KR20230104110A - 아르기닌 고갈제를 사용하여 aml 아형을 치료하는 방법 - Google Patents

아르기닌 고갈제를 사용하여 aml 아형을 치료하는 방법 Download PDF

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수이 이 쿽
수이 이 ?o
노먼 펑 맨 와이
테렌스 샤우 인 와이
윈 충 량
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비전 글로벌 홀딩스 리미티드.
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Abstract

본 발명은 급성 골수성 백혈병의 치료를 필요로 하는 대상의 급성 골수성 백혈병(AML)을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상에게 치료 유효량의 아르기닌 고갈제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)이다.

Description

아르기닌 고갈제를 사용하여 AML 아형을 치료하는 방법
본 발명은 일반적으로 생물학 및 의약 분야에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 급성 골수성 백혈병(AML, acute myeloid leukemia)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 보다 더 구체적으로, 본 발명은 아르기닌 고갈제를 사용하여 AML 아형(subtype)을 치료하는 방법 및 AML 치료용 약제의 제조에서 아르기닌 고갈제의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 배경에 대한 다음 논의는 단지 독자가 본 발명을 이해하는 것을 돕기 위해 제공되며, 본 발명에 대한 선행 기술을 설명하거나 구성하도록 허용되지 않는다.
급성 골수구성 백혈병으로도 알려진 급성 골수성 백혈병(AML)은 유전자 변형의 축적이 골수 및 혈액에서 골수 전구 세포의 제어되지 않는 클론 증식을 초래하는 유전적으로 이질적인 공격적인 암이다. 더 심각한 경우에는 비정상 세포가 장기에 침투한다. AML은 성인 케이스의 약 80%, 소아 백혈병 진단의 약 20%를 차지하는 성인과 어린이에서 가장 흔한 급성 백혈병 중 하나이다. 대부분의 AML의 케이스는 성인에서 발생하며 평균 진단 연령은 68세이다. AML 진단을 받은 20세 초과의 사람들의 5년 생존율은 25%에 불과하다.
AML은 여러 아형으로 분류되는 이질적인 질병이다. AML 아형에는 FAB(French-American-British) 시스템과 WHO(World Health Organization) 분류 시스템의 두 가지 주요 분류 시스템이 있다. FAB 분류 시스템은 가장 일반적으로 사용되는 시스템이며 본 명세서에서 언급되는 시스템이다. AML 진단을 받은 대부분의 사람들은 AML의 9 가지 다른 FAB 하위 유형(M0, M1, M2, M3, M4, M4 eos, M5, M6 & M7) 중 하나를 갖는다. AML의 케이스의 예후는 종종 특히 FAB AML 아형에 따라 다르다.
기술 발전과 질병에 대한 새로운 이해에도 불구하고 AML 진단을 받은 환자의 전체 생존율을 정체 상태에 있으며 상당한 수의 사람들이 계속해서 질병으로 사망하고 있다. 화학 요법은 현재 AML의 주요 치료 방식이며 유도 및 강화의 두 가지 주요 단계를 포함한다. 유도 요법은 암의 완전한 관해(remission)를 목표로 한다. 강화는 관해 후 치료에 주어진 용어이다. 환자는 치료 관련 사망으로 인해 치료 시작 후 며칠 이내에 사망할 수 있다. 환자가 완치되지 않는 주된 이유는 치료에 대한 저항성이며, 이는 종종 관해에서 재발하는 것으로 나타난다. 그러나 성인 재발성 또는 불응성 AML에 대한 현재 치료 표준이 없으며, 이러한 환자의 예후는 일반적으로 좋지 않다.
AML은 여전히 도전적인 질병이며 이 공격적인 암의 치료를 위한 새로운 치료법에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 아르기닌 고갈제를 사용하여 급성 골수성 백혈병(AML)을 치료하는 방법 및 AML 치료용 약제의 제조에서 아르기닌 고갈제의 용도를 제공한다.
본 발명의 발명자는 놀랍게도 특정 FAB AML 아형이 다른 것보다 아르기닌 고갈에 현저하게 더 잘 반응한다는 것을 발견하였다. 따라서 본 명세서에 설명된 방법 및 용도는 FAB AML 아형에 기초한 AML의 표적 치료에 유용할 수 있다.
제1 양태에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상에 치료 유효량의 아르기닌 고갈제를 투여하는 것을 포함하며, AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)이다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 아르기닌 이화 효소를 포함한다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 이화 효소는 아르기닌 데미나제, 아르기나제, 아르기닌 데카르복실라제 또는 아르기닌 2-모노옥시게나제이다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 합성 아르기닌 고갈제이다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인, 면역글로불린의 Fe 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹, 인간 트랜스페린, XTEN, 프롤린-알라닌-세린 폴리머(PAS), 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP), 호모 아마노산 폴리머(HAP), 인공 젤라틴 유사 단백질(GLK), 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 또는 이들의 조합을 포함한다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 일간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 이들의 조합을 포함한다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
제1 양태의 일 실시예에서, AML은 FAB 아형 M4 또는 M7이다.
제1 양태의 일 실시예에서, AML은 FAB 아형 M7이며 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
제1 양태의 일 실시예에서, AML은 FAB 아형 M7이며 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
제1 양태의 일 실시예에서, AML은 아르기닌에 대해 영양요구성이다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 근육 내, 정맥내, 피하 또는 경구로 투여된다.
제1 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 정맥내로 투여된다.
제1 양태의 일 실시예에서, 대상은 인간이다.
제2 양태에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상의 AML의 치료를 위해 약제의 제조를 위한 아르기닌 고갈제의 용도를 제공하며, AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)이다.
제3 양태에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제를 제공하며, AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)이다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 아르기닌 이화 효소를 포함한다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 이화 효소는 아르기닌 데미나제, 아르기나제, 아르기닌 데카르복실라제 또는 아르기닌 2-모노옥시게나제이다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 합성 아르기닌 고갈제이다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인, 면역글로불린의 Fe 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹, 인간 트랜스페린, XTEN, 프롤린-알라닌-세린 폴리머(PAS), 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP), 호모 아마노산 폴리머(HAP), 인공 젤라틴 유사 단백질(GLK), 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 또는 이들의 조합을 포함한다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 일간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 이들의 조합을 포함한다.
제2 양태의 일 실시예에서, AML은 아르기닌에 대해 영양요구성이다.
제2 양태의 일 실시예에서, 약제는 근육 내, 정맥내, 피하 또는 경구 투여를 위해 조제된다.
제2 양태의 일 실시예에서, 약제는 정맥내 투여를 위해 조제된다.
제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 대상에게 근육 내, 정맥내, 피하 또는 경구로 투여된다.
제3 양태의 일 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 대상에게 정맥내로 투여된다.
제2 또는 제3 양태의 일 실시예에서, 대상은 인간이다.
정의
다음과 같은 의미를 갖는 특정 용어가 본 명세서에서 사용된다.
