KR20230006477A - Hsp70을 표적화하는 모노클로날 항체 및 이의 치료학적 용도 - Google Patents

Hsp70을 표적화하는 모노클로날 항체 및 이의 치료학적 용도 Download PDF

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KR20230006477A
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로버트 제트. 올로우스키
리차드 제이. 존스
로라 씨. 보버
제노 규리스
존 밀러
제임스 버나드 맥클로리
캔 다라흐 맥
주니어 윌리엄 엠 윈스턴
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더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
아실리아 테라퓨틱스
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Abstract

HSP70을 표적화하는 제제, 예를 들면, 항체 및 키메라 항원 수용체가 본원에 제공된다. 이를 필요로 하는 환자에게 유효량의 HSP70-표적화제를 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법이 제공된다. HSP70-특이성 항체는 항원 제시 세포에 의한 HSP70의 흡수를 향상시킬 수 있다.

Description

HSP70을 표적화하는 모노클로날 항체 및 이의 치료학적 용도
관련된 출원에 대한 참고
본 출원은 2020년 3월 27일자로 출원된 미국 가특허원 제63/001,011호의 우선권 이익을 주장하며, 이의 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록에 대한 참고
본 출원은 EFS-Web을 통해 ASCII 양식으로 제출되고 이의 전문이 본원에 참고로 포함된, 서열 목록을 함유한다. 2021년 3월 25일자로 생성된 상기 ASCII 카피는 UTFCP1469WO_ST25.txt로 명명되고 크기는 220 킬로바이트이다.
배경
1. 분야
본 발명은 일반적으로 의약, 면역학, 및 암 생물학의 분야에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 HSP70을 표적화하는 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
2. 관련된 기술의 설명
암 세포에 대한 면역 반응의 발달은 일련의 강화 현상(reinforcing event)에 의존하는 것으로 여겨지며, 이는 암 면역력 주기(Cancer Immunity Cycle)로서 지칭되어 왔으며(Chen & Mellman, 2013), 이는 암 세포 사멸 동안 암 세포 항원의 방출로 시작한다. 수지상 세포(dendritic cell; DC)는 이러한 종양 항원을 포획(capture)하고, 프로세싱(processing)한 다음 이를 조직접합성 복합체(histocompatibility complex; MHC) 제I 및 제II 부류 분자를 통한 제시(presentation)를 통해 T 세포에 대해 나타내고, 이는 이후 효과기(effector) CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응의 프라이밍(priming) 및 활성화를 야기하는 이의 능력으로 인해 이러한 반응의 주요 조기 구성성분인 것으로 여겨진다. DC의 주요 역할은 부분적으로 종양에 의해 영향을 받아 DC 활성화를 억제하는 많은 메카니즘, 예를 들면, 다른 것들 중에서 저산소증(hypoxia), 아데노신, 락트산, 저 pH, 및 인터류킨(interleukin; IL)-10 및 PD-L1의 발현에 의해 입증된다(Veglia & Gabrilovich, 2017).
일반적으로, 열 쇼크 단백질(heat shock protein; HSP) 및 특히 HSP70은 선천성 및 적응성 면역 반응(adaptive immune response)을 연결시키는 이의 능력으로 인하여 이러한 공정에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다(Shevtsov & Multhoff, 2016). 예를 들면, 세포외 HSP70은 종양 항원에 결합하여 샤프론(chaperone) 역할을 한 다음 명백한 세포 표면 수용체, 예를 들면, 다른 것들 중에서, CD91, 산화된 저-밀도 지단백질 수용체 1(OLR1), 및 내피 세포 (SREC)-1에 의해 발현된 스캐빈저 수용체를 통해 항원 제시 세포, 예를 들면, DC를 표적화하며 (McNulty et al., 2013), 이에 의해 결합된 항원을 프로세싱을 위해 DC로 전달한다. 또한, 종양 세포로부터 분비된 세포외 HSP70은 대식구로부터 염증성 사이토킨, 예를 들면, 인터류킨(IL)-6 및 종양 괴사 인자(TNF)-α를 유도하며(Vega et al., 2008), 이에 의해 가교-제시(cross-presentation) 및 T-세포 활성화 각각을 가능하도록 한다. 따라서, HSP70은 다양한 스트레스요인(stressor), 예를 들면, 방사선 및 다양한 화학치료제에 접하여 암 세포 생존을 촉진시키는 동결보호성의, 항-세포자멸성 인자(anti-apoptotic factor)로서 이의 중요한 세포내 역할로 인하여 암 치료요법에 대한 매력적인 표적인 것으로 고려된다(Boudesco et al., 2018). 추가로, HSP70은 DC 뿐만 아니라 가능하게는 또한 대식구, NK 세포, 및 T 세포를 통해 면역 반응을 자극시키는 이의 능력으로 인하여 암 치료요법에 대한 매력적인 표적인 것으로 고려된다.(Shvetsov & Multhoff, 2016; Zininga et al., 2018).
HSP70-종양 항원 복합체의 DC 흡수(uptake)를 향상시키는 접근법은 항-종양 면역성(immunity) 및 파괴 내성(breaking tolerance)을 향상시키는 가능성을 유지한다. 세포내 HSP70을 직접적으로 표적화하는 수개의 약리학적 억제제, 또는 방사선 또는 화학치료요법에 대한 감작화제로서 작용할 수 있는 일부 이의 공-차페론(co-chaperone)이 개발되어 왔다(Boudesco et al., 2018). 또한, 막-결합된 HSP70은 일반적으로 정상 세포에서 부재하거나 낮은 수준으로만 발견되지만, 이는 흔히 종양 세포의 표면에서 향상된 발현을 나타내며, 일부 악성종양(malignancy)은 보다 공격적인 표현형 및 보다 열악한 예후와 관련되었다(Boudesco et al., 2018; Chatterjee & Burns, 2017). 더욱이, HSP70-/- 종양은 거의 면역원성이 아니고 보다 공격성임이 밝혀졌다(Dodd et al., 2015). 이는 다양한 접근법, 예를 들면, 강자성 및 금 나노입자-기반 치료요법, 백신 전략(Shvetsov & Multhoff, 2016), 및 이의 활성을 위해 HSP70 세포 표면 발현에 의존하는, 모노클로날 항체, 예를 들면, cmHSP70.1(Stangl et al., 2011)의 개발 및 시험을 이끌었다.
최근 수년에 걸쳐, 면역 체크포인트 억제제(immune checkpoint inhibitor; ICI), 예를 들면, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(CTLA-4)에 대한 모노클로날 항체 및 프로그램화된 세포 사멸 1(programmed cell death 1; PD-1) 및 이의 리간드, PD-L1가 심지어 진전된 악성종양에서도 영속성있는 차도를 유도하는 이의 능력을 통해 면역치료요법(immunotherapy)에 변혁을 일으켰다. 일반적으로, ICI에 대해 반응하는 종양은 보다 높은 면역 세포 침윤 및/또는 인터페론 유전자 특색(signature), 또는 보다 높은 종양 성숙 버든(tumor mutation burden; TMB)을 갖는 경향이 있는 것으로 여겨지며, 때때로 "핫(hot)" 종양으로 지칭된다(Maleki Vareki, 2018). 대조적으로, 낮은 면역 세포 침윤 또는 낮은 TMB를 지닌 소위 "콜드(cold)" 종양은 ICI에 대해 반응하지 않는 경향이 있으며, 췌장 암(pancreatic cancer) 및 전립선 암(prostate cancer)을 포함한다(Maleki Vareki, 2018). 다양한 악성종양을 치료하는데 있어서의 진전에도 불구하고, 콜드 종양을 보다 면역원성 종양으로 전환시키는 새로운 접근법이 여전히 요구되고 있으며, 이는 이러한 종양의 치료를 위한 대안의 접근법을 제공할 수 있다.
요약
본 발명은 부분적으로, 항-HSP70 모노클로날(monoclonal) 항체 또는 항체 단편의 발견을 기반으로 한다. 특정의 환경에서, 항-HSP70 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 예를 들면, 면역 세포(예컨대, 수지상 세포)에 대한 종양-유래된 항원과 관련된 세포외 또는 가용성 HSP70을 표적화함으로써 암을 치료하고/하거나 암 치료요법(예컨대, 암 면역치료요법)의 효능을 향상시킬 수 있다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 본원에 기술된 바와 같은, 77A 항체이다. 예를 들면, 일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 5의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 7에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성(identity)을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 7에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 7에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 9에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화된다. 일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 9에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화(encoding)된다. 일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 9에 따른 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 따른 경쇄 가변 서열에 의해 암호화된다.
다른 양태에서, 77A 항체의 사람화된 변이체가 제공된다. 예를 들면, 일부 양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음 서열을 갖는 중쇄 가변 서열:
Figure pct00001
(여기서 X1은 Q 또는 E이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 Q 또는 E이고, X5는 A, P, 또는 G이고, X6은 E 또는 G이고, X7은 V 또는 L이고, X8은 V 또는 K이고, X9는 A, E, G, 또는 S이고, X10은 V 또는 L이고, X11은 K 또는 R이고, X12는 V, L, 또는 I이고, X13은 A 또는 T이고, X14는 K 또는 Q이고, X15는 E 또는 K이고, X16은 M 또는 V이고, X17은 F 또는 V이고, X18은 F, M, 또는 I이고, X19는 T 또는 S이고, X20은 T, R, 또는 A이고, X21은 T, D, 또는 E이고, X22는 T, A, 또는 K이고, X23은 S 또는 N이고, X24는 L 또는 A이고, X25는 M 또는 L이고, X26은 E 또는 Q이고, X27은 L 또는 M이고, X28은 R, S, T, 또는 N이고, X29는 S 또는 G이고, X30은 R, K, 또는 M이고, X31은 S 또는 T이고, X32는 D 또는 E이고, X33은 L, S, 또는 T이다); 및/또는
다음 서열을 갖는 경쇄 가변 서열:
Figure pct00002
(여기서 X1은 E 또는 D이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 L 또는 M이고, X5는 D 또는 S이고, X6은 A 또는 S이고, X7은 V 또는 A이고, X8은 L 또는 V이고, X9는 E 또는 D이고, X10은 A 또는 V이고, X11은 N 또는 T이고, X12는 A 또는 P이고, X13은 Q 또는 K이고, X14는 S, V, 또는 P이고, X15는 K 또는 R이고, X16은 D 또는 S이고, X17은 S, D, 또는 N이고, X18은 S 또는 T이고, X19는 A 또는 P이고, X20은 V 또는 T이고, X21은 Q 또는 G이고, X22는 L 또는 V이다)를 포함한다.
특정의 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 12 내지 16으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12 내지 19 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19 내지 23으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19 내지 23 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
또한, 77A 항체의 최적화된 사람화된 변이체(humanized variant)가 제공된다. 예를 들면, 일부 양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 GYX1FTX2YG(서열 번호: 214)의 VHCDR1 아미노산 서열(여기서, X1은 T, S, 또는 I이고, X2는 N 또는 K이다), INTYTGEX1(서열 번호: 215)의 VHCDR2 아미노산 서열(여기서 X1은 P, S, T, 또는 A이다), 및 X1RYDHX2MDY(서열 번호: 216)의 VHCDR3 아미노산 서열(여기서 X1은 A, T, V, 또는 G이고, X2는 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이다)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 QSLX1NSGTRKNY(서열 번호: 212)의 VLCDRl 아미노산 서열(여기서 X1은 L, F, 또는 V이다), 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 KQSYX1LYT(서열 번호: 213)의 VLCDR3 아미노산 서열(여기서 X1은 T, N, 또는 S이다)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 1 및 164 내지 166으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2 및 167 내지 169로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3 및 170 내지 185로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR3 아미노산 서열; 및/또는 서열 번호: 4 및 159 내지 161로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6, 162, 및 163으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 서열을 갖는 중쇄 가변 서열:
Figure pct00003
(여기서 X1은 Q 또는 H이고, X2는 A, D, T, V, S, 또는 P이고, X3은 T, S, 또는 I이고, X4는 N 또는 K이고, X5는 P, S, T, 또는 A이고, X6은 T, R, K, 또는 I이고, X7은 A, T, V, S, 또는 G이고, X8은 S, R, 또는 T이고, X9는 A, V, 또는 G이고, X10은 E 또는 D이고, X11은 L 또는 V이고, X12는 A, T, V, 또는 G이고, X13은 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이고, X14는 T 또는 S이다); 및/또는
다음의 서열의 경쇄 가변 서열:
Figure pct00004
(여기서 X1은 A, T, 또는 S이고, X2는 N 또는 K이고, X3은 L, F, 또는 V이고, X4는 A, S, 또는 T이고, X5는 Q 또는 K이고, X6은 A, P, 또는 S이고, X7은 K 또는 N이고, X8은 L, V, 또는 I이고, X9는 G 또는 A이고, X10은 T 또는 S이고, X11은 S 또는 R이고, X12는 A 또는 T이고, X13은 V, I, 또는 L이고, X14는 T, N, 또는 S이다)을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 17 및 26 내지 103으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17 및 26 내지 103 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24 및 105 내지 157로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24 및 105 내지 157 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 항체는 HSP70에 결합하거나, 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 Octet 바이오-층 간섭법(bio-layer interferometry; BLI) 분석으로 측정된 바와 같이, 사람 HSP70에 대해 약 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.9, 0.85, 0.8, 0.75, 0.7, 0.6, 또는 0.5 nM 미만의 KD로 결합한다.
본 구현예 중 어느 하나에 따른 모노클로날 항체 또는 항체 단편과 동일한 에피토프(epitope)에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 또한 본원에 제공된다. 예를 들면, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 77A와 HSP70에 개한 결합에 대해 경쟁하는 항-HSP70 항체를 포함한다. 항체가 77A 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나, 이와 결합하는 것에 대해 경쟁하는지의 여부를 당해 분야에 공지된 통상의 방법을 사용하여 측정하는 것이 가능하다. 예를 들면, 시험 항체가 77A 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 측정하기 위해, 77A 항체는 포화 조건 하에서 HSP70 단백질 또는 펩타이드에 결합하도록 한다. 다음에, HSP70 단백질 또는 펩타이드에 결합하는 시험 항체의 능력을 평가한다. 시험 항체가 77A 항체와 포화 결합 후 HSP70 단백질 또는 펩타이드에 결합할 수 있는 경우, 시험 항체는 77A 항체보다 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결론지어질 수 있다. 다른 한편, 시험 항체가 77A 항체와 포화 결합 후 HSP70 단백질 또는 펩타이드에 결합할 수 없는 경우, 시험 항체는 77A 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 어느 하나의 항체 또는 항체 단편에 의해 인식된 HSP70 상의 에피토프에 결합하거나, 이에 결합할 수 있는 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 11의 K573-Q601에 상응하는 펩타이드에 의해 정의된 HSP70의 에피토프에 결합한다. 특정의 양태에서, HSP70에 결합된 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 중 1 또는 2개에 결합한다: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601. 일부 양태에서, HSP70에 결합된 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 모두에 결합한다: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601. 일부 양태에서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 중 적어도 하나에 추가로 결합한다: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598. 일부 양태에서, HSP70에 결합하는 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 중 적어도 2, 3, 4, 또는 5개에 추가로 결합한다: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598. 일부 양태에서, HSP70에 결합하는 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 중 모두에 결합한다: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, H594, K595, R596, E598, 및 Q601.
일부 양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 면역 효과기 세포에 의해 종양-유래된 ADP-HSP70-펩타이드 항원 복합체의 흡수를 향상시킨다.
본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 HSP70에 결합하거나, 이에 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 ADP-결합된 형태로 HSP70에 결합하거나, 이에 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 펩타이드-결합된 형태의 HSP70에 결합하거나 이에 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 ADP-결합된 및 펩타이드 결합된 형태로 HSP70에 결합하거나 이에 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 ADP-결합된 및 펩타이드 형태로 HSP70에 결합하거나 이에 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 Octet 바이오-층 간섭법(BLI) 분석으로 측정된 바와 같이, 사람 HSP70에 약 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.9, 0.85, 0.8, 0.75, 0.7, 0.6, 또는 0.5 nM 미만의 KD로 결합하거나 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 항체-의존성 세포 세포독성을 유도하지 않는다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 상보체-의존성 세포 세포독성(complement-dependent cellular cytotoxicity)을 유도하지 않는다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 면역 효과기 세포, 예를 들면, 단핵세포/대식구 및 수지상 세포에 의한 HSP70 흡수를 향상시킨다. 일부 양태에서, 흡수는 사람 FcγR2A 및/또는 사람 FcγR2B에 의해 매개된다.
본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체 단편은 1가 scFv(가변성의 단일 쇄 단편) 항체, 2가 scFv, Fab 단편, F(ab')2 단편, F(ab')3 단편, Fv 단편, 또는 단일 쇄 항체이다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 키메라 항체(chimeric antibody), 이중특이성 항체(bispecific antibody), 또는 BiTE이다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 IgG 항체 또는 재조합(recombinant) IgG 항체 또는 항체 단편이다.
본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 영상화제(imaging agent) 또는 세포독성제(cytotoxic agent)에 접합(conjugating)되거나 융합(fusing)된다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 표지된다. 일부 양태에서, 표지(label)는 형광성 표지, 효소 표지, 또는 방사활성 표지이다.
일부 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 IgG 항체 또는 항체 단편이다. 일부 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체 또는 항체 단편이고, 예를 들면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 217 내지 221 중 어느 하나를 포함한다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 어느 하나의 항체의 항체 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 핵산이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 단리된 핵산은 서열 번호: 9 및/또는 10에 대해 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 임의의 하나의 핵산을 포함하는 발현 벡터가 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 임의의 하나의 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 하이브리도마(hybridoma) 또는 가공된 세포(engineered cell)가 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 본 구현예의 임의의 하나의 핵산을 포함하는 하이브리도마 또는 가공된 세포가 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 임의의 하나의 모노클로날 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법이 본원에 제공되고, 이러한 방법은 본 구현예 중 어느 하나의 하이브리도마 또는 가공된 세포를 항체의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 임의로 배양물로부터 항체를 단리하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 임의의 하나의 하나 이상의 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 제형이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 암을 가진 환자를 치료하는 방법이 본원에 제공되고, 이러한 방법은 환자에게 유효량의 본 구현예 중 어느 하나의 항체 또는 항체 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 항원 제시 세포에 의해 HSP70의 흡수를 향상시킨다. 일부 양태에서, 항원 제시 세포에 의한 HSP70의 흡수는 사람 FcγR2A 및/또는 사람 FcγR2B에 의해 매개된다.
일부 양태에서, 방법은 세포독성 T 세포-매개된 항종양 면역성을 향상시키기 위한 방법으로서 추가로 정의된다. 일부 양태에서, 방법은 면역치료요법에 대한 민감성(sensitivity)을 증가시키기 위한 방법으로서 추가로 정의된다. 일부 양태에서, 방법은 면역 효과기 세포에 의한 종양-유래된 ADP-HSP70-펩타이드 항원 복합체의 흡수를 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된다. 일부 양태에서, 방법은 수지상 세포에 의한 항원 제시를 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된다. 일부 양태에서, 방법은 종양 항원에 대한 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된다.
일부 양태에서, 암은 면역학적으로 콜드 암(cold cancer), 예컨대, 췌장 암(pancreatic cancer) 또는 전립선 암(prostate cancer)이다.
일부 양태에서, 방법은 적어도 하나의 제2의 항암 치료요법, 예컨대, 화학치료요법, 면역치료요법, 방사선치료요법, 유전자 치료요법, 호르몬 치료요법, 항-혈관형성 치료요법(anti-angiogenic therapy), 또는 사이토킨 치료요법을 투여함을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 사람 HSP70에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR) 단백질이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1 및 164 내지 166으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2 및 167 내지 169로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3 및 170 내지 185로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR3 아미노산 서열; 및/또는 서열 번호: 4 및 159 내지 161로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6, 162, 및 163으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 양태에서, CAR 단백질은 HSP70에 결합할 수 있다.
일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7, 12 내지 17, 및 26 내지 103으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 7, 12 내지 17, 및 26 내지 103 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 8, 19 내지 24, 및 105 내지 157로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 8, 19 내지 24, 및 105 내지 157 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 9에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화된다. 일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 9에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화된다. 일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 9에 따른 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 따른 경쇄 가변 서열에 의해 암호화된다.
일부 양태에서, 항원 결합 도메인은 사람화된 사람-항원 도메인이다. 일부 양태에서, CAR 단백질은 힌지 도메인(hinge domain), 막관통 도메인(transmembrane domain), 및 세포내 신호전달 도메인(intracellular signaling domain)을 추가로 포함한다. 힌지 도메인은 CD8a 힌지 도메인 또는 IgG4 힌지 도메인일 수 있다. 막관통 도메인은 CD8a 막관통 도메인 또는 CD28 막관통 도메인일 수 있다. 세포내 신호전달 도메인은 CD3z 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 본 구현예 중 어느 하나의 CAR 단백질을 암호화하는 핵산 분자가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, CAR 단백질을 암호화하는 서열은 발현 제어 서열에 작동적으로 연결된다. 일부 양태에서, 핵산 분자는 발현 벡터로서 추가로 정의된다.
일 구현예에서, 사람 HSP70에 결합하거나, 이에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 가공된 세포가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 핵산 분자는 본 구현예 중 어느 하나의 CAR 단백질을 암호화한다.
일부 양태에서, 세포는 T 세포 또는 NK 세포이다. 일부 양태에서, 핵산은 세포의 게놈(genome) 내로 통합된다. 일부 양태에서, 세포는 사람 세포이다.
일 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 담체(carrier) 속에 본 구현예 중 어느 하나에 따른 세포의 집단(population)을 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 환자에게 본 구현예 중 어느 하나에 따른 하나 이상의 세포를 포함하는 세포 치료요법의 항-종양 유효량을 투여함을 포함하여 이를 필요로 하는 사람 환자에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 세포는 동종이계 세포 또는 자가 세포이다. 일부 양태에서, 세포는 대상체(subject)에 대해 일치된(matched) HLA이다. 일부 양태에서, 암은 췌장 암 또는 전립선 암이다.
일부 양태에서, 방법은 제2의 항-암 치료요법, 예컨대, 화학치료요법, 면역치료요법, 방사선치료요법, 유전자 치료요법, 호르몬 치료요법, 항-혈관형성 치료요법 또는 사이토킨 치료요법을 투여함을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 시험관 내(in vitro) 샘플 속에서 HSP70을 검출하는 방법이 본원에 제공되고, 이러한 방법은 시험관 내 샘플을 본 구현예 중 어느 하나의 항체 또는 항체 단편을 접촉시키는 단계 및 샘플에 대한 항체 또는 항체 단편의 결합을 검출시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 검출은 유동 세포분석법(flow cytometry), 질량 분석법(mass spectrometry), 웨스턴 블롯, 면역조직화학, ELISA, 또는 RIA에 의한다.
일 구현예에서, 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 본 구현예 중 어느 하나의 항체 분자, 약제학적 조성물, 세포, 또는 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조시의, 본 구현예 중 어느 하나의 항체 분자, 약제학적 조성물, 세포, 또는 약제학적 조성물의 용도가 본원에 제공된다.
본원에 사용된 바와 같이, 명시된 구성성분과 관련하여 용어 "필수적으로 유리된(essentially free)"은 명시된 구성성분 중 어느 것도 조성물로 의도적으로 제형화되었고/되었거나 오염물질로서 또는 미량으로서 존재함을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 조성물의 임의의 의도되지 않은 오염으로부터 생성된 명시된 구성성분의 총 양은 따라서, 0.5%, 0.1%, 또는 0.05% 이하이고, 바람직하게는 0.01% 이하이다. 명시된 구성성분이 양이 표준 분석 방법을 사용하여 검출될 수 없는 조성물이 가장 바람직하다.
본원의 명세서에 사용된 바와 같이, 단수형("a" 또는 "an")은 하나 이상을 의미할 수 있다. 본원의 청구범위(들)에 사용된 바와 같이, 단어 "포함하는"과 함께 사용된 경우 단수형("a" 또는 "an")은 하나 또는 하나 이상을 의미할 수 있다.
본 개시내용이 유일한 대안 및 "및/또는"을 지칭하는 정의를 뒷받침하지만, 청구범위에서 용어 "또는"의 사용은 대안 만을 지칭하는 것으로 분명하게 나타내거나 대안이 상호 배타적이지 않는 한 "및/또는"을 의미하기 위해 사용된다. 본원에 사용된 바와 같이 "다른"은 적어도 제2 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
본 명세서 전체에서, 용어 "약"은 값이 장치, 값을 측정하는데 사용되는 방법, 연구 대상체(subject) 중에 존재하는 변화, 또는 기술된 값의 10% 이내인 값에 대한 고유의 오차 변화를 포함함을 나타내기 위해 사용된다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 장점은 다음의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 본 발명의 취지 및 영역 내 다양한 변화 및 변형이 본 발명의 상세한 설명으로부터 당해 분야의 숙련가에게 명백해질 것이지만, 상세한 설명 및 구체적인 실시예는, 본 발명의 바람직한 구현예를 나타내지만, 단지 나열의 방식으로서 제공됨이 이해되어야 한다.
다음의 도면은 본 명세서의 부분을 형성하고 본 발명의 특정 양태를 추가로 입증하기 위해 포함된다. 본 발명은 본원에 나타낸 구체적인 구현예의 상세한 설명과 함께 이러한 도면 중 하나 이상에 대한 참고로 보다 잘 이해될 수 있다.
도 1. MOPC315.BM-luc 세포를 주사받은 BALB/c 마우스(mouse)에게, 나타낸 HSP70 mAb(사각형) 또는 이의 IgG2B 동형 대조군(원형)을 1 내지 3주 동안 주당 2회 200 μg 주사로 제공하였다. 질환 버든(disease burden)을 전체-동물 생체 내(in vivo) 영상화로 모니터링하고 혈청 경쇄 수준으로 확인하였다.
도 2a 내지 2c. 뮤린(murine) HSP70(상부 패널), 이. 콜라이(E. coli)에서 제조된 사람 HSP70(중간 패널), 및 Sf9 곤충 세포에서 제조된 사람 HSP70(하부 패널)에 대한 77A의 친화성을 연구하는 Octet 분석(A). 77A는 ADP-HSP70 복합체에 대한 우선적인 결합을 나타낸다(B). HSP70-GFP에 대한 77A 결합은 ADP 및 펩타이드 기질(NRL)이 존재하는 경우 가장 큰 친화성을 나타낸다(C). (C) 내 컬럼의 각각의 그룹 내에서, 컬럼은 좌측으로부터 우측으로, 완충제, ATP, ADP, ATP NRL, 및 ADP NRL을 나타낸다.
도 3a 내지 3f. 전체-길이(FL) HSP70을, 보다 C-말단인 아미노산을 계속해서 제거하는 나타낸 길이의 결실 돌연변이와 함께, HSP70 KO 293T 세포 내 N-말단 GFP 융합 단백질로서 발현시켰다(A). 77A를 사용한 세포 추출물의 IP에 이어 항-GFP 항체를 사용한 웨스턴 블롯팅(Western blotting; WB)에 의해 단백질을 검출하였다(B). 이후에, 유사한 결실을 보다 미세한 맵핑(finer mapping)에 대해 생성시키고(C), 나타낸 IP를 세포 분해물(CL) 또는 배양 배지 상층액(CM)으로부터 수행하였다. 로딩을 α-경쇄(LC) 항체로 확인하였다. 77A에 대한 추정된 결합 도메인을 단백질의 관련 영역을 나타내는 HSP70의 분자 모델에서 나타낸다(D). 77A 에피토프를 포함하는 정확한 아미노산을 알라닌 스캐닌 분석을 사용하여 측정하였고, 결과는 (E)에 나타내며, 제1 및 제2의 중요한 부위를 나타내는 리본 다이아그램(ribbon diagram)은 (F)에 나타낸다.
도 4a 및 4b. Luc-표지된 MM1.S 사람 골수종 세포를 누드 마우스(nude mouse)에게 주사하고, 치료를 나타낸 용량에서 IgG2b 동형 대조군 mAb 또는 77A로 2 내지 5주 동안 주당 2회 제공하였다. 전체 동물 생존 영상 데이타를 등(상부 패널) 및 복부(하부 패널) 시야(view)로 5주째에 나타내며 이는 IgG2B-처리된 마우스에서 유의적인 종양 성장을 나타내지만 77A-처리된 마우스에서는, 특히 보다 높은 용량 수준에서 유의적인 종양 성장을 나타내지 않음을 입증한다. 이후에, 동일한 실험을 NSG 마우스에서 수행하고, 종양 성장을 영상화(B) 및 사람 경쇄에 대해 ELISA 둘 다로 측정하였다.
도 5. 미성숙 뮤린 DC2.4 세포에게 37℃에서 6시간 동안 비히클(죄측 2개의 패널) 또는 6x-His-태그된(tagged) HSP70(우측 2개의 패널)과 함께 나타낸 바와 같은 IgG2B 또는 77A의 존재하에서 항온처리하였다. 이후에 이를 대조군 IgG(좌측 패널) 또는 α-6x-His 태그(tag) mAb(우측 3개의 패널)로 염색하고, HSP70 흡수를 유동으로 측정하였다. HSP70의 유의적인 흡수는 단지 77A(가장 우측 패널)의 존재하에서만 관찰된다.
도 6. 동형 대조군 mAb 또는 77A mAb의 존재하에서 Sf9-유래된 6x-His-태그된 사람 HSP70에 노출시킨 DC2.4 세포를 Alexa Fluor 594에 접합된 맥아 아글루티닌(wheat germ agglutinin; WGA)으로 염색하여 세포 막을 염색시키거나, Alexa Fluor 488-태그된 α-6x- His-tag mAb로 염색하여 HSP70을 검출하거나, 4',6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI)로 염색하여 핵을 염색하고, 개체 뿐만 아니라, 병합된 영상을 수득하였다. 대표적인 필드(field)를 200 x 확대로 나타낸다.
도 7. HSP70 및 금-표지된(gold-labeled) 77A에 노출된 DC의 전자 현미경사진. 나타낸 확대는 100,000 x이다.
도 8a 내지 8c. 마우스 DC2.4 세포를 PBS, 또는 높은 수준의 이러한 단백질을 발현하므로 HSP70의 양호한 공급원인, A-375 흑색종 세포로부터 정제된 5 μg의 ADP-HSP70으로, 10 μg의 IgG2B 또는 77A와 함께 48시간 동안 처리하였다. RNA를 수거하고 cDNA를 내용에 기술된 qPCR 배열에 대해 하이브리드화하였다. ≥2 배까지 활성화되거나 억압(repress)된 유전자를 IgG2B와 PBS(A; 상부 패널) 뿐만 아니라 77A와 PBS(A; 하부 패널) 사이를 비교하기 위해 나타낸다. 데이타는 3개의 생물학적 반복물(biological replicate)로부터 나타낸다. 이후에, Ingenuity 경로 분석(Ingenuity Pathway Analysis)을 수행하여(B) 이러한 변화에 의해 영향받을 수 있는 생물학적 과정을 확인하였다. 이후에 성숙한 DC에 의해 방출된 사이토킨을 BioRad Bio-PlexTM 프로 마우스 사이토킨 배열(Pro Mouse Cytokine Array)을 사용하여 분석하였다. HSP70 및 77A 노출된 세포 대 HSP70 및 IgG2B 노출된 세포에서 유도된 주목할만한 변화를 바아 그래프(bar graph)로 나타낸다(C). (C)에서의 컬럼의 각각의 그룹 내에서, 좌측 컬럼은 IgG CTRL(대조군 IgG)을 나타내고 우측 컬럼은 HSP70 STIMULATED(모의된 HSP70)을 나타낸다.
도 9a 내지 9g. BALB/c 마우스에게 4번째 우측 유선으로 7,500 luc-4T1 세포를 주사하였다. 12일 후, 모든 마우스가 감지될 수 있고 측정가능한 종양을 가진 경우, 200 μg의 IgG2B(채워진 박스(filled box)) 또는 77A(빈 박스(open box))를 3주 동안 주당 2회 IV 주사하였다. 종양 용적을 1차에 대해 캘리퍼(caliper) 및 전체 동물 영상 둘 다를 사용하여 측정하고(A), 이 동안 영상을 사용하여 폐 전이를 평가하였다(B). 말초 혈액을 32일째에 수집하고 CD4+ 및 CD8+ T-세포에 대해(C), 및 또한 이중 CD11c+/MHC 제II+ 부류 세포 뿐만 아니라 전체 MHC 제II+ 부류 세포에 대해(D) 평가하였다. 77A는 사람 1차 CD4+ 및 CD8+ T 세포 내로 HSP70의 흡수를 유도한다(E). 77A는 MHC-의존성 세포질성 CD4 T-세포 활성을 자극한다(F). 누드 마우스에서 A375 흑색종 모델에 대한 77A 활성(G).
도 10. 뉴클레오타이드 결합 도메인(nucleotide binding domain: NBD) 내 ATP에 결합한 HSP70(청색으로 나타냄)은 개방 구조를 가짐으로써 기질 결합 도메인(substrate binding domain; SBD)과의 상호작용을 허용한다. 기질 펩타이드는 J-단백질 및 뉴클레오타이드 교환 인자(nucleotide exchange factor; NEF)와 합동으로, SBD와 상호작용하고, HSP70 ATPase 활성을 자극하여, lid를 폐쇄시킴을써, 기질과 HSP70의 상호작용을 안정화시킨다. 문헌(Craig & Marszalek, 2017)으로부터 채택됨. HSP70 모델에서 77A 결합의 적절한 국재화는 또한 우측 패널에 나타낸다.
도 11a 내지 11c. HSP70-GFP를 발현하는 4T1 세포의 10 mL 펠렛(pellet)의 균질물(homogenate)을 ADP-아가로스 컬럼 위에서 정제하여 ADP-HSP70-펩타이드 복합체를 단리하고, 10 μg을 -24일째에 BALB/c 마우스 내로 복강내 주사하고 -10일째에 피하 부스트(boost)시켰다. 이후에, 이것에게 0일째에 도 9a 내지 9d에 대한 범례에서와 같이 HSP70-GFP를 발현하는 4T1-luc 세포를 주사하고, 종양 성장을 전체 동물 영상으로 모니터링하였다(A). 37일째에, 동물을 마취시키고, 비장 세포를 단리하고 이 날짜에 FACS로 분석하거나 HSP70-GFP를 발현하는 조사된 4T1 세포의 존재하에서 7일 동안 배양물 내에 둔 다음 FACS로 분석하였다. 비교를 비장 단리시(0일째)에 및 배양 7일 후(좌측 패널)에 CD4+(B) 및 CD8+(C) T-세포 함량에 대해 제공한다. 세포독성 T-세포 활성을 또한 나타낸 세포 분획을 살아있는 야생형 4T1 세포 또는 HSP70-GFP를 발현하는 4T1 세포에 노출시킨 다음 생존능 연구에 의해 시험하였다(우측 패널).
도 12a 및 12b. 사이토킨 방출 검정을 4T1 세포 또는 상술한 바와 같이 HSP70-GFP를 발현하는 4T1 세포에 노출시킨 후 뮤린 비장으로부터 단리한 CD4+(A) 및 CD8+(B) T 세포에서 수행하였다. IFNγ 분비를 각각의 상단 패널에 나타낸 반면 IL-2 분비는 하단 패널에 나타낸다.
도 13. 77A는 FcγR2A 및 FcγR2B를 통해 HSP70의 흡수를 유도한다. 상단 열은 사람 FcγR2A를 발현하는 HSP70 녹아웃(knockout) HEK 293T 세포를 낱낸다. 하단 열은 나타낸 사람 Fcγ 수용체를 발현하는 HSP70 녹아웃 HEK 293T 세포를 나타낸다.
도 14a 및 14b. 77A에 대한 제안된 결합 부위에서 뮤린 및 사람 HSP70의 서열이 강조되어 있다(A). 아미노산 차이는 박스(box)로 표시되어 있는 반면, 잠재적인 포스포릴화 부위는 적색이고 유비퀴틴화 부위는 녹색이다. 뮤린 버젼을 모사(mimic)하는 사람 HSP70내 3개의 아미노산의 돌연변이는 77A의 사람 HSP70을 인식하는 능력을 감소시킨다(B).
도 15a 및 15b. 77A에 대한 종양 표적. IgG2B 또는 77A를 지닌 PLD를 4T1 세포를 정위적으로 주사받은 BALB/c 마우스에서(A) 및 CT26-기반 면역-적격성 결장 암종(immune-competent colon carcinoma) 방식(B)으로 평가하였다.
도 16. 항체 77A를 HSP70 단백질에 대한 결합에서 나타낸 항체와의 경쟁에 대해 에피토프 비닝 실험(epitope binning experiment)에서 시험하였다. 도 16에서 번호는 잠재적으로 경쟁하는 항체의 존재하에서 최대 결합의 퍼센트를 반영한다.
도 17. 바이오층 간섭법(biolayer interferometry; BLI)에 의해 측정된 것으로서 ADP-HSP70(상단) 및 ATP-HSP70(하단)에 대한 항체 77A 결합.
도 18. ELISA에 의해 측정된 바와 같은 ADP-HSP70 및 ATP-HSP70에 대한 항체 77A의 결합; 여기서 번호 1° 및 2°는 음성 대조군을 나타내고 여기서 제1 항체 또는 제2 항체는 각각 존재하지 않았다.
도 19. 나타낸 항체로 CT-26 종양을 지닌 마우스의 치료 후 종양 용적, 박스쳐진 날짜(14, 17, 21)는 마우스가 처리받은 일자를 나타낸다. * 둔넷 다중 비교 t 시험(Dunnett's multiple comparison t test)으로 측정된 것으로서 동형 대조군(IgG2B)에 대해 p=0.0023.
도 20a 및 20b. 사람화된 변이체 hVH-1 내지 hVH-5(도 20a) 및 hVL-1 내지 hVL-5(도 20b)의 서열 정렬.
도 21. 총 MFI(좌측) 및 GFP 양성 세포 %(우측)로서 측정된 것으로서, 나타낸 사람 Fcγ 수용체를 발현하는 세포와 HSP70GFP, GFP-나노보디(Nanobody) Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 253-77A 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 22. 총 MFI(좌측) 및 GFP 양성 세포 %(우측)로서 측정된 것으로서, 나타낸 사람 Fcγ 수용체를 발현하는 세포와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 IgG2 항체를 발현하는 세포의 항온처리 후 HSP70 흡수. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 23. 총 MFI(좌측) 및 GFP 양성 세포 %(우측)로서 측정된 것으로서, 나타낸 마우스 Fcγ 수용체를 발현하는 세포와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 24. 총 MFI(좌측) 및 GFP 양성 세포 %(우측)로서 측정된 것으로서, 나타낸 마우스 Fcγ 수용체를 발현하는 세포와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 IgG2 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 25. 총 MFI(좌측) 및 GFP 양성 세포 %(우측)로서 측정된 것으로서, DC와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 결가는 HSP70GFP에 대해 게이트된(gated) 전체 세포에 대해 나타낸다. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 26. GFP 양성 세포 %(좌측) 및 MFI(우측)으로 측정된 것으로서, DC와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 결과는 형질세포양(plasmacytoid) DC, CD303+ve, CD1C-ve 세포에 대해 나타낸다. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 27. GFP 양성 세포 %(좌측) 및 MFI(우측)으로 측정된 것으로서, DC와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 결과는 제1형 DC, CD141+ve, CD1c-ve 세포에 대해 나타낸다. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 28. GFP 양성 세포 %(좌측) 및 MFI(우측)으로 측정된 것으로서, DC와 HSP70GFP, GFP-나노바디 Alexa-488, 및 나타낸 항체의 항온처리 후 HSP70 흡수. 결과는 제2형 DC, CD1C+ve, CD303-ve 세포에 대해 나타낸다. 253-77A = 77A; HC1 LC1 = h77A-1; HC2 LC1 = h77A-6; HC3 LC1 = h77A-11.
도 29a 내지 29j. 사람화된 변이체 hVH-1.1 내지 hVH-1.78(도 29a 내지 29f) 및 hVL-1.1 내지 hVL-1.53(도 29g 내지 29j)의 서열 정렬.
상세한 설명
본 발명은 부분적으로 특정 징후, 예컨대, 암의 치료에 유용한, 항-HSP 항체, 또는 이의 당편의 개발을 기반으로 한다. 특정 상황에서, 항-HSP70 모노클로날 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면, 면역 세포(예컨대, 수지상 세포)에 대한 종양-류래된 항원과 관련된 세포외 또는 가용성 HSP70을 표적화함으로써 암을 치료하고/하거나 암 치료요법(예컨대, 암 면역치료요법)의 효능을 향상시킬 수 있다.
본원에 제공된 데이타는 항-HSP70 mAb(클론 77A로서 나타냄)가 표면 HSP70 발현과 독립적인 활성을 나타내고 종양-유래된 항원을 지닌 세포외 HSP70을 DC에 대해 표적화함을 나타낸다. 이러한 항체를 사용하여 면역성에 있어서 HSP70의 역할의 역할, 및 또한 암 면역치료요법의 효능을 향상시키기 위한 치료제로서 보다 잘 이해할 수 있다. 실제로, 클론 77A는 면역-상보성 및 누드 마우스(nude mouse)에서 혈액학적 악성종양 및 고형 종양 둘 다의 모델에서 항-종양 효능을 나타내지만 자발적 단백질 키나제, DNA-활성화된, 촉매적 소단위(subunit) (PRKDCSCID) 돌연변이를 지닌, 또한 SCID 마우스로서 공지된, 면역-결핍성 마우스에서는 항-종양 효능을 나타내지 않는 고 친화성 HSP70 mAb이다. 항체는 DC 성숙과 관련된 유전자의 상향-조절을 초래하는 시험관 내 검정에서 DC에 의한 HSP70의 세포내 흡수를 향상시킨다. 정위적으로 이식된 4T1 세포에 대해 시험하는 경우, ICI에 반응하지 않는 뮤린 삼중-음성 유방 암의 면역학적 콜드 모델인, 77A는 1차 종양 성장을 감소시켰고 폐 및 간 전이의 발달을 억제하였다. 면역원성 세포 사멸(immunogenic cell death; ICD)을 유발하고 HSP70-종양 펩타이드 복합체의 방출을 향상시키는 제제인, 페길화된(pegylated) 리포좀 독소루비신(PLD)과 함께, 77A는 4T1 모델 및 결장직장 암(colorectal cancer) 둘 다에서 일부 마우스를 치유하였다. 최종적으로, 4T1 세포로부터 정제된 ADP-HSP70 복합체를 77A와의 백신으로서 사용한 경우, 살아있는 4T1 세포를 사용한 후속적인 챌린지 후 종양 성장은 mAb 동형 대조군과 비교하여 억제되었고, 4T1-특이성 세포질성 CD4+ 및 CD8+ T-세포 활성의 풍부성은 향상되었다. 따라서, 클론 77A mAb를 사용하여 면역 세포에 의한 HSP70의 흡수를 향상시키는 것은 단독으로, 및 다수의 비례적으로 설계된 조합 요법 둘 다에서 항-종양 면역성을 증강시킨다.
