, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨, 및 락토오스가 포함될 수 있다. 조성물은 혈관수축 제제를 포함할 수 있다. 등장성 용액에는 인산염 완충 식염수가 포함될 수 있다. 조성물은 젤라틴 및 알부민을 포함하는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. LGS 또는 다중 양이온 또는 다중 음이온을 포함하는 안정화제는 제형이 연장된 시기 동안 실온 또는 상온에서 안정하도록 할 수 있다.

7. 합성 항체를 생산하는 방법

본 발명은 또한 합성 항체의 생성 방법에 대한 것이다. 방법에는 하기에서 보다 상세히 기재된 전달 방법을 이용함으로써 이를 필요로 하는 대상체에게 조성물을 투여하는 단계가 포함될 수 있다. 따라서 합성 항체는 대상체에 대한 조성물의 투여 시 생체 내 또는 대상체에서 생성된다.

방법에는 또한 하나 이상의 세포 내로 조성물을 투여하는 단계가 포함될 수 있고, 이에 따라 합성 항체는 하나 이상의 세포에서 생성되거나 생산될 수 있다. 방법에는 하나 이상의 조직, 예를 들어 비제한적으로 피부 및 근육 내로 조성물을 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있고, 이에 따라 합성 항체는 하나 이상의 조직에서 생성되거나 생산될 수 있다.

8. 항체에 대한 동정 또는 스크리닝 방법

본 발명은 추가로 전술한 항원에 반응성이거나 이에 결합하는 전술한 항체의 확인 또는 스크리닝 방법에 관한 것이다. 항체의 확인 또는 스크리닝 방법은 항체를 확인하거나 스크리닝하기 위해 당업자에게 공지된 방법론으로 항원을 이용할 수 있다. 이러한 방법론에는 비제한적으로 라이브러리(예를 들어, 파지 디스플레이)로부터의 항체 선택 및 동물의 면역화 이후 항체의 단리 및/또는 정제가 포함될 수 있다.

9. 조성물의 전달 방법

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에 조성물을 전달하는 방법에 관한 것이다. 전달 방법에는 대상체에게 조성물을 투여하는 단계가 포함될 수 있다. 투여에는 비제한적으로 생체 내 전기천공을 포함하는 및 포함하지 않는 DNA 주입, 리포좀 매개된 전달 및 나노입자 촉진된 전달이 포함될 수 있다.

조성물 전달을 수신하는 포유류는 인간, 영장류, 비인간 영장류, 젖소, 육우, 양, 염소, 영양, 유럽들소, 물소, 유럽들소, 소과, 사슴, 고슴도치, 코끼리, 라마, 알파카, 마우스, 래트 및 닭일 수 있다.

조성물은 경구, 비경구, 설하, 경피, 직장, 경점막, 국소, 흡입을 통해, 협측 투여를 통해, 흉막내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하, 근육내, 비강내 경막내, 및 관절내 또는 이들의 조합을 포함하는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다. 수의학적 용도를 위해, 조성물은 정상적인 수의학적 관례에 따라 적합하게 허용 가능한 제형으로 투여될 수 있다. 수의사는 특정 동물에 가장 적절한 투여 방식 및 투여 경로를 쉽게 결정할 수 있다. 조성물은 전통적인 주사기, 무바늘 주입 장치, "미세발사체 충격 유전자 총(microprojectile bombardment gene gun)", 또는 다른 물리적 방법, 예를 들어, 전기천공("EP"), "수력학적 방법", 또는 초음파에 의해 투여될 수 있다.

전기천공

전기천공을 통한 조성물의 투여는 가역적 구멍을 세포막에 형성하기 위해 효과적인 에너지 자극을 원하는 포유류 조직으로 전달하도록 배치될 수 있는 전기천공 장치를 이용해서 달성될 수 있고, 바람직한 에너지 자극은 사용자에 의해 사전 설정된 전류 입력과 유사한 정전류이다. 전기천공 장치는 전기천공 성분 및 전극 어셈블리 또는 핸들 어셈블리를 포함한다. 전기천공 성분에는 하기를 포함하는 전기천공 장치의 다양한 요소의 하나 이상이 포함되고 도입될 수 있다: 컨트롤러, 전류 파형 생성기, 임피던스 평가기, 파형 로거, 입력 요소, 상태 보고 요소, 소통 포트, 메모리 성분, 전원 및 전력 스위치. 전기천공은 플라스미드에 의한 세포의 형질주입을 촉진시키기 위해, 생체 내 전기천공 장치, 예를 들어 CELLECTRA EP 시스템(Inovio Pharmaceuticals, 펜실베니아 플리머스 미팅 소재) 또는 Elgen 전기천공기(Inovio Pharmaceuticals, 펜실베니아 플리머스 미팅 소재)를 이용해서 달성될 수 있다.

전기천공 성분은 전기천공 장치의 하나의 요소로 기능할 수 있고, 다른 요소가 전기천공 성분과 소통하는 별도의 요소(또는 성분)이다. 전기천공 성분은 전기천공 장치의 둘 이상의 요소로 기능할 수 있고, 이는 전기천공 성분과 별도의 전기천공 장치의 다른 요소와 여전히 소통할 수 있다. 하나의 전기기계적 또는 기계적 장치의 일부로 존재하는 전기천공 장치의 요소는 요소가 하나의 장치로 또는 서로 소통하는 별도 요소로서 기능할 수 있는 것으로 제한되지 않을 수 있다. 전기천공 성분은 원하는 조직에서 정전류를 생성하는 에너지 자극을 전달할 수 있고, 피드백 메커니즘이 포함된다. 전극 어셈블리에는 복수 전극을 공간적 배열로 갖는 전극 어레이가 포함될 수 있고, 여기서 전극 어셈블리는 전기천공 성분으로부터 에너지 자극을 수신하고, 이를 전극을 통해 원하는 조직으로 전달한다. 적어도 하나의 복수 전극은 에너지 자극의 전달 동안 중성이고, 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고 전기천공 성분으로 임피던스와 소통한다. 피드백 메커니즘은 측정된 임피던스를 수신할 수 있고, 정전류를 유지하기 위해 전기천공 성분에 의해 전달된 에너지 자극을 조정할 수 있다.