본 출원에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 “a”, “an” 및 “the”는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 참조를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 “포함하는(comprising)”은 포괄적이지 않은 의미에서 “포함하는(including)”을 의미한다. “포함하다(comprise)” 및 “포함하다(comprises)”와 같은 “포함하는(comprising)”의 변형은 상응하는 다양한 의미를 갖는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 “복수”는 하나 초과를 의미한다. 특정 구체적 양태 또는 실시예에서, 복수는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 또는 그 이상, 및 그 안에서 유도 가능한 임의의 수치 값, 및 그 안에서 유도 가능한 임의의 범위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 수치 값의 범위와 관련하여 사용될 때 용어 “사이”는 범위의 각 종점에서의 수치 값을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 제품을 설명하기 위하여 사용될 때 용어 “합성”은 자연적으로 발생하는 제품이 아닌 인각이 생산한 제품을 의미한다. 예를 들어, “합성” 아르기닌 고갈제는 인공 화학 반응에 의해 생성된 아르기닌 고갈제를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 “치료하다”, “치료하는”, “치료” 등은 장애/질병 및/또는 이와 관련된 증상을 감소시키거나 관해시키는 것을 지칭한다. 배제되지는 않지만, 장애 또는 병태를 치료하는 것이 그와 관련된 장애, 병태 또는 증상을 완전히 제거할 것을 요구하지는 않는다는 것을 이해할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 “이화작용(catabolism)” 또는 “이화(catabolic)”는 분자가 다른 분자, 예를 들어 더 작은 분자로 분해되는 화학 반응을 의미한다. 예를 들어 용어 “아르기닌 이화 효소”는 아르기닌과 반응하여 이를 오르니틴, 시트룰린 및 아그마틴과 같은 다른 분자로 변형시킬 수 있는 임의의 효소를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 “대상”은 인간, 인간이 아닌 영장류, 개, 고양이 및 설치류를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 “FAB 아형”, “FAB AML 아형” 및 “FAB AML”은 FAB(French-American-British) 분류 시스템에 의해 분류되는 AML의 아형을 의미한다. FAB 시스템은 AML을 백혈병이 발생하는 세포 유형과 세포의 성숙 정도에 따라 M0, M1, M2, M3, M4, M4 eos, M5, M6 및 M7의 9 가지 아형으로 나눈다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, “서열 동일성”의 백분율은 서열 사이에 최대 상관관계를 제공하도록 정렬된 두 서열의 비교로부터 발생하는 것으로 이해될 것이다. 이는 정렬 정도를 향상시키기 위해 하나 또는 두 시퀀스 모두에 “갭”을 삽입하는 것을 포함할 수 있다. 서열 동일성의 백분율은 비교되는 각각의 서열의 길이에 걸쳐 결정될 수 있다. 예를 들어, 다른 뉴클레오티드 서열(“쿼리 서열”)과 적어도 95%의 “서열 동일성”을 갖는 뉴클레오티드 서열(“대상 서열”)은 대상 서열이 쿼리 서열의 100 뉴클레오티드 당 최대 5 개의 뉴클레오티드 변경을 포함할 수 있다는 것을 제외하고 대상 서열이 쿼리 서열과 동일하다는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 즉, 쿼리 서열에 대해 적어도 95%의 서열 동일성의 뉴클레오티드 서열을 획득하기 위해, 대상 서열에서 뉴클레오티드의 최대 5%(즉, 100개 중 5개)가 삽입되거나 다른 뉴클레오티드로 치환되거나 결실될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 암을 설명하기 위해 사용될 때 용어 “영양요구성”은 성장 및/또는 대사에 필요한 하나 이상의 특정 물질을 합성할 수 없는 암을 의미한다. 예를 들어, “아르기닌에 대한 영양요구성”인 AML은 아르기닌을 합성할 수 없는 AML을 의미한다.
본 개시의 상기 및 다른 양태 및 실시예는 첨부된 도면과 함께 취해지는 경우 개시의 다음 설명으로부터 명백해질 것이다.
도 1은 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS)와 우레아 사이클 사이의 관계의 개략도를 제공한다.
도 2는 NEI-01 치료 후에 췌장 세포주(Mia PaCa-2)에서 자가포식(LC3-II, BECLIN-1 및 포스포-AMPKα) 및 사멸(PARP-1) 마커의 발현 수준을 보여주는 겔 이미지이다.
도 3은 NEI-01 치료 후에 AML 세포주(HL-60)에서 자가포식(LC3-II, p62, 포스포-AMPK-α, AMPK-α) 및 사멸(카스파제-9) 마커의 발현 수준을 보여주는 겔 이미지이다.
도 4는 C1498(M4) 동계(syngeneic) AML 모델에서 AML이 있는 마우스의 Kaplan-Meier 생존 곡선을 제공한다.
도 5a는 C1498(M4) 동계 AML 모델에서 생체내 생물발광 이미징을 사용하여 모니터링되고 정량화된 종양 부담(tumour burden)의 이미지를 제공한다.
도 5b는 C1498(M4) 동계 AML 모델에서 생체내 생물발광 이미징을 사용하여 모니터링되고 정량화된 종양 부담의 이미지를 제공한다.
도 5c는 C1498(M4) 동계 AML 모델에서 생체내 생물발광 이미징을 사용하여 모니터링되고 정량화된 종양 부담의 이미지를 제공한다.
도 5d는 C1498(M4) 동계 AML 모델에서 생체내 생물발광 이미징을 사용하여 모니터링되고 정량화된 종양 부담의 이미지를 제공한다.
도 6은 C1498(M4) 동계 AML 모델에서 생체내 생물발광 이미징을 사용하여 모니터링되고 정량화된 종양 부담의 그래프를 제공한다.
도 7는 KG-1-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M0) 이종이식 모델에서 반복된 NEI-01 치료 후에 종양 성장의 억제를 보여주는 그래프를 제공한다. (A)는 4주 동안 평균 종양 부피의 변화를 보여준다. (B)는 4주에 걸쳐 평균 T/C%의 변화를 보여준다. 종양 부피는 3일마다 측정되었다. 28일까지 치료 그룹에서 39% 감소가 관찰되었다. 통계는 사후 분석을 위한 Sidak의 다중 비교에 이어 RM two-way ANOVA를 사용하여 계산되었다. **는 0.01 미만의 p-값을 나타낸다. ***는 0.001 미만의 p-값을 나타낸다.
도 8은 HL-60-gfphi-Luc+ AML 세포가 이식된 마우스에서 생물발광 신호를 보여주는 그래프를 제공한다. 생체내 BLI는 일주일에 두 번 수행되었으며 BLI 강도의 변화가 표시되었다. 데이터는 평균 ±SEM으로 표현된다.
도 9는 P31/FUJ-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M5) 이종이식 모델에서 반복된 NEI-01 치료 후 종양 성장의 억제를 나타내는 그래프를 제공한다. (A)는 4주 동안 평균 종양 부피의 변화를 보여준다. (B)는 4주에 걸쳐 평균 T/C%의 변화를 보여준다. 통계는 사후 분석을 위한 Sidak의 다중 비교에 이어 RM two-way ANOVA를 사용하여 계산되었다. *는 0.05 미만의 p-값을 나타낸다. **는 0.01 미만의 p-값을 나타낸다. ***는 0.001 미만의 p-값을 나타낸다. (C)는 대조군과 치료군 사이의 종양 무게의 차이를 보여준다.
도 10은 MKPL-1-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M7) 이종이식 모델에서 반복된 NEI-01 치료 후 종양 성장의 억제를 나타내는 그래프를 제공한다. (A)는 3주 동안 평균 종양 부피의 변화를 보여준다. (B)는 3주에 걸쳐 평균 T/C%의 변화를 제공한다. (C)는 연구 종료 후 종양 무게를 보여준다. 통계는 사후 분석을 위한 Sidak의 다중 비교에 이어 RM two-way ANOVA를 사용하여 계산되었다. *는 0.05 미만의 p-값을 나타낸다. **는 0.01 미만의 p-값을 나타낸다. ***는 0.001 미만의 p-값을 나타낸다.
도 11은 말초 혈액에서 종양 부담(hCD45+ 세포의 %로 표시됨)의 성장 곡선 그래프를 제공한다. 데이터는 평균 ±SEM으로 표현된다.
도 12는 AM8096 모델에서 마우스의 Kaplan-Meirer 생존 곡선의 그래프이다.
도 13은 NEI-01에 대한 Jurkat 세포의 생체내 반응을 보여주는 그래프를 제공한다. (A)는 4주에서 종양 부피(%)의 변화를 보여준다. (B)는 4주에서 평균 T/C%의 변화를 보여준다. 종양 부피는 일주일에 두 번 측정되었다. 데이터는 평균 ±SEM으로 표현된다. 양측 스튜던트 T-테스트(two-tailed T-test)가 사용되었다. *는 0.05 이하의 p값을 나타낸다.
도 14a는 1일 및 22일에 반복 투여 연구에 대한 수컷 마우스에서의 NEI-01의 평균 혈장 농도의 그래프를 제공한다.
도 14b는 1일 및 22일에 반복 투여 연구에 대한 암컷 마우스에서 NEI-01의 평균 혈장 농도의 그래프를 제공한다.
급성 골수성 백혈병(AML)은 성인과 어린이에서 가장 흔한 급성 백혈병 중 하나이다. AML을 치료하기 위한 현재의 방법은 때때로 치료 관련 사망에 대한 책임이 있다. 치료가 초기에 성공한 경우 관해에서 재발하는 것이 일반적이다. 이 공격적인 암에 대한 새로운 치료법을 개발하는 것이 매우 중요하다.
본 발명은 아르기닌 고갈제를 사용하여 AML을 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에 제공된 방법은 질병 및/또는 이와 관련된 증상을 감소시키거나 완화할 수 있다. 방법은 상기 질병 및/또는 증상을 완전히 제거하거나 제거하지 않을 수 있다. 본 명세서에 설명된 아르기닌 고갈제는 또한 AML 치료용 약제의 제조에 사용될 수 있으며, 이는 질병 및/또는 이와 관련된 증상을 감소 또는 개선할 수 있고 상기 질병 및/또는 증상을 완전히 제거하거나 제거하지 않을 수 있다.