I. 정의
본원에 사용된 바와 같은 "핵산", "핵산 서열", "올리고뉴클레오타이드", "폴리뉴클레오타이드" 또는 다른 문법적 등가물은 서로 공유결합으로 연결된, 데옥시리보뉴클레오타? 또는 리보뉴클레오타이드인, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 또는 이의 유사체를 의미한다. 폴리뉴클레오타이드는 임의의 길이, 예컨대, 20, 50, 100, 200, 300, 500, 1000, 2000, 3000, 5000, 7000, 10,000 등의 중합체이다. 본원에 기술된 폴리뉴클레오타이드는 일부 경우에, 적어도 하나의 상이한 연결, 예컨대, 포스포르아미데이트, 포스포로티오에이트, 포스로로디티오에이트, 또는 O-메틸포스로포아미디트 연결, 및 펩타이드핵산 골격 및 연결을 가질 수 있는 핵산 유사체가 포함될 수 있지만, 일반적으로 포스포디에스테르 결합을 함유한다. 천연적으로 발생하는 폴리뉴클레오타이드 및 유사체의 혼합물이 제조될 수 있고; 대안적으로, 상이한 폴리뉴클레오타이드 유사체의 혼합물, 및 천연적으로 발생하는 폴리뉴클레오타이드 및 유사체의 혼합물이 제조될 수 있다. 다음은 폴리뉴클레오타이드; 유전자 또는 유전자 단편, 엑손, 인트론, 전령 RNA(messenger RNA; mRNA), 전달(transfer) RNA, 리보소옴 RNA, 리보자임, cDNA, cRNA, 재조합 폴리뉴클레오타이드, 측쇄된 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브, 및 프라이머의 비-제한적 예이다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들면, 메틸화된 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오타이드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 첨가(impart)될 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 구성성분에 의해 차단될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 중합체화 후, 예를 들면, 표지화 구성성분과의 접합체 의해 추가로 변형될 수 있다. 용어는 또한 이중- 및 단일-가닥 분자 둘 다를 포함한다. 달리 명시되지 않거나 요구되지 않는 한, 용어 폴리뉴클레오타이드는 이중-가닥 형태를 구성하는 것으로 알려졌거나 에측된 이중-가닥 형태 및 2개의 상보성 단일-가닥 형태 각각을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드는 4개의 뉴클레오타이드 염기의 특정 서열로 구성된다: 아데닌(A), 사이토신(C), 구아닌(G), 티민(T), 및 폴리뉴클레오타이드가 RNA인 경우 티민에 대해 우라실(U). 따라서, 용어 "폴리뉴클레오타이드 서열"은 폴리뉴클레오타이드 분자의 알파벳적 표시이다. 달리 나타내지 않는 한, 특수한 폴리뉴클레오타이드 서열은 또한 암시적으로 이의 보존적으로 변형된 변이체(예컨대, 퇴화된(degenerate) 코돈 치환) 및 상보성 서열 뿐만 아니라 명쾌하게 나타낸 서열을 포함한다. 구체적으로, 퇴화된 코돈 치한은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 제3의 위치가 혼합된-염기 및/또는 데독시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 이러한 용어는 또한 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연적으로 발생하는 아미노산의 인공의 화학적 모사체(mimetic)인 아미노산 중합체 뿐만 아니라, 천연적으로 발생하는 아미노산 중합체에 적용되며, 이들은 변형된 잔기, 및 비-천연적으로 발생하는 아미노산 중합체를 함유한다. 본 발명의 경우에, 용어 "폴리펩타이드"는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
본원에 사용된 것으로서 재조합 핵산 기술, 미생물학, 면역학, 항체 가공, 및 분자 및 세포 생물학 분야에서 사용된 용어는 일반적으로 적용가능한 분야에서 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다.
II. 항체 및 항체의 변형
표 1, 6, 9 및 10에 나타낸 바와 같은 중쇄 및 경쇄로부터의 클론-쌍식 CDR을 갖는 모노클로날 항체가 본원에 제공된다. 이러한 항체는 본원에 기술된 방법을 사용하여 생산할 수 있다.
본 발명의 모노클로날 항체는 수 개의 적용을 가지며, HSP70을 검출하는데 사용할 뿐만 아니라, HSP70의 증가된 수준과 관련된 질환을 치료하기 위한 딘단 키트(kit)의 생산을 포함한다. 이러한 문맥에서, 이러한 항체를 진단 또는 치료제에 연결시키거나, 이를 포획제 또는 경쟁적 검정에서 경쟁인자로서 사용하거나, 이에 부착된 추가의 제제없이 개별적으로 이를 사용할 수 있다. 항체는 하기에 추가로 논의된 바와 같이 돌연변이되거나 변형될 수 있다. 항체를 제조 및 특성화하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다(참고: 예컨대, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988; 미국 특허 제4,196,265호).
"항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역 내에 위치한, 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해, 표적, 예를 들면, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 폴리펩타이드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어는 완전한 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 또한 이의 단편(예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fd, Fd', 단일 쇄 항체(ScFv), 디아보디(diabody), 선형 항체), 이의 돌연변이체, 천연적으로 발생하는 변이체, 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 지닌 항체, 사람화된 항체(humanized antibody), 키메라 항체, 및 요구된 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구조를 지닌 항체 부위를 포함하는 융합 단백질을 포함한다.
"단리된 항체"는 이의 천연 환경의 구성성분으로부터 분리되고/되거나 회수된 항체이다. 이의 천연 환경의 오염 구성성분은 항체에 대한 진단 또는 치료학적 용도를 방해할 수 있는 물질이고, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 특수한 예에서, 항체는: (1) 로우리 방법(Lowry method)에 의해 측정된 것으로서 항체의 95 중량% 이상까지, 및 가장 특히 99 중량% 이상까지; 또는 (2) 꼬마지에 블루(Coomassie blue) 또는 은 염색(silver stain)을 사용한 환원 또는 비-환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의한 균질성까지 정제된다. 단리된 항체는, 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 구성성분이 존재하지 않을 것이므로 재조합 세포 내에서 원 위치 내(in situ) 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
기본적인 4개-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된 이종사량체성 당단백질이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "중쇄"는 이의 아미노 말단 영역을 통해, 면역글로불린 경쇄와 연합하는 보다 큰 면역글로불린 소단위를 지칭한다. 중쇄는 가변 영역(VH) 및 불변 영역(CH)을 포함한다. 불변 영역은 CH1, 힌지(hinge), CH2, 및 CH3 도메인을 추가로 포함한다. IgE, IgM, 및 IgY의 경우에, 중쇄는 CH4 도메인을 포함하지만 힌지 도메인을 가지지 않는다. 당해 분야의 숙련가는 중쇄가 감마, 뮤(mu), 알파, 델타, 또는 엡실론(γ, μ, α, δ, ε)과, 이들 중에서 일부 소부류(subclass)(예컨대, γ1-γ4, α1-α2)로 분류됨을 인식할 것이다. 이는 항체의 "부류"를 IgG, IgM, IgA IgD, 또는 IgE 각각으로 결정하는 이의 쇄의 특성이다. 면역글로불린 소부류(동형), 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 등은 잘 특성화되어 있고 기능적 분화를 부여하는 것으로 알려져 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "경쇄"는 중쇄의 아미노 말단 영역과 관련된 보다 작은 면역글로불린 소단위를 지칭한다. 중쇄와 같이, 경쇄는 가변 영역(VL) 및 불변 영역(CL)을 포함한다. 경쇄는 이의 불변 영역(CL)의 아미노산 서열을 기반으로 카파 또는 람다(κ,λ)로서 분류된다. 이의 쌍은 임의의 다양한 중쇄의 쌍과 연합하여 면역글로불린 분자를 형성할 수 있다. 또한 경쇄의 의미 내에 카파 불변 영역(C-카파)에 연결된 람다 가변 영역(V-람다) 또는 람다 불변 영역(C-람다)에 연결된 카파 가변 영역(V-카파)을 지닌 경쇄가 포함된다.
IgM 항체는, 예를 들면, J 쇄로 불리는 추가의 폴리펩타이드를 따라 5개의 기본 헤테로사량체 단위로 이루어지므로, 10개의 항원 결합 부위를 함유하지만, 분비된 IgA 항체는 중합되어 J 쇄를 따라 기본 4-쇄 단위 2 내지 5개를 포함하는 다가 조립체(assemblage)를 형성한다. IgG의 경우에, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 공유결합성 이황화물 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 동형에 따라 하나 이상의 이황화물 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 일정하게 이격된 쇄간 이황화물 브릿지를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에서, 가변 영역(VH)에 이어 알파 및 감마 쇄 각각에 대해 3개의 불변 영역 및 뮤(mu) 및 동형에 대해 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서, 가변 영역(VL)에 이어 이의 다른 끝에 불변 도메인(CL)을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고 CL은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬되어 있다. 특수한 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 영역 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH 및 VL는 함께 쌍(pairing)을 이루어 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 항체의 상이한 부류의 구조 및 특성에 대해서는, 예컨대, 문헌: Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, Conn., 1994, page 71, and Chapter 6을 참고한다.
항체의 "가변 영역"은 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 단독으로 또는 함께 지칭한다. 용어 "가변"은 가변 영역의 특정 분절이 항체 중에서의 서열에서 집중적으로 상이하다는 사실을 지칭한다. 경(VL) 및 중(VH) 쇄 부위 둘 다의 가변 영역은 항원 결합을 매개하며 이의 특수한 항원에 대한 특수한 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변능은 가변 영역 전체에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 대신에, 가변 영역은 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR) 또는 초가변 영역으로 불리는 극도의 가변성의 보다 짧은 영역에 의해 분리된 비교적 불변의 스트레치(stretch)로 이루어진다. 천연의 경쇄 및 중쇄 각각의 가변 영역은 3개의 CDR에 의해 연결된, 베타-쉬이트 구조(beta-sheet configruation)를 크게 채택하는 4개의 FR을 포함하고, 이는 베타-쉬이트 구조를 연결시키고, 일부 경우에, 이의 일부를 형성하는 루프(loop)를 형성한다. CDR은 항원의 형태를 보충하고 항체의 친화성 및 항원에 대한 특이성을 결정한다. VL과 VH 둘 다 사이에 6개의 CDR이 존재한다. 각각의 쇄 내 CDR은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(참고: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
용어 "초가변 영역"은 본원에 사용된 경우 항원 결합에 관여하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예컨대, 카밧(Kabat) 번호매김 시스템에 따라 번호매김하는 경우 VL 내 약 24 내지 34번 잔기(L1), 50 내지 56번 잔기(L2) 및 89 내지 97번 잔기(L3) 주변 및 VH 내 약 31 내지 35번 잔기(H1), 50 내지 65번 잔기(H2) 및 95 내지 102번 잔기(H3) 주변; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)); 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기(예컨대, 초티아(Chothia) 번호매김 시스템에 따라 번호매김한 경우 VL 내 24 내지 34번 잔기(L1), 50 내지 56번 잔기(L2) 및 89 내지 97번 잔기(L3) 및 VH 내 26 내지 32번 잔기(H1), 52 내지 56번 잔기(H2) 및 95 내지 101번 잔기(H3) 주변; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)); 및/또는 "초가변 루프"/CDR로부터의 잔기(예컨대, IMGT 번호매김 시스템에 따라 번호매김한 경우 VL 내 27 내지 38번 잔기(L1), 56 내지 65번 잔기(L2) 및 105 내지 120번 잔기(L3) 및 VH 내 27 내지 38번 잔기(H1), 56 내지 65번 잔기(H2) 및 105 내지 120번 잔기(H3); Lefranc, M. P. et al. Nucl. Acids Res. 27:209-212 (1999), Ruiz, M. et al. Nucl. Acids Res. 28:219-221 (2000))를 포함한다. 임의로 항체는 AHo에 따라 번호매김한 경우 VL 내 다음 지점: 28, 36(L1), 63, 74-75(L2) 및 123(L3) 및 VH 내 다음 지점: 28, 36 (H1), 63, 74-75(H2) 및 123(H3) 중 하나 이상에서 대칭 삽입물을 갖는다; Honneger, A. and Plunkthun, A. J. Mol. Biol. 309:657-670 (2001)). 본원에 사용된 바와 같이, CDR은 임의의 이러한 번호매김 접근법에 의해 또는 접근법들의 조합에 의해 또는 다른 목적한 접근법에 의해 정의된 CDR을 지칭할 수 있다. 또한, 고도로 보존된, 코어, 경계 및 초-가변 영역의 새로운 정의를 사용할 수 있다.
항체의 "불변 영역"은 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을, 단독으로 또는 함께 지칭한다. 경쇄(CL) 및 중쇄(IgM 및 IgE의 경우에 CH1, CH2 또는 CH3, 또는 CH4)의 불변 영역은 분비, 태반 이동성, Fc 수용체 결합, 상보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 특성을 부여한다. 전환에 의해 불변 영역 도메인의 번호매김은, 이것이 항원 결합 부위 또는 항체의 아미노-말단으로부터 보다 멀어지게 되면서 증가한다. 불변 영역은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관련되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예를 들면, 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포 식세포작용(antibody-dependent cellular phagocytosis; ADCP), 항체-의존성 호중구 식세포작용(antibody-dependent neutrophil phagocytosis; ADNP), 및 항체-의존성 상보체 침착(antibody-dependent complement deposition; ADCD)에서 항체의 참여를 나타낸다.
항체는 항체 단편일 수 있다. "항체 단편"은 일반적으로 완전한 항체의 항원 결합 부위를 포함함으로써 항원에 결합하는 능력을 보유하는, 완전한 항체의 부위 만을 포함한다. 본 정의에 포함된 항체 단편의 예는: (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인, Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인 및 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 단일 항체의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편; (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편인, F(ab')2 단편; (ix) 단일 쇄 항체 분자(예컨대, 단일 쇄 Fv; scFv); (x) 동일한 폴리펩타이드 쇄 내 경쇄 가변 도메인(VL)에연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 2개의 항원 결합 부위를 지닌 "디아보디(diabody)"; (xi) 상보성 경쇄 폴리펩타이드와 함께 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 탄뎀 Fd 분절(tandem Fd segment)의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 "선형 항체"를 포함한다.
항체는 키메라 항체일 수 있다. "키메라 항체"는 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 각각의 하나의 부위가 특수한 종으로부터 유래되거나 특수한 부류에 속하는 항체 내 상응하는 서열에 대해 상동성이지만, 쇄의 나머지 분절이 다른 것의 상응하는 서열에 대해 상동성인 항체를 지칭한다. 예를 들면, 키메라 항체는 이종의 비-사람, 사람, 또는 사람화된 서열(예컨대, 골격 및/또는 불변 도메인 서열)에 이식된 비-사람 공여체로부터의 항원 결합 서열을 포함하는 항체일 수 있다. 전형적으로, 이러한 키메라 항체에서, 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 포유동물의 하나의 종으로부터 유래된 항체의 가변 영역을 모사하지만, 불변 부위는 다른 것으로부터 유래된 항체 내 서열에 대해 상동성이다. 예를 들면, 모노클로날 항체의 경쇄 및 중쇄 불변 도메인을 사람 기원의 상동성 도메인으로 대체하여, 외부 항체의 가변 영역이 완전하게 남도록 하는 방법이 개발되었다. 대안적으로, "완전한 사람" 모노클로날 항체는 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자이식된 마우스 내에서 생산된다. 설치류, 예를 들면, 마누스, 및 사람 아미노산 서열 둘 다를 갖는 항체 가변 도메인을 재조합적으로 작제함으로써 모노클로날 항체의 가변 도메인을 보다 사람 형태로 전환시키는 방법이 또한 개발되었다. "사람화된" 모노클로날 항체에서, 초가변성 CDR 만이 마우스 모노클로날 항체로부터 유래되며, 골격 및 불변 영역은 사람 아미노산 서열로부터 유래된다(참고: 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제5,091,513호 및 제6,881,557호). 설치류의 특징인 아미노산 내 아미노산 서열을 사람 항체의 상응하는 위치 내에서 발견된 아미노산 서열로 대체하는 것은 치료학적 사용 동안에 부정적인 면역 반응 경향성을 감소시킬 것임이 고려된다. 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 다른 세포를 또한 유전적 돌연변이 또는 다른 변화에 적용시킬 수 있고, 이는 하이브리도마에 의해 생상된 항체의 결합 특이성을 변경시키거나 변경시키지 않을 수 있다.
A. 모노클로날 항체
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 상동성인 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하는데, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 매우 특이적이고, 단일 항원성 부위에 대해 지시된다. 또한, 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원에서 단일 결정인자에 대해 지시된다. 이의 특이성 외에, 모노클로날 항체는 이들이 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 개질인자 "모노클로날"은 임의의 특수한 방법에 의해 항체의 생산을 요구하는 것으로 고려되지 않아야 한다. 예를 들면, 본 개시내용에 유용한 모노클로날 항체는 문헌: Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)에 먼저 기술된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나, 항원 특이성 B 세포, 감염 또는 면역화에 대해 반응하는 항원 특이성 형질모세포의 단일 세포 분류, 또는 다량의 분류된 항원 특이성 수집물에서 단일 세포로부터 연결된 중쇄 및 경쇄의 포획 후 세균, 진핵 동물 또는 식물 세포 내에서 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조할 수 있다(참고:, 예컨대, 미국 특허 제4,816,567호). 모노클로날 항체는 또한 예를 들면, 문헌: Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)에 기술된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
사람화된, 키메라, 및 완전한 사람을 포함하는 다양한 유형의 모노클로날 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 고도로 예측가능하다. 예를 들면, 다음의 미국 특허 및 특허원은 이러한 방법의 가능한 설명을 제공한다: 각각 본원에 참고로 포함된, 미국 특허원 제2004/0126828호 및 제2002/0172677호; 및 미국 특허 제3,817,837호; 제3,850,752호; 제3,939,350호; 제3,996,345호; 제4,196,265호; 제4,275,149호; 제4,277,437호; 제4,366,241호; 제4,469,797호; 제4,472,509호; 제4,606,855호; 제4,703,003호; 제4,742,159호; 제4,767,720호; 제4,816,567호; 제4,867,973호; 제4,938,948호; 제4,946,778호; 제5,021,236호; 제5,164,296호; 제5,196,066호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,420,253호; 제5,565,332호; 제5,571,698호; 제5,627,052호; 제5,656,434호; 제5,770,376호; 제5,789,208호; 제5,821,337호; 제5,844,091호; 제5,858,657호; 제5,861,155호; 제5,871,907호; 제5,969,108호; 제6,054,297호; 제6,165,464호; 제6,365,157호; 제6,406,867호; 제6,709,659호; 제6,709,873호; 제6,753,407호; 제6,814,965호; 제6,849,259호; 제6,861,572호; 제6,875,434호; 및 제6,891,024호.
B. 단일 쇄 항체
단일 쇄 가변 단편(scFv)은 짧은 링커(linker)와 함께 연결된, 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 융합체이다. 이러한 키메라 분자는 불변 영역의 제거 및 링커 펩타이드의 도입에도 불구하고, 원래의 면역글로불린의 특이성을 보유한다. 이러한 변형은 일반적으로 변경되지 않은 특이성을 남긴다. scFv는 하이브리도마 또는 B 세포로부터 유래된 서브클론된(subcloned) 중쇄 및 경쇄로부터 직접 생성될 수 있다. 단일 쇄 가변 단편은 완전한 항체 분자에서 발견된 불변 Fc 영역, 및 따라서, 항체를 정제하는데 사용된 일반적인 결합 부위(예컨대, 단백질 A/G)을 결여한다. 이러한 단편은 흔히 단백질 L이 카파 경쇄의 가변 영역과 상호작용하므로 단백질 L를 사용하여 정제/고정화시킬 수 있다.
가요성 링커(flexible linker)는 일반적으로 알라닌, 세린 및 글리신과 같은 나선(helix)- 및 턴(turn)-촉진 아미노산 잔기로 구성된다. 그러나, 다른 잔기가 또한 작용할 수 있다. 예를 들면, 링커는 VH C 말단에서 2개의 잔기 후 프롤린 잔기 및 다른 위치에서 아르기닌 및 프롤린의 풍부성을 가질 수 있다.
단일-쇄 항체는 또한 비-펩타이드 링커 또는 화학 단위를 사용하여 수용체 경쇄 및 중쇄를 결합시킴으로써 생성시킬 수 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 명백한 세포 내에서 생산, 정제, 및 후속적으로 적절한 양식으로 함께 연결된다(즉, 중쇄의 N-말단은 적절한 화학적 브릿지를 통해 경쇄의 C-말단에 부착된다).
가교-결합 시약을 사용하여 2개의 상이한 분자, 예컨대, 안정화제 및 응고제의 작용 그룹을 묶는 분자 브릿지를 형성한다. 그러나, 동일한 유사체의 이량체 또는 다량체 또는 상이한 유사체로 구성된 이형 복합체(heteromeric complex)를 생성할 수 있다. 단계식 방식으로 2개의 상이한 화합물을 결합시키기 위하여, 헤테로-원치않는 단독중합체 형성을 제거하는 이기능성 가교-결합제를 사용할 수 있다.
예시적인 헤테로-이기능성 가교-결합제는 2개의 반응성 그룹: 1차 아민 그룹(예컨대, N-하이드록시 석신이미드)와 반응하는 것 및 티올 그룹(예컨대, 피리딜 디설파이드, 말레이미드, 할로겐 등)과 반응하는 다른 것을 함유한다. 1차 아민 반응성 그룹을 통해, 가교-결합제는 하나의 단백질(예컨대, 선택된 항체 또는 단편)의 라이신 잔기(들)와 반응할 수 있고 티올 반응성 그룹을 통해, 이미 제1 단백질에 묶인, 가교-결합제는 다른 단백질(예컨대, 선택성 제제)의 시스테인 잔기(유리 설프하이드릴 그룹)과 반응할 수 있다.
혈액 속에서 충분한 안정성을 갖는 가교-결합제를 사용할 것이 바람직하다. 표적화제 및 치료제/예방제를 접합시키는데 성공적으로 사용될 수 있는 다수 유형의 이황화물-결합을 함유하는 링커가 공지되어 있다. 입체적으로 장애된 이황화물 결합을 함유하는 링커는 생체 내(in vivo)에서 보다 큰 안정성을 제공하여, 작용 부위에 도달하기 전에 표적화 펩타이드의 방출을 방지함이 입증될 수 있다.
예를 들면, SMPT는 인접한 벤젠 환 및 메틸 그룹에 의해 "입체적으로 장애된" 이황화물 결합을 함유하는 이작용성 가교-결합제이다. 이황화물 결합의 입체적 장애는 조직 및 혈액 속에 존재함으로써 부착된 제제를 표적 부위로 전달하기 건에 접합체의 탈커플링(decoupling)을 방지하는데 도움을 줄 수 있는 글루타티온과 같은 티올레이트 음이온에 의한 공격으로부터 결합을 보호하는 기능을 제공하는 것으로 여겨진다. 많은 다른 공지된 가교-결합제와 같이, SMPT 가교-결합제는 시스테인의 SH 또는 1급 아민(예컨대, 라이신의 엡실론 아미노 그룹)과 같은 작용 그룹을 가교-결합시키는 능력을 부여한다. 가교-결합제의 다른 가능한 유형은 절단가능한 이황화물 결합을 함유하는 헤테로-이작용성 광반응성 페닐아지드, 예를 들면, 설포석신이미딜-2-(p-아지도 살리실아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트를 포함한다. N-하이드록시-석신이미딜 그룹은 1차 아미노 그룹과 반응하고 페닐아지드(광분해 시)는 임의의 아미노산 잔기와 비-선택적으로 반응한다.
장애된 가교-결합제 외에도, 장애되지 않은 링커를 또한 본원에 따라 사용할 수 있다. 보호된 이황화물을 함유하거나 생성하는 것으로 고려되지 않는, 다른 유용한 가교-결합제는 SATA, SPDP 및 2-이미노티올란을 포함한다. 이러한 가교-결합제의 사용은 당해 분야에 잘 이해되어 있다. 가요성 링커가 또한 사용될 수 있다.
미국 특허 제4,680,338호는 특히 킬레이터, 약물, 효소, 검출가능한 표지 등과의 항체 접합체를 형성하기 위한, 리간드와 아민-함유 중합체 및/또는 단백질의 접합체를 생산하는에 유용한 이작용성 링커를 설명한다. 미국 특허 제5,141,648호 및 제5,563,250호는 다양한 온화한 조건 하에서 절단가능한 불안정한 결합을 함유하는 절단가능한 접합체를 개시하고 있다. 이러한 링커는 목적한 제제가 링커에 직접 결합될 수 있고, 절단은 활성제의 방출을 야기한다는 점에서 특히 유용하다. 특수한 사용은 단백질, 예를 들면, 항체, 또는 약물에 유리 아미노 또는 유리 설프하이드릴 그룹을 가함을 포함한다.
미국 특허 제5,856,456호는 폴리펩타이드 구성성분을 연결시켜 융합 단백질, 예컨대, 단일 쇄 항체를 제조하는데 사용하기 위한 펩타이드 링커를 제공한다. 링커는 길이가 약 50개 이하의 아미노산이며, 하전된 아미노산(바람직하게는 아르기닌 또는 라이신)의 적어도 1회 발생에 이어 프롤린을 함유하고, 보다 큰 안정성 및 감소된 응집에 의해 특징화된다. 미국 특허 제5,880,270호는 다양한 면역진단 및 분리 기술에 유용한 아미노옥시-함유 링커를 개시하고 있다.
C. 이중특이성(bispecific) 및 다중특이성(multispecific) 항체
항체는 이중특이성이거나 다중특이성일 수 있다. "이중특이성 항체"는 적어도 2개의 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이성 항체는 단일 항원의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 이러한 항체는 제1의 항원 결합 부위를 제2 항원에 대한 결합 부위와 조합시킬 수 있다. 대안적으로, 항원-특이성 아암(antigen-specific arm)은 백혈구 상에서 개시 분자(triggering molecule), 예를 들면, T-세포 수용체 분자(예컨대, CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체(FcγR), 예를 들면, FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 Fc 감마 RIII(CD16)에 결합하는 아암과 조합되어 감염된 세포에 대해 세포 방어 메카니즘을 집중시키거나 국재화할 수 있다. 이중특이성 항체를 또한 사용하여 세포독성제를 감염된 세포에 국재화시킬 수 있다. 이러한 항체는 항원-결합 아암 및 세포독성제(예컨대, 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사활성 동위원소 합텐)에 결합하는 아암을 지닌다. 이중특이성 항체는 전체 길이의 항체 또는 항체 단편(예컨대, F(ab')2 이중특이성 항체)으로서 제조될 수 있다. 문헌: Taki et al. (2015)은 이중특이성 항-HSP70/항-CD3 항체를 기술하고 있다.
이중특이성 항체를 제조하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 전체 길이의 이중특이성 항체의 전통적인 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공-발현을 기반으로 하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인하여, 이러한 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생산하고, 이중 하나 만이 정확한 이중특이성 구조를 갖는다. 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 일반적으로 수행된, 정확한 분자의 정제는 오히려 다루기 힘들고(cumbersome), 생산 수율은 낮다.
상이한 접근법에 따라서, 목적한 결합 특이성(항체-항원 조합 부위)를 지닌 항체 가변 영역은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 바람직하게는, 융합은 힌지의 적어도 일부분, CH2, 및 CH3 영역을 포함하는, Ig 중쇄 불변 도메인의 사용에 의한다. 융합체의 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필수적인 부위를 함유하는 제1의 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및, 바람직하게는, 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA는 별개의 발현 벡터 내로 삽입되며, 적합한 숙주 세포 내로 공-형질감염된다. 이는 작제에 사용된 3개의 폴리펩타이드 쇄의 균일하지 않은 비가 목적한 이중특이성 항체의 최적 수율을 제공하는 경우 3개의 폴리펩타이드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 보다 큰 가요성을 제공한다. 그러나, 동일한 비의 적어도 2개의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 고 수율로 생성되거나 비율이 목적한 쇄 조합의 수율에서 유의적인 효과를 가지지 않는 경우 2개 또는 모든 3개의 폴리펩타이드 쇄에 대한 코딩 서열(coding sequence)을 단일 발현 벡터 내로 삽입하는 것이 가능하다.
이중특이성 항체는 하나의 아암에서 제1의 결합 특이성을 지닌 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암 내에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2의 결합 특이성을 제공함)으로 구성될 수 있다. 이중특이성 분자의 단지 1/2에서 면역글로불린 경쇄의 존재가 용이한 분리 방법을 제공하므로, 이러한 비대칭 구조는 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 목적한 이중특이성 화합물의 분리를 촉진한다. 이러한 접근법은 제WO 94/04690호에 개시되어 있다. 이중특이성 항체를 생성하는 추가의 세포사항에 대해서는 예를 들면, 문헌: Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)을 참고한다.
미국 특허 제5,731,168호에 기술된 다른 접근법에 따라서, 항체 분자의 쌍 사이의 계면을 가공하여 재조합 세포 배양물로부터 회수된 헤테로이량체의 퍼센트를 극대화시킬 수 있다. 바람직한 계면은 CH3 도메인의 적어도 일부분을 포함한다. 이러한 방법에서, 제1의 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 보다 큰 측쇄(예컨대, 타이로신 또는 트립토판)으로 대체된다. 동일하거나 유사한 크기의 보상 "구멍(cavity)"은 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것(예컨대, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체시킴에 의해 제2 항체의 계면에서 생성된다. 이는 다른 원치않는 최종-생성물, 예를 들면, 단독이량체에 걸쳐 이종이량체의 수율을 증가시키기 위한 메카니즘을 제공한다.
이중특이성 항체는 가교결합되거나 "이종접합체" 항체를 포함한다. 예를 들면, 이종접합체 내 항체 중 하나는 아비딘과 커플링될 수 있고, 다른 것은 바이오틴에 커플링될 수 있다. 이러한 항체는 예를 들면, 원치않는 세포에 대해 면역계 세포를 표적화하는 것으로 제안되었다(미국 특허 제4,676,980호). 이존접합체 항체는 임의의 편리한 가교-결합 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 적합한 가교-결합제는 당해 분야에 잘 공지되어 있고, 다수의 가교-결합 기술과 함께 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.
항체 단편으로부터 이중특이성 항체를 생성하기 위한 기술은 문헌에 또한 기술되어 있다. 예를 들면, 이중특이성 항체는 화학적 연결을 사용하여 제조할 수 있다. 문헌: Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)은 완전한 항체가 예방학적으로 절단되어 F(ab')2 단편을 생성하는 과정을 기술하고 있다. 이러한 단편은 디티올 복합화제, 나트륨 아르세나이트의 존재하에서 환원되어 인접한 디티올을 안정화시키고 분가간 이황화물 형성을 방지한다. 생성된 Fab' 단편은 이후에 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. Fab'-TNB 유도체 중 하나는 이후에 머캅토에틸아민을 사용한 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환되며 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이중특이성 항체를 형성한다. 생산된 이중특이성 항체는 효소의 선택적인 고정화를 위한 제제로서 사용될 수 있다.
이. 콜라이로부터 Fab'-SH 단편의 직접적인 회수를 촉진시키는 기술이 존재하며, 이는 화학적으로 커플링되어 이중특이성 항체를 형성할 수 있다. 문헌: Shalaby et al., J. Exp. Med., 175: 217-225 (1992)은 사람화된 이중특이성 항체 F(ab')2 분자의 생산을 기술한다. 각각의 Fab' 단편은 이. 콜라이로부터 별도로 분비되어 시험관 내에서 직접적인 화학적 커플링에 적용되어 이중특이성 항체를 형성한다. 이렇게 형성된 이중특이성 항체는 ErbB2 수용체 및 정상의 사람 T 세포를 과발한하는 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 사람 유방 종양 표적에 대해 사람 세포독성 림프구의 분해 활성을 개시할 수 있다.
재조합 세포 배양물로부터 이중특이성 항체 단편을 직접 제조 및 단리하기 위한 다양한 기술이 또한 기술되었다(Merchant et al., Nat. Biotechnol.　16,　677-681　(1998)). 예를 들면, 이중특이성 항체는 루이신 지퍼(leucine zipper)를 사용하여 생산되었다(Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553, 1992). Fos 및 Jun 단백질로부터 루이신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부위에 연결되었다. 항체 단독이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성한 다음 재-산화되어 항체 이종이량체를 형성하였다. 이러한 방법은 또한 항체 단독이량체의 생산을 위해 활용될 수 있다. 문헌: Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)에 기술된 "디아보디" 기술은 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 대안의 메카니즘을 제공하였다. 단편은 동일한 쇄 상의2개의 도메인 사이에 쌍을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 ?마한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 쌍을 이루도록 강제됨으로서, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-쇄 Fv(sFv) 이량체의 사용에 의해 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 다른 전략이 또한 보고되었다(참고: Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)).
이중특이성 또는 다중특이성 항체는 DOCK-AND-LOCKTM(DNLTM) 복합체로서 형성될 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제7,521,056호; 제7,527,787호; 제7,534,866호; 제7,550,143호 및 제7,666,400호). 일반적으로, 기술은 cAMP-의존성 단백질 키나제(PKA)의 조절성(R) 소단위의 이량체와 및 도킹 도메인(docking domain; DDD)과 다양한 AKAP 단백질 중 임의의 것으로부터 유래된 앵커 도메인(anchor domain; AD) 서열 사이에서 발생하는 특이성이고 고-친화성인 결합 상호작용의 장점을 취한다(Baillie et al., FEBS Letters. 2005; 579: 3264; Wong and Scott, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2004; 5: 959). DDD 및 AD 펩타이드는 임의의 단백질, 펩타이드 또는 다른 분자에 부착될 수 있다. DDD 서열은 자발적으로 이량체화되거 AD 서열에 결합하므로, 기술은 DDD 또는 AD 서열에 부착될 수 있는 임의의 선택된 분자 사이에 복합체의 형성을 허용한다.
2개 이상의 원자가를 지닌 항체가 고려된다. 예를 들면, 삼중특이성 항체가 제조될 수 있다(Tutt et al., J. Immunol. 147: 60, 1991; Xu et al., Science, 358(6359):85-90, 2017). 항체는 또한 수용체의 이량체화 또는 다량체화를 허용하는 서열 또는 모이어티(moiety)를 포함할 수 있다. 이러한 서열은 IgA로부터 유래된 것을 포함하며, 이는 J-쇄와 함께 다량체의 형성을 허용한다. 다른 다량체화 도메인은 Gal4 이량체화 도메인이다.
다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 더 신속하게 내재화(및/또는 이화작용)될 수 있다. 본 개시내용의 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 지닌 다가 항체(예컨대, 4가 항체)일 수 있고, 이는 항체의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생산될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다(또는 이루어진다). 이러한 시나리오에서, 항체는 Fc 영역 및 Fc 영역에 대해 아미노-말단의 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. 다가 항체는 3 내지 약 8개, 예를 들면, 4개의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다(또는 이루어질 수 있다). 다가 항체는 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄(및 바람직하게는 2개의 폴리펩타이드 쇄)를 포함하고, 여기서 폴리펩타이드 쇄(들)은 2개 이상의 가변 영역을 포함한다. 예를 들면, 폴리펩타이드 쇄(들)은 VD1-(X1).sub.n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있고, 여기서 VD1은 제1의 가변 영역이고, VD2는 제2의 가변 영역이고, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩타이드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩타이드를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 예를 들면, 폴리펩타이드 쇄(들)은: VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본원의 다가 항체는 적어도 2개(및 바람직하게는 4개)의 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본원의 다가 항체는 예를 들면, 약 2 내지 약 8개의 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 본원에 고려된 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 임으로 CL 도메인을 추가로 포함한다.
전하 변형은 다중특이성 항체의 문맥에서 특히 유용하며, 여기서 Fab 분자 내 아미노산 치환은 경쇄와 일치하지 않는 중쇄의 잘못된 쌍화(mispairing)(벤스-존스-유형 측 생성물(Bence-Jones-type side products))을 생성하며, 이는 이의 결합 아암 중 하나(또는 2개 이상의 항원-결합 Fab 분자를 포함하는 분자의 경우에 그 이상)에서 VH/VL 교환을 지닌 Fab-기반 이중-/다중특이성 항원 결합 분자의 생산에서 발생할 수 있다(참고: 또한 이의 전문이 본원에 참고로 포함된, PCT 공보 제WO 2015/150447호, 특히 여기서의 실시예).
D. BiTES
이중특이성 T-세포 인게이저(engager)(BiTE®)는 숙주 면역 시스템, 보다 구체적으로 표적의 질환이 있는 세포에 T 세포 세포독성 활성을 지시하는 인공의 이중특이성 모노클로날 항체이다. BiTE는 약 55 킬로달톤의 단일 펩타이드 쇄 상에서, 상이한 항체의 2개의 단일-쇄 가변 단편(scFv), 또는 4개의 상이한 유전자로부터의 아미노산 서열로 이루어진 융합 단백질이다. scFv 중 하나는 CD3 수용체를 통해 T 세포에 결합하고, 다른 것은 특이성 분자를 통해 감염된 세포에 결합한다.
다른 이중특이성 항체와 유사하게, 및 통상의 모노클로날 항체와는 달리, BiTE는 T 세포와 표적 세포 사이에 연결을 형성한다. 이는 T 세포가 MHC I 또는 공-자극성 분자의 존재와는 독립적으로, 페르포린 및 그랜자임과 같은 단백질은 생산함으로써 표적 세포 상에서 세포독성 활성을 발휘하도록 한다. 이러한 단백질은 표적 세포로 들어가서 세포자멸사를 개시한다. 이러한 작용은 감염된 세포에 대한 T 세포 공격 동안 관찰된 생리학적 공정을 모사한다.
E. 항체 접합체
본 개시내용의 항체는 적어도 하나의 제제와 연결되어 항체 접합체를 형성할 수 있다. 접합체는 예를 들면, 다른 단백질성, 탄수화물, 지질, 또는 혼합된 모이어티 분자(들)에 접합된 항체일 수 있다. 이러한 항체 접합체는 하나 이상의 중합체에 항체를 연결시킴을 포함하는 변형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들면, 항체는 하나 이상의 수용성 중합체에 연결될 수 있다. 수용성 중합체에 대한 연결은 항체가 수성 환경, 예를 들면, 생리학적 환경 속에서 침전할 가능성을 감소시킨다. 당해 분야의 숙련가는 중합체/항체 접합체가 환자의 치료시 사용될 것인지의 여부 및, 그럴 경우, 항체의 약리학적 프로파일(예컨대, 반감기, 투여량, 활성, 항원성, 및/또는 다른 인자)을 포함하나, 이에 한정되지 않는 고려사항을 기반으로 적합한 수용성 중합체를 선택할 수 있다.
진단제 또는 치료제로서 항체 분자의 효능을 증가시키기 위하여, 적어도 하나의 목적한 분자 또는 모이어티를 연결시키거나 공유결합적으로 결합 또는 복합체화시키는 것이 편리하다. 이러한 분자 또는 모이어티는 적어도 하나의 효과기 또는 리포터 분자일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 효과기 분자는 목적한 활성, 예컨대, 세포독성 활성을 갖는 분자를 포함한다. 항체에 부착된 효과기 분자의 비-제한적 예는 독소, 항-종양제, 치료학적 효소, 방사핵종, 항바이러스 제제, 킬레이트제(chelating agent), 사이토킨, 성장 인자, 및 올리고- 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 대조적으로, 리포터 분자는 검정을 사용하여 검출될 수 있는 임의의 모이어티로 정의된다. 항체에 접합된 리포터 분자의 비-제한적 예는 효소, 방사핵종, 합텐, 형광성 표지, 인광성 분자, 화학발광성 분자, 발색단, 광친화성 분자, 착색된 입자 또는 리간드, 효소(예컨대, 비색 또는 형광분석 반응을 촉매하는), 기질, 고체 매트릭스, 예를 들면, 바이오틴을 포함한다. 항체는 임의의 이러한 표지 중 1개, 2개, 또는 그 이상을 포함할 수 있다.
항체 접합체를 사용하여 표적 세포에 세포독성제를 전달할 수 있다. 이러한 유형의 세포독성제는 항체-매개된 세포독성을 증진시킬 수 있고, 이러한 모이어티를 세포 사멸을 직접 또는 간접적으로 자극하는 사이토킨, 방사핵종, 화학치료 약물(예를 들면, 프로드럭(prodrug), 세균 독소(예컨대, 슈도모나스 외독소, 디프테리아 독소 등), 식물 독소(예컨대, 리신, 겔로닌 등), 화학적 접합체(예컨대, 마이탄시노이드 독소, 아우리스타틴, α-아마니틴, 안트라사이클린, 칼레캐미신 등), 방사선접합체, 효소 접합체(예컨대, RNase 접합체, 그랜자임 항체-지시된 효소/프로드럭 치료요법) 등으로서 포함한다.
항체 접합체를 또한 진단제로서 사용한다. 항체 진단제는 일반적으로 2개 부류, 즉, 다양한 면역검정에서와 같이, 시험관 내 진단에서 사용하기 위한 것, 및 일반적으로 "항체-지시된 영상화"로서 공지된, 시험관 내 진단 프로토콜에서 사용하기 위한 것에 속한다. 많은 적절한 영상화제가 항체에 이를 부착시키는 방법과 같이, 당해 분야에 공지되어 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제5,021,236호, 제4,938,948호, 및 제4,472,509호). 사용된 영상화 모이어티는 상자성 이온, 방사활성 동위원소, 플루오로크롬, NMR-검출가능한 기질, 및 X-선 영상화제일 수 있다.
접합체로서 사용하기 위해 고려된 상자성 이온은 크롬(III), 망간(II), 철(III), 철(II), 코발트(II), 니켈(II), 구리(II), 에오디뮴(III), 사마륨(III), 이테븀(III), 가돌리늄(III), 바나듐(II), 테르븀(III), 디스프로슘(III), 홀뮴(III) 및/또는 에르븀(III)을 포함하고, 가돌리늄이 특히 바람직하다. 다른 문맥, 예를 들면, X-선 영상화에서 유용한 이온은 란타늄(III), 금(III), 납(II), 및 비스무쓰(III)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
접합된 것으로 사용하기 위해 고려된 방사활성 동위원소는 아스타틴211, 14탄소, 51크롬, 36염소, 57코발트, 58코발트, 구리67, 152Eu, 갈륨67, 3수소, 요오드123, 요도드125, 요오드131, 인듐111, 59철, 32인, 레늄186, 레늄188, 75셀레늄, 35황, 테크니슘99m 및/또는 이트륨90을 포함한다. 125I가 흔히 바람직하다. 테크니슘99m 및/또는 인듐111이 이의 낮은 에너지 및 긴 범위의 검출을 위한 적합성으로 인하여 바람직하다. 본 개시내용의 방사활성적으로 표지된 모노클로날 항체는 당해 분야에 잘 공지된 방법에 따라 생산할 수 있다. 예를 들면, 모노클로날 항체는 요오드화나트륨 및/또는 요오드화칼륨 및 화학적 산화제, 예를 들면, 차아염소산나트륨, 또는 효소 산화제, 예를 들면, 락토퍼옥시다제와의 접촉에 의해 요오드화될 수 있다. 개시내용에 따른 모노클로날 항체는 리간드 교환 공정, 예를 들면, 퍼테크네이트를 주석 용액으로 환원시키고, 환원된 테크네튬을 세파덱스 컬럼 위에 킬레이트시키고 항체를 이러한 컬럼에 적용시킴으로써 테크네튬99m으로 표지시킬 수 있다. 대안적으로, 직접적인 표지화 기술을 예컨대, 퍼테크네이트, 환원제, 예를 들면, SNCl2, 완충제 용액, 예를 들면, 나트륨-칼륨 프탈레이트 용액, 및 항체를 항온처리함으로서 사용할 수 있다. 금속성 이온으로서 존재하는 방사선동위원소를 항체에 결합시키는데 흔히 사용된 중간 작용성 그룹은 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA) 또는 에틸렌 디아민테트라아세트산(EDTA)이다.
