KR20230011279A - 화합물, 약제학적 조성물, 및 화합물의 제조 방법 및 그의 사용 방법 - Google Patents

화합물, 약제학적 조성물, 및 화합물의 제조 방법 및 그의 사용 방법 Download PDF

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KR20230011279A
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빙칸 리우
에블린 디트리히
프레데릭 발레
알렉산더 페리먼
장-프랑수아 트루혼
로버트 팝
패트릭 보뤼우
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Abstract

필요로 하는 대상체의 치료에 사용될 수 있는 화합물 및 그의 약제학적으로 허용되는 염이 개시된다. 본원에 개시된 화합물은 티로신 및 트레오닌 특이적 cdc2-억제 키나제(Myt1)의 억제제일 수 있다. 또한, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 약제학적 조성물 및 그의 제조 및 사용 방법이 개시된다.

Description

화합물, 약제학적 조성물, 및 화합물의 제조 방법 및 그의 사용 방법
본 발명은 화합물 및 약제학적 조성물, 그의 제조 및 질환 또는 병태, 예를 들어, 암, 및 특히 막 연관 티로신 및 트레오닌 특이적 cdc2-억제 키나제(Myt1)(유전자 명칭 PKMYT1)의 활성에 의존하는 질환 또는 병태(예를 들어, CCNE1 증폭/과발현이 잠복된 암 또는 FBXW7 돌연변이 암)에서의 그의 용도에 관한 것이다.
DNA는 DNA 손상을 유발할 수 있는 내인성 손상(예를 들어, 고착된 복제 포크, 반응성 산소 종)과 외인성 손상(UV, 이온화 방사선, 화학 물질)에 지속적으로 영향을 받는다. 결과적으로, 세포는 게놈 무결성을 손상시키고 암과 같은 게놈 불안정성 질환을 유발할 수 있는 이러한 유해한 이벤트에 대응하는 정교한 메커니즘을 확립하였다. 이러한 메커니즘을 총칭하여 DNA 손상 반응(DDR)이라고 한다. 전체 DDR의 한 구성요소는 G1, S, G2 및 유사분열 체크포인트를 포함하는 세포 주기의 다양한 기(phase) 전반에 걸쳐 특정 DNA 복구 메커니즘을 조절하는 다양한 체크포인트 경로의 활성화이다. 대부분의 암 세포는 p53 돌연변이로 인해 G1 체크포인트를 잃어버렸기 때문에 G2 체크포인트에 의존하여 유사분열에 들어가 2개의 딸세포로 분열하기 전에 필요한 DNA 손상 보정을 수행한다.
새로운 항암 치료 접근법, 예를 들어 소분자를 이용하는 접근법, 특히 표적화된 암 치료를 허용하는 요법에 대한 요구가 있다.
일 양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
식 중
각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 CR2이고;
R1 및 각각의 R2는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, 시아노, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이거나; 또는 R1은 R1에 인접한 하나의 R2와 결합하여, 선택적으로 치환된 C3-6 알킬렌을 형성하고;
각각의 R3 및 R4는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬 또는 할로겐이고;
R5는 H 또는 -N(R7)2이고;
R6은 -C(O)NH(R8), -C(O)R7A, 또는 -SO2R7A이고;
각각의 R7은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 또는 -SO2R7A이거나; 또는 2개의 R7 기는 둘 모두가 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R7A는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴이고;
각각의 R7B는 독립적으로 하이드록실, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, -N(R7)2, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 선택적으로 치환된 알콕시이고;
각각의 R8은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알콕시알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴이거나; 또는 2개의 R8은, 이들이 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
Q는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴렌, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌이다.
일부 구현예에서, 화합물은 화학식 (IA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00002
일부 구현예에서, X는 CR2이다. 일부 구현예에서, 화합물은 화학식 (II)의 화합물이다:
Figure pct00003
일부 구현예에서, 화합물은 화학식 (IIA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00004
일부 구현예에서, 화합물은 화학식 (III)의 화합물이다:
Figure pct00005
R2A는 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이다.
일부 구현예에서, 화합물은 화학식 (IIIA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00006
일부 구현예에서, R2A는 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 또는 할로겐이다.
일부 구현예에서, R3은 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, R3은 할로겐이다. 일부 구현예에서, R4는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, R4는 할로겐(예를 들어, 염소)이다.
일부 구현예에서, R2는 수소이다. 일부 구현예에서, R2는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, R2는 선택적으로 치환된 메틸 또는 선택적으로 치환된 이소프로필이다. R2는 할로겐이다.
일부 구현예에서, R1은 수소이다. 일부 구현예에서, R1은 할로겐이다. 일부 구현예에서, R1은 염소 또는 브롬이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 메틸, 선택적으로 치환된 에틸, 선택적으로 치환된 이소프로필 또는 선택적으로 치환된 부틸이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, R1은 1,3-티아졸릴, 1,2-티아졸릴, 1,3-옥사졸릴, 벤조-1,3-티아졸릴, 벤조-1,3-옥사졸릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 피리딜, 이미다졸릴, 피리미딜, 피라지닐, 피리다지닐, 또는 피라졸릴이되, R1은 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴에 대해 정의된 치환기로 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이고, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬에 대해 정의된 치환기로 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴이다. 일부 구현예에서, R1은 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 피페리디닐, 모폴리닐, 피페라지닐, 티오모폴리닐, 옥사-아자-스피로[3,3]헵탄, 또는 옥사-아자-바이사이클로[3.2.1]옥탄이고, R1은 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴에 대해 정의된 바와 같은 치환기로 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 사이클로헥세닐 또는 선택적으로 치환된 사이클로펜테닐이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 C6-10 아릴이다. 일부 구현예에서, R1은 선택적으로 치환된 페닐이다.
일부 구현예에서, R1은 -Q-R7B이다. 일부 구현예에서, Q는 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐렌이다. 일부 구현예에서, Q는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴렌이다. 일부 구현예에서, R7B는 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴이다. 일부 구현예에서, R7B는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴이다.
일부 구현예에서, R1은 메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 불소, 염소, 브롬, 아미노, 하이드록실, 시아노, 옥소, -C(O)NH2, -C(O)NH(Me), -C(O)N(Me)2, -(CH2)n-C(O)OH, 및 -(CH2)n-C(O)Ot-Bu로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 군으로 선택적으로 치환되되, 여기서 n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, R1은 -N(R7)2이다. 일부 구현예에서, R1은 디에틸아미노이다.
일부 구현예에서, R5는 수소이다. 일부 구현예에서, R5는 -N(R7)2이다. 일부 구현예에서, R5는 -NH2이다. 일부 구현예에서, R6은 -C(O)NH(R8)이다. 일부 구현예에서, R6은 -C(O)NH2이다. 일부 구현예에서, R6은 -C(O)NH(Me)이다. 일부 구현예에서, R6은 -SO2R7A이다. 일부 구현예에서, R6은 -SO2Me이다.
일부 구현예에서, 화합물은 화합물 1-328(예를 들어, 화합물 1-288) 및 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 조성물은 중수소가 동위원소적으로 풍부하다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포를 본원에 개시된 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, Myt1을 발현하는 세포에서 Myt1을 억제하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 세포는 CCNE1을 과발현한다. 일부 구현예에서, 세포는 대상체에 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 대상체는 세포 과증식의 증상을 갖는 질환 또는 병태로 고통받고 있고 이에 대한 치료가 필요하다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 CCNE1을 과발현하는 암이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 Myt1 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 암은 CCNE1을 과발현하는 암으로 이전에 확인되었다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 Myt1 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 암은 CCNE1을 과발현하는 암이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 CCNE1을 과발현하는 암 세포에서 세포 사멸을 유도하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 유효량의 Myt1 억제제와 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 대상체에 있다. 일부 구현예에서, Myt1 억제제는 본원에 개시된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다. 일부 구현예에서, CCNE1을 과발현하는 암은 자궁암, 난소암, 유방암, 위암, 식도암, 폐암, 또는 자궁내막암이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 Myt1 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 암은 FBXW7 유전자에서 불활성화 돌연변이를 갖는 암으로서 이전에 확인되었다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 Myt1 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 암은 FBXW7 유전자에서 불활성화 돌연변이를 가지고 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 FBXW7 돌연변이 암 세포에서 세포 사멸을 유도하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 유효량의 Myt1 억제제와 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 대상체에 있다. 암은 자궁암, 결장직장암, 유방암, 폐암 또는 식도암이다. 일부 구현예에서, Myt1 억제제는 본원에 개시된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다.
약어
유기 화학, 의약 화학, 약리학, 및 의학 분야에 일반적으로 사용되며 이러한 분야의 종사자에게 잘 알려져 있는 약어 및 용어가 본원에 사용된다. 대표적인 약어 및 정의가 아래에 제시되어 있다:
Ac는 아세틸 [CH3C(O)-]이고, Ac2O은 아세트산 무수물이고; AcOH은 아세트산이고; APC는 항원-제시 세포이고; aq.는 수성이고; 9-BBN은 9-보라비사이클로[3.3.1]노난이고; BINAP는 (2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸)이고; Bn은 벤질이고; BOC는 tert-부틸옥시카보닐이고; CDI는 카보닐디이미다졸이고; DCM은 디클로로메탄이고; DIAD는 디이소프로필아조디카복실레이트이고; DIBAL은 수소화디이소부틸알루미늄이고; DIPEA는 디이소프로필에틸 아민이고; DMA는 디메틸 아세트아미드이고; DMAP는 4-디메틸아미노피리딘이고; DMF는 N,N-디메틸포름아미드이고; DMSO는 디메틸 설폭사이드이고; dppf는 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센이고; EDAC (또는 EDC)는 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카보디이미드 HCl이고; ESI는 전기분무 이온화 질량 분석법이고; Et2O은 디에틸 에테르이고; Et3N은 트리에틸아민이고; Et는 에틸이고; EtOAc는 에틸 아세테이트이고; EtOH는 에탄올이고; 3-F-Ph는 3-플루오로페닐이고, HATU는 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트이고; HCl는 염산이고; HOBt는 1-하이드록시벤조트리아졸이고; HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피이고; LCMS는 질량 분광 검출이 행해지는 HPLC이고; LiHMDS는 비스(트리메틸실릴)아미드리튬이고; LG는 이탈 기이고; M은 몰농도(molar)이고; mCPBA는 메타클로로과벤조산이고; mmol은 밀리몰이고; Me는 메틸이고; MeCN은 아세토니트릴이고; MeOH는 메탄올이고; Ms는 메탄설포닐이고; MS는 질량 분석법이고; N은 노르말 농도이고; NaHMDS는 헥사메틸디실리아지드화나트륨이고; NaOAc는 아세트산나트륨이고; NaOtBu는 tert-부톡시화나트륨이고; NMO는 N-메틸몰폴린 N-옥사이드이고; NMP는 N-메틸 피롤리디논이고; NMR은 핵 자기 공명 분광법이고; Pd2(dba)3은 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐이고; PdCl2(PPh3)2는 디클로로비스-(트리페닐포스펜) 팔라듐이고; PG는 특정되지 않은 보호 기를 의미하고; Ph는 페닐이고; PhMe는 톨루엔이고; PPh3은 트리페닐포스핀이고; PMB는 파라-메톡시벤질이고; rt는 실온이고; RBF는 둥근 바닥 플라스크이고; RuPhos Pd G1은 클로로-(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2-아미노에틸)페닐]팔라듐(II)이고; SEM은 [2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸이고; SFC는 초임계 유체 크로마토그래피이고; SNAr은 친핵성 방향족 치환이고; TBAB는 브롬화테트라부틸암모늄이고; TBAF는 플루오르화테트라부틸암모늄이고; TBS는 tert-부틸디메틸실릴이고; tBu는 tert-부틸이고; Tf는 트리플레이트이고; TFA는 트리플루오로아세트산이고; THF는 테트라히드로퓨란이고; THP는 테트라히드로피란이고; TLC는 박층 크로마토그래피이고; TMAD는 테트라메틸아조디카복스아미드이고; TMS는 트리메틸실릴이고; TPAP는 과루테늄산 테트라프로필암모늄이고; Ts는 p-톨루엔설포닐이고; UPLC는 초고성능 액체 크로마토그래피이다.
정의
본원에 사용된 용어 "이상"은, 정상과 다름을 지칭한다. 효소 활성을 설명하기 위해 사용된 경우에 이상은, 정상 대조 또는 정상의 질병이 일어나지 않은 대조 샘플의 평균을 초과하거나 미만인 활성을 지칭한다. 이상 활성은 질병을 초래하는 활성의 양을 지칭할 수 있으며, 이 때 상기 이상 활성이 (예를 들면, 본원에 설명된 바와 같이 화합물을 투여하거나 방법을 사용함에 의해) 정상 또는 비-질병-관련된 양으로 복귀되면 질병 또는 하나 이상의 질병 증상이 감소되게 된다.
본원에 사용된 용어 "아실"은 기 -C(=O)-R을 나타내며, 여기서 R은 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클릴이다. 아실은 각각의 R 기에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "선암종"은, 유기체 내부에서 기관을 라이닝(lining) 하는 선 세포로부터 비롯되는 암을 나타낸다. 선암종의 비제한적인 예는 비-소 세포 폐 암, 전립선 암, 췌장 암, 식도 암, 및 결장직장 암을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알카노일"은, 카보닐 기를 통하여 모 분자 기에 부착되는 알킬 기 또는 수소를 나타내며, 포르밀 (즉, 카복시알데히드 기), 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 및 이소-부티릴로 예시된다. 치환되지 않은 알카노일 기는 1 내지 7개의 탄소를 함유한다. 알카노일 기는 치환되지 않거나, 알킬 기에 대하여 본원에서 설명된 바와 같이 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 C1-7 알카노일). 말단의 "-오일"은, 본원에서 정의된 또 다른 기, 예를 들면, 아릴, 사이클로알킬, 및 헤테로사이클릴에 부가되어, "아릴오일," "사이클로알카노일," 및 "(헤테로사이클릴)오일"을 규정할 수 있다. 이러한 기들은 각각 아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클릴로 치환된 카보닐 기를 나타낸다. "아릴오일", "사이클로알카노일", 및 "(헤테로사이클릴)오일" 각각은, 각각 "아릴", "사이클로알킬," 또는 "헤테로사이클릴"에 대하여 정의된 대로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은, 1개, 2개 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 비환상(acyclic)의 1가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 나타낸다. 알케닐 기의 비제한적인 예는 에테닐, 프로프-1-에닐, 프로프-2-에닐, 1-메틸에테닐, 부트-1-에닐, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 1-메틸프로프-1-에닐, 2-메틸프로프-1-에닐, 및 1-메틸프로프-2-에닐을 포함한다. 알케닐 기는, 알킬에 대하여 본원에서 정의된 대로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐렌"은 2가 알케닐 기를 지칭한다. 임의로 치환된 알케닐렌은 알케닐에 대해 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된 알케닐렌이다.
본원에 사용된 용어 "알콕시"는 식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서 R은 달리 명시되지 않는 한 C1-6 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 본원에서 정의된 대로 추가로 치환될 수 있다. 용어 "알콕시"는 본원에서 정의된 다른 용어, 예를 들면, 아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클릴과 조합되어, "아릴 알콕시," "사이클로알킬 알콕시," 및 "(헤테로사이클릴)알콕시" 기를 규정할 수 있다. 이러한 기는 각각 아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클릴에 의해 치환되는 알콕시를 나타낸다. "아릴 알콕시", "사이클로알킬 알콕시", 및 "(헤테로사이클릴)알콕시" 각각은, 각각의 개별 부분에 대하여 본원에서 정의된 대로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알콕시알킬"은 식 -L-O-R의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서 L은 C1-6 알킬렌이고 R은 C1-6 알킬이다. 임의로 치환된 알콕시알킬은 알킬에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환되는 알콕시알킬이다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 달리 명시되지 않는 한, 치환되지 않는 경우에 1 내지 12개의 탄소를 갖는 비환상의 직쇄 또는 분지쇄 포화된 탄화수소 기를 지칭한다. 특정의 바람직한 구현예에서, 치환되지 않은 알킬은 1 내지 6개의 탄소를 갖는다. 알킬 기는 메틸; 에틸; n- 및 이소-프로필; n-, sec-, 이소- 및 tert-부틸; 네오펜틸 등으로 예시되며, 원자가를 허용하면서, 아미노; 알콕시; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 헤테로아릴; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; 알킬설포닐; 알킬설피닐; 알킬설페닐; =O; =S; -C(O)R 또는 -SO2R (여기서, R은 아미노임); 및 =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴, 또는 헤테로사이클릴이다)로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 또는 2개 이상의 탄소로 된 알킬 기의 경우에 4개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있다. 각각의 치환기는 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 원자가를 허용하면서 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알킬렌"은 2가 알킬 기를 지칭한다. 임의로 치환된 알킬렌은, 알킬에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환되는 알킬렌이다.
본원에 사용된 용어 "알킬아미노"는, 식 -N(RN1)2 또는 -NHRN1을 갖는 기를 지칭하며, 여기서 RN1은 본원에서 정의된 바와 같은 알킬이다. 알킬아미노의 알킬 부분은 알킬에 대하여 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 치환된 알킬아미노 위의 각각의 선택적인 치환기는 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 원자가를 허용하면서 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알킬설페닐"은 식 -S-(알킬)의 기를 나타낸다. 알킬설페닐은 알킬에 대하여 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알킬설피닐"은 식 -S(O)-(알킬)의 기를 나타낸다. 알킬설피닐은 알킬에 대하여 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알킬설포닐"은 식 -S(O)2-(알킬)의 기를 나타낸다. 알킬설포닐은 알킬에 대하여 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알키닐"은, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 2 내지 6개의 탄소 원자로 된 1가의 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 나타내며, 에티닐, 1-프로피닐 등으로 예시된다. 알키닐 기는 치환되지 않거나 알킬에 대하여 정의된 바와 같이 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 알키닐).
본원에 사용된 용어 "알키닐렌"은 2가 알키닐 기를 지칭한다. 임의로 치환된 알키닐렌은 알키닐에 대해 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된 알키닐렌이다.
본원에 사용된 용어 "아미노"는 식 -N(RN1)2를 나타내며, 여기서 아미노가 치환되지 않으면 둘 모두의 RN1이 H이거나; 아미노가 치환되면 각각의 RN1은 독립적으로 H, -OH, -NO2, -N(RN2)2, -SO2ORN2, -SO2RN2, -SORN2, -C(O)ORN2, N-보호 기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 아릴알킬, 아릴옥시, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로알킬, 또는 헤테로사이클릴이고, 단, 적어도 하나의 RN1은 H가 아니며, 여기서 각각의 RN2는 독립적으로 H, 알킬, 또는 아릴이다. 각각의 치환기는 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 각각의 알킬기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노는 치환되지 않은 아미노 (즉, -NH2) 또는 치환된 아미노 (예를 들면, NHRN1)이며, 여기서 RN1은 -OH, -SO2ORN2, -SO2RN2, -SORN2, -COORN2, 임의로 치환된 알킬, 또는 임의로 치환된 아릴이고, 각각의 RN2는 임의로 치환된 알킬 또는 임의로 치환된 아릴일 수 있다. 일부 구현예에서, 치환된 아미노는 알킬아미노일 수 있고, 여기서 알킬 기는 알킬에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 아미노 기는 -NHRN1이며, 여기서 RN1은 임의로 치환된 알킬이다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은, 1개 또는 2개의 방향족 고리를 갖는 단환, 이환, 또는 다중환의 탄소환식(carbocyclic) 고리 계를 나타낸다. 아릴 기는 6 내지 10개의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 치환되지 않은 탄소환식 아릴 기 내부의 모든 원자는 탄소 원자이다. 탄소환식 아릴 기의 비제한적인 예는 페닐, 나프틸, 1,2-디히드로나프틸, 1,2,3,4-테트라히드로나프틸, 플루오레닐, 인다닐, 인데닐 등을 포함한다. 아릴 기는 치환되지 않을 수 있거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; (CH2)n-C(O)ORA; C(O)R; 및 -SO2R(여기서 R은 아미노 또는 알킬이고, RA는 H 또는 알킬이고, n은 0 또는 1임)로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다. 치환기 각각은 그 자체로 치환되지 않을 수 있거나, 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아릴 알킬"은, 아릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 아릴 및 알킬 부분은 본원에 설명된 바와 같이 개별적인 기로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아릴렌"은 2가 아릴 기를 지칭한다. 임의로 치환된 아릴렌은, 아릴에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 개별적인 기로 임의로 치환되는 아릴렌이다.
본원에 사용된 용어 "아릴옥시"는 식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서 R은 달리 명시되지 않는 한 아릴 기이다. 임의로 치환된 아릴옥시에서, 아릴 기는 아릴에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환된다.
본원에 사용된 용어 "아지도"는 -N3 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "암"은 포유동물(예: 인간)에서 확인된 모든 유형의 암, 신생물 또는 악성 종양을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "탄소환식"은, 방향족 또는 비-방향족일 수 있는 고리가 탄소 원자에 의해 형성되는, 임의로 치환된 C3-16 단환, 이환, 또는 삼환 구조를 나타낸다. 탄소환 구조는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 및 특정의 아릴 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "카보닐"은 -C(O)- 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "암종"은, 둘러싸는 조직을 침윤하여 전이를 일으키는 경향이 있는, 상피 세포로 구성된 악성의 신규 생장물로 지칭된다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는, -CN 기를 나타낸다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "CCNE1" 및 "사이클린 E1"은 G1/S 특이적 사이클린 E1(유전자명: CCNE1)을 지칭한다. CCNE1을 과발현하는 세포는 CCNE1을 정상적으로 발현하는 세포보다 CCNE1의 더 높은 활성을 나타내는 것이다. 예를 들어, CCNE1-과발현 세포는 2개의 카피를 갖는 이배체 정상 세포와 비교하여 적어도 3개의 카피 수를 나타내는 세포이다. 따라서, CCNE1의 3보다 큰 카피 수를 나타내는 세포는 CCNE1을 과발현하는 세포이다. CCNE1 과발현은 세포에서 유전자 생성물의 발현 수준(예를 들어, CCNE1 mRNA 전사체 수 또는 CCNE1 단백질 수준)을 확인함으로써 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알케닐"은, 달리 명시되지 않는 한 고리 중에 적어도 하나의 이중 결합 및 3 내지 10개의 탄소를 갖는 비-방향족의 탄소환식 기 (예를 들면, C3-10 사이클로알케닐)를 지칭한다. 사이클로알케닐의 비제한적인 예는 사이클로프로프-1-에닐, 사이클로프로프-2-에닐, 사이클로부트-1-에닐, 사이클로부트-1-에닐, 사이클로부트-2-에닐, 사이클로펜트-1-에닐, 사이클로펜트-2-에닐, 사이클로펜트-3-에닐, 노르보르넨-1-일, 노르보르넨-2-일, 노르보르넨-5-일, 및 노르보르넨-7-일을 포함한다. 사이클로알케닐 기는 치환되지 않을 수 있거나, 사이클로알킬에 대하여 설명된 바와 같이 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 사이클로알케닐).
본원에 사용된 용어 "사이클로알케닐 알킬"은, 각각 본원에서 정의된 바와 같은 사이클로알케닐 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 사이클로알케닐 및 알킬 부분은 본원에서 정의된 개별 기로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알케닐렌"은 2가 사이클로알케닐 기를 나타낸다. 임의로 치환된 사이클로알케닐렌은 사이클로알킬에 대해 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된 사이클로알케닐렌이다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알콕시"는 식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서 R은 달리 명시되지 않는 한 사이클로알킬 기이다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬 기는 본원에서 정의된 바와 같이 추가로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알킬"은, 달리 명시되지 않는 한 3 내지 10개의 탄소를 갖는 환상의 알킬 기 (예를 들면, C3-C10 사이클로알킬)를 지칭한다. 사이클로알킬 기는 단환 또는 이환일 수 있다. 이환 사이클로알킬 기는 비사이클로[p.q.0]알킬 유형일 수 있으며, 여기서 각각의 p 및 q는 독립적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고, 단, p와 q의 합은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다. 대안적으로, 이환 사이클로알킬 기는 가교된 사이클로알킬 구조, 예를 들면, 비사이클로[p.q.r]알킬을 포함할 수 있으며, 여기서 r은 1, 2, 또는 3이고, 각각의 p 및 q는 독립적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이고, 단, p, q, 및 r의 합은 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다. 사이클로알킬 기는 스피로환상(spirocyclic) 기, 예를 들면, 스피로[p.q]알킬일 수 있고, 여기서 각각의 p 및 q는 독립적으로, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고, 단, p와 q의 합은 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9이다. 사이클로알킬의 비제한적인 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 1-비사이클로[2.2.1.]헵틸, 2-비사이클로[2.2.1.]헵틸, 5-비사이클로[2.2.1.]헵틸, 7-비사이클로[2.2.1.]헵틸, 및 데칼리닐을 포함한다. 사이클로알킬 기는 치환되지 않을 수 있거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 헤테로아릴; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; =O; =S; -SO2R (여기서, R은 임의로 치환된 아미노이다); =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴, 또는 헤테로사이클릴이다); 및 -CON(RA)2 (여기서, 각각의 RA는 독립적으로 H 또는 알킬이거나, 둘 모두의 RA는 이것들이 부착되는 원자와 함께 조합되어 헤테로사이클릴을 형성한다)로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 사이클로알킬). 각각의 치환기는 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알킬 알킬"은, 각각이 본원에서 정의된 바와 같은 사이클로알킬 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 사이클로알킬 및 알킬 부분은 본원에 설명된 개별 기로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알킬렌"은 2가의 사이클로알킬 기를 나타낸다. 임의로 치환된 사이클로알킬렌은, 사이클로알킬에 대하여 본원에서 설명된 바와 같이 임의로 치환되는 사이클로알킬렌이다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알키닐"은, 달리 명시되지 않는 한 1개 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 가지며 8 내지 12개의 탄소를 갖는 1가의 탄소환식 기를 지칭한다. 사이클로알키닐은 1개의 고리횡단(transannular) 결합 또는 가교를 포함할 수 있다. 사이클로알키닐의 비제한적인 예는 사이클로옥티닐, 사이클로노니닐, 사이클로데시닐, 및 사이클로데카디이닐을 포함한다. 사이클로알키닐 기는 치환되지 않을 수 있거나 사이클로알킬에 대하여 정의된 바 대로 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 사이클로알키닐).
"질병" 또는 "병태"는, 본원에 제공된 화합물 또는 방법으로 치료될 수 있는 환자 또는 대상체의 건강 상태 또는 상태를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "FBXW7"은 F-box/WD 반복-함유 단백질 7 유전자, 전사체 또는 단백질을 지칭한다. 불활성화 돌연변이를 갖는 FBXW7 유전자로도 본원에서 기재되는 FBXW7 돌연변이 유전자는 기능적 FBXW7 단백질을 생성하지 못하거나 세포에서 감소된 양의 FBXW7 단백질을 생성하는 유전자이다.
본원에 사용된 용어 "할로"는, 브롬, 염소, 아이오딘, 및 플루오린으로부터 선택된 할로겐을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "헤테로알킬"은, 1개 또는 2개의 헤테로원자로 1회; 매회 독립적으로 1개 또는 2개의 헤테로원자로 2회; 매회 독립적으로 1개 또는 2개의 헤테로원자로 3회; 또는 매회 독립적으로 1개 또는 2개의 헤테로원자로 4회 중단된 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 기를 지칭한다. 각각의 헤테로원자는 독립적으로, O, N, 또는 S이다. 일부 구현예에서, 헤테로원자는 O 또는 N이다. 헤테로알킬 기 중 어느 것도 2개의 연속하는 산소 또는 황 원자를 포함하지 않는다. 헤테로알킬 기는 치환되지 않을 수 있거나 치환될 수 있다 (예를 들면, 임의로 치환된 헤테로알킬). 헤테로알킬이 치환되고 치환기가 헤테로원자에 결합되는 경우에, 상기 치환기는 헤테로원자의 특성 및 원자가에 따라 선택된다. 따라서, 원자가를 허용하면서 헤테로원자에 결합된 치환기는 =O, -N(RN2)2, -SO2ORN3, -SO2RN2, -SORN3, -COORN3, N 보호 기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클릴, 또는 시아노로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 여기서 각각의 RN2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 또는 헤테로사이클릴이고, 각각의 RN3은 독립적으로 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 또는 헤테로사이클릴이다. 이러한 치환기의 각각은 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다. 헤테로알킬이 치환되고 치환기가 탄소에 결합되는 경우에, 상기 치환기는 알킬에 대하여 설명된 것들로부터 선택되며, 단, 헤테로원자에 결합된 탄소 원자 위 치환기는 Cl, Br, 또는 I가 아니다. 탄소 원자가 헤테로알킬 기의 말단에서 확인됨이 이해된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴 알킬"은, 각각 본원에서 정의된 바와 같은 헤테로아릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 헤테로아릴 및 알킬 부분은 본원에 설명된 개별 기로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴렌"은 2가의 헤테로아릴을 나타낸다. 임의로 치환된 헤테로아릴렌은, 헤테로아릴에 대하여 본원에서 설명된 바와 같이 임의로 치환되는 헤테로아릴렌이다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴옥시"는 구조 -OR을 지칭하며, 여기서 R은 헤테로아릴이다. 헤테로아릴옥시는 헤테로사이클릴에 대하여 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클릴"은, 질소, 산소, 및 황으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자를 함유하는, 달리 명시되지 않는 한 융합된, 가교되는, 및/또는 스피로 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 또는 8원 고리를 갖는 단환, 이환, 삼환 또는 사환의 고리 계를 나타낸다. 일부 구현예에서, "헤테로사이클릴"은 질소, 산소, 및 황으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자를 함유하는, 달리 명시되지 않는 한 융합되거나 가교되는 5-, 6-, 7-, 또는 8원 고리를 갖는 단환, 이환, 삼환 또는 사환의 고리 계이다. 헤테로사이클릴은 방향족 또는 비-방향족일 수 있다. 비-방향족의 5원 헤테로사이클릴은 0 또는 1개의 이중 결합을 가지며, 비-방향족의 6- 및 7원 헤테로사이클릴 기는 0 내지 2개의 이중 결합을 가지며, 비-방향족 8원 헤테로사이클릴 기는 0 내지 2개의 이중 결합 및/또는 0 또는 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는다. 헤테로사이클릴 기는 달리 명시되지 않는 한 1 내지 16개의 탄소 원자를 포함한다. 특정의 헤테로사이클릴 기는 9개 이하의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 비-방향족 헤테로사이클릴 기는 피롤리닐, 피롤리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피페리디닐, 호모피페리디닐, 피페라지닐, 피리다지닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 몰폴리닐, 티오몰폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로퓨라닐, 디히드로퓨라닐, 테트라히드로티에닐, 디히드로티에닐, 디히드로인돌릴, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 피라닐, 디히드로피라닐, 디티아졸릴 등을 포함한다. 복소환식 고리 계가 적어도 하나의 방향족 공명 구조 또는 적어도 하나의 방향족 토토머(tautomer)를 갖는 경우에, 그와 같은 구조는 방향족 헤테로사이클릴 (즉, 헤테로아릴)이다. 헤테로아릴 기의 비제한적인 예는 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨릴, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 벤즈옥사졸릴, 퓨릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 이소인다졸릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 퓨리닐, 피롤릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 티아디아졸릴 (예를 들면, 1,3,4-티아디아졸), 티아졸릴, 티에닐, 트리아졸릴, 테트라졸릴 등을 포함한다. 용어 "헤테로사이클릴"은, 또한 하나 이상의 탄소 및/또는 헤테로원자가 단환 고리의 2개의 인접하지 않은 구성원을 가교시키는 가교된 다환 구조를 갖는 복소환식 화합물 (예를 들면, 퀴누클리딘, 트로판, 또는 디아자-비사이클로[2.2.2]옥탄)을 나타낸다. 용어 "헤테로사이클릴"은, 이상의 복소환식 고리 중 임의의 것이 1개, 2개, 또는 3개의 탄소환 고리, 예를 들면, 아릴 고리, 사이클로헥산 고리, 사이클로헥센 고리, 사이클로펜탄 고리, 사이클로펜텐 고리, 또는 또 다른 단환의 복소환식 고리에 융합되는 이환, 삼환 및 사환 기를 포함한다. 융합된 헤테로사이클릴의 예는 1,2,3,5,8,8a-헥사히드로인돌리진; 2,3-디히드로벤조퓨란; 2,3-디히드로인돌; 및 2,3-디히드로벤조티오펜을 포함한다. 헤테로사이클릴 기는 치환되지 않을 수 있거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; -C(O)R 또는 -SO2R(여기서, R은 아미노 또는 알킬이다); =O; =S; =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴, 또는 헤테로사이클릴이다)로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다. 각각의 치환기는 자체적으로 치환되지 않을 수 있거나, 각각의 기에 대하여 본원에서 정의된 치환되지 않은 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클릴 알킬"은, 각각이 본원에서 정의된 바와 같은 헤테로사이클릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 헤테로사이클릴 및 알킬 부분은 본원에 설명된 개별 기로 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클릴렌"은 2가의 헤테로사이클릴을 나타낸다. 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌은, 헤테로사이클릴에 대하여 본원에 설명된 바와 같이 임의로 치환되는 헤테로사이클릴렌이다.