FAB AML 아형
AML은 여러 아형으로 분류되는 이질적인 질병이다. AML 아형에는 FAB(French-American-British) 시스템과 WHO(World Health Organization) 분류 시스템의 두 가지 주요 분류 시스템이 있다. FAB 분류 시스템은 가장 일반적으로 사용되는 시스템이며 본 명세서에서 언급되는 시스템이다. AML 진단을 받은 대부분의 사람들은 AML의 9가지 다른 FAB 아형(M0, M1, M2, M3, M4, M4 eos, M5, M6 & M7) 중 하나를 갖는다. AML의 케이스의 예후는 종종 특히 AML 아형에 따라 다르다.
FAB 분류 시스템은 표 1에 약술된 바와 같이 백혈병이 발생하는 세포의 유형 및 세포의 성숙도에 기초하여 AML을 아형 M0 내지 M7로 나눈다:
표 1: FAB AML 아형 및 설명
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본 발명은 AML의 치료 방법 및 임의의 아형의 AML 치료용 약제의 제조를 위한 아르기닌 고갈제의 용도를 제공한다. 일부 실시예에서, 본 발명은 FAB AML M0을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 아르기닌 고갈제의 용도 및 방법을 제공한다. 본 발명의 방법 및 약제는 또한 FAB AML M2를 치료하는데 사용될 수 있다. 다른 실시예에서, 본 발명은 FAB AML M4를 치료하기 위한 방법 및 약제를 제공한다. 추가 실시예에서, 본 발명은 FAB AML M4 eos를 치료하기 위한 방법 및 약제를 제공한다. 또 다른 실시예에서, 본 발명은 FAB AML M5를 치료하기 위한 방법 및 약제를 제공한다. FAB AML M6를 치료하기 위한 방법 및 약제가 또한 본 명세서에 제공된다. 본 발명은 또한 FAB AML M7을 치료하기 위한 방법 및 약제를 제공한다. 본 명세서에 제공된 방법 및 약제가 FAB 분류 시스템에 의해 정의된 바와 같이 AML 아형을 치료하는 맥락에서 제시되지만, 당업자는 임의의 다른 분류 시스템 또는 방법을 사용하여 분류된 AML의 사례를 치료하는데 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
FAB AML 분류 시스템은 1976년에 확립되었으며 당업계에 잘 알려져 있다. 당업자는 예를 들어 조직화학적 염색 및 현미경을 사용하여 샘플의 FAB AML 아형을 쉽게 식별할 수 있다. 사용된 AML 샘플은 예를 들어 말초 혈액, 골수 흡인물 또는 생검에서 얻을 수 있다. 식별을 돕기 위한 이미지를 포함하여 각 FAB AML 아형에 대한 자세한 설명은 “Holland-Frei Cancer Medicine, 6th edition”, Kufe DW, Pollock RE, Weichselbaum RR, et al. (eds.) Hamilton (ON), 1983의 Charles A. Schiffer, MD 및 Richard M. Stone, MD (2003)에 제공된다.
아르기닌은 다양한 대사 경로에 필요하다. 많은 종양은 아르기닌 합성에 필요한 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS) 및/또는 오르티닌 트랜스카르바모일라제(OTC)의 부재 또는 낮은 수준으로 인한 아르기닌에 대한 영양요구성이다. AML의 대부분의 경우 세포는 인간의 ASS를 암호화하는 유전자인 ASS1이 결핍된다. Western Blot, ELISA SDS-PAGE 또는 면역침강법과 같은 잘 알려진 방법을 사용하여 AML 샘플의 세포가 전술한 효소 중 하나 또는 둘 다에서 결핍되었는지 여부를 결정하는 것은 당업자에게 용이할 것이다.
본 발명의 일부 실시예는 치료적 유효량의 아르기닌 고갈제를 대상에게 토여하는 것을 포함하는 대상의 AML을 치료하는 방법을 제공한다. 추가의 실시예는 AML 치료를 필요로 하는 대상에서 AML의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 아르기닌 고갈제의 용도를 제공한다. 대상은 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이 및 설치류를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)일 수 있다.
아르기닌 고갈제
본 명세서에 설명된 치료 방법 및 약제에 사용되는 아르기닌 고갈제는 대상에서 아르기닌의 혈장 및/또는 세포 수준을 감소시킬 수 있는 것으로 당업계에 공지된 임의의 아르기닌 고갈제일 수 있다. 아르기닌 고갈제는 예를 들어 소분자 또는 단백질일 수 있다.
일부 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 아르기닌 이화 효소를 포함한다. 아르기닌 이화 요소의 비제한적인 예는 아르기나제, 아르기닌 데이미나제, 아르기닌 데카르복실라제 및 아르기닌 2-모노옥시게나제를 포함한다.
아르기나제는 박테라이, 진균 어류, 인간, 소, 돼지, 토끼, 설치류, 영장류, 양 및 염소에 의해 생산되는 것과 같은 당업계에 공지된 임의의 아르기나제일 수 있다. 아르기나제의 비제한적인 예는 바실러스 칼도벨록스(Bacillus caldovelox) 아르기나제, 테르무스 테르모필루스(Thermus thermophilus) 아르기나제, 염소(Capra hircus) 아르기나제 I, 벌거숭이 뻐드렁니 쥐(Heterocephalus glaber) 아르기나제 I, 유럽 가축우(Bos taurus) 아르기나제 I, 멧돼지(Sus scrofa) 아르기나제 I, 은어(Plecoglossus altivelis) 아르기나제 I, 대서양 연어(Salmo salar) 아르기나제 I, 온코르힌추스 미키스(Oncorhynchus mykiss) 아르기나제 I, 오스메루스 모르다크스(Osmerus mordax) 아르기나제 I, 날개조개(Hyriopsis cumingii) 아르기나제 I, 갈색쥐(Rattus norvegicus) 아르기나제 I, 마우스(Mus musculus) 아르기나제 I, 호모 사피엔스(Homo sapiens) (인간) 아르기나제 I, 침팬지(Pan troglodytes) 아르기나제 I, 굴토끼(Oryctolagus cuniculus) 아르기나제 I, 갈색쥐(Rattus norvegicus) 아르기나제 II, 마우스(Mus musculus) 아르기나제 II, 호모 사피엔스(Homo sapiens) (인간) 아르기나제 II, 유럽 가축우(Bostaurus) 아르기나제 II, 벌거숭이 뻐드렁니 쥐(Heterocephalus glaber) 아르기나제 II, 침팬지(Pan troglodytes) 아르기나제 II, 굴토끼(Oryctolagus cuniculus) 아르기나제 II, 델프티아(Delftia) 아르기나제, 바실러스 코아큘란스(Bacillus coagulans) 아르기나제, 훼플레아 포토트로피카(Hoeflea phototrophica) 아르기나제 및 로제이플렉서스 카스텐홀지(Roseiflexus castenholzii) 아르기나제를 포함한다. 다른 예로는 바실러스 메탄올리쿠스(Bacillus methanolicus), 바실러스 속(Bacillus sp). NRRL B-14911, 플라노코커스 동해엔시스(Planococcus donghaensis), 파에니바실러스 덴드리티포르미스(Paenibacillus dendritiformis), 데스모스포라 속(Desmospora sp.), 메틸로박터 툰드리팔루덤(Methylobacter tundripaludum), 스테노트로포모나스 속(Stenotrophomonas sp.), 마이크로박테리움 라에바니포르만스(Microbacterium laevaniformans), 포르피로모나스 우에노니스(Porphyromonas uenonis), 아그로박테리움 속(Agrobacterium sp.), 옥타데카박터 아르크티쿠스(Octadecabacter arcticus), 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens), 아녹시바실러스 플라비테르무스(Anoxybacillus flavithermus), 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus), 게오바실러스 테르모글루코시다시우스(Geobacillus thermoglucosidasius), 게오바실러스 테르모글루코시단스(Geobacillus thermoglucosidans), 브레리바실러스 라테르스포러스(Brevibacillus laterosporus), 데술포토마쿠룸 루미니스(Desulfotomaculum ruminis), 게오바실러스 카우스토필러스(Geobacillus kaustophilus), 게오바실러스 테르모레오보란스(Geobacillus thermoleovorans), 게오바실러스 테르모데니트리피칸스(Geobacillus thermodenitrificans), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 할로필릭 아르카에온(Halophilic archaeon DL31), 할로피게르 크사나두엔시스(Halopigerxanaduensis), 나트리알바 마가디(Natrialba magadii), 플라스모딤 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 등으로부터의 아르기나제를 포함한다.
