KR20230002391A - 신장 질환 또는 병태를 치료하기 위한 단일-가지 actriia 및 actriib 이종다량체 및 치료 방법 - Google Patents
신장 질환 또는 병태를 치료하기 위한 단일-가지 actriia 및 actriib 이종다량체 및 치료 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230002391A KR20230002391A KR1020227035212A KR20227035212A KR20230002391A KR 20230002391 A KR20230002391 A KR 20230002391A KR 1020227035212 A KR1020227035212 A KR 1020227035212A KR 20227035212 A KR20227035212 A KR 20227035212A KR 20230002391 A KR20230002391 A KR 20230002391A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- subject
- creatinine
- actriib
- amino acid
- actriia
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 357
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 title claims abstract description 73
- 101100437153 Rattus norvegicus Acvr2b gene Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 40
- 102100021886 Activin receptor type-2A Human genes 0.000 title description 280
- 101710191686 Activin receptor type-2A Proteins 0.000 title 1
- 201000005206 focal segmental glomerulosclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 144
- 231100000854 focal segmental glomerulosclerosis Toxicity 0.000 claims abstract description 144
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims abstract description 116
- 208000003215 hereditary nephritis Diseases 0.000 claims abstract description 54
- 208000024985 Alport syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 208000030761 polycystic kidney disease Diseases 0.000 claims abstract description 21
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 236
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 199
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 197
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 192
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 189
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 163
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 158
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 155
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 153
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 claims description 126
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 99
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 96
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 91
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 47
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 44
- 102100040898 Growth/differentiation factor 11 Human genes 0.000 claims description 42
- 101000893545 Homo sapiens Growth/differentiation factor 11 Proteins 0.000 claims description 42
- -1 salprisartan Chemical compound 0.000 claims description 41
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 40
- 206010001580 Albuminuria Diseases 0.000 claims description 38
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 claims description 36
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 30
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 29
- 108010023079 activin B Proteins 0.000 claims description 27
- 208000010061 Autosomal Dominant Polycystic Kidney Diseases 0.000 claims description 26
- 208000002814 Autosomal Recessive Polycystic Kidney Diseases 0.000 claims description 26
- 208000017354 Autosomal recessive polycystic kidney disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000022185 autosomal dominant polycystic kidney disease Diseases 0.000 claims description 26
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 claims description 24
- 201000000523 end stage renal failure Diseases 0.000 claims description 23
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 22
- 102100028726 Bone morphogenetic protein 10 Human genes 0.000 claims description 21
- 101000695367 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 10 Proteins 0.000 claims description 21
- 102100022525 Bone morphogenetic protein 6 Human genes 0.000 claims description 19
- 101000899390 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 6 Proteins 0.000 claims description 19
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 17
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 17
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 17
- 102100022526 Bone morphogenetic protein 5 Human genes 0.000 claims description 16
- 102100035364 Growth/differentiation factor 3 Human genes 0.000 claims description 16
- 101000899388 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 5 Proteins 0.000 claims description 16
- 101001023986 Homo sapiens Growth/differentiation factor 3 Proteins 0.000 claims description 16
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 15
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 claims description 14
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 14
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims description 14
- 230000001934 delay Effects 0.000 claims description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 claims description 12
- 229940125364 angiotensin receptor blocker Drugs 0.000 claims description 10
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 9
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 claims description 8
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 claims description 8
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 claims description 8
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 claims description 8
- RMMXLENWKUUMAY-UHFFFAOYSA-N telmisartan Chemical compound CCCC1=NC2=C(C)C=C(C=3N(C4=CC=CC=C4N=3)C)C=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C(O)=O RMMXLENWKUUMAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 claims description 7
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 claims description 7
- XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N Benazepril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H]1C(N(CC(O)=O)C2=CC=CC=C2CC1)=O)CC1=CC=CC=C1 XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004072 C09CA03 - Valsartan Substances 0.000 claims description 6
- 239000002947 C09CA04 - Irbesartan Substances 0.000 claims description 6
- 102100039939 Growth/differentiation factor 8 Human genes 0.000 claims description 6
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 claims description 6
- 229960004530 benazepril Drugs 0.000 claims description 6
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 claims description 6
- 229960002198 irbesartan Drugs 0.000 claims description 6
- YCPOHTHPUREGFM-UHFFFAOYSA-N irbesartan Chemical compound O=C1N(CC=2C=CC(=CC=2)C=2C(=CC=CC=2)C=2[N]N=NN=2)C(CCCC)=NC21CCCC2 YCPOHTHPUREGFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 claims description 6
- 229960004699 valsartan Drugs 0.000 claims description 6
- SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N valsartan Chemical compound C1=CC(CN(C(=O)CCCC)[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 229960003401 ramipril Drugs 0.000 claims description 5
- HDACQVRGBOVJII-JBDAPHQKSA-N ramipril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](C[C@@H]2CCC[C@@H]21)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HDACQVRGBOVJII-JBDAPHQKSA-N 0.000 claims description 5
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005485 Azilsartan Substances 0.000 claims description 4
- 239000002083 C09CA01 - Losartan Substances 0.000 claims description 4
- 239000002053 C09CA06 - Candesartan Substances 0.000 claims description 4
- 239000005537 C09CA07 - Telmisartan Substances 0.000 claims description 4
- 108010061435 Enalapril Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010007859 Lisinopril Proteins 0.000 claims description 4
- 239000005480 Olmesartan Substances 0.000 claims description 4
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 claims description 4
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VXFJYXUZANRPDJ-WTNASJBWSA-N Trandopril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](C[C@H]2CCCC[C@@H]21)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VXFJYXUZANRPDJ-WTNASJBWSA-N 0.000 claims description 4
- 241000830536 Tripterygium wilfordii Species 0.000 claims description 4
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003697 abatacept Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002333 angiotensin II receptor antagonist Substances 0.000 claims description 4
- 229960002731 azilsartan Drugs 0.000 claims description 4
- KGSXMPPBFPAXLY-UHFFFAOYSA-N azilsartan Chemical compound CCOC1=NC2=CC=CC(C(O)=O)=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NOC(=O)N1 KGSXMPPBFPAXLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000932 candesartan Drugs 0.000 claims description 4
- SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N candesartan Chemical compound CCOC1=NC2=CC=CC(C(O)=O)=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000830 captopril Drugs 0.000 claims description 4
- FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N captopril Chemical compound SC[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 4
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960000873 enalapril Drugs 0.000 claims description 4
- GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N enalapril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002394 lisinopril Drugs 0.000 claims description 4
- RLAWWYSOJDYHDC-BZSNNMDCSA-N lisinopril Chemical compound C([C@H](N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 RLAWWYSOJDYHDC-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004773 losartan Drugs 0.000 claims description 4
- KJJZZJSZUJXYEA-UHFFFAOYSA-N losartan Chemical compound CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2[N]N=NN=2)C=C1 KJJZZJSZUJXYEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 claims description 4
- 229960005117 olmesartan Drugs 0.000 claims description 4
- VTRAEEWXHOVJFV-UHFFFAOYSA-N olmesartan Chemical compound CCCC1=NC(C(C)(C)O)=C(C(O)=O)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2NN=NN=2)C=C1 VTRAEEWXHOVJFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002582 perindopril Drugs 0.000 claims description 4
- IPVQLZZIHOAWMC-QXKUPLGCSA-N perindopril Chemical compound C1CCC[C@H]2C[C@@H](C(O)=O)N(C(=O)[C@H](C)N[C@@H](CCC)C(=O)OCC)[C@H]21 IPVQLZZIHOAWMC-QXKUPLGCSA-N 0.000 claims description 4
- HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N pioglitazone Chemical compound N1=CC(CC)=CC=C1CCOC(C=C1)=CC=C1CC1C(=O)NC(=O)S1 HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 claims description 4
- 229960005187 telmisartan Drugs 0.000 claims description 4
- 235000015398 thunder god vine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960002051 trandolapril Drugs 0.000 claims description 4
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000005475 Fimasartan Substances 0.000 claims description 3
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 claims description 3
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Valproic acid Chemical compound CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940046731 calcineurin inhibitors Drugs 0.000 claims description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 229960003489 fimasartan Drugs 0.000 claims description 3
- AMEROGPZOLAFBN-UHFFFAOYSA-N fimasartan Chemical compound CCCCC1=NC(C)=C(CC(=S)N(C)C)C(=O)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2NN=NN=2)C=C1 AMEROGPZOLAFBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- JWUBBDSIWDLEOM-QFVHMXLQSA-N (1s,3z)-3-[(2e)-2-[(1r,3as,7ar)-7a-methyl-1-[(2r)-7,7,7-trideuterio-6-hydroxy-6-(trideuteriomethyl)heptan-2-yl]-2,3,3a,5,6,7-hexahydro-1h-inden-4-ylidene]ethylidene]-4-methylidenecyclohexan-1-ol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(O)(C([2H])([2H])[2H])C([2H])([2H])[2H])=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C JWUBBDSIWDLEOM-QFVHMXLQSA-N 0.000 claims description 2
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 claims description 2
- PUDHBTGHUJUUFI-SCTWWAJVSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-n-[(2s,3r)-1-amino-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]-19-[[(2r)-2-amino-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17-p Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N)=O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 PUDHBTGHUJUUFI-SCTWWAJVSA-N 0.000 claims description 2
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 claims description 2
- WRADPCFZZWXOTI-BMRADRMJSA-N (9E)-10-nitrooctadecenoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C([N+]([O-])=O)=C/CCCCCCCC(O)=O WRADPCFZZWXOTI-BMRADRMJSA-N 0.000 claims description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YYBOLPLTQDKXPM-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(4-cyanonaphthalen-1-yl)pyridin-4-yl]sulfanyl-2-methylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)(C)SC1=CC=NC=C1C1=CC=C(C#N)C2=CC=CC=C12 YYBOLPLTQDKXPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WRFHGDPIDHPWIQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[(2-butyl-4-oxo-1,3-diazaspiro[4.4]non-1-en-3-yl)methyl]-2-(ethoxymethyl)phenyl]-n-(4,5-dimethyl-1,2-oxazol-3-yl)benzenesulfonamide Chemical compound O=C1N(CC=2C=C(COCC)C(=CC=2)C=2C(=CC=CC=2)S(=O)(=O)NC=2C(=C(C)ON=2)C)C(CCCC)=NC21CCCC2 WRFHGDPIDHPWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UIWZIDIJCUEOMT-PKNBQFBNSA-N 2-[[(e)-3-(3-methoxy-4-prop-2-ynoxyphenyl)prop-2-enoyl]amino]benzoic acid Chemical compound C1=C(OCC#C)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)NC=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=C1 UIWZIDIJCUEOMT-PKNBQFBNSA-N 0.000 claims description 2
- 108010039636 3-isopropylmalate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 2
- LUUMLYXKTPBTQR-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-n-[5-methyl-2-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine-4-carbonyl)pyridin-3-yl]-3-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide Chemical compound C=1C(C)=CN=C(C(=O)C=2C=3C=CNC=3N=CN=2)C=1NS(=O)(=O)C1=CC=C(Cl)C(C(F)(F)F)=C1 LUUMLYXKTPBTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethyl-1-[3-(2,4,5-trichlorophenoxy)propoxy]-1,6-dihydro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound CC1(C)N=C(N)N=C(N)N1OCCCOC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UXOWGYHJODZGMF-QORCZRPOSA-N Aliskiren Chemical compound COCCCOC1=CC(C[C@@H](C[C@H](N)[C@@H](O)C[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(C)(C)C(N)=O)C(C)C)=CC=C1OC UXOWGYHJODZGMF-QORCZRPOSA-N 0.000 claims description 2
- XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N Atorvastatin Natural products C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N Atorvastatin Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N 0.000 claims description 2
- WPTTVJLTNAWYAO-KPOXMGGZSA-N Bardoxolone methyl Chemical group C([C@@]12C)=C(C#N)C(=O)C(C)(C)[C@@H]1CC[C@]1(C)C2=CC(=O)[C@@H]2[C@@H]3CC(C)(C)CC[C@]3(C(=O)OC)CC[C@]21C WPTTVJLTNAWYAO-KPOXMGGZSA-N 0.000 claims description 2
