KR20230020943A

KR20230020943A - 바이러스 감염 치료용 하이브리드 인터페론

Info

Publication number: KR20230020943A
Application number: KR1020227034755A
Authority: KR
Inventors: 윌리엄 스팀슨
Original assignee: 아이엘씨 테라퓨틱스 리미티드
Priority date: 2020-03-16
Filing date: 2021-03-16
Publication date: 2023-02-13
Also published as: CN115697377A; CA3170629A1; EP4121092A1; EP4121092C0; AU2021238925A1; WO2021186162A1; JP2023517525A; EP4121092B1; US20230203120A1

Abstract

보다 일반적으로 코로나바이러스 및 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물 및 방법이 제공된다. 특히, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물이 제공된다.

Description

바이러스 감염 치료용 하이브리드 인터페론

본 발명은 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한, 예를 들어, 세포 변성 효과 또는 플라크(plaque) 형성과 같은 바이러스 활성을 적절히 감소시키기 위한, 특히 코로나바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물로 확장된다. 본 발명은 또한 인간 및 가축 요법을 위한 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 조성물 및 이를 위한 본 발명의 조성물의 용도로 확장된다.

코로나바이러스(CoV)는 포유류 및 조류에서 질환을 유발하는 큰 바이러스 패밀리이다. 인간의 경우, 코로나바이러스는 일반적인 감기에서부터 더욱 심각한 질환, 예를 들어 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군(MERS) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)에 이르는 호흡기 감염을 유발한다. 코로나바이러스는 곤봉-형태의 투영이 산재된 지질 외피를 갖는 단일-가닥 RNA 바이러스 패밀리(코로나비리대(Coronaviridae))에 속한다. 코로나바이러스 감염은 호흡기 및 장에 심각한 질환을 유발할 수 있다.

SARS 인간 코로나바이러스(SARS-CoV-1)는 주로 인간에서 심각한 질환을 유발하는 첫 번째 코로나바이러스였다. 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV)와 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19) 또한 인간에서 심각한 질환을 유발할 수 있다. SARS-CoV-2(Covid19)는 사람에서 사람으로 쉽게 전염될 수 있기 때문에 인간 코로나바이러스 중 가장 전염성이 높은 것이 되었다. SARS-CoV-2의 증상에는 기침, 발열 및 숨가쁨이 있다. 이들 바이러스는 감염체에 중증 폐렴-유사 증상을 유발할 수 있으며, 가장 심각한 경우 사망에 이르게 할 수도 있다.

일반적인 항-바이러스제, 바이러스 세포 침입 또는 복제를 억제하는 치료제 및 면역자극제를 포함하는, 다양한 항-바이러스 치료제가 SARS-CoV-1과 SARS-CoV-2에 감염된 사람에게 투여되었다. 리바비린(ribavirin)은 퓨린 뉴클레오사이드 유사체를 기반으로 하는 광범위 항-바이러스제이며 C형 간염의 표준 치료제이다. 리바비린은 다양한 RNA 바이러스에 대해 활성이 있는 것으로 알려져 있으며 동물 코로나바이러스에 대해 항-바이러스 활성을 보이는 것으로 알려져 있다. 하지만, SARS-CoV-1에 대한 약물 효능 시험관 내 시험에서 일련의 음성적 결과가 나타났고 부작용도 보고되었다.

SARS-CoV-2에 특이적인 치료제는 없다. 연구자들은 현재 코로나바이러스에 대해 파빌라비르(favilavir), 렘데시비르(remdesivir), 로피나비르(lopinavir) 및 리토나비르(ritonavir)와 같은 항-바이러스 약물의 효과를 고려하고 있다. 하지만, SARS-CoV-2에 대해 입증된 치료제는 아직 밝혀지지 않았다.

다른 병원체는 시험관 내에서 다른 인터페론-알파(IFN-α) 하위유형을 유도하고 IFN-α 하위유형은 서로 다른 항-바이러스, 항-증식 및 면역조절 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. IFN-α의 작용 기작, 특히 각 IFN-α 하위유형의 작용 기작은 아직까지는 부분적으로만 이해되고 있다. 다양한 경로를 통한 감염은 다른 하위유형 프로파일을 유도하는 것으로 나타났다. IFN-α 하위유형은 같은 수용체에 결합하고, 공통적인 신호전달 경로를 활성화하고, 유사한 면역학적 기능을 가질 것으로 예상되었다. 모든 IFN-α 하위유형은 정의상 항-바이러스 활성을 갖지만, 이러한 맥락에서 이들의 완전한 효능은 상당히 다를 수 있다. 또한, 면역조절 및 항-증식 활성을 포함하여 다양한 능력을 갖는 많은 다른 생물학적 특성이 설명되었다. 다면발현 효과는 수용체 사슬과의 차별적인 상호작용 및 다른 세포 내 경로를 통한 이펙터 분자로의 신호전달에 따른 것으로 보인다. I형 IFN 수용체는 IFNR1과 IFNR2의 두 개의 사슬로 이루어진다. 다른 수용체 사슬을 갖는 12개의 각 IFN-α 하위유형에 대한 결합 친화도 범위가 있다. IFNα-14는 2개의 인터페론 수용체 모두에 대해 가장 높은 친화도 중 하나를 가지며, 이것이 다른 11개의 하위유형에 비교하여 활성이 높은 이유이다.

IFN 알파 2 하위유형으로만 이루어진 재조합 인터페론이 현재 항-바이러스 적용 시장을 지배하고 있다. Schering Plough의 Intron A™(IFN-알파 2b) 및 Roche의 Roferon™(IFN-알파 2a)과 같은 2가지 주요 재조합 알파 IFN 제품이 있다. 이러한 단일-하위유형 제품과 달리, 다른 하위유형의 혼합으로 이루어진 몇몇 알파 IFN 조제물이 있다. 이러한 다중-하위유형 IFN 알파 제품은 바이러스 자극에 반응하여 인간 백혈구에 의해 생산되거나(예를 들어, Viragen, Inc 또는 이의 자회사의 Multiferon™ 또는 Interferon Sciences/Hemispherix의 Alferon-N™), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma) 환자로부터 배양된 인간 림프아구세포에서 생산된다(예를 들어, Sumitomo의 Sumiferon™).

현재 코로나바이러스 감염자, 특히 SARS-CoV-1, MERS-CoV 또는 SARS-CoV-2 감염자에 대한 완전히 효과적인 치료적 또는 예방적 제제는 없다. 따라서 인간의 코로나바이러스 감염에 대한, 특히 SARS, MERS 및 SARS-CoV-2의 치료 및/또는 예방을 위한 안전하고 효과적인 치료제에 대한 충족되지 않은 상당한 요구가 있다.

본 발명자는 바이러스 감염, 특히 인간의 코로나바이러스 감염에 대한, 특히 SARS, MERS 및 SARS-CoV-2의 치료 및/또는 예방을 위한 치료제를 개발하는 것이 바람직할 것임을 제시한다. 본 발명은 NK 및 T 세포 반응성을 유도하여 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물로 확장된다. 또한 본 발명은 인간 및 가축 요법을 위한 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 조성물 및 이를 위한 본 발명의 조성물의 용도로 확장된다.

본 발명은 바이러스 감염, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)와 같은 코로나바이러스 감염의 결과로서 유발되는 상태를 예방 또는 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 SARS, MERS 또는 SARS-CoV-2의 치료 및/또는 예방의 본 발명의 조성물의 용도로 확장된다. 또한 본 발명은 치료적 유용량의 적합한 항-바이러스 화합물과 함께 치료적 유용량의 본 발명의 인터페론을 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것으로 확장된다.

적합하게는 본 발명은 호흡기 바이러스 질환, 위장관 바이러스 질환, 발진성 바이러스 질환, 간 바이러스 질환, 피부 바이러스 질환, 출혈성 바이러스 질환, 신경계 바이러스 질환, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)와 같은 바이러스 상태의 치료를 위해 사용될 수 있다. 특정 바이러스, 특히 새롭게 발생한 바이러스를 표적으로 하는 백신이 없는 경우, 효과적인 항 바이러스 약물이 특히 유리할 것이며, SAR, 인플루엔자(특히 H5N1), 지카 바이러스, WNV 및 EBOV의 발생과 관련하여 적합하다. 적합하게는 본 발명은 RSV(호흡기 세포융합 바이러스)의 치료에 사용될 수 있다.

광범위한 실험 결과, 본 발명의 발명자는 놀랍게도 IFN-α14, 예를 들어 본 명세서에 기술된 바와 같은 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편, HYBRID 1, 예를 들어 서열번호 2 또는 이의 변이체 또는 단편, 또는 HYBRID 2, 예를 들어 서열번호 3 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 코로나바이러스 감염의 영향을 억압 또는 억제한다는 것을 발견하였다. 본 발명자는 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2가 코로나바이러스 감염으로 유발되는 세포 변성 효과를 직접적으로 억제할 수 있음을 예기치 않게 알아내었다. 세포 변성 효과 또는 세포 병원성 효과는 바이러스의 침입으로 유발되는 숙주 세포의 구조적 변화를 의미한다. 본 발명자는 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2가 코로나바이러스 감염에 관련된 플라크 형성도 억제한다는 것을 입증하였다. 놀랍게도, 이러한 효과는 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2를 설하 투여했을 때 나타났다. 본 발명자는 HYBRID 2가 바이러스 감염으로 유발되는 세포 변성 효과를 직접적으로 억제할 수 있음을 예기치 않게 알아내었다. 세포 변성 효과 또는 세포 병원성 효과는 바이러스의 침입으로 유발되는 숙주 세포의 구조적 변화를 의미한다. 본 발명자는 HYBRID 2가 바이러스 감염에 관련된 플라크 형성도 억제한다는 것을 입증하였다. HYBRID 2의 활성은 항바이러스 활성을 제공하는데 특히 적합한 것으로 보인다.

본 발명자는 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2의 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제하는 것에 대한 합성 알파-인터페론인 인터페론-알파-14(서열번호 1)의 능력을 조사하였다. 본 발명자는 항-바이러스 화합물인 리바비린과 다중-하위유형 인터페론인 멀티페론(Multiferon™)을 비교하여 세포 변성 효과의 억제를 조사하였다. 놀랍게도 인터페론-알파14(서열번호 1)은 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2에 대한 활성이 있는 반면 리바비린과 다중-하위유형 인터페론인 멀티페론은 억제 활성이 훨씬 낮은 것으로 나타났다.