본 발명의 방법 및 약제에 사용되는 아르기닌 데이미나제는 마이코플라스마(Mycoplasma), 락토코커스(Lactococcus), 슈도모나스(Pseudomonas), 스트렙토코커스(Steptococcus), 에스케리키아(Escherichia), 마이코박테리움(Mycobacterium) 또는 바실러스(Bacillus) 미생물로부터 생산 된 것과 같은 당업계에 알려진 임의의 아르기닌 데이미나제일 수 있다. 예시적인 아르기닌 데이미나제는 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis), 마이코플라스마 아르기니니(Mycoplasma arginini), 마이코플라스마 아르쓰리티디스(Mycoplasma arthritidis), 클로스트리듐 페르프린겐스(Clostridium perfringens), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi), 보렐리아 아프젤리이(Borrelia afzellii), 엔테로코커스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 뉴모니아(Steptococcus pneumoniae), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 기아르디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis), 미코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis), 슈도모나스 플레코글로시시다(Pseudomonas plecoglossicida), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 등으로부터 생산된 것을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
아르기닌 데카르복실라제는 대장균(Escherichia coli.), 살모넬라 티필뮤리움(Salmonella typhimurium), 클라미도필라 뉴모니아(Chlamydophila pneumoniae), 메타노칼도코커스 야나시(Methanocaldococcus jannaschii), 파라메시움 부르사리아 클로렐라 바이러스 1(Paramecium bursaria Chlorella virus 1), 비브리오 벌니피쿠스 YJ016 (Vibrio vulnificus YJ016), 캄필로박터 제주니 subsp.(Campylobacter jejuni subsp.), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 설포로버스 솔파타리쿠스(Sulfolobus solfataricus), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 카리카 파파야(Carica papaya), 니코티아나토바쿰(Nicotianatobacum), 클리신 맥스(Glycine max), 로터스 코니큘라타(Lotus coniculata), 비브리오 벌니피쿠스(Vibrio vulnificus), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 마우스(Mus musculus), 테르모토가(Thermotoga), 갈색쥐(Rattus norvegicus), 호모 사피엔스(Homo sapiens), 유럽 가축우(Bos taurus), 서스크로파(Susscrofa), 테르무스 테르모필레스(Thermus thermophiles), 테르무스 파르바티엔시스(Thermus parvatiensis), 테르무스 아쿼티쿠스(Thermus aquaticus), 테르푸스 테르모필러스(Thermus thermophilus), 테르무스 이슬란디쿠스(Thermus islandicus), 아라비도프시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana), 아베나 사티바(Avena sativa) 등에 의해 생산된 것과 같은 당업계에 공지된 임의의 아르기닌 데카르복실라제일 수 있다.
본 발명의 방법 및 약제에 사용되는 아르기닌 2-모노옥시게나제는 아르쓰로박터 글로비포르미스 IFO 12137(Arthrobacter globiformis IFO 12137), 아르쓰로박터 심플렉스(Arthrobacter simplex IFO 12069), 브레비박테리움 헬로볼룸 IFO 12073(Brevibacterium helvolum IFO 12073), 헬리코박터 시나에디 CCUG 18818(Helicobacter cinaedi CCUG 18818), 스트렙토코커스 그리세우스(Streptomyces griseus) 등에 의해 생산된 것과 같은 당업계에 공지된 임의의 아르기닌 2-모노옥시게나제일 수 있다.
본 발명의 아르기닌 고갈제는 자연 발생 및/도는 합성 제품을 포함할 수 있다. 본 발명의 일부 실시에에서, 아르기닌 고갈제는 자연 발생 아르기닌 이화 효소를 포함한다. 다른 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 합성 아르기닌 이화 효소를 포함한다.
아르기닌 고갈제는 전체 단백질 및/또는 이의 기능적 단편 및/또는 변이체를 포함할 수 있다. 방법 및 용도에서 사용되는 아르기닌 데카르복실라제, 아르기닌 데에미나제, 아르기닌 2-모노옥시게나제, 아르기나제 및 다른 아르기닌 고갈제는 단백질 및/또는 이의 기능적 단편 및/또는 변이체를 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인, 면역글로불린의 Fe 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹 또는 이들의 조합과 융합하는 것과 같이 그 약동학적 특성을 향상시키기 위해 변형될 수 있다. 본 발명의 일부 실시예에서, 전술한 변형 중 하나 이상은 아르기닌 고갈제의 반감기를 연장시킨다. 다른 실시예에서, 반감기의 증가는 동일한 결과를 달성하는데 필요한 아르기닌 고갈제의 투여 빈도를 감소시킨다. 아르기닌 고갈제에 대한 전술한 변형 중 하나 이상은 면역 원성을 감소시켜 부작용을 피하는데 도움이 될 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 아르기닌 이화 효소는 예를 들어 PEG가 선택적으로 부착될 수 있는 효소 상의 특정 부위를 포함하도록 조작될 수 있다. 선택된 페길화 부위는 효소의 활성 부위에서 제거된 부위에 위치될 수 있고/있거나 일반적으로 용매에 노출되어 페길화 시약과 반응할 수 있다.
당업계에 공지된 임의의 페길화 시약을 사용하여 PEG를 본 명세서에 설명된 아르기닌 이화 효소에 공유 부착시킬 수 있다. 예시적인 페길화 시약은 mPEG-ALD(메톡시폴리에틸렌 글리콜-프로피온알데히드); mPEG-MAL(메톡시폴리에틸렌 글리콜-말레이미드); mPEG-NHS(메톡시폴리에틸렌 글리콜-N-히드록시-숙신이미드); mPEG-SPA(메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙신이미딜 프로피오네이트); 및 mPEG-CN(메톡시폴리에틸렌 글리콜-시아누르산 클로라이드)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시예에서, PEG 그룹은 약 5,000 내지 약 20,000 amu, 약 5,000 내지 약 15,000 amu, 약 5,000 내지 약 12,000 amu, 약 7,000 내지 약 12,000 amu 또는 약 7,000 내지 약 10,000 amu의 분자량을 갖는다. 특정 실시예에서, PEG 그룹은 약 2,000 amu 내지 10,000 amu의 분자량을 갖는다. 일부 실시예에서, PEG 그룹은 PEG 4,000, PEG 5,000, PEG 6,000 또는 PEG 7,000이다.
PEG 그룹은 효소에 직접 공유적으로 부착되거나 링커를 통해 부착될 수 있다. 특정 실시예에서, 효소는 프로피온산 링커를 통해 PEG에 공유 부착된다.
아르기닌 이화 효소는 본질적으로 긴 혈청 반감기를 갖는 단백질에 융합될 수 있으며, 이는 보다 바람직한 약동학적 프로파일을 초래할 수 있다. 본 발명의 아르기닌 고갈제는 항체 FC 도메인 및/또는 혈청 알부민을 포함할 수 있다. 아르기닌 고갈제는 항체 FC 도메인 및/또는 혈청 알부민에 유전적으로 융합된 아르기닌 이화 효소를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 면역글로불린의 Fe 영역은 인간 면역글로불린, 예를 들어 IgG로부터 유래한다. 일부 실시예에서, 효소는 알부민 결합 도메인에 융합될 수 있다. 일부 실시예에서, 효소는 인간 트랜스페린에 융합될 수 있다.
본 발명의 추가 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 비구조화 폴리펩티드에 융합된 아르기닌 이화 효소를 포함한다. 비구조화 폴리펩티드에 대한 효소의 융합은 제제의 전체 크기 및/또는 유체역학적 반경을 증가시킬 수 있다. 본 발명의 일부 실시예에서, 아르기닌 이화 효소는 재조합 PEG 모방체(XTENylation)인 XTEN, 프롤린-알라닌-세린 폴리머(PASylation)인 PAS, 엘라스틴 유사 폴리펩티드(ELPylation)인 ELP, 동종 아미노산 폴리머(HAPylation)인 HAP 및 인공 젤라틴 유사 단백질(GLK) 중 하나 이상에 융합된다.
본 발명의 일부 실시예에서 사용되는 아르기닌 이화 효소는 제제의 음전하를 증가시킬 수 있는 음이온성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 효소는 카르복시 말단 펩티드(CTP)에 융합될 수 있다. 적합한 CTP 융합의 한 비제한적 예는 인간 융모막 성선자극호르몬(CG) β 사슬로부터의 CTP의 유전적 융합이다.