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 claims description 2
- VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N Catenarin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000032862 Clinical Deterioration Diseases 0.000 claims description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 claims description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 claims description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 claims description 2
- JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N Dapagliflozin Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1CC1=CC([C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=CC=C1Cl JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N 0.000 claims description 2
- 239000010282 Emodin Substances 0.000 claims description 2
- RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N Emodin-dianthron Natural products O=C1C2=CC(C)=CC(O)=C2C(=O)C2=C1CC(=O)C=C2O RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 claims description 2
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 claims description 2
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N Helminthosporin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 claims description 2
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 claims description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N Isotretinoin Chemical compound OC(=O)C=C(C)/C=C/C=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N 0.000 claims description 2
- 229940122245 Janus kinase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002145 L01XE14 - Bosutinib Substances 0.000 claims description 2
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 206010027525 Microalbuminuria Diseases 0.000 claims description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-OZRXBMAMSA-N N-acetyl-beta-D-mannosamine Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-OZRXBMAMSA-N 0.000 claims description 2
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 claims description 2
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N Rheoemodin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004012 Tofacitinib Substances 0.000 claims description 2
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004601 aliskiren Drugs 0.000 claims description 2
- OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N allopurinol Chemical compound OC1=NC=NC2=C1C=NN2 OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003459 allopurinol Drugs 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005370 atorvastatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940062310 avandia Drugs 0.000 claims description 2
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 claims description 2
- NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N beclomethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(Cl)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N 0.000 claims description 2
- 229940092705 beclomethasone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002537 betamethasone Drugs 0.000 claims description 2
- UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N betamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 2
- UBPYILGKFZZVDX-UHFFFAOYSA-N bosutinib Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC(NC=2C3=CC(OC)=C(OCCCN4CCN(C)CC4)C=C3N=CC=2C#N)=C1Cl UBPYILGKFZZVDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003736 bosutinib Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 claims description 2
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003834 dapagliflozin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 2
- 235000021045 dietary change Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 claims description 2
- RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N emodin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N emodin Natural products OC1=C(OC2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O)C1=CC=C(C=C1)O VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003765 fluvastatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 2
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005280 isotretinoin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005435 ixekizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 108010021336 lanreotide Proteins 0.000 claims description 2
- 229960002437 lanreotide Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 claims description 2
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 claims description 2
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- PIDANAQULIKBQS-RNUIGHNZSA-N meprednisone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)CC2=O PIDANAQULIKBQS-RNUIGHNZSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001810 meprednisone Drugs 0.000 claims description 2
- 238000011133 mesenchymal stem cell therapy Methods 0.000 claims description 2
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 claims description 2
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940014456 mycophenolate Drugs 0.000 claims description 2
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 claims description 2
- PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N physcion Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005095 pioglitazone Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 claims description 2
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 claims description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 claims description 2
- 229940099538 rapamune Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004586 rosiglitazone Drugs 0.000 claims description 2
- SUFUKZSWUHZXAV-BTJKTKAUSA-N rosiglitazone maleate Chemical compound [H+].[H+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O.C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O SUFUKZSWUHZXAV-BTJKTKAUSA-N 0.000 claims description 2
- QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N saquinavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN1C[C@H]2CCCC[C@H]2C[C@H]1C(=O)NC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)C=1N=C2C=CC=CC2=CC=1)C1=CC=CC=C1 QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001852 saquinavir Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004540 secukinumab Drugs 0.000 claims description 2
- 235000021023 sodium intake Nutrition 0.000 claims description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 claims description 2
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 claims description 2
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 claims description 2
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 claims description 2
- HVXKQKFEHMGHSL-QKDCVEJESA-N tesevatinib Chemical compound N1=CN=C2C=C(OC[C@@H]3C[C@@H]4CN(C)C[C@@H]4C3)C(OC)=CC2=C1NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1F HVXKQKFEHMGHSL-QKDCVEJESA-N 0.000 claims description 2
- 229950003046 tesevatinib Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001350 tofacitinib Drugs 0.000 claims description 2
- UJLAWZDWDVHWOW-YPMHNXCESA-N tofacitinib Chemical compound C[C@@H]1CCN(C(=O)CC#N)C[C@@H]1N(C)C1=NC=NC2=C1C=CN2 UJLAWZDWDVHWOW-YPMHNXCESA-N 0.000 claims description 2
- GYHCTFXIZSNGJT-UHFFFAOYSA-N tolvaptan Chemical compound CC1=CC=CC=C1C(=O)NC(C=C1C)=CC=C1C(=O)N1C2=CC=C(Cl)C=C2C(O)CCC1 GYHCTFXIZSNGJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001256 tolvaptan Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005294 triamcinolone Drugs 0.000 claims description 2
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003824 ustekinumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004914 vedolizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229950008988 verinurad Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005289 voclosporin Drugs 0.000 claims description 2
- BICRTLVBTLFLRD-PTWUADNWSA-N voclosporin Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O BICRTLVBTLFLRD-PTWUADNWSA-N 0.000 claims description 2
- 108010057559 voclosporin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960002769 zofenopril Drugs 0.000 claims description 2
- IAIDUHCBNLFXEF-MNEFBYGVSA-N zofenopril Chemical compound C([C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](C[C@@H](C1)SC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)SC(=O)C1=CC=CC=C1 IAIDUHCBNLFXEF-MNEFBYGVSA-N 0.000 claims description 2
- 101000886562 Homo sapiens Growth/differentiation factor 8 Proteins 0.000 claims 3
- ASHVULSQMDWKFO-UHFFFAOYSA-N MMF Natural products COCC1=CC=C(C=O)O1 ASHVULSQMDWKFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 claims 2
- NKHAVTQWNUWKEO-UHFFFAOYSA-N fumaric acid monomethyl ester Natural products COC(=O)C=CC(O)=O NKHAVTQWNUWKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FJLGEFLZQAZZCD-MCBHFWOFSA-N (3R,5S)-fluvastatin Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 FJLGEFLZQAZZCD-MCBHFWOFSA-N 0.000 claims 1
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 claims 1
- 241000246358 Thymus Species 0.000 claims 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 claims 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N pravastatin Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N 0.000 claims 1
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 claims 1
- 108010057453 activin receptor type II-B Proteins 0.000 description 381
- 108010057429 activin receptor type II-A Proteins 0.000 description 299
- 102100027647 Activin receptor type-2B Human genes 0.000 description 260
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 215
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 135
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 77
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 62
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 54
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 39
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 39
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 38
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 34
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 33
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 33
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 26
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 25
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 25
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 24
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 23
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 20
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 20
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 19
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 19
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 19
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 18
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 18
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 17
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 17
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 16
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 15
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 208000028208 end stage renal disease Diseases 0.000 description 12
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 11
- 208000004608 Ureteral Obstruction Diseases 0.000 description 11
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 11
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 11
- 101000970954 Homo sapiens Activin receptor type-2A Proteins 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 10
- 208000006750 hematuria Diseases 0.000 description 10
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 9
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 9
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 9
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 9
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 8
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 210000000557 podocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 102100033780 Collagen alpha-3(IV) chain Human genes 0.000 description 7
- 101000937269 Homo sapiens Activin receptor type-2B Proteins 0.000 description 7
- 101000710870 Homo sapiens Collagen alpha-4(IV) chain Proteins 0.000 description 7
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 7
- 208000022182 gross hematuria Diseases 0.000 description 7
- 102000045412 human ACVR2B Human genes 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 101150060812 Col4a3 gene Proteins 0.000 description 6
- 102100033779 Collagen alpha-4(IV) chain Human genes 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 101000710873 Homo sapiens Collagen alpha-3(IV) chain Proteins 0.000 description 6
- 101000710886 Homo sapiens Collagen alpha-5(IV) chain Proteins 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 6
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 description 5
- 102100030762 Apolipoprotein L1 Human genes 0.000 description 5
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 5
- 102100033775 Collagen alpha-5(IV) chain Human genes 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 102100032596 Fibrocystin Human genes 0.000 description 5
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 5
- 102100040892 Growth/differentiation factor 2 Human genes 0.000 description 5
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101100323521 Homo sapiens APOL1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101000893585 Homo sapiens Growth/differentiation factor 2 Proteins 0.000 description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102100036143 Polycystin-1 Human genes 0.000 description 5
- 102100036142 Polycystin-2 Human genes 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000002429 X-linked Alport syndrome Diseases 0.000 description 5
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 4
- 101150057990 COL4A4 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 4
- 102100029379 Follistatin-related protein 3 Human genes 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000899361 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 7 Proteins 0.000 description 4
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 4
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 4
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 4
- 231100000852 glomerular disease Toxicity 0.000 description 4
- 206010061989 glomerulosclerosis Diseases 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 4
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 210000000885 nephron Anatomy 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 4
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 4
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 102100024505 Bone morphogenetic protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 101150114528 COL4A5 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 3
