KR20230026446A - 재조합 항-pd-1 단일클론 항체를 위한 안정한 제형 - Google Patents

재조합 항-pd-1 단일클론 항체를 위한 안정한 제형 Download PDF

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핑 후
얀 리우
춘윤 선
칭루 화이
샤오메이 톈
밍전 타오
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사이노셀테크 엘티디.
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Abstract

재조합 항-PD-1 단일클론 항체, 완충액, 삼투압 조절제, 산화제, 및 계면활성제로 이루어진 재조합 단일클론 항체를 위한 안정한 제형이 제공된다. 약제학적 제형은 항체의 안정성을 향상시킬 수 있고 수성 제형에서 항체의 유효 기간을 연장시킨다.
도 8이 요약 도면으로 선택된다.

Description

재조합 항-PD-1 단일클론 항체를 위한 안정한 제형
관련 출원의 교차-참조
본 출원은 2020년 6월 19일 출원된 중국 특허 출원 제202010566153.8호의 이익을 주장하며, 이의 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은 생물의약 제제 분야에 관한 것이며, 특히, 재조합 항-PD-1 단일클론 항체를 위한 안정한 제형에 관한 것이다.
프로그래밍된 세포 사멸 수용체 1로 알려진 PD-1은 CD28 패밀리의 한 구성원이며, CD279로도 알려져 있다. 이는 프로그래밍된 세포 사멸의 조절제로 기능하고 주로 성숙한 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 표면 상에 발현되며, 자연 살해 T 세포, B 세포, 단핵구, 및 일부 수지상 세포의 표면 상에도 발현된다. PD-1은 T 세포의 면역 조절에 관여한다.
PD-1은 2개의 리간드: PD-L1 및 PD-L2을 가지며, 이들은 항원-존재 세포 상에서 정상 발현되고, PD-1에 결합하면, T 세포의 활성화 및 증식을 억제한다. 정상적인 상황에서, 면역계는 림프절 또는 비장에 축적된 외래 항원들에 반응하여, T 세포의 항원 특이적 활성화 및 증식을 촉진한다. 대조적으로, PD-L1에 대한 PD-1의 결합은 음성 조절 신호를 전달하고 T-세포 활성화 및 증식을 억제한다.
종양 세포들이 T 세포 사멸로부터 회피하는 방법들 중 하나는 이들의 세포 표면 상에 PD-L1을 발현시키는 것이다. PD-L1이 종양 항원-특이적 T 세포의 표면 상의 PD-L1에 결합하는 경우, 이는 음성 조절 신호를 전달하여, 종양 항원-특이적 T 세포가 종양 세포를 모니터링하여 종양 세포에 대한 공격 신호를 전달하는 것을 못하게 하여, 종양 세포가 신체에 의한 면역 감시(immune surveillance) 및 사멸을 회피하게 된다.
PD-1에 대한 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고, PD-1의 PD-L1과의 상호작용을 차단하고, PD-1/PD-L1-매개 T-세포 면역억제를 해제시키며, 이로 인해 T-세포 활성화를 유도하고 종양 세포를 모니터링하고 공격하는 신체의 능력을 재확립한다.
하지만, 투여 전에, 항체 제형은 항체의 물리적 및 화학적 분해가 일어나는 동안 저장 및 수송 과정을 거치고, 이러한 불안정성은 항체의 효능(potency)을 감소시키고/시키거나 항체의 면역원성을 증가시키기 때문에, 투여 전까지 항체가 치료적으로 활성 및 안전성(safety)을 유지하는 것을 보장하는 안정한 제형이 필요하다.
요약
본 발명에 의해 해결하고자 하는 기술적 과제는 재조합 항-PD-1 단일클론 항체를 위한 안정한 제형을 제공하는 것이다. 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 이 제형에서 우수한 안정성을 갖는다.
본 발명의 제1 측면은 재조합 항-PD-1 단일클론 항체, 완충액, 삼투압 조절제(osmolarity regulator), 안정화제(stabilizer), 및 계면활성제를 포함하는 안정화된 제형에 관한 것이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체의 농도는 10-50 mg/mL, 바람직하게는, 10-25 mg/mL의 재조합 항-PD-1 단일클론 항체이고;
상기 완충액의 농도는 10-50 mM, 바람직하게는, 20-40 mM의 완충액이고;
상기 삼투압 조절제의 농도는 20-200 mM, 바람직하게는, 80-160 mM이고;
상기 안정화제의 농도는 10-250 mM, 바람직하게는, 20-205 mM이고;
상기 계면활성제의 농도는 0.005-0.05 wt%, 바람직하게는, 0.02-0.04 wt%이고;
용액의 pH는 5.5-6.5, 바람직하게는, 5.8-6.2이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 완충액은 시트르산 완충액, 아세테이트 완충액, 또는 히스티딘 완충액 중 하나 이상으로부터 선택되고;
상기 삼투압 조절제는 염화나트륨으로부터 선택되고;
상기 안정화제는 수크로스, 트레할로스, 또는 아르기닌 염산염 중 하나 이상이고, 바람직하게는,
205 mM 수크로스, 또는 20 mM - 80 mM 아르기닌 염산염, 또는 200 mM 트레할로스이고;
상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80으로부터 선택된다.