접합체로서 사용하기 위해 고려된 형광성 표지는 Alexa 350, Alexa 430, AMCA, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665, BODIPY-FL, BODIPY-R6G, BODIPY-TMR, BODIPY-TRX, Cascade Blue, Cy3, Cy5,6-FAM, 플루오레세인 이소티오시아네이트, HEX, 6-JOE, Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, REG, Rhodamine Green, Rhodamine Red, Renographin, ROX, TAMRA, TET, 테트라메틸로다민, 및/또는 Texas Red를 포함한다.
본 개시내용에서 고려된 항체의 추가의 유형은 시험관 내에서 사용하기 위해 주로 의도된 것이며, 여기서 항체는 제2의 결합 리간드 및/또는 생원체성 기질과 접촉시 착색된 생성물을 생성할 효소(효소 태그)에 연결된다. 적합한 효소의 예는 우레아제, 알칼린 포스파타제, (서양고추냉이) 하이드로겐 퍼옥시다제 또는 글루코스 옥시다제를 포함한다. 바람직한 제2의 결합 리간드는 바이오틴 및 아비딘 및 스트렙타비딘 화합물이다.
이의 접합 모이어티에 항체를 부착 또는 접합시키기 위한 수 개의 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 일부 부착 방법은 예를 들면, 유기 킬레이트제, 예를 들면, 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA); 에틸렌트리아민테트라아세트산; N-클로로-p-톨루엔설폰아미드; 및/또는 항체에 부착된 테트라클로로-3α-6α-디페닐글리코우릴-3을 사용하는 금속 킬레이트 복합체의 사용을 포함한다(미국 특허 제4,472,509호 및 제4,938,948호). 모노클로날 항체는 또한 커플링제, 예를 들면, 글루타르알데하이드 또는 퍼요오데이트의 존재하에 효소와 반응될 수 있다. 플루오레세인 마커와의 접합체는 이러한 커플링제의 존재하에서 또는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조된다. 미국 특허 제4,938,948호에서, 유방 종양(breast tumor)의 영상화는 모노클로날 항체를 사용하여 달성되며 검출가능한 영상화 모이어티는 링커, 예를 들면, 메틸-p-하이드록시벤즈이미데이트 또는 N-석신이미딜-3-(4-하이드록시페닐)프로피오네이트를 사용하여 항체에 결합시킨다.
항체에 대한 분자의 부위-특이성 부착의 다른 공지된 방법은 항체와 합텐-기반 친화성 표지의 반응을 포함한다. 필수적으로, 합텐-기반 친화성 표지는 항원 결합 부위에서 아미노산과 반응함으로써, 이러한 부위를 파괴하고 특이성 항원 반응을 차단한다. 그러나, 이는 항체 접합체에 의한 항원 결합의 손실을 야기하므로 유리하지 않을 수 있다.
아지도 그룹을 함유하는 분자를 또한 사용하여 저 강도 자외선 광에 의해 생성된 반응성 니트렌 중간체를 통해 단백질에 대한 공유결합성 결합을 형성시킬 수 있다. 특히, 퓨린 뉴클레오타이드의 2- 및 8-아지도 유사체를 부위-지시된 광프로브로서 사용하여 조 세포 추출물 내 뉴클레오타이드 결합 단백질을 확인하였다. 2- 및 8-아지도 뉴클레오타이드를 또한 사용하여 정제된 단백질의 뉴클레오타이드 결합 도메인을 맵핑하고 항체 결합제로서 사용할 수 있다.
항체 조합 부위를 변경시키지 않는 반응을 사용하여, 면역글로불린의 Fc 영역내 설프하이드릴 그룹을 선택적으로 도입함으로써 면역글로불린의 유도체화를 또한 고려한다. 증진된 지속성, 특이성 및 민감성을 나타내기 위해, 이러한 방법론에 따라 생산된 항체 접합체가 개시되어 있다(본원에 참고로 포함된, 미국 특허 제5,196,066호). 리포터 또는 효과기 분자가 Fc 영역 내 탄수화물 잔기에 접합된, 효과기 또는 리포터 분자의 부위-특이성 부착이 또한 문헌에 개시되었다. 이러한 접근법은 현재 임상 평가 중인 진단학적으로 및 치료학적으로 촉망되는 항체를 생산하는 것으로 보고되었다.
F. 항체 약물 접합체
항체 약물 접합체, 또는 ADC는 질환이 있는 사람의 치료를 위한 표적화된 치료요법으로서 진단된 매우 강력한 생물약제학적 약물의 신규 부류이다. ADC는 불안정한 결합을 지닌 안정한 화학적 링커를 통해 생물학적 활성 세포독성/항-바이러스 페이로드 또는 약물에 연결된 항체(전체 mAb 또는 항체 단편, 예를 들면, scFv)로 구성된 복합체 분자이다. 항체 약물 접합체는 생물접합체 및 면역접합체의 예이다.
모노클로날 항체의 유일한 표적화 능력과 세포독성 약물의 암-사멸 능력을 조합함으로써, 항체-약물 접합체는 건강한 조직과 질환이 있는 조직 사이의 민감한 식별을 허용한다. 이는 전통적인 시스템적 접근법과는 대조적으로, 항체-약물 접합체는 질환이 있는 세포를 표적화하여 공격함으로써 건강한 세포가 거의 심각하게 영향받지 않도록 함을 의미한다.
ADC-기반 항-종양 치료요법의 개발에서, 항암 약물(예컨대, 세포의 독소(cell toxin) 또는 세포독소(cytotoxin))은 특정의 세포 마커(예컨대, 이상적으로 질환이 있는 세포 내에서 또는 질환이 있는 세포 상에서만 발견되는 단백질)를 특이적으로 표적화하는 항체에 커플링된다. 항체는 신체 내에서 이러한 단백질을 추적하여 잡으며 자체적으로 질환이 있는 세포의 표면에 부착된다. 항체와 표적 단백질(항원) 사이의 생화학적 반응은 표적화된 세포 내에서 신호를 개시하며, 이는 이후에 세포독소와 함께 항체를 흡수하거나 이를 내재화한다. ADC가 내재화된 후, 세포독성 약물이 방출되며 세포를 사멸시키거나 세포 복제를 손상시킨다. 이러한 표적화로 인해, 이상적으로 약물은 보다 낮은 부작용을 가지며 다른 제제보다 더 광범위한 치료학적 윈도우(therapeutic window)를 제공한다.
항체의 세포독성제 사이의 안정한 연결은 ADC의 결정적인 양태이다. 링커는 이황화물, 하이드라존 또는 펩타이드(절단가능), 또는 티오에테르(절단가능하지 않음)를 포함하는 화학적 모티프를 기반으로 하며 세포독성제를 표적 세포로 분포 및 전달하는 것을 제어한다. 링커의 절단가능한 및 비-절단가능한 유형은 전임상 및 임상 시험에서 안전한 것으로 입증되었다. 브렌툭시맙 베도틴은 강력하고 매우 독성인 항미세관 제 모노메틸 아우리스타틴 E 또는 MMAE, 합성 항혈관형성제를 사람 특이성 CD30-양성 악성종양 세포로 전달하는 효소-민감성의 절단가능한 링커를 포함한다. 이의 높은 독성으로 인하여, 투불린의 중합화를 차단함으로써 세포 분열을 억제하는 MMAE는 단일-제제 화학치료학적 약물로서 사용될 수 없다. 그러나, 항-CD30 모노클로날 항체(cAC10, 종양 괴사 인자 또는 TNF 수요체의 세포 막 단백질)에 연결된 MMAE의 조합은 세포외 유체 속에서 안정하고 카텝신에 의해 절단가능하고 치료요법에 대해 안정함이 입증되었다. 다른 승인된 ADC인, 트라스투주맙 엠탄신은 안정한, 비-절단가능한 링커에 의해 부착된 미소관-형성 억제제 머탄신(DM-1), 마이탄신의 유도체, 및 항체 트라스투주맙((Herceptin®/Genentech/Roche)의 조합물이다.
보다 우수하고 보다 안정한 링커의 이용가능성은 화학 결합의 작용을 변화시켰다. 절단가능하거나 절단가능하지 않은, 링커의 유형은 세ㅗ독성(예컨대, 항-암) 약물에 특이성 특성을 부여한다. 예를 들면, 비-절단가능한 링커는 세포 내에서 약물을 유지시킨다. 그 결과, 전체 항체, 링커, 및 세포독성제는 표적 세포로 들어가며 여기서 항체는 아미노산의 수준으로 분해된다. 수득되는 복합체 - 아미노산, 링커 및 세포독성제-는 이제 활성 약물이 된다. 대조적으로, 절단가능한 링커는 숙주 세포 내에서 효소에 의해 촉매됨으로써, 세포독성제를 방출한다.
다른 유형의 절단가능한 링커는 세포독성 약물과 절단 부위 사이에 추가의 분자를 가한다. 이러한 링커 기술은 연구자가 절단 역학의 변화에 관한 우려없이 ADC를 보다 가요성있게 생성하도록 한다. 연구자들은 Edman 분해를 기반으로 펩타이드 절단의 새로운 방법을 개발 중에 있다. ADC의 개발에서 추가의 방향은 또한 부위-특이성 접합(TDC)의 개발을 포함함으로써 안정성 및 치료학적 지표 및 α-방출 면역접합체 및 항체-접합된 나노입자를 추가로 증진시킨다.
G. 인트라보디(Intrabody)
특수한 구현예에서, 항체는 세포의 내부에서 작용하기에 적합한 재조합 항체이며-이러한 항체는 "인트라보디"로 알려져 있다. 이러한 항체는 다양한메카니즘, 예를 들면, 세포내 단백질 트래피킹(trafficking)을 변경시킴고, 효소 기능을 방해하고, 단백질-단백질 또는 단백질-DNA 상호작용을 차단함으로써 표적 작용을 방해할 수 있다. 많은 방법으로, 이의 구조는 상기 논의된, 단일 쇄 및 단일 도메인 항체의 구조를 모사하거나 유사하다. 또한, 단일-전사체/단일-쇄는 표적 세포 내에서 세포내 발현을 허용하고, 또한 세포막을 횡당하는 단백질 수송을 보다 용이하도록 하는 중요한 특징이다. 그러나, 추가의 특징이 요구된다. 인트라보디가 요구될 수 있는 추가의 특징은 세포내 표적화를 위한 신호이다. 인트라보디(또는 다른 단백질)를 소세포 영역, 예를 들면, 세포질, 핵, 미토콘드리아 및 ER에 대해 표적화할 수 있는 벡터는 설계되었고 상업적으로 이용가능하다(Invitrogen Corp.).
인트라보디 치료제의 시행에 영향을 미치는 2개의 주요 쟁점은 전달, 예를 들면, 세포/조직 표적화, 및 안정성이다. 전달과 관련하여, 다양한 접근법, 예를 들면, 조직-지시된 전달, 세포형 특이성 프로모터의 사용, 바이러스-기반 전달, 세포-투과능/막 전좌 펩타이드의사용, 및 엑소좀을 사용한 전달이 사용되었다. 전달의 하나의 수단은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된, 미국 특허원 공보 제2018/0177727호에 교시된 바와 같은 지질-기반 나노입자, 또는 엑소좀의 사용을 포함한다. 안전성과 관련하여, 접근법은 일반적으로 브루트 력(brute force)에 의한 스크리닝, 예를 들면, 파아지 디스플레이를 포함하고 서열 성숙 또는 컨센수스 서열(consensus sequence)의 개발, 또는 보다 지시된 변형, 예를 들변, 삽입 안정화 서열(예컨대, Fc 영역, 차페론 단백질 서열, 루이신 지퍼(leucine zipper)) 및 이황화물 대체/변형을 포함하는 방법이다.
H. 항체의 생산 및 정제
모노클로낭 항체를 생성하는 방법은 일반적으로 폴리클로날 항체를 제조하기 위한 것과 같은 동일한 세포주에 따라 시작한다. 이러한 방법 둘 다에 대한 제1 단계는 적절한 숙주의 면역화이다. 당해 분야에 잘 공지된 바와 같이, 면역화를 위해 주어진 조성물은 이의 면역원성에 있어서 다양할 수 있다. 따라서, 펩타이드 또는 폴리펩타이드 면역원을 담체에 커플링시킴으로써 달성될 수 있는 바와 같이, 숙주 면역계를 증강(boost)시키는 것이 흔히 필수적이다. 예시적이고 바람직한 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin; KLH) 및 소 혈청 알부민(bovine serum albumin; BSA)이다. 다른 알부민, 예를 들면, 오브알부민, 마우스 혈청 알부민 또는 토끼 혈청 알부빈을 또한 담체로서 사용할 수 있다. 폴리펩타이드를 담체 단백질에 접합시키기 위한 수단은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 글루타르알데하이드, m-말레이미도벤코일-N-하이드록시석신이미드 에스테르, 카르보디이미드 및 비스-비아조화된(bis-biazotized) 벤디딘을 포함한다. 당해 분야에 잘 공지된 바와 같이, 특수한 면역원 조성물의 면역원성은 보조제로서 알려진 면역 반응의 비-특이성 자극인자의 사용에 의해 향상될 수 있다. 동물에서 예시적이고 바람직한 보조제는 완전 프루언트 보조제(complete Freund's adjuvant)(사멸된 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis)를 함유하는 면역 반응의 비-특이성 자극인자), 불완전 프루언드 보조제 및 수산화알루미늄 보조제를 포함하고 사람에서 명반(alum), CpG, MFP59, 및 면역자극성 분자의 조합("보조제 시스템", 예를 들면, AS01 또는 AS03)을 포함한다. 항원-특이성 B 세포를 유도하는 접종의 추가의 실험 형태, 예를 들면, 나노입자 백신, 또는 생리학적 전달 시스템에서 DNA 또는 RNA 유전자로서 전달된, 및 침, 유전자 총(gene gun), 또는 경피 전기천공 장치(transcutaneous electroporation device)를 사용하여 전달된 유전자-암호화된 항원가 가능하다. 항원 유전자는 또한 복제 적격성 또는 결합성 바이러스 벡터, 예를 들면, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 폭스바이러스, 헤르페스바이러스, 또는 알파바이러스 레플리콘, 또는 대안적으로 바이러스-유사 입자에 의해 암호화된 바와 같이 운반될 수 있다.
항체-생산 세포 및 골수 세포의 하이브리드를 생성시키는 방법은 일반적으로 체세포를 골수종 세포와 2:1의 비로 혼합함을 포함하며, 이러한 비는 세포 막의 융합을 촉진시키는 제제 또는 제제들(화학적 또는 전기적)의 존재하에서 약 20:1 내지 약 1:1로 변할 수 있다. 일부 경우에, 초기 단계로서 사람 B 세포를 엡슈타인 바르 바이러스(Epstein Barr virus; EBV)로 형질전환시키는 것은 B 세포의 크기를 증가시켜, 비교적 큰-크기의 골수종 세포와의 융합을 향상시킨다. EBV에 의한 형질전환 효능은 형질전환 매질 속에서 CpG 및 Chk2 억제제 약물을 사용함으로써 향상된다. 대안적으로, 사람 B 세포는 추가의 가용성 인자, 예를 들면, IL-21 및 사람 B 세포 활성화 인자(BAFF), TNF 상과(superfamily)의 제II형 구성원을 함유하는 배지 속에서 CD40 리간드(CD154)를 발현시키는 형질감염된 세포주와 공-배양함으로써 활성화시킬 수 있다. 센다이 바이러스 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 사용한 융합 방법은 또한 알려져 있다. 전기적으로 유도된 융합 방법의 사용이 또한 적절하다. 융합 과정은 일반적으로 다양한 하이브리드를 낮은 빈도, 약 1 x 10-6 내지 1 x 10-8으로 생산하지만, 최적화된 과정을 사용하여 융합 효능을 200 중 1로 근접시킬 수 있다. 그러나, 비교적 낮은 융합 효능은 생존가능한, 융합된 하이브리드가 선택 배지 속에서 배양함에 의해, 주입된 모 세포(특히, 일반적으로 지속적으로 무한 분열할 수 있는 주입된 골수종 세포)로부터 분화되므로, 문제를 지지지 않는다. 선택 배지는 일반적으로 조직 배양 배지 속에서 뉴클레오타이드의 신규(de novo) 합성을 차단하는 제제를 함유하는 것이다. 예시적이고 바람직한 제제는 아미노프테린, 메토트렉세이트, 및 아자세린이다. 아미노프테린 및 메토트렉세이트는 푸린 및 피리미딘 둘 다의 신규 합성을 차단하는 반면, 아자세린은 푸린 합성 만을 차단한다. 아미노프테린 또는 메토트렉세이트가 사용된 경우, 배지는 하이포크산틴 및 티미딘이 뉴클레오타이드의 공급원으로서(HAT 배지) 보충된다. 아자세린이 사용된 경우, 배지는 하이포크산틴으로 보충된다. 오우아바인(ouabain)은 B 세포 공급원이 EBV-형질감염된 사람 B 세포주인 경우 첨가되어 골수종에 융합되지 않은 EBV-형질전환된 세포주를 제거한다.
바람직한 선택 배지는 HAT 또는 오우아바인이 들어있는 HAT이다. 뉴클레오타이드 구조 경로(nucleotide salvage pathway)를 작동시킬 수 있는 세포 만이 HAT 배지 속에서 생존할 수 있다. 골수종 세포는 구조 경로의 주요 효소, 예컨대, 하이포크산틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(hypoxanthine phosphoribosyl transferase; HPRT)를 결여하고 있으며, 이는 생존할 수 없다. B 세포는 이러한 경로를 작동시킬 수 있지만, 이는 배양물 속에서 제한된 수명을 가지며 일반적으로 약 2주 내에 죽는다. 따라서, 선택 배지 속에서 생존할 수 있는 세포 만이 골수종 및 B 세포로부터 형성된 하이브리드이다. 융합에 사용된 B 세포의 공급원이 EBV-형질전환된 B 세포주인 경우, 본원에서와 같이, EBV-형질전환된 B 세포가 약물 사멸에 민감하지만, 사용된 골수종 파트너는 오우아바인 내성이 되도록 선택되므로, 오우아바인은 또한 하이브리드의 약물 선택을 위해 사용될 수 있다.
배양은 이로부터 특이성 하이브리도마가 선택된 하이브리도마의 집단을 제공한다. 전형적으로, 하이브리도마의 선택은 세포를 미세역가 플레이트 속에서 단일-클론 희석에 의해 배양한 후, 개개 클론 상층액(약 2 내지 3주 후)을 목적한 반응성에 대해 시험함으로써 수행한다. 검정, 예를 들면, 방사선면역검정, 효소 면역검정, 세포독성 검정, 플라크 검정 도트 면역결합 검정(plaque assays dot immunobinding assay) 등은 민감하고, 단순하며, 신속할 수 있다. 선택된 하이브리도마는 이후 일련 희석되거나 유동 세포분석법적 분류에 의해 단일-세포 분류되고 개개의 항체-생산 세포주로 클로닝되며, 이러한 클론은 이후 무제한으로 증식하여 모노클로날 항체를 제공할 수 있다. 세포주는 2개의 기본 방식으로 모노클로날 항체 생산을 위해 탐구될 수 있다. 하이브리도마의 샘플은 동물(예컨대, 마우스) 내로 주사(흔히 복강 내로)될 수 있다. 임의로, 동물은 주사 전에 탄화수소, 특히 오일, 예를 들면, 프리스탄(테트라메틸펜타데칸)으로 프라임된다. 사람 하이브리도마가 이러한 방식으로 사용된 경우, 면역약화된 마우스(immunocompromised mice), 예를 들면, SCID 마우스에게 주사하여, 종양 거부를 방지하는 것이 최적이다. 주사된 동물은 융합된 세포 하이브리드에 의해 생산된 특이성 모노클로날 항체를 분비하는 종양을 발달시킨다. 동물의 체액, 예를 들면, 혈청 또는 복수액은 이후 탭핑(tapping)되어 모노클로날 항체를 고 농도로 제공할 수 있다. 개개 세포주는 또한 시험관 내에서 배양될 수 있고, 여기서 모노클로날 항체는 천연적으로 이들이 고 농도로 용이하게 수득될 수 있는 배양 배지로 분비된다. 대안적으로, 사람 하이브리도마 세포주는 시험관 내에서 사용되어 세포 상층액 속에 면역글로불린을 생산할 수 있다. 세포주는 성장을 위해 혈청-유리된 배지속에서 적응되어 고 순도의 사람 모노클로날 면역글로불린을 회수하는 능력을 최적화시킬 수 있다.
하이브리도마가 배양된 후, 세포가 분해되고, 총 RNA가 추출될 수 있다. 무작위 헥사머는 RT와 함께 사용되어 RNA의 cDNA 카피를 생성한 다음 PCR 프라이머의 멀티플렉스 혼합물을 사용하여 수행된 PCR은 모든 사람 가변 유전자 서열을 증폭시키는 것으로 예측될 수 있다. PCR 생성물은 pGEM-T Easy 벡터로 클로닝될 수 있고, 이후 자동화된 DNA 서열분석에 의해 표준 벡터 프라이머를 사용하여 서열분석될 수 있다. 결합 및 중화의 검정은 하이브리도마 상층액으로부터 수집되고, 단백질 G 컬럼을 사용하여 FPLC에 의해 정제된 항체를 사용하여 수행될 수 있다.
재조합 전체 길이의 IgG 항체는 중쇄 및 경쇄 Fv DNA를 클로닝 벡터로부터 IgG 플라스미드 벡터로 서브클로닝함으로써 생성될 수 있고, 293(예컨대, 프리스타일(Freestyle)) 세포 또는 CHO 세포 내로 형질감염시키고, 항체를 수집하여, 293 또는 CHO 세포 상층액으로부터 정제할 수 있다. 다른 적절한 숙주 세포 시스템은 세균, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli), 곤충 세포(S2, Sf9, Sf29, High Five), 식물 세포(예컨대, 사람-유사 글리칸에 대해 가공되거나 가공되지 않은, 담배), 조류, 또는 다양한 비-사람 전이유전자성 세포, 예를 들면, 마우스, 랫트, 염소 또는 소를 포함한다.
후속적인 항체 정제, 및 숙주의 면역화를 위한 목적 둘 다를 위한, 항체를 암호화하는 핵산의 발현이 또한 고려된다. 항체 코딩 서열은 RNA, 예를 들면, 천연 RNA 또는 변형된 RNA일 수 있다. 변형된 RNA는 mRNA에 증가된 안정성 및 낮은 면역원성을 제공함으로써, 치료학적으로 중요한 단백질의 발현을 촉진시키는 특정의 화학적 변형을 고려한다. 예를 들면, N1-메틸-슈도우리딘(N1mΨ)은 이식 능력의 측면에서 수개의 다른 뉴클레오사이드 변형 및 이의 조합을 능가한다. 해독의 면역/eIF2α 인산화-의존성 억제를 끄는 것(turning off) 외에, 혼입된 N1mΨ 뉴클레오타이드는 mRNA 상에서 리보소옴 정지(pausing) 및 밀도를 증가시킴으로써 해독 공정의 역학을 현저히 변경시킨다. 변형된 mRNA의 증가된 리보소옴 로딩은 동일한 mRNA 상에서 리보소옴 재순환 또는 새로운 리보소옴 보충을 선호함으로써 이들이 개시에 대해 보다 허용성이 되도록 한다. 이러한 변형을 사용하여 RNA를 사용한 접종 후 생체 내에서 항체 발현을 향상시킬 수 있었다. RNA는, 천연 또는 변형에 상관없ㅎ이, 네이크드 RNA(naked RNA) 또는 전달 비히클, 예를 들면, 지질 나노입자로서 전달될 수 있다.
대안적으로, 항체를 암호화하는 DNA를 동일한 목적을 위해 사용할 수 있다. DNA는 이것이 설계된 숙주 세포 내에서 활성인 프로모터를 포함하는 발현 카세트 내에 ?마된다. 발현 카세트는 유리하게는 복제가능한 벡터, 예를 들면, 통상의 플라스미드 또는 미니벡터 내에 포함된다. 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들면, 폭스바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 및 렌티바이러스가 고려된다. 항체 유전자를 암호화하는 레플리콘(replicon), 예를 들면, VEE 바이러스 또는 신드비스 바이러스를 기반으로 한 알파바이러스 레플리콘이 또한 고려된다. 이러한 벡터의 전달은 근육내, 피하, 또는 피내 경로를 통해 침으로, 또는 생체 내 발현이 요구되는 경우 경피 전기천공으로 수행될 수 있다.
대안적으로, 분자 클로닝 접근법을 사용하여 모노클로날 항체를 생성할 수 있다. 목적한 항원으로 표지된 단일 B 세포는 상자성 비드 선택 또는 유동 세포분석법적 분류를 사용하여 물리적으로 분류한 다음, RNA를 단일 세포 및 RT-PCR에 의해 증폭된 항체 유전자로부터 단리할 수 있다. 대안적으로, 항원-특이성의 다량의 분류된 세포의 집단을 미세소낭 및 중쇄 및 경쇄 앰플리콘의 물리적 연결을 사용하여 단일 세포로부터 회수한 매치된 중쇄 및 경쇄 가변 유전자, 또는 소낭으로부터 중쇄 및 경쇄 유전자의 일반적인 바코드화로 구분할 수 있다. 단일 세포로부터 일치된 중쇄 및 경쇄 유전자는 세포를 RT-PCR 프라이머를 지닌 세포-침투 나노입자 및 세포당 1개의 바코드를 지닌 전사체를 제조하기 위한 바코드로 처리함으로써 항원 특이성 B 세포의 집단으로부터 수득할 수 있다. 항체 가변 유전자는 또한 하이브리도마 세포주 및 RT-PCR에 의해 수득된 항체 유전자의 RNA 추출에 의해 단리하고, 면역글로불린 발현 벡터 내로 클로닝할 수 있다. 대안적으로, 조합 면역글로불린 파아지미드 라이브러리는 세포주로부터 단리된 RNA로부터 제조되며 적절한 항체를 발현하는 파아지미드는 바이러스 항원을 사용하여 패닝(panning)함으로써 선택된다. 통상의 하이브리도마 기술보다 이러한 접근법의 장점은 대략 104 배의 많은 항체가 생산되고 1회 라운드에서 스크리닝될 수 있다는 것이며, 새로운 특이성이 적절한 항체를 발견할 기회를 추가로 증가시키는 H 및 L 쇄 조합에 의해 생성된다는 것이다.
각각 본원에 참고로 포함되고, 본 개시내용에서 유용한 항체의 생산을 교시하는, 다른 미국 특허는 조합적 접근법을 사용한 키메라 항체의 생산을 기술하는 미국 특허 제5,565,332호; 재조합 면역글로불린 제조를 기술하는 미국 특허 제4,816,567호; 및 항체-치료제 접합체를 기술하는 미국 특허 제4,867,973호를 포함한다.
임의의 수단으로 생산된 모노클로날 항체는 필요한 경우, 여과, 원심분리, 및 다양한 크로마토그래피 방법, 예를 들면, FPLC 또는 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제할 수 있다. 본 개시내용의 모노클로날 항체의 단편은 효소, 예를 들면, 펩신 또는 파파인을 사용한 분해를 포함하는 방법, 및/또는 화학적 환원에 의한 이황화물 결합의 절단에 의해 정제된 모노클로날 항체로부터 수득할 수 있다. 대안적으로, 본 개시내용에 포함된 모노클로날 항체 단편은 자동화된 펩타이드 합성기를 사용하여 합성할 수 있다.
본 개시내용의 항체는 정제될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "정제된"은 다른 구성성분으로부터 단리될 수 있는 조성물을 지칭하는 것으로 의도되며, 여기서 단백질은 이의 천연적으로 수득가능한 상태와 비교하여 임의의 정도로 정제된다. 따라서, 정제된 단백질은 또한 이것이 천연적으로 발생할 수 있는 환경으로부터 유리된 단백질을 지칭한다. 용어 "실질적으로 정제된"이 사용된 경우, 이러한 명칭은 단백질 또는 펩타이드가 조성물의 주요 구성성분을 형성하는, 예를 들면, 조성물 속의 단백질의 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95% 이상을 구성하는 조성물을 지칭할 것이다.
단백질 정제 기술은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 이러한 기술은 하나의 수준에서, 폴리펩타이드 및 비-폴리펩타이드 분획으로 세포 환경의 조 분획화를 포함한다. 다른 단백질로부터 폴리펩타이드를 분리하고, 목적한 폴리펩타이드를 크로마토그래피 또는 전기영동 기술을 사용하여 정제함으로써 부분적인 또는 완전한 정제(또는 균질성으로의 정제)를 달성할 수 있다. 순수한 펩타이드의 제조에 특히 적합한 분석 방법은 이온-교환 크로마토그래피, 절개 크로마토그래피; 폴리아크릴아미드 겔 전기영동; 등전점 포커싱(isoelectric focusing)이다. 단백질 정제를 위한 다른 방법은 황산암모늄, PEG, 항체 등을 사용한 침전 또는 열 변형에 이어, 원심분리; 겔 여과, 역상, 하이드록시아파타이트 및 친화성 크로마토그래피; 및 이러한 및 다른 기술의 조합을 포함한다.
본 개시내용의 항체를 정제하는데 있어서, 폴리펩타이드를 진핵 세포 또는 원핵세포 발현 시스템에서 발현시키고, 단백질을 변성 조건을 사용하여 추출하는 것이 바람직할 수 있다. 폴리펩타이드는 다른 세포 구성성분으로부터 친화성 컬럼을 사용하여 정제할 수 있으며, 이는 폴리펩타이드의 태그된 부위에 결합한다. 당해 분야에 일반적으로 공지된 바와 같이, 다양한 정제 단계를 수행하는 순서는 변할 수 있거나, 특정의 단계가 빠질 수 있고, 실질적으로 정제된 단백질 또는 펩타이드의 제조를 위한 적합한 방법을 여전히 생성하는 것으로 여겨진다.
일반적으로, 완전한 항체는 항체의 Fc 부위에 결합하는 제제(즉, 단백질 A)를 활용하여 분획화된다. 대안적으로, 항원을 사용하여 적절한 항체를 동시 정제 및 선택할 수 있다. 이러한 방법은 흔히 지지체, 예를 들면, 컬럼, 필터 또는 비드에 결합된 선택제를 활용한다. 항체는 지지체에 결합되고, 오염물질이 제거(예컨대, 세척 제거)되고, 항체는 조건(염, 열 등)을 적용시킴으로써 방출시킨다.
단백질 또는 펩타이드의 정제도를 정량화하기 위한 다양한 방법이 본 개시내용의 측면에서 당해 분야의 숙련가에게 공지될 것이다. 이는 예를 들면, 활성 분획의 특이적 활성을 측정하거나, 분획 내 폴리펩타이드의 양을 SDS/PAGE 분석으로 평가함을 포함한다. 분획의 순도를 평가하기 위한 다른 방법은 분획의 특이성 활성을 계산하고, 이를 초기 추출물의 특이적 활성과 비교하고, 따라서, 순도의 정도를 계산하는 것이다. 활성의 양을 나타내는데 사용된 실제 단위는 물론, 정제를 수행하기 위해 선택된 특수한 검정 기술 및 발현된 단백질 또는 펩타이드가 검출가능한 활성을 나타내는지의 여부에 의존할 것이다.
폴리펩타이드의 이주는 때때로 SDS/PAGE의 상이한 조건을 사용하여 유의적으로 변화시킬 수 있음이 알려져 있다. 따라서, 상이한 전기영동 조건 하에서, 정제된 또는 부분 정제된 발현 생성물의 겉보기 분자량은 변할 수 있음이 인식될 것이다.
I. 항체의 변형
항체의 서열은 다양한 이유, 예를 들면, 증진된 발현, 증진된 가교-반응성, 또는 약화된 오프-표적 결합(off-target binding)을 위해 변형시킬 수 있다. 변형된 항체는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 기술, 예를 들면, 표준 분자 생물학적 기술을 통한 발현, 또는 폴리펩타이드의 화학적 합성에 의해 제조될 수 있다.
예를 들면, 변형, 예를 들면, 보존적 변화를 항체 분자 내로 도입시키는 것이 요구될 수 있다. 이러한 변화를 이루기 위해, 아미노산의 수치 색인(hydropathic index)이 고려될 수 있다. 단백질에서 상호작용 생물학적 작용을 부여하는데 있어서 수치적 아미노산 색인의 중요성은 일반적으로 당해 분야에서 이해된다(Kyte and Doolittle, 1982). 아미노산의 상대적인 수치적 특징은 수득되는 단백질의 2차 구조에 기여하는 것으로 받아들여지며, 이는 궁극적으로 단백질과 다른 분자, 예를 들면, 효소, 기질, 수용체, DNA, 항체 등의 상호작용을 정의한다.
유사 아미노산의 치환은 친수성을 기반으로 효과적으로 이루어질 수 있다. 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제4,554,101호는 이의 인접한 아미노산에 의해 지배된 것으로서, 단백질의 가장 큰 국소 평균 친수성은 단백질의 생물학적 특성과 관련되어 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 설명된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 아미노산 잔기에 대해 지정되었다. 염기성 아미노산: 아르기닌(+3.0), 라이신(+3.0), 및 히스티딘(-0.5); 산성 아미노산: 아스파르테이트(+3.0 ± 1), 글루타메이트(+3.0 ± 1), 아스파라긴(+0.2), 및 글루타민(+0.2); 친수성의, 비이온성 아미노산: 세린(+0.3), 아스파라긴(+0.2), 글루타민(+0.2), 및 트레오닌(-0.4), 황 함유 아미노산: 시스테인(-1.0) 및 메티오닌(-1.3); 소수성의, 비방향족 아미노산: 발린(-1.5), 루이신(-1.8), 이소루이신(-1.8), 프롤린(-0.5 ± 1), 알라닌(-0.5), 및 글리신(0); 소수성의, 방향족 아미노산: 트립토판(-3.4), 페닐알라닌(-2.5), 및 타이로신(-2.3).
아미노산은 유사한 친수성을 갖는 다른 것으로 치환될 수 있고 생물학적으로 또는 면역학적으로 변형된 단백질을 생산할 수 있다. 이러한 변화에서, 이의 친수성 값이 ± 2 이내인 아미노산의 치환이 바람직하고, ± 1 이내인 것이 특히 바람직하고, ± 0.5 이내인 것이 심지어 보다 특히 바람직하다.
아미노산 치환은 일반적으로 아미노산 측쇄 치환체, 예를 들면, 이의 소수성, 친수성, 전하, 크기 등의 상대적인 유사성을 기반으로 한다. 다양한 앞서의 특성을 고려한 예시적인 치환은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있고 다음을 포함한다: 아르기닌 및 라이신; 글루타메이트 및 아스파르테이트; 세린 및 트레오닌; 글루타민 및 아스파라긴; 및 발린, 루이신 및 이소루이신.
본 개시내용은 또한 동형 변형을 고려한다. Fc 영역을 상이한 동형을 갖도록 변형시킴으로써, 상이한 기능성을 달성할 수 있다. 예를 들면, IgG1으로 변화시키는 것은 항체 의존성 세포 세포독성을 증가시키고, 부류 A로의 스위칭(switching)은 조직 분포를 증진시킬 수 있고, 부류 M으로의 스위칭은 원자가를 증진시킬 수 있다.
예컨대, C1q 결합 및/또는 FcγR 결합을 변형시킴으로써, CDC 활성 및/또는 ADCC 활성을 변화시킴에 의해 변형된 효과기 기능을 지닌 항체의 Fc 영역을 설계할 수 있다. "효과기 기능"은 생물학적 활성(예컨대, 대상체 내에서)을 활성화시키거나 감소시키는데 관여한다. 효과기 기능의 예는 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: C1q 결합; 상보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식세포작용(phagocytosis); 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등. 이러한 효과기 기능은 Fc 영역이 결합 도메인(예컨대, 항체 가변 도메인)과 조합되는 것이 필요할 수 있고 다양한 검정(예컨대, Fc 결합 검정, ADCC 검정, CDC 검정 등)을 사용하여 평가할 수 있다.
예를 들면, 증진된 C1q 결합 및 증진된 FcγRIII 결합(예컨대, 증진된 ADCC 활성 및 증진된 CDC 활성 둘 다를 갖는)을 지닌 항체의 변이체 Fc 영역을 생성할 수 있다. 대안적으로, 효과기 기능이 감소되거나 제거되는 것이 요구되는 경우, 변이체 Fc 영역을 감소된 CDC 활성 및/또는 감소된 ADCC 활성으로 가공시킬 수 있다. 다른 구현예에서, 이러한 활성 중 하나 만이 증가될 수 있으며, 임의로, 또한 다른 활성이 감소될 수 있다(예컨대, 증진된 ADCC 활성을 지니지만, 감소된 CDC 활성을 지닌, 및 이의 역인 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다).
단리된 모노클로날 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 시알산, 갈락토스, 또는 푸코스의 부재하에 실질적으로 균질한 글리칸을 함유할 수 있다. 전술한 실질적으로 균질한 글리칸은 중쇄 불변 영역에 공유결합으로 부착될 수 있다.
모노클로날 항체는 신규한 Fc 글리코실화 패턴을 가질 수 있다. Fc 영역의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. O-연결된 글리코실화는 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스, 또는 크실로스의 부착을 지칭하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록ㄷ시라이신이 또한 사용될 수 있다. 아스파라긴 측쇄 펩타이드 서열에 대한 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열은 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌이고, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다. 따라서, 폴리펩타이드 내 이러한 이러한 펩타이드 서열 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성한다.
글리코실화 패턴은 예를 들면, 폴리펩타이드 내에서 발견된 하나 이상의 글리코실화 부위(들)을 결실시키고/시키거나 폴리펩타이드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위(들)을 가함으로서 변경시킬 수 있다. 항체의 Fc 영역에 대한 글리코실화 부위의 첨가는 아미노산 서열을 변경시켜 이것이 상술한 트리펩타이드 서열(N-연결된 글리코실화 부위의 경우)을 함유하도록 함으로써 편리하게 달성된다. 예시적인 글리코실화 변이체는 중쇄의 잔기 Asn 297의 아미노산 치환을 갖는다. 변경은 또한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 원래의 폴리펩타이드(O-연결된 글리코실화 부위의 경우)의 서열에 첨가하거나 이에 의해 치환시킴으로써 이룰 수 있다. 추가로, Asn 297의 Ala으로의 변화는 글리코실화 부위 중 하나를 제거할 수 있다.
단리된 모노클로날 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 실질적으로 균질한 GNGN 당형(glycoform)이 없고 G0, G1F, G2F, GNF, GNGNF 또는 GNGNFX 함유 당형을 지닌 동일한 항체와 비교하여 Fc 감마 RI 및 Fc 감마 RIII에 대해 증가된 결합 친화성을 나타내는, GNGN 또는 G1/G2 당형에 의해 나타낸 실질적으로 균질한 조성물 속에 존재할 수 있다. Fc 글리코실화는 치료학적 mAb의 항-바이러스 및 항-암 특성에서 유의적인 역할을 담당한다. 코어 푸코스의 제거는 천연 킬러(NK) 세포에 의해 매개된 mAb의 ADCC 활성을 현저히 증진시키지만 다형핵 세포(polymorphonuclear cell; PMS)의 ADCC 활성에서 반대 효과를 갖는 것으로 여겨진다.
단리된 모노클로날 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 베타 (1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnT III)을 발현함으로써, GnT III이 GlcNAc를 항체에 가하도록 하는 세포 내에서 발현될 수 있다. 이러한 양식으로 항체를 생산하는 방법은 제WO/9954342호 및 제WO/03011878호에 제공된다. 세포주는 게놈 편집 기술, 예를 들면, 크리스퍼(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats; CRISPR)를 사용하여, 특정의 해독 후 변형, 예를 들면, 글리코실화를 향상시기거나 감소시키거나 제거하도록 변경될 수 있다. 예를 들면, CRISPR 기술을 사용하여 모노클로날 항체를 발현하는데 사용된 293 또는 CHO 세포 내에서 글리코실화 효소를 암호화하는 유전자를 제거할 수 있다.
이의 제작능(manufacturability) 및 안전성을 향상시키기 위해 사람 B 세포로부터 수득된 항체 가변 유전자 서열을 가공하는 것이 가능하다. 잠재적인 단백질 서열 라이브러리는 다음을 함유하는 부위와 관련된 서열 모티프(motif)에 대해 조사함으로써 확인할 수 있다:
1) 쌍을 이루지 않은 Cys 잔기,
2) N-연결된 글리코실화,
3) Asn 탈아미드화,
4) Asp 이성체화,
5) SYE 트렁케이션(truncation),
6) Met 산화,
7) Trp 산화,
8) N-말단 글루타메이트,
9) 인테그린 결합,
10) CD11c/CD18 결합, 또는
11) 단편화.
이러한 모티프는 항체를 암호화하는 cDNA를 포함하는 합성 유전자를 변경시킴으로써 제거할 수 있다.
항체를 가공하여 용해도를 향상시킬 수 있다. 예를 들면, 일부 친수성 잔기, 예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산, 및 세린은 다른 친수성 잔기, 예를 들면, 아스파라긴, 글루타민, 트레오닌, 라이신, 및 아르기닌보다 단백질 용해도에 유의적으로 보다 더 유리하게 기여한다.
혈액 공여체로부터 사람 B 세포의 B 세포 레파토리 깊은 서열분석(B cell repertoire deep sequencing)이 대규모로 수행되었다. 사람 항체 레파토리의 유의적인 부위에 대한 서열 정보는 건강한 사람에서 일반적인 항체 서열 특징의 실질적인 평가를 촉진시킨다. 사람 재조합된 항체 가변 유전자 참고 데이타베이스에서 항체 서열 특징에 대한 지식으로, 항체 서열의 "사람 유사성(Human Likeness; HL)"의 위치 특이성 정도가 평가될 수 있다. HL은 치료학적 항체 또는 백신으로서의 항체와 같이, 임상 용도에서 항체의 개발에 유용한 것으로 밝혀졌다. 목표는 항체의 사람 유사성을 증가시켜 잠재적인 부작용 및 항체 약물의 유의적으로 감소된 효능을 초래할 수 있거나 심각한 건강 합병증을 유도할 수 있는 항-항체 면역 반응을 감소시키는 것이다. 총 약 4억개의 서열의 3명의 건강한 사람 공여체의 조합된 항체 레파토리의 항체 특성을 평가하고 항체의 초가변 영역에 촛점을 맞춘 신규한 "상대적인 사람 유사성(relative Human Likeness; rHL)" 점수를 생성할 수 있다. rHL 점수는 사람(양성 점수)과 비-사람 서열(음성 점수) 사이를 용이하게 구별할 수 있도록 한다. 항체는 사람 레파토리에서 일반적이지 않은 잔기를 제거하도록 가공될 수 있다.