IFN-α14(서열번호 1), HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이들의 변이체 또는 단편을 사용하여 SARS-CoV-2(Covid19)를 치료하는 경우, 전달 방식은 폐에 직접 주입하거나 에어로졸에 의한 것일 가능성이 있을 것으로 간주된다. 투여당 10⁴내지 10⁷ IU 범위의 적합한 용량을 적절하게 사용할 수 있다. 설하 치료로서 IFN-α14(서열번호 1), HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3)의 사용에 일부 관련성이 있을 수도 있다. 본 발명자는 놀랍게도 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2, 특히 서열번호 1, 2 또는 3 또는 이의 변이체 또는 단편을 설하 투여하는 것이 이전 항-바이러스 약물과 비교하여 훨씬 큰 코로나바이러스 활성의 감소 또는 억제를 나타낼 수 있음을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2를 매우 낮은 용량으로, 예를 들어 하루에 10⁴ 내지 5×10⁶ IU까지 사용할 수 있음을 알아내었다.

이는 본 발명자에 의한 코로나바이러스 감염, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19) 감염의 치료 및/또는 예방에 유용성을 갖는 개선된 요법적 조성물의 확인으로 이어졌다.

따라서, 본 발명의 제1양상은 바이러스 감염, 특히 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법으로서,

(i) 치료적 유효량의 인터페론 알파 하위유형을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계로서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14과 HYBRID 1, IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 단계

를 포함하는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법을 제공한다.

실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)이다.

실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1)이다.

실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)이다.

적합하게는 바이러스 감염은 플라비비리대(Flaviviridae) 과(예를 들어, 플라비바이러스(Flavivirus), 페스트리바이러스(Pestivirus) 및 헤파시빈트(Hepacivints) 속의 바이러스)에서 선택된 바이러스의 감염일 수 있으며, 여기에는 C형 간염 바이러스, 황열 바이러스(Yellow fever virus); 진드기매개 바이러스(Tick-borne virus), 예를 들어 가젯 굴리 바이러스(Gadgets Gully virus), 카담 바이러스(Kadam virus), 카야사나 삼림병 바이러스(Kyasanur Forest disease virus), 랑가트 바이러스(Langat virus), 옴스크 출혈열 바이러스(Omsk hemorrhagic fever virus), 포와산 바이러스(Powassan virus), 로얄 팜 바이러스(Royal Farm virus), 카르시 바이러스(Karshi virus), 진드기 매개 뇌염 바이러스(tick-borne encephalitis virus), 노이되르플 바이러스(Neudoerfl virus), 소프진 바이러스(Sofjin virus), 루우핑 일 바이러스(Louping ill virus) 및 네기시 바이러스(Negishi virus); 바닷새 진드기 매개 바이러스(seabird tick-borne virus), 예를 들어 미반 바이러스(Meaban virus), 사우마레즈 리프 바이러스(Saumarez Reef virus) 및 튤레니 바이러스(Tyuleniy virus); 모기 매개 바이러스(mosquito-borne virus), 예를 들어 아르나 바이러스(Arna virus), 뎅기 바이러스(dengue virus), 케두구 바이러스(Kedougou virus), 카시파코레 바이러스(Cacipacore virus), 쿠탕고 바이러스(Koutango virus), 일본 뇌염 바이러스(Japanese encephalitis virus), 머레이 밸리 뇌염 바이러스(Murray Valley encephalitis virus), 세인트 루이스 뇌염 바이러스(St. Louis encephalitis virus), 우수투 바이러스(Usutu virus), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 얌데 바이러스(Yammde virus), 코코베라 바이러스(Kokobera virus), 바가자 바이러스(Bagaza virus), 일헤우스 바이러스(Ilheus virus), 이스라엘 터키 뇌수막염 바이러스(Israel turkey meningoencephalo-myelitis virus), 은타야 바이러스(Ntaya virus), 템부수 바이러스(Tembusu virus), 지카 바이러스(Zika virus), 바리지 바이러스(Barizi virus), 부부이 바이러스(Bouboui virus), 엣지 힐 바이러스(Edge Hill virus), 주그라 바이러스(Jugra virus), 사보야 바이러스(Saboya virus), 세픽 바이러스(Sepik virus), 우간다 에스 바이러스(Uganda S virus), 웨셀스브론 바이러스(Wesselsbron virus), 황열 바이러스; 엔테베 박쥐 바이러스(Entebbe bat virus), 요코세 바이러스(Yokose virus), 아포이 바이러스(Apoi virus), 카오본 릿지 바이러스(Cowbone Ridge virus), 주티아파 바이러스(Jutiapa virus), 모독 바이러스(Modoc virus), 살 비에자 바이러스(Sal Vieja virus), 산 페르리타 바이러스(San Perlita virus), 부칼라사 박쥐 바이러스(Bukalasa bat virus), 캐리 섬 바이러스(Carey Island virus), 다카르 박쥐 바이러스(Dakar bat virus), 몬타나 윗수염박쥐속 백질뇌염 바이러스(Montana myotis leukoencephalitis virus), 프놈 펜 박쥐 바이러스(Phnom Penh bat virus), 리오 브라보 바이러스(Rio Bravo virus), 타마나 박쥐 바이러스(Tamana bat virus) 및 세포 융합제 바이러스(Cell fusing agent virus)가 포함된다.

다른 실시형태에서, 바이러스는 아레나비리대(Arenaviridae) 과의 구성원에서 선택되며, 이피 바이러스(Ippy virus), 라싸 바이러스(Lassa virus)(예를 들어, 조시아(Josiah), LP 또는 GA391 바이러스주), 림프구성 맥락수막염 바이러스(lymphocytic choriomeningitis virus: LCMV), 모발라 바이러스(Mobala virus), 모페이아 바이러스(Mopeia virus), 아마파리 바이러스(Amapari virus), 플렉살 바이러스(Flexal virus), 구아나리토 바이러스(Guanarito virus), 주닌 바이러스(Junin virus), 라티노 바이러스(Latino virus), 마츄포 바이러스(Machupo virus), 올리베로스 바이러스(Oliveros virus), 파라나 바이러스(Parana virus), 피친데 바이러스(Pichinde virus), 피리탈 바이러스(Pirital virus), 사비아 바이러스(Sabia virus), 타카리베 바이러스(Tacaribe virus), 타미아미 바이러스(Tamiami virus), 화이트워터 아로요 바이러스(Whitewater Arroyo virus), 차파레 바이러스(Chapare virus) 및 루조 바이러스(Lujo virus)가 포함된다.

또 다른 실시형태에서 바이러스는, 한탄 바이러스(Hantaan virus), 신 놈브레 바이러스(Sin Nombre virus), 두그베 바이러스(Dugbe virus), 부니암웨라 바이러스(Bunyamwera virus), 리프트 밸리열 바이러스(Rift Valley fever virus), 라 크로세 바이러스(La Crosse virus), 푼타 토로 바이러스(Punta Toro virus: PTV), 캘리포니아 뇌염 바이러스(California encephalitis virus) 및 크림-콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever: CCHF) 바이러스를 포함하는, 부니아비리대(Bunyaviridae) 과의 구성원(예를 들어, 한타바이러스(Hantavirus), 나이로바이러스(Nairovirus), 오쏘부니아바이러스(Orthobunyavirus) 및 프레보바이러스(Phlebovirus) 속의 구성원), 에볼라 바이러스(Ebola virus)(예를 들어, 자이르, 수단, 코트디부아르, 레스턴 및 우간다 바이러스주) 및 마르부르그 바이러스(Marburg virus)(예를 들어, 앙골라, Ci67, 무소케, 포프, 라븐 및 빅토리아호 바이러스주)를 포함하는, 필로비리대(Filoviridae) 과의 바이러스에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(Venezuelan equine encephalitis virus: VEE), 동부 말 뇌염 바이러스(Eastern equine encephalitis virus: EEE), 서부 말 뇌염 바이러스(Western equine encephalitis virus: WEE), 신드비스 바이러스(Sindbis virus), 루벨라 바이러스(rubella virus), 셈리키 삼림 바이러스(Semliki Forest virus), 로스강 바이러스(Ross River virus), 바마 삼림 바이러스(Barmah Forest virus), 오니옹니옹 바이러스(O'nyong'nyong virus) 및 치쿤구니아 바이러스(chikungunya virus)를 포함하는, 토가비리대(Togaviridae) 과의 구성원(예를 들어, 알파바이러스(Alphavirus) 속의 구성원); 천연두 바이러스(smallpox virus), 우두 바이러스, 원숭이폭스 바이러스(monkeypox virus) 및 백시니아 바이러스(vaccinia virus)를 포함하는, 폭스비리대(Poxviridae) 과의 구성원(예를 들어, 오쏘폭스바이러스(Orthopoxvirus) 속의 구성원); 단순 포진 바이러스(herpes simplex virus: HVS; 1형, 2형 및 6형), 인간 헤르페스 바이러스(예를 들어, 7형 및 8형), 거대세포바이러스(cytomegalovirus: CMV), 엡스테인-바 바이러스(Epstein-Barr virus: EBV), 수두-대상포진 바이러스(Varicella-Zoster virus) 및 카포시 육종 관련-헤르페스바이러스(Kaposi's sarcoma associated-herpesvirus: KSHV)를 포함하는, 헤르페스비리대(Herpesviridae) 과의 구성원에서 선택될 수 있다.

다른 실시형태에서, 바이러스는, H5N1 조류 인플루엔자 바이러스 또는 H1N1 돼지 인플루엔자 바이러스와 같은 인플루엔자 바이러스(A, B 및 C)를 포함하는, 오쏘믹소비리대(Orthomyxoviridae) 과의 구성원; 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 바이러스를 포함하는, 코로나비리대 과의 구성원; 광견병 바이러스(rabies virus) 및 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus: VSV)를 포함하는, 랍도비리대(Rhabdoviridae) 과의 구성원; 인간 호흡기 세포융합 바이러스(human respiratory syncytial virus: RSV), 뉴캐슬 질환 바이러스(Newcastle disease virus), 핸드라바이러스(hendravirus), 니파바이러스(nipahvirus), 홍역 바이러스(measles virus), 우역 바이러스(rinderpest virus), 개 홍역 바이러스(canine distemper virus), 센다이 바이러스(Sendai virus), 인간 파라인플루엔자 바이러스(예를 들어, 1, 2, 3 및 4), 리노바이러스(rhinovirus) 및 멈프스 바이러스(mumps virus)를 포함하는, 파라믹소비리대(Paramyxoviridae) 과의 구성원;에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 폴리오바이러스(poliovirus), 인간 장 바이러스(human enterovirus)(A, B, C 및 D), A형 간염 바이러스 및 콕삭키바이러스(coxsackievirus)를 포함하는, 피코르나비리대(Picornaviridae) 과의 구성원; B형 간염 바이러스를 포함하는, 헤파드나비리대(Hepadnaviridae) 과에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 인간 파필로마 바이러스를 포함하는, 파필로마비리대(Papillomaviridae) 과의 구성원; 아데노-관련 바이러스를 포함하는, 파르보비리대(Parvoviridae) 과의 구성원; 아스트로바이러스(astrovirus)를 포함하는, 아스트로비리대(Astroviridae) 과의 구성원; JC 바이러스, BK 바이러스 및 SV 40 바이러스를 포함하는, 폴리오마비리대(Polyomaviridae) 과의 구성원에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 노워크 바이러스(Norwalk virus)를 포함하는, 칼리시비리대(Caliciviridae) 과의 구성원에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 로타바이러스(rotavirus)를 포함하는, 레오비리대(Reoviridae) 과의 구성원에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는, 인간 면역 결핍 바이러스(HIV; 예를 들어 1형 및 2형) 및 I형 및 II형 인간 T-세포림프친화 바이러스(human T-lymphotropic virus)(각각 HTLV-1 및 HTLV-2)를 포함하는, 레트로비리대(Retroviridae) 과의 구성원에서 선택될 수 있다.