본원에 사용된 용어 "(헤테로사이클릴)옥시"는 식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서 R은 달리 명시되지 않는 한 헤테로사이클릴 기이다. (헤테로사이클릴)옥시는 헤테로사이클릴에 대하여 설명된 방식으로 임의로 치환될 수 있다.
본원에서 교환가능하게 사용된 용어 "히드록실" 및 "하이드록시"는 -OH 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "동위원소적으로 풍부한"은, 자연적으로 풍부한 이 동위원소보다 적어도 100배 더 많은, 분자 내부에서 미리 결정된 위치에 있는 하나의 동위원소에 대한 동위원소 함량을 갖는 약제학적 활성제를 지칭한다. 예를 들면, 중수소가 동위원소적으로 풍부한 조성물은 자연적으로 풍부한 중수소보다 적어도 1000배 더 많은 풍부한 중수소를 갖는 적어도 하나의 수소 원자 위치를 지닌 활성제를 포함한다. 바람직하게는, 동위원소적으로 풍부한 중수소는 자연적으로 풍부한 중수소보다 적어도 100배 더 많다. 더욱 바람직하게는, 동위원소적으로 풍부한 중수소는 자연적으로 풍부한 중수소보다 적어도 4000배 더 많다 (예를 들면, 적어도 4750배 더 많고, 예를 들면, 최대 5000배 더 많다).
본원에 사용된 용어 "백혈병"은, 조혈 기관의 진행성, 악성 질병을 광범위하게 지칭하며, 혈액 및 골수에서 백혈구 및 이것의 전구물질의 왜곡된 증식 및 발달에 의해 일반적으로 특성규명된다. 백혈병은 (1) 질병-급성 또는 만성의 특성 및 지속기간; (2) 관련된 세포의 유형; 골수성 (골수형성), 림프성 (림프형성), 또는 단핵구성; 및 (3) 혈액-백혈성 또는 무백혈성 (아백혈성)에서 비정상 세포 수에서의 증가 또는 비-증가를 토대로 일반적으로 임상적으로 분류된다.
본원에 사용된 용어 "림프종"은, 면역 기원의 세포로부터 비롯되는 암을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "흑색종"은, 피부의 멜라닌세포 계 및 다른 기관으로부터 비롯되는 종양을 의미하는 것으로 간주된다.
본원에 사용된 용어 "Myt1"은 막-연관 티로신 및 트레오닌 특이적 cdc2 억제 키나제(Myt1)(유전자명 PKMYT1)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "Myt1 억제제"는 시험관내, 세포 배양에서 또는 동물에서, Myt1 효소와 접촉시 Myt1의 활성을 감소시켜 측정된 Myt1 IC50이 10μM 이하(예: 5μM 이하 또는 1μM 이하)가 되도록 하는 화합물을 나타낸다. 특정 Myt1 억제제의 경우, Myt1 IC50은 100nM 이하(예: 10nM 이하, 또는 3nM 이하)일 수 있고 100pM 또는 10pM만큼 낮을 수 있다. 바람직하게는, Myt1 IC50은 1nM 내지 1μM(예를 들어, 1nM 내지 750nM, 1nM 내지 500nM, 또는 1nM 내지 250nM)이다. 좀더 바람직하게는, Myt1 IC50은 20 nm 미만(예를 들어, 1 nM 내지 20 nM)이다.
본원에 사용된 용어 "니트로"는 -NO2 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 2가의 산소 원자를 나타낸다 (예를 들면, 옥소의 구조는 =O로 표시될 수 있다).
본원에 사용된 용어 "Ph"는 페닐을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "약제 조성물"은, 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제형화되고, 포유동물에서 질병의 치료를 위한 치료 계획의 일부로서 정부 규제 기관의 승인 하에서 제조되거나 판매된, 본원에 설명된 화합물을 함유하는 조성물을 나타낸다. 약제 조성물은 예를 들면, 단위 투여형 (예를 들면, 정제, 캡슐, 캐플릿, 젤캡, 또는 시럽)으로의 경구 투여를 위해; 국소 투여를 위해 (예를 들면, 크림, 젤, 로션 또는 연고로); 정맥내 투여를 위해 (예를 들면, 미립자 색전(particulate emboli) 비함유의 멸균 용액으로 그리고 정맥내에서의 사용에 적합한 용매 계로); 또는 본원에 설명된 임의의 다른 제형으로 제형화될 수 있다.
본 발명에서 교환가능하게 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 부형제" 또는 "약제학적으로 허용되는 담체"는, 본원에 설명된 화합물 이외의 그리고 환자에서 비독성이고 비-염증성의 특성을 갖는 임의의 성분 (예를 들면, 활성 화합물을 현탁시키거나 용해시킬 수 있는 비히클)을 지칭한다. 부형제는 예를 들면: 유착방지제(antiadherent), 산화방지제, 결합제, 코팅, 압축 조제, 붕해제, 염료 (색소, 연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅, 향미제, 향료, 활택제 (흐름 증진제), 윤활제, 보존제, 인쇄 잉크, 흡수제(sorbent), 현탁제 또는 분산제, 감미제, 또는 수화용 물을 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 부틸화 하이드록시톨루엔 (BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘 (이염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카멜로스, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미세결정성 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 전호화전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 시트르산나트륨, 글리콜산나트륨 전분, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로스, 탤크, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은, 건전한 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 염증, 알레르기 반응 등이 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜서 사용하기에 적합하며, 합리적인 유익성/위해성 비(benefit/risk ratio)로 균형이 잡힌 그러한 염을 나타낸다. 약제학적으로 허용되는 염은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 약제학적으로 허용되는 염은 문헌 [Berge 등, J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977] 및 [Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl 및 C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008]에 기재되어 있다. 상기 염은 본원에 설명된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안, 또는 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시켜서 별도로 현장에서 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알긴산염, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 비설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캠퍼레이트, 캠퍼설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발러레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등 뿐만 아니라, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는 비독성 암모늄, 4차 암모늄, 및 아민 양이온을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "전악성" 또는 "전암성"은, 악성은 아니지만 악성이 될 준비를 하는 병태를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "보호 기"는, 하이드록시, 아미노, 또는 카보닐이 화학적 합성 동안 하나 이상의 바람직하지 않은 반응에 참여하는 것으로부터 보호하도록 의도된 기를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "O-보호 기"는, 하이드록시 또는 카보닐 기가 화학적 합성 동안 하나 이상의 바람직하지 않은 반응에 참여하는 것으로부터 보호하도록 의도된 기를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "N-보호 기"는, 질소 함유 (예를 들면, 아미노, 아미도, 복소환식 N-H, 또는 히드라진) 기가 화학적 합성 동안 하나 이상의 바람직하지 않은 반응에 참여하는 것으로부터 보호하도록 의도된 기를 나타낸다. 일반적으로 사용된 O- 및 N-보호 기가, 본원에 참고로 편입되는 문헌 [Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3rd Edition (John Wiley & Sons, New York, 1999)]에 개시되어 있다. 예시적인 O- 및 N-보호 기는 알카노일, 아릴오일, 또는 카바밀 기, 예컨대 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 피발로일, t-부틸아세틸, 2-클로로아세틸, 2-브로모아세틸, 트리플루오로아세틸, 트리클로로아세틸, 프탈릴, o-니트로페녹시아세틸, α-클로로부티릴, 벤조일, 4-클로로벤조일, 4-브로모벤조일, t-부틸디메틸실릴, 트리-이소-프로필실릴옥시메틸, 4,4'-디메톡시트리틸, 이소부티릴, 페녹시아세틸, 4-이소프로필페헤녹시아세틸, 디메틸포름아미디노, 및 4-니트로벤조일을 포함한다.
카보닐 함유 기를 보호하는 예시적인 O-보호 기는 아세탈, 아실알, 1,3-디티안, 1,3-디옥산, 1,3-디옥솔란, 및 1,3-디티올란을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는다.
다른 O-보호 기는 치환된 알킬, 아릴, 및 아릴-알킬 에테르 (예를 들면, 트리틸; 메틸티오메틸; 메톡시메틸; 벤질옥시메틸; 실릴옥시메틸; 2,2,2,-트리클로로에톡시메틸; 테트라히드로피라닐; 테트라히드로퓨라닐; 에톡시에틸; 1-[2-(트리메틸실릴)에톡시]에틸; 2-트리메틸실릴에틸; t-부틸 에테르; p-클로로페닐, p-메톡시페닐, p-니트로페닐, 벤질, p-메톡시벤질, 및 니트로벤질); 실릴 에테르 (예를 들면, 트리메틸실릴; 트리에틸실릴; 트리이소프로필실릴; 디메틸이소프로필실릴; t-부틸디메틸실릴; t-부틸디페닐실릴; 트리벤질실릴; 트리페닐실릴; 및 디페닐메틸실릴); 카보네이트 (예를 들면, 메틸, 메톡시메틸, 9-플루오레닐메틸; 에틸; 2,2,2-트리클로로에틸; 2-(트리메틸실릴)에틸; 비닐, 알릴, 니트로페닐; 벤질; 메톡시벤질; 3,4-디메톡시벤질; 및 니트로벤질)를 포함하지만 이것들로 제한되지 않는다.
다른 N-보호 기는 키랄 보조체(chiral auxiliary), 예컨대 보호되거나 보호되지 않은 D, L 또는 D, L-아미노산, 예컨대 알라닌, 류신, 페닐알라닌 등; 설포닐-함유 기, 예컨대 벤젠설포닐, p-톨루엔설포닐 등; 카바메이트 형성 기, 예컨대 벤질옥시카보닐, p-클로로벤질옥시카보닐, p-메톡시벤질옥시카보닐, p-니트로벤질옥시카보닐, 2-니트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, 3,4-디메톡시벤질옥시카보닐, 3,5 디메톡시벤질 옥시카보닐, 2,4-디메톡시벤질옥시카보닐, 4 메톡시벤질옥시카보닐, 2-니트로-4,5-디메톡시벤질옥시카보닐, 3,4,5 트리메톡시벤질옥시카보닐, 1-(p-비페닐일)-1-메틸에톡시카보닐, α,α-디메틸-3,5 디메톡시벤질옥시카보닐, 벤즈히드릴옥시 카보닐, t-부틸옥시카보닐, 디이소프로필메톡시카보닐, 이소프로필옥시카보닐, 에톡시카보닐, 메톡시카보닐, 알릴옥시카보닐, 2,2,2,-트리클로로에톡시카보닐, 페녹시카보닐, 4-니트로페녹시 카보닐, 플루오레닐-9-메톡시카보닐, 사이클로펜틸옥시카보닐, 아다만틸옥시카보닐, 사이클로헥실옥시카보닐, 페닐티오카보닐 등, 아릴-알킬 기, 예컨대 벤질, p-메톡시벤질, 2,4-디메톡시벤질, 트리페닐메틸, 벤질옥시메틸 등, 실릴알킬아세탈 기, 예컨대 [2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸 및 실릴 기, 예컨대 트리메틸실릴 등을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는다. 유용한 N-보호 기는 포르밀, 아세틸, 벤조일, 피발로일, t-부틸아세틸, 알라닐, 페닐설포닐, 벤질, 디메톡시벤질, [2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸 (SEM), 테트라히드로피라닐 (THP), t-부틸옥시카보닐 (Boc), 및 벤질옥시카보닐 (Cbz)이다.
용어 "토토머"는, 종종 양성자의 재배치에 의해 용이하게 상호전환되는 구조적 이성질체를 지칭한다. 토토머는 분광 특징을 다르게 하여 확인될 수 있지만 일반적으로는 개별적으로 단리될 수 없는 별개의 화학 종이다. 토토머의 비제한적인 예는 케톤 - 엔올, 엔아민 - 이민, 아미드 - 이미드산, 니트로소 - 옥심, 케텐 -인올, 및 아미노산 - 카복실산암모늄을 포함한다.
용어 "육종"은, 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성되며 일반적으로 원섬유 또는 균질 물질 중에 매몰된 조밀하게 패킹된 세포로 구성되는 종양을 일반적으로 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는, 대상체로부터의 샘플(들)의 당해 분야에 공지된 실험실 시험(들)을 사용하거나 사용하지 않고 자격있는 전문가 (예를 들면, 의사 또는 전문 간호사)에 의해 확정된 질병 또는 병태를 앓고 있거나 상기 질병 또는 병태의 위험이 있는 인간 또는 비-인간 동물 (예를 들면, 포유동물)을 나타낸다. 바람직하게는, 상기 대상체는 인간이다. 질병 및 병태의 비제한적인 예는 세포 과증식의 증상을 갖는 질병, 예를 들면, 암을 포함한다.
본원에 사용된 "치료" 및 "치료하는"은, 질병 또는 병태를 개선, 완화, 안정, 예방 또는 치유하는 의도를 갖는, 대상체의 의학적 관리를 지칭한다. 이 용어는 능동적 치료 (질병 또는 병태를 개선시키기 위한 치료); 인과적 치료 (관련된 질병 또는 병태의 원인에 대한 치료); 완화적 치료 (질병 또는 병태의 증상 완화를 위해 설계된 치료); 예방적 치료 (관련된 질병 또는 병태의 진행을 부분적으로 또는 완전히 억제하거나 최소화시키기 위한 치료); 및 협력적 치료 (또 다른 치료를 보충하도록 사용된 치료)를 포함한다.
도 1a는 TCGA PanCancer Atlas로부터 시퀀싱된 종양에 걸친 CCNE1 증폭/과발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 1b는 TCGA PanCancer Atlas로부터의 CCNE1 유전자 발현 데이터를 보여주는 산점도이다.
도 2a는 TCGA PanCancer Atlas로부터 시퀀싱된 종양에 걸친 FBXW7 돌연변이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 2b는 유전자에 걸친 FBXW7 돌연변이의 빈도를 보여주는 막대사탕 그래프이다. 이 그래프는 사이클린 E1 기질의 인식을 방해하고 유해한 것으로 분류되는 세 번째 및 네 번째 WD40 반복체 내에서 세 가지 일반적인 아르기닌 핫스팟 돌연변이(R465, R479 및 R505)를 강조 표시한다.
도 3a는 상이한 용량의 화합물 133으로 처리된 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 및 CCNE1-과발현 클론을 사용한 증식 검정의 결과를 보여주는 막대 그래프이다.
도 3b는 PKMYT1 sgRNA로 형질도입된 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 및 CCNE1-과발현 클론을 사용한 클론원성 생존 검정의 결과를 나타내는 일련의 이미지이다. 감염된 세포를 저밀도로 플레이팅하여 >50개 세포의 콜로니를 형성하는 능력을 측정하였다. 성장 10일 후, 콜로니를 염색하고 이미지화하고 정량화하였다. 결과는 비표적 LacZ 대조군 sgRNA로 형질도입된 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 모 및 CCNE1-과발현 클론의 생존에 대해 정규화된다.
도 3c는 상이한 용량의 화합물 133으로 처리된 RPE1-hTERT Cas9 TP54-/- 및 CCNE1-과발현 클론을 사용한 증식 검정의 결과를 보여주는 선 그래프이다.
도 4a는 PKMYT1 sgRNA로 형질도입된 FT282-hTERT TP53R175H 및 CCNE1-과발현 세포를 사용한 클론원성 생존 검정의 결과를 보여주는 막대 그래프이다. 감염된 세포를 저밀도로 플레이팅하여 >50개 세포의 콜로니를 형성하는 능력을 측정하였다. 성장 10일 후, 콜로니를 염색하고 이미지화하고 정량화하였다. 결과는 AAVS1 대조군 sgRNA로 형질도입된 FT282-hTERT TP53R175H 및 CCNE1-과발현 세포의 생존에 대해 정규화되었다.
도 4b는 도 4a에 기재된 염색된 콜로니를 보여주는 일련의 이미지이다.
도 4c는 상이한 용량의 화합물 133으로 처리된 FT282-hTERT TP53R175H 및 CCNE1-과발현 클론을 사용한 증식 검정의 결과를 보여주는 선 그래프이다.
도 5a, 5b, 및 5c는 야생형 또는 촉매적 사멸 FLAG 태깅된 PKMYT1 sgRNA 내성 ORF를 발현하는 안정한 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 모 및 CCNE1-과발현 클론에 대한 클론원성 생존 검정의 결과를 보여준다. 이러한 안정한 세포주는 LacZ 비표적화 sgRNA 또는 PKMYT1 sgRNA #4로 형질도입되고 저밀도에서 플레이팅되어 >50개 세포의 콜로니를 형성하는 능력을 측정하였다. 성장 10일 후, 콜로니를 염색하고 이미지화하고 정량화하였다. 결과는 비-표적화 LacZ 대조군 sgRNA로 형질도입된 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- CCNE1-과발현 클론의 생존에 대해 정규화되고 도 5c에서 막대 그래프로 제시된다. 클론 2와 21은 이 연구에서 유사하게 거동한다.
도 6은 상이한 용량의 화합물 28로 처리된 CCNE1 야생형 및 CCNE1-증폭/과발현 암 세포주의 패널에 대한 증식 검정의 결과를 보여주는 차트이다. IC50 값은 각 세포주에 대해 플롯팅되며 CCNE1-과발현 세포주가 CCNE1 WT 세포주와 비교하여 Myt1 억제제에 대한 향상된 민감성을 나타냄을 입증한다.
도 7은 상이한 용량의 화합물 95로 처리된 FBXW7 야생형 및 FBXW7-돌연변이된 암 세포주의 패널에 대한 증식 검정의 결과를 보여주는 차트이다. IC50 값은 각 세포주에 대해 플롯팅되며 FBXW7 돌연변이 세포주가 FBXW7 WT 세포주와 비교하여 Myt1 억제제에 대한 향상된 민감성을 나타냄을 입증한다.
일반적으로, 본 발명은 화합물, 이를 함유하는 약제학적 조성물, 화합물의 제조 방법, 및 사용 방법을 제공한다. 본 발명의 화합물은 Myt1 억제제일 수 있다. 이들 화합물은 세포, 예를 들어 대상체의 세포(예를 들어, CCNE1을 과발현하거나 FBXW7 유전자에 불활성화 돌연변이를 갖는 세포)에서 Myt1을 억제하는 데 사용될 수 있다. 대상체는 질환 또는 병태, 예를 들어, 세포 과증식의 증상을 갖는 질환 또는 병태, 예를 들어, 암에 대한 치료가 필요할 수 있다. 본원에 개시된 화합물의 Myt1 억제 활성은 암 치료가 필요한 대상체를 치료하는 데 유용하다.
Myt1은 주로 소포체와 골지 복합체에 국한된 키나제를 조절하는 세포 주기이다. Wee1 및 Wee1b를 포함하는 키나제의 Wee 계열의 일부이다. 이는 세포 주기의 G2-기에서 유사분열기(M-기)로 세포의 진행을 촉진하는 CDK1-사이클린 B 복합체의 음성 조절에 관여한다. DNA 손상 동안, Myt1은 Wee1(Tyr15 인산화만 매개)과 함께 G2 체크포인트 반응의 일부로 G2에서 키나제 복합체를 불활성 상태로 유지하고 손상이 복구될 때까지 유사분열로 들어가는 것을 방지하는 CDK1(CDK1의 Tyr15 및 Thr14 모두)에서 인산화를 유도한다. 또한, Myt1은 세포질에서 CDK1 복합체와 직접 상호 작용하고 핵 전위를 방지하여 세포 주기 진행을 억제한다고 제안되었다.
Myt1은 많은 암세포에서 필수적이기 때문에 잠재적으로 중요한 암 표적으로 연루되어 있었다. Myt1의 과발현은 간세포 암종 및 투명 세포 신세포 암종을 비롯한 다양한 암에서 관찰되었다. Myt1 하향조절은 교란되지 않은 세포에서는 작은 역할을 하지만 DNA 손상에 노출된 세포에서는 더 두드러진 역할을 한다. 또한, 결함이 있는 G1 체크포인트 조절 외에 높은 수준의 복제 스트레스를 나타내는 세포는 Myt1 기능의 상실에 특히 민감할 수 있는 것은, 이러한 세포가 유사분열 재앙으로 이어지는 손상된 게놈 물질로 조기에 유사분열에 들어가는 경향이 있기 때문이다.
G2-M 전이의 조절자인 Myt1의 억제제는 합성 치사 치료 전략을 사용하여 CCNE1- 증폭 또는 FBXW7 기능 상실 돌연변이가 있는 종양의 치료에 특히 유용할 수 있다.
사이클린 E1(CCNE1 유전자에 의해 인코딩됨)은 G1기에서 S기 세포 주기 전이에 관여한다. 세포 주기의 후기 G1 기에서는, 사이클린 의존적 키나제 2 (CDK2)와 복합체를 형성하여 E2F 전사 인자 활성화 및 S-단계 진입을 촉진한다. 사이클린 E1 수준은 정상 세포 주기 동안 엄격하게 조절되어 G1/S 전이에서 축적되고 S기가 끝날 때 완전히 분해된다. 사이클린 E1의 세포 주기 의존적 프로테아좀 분해는 SCFFBW7 유비퀴틴 리가제 복합체에 의해 매개된다. G1 후기에 활성화되면, 사이클린 E1/CDK2 복합체는 RB1의 인산화 및 불활성화와 E2F 전사 인자의 후속 방출을 통해 S기로의 전이를 촉진한다. S기는 복제전 복합 서브유닛 ORC1, CDC6, CDT1 및 MCM 헬리카제 인자를 포함하여 DNA 복제에 관여하는 수많은 유전자의 E2F 매개 전사에 의해 촉진된다.
CCNE1은 인간 암에서 자주 증폭 및/또는 과발현된다(도 1). CCNE1 증폭은 5 내지 40%의 빈도 범위에서 자궁내막, 난소, 유방 및 위를 포함한 몇 개의 암 유형에서 보고되었다. 중요하게도, 수많은 연구에서 사이클린 E1이 이러한 징후에서 종양 형성의 동인임을 확인했으며 CCNE1 증폭은 자궁 암육종 (UCS; ~40%), 자궁 장액성 암종 (USC; ~25%), 고-등급 장액성 난소 암종 (HGSOC; ~25%), 및 삼중-음성 유방암 (TNBC; ~8%)을 포함하는 보다 공격적인 하위 유형에서 관찰된다 면역조직화학 및/또는 게놈 카피 수 분석에 의해 종양 생검에서 사이클린 E1 과발현의 증거가 있는 환자는 정상 사이클린 E1 수준을 갖는 환자에 비해 전체 생존이 더 낮다. 사이클린 E1 과발현이 있는 HGSOC 환자는 현재 표준 치료인 시스플라틴에 대한 반응 속도가 더 낮다.
SCFFBW7 유비퀴틴 리가제 복합체에 의한 사이클린 E1의 결함 있는 세포 주기 조절 단백질 분해는 종양에서 관찰되는 CCNE1 과발현의 또 다른 기전이다. F-박스 단백질 유전자인 FBXW7은 자궁내막암, 결장직장암 및 위암을 비롯한 몇 개의 암 유형에서 자주 돌연변이되며 빈도는 5 내지 35%이다(도 2). CCNE1과 마찬가지로, FBXW7 드라이버 돌연변이는 UCS(~35%) 및 USC(~25%)를 포함한 자궁내막암의 보다 공격적인 하위 유형에서 관찰된다. FBXW7은 유전자 전체에 걸쳐 있는 말단절단 돌연변이 및 WD40 반복체를 인식하는 사이클린 E1 내의 미스센스 돌연변이를 포함하여 암에서 기능 상실 돌연변이의 다양한 스펙트럼을 가지고 있다. FBW7은 SCF 복합체 내에서 동종이량체로 기능하고 WD40 반복체 내에서 많은 해로운 미스센스 돌연변이는 대부분 이형접합성이고 우성 음성이다. 놀랍게도, R465, R479 및 R505를 포함한 WD40 반복체에서 몇 가지 반복되는 핫스팟 미스센스 돌연변이가 발견되며, 이 모두는 사이클린 E1 결합 및 편재화를 방해한다.
사이클린 E1 과발현 및/또는 FBXW7 기능 상실은 게놈 불안정성(예를 들어, 증가된 기원 발화, 결함 있는 뉴클레오티드 풀, 전사-복제 충돌 및/또는 포크 불안정성)을 유도하여 종양 형성을 유도하는 것으로 생각된다. 사이클린 E1의 과발현은 취약한 부위에서 복제 포크가 느려지거나 지연되고 이형접합체의 상실을 특징으로 하는 복제 스트레스를 유도하는 것으로 나타났다. 사이클린 E1 과발현이 복제 스트레스를 유발하는 주요 메커니즘은 초기 S-기에서 증가된 기원 발화 후 뉴클레오티드 풀을 포함한 복제 인자의 고갈이다. 전체 복제 단백질 및 뉴클레오티드의 감소는 포크 진행을 감소시키고 실속 및 후속 붕괴 또는 역전을 유발한다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
Figure pct00007
식 중
각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 CR2이고;
R1 및 각각의 R2는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이거나; 또는 R1은 R1에 인접한 하나의 R2와 결합하여, 선택적으로 치환된 C3-6 알킬렌을 형성하고;
각각의 R3 및 R4는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬 또는 할로겐이고;
R5는 H 또는 -N(R7)2이고;
R6은 -C(O)NH(R8), -C(O)R7A, 또는 -SO2R7A이고;
각각의 R7은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 또는 -SO2R7A이고; 또는 2개의 R7 기는 둘 모두가 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R7A는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴이고;
각각의 R7B는 독립적으로 하이드록실, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, -N(R7)2, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 선택적으로 치환된 알콕시이고;
각각의 R8은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알콕시알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴이거나; 또는 2개의 R8은, 이들이 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
Q는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴렌, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌이다.
바람직하게는, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00008
여기서 모든 변수는 본원에 기재된 바와 같다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 화학식 (II)의 화합물일 수 있다:
Figure pct00009
여기서 모든 변수는 본원에 기재된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (IIA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00010
(IIA)
여기서 모든 변수는 본원에 기재된 바와 같다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 화학식 (III)의 화합물일 수 있다:
Figure pct00011
식 중 R2A는 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이다.
바람직하게는, 화학식 (III)의 화합물은 화학식 (IIIA)의 회전장애이성질체가 풍부하다:
Figure pct00012
본 발명의 화합물은 예를 들어 하기 표 1에 열거된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
본 발명은 (가능한 경우) 본원에 개시된 화합물의 개별 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 에피머 및 회전장애이성질체, 및 라세미 혼합물을 포함하는 그의 부분입체이성질체 및/또는 거울상이성질체의 혼합물을 포함한다. 본원에 개시된 특정 입체화학이 바람직하지만, 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 에피머, 회전장애이성질체 및 이들의 혼합물을 비롯한 다른 입체 이성질체도 Myt1 매개 질환을 치료하는 데 유용할 수 있다. 불활성 또는 덜 활성인 부분입체이성질체 및 거울상이성질체는 예를 들어 수용체 및 활성화 메커니즘과 관련된 과학적 연구에 유용할 수 있다.
특정 분자는 여러 호변이성체 형태로 존재할 수 있는 것으로 이해된다. 본 발명은 실시예에서 단 하나의 호변이성질체만 나타낼 수 있지만 모든 호변이성질체를 포함한다.
본 발명은 또한 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 및 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 화합물은 예를 들어 특정 종류의 암에서 그리고 일단 암이 환자에서 발병하면 암의 진행을 늦추는 데 특히 유용하다.
본원에 개시된 화합물은 (a) 화합물(들) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 사용될 수 있다. 화합물은 하나 이상의 다른 활성 약제학적 성분을 포함하는 약제학적 조성물에 사용될 수 있다. 화합물은 또한 본원에 개시된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 유일한 활성 성분인 약제학적 조성물에 사용될 수 있다.
광학 이성질체 - 부분입체이성질체 - 기하 이성질체 - 호변이성질체
본원에 개시된 화합물은 예를 들어 하나 이상의 입체 중심을 함유할 수 있고 라세미체, 라세미 혼합물, 단일 거울상이성질체, 개별 부분입체이성질체, 및 부분입체이성질체 및/또는 거울상이성질체의 혼합물로서 발생할 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 화합물의 이러한 모든 이성질체 형태를 포함한다. 혼합물에서 그리고 순수 또는 부분적으로 정제된 화합물로서 가능한 모든 입체 이성질체(예를 들어, 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체)가 본 발명의 범위 내에 포함되도록 의도된다(즉, 순수한 화합물로서 또는 혼합물에서 입체 중심의 가능한 모든 조합).
본원에 기재된 화합물 중 일부는 2개의 개별 로토머 또는 회전장애이성질체가 분리되어 유리할 수 있는 상이한 생물학적 활성을 갖는 것으로 밝혀질 수 있도록 부자유 회전을 갖는 결합을 함유할 수 있다. 가능한 모든 회전장애이성질체가 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
본원에 기재된 화합물 중 일부는 올레핀성 이중 결합을 함유할 수 있으며, 달리 명시되지 않는 한 E 및 Z 기하 이성질체를 모두 포함하는 것을 의미한다.