이의 구현예들 중 하나에서,
이 제형 용액의 pH는 6.0이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
이 제형은 25 mg/mL 재조합 항-PD-1 단일클론 항체; 20 mM 히스티딘 완충액, 120 mM 염화나트륨, 40 mM 아르기닌 염산염, 및 0.02 wt% 폴리소르베이트 80을 함유한다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
이때, 상기 경쇄 가변 영역은 아미노산 서열 서열 번호 1을 갖는 경쇄 CDR1, 아미노산 서열 서열 번호 2를 갖는 경쇄 CDR2, 및 아미노산 서열 서열 번호 3을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하고;
상기 중쇄 가변 영역은 아미노산 서열 서열 번호 4를 갖는 중쇄 CDR1, 아미노산 서열 서열 번호 5를 갖는 중쇄 CDR2, 및 아미노산 서열 서열 번호 6을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 PD-1 항체 경쇄 가변 영역 서열 서열 번호 8과 적어도 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및/또는 PD-1 항체 중쇄 가변 영역 서열 서열 번호 7과 적어도 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 항체는 경쇄 불변 영역 및 중쇄 불변 영역을 더 포함하고, 바람직하게는, 상기 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 10의 카파(kappa) 경쇄 불변 영역과 적어도 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 및/또는 상기 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 9의 IgG4 중쇄 불변 영역과 적어도 90%, 92%, 95%, 98% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 IgG 항체, 바람직하게는, IgG4 항체이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 단일클론 항체이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
재조합 인간 PD-1 단백질에 대한 상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체의 평균 친화도인 평균 KD는 20-200 pM, 바람직하게는, 60-70 pM, 더욱 바람직하게는, 64.8 pM이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 제형은 수성 형태 또는 동결건조된(lyophilized) 형태이다.
이의 구현예들 중 하나에서,
상기 제형은 2~8℃에서 적어도 42개월 및 25℃에서 적어도 12개월 동안 안정적으로 저장될 수 있다.
본 발명의 제2 측면은 종양 또는 암, 바람직하게는 결장암의 치료를 위한 약제의 제조에서 본 발명의 제형의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 제3 측면은 종양 또는 암, 바람직하게는 결정암의 치료를 위한 본 발명의 제형의 용도에 관한 것이다.
도 1은 0주차, 3주차, 및 5주차에 4℃ 및 37℃에서 실시예 1의 각 제형 샘플의 순도 경향을 나타낸다.
도 2는 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 1의 각 제형 샘플의 산성 피크(acidic peak) 경향을 나타낸다.
도 3은 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 2의 각 제형 샘플의 순도 경향을 나타낸다.
도 4는 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 2의 각 제형 샘플의 산성 피크 경향을 나타낸다.
도 5는 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 3의 각 제형 샘플의 순도 경향을 나타낸다.
도 6은 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 3의 각 제형 샘플의 산성 피크 경향을 나타낸다.
도 7은 0주, 3주, 및 5주 동안 4℃ 및 37℃에서 실시예 4의 각 제형 샘플의 순도 경향을 나타낸다.
도 8은 0주, 1주, 2주, 및 4주 동안 -80℃ 및 45℃에서 실시예 5의 각 제형 샘플의 순도 경향을 나타낸다.
상세한 설명
본 발명은 저장 및 운송 동안의 항체 안정성 문제를 해결하는 재조합 항-PD-1 단일클론 항체의 안정한 제형을 제공한다. 상기 항체는 환자에 투여하기 전에 치료 목적을 위한 활성 및 안전성을 유지하도록 보장된다.
용어 "제형(formulation)"은 활성 성분의 생물학적 활성을 효과적인 방식으로 유지하고 대상체에게 허용되지 않을 정도로 독성인 다른 성분을 함유하지 않는 조성물을 지칭한다. 이러한 제제는 멸균된 것이다. 용어 "멸균"은 살아 있는 박테리아의 부재 또는 모든 살아 있는 미생물 및 이의 포자의 부재 또는 실질적인 부재를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "안정한(stable)" 제형은 활성 성분이 저장 후에도 실질적으로 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성, 및/또는 생물학적 활성을 유지하는 제형을 지칭한다. 바람직하게는, 상기 제형은 저장 후에 실질적으로 이의 물리적 및 화학적 안정성뿐만 아니라, 이의 생물학적 활성을 유지한다.
용어 "환자" 또는 "대상체"는 상호교환적으로 사용 가능하고, 본 발명에 따른 병태 또는 질병을 앓는 임의의 포유동물을 지칭한다. 바람직하게는, 상기 포유동물은 인간이다.
본 발명의 안정화된 제형은 재조합 항-PD-1 단일클론 항체, 완충액, 삼투압 조절제, 안정화제, 및 계면활성제를 포함한다.
