KR20230096821A

KR20230096821A - 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20230096821A
Application number: KR1020220109194A
Authority: KR
Inventors: 김동선; 성윤영; 육흥주; 손은정; 이윤미; 김영숙
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2021-12-23
Filing date: 2022-08-30
Publication date: 2023-06-30

Abstract

본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 게박쥐나물 추출물이 피부각질세포로부터 염증유발 케모카인 RANTES 감소, 피부장벽 및 보습 인자인 필라그린의 발현량 증가 및 비만세포 탈과립으로 유리된 히스타민 분비를 감소시키는 효과가 있으므로, 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용의 건강기능식품, 의약품, 사료 첨가제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, ameliorating or treating skin disease comprising Cacalia adenostyloides extract as effective component}

본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

인체의 피부는 물리적, 화학적으로 외계로부터 신체를 보호하는 동시에 전신의 대사에 필요한 생화학적 기능을 영위하는 생명유지에 필수 불가결한 기관이다. 사람의 피부 (머리털, 손, 발톱 등을 포함)에 나타나는 모든 이상 소견을 피부질환, 즉 피부병이라 한다. 피부는 신체의 표면을 덮고 있으므로 외계로부터 자극이나 여러 병원체에 직접 접촉될 기회가 많고, 체내로부터 영향을 강하게 받는다. 더욱이 피부의 근소한 변화도 눈으로 보고 손으로 만질 수 있으며, 병변부의 일부를 채취하여 병리조직학적으로 검사하거나, 미생물의 검색 등의 검사를 하기 쉽고, 개개의 질병의 진단을 명확하게 하는 것이 용이하므로, 그 종류는 다른 장기에 비하여 상당한 수에 이르며, 병명도 복잡 다양하다. 비교적 흔한 피부질환으로는 아토피 피부염, 접촉성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 무좀, 완선, 건선, 단순포진/대상포진, 피부 건조증, 주부습진, 여드름 등이 있다. 이 중 아토피성 피부염은 심한 소양감을 가지는 재발성의 만성 피부염으로 그 원인이 현재까지 명확하게 규명되지 않았으나, 세계 전 인구의 10~20%가 이 피부염으로 고통받는 것으로 추정되고 있다.

또한, 환경 오염 등에 의한 공기 매개성 알러지 원인 물질의 증가와 건조성 피부를 형성시키는 조건의 증가 등으로 인하여 최근 수십 년 동안 아토피성 피부염에 대한 유병율이 계속 상승하고 있다. 아토피 피부염은 홍반, 부종, 심한 소양증과 건조증, 침출과 부스럼 딱지를 특징으로 하고 급성기에는 표피내에 수포를 형성하며 만성기에는 피부의 비후가 생기는 피부염증질환의 일종으로, 아토피성 체질을 주로 하여 발생하는 특유의 임상 특징과 만성적인 특징을 지니는 피부염으로 알러지성 습진, 소아태열, 범발성 신경피부염 등으로 불리기도 한다. 최근 수십 년간 선진국에서는 아토피질환의 이환율이 상당히 증가하는 추세에 있으며, 우리나라에서도 최근 알레르기 질환의 급증과 함께 아토피 피부염 환자가 증가하고 있는 추세이다.

한편, 게박쥐나물(Cacalia adenostyloides)은 깊은 산의 나무 그늘에서 자라며, 전체에 털이 없고, 원줄기에 홈이 파진 능선이 있으며 높이는 60∼100cm이다. 잎은 어긋나고 막질로 콩팥 모양이며 다섯갈래로 얕게 갈라져 마치 게처럼 생겼다. 갈라진 조각은 끝이 뾰족하고 고르지 않은 톱니가 있으며 잎자루는 길이 3∼13cm이다. 꽃은 흰색이고 6∼9월에 피는데 지름 3∼4mm로 줄기 끝에 원추꽃차례로 달리며 꽃대에는 꼬불꼬불한 잔털이 있다. 총포는 좁은 통 모양이고 3개의 포 조각은 긴타원형이다. 작은 꽃은 3∼5개이며 꽃잎은 끝이 다섯개로 깊게 갈라진다. 열매는 수과로 흰색의 갓털이 있고, 어린 순은 식용하며, 한국(백두산)과 일본(북부)에 분포한다.