아르기닌 이화 효소는 혈청 알부민과의 비공유 상호작용을 통해 혈청 알부민에 연결될 수 있으며, 이는 또한 제제의 반감기를 연장할 수 있다. 본 발명의 실시예의 일 비제한적 예에서, 알부민 결합 모이어티(moiety)는 치료 효소에 접합되거나 유전적으로 융합된다. 많은 유형의 모이어티가 (i) 알부민에 대한 고유 친화도를 갖는 분자; (ii) 알부민 결합 활성을 나타내도록 생성되고 선택된 펩티드, 항체 단편, 대체 스캐폴드 및 작은 화학물질을 포함하여 사용될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
재조합 융합 단백질은 1980년대에 처음 사용되었으며 각각 별개의 단백질을 암호화하는 2개 이상의 유전자의 융합에 의해 생성된다. 융합 단백질의 합성을 위한 다양한 방법이 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 합성 융합 단백질의 설계 및 구성에 현재 사용되는 가장 일반적인 접근법의 검토를 제공하는 Yu et al., Biotechnology Advances, 2015; 33: 155-164를 살펴본다. Strohl, Biodrugs, 2015; 29(4): 215-239는 융합 단백질에 대한 다른 상세한 검토를 제공하고 융합 방법 및 상이한 유형의 융합 단백질 모두의 이점 및 단점을 개략적으로 설명한다.
본 발명의 일부 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO:1에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 다른 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO:1에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 또 다른 실시예에서, 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO:1에 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
서열 간의 상동성 및 동일성의 수준을 평가하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 두 서열 사이의 서열 동일성의 백분율은 예를 들어 수학적 알고리즘을 사용하여 계산될 수 있다. 적합한 수학적 알고리즘의 비제한적인 예는 Karlin 및 동료들의 간행물(1993, PNAS USA, 90:5873-5877)에 설명된다. 이 알고리즘은 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 웹사이트 홈페이지(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)를 통해 접근 가능한 프로그램의 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool) 계열에 통합된다(Altschul et al.(1990), J. Mol. Biol. 215, 403-410 또는 Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res, 25:3389-3402 참조). BLAST 프로그램은 https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi에서 자유롭게 접근 가능하다. 다른 비제한적인 예는 Clustal(http://www.clustal.org/) 및 FASTA(Pearson(1990), Methods Enzymol. 83, 63-98; Pearson and Lipman(1988), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 85, 2444-2448.) 프로그램을 포함한다. 이러한 프로그램 및 다른 프로그램을 사용하여 주어진 입력 서열와 최소한 어느 정도 동일한 수준의 서열을 식별할 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, Wisconsin Sequence Analysis Package, 버전 9.1(Devereux et al. 1984, Nucleic Acids Res., 387-395)에서 이용 가능한 프로그램, 예를 들어 GAP 및 BESTFIT 프로그램은 2개의 폴리펩티드 서열 사이의 서열 동일성의 백분율을 결정하는데 사용된다. BESTFIT는 Smith 및 Waterman(1981, J. Mol. Biol. 147, 195-197)의 로컬 상동성 알고리즘을 사용하고 두 서열 사이에서 가장 유사한 단일 영역을 식별한다. 본 명세서에서 참조 아미노산 서열에 대해 특정 비율의 서열 동일성을 공유하는 아미노산 서열이 언급된느 경우, 서열 간의 차이는 부분적으로 또는 완전히 보존적 아미노산 치환에서 발생할 수 있다. 그러한 경우에, 보존적 아미노산 치환으로 식별된 서열은 참조 서열의 동일한 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 유지할 수 있다.
아르기닌 고갈제의 투여
치료적 사용을 위해, 본 명세서에 설명된 아르기닌 고갈제는 약제학적으로 허용되는 담체에 활성 성분으로서 본 명세서에 설명된 아르기닌 고갈제의 치료학적 유효량을 함유하는 약제학적 조성물로서 제조될 수 있다. 용어 “담체”는 활성 조성물과 함께 투여되는 희석제, 보조제 또는 비히클(vehicle)을 의미한다. 이러한 비히클은 석유, 동물성, 식물성 또는 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등과 같은 합성 기원을 포함하는 오일 및 물과 같은 액체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 0.9% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이러한 용액은 무균 상태일 수 있으며 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 종래의 잘 알려진 멸균 기술(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 안정화제, 증점제, 윤활제 및 착색제 등과 같은 대략적인 생리학적 조건에 필요한 약학적으로 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다. 이러한 약제학적 제제의 아르기닌 고갈제의 농도는 광범위하게 변할 수 있고 선택한 특정 투여 방식에 따라 필요한 용량, 체액 부피, 점도 등에 따라 선택될 수 있다. 적합한 비히클 및 제제는 예를 들어 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D. B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA. 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092에 설명되며, 특히 pp. 958-989를 참조한다.
치료 효과를 관찰하기 위해 필요한 대상에서 혈장 아르기닌의 농도는 대상의 상태 및/또는 AML 및/또는 식이 조성물의 유형 및 중증도를 포함하는 수많은 요인에 따라 달라질 수 있다. 목표 혈장 아르기닌 수준의 선택은 당업자의 기술 범위 내에 있다.
치료 기간, 예를 들어 혈장 아르기닌 농도가 대상에서 고갈된 상태로 유지되는 기간의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 특정 실시예에서, 치료 기간은 1주 초과, 2주 초과, 3주 초과, 4주 초과, 5주 초과, 6주 초과, 7주 초과, 8주 초과, 9주 초과, 10주 초과, 11주 초과, 12주 초과, 24주 초과, 28주 초과, 32주 초과, 36주 초과, 40주 초과, 44주 초과, 48주 초과, 52주 초과 또는 56주 초과이다.
본 발명의 방법 및 용도에서 아르기닌 고갈제의 투여 방식과 관련하여 제한이 적용되지 않는다. 본 발명의 일부 실시예에서, 아르기닌 고갈제의 투여 방식은 정맥내 투여이다. 본 명세서에 설명된 아르기닌 고갈제의 치료적 사용을 위한 투여 방식은 비경구 투여, 예를 들어 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및/또는 피하; 폐; 경점막(예를 들어, 경구, 배강내, 질내 및/또는 직장); 정제, 캡슐, 용액, 현탁액, 분말, 겔 및/또는 입자의 제형을 사용하는 것; 주사기, 이식된 장치, 삼투 펌프, 카트리지 및/또는 마이크로 펌프에 포함됨; 또는 당업계에 잘 알려진 바와 같이 숙련된 기술자에 의해 이해되는 다른 수단과 같은 대상에 제제를 전달하는 임의의 적절한 루트일 수 있다.
당업자는 광범위하게 설명된 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어나지 않고 특정 실시예에 개시된 바와 같이 본 발명에 대해 수많은 변형 및/또는 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것으로 간주되어야 하며 제한적이지 않다.
실시예
본 발명은 이제 하기의 특정 실시예를 참조하여 설명될 것이며, 이는 어떤 방식으로든 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1: 다양한 암 세포주에서 NEI-01의 세포독성.
외인성 아르기닌은 일부 아르기니노숙시네이트 합성효소(ASS)-결핍 암에서 성장에 필요하다. NEI-01은 아르기닌을 시트룰린과 암모니아로 전환할 수 있는 재조합 알부민 결합 아르기닌 데이미나제이며, 아르기닌을 고갈시켜 다양한 ASS 결핍 암의 성장을 억제한다(도 1). 세포독성 분석 결과는 NEI-01이 상이한 암 세포주의 범위에서 아르기닌을 고갈시키고 암 세포 성장(특히 ASS1 결핍 암 세포주의 경우)을 억제함을 입증했다(표 2).
표 2. NEI-01 치료 후 상이한 암 세포주에 대한 세포독성 분석 결과.
Figure pct00002
NEI-01 치료 후 상이한 AML 세포주에 대한 세포독성 분석의 결과가 표 3에 제공된다.
표 3. NEI-01 치료 후 상이한 AML 세포주에 대한 세포독성 분석 결과.
Figure pct00003
실시예 2: 사멸 및 자가포식. 췌장암 세포주 Mia PaCa-2의 NEI-01 치료.
자가포식 세포 사멸에 의한 아르기닌 결핍-매개된 세포 생존력의 감소를 확인하기 위해, Mia PaCa-2 세포를 콜로퀸(CQ)과 함께 또는 없이 지정된 농도의 NEI-01로 치료했다. 표시된 시점에서 세포를 수확하고 여러 자가포식 및 사멸 마커에 대한 항체를 사용하여 면역 블로팅을 수행했다.
도 2에 도시된 바와 같이, 자가포식 마커 LC3-II, BECLIN-1 및 포스포-AMPKα의 발현 수준이 NEI-01 치료 시 증가하였고, 이는 자가포식이 NEI-01-유도 세포 사멸에서 역할을 한다는 것을 암시한다. 반대로, NEI-01 치료 시 사멸 마커 PARP-1의 발현 수준이 감소하여 사멸 경로의 활성화를 입증했다. 이러한 결과는 사멸과 자가포식이 세포 사멸의 아르기닌 결핍-매개된 메커니즘에서 역할을 한다는 것을 보여준다.