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- 101710182545 Fibrocystin Proteins 0.000 description 3
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 3
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 3
- 102100035379 Growth/differentiation factor 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100035368 Growth/differentiation factor 6 Human genes 0.000 description 3
- 102100035363 Growth/differentiation factor 7 Human genes 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 101000762379 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 101001062529 Homo sapiens Follistatin-related protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 101001023988 Homo sapiens Growth/differentiation factor 5 Proteins 0.000 description 3
- 101001023964 Homo sapiens Growth/differentiation factor 6 Proteins 0.000 description 3
- 101001023968 Homo sapiens Growth/differentiation factor 7 Proteins 0.000 description 3
- 101001074444 Homo sapiens Polycystin-1 Proteins 0.000 description 3
- 101001074439 Homo sapiens Polycystin-2 Proteins 0.000 description 3
- 101001026882 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase D2 Proteins 0.000 description 3
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 3
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 3
- 201000008450 Intracranial aneurysm Diseases 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 3
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 3
- 108010056852 Myostatin Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 206010038468 Renal hypertrophy Diseases 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000019291 X-linked disease Diseases 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 3
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 201000008627 kidney hypertrophy Diseases 0.000 description 3
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 201000008519 polycystic kidney disease 1 Diseases 0.000 description 3
- 201000008542 polycystic kidney disease 2 Diseases 0.000 description 3
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N (13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl) 3-phenylpropanoate Chemical compound CC12CCC(C3CCC(=O)C=C3CC3)C3C1CCC2OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 2
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 2
- 102100032959 Alpha-actinin-4 Human genes 0.000 description 2
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 2
- 102220638160 Arylamine N-acetyltransferase 1_R64K_mutation Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 201000002431 Autosomal dominant Alport syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 2
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100024504 Bone morphogenetic protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 208000006029 Cardiomegaly Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010061803 Cyst rupture Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102100040897 Embryonic growth/differentiation factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 2
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 208000002513 Flank pain Diseases 0.000 description 2
- 108010012820 Follistatin-Related Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100035970 Growth/differentiation factor 9 Human genes 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 101000797282 Homo sapiens Alpha-actinin-4 Proteins 0.000 description 2
- 101000762366 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000762375 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000893552 Homo sapiens Embryonic growth/differentiation factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000730595 Homo sapiens Fibrocystin Proteins 0.000 description 2
- 101001075110 Homo sapiens Growth/differentiation factor 9 Proteins 0.000 description 2
- 101000597429 Homo sapiens Nuclear RNA export factor 5 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 2
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 2
- 241000287143 Myotis davidii Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 2
- 102100035400 Nuclear RNA export factor 5 Human genes 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 241000243985 Onchocerca volvulus Species 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000937265 Ovis aries Activin receptor type-2A Proteins 0.000 description 2
- 208000000407 Pancreatic Cyst Diseases 0.000 description 2
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 2
- 101710146367 Polycystin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710146368 Polycystin-2 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 description 2
- 241000242680 Schistosoma mansoni Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000043168 TGF-beta family Human genes 0.000 description 2
- 108091085018 TGF-beta family Proteins 0.000 description 2
- 208000034841 Thrombotic Microangiopathies Diseases 0.000 description 2
- 241000566589 Tyto alba Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000868 anti-mullerian hormone Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 201000002430 autosomal recessive Alport syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 2
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 210000002665 bowman capsule Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 210000000497 foam cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 2
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 208000002042 onchocerciasis Diseases 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 208000012263 renal involvement Diseases 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M (3R,5S)-fluvastatin sodium Chemical compound [Na+].C12=CC=CC=C2N(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030492 1-phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate phosphodiesterase epsilon-1 Human genes 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 102100027451 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150031865 ACVR2B gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 description 1
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101150027490 Acvr2a gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100022299 All trans-polyprenyl-diphosphate synthase PDSS1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033552 All trans-polyprenyl-diphosphate synthase PDSS2 Human genes 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 200000000007 Arterial disease Diseases 0.000 description 1
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 1
- 208000034048 Asymptomatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102100028727 Bone morphogenetic protein 15 Human genes 0.000 description 1
- 102100022545 Bone morphogenetic protein 8B Human genes 0.000 description 1
- 101000970957 Bos taurus Activin receptor type-2A Proteins 0.000 description 1
- 101000937267 Bos taurus Activin receptor type-2B Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100031168 CCN family member 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027209 CD2-associated protein Human genes 0.000 description 1
- 102220479051 CD59 glycoprotein_L79D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101000724917 Calliophis bivirgatus Delta-elapitoxin-Cb1a Proteins 0.000 description 1
- 101000724912 Calliophis bivirgatus Maticotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102220601920 Cerebral dopamine neurotrophic factor_S169N_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010057573 Chronic hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 208000026292 Cystic Kidney disease Diseases 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000724921 Dendroaspis polylepis polylepis Dendroaspis polylepis MT9 Proteins 0.000 description 1
- 101100108136 Drosophila melanogaster Adck1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000010334 End Stage Liver Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 102100030863 Eyes absent homolog 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027867 FH2 domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 101150050927 Fcgrt gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000019203 Follistatin-Related Proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010018366 Glomerulonephritis acute Diseases 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100040895 Growth/differentiation factor 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019273 Heart disease congenital Diseases 0.000 description 1
- 206010019646 Hepatic cyst Diseases 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 101001126442 Homo sapiens 1-phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate phosphodiesterase epsilon-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000725614 Homo sapiens 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 description 1
- 101000902409 Homo sapiens All trans-polyprenyl-diphosphate synthase PDSS1 Proteins 0.000 description 1
- 101000872070 Homo sapiens All trans-polyprenyl-diphosphate synthase PDSS2 Proteins 0.000 description 1
- 101000695360 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000899368 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 8B Proteins 0.000 description 1
- 101000777550 Homo sapiens CCN family member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914499 Homo sapiens CD2-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 101000938435 Homo sapiens Eyes absent homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001060553 Homo sapiens FH2 domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000893563 Homo sapiens Growth/differentiation factor 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000893549 Homo sapiens Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000961145 Homo sapiens Immunoglobulin heavy constant gamma 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001002508 Homo sapiens Immunoglobulin-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001015006 Homo sapiens Integrin beta-4 Proteins 0.000 description 1
- 101001012154 Homo sapiens Inverted formin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001046971 Homo sapiens KN motif and ankyrin repeat domain-containing protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000984044 Homo sapiens LIM homeobox transcription factor 1-beta Proteins 0.000 description 1
- 101001008558 Homo sapiens Laminin subunit beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946306 Homo sapiens Laminin subunit gamma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001030232 Homo sapiens Myosin-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000978730 Homo sapiens Nephrin Proteins 0.000 description 1
- 101100029888 Homo sapiens PKD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000613577 Homo sapiens Paired box protein Pax-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000595193 Homo sapiens Podocin Proteins 0.000 description 1
- 101001003584 Homo sapiens Prelamin-A/C Proteins 0.000 description 1
- 101000591211 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase O Proteins 0.000 description 1
- 101000695838 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase U Proteins 0.000 description 1
- 101000615373 Homo sapiens SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily A-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000658648 Homo sapiens Tetratricopeptide repeat protein 21B Proteins 0.000 description 1
- 101000952936 Homo sapiens Ubiquinone biosynthesis monooxygenase COQ6, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001000122 Homo sapiens Unconventional myosin-Ie Proteins 0.000 description 1
- 101000855037 Homo sapiens WD repeat-containing protein 73 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000829111 Human polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000024781 Immune Complex disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102100039348 Immunoglobulin heavy constant gamma 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100021042 Immunoglobulin-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100033000 Integrin beta-4 Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102100030075 Inverted formin-2 Human genes 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 102100022904 KN motif and ankyrin repeat domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 208000023768 LCAT deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100025457 LIM homeobox transcription factor 1-beta Human genes 0.000 description 1
- 102100027454 Laminin subunit beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 208000003465 Lecithin Cholesterol Acyltransferase Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000035809 Lymphohistiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102220639870 Lysine-specific demethylase RSBN1L_N65A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100020983 Lysosome membrane protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- 101000783591 Micrurus clarki Clarkitoxin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000963932 Micrurus frontalis Frontoxin II Proteins 0.000 description 1
- 101000783588 Micrurus mipartitus Mipartoxin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000963935 Micrurus nigrocinctus Nicotinic acetylcholine receptor-binding protein Mnn-1A Proteins 0.000 description 1
- 101000964147 Micrurus nigrocinctus Nicotinic acetylcholine receptor-binding protein Mnn-3C Proteins 0.000 description 1
- 101000964140 Micrurus nigrocinctus Nicotinic acetylcholine receptor-binding protein Mnn-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000724922 Micrurus pyrrhocryptus Venom protein E2 Proteins 0.000 description 1
- 101000724923 Micrurus surinamensis Short neurotoxin MS11 Proteins 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100490443 Mus musculus Acvr1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100175313 Mus musculus Gdf3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 102100038938 Myosin-9 Human genes 0.000 description 1
- PHSRRHGYXQCRPU-AWEZNQCLSA-N N-(3-oxododecanoyl)-L-homoserine lactone Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)CC(=O)N[C@H]1CCOC1=O PHSRRHGYXQCRPU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101000724924 Naja kaouthia Nakoroxin Proteins 0.000 description 1
- 102100023195 Nephrin Human genes 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 101000963934 Ophiophagus hannah Neurotoxin Oh9-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000724920 Ophiophagus hannah Short neurotoxin OH-26 Proteins 0.000 description 1
- 101000963927 Ophiophagus hannah Short neurotoxin OH-32 Proteins 0.000 description 1
- 101000724910 Ophiophagus hannah Short neurotoxin OH-46 Proteins 0.000 description 1