복수의 전극은 분산된 패턴으로 에너지 자극을 전달할 수 있다. 복수의 전극은 프로그래밍된 순서로 전극 제어를 통해 분산된 패턴으로 에너지 자극을 전달할 수 있고, 프로그래밍된 순서는 전기천공 성분으로 사용자에 의해 입력된다. 프로그래밍된 순서는 순서대로 전달된 복수의 자극을 포함할 수 있고, 여기서 복수 자극의 각각의 자극은 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전극에 의해 전달되며, 복수 자극의 후속 자극은 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전극 중 다른 것에 의해 전달된다.

피드백 메커니즘은 하드웨어 또는 소프트웨어에 의해 수행될 수 있다. 피드백 메커니즘은 아날로그 폐쇄-루프 회로에 의해 수행될 수 있다. 피드백은 50㎲, 20㎲, 10㎲ 또는 1㎲마다 일어나지만, 바람직하게는 실시간 피드백이거나 순간적이다(즉, 반응 시간을 결정하기 위해 이용 가능한 기법에 의해 결정되는 바에 따라 실질적으로 순간적임). 중성 전극은 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고 피드백 메커니즘으로 임피던스를 소통할 수 있고, 피드백 메커니즘은 임피던스에 반응하여 정전류를 사전 설정된 전류와 유사한 값으로 유지하기 위해 에너지 자극을 조정한다. 피드백 메커니즘은 에너지 자극의 전달 동안 연속적으로 및 순간적으로 정전류를 유지할 수 있다.

본 발명의 조성물 전달을 촉진할 수 있는 전기천공 장치 및 전기천공 방법의 예에는 그 내용의 전문이 본 명세서 참고로 도입된 미국 특허 제7,245,963호(Draghia-Akli 등), 미국 특허 공개 제2005/0052630호(Smith 등)에 기재된 것들이 포함된다. 조성물의 전달을 촉진시키기 위해 이용될 수 있는 다른 전기천공 장치 및 전기천공 방법에는 2006년 10월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/852,149호 및 2007년 10월 10일자로 출원된 제60/978,982호에 대해 35 USC 119(e) 하에 이익을 청구하는, 2007년 10월 17일자로 출원된 공동 계류 중이고 공동 소유된 미국 특허 출원 제11/874072호에 제공된 것들이 포함되며, 모두 본 명세서 이들의 전문이 도입된다.

미국 특허 제7,245,963호(Draghia-Akli 등)는 체내 또는 식물에서 선택된 조직 세포 내 생체분자의 도입을 촉진시키기 위한 모듈형 전극 시스템 및 이들의 용도를 기재한다. 모듈형 전극 시스템은 복수의 바늘 전극; 피하 바늘; 프로그래밍 가능한 정전류 자극 컨트롤러로부터 복수의 바늘 전극으로 전도성 링크를 제공하는 전기 커넥터; 및 전원을 포함할 수 있다. 조작자는 지지 구조 상에 실장된 복수의 바늘 전극을 쥐고 이들을 체내 또는 식물에서 선택된 조직 내로 단단히 삽입할 수 있다. 이어서 생체분자는 피하 바늘을 통해 선택된 조직 내로 전달된다. 프로그래밍 가능한 정전류 자극 컨트롤러가 활성화되며 정전류 전기 자극이 복수의 바늘 전극에 적용된다. 적용된 정전류 전기 자극은 복수의 전극 간에서 세포 내로 생체분자의 도입을 촉진한다. 미국 특허 제7,245,963호의 전체 내용이 본 명세서 참고로 포함된다.

미국 특허 공개 제2005/0052630호(Smith 등)는 체내 또는 식물에서 선택된 조직 세포 내로 생체분자의 도입을 효과적으로 촉진시키기 위해 이용될 수 있는 전기천공 장치를 기재한다. 전기천공 장치는 그 작동이 소프트웨어 또는 펌웨어에 의해 특정되는 전기-역학 장치("EKD 장치")를 포함한다. EKD 장치는 자극 파라미터의 입력 및 사용자 제어에 기반하여 어레이 내 전극 간에 일련의 프로그래밍 가능한 정전류 자극 패턴을 생성하며, 전류 파형 데이터의 저장 및 획득을 허용한다. 전기천공 장치는 또한 바늘 전극 어레이, 주입 바늘을 위한 중심 주입 채널, 및 제거 가능한 가이드 디스크를 갖는 대체 가능한 전극 디스크를 포함한다. 미국 특허 공개 제2005/0052630호의 전체 내용이 본 명세서 참고로 포함된다.

미국 특허 제7,245,963호 및 미국 특허 공개 제2005/0052630호에 기재된 전극 어레이 및 방법은 근육과 같은 조직뿐만 아니라 다른 조직 또는 기관 내로의 심부 침투를 위해 채택될 수 있다. 전극 어레이의 구조로 인해, (선택한 생체분자의 전달을 위한) 주입 바늘도 표적 기관 내로 완전 삽입되고, 주입은 전극에 의해 사전-서술된 영역에서 해당 표적에 수직으로 투여된다. 미국 특허 제7,245,963호 및 미국 특허 공개 제2005/005263호에 기재된 전극은 바람직하게는 20 mm 길이 및 21 게이지이다.

추가적으로, 전기천공 장치 및 이들의 용도를 도입하는 일부 실시형태에, 하기 특허에 기재된 것들인 전기천공 장치가 고려된다: 1993년 12월 28일자로 허여된 미국 특허 제5,273,525호, 2000년 8월 29일자로 허여된 미국 특허 제6,110,161호, 2001년 7월 17일자로 허여된 제6,261,281호, 및 2005년 10월 25일자로 허여된 제6,958,060호, 및 2005년 9월 6일자로 허여된 미국 특허 제6,939,862호. 또한, 임의의 다양한 장치를 이용한 DNA 전달에 관한 2004년 2월 24일자로 허여된 미국 특허 제6,697,669호, 및 DNA의 주입 방법에 대한 2008년 2월 5일자로 허여된 미국 특허 제7,328,064호에서 제공된 요지를 포괄하는 특허가 본 명세서에서 고려된다. 상기 특허는 이들의 전문이 참고로 포함된다.