용어 "포함하다" 및 "함유하다"는 앞서 언급된 성분에 더하여 추가 성분들이 포함될 수 있음을 의미한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용될 때, 단수 형태 "하나(one)," "한(a)," "또 다른(another)," 및 "상기(said)"는 문맥상 달리 명시하지 않는 한 대상의 복수의 지시 대상을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "완충액"은 짝 산-염기 쌍의 작용을 통해 pH 변화에 저항하는 완충 용액을 지칭한다. 본 발명의 구현예에서, 히스티딘 완충 용액이 선택되며, 바람직하게는, 약 5.5 내지 약 6.5, 바람직하게는, 약 6의 pH를 갖는 히스티딘 완충 용액이 선택된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "계면활성제"는 표면 활성 제제(surface active agent)를 지칭하며, 일 구현예에서, 본 명세서의 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다.
용어 "삼투압 조절제"는 약제학적으로 허용가능한 삼투압 조절제를 지칭한다. 적합한 삼투압 조절제는, 약 80 mM 내지 약 160 mM의 농도의 염, 본 발명의 일 구현예에서, 염화나트륨 (NaCl)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "안정화제"는 아미노산 및 당을 포함하나, 이에 제한되지 않는 약제학적으로 허용가능한 안정화제를 지칭하며, 예컨대, 본 발명의 구현예에서, 아르기닌 염산염, 수크로스, 및 트레할로스는, 단독으로 사용되거나 약 20-80 mM 아르기닌 염산염, 약 205 mM 수크로스, 및 약 200 mM 트레할로스의 농도로 조합하여 사용될 수 있다.
단백질 "안정성(stability)"은 선택된 기간 동안에 선택된 온도에서 저장한 후에 응집체 형성의 평가 (예를 들어 크기 배제 크로마토그래피 사용, 탁도(turbidity) 측정, 및/또는 육안 검사에 의함); 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전 집중법(capillary isoelectric focusing; icIEF) 또는 모세관 구역 전기영동(capillary zone electrophoresis)을 사용한 전하 이질성의 평가; 아미노-말단 또는 카르복시-말단 서열의 분석법; 질량 분석법; 환원된 항체와 온전한 항체를 비교하는 SDS-PAGE 분석법; 펩티드 매핑 (예를 들면, 트립신 또는 LYS-C) 분석법; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능의 평가 등을 포함하는 몇 가지 다양한 방식들로 정성적 및/또는 정성적으로 평가될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 선택된 기간의 저장 후에 샘플의 순도는 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피: 상이한 분자 크기에 따른 분리 및 정량화, 및 그에 따른 샘플 단량체, 응집체, 및 단편의 양에 대한 정보 수득에 의해 검출되고; 전하 이성질체는 양이온 고성능 액체 크로마토그래피 (CEX-HPLC): 상이한 단백질 전하에 따른 분리 및 정량화, 및 그에 따른 샘플의 전하 이질성에 대한 정보 수득에 의해 검출되거나; 전하 이성질체는 이미징 모세관 등전 집중 전기영동 (IEF): 단백질들의 상이한 등전점에 기초하여 분리 및 정량화, 그에 따른 샘플 중 산성 및 염기성 단백질의 양에 대한 정보 수득에 의해 검출되고; 샘플의 "생물학적 활성"은 리포터 유전자 검정에 의해 결정되고, 이는 PD-1 및 루시페라제를 발현하는 이펙터 세포에 대한 PD-L1-발현 표적 세포의 결합이 루시페라제 발현을 억제하고, PD-1 항체의 첨가가 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 차단한다는 원리에 기초하기 때문에, PD-1 항체의 생물학적 활성은 루시페라제 발현의 강도를 분석함으로써 결정할 수 있다.
용어 "항체"는 이뮤노글로불린 분자를 지칭하며 원하는 생물학적 활성을 나타내는 임의의 형태의 항체를 지칭한다. 이는, 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체를 포함), 다중클론 항체 및 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체) 및 심지어 항체 단편을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 통상적으로, 전장 항체 구조는 바람직하게는 통상적으로 이황화 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)인 4개의 폴리펩티드 사슬들을 함유한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 함유한다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 함유한다. 이 통상적인 전장 항체 구조에 더하여, 상기 구조는 다른 유도체 형태 또한 포함한다.
용어 "가변 영역"은 항원에 대한 항체 결합에 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 (각각, VH 및 VL)은, 일반적으로 유사한 구조를 가지며 보다 보존된 영역 (프레임워크 영역 (FR)로 불림)에 산재되어 있는 초가변 영역 (상보성 결정 영역 (CDR)로 불림)으로 더 세분될 수 있다.
용어 "상보성 결정 영역" (CDR, 예를 들면, CDR1, CDR2, 및 CDR3)은 그 존재가 항체 결합에 필수적인 항체의 가변 영역의 이러한 아미노산 잔기들을 지칭한다. 각 가변 영역은 통상적으로 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 식별되는 3개의 CDR 영역들을 갖는다. 각 상보성 결정 영역은 Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. 1991) 및/또는 “초가변 루프(highly variable loop)" (Chothia 및 Lesk; J Mol Biol 196: 901- 917 (1987))의 잔기들로 정의되는 “상보성 결정 영역”의 아미노산 잔기들을 함유할 수 있다.