- 101000964138 Ophiophagus hannah Short neurotoxin OH-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000724915 Ophiophagus hannah Short neurotoxin SNTX11 Proteins 0.000 description 1
- 101000724916 Ophiophagus hannah Short neurotoxin SNTX14 Proteins 0.000 description 1
- 101000724918 Ophiophagus hannah Short neurotoxin SNTX26 Proteins 0.000 description 1
- 101000724908 Ophiophagus hannah Short neurotoxin SNTX6 Proteins 0.000 description 1
- 101000964146 Ophiophagus hannah Weak neurotoxin WNTX33 Proteins 0.000 description 1
- 239000004235 Orange GGN Substances 0.000 description 1
- 101000964133 Oxyuranus microlepidotus Toxin 3FTx-Oxy5 Proteins 0.000 description 1
- 101000724919 Oxyuranus scutellatus scutellatus Scutelatoxin Proteins 0.000 description 1
- 101000964145 Oxyuranus scutellatus scutellatus Short neurotoxin 3 Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150056230 PKD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150049489 PKHD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102100040852 Paired box protein Pax-2 Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108010030544 Peptidyl-Lys metalloendopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 208000001300 Perinatal Death Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102100036037 Podocin Human genes 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 102100026531 Prelamin-A/C Human genes 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100034086 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase O Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010038423 Renal cyst Diseases 0.000 description 1
- 206010038470 Renal infarct Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108091005488 SCARB2 Proteins 0.000 description 1
- 102100021248 SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily A-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 108010007945 Smad Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007374 Smad Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007453 TGF-beta Superfamily Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010085004 TGF-beta Superfamily Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150000629 TGFB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150072275 TGFB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010004408 TRPP Cation Channels Proteins 0.000 description 1
- 102100034908 Tetratricopeptide repeat protein 21B Human genes 0.000 description 1
- 101150009943 Tgfb3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 206010043458 Thirst Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 108050001421 Transient receptor potential channel, canonical 6 Proteins 0.000 description 1
- 102000011213 Transient receptor potential channel, canonical 6 Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010041546 Type II Activin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000523 Type II Activin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100037292 Ubiquinone biosynthesis monooxygenase COQ6, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100035820 Unconventional myosin-Ie Human genes 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 102100020717 WD repeat-containing protein 73 Human genes 0.000 description 1
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 231100000851 acute glomerulonephritis Toxicity 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 1
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical group N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 208000025341 autosomal recessive disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 238000009530 blood pressure measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 102220384347 c.298A>G Human genes 0.000 description 1
- 230000028956 calcium-mediated signaling Effects 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000008619 cell matrix interaction Effects 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 208000007413 cholesterol embolism Diseases 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 208000011444 chronic liver failure Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 208000028283 digenic inheritance Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000018578 heart valve disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000008085 high protein diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000012203 high throughput assay Methods 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 208000024326 hypersensitivity reaction type III disease Diseases 0.000 description 1
- 208000016036 idiopathic nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 210000003228 intrahepatic bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 101150118347 kn gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 1
- 210000000982 limb bud Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 238000009136 lithium therapy Methods 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 208000012268 mitochondrial disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012900 molecular simulation Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001002 morphogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000037257 muscle growth Effects 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000002151 myoclonic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000002988 nephrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001706 olfactory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000025342 organ morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046231 pamidronate Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 101150112863 pkd2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-M pravastatin(1-) Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-M 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 208000022204 primary glomerular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007425 progressive decline Effects 0.000 description 1
- 201000008171 proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- XEABSBMNTNXEJM-UHFFFAOYSA-N propagermanium Chemical compound OC(=O)CC[Ge](=O)O[Ge](=O)CCC(O)=O XEABSBMNTNXEJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950002828 propagermanium Drugs 0.000 description 1
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010038464 renal hypertension Diseases 0.000 description 1
- 210000005227 renal system Anatomy 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 102220220520 rs1060503090 Human genes 0.000 description 1
- 102220278863 rs1395998044 Human genes 0.000 description 1
- 102220039284 rs199473359 Human genes 0.000 description 1
- 102220058274 rs45617634 Human genes 0.000 description 1
- 102200012687 rs73846070 Human genes 0.000 description 1
- 102200108223 rs869312782 Human genes 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000022379 skeletal muscle tissue development Effects 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 201000002859 sleep apnea Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004926 tubular epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003160 two-hybrid assay Methods 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000025883 type III hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- SQQWBSBBCSFQGC-JLHYYAGUSA-N ubiquinone-2 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O SQQWBSBBCSFQGC-JLHYYAGUSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 1
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011100 viral filtration Methods 0.000 description 1
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 1
- 238000007482 whole exome sequencing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
- A61K38/13—Cyclosporins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1796—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2006—IL-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
요약서
일부 측면들에서, 본 명세서는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 및 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 그리고 신장 질환 또는 병태의 치료, 예방, 또는 진행 속도를 감소시키거나, 및/또는 이의 중증도를 감소시키는, 구체적으로, 신장-연합된 합병증을 치료, 예방, 및/또는 이의 진행 속도 및/또는 중증도 감소에 이러한 이종다량체를 이용하는 방법에 관계한다. 본 명세서는 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 및/또는 만성 신장 질환을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 다양한 병태를 치료, 예방, 또는 진행 속도 및.또는 중증도를 감소시키기 위해, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이용하는 방법을 또한 제공한다.
일부 측면들에서, 본 명세서는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 및 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 그리고 신장 질환 또는 병태의 치료, 예방, 또는 진행 속도를 감소시키거나, 및/또는 이의 중증도를 감소시키는, 구체적으로, 신장-연합된 합병증을 치료, 예방, 및/또는 이의 진행 속도 및/또는 중증도 감소에 이러한 이종다량체를 이용하는 방법에 관계한다. 본 명세서는 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 및/또는 만성 신장 질환을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 다양한 병태를 치료, 예방, 또는 진행 속도 및.또는 중증도를 감소시키기 위해, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이용하는 방법을 또한 제공한다.
Description
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2020년 3월 13 일에 출원된 U.S. 가특허 출원 번호 62/989,037을 우선권으로 하여, 이의 이점을 주장한다. 전술한 출원의 내용은 본 명세서에 이의 전문이 참고자료에 편입된다.
발명의 배경
신장 질환에는 신장 기능 상실로 이어질 수 있는 다양한 병태가 내포되며, 경우에 따라 치명적일 수 있다. 정상적으로-기능하는 신장은 혈액에서 노폐물과 잉여 체액을 걸러내고, 이들은 그 다음 소변으로 배출된다. 예를 들면, 만성 신장 질환이 진행 단계에 도달하면, 위험한 수준의 체액, 전해질 및 노폐물이 혈류에 축적될 수 있다. 신장 질환을 치료하지 않고 방치할 경우, 신장 질환은 말기 신부전(가령, 말기-신부전)으로 진행될 수 있고, 인공 여과(투석) 또는 신장 이식 없이는 치명적이다. 따라서, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 치료하기 위한 효과적 치료법에 대한 충족되지 않은 높은 수요가 있다.
본 발명의 요약
부분적으로, 본 명세서는 단일 ActRIIA 또는 단일 ActRIIB 폴리펩티드, 이의 단편들 및 이의 변이체들을 포함하는 단일-가지 이종다량체형 복합체를 제공한다. 이들 구조체는 본원에서 단일-가지 이종다량체, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 이형이량체, 및 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 이형이량체로 지칭될 수 있다. 임의선택적으로, 본원에서 기술된 단일-가지 폴리펩티드 이종다량체 (가령, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 이를 테면, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합)는 대응하는 이종다량체 (가령, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합)과 비교하였을 때, 상이한 리간드-결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본원의 실시예들에서 나타낸 것과 같이, ActRIIA의 단일 도메인 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 단일 도메인을 포함하는 이종다량체에 의해 신규한 속성들을 나타낸다.
이종다량체형 구조들에는 예를 들면, 이형이량체, 이종삼량체, 및 더 높은 차수의 복합체들이 내포된다. 바람직하게는, 본원에서 기술된 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 수용체의 리간드-결합 도메인, 예를 들면, ActRIIA 또는 ActRIIB 수용체의 세포외 도메인을 포함한다. 따라서, 특정 측면들에서, 본원에서 기술된 이종다량체는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 뿐만 아니라 이의 절두(truncations) 및 이의 변이체들의 세포외 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 본원에서 기술된 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 뿐만 아니라 이를 포함하는 이종다량체는 가용성이다. 특정 측면들에서, 본 명세서의 이종다량체는 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10)에 결합한다. 임의선택적으로, 본 명세서의 단백질 복합체는 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 또는 10-12에 대등한 또는 이보다 적은 KD로 하나 또는 그 이상의 이들 리간드에 결합한다. 일반적으로, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 적어도 하나의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드의 하나 또는 그 이상의 활성을 길항(억제)하고, 이러한 변경은 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 것과 같은 세포-기반 분석(세포-기반의 assay)을 비롯한 당분야에 공지된 다양한 분석에 의해 측정될 수 있다. 바람직하게는, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 포유류 (가령, 마우스 또는 인간)에서 적어도 4, 6, 12, 24, 36, 48, 또는 72 시간의 혈청 반감기를 나타낸다. 임의선택적으로, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 포유동물 (가령, 마우스 또는 인간)에서 적어도 6, 8, 10, 12, 14, 20, 25, 또는 30 일의 혈청 반감기를 나타낼 수 있다.
부분적으로, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 치료하는데 이용될 수 있는 ActRIIA 또는 ActRIIB 단일-가지 이종다량체를 제공한다. UUO 및 Col4a3 (-/-) 알포트 증후군 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이종다량체에 대해 긍정적인 효과가 관찰되었다. 본 명세서는 ActRIIA (가령, ActRIIA 및 ActRIIB) 신호전달 경로의 길항 활성은 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)의 중증도를 감소시키는데 이용할 수 있으며, 바람직한 치료요법적 작용제들이 ActRIIA 신호전달 길항제 활성을 기반으로 선별될 수 있다는 것을 확립하였다. 따라서, 일부 구체예들에서, 본 명세서는 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 및 만성 신장 질환을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 신장 질환 또는 병태 치료용으로, 다양한 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 [가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP6, BMP5, 및 BMP10]를 억제하는 단일-가지 이종다량체를 이용하는 방법을 제공한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 이종다량체는 제 2 폴리펩티드에 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하며, 이때 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝(pair)의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIB의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 ActRIIB를 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 및 6중 임의의 번호의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성되며; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 79의 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 79의 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 이때 상기 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1에 대하여 위치 79에 산성 아미노산을 포함한다. 특정 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 방법 및 용도에 따라 이용된 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1의 L79에 상응하는 위치에서 산성 아미노산을 포함하지 않는다. 특정 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 방법 및 용도에 따라 이용된 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1의 L79에 상응하는 위치에서 아스파르트산 (D)을 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일-가지 ActRIIA 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일-가지 ActRIIA 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 이종다량체는 제 2 폴리펩티드에 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하며, 이때 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝(pair)의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIA의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 ActRIIA를 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 9, 10, 및 11중 임의의 번호의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성되며; 또는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 9의 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 이종다량체는 이형이량체다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소는 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소는 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28로부터 선택된 임의의 하나의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90, 및 91중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 49, 51, 62, 63, 85, 및 87중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 상기 ActRIIB 폴리펩티드와 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커 도메인은 서열 식별 번호: 29-44중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 상기 ActRIIA 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커 도메인은 서열 식별 번호: 29-44중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화된 아미노산, 페길화된(PEGylated) 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 지질 모이어티에 콘쥬게이트된 아미노산, 및 유기 유도화된 물질에 콘쥬게이트된 아미노산으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화되고, CHO 세포에서 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는다.