10. 치료 방법

또한 대상체에서 합성 항체를 생성함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 질환의 치료, 보호 및/또는 예방 방법이 본 명세서 제공된다. 방법에는 대상체에 대한 조성물의 투여 단계가 포함될 수 있다. 대상체에 대한 조성물의 투여는 전술한 전달 방법을 이용하여 수행될 수 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명은 보렐리아 종 감염에 대해 보호하는 치료 방법 및/또는 예방 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 라임병을 치료하고/하거나 보호하고/하거나 예방한다.

대상체에서 합성 항체의 생성 시, 합성 항체는 항원에 결합하거나 또는 이와 반응할 수 있다. 이러한 결합은 항원을 중화시키며, 다른 분자, 예를 들어, 단백질 또는 핵산에 의해 항원의 인식을 차단시키고, 항원에 대한 면역 반응을 일으키거나 또는 유도함으로써, 대상체에서 항원과 관련된 질환에 대해 치료하고/하거나 보호하고/하거나 예방할 수 있다.

합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 항원에 결합함으로써 합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환에 대해 치료하고/하거나 예방하고/하거나 보호할 수 있다. 합성 항체는 조성물이 투여된 대상체에서 질환의 생존을 촉진시킬 수 있다. 일 실시형태에서, 합성 항체는 합성 항체를 투여하지 않은 질환을 갖는 대상체의 예상되는 수명 이상으로 대상체에서 질환의 증가된 생존을 제공할 수 있다. 다양한 실시형태에서, 합성 항체는 조성물의 부재 하에서 예상되는 생존 이상으로 조성물이 투여된 대상체에서 질환의 생존의 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 증가를 제공할 수 있다. 일 실시형태에서, 합성 항체는 합성 항체를 투여하지 않은 대상체의 예상된 보호 이상으로 대상체에서 질환에 대한 증가된 보호를 제공할 수 있다. 다양한 실시형태에서, 합성 항체는 조성물의 부재 하에서 예상된 보호 이상으로 조성물이 투여된 대상체의 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 질환에 대해 보호할 수 있다.

11. 항생제와의 조합에서의 사용

본 발명은 또한 합성 항체 및 치료적 항생제의 조합물을 투여함으로써 질환의 치료, 보호, 예방이 필요한 대상체에서 질환에 대해 치료하고/하거나, 보호하고/하거나 예방하는 방법을 제공한다.

합성 항체와 항생제의 조합물이 둘 다 대상체에 존재하도록 합성 항체 및 항생제는 임의의 적합한 방법을 이용하여 합성 항체와 항생제가 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 상기에 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제1 조성물의 투여 및 합성 항체의 투여 후 1일 미만, 2일 미만, 3일 미만, 4일 미만, 5일 미만, 6일 미만, 7일 미만, 8일 미만, 9일 미만 또는 10일 미만에 항생제를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 상기 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제1 조성물 및 합성 항체의 투여 후 1일 초과, 2일 초과, 3일 초과, 4일 초과, 5일 초과, 6일 초과, 7일 초과, 8일 초과, 9일 초과 또는 10일 초과에 항생제를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 항생제를 포함하는 제1 조성물의 투여 및 항생제의 투여 후 1일 미만, 2일 미만, 3일 미만, 4일 미만, 5일 미만, 6일 미만, 7일 미만, 8일 미만, 9일 미만 또는 10일 미만에 상기 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 항생제를 포함하는 제1 조성물의 투여 및 항생제의 투여 후 1일 초과, 2일 초과, 3일 초과, 4일 초과, 5일 초과, 6일 초과, 7일 초과, 8일 초과, 9일 초과 또는 10일 초과에 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 상기 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제1 조성물의 투여 및 동시에 항생제를 포함하는 제2 조성물을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 상기 상세하게 기재한 임의의 방법에 의해 본 발명의 합성 항체를 포함하는 제1 조성물의 투여 및 동시에 항생제를 포함하는 제2 조성물을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 본 발명의 합성 항체 및 항생제를 포함하는 단일 조성물의 투여를 포함할 수 있다.

본 발명의 합성 항체와 조합하여 사용될 수 있는 항생제의 비제한적 예는 아미노글리코사이드(예를 들어, 겐타마이신, 아미카신, 토브라마이신), 퀴놀론(예를 들어, 시프로플록사신, 레보플록사신), 세팔로스포린(예를 들어, 세프타지딤, 세페핌, 세포페라존, 세포페라존, 세프피롬, 세프토비프롤), 항녹농균 페니실린: 카복시페니실린(예를 들어, 카베니실린 및 티카르실린) 및 유레이도페니실린(예를 들어, 메즐로실린, 아즐로실린 및 피페라실린), 카바페넴(예를 들어, 메로페넴, 이미페넴, 도리페넴), 폴리믹신(예를 들어, 폴리믹신 B 및 콜리스틴) 및 모노박탐(예를 들어, 아즈트레오남)을 포함한다.

12. 시험관내 및 생체외 합성 항체의 생성

일 실시형태에서, 합성 항체는 시험관내 또는 생체외에서 생성된다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 합성 항체를 코딩하는 핵산은 시험관내 또는 생체외 세포에 도입되고 발현될 수 있다. 세포 내에 유전자를 도입하고 발현시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 발현 벡터와 관련하여, 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어, 포유류, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포 내로 전달될 수 있다.

숙주 세포 내로 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 물리적 방법은 인산 칼슘 침전, 리포펙션, 유전자총, 미량주사법, 전기천공법 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생성하기 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al. (2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)] 참조. 숙주 세포 내로 폴리뉴클레오타이드의 도입을 위한 바람직한 방법은 인산칼슘 형질주입이다.

숙주 세포 내로 관심 대상의 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 생물학적 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터 및 특히 레트로바이러스 벡터는 포유류, 예를 들어, 인간 세포 내로 유전자를 삽입하기 위한 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순 포진 바이러스 I형, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,350,674호 및 제5,585,362호 참조.