실시형태에서, 바이러스는 아테리 바이러스(ateri virus), 파포바바이러스(papovavirus) 및 에코 바이러스(echo virus)에서 선택될 수 있다. 적합하게는 바이러스는 1형 IFN 반응을 길항작용하는 것으로 알려진 단백질을 암호화하는 바이러스에서 선택될 수 있다:

치쿤구니아 바이러스(CHIKV)

콕삭키바이러스

뎅기 바이러스(DENV)

에볼라 바이러스(EBOV)

엡스테인-바 바이러스(EBV)

B형 간염 바이러스(HBV)

C형 간염 바이러스(HCV)

인간 거대세포바이러스(HCMV)

인간 면역-결핍 바이러스(HIV)

인간 파라인플루엔자 바이러스(HPIV)

인간 파필로마바이러스(HPV)

인간 호흡기 세포융합 바이러스(HRSV)

인간 리노 바이러스(HRV)

단순 포진 바이러스(HSV)

인플루엔자 A 바이러스(IAV)

인플루엔자 B 바이러스(IBV)

라싸 바이러스(LASV)

홍역 바이러스(MeV)

중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV)

멈프스 바이러스(MuV)

니파 바이러스(NiV)

폴리오바이러스(PV)

광견병 바이러스(RABV)

NSP1 강화 로타바이러스(RV)

중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)

백시니아 바이러스(VACV)

웨스트 나일 바이러스(WNV)

황열 바이러스(YFV)

지카 바이러스(ZIKV).

적합하게는 바이러스는 외피보유 바이러스, 바람직하게는 인간 면역결핍 바이러스 1(HIV-1), 인간 면역결핍 바이러스 2(HIV-2), 1형 헤르페스 바이러스(HSV-1), 2형 헤르페스 바이러스(HSV-2), 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 거대세포바이러스(CMV), 지카 바이러스(ZKV), 뎅기 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 라싸 바이러스, 에볼라 바이러스, 로비우 바이러스(Lloviu virus), 분디부교 바이러스(Bundibugyo virus), 레스톤 바이러스(Reston virus), 수단 바이러스(Sudan virus), 타이 삼림 바이러스(Tai Forest virus), 마르부르그 바이러스, 레이븐 바이러스(Ravn virus: RAW), 뉴모바이러스(Pneumovirus), 주닌 바이러스, 리프트 밸리열 바이러스, 라 크로세 바이러스, 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스, 폭스바이러스, 소 바이러스성 설사 노로바이러스, SARS 코로나바이러스, 치쿤구니아 바이러스, C형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, 슈말렌베르그 바이러스(Schmallenberg virus), 아프리카 돼지 열병 바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스, 우두 바이러스, 서부 말 뇌염 바이러스, 니파 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 진드기매개 뇌염 바이러스, 러시아 봄-여름 뇌염(RSSE) 바이러스, 황열 바이러스, 뉴캐슬 바이러스, 바이러스(BVDV), 5형 파라인플루엔자 바이러스(PIV5), 양의 보더병 바이러스(Border Disease Virus: BDV), 고전적 돼지 열병 바이러스(CSFV), 수포성 구내염 바이러스(Vesicular Stomatitis Virus: VSV) 및 아사이클로비르 저항성 HSV-2(HSV-2 Acy R)로 이루어진 군에서 선택된 바이러스, 보다 바람직하게는 HIV-1, HSV-1, HSV-2, HCMV, RSV, VSV, H1N1, DENV-2 및 ZKV로 이루어진 군에서 선택된 외피보유 바이러스에 의해 유발되는 바이러스성 질환에서 선택될 수 있다.

접합하게는 바이러스 감염은 코로나바이러스 감염, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염에서 선택된 것일 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2는 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다. 기능적 활성은 본 명세서에 기술된 바와 같은 분석법을 사용한 항-바이러스 활성의 특성화, 예를 들어 세포 변성 효과, 플라크 형성, 인간 백혈구로부터 IL 17F 생성의 효과 및 CXCL 10 생성의 효과, 인터페론 감마 생성 효과, TNF 알파 분비 효과, 세포자멸사(apoptosis)의 유도, NK 세포 군집화 효과 중 하나 이상을 통해 결정할 수 있다. 유사한 활성, 적합하게는 몇몇 분석에 대한 유사한 활성 범위를 나타내는 기능적 변이체 및 단편을 결정하기 위해 이들의 활성을 HYBRID 2의 활성과 비교할 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14는 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 1은 서열번호 2의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2는 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

실시형태에서, 투여 방법은 설하 투여이다. 실시형태에서, 투여 방법은 경구 투여이다. 실시형태에서, 투여 방법은 주사 투여이다. 실시형태에서, 투여 방법은 폐에 에어로졸을 전달하는 것이다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2는 설하 투여로 투여된다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형은 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 4회 투여될 수 있다. 적합하게는, 설하 투여로 매일 단일 용량이 제공될 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 치료적 유효량은 저용량이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 치료적 유효량은 10⁴ 내지 5×10⁶ IU 유닛/㎖이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 치료적 유효량은 현재의 코로나바이러스 감염에 대한 전신성 치료보다 낮다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 5IU/㎖, 10IU/㎖, 50IU/㎖, 1×10²IU/㎖, 1×10³IU/㎖, 1×10⁴IU/㎖, 1×10⁵IU/㎖, 1×10⁶IU/㎖ 또는 1×10⁷IU/㎖의 용량으로 투여된다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 0.1㎎ 내지 1㎎의 용량으로, 적합하게는 1ng 내지 50마이크로그램으로 투여된다. 예를 들어, 사람에 적용 시, 5×10⁴ IU/㎖ 단위 이하를 사용할 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 설하 투여로 투여된다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형은 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 4회 투여될 수 있다. 적합하게는, 설하 투여로 매일 단일 용량이 제공될 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 코로나바이러스의 바이러스 활성을 방해한다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 코로나바이러스의 세포 변성 효과 또는 플라크 형성을 억제한다.

특정 실시형태에서, 대상체는 코로나바이러스에 의해 유발되는 상태를 앓을 수 있다. 실시형태에서, 대상체는 호흡기 감염 또는 폐렴, 또는 급성 호흡 곤란 증후군(Acute Respiratory Distress Syndrome: ARDS)을 앓을 수 있다.

전형적으로, 대상체는 포유동물, 특히 인간이다. 실시형태에서, 대상체는 조류일 수 있다. 실시형태에서, 대상체는 동물일 수 있다.

특정 실시형태에서, 방법은 치료적 유용량의 적합한 항-바이러스 화합물을 투여하는 단계를 포함한다. 실시형태에서, 항-바이러스 화합물은 리바비린이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2와의 조합으로, 렘데시비르(Remdesivir), LAM-002A(아필리모드(apilimod) - 선택적 PIKfyve 인산화효소 저해제), 덱사메타손(dexamethasone) 및 아비간(Avigan)(파빌라비르(favilavir))에서 추가 치료제가 선택될 수 있다.

본 발명의 제2양상에 따르면, 바이러스 감염, 특히 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형으로서, 여기서 인터페론 알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형이 제공된다.

본 발명의 제2양상에 따르면, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형인 HYBRID 2가 제공된다.

실시형태에서, HYBRID 2의 치료적 유효량은 저용량이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2의 치료적 유효량은 10⁴ 내지 5×10⁶ IU 유닛/㎖이다. 실시형태에서, HYBRID 2의 치료적 유효량은 현재의 코로나바이러스 감염에 대한 전신성 치료보다 낮다.

실시형태에서, HYBRID 2는 5IU/㎖, 10IU/㎖, 50IU/㎖, 1×10²IU/㎖, 1×10³IU/㎖, 1×10⁴IU/㎖, 1×10⁵IU/㎖, 1×10⁶IU/㎖ 또는 1×10⁷IU/㎖의 용량으로 투여된다.

실시형태에서, HYBRID 2는 0.1㎎ 내지 1㎎의 용량으로, 적합하게는 1ng 내지 50마이크로그램으로 투여된다. 예를 들어, 사람에 적용 시, 5×10⁴ IU/㎖ 단위 이하를 사용할 수 있다. 동물, 예를 들어 개의 경우, 설하 사용은, 예를 들어 1㎖ PBS 중, 10⁴ IU/㎏일 수 있다.

특정 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형은 설하 투여될 수 있다. 실시형태에서, 투여 방법은 경구 투여이다. 실시형태에서, 투여 방법은 주사이다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2는 0.1㎎ 내지 1㎎의 용량으로, 적합하게는 1ng 내지 50마이크로그램으로 투여된다. 예를 들어, 사람에 적용 시, 5×10⁴ IU/㎖ 단위 이하를 사용할 수 있다. 동물, 예를 들어 개의 경우, 설하 사용은, 예를 들어 1㎖ PBS 중, 10⁴ IU/㎏일 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형은 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 4회 투여될 수 있다. 적합하게는, 설하 투여로 매일 단일 용량이 제공될 수 있다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2와의 조합으로, 렘데시비르, LAM-002A(아필리모드 - 선택적 PIKfyve 인산화효소 저해제), 덱사메타손 및 아비간(파빌라비르)에서 추가 치료제가 선택될 수 있다.

IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2의 투여는 이 분야에 알려진 바와 같은 임의의 적합한 수단에 의해 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2는, 적합한 아미노산 서열을 암호화하거나 대상에서 적합한 아미노산 서열의 발현을 일으킬 수 있는 뉴클레오타이드 서열의 제공으로, 대상에서 발현될 수 있다.

본 발명의 제3 양상에 따르면, 바이러스 감염, 특히 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조에서 인터페론 알파 하위유형의 용도로서, 여기서 인터페론-알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 바이러스 감염, 특히 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물로서, 여기서 인터페론 알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물이 제공된다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 바이러스 감염, 특히 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물로서, 여기서 인터페론 알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.

실시형태에서, 약제학적 조성물은 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2를 추가 치료제와의 조합으로 제공할 수 있으며, 여기서 추가 치료제는 렘데시비르, LAM-002A(아필리모드 - 선택적 PIKfyve 인산화효소 저해제), 덱사메타손 및 아비간(파빌라비르)에서 선택될 수 있다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 면역 반응을 조절하는데 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형으로서, 여기서 인터페론 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형이 제공된다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 면역 반응을 조절하는데 사용하기 위한 HYBRID 2가 제공된다.