본원에 기재된 화합물 중 일부는 호변이성질체로 지칭되는 상이한 수소 부착 지점으로 존재할 수 있다. 예는 케톤 및 케토-에놀 호변이성질체로 알려진 케톤의 에놀 형태이다. 개별 호변이성질체 및 이들의 혼합물이 본 발명에 포함된다.
하나 이상의 비대칭 중심을 갖는 본원에 개시된 화합물은 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 부분입체이성질체, 거울상이성질체 등으로 분리될 수 있다.
대안적으로, 거울상이성질체 및 키랄 중심을 갖는 기타 화합물은 광학적으로 순수한 출발 물질 및/또는 공지된 배열의 시약을 사용하여 입체특이성 합성에 의해 합성될 수 있다.
대사산물 - 전구약물
본 발명은 치료적 활성 대사산물을 포함하며, 대사산물 자체는 청구범위의 범위에 속한다. 본 발명은 또한 환자에게 투여될 때 또는 환자에게 투여된 후에 청구된 화합물로 전환되는 화합물인 전구약물을 포함한다. 일부 경우에 본원의 청구된 화학 구조 자체가 전구약물일 수 있다.
동위원소 풍부 유도체
본 발명은 분자 내의 하나 이상의 위치에서 동위원소 풍부 분자를 포함한다. 따라서, 중수소가 풍부한 화합물은 청구 범위에 속한다.
본 발명의 화합물의 제조 방법
본 발명의 화합물은 당업계에 공지된 반응 및 기술 및 본원에 기재된 것을 사용하여 제조될 수 있다. 당업자는 본원에 기재된 본 발명의 화합물을 제조하는 방법이 비제한적이며 방법 내의 단계가 최종 생성물의 구조에 영향을 미치지 않으면서 상호교환가능할 수 있음을 이해할 것이다.
방법 A
본 발명의 화합물은 반응식 A에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 5-브로모-6-클로로피라진-2-아민의 아미노 기는 염기 존재 하에 벤질 브로마이드로 벤질화되어 주요 중간체 B를 생성할 수 있는 하이드록실로 전환될 수 있다. 브로모는 금속 매개 조건 하에서 방향족 아민에 의해 치환될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 클로로는 금속 매개 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환되어 아미노파이롤 중간체 C를 얻을 수 있다. 니트릴은 벤질 기의 동반 절단과 함께 산으로 처리시 카복사미드로 가수분해될 수 있다. 생성된 하이드록실은 트리플레이트로 전환되어 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 트리플레이트 주요 중간체 D를 생성할 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링 또는 SNAr 대체를 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. R1 기의 본질에 따라, 트리플레이트 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R1 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 예를 들어, 주요 중간체 D는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 상기에 기재된 중간체 D와 유사하게 조작될 수 있는 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체를 제공하기 위해 키랄 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
Figure pct00041
방법 B
본 발명의 화합물은 반응식 B에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 중간체 B의 클로로는 SNAr 조건 하에 방향족 아민에 의해 대체될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 그 다음 브로모는 금속 매개 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. OBn은 니트릴 가수분해 후에 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 주요 중간체 E를 제공하도록 수소화될 수 있다. 예를 들어, 미츠노부(Mitsunobu) 또는 알킬화 조건을 사용하여 R2에 기를 설치할 수 있다. 대안적으로, 중간체 E는 니트릴 가수분해 후에 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 트리플레이트 주요 중간체 F로 전환될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R2에 기를 설치할 수 있다. R2 기의 본질에 따라, 하이드록실 또는 트리플레이트 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R2 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00042
방법 C
본 발명의 화합물은 반응식 C에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 3-브로모-2,6-디클로로피리딘의 2-클로로는 염기로 SNAr 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환될 수 있다. 브로모는 금속 매개 조건 하에 방향족 아민에 의해 치환되어 아미노아자인돌을 얻을 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 보호 기(들)는 산 처리 시 니트릴이 카복사미드로 가수분해되어 중간체 G를 생성하기 전에 제거될 수 있다. 나머지 클로로는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. R1 기의 본질에 따라, 클로로 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R1 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00043
방법 D
본 발명의 화합물은 반응식 D에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 적절하게 치환된 5-니트로피리딘의 위치 2에 있는 할로겐은 SNAr 조건 또는 금속 매개 C-N 커플링 조건 하에 방향족 아민으로 치환될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 3-브로모는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환되어 아미노아자인돌을 얻을 수 있다. 생성된 아미노 기는 적합한 보호 기, 예를 들어 BOC로 보호될 수 있다. 니트로가 환원될 수 있고 생성된 아미노는 할로겐화 유도체를 생성하는 샌드메이어(Sandmeyer) 조건 하에서 할로겐으로 전환될 수 있다. 아미노파이롤 N-보호 기는 절단될 수 있고 니트릴은 카복사미드로 가수분해되어 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 중간체 I을 얻을 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. R1 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. R1 기의 본질에 따라, 할로겐 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R1 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00044
방법 E
본 발명의 화합물은 반응식 E에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 2,3-디클로로-피라진의 1개의 클로로는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환될 수 있다. 나머지 클로로는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에 방향족 아민으로 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 아릴아민 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00045
방법 F
본 발명의 화합물은 반응식 F에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 2,3-디클로로피라진의 1개의 클로로는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환될 수 있다. 다른 클로로는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에 방향족 아민으로 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 피라진 고리는 NBS와 같은 적합한 브롬화 시약을 사용하여 브롬화될 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행될 수 있고 보호 기는 절단되어 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 주요 중간체 H를 제공할 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R2에 기를 설치할 수 있다. R2 기의 본질에 따라, 브로모 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R2 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00046
방법 G
본 발명의 화합물은 반응식 G에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 2-클로로-3-브로모피리딘의 클로로는 SNAr 조건 하에 말로노니트릴에 의해 치환될 수 있다. 브로모는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에 방향족 아민으로 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 보호 기를 보유하는 아릴아민 기의 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00047
방법 H
본 발명의 화합물은 반응식 H에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 주요 중간체 C는 NBS와 같은 적합한 브롬화 시약을 사용하여 브롬화될 수 있다. 니트릴은 벤질 기의 동반 절단과 함께 산으로 처리시 카복사미드로 가수분해될 수 있다. 생성된 하이드록실은 트리플레이트로 전환될 수 있다. 브로모 및 트리플레이트는 상이한 기로 순차적으로 유도체화될 수 있거나, 대안적으로 브로모 및 트리플레이트는 동일한 기로 동시에 유도체화될 수 있다. 브로모 및 트리플레이트는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1 및/또는 R2에 기를 순차적으로 또는 동시에 설치할 수 있다. R1 및/또는 R2 기의 본질에 따라, 브로모 또는 트리플레이트 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 중간체 C를 제조하는 데 사용되는 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00048
방법 I
본 발명의 화합물은 반응식 I에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 3-브로모-2-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘의 클로로는 SNAr 또는 팔라듐 매개 조건 하에서 방향족 아민으로 치환될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 브로모는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴로 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 아릴아민 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00049
방법 J
본 발명의 화합물은 반응식 J에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 주요 중간체 C는 NBS 또는 NIS와 같은 적합한 할로겐화 시약을 사용하여 할로겐화될 수 있다. 할로겐은 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R2에 기를 설치할 수 있다. 니트릴은 벤질 기의 동반 절단과 함께 산으로 처리시 카복사미드로 가수분해될 수 있다. 생성된 하이드록실은 트리플레이트로 전환될 수 있다. 트리플레이트는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. R1 및/또는 R2 기의 본질에 따라, 할로겐 및/또는 트리플레이트 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 중간체 C를 제조하는 데 사용되는 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00050
방법 K
본 발명의 화합물은 반응식 K에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 3-브로모-2-플루오로-피리딘의 플루오로가 SNAr 조건 하에 방향족 아민으로 치환될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 브로모는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴로 치환되어 아미노아자인돌을 얻을 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 아릴아민 또는 R1 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00051
방법 L
본 발명의 화합물은 반응식 L에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 주요 중간체 D의 트리플레이트는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. 피라진은 NBS와 같은 적합한 브롬화 시약을 사용하여 브롬화될 수 있다. 브로모는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R2에 기를 설치할 수 있다. R1 및/또는 R2 기의 본질에 따라, 트리플레이트 및/또는 브로모 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 중간체 D를 제조하는 데 사용되는 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00052
방법 M
본 발명의 화합물은 반응식 M에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 주요 중간체 C의 니트릴은 그리냐르 시약으로 처리하면 케톤을 생성할 수 있다. 벤질 기는 산성 조건 하에 절단될 수 있다. 생성된 하이드록실은 트리플레이트로 전환되어 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 다수의 상이한 방식으로 유도체화될 수 있는 트리플레이트를 생성할 수 있다. 예를 들어, 금속 매개 커플링을 사용하여 R1에 기를 설치할 수 있다. R1 기의 본질에 따라, 트리플레이트 유도체화 반응 전에 제자리에 보호 기가 있어야 할 수 있다. R1 기가 불포화를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 수소화 반응이 필요할 수 있다. 아릴아민 및/또는 R1 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 중간체 C를 제조하는 데 사용되는 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00053
방법 N
본 발명의 화합물은 반응식 N에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 본원에 기술된 아미노파이롤의 아미노는 디아조화 조건 하에 양성자에 의해 치환될 수 있다. 니트릴은 산성 또는 염기성 조건 하에 카복사미드로 가수분해되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. R1 및/또는 R2 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. N-아릴 기의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00054
방법 O
본 발명의 화합물은 반응식 O에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 2-아미노피리딘은 2-브로모피리딘으로 전환될 수 있고, 이는 2-하이드록시피리딘으로 전환될 수 있다. 2-브로모는 팔라듐 매개 조건 하에 방향족 아민으로 치환될 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 이 반응 전에 제자리에서 보호 기가 필요할 수 있다. 3-브로모는 팔라듐 매개 조건 하에 말로노니트릴로 치환되어 아미노파이롤을 얻을 수 있다. 니트릴의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에 수행되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다. 아릴아민 기가 보호 기를 갖는 경우, 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 산, 염기 및/또는 플루오라이드를 사용하는 탈보호 단계(들)가 필요할 수 있다. 아릴아민의 본질에 따라, 회전장애이성질체 혼합물을 얻을 수 있다. 이러한 경우에 키랄 크로마토그래피를 수행하여 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 관심 회전장애이성질체를 단리하는 것이 필요할 수 있다. 대안적으로, 회전장애이성질체적으로 순수한 중간체는 단리될 수 있고 추가로 유도체화되어 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.
Figure pct00055
치료 방법
본 발명의 화합물은 Myt1(유전자 명칭 PKMYT1)의 활성에 의존하는 질환 또는 병태(예를 들어, CCNE1을 과발현하거나 FBXW7 유전자에 불활성화 돌연변이를 갖는 암)의 치료에 사용될 수 있다.
질환 또는 병태는 세포 과증식의 증상을 가질 수 있다. 예를 들어, 질환 또는 병태는 암(예를 들어, CCNE1을 과발현하거나 FBXW7 유전자에 불활성화 돌연변이를 갖는 암)일 수 있다.
CCNE1 과발현의 발병률이 높은 암은 예를 들어 자궁암, 난소암, 유방암, 위암, 식도암, 폐암 및 자궁내막암을 포함한다.
FBXW7이 결핍된 암에는 예를 들어 자궁암, 결장직장암, 유방암, 폐암 및 식도암이 포함된다.
본 발명의 화합물은 경구, 설하, 협측, 경피, 진피내, 근육내, 비경구, 정맥내, 동맥내, 두개내, 피하, 안와내, 뇌실내, 척수내, 복강내, 비강내, 흡입, 종양내, 및 국소 투여로 이루어진 군으로부터 선택된 경로에 의해 투여될 수 있다.
약제학적 조성물
본원에 설명된 방법에 사용된 화합물은, 생체 내 투여에 적합한 생물학적으로 적합한(compatible) 형태로 인간 대상체에게 투여하기 위한 약제 조성물로 바람직하게 제형화된다. 약제 조성물은 전형적으로 본원에서 설명된 바와 같은 화합물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 특정의 약제 조성물은 본원에 설명된 하나 이상의 추가의 약제학적 활성제를 포함할 수 있다.
본원에 설명된 화합물은 또한 유리 염기 형태로, 염, 쯔비터이온, 용매화합물 형태로, 또는 전구약물, 또는 이것의 약제 조성물로 사용될 수 있다. 모든 형태가 본 발명의 범주 내에 있다. 상기 화합물, 이것의 염, 쯔비터이온, 용매화합물, 전구약물, 또는 약제 조성물은 당업자에게 이해될 것이듯이, 선택된 투여 경로에 따라 다양한 형태로 환자에게 투여될 수 있다. 본원에 설명된 방법에 사용된 화합물은 예를 들면, 경구, 비경구, 협측, 설하, 비내, 직장, 패치, 펌프 또는 경피 투여에 의해 투여될 수 있고, 약제 조성물은 그에 따라 제형화될 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 복막내, 피하, 근육내, 경상피, 비내, 폐내, 경막내, 직장, 및 국소 투여 방식을 포함한다. 비경구 투여는 선택된 시간 기간에 걸쳐 연속적인 주입에 의해 이루어질 수 있다.
인간에서의 사용을 위해, 본 발명의 화합물은 단독으로, 또는 의도된 투여 경로 및 표준의 약제 실무에 관해 선택된 약제용 담체와의 혼합물로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제 조성물은, 본 발명의 화합물의 약제학적으로 사용될 수 있는 제조물로의 가공을 촉진시키는 보조제 및 부형제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 담체를 사용하여 통상적인 방식으로 제형화될 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 함유할 수 있는 약제 조성물을 포함한다. 본 발명의 약제 조성물을 제조함에 있어서, 활성 성분이 전형적으로 부형제와 혼합되고, 부형제에 의해 희석되거나, 예를 들면, 캡슐, 향낭(sachet), 종이, 또는 다른 용기 형태로 그와 같은 담체 내부에 담겨진다. 부형제가 희석제로 작용하는 경우에, 이것은 고체, 반고체, 또는 액체 물질 (예를 들면, 일반 식염수)일 수 있고, 이것은 활성 성분에 대한 비히클, 담체 또는 매체로 작용한다. 따라서, 상기 조성물은 정제, 분말, 로젠지, 향낭, 카세제(cachet), 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 및 연질 및 경질 젤라틴 캡슐 형태일 수 있다. 당업계에 공지되어 있듯이, 희석제의 유형은 의도된 투여 경로에 따라 가변될 수 있다. 생성되는 조성물은 추가 제제, 예를 들면, 보존제를 포함할 수 있다.
부형제 또는 담체는 투여 방식 및 경로를 토대로 선택된다. 약제 제형에 사용하기에 적합한 약제용 담체 뿐만 아니라 약제용 필수품은, 이 분야에 잘 공지된 참고 문헌인 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)], 및 USP/NF (미국 약전 및 국립 처방집)에 기재되어 있다. 적합한 부형제의 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 인산칼슘, 알긴산염, 트라가칸트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 및 메틸 셀룰로스이다. 상기 제형은 추가로 윤활제, 예를 들면, 탤크, 스테아르산마그네슘, 및 광물유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예를 들면, 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 및 향미제를 포함할 수 있다. 다른 예시적인 부형제는 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Exipients, 6th Edition, Rowe 등, Eds., Pharmaceutical Press (2009)]에 기재되어 있다.
이러한 약제 조성물은 통상적인 방식으로, 예를 들면, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 빻기(levigating), 유화, 캡슐화, 포착(entrapping) 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 당업계에 잘 공지된 제형의 제조 방법은 예를 들면, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005), 및 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York]에서 확인된다. 적절한 제형화는 선택된 투여 경로에 따른다. 그와 같은 조성물의 제형화 및 제조는 약제 제형의 당업자에게 잘 공지되어 있다. 제형을 제조함에 있어서, 활성 화합물은 다른 성분과의 조합 전에 적절한 입자 크기로 밀링(milling)될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성이면, 이것은 200 메시(mesh) 미만의 입자 크기로 밀링될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성이면, 입자 크기는 제형 내 실질적으로 균일한 분포, 예를 들면, 약 40 메시를 제공하도록 밀링에 의해 조정될 수 있다.
투여량
본원에 설명된 방법에 사용된 화합물, 또는 이것의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물, 또는 이것의 약제 조성물의 투여량은 다수의 인자, 예를 들면, 화합물의 약물동역학적 특성; 투여 방식; 수용자(recipient)의 나이, 건강, 및 무게; 증상의 특성 및 정도; 치료 빈도, 및 만일 있다면, 동시 치료의 유형; 및 치료할 동물에서 상기 화합물의 청소율(clearance rate)에 따라 가변될 수 있다. 당업자는 상기 인자를 토대로 적절한 투여량을 결정할 수 있다. 본원에 설명된 방법에 사용된 화합물은 처음에는 임상 반응에 따라 필요에 따라 조정될 수 있는 적합한 투여량으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물의 적합한 일일 투여량은 치료 효과를 나타내기에 효과적인 최저 투여량인 그러한 화합물의 양일 것이다. 그와 같은 유효량은 일반적으로 상술된 인자에 따를 것이다.
본 발명의 화합물은 1회 투여량으로 또는 다회 투여량으로 환자에게 투여될 수 있다. 다회 투여량이 투여되는 경우에, 상기 투여량은 예를 들면, 1-24시간, 1-7일, 1-4주, 또는 1-12개월만큼 서로 분리될 수 있다. 상기 화합물은 스케쥴에 따라 투여될 수 있거나, 상기 화합물은 소정의 스케쥴 없이 투여될 수 있다. 활성 화합물은 예를 들면, 일 당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12회, 2일, 3일, 4일, 5일 또는 6일마다, 주 당 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7회, 월 당 1, 2, 3, 4, 5 또는 6회, 년 당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12회로 투여될 수 있다. 임의의 특정한 대상체에 대하여, 특정한 투여 계획은 개인적 필요 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 개인의 전문적인 판단에 따라 시간 경과에 따라 조정되어야 함이 이해되어야 한다.
주치의가 적절한 양 및 투여 계획을 궁극적으로 결정한다 하더라도, 본 발명의 화합물의 유효량은 예를 들면, 0.05 mg 내지 3000 mg의, 임의의 본원에 설명된 화합물의, 예를 들면, 총 일일 투여량일 수 있다. 대안적으로, 상기 투여량은 환자의 체중을 사용하여 계산될 수 있다. 그와 같은 투여량 범위는 예를 들면, 10-1000 mg (예를 들면, 50-800 mg)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 또는 1000 mg의 화합물이 투여된다.
본 발명의 방법에서, 다회 투여량의 본 발명의 화합물이 환자에게 투여되는 시간 기간은 가변될 수 있다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물의 투여량은 1-7일; 1-12주; 또는 1-3개월인 시간 기간에 걸쳐 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 화합물은 예를 들면, 4-11개월 또는 1-30년인 시간 기간에 걸쳐 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 화합물은 증상 개시 시에 환자에게 투여된다. 이러한 구현예 중 임의의 것에서, 투여되는 화합물의 양은 투여의 시간 기간 동안 가변될 수 있다. 화합물이 매일 투여되면, 투여는 예를 들면, 일 당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12회로 일어날 수 있다.
제형
본원에 설명된 방법 중 임의의 것을 사용하여 본원에 설명된 병태 중 임의 것을 치료할 수 있는 것으로 확인된 화합물은, 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체, 또는 부형제와 함께 단위 투여형으로 환자 또는 동물에게 투여될 수 있다. 그와 같은 치료에 사용하기 위한 화학적 화합물은 의약 화학 분야의 당업자에게 공지된 임의의 표준 기술에 의해 생산되고 단리될 수 있다. 통상적인 약제 실무가, 확인된 화합물을 질병 또는 병태를 앓고 있는 환자에게 투여하기에 적합한 제형 또는 조성물을 제공하는데 사용될 수 있다. 투여는 환자가 징후를 나타내기 전에 시작될 수 있다.
본 발명에 사용된 화합물 (예를 들면, 본 발명의 화합물) 또는 이것의 약제 조성물의 예시적인 투여 경로는 경구, 설하, 협측, 경피, 피내, 근육내, 비경구, 정맥내, 동맥내, 두개내, 피하, 안와내, 심실내, 척추내, 복막내, 비내, 흡입, 및 국소 투여를 포함한다. 상기 화합물은 바람직하게는 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 투여된다. 본원에 설명된 질환을 치료하기 위해 제형화된 본원에 설명된 화합물의 약제 제형이 또한 본 발명의 일부이다.
경구 투여를 위한 제형
본 발명에 의해 고찰된 약제 조성물은 경구 투여를 위해 제형화된 것들 ("경구 투여형")을 포함한다. 경구 투여형은, 비-독성의 약제학적으로 허용되는 부형제와의 혼합물 중에 활성 성분(들)을 함유하는, 예를 들면, 정제, 캡슐, 액체 용액 또는 현탁액, 분말, 또는 액체 또는 고체 결정의 형태일 수 있다. 이러한 부형제는 예를 들면, 불활성 희석제 또는 충전제 (예를 들면, 수크로스, 소르비톨, 당, 만니톨, 미세결정성 셀룰로스, 감자 전분을 포함하는 전분, 탄산칼슘, 염화나트륨, 락토스, 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 인산나트륨); 과립화제 및 붕해제 (예를 들면, 미세결정성 셀룰로스를 포함하는 셀룰로스 유도체, 감자 전분을 포함하는 전분, 크로스카멜로스 나트륨, 알긴산염 또는 알긴산); 결합제 (예를 들면, 수크로스, 글루코스, 소르비톨, 아카시아, 알긴산, 알긴산나트륨, 젤라틴, 전분, 전호화 전분, 미세결정성 셀룰로스, 규산마그네슘알루미늄, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 또는 폴리에틸렌 글리콜); 및 윤활제, 활택제, 및 유착방지제 (예를 들면, 스테아르산마그네슘, 스테아르산아연, 스테아르산, 실리카, 수소첨가된 식물성 오일, 또는 탤크)일 수 있다. 다른 약제학적으로 허용되는 부형제는 착색제, 향미제, 가소제, 보습제, 완충제 등일 수 있다.
경구 투여용 제형은 또한 츄어블 정제로; 활성 성분이 불활성 고체 희석제 (예를 들면, 감자 전분, 락토스, 미세결정성 셀룰로스, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린)와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로; 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매체, 예를 들면, 땅콩 오일, 액체 파라핀, 또는 올리브 오일과 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로 제공될 수 있다. 분말, 과립제, 및 펠릿(pellet)이 예를 들면, 혼합기, 유동층 장치 또는 분무 건조 장비를 사용하여 통상적인 방식으로 정제 및 캡슐로 위에 언급된 성분을 사용하여 제조될 수 있다.
경구 사용을 위한 제어 방출 조성물은, 활성 약물 물질의 용해 및/또는 확산을 제어함에 의해서 활성 약물을 방출하도록 구성될 수 있다. 제어 방출 및 시간 프로파일에 대한 목표 혈장 농도를 얻기 위해 다수의 전략 중 임의의 것이 추구될 수 있다. 한 예에서, 제어 방출은 예를 들면, 다양한 유형의 제어 방출 조성물 및 코팅을 포함하는 다양한 제형 파라미터 및 성분의 적절한 선택에 의해서 얻어진다. 예는 1회 또는 다회의 단위 정제 또는 캡슐 조성물, 오일 용액, 현탁액, 에멀젼, 미소캡슐, 미소구체, 나노입자, 패치, 및 리포좀을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 생분해가능한, pH, 및/또는 온도-민감한 폴리머 코팅을 포함한다.
용해 또는 확산-제어 방출은 화합물의 정제, 캡슐, 펠릿, 또는 과립화 제형의 적절한 코팅에 의해, 또는 상기 화합물을 적절한 매트릭스 내로 혼입시킴에 의해 성취될 수 있다. 제어 방출 코팅은 위에 언급된 코팅 물질 중 하나 이상 및/또는, 예를 들면, 셸락(shellac), 밀랍, 글리코왁스, 피마자 왁스, 카나우바 왁스, 스테아릴 알콜, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세롤 팔미토스테아레이트, 에틸셀룰로스, 아크릴 수지, 디-폴리락트산, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐 아세테이트, 비닐 피롤리돈, 폴리에틸렌, 폴리메타크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 2-하이드록시메타크릴레이트, 메타크릴레이트 히드로겔, 1,3 부틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메타크릴레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 제어 방출 매트릭스 제형에서, 매트릭스 물질은 또한 예를 들면, 수화된 메틸셀룰로스, 카나우바 왁스 및 스테아릴 알콜, 카보폴 934, 실리콘, 글리세릴 트리스테아레이트, 메틸 아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리에틸렌, 및/또는 할로겐화 플루오로탄소를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물이 경구 투여를 위해 혼입될 수 있는 액체형은 수용액, 적합하게 향 첨가된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 식용 오일, 예를 들면, 목화씨 오일, 참깨 오일, 코코넛 오일, 또는 땅콩 오일과의 향 첨가된 에멀젼 뿐만 아니라, 엘릭시르 및 유사한 약제용 비히클을 포함한다.
비경구 투여용 제형
본 발명의 방법에 사용하기 위한 본원에 설명된 화합물은, 본원에 설명된 바와 같은 약제학적으로 허용되는 비경구 (예를 들면, 정맥내 또는 근육내) 제형으로 투여될 수 있다. 상기 약제 제형은 또한 통상적인, 비-독성의 약제학적으로 허용되는 담체 및 보조제를 함유하는 투여형 또는 제형으로 비경구적으로 (정맥내, 근육내, 피하 등) 투여될 수 있다. 특히, 비경구 투여에 적합한 제형은 산화방지제, 완충제, 세균억제제, 및 상기 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성의 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성의 멸균 현탁액을 포함한다. 예를 들면, 그와 같은 조성물을 제조하기 위해서, 본 발명의 화합물은 비경구적으로 허용되는 액체 비히클에 용해되거나 현탁될 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매는 물, 적절한 양의 염산, 수산화나트륨 또는 적합한 완충제를 첨가하여 적합한 pH로 조정된 물, 1,3-부탄디올, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이다. 수성 제형은 또한 하나 이상의 보존제, 예를 들면, 메틸, 에틸, 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트를 함유할 수 있다. 비경구 제형에 관한 추가 정보는 예를 들면, 본원에 참고로 편입된 미국 약전-국립 처방집 (USP-NF)에서 확인될 수 있다.
비경구 제형은, 비경구 투여에 적합한 것으로 USP-NF에 의해 확인된 5개의 일반적인 유형의 제조물 중 임의의 것일 수 있다:
(1) 약물 주사제: 약물 물질 (예를 들면, 본 발명의 화합물), 또는 이것의 용액인 액체 제조물;
(2) 주사용 약물: 약물 주사제로서의 비경구 투여에 적절한 멸균 비히클과 조합될, 건조 고형물로서의 약물 물질 (예를 들면, 본 발명의 화합물);
(3) 약물 주사가능한 에멀젼: 적합한 에멀젼 매체 중에 용해되거나 분산되는 약물 물질 (예를 들면, 본 발명의 화합물)의 액체 제조물;
(4) 약물 주사가능한 현탁액: 적합한 액체 매체 중에 현탁된 약물 물질 (예를 들면, 본 발명의 화합물)의 액체 제조물; 및
(5) 주사가능한 현탁액에 대한 약물: 약물 주사가능한 현탁액으로서의 비경구 투여에 적절한 멸균 비히클과 조합될, 건조 고형물로서의 약물 물질 (예를 들면, 본 발명의 화합물).
비경구 투여용 제형은, 계면활성제, 예를 들면, 하이드록시프로필셀룰로스와 적절하게 혼합된 물에서 제조된 화합물의 용액을 포함한다. 분산물은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, DMSO, 및 알콜과 또는 알콜없는 이것들과의 혼합물 중에서, 그리고 오일 중에서 제조될 수 있다. 일반적인 저장 및 사용 조건 하에서, 이러한 제조물은 미생물 성장을 방지하는 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 제형의 선택 및 제조를 위한 통상적인 절차 및 성분은 예를 들면, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)] 및 미국 약전: 2013년에 발행된 국립 처방집 (USP 36 NF31)에 기재되어 있다.
비경구 투여용 제형은 예를 들면, 부형제, 멸균수, 또는 식염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 유래 오일, 또는 수소첨가된 나프탈렌을 함유할 수 있다. 생체적합한, 생분해가능한 락티드 폴리머, 락티드/글리콜리드 코폴리머, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머가 상기 화합물의 방출을 제어하는데 사용될 수 있다. 화합물에 대한 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 코폴리머 입자, 삼투압 펌프, 이식가능한 주입 시스템, 및 리포솜을 포함한다. 흡입용 제형은 부형제, 예를 들면, 락토스를 함유할 수 있거나, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 글리콜레이트 및 데옥시콜레이트를 함유하는 수용액일 수 있거나, 비점제(nasal drop) 형태의, 또는 젤로서의 투여를 위한 오일 용액일 수 있다.
비경구 제형은 화합물의 즉각 방출을 위해 또는 지속/연장 방출을 위해 제형화될 수 있다. 화합물의 비경구 방출을 위한 예시적인 제형은 수용액, 재구성용 분말, 공용매 용액, 오일/물 에멀젼, 현탁액, 유성(oil-based) 용액, 리포솜, 미소구체, 및 폴리머 젤을 포함한다.
병용(combination)
본 발명의 화합물은 하나 이상의 추가 제제, 예를 들면:
(a) 세포독성제;
(b) 항대사산물;
(c) 알킬화제;
(d) 안트라사이클린;
(e) 항생제;
(f) 유사분열억제제;
(g) 호르몬 요법;
(h) 신호 변환 억제제;
(i) 유전자 발현 조절제;
(j) 세포자멸사 유도제;
(k) 혈관생성 억제제;
(l) 면역요법제;
(m) DNA 손상 복구 억제제;
또는
이것들의 조합과 함께 대상체에게 투여될 수 있다.