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 각각은 통상적으로 3개의 CDR들 및 최대 4개의 FR들을 함유하며, 상기 CDR들 및 FR들은 예를 들면 하기 순서, FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노산 말단에서 카르복실 말단까지 배열된다.
소정의 항체의 상보성 결정 영역 (CDR) 및 프레임워크 영역 (FR)은 Kabat 시스템 (Kabat et al: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edition, U.S. Department of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication No. 91-3242, 1991)을 사용하여 식별될 수 있다.
용어 "불변 영역"은 항체-항원 결합에 직접 관여하지는 않지만, 항체 의존성 세포독성과 같은 다양한 이펙터 기능들을 나타내는, 항체의 경쇄 및 중쇄의 이러한 아미노산 서열들을 지칭한다.
"항체의 항원 결합 단편"은 모 항체의 결합 특이성의 적어도 일부를 보유하고 통상적으로 모 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역의 적어도 일부 (예를 들면, 하나 이상의 CDR들)을 포함한다. 항원 결합 단편의 예시는, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fd 단편, Fd' 단편, 단쇄 항체 분자 (예를 들면, scFv, di-scFv 또는 tri-scFv, 이분 항체(bipartite antibodies) 또는 scFab), 및 단일-도메인 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
"항체 단편"은 모 항체의 생물학적 성질의 적어도 일부를 보유한 비-온전 항체이며, 앞서 “항원 결합 단편”으로 기술된 것에 더하여, Fc 단편을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 공급원 또는 종으로부터 유래하고 나머지는 다른 공급원 또는 종으로부터 유래한 항체를 지칭한다. "인간화된 항체"는 “키메라 항체”의 하위집합이다.
용어 "인간화된 항체" 또는 "인간화된 항원 결합 단편"은 본 명세서에서 하기 항체 또는 항체 단편으로 정의된다: (i) 비인간 공급원 (예를 들면, 이종 면역 시스템을 보유한 형질전환 마우스)로부터 유래하고 인간 생식계열 서열에 기초한 항체; 또는 (ii) 가변 영역은 비인간 기원이고 불변 영역은 인간 기원인 키메라 항체; 또는 (iii) 가변 영역의 CDR은 비인간 기원이고 가변 영역의 프레임워크 영역들 중 하나 이상은 인간 기원이며 불변 영역 (있는 경우)은 인간 기원인, CDR 이식체(CDR graft). "인간화”의 목적은 가능한 최상의 친화도를 유지하면서 인간에서 비인간 기원 항체의 면역원성을 제거하는 것이다. 인간화를 위한 주형으로서 비인간 공급 항체의 프레임워크 영역 서열과 가장 유사한 인간 프레임워크 영역 서열을 선택하는 것이 유리하다. 일부 경우에서, 친화도 손실을 방지하기 위해 인간 프레임워크 영역 서열의 하나 이상의 아미노산 서열을 비인간 프레임워크 영역의 대응하는 잔기들로 교체하는 것이 필요할 수 있다.
용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 유래한 항체를 지칭하며, 즉, 이 집단에 포함된 모든 단일 항체는 매우 소량으로 존재할 수 있는 가능한 돌연변이 (예를 들면, 자연적 돌연변이)를 제외하고 동일하다. 따라서, 용어 "단일클론"은 상기 항체들의 성질, 즉, 관련 없는 항체들의 혼합물이 아님을 나타낸다. 일반적으로 상이한 항원 결정기 (에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체 제제와 대조적으로, 단일클론 항체 제제의 각 단일클론 항체는 별개의 항원 결정기에 대해 지시된다. 이의 특이성에 더하여, 단일클론 항체 제제는 일반적으로 다른 항체들로 오염되지 않는다는 이점을 갖는다. 용어 "단일클론"은 상기 항체를 생산하는 임의의 특정 방법을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 용어 단일클론 항체는 구체적으로 키메라 항체, 인간화된 항체, 및 인간 항체를 포함한다.
항체가 종양-관련 펩티드 항원 표적 (본 명세서에서, PD-1)과 같은 표적 항원에 “특이적으로 결합”하는데, 즉, 상기 항체가 치료제로 사용되도록 상기 항원에 충분한 친화도로 결합하며, 상기 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적하고 앞서 언급된 항원성 표적의 동족체 및 변이체 (예를 들면, 돌연변이 형태, 스플라이스 변이체, 또는 단백질 분해 절단된 형태)이외의 단백질과 유의하게 교차-반응하지 않는다.