실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2와 렘데시비르, LAM-002A(아필리모드 - 선택적 PIKfyve 인산화효소 저해제), 덱사메타손 및 아비간(파빌라비르)에서 선택된 추가 치료제의 조합이 면역 반응을 조절하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 바이러스, 특히 코로나바이러스, 특히 중증 급성 호흡기계(SARS) 코로나바이러스-1(SARS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염을 치료 또는 예방하기 위한 인터페론 알파 하위유형 및 항-바이러스 화합물의 용도로서, 여기서 인터페론 알파 하위유형은 IFN-α14, HYBRID 1, HYBRID 2, 또는 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 임의의 조합, 예를 들어 IFN-α14와 HYBRID 1 또는 IFN-α14와 HYBRID 2 또는 HYBRID 1과 HYBRID 2인, 인터페론 알파 하위유형 및 항-바이러스 화합물의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 양상에 따르면, 바이러스, 특히 중증 급성 호흡기계(SARS) 코로나바이러스-1(SARS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염을 치료 또는 예방하기 위한 항-바이러스 화합물과의 조합에서 HYBRID 2의 용도가 제공된다. 적합하게는 바이러스는 다음에서 선택될 수 있다:

치쿤구니아 바이러스(CHIKV)

콕삭키바이러스

뎅기 바이러스(DENV)

에볼라 바이러스(EBOV)

엡스테인-바 바이러스(EBV)

B형 간염 바이러스(HBV)

C형 간염 바이러스(HCV)

인간 거대세포바이러스(HCMV)

인간 면역-결핍 바이러스(HIV)

인간 파라인플루엔자 바이러스(HPIV)

인간 파필로마바이러스(HPV)

인간 호흡기 세포융합 바이러스(HRSV)

인간 리노바이러스(HRV)

단순 포진 바이러스(HSV)

인플루엔자 A 바이러스(IAV)

인플루엔자 B 바이러스(IBV)

라싸 바이러스(LASV)

홍역 바이러스(MeV)

중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV)

멈프스 바이러스(MuV)

니파 바이러스(NiV)

폴리오바이러스(PV)

광견병 바이러스(RABV)

NSP1 강화 로타바이러스(RV)

중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)

백시니아 바이러스(VACV)

웨스트 나일 바이러스(WNV)

황열 바이러스(YFV)

지카 바이러스(ZIKV).

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)이다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1)이다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)이다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14는 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 1은 서열번호 2의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2는 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어진다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 조성물 또는 약제학적 조성물은 설하 투여된다. 이는 특히 수의학적 치료에서 유리할 수 있다. 실시형태에서, 투여 방법은 경구 투여이다. 실시형태에서, 투여 방법은 주사이다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및/또는 HYBRID 2의 치료적 유효량은 저용량이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 치료적 유효량은 10⁴ 내지 5×10⁶ IU 유닛/㎖이다. 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및 HYBRID 2의 치료적 유효량은 현재의 코로나바이러스 감염에 대한 전신성 치료보다 낮다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및/또는 HYBRID 2는 5IU/㎖, 10IU/㎖, 50IU/㎖, 1×10²IU/㎖, 1×10³IU/㎖, 1×10⁴IU/㎖, 1×10⁵IU/㎖, 1×10⁶IU/㎖ 또는 1×10⁷IU/㎖의 용량으로 투여된다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14, HYBRID 1 및/또는 HYBRID 2는 0.1㎎ 내지 1㎎의 용량으로, 적합하게는 1ng 내지 50마이크로그램으로 투여된다. 예를 들어, 사람에 적용 시, 5×10⁴ IU/㎖ 단위 이하를 사용할 수 있다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 실시형태에서, 인터페론 알파 하위유형은 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 4회 투여될 수 있다. 적합하게는, 설하 투여로 매일 단일 용량이 제공될 수 있다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 특정 실시형태에서, IFN-α 하위유형은 융합 단백질, 또는 재조합 단백질 등과 같은 IFN-α14를 포함하거나 이로 이루어지거나 IFN-α14이며, 특히 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 이로 이루어지는 것이다. 실시형태에서, IFN-α14 또는 HYBRID 1 또는 HYBRID 2는 글리코실화될 수 있다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 특정 실시형태에서, IFN-α 하위유형은 융합 단백질, 또는 재조합 단백질 등과 같은 HYBRID 1을 포함하거나 이로 이루어지거나 HYBRID 1이며, 특히 서열번호 2의 아미노산 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 이로 이루어지는 것이다.

위에 설명된 본 발명의 양상의 특정 실시형태에서, IFN-α 하위유형은 융합 단백질, 또는 재조합 단백질 등과 같은 HYBRID 2를 포함하거나 이로 이루어지거나 HYBRID 2이며, 특히 서열번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 이로 이루어지는 것이다.

본 발명의 추가 양상에서, 서열번호 1 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어지는 재조합 폴리펩타이드가 제공된다. 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열에서 유래된 핵산 서열로 확장된다.

본 발명의 추가 양상에서, 서열번호 2 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어지는 재조합 폴리펩타이드가 제공된다. 본 발명은 서열번호 2의 아미노산 서열에서 유래된 핵산 서열로 확장된다.

본 발명의 추가 양상에서, 서열번호 3 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어지는 재조합 폴리펩타이드가 제공된다. 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열에서 유래된 핵산 서열로 확장된다.

설명

본 발명의 발명자는 놀랍게도, 본 명세서에 기술된 바와 같은, IFN-α14, 예를 들어 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편, HYBRID 1과 같은 IFN-α14/IFN-α10 하이브리드, 예를 들어 서열번호 2 또는 이의 변이체 또는 단편, 또는 HYBRID 2, 예를 들어 서열번호 3 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 코로나바이러스 감염에서 면역 반응과 관련된 바이러스 활성을 억압 또는 억제한다는 것을 발견하였다. 적합하게는, 본 명세서에 기술된 바와 같은, IFN-α14, 예를 들어 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편, HYBRID 1과 같은 IFN-α14/IFN-α10 하이브리드, 예를 들어 서열번호 2 또는 이의 변이체 또는 단편, 또는 HYBRID 2, 예를 들어 서열번호 3 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 코로나바이러스, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19) 감염을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 놀랍게도, 이러한 효과는 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2가 설하 투여될 때 향상될 수 있다.

서열번호 1은 IFNα-14이며 다음과 같이 정의될 수 있다:

서열번호 2는 HYBRID 1이며 다음과 같이 정의될 수 있다:

서열번호 3은 HYBRID 2이며 다음과 같이 정의될 수 있다:

특히, 본 발명자는 IFN-α14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이의 변이체 또는 단편이 코로나바이러스 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제함을 발견하였다. 세포 변성 효과 또는 세포 병원성 효과는 바이러스의 침입으로 유발되는 숙주 세포의 구조적 변화를 의미한다.

특히, 본 발명자는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이의 변이체 또는 단편이 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제함을 발견하였다. 세포 변성 효과 또는 세포 병원성 효과는 바이러스의 침입으로 유발되는 숙주 세포의 구조적 변화를 의미한다.

본 발명자는 또한 재조합 IFN-하이브리드 분자인 HYBRID 2(서열번호 3)가 인터페론 수용체에 대한 높은 결합 친화성을 갖는다는 것을 규명하였다.

본 발명자들은 천연 분자 IFNα-14, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 이들의 변이체 또는 단편이 매우 낮은 용량에서 코로나바이러스의 작용을 차단하거나 억제한다는 것을 입증하였다. 이러한 발견은 코로나바이러스 감염, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)를 치료 및/또는 예방하기 위한 개선된 방법 및 개선된 조성물을 제공하는데 적용될 수 있다.

인터페론 하위유형 IFN-α10 및 IFN-α14 및 이들의 하이브리드는 PCT 공개번호 WO2014/037717 및 PCT 공개번호 WO2015/136287에 나타나 있다. 특히, 모든 12종의 알파-인터페론의 공통 중추 서열을 기반으로 하는 IFN-α10 및 IFN-α14 하위유형 결합 부위의 서열 특징을 함유하는 IFN-α10-IFN-α14 하이브리드가 개시된다. 인터페론 하위유형 IFN-α10 및 IFN-α14 및 이들의 하이브리드는 PCT 공개번호 WO2017/046583에도 나타나 있다. 특히, 모든 12종의 IFN-α 하위유형의 공통 서열을 기반으로 하지 않는 IFN-α10 및 IFN-α14 하위유형에서 유래된 고친화성 결합 부위를 갖는 IFN-α10-IFN-α14 하이브리드가 개시된다. 이 하이브리드는 다른 10종의 인터페론-알파 하위유형의 서열 특징 없이 IFN-α10 및 IFN-α14 하위유형의 서열 특징을 유도한다.

본 발명자는 또한 본 명세서에서 HYBRID 1(서열번호 2) 및 HYBRID 2(서열번호 3)으로 알려진 재조합 IFN-하이브리드 분자 또한 인터페론 수용체에 대한 높은 결합 친화성을 갖는다는 것을 입증하였다.

이론에 얽매이는 것을 원치 않지만, 본 발명자는 IFN-α10의 아미노산 서열을 포함하는 단백질이 인터페론 수용체 2(IFNR2)에 대해 더 높은 친화성을 가지며 IFN-α14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질이 인터페론 수용체 1(IFNR1)에 대해 더 높은 친화성을 갖는다고 믿는다. 따라서, IFN-α10의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인터페론 수용체 1에 결합하는 것을 허용하는 IFN-α14의 아미노산으로 치환하는 것 또는 IFN-α14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인터페론 수용체 2에 결합하는 것을 허용하는 IFN-α10의 아미노산으로 치환하는 것은 IFN-α10 또는 IFN-α14 단독의 경우보다 인터페론 수용체 1 및 2 모두에 더 강한 결합 친화성을 갖는 IFN-α10 IFN-α14 하이브리드 단백질을 제공하는 것으로 간주된다. IFN-α10 및 IFN-α14의 주요 인터페론 수용체 결합 부위를 포함한다는 것은 하이브리드가 IFN-α10에서 선택된 아미노산을 포함하고 IFN-α14의 아미노산 서열로 치환되어 인터페론 수용체 2에 결합하는 IFN-α14 하위유형의 능력이 개선되며/개선되거나 하이브리드가 IFN-α14에서 선택된 아미노산을 포함하고 IFN-α10의 아미노산 서열로 치환되어 인터페론 수용체 1에 결합하는 IFN-α10 하위유형의 능력이 개선되는 것으로 여겨진다.

