KR20230096052A - 항체-링커 접합체를 생성하기 위한 수단 및 방법 - Google Patents

항체-링커 접합체를 생성하기 위한 수단 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의한 항체-페이로드 접합체를 생성하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 구조 (N → C 방향으로 표시됨) (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하며, 상기에서 (Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고; (Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며; (Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고; R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며; K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고; B는 연결 모이어티 또는 페이로드이며; 상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합된다. 또한, 본 발명은 RK 모티프를 포함하는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 및 링커 작제물에 관한 것이다.

Description

항체-링커 접합체를 생성하기 위한 수단 및 방법
본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (microbial transglutaminase)에 의해 항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate)를 생성하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 링커 작제물, 및 본 발명의 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물, 및 이의 용도를 제공한다.
항체-약물 접합체 (Antibody-drug conjugates: ADCs)는 전형적으로 항체 (antibody) 및 상기 항체에 화학적 링커를 통해 접합된 소분자 약물 (small molecule drug)로 구성된다. 수십 년 간의 전임상 및 임상 연구로, 특정 종양 타입을 치료하기 위한 일련의 ADC, 예컨대 재발성 호지킨 림프종 및 전신 역형성 대세포 림프종의 경우 브렌툭시맙 베도틴 (brentuximab vedotin) (Adcetris®), 급성 골수성 백혈병의 경우 젬투주맙 오조가미신 (gemtuzumab ozogamicin) (Mylotarg®), HER2-포지티브 전이성 유방암의 경우 아도-트라스투주맙 엠탄신 (ado-trastuzumab emtansine) (Kadcyla®), B 세포 악성 종양의 경우 이노투주맙 오조가미신 (inotuzumab ozogamicin) (Besponsa®) 및 최근에는 폴라투주맙 베도틴-피이크 (polatuzumab vedotin-piiq) (Polivy®)가 승인받았다. 가장 최근에는 엔포르투맙 베도틴 (enfortumab vedotin) (Padcev®), 트라스투주맙 데룩스테칸 (trastuzumab deruxtecan) (Enhertu®), 사시투주맙 고비테칸 (sacituzumab govitecan) (Trodelvy®) 및 벨란타맙 마파도틴 (belantamab mafadotin) (Blenrep®)이 시장의 승인 (market approval)을 받았다. ADC에 대한 리뷰는 예를 들어 (Zhao P. et al., 2020, Acta Pharmaceutica Sinica B, 10, 1589-1600)를 참조한다. 많은 ADC가 인상적인 항암 활성을 보여 주었지만, 많은 환자들이 이러한 치료에 반응하지 않거나, 효능이 나타나기 전에 심각한 부작용을 경험하거나, 또는 일정 기간 후에 재발을 경험하였기 때문에, 유리한 약물-유사 특성을 가지고 있고, 약물 개발을 지원하는데 충분한 양과 품질을 합리적인 비용으로 생성할 수 있으며, 치료제로서 적합한 신규한 ADC 형식에 대한 의학적 필요성이 여전히 크다.
ADC 제조의 핵심 단계는 항체에 대한 페이로드 (payload)의 공유 접합 단계 (covalent conjugation step)이다. 현재 임상 개발 중인 대부분의 ADC는 항체의 내인성 리신 또는 시스테인 잔기에 대한 접합에 의해 제조하였고, 평균 약물 대 항체 비율 (drug-to-antibody ratio: DAR)을 3.5-4.0 범위로 수득하기 위해 평균 변형 정도를 신중하게 제어하였다. 이러한 비율은 역사적으로 (a) 비-접합된 항체 양의 최소화 및 (b) DAR이 매우 높은 혼합물 중 종 (species)의 회피에 근거하여 선택하였고, 이는 더 높은 소수성 및 더 낮은 용해도로 인해 제조 및 제형에서 문제가 될 수 있으며 (Lambert JM and Berkenbilt A., 2018, Annu. Rev. Med. 69, 191-207), 전형적으로 낮은 약동학적 특성을 초래한다 (Lyon RP, et al., 2015, Nat Biotechnol, 33, 733-735). 최근에는 부위-특이적 접합을 위해 다양한 유전적, 화학적 및 효소적 방법이 개발되었고, 이는 항체의 변형 결여 또는 과잉을 회피하면서 DAR을 2 (또는 4)로 가능하게 할 수 있다. 이러한 방법론에 대한 개요가 Yamada et al. (reviewed in Kei Yamada and Yuji Ito, 2019, ChemBioChem, 20, 2729-2739)에 제공된다.
효소적 접합 (enzymatic conjugation) 반응은 전형적으로 빠르고, 부위-특이적이며, 생리학적 조건하에 수행될 수 있기 때문에 큰 관심을 받았다. 이용 가능한 효소 중에서, 스트렙토마이세스 모바라엔시스 (Streptomyces mobaraensis) 종 유래의 미생물 트란스글루타미나제 (microbial transglutaminase: MTG)는 항체를 포함한 기능적 모이어티 (moieties)의 기존 화학적 단백질 접합 (chemical protein conjugation)에 대한 매력적인 대안으로 점점 더 많은 관심을 받고 있다. MTG는 생리학적 조건하에 단백질 또는 펩티드의 '반응성' 글루타민과, 단백질 또는 펩티드의 '반응성' 리신 잔기 사이의 트란스아미드화 반응 (transamidation reaction)을 촉매하며, 후자는 또한 5-아미노펜틸 기와 같은 간단한, 저분자량 1차 아민일 수 있다 (Jeger S. et al., 2010, Angew. Chem. Int. Ed., 49, 9995-9997).
Jeger 등은 효소로서 트란스글루타미나제를 사용한 항체의 접합이 Q295 잔기에서 발생하지만, 그러나 접합은 PNGase F로 아스파라긴 잔기 297 (N297)에서 글리칸 모이어티를 제거하는 경우에만 가능하였고, 글리코실화 항체 (glycosylated antibody)는 효율적으로 접합될 수 없었다 (접합 효율 ＜20%)고 기재하였다 (Jeger S. et al., 2010, Angew. Chem. Int. Ed., 49, 9995-9997; Mindt T. et al. 2008, Bioconj Chem, 9, 271-278).
MTG에 의해 ADC를 생성하는 다른 접근법은 아글리코실화 항체 (aglycosylated antibodies)의 사용을 기반으로 하며, 여기서 잔기 N297은 글리코실화될 수 없는 아미노산 잔기로 치환된다. 그러나 다른 아미노산에 대한 N297의 치환은 목적하지 않은 효과를 초래할 수 있으며, 이는 전체 Fc 도메인의 전반적인 안정성 (Subedi GP and Barb AW., 2015, Structure, 23, 1573-1583), 및 전체 접합체의 효능에 영향을 미칠 수 있기 때문이다. 그 결과 항체 응집이 증가하고 소수성 페이로드에 특히 중요한 용해도가 감소할 수 있다. 또한, N297에 존재하는 글리칸은 중요한 면역조절 효과를 가지며, 이는 이펙터 기능 예컨대 ADCC (antibody dependent cellular cytotoxicity) 등을 유발하기 때문이다. 이러한 면역조절 효과는 아글리코실화 항체를 수득하기 위해 상기에 논의된 임의의 다른 접근법 또는 데글리코실화에 의해 소실될 것이다. 또한, 수립된 항체의 임의의 서열 변형은 조절 문제를 초래할 수 있으며, 이는 종종 허용되고 임상적으로 검증된 항체가 ADC 접합을 위한 출발점으로 사용되기 때문에 문제가 된다.
최근에, Spycher 등은 페이로드 접합을 위한 항체의 사전 데글리코실화를 필요로 하지 않는 트란스글루타미나제-기반 접합 접근법을 개시하였다 (Spycher et al., WO 2019/057772). 네이티브, 글리코실화 항체를 접합할 수 있는 가능성은 제조 측면에서 상당한 이점을 제공하고: 효소적 데글리코실화 단계는 GMP (good manufacturing process) 측면에서 바람직하지 않으며, 이는 절단된 글리칸 뿐만 아니라 데글리코실화 효소 (예: PNGase F) 모두가 반응 혼합물로부터 제거되는지 확인해야 하기 때문이다. 또한, 페이로드 부착을 위한 항체의 유전자 조작이 필요하지 않으므로, 면역원성을 증가시키고 항체의 전반적인 안정성을 감소시킬 수 있는 서열 삽입을 피할 수 있다.
전술한 관점에서, 접합 효율이 높은 ADC를 생성하기 위한 개선된 방법이 당해 기술 분야에서 여전히 필요하다.
또한, 개선된 효능 및/또는 약동학적 특성 뿐만 아니라 고도로 정의된 약물-대-항체 비율을 갖는 신규한 ADC가 당해 기술 분야에서 필요하다.
발명의 요약
본 발명은 본원에 제공된 구체예 및 청구범위에 특징이 있다. 구체적으로, 본 발명은 특히 하기 구체예에 관한 것이다:
1. 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 (primary amine)을 통해 접합되는,
미생물 트란스글루타미나제 (microbial transglutaminase: MTG)에 의한 항체-링커 접합체를 생성하는 방법:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00001
(Sp1)은 화학적 스페이서 (chemical spacer)이거나 또는 부재하고;
Figure pct00002
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00003
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00004
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00005
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00006
B는 연결 모이어티 (linking moiety) 또는 페이로드 (payload)이다.
2. 구체예 1에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 방법.
3. 구체예 1 또는 2에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 방법.
4. 구체예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 링커의 순전하 (net charge)는 중성 또는 양성인 방법.
5. 구체예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 것인 방법.
6. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 또는 RKR (서열 번호: 4)을 포함하는 방법.
7. 구체예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2) 또는 ARK (서열 번호: 3)를 포함하는 방법.
8. 구체예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)를 포함하는 방법.
9. 구체예 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, B는 연결 모이어티인 방법.
10. 구체예 9에 있어서, 연결 모이어티 B는
Figure pct00007
생물직교 마커 기 (bioorthogonal marker group), 또는
Figure pct00008
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티 (non-bio-orthogonal entity)를 포함하는 방법.
11. 구체예 10에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 방법:
Figure pct00009
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00010
Lys(N3);
Figure pct00011
테트라진;
Figure pct00012
알킨;
Figure pct00013
스트레인드 사이클로옥틴 (strained cyclooctyne);
Figure pct00014
BCN;
Figure pct00015
스트레인드 알켄 (strained alkene);
Figure pct00016
광반응성 기 (photoreactive group);
Figure pct00017
알데히드;
Figure pct00018
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00019
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00020
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00021
티오-선택적 친전자체 (thio-selective electrophile);
Figure pct00022
-SH; 및
Figure pct00023
시스테인.
12. 구체예 9 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 페이로드를 연결 모이어티 B에 접합시키는 추가 단계를 포함하는 방법.
13. 구체예 12에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 클릭-반응 (click-reaction)을 통해 접합되는 방법.
14. 구체예 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, B는 페이로드인 방법.
15. 구체예 12 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 방법:
Figure pct00024
독소;
Figure pct00025
사이토카인;
Figure pct00026
성장 인자;
Figure pct00027
방사성핵종 (radionuclide);
Figure pct00028
호르몬;
Figure pct00029
항-바이러스제;
Figure pct00030
항-박테리아제;
Figure pct00031
형광 염료;
Figure pct00032
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00033
반감기 증가 모이어티 (half-life increasing moiety);
Figure pct00034
용해도 증가 모이어티 (solubility increasing moiety);
Figure pct00035
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00036
핵산;
Figure pct00037
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00038
비타민;
Figure pct00039
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00040
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00041
항-염증제.
16. 구체예 15에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 방법:
Figure pct00042
피롤로벤조디아제핀 (pyrrolobenzodiazepine) (예: PBD);
Figure pct00043
아우리스타틴 (auristatin) (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00044
메이탄시노이드 (maytansinoid) (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00045
두오카르마이신 (duocarmycin);
Figure pct00046
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (nicotinamide phosphoribosyltransferase: NAMPT) 억제제;
Figure pct00047
튜불리신 (tubulysin);
Figure pct00048
엔디인 (enediyne) (예: 칼리케아미신 (calicheamicin));
Figure pct00049
안트라사이클린 유도체 (anthracycline derivative) (PNU) (예: 독소루비신 (doxorubicin));
Figure pct00050
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (kinesin spindle protein: KSP) 억제제;
Figure pct00051
크립토피신 (cryptophycin);
Figure pct00052
약물 유출 펌프 억제제 (drug efflux pump inhibitor);
Figure pct00053
산드라마이신 (sandramycin);
Figure pct00054
아마니틴 (amanitin) (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00055
캄프토테신 (camptothecin) (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
17. 구체예 14 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티 (self-immolative moiety)를 포함하는 방법.
18. 구체예 17에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 방법.
19. 구체예 17 또는 18에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (p-aminobenzyl carbamoyl: PABC) 모이어티를 포함하는 방법.
20. 구체예 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 방법.
21. 구체예 20에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 항체의 Fc 도메인에 포함되고, 구체적으로 링커가 접합된 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)인 방법.
22. 구체예 20에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 분자 공학 (molecular engineering)에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 방법.
23. 구체예 22에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)인 방법.
24. 구체예 22에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함되는 방법.
25. 구체예 24에 있어서, Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된 방법.
26. 구체예 20 내지 22 또는 24 내지 25 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 것인 방법.
27. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항체는 브렌툭시맙 (Brentuximab), 트라스투주맙 (Trastuzumab), 젬투주맙 (Gemtuzumab), 이노투주맙 (Inotuzumab), 아벨루맙 (Avelumab), 세툭시맙 (Cetuximab), 리툭시맙 (Rituximab), 다라투무맙 (Daratumumab), 페르투주맙 (Pertuzumab), 베돌리주맙 (Vedolizumab), 오크렐리주맙 (Ocrelizumab), 토실리주맙 (Tocilizumab), 우스테키누맙 (Ustekinumab), 골리무맙 (Golimumab), 오비누투주맙 (Obinutuzumab), 사시투주맙 (Sacituzumab), 벨란타맙 (Belantamab), 폴라투주맙 (Polatuzumab) 또는 엔포르투맙 (Enfortumab)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
28. 구체예 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
29. 구체예 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 방법.
30. 구체예 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기의 γ-카복사미드 기에 접합되는 방법.
31. 구체예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%의 접합 효율 (conjugation efficiency)로 접합시키기에 적합한 것인 방법.
32. 구체예 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 미생물 트란스글루타미나제는 스트렙토마이세스 (Streptomyces) 종, 구체적으로 스트렙토마이세스 모바라엔시스 (Streptomyces mobaraensis)로부터 유래되는 방법.
33. 구체예 1 내지 32 중 어느 하나에 따른 방법으로 생성된 항체-링커 접합체.
34. a) 항체; 및
b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 RK 모티프 (RK motif)에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합 (isopeptide bond)을 통해 상기 항체에 접합되는,
항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate):
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00056
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00057
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00058
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00059
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00060
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00061
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
35. 구체예 34에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 항체-링커 접합체.
36. 구체예 34 또는 35에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 항체-링커 접합체.
37. 구체예 34 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 링커의 순전하는 중성 또는 양성인 항체-링커 접합체.
38. 구체예 34 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 항체-링커 접합체.
39. 구체예 34 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 및 RKR (서열 번호: 4)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 항체-링커 접합체.
40. 구체예 34 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2) 및 ARK (서열 번호: 3)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 항체-링커 접합체.
41. 구체예 34 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)를 포함하는 항체-링커 접합체.
42. 구체예 34 내지 41 중 어느 하나에 있어서, B는 연결 모이어티인 항체-링커 접합체.
43. 구체예 42에 있어서, 연결 모이어티 B는
Figure pct00062
생물직교 마커 기, 또는
Figure pct00063
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 항체-링커 접합체.
44. 구체예 43에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 항체-링커 접합체:
Figure pct00064
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00065
Lys(N3);
Figure pct00066
테트라진;
Figure pct00067
알킨;
Figure pct00068
스트레인드 사이클로옥틴;
Figure pct00069
BCN;
Figure pct00070
스트레인드 알켄;
Figure pct00071
광반응성 기;
Figure pct00072
알데히드;
Figure pct00073
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00074
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00075
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00076
티오-선택적 친전자체;
Figure pct00077
-SH; 및
Figure pct00078
시스테인.
45. 구체예 42 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 접합된 항체-링커 접합체.
46. 구체예 45에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 클릭-반응을 통해 접합된 항체-링커 접합체.
47. 구체예 34 내지 41 중 어느 하나에 있어서, B는 페이로드인 항체-링커 접합체.
48. 구체예 45 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 항체-링커 접합체:
Figure pct00079
독소;
Figure pct00080
사이토카인;
Figure pct00081
성장 인자;
Figure pct00082
방사성핵종;
Figure pct00083
호르몬;
Figure pct00084
항-바이러스제;
Figure pct00085
항-박테리아제;
Figure pct00086
형광 염료;
Figure pct00087
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00088
반감기 증가 모이어티;
Figure pct00089
용해도 증가 모이어티;
Figure pct00090
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00091
핵산;
Figure pct00092
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00093
비타민;
Figure pct00094
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00095
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00096
항-염증제.
49. 구체예 48에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 항체-링커 접합체:
Figure pct00097
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00098
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00099
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00100
두오카르마이신;
Figure pct00101
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00102
튜불리신;
Figure pct00103
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00104
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00105
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00106
크립토피신;
Figure pct00107
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00108
산드라마이신;
Figure pct00109
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00110
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
50. 구체예 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티를 포함하는 항체-링커 접합체.
51. 구체예 50에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 항체-링커 접합체.
52. 구체예 50 또는 51에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 항체-링커 접합체.
53. 구체예 34 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 항체-링커 접합체.
54. 구체예 53에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 항체의 Fc 도메인에 포함되고, 구체적으로 링커가 접합된 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)인 항체-링커 접합체.
55. 구체예 53에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 항체-링커 접합체.
56. 구체예 55에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)인 항체-링커 접합체.
57. 구체예 55에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함되는 항체-링커 접합체.
58. 구체예 57에 있어서, Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된 항체-링커 접합체.
59. 구체예 53 내지 55 또는 57 내지 58 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 항체-링커 접합체.
60. 구체예 34 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 이노투주맙, 아벨루맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 다라투무맙, 페르투주맙, 베돌리주맙, 오크렐리주맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 골리무맙, 오비누투주맙, 사시투주맙, 벨란타맙, 폴라투주맙 또는 엔포르투맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 항체-링커 접합체.
61. 구체예 34 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 항체-링커 접합체.
62. 구체예 34 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 항체-링커 접합체.
63. a) IgG 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 또는 RKR (서열 번호: 4)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되고;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해 상기 IgG 항체에 접합되는,
항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate).
64. 구체예 63에 있어서, 약물 모이어티 B는 링커에 포함된 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에 자기-희생 모이어티를 통해 연결되는 항체-약물 접합체.
65. 구체예 64에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체.
66. 구체예 63 내지 65 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 항체-약물 접합체.
67. 구체예 63 내지 66 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 IgG1 항체인 항체-약물 접합체.
68. 구체예 63 내지 67 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 폴라투주맙, 또는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
69. 구체예 63 내지 67 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 트라스투주맙, 또는 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
70. 구체예 63 내지 67 중 어느 하나에 있어서, IgG 항체는 엔포르투맙, 또는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10 또는 11에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
71. 구체예 63 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 약물은 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는 독소인 항체-약물 접합체:
Figure pct00111
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00112
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00113
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00114
두오카르마이신;
Figure pct00115
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00116
튜불리신;
Figure pct00117
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00118
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00119
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00120
크립토피신;
Figure pct00121
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00122
산드라마이신;
Figure pct00123
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00124
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
72. 구체예 63 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 링커는 구조 RKAA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
73. 구체예 63 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 링커는 구조 RKA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
74. 구체예 63 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 링커는 구조 ARK-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
75. 구체예 63 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 링커는 구조 RKR-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
76. 하기 구조를 포함하는 링커 작제물 (linker construct):
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00125
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00126
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00127
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00128
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00129
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00130
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
77. 구체예 76에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 링커 작제물.
78. 구체예 76 또는 77에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 링커 작제물.
79. 구체예 76 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 링커의 순전하는 중성 또는 양성인 링커 작제물.
80. 구체예 76 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 링커 작제물.
81. 구체예 76 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 또는 RKR (서열 번호: 4)을 포함하는 링커 작제물.
82. 구체예 76 내지 81 중 어느 하나에 있어서, B는 연결 모이어티인 링커 작제물.
83. 구체예 82에 있어서, 연결 모이어티 B는
Figure pct00131
생물직교 마커 기, 또는
Figure pct00132
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 링커 작제물.
84. 구체예 83에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 링커 작제물:
Figure pct00133
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00134
Lys(N3);
Figure pct00135
테트라진;
Figure pct00136
알킨;
Figure pct00137
스트레인드 사이클로옥틴;
Figure pct00138
BCN;
Figure pct00139
스트레인드 알켄;
Figure pct00140
광반응성 기;
Figure pct00141
알데히드;
Figure pct00142
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00143
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00144
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00145
티오-선택적 친전자체;
Figure pct00146
-SH; 및
Figure pct00147
시스테인.
85. 구체예 76 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKAA-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
86. 구체예 76 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKA-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
87. 구체예 76 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 ARK-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
88. 구체예 76 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 B-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
89. 구체예 76 내지 81 중 어느 하나에 있어서, B는 페이로드인 링커 작제물.
90. 구체예 89에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 링커 작제물:
Figure pct00148
독소;
Figure pct00149
사이토카인;
Figure pct00150
성장 인자;
Figure pct00151
방사성핵종;
Figure pct00152
호르몬;
Figure pct00153
항-바이러스제;
Figure pct00154
항-박테리아제;
Figure pct00155
형광 염료;
Figure pct00156
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00157
반감기 증가 모이어티;
Figure pct00158
용해도 증가 모이어티;
Figure pct00159
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00160
핵산;
Figure pct00161
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00162
비타민;
Figure pct00163
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00164
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00165
항-염증제.
91. 구체예 90에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 링커 작제물:
Figure pct00166
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00167
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00168
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00169
두오카르마이신;
Figure pct00170
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00171
튜불리신;
Figure pct00172
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00173
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00174
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00175
크립토피신;
Figure pct00176
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00177
산드라마이신;
Figure pct00178
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00179
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
92. 구체예 89 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티를 포함하는 링커 작제물.
93. 구체예 92에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 링커 작제물.
94. 구체예 92 또는 93에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 링커 작제물.
95. 구체예 89 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKAA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
96. 구체예 89 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
97. 구체예 89 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 ARK-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
98. 구체예 89 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 링커 작제물는 구조 B-PABC-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
99. 미생물 트란스글루타미나제에 의한 항체-링커 접합체의 생성에서 구체예 76 내지 98 중 어느 하나에 따른 링커 작제물의 용도.
100. 구체예 99에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 용도.
101. 구체예 65 또는 66에 있어서, 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 용도.
102. a) 구체예 33 내지 62 중 어느 하나에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate); 또는
b) 구체예 63 내지 75 중 어느 하나에 따른 항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate); 및
적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분을 포함하는 약학 조성물을 포함하는,
약학 조성물 (pharmaceutical composition).
103. 구체예 102에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 치료 활성물질 (therapeutically active agent)를 포함하는 약학 조성물.
104. 요법 (therapy) 및/또는 진단 (diagnostics)에 사용하기 위한, 구체예 33 내지 62 중 어느 하나에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 구체예 63 내지 75 중 어느 하나에 따른 항체-약물 접합체, 또는 구체예 102 또는 103에 따른 약학 조성물.
105. 신생물 질환 (neoplastic disease), 신경계 질환 (neurological disease), 자가면역 질환 (autoimmune disease), 염증성 질환 (inflammatory disease) 또는 감염성 질환 (infectious disease)을
Figure pct00180
앓고 있고,
Figure pct00181
발병 위험이 있으며, 및/또는
Figure pct00182
진단받은
환자의 치료에 사용하기 위한, 구체예 33 내지 62 중 어느 하나에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 구체예 63 내지 75 중 어느 하나에 따른 항체-약물 접합체, 또는 구체예 102 또는 103에 따른 약학 조성물.
106. 구체예 105에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 폴라투주맙을 포함하고, 신생물 질환은 B-세포 관련 암 (B-cell associated cancer)인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
107. 구체예 106에 있어서, B-세포 관련 암은 비-호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma)이고, 구체적으로 B-세포 관련 암은 미만성 거대 B-세포 림프종 (diffuse large B-cell lymphoma)인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
108. 구체예 106 또는 107에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 벤다무스틴 (bendamustine) 및/또는 리툭시맙 (rituximab)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
109. 구체예 105에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 트라스투주맙을 포함하고, 신생물 질환은 HER2-포지티브 암 (HER2-positive cancer), 구체적으로 HER2-포지티브 유방암, 위암, 난소암 또는 폐암인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
110. 구체예 109에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 라파티닙 (lapatinib), 카페시타빈 (capecitabine) 및/또는 탁산 (taxane)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
111. 구체예 105에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 엔포르투맙 또는 엔포르투맙 변이체를 포함하고, 신생물 질환은 Nectin-4 포지티브 암 (Nectin-4 positive cancer), 구체적으로 Nectin-4 포지티브 췌장암, 폐암, 방광암 또는 유방암인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
112. 구체예 111에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 시스플라틴-기반 화학요법제 (cisplatin-based chemotherapeutic agent) 및/또는 펨브롤리주맙 (Pembrolizumab)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
113. 신생물 질환, 신경계 질환, 자가면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을
Figure pct00183
앓고 있고,
Figure pct00184
발병 위험이 있으며, 및/또는
Figure pct00185
진단받은
환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 구체예 33 내지 62 중 어느 하나에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 구체예 63 내지 75 중 어느 하나에 따른 항체-약물 접합체, 또는 구체예 102 또는 103에 따른 약학 조성물.
114. 구체예 33 내지 62 중 어느 하나에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 구체예 63 내지 75 중 어느 하나에 따른 항체-약물 접합체, 또는 구체예 102 또는 103에 따른 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는,
신생물 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
따라서, 일 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서,
상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에, 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00186
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00187
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00188
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00189
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00190
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00191
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
즉, 본 발명은 펩티드 모티프 RK (아르기닐-리실)를 포함하는 링커가 글리코실화 항체에 고효율로 접합될 수 있다는 놀라운 발견에 적어도 부분적으로 기반한다. 특허 출원 WO 2019/057772에서, 펩티드-기반 링커는 글리코실화 항체의 글루타민-잔기에 링커내 리신 잔기를 통해 효율적으로 접합될 수 있음이 입증되었다. 그러나, 놀랍게도 본원에서 연장된 모티프 RK가 개선된 접합 효율을 추가로 제공한다는 것이 밝혀졌다.
본 발명자들은 RK 모티프가 없는 리신-포함 링커가 약물 분자에 직접 부착되는 경우 27 내지 77% 범위의 접합 효율을 초래하는 것을 보여주었다 (표 4 참조). 본원에서 제공된 RK 모티프를 포함하는 링커는 글리코실화 항체에 적어도 82%, 소정의 경우에는 최대 100%의 효율로 접합되었다 (표 3 및 5 참조). 따라서, RK 모티프를 포함하는 링커는 글리코실화 항체에 대한 MTG-기반 접합의 경우, 구체적으로 페이로드가 1-단계 반응으로 글리코실화 항체에 직접 접합되는 경우에 다른 리신-기반 링커보다 특히 바람직하다.
본 발명 내에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)를 포함하는 것이 바람직하며, 여기서 링커는 항체내 글루타민 잔기에, 링커의 RK 모티프에 포함된 잔기 K에 포함된 1차 아민을 통해 접합된다. 소정의 구체예에서, 잔기 K는 리신 잔기이다. 그러나, 소정의 구체예에서, 잔기 K는 또한 리신 모방체 또는 리신 유도체일 수 있으며, 단 상기 리신 모방체 또는 리신 유도체는 이의 아미노산 측쇄에 1차 아민을 포함해야 한다.
따라서, 소정의 구체예에서, 잔기 K는 리신 모방체일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "리신 모방체 (lysine mimetic)"는 리신과 상이한 구조를 갖지만, 리신과 유사한 특징을 가지고 있어서, 펩티드 또는 단백질의 기능 및/또는 구조를 유의미하게 변경하지 않고 펩티드 또는 단백질에서 리신을 대체하는데 사용될 수 있는 화합물을 지칭한다. 소정의 구체예에서, 리신 모방체는 1차 아민 및 α-탄소 원자를 연결하는 지방족 사슬의 길이 또는 조성이 리신과 상이할 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 리신 모방체는 오르니틴 또는 2,7-디아미노헵타노산일 수 있다. 소정의 구체예에서, 리신 모방체는 베타-아미노산, 예컨대 베타-호모리신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 잔기 K는 리신 유도체일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "리신 유도체 (lysine derivative)"는 리신 또는 리신 모방체에 포함된 하나 이상의 관능기가 변형되거나 또는 치환된, 리신 또는 리신 모방체를 지칭한다. 본 발명 내에서, 리신 유도체의 측쇄에 있는 아미노 기는 변형되지 않아서, 단백질내 글루타민 잔기에의 접합에 이용할 수 있는 것이 바람직하다. 구체예에서, 잔기 K가 링커의 C-말단 위치에 위치하는 경우, K는 α-카복실 기가 변형되거나 또는 치환된 리신 유도체일 수 있다. 소정의 구체예에서, 리신 모방체의 α-카복실 기는 아미드화될 수 있다.
링커는 잔기 R을 추가로 포함하며, 이는 잔기 K와 함께, 링커의 RK 모티프를 형성한다. 소정의 구체예에서, 잔기 R은 아르기닌 잔기이다. 그러나, 소정의 구체예에서, 잔기 R은 또한 아르기닌 모방체 또는 아르기닌 유도체일 수 있다.
따라서, 소정의 구체예에서, 잔기 R은 아르기닌 모방체일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "아르기닌 모방체 (arginine mimetic)"는 아르기닌과 상이한 구조를 갖지만, 아르기닌과 유사한 특징을 가지고 있어서, 펩티드 또는 단백질의 기능 및/또는 구조를 유의미하게 변경하지 않고 펩티드 또는 단백질에서 아르기닌을 대체하는데 사용될 수 있는 화합물을 지칭한다. 아르기닌 모방체는 구아니디노 기 및 α-탄소 원자를 연결하는 지방족 사슬의 길이 또는 조성이 아르기닌과 상이할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 아르기닌 모방체는 구아니디노 기 자체가 아르기닌과 상이할 수 있다. 즉, 아르기닌 모방체는 구아니디노 기와 유사한 물리화학적 특성을 갖는 관능기를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 아르기닌 모방체는 호모아르기닌, 2-아미노-3-구아니디노-프로피온산, β-우레이도알라닌 또는 시트룰린일 수 있다.
소정의 구체예에서, 잔기 R은 아르기닌 유도체일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "아르기닌 유도체 (arginine derivative)"는 아르기닌 또는 아르기닌 모방체에 포함된 하나 이상의 관능기가 변형되거나 또는 치환된, 아르기닌 또는 아르기닌 모방체를 지칭한다. 아르기닌 유도체는 구아니디노 기가 치환되거나 또는 변형된, 아르기닌 또는 아르기닌 모방체일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아르기닌 유도체는 ω-메틸아르기닌일 수 있다. 구체예에서, 잔기 R이 링커의 N-말단 위치에 위치하는 경우, R은 α-아미노 기가 변형되거나 또는 치환된, 아르기닌 유도체일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아르기닌 모방체의 α-아미노 기는 아세틸화될 수 있다.
RK 모티프는 바람직하게는 아미노산 아르기닌 및 리신으로 구성되는 것으로 이해해야 한다. 그러나, 아르기닌 또는 리신 잔기, 또는 이들 모두는 상기 개시된 바와 같이 모방체 또는 유도체로 대체될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 아르기닌 및 오르니틴으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 아르기닌 및 2,7-디아미노헵타노산으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 호모아르기닌 및 리신으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 2-아미노-3-구아니디노-프로피온산 및 리신으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 호모아르기닌 및 오르니틴으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 호모아르기닌 및 2,7-디아미노헵타노산으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 2-아미노-3-구아니디노-프로피온산 및 오르니틴으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, RK 모티프는 아미노산 2-아미노-3-구아니디노-프로피온산 및 2,7-디아미노헵타노산으로 구성될 수 있다.
본 발명 내에서, RK 모티프는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)에 내포된다. 즉, 링커는 하나 이상의 화학적 스페이서 (Sp)를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "화학적 스페이서 (chemical spacer)"는 링커의 화학적 잔기에 공유결합으로 부착되고 및/또는 링커의 2개의 화학적 잔기들 사이에 개재되는 화학적 모이어티를 설명한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다.
즉, 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 존재하거나 또는 부재할 수 있다. (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 존재하는 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3) 각각은 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 또한 비-아미노산 잔기를 포함할 수 있음에 유의해야 하며, 이는 하기에 보다 상세히 개시된다.
화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에 포함된 "아미노산 잔기 (amino acid residue)"는 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체일 수 있다. 용어 아미노산 (amino acid)은 α-아미노산 뿐만 아니라, 다른 아미노산 예컨대 β-, γ- 또는 δ-아미노산을 포함하는 것으로 이해해야 한다. α-아미노산 잔기는 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에 이의 L- 또는 D-형태로 존재할 수 있다. 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 키랄 β-, γ- 또는 δ-아미노산을 포함하는 경우, 상기 키랄 β-, γ- 또는 δ-아미노산은 이의 S- 또는 R-형태로 존재할 수 있다. 따라서, 이의 가장 넓은 의미에서, 본원에서 사용된 용어 "아미노산 잔기 (amino acid residue)"는 아미노 기 (-NH2) 및 카복실 기 (-COOH)를 함유하는 임의의 유기 화합물을 지칭할 수 있다. 따라서, "아미노산" 또는 "아미노산 잔기"가 본 개시내용 전반에 걸쳐 언급될 때마다, 용어 아미노산 잔기는 또한 아미노산 모방체 또는 유도체를 포함할 수 있는 것으로 이해해야 한다.
또한, 용어 아미노산 잔기 (amino acid residue)는 알려진 단백질생성 아미노산 (proteinogenic amino acids)의 세트, 즉 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린에 한정되지 않으며, 또한 비-정준 및 비-천연 아미노산을 포함하는 것으로 이해해야 한다. 본원에서 사용된, "비-정준 아미노산 (non-canonical amino acid)"은 단백질생성 아미노산 세트의 일부는 아니지만, 천연 공급원으로부터 수득될 수 있는 임의의 아미노산일 수 있다. 그러나, 일부 비-정준 아미노산은 또한 자연 발생 펩티드 및/또는 단백질에서 발견될 수 있다는 점에 유의해야 한다.
본원에서 사용된, "비-천연 아미노산 (non-natural amino acid)" 또는 "합성 아미노산 (synthetic amino acid)"은 아미노 기 및 카복실 기를 포함하는 아미노산의 일반적인 정의에는 속하지만, 자연에서는 발견되지 않는 임의의 분자일 수 있다. 따라서, 비-천연 아미노산은 바람직하게는 화학적 합성에 의해 수득된다. 비-정준 아미노산 및 비-천연 아미노산 간의 차이는 어떤 경우에는 불확실할 수 있음을 이해해야 한다. 예를 들어, 비-천연 아미노산으로 정의된 아미노산은 이후에 자연에서 확인되어, 비-정준 아미노산으로 재분류될 수 있다.
비-정준 또는 비-천연 아미노산의 예로는 제한 없이, D-아미노산 (예컨대 D-알라닌, D-아르기닌, D-메티오닌), 호모-아미노산 (예컨대 호모세린, 호모아르기닌, 호모시스테인, α-아미노아디프산), N-메틸화 아미노산 (예컨대 사르코신, N-Me-류신), α-메틸 아미노산 (예컨대 α-메틸-히스티딘, α-아미노이소부티르산), β-아미노산 (예컨대 β-알라닌, D-3-아미노이소부티르산, L-β-호모알라닌), γ-아미노산 (예컨대 γ-아미노부티르산), 알라닌 모방체 또는 유도체 (예컨대 β-사이클로프로필알라닌, 페닐글리신, 데하이드로-알라닌, β-시아노알라닌, β-(3-피리딜)-알라닌, β-(1,2,4-트리아졸-1-일)-알라닌, β-(1-피페라지닐)-알라닌), 페닐알라닌 모방체 또는 유도체 (예컨대 4-요오도페닐알라닌, 펜타플루오로-페닐알라닌, 나프틸-알라닌, 4-아미노페닐알라닌), 아르기닌 모방체 또는 유도체 (예컨대 β-우레이도알라닌, ω-메틸아르기닌), 리신 모방체 또는 유도체 (예컨대 (3-(3-메틸-3H-디아지린-3-일)프로파미노)카보닐-1-리신, Nε,Nε,Nε-트리메틸리신), 히스티딘 모방체 또는 유도체 (예컨대 2,5-디-요오도히스티딘, 1-메틸히스티딘), 티로신 모방체 또는 유도체 (예컨대 3-아미노티로신, 티로닌, 3,5-디니트로티로신, 3-하이드록시-메틸-티로신, O-포스포-L-티로신), 트립토판 모방체 또는 유도체 (예컨대 5-하이드록시-트립토판, 1-메틸트립토판), 세린 모방체 또는 유도체 (예컨대 β-(2-티에닐)-세린, β-(3,4-디하이드록시페닐)-세린, O-포스포세린), 트레오닌 모방체 또는 유도체 (예컨대 알로-트레오닌, O-포스포트레오닌), 프롤린 모방체 또는 유도체 (예컨대 하이드록시프롤린, 3,4-데하이드로-프롤린, 피로글루탐산, 티아프롤린, 시스-옥타하이드로인돌-2-카복실산), 류신 및 이소류신 모방체 또는 유도체 (예컨대 알로-이소류신, 노르류신, 4,5-데하이드로류신, (4S)-4-하이드록시-L-이소류신), 발린 모방체 또는 유도체 (예컨대 노르발린, γ-하이드록시발린), 시트룰린 모방체 또는 유도체 (예컨대 티오시트룰린, 호모시트룰린), 시스테인 모방체 또는 유도체 (예컨대 페니실라민, 셀레노시스테인, 부티오닌-설폭시민), 메티오닌 모방체 또는 유도체 (예컨대 S-메틸메티오닌, L-메티오닌 설폰, L-메티오닌 설폭사이드, L-메티오닌 설폭시민, 셀레노메티오닌), 아스파르트산 모방체 또는 유도체 (예컨대 DL-트레오-β-하이드록시아스파르트산, L-아스파르트산 β-메틸 에스테르), 글루탐산 모방체 또는 유도체 (예컨대 γ-메틸렌글루탐산, γ-카복시글루탐산, γ-하이드록시글루탐산, L-글루탐산 5-메틸 에스테르, L-2-아미노헵탄디오산), 아스파라긴 모방체 또는 유도체 (예컨대 L-트레오-3-하이드록시아스파라긴, N,N-디메틸-L-아스파라긴, L-2-아미노-2-카복시에탄설폰아미드, 5-디아조-4-옥소-L-노르발린), 글루타민 모방체 또는 유도체 (예컨대 4-F-(2S,4R)-플루오로글루타민, γ-글루타밀메틸아미드, 테아닌, L-글루탐산 γ-모노하이드록사메이트), 고리형 모이어티를 포함하는 아미노산 (예컨대 4-아미노피페리딘-4-카복실산, 아제티딘-2-카복실산, 피페콜산, 1-아미노사이클로펜탄카복실산, 스피나신), 또는 생물-직교 모이어티를 포함하는 아미노산 (예컨대 프로파르길글리신, α-알릴글리신, L-아지도-호모알라닌, p-벤조일-l-페닐알라닌, p-2-플루오로아세틸-l-페닐알라닌, (S)-2-아미노-3-(4-(6-메틸-1,2,4,5-테트라진-3-일)페닐)프로파노산)일 수 있다.
전술한 알파-아미노산 이외에, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 하나 이상의 β-, γ-, δ- 또는 ε-아미노산을 포함할 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 펩티도모방체 (peptidomimetic)일 수 있다. 펩티도모방체는 2개의 α-아미노산들 사이에 형성된 고전적인 펩티드 결합을 전적으로 함유하지 않을 수 있지만, 추가로 또는 대신에 알파 아미노산 및 β-, γ-, δ- 또는 ε-아미노산 사이에, 또는 2개의 β-, γ-, δ- 또는 ε-아미노산 사이에, 각각 형성된 하나 이상의 아미드 결합을 포함할 수 있다. 따라서, 링커가 펩티드로 기재된 본 발명의 임의의 예에서, 링커는 또한 펩티도모방체일 수 있고, 따라서 전적으로 α-아미노산으로 구성되지 않고, 대신에 하나 이상의 β-, γ-, δ- 또는 ε-아미노산, 또는 아미노산으로 분류되지 않는 분자를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 링커에 포함될 수 있는 β-, γ-, δ- 또는 ε-아미노산의 예는 β-알라닌, γ-아미노부티르산, 4-아미노-3-하이드록시-5-페닐펜타노산, 4-아미노-3-하이드록시-6-메틸헵타노산, 6-아미노헥사노산 및 스타틴을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
또한, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 아미노산 유도체 및/또는 아미노산 모방체를 포함할 수 있다. (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 하나 이상의 아미노산 유도체를 포함하는 구체예에서, 아미노산 유도체가 펩티드 또는 이소펩티드 결합을 형성할 수 있도록, 아미노산 유도체는 유리 아미노 및 카복실 기를 갖는 것이 바람직하다. (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 하나 이상의 아미노산 모방체를 포함하는 구체예에서, 아미노산 모방체가 펩티드 또는 이소펩티드 결합을 형성할 수 있도록, 아미노산 모방체는 유리 아미노 및 카복실 기를 가질 수 있다. 그러나, 소정의 구체예에서, 아미노산 모방체 또는 유도체는 펩티드 결합의 형성을 방해하지 않는 치환된 아미노 기를 가질 수 있다. 이러한 아미노산 모방체 또는 유도체의 예는 N-메틸화 아미노산 예컨대 사르코신 또는 N-Me-류신일 수 있다.
(Sp1) 또는 (Sp3)에 포함된 아미노산 잔기가 말단 아미노산 잔기인 구체예에서, 말단 아미노산 잔기는 변형되거나, 보호되거나 또는 치환된 N-말단 아미노 기 또는 C-말단 카복실 기를 포함할 수 있다.
또한, 아미노산 모방체 또는 유도체는 유도체화된 아미노 기를 포함하는 아미노산, 예를 들어 프롤린의 모방체 또는 유도체 또는 다른 고리형 아미노산 예컨대 아제티딘-2-카복실산, 피페콜산 또는 스피나신일 수 있다. 추가로, 아미노산 모방체는 또한 표준 아미노산의 아미노 및/또는 카복실 기를 대체하는 다른 관능기를 포함할 수 있으며, 이는 아미노산 모방체가 인접한 아미노산, 아미노산 유도체 및/또는 아미노산 모방체와 대체 결합을 형성하고 펩티도모방체를 형성하도록 한다.