숙주 세포 내로 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 화학적 수단은 콜로이드 분산물 시스템, 예컨대 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로스피어, 비드 및 수중유 에멀션을 비롯한 지질계 시스템, 마이셀, 혼합 마이셀 및 리포좀을 포함한다. 시험관내 및 생체내 전달 비히클로서 사용하기 위한 예시적 콜로이드 시스템은 리포좀(예를 들어, 인공 막 소포)이다.

비-바이러스 전달 시스템이 이용되는 경우에, 예시적인 전달 비히클은 리포좀이다. 지질 제형의 사용은 숙주 세포 내로 핵산의 도입에 대해 상정된다(시험관내, 생체외 또는 생체내). 다른 양상에서, 핵산은 지질과 회합될 수 있다. 지질과 회합된 핵산은 리포좀의 수성 내부에서 캡슐화될 수 있고, 리포좀의 지질 이중층 내에 배치되거나, 리포좀과 올리고뉴클레오타이드 둘 다와 회합된 연결 분자를 통해 리포좀에 부착되거나, 리포좀에 가둬지거나, 리포좀과 복합체화되거나, 지질을 함유하는 용액 중에서 분산되거나, 지질과 혼합되거나, 지질과 조합되거나, 지질 중의 현탁액으로서 함유되거나, 마이셀과 함께 함유되거나 또는 복합체화되거나, 또 다르게는 지질과 회합될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 회합 조성물은 용액 중의 임의의 특정 구조로 제한되지 않는다. 예를 들어, 그들은 이중층 구조에, 마이셀로서, 또는 "붕괴된" 구조로 존재할 수 있다. 그들은 또한 가능하게는 크기 또는 형상이 균일하지 않은 응집물을 형성하는 용액 중에 단순히 배치될 수 있다. 지질은 천연 유래 또는 합성 지질일 수 있는 지질 물질이다. 예를 들어, 지질은 세포질에서 자연적으로 생기는 지방 점적뿐만 아니라 장쇄 지방족 탄화수소 및 그들의 유도체, 예컨대 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올 및 알데하이드를 함유하는 화합물의 부류를 포함한다.

본 발명은 다음의 비제한적 실시예에 의해 예시되는 다중 양상을 가진다.

13. 실시예

본 발명은 하기 실시예에서 추가로 예시된다. 이러한 실시예가 본 발명의 바람직한 실시형태를 명시하지만, 단지 예시로서 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 상기 논의 및 이들 실시예로부터, 당업자는 본 발명의 본질적 특징을 확인할 수 있고, 이들의 요지 및 범위에서 벗어나지 않고 다양한 이용 및 조건에 이를 채택하기 위해 본 발명의 다양한 변화 및 변형을 수행할 수 있다. 따라서 본 명세서 나타내고 기재된 것들에 부가하여 본 발명의 다양한 변형이 상기 기재로부터 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 또한 첨부된 특허청구범위의 범위 내에 속하는 것이다.

실시예 1

본 명세서에 제시된 연구는 플라스미드 DNA의 근육내 전기천공을 통한 기능성 항-OspA "DNA 단일클론 항체"(DMAb)의 생성을 입증한다. 항-OspA 단일클론 항체로부터 코돈 최적화된 가변 영역 DNA 서열을 인간 IgG1 불변 도메인으로 합성하였다. 항체를 코딩하는 플라스미드 DNA를 C3H 마우스로 전달하였다. 이 연구는 기존의 생물학적 치료에 대한 대안으로서 DMAb를 지지한다.

물질 및 방법을 이제 기재한다.

동물 및 단백질 및 플라스미드 투여 및 전달. 야생형 또는 OspA에 특이적인 변형된 공통 DMAb를 C3H 마우스(5마리 마우스/그룹)에 투여하였다. 이들 투여를 위해, 300㎍의 플라스미드 DNA를 근육내로(IM) 주사한 다음에 MID-EP 시스템(CELLECTRA(등록상표); 펜실베니아주 블루벨에 소재한 이노바이오 파마슈티컬스(Inovio Pharmaceuticals))에 의한 EP 매개 증강된 전달이 이어졌다. 전달에 대한 펄싱 매개변수는 0.5 Amp 정전류의 3 펄스, 1 초 간격 및 길이 52㎳였다. 각각의 동물은 진드기 시험감염 5일 전에 실험 또는 대조군 플라스미드 제형 중 하나의 단일 투여를 받았다. 분석을 위해 진드기 시험감염 21일 후에 마우스로부터의 혈청을 수집하였다(도 1).

DMAb-319-44 wt 및 DMAb-221-7 wt 플라스미드 DNA의 작제. DMAb-319-44wt 및 DMAb-221-1wt를 각각 코딩하는 DNA 플라스미드 p319-44wt 및 p221-7wt는 가변 영역이 항-hisOspA 항체 319-44 및 221-7로부터 각각 유래된 완전 인간 IgG1 mAb를 코딩한다. 각각의 이식유전자는 P2A 자기-가공 서열과 결합된 퓨린 절단 부위에 의해 분리된 중쇄 및 중쇄 유전자로 이루어졌다. 이식유전자는 인간에서 발현을 위해 코돈 및 RNA 최적화되었고, 젠스크립트(GenScript)에 의해 합성되며, 인간 거대세포바이러스 급초기 촉진자의 제어 하에서 변형된 pVax1 포유류 발현 벡터(Invitrogen) 내로 클로닝시켰다.