용어 "결합 친화도"는 분자의 개별 결합 부위 및 이의 결합 파트너 사이의 비공유결합 상호작용의 합의 강도를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 "결합 친화도"는 본래의 결합 친화도를 지칭하며, 결합 쌍의 구성원들 (예를 들면, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영한다. "KD", "결합 속도 상수 kon" 및 "해리 속도 상수 koff"는 일반적으로 분자 (예를 들면, 항체) 및 이의 결합 파트너 (예를 들면, 항원) 사이의 친화도, 즉, 리간드가 특정 단백질에 얼마나 단단히 결합하는 지를 기술하기 위해 사용된다. 결합 친화도는 두 분자 사이의 수소 결합, 정전기적 상호작용, 소수성 및 반데르발스 힘과 같은 비공유결합 분자간 상호작용에 의해 영향을 받는다. 또한, 리간드 및 이의 표적 분자 사이의 결합 친화도는 다른 분자의 존재에 의해 영향을 받을 수 있다. 친화도는 본 명세서에 기술된 ELISA 방법을 포함하여 당업계에 공지된 기존의 방법들에 의해 분석될 수 있다.
"단리된" 항체는 항체를 자연적으로 발현하는 세포로부터 식별되고 단리된 항체이다. 단리된 항체는 재조합 세포의 인 시츄(in situ) 항체 및 적어도 하나의 정제 단계에 의해 통상적으로 제조되는 항체들을 포함한다.
2개의 펩티드 또는 핵산 서열들 사이의 "서열 동일성"은 상기 서열들 사이에서 동일한 잔기들의 수를 총 잔기 수의 백분율로 나타낸다. 퍼센트 동일성을 계산할 때, 비교되는 서열들은 서열들 사이에 최대 매치(match)를 생성하는 방식으로 매칭되고, 매치에서 빈 위치 (존재하는 경우)는 특정한 알고리즘에 의해 해결된다. 두 서열들 사이의 동일성을 결정하는 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법들은, GAP, BLASTP, BLASTN, 및 FASTA (Altschul et al. 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410)를 포함하는 GCG 프로그램 패키지를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상기 절차들은 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 및 다른 공급원들로부터 공개적으로 사용될 수 있다. 익히 공지된 Smith Waterman 알고리즘 동일성을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 2019년 12월 19일 출원된 특허 출원 제PCT/CN2019/126594호에 기술된 재조합 항-PD-1 단일클론 항체를 사용하고, 특히 바람직한 구현예에서, PD1-H944 항체를 사용한다. 제PCT/CN2019/126594호는 본 명세서 및 청구범위에 참조로 도입된다.
본 발명의 특히 바람직한 일 구현예에서, 제형은 25 mg/mL PD1-H944 항체; 20 mM 히스티딘 완충액, 120 mM 염화나트륨, 40 mM 아르기닌 염산염, 및 0.02 wt% 폴리소르베이트 80을 함유한다. 이 제형은 우수한 안정성을 갖고 2 내지 8℃에서 적어도 42개월 동안 및 25℃에서 적어도 12개월 동안 안정하다.
본 발명의 제형은 액체 형태로 제공되거나 동결건조된 형태로 제공될 수 있다. 이는 투여 전에 동결건조된 제형으로 재구성함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 제형은 종양 또는 암, 바람직하게는 결장암을 치료할 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 구현예들을 참조하여 보다 완전히 이해될 것이다. 하지만, 이들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 모든 문헌, 특허, 및 특허 출원은 본 명세서에 참조로 포함된다.
하기 구현예에서, 사용되는 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 PD1-H944이고, 이의 준비(preparation), 특성화, 및 성능 식별은 2019년 12월 19일 출원된 제 PCT/CN2019/126594호에 기술되어 있다.
하기 구현예에서, 사용된 검출 방법은 하기에 기술된 것과 같다.
(1) 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피 (SEC-HPLC)
컬럼 사용: TSKgel G3000SWX 겔 여과 컬럼 (7.8Х300mm, 5μm) (카탈로그 번호 0008541), 이동상은 SEC 이동상이었고 (200mM 인산 수소 이나트륨, 100mM 아르기닌, pH6.50, 1% 이소프로판올), UV 검출 파장은 280nm이었고, 컬럼 온도는 25℃이었고, 80μg의 테스트 샘플을 액체 크로마토그래프에 주입하였고, 샘플 순도는 면적 정규화 방법 (중국 약전 (2015년 III판)의 일반 규칙 0514)에 따라 계산하였다.
2) 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피 (CEX-HPLC)
이동상으로서 상 A (10 mM PB, pH=7.0) 및 상 B (10 mM PB, 200 mM NaCl, pH=7.0)와 함께 약한 양이온 교환 컬럼 WCX-10 (4*250 mm) (제품 번호. 054993)을 사용했고, UV 검출 파장은 280 nm이었고, 컬럼 온도는 35 ℃이었다. SCT-I10A의 구배 용출을 하기 표에 따라 수행했다.
Figure pct00001
80 μg의 테스트 샘플을 액체 크로마토그래프에 주입했고 샘플의 순도를 면적 정규화 방법에 따라 계산했다 (중화인민 공화국 약전 (2015년 버전 III판) 일반 규칙 0512 및 일반 규칙 0513 참조).