본원에서 사용된, 용어 "아미노산 모방체 (amino acid mimetic)"는 특정 아미노산과 상이한 구조를 갖지만 상기 특정 아미노산과 유사한 방식으로 기능하여 상기 특정 아미노산을 대체하는데 사용될 수 있는 화합물을 지칭한다. 아미노산 모방체는 이것이 모방하는 아미노산과 유사한 구조적 및/또는 기능적 특징을 적어도 어느 정도 충족하는 경우, 상기 아미노산 모방체가 특정 아미노산과 유사한 방식으로 기능한다고 한다. 용어 "아미노산 유도체 (amino acid derivative)"는 아미노산에 포함된 하나 이상의 관능기(들)가 변형되거나 또는 치환된, 본원에 정의된 아미노산을 지칭한다. 아미노산 유도체는 바람직하게는 단백질생성 또는 비-정준 아미노산의 유도체일 수 있다. 아미노산 유도체의 임의의 관능기는 치환되거나 또는 변형될 수 있다.
링커가 하나 이상의 말단 아미노산 잔기(들)를 포함하는 구체예에서, 말단 아미노산 잔기는 보호될 수 있다. 예를 들어, (Sp1)이 N-말단 아미노산 잔기를 포함하는 구체예에서, N-말단 아미노 기는 보호될 수 있다. 예를 들어, 소정의 구체예에서, 스페이서 (Sp1)에 포함된 N-말단 아미노산 잔기는 아세틸화될 수 있다. 다른 구체예에서, RK 모티프에 포함된 R 잔기는 링커의 N-말단 아미노산일 수 있다. 이러한 구체예에서, 아르기닌, 아르기닌 모방체 또는 아르기닌 유도체의 N-말단 아미노 기는 예를 들어 아세틸화에 의해 보호될 수 있다. 소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B 또는 페이로드 B는 아미노산이거나 또는 아미노산에 기반할 수 있다. 이러한 구체예에서, 아미노산-기반 페이로드 또는 연결 모이어티 B의 N-말단 아미노 기는 예를 들어 아세틸화에 의해 보호될 수 있다.
마찬가지로, (Sp3)이 C-말단 아미노산 잔기를 포함하는 구체예에서, C-말단 카복실 기는 보호될 수 있다. 예를 들어, 소정의 구체예에서, 스페이서 (Sp3)내 C-말단 아미노산 잔기는 아미드화될 수 있다. 다른 구체예에서, RK 모티프에 포함된 K 잔기는 링커의 C-말단 아미노산일 수 있다. 이러한 구체예에서, 리신, 리신 모방체 또는 리신 유도체의 C-말단 카복실 기는 예를 들어 아미드화에 의해 보호될 수 있다. 소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B 또는 페이로드 B는 아미노산이거나 또는 아미노산에 기반할 수 있다. 이러한 구체예에서, 아미노산-기반 페이로드 또는 연결 모이어티 B의 C-말단 카복실 기는 예를 들어 아미드화에 의해 보호될 수 있다.
소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3) 각각은 아미노산 유도체 및 아미노산 모방체를 포함하는, 아미노산 잔기를 0 내지 12개 포함할 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, (Sp1)은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있고, (Sp2)는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며, (Sp3)은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다.
즉, 소정의 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 포함할 수 있다. 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 링커에 포함된 아미노산 잔기는 바람직하게는 RK 모티프에, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에, 소정의 구체예에서 B가 아미노산-기반 연결 모이어티 또는 페이로드인 경우 또한 B에 포함된 아미노산 잔기이다. 링커가 2개의 아미노산 잔기만을 포함하는 구체예에서, 상기 2개의 아미노산 잔기는 RK 모티프에 포함된다. 이러한 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 부재하거나 또는 임의의 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체를 포함하지 않는다.
소정의 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 2 내지 25개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 2 내지 20개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 2 내지 15개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 2 내지 10개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 3 내지 10개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 3 내지 8개 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 링커는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기를 3 내지 6개 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커의 순전하는 중성 또는 양성이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 펩티드 링커 (또는 본원에 개시된 펩티도모방체)이다. 즉, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)가 존재하는 경우, 이는 전적으로 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체로 구성된다. 펩티드의 순전하는 통상 중성 pH (7.0)에서 계산된다. 가장 간단한 접근법으로, 순전하는 양으로 하전된 아미노산 잔기 (Arg 및 Lys 및 선택적으로 His)의 수와 음으로 하전된 아미노산 잔기 (Asp 및 Glu)의 수를 더하여 결정하고, 두 그룹의 차이를 계산한다. 링커가 비-정준 아미노산 또는 아미노산 유도체 (여기서 하전된 관능기가 변형되거나 또는 치환됨)를 포함하는 경우에, 당업자는 중성 pH에서 비-정준 아미노산 또는 아미노산 유도체의 전하를 결정하는 방법을 알고 있다.
소정의 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에 포함된 페이로드 또는 연결 모이어티 B 또는 임의의 비-아미노산 모이어티는 또한 링커의 순전하에 기여할 수 있다. 그러나, 당업자는 바람직하게는 중성 pH (7.0)에서 임의의 비-아미노산 모이어티를 포함하는, 전체 링커의 순전하를 계산하는 방법을 알고 있다.
소정의 구체예에서, 링커의 순전하는 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체를 포함하는, 링커에 포함된 아미노산 잔기에 기반하여 단독으로 계산된다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커에 포함된 아미노산 잔기의 순전하는 중성 또는 양성이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 음으로 하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는다.
즉, 링커는 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체를 포함하는, 음으로 하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않을 수 있다. 음으로 하전된 아미노산 잔기는 중성 pH (7.0)에서 음전하를 운반하는 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체이다. 음으로 하전된 정준 아미노산은 글루탐산 및 아스파르트산이다. 그러나, 음으로 하전된 비-정준 아미노산, 아미노산 모방체 및 아미노산 유도체가 당해 기술 분야에 알려져 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 RK 모티프 외부에 적어도 하나의 양으로-하전된 아미노산 잔기를 포함한다. 즉, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 적어도 하나의 양으로-하전된 아미노산을 포함한다. 소정의 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 적어도 하나의 히스티딘 잔기를 포함한다.
아미노산 모방체 및 유도체를 포함하는, 아미노산 잔기 이외에 또는 그 대신에, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 비-아미노산 모이어티를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 전적으로 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체로 구성되지 않을 수 있다. 즉, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 비-아미노산 성분을 포함할 수 있거나 또는 전적으로 비-아미노산 성분으로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 아미노산 및 비-아미노산 성분을 포함할 수 있다.
예를 들어, 그러나 제한 없이, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3) 각각은 하나 이상의 원자에 치환된, 1 내지 200개 원자의 탄소 포함 프레임워크 (carbon comprising framework), 선택적으로 적어도 10개 원자, 예를 들어 10 내지 100개 원자 또는 20 내지 100개 원자의 탄소 포함 프레임워크를 포함할 수 있으며, 선택적으로 상기 탄소 포함 프레임워크는 선형 탄화수소이거나, 또는 고리형 기, 대칭 또는 비대칭 분지형 탄화수소, 모노사카라이드, 디사카라이드, 선형 또는 분지형 올리고사카라이드 (비대칭 분지형 또는 대칭 분지형), 다른 천연 선형 또는 분지형 올리고머 (비대칭 분지형 또는 대칭 분지형), 또는 더 일반적으로 임의의 사슬-성장 또는 단계-성장 중합 공정으로부터 생성되는 임의의 이량체, 삼량체 또는 고급 올리고머 (선형, 비대칭 분지형 또는 대칭 분지형)를 포함한다.
(Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 임의의 직쇄형, 분지쇄형 및/또는 고리형 C2-30 알킬, C2-30 알케닐, C2-30 알키닐, C2-30 헤테로알킬, C2-30 헤테로알케닐, C2-30 헤테로알키닐 (선택적으로 하나 이상의 호모사이클릭 방향족 화합물 라디칼 또는 헤테로사이클릭 화합물 라디칼이 삽입될 수 있음); 특히, 임의의 직쇄형 또는 분지쇄형 C2-5 알킬, C5-10 알킬, C11-20 알킬, -O-C1-5 알킬, -O-C5-10 알킬, -O-C11-20 알킬, 또는 (CH2-CH2-O-)1-24 또는 (CH2)x1-(CH2-O-CH2)1-24-(CH2)x2- 기 (여기서 x1 및 x2는 독립적으로 0 내지 20 범위에서 선택된 정수), 아미노산, 올리고펩티드, 글리칸, 설페이트, 포스페이트 또는 카복실레이트일 수 있다. 일부 구체예에서, (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 C2-6 알킬 기를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티 또는 유사한 축합 폴리머, 예컨대 폴리(카복시베타인 메타크릴레이트) (pCBMA), 폴리옥사졸린, 폴리글리세롤, 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리(하이드록시에틸메타크릴레이트) (pHEMA)를 포함할 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)은 산업적 제조에서 의약품에 이르기까지 다양한 용도로 사용되는 폴리에테르 화합물이다. PEG는 또한 이의 분자량에 따라 폴리에틸렌 옥사이드 (PEO) 또는 폴리옥시에틸렌 (POE)으로 알려져 있다. PEG의 구조는 일반적으로 H-(O-CH2-CH2)n-OH로 표시된다. 당업자는 축합 폴리머가 아미노산 잔기 또는 페이로드에 커플링될 수 있도록 축합 폴리머를 관능화하는 방법을 알고 있다.
PEG 모이어티를 포함하는 링커가 PEG 모이어티가 없는 비교 가능한 링커만큼 효율적으로 글리코실화 항체에 접합될 수 있다는 것이 본 발명자들에 의해 밝혀졌다. 예를 들어, 링커 ARK-PEG2-PABC-MMAE (도 14) 및 ARK-PEG2-(NH)-(CH3)-S-C4-메이탄신 (도 15)은 글리코실화 폴라투주맙에, 각각 92% 및 90%의 효율로 접합되었다 (ARK-PABC-MMAE의 경우 94%와 비교). 다른 예에서, 링커 ARK-PEG2-PABC-MMAE (도 14) 및 ARK-PEG2-(NH)-(CH3)-S-C4-메이탄신 (도 15)은 글리코실화 트라스투주맙에 99%의 효율로 접합되었다 (ARK-PABC-MMAE의 경우 100%와 비교).
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 하나 이상의 PEG 모이어티를 포함한다. 소정의 구체예에서, PEG 모이어티는 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에 포함될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커에 포함된 각 PEG 모이어티는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 모노머, 2 내지 15개의 에틸렌 글리콜 모노머, 2 내지 10개의 에틸렌 글리콜 모노머, 또는 2 내지 5개의 에틸렌 글리콜 모노머를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, PEG 모이어티는 (Sp2)에 포함되어 연결 모이어티 또는 페이로드를 RK 모티프에 직접 연결한다. 소정의 구체예에서, PEG 모이어티는 (Sp2)에 포함되어 연결 모이어티 또는 페이로드를 (Sp2)에 포함된 아미노산 잔기에 연결한다. 소정의 구체예에서, PEG 모이어티는 (Sp2)에 포함되어 RK 모티프를 자기-희생 모이어티에 연결하고, 결국 페이로드에 연결한다. 소정의 구체예에서, PEG 모이어티는 (Sp2)에 포함되어 (Sp2)에 포함된 아미노산 잔기를 자기-희생 모이어티와 연결하고, 결국 페이로드에 연결한다.
소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 덱스트란을 포함할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "덱스트란 (dextran)"은 3 내지 2000 kDa 범위의 중량을 가질 수 있는, 다양한 길이의 사슬로 이루어진 복합 분지형 글루칸을 지칭한다. 직쇄는 전형적으로 글루코스 분자들 사이의 알파-1,6 글리코시드 연결로 구성되는 반면에, 분지쇄는 알파-1,3 연결로부터 시작한다. 덱스트란은 예를 들어 락트산 박테리아에 의해 수크로스로부터 합성될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 담체로 사용되는 덱스트란은 바람직하게는 약 15 내지 1500 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "올리고뉴클레오티드 (oligonucleotide)"는 리보핵산 (RNA) 또는 데옥시리보핵산 (DNA)의 올리고머 또는 폴리머 뿐만 아니라, 비-자연 발생 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 더 높은 안정성으로 인해, 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 DNA의 폴리머이다.
소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 존재하는 경우, 이는 전적으로 아미노산 모방체 및 유도체를 포함하는 아미노산 잔기, 및 PEG 모이어티로 구성된다. 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 존재하는 경우, 이는 전적으로 아미노산 모방체 및 유도체를 포함하는 아미노산 잔기로 구성된다. 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)에 포함된 모든 아미노산 잔기는 α-L-아미노산이다. 즉, 소정의 구체예에서, 페이로드 또는 연결 모이어티 B를 제외한 링커는 전적으로 아미노산 잔기로 구성된다. 소정의 구체예에서, 페이로드 또는 연결 모이어티 B를 제외한 링커는 전적으로 α-L-아미노산 잔기로 구성된다. 이러한 펩티드-기반 링커는 N- 및/또는 C-말단에 보호 기 (protection group)를 포함할 수 있다. 즉, N-말단 아미노 기는 아세틸화될 수 있고 및/또는 C-말단 카복실 기는 아미드화될 수 있다.
화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 동일한 구조를 가질 수 있음에 유의해야 한다. 그러나, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3) 각각은 상이한 구조를 갖고 및/또는 모든 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)이 동시에 존재하지 않는 것이 바람직하다. 즉, 소정의 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3) 중 단 하나 또는 2개가 링커에 존재할 수 있다.
소정의 구체예에서, RK 모티프는 하나 이상의 작은 소수성 아미노산 잔기에 직접 연결될 수 있다. 예를 들어, 소정의 구체예에서, RK 모티프는 하나 이상의 알라닌 잔기에 직접 연결될 수 있다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함한다. 링커를 항체의 글루타민 잔기에 접합시키기 위해 사용되는 RK 모티프는 아미노산 서열 RKAA, RKA, ARK, RKR 또는 RK-Val-Cit에 포함될 수 있음을 이해해야 한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2) 또는 ARK (서열 번호: 3)를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함한다.
본 발명 내에서, 링커는 RK 모티프에 포함된 잔기 K의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 항체에 접합되는 것이 바람직하다. 따라서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및/또는 (Sp3)은 트란스글루타미나제-기반 접합 반응에서 추가적인 아민 공여체로서 역할을 할 수 있는 추가의 리신 잔기, 리신 모방체 또는 리신 유도체를 포함하지 않는 것이 바람직하다. 다른 구체예에서, 링커에 포함된 임의의 유리 N-말단 아미노 기는 미생물 트란스글루타미나제에 대한 기질로서 역할을 할 수 없도록 치환, 예를 들어 아세틸화될 수 있다.
본 발명에 따른 링커는 적어도 하나의 연결 모이어티 또는 페이로드 B를 추가로 포함한다. 본 발명에 따른 링커는 1-단계 접합 공정으로 페이로드를 항체에 직접 접합시키는데 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 제1 단계에서 하나 이상의 연결 모이어티를 포함하는 링커가 항체에 접합될 수 있고, 이어서 제2 단계에서 하나 이상의 페이로드가 항체-링커 접합체에 연결될 수 있다. 하기 표 1에서 본원에서 사용된 두 용어를 명확하게 설명한다.
1-단계 및 2-단계 접합
링커 펩티드 (예시) 공정 타입 단계
(Sp1)-RK-(Sp2)-페이로드-(Sp3) 또는
(Sp1)-페이로드-(Sp2)-RK-(Sp3)		 1-단계 접합 단계 1: 항체내 Gln 잔기에 대한 페이로드를 포함하는 링커의 접합
(Sp1)-RK-(Sp2)-연결 모이어티-(Sp3)
또는
(Sp1)-연결 모이어티-(Sp2)-RK-(Sp3)		 2-단계 접합 단계 1: 항체내 Gln 잔기에 대한 연결 모이어티를 포함하는 링커의 접합
단계 2: 연결 모이어티에 대한 페이로드의 접합
소정의 구체예에서, 링커는 하나 이상의 연결 모이어티 B를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 B는 연결 모이어티이다.
본원에서 사용된, "연결 모이어티 (linking moiety)"는 일반적으로 적어도 이-관능성 분자 (bi-functional molecule)를 지칭한다. 본 발명 내에서, 연결 모이어티는 연결 모이어티를 본 발명의 링커에 커플링하는 제1 관능기, 및 링커가 항체에 접합되기 전 또는 후에 추가 분자를 링커에 커플링하는데 사용될 수 있는 제2 관능기를 포함한다. 소정의 구체예에서, 본 발명의 연결 모이어티는 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체이다. 이러한 구체예에서, 연결 모이어티는 바람직하게는 링커에 이의 아미노 기를 통해 연결되는 반면에, 아미노산 측쇄에 포함된 관능기는 추가 분자를 링커에 커플링하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 연결 모이어티는 링커에 이의 카복실 기를 통해 연결될 수 있는 반면에, 아미노산 측쇄에 포함된 관능기는 추가 분자를 링커에 커플링하는데 사용될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 연결 모이어티 B는 하기를 포함한다:
Figure pct00192
생물직교 마커 기, 또는
Figure pct00193
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티.
용어 "생물직교 마커 기 (bioorthogonal marker group)"는 Sletten 및 Bertozzi (A Bioorthogonal Quadricyclane Ligation. J Am Chem Soc 2011, 133 (44), 17570-17573)에 의해 네이티브 생화학적 과정을 방해하지 않고 생명체 시스템 내부에서 화학 반응을 일으킬 수 있는 반응성 기를 지정하기 위해 확립되었다. "가교를 위한 비-생물-직교 엔티티 (non-bio-orthogonal entity for crosslinking)"는 제1 관능기를 포함하거나 또는 이로 구성된 임의의 분자일 수 있으며, 여기서 제1 관능기는 적합한 제2 관능기를 포함하는 페이로드에 화학적으로 또는 효소적으로 가교될 수 있다. 가교 반응이 비-생물-직교 반응인 경우에도, 상기 반응이 페이로드를 링커에 가교시키는 것 이외에 항체에 추가적인 변형을 도입하지 않는 것이 바람직하다. 상기 관점에서, 연결 모이어티 B는 "생물직교 마커 기" 또는 "비-생물-직교 엔티티"로 구성될 수 있거나, 또는 "생물직교 마커 기" 또는 "비-생물-직교 엔티티"를 포함할 수 있다. 예를 들어, 연결 모이어티 Lys(N3)의 경우, 전체 Lys(N3) 및 아지드 기 단독은 본 발명 내에서 생물직교 마커 기로 볼 수 있다. Lys(N3)는 6-아지도-L-리신을 지칭하며, 이는 또한 K(N3)으로 약칭될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함한다:
Figure pct00194
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00195
Lys(N3);
Figure pct00196
테트라진;
Figure pct00197
알킨;
Figure pct00198
스트레인드 사이클로옥틴;
Figure pct00199
BCN;
Figure pct00200
스트레인드 알켄;
Figure pct00201
광반응성 기;
Figure pct00202
알데히드;
Figure pct00203
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00204
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00205
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00206
티오-선택적 친전자체;
Figure pct00207
-SH; 및
Figure pct00208
시스테인.
링커에 포함된 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 예를 들어 하기 표 2에 제시된 임의의 결합 반응에 관여할 수 있다:
Figure pct00209
Figure pct00210
연결 모이어티 B는 상기 표 2에서 "결합 파트너 1" 또는 "결합 파트너 2"로 지칭되는 것이거나 또는 이를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B는 유리 설프하이드릴 기 (free sulfhydryl group)를 갖는 시스테인, 시스테인 모방체 또는 시스테인 유도체일 수 있다.
이러한 Cys 잔기 (또는 모방체 또는 유도체)의 유리 설프하이드릴 기는 티오-선택적 친전자체 예컨대 말레이미드를 포함하는 페이로드 구조체에 접합될 수 있다. 말레이미드 모이어티를 포함하는 독소 구조체가 자주 사용되었으며, 또한 애드세트리스 (Adcetris)가 의료 당국의 승인을 받았다. 따라서, MMAE 독소를 포함하는 독소 구조체는 본 발명의 링커내 Cys 잔기의 유리 설프하이드릴 기에 커플링될 수 있다.
다른 티오-선택적 친전자체 예컨대 3-아릴프로피오니트릴 (APN) 또는 포스폰아미데이트가 본 발명의 방법에서 말레이미드 대신에 사용될 수 있음에 유의해야 한다.
그러므로 본 발명에 따른 링커에 Cys-잔기를 제공하는 것은 기성품 (off-the-shelf) 독소-말레이미드 구조체를 사용하여 항체-페이로드 접합체를 형성하거나, 보다 일반적으로 Cys-말레이미드 결합 화학의 이점을 충분히 활용할 수 있도록 하는 이점을 갖는다. 동시에, 기성품 항체 (off-the-shelf antibodies)를 사용할 수 있으며, 이는 데글리코실화될 필요가 없다. 특정 구체예에서, Cys 잔기는 아미노산-기반 링커에서 사슬내 또는 C-말단에 존재할 수 있다.
다른 구체예에서, 연결 모이어티 B는 아지드 기를 포함할 수 있다. 당업자는 본 발명에 따른 링커에 혼입될 수 있는 아지드 기를 포함하는 분자, 예컨대 6-아지도-리신 (Lys(N3)) 또는 4-아지도-호모알라닌 (Xaa(N3))을 알고 있다. 아지드 기를 포함하는 연결 모이어티는 다양한 생물-직교 반응 (bio-orthogonal reactions), 예컨대 SPAAC (strain-promoted azide-alkyne cycloaddition), CuAAC (copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition) 또는 Staudinger 결찰에서 기질로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 소정의 구체예에서, 사이클로옥틴 유도체 예컨대 DBCO, DIBO, BCN 또는 BARAC를 포함하는 페이로드는 아지드 기를 포함하는 링커에 SPAAC에 의해 커플링될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 연결 모이어티 B는 테트라진 기를 포함할 수 있다. 당업자는 본 발명에 따른 링커에 혼입될 수 있는 테트라진-포함 분자, 바람직하게는 테트라진 기를 포함하는 아미노산 유도체를 알고 있다. 테트라진을 포함하는 연결 모이어티는 생물-직교 테트라진 결찰에서 기질로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 소정의 구체예에서, 사이클로프로펜, 노르보렌, 노르보렌 유도체 또는 사이클로옥틴 기, 예컨대 비사이클로[6.1.0]노닌 (BCN)을 포함하는 페이로드가 테트라진 기를 포함하는 링커에 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B는 고리형 디엔, 예컨대 사이클로펜타디엔 유도체를 포함할 수 있다. 말레이미드-포함 페이로드 분자에 연결될 수 있는 잠재적인 사이클로펜타디엔 유도체는 Amant et al., Tuning the Diels-Alder Reaction for Bioconjugation to Maleimide Drug-Linkers; Bioconjugate Chem. 2018, 29, 7, 2406-2414 및 Amant et al., A Reactive Antibody Platform for One-Step Production of Antibody-Drug Conjugates through a Diels-Alder Reaction with Maleimide; Bioconjugate Chem. 2019, 30, 9, 2340-2348에 기재되어 있다.
소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B는 광반응성 기를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "광반응성 기 (photoreactive group)"는 활성 종 (active species)의 생성을 수행하기 위해 적용된 외부 에너지원에 반응하여 인접한 화학 구조 (예를 들어, 추출 가능한 수소)에 공유 결합을 초래하는 화학기 (chemical group)를 지칭한다. 광반응성 기의 예는 아릴 아지드 예컨대 페닐 아지드, o-하이드록시페닐 아지드, m-하이드록시페닐아지드, 테트라플루오로페닐 아지드, o-니트로페닐 아지드, m-니트로페닐 아지드, 또는 아지도-메틸쿠마린, 디아지린, 소랄렌 (psoralen) 또는 벤조페논이 있으며, 이에 한정되지 않는다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하나 이상의 페이로드를 연결 모이어티 B에 접합시키는 추가 단계를 포함한다.
1-단계 공정으로 하나 이상의 페이로드를 포함하는 링커를 항체에 직접 접합시키는 대신에, 본 발명은 소정의 구체예에서 2-단계 공정을 언급하며, 여기서 제1 단계에서 적어도 하나의 연결 모이어티 B를 포함하는 링커가 항체에 접합되고, 후속하여 제2 단계에서 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 커플링될 수 있다.
본원에서 사용된, 용어 "페이로드 (payload)"는 화학적으로 합성될 수 있는 화학적 엔티티 또는 소분자량 분자, 및 숙주 세포의 발효에 의해 생성될 수 있거나 또는 화학적으로 합성되어 항체에 신규한 기능을 부여할 수 있는 생물학적 엔티티 또는 더 큰 분자를 포함하는, 임의의 자연 발생 또는 합성 생성 분자를 나타낸다. 링커에 포함된 연결 모이어티 또는 링커의 다른 부분 예컨대 화학적 스페이서 (Sp1) 및/또는 (Sp3) 또는 RK 모티프에 대한 페이로드의 커플링을 가능하게 하는 추가 구조 또는 관능기를 상기 페이로드가 포함할 수 있음을 이해해야 한다.
2-단계 접합 공정에서, 페이로드는 당해 기술 분야에 알려진 임의의 적합한 방법에 의해 연결 모이어티에 연결될 수 있다. 바람직하게는, 페이로드는 본원에 개시된 임의의 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티에 연결될 수 있다. 즉, 페이로드는 바람직하게는 적어도 하나의 연결 모이어티 B에 포함된 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티와 적합할 수 있는 관능기를 포함한다.
연결 모이어티 B에 포함된 생물직교 마커 기에 페이로드를 연결하는데 사용될 수 있는 여러 생물직교 반응이 당해 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 생물직교성 (bio-orthogonality)의 요건을 충족시키는 다수의 화학적 결찰 전략이 개발되었으며, 이는 하기를 포함한다: 아지드 및 사이클로옥틴 간의 1,3-쌍극자 고리화 첨가반응 (1,3-dipolar cycloaddition) (또한, 무-구리 클릭 화학 (copper-free click chemistry)이라 함, Baskin et al ("Copper-free click chemistry for dynamic in vivo imaging". Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (43): 16793-7)), 니트론 (nitrones) 및 사이클로옥틴 (cyclooctynes) 간의 1,3-쌍극자 고리화 첨가반응 (Ning et al ("Protein Modification by Strain-Promoted Alkyne-Nitrone Cycloaddition". Angewandte Chemie International Edition. 49 (17): 3065)), 알데히드 및 케톤으로부터의 옥심/하이드라존 형성 (Yarema, et al ("Metabolic Delivery of Ketone Groups to Sialic Acid Residues. Application To Cell Surface Glycoform Engineering". Journal of Biological Chemistry. 273 (47): 31168-79)), 테트라진 결찰 (Blackman et al ("The Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation based on Inverse-electron-demand Diels-Alder Reactivity". Journal of the American Chemical Society. 130 (41): 13518-9)), 이소니트릴-기반 클릭 반응 (isonitrile-based click reaction) (Stockmann et al ("Exploring isonitrile-based click chemistry for ligation with biomolecules". Organic & Biomolecular Chemistry. 9 (21): 7303)), 및 가장 최근에, 쿠아드리사이클란 결찰 (quadricyclane ligation) (Sletten & Bertozzi (JACS, A Bioorthogonal Quadricyclane Ligation. J Am Chem Soc 2011, 133 (44), 17570-17573)), 구리(I)-촉매화 아지드-알킨 고리화 첨가반응 (Copper(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition) (CuAAC, Kolb & Sharpless ("The growing impact of click chemistry on drug discovery". Drug Discov Today. 8 (24): 1128-1137)), 스트레인-촉진된 아지드-알킨 고리화 첨가반응 (Strain-promoted azide-alkyne cycloaddition) (SPAAC, Agard et al ("A Comparative Study of Bioorthogonal Reactions with Azides". ACS Chem. Biol. 1: 644-648)), 또는 스트레인-촉진된 알킨-니트론 고리화 첨가반응 (Strain-promoted alkyne-nitrone cycloaddition) (SPANC, MacKenzie et al ("Strain-promoted cycloadditions involving nitrones and alkynes―rapid tunable reactions for bioorthogonal labeling". Curr Opin Chem Biol. 21: 81-8)). 이러한 모든 문헌은 충분한 권능을 부여하는 개시내용을 제공하고, 긴 반복을 피하기 위해 본원에 참조에 의해 통합된다.
링커가 항체의 Gln 잔기에 미생물 트란스글루타미나제에 의해 접합된 후에 페이로드가 바람직하게는 본 발명에 따른 링커에 포함된 생물-직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티에 커플링되는 것으로 이해해야 한다. 그러나, 본 발명은 또한 제1 단계에서 하나 이상의 페이로드가 적어도 하나의 연결 모이어티 B를 포함하는 링커에 커플링되고 제2 단계에서 생성된 링커-페이로드 구조체가 항체에 미생물 트란스글루타미나제에 의해 접합되는 항체-링커 접합체를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 하나 이상의 페이로드는 연결 모이어티 B에 클릭 반응을 통해 접합된다.
즉, 하나 이상의 페이로드는 클릭 반응, 구체적으로 본원에 개시된 임의의 클릭 반응으로 연결 모이어티 B에 연결될 수 있다.
특히 바람직한 구체예에서, 적어도 하나의 페이로드는 링커에 포함된 연결 모이어티 B에 티올-말레이미드 접합을 통해 접합될 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, 페이로드는 말레이미드 기를 포함할 수 있고, 연결 모이어티 B는 티올 기, 예컨대 이에 한정되는 것은 아니지만 시스테인 잔기 또는 시스테인 모방체 예컨대 호모시스테인을 포함하는 분자일 수 있다. 그러나, B는 또한 유리 티올 기를 포함하는 비-아미노산 분자일 수 있다. 다른 구체예에서, 페이로드는 유리 티올 기를 포함할 수 있고, 연결 모이어티 B는 말레이미드 기를 포함할 수 있다.
다른 특히 바람직한 구체예에서, 적어도 하나의 페이로드는 링커에 포함된 연결 모이어티 B에 SPAAC (strain-promoted azide-alkyne cycloaddition)를 통해 접합될 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, 페이로드는 알킨 기, 예컨대 제한 없이 사이클로옥틴 (cycloocytne) 기를 포함할 수 있고, 연결 모이어티 B는 아지드 기, 예컨대 제한 없이 본원에 개시된 리신 유도체 Lys(N3)를 포함하는 분자일 수 있다. 그러나, B는 또한 유리 아지드 기를 포함하는 비-아미노산 분자일 수 있다. 다른 구체예에서, 페이로드는 알킨 기 예컨대 사이클로옥틴 기를 포함할 수 있고, 연결 모이어티 B는 아지드 기를 포함할 수 있다.
링커내 연결 모이어티 및 페이로드내 관능기 사이의 클릭 반응 이외에, 페이로드는 연결 모이어티에 당해 기술 분야에 알려진 임의의 효소적 또는 비-효소적 반응에 의해 공유 결합될 수 있다.
페이로드는 연결 모이어티에 공유 결합을 통해 연결되는 것이 바람직하다. 그러나, 소정의 구체예에서, 페이로드는 연결 모이어티에 강한 비-공유 결합을 통해 연결될 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, 연결 모이어티 B는 바이오틴 모이어티, 예컨대 비-제한적으로 리신 유도체 바이오시틴 (biocytin)을 포함할 수 있다. 이러한 구체예에서, 스트렙타비딘 모이어티를 포함하는 페이로드는 바이오틴 모이어티를 포함하는 링커에 연결될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 B는 페이로드이다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 이미 링커의 일부일 수 있으므로 페이로드가 1-단계 공정으로 항체에 접합될 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 바람직하게는 링커에 화학적 합성에 의해 커플링된다. 페이로드는 바람직하게는 링커에 포함된 화학적 스페이서에 커플링되거나 또는 RK 모티프에 직접 커플링된다. 페이로드가 아미노산 모방체 및 유도체를 포함하는 아미노산 잔기에 커플링되는 구체예에서, 페이로드는 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기 또는 N-말단 아미노 기에 커플링될 수 있다. 대안적으로, 페이로드는 아미노산 잔기의 측쇄에 포함된 관능기에 커플링될 수 있다. 당업자는 페이로드가 카복실 기, 아미노 기 또는 아미노산 측쇄에 커플링될 수 있도록 상기 페이로드를 관능화하는 방법을 알고 있다.
또한, 당업자는 페이로드를 아미노산-기반 링커에 화학적 합성에 의해 커플링하는 방법을 알고 있다. 예를 들어, 아민-포함 페이로드, 또는 티올-포함 페이로드 (예: 메이탄신 유사체), 또는 하이드록실-함유 페이로드 (예: SN-38 유사체)는 아미노산-기반 링커의 C-말단에 화학적 합성에 의해 부착될 수 있다. 그러나, 당업자는 페이로드를 아미노산 또는 아미노산 유도체의 N-말단, C-말단 또는 측쇄에 화학적 합성에 의해 커플링하는데 사용될 수 있는 추가 반응 및 반응성 기를 알고 있다. 페이로드를 아미노산-기반 링커에 화학적 합성에 의해 커플링하는데 사용될 수 있는 전형적인 반응에는 펩티드 커플링, 활성화된 에스테르 커플링 (NHS 에스테르, PFP 에스테르), 클릭 반응 (CuAAC, SPAAC), Michael 첨가반응 (티올 말레이미드 접합)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 펩티드에 대한 페이로드의 커플링은 선행 기술, 예를 들어 Costoplus et al. (Peptide-Cleavable Self-immolative Maytansinoid Antibody-Drug Conjugates Designed To Provide Improved Bystander Killing. ACS Med Chem Lett. 2019 Sep 27;10(10):1393-1399), Sonzini et al. (Improved Physical Stability of an Antibody-Drug Conjugate Using Host-Guest Chemistry. Bioconjug Chem. 2020 Jan 15;31(1):123-129), Bodero et al. (Synthesis and biological evaluation of RGD and isoDGR peptidomimetic-α-amanitin conjugates for tumor-targeting. Beilstein J. Org. Chem. 2018, 14, 407-415), Nunes et al. (Use of a next generation maleimide in combination with THIOMABTM antibody technology delivers a highly stable, potent and near homogeneous THIOMABTM antibody-drug conjugate (TDC). RSC Adv., 2017,7, 24828-24832), Doronina et al. (Enhanced activity of monomethylauristatin F through monoclonal antibody delivery: effects of linker technology on efficacy and toxicity. Bioconjug Chem. 2006 Jan-Feb;17(1):114-24), Nakada et al. (Novel antibody drug conjugates containing exatecan derivative-based cytotoxic payloads. Bioorg Med Chem Lett. 2016 Mar 15;26(6):1542-1545) and Dickgiesser et al. (Site-Specific Conjugation of Native Antibodies Using Engineered Microbial Transglutaminases. Bioconjug Chem. 2020 Mar 12. doi: 10.1021/acs.bioconjchem.0c00061)에 광범위하게 기재되어 있다.
페이로드는 본 발명에 따른 펩티드-기반 링커 또는 펩티드-포함 링커의 N-말단 또는 C-말단 단부에 커플링될 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 펩티드 또는 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기 또는 C-말단 카복실 기에 직접 커플링될 수 있다 (예를 들어 도 22 참조).
당업자는 페이로드를 아미노산 잔기에 커플링하기에 적합한 반응성 기를 알고 있다. 예를 들어, 아민-포함 페이로드는 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기에 아미드 결합을 통해 커플링될 수 있다 (도 22). 대안적으로, 티올 기 또는 하이드록실 기를 포함하는 페이로드는 아미노산의 C-말단 카복실 기에 각각 티오에스테르 또는 에스테르 결합을 통해 커플링될 수 있다. 카복실산 기를 포함하는 페이로드는 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 본 발명에 따른 링커에 포함된 펩티드 또는 아미노산 잔기의 N- 또는 C-말단 단부에 간접적으로 커플링될 수 있다. 당업자는 본 발명에 따른 링커에 포함된 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기 또는 C-말단 카복실 기에 페이로드를 커플링하는데 사용될 수 있는 링커 분자를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 하이드록실 기를 포함하는 페이로드는 아미노산 잔기의 N-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 하이드록실 기를 포함하는 페이로드는 N-말단 아미노 기에 카바메이트 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다 (도 24).
소정의 구체예에서, 티올 기를 포함하는 페이로드는 아미노산 잔기의 N-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 티올 기를 포함하는 페이로드는 N-말단 아미노 기에 티오카바메이트 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다 (도 28). 대안적으로, 티올 기를 포함하는 페이로드는 N-말단 아미노 기에 카복실 기 및 티올 기를 포함하는 알킬 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 소정의 구체예에서, 알킬 링커 분자는 3-머캅토프로피온산 링커 분자일 수 있으며, 여기서 페이로드는 3-머캅토프로피온산 링커 분자에 포함된 티올 기와 이황 결합 (di-sulfur bond)을 형성한다 (도 29).
소정의 구체예에서, 아미드 기를 포함하는 페이로드는 아미노산 잔기의 N-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 아민 기를 포함하는 페이로드는 N-말단 아미노 기에 디카복실산 링커 분자를 통해 커플링될 수 있으며, 여기서 디카복실산 링커는 페이로드 및 N-말단 아미노산 잔기의 아미노 기와 아미드 결합을 형성한다. 본 발명에서 링커 분자로서 사용될 수 있는 디카복실산의 예는 제한 없이 숙신산 또는 피멜산이다 (도 9 및 30 참조).
페이로드를 본 발명에 따른 링커에 포함된 아미노산 잔기의 N-말단에 간접적으로 커플링하기 위한 대체 링커 분자 또는 페이로드를 본 발명에 따른 링커에 포함된 아미노산 잔기의 C-말단에 간접적으로 커플링하기에 적합한 링커 분자는 당해 기술 분야에 기재되어 있고, 본 발명에 포함된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함한다:
Figure pct00211
독소;
Figure pct00212
사이토카인;
Figure pct00213
성장 인자;
Figure pct00214
방사성핵종;
Figure pct00215
호르몬;
Figure pct00216
항-바이러스제;
Figure pct00217
항-박테리아제;
Figure pct00218
형광 염료;
Figure pct00219
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00220
반감기 증가 모이어티;
Figure pct00221
용해도 증가 모이어티;
Figure pct00222
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00223
핵산;
Figure pct00224
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00225
비타민;
Figure pct00226
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00227
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00228
항-염증제.
본원에 개시된 페이로드 중 어느 하나는 본원에 개시된 1-단계 접합 공정에 사용하기 위해 링커에 직접 커플링될 수 있거나, 또는 본원에 개시된 2-단계 공정의 일부로서 생성된 항체-링커 접합체에 포함된 연결 모이어티에 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 사이토카인일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "사이토카인 (cytokine)"은 다른 세포의 기능에 영향을 미치고, 면역 또는 염증 반응에서 세포들 간의 상호작용을 조절하는 임의의 분비된 폴리펩티드를 의미한다. 사이토카인은 모노카인 (monokines), 림포카인 (lymphokines) 및 케모카인 (chemokines)을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 이는 어떤 세포가 이들을 생성하는지에는 관계 없다. 예를 들어, 모노카인은 일반적으로 단핵구에 의해 생성되고 분비되는 것으로 언급되지만, 자연 살해 세포, 섬유아세포, 호염기구, 호중구, 내피 세포, 뇌 성상세포, 골수 간질 세포, 표피 각질형성세포 및 B-림프구와 같은 많은 다른 세포가 모노카인을 생성한다. 림포카인은 일반적으로 림프구 세포에 의해 생성되는 것으로 언급된다. 사이토카인의 예는 인터루킨-1 (IL-1), 인터루킨-6 (IL-6), 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및 종양 괴사 인자 베타 (TNFβ)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 항염증제일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "항염증제 (anti-inflammatory agent)"는 주요 작용 방식 및 사용이 염증 치료 영역에 있는 항염증제 부류 및 또한 유용한 항염증 효과를 갖는 다른 치료제 부류로부터의 임의의 다른 약제를 의미한다. 이러한 항염증제는 비-스테로이드성 항염증 약물 (non-steroidal anti-inflammatory drugs: NSAIDs), 질병 조절 항-류마티스 약물 (disease modifying anti-rheumatic drugs: DMARDs), 마크롤라이드 항생제 (macrolide antibiotics) 및 스타틴 (statins)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, NSAID는 살리실레이트 (예: 아스피린), 아릴프로피온산 (예: 이부프로펜), 안트라닐산 (예: 메페남산), 피라졸 (예: 페닐부타존), 사이클릭 아세트산 (인도메티신) 및 옥시캄 (예: 피록시캄)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 항염증제는 설린닥, 디클로페낙, 테녹시캄, 케토롤락, 나프록센, 나부메톤, 디플루나살, 케토프로펜, 아릴프로피온산 (arlypropionic acid), 테니답, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 셀레콕시브, 로페콕시브, 멜록시캄, 에토리콕시브, 발데콕시브, 메토트렉세이트, 에타네르셉트, 인플릭시맙, 아달리무맙, 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 클라리트로마이신, 아지트로마이신, 록시트로마이신, 에리트로마이신, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 플루르비프로펜, 페노프로펜, 펜부펜, 베녹사프로펜, 덱스케토프로펜, 톨페남산, 니메설리드 (nimesulide) 및 옥사프로진을 포함한다.
소정의 구체예에서, 항염증제는 표적 특이적 항체에 접합되는 경우, 예를 들어 자가면역 질환에 의해 유발된 염증을 완화할 수 있는 항-염증성 사이토카인일 수 있다. 항염증 활성을 갖는 사이토카인은 제한 없이 IL-1RA, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11, IL-13 또는 TGF-β일 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 성장 인자일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "성장 인자 (growth factor)"는 세포 성장, 증식, 세포 분화 및/또는 세포 성숙을 자극할 수 있는 자연 발생 물질을 지칭한다. 성장 인자는 단백질 또는 스테로이드 호르몬의 형태로 존재한다. 성장 인자는 다양한 세포 과정을 조절하는데 중요하다. 성장 인자는 전형적으로 세포들 간의 신호전달 분자 (signaling molecules)로서 역할을 한다. 그러나, 세포 성장, 증식, 세포 분화 및 세포 성숙을 촉진하는 능력은 성장 인자들 간에 다양하다. 성장 인자의 예의 비-제한적인 목록은 하기를 포함한다: 염기성 섬유아세포 성장 인자 (basic fibroblast growth factor), 아드레노메둘린, 안지오포이에틴, 자가분비 운동성 인자 (autocrine motility factor), 골 형태형성 단백질, 뇌-유래 신경영양 인자, 표피 성장 인자, 상피 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, 아교 세포주-유래 신경영양 인자, 과립구 콜로니-자극 인자, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자, 성장 분화 인자-9, 간세포 성장 인자, 간암-유래 성장 인자, 인슐린 성장 인자, 인슐린-유사 성장 인자, 이동-자극 인자 (migration-stimulating factor), 마이오스타틴, 신경 성장 인자, 및 다른 뉴로트로핀 (neurotrophins), 혈소판-유래 성장 인자, 전환 성장 인자 알파, 전환 성장 인자 베타, 종양-괴사-인자-알파, 혈관 내피 성장 인자, 태반 성장 인자, 우태아 소마토트로핀 (fetal bovine somatotrophin), 및 사이토카인 (예: IL-3 및 IL-6에 대한 IL-1-보조인자, IL-2-t-세포 성장 인자, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, 및 IL-7).