DMAb-319-44 mod1 및 DMAb-221-7 mod9 플라스미드 DNA의 작제. p319-44wt 및 p221-7wt DMAb 발현을 개선시키기 위해, 'wt' DMAb의 중쇄와 경쇄 가변 영역 서열을 둘 다 상당한 틀 영역 변형을 통해 항체 안정성을 증가시키는 것에 중점을 둔 표적화된 접근에 의해 추가로 최적화하여, 시험관내와 생체내 환경 둘 다에서의 항체 생성을 개선시켰다. 첫째로, 접합을 위한 수용자 틀로서 작용하는 고-발현 DMAb를 동정하였다. HER2 항원을 표적화하고, 단일 용량의 100㎍ DNA 후에 면역 결핍 마우스에서 5㎍/㎖ 초과의 인간 IgG를 발현시키는 것으로 나타난 이 수용자 DMAb는 고도로 안정성인 생식계열 패밀리 hV_H3 및 hVκ1로부터의 중쇄 및 경쇄를 각각 포함한다. 최적화된 319-44mod1을 생성하기 위해, 본 발명자들은 고발현성 DMAb 유전자 상에 319-44wt의 3개의 CDR 및 추가적인 13개의 중요한 중쇄 및 중쇄틀 잔기를 접합시켰다. 221-7mod9에 대해, 본 발명자들은 고-발현 DMAb 유전자 상에 221-7wt의 3개의 CDR 및 추가적인 11개의 중요한 중쇄 및 중쇄틀 잔기를 접합시켰다.

진드기 시험감염 분석. 마우스에 보렐리아를 보균하는 진드기에 의한 시험감염 5일 전에 300㎍의 pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1, pDMAb-221-7 wt, pDMAb-221-7 mod9 또는 음성 대조군(pDVSF-3 LSLS)을 투여하였다. 진드기 시험감염의 21일 후에 혈청을 수집하였고, 보렐리아의 존재에 대해 그리고 IgG 반응에 대해 분석하였다. 조직 내 감염의 분석을 위해, 진드기 시험감염 후 21일에 마우스를 희생시키고, 세포를 채취하고, 이어서 배양시키고 나서, 진드기 시험감염 후 50일까지의 추가적인 시험 기간 동안 보렐리아 부르그도르페리의 존재에 대해 관찰하였다(도 1).

실험의 결과는 이제 기재한다.

DMAb-319-44 mod1 및 DMAb-221-7 mod9의 생체내 특성규명 - 마우스에 근육내 경로 다음에 EP를 통한 증강된 전달에 의해 pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1, pDMAb-221-7 wt 또는 pDMAb-221-7 mod9를 투여하였다. 진드기 시험감염 5일 전에 DNA 플라스미드의 단일 주사를 전달하였고, 진드기 시험감염 21일 후에 혈청을 수집하였다(도 1). 도 2의 데이터는 Ig/Fab 수준에 비례하여 OD450㎚로서 제시한다(pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1, pDMAb-221-7 wt 및 대조군에서 개개 마우스로부터). 이들 데이터는 pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1 및 pDMAb-221-7 wt의 단일 투여 후에 Fab의 상대적 수준이 DMAb 투여 3일 후에 검출 가능하였다는 것을 입증하였다. pDMAb-319-44 wt 및 pDMAb-319-44 mod1의 수준은 제3일에 더 높았고, 진드기 시험감염으로부터 "보호 중인" 마우스 수의 증가를 야기하였다. pDMAb의 연속 희석은 pDMAb의 1:100 내지 1:24,000 희석을 투여한 마우스가 음성 대조군을 투여한 마우스보다 제21일에 상당히 더 고수준의 IgG를 나타내었다는 것을 발견하였다(도 3).

pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1, pDMAb-221-7 wt 및 pDMAb-221-7 mod9의 보렐리아살균 활성을 평가하였다. pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1, pDMAb-221-7 wt 및 pDMAb-221-7 mod9를 투여한 마우스는 대조군 항체를 투여한 마우스에 비해 생 보렐리아의 백분율 감소를 나타내었다(도 4). pDMAb-319-44 wt, pDMAb-319-44 mod1 및 pDMAb-221-7 wt을 그들의 강한 보렐리아살균 효능에 기반하여 시험감염 실험을 위해 선택하였다.

pDMAb-319-44 mod1을 투여한 마우스는 pDMAb-319-44 wt를 투여한 마우스에 비해 유사하거나 또는 약간 증가된 IgG 반응을 나타내었다(도 5). 제형은 제7일에 300㎍ 용량을 대략 7㎍/㎖의 수준으로 증가시킨다. 하이알루로니다제에 의한 제형화된 투약(예를 들어, 안정제 및/또는 보조제의 첨가)은 WT와 mod1 DMAb 둘 다의 생체내에서의 더 큰 발현을 초래하였다(도 5).

3-줄 최적화 전략은 pDMAb-221-7 mod 9의 증가된 생체내 발현을 야기하였다(도 6). 제형은 제7일까지 300㎍ 용량을 대략 10㎍/㎖ 초과의 수준으로 증가시킨다.

생체내 연구는 주사 후 2일 내지 적어도 7일에 라임 항체(항-OspA)의 증가 및 인간 IgG에서의 관련된 증가가 있다는 것을 입증한다(도 7). 221-7은 제형화가 없는 wt DMAb의 주사를 반형한다는 것을 주목하여야 한다.

pDMAb-319-44 mod1 항체의 투여는 보렐리아 감염으로부터의 80% 보호를 제공한다. 이는 pDMAb-319-44 wt 항체에 의해 제공되는 보호 이상의 증가이다(도 8).

DNA는 생체내에서 유전자 및 뉴클레오타이드 서열을 전달하기 위한 유연한 플랫폼이다. DNA-암호화된 mAb는 단백질 IgG mAb와 비슷한 효능으로 박테리아에 대해 보호적이다.

DNA 기법은 일상적인 전달을 위한 mAb 전달 요법을 가능하게 하며, 전세계 시장에 대한 접근능력을 확장시킨다. DMAb는 즉시 그리고 지속적 면역력을 제공하기 위해 DNA 백신 기법과 조합할 수 있다.

서열:

서열번호 1 DMAb 319-44 mod1 CDR의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀(custom) 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파)-2 정지 코돈에 작동 가능하게 연결됨

서열번호 2 DMAb 319-44 mod1 CDR의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파)

서열번호 3 DMAb 319-44 mod1 중쇄의 뉴클레오타이드 서열(항-HER2 DMAb 최적화된 CDR 접합): 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3

서열번호 4 DMAb 319-44 mod1 중쇄의 아미노산 서열(항-HER2 DMAb 최적화된 CDR 접합): 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 5 DMAb 319-44 mod1 경쇄의 뉴클레오타이드 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 6 DMAb 319-44 mod1 경쇄의 아미노산 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 7 DMAb 319-44 wt의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파)- 2 정지 코돈에 작동 가능하게 연결.