3) 이미징 모세관 등전 집중 전기영동 (IEF)
이미징 모세관 등정 집중 전기영동 기기를 사용하여 iCE3 검정을 수행했다. iCIEF에 대한 관련 매개변수들은 하기와 같았다: 테스트 샘플을 IEF를 위한 Pharmalyte 3-10, 1% 메틸셀룰로오스 (1% MC), 5.12 및 9.33의 pI를 갖는 pI 마커, 및 물과 혼합하여 분석을 위한 샘플 용액을 제조했다. 단백질의 최종 농도는 0.25 mg/mL이었고, 양쪽성 전해질의 최종 농도는 4%이었고, MC의 최종 농도는 최종 용액 중 0.35%이었다. 하기 집중 조건 하에서 ICE3 분석을 수행했다: 1 min 동안 1500 V; 6 min 동안 3000 V. 모세관에 전압을 인가한 후에, 샘플을 이의 pI 점에 집중시켰다. 검출 파장은 280 nm이고, UV 흡수 피크를 촬영한 다음에, 집중된 스펙트럼을 얻을 수 있었고, 샘플 중 산성 및 염기성 단백질의 양에 대한 정보를 계산으로 얻었다 (중국 약전, 2015년, IV판, 일반 규칙 0542 모세관 전기영동 방법).
4) 샘플의 "생물학적 활성"을 결정하기 위한 리포팅 유전자 방법
CHO-K1-PD-L1-CD3E 세포를 20K/웰로 96-웰 플레이트에 접종하고 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이팅한 다음에, 상층액을 제거했다. 세포에 작동 대조군 샘플 및 테스트 샘플의 연속 희석액을 40μL/웰로 첨가하여 40.000, 13.333, 4.444, 1.481, 0.494, 0.165, 0.055, 0.018, 및 0.006 μg/mL의 최종 농도로 만들었고, Jurkat-NFAT-Luc2p-PD-1 세포를 75K/웰 (40 μL/웰)로 첨가하고 5% CO2 환경 하에서 37℃에서 6 h동안 인큐베이팅하고, 세포를 용해하고 20 μL/웰의 세포 용해물을 96 웰 흰색 바닥 플레이트에 옮겨, 마이크로플레이트 발광 검출기 상에 배치했고, 생물발광 검출을 위해 60 μL/웰의 루시페라제 검정 시스템을 첨가했다. 샘플의 상대적 활성을, 샘플 농도의 로그값(logarithm)을 수평 좌표로 생물발광값 (RLU)를 수직 좌표로 플롯팅하고 4개-매개변수 방정식을 핏팅(fitting)하여 샘플 및 작업 대조군 샘플의 EC50 값을 얻음으로써 계산했다. 상대적 활성 (%) = 작업 대조군 샘플 EC50 / 샘플 EC50 Х 100% (Lan Wang, Chuanfei Yu , Yalan Yang, et al. Development of a robust reporter gene assay to measure the bioactivity of anti-PD-l / anti-PD-L1 therapeutic antibodies. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2017,145:447-453; 중국 약전, 2015년 IV판 일반 3523, 인터페론 생물학적 활성 검정 방법 II 리포터 유전자 방법).
실시예 1: 제형 용액 pH의 스크리닝
이 구현예를 위한 PD1-H944의 제형이 하기 표에 나타나 있다.
Figure pct00002
항체 제형의 제조 방법: 한외 여과에 의해 항체를 표적 완충액 (폴리소르베이트 80 및 항체를 제외한 모든 성분)으로 교환하고, 필요량의 폴리소르베이트 80으로 보충했고, 항체 농도를 25 mg/mL로 조정하고, 무균적으로 분배하여 각각 4℃ 냉장고 및 37℃ 온도 조절 장치에 배치하고, 분석 및 검출을 위해 0주차, 3주차, 및 5주차에 취하여, SEC -HPLC 및 IEF를 포함하는 검정들을 했다.
분석 및 검출 방법:
순도 검출: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피 (SEC-HPLC); 이의 검출 원리는 상이한 크기에 따라 분자들을 분리하고 정량화한 다음에, 샘플 단량체, 응집체, 및 단편의 양에 대한 정보를 얻는 것이다.
전하 이성질체: 이미징 모세관 등전 집중 전기영동 (IEF); 이의 검출 원리는 상이한 등전점에 따라 단백질을 분리하고 정량화한 다음에, 샘플 중 산성 및 염기성 단백질의 양에 대한 정보를 얻는 것이다; 항체 생성물의 경우, 산성 피크가 낮은 것이 적절하다.
테스트 결과는 첨부된 도 1 내지 2에 나타나 있다.
테스트 결과는 F3에서의 PD1-H944의 순도가 다른 제형들에서보다 높고 산성 피크는 다른 제형들보다 낮은 것을 보여주어, F3의 안정성이 다른 제형들보다 우수함을 나타냈다.
실시예 2: 항체 농도의 스크리닝
이 구현예를 위한 PD1-H944의 제형이 하기 표에 나타나 있다.
Figure pct00003
항체 제형의 제조 방법: 한외 여과에 의해 항체를 표적 완충액 (폴리소르베이트 80 및 항체를 제외한 모든 성분)으로 교환하고, 필요량의 폴리소르베이트 80으로 보충했고, 항체 농도를 각각 10 mg/mL 및 25 mg/mL로 조정하고, 무균적으로 분배하여 각각 4℃ 냉장고 및 37℃ 온도 조절 장치에 배치하고, 분석 및 검출을 위해 0주차, 3주차, 및 5주차에 취하여, SEC -HPLC 및 IEF를 포함하는 검정들을 했다.