소정의 구체예에서, 페이로드는 호르몬일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "호르몬 (hormone)"은 신체의 한 부분에 있는 세포 (cell) 또는 샘 (gland)에 의해 방출되는 화학 물질이 유기체의 다른 부분에 있는 세포에 영향을 미치는 메시지를 보내는 화학물질을 지칭한다. 본 발명에 유용한 호르몬의 예로는 제한 없이 멜라토닌 (MT), 세로토닌 (5-HT), 티록신 (T4), 트리요오도티로닌 (T3), 에피네프린 또는 아드레날린 (EPI), 노르에피네프린 또는 노르아드레날린 (NRE), 도파민 (DPM 또는 DA), 항뮐러관 호르몬 (antimullerian hormone) 또는 뮐러관 억제 호르몬 (mullerian inhibiting hormone) (AMH), 아디포넥틴 (Acrp30), 부신피질 자극 호르몬 또는 코르티코트로핀 (ACTH), 안지오텐시노겐 및 안지오텐신 (AGT), 항이뇨 호르몬 또는 바소프레신 (ADH), 심방 나트륨이뇨 펩티드 또는 아트리오펩틴 (ANP), 칼시토닌 (CT), 콜레시스토키닌 (CCK), 코르티코트로핀-방출 호르몬 (CRH), 에리트로포이에틴 (EPO), 난포-자극 호르몬 (FSH), 가스트린 (GRP), 그렐린 (ghrelin), 글루카곤 (GCG), 성선자극호르몬-방출 호르몬 (GnRH), 성장 호르몬-방출 호르몬 (GHRH), 인간 융모막 성선자극호르몬 (hCG), 인간 태반 락토겐 (HPL), 성장 호르몬 (GH 또는 hGH), 인히빈, 인슐린 (INS), 인슐린-유사 성장 인자 또는 소마토메딘 (IGF), 렙틴 (LEP), 황체형성 호르몬 (LH), 멜라닌 세포 자극 호르몬 (MSH 또는 α-MSH), 오렉신, 옥시토신 (OXT), 부갑상선 호르몬 (PTH), 프로락틴 (PRL), 렐락신 (RLN), 세크레틴 (SCT), 소마토스타틴 (SRIF), 트롬보포이에틴 (TPO), 갑상선-자극 호르몬 또는 티로트로핀 (TSH), 티로트로핀-방출 호르몬 (TRH), 코르티솔, 알도스테론, 테스토스테론, 데하이드로에피안드로스테론 (DHEA), 안드로스텐디온, 디하이드로테스토스테론 (DHT), 에스트론, 에스트리올 (E3), 프로게스테론, 칼시트리올, 칼시디올, 프로스타글란딘 (PG), 류코트리엔 (LT), 프로스타사이클린 (PGI2), 트롬복산 (TXA2), 프로락틴 방출 호르몬 (PRH), 리포트로핀 (PRH), 뇌 나트륨이뇨 펩티드 (BNP), 신경펩티드 Y (NPY), 히스타민, 엔도텔린, 췌장 폴리펩티드, 레닌 및 엔케팔린이 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 항바이러스제일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "항바이러스제 (antiviral agent)"는 포유동물에서 바이러스의 형성 및/또는 복제를 억제하는데 효과적인 제제 (화합물 또는 생물학적 제제)를 의미한다. 이는 포유동물에서 바이러스의 형성 및/또는 복제에 필요한 숙주 또는 바이러스 기전을 방해하는 제제를 포함한다. 항바이러스제는 예를 들어 리바비린, 아만타딘, VX-497 (merimepodib, Vertex Pharmaceuticals), VX-498 (Vertex Pharmaceuticals), 레보비린, 비라미딘, 세플렌 (Ceplene) (maxamine), XTL-001 및 XTL-002 (XTL Biopharmaceuticals)를 포함한다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 항박테리아제일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "항박테리아제 (antibacterial agent)"는 하기를 수행할 수 있는 임의의 물질, 화합물, 물질들의 조합 또는 화합물들의 조합을 지칭한다: (i) 박테리아 성장의 억제, 감소 또는 방지; (ii) 대상체에서 감염을 일으키는 박테리아 능력의 억제 또는 감소; 또는 (iii) 박테리아가 환경에서 번식하거나 또는 감염성을 유지하는 능력의 억제 또는 감소. 용어 "항박테리아제"는 또한 박테리아의 감염성 또는 병독성을 감소시킬 수 있는 화합물을 지칭한다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 면역조절제일 수 있다. 병용 요법을 위해 본원에서 사용된, 용어 "면역조절제 (immunoregulatory agent)"는 숙주의 면역계를 억제, 차폐 또는 증진시키는 작용을 하는 물질을 지칭한다. 면역조절제의 예로는 단백질성 제제 (proteinaceous agents) 예컨대 사이토카인, 펩티드 모방체 및 항체 (예컨대, 인간, 인간화, 키메라, 모노클로날, 폴리클로날, Fvs, ScFvs, Fab 또는 F(ab)2 단편 또는 에피토프 결합 단편), 핵산 분자 (예컨대, 안티센스 핵산 분자, iRNA 및 삼중 나선), 소분자, 유기 화합물 및 무기 화합물을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 면역조절제는 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 사이클로포스파미드, 사이톡산 (cytoxan), 임무란 (Immuran), 사이클로스포린 A, 미노사이클린, 아자티오프린, 항생제 (예컨대, FK506 (타크롤리무스)), 메틸프레드니솔론 (MP), 코르티코스테로이드, 스테로이드, 마이코페놀레이트, 모페틸, 라파마이신 (시롤리무스), 미조리빈, 데옥시스페르구알린, 브레퀴나르, 말로노니트릴로아민데스 (malononitriloamindes) (예: 레플룬아미드), T 세포 수용체 조절제 및 사이토카인 수용체 조절제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
소정의 구체예에서, 면역조절제는 면역자극제일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "면역자극제 (immunostimulatory agent)"는 바람직하게는 면역 반응 (예를 들어, 특정 병원체에 대한 면역 반응)을 유발할 수 있는 임의의 물질 또는 물질들을 지칭한다. 면역 세포 활성화 화합물은 Toll-유사 수용체 (Toll-like receptor: TLR) 효능제를 포함한다. 이러한 효능제는 병원체 관련 분자 패턴 (pathogen associated molecular patterns: PAMPs), 예컨대 감염-모방 조성물 (infection-mimicking composition) 예컨대 박테리아-유래 면역조절제 (일명 위험 신호 (danger signal)) 및 손상 관련 분자 패턴 (damage associated molecular pattern: DAMPs), 예컨대 스트레스를 받거나 또는 손상된 세포를 모방하는 조성물을 포함한다. TLR 효능제는 핵산 또는 지질 조성물 (예를 들어, 모노포스포릴 지질 A (monophosphoryl lipid A: MPLA))을 포함한다. 일례에서, TLR 효능제는 TLR9 효능제 예컨대 시토신-구아노신 올리고뉴클레오티드 (CpG-ODN), 폴리(에틸렌이민) (PEI)-축합 올리고뉴클레오티드 (ODN) 예컨대 PEI-CpG-ODN, 또는 이중 가닥 데옥시리보핵산 (DNA)을 포함한다. 다른 예에서, TLR 효능제는 TLR3 효능제 예컨대 폴리이노신-폴리시티딜산 (폴리 (I:C)), PEI-폴리 (I:C), 폴리아데닐산-폴리우리딜산 (폴리 (A:U)), PEI-폴리 (A:U), 또는 이중 가닥 리보핵산 (RNA)을 포함한다. 다른 예시되는 백신 면역자극 화합물은 리포폴리사카라이드 (LPS), 케모카인/사이토카인, 진균성 베타-글루칸 (예컨대 렌티난), 이미퀴모드, CRX-527 및 OM-174를 포함한다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 반감기 증가 모이어티 (half-life increasing moiety) 또는 용해도 증가 모이어티 (solubility increasing moiety)일 수 있다. 반감기 증가 모이어티는 예를 들어 PEG-모이어티 (폴리에틸렌글리콜 모이어티; PEGylation), 다른 폴리머 모이어티, PAS 모이어티 (프롤린, 알라닌 및 세린을 포함하는 올리고펩티드; PASylation), 또는 혈청 알부민 결합제이다. 용해도 증가 모이어티는 예를 들어 PEG-모이어티 (PEGylation) 또는 PAS 모이어티 (PASylation)이다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 폴리머-독소 접합체 (polymer-toxin conjugate)일 수 있다. 폴리머-독소 접합체는 많은 페이로드 분자를 운반할 수 있는 폴리머이다. 이러한 접합체는 때때로 플렉시머 (fleximers)라고 지칭되며, 예를 들어 Mersana therapeutics에 의해 시판된다. 폴리머-독소 접합체는 본원에 개시된 임의의 독소를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 뉴클레오티드일 수 있다. 핵산 페이로드의 일례는 MCT-485이며, 이는 MultiCell Technologies, Inc.에서 개발한, 종양 용해 및 면역 활성화 특성을 갖는 매우 작은 비-코딩 이중 가닥 RNA이다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 형광 염료일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "형광 염료 (fluorescent dye)"는 제1 파장의 광을 흡수하고 제1 파장보다 긴 제2 파장에서 방출하는 염료를 지칭한다. 소정의 구체예에서, 형광 염료는 근적외선 형광 염료로, 이는 650 내지 900 nm 파장의 광을 방출한다. 이 영역에서는 조직 자가형광이 더 낮고, 형광 소광이 적어 배경 간섭 (background interference)을 최소화하면서 심층 조직 침투를 증진시킨다. 따라서, 근적외선 형광 영상화를 사용하여 본 발명의 항체-페이로드 접합체에 의해 결합된 조직을 수술 중에 시각화할 수 있다. "근적외선 형광 염료 (near-infrared fluorescent dyes)"는 당해 기술 분야에 알려져 있고 상업적으로 이용 가능하다. 소정의 구체예에서, 근적외선 형광 염료는 IRDye 800CW, Cy7, Cy7.5, NIR CF750/770/790, DyLight 800 또는 Alexa Fluor 750일 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 방사성핵종을 포함할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "방사성핵종 (radionuclide)"은 예를 들어 방사성금속 (radiometals) 예컨대 Y, In, Tb, Ac, Cu, Lu, Tc, Re, Co, Fe 등의 양으로 하전된 이온 예컨대 90Y, 111In, 67Cu, 77Lu, 99Tc, 161Tb, 225Ac 등을 포함하는, 의학적으로 유용한 방사성핵종과 관련된다. 방사성핵종은 킬레이트제 예컨대 DOTA 또는 NODA-GA에 포함될 수 있다. 또한, 방사성핵종은 치료용 방사성핵종 또는 하기에서 논의되는 영상화 기술에서 조영제로서 사용될 수 있는 방사성핵종일 수 있다. 방사성핵종 또는 방사성핵종을 포함하는 분자는 당해 기술 분야에 알려져 있고, 상업적으로 이용 가능하다.
소정의 구체예에서, 페이로드는 비타민 (vitamin)일 수 있다. 비타민은 엽산, 폴라신 및 비타민 B9를 포함하는 폴레이트 (folates)로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나이다:
Figure pct00229
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00230
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00231
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00232
두오카르마이신;
Figure pct00233
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00234
튜불리신;
Figure pct00235
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00236
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00237
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00238
크립토피신;
Figure pct00239
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00240
산드라마이신;
Figure pct00241
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00242
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
즉, 본 발명의 방법으로 제조된 항체-링커 접합체는 바람직하게는 독소 페이로드를 포함한다. 본원에서 사용된, 용어 "독소 (toxin)"는 살아있는 세포 또는 유기체에 의해 생성되고, 세포 또는 유기체에 유독한 임의의 화합물과 관계가 있다. 따라서, 독소는 예를 들어 소분자, 펩티드 또는 단백질일 수 있다. 특정 예는 신경독소 (neurotoxins), 괴사독소 (necrotoxins), 혈액독소 (hemotoxins) 및 세포독소 (cytotoxins)이다. 소정의 구체예에서, 독소는 신생물 질환의 치료에 사용되는 독소이다. 즉, 독소는 본 발명의 방법으로 항체에 접합될 수 있고 항체의 표적 특이성으로 인해 악성 세포로 또는 악성 세포 내로 전달될 수 있다.
소정의 구체예에서, 독소는 아우리스타틴일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "아우리스타틴 (auristatin)"은 항-유사분열제 (anti-mitotic agents)의 계열을 지칭한다. 아우리스타틴 유도체는 또한 용어 "아우리스타틴"의 정의 내에 포함된다. 아우리스타틴의 예는 아우리스타틴 E (AE), 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 및 돌라스타틴 (dolastatin)의 합성 유사체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
소정의 구체예에서, 독소는 메이탄시노이드일 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "메이탄시노이드 (maytansinoid)"는 원래 아프리카 관목 마이테누스 오바투스 (Maytenus ovatus)로부터 단리된 고도로 세포독성인 약물 부류 및 추가로 메이탄시놀 (Maytansinol) 및 천연 메이탄시놀의 C-3 에스테르 (미국 특허 제4,151,042호); 합성 메이탄시놀의 C-3 에스테르 유사체 (Kupchan et al., J. Med. Chem. 21: 31-37, 1978; Higashide et al., Nature 270: 721-722, 1977; Kawai et al., Chem. Farm. Bull. 32: 3441-3451; 및 미국 특허 제5,416,064호); 간단한 카복실산의 C-3 에스테르 (미국 특허 제4,248,870호; 제4,265,814호; 제4,308,268호; 제4,308,269호; 제4,309,428호; 제4,317,821호; 제4,322,348호; 및 제4,331,598호); 및 N-메틸-L-알라닌의 유도체와의 C-3 에스테르 (미국 특허 제4,137,230호; 제4,260,608호; 및 Kawai et al., Chem. Pharm Bull. 12: 3441, 1984)를 지칭한다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있거나 또는 본 발명의 항체-페이로드 접합체에 포함될 수 있는 예시되는 메이탄시노이드는 메이탄신, DM1, DM3, DM4 및/또는 DM21이다.
소정의 구체예에서, 독소는 두오카르마이신 (duocarmycin)일 수 있다. 적합한 두오카르마이신은 예컨대 두오카르마이신 A, 두오카르마이신 B1, 두오카르마이신 B2, 두오카르마이신 CI, 두오카르마이신 C2, 두오카르마이신 D, 두오카르마이신 SA, 두오카르마이신 MA 및 CC-1065일 수 있다. 용어 "두오카르마이신"은 또한 두오카르마이신의 합성 유사체, 예컨대 아도젤레신, 비젤레신, 카르젤레신, KW-2189 및 CBI-TMI를 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
소정의 구체예에서, 독소는 NAMPT 억제제일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "NAMPT 억제제" 및 "니코틴아미드 포스포리보실 트란스퍼라제 억제제 (nicotinamide phosphoribosyl transferase inhibitor)"는 NAMPT의 활성을 감소시키는 억제제를 지칭한다. 용어 "NAMPT 억제제"는 또한 NAMPT 억제제의 프로드러그를 포함할 수 있다. NAMPT 억제제의 예로는 제한 없이, FK866 (또한, APO866이라 함), GPP 78 염산염, ST 118804, STF31, 피리딜 시아노구아니딘 (또한, CH-828이라 함), GMX-1778 및 P7C3을 포함한다. 추가적인 NAMPT 억제제는 당해 기술 분야에 알려져 있고, 본원에 기재된 조성물 및 방법에 사용하기에 적합할 수 있다. 예를 들어, PCT 공개 WO 2015/054060, 미국 특허 제8,211,912호, 및 제9,676,721호를 참조하며, 이들의 전문이 본원에 참조로 통합된다. 일부 구체예에서, NAMPT 억제제는 FK866이다. 일부 구체예에서, NAMPT 억제제는 GMX-1778이다.
소정의 구체예에서, 독소는 튜불리신 (tubulysin)일 수 있다. 튜불리신은 세포독성 펩티드이며, 이는 9개의 구성원 (A-I)을 포함한다. 튜불리신 A는 항암제로서의 잠재적 적용 가능성을 가지고 있다. 이는 G2/M 단계에서 세포를 정지시킨다. 튜불리신 A는 빈블라스틴 (vinblastine)보다 더 효과적으로 중합을 억제하고, 단리된 미세소관의 해중합 (depolymerization)을 유도한다. 튜불리신 A는 피코몰 (picomolar) 범위의 IC50으로 다양한 종양 세포주에 대한 강력한 세포증식억제 효과 (cytostatic effects)를 갖는다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 튜불리신은 튜불리신 E일 수 있다.
소정의 구체예에서, 독소는 엔디인일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "엔디인 (enediyne)"은 이중 결합에 의해 분리된 2개의 삼중 결합을 함유하는 9원 및 10원 고리를 특징으로 하는 박테리아 천연물의 부류를 지칭한다 (예를 들어, K. C. Nicolaou; A. L. Smith; E. W. Yue (1993). "Chemistry and biology of natural and designed enediynes". PNAS 90 (13): 5881-5888을 참조하며; 이의 전체 내용은 본원에 참조로 통합됨). 일부 엔디인은 Bergman 고리화를 수행할 수 있고, 생성된 디라디칼 (diradical)인 1,4-데하이드로벤젠 유도체는 DNA 가닥 절단을 초래하는 DNA의 당 백본으로부터 수소 원자를 추출할 수 있다 (예를 들어, S. Walker; R. Landovitz; W. D. Ding; G. A. Ellestad; D. Kahne (1992). "Cleavage behavior of calicheamicin gamma 1 and calicheamicin T". Proc Natl Acad Sci U.S.A. 89 (10): 4608-12를 참조하며; 이의 전체 내용은 본원에 참조로 통합됨). 이의 DNA와의 반응성은 많은 엔디인에 항생제 특성을 부여하고, 일부 엔디인은 임상적으로 항암 항생제로서 연구되었다. 엔디인의 비-제한적인 예는 다이네마이신 (dynemicin), 네오카르지노스타틴 (neocarzinostatin), 칼리케아미신 (calicheamicin), 에스페라마이신 (esperamicin)이 있다 (예를 들어, Adrian L. Smith and K. C. Bicolaou, "The Enediyne Antibiotics" J. Med. Chem., 1996, 39 (11), pp 2103-2117; 및 Donald Borders, "Enediyne antibiotics as antitumor agents," Informa Healthcare; 1st edition (Nov. 23, 1994, ISBN-10: 0824789385를 참조하며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 통합됨). 특정 구체예에서, 독소는 칼리케아미신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 독소는 독소루비신일 수 있다. 본원에서 사용된, "독소루비신 (doxorubicin)"은 스트렙토마이세스 박테리아 (Streptomyces bacterium)인 스트렙토마이세스 페우세티우스 변종 캐시우스 (Streptomyces peucetius var. caesius)로부터 유래된 안트라사이클린 패밀리의 구성원을 지칭하며, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신 및 이다루비신을 포함한다.
소정의 구체예에서, 독소는 키네신 스핀들 단백질 억제제일 수 있다. 용어 "키네신 스핀들 단백질 억제제 (kinesin spindle protein inhibitor)"는 세포 분열 중에 양극성 스핀들의 조립에 관여하는, 키네신 스핀들 단백질을 억제하는 화합물을 지칭한다. 암 치료를 위해 키네신 스핀들 단백질 억제제가 연구되고 있다. 키네신 스핀들 단백질 억제제의 예는 이스피네십 (ispinesib)을 포함한다. 또한, 용어 "키네신 스핀들 단백질 억제제"는 GlaxoSmithKline의 SB715992 또는 SB743921, 및 CombinatoRx의 펜타미딘/클로르프로마린을 포함한다.
소정의 구체예에서, 독소는 US20180078656A1 (참조로 통합됨)에 기재된 크립토피신 (cryptophycin)일 수 있다.
소정의 구체예에서, 독소는 산드라마이신 (sandramycin)일 수 있다. 산드라마이신은 처음 노카르디오이데스 종 (Nocardioides sp.) (ATCC 39419)으로부터 단리된 뎁시펩티드 (depsipeptide)이고, 세포독성 및 항종양 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
소정의 구체예에서, 독소는 아마톡신 (amatoxin)일 수 있다. 아마톡신 (알파-아마니틴, 베타-아마니틴 및 아마니틴 포함)은 8개의 아미노산으로 이루어진 고리형 펩티드이다. 이들은 아마니타 팔로이데스 (Amanita phalloides) 버섯으로부터 단리되거나, 또는 빌딩 블록으로부터 합성에 의해 제조될 수 있다. 아마톡신은 특히 포유동물 세포의 DNA-의존성 RNA 폴리머라제 II를 억제하고, 세포의 전사 및 단백질 생합성에 의해 영향을 받는다. 세포에서 전사 억제는 성장 및 증식을 정지시킬 수 있다. 공유 결합되지는 않았지만, 아마니틴 및 RNA-폴리머라제 II 사이의 복합체는 매우 단단하다 (KD=3 nM). 효소로부터 아마니틴의 해리는 영향을 받은 세포의 회복 가능성을 낮추는 매우 느린 과정이다. 세포에서 전사 억제가 너무 길게 지속되면, 세포는 프로그램된 세포 사멸 (아폽토시스)을 겪는다. 바람직한 일 구체예에서, 본원에서 사용된, 용어 "아마톡신"은 예를 들어 WO2010/115630, WO2010/115629, WO2012/119787, WO2012/041504, 및 WO2014/135282에 기재된 알파-아마니틴 또는 이의 변이체를 지칭한다.
소정의 구체예에서, 독소는 캄프토테신일 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "캄프토테신 (camptothecin)"은 토포이소머라제 I 억제제로서 기능하는 캄프토테신 또는 캄프토테신 유도체를 의미하는 것으로 의도된다. 예시되는 캄프토테신은 예를 들어 토포테칸, 엑사테칸, 데룩스테칸, 이리노테칸, DX-8951f, SN38, BN 80915, 루르토테칸, 9-니트로캄프토테신 및 아미노캄프토테신을 포함한다. 인간 암 환자를 치료하는데 사용되는 캄프토테신을 포함하는, 다양한 캄프토테신이 기재되었다. 몇몇 캄프토테신은 예를 들어 Kehrer et al., Anticancer Drugs, 12 (2): 89-105, (2001) 또는 Li et al., ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 10, 1386-1392)에 기재되어 있다.
본 발명의 의미에서, 독소는 또한 약물 유출 수송체 (drug efflux transporter)의 억제제일 수 있다. 독소 및 약물 유출 수송체의 억제제를 포함하는 항체-페이로드 접합체는 세포 내로 내재되는 경우 약물 유출 수송체의 억제제가 세포 밖으로 독소의 유출을 방지한다는 이점을 가질 수 있다. 본 발명 내에서, 약물 유출 수송체는 P-당단백질일 수 있다. P-당단백질의 일부 통상적인 약리학적 억제제에는 하기를 포함한다: 아미오다론 (amiodarone), 클라리트로마이신 (clarithromycin), 시클로스포린 (ciclosporin), 콜키신 (colchicine), 딜티아젬 (diltiazem), 에리트로마이신 (erythromycin), 펠로디핀 (felodipine), 케토코나졸 (ketoconazole), 란소프라졸 (lansoprazole), 오메프라졸 (omeprazole) 및 다른 양성자-펌프 억제제 (proton-pump inhibitors), 니페디핀 (nifedipine), 파록세틴 (paroxetine), 레세르핀 (reserpine), 사퀴나비르 (saquinavir), 세르트랄린 (sertraline), 퀴니딘 (quinidine), 타목시펜 (tamoxifen), 베라파밀 (verapamil), 및 둘록세틴 (duloxetine). 엘라크리다르 (elacridar) 및 CP 100356은 다른 통상적인 P-gp 억제제이다. 조수퀴다르 (zosuquidar) 및 타리퀴다르 (tariquidar)는 또한 이를 염두에 두고 개발되었다. 마지막으로, 발스포다르 (valspodar) 및 레베르산 (reversan)은 이러한 제제의 다른 예이다.
본원에 정의된 페이로드 B는 전적으로 실제 페이로드 그 자체로 이해되는 것이 아니라, 오히려 페이로드 분자로 이해되어야 하는 것으로 이해해야 한다. 본원에서 사용된 페이로드 분자 (payload molecule)는 예를 들어 페이로드를 연결 모이어티 B 또는 RK 모티프 또는 화학적 스페이서에 화학적 합성을 통한 커플링을 촉진하기 위한 추가 구조를 포함할 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 실제 페이로드는 본 발명의 링커에 연결된 페이로드 분자에 포함될 수 있다. 페이로드 분자는 하기 구조를 가질 수 있다:
X-(스페이서)-페이로드,
여기서 페이로드는 실제 페이로드, 예컨대 본원에 개시된 화합물 중 하나를 나타내고, X는 페이로드 분자를 연결 모이어티 (2-단계 공정) 또는 링커의 화학적 스페이서 또는 RK 모티프 (1-단계 공정)에 있는 적합한 관능기에 부착시키기에 적합한 반응성 기를 나타내며, 여기서 (스페이서)는 반응성 기 X로부터 실제 페이로드를 공간적으로 분리시키는 화학적 스페이서를 나타낸다. 그러나, 소정의 구체예에서, 반응성 기 X는 스페이서 또는 실제 페이로드의 일부일 수 있음을 이해해야 한다. 예를 들어, 스페이서는 펩티드 또는 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며, 여기서 반응성 기 X는 스페이서에 포함된 N-말단 아미노산 잔기의 아미노 기일 수 있다. 다른 구체예에서, 스페이서는 부재할 수 있다. 구체예에서, 스페이서가 부재한 경우, 관능기는 실제 페이로드에 포함될 수 있다. 소정의 구체예에서, 스페이서는 관심 관능기, 즉 연결 모이어티에 포함된 관능기에 적합한 관능기를 실제 페이로드에 부착시키는데 사용될 수 있다. 소정의 구체예에서, 반응성 기 X는 말레이미드 기 또는 사이클로옥틴 기, 예컨대 제한 없이, DBCO 또는 BCN 기일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp2)는 자기-희생 모이어티를 포함한다.
즉, 링커는 표적 세포 또는 조직에서 페이로드의 방출을 촉진하기 위한 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 자기-희생 모이어티는 링커의 임의의 부분에 포함될 수 있다. 그러나, 자기-희생 모이어티는 바람직하게는 RK 모티프로부터 페이로드를 분리하는 화학적 스페이서 (Sp2)에 포함된다. 대안적으로, 자기-희생 모이어티는 상기 정의된 페이로드 분자에 포함되는 (스페이서)에 포함될 수 있다.
본원에서 사용된, 용어 "자기-희생 모이어티 (self-immolative moiety)"는 링커에 포함될 수 있고 초기 반응이 일어난 후에 자발적으로 분해되어 페이로드를 방출할 수 있는 적어도 이관능성 분자 (bifunctional molecule)를 지칭한다. 초기 반응은 자기-희생 모이어티 및 아미노산 잔기 사이의 공유 결합의 가수분해일 수 있다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티 및 아미노산 잔기 사이의 공유 결합은 아미노산의 α-카복실 기 및 자기-희생 모이어티에 포함된 아민 기 사이에 형성된 아미드 결합일 수 있고, 초기 반응은 펩티다제 또는 프로테아제에 의해 촉매될 수 있다. 그러나, 다른 화학이 본 발명에 포함된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 페이로드 B에 직접 부착된다.
더 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 페이로드 B에 직접 부착되어, 상기 페이로드는 자기-희생 모이어티의 분해 시에 방출된다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 페이로드 및 링커에 포함된 RK 모티프 사이에 위치한다. 즉, 자기-희생 모이어티는 잔기 R의 N-말단 또는 잔기 K의 C-말단에 커플링될 수 있다. 대안적으로, 자기-희생 모이어티는 페이로드 및 화학적 스페이서 (Sp2)에 포함된 아미노산 잔기 사이, 바람직하게는 상기 아미노산 잔기의 N- 또는 C-말단에 위치할 수 있다. 또한, 자기-희생 모이어티는 당해 기술 분야에 알려진 임의의 방법에 의해 페이로드 및 화학적 스페이서 (Sp2)에 포함된 비-아미노산 잔기 사이에 위치할 수 있다.
자기-희생 모이어티의 선택은 무엇보다도 페이로드 분자에서 이용 가능한 관능기에 좌우되는 것으로 이해해야 한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함한다.
즉, 소정의 구체예에서, 링커는 자기-희생 모이어티 p-아미노벤질 카바모일 (PABC)을 포함할 수 있다. PABC는 아미노산 잔기 또는 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 유리 아민 기, 및 페이로드, 특히 아민-포함 페이로드에 커플링될 수 있는 카바모일 기를 포함한다. 그러나, 당업자는 페이로드가 아민 기를 포함하도록 상기 페이로드를 관능화하는 방법을 알고 있다. 자기-희생 모이어티 PABC는 바람직하게는 페이로드 및 링커에 포함된 아미노산 잔기 사이에 위치한다. 아미노산 잔기는 바람직하게는 RK 모티프에 포함된 잔기 K 또는 화학적 스페이서 (Sp2)에 포함된 아미노산이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티 PABC는 페이로드 및 화학적 스페이서 (Sp2)에 포함된 알라닌 잔기 사이에 위치한다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 페이로드 및 펩티다제 절단 부위 사이에 위치할 수 있다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 페이로드 및 카텝신 절단 부위 사이에 위치할 수 있다. 즉, 자기-희생 모이어티는 페이로드 및 카텝신에 의해 절단 가능한 것으로 알려진 모티프 사이에 위치할 수 있다.
본원에서 사용된, 용어 "카텝신 (cathepsin)"은 프로테아제의 패밀리를 지칭한다. 용어 카텝신은 카텝신 A, 카텝신 B, 카텝신 C, 카텝신 D, 카텝신 E, 카텝신 F, 카텝신 G, 카텝신 H, 카텝신 K, 카텝신 L1, 카텝신 L2, 카텝신 O, 카텝신 S, 카텝신 W 및 카텝신 Z를 포함한다. 특정 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 카텝신 B에 의해 특이적으로 가수분해되는 모티프, 예컨대 발린-알라닌, 발린-시트룰린 또는 알라닌-알라닌일 수 있다. 펩티다제에 의해 특이적으로 가수분해될 수 있는 추가 모티프는 Salomon et al., Optimizing Lysosomal Activation of Antibody-Drug Conjugates (ADCs) by Incorporation of Novel Cleavable Dipeptide Linkers, Mol Pharm. 2019, 16(12), p.4817-4825에 개시되어 있다.
ADC 링커에 사용되는 하나의 전형적인 디펩티드 구조는 발린-시트룰린 모티프로, 예를 들어 브렌툭시맙 베도틴 (Brentuximab Vedotin)으로 제공되고, Dubowchik and Firestone; Cathepsin B-labile dipeptide linkers for lysosomal release of doxorubicin from internalizing immunoconjugates: model studies of enzymatic drug release and antigen-specific in vitro anticancer activity; Bioconjug Chem; 2002; 13(4); p.855-69에서 논의된 바와 같다. 이러한 링커는 카텝신 B에 의해 절단되어 실제 페이로드를 질병 부위에 방출할 수 있다. 예를 들어 SGN-CD33A로 제공되는, 발린-알라닌 모티프에도 동일하게 적용된다.
따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-페이로드를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-Val-Cit-페이로드를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-Val-Cit-PABC-페이로드를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-페이로드를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-페이로드를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
펩티드 절단 부위는 또한 다른 펩티다제 예컨대 Caspase 3, Legumain 또는 호중구 엘라스타제 (Neutrophil elastase)에 의해 절단 가능한 모티프, 또는 Dal Corso et al., Innovative Linker Strategies for Tumor-Targeted Drug Conjugates; Chemistry;25(65); p.14740-14757에 기재된 모티프일 수 있다는 점에 유의해야 한다.
그러나, 세포는 광범위한 세포 펩티다제를 포함하고, 또한 덜 보존된 다른 아미노산 모티프가 펩티다제에 의해 효율적으로 절단될 수 있다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-PABC-페이로드를 포함할 수 있으며, 여기서 (Sp2)는 부재하거나 또는 아미노산 잔기로 구성된다.
소정의 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-PABC-페이로드를 포함할 수 있으며, 여기서 (Sp2)는 PABC 모이어티 및 (Sp2) 또는 RK 모티프에 포함된 최외 C-말단 아미노산 잔기 사이에 PEG 모이어티를 포함한다.
소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티 PABC를 포함하는 링커는 아민-포함 페이로드, 구체적으로 1차 또는 2차 아민을 포함하는 페이로드에 커플링된다. 소정의 구체예에서, 아민-포함 페이로드는 아우리스타틴 (ausristatin), 예컨대 MMAE이다. 소정의 구체예에서, 아민-포함 페이로드는 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신이다.
페이로드는 자기-희생 PABC 모이어티에 추가의 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다는 점에 유의해야 한다. 예를 들어, 아민-포함 페이로드는 PABC 모이어티에 p-니트로페놀 (p-nitrophenol: PNP) 기를 통해 커플링될 수 있다. 아민 이외의 다른 반응성 기를 포함하는 페이로드가 PABC 모이어티에의 커플링을 가능하게 하는 추가의 링커 분자는 Su et al., Bioconjugate Chem. 2018, 29, 4, 1155-1167; 및 Dokter et al., Mol Cancer Ther. 2014 Nov;13(11):2618-29에 개시되어 있다. 예를 들어, 알코올 또는 페놀 기를 포함하는 페이로드는 PABC에 에틸렌 디아민 (EDA) 링커를 통해 커플링될 수 있다 (도 18 및 19 참조).
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 메틸 아민 기를 포함한다. 이전에 메틸 아민 기가 ADC의 펩티드 기반 링커에서 자기-희생 모이어티로 사용될 수 있다는 것이 입증되었다 (Costoplus et al., ACS Med. Chem. Lett., 2019, 10, 10, 1393-1399 and Li et al., ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 10, 1386-1392).
구체적으로, 메틸 아민 기를 포함하는 자기-희생 모이어티는 아미노산 잔기의 C-말단 단부에, 아미노산 잔기의 α-카복실 기 및 메틸 아민 기에 포함된 아민 사이에 형성된 아미드 결합을 통해 커플링될 수 있다. 아미노산 잔기는 (Sp2)에 포함된 아미노산 잔기 또는 RK 모티프에 포함된 잔기 K일 수 있다. 메틸 아민 기에 포함된 메틸 기는 페이로드에 에테르 또는 티오에테르 결합에 의해 커플링될 수 있다. 따라서, 페이로드가 하이드록실 또는 티올 기를 포함하는 경우 메틸 아민 기는 자기-희생 기로 바람직하게 사용될 수 있다. 소정의 구체예에서, 하이드록실-포함 페이로드는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 유도체 Dxd 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다. 소정의 구체예에서, 티올-포함 페이로드는 메이탄시노이드 예컨대 DM1, DM4 또는 DM21일 수 있다.
메틸 아민 기를 포함하는 링커는 분자 구조 C-(NH)-(CH3)-O-C 또는 C-(NH)-(CH3)-S-C를 포함할 수 있다. 메틸 아민 기를 포함하는 예시되는 링커는 도 15, 17 및 21에 도시되어 있다.
바람직하게는 페이로드를 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기에 커플링하는데 PABC 및 메틸 아민 기를 포함하는 자기-희생 모이어티가 사용됨을 이해해야 한다.
페이로드를 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기에 커플링하는데 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티는 페놀-포함 페이로드를 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기에 커플링하기 위한 p-아미노벤질 에탄올 (PABE) 링커 (Zhang et al., Bioconjugate Chem. 2018, 29, 6, 1852-1858), 또는 3차 아민 또는 헤테로아릴 모이어티를 포함하는 페이로드를 아미노산 잔기의 C-말단 카복실 기에 커플링하기 위한 파라-메틸 아닐린 (PMA) 링커 (Staben et al., Nature Chemistry volume　8,　pages 1112-1119(2016))를 포함한다 (각각 도 20 및 23 참조). 페놀 기를 포함하는 페이로드의 비-제한적인 예로는 두오카르마이신 GA 또는 피롤로벤조디아제핀 PBD이다. 3차 아민을 포함하는 페이로드의 비-제한적인 예로는 두오카르마이신 GA이다.
그러나, 페이로드는 또한 N-말단 아미노 기에 자기-희생 모이어티를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 페이로드는 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에, 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트를 포함하는 자기-희생 모이어티를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (ortho-hydroxy-protected aryl sulfate: OHPAS)를 사용하여 페놀 페이로드 예컨대 PBD를 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에 커플링할 수 있다 (도 27 참조). OHPAS 모이어티는 바람직하게는 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에 직접 커플링될 수 있는 카복실 기를 포함한다. 대안적으로, OHPAS 모이어티는 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에, 관능화된 PEG 링커, 예를 들어 제한 없이 관능화된 (PEG)2 링커를 통해 커플링될 수 있다. 바람직하게는, PEG 링커는 OHPAS 모이어티에 포함된 카복실 기에 대한 커플링을 가능하게 하는 아미노 기로 한쪽 단부가 관능화되고, 아미노산 잔기의 N-말단 아미노 기에 대한 커플링을 가능하게 하는 카복실 기로 다른 쪽 단부가 관능화된다 (Park et al., Bioconjugate Chem. 2019, 30, 7, 1957-1968) (도 26 참조).
대안적으로 또는 추가로, 링커 분자는 OHPAS의 설페이트 기 및 페이로드 사이에 위치하여 비-페놀 페이로드가 OHPAS에 커플링할 수 있다. 예를 들어, 1차 또는 2차 아민을 포함하는 페이로드를 OHPAS 모이어티에 카바메이트의 형성을 통해 커플링하는데 파라-하이드록시 벤질 (PHB) 링커 분자가 사용될 수 있다 (도 31 및 32 참조). 3차 아민을 포함하는 페이로드는 링커를 포함하는 OHPAS에 4차 암모늄의 형성을 통해 커플링될 수 있다 (도 33 및 34 참조). 또한, 하이드록실-포함 페이로드를 OHPAS 모이어티에 카바메이트의 형성을 통해 커플링하는데 파라-하이드록시 벤질 에틸렌디아민 (PHB-EDA) 링커 분자가 사용될 수 있다 (Park et al., Bioconjugate Chem. 2019, 30, 7, 1957-1968) (도 25 참조).
소정의 구체예에서, 페이로드는 링커에 포함된 아미노산 잔기에 절단 가능한 모이어티를 통해 커플링될 수 있다. 본원에서 사용된, "절단 가능한 모이어티 (cleavable moiety)"는 효소적 또는 비-효소적 가수분해에 의해 실제 페이로드로부터 분리될 수 있는 화학적 유닛 (chemical unit)이다. 소정의 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 펩티다제 또는 프로테아제에 의해 가수분해 가능한 아미노산 모티프일 수 있다.
다른 구체예에서, 링커에 포함된 절단 가능한 모이어티는 탄수화물 모이어티일 수 있다. 이러한 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 글루코시다제에 의해 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 베타-글루쿠로니다제 또는 베타-갈락토시다제에 의해 절단 가능한 모이어티일 수 있다.
다른 구체예에서, 링커에 포함된 절단 가능한 모이어티는 포스페이트 모이어티일 수 있다. 이러한 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 포스파타제에 의해 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 절단 가능한 모이어티는 베타 리소솜 산 피로포스파타제 (beta lysosomal acid pyrophosphatase) 또는 산 포스파타제 (acid phosphatase)에 의해 절단 가능한 모이어티일 수 있다.
링커 분자로부터 페이로드를 방출하기 위해 사용될 수 있는 추가의 절단 가능한 모이어티의 예는 Bargh et al., Cleavable linkers in antibody-drug conjugates; Chem Soc Rev. 2019 Aug 12;48(16):4361-4374에 기재되어 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 (절단 가능한 모이어티)-(자기-희생 모이어티)-페이로드를 포함할 수 있다. 이러한 일 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 절단 가능한 모이어티의 절단 시에 분해되어 페이로드를 방출할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 도 1, 도 2, 도 3, 도 8, 도 9, 도 14, 도 15, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23, 도 24, 도 25, 도 26, 도 27, 도 28, 도 29, 도 30, 도 31, 도 32, 도 33 또는 도 34에 도시된 링커들 중 어느 하나이다.
소정의 구체예에서, 링커는 2개 이상의 연결 모이어티 및/또는 페이로드 B를 포함할 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, 링커는 하기 구조를 포함할 수 있다:
a) (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)-B2-(Sp4),
b) (Sp4)-B2-(Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3),
c) (Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)-B2-(Sp4), 또는
d) (Sp4)-B2-(Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3).
이러한 구체예에서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2), (Sp3) 및 RK 모티프는 상기 정의된 바와 동일한 특성을 가질 수 있다. 또한, 모이어티 B1 및 B2는 상기 정의된 연결 모이어티 및/또는 페이로드 중 어느 하나일 수 있다. 또한, 화학적 스페이서 (Sp4)는 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 또는 (Sp3)과 동일한 특성을 가질 수 있거나, 또는 부재할 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 제2 연결 모이어티 또는 페이로드 B2를 포함하고, 구체적으로 B2는 링커에 화학적 스페이서 (Sp1) 또는 (Sp3)을 통해 연결된다.
즉, 페이로드 또는 연결 모이어티 B2는 화학적 스페이서 (Sp1) 또는 (Sp3)에 연결되거나, 또는 페이로드 또는 연결 모이어티 B1에 직접 연결될 수 있다. 페이로드 또는 연결 모이어티 B2는 B2를 (Sp1), (Sp3) 또는 B1에 포함된 관능기에 커플링하는데 적합한 임의의 관능기를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드 또는 연결 모이어티 B2는 B2가 (Sp3) 또는 B1에 연결되는 아미노 기를 포함할 수 있다. 즉, B2는 (Sp3) 또는 B1에 포함된 카복실 기에 상기 아미노 기를 통해 연결될 수 있다. 소정의 구체예에서, (Sp3)에 포함된 카복실 기는 화학적 스페이서 (Sp3)의 C-말단 아미노산 잔기에 포함된 카복실 기일 수 있다. 소정의 구체예에서, B1에 포함된 카복실 기는 아미노산-기반 페이로드 또는 연결 모이어티의 α-카복실 기일 수 있다. 소정의 구체예에서, B2는 (Sp3) 또는 B1에 포함된 카복실 기에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커 분자는 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드 또는 연결 모이어티 B2는 B2가 (Sp1) 또는 B1에 연결되는 카복실 기를 포함할 수 있다. 즉, B2는 (Sp1) 또는 B1에 포함된 아민 기에 상기 카복실 기를 통해 연결될 수 있다. 소정의 구체예에서, (Sp1)에 포함된 아민 기는 화학적 스페이서 (Sp1)의 N-말단 아미노산 잔기에 포함된 아민 기일 수 있다. 소정의 구체예에서, B1에 포함된 아민 기는 아미노산-기반 페이로드 또는 연결 모이어티의 α-아미노 기일 수 있다. 소정의 구체예에서, B2는 (Sp1) 또는 B1에 포함된 아민 기에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커 분자는 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다.