상기 세포독성제는 예를 들면, 액티노마이신-D, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로퓨리놀, 알트레타민, 아미포스틴, 암포테리신, 암사크린, 삼산화비소, 아스파라기나제, 아자시티딘, 아자티오프린, 바실러스 칼메트-게랭(
Figure pct00056
) (BCG), 벤다무스틴, 벡사로텐, 베바쿠지맙, 블레오마이신, 보르테조밉, 부설판, 카페시타빈, 카보플라틴, 카필조밉, 카무스틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 클로람부실, 클라드리빈, 클로파라빈, 콜히친, 크리산타스파제, 사이클로포스파미드, 사이클로스포린, 시타라빈, 사이토칼라신 B, 다카바진, 닥티노마이신, 다르베포에틴 알파, 다사티닙, 다우노루비신, 1-데히드로테스토스테론, 네니류킨, 덱사메타손, 덱스라조산, 디하이드록시 안트라신 디온, 디설피람, 도세탁셀, 독소루비신, 에메틴, 에피루비신, 에를로티닙, 에피갈로카테킨 갈레이트, 에포에틴 알파, 에스트라무스틴, 브롬화에티듐, 에토포시드, 에베롤리무스, 필그라스팀, 피나서네이트, 플록스우리딘, 플루다라빈, 플루오우라실 (5-FU), 풀베스트란트, 간시클로비르, 젤다나마이신, 젬시타빈, 글루코코르티코이드, 그라미시딘 D, 히스트렐린 아세테이트, 하이드록시 우레아, 이브리투모맙, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙, 이리노테칸, 인터페론, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 익사베필론, 락테이트 데히드로게나제 A (LDH-A), 레날리도미드, 레트로졸, 류코보린, 레바미솔, 리도카인, 로무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메톡살렌, 메토프린, 메트로니다졸, 미트라마이신, 미토마이신-C, 미톡산트론, 난드롤론, 넬라라빈, 닐로티닙, 노페투모맙, 오프렐베킨, 옥살리플라틴, 파크리탁셀, 페메트렉세드, 펜토스타틴, 팔리페르민, 파미드로네이트, 페가데마제, 페가스파르가제, 페그필그라스팀, 페메트렉세드 이나트륨, 플리카마이신, 포피머 나트륨, 프로카인, 프로카바진, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 퀴나크린, 라디시콜, 방사성 동위원소, 랄티트렉세드, 라파마이신, 라스부리카제, 살리노스포르아미드 A, 사그래모스팀, 수니티닙, 테모졸로미드, 테니포시드, 테트라카인, 6-티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 트라스투주맙, 트레오술판, 트레티노인, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 졸레드로네이트, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 항대사산물은 예를 들면, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카바진, 클라드리빈, 페메트렉세드, 젬시타빈, 카페시타빈, 하이드록시우레아, 메르캅토퓨린, 플루다라빈, 프랄라트렉세이트, 클로파라빈, 시타라빈, 데시타빈, 플록스우리딘, 넬라라빈, 트리메트렉세이트, 티오구아닌, 펜토스타틴, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 알킬화제는 예를 들면, 메클로레타민, 티오테파, 클로람부실, 멜팔란, 카무스틴 (BSNU), 로무스틴 (CCNU), 사이클로토스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로로디아민 플래티늄 (II) (DDP) 시스플라틴, 알트레타민, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 헥사메틸멜라민, 알트레타민, 프로카바진, 다카바진, 테모졸로미드, 스트렙토조신, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 우라무스틴, 벤다무스틴, 트라벡테딘, 세무스틴, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 안트라사이클린은 예를 들면, 다우노루비신, 독소루비신, 아클라루비신, 알독소루비신, 암루비신, 안나마이신, 카루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 발루비신, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 항생제는 예를 들면, 닥티노마이신, 블레오마이신, 미트라마이신, 안트라마이신 (AMC), 암피실린, 바캄피실린, 카베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 나프실린, 옥사실린, 피페라실린, 피밤피실린, 피브메실리남, 티카실린, 아즈트레오남, 이미페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 메로페넴, 세팔로스포린, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 록시트로마이신, 텔리트로마이신, 린코마이신, 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴, 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 토브라마이신, 스트렙토마이신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설피속사졸, 데메클로사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린, 페니실린, 아목시실린, 세팔렉신, 에리트로마이신, 클라리트로마이신, 아지트로마이신, 시프로플록사신, 레보플록사신, 오플록사신, 독시사이클린, 클린다마이신, 메트로니다졸, 티게사이클린, 클로람페니콜, 메트로니다졸, 티니다졸, 니트로푸란토인, 반코마이신, 테이코플라닌, 텔라반신, 리네졸리드, 사이클로세린, 리파마이신, 폴리믹신 B,, 바시트라신, 비오마이신, 카프레오마이신, 퀴놀론, 다우 노루비신, 독소루비신, 4'-데옥시독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 플리카마이신, 미토마이신-c, 미톡산트론, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 유사분열억제제는 예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 도세탁셀, 에스트라무스틴, 익사베필론, 파클리탁셀, 메이탄시노이드, 돌라스타틴, 크립토피신, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 신호전달 변환 억제제는 예를 들면, 이마티닙, 트라스투주맙, 에를로티닙, 소라페닙, 수니티닙, 템시롤리무스, 베무라페닙, 라파티닙, 보테조밉, 세툭시맙 파니투무맙, 마투주맙, 제피티닙, STI 571, 라파마이신, 플라보피리돌, 이마티닙 메실레이트, 바탈라닙, 세막시닙, 모테사닙, 악시티닙, 아파티닙, 보서티닙, 크리조티닙, 카보잔티닙, 다사티닙, 엔트렉티닙, 파조파닙, 라파티닙, 반데타닙, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 유전자 발현 조절제는 예를 들면, siRNA, shRNA, 안티센스(antisense) 올리고뉴클레오티드, HDAC 억제제, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 HDAC 억제제는 예를 들면, 트리코스타틴 A, 트라폭신 B, 발프로산, 보리노스타트, 벨리노스타트, LAQ824, 파노비노스타트, 엔티노스타트, 타세디날린, 모세티온스타트, 기비노스타트, 레스미노스타트, 아벡시노스타트, 키시노스타트, 로실리노스타트, 프락티노스타트, CHR-3996, 부티르산, 페닐부티르산, 4SC202, 로미뎁신, 서티놀, 캄비놀, EX-527, 니코틴아미드, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 예를 들면, 커스터센, 아파토센, AZD9150, 트라바더센, EZN-2968, LErafAON-ETU, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 siRNA는 예를 들면, ALN-VSP, CALAA-01, Atu-027, SPC2996, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 호르몬 요법은 예를 들면, 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 길항제일 수 있다. 호르몬 요법은 예를 들면, 퍼마곤, 류프롤린, 고세렐린, 부세렐린, 플루타미드, 비칼루타미드, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 프레드니손, 히드록실-프로게스테론 카프로에이트, 메드록시-프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 디에틸스틸-베스트롤, 에티닐 에스트라디올, 타목시펜, 테스토스테론 프로피오네이트, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 랄록시펜, 드롤록시펜, 아이오독시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 토레미핀 시트레이트, 메게스트롤 아세테이트, 엑세메스탄, 파드로졸, 보로졸, 레트로졸, 아나스트로졸, 닐루트아미드, 트리프테렐린, 히스테렐린, 아르비라테론, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 디에틸스틸베스트롤, 프레마린, 플루옥시메스테론, 트레티노인, 펜레티니드, 트록사시타빈 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 세포자멸사 유도제는 예를 들면, 재조합 인간 TNF-관련 세포자멸사-유도 리간드 (TRAIL), 캄프토테신, 보르테조밉, 에토포시드, 타목시펜, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 혈관형성 억제제는 예를 들면, 소라페닙, 서니티닙, 파조파닙, 에베롤리무스 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 면역요법제는 예를 들면, 단클론 항체, 암 백신 (예를 들면, 수지상 세포 (DC) 백신), 암용해 바이러스, 사이토킨, 입양 T 세포 요법, 바실러스 칼메트-게랭 (BCG), GM-CSF, 탈리도미드, 레날리도미드, 포말리도미드, 이미퀴모드, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 단클론 항체는 예를 들면, 항-CTLA4, 항-PD1, 항-PD-L1, 항-LAG3, 항-KIR, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 단클론 항체는 예를 들면, 알렘투주맙, 트라스투주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 브렌툭시맙 베도틴, 트라스투주맙, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 블리나투모맙, 베바시주맙, 세툭시맙, 페르투주맙, 파니투무맙, 라무시루맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 페르투주맙, 토시투모맙, 젬투주맙 오조감마이신, 토시투모맙, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 암 백신은 예를 들면, Sipuleucel-T, BioVaxID, NeuVax, DCVax, SuVaxM, CIMAvax®, Provenge,®, hsp110 샤페론 복합체 백신, CDX-1401, MIS416, CDX-110, GVAX Pancreas, HyperAcute™ Pancreas, GTOP-99 (MyVax®), 또는 Imprime PGG®일 수 있다. 상기 암용해 바이러스는 예를 들면, 탈리모겐 라헤르파레프벡(talimogene laherparepvec)일 수 있다. 상기 사이토킨은 예를 들면, IL-2, IFNα, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 입양 T 세포 요법은 예를 들면, 티사겐렉류셀, 악시카브타겐 실로류셀, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
상기 DNA 손상 복구 억제제는 예를 들면, PARP 억제제, 세포 검문지점 키나제 억제제, 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 PARP 억제제는 예를 들면, 올라파립, 루카파립, 벨리파립 (ABT-888), 니라파립 (ZL-2306), 이니파립 (BSI-201), 탈라조파립 (BMN 673), 2X-121, CEP-9722, KU-0059436 (AZD2281), PF-01367338 또는 이것들의 조합일 수 있다. 상기 세포 검문지점 키나제 억제제는 예를 들면, MK-1775 또는 AZD1775, AZD7762, LY2606368, PF-0477736, AZD0156, GDC-0575, ARRY-575, CCT245737, PNT-737 또는 이것들의 조합일 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이다. 실시예는 어떤 식으로든 본 발명을 제한하려는 것이 아니다. 반응은 일반적으로 하기 실시예에서 달리 기재되지 않는 한 건조 용매(Sure/SealTM)를 사용하여 질소 분위기 하에 실온(rt)에서 수행되었다. 반응은 TLC로 모니터링되거나 물 중 아세토니트릴 (15% 내지 98%)의 구배 (1.86 분)로 용출하는 Acquity® UPLC HSS C18 2.1x30mm 칼럼을 사용하여 Waters Acquity-H UPLC ® Class 시스템에 작은 분취량을 주입하여 모니터링될 수 있다 (둘 모두는 0.1% 포름산 함유함). 분취 HPLC에 의한 정제는 달리 명시되지 않는 경우 12분에 걸쳐 40 mL/min의 흐름에서 Phenomenex Gemini® 5μm NX-C18 110Å 150 x 21.2 mm 칼럼 (<100mg 또는 다중 주입 <100mg) 또는 물 중 아세토니트릴의 적절한 구배로 용출하는 HP C18 RediSep ® Rf 금 칼럼 (>100mg)을 사용하여 Teledyne Isco Combi Flash ® EZ Prep 시스템 상에서 수행되었다(둘 모두는 0.1% 포름산 함유함). 구배는 Waters Acquity-H UPLC ® Class 시스템 상에서 반응 모니터링에 의해 관찰된 체류 시간을 기반으로 선택되었다 (상기 참조). 원하는 화합물을 함유하는 분획을 조합하고 최종적으로 동결건조시켰다. 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제는 적절한 크기의 RediSep ® Rf 실리카겔 칼럼을 사용하여 Teledyne Isco Combi Flash ® Rf 시스템 상에서 수행되었다. 최종 화합물의 순도는 물 중 아세토니트릴 (2% 내지 98%)의 구배 (7분)로 용출하는 Acquity ® UPLC BEH C18 2.1x50mm 칼럼을 사용하여 Waters Acquity-H UPLC ® Class 시스템에 작은 분취량을 주입하여 평가될 수 있다 (둘 모두는 0.1% 포름산 함유함).
약어
유기화학, 의약화학, 약리학 및 의학 분야에서 일반적으로 사용되며 이들 분야의 종사자에게 잘 알려진 약어 및 용어가 본 명세서에서 사용된다. 대표적인 약어 및 정의는 다음과 같다:
Ac는 아세틸 [CH3C(O)-]이고;
ACN은 아세토니트릴이고;
Ac2O는 아세트산 무수물이고;
AcOH는 아세트산이고;
Ar은 아릴이고;
BOC는 tert-부틸옥시카보닐이고;
n-BuLi은 n-부틸 리튬이고;
cmpd는 화합물이고;
conc.은 농축된 것이고;
DCM은 디클로로메탄이고;
DIPEA는 디이소프로필에틸 아민이고;
DMAP는 4-(디메틸아미노)피리딘이고;
DME는 디메톡시에탄이고;
DMF은 N,N-디메틸포름아미드이고;
DMSO는 디메틸 설폭사이드이고;
EtOAc는 에틸 아세테이트이고;
EtOH는 에탄올이고;
h는 시간(hr)이고;
HATU는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트이고;
HCl은 염산이고;
Hex는 헥산이고;
HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피이고;
IPA는 이소프로판올이고;
LCMS는 질량 스펙트럼 검출이 있는 HPLC이고;
LiHMDS는 리튬 헥사메틸디실라잔이고;
M은 몰이고; mmol은 밀리몰이고;
Me는 메틸이고;
MeCN은 아세토니트릴이고;
MeMgBr은 메틸마그네슘 브로마이드이고;
MeMgCl은 메틸마그네슘 클로라이드이고;
MeOH는 메탄올이고;
MOM은 메톡시메틸이고;
min은 분이고;
N은 노르말이고;
NBS는 N-브로모석신이미드이고;
NCS는 N-클로로석신이미드이고;
NIS는 N-요오도석신이미드이고;
NMP은 N-메틸 피롤리디논이고;
NMR은 핵자기 공명 분광법이고;
PdCl2(dppf)은 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)이고;
PdCl2(dppf).CH2Cl2는 디클로로메탄과의 착물인 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)이고;
Pd2(dba)3은 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)이고;
Pd-PEPPSITM-SIPr은 (1,3-비스(2,6-디이소프로필페닐)이미다졸리덴) ( 3-클로로피리딜) 팔라듐(II) 이염화물이고;
Ph는 페닐이고;
PIV-Cl은 피발로일 클로라이드, 트리메틸아세틸 클로라이드이고;
시약 알코올은 90% 에탄올, 5% 이소프로판올 및 5% 메탄올의 혼합물이고;
Rt는 실온이고;
sat.는 포화된 것이고;
tBu는 tert-부틸이고;
Tf는 트리플루오로메탄설포네이트이고;
TFA는 트리플루오로아세트산이고;
THF는 테트라하이드로푸란이고;
TMS는 트리메틸실릴이고;
Ts는 p-톨루엔설포닐이고;
Xantphos는 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐이다.
실시예 1. 화합물의 제조
Figure pct00057
중간체 B (5-벤질옥시-2-브로모-3-클로로-피라진)
단계 1. 아질산나트륨 (40 g, 580 mmol)을 0℃에서 기계적 교반 하에 황산 (770 mL) 중 5-브로모-6-클로로-피라진-2-아민 (110 g, 528 mmol)의 용액에 나누어서 첨가하였다. 생성된 진한 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 온도를 30℃ 미만으로 유지하는 분쇄 얼음을 함유하는 냉수 6 L에 천천히 부었다. 생성된 침전물을 여과로 수집하고, 물로 세척한 다음, 진공 하에 톨루엔으로 2회 공증발시켜 건조시켜 5-브로모-6-클로로-피라진-2-올 (104.6 g, 95% 수율)을 옅은 베이지색 고체로서 얻었다.
단계 2. 벤질 브로마이드 (48 mL, 404 mmol)을 톨루엔 (2 L) 중 5-브로모-6-클로로-피라진-2-올 (80 g, 382 mmol) 및 은 카보네이트 (216 g, 778 mmol)의 현탁액에 적가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 현탁액을 셀라이트 상에 여과하였다. 여액을 증발 건조시켜 황색 오일을 제공하고, 이를 따뜻한 EtOH에 용해시켰다. 초음파 처리 하에 물을 천천히 첨가한 후, 침전물을 여과로 수집하여 5-벤질옥시-2-브로모-3-클로로-피라진 (85.2 g, 75% 수율)을 베이지색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 3H), 5.36 (s, 2H).
Figure pct00058
중간체 C (6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴)
단계 1. 톨루엔 (1350 mL) 중 중간체 B (90 g, 300 mmol)의 용액에 칼륨 tert-부톡사이드 (45.0 g, 401 mmol),　3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (48 g, 318 mmol), Pd2(dba)3 (14.4 g, 15.7 mmol)　및　Xantphos (18.0 g, 31 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 다시 채웠다. 생성된 혼합물을 80℃에서 45분 동안 교반한 다음, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 DCM (500 mL)에 용해시키고, 200 g의 실리카겔을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 15% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔의 패드 (1 kg의 실리카겔) 상에서 정제하여 5-벤질옥시-3-클로로-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피라진-2-아민 (108.4 g, 98% 수율)을 옅은 베이지색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DME (1800 mL) 중 프로판디니트릴 (42.1 g, 637 mmol)의 용액에 NaH (25.0 g, 628 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)을 나누어서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안을 교반한 다음, DME (500 mL) 중 5-벤질옥시-3-클로로-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피라진-2-아민 (115 g, 311 mmol) 및　Pd(PPh3)4 (17.7 g, 15.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 진공에서 1 L로 농축하였다. 물 (1 L)을 천천히 첨가하고 생성된 2상 혼합물을 18시간 동안 기계적 교반기로 교반하였다. 생성된 고체를 여과로 회수하고, 물로 세척하고, 진공에서 건조시켰다. DCM에서 분쇄하여 원하는 물질의 제1 배치를 여과에 의해 단리된 베이지색 고체로서 제공하였다. 모액을 진공에서 농축하고, 잔류물을 헥산 중 10 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 원하는 물질의 제2 배치를 제공하였다. 2개의 배치를 조합하여 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (103.1 g, 83% 수율)을 베이지색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.60 (s, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 7.33 - 7.27 (m, 1H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.91 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 1.90 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.83 (s, 3H). MS: [M+1]: 400.4.
Figure pct00059
중간체 D ([6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트)
단계 1. 황산 (550 mL) 중 중간체 C (83 g, 208 mmol)의 용액을 기계적 교반기로 18시간 동안 교반하였다. 진한 갈색 혼합물을 기계적 교반기로 교반하면서 내부 온도를 20℃ 미만으로 유지하는 빙욕의 얼음 물(2 L)에 천천히 부었다. 담황색 고체가 침전되었다. 빙욕에서 생성된 현탁액을 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 수성 수산화암모늄(28% 용액, 850 mL)를 사용하여 염기성 pH로 천천히 중화하였다. 침전물을 여과로 수집하고, 물로 세척하고, 진공에서 건조시켜 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (65.1 g, 96% 수율)을 옅은 베이지색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DMF (300 mL) 중 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (30.5 g, 93.2 mmol) 및　Cs2CO3 (34.9 g, 107 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (36.6 g, 103 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 물 (900 mL)로 희석하고 EtOAc (3x300 mL)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (28 g, 65% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.75 (s, 1H), 7.22 m, 2H), 6.97 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 5.49 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 1.91 (s, 3H), 1.84 (s, 3H). MS: [M+1]: 528.4.
중간체 D (7.0 g, 15 mmol) (기기: Waters Prep 100 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm; 조건: 25% MeOH에서 75% CO2와 등용매; 유량: 70 mL/min)의 키랄 SFC 분리로 중간체 D1 및 중간체 D2를 제공하였다.
Figure pct00060
중간체 D의 키랄 SFC 분리로부터의 중간체 D1. 피크 1 (체류 시간 4.95분, 99.77%): 백색 솜털 같은 고체로서 R-6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-일 트리플루오로메탄설포네이트 (1.93 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 1H), 7.89 (br s, 2H), 7.50 (br s, 1H), 7.28 (dt, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.80 (br s, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.82 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.74 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -72.83. MS: [M+1]: 460.0.
Figure pct00061
중간체 D의 키랄 SFC 분리로부터의 중간체 D2. 피크 2 (체류 시간 6.44분, 99.01%): 백색 솜털 같은 고체로서 S-6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-일 트리플루오로메탄설포네이트 (1.95 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 1H), 7.89 (br s, 2H), 7.50 (br s, 1H), 7.28 (dt, J = 8.5, 0.7 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.80 (br s, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.82 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.74 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -72.83. MS: [M+1]: 460.0.
Figure pct00062
중간체 E (6-아미노-3-하이드록시-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴)
단계 1. THF (40 mL) 중 5-벤질옥시-2-브로모-3-클로로-피라진 (5.08 g, 17.0 mmol) 및 5-(메톡시메톡시)-2-메틸-아닐린 (5.70 g, 34.1 mmol)의 용액에 0℃에서 THF (1 M, 48 mL) 중 칼륨 tert-부톡사이드를 적가하였다. 0℃에서 90분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, 물로 희석하고, EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 미정제 잔류물을 헥산 중 0 내지 20% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 6-벤질옥시-3-브로모-N-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피라진-2-아민 (1.80 g, 25% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다.
단계 2. THF (28 mL) 중 NaH (631 mg, 16.5 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)의 현탁액에 0℃에서 THF (12 mL) 중 말로노니트릴 (556 mg, 8.42 mmol)을 적가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 빙욕을 제거하고 6-벤질옥시-3-브로모-N-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피라진-2-아민 (1.80 g, 4.18 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (242 mg, 209 μmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소로 플러싱하고, 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고, 포화 수성 NH4Cl에 천천히 부었고 그 다음 EtOAc (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 6-아미노-3-벤질옥시-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (1.63 g, 94% 수율)을 밝은 황갈색 고체로서 제공하였다.
단계 3. 혼합물 6-아미노-3-벤질옥시-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (1.39 g, 3.35 mmol) 및 탄소상 팔라듐 (350 mg, 0.329 mmol, 10% w/w)을 질소로 플러싱하고 MeOH (40 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소로 플러싱하고 수소 분위기(1 atm) 하에 2시간 동안 교반한 다음, 질소로 플러싱하고, DCM 및 MeOH를 사용하여 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 여액을 진공에서 농축한 다음, 건조시켜 6-아미노-3-하이드록시-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (1.12 g, 100%)을 황토색 고체로서 얻었다. MS: [M+1]: 326.1.
Figure pct00063
중간체 F ([6-아미노-7-시아노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-3-일] 트리플루오로메탄설포네이트)
단계 1. THF (45 mL) 중 6-아미노-3-하이드록시-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (1.12 g, 3.44 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (1.49 g, 4.17 mmol)의 용액에 Et3N (1.23 g, 12.2 mmol, 1.70 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 교반한 다음, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 [6-아미노-7-시아노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[2,3-b]피라진-3-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (1.72 g, 100%)를 농황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 (s, 1H), 8.13 (br s, 2H), 7.41 (dd, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 8.5, 2.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.38 (s, 3H), 1.90 (s, 3H). MS: [M+1]: 458.0.
Figure pct00064
중간체 G (2-아미노-5-클로로-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. DME (200 mL) 중 프로판디니트릴 (11.8 g, 179 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH (7.0 g, 175.00 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)을 나누어서 첨가하였다. 그 다음 3-브로모-2,6-디클로로-피리딘 (20 g, 88.15 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1M HCl로 중화하고, 물로 희석하고 EtOAc(3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 다중 배치로 분취 HPLC로 정제하였다. 원하는 분획을 조합하고 농축 건조시켜서 2-(3-브로모-6-클로로-2-피리딜)프로판디니트릴 (8.0 g, 35% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DMF (75 mL) 중 2-(3-브로모-6-클로로-2-피리딜)프로판디니트릴 (5 g, 19.5 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (1.75g, 1.91 mmol),　5-(메톡시메톡시)-2-메틸-아닐린 (3.6 g, 21.53 mmol),　Cs2CO3 (12.7 g) 및 Xantphos (1.12 g, 1.94 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 3회 다시 채웠다. 생성된 혼합물을 130℃에서 8시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc(3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 10 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 분획을 농축 건조시키고, 잔류물을 DCM으로 분쇄하여 2-아미노-5-클로로-1-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 (2.2 g, 33% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. DCM (5 mL) 중 2-아미노-5-클로로-1-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 (2.20 g, 6.42 mmol)의 현탁액에 디옥산 (4 M, 5 mL) 중 염화수소 4M을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하여 2-아미노-5-클로로-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 HCl 염 (2.10 g, 98% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 4. 농축 황산 (25 mL) 중 2-아미노-5-클로로-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 (2.3 g, 7.70 mmol)의 용액을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 분쇄 얼음으로 희석하고, 농축 암모니아수로 pH 8로 염기성화하였다. 현탁액을 여과하였다. 침전물을 물로 세척하고, 진공에서 건조시켜 2-아미노-5-클로로-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (2 g, 82 % 수율)를 주로 함유하는 회백색 혼합물을 제공하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.77 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.30 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 7.16 (m,　3H), 6.98 - 6.91 (m, 2H), 6.87 (d,　J　= 8.1 Hz, 1H), 6.71 (d,　J　= 2.6 Hz, 1H), 1.81 (s, 3H). MS: [M+1]: 317.1.
Figure pct00065
중간체 H (6-아미노-3-브로모-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 프로판디니트릴 (26.6 g, 403 mmol)을 격렬한 교반과 함께 DME (600 mL) 중 미네랄 오일(16 g, 418 mmol) 중 NaH 60% 분산물의 현탁액에을 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 2,3-디클로로피라진 (30 g, 201 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반한 다음, 1시간 동안 가열 환류하였다. DME을 진공 하에 증발시키고 생성된 잔류물을 차가운 수성 HCl 1 M로 처리하여 황색 생성물을 얻었고, 이를 여과로 회수하고, 물 및 최소의 에탄올로 세척하여 2-(3-클로로피라진-2-일)프로판디니트릴 (34.2 g, 95% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
단계 2. 2-(3-클로로피라진-2-일)프로판디니트릴 (1.00 g, 5.60 mmol), 3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (2.54 g, 16.8 mmol) 및 NMP (10 mL)을 수용하는 마이크로파 바이알을 캡핑하고, 150℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 200℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3에 부었고 물 및 EtOAc로 희석하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고 층을 분리하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 실리카 상에 흡착시키고 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 다시 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (346 mg, 21% 수율)을 베이지색 고체로서 제공하였다.
단계 3. DMF (10 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (600 mg, 2.05 mmol)의 용액에 NBS (436 mg, 2.45 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 물로 희석하고, 20분 동안 교반한 다음, 여과하였다. 고체를 물로 세척하고 진공에서 건조시켰다. 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (350 mg, 46% 수율)을 제공하였다.
단계 4. DCM (10 mL) 중 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (350 mg, 940 μmol)의 용액에 H2SO4 (1.88 mmol, 1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 교반하고, 분쇄 얼음으로 켄칭하고 DCM으로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 정제하여 6-아미노-2-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (300 mg, 82% 수율)을 제공하였다.
단계 5. DCM (3 mL) 중 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (300 mg, 769 μmol)의 용액에 DCM (1 M, 2.31 mL) 중 BBr3 용액을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하여 6-아미노-3-브로모-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드의 미정제 혼합물(263 mg, 91% 수율)을 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.29 (s, 1H), 7.55 (s, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 1H), 6.96 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.78 (s, 3H), 1.70 (s, 3H). MS: [M+1]: 378.3.
Figure pct00066
중간체 I (2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. NMP (120 mL) 중 2,3-디브로모-5-니트로-피리딘 (20 g, 63.85 mmol)의 용액에 2,6-디메틸피리딘 (11.08 g, 103.4 mmol, 12 mL),　3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (14 g, 95.23 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 밤새 가열하였다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이를 물 적가로 희석하고, rt에서 20분 동안 교반하고, 여과하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공에서 건조시켰다. 잔류물을 헵탄 중 10 내지 30% EtOAc의 구배로 용출하는 2 x 330 g 실리카겔을 사용하여 정제하여 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피리딘-2-아민 (12 g, 53% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DME (120 mL) 중 프로판디니트릴 (4.4 g, 66.6 mmol, 4.19 mL)의 용액에 NaH (2.90 g, 66.9 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)을 나누어서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피리딘-2-아민 (11.6 g, 32.9 mmol)　및　PdCl2(dppf).CH2Cl2 (1.34 g, 1.65 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고 EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (11 g, 99% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 3. THF (15 mL) 중 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (1.130 g, 3.35 mmol)의 용액에 Et3N (3.37 mmol, 470 uL),　DMAP (45 mg, 368 μmol)　및　tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (1.47 g, 6.73 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 에틸렌디아민 (500 μL)을 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 희석하고, DCM (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 20 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (1.27 g, 87% 수율)을 제공하였다.
단계 4. DCM (30 mL)　및 MeOH (30 mL) 중 tert-부틸 N-[3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (2.94 g, 6.72 mmol)의 용액에 탄소상 팔라듐 (10% w/w, 400 mg, 376 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 H2의 1 atm 하에 교반하였다. 현탁액을 셀라이트의 패드 상에서 여과하고 진공에서 농축시켜서 tert-부틸 N-[5-아미노-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (2.7 g, 99% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 5. DMF (60 mL) 및 아세토니트릴 (80 mL)의 혼합물 중 tert-부틸 N-[5-아미노-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (15.1 g, 37.1 mmol)의 용액에 tert-부틸 아질산염 (5.72 g, 55.5 mmol, 6.6 mL) 그 다음 구리(II) 브로마이드 (10 g, 44.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 20분 동안 교반한 다음, 이를 물로 희석하고, 암모니아로 처리하고, EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM 중 0 내지 5% EtOAc의 구배로 용출하는 3 X 330 실리카겔 칼럼을 사용하여 정제하여 tert-부틸 N-[5-브로모-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (9.67 g, 55% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. MS: 471.2 (M+H)+. 다음의 부산물을 또한 정제로부터 단리하였다: tert-부틸 (3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)카바메이트 (350 mg, 2% 수율).
단계 6. EtOH (15 mL) 중 tert-부틸 N-[5-브로모-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (1.05 g, 2.23 mmol)의 용액에 80℃에서 수성 HCl (6 M, 6 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 농축 건조시키고, MeOH로 공증발시키고, Et3N로 처리하고 그 다음 농축 건조시켰다. 잔류물을 CH3CN/물/0.1% 포름산으로 용출하는 C18 카트리지 상의 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (515 mg, 60% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 7. EtOH (6 mL) 및 물 (2 mL)의 혼합물 중 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (580 mg, 1.56 mmol)의 용액에 LiOH.H2O (500 mg, 11.9 mmol) 및　H2O2 (27% w/w 수성 용액, 21.02 mmol, 650 uL)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 20분 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고 여과하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공에서 건조시켜 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (600 mg, 99% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.20 (dt, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 7.13 (s, 2H), 7.05 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 1.75 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]:　469.1.
Figure pct00067
화합물 2 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸페닐)-2-(2-(피롤리딘-2-일)에틸)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF 중 중간체 D (0.25 g, 0.55 mmol)의 용액에 tert-부틸 2-에티닐파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.213 g, 1.08 mmol) 및 Et3N (234 μL, 1.66 mmol)을 첨가하였다. 질소 가스를 10분 동안 반응 혼합물에서 버블링하였다. 그 다음 CuI (10 mg, 0.054 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (20 mg, 0.027 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 1.5시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 냉수로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 60% EtOAc로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 2-((6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-l)에티닐)파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.27 g, 83% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
단계 2. 메탄올 중 tert-부틸 2-((6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-l)에티닐)파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.13 g, 0.55 mmol)의 용액에 탄소상 팔라듐 (10% w/w, 50% 수분)을 첨가하였다. 현탁액을 수소 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에 여과하고 메탄올로 세척하였다. 여액을 진공에서 농축하고 잔류물을 헥산 중 30% EtOAc로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 2-(2-(6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-일)에틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.105 g, 49% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. BBr3을 사용하는 O-Me 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸페닐)-2-(2-(피롤리딘-2-일)에틸)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (2.7 mg, 3.5% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.79 (bs, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.39 (s, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.80 (s, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.83 (s, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.46 (s, 1H). MS: [M+1]: 395.5.