항체 및 항체 단편의 항원성을 감소시키거나 제거하기 위한 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 항체를 사람에게 투여하는 경우, 항체는 바람직하게는 "사람화되어" 사람에서 항원성을 감소 또는 제거한다. 바람직하게는, 각각의 사람화된 항체는 이것이 유래된 비-사람화된 마우스 항체에 대해 동일하거나 실질적으로 동일한 친화성을 갖는다.
하나의 사람화 접근법에서, 키메라 단백질이 생성되며 여기서 마우스 면역글로불린 불변 영역은 사람 면역글로불린 불변 영역으로 대체된다. 예컨대, 문헌: Morrison et al., 1984, PROC. NAT. ACAD. SCI. 81:6851-6855, Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608; 미국 특허 제6,893,625호(Robinson); 제5,500,362호(Robinson); 및 제4,816,567호(Cabilly)를 참고한다.
CDR 그래프팅(grafting)으로 알려진 접근법에서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 다른 종으로부터 골격 내로 이식된다. 예를 들면, 뮤린 CDR는 사람 FR 내로 이식될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 사람 FR 또는 컨센서스 사람 FR(consensus human FR)로 이식된다. 컨센서스 사람 FR을 생성시키기 위해, 수개의 사람 중쇄 또는 경쇄 아미노산으로부터의 FR을 정렬하여 컨센서스 아미노산 서열을 확인한다. CDR 그래프팅은 미국 특허 제7,022,500호(Queen); 제6,982,321호(Winter); 제6,180,370호(Queen); 제6,054,297호(Carter); 제5,693,762호(Queen); 제5,859,205호(Adair); 제5,693,761호(Queen); 제5,565,332호(Hoogenboom); 제5,585,089호(Queen); 제5,530,101호(Queen); Jones et al. (1986) Nature 321: 522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332: 323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239: 1534-1536; 및 Winter (1998) Febs Lett 430: 92-94에 기술되어 있다.
"SUPERHUMANIZATIONTM"으로 불리는 접근법에서, 사람CDR 서열은 사람화될 마우스 항체의 것에 대한 사람 CDR의 구조적 유사성을 기반으로, 사람 배선 유전자로부터 선택된다. 예컨대, 미국 특허 제6,881,557호(Foote); 및 Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-1125를 참고한다.
면역원성을 감소시키는 다른 방법은 "재성형(reshaping)", "초키메라화(hyperchimerization)" 및 "베니어링(veneering)/재표면화(resurfacing)"를 포함한다. 예컨대, 문헌: Vaswami et al., 1998, Annals Of Allergy, Asthma, & Immunol. 81:105; Roguska et al., 1996, Prot. Engineer 9:895-904; 및 미국 특허 제6,072,035호(Hardman)를 참고한다. 베니어링/재표면화 접근법에서, 뮤린 항체내 표면 허용되는 아미노산 잔기는 사람 항체 내 동일한 위치에서 보다 흔히 발견된 아미노산 잔기로 대체된다. 이러한 유형의 항체 재표면화는 예컨대, 미국 특허 제5,639,641호(Pedersen)에 기술되어 있다.
마우스 항체를 사람에서 의학적 용도에 적합한 형태로 전환시키기 위한 다른 접근법은 ACTIVMABTM 기술(Vaccinex, Inc., 뉴욕주 로체스터 소재)로 알려져 있고, 이는 포유동물 세포 내에서 항체를 발현하기 위한 박시니아 바이러스-기반 벡터를 포함한다. IgG 중쇄 및 경쇄의 조합 다양성의 고 수준이 생산될 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제6,706,477호(Zauderer); 제6,800,442호(Zauderer); 및 제6,872,518호(Zauderer)를 참고한다. 마우스 항체를 사람에서 사용하기에 적합한 형태로 전환시키기 위한 다른 접근법은 KaloBios Pharmaceuticals, Inc.(캘리포니아주 팔로 알토 소재)에 의해 상업적으로 실시된 기술이다. 이러한 기술은 사람 "수용체" 라이브러리를 사용하여 항체 선택을 위한 "에피토프에 촛점을 맞춘" 라이브러리를 생산하는 것을 포함한다. 마우스 항체를 사람에서 의학적 용도에 적합한 형태로 변형시키기 위한 다른 접근법은 HUMAN ENGINEERINGTM 기술이고, 이는 XOMA (US) LLC에 의해 상업적으로 실시된다. 예컨대, 국제 (PCT) 공보 제WO 93/11794호 및 미국 특허 제5,766,886호(Studnicka); 제5,770,196호(Studnicka); 제5,821,123호(Studnicka); 및 제5,869,619호(Studnicka)를 참고한다.
임의의 상기 접근법을 포함하는, 임의의 적합한 접근법을 사용하여 항체의 사람 면역원성을 감소 또는 제거할 수 있다.
J. 항체의 특성화
본 개시내용에 따른 항체는 제1의 예에서 이의 결합 특이성에 의해 정의될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는, 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 기술을 사용하여 주어진 항체의 결합 특이성/친화성을 평가함으로써, 이러한 항체가 본 청구범위의 영역 내에 속하는지의 여부를 측정할 수 있다. 예를 들면, 주어진 항체가 이에 대해 결합할 수 있는 에피토프는 항원 분자 내에 위치한 3개 이상(예컨대, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개)의 아미노산의 단일의 연속 서열로 이루어질 수 있다. 대안적으로, 에피토프는 항원 분자(예컨대, 구조적 에피토프) 내에 위치한 다수의 비-연속적인 아미노산(또는 아미노산 서열)으로 이루어질 수 있다.
당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술을 사용하여 항체가 폴리펩타이드 또는 단백질 내 "하나 이상의 아미노산과 상호작용하는지"의 여부를 측정할 수 있다. 예시적인 기술은 예를 들면, 통사의 가교-차단 검정, 예를 들면, 문헌: Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)에 기술된 것을 포함한다. 가교-차단은 다양한 결합 검정, 예를 들면, ELISA, 바이오층 간섭법(biolayer interferometry), 또는 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)에서 측정할 수 있다. 다른 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석(alanine scanning mutational analysis), 펩타이드 블롯 분석(peptide blot analysis)(Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63), 펩타이드 절단 분석, 단일 입자 재구성을 사용한 고-해상도 전자 현미경 기술(high-resolution electron microscopy technique), cryoEM, 또는 단층촬영, 결정학 연구(crystallographic studies) 및 NMR 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절개, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법을 사용할 수 있다(Tomer (2000) Prot. Sci. 9: 487-496). 이를 사용하여 항체가 상호작용하는 폴?베타이드 내 아미노산을 확인하는데 사용될 수 있는 다른 방법은 질량 분광법에 의해 검출된 수소/중수소 교환이다. 일반적인 측면에서, 수소/중수소 교환 방법은 목적한 단백질의 중수소-표지화에 이은, 중수소-표지된 단백질에 대한 항체의 결합을 포함한다. 다음에, 항체 복합체에 의해 보호된 아미노산 내 물 및 교환가능한 양성자로 이전된 단백질/항체 복합체는 계면의 일부가 아닌 아미노산 내에서 교환가능한 양성자보다 더 느린 속도에서 중수소-대-수소 역-교환을 겪는다. 그 결과, 단백질/항체 계면의 부분을 형성하는 아미노산은 중수소를 보유할 수 있으므로 계면에 포함된 아미노산과 비교하여 비교적 더 높은 질량을 나타낸다. 항체의 해리 후, 표적 단백질은 프로테아제 분해 및 질량 분광법 분석에 적용됨으로서, 항체가 상호작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 나타낸다. 예컨대, 문헌: Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A를 참고한다.
용어 "에피토프"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 지칭한다. B-세포 에피토프는 단백질의 3차 폴딩(tertiary folding)에 의해 병치된 연속된 아미노산 또는 비연속된 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 연속된 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출시 보유되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매를 사용한 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 유일한 공간 구조 내에 적어도 3개, 및 보다 일반적으로, 적어도 5 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다.
항원 구조-기반한 항체 프로파일링(Antigen Structure-based Antibody Profiling; ASAP)으로서 또한 공지된, 변형-보조된 프로파일링(Modification-Assisted Profiling; MAP)은 화학적으로 또는 효소적으로 변형된 항원 표면에 대한 각각의 항체의 결합 프로파일의 유사성에 따라 동일한 항원에 대해 지시된 다수의 모노클로날 항체를 범주화하는 방법이다(참고; 이의 전문이 본원에 참고로 구체적으로 포함된 제US 2004/0101920호). 각각의 카타고리는 다른 카타고리에 의해 나타낸 에피토프와는 병백하게 상이하거나 부분적으로 오버랩핑된(overlapped) 유일한 에피토프를 반영할 수 있다. 이러한 기술은 일반적으로 동일한 항체의 신속한 필터링을 허용함으로써, 특성화가 유전적으로 명백한 항체에 대해 집중될 수 있도록 한다. 하이브리도마 스크리닝에 적용된 경우, MAP는 목적한 특성을 갖는 모노클로날 항체를 생산하는 드믄 하이브리도마 클론의 확인을 용이하게 할 수 있다. MAP를 사용하여 본 개시내용의 항체를 사이한 에피토프와 결합하는 항체의 그룹으로 분류할 수 있다.
본 개시내용은 동일한 에피토프, 또는 동일한 에피토프의 부위에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 항체가 당해 분야에 공지된 통상의 방법을 사용하여 참고 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나, 참고 항체와 결합에 대해 경쟁하는지의 여부를 용이하게 측정할 수 있다. 예를 들면, 시험 항체가 참고 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 측정하기 위하여, 참고 항체를 포화 조건 하에서 표적 분자에 결합하도록 한다. 다음에, 표적 분자에 결합하는 시험 항체의 능력을 평가한다. 시험 항체가 표적 분자에 결합한 다음 참고 항체와 포화 결합할 수 있는 경우, 시험 항체는 참고 항체보다 상이한 에피토프에 결합한다고 결론지어질 수 있다. 다른 한편, 시험 항체가 표적 분자에 결합한 후 참고 항체와 포화 결합할 수 없는 경우, 시험 항체는 참고 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
항체가 예컨대, 77A 항체와의 결합에 대해 경쟁하는지의 여부를 측정하기 위하여, 상술한 결합 방법론을 2개 배향으로 수행한다: 제1 배향에서, 77A 항체는 포화 조건 하에 HSP70 단백질과 결합하도록 한 후 HSP70 단백질에 대한 시험 항체의 결합을 평가한다. 제2 배향에서, 시험 항체를 포화 조건 하에서 HSP70 단백질에 결합하도록 한 후 HSP70단백질에 대한 77A 항체의 결합을 평가한다. 둘 다의 배양에서, 제1(포화디는) 항체 만이 HSP70 분자에 결합할 수 있는 경우, 시험 항체 및 77A 항체는 HSP70에 대한 결합에 대해 경쟁하는 것으로 결론지어진다. 당해 분야의 통상의 기술자가 인식할 바와 같이, 참고 항체와의 결합에 대해 경쟁하는 항체는 필수적으로 참고 항체와 동일한 에피토프에 결합하지 않을 수 있지만, 오버랩핑 또는 인접한 에피토프에 결합함으로써 참고 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다.
2개의 항체는 각각 항원에 대해 다른 것의 결합을 완전히 억제(차단)하는 경우 동일하거나 오버랩핑된 에피토프에 결합한다. 즉, 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 과량의 하나의 항체는 경쟁적 결합 검정에서 측정한 것으로서 다른 것의 결합을 적어도 50%까지 그러나 바람직하게는 75%, 90%, 또는 심지어 99%까지 억제한다(참고: 예컨대, Junghans et al., Cancer Res. 1990 50:1495-1502). 대안적으로, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원 내 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 2개의 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 억제하는 경우 항체는 오버랩핑 에피토프를 갖는다.
이후에, 추가의 통상의 실험(예컨대, 펩타이드 돌연변이 및 결합 분석)을 수행하여 시험 항체의 결합의 관찰된 결여가 실제로 참고 항체와 동일한 에피토프에 대한 결합에 기인하는지의 여부 또는 입체적 차단(또는 다른 현상)이 관찰된 결합의 결여에 관여하는지의 여부를 확인할 수 있다. 이러한 부류의 실험은 ELISA, RIA, 표면 플라스몬 공명, 유동 세포분석법 또는 당해 분야에서 이용가능한 임의의 다른 정량적 또는 정성적 항체-결합 검정을 사용하여 수행할 수 있다.
다른 양태에서, 항체는 이의 가변 서열에 의해 정의될 수 있으며, 이는 추가의 "골격" 영역을 포함한다. 이는 전체 가변 영역을 나타내는 표 2, 3, 6, 9, 및 10에 제공된다. 또한, 항체 서열은 이러한 서열로부터, 임의로 하기 보다 상세히 논의된 방법을 사용하여 변할 수 있다. 예를 들면, 핵산 서열은 (a) 가변 영역이 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인으로부터 떨어져서 구분될 수 있거나, (b) 핵산이 이에 의해 암호화된 잔기에 영향을 미치지 않으면서 상기 설정된 것으로부터 변할 수 있거나, (c) 핵산이 상기 설정된 것으로부터 주어진 퍼센트, 예컨대, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성까지 변할 수 있거나, (d) 핵산이 상기 설정된 것으로부터 약 50℃ 내지 약 70℃의 온도에서 약 0.02 M 내지 약 0.15 M NaCl로 제공된 바와 같이, 저 염 및/또는 고온 조건에 의해 예시된 바와 같은, 높은 스트링전시 조건 하에서 하이브리드화하는 능력으로 인하여 변할 수 있거나, (e) 아미노산이 상기 설정된 것으로부터 주어진 퍼센트, 예컨대, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성까지 변할 수 있거나, (f) 아미노산이 보존적 치환을 허용하면서 상기 설정된 것으로부터 변할 수 있다는 점에서 상기 설정된것으로부터 변할 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열을 비교하는 경우, 2개의 서열 내 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 서열이 후술된 바와 같이, 최대의 상응성에 대해 정렬할 때 동일한 경우 2개의 서열은 "동일"한 것으로 일컬어진다. 2개의 서열 사이의 비교는 전형적으로 서열을 비교 윈도우(comparison window)에 걸쳐 비교함으로써 수행하여 서열 유사성의 국소 영역을 확인하고 비교한다. 본원에 사용된 바와 같은 "비교 윈도우"는 적어도 약 20개의 연속된 위치, 일반적으로 30 내지 약 75, 40 내지 약 50의 분절을 지칭하고, 여기서 서열은 2개의 서열을 최적으로 정렬한 후 동일한 수의 연속된 위치의 참고 서열과 비교할 수 있다.
비교를 위한 서열의 최적의 정렬은 디폴트 매개변수(default parameter)를 사용하여, bioinformatics 소프트웨어((DNASTAR, Inc., 위스콘신주 매디슨 소재)의 레이저젠 스위트(Lasergene suite)에서 메갈라인 프로그램(Megalign program)을 사용하여 수행할 수 있다. 대안적으로, 비교를 위한 서열의 최적의 정렬은 문헌: Smith and Waterman (1981) Add. APL. Math 2:482의 국소 동일성 알고리즘에 의해, 문헌: Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443의 동일성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌: Pearson and Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444의 유사성 방법에 대한 조사에 의해, 이러한 알고리즘의 컴퓨터처리된 시행(위스콘신주 매디슨 소재의 Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr.에서 GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 점검(inspection)에 의해 수행될 수 있다.
서열 동일성 및 서열 유사성 퍼센트를 측정하는데 적합한 알고리즘의 특수한 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이고, 이는 각각 문헌: Altschul et al. (1977) Nucl. Acids Res. 25:3389-3402 및 Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410에 기술되어 있다. BLAST 및 BLAST 2.0을 예를 들면, 본원에 기술된 매개변수와 함께 사용하여 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드에 대한 서열 동일성 퍼센트를 측정할 수 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 생명공학 정보에 대한 국립 센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공공 이용가능하다. 항체 서열의 재정렬된 특성 및 각각의 유전자의 다양한 길이는 단일 항체 서열에 대한 BLAST 조사의 다수 라운드를 필요로 한다. 또한, 상이한 유전자의 매뉴얼 조립은 어렵고 오류 발생이 쉽다(error-prone). 서열 분석 도구 IgBLAST(world-wide-web at ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)는 배선 V, D 및 J 유전자에 대한 매치match), 재정렬 연결부에서의 세부사항, Ig V 도메인 골격 영역의 선형화 및 상호성 결정 영역을 확인한다. IgBLAST는 뉴클레오타이드 또는 단백질 서열을 분석할 수 있고 재치에 서열을 프로세싱하고 배선 유전자 데이타베이스 및 다른 서열 데이타베이스에 대해 동시에 조사하여 가능하게는 가장 매치되는 배선 V 유전자의 상실 기회를 최소화하도록 한다.
하나의 접근법에서, "서열 동일성 퍼센트"는 2개의 최적으로 정렬된 서열을 적어도 20개 위치의 비교 윈도우에 걸쳐 비교함으로써 측정하며, 여기서, 비교 윈도우 내 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 부위는 2개의 서열의 최적의 정렬을 위한 참고 서열(이는 첨가 또는 결실을 포함하지 않는다)과 비교하여, 20 퍼센트 이하, 일반적으로 5 내지 15 퍼센트, 또는 10 내지 12 퍼센트의 첨가 또는 결실(즉, 갭(gap))을 포함할 수 있다. 퍼센트는 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 서열 둘 다에 존재하여 매치된 위치의 수를 생성하는 위치의 수를 측정하고, 매치된 위치의 수를 참고 서열 내 위치의 전체 수(즉, 윈도우 크기)로 나누고 결과물에 100을 곱하여 서열 동일성 퍼센트를 수득함으로써 계산한다.
항체를 정의하는 여전히 다른 방법은 본원에 제공된 임의의 항체 및 이의 항원-결합 단편의 "유도체"로서이다. 유도체 항체 또는 항체 단편은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기술, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 특이성의 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 투니카마이신의 대사 합성 등을 사용한 화학적 변형에 의해 변형시킬 수 있다. 일 구현예에서, 항체 유도체는 모 항체와 유사하거나 동일한 기능을 지닐 것이다. 다른 구현예에서, 항체 유도체는 모 항체와 비교하여 변경된 활성을 나타낼 것이다. 예를 들면, 유도체 항체(또는 이의 단편)은 이의 에피토프에 모 항체보다 보다 강력하게 또는 단백질분해에 대해 보다 내성이 되도록 결합할 수 있다.
용어 "유도체"는 항원에 면역특이적으로 결합하지만 "모(parental)"(또는 야생형) 분자에 대해 1, 2, 3, 4, 5개 이상의 아미노산 치환, 첨가, 결실 또는 변형을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 이러한 아미노산 치환 또는 첨가는 천연적으로 존재하는(즉, DNA-암호화된) 또는 비-천연적으로 존재하는 아미노산 잔기를 도입할 수 있다. 용어 "유도체"는 예를 들면, 변경된 CH1, 힌지, CH2, CH3 또는 CH4 영역을 갖는 변이체로서 포함함으로서, 예를 들면, 향상된 또는 손상된 효과기 또는 결합 특성을 나타내는 변이체 Fc 영역을 갖는 항체를 형성한다. 용어 "유도체"는 또한 비-아미노산 변형, 예를 들면, 글리코실화될 수 있고(예컨대, 변경된 만노스, 2-N-아세틸뉴라민산, 5-글리콜뉴라민산 등의 성분을 갖는다), 아세틸화될 수 있고, 페길화될 수 있고, 인산화될 수 있고, 아미드화될 수 있고, 공지된 보호/차단 그룹으로 유도체화될 수 있고, 단백질분해적 절단될 수 있고, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 연결될 수 있는 등의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 변경된 탄수화물 변형은 다음 중 하나 이상을 조절한다: 항체의 가용하, 소세포 수송(subcellular transport) 및 항체의 분비의 용이화, 항체 조립의 촉진, 구조적 통합성, 및 항체-매개된 효과기 기능. 구체적인 구현예에서, 변경된 탄수화물 변형은 탄수화물 변형을 결여하는 항체아 비교하여 항체 매개된 효과기 기능을 향상시킨다. 변경된 항체 매개된 효과기 기능을 초래하는 탄수화물 변형은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.
항체의 생물물리학적 특성을 측정할 수 있다. 폴딩되지 않은 항체에 대해 승온을 사용하여 평균 겉보기 용융 온도를 사용하여, 상대적인 안전성을 측정할 수 있다. 차등 주사 열량계(Differential Scanning Calorimetry; DSC)는 온도의 함수로서 분자의 열 능력, Cp를 측정한다(이를 가온시키는데 요구되는 열, 도(degree) 당). DSC를 사용하여 항체의 열 안정성을 연구할 수 있다. mAb에 대한 DSC 데이타는 이것이 때때로 mAb 구조 내에서 개개 도메인의 비폴딩(unfolding)을 해결하여, 온도기록도 내에 3개 이항의 피크를 생산하므로(Fab, CH2, 및 CH3 도메인의 비폴딩으로부터) 특히 흥미롭다. 전형적으로 Fab 도메인의 비폴딩은 가장강력한 피크를 생산한다. Fc 부위의 DSC 프로파일 및 상대적인 안정성은 사람 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4　소부류에 대해 특징적인 차이를 나타낸다(Garber and Demarest, Biochem. Biophys. Res. Commun.　355, 751-757, 2007). CD 분광계를 사용하여 수행된 원평광 이색성(circular dichroism; CD)을 사용하여 평균 겉보기 용융 온도를 또한 측정할 수 있다. 원거리 자외선 방사(Far-UV CD) 스펙트럼은 0.5 nm의 증분으로 200 내지 260 nm의 범위에서 항체에 대해 측정할 것이다. 최종 스펙트럼은 20개 축적의 평균으로 측정할 수 있다. 잔기 타원율 값(residue ellipticity value)은 배경을 감한 후 계산할 수 있다. 항체의 열 비폴딩(0.1 mg/mL)은 25 내지 95℃로부터 235 nm에서 및 2℃/min의 가열 속도에서 모니터링할 수 있다. 동적 광 산란(dynamic light scattering; DLS)을 사용하여 응집에 대한 경향성을 평가할 수 있다. DLS는 단백질을 포함하는 다양한 입자의 크기를 특성화하는데 사용된다. 시스템이 크기에서 분산되어 있지 않은 경우, 입자의 평균 유효 직경을 측정할 수 있다. 이러한 측정은 임자 코어의 크기, 표면 구조의 크기, 및 입자 농도에 의존한다. DLS는 입자로 인한 산란된 광 강도에서의 변동을 필수적으로 측정하므로, 입자의 확산 계수를 측정할 수 있다. 시판되는 DLA 장치내 DLS 소프트웨어는 상이한 직경에서 입자 집단을 나타낸다. 안정성 연구는 DLS를 사용하여 편리하게 수행될 수 있다. 샘플의 DLS 측정은 입자가 시간에 걸쳐 또는 입자의 유체역학적 반경이 증가하는지의 여부를 측정함으로써 온도 변화에 걸쳐 응집하는지의 여부를 나타낼 수 있다. 입자가 응집하는 경우, 보다 큰 반경을 지닌 입자의 보다 큰 집단을 관찰할 수 있다. 온도에 의존한 안정성은 반응계 내에서 온도를 제어함으로써 분석할 수 있다. 모세관 전기영동(Capillary electrophoresis; CE) 기술은 항체 안정성의 특징을 측정하기 위한 입증된 방법론을 포함한다. iCE 접근법을 사용하여 탈아미드화, C-말단 라이신, 시알릴화, 산화, 글리코실화, 및 단백질의 pI내 변화를 야기할 수 있는 단백질에 대한 임의의 다른 변화로 인한 항체 단백질 전하 변이체를 해결할 수 있다. 각각의 발현된 항체 단백질은 고 처리량(high throughput), 모세관 컬럼(cIEF) 내에서 유리 용액 등전점 포커싱(isoelectric focusing; IEF)에 의해 Protein Simple Maurice 장치를 사용하여 평가할 수 있다. 전체-컬럼(Whole-column) UV 흡수 검출을 등전점(pI)에서 촛점을 맞춘 분자의 실시간 모니터링 동안 30초마다 수행할 수 있다. 이러한 접근접은 전통적인 겔 IEF를 이동 단계(mobilization step)에 대한 필요성을 제거하면서, 컬럼-기반 분리에서 발견된 정량화 및 자동화의 장점과 조합시킨다. 이러한 기술은 발현된 항체에 대한 동일성, 순도, 및 이질성 프로파일의 재생가능한, 정량적 분석을 생성한다. 결과는 흡광도 및 천연 형광성 검출 방식을 사용하고 0.7 μg/mL로 떨어진 검출 민감성 둘 다로, 항체에서 전하 이질성 및 분자 크기를 확인한다.
항체 서열의 고유의 용해도 점수를 측정할 수 있다. 고유의 용해도 점수는 CamSol Intrinsic을 사용하여 계산할 수 있다(Sormanni et al., J Mol Biol 427, 478-490, 2015). 각각의 항체 단편, 예를 들면, scFv의 HCDR3에서 95 내지 102번 잔기(카밧 번호매김)에 대한 아미노산은 온라인 프로그램을 통해 평가하여 용해도 점수를 계산할 수 있다. 또한 실험실 기술을 사용하여 용해도를 측정할 수 있다. 다양한 기술, 예를 들면, 동결건조된 단백질을 용액이 포화되어 용해도 한계에 도달할 때까지 용액에 첨가하는 것, 또는 적합한 분자량 컷-오프(cut-off)를 지닌 미세농축기 속에서 한외여과에 의한 농축이 존재한다. 가장 간단한 방법은 무정형 침전의 도입이며, 이는 단백질 용해도를 황산암모늄을 사용한 단백질 침전을 포함하는 방법을 사용하여 측정한다(Trevino et al., J Mol Biol,　366: 449-460, 2007).　황상암모늄 침전은 상대적인 용해도 값에 대한 신속하고 정밀한 정보를 제공한다. 항산암모늄 침전은 잘-정의된 수성 및 고체 상을 지닌 침전된 용액을 생산하며 비교적 소량의 단백질을 필요로 한다. 황산암모늄에 의한 무정형 침전의 도입을 사용하여 수행된 용해도 측정은 상이한 pH 값에서 용이하게 수행될 수 있다. 단백질 용해도는 고도로 pH 의존성이며, pH는 용해도에 영향을 미치는 가장 중요한 고유의 인자인 것으로 고려된다.
일반적으로, 자동반응성 클론이 음성 선택에 의해 개체발생 동안 제거될 수 있는 것으로 고려되지만; 자동반응성 특성을 지닌 많은 사람의 천연적으로발생하는 항체는 성체의 성숙한 레퍼토리를 지속하며, 자동반응성은 병원체에 대한 많은 항체의 항바이러스 기능을 향상시킬 수 있음이 명백해졌다. 조기 B 세포 발달 동안 항체 내 HCDR3 루프는 흔히 양 전하가 풍부하며 자동반응성 패턴을 나타냄이 주목되었다(Wardemann et al., Science 301, 1374-1377, 2003). 현미경(부착성 HeLa 또는 HEp-2 상피 세포를 사용) 및 유동 세포분석법적 세포 표면 염색(현탁액 저켓(Jurkat) T 세포 및 293S 사람 배아 신장 세포를 사용)에서 사람 원래의 세포에 대한 결합의 수준을 평가함으로서 자동반응성에 대해 주어진 항체를 시험할 수 있다. 자동반응성은 또한 조직 배열에서 조직에 대한 결합의 평가를 사용하여 측량할 수 있다.
K. 특정 구현예
일 구현예에서, GYX1FTX2YG(서열 번호: 214)(여기서 X1은 T, S, 또는 I이고, X2는 N 또는 K이다)의 VHCDR1 아미노산 서열, INTYTGEX1(서열 번호: 215)(여기서 X1은 P, S, T, 또는 A이다)의 VHCDR2 아미노산 서열, X1RYDHX2MDY(서열 번호: 216)(여기서 X1은 A, T, V, 또는 G이고, X2는 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이다)의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 QSLX1NSGTRKNY(서열 번호: 212)(여기서 X1은 L, F, 또는 V이다)이 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 KQSYX1LYT(서열 번호: 213)(여기서 X1은 T, N, 또는 S이다)의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 1 및 164 내지 166으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2 및 167 내지 169로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3 및 170 내지 185로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4 및 159 내지 161로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6, 162, 및 163으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 항체 또는 항체 단편은:
(i) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(iii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
(iv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
(v) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
(vi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 172의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(vii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(viii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 173의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(x) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 176의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 177의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xv) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xviii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 180의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 182의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 185의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xvii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxviii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 160의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxiv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호:168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxviii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxix) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xl) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xli) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlii) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xliii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xliv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
(xlvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되며, 여기서 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 192 내지 195로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196 내지 211로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3 및 170 내지 185로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186 내지 190으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6, 162, 및 163으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 항체 또는 항체 단편은:
(i) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 197의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(iii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(iv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 198의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(v) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(vi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(vii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(viii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 172의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(ix) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(x) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 173의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 199의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xiii) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xiv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 200의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 201의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xvi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 201의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, a 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 188의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xviii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열번호: 189의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xix) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 176의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xx) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 173의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 197의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 177의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxiii) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxiv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxvi) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 202의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 180의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxviii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 201의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxix) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxx) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 182의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxiii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxiv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 203의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxv) 서열 번호: 194의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 185의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 189의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxvi) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 197의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 204의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxviii) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 205의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xxxix) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 206의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xl) 서열 번호: 194의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xli) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 207의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 190의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xliii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 206의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xliv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 189의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlvi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 202의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 207의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlviii) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 202의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(xlix) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 208의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(l) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 209의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(li) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 209의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lii) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 206의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(liii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 210의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(liv) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 197의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 210의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 188의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lvi) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 209의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lviii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 버놓: 188의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lix) 서열 번호: 194의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lx) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 188의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxi) 서열 번호: 192의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 211의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 210의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 172의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 189의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxiii) 서열 번호: 195의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 196의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxiv) 서열 번호: 194의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 206의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxv) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 208의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(lxvi) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 199의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 187의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
(lxvii) 서열 번호: 193의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 199의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 186의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 191의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 양태에서, 항체 또는 항체 단편은
Figure pct00005
(여기서 X1은 Q 또는 E이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 Q 또는 E이고, X5는 A, P, 또는 G이고, X6은 E 또는 G이고, X7은 V 또는 L이고, X8은 V 또는 K이고, X9는 A, E, G, 또는 S이고, X10은 V 또는 L이고, X11은 K 또는 R이고, X12는 V, L, 또는 I이고, X13은 A 또는 T이고, X14는 K 또는 Q이고, X15는 E 또는 K이고, X16은 M 또는 V이고, X17은 F 또는 V이고, X18은 F, M, 또는 I이고, X19는 T 또는 S이고, X20은 T, R, 또는 A이고, X21은 T, D, 또는 E이고, X22는 T, A, 또는 K이고, X23은 S 또는 N이고, X24는 L 또는 A이고, X25는 M 또는 L이고, X26은 E 또는 Q이고, X27은 L 또는 M이고, X28은 R, S, T, 또는 N이고, X29는 S 또는 G이고, X30은 R, K, 또는 M이고, X31은 S 또는 T이고, X32는 D 또는 E이고, X33은 L, S, 또는 T이다)의 서열을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는
Figure pct00006
(여기서 X1는 E 또는 D이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 L 또는 M이고, X5는 D 또는 S이고, X6은 A 또는 S이고, X7은 V 또는 A이고, X8은 L 또는 V이고, X9는 E 또는 D이고, X10은 A 또는 V이고, X11은 N 또는 T이고, X12는 A 또는 P이고, X13은 Q 또는 K이고, X14는 S, V, 또는 P이고, X15는 K 또는 R이고, X16은 D 또는 S이고, X17은 S, D, 또는 N이고, X18은 S 또는 T이고, X19는 A 또는 P이고, X20은 V 또는 T이고, X21은 Q 또는 G이고, X22는 L 또는 V이다)의 서열을 갖는 경소 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은
Figure pct00007
(여기서 X1은 Q 또는 H이고, X2는 A, D, T, V, S, 또는 P이고, X3은 T, S, 또는 I이고, X4는 N 또는 K이고, X5는 P, S, T, 또는 A이고, X6은 T, R, K, 또는 I이고, X7은 A, T, V, S, 또는 G이고, X8은 S, R, 또는 T이고, X9는 A, V, 또는 G이고, X10은 E 또는 D이고, X11은 L 또는 V이고, X12는 A, T, V, 또는 G이고, X13은 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이고, X14는 T 또는 S이다)의 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및/또는
Figure pct00008
(서열 번호: 158)(여기서 X1은 A, T, 또는 S이고, X2는 N 또는 K이고, X3은 L, F, 또는 V이고, X4는 A, S, 또는 T이고, X5는 Q 또는 K이고, X6은 A, P, 또는 S이고, X7은 K 또는 N이고, X8은 L, V, 또는 I이고, X9는 G 또는 A이고, X10은 T 또는 S이고, X11은 S 또는 R이고, X12는 A 또는 T이고, X13은 V, I, 또는 L이고, X14는 T, N, 또는 S이다)의 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 7, 12 내지 17, 26 내지 103, 및 225 내지 229로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 7, 12 내지 17, 26 내지 103, 및 225 내지 229중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 8, 19 내지 24, 105 내지 157, 및 230 내지 234로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 8, 19 내지 24, 105 내지 157, 및 230 내지 234 중 어느 하나에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 항체 또는 항체 단편은:
(i) 서열 번호: 7에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 7에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 8에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 8에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(ii) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(iii) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(iv) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(v) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(vi) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(vii) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(viii) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(ix) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(x) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xi) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xii) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xiii) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xiv) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xv) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xvi) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xvii) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xviii) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xix) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xx) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxi) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxii) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxiii) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxiv) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxv) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxvi) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxvii) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxviii) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxix) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxx) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxi) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxii) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxiii) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxiv) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxv) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxvi) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxvii) 서열 번호: 17에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 17에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 24에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxviii) 서열 번호: 26에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xxxix) 서열 번호: 27에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xl) 서열 번호: 28에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xli) 서열 번호: 29에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlii) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 106에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 106에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xliii) 서열 번호: 31에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xliv) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlv) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlvi) 서열 번호: 33에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlvii) 서열 번호: 34에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlviii) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xlix) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(l) 서열 번호: 35에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 35에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(li) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lii) 서열 번호: 37에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 37에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(liii) 서열 번호: 26에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(liv) 서열 번호: 38에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 38에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lv) 서열 번호: 31에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 110에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 110에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lvi) 서열 번호: 39에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 39에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lvii) 서열 번호: 40에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 40에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lviii) 서열 번호: 34에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 111에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 111에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lix) 서열 번호: 41에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 41에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lx) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 112에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 112에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxi) 서열 번호: 28에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 113에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 113에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxii) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 114에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 114에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxiii) 서열 번호: 42에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 42에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxiv) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 115에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 115에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxv) 서열 번호: 43에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 43에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxvi) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxvii) 서열 번호: 44에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 44에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxviii) 서열 번호: 35에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 35에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxix) 서열 번호: 45에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 45에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxx) 서열 번호: 46에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 46에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxi) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 118에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 118에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxii) 서열 번호: 47에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 47에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 115에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 115에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxiii) 서열 번호: 48에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 48에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxiv) 서열 번호: 49에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 49에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxv) 서열 번호: 50에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 50에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxvi) 서열 번호: 51에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 51에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 106에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 106에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxvii) 서열 번호: 52에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 52에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 119에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 119에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxviii) 서열 번호: 53에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 53에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxix) 서열 번호: 54에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 54에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxx) 서열 번호: 55에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 55에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxi) 서열 번호: 56에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 56에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxii) 서열 번호: 57에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 57에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 120에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 120에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxiii) 서열 번호: 58에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 58에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 121에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 121에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxiv) 서열 번호: 59에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 59에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 122에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 122에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxv) 서열 번호: 60에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 60에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxvi) 서열 번호: 61에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 61에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 123에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 123에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxvii) 서열 번호: 62에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 62에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 114에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 114에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxviii) 서열 번호: 63에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 124에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 124에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(lxxxix) 서열 번호: 64에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xc) 서열 번호: 65에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 125에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 125에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xci) 서열 번호: 66에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcii) 서열 번호: 67에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 125에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 125에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xciii) 서열 번호: 68에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 126에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 126에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xciv) 서열 번호: 69에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 127에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 127에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcv) 서열 번호: 70에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 70에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 128에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 128에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcvi) 서열 번호: 71에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 71에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcvii) 서열 번호: 72에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 72에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 129에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 129에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcviii) 서열 번호: 73에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 73에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 130에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 130에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(xcix) 서열 번호: 74에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 74에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 131에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 131에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(c) 서열 번호: 73에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 73에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 132에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 132에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(ci) 서열 번호: 75에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 75에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 133에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 133에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cii) 서열 번호: 76에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 76에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 134에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 134에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(ciii) 서열 번호: 77에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 77에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(civ) 서열 번호: 78에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 78에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 135에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 135에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cv) 서열 번호: 79에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 79에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 136에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 136에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cvi) 서열 번호: 80에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 80에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 137에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 137에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cvii) 서열 번호: 41에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 41에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 138에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 138에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cviii) 서열 번호: 81에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 139에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 139에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cix) 서열 번호: 82에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 82에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cx) 서열 번호: 83에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 83에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 126에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 126에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxi) 서열 번호: 84에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 84에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 140에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 140에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxii) 서열 번호: 85에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 85에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 141에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 141에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxiii) 서열 번호: 86에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 86에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 141에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 141에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxiv) 서열 번호: 87에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 87에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxv) 서열 번호: 88에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 88에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 142에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 142에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxvi) 서열 번호: 89에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 89에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 143에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 143에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxvii) 서열 번호: 90에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 90에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 144에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 144에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxviii) 서열 번호: 91에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 91에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxix) 서열 번호: 92에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 92에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 145에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 145에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxx) 서열 번호: 93에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 93에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 146에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 146에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxi) 서열 번호: 94에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 94에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 147에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 147에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxii) 서열 번호: 95에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 95에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 148에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 148에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxiii) 서열 번호: 96에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 96에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 149에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 149에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxiv) 서열 번호: 97에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 97에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 150에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 150에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxv) 서열 번호: 98에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 98에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 151에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 151에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxvi) 서열 번호: 99에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 99에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 152에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 152에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxvii) 서열 번호: 100에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 100에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 136에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 136에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxviii) 서열 번호: 91에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 91에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 153에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 153에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxix) 서열 번호: 101에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 101에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 154에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 154에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxx) 서열 번호: 102에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 102에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 155에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 155에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
(cxxxi) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 156에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 156에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열; 또는
(cxxxii) 서열 번호: 103에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 103에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 157에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 157에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 이는 본 구현예 중 어느 하나에 따른 모노클로날 항체 또는 항체 단편과 HSP70 상의 동일한 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁한다. 일 구현예에서, 본 구현예 중 어느 하나의 항체 또는 항체 단편에 의해 인식된 HSP70 상의 에피토프에 결합하거나, 결합할 수 있는 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공되고, 여기서 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 서열 번호: 11의 K573 내지 Q601에 상응하는 펩타이드에 의해 정의된 HSP70의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, HSP70에 결합된 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음의 잔기 중 1개 또는 2개에 결합한다: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601. 일부 양태에서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음 잔기 모두에 결합한다: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601. 일부 양태에서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음 잔기 중 적어도 하나에 추가로 결합한다: 서열 번호; 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598. 일부 양태에서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음 잔기 중 적어도 2개, 3개, 4개, 또는 5개에 추가로 결합한다: 서열 번호; 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598. 일부 양태에서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 다음 잔기 모두에 결합한다: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, H594, K595, R596, E598, 및 Q601.
본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 HSP70에 결합하거나 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 ADP-결합된 형태로 HSP70에 결합하거나 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 펩타이드-결합된 형태로 HSP70에 결합하거나 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 이의 ADP-결합된 및 펩타이드-결합된 형태로 HSP70에 결합하거나 결합할 수 있다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 항체-의존성 세포 세포독성을 유도하지 않는다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 상보체-의존성 세포 세포독성을 유도하지 않는다. 본 구현예 중 어느 하나의 일부 양태에서, 항체는 면역 효과기 세포, 예를 들면, 단핵세포/대식구 및 수지상 세포에 의한 HSP70 흡수를 향상시킨다. 일부 양태에서, 흡수는 사람 FcγR2A 및/또는 사람 FcγR2B에 의해 매개된다.
일부 양태에서, 항체는 HSP70에 결합하거나 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 Octet 바이오-층 간섭법(bio-layer interferometry; BLI) 분석에 의해 측정된 것으로서, 사람 HSP70(예컨대, ADP-결합된 및/또는 펩타이드-결합된 형태로 HSP70)에 약 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.9, 0.85, 0.8, 0.75, 0.7, 0.6, 0.5, 0.1, 0.05 nM, 또는 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.9, 0.85, 0.8, 0.75, 0.7, 0.6, 0.5, 0.1, 또는 0.05 pM 이하의 KD로 결합한다. 일부 양태에서, 항체는 Octet 바이오-층 간섭법(BLI) 분석에 의해 측정된 것으로서, 사람 HSP70(예컨대, 이의 ADP-결합된 및/또는 펩타이드-결합된 형태로 HSP70)에 약 20 nM 내지 약 0.05 nM, 약 20 nM 내지 약 0.075 nM, 약 20 nM 내지 약 0.1 nM, 약 20 nM 내지 약 0.5 nM, 약 20 nM 내지 약 1 nM, 약 10 nM 내지 약 0.05 nM, 약 10 nM 내지 약 0.075 nM, 약 10 nM 내지 약 0.1 nM, 약 10 nM 내지 약 0.5 nM, 약 10 nM 내지 약 1 nM, 약 5 nM 내지 약 0.05 nM, 약 5 nM 내지 약 0.075 nM, 약 5 nM 내지 약 0.1 nM, 약 5 nM 내지 약 0.5 nM, 약 5 nM 내지 약 1 nM, 약 3 nM 내지 약 0.05 nM, 약 3 nM 내지 약 0.075 nM, 약 3 nM 내지 약 0.1 nM, 약 3 nM 내지 약 0.5 nM, 약 3 nM 내지 약 1 nM, 약 3 nM 내지 약 2 nM, 약 2 nM 내지 약 0.05 nM, 약 2 nM 내지 약 0.075 nM, 약 2 nM 내지 약 0.1 nM, 약 2 nM 내지 약 0.5 nM, 약 2 nM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 0.05 nM, 약 1 nM 내지 약 0.075 nM, 약 1 nM 내지 약 0.1 nM, 약 1 nM 내지 약 0.5 nM, 약 0.5 nM 내지 약 0.05 nM, 약 0.5 nM 내지 약 0.075 nM, 약 0.5 nM 내지 약 0.1 nM, 약 0.1 nM 내지 약 0.05 nM, 약 0.1 nM 내지 약 0.075 nM, 또는 약 0.075 nM 내지 약 0.05 nM의 KD로 결합한다. 일부 양태에서, 항체는 Octet 바이오-층 간섭법(BLI) 분석에 의해 측정된 것으로서, 사람 HSP70(예컨대, 이의 ADP-결합된 및/또는 펩타이드-결합된 형태로 HSP70)에 약 20 pM 내지 약 0.05 pM, 약 20 pM 내지 약 0.075 pM, 약 20 pM 내지 약 0.1 pM, 약 20 pM 내지 약 0.5 pM, 약 20 pM 내지 약 1 pM, 약 10 pM 내지 약 0.05 pM, 약 10 pM 내지 약 0.075 pM, 약 10 pM 내지 약 0.1 pM, 약 10 pM 내지 약 0.5 pM, 약 10 pM 내지 약 1 pM, 약 5 pM 내지 약 0.05 pM, 약 5 pM 내지 약 0.075 pM, 약 5 pM 내지 약 0.1 pM, 약 5 pM 내지 약 0.5 pM, 약 5 pM 내지 약 1 pM, 약 3 pM 내지 약 0.05 pM, 약 3 pM 내지 약 0.075 pM, 약 3 pM 내지 약 0.1 pM, 약 3 pM 내지 약 0.5 pM, 약 3 pM 내지 약 1 pM, 약 3 pM 내지 약 2 pM, 약 2 pM 내지 약 0.05 pM, 약 2 pM 내지 약 0.075 pM, 약 2 pM 내지 약 0.1 pM, 약 2 pM 내지 약 0.5 pM, 약 2 pM 내지 약 1 pM, 약 1 pM 내지 약 0.05 pM, 약 1 pM 내지 약 0.075 pM, 약 1 pM 내지 약 0.1 pM, 약 1 pM 내지 약 0.5 pM, 약 0.5 pM 내지 약 0.05 pM, 약 0.5 pM 내지 약 0.075 pM, 약 0.5 pM 내지 약 0.1 pM, 약 0.1 pM 내지 약 0.05 pM, 약 0.1 pM 내지 약 0.075 pM, 또는 약 0.075 pM 내지 약 0.05 pM의 KD로 결합한다.