일부 구체예들에서, 상기 이종다량체 (가령, 이형이량체 Fc 융합)는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체보다 더 큰 리간드 선택성을 갖는다. 일부 구체예들에서, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, 및 BMP10에 강력하게 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 액티빈 B 및 GDF11에 강력하게 결합하고, GDF8 및 액티빈 A에는 중간 수준으로 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 BMP10에 대해서는 약한 결합, 최소한의 결합, 또는 탐지불가능한 결합을 나타낸다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF8, 및 GDF11을 길항시키고, BMP9, BMP10, BMP6, 및 GDF3중 하나 또는 그 이상은 최소한으로 길항시킨다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 GDF11에 비해 액티빈 A에 대해 크게 향상된 선택성과 함께, 액티빈 B보다 액티빈 A에 대한 우선적 결합을 나타낸다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체로 관찰하였을 때, GDF8 및 BMP10에 대해 중간수준의 결합을 대개 유지한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 GDF11의 길항작용을 최소화하면서, 액티빈 B보다 액티빈 A를 우선적으로 길항하는 것이 바람직한 치료 응용 분야에서 활용된다. 본 명세서의 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체 또는 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 세포-기반 분석에서 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드의 활성을 억제시킨다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 신장 질환 또는 병태는 알포트 증후군이다. 일부 구체예들에서, 상기 신장 질환 또는 병태는 국소 분절 사구체경화증 (FSGS)이다. 일부 구체예들에서, FSGS는 원발성 FSGS이다. 일부 구체예들에서, FSGS는 이차적 FSGS이다. 일부 구체예들에서, FSGS는 유전적 FSGS이다. 일부 구체예들에서 상기 신장 질환 또는 병태는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환 (ADPKD)이다. 일부 구체예들에서, 상기 신장 질환 또는 병태는 상염색체 열성 다낭성 신장 질환 (ARPKD)이다. 일부 구체예들에서, 상기 신장 질환 또는 병태는 만성 신장 질환 (CKD)이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 해당 대상체에게 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법을 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 다음의 군에서 선택된다: 안지오텐신 수용체 차단제 (ARB) (가령, 로사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 칸데사르탄, 발사르탄, 피마사르탄, 아질사르탄, 살프리사르탄, 및 텔미사르탄), 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제 (가령, 베나제프릴, 캡토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 조페노프릴), 글루코코르티코이드 (가령, 베클로메타손, 베타메타손, 부데소니드, 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 메틸프레드니손, 프레드니손, 및 트리암시놀론), 칼시뉴린 억제제 (가령, 사이클로스포린, 타크로리무스), 시클로포스파미드, 클로람부실, 야누스 키나제 억제제 (가령, 토파시티닙), mTOR 억제제 (가령, 시롤리무스, 에베롤리무스), IMDH 억제제 (가령, 아자티오프린, 레플루노마이드, 마이코페놀레이트), 생물학제 (가령, 아바타셉트, 아달리무맙, 아나킨라, 바실릭시맙, 세르톨리주맙, 다클리주맙, 에타너셉트, 프레솔리무맙, 골리무맙, 인플릭시맙, 익세키주맙, 나탈리주맙, 리툭시맙, 세쿠키누맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙), 스태틴 (가령, 베나제프릴, 발사르탄, 플루바스태틴, 프라바스태틴), 라데미르센 (항-miRNA-21)바르독솔론 메틸, 아크타르 겔, 톨밥탄, 스파센탄과 조합된 아바타셉트, 알리스키렌, 알로푸리놀, ANG-3070, 아토르바스태틴, 블레셀루맙, 보수티닙, CCX140-B, CXA-10, D6-25-하이드록시비타민 D3, 다파글리플로진, MMF와 함께 덱사메타손, 에모딘, FG-3019, FK506, FK-506 및 MMF, FT-011, 갈락토즈, GC1008, GFB-887, 이소트레티노인, 란레오티드, 레바미솔, 리씨밥탄, 로스마피모드, 메트포르민, 미조르빈, N-아세틸만노사민, 옥트레오타이드, 파리칼시톨, PF-06730512, 피오글리타존, 프로파게르마늄, 프로파게르마늄 및 이르베사르탄, 라파무네, 라파마이신, RE-021 (가령, 스파센탄), RG012, 로시글리타존 (가령, 아반디아), 사퀴나비르, SAR339375, 소마토스태틴, 스피로노락톤, 테세바티닙(KD019), 테트라코삭틴, 트립테리지움 윌포르디(tripterygium wilfordii) (TW), 발프로산, VAR-200, 벤글루스타트 (GZ402671), 베리누라드, 보클로스포린, VX-147, 신장투석, 신장이식, 간엽줄기세포치료, 골수 줄기 세포, 지단백질 제거, Liposorber LA-15 장치, 혈장사혈, 혈장 교환 및 식단의 변화(가령, 식이 나트륨 섭취). 일부 구체예들에서, 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 로사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 칸데사르탄, 발사르탄, 피마사르탄, 아질사르탄, 살프리사르탄, 및 텔미사르탄로 구성된 군에서 선택된 안지오텐신 수용체 차단제 (ARB)이다. 일부 구체예들에서, 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 베나제프릴, 캅토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 조페노프릴로 구성된 군에서 선택된 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제이다. 일부 구체예들에서, 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 ARB 및 ACE 억제제의 병용이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에서 알부민뇨, 단백뇨, 마이크로알부민뇨, 및 마크로알부민뇨중 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단백뇨를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 알부민뇨를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 중등도 알부민뇨를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 중증 알부민뇨를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 24시간의 소변 수집당 약 30 ~ 약 300mg 알부민의 알부민-크레아티닌 비율(ACR)를 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 크레아티닌 g 당 약 30 ~ 약 300 mg 알부민의 ACR을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체의 알부민-크레아티닌 비율 (ACR)은 약 300 mg 이상의 알부민/24 시간이다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 크레아티닌 g 당 약 300 mg 이상의 알부민의 ACR을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 A1 알부민뇨를 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 A2 알부민뇨를 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 A3 알부민뇨를 갖는다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A1 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A2 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A3 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 A1 알부민뇨를 갖는 대상체가 단계 A2 알부민뇨로 진행하는 것을 지연시키거나, 또는 방지시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 A2를 갖는 대상체가 단계 A3 알부민뇨로 진행하는 것을 지연시키거나, 또는 방지시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 알부민뇨 단계 진행을 지연 또는 악화를 방지시키는 것이 필요한 대상체에서 이를 지연 및/또는 방지시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 대상체의 알부민뇨 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 상기 대상체의 ACR을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 ACR을 크레아티닌의 당 약 0.1 ~ 약 100.0 mg의 알부민 (가령, 크레아티닌의 당 약 0.1 ~ 약 2.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg 알부민)으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 ACR을 기선시점 측량과 비교하였을 때 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 상기 대상체의 뇨 단백질-크레아티닌 비율 (UPCR)을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 0.1 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질 (가령, 크레아티닌 mg 당약 0.1 ~ 약 2.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질)으로 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 상기 대상체의 뇨 단백질-크레아티닌 비율 (UPCR)을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 0.1 ~ 약 100.0 g의 뇨 단백질 (가령, 크레아티닌 mg 당약 0.1 ~ 약 2.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 2.5 ~ 약 3.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 3.5 ~ 약 5.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 5.0 ~ 약 7.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 7.5 ~ 약 10.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 10.0 ~ 약 15.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 15.0 ~ 약 20.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 20.0 ~ 약 25.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 30.0 ~ 약 35.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 40.0 ~ 약 45.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 45.0 ~ 약 50.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 50.0 ~ 약 60.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 60.0 ~ 약 70.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 70.0 ~ 약 80.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 80.0 ~ 약 90.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 90.0 ~ 약 100.0 g의 뇨 단백질)으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g 미만으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.3g 미만으로 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 30%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 40%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 50%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 상기 대상체의 추정된 사구체 여과율 (eGFR) 및/또는 사구체 여과율 (GFR)을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR은 혈청 크레아티닌, 연령 변수, 민족성 변수, 및 성별 변수를 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR은 Cockcroft-Gault 공식, 신장 질환 (MDRD) 공식에서 식이 변화, CKD-EPI 공식, Mayo 이차 공식, 및 Schwartz 공식중 하나 또는 그 이상을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 증가된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 30%에 대등하게, 또는 그 이상으로 증가된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 40%에 대등하게, 또는 그 이상으로 증가된다.
일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 약 1 mL/분/1.73 m2 (가령, 3, 5, 7, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 mL/분/1.73 m2 ) 증가된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 약 1 mL/분/년 (가령, 2, 3, 5, 7, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 mL/분/년 ) 증가된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 1 mL/분/년으로 증가된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 3 mL/분/년으로 증가된다.
본 명세서의 일부 구체예들에서, 대상체의 신장 질환 또는 병태는 만성 신장 질환 단계 (CKD)에서 평가된다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 1 만성 신장 질환 (CKD)을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 2 만성 신장 질환 (CKD)을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 3 만성 신장 질환 (CKD)을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 4 만성 신장 질환 (CKD)을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 5 만성 신장 질환 (CKD)을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 1 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 2 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3a CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3b CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 4 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 5 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 1 CKD를 갖는 대상체가 단계 2 CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 2 CKD를 갖는 대상체가 단계 3 CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 2 CKD를 갖는 대상체가 단계 3a CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3a CKD를 갖는 대상체가 단계 3b CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3 CKD를 갖는 대상체가 단계 4 CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 3b CKD를 갖는 대상체가 단계 4 CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 단계 4 CKD를 갖는 대상체가 단계 5 CKD로의 진행되는 것을 방지하거나 또는 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 CKD 단계 진행을 지연 또는 악화를 방지시키는 것이 필요한 대상체에서 이를 지연 및/또는 방지시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 대상체의 신장 손상 CKD 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 대상체에서 총 신장 용적을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 총 신장 용적은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 상기 대상체의 혈액 요소 질소 (BUN)를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 BUN은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 대상체에서 소변 호중구 젤라티나제-연합된 리포칼린 (uNGAL) 농도를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, uNGAL는 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소된다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 <50 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 이는 낮은 위험의 급성 신장 손상을 시사한다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 약 50 ~ 약 149 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 급성 신장 손상에 대한 불확신한 위험을 시사한다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 약 150 ~ 약 300 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 중등도 위험의 급성 신장 손상을 시사한다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 >300 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 고 위험의 급성 신장 손상을 시사한다. 본 명세서의 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL를 약 0.1 ~ 약 300.0 ng/mL (가령, 약 0.1 ~ 약 50 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 100.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 150.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 200.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 250.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 300.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 25 ng/mL, 약 25 ~ 약 50 ng/mL, 약 50 ~ 약 100 ng/mL, 약 100 ~ 약 150 ng/mL, 약 150 ~ 약 200 ng/mL, 약 200 ~ 약 250 ng/mL, 약 250 ~ 약 300 ng/mL, 300 ng/mL 이상으로) 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 신장 질환 또는 병태의 임상적 악화 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 방지하거나, 또는 이를 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 하나 또는 그 이상의 신장 질환 또는 병태의 연합된 합병증 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에 대한 입원 위험을 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 피하로 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 2주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 3주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 4주에 한 번 투여된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 다중 ActRIIB 및 ActRIIA 결정 구조의 복합 분석에 근거하여, 상자로 표시된 리간드와 직접 접촉하기 위하여, 본 명세서에서 추측된 잔기를 갖는 인간 ActRIIA의 세포외 도메인(서열 식별 번호: 66)과 인간 ActRIIB의 세포외 도메인 (서열 식별 번호: 2)의 정렬을 나타낸다.
도 2세포내 도메인없는 다양한 척추동물 ActRIIB 전구체 단백질(서열 식별 번호: 67, 68, 69, 70, 71, 72, 차례로), 세포내 도메인없는 humActRIIA 전구체 단백질(서열 식별 번호: 73), 그리고 콘센수스 ActRIIA 전구체 단백질 (서열 식별 번호: 74)의 다중 서열 정렬을 나타낸다.