Figure pct00068
화합물 6 (2-아미노-5-(사이클로펜텐-1-일)-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
디옥산 (1.5 mL) 중 중간체 G (33 mg, 104 μmol)의 용액에 2-(사이클로펜텐-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (40 mg, 206 μmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 (8 mg, 10 μmol) 및　수성 Na2CO3 (2 M, 200 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-5-(사이클로펜텐-1-일)-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (5 mg, 14% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.77 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.25 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.99 (d,　J　= 8.1 Hz, 2H), 6.91 (s, 2H), 6.88 (dd,　J　= 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.82 (d,　J　= 8.1 Hz, 1H), 6.66 (d,　J　= 2.5 Hz, 1H), 6.41 (t,　J　= 2.1 Hz, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.50 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.78 (s, 3H). MS: [M+1]: 349.1.
Figure pct00069
화합물 16 (2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(3-모폴리노프로프-1-인일)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
DMF (2 mL) 중 4-프로프-2-이닐모폴린 (40 mg, 0.32 mmol),　중간체 G (50 mg, 0.16 mmol), 구리(I) 아이오다이드 (3 mg, 16 μmol), Na2CO3 (70 mg, 0.66 mmol),　트리-tert-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트 (9 mg, 31 μmol) 및　PdCl2 (3 mg, 17 μmol)의 용액을 진공에서 탈기하고 질소로 다시 채웠다. 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH3CN/물/10 mM 중탄산암모늄 (pH 10)로 용출하는 분취 HPLC로 정제하였다. 원하는 분획을 조합하고 동결건조시켜 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(3-모폴리노프로프-1-인일)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (22 mg, 35% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.　1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 7.74 (d,　J　= 3.6 Hz, 1H), 7.38 - 7.16 (m, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.98 (d,　J　= 8.1 Hz, 1H), 6.88 (dd,　J　= 8.4, 2.6 Hz, 1H), 6.83 (d,　J　= 8.0 Hz, 1H), 6.66 (d,　J　= 2.5 Hz, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 2.52 - 2.47 (m, 4H), 1.77 (s, 3H). MS: [M+1]: 406.2.
Figure pct00070
화합물 18 (2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(3-모폴리노프로필)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
MeOH (2 mL) 중 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(3-모폴리노프로프-1-인일)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (20 mg, 49 μmol)의 용액에 탄소상 팔라듐 (10% w/w, 6 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고 진공에서 농축시켜서 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(3-모폴리노프로필)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (17.8 mg, 88% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.74 bs, 1H), 8.01 (d,　J　= 4.0 Hz, 1H), 7.24 (dd,　J　= 8.3, 0.8 Hz, 1H), 6.97 (d,　J　= 4.0 Hz, 1H), 6.90 - 6.81 (m, 3H), 6.76 (d,　J　= 8.0 Hz, 1H), 6.67 (d,　J　= 8.1 Hz, 1H), 6.63 (d,　J　= 2.5 Hz, 1H), 3.51 (m, 4H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.28 (m, 6H), 1.91 - 1.78 (m, 2H), 1.77 (s, 3H). MS: [M+1]:　410.2.
Figure pct00071
화합물 23 (2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-피리미딘-2-일-피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
DMF (2 mL) 중 중간체 G (50 mg, 0.158 mmol)의 용액에 트리부틸(피리미딘-2-일)스탄난 (73 mg, 0.199 mmol, 60 μL), CuI (3 mg, 16 μmol), LiCl (7 mg, 165 μmol)　및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (12 mg, 16 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 3회 다시 채운 다음, 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-피리미딘-2-일-피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (8 mg, 14% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.79 (s, 1H), 8.90 (d,　J　= 4.8 Hz, 2H), 8.32 (d,　J　= 3.9 Hz, 1H), 8.02 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 7.43 (t,　J　= 4.8 Hz, 1H), 7.28 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 7.16 (d,　J　= 3.8 Hz, 1H), 7.05 (s, 2H), 7.02 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.90 (dd,　J　= 8.4, 2.5 Hz, 1H), 6.72 (d,　J　= 2.5 Hz, 1H), 1.82 (s, 3H). MS: [M+1]: 361.2.
Figure pct00072
화합물 27 (2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(1,2,3,6-테트라하이드로피리딘-5-일)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 HCl 염)
MeOH (1 mL) 중 tert-부틸 5-[2-아미노-3-카바모일-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)피롤로[3,2-b]피리딘-5-일]-3,6-디하이드로-2H-피리딘-1-카복실레이트 (75 mg, 0.162 mmol, 화합물 6과 유사하게 제조됨)의 용액에 디옥산 (4 M, 0.5 mL) 중 HCl을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 물 및 CH3CN에 용해시킨 다음, 동결건조시켜 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-5-(1,2,3,6-테트라하이드로피리딘-5-일)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 HCl 염 (64 mg, 99% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.01 - 7.41 (m, 1H), 7.26 (d,　J　= 8.4, Hz, 1H), 7.12 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 7.02 (s, 3H), 6.92 - 6.82 (m, 2H), 6.72 - 6.61 (m, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.44 (m 2H), 3.19 (m, 2H), 1.77 (s, 3H). MS: [M+1]: 464.2.
Figure pct00073
화합물 28 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF (3 mL) 중 트리부틸(티아졸-2-일)스탄난 (345 mg, 0.922 mmol, 290 uL),　중간체 D (210 mg, 0.457 mmol),　CuI (11 mg, 58 μmol),　LiCl (40 mg, 0.943 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 (35 mg, 45 μmol)의 혼합물을 진공에서 탈기한 다음, 질소로 다시 채웠다. 최종 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (136 mg, 75% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (23 mg, 58 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg, 45% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.91 (d,　J　= 3.2 Hz, 1H), 7.78 (d,　J　= 3.2 Hz, 1H), 7.61 (s, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.06 (d, ,　J　= 8.4 Hz, 1H), 6.92 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS:　[M+1]: 381.2.
Figure pct00074
화합물 31 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF (40 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 중간체 C (4 g, 10 mmol)의 용액에 NBS (4 g, 10 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 물로 희석하고, 최종적으로 20분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 물로 세척하고 진공에서 건조한 다음, 헥산 중 20 내지 80% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-벤질옥시-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (3.86 g, 81% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. 디옥산 (10 mL) 및　물 (3 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (650 mg, 1.36 mmol)의 용액에 Pd(PPh3)4 (80 mg, 69 μmol),　K2CO3 (800 mg, 5.79 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기한 다음, 질소로 3회 다시 채웠다. 그 다음 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (712 mg, 2.84 mmol, 0.8 mL)을 첨가하고 최종 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 45% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (300 mg, 53% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. 황산을 사용하는 니트릴 가수분해의 경우, 화합물 164를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (260 mg, 0.629 mmol)에 대해 수행하여 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (205 mg, 96% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 4. DMF (2 mL) 중 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (206 mg,　0.603 mmol) 및　Cs2CO3 (390 mg, 1.20 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (235 mg, 0.658 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 물로 희석하고 EtOAc (4x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고,　Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 70% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (160 mg, 56% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 5. DMF (1.5 mL) 중 트리부틸(티아졸-2-일)스탄난 (83 mg, 0.223 mmol, 70 uL),　[6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (50 mg, 0.106 mmol), CuI (3 mg, 16 μmol), LiCl (7 mg, 0.165 mmol),　PdCl2(dppf).CH2Cl2 (8 mg, 11 μmol)의 혼합물을 진공에서 탈기한 다음, 질소로 다시 채웠다. 반응 혼합물을 110℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (22 mg, 51% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 6. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (22 mg, 53 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-메틸-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg, 24% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.64 (s, 1H), 7.94 (d,　J　= 3.3 Hz, 1H), 7.76 (d,　J　= 3.3 Hz, 1H), 7.47 (s, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.06 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.92 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS:　[M+1]: 395.2.
Figure pct00075
화합물 33 (6-아미노-3-브로모-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF (1 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (화합물 28, 60 mg, 0.15 mmol)의 용액에 NBS (30 mg, 0.17 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고, 물로 희석하고, 20% 수성 Na2S2O3로 처리하고, EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (45 mg, 63% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (35 mg, 74 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-3-브로모-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg, 29% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.71 (s, 1H), 7.97 (d,　J　= 3.3 Hz, 1H), 7.88 (d,　J　= 3.3 Hz, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.19 - 7.00 (m, 2H), 6.94 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.71 (s, 3H). MS: [M+1]: 460.2.
Figure pct00076
화합물 35 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[2-(트리플루오로메틸)-4-피리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 디옥산 (1 mL) 중 중간체 D (50 mg, 0.109 mmol)의 용액에 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (8 mg, 10 μmol), [2-(트리플루오로메틸)-4-피리딜]붕산 (40 mg, 0.209 mmol)　및　수성 Na2CO3 (2 M, 200 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 다시 채웠다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석한 다음, 여과하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공에서 건조하고 최종적으로 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[2-(트리플루오로메틸)-4-피리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (36 mg, 72% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. (BBr 3 을 사용하는 OMe 탈보호에 대한 일반적인 절차)
DCM (1 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[2-(트리플루오로메틸)-4-피리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (36 mg, 79 μmol)의 용액에 BBr3 (DCM 중 1 M, 230 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고 다시 농축 건조시켰다. 그 다음 이를 MeOH에 용해시키고, Et3N (100 μL)을 첨가하고 혼합물을 다시 농축 건조시켰다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[2-(트리플루오로메틸)-4-피리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (16 mg, 46% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 8.81 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.41 (m, 1H), 7.63 (s, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.07 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.93 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS:　[M+1]: 443.2.
Figure pct00077
화합물 46 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[4-(메틸카바모일)-1-피페리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMSO (1 mL) 중 중간체 D (50 mg, 0.109 mmol)의 용액에 N-메틸피페리딘-4-카복사미드 (80 mg, 0.563 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 밀봉된 바이알에서 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[4-(메틸카바모일)-1-피페리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (14 mg, 28% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (15 mg, 32 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[4-(메틸카바모일)-1-피페리딜]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg, 69% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.72 (d,　J　= 4.8 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.14 - 6.96 (m, 4H), 6.87 (d,　J　= 8.2 Hz, 1H), 4.13 (d,　J　= 12.4 Hz, 2H), 2.85 - 2.68 (m, 2H), 2.53 (d,　J　= 4.6 Hz, 3H), 2.35 - 2.20 (m, 1H), 1.74 (m, 5H), 1.65 (s, 3H), 1.64 - 1.50 (m, 2H). MS: [M+1]: 438.2.
Figure pct00078
화합물 97 (1-[6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-피라진-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에테논)
단계 1. THF (20 mL) 중 중간체 C (2.5 g, 6.26 mmol)의 용액에 THF (3 M, 6.50 mL) 중 MeMgBr 용액을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 가온하고 18시간 동안 교반하였다. THF (3 M, 4.00 mL) 중 추가 양의 MeMgBr 용액을 첨가하고 혼합물을 추가 5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 30% EtOAc의 구배를 용출하는 실리카겔 칼럼으로 정제하여 1-[6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (120 mg, 5% 수율)을 제공하였다.
단계 2. DCM (1 mL) 중 1-[6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (100 mg, 0.240 mmol)의 용액에 TFA (500 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 1-[6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (43 mg, 55% 수율)을 제공하였다.
단계 3. DMF (1 mL) 중 1-[6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (43 mg, 0.132 mmol) 및　Cs2CO3 (50 mg, 0.153 mmol)의 혼합물에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (52 mg, 0.146 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 70% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 [7-아세틸-6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (46 mg, 76% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 4. DMF (1 mL) 중 [7-아세틸-6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (46 mg, 0.100 mmol)의 용액에 LiCl (9 mg, 0.212 mmol),　트리부틸(피라진-2-일)스탄난 (74 mg, 0.200 mmol), 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (7 mg, 9.6 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 1-[6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-피라진-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (38 mg, 97% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 5. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (38 mg, 98 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 1-[6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-피라진-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-일]에탄온 (18 mg, 49% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.62 (s, 1H), 9.55 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.69 - 8.62 (m, 2H), 8.13 (s, 2H), 7.07 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.93 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS: [M+1]: 375.
Figure pct00079
화합물 102 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)-2-비닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF (10 mL) 중 중간체 C (800 mg, 2.00 mmol)의 용액에 NIS (450 mg, 2.00 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 물로 희석하고 20분 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과로 수집한 다음, 헥산 중 20 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-벤질옥시-3-요오도-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (820 mg, 78% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DMF (10 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-3-요오도-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (745 mg, 1.42 mmol)의 용액에 (1,10-펜안트롤린)(트리플루오로메틸)구리(I) (900 mg, 2.88 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (300 mg, 45% 수율)을 제공하였다.
단계 3. 황산 (1 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (300 mg, 0.642 mmol)의 용액을 5시간 동안 교반하고, 분쇄 얼음에 부었고, 암모니아 용액으로 중화하고 생성된 침전물을 여과하였다. 침전물을 물로 세척하고, 진공에서 건조시켜 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (232 mg, 91% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 4. DMF (2 mL) 중 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (232 mg, 0.587 mmol)　및　Cs2CO3 (200 mg, 0.615 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (210 mg, 0.588 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 물로 희석하고 20분 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공에서 건조시켰다. 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 추가 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (190 mg, 61% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 5. 디옥산 (1 mL) 중 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (90 mg, 0.171 mmol)의 용액에 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (14 mg, 17 μmol),　4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (30 mg, 0.195 mmol) 및 수성 Na2CO3 (2M, 100 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)-2-비닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg, 14% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 6. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (10 mg, 25 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)-2-비닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (3 mg, 31% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.67 (s, 1H), 7.85 (s, 2H), 7.41 (m, 2H), 7.10 - 6.89 (m, 3H), 6.50 (m, 1H), 5.60 (m, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H). MS:　[M+1]: 392.2.
Figure pct00080
화합물 110 (6-아미노-2-사이클로프로필-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. THF (10 mL) 중 마그네슘 조각 (140 mg, 5.76 mmol)의 현탁액에 요오드 (13 mg, 52 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음,　CD3I (5.14 mmol, 320 μL)을 첨가하고 혼합물을 18시간 동안 질소 하에 교반하여 회백색 현탁액을 생성하였다. 혼합물에 ZnCl2 (THF 중 0.5 M, 10.5 mL)을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 6-아미노-2-벤질옥시-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (500 mg, 1.05 mmol) 및　Pd(PPh3)4 (120 mg, 0.103 mmol)을 첨가하였다. 최종 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응을 HCl 1M로 켄칭하고, 물로 희석하고, EtOAc (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (328 mg, 75% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. H2SO4 (2 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (328 mg, 0.788 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 농축 암모니아수를 사용하여 pH 7로 중화하였다. 생성된 혼합물을 동결건조하고, 잔류물을 물로 분쇄하고 여과하였다. 고체를 진공에서 건조시켜서 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (220 mg, 81% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. DMF (3 mL) 중 6-아미노-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (232 mg, 0.674mmol)의 용액에 Cs2CO3 (320 mg, 0.982 mmol) 및　1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (360 mg, 1.01 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (200 mg, 62% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 4. DMF (3 mL) 중 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (200 mg, 0.420 μmol)의 용액에 리튬 클로라이드 (36 mg, 0.849 mmol) 및　트리부틸(사이클로프로필)스탄난 (275 mg, 0.831 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-사이클로프로필-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (80 mg, 52% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 5. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (35 mg, 95 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-사이클로프로필-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (20 mg, 59% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.49 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 - 6.98 (m, 4H), 6.89 (d,　J　= 8.2 Hz, 1H), 2.11 (m, 1H), 1.84 - 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.04 - 0.81 (m, 4H). MS:　[M+1]: 356.2. 화합물 110의 키랄 SFC 분리 (20 mg, 0.056 mmol) (기기: Waters Prep 15 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm; 조건: 55% MeOH에서 45% CO2와 등용매; 유량: 10 mL/min)로 화합물 111 및 화합물 112를 제공하였다.
Figure pct00081
110의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 111. 피크 1 (체류 시간 5.33분, 99.95%): S-6-아미노-2-사이클로프로필-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (7.8 mg)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.49 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 - 6.98 (m, 4H), 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 2.11 (m, 1H), 1.84 - 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.04 - 0.81 (m, 4H). MS: [M+1]: 356.2.
Figure pct00082
110의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 112. 피크 2 (체류 시간 6.00분, 99.78%): R-6-아미노-2-사이클로프로필-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5.3 mg)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.49 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 - 6.98 (m, 4H), 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 2.11 (m, 1H), 1.84 - 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.04 - 0.81 (m, 4H). MS: [M+1]: 356.2.
Figure pct00083
화합물 116 (2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. 물 (0.5 mL)　및　디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 N-[5-브로모-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (중간체 I의 합성에 기재됨) (110 mg, 0.233 mmol)의 용액에 사이클로프로필붕산 (41 mg, 0.477 mmol),　Cs2CO3 (270 mg, 0.829 mmol),　PdCl2(dppf).CH2Cl2 (18 mg, 22 μmol)을 밀봉된 바이알에서 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 다시 채웠다. 생성된 혼합물을 100℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (63 mg, 81% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. EtOH (1.5 mL) 및 물 (300 μL) 중 2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (73 mg, 0.220 mmol)의 용액에 LiOH.H2O (50 mg, 1.19 mmol) 및　H2O2 (700 uL, 27% w/w 수용액)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 20분 동안 교반한 다음, 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (22 mg, 29% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (22 mg, 63 μmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (15 mg, 71% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.43 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.00 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.86 (m, 3H), 6.69 (s, 2H), 1.88 m, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 0.86 (m, 2H), 0.81 - 0.68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337.2.
화합물 116의 키랄 SFC 분리 (410 mg, 1.22 mmol) (기기: Waters Prep 100 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm; 조건: 50% ACN/EtOH 1:1에서 50% CO2와 등용매; 유량: 70 mL/min)로 화합물 117 및 화합물 118을 제공하였다.
Figure pct00084
116의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 117. 피크 1 (체류 시간 5.60분, 99.83%):S-2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (130 mg)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.08 - 7.92 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.00 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337.2.
Figure pct00085
116의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 118. 피크 2 (체류 시간 7.81분, 98.81%): R-2-아미노-5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (130 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.08 - 7.92 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.00 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.68 (m, 2H). MS: [M+1]: 337.2.
Figure pct00086
화합물 132 (2-아미노-5-클로로-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. THF (50 mL) 중 3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (3.61 g, 23.9 mmol) 및 3-브로모-5-클로로-2-플루오로-피리딘 (5.02 g, 23.9 mmol)의 용액에 THF (1 M, 48 mL) 중 LiHMDS 용액을 18분에 걸쳐 적가하였다. 16℃ 발열이 관찰되었다. 30분 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 미정제 생성물을 헵탄 중 0 내지 20% EtOAc의 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 분획을 조합하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 3-브로모-5-클로로-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피리딘-2-아민 (6.58 g, 81% 수율)을 복숭아색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DME (60 mL) 중 NaH (1.08 g, 24.9 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)의 현탁액에 DME (15 mL) 중 프로판디니트릴 (1.62 g, 24.6 mmol)을 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, DME (15 mL) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (1.08 g, 1.32 mmol) 중 3-브로모-5-클로로-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피리딘-2-아민 (4.00 g, 11.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 용액을 통해 질소 버블링으로 플러싱한 다음, 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 빙수 (250 mL)을 적가하였다. 생성된 침전물을 여과로 수집하고 물로 세척하였다. 고체를 공기 건조시킨 다음, 톨루엔 (2x)로 동시 증발시키고, 진공에서 건조시켜 4.67 g의 미정제 생성물을 얻었다. 헵탄 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 분획을 조합하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 2-아미노-5-클로로-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (3.27 g, 85% 수율)을 아이보리색 결정질 고체를 얻었다.
단계 3. 물 (60 mL) 및 시약 알코올 (180 mL) 중 2-아미노-5-클로로-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (7.50 g, 23.0 mmol)의 현탁액에 LiOH.H2O, 98% (7.22 g, 172 mmol) 및 H2O2 (27% w/w 수성 용액, 9.8 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 물 (500 mL)을 적가하고 고체를 여과로 수집하고, 물로 세척하고 공기 건조시켰다. 여액을 물로 희석하고 고체의 제2 수확물을 수득하였다. 최종적으로 여액을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 미정제 생성물의 제3 수확물을 얻었다. 조합된 미정제 물질을 헵탄 중 50 내지 100% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고 농축하고, 진공에서 건조시켜 2-아미노-5-클로로-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (3.90 g, 49% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다. 대안적으로, 니트릴 가수분해를 H2SO4 조건 (화합물 164를 위해 사용된 것과 동일한 절차를 사용함) 하에 수행하여 2-아미노-5-클로로-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드를 정량적 수율로 얻었다.
단계 4. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (3.90 g, 11.3 mmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 MeOH (4x)로 동시 증발시키고, 진공에서 건조하고, 포화 수성 NaHCO3로 분쇄하고 여과하였다. 미정제 생성물을 CH2Cl2 중 0 내지 20% MeOH의 구배를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피 실리카로 정제하여 2-아미노-5-클로로-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (3.54g, 95% 수율)을 밝은 베이지색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.14 (br s, 2H), 7.06 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.86 (br s, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331.1.
화합물 132의 키랄 SFC 분리 (3.54 g, 10.7 mmol) (기기: Waters Prep 100 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm; 조건: 45% ACN/EtOH 1:1에서 55% CO2로 등용매; 유량: 70 mL/min)로 화합물 133 및 화합물 134를 제공하였다.
Figure pct00087
132의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 133. 피크 1 (체류 시간 5.37분, 99.70%): S-2-아미노-5-클로로-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (1.26 g)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.14 (br s, 2H), 7.06 (dt, J = 8.2, 0.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.86 (br s, 2H), 1.74 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331.1.
Figure pct00088
132의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 134. 피크 2 (체류 시간 7.79분, 99.19%): R-2-아미노-5-클로로-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (1.26 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.14 (br s, 2H), 7.06 (dt, J = 8.2, 0.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.86 (br s, 2H), 1.74 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 331.1.
Figure pct00089
화합물 150 (6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-페닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 중간체 F (101 mg, 0.236 mmol), 페닐 붕산 (29 mg, 0.24 mmol)을 첨가하였다. Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.026 mmol) 및 인산칼륨 삼염기성 무수 (176 mg, 0.829 mmol)을 마이크로파 바이알에서 로딩하고, 이것을 질소로 플러싱한 다음, 디옥산 (2 mL)을 첨가하고, 바이알을 캡핑하고 90℃로 설정된 열 블록에 배치하였다. 90분 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(5-메톡시-2-메틸-페닐)-3-페닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (30 mg, 36% 수율)을 오렌지 고체로서 제공하였다.
단계 2. 황산을 사용하는 니트릴 가수분해의 경우, 화합물 164를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (28 mg, 0.079 mmol)에 대해 수행하여 6-아미노-5-(5-메톡시-2-메틸-페닐)-3-페닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (20 mg, 68% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다.
단계 3. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-페닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (11 mg, 57% 수율)을 백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.71 (br s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.92 - 7.76 (m, 2H), 7.49 (br s, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 3H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 7.26 (br s, 1H), 6.92 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 1.89 (s, 3H). MS: [M+1]: 360.2.
Figure pct00090
화합물 153 (6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. THF (2mL) 중 중간체 E (51 mg, 0.16 mmol), 3-피리딜메탄올 (41 mg, 0.38 mmol) 및 트리페닐포스핀 (62 mg, 0.24 mmol)의 혼합물에 디이소프로필 아조디카복실레이트 (47 uL, 0.24 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 추가의 트리페닐포스핀 (62 mg, 0.24 mmol), 3-피리딜메탄올 (41 mg, 0.38 mmol) 및 디이소프로필 아조디카복실레이트 (47 uL, 0.24 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2.5시간 동안 추가 교반하고 농축 건조시켰다. 미정제 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (115 mg)을 불순한 호박색 검 (트리페닐 포스핀 옥사이드 함유)로서 제공하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계로 옮겼다.
단계 2. MeOH (1.5 mL) 중 6-아미노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (65.0 mg, 0.156 mmol)의 용액에 디옥산 (4 M, 1.50 mL) 중 HCl을 첨가하였다. 75분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 진공에서 건조시켰다. 비스 HCl 염으로 추정되는 미정제 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴을 추가 정제없이 다음 단계로 옮겼다.
단계 3. MeOH (1.0 mL) 중 미정제 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (70 mg, 0.156 mmol, 비스 HCl 염으로 추정됨)의 용액에 수성 NaOH 용액 (4 M, 1.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 예열된 열 블록으로 옮기고 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 3N HCl로 중화하고 물로 희석하였다. 침전물을 여과로 수집하고 물로 세척한 다음, 공기 건조시켰다. 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-(3-피리딜메톡시)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (4 mg, 7% 수율)을 백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.68 (br s, 1H), 8.48 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.42 (dd, J = 4.8, 1.7 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.65 (dt, J = 7.8, 2.0 Hz, 1H), 7.26 (ddd, J = 7.9, 4.9, 0.9 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.15 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 7.00 (br s, 2H), 6.87 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 1.72 (s, 3H). MS: [M+1]: 391.2.
Figure pct00091
화합물 160 (6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 중간체 F (251 mg, 0.549 mmol), Pd(PPh3)4 (65 mg, 0.056 mmol), CuI (43 mg, 0.023 mmol)이 채워지고 질소로 플러싱된 마이크로파 바이알에 DMF (2.5 mL) 중 3-에티닐피리딘 (72 mg, 0.698 mmol), 그 다음 Et3N (610 μL, 4.39 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 캡핑한 다음, 예열된 열 블록 (120℃)로 옮겼다. 1시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 그 다음 THF에서 취하고 실리카 상에 흡착시켰다. 휘발성물질을 진공 하에 증발시키고 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc, 그 다음 EtOAc 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, 6-아미노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (260 mg, 99%)을 황갈색 고체로서 제공하였다.
단계 2. MeOH (3 mL) 중 6-아미노-5-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (225 mg, 0.548 mmol)의 현탁액에 디옥산 중 HCl (4 M, 3 mL)을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축 건조시킨 다음, 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (319 mg, 비스 HCl 염)을 황갈색 점착성 고체로서 얻었고, 이는 추가 정제없이 다음 단계에서 사용되었다.
단계 3. 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 비스 HCl 염 (241 mg, 0.548 mmol)을 농축 H2SO4 (2 mL)에서 교반하였다. 3일 후, 반응 혼합물을 분쇄 얼음으로 켄칭하고, 빙욕에 배치하고 1:1 NH4OH/H2O로 알칼리성 (pH 약 10)을 만들었다. 고체를 여과로 수집하고 밤새 공기 교반하고, 미정제 생성물을 황토색 황색 고체 (249 mg)로서 얻었다. 일부(67 mg)을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (26 mg, 46% 계산된 수율)을 담황색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.77 (br s, 1H), 8.75 (dd, J = 2.3, 0.9 Hz, 1H), 8.57 (dd, J = 4.9, 1.7 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.98 (dt, J = 7.9, 1.9 Hz, 1H), 7.73 (br s, 2H), 7.44 (ddd, J = 8.0, 4.9, 0.9 Hz, 1H), 7.35 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 1.85 (s, 3H). MS: [M+1]: 385.3.
Figure pct00092
화합물 162 (6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에틸]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에티닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (102 mg, 0.265 mmol) 및 탄소상 팔라듐 (30 mg, 0.028 mmol, 10% w/w)을 MeOH (3 mL)에서 수소 분위기 하에 밤새 교반하고, MeOH를 사용하여 디스크 필터 상에서 여과하고, 농축하고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-3-[2-(3-피리딜)에틸]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (7 mg, 7% 수율)을 회백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 (dd, J = 4.8, 1.7 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.55 (ddd, J = 7.8, 2.4, 1.7 Hz, 1H), 7.34 (br s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 7.28 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 7.23 (ddd, J = 7.8, 4.8, 0.9 Hz, 1H), 7.15 (br s, 1H), 6.92 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.01 - 2.93 (m, 2H), 2.92 - 2.84 (m, 2H), 1.82 (s, 3H). MS: [M+1]: 389.2.
Figure pct00093
화합물 164 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. THF (100 mL) 중 NaH (3.54 g, 92 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)의 현탁액에 0℃에서 THF (30 mL) 중 말로노니트릴 (3.99 g, 60.4 mmol)을 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 첨가 종료 시 냉욕을 제거하고 생성된 혼합물을 45분 동안 실온에서 교반되도록 하였다. 2,3-디클로로-5,6-디메틸-피라진 (5.49 g, 31.0 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (1.76 g, 1.52 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3.25시간 동안 환류하고, 실온으로 냉각시키고, 200 mL 1:1 분쇄 얼음 및 1N HCl에 부었고, DCM (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 미정제 생성물을 DCM/THF를 사용하여 실리카 상에 흡착시키고 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 혼합 분획을 동일한 조건을 사용하여 제2 실리카겔 크로마토그래피로 재정제하였다. 두 칼럼으로부터의 깨끗한 분획을 조합하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 2-(3-클로로-5,6-디메틸-피라진-2-일)프로판디니트릴 (5.0 g, 78% 수율)을 오렌지 고체로서 얻었다.
단계 2. 반응물을 각각의 양의 1/3을 함유하는 3개의 바이알로 나누었다. 마이크로파 바이알에 2-(3-클로로-5,6-디메틸-피라진-2-일)프로판디니트릴 (3.04 g, 14.7 mmol), 3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (6.61 g, 43.7 mmol), 칼륨 tert-부톡사이드 (3.30 g, 29.4 mmol) 및 Pd-PEPPSITM-SIPr 촉매 (513 mg, 0.752 mmol)을 채우고, 질소로 3회 플러싱한 다음, 건조 NMP (30 mL)을 첨가하고, 질소로 다시 플러싱하고, 캡핑하고 30분 동안 마이크로파 조사 (100℃)로 옮겼다. 바이알을 조합하고 EtOAc, 포화 수성 NH4Cl 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 미정제 생성물을 헵탄 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 분획을 조합하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (2.57 g, 54% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 3. (황산을 사용하는 니트릴 가수분해에 대한 일반적인 절차)
6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (7.11 g, 22.1 mmol)을 농축 황산 (70 mL)에 용해시킨 다음, 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분쇄 얼음 (500 cc)에 천천히 부은 다음, 빙욕에 배치하고 내부 온도를 35℃ 미만으로 유지하면서 농축 NH4OH (약 190 mL)로 pH 8-9로 중화하였다. 1시간 동안 교반한 후, 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 공기 건조시키고, 그 다음 톨루엔으로 진공 하에 톨루엔으로 동시 증발로 추가로 건조시킨 다음 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (7.5 g, 정량적 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
단계 4. DCM (132 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (7.50 g, 22.1 mmol)의 현탁액에 BBr3 (66.3 mmol, 6.4 mL)을 천천히 첨가하였다. 70분 동안 교반 후, 반응 혼합물을 농축 건조시키고, DCM에 재현탁시키고, MeOH를 첨가하였다 (발열이 관찰됨). 농축한 후, 미정제 혼합물을 DCM/MeOH로 다시 동시 증발시킨 다음, 포화 수성 NaHCO3 (100 mL)로 신중하게 분쇄하고, 물로 희석하고 1.5시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고 공기 건조시킨 다음, DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 혼합된 분획을 조합하고 동일한 조건을 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 재정제하였다. 두 칼럼으로부터의 깨끗한 물질을 조합하고, 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5.3 g, 74% 수율)를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.57 (s, 1H), 7.45 (br s, 1H), 7.18 - 7.02 (m, 4H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.48 - 2.45 (m, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 3H), 1.81 - 1.73 (m, 3H), 1.68 (s, 3H). MS: [M+1]: 326.4.