서열번호 8 DMAb 319-44 wt의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파).

서열번호 9 DMAb 319-44 wt 중쇄의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 10 DMAb 319-44 wt 중쇄의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 11 DMAb 319-44 wt 경쇄의 뉴클레오타이드 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 12 DMAb 319-44 wt 경쇄의 아미노산 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 13 DMAb 221-7 mod 9 전장 인간 IgG1 단일 플라스미드의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파)- 2 정지 코돈에 작동 가능하게 연결.

서열번호 14 DMAb 221-7 mod 9 전장 인간 IgG1 단일 플라스미드의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파).

서열번호 15 DMAb 221-7 mod 9 중쇄 인간 IgG1의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 16 DMAb 221-7 mod 9 중쇄 인간 IgG1의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 17 DMAb 221-7 mod 9 경쇄 인간 IgG1의 뉴클레오타이드 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 18 DMAb 221-7 mod 9 경쇄 인간 IgG1의 아미노산 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 19 DMAb 221-7 wt의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파)- 2 정지 코돈에 작동 가능하게 연결.

서열번호 20 DMAb 221-7 wt의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드-인간 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파).

서열번호 21 DMAb 221-7 wt 중쇄의 뉴클레오타이드 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 22 DMAb 221-7 wt 중쇄의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 23 DMAb 221-7 wt 경쇄의 뉴클레오타이드 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 24 DMAb 221-7 wt 경쇄의 아미노산 서열: 인간 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

서열번호 25 뮤린 DMAb 221-7 mod 9 CDR의 아미노산 서열: IgG2a 중쇄 신호 펩타이드-VH-CH1-힌지 영역-CH2-CH3-커스텀 퓨린 절단 부위-'GSG' 링커 및 P2A 펩타이드- 카파 경쇄 신호 펩타이드-VL-CL(카파).

서열번호 26 뮤린 DMAb 221-7 mod 9 IgG2a 중쇄의 아미노산 서열: 인간 IgG 중쇄 신호 펩타이드, 가변 중쇄 영역, 불변 중쇄 영역 1, 힌지 영역, 불변 중쇄 영역 2 및 불변 중쇄 영역 3.

서열번호 27 뮤린 DMAb 221-7 mod 9 IgG2a 경쇄의 아미노산 서열: 카파 경쇄 신호 펩타이드, 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역.

앞서 언급한 상세한 설명 및 수반하는 실시예는 단지 예시적이며 첨부하는 청구범위 및 그들의 동등물에 의해서만 정해지는 본 발명의 범주에 대한 제한으로서 취해져서는 안 된다는 것이 이해된다.

개시된 실시형태에 대한 다양한 변화 및 변형은 당업자에게 자명할 것이다. 비제한적으로 본 발명의 화학적 구조, 치환체, 유도체, 중간체, 합성, 조성물, 제형 또는 이용 방법에 관한 것들을 포함하는 이러한 변화 및 변형이 발명의 요지 및 범위에서 벗어나지 않고 수행될 수 있다.