적합하게는, 인터페론 수용체 1에 대한 결합에 관련된 것으로 결정된 IFN-α14의 아미노산으로 IFN-α10의 아미노산 서열을 포함하는 단백질의 몇몇 아미노산을 치환하는 것은 인터페론 수용체 1에 대한 단백질의 결합을 향상시킬 수 있다. 적합하게는, 인터페론 수용체 2에 대한 결합에 관련된 것으로 결정된 IFN-α10의 아미노산으로 IFN-α14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질의 아미노산을 치환하는 것은 인터페론 수용체 2에 대한 단백질의 결합을 향상시킬 수 있다.

실시형태에서, IFN-α10-IFN-α14 하이브리드는 대체로 IFN-α10의 아미노산 서열을 가질 수 있지만, IFN-α14 서열에 의해 제공된 아미노산을 제공하기 위해 80 내지 150번 아미노산 잔기 사이, 또는 적합하게는 84 내지 144번 아미노산 잔기 사이, 또는 적합하게는 92 내지 115번 아미노산 잔기 사이 또는 적합하게는 90 내지 110번 아미노산 잔기 사이(IFN-α10 서열의 넘버링 활용)의 영역이 변형된다. 이들 영역 또는 이들 영역의 일부에 있는 아미노산 잔기는 인터페론 수용체 1에 대한 IFN-α14의 결합을 제공하는 것으로 간주된다. 특히, 하이브리드 서열은 IFN-α14 서열 또는 이의 보존된 돌연변이에 상응하는 잔기를 제공하기 위해 IFN-α10 서열의 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개 또는 적어도 11개의 변형을 포함할 수 있다. 실시형태에서, 굵은 글씨로 표시된 아미노산으로 나타낸 바와 같이 11개의 변형이 제공된다.

(HYBRID 2: 서열번호 3).

실시형태에서, IFN-α10-IFN-α14 하이브리드 서열은 94, 101, 102, 109 또는 144번 위치의 아미노산에서 선택된 적어도 하나의 돌연변이, 바람직하게는 94, 101, 102, 109 또는 144번 위치의 아미노산에서 선택된 적어도 둘의 돌연변이, 보다 바람직하게는 94, 101, 102, 109 또는 144번 위치의 아미노산에서 선택된 적어도 셋의 돌연변이, 보다 바람직하게는 94, 101, 102, 109 또는 144번 위치의 아미노산에서 선택된 적어도 넷의 돌연변이, 또는 보다 바람직하게는 94, 101, 102, 109 또는 144번 위치의 아미노산에서 선택된 적어도 다섯의 돌연변이를 포함할 수 있다. 대안적인 실시형태에서, IFN-α14는 하이브리드의 중추 구조로 활용될 수 있으며, IFN-α10 서열 및 IFN-α14 서열의 N 및 C 말단 영역에서 이들 서열 사이의 서로 다른 잔기는 IFN-α10 서열에 존재하는 것으로 하이브리드 서열에 제공될 수 있다. 적합하게는 이들 아미노산 위치에 IFN-α10의 잔기를 제공하는 하이브리드 서열을 제공하기 위해 IFN-α14 N-말단 서열의 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개 또는 적어도 11개의 치환이 만들어질 수 있으며 여기서 아미노산은 IFN-α10 및 IFN-α14 사이에 공유되거나/공통되지 않는다. 적합하게는, IFN-α10 및 IFN-α14 사이에 공유되거나/공통되지 않는 이들 아미노산 위치에서 하이브리드 서열에 IFN-α10의 잔기를 제공하기 위해 적어도 1개, 적어도 2개 또는 적어도 3개의 치환이 IFN-α14의 C 말단 서열에 제공된다. 실시형태에서, IFN-α10 및 IFN-α14 사이에 공유되거나/공통되지 않는 아미노산 서열을 갖는 이들 아미노산 위치에서 하이브리드 서열에 IFN-α10의 잔기를 제공하기 위해 IFN-α14의 N-말단 서열로부터 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개 또는 적어도 11개의 치환 및 IFN-α14의 C-말단 서열로부터 적어도 1개, 적어도 2개 또는 적어도 3개의 치환이 만들어진다.

기능적 활성이라는 것은 IFN-α10 및 IFN-α14의 주요 인터페론 결합 부위를 포함하는 IFN-α10-IFN-α14 하이브리드 폴리펩타이드를 의미하며, 여기서 대상체에 펩타이드를 투여하거나 대상체에서 펩타이드를 발현시키는 것은 코로나바이러스 감염에 대한 면역 반응의 억제를 촉진한다. 또한, 기능적 활성은 코로나바이러스 감염에 대한 면역 반응을 억제하는 하이브리드 펩타이드의 능력을 나타낼 수 있다.

단편은 서열번호 1, 2 또는 3으로부터의 적어도 50개, 바람직하게는 100개, 보다 바람직하게는 150개 이상의 연속 아미노산으로서 기능적으로 활성인 아미노산을 포함할 수 있다. 적합하게는, 단편은 예를 들어 cDNA의 C-말단 연속 결실을 사용하여 결정될 수 있다. 이후 상기 결실 작제물은 적합한 플라스미드에 클로닝될 수 있다. 이후 본 명세서에 기술된 바와 같은 생물학적 활성을 위해 이러한 결실 돌연변이의 활성을 시험할 수 있다.

변이체라는 것은 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 70%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 96%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 97%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 98%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 2 또는 3에 대해 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 의미한다. 변이체는 아미노산의 치환, 특히 단백질의 생물학적 활성 또는 배열, 또는 접힘의 임의의 유의적 변형을 초래하지 않을 가능성이 높은 것으로 알려진 치환(들)을 포함하는 서열번호 1, 2 또는 3의 폴리펩타이드 서열을 포함한다. 전형적으로 보존된 치환으로 알려진 이러한 치환은 이 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 아르기닌, 라이신 및 히스티딘 군은 상호교환가능한 염기성 아미노산으로 알려져 있다. 적합하게는, 실시형태에서, 같은 전하, 크기 또는 소수성을 갖는 아미노산이 서로 치환될 수 있다. 적합하게는, 서열을 정렬했을 때 유사하거나 동일한 위치에서 다른 알파 하위유형에 존재하는 아미노산에 대한 아미노산 치환을 제공하기 위해 임의의 치환이 인터페론 알파 하위유형의 아미노산 서열 정렬 분석을 기반으로 선택될 수 있다. 하이브리드 및 이의 변이체 및 단편은 이 분야에 알려진 적합한 분자 생물학 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 적합하게는 상동성은 서열 동일성에 의해 설명될 수 있다. 서열 동일성은 이 분야에 알려진 방법, 예를 들어 BLAST로 결정될 수 있다.

이 분야의 IFN 알파의 재조합 형태와 다중-하위유형 형태 사이의 많은 차이가 있다. 가장 명확한 차이는 각각이 보유하고 있는 IFN 알파 하위유형의 수이다. 재조합 형태는 Intron A™(Schering Plough)의 알파 2b 형태 및 Roferon™(Roche)의 알파 2a 형태인 알파 2 하위유형 만 포함한다. IFN 알파의 다중 하위유형 형태는 IFN 알파의 많은 하위유형을 포함한다. IFN 알파의 다중-하위유형 형태는 광범위 약물이며 IFN 알파 하위유형 중 어느 하나가 더하거나 덜한 항-바이러스 활성을 갖는다는 징후는 없다. 다중 하위유형과 재조합 형태 사이의 다른 차이는 다중-하위유형 형태의 제조 과정에서 인간 세포에 의해 생산된 IFN 알파 2는 글리코실화되는 반면, 재조합 형태는 세균 발효를 통해 생산된다는 점에서 글리코실화되지 않는다는 것이다. 글리코실화는 단백질 제품의 많은 기능에서, 예를 들어 반감기, 생물활성 및 면역원성과 같은 중요한 역할을 한다. 따라서 제품의 글리코실화는, 투여 후 체내 지속시간, 치료적 적절한 용량의 활성 및 제품 자체에 대한 내약성에 영향을 미칠 수 있으므로, 치료적 또는 예방적 치료제를 개발할 때 중요한 고려사항이다.

본 발명자는 IFN-α14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이들의 변이체 또는 단편의 투여가 세포 변성 효과 또는 플라크 형성과 같은 바이러스 활성을 IFN-α14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이들의 변이체 또는 단편을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 10%, 바람직하게는 20%, 바람직하게는 30%, 바람직하게는 40%, 바람직하게는 50%, 바람직하게는 60%, 바람직하게는 70%, 바람직하게는 80% 및 보다 바람직하게는 90% 이상 감소시킨다는 것을 발견하였다.

본 발명자는 IFN-α14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이들의 변이체 또는 단편의 투여가 세포 변성 효과 또는 플라크 형성과 같은 바이러스 활성을 기존 항-바이러스 약물과 비교하여 10%, 바람직하게는 20%, 바람직하게는 30%, 바람직하게는 40%, 바람직하게는 50%, 바람직하게는 60%, 바람직하게는 70%, 바람직하게는 80% 및 보다 바람직하게는 90% 이상 감소시킨다는 것을 발견하였다.

본 발명자는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 세포 변성 효과 또는 플라크 형성과 같은 바이러스 활성을 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이의 변이체 또는 단편을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 10%, 바람직하게는 20%, 바람직하게는 30%, 바람직하게는 40%, 바람직하게는 50%, 바람직하게는 60%, 바람직하게는 70%, 바람직하게는 80% 및 보다 바람직하게는 90% 이상 감소시킨다는 것을 발견하였다.

본 발명자는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 세포 변성 효과 또는 플라크 형성과 같은 바이러스 활성을 기존 항-바이러스 약물과 비교하여 10%, 바람직하게는 20%, 바람직하게는 30%, 바람직하게는 40%, 바람직하게는 50%, 바람직하게는 60%, 바람직하게는 70%, 바람직하게는 80% 및 보다 바람직하게는 90% 이상 감소시킨다는 것을 발견하였다.

HYBRID 2의 투여는 세포 변성 효과 또는 플라크 형성을 50%까지, 바람직하게는 60%까지, 바람직하게는 70%까지, 바람직하게는 80%까지, 바람직하게는 90%까지, 바람직하게는 91%까지, 바람직하게는 92%까지, 바람직하게는 93%까지, 바람직하게는 94%까지, 바람직하게는 95%까지, 바람직하게는 96%까지, 바람직하게는 97%까지 및 보다 바람직하게는 98%까지 감소시킬 수 있다.

본 발명자는 놀랍게도 IFN-α14, 특히 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 코로나바이러스 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 또는 플라크 형성을 50%까지, 바람직하게는 60%까지, 바람직하게는 70%까지, 바람직하게는 80%까지, 바람직하게는 90%까지, 바람직하게는 91%까지, 바람직하게는 92%까지, 바람직하게는 93%까지, 바람직하게는 94%까지, 바람직하게는 95%까지, 바람직하게는 96%까지, 바람직하게는 97%까지 및 보다 바람직하게는 98%까지 억제한다는 것을 발견하였다. HYBRID 1 및 HYBRID 2는 유사한 기능적 효과를 보인다. HYBRID 2는 바이러스 활성 감소에서 특히 효과적인 것으로 간주된다.