화합물 164의 키랄 SFC 분리 (5.40 g, 16.6 mmol) (기기: Waters Prep 100 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm; 조건: 55% ACN/EtOH 1:1에서 45% CO2와 등용매; 유량: 70 mL/min)로 화합물 165 및 화합물 166을 제공하였다.
Figure pct00094
164의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 165. 피크 1 (체류 시간 4.07분, 99.99%): S-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (1.31 g)을 밝은 베이지색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.57 (s, 1H), 7.45 (br s, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.09 (br s, 2H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H). MS: [M+1]: 327.3.
Figure pct00095
164의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 166. 피크 2 (체류 시간 4.81분, 99.83%): R-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (1.43 g)을 밝은 베이지색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.57 (s, 1H), 7.45 (br s, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.09 (br s, 2H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H). MS: [M+1]: 327.3.
Figure pct00096
화합물 173 (6-아미노-2-사이클로부틸-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 마이크로파 바이알에 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (200 mg, 0.435 μmol) 및　Pd(PPh3)4 (56 mg, 49 μmol)를 로딩하고, 질소로 플러싱하고,　THF (2 mL)을 첨가하고, 질소로 버블링하고, 사이클로부틸 아연 브로마이드 용액 (0.5 M, 4.35 mL)을 첨가하고, 질소로 버블링하고, 캡핑하고 70℃로 예열된 열 블록으로 옮겼다. 반응 혼합물을 90분 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고 EtOAc (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-2-사이클로부틸-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (110 mg, 69% 수율)을 백색/베이지색 고체로서 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (110 mg, 0.301 mmol)에 대해 수행하여 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-사이클로부틸-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (54 mg, 51% 수율)을 회백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.58 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.32 (br s, 2H), 7.23 (br s, 1H), 7.07 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.93 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 3.66 (p,　J　= 8.6 Hz, 1H), 2.42 - 2.17 (m, 4H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.88 (td,　J　= 8.5, 4.0 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H). MS: [M+1]: 352.4.
Figure pct00097
화합물 178 (6-아미노-2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DCM (2 mL) 중 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (화합물 190, 46.0 mg, 0.129 mmol)의 용액에 -78℃에서 Deoxo-fluor ® 용액 (315 mg, 0.712 mmol, THF 중 50%)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반하고, 농축하고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (23 mg, 50% 수율)을 회백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 7.92 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.46 (br s, 2H), 7.37 (br s, 1H), 7.26 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.75 (d, J = 22.4 Hz, 6H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137.78 (hept, J = 22.1 Hz). MS: [M+1]: 358.2.
화합물 178의 키랄 SFC 분리 (19 mg, 0.053 mmol) (기기: Mettler Toledo Minigram SFC; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm; 조건: 45% ACN/EtOH 1:1에서 55% CO2로 등용매; 유량: 10 mL/min)로 화합물 179 및 화합물 180을 제공하였다.
Figure pct00098
178의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 179. 피크 1 (체류 시간 3.63분, 99.87%): 백색 솜털 같은 고체로서 S-6-아미노-2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.46 (br s, 2H), 7.42 - 7.32 (m, 1H), 7.30 - 7.19 (m, 1H), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.75 (d, J = 22.4 Hz, 6H), 1.69 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137.75 (hept, J = 22.1 Hz). MS: [M+1]: 358.2.
Figure pct00099
178의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 180. 피크 2 (체류 시간 4.00분, 99.90%): 백색 솜털 같은 고체로서 R-6-아미노-2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.46 (br s, 2H), 7.37 (br s, 1H), 7.26 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.74 (d, J = 22.4 Hz, 6H), 1.69 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -137.75 (hept, J = 22.1 Hz). MS: [M+1]: 358.2.
Figure pct00100
화합물 181 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (방법 D로부터)
단계 1. 압력 용기에 3-브로모-2-클로로-6-메틸-5-니트로-피리딘 (10.11 g, 40.2 mmol)　및　3-메톡시-2,6-디메틸아닐린 (아닐린 A2, 9.20 g, 60.8 mmol)를 로딩하였다. NMP (40 mL)　및　2,6-디메틸피리딘 (8.58 g, 80.1 mmol, 9.3 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 UPLCMS에 의해 평가된 만족스러운 전환이 달성될 때까지 5일 동안 130℃ (펠렛 배쓰)로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 생성된 페이스트를 원추형 플라스크로 옮기고 500 mL HCl 0.5 N을 교반하면서 적가하고, 점착성 검을 생성하였다. 상청액을 부크너 깔때기 상에서 여과하였다. 나머지 검을 H2O로 세척하고, DCM에 용해시키고, DCM (총 200 mL)에도 용해된 고체와 조합하였다. DCM 용액을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 미정제 잔류물을 헵탄 중 0 내지 100% DCM의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피리딘-2-아민 (10.5 g, 71% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DME (150 mL) 중 수소화나트륨 (3.13 g, 72.2 mmol, 미네랄 오일 중 60% w/w)를 수용하는 RBF에 DME (50 mL) 중 프로판디니트릴 (4.75 g, 71.9 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후,　3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피리딘-2-아민 (10.5 g, 28.7 mmol) 및　Pd(dppf)Cl2ㆍDCM (2.31 g, 2.83 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 용액을 통해 N2를 버블링하여 탈기하고, 응축기를 장착하고, 1시간 동안 95℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl에 부었고 DCM (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 실리카 상에 흡착시켰다. 미정제 잔류물을 헵탄 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고, 농축하고 생성된 고체를 DCM로 분쇄하고, 여과하고, 진공에서 건조시켜 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (7.97 g, 79% 수율)을 밝은 황색 고체로서 얻었다. 물질의 제2 수확을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하고 동일한 방식으로 분쇄하여 이전 분쇄의 여액으로부터 수득하여, 추가의　2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (1.04 g, 10% 수율)를 농황색 고체로서 제공하였다.
단계 3. THF (120 mL) 중 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (9.0 g, 25.6 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (7.99 g, 78.9 mmol, 11 mL) ,　DMAP (312 mg, 2.55 mmol) 및　tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (17.0 g, 77.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 40분 동안 교반하였다. 가열을 중단하고, 에틸렌디아민 (6.20 g, 103 mmol, 6.90 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 다음, H2O 및 DCM으로 희석하였다. 층을 분리하고 수성층을 DCM (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 절반-포화 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 미정제 잔류물을 헵탄 중 0 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 tert-부틸 N-[3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (13.94 g, 정량적 수율)을 회백색 고체로서 제공하고, 이는 tert-부틸 N-[2-(tert-부톡시카보닐아미노)에틸]카바메이트 (1H NMR에 의한 50 mol%)로 오염되었다.
단계 4. DCM (280 mL) 및　MeOH (280 mL) 중 tert-부틸 N-[3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-5-니트로-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (13.94 g, 25.6 mmol) (이전 단계에서 정량적으로 추정됨)를 수용하는 RBF에 탄소상 팔라듐 (2.08 g, 1.95 mmol, 10%w/w)을 용매 혼합물의 일부에서 슬러리로서 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2로 플러싱하고 H2 분위기 (밸룬) 하에 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 N2로 플러싱하고, 셀라이트 패드 상에 여과하고, DCM 및 MeOH로 린스하였다. 여액을 농축하고 진공에서 건조시켜 담황색 고체를 얻었고, 이를 헵탄 중 EtOAc (20 내지 100%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 tert-부틸 N-[5-아미노-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (9.34 g, 87% 수율)을 회백색 고체로서 얻었다.
단계 5. 아세토니트릴 (100 mL)　및　DMF (60 mL) 중 tert-부틸 N-[5-아미노-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (10.34 g, 24.5 mmol)의 용액에 tert-부틸 아질산염 (5.20 g, 50.5 mmol, 6.0 mL), 이어서　구리(II) 브로마이드 (6.58 g, 29.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 35분 동안 70℃로 가열하고, 실온으로 냉각시키고, H2O (600 mL) 및 NH4OH 농축 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 포화 NH4Cl (2x), 절반-포화 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 헵탄 중 EtOAc (0 내지 100%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 tert-부틸 N-[5-브로모-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (6.18 g, 52% 수율)을 아이보리색 고체로서 얻었다.
단계 6. EtOH (60 mL) 중 tert-부틸 N-[5-브로모-3-시아노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]카바메이트 (6.18 g, 12.7 mmol)을 수성 HCl (6M, 34 mL)로 처리하고 70분 동안 80℃에서 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고 농축하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 과잉의 Et3N으로 알칼리성으로 만들고 다시 농축하였다. 잔류물을 헵탄 중 EtOAc (0 내지 100%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (3.70 g, 75% 수율)을 어두운 심홍색 고체로서 얻었다.
단계 7. 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (3.70 g, 9.6 mmol)을 농축 황산 (18M, 25 mL)에서 55분 동안 교반하고, 그 다음 반응 혼합물을 분쇄 얼음으로 켄칭하고, 빙욕에 배치하고 NH4OH를 천천히 첨가하여 pH 8-9로 알칼리성으로 만들었다. 생성된 고체를 부크너 깔때기 상에서 여과에 의해 수집하고 H2O로 세척하였다. 물질을 공기 건조시킨 다음, 톨루엔으로 2회 동시 증발시키고 진공에서 건조한 다음, 10% MeOH/DCM에서 교반하고 실리카 플러그 상에서 여과하고, 10% MeOH/DCM로 용출하여 잔류 암모늄 염을 제거하였다. 여액을 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (3.80 g, 98% 수율)을 분홍색 고체로서 얻었다.
단계 8. N2 하에 RBF에서 THF (160 mL) 중 메틸 마그네슘 클로라이드 (3M, 18.8 mL)의 용액에 THF (0.5M, 112 mL)의 아연 이염화물의 용액을 실온에서 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 첨가 후, 생성된 백색 현탁액을 실온에서 35분 동안 교반하였다. 아연산염 용액에 2-아미노-5-브로모-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (4.48 g, 11.1 mmol)을 첨가하고, 플라스크를 20 mL THF로 린스하고,　팔라듐 (0) 테트라키스(트리페닐포스핀) (1.14 g, 0.987 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2로 버블링하고, 그 다음 응축기를 장착하고 (80℃로 설정된 열 블록) 24시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 그 다음 포화 수성 NH4Cl로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 헵탄 중 EtOAc (0 내지 100%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제한 다음, DCM 중 MeOH (1 내지 15%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피 (건조 로드)로 다시 정제하였다. 두 컬럼의 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (2.22 g, 59% 수율, 77% 순도)을 연분홍색 고체로서 얻었고, 이는 일부의 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-6-메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 부산물 (UPLCMS에 의해 19%)을 함유하였다.
단계 9. DCM (25 mL) 중 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (2.22 g, 6.56 mmol, 77% 순도)의 현탁액에 DCM (1M, 26 mmol, 26 mL) 중 트리브로모보란을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 다음, 농축 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM에서 취하고 빙욕에 배치하고 MeOH를 신중하게 첨가하였다 (발열). 혼합물을 농축 건조시킨 다음, MeOH로 2회 동시 증발시켰다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3로 분쇄하였다. 고체를 부크너 깔때기 상에서 여과로 수집하고, H2O로 세척하고 공기 건조시켰다. 여전히 습성 고체를 DCM/MeOH에 용해시키고, 농축 건조시키고 20% MeOH/DCM (50 mL)에서 분쇄하였다. 고체를 여과로 수집하고, 20% MeOH/DCM으로 세척하고, 공기 건조시킨 다음, 진공에서 건조시켜 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (1.60g, 75% 수율)을 밝은 베이지색 고체로서 얻었다. MS: [M+1]: 325.1. 상이한 배치를 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (63% 수율)을 회백색 솜털 같은 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.71 (br s, 2H), 6.64 (br s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 325.1.
화합물 181의 키랄 SFC 분리 (1.60g, 4.93 mmol) (기기: Waters Prep 100 SFC-MS; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm; 조건: 55% IPA + 10mM 암모늄 포르메이트에서 45% CO2와 등용매; 유량: 70 mL/min)로 화합물 182 및 화합물 183을 제공하였다.
Figure pct00101
181의 SFC 분리로부터의 화합물 182. 피크 1 (체류 시간 3.94분, 99.86%): (S)-2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (381 mg)을 회백색 솜털 같은 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.65 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 325.1.
Figure pct00102
181의 SFC 분리로부터의 화합물 183. 피크 2 (체류 시간 4.35분, 98.09%): (R)-2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (495 mg)을 회백색 솜털 같은 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.66 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 325.1.
Figure pct00103
화합물 181 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (방법 O로부터)
단계 1. 황산 (140.1 mL, 2575 mmol)을 물 (1.15 L)에 천천히 첨가하고 용액을 25℃에서 냉각시켰다. 2-아미노-3-브로모-5,6-디메틸피리딘 (114.8 g, 571.0 mmol)을 한번에 첨가하여 용액을 얻었다. 용액을 빙수욕으로 0℃ 내지 5℃로 냉각시켜 현탁액을 얻었다. 강한 교반 하에, 물 (175.0 mL) 중 아질산나트륨 (49.25 g, 713.7 mmol)의 용액을을 90분에 걸쳐 적가하였다. 빙수욕을 제거하고, 현탁액을 11℃로 천천히 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 400 mL의 물 중 수산화나트륨 (175 g, 4.37 mol)의 용액을 적가하여 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다. 용액의 pH를 70 mL의 물 중 K2HPO4 (~58 g, 0.33 mol)로 7로 조정하였다. 현탁액을 10℃에서 여과하였다. 필터 케이크를 물 (250 mL)에서 분쇄하고 여과하였다. 필터 케이크를 빙냉수로 충분히 세척하고 진공 흡인으로 건조시켰다. 생성물을 진공 하에 60℃에서 밤새 오븐 건조시켜 3-브로모-5,6-디메틸피리딘-2-올을 담황색 결정질 고체(105.69 g, 91.6%)로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.96 (br s, 1H), 7.73 (s, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (s, 3H). MS: [M+1]: 202.0, 204.0.
단계 2. N,N-디메틸포름아미드 (316 mL) 및 톨루엔 (527 mL) 중 3-브로모-5,6-디메틸피리딘-2-올 (105.3 g, 521.2 mmol)의 용액에 90℃에서 질소 하에 인 옥시브로마이드 (자일렌 중 1.3:1, 56.5% (w/w)) (278 mL, 781.7 mmol)을 90분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물 (2 L)에 천천히 첨가하였다. 플라스크를 500 mL의 물로 세척하였다. 조합된 수성상을 MTBE (3 x 1 L)로 추출하였다. 유기상을 조합하고 0.5N NaOH (1 L), 물 (3 x 1 L) 및 염수 (1 L)로 세척한 다음, 황산나트륨으로 건조시키고 농축하였다. 고체를 MTBE (400 mL)에 부분적으로 용해시키고 헵탄 (300 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 감압 하에서 ~1.7 부피로 농축하여 침전물을 제공하였다. 혼합물을 여과하고 헵탄으로 린스하였다. 잔류물을 건조시켜 2,3-디브로모-5,6-디메틸피리딘을 베이지색 고체로서 얻었다 (114.290 g, 82.8 %). 여액을 추가로 농축하고 여과하여 고체의 제2 수확물: (8.73 g, 6.32 %)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (s, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H). MS: [M+1]: 264.0, 266.0, 268.0.
단계 3. 2000 mL 4-구 둥근바닥 플라스크에 중간체 A2 (33.0 g, 218.0 mmol), 탈기된 1,2-디메톡시에탄 (750 mL), 2,3-디브로모-5,6-디메틸피리딘 (55 g, 207.6 mmol), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9- 디메틸크산텐 (10.8 g, 18.68 mmol) 및 탄산세슘 (169.1 g, 519.0 mmol)을 채웠다. 반응 혼합물을 질소로 살포하면서 반응 혼합물을 20분 동안 초음파 처리하였다. 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (8.55 g, 9.341 mmol)을 첨가하고 현탁액을 가열 환류하였다. 교반 13시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 실리카겔의 패드 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (1.2L)로 세척하였다. 여액을 ~200 mL의 부피로 증발시키고 헵탄 (300 mL)을 첨가하였다. 용매를 증발시켜 ~2 부피의 용매에 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고 헵탄으로 세척하여 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5,6-디메틸피리딘-2-아민을 담황색 고체로서 제공하였다. (56.2 g, 80.8 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.57 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.94 (s, 3H). MS: [M+1]: 335.2, 337.2.
단계 4. 1,2-디메톡시에탄 (1000 mL) 중 말로노니트릴 (33.3 g, 503.5 mmol)의 탈기 용액에 나트륨 tert-부톡사이드 (46.3 g, 482.0 mmol)을 4부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하여 용액을 얻었다. 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5,6-디메틸피리딘-2-아민 (80 g, 238.6 mmol) 및 디클로로메탄 (14.9 g, 18.26 mmol)과의 착물인 1,1'- 비스(디페닐포스피노)페로센 팔라듐(II) 클로라이드를 한번에 첨가하고 현탁액을 강한 환류로 가열하였다. 교반 17시간 후, 반응 혼합물을 5000 mL 플라스크로 옮기고 에틸 아세테이트 (1.5 L)을 첨가하였다. 물 (500 mL) 중 N-아세틸-L-시스테인 (12.1 g, 74 mmol, 4x Pd mol 함량) 및 Na2CO3 (15.7 g, 148 mmol)의 용액을 첨가하였다. 2상 용액을 10분 동안 60℃에서 교반하고 그 다음 75분에 걸쳐 40℃로 천천히 냉각하였다. 5000 ml 플라스크 내부에서, 2개의 층을 40℃에서 분리하고 유기상을 물 (2x 250 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척하고 그 다음 실리카겔의 패드(3 인치, 185 g) 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 DCM/EtOAc로 린스하였다. 여액을 증발시키고, 회전증발 증발 동안 용매를 EtOAc로 전환하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 실온에서 여과하고 필터 케이크를 50 mL의 빙냉 에틸 아세테이트에서 분쇄하였다. 생성물을 여과하고 필터 케이크를 50 mL의 빙냉된 에틸 아세테이트로 린스하였다. 생성물을 진공 하에 60℃에서 밤새 건조시켜 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5,6-디메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴을 담황색 고체로서 얻었다. (65.38 g, 85.5 %, 8% (w/w) DME). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.38 (s, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.76 (br s, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS: [M+1]: 321.2.
단계 5. 메탄설폰산 (600 mL, 9239 mmol)에 황산 (93 mL)/물 (7.0 mL)의 용액을 5분에 걸쳐 실온에서 천천히 첨가하였다. 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5,6-디메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (80 g, 249.7 mmol)을 15분에 걸쳐 나누어서 첨가하여 반응 온도를 40℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 용액을 실온에서 90분 동안 교반하였다. DL-메티오닌 (149.028 g, 998.8 mmol)을 20분에 걸쳐 40℃ 미만에서 나누어서 첨가하였다. 용액을 40℃에서 교반하였다. 교반 37시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 그 다음 1.5시간에 걸쳐 물 (5 L) 중 K2HPO4 (100 g) 및 NaOH (540 g)의 용액에 천천히 첨가하였다. EtOAc (1 L)을 첨가하고 2상 혼합물을 5분 동안 교반하여 침전물을 얻었다. 생성물을 여과하였다. 모액을 EtOAc (3 x 1L)로 추출하였다. 유기상을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 ~ 100 mL로 농축하여 현탁액을 얻었다. 현탁액을 여과하고 EtOAc (50 mL)로 린스하였다. 고체를 조합하고 물 (800 mL)에서 2회 분쇄하였다. 잔류물을 EtOAc (500 mL)에 현탁시키고, 10분 동안 교반하고 여과하였다. 생성물을 감압 하에 오븐 건조시켜 67.8 g의 미정제 생성물을 얻었다. 화합물을 DMSO (350 mL, 5 vol)에 현탁시키고 혼합물을 65℃로 가열하여 용액을 얻었다. 용액을 28℃에서 수조로 천천히 냉각시켰다. 물 (1.05 L)을 2시간에 걸쳐 적가하여 현탁액을 얻었다. 실온에서 교반 5분 후, 생성물을 여과하였다. 고체를 100 mL의 물에서 분쇄하고 여과하였다. 필터 케이크를 2 x 100 mL의 물로 세척하였다. 생성물을 60℃에서 진공 하에 오븐 건조시켜 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5,6-디메틸-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드를 담황색 고체로서 얻었다. 61.5 g, (75%, 3% (w/w) EtOAc 및 6% (w/w) DMSO). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.71 (br. s, 2H), 6.64 (br. s., 2H), 2.27 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.66 (s, 3H). MS: [M+1]: 325.2.
Figure pct00104
Figure pct00105
화합물 184 및 화합물 190
단계 1. DCM (9 mL) 중 중간체 D (1.07 g, 2.33 mmol)의 용액에 DCM (1 M, 9.3 mL, 9.3 mmol) 중 BBr3 용액을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 실리카를 첨가하고, 혼합물을 농축한 다음, DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (744 mg, 72% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DMF (8 mL) 및 MeOH (8 mL) 및 Et3N (1.40 mL, 10.0 mmol)의 혼합물 중 [6-아미노-7-카바모일-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (744 mg, 1.67 mmol), PdCl2(PPh3)2 (117 mg, 0.167 mmol)의 용액을 일산화탄소(밸룬)의 분위기 하에 70℃로 가열하였다. 장치를 이전에 일산화탄소로 1회 플러싱하였다. 2시간 후, 추가의 PdCl2(PPh3)2 (117 mg, 0.167 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 18시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH로 린스하고 여액을 농축하였다. 잔류물을 DCM 중 0 내지 20%의 MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 암녹색 점착성 고체를 제공하였다. 고체를 EtOAc에 용해시키고, EtOAc / MeOH (5%)를 사용하여 실리카 플러그를 통과시키고, 휘발성물질의 증발 시 메틸 6-아미노-7-카바모일-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실레이트 (418 mg, 70% 수율)을 밝은 갈색 점착성 고체로서 제공하였다.
단계 3. THF (12 mL) 중 메틸 6-아미노-7-카바모일-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실레이트 (322 mg, 0.906 mmol)의 용액을 -40℃로 냉각시키고 THF (3 M, 4.53 mL, 13.1 mmol) 중 MeMgCl 용액을 적가하였다. 혼합물을 밤새 실온으로 가온되도록 하고, 포화 수성 NH4Cl (25 mL)로 켄칭하고, pH를 1N HCl로 7-8로 조정하고 혼합물을 DCM (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 화합물 190 (103 mg, 32% 수율)을 밝은 황갈색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.50 (br s, 1H), 7.42 (br s, 2H), 7.23 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.95 - 5.81 (m, 1H), 5.30 - 5.17 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.70 (s, 3H). MS: [M+1]: 338.1; 및 2-아세틸-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 화합물 184 (31 mg, 10% 수율)을 밝은 황갈색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.83 (br s, 1H), 8.38 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.68 (br s, 2H), 7.40 (s, 2H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340.1.
화합물 190의 키랄 SFC 분리 (39 mg, 0.110 mmol) (기기: Mettler Toledo Minigram SFC; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm; 조건: 40% IPA + 10mM 암모늄 포르메이트에서 60% CO2와 등용매; 유량: 10 mL/min)로 화합물 191 및 화합물 192를 제공하였다.
Figure pct00106
190의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 191. 피크 1 (체류 시간 3.83분, 100%): 회백색 고체로서 S-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.52 (br d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.32 (br s, 2H), 7.18 (br d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.08 (dt, J = 8.2, 0.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.26 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). MS: [M+1]: 356.2.
Figure pct00107
190의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 192. 피크 2 (체류 시간 4.07 min): R-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.62 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.52 (br d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.32 (br s, 2H), 7.18 (br d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.08 (dt, J = 8.3, 0.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.26 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). MS: [M+1]: 356.2.
화합물 184의 키랄 SFC 분리 (103 mg, 0.290 mmol) (기기: Mettler Toledo Minigram SFC; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm; 조건: 40% IPA + 10mM 암모늄 포르메이트에서 60% CO2와 등용매; 유량: 10 mL/min)로 화합물 185 및 화합물 186을 제공하였다.
Figure pct00108
184의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 185. 피크 1 (체류 시간 3.87분, 100%): 황색 솜털 같은 고체로서 S-2-아세틸-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (9 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.68 (br s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 (br s, 2H), 7.41 (br s, 2H), 7.09 (dt, J = 8.3, 0.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 1.77 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340.2.
Figure pct00109
184의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 186. 피크 2 (체류 시간 4.21분, 99.80%): 황색 솜털 같은 고체로서 R-2-아세틸-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (9 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.69 (br s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 (br s, 2H), 7.41 (br s, 2H), 7.09 (dt, J = 8.2, 0.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 1.77 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.69 (s, 3H). MS: [M+1]: 340.1.
Figure pct00110
화합물 198 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)사이클로프로필]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 마이크로파 바이알에 중간체 D (500 mg, 1.09 mmol), 4,4,6-트리메틸-2-[1-(트리플루오로메틸)비닐]-1,3,2-디옥사보리난 (502 mg, 2.26 mmol), 디옥산 (5 mL) 및 수성 Na2CO3 (2 M, 1.63 mL, 3.26 mmol)를 로딩하고, 질소로 플러싱하였다 (하우스 진공 후 질소, 3x). PdCl2(dppf).CH2Cl2 (444 mg, 0.544 mmol)을 첨가하고, 바이알을 다시 플러싱하고, 캡핑하고 예열된 (80℃) 열 블록으로 옮기고 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 상에 여과하고, 물 및 DCM으로 세척하고 염수로 희석하였다. 층을 분리하였다 (상 분리기). 수성층을 DCM (2x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 농축하고 DCM 중 0 내지 50% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)비닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (169 mg, 38% 수율)을 농황색 검으로서 얻었다.
단계 2. DCM (2 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)비닐]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (42.0 mg, 0.104 mmol)의 용액에 0℃에서 Et2O (0.5 M, 400 μL) 중 디아조메탄 용액을 첨가한 다음, 실온으로 가온하였다. 디아조메탄 용액 (0.5 M, 400 μL)의 다른 부분을 첨가하였다. UPLCMS로 완전한 것으로 반응을 간주한 후, 반응 혼합물을 AcOH (200 μL)로 켄칭하고, 몇 분 동안 교반하고 농축 건조시키고, 그 다음 포화 수성 NaHCO3 및 DCM에서 취하였다. 층을 분리하였다 (상 분리기). 수성층을 DCM (3 x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[5-(트리플루오로메틸)-3,4-디하이드로피라졸-5-일]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (48 mg, 정량적 수율)을 황색 검으로서 얻었다.
단계 3. 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[5-(트리플루오로메틸)-3,4-디하이드로피라졸-5-일]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (48.0 mg, 0.107 mmol)을 자일렌 (3 mL)에 용해시키고 총 75분 동안 공기에 개방된 환류 응축기로 130℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 농축한 다음, 헵탄 중 0 내지 100% EtOAc의 구배, 그 다음 EtOAc 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)사이클로프로필]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (35 mg, 81% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다.
단계 4. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)사이클로프로필]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (17 mg, 50% 수율)을 백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.62 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.49 (br s, 2H), 7.36 (br s, 1H), 7.28 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.46 - 1.29 (m, 4H).
19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -66.85. MS: [M+1]: 406.1.
화합물 198의 키랄 SFC 분리 (14.5 mg, 0.358 mmol) (기기: Mettler Toledo Minigram SFC; 칼럼: Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm; 조건: 40% ACN/EtOH 1:1에서 60% CO2와 등용매; 유량: 10 mL/min)로 화합물 199 및 화합물 200를 제공하였다.
Figure pct00111
198의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 199. 피크 1 (체류 시간 3.50분, 99.99%): 백색 솜털 같은 고체로서 S-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)사이클로프로필]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.48 (br s, 2H), 7.36 (br s, 1H), 7.27 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.43 - 1.33 (m, 4H). MS: [M+1]: 406.2.
Figure pct00112
198의 키랄 SFC 분리로부터의 화합물 200. 피크 2 ((체류 시간 3.81분, 99.95%): 백색 솜털 같은 고체로서 R-6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-[1-(트리플루오로메틸)사이클로프로필]피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.48 (br s, 2H), 7.36 (br s, 1H), 7.27 (br s, 1H), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.43 - 1.35 (m, 4H). MS: [M+1]: 406.2.
Figure pct00113
화합물 209 (5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. THF (7 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (298 mg, 0.927 mmol)의 용액에 tert-부틸 아질산염 (550 μL, 4.63 mmol)을 첨가하였다. 30분 교반 후, 혼합물을 3.5시간 동안 환류시킨 다음, 실온으로 냉각하고 농축 건조시키고 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 조합된 순수한 분획을 농축하고 진공에서 건조시켜 5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (150 mg, 53% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다.
단계 2. 황산을 사용하는 니트릴 가수분해의 경우, 화합물 164를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (150 mg, 0.490 mmol)에 대해 수행하여 5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (144 mg, 91% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-디메틸-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (76 mg, 55% 수율)을 회백색 솜털 같은 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.65 (br s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.60 (br s, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.64 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.64 (s, 3H). 1 Me 단일항은 dmso 피크 하에 매장된 가능성이 있었다. MS: [M+1]: 311.1.
Figure pct00114
화합물 212 (2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-6-(트리플루오로메틸)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. DME (3 mL) 중 NaH (108 mg, 2.83 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)의 현탁액에 DME (3 mL) 중 3-브로모-2-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘 (300 mg, 1.15 mmol)를 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 25분 동안 교반한 다음, 프로판디니트릴 (188 mg, 2.85 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 18시간 동안 환류하고, 실온으로 냉각시키고 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 2-[3-브로모-5-(트리플루오로메틸)-2-피리딜]프로판디니트릴 (100 mg, 30% 수율)을 제공하였다.
단계 2. DMF (2 mL) 중 2-[3-브로모-5-(트리플루오로메틸)-2-피리딜]프로판디니트릴 (50 mg, 172 μmol)의 용액에 Pd2dba3 (16 mg, 17 μmol), 5-(메톡시메톡시)-2-메틸-아닐린 (33.3 mg, 199 μmol), Cs2CO3 (84 mg, 259 μmol) 및 Xantphos (10.0 mg, 17.3 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 다시 채웠다 (3회). 혼합물을 130℃에서 8시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고 EtOAc(3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 5 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-1-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-6-(트리플루오로메틸)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 (30 mg, 46% 수율)을 제공하였다.