도 3은 다양한 척추동물 ActRIIA 단백질 및 인간 ActRIIA (서열 식별 번호: 75-82)의 다중 서열 정렬을 보여준다.
도 4는 Clustal 2.1을 이용하여 인간 IgG 아이소타입으로부터 Fc 도메인의 다중 서열 정렬을 보여준다. 힌지 영역은 점선 밑줄에 의해 표시된다. 이중 밑줄은 비대칭 쇄의 페어링을 촉진시키기 위해 IgG1 Fc (서열 식별 번호: 22)에서 조작된 예시적인 위치들을 표시하며, 다른 아이소타입 IgG2 (서열 식별 번호: 23), IgG3 (서열 식별 번호: 24) 및 IgG4 (서열 식별 번호: 26)에 대하여 상응하는 위치의 실례들을 표시한다.
도 5는 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 비교하였을 때, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 리간드 결합 데이터를 나타낸다. 각 단백질 이종다량체의 경우, 리간드는 리간드 신호전달 억제와 관련된 운동 상수인 해리율 (koff 또는 kd)로 등급결정되며, 결합 친화력 (가장 단단하게 결합된 리간드가 상위에 열거됨)의 내림 순서로 열거된다. 왼쪽의 노란색, 빨간색, 녹색 및 파란색 선은 해리 속도 상수의 크기를 나타낸다. 특정 관심대상의 리간드는 굵게 강조 표시되고, 한편 다른 리간드들은 회색으로 표시되며, 검정색 실선은 동형이량체와 비교하여 이형이량체에 대한 결합이 강화되거나 또는 변하지 않은 리간드를 나타내지만, 빨간색 점선은 동형이량체에 비해 결합이 실질적으로 감소한 것을 나타낸다. 나타낸 것과 같이, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체는 유사하게 높은 친화력을 갖는 5개의 높은 친화력 리간드 각각에 결합하지만, 반면 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 이들 리간드중에서 더 용이하게 구별된다. 따라서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 액티빈 B 및 GDF11에 강력하게 결합하고, GDF8 및 액티빈 A에 중간 강도 수준으로 결합한다. ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 더 대조적으로, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합는 BMP10에 단지 약한 결합을 나타내며, BMP9에는 결합하지 않는다. 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 동종이량체형 ActRIIB Fc 융합체보다 더 큰 리간드 선택성을 갖는다는 것을 나타낸다.
도 6은 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체와 비교하였을 때 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체에 대한 리간드 결합 데이터를 나타낸다. 형식은 도 5의 경우와 동일하다. 나타낸 것과 같이, ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체는 액티빈 A 및 GDF11에 강력하게 결합하는 것과 복합하여 액티빈 B에 우선 선호적 결합을 나타내며, 반면 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 GDF11 (약한 결합자)보다는 액티빈 A에 대해 상당히 강화된 선택성을 나타내는 것과 복합하여, 액티빈 B보다는 액티빈 A에 역전된 선호도를 갖는다. 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 동종이량체형 ActRIIA Fc 융합체보다 실질적으로 상이한 리간드 선택성을 갖는다는 것을 나타낸다.
도 7은 UUO 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 16마리의 마우스는 신장 하부 극단 수준에서 2회 좌측 편측 요관 결찰술을 시행하였고, 3일 후 무작위로 두 그룹으로 나누었다: i) "UUO/PBS" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 피하 주사했고) 그리고 ii) "UUO/sa-IIB-hd" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 10mg/kg의 투여분량으로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 피하 주사했다). "대조군"은 좌측 편측 요관 결찰술을 받지 않은 반대쪽 신장이다. 도 7A-7F는 섬유성 유전자 마커 (차례로, 피브로넥틴, PAI-I, CTGF, Col-I, Col-III, a-SMA)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7G-7H는 염증성 유전자 마커 (차례로, MCP-1, TNFa)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7I는 트롬보스폰딘 1 (Thbs1)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7J는 신장 손상 마커 (NGAL)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 그리고 도 K-N는 TGFβ 리간드(차례로, Tgfb1, Tgfb2, Tgfb3, 액티빈 A)의 유전자 발현 분석을 나타낸다. "UUO/PBS" 처리된 마우스와 비교하여, "UUO/sa-IIB-hd" 처리된 마우스는 섬유성 유전자 및 염증성 유전자의 발현을 유의미적으로 낮았고, TGFβ 1/2/3, 액티빈 A, 및 Thbs1의 상향조절이 감소되었고, 그리고 신장 손상 유전자 발현이 감소되었다. 통계학적 유의성 (p 값)은 "대조군"과 샘플 "UUO/PBS" 간의 비교를 위한 * p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001로 나타낸다. 통계학적 유의성 (p 값)은 "대조군"과 샘플 "UUO/sa-IIB-hd" 간의 비교를 위한 # p<0.05, ##p<0.01, ###p<0.001, 및 ####p<0.0001로 나타낸다. 통계학적 유의성 (p 값)은 샘플 "UUO/PBS"과 샘플 "UUO/sa-IIB-hd" 간의 비교를 위해, @ p<0.05, @@p<0.01, @@@p<0.001, 및 @@@@p<0.0001로 나타낸다. "B.D.L."이란 측정값이 검출 한계 미만임을 의미하고, 그리고 "B.D.L." 값과 비교하여 값에 대한 통계는 산출되지 않았다.
도 8은 Col4a3 (-/-) 알포트 증후군 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 13마리의 Col4a3-/- 마우스를 무작위로 두 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (7마리 마우스에게 피하로 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 주당 2회 주사함), 그리고 ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (6마리 마우스에게 피하로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 주사함). 6마리 "WT" 마우스는 처치를 받지 않은 Col4a3+/+ 마우스이며, 7.5주차 시점에 또한 분석되었다. Col4a3 비히클 마우스와 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)로 마우스를 치료하면 알부민뇨를 약 49.9% 상당히 감소시켰고(p<0.01) (알부민-크레아티닌 비율 (ACR)로 도시됨) (도 8A), 이것은 Col4a3 sa-IIB-hd 마우스에서 감소된 혈액 요소 질소 (BUN)와 연합된다(도 8B). 통계학적 유의성 (p 값)은 * p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001로 나타낸다.
도 9는 Col4a3 (-/-) 알포트 증후군 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 58마리의, 6-주령 나이의 Col4a3-/- 마우스를 음용수에 라미프릴 (ACEi, 10mg/kg/일일)로 처리하였고, 무작위로 세 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (27마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)로, 피하로, 주당 2회 주사하였음); ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (10 mpk)" (11마리 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 10mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음); 그리고 iii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (20마리의 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음). "WT" 마우스는 처리를 받지 않은 Col4a3 +/+ 마우스이다. Col4a3 비히클 마우스과 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)을 10mg/pk 및 30mg/kg으로 마우스를 처리하면 ACEi 존재 하에서 알부민뇨가 상당히 감소되었다 (도 9A). 또한, 30mg/kg 처리는 ACEi 존재 하에서 소변 NGAL (가령, uNAGL) 수준을 상당히 감소시켰다 (도 9B). ACEi 존재 하에서, "Col4a3 비히클" 마우스의 정중 생존 기간은 76 일이었다 (도 9C). 통계학적 유의성 (p 값)은 *p<0.05 30mpk vs 비히클, ***:p<0.001 30mpk vs 비히클, ****p<0.0001 30mpk vs 비히클, ##: p<0.01 10mpk vs 비히클, 및 ###p<0.001 10mpk vs 비히클로 나타낸다.
도 1은 다중 ActRIIB 및 ActRIIA 결정 구조의 복합 분석에 근거하여, 상자로 표시된 리간드와 직접 접촉하기 위하여, 본 명세서에서 추측된 잔기를 갖는 인간 ActRIIA의 세포외 도메인(서열 식별 번호: 66)과 인간 ActRIIB의 세포외 도메인 (서열 식별 번호: 2)의 정렬을 나타낸다.
도 2세포내 도메인없는 다양한 척추동물 ActRIIB 전구체 단백질(서열 식별 번호: 67, 68, 69, 70, 71, 72, 차례로), 세포내 도메인없는 humActRIIA 전구체 단백질(서열 식별 번호: 73), 그리고 콘센수스 ActRIIA 전구체 단백질 (서열 식별 번호: 74)의 다중 서열 정렬을 나타낸다.
도 3은 다양한 척추동물 ActRIIA 단백질 및 인간 ActRIIA (서열 식별 번호: 75-82)의 다중 서열 정렬을 보여준다.
도 4는 Clustal 2.1을 이용하여 인간 IgG 아이소타입으로부터 Fc 도메인의 다중 서열 정렬을 보여준다. 힌지 영역은 점선 밑줄에 의해 표시된다. 이중 밑줄은 비대칭 쇄의 페어링을 촉진시키기 위해 IgG1 Fc (서열 식별 번호: 22)에서 조작된 예시적인 위치들을 표시하며, 다른 아이소타입 IgG2 (서열 식별 번호: 23), IgG3 (서열 식별 번호: 24) 및 IgG4 (서열 식별 번호: 26)에 대하여 상응하는 위치의 실례들을 표시한다.
도 5는 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 비교하였을 때, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 리간드 결합 데이터를 나타낸다. 각 단백질 이종다량체의 경우, 리간드는 리간드 신호전달 억제와 관련된 운동 상수인 해리율 (koff 또는 kd)로 등급결정되며, 결합 친화력 (가장 단단하게 결합된 리간드가 상위에 열거됨)의 내림 순서로 열거된다. 왼쪽의 노란색, 빨간색, 녹색 및 파란색 선은 해리 속도 상수의 크기를 나타낸다. 특정 관심대상의 리간드는 굵게 강조 표시되고, 한편 다른 리간드들은 회색으로 표시되며, 검정색 실선은 동형이량체와 비교하여 이형이량체에 대한 결합이 강화되거나 또는 변하지 않은 리간드를 나타내지만, 빨간색 점선은 동형이량체에 비해 결합이 실질적으로 감소한 것을 나타낸다. 나타낸 것과 같이, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체는 유사하게 높은 친화력을 갖는 5개의 높은 친화력 리간드 각각에 결합하지만, 반면 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 이들 리간드중에서 더 용이하게 구별된다. 따라서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 액티빈 B 및 GDF11에 강력하게 결합하고, GDF8 및 액티빈 A에 중간 강도 수준으로 결합한다. ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 더 대조적으로, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합는 BMP10에 단지 약한 결합을 나타내며, BMP9에는 결합하지 않는다. 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 동종이량체형 ActRIIB Fc 융합체보다 더 큰 리간드 선택성을 갖는다는 것을 나타낸다.