본 발명자는 놀랍게도 IFN-α14, 특히 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편의 투여가 본 명세서에서 논의된 낮은 용량에서 세포 변성 효과 또는 플라크 형성을 억제한다는 것을 발견하였다. HYBRID 1 및 HYBRID 2는 유사한 기능적 효과를 보인다. HYBRID 2는 바이러스 활성 감소에서 특히 효과적인 것으로 간주된다.

본 발명의 치료제는 5IU/㎖, 10IU/㎖, 50IU/㎖, 1×10²IU/㎖, 1×10³IU/㎖, 1×10⁴IU/㎖, 1×10⁵IU/㎖, 1×10⁶IU/㎖, 1×10⁷IU/㎖ 또는 1×10⁸IU/㎖의 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 치료제는 적합하게는 1ng 내지 50마이크로그램, 0.1㎎ 내지 1㎎, 1㎎ 내지 3㎎, 3㎎ 내지 5㎎ 또는 5㎎ 내지 10㎎의 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 치료제는 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 적어도 4회 설하 투여될 수 있다. 본 발명의 치료제는 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 적어도 4회 폐에 에어로졸 전달하여 투여될 수 있다. 본 발명의 치료제는 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회 또는 하루에 적어도 4회 주사로 투여될 수 있다.

또한, 본 발명자는 IFN-α14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3) 또는 이들의 변이체 또는 단편의 투여 또는 사용이 코로나바이러스 활성을 전체 또는 부분적으로 억제하고/억제하거나 코로나바이러스 감염으로 인한 세포 변성 효과를 전체 또는 부분적으로 억제하고/억제하거나 코로나바이러스 감염으로 인한 플라크 형성을 전체 또는 부분적으로 억제한다는 것을 발견하였다.

본 발명은 코로나바이러스 감염, 특히 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)의 감염에 안전하고 효과적인 우수한 치료를 제공한다. 이 치료는 낮은 부작용 양상을 보여준다. 필요로 하는 약물의 용량이 낮으며 IFN-α14, HYBRID 1 또는 HYBRID 2는 천연물로서 시험관 내 실험에서 높은 농도(1×10⁸IU/㎖)에서 조차 세포독성을 나타내지 않는다.

본 발명자는 인터페론-알파-14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1, 특히 서열번호 2 또는 HYBRID 2, 특히 서열번호 3, 또는 이들의 변이체 또는 단편의 추가가 코로나바이러스 활성을 강하게 억제한다는 것을 입증하였다. 본 발명자는 SARS-CoV-1의 감염으로 인한 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제하는 합성 알파-인터페론인 인터페론-알파-14(서열번호 1)의 능력을 입증하였다. 본 발명자는 항-바이러스 화합물인 리바비린 및 다중-하위유형 인터페론인 Multiferon™과 비교하여 세포 변성 효과의 억제를 조사하였다. 놀랍게도 인터페론-알파14(서열번호 1)는 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2에 대해 활성적인 반면 리바비린과 다중-하위유형 인터페론 Multiferon™은 훨씬 낮은 억제 활성을 보인다. HYBRID 1 및 HYBRID 2는 유사한 기능적 효과를 보인다. 이러한 결과는 코로나바이러스 감염의 치료에서 기존 항-바이러스 치료제를 뛰어넘는 IFNα-14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1, 특히 서열번호 2 또는 HYBRID 2, 특히 서열번호 3 또는 이들의 변이체 또는 단편의 잠재적인 우수성을 명확하게 보여준다.

정의

단편

단편은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3으로부터의 적어도 50개, 바람직하게는 100개, 보다 바람직하게는 150개 이상의 연속 아미노산으로서 기능적으로 활성인 아미노산을 포함할 수 있다. 적합하게는, 단편은 예를 들어 cDNA의 C-말단 연속 결실을 사용하여 결정될 수 있다. 이후 상기 결실 작제물은 적합한 플라스미드에 클로닝될 수 있다. 이후 본 명세서에 기술된 생물학적 활성을 위해 이러한 결실 돌연변이의 활성을 시험할 수 있다. 단편은 이 분야에 알려진 적합한 분자 생물학 방법을 사용하여 생성할 수 있다.

변이체

변이체라는 것은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 70%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 96%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 97%의 상동성을 갖는, 보다 바람직하게는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 대해 적어도 98%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 의미한다. 변이체는 아미노산의 치환, 특히 단백질의 생물학적 활성 또는 배열, 또는 접힘의 임의의 유의적 변형을 초래하지 않을 가능성이 높은 것으로 알려진 치환(들)을 포함하는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 폴리펩타이드 서열을 포함한다. 전형적으로 보존된 치환으로 알려진 이러한 치환은 이 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 아르기닌, 라이신 및 히스티딘 군은 상호교환가능한 염기성 아미노산으로 알려져 있다. 적합하게는, 실시형태에서, 같은 전하, 크기 또는 소수성을 갖는 아미노산이 서로 치환될 수 있다. 적합하게는, 서열을 정렬했을 때 유사하거나 동일한 위치에서 다른 알파 하위유형에 존재하는 아미노산에 대한 아미노산 치환을 제공하기 위해 임의의 치환이 인터페론 알파 하위유형의 아미노산 서열 정렬 분석을 기반으로 선택될 수 있다. 변이체는 이 분야에 알려진 적합한 분자 생물학 방법을 사용하여 생성할 수 있다.

대상체

본 명세서에 정의된 바와 같이, "대상체"는 인간, 영장류 및 가축(예를 들어, 양, 돼지, 소, 말, 당나귀)과 같은 포유 동물; 생쥐, 토끼, 쥐 및 기니피그와 같은 실험 동물; 및 개 및 고양이와 같은 반려 동물을 포함한다.

치료/요법

용어 "치료"는 본 명세서에서 인간 또는 인간이 아닌 동물에게 도움이 될 수 있는 임의의 요법을 지칭하기 위해 사용된다. 치료는 코로나바이러스 감염에 관한 것일 수 있고 예방적인 것(예방적 치료)일 수 있다. 치료는 치유적이거나 완화적인 효과를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 "치료적" 및 "예방적" 치료에 대한 언급은 가장 넓은 맥락에서 고려되어야 한다. 용어 "치료적"은 반드시 대상체가 완전히 회복될 때까지 치료되는 것을 의미하지는 않는다. 유사하게, "예방적"은 반드시 대상체가 결국 질환 상태에 걸리지 않는다는 것을 의미하지는 않는다. 따라서, 치료적 및/또는 예방적 치료는 코로나바이러스 감염 증상의 개선 또는 바이러스 감염, 적합하게는 코로나바이러스 감염의 발병 위험을 예방하거나 감소시키는 것을 포함한다. 용어 "예방적"은 특정 상태의 중증도 또는 발병을 감소시키는 것으로 간주될 수 있다. "치료적"은 기존 상태의 중증도를 줄이는 것일 수도 있다.

투여

본 발명에서 사용되는 활성 성분, 특히 본 명세서에 기술된 인터페론 하위유형 IFN-α14, 예를 들어 서열번호 1, HYBRID 1(서열번호 2) 또는 HYBRID 2(서열번호 3)는 같은 대상체에 개별적으로, 선택적으로 순차적으로, 투여되거나 약학적 또는 면역원성 조성물로서 동시에 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 인터페론 및 본 발명에서 사용하기 위한 인터페론은 단독으로 또는 다른 제제와 조합으로 투여될 수 있으나, 바람직하게는 약제학적 조성물로 투여될 것이다. 약제학적 조성물은 일반적으로 의도된 투여 경로에 따라 선택된 적합한 약학적 부형제, 희석제 또는 담체를 포함할 것이다.

활성 성분은 임의의 적합한 경로를 통해 치료를 필요로 하는 환자에 투여될 수 있다. 정확한 용량은 아래에서 보다 구체적으로 논의되는 바와 같은 여러 요인들에 따를 것이다.

일부 적합한 투여 경로에는 경구, 직장, 비강, 국소(구강 및 설하 포함), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 진피내, 수막공간내 및 경막외 포함) 투여, 또는 구강 또는 비강 흡입을 통한 투여가 포함된다(하지만 이로 제한되는 것은 아님).

조성물은 주사가능한 조성물로 전달 가능하며, 경구적으로 투여되며, 구강 또는 비강 흡입을 통한 에어로졸로서 폐에 투여된다.

하나의 적합한 투여 경로는 설하 투여, 예를 들어 대상체의 혀 밑에 적용하는 것이다.

구강 또는 비강 흡입 경로를 통한 투여의 경우, 바람직하게는 활성 성분이 적합한 약학적 제형으로 제형화될 것이며 흡입기 또는 네뷸라이저 기기를 포함하지만 이로 제한되지 않는 기계적 형태를 사용하여 전달될 수 있다.

또한, 구강 또는 비강 흡입 경로를 사용하는 경우, SPAG(미립자 에어로졸 생성기)를 사용한 투여가 사용될 수 있다.

정맥 주사의 경우, 활성 성분이 비경구적으로 허용가능한 수용액 형태로서 발열원이 없고 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 형태에 포함될 것이다. 이 분야의 기술자는 예를 들어 염화나트륨 주사제, 링거 주사제, 젖산염화 링거 주사제와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 필요에 따라, 방부제, 안정제, 완충제, 항산화제 및/또는 기타 첨가제가 포함될 수 있다.

경구 투여를 위한 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 젤라틴과 같은 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 물, 석유, 동물 또는 식물성 오일, 미네랄 오일 또는 합성 오일과 같은 액체 담체를 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로스 또는 기타 당류 용액 또는 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜이 포함될 수 있다.

조성물은 또한 미세구체, 리포솜, 기타 미세미립자 전달 시스템 또는 혈액을 포함하는 특정 조직에 배치된 지속 방출 제형을 통해 투여될 수도 있다. 지속 방출 담체의 적합한 예시에는 공유 물품 형태의 반투과성 중합체 매트릭스, 예를 들어 좌제 또는 미세캡슐이 포함된다. 이식가능하거나 미세캡슐의 지속 방출 매트릭스에는 L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 폴리락타이드 공중합체, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 에틸렌 비닐 아세테이트가 포함된다.

위에 언급된 기술 및 프로토콜 및 본 발명에 따라 사용될 수 있는 기타 기술 및 프로토콜의 예시는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A. (ed), 1980]에서 찾을 수 있다.

약제학적 조성물

위에 기술된 바와 같이, 본 발명은 코로나바이러스 감염의 치료를 위한 약제학적 조성물로 확장된다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물 및 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성 성분에 추가로 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 완충제, 안정제 또는 이 분야의 기술자에게 잘 알려진 기타 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질들은 독성이 없어야 하며 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 기타 물질의 정확한 성질은, 예를 들어 경구, 정맥내, 비강내 또는 구강 또는 비강 흡입을 통한 것일 수 있는, 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 제형은 액체, 예를 들어 pH 6.8 내지 7.6의 비-인산염 완충제를 함유하는 생리 식염수 또는 동결건조 분말일 수 있다.