단계 3. 2-아미노-1-[5-(메톡시메톡시)-2-메틸-페닐]-6-(트리플루오로메틸)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카보니트릴 (30 mg, 135 μmol)을 H2SO4 (1 mL)에서 교반하였다. 90분 후, 반응 혼합물을 분쇄 얼음에 부었고, 빙욕에 배치하고 1:1 NH4OH/H2O로 중화하였다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고 밤새 공기 건조하였다. 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-1-(5-하이드록시-2-메틸-페닐)-6-(트리플루오로메틸)피롤로[3,2-b]피리딘-3-카복사미드 (3.2 mg, 11% 수율)을 오렌지 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.34 (s, 2H), 7.31 - 7.13 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 6.91 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 1.78 (s, 3H). MS: [M+1]: 351.3.
Figure pct00115
화합물 214 (6-아미노-3-(2-사이클로프로필에티닐)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 농축 H2SO4 (2 mL) 및 DCM (2 mL) 중 6-아미노-2-벤질옥시-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카보니트릴 (400 mg, 836 μmol, 화합물 31의 제조에 기재됨)의 용액을 10분 동안 교반하였다. NaOH 0.4 M을 첨가한 다음, 물 및 생성된 침전물을 여과로 회수하였다. 미정제 생성물을 DCM 중 0 내지 20% MeOH의 구배를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 6-아미노-3-브로모-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (300 mg, 88% 수율)을 얻었다.
단계 2. DMF (3 mL) 중 6-아미노-3-브로모-2-하이드록시-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (300 mg, 739 μmol) 및 Cs2CO3 (440 mg, 1.35 mmol)의 용액에 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸설포닐)메탄설폰아미드 (288 mg, 807 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 6-아미노-3-브로모-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-일 트리플루오로메탄설포네이트 (460 mg, 43% 수율)을 얻었다.
단계 3. DMF (1 mL) 중 [6-아미노-3-브로모-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (35 mg, 65 μmol), 에티닐사이클로프로판 (5.0 mg, 75 μmol), CuI (1.3 mg, 7 μmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (5.0 mg, 7 μmol)가 채워진 마이크로파 바이알을 질소로 플러싱한 다음, Et3N (520 μmol, 73 uL)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 분취 HPLC로 정제하여 [6-아미노-7-카바모일-3-(2-사이클로프로필에티닐)-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (10 mg, 29% 수율)을 제공하였다.
단계 4. 트리부틸(티아졸-2-일)스탄난 (38.5 μmol, 12.1 uL), [6-아미노-7-카바모일-3-(2-사이클로프로필에티닐)-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (10.0 mg, 19.1 μmol)의 혼합물을 첨가하였다. CuI (0.5 mg, 2.5 μmol), LiCl (1.7 mg, 40 μmol). DMF (3 mL) 중 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (1.5 mg, 2 μmol)을 진공에서 탈기한 다음, 질소로 다시 채웠다. 반응 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 생성된 침전물을 여과로 회수하여 미정제 6-아미노-3-(2-사이클로프로필에티닐)-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5 mg, 57% 수율)을 얻었다.
단계 5. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-3-(2-사이클로프로필에티닐)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-티아졸-2-일-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (1.1 mg, 23% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 9.16 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 7.89 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.55 - 2.47 (m, 1H), 1.88 (d, J = 21.7 Hz, 6H), 1.37 - 1.31 (m, 2H), 1.11 - 1.05 (m, 2H). MS: [M+1]: 445.3.
Figure pct00116
화합물 215 (2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. 4-프로프-2-이닐모폴린 (26 mg, 204 umol), 구리 (I) 아이오다이드 (3.5 mg, 19 umol), 및 트리에틸아민 (1.49 mmol, 207 uL)이 채워진 마이크로파 바이알을 N2로 플러싱한 다음, DMF (1 mL) 중 6-아미노-3-브로모-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸페닐)-5H-피롤로[2,3-b]피라진-2-일 트리플루오로메탄설포네이트 (100 mg, 186 umol)을 첨가한 다음, PdCl2(PPh3)2 (14 mg, 19 umol)을 첨가하였다. 바이알을 캡핑하고 120℃로 가열하였다. 1시간 후, 진공 하에 농축하고 농축한 다음, THF를 사용하여 실리카(4g) 상에 흡착시켰다. 헥산 중 0 내지 100% EtOAc, 그 다음 EtOAc 중 0 내지 20% MeOH의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-비스(3-모폴리노프로프-1-인일)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (16mg, 15% 수율)을 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (7 mg, 45% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 7.70 (s, 2H), 7.35 - 7.13 (m, 2H), 7.05 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 6.92 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 3.62 - 3.51 (m, 11H), 3.49 (s, 2H), 2.52 (q,　J　= 4.3, 3.9 Hz, 4H), 1.74 (s, 3H), 1.66 (s, 3H). MS: [M+1]: 544.5.
Figure pct00117
Figure pct00118
화합물 219 및 화합물 220
단계 1. NMP (3 mL) 중 중간체 D (150 mg, 327 μmol), Zn(CN)2 (38.3 mg, 327 μmol) 및 Zn 분말 (4 mg, 65 μmol)의 혼합물을 탈기하였다. Pd(PPh3)4 (38 mg, 33 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 24시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-시아노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (50 mg, 46% 수율)을 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-시아노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 화합물 219 (2.6 mg, 9% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.64 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.88 (s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.65 (s, 3H), MS: [M+1]: 324.2; 및 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2,7-디카복사미드 화합물 220 (10 mg, 33% 수율). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.57 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.64 (s, 3H), 7.41 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.11 - 6.97 (m, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 341.4.
Figure pct00119
화합물 221 (2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드)
단계 1. 톨루엔 (15 mL) 중 3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (2.02 g, 13.4 mmol)의 용액에 칼륨 tert-부톡사이드 (1.64 g, 14.6 mmol), 3-브로모-2-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘 (3.16 g, 12.1 mmol)을 첨가하였다. Pd2dba3 (582 mg, 635 μmol) 및 Xantphos (723 mg, 1.26 mmol). 혼합물을 진공에서 탈기하고 질소로 다시 채웠다. 생성된 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 70% EtOAc의 구배로 용출하는 플래시 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-아민 (1.55 g, 34% 수율)을 제공하였다.
단계 2. DME (20 mL) 중 프로판디니트릴 (556 mg, 8.41 mmol)의 용액에 NaH (361 mg, 8.34 mmol, 미네랄 오일 중 60% 분산물)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 3-브로모-N-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-아민 (1.55 g, 4.13 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (231 mg, 200 μmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 17시간 동안 압력 바이알에서 교반하였다. DME을 감압 하에서 제거한 다음, 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc의 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보니트릴 (44 mg, 3% 수율)을 제공하였다.
단계 3. 황산을 사용하는 니트릴 가수분해의 경우, 화합물 164를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 적절한 중간체 (44 mg, 0.121 mmol)에 대해 수행하여 2-아미노-1-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (40 mg, 87% 수율)을 제공하였다.
단계 4. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 2-아미노-1-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-5-(트리플루오로메틸)피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드 (25 mg, 59% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.66 (s, 1H), 8.47 (dt, J = 2.0, 1.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.31 (s, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.10 (dt, J = 8.3, 0.8 Hz, 1H), 7.00 - 6.80 (m, 2H), 1.82 - 1.57 (m, 6H). MS: [M+1]: 365.3.
Figure pct00120
화합물 242 (6-아미노-3-[2-(4,4-디플루오로-1-하이드록시-사이클로헥실)에티닐]-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
DMF (1 mL) 중 중간체 H (20.0 mg, 53.2 μmol), CuI (1.0 mg, 5.3 μmol), 1-에티닐-4,4-디플루오로-사이클로헥산올 (43 mg, 266 μmol)가 채워진 마이크로파 바이알에 PdCl2(PPh3)2 (4 mg, 6 μmol) 및 Et3N (425 μmol, 60 uL)을 첨가하였다. 바이알을 캡핑하고 3시간 동안 80℃로 가열하였다. 실온으로 냉각한 후, 혼합물을 여과하고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-3-[2-(4,4-디플루오로-1-하이드록시-사이클로헥실)에티닐]-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (5.1 mg, 21% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.57 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 7.28 (s, 2H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.77 (s, 1H), 2.11 - 1.74 (m, 8H), 1.73 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 456.4.
Figure pct00121
화합물 243 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-N2-(3-피리딜)피롤로[2,3-b]피라진-2,7-디카복사미드)
단계 1. DMF (5 mL), MeOH (5 mL) 및 Et3N (1.90 mL, 13.6 mmol)의 혼합물 중 중간체 D (1.00 g, 2.18 mmol), PdCl2(PPh3)2 (319 mg, 435 μmol)의 혼합물을 70℃에서 일산화탄소(밸룬)의 분위기 하에 18시간 동안 가열하였다. 장치를 이전에 일산화탄소로 1회 플러싱하였다. 휘발성물질을 진공에서 증발시키고 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 메틸 6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실레이트 (689 mg, 86% 수율)을 제공하였다.
단계 2. THF (5 mL) 중 메틸 6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실레이트 (689 mg, 1.87 mmol)에 NaOH (1 M, 5.60 mL)을 첨가하고 혼합물을 1.5시간 동안 교반하였다. pH를 농축 HCl를 사용하여 산성화하고, DMSO을 첨가하고, 휘발성물질을 감압 하에서 제거하고 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실산 (366 mg, 55% 수율)을 제공하였다.
단계 3. DCM (5 mL) 중 피리딘-3-아민 (7.95 mg, 84.4 μmol), 6-아미노-7-카바모일-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-2-카복실산 (25 mg, 70 μmol) 및 HATU (29 mg, 77 μmol)에 DIPEA (211 μmol, 37 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하고, 유기상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켜서 미정제 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-N2-(3-피리딜)피롤로[2,3-b]피라진-2,7-디카복사미드 (21 mg, 34% 수율, 49% 순도)를 얻었다.
단계 4. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-N2-(3-피리딜)피롤로[2,3-b]피라진-2,7-디카복사미드 (3.5 mg, 12% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.82 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 8.92 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.32 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.20 - 8.10 (m, 1H), 7.75 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 7.40 (dd, J = 8.3, 4.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.67 (s, 3H). MS: [M+1]: 418.3.
Figure pct00122
화합물 257 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-비닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. DMF (1 mL) 중 트리부틸(비닐)스탄난 (37.1 mg, 117 μmol), 중간체 H (40.0 mg, 106 μmol), CuI (2.56 mg, 13.4 μmol), LiCl (9.30 mg, 220 μmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 (8.1 mg, 10 μmol)의 혼합물을 진공에서 탈기한 다음, 질소로 다시 채웠다. 최종 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-3-비닐-피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (1.4 mg, 4% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.59 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.38 (d, J = 24.4 Hz, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.69 (dd, J = 17.3, 10.8 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 17.3, 1.8 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 10.7, 1.8 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.67 (s, 3H). MS: [M+1]: 324.3.
Figure pct00123
화합물 260 (6-아미노-2-(사이클로프로폭시)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. NMP (1 mL) 중 사이클로프로판올 (12 mg, 202 μmol), 중간체 D (31 mg, 67 μmol) 및 Cs2CO3 (66 mg, 202 μmol)의 용액을 140℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-(사이클로프로폭시)-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (3 mg, 12% 수율)을 제공하였다.
단계 2. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-(사이클로프로폭시)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (0.52 mg, 18% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.57 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.19 (d, J = 19.0 Hz, 3H), 7.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.25 - 4.14 (m, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.65 (s, 3H), 0.73 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 0.68 (s, 2H). MS:　[M+1]: 354.4.
Figure pct00124
화합물 263 (6-아미노-2-(디플루오로메틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. 마이크로파 플라스크에 충전하였다　PdCl2(PPh3)2 (79.6 mg, 109 μmol),　중간체 D (1.00 g, 2.18 mmol) 및　포름산나트륨 (222 mg, 3.27 mmol)을 채웠다. 플라스크를 일산화탄소로 플러싱하였다.　DMF (5 mL)을 첨가하고 일산화탄소의 느린 스트림을 현탁액에 통과시켰다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 일산화탄소의 분위기 하에 격렬하게 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고 상청액을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-포르밀-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드의 미정제 혼합물 (556 mg, 75% 수율)을 제공하였다.
단계 2. DCM (2 mL) 중 6-아미노-2-포르밀-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (180 mg, 530 μmol)의 용액에 0℃에서 Deoxo-fluor ® 용액(THF 중 50%, 1.46 M, 2.00 mL)을 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 2시간 후,　여분의 Deoxo-fluor ® 용액 (THF 중 50%, 1.17 g, 2.65 mmol)을 첨가하였다. 1시간 후, 추가의　Deoxo-fluor ® 용액 (THF 중 50%, 2.35 g, 5.30 mmol)을 첨가하고 최종 혼합물을 4시간 동안 교반한 다음, DCM으로 희석하고 포화 수성 Na2CO3을 첨가하였다. 2상 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-(디플루오로메틸)-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (10 mg, 5% 수율)을 제공하였다.
단계 3. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-2-(디플루오로메틸)-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (3.0 mg, 31% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.66 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 7.30 (d,　J　= 34.1 Hz, 2H), 7.11 - 6.98 (m, 2H), 6.99 - 6.69 (m, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.65 (s, 3H). MS: [M+1]: 348.2.
Figure pct00125
화합물 266 (6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-비스(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드)
단계 1. Et2O (20 mL) 중 마그네슘 조각 (380 mg, 15.7 mmol)의 현탁액에 요오드 (33 mg, 130 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, CD3I (975 μL, 15.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 질소 분위기 하에 교반하여 회백색 현탁액을 생성하였다.　ZnCl2 (THF 중 0.5 M, 1.4 mL)을 적가하고 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 중간체 D (1.2 g, 2.61 mmol) 및　Pd(PPh3)4 (300 mg, 259 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 72시간 동안 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응을 수성 HCl 1M으로 켄칭하고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 80% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (400 mg, 46% 수율)을 제공하였다.
단계 2. DMF (2 mL) 중 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (400 mg, 1.22 mmol)의 용액에 NBS (259 mg, 1.46 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 물로 희석하고, 20분 동안 교반하고 여과하였다. 침전물을 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (400 mg, 81% 수율)을 제공하였다.
단계 3. 에테르 (10 mL) 중 마그네슘 (177 mg, 7.3 mmol)의 현탁액에 요오드 (16 mg, 61 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, 이에 CD3I (455 μL, 7.31 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 질소 분위기 하에 교반하여 회백색 현탁액을 얻었다. ZnCl2 (THF 중 0.5 M, 14.6 mL)을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 6-아미노-3-브로모-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (496 mg, 1.22 mmol), Pd2dba3 (111 mg, 122 μmol), 및 트리-tert-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트 (71 mg, 244 μmol)을 첨가하고 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응을 수성 HCl 1M로 켄칭하고, 물로 희석하고 EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 60% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-5-(3-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-비스(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (400 mg, 95% 수율)을 제공하였다.
단계 4. BBr3을 사용하는 OMe 탈보호의 경우, 화합물 35를 위해 사용된 것과 동일한 절차로 잔류물을 제공하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 6-아미노-5-(3-하이드록시-2,6-디메틸-페닐)-2,3-비스(트리듀테리오메틸)피롤로[2,3-b]피라진-7-카복사미드 (65 mg, 17% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.22 - 6.98 (m, 4H), 6.89 (d,　J　= 8.3 Hz, 1H), 1.74 - 1.69 (m, 3H), 1.63 (s, 3H). MS: [M+1]: 332.2.
아릴아민 제조의 예
다양한 아릴아민을 사용하여 본 발명의 화합물을 제조하였다. 이러한 아릴아민 중 일부는 상업적으로 이용 가능하고 일부는 제조되었다. 표 2는 제조가 본원에 기개된 이러한 아릴아민의 일부 예를 나열한다.
Figure pct00126
아릴아민 A1의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A1에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A1로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 4-메틸-3-니트로-페놀은 O-MOM과 같은 적절한 보호 기로 O-보호될 수 있다. 니트로를 환원시켜 아릴아민 A1을 생성할 수 있다.
반응식 A1
Figure pct00127
단계 1. DCM (250 mL) 중 4-메틸-3-니트로-페놀 (25 g, 163 mmol)의 현탁액에 DIPEA (34 mL, 195 mmol) 그 다음 클로로(메톡시)메탄 (26.0 g, 323 mmol, 24.5 mL)을 적가하였다. 18시간 교반 후, 반응 혼합물을 물로 세척하였다. 층을 분리하였다. 유기층을 0.2N HCl (2x), 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 4-(메톡시메톡시)-1-메틸-2-니트로-벤젠 (31.4 g, 98% 수율)을 암적색 오일로서 얻었다.
단계 2. EtOH (200 mL) 및 물 (75 mL) 중 4-(메톡시메톡시)-1-메틸-2-니트로-벤젠 (31.4 g, 159 mmol)의 현탁액에 염화암모늄 (43.3 g, 809 mmol), 그 다음 철 분말 (44.5 g, 796 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3.5시간 동안 80℃로 가열한 다음, 온도는 4일 동안 교반하면서 90℃로 증가되었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고 EtOAc로 린스하였다. 여액을 농축하고 EtOAc 및 포화 수성 NaHCO3로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (2x)으로 역추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 26.3 g의 미정제 생성물을 어두운 갈색 오일로서 얻었고, 이를 20-헥산 중 30% EtOAc로 용출하는 실리카겔 패드 상에서 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고, 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 5-(메톡시메톡시)-2-메틸-아닐린 (25.4 g, 95% 수율)을 자주색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.94 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 6.45 - 6.30 (m, 2H), 5.12 (s, 2H), 3.47 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). MS: [M+1]: 168.3.
아릴아민 A2의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A2에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A2로부터 제조될 수 있다 (Can J Chem 2012, 90, 75-84에서 수정됨). 상업적으로 입수가능한 1,3-디메틸-2-니트로벤젠은 적절한 브롬화 조건에서 브롬화될 수 있다. 생성된 브로모는 나트륨 메톡사이드 및 구리(I) 브로마이드로 처리 시 메톡시로 전환될 수 있다. 니트로를 환원시켜 아릴아민 A2를 생성할 수 있다.
반응식 A2
Figure pct00128
단계 1. 기계적 교반기, 환류 응축기 및 부가 깔때기가 장착되고 1,3-디메틸-2-니트로-벤젠 (300 g, 1.98 mol)가 로딩된 3구 3L 둥근바닥 플라스크에, DCM (900 mL), 철 분말 (28.0 g, 501 mmol) 및 철(III) 브로마이드 (11.9 g, 40.3 mmol)을 첨가하였다. 브롬 (112 mL, 2.19 mol)을 45 내지 60분에 걸쳐 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 온도의 내부 모니터링은 30℃까지 발열을 나타내었다. 브롬의 첨가 완료 90분 후, 추가의 브롬 (5 mL, 97.6 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 45분 더 교반하여 전환을 완료하였다. 반응 혼합물을 빙수 (1.5 L) 및 Et2O (1.5 L)로 희석하였다. 층을 분리하였다. 수성층을 Et2O (0.5 L)으로 역추출하였다. 조합된 유기 층을 수성 20% Na2S2O3 (1 L), 염수 (500 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 실리카겔 패드(300 cc) 상에서 여과하고, 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 1-브로모-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (451.5 g, 99% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다.
단계 2. 기계적 교반기 및 환류 응축기가 장착된5L 4 목 둥근바닥 플라스크에 DMF (1.6 L) 중 1-브로모-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (451.5 g, 1.96 mol)을 채웠다. CuBr (28.0 g, 195 mmol), 그 다음 MeONa (1.31 L, 5.89 mol, MeOH 중 25%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 95℃로 천천히 가열하고, 경미한 환류를 얻었다. 6시간 후, 반응 혼합물을 밤새 실온으로 냉각되도록 두었다. 반응 혼합물을 Et2O 및 포화 수성 NH4Cl (각각 1.5L)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성층을 Et2O (750 mL)으로 역추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수 (750 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 실리카 패드 상에서 여과하고, Et2O로 린스하고 농축하고, 진공에서 건조시켜 1-메톡시-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (352 g, 99% 수율)을 황토색 고체로서 제공하였다.
단계 3. EtOH (1.5 L) 중 1-메톡시-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (115 g, 635 mmol)의 용액에 기계적 교반기가 장착된 3 목 3 L 플라스크에서 철 분말 (213 g, 3.81 mol)을 첨가한 다음, 물 (500 mL) 중 염화암모늄 (204 g, 3.81 mol)의 용액을 나누어서 첨가하였다. 혼합물을 8시간 동안 85℃로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고 셀라이트 상에 여과하였다. 여액의 부피를 감소시키고 (대부분의 EtOH는 증발됨), 생성된 혼합물을 Et2O (800 mL) 및 물 (150 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성층을 Et2O (500 mL)으로 역추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 3-메톡시-2,6-디메틸-아닐린 (89.1 g, 93% 수율)을 갈색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.88 (dq, J = 8.3, 0.7 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.61 (br s, 2H), 2.14 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.07 (s, 3H). MS: [M+1]: 152.3.
아릴아민 A3의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A3에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A3으로부터 제조될 수 있다. 중간체 A2의 제조에 기재된 1-메톡시-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠의 메톡시를 BBr3을 사용하여 절단할 수 있고 생성된 페놀을 O-MOM과 같은 적절한 보호 기로 O-보호할 수 있다. 니트로를 환원시켜 아릴아민 A3을 생성할 수 있다.
반응식 A3
Figure pct00129
단계 1. 드라이아이스/아세토니트릴 배쓰에서 냉각된 DCM (200 mL) 중 1-메톡시-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (20 g, 110 mmol)의 용액에, DCM (1 M, 168 mL) 중 BBr3 용액을 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 혼합물을 밤새 실온으로 천천히 가온되도록 두었다. 그 다음 반응 혼합물을 얼음, 물 (1 L) 및 KH2PO4 (75g)의 교반 혼합물에 천천히 부었다. 층을 분리하고, 수성층을 DCM (2 x 500 mL)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수 (500 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 실리카 패드 (375g) 상에서 여과하고, DCM으로 용출하고, 농축하고 진공에서 건조시켜 2,4-디메틸-3-니트로-페놀 (18.0 g, 98% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 2. DCM (200 mL) 중 2,4-디메틸-3-니트로-페놀 (18.96 g, 113 mmol)의 현탁액에 DIPEA (23.7 mL, 136 mmol), 그 다음 클로로(메톡시)메탄 (9.5 mL, 125 mmol)을 적가하였다. 3.5시간 동안 교반한 후, 추가의 클로로(메톡시)메탄 (2.0 mL, 26 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고 물 (100 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성층을 DCM (100 mL)으로 역추출하였다. 조합된 유기 추출물을 0.2N HCl (2 x 100 mL), 1M NaOH (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 실리카 (약 100 cc) 상에서 여과하고, DCM으로 용출하고, 농축하고, 진공에서 건조시켜 1-(메톡시메톡시)-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (22.1 g, 92% 수율)을 담황색 왁스성 고체로서 제공하였다.
단계 3. 질소 하에 탄소상 팔라듐 (5.06 g, 4.76 mmol, 10% w/w)를 수용하는 플라스크에 MeOH (300 mL) 그 다음 1-(메톡시메톡시)-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (20.1 g, 95.1 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 수소로 플러싱하고 수소 분위기 하에 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소로 플러싱하고 2시간 동안 교반하고, 셀라이트를 첨가하였다. 혼합물을 MeOH 및 DCM을 사용하여 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 여액을 농축하고 진공에서 건조시켜 3-(메톡시메톡시)-2,6-디메틸-아닐린 (17.1 g, 99% 수율)을 옅은 오렌지 탁한 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.48 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). MS: [M+1]: 182.2.
아릴아민 A4의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A4에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A4로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 2-클로로-3-메톡시-벤조산은 적합한 브롬화 시약으로 브롬화될 수 있고 카복실산은 커티우스(Curtius) 조건 하에 NHBoc로 전환될 수 있다. 브로모는 메틸로 전환될 수 있고 NHBoc는 산성 조건에서 절단되어 아릴아민 A4를 생성할 수 있다.
반응식 A4
Figure pct00130
단계 1. AcOH (250 mL) 및 물 (250 mL) 중 2-클로로-3-메톡시-벤조산 (50 g, 268 mmol)의 용액에 브롬 (27.5 mL, 537 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 염수를 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켜서 6-브로모-2-클로로-3-메톡시-벤조산 (71 g, 정량적 수율)을 갈색 오일로서 제공하고, 이는 주말에 걸쳐 진공 하에 정치시 고화되었다.
단계 2. 톨루엔 (500 mL) 중 Et3N (38 mL, 271 mmol) 및 tert-부탄올 (42.5 mL, 450 mmol) 중 6-브로모-2-클로로-3-메톡시-벤조산 (23.6 g, 88.9 mmol)의 용액에 [아지도(페녹시)포스포릴]옥시벤젠 (29.5 mL, 136 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 100℃로 가열하고, 실온으로 냉각한 다음, 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 유기층을 5% 시트르산, 물, 포화 수성 NaHCO3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 20% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(6-브로모-2-클로로-3-메톡시-페닐)카바메이트 (16.2 g, 54% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
단계 3. 디옥산 (500 mL) 중 tert-부틸 N-(6-브로모-2-클로로-3-메톡시-페닐)카바메이트 (25 g, 74.3 mmol)의 용액에 트리메틸보록신 (THF 중 50% w/w, 20.51 g, 81.7 mmol)을 첨가하였다. PdCl2(dppf).CH2Cl2 (5.22 g, 7.43 mmol) 및 수성 Na2CO3 (2 M, 111 mL, 223 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 100℃로 가열하고, 실온으로 냉각한 다음, 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 유기층을 분리하고 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥탄 중 0 내지 30% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-클로로-3-메톡시-6-메틸-페닐)카바메이트 (13.8 g, 68% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
단계 4. 디옥산 중 HCl (4 M, 100 mL)을 MeOH (100 mL) 중 tert-부틸 N-(2-클로로-3-메톡시-6-메틸-페닐)카바메이트 (13.8 g, 50.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 3시간 후, 휘발성물질을 진공 하에 증발 건조시켜 백색 고체를 제공하고, 이에 격렬한 교반 하에 250 mL의 EtOAc 및 250 mL의 수성 포화 NaHCO3을 첨가하였다. 유기층을 분리하였다. 수성층을 EtOAc으로 역추출하였다. 조합된 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 헥탄 중 0 내지 30% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-클로로-3-메톡시-6-메틸-아닐린 (7.9 g, 91% 수율)을 맑은 오일로서 제공하고, 이는 정치시 고화되었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.95 - 6.79 (m, 1H), 6.27 (dd, J = 8.3, 1.5 Hz, 1H), 4.06 (br s, 2H), 3.83 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.12 (d, J = 0.8 Hz, 3H). MS: [M+1]: 172.2.
아릴아민 A5의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A5에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A5로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 3-메톡시-2-메틸-아닐린을 염소화 시약으로 염소화하여 아릴아민 A5를 생성할 수 있다.
반응식 A5
Figure pct00131
단계 1. NCS (98 g, 734 mmol)을 4부분(각 첨가 사이에 15분)으로 DCM (500 mL) 중 3-메톡시-2-메틸-아닐린 (100 g, 729 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 마지막 첨가 30분 후, 100 g의 실리카겔을 첨가하고, 혼합물을 진공 하에 증발시키고 흑색 잔류물을 헥산 중 0 내지 10% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하여 6-클로로-3-메톡시-2-메틸-아닐린 (55.6 g, 44% 수율)을 오렌지 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.02 (br s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.07 (s, 3H). MS: [M+1]: 172.3.
아릴아민 A6의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A6에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 아릴아민 A6으로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 3-아미노-2,4-디클로로-페놀은 O-PMB와 같은 적합한 보호 기로 O-보호되어 아릴아민 A6.을 행성할 수 있다.
반응식 A6
Figure pct00132
DMF (150 mL) 중 3-아미노-2,4-디클로로-페놀.HCl 염 (20 g, 93.3 mmol)의 현탁액에 1-(클로로메틸)-4-메톡시-벤젠 (14.0 mL, 103 mmol), 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (1 g, 3.00 mmol) 및 Cs2CO3 (64.0 g, 196 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 밤새 교반한 다음, 이를 물로 희석하고, 20분 동안 교반하고, 여과하였다. 침전물을 물로 세척하고 진공에서 건조시켰다. 생성된 미정제 생성물을 헥산 중 0 내지 100% DCM의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2,6-디클로로-3-[(4-메톡시페닐)메톡시]아닐린 (20 g, 72% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.05 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.92 - 6.77 (m, 2H), 6.32 (s, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.79 (s, 3H). MS: [M+1]: 298.0.
아릴아민 A7의 제조.
본 발명의 화합물은 반응식 A7에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 주요 중간체 A7, A8 또는 A9로부터 제조될 수 있다 (J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 1150-1160에서 수정됨). 상업적으로 입수가능한 3-메톡시아닐린은 적합한 보호 기 예컨대 NH-PIV로 N-보호될 수 있다. 방향성 오르소 금속화 접근법을 사용하여 CH3 또는 CD3과 같은 적절한 R1을 도입할 수 있다. NH-PIV 보호 기는 산성 조건에서 절단될 수 있고 나머지 오르토-대-질소는 NBS와 같은 적합한 브롬화 시약으로 브롬화될 수 있다. 이 시점에서, 브롬은 금속 매개 조건에서 보로네이트 에스테르로 치환될 수 있고 추가로 적합한 R2 예컨대 CH3 또는 CD3에 의해 유도체화되어 주요 중간체 A7, A8 또는 A9를 생성할 수 있다. 대안적으로, 브로모아닐린은 브로모 치환 전에 NH-Boc와 같은 적절한 보호 기로 N-보호될 수 있다. 이 경우에, NH-Boc은 산성 조건 하에 절단되어 주요 중간체 A7, A8 또는 A9를 생성할 수 있다.
반응식 A7
Figure pct00133
아릴아민 A7
단계 1. 2,2-디메틸프로파노일 클로라이드 (51 mL, 416 mmol)을 DCM (500 mL) 중 3-메톡시아닐린 (50 g, 406 mmol, 45.5 mL), 피리딘 (66 mL, 816 mmol) 및 DMAP (500 mg, 4.1 mmol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 1시간 후, 수성 1 N HCl을 첨가하고 층을 분리하였다. 수성층을 CH2Cl2으로 역추출하였다. 유기층을 조합하고, 수성 1 N HCl, 염수로 세척한 다음, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 증발 건조시켜 N-(3-메톡시페닐)-2,2-디메틸-프로판아미드 (84 g, 정량적 수율)을 제공하였다.
단계 2. THF (820 mL) 중 N-(3-메톡시페닐)-2,2-디메틸-프로판아미드 (82 g, 396 mmol)의 용액에 0℃에서 nBuLi (2.5 M, 325 mL, 813 mmol)을 적가하였다. 0℃에서 2시간 후, 용액을 -78℃로 냉각시키고 CD3I (27 mL, 434 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 수성 1 N HCl에 부었고 EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켜서 N-[3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)페닐]-2,2-디메틸프로판아미드 (82 g, 92% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 3. 디옥산 (300 mL) 및 HCl 농축 (12 M, 300 mL) 중 N-[3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)페닐]-2,2-디메틸-프로판아미드 (81.5 g, 363 mmol)을 24시간 동안 가열 환류하였다. 어두운 혼합물을 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 수성 2N NaOH로 중화하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켜서 어두운 잔류물을 제공하고, 이를 헵탄 중 0 내지 50% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)아닐린 (36 g, 71% 수율)을 맑은 오일로서 제공하였다.