분석 및 검출 방법:
순도 테스팅: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피.
전하 이성질체: 이미징 모세관 등전 집중 전기영동.
테스트 결과는 첨부된 도 3 내지 4에 나타나 있다.
검정 결과는 0, 3 및 5주 동안 37℃에 배치되는 경우에 F1 및 F2에서의 순도가 99%보다 높았고 산성 피크의 변화 경향이 기본적으로 동일한 것을 보여주어, F1 및 F2에서 PD1-H944의 안정성이 비슷했음을 나타냈다.
실시예 3: 계면활성제 농도의 스크리닝
이 구현예의 PD1-H944 제형이 하기에 나타나 있다.
Figure pct00004
항체 제형의 제조 방법: 한외 여과에 의해 항체를 표적 완충액 (폴리소르베이트 80 및 항체를 제외한 모든 성분)으로 교환하고, 필요량의 폴리소르베이트 80으로 보충했고, 항체 농도를 25 mg/mL로 조정하고, 무균적으로 분배하여 각각 4℃ 냉장고 및 37℃ 온도 조절 장치에 배치하고, 분석 및 검출을 위해 0주차, 3주차, 및 5주차에 취하여, SEC -HPLC 및 IEF를 포함하는 검정들을 했다.
분석 및 검출 방법:
순도 테스팅: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피.
전하 이성질체: 이미징 모세관 등전 집중 전기영동.
테스트 결과는 첨부된 도 5 내지 6에 나타나 있다.
검출 결과는 F1에서의 PD1-H944의 순도가 F2에서보다 더 높고, 산성 피크 변화 경향이 기본적으로 동일한 것을 보여주어, F1의 안정성이 F2의 안정성보다 우수했음을 나타냈다.
실시예 4: 삼투압 조절제 농도의 스크리닝
이 구현예의 PD1-H944 제형이 하기에 나타나 있다.
Figure pct00005
항체 제형의 제조 방법: 한외 여과에 의해 항체를 표적 완충액 (폴리소르베이트 80 및 항체를 제외한 모든 성분)으로 교환하고, 필요량의 폴리소르베이트 80으로 보충했고, 항체 농도를 25 mg/mL로 조정하고, 무균적으로 분배하여 각각 4℃ 냉장고 및 37℃ 온도 조절 장치에 배치하고, 분석 및 검출을 위해 0주차, 3주차, 및 5주차 각각에 취했다.
분석 및 검출 방법:
순도 테스트: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피.
테스트 결과는 첨부된 도 7에 나타나 있다.
검정 결과는 F1에서의 PD1-H944의 순도가 F2 및 F3에서보다 높은 것을 보여주어, F1의 안정성이 F2 및 F3의 안정성보다 더 우수했음을 나타냈다.
실시예 5: 안정화제 및 안정화제 농도의 스크리닝
이 구현예의 PD1-H944 제형이 하기에 나타나 있다.
Figure pct00006
*각 제형에서 pH 6.0
항체 제형의 제조 방법: 한외 여과에 의해 항체를 표적 완충액 (폴리소르베이트 80 및 항체를 제외한 모든 성분)으로 교환하고, 필요량의 폴리소르베이트 80으로 보충했고, 항체 농도를 25 mg/mL로 조정하고, 무균적으로 분배하여 각각 -80℃ 냉장고 및 45℃ 온도 조절 장치에 배치하고, 분석 및 검출을 위해 0주차, 1주차, 2주차 및 4주차 각각에 취했다.
분석 및 검출 방법:
순도 테스트: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피.
테스트 결과는 첨부된 도 8에 나타나 있다.
테스트 결과는 4주 동안 45℃에서 F1에서의 PD1-H944의 순도가 다른 제형들보다 높은 것을 보여주어, F1의 안정성이 다른 제형들보다 우수했음을 나타냈다.
실시예 6: 제형 확인 검정
재조합 PD-1 단일클론 항체 제형들의 3개의 배치들 (25 mg/mLPD1-H944 + 20 mM 히스티딘 완충액 + 120 mM 염화나트륨 + 40 mM 아르기닌 염산염 + 0.02 wt% 폴리소르베이트 80, pH 6.0의 제조 공식)을 2~8℃ 및 25±2℃에서의 안정성에 대해 분석했고, SEC-HPLC, CEX-HPLC 및 생물학적 활성으로 분석했다.
분석 및 검출 방법:
순도 테스팅: 분자 배제 고성능 액체 크로마토그래피.
전하 이성질체: 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피 (CEX-HPLC); 이의 검출 원리는 상이한 전하에 따라 단백질을 분리하고 정량화하여, 샘플의 전하 이질성(heterogeneity)에 대한 정보를 얻는 것이다.