일부 양태에서, 중쇄 가변 영역 서열, 예를 들면, 서열 번호: 7, 12 내지 17, 및 26 내지 103 중 어느 하나의 VH 서열, 또는 이의 임의의 변이체는 당해 분야에 공지된 다양한 중쇄 불변 영역 서열에 공유결합으로 연결될 수 있는 것으로 고려된다. 유사하게, 경쇄 가변 영역 서열, 예를 들면, 서열 번호: 8, 19 내지 24, 및 105 내지 157 중 어느 하나의 VL 서열, 또는 이의 임의의 변이체는 당해 분야에 공지된 다양한 경쇄 불변 영역 서열에 공유결합으로 연결된다.
예를 들면, 항체 또는 항체 단편은 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된; 특히 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 (예컨대, 사람) 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예컨대, 카파 또는 람다의 (예컨대, 사람) 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 불변 영역은 변경, 예컨대 돌연변이시켜 항체 또는 항체 단편의 특성을 조절 할 수 있다(예컨대, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 및/또는 상보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시킬 수 있다). 일 구현예에서 항체 항체 단편은 효과기 기능을 가지고 상보체를 고정시킬 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 효과기 세포를 보충하지 않거나 상보체를 고정시키지 않는다. 다른 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소되었거나 없다. 예를 들면, 이는 동형 또는 아형(subtype), 단편 또는 다른 돌연변이체이고, 이는 Fc 수용체에 대한 결합을 지지하지 않는데, 예컨대, 이는 돌연변이되거나 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 갖는다.
일부 양태에서, 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 불변 영역은 다음의 아미노산 서열을 갖는 사람 IgG1 동형이다:
Figure pct00009
일부 양태에서, 사람 IgG1 불변 영역은 아미노산 Asn297(앞서의 절에서 서열 번호: 217내 박스쳐진 곳), 예를 들면 Asn297Ala (N297A)에서 변형되어 항체의 글리코실화를 방지한다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Leu235(앞서의 절에서 서열 번호: 217 내 박스쳐진 곳), 예를 들면 Leu235Glu(L235E) 또는 Leu235Ala(L235A)에서 변형되어 Fc 수용체 상호작용을 변경시킨다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Leu234(선행의 절에서 서열 번호: 217 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Leu234Ala(L234A)에서 변형되어 Fc 수용체 상호작용을 변경시킨다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Glu233(앞서의 절에서 서열 번호: 217내 박스쳐진 곳), 예컨대, Glu233Pro(E233P)에서 변형된다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 234 및 235 둘 다에서, 예를 들면 Leu234Ala 및 Leu235Ala(L234A/L235A)에서 변경된다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 233, 234, 및 234에서, 예를 들면, Glu233Pro, Leu234Ala, 및 Leu235Ala(E233P L234A/L235A)에서 변경된다(Armour KL. et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29(8):2613-24). 모든 잔기 번호는 EU 번호매김(numbering)에 따른다(Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences Of Proteins Of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242).
일부 양태에서, 항체의 중쇄의 불변 영역은 다음의 아미노산 서열을 갖는 사람 IgG1 동형이다:
Figure pct00010
일부 양태에서, 사람 IgG1 불변 영역은 아미노산 Asn297(앞서의 절에서 서열 번호: 218 내 박스쳐진 곳), 예를 들면 Asn297Ala(N297A)에서 변형되어 항체의 글리코실화를 방지한다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Leu235(앞서의 절에서 서열 번호: 218 내 박스쳐진 곳), 예를 들면 Leu235Glu(L235E) 또는 Leu235Ala(L235A)에서 변형되어 Fc 수용체 상호작용을 변경시킨다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Leu234(앞서의 절에서 서열 번호: 218 내 박스쳐진 곳)에서 변형되어 Fc 수용체 상호작용, 예컨대, Leu234Ala(L234A)를 변경시킨다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 Glu233(앞서의 절에서 서열 번호: 218 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Glu233Pro(E233P)에서 변형된다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 234 및 235 둘 다, 예를 들면 Leu234Ala 및 Leu235Ala(L234A/L235A)에서 변경된다. 일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 아미노산 233, 234, 및 234, 예를 들면, Glu233Pro, Leu234Ala, 및 Leu235Ala(E233P L234A/L235A)에서 변경된다(Armour KL. et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29(8):2613-24). 모든 잔기 번호는 EU 번호매김에 따른다(Kabat, E.A., et al., 상기 참고).
일부 양태에서, 사람 IgG1 불변 영역은 변형되어 제2의 불변 영역과 이종이량체화를 위해 "놉(knob)" 돌연변이, 예컨대, T366Y, 또는 "홀(hole)" 돌연변이, 예컨대, Y407T를 포함한다(EU 번호매김에 따른 잔기 번호(Kabat, E.A., et al., 상기 참고)).
일부 양태에서, 항체의 중쇄의 불변 영역은 사람 IgG1 동형, 예컨대, 사람 IgG1 동형의 동종이인자형(allotype), 예컨대, IgG1 G1m3 동종이형자형이다. 예시적인 사람 IgG1 동종이형자형은 문헌: Magdelaine-Beuzelin et al. (2009) Pharmacogenet. Genomics 19(5):383-7에 기술되어 있다.
일부 양태에서, 항체의 중쇄의 불변 영역은 다음의 아미노산 서열을 갖는 사람 IgG2 동형이다:
Figure pct00011
일부 양태에서, 사람 IgG2 불변 영역은 아미노산 Asn297(앞서의 절에서 서열 번호: 219 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Asn297Ala(N297A)에서 변형되어 항체의 글리코실화를 방지하며, 여기서 잔기 번호매김은 EU 번호매김에 따른다(Kabat, E.A., et al., 상기 참고).
일부 양태에서, 항체의 불변 영역은 다음의 아미노산 서열을 갖는 사람 IgG3 동형이다:
Figure pct00012
일부 양태에서, 사람 IgG3 불변 영역은 아미노산 Asn297(앞서의 절에서 서열 번호: 220 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Asn297Ala(N297A)에서 변형되어 항체의 글리코실화를 방지한다. 일부 양태에서, 사람 IgG3 불변 영역은 아미노산 Arg435(앞서의 절에서 서열 번호: 220 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Arg435H(R435H)에서 변형되어 반감기를 연장시킨다. 모든 잔기 번호는 EU 번호매김에 따른다(Kabat, E.A., et al., 상기 참고).
일부 양태에서, 항체의 중쇄의 불변 영역은 다음의 아미노산 서열을 갖는, 사람 IgG4 동형이다:
Figure pct00013
일부 양태에서, 사람 IgG4 불변 영역은 힌지 영역 내에서 변형되어 가닥 교환을 방지 또는 감소시키는데, 예컨대, 일부 양태에서 사람 IgG4 불변 영역은 Ser228(앞서의 절에서 서열 번호: 221 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Ser228Pro(S228P)에서 변형된다. 다른 구현예에서, 사람 IgG4 불변 영역은 아미노산 Leu235(앞서의 절에서 서열 번호: 221 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Leu235Glu(L235E)에서 변형되어 Fc 수용체 상호작용을 변경시킨다. 일부 양태에서, 사람 IgG4 불변 영역은 Ser228 및 Leu335 둘 다, 예컨대, Ser228Pro 및 Leu235Glu(S228P/L235E)에서 변형된다. 일부 양태에서, 사람 IgG4 불변 영역은 아미노산(앞서의 절에서 서열 번호: 221 내 박스쳐진 곳), 예컨대, Asn297Ala(N297A)에서 변형되어 항체의 글리코실화를 방지한다. 모든 잔기 번호는 EU 번호매김에 따른다(Kabat, E.A., et al., 상기 참고).
일부 양태에서, 사람 IgG 불변 영역은 변형되어 FcRn 결합을 향상시킨다. FcRn에 대한 결합을 향상시키는 Fc 돌연변이의 예는 Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu(각각 M252Y, S254T, T256E)(Dall'Acqua et al. (2006) J. Biol. Chem. 281(33): 23514-23524), 또는 Met428Leu 및sn434Ser(M428L, N434S)(Zalevsky et al. (2010) Nature Biotech. 28(2): 157-159)이다. 모든 잔기 번호는 EU 번호매김에 따른다(Kabat, E.A., et al., 상기 참고).
일부 양태에서, 사람 IgG 불변 영역은 변형되어 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC) 및/또는 상보체-의존성 세포독성(CDC)을 변경시킨다, 예컨대, 문헌: Natsume et al. (2008) Cancer Res. 68(10): 3863-72; Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166(4): 2571-5; Moore et al. (2010) mAbs 2(2): 181-189; Lazar et al. (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103(11): 4005-4010, Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276(9): 6591-6604; Stavenhagen et al. (2007) Cancer Res. 67(18): 8882-8890; Stavenhagen et al. (2008) Advan. Enzyme Regul. 48: 152-164; Alegre et al. (1992) J. Immunol. 148: 3461-3468에 기술된 아미노산 변형.
일부 양태에서, 사람 IgG 불변 영역은 변형되어 헤테로이량체화를 유도한다. 예를 들면, Thr366에서 CH3 도메인 내 아미노산 변형, 예컨대, 보다 큰(bulky) 아미노산으로의 치환, 예컨대, Tyr(T366W)을 갖는 중쇄는 위치 Thr366, Leu368, 및 Tyr407에서 거의 크지 않은 아미노산, 예컨대, 각각 Ser, Ala 및 Val(T366S/L368A/Y407V)로의 아미노산 변형을 갖는 CH3 도메인을 갖는 제2의 중쇄와 우선적으로 쌍을 이룰 수 있다. CH3 변형을 통한 헤테로이량체화는 반대의 CH3 도메인에서 이황화물 결합의 도입에 의해, 예를 들면, Ser354를 Cys(S354C)으로 및 Y349를 Cys(Y349C)로 변화시킴에 의해 추가로 안정화될 수 있다(참고: Carter (2001) J. Immunol. Methods 248: 7-15).
일부 양태에서, 항체의 결쇄의 불변 영역은 사람 카파 불변 영역, 예컨대, 다음의 아미노산 서열:
Figure pct00014
을 갖는 사람 카파 불변 영역이다.
일부 양태에서, 항체의 경쇄의 불변 영역은 사람 카파 불변 영역, 예컨대, 다음의 아미노산 서열:
Figure pct00015
을 갖는 사람 카파 불변 영역이다.
일부 양태에서, 항체의 경쇄의 불변 영역은 사람 람다 불변 영역, 예컨대, 다음의 아미노산 서열:
Figure pct00016
을 갖는 사람 람다 불변 영역이다.
III. 키메라 항원 수용체
키메라 항원 수용체(CAR) 분자는 재조합 융합 단백질이고 사멸, 증식, 및 사이토킨 생산을 위해 유전적으로 변형된 면역 효과기 세포를 활성화시키기 위하여 항원에 결합하고 이의 세포질성 테일 속에 존재하는 면역수용체 활성화 모티프(immunoreceptor activation motif; ITAM)를 통해 활성화 신호를 형질도입시키는 이의 능력 둘 다에 의해 구별된다. 항원-결합 모이어티(예를 들면, 단일 쇄 항체(scFv)로부터 생성됨)를 활용한 수용체 작제물은 이들이 HLA-의존성 양식으로 표적 세포 표면에서 천연 항원에 결합한다는 점에서 "공통적인" 추가의 장점을 제공한다.
본원에 기술된 CAR의 구현예는 세포내 신호전달 도메인, 막관통 도메인, 및 항원-결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인을 포함하는 항원-특이성 CAR 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함한다. CAR은 하나 이상의 항원 사이에 공유된 공간으로 구성된 에피토프를 인식할 수 있다. 임의로, CAR은 막관통 도메인과 항원 결합 도메인 사이에 위치한 힌지 도메인을 포함할 수 있다. CAR은 CAR의 발현을 세포 표면에 지시하는 신호 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, CAR은 GM-CSF로부터의 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR은 막-결합된 사이토킨과 함께 공-발현되어 지속성을 증진시킬 수 있다. 예를 들면, CAR은 막-결합된 IL-15와 함께 공-발현될 수 있다.
CAR의 도메인 및 도메인에서 사용된 특정 서열에 따라서, CAR을 발현하는 면역 효과기 세포는 표적 세포에 대해 상이한 수준의 활성을 가질 수 있다. 상이한 CAR 서열은 면역 효과기 세포 내로 도입되어 가공된 세포, 상승된 SRC에 대해 선택된 가공된 세포, 및 최대의 치료학적 효능을 가진 것으로 예측된 CAR 작제물을 확인하기 위한 활성에 대해 시험된 선택된 세포를 생성할 수 있다.
키메라 항원 수용체는, 바람직하게는 이것이 재조합 DNA 기술을 사용하여 생상되지만, 당해 분야에 공지된 임의의 수단에 의해 생산될 수 있다. 키메라 항원 수용체의 수개의 영역을 암호화하는 핵산 서열을 제조하고 분자 클로닝의 표준 기술(게놈성 라이브러리 스크리닝, PCR, 프라이머-보조된 연결, 효모 및 세균으로부터의 scFv 라이브러리, 부위-지시된 돌연변이유발 들)에 의해 완전한 암호화 서열 내로 조립할 수 있다. 수득되는 암호화 영역은 발현 벡터 내로 삽입하고 적합한 발현 숙주 동종이계 또는 자가 면역 효과기 세포, 예를 들면, T 세포 또는 NK 세포를 형질전환시키는데 사용할 수 있다.
키메라 작제물은 네이키드(naked) DNA로서 면역 효과기 세포 내로 또는 적합한 벡터 내에 도입시킬 수 있다. 네이키드 DNA를 사용한 전기천공에 의해 세포를 안정하게 형질감염시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허 제6,410,319호를 참고한다. 네이키드 DNA는 일반적으로 발현을 위한 적절한 배향으로 플라스미드 발현 벡터 내에 함유된 키메라 수용체를 암호화하는 DNA를 지칭한다. 대안적으로, 바이러스 벡터(예컨대, 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련 바이러스 벡터, 또는 렌티바이러스 벡터)를 사용하여 키메라 작제물을 면역 효과기 세포 내로 도입시킬 수 있다. 본 발명의 방법에 따라서 사용하기에 적합한 벡터는 면역 효과기 세포 내에서 비-복제성이다. 다수의 벡터, 예컨대, HIV, SV40, EBV, HSV, 또는 BPV를 기반으로 하는 벡터가 바이러스를 기반으로 공지되어 있고, 여기서 세포 내에 유지된 바이러스의 카피 수는 세포 내에 유지된 바이러스의 카피 수는 세포의 생존능을 유지하기에 충분히 낮다.
A. 항원 결합 도메인
항원 결합 도메인은 모노클로날 항체의 상보성 결정영역, 모노클로날 항체의 가변 영역, 및/또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 항원 결합 영역 또는 도메인은 특수한 마우스, 사람, 또는 사람화된 모노클로날 항체로부터 유래된 단일-쇄 가변 단편(scFv)의 VH 및 VL 쇄의 단편을 포함할 수 있다. 단편은 또한 항원-트이성 항체의 임의의 수의 상이한 항원 결합 도메인일 수 있다. 단편은 사람 세포 내에서 발현을 위한 사람 코돈 사용을 위해 최적화된 서열에 의해 암호화된 항원-특이성 scFv일 수 있다. 특정의 양태에서, CAR의 VH 및 VL 도메인은 링커 서열, 예를 들면, Whitlow 링커에 의해 분리된다.
원형(prototypical) CAR은 막관통 도메인 및 하나 이상의 세포질성 신호전달 도메인(예컨대, 공자극성 도메인 및 신호전달 도메인)에 커플링된, 하나의 모노클로날 항체(mAb)로부터 유래된 VH 및 VL 도메인을 포함하는 scFv를 암호화한다. 따라서, CAR은 HSP70에 결합하는 항체의 LCDR1-3 서열 및 HCDR1-3 서열을 포함할 수 있다. 그러나, 추가의 양태에서, 목적한 항원에 결합하는 2개 이상의 항체는 확인되어 있으며 다음을 포함하는 CAR이 작제된다: (1) 항원에 결합하는 제1의 항체의 HCDR1-3 서열; 및 (2) 항원에 결합하는 제2의 항체의 LCDR1-3 서열. 2개의 상이한 항원 결합 항체로부터의 HCDR 및 LCDR 서열을 포함하는 이러한 CAR은 항원의 특수한 구조(예컨대, 정상 조직보다 암 세포와 우선적으로 연합되는 구조)에 우선적으로 결합하는 장점을 가질 수 있다.
대안적으로, CAR은 CAR+ 면역 효과기 세포의 패널을 생성하기 위해 상이한 mAb로부터 유래된 VH 및 VL 쇄를 사용하여 가공할 수 있다. CAR의 항원 결합 도메인은 제1 항체의 LCDR1-3 서열 및 제2의 항체의 HCDR1-3 서열의 임의의 조합을 함유할 수 있다.
B. 힌지(hinge) 도메인
CAR 폴리펩타이드는 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치한 힌지 도메인을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 힌지 도메인은 CAR 폴리펩타이드 내에 포함되어 항원 결합 도메인과 세포 표면 사이에 적절한 거리를 제공하거나 항원 결합 또는 CAR-변형된 면역 효과기 세포의 효과기 기능에 역으로 영향을 미칠 수 있는 가능한 입체적 장애를 완화시킬 수 있다. 힌지 도메인은 Fc 수용체, 예를 들면, FcγR2a 또는 FcγR1a에 결합하는 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 힌지 서열은 Fc 수용체에 결합하는 사람 면역글로불린(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgM, IgD 또는 IgE)로부터의 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
CAR 힌지 도메인은 사람 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 Ig 힌지를 포함하는 이의 부위로부터, 또는 사람 CD8 α 막관통 도메인 및 CD8a-힌지 영역으로부터 유래될 수 있다. CAR 힌지 도메인은 항체 동형 IgG4의 힌지-CH2-CH3 영역을 포함할 수 있다. 힌지 도메인(및/또는 CAR)은 야생형 사람 IgG4 CH2 및 CH3 서열을 포함하지 않을 수 있다. 점 돌연변이는 항체 중쇄 CH2 도메인 내에 포함되어 CAR-변형된 면역 효과기 세포의 글리코실화 및 비-특이성 Fc 감마 수용체 결합을 감소시킬 수 있다.
CAR 힌지 도메인은 Fc-수용체 결합을 감소시키는 야생형 Ig Fc 도메인과 비교하여 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Ig Fc 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들면, CAR 힌지 도메인은 Fc-수용체 결합을 감소시키는 야생형 IgG4-Fc 도메인과 비교하여 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 IgG4-Fc 도메인을 포함할 수 있다. CAR 힌지 도메인은 야생형 IgG4-Fc 서열과 비교하여 L235 및/또는 N297에 상응하는 위치에서 돌연변이(예를 들면, 아미노산 결실 또는 치환)를 갖는 IgG4-Fc 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들면, CAR 힌지 도메인은 야생형 IgG4-Fc 서열과 비교하여 L235E 및/또는 N297Q 돌연변이를 갖는 IgG4-Fc 도메인을 포함할 수 있다. CAR 힌지 도메인은 친수성인 아미노산, 예를 들면, R, H, K, D, E, S, T, N 또는 Q이거나, "E"에 대해 유사한 특성을 갖는 아미노산, 예를 들면, D에 대해 위치 l235에서 아미노산 치환을 갖는 IgG4-Fc 도메인을 포함할 수 있다. CAR 힌지 도메인은 "Q"에 대해 유사한 특성을 갖는 아미노산, 예를 들면, S 또는 T에 대해 위치 N297에서 아미노산 치환을 갖는 IgG4-Fc 도메인을 포함할 수 있다.
힌지 도메인은 IgG4 힌지 도메인, CD8a 힌지 도메인, CD28 힌지 도메인, 또는 가공된 힌지 도메인에 대해 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함할 수 있다.
C. 막관통 도메인
항원-특이성 세포외 도메인 및 세포내 신호전달-도메인은 막관통 도메인에 의해 연결될 수 있다. 막관통 도메인의 부분으로서 사용될 수 있는 폴리펩타이드 서열은 제한없이, 사람 CD4 막관통 도메인, 사람 CD28 막관통 도메인, 막관통 사람 CD3ξ 도메인, 시스테인 돌연변이된 사람 CD3ξ 도메인, 또는 다른 사람 막관통 신호전달 단백질, 예를 들면, CD16, CD18, 및 에리트로포이에틴 수용체로부터의 다른 막관통 도메인을 포함한다. 예를 들면, 막관통 도메인은 둘 다 본원에 참고로 포함된, 미국 특허 공보 제2014/0274909호(예컨대, CD8 및/또는 CD28 막관통 도메인) 또는 미국 특허 제8,906,682호(예컨대, CD8α 막관통 도메인)에 제공된 것 중 하나에 대해 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 막관통 영역은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154로부터 유래될 수 있다(즉, 적어도 이의 막관통 영역(들)을 포함할 수 있다). 특정의 구체적인 양태에서, 막관통 도메인은 CD8a 막관통 도메인 또는 CD28 막관통 도메인에 대해 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일할 수 있다.
D. 세포내 신호전달 도메인
CAR의 세포내 신호전달 도메인은 CAR을 발현하도록 가공된 면역 세포의 정상적인 효과기 기능 중 적어도 하나의 활성화에 관여한다. 용어 "효과기 기능"은 분화된 세포의 구체화된 기능을 지칭한다. T 세포의 효과기 기능은, 예를 들면, 세포분해 활성 또는 헬퍼 활성, 예를 들면, 사이토킨의 분비일 수 있다. 나이브(naive), 이억, 또는 기억-유형 T 세포에서 효과기 기능은 항원-의존성 증식을 포함한다. 따라서, 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 효과기 기능 신호를 형질도입하는 단백질의 부위를 지칭하고 세포를 구체화된 기능을 수행하도록 지시한다. 세포내 신호전달 도메인은 천연 수용체의 세포내 신호전달 도메인으로부터 유래될 수 있다. 이러한 천연 수용체의 예는 T-세포 수용체의 제타 쇄 또는 임의의 이의 동족체(예컨대, 델타, 감마, 또는 엡실론), MB1 쇄, B29, Fc RIII, Fc RI, 및 신호전달 분자, 예를 들면 CD3ξ 및 CD28의 조합, CD27, 4-1BB/CD137, ICOS/CD278, IL-2R
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/CD122, IL-2Rα/CD132, DAP10, DAP12, CD40, OX40/CD134, 및 이의 조합 뿐만 아니라, 다른 유사한 분자 및 단편을 포함한다. 활성화 단백질의 게열의 다른 구성원의 세포내 신호전달 부위를 사용할 수 있다.
전체 세포내 신호전달 도메인을 사용할 수 있지만, 많은 경우에, 전체 세포내 폴리펩타이드를 사용하는 것이 필수적이지는 않을 것이다. 세포내 신호전달 도메인의 트렁케이트된 부위가 용도를 발견할 수 있는 정도까지, 이러한 트렁케이트된 부위는, 이것이 효과기 기능 신호를 여전히 형질도입하는 한, 완전한 쇄 대신에 사용될 수 있다. 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 따라서 표적에 대한 CAR 결합시, 효과기 기능 신호를 형질도입하기에 충분한 세포내 신호전달 도메인의 트렁케이트된 부위를 포함함을 의미한다. 소위 제3 세대 CAR은 추가의 또는 상승적 효과를 위해 함께 융합된 적어도 2개 또는 3개의 신호전달 도메인을 가지므로, 하나 또는 다수의 세포질성 도메인을 사용할 수 있는데, 예를 들면 CD28 및 4-1BB은 CAR 작제물 내에서 조합될 수 있다. 특정의 구체적인 양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3ξ 세포내 도메인, CD28 세포내 도메인, CD137 세포내 도메인, 또는 4-1BB 세포네 도메인에 융합된 CD28 세포내 도메인을 포함하는 도메인에 대해 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
E. 면역 효과기 세포
면역 효과기 세포는 T 세포(예컨대, 조절 T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 감마-델타 T 세포), 천연 킬러(NK) 세포, 비변이체 NK 세포(invariant NK cell), 또는 NKT 세포일 수 있다. 또한 면역 효과기 세포를 생산 및 가공하는 방법 뿐만 아니라 입양 세포 치료요법(adoptive cell therapy)을 위해 세포를 사용 및 투여하는 방법이 본원에 제공되며, 이러한 경우 세포는 자가 또는 동종이계일 수 있다. 따라서, 면역 효과기 세포는 면역치료요법으로서, 예를 들면, 암 세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다.
면역 효과기 세포는 대상체(subject), 특히 사람 대상체로부터 단리할 수 있다. 면역 효과기 세포는 목적한 대상체, 예를 들면, 특수한 질환 또는 상태가 예측되는 대상체, 특수한 질환 또는 상태에 걸리는 경향을 가진 것으로 예측되는 대상체, 특수한 질환 또는 상태에 대한 치료요법을 받고 있는 대상체, 건강한 자원자 또는 건강한 공여체(donor)인 대상체, 또는 혈액 은행으로부터 수득할 수 있다. 면역 효과기 세포는 임의의 조직 또는 기관으로부터 수집, 농축, 및/또는 정제할 수 있으며 여기서 이는 혈액, 제대혈, 비장, 흉선, 림프절, 골수, 수술 과정 동안 제거되고/되거나 노출된 조직, 및 생검 과정을 통해 수득된 조직을 포함하나, 이에 한정되지 않는 대상체 내에 잔류한다. 단리된 효과기 세포는 직접 사용하거나, 이들을 기간 동안, 예를 들면, 동결에 의해 저장할 수 있다.
면역 효과기 세포가 이로부터 농축, 단리, 및/또는 정제되는 조직/기관은 살아있는 및 살아있지 않은 대상체 둘 다로부터 단리할 수 있고, 여기서, 살아있지 않은 대상체는 기관 공여체이다. 제대혈로부터 단리된 면역 효과기 세포는 CD4- 또는 CD8-양성 T 세포 억제에 의해 측정된 바와 같이, 면역조절 능력이 풍부할 수 있다. 면역 효과기 세포는 혼주된 혈액, 특히 혼주된 제대혈로부터, 향상된 면역조절 능력을 위해 단리될 수 있다. 혼주된 혈액은 2개 이상, 예를 들면, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 공급원(예컨대, 공여체 대상체)로부터 유래될 수 있다.
면역 세포의 집단(population)은 치료요법을 필요로 하거나 감소된 면역 효과기 세포 활성과 관련된 질환을 앓는 대상체로부터 수득될 수 있다. 따라서, 세포는 치료요법을 필요로 하는 대상체에 대해 자가일 것이다. 대안적으로, 면역 효과기 세포의 집단은 공여체, 바람직하게는 동종이계 공여체로부터 수득될 수 있다. 동종이계 공여체 세포는 사람-백혈구-항원(human-leukocyte-antigen; HLA)-혼용성이거나 아닐 수 있다. 대상체-혼용성이 되도록 하기 위해, 동종이계 세포를 처리하여 면역원성을 감소시킬 수 있다.
1. T 세포
면역 효과기 세포는 T 세포일 수 있다. T 세포는 혈액, 골수, 림프, 제대혈, 또는 림프 기관으로부터 유래될 수 있다. T 세포는 사람 T 세포일 수 있다. T 세포는 전형적으로 1차 세포, 예를 들면, 대상체로부터 직접 단리되고/되거나 대상체로부터 단리되어 동결된 것이다. 세포는 T 세포 또는 다른 세포 유형의 하나 이상의 소세트, 예를 들면, 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포, 및 이의 소집단, 예를 들면, 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 잠재능, 확장, 재순환, 국재화, 지속성 능력, 항원-특이성, 항원 수용체의 유형, 특수한 기관 또는 구획내에서의 존재, 마커 또는 사이토킨 분비 프로파일, 및/또는 분화의 정도에 의해 정의된 것을 포함할 수 있다. 치료될 대상체를 참고로, 세포는 동종이계 및/또는 자가일 수 있다. 기성제품 기술(off-the-shelf technologies)을 위해, 세포는 다능성(pluripotent) 및/또는 다분화능(multipotent) 세포, 예를 들면, 줄기 세포, 예를 들면, 유도된 다능성 줄기 세포(pluripotent stem cell; iPSC)로부터 유래될 수 있다.
T 세포의 소-유형 및 소집단(예컨대, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포) 중에는 나이브 T(TN) 세포, 효과기 T 세포(TEFF), 기억 T 세포 및 이의 소-유형, 예를 들면, 줄기 세포 기억 T(TSCM), 중심 기억 T(TCM), 효과기 기억 T(TEM), 또는 말단 분화된 효과기 기억 T 세포, 종양-침윤 림프구(TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 점막-관련 비변이체 T(MAIT) 세포, 천연적으로 발생하는 및 적응성 조절 T(daptive regulatory T; Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예를 들면, TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 소포 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포, 및 델타/감마 T 세포가 존재한다.
T 세포 집단 중 하나 이상은 특정 마커, 예를 들면, 표면 마커에 대해 양성이거나, 특정 마커에 대해 음성인 세포가 풍부하거나 고갈되어 있을 수 있다. 일부 경우에, 이러한 마커는 T 세포의 특정 집단(예컨대, 비-기억 세포)에서 부재하거나 비교적 낮은 수준으로 발현되지만 T 세포의 특정의 다른 집단(예컨대, 기억 세포)에서 존재하거나 비교적 보다 높은 수준으로 발현되는 것이다.
T 세포는 비-T 세포, 예를 들면, B 세포, 단핵세포, 또는 다른 백혈 세포, 예를 들면, CD14에서 발현된 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리될 수 있다. 일부 양태에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계를 사용하여 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리한다. 이러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 나이브, 기억, 및/또는 효과기 T 세포 소집단(subpopulation)에서 발현되거나 비교적 보다 높은 정도로 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 소-집단으로 추가로 분류될 수 있다.
CD8+ T 세포는 나이브, 중심 기억, 효과기 기억, 및/또는 중심 기억 줄기 세포가 예를 들면, 각각의 소집단과 관련된 표면 항원을 기반으로 한 양성 또는 음성 선택에 의해 추가로 농축될 수 있다. 중심 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축을 수행하여 효능을 증가시킬 수 있는데, 예를 들어, 투여 후 장기간 생존, 확장, 및/또는 이식(engraftment)을 증진시킬 수 있고, 이는 일부 양태에서, 이러한 소-집단에서 특히 풍부하다.
T 세포는 자가 T 세포일 수 있다. 이러한 방법에서, 종양 샘플은 환자로부터 수득되며 단일 세포 현탁액이 수득된다. 단일 세포 현탁액은 임의의 적합한 방식으로, 예컨대, 기계적으로(예컨대, gentleMACSTM 분해기(Dissociator)(Miltenyi Biotec, 캘리포니아주 아우번 소재)를 사용하여 종양을 분해) 또는 효소적으로(예컨대, 콜라게나제 또는 DNase) 수득할 수 있다. 종양 효소 분해물의 단일-세포 현탁액은 인터류킨-2(IL-2) 속에서 배양한다. 세포는 합치(confluence)될 때까지(예컨대, 약 2Х106개의 림프구), 예컨대, 약 5 내지 약 21일, 바람직하게는 약 10 내지 약 14일 동안 배양된다.
배양된 T 세포는 혼주(pooling)시키고 신속하게 확장시킬 수 있다. 신속한 확장은 약 10 내지 약 14일의 기간에 걸쳐 항원-특이성 T 세포의 수의 적어도 약 50-배(예컨대, 50-, 60-, 70-, 80-, 90-, 또는 100-배 이상)의 증가를 제공한다.
확장은 당해 분야에 공지된 바와 같은 임의의 다수의 방법으로 달성할 수 있다. 예를 들면, T 세포는 공급인자 림프구 및 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터류킨-15(IL-15)의 존재하에거, 바람직하게는 IL-2의 존재하에서 비-특이성 T-세포 수용체 자극을 사용하여 신속하게 확장시킬 수 있다. 비-특이성 T-세포 수용체 자극은 대략 30 ng/ml의 OKT3, 마우스 모노클로날 항-CD3 항체(뉴저지주 라리탄 소재의 Ortho-McNeil®로부터 이용가능)를 포함할 수 있다. 대안적으로, T 세포는 시험관 내에서 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 벡터, 예를 들면, 사람 백혈구 항원 A2(HLA-A2) 결합 펩타이드로부터 임의로 발현될 수 있는 암의 하나 이상의 항원(예를 들면, 이의 항원 부위, 예를 들면, 에피토프(들), 또는 세포)으로 T-세포 성장 인자, 예를 들면, 300 IU/ml의 IL-2 또는 IL-15, 바람직하게는 IL-2의 존재하에 자극시킴으로써 신속하게 확장시킬 수 있다. 시험관 내-유도된 T-세포는 HLA-A2-발현 항원-제시 세포 상에서 암의 동일한 항원(들)로 재-자극시켜 신속하게 확장시킨다. 대안적으로, T-세포는 조사된, 자가 림프구로 또는 조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 예를 들면, IL-2로 재-자극시킬 수 있다.
자가 T-세포는 변형시켜 자가 T-세포의 성장 및 활성화를 촉진시키는 T-세포 성장 인자를 발현시킬 수 있다. 적합한 T-세포 성장 인자는 예를 들면, 인터류킨(IL)-2, IL-7, IL-15, 및 IL-12를 포함한다. 적합한 제작 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; 및usubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994을 참고한다. 특수한 양태에서, 변형된 자가 T-세포는 T-세포 성장 인자를 고 수준에서 발현한다. T-세포 성장 인자 코딩 서열, 예를 들면, IL-12의 것은 T-세포 성장 인자 코딩 서열에 대한 이의 작동가능한 연결이 고-수준 발현을 촉진하는, 프로모터와 같이, 당해 분야에서 용이하게 이용가능하다.
2. NK 세포
면역 효과기 세포는 천연 킬러(NK) 세포일 수 있다. 천연 킬러(NK) 세포는 다양한 종양 세포, 바이러스-감염된 세포, 및 골수 및 흉선 내 일부 정상 세포에 대해 자발적인 세포독성을 갖는 림프구의 소집단이다. NK 세포는 형질전환된 및 바이러스-감염된 세포에 대한 조기 선천성 면역 반응의 중요한 효과기이다. NK 세포는 사람 말초 혈액 속의 림프구의 약 10%를 구성한다. 림프구를 인터류킨 2(IL-2)의 존재하에서 배양하는 경우, 강력한 세포독성 반응이 개발된다. NK 세포는 이의 큰 크기 및 이의 세포질 내에서 특징적인 아주르친화성 과립(azurophilic granule)의 존재로 인하여 큰 과립 림프구로 알려진 효과기 세포이다. NK 세포는 골수, 림프절, 비장, 편도선, 및 흉선에서 분화하고 성숙한다. NK 세포는 사람 내에서 특이성 표면 마커, 예를 들면, CD16, CD56, 및 CD8에 의해 검출될 수 있다. NK 세포는 T-세포 항원 수용체, 판(pan) T 마커 CD3, 또는 표면 면역글로불린 B 세포 수용체를 발현하지 않는다.
NK 세포의 자극은 세포 표면 활성화 및 억제성 수용체로부터 유래된 신호의 크로스-톡(cross-talk)을 통해 달성된다. NK 세포의 활성화 상태는 배선-암호화된 활성화 및 억제성 수용체의 배열로부터 수신된 세포내 신호의 균형에 의해 조절된다. NK 세포가 정상 세포(예컨대, 종양 또는 바이러스-감염된 세포)와 접하여 활성화 신호가 우세하게 된 경우, NK 세포는 페르포린 및 그랜자임을 함유하는 세포분해 과립의 지시된 분비 또는 사멸 도메인-함유 수용체의 맞물림(engagement)을 통해 표적 세포의 세포자멸사를 신속하게 유도할 수 있다. 활성화된 NK 세포는 또한 제I형 사이토킨, 예를 들면, 인터페론-γ, 종양 괴사 인자-α 및 과립구-대식구 콜로니-자극 인자(GM-CSF)를 분비할 수 있고, 이는 선천성 및 적응성 면역 세포 둘다 뿐만 아니라 다른 사이토킨을 활성화시킨다. 조기 선천성 면역 반응에서 NK 세포에 의한 이러한 가용성 인자의 생산은 다른 조혈 세포의 보충 및 기능에 유의적으로 영향을 미친다. 또한, 사이토킨의 물리적 접촉 및 생산을 통해, NK 세포는 면역 반응을 증진시키거나 저지하기 위한 수지상 세포 및 호중구와의 조절성 크로스톡 네트워크에서 중추적인 작용인자(player)이다.
NK 세포는 사람 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 자극되지 않은 백혈구성분채집술 생성물(unstimulated leukapheresis product; PBSC), 사람 배아 줄기 세포(human embryonic stem cell; hESC), 유도된 다능성 줄기 세포(induced pluripotent stem cell; iPSC), 골수, 또는 제대혈로부터 당해 분야에 잘 공지된 방법에 의해 유래될 수 있다. 특정 양태에서, NK 세포를 단리 및 생체외에서 확장시킨다. 예를 들면, CB 단핵 세포를 피콜 밀도 구배 원심분리(ficoll density gradient centrifugation)에 의해 단리하고 생물반응기 속에서 IL-2 및 인공 항원 제시 세포(aAPC)와 함께 배양할 수 있다. 7일 후, 세포 배양물은 CD3을 발현하는 임의의 세포를 결실할 수 있으며 추가로 7일 동안 재-배양될 수 있다. 세포를 다시 CD3-고갈시키고 특성화하여 CD56+/CD3- 세포 또는 NK 세포의 퍼센트를 측정할 수 있다. 다른 방법에서, 제대 CB를 사용하여 CD34+ 세포를 단리하고 SCF, IL-7, IL-15, 및 IL-2를 함유하는 배지 속에서의 배양에 의해 CD56+/CD3- 세포로 분화시킴으로써 NK 세포를 유도할 수 있다.
F. 면역 효과기 세포의 가공
면역 효과기 세포(예컨대, 자가 또는 동종이계 T 세포(예컨대, 조절성 T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 감마-델타 T 세포), NK 세포, 비변이체 NK 세포, 또는 NKT 세포)를 유전적으로 가공하여 항원 수용체, 예를 들면, 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR)를 발현시킬 수 있다. 예를 들면, 숙주 세포(예컨대, 자가 또는 동종이계 T-세포)를 변형시켜 HSP70에 대해 항원 특이성을 갖는 CAR을 발현시킬 수 있다. 특수한 구현예에서, NK 세포를 가공하여 CAR을 발현한다. 상이한 항원에 대한 것과 같은 다수의 CAR을 단일 세포형, 예를 들면, T 세포 또는 NK 세포에 가할 수 있다.
세포는 유전적 가공을 통해 도입된, 하나 이상의 항원 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산, 및 이러한 핵산의 유전적으로 가공된 생성물을 포함할 수 있다. 핵산은 이종, 즉, 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플, 예를 들면, 가공되는 세포 및/또는 이러한 세포가 유래된 유기체 내에서 원래 발견되지 않은, 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것일 수 있다. 핵산은 천연적으로 존재하지 않을 수 있는데, 예를 들면, 천연에서 발견되지 않은 핵산(예컨대, 키메라)일 수 있다.
IV. 약제학적 제형
본 개시내용은 HSP70을 선택적으로 표적화하는 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 예방학적 또는 치료학적 유효량의 항체 또는 이의 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 또한 CAR을 발현하는 면역 세포(예컨대, T 세포 또는 NK 세포) 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형이 본원에 제공된다.
어구 "약제학적으로 또는 약리학적으로 허용되는"은 동물, 적절하게는 예를 들면, 사람에게 투여된 경우 부작용, 알레르기 반응, 또는 다른 원치않는 반응을 생산하지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다. 항체 또는 추가의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 제조는 본 개시내용의 측면에서 당해 분야의 숙련가에게 알려져 있을 것이다. 더욱이, 동물(예컨대, 사람) 투여를 위해, 제제는 생물학 표준의 FDA 사무국(FDA Office of Biological Standards)에 의해 요구된 것으로서, 멸균성, 발열원성, 일반적인 안전성, 및 순도 표준을 충족할 수 있음이 이해될 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, "약제학적으로 허용되는 담체"는 당해 분야의 통상의 기술자에게 알려질 수 있는 바와 같이, 임의의 및 모든 수성 용매(예컨대, 물, 알코올/수용액, 염수 용액, 비경구 비히클, 예를 들면, 염화나트륨, 링커 덱스트로스(Ringer's dextrose) 등), 비-수성 용매(예컨대, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들면, 에틸올레에이트), 분산 매질, 코팅, 표면활성제, 항산화제, 방부제(예컨대, 항세균 또는 항진균제, 항산화제, 킬레이트제, 및 불활성 가스), 등장성 제제, 흡수 디연제, 염, 약물, 약물 안정화제, 겔, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 염료, 유체 및 영양 보충제, 예를 들면 유사 물질 및 이의 조합물을 포함한다. 약제학적 조성물 속의 다양한 구성성분의 pH 및 정확한 농도는 잘 공지된 매개변수에 따라 조정된다.