그러나, B2는 또한 아민 또는 카복실 기 이외의 다른 관능기를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 이러한 구체예에서, B2는 (Sp1), (Sp3) 또는 B1에, 당해 기술 분야에 알려진 임의의 방법에 의해, 직접적으로, 또는 링커 또는 자기-희생 기를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 페이로드 또는 연결 모이어티 B2는 (Sp1) 또는 (Sp3)에 포함된 아미노산 측쇄에 커플링될 수 있다. 즉, B2는 (Sp1) 또는 (Sp3)에 포함된 아미노산 측쇄의 관능기에, 적합한 관능기를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, (Sp1), (Sp2), (Sp3) 및 RK 모티프는 전적으로 아미노산, 아미노산 모방체 및/또는 아미노산 유도체로 구성된다. 소정의 구체예에서, 또한 B1 및/또는 B2는 아미노산 백본을 포함한다. 이러한 구체예에서, 링커는 선형 펩티드 또는 펩티도모방체일 수 있다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 RK-(Sp2)-B1-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 RK-(Sp2)-B1-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 RK-(Sp2)-B1을 가질 수 있으며, 여기서 RK-(Sp2)-B1은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 RK-B1-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 RK-B1-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 RK-B1을 가질 수 있으며, 여기서 RK-B1은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다.
B1 및 B2가 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)-B2-(Sp4)를 가질 수 있으며, 여기서 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)-B2-(Sp4)는 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1 및 B2가 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 다른 구체예에서, 링커는 구조 (Sp4)-B2-(Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp4)-B2-(Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다. B1 및 B2가 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체인 구체예에서, 링커는 구조 (Sp4)-B2-(Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp4)-B2-(Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이다.
B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체가 아닌 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp1)-RK-(Sp2)는 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이고, B1은 (Sp2)에 포함된 C-말단 카복실 기에 연결된다. B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체가 아닌 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp2)-RK-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이고, B1은 (Sp2)에 포함된 N-말단 아미노 기에 연결된다. 그러나, B1이 반드시 펩티드 또는 펩티도모방체에 직접 커플링될 필요는 없다는 점에 유의해야 한다. 대신에, B1은 펩티드 또는 펩티도모방체에 링커 분자 및/또는 자기-희생 모이어티를 통해 커플링될 수 있다.
B1이 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체이고 B2가 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체가 아닌 구체예에서, 링커는 구조 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3)-B2-(Sp4), (Sp4)-B2-(Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3), (Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)-B2-(Sp4) 또는 (Sp4)-B2-(Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)을 가질 수 있으며, 여기서 (Sp1)-RK-(Sp2)-B1-(Sp3) 또는 (Sp1)-B1-(Sp2)-RK-(Sp3)은 선형 펩티드 또는 펩티도모방체이고, B2는 (Sp3), B1 또는 RK에 포함된 C-말단 카복실 기, 또는 (Sp1), B1 또는 RK의 N-말단 아미노 기에 커플링된다.
이러한 구체예에서, 항체-페이로드 접합체는 예를 들어 페이로드에 대한 항체의 비율이 2 또는 4로 생성될 수 있으며, 예를 들어 1개 또는 2개의 페이로드가 각 Q295 잔기에 접합된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 B1 및 B2는 동일하거나 또는 서로 상이하다.
즉, 페이로드 또는 연결 모이어티 B1 및 B2는 동일할 수 있으며, 즉 동일한 화학적 구조를 갖거나, 또는 구조적으로 상이할 수 있다. 소정의 구체예에서, B1 및 B2는 둘 다 페이로드이거나, 또는 둘 다 연결 모이어티이다. B1 및 B2가 둘 다 페이로드인 구체예에서, 페이로드 B1 및 B2는 동일하거나 또는 상이한 페이로드일 수 있다. B1 및 B2가 둘 다 연결 모이어티인 구체예에서, 연결 모이어티 B1 및 B2는 동일하거나 또는 상이한 연결 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, B1은 연결 모이어티일 수 있고, B2는 페이로드일 수 있거나, 또는 그 반대의 경우일 수 있다.
모든 페이로드 또는 연결 모이어티가 위치 B1에서 사슬내 (intrachain) 페이로드 또는 연결 모이어티로 기능할 수 있는 것은 아님을 이해해야 하며, 예를 들어 이는 한쪽에서 (Sp2) 또는 RK, 및 다른 쪽에서 (Sp3), (Sp1) 또는 B2와 공유 결합을 형성하는 관능기를 갖지 않기 때문이다. 따라서, B1이 사슬내 페이로드 또는 연결 모이어티인 구체예에서, B1은 2가 또는 다가 분자인 것이 바람직하다. 예를 들어, B1은 아미노산, 아미노산 모방체 또는 아미노산 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, B1은 이의 아미노 기를 통해 (Sp2) 또는 RK의 C-말단 카복실 기에 커플링될 수 있고, 이의 카복실 기를 통해 (Sp3) 또는 B2의 N-말단 아미노 기와 커플링될 수 있다. 대안적으로, B1은 이의 카복실 기를 통해 (Sp2) 또는 RK의 N-말단 아미노 기에 커플링될 수 있고, 이의 아미노 기를 통해 (Sp1) 또는 B2의 C-말단 카복실 기와 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 링커는 2개의 연결 모이어티 B1 및 B2를 포함할 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 본 발명은 2개의 생물-직교 마커 기 및/또는 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 링커를 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 따른 링커는 아지드-포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3) 또는 Xaa(N3), 및 설프하이드릴-포함 연결 모이어티, 예컨대 시스테인을 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 링커는 아지드-포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3) 또는 Xaa(N3), 및 테트라진-포함 연결 모이어티, 예컨대 테트라진-변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 링커는 설프하이드릴-포함 연결 모이어티 예컨대 시스테인, 및 테트라진-포함 연결 모이어티 예컨대 테트라진-변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 2개의 상이한 생물-직교 마커 기 및/또는 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 링커는 이들이 2개의 별개의 페이로드를 수용할 수 있고 따라서 하나 초과의 페이로드를 포함하는 항체-페이로드 접합체를 생성할 수 있다는 이점을 갖는다.
이러한 방식으로, 2+2의 항체 페이로드 비율을 수득할 수 있다. 제2 페이로드를 사용하면 효능 (efficacy) 및 역가 (potency)와 관련하여 현재의 치료적 접근법을 넘어서는 완전히 새로운 부류의 항체 페이로드 접합체를 개발할 수 있다.
이러한 구체예는 특히 세포 내의 2개의 상이한 구조, 가령 예를 들어 DNA 및 미세소관을 표적화할 수 있다. 일부 암은 예를 들어 미세소관 독소 (mirobutule toxin)와 같은 한 가지 약물에 대한 저항성이 있을 수 있기 때문에, DNA-독소는 여전히 암 세포를 사멸시킬 수 있다.
다른 구체예에 따르면, 2개의 약물이 사용될 수 있으며, 이는 이들이 동일한 조직에서 동시에 방출되는 경우 완전한 효능을 갖는다. 이는 건강한 조직에서 항체가 일부 분해되거나 또는 하나의 약물이 조기에 손실되는 경우 오프-타겟 독성 (off-target toxicity)을 감소시킬 수 있다.
또한, 이중-표지된 프로브 (dual-labeled probes)는 비-침습적 영상화 (non-invasive imaging) 및 요법 (therapy) 또는 수술 중/수술 후 영상화 (intra/post-operative imaging)/수술 (surgery)에 사용될 수 있다. 이러한 구체예에서, 종양 환자는 비-침습적 영상화에 의해 선택될 수 있다. 그 다음에, 외과의사 또는 로봇이 수술 중에 모든 암성 조직을 식별하는데 도움이 되는 다른 영상화제 (예컨대, 형광 염료)를 사용하여, 종양은 외과적으로 제거될 수 있다.
소정의 구체예에서, B1 및 B2 중 하나는 티올 기 예컨대 시스테인을 포함하는 연결 모이어티일 수 있고, B1 및 B2 중 다른 하나는 아지드 모이어티 예컨대 Lys(N3)을 포함하는 연결 모이어티일 수 있다. 이러한 구체예에서, 2개의 구별되는 페이로드가 링커에 커플링될 수 있으며, 하나는 티올-말레이미드 접합을 통해 그리고 다른 하나는 SPAAC 반응을 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 링커는 2개의 페이로드를 포함할 수 있다. 페이로드만을 포함하고 연결 모이어티는 포함하지 않는 링커는 1-단계 공정으로 항체에 접합될 수 있다.
B1 및 B2가 모두 페이로드인 구체예에서, B1 및 B2는 동일하거나 또는 구조가 상이할 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 하나 이상의 페이로드를 포함하는 링커는 화학적으로 합성될 수 있다. 대안적으로, 링커가 항체에 접합되기 전에 하나 이상의 페이로드는 링커에 포함된 연결 모이어티에 본원에 개시된 임의의 방법에 의해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명의 링커는 2개의 상이한 페이로드를 항체의 CH2 도메인의 잔기 Q295에 접합되도록 할 수 있다. 제2 페이로드를 사용하면 효능 및 역가와 관련하여 현재의 치료적 접근법을 넘어서는 완전히 새로운 부류의 항체-페이로드 접합체를 개발할 수 있다. 또한 새로운 적용 분야, 예를 들어 영상화 및 요법 또는 수술 중/수술 후 수술을 위한 이중-타입 영상화 (dual-type imaging)가 기대된다 (cf. Azhdarinia A. et al., Dual-Labeling Strategies for Nuclear and Fluorescence Molecular Imaging: A Review and Analysis. Mol Imaging Biol. 2012 Jun; 14(3): 261-276). 예를 들어, 수술전 양전자 방출 단층 촬영 (positron emission tomography: PET)을 위한 분자 영상화제 (molecular imaging agent) 및 수술 절제면의 가이드 묘사를 위한 근적외선 형광 (near-infrared fluorescent: NIRF)-염료를 포함하는 이중-표지된 항체 (dual-labeled antibodies)는 암의 진단, 병기 결정 및 절제를 크게 증진시킬 수 있다 (cf. Houghton JL. et al., Site-specifically labeled CA19.9-targeted immunoconjugates for the PET, NIRF, and multimodal PET/NIRF imaging of pancreatic cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Dec 29;112(52):15850-5). PET 및 NIRF 광학 영상화는 보완적인 임상 적용을 제공하여, 비-침습적 전신 영상화를 통해 수술 중 질병을 국소화하고 종양 절제면을 식별할 수 있도록 한다. 그러나, 최근까지 이러한 이중-표지된 프로브의 생성은 적절한 부위-특이적 방법의 결여로 인해 어려웠으며; 2개의 상이한 프로브를 화학적 수단에 의해 부착하면 프로브의 무작위 접합으로 인해 분석 및 재현이 거의 불가능하다.
또한, Levengood M. et al., (Orthogonal Cysteine Protection Enables Homogeneous Multi-Drug Antibody-Drug Conjugates. Angewandte Chemie, Volume56, Issue3, January 16, 2017)의 연구에서, 2가지 상이한 아우리스타틴 독소 (서로 다른 물리화학적 특성을 갖고 보완적인 항암 활성을 발휘함)가 부착된 이중-약물 표지된 항체는 개별 아우리스타틴 성분으로 이루어진 ADC에 대해 불응성인 이종이식 모델 (xenograft models) 및 세포주에 활성을 부여하였다. 이는 이중-표지된 ADC가 단일 기존 ADC 단독보다 더 효과적으로 암 이질성 (heterogeneity) 및 저항성 (resistance)을 해결할 수 있음을 시사한다. ADC에 대한 하나의 저항성 기전은 암 세포로부터 세포독성 모이어티의 능동적 펌핑-아웃 (active pumping-out)을 포함하기 때문에, 또 다른 이중-약물 적용은 세포독성 약물의 유출 기전을 특이적으로 차단하는 약물의 추가적 및 동시 전달을 포함할 수 있다. 따라서 이러한 이중-표지된 ADC는 기존 ADC보다 더 효과적으로 ADC에 대한 암 저항성을 극복하는데 도움이 될 수 있다.
본원에서 용어 "항체 (antibody)"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 특히 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 적어도 2개의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이성 항체 (예: 이중특이성 항체) 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함한다. 용어 "항체" 및 "항체들"은 광범위하게 항체의 자연-발생 형태 (예: IgG, IgA, IgM, IgE)를 포함한다.
항체는 바람직하게는 모노클로날 항체이다. 항체는 인간 기원일 수 있지만, 마찬가지로 마우스 (mouse), 래트 (rat), 염소, 당나귀, 햄스터 또는 토끼로부터 기원할 수 있다. 접합체가 치료용인 경우, 뮤린 (murine) 또는 토끼 항체는 선택적으로 키메라화되거나 또는 인간화될 수 있다.
CH2 도메인을 포함하는 항체의 단편 또는 재조합 변이체는 예를 들어 하기일 수 있다:
Figure pct00243
중쇄 도메인을 단독으로 포함하는 항체 형식 (상어 (shark) 항체/IgNAR (VH-CH1-CH2-CH3-CH4-CH5)2 또는 낙타류 (camelid) 항체/hcIgG (VH-CH2-CH3)2)
Figure pct00244
scFv-Fc (VH-VL-CH2-CH3)2
Figure pct00245
Fc 도메인 및 하나 이상의 수용체 도메인을 포함하는 Fc 융합 펩티드.
항체는 또한 이중특이성 (예: DVD-IgG, crossMab, appended IgG - HC fusion) 또는 이중파라토프 (biparatopic)일 수 있다. 개요를 위해, Brinkmann and Kontermann; Bispecific antibodies; Drug Discov Today; 2015; 20(7); p.838-47을 참조한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체이다.
본원에서 사용된, "IgG"는 알려진 면역글로불린 감마 유전자에 의해 실질적으로 코딩되는 항체의 부류에 속하는 폴리펩티드를 의미한다. 인간에서, IgG는 서브클래스 또는 이소타입 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 마우스에서, IgG는 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3을 포함한다. 전장 IgG는 2개의 면역글로불린 사슬의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 각 쌍은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄를 가지며, 각 경쇄는 면역글로불린 도메인 VL 및 CL을 포함하고, 각 중쇄는 면역글로불린 도메인 VH, Cγ1 (또한 CH1이라고 함), Cγ2 (또한 CH2라고 함) 및 Cγ3 (또한 CH3이라고 함)을 포함한다. 인간 IgG1의 맥락에서, Kabat에서와 같은 EU index에 따라, "CH1"은 위치 118-215를 지칭하고, CH2 도메인은 위치 231-340을 지칭하며, CH3 도메인은 위치 341-447을 지칭한다. IgG1은 또한 IgG1의 경우 위치 216-230을 지칭하는 힌지 도메인 (hinge domain)을 포함한다.
본 발명의 방법 또는 본 발명의 항체-페이로드 접합체에 사용된 항체는 임의의 항체, 바람직하게는 임의의 IgG 타입 항체일 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체는 브렌툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 이노투주맙, 아벨루맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 다라투무맙, 페르투주맙, 베돌리주맙, 오크렐리주맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 골리무맙, 오비누투주맙, 사시투주맙, 벨란타맙, 폴라투주맙 및 엔포르투맙일 수 있고 이에 한정되지 않는다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 브렌툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 이노투주맙, 아벨루맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 다라투무맙, 페르투주맙, 베돌리주맙, 오크렐리주맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 골리무맙, 오비누투주맙, 사시투주맙, 벨란타맙, 폴라투주맙 및 엔포르투맙으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
바람직한 일 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
더 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 폴라투주맙이고, 링커는 본원에 개시된 링커 중 어느 하나이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 트라스투주맙이고, 링커는 본원에 개시된 링커 중 어느 하나이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 엔포르투맙이고, 링커는 본원에 개시된 링커 중 어느 하나이다.
본 발명에 따른 방법에 사용하기 위한 항체는 글리코실화 항체, 데글리코실화 항체 또는 아글리코실화 항체일 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 항체는 바람직하게는 잔기 N297에서 글리코실화된 IgG 항체일 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다.
본원에서 논의된 바와 같이, 잔기 N297에서 글리코실화된 IgG 항체는 비-글리코실화 항체에 비해 몇 가지 이점을 갖는다.
그러나, 항체는 또한 데글리코실화 항체일 수 있으며, 바람직하게는 잔기 N297에서의 글리칸은 효소 PNGase F로 절단되었다. 또한, 항체는 아글리코실화 항체일 수 있으며, 바람직하게는 잔기 N297은 비-아스파라긴 잔기로 대체되었다. 항체를 데글리코실화하는 방법 및 아글리코실화 항체를 생성하는 방법은 당해 기술 분야에 알려져 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명의 링커는 항체의 Fc 도메인 내의 내인성 Gln 잔기 또는 분자 공학에 의해 항체에 도입된 Gln 잔기에 접합될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커가 접합되는 Gln 잔기가 항체의 Fc 도메인에 포함되고, 구체적으로 링커가 접합되는 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)이다.
본 발명의 링커는 미생물 트란스글루타미나제에 대한 기질로서 제공할 수 있는 항체의 Fc 도메인 내의 임의의 Gln 잔기에 접합될 수 있다. 전형적으로, 본원에서 사용된 용어 Fc 도메인은 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인 (CH2 및 CH3), 및 IgE, IgY 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 도메인 (CH2, CH3 및 CH4)을 지칭한다. 즉, 본 발명에 따른 링커는 항체의 CH2, CH3 및 적용 가능한 경우 CH4 도메인에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 내인성 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)일 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체의 Fc 도메인 내의 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)이다.
Q295는 IgG 타입 항체에서 극도로 보존된 아미노산 잔기라는 것을 이해하는 것이 중요하다. 이는 인간 IgG1, 2, 3, 4 뿐만 아니라 특히 토끼 및 래트 항체에 보존된다. 그러므로 Q295를 사용할 수 있다는 것은 치료용 항체-페이로드 접합체 또는 항체가 종종 비-인간 기원인 진단용 접합체를 제조하는데 상당한 이점이 있다. 그러므로 본 발명에 따른 방법은 매우 다양하고 광범위하게 적용 가능한 수단 (tool)을 제공한다. 잔기 Q295는 IgG 타입 항체 중에서 극도로 보존되지만, 일부 IgG 타입 항체 (예컨대, 마우스 및 래트 IgG2a 항체)는 이 잔기를 갖지 않는다. 따라서, 본 발명의 방법에 사용되는 항체는 바람직하게는 CH2 도메인의 잔기 Q295 (EU numbering)를 포함하는 IgG 타입 항체인 것으로 이해해야 한다.
또한, 페이로드 부착을 위해 Q295를 사용하는 조작된 접합체가 우수한 약동학 및 효능을 나타내고 (Lhospice et al., Site-Specific Conjugation of Monomethyl Auristatin E to Anti-Cd30 Antibodies Improves Their Pharmacokinetics and Therapeutic Index in Rodent Models, Mol Pharm; 2015; 12(6), p.1863-1871), 분해되기 쉬운 불안정한 독소도 운반할 수 있다 (Dorywalska et al.; Site-Dependent Degradation of a Non-Cleavable Auristatin-Based Linker-Payload in Rodent Plasma and Its Effect on ADC Efficacy. PLoS ONE; 2015; 10(7): e0132282)는 것이 밝혀졌다. 따라서 동일한 잔기가 변형되지만 글리코실화 항체의 것이기 때문에 이러한 부위-특이적 방법으로 유사한 효과가 나타날 것으로 기대된다. 글리코실화는 전체 ADC 안정성에 추가로 기여할 수 있으며, 언급된 접근법을 사용하여 밝혀진 바와 같이 글리칸 모이어티를 제거하면 안정성이 떨어진 항체가 생성된다 (Zheng et al.; The impact of glycosylation on monoclonal antibody conformation and stability. Mabs-Austin; 2011, 3(6), p.568-576).
트란스글루타미나제에 의한 CH2 Gln 잔기에 대한 링커의 접합을 논의하는 문헌에서는 작은 저분자량 기질에 초점을 두었다. 그러나, 선행 기술 문헌에서는 이러한 접합을 달성하기 위해, 위치 N297에서의 데글리코실화 단계 또는 아글리코실화 항체의 사용이 필요하다고 항상 기재되어 있다 (WO 2015/015448; WO 2017/025179; WO 2013/092998).
그러나 상당히 놀랍게도, 그리고 모든 기대에 반하여, 글리코실화 항체의 Q295에 대한 부위-특이적 접합은 실제로 상기에서 논의된 링커 구조를 사용함으로써 효율적으로 가능하다. 구체적으로, 독소 분자를 포함하는 링커의 커플링은 접합 효율 80% 초과로 달성하였다.
Q295가 네이티브 상태에서 글리코실화된 N297에 매우 가깝지만, 특정 링커를 사용하는 본 발명에 따른 방법은 여전히 이에 대한 링커 또는 페이로드의 접합을 가능하게 한다.
개시된 바와 같이, 본 발명에 따른 방법은 N297의 전위 효소적 데글리코실화 (upfront enzymatic deglycosylation), 아글리코실화 항체의 사용, 다른 아미노산에 대한 N297의 치환, 또는 글리코실화를 방지하기 위한 T299A 돌연변이의 도입을 필요로 하지 않는다.
이러한 2가지 포인트는 제조 측면에서 상당한 이점을 제공한다. 효소적 데글리코실화 단계는 GMP 측면에서 바람직하지 않으며, 이는 데글리코실화 효소 (예: PNGase F) 및 절단된 글리칸이 모두 배지로부터 제거되어야 하기 때문이다.
또한, 페이로드 부착을 위한 항체의 유전자 조작이 필요하지 않으므로, 면역원성을 증가시키고 항체의 전반적인 안정성을 감소시킬 수 있는 서열 삽입을 피할 수 있다.
다른 아미노산에 대한 N297의 치환은 또한 목적하지 않은 효과를 가지며, 이는 전체 Fc 도메인의 전반적인 안정성 (Subedi et al, The Structural Role of Antibody N-Glycosylation in Receptor Interactions. Structure 2015, 23 (9), 1573-1583), 및 결과적으로 항체 응집 증가 및 용해도 감소를 초래할 수 있는 전체 접합체의 효능 (Zheng et al.; The impact of glycosylation on monoclonal antibody conformation and stability. Mabs-Austin 2011, 3 (6), 568-576)에 영향을 줄 수 있기 때문이며, 이는 특히 소수성 페이로드 예컨대 PBD에 중요하다. 또한, N297에 존재하는 글리칸은 항체 의존성 세포 세포독성 (antibody dependent cellular cytotoxicity: ADCC) 등을 유발하므로 중요한 면역조절 효과를 갖는다. 이러한 면역조절 효과는 아글리코실화 항체를 수득하기 위해 데글리코실화 또는 상기에서 논의된 다른 접근법 중 어느 하나에 의해 소실될 것이다. 추가로, 확립된 항체의 임의의 서열 변형은 또한 조절 문제를 야기할 수 있으며, 이는 종종 허용되고 임상적으로 검증된 항체가 ADC 접합을 위한 출발점으로 사용되기 때문에 문제가 된다.
그러므로, 본 발명에 따른 방법은 부위 특이적 페이로드 결합을 갖는 화학량론적으로 잘-정의된 ADC를 용이하게 그리고 단점 없이 제조할 수 있다.
상기의 관점에서, 본 발명의 방법은 바람직하게는 항체의 CH2 도메인의 잔기 Q295 (EU numbering)에서 IgG 항체의 접합에 사용되며, 여기서 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다. 그러나, 본 발명의 방법은 또한 잔기 Q295 또는 항체의 임의의 다른 적절한 Gln 잔기에서의 데글리코실화 또는 아글리코실화 항체의 접합을 포함하는 것이 명시적으로 언급되어 있으며, 여기서 Gln 잔기는 내인성 Gln 잔기 또는 분자 공학에 의해 도입된 Gln 잔기일 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커가 접합되는 Gln 잔기는 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입되었다.
본원에서 사용된, 용어 "분자 공학 (molecular engineering)"은 핵산 서열을 조작하기 위한 분자 생물학 방법의 사용을 의미한다. 본 발명 내에서, 항체의 중쇄 또는 경쇄에 Gln 잔기를 도입하기 위해 분자 공학이 사용될 수 있다. 일반적으로, 항체의 중쇄 또는 경쇄에 Gln 잔기를 도입하기 위한 2가지 상이한 전략이 본 발명 내에서 고려된다. 첫째, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 단일 잔기가 Gln 잔기로 치환될 수 있다. 둘째, 2개 이상의 아미노산 잔기로 구성된 Gln-함유 펩티드 태그가 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합될 수 있다. 이를 위해, 펩티드 태그는 중쇄 또는 경쇄의 내부 위치, 즉 중쇄 또는 경쇄의 2개의 기존 아미노산 잔기 사이에 통합하거나 또는 이들을 대체할 수 있거나, 또는 펩티드 태그는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합 (부착)될 수 있다.
예를 들어, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 잔기는 Gln 잔기로 치환될 수 있으며, 단 생성된 항체는 미생물 트란스글루타미나제에 의해 본 발명의 링커와 접합될 수 있어야 한다. 소정의 구체예에서, 항체는 IgG 항체의 CH2 도메인의 아미노산 잔기 N297 (EU numbering)이 치환되고, 구체적으로 상기 치환이 N297Q 치환인 항체이다. N297Q 돌연변이를 포함하는 항체는 항체의 중쇄당 1개 초과의 링커에 접합될 수 있다. 예를 들어, N297Q 돌연변이를 포함하는 항체는 4개의 링커에 접합될 수 있으며, 여기서 하나의 링커는 항체의 제1 중쇄의 잔기 Q295에 접합되고, 하나의 링커는 항체의 제1 중쇄의 잔기 N297Q에 접합되며, 하나의 링커는 항체의 제2 중쇄의 잔기 Q295에 접합되고, 하나의 링커는 항체의 제2 중쇄의 잔기 N297Q에 접합된다. 당업자는 IgG 항체의 잔기 N297을 Gln 잔기로 대체하여 아글리코실화 항체를 생성하는 것을 알고 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함된다.
항체의 단일 아미노산 잔기를 치환하는 대신에, 트란스글루타미나제에 접근 가능한 Gln 잔기를 포함하는 펩티드 태그가 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입될 수 있다. 이러한 펩티드 태그는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단에 융합될 수 있다. 대안적으로, 펩티드 태그는 적절한 위치에서 항체의 중쇄 또는 경쇄에 삽입될 수 있다. 바람직하게는, 트란스글루타미나제-접근 가능한 Gln 잔기를 포함하는 펩티드 태그는 항체의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 훨씬 더 바람직하게는, 트란스글루타미나제-접근 가능한 Gln 잔기를 포함하는 펩티드 태그는 IgG 항체의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 항체의 중쇄의 C-말단에 융합될 수 있고 미생물 트란스글루타미나제에 대한 기질로서 제공될 수 있는 여러 펩티드 태그가 WO 2012/059882 및 WO 2016/144608에 기재되어 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된다.
항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입될 수 있고, 구체적으로 항체의 중쇄의 C-말단에 융합될 수 있는 예시되는 펩티드 태그는 LLQGG (서열 번호: 16), LLQG (서열 번호: 17), LSLSQG (서열 번호: 18), GGGLLQGG (서열 번호: 19), GLLQG (서열 번호: 20), LLQ(서열 번호: 21), GSPLAQSHGG (서열 번호: 22), GLLQGGG (서열 번호: 23), GLLQGG (서열 번호: 24), GLLQ (서열 번호: 25), LLQLLQGA (서열 번호: 26), LLQGA (서열 번호: 27), LLQYQGA (서열 번호: 28), LLQGSG (서열 번호: 29), LLQYQG (서열 번호: 30), LLQLLQG (서열 번호: 31), SLLQG (서열 번호: 32), LLQLQ (서열 번호: 33), LLQLLQ (서열 번호: 34), LLQGR (서열 번호: 35), EEQYASTY (서열 번호: 36), EEQYQSTY (서열 번호: 37), EEQYNSTY (서열 번호: 38), EEQYQS (서열 번호: 39), EEQYQST (서열 번호: 40), EQYQSTY (서열 번호: 41), QYQS (서열 번호: 42), QYQSTY (서열 번호: 43), YRYRQ (서열 번호: 44), DYALQ (서열 번호: 45), FGLQRPY (서열 번호: 46), EQKLISEEDL (서열 번호: 47), LQR (서열 번호: 48) 및 YQR (서열 번호: 49)이다.
당업자는 예를 들어 Sambrook, Joseph. (2001). Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor, N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press에 기재된 바와 같은 분자 클로닝 방법에 의해, 항체의 아미노산 잔기를 치환하는 방법 또는 펩티드 태그를 항체에 도입하는 방법을 알고 있다.
일반적으로, 당업자는 링커가 접합되는 항체의 위치를 결정하는 방법을 알고 있다. 예를 들어, 접합 부위는 항체-페이로드 접합체의 단백질분해 소화 및 생성된 단편의 LC-MS 분석에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 샘플은 GlyciNATOR (Genovis)로 설명서 매뉴얼에 따라 데글리코실화될 수 있으며, 이어서 각각 트립신 골드 (trypsin gold) (mass spectrometry grade, Promega)로 소화될 수 있다. 그러므로, 1 μg의 단백질을 50 ng의 트립신과 37℃에서 밤새 인큐베이션할 수 있다. LC-MS 분석은 Synapt-G2 질량 분광분석기 (Waters)에 커플링된 nanoAcquity HPLC 시스템을 사용하여 수행할 수 있다. 이를 위해, 100 ng 펩티드 용액을 Acquity UPLC Symmetry C18 트랩 컬럼 (trap column) (Waters, part no. 186006527)에 로딩하고, 1 % 버퍼 A (물, 0.1 % 포름산) 및 99 % 버퍼 B (아세토니트릴, 0.1 % 포름산)를 5 μL/min의 유속으로 3분 동안 트래핑 (trapping)할 수 있다. 그 다음에 펩티드를 버퍼 B로 3%에서 65%로의 선형 구배로 25분 이내에 용출시킬 수 있다. 데이터는 포지티브 극성을 갖는 분해능 모드에서 50 내지 2000 m/z의 질량 범위에서 수집할 수 있다. 다른 기기 설정은 하기와 같을 수 있다: 모세관 전압 (capillary voltage) 3.2 kV, 샘플링 콘 (sampling cone) 40 V, 추출 콘 (extraction cone) 4.0 V, 소스 온도 (source temperature) 130 ℃, 콘 기체 (cone gas) 35 L/h, 나노 유동 기체 (nano flow gas) 0.1 bar, 및 퍼지 기체 (purge gas) 150 L/h. 질량 분광분석기는 [Glu1]-피브리노펩티드로 보정할 수 있다.
또한, 당업자는 항체-페이로드 구조체의 약물-대-항체 (drug-to-antibody: DAR) 비율 또는 페이로드-대-항체 비율을 결정하는 방법을 알고 있다. 예를 들어, DAR은 소수성 상호작용 크로마토그래피 (hydrophobic interaction chromatography: HIC) 또는 LC-MS에 의해 결정될 수 있다.
소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)의 경우, 샘플을 0.5M 황산암모늄으로 조정하고, MAB PAK HIC 부틸 컬럼 (5 μm, 4.6 x 100 mm, Thermo Scientific)을 통해 30℃에서 20분에 걸쳐 1 mL/min으로 A (1.5 M 황산암모늄, 25 mM Tris HCl, pH 7.5)에서 B (20 % 이소프로판올, 25 mM Tris HCl, pH 7.5)로의 전체 구배를 사용하여 평가할 수 있다. 전형적으로, 40 μg의 샘플이 사용될 수 있으며, 신호는 280 nm에서 기록될 수 있다. 상대 HIC 체류 시간 (HIC-RRT)은 ADC DAR 2 종 (species)의 절대 체류 시간을 각각의 비-접합된 mAb의 체류 시간으로 나누어 계산할 수 있다.
LC-MS DAR 결정을 위해, ADC는 NH4HCO3을 사용하여 최종 농도 0.025 mg/mL로 희석시킬 수 있다. 후속하여, 이 용액의 40 μL를 실온에서 5분 동안 1 μL TCEP (500 mM)로 환원시킨 다음에, 10 μL의 클로로아세트아미드 (200 mM)를 부가하여 알킬화한 다음에, 암실에서 37℃에서 밤새 인큐베이션할 수 있다. 역상 크로마토그래피의 경우, 소프트웨어 Chromeleon과 조합된 Dionex U3000 시스템을 사용할 수 있다. 상기 시스템에는 70℃로 가열된 RP-1000 컬럼 (1000 Å, 5 μm, 1.0 × 100 mm, Sepax), 및 214 nm의 파장으로 설정된 UV-검출기가 장착될 수 있다. 용매 A는 물과 0.1% 포름산으로 구성될 수 있고, 용매 B는 0.1% 포름산과 함께 85% 아세토니트릴을 포함할 수 있다. 환원되고 알킬화된 샘플을 컬럼 상에 로딩하고, 14분 동안 30 - 55%의 용매 B의 구배로 분리할 수 있다. 액체 크로마토그래피 시스템은 DAR 종의 확인을 위해 Synapt-G2 질량 분광분석기에 커플링될 수 있다. 질량 분광분석기의 모세관 전압은 3 kV로, 샘플링 콘은 30 V로 설정될 수 있고, 추출 콘은 최대 5 V의 값으로 부가될 수 있다. 소스 온도는 150℃로, 탈용매화 온도는 500℃로, 콘 기체는 20 l/h로, 탈용매화 기체는 600 l/h로 설정될 수 있으며, 수집은 질량 범위 600-5000 Da에서 1s 스캔 시간으로 포지티브 모드로 수행될 수 있다. 상기 기기는 요오드화나트륨으로 보정할 수 있다. 스펙트럼의 디컨볼루션 (deconvolution)은 MassLynx의 MaxEnt1 알고리즘을 사용하여 수렴 (convergence)될 때까지 수행할 수 있다. DAR 종을 크로마토그래피 피크에 배정한 후에, DAR은 역상 크로마토그램의 적분된 피크 면적에 기반하여 계산할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기의 γ-카복사미드 기에 접합된다.
즉, 본 발명에 따른 링커는 바람직하게는 항체에 포함된 Gln 잔기, 바람직하게는 본원에 개시된 Gln 잔기들 중 어느 하나, 더 바람직하게는 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)의 측쇄에 있는 아미드 기에 접합된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 링커는 글리코실화 항체에 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%의 접합 효율로 접합하기에 적합하다.
즉, 소정의 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 바람직한 일 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 70%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 75%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 80%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 85%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 90%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 95%의 효율로 접합될 수 있는 링커일 수 있다. 바람직하게는, 글리코실화 항체는 글리코실화 IgG 항체, 더 바람직하게는 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 IgG 항체이다.
당업자는 특정 링커로 항체의 접합 효율을 결정하는 방법을 알고 있다. 예를 들어, 접합 효율은 본원에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다. 즉, 항체, 구체적으로 IgG1 항체는 1-5 mg/mL의 농도로 적절한 버퍼에서 항체 1 mg당 5-20 eq 몰 당량의 링커 및 3-6 U의 미생물 트란스글루타미나제와 함께 37℃에서 20-48시간 동안 인큐베이션할 수 있거나, 또는 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행할 수 있다. 인큐베이션 기간 후에, 접합 효율은 환원 조건하에 LC-MS 분석에 의해 결정될 수 있다. 미생물 트란스글루타미나제는 Zedira (Germany)로부터 이용 가능한 스트렙토마이세스 모바라엔시스 (Streptomyces mobaraensis) 유래의 MTG일 수 있다. 적합한 버퍼는 Tris, MOPS, HEPES, PBS 또는 BisTris 버퍼일 수 있다. 그러나, 버퍼 시스템의 선택은 가변할 수 있으며, 링커의 화학적 특성에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 그러나, 당업자는 본 발명의 개시내용에 기반하여 최적의 버퍼 조건을 확인할 수 있다. 대안적으로, 접합 효율은 Spycher et al. (Dual, Site-Specific Modification of Antibodies by Using Solid-Phase Immobilized Microbial Transglutaminase, ChemBioChem 2019 18(19):1923-1927)에 기재된 바와 같이 결정되고, Benjamin et al. (Thiolation of Q295: Site-Specific Conjugation of Hydrophobic Payloads without the Need for Genetic Engineering, Mol. Pharmaceutics 2019, 16: 2795-2807)에 기재된 바와 같이 분석될 수 있다.
소정의 구체예에서, 항체는 실시예 1에 기재된 바와 같이 접합될 수 있다. 즉, 5 mg/ml의 네이티브, 글리코실화 모노클로날 항체는 회전 열혼합기 (rotating thermomixer)에서 5 몰 당량의 표시된 링커-페이로드 및 5 U/mg 항체 농도의 미생물 트란스글루타미나제 (MTG, Zedira)를 포함하는 50 mM Tris pH 7.6에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 미생물 트란스글루타미나제는 스트렙토마이세스 종, 구체적으로 스트렙토마이세스 모바라엔시스로부터 유래된다.
즉, 본 발명의 방법에 사용되는 미생물 트란스글루타미나제는 스트렙토마이세스 종, 구체적으로 스트렙토마이세스 모바라엔시스로부터 유래될 수 있으며, 바람직하게는 네이티브 효소에 대해 80%의 서열 동일성을 갖는다. 따라서, MTG는 네이티브 효소일 수 있거나 또는 네이티브 효소의 조작된 변이체일 수 있다.
이러한 미생물 트란스글루타미나제 중 하나는 Zedira (Germany)에서 상업적으로 이용 가능하다. 이는 대장균 (E. coli)에서 재조합으로 생산된다. 스트렙토마이세스 모바라엔시스 트란스글루타미나제는 서열 번호: 12에 개시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다. 다른 아미노산 서열을 가진 S. 모바라엔시스 MTG 변이체가 보고되었으며, 또한 본 발명에 포함된다 (서열 번호: 13 및 14).
다른 구체예에서, 스트렙토마이세스 라다카눔 (Streptomyces ladakanum) (이전에 스트렙토베르티실리움 라다카눔 (Streptoverticillium ladakanum)) 유래의 미생물 트란스글루타미나제가 사용될 수 있다. 스트렙토마이세스 라다카눔 트란스글루타미나제 (미국 특허 제6,660,510호 B2)는 서열 번호: 15에 개시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
상기 트란스글루타미나제 모두는 서열 변형될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 서열 번호: 12 - 15 중 어느 하나와 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 초과의 서열 동일성을 갖는 트란스글루타미나제가 사용될 수 있다.
다른 적합한 미생물 트란스글루타미나제는 ACTIVA TG로 불리는, Ajinomoto로부터 시판되고 있다. Zedira로부터의 트란스글루타미나제와 비교하여, ACTIVA TG는 4개의 N-말단 아미노산이 결여되어 있지만, 유사한 활성을 갖는다.
본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 추가의 미생물 트란스글루타미나제는 Kieliszek and Misiewicz (Folia Microbiol (Praha). 2014; 59(3): 241-250), WO 2015/191883 A1, WO 2008/102007 A1 및 US 2010/0143970에 개시되어 있고, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 통합된다.
소정의 구체예에서, 미생물 트란스글루타미나제의 돌연변이 변이체가 항체에 대한 링커의 접합에 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 방법에 사용되는 미생물 트란스글루타미나제는 서열 번호: 12 또는 13에 제시된 바와 같은 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제의 변이체일 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 바와 같은 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 G254D를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 G254D 및 E304D를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 D8E 및 G254D를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 E124A 및 G254D를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 A216D 및 G254D를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 서열 번호: 12에 제시된 재조합 S. 모라바엔시스 트란스글루타미나제는 돌연변이 G254D 및 K331T를 포함할 수 있다.
미생물 트란스글루타미나제는 항체와 링커의 효율적인 접합을 가능하게 하는 임의의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다. 소정의 구체예에서, 접합 반응에서 미생물 트란스글루타미나제의 농도는 동일한 반응에서 사용되는 항체의 양에 따라 좌우될 수 있다. 예를 들어, 미생물 트란스글루타미나제는 항체 1 mg당 100 U/mg, 90 U/mg 항체, 80 U/mg 항체, 70 U/mg 항체, 60 U/mg 항체, 50 U/mg 항체, 40 U/mg 항체, 30 U/mg 항체, 20 U/mg 항체, 10 U/mg 항체 또는 6 U/mg 항체 미만의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다. 소정의 구체예에서, 미생물 트란스글루타미나제는 항체 1 mg당 1, 3, 5 또는 6 U/mg의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 미생물 트란스글루타미나제는 항체 1 mg당 1 - 20 U/mg 항체, 바람직하게는 1 - 10 U/mg 항체, 더 바람직하게는 1 - 7.5 U/mg 항체, 더욱 바람직하게는 2 - 6 U/mg 항체, 더욱 바람직하게는 2 - 4 U/mg 항체의 범위, 가장 바람직하게는 3 U/mg 항체의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 미생물 트란스글루타미나제의 사용을 포함한다. 그러나, 비-미생물 기원인 트란스글루타미나제 활성을 포함하는 효소에 의해 동등한 반응이 수행될 수 있음에 유의해야 한다. 따라서, 또한 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 비-미생물 기원인 트란스글루타미나제 활성을 포함하는 효소로 생성될 수 있다.
항체는 임의의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다. 그러나, 항체가 0.1 - 20 mg/ml 범위의 농도로 접합 반응에 부가되는 것이 바람직하다. 즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 0.1 - 20 mg/mL, 바람직하게는 0.25 - 15 mg/mL, 더 바람직하게는 0.5 - 12.5 mg/mL, 더욱 바람직하게는 1 - 10 mg/mL, 더욱 바람직하게는 2 - 7.5 mg/mL, 가장 바람직하게는 약 5 mg/mL의 농도로 접합 반응에 부가된다.
대안적으로, 항체는 1 - 20 mg/ml, 바람직하게는 2.5 - 20 mg/mL, 더 바람직하게는 5 - 20 mg/mL, 가장 바람직하게는 5 - 17 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가될 수 있다.
효율적인 접합을 수득하기 위해서, 링커는 항체에 몰 과량 (molar excess)으로 부가되는 것이 바람직하다. 즉, 소정의 구체예에서, 항체는 적어도 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 몰 당량의 링커와 혼합된다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체는 2 - 100 몰 당량의 링커, 바람직하게는 2 - 80 몰 당량의 링커, 더 바람직하게는 2 - 70 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 60 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 50 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 40 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 30 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 25 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 20 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2 - 15 몰 당량의 링커, 가장 바람직하게는 2 - 10 몰 당량의 링커와 접촉된다.