용량

조성물은 바람직하게는 "치료적 유효량" 또는 "원하는 양"으로 개인에게 투여되며, 이는 개인에게 이익을 나타내기에 충분하다. 본 명세서에 정의된 바와 같이, 용어 "유효량"은 원하는 반응을 적어도 부분적으로 얻기 위해 필요하거나 치료되는 특정 상태의 발병을 지연하거나 치료되는 특정 상태의 진행을 억제하거나 치료되는 특정 상태의 발병 또는 진행을 모두 정지시키는데 필요한 양을 의미한다. 양은 치료하는 대상체의 건강 및 신체 상태, 치료하는 대상체의 분류학적 군, 원하는 보호 정도, 조성물의 제형, 의학적 상황의 평가 및 기타 관련 요인에 따라 다르다. 양은 비교적 넓은 범위에 속할 것으로 기대되며, 이는 일상적인 시험을 통해 결정될 수 있다. 치료의 처방, 예를 들어 용량의 결정 등은 궁극적으로는 일반의, 내과의 또는 기타 의사의 책임 및 재량 내에 있으며, 전형적으로 치료할 장애, 개별 환자의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 의사에게 알려진 기타 요인을 고려한다. 최적 용량은 예를 들어 연령, 성별, 체중, 치료되는 상태의 중증도, 투여되는 활성 성분 및 투여 경로를 포함하는 다수의 파라미터를 기반으로 의사에 의해 결정될 수 있다. 넓은 용량 범위가 적용될 수 있다. 인간 환자에 대한 경구 투여를 고려하면, 인간 용량당 예를 들어 약 10㎍ 내지 약 1000㎍의 제제가 투여될 수 있으며, 선택적으로 3 내지 4회 용량으로 투여될 수 있다. 최적 치료 반응을 제공하고 부작용을 감소시키기 위해 투여량을 조절할 수 있다. 예를 들어, 여러 분할 용량이 매일, 매주, 매달 또는 기타 적합한 시간 간격으로 투여되거나 상황의 긴급성에 따라 용량이 비례적으로 감소될 수 있다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 과학적 용어는 본 발명의 기술 분야의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다.

도 1은 SARS-CoV-1 코로나바이러스 감염 후 세포 변성 효과에 대한 IFNα-14의 효과를 나타낸다.
도 2는 SARS-CoV-1 코로나바이러스 감염 후 플라크 형성에 대한 IFNα-14의 효과를 보여주는 그래프를 나타낸다.
도 3은 SARS-CoV-2 억제 플라크 분석에서 베로 세포(Vero cell)를 사용한 플라크 억제 분석 결과로서, IFN알파 2a(상업적으로 이용가능한 하위유형)와 IFN알파 14를 비교한 것이며, IC50을 나타낸 것이고, 이 결과는 알파-14가 알파-2a보다 Covid 19 바이러스에 대해 20배 더 강력함을 나타낸다.
도 4는 5종의 인터페론(인터페론-알파 14, HYBRID 2, HYBRID 1, 인터페론-베타 1a, 인터페론-알파 2a)을 비교하는 연구에서 베로 세포를 사용한 플라크 억제 분석 결과를 나타내는데, 이는 알파-2a를 재차 기반으로 한 비교로서 알파-2a에 비해 4종의 다른 인터페론이 20배, 10배, 5배 이상 더 강력함을 제공한다.
도 5는 인간 내피 세포에 의한 CXCL-10 합성 상에서 인터페론-알파 14의 효과를 나타낸다. CXCL-10은 항바이러스성 NK 세포에 대한 유인물질이다.
도 6은 인터페론 알파 14를 사용한 그랜자임 B(Granzyme B)의 빠른 유도를 나타낸다. 그랜자임 B는 바이러스를 갖는 세포를 죽이기 위해 방출을 유발한다.
도 7은 Hybrid 2에 의해 IL-17A의 합성이 억제되는 것을 나타낸다. 인터페론 알파 14는 17A 및 F 모두를 매우 강력하게 억제한다. IL17 염증은 ARDS에서 중요한 문제로 간주된다.
도 8은 Hybrid 2로 IL 17F가 억제되는 것을 나타낸다.
도 9는 인간 백혈구의 CXCL 10 생성에 있어서 Hybrid 2의 효과를 나타낸다.
도 10은 인터페론 감마 생성을 나타낸다.
도 11은 TNF 알파 분비를 나타낸다.
도 12는 면역 세포와 Hybrid 2로부터의 이미지를 나타낸다.
도 13은 Hybrid 2가 세포자멸사를 유도할 수 있음을 나타낸다.
도 14는 NK 세포 군집화를 나타낸다.
도 15는 Hybrid 2에 의한 NK 세포의 직접 활성화를 나타낸다.
도 16은 인간 RSV를 사용한 플라크 분석의 HYBRID 2 억제를 나타낸다.

실험 자료

본 발명자는 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2의 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 기반으로 한 모델 시스템을 사용하여 바이러스 감염을 억제하는 합성 알파-인터페론 Hybrid 2의 능력을 조사하였다. 또한 본 발명자는 항-바이러스 화합물 리바비린 및 다중-하위유형 인터페론 Multiferon™과 비교하여 세포 변성 효과의 억제를 조사하였다. 추가로 본 발명자는 HYBRID 2의 항-바이러스 효과를 입증하기 위해 RSV를 활용하였다. RSV 감염은 유아 입원의 가장 중요한 원인이며 유아 사망의 주요 원인 중 하나이다. 인플루엔자, 리노바이러스 및 코로나바이러스와 함께, 호흡기 바이러스 중 하나로서, 그 자체로 흥미롭고 지표 모델을 제공한다.

실험 1: SARS-CoV-1 코로나바이러스 감염 후 세포 변성 효과에 대한 IFNα-14의 효과.

SARS-CoV-1 감염 후 세포 변성 효과를 억제하는 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14의 효과를 세포 변성 종말점 분석법(cytopathic endpoint assay)으로 시험하였다. 모든 종말점 분석은 비교를 위해 다중-하위유형 Multiferon 및 IFN-α14뿐만 아니라 항-바이러스 리바비린을 사용하여 수행하였다.

항-바이러스 치료제 준비.

다른 바이러스-숙주 조합에 일반적으로 사용되는 억제 용량을 포함하는 광범위한 농도(10배 희석으로 얻음)를 시험하였다. 화합물은 행크 완충-식염수에 용해하였다.

플라크 분석의 경우, 아래에 명시된 바와 같이 성장 배지를 사용하여 5배 약물 희석액을 준비하였다. SARS-CoV-1 생산 및 감염 아프리카 녹색 원숭이(Vero E6) 세포(American Type Culture Collection, 미국 버지니아주 머내서스 소재)를 10% 소태아혈청(fetal calf serum: FCS; Biological Industries, 이스라엘 소재)이 보충된 Medium 199(Sigma, 미국 세인트루이스 소재)로 이루어진 성장 배지 함유 75㎝ 세포 배양 플라스크에서 번식시켰다. SARS-HCoV2003VA2774(싱가포르의 SARS 환자에서 분리)를 Vero E6 세포에서 번식시켰다. 간략하게, 2㎖의 스톡 바이러스를 Vero E6 세포의 융합 단층에 첨가하고 1시간 동안 5% CO₂ 조건의 37℃에서 배양하였다. 이후 5% FCS가 보충된 Medium 199 13㎖을 첨가하였다. 배양액을 5% CO₂ 조건의 37℃에서 배양하고 도립 현미경으로 각 웰을 관찰하여 세포 변성 효과의 억제를 측정하였다. 48시간 후 75% 이상의 억제가 관찰되는 경우, 상등액을 수집하였다. 상등액을 2500rpm에서 투명하게 만들고 저온 바이알에 분주하여 사용할 때까지 -80℃에서 보관하였다.

바이러스 취급 및 적정

플라크 분석을 2회 반복 수행하여 동결된 배양 상등액의 바이러스 역가를 결정하였다. 간략하게, 10배 연속 희석액의 바이러스 100마이크로리터를 24 웰-플레이트의 Vero E6 세포 단층에 첨가하였다. 5% CO₂ 조건의 37℃에서 1시간 동안 배양한 다음, 5% FCS가 보충된 바이러스 Medium 199를 첨가하였다. 세포를 10%(v/v) 포르말린으로 고정시키고 2%(w/v) 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다. 육안으로 플라크를 계수하고 ㎖당 플라크 형성 단위(pfu/㎖)의 바이러스 역가를 계산하였다.

세포 변성 종말점 분석

각 항-바이러스 치료의 효과를 4회 반복하여 시험하였다. 간략하게, 각 치료제의 연속 10배 희석액 100마이크로리터를 96-웰 플레이트에서 웰당 20,000개 세포의 최종 세포수를 제공하는 Vero E6 세포 100마이크로리터와 함께 배양하였다. 인터페론 제제를 위해 5% CO₂ 조건의 37℃에서 밤새 배양하였고 0.5의 감염다중도(MOI)(세포당 바이러스 입자)를 위해 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 5% CO₂ 조건의 37℃에서 3일 동안 배양하고 매일 세포 변성 효과를 관찰하였다. 종말점은 모든 4회의 설정에서 세포 변성 효과를 억제한 희석 농도로 하였다.

세포독성을 결정하기 위해, 각 치료제의 연속 10배 희석액 100마이크로리터를, 바이러스 처리없이, 96-웰 플레이트에서 웰당 20,000개 세포의 최종 세포수를 제공하는 Vero E6 세포 100마이크로리터와 함께 배양하였다. 이후 플레이트를 5% CO₂ 조건의 37℃에서 3일 동안 배양하고 도립 현미경을 사용하여 독성 효과를 관찰하였다.

이후 10,000pfu/웰 농도의 바이러스 10마이크로리터를 각 시험 웰에 첨가하였다. 이것은 0.5의 감염다중도(MOI)(세포당 바이러스 입자)에 해당한다. 플레이트를 5% CO₂ 조건의 37℃에서 3일 동안 배양하고 매일 세포 변성 효과에 대해 관찰하였다. 종말점은 모든 4회의 설정에서 세포 변성 효과를 억제한 희석 농도로 하였다(CIA100).

세포독성을 결정하기 위해, 각 치료제의 연속 10배 희석액 100마이크로리터를, 바이러스 처리없이, 96-웰 플레이트에서 웰당 20,000개 세포의 최종 세포수를 제공하는 Vero E6 세포 100마이크로리터와 함께 배양하였다. 이후 플레이트를 5% CO₂ 조건의 37℃에서 3일 동안 배양하고 도립 현미경을 사용하여 독성 효과를 관찰하였다. 완전한 억제를 나타낸 인터페론은 추가로 10³ 및 10²pfu/웰의 더 낮은 바이러스 역가에서 시험하였다.