게박쥐나물 추출물 관련 기술로, 생약학회지(Korean Journal of Pharmacognosy, 2017년 vol. 48, p243-247)에 동속이종인 '민박쥐나물 추출물의 Catteoylquinic acid 정량 및 actylcholinesterase 활성과 peroxynitrite 농도에 대한 효과'가 개시되어 있으며, 생약학회지(Korean Journal of Pharmacognosy, 2017년 vol. 48, p243-247)에 동속이종인 '병풍쌈 추출물의 Caffeoylquinic Acid 성분 분석과 Peroxynitrite 소거효과'가 개시되어 있으나, 아직까지는 본 발명의 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대하여 언급된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 게박쥐나물 추출물이 피부각질세포로부터 염증유발 케모카인 RANTES 감소, 피부장벽 및 보습 인자인 필라그린의 발현량 증가 및 비만세포 탈과립으로 유리된 히스타민 분비를 감소시키는 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 게박쥐나물 추출물이 피부각질세포로부터 염증유발 케모카인 RANTES 감소, 피부장벽 및 보습 인자인 필라그린의 발현량 증가 및 비만세포 탈과립으로 유리된 히스타민 분비를 감소시키는 효과가 있다.

도 1은 게박쥐나물 추출물의 HaCaT 세포에 대한 세포생존율을 확인한 결과이다.
도 2는 HaCaT 세포에서, 게박쥐나물 추출물의 RANTES 생성율을 확인한 결과이다. ###은 대조군(Control) 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군(TI)에서의 RANTES 생성율이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이고, **, ***은 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군 대비 게박쥐나물 추출물 및 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 동시 처리한 군에서의 RANTES 생성율이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, **은 p<0.01이고, ***은 p<0.001이다.
도 3은 HaCaT 세포에서, 게박쥐나물 추출물의 필라그린 발현량을 확인한 결과이다. (A)는 HaCaT 세포에 게박쥐나물 추출물을 처리한 결과이고, **, ***은 대조군(Control) 대비 게박쥐나물 추출물 처리군 또는 양성대조군에서의 필라그린 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, **은 p<0.01이고, ***은 p<0.001이다. CA200은 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물 처리군이고, CaCl₂는 양성대조군이다.
(B)는 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군(TI)에 대비하여 게박쥐나물 추출물 및 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 동시 처리군의 비교 결과이다. ##는 아무것도 처리하지 않은 대조군(Control) 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군에서의 필라그린 발현량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.01이고, ***은 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군 대비 게박쥐나물 추출물 및 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 동시 처리한 군 또는 양성대조군에서의 필라그린 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, ***은 p<0.001이다.
도 4는 본 발명의 게박쥐나물 추출물의 MC/9 세포에 대한 세포생존율을 확인한 결과이다.
도 5는 MC/9 세포에서, 게박쥐나물 추출물의 처리에 따른 히스타민 방출량을 확인한 결과이다. ##은 대조군(Control) 대비 Compound 48/80 처리군에서의 히스타민 방출량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이고, *은 Compound 48/80 처리군 대비 게박쥐나물 추출물을 처리한 군에서의 히스타민 방출량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
도 6은 게박쥐나물 추출물의 처리에 따른 IL-6 생성량을 확인한 결과이다. ##은 대조군(Control) 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군의 IL-6 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이고, *은 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리 및 게박쥐나물 추출물 처리군의 IL-6 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로 p<0.05이다.
도 7은 게박쥐나물 추출물의 처리에 따른 TSLP 생성량을 확인한 결과이다. ##은 대조군(Control) 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군의 TSLP 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이고, **은 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리군 대비 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리 및 게박쥐나물 추출물 처리군의 TSLP 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로 p<0.01이다.

본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

상기 피부질환은 알레르기성 또는 염증성 피부질환인 것이 바람직하며, 상기 알레르기성 또는 염증성 피부질환은 피부 염증, 습진, 접촉성 피부염, 아토피 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 건선, 건선관절염, 일광 피부염, 일광화상 및 여드름 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.

상기 게박쥐나물 추출물은 게박쥐나물의 전초를 추출한 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않고, 필요에 따라 특정부위를 채택하여 사용할 수 있다.

상기 게박쥐나물 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:

(1) 건조 게박쥐나물에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

(2) 단계 (1)의 추출액을 여과하는 단계; 및

(3) 단계 (2)의 여과한 추출액을 건조하여 추출물을 제조하는 단계.

상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물 또는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다. 상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 게박쥐나물 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20~100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1~5시간인 것이 바람직하며, 2~4시간이 더욱 바람직하지만 이에 한정하지 않는다. 상기 단계 (3)에서, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 동결건조이나 이에 한정하지 않는다.