<110> THE WISTAR INSTITUTE OF ANATOMY AND BIOLOGY THE TRUSTEES OF THE UNIVERSITY OF PENNSYLVANIA <120> DNA ANTIBODY CONSTRUCTS FOR USE AGAINST LYME DISEASE <130> MPI19-015-D2 <150> US 62/418,468 <151> 2016-11-07 <160> 27 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2193 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of DMAb 319-44 mod1 CDR <400> 1 atggactgga cttggagaat cctgttcctg gtcgccgccg ctactgggac tcacgccgag 60 atgcagctgg tcgaatccgg gggaggcctg gtgcagcctg gcggaagcct gcgactgtcc 120 tgcgctggct ctggatacat cttcgcaact tattggattg gatgggtccg ccaggcacca 180 gggaagggac tggaatgggt gggaatcatc tacccaaacg actctgatac aagatatagt 240 ccccggttca aaggccgctt taccatcagt gccgacaagt caattaacac agcttacctg 300 cagatgaatt ccctgcgagc agaggacacc gccgtgtact attgcgcccg gacacgctgg 360 tatttcgatc tgtggggaca ggggaccctg gtcacagtga gctccgcctc aaccaaaggg 420 cctagcgtgt ttcccctggc tccttctagt aagtcaacta gcgggggcac cgccgctctg 480 ggatgtctgg tgaaggatta cttccctgag ccagtcacag tgagctggaa ctccggcgct 540 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ggaaacgagg caggaagagg agatccggct ctggagcaac aaacttctcc 1440 ctgctgaagc aggccgggga tgtggaggaa aatcctggcc caatggtcct gcagacccag 1500 gtgtttatca gtctgctgct gtggatttca ggagcctacg gggacatcca gctgacacag 1560 tctccctcct ctctgagtgc atcacctggc gatcgagtca ccattacatg tagggccagc 1620 cagtccgtga gttcaagcta cctggcttgg tatcagcaga agcctggaaa agcaccaaag 1680 ctgctgatct acggagcatc ctctagagcc actggagtgc ccagccggtt ctctgggagt 1740 ggctcaggaa ccgactttac tctgaccatt agttcactgc agcccgagga tttcgccacc 1800 tactattgcc agcagtatgg cagctcccct ctgacttttg gcggagggac caaagtggaa 1860 atcaagcgaa ctgtcgcagc ccccagcgtg ttcatctttc cacccagtga cgagcagctg 1920 aagagcggca ccgcttccgt ggtgtgcctg ctgaacaatt tctaccctag ggaagccaaa 1980 gtccagtgga aggtggataa cgctctgcag tcaggcaata gccaggagtc cgtgacagaa 2040 caggactcta aagatagtac ttattcactg tctagtacac tgactctgag caaggcagac 2100 tacgagaagc ataaagtgta tgcctgcgaa gtcactcacc aggggctgcg gtcacccgtc 2160 acaaaatctt tcaacagagg ggaatgttga taa 2193 <210> 2 <211> 729 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of DMAb 319-44 mod1 CDR <400> 2 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Thr His Ala Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Tyr Ile Phe 35 40 45 Ala Thr Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Ile Ile Tyr Pro Asn Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser 65 70 75 80 Pro Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Arg Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly 115 120 125 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 210 215 220 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 225 230 235 240 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 245 250 255 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 260 265 270 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 275 280 285 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 290 295 300 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 305 310 315 320 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 325 330 335 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 340 345 350 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 355 360 365 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 370 375 380 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 385 390 395 400 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 405 410 415 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 420 425 430 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 435 440 445 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 450 455 460 Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser 465 470 475 480 Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val 485 490 495 Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala 500 505 510 Tyr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser 515 520 525 Pro Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser 530 535 540 Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 545 550 555 560 Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser Arg 565 570 575 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 580 585 590 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser 595 600 605 Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly 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cccaggtgta cactctgcct ccaagcagag acgagctgac aaaaaaccag 1140 gtcagcctga cttgtctggt gaaggggttc tatccatccg atatcgcagt ggagtgggaa 1200 tctaatggcc agcccgaaaa caattacaag accacacccc ctgtgctgga ctctgatggc 1260 agtttctttc tgtatagcaa actgaccgtg gacaagtccc ggtggcagca gggaaacgtc 1320 ttttcctgct ctgtgatgca tgaggccctg cacaatcatt acacccagaa aagtctgtca 1380 ctgagcccag ggaaa 1395 <210> 4 <211> 465 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of DMAb 319-44 mod1 heavy chain (anti-HER2 DMAb optimized CDR graft) <400> 4 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Thr His Ala Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Tyr Ile Phe 35 40 45 Ala Thr Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Ile Ile Tyr Pro Asn Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser 65 70 75 80 Pro Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn 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tcgagtcacc 120 attacatgta gggccagcca gtccgtgagt tcaagctacc tggcttggta tcagcagaag 180 cctggaaaag caccaaagct gctgatctac ggagcatcct ctagagccac tggagtgccc 240 agccggttct ctgggagtgg ctcaggaacc gactttactc tgaccattag ttcactgcag 300 cccgaggatt tcgccaccta ctattgccag cagtatggca gctcccctct gacttttggc 360 ggagggacca aagtggaaat caagcgaact gtcgcagccc ccagcgtgtt catctttcca 420 cccagtgacg agcagctgaa gagcggcacc gcttccgtgg tgtgcctgct gaacaatttc 480 taccctaggg aagccaaagt ccagtggaag gtggataacg ctctgcagtc aggcaatagc 540 caggagtccg tgacagaaca ggactctaaa gatagtactt attcactgtc tagtacactg 600 actctgagca aggcagacta cgagaagcat aaagtgtatg cctgcgaagt cactcaccag 660 gggctgcggt cacccgtcac aaaatctttc aacagagggg aatgt 705 <210> 6 <211> 235 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of DMAb 319-44 mod1 light chain <400> 6 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Pro Gly Asp Arg Val 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85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ile Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Phe Leu Asp 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 145 150 155 160 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 210 215 220 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 225 230 235 240 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 245 250 255 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 275 280 285 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 290 295 300 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 305 310 315 320 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 325 330 335 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 340 345 350 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 355 360 365 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 370 375 380 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 385 390 395 400 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 405 410 415 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 420 425 430 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 435 440 445 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 450 455 460 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 23 <211> 699 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of DMAb 221-7 wt light chain: <400> 23 atggtcctgc agacccaggt gtttatctcc ctgctgctgt ggatttctgg ggcatacggc 60 gccatccagc tgacacagtc tcccagctcc ctgtccgcat ctgtcggcga ccgagtgacc 120 atcacatgta gggccagcca ggggatttct agtggctcag catggtacca gcagaagcct 180 gggaaagcac caaagctgct gatctatgac gtgtctagcc tggaatccgg agtgcctagc 240 cggttctccg gatcaggaag tgggacagag tttactctga ccatttcaag cctgcagcct 300 gaggatttcg ccacttacta ttgccagcag ttcaatagct atctgctgac ttttggaggg 360 ggcaccaaag tggaaatcaa gactgtcgca gcccctagcg tgttcatttt tccaccctcc 420 gatgagcagc tgaagagcgg caccgcttcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccca 480 cgcgaggcca aagtccagtg gaaggtggac aacgctctgc agtctggaaa tagtcaggag 540 tcagtgactg aacaggacag caaagattcc acctattctc tgtcctctac actgactctg 600 agcaaggcag actacgagaa gcataaagtg tatgcctgcg aagtcaccca ccaggggctg 660 aggtcaccag tcactaaatc tttcaatcgg ggagaatgt 699 <210> 24 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of DMAb 221-7 wt light chain <400> 24 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Ser Ser Gly Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn 100 105 110 Ser Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr 115 120 125 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 130 135 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser Pro Val 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 25 <211> 738 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of Murine DMAb 221-7 mod 9 CDR <400> 25 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Phe Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser 65 70 75 80 Pro Ser Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ile Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Phe Leu Asp 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140 Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Gly Thr Thr Gly 145 150 155 160 Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 Thr Val Thr Ser Asn Thr Trp Pro Ser Gln Thr Ile Thr Cys Asn Val 210 215 220 Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg 225 230 235 240 Val Pro Ile Thr Gln Asn Pro Cys Pro Pro Leu Lys Glu Cys Pro Pro 245 250 255 Cys Ala Ala Pro Asp Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 260 265 270 Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Met Val Thr 275 280 285 Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser 290 295 300 Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His 305 310 315 320 Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile 325 330 335 Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn 340 345 350 Asn Arg Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Pro Arg 355 360 365 Gly Pro Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Ala Glu 370 375 380 Glu Met Thr Lys Lys Glu Phe Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Gly Phe 385 390 395 400 Leu Pro Ala Glu Ile Ala Val Asp Trp Thr Ser Asn Gly Arg Thr Glu 405 410 415 Gln Asn Tyr Lys Asn Thr Ala Thr Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr 420 425 430 Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Gln Lys Ser Thr Trp Glu Arg Gly 435 440 445 Ser Leu Phe Ala Cys Ser Val Val His Glu Val Leu His Asn His Leu 450 455 460 Thr Thr Lys Thr Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg 465 470 475 480 Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly 485 490 495 Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe 500 505 510 Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Leu 515 520 525 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr 530 535 540 Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Gly Ser Ala Trp Tyr 545 550 555 560 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser 565 570 575 Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 580 585 590 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala 595 600 605 Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Gln 610 615 620 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser 625 630 635 640 Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val 645 650 655 Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp 660 665 670 Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr 675 680 685 Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr 690 695 700 Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala 705 710 715 720 Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn 725 730 735 Glu Cys <210> 26 <211> 475 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of Murine DMAb 221-7 mod 9 <400> 26 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Phe Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser 65 70 75 80 Pro Ser Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ile Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Phe Leu Asp 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135 140 Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Gly Thr Thr Gly 145 150 155 160 Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val 195 200 205 Thr Val Thr Ser Asn Thr Trp Pro Ser Gln Thr Ile Thr Cys Asn Val 210 215 220 Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg 225 230 235 240 Val Pro Ile Thr Gln Asn Pro Cys Pro Pro Leu Lys Glu Cys Pro Pro 245 250 255 Cys Ala Ala Pro Asp Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 260 265 270 Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Met Val Thr 275 280 285 Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser 290 295 300 Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His 305 310 315 320 Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile 325 330 335 Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn 340 345 350 Asn Arg Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Pro Arg 355 360 365 Gly Pro Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Ala Glu 370 375 380 Glu Met Thr Lys Lys Glu Phe Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Gly Phe 385 390 395 400 Leu Pro Ala Glu Ile Ala Val Asp Trp Thr Ser Asn Gly Arg Thr Glu 405 410 415 Gln Asn Tyr Lys Asn Thr Ala Thr Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr 420 425 430 Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Gln Lys Ser Thr Trp Glu Arg Gly 435 440 445 Ser Leu Phe Ala Cys Ser Val Val His Glu Val Leu His Asn His Leu 450 455 460 Thr Thr Lys Thr Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys 465 470 475 <210> 27 <211> 234 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of Murine DMAb 221-7 mod 9 <400> 27 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Ser Ser Gly Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn 100 105 110 Ser Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135 140 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln 165 170 175 Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200 205 His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 210 215 220 Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230