도 6은 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체와 비교하였을 때 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체에 대한 리간드 결합 데이터를 나타낸다. 형식은 도 5의 경우와 동일하다. 나타낸 것과 같이, ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체는 액티빈 A 및 GDF11에 강력하게 결합하는 것과 복합하여 액티빈 B에 우선 선호적 결합을 나타내며, 반면 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 GDF11 (약한 결합자)보다는 액티빈 A에 대해 상당히 강화된 선택성을 나타내는 것과 복합하여, 액티빈 B보다는 액티빈 A에 역전된 선호도를 갖는다. 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 동종이량체형 ActRIIA Fc 융합체보다 실질적으로 상이한 리간드 선택성을 갖는다는 것을 나타낸다.
도 7은 UUO 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 16마리의 마우스는 신장 하부 극단 수준에서 2회 좌측 편측 요관 결찰술을 시행하였고, 3일 후 무작위로 두 그룹으로 나누었다: i) "UUO/PBS" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 피하 주사했고) 그리고 ii) "UUO/sa-IIB-hd" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 10mg/kg의 투여분량으로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 피하 주사했다). "대조군"은 좌측 편측 요관 결찰술을 받지 않은 반대쪽 신장이다. 도 7A-7F는 섬유성 유전자 마커 (차례로, 피브로넥틴, PAI-I, CTGF, Col-I, Col-III, a-SMA)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7G-7H는 염증성 유전자 마커 (차례로, MCP-1, TNFa)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7I는 트롬보스폰딘 1 (Thbs1)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 도 7J는 신장 손상 마커 (NGAL)의 유전자 발현 분석을 나타내며, 그리고 도 K-N는 TGFβ 리간드(차례로, Tgfb1, Tgfb2, Tgfb3, 액티빈 A)의 유전자 발현 분석을 나타낸다. "UUO/PBS" 처리된 마우스와 비교하여, "UUO/sa-IIB-hd" 처리된 마우스는 섬유성 유전자 및 염증성 유전자의 발현을 유의미적으로 낮았고, TGFβ 1/2/3, 액티빈 A, 및 Thbs1의 상향조절이 감소되었고, 그리고 신장 손상 유전자 발현이 감소되었다. 통계학적 유의성 (p 값)은 "대조군"과 샘플 "UUO/PBS" 간의 비교를 위한 * p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001로 나타낸다. 통계학적 유의성 (p 값)은 "대조군"과 샘플 "UUO/sa-IIB-hd" 간의 비교를 위한 # p<0.05, ##p<0.01, ###p<0.001, 및 ####p<0.0001로 나타낸다. 통계학적 유의성 (p 값)은 샘플 "UUO/PBS"과 샘플 "UUO/sa-IIB-hd" 간의 비교를 위해, @ p<0.05, @@p<0.01, @@@p<0.001, 및 @@@@p<0.0001로 나타낸다. "B.D.L."이란 측정값이 검출 한계 미만임을 의미하고, 그리고 "B.D.L." 값과 비교하여 값에 대한 통계는 산출되지 않았다.
도 8은 Col4a3 (-/-) 알포트 증후군 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 13마리의 Col4a3-/- 마우스를 무작위로 두 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (7마리 마우스에게 피하로 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 주당 2회 주사함), 그리고 ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (6마리 마우스에게 피하로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 주사함). 6마리 "WT" 마우스는 처치를 받지 않은 Col4a3+/+ 마우스이며, 7.5주차 시점에 또한 분석되었다. Col4a3 비히클 마우스와 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)로 마우스를 치료하면 알부민뇨를 약 49.9% 상당히 감소시켰고(p<0.01) (알부민-크레아티닌 비율 (ACR)로 도시됨) (도 8A), 이것은 Col4a3 sa-IIB-hd 마우스에서 감소된 혈액 요소 질소 (BUN)와 연합된다(도 8B). 통계학적 유의성 (p 값)은 * p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001로 나타낸다.
도 9는 Col4a3 (-/-) 알포트 증후군 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("sa-IIB-hd")의 치료요법적 효과를 보여준다. 58마리의, 6-주령 나이의 Col4a3-/- 마우스를 음용수에 라미프릴 (ACEi, 10mg/kg/일일)로 처리하였고, 무작위로 세 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (27마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)로, 피하로, 주당 2회 주사하였음); ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (10 mpk)" (11마리 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 10mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음); 그리고 iii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (20마리의 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음). "WT" 마우스는 처리를 받지 않은 Col4a3 +/+ 마우스이다. Col4a3 비히클 마우스과 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)을 10mg/pk 및 30mg/kg으로 마우스를 처리하면 ACEi 존재 하에서 알부민뇨가 상당히 감소되었다 (도 9A). 또한, 30mg/kg 처리는 ACEi 존재 하에서 소변 NGAL (가령, uNAGL) 수준을 상당히 감소시켰다 (도 9B). ACEi 존재 하에서, "Col4a3 비히클" 마우스의 정중 생존 기간은 76 일이었다 (도 9C). 통계학적 유의성 (p 값)은 *p<0.05 30mpk vs 비히클, ***:p<0.001 30mpk vs 비히클, ****p<0.0001 30mpk vs 비히클, ##: p<0.01 10mpk vs 비히클, 및 ###p<0.001 10mpk vs 비히클로 나타낸다.
발명의 상세한 설명
1.
개요
부분적으로, 본 명세서는 ActRIIA의 세포외 도메인 또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함하는 단일-가지 이종다량체, 이러한 단일-가지 이종다량체를 만드는 방법, 그리고 이의 용도에 관한 것이다. 본원에서 기술된 바와 같이, 단일-가지 이종다량체는 ActRIIA 또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 특정 바람직한 구체예들에서, 본 명세서의 이종다량체는 대응하는 동종다량체 복합체에 비교하여 (가령, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 비교하여 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체), ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 대한 변경된 결합 프로파일을 갖는다.
TGF-β 슈퍼패밀리는 TGF-베타, 액티빈, nodals, 뼈 형태발생 단백질 (BMPs), 성장 및 분화 인자 (GDFs), 그리고 항-Mullerian 호르몬 (AMH)을 포함하는 30가지 이상의 분비된 인자로 구성된다[Weiss et al. (2013) Developmental Biology, 2(1): 47-63]. 척추동물과 무척추동물 모두에서 발현되는 상기 슈퍼패밀리의 구성요소들은 동물의 평생 동안 발달의 가장 초기 단계에서 다양한 조직과 기능에 편재되어 발현된다. 게다가, TGF-β 슈퍼패밀리 단백질은 줄기 세포의 자가 재생, 생식기, 분화, 기관 형태 형성 및 성인 조직 항상성의 핵심 매개체이다. 이러한 편재된 활성과 일관되게, TGF-베타 슈퍼패밀리의 비정상 신호전달은 예를 들면, 자가면역 질환, 심혈관 질환, 섬유증 질환, 및 암이 포함된 다양한 인간 병리에 관련된다.
TGF-베타 슈퍼패밀리의 리간드(가령, ActRIIA 또는 ActRIIB에 결합하는 리간드)는 하나의 단량체의 중심 3-1/2 회전 나선이 다른 단량체의 베타-가닥에 의해 형성된 오목한 표면을 채우는 동일한 이량체 구조를 공유한다. 대다수의 TGF-베타 패밀리 구성요소들은 분자 내 이황화 결합으로 더욱 안정화된다. 이 디설파이드 결합은 다른 2 개의 디설파이드 결합에 의해 형성된 고리를 통과하는데, 이로써 '시스테인 매듭 (knot)' 모티프로 불리는 것을 생성된다[Lin et al. (2006) Reproduction 132: 179-190; 그리고 Hinck et al. (2012) FEBS Letters 586: 1860-1870].
TGF-베타 슈퍼패밀리(가령, ActRIIA 또는 ActRIIB) 신호전달은 리간드 자극 시 하류 SMAD 단백질 (가령, SMAD 단백질 1, 2, 3, 5, 및 8) 을 인산화시키고, 활성화시키는 이형화학성 복합체 of 유형 I 및 유형 II 세린/트레오닌 키나제 수용체에 의해 매개된다[ (2000) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1:169-178]. 이들 유형 I 및 유형 II 수용체는 시스테인-풍부한 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 그리고 예측된 세린/트레오닌 특이성을 갖는 세포질 도메인으로 구성된 막경유 단백질이다. 일반적으로, 유형 I 수용체는 세포내 신호전달을 중재하고, 유형 II 수용체는 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 결합에 필요하다. 유형 I 및 II 수용체는 리간드 결합 후 안정적 복합체를 형성하여, 유형 II 수용체에 의한 유형 I 수용체가 인산화된다.
TGF-베타 패밀리는 그들이 결합하는 I 형 수용체와 그들이 활성화시키는 Smad 단백질을 기반으로 두 가지 계통 발생 가지로 나눌 수 있다. 하나는 좀더 최근에 전개된 가지로써, 가령, TGF-베타, 액티빈, GDF8, GDF9, GDF11, BMP3 및 nodal을 포함하며, Smads 2 및 3을 활성화시키는 유형 I 수용체를 통하여 신호전달한다 [Hinck (2012) FEBS Letters 586:1860-1870]. 다른 가지는 슈퍼패밀리의 좀더 거리가 있는 관련 단백질을 포함하는데, 가령, BMP2, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF1, GDF5, GDF6, 및 GDF7을 포함하며, 이들은 Smads 1, 5, 및 8을 통하여 신호전달한다.
액티빈은 TGF-베타 슈퍼패밀리의 구성요소이며, 구성원이며 처음에는 난포-자극 호르몬의 분비 조절제로 밝혀졌지만, 이후 다양한 생식 및 비 생식-기능이 규명되었다. 2개의 밀접하게 관련된 β 소단위 (βAβA, βBβB, 및 βAβB, 차례로)의 동형/이형이량체인 3가지 주요 액티빈 형태(A, B, 및 AB)가 있다. 인간 게놈은 또한 주로 간에서 발현되는 액티빈 C 및 액티빈 E 를 인코드하고, 그리고 βC 또는 βE를 함유하는 이형이량체 형태 또한 공지되어 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리에서, 액티빈은 난소 및 태반 세포에서 호르몬 생성을 자극하고, 신경 세포 생존을 지원하고, 세포 유형에 따라 세포주기 진행에 긍정적 또는 부정적 영향을 미칠 수 있고, 그리고 적어도 양서류 태아에서 중배엽 분화를 유도할 수 있는 독특하고 다기능적 요소다[DePaolo et al. (1991) Proc Soc Ep Biol Med. 198:500-512; Dyson et al. (1997) Curr Biol. 7:81-84; 그리고 Woodruff (1998) Biochem Pharmacol. 55:953-963]. 몇몇 조직에서, 액티빈 신호전달은 이것의 관련된 이형이량체, 인히빈(inhibin)에 의해 길항된다. 예를 들면, 뇌하수체로부터 난포-자극 호르몬 (FSH) 분비 조절에 있어서, 액티빈은 FSH 합성 및 분비를 촉진시키지만, 한편 인히빈은 FSH 합성 및 분비를 감소시킨다. 액티빈 생활성을 조절하고 및/또는 액티빈에 결합하는 다른 단백질은 폴리스태틴 (FS), 폴리스태틴-관련된 단백질 (FSRP, 또한 FLRG 또는 FSTL3으로도 알려짐), 및 α2-마크로글로블린을 포함한다.