실시예 3. AML 세포주 HL-60의 NEI-01 치료.
자가포식 세포 사멸에 의한 아르기닌 결핍-매개된 세포 생존력의 감소를 추가로 확인하기 위해, ASS1-결핍 HL-60 AML 세포를 NEI-01 및 CQ로 치료했다. 도 3에 도시된 바와 같이, 자가포식 마커 LC3-II, p62, 포스포-AMPKα 및 AMPKα의 발현 수준은 NEI-01 치료 시 증가했으며, 이는 자가포식이 NEI-01-유도된 세포 사멸에 역할을 한다는 것을 암시한다. 반대로, NEI-01 치료 후 사멸 마커 Caspase-9의 발현 수준이 감소하여 사멸 경로의 활성화를 입증했다. 이러한 결과는 사멸과 자가포식이 세포 사멸의 아르기닌 결핍-매개된 메커니즘에서 역할을 한다는 것을 보여준다.
실시예 4 내지 10: AML 아형에 대한 NEI-01의 효과
AML 아형을 식별하기 위한 2 개의 주요 분류 시스템 - FAB(French-American-British) 시스템 및 WHO(World Health Organization) 분류 시스템이 존재한다. FAB 시스템은 가장 일반적으로 사용되는 시스템이며 본 명세서에서 사용될 것이다. FAB 시스템에 따르면 AML로 진단받은 대부분의 사람들은 AML의 9가지 종류(아형) 중 하나를 갖는다: M0, M1, M2, M3, M4, M4 eos, M5, M6 및 M7.
실시예 4: C1498 동계 급성 골수성 백혈병(FAB AML M4) 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
이 연구는 C1498 동계 AML(FAB AML M4) 모델에서 아르기닌 결핍 효소 NEI-01의 항암 활성을 평가하는 것을 목표로 했다.
뮤린 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1) - 루시페라제 및 녹색 형광 단백질(GFP)로 공동 표지된 결핍 C1498 세포를 C57BL/6 마우스에 정맥내(i.v.) 이식하여 동계 AML 모델을 확립했다. 마우스를 무작위로 4개의 그룹으로 나누었다. 4개 그룹 및 대응하는 치료 요법에 대한 자세한 내용은 표 4에 제공된다.
표 4: C1498 동계 급성 골수성 백혈병(FAB AML M4) 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00004
결과는 NEI-01을 사용한 치료가 PBS-치료된 대조군과 비교하여 AML 아형 M4를 갖는 마우스의 전체 생존을 상당히 연장시켰음을 보여줬다(도 4). 중간 생존일(MSD)은 그룹 1(대조군)의 24일에서 그룹 2(주 1회 NEI-01 140 U/kg으로 치료됨, p = 0.0058 vs 대조군)의 29일로 연장됐다.
또한, 그룹 3의 마우스의 60% 초과(NEI-01 280 U/kg으로 주 1회 치료됨) 및 그룹 4의 모든 마우스(NEI-01 280 U/kg으로 주 2회 치료됨)가 실험이 끝날 때까지 살아남았다. 평균 생존율은 그룹 3 및 그룹 4에서 >31일 이었다(그룹 3 vs 대조군, p = 0.0003; 그룹 4 vs 대조군, p < 0.0001). 전체 생존에 대해 관찰된 결과와 일관되게 NEI-01을 사용한 치료는 질병 진행을 늦출 뿐만 아니라 총 백혈병 부담을 크게 줄였다(도 5 및 6). 이러한 NEI-01의 항암 활성은 용량 의존적 방식으로 나타났다.
이 연구는 C1498 동계 AML M4 모델에서 NEI-01의 강력한 항암 활성을 입증했다.
실시예 5: KG-1 유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M0) 이종이식 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
이 연구에서, NEI-01의 항암 효과는 뮤린 이종이식 모델에서 평가됐다.
인간 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1) - 결핍 M0-아형 급성 골수성 백혈병 KG-1 세포를 면역결핍 BALB/c 누드 마우스에 피하 주사했다. 종양 부피가 180 mm3에 도달했을 때 마우스를 일주일에 한 번 MHT 완충액 또는 NEI-01(280 U/kg)으로 정맥 주사(i.v.) 치료했다. 연구 그룹 및 대응하는 치료 요법의 세부 사항은 표 5에 제공된다.
표 5: KG-1 유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M0) 이종이식 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00005
종양 부피는 3일마다 측정됐다. 4주 후, 마우스(n=9)를 희생시켰다. 이종이식 종양이 해부되고 개별적으로 무게를 측정했다.
결과는 NEI-01 치료가 종양의 부피를 상당히 감소시켰음을 보여줬다(도 7). 39% 감소가 28일까지 관찰되었다. 최종 T/C 비율은 60.6%에 도달했다. 연구 종료 시 종양 무게는 대조군에서 3.41 ± 0.53g, NEI-01(280 U/kg 주 1회) 치료군에서 2.03 ± 0.47g이었다. 종양 무게가 40.38% 감소했다.
이 연구는 뮤린 AMl M0 KG-1 이종이식에서 NEI-01의 효율적인 항암 활성을 입증했다.
실시예 6: HL-60 유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M2) 동소 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
이 연구에서, NEI-01의 항암 활성은 뮤린 동소 AML 모델에서 평가됐다.
인간 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1) - 루시페라제 및 녹색 형광 단백질(GFP)로 공동 표지된 결핍 M2-아형 급성 골수성 백혈병 HL-60 세포를 동소 AML 모델을 확립하기 위해 비 비만 당뇨병/중증 복합 면역결핍(NOD/SCID) 마우스에 정맥내(i.v.) 이식했다. 마우스를 무작위로 3개의 그룹으로 나눴다. 연구 그룹 및 대응하는 치료 요법의 세부 사항은 표 6에 제공된다.
표 6: HL-60 유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M2) 동소 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00006
백혈병 세포(HL-60-gfphi-Luc+ 세포)를 추적하고 전체 백혈병 부담을 생체내 BLI로 정량화했다. 질병 진행은 BLI 강도의 변화에 의해 결정됐다. 결과는 도 8에 도시된다. 공격적인 질병 진행이 AML 마우스 전체에 걸쳐 분명한 강력한 신호와 함께 발견됐다. 이 진행은 마우스가 NEI-01로 일주일에 한 번(p<0.05, 4일에서 25일까지) 또는 일주일에 두 번(p<0.01, 전체 치료 기간) 치료됐을 때 상당히 억제되었다.
결과는 NEI-01을 사용한 치료가 마우스에서 혈장으로부터 아르기닌을 효율적으로 고갈시켰고, 그 결과 조혈 조직(골수 및 비장 포함)에서 종양 부담의 감소뿐만 아니라 질병 진행의 억제를 초래했음을 입증했다. 질병 진행은 마우스를 NEI-01로 일주일에 한 번(p<0.05, 4일에서 25일까지) 또는 일주일에 두 번(p<0.01, 전체 치료 기간) 치료됐을 때 상당히 억제되었다. 골수와 비장에서 특히 효율적인 활동이 관찰되었다. 마우스가 일주일에 두 번 280 U/kg NEI-01로 치료됐을 때 종양 부담은 골수(p<0.0001) 및 비장(p<0.005)에서 상당히 감소했다.
이 연구는 HL-60 동소 AML M2 모델에서 NEI-01의 강력한 항암 활성을 입증했다.
실시예 7: P31/FUJ-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M5) 이종이식 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
본 연구에서, NEI-01의 항암 활성은 뮤린 이종이식 모델에서 평가됐다.
인간 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1) - 결핍 M5-아형 급성 골수성 백혈병 P31/FUJ 세포를 비 비만 당뇨병/중증 복합 면역 결핍(NOD/SCID) 마우스에 피하 접종하였다. 종양 부피가 200 mm3에 도달했을 때, 마우스를 일주일에 한 번 완충액 MHT 또는 NEI-01(280 U/kg)로 정맥내(i.v.) 치료했다. 종양 부피는 3-4일 마다 측정됐다. 4주 후에, 마우스(n=10)를 희생시키고 이종이식 종양을 해부하고 개별적으로 무게를 쟀다. 연구 그룹 및 대응하는 치료 요법의 세부 사항은 표 7에 제공된다.