대안적으로, 항체는 2.5 - 100 몰 당량의 링커, 바람직하게는 2.5 - 80 몰 당량의 링커, 더 바람직하게는 2.5 - 70 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 60 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 50 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 40 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 30 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 20 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 15 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 2.5 - 10 몰 당량의 링커, 가장 바람직하게는 2.5 - 8 몰 당량의 링커와 접촉될 수 있다.
대안적으로, 항체는 5 - 100 몰 당량의 링커, 바람직하게는 5 - 80 몰 당량의 링커, 더 바람직하게는 5 - 70 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 60 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 50 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 40 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 30 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 20 몰 당량의 링커, 더욱 바람직하게는 5 - 15 몰 당량의 링커, 가장 바람직하게는 5 - 10 몰 당량의 링커와 접촉될 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 바람직하게는 pH 6 내지 9 범위에서 수행된다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체에 대한 링커의 접합은 pH 6 내지 8.5의 범위, 더 바람직하게는 pH 6.5 내지 8의 범위, 더욱 바람직하게는 pH 7 내지 8 범위에서 달성된다. 가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것으로서, 여기서 항체에 대한 링커의 접합은 pH 7.6에서 달성된다.
본 발명의 방법은 링커에 대한 페이로드의 접합에 적합한 임의의 버퍼에서 수행될 수 있다. 본 발명의 방법에 적합한 버퍼는 제한 없이, Tris, MOPS, HEPES, PBS 또는 BisTris 버퍼를 포함한다. 버퍼의 농도는 무엇보다도 항체 및/또는 링커의 농도에 따라 좌우되며, 10 - 1000 mM, 10 - 500 mM, 10 - 400 mM, 10 내지 250 mM, 10 내지 150 mM 또는 10 내지 100 mM의 범위일 수 있다. 또한, 버퍼는 본 발명의 방법을 수행하기에 적합한 임의의 염 농도를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법에 사용되는 버퍼는 염 농도가 ≤ 150 mM, ≤ 140 mM, ≤ 130 mM, ≤ 120 mM, ≤ 110 mM, ≤ 100 mM, ≤ 90 mM, ≤ 80 mM, ≤ 70 mM, ≤ 60 mM, ≤ 50 mM, ≤ 40 mM, ≤ 30 mM, ≤ 20 mM 또는 ≤ 10 mM일 수 있거나 또는 염이 존재하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 50 mM Tris (pH 7.6), 바람직하게는 염이 없이 수행된다.
최적의 반응 조건 (예컨대 pH, 버퍼, 염 농도)은 페이로드들 간에 가변될 수 있고, 링커 및/또는 페이로드의 물리화학적 특성에 따라 어느 정도는 좌우될 수 있음에 유의해야 한다. 그러나, 본 발명의 방법을 수행하기에 적합한 반응 조건을 확인하기 위해 당업자의 과도한 실험이 요구되지 않는다.
본 출원은 상기 개시된 링커, 항체 MTG 및/또는 버퍼 농도의 임의의 조합을 포함하는 것으로 이해해야 한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 2 - 80 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 1 - 20 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 0.1 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00246
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00247
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00248
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00249
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00250
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00251
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
더 바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 2 - 50 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 1 - 10 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 1 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00252
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00253
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00254
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00255
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00256
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00257
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
더욱 바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 2 - 30 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 2 - 10 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 5 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00258
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00259
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00260
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00261
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00262
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00263
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
더욱 바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 약 2 - 20 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 2 - 10 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 5 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00264
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00265
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00266
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00267
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00268
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00269
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
더욱 바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 약 2.5 - 15 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 2 - 10 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 5 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00270
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00271
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00272
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00273
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00274
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00275
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
가장 바람직한 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제 (MTG)에 의해 항체-링커 접합체를 생성하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민을 통해 접합되고;
상기 항체는 약 2.5 - 10 몰 당량의 링커와 접촉되고; 및/또는
상기 미생물 트란스글루타미나제는 2 - 10 U/mg 항체 범위의 농도로 접합 반응에 부가되고, 선택적으로 상기 항체는 5 - 20 mg/mL 범위의 농도로 접합 반응에 부가된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
상기에서
Figure pct00276
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00277
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00278
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00279
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00280
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00281
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 방법으로 생성된 항체-링커 접합체에 관한 것이다.
즉, 본 발명은 임의의 전술한 단계로 생성된 항체-링커 접합체에 관한 것이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-링커 접합체는
a) 항체; 및
b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 링커는 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 RK 모티프에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해 항체에 접합된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00282
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00283
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00284
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00285
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00286
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00287
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
즉, 본 발명은 또한 본 발명의 방법으로 생성된 항체-링커 접합체에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 항체의 중쇄 또는 경쇄에 포함된 글루타민 잔기에서 본 발명의 방법을 위해 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나의 링커와 접합된 항체에 관한 것이다. 즉, 본 발명의 방법을 위해 상기에 개시된 모든 링커는 본 발명의 항체-링커 작제물에 포함될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 링커는 항체에 포함된 글루타민 잔기의 아미드 측쇄 및 링커의 RK 모티프에 포함된 잔기 K에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 아미드 결합을 통해 항체내 글루타민 잔기에 접합된다. 소정의 구체예에서, 잔기 K에 포함된 1차 아민은 본원에 개시된 바와 같이 리신 잔기, 리신 모방체 또는 리신 유도체의 측쇄에 포함된 아민 기이다. 소정의 구체예에서, K는 리신 잔기이고, 링커가 항체에 접합되는데 경유되는 1차 아민은 리신 잔기에 포함된 ε-아미노 기이다.
본원에 개시된 항체-링커 작제물에 포함된 화학적 스페이서는 본원에 개시된 RK-포함 링커들 중 어느 하나일 수 있다. 즉, 링커는 단일 연결 모이어티 또는 페이로드 B를 포함하는 링커일 수 있거나, 또는 둘 이상의 연결 모이어티 및/또는 페이로드 B1, B2 등을 포함하는 링커일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커의 순전하는 중성 또는 양성이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 음으로 하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 및 RKR (서열 번호: 4)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2) 및 ARK (서열 번호: 3)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 B는 연결 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 연결 모이어티 B는 하기를 포함한다:
Figure pct00288
생물직교 마커 기, 또는
Figure pct00289
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함한다:
Figure pct00290
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00291
Lys(N3);
Figure pct00292
테트라진;
Figure pct00293
알킨;
Figure pct00294
스트레인드 사이클로옥틴;
Figure pct00295
BCN;
Figure pct00296
스트레인드 알켄;
Figure pct00297
광반응성 기;
Figure pct00298
알데히드;
Figure pct00299
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00300
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00301
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00302
티오-선택적 친전자체;
Figure pct00303
-SH; 및
Figure pct00304
시스테인.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 하나 이상의 연결 모이어티를 포함하는 링커에 접합된 항체일 수 있다. 이러한 항체-링커 접합체는 이후 하나 이상의 페이로드, 구체적으로 하나 이상의 연결 모이어티에 커플링하기에 적합할 수 있는 페이로드로 맞춤화될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 하나 이상의 페이로드는 연결 모이어티 B에 접합된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 하나 이상의 페이로드는 연결 모이어티 B에 클릭-반응을 통해 접합된다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 본원에 개시된 바와 같은 2-단계 공정으로 생성된 항체-페이로드 접합체일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 B는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함한다:
Figure pct00305
독소;
Figure pct00306
사이토카인;
Figure pct00307
성장 인자;
Figure pct00308
방사성핵종;
Figure pct00309
호르몬;
Figure pct00310
항-바이러스제;
Figure pct00311
항-박테리아제;
Figure pct00312
형광 염료;
Figure pct00313
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00314
반감기 증가 모이어티;
Figure pct00315
용해도 증가 모이어티;
Figure pct00316
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00317
핵산;
Figure pct00318
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00319
비타민;
Figure pct00320
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00321
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00322
항-염증제.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나이다:
Figure pct00323
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00324
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00325
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00326
두오카르마이신;
Figure pct00327
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00328
튜불리신;
Figure pct00329
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00330
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00331
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00332
크립토피신;
Figure pct00333
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00334
산드라마이신;
Figure pct00335
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00336
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp2)는 자기-희생 모이어티를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 페이로드 B에 직접 부착된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함한다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 본원에 개시된 바와 같은 1-단계 공정으로 생성된 항체-페이로드 접합체일 수 있다.
본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 포함된 항체는 본 발명에 따른 방법을 위해 본원에 개시된, 항체들 중 어느 하나, 구체적으로 IgG 타입 항체들 중 어느 하나일 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 포함된 항체는 본 발명에 따른 방법을 위해 본원에 개시된 항체와 동일한 글리코실화 패턴, 돌연변이 및/또는 변형을 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-페이로드 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 도 1, 도 2, 도 3, 도 8, 도 9, 도 14, 도 15, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23, 도 24, 도 25, 도 26, 도 27, 도 28, 도 29, 도 30, 도 31, 도 32, 도 33 또는 도 34에 도시된 링커들 중 어느 하나이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커가 접합되는 Gln 잔기는 항체의 Fc 도메인에 포함되며, 구체적으로 링커가 접합되는 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커가 접합되는 Gln 잔기는 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄로 도입된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄로 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 브렌툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 이노투주맙, 아벨루맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 다라투무맙, 페르투주맙, 베돌리주맙, 오크렐리주맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 골리무맙, 오비누투주맙, 사시투주맙, 벨란타맙, 폴라투주맙 및 엔포르투맙으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙이다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 즉, 항체는 본 발명에 따른 링커에 접합될 수 있으며, 여기서 링커는 하나 이상의 독소를 포함한다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-약물 접합체는
a) IgG 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 또는 RKR (서열 번호: 4)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되고;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해 IgG 항체에 접합된다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-약물 접합체는
a) IgG 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 서열 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하거나 또는 이로 구성된 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되고;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해 IgG 항체에 접합된다.
즉, 소정의 구체예에서, 링커는 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54) 중 어느 하나를 포함할 수 있으며, 여기서 링커는 잔기 K에 포함된 1차 아민을 통해 항체내 글루타민 잔기에 접합된다. 상기 약물 모이어티 B는 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)에 직접 연결되지 않는 것으로 이해해야 한다. 대신에 상기 약물 모이어티 B는 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)에 간접적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 상기 링커는 약물 모이어티 B 및 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54) 사이에 위치한 추가의 화학적 구조를 포함할 수 있다. 이러한 화학적 구조는 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 또는 (Sp3)에 대해 본원에 개시된 임의의 구조일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 약물 모이어티 B 및 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54) 사이에 위치한 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 약물 모이어티 B 및 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54) 사이에 위치한 하나 이상의 PEG 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 약물 모이어티 B 및 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54) 사이에 위치한 절단 가능한 및/또는 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 약물 모이어티 B는 링커에 포함된 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에 자기-희생 모이어티를 통해 연결된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함한다.
즉, 본 발명에 따른 링커에 포함된 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나일 수 있다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 본원에 개시된 바와 같은 메틸 아민 기일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 IgG1 항체이다.
즉, 항체는 바람직하게는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체이고, 구체적으로 상기 IgG 또는 IgG1 항체는 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다.
상기 항체-약물 접합체는 본원에 개시된 하나 이상의 독소를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 약물은 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 독소이다:
Figure pct00337
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00338
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00339
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00340
두오카르마이신;
Figure pct00341
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00342
튜불리신;
Figure pct00343
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00344
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00345
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00346
크립토피신;
Figure pct00347
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00348
산드라마이신;
Figure pct00349
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00350
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
상기 독소는 화학적 합성에 의해 링커에 직접 커플링될 수 있음을 이해해야 한다. 그러나, 다른 구체예에서, 독소는 또한 2-단계 공정으로 링커에 포함된 연결 모이어티에 연결될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKAA-B 또는 RKAA-(링커 분자)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
즉, 상기 페이로드 B는 알라닌 잔기의 C-말단에 직접 커플링될 수 있거나 또는 알라닌 잔기의 C-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 링커 분자의 선택은 페이로드 B에서 이용 가능한 관능기에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 상이한 관능기를 갖는 페이로드를 펩티드에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다. 상기 링커 분자는 절단 가능하거나 또는 비-절단 가능한 링커 분자일 수 있다. 구체적으로, 링커 분자는 자기-희생 모이어티, 구체적으로 본원에 개시된 자기-희생 모이어티들 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
대안적으로, 상기 페이로드는 아르기닌 잔기의 N-말단에 직접 또는 링커 분자를 통해, 예를 들어 본원에 개시된 링커 분자들 중 어느 하나를 통해 커플링될 수 있다. 즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-RKAA 또는 B-(링커 분자)-RKAA를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 소정의 구체예에서, 상기 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA에 포함된 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKAA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이며, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 상기 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-PABC-B를 가질 수 있다. 즉, 링커는 선형 펩티드 RKAA를 포함할 수 있으며, 여기서 C-말단 알라닌 잔기의 카복실-기는 PABC에 포함된 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링된다. 상기 독소 B는 PABC에 카바메이트의 형성을 통해 부착될 수 있다. 모든 독소가 PABC를 가진 카바메이트의 형성을 가능하게 하는 관능기를 포함하는 것은 아님을 이해해야 한다. 따라서, 독소는 PABC에 링커를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 1차 또는 2차 아민을 포함하는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 독소는 MMAE 또는 메이탄신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 보호된 N-말단 단부를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 N-말단 단부는 아세틸화될 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 도 1 또는 도 8에 도시된 링커이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-(PEG)n-PABC-MMAE를 가질 수 있으며, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-(PEG)2-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKAA-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 PABC 모이어티 및 MMAE 사이에 추가의 링커를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 추가의 링커는 p-니트로페놀 (PNP) 기일 수 있다.
상기 링커는 PABC 이외의 다른 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 즉, 상기 링커는 구조 RKAA-(자기-희생 모이어티)-독소를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명 내에서 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티를 알고 있다. 또한, 당업자는 자기-희생 모이어티에, 선택적으로 추가의 링커를 통해 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 하이드록실 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-O-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 하이드록실-포함 독소는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체, 구체적으로 엑사테칸 유도체 Dxd, 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 티올 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-S-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 티올-포함 독소는 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 이의 티올-포함 유도체일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKA-B 또는 RKA-(링커 분자)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
즉, 상기 페이로드 B는 알라닌 잔기의 C-말단에 직접 커플링될 수 있거나, 또는 알라닌 잔기의 C-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 상기 링커 분자의 선택은 페이로드 B에서 이용 가능한 관능기에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 상이한 관능기를 갖는 페이로드를 펩티드에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다. 상기 링커 분자는 절단 가능하거나 또는 비-절단 가능한 링커 분자일 수 있다. 구체적으로, 상기 링커 분자는 자기-희생 모이어티, 구체적으로 본원에 개시된 자기-희생 모이어티들 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKA-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
대안적으로, 상기 페이로드는 아르기닌 잔기의 N-말단에 직접 또는 링커 분자를 통해, 예를 들어 본원에 개시된 링커 분자들 중 어느 하나를 통해 커플링될 수 있다. 즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-RKA 또는 B-(링커 분자)-RKA를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKA를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 소정의 구체예에서, 상기 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKA에 포함된 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이며, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 상기 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-PABC-B를 가질 수 있다. 즉, 링커는 선형 펩티드 RKA를 포함할 수 있으며, 여기서 C-말단 알라닌 잔기의 카복실-기는 PABC에 포함된 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링된다. 상기 독소 B는 PABC에 카바메이트의 형성을 통해 부착될 수 있다. 모든 독소가 PABC를 가진 카바메이트의 형성을 가능하게 하는 관능기를 포함하는 것은 아님을 이해해야 한다. 따라서, 독소는 PABC에 링커를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 1차 또는 2차 아민을 포함하는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 독소는 MMAE 또는 메이탄신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 보호된 N-말단 단부를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 N-말단 단부는 아세틸화될 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 도 2에 도시된 링커이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-(PEG)n-PABC-MMAE를 가질 수 있으며, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-(PEG)2-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKA-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 PABC 모이어티 및 MMAE 사이에 추가의 링커를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 추가의 링커는 p-니트로페놀 (PNP) 기일 수 있다.
상기 링커는 PABC 이외의 다른 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 즉, 상기 링커는 구조 RKA-(자기-희생 모이어티)-독소를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명 내에서 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티를 알고 있다. 또한, 당업자는 자기-희생 모이어티에, 선택적으로 추가의 링커를 통해 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 하이드록실 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-O-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 하이드록실-포함 독소는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체, 구체적으로 엑사테칸 유도체 Dxd, 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 티올 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-S-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 티올-포함 독소는 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 이의 티올-포함 유도체일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 ARK-B 또는 ARK-(링커 분자)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
즉, 상기 페이로드 B는 리신 잔기의 C-말단에 직접 커플링될 수 있거나, 또는 리신 잔기의 C-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 상기 링커 분자의 선택은 페이로드 B에서 이용 가능한 관능기에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 상이한 관능기를 갖는 페이로드를 펩티드에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다. 상기 링커 분자는 절단 가능하거나 또는 비-절단 가능한 링커 분자일 수 있다. 구체적으로, 상기 링커 분자는 자기-희생 모이어티, 구체적으로 본원에 개시된 자기-희생 모이어티들 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 ARK-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
대안적으로, 상기 페이로드는 알라닌 잔기의 N-말단에 직접 또는 링커 분자를 통해, 예를 들어 본원에 개시된 링커 분자들 중 어느 하나를 통해 커플링될 수 있다. 즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-ARK 또는 B-(링커 분자)-ARK를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-ARK를 포함하거나 또는 이로 구성된다. 소정의 구체예에서, 상기 구조 B-(자기-희생 모이어티)-ARK에 포함된 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 ARK-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이며, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 상기 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-PABC-B를 가질 수 있다. 즉, 링커는 선형 펩티드 ARK를 포함할 수 있으며, 여기서 C-말단 리신 잔기의 카복실-기는 PABC에 포함된 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링된다. 상기 독소 B는 PABC에 카바메이트의 형성을 통해 부착될 수 있다. 모든 독소가 PABC를 가진 카바메이트의 형성을 가능하게 하는 관능기를 포함하는 것은 아님을 이해해야 한다. 따라서, 독소는 PABC에 링커를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 1차 또는 2차 아민을 포함하는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 독소는 MMAE 또는 메이탄신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 보호된 N-말단 단부를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 N-말단 단부는 아세틸화될 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 도 3에 도시된 링커이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-(PEG)n-PABC-MMAE를 가질 수 있으며, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-(PEG)2-PABC-MMAE를 가질 수 있다 (도 14 참조). 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 ARK-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 PABC 모이어티 및 MMAE 사이에 추가의 링커를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 추가의 링커는 p-니트로페놀 (PNP) 기일 수 있다.
상기 링커는 PABC 이외의 다른 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 즉, 상기 링커는 구조 ARK-(자기-희생 모이어티)-독소를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명 내에서 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티를 알고 있다. 또한, 당업자는 자기-희생 모이어티에, 선택적으로 추가의 링커를 통해 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 하이드록실 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-O-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 하이드록실-포함 독소는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체, 구체적으로 엑사테칸 유도체 Dxd, 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 티올 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-S-독소 (도 15와 유사함)를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 티올-포함 독소는 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 이의 티올-포함 유도체일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 도 14 또는 도 15에 도시된 링커이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKR-B 또는 RKR-(링커 분자)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
즉, 상기 페이로드 B는 아르기닌 잔기의 C-말단에 직접 커플링될 수 있거나, 또는 아르기닌 잔기의 C-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 상기 링커 분자의 선택은 페이로드 B에서 이용 가능한 관능기에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 상이한 관능기를 갖는 페이로드를 펩티드에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다. 상기 링커 분자는 절단 가능하거나 또는 비-절단 가능한 링커 분자일 수 있다. 구체적으로, 상기 링커 분자는 자기-희생 모이어티, 구체적으로 본원에 개시된 자기-희생 모이어티들 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKR-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
대안적으로, 상기 페이로드는 아르기닌 잔기의 N-말단에 직접 또는 링커 분자를 통해, 예를 들어 본원에 개시된 링커 분자들 중 어느 하나를 통해 커플링될 수 있다. 즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-RKR 또는 B-(링커 분자)-RKR을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 디카복실산 링커일 수 있다 (도 9 참조). 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKR을 포함하거나 또는 이로 구성된다. 소정의 구체예에서, 상기 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKR에 포함된 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RKR-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이며, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 상기 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-PABC-B를 가질 수 있다. 즉, 링커는 선형 펩티드 RKR을 포함할 수 있으며, 여기서 C-말단 아르기닌 잔기의 카복실-기는 PABC에 포함된 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링된다. 상기 독소 B는 PABC에 카바메이트의 형성을 통해 부착될 수 있다. 모든 독소가 PABC를 가진 카바메이트의 형성을 가능하게 하는 관능기를 포함하는 것은 아님을 이해해야 한다. 따라서, 독소는 PABC에 링커를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 1차 또는 2차 아민을 포함하는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 독소는 MMAE 또는 메이탄신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 보호된 N-말단 단부를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 N-말단 단부는 아세틸화될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-(PEG)n-PABC-MMAE를 가질 수 있으며, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-(PEG)2-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RKR-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 PABC 모이어티 및 MMAE 사이에 추가의 링커를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 추가의 링커는 p-니트로페놀 (PNP) 기일 수 있다.
상기 링커는 PABC 이외의 다른 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 즉, 상기 링커는 구조 RKR-(자기-희생 모이어티)-독소를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명 내에서 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티를 알고 있다. 또한, 당업자는 자기-희생 모이어티에, 선택적으로 추가의 링커를 통해 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 하이드록실 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-O-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 하이드록실-포함 독소는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체, 구체적으로 엑사테칸 유도체 Dxd, 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 티올 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-S-독소 (도 15와 유사함)를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 티올-포함 독소는 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 이의 티올-포함 유도체일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RK-Val-Cit-B 또는 RK-Val-Cit-(링커 분자)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
즉, 상기 페이로드 B는 시트룰린 잔기의 C-말단에 직접 커플링될 수 있거나, 또는 시트룰린 잔기의 C-말단에 링커 분자를 통해 커플링될 수 있다. 상기 링커 분자의 선택은 페이로드 B에서 이용 가능한 관능기에 크게 좌우된다는 것을 이해해야 한다. 상이한 관능기를 갖는 페이로드를 펩티드에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다. 상기 링커 분자는 절단 가능하거나 또는 비-절단 가능한 링커 분자일 수 있다. 구체적으로, 상기 링커 분자는 자기-희생 모이어티, 구체적으로 본원에 개시된 자기-희생 모이어티들 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이며, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 상기 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신이다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B를 가질 수 있다. 즉, 링커는 선형 펩티드 RK-Val-Cit를 포함할 수 있으며, 여기서 C-말단 시트룰린 잔기의 카복실-기는 PABC에 포함된 아미노 기에 아미드 결합을 통해 커플링된다. 상기 독소 B는 PABC에 카바메이트의 형성을 통해 부착될 수 있다. 모든 독소가 PABC를 가진 카바메이트의 형성을 가능하게 하는 관능기를 포함하는 것은 아님을 이해해야 한다. 따라서, 독소는 PABC에 링커를 통해 연결될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 1차 또는 2차 아민을 포함하는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 독소는 MMAE 또는 메이탄신일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 보호된 N-말단 단부를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 N-말단 단부는 아세틸화될 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RK-(PEG)n-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있으며, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RK-(PEG)2-Val-Cit-PABC-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-MMAE를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 링커는 PABC 모이어티 및 MMAE 사이에 추가의 링커를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 추가의 링커는 p-니트로페놀 (PNP) 기일 수 있다.
상기 링커는 PABC 이외의 다른 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 즉, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-독소를 가질 수 있다. 당업자는 본 발명 내에서 사용될 수 있는 다른 자기-희생 모이어티를 알고 있다. 또한, 당업자는 자기-희생 모이어티에, 선택적으로 추가의 링커를 통해 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 하이드록실 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 하이드록실-포함 독소는 캄프토테신, 예컨대 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체, 구체적으로 엑사테칸 유도체 Dxd, 또는 안트라사이클린, 예컨대 PNU-159682일 수 있다.
소정의 구체예에서, 상기 독소는 티올 기를 포함하는 독소일 수 있고, 상기 링커는 자기-희생 메틸 아민 기를 포함할 수 있다. 즉, 상기 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-독소를 가질 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 티올-포함 독소는 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 이의 티올-포함 유도체일 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 항체 폴라투주맙 (Polatuzumab), 또는 대안적으로 항-CD79b 항체를 포함하는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-링커 접합체는
a) 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체; 및
b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 링커는 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 RK 모티프에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체에 접합된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00351
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00352
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00353
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00354
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00355
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00356
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체를 포함하는 항체-페이로드 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 도 1, 도 2, 도 3, 도 8, 도 9, 도 14, 도 15, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23, 도 24, 도 25, 도 26, 도 27, 도 28, 도 29, 도 30, 도 31, 도 32, 도 33 또는 도 34에 도시된 링커들 중 어느 하나이다.
폴라투주맙은 항체-약물 접합체로서 폴라투주맙 베도틴 (Polatuzumab vedotin)으로 상업적으로 이용 가능하며, Polivy라는 명칭으로 시판된다. 폴라투주맙 베도틴은 항-CD79b 항체인 폴라투주맙 및 링커 말레이미도카프로일-L-발린-L-시트룰린-PABC-MMAE (mc-vc-PABC-MMAE)를 포함하고, 이는 통상적으로 베도틴 (vedotin)으로 알려져 있다. 폴라투주맙 베도틴의 mc-vc-PABC-MMAE 링커는 항체에 포함된 유리 시스테인 잔기에 접합된다. 항체 폴라투주맙은 WO 2009/012268에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 통합된다. 추가로, 폴라투주맙의 시스테인-조작된 변이체는 WO 2009/099728에 개시되어 있으며, 이는 또한 그 전문이 본원에 참조로 통합된다.
본 발명자들은 본 발명에 따른 링커를 포함하는 폴라투주맙 접합체가 상업적으로 이용 가능한 접합체 폴라투주맙 베도틴과 비교하여 혈장에서 더 긴 반감기를 갖는 것을 보여주었다. 따라서, 미생물 트란스글루타미나제에 의해 본 발명에 따른 링커에 접합된 항체-링커 접합체는 놀랍게도 다른 기술, 예를 들어 말레이미드-포함 링커를 항체의 시스테인 잔기에 접합시킴으로써 생성된 항체보다 더 안정하다. 따라서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 조기에 페이로드를 손실하지 않고, 표적 세포 또는 조직에 도달할 가능성이 더 높다.
소정의 구체예에서, 항체는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 포함하는 폴라투주맙이다. 그러나, 본 발명은 또한 중쇄 및/또는 경쇄가 각각 서열 번호: 5 및/또는 서열 번호: 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 서열 동일성을 포함하는 폴라투주맙의 변이체를 포함한다. 구체적으로, 상기 항체는 WO 2009/012268 또는 WO 2009/099728에 개시되어 있는 임의의 서열 변이를 포함할 수 있다.
본원에서 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체가 항체-링커 접합체에 글리코실화 형태로 존재하는 것이 바람직하다. 즉, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 바람직하게는 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다. 그러나, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 또한 본원에 기재된 바와 같이 데-글리코실화될 수 있다.
폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 특히 본 발명에 따른 방법을 위해, 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다. 바람직하게는, 상기 링커는 항체의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)에 MTG-촉매화된 방식 (MTG-catalyzed manner)으로 접합된다. 그러나, 상기 링커는 또한 조작된 글루타민 잔기, 예컨대 N297Q (EU numbering) 및/또는 본원에 개시된 글루타민-포함 태그 (glutamine-comprising tags) 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체에 접합된 링커는 단일 연결 모이어티 또는 페이로드 B를 포함할 수 있거나 또는 다수의 연결 모이어티 및/또는 페이로드 B1, B2 등을 포함할 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 폴라투주맙-링커 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 연결 모이어티 B를 포함할 수 있다. 이러한 폴라투주맙-링커 접합체는 이후 본원에 개시된 바와 같이 2-단계 공정으로 적합한 페이로드로 관능화될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙-페이로드 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 페이로드 B를 포함할 수 있다. 이러한 폴라투주맙-페이로드 접합체는 2-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 연결 모이어티를 포함하는 링커는 제1 단계에서 폴라투주맙에 접합되고, 페이로드는 제2 단계에서 연결 모이어티에 연결된다. 대안적으로, 폴라투주맙-페이로드 접합체는 1-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 페이로드를 포함하는 링커가 폴라투주맙에 직접 접합된다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 폴라투주맙 또는 항-CD79B 항체를 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 즉, 항체-약물 접합체에 포함된 링커는 본원에 기재된 하나 이상의 독소를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커를 포함할 수 있다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-약물 접합체는
a) 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되며;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체에 접합된다.
바람직하게는, 상기 항체는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 포함하는 폴라투주맙이다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 폴라투주맙 또는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 포함하는 항체이다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체에 접합된 링커는 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커는 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체의 잔기 Q295에, 잔기 K에 포함된 1차 아민을 통해 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 1 참조). 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다 (도 8 참조). 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 2 참조). 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 3 참조). 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9에서 예시되는 바와 같이, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 폴라투주맙 또는 항-CD79b 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 항체 트라스투주맙 (Trastuzumab), 또는 대안적으로 항-HER2/neu 항체를 포함하는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-링커 접합체는
a) 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체; 및
b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 링커는 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 RK 모티프에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체에 접합된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00357
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00358
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00359
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00360
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00361
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00362
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체를 포함하는 항체-페이로드 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 도 1, 도 2, 도 3, 도 8, 도 9, 도 14, 도 15, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23, 도 24, 도 25, 도 26, 도 27, 도 28, 도 29, 도 30, 도 31, 도 32, 도 33 또는 도 34에 도시된 링커들 중 어느 하나이다.
트라스투주맙은 항체-약물 접합체 트라스투주맙 엠타신 (Trastuzumab emtasine)으로 상업적으로 이용 가능하고, Kadcyla라는 이름으로 시판된다. 트라스투주맙 엠타신은 항-HER2/neu 항체 트라스투주맙 및 독소 DM1을 포함하고, 이는 N-숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC) 링커를 통해 트라스투주맙에 커플링된다. 상기 링커-DM1 구조체는 항체에 포함된 최대 8개의 상이한 리신 잔기에 접합될 수 있어서, 다양한 약물 대 항체 비율을 갖는 항체를 생성한다. 바람직하게는, 트라스투주맙은 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 포함한다. 그러나, 본 발명은 또한 중쇄 및/또는 경쇄가 각각 서열 번호: 7 및/또는 서열 번호: 8과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 서열 동일성을 포함하는 트라스투주맙의 변이체를 포함한다. 소정의 구체예에서, 항체는 예를 들어 WO 1998/006692, WO 1999/905536, WO 2003/087131에 개시된 바와 같은 항-HER2/neu 항체일 수 있지만 이에 한정되지 않으며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 통합된다.
본원에서 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체가 항체-링커 접합체에 글리코실화 형태로 존재하는 것이 바람직하다. 즉, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 바람직하게는 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다. 그러나, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 또한 본원에 기재된 바와 같이 데-글리코실화될 수 있다.
트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 특히 본 발명에 따른 방법을 위해, 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다. 바람직하게는, 상기 링커는 항체의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)에 MTG-촉매화된 방식으로 접합된다. 그러나, 상기 링커는 또한 조작된 글루타민 잔기, 예컨대 N297Q (EU numbering) 및/또는 본원에 개시된 글루타민-포함 태그 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체에 접합된 링커는 단일 연결 모이어티 또는 페이로드 B를 포함할 수 있거나 또는 다수의 연결 모이어티 및/또는 페이로드 B1, B2 등을 포함할 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 트라스투주맙-링커 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 연결 모이어티 B를 포함할 수 있다. 이러한 트라스투주맙-링커 접합체는 이후 본원에 개시된 바와 같이 2-단계 공정으로 적합한 페이로드로 관능화될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙-페이로드 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 페이로드 B를 포함할 수 있다. 이러한 트라스투주맙-페이로드 접합체는 2-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 연결 모이어티를 포함하는 링커는 제1 단계에서 트라스투주맙에 접합되고, 페이로드는 제2 단계에서 연결 모이어티에 연결된다. 대안적으로, 트라스투주맙-페이로드 접합체는 1-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 페이로드를 포함하는 링커가 트라스투주맙에 직접 접합된다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체를 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 즉, 항체-약물 접합체에 포함된 링커는 본원에 기재된 하나 이상의 독소를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커를 포함할 수 있다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-약물 접합체는
a) 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되며;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체에 접합된다.
바람직하게는, 상기 항체는 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 포함하는 트라스투주맙이다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 트라스투주맙 또는 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 포함하는 항체이다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체에 접합된 링커는 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커는 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체의 잔기 Q295에, 잔기 K에 포함된 1차 아민을 통해 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 1 참조). 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다 (도 8 참조). 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 2 참조). 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 3 참조). 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9에서 예시되는 바와 같이, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 트라스투주맙 또는 항-HER2/neu 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 항체 엔포르투맙 (Enfortumab), 또는 대안적으로 항-Nectin-4 항체를 포함하는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-링커 접합체는
a) 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체; 및
b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 링커는 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 RK 모티프에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체에 접합된다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
상기에서
Figure pct00363
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00364
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00365
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00366
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00367
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00368
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체를 포함하는 항체-페이로드 접합체에 관한 것으로서, 여기서 링커는 도 1, 도 2, 도 3, 도 8, 도 9, 도 14, 도 15, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23, 도 24, 도 25, 도 26, 도 27, 도 28, 도 29, 도 30, 도 31, 도 32, 도 33 또는 도 34에 도시된 링커들 중 어느 하나이다.
엔포르투맙은 항체-약물 접합체 엔포르투맙 베도틴 (Enfortumab vedotin)으로 상업적으로 이용 가능하고, Padcev라는 이름으로 시판된다. 엔포르투맙 베도틴은 항-Nectin-4 항체 엔포르투맙 및 링커 말레이미도카프로일-L-발린-L-시트룰린-PABC-MMAE (mc-vc-PABC-MMAE)를 포함하고, 이는 통상적으로 베도틴 (vedotin)으로 알려져 있다. 엔포르투맙 베도틴의 mc-vc-PABC-MMAE 링커는 항체에 포함된 유리 시스테인 잔기에 접합된다. 항체 엔포르투맙은 WO 2012/047724에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 통합된다.
소정의 구체예에서, 항체는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10에 제시된 경쇄를 포함하는 엔포르투맙이다. 그러나, 본 발명은 또한 중쇄 및/또는 경쇄가 각각 서열 번호: 9 및/또는 서열 번호: 10과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 서열 동일성을 포함하는 엔포르투맙의 변이체를 포함한다. 구체적으로, 항체는 WO 2012/047724에 개시된 임의의 서열 변형을 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙의 경쇄는 서열 번호: 10의 잔기 Q55에 돌연변이를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 돌연변이는 Q55N (서열 번호: 11)이다.
본원에서 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체가 항체-링커 접합체에 글리코실화 형태로 존재하는 것이 바람직하다. 즉, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 바람직하게는 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된다. 그러나, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 또한 본원에 기재된 바와 같이 데-글리코실화될 수 있다.
엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 특히 본 발명에 따른 방법을 위해, 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다. 바람직하게는, 상기 링커는 항체의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)에 MTG-촉매화된 방식으로 접합된다. 그러나, 상기 링커는 또한 조작된 글루타민 잔기, 예컨대 N297Q (EU numbering) 및/또는 본원에 개시된 글루타민-포함 태그 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체에 접합된 링커는 단일 연결 모이어티 또는 페이로드 B를 포함할 수 있거나 또는 다수의 연결 모이어티 및/또는 페이로드 B1, B2 등을 포함할 수 있다.
즉, 소정의 구체예에서, 엔포르투맙-링커 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 연결 모이어티 B를 포함할 수 있다. 이러한 엔포르투맙-링커 접합체는 이후 본원에 개시된 바와 같이 2-단계 공정으로 적합한 페이로드로 관능화될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙-페이로드 접합체에 포함된 링커는 하나 이상의 페이로드 B를 포함할 수 있다. 이러한 엔포르투맙-페이로드 접합체는 2-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 연결 모이어티를 포함하는 링커는 제1 단계에서 엔포르투맙에 접합되고, 페이로드는 제2 단계에서 연결 모이어티에 연결된다. 대안적으로, 엔포르투맙-페이로드 접합체는 1-단계 공정으로 수득될 수 있으며, 여기서 페이로드를 포함하는 링커가 엔포르투맙에 직접 접합된다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체를 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 즉, 항체-약물 접합체에 포함된 링커는 본원에 기재된 하나 이상의 독소를 포함할 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커를 포함할 수 있다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 상기 항체-약물 접합체는
a) 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체; 및
b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되며;
상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기 및 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체에 접합된다.
바람직하게는, 상기 항체는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10에 제시된 경쇄를 포함하는 엔포르투맙이다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 IgG 항체는 엔포르투맙 또는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10에 제시된 경쇄를 포함하는 항체이다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체에 접합된 링커는 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 구조 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커는 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체의 잔기 Q295에, 잔기 K에 포함된 1차 아민을 통해 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 1 참조). 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다 (도 8 참조). 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKAA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKA-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 2 참조). 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKA-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKA에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9와 유사하게, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 ARK-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-PABC-MMAE에 접합될 수 있다 (도 3 참조). 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 ARK-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-ARK에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RKR-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RKR-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 B-(자기-희생 모이어티)-RKR에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 N-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 오르토-하이드록시-보호된 아릴 설페이트 (OHPAS) 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아민 포함 페이로드 B는 도 9에서 예시되는 바와 같이, N-말단 아르기닌 모이어티에 디카복실산 링커를 통해 커플링될 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 본원에 개시된 링커 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B에 접합될 수 있으며, 상기 B는 바람직하게는 독소이다. 상기 자기-희생 모이어티는 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티일 수 있다. 소정의 구체예에서, 상기 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸-아민 포함 기일 수 있다.
소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-B에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-메이탄신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-PABC-PNP-MMAE에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-B에 접합될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합의 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신에 접합될 수 있다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-B에 접합될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합의 황 원자이고, B는 티올-포함 독소이다. 소정의 구체예에서, 엔포르투맙 또는 항-Nectin-4 항체는 링커 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-DM1에 접합될 수 있다.