단계 4. DCM (500 mL) 중 3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)아닐린 (35 g, 250 mmol)의 용액에 0℃에서 NBS (45 g, 253 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하고 대략 75 mL로 농축시키고 여과하였다. 여액을 증발 건조되고 잔류물을 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6-브로모-3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)아닐린 (35 g, 64% 수율)을 제공하였다.
단계 5. tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (87.2 g, 400 mmol)을 THF (500 mL) 중 6-브로모-3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)아닐린 (35 g, 160 mmol), DMAP (3.90 g, 32 mmol) 및 DIPEA (415 mmol, 72.3 mL)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 가열 환류하였다. 휘발성물질을 진공 하에 제거하고 잔류물을 헥산 중 50% EtOAc로 용출하는 실리카겔을 통해 여과하여 tert-부틸 N-[6-브로모-3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 및 tert-부틸 N-[6-브로모-3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)페닐]-N-tert-부톡시카보닐-카바메이트 (64 g)의 혼합물을 맑은 오일로서 제공하고, 이를 메탄올 (500 mL)에 용해시켰다. K2CO3 (110 g, 796 mmol)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 48시간 동안 교반하였다. 휘발성물질을 진공 하에 제거하였다. EtOAc 및 물을 잔류물에 첨가하였다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 0 내지 40% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[6-브로모-3-메톡시-2-트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (50 g, 정량적 수율)을 맑은 오일로서 제공하였다.
단계 6. 디옥산 (700 mL) 중 tert-부틸 N-[6-브로모-3-메톡시-2-(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (33 g, 103 mmol)의 용액에 비스(피나콜레이트)디보론 (51 g, 201 mmol), KOAc (35.5 g, 362 mmol) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (7.6 g, 10.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 탈기하고, 질소로 다시 채우고 환류에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 더 작은 부피로 농축시켰다. 흑색 잔류물을 EtOAc로 희석하고 헵탄 중 2L의 50% EtOAc로 용출하는 실리카겔 패드 (250 g)를 통해 여과하였다. 여액을 증발시키고, 잔류물을 헵탄 중 0 내지 20% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[3-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (22.5 g, 59% 수율)를 제공하고, 이는 진공 하에 정치 시 고화되었다.
단계 7. DMF (500 mL) 중 PdCl2(dppf).CH2Cl2 (5.3 g, 7.24 mmol)의 용액에 CD3I (60.6 g, 418 mmol, 26 mL), tert-부틸 N-[3-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (52 g, 142 mmol) 및 수성 인산칼륨 삼염기성 (2 M, 350 mL)을 연속적으로 빠르게 첨가하였다. 질소를 용액에서 2분 동안 버블링한 다음, 혼합물을 80℃에서 30분 동안 질소 분위기 하에 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc을 첨가하였다. 유기층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 헵탄 중 0 내지 20% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[3-메톡시-2,6-비스(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (15 g, 41% 수율)를 진한 맑은 오일로서 제공하였다.
단계 8. 디옥산 중 HCl (4 M, 100 mL)을 MeOH (100 mL) 중 tert-부틸 N-[3-메톡시-2,6-비스(트리듀테리오메틸)페닐]카바메이트 (22.5 g, 87.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 3시간 후 휘발성물질을 진공 하에 제거하여 백색 고체를 제공하였다. EtOAc 및 물을 첨가한 다음, 염기성 pH까지 포화 NaHCO3 수용액을 첨가하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 증발 건조된다. 잔류물을 헵탄 중 0 내지 40% EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 3-메톡시-2,6-비스(트리듀테리오메틸)아닐린 (7.5 g, 55% 수율)을 맑은 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.96 (dd, J = 8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.38 (dd, J = 8.3, 2.5 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 3.64 (s, 2H). MS: [M+1]: 158.3.
아릴아민 A8( Boc 없음)의 제조에 사용되는 대안적인 경로
단계 1. 밀봉 튜브에서, 6-브로모-3-메톡시-2-메틸아닐린 (3.4 g, 15.7 mmol), 비스(피나콜레이트)디보론 (5.58 g, 21.98 mmol) 및 Cs2CO3 (15.4 g, 47.1 mmol)을 무수 1,4-디옥산 (68 mL)에서 취하고 질소 가스를 반응 혼합물로 15분 동안 퍼지하였다. 이어서, PdCl2(dppf) (1.92 g, 2.36 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 2시간 동안 100℃로 가열하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고 EtOAc (3 x 100 mL)을 사용하여 추출하였다. 조합된 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이를 헥산 중 10 내지 12% EtOAc)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 3-메톡시-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (2.50 g, 60% 수율)을 제공하였다.
단계 2. 밀봉 튜브에서, 3-메톡시-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (2.5 g, 9.39 mmol), 요오도메탄-d 3 (4.08 g, 28.19 mmol) 및 인산칼륨 삼염기성 (9.95 g, 46.9 mmol)을 무수 DMF (50 mL)에서 취하고 질소 가스를 15분 동안 반응 혼합물에 퍼지하였다. 이어서, PdCl2(dppf) (0.766 g, 0.939 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 빙수를 사용하여 켄칭하고 EtOAc (3 x 50 mL)를 사용하여 추출하였다. 조합된 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이를 헥산 중 6 내지 8 % EtOAc의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 순수한 3-메톡시-2-메틸-6-(메틸-d 3) 아닐린을 무색 액체 (0.75 g, 51% 수율)로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 6.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.55 (s, 3H), 1.94 (s, 3H). MS: [M+1]: 155.3.
아릴아민 A10의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A8에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 주요 중간체 A10으로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 3-메톡시-2-니트로벤조산은 브롬화될 수 있다. 그 다음 산은 에스테르화될 수 있고, 브로모는 메틸로 전환되고 니트로는 아미노로 환원될 수 있다. 생성된 아미노는 샌드마이어(Sandmeyer) 조건에서 브로모로 전환될 수 있으며 그 다음 에스테르는 비누화될 수 있다. 그 다음, 생성된 산은 커티우스 조건 하에 NHBoc로 전환될 수 있다. 이 경우, NH-Boc는 산성 조건에서 절단되어 주요 중간체 A10을 생성할 수 있다.
반응식 A8
Figure pct00134
단계 1. 3-메톡시-2-니트로-벤조산 (10.04 g, 50.93 mmol) 및 Ag2SO4 (8.10 g, 26.0 mmol)에 어두운 곳에서 농축 황산 (200 mL) 및 분자 브롬 (9.4 g, 58.6 mmol, 3.0 mL)을 적가하였다. 혼합물을 어두운 곳에서 3.5시간 동안 교반한 다음, 분쇄 얼음의 첨가로 켄칭하고, 빙욕에서 냉각하고 교반하였다. 고체를 여과로 수집하고, H2O로 세척하고 공기 건조시켰다. 생성된 고체를 아세톤 (300 mL)에서 취하고, 여과하고, 잔류물 (은 염)을 아세톤으로 세척하였다. 여액을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 6-브로모-3-메톡시-2-니트로-벤조산 (14.64 g, 100% 수율)을 자주색 고체로서 얻었다.
단계 2. DMF (140 mL) 중 6-브로모-3-메톡시-2-니트로-벤조산 (14.64 g, 53.0 mmol)의 용액에 무수 탄산칼륨 (14.66 g, 106.1 mmol), 그 다음 요오드화메틸 (11.4 g, 80.3 mmol, 5.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, H2O(420 mL)을 적가하였다. 고체를 여과로 수집하고 H2O로 세척하고, 공기 건조시킨 다음, 진공에서 건조시켜 메틸 6-브로모-3-메톡시-2-니트로-벤조에이트 (12.89 g, 84% 수율)을 밝은 베이지색 고체로서 얻었다.
단계 3. 압력 용기에서, 디옥산 (100 mL) 및 수성 Na2CO3 용액 (2 M, 31 mL, 62.3 mmol) 중 메틸 6-브로모-3-메톡시-2-니트로-벤조에이트 (6.0 g, 20.7 mmol)의 용액을 N2로 버블링한 다음, Pd(dppf)Cl2 (1.64 g, 2.01 mmol) 및 트리메틸보록신 (6.74 g, 26.8 mmol, 7.5 mL)을 첨가하였다. 용액을 N2로 버블링하였다. 용기를 캡핑하고, 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O에 부었고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 실리카 플러그 상에서 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 100%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 메틸 3-메톡시-6-메틸-2-니트로-벤조에이트 (3.06 g, 66% 수율)을 밝은 베이지색 왁스성 고체로서 얻었다.
단계 4. MeOH (225 mL) 중 메틸 3-메톡시-6-메틸-2-니트로-벤조에이트 (3.06 g, 13.6 mmol)의 용액에 일부의 MeOH에서 슬러리화된 탄소상 팔라듐 (10% w/w, 1.42 g, 1.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 H2로 플러싱하고 수소 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 농축한 다음, 진공에서 건조시켜 메틸 2-아미노-3-메톡시-6-메틸-벤조에이트 (2.56 g, 97% 수율)을 밝은 호박색 오일로서 얻었다.
단계 5. DMF (12 mL) 및 MeCN (18 mL) 중 메틸 2-아미노-3-메톡시-6-메틸-벤조에이트 (2.13 g, 10.9 mmol)의 용액에 tert-부틸 아질산염 (2.0 mL, 17 mmol), 그 다음 구리 (II) 브로마이드 (2.86 g, 12.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 9분 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, H2O로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 포화 수성 NH4Cl, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 70%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피 (건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 메틸 2-브로모-3-메톡시-6-메틸-벤조에이트 (1.52 g, 54% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.15 - 7.05 (m, 1H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 2.26 (d, J = 0.7 Hz, 3H).
단계 6. MeOH (15 mL) 및 THF (15 mL) 중 메틸 2-브로모-3-메톡시-6-메틸-벤조에이트 (1.52 g, 5.87 mmol)의 용액에 NaOH 수성 (4 M, 15 mL, 60.0 mmol) 및 과산화수소 용액 30% (1.5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 교반한 다음, 90℃에서 4일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 3N HCl (20 mL)로 희석하고 CHCl3/iPrOH (4:1, 4x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 농축한 다음, 진공에서 건조하고 미정제 생성물을 1% AcOH 개질제를 갖는 CH2Cl2 중 MeOH (0 내지 10%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 2-브로모-3-메톡시-6-메틸-벤조산 (896 mg, 62% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
단계 7. 톨루엔 (8 mL) 중 2-브로모-3-메톡시-6-메틸-벤조산 (1.15 g, 4.68 mmol), 트리에틸아민 (1.42 g, 14.1 mmol, 2.0 mL) , 및 tert-부탄올 (1.73 g, 23.4 mmol, 2.25 mL)의 용액에 DPPA (1.93 g, 7.01 mmol, 1.52 mL)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 가열 환류하고 실온으로 냉각시켰다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 수성 시트르산 15%로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 수성 1N NaOH, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 미정제 생성물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 30%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 tert-부틸 N-(2-브로모-3-메톡시-6-메틸-페닐)카바메이트 (1.34 g, 91% 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
단계 8. MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 N-(2-브로모-3-메톡시-6-메틸-페닐)카바메이트 (1.34 g, 4.24 mmol)의 용액에 디옥산 중 HCl (4 M, 10.5 mL, 42.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 75분 동안 교반하였다. 용액을 진공에서 증발 건조한 다음, 포화 수성 NaHCO3에 현탁시키고 DCM (3 x, 상 분리기)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 농축하고 미정제 생성물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 50%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 2-브로모-3-메톡시-6-메틸-아닐린 (807 mg, 88% 수율)을 회백색 왁스성 고체로서 얻었다. MS: [M+1]: 218.0.
아릴아민 A11의 제조
본 발명의 화합물은 반응식 A9에 도시되고 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있는 주요 중간체 A11로부터 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 6-브로모-3-메톡시-2-메틸벤조산은 커티우스 재배열 조건 하에 N-Boc으로 전환될 수 있다. NH-Boc은 can be 산성 조건 하에 절단되어 주요 중간체 A11을 생성할 수 있다.
반응식 A9
Figure pct00135
단계 1. 톨루엔 (7 mL) 중 6-브로모-3-메톡시-2-메틸-벤조산 (1 g, 4.08 mmol), 트리에틸아민 (1.23 g, 12.2 mmol, 1.70 mL), 및 tert-부탄올 (1.55 g, 20.9 mmol)의 용액에 [아지도(페녹시)포스포릴]옥시벤젠 (1.72 g, 6.25 mmol, 1.35 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 가열 환류하고 실온으로 냉각시켰다. 휘발성물질을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 수성 시트르산 15%로 희석하고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 30%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 tert-부틸 N-(6-브로모-3-메톡시-2-메틸-페닐)카바메이트 (1.41 g, 정량적 수율)을 무색 오일로서 얻었고, 이는 순수하지 않지만 다음 단계에서 있는 그대로 사용된다.
단계 2. MeOH (22 mL) 중 tert-부틸 N-(6-브로모-3-메톡시-2-메틸-페닐)카바메이트 (1.41 g, 4.46 mmol)의 용액에 디옥산 중 HCl (4 M, 22 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하였다. 용액을 진공에서 증발 건조시키고, 그 다음 포화 수성 NaHCO3에 현탁시키고 DCM (3 x)로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 Hep 중 EtOAc (0 내지 50%)의 구배로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피(건조 로드)로 정제하였다. 적절한 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜서 6-브로모-3-메톡시-2-메틸-아닐린 (586 mg, 61% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.23 (dd, J = 8.8, 0.6 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.06 (br s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.09 (t, J = 0.5 Hz, 3H). MS: [M+1]: 218.0.
선택된 화합물의 키랄 분리
회전장애이성질체의 라세미 혼합물은 Mettler Toledo Minigram SFC(MTM), Waters Prep 15 SFC-MS(WP15) 또는 Waters Prep 100 SFC-MS(WP100)에서 키랄 SFC 방법을 사용하여 분리되었다(표 3). 피크의 만족스러운 분해능을 달성하기 위해 적절한 칼럼이 선택되었다. 각 피크에 대한 적절한 분획을 조합하고, 농축하고, 일반적으로 물과 적합한 수혼화성 유기 용매 예컨대 EtOH, IPA, CH3CN 또는 이들의 혼합물의 혼합물에서 취하고 동결 건조시켰다. 분리된 생성물을 키랄 SFC로 재분석하여 키랄 순도를 평가하였다.
C1A는 Phenomenex Lux Cellulose-2, 10 x 250 mm, 5 μm이고; C1B는 Phenomenex Lux Cellulose-2, 30 x 250 mm, 5 μm이고; C2는 Chiral Technologies IA, 10 x 250mm, 5μm이다. C3은 Chiral Technologies IC, 10 x 250mm, 5μm이다. C4는 Chiral Technologies ID, 10 x 250mm, 5μm이다. C5는 Chiral Technologies IG, 10 x 250mm, 5μm이다. C6은 Chiral Technologies AS, 10 x 250mm, 5μm이다. C7은 Phenomenex Lux Cellulose-4, 10 x 250mm, 5μm이다.
분리된 회전장애이성질체의 구조적 할당은 생물학적 활성에 의해 확인되었으며, 생물학적 활성 거울상이성질체는 (S) 배열을 갖도록 할당되었으며, 이는 주요 화합물의 X-선 결정학에 의해 확인되었다.
Figure pct00136
Figure pct00137
실시예 2. 효소적 검정
Myt1 키나제 활성의 검출은 상업적으로 입수가능한 ADP-Glo 검정(Promega의 ADP-GloTM 키나제 검정, 10 000 검정, #V9102)을 사용하여 ATP의 가수분해를 측정하는 재조합 인간 Myt1 키나제 검정을 활용하였다. 간단히 말해서, 5 μL 재조합 인간 Myt1(Thermo Fisher #A33387의 곤충 세포에서 발현된 전장 PKMYT1 재조합 인간 단백질, ~80% 순도)을 반응 완충액 (70 mM HEPES, 3 mM MgCl2, 3 mM MnCl2, 50 μg/ml PEG 20000, 3μM Na-오르토바나데이트, 1.2 mM DTT)에서 제조하고, 384개의 웰 백색 폴리스티렌, 평평한 바닥 웰, 미처리, 마이크로플레이트(Corning #3572)에 첨가하였다. 그 후, 5 μL의 화합물(반응 완충액에서 0.5% DMSO로 희석)을 마이크로플레이트에 첨가하고 플레이트를 짧게 회전시키고 22℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 초순수 아데노신 트리포스페이트(ATP) 용액(Promega의 ADP-Glo 키트)을 반응 완충액에 희석하고 5μL를 마이크로플레이트에 첨가하고 간단히 회전시키고 30℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 최종 Myt1 효소 농도는 18 nM였고 최종 ATP 농도는 10 μM였다. 60분 인큐베이션 후, 15 μL의 ADP-Glo 시약을 첨가하고 플레이트를 짧게 회전시키고, 밀봉하고 암실에서 22℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 30μL의 키나제 검출 시약을 웰당 첨가하고 플레이트를 짧게 회전시키고, 밀봉하고, 암실에서 22℃에서 45 내지 60분 동안 인큐베이션하였다. Envision(250 ms 통합)을 사용하여 발광을 판독하였다. 테스트된 각각의 억제제 화합물에 대해 IC50 및 최대 억제율(%)을 계산하였다.
예시적으로 제조된 화합물 및 이들의 활성을 하기 표 4에 나타내었다.
Figure pct00138
Figure pct00139
Figure pct00140
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
Figure pct00145
표 4에서, 방법 칼럼은 화합물의 제조에 사용된 전술된 제조 방법을 나타낸다.
실시예 3. 유전적 검증
PKMYT1에 대한 2개의 sgRNA 및 LacZ(대조군)에 대한 1개의 sgRNA를 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 모 (WT) 및 CCNE1-과발현 클론으로 형질도입하였다. 감염된 세포를 저밀도로 플레이팅하여 <50개 세포의 콜로니를 형성하는 능력을 측정하였다. 성장 10일 후, 콜로니를 염색하고 이미지화하고 정량화하였다. 클론원성 생존 검정을 사용하여, PKMYT1 sgRNA로 형질도입된 모 세포와 비교하여 CCNE1-과발현 세포에서 엄청난 세포 적합성 결함을 관찰하였다(도 3a 및 3b). 이 실험은 FT282-hTERT TP53-/- 모 (WT) 및 CCNE1-과발현 클론을 사용하여 반복되었고 유사한 결과가 관찰되었다 (도 4a 및 4b).
PKMYT1의 키나제 활성이 CCNE1-과발현 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 세포의 생존력을 유지하는 데 책임이 있는지 확인하기 위해, PKMYT1 열린 해독틀(ORF)을 유도성 포유동물 발현 벡터에 클로닝하였다. 그 다음 PKMYT1 ORF 서열의 sgRNA 내성 침묵 돌연변이가 PCR 돌연변이유발에 의해 생성되었다. 단일 점 돌연변이가 생성되어 잔기 238에서 아스파라긴(N)에서 알라닌(A) 아미노산으로 변경되었다. 키나제 도메인의 N238A 아미노산 변화는 촉매적으로 불활성인 PKMYT1 돌연변이를 초래하였다. 야생형 PKMYT1 ORF 또는 키나제-사멸 N238A 돌연변이체를 발현하는 RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 모 및 CCNE1-과발현 클론에서 안정한 세포주가 생성되었다(도 5a). 이러한 안정한 세포주는 LacZ 비표적화 sgRNA 또는 PKMYT1 sgRNA #4로 형질도입되었다. 그 다음, 세포를 저밀도로 플레이팅하여 >50개 세포의 콜로니를 형성하는 능력을 측정하였다. 성장 10일 후, 콜로니를 염색하고 이미지화하고 정량화하였다. 촉매적-사멸 버전이 아닌 sgRNA 내성 PKMYT1 ORF의 발현은 두 CCNE1-과발현 클론으로의 sgRNA #4의 형질도입에 의해 유도된 적합성 결함을 구제하였다(도 5b 및 5c). 이 결과는 PKMYT1의 키나제 활성을 표적으로 하는 것이 CCNE1-과발현 세포를 선택적으로 사멸시킨다는 것을 입증하였다.
실시예 4. 약리학적 검증
RPE1-hTERT Cas9 TP53-/- 모 (WT) 및 CCNE1-과발현 클론을 용량 적정에서 화합물 133으로 처리하고 세포 생존력을 측정하였다. CCNE1-과발현 세포는 상응하는 WT 세포보다 화합물 133에 더 민감한 것으로 밝혀졌다(도 3c). 유사한 효과가 FT282-hTERT TP53R175H WT 및 CCNE1-과발현 클론에서 관찰되었다(도 4c). RPE1-hTERT 및 FT282-hTERT 세포주를 사용한 용량-반응 증식 검정의 경우, 세포를 96-웰 플레이트에 씨딩하고 연속 희석된 Myt1 억제제를 투여하였다. 세포는 IncuCyte S3 현미경을 사용하여 하루에 한 번 이미지화되었고 퍼센트 웰 컨플루언시(percent well confluency)는 시간 경과에 따라 계산되었다. 일단 세포가 4배의 집단에 도달하면, 실험을 종료하고 최종 시점에 대한 IC50 곡선을 플롯팅하였다. 백분율 컨플루언시는 처리되지 않은 웰의 세포 컨플루언시에 대해 계산되었다.
정상(n=8) 또는 상승된 수준의 CCNE1(n=8)을 갖는 16개 암 세포주의 패널을 세포 증식 검정에서 화합물 28에 대한 감수성에 대해 평가하였다(도 6). 이러한 암 세포주 증식 검정에서 용량-반응 곡선은 다음과 같이 생성되었다. 세포를 96-웰 플레이트에 씨딩하고 연속 희석된 화합물 28을 투여하였다. 7일 후, CTG(Cell Titer Glo)를 사용하여 이들 세포의 증식 상태를 평가하고 IC50 값을 플롯팅하였다.
야생형 FBXW7 (n=5) 또는 FBXW7-돌연변이 (n=3)가 있는 8개 암 세포주의 패널에서 유사한 실험을 수행했으며, 여기서 이들 세포는 세포 증식 검정에서 화합물 95에 대한 감수성에 대해 평가되었다 (도 7) 이러한 암 세포주 증식 검정에서 용량-반응 곡선은 다음과 같이 생성되었다. 세포를 96-웰 플레이트에 씨딩하고 연속 희석된 Myt1 억제제를 투여하였다. 세포는 IncuCyte S3 현미경을 사용하여 하루에 한 번 이미지화되었고 퍼센트 웰 컨플루언시(percent well confluency)는 시간 경과에 따라 계산되었다. 일단 세포가 4배의 집단에 도달하면, 실험을 종료하고 최종 시점에 대한 IC50 곡선을 플롯팅하였다. 백분율 컨플루언시는 처리되지 않은 웰의 세포 컨플루언시에 대해 계산되었다.
다른 구현예
기재된 본 발명의 다양한 수정 및 변형은 본 발명의 범위 및 사상을 벗어나지 않고 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명이 특정 구현예와 관련하여 기재되었지만, 청구된 발명이 그러한 특정 구현예에 과도하게 제한되어서는 안 된다는 것을 이해해야 한다. 실제로, 당업자에게 명백한 본 발명을 수행하기 위한 기술된 방식의 다양한 수정은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
다른 구현예는 청구범위에 있다.

Claims (53)

  1. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00146

    식 중
    각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 CR2이고;
    R1 및 각각의 R2는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, 시아노, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이거나; 또는 R1은 R1에 인접한 하나의 R2와 결합하여, 선택적으로 치환된 C3-6 알킬렌을 형성하고;
    각각의 R3 및 R4는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬 또는 할로겐이고;
    R5는 H 또는 -N(R7)2이고;
    R6은 -C(O)NH(R8), -C(O)R7A, 또는 -SO2R7A이고;
    각각의 R7은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 또는 -SO2R7A이거나; 또는 2개의 R7 기는 둘 모두가 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
    각각의 R7A는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴이고;
    각각의 R7B는 독립적으로 하이드록실, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, -N(R7)2, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 선택적으로 치환된 알콕시이고;
    각각의 R8은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알콕시알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴이거나; 또는 2개의 R8은, 이들이 부착된 원자와 함께, 조합하여 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴을 형성하고;
    Q는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐렌, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴렌, 또는 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌이다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (IA)의 회전장애이성질체가 풍부한, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00147
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, X는 CR2인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, 화학식 (II)의 것인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00148
  5. 제4항에 있어서, 화학식 (IIA)의 회전장애이성질체가 풍부한, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00149
  6. 제1항에 있어서, 화학식 (III)의 것인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00150

    R2A는 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-6 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알케닐, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 C1-6 알킬, 선택적으로 치환된 C6-10 아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴 C1-6 알킬, 할로겐, -N(R7)2, -OR7, -C(O)N(R8)2, -SO2N(R8)2, -SO2R7A, 또는 -Q-R7B이다.
  7. 제6항에 있어서, 화학식 (IIIA)의 회전장애이성질체가 풍부한, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00151
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, R2A는 수소, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬, 또는 할로겐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 선택적으로 치환된 C1-6 알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 할로겐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 할로겐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제10항 또는 제12항에 있어서, 할로겐은 염소인, 화합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 수소인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  16. 제15항에 있어서, R2는 선택적으로 치환된 메틸 또는 선택적으로 치환된 이소프로필인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 할로겐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 수소인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 할로겐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  20. 제19항에 있어서, R1은 염소 또는 브롬인 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  21. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C1-6 알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  22. 제21항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 메틸, 선택적으로 치환된 에틸, 선택적으로 치환된 이소프로필 또는 선택적으로 치환된 부틸인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  23. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  24. 제23항에 있어서, R1은 1,3-티아졸릴, 1,2-티아졸릴, 1,3-옥사졸릴, 벤조-1,3-티아졸릴, 벤조-1,3-옥사졸릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 피리딜, 이미다졸릴, 피리미딜, 피라지닐, 피리다지닐, 또는 피라졸릴이되, R1은 선택적으로 치환된 C1-9 헤테로아릴에 대해 정의된 치환기로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  25. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  26. 제25항에 있어서, R1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이고, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬에 대해 정의된 치환기로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  27. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  28. 제27항에 있어서, R1은 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 피페리디닐, 모폴리닐, 피페라지닐, 티오모폴리닐, 옥사-아자-스피로[3,3]헵탄, 또는 옥사-아자-바이사이클로[3.2.1]옥탄이고, R1은 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴에 대해 정의된 바와 같은 치환기로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  29. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  30. 제29항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 사이클로헥세닐 또는 선택적으로 치환된 사이클로펜테닐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  31. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 C6-10 아릴인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  32. 제31항에 있어서, R1은 선택적으로 치환된 페닐인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  33. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -Q-R7B인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  34. 제33항에 있어서, Q는 선택적으로 치환된 C2-6 알키닐렌인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  35. 제33항에 있어서, Q는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  36. 제33항에 있어서, Q는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴렌인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, R7B는 선택적으로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  38. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, R7B는 선택적으로 치환된 C6-10 아릴인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 불소, 염소, 브롬, 아미노, 하이드록실, 시아노, 옥소, -C(O)NH2, -C(O)NH(Me), -C(O)N(Me)2, -(CH2)n-C(O)OH, 및 -(CH2)n-C(O)Ot-Bu로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 군으로 선택적으로 치환되되, 여기서 n은 0 또는 1인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  40. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -N(R7)2인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  41. 제40항에 있어서, R1은 디에틸아미노인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 수소인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  43. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 -N(R7)2인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  44. 제43항에 있어서, R5는 -NH2인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 -C(O)NH(R8)인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  46. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 -C(O)NH2인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  47. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 -C(O)NH(Me)인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  48. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 -SO2R7A인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  49. 제48항에 있어서, R6은 -SO2Me인, 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  50. 화합물 1-328 및 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물.
  51. 제50항에 있어서, 화합물 1-288 및 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  53. 제52항에 있어서, 조성물은 중수소가 동위원소적으로 풍부한 것인, 약제학적 조성물.
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3173955A1 (en) * 2020-04-01 2021-10-07 Repare Therapeutics Inc. Methods of using myt1 inhibitors
IL301768A (en) * 2020-09-30 2023-05-01 Fl2022 001 Inc HSD17B13 inhibitors and uses thereof
US20240207300A1 (en) * 2021-04-07 2024-06-27 Repare Therapeutics Inc. Combination therapies including myt1 inhibitors
WO2023155892A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Insilico Medicine Ip Limited Membrane-associated tyrosine-and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase (pkmyt1) inhibitors and uses thereof
WO2023155870A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Insilico Medicine Ip Limited Membrane-associated tyrosine-and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase (pkmyt1) inhibitors and uses thereof
WO2023174329A1 (en) * 2022-03-15 2023-09-21 Insilico Medicine Ip Limited Heteroaromatic compounds as pkmyt1 inhibitors and use thereof
WO2023198199A1 (zh) * 2022-04-15 2023-10-19 先声再明医药有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂
WO2023220831A1 (en) * 2022-05-18 2023-11-23 Repare Therapeutics Inc. Heteroarenes, pharmaceutical compositions containing the same, and methods of using the same
WO2023249563A1 (en) * 2022-06-23 2023-12-28 Engine Biosciences Pte. Ltd. Compounds and method for pkmyt1 inhibition
WO2024012409A1 (zh) * 2022-07-12 2024-01-18 微境生物医药科技(上海)有限公司 作为myt1抑制剂的化合物
WO2024041440A1 (en) * 2022-08-24 2024-02-29 Danatlas Pharmaceuticals Co., Ltd. Tricyclic heterocyclic derivatives, compositions and uses thereof
WO2024048687A1 (ja) * 2022-08-31 2024-03-07 中外製薬株式会社 Ｍｙｔ１阻害剤と化学療法剤を併用する、ｒｂ１の機能低下が生じている患者のがんの治療剤及び治療方法
WO2024061343A1 (zh) * 2022-09-23 2024-03-28 先声再明医药有限公司 膜缔合酪氨酸和苏氨酸激酶抑制剂及其应用
WO2024104282A1 (zh) * 2022-11-14 2024-05-23 捷思英达控股有限公司 一种1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2024109942A1 (zh) * 2022-11-25 2024-05-30 上海齐鲁制药研究中心有限公司 Pkmyt1抑制剂、制备方法、药物组合物及其用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002531504A (ja) * 1998-12-07 2002-09-24 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｍｙｔ１キナーゼ阻害剤
CO5261594A1 (es) * 2000-03-02 2003-03-31 Smithkline Beecham Corp Inhibidores de myt1 cinasa
WO2015073528A1 (en) * 2013-11-12 2015-05-21 Proteostasis Therapeutics, Inc. Proteasome activity enhancing compounds
AU2015318233B2 (en) * 2014-09-15 2020-03-12 Plexxikon Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof

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