표 7: P31/FUJ-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M5) 이종이식 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00007
도 9는 NEI-01 치료가 종양 부피뿐만 아니라 종양 무게를 상당히 감소시켜 28일까지 종양 부피가 51.27% 감소되었음을 보여준다. 최종 T/C 비율은 51.14%에 도달했다. 연구 종료 시 종양 무게는 대조군에서 1.08 ± 0.98g이며 NEI-01(280 U/kg 주 1회) 치료군에서 0.78 ± 0.08g(p<0.05)이었다.
이 연구는 뮤린 AML M5 P31/FUJ 이종이식에서 NEI-01의 효율적인 항암 활성을 입증했다.
실시예 8: MKPL-1-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M7) 이종이식 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
이 연구에서, NEI-01의 항암 효과는 뮤린 이종이식 모델에서 평가됐다.
인간 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1) - 결핍 M7-아형 급성 골수성 백혈병 MKPL-1 세포를 비 비만 당뇨병/중증 복합 면역 결핍(NOD/SCID) 마우스에 피하 접종하였다. 종양 크기가 120 mm3에 도달했을 때 마우스를 일주일에 한 번 완충액 MHT 또는 NEI-01(280 U/kg)로 정맥 주사(i.v.) 치료했다. 종양 부피는 2-3일 마다 측정됐다. 3주 후에, 마우스(n=9)를 희생시키고 이종이식 종양을 해부하고 개별적으로 무게를 쟀다. 연구 그룹 및 대응하는 치료 요법의 세부 사항은 표 8에 제공된다.
표 8: MKPL-1-유래 급성 골수성 백혈병(FAB AML M7) 이종이식 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00008
도 10은 NEI-01 치료가 종양 부피뿐만 아니라 종양 무게를 상당히 감소시켜 22일까지 종양 부피가 99% 감소되었음을 보여준다. 종양 무게는 대조군에서 8.05 ± 0.056g이며 NEI-01(280 U/kg 주 1회) 치료군에서 0.15 ± 0.05g이었다. 최종 T/C 비율은 99%에 도달했다.
이 연구는 뮤린 AML M7 MKPL-1 이종이식에서 NEI-01의 효율적인 항암 활성을 입증했다.
실시예 9: 환자-유래 AM5512 급성 골수성 백혈병(FAB AML M7) 모델의 치료에서 NEI-01의 생체내 효능 연구.
환자-유래 이종이식(PDX)은 암 약물 개발에서 효능 스크리닝을 위한 가장 번역적인 전임상 모델을 제공한다. 환자 종양에서 직접 유래되고 체외에서 성장하도록 구성되지 않은 PDX 모델은 인간 환자 집단의 이질성과 다양성을 반영한다. 본 연구에서는 환자-유래 AM5512(FAB AML M7) 급성 골수성 백혈병 모델에서 NEI-01의 항암 효과를 평가했다.
인간 AM5512 세포를 비 비만 당뇨병/중증 복합 면역 결핍(NOD/SCID) 마우스에 정맥내(i.v.) 접종하였다. 말초 혈액의 종양 부담이 ~1.33%일 때 표 9에 요약된 바와 같이 마우스를 무작위로 3개 그룹: 그룹 1(비히클), 그룹 2(NEI-01, 140 U/kg) 및 그룹 3(NEI-01, 280 U/kg)으로 나누었다.
표 9: 환자-유래 AM5512 급성 골수성 백혈병(FAB AML M7) 모델에 대한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00009
NEI-01(280 U/kg 또는 140 U/kg 주 1회)을 사용한 치료는 NEI-01의 3차 투여 후 말초 혈액에서 종양 부담 성장을 상당히 억제했다(도 11). 연구 종료 시(NEI-01의 4차 투여 1주 후), 280 U/kg 또는 140 U/kg 주 1회로 NEI-01로 치료한 후(p<0.05, 비히클 그룹과 비교하여) 말초 혈액 및 조혈 조직(비장, 간 및 골수 포함)에서 종양 부담의 상당한 감소가 관찰되었다. 이러한 항백혈병 효과는 용량 의존적인 방식으로 나타났다.
이 연구는 NEI-01이 AM5512(M7) PDX 모델에서 강력한 항백혈병 효과를 갖는다는 것을 뒷받침하는 강력한 증거를 제공한다.
실시예 10: 환자-유래 AM8096 급성 골수성 백혈병(FAB AML M2) 모델의 치료에서 NEI-01의 생체내 효능 연구.
본 연구에서, 환자-유래 AM8096 급성 골수성 백혈병 모델에서 NEI-01의 항암 효과를 평가하였다.
인간 AM8096 세포를 비 비만 당뇨병/중증 복합 면역결핍(NOD/SCID) 마우스에 정맥내(i.v.) 접종하였다. 말초 혈액의 종양 부담이 ~1.5%일 때, 표 10에 요약된 바와 같이 마우스를 무작위로 3개 그룹: 그룹 1(비히클), 그룹 2(NEI-01, 140 U/kg) 및 그룹 3(NEI-01, 280 U/kg)으로 나누었다.
표 10: 환자-유래 AM8096 급성 골수성 백혈병(FAB AML M2) 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00010
결과는 주 1회 NEI-01로 치료하면 비히클 대조곤에서 12일로부터 NEI-01(140 U/kg) 치료군에서 14.5일 및 NEI-01(280 U/kg) 치료군에서 16.5일로 중간 생존 일수가 약간 연장됨을 보여주었다(도 12 및 표 11).
NEI-01 치료된 마우스(140 U/kg 또는 280 U/kg)의 수명 증가(ILS)는 비히클 대조군과 비교할 때 각각 20.8% 및 37.5%였다(표 11). 흥미롭게도 NEI-01(280 U/kg) 치료 그룹의 마우스 중 하나는 초기 치료 후 41일까지 생존했다. 이러한 데이터는 NEI-01이 적어도 일부 AM8096 모델 집단에서 항백혈병 효과가 있음을 암시한다.
표 11: AM8096 모델에서 각 그룹에 대한 중간 생존 일수 및 수명(ILS).
Figure pct00011
실시예 11: Jurkat-유래 백혈병 암 이종이식 모델에서 NEI-01의 항암 활성.
급성 림프모구성 백혈병(T-ALL)의 T-세포 면역표현형은 성인 및 어린이의 급성 백혈병의 약 15 내지 25%를 차지한다. 급속한 기술 발전과 새로운 이해의 혜택을 받아 T-ALL 치료에서 상당한 진전이 이루어졌다. 그러나 상당수의 환자가 재발 위험이 높으며 질병이 재발할 때 생존하는 환자는 거의 없다. 따라서 새로운 치료적 접근이 절실히 필요하다.
약물-유발 아미노산 결핍은 아스파라기나아제가 유도 화학 요법의 중요한 부분인 급성 림프구성 백혈병의 치료에 성공적으로 사용된 하나의 전략이다. 다양한 대사 경로의 개시를 위한 전구체로서 아르기닌은 종양 형성에 조절 효과를 갖는 것으로 확인되었다. 아르기닌 결핍은 시트룰린으로부터 아르기닌을 합성하는 제한 효소인 아르기니노숙시네이트 신타제(ASS1)가 결여된 아르기닌-요구성 종양에 대한 유망한 치료 접근법으로 입증되었다. 본 연구는 T-ALL Jurkat 이종이식 모델에서 아르기닌 결핍 효소인 NEI-01의 항암 활성을 평가하는 것을 목적으로 했다.
인간 ASS1-결핍 T-ALL Jurkat 세포를 면역결핍 BALB/c 누드 마우스에 피하 접종하였다. 종양 부피가 40 mm3에 도달했을 때, 표 12에 요약된 바와 같이 마우스를 대조군과 NEI-01 치료군의 두 그룹으로 무작위로 나누었다. 마우스에게 PBS 또는 NEI-01(마우스당 5U ~ 280U/kg)로 4주 동안 주 2회 복강내(i.p.) 투여하였다. 종양 부피는 주 2회 측정되었다.
표 12: Jurkat-유래 백혈병 암 이종이식 모델 연구를 위한 그룹 및 치료 요법.
Figure pct00012
결과는 NEI-01(마우스당 5U ~ 280U/kg)로 주 2회 치료하면 28일에 대조군과 비교했을 때 종양 성장이 상당히 억제(p≤0.05)됨을 보여주었다(도 13).
이들 데이터는 Jurkat-유래 백혈병 피하 이종이식 모델에서 NEI-01의 강력한 항암 활성에 대한 지원을 제공한다.
실시예 12: 반복 투여 연구로부터 마우스 혈장에서 NEI-01의 결정.