또한, 본 발명은 모티프 RK를 포함하는 링커 작제물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 링커 작제물는 광범위한 항체의 접합에 사용될 수 있다. 고도로 보존된 접합 부위 Q295로 인해, 본 발명에 따른 링커 접합체는 기본적으로 임의의 IgG 타입 항체의 항체-페이로드 접합체를 생성하기 위해 "기성품 (off the shelf)"으로 사용될 수 있다. 선행 기술로부터 알려진 링커와 비교하여, 본 발명의 RK 링커는 글리코실화 항체의 매우 효율적인 접합에 사용될 수 있고, 심지어 독소와 같은 벌크한 페이로드를 포함하는 경우 높은 접합 효율을 초래하였다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 하기 구조를 포함하는 링커 작제물에 관한 것이다:
(Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
(Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3); 상기에서
Figure pct00369
(Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00370
(Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
Figure pct00371
(Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
Figure pct00372
R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
Figure pct00373
K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
Figure pct00374
B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
상기 링커 작제물는 본 발명에 따른 방법, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 및/또는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체에 대해 상기 개시된 링커와 동일한 구조 및/또는 특성을 가질 수 있음을 이해해야 한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커의 순전하는 중성 또는 양성이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커는 음으로 하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 B는 연결 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 연결 모이어티 B는 하기를 포함한다:
Figure pct00375
생물직교 마커 기, 또는
Figure pct00376
가교를 위한 비-생물-직교 엔티티.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함한다:
Figure pct00377
-N-N≡N, 또는 -N3;
Figure pct00378
Lys(N3);
Figure pct00379
테트라진;
Figure pct00380
알킨;
Figure pct00381
스트레인드 사이클로옥틴;
Figure pct00382
BCN;
Figure pct00383
스트레인드 알켄;
Figure pct00384
광반응성 기;
Figure pct00385
알데히드;
Figure pct00386
아실트리플루오로보레이트;
Figure pct00387
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00388
사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
Figure pct00389
티오-선택적 친전자체;
Figure pct00390
-SH; 및
Figure pct00391
시스테인.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKAA-B 또는 B-RKAA로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKAA-B 또는 B-RKAA를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 여기서 B는 연결 모이어티이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 연결 모이어티일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 상기 B는 티올-포함 연결 모이어티 예컨대 시스테인, 아지드 포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3), 또는 테트라진 포함 연결 모이어티일 수 있다. 구조 RKAA-B 또는 B-RKAA를 포함하는 링커는 추가적인 아미노산 잔기, 연결 모이어티, 페이로드 및/또는 다른 화학적 기 예컨대 제한 없이 PEG 모이어티를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 상기 링커 작제물는 구조 RKAA-B 또는 B-RKAA로 구성된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKA-B 또는 B-RKA로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKA-B 또는 B-RKA를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 연결 모이어티이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 연결 모이어티일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 티올-포함 연결 모이어티 예컨대 시스테인, 아지드 포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3), 또는 테트라진 포함 연결 모이어티일 수 있다. 구조 RKA-B 또는 B-RKA를 포함하는 링커는 추가적인 아미노산 잔기, 연결 모이어티, 페이로드 및/또는 다른 화학적 기 예컨대 제한 없이 PEG 모이어티를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 상기 링커 작제물는 구조 RKA-B 또는 B-RKA로 구성된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 ARK-B 또는 B-ARK로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 ARK-B 또는 B-ARK를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 연결 모이어티이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 연결 모이어티일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 티올-포함 연결 모이어티 예컨대 시스테인, 아지드 포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3), 또는 테트라진 포함 연결 모이어티일 수 있다. 구조 ARK-B 또는 B-ARK를 포함하는 링커는 추가적인 아미노산 잔기, 연결 모이어티, 페이로드 및/또는 다른 화학적 기 예컨대 제한 없이 PEG 모이어티를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 상기 링커 작제물는 구조 ARK-B 또는 B-ARK로 구성된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKR-B 또는 B-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKR-B 또는 B-RKR을 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 연결 모이어티이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 연결 모이어티일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 티올-포함 연결 모이어티 예컨대 시스테인, 아지드 포함 연결 모이어티 예컨대 Lys(N3), 또는 테트라진 포함 연결 모이어티일 수 있다. 구조 RKR-B 또는 B-RKR을 포함하는 링커는 추가적인 아미노산 잔기, 연결 모이어티, 페이로드 및/또는 다른 화학적 기 예컨대 제한 없이 PEG 모이어티를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, 상기 링커 작제물는 구조 RKR-B 또는 B-RKR로 구성된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 B는 페이로드이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함한다:
Figure pct00392
독소;
Figure pct00393
사이토카인;
Figure pct00394
성장 인자;
Figure pct00395
방사성핵종;
Figure pct00396
호르몬;
Figure pct00397
항-바이러스제;
Figure pct00398
항-박테리아제;
Figure pct00399
형광 염료;
Figure pct00400
면역조절제/면역자극제;
Figure pct00401
반감기 증가 모이어티;
Figure pct00402
용해도 증가 모이어티;
Figure pct00403
폴리머-독소 접합체;
Figure pct00404
핵산;
Figure pct00405
바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
Figure pct00406
비타민;
Figure pct00407
단백질 분해제 ('PROTAC');
Figure pct00408
표적 결합 모이어티; 및/또는
Figure pct00409
항-염증제.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나이다:
Figure pct00410
피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
Figure pct00411
아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
Figure pct00412
메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
Figure pct00413
두오카르마이신;
Figure pct00414
니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
Figure pct00415
튜불리신;
Figure pct00416
엔디인 (예: 칼리케아미신);
Figure pct00417
안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
Figure pct00418
피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
Figure pct00419
크립토피신;
Figure pct00420
약물 유출 펌프 억제제;
Figure pct00421
산드라마이신;
Figure pct00422
아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
Figure pct00423
캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 화학적 스페이서 (Sp2)는 자기-희생 모이어티를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 자기-희생 모이어티는 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 C-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 PABC-기반 자기-희생 링커, PABE-기반 자기-희생 링커 또는 메틸 아민 포함 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKAA로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 N-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 N-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 OHPAS 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-RKAA 또는 RKAA-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 페이로드 B는 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 직접 커플링될 수 있다. 페이로드에 포함된 관능기가 펩티드의 N- 및/또는 C-말단과 적합하지 않은 경우, 링커 분자를 사용하여 페이로드를 펩티드의 N- 및/또는 C-말단에 각각 커플링할 수 있다. 페이로드를 펩티드의 N- 또는 C-말단에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKAA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 특히 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 메이탄신이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKAA-B를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 페이로드이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 페이로드일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 자기-희생 모이어티에 의해 펩티드 RKAA로부터 분리될 수 있다. 따라서, 링커는 구조 RKAA-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 상기 B는 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸 아민 기일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-PABC-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-O-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합에 포함된 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-S-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합에 포함된 황 원자이고, B는 티올-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아우리스타틴은 MMAE일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-PABC-MMAE 또는 RKAA-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-PABC-메이탄신 또는 RKAA-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 DM1 또는 DM1 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-S-DM1을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 캄프토테신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKAA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKA-(자기-희생 모이어티)-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 C-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 PABC-기반 자기-희생 링커, PABE-기반 자기-희생 링커 또는 메틸 아민 포함 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKA로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 N-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 N-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 OHPAS 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-RKA 또는 RKA-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 페이로드 B는 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 직접 커플링될 수 있다. 페이로드에 포함된 관능기가 펩티드의 N- 및/또는 C-말단과 적합하지 않은 경우, 링커 분자를 사용하여 페이로드를 펩티드의 N- 및/또는 C-말단에 각각 커플링할 수 있다. 페이로드를 펩티드의 N- 또는 C-말단에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 특히 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 메이탄신이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKA-B를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 페이로드이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 페이로드일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 자기-희생 모이어티에 의해 펩티드 RKA로부터 분리될 수 있다. 따라서, 링커는 구조 RKA-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 상기 B는 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸 아민 기일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKA-PABC-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-O-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합에 포함된 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-S-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합에 포함된 황 원자이고, B는 티올-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아우리스타틴은 MMAE일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKA-PABC-MMAE 또는 RKA-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKA-PABC-메이탄신 또는 RKA-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 DM1 또는 DM1 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-S-DM1을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 캄프토테신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKA-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 ARK-(자기-희생 모이어티)-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 C-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 PABC-기반 자기-희생 링커, PABE-기반 자기-희생 링커 또는 메틸 아민 포함 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-ARK로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 N-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 N-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 OHPAS 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-ARK 또는 ARK-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 페이로드 B는 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 직접 커플링될 수 있다. 페이로드에 포함된 관능기가 펩티드의 N- 및/또는 C-말단과 적합하지 않은 경우, 링커 분자를 사용하여 페이로드를 펩티드의 N- 및/또는 C-말단에 각각 커플링할 수 있다. 페이로드를 펩티드의 N- 또는 C-말단에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 ARK-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 특히 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 메이탄신이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 ARK-B를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 페이로드이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 페이로드일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 자기-희생 모이어티에 의해 펩티드 ARK로부터 분리될 수 있다. 따라서, 링커는 구조 ARK-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 상기 B는 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸 아민 기일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 ARK-PABC-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-O-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합에 포함된 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-S-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합에 포함된 황 원자이고, B는 티올-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아우리스타틴은 MMAE일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 ARK-PABC-MMAE 또는 ARK-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 ARK-PABC-메이탄신 또는 ARK-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 DM1 또는 DM1 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-S-DM1을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 캄프토테신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 ARK-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKR-(자기-희생 모이어티)-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 C-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 PABC-기반 자기-희생 링커, PABE-기반 자기-희생 링커 또는 메틸 아민 포함 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-(자기-희생 모이어티)-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 N-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 N-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 OHPAS 모이어티를 포함하는 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 B-RKR 또는 RKR-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 페이로드 B는 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 직접 커플링될 수 있다. 페이로드에 포함된 관능기가 펩티드의 N- 및/또는 C-말단과 적합하지 않은 경우, 링커 분자를 사용하여 페이로드를 펩티드의 N- 및/또는 C-말단에 각각 커플링할 수 있다. 페이로드를 펩티드의 N- 또는 C-말단에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RKR-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 특히 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 메이탄신이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RKR-B를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 페이로드이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 페이로드일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 자기-희생 모이어티에 의해 펩티드 RKR로부터 분리될 수 있다. 따라서, 링커는 구조 RKR-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 상기 B는 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸 아민 기일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKR-PABC-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-O-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합에 포함된 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-S-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합에 포함된 황 원자이고, B는 티올-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아우리스타틴은 MMAE일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKR-PABC-MMAE 또는 RKR-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKR-PABC-메이탄신 또는 RKR-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 DM1 또는 DM1 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-S-DM1을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 캄프토테신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RKR-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 링커 작제물는 페이로드 B를 펩티드의 C-말단에 커플링하기에 적합한 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 독소일 수 있다. 당업자는 적합한 자기-희생 모이어티를 통해 펩티드의 C-말단에 커플링될 수 있는 독소를 알고 있다. 바람직하게는, 자기-희생 모이어티는 본원에 개시된 자기-희생 모이어티 중 어느 하나, 예컨대 제한 없이 PABC-기반 자기-희생 링커, PABE-기반 자기-희생 링커 또는 메틸 아민 포함 자기-희생 모이어티이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RK-Val-Cit-B로 구성되거나 또는 이를 포함한다. 즉, 페이로드 B는 펩티드의 C-말단에 직접 커플링될 수 있다. 페이로드에 포함된 관능기가 펩티드의 C-말단과 적합하지 않은 경우, 링커 분자를 사용하여 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링할 수 있다. 페이로드를 펩티드의 C-말단에 커플링하는데 적합한 링커 분자가 본원에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 링커 작제물에 관한 것으로서, 여기서 링커 작제물는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 특히 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 메이탄신이다.
즉, 특정 구체예에서, 본 발명은 구조 RK-Val-Cit-B를 포함하는 링커에 관한 것으로서, 상기 B는 페이로드이다. 상기 B는 당해 기술 분야에 알려져 있고 및/또는 본원에 개시된 임의의 페이로드일 수 있음을 이해해야 한다. 소정의 구체예에서, B는 독소일 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드 B는 자기-희생 모이어티에 의해 펩티드 RK-Val-Cit로부터 분리될 수 있다. 따라서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(자기-희생 모이어티)-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 상기 B는 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 자기-희생 모이어티는 PABC 또는 메틸 아민 기일 수 있다. 따라서, 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 O는 에테르 결합에 포함된 산소 원자이고, B는 하이드록실-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-B를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있으며, 여기서 S는 티오에테르 결합에 포함된 황 원자이고, B는 티올-포함 페이로드이다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드일 수 있다. 소정의 구체예에서, 아우리스타틴은 MMAE일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-MMAE 또는 RK-Val-Cit-MMAE를 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 메이탄신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-메이탄신 또는 RK-Val-Cit-메이탄신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 메이탄시노이드는 DM1 또는 DM1 유도체일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-S-DM1을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 소정의 구체예에서, 페이로드는 캄프토테신일 수 있다. 이러한 구체예에서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-(NH)-(CH3)-O-캄프토테신을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 적어도 하나의 독소를 포함한다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 적어도 하나의 링커에 접합된 항체를 포함하며, 여기서 하나의 링커는 적어도 하나의 독소를 포함한다. 소정의 구체예에서, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 링커를 포함하며, 여기서 항체의 각 중쇄는 하나의 링커에 접합된다. 소정의 구체예에서, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물-접합체는 4개의 링커를 포함하며, 여기서 항체의 각 중쇄는 2개의 링커에 접합된다. 이러한 경우에, 각 링커는 하나 이상의 페이로드, 예컨대 독소를 함유할 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 링커를 포함하며, 여기서 각 링커는 하나의 페이로드, 예를 들어 독소를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 링커를 포함하며, 여기서 각 링커는 2개의 페이로드, 예를 들어 하나의 독소 및 하나의 다른 페이로드 또는 2개의 동일하거나 또는 상이한 독소를 포함한다. 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 2개의 링커를 포함하는 구체예에서, 링커는 IgG 항체의 2개의 중쇄의 잔기 Q295에 접합되는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 항체는 잔기 N297에서 글리코실화된 IgG 항체이다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 4개의 링커를 포함하며, 여기서 각 링커는 하나의 페이로드, 예를 들어 독소를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 4개의 링커를 포함하며, 여기서 각 링커는 2개의 페이로드, 예를 들어 하나의 독소 및 하나의 다른 페이로드 또는 2개의 동일하거나 또는 상이한 독소를 포함한다. 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 4개의 링커를 포함하는 구체예에서, 링커는 IgG 항체의 2개의 중쇄의 잔기 Q295 및 N297Q에 접합되는 것이 바람직하다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 상이한 독소를 포함한다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 상이한 독소를 포함할 수 있다. 즉, 소정의 구체예에서, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 각 링커는 2개의 상이한 독소를 포함한다. 2개의 상이한 독소를 포함하는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 증가된 세포독성 활성을 가질 수 있다는 이점을 갖는다. 이러한 세포독성 활성 증가는 2개의 상이한 세포 기전을 표적으로 하는 2개의 독소들을 조합함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 세포 분열을 억제하는 제1 독소 및 DNA의 복제 및/또는 전사를 방해하는 독소인 제2 독소를 포함할 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 제1 독소는 세포 분열을 억제하는 독소이고, 제2 독소는 DNA의 복제 및/또는 전사를 방해하는 독소이다.
세포 분열을 억제하는 독소, 예컨대 항-유사분열제 (anti-mitotic agent) 또는 스핀들 독 (spindle poison)은 세포의 유사분열을 억제하거나 또는 방지할 수 있는 잠재력을 가진 제제이다. 스핀들 독은 스핀들 (spindles)로 알려진, 염색체의 중심체 영역을 연결하는 단백질 실 (protein threads)에 영향을 주어 세포 분열을 방해하는 독이다. 스핀들 독은 스핀들 조립 체크포인트 (spindle assembly checkpoint: SAC)에서 세포 분열의 유사분열 단계를 방해하여 새로운 세포의 생산을 효과적으로 중단시킨다. 유사분열 스핀들은 조절 단백질과 함께, 복제된 염색체를 적절하게 분리하는 활성을 서로 보조하는 미세소관 (중합된 튜불린)으로 이루어진다. 유사분열 스핀들에 영향을 미치는 특정 화합물이 고형 종양 및 혈액 악성 종양에 대해 매우 효과적인 것으로 입증되었다.
항유사분열제의 2가지 특정 계열인 빈카 알칼로이드 (vinca alkaloids) 및 탁산 (taxanes)은 미세소관 동역학의 교란에 의해 세포 분열을 방해한다. 빈카 알칼로이드는 튜불린의 미세소관으로의 중합 억제를 유발하는 작용을 하여, 세포 주기 내에서 G2/M 정지를 초래하여, 결국 세포 사멸을 유도한다. 대조적으로, 탁산은 해중합에 대해 미세소관을 안정화시킴으로써 유사분열 세포 주기를 정지시킨다. 신규한 화학요법제의 표적일 수 있는 수많은 다른 스핀들 단백질이 존재하지만, 튜불린-결합제는 임상에서 사용되는 유일한 타입이다. 운동 단백질 키네신 (motor protein kinesin)에 영향을 주는 제제가 임상 시험에 진입하기 시작하였다. 또 다른 타입인 파클리탁셀은 기존 미세소관 내의 튜불린에 부착하여 작용한다. 본 발명 내에서 세포 분열을 억제하는 바람직한 독소는 아우리스타틴 예컨대 MMAE 및 MMAF, 및 메이탄시노이드, 예컨대 DM1, DM3, DM4 및/또는 DM21이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 독소 중 적어도 하나는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이다.
DNA 분자의 정확한 복제 및/또는 전사를 방지하고 암 치료에 적합한 것으로 밝혀진 몇몇 제제가 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 새롭게 형성된 DNA 및/또는 RNA 분자에 잘못 혼입된 (misincorporated) 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드 유사체와 같은 항대사물질 (antimetabolites)이 당해 기술 분야에 알려져 있으며, Tsesmetzis et al, Cancers (Basel), 2018, 10(7): 240에 요약되어 있다. DNA의 복제 및/또는 전사를 방해하는 것으로 알려진 다른 독소로는 두오카르마이신 (duoromycins)이 있다.
따라서, 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 상이한 독소를 포함하며, 여기서 제1 독소는 두오카르마이신이고, 제2 페이로드는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체는 2개의 상이한 아우리스타틴을 포함한다.
2개의 상이한 독소를 포함하는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체의 주요 이점 중 하나는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 독소들 중 하나의 작용 기전을 회피한 표적 세포에 대해 여전히 작용할 수 있고 및/또는 항체-페이로드 접합체가 이종 종양에 대한 더 높은 효능을 가질 수 있다는 점이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체는 독소 및 약물 유출 수송체의 억제제를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 독소 및 용해도 증가 모이어티를 포함한다.
즉, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 페이로드를 포함할 수 있으며, 여기서 제1 페이로드는 독소이고, 제2 페이로드는 용해도 증가 모이어티이다. 대안적으로, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 링커의 아지드-포함 연결 모이어티에 독소를 클릭하고 동일한 링커의 시스테인 측쇄에 말레이미드-포함 용해도 증가 모이어티를 클릭함으로써 수득될 수 있다. 대안적으로, 독소 및/또는 용해도 증가 모이어티는 링커에 화학적 합성에 의해 부착될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체는 독소 및 면역자극제를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이 문맥에 따라, 용어 "면역자극제 (immunostimulatory agent)"는 항원에 대한 대상체의 면역 반응을 증가시키는 화합물을 포함한다. 면역자극제의 예로는 면역 자극제 (immune stimulants) 및 면역 세포 활성화 화합물을 포함한다. 본 발명의 항체-링커 접합체는 면역 세포가 리간드를 인식하고 항원 제시를 증진하도록 프로그래밍하는 것을 보조하는 면역자극제를 함유할 수 있다. 면역 세포 활성화 화합물은 Toll-유사 수용체 (TLR) 효능제를 포함한다. 이러한 효능제는 병원체 관련 분자 패턴 (PAMPs), 예컨대 감염-모방 조성물 예컨대 박테리아-유래 면역조절제 (일명 위험 신호) 및 손상 관련 분자 패턴 (DAMPs), 예컨대 스트레스를 받거나 또는 손상된 세포를 모방하는 조성물을 포함한다. TLR 효능제는 핵산 또는 지질 조성물 (예를 들어, 모노포스포릴 지질 A (MPLA))을 포함한다. 일례에서, TLR 효능제는 TLR9 효능제 예컨대 시토신-구아노신 올리고뉴클레오티드 (CpG-ODN), 폴리(에틸렌이민) (PEI)-축합 올리고뉴클레오티드 (ODN) 예컨대 PEI-CpG-ODN, 또는 이중 가닥 데옥시리보핵산 (DNA)을 포함한다. 다른 예에서, TLR 효능제는 TLR3 효능제 예컨대 폴리이노신-폴리시티딜산 (폴리 (I:C)), PEI-폴리 (I:C), 폴리아데닐산-폴리우리딜산 (폴리 (A:U)), PEI-폴리 (A:U), 또는 이중 가닥 리보핵산 (RNA)을 포함한다. 다른 예시되는 백신 면역자극 화합물은 리포폴리사카라이드 (LPS), 케모카인/사이토카인, 진균성 베타-글루칸 (예컨대 렌티난), 이미퀴모드, CRX-527 및 OM-174를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 2개의 상이한 면역자극제를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것으로서, 여기서 적어도 하나의 면역자극제는 TLR 효능제이다.
본원에서 사용된, 용어 "TLR 효능제 (TLR agonist)"는 직접적인 리간드로서 또는 간접적으로 내인성 또는 외인성의 생성을 통해, TLR 신호전달 경로를 통해 신호전달 반응을 유발할 수 있는 분자를 지칭한다. TLR 수용체의 효능적 리간드 (agonistic ligands)는 (i) 실제 TLR 수용체의 천연 리간드, 또는 TLR 수용체에 결합하여 이에 공동-자극 신호를 유도하는 능력을 보존하는 이의 기능적으로 동등한 변이체, 또는 (ii) TLR 수용체에 대한 효능제 항체, 또는 TLR 수용체, 더 구체적으로 상기 수용체의 세포외 도메인에 특이적으로 결합할 수 있고 이러한 수용체 및 관련 단백질에 의해 제어되는 면역 신호의 일부를 유도할 수 있는 이의 기능적으로 동등한 변이체이다. 결합 특이성은 인간 TLR 수용체 또는 상이한 종들 중 인간의 TLR과 상동인 TLR 수용체에 대한 것일 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 하나 이상의 영상화제를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체는 방사성핵종 및 형광 염료를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체에 관한 것으로서, 여기서 방사성핵종은 단층 촬영, 구체적으로 단일-광자 방출 컴퓨터 단층 촬영 (single-photon emission computed tomography: SPECT) 또는 양전자 방출 단층 촬영 (positron emission tomography: PET)에 사용하기에 적합한 방사성핵종이고, 상기 형광 염료는 근적외선 형광 염료이다.
본원에서 사용된, 용어 "방사성핵종 (radionuclide)"은 방사성 핵종 (radioactive nuclide), 방사성동위원소 (radioisotope) 또는 방사성 동위원소 (radioactive isotope)와 동일한 의미를 갖는다.
방사성핵종은 바람직하게는 핵의학 분자 영상화 기술(들), 예컨대 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영 (SPECT), SPECT 및/또는 PET의 하이브리드 또는 이들의 조합에 의해 검출 가능하다. 본원에서 SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography)는 PS (planar scintigraphy)를 포함한다.
SPECT 및/또는 PET의 하이브리드는 예를 들어 SPECT/CT, PET/CT, PET/IRM 또는 SPECT/IRM이다.
SPECT 및 PET는 대상체의 체내로 도입된 방사성핵종의 농도 (또는 흡수)에 대한 정보를 수집한다. PET는 양전자-방출 방사성핵종에 의해 간접적으로 방출되는 감마선 쌍을 감지하여 영상을 생성한다. PET 분석은 관심 영역 (예를 들어, 뇌, 유방, 간 등)에 대해 신체의 일련의 얇은 슬라이스 영상 (slice images)을 생성한다. 이러한 얇은 슬라이스 영상은 검사 영역의 3차원 표시로 조립될 수 있다. SPECT는 PET와 유사하지만, SPECT에 사용되는 방사성 물질은 PET에 사용되는 것보다 붕괴 시간이 더 길고, 이중 감마선 대신 단일 감마선을 방출한다. SPECT 영상은 PET 영상보다 감도가 더 낮고 상세하지 않지만, SPECT 기술은 PET보다 훨씬 저렴하고, 입자 가속기에 근접할 필요가 없다는 이점을 제공한다. 실제 임상 PET는 SPECT보다 더 높은 감도 및 더 양호한 공간 분해능을 나타내며, 높은 광자 에너지로 인해 정확한 감쇠 보정의 이점을 제시하므로; 따라서 PET는 SPECT보다 더 정확한 정량적 데이터를 제공한다. PS (planar scintigraphy)는 동일한 방사성핵종을 사용한다는 점에서 SPECT와 유사하다. 그러나, PS는 2D-정보만을 생성한다.
SPECT는 국소 방사성추적자 흡수 (local radiotracer uptake)에 대한 컴퓨터-생성 영상을 생성하는 반면에, CT는 인체의 X선 밀도에 대한 3D 해부학적 영상을 생성한다. 조합된 SPECT/CT 영상화는 단일 검사 중에 수득된, SPECT로부터의 기능적 정보 및 CT로부터의 해부학적 정보를 순차적으로 제공한다. CT 데이터는 또한 단일 광자 방출 데이터의 신속하고 최적의 감쇠 보정에 사용된다. 비정상적 및/또는 생리학적 추적자 흡수 영역을 정확하게 국소화함으로써, SPECT/CT는 감도 및 특이성을 개선할 뿐만 아니라, 정확한 선량 측정을 달성하고 중재 절차를 가이드하거나 또는 외부 빔 방사선 요법을 위한 표적 부피를 더 잘 정의하는데 보조할 수 있다. 단일 광자 방출 방사성추적자를 사용한 감마 카메라 영상화 (gamma camera imaging)가 대부분의 절차를 나타낸다.
상기 방사성핵종은 테크네튬 (technetium)-99m (99mTc), 갈륨 (gallium)-67 (67Ga), 갈륨 (gallium)-68 (68Ga) 이트륨 (yttrium)-90 (90Y), 인듐 (indium)-111 (111In), 레늄 (rhenium)-186 (186Re), 불소 (fluorine)-18 (18F), 구리 (copper)-64 (64Cu), 테르븀 (terbium)-149 (149Tb) 또는 탈륨 (thallium)-201 (201TI)로 구성된 그룹에서 선택될 수 있다. 방사성핵종은 분자 내에 포함되거나 또는 킬레이트제에 결합될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 미생물 트란스글루타미나제에 의한 항체-링커 접합체의 생성에서 본 발명에 따른 링커 작제물의 용도에 관한 것이다.
즉, 상기 기재된 링커 작제물는 본원에 기재된 항체-링커 접합체의 생성에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 내인성 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)를 포함하는 IgG 항체이다. 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 링커는 본원에 개시된 임의의 반응 조건을 적용함으로써 항체-링커 접합체의 생성에 사용된다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 용도에 관한 것으로서, 여기서 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 용도에 관한 것으로서, 여기서 항체는 폴라투주맙 또는 트라스투주맙 또는 엔포르투맙이다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 약학 조성물에 관한 것으로서, 상기 약학 조성물은
a) 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체; 또는
b) 본 발명에 따른 항체-약물 접합체; 및
적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분을 포함하는 약학 조성물을 포함한다.
상기 약학 조성물은 본원에 개시된 1-단계 또는 2-단계 공정으로 생성된 항체-페이로드 접합체를 포함할 수 있음을 이해해야 한다.
상기 약학 조성물에 포함된 항체-페이로드 구조체에 포함된 페이로드의 타입은 약학 조성물의 용도에 따라 좌우된다. 약학 조성물이 질병 치료를 위해 사용되는 구체예에서, 페이로드는 바람직하게는 약물이다. 질병이 신생물 질환인 경우, 페이로드는 바람직하게는 독소이다. 약학 조성물이 진단에 사용되는 구체예에서, 페이로드는 바람직하게 영상화제이다.
대안적으로, 의약품은 본원에 개시된 항체-약물 접합체를 포함할 수 있다. 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물은 바람직하게는 질병 치료에 사용된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 적어도 하나의 추가적인 치료 활성 물질을 포함하는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분을 포함할 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 성분은 활성 성분 이외에, 대상체에게 무독성인, 약학적 제제 중의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용 가능한 성분은 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 항체-링커 접합체의 약학적 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 이러한 접합체를 하나 이상의 선택적 약학적으로 허용 가능한 성분과 혼합하여 (Flemington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Oslo, A. Ed. (1980)), 동결건조 제제 또는 수성 용액의 형태로 제조된다. 약학적으로 허용 가능한 성분은 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수혜자에게 무독성이며, 하기를 포함하지만 이에 한정되지 않는다: 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물; 킬레이트제 예컨대 EDTA; 당 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예컨대 Zn 단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 본원에서 예시되는 약학적으로 허용 가능한 성분은 간질 약물 분산제 (insterstitial drug dispersion agents) 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는, 특정 예시되는 sHASEGPs 및 사용 방법이 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 개시되어 있다. 예를 들어, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제 예컨대 콘드로이티나제 (chondroitinases)와 조합될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 치료 및/또는 진단에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 대상체의 치료 또는 대상체의 질병 또는 병태를 진단하는데 사용될 수 있다. 개체 또는 대상체는 바람직하게는 포유동물이다. 포유동물에는 가축 (예컨대, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예컨대, 인간 및 비-인간 영장류 예컨대 마카크 (macaques)), 토끼, 및 설치류 (예컨대, 마우스 및 래트)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 소정의 구체예에서, 개체 또는 대상체는 인간이다. 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-링커 접합체를 포함하는 약학 조성물이 치료에 사용되는 경우, 상기 링커는 약물을 포함하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-링커 접합체를 포함하는 약학 조성물이 진단에 사용되는 경우, 상기 링커는 적어도 하나의 영상화제를 포함하는 것이 바람직하다.
특정 구체예에서, 본 발명은 신생물 질환, 신경계 질환, 자가면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을
Figure pct00424
앓고 있고,
Figure pct00425
발병 위험이 있으며, 및/또는
Figure pct00426
진단받은
환자의 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 신생물 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
본원에서 사용된, 용어 "신생물 질환 (neoplastic disease)"은 세포 성장이 제어되지 않고 비정상적인 것을 특징으로 하는 병태를 지칭한다. 신생물 질환에는 암을 포함한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 유방암, 전립선암, 결장암, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 난소암, 경부암 (cervical cancer), 위장관암, 췌장암, 교모세포종, 간암, 방광암, 간암, 결장직장암, 자궁 경부암 (uterine cervical cancer), 자궁내막 암종, 침샘 암종, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 피부암, 흑색종, 뇌암, 난소암, 신경아세포종, 골수종, 다양한 타입의 두경부암, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종 (Ewing sarcoma) 및 말초 신경상피종을 포함한다. 바람직한 암은 간암, 림프종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종 및 말초 신경상피종을 포함한다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 바람직하게는 암 치료에 사용된다. 이와 같이, 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 종양 세포 상에 존재하는 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 소정의 구체예에서, 항원은 종양 세포 표면 상의 항원일 수 있다. 소정의 구체예에서, 종양 세포 표면 상의 항원은 항체-링커 접합체가 항원에 결합 시에 항체-링커 접합체와 함께 세포 내로 내재화될 수 있다.
본 발명에 따른 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 암 치료에 사용되는 경우, 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 결합하는 종양 세포를 사멸시키거나 또는 증식을 억제할 가능성이 있는 적어도 하나의 페이로드를 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 포함하는 것이 바람직하다. 소정의 구체예에서, 적어도 하나의 페이로드는 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 종양 세포 내로 내재화된 후에 이의 세포독성 활성을 나타낸다. 소정의 구체예에서, 적어도 하나의 페이로드는 독소이다.
상기 염증성 질환은 자가면역 질환일 수 있다. 상기 감염성 질환은 박테리아 감염 또는 바이러스 감염일 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 및/또는 약학 조성물이 B-세포 관련 암의 치료에 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 폴라투주맙을 포함하고, 여기서 신생물 질환은 B-세포 관련 암이다.
이를 위해, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체가 본원에 개시된 항-CD79b 항체를 포함하는 것이 바람직하며, 바람직하게는 상기 항-CD79b 항체는 CD79b에 결합 시에 표적 세포로 내재화된다. 소정의 구체예에서, 상기 항-CD79b 항체는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 갖는 폴라투주맙이다. 또한, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물-접합체가 적어도 하나의 독소를 포함하는 것이 바람직하다.
소정의 구체예에서, 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 포함된 항-CD79b 항체는 도 1, 2, 3, 8, 9, 14 또는 15에 도시된 링커들 중 어느 하나 또는 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
B-세포 관련 암은 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다: 고등급, 중간 등급 및 저등급 림프종 (B 세포 림프종, 예를 들어 점막-관련 림프 조직 B 세포 림프종 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 외투 세포 림프종, 버킷 림프종 (Burkitt's lymphoma), 소림프구성 림프종, 변연부 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 및 호지킨 림프종 및 T 세포 림프종 포함) 및 백혈병 (속발성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 예컨대 B 세포 백혈병 (CD5+ B 림프구), 골수성 백혈병 예컨대 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병 (lymphoid leukemia), 예컨대 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 및 골수이형성증 포함), 및 기타 혈액 및/또는 B 세포- 또는 T 세포-관련 암 (추가의 조혈 세포 (다형핵 백혈구, 예컨대 호염기구, 호산구, 호중구 및 단핵구, 수지상 세포, 혈소판, 적혈구 및 자연 살해 세포 포함)의 암 포함). 또한, 하기로부터 선택되는 암성 B 세포 증식 장애를 포함한다: 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL) 공격적 NHL, 재발성 공격적 NHL, 재발성 무통성 NHL, 불응성 NHL, 불응성 무통성 NHL, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소림프구성 림프종, 백혈병, 모발상 세포 백혈병 (HCL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 및 외투 세포 림프종.
특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 상기 B-세포 관련 암은 비-호지킨 림프종이고, 구체적으로 상기 B-세포 관련 암은 미만성 거대 B-세포 림프종이다.
또한, 항-CD79b 항체-링커 접합체, 항-CD79b 항체-약물 접합체, 및/또는 항-CD79b 항체-링커 접합체 또는 항-CD79b 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물이 B-세포 관련 암 치료에 적합한 다른 요법과 함께 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 벤다무스틴 및/또는 리툭시맙과 조합하여 투여된다.
상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 추가의 치료제 예컨대 벤다무스틴 및/또는 리툭시맙과 반드시 동시에 투여될 필요는 없음을 이해해야 한다. 대신에 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 상이한 투여 일정으로 투여될 수 있고, 결과적으로 동일한 질병의 치료에 사용되는 다른 치료제와 다른 날에 투여될 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물-접합체 및/또는 약학 조성물은 HER2-포지티브 암의 치료에 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 트라스투주맙을 포함하고, 여기서 신생물 질환은 HER2-포지티브 암, 구체적으로 HER2-포지티브 유방암, 위암, 난소암 또는 폐암이다.
이를 위해, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 본원에 개시된 항-HER2/neu 항체를 포함하는 것이 바람직하고, 바람직하게는 상기 항-HER2/neu 항체는 HER2/neu에 결합 시에 표적 세포 내로 내재화된다. 소정의 구체예에서, 상기 항-HER2/neu 항체는 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 갖는 트라스투주맙이다. 또한, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물-접합체는 적어도 하나의 독소를 포함하는 것이 바람직하다.
소정의 구체예에서, 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 포함된 항-HER2/neu 항체는 도 1, 2, 3, 8, 9, 14 또는 15에 도시된 링커들 중 어느 하나 또는 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
본원에서 사용된 HER2-포지티브 암은 제한 없이 HER2-포지티브 유방암, 위암, 난소암 또는 폐암일 수 있다. 당업자는 암이 HER2-포지티브 암인지 여부를 결정할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 생검에서 단리될 수 있고, HER2/neu의 존재는 당해 기술 분야에 알려진 임의의 방법으로 결정될 수 있다.
또한, 항-HER2/neu 항체-링커 접합체, 항-HER2/neu 항체-약물 접합체, 및/또는 항-HER2/neu 항체-링커 접합체 또는 항-HER2/neu 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물이 HER2-포지티브 암 치료에 적합한 다른 요법과 함께 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 라파티닙, 카페시타빈 및/또는 탁산과 조합하여 투여된다.
상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 추가의 치료제 예컨대 라파티닙, 카페시타빈 및/또는 탁산과 반드시 동시에 투여될 필요는 없음을 이해해야 한다. 대신에 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 상이한 투여 일정으로 투여될 수 있고, 결과적으로 동일한 질병의 치료에 사용되는 다른 치료제와 다른 날에 투여될 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물-접합체 및/또는 약학 조성물은 Nectin-4-포지티브 암의 치료에 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 엔포르투맙 또는 엔포르투맙 변이체를 포함하고, 여기서 신생물 질환은 Nectin-4 포지티브 암, 구체적으로 Nectin-4 포지티브 췌장암, 폐암, 방광암 또는 유방암이다.
이를 위해, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 본원에 개시된 항-Nectin-4 항체를 포함하는 것이 바람직하고, 바람직하게는 상기 항-Nectin-4 항체는 Nectin-4에 결합 시에 표적 세포 내로 내재화된다. 소정의 구체예에서, 상기 항-Nectin-4 항체는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10에 제시된 경쇄를 갖는 엔포르투맙이다. 또한, 상기 항체-링커 접합체 또는 항체-약물-접합체는 적어도 하나의 독소를 포함하는 것이 바람직하다.
소정의 구체예에서, 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 포함된 항-Nectin-4 항체는 도 1, 2, 3, 8, 9, 14 또는 15에 도시된 링커들 중 어느 하나 또는 본원에 개시된 링커들 중 어느 하나에 접합될 수 있다.
본원에서 사용된 Nectin-4-포지티브 암은 제한 없이 Nectin-4-포지티브 췌장암, 폐암, 방광암 또는 유방암일 수 있다. 당업자는 암이 Nectin-4-포지티브 암인지 여부를 결정할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 생검에서 단리될 수 있고, Nectin-4의 존재는 당해 기술 분야에 알려진 임의의 방법으로 결정될 수 있다.
또한, 항-Nectin-4 항체-링커 접합체, 항-Nectin-4 항체-약물 접합체, 및/또는 항-Nectin-4 항체-링커 접합체 또는 항-Nectin-4 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 조성물이 Nectin-4-포지티브 암 치료에 적합한 다른 요법과 함께 사용될 수 있다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 여기서 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 시스플라틴-기반 화학요법제 및/또는 펨브롤리주맙과 조합하여 투여된다.
상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 추가의 치료제 예컨대 시스플라틴-기반 화학요법제 및/또는 펨브롤리주맙과 반드시 동시에 투여될 필요는 없음을 이해해야 한다. 대신에 상기 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 상이한 투여 일정으로 투여될 수 있고, 결과적으로 동일한 질병의 치료에 사용되는 다른 치료제와 다른 날에 투여될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 신생물 질환, 신경계 질환, 자가면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을
Figure pct00427
앓고 있고,
Figure pct00428
발병 위험이 있으며, 및/또는
Figure pct00429
진단받은
환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 신생물 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 수술 전, 수술 중 또는 수술 후 영상화에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
즉, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 의료 영상화에 사용될 수 있다. 이를 위해, 항체-링커 접합체는 특정 표적 분자, 세포 또는 조직에 결합하면서 시각화될 수 있다. 특정 페이로드를 시각화하기 위한 다양한 기술이 당해 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 페이로드가 방사성핵종인 경우, 항체-링커 접합체가 결합하는 분자, 세포 또는 조직은 PET 또는 SPECT로 시각화될 수 있다. 페이로드가 형광 염료인 경우, 항체-링커 접합체가 결합하는 분자, 세포 또는 조직은 형광 영상화로 시각화될 수 있다. 소정의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체는 2개의 상이한 페이로드, 예를 들어 방사성핵종 및 형광 염료를 포함한다. 이러한 경우에, 항체-링커 접합체가 결합하는 분자, 세포 또는 조직은 2가지의 상이하고 및/또는 보완적인 영상화 기술, 예를 들어 PET/SPECT 및 형광 영상화를 사용하여 시각화될 수 있다.
항체-링커 접합체는 수술 전, 수술 중 및/또는 수술 후 영상화에 사용될 수 있다.
수술 전 영상화 (pre-operative imaging)는 특정 질병 또는 병태를 진단하는 경우 특정 표적 분자, 세포 또는 조직을 시각화하여 선택적으로 수술을 위한 가이드를 제공하기 위해, 수술 전에 수행할 수 있는 모든 영상화 기술을 포함한다. 수술 전 영상화는 종양 상의 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하고 방사성핵종을 포함하는 페이로드에 접합된 항체-링커 접합체를 사용하여 수술이 수행되기 전에 PET 또는 SPECT로 종양을 시각화하는 단계를 포함할 수 있다.
수술 중 영상화 (intra-operative imaging)는 특정 표적 분자, 세포 또는 조직을 시각화하여 수술을 위한 가이드를 제공하기 위해 수술 중에 수행할 수 있는 모든 영상화 기술을 포함한다. 소정의 구체예에서, 근적외선 형광 염료를 포함하는 항체-링커 접합체는 근적외선 형광 영상화에 의해 수술 중에 종양을 시각화하는데 사용될 수 있다. 수술 중 영상화를 통해 외과의는 수술 중 특정 조직, 예를 들어 종양 조직을 확인할 수 있으므로, 종양 조직을 완전히 제거할 수 있다.
수술 후 영상화 (post-operative imaging)는 특정 표적 분자, 세포 또는 조직을 시각화하고 수술 결과를 평가하기 위해 수술 후 수행할 수 있는 모든 영상화 기술을 포함한다. 수술 후 영상화는 수술 전 영상화와 유사하게 수행할 수 있다.
소정의 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 상이한 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체에 관한 것이다. 예를 들어, 항체-링커 접합체는 방사성핵종 및 근적외선 형광 염료를 포함할 수 있다. 이러한 항체-페이로드 접합체는 PET/SPECT에 의한 영상화 및 근적외선 형광 영상화에 사용될 수 있다. 이러한 항체의 이점은 수술 전후에 PET 또는 SPECT에 의해 표적 조직, 예를 들어 종양을 시각화하는데 사용될 수 있다는 것이다. 동시에, 수술 중에 근적외선 형광 영상화에 의해 종양을 시각화할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명은 수술 중 영상-가이드 암 수술 (intraoperative imaging-guided cancer surgery)에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 항체-링커 접합체는 표적 분자, 세포 또는 조직을 시각화하고 수술 중에 외과의 또는 로봇을 가이드하는데 사용될 수 있다. 즉, 항체-링커 접합체를 사용하여 수술 중에 예를 들어 근적외선 영상화에 의해 종양 조직을 시각화하고 종양 조직의 완전한 제거를 가능하게 할 수 있다.
본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 질병을 효율적으로 치료하거나 또는 진단 목적에 충분한 양 또는 투여량으로 인간 또는 동물 대상체에게 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적절한 수단에 의해 투여할 수 있고, 국소 치료를 목적하는 경우, 병변내 (intralesional), 자궁내 (intrauterine) 또는 방광내 (intravesical) 투여를 포함할 수 있다. 비경구 주입 (parenteral infusions)은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투약 (dosing)은 부분적으로 투여가 단기적 또는 장기적인지에 따라, 임의의 적절한 경로, 예를 들어 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의해 수행할 수 있다. 단일 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여, 및 펄스 주입을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 투약 일정이 본원에서 고려된다.
본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 본 발명의 방식이 우수한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 수 있는 것과 같이 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려해야 할 요인에는 치료할 특정 장애, 치료할 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의료 실무자에게 알려진 다른 요인을 포함한다. 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물은 선택적으로 해당 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 제제화되며, 반드시 그럴 필요는 없다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제제에 존재하는 항체-링커 접합체의 양, 장애 또는 치료의 타입, 및 상기에서 논의된 다른 요인에 따라 좌우된다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%, 또는 실증적으로/임상적으로 적절하다고 결정된 임의의 투여량 및 임의의 경로로 사용된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물의 적절한 투여량 (단독으로 또는 하나 이상의 다른 추가 치료제와 조합하여 사용되는 경우)은 치료할 질병의 타입, 항체-페이로드 접합체의 타입, 질병의 중증도 및 경과, 항체-링커 접합체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 환자의 임상 병력 및 항체-링커 접합체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 좌우될 것이다. 본 발명에 따른 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체 또는 약학 조성물이 환자에게 한 번에 또는 일련의 치료로 적절하게 투여된다.
도 1은 본 발명에 따른 RKAA-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 2는 본 발명에 따른 RKA-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKA 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 3은 본 발명에 따른 ARK-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-ARK 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 4는 (본 발명에 따르지 않는) KRA-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-KRA 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 5는 (본 발명에 따르지 않는) AKR-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-AKR 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 6은 (본 발명에 따르지 않는) KAAR-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-KAAR 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 7은 (본 발명에 따르지 않는) KARA-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-KARA 펩티드는 PABC 및 MMAE에 공유결합으로 연결된다.
도 8은 본 발명에 따른 RKAA-메이탄신 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 PABC 및 메이탄신에 공유결합으로 연결된다.
도 9는 본 발명에 따른 메이탄신-RKR 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 메이탄신이 RKR 펩티드 (C-말단 아미드 보호기를 가짐)에 연결된 C4-알킬-아미드 스페이서에 공유결합으로 연결된다.
도 10은 본 발명의 항체-약물 접합체 ARA-01-RKAA-PABC-MMAE의 크기 배제 크로마토그램 (SEC)을 보여준다.
도 11은 3개의 상이한 CD79b 과발현 세포주 (a-c) 및 CD79b 비-발현 세포주 (d)에 대한 본 발명의 항체-약물 접합체 ARA-01-RKAA-PABC-MMAE의 용량-의존적 인 비트로 세포독성 효과의 결과를 도시한다.
도 12는 폴라투주맙 (서열 번호: 5 및 6), 본 발명의 항체-약물 접합체 (ARA01-RKAA-PABC-MMAE) 및 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®)을 CD1 Swiss 마우스에게 5 mg/kg의 단일 i.v. 주사 후에 상이한 시점에서 이들의 혈장 농도를 보여준다. 혈장내 농도는 ELISA로 결정하였다. 5마리의 마우스의 평균 혈장 농도를 시간에 대해 플로팅하고, 오차 막대는 평균의 표준 오차 (SEM)를 나타낸다. 도 12에서 약어 ARA01-RKAA-MMAE는 항체-약물 접합체 ARA01-RKAA-PABC-MMAE를 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
도 13은 1-단계 접합 공정을 개략적으로 보여준다.
도 14는 본 발명에 따른 ARK-PEG2-PABC-MMAE 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-ARK 펩티드는 PEG2 스페이서 및 PABC-MMAE 페이로드에 공유결합으로 연결된다.
도 15는 본 발명에 따른 ARK-PEG2-(NH)-(CH3)-S-C4-메이탄신 링커-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-ARK 펩티드는 PEG2-(NH)-(CH3)-S-C4 알킬 스페이서 및 메이탄신 페이로드에 공유결합으로 연결된다.