상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 게박쥐나물 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 제조될 수 있다. 상기 게박쥐나물 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 캐러멜, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 중에서 선택된 어느 하나의 형태일 수 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 즉, 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 상기의 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토스, 슈크로스와 같은 이당류, 덱스트린, 사이클로 덱스트린과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 크게 중요하지 않지만, 본 발명의 조성물 100g에 대하여, 0.01~0.04g인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.02~0.03g을 포함하는 것이지만 이에 한정하지 않는다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 락토스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 성분들 이외에 항산화제, 완충액, 정균제, 희석제, 계면활성제, 결합제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적으로 허용되는 어떠한 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 근육 내 투여, 점안 투여, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피 패치 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장 내 투여 등의 경로를 통해 투여될 수 있고, 구체적으로 근육 내 투여의 경로를 통해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 로션, 클렌징 크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누, 파우더, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 화장품 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로 히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제에 관한 것이다.

본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물의 유효한 양은 동물의 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강상태 또는 성별에 따른 본 발명의 유효성분에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

실시예 1. 게박쥐나물 추출물의 제조

건조 게박쥐나물 전초를 70%(v/v) 에탄올로 2시간 동안 2회 환류 추출한 후 추출액을 여과하고 여과액을 감압농축, 건조하여 추출물을 수득하였다.

실시예 2. 인간 각질세포에서의 항염 효과 확인

(1) 인간 각질세포 배양

인간 각질세포(human keratinocyte; HaCaT)를 열-불활성된 10% FBS(Fetal Bovine Serum), 100units/㎖ 페니실린(penicillin), 100㎍/㎖ 스트렙토마이신(streptomycin)을 첨가한 DMEM 배지로 37℃, 5% CO₂ 환경에서 배양하였다.

(2) 세포 독성 실험

게박쥐나물 추출물의 세포 독성을 확인하고자 CCK-8(Cell Counting Kit-8) 어세이를 실시하였다. 96웰 플레이트에서 100 및 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물을 HaCaT 세포에 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 배지에 CCK-8을 10% 농도로 첨가한 다음 2시간 동안 37℃에서 반응시킨 후, 마이크로플레이트 스펙트로포토미터(microplate spectrophotometer)(Biorad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하고, 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포 생존율(%)을 계산하였다.

그 결과 도 1에 개시한 바와 같이 게박쥐나물 추출물은 세포독성이 거의 없는 것으로 나타났고, HaCaT 세포에 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리와 동시에 10, 20 및 50㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물을 처리하고 24시간동안 배양한 후 세포 생존율을 확인한 결과에서도 세포독성이 거의 없는 것으로 나타났다.

(3) 염증성 케모카인 분비 억제 효능 실험

인체 피부각질세포주인 HaCaT(human keratinocyte cell, ATCC, USA) 세포는 FBS(fetal bovine serum) 및 PS(penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium) 배지로 배양하였으며, 웰당 5×10⁴ 개의 세포를 96웰 플레이트에 10%가 포함된 DMEM 배지에 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리, 또는 100 및 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물;과 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ;를 동시 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 양성대조군으로 12㎍/㎖의 실리마린(SLY)을 처리하였다. RANTES 분비량은 ELISA 키트(R&D systems, USA)를 이용하여 제조사의 방법에 따라 세포 상층액에 존재하는 RANTES의 분비량을 측정하였다. 통계적 차이는 스튜던트 t-테스트를 이용하여 유의성을 평가하였다.

그 결과 도 2에 개시한 바와 같이 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ를 처리한 군에서는 대조군(Control)에 비해 RANTES 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였고, 이에 대비하여 10, 20, 50, 100 및 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물;과 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ;를 동시 처리한 군에서는 통계적으로 유의미하게 RANTES 함량이 유의미하게 감소하였다.

실시예 3. 인간 각질세포에서의 피부장벽 개선 및 보습 효과 확인

(1) 피부장벽 개선 및 보습 효과

HaCaT세포는 FBS(fetal bovine serum) 및 PS(penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium) 배지로 배양하였으며, 웰당 1×10⁵ 개의 세포를 24웰 플레이트에 10%가 포함된 DMEM 배지에 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물을 처리하였다. 또한, 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물, 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ를 동시 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 양성대조군은 1.2mM의 CaCl₂을 처리하였다. 세포로부터 분해 완충용액을 이용하여 단백질을 추출한 다음 필라그린(filaggrin) ELISA 키트를 이용하여 발현된 필라그린의 양을 측정하였으며 총 단백질로 정량하여 필라그린의 발현량을 산출하였다. 통계적 차이는 스튜던트 t-테스트를 이용하여 유의성을 평가하였다.