실험 2: SARS-CoV-1 코로나바이러스 감염 후 플라크 형성에서 IFNα-14의 효과.

SARS-CoV-1 감염 후 플라크 형성을 억제하는 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14의 효과를 플라크 감소 분석법으로 시험하였다.

바이러스 스톡의 10배 희석액을 사용하여 플라크 분석을 수행하였으며, 0.1㎖의 분액을 민감성 세포 단층에 접종하였다. 바이러스가 세포에 부착되도록 하는 배양 기간 후, 겔 형성을 유발하는 물질, 일반적으로 아가(agar)를 함유하는 영양 배지로 단층을 덮었다. 플레이트를 배양한 후, 본래 감염된 세포는 자손 바이러스를 방출하였다. 새로운 바이러스의 확산은 겔에 의해 인근 세포로 제한된다. 이의 결과, 각 감염 입자는 플라크라고 불리는 감염된 세포의 원형 영역을 생성하였다. 결국에 플라크는 육안으로 볼 수 있을 정도로 커졌다. 살아있는 세포와 플라크 사이의 대비를 높이기 위해 살아있는 세포를 염색하는 염색제를 사용하였다. 세포에 가시적인 손상을 일으키는 바이러스, 즉 SARS-CoV-1 만 이러한 방식으로 분석하였다.

이러한 결과는 SARS-CoV-1의 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제하는 합성 알파-인터페론인 인터페론-알파-14(서열번호 1)의 능력을 명확하게 보여준다. 이 결과는 항-바이러스 화합물 리바비린 및 다중-하위유형 인터페론 Multiferon™과 비교한 세포 변성 효과의 억제를 보여준다. 놀랍게도, 인터페론-알파14(서열번호 1)는 SARS-CoV-1에 대해 활성인 반면 리바비린과 다중-하위유형 인터페론 Multiferon™은 훨씬 낮은 억제 활성을 보인다. HYBRID 1 및 HYBRID 2는 유사한 기능적 효과를 보인다. 이러한 결과는 코로나바이러스 감염의 치료에 대해 기존 항-바이러스 치료제를 뛰어넘는 IFNα-14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1, 특히 서열번호 2 또는 HYBRID 2, 특히 서열번호 3 또는 이들의 변이체 또는 단편의 잠재적인 우수성을 명확하게 나타낸다.

실험 3: SARS-CoV-2 코로나바이러스 감염 후 플라크 형성에서 IFNα-14의 효과.

SARS-CoV-2 감염 후 플라크 형성을 억제하는 인터페론 알파 하위유형 IFN-α14의 효과를 플라크 감소 분석법으로 시험하였다.

바이러스 스톡의 10배 희석액을 사용하여 플라크 분석을 수행하였으며, 0.1㎖의 분액을 민감성 세포 단층에 접종하였다. 바이러스가 세포에 부착되도록 하는 배양 기간 후, 겔 형성을 유발하는 물질, 일반적으로 아가(agar)를 함유하는 영양 배지로 단층을 덮었다. 플레이트를 배양한 후, 본래 감염된 세포는 자손 바이러스를 방출하였다. 새로운 바이러스의 확산은 겔에 의해 인근 세포로 제한된다. 이의 결과, 각 감염 입자는 플라크라고 불리는 감염된 세포의 원형 영역을 생성하였다. 결국에 플라크는 육안으로 볼 수 있을 정도로 커졌다. 살아있는 세포와 플라크 사이의 대비를 높이기 위해 살아있는 세포를 염색하는 염색제를 사용하였다. 세포에 가시적인 손상을 일으키는 바이러스, 즉 SARS-CoV-2 만 이러한 방식으로 분석하였다.

이러한 결과(도 3 및 4)는 SARS-CoV-2의 감염으로 유발되는 세포 변성 효과 및 플라크 형성을 억제하는 합성 알파-인터페론인 인터페론-알파-14(서열번호 1)의 능력을 명확하게 보여준다. 이 결과는 다른 인터페론과 비교한 세포 변성 효과의 억제를 보여준다. 인터페론-알파14(서열번호 1), HYBRID 1 및 HYBRID 2는 SARS-CoV-2에 대해 활성이다. 이러한 결과는 코로나바이러스 감염의 치료에 대해 기존 항-바이러스 치료제를 뛰어넘는 IFNα-14, 특히 서열번호 1, HYBRID 1, 특히 서열번호 2 또는 HYBRID 2, 특히 서열번호 3 또는 이들의 변이체 또는 단편의 잠재적인 우수성을 명확하게 나타낸다.

관련 IL-17, 그랜자임 B, 인터페론 감마, 인터페론 알파, NK 세포 분석

주요 면역 조절제와 관련하여 인터페론 알파 14 및 Hybrid 2를 활용한 분석을 이 분야에서 이해되는 바에 따라 수행하였다.

면역 세포 사멸에서 HYBRID 2의 효과

IncuCyte ZOOM 플랫폼에서 면역 세포 사멸의 생세포 이미지 분석으로 하이브리드 재조합 인터페론의 효과를 시험하였다.

적색 표지 핵을 갖는 SK-OV-3 난소암 세포(SK-OV-3 NucLight Red)를 연구에서 표적 세포로 사용하였다. 면역 세포 사멸을 위해, 세포를 자연 살해(NK) 세포와 함께 배양하였고 양성 대조군을 IL-2 및 IL-12로 처리된 세포로 구성하였다. 카스파제 3/7 양성 개체를 염색하여 세포 자멸사를 검출하였고 적색 핵을 계수하여 세포수를 결정하였다. 공동-배양 모델의 결과를 SK-OV-3 NucLight Red 세포 단독으로 이루어진 단일-배양 모델의 결과와 비교하였다.

4가지의 표적 및 효과기 세포 비율로 초기 최적화 실험을 수행하였다. 이의 결과 96-웰 플레이트의 웰당 5,000개의 자연 살해 세포 및 2,000개의 SK-OV-3 NucLight Red 세포인 경우 면역 세포 사멸 검출을 위한 적합한 분석창을 제공하였다.

면역 세포 사멸에 대한 효과를 위해 10IU/㎖ 내지 3×10⁶IU/㎖ 범위에서 하이브리드 재조합 인터페론의 8가지 용량을 시험하였다. 결과를 비처리 대조군, 비히클 처리 대조군 및 IL-2/IL-12 처리 세포와 비교하였다. 공동-배양(SK-OV-3 NucLight 및 NK 세포) 및 단일-배양 세포(SK-OV-3 NucLight Red)를 사용하여 모든 조건을 시험하였다.

IncuCyte ZOOM을 사용하여 4일 동안 세포를 모니터하였고, IncuCyte 소프트웨어를 사용하여 시간에 따른 녹색(세포 자멸사) 및 적색(세포수) 개체수를 측정하였다. 곡선 하 면적(AUC) 분석을 사용하여 시간 경과에 따른 세포 자멸사 및 세포수를 정량화하였다.

IL-17, IL-6, CCL-5 및 면역 반응이 Covid-19 감염 후, 특히 IL-17 염증이 유의미한 것으로 나타난 Covid-19 유발 급성 호흡 곤란 증후군 후, 조절되는 것으로 결정되었다.

하이브리드 재조합 인터페론은 공동-배양 모델에서 세포 자멸사를 강하게 유도하였으며, AUC는 비히클 대조군의 200에서 하이브리드 재조합 인터페론의 가장 높은 용량의 1174로 증가하였다. 세포 자멸사 유도에 대해 1.5×10⁶IU/㎖의 EC₅₀이 도출되었다. 반대로, 단일-배양 세포는 하이브리드 rIFN에 대해 미미한 반응만을 나타냈다.

또한, 하이브리드 재조합 인터페론은 세포수의 감소를 유발하였다. 세포수에 대한 AUC 값은 비히클 대조군의 39921에서 하이브리드 rIFN의 가장 높은 용량의 19501로 떨어졌다. 세포수의 감소에 대해 IC₅₀이 1.3×10⁶IU/㎖로 결정되었다.

하이브리드 rIFN에 의한 자연 살해 세포의 매우 강한 직접 활성화의 증거가 있었고, 이와 함께 NK 세포 단일배양 모델에서 하이브리드 재조합 인터페론 처리에 대한 반응으로 NK 세포의 군집화가 관찰되었다.

도 5 내지 도 15에 나타난 바와 같이, IFN 알파 14 및 특히 Hybrid 2는 IL-17(17A 및 F 모두를 매우 강하게 억제함), IL-6, CCL-5 및 CCL-2를 조절하며 항 바이러스 NK 반응을 제공하는 것으로 입증되었다.

본 발명의 기술된 실시형태에 대한 다양한 변경 및 변화는 본 발명의 범위에서 벗어남 없이 이 분야의 기술자에게 자명할 것이다. 비록 특정 바람직한 실시형태와 관련하여 본 발명을 기술하였지만, 청구된 바와 같은 본 발명은 이러한 특정 실시형태에 과도하게 제한되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 실제로, 본 발명을 수행하는 것에 대한 기술된 방식을 다양하게 변경하는 것은 이 분야의 기술자에게 자명하며, 이러한 다양한 변경이 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.

Claims

바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법으로서,
(i) 치료적 유효량의 인터페론 알파 하위유형을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계로서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 단계
를 포함하는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
세포 변성 효과 또는 플라크 형성과 같은 바이러스 활성의 감소를 제공하기 위한 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법으로서,
(i) 치료적 유효량의 인터페론 알파 하위유형을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계로서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 단계
를 포함하는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법으로서,
(i) 치료적 유효량의 인터페론 알파 하위유형을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계로서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 단계
를 포함하는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HYBRID 2는 하기 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법:
제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터페론 알파 하위유형 HYBRID 2는 하기 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어지는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법:
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 방법은 설하 투여, 경구 투여 또는 주사 투여인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터페론 알파 하위유형의 치료적 유효량은 저용량인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형으로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형.
제9항에 있어서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 HYBRID 2이고, 상기 HYBRID 2는 하기 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형:
제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 코로나바이러스 감염인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-1(SARS-CoV-1), 인간 코로나바이러스 NL63, 인간 코로나바이러스 HKU1, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2(SARS-CoV-2 또는 Covid19)인, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형.
제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 설하 투여, 경구 투여 또는 주사 투여로 투여되는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형.
제13항에 있어서, 상기 인터페론 알파 하위유형은 저용량으로 투여되는, 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 인터페론 알파 하위유형.
인터페론 알파 하위유형으로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조에 사용하기 위한 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형.
인터페론 알파 하위유형으로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조에 사용하기 위한 HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형.
인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물.
인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 조성물.
인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물.
인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물로서,
상기 인터페론 알파 하위유형은 코로나바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, HYBRID 2 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 변이체인, 인터페론 알파 하위유형을 포함하는 약제학적 조성물.