도 16은 Granta 519 마우스 종양 모델을 도시한다. 인간 B-세포 림프종-종양 세포 (Granta 519)를 CB17 SCID 마우스에 피하로 접종하였다 (치료 그룹 당 n=8). 종양의 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 상기 동물에게 0.53 mg/kg 또는 2.1 mg/kg 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®), 및 0.53 mg/kg, 1 mg/kg 또는 2.1 mg/kg의 ARA01-RKAA-PABC-MMAE를 단일 주사하였다. ARA01-RKAA-PABC-MMAE는 폴라투주맙-베도틴에 비해 페이로드 용량의 약 절반으로 동등한 종양 성장 억제 및 생존을 제공하였다 (도 16a, 및 도 16b에서 0.53 mg/kg 용량). 폴라투주맙-베도틴에 비해 대략 동일한 페이로드 용량에서, ARA01-RKAA-PABC-MMAE 치료는 더 큰 항종양 효능 및 상당한 생존 이점을 유도하였고, 여기서 폴라투주맙-베도틴의 완전 종양 관해 0/8에 비해 완전 종양 관해 6/8을 갖는다 (도 16b에서 0.53 mg/kg 용량의 폴라투주맙-베도틴 및 1 mg/kg 용량의 ARA01-RKAA-PABC-MMAE의 비교). 평균 종양 부피는 ± 평균의 표준 오차 (SEM)로 표시된다.
도 17은 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 엑사테칸 유도체 Dxd에 자기-희생 메틸 아민 링커를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 18은 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 페이로드 PNU-159682에 자기-희생 모이어티 PABC-EDA를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 19는 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 페이로드 두오카르마이신 GA에 자기-희생 모이어티 PABC-EDA를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 20은 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 페이로드 PBD에 자기-희생 모이어티 PABE를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 21은 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 페이로드 메이탄신에 자기-희생 메틸 아민 링커 및 추가의 알킬 링커 분자를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 22는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKR 펩티드는 페이로드 MMAE에 직접 커플링된다.
도 23은 본 발명에 따른 RKAA-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 N-말단 보호된 Ac-RKAA 펩티드는 페이로드 두오카르마이신 GA에 자기-희생 파라-메틸 아닐린 (PMA) 모이어티를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 24는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 PNU-159682에 카바메이트를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 25는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 PNU-159682에 자기-희생 모이어티 OHPAS-PHB-EDA 및 추가의 (PEG)2 모이어티를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 26은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 PBD에 자기-희생 모이어티 OHPAS 및 추가의 (PEG)2 모이어티를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 27은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 PBD에 자기-희생 모이어티 OHPAS를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 28은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 DM21에 직접 커플링된다.
도 29는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 DM4에 카복실 기 및 티올 기를 포함하는 알킬 링커 분자를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 30은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 MMAE에 디카복실산 링커 분자를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 31은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 MMAE에 자기-희생 모이어티 OHPAS-PHB 및 추가의 (PEG)2 모이어티를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 32는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 MMAE에 자기-희생 모이어티 OHPAS-PHB를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 33은 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 두오카르마이신 GA에 자기-희생 모이어티 OHPAS-4차 암모늄 및 추가의 (PEG)2 모이어티를 통해 공유결합으로 연결된다.
도 34는 본 발명에 따른 RKR-페이로드 복합체의 화학적 구조를 나타내며, 여기서 C-말단 보호된 RKR-아미드 펩티드는 페이로드 두오카르마이신 GA에 자기-희생 모이어티 OHPAS-4차 암모늄을 통해 공유결합으로 연결된다.
도 35는 HER2-포지티브 세포주 SKBR-3에 대한 본 발명의 항체-약물 접합체 트라스투주맙-RKAA-PABC-MMAE 또는 트라스투주맙-RKAA-PABC-메이탄신의 용량-의존적 인 비트로 세포독성 효과의 결과를 도시한다.
도 36은 CD79b-포지티브 세포주 Granta-519에 대한 본 발명의 항-CD79b 항체-약물 접합체 ARA01-ARK-PABC-MMAE, ARA01-RKA-PABC-MMAE 및 ARA01-RKValCit-PABC-MMAE의 용량-의존적 인 비트로 세포독성 효과의 결과를 도시한다.
도 37은 Nectin-4-포지티브 세포주 SUM190PT에 대한 본 발명의 항-Nectin-4 항체-약물 접합체 ARA04-RKAA-PABC-MMAE, ARA04-ARK-PABC-MMAE, ARA04-RKA-PABC-MMAE 및 ARA04-RKValCit-PABC-MMAE의 용량-의존적 인 비트로 세포독성 효과의 결과를 도시한다.
도 38은 Nectin-4-네가티브 세포주 A549에 대한 본 발명의 항-Nectin-4 항체-약물 접합체 ARA04-RKAA-PABC-MMAE, ARA04-ARK-PABC-MMAE, ARA04-RKA-PABC-MMAE 및 ARA04-RKValCit-PABC-MMAE의 용량-의존적 인 비트로 세포독성 효과의 결과를 도시한다.
도 39는 폴라투주맙/ARA01 (서열 번호: 5 및 6) 본 발명의 항체-약물 접합체 (ARA01-ARK-PABC-MMAE, ARA01-RKA-PABC-MMAE, ARA01-RKValCit-PABC-MMAE) 및 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®)을 CD1 Swiss 마우스에게 5 mg/kg의 단일 i.v. 주사 후에 상이한 시점에서 이들의 혈장 농도를 보여준다. 혈장내 ADC 농도는 ELISA로 결정하였다. 5마리의 마우스의 평균 혈장 농도를 시간에 대해 플로팅하고, 오차 막대는 평균의 표준 오차 (SEM)를 나타낸다. 도 39에서 약어 ARA01-ARK/RKA/RKValCit-PABC-MMAE는 항체-약물 접합체 ARA01-ARK/RKA/RKValCit-PABC-MMAE를 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
도 40은 엔포르투맙/ARA04 (서열 번호: 9 및 11) 본 발명의 항체-약물 접합체 (ARA04-RKAA-PABC-MMAE, ARA04-ARK-PABC-MMAE, ARA04-RKA-PABC-MMAE, ARA04-RKValCit-PABC-MMAE) 및 엔포르투맙-베도틴 (Padcev®)을 CD1 Swiss 마우스에게 5 mg/kg의 단일 i.v. 주사 후에 상이한 시점에서 이들의 혈장 농도를 보여준다. 혈장내 ADC 농도는 ELISA로 결정하였다. 5마리의 마우스의 평균 혈장 농도를 시간에 대해 플로팅하고, 오차 막대는 평균의 표준 오차 (SEM)를 나타낸다. 도 40에서 약어 ARA04-ARK/RKA/RKValCit-PABC-MMAE는 항체-약물 접합체 ARA04-ARK/RKA/RKValCit-PABC-MMAE를 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
도 41은 Ramos 마우스 종양 모델을 도시한다. 인간 Burkitt 림프종-종양 세포 (Ramos)를 CB17 SCID 마우스에게 피하로 접종하였다 (치료 그룹 당 n=6). 종양의 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 상기 동물에게 1.43 mg/kg 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®) 또는 1.25 mg/kg (폴라투주맙 베도틴에 대해 조정된 페이로드 용량) ARA01-RKAA-PABC-MMAE 또는 ARA01-ARK-PABC-MMAE를 단일 주사하였다. 본 발명의 ADC 모두는 폴라투주맙-베도틴에 비해 약 절반의 페이로드 용량으로 동등한 종양 성장 억제 및 생존 및 장기-지속 항-종양 반응을 제공하였다. 대조적으로, 동일한 페이로드 용량으로 투여된 폴라투주맙 베도틴은 일시적인 종양 제거만을 보여주었다. 평균 종양 부피는 ± 평균의 표준 오차 (SEM)로 표시된다.
도 42는 SUM190PT 마우스 종양 모델을 도시한다. 유방암-종양 세포 (SUM190PT)를 CB17 SCID 마우스의 유선 지방체 (mammary fatpat)에 접종하였다 (치료 그룹 당 n=6). 종양의 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 상기 동물에게 1.5 mg/kg 엔포르투맙-베도틴 (Padcev®) 또는 3 mg/kg (엔포르투맙 베도틴에 대해 조정된 페이로드 용량) ARA04-RKAA-PABC-MMAE 또는 ARA04-ARK-PABC-MMAE 각각을 단일 주사하였다. 본 발명의 ADC 모두는 엔포르투맙-베도틴과 동일한 페이로드 용량으로 103일 동안 완전하고 장기-지속 항-종양 반응을 제공하였다. 대조적으로, 동일한 페이로드 용량으로 투여된 엔포르투맙 베도틴은 일시적인 항-종양 반응을 보여주었다. 도 42 및 43을 보면, 본 발명의 ADC인 ARA04-RKAA-PABC-MMAE 또는 ARA04-ARK-PABC-MMAE는 페이로드 용량의 1/4 (=4-배 적게) 만을 투여한 경우에도 우수한 효능을 보여주는 것이 명백하였다. 비-결합 mAb-RKAA-PABC-MMAE는 종양 성장에 어떠한 효과도 보여주지 않았다. 평균 종양 부피는 ± 평균의 표준 오차 (SEM)로 표시된다.
도 43은 SUM190PT 마우스 종양 모델을 도시한다. 유방암-종양 세포 (SUM190PT)를 CB17 SCID 마우스의 유선 지방체에 접종하였다 (치료 그룹 당 n=6). 종양의 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 상기 동물에게 0.5 mg/kg 엔포르투맙-베도틴 (Padcev®) 또는 1 mg/kg (엔포르투맙 베도틴에 대해 조정된 페이로드 용량) ARA04-RKAA-PABC-MMAE 또는 ARA04-ARK-PABC-MMAE를 단일 주사하였다. 본 발명의 ADC 모두는 엔포르투맙-베도틴과 동일한 페이로드 용량으로 103일 동안 완전하고 장기-지속 항-종양 반응을 제공하였다. 대조적으로, 동일한 페이로드 용량으로 투여된 엔포르투맙-베도틴은 경미한 종양-성장 지연만을 초래하였다. 평균 종양 부피는 ± 평균의 표준 오차 (SEM)로 표시된다.
실시예
실시예 1: 2개의 상이한 항체에 대한 펩티드-MMAE 링커의 접합
방법
항체 트라스투주맙 (Herceptin®, Roche, 약국에서 구입) 뿐만 아니라 모든 링커-페이로드 구조체 (Levena Biopharma에서 맞춤 합성)는 상업적으로 이용 가능하였다. 서열 번호: 5 및 6의 서열로 구성된 중쇄 및 경쇄를 갖는 폴라투주맙을 현탁액-적응된 CHO-K1 세포에 일시적으로 형질감염시키고, 무-혈청/동물 성분 무함유 배지에서 발현시켰다. 단백질 A 친화도 크로마토그래피 (Mab Select Sure column; GE Healthcare)에 의해 상등액으로부터 단백질을 정제하였다.
1-단계 접합을 위해 (도 13 참조), 50 mM Tris pH 7.6 중 네이티브, 글리코실화 모노클로날 항체 5 mg/mL, 50 mM Tris pH 7.6 또는 물 중 5 U/mg 농도의 미생물 트란스글루타미나제 (MTG, Zedira), 및 표시된 링커-페이로드 5 몰 당량을 사용하고, 회전 열혼합기 (rotating thermomixer)에서 37℃로 24시간 동안 인큐베이션하였다. 접합 효율은 DTT 환원 조건하에 LC-MS로 평가하였다. 50 mM DTT/50 mM Tris 버퍼에서 37℃로 10분 동안 항체-약물-접합체 (ADC)를 인큐베이션하여 샘플의 환원을 달성하였다. Acquity UPLC H-Class System (Waters) 및 ACQUITY UPLC BEH C18 컬럼에 커플링된 Xevo G2-XS QTOF (Waters)에서 프로브를 분석하였다. 접합 효율은 디컨볼루션된 스펙트럼 (deconvoluted spectra)으로부터 계산하였고, % 링커-페이로드 접합된 항체 (=ADC)로 제시하였다. 총 접합 효율의 계산을 위해 2개의 글리코형 (glycoforms) (G1F 및 G0F)으로부터 생성된 세기를 고려하였고, 즉
총 접합 효율 (%) = 총 세기 - 비-접합된 항체의 세기 %,
상기는 하기 식을 유도한다:
접합 효율 (%) = 100 * (1 - (세기 (G1F) + 세기 (G0F)) / 총 세기))
결과
접합 효율은 링커 구조 및 사용된 항체에 따라 다르지만, 그러나 리신 함유 펩티드 링커가 RK 모티프를 포함한 경우 접합 효율이 최고인 것을 관찰할 수 있었다 (표 3 및 4).
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 복합체의 접합 효율이 제시된다.
링커-페이로드
(본 발명에 따름)		 항체 트라스투주맙에 대한 접합 효율 (%) 항체 폴라투주맙에 대한 접합 효율 (%)
RKAA-MMAE (도 1) 100% 89%
RKA-MMAE (도 2) 100% 93%
ARK-MMAE (도 3) 100% 94%
(본 발명에 따르지 않는) 링커-페이로드 복합체의 접합 효율이 제시된다.
링커-페이로드
(본 발명에 따르지 않음)		 항체 트라스투주맙에 대한 접합 효율 (%) 항체 폴라투주맙에 대한 접합 효율 (%)
KRA-MMAE (도 4) (서열 번호: 50) 43% 49%
AKR-MMAE (도 5) (서열 번호: 51) 68% 27%
KAAR-MMAE (도 6) (서열 번호: 52) 64% 28%
KARA-MMAE (도 7) (서열 번호: 53) 77% 65%
실시예 2: 2개의 상이한 항체에 대한 펩티드-메이탄신의 접합
높은 접합 효율이 다른 페이로드, 즉 MMAE 이외의 페이로드로도 달성될 수 있음을 입증하기 위해, 메이탄신 함유 링커-페이로드 구조체를 2개의 상이한 항체에 대한 접합에 사용하였다.
방법
접합은 실시예 1에 기재된 것과 정확히 동일한 방식으로 수행하였다. 해당하는 메이탄신-링커 작제물는 Levena Biopharm에서 맞춤 합성하였다.
결과
MMAE와 다른 페이로드로, 본 실시예에서 메이탄신을 사용하는 경우, 리신 함유 펩티드 링커가 RK 모티프를 포함한 경우 접합 효율이 또한 매우 높았다 (표 4). 본 실시예는 리신 함유 펩티드 링커가 RK 모티프를 포함하는 경우 페이로드에 관계없이 접합 효율이 높은 것을 보여준다.
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 복합체의 접합 효율이 제시된다.
링커-페이로드
(본 발명에 따름)		 항체 트라스투주맙에 대한 접합 효율 (%) 항체 폴라투주맙에 대한 접합 효율 (%)
RKAA-메이탄신 (도 8) 92% 82%
메이탄신-RKR (도 9) 96% 95%
실시예 3: 제3 항체에 대한 (본 발명에 따른) 링커-페이로드의 접합
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 구조체로 수득된 높은 접합 효율을 추가로 입증하기 위해, 제3 항체를 선택하여 고효율로 성공적으로 접합시켰다 (2개의 상이한 페이로드에 대해, 보편적 적용 가능성을 추가로 입증함).
방법
접합은 실시예 1에 기재된 것과 정확히 동일한 방식으로 수행하였다. 서열 번호: 9의 서열로 구성된 중쇄 및 서열 번호: 10의 서열로 구성된 경쇄 변이체를 갖는 항체 엔포르투맙을 현탁액-적응된 CHO-K1 세포에 일시적으로 형질감염시키고, 무-혈청/동물 성분 무함유 배지에서 발현시켰다. 단백질 A 친화도 크로마토그래피 (Mab Select Sure column; GE Healthcare)에 의해 상등액으로부터 단백질을 정제하였다.
결과
본 발명에 따른 2개의 상이한 링커-페이로드 구조체를 사용하여 항체 엔포르투맙과 높은 접합 효율을 수득하였다.
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 복합체의 접합 효율이 제시된다.
링커-페이로드
(본 발명에 따름)		 항체 엔포르투맙에 대한 접합 효율 (%)
RKAA-MMAE (도 1) 91%
RKAA-메이탄신 (도 8) 97%
실시예 4: 비-아미노산 스페이서를 포함하는 (본 발명에 따른) 링커-페이로드의 접합
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 구조체로 수득된 높은 접합 효율을 추가로 입증하기 위해, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 스페이서를 갖는 링커를 사용하여, 2개의 상이한 항체에 고효율로 접합시켰다.
방법
접합은 실시예 1에 기재된 것과 정확히 동일한 방식으로 수행하였다. 모든 링커-페이로드 구조체는 Levena Biopharma에서 맞춤 합성하였다.
결과
PEG 스페이서를 포함하는 (본 발명에 따른) 링커-페이로드와 2개의 상이한 항체에 대한 높은 접합 효율을 수득하였다.
(본 발명에 따른) 링커-페이로드 복합체의 접합 효율이 제시된다.
링커-페이로드
(본 발명에 따름)		 항체 트라스투주맙에 대한 접합 효율 (%) 항체 폴라투주맙에 대한 접합 효율 (%)
ARK-PEG2-PABC-MMAE (도 14) 99% 92%
ARK-PEG2-S-C4-메이탄신 (도 15) 99% 90%
실시예 5: 본 발명의 ADC는 모노머이고, 응집되지 않는다.
링커-페이로드 RKAA-PABC-MMAE (도 1)를 상기 실시예 1에 기재된 항체 폴라투주맙 (서열 번호: 5 및 6)에 접합시켰다. 생성된 ADC로 ARA-01-RKAA-PABC-MMAE는 크기 배제 크로마토그래피로 분석하여 DAR (drug-to-antibody ratio) 1.9를 가졌다 (기본적으로 Richard Y.C. Huang and Guodong Chen (2016) Characterization of antibody-drug conjugates by mass spectrometry: advances and future trends, Drug Discover Today Volume 21, Number 5에 기재된 표준 질량 분광분석 방법을 사용하여 결정됨).
방법
SuperdexTM 200 Increase 10/300 (Amersham Pharmacia Biotech) 컬럼을 구비한 AKTA FPLC (Amersham Pharmacia Biotech)를 사용하여 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 수행하였다. 단백질은 280 nm의 파장에서 UV/VIS로 검출하였다. 샘플을 50 mM 포스페이트, 100 mM NaCl, pH 7.4 러닝 버퍼 (running buffer)에서 1 mL/분의 유속으로 분석하였다.
결과
정제 후에 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 프로파일로부터, ARA-01-RKAA-MMAE가 단일 모노머 피크로 용출되는 것으로 나타났고, 이는 ADC가 우수한 생물물리학적 특성을 가지고 있음을 보여준다 (도 10).
실시예 6: 본 발명의 ADC는 강력한 인 비트로 항-종양 효과를 보여준다.
방법
ARA01-RKAA-PABC-MMAE의 성장 억제 효과를 하기 3개의 CD79b 과발현 세포주에서 인 비트로 조사하였다: Granta-519 (DSMZ, Acc No: 342), BJAB (CLS) 및 WSU-DLCL2 (DSMZ, ACC 575). 네가티브 대조군으로서, CD79 네가티브 세포주 HT (ATCC, Ref: CRL-2260)를 사용하였다. 4000개의 세포를 96-웰 배양 플레이트에 시딩하고, ARA-01-RKAA-PABC-MMAE와 함께 가습 챔버 및 5% CO2에서 37℃로 72시간 동안 인큐베이션하였다.
처리된 배양물의 생존율은 공급자 (Promega)가 설명한 바와 같이 CellTiterGloLuminescence 분석에서 ATP-정량화에 의해 결정하였다. 비-처리된 세포에 대한 % 생존율은 하기 식에 따라 계산하였다:
Figure pct00430
평균 % 생존율을 log10(농도)에 대해 플로팅하고, 생성된 용량-반응 곡선은 4개의 파라미터 용량-반응 곡선 방정식을 사용하여, 소프트웨어 Prism8로 비선형 회귀로 분석하였다.
결과
도 11은 ARA01-RKAA-PABC-MMAE가 기존의 ADC에 필적하는 EC50 값으로 CD79b 과발현 세포에 대해 매우 높은 세포독성 활성을 갖는 것을 보여준다. 예상된 바와 같이, HT 세포주에서 기본적으로 세포 생존율이 감소하지 않기 때문에, 세포독성 활성은 CD79b 과발현 세포에 대해 매우 선택적이었다. 요약하면, ARA01-RKAA-PABC-MMAE는 인 비트로 항원-특이적, 유의미한 항-증식 활성을 보여주었다.
실시예 7: 본 발명의 ADC는 유리한 인 비보 약동학적 파라미터를 보여준다.
본 발명에 따른 항-CD79b ADC인 ARA01-RKAA-MMAE의 약동학적 프로파일을 마우스에서 조사하고, 상업적으로 이용 가능한 항-CD79b ADC 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®)과 비교하였다. 폴라투주맙-베도틴은 항-CD79b 항체 폴라투주맙으로 구성된 ADC이며, 여기서 MMAE는 항체의 시스테인에 접합되어, 항체당 평균 3.5개의 MMAE 모이어티가 연결되었다 (European Medicines Agency, Assessment Report on Polivy®, Procedure number: EMEA/H/C/004879/0000, https://www.ema.europa.eu/en/medicines/human/ EPAR/polivy 참조).
방법
ARA01-RKAA-PABC-MMAE (상기 실시예 5에 기재된 바와 같이 자체 생성됨), Polivy® (Roche, 약국에서 구입) 및 네이키드 (naked) 항-CD79b 항체 폴라투주맙 (서열 번호: 5 및 6; 상기 기재된 바와 같이 발현 및 정제됨)을 각각 5 mg/kg의 ADC 또는 항체의 용량으로 5마리의 암컷 마우스 (CD1 Swiss, Janvier)에게 정맥내로 주사하였다. 10분, 5.5, 24, 48, 96, 144, 168 및 360시간 후에, 약 20 μl의 혈액을 복재 정맥 (vena saphena)으로부터 EDTA-코팅된 Microvettes CB 300 (Sarstedt)으로 채혈하였다. 혈액 샘플을 9500 xg로 10분 동안 원심분리하고, 혈장을 ELISA 분석을 수행할 때까지 -80℃에서 보관하였다. 해당하는 샘플의 알려진 농도를 갖는 일련의 희석물을 사용하여, 포획제 (capturing agent)로서 His-태그된 인간 CD79b를 사용하는 ELISA로 혈장내 농도를 결정하였다: PBS에서 희석시킨 HisCD79b (SinoBiological, Ref.: 29750-H08H) 125 ng을 니켈 플레이트 (Ni-NTA HisSorb, Qiagen)에 부가하였고, 200 μl PBS, 4% 우유 (Rapilait, Migros, Switzerland)로 차단시킨 후에, 50 μl의 희석시킨 혈장 샘플 (PBS, 4% 우유 중)을 부가하였다. 1시간 동안 인큐베이션하고 PBS로 세척한 후에, 당나귀-항-인간 (donkey-anti-human) IgG-HRP (Biolegend, Poly24109)를 웰에 부가하여 전체 항체를 검출하거나, 또는 전체 ADC 검출을 위해, 토끼 항-MMAE 항체 (Levena, Ref: LEV-PAE1)를 실온에서 추가 1시간 동안 부가하고, 세척하고, 항-토끼 IgG-HRP를 통해 검출하였다. 퍼옥시다제 활성은 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (Sigma)을 부가하여 검출하였고, 산을 부가하여 정지시켰다. 판독값은 450 nm에서 1 내지 5분 후에 측정하였다. 주사 후에 상이한 시점들에서 ELISA에 의해 결정된 혈장 중 샘플의 농도 및 제거 단계 (시점 24h-360h)의 생성된 기울기 k (반-대수 스케일 (semi-logarithmic scale)로 플로팅됨)로부터, 샘플의 반감기 (t1/2)는 식 t1/2 = ln2/-k를 사용하여 계산하였다.
결과
주사 후에 상이한 시점들에서 채취한 샘플에서 측정된 혈장 농도는 도 12에 도시되어 있다. ARA01-RKAA-PABC-MMAE 및 Polivy®의 반감기는 하기 표 8에 제시되어 있다. 본 발명에 따른 ADC인 ARA01-RKAA-PABC-MMAE는 승인된 ADC Polivy®보다 인 비보에서 적어도 2배 더 긴 반감기를 갖는 것을 볼 수 있다. 혈장내 안정성 개선은 페이로드가 조기에 방출되지 않는 것처럼 보이기 때문에 더 나은 안전성 프로파일 (safety profile)을 유도할 수 있다.
혈장 반감기
구조체 반감기 (t 1/2 ), 시간
폴라투주맙 (서열 번호: 5 및 6), 네이키드 항체 385
ARA01-RKAA-MMAE, 온전한 ADC 248
폴라투주맙-베도틴 (Polivy®), 온전한 ADC 120
실시예 8: 본 발명의 항-CD79b ADC는 승인된 항-CD79b ADC 폴라투주맙-베도틴보다 더 효율적으로 인 비보에서 종양 성장을 억제한다.
종양 성장 억제에 대해 항-CD79b ADC인 ARA01-RKAA-PABC-MMAE를 인 비보에서 조사하였고, 상업적으로 이용 가능한 폴라투주맙-베도틴과 비교하였다.
방법
20 x 106개의 인간 B-세포 림프종 종양 세포 Granta 519 (DSMZ, Acc No: 342)를 CB17 SCID 마우스 (Janvier)에게 s.c. 이식하였다. 종양 치수 및 체중은 매주 3회 기록하였다. 종양 부피는 식 부피 = (너비) 2 x 길이 x 0.5에 따라 계산하였다. 평균 종양 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 비-무작위 계층화 프로토콜 (non-random stratification protocol)을 사용하여 마우스를 각각 8마리의 마우스를 포함하는 치료 그룹으로 배정하였다. ARA01-RKAA-PABC-MMAE (상기 실시예 5에 기재된 바와 같이 자체 생성됨) 용량 0.53 mg/kg, 1 mg/kg 및 2.1 mg/kg, 및 폴라투주맙 베도틴 용량 0.53 mg/kg 및 2.1 mg/kg을 0일차 (무작위화 당일)에 단일 i.v. 주사로 투여하였다. 대조 그룹의 마우스에게는 PBS를 주사하였다. 모든 마우스 실험은 스위스 가이드라인에 따라 수행하였고, 스위스 취리히의 Veterinarian Office의 승인을 받았다. 이러한 가이드라인에 따라, 마우스는 PBS 그룹 및 모든 0.53 mg/kg 용량의 경우 10일차에 희생시키고, 1 mg/kg 그룹의 마우스 2마리는 6일 및 30일차 (종양의 궤양)에 희생시켰다.
결과:
폴라투주맙-베도틴 (DAR 3.5)과 비교하여 ARA01-RKAA-PABC-MMAE (DAR 1.9)의 인 비보 효능을 Granta 519 종양 모델에 대해 평가하였다. 구체적으로, 동물에게 0.53 mg/kg 또는 2.1 mg/kg의 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®), 및 0.53 mg/kg, 1 mg/kg 또는 2.1 mg/kg의 ARA01-RKAA-PABC-MMAE를 단일 주사하였다. 중요하게는, ARA01-RKAA-PABC-MMAE는 폴라투주맙-베도틴에 비해 약 절반의 페이로드 용량으로 동등한 종양 성장 억제 및 생존을 제공하였다 (도 16a의 2 mg/kg 용량, 및 도 16b의 0.53 mg/kg 용량의 비교). 폴라투주맙-베도틴에 비해 대략 동일한 페이로드 용량에서, ARA01-RKAA-PABC-MMAE 치료는 더 큰 항종양 효능 및 상당한 생존 이점을 유도하였고, 여기서 폴라투주맙-베도틴의 완전 종양 관해 0/8에 비해 완전 종양 관해 6/8을 갖는다 (도 16b에서 0.53 mg/kg 용량의 폴라투주맙-베도틴 및 1 mg/kg 용량의 ARA01-RKAA-PABC-MMAE의 비교). 요약하면, 대략 동일한 페이로드 용량에서, ARA01-RKAA-PABC-MMAE 치료는 폴라투주맙 베도틴에 비해 더 큰 항종양 효능 및 상당한 생존 이점을 유도하였다.
실시예 9: 항체 트라스투주맙에 대한 다양한 RK-모티프-펩티드의 접합
테스트한 모든 RK-함유 펩티드는 고효율로 접합되었다.
방법
접합 반응은 실시예 1에 기재된 조건으로부터 조정하였다. 요약하면, 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 네이티브, 글리코실화 트라스투주맙 항체, 1.5 U/mg 농도의 MTG, 및 20몰 당량의 RK-모티프를 함유하는 표시된 펩티드-링커를 혼합하였다. 접합 효율은 하기와 같이 LCMS로 평가하였다: 접합 효율 (CE)은 디컨볼루션된 스펙트럼으로부터 계산하였고, %로 표시하였다. 하기 식에 따라, 2개의 글리코형 (G1F 및 G0F)으로부터 생성된 세기를 계산에 고려하였다:
Figure pct00431
여기서 cj = 접합됨 및 ncj = 비-접합됨
결과
테스트한 모든 RK-모티프-링커는 표 9에 제시된 바와 같이 네이티브, 완전 글리코실화 트라스투주맙에 ＞ 50%의 효율로 잘 접합하였다.
Figure pct00432
실시예 10: RK-모티프-펩티드의 접합
방법
반응 조건: 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 네이티브, 글리코실화 트라스투주맙 항체, 5 U/mg 농도의 MTG, 및 5 몰 당량의 표시된 펩티드-링커. 접합 효율은 실시예 9에 기재된 바와 같이 LCMS로 평가하였다.
결과
RK-모티프를 함유하는 펩티드는 표 10에 제시된 바와 같이 유의미한 접합 효율로 접합되었다.
Figure pct00433
실시예 11: RK-모티프-링커-페이로드와 MMAE의 접합
RK-모티프-링커-페이로드가 또한 1-단계로 항체 접합에 적합하다는 것을 보여주기 위해, MMAE를 페이로드로 사용하여 RK-모티프를 함유하는 추가 링커-페이로드를 트라스투주맙에 대한 접합에 사용하였다.
방법
접합 반응은 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 네이티브, 글리코실화 트라스투주맙 항체, 5 U/mg 농도의 MTG, 및 5 몰 당량의 표시된 링커-페이로드를 혼합하여 수행하였다. 접합 효율은 실시예 9에 기재된 바와 같이 LCMS로 평가하였다.
결과
놀랍게도, 표 11A에 제시된 바와 같이 네이티브, 글리코실화 트라스투주맙 항체에 대한 접합을 위해 MMAE를 함유하는 다양한 RK-모티프-링커-페이로드를 사용하여 우수한 접합 효율 (85% 이상)을 수득하였다. 놀랍게도, 표 11A 및 11B에 제시된 바와 같이 링커-페이로드가 RK 모티프를 포함하지 않는 경우 접합 효율이 유의미하게 더 낮은 것을 관찰하였다.
Figure pct00434
실시예 12: 대체 페이로드 부류를 사용한 RK-모티프 링커-페이로드의 접합
본 발명의 링커 기술의 다양성 (versatility)을 입증하기 위해, 다양한 RK-모티프 링커-페이로드를 트라스투주맙에 대한 접합에 사용하였다. 페이로드는 하기 페이로드 부류로부터 선택하였다: 세포독소, 스테로이드 (코르티솔 = CS) 및 면역조절제 (즉, STING 효능제)를 평가하였다.
방법
접합 반응은 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 네이티브, 글리코실화 트라스투주맙 항체, 5-10 U/mg 농도의 MTG, 및 5-10 몰 당량의 표시된 링커-페이로드를 혼합하여 수행하였다. 접합 효율은 실시예 9에 기재된 바와 같이 LCMS로 평가하였다.
결과
놀랍게도, 표 12에 제시된 바와 같이 다양한 RK-모티프 링커 버전 및 페이로드 부류를 사용하여 우수한 접합 효율 (80% 이상)을 수득하였다. 또한 놀랍게도, N-말단 위치에 위치한 페이로드가 (May-C5-RKR에서 입증된 바와 같이) 매우 잘 견디는 것을 관찰하였다.
Figure pct00435
May: 메이탄신; Exa: 엑사테칸-유도체; STING (인터페론 유전자의 자극제; 면역자극제의 부류); PNU (안트라사이클린 유사체).
실시예 13: 3개의 상이한 항체에 대한 RK-모티프 링커-페이로드의 접합
반응의 보편적인 적용 가능성을 입증하기 위해, MMAE 또는 메이탄신 (May)을 함유하는 RK-모티프-링커-페이로드를 선택하여 3개의 상이한 항체: 트라스투주맙, 폴라투주맙 및 엔포르투맙 변이체 (중쇄 서열 번호: 9 및 경쇄 서열 번호: 11)에 접합시켰다.
방법
접합 반응은 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 표시된 네이티브, 글리코실화 항체, 5-10 U/mg 농도의 MTG, 및 5-10 몰 당량의 표시된 링커-페이로드를 혼합하여 수행하였다. 접합 효율은 실시예 9에 기재된 바와 같이 LCMS로 평가하였다.
결과
놀랍게도, 표 13에 제시된 바와 같이 모든 테스트한 RK-모티프-MMAE 또는 May 링커 페이로드와 3개의 테스트한 항체 모두에 대해 높은 접합 효율을 수득하였다.
3개의 상이한 항체에 대한 링커-페이로드의 접합 효율
RK-링커-페이로드 트라스투주맙과의 접합 효율 (%) 폴라투주맙과의 접합 효율 (%) 엔포르투맙과의 접합 효율 (%)
RKAA-PABC-MMAE (서열 번호: 1) 100% 98% 96%
ARK-PABC-MMAE (서열 번호: 3) 100% 94% 97%
RKA-PABC-MMAE (서열 번호: 2) 100% 93% 95%
RKValCit-PABC-MMAE (서열 번호: 54) 91% 97% 87%
RKAA-PABC-May (서열 번호: 1) 92% 82% 94%
May-C5-RKR (서열 번호: 4) 96% 95% NT
NT: 테스트되지 않음
실시예 14: 상이한 반응 조건을 사용한 RK-모티프 링커-페이로드의 접합
RK-링커-페이로드와의 접합이 다양한 반응 조건을 견딜 수 있음을 입증하기 위해, 파라미터를 가변시킨 다양한 반응 조건을 사용하여 폴라투주맙에 대한 링커-페이로드 접합을 수행하였다.
방법
표준 조건으로서, 하기 파라미터를 사용하였다: 회전 열혼합기에서 37℃로 24시간 동안, Tris 50 mM pH 7.6 중 5 mg/mL의 네이티브, 글리코실화 폴라투주맙 항체, 5 U/mg 농도의 MTG, 및 5 몰 당량의 RKAA-PABC-MMAE. 접합 효율은 실시예 9에 기재된 바와 같이 LCMS로 평가하였다.
가변 파라미터는 표 14에 제시되어 있다.
결과
RKAA-PABC-MMAE 링커-페이로드는 매우 큰 범위의 반응 조건에 대해 매우 높은 접합 효율로 접합하였다: 5 내지 17 mg/ml의 항체 농도, 2 내지 10 U/mg의 항체 농도 (U/mg)에 대한 MTG 농도를 사용하여 접합 효율 ＞ 80%를 달성하였다. 또한, 항체에 대한 링커의 몰 농도 (2 내지 8 당량) 뿐만 아니라 매우 넓은 범위의 pH를 사용하여 높은 접합 효율을 또한 수득하였다 (pH 6.0의 경우 접합 효율 67%, pH 8의 경우 86%임).
놀랍게도, 항체에 대한 더 적은 링커-페이로드 과량을 사용하여 더 높은 접합 효율을 수득하였고, 즉 링커 페이로드를 2-20 당량으로 사용하는 것이 80 당량으로 사용하는 것보다 더 높은 접합 효율을 수득하였으며, 이는 예상할 수 있는 것과 상반된다 (표 14).
상이한 반응 조건하에 폴라투주맙에 대한 RK-링커-페이로드의 접합 효율
접합 효율에 대한 반응 파라미터의 효과
파라미터 항체 최종 농도 (mg/mL)
5 6 8 10 15 17
CE (%) 98% 95% 95% 96% 86% 95%
파라미터 MTG 로딩 (U/mg)
2 3 3.5 4.5 5 6 9 10
CE (%) 94% 92% 95% 97% 98% 100% 96% 88%
파라미터 항체에 대한 RK-링커-페이로드의 몰 당량
2 2.5 3 4 5 6 8 20 80
CE (%) 70% 81% 80% 92% 98% 94% 93% 71% 50%
파라미터 pH
6.0 6.5 7.0 7.5 7.6 8.0
CE (%) 67% 86% 91% 90% 98% 86%
실시예 15: RK-모티프-PABC-페이로드 링커 페이로드를 함유하는 ADC는 3개의 상이한 항체를 사용하여 인 비트로 효율적이다.
본 발명에 따른 ADC, 즉 RK-모티프-MMAE/메이탄신 링커 페이로드로 생성된 ADC가 암 세포주에 효율적인 방출 및 표적-특이적 독성을 유발하는 지를 입증하기 위해서, 트라스투주맙-, 폴라투주맙- (ARA01), 및 엔포르투맙- (서열 번호: 9 및 서열 번호: 11; ARA04)-기반 ADC를 링커 RKAA-PABC-MMAE, RKAA-PABC-메이탄신, ARK-PABC-MMAE, RKA-PABC-MMAE 및 RKValCit-MMAE를 사용하여 표적-발현 세포에서 테스트하였다.
방법
트라스투주맙-RKAA-PABC-MMAE 및 트라스투주맙-RKAA-PABC-메이탄신의 성장 억제 효과를 HER-2 포지티브 SKBR-3 (ATCC HTB-30) 세포에서 조사하였고, ARA01-ARK-PABC-MMAE, ARA01-RKA-PABC-MMAE 및 ARA01-RKValCit-PABC-MMAE의 억제 효과를 CD79b-포지티브 Granta-519 림프종 세포에서 테스트하였으며, ARA04-RKAA-PABC-MMAE, ARA04-ARK-PABC-MMAE, ARA04-RKA-PABC-MMAE 및 ARA04-RKValCit-PABC-MMAE의 세포독성 효과를 Nectin-4 포지티브 유방암 세포, SUM190PT (BIOIVT, 28068A16284) 세포에서 조사하였다. 표적 의존성 및 특이성은 Nectin-4-네가티브 폐 암종 세포 A549 (ATCC CCL-185)에서 테스트하였다. 모든 조건에 대해, 4000개의 세포를 96-웰 배양 플레이트에 시딩하고, 각 ADC와 함께 가습 챔버 및 5% CO2에서 37℃로 72시간 동안 인큐베이션하였다.
결과
도 35는 본 발명의 트라스투주맙-RKAA-PABC-MMAE 및 트라스투주맙-RKAA-PABC-메이탄신 둘 모두가 기존의 ADC에 필적하는 EC50 값으로 HER-2 과발현 세포에 대해 매우 높은 세포독성 활성을 발휘하는 것을 보여준다.
CD79b 및 Nectin-4 표적화 ADC 중에, 본 발명의 상이한 링커를 함유하는 ARA01 및 ARA04 ADC는 각각 표적-포지티브 Granta-519 (도 36) 및 SUM190PT (도 37) 세포에 대해 매우 높은 표적-특이적 세포독성 활성을 보여준다. EC50 값은 기존 ADC 범위에 있다. 대조적으로, 동일한 ADC는 표적-네가티브 A549 세포에 영향을 미치지 않으며 (도 38), 기존 ADC와 유사한 효과를 보여준다.
요약하면, 모체 항체로서 트라스투주맙, 폴라투주맙 또는 엔포르투맙에 접합된 본 발명에 따른 RK-모티프 링커-페이로드를 사용하는 모든 ADC는 인 비트로 표적-특이적 및 유의미한 항-증식 활성을 보여주었다.
실시예 16: RK-모티프-PABC-MMAE 링커 페이로드를 함유하는 ADC는 유리한 인 비보 약동학적 특성을 보여준다.
RK-모티프 MMAE ADC의 인 비보 안정성을 평가하기 위해, 폴라투주맙 및 엔포르투맙에 접합된 상이한 RK-모티프 링커 페이로드를 사용하여 마우스 약동학적 연구를 수행하였다.
본 발명에 따른 링커-페이로드로 생성된 항-CD79b ADC인 ARA01-ARK-PABC-MMAE, ARA01-RKA-PABC-MMAE 및 ARA01-RKValCit-PABC-MMAE, 및 상이한 링커로 생성된 항-Nectin-4 ADC인 ARA04-ARK-PABC-MMAE, ARA04-RKA-PABC-MMAE 및 ARA04-RKValCit-PABC-MMAE의 약동학적 프로파일을 마우스에서 조사하였고, 상업적으로 이용 가능한 항-CD79b ADC 폴라투주맙-베도틴 (Polivy®) 및 상업적으로 이용 가능한 항-Nectin-4 ADC 엔포르투맙-베도틴 (Padcev®)과 비교하였다.
방법
약동학적 연구는 실시예 7에 기재된 바와 같이 수행하였으며, 여기서 샘플링 시점을 조정하였다: 혈액 샘플은 복재 정맥으로부터 10분, 4, 48, 96, 168, 264, 336 및 504시간 후에 채혈하였다. 항-CD79b ADC 검출의 경우, 실시예 7에 기재된 방법을 조정하였다. 항-Nectin-4 ADC 검출은 하기와 같이 간단하게 수행하였다: 혈장 중 ADC 농도는 포획제로서 His-태그된 인간 Nectin-4를 사용하여 ELISA로 결정하였다: PBS에서 희석시킨 His-Nectin-4 (SinoBiological, Ref.: 19771-H08H) 125 ng을 니켈 플레이트 (Ni-NTA HisSorb, Qiagen)에 부가하였다. 200 μl PBS, 4% 우유 (Rapilait, Migros, Switzerland)로 차단시킨 후에, 50 μl의 희석시킨 혈장 샘플 (PBS, 4% 우유 중)을 부가하였다. 1시간 동안 인큐베이션하고 PBS로 세척한 후에, 토끼 항-MMAE 항체 (Levena, Ref: LEV-PAE1)를 사용하여 전체 ADC를 검출하였고, 여기서 이를 실온에서 또 다른 1시간 동안 부가하고, 세척하고, 항-토끼 IgG-HRP를 통해 검출하였다. 퍼옥시다제 활성은 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (Sigma)의 부가로 검출하였고, 산을 부가하여 정지시켰다. 판독값은 450 nm에서 1 내지 5분 후에 측정하였다. 반감기는 시간에 대해 플로팅된 혈장 내 샘플의 ADC 농도를 사용하여 계산하였다 (반-대수 스케일). 시점 48 - 504 시간을 사용한 제거 단계의 생성된 기울기 k를 사용하여 식 t1/2 = ln2/-k로 반감기 (t1/2)를 결정하였다.