Claims (25)

1. 하나 이상의 합성 항체를 코딩하는 핵산 분자로서, 상기 핵산 분자는,
   a) 항-OspA 합성 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열, 및
   b) 항-OspA 합성 항체의 단편을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열
   로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함하는, 하나 이상의 합성 항체를 코딩하는 핵산 분자.
2. 제1항에 있어서, 절단 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하는, 핵산 분자.
3. 제1항에 있어서, 상기 핵산 분자는,
   a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 상기 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열;
   b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열; 및
   c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편
   으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는, 핵산 분자.
4. 제1항에 있어서, 상기 핵산 분자는,
   a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 및 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열에 대해 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열;
   b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 및 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
   c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 및 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택된뉴클레오타이드 서열의 단편
   으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함하는, 핵산 분자.
5. 제1항에 있어서, 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 상기 가변 중쇄 영역을 코딩하는 서열은,
   a) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16, 및 서열번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열;
   b) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16, 및 서열번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열,
   c) 서열번호 3, 서열번호 9, 서열번호 15, 및 서열번호 21로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 및
   d) 서열번호 3, 서열번호 9, 서열번호 15 및 서열번호 21로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열
   로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
   상기 가변 경쇄 영역을 코딩하는 서열은,
   e) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18 및 서열번호 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열;
   f) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18, 및 서열번호 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열,
   g) 서열번호 5, 서열번호 11, 서열번호 17, 및 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 및
   h) 서열번호 5, 서열번호 11, 서열번호 17, 및 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열
   로 이루어진 군으로부터 선택된, 핵산 분자.
6. 제5항에 있어서, 서열번호 2, 서열번호 8, 서열번호 14 및 서열번호 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산 분자.
7. 제1항에 있어서,
   a) 서열번호 26을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및
   b) 서열번호 27을 포함하는 가변 경쇄 영역
   중 하나 이상을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산 분자.
8. 제7항에 있어서, 서열번호 25를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산 분자.
9. 제1항에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 서열은 리더 서열을 코딩하는, 핵산 분자.
10. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자는 발현 벡터를 포함하는, 핵산 분자.
11. 하나 이상의 합성 항체를 포함하는 아미노산 분자로서, 상기 아미노산 분자는,
    a) 항-OspA 합성 항체를 포함하는 아미노산 서열, 및
    b) 항-OspA 합성 항체의 단편을 포함하는 아미노산 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 포함하는, 아미노산 분자.
12. 제11항에 있어서, 절단 도메인을 더 포함하는, 아미노산 분자.
13. 제11항에 있어서,
    a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열;
    b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및
    c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 분자.
14. 제11항에 있어서, 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역 중 하나 이상을 포함하되, 상기 가변 중쇄 영역을 포함하는 서열은,
    a) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16, 및 서열번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열; 및
    b) 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 16, 및 서열번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    상기 가변 경쇄 영역을 코딩하는 서열은,
    c) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18, 및 서열번호 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열; 및
    d) 서열번호 6, 서열번호 12, 서열번호 18, 및 서열번호 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된, 아미노산 분자.
15. 제13항에 있어서,
    a) 서열번호 26을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및
    b) 서열번호 27을 포함하는 가변 경쇄 영역
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 분자.
16. 제15항에 있어서, 서열번호 25에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 분자.
17. 제16항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 리더 서열을 포함하는, 아미노산 분자.
18. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 조성물.
19. 제18항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함하는, 조성물.
20. 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항의 아미노산 분자를 포함하는 조성물.
21. 제20항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함하는 조성물.
22. 대상체에서 질환을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 핵산 분자 또는 제18항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
23. 제22항에 있어서, 상기 질환은 라임병인, 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
24. 대상체에서 질환을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항의 아미노산 분자 또는 제20항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
25. 제24항에 있어서, 상기 질환은 라임병인, 질환을 예방 또는 치료하는 방법.