NEI-01을 160, 280 및 560U/kg의 용량으로 4주 동안 주 1회 정맥내로 ICR 마우스에 투여했다. 혈액 샘플은 1일 및 22일에 1일에 모든 그룹에 대해 투여 전(-1) 투여 후 0.25, 6, 24, 48 및 72시간, 8일(2주차)에 모든 그룹에 대해 투여 전(-1), 15일(3주차)에 모든 그룹에 대해 투여 전(-1), 22일(4주차)에 투여 전(-1), 투여 후 0.25, 6, 24, 48 및 72시간, 29일(5주차)에 마우스를 희생시키기 전에 채취되었다. 5마리 동물/그룹/성별/시점 및 혈장 농도가 정량화됐다(도 14).
치료군에 대한 NEI-01의 약동학적 평가를 위한 파라미터 및 얻어진 결과는 표 13(1일) 및 표 14(22일)에 제시된다. 비히클 대조군에서 NEI-01의 모든 혈장 농도는 정량 한계 미만이었다. 따라서 비히클 대조군 데이터는 표에 제시되지 않는다.
표 13: NEI-01 치료군에 대한 1일차 마우스에 대한 약동학 파라미터 및 측정치.
Figure pct00013
표 14: NEI-01 치료군에 대한 22일차 마우스에 대한 약동학 파라미터 및 측정치.
Figure pct00014
NEI-01을 마우스에 정맥내 투여한 후, NEI-01에 대한 전신 노출(systemic exposure)이 관찰되었고 평균값 Tmax는 1일차에 수컷 및 암컷 모두에서 투여 후 0.25시간이었다. T1/2는 21.04 내지 36.58시간이었다.
NEI-01에 대한 전신 노출(AUC0-72에 의해 측정됨)은 1일차 및 22일차 모두에서 수컷 및 암컷에서 비례 방식으로 용량에 따라 증가하였다. AUC0-72는 560U/kg에서 1일차(5.82×106 ng.h/ml ~ 6.04×106 ng.h/ml) 및 22일차(5.97×106 ng.h/ml ~ 6.27×106 ng.h/ml)에 수컷 및 암컷에서 유사하였다. 또한, Cmax 결과는 1일차 및 22일차 모두 결과가 수컷 및 암컷에 대해 유사하다는 점에서 AUC0-72와 유사하였다. 또한 수컷 및 암컷 치료군 사이에 체중의 유의한 차이가 없었다.
현재 청구된 발명의 목적은 AML을 치료하기 위한 대체 방법을 제공하는 것이다.
<110> VISION GLOBAL HOLDINGS LIMITED <120> Method of treating AML subtypes using arginine-depleting agents <130> P21913PCT00 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Met Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr 1 5 10 15 Gly Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asn Asn Ala Lys Thr Val 20 25 30 Glu Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Ser 35 40 45 Gly Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Gly Ser Gly Gly Ser Val Phe Asp 50 55 60 Ser Lys Phe Lys Gly Ile His Val Tyr Ser Glu Ile Gly Glu Leu Glu 65 70 75 80 Ser Val Leu Val His Glu Pro Gly Arg Glu Ile Asp Tyr Ile Thr Pro 85 90 95 Ala Arg Leu Asp Glu Leu Leu Phe Ser Ala Ile Leu Glu Ser His Asp 100 105 110 Ala Arg Lys Glu His Lys Gln Phe Val Ala Glu Leu Lys Ala Asn Asp 115 120 125 Ile Asn Val Val Glu Leu Ile Asp Leu Val Ala Glu Thr Tyr Asp Leu 130 135 140 Ala Ser Gln Glu Ala Lys Asp Lys Leu Ile Glu Glu Phe Leu Glu Asp 145 150 155 160 Ser Glu Pro Val Leu Ser Glu Glu His Lys Val Val Val Arg Asn Phe 165 170 175 Leu Lys Ala Lys Lys Thr Ser Arg Glu Leu Val Glu Ile Met Met Ala 180 185 190 Gly Ile Thr Lys Tyr Asp Leu Gly Ile Glu Ala Asp His Glu Leu Ile 195 200 205 Val Asp Pro Met Pro Asn Leu Tyr Phe Thr Arg Asp Pro Phe Ala Ser 210 215 220 Val Gly Asn Gly Val Thr Ile His Tyr Met Arg Tyr Lys Val Arg Gln 225 230 235 240 Arg Glu Thr Leu Phe Ser Arg Phe Val Phe Ser Asn His Pro Lys Leu 245 250 255 Ile Asn Thr Pro Trp Tyr Tyr Asp Pro Ser Leu Lys Leu Ser Ile Glu 260 265 270 Gly Gly Asp Val Phe Ile Tyr Asn Asn Asp Thr Leu Val Val Gly Val 275 280 285 Ser Glu Arg Thr Asp Leu Gln Thr Val Thr Leu Leu Ala Lys Asn Ile 290 295 300 Val Ala Asn Lys Glu Cys Glu Phe Lys Arg Ile Val Ala Ile Asn Val 305 310 315 320 Pro Lys Trp Thr Asn Leu Met His Leu Asp Thr Trp Leu Thr Met Leu 325 330 335 Asp Lys Asp Lys Phe Leu Tyr Ser Pro Ile Ala Asn Asp Val Phe Lys 340 345 350 Phe Trp Asp Tyr Asp Leu Val Asn Gly Gly Ala Glu Pro Gln Pro Val 355 360 365 Glu Asn Gly Leu Pro Leu Glu Gly Leu Leu Gln Ser Ile Ile Asn Lys 370 375 380 Lys Pro Val Leu Ile Pro Ile Ala Gly Glu Gly Ala Ser Gln Met Glu 385 390 395 400 Ile Glu Arg Glu Thr His Phe Asp Gly Thr Asn Tyr Leu Ala Ile Arg 405 410 415 Pro Gly Val Val Ile Gly Tyr Ser Arg Asn Glu Lys Thr Asn Ala Ala 420 425 430 Leu Glu Ala Ala Gly Ile Lys Val Leu Pro Phe His Gly Asn Gln Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Met Gly Asn Ala Arg Cys Met Ser Met Pro Leu Ser Arg 450 455 460 Lys Asp Val Lys Trp 465

Claims (25)

  1. 급성 골수성 백혈병의 치료를 필요로 하는 대상의 급성 골수성 백혈병(AML)을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 대상에게 치료 유효량의 아르기닌 고갈제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 아르기닌 이화 효소를 포함하는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 아르기닌 이화 효소는 아르기닌 데이미나제, 아르기나제, 아르기닌 데카르복실라제 또는 아르기닌 2-모노옥시게나제인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 합성 아르기닌 고갈제인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인, 면역글로불린의 Fe 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹, 인간 트랜스페린, XTEN, 프롤린-알라닌-세린 폴리머(PAS), 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP), 호모 아마노산 폴리머(HAP), 인공 젤라틴 유사 단백질(GLK), 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 또는 이들의 조합을 포함하는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 일간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 이들의 조합을 포함하는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 AML은 FAB 아형 M4 또는 M7인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 SEQ ID NO: 1에 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 AML은 아르기닌에 대해 영양요구성인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 근육 내, 정맥내, 피하 또는 경구로 투여되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 정맥내로 투여되는, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 대상은 인간인, 대상의 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 방법.
  16. AML의 치료를 필요로 하는 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제로서, 여기서 상기 AML은 FAB(French-American-British) 아형 M0(미분화 급성 골수성 백혈병), M2(성숙 급성 골수성 백혈병), M4(성숙 급성 골수성 백혈병), M4 eos(호산구 증가증을 동반한 급성 골수성 백혈병), M5(급성 단핵구성 백혈병), M6(급성 적혈구성 백혈병) 또는 M7(급성 거핵모구성 백혈병)인, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 아르기닌 이화 효소를 포함하는, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 아르기닌 이화 효소는 아르기닌 데이미나제, 아르기나제, 아르기닌 데카르복실라제 또는 아르기닌 2-모노옥시게나제인, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  19. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 합성 아르기닌 고갈제인, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  20. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인, 면역글로불린의 Fe 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹, 인간 트랜스페린, XTEN, 프롤린-알라닌-세린 폴리머(PAS), 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP), 호모 아마노산 폴리머(HAP), 인공 젤라틴 유사 단백질(GLK), 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 또는 이들의 조합을 포함하는, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  21. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 일간 혈청 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 이들의 조합을 포함하는, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  22. 제16항에 있어서,
    상기 AML은 아르기닌에 대해 영양요구성인, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  23. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 근육 내, 정맥내, 피하 또는 경구로 투여되는, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  24. 제16항에 있어서,
    상기 아르기닌 고갈제는 정맥내로 투여되는, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
  25. 제16항에 있어서,
    상기 대상은 인간인, 대상의 AML을 치료하는데 사용하기 위한 아르기닌 고갈제.
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