결과
항-CD79b ADC (도 39) 및 Nectin-4 ADC (도 40)에 대해, 주사 후 상이한 시점에서 채취한 샘플에서 측정된 온전한 ADC의 혈장 농도를 보여준다.
ARA01-ARK-PABC-MMAE, ARA01-RKA-PABC-MMAE 및 ARA01-RKValCit-PABC-MMAE에 대한 반감기는 하기 표 15에 제시되어 있다. 놀랍게도, 계산된 폴라투주맙-베도틴과 비교하여 본 발명에 따른 모든 ADC는 반감기가 약 2배 더 긴 것으로 관찰되었다.
ARA04-RKAA-MMAE, ARA04-ARK-MMAE, ARA04-RKA-MMAE, ARA04-RKValCit-MMAE 및 Padcev®에 대한 반감기는 하기 표 16에 제시되며, 승인된 엔포르투맙-베도틴과 비교하여 이들 ADC는 반감기가 평균 2 내지 2.5배 더 긴 것을 보여준다.
요약하면, 모체 항체로서 폴라투주맙 또는 엔포르투맙을 사용하여 본 발명에 따라 생성된 모든 ADC는 베도틴 벤치마크와 비교하여 반감기가 2-2.5배 개선된 것을 보여준다. 이는 본 발명에 따른 링커-페이로드로 생성된 ADC의 ADC 안정성이 인 비보에서 개선되었고, 이는 페이로드가 조기에 방출되지 않기 때문에 전반적으로 더 양호한 안전성 프로파일 및 치료 지수 (therapeutic index: TI)를 유도할 수 있음을 나타낸다.
항-CD79b ADC의 혈장 반감기
구조체 반감기 (t 1/2 ), 시간
폴라투주맙/ARA01 (서열 번호: 5 및 6), 네이키드 항체 393
ARA01-ARK-MMAE, 온전한 ADC 237
ARA01-RKA-MMAE, 온전한 ADC 197
ARA01-RKValCit-MMAE, 온전한 ADC 220
폴라투주맙-베도틴 (Polivy®), 온전한 ADC 118
항-Nectin-4 ADC의 혈장 반감기
구조체 반감기 (t 1/2 ), 시간
ARA04 (서열 번호: 9 및 11), 네이키드 항체 303
ARA04-RKAA-MMAE, 온전한 ADC 245
ARA04-ARK-MMAE, 온전한 ADC 242
ARA04-RKA-MMAE, 온전한 ADC 179
ARA04-RKValCit-MMAE, 온전한 ADC 199
엔포르투맙-베도틴 (Padcev®), 온전한 ADC 109
실시예 17: RK-모티프-PABC-MMAE 링커 페이로드를 함유하는 ADC는 CD79b-포지티브 액형 종양 모델 및 Nectin-4 포지티브 고형 종양 모델에서 벤치마크와 비교하여 더 효율적인 인 비보 종양 성장 억제를 보여준다.
본 발명에 따른 항-CD79b ADC인, ARA01-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA01-ARK-PABC-MMAE를 Ramos (CD79b-포지티브, 액형 종양) 모델에서 종양 성장 억제에 대해 인 비보 조사하였다. 본 발명에 따른 항-Nectin-4 ADC인 ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 AR04-ARK-PAPBC-MMAE의 항-종양 특성을 SUM190PT (Nectin-4 포지티브, 고형 종양) 이종이식편 모델 (xenograft model)에서 테스트하였다. 비특이적 ADC 활성을 배제하기 위해 비-결합 mAb-RKAA-PABC-MMAE 대조군 ADC를 포함하였다.
방법
SUM190PT 이종이식편의 경우, 2 x 106개의 세포를 유선 지방체에 주사하였다; Ramos의 경우, 20 x 106개의 세포를 CB17 SCID 마우스 (Janvier)에게 s.c. 주사하였다. 종양 치수 및 체중은 매주 3회 기록하였다. 종양 부피는 식 부피 = (너비) 2 x 길이 x 0.5에 따라 계산하였다. 평균 종양 크기가 약 200 mm3에 도달한 경우, 비-무작위 계층화 프로토콜을 사용하여 마우스를 각각 6마리의 마우스를 포함하는 치료 그룹으로 배정하였다. ADC는 무작위화 당일에 1회 정맥내로 주사하였다.
모든 ADC는 실시예 5에 기재된 바와 같이 사내에서 생성하였다.
ARA01-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA01-RKAA-PABC-MMAE (모두 DAR1.9)를 1.25 mg/kg (체중 1 kg당 페이로드 25 ug에 해당) 용량으로 주사하였다. 폴라투주맙 베도틴 (PV, DAR 3.6)은 페이로드 50 ug/kg 또는 ARA01-ADC의 페이로드 용량의 2배에 해당하는 1.43 mg/kg으로 주사하였다.
ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-RKAA-PABC-MMAE (모두 DAR 1.9)를 1 및 3 mg/kg (체중 1 kg당 페이로드 10 및 30 ug에 해당)의 ADC 용량으로 주사하고, 엔포르투맙 베도틴 (EV, DAR 3.8) 0.5 mg/kg 및 1.5 mg/kg 용량과 비교하였다. 비-결합 mAb-RKAA-PABC-MMAE ADC (ARA04 ADC와 동일한 링커-페이로드 및 DAR 포함)를 3 mg/kg으로 주사하였다. 대조 그룹의 마우스에게 PBS를 주사하였다. 모든 마우스 실험은 스위스 가이드라인에 따라 수행하였으며, 스위스 취리히의 Veterinarian Office의 승인을 받았다.
결과:
본 발명의 ADC인 ARA01-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA01-ARK-PABC-MMAE를 빠르게 성장하는 Ramos 이종이식편 모델에서 폴라투주맙 베도틴 (PV)과 비교하였다.
도 41은 1.25 mg/kg (또는 마우스 체중 1 kg당 25 ug 페이로드)을 1회 i.v. 주사하여 모든 마우스에서 매우 효율적인 항-종양 반응이 유도되는 것을 보여준다. 대조적으로, 1.43 mg/kg 또는 체중 1 kg당 페이로드 50 ug으로 투여된 PV는 치료 후 20일차에 무-종양 개체가 없는, 짧고 일시적인 종양 제거만을 보여주었다. 대조적으로 그리고 매우 놀랍게도, ARA01-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA01-ARK-PABC-MMAE는 페이로드 용량의 절반으로 지속적이고 완전한 항-종양 반응을 보여주었다.
고형 종양 모델에서, ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-ARK-PABC-MMAE를 SUM190PT 유방암 종양 모델에서 엔포르투맙-베도틴 (EV)과 비교하였다. 중요하게는, 본 발명의 두 ADC인, ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-ARK-PABC-MMAE는 1 및 3 mg/kg으로 매우 효과적이었고, 도 42 및 43에 도시된 바와 같이 연구의 전체 과정 (주사 후 103일) 동안 완전한 종양 박멸 및 장기-지속 반응을 유도하였다.
엔포르투맙-베도틴에 비해 거의 동일한 페이로드 용량에서, ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-ARK-PABC-MMAE (3 mg/kg) 치료로 모두 더 크고 더 길게 지속되는 항종양 효능 및 상당한 생존 이점을 유도하였고, 여기서 EV의 완전 종양 관해 0/6에 비해 완전 종양 관해 4/6를 갖는다 (도 42에서 1.5 mg/kg 용량의 EV 및 3 mg/kg 용량의 ARA04-RKAA-PABC-MMAE의 비교). 비-결합 mAb-RKAA-PABC-MMAE는 종양 성장에 어떠한 영향도 미치지 않았으며, 표적화 ADC의 높은 표적-특이성을 시사한다. 놀랍게도, ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-ARK-PABC-MMAE ADC는 모두 엔포르투맙-베도틴에 비해 용량의 약 1/3로 동일한 종양 성장 억제 및 생존을 제공하였고 (1.5 mg/kg =30 ug/kg 페이로드 용량과 1 mg/kg (= 10 ug/kg 페이로드 용량)의 ARA04-RKAA/ARK-MMAE 용량과 비교), 도 42 및 43을 참조한다. 종합하면, 페이로드 용량의 약 1/3에서, ARA04-RKAA-PABC-MMAE 및 ARA04-ARK-PABC-MMAE 치료는 엔포르투맙 베도틴보다 더 크고 지속 가능한 항종양 효능 및 상당한 생존 이점을 유도하였다.
종합적으로, 본 발명자들은 본 발명에 따라 RK-모티프 링커-페이로드로 생성된 항-CD79b 및 항-Nectin-4 ADC가 이들 각각의 벤치마크 ADC와 동일한 항체 및 페이로드로 구성된 경우, 인 비보에서 고도로 활성이고, 2-3배 더 우수한 효능을 나타내므로, 베도틴-기반 ADC에 비해 상당한 생존 이점을 제공하는 것으로 요약하였고, 이는 매우 놀라운 일이다.
SEQUENCE LISTING <110> Araris Biotech AG <120> Means and methods for producing antibody-linker conjugates <130> AD2609 PCT BS <140> EP20020492.3 <141> 2020-10-25 <140> EP20203887.3 <141> 2020-10-26 <160> 72 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 1 <400> 1 Arg Lys Ala Ala 1 <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 2 <400> 2 Arg Lys Ala 1 <210> 3 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 3 <400> 3 Ala Arg Lys 1 <210> 4 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 4 <400> 4 Arg Lys Arg 1 <210> 5 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polatuzumab heavy chain <400> 5 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe 50 55 60 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Tyr Gly Cys Val Gly Val Thr 130 135 140 Trp Val Asn Ser Gly Gln Tyr Pro Thr Asn Arg Leu Ala Phe Ala Ser 145 150 155 160 Phe Asp Glu Asp Arg Phe Lys Asn Glu Leu Lys Asn Gly Arg Pro Arg 165 170 175 Ser Gly Glu Thr Arg Ala Glu Phe Glu Gly Arg Val Ala Lys Glu Ser 180 185 190 Phe Asp Glu Glu Lys Gly Phe Gln Arg Ala Arg Glu Val Ala Ser Val 195 200 205 Met Asn Arg Ala Leu Glu Asn Ala His Asp Glu Ser Ala Tyr Leu Asp 210 215 220 Asn Leu Lys Lys Glu Leu Ala Asn Gly Asn Asp Ala Leu Arg Asn Glu 225 230 235 240 Asp Ala Arg Ser Pro Phe Tyr Ser Ala Leu Arg Asn Thr Pro Ser Phe 245 250 255 Lys Glu Arg Asn Gly Gly Asn His Asp Pro Ser Arg Met Lys Ala Val 260 265 270 Ile Tyr Ser Lys His Phe Trp Ser Gly Gln Asp Arg Ser Ser Ser Ala 275 280 285 Asp Lys Arg Lys Tyr Gly Asp Pro Asp Ala Phe Arg Pro Ala Pro Gly 290 295 300 Thr Gly Leu Val Asp Met Ser Arg Asp Arg Asn Ile Pro Arg Ser Pro 305 310 315 320 Thr Ser Pro Gly Glu Gly Phe Val Asn Phe Asp Tyr Gly Trp Phe Gly 325 330 335 Ala Gln Thr Glu Ala Asp Ala Asp Lys Thr Val Trp Thr His Gly Asn 340 345 350 His Tyr His Ala Pro Asn Gly Ser Leu Gly Ala Met His Val Tyr Glu 355 360 365 Ser Lys Phe Arg Asn Trp Ser Glu Gly Tyr Ser Asp Phe Asp Arg Gly 370 375 380 Ala Tyr Val Ile Thr Phe Ile Pro Lys Ser Trp Asn Thr Ala Pro Asp 385 390 395 400 Lys Val Lys Gln Gly Trp Pro 405 <210> 15 <211> 395 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Streptoverticillium ladakanum MTG <400> 15 Met His Arg Arg Ile His Ala Val Gly Gln Ala Arg Pro Pro Pro Thr 1 5 10 15 Met Ala Arg Gly Lys Glu Thr Lys Ser Tyr Ala Glu Thr Tyr Arg Leu 20 25 30 Thr Ala Asp Asp Val Ala Asn Ile Asn Ala Leu Asn Glu Ser Ala Pro 35 40 45 Ala Ala Ser Ser Ala Gly Pro Ser Phe Arg Ala Pro Asp Ser Asp Asp 50 55 60 Arg Val Thr Pro Pro Ala Glu Pro Leu Asp Arg Met Pro Asp Pro Tyr 65 70 75 80 Arg Pro Ser Tyr Gly Arg Ala Glu Thr Val Val Asn Asn Tyr Ile Arg 85 90 95 Lys Trp Gln Gln Val Tyr Ser His Arg Asp Gly Arg Lys Gln Gln Met 100 105 110 Thr Glu Glu Gln Arg Glu Trp Leu Ser Tyr Gly Cys Val Gly Val Thr 115 120 125 Trp Val Asn Ser Gly Gln Tyr Pro Thr Asn Arg Leu Ala Phe Ala Ser 130 135 140 Phe Asp Glu Asp Arg Phe Lys Asn Glu Leu Lys Asn Gly Arg Pro Arg 145 150 155 160 Ser Gly Glu Thr Arg Ala Glu Phe Glu Gly Arg Val Ala Lys Glu Ser 165 170 175 Phe Asp Glu Glu Lys Gly Phe Gln Arg Ala Arg Glu Val Ala Ser Val 180 185 190 Met Asn Arg Ala Leu Glu Asn Ala His Asp Glu Ser Ala Tyr Leu Asp 195 200 205 Asn Leu Lys Lys Glu Leu Ala Asn Gly Asn Asp Ala Leu Arg Asn Glu 210 215 220 Asp Ala Arg Ser Pro Phe Tyr Ser Ala Leu Arg Asn Thr Pro Ser Phe 225 230 235 240 Lys Glu Arg Asn Gly Gly Asn His Asp Pro Ser Arg Met Lys Ala Val 245 250 255 Ile Tyr Ser Lys His Phe Trp Ser Gly Gln Asp Arg Ser Ser Ser Ala 260 265 270 Asp Lys Arg Lys Tyr Gly Asp Pro Asp Ala Phe Arg Ser Ala Pro Gly 275 280 285 Thr Gly Leu Val Asp Met Ser Arg Asp Arg Asn Ile Pro Arg Ser Pro 290 295 300 Thr Ser Pro Gly Glu Gly Phe Val Asn Phe Asp Tyr Gly Trp Phe Gly 305 310 315 320 Ala Gln Thr Glu Ala Asp Ala Asp Lys Thr Val Trp Thr His Gly Asn 325 330 335 His Tyr His Ala Pro Asn Gly Ser Leu Gly Cys His Ala Cys Leu Thr 340 345 350 Arg Ala Ser Ser Ala Thr Gly Ser Glu Gly Tyr Ser Asp Phe Asp Arg 355 360 365 Gly Glu Pro Tyr Val Val Ser Pro Ser Pro Ser Pro Arg Met Leu Glu 370 375 380 His Arg Pro Arg Gln Gly Lys Ala Gly Leu Ala 385 390 395 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 1 <400> 16 Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 17 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 2 <400> 17 Leu Leu Gln Gly 1 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 3 <400> 18 Leu Ser Leu Ser Gln Gly 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 4 <400> 19 Gly Gly Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 5 <400> 20 Gly Leu Leu Gln Gly 1 5 <210> 21 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 6 <400> 21 Leu Leu Gln 1 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 7 <400> 22 Gly Ser Pro Leu Ala Gln Ser His Gly Gly 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 8 <400> 23 Gly Leu Leu Gln Gly Gly Gly 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 9 <400> 24 Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 25 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 10 <400> 25 Gly Leu Leu Gln 1 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 11 <400> 26 Leu Leu Gln Leu Leu Gln Gly Ala 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 12 <400> 27 Leu Leu Gln Gly Ala 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 13 <400> 28 Leu Leu Gln Tyr Gln Gly Ala 1 5 <210> 29 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 14 <400> 29 Leu Leu Gln Gly Ser Gly 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 15 <400> 30 Leu Leu Gln Tyr Gln Gly 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 16 <400> 31 Leu Leu Gln Leu Leu Gln Gly 1 5 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 17 <400> 32 Ser Leu Leu Gln Gly 1 5 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 18 <400> 33 Leu Leu Gln Leu Gln 1 5 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 19 <400> 34 Leu Leu Gln Leu Leu Gln 1 5 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 20 <400> 35 Leu Leu Gln Gly Arg 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 21 <400> 36 Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 22 <400> 37 Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 23 <400> 38 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 1 5 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 24 <400> 39 Glu Glu Gln Tyr Gln Ser 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 25 <400> 40 Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 26 <400> 41 Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 1 5 <210> 42 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 27 <400> 42 Gln Tyr Gln Ser 1 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 28 <400> 43 Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 1 5 <210> 44 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 29 <400> 44 Tyr Arg Tyr Arg Gln 1 5 <210> 45 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 30 <400> 45 Asp Tyr Ala Leu Gln 1 5 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 31 <400> 46 Phe Gly Leu Gln Arg Pro Tyr 1 5 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 32 <400> 47 Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 1 5 10 <210> 48 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 33 <400> 48 Leu Gln Arg 1 <210> 49 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q-Tag 34 <400> 49 Tyr Gln Arg 1 <210> 50 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 5 <400> 50 Lys Arg Ala 1 <210> 51 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 6 <400> 51 Ala Lys Arg 1 <210> 52 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 7 <400> 52 Lys Ala Ala Arg 1 <210> 53 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 8 <400> 53 Lys Ala Arg Ala 1 <210> 54 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 9 <220> <221> MOD_RES <222> 4 <223> Xaa is L-citrulline <400> 54 Arg Lys Val Xaa 1 <210> 55 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 10 <400> 55 His Arg Lys His Ala 1 5 <210> 56 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 11 <400> 56 His Arg Lys Ala His 1 5 <210> 57 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 12 <400> 57 Arg Lys Ala His 1 <210> 58 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 13 <400> 58 Arg Lys His 1 <210> 59 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 14 <400> 59 Arg Lys His Ala 1 <210> 60 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 15 <400> 60 Arg Lys His His 1 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 16 <400> 61 Ala Arg Lys Ala His 1 5 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 17 <400> 62 Ala Arg Lys His Ala 1 5 <210> 63 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 18 <400> 63 His Arg Lys 1 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 19 <400> 64 Arg Lys Ala Ala His 1 5 <210> 65 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 20 <400> 65 Ala Arg Lys His His 1 5 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 21 <400> 66 Arg Lys Ala Ala Ala 1 5 <210> 67 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 22 <400> 67 Arg Lys Ala Ala Arg 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 23 <400> 68 Arg Arg Lys Ala Tyr 1 5 <210> 69 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 24 <400> 69 Arg Arg Lys 1 <210> 70 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 25 <400> 70 Ala Arg Lys Arg Ala 1 5 <210> 71 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 26 <400> 71 Lys Arg 1 <210> 72 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker 27 <400> 72 Lys Ala Ala 1

Claims (116)

  1. 하기 구조 (N → C 방향으로 표시됨)를 포함하는 링커를 항체에 포함된 Gln 잔기에 접합시키는 단계를 포함하고,
    상기 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기에 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 (primary amine)을 통해 접합되는,
    미생물 트란스글루타미나제 (microbial transglutaminase: MTG)에 의한 항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate)를 생성하는 방법:
    (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는 (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3)
    상기에서
    Figure pct00436
    (Sp1)은 화학적 스페이서 (chemical spacer)이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00437
    (Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
    Figure pct00438
    (Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00439
    R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
    Figure pct00440
    K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
    Figure pct00441
    B는 연결 모이어티 (linking moiety) 또는 페이로드 (payload)이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 방법.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 또는 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 방법.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 순전하 (net charge)는 중성 또는 양성인 방법.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 것인 방법.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 방법.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 방법.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)을 포함하는 방법.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, B는 연결 모이어티인 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 연결 모이어티 B는
    Figure pct00442
    생물직교 마커 기 (bioorthogonal marker group), 또는
    Figure pct00443
    가교를 위한 비-생물-직교 엔티티 (non-bio-orthogonal entity)를 포함하는 방법.
  11. 청구항 10에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 방법:
    Figure pct00444
    -N-N≡N, 또는 -N3;
    Figure pct00445
    Lys(N3);
    Figure pct00446
    테트라진;
    Figure pct00447
    알킨;
    Figure pct00448
    스트레인드 사이클로옥틴 (strained cyclooctyne);
    Figure pct00449
    BCN;
    Figure pct00450
    스트레인드 알켄 (strained alkene);
    Figure pct00451
    광반응성 기 (photoreactive group);
    Figure pct00452
    알데히드;
    Figure pct00453
    아실트리플루오로보레이트;
    Figure pct00454
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00455
    사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
    Figure pct00456
    티오-선택적 친전자체 (thio-selective electrophile);
    Figure pct00457
    -SH; 및
    Figure pct00458
    시스테인.
  12. 청구항 9 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 페이로드를 연결 모이어티 B에 접합시키는 추가 단계를 포함하는 방법.
  13. 청구항 12에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 클릭-반응 (click-reaction)을 통해 접합되는 방법.
  14. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, B는 페이로드인 방법.
  15. 청구항 12 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 방법:
    Figure pct00459
    독소;
    Figure pct00460
    사이토카인;
    Figure pct00461
    성장 인자;
    Figure pct00462
    방사성핵종 (radionuclide);
    Figure pct00463
    호르몬;
    Figure pct00464
    항-바이러스제;
    Figure pct00465
    항-박테리아제;
    Figure pct00466
    형광 염료;
    Figure pct00467
    면역조절제/면역자극제;
    Figure pct00468
    반감기 증가 모이어티 (half-life increasing moiety);
    Figure pct00469
    용해도 증가 모이어티 (solubility increasing moiety);
    Figure pct00470
    폴리머-독소 접합체;
    Figure pct00471
    핵산;
    Figure pct00472
    바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
    Figure pct00473
    비타민;
    Figure pct00474
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00475
    표적 결합 모이어티; 및/또는
    Figure pct00476
    항-염증제.
  16. 청구항 15에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 방법:
    Figure pct00477
    피롤로벤조디아제핀 (pyrrolobenzodiazepine) (예: PBD);
    Figure pct00478
    아우리스타틴 (auristatin) (예: MMAE, MMAF);
    Figure pct00479
    메이탄시노이드 (maytansinoid) (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
    Figure pct00480
    두오카르마이신 (duocarmycin);
    Figure pct00481
    니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (nicotinamide phosphoribosyltransferase: NAMPT) 억제제;
    Figure pct00482
    튜불리신 (tubulysin);
    Figure pct00483
    엔디인 (enediyne) (예: 칼리케아미신 (calicheamicin));
    Figure pct00484
    안트라사이클린 유도체 (anthracycline derivative) (PNU) (예: 독소루비신 (doxorubicin));
    Figure pct00485
    피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (kinesin spindle protein: KSP) 억제제;
    Figure pct00486
    크립토피신 (cryptophycin);
    Figure pct00487
    약물 유출 펌프 억제제 (drug efflux pump inhibitor);
    Figure pct00488
    산드라마이신 (sandramycin);
    Figure pct00489
    아마니틴 (amanitin) (예: α-아마니틴); 및
    Figure pct00490
    캄프토테신 (camptothecin) (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
  17. 청구항 14 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티 (self-immolative moiety)를 포함하는 방법.
  18. 청구항 17에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 방법.
  19. 청구항 17 또는 18에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (p-aminobenzyl carbamoyl: PABC) 모이어티를 포함하는 방법.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 방법.
  21. 청구항 20에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 항체의 Fc 도메인에 포함되고, 구체적으로 링커가 접합된 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)인 방법.
  22. 청구항 20에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 분자 공학 (molecular engineering)에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 방법.
  23. 청구항 22에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체 (aglycosylated IgG antibody)의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)인 방법.
  24. 청구항 22에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함되는 방법.
  25. 청구항 24에 있어서, Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된 방법.
  26. 청구항 20 내지 22, 24 및 25 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 글리코실화된 IgG 항체 (glycosylated IgG antibody)이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 것인 방법.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 브렌툭시맙 (Brentuximab), 트라스투주맙 (Trastuzumab), 젬투주맙 (Gemtuzumab), 이노투주맙 (Inotuzumab), 아벨루맙 (Avelumab), 세툭시맙 (Cetuximab), 리툭시맙 (Rituximab), 다라투무맙 (Daratumumab), 페르투주맙 (Pertuzumab), 베돌리주맙 (Vedolizumab), 오크렐리주맙 (Ocrelizumab), 토실리주맙 (Tocilizumab), 우스테키누맙 (Ustekinumab), 골리무맙 (Golimumab), 오비누투주맙 (Obinutuzumab), 사시투주맙 (Sacituzumab), 벨란타맙 (Belantamab), 폴라투주맙 (Polatuzumab) 및 엔포르투맙 (Enfortumab)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 폴라투주맙, 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 방법.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 항체에 포함된 Gln 잔기의 γ-카복사미드 기에 접합되는 방법.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 글리코실화 항체에 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%의 접합 효율 (conjugation efficiency)로 접합시키기에 적합한 것인 방법.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 미생물 트란스글루타미나제는 스트렙토마이세스 (Streptomyces) 종, 구체적으로 스트렙토마이세스 모바라엔시스 (Streptomyces mobaraensis)로부터 유래되는 방법.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 따른 방법으로 생성된 항체-링커 접합체.
  34. a) 항체; 및
    b) 하기 구조를 포함하는 링커를 포함하고,
    상기 링커는 항체에 포함된 글루타민 잔기의 γ-카복사미드 기와 링커에 포함된 RK 모티프 (RK motif)에 포함된 리신 잔기, 리신 유도체 또는 리신 모방체의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합 (isopeptide bond)을 통해 상기 항체에 접합되는,
    항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate):
    (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
    (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
    상기에서
    Figure pct00491
    (Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00492
    (Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
    Figure pct00493
    (Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00494
    R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
    Figure pct00495
    K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
    Figure pct00496
    B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
  35. 청구항 34에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 항체-링커 접합체.
  36. 청구항 34 또는 35에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 또는 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 항체-링커 접합체.
  37. 청구항 34 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 순전하는 중성 또는 양성인 항체-링커 접합체.
  38. 청구항 34 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 항체-링커 접합체.
  39. 청구항 34 내지 38 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 및 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 항체-링커 접합체.
  40. 청구항 34 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3) 및 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 항체-링커 접합체.
  41. 청구항 34 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1)을 포함하는 항체-링커 접합체.
  42. 청구항 34 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, B는 연결 모이어티인 항체-링커 접합체.
  43. 청구항 42에 있어서, 연결 모이어티 B는
    Figure pct00497
    생물직교 마커 기, 또는
    Figure pct00498
    가교를 위한 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 항체-링커 접합체.
  44. 청구항 43에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 항체-링커 접합체:
    Figure pct00499
    -N-N≡N, 또는 -N3;
    Figure pct00500
    Lys(N3);
    Figure pct00501
    테트라진;
    Figure pct00502
    알킨;
    Figure pct00503
    스트레인드 사이클로옥틴;
    Figure pct00504
    BCN;
    Figure pct00505
    스트레인드 알켄;
    Figure pct00506
    광반응성 기;
    Figure pct00507
    알데히드;
    Figure pct00508
    아실트리플루오로보레이트;
    Figure pct00509
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00510
    사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
    Figure pct00511
    티오-선택적 친전자체;
    Figure pct00512
    -SH; 및
    Figure pct00513
    시스테인.
  45. 청구항 42 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 접합된 항체-링커 접합체.
  46. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 페이로드가 연결 모이어티 B에 클릭-반응을 통해 접합된 항체-링커 접합체.
  47. 청구항 34 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, B는 페이로드인 항체-링커 접합체.
  48. 청구항 45 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 항체-링커 접합체:
    Figure pct00514
    독소;
    Figure pct00515
    사이토카인;
    Figure pct00516
    성장 인자;
    Figure pct00517
    방사성핵종;
    Figure pct00518
    호르몬;
    Figure pct00519
    항-바이러스제;
    Figure pct00520
    항-박테리아제;
    Figure pct00521
    형광 염료;
    Figure pct00522
    면역조절제/면역자극제;
    Figure pct00523
    반감기 증가 모이어티;
    Figure pct00524
    용해도 증가 모이어티;
    Figure pct00525
    폴리머-독소 접합체;
    Figure pct00526
    핵산;
    Figure pct00527
    바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
    Figure pct00528
    비타민;
    Figure pct00529
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00530
    표적 결합 모이어티; 및/또는
    Figure pct00531
    항-염증제.
  49. 청구항 48에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 항체-링커 접합체:
    Figure pct00532
    피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
    Figure pct00533
    아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
    Figure pct00534
    메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
    Figure pct00535
    두오카르마이신;
    Figure pct00536
    니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
    Figure pct00537
    튜불리신;
    Figure pct00538
    엔디인 (예: 칼리케아미신);
    Figure pct00539
    안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
    Figure pct00540
    피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
    Figure pct00541
    크립토피신;
    Figure pct00542
    약물 유출 펌프 억제제;
    Figure pct00543
    산드라마이신;
    Figure pct00544
    아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
    Figure pct00545
    캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
  50. 청구항 47 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티를 포함하는 항체-링커 접합체.
  51. 청구항 50에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 항체-링커 접합체.
  52. 청구항 50 또는 51에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 항체-링커 접합체.
  53. 청구항 34 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 항체-링커 접합체.
  54. 청구항 53에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 항체의 Fc 도메인에 포함되고, 구체적으로 링커가 접합된 Gln 잔기는 IgG 항체의 CH2 도메인의 Gln 잔기 Q295 (EU numbering)인 항체-링커 접합체.
  55. 청구항 53에 있어서, 링커가 접합된 Gln 잔기는 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 항체-링커 접합체.
  56. 청구항 55에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 아글리코실화 IgG 항체의 CH2 도메인의 N297Q (EU numbering)인 항체-링커 접합체.
  57. 청구항 55에 있어서, 분자 공학에 의해 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된 Gln 잔기는 (a) 항체의 중쇄 또는 경쇄에 통합되거나 또는 (b) 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N- 또는 C-말단 단부에 융합된 펩티드에 포함되는 항체-링커 접합체.
  58. 청구항 57에 있어서, Gln 잔기를 포함하는 펩티드는 항체의 중쇄의 C-말단 단부에 융합된 항체-링커 접합체.
  59. 청구항 53 내지 55, 57 및 58 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 글리코실화된 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 항체-링커 접합체.
  60. 청구항 34 내지 59 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 이노투주맙, 아벨루맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 다라투무맙, 페르투주맙, 베돌리주맙, 오크렐리주맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 골리무맙, 오비누투주맙, 사시투주맙, 벨란타맙, 폴라투주맙 및 엔포르투맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 항체-링커 접합체.
  61. 청구항 34 내지 60 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 브렌툭시맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 이노투주맙, 폴라투주맙, 엔포르투맙, 사시투주맙 및 벨란타맙으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 항체-링커 접합체.
  62. 청구항 34 내지 61 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 폴라투주맙, 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 항체-링커 접합체.
  63. a) IgG 항체; 및
    b) 약물 모이어티 B를 포함하는 링커를 포함하고,
    상기 약물 모이어티 B는 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열에 공유결합으로 연결되고;
    상기 링커는 항체의 CH2 도메인의 글루타민 잔기 Q295 (EU numbering)의 γ-카복사미드 기와 링커에 포함된 리신 잔기의 측쇄에 포함된 1차 아민 사이에 형성된 이소펩티드 결합을 통해 상기 IgG 항체에 접합되는,
    항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate).
  64. 청구항 63에 있어서, 약물 모이어티 B는 링커에 포함된 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에 자기-희생 모이어티를 통해 연결되는 항체-약물 접합체.
  65. 청구항 64에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체.
  66. 청구항 63 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 글리코실화 IgG 항체이고, 구체적으로 IgG 항체는 CH2 도메인의 잔기 N297 (EU numbering)에서 글리코실화된 항체-약물 접합체.
  67. 청구항 63 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 IgG1 항체인 항체-약물 접합체.
  68. 청구항 63 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 폴라투주맙, 또는 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 6에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
  69. 청구항 63 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 트라스투주맙, 또는 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 8에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
  70. 청구항 63 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, IgG 항체는 엔포르투맙, 또는 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 및 서열 번호: 10 또는 11에 제시된 경쇄를 포함하는 항체인 항체-약물 접합체.
  71. 청구항 63 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, 약물은 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는 독소인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00546
    피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
    Figure pct00547
    아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
    Figure pct00548
    메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
    Figure pct00549
    두오카르마이신;
    Figure pct00550
    니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
    Figure pct00551
    튜불리신;
    Figure pct00552
    엔디인 (예: 칼리케아미신);
    Figure pct00553
    안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
    Figure pct00554
    피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
    Figure pct00555
    크립토피신;
    Figure pct00556
    약물 유출 펌프 억제제;
    Figure pct00557
    산드라마이신;
    Figure pct00558
    아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
    Figure pct00559
    캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
  72. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 구조 RKAA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
  73. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 구조 RKA-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
  74. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 구조 ARK-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
  75. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 구조 RKR-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
  76. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B를 갖고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 항체-약물 접합체.
  77. 하기 구조를 포함하는 링커 작제물 (linker construct):
    (Sp1)-RK-(Sp2)-B-(Sp3) 또는
    (Sp1)-B-(Sp2)-RK-(Sp3);
    상기에서
    Figure pct00560
    (Sp1)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00561
    (Sp2)는 화학적 스페이서이거나 또는 부재하며;
    Figure pct00562
    (Sp3)은 화학적 스페이서이거나 또는 부재하고;
    Figure pct00563
    R은 아르기닌 또는 아르기닌 유도체 또는 아르기닌 모방체이며;
    Figure pct00564
    K는 리신 또는 리신 유도체 또는 리신 모방체이고;
    Figure pct00565
    B는 연결 모이어티 또는 페이로드이다.
  78. 청구항 77에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp1), (Sp2) 및 (Sp3)은 각각 독립적으로 0 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함하는 링커 작제물.
  79. 청구항 77 또는 78에 있어서, 링커는 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 또는 4개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 링커 작제물.
  80. 청구항 77 내지 79 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 순전하는 중성 또는 양성인 링커 작제물.
  81. 청구항 77 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 음으로-하전된 아미노산 잔기를 포함하지 않는 링커 작제물.
  82. 청구항 77 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 아미노산 서열 RKAA (서열 번호: 1), RKA (서열 번호: 2), ARK (서열 번호: 3), RKR (서열 번호: 4) 또는 RK-Val-Cit (서열 번호: 54)를 포함하는 링커 작제물.
  83. 청구항 77 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, B는 연결 모이어티인 링커 작제물.
  84. 청구항 83에 있어서, 연결 모이어티 B는
    Figure pct00566
    생물직교 마커 기, 또는
    Figure pct00567
    가교를 위한 비-생물-직교 엔티티를 포함하는 링커 작제물.
  85. 청구항 84에 있어서, 생물직교 마커 기 또는 가교를 위한 비-생물-직교 엔티티는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 분자 또는 모이어티로 구성되거나 또는 이를 포함하는 링커 작제물:
    Figure pct00568
    -N-N≡N, 또는 -N3;
    Figure pct00569
    Lys(N3);
    Figure pct00570
    테트라진;
    Figure pct00571
    알킨;
    Figure pct00572
    스트레인드 사이클로옥틴;
    Figure pct00573
    BCN;
    Figure pct00574
    스트레인드 알켄;
    Figure pct00575
    광반응성 기;
    Figure pct00576
    알데히드;
    Figure pct00577
    아실트리플루오로보레이트;
    Figure pct00578
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00579
    사이클로펜타디엔/스피롤로사이클로펜타디엔;
    Figure pct00580
    티오-선택적 친전자체;
    Figure pct00581
    -SH; 및
    Figure pct00582
    시스테인.
  86. 청구항 77 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKAA-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
  87. 청구항 77 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKA-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
  88. 청구항 77 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 ARK-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
  89. 청구항 77 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 B-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 Lys(N3) 또는 시스테인인 링커 작제물.
  90. 청구항 77 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, B는 페이로드인 링커 작제물.
  91. 청구항 90에 있어서, 페이로드는 하기 중 적어도 하나를 포함하는 링커 작제물:
    Figure pct00583
    독소;
    Figure pct00584
    사이토카인;
    Figure pct00585
    성장 인자;
    Figure pct00586
    방사성핵종;
    Figure pct00587
    호르몬;
    Figure pct00588
    항-바이러스제;
    Figure pct00589
    항-박테리아제;
    Figure pct00590
    형광 염료;
    Figure pct00591
    면역조절제/면역자극제;
    Figure pct00592
    반감기 증가 모이어티;
    Figure pct00593
    용해도 증가 모이어티;
    Figure pct00594
    폴리머-독소 접합체;
    Figure pct00595
    핵산;
    Figure pct00596
    바이오틴 또는 스트렙타비딘 모이어티;
    Figure pct00597
    비타민;
    Figure pct00598
    단백질 분해제 ('PROTAC');
    Figure pct00599
    표적 결합 모이어티; 및/또는
    Figure pct00600
    항-염증제.
  92. 청구항 91에 있어서, 독소는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 링커 작제물:
    Figure pct00601
    피롤로벤조디아제핀 (예: PBD);
    Figure pct00602
    아우리스타틴 (예: MMAE, MMAF);
    Figure pct00603
    메이탄시노이드 (예: 메이탄신, DM1, DM4, DM21);
    Figure pct00604
    두오카르마이신;
    Figure pct00605
    니코틴아미드 포스포리보실트란스퍼라제 (NAMPT) 억제제;
    Figure pct00606
    튜불리신;
    Figure pct00607
    엔디인 (예: 칼리케아미신);
    Figure pct00608
    안트라사이클린 유도체 (PNU) (예: 독소루비신);
    Figure pct00609
    피롤-계 키네신 스핀들 단백질 (KSP) 억제제;
    Figure pct00610
    크립토피신;
    Figure pct00611
    약물 유출 펌프 억제제;
    Figure pct00612
    산드라마이신;
    Figure pct00613
    아마니틴 (예: α-아마니틴); 및
    Figure pct00614
    캄프토테신 (예: 엑사테칸, 데룩스테칸).
  93. 청구항 90 내지 92 중 어느 한 항에 있어서, 화학적 스페이서 (Sp2)가 자기-희생 모이어티를 포함하는 링커 작제물.
  94. 청구항 93에 있어서, 자기-희생 모이어티가 페이로드 B에 직접 부착되는 링커 작제물.
  95. 청구항 93 또는 94에 있어서, 자기-희생 모이어티가 p-아미노벤질 카바모일 (PABC) 모이어티를 포함하는 링커 작제물.
  96. 청구항 90 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKAA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
  97. 청구항 90 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 RKA-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
  98. 청구항 90 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 ARK-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
  99. 청구항 90 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 B-PABC-RKR로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
  100. 청구항 90 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, 링커 작제물는 구조 RK-Val-Cit-PABC-B로 구성되거나 또는 이를 포함하고, 구체적으로 상기 B는 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드이고, 구체적으로 상기 아우리스타틴은 MMAE이고, 메이탄시노이드는 DM1 또는 메이탄신인 링커 작제물.
  101. 미생물 트란스글루타미나제에 의한 항체-링커 접합체의 생성에서 청구항 77 내지 100 중 어느 한 항에 따른 링커 작제물의 용도.
  102. 청구항 99에 있어서, 항체는 IgG 항체, 구체적으로 IgG1 항체인 용도.
  103. 청구항 101 또는 102에 있어서, 항체는 폴라투주맙, 트라스투주맙 또는 엔포르투맙인 용도.
  104. a) 청구항 34 내지 63 중 어느 한 항에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체 (antibody-linker conjugate); 또는
    b) 청구항 64 내지 76 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate); 및
    적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분을 포함하는 약학 조성물을 포함하는,
    약학 조성물 (pharmaceutical composition).
  105. 청구항 104에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 치료 활성물질 (therapeutically active agent)를 포함하는 약학 조성물.
  106. 요법 (therapy) 및/또는 진단 (diagnostics)에 사용하기 위한, 청구항 34 내지 63 중 어느 한 항에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 청구항 64 내지 76 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 청구항 104 또는 105에 따른 약학 조성물.
  107. 신생물 질환 (neoplastic disease), 신경계 질환 (neurological disease), 자가면역 질환 (autoimmune disease), 염증성 질환 (inflammatory disease) 또는 감염성 질환 (infectious disease)을
    Figure pct00615
    앓고 있고,
    Figure pct00616
    발병 위험이 있으며, 및/또는
    Figure pct00617
    진단받은
    환자의 치료에 사용하기 위한, 청구항 34 내지 63 중 어느 한 항에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 청구항 64 내지 76 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 청구항 104 또는 105에 따른 약학 조성물.
  108. 청구항 107에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 폴라투주맙을 포함하고, 신생물 질환은 B-세포 관련 암 (B-cell associated cancer)인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  109. 청구항 108에 있어서, B-세포 관련 암은 비-호지킨 림프종 (non-Hodgkin lymphoma)이고, 구체적으로 B-세포 관련 암은 미만성 거대 B-세포 림프종 (diffuse large B-cell lymphoma)인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  110. 청구항 108 또는 109에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 벤다무스틴 (bendamustine) 및/또는 리툭시맙 (rituximab)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  111. 청구항 107에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 트라스투주맙을 포함하고, 신생물 질환은 HER2-포지티브 암 (HER2-positive cancer), 구체적으로 HER2-포지티브 유방암, 위암, 난소암 또는 폐암인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  112. 청구항 111에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 라파티닙 (lapatinib), 카페시타빈 (capecitabine) 및/또는 탁산 (taxane)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  113. 청구항 107에 있어서, 약학 조성물에 포함된 항체-링커 접합체 또는 항체-약물 접합체는 엔포르투맙 또는 엔포르투맙 변이체를 포함하고, 신생물 질환은 Nectin-4 포지티브 암 (Nectin-4 positive cancer), 구체적으로 Nectin-4 포지티브 췌장암, 폐암, 방광암 또는 유방암인 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  114. 청구항 113에 있어서, 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물이 시스플라틴-기반 화학요법제 (cisplatin-based chemotherapeutic agent) 및/또는 펨브롤리주맙 (Pembrolizumab)과 병용하여 투여되는 항체-링커 접합체, 항체-약물 접합체, 또는 약학 조성물.
  115. 신생물 질환, 신경계 질환, 자가면역 질환, 염증성 질환 또는 감염성 질환을
    Figure pct00618
    앓고 있고,
    Figure pct00619
    발병 위험이 있으며, 및/또는
    Figure pct00620
    진단받은
    환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 청구항 34 내지 63 중 어느 한 항에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 청구항 64 내지 76 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 청구항 104 또는 105에 따른 약학 조성물.
  116. 청구항 34 내지 63 중 어느 한 항에 따른 항체-링커 접합체, 구체적으로 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 항체-링커 접합체, 청구항 64 내지 76 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체, 또는 청구항 104 또는 105에 따른 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는,
    신생물 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
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