활성 성분은 비경구 투여용으로 제형화될 수 있는데, 예컨대, 정맥내, 근육내, 피하, 또는 심지어 복강내 경로를 통해 주사용으로 제형화될 수 있다. 전형적으로, 이러한 조성물은 액체 액제 또는 현탁제로 제조될 수 있고; 주사 전 액체의 첨가로 액제 또는 현탁제를 제조하는데 사용하기에 적합한 고체 형을 또한 제조할 수 있으며; 제제는 또한 에멀젼화될 수 있다.
본 발명의 구현예의 치료학적 조성물은 유리하게는 액체 액제 또는 현탁제로서 주사가능한 조성물의 형태로 투여될 수 있고; 주사 전에 액체 속의 액제, 또는 현탁제에 적합한 고체 형을 또한 제조할 수 있다. 이러한 제제는 또한 에멀젼화될 수 있다.
주사용으로 적합한 약제학적 형태는 멸균 수성 액제 또는 분산제를 포함하고; 참깨 오일, 땅콩 오일, 또는 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제형; 및 멸균 주사가능한 액제 또는 분산제의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에, 형태는 멸균성이어야만 하고 이것이 용이하게 주사될 수 있을 정도까지 유체이어야 한다. 이는 또한 제작 및 저장 조건 하에서 안정할 수 있고 미생물, 예를 들면, 세균 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야만 한다.
단백질성 조성물은 중성 또는 염 형태로 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 산 부가염(단백질의 유리 아미노 그룹과 함께 형성됨)을 포함하고 이는 예를 들면, 염화수소산 또는 인산과 같은 무기 산, 또는 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산 등과 같은 유기산과 함께 형성된다. 유리 카복실 그룹과 함께 형성된 염은 또한 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 또는 철 산화물과 같은 무기 염기, 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.
약제학적 조성물은 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등)을 함유하는 용매 또는 분산 매질, 적합한 이의 혼합물, 및 식물성 오일을 포함할 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들면, 코팅, 예를 들면, 레시틴을 사용함에 의해, 분산제의 경우에 필요한 입자 크기를 유지함에 의해, 및 표면활성제의 사용에 의해 유지시킬 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항세균제 및 항진균제, 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 가져올 수 있다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들면, 당 또는 염화나트륨을 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물 속에 사용함으로써 가져올 수 있다.
조성물은, 경우에 따라, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 액제, 현탁제, 유제, 정제, 환제(pill), 캡슐제, 산제, 지속-방출형 제형(sustained-release formulation) 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제형은 표준 담체, 예를 들면, 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 제제의 예는 문헌: Remington's Pharmaceutical Sciences에 기술되어 있다. 이러한 조성물은 예방학적 또는 치료학적 유효량의 항체 또는 이의 단편을, 바람직하게는 정제된 형태로, 적합한 양의 담체와 함께 함유함으로써 환자에게 적절하게 투여하기 위한 형태를 제공할 것이다.
항체의 수동적 전달(passive transfer)은 일반적으로 정맥내 또는 근육내 주사를 포함할 것이다. 수득되는 면역성은 일반적으로 단지 단기간 동안 지속되며, 또한 특히 비-사람 기원의 감마 글로불린으로부터의, 과감작성 반응, 및 혈청 질병(serum sickness)에 대한 잠재적인 위험이 존재한다. 항체는 주사에 적합한 담체 속에, 즉, 멸균 및 주사가능하게 제형화될 수 있다.
일반적으로, 본 개시내용의 조성물의 성분은 별도로 또는 단위 투여량 형태, 예를 들면, 완전밀폐 밀봉된 용기, 예를 들면, 앰플 또는 활성제의 양을 나타내는 사셰(sachette) 속의 무수 동결건조된 분말 또는 물이 없는 농축물로서 함께 혼합된다. 조성물이 주입에 의해 투여될 경우, 이는 멸균 약제학적 등급의 물 또는 염수를 함유하는 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플을 제공함으로써 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 할 수 있다.
특정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 예를 들면, 적어도 약 0.1%의 활성 성분을 함유할 수 있다. 다른 구현예에서, 활성 성분은 약 2 중량% 내지 약 75 중량%의 단위, 또는 약 25% 내지 약 60%, 예를 들면, 여기에서 유도가능한 임의의 범위로 포함될 수 있다.
용어 "단위 용량(unit dose)" 또는 "투여량(dosage)"은 대상체에서 사용하기에 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하고, 각각의 단위는 이의 투여, 즉, 적절한 경로 및 투여 요법과 관련하여 상기 논의된 바람직한 반응을 생산하도록 계산된 예정된 양의 치료학적 조성물을 함유한다. 치료 횟수 및 단위 용량 둘 다에 따라, 투여될 양은 목적한 효과에 의존한다. 환자 또는 대상체에게 투여된 본 구현예의 조성물의 실제 투여량 양은 물리적 및 생리학적 인자, 예를 들면, 대상체의 체중, 건강, 및 성별, 치료된 질환의 유형, 질환 침투 정도, 사전 또는 현재 치료학적 개입, 환자의 특발증(idiopathy), 투여 경로, 및 특수한 치료학적 물질의 잠재능, 안정성, 및 독성에 의해 결정될 수 있다. 예를 들면, 투여량은 또한 투여 당 약 1 μg/kg/체중 내지 약 1000 mg/kg/체중(이러한 범위는 사이의 용량을 포함한다) 이상을 포함한다. 본원에 나타낸 숫자로부터의 유도가능한 범위의 비-제한적 예에서, 약 5 μg/kg/체중 내지 약 100 mg/kg/체중, 약 5 μg/kg/체중 내지 약 500 mg/kg/체중 등의 범위가 투여될 수 있다. 투여에 관여하는 숙련의는 어떠한 경우에도 개개 대상체에 대한 조성물 및 적절한 용량(들) 속의 활성 성분(들)의 농도를 결정할 것이다.
IV. 치료 방법
본 구현예의 특정의 양태를 사용하여 HSP70의 상승된 수준과 관련된 질환 또는 장애, 예를 들면, 암, 예를 들면, 폐 암(lung cancer), 전립선 암(prostate cancer), 위장 암(stomach cancer), 갑상선 암(thyroid cancer), 또는 유방 암(breast cancer)을 방지 또는 치료할 수 있다. HSP70의 기능화는 임의의 적합한 약물에 의해 감소시킬 수 있다. 바람직하게는, 이러한 물질은 항-HSP70 항체, HSP70-특이성 CAR T 세포, 또는 HSP70-특이성 CAR NK 세포일 수 있다.
"치료" 및 "치료하는"은 질환 또는 건강-관련 상태의 치료학적 이점을 수득할 목적을 위해 대상체에게 치료제의 투여 또는 적용 또는 대상체에서 수술 또는 양상(modality)의 수행을 지칭한다. 예를 들면, 치료는 HSP70을 표적화하는 약제학적 유효량의 항체를 단독으로 또는 화학치료요법, 면역치료요법, 또는 방사선치료요법, 수술의 수행, 또는 이의 임의의 조합과 함께 투여함을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 대상 방법이 수행되는 임의의 개체 또는 환자를 지칭한다. 일반적으로, 대상체는 사람이고, 당해 분야의 숙련가에의해 인식될 것이지만, 대상체는 동물일 수 있다. 따라서, 다른 동물, 예를 들면, 포유동물, 예를 들면, 설치류(예를 들면, 마우스, 랫트, 햄스터, 및 기니아 피크), 고양이, 개, 토끼, 농장 동물(예를 들면, 소, 말, 염소, 양, 돼지 등), 및 영장류(예를 들면, 원숭이, 침팬지, 오랑우탄, 및 고릴라)이 대상체의 정의 내에 포함된다.
본 명세서 전체에 사용된 바와 같은 용어 "치료학적 이점" 또는 "치료학적으로 유효한"은 이러한 상태의 의학적 치료와 관련하여 대상체의 웰-빙을 촉진하거나 향상시키는 어느것을 지칭한다. 이는 질환의 신호 또는 증상의 빈도 또는 중증도에 있어서의 감소를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들면, 암의 치료는 예를 들면, 종양의 크기에서의 감소, 종양의 침입성에서의 감소, 암의 성장 속에도에서 감소, 또는 전이의 방지를 포함할 수 있다. 암의 치료는 또한 암을 지닌 대상체의 생존을 연장시키는 것을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "암"은 고형 종양(solid tumor), 전이성 암(metastatic cancer), 또는 비-전이성 암(non-metastatic cancer)을 기술하는데 사용될 수 있다. 특정의 구현예에서, 암은 방광, 혈액, 골, 골수, 뇌, 유방, 결장, 식도, 회장, 소장, 대장, 결장, 직장, 항문, 잇몸, 머리, 신장, 간, 폐, 비인두, 목, 난소, 췌장, 전립선, 피주, 위장, 고환, 혀, 또는 자궁에서 기원할 수 있다.
암은 구체적으로 다음의 조직학적 유형일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다: 신생물(neoplasm), 악성(malignant); 암종(carcinoma); 미분화된 암종(carcinoma, undifferentiated); 거대 세포 및 방추 세포 암종(giant and spindle cell carcinoma); 소 세포 암종(small cell carcinoma); 유두상 암종(papillary carcinoma); 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma); 림프상피 암종(lymphoepithelial carcinoma); 기저 세포 암종(basal cell carcinoma); 모기질 암종(pilomatrix carcinoma); 전이 세포 암종(transitional cell carcinoma); 유상 이행 세포 암종(papillary transitional cell carcinoma); 선암종(adenocarcinoma); 악성 가스트린종(gastrinoma, malignant); 담관암종(cholangiocarcinoma); 간세포 암종(hepatocellular carcinoma); 조합된 간세포 암종(combined hepatocellular carcinoma) 및 담관암종(cholangiocarcinoma); 소주 선암종(trabecular adenocarcinoma); 샘낭 암종(adenoid cystic carcinoma); 선종 용종에서의 선암종(adenocarcinoma in adenomatous polyp); 가족성 대장용종증 선암종(adenocarcinoma, familial polyposis coli); 고형 암종(solid carcinoma); 악성 유암종(carcinoid tumor, malignant); 세기관지-치조 선암종(branchiolo-alveolar adenocarcinoma); 유두모양 선암종(papillary adenocarcinoma); 난염성 암종(chromophobe carcinoma); 친산성 암종(acidophil carcinoma); 호산성 선암종(oxyphilic adenocarcinoma); 호염기성 암종(basophil carcinoma); 투명 세포 선암종(clear cell adenocarcinoma); 거대 세포 암종(granular cell carcinoma); 여포성 선암종(follicular adenocarcinoma); 유두상 및 여포성 선암종(papillary and follicular adenocarcinoma); 비봉합 경화성 암종(nonencapsulating sclerosing carcinoma); 부신 외피 암종(adrenal cortical carcinoma); 자궁내막 암종(endometroid carcinoma); 피부 부속기관 암종(skin appendage carcinoma); 아포크린 선암종(apocrine adenocarcinoma); 피지 선암종(sebaceous adenocarcinoma); 귀지 선암종(ceruminous adenocarcinoma); 점액표피양 암종(mucoepidermoid carcinoma); 낭선암종(cystadenocarcinoma); 유두성 낭선암종(papillary cystadenocarcinoma); 유두 장액 낭선암종(papillary serous cystadenocarcinoma); 점소양 낭선암종(mucinous cystadenocarcinoma); 점액성 선암종(mucinous adenocarcinoma); 반지 세포 암종(signet ring cell carcinoma); 침윤성 도관 암종(infiltrating duct carcinoma); 속질 암종(medullary carcinoma); 소엽 암종(lobular carcinoma); 염증성 암종(inflammatory carcinoma); 유방 페제트 질환(paget's disease, mammary); 세엽 세포 암종(acinar cell carcinoma); 선편평세포 암종(adenosquamous carcinoma); 편평 상화세포가 있는 선암종(adenocarcinoma w/squamous metaplasia); 악성 흉선종(thymoma, malignant); 악성, 난소 기질 종양(ovarian stromal tumor, malignant); 악성 난포막종(thecoma, malignant); 악성 과립막 세포 종양(granulosa cell tumor, malignant); 악성 낭성모세포종(androblastoma, malignant); 세르톨리 세포 암종(sertoli cell carcinoma); 악성 라이디히 세포 종양(leydig cell tumor, malignant); 악성 지질 세포 종양(lipid cell tumor, malignant); 악성 부신경절종(paraganglioma, malignant); 악성 부신외의 부신경절종(extra-mammary paraganglioma, malignant); 크롬틴화성 세포종(pheochromocytoma); 사구맥관육종(glomangiosarcoma); 악성 흑색종(malignant melanoma); 멜라닌결핍 흑색종(amelanotic melanoma); 표재 확산 흑색종(superficial spreading melanoma); 거대 색소 모반 내 악성 흑색종(malignant melanoma in giant pigmented nevus); 상피 세포 흑색종(epithelioid cell melanoma); 악성 청색 모반(blue nevus, malignant); 육종(sarcoma); 섬유육종(fibrosarcoma); 악성 섬유조직구증(fibrous histiocytoma, malignant); 점액육종(myxosarcoma); 지방육종(liposarcoma); 평활근육종(leiomyosarcoma); 횡문근육종(rhabdomyosarcoma); 배아형 횡문근육종(embryonal rhabdomyosarcoma); 포상 횡문근육종(alveolar rhabdomyosarcoma); 기질 육종(stromal sarcoma); 악성 혼합 종양(mixed tumor, malignant); 뮬레 혼합 종양(mullerian mixed tumor); 신장모세포종(nephroblastoma); 간모세포종(hepatoblastoma); 암육종(carcinosarcoma); 악성 중간엽종(mesenchymoma, malignant); 악성 블렌너 종양(brenner tumor, malignant); 악성 엽상 종양(phyllodes tumor, malignant); 윤활막 육종(synovial sarcoma); 악성 중피종(mesothelioma, malignant); 미분화세포종(dysgerminoma); 배아 암종(embryonal carcinoma); 악성 기형종(teratoma, malignant); 악성 난소갑상선종(struma ovarii, malignant); 융모막 암종(choriocarcinoma); 악성 중간콩팥종(mesonephroma, malignant); 혈관육종(hemangiosarcoma); 악성 혈관내피종(hemangioendothelioma, malignant); 카포시 육종(kaposi's sarcoma); 악성 혈관주위세포종(hemangiopericytoma, malignant); 림프관육종(lymphangiosarcoma); 골육종(osteosarcoma); 피질주위 골육종(juxtacortical osteosarcoma); 연골육종(chondrosarcoma); 악성 연골모세포종(chondroblastoma, malignant); 중간엽연골육종(mesenchymal chondrosarcoma); 골의 거대 세포 종양(giant cell tumor of bone); 유윙 육종(ewing's sarcoma); 악성 치원성 종양(odontogenic tumor, malignant); 상아질 치아암종(ameloblastic odontosarcoma); 악성 법랑질모세포종(ameloblastoma, malignant); 사기질 모세포 섬유육종(ameloblastic fibrosarcoma); 악성 송과체종(pinealoma, malignant); 척색종(chordoma); 악성 신경교종(glioma, malignant); 뇌질피복 세포증(ependymoma); 성상세포종(astrocytoma); 원형질 성상세포종(protoplasmic astrocytoma); 원섬유성 별아교세포종(fibrillary astrocytoma); 별모세포종(astroblastoma); 교아세포종(glioblastoma); 희소돌기아교세포종(oligodendroglioma); 히소돌기아교모세포종(oligodendroblastoma); 원시신경외배엽 종양(primitive neuroectodermal); 소뇌 육종(cerebellar sarcoma); 신경절아세포종(ganglioneuroblastoma); 신경아세포종(neuroblastoma); 망막아종(retinoblastoma); 후각 신경성 종양(olfactory neurogenic tumor); 악성 수막종(meningioma, malignant); 신경섬유육종(neurofibrosarcoma); 악성 신경집종(neurilemmoma, malignant); 악성 과립 세포 종양(granular cell tumor, malignant); 악성 림프종(malignant lymphoma); 호지킨 질환(hodgkin's disease); 호지킨 파라육아종(hodgkin's; paragranuloma); 소 림프구성, 악성 림프종(malignant lymphoma, small lymphocytic); 거대 세포, 확산성, 악성 림프종(malignant lymphoma, large cell, diffuse); 난포성 악성 림프종(malignant lymphoma, follicular); 균상식육종(mycosis fungoides); 다른 구체화된 비-호지킨 림프종(other specified non-hodgkin's lymphomas); 악성 조직구증(malignant histiocytosis); 다발 골수종(multiple myeloma); 비만 세포 육종(mast cell sarcoma); 면역증식성 소장 질환(immunoproliferative small intestinal disease); 백혈병(leukemia); 림프성 백혈병(lymphoid leukemia); 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia); 적백혈병(erythroleukemia); 림프육종 세포 백혈병(lymphosarcoma cell leukemia); 골수성 백혈병(myeloid leukemia); 호염기구성 백혈병(basophilic leukemia); 호산구성 백혈병(eosinophilic leukemia); 단구성 백혈병(monocytic leukemia); 비만 세포 백혈병(mast cell leukemia); 거대아구성 백혈병(megakaryoblastic leukemia); 골수성 육종(myeloid sarcoma); 및 털세포 백혈병(hairy cell leukemia). 그럼에도 불구하고, 본 발명은 또한 비-암성 질환(예컨대, 진균 감염, 세균 감염, 바이러스 감염, 신경변성 질환, 및/또는 유전 장애)를 치료하는데 사용될 수 있다.
특정의 구현예에서, 본 구현예의 조성물 및 방법은 제2의 또는 추가의 치료요법, 예를 들면, 화학치료요법 또는 면역치료요법과 함께, HSP70에 대한 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 이러한 치료요법은 상승된 HSP70과 관련된 임의의 질환의 치료에 적용될 수 있다. 예를 들면, 질환은 암일 수 있다.
조합 치료요법을 포함하는 방법 및 조성물은 치료 또는 보호 효과를 향상시키고/시키거나 다른 항-암 또는 항-과증식성 치료요법의 치료학적 효과를 증가시킨다. 치료 및 예방 방법 및 조성물은 목적한 효과, 예를 들면, 암 세포의 사멸 및/또는 세포 과증식의 억제를 달성하는데 효과적인 조합 양으로 제공될 수 있다. 이러한 공정은 항체 또는 항체 단편 및 제2의 치료요법 둘 다와 세포를 접촉시킴을 포함할 수 있다. 조직, 종양, 또는 세포는 제제(즉, 항체 또는 항체 단편 또는 항암제) 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 조성물 또는 약리학적 제형(들)과, 또는 조직, 종양, 및/또는 세포를 2개 이상의 명백한 조성물 또는 제형과 접촉시킴에 의해 접촉시킬 수 있고, 여기서 하나의 조성물은 1) 항체 또는 항체 단편, 2) 항암제, 3) 항체 또는 항체 단편 및 항암제 둘 다를 제공한다. 또한, 이러한 조합 치료요법은 화학치료요법, 방사선치료요법, 외과적 치료요법, 또는 면역치료요법과 함께 사용될 수 있다.
세포에 적용되는 경우 용어 "접촉된" 및 "노출된"은 본원에서 이에 의히 치료학적 작제물 및 화학치료제 또는 방사선치료제가 표적 세포에 전달되거나 표적 세포와 직접적인 병렬로 위치하는 공정을 기술하기 위해 사용된다. 세포 사멸을 달성하기 위해, 예를 들면, 제제 둘 다는 세포를 사멸시키거나 이것이 분열하는 것을 방지하는데 효과적인 조합된 양으로 세포에 전달된다.
항체는 항암 치료와 관련하여 전에, 동안에, 후에, 또는 다양한 조합으로 투여될 수 있다. 투여는 수분 내지 수일 내지 수주 범위의 간격일 수 있다. 항체 또는 항체 단편이 항암제로부터 별개로 환자에게 제공된 구현예에서, 각각의 전달 시간 사이에 유의적인 기간이 끄타지 않도록 보증함으로써, 2개의 화합물이 여전히 환자에서 유리하게 조합된 효과를 발휘할 수 있을 수 있다. 이러한 예에서, 환자에게 항체 치료요법 및 항암 치료요법을 서로 약 12 내지 24시간 또는 72시간 내에 및, 보다 특히 서로 약 6 내지 12시간 내에 제공할 수 있는 것으로 고려된다. 일부 상황에서, 치료 기간을 유의적으로 연장시키는 것이 바람직할 수 있고 여기서 수일(2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일) 내지 수주(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주)가 각각의 투여 사이에 경과된다.
특정의 구현예에서, 치료 과정은 1 내지 90일 이상(이러한 범위는 중간 일자를 포함한다) 지속될 것이다. 하나의 제제가 1 내지 90일(이러한 밤위는 중간 날짜를 포함한다) 중 어느 하루 또는 이의 임의의 조합에 제공될 수 있고, 다른 제제는 1 내지 90일(이러한 밤위는 중간 날짜를 포함한다) 중 어느 하루 또는 이의 임의의 조합에 제공된다. 하루 이내(24시간)에, 환자에게 제제(들)을 1회 또는 다수 투여로 제공될 수 있다. 또한, 치료 과정 후, 항암 치료가 투여되지 않는 기간이 존재함이 고려된다. 이러한 기간은 한자의 상태, 예를 들면, 이의 징후, 강도, 건강 등에 따라, 1 내지 7일, 및/또는 1 내지 5주, 및/또는 1 내지 12개월 이상(이러한 범위는 중간 날짜를 포함한다) 지속될 수 있다. 치료 주기는 필요한 경우 반복될 수 있는 것으로 고려된다.
다양한 조합이 사용될 수 있다. 하기 예에서, 항체 치료요법은 "A"이고 항암 치료요법은 "B"이다:
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B
B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A
B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A
환자에 대한 본 구현예의 임의의 화합물 또는 치료요법의 투여는 경우에 따라, 제제의 독성을 고려하여, 이러한 화합물의 투여를 위한 일반적인 프로토콜을 따를 것이다. 따라서, 일부 구현예에서, 조합 치료요법에 기여할 수 있는 독성을 모니터링하는 단계가 존재한다.
A. 화학치료요법
광범위한 화학치료제를 본 구현예에 따라 사용할 수 있다. 용어 "화학치료요법"은 암을 치료하기 위한 약물의 사용을 지칭한다. "화학치료제"를 사용하여 암의 치료에 투여된 화합물 또는 조성물을 함축시킬 수 있다. 이러한 제제 또는 약물은 세포 내 이의 활성 방식, 예를 들면, 세포 주기에 영향을 미지는지의 여부 및 영향을 미치는 단계에 의해 분류될 수 있다. 대안적으로, 제제는 DNA를 직접적으로 가교-연결시키거나, DNA 내로 개재되거나(intercalate), 핵산 합성에 영향을 미침으로써 염색체 및 유사분열 비정상을 유도하는 이의 능력을 기반으로 특성화할 수 있다.
화학치료제의 예는 알킬화제, 예를 들면, 티오테파 및 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예를 들면, 부설판, 임프로설판, 및 피포설판,; 아지리딘, 예를 들면, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예를 들면, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에티일렌티오포스파르아미드, 및 트리메틸롤로메라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(예를 들면, 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(예를 들면, 이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성유사체); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신(예를 들면, 합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예를 들면 클로람부실, 클로르나파진, 클로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벨비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 및 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예를 들면, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴; 항생제, 예를 들면, 에네디인 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1); 다이네마이신, 예를 들면, 다이네마이신 A; 시포스포네이트, 예를 들면, 클로드로네이트; 에스페르아미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 크로모프로데인 에네디인 항생제 발색단(related chromoprotein enediyne antiobiotic chromophore), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아자-5-옥소-L-노르루이신, 독소루비신(예를 들면, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예를 들면, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플레오마이신, 포트리로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 및 조루비신; 항-대사제, 예를 들면, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예를 들면, 데노프테린, 프테로프테린, 및 트리메트렉세이트; 푸린 유사체, 예를 들면, 플루다라빈, 6-머캅토푸린, 티아미프린, 및 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들면, 안시타빈, 아자시타빈, 6-아자우리딘,카르모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 및 플록수리딘; 안드로겐, 예를 들면, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피틸로스탄, 및 테스톨락톤; 항-아드레날, 예를 들면, 미토탄 및 트릴로스탄; 엽산 보충제(folic acid replenisher), 예를 들면, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 데다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀴온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 레티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예를 들면, 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK다당류 복합체; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 네누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리초테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피로브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 탁소이드, 예컨대, 파클리탁셀 및 도세탁셀 겜시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토푸린; 백금 배위 복합체, 예를 들면, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; 이리노테칸(예컨대, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로르니틴(difluorometlhylornithine; DFMO); 레티노이드, 예를 들면, 레티노산; 파펙시타빈; 카르보플라틴, 프로카르바진, 플리코마이신, 겜시타빈, 나벨빈, 파르네실-단백질 트랜스퍼라제 억제제, 트랜스플라눔, 및 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 상기 임의의 유도체를 포함한다.
B. 방사선치료요법
DNA 손상을 유발하고 집중적으로 사용된 다른 인자는 γ-선, X-선, 및/또는 종양 세포에 방사선동위원소의 직접적인 전달로 일반적으로 공지된 것을 포함한다. DNA 손상 인자의 다른 형태, 예를 들면, 극초단파, 양성자 빔 조사(미국 특허 제5,760,395호 및 제4,870,287호), 및 UV-조사가 또한 고려될 수 있다. 이러한 인자 모두는 DNA, DNA의 전구체, DNA의 복제 및 복구, 및 염색체의 조립 및 유지에서 광범위한 손상에 영향을 미치는 경향이 있다. X-선에 대한 선량 범위는 연장된 기간(3 내지 4주) 동안 50 내지 200 뢴트겐(roentgen)의 1일 용량 내지 2,000 내지 6,000 뢴트겐의 단일 용량의 범위이다. 방사선동위원소에 대한 선량 범위는 광범위하게 변하며, 동위원소의 반감기, 방사된 방사선의 강도 및 유형, 및 신생물 세포에 의한 흡수에 의존한다.
C. 면역치료요법
숙련가는 구현예의 방법과 함께 또는 이와 결합하여 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 암 치료의 문맥에서, 면역치료제는 일반적으로 암 세포를 표적화하여 파괴하는 면역 효과기 세포 및 분자의 사용에 의존한다. 리툭시맙(RITUXAN®)이 이러한 예이다. 면역 효과기는 예를 들면, 종양 세포의 표면 상에서 일부 마커에 대해 특이성 항체일 수 있다. 항체 단독은 치료요법의 효과기로서 제공될 수 있거나 이는 다른 세포를 보충하여 세포 사멸에 실제로 영향을 미칠 수 있다. 항체는 또한 약물 또는 독소(화학치료제, 방사선핵종, 리신 A 쇄, 콜레라 독소, 페르투시스 독소 등)과 접합되고 단순히 표적화제로서 제공될 수 있다. 대안적으로, 효과기는 종양 세포 표적과 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 표면 분자를 수반하는 림프구일 수 있다. 다양한 효과기 세포는 세포독성 T 세포 및 NK 세포를 포함한다.
면역치료요법의 일 양태에서, 종양 세포는 표적화에 대해 처리가능한, 즉, 다른 세포 대부분에 존재하지 않는 일부 마커를 지녀야 한다. 많은 종양 마커가 존재하고 이중 어느 것도 본 구현예의 문백에서 표적화하기에 적합할 수 있다. 일반적인 종양 마커는 B-세포 성숙 항원, CD20, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen), 타이로시나네(p97), gp68, GPRC5D, TAG-72, HMFG, 시알릴 루이스 항원(Sialyl Lewis Antigen), MucA, MucB, PLAP, 라미닌 수용체, erb B, 및 p155를 포함한다. 면역치료요법의 대안의 양태는 항암 효과를 면역 자극 효과와 결합시키는 것이다. 면역 자극 분자, 예를 들면, 사이토킨, 예를 들면, IL-2, IL-4, IL-12, GM-CSF, 감마-IFN, 케모킨, 예를 들면, MIP-1, MCP-1, IL-8, 및 성장 인자, 예를 들면, FLT3 기간드가 존재한다.
현재 연구중이거나 사용 중인 면역치료요법의 예는 면역 보조제, 예컨대, 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 디니트로클로로벤젠, 및 방향족 화합물(미국 특허 제5,801,005호 및 제5,739,169호; Hui and Hashimoto, 1998; Christodoulides et al., 1998); 사이토킨 치료요법, 예컨대, 인터페론 α, β, 및 γ, IL-1, GM-CSF, 및 TNF(Bukowski et al., 1998; Davidson et al., 1998; Hellstrand et al., 1998); 유전자 치료요법, 예컨대, TNF, IL-1, IL-2, 및 p53(Qin et al., 1998; Austin-Ward and Villaseca, 1998; 미국 특허 제5,830,880호 및 제5,846,945호); 및 모노클로날 항체, 예컨대, 항-CD20, 항-강글리오시드 GM2, 및 항-p185(Hollander, 2012; Hanibuchi et al., 1998; 미국 특허 제5,824,311호)이다. 하나 이상의 항-암 치료요법을 본원에 기술된 항체 치료요법과 함께 사용될 수 있음이 고려된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 조합은 종양 면역억제를 감소시키는 제제, 예를 들면, 케모킨(C-X-C 모티프) 수용체 2(CXCR2) 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 다니릭신(CAS 등록 번호: 954126-98-8)이다. 다니릭신은 또한 GSK1325756 또는 1-(4-클로로-2-하이드록시-3-피페리딘-3-일설포닐페닐)-3-(3-플루오로-2-메틸페닐)우레아로서 공지되어 있다. 다니릭신은 예컨대, 문헌: Miller et al.　Eur J Drug Metab Pharmacokinet　(2014) 39:173-181; 및 Miller et al.　BMC Pharmacology and Toxicology　(2015), 16:18에 개시되어 있다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 레파릭신(CAS 등록 번호: 266359-83-5)이다. 레파릭신은 또한 레페르탁신 또는 (2R)-2-[4-(2-메틸프로필)페닐]-N-메틸설포닐프로판아미드로서 공지되어 있다. 레파릭신은 CXCR1/2의 비-경쟁적 알로스테릭 억제제이다. 레파릭신은 예컨대, 문헌: Zarbock et al.　British Journal of Pharmacology　(2008), 1-8에 개시되어 있다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 나바릭신이다. 나바릭신은 또한 MK-7123, SCH527123, PS291822, 또는 2-하이드록시-N,N-디메틸-3-[[2-[[(1R)-1-(5-메틸푸란-2-일)프로필]아미노]-3,4-디옥사사이클로부텐-1-일]아미노]벤즈아미드로서 알려져 있다. 나바릭신은 예컨대, 문헌: Ning et al.　Mol Cancer Ther.　2012; 11(6):1353-64에 개시되어 있다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 또한 N-[2-[[(2,3-디플루오로페닐)메틸]티오]-6-{[(1 R,2S)-2,3-디하이드록시-1-메틸프로필]옥시}-4-피리미디닐]-1-아제티딘설폰아미드로서 공지된 AZD5069이다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 제WO2020/028479호에 개시된 것과 같은 항-CXCR2 항체이다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 조합은 수지상 세포를 활성화시키는 제제, 예를 들면, TLR 작용제를 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 "TLR 작용제"는 문헌: Bauer et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 9237-9242에 기술된 바와 같은 톨-유사 수용체를 활성화시키는 임의의 분자이다. TLR 작용제는 소 분자(small molecule), 재조합 단백질, 항체 또는 항체 단편, 핵산, 또는 단백질일 수 있다. 특정 구현예에서, TLR 작용제는 재조합, 천연 리간드, 면역자극성 뉴클레오타이드 서열, 소 분자, 정제된 세균 추출물 또는 불활성화된 세균 제제이다.
미생물로부터 유래된 TLR의 수개의 작용제(agonist), 예를 들면, 지질다당류, 펩티도글리칸, 플라겔린 및 리포테이초산(lipoteichoic acid)(Aderem et al., 2000, Nature 406:782-787; Akira et al., 2001, Nat. Immunol. 2: 675-680)가 기술되었다. 이러한 리간등 중 일부는 TLR의 명백한 패턴을 발현하는, 상이한 수지상 세포 소세트를 활성화시킬 수 있다(Kadowaki et al., 2001, J. Exp. Med. 194: 863-869). 따라서, TLR 작용제는 TLR 작용제 특성을 지닌 미생물의 임의의 제제일 수 있다. 해독되지 않은 DNA의 특정 유형은 TLR을 활성화시킴으로써 면역 반응을 자극하는 것으로 밝혀졌다. 특히, CpG 모티프를 함유하는 면역자극성 올리고뉴클레오타이드는 광범위하게 개시되어 있으며 림프구를 활성화시키는 것으로 보고되었다(참고: 미국 특허 제6,194,388호). 본원에 사용된 바와 같은 "CpG 모티프"는 메틸화되지 않는 시스테인-구아닌(CpG) 디뉴클레오타이드로 정의된다. CpG 모티프를 함유하는 면역자극성 올리고뉴클레오타이드는 또한 본 발명의 방법에 따라 TLR 작용제로서 사용될 수 있다. 면역자극성 뉴클레오타이드 서열은 포스포로티오에이트 변형과 같은 구조 변형에 의해 안정화될 수 있거나 양이온성 리포좀 속에 캡슐화되어 생체내 약물동력학 및 종양 표적화를 증진시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 면역치료요법은 면역 체크포인트 억제제일 수 있다. 면역 체크포인트는 신호를 켜거나(예컨대, 공-자극성 분자) 신호를 끌 수 있다. 면역 체크포인트는 신호를 켜거나(예컨대, 공-자극성 분자) 신호를 끌 수 있다. 면역 체크포인트 차단에 의해 표적화될 수 있는 면역 체크포인트 단백질은 아데노신 A2A 수용체(A2AR), B7-H3(CD276으로서 또한 공지됨), B 및 T 림프구 약화제(attenuator)(BTLA), CCL5, CD27, CD38, CD8A, CMKLR1, 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4(CTLA-4, CD152로서 또한 공지됨), CXCL9, CXCR5, 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체-관련 단백질(glucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor-related protein; GITR), HLA-DRB1, ICOS(또한 CD278로서 공지됨), HLA-DQA1, HLA-E, 인돌아민 2,3-디옥시게나제 1(IDO1), 킬러-세포 면역글로불린(KIR), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3, CD223으로서 또한 공지됨), Mer 타이로신 키나제(MerTK), NKG7, OX40(또한 CD134로서 공지됨), 프로그램화된 사멸(programmed death 1; PD-1), 프로그램화된 사멸-리간드 1(programmed death-ligand 1; PD-L1, 또한 CD274로서 공지됨), PDCD1LG2, PSMB10, STAT1, Ig 및 ITIM 도메인을 지닌 T 세포 면역수용체(TIGIT), T-세포 면역글로불린 도메인 및 무신 도메인(mucin domain 3; TIM-3), 및 T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자(VISTA, 또한 C10orf54로서 공지됨)를 포함한다. 특히, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 축 및/또는 CTLA-4를 표적화한다.
면역 체크포린트 억제제는 약물, 예를 들면, 소 분자, 리간드 또는 수용체의 재조합 형태, 또는 항체, 예를 들면, 사람 항체(예컨대, 국제 특허 공보 제WO2015/016718호; Pardoll, Nat Rev Cancer, 12(4): 252-264, 2012; 둘 다 본원에 참고로 포함됨)일 수 있다. 면역 체크포인트 단백질 또는 이의 유사체의 공지된 억제제를 사용할 수 있고, 특히 키메라된, 사람화된, 또는 항체의 사람 형태를 사용할 수 있다. 숙련가가 알게 될 바와 같이, 대안의 및/또는 등가의 명칭이 본 개시내용에서 언급된 특정 항체에 대해 사용하는데 사용될 수 있다. 이러한 대안의 및/또는 등가의 명칭은 본 개시내용의 문맥에서 상호교환가능하다. 예를 들면, 람브롤리주맙은 대안 및 등가의 명칭 MK-3475 및 펨브롤리주맙 하에 공지되어 있다.
일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제(antagonist)는 이의 리간드 결합 파트너에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 양태에서, PD-1 리간드 결합 파트너는 PD-L1 및/또는 PD-L2이다. 다른 구현예에서, PD-L1 리간드 길항제는 이의 결합 파트너에 대한 PD-L1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정의 양태에서, PD-L1 결합 파트너는 PD-1 및/또는 B7-1이다. 다른 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 이의 결합 파트너에 대한 PD-L2의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 양태에서, PD-L2 결합 파트너는 PD-1이다. 길항제는 항체, 이의 항원 결합 파트너, 임뮤노어드헤신(immunoadhesin), 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 예시적인 항체는 미국 특허 제8,735,553호, 제8,354,509호, 및 제8,008,449호에 기술되어 있고, 이들 모두는 본원에 참고로 포함된다. 본원에 제공된 방법에서 사용하기 위한 다른 PD-1 축 길항제는 당해 분야, 예를 들면, 미국 특허 공보 제2014/0294898호, 제2014/022021호, 및 제2011/0008369호에 기술된 바와 같이 공지되어 있고, 이들 모두는 본원에 참고로 포함된다.
일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체)이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 페므롤리주맙, 및 CT-011로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 임뮤노어드헤신(예컨대, 불변 영역(예컨대, 면역글로불린 서열의 Fc 영역))에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부위를 포함하는 임뮤노어더헤신이다. 일부 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다. MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558, 및 OPDIVO®로서 또한 공지된, 니볼루맙은 제WO2006/121168호에 기술된 항-PD-1 항체이다. MK-3475, Merck 3475, 람브롤리주맙, KEYTRUDA®, 및 SCH-900475로서 또한 공지된 펨브롤리주맙은 제WO2009/114335호에 기술된 항-PD-1 항체이다. hBAT 또는 hBAT-1으로서 또한 공지된, CT-011은 제WO2009/101611호에 기술된 항-PD-1 항체이다. B7-DCIg로서 또한 공지된, AMP-224는 제WO2010/027827호 및 제WO2011/066342호에 기술된 PD-L2-Fc 융합 가용성 수용체이다.
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 CD152로서 또한 공지된, 세포독성 T-림프구-관련 단백질(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4; CTLA-4)이다. 사람 CTLA-4의 완전한 cDNA 서열은 Genbank 수탁 번호 제L15006호를 갖는다. CTLA-4는 T 세포의 표면에서 발견되며 항원-제시 세포의 표면에서 CD80 또는 CD86에 결합되는 경우 "오프(off)" 스위치로서 작용한다. CTLA-4는 T-세포 공-자극성 단백질, CD28과 유사하며, 분자 둘 다는 항원-제시 세포에서 각각 또한 B7-1 및 B7-2로 불리는 CD80 및 CD86에 결합한다. CTLA-4는 억제성 신호를 T 세포에 전달하는 반면, CD28는 자극성 신호를 전달한다. 세포내 CTLA-4는 또한 조절성 T 세포에서 발견되며 이의 기능에 중요할 수 있다. T 세포 수용체 및 CD28을 통한 T 세포 활성화는 B7 분자에 대한 억제성 수용체인, CTLA-4의 증가된 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에 사용하기에 적합한 항-사람-CTLA-4 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-CTLA-4 항체를 사용할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제8,119,129호; PCT 공보 제WO 01/14424호, 제WO 98/42752호, 제WO 00/37504호(CP675,206, 또한 트레멜리무맙으로서 공지된; 이전에 티실리무맙); 미국 특허 제6,207,156호; Hurwitz et al. (1998) Proc Natl Acad Sci USA, 95(17): 10067-10071; Camacho et al. (2004) J Clin Oncology, 22(145): Abstract No. 2505 (antibody CP-675206); 및 Mokyr et al. (1998) Cancer Res, 58:5301-5304에 개시된 호에 개시된 항-CTLA-4 항체를 본원에 개시된 방법에서 사용할 수 이다. 전술한 공보 각각의 교시는 본원에 참고로 포함된다. CTLA-4에 대한 결합에 대해 이러한 당해 분야에 인식된 항체 중 어느 것과 경쟁하는 항체를 또한 사용할 수 있다. 예를 들면, 사람화된 CTLA-4 항체는 국제 특허원 제WO2001/014424호, 제WO2000/037504호, 및 미국 특허 제8,017,114호에 기술되어 있고; 모두는 본원에 참고로 포함된다.
예시적인 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(또한 10D1, MDX- 010, MDX- 101, 및 Yervoy®로서 공지됨) 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체(참고: 예컨대, 제WO 01/14424호)이다. 다른 구현예에서, 항체는 이필리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 VR을 포함한다. 따라서, 일 구현예에서, 항체는 이필리무맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 이필리무맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인을 포함한다. 다른 구현에에서, 항체는 상술한 항체와 동일한 CTLA-4 상의 에피토프와 결합에 대해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다. 다른 구현예에서, 항체는 상술한 항체와 적어도 약 90%의 가변 영역 아미노산 서열 동일성(예컨대, 이필리무맙과 적어도 약 90%, 95%, 또는 99% 가변 영역 동일성)을 갖는다. CTLA-4를 조절하는 다른 분자는 모두 본원에 참고로 포함된, CTLA-4 리간드 및 미국 특허 제5844905호, 제5885796호 및 국제 특허원 제WO1995001994호 및 제WO1998042752호에 기술된 것과 같은 수용체, 및 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8329867호에 기술된 것과 같은 임뮤노어드헤신을 포함한다.
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 CD223으로서 또한 공지된, 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)이다. 사람 LAG-3의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP-002277호를 갖는다. LAG-3은 활성화된 T 세포, 천연 킬러 세포, B 세포, 및 형질세포양 수지상 세포의 표면에서 발견된다. LAG-3은 항원-제시 세포의 표면에서 MHC 제II 부류에 결합된 경우 "오프" 스위치로서 작용한다. LAG-3의 억제는 효과기 T 세포 및 억제제 조절 T 세포 둘 다를 활성화시킨다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-LAG-3 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고뉴클레오타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-LAG-3 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-LAG-3 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-LAG-3 항체는 렐라틀리맙(또한 BMS-986016으로서 공지됨) 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체(참고: 예컨대, 제WO 2015/116539호)이다. 다른 예시적인 항-LAG-3 항체는 TSR-033(참고: 예컨대, 제WO 2018/201096호), MK-4280, 및 REGN3767을 포함한다. MGD013은 제WO 2017/019846호에 기술된 항-LAG-3/PD-1 이중특이성 항체이다. FS118은 제WO 2017/220569호에 기술된 항-LAG-3/PD-L1 이중특이성 항체이다.
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 또한 C10orf54로서 또한 공지된, T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제제(V-domain Ig suppressor of T cell activation; VISTA)이다. 사람 VISTA의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 반호 제NP_071436호를 갖는다. VISTA는 백혈 세포에서 발견되며 T 세포 효과기 기능을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-VISTA3 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-VISTA 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-VISTA 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-VISTA 항체는 JNJ-61610588(또한 온바틸리맙으로 공지됨)이다(참고: 예컨대, 제WO 2015/097536호, 제WO 2016/207717호, 제WO 2017/137830호, 제WO 2017/175058호). VISTA는 또한 소 분자 CA-170에 의해 억제될 수 있고, 이는 PD-L1 및 VISTA를 선택적으로 표적화한다(참고: 예컨대, 제WO 2015/033299호, 제WO 2015/033301호).
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질인 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO)이다. 사람 IDO의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_002155호를 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 소 분자 IDO 억제제이다. 예시적인 소 분자는 BMS-986205, 에파카도스타트(INCB24360), 및 나복시모드(GDC-0919)를 포함한다.