생물학적 활성: 리포터 유전자 방법; 이 검정의 원리는 PD-1 및 루시페라제를 발현하는 이펙터 세포에 대한 PD-L1-발현 표적 세포의 결합이 루시페라제의 발현을 억제하고, PD-1 항체의 첨가가 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 차단하기 때문에, PD-1 항체의 생물학적 활성은 루시페라제 발현의 강도를 분석함으로써 결정할 수 있다 (제PCT/CN2019/126594호 참조).
실험 결과는 표 6 내지 11에 나타나 있다.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
실험 결과는 본 발명에 개시된 PD1-H944 제형이 우수한 안정성을 가지고 2~8℃에서 적어도 42개월 동안 및 25℃에서 적어도 12개월 동안 안정적으로 저장될 수 있음을 나타낸다.
서열 목록
Figure pct00013
Figure pct00014
SEQUENCE LISTING <110> SINOCELLTECH LIMITED <120> STABLE FORMULATION FOR RECOMBINANT ANTI-PD-1 MONOCLONAL ANTIBODY <130> PCT69930SXB <160> 10 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 1 Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 2 Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 1 5 10 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 3 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 5 Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 6 Ser Arg Gln Tyr Gly Thr Val Trp Phe Phe Asn 1 5 10 <210> 7 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Gln Tyr Gly Thr Val Trp Phe Phe Asn Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 8 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 9 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> The sequence is artifically synthesized. <400> 10 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims (14)

10 내지 50 mg/mL의 재조합 항-PD-1 단일클론 항체, 바람직하게는, 10 내지 25 mg/mL의 재조합 항-PD-1 단일클론 항체;
10 내지 50 mM의 완충액, 바람직하게는, 20 내지 40 mM의 완충액;
20 내지 200 mM의 삼투압 조절제, 바람직하게는, 80 내지 160 mM의 삼투압 조절제;
10 내지 250 mM의 안정화제, 바람직하게는, 20 내지 205 mM의 안정화제; 및
0.005 내지 0.05 wt%의 계면활성제, 바람직하게는, 0.02 내지 0.04 wt%의 계면활성제;를 포함하는 안정한 제형으로서,
용액의 pH는 5.5 내지 6.5, 바람직하게는, 5.8 내지 6.2인 것인, 제형.
제1항에 있어서,
상기 완충액은 시트르산 완충액, 아세테이트 완충액, 또는 히스티딘 완충액 중 하나 이상으로부터 선택되고;
상기 삼투압 조절제는 염화나트륨으로부터 선택되고;
상기 안정화제는 수크로스, 트레할로스, 또는 아르기닌 염산염 중 하나 이상이고, 바람직하게는,
205 mM 수크로스, 또는 20 mM - 80 mM 아르기닌 염산염, 또는 200 mM 트레할로스이고;
상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80으로부터 선택되는 것인, 제형.
제1항 또는 제2항에 있어서, 제형 용액은 6.0의 pH를 갖는 것인, 제형.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 25 mg/mL 재조합 항-PD-1 단일클론 항체; 20 mM 히스티딘 완충액, 120 mM 염화나트륨, 40 mM 아르기닌 염산염, 및 0.02 wt% 폴리소르베이트 80을 포함하는, 제형.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하고,
상기 경쇄 가변 영역은 아미노산 서열 서열 번호 1을 갖는 경쇄 CDR1, 아미노산 서열 서열 번호 2를 갖는 경쇄 CDR2, 및 아미노산 서열 서열 번호 3을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하고;
상기 중쇄 가변 영역은 아미노산 서열 서열 번호 4를 갖는 중쇄 CDR1, 아미노산 서열 서열 번호 5를 갖는 중쇄 CDR2, 및 아미노산 서열 번호 6을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 것인, 제형.
제5항에 있어서, 상기 재조합 항-PD-1 단일클론 항체는 PD-1 항체 경쇄 가변 영역 서열 서열 번호 8과 적어도 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 및/또는 PD-1 항체 중쇄 가변 영역 서열 서열 번호 7과 적어도 90%, 92%, 95%, 98% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 제형.
제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 항체는 경쇄 불변 영역 및 중쇄 불변 영역을 더 포함하고, 바람직하게는, 상기 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 10의 카파(kappa) 경쇄 불변 영역과 적어도 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 및/또는 상기 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 9의 IgG4 중쇄 불변 영역과 적어도 90%, 92%, 95%, 98% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 것인, 제형.
제7항에 있어서, 상기 제형은 IgG 항체, 바람직하게는 IgG4 항체인, 제형.
제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 제형은 단일클론 항체인, 제형.
제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 20 내지 200 pM, 바람직하게는, 60 내지 70 pM, 더욱 바람직하게는, 64.8 pM의 KD 평균 친화도로 재조합 인간 PD-1 단백질에 결합하는 평균 KD를 갖는, 제형.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 수성 제형의 형태 또는 동결건조된 형태인, 제형.
종양 또는 암, 바람직하게는, 결장암의 치료를 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 기재된 제형의 용도.
종양 또는 암, 바람직하게는 결장암의 치료를 위한, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 기재된 제형.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 2 내지 8℃에서 적어도 42개월 동안 및 25℃에서 적어도 12개월 동안 안정적으로 저장될 수 있는, 제형.
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