그 결과, 도 3A에 개시한 바와 같이 본 발명의 게박쥐나물 추출물을 처리한 군의 필라그린 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였고, 도 3B에 개시한 바와 같이 필라그린 발현량이 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리에 의해 감소되었고, 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물과 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ의 동시 처리에 의해 통계적으로 유의미하게 증가하였다.

실시예 4. MC/9 세포에서 항히스타민 효과

(1) 세포 배양

마우스 비만세포(mast cell) MC/9 세포를 ATCC(American Type Culture Collection, Rockville, MD, USA)로부터 구입하여 10% 열-불활성화된 FBS(Fetal Bovine Serum), 100units/㎖의 페니실린(penicillin), 100㎍/㎖의 스트렙토마이신(streptomycin)을 첨가한 DMEM 배지로 37℃, 5% CO₂ 환경에서 배양하였다.

(2) 세포 독성 실험

게박쥐나물 추출물의 세포 독성을 확인하고자 CCK-8(Cell Counting Kit-8) 어세이를 실시하였다. 96웰 플레이트에서 MC/9 비만세포에 100 및 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물을 처리하고 배양하였다. 24시간 후에 배지에 10%의 CCK-8를 첨가한 다음 2시간 동안 37℃에서 반응시킨 후, 마이크로플레이트 스펙트로포토미터(Biorad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하고, 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포 생존율(%)을 계산하였다.

그 결과 도 4에 개시한 바와 같이 본 발명의 게박쥐나물 추출물은 세포독성이 거의 없는 것으로 나타났다.

(3) 히스타민 분비량 억제 효능 실험

배양된 MC/9 마우스 비만 세포를 96웰 플레이트에 접종하여 25㎍/㎖의 compound 48/80(Sigma, USA)과 100 및 200㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물을 30분 동안 처리하였다. 그 후, 배지에 분비된 알러지성 히스타민의 분비량을 ELISA 키트(Oxford Biomedical Research Inc., USA)를 이용하여 확인하였다. 100% 생성량은 compound 48/80이 처리되지 않은 군에서 처리된 군 사이의 히스타민 분비량의 차이로 계산하였고, 통계적 차이는 스튜던트 t-테스트를 이용하여 유의성을 평가하였다.

그 결과 도 5에 개시한 바와 같이, compound 48/80에 의한 알러지 유발군은 통계적으로 유의미하게 히스타민 분비량이 증가하였고, 이에 대비하여 본 발명의 게박쥐나물 추출물을 동시에 처리한 군에서는 히스타민 분비량이 감소하였다.

실시예 5. IL-6 및 TSLP 생성량 분석

인체 피부각질세포주인 HaCaT(human keratinocyte cell, ATCC, USA) 세포는 FBS(fetal bovine serum) 및 PS(penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium) 배지로 배양하였으며, 웰당 5×10⁴ 개의 세포를 96웰 플레이트에 10%가 포함된 DMEM 배지에 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리, 또는 10,20 및 50㎍/㎖의 게박쥐나물 추출물;과 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ;를 동시 처리하여 24시간 동안 배양하였다. IL-6, TSLP 분비량은 ELISA 키트(R&D systems, USA)를 이용하여 제조사의 방법에 따라 세포 상층액에 존재하는 IL-6, TSLP의 분비량을 측정하였다. 통계적 차이는 스튜던트 t-테스트를 이용하여 유의성을 평가하였다.

도 6 및 7에 개시한 바와 같이, 10ng/㎖의 TNF-α+10ng/㎖의 IFN-γ 처리에 의해 증가된 IL-6 및 TSLP 생성량이 본 발명의 게박쥐나물 추출물을 처리에 의해 감소된 것을 확인하였다.

Claims

게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 피부질환은 알레르기성 또는 염증성 피부질환인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제2항에 있어서, 상기 알레르기성 또는 염증성 피부질환은 피부 염증, 습진, 접촉성 피부염, 아토피 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 건선, 건선관절염, 일광 피부염, 일광화상 및 여드름 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 게박쥐나물 추출물은 게박쥐나물의 전초를 추출한 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 게박쥐나물 추출물의 추출용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제6항에 있어서, 상기 게박쥐나물 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제.
게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물.