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 CD38이다. 사람 CD38의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_001766호를 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-CD38 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-CD38 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-CD38 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-CD38 항체는 다라투무맙이다(참고: 예컨대, 미국 특허 제7,829,673호).
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 또한 CD278로서 공지된 ICOS이다. 사람 ICOS의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_036224호를 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-ICOS 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-ICOS 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-ICOS 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-ICOS 항체는 JTX-2011(참고: 예컨대, 제WO 2016/154177호, 제WO 2018/187191호) 및 GSK3359609(참고: 예컨대, 제WO 2016/059602호)를 포함한다.
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 Ig 및 ITIM 도메인(TIGIT)을 지닌 T 세포 면역수용체이다. 사람 TIGIT의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_776160호를 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-TIGIT 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-TIGIT 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-TIGIT 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-TIGIT 항체는 MK-7684이다(참고: 예컨대, 제WO 2017/030823호, 제WO 2016/028656호).
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 또한 CD134로서 공지된, OX40이다. 사람 OX40의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_003318을 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-OX40 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-OX40 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-OX40 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-OX40 항체는 PF-04518600(참고: 예컨대, 제WO 2017/130076호)이다. ATOR-1015는 CTLA4 및 OX40을 표적화하는 이중특이성 항체이다(참고: 예컨대, 제WO 2017/182672호, 제WO 2018/091740호, 제WO 2018/202649호, 제WO 2018/002339호).
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 다른 면역 체크포인트 단백질은 또한 TNFRSF18 및 AITR로서 공지된, 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체-관련 단백질(glucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor-related protein; GITR)이다. 사람 GITR의 완전한 단백질 서열은 Genbank 수탁 번호 제NP_004186호를 갖는다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-GITR 항체(예컨대, 사람 항체, 사람화된 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 임뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다. 본 방법에서 사용하기에 적합한 항-사람-GITR 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL ㄷ메인)은 당해 분야에 장 공지된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 대안적으로, 당해 분야에 인식된 항-GITR 항체를 사용할 수 있다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다(참고: 예컨대, 제WO 2006/105021호).
일부 구현예에서, 면역 치료요법은 생체 외에서 생성된 자가 항원-특이성 T 세포의 전달을 포함하는 입양 면역치료요법일 수 있다. 입양 면역치료요법을 위해 사용된 T 세포는 항원-특이성 T 세포의 확장 또는 유전 가공을 통한 T 세포의 재지시에 의해 생성시킬 수 있다(Park, Rosenberg et al. 2011). 종양 특이성 T 세포의 단리 및 전달은 흑색종을 치료하는데 성공적인 것으로 밝혀졌다. T 세포에서 신규 특이성은 이식유전자성 T 세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)의 유전적 전달을 통해 성공적으로 생성되었다(Jena, Dotti et al. 2010). CAR은 단일 융합 분자 내 하나 이상의 신호전달 도메인과 관련된 표적화 모이어티로 이루어진 합성 수용체이다. 일반적으로, CAR의 결합 모이어티는 가요성 링커에 의해 결합된 모노클로날 항체의 경 및 가변 단편을 포함하는 단일-쇄 항체(scFv)의 항원-결합 도메인으로 이루어진다. 수용체 또는 리간드 도메인을 기반으로 한 결합 모이어티가 또한 성공적으로 사용되었다. 제1 세대 CAR에 대한 신호전달 도메인은 CD3제타 및 Fc 수용체 감마 쇄의 세포질성 영역으로부터 유래된다. CAR은 T 세포가 림프구 및 고형 종양을 포함하는 다양한 악성종양으로부터의 종양 세포의 표면에서 발현된 항원에 대해 성공적으로 재지시되도록 한다(Jena, Dotti et al. 2010).
일 구현예에서, 본 출원은 암의 치료를 위한 조합 치료요법을 제공하며 여기서 조합 치료요법은 입양 T 세포 치료요법 및 체크포인트 억제제를 포함한다. 일 양태에서, 입양 T 세포 치료요법은 자가 및/또는 동종이계 T-세포를 포함한다. 다른 양태에서, 자가 및/또는 동종이계 T-세포는 종양 항원에 대해 표적화된다.
D. 수술
암을 지닌 개인의 대략 60%는 예방, 진단 또는 단계화, 치유, 및 고통완화 수술(palliative surgery)을 포함하는, 일부 유형의 수술을 겪을 것이다. 치유적 수술은 절개를 포함하고 여기서 암성 조직의 모두 또는 일부가 물리적으로 제거, 절개, 및또는 파괴되고 다른 치료요법, 예를 들면, 본 구현예의 치료, 화학치료요법, 방사선치료요법, 호르몬 치료요법, 유전자 치료요법, 면역치료요법 및/또는 대안의 치료요법과 함께 사용될 수 있다. 종양 절개는 종양의 적어도 일부의 물리적 제거를 지칭한다. 종양 절개 외에, 수술에 의한 치료는 레이저 수술, 저온수술(cryosurgery), 전기수술(electrosurgery), 및 현미경적으로-제어된 수술(and microscopically-controlled surgery)(모흐 수술(Mohs' surgery))을 포함한다.
암성 세포, 조직 또는 종양의 일부 또는 모두의 절제시, 체 내에 구멍(cavity)이 형성될 수 있다. 치료는 관류, 직접적인 주사, 또는 추가의 항암 치료요법을 사용한 부위의 국소 적용에 의해 달성될 수 있다. 이러한 치료는 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일마다, 또는 1, 2, 3, 4, 및 5주마다 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월마다 반복될 수 있다. 이러한 치료는 또한 다양한 투여량일 수 있다.
E. 다른 제제
다른 제제가 치료의 치료학적 효능을 증진시키기 위해 본 구현예의 특정 양태와 함께 사용될 수 있음이 고려된다. 이러한 추가의 제제는 세포 표면 수용체 및 GAP 연결에 영향을 미치는 제제, 세포정지 및 분화제, 세포 부착의 억제제, 세포자멸사 유도인자에 대한 고증식성 세포의 민감성을 증가시키는 제제, 또는 다른 생물학적 제제를 포함한다. GAP 연결의 수를 증가시킴에 의한 세포간 신호전달에서의 증가는 이웃하는 초증식성 세포 집단에서 항-과증식 효과를 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, 세포정지제 또는 분화제를 본 구현예의 특정 양태와 함께 사용하여 치료의 항-과증식성효능을 증진시킬 수 있다. 세포 부착의 억제제는 본 구현예의 효능을 증진시키는 것으로 고려된다. 세포 부착 억제제의 예는 중심 부착 키나제(focal adhesion kinase; FAK) 억제제 및 로바스타틴이다. 세포자멸사에 대한 과증식성 세포의 민감성을 증가시키는 제제, 예를 들면, 항체 c225가 본 구현예의 특정 양태와 함께 사용되어 치료 효능을 증진시키는 것으로 또한 고려된다.
Ⅵ. 검출 방법
일부 양태에서, 본 개시내용은 HSP70의 발현을 검출하기 위한 면역검출 방법에 관한 것이다. 광범위한 검정 양식, 예를 들면, 면역조직화학, 효소 연결된 면역흡착성 검정(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA), 방사면역검정(radioimmunoassay; RIA), 면역방사측정 검정(immunoradiometric assay), 형광면역검정(fluoroimmunoassay), 화학발광성 검정, 생물발광성 검정(bioluminescent assay), 도트 블롯팅(dot blotting), FACS 분석 및 웨스턴 블롯(Western blot)이 단백질 생성물을 검출하기 위해 고려된다. 다양한 유용한 면역검출 방법의 단계는 과학 문헌에 기술되었다. 일반적으로, 면역결합 방법은 샘플을 수득하는 단계, 및 샘플을 면역복합체의 형성을 허용하기에 효과적인 조건 하에서 존재할 수 있는 바와 같이, 검출된 단백질에 대해 특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 면역복합체 형성의 검출은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 다수의 접근법의 적용을 통해 달성될 수 있다. 이러한 방법은 일반적으로 표지 도는 마커, 예를 들면, 방사활성, 형광성, 생물학적 및 효소적 태그 중 어는 것의 검출을 기반으로 한다. 물론, 제2의 결합 리간드, 예를 들면, 제2의 항체 및/또는 당해 분야에 공지된 바와 같이, 바이오틴/아비딘 리간드 결합 정령의 사용을 통해 추가의 장점을 찾을 수 있다.
검출에 사용된 항체 자체는 검출가능한 표지에 연결될 수 있고, 여기서 이러한 표지를 사용하여 단순히 검출함으로써, 조성물 속의 1차 면역 복합체의 양이 측정되도록 할 수 있다. 대안적으로, 1차 면역 복합체 내에 결합되는 제1 항체는 항체에 대해 결합 친화성을 갖는 제2의 결합 리간드의 수단에 의해 검출될 수 있다.이러한 경우에, 제2의 결합 리간드는 검출가능한 표지에 연결될 수 있다. 제2의 결합 리간드 자체는 흔히 항체이고, 이는 따라서 "제2" 항체로 명명될 수 있다. 1차 면역 복합체는 표지된, 제2의 결합 리간드, 또는 항체와 제2의 면역 복합체의 형성을 허용하기에 효과적인 조건 하에서 및 충분한 기간 동안 접촉시킨다. 이후에, 제2의 면역 복합체를 일반적으로 세척하여 임의의 비-특이적으로 결합된 제2 항체 또는 리간드를 제거한 다음, 제2의 면역 복합체 속에 남아있는 표지를 검출한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "샘플"은 본 발명에 의해 제공된 검출 방법에 적합한 임의의 샘플을 지칭한다. 샘플은 검출 또는 단리에 적합한 물질을 포함하는 임의의 샘플일 수 있다. 샘플의 공급원은 혈액, 흉수, 복강액, 뇨, 타액, 악성 복수액(malignant ascites), 기관지-폐포 세척 유액(broncho-alveolar lavage fluid), 활액(synovial fluid), 및 기관지 세척액을 포함한다. 일 양태에서, 샘플은 예를 들면, 전혈 또는 이의 임의의 분획 또는 구성성분을 포함하는, 혈액 샘플이다. 본 발명과 함께 사용하기에 적합한 혈액 샘플은 혈액 세포 또는 이의 구성성분, 예를 들면, 정맥, 동맥, 말초, 조직, 제대 등을 포함하는 공지된 임의의 공급원으로부터 추출할 수 있다. 예를 들면, 샘플은 잘 공지된 통상의 임상 방법(예컨대, 전혈을 채혈하여 가공하기 위한 과정)을 사용하여 수득하고 가공할 수 있다. 일 양태에서, 예시적인 샘플은 암을 지닌 대상체로부터 채혈된 말초 혈액일 수 있다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 다수의 세포를 포함한다. 특정 양태에서, 생물학적 샘플은 신선하거나 동결된 조직을 포함한다. 특정 양태에서, 생물학적 샘플은 포르말란 고정된, 파라핀 봉매된 조직을 포함한다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 조직 생검, 미세 침 흡인물, 혈액, 혈청, 혈장, 뇌척수액, 뇨, 대변, 타익, 순환하는 종양 세포, 엑소좀(exosome), 또는 흡인물 및 체 분비물, 예를 들면, 땀을 포함한다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 세포-유리된 DNA를 함유한다.
Ⅶ. 키트(kit)
구현예의 다양한 양태에서, 키트는 치료제 및/또는 다른 치료제 및 전달제를 함유하는 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, 구현예의 치료요법을 제조 및/또는 투여하기 위한 키트가 제공된다. 키트는 본 구현예의 약제학적 조성물 중 어느 것을 함유하는 하나 이상의 밀봉된 바이알을 포함할 수 있다. 키트는 예를 들면, 적어도 하나의 HSP70 항체 또는 HSP70-특이성 CAR 작제물 뿐만 아니라, 구현예의 구성성분을 제조, 제형화, 및/또는 투여하거나 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계를 수행하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 또한 적합한 용기를 포함할 수 있고, 이는 키트의 구성성분과 반응하지 않는 용기, 예를 들면, 엔펜도르프 튜브(eppendorf tube), 검정 플레이트, 주사기, 병, 또는 튜브이다. 용기는 멸균가능한 물질, 예를 들면, 플라스틱 또는 유리로 제조될 수 있다.
키트는 본원에 설정된 방법의 과정 단계를 요약한 설명서 쉬트를 추가로 포함할 수 있고 실질적으로 본원에 기술되거나 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 동일한 과정을 따를 것이다. 설명서 정보는 컴퓨터를 사용하여 실행하는 경우 약제학적 유효량의 치료제를 전달하는 실제 또는 가상의 과정의 디스플레이를 유도하는 기계-판독가능한 설명서를 함유하는 컴퓨터 판독가능한 매체일 수 있다.
VIII. 실시예
다음의 실시예는 본 발명의 바람직한 구현예를 입증하기 위해 포함된다. 이어오는 실시예에 개시된 기술은 본 발명자에 의해 본 발명의 실시에서 잘 기능하는 것으로 발견된 기술을 나타내므로 이의 실시를 위한 바람직한 방식을 구성하는 것으로 고려될 수 있음이 당해 분야의 숙련가에 의해 인식될 수 있다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는 본 개시내용의 측면에서, 많은 변화가 개시된 특정 구현예에서 이루어질 수 있고 본 발명의 취지 및 영역으로부터 벗어나지 않는 동일하거나 유사한 결과를 여전히 수득할 수 있음을 인식할 수 있다.
실시예 1 - HSP70을 표적화하는 치료학적 항체의 생성
항-HSP70 mAb를 개발하기 위하여, 녹색 형광성 단백질(GFP)에 융합된 사람 HSP70을 발현하는 뮤린 섬유아세포 L-세포(Willert et al., 2003)를 생성시키고 MD 앤더슨 모노클로날 항체 코어 시설(MD Anderson Monoclonal Antibody Core Facility)과 공동으로 BALB/c 마우스의 발바닥 내로 주사하였다. 3일마다 4회의 초기 일련의 주사, 및 13 및 15일째에 2회의 증강 주사(boost injection) 후, 뮤린 비장 세포를 Sp2/0-Ag14 뮤린 골수종 세포와 융합시켜(Shulman et al., 1978) 하이브리도마를 생성하였다. 단일-세포 클로닝은 혼합된 배양물 속의 96개 클론의 초기 처리량을 46개 클론으로 협소화시키며, 이후, 무수-세포 ELISA를 사용한 스크리닝에 의해 HSP70-GFP를 발현하지만, 벡터를 지닌 야생형이 아닌 L-세포, 또는 GFP-발현 L-세포를 인식하는 mAb를 확인하였다. 남아있는 28개의 하이브리도마 클론으로 제조된 mAb를 유동에 의해 완전한 MM1.S 골수종 세포 상에서, 및 웨스턴 블롯팅에 의해 MM1.S 세포 추출물 속에서 HSP70을 인식하는 이의 능력에 의해 특성화하였으며, 이는 17개의 클론이 목적한 특성을 가졌음을 나타내었다. 이를 RPMI 8226 사람 골수종 세포 및 HSP70을 CRISP/Cas9-매개된 유전자 편집을 사용하여 녹아웃시킨 8226 세포를 사용하여, HSP70 대 밀접하게 상동성인 HSP70 계열 구성원에 대한 이의 결합에 대해 추가로 스크리닝하였으며(Daugaard et al., 2007), 6개의 mAb가 사람 HSP70에 대해 최고의 특이성을 가졌다는 결론을 이끌었다. 최종 스크리닝으로서, 항체의 항-종양 활성을 용골성 골 질환(osteolytic bony disease)의 발달을 포함하는, 사람 골수종의 많은 자연 병력을 개괄하는 모델에서 루시퍼라제(luc)-발현 MOPC315.BM 뮤린 골수종 세포가 주사된 면역-적격성 BALB/c 마우스 내에서 평가하였다(Hofgaard et al., 2012). 이는 아미노산 수준에서 뮤린와 사람 HSP70 사이에 매우 밀접한, 95%의 상동성 및 mAb가 단백질 둘 다에 결합하였다는 발견으로 인하여 가능하였다(Hunt & Calderwood, 1990). 클론 77A는 파일런 연구(pilot study)에서 항-종양 활성을 나타내었고(도 1), 2/5마리의 처리된 마우스가 100일째에 재발없이 완전한 골수종 분해능을 나타내었으므로 클론 77A(이후 77A로 지칭됨)를 추가의 연구를 위해 선택하였다.
77A 항체의 상보성-결정 영역(CDR) 및 가변 영역을 표 1 내지 3에 제공한다.
[표 1]
Figure pct00018
[표 2]
Figure pct00019
[표 3]
Figure pct00020
실시예 2 - mAb 77A는 사람 HSP70에 대해 강력한 친화성을 나타낸다
Octet 분석을 수행하여 77A 결합의 친화성 및 역학을 연구하였다(도 2a). 이. 콜라이 내에서 이루어진 뮤린 HSP70 및 사람 HSP70에 대한 해리 상수(KD)는 각각 9.88 x 10-7 및 8.50 x 10-10이었지만, 진핵 곤충 Sf9 세포 내에서 이루어진 HSP70에 대한 것은 검출 한계 이하(1.0 x 10-12)이었다. 일부 내용을 제공하기 위해, 77A의 0.85 nM 친화성을 항-CD20 mAb 리툭시맙(5.2 nM)의 것(Malviay et al., 2012) 및 항-CD38 mAb 다라투무맙(4.36 nM)(van de Donk et al., 2016)과 우선적으로 비교하였고, 이는 각각 B-세포 림프종 및 골수종에 대해 임상 사용 중에 있다. 따라서, 77A는 사람 HSP70에 대해 특히 강력한 친화성을 가지며, 원핵 세포 대 진핵 세포 내에서 이루어진 사람 HSP70 사이의 차이는 이것이 상이하게 폴딩되거나 해독 후 변형된 에피토프를 표적화할 수 있음을 시사한다.
지금까지의 연구는 이것이 펩타이드에 대해 보다 높은 친화성을 가지고 보다 면역원성이므로 ADP-아가로스보다는 HSP70의 정제에 의한 ADP-HSP70에 촉점을 맞추었다(Greene et al., 2018; Peng et al., 1997). 실제로, 77A는 종양-유래된 펩타이드 항원을 함유할 수 있는, ADP-HSP70 복합체에 대해 우선적인 결합을 나타내었다(도 2b). 더욱이, HSP70-GFP에 대한 77A 결합의 ELISA 연구는 ADP 및 펩타이드 기질(NRL)이 존재하는 경우 최고의 친화성을 나타낸다(도 2c). 이의 ADP-/펩타이드 결합된 형태에서 HSP70에 대한 우선적 결합은 종양 미세환경으로부터 종양-관련된 항원의 전달을 향상시키는 경향이 있다.
실시예 3 - HSP70 결실 돌연변이체를 사용한 77A 에피토프의 맵핑(mapping)
HSP70에 대한 77A의 결합을 보다 잘 이해하기 위하여, HSP70 KO 사람 배아 신장(human embryonic kidney; HEK) 293T 세포를 CRISPR/Cas9 편집을 사용하여 생성시킨 다음, 전체 길이의 HSP70을 N-말단 GFP 양식으로, 또는 다양한 HSP70 결실 돌연변이체로 발현시켰다(도 3a). 77A를 사용한 세포 추출물의 면역침전(IP)에 이어, α-GFP 항체를 사용한 웨스턴 블롯팅은, 77A가 641개 아미노산(aa)의 전체 길이 HSP70, 및 C-말단으로부터 27개 아미노산(aa)이 결실된 624개 aa 단백질에 결합하였지만, 결합은 추가의 30개 aa 결실로 감소되었음을 나타내었다(도 3b). 이러한 발견은 이러한 돌연변이체를 발현하는 293T 세포에 대한 77A 결합의 유동 연구를 통해 확인되었다. 보다 작은 결실은 aa 604 내지 614번이 결실된 경우 세포 배양 상층액으로부터 분비된 HSP70을 인식하는 77A의 능력에서의 감소를 나타내었다(도 3c). 흥미롭게도, 세포 분해물로부터의 HSP70을 표적으로서 사용한 경우, 594 내지 604번의 결실이 감소된 인식과 관련되었다. 이러한 발견은 77A가 앞서 기술된 mAb에 대한 표적이 아닌, 아미노산 594 내지 614번 내 에피토프를 인식하며(도 3d) 77A에 의한 인식에 영향을 미치는 분비된 HSP70의 차등적인 해독후 변형이 존재할 수 있거나 77A가 공-차페론의 맥락에서 HSP70에 결합함을 시사한다. 알라닌 주사 분석을 수행하여 77A가 상호작용하는 HSP70내 주요 아미노산을 확인하였다(도 3e). 이러한 분석은 77A가 제2의 주요 부위로서의 K573, E576, W580, R596, 및 E598 및 1차 주요 부위로서의 H594, K595, 및 Q601와, 서열 번호: 11 내 아미노산에 상응하는 부위를 포함하는 HSP70의 구조적 에피토프를 인식함을 측정하였다(도 3f). 이러한 데이타는 HSP70이 이의 ADP- 및 항원성 펩타이드-결합된 형태로 존재하여 기질 결합을 차단하고 흡수를 증가시키는 경우 77A가 신규한 HSP70 도메인에 결합하는 모델을 뒷받침한다.
실시예 4 - 면역 결핍성 골수종 모델에서 77A의 차등적 활성
77A는 진핵 세포로부터의 사람 HSP70에 강력하게 결합하므로(도 2a), 이의 활성을 사람 골수종 세포에 대해 생체 내에서 연구하였다. 누드 마우스(nude mouse) 내에서 luc-표지된 MM1.S 세포의 모델에서, 77A는 50 μg의 주사로 주당 2회 제공된 경우 일부 종양 성장 감소, 및 100 내지 200 μg의 용량에서 보다 강력한 활성으로 용량-의존성 항-종양 활성을 나타내었다(도 4a). 이는 ELISA에 의해 측정된 것으로서 사람 경쇄 수준에서의 감소에 의해 동반되었다. 주목하게도, 본 연구를 SCID 마우스 및 비-비만의 중증 당뇨병과 조합된 면역결핍성 IL-2 수용체 γ-널(null)(NOD/SCID IL-2Rγnull (NSG)) 마우스에서 MM1.S 세포로 반복한 경우, 77A는 생체 내 영상화(도 4b) 또는 경쇄 정량화에 의한 활성을 나타내지 않았다. 이와 함께, 이러한 대조적인 결과는 77A가 누드 마우스에서는 보유되어 있지만 NSG 마우스에서는 부재하는 면역 효과기 세포에 의존성임을 시사하였다. 더욱이, MM1.S 세포 및 77A를 활용하는 시험관 내 검정은 직접적인 세포독성 활성을 나타내지 않았고, 77A는 항체- 또는 상보체-의존성 세포 세포독성(ADCC, CDC)을 유도하지 않았다.&&
실시예 5 - 77A는 수지상 세포에 의한 HSP70 흡수를 향상시킨다.
DC, 대식구, 및 천연 킬러(NK) 세포는 NSG 마우스에서 결함이 있는 반면(Shultz et al., 1995) 이러한 세포는 누드 마우스에 존재하고 기능성이다. NSG 및 누드 마우스 사이에 다른 차이점이 존재하지만, 종양 세포로부터 분비된 HSP70이 DC로의 항원의 전달을 촉진시키는 것으로 알려져 있으므로 DC에 첫번째로 집중하였다(Shevtsov & Multhoff, 2016; Binder, 2008). 따라서, Sf9 세포 내에서 제조된 정제된 헥사-(6x)-히스티딘-태그된 사람 HSP70을 사용하여 C57BL/6 마우스의 골수 단리체를 뮤린 과립구-대식구 CSF(GM-CSF) 및 MYC 및 RAF 종양유전자를 발현하는 레트로바이러스 벡터로 형질도입시켜 생성된 무한증식 뮤린 세포주인 DC2.4 미성숙 DC에 의한 6x-His-HSP70의 흡수를 연구하였다(Shen et al., 1997). 77A는 계란 라이소자임에 대해 지시된 대조군 동형 mAb(IgG2B로서 지칭됨)와 비교하여 4℃ 및 37℃에서 HSP70 흡수를 실질적으로 증가시켰지만(도 5), 다른 α-HSP70 mAb는 이러한 활성을 가지지 않았다. 77A의 존재하에서 향상된 HSP70 흡수를 또한 DC2.4 세포의 면역형광성 염색으로 입증할 수 있었다(도 6). 최종적으로, DC 내로의 HSP70 흡수를 전자 현미경에 의해 15 nM 금 입자에 접합된 77A를 사용하여 시험하였다. 77A는 이전의 검정에서 이것이 가졌던 바와 같이 EM에 의한 IgG2B 보다 HSP70 흡수를 향상시켰고(도 5 및 6), HSP70은 포식용해소체(phagolysosome)와 유사한 세포내 세포질성 막-결합된 바디(intracellular cytoplasmic membrane-bound body) 내에서 발견되었다.
뮤린 및 사람 HSP70에 대한 77A의 친화성에 있어서 실질적인 차이를 고려할 때(도 5), 부위-지시된 돌연변이유발을 사용하여 2개의 변이체(도 14a)(즉 각각은 가능한 2개의 아미노산 변화를 지니고, 하나는 3개 모두의 변화를 지닌다) 사이에서 상이한 각각의 아미노산에 대해 단일 변화(K->E, Q->R, N->S)를 지닌 사람 HSP70을 발현시켰다. 이는 HSP70 KO 293T 세포 내에서 발현되었고, 77A의 결합하는 능력은 IP 연구에서 실험되었다(도 3에서와 같이). IgG2B 및 77A의 존재하에서 이러한 돌연변이를 취하는 DC2.4 세포의 능력을 FACS로 연구하였다(도 5에서와 같이). 뮤린 서열과 매치하는 594 내지 614번 영역 내 사람 HSP70 서열의 돌연변이는 HSP70에 대한 77A의 능력 및 DC2.4 세포에 의한 흡수를 유도하는 이의 능력을 감소시킨다(도 14b).
이를 통해 77A/HSP70 복합체가 DC에 의해 취해진 수용체를 측정하는 것은 유사하게 영향받을 수 있는 다른 면역 효과기를 확인하는 것을 돕는다. 뮤린 FcγR2B를 발현하는 HSP70 녹-아웃(knock-out) HEK 239T 세포는 77A-결합된 HSP70을 취하는 것으로 밝혀졌다. 유사하게, 사람 FcγR2A 또는 사람 FcγR2B를 발현하는 HSP70 녹-아웃 HEK 239T 세포는 77A-결합된 HSP70를 취하는 것으로 밝혀진 반면, 다른 Fc 수용체의 발현은 이러한 효과를 생산하지 않았다(도 13). 사람 FcγR2A 및 FcγR2B는 단핵구/대식구 및 수지상 세포 내에서 발현된다(Bruhns, 2012).
실시예 6 - HSP70의 DC 흡수는 성숙을 향상시킨다.
DC에 의한 HSP70의 기능성 결과의 연구를 시작하기 위하여, DC2.4 세포를 IgG2B 또는 77A의 존재하에서 HSP70에 노출시켰다. RNA를 수거하고, cDNA로 전환시키고, 이를 384개 유전자를 함유하는 BioRad 면역 반응 역가(Immune Response Tier) 1-4 qPCR 배열에 하이브리드화하였다. 대조군 보다 2배 이상의 변화의 한계값(threshold)을 사용하여, IgG2B 활성화된 비교적 적은 유전자를 음성 대조군과 비교하였지만(도 8a; 상부 패널), 77A는 훨씬 더 큰 유전자 세트의 전사를 활성화시켰다(도 8a; 하단 패널). 독창성 경로 분석(Ingenuity Pathway Analysis)은 상부 활성화된 경로가 수지상 세포 성숙을 나타내는 것임에 주목하고(도 8b), 상부 유전자 중 일부가 CD70(Bourque & Hawiger, 2018), 아데노신 데아미나제(Casanova et al., 2012), 카텝신 S(Kim et al., 2017), 및 CC 케모킨 리간드 5(Wang et al., 2002)를 포함하여, DC 기능에서 중요한 역할을 한다는 발견에 의해 부분적으로 반영하였다. 다른 활성화된 경로는 신경염증 신호전달 경로, Th1 및 Th2 신호전달 둘 다, 및 톨-유사 수용체(TLR) 신호전달을 포함하였다. 또한, 이러한 실험으로부터의 세포 배양 상층액을 수집하고 사이토킨 배열을 사용하여 분석하였다. 77A 대 대조군으로서 IgG2B의 존재하에서 HSP70에 의해 유도된 주목할만한 변화는 DC 생물학에서 중요한 역할을 하는 사이토킨, 예를 들면, 다른 것들 중에서 종양-괴사 인자(TNF)-α, 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 및 인터류킨(IL)-1(도 8c)에서의 증가를 포함하였다(Turner et al., 2014).
실시예 7 - 종양 모델에서 77A의 활성
77A가 흑색종 모델 및 잘 특성화된 뮤린 삼중-음성 유방 암종(triple-negative breast carcinoma; TBC)(Chen et al., 2019) 모델인, 4T1 세포 내에서 이의 활성의 실험을 촉발한 많은 종양과 관련된 일반적인 면역성 메카니즘에 영향을 미쳤을 가능성은 면역학적으로 맞지않는(cold)것으로 고려되며(Kim et al., 2014), 표면 HSP70를 발현하지 않는다. luc-표지된 4T1 세포가 유방 지방 패드(mammary fat pad) 내로 주사되고 77A로 처리된 면역-적격성 BALB/c 마우스는 IgG2B보다 더 느린 1차 종양 성장을 나타내었다(도 9a). 주목하게도, 77A는 폐(도 9b) 및 또한 비장 및 간에 대한 전이성 질환의 발달을 강력하게 억제하였다. 말초 혈액을 생존하는 마우스로부터 32일째에 수집하고 T-세포 소세트에 대해 다중-매개변수 유동으로 분석하였으며, 이는 CD4+ T-세포 내에서 유의적인 증가 및 CD8+ T-세포 내에서 보다 조심스런 증가를 나타내었다(도 9c). 또한 말초 혈액 내에서 MHC 제II 부류+ 세포(도 9d), 및 제II 부류+ 및 CD11c+ 둘 다인 세포에 대해 주목된 증가가 존재하였고, 이는 77A 처리 후 뮤린 DC에서의 증가와 일치하였다. 77A는 (a) 사람 1차 CD4+ 및 CD8+ T 세포 내로 HSP70의 흡수를 유도하고(도 9e), (b) T-세포 증식 및 성숙 마커, 예를 들면, CD69 및 HLA DR의 발현을 향상시키고, (c) 다수의 종양 모델, 예를 들면, A549 사람 폐 암종 세포에서 MHC-독립된 세포질성 CD4 T-세포 활성을 자극시킴(도 9f)이 밝혀졌다.
흑색종 모델의 경우, 누드 마우스에서 A375 흑색종 모델을 사용하였다. 제1 용량의 77A를 23일째에 제공하고, 마지막 용량을 39일째에 제공하였다. 종양 용적은 77A 처리된 마우스에서보다 더 느렸다(도 9g).
실시예 8 - 4T1-기반 백신 전략의 효능을 향상시키기 위한 77A의 활용
DC는 전문적인 항원 제시 세포로서의 이의 역할을 고려할 때 백신 전략의 개발을 위한 매력적인 표적으로 고려되어 왔다(Gornati et al., 2018). 따라서, 77A가 HSP70-펩타이드 항원 복합체 흡수를 향상시키는 이의 능력을 통해 백신 효능을 향상시킬 수 있다는 가능성이 고려되었다. 이를 시험하기 위해, HSP70-GFP를 발현하는 4T1 세포를 사용하여 ADP-아가로스 컬럼 위에서 ADP-HSP70-펩타이드 복합체를 정제하고, BALB/c 마우스에게 PBS, 또는 IgG2B 또는 77A가 들어있는 ADP-HSP70-펩타이드 벡신을 주사하였다. ATP-HSP70와 비교하여 ADP-HSP70에 대해 집중되었고, ADP-HSP70은 종양-유래된 펩타이드를 포함하는 기질에 대한 보다 높은 친화성을 갖는 형태이므로, 보다 면역원성이다(Greene et al., 1995; Peng et al., 1997; Craig & Marszalek, 2017)(HSP70 기구의 토대의 개관에 대해서는 도 10을 참고한다). 0일째에, 마우스에게 살아있는 4T1-luc 표지된, HSP70-GFP-발현 세포를 정위적으로 주사하고, 종양의 발달은 전체 동물 영상화로 모니터링하였다. IgG2B의 존재하에서 ADP-HSP-펩타이드 복합체를 사용한 예방접종은 PBS 대조군과 비교하여 살아있는 4T1 세포를 사용한 챌린지 후에 마우스 내에서 종양 성장을 늦추지 않았지만(도 11a), 77A를 사용한 예방접종은 실질적으로 성장을 늦추었다. 37일째에 이러한 마우스로부터 단리한 비장세포를 이후에 조사된 4T1 세포에 7일 동안 노출시켰으며, CD4+ 및, 보다 적은 정도로, CD8+ T-세포에서의 증가를 나타내었다(도 11b & c; 좌측 패널). 또한, 이러한 세포는 HSP70-GFP의 부재하에서 HSP70-GFP를 발현하는 4T1 세포, 또는 4T1 세포에 대해 7일 후 향상된 세포독성을 나타내었고(도 11b & c; 우측 패널), 이는 HSP70-GFP-유래된 항원 및 다른 종양-유래된 항원 둘 다를 인식하는 세포독성 T 림프구(CTL)의 가능한 발달을 뒷받침한다. 이러한 가능성을 또한 인터페론 (IFN)-γ 및 IL2를 정교하게 하는 이러한 T-세포의 능력을 평가함으로서 시험하였다. 77A-예방접종된 마우스로부터의 추정된 CD4+ CTL은 이들을 4T1 또는 4T1-HSP70-GFP에 노출시킨 경우 IgG2B 대조군과 비교하여 증가된 IFNγ 및 IL2 분비를 나타내었다(도 12a). CD8+ CTL의 경우에(도 12b), 이는 또한 ADP-HSP70 복합체 및 77A를 사용한 예방접종 후 4T1 또는 4T1-HSP70-GFP 세포에 노출시킨 경우 증가된 IFNγ 분비를 나타내었지만, 결과는 IL-2 생산의 경우 놀라운 것이 아니었다. 이와 함께, 이러한 데이타는 77A가 DC에 의한 항원 흡수를 향상시킬 수 있고 보다 풍부한 하부(downstream) CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 생산함을 시사한다.
실시예 9 - 클론 77A HSP70 mAb에 대한 종양 표적의 확인
페길화된 리포좀 독소루비신(PLD; Doxil®)은 유방 암 치료요법에 대해 규제상 승인되었고(Lao et al., 2013) 다른 악성종양에 대해 활성이며(Lyseng-Williamson et al., 2013), ICD를 유발하므로(Kroemer et al., 2013), 이를 77A와 조합시키기 위한 제1 제제로서 선택하였다. IgG2B 또는 77A를 지닌 PLD를 4T1 세포가 정위적으로 주사된 BALB/c 마우스에서 평가하였다. PLD + IgG2B와 비교하여, PLD + 77A는 종양 성장에서 보다 큰 감소 및 지연을 유도하였고(도 15a), 4/5 마우스는 PLD + 77A로 치유된 반면(100일째에 재발의 결여로 정의됨), 이는 1/5 PLD + IgG2B 대조군 만의 경우이었다. 또한, 이러한 조합을 CT26-기반 면역-적격성 결장 암종 모델에서 평가하였으며, 여기서 종양 성장에서의 보다 큰 감소 및 지연이 또한 관찰되었다. 주목하게도, 81일째에, 3/5 PLD + 77A 마우스는 생존하였고 종양 재발이 없었지만, 1/5 IgG2B + PLD 마우스 만은 살았고, 개개 마우스는 측정가능한 질환을 가?다(도 15b).
실시예 10 - 항-HSP70 항체 에피토프 비닝(Binning)
에피토프 비닝 실험을 수행하여 이에 대해 상이한, 관련되지 않은 항-HSP70 항체가 HSP70에 대한 77A의 결합을 방해하거나 차단하는 정도를 측정하였다.
비닝 실험을 수행하기 위하여, 항체를 비닝 쌍에서 설정하였다. Octet 플랫포옴을 샌드위치 구조(sandwich configuration)로 사용하였다. 분석을 데이타 분석 HT 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 각각의 쌍에 대한 제1 항체를 딥-앤드-리드 센서 표면(dip-and-read sensor surface) 위에 로딩한 다음, 센서를 HSP70 용액 내로 침지하여 항원을 로딩하였다. 최종적으로, 센서를 각각의 쌍에 대해 제2 항체 내로 침지하고 반응을 측정하였다. 각각의 쌍에 대한 결과를 쌍식 매트릭스(pairwise matrix) 내로 표화하였다.
결과는 도 16에 나타낸다. 도 16에서의 숫자는 잠재적으로 경쟁하는 항체의 존재하에서 최대 결합의 퍼센트를 반영한다. 예측한 바와 같이, 모든 항체는 자체적으로 경쟁하였다. 나타낸 바와 같이, 77A는 C92F3-5(Fisher Scientific) 또는 N15F2-5(Enzo Life Sciences)와 경쟁하지 않았다.
실시예 11 - ADP 대 ATP-결합된 HSP70에 대한 결합 역학
HSP70의 ATP 또는 ADP-결합된 형태에 대한 77A 결합을 바이오층 간섭법(biolayer interferometry; BLI) 장치 및 ELISA를 사용하여 특성화하였다.
HSP70은 SF9 세포 내에서 발현되었다. ADP 또는 ATP-결합 단백질에 대해 선택성인 수지를 사용한 친화성 크로마토그래피를 사용하여 상응하게 결합한 HSP70 재조합 단백질의 거대 제제를 농축시켰다. 용출 후에 측정된 단백질 농도를 측정하여 동일한 농도가 후속적인 검정에서 사용될 수 있도록 하였다. BLI-기반 검정의 경우, 항체 및 시약을 미세웰 플레이트 상에서 희석하고 장치 내로 로딩하였다. 처리되는 항체를 딥-앤드-리드 센서 상에 고정시킨 다음 ATP 또는 ADP-농축된 HSP70에 대한 결합 동안 역학에 대해 관찰하였다. ELISA를 위해, 관련된 농축된 HSP70 단백질을 ELISA 플레이트 웰에 밤새 직접 코팅하였다. 이후에, 시험 항체를 플레이트 웰에 따라 일련 희석시키고, 적절한 제2 항체-HRP 접합체를 사용하여 검출하였다. 플레이트를 TMB 기질을 사용하여 전개시키고, O.D.를 산 정지 용액을 사용하여 안정화시켰다. BLI 센소그램 추적 데이타(sensogram trace data)는 도 17에 나타낸다. 나타낸 바와 같이, ATP-농축된 HSP70과는 대조적으로, ADP-농축된 HSP70에 대한 항원 연합 단계 동안 우수한 반응(nm 이동)이 존재하였다. 결합 역학은 표 4에 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 77A는 ADP-농축된 HSP70에 ATP-농축된 HSP70보다 ≥4배 더 큰 친화성(KD)으로 결합하였다.
[표 4]
Figure pct00021
도 18에 나타낸, ELISA 데이타는 동일한 경향성을 나타내었고, 여기서 77A는 ATP-농축된 HSP70보다 ADP-농축된 HSP70으로 보다 높은 최대 흡광도를 가졌다. 77A는 또한 ATP-농축된 HSP70(1.774 nM)보다 ADP-농축된 HSP70(0.7372 nM)으로 보다 낮은 EC50 값을 가졌다.
이와 함께, 이러한 결과는 77A가 ATP-HSP70 단백질과 비교하여 ADP-HSP70 단백질에 우선적으로 결합함을 나타낸다.
실시예 12 - 뮤린 CT-26 종양 모델에서 77A 활성
본 실시예는 뮤린 CT-26 결장직장 암종 악액질(colorectal adenocarcinoma cachexia) 모델에서 77A 항체를 단독으로 및 항-CTLA4 항체와 함께 시험한 것을 나타낸다.
CT26 세포를 누드 BLB/c 마우스에게 피하 접종하였다. 종양이 평균 ~ 80 mm3 용적에 도달하면 처리를 시작하였다. 마우스에게 10 mg/kg의 77A, 동형 대조군(IgG2B), 및/또는 항-CTLA4 항체를 14, 17, 및 21일 째에 투여하였다. 종양 용적은 도 19에 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 77A 및 항-CTLA-4 항체의 조합은 종양 용적에서 가장 큰 효과를 가졌고, 조합은 동형 대조군과 비교하여 종양 용적을 유의적으로 감소시켰다. 조합 치료요법은 모든 5마리의 처리된 동물에서 종양을 완전히 근절시켰다.
실시예 13 - 사람화(humanization)
본 실시예는 77A 항체의 사람화된 변이체의 생성을 기술한다.
77A 항체에 대한 뮤린 면역글로불린 계열 소그룹(subgroup)을 측정한 다음, 항원 결합 서열을 모델링하고 중쇄 및 경쇄 둘 다에 대한 관련된 사람 면역글로불린 계열의 상용성의 잠재적인 골격 내로 이식하였다. 역돌연변이를 필요한 경우 사용하였다. 5백개의 중쇄 변이체(hVH-1 내지 hVH-5, 표 5에 나타낸 바와 같음), 및 5개의 사람화된 경쇄 변이체(hVL-1 내지 hVL-5, 표 5에 나타낸 바와 같음)를 생성시켰다. hVH-1 내지 hVH-5의 서열 정렬을 도 20a에 나타내고, hVL-1 내지 hVL-5의 서열 정렬을 도 20b에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00022
각각의 사람화된 중쇄 및 경쇄의 조합을 포함하는 항체를 제조하고 특성화하였다. 이러한 항체는 h77A-1 내지 h77A-25로 지칭되며, 상응하는 아미노산 서열은 표 6에 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00023
사람화된 변이체를 바이오층 간섭법(BLI)을 사용하여 결합에 대해 특성화하였다. 뮤린 77A 항원 결합 영역 및 사람 Fc 영역을 포함하는 키메라 항체를 또한 시험하였다. 항체 및 시약을 미세웰 플레이트 상에 희석시키고 장치 내로 로딩하였다. 희석된 항체를 딥-앤드-리드 센서 상에 우선 고정시킨 다음, 기본선에 대한 측정치를 획득하였다. 후속적으로, 센서를 용액 속에 항원을 함유하거나, 완충제 만을 함유하는 웰 내로 침지시켰다. 센서에 결합된 분자의 수에 있어서의 변화를 프로토콜의 각각의 단계 동안 광의 간섭 패턴에서의 이동을 측정함으로써 정량화하였다. 수학적 모델링을 이러한 값 및 검정에 사용된 시약의 농도를 기반으로 수행하고 역학적 값을 계산하는데 사용하였다.
결과는 표 7에 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 시험한 사람화된 변이체 모두는 모 뮤린 항체의 2 내지 5배 내에서 친화성 측정값을 가졌다.
[표 7]
Figure pct00024
실시예 14 - 사람화된 77A 변이체에 의해 매개된 HSP70 흡수
본 실시예는 사람화된 77A 변이체에 의해 매개된 HSP70의 흡수에 있어서 Fc 수용체 연루(involvement)의 평가를 기술한다.
293HSP70KO 세포를 마우스 Fc 수용체 또는 사람 Fc 수용체의 패널을 암호화하는 벡터로 24시간 동안 형질감염시켰다. 형질감염을 2.5 μg(마우스 Fc 수용체의 경우) 또는 1.42 μg(사람 Fc 수용체의 경우)의 각각의 벡터가 들어있는 10cm 디쉬에서 JetPrime을 사용하여 수행하였다.
다음에, HSP70GFP(BME 유리됨; 5 μg/ml) 및 GFP-나노보디(Nanobody) Alexa-488(1:1000)를 단독으로 또는 항체(1 μg/ml)와 함께 1시간 동안 37℃에서 가하였다. 세포를 이후에 FAC로 분석하였다.
시험한 항체는 다음과 같았다: 각각 실시예 12에 기술된 바와 같은, IgG2 동형 대조군, 77A(뮤린), 사람 IgG1 Fc 도메인을 지닌 키메라 77A, 사람 IgG2 Fc 도메인을 지닌 키메라 77A, 사람 IgG4 도메인을 지닌 키메라 77a, 및 사람화된 변이체 h77A-1(hVH-1 및 hVL-1 포함), h77A-6(hVH-2 및 hVL-1 포함), 및 h77A-11(hVH-3 및 hVL-1 포함). 사람화된 항체 h77A-1, h77A-6, 및 h77A-11을 각각 사람 IgG2 Fc 도메인과 함께 시험하였다.
시험한 마우스 Fc 수용체는 다음과 같았다: FcγR1(Origene 카탈로그 번호 MR225268), FcγR2B(Origene 카탈로그 번호 MR204036), FcγR3(Origene 카탈로그 번호 MR203404), 및 FcγR4(Origene 카탈로그 번호 MR203178).
시험한 FC 수용체는 다음과 같았다: FcγR1A(Origene 카탈로그 번호 RC207487), FcγR1B(Origene 카탈로그 번호 RC219204), FcγR2A(Origene 카탈로그 번호 RC205786), FcγR2B(Origene 카탈로그 번호 RC211982), FcγR2C(Origene 카탈로그 번호 RC213460), FcγR3A(Origene 카탈로그 번호 SC124061), 및 FcγR3B(Origene 카탈로그 번호 RC204749).
결과는 도 21 내지 24에 나타낸다. 사람 FcγR을 사용한 결과의 요약은 표 8에 나타낸다. 결가는 모든 사람화된 항체 뿐만 아니라 키메라 및 모 뮤린 77A 항체가 FcγR2A 내지 FcγR2B 수용체를 통한 HSP70의 흡수를 매개할 수 있었음을 입증하였다. 키메라 IgG1 및 IgG4 항체는 또한 FcγR1A 수용체를 통한 HSP70의 흡수를 매개할 수 있었다. 뮤린 FcγR을 사용한 결과의 요약은 표 9에 나타낸다. 실험은 모든 3개의 사람화된 항체가 뮤린 FcγR2B 수용체를 통해 HSP70 흡수를 매개할 수 있음을 입증하였다. 키메라 IgG1 항체는 FcγR1, FcγR2B, 및 FcγR4 수용체를 통한 흡수를 촉진한 반면 IgG4 키메라는 HSP70 흡수를 위해 FcγR1 및 FcγR2B 수용체를 활용하였다. 모 뮤린 항체는 수용체 FcγR2B 및 FcγR4를 통한 흡수를 촉진하였다.
[표 8]
Figure pct00025
[표 9]
Figure pct00026
실시예 15 - 사람화된 77A 변이체에 의해 매개된 HSP70 수지상 세포 흡수
본 실시예는 사람화된 77A 변이체에 의해 매개된 수지상 세포(DC)에 의한 HSP70의 흡수를 기술한다.
혈액 수지상 세포 단리 키트(Blood Dendritic Cell Isolation Kit) II(Miltenyi Biotec)를 사용하여 사람 버피 코트(human buffy coat)로부터 수지상 세포를 단리하였다. 요약하면, B 세포 및 단핵구를 자기적으로 표지하고 CD19 및 CD14 마이크로비드(MicroBead)의 칵테일을 사용하여 고갈시켰다. 후속적으로, 비-자기 유동-통과 분획(non-magnetic flow-through fraction) 속의 예비-농축시킨 수지상 세포를 자기적으로 표지하고 수지상 세포 마커 CD304(BDCA-4/뉴로필린-1), CD141 (BDCA-3), 및 CD1c(BDCA-1)에 대한 항체의 칵테일을 사용하여 농축시켰다. 수집된 분획은 형질세포양 수지상 세포, 제1형 골수구 수지상 세포(MDC1s), 제2형 골수구 수지상 세포(MDC2), 및 비-DC 분획을 나타내는 표지되지 않은 유동 통과 분획을 포함하였다. 고도로 순수한 농축된 세포 분획은: 형질세포양 수지상 세포, 제1형 골수구 수지상 세포(MDC1), 및 제2형 골수구 수지상 세포(MDC2)를 포함한다.
세포를 HSP70GFP(BME 유리됨; 5 μg/ml)와 함께 항온처리하고 GFP-나노바디 Alexa-488(1:1000)를 단독으로 또는 항체(1 μg/ml)와 함께 1시간 동안 4℃에서 가하였다. 세포를 Ghost Violet 450, CD11C, CD19, CD14, CD80, CD86, CD141, CD1C, 및 CD303를 사용하거나 이를 위하여 염색하였다.
시험한 항체는 다음과 같았다: 각각 실시예 12에 기술된 바와 같은, IgG2 동형 대조군, 77A(뮤린), 사람 IgG1 Fc 도메인을 지닌 키메라 77A, 사람 IgG2 Fc 도메인을 지닌 키메라 77A, 사람 IgG4 도메인을 지닌 키메라 77A, 및 사람화된 변이체 h77A-1(예를 들면, hVH-1 및 hVL-1), h77A-6(예를 들면, hVH-2 및 hVL-1), 및 h77A-11(예를 들면, hVH-3 및 hVL-1). 사람화된 항체 h77A-1, h77A-6, 및 h77A-11을 사람 IgG2 Fc 도메인을 사용하여 각각 시험하였다.
결과는 도 25 내지 28에 나타낸다. 이와 함께, 결과는 77A의 사람 IgG2 동형이 1차 사람 DC 내로 HSP70의 흡수를 매개함으로써, 형질세포양 및 제2형 말초 혈액 DC를 우선적으로 표적화함을 나타내었다. 보다 적은 흡수가 제1형 말초 혈액 DC에 대해 관찰되어다. 또한, IgG1 키메라 만이 분획을 통해 표지되지 않은 유동 내로의 흡수를 유도하였다(도 25).
실시예 16 - 추가의 77A 변이체
hVH-1 및 hVL-1의 조합(실시예 12에 기술된 바와 같음)을 포함하는, h77A-1을 추가의 최적화를 위해 선택하였다.
이러한 서열을 최적화시키기 위하여, hVH-1 및 hVL-1의 변이체를 포함하는 큰 라이브러리를 생성시켰다. 후속적으로, 항체-항원 결합의 인 실리코(in silico) 모델을 생성시키고 전체 라이브러리에 대한 항체-항원 결합을 컴퓨터로 모의하였다. 상부 95개 항체는 h77A-1.1 내지 h77A-1.95로서 지칭되고, 표 10(카밧 CDR 서열) 및 표 11(IMGT CDR 서열)에 기술되어 있다. h77A-1.1 내지 h77A-1.95에 포함된 CDR 변이체의 아미노산 서열은 표 12에 제공되며, h77A-1.1 내지 h77A-1.95 내에 포함된 가변 영역 변이체의 아미노산 서열은 표 13에 제공된다. 추가의 항체 변이체 h77A-1.96, h77A-1.97, h77A-1.98(또한 표 10 및 11에 기술됨)을 또한 제조하고 시험하였다.
[표 10]
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
[표 11]
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
[표 12]
Figure pct00033
Figure pct00034
[표 13]
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
사람화된 변이체 hVH-1.1 내지 hVH-1.78의 서열 정렬을 도 29a 내지 29f에 나타내고, hVL-1.1 내지 hVL-1.53을 도 29g 내지 29j에 나타낸다.
변이체의 아미노산 서열을 암호화하는 DNA를 합성하고 포유동물 일시적인 발현 플라스미드 내로 클로닝하였다. 변이체를 CHO 기반 일시적인 발현 시스템을 사용하여 발현시키고 수득되는 항체를 함유하는 세포 배양 상층액을 원심분리 및 여과로 명확하게 하여ㅛㅆ다. 변이체를 세포 배양 상층액으로부터 친화성 크로마토그래피를 통해 정제하여다. 정제된 항체를 인산염 완충된 염수 용액으로 교환하였다. 수득되는 항체의 순도는 환원 및 변형 SDS-PAGE 겔에 의해 판단된 것으로서, >95%인 것으로 측정되었다. 항체 농도를 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 측정하였다.
결합 검정을 다음과 같이 수행하였다. 항체 변이체를 항-사람 Fc를 사용하여 일련의 바이오센서의 표면 상에 0.15 μg/ml에서 고정시켰다. 항원을, 100 nM에서 표면 위에 통과시켜 결합 반응을 생성하였다. 항체:항원 상호작용에 대한 결합 데이타를 25℃에서 바이오센서 상에 수집하였다. 선택된 항체 변이체에 대한 결과는 표 14에 나타낸다. 표 14에서, X=610은 해리 상의 시작시 포획된 항원 값(nM)(바이오센서를 초기에 항원과 접촉시킨 후 610초째에 측정함)을 나타내고 X=1495는 해리 상의 말기에 포획된 항원 값(nM)(바이오센서가 항원과 초기에 접촉한 후 1495초째에 측정함)을 나타낸다. 0.2 초과의 X=610 값 및 10% 미만의 해리 %를 갖는 항체를 굵은 글씨로 나타낸다.
[표 14]
Figure pct00043
Figure pct00044
추가의 역학적 분석을 선택 항체 변이체에 대해 수행하였다. 검정은 다음과 같이 수행하였다. 항체 변이체를 항-사람 Fc를 사용하여 일련의 바이오센서의 표면 위에 고정시켰다. 항원을 표면 위에 통과시켜 결합 반응을 생성하였다. 항체-항원 상호작용에 대한 결합 데이타를 25℃에서 바이오센서 상에서 수집하였다. 항원의 희석 시리즈를 해리 단계에서 사용하여, 전반적으로 결과를 맞추고 ka, kd, 및 KD에 대한 가장 우수한 값을 수득하였다. 표면 고정된 항체에 대한 항원의 결합에 대한 반응 데이타를 1:1 결합 모델에 대해 맞추었다. 역학 매개변수를 표 15에 요약한다.
[표 15]
Figure pct00045
본원에 개시되어 청구된 방법 모두는 본 개시내용의 측면에서 과도한 실험없이 이루어지고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 구현예의 측면에서 기술되었지만, 변화가 본 발명의 개념, 취지 및 영역에 벗어나지 않고 본원에 기술된 방법 및 방법의 단계의 순서에 적용될 수 있음이 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 화학적으로 및 생리학적으로 둘 다 관련된 특정 제제가 본원에 기술된 제제에 대해 치환될 수 있지만 동일하거나 유사한 결과가 달성될 수 있음이 명백할 것이다. 당해 분야의 숙련가에게 명백한 모든 이러한 치환 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 본 발명의 취지, 영역 및 개념 내에 있는 것으로 고려된다.
참고문헌
다음의 참고문헌은 이들이 예시적인 과정 또는 본원에 나타낸 것을 보충하는 다른 세부사항을 제공하는 정도까지, 본원에 참고로 구체적으로 포함된다.
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
SEQUENCE LISTING <110> Board of Regents, The University of Texas System Asylia Therapeutics <120> MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING HSP70 AND THERAPEUTIC USES THEREOF <130> UTFC.P1469WO <140> not yet known <141> 2021-03-26 <150> US63/001,011 <151> 2020-03-27 <160> 234 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 2 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 3 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 4 Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 5 Trp Thr Ser 1 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 6 Lys Gln Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 7 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 8 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 349 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polynucleotide <400> 9 cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60 tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120 ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180 gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccac cactgcctat 240 ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aaggtacgac 300 catgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctcag 349 <210> 10 <211> 337 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polynucleotide <400> 10 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagctggaga gaaggtcact 60 atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtggaa cccgaaagaa ctacttggct 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactggac atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcaacagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttatactctg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaac 337 <210> 11 <211> 641 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Ala Lys Ala Ala Ala Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser 1 5 10 15 Cys Val Gly Val Phe Gln His Gly Lys Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp 20 25 30 Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu 35 40 45 Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Leu Asn Pro Gln 50 55 60 Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Gly Asp 65 70 75 80 Pro Val Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Gln Val Ile Asn 85 90 95 Asp Gly Asp Lys Pro Lys Val Gln Val Ser Tyr Lys Gly Glu Thr Lys 100 105 110 Ala Phe Tyr Pro Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu Thr Lys Met Lys 115 120 125 Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Tyr Pro Val Thr Asn Ala Val Ile 130 135 140 Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp 145 150 155 160 Ala Gly Val Ile Ala Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro 165 170 175 Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Arg Thr Gly Lys Gly Glu 180 185 190 Arg Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser 195 200 205 Ile Leu Thr Ile Asp Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly 210 215 220 Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Leu Val Asn His 225 230 235 240 Phe Val Glu Glu Phe Lys Arg Lys His Lys Lys Asp Ile Ser Gln Asn 245 250 255 Lys Arg Ala Val Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys Glu Arg Ala Lys Arg 260 265 270 Thr Leu Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ser Leu Glu Ile Asp Ser Leu Phe 275 280 285 Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu 290 295 300 Leu Cys Ser Asp Leu Phe Arg Ser Thr Leu Glu Pro Val Glu Lys Ala 305 310 315 320 Leu Arg Asp Ala Lys Leu Asp Lys Ala Gln Ile His Asp Leu Val Leu 325 330 335 Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Val Gln Lys Leu Leu Gln Asp 340 345 350 Phe Phe Asn Gly Arg Asp Leu Asn Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala 355 360 365 Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Met Gly Asp Lys 370 375 380 Ser Glu Asn Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Ala Pro Leu Ser 385 390 395 400 Leu Gly Leu Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Ala Leu Ile Lys Arg 405 410 415 Asn Ser Thr Ile Pro Thr Lys Gln Thr Gln Ile Phe Thr Thr Tyr Ser 420 425 430 Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu Arg Ala 435 440 445 Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Arg Phe Glu Leu Ser Gly Ile 450 455 460 Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile 465 470 475 480 Asp Ala Asn Gly Ile Leu Asn Val Thr Ala Thr Asp Lys Ser Thr Gly 485 490 495 Lys Ala Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu Ser Lys 500 505 510 Glu Glu Ile Glu Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Lys Ala Glu 515 520 525 Asp Glu Val Gln Arg Glu Arg Val Ser Ala Lys Asn Ala Leu Glu Ser 530 535 540 Tyr Ala Phe Asn Met Lys Ser Ala Val Glu Asp Glu Gly Leu Lys Gly 545 550 555 560 Lys Ile Ser Glu Ala Asp Lys Lys Lys Val Leu Asp Lys Cys Gln Glu 565 570 575 Val Ile Ser Trp Leu Asp Ala Asn Thr Leu Ala Glu Lys Asp Glu Phe 580 585 590 Glu His Lys Arg Lys Glu Leu Glu Gln Val Cys Asn Pro Ile Ile Ser 595 600 605 Gly Leu Tyr Gln Gly Ala Gly Gly Pro Gly Pro Gly Gly Phe Gly Ala 610 615 620 Gln Gly Pro Lys Gly Gly Ser Gly Ser Gly Pro Thr Ile Glu Glu Val 625 630 635 640 Asp <210> 12 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 12 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 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Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Thr Gly Leu Met Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 16 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 17 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Ile or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Val or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Ala, Pro, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Val or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Val or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Ala, Glu, Gly, or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa is Val or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Xaa is Val, Leu, or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Ala or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> Xaa is Lys or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> Xaa is Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> Xaa is Met or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..(68) <223> Xaa is Phe or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (70)..(70) <223> Xaa is Phe, Met, or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (71)..(71) <223> Xaa is Thr or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> Xaa is Thr, Arg, or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> Xaa is Thr, Asp, or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(76) <223> Xaa is Thr, Ala, or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> Xaa is Ser or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> Xaa is Leu or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(81) <223> Xaa is Met or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> Xaa is Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (84)..(84) <223> Xaa is Arg, Ser, Thr, or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> Xaa is Ser or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> Xaa is Arg, Lys, or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (88)..(88) <223> Xaa is Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89)..(89) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (111)..(111) <223> Xaa is Leu, Ser, or Thr <400> 18 Xaa Xaa Gln Leu Xaa Xaa Ser Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Pro Gly Xaa 1 5 10 15 Ser Xaa Xaa Xaa Ser Cys Lys Xaa Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Xaa Gly Leu Xaa Trp Xaa 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Ser Xaa Xaa Thr Xaa Tyr 65 70 75 80 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 19 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 20 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 21 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 21 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 22 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 22 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 23 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 23 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 24 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 24 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 25 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Ile or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Val or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Asp or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is Val or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Leu or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Asn or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> Xaa is Gln or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> Xaa is Ser, Val, or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (66)..(66) <223> Xaa is Asp or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> Xaa is Ser, Asp, or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> Xaa is Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (86)..(86) <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (91)..(91) <223> Xaa is Val or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (105)..(105) <223> Xaa is Gln or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (109)..(109) <223> Xaa is Leu or Val <400> 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa Xaa Ser Xaa Gly 1 5 10 15 Xaa Arg Xaa Thr Ile Xaa Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Xaa 35 40 45 Xaa Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Xaa Xaa Leu Gln Xaa Glu Asp Val Ala Xaa Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 26 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 26 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 27 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 28 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 29 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 29 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 30 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 31 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 31 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 32 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Phe Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 33 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 34 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Asp Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 35 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 36 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 37 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 38 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 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Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 100 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 100 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr Thr Gly Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 101 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 101 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Gly Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 102 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Thr Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 103 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 104 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Gln or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Ala, Asp, Thr, Val, Ser, or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> Xaa is Thr, Ser, or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa is Asn or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> Xaa is Pro, Ser, Thr, or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (59)..(59) <223> Xaa is Thr, Arg, Lys, or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (61)..(61) <223> Xaa is Ala, Thr, Val, Ser, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> Xaa is Ser, Arg, or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> Xaa is Ala, Val, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> Xaa is Leu or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97)..(97) <223> Xaa is Ala, Thr, Val, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (102)..(102) <223> Xaa is Ala, Arg, Phe, Thr, Pro, Val, Ser, Asp, Asn, His, Leu, Tyr, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (110)..(110) <223> Xaa is Thr or Ser <400> 104 Gln Ile Xaa Leu Val Gln Ser Gly Xaa Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Xaa Thr Xaa Tyr 65 70 75 80 Met Xaa Xaa Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Xaa Arg Tyr Asp His Xaa Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Xaa Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 105 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 105 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 106 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 106 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 107 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 107 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Lys Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 108 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 108 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 109 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 109 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 110 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 110 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Val Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 111 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 111 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 112 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 112 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 113 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 113 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 114 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 114 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 115 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 115 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 116 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 116 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 117 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 117 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 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Engineered polypeptide <400> 122 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Thr Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 123 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 123 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 124 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 124 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 125 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 125 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser 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Thr or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> Xaa is Ser or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (86)..(86) <223> Xaa is Ala or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (91)..(91) <223> Xaa is Val, Ile, or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(99) <223> Xaa is Thr, Asn, or Ser <400> 158 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Xaa Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Xaa Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Xaa Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Xaa Trp Tyr Gln Xaa Lys Xaa Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Xaa Leu Xaa Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Xaa Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Xaa 65 70 75 80 Ile Asp Xaa Leu Gln Xaa Glu Asp Val Ala Xaa Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Xaa Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 159 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 159 Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 160 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 160 Gln Ser Leu Val Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 161 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 161 Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 162 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 162 Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Tyr Thr 1 5 <210> 163 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 163 Lys Gln Ser Tyr Ser Leu Tyr Thr 1 5 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 164 Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Gly 1 5 <210> 165 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 165 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 166 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 166 Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 167 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 167 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser 1 5 <210> 168 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 168 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr 1 5 <210> 169 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 169 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ala 1 5 <210> 170 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 170 Ala Arg Tyr Asp His Arg Met Asp Tyr 1 5 <210> 171 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 171 Ala Arg Tyr Asp His Phe Met Asp Tyr 1 5 <210> 172 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 172 Ala Arg Tyr Asp His Thr Met Asp Tyr 1 5 <210> 173 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 173 Ala Arg Tyr Asp His Pro Met Asp Tyr 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 174 Ala Arg Tyr Asp His Val Met Asp Tyr 1 5 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 175 Ala Arg Tyr Asp His Ser Met Asp Tyr 1 5 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 176 Thr Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 177 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 177 Ala Arg Tyr Asp His Asp Met Asp Tyr 1 5 <210> 178 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 178 Ala Arg Tyr Asp His Asn Met Asp Tyr 1 5 <210> 179 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 179 Ala Arg Tyr Asp His His Met Asp Tyr 1 5 <210> 180 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 180 Ala Arg Tyr Asp His Leu Met Asp Tyr 1 5 <210> 181 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 181 Ala Arg Tyr Asp His Tyr Met Asp Tyr 1 5 <210> 182 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 182 Thr Arg Tyr Asp His Arg Met Asp Tyr 1 5 <210> 183 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 183 Val Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 184 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 184 Gly Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 185 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 185 Ala Arg Tyr Asp His Gly Met Asp Tyr 1 5 <210> 186 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 186 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 187 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 187 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 188 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 188 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ser <210> 189 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 189 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 190 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 190 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 191 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 191 Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 192 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 192 Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 193 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 193 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 194 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 194 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 195 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 195 Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 196 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 196 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 197 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 197 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 198 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 198 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 199 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 199 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 200 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 200 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 201 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 201 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 202 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 202 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 203 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 203 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Gly Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 204 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 204 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Lys Tyr Thr Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 205 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 205 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Lys Tyr Gly Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 206 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 206 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Gly Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 207 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 207 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 208 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 208 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Thr Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 209 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 209 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 210 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 210 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Lys Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 211 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 211 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Val Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 212 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Leu, Phe, or Val <400> 212 Gln Ser Leu Xaa Asn Ser Gly Thr Arg Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 213 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Thr, Asn, Ser <400> 213 Lys Gln Ser Tyr Xaa Leu Tyr Thr 1 5 <210> 214 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Thr, Ser, or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Asn or Lys <400> 214 Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr Gly 1 5 <210> 215 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is Pro, Ser, Thr, or Ala <400> 215 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Xaa 1 5 <210> 216 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Ala, Thr, Val, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ala, Arg, Phe, Thr, Pro, Val, Ser, Asp, Asn, His, Leu, Tyr, or Gly <400> 216 Xaa Arg Tyr Asp His Xaa Met Asp Tyr 1 5 <210> 217 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 217 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 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Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 219 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 219 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 220 <211> 377 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 220 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125 Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135 140 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 340 345 350 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 355 360 365 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 221 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 221 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 222 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 223 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 224 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224 Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys 100 105 <210> 225 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 225 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 226 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 226 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Met Arg Arg Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Phe 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 227 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 227 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Thr Gly Leu Met Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 228 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 228 Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Arg Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 229 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 229 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 230 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 230 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asp Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 231 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 231 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 232 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 232 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 233 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 233 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Val Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 110 <210> 234 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Engineered polypeptide <400> 234 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Thr Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (94)

  1. 모노클로날 항체(monoclonal antibody) 또는 항체 단편으로서, 여기서 항체 또는 항체 단편이 GYX1FTX2YG(서열 번호: 214)의 VHCDR1 아미노산 서열(여기서, X1은 T, S, 또는 I이고, X2는 N 또는 K이다), INTYTGEX1(서열 번호: 215)의 VHCDR2 아미노산 서열(여기서, X1은 P, S, T, 또는 A이다), 및 X1RYDHX2MDY(서열 번호: 216)의 VHCDR3 아미노산 서열(여기서, X1은 A, T, V, 또는 G이고, X2는 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이다)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 QSLX1NSGTRKNY(서열 번호: 212)의 VLCDRl 아미노산 서열(여기서, X1은 L, F, 또는 V이다), 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 KQSYX1LYT(서열 번호: 213)의 VLCDR3 아미노산 서열(여기서, X1은 T, N, 또는 S이다)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 다음을 포함하는 모노클로날 항체 또는 항체 단편:
    (i) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (iii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (iv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (v) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (vi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 172의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (vii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (viii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 173의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (x) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 176의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 177의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xv) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xviii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 180의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 182의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 185의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxviii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 160의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxiv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호:168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxviii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxix) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xl) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xli) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xlii) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xliii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xliv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xlv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
    (xlvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이:
    Figure pct00054

    (여기서 X1은 Q 또는 E이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 Q 또는 E이고, X5는 A, P, 또는 G이고, X6은 E 또는 G이고, X7은 V 또는 L이고, X8은 V 또는 K이고, X9는 A, E, G, 또는 S이고, X10은 V 또는 L이고, X11은 K 또는 R이고, X12는 V, L, 또는 I이고, X13은 A 또는 T이고, X14는 K 또는 Q이고, X15는 E 또는 K이고, X16은 M 또는 V이고, X17은 F 또는 V이고, X18은 F, M, 또는 I이고, X19는 T 또는 S이고, X20은 T, R, 또는 A이고, X21은 T, D, 또는 E이고, X22는 T, A, 또는 K이고, X23은 S 또는 N이고, X24는 L 또는 A이고, X25는 M 또는 L이고, X26은 E 또는 Q이고, X27은 L 또는 M이고, X28은 R, S, T, 또는 N이고, X29는 S 또는 G이고, X30은 R, K, 또는 M이고, X31은 S 또는 T이고, X32는 D 또는 E이고, X33은 L, S, 또는 T이다); 및
    Figure pct00055

    (여기서 X1은 E 또는 D이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 V 또는 Q이고, X4는 L 또는 M이고, X5는 D 또는 S이고, X6은 A 또는 S이고, X7은 V 또는 A이고, X8은 L 또는 V이고, X9는 E 또는 D이고, X10은 A 또는 V이고, X11은 N 또는 T이고, X12는 A 또는 P이고, X13은 Q 또는 K이고, X14는 S, V, 또는 P이고, X15는 K 또는 R이고, X16은 D 또는 S이고, X17은 S, D, 또는 N이고, X18은 S 또는 T이고, X19는 A 또는 P이고, X20은 V 또는 T이고, X21은 Q 또는 G이고, X22는 L 또는 V이다)의 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 이의 항체 단편.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이:
    (i) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (ii) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (iii) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (iv) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (v) 서열 번호: 12에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (vi) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (vii) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (viii) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (ix) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (x) 서열 번호: 13에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xi) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xii) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xiii) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xiv) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xv) 서열 번호: 14에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xvi) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xvii) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xviii) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xix) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xx) 서열 번호: 15에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 15에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxi) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 19에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 19에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxii) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 20에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxiii) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 21에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxiv) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 22에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxv) 서열 번호: 16에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 16에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 23에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 이의 항체 단편.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이:
    Figure pct00056

    (여기서 X1은 Q 또는 H이고, X2는 A, D, T, V, S, 또는 P이고, X3은 T, S, 또는 I이고, X4는 N 또는 K이고, X5는 P, S, T, 또는 A이고, X6은 T, R, K, 또는 I이고, X7은 A, T, V, S, 또는 G이고, X8은 S, R, 또는 T이고, X9는 A, V, 또는 G이고, X10은 E 또는 D이고, X11은 L 또는 V이고, X12는 A, T, V, 또는 G이고, X13은 A, R, F, T, P, V, S, D, N, H, L, Y, 또는 G이고, X14는 T 또는 S이다)의 서열을 갖는 중쇄 가변 서열; 및
    Figure pct00057

    (여기서 X1은 A, T, 또는 S이고, X2는 N 또는 K이고, X3은 L, F, 또는 V이고, X4는 A, S, 또는 T이고, X5는 Q 또는 K이고, X6은 A, P, 또는 S이고, X7은 K 또는 N이고, X8은 L, V, 또는 I이고, X9는 G 또는 A이고, X10은 T 또는 S이고, X11은 S 또는 R이고, X12는 A 또는 T이고, X13은 V, I, 또는 L이고, X14는 T, N, 또는 S이다)의 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 이의 항체 단편.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이:
    (i) 서열 번호: 26에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (ii) 서열 번호: 27에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (iii) 서열 번호: 28에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (iv) 서열 번호: 29에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (v) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 106에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 106에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (vi) 서열 번호: 31에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (vii) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (viii) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (ix) 서열 번호: 33에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (x) 서열 번호: 34에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xi) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xii) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xiii) 서열 번호: 35에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 35에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (viv) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xv) 서열 번호: 37에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 37에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xvi) 서열 번호: 26에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xvii) 서열 번호: 38에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 38에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xviii) 서열 번호: 31에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 110에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 110에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xiv) 서열 번호: 39에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 39에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xx) 서열 번호: 40에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 40에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxi) 서열 번호: 34에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 111에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 111에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxii) 서열 번호: 41에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 41에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxiii) 서열 번호: 30에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 112에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 112에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxiv) 서열 번호: 28에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 113에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 113에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxv) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 114에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 114에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxvi) 서열 번호: 42에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 42에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxvii) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 115에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 115에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxviii) 서열 번호: 43에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 43에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxix) 서열 번호: 32에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxx) 서열 번호: 44에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 44에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxi) 서열 번호: 35에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 35에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxii) 서열 번호: 45에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 45에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxiii) 서열 번호: 46에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 46에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxiv) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 118에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 118에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxv) 서열 번호: 47에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 47에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 115에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 115에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxvi) 서열 번호: 48에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 48에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxvii) 서열 번호: 49에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 49에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxviii) 서열 번호: 50에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 50에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xxxiv) 서열 번호: 51에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 51에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 106에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 106에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xl) 서열 번호: 52에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 52에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 119에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 119에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xli) 서열 번호: 53에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 53에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlii) 서열 번호: 54에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 54에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xliii) 서열 번호: 55에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 55에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xliv) 서열 번호: 56에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 56에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 116에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 116에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlv) 서열 번호: 57에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 57에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 120에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 120에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlvi) 서열 번호: 58에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 58에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 121에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 121에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlvii) 서열 번호: 59에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 59에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 122에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 122에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlviii) 서열 번호: 60에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 60에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 108에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 108에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xlix) 서열 번호: 61에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 61에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 123에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 123에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (l) 서열 번호: 62에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 62에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 114에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 114에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (li) 서열 번호: 63에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 124에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 124에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lii) 서열 번호: 64에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (liii) 서열 번호: 65에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 125에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 125에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (liv) 서열 번호: 66에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lv) 서열 번호: 67에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 125에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 125에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lvi) 서열 번호: 68에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 126에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 126에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lvii) 서열 번호: 69에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 127에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 127에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lviii) 서열 번호: 70에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 70에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 128에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 128에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lix) 서열 번호: 71에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 71에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lx) 서열 번호: 72에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 72에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 129에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 129에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxi) 서열 번호: 73에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 73에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 130에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 130에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxii) 서열 번호: 74에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 74에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 131에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 131에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxiii) 서열 번호: 73에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 73에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 132에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 132에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxiv) 서열 번호: 75에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 75에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 133에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 133에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxv) 서열 번호: 76에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 76에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 134에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 134에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxvi) 서열 번호: 77에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 77에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 107에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 107에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxvii) 서열 번호: 78에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 78에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 135에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 135에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxviii) 서열 번호: 79에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 79에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 136에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 136에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxix) 서열 번호: 80에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 80에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 137에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 137에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxx) 서열 번호: 41에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 41에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 138에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 138에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxi) 서열 번호: 81에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 139에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 139에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxii) 서열 번호: 82에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 82에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 105에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 105에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxiii) 서열 번호: 83에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 83에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 126에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 126에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxiv) 서열 번호: 84에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 84에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 140에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 140에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxv) 서열 번호: 85에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 85에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 141에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 141에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxvi) 서열 번호: 86에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 86에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 141에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 141에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxvii) 서열 번호: 87에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 87에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 117에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 117에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxviii) 서열 번호: 88에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 88에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 142에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 142에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxix) 서열 번호: 89에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 89에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 143에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 143에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxx) 서열 번호: 90에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 90에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 144에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 144에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxi) 서열 번호: 91에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 91에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 109에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 109에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxii) 서열 번호: 92에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 92에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 145에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 145에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxiii) 서열 번호: 93에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 93에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 146에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 146에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxiv) 서열 번호: 94에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 94에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 147에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 147에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxv) 서열 번호: 95에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 95에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 148에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 148에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxvi) 서열 번호: 96에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 96에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 149에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 149에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxvii) 서열 번호: 97에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 97에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 150에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 150에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxviii) 서열 번호: 98에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 98에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 151에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 151에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (lxxxix) 서열 번호: 99에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 99에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 152에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 152에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xc) 서열 번호: 100에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 100에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 136에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 136에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xci) 서열 번호: 91에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 91에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 153에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 153에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xcii) 서열 번호: 101에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 101에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 154에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 154에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xciii) 서열 번호: 102에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 102에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 155에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 155에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열;
    (xciv) 서열 번호: 36에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 36에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 156에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 156에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열; 또는
    (xc) 서열 번호: 103에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 103에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열; 및/또는 서열 번호: 157에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열, 또는 서열 번호: 157에 대해 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 이의 항체 단편.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 7에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 7에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  10. 제9항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 7에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 9에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화(encoding)되는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 9에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화되는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 9에 따른 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 따른 경쇄 가변 서열에 의해 암호화되는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 HSP70에 결합할 수 있는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 사람화된 항체(humanized antibody)인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편이 1가 scFv(가변성의 단일 쇄 단편) 항체, 2가 scFv, Fab 단편, F(ab')2 단편, F(ab')3 단편, Fv 단편, 또는 단일 쇄 항체인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 키메라 항체(chimeric antibody), 이중특이성 항체(bispecific antibody), 또는 BiTE인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 IgG 항체 또는 재조합 IgG 항체 또는 항체 단편인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체, 또는 재조합 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체 또는 항체 단편인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 217 내지 221을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 영상화제(imaging agent) 또는 세포독성제(cytotoxic agent)에 접합(conjugating)되거나 융합(fusing)되는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 표지(label)되어 있는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  23. 제22항에 있어서, 표지가 형광성 표지, 효소 표지, 또는 방사활성 표지인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항체 단편과 동일한 에피토프(epitope)에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편에 의해 인식된 HSP70 상의 에피토프에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  26. 모노클로날 항체 또는 항체 단편으로서, 여기서 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 11의 K573 내지 Q601에 상응하는 펩타이드에 의해 정의된 HSP70의 에피토프에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  27. 제26항에 있어서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 다음의 잔기: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601 중 1개 또는 2개에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 다음의 잔기: 서열 번호: 11의 H594, K595, 및 Q601 모두에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 다음의 잔기: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598 중 적어도 하나에 추가로 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  30. 제27항 또는 제28항에 있어서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 다음의 잔기: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, R596, 및 E598 중 적어도 2, 3, 4, 또는 5개에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, HSP70에 결합한 경우, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 다음의 잔기: 서열 번호: 11의 K573, E576, W580, H594, K595, R596, E598, 및 Q601 모두에 결합하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  32. 모노클로날 항체 또는 항체 단편으로서, HSP70에 결합한 경우, 항체 또는 항체 단편이 면역 효과기 세포(immune effector cell)에 의한 종양-유래된 ADP-HSP70-펩타이드 항원 복합체의 흡수(uptake)를 향상시키는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  33. 제24항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 사람화된 항체인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  34. 제24항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편이 1가 scFv(가변성 단일 쇄 단편) 항체, 2가 scFv, Fab 단편, F(ab')2 단편, F(ab')3 단편, Fv 단편, 또는 단일 쇄 항체인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  35. 제24항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 항체 단편이 키메라 항체 또는 이중특이성 항체인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  36. 제24항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG 항체 또는 재조합(recombinant) IgG 항체 또는 항체 단편인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  37. 제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체, 또는 재조합 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체 또는 항체 단편인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  38. 제24항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 217 내지 221을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  39. 제24항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 영상화제 또는 세포독성제에 접합되거나 융합되는, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  40. 제24항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항체 단편인, 모노클로날 항체 또는 항체 단편.
  41. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편의 항체 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 핵산.
  42. 제41항에 있어서, 서열 번호: 9 또는 10과 적어도 85% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  43. 제41항 또는 제42항에 다른 핵산을 포함하는 발현 벡터(expression vector).
  44. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 하이브리도마 또는 가공된 세포(engineered cell).
  45. 제41항 또는 제42항에 따른 핵산을 포함하는 하이브리도마 또는 가공된 세포.
  46. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법으로서, 이러한 방법이 제44항 또는 제45항에 따른 하이브리도마 또는 가공된 세포를 항체 또는 항체 단편의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 임의로 배양물로부터 항체를 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
  47. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 제형.
  48. 암(cancer)을 가진 환자를 치료하는 방법으로서, 이러한 방법이 유효량의 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편을 투여함을 포함하는, 방법.
  49. 제48항에 있어서, 방법이 항원 제시 세포(antigen presenting cell)에 의한 HSP70의 흡수를 향상시키는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 항원 제시 세포에 의한 HSP70의 흡수가 사람 FcγR2A 및/또는 사람 FcγR2B에 의해 매개되는, 방법.
  51. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성 T 세포-매개된 항종양 면역성(immunity)을 향상시키기 위한 방법으로서 추가로 정의된, 방법.
  52. 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 면역치료요법(immunotherapy)에 대한 민감성(sensitivity)을 증가시키기 위한 방법으로서 추가로 정의된, 방법.
  53. 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 효과기 세포에 의한 종양-유래된 ADP-HSP70-펩타이드 항원 복합체의 흡수를 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된, 방법.
  54. 제48항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포(dendritic cell)에 의한 항원 제시를 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된, 방법.
  55. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 항원에 대한 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 향상시키는 방법으로서 추가로 정의된, 방법.
  56. 제48항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 췌장 암(pancreatic cancer) 또는 전립선 암(prostate cancer)인, 방법.
  57. 제48항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 제2의 항-암 치료요법을 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 제2의 항-암 치료요법이 화학치료요법, 면역치료요법, 방사선치료요법, 유전자 치료요법, 수술, 호르몬 치료요법, 항-혈관형성 치료요법 또는 사이토킨 치료요법인, 방법.
  59. 사람 HSP70에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR) 단백질.
  60. 제59항에 있어서, CAR 단백질이:
    (i) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (iii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (iv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (v) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL);
    (vi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 172의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (vii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (viii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 173의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (ix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (x) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 176의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 171의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 177의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xv) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 179의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 159의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xviii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 180의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 182의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 181의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxiv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 185의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xvii) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxviii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxix) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 174의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 160의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxx) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 175의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxiii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 169의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxiv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 167의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxv) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxvi) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호:168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxvii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxviii) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xxxix) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 184의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xl) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 178의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 163의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xli) 서열 번호: 164의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 170의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xlii) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xliii) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xliv) 서열 번호: 166의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (xlv) 서열 번호: 165의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 161의 VLCDRl 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 162의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
    (xlvi) 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 168의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 183의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및/또는 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, CAR 단백질.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 1의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 2의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 3의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열 번호: 4의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열 번호: 5의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열 번호: 6의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, CAR 단백질.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 7에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, CAR.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 7에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, CAR.
  64. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 7에 따른 서열을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 8에 따른 서열을 갖는 경쇄 가변 서열을 포함하는, CAR.
  65. 제59항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 9에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 70%, 80%, 또는 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화되는, CAR.
  66. 제59항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 9에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 서열 및 서열 번호: 10에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 서열에 의해 암호화되는, CAR.
  67. 제59항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 서열 번호: 9에 따른 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 따른 경쇄 가변 서열에 의해 암호화되는, CAR.
  68. 제59항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 HSP70에 결합할 수 있는, CAR.
  69. 제59항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 사람화된 항원-결합 도메인인, CAR.
  70. 제59항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 도메인(hinge domain), 막관통 도메인(transmembrane domain) 및 세포내 신호전달(signaling) 도메인을 추가로 포함하는, CAR.
  71. 제70항에 있어서, 힌지 도메인이 CD8a 힌지 도메인 또는 IgG4 힌지 도메인인, CAR.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서, 막관통 도메인이 CD8a 막관통 도메인 또는 CD28 막관통 도메인인, CAR.
  73. 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인이 CD3z 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, CAR.
  74. 제59항 내지 제73항 중 어느 한 항에 따른 CAR을 암호화하는 핵산 분자.
  75. 제74항에 있어서, CAR을 암호화하는 서열이 발현 제어 서열에 작동적으로 연결되는, 핵산 분자.
  76. 제74항 또는 제75항에 있어서, 발현 벡터로서 추가로 정의되는, 핵산 분자.
  77. 사람 HSP70에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 가공된 세포.
  78. 제77항에 있어서, 핵산 분자가 제59항 내지 제73항 중 어느 한 항에 따른 CAR을 암호화하는. 세포.
  79. 제77항 또는 제78항에 있어서, 세포가 T 세포인, 세포.
  80. 제77항 또는 제78항에 있어서, 세포가 NK 세포인, 세포.
  81. 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 세포의 게놈(genome) 내로 통합되는, 세포.
  82. 제77항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 사람 세포인, 세포.
  83. 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 따른 세포의 집단(population)을 약제학적으로 허용되는 담체 속에 포함하는 약제학적 조성물.
  84. 이를 필요로 하는 사람 환자에게 항-종양 유효량의 제78항 내지 제82항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 세포를 포함하는 세포 치료요법을 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 사람 환자에서 암을 치료하는 방법.
  85. 제84항에 있어서, 세포가 동종이계 세포(allogeneic cell)인, 방법.
  86. 제84항에 있어서, 세포가 자가 세포인, 방법.
  87. 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 대상체(subject)에 대해 매치된(matched) HLA인, 방법.
  88. 제84항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 췌장 암 또는 전립선 암인, 방법.
  89. 제84항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 제2의 항-암 치료요법을 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  90. 제89항에 있어서, 제2의 항-암 치료요법이 화학치료요법, 면역치료요법, 방사선치료요법, 유전자 치료요법, 수술, 호르몬 치료요법, 항-혈관형성 치료요법(anti-angiogenic therapy) 또는 사이토킨 치료요법인, 방법.
  91. 시험관 내(in vitro) 샘플 속에서 HSP70을 검출하는 방법으로서, 시험관 내 샘플을 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계 및 샘플에 대한 항체 또는 항체 단편의 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  92. 제91항에 있어서, 검출 단계가 유동 세포분석법(flow cytometry), 질량 분광법(mass spectrometry), 웨스턴 블롯(western blot), 면역조직화학, ELISA, 또는 RIA에 의한 것인, 방법.
  93. 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편, 제47항에 따른 약제학적 조성물, 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 따른 세포, 또는 제83항에 따른 약제학적 조성물.
  94. 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조 시의, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편, 제47항에 따른 약제학적 조성물, 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 따른 세포, 또는 제83항에 따른 약제학적 조성물의 용도.
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