본 명세서에서 기술된 바와 같이, 단리된 βA 소단위 또는 이량체 복합체 (가령, βAβA 동형이량체 또는 βAβB 이형이량체)에서 "액티빈 A"에 결합하는 물질은 βA 소단위에 특이적으로 결합하는 물질이다. 이형이량체 복합체 (가령, βAβB 이형이량체)의 경우, "액티빈 A"에 결합하는 물질은 βA 소단위 안에 존재하는 에피토프(epitopes)에 특이적이지만, 이 복합체의 비-βA 소단위 (가령, 복합체의 βB 소단위 ) 안에 존재하는 에피토프에는 결합하지 않는다. 유사하게, "액티빈 A"를 길항(억제)하는 것으로 본 명세서에서 공개된 물질은 단리된 βA 소단위 또는 이량체 복합체 (가령, βAβA 동형이량체 또는 βAβB 이형이량체)에서 βA 소단위에 의해 중개되는 하나 또는 그 이상의 활성을 억제하는 물질이다. βAβB 이형이합체의 경우에, "액티빈 A"를 저해하는 작용제는 βA 하위단위의 하나 또는 그 이상의 활성을 특이적으로 저해하지만, 복합체의 비-βA 하위단위 (가령, 복합체의 βB 하위단위)의 활성을 저해하지 않는 작용제이다. 이러한 원리는 "액티빈 B", "액티빈 C" 및 "액티빈 E"에 결합하고 및/또는 이를 저해하는 작용제에도 적용된다. "액티빈 AB"에 길항작용하는 본원에서 개시된 작용제는 βA 하위단위에 의해 매개된 하나 또는 그 이상의 활성 및 βB 하위단위에 의해 매개된 하나 또는 그 이상의 활성을 저해하는 작용제이다.
BMPs 및 GDFs는 함께, TGF-베타 슈퍼패밀리의 특징적인 폴드(characteristic fold)를 공유하는 시스테인-매듭 사이토킨의 패밀리를 형성한다[Rider et al. (2010) Biochem J., 429(1):1-12]. 이 패밀리는 예를 들면, BMP2, BMP4, BMP6, BMP7, BMP2a, BMP3, BMP3b (GDF10로도 알려짐), BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8, BMP8a, BMP8b, BMP9 (GDF2로도 알려짐), BMP10, BMP11 (GDF11로도 알려짐), BMP12 (GDF7로도 알려짐), BMP13 (GDF6로도 알려짐), BMP14 (GDF5로도 알려짐), BMP15, GDF1, GDF3 (VGR2로도 알려짐), GDF8 (미오스태틴로도 알려짐), GDF9, GDF15, 및 decapentaplegic을 포함한다. 뼈 형성을 유도 할 수 있는 능력(이로 인하여 BMPs로 불림)외에도, BMP/GDF는 광범위한 조직의 발생에 형태형성적 활성을 보여준다. BMP/GDF 동종-이량체 및 이형-이량체는 I 형과 II 형의 수용체 이량체의 조합과 상호작용하여, 여러 가지 가능한 신호 생성 복합체를 생성하고, SMAD 전사 인자의 두 경쟁 세트 중 하나의 활성화를 유도한다. BMP/GDFs는 매우 특이적이며, 국소화된 기능을 갖는다. 이들은 다양한 방식으로 조절되는데, BMP/GDF 발현의 발생 제한, 그리고 사이토킨에 고친화력으로 결합하는 몇 가지 특이적인 BMP 길항 단백질의 분비를 통하여 조절된다. 신기하게도, 다수의 이들 길항제들은 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들을 닮았다.
성장 및 분화 인자-8 (GDF8)은 또한 미오스태틴으로 알려져 있다. GDF8은 골격근량의 음성 조절인자로써, 발생중인 그리고 성인 골격근에서 상당히 발현된다. 유전자삽입 마우스에서 GDF8 null 돌연변이는 골격근의 눈에 띄는 비대 및 다형성을 특징으로 한다 [McPherron et al. Nature (1997) 387:83-90]. 소에서 GDF8의 자연 발생 돌연변이에서 골격근량의 비슷한 증가가 있고, 그리고 인간에서 현저하게 나타난다 [Ashmore et al. (1974) 성장, 38:501-507; Swatland and Kieffer, J. Anim. Sci. (1994) 38:752-757; McPherron and Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1997) 94:12457-12461; Kambadur et al. Genome Res. (1997) 7:910-915; 그리고 Schuelke et al. (2004) N Engl J Med, 350:2682-8]. 연구에 따르면, 사람의 HIV 감염과 관련된 근육 소모는 GDF8 단백질 발현 증가를 수반한다[Gonzalez-Cadavid et al., PNAS (1998) 95:14938-43]. 또한, GDF8은 근육 특이적 효소 (가령, 크레아틴 키나제)의 생산을 조절하고, 근섬유 세포 증식을 조절할 수 있다 [국제 특허 출원 공개 번호. WO 00/43781]. GDF8 프로펩티드(propeptide)는 성숙한 GDF8 도메인 이량체에 비공유 결합하여, 그 생물학적 활성을 불활성화시킬 수 있다. [Miyazono et al. (1988) J. Biol. Chem., 263: 6407-6415; Wakefield et al. (1988) J. Biol. Chem., 263; 7646-7654; 그리고 Brown et al. (1990) Growth Factors, 3: 35-43]. GDF8 또는 구조적으로 관련된 단백질에 결합하고, 이들의 생물학적 활성을 억제시키는 다른 단백질은 폴리스태틴, 그리고 잠재적으로, 폴리스태틴-관련된 단백질을 포함한다[Gamer et al. (1999) Dev. Biol., 208: 222-232].
BMP11로도 알려진, GDF11은 ,마우스 발생 동안 꼬리 싹(tail bud), 팔다리 싹(limb bud), 상악 및 하악 아치, 그리고 후근 신경절에서 발현되는 분비 단백질이다 [McPherron et al. (1999) Nat. Genet., 22: 260-264; 그리고 Nakashima et al. (1999) Mech. Dev., 80: 185-189]. GDF11은 중배엽 및 신경 조직 모두에서 패턴화에 독특한 역할을 한다 [Gamer et al. (1999) Dev Biol., 208:222-32]. GDF11은 병아리 날개 발달에있어서 연골 형성 및 근형성의 음성 조절자인 것으로 나타났다 [Gamer et al. (2001) Dev Biol., 229:407-20]. 근육에서 GDF11의 발현은 GDF8과 유사한 방식으로 근육 성장을 조절하는 역할을 암시한다. 또한, 뇌에서 GDF11의 발현은 GDF11이 또한 신경계의 기능과 관련된 활성을 가질 수 있음을 시사한다. 흥미로운 것은, GDF11은 후각 상피의 신경 발생을 억제하는 것으로 밝혀졌다[Wu et al. (2003) Neuron., 37:197-207]. 따라서, GDF11은 근육 질환 및 신경 퇴행성 질환(가령, 근위축성 측색 경화증)과 같은 질병의 치료에서 시험관내 및 생체내 적용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, ActRII는 유형 II 액티빈 수용체 패밀리를 지칭한다. 이 패밀리에는 ACVR2A 유전자에 의해 인코드된 액티빈 수용체 유형 IIA (ActRIIA), 및 ACVR2B 유전자에 의해 인코드된 액티빈 수용체 유형 IIB (ActRIIB)이 내포된다. ActRIIA 수용체는 액티빈, GDF8 (미오스태틴), GDF11, 및 BMPs의 하위집단, 주로 BMP6과 BMP7을 비롯한, 다양한 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 결합하는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체들이다. ActRIIA 수용체는 근육 및 신경근 장애 (가령, 근이영양증, 근위축성 측삭 경화증(ALS) 및 근육 위축), 원치 않는 뼈/연골 성장, 지방 조직 장애(가령, 비만), 대사 장애(가령, 제2형 당뇨병) 및 신경퇴행성 장애를 비롯한 다양한 생물학적 장애에 연루된다. 가령, Tsuchida et al., (2008) Endocrine Journal 55(1):11-21, Knopf et al., U.S.8,252,900, 및 OMIM entries 102581 및 602730 참고.
특정 측면들에서, 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6 및 BMP10)에 의해 개시된 세포내 신호전달 변환 (가령, Smad 신호전달)을 길항하기 위한, 각각 ActRIIA 또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함하는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 바람직하게는 가용성 이종다량체의 용도에 관계한다. 본원에서 기술된 바와 같이, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환) 치료에 유용할 수 있다.
본원에서 실증된 바와 같이, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 섬유성 유전자 및 염증성 유전자의 발현 억제, TGFβ 1/2/3, 액티빈 A, 및 Thbs1의 상향조절 억제, 그리고 신장 손상 감소에 효과적이다. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 UUO 모델 치료에서 신장 섬유증 및 염증을 억제시키고, 신장 손상이 감소된다. 더욱이, 뇨 알부민 대 크레아티닌 비율(ACR)은 알부민뇨를 측정하기 위해 산출되었으며, 이는 Col4a3-/- 마우스("Col4a3 비히클") 마우스에서 4주에서 부터 7.5주까지 유의미하게 증가했다. 마우스를 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체로 치료하면 알부민뇨가 유미의적으로 49.9% (p<0.01) 감소되었고, 이는 Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클") 마우스에서 감소된 BUN와 연합되었다. ACE 억제제 치료와 무관하게, Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클")에서 6주에서부터 10주까지 알부민뇨는 유의미적으로 증가되었다. Col4a3 비히클 마우스과 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)을 10mg/pk 및 30mg/kg으로 마우스를 처리하면 ACEi 존재 하에서 알부민뇨가 상당히 감소되었고, 생존도 증가되었다. 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체 치료는 Alport 마우스 모델에서 알부민뇨를 감소시키고, 신장 기능을 개선시킨다는 것이 실증된다. 더욱이, 이들 이들 데이터는 다른 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질, 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질도 신장 질환 또는 병태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있음을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 용어는 일반적으로 본 개시 내용 및 각 용어가 사용되는 특정 상황에서 당해 분야의 통상적인 의미를 갖는다. 특정 용어는 본 명세서의 구성 및 방법을 설명하고, 이를 작성하고 사용하는 방법에 대해 당업자에게 추가 지침을 제공하기 위해 아래 또는 다른 곳에서 논의된다. 어떤 용어의 사용의 범위나 의미는 그것이 사용되는 특정 상황에서 명백해질 것이다.
모든 문법적 형태 및 단어 변이에서 "상동성(homologous)"이란 동일한 유기체 종에서 슈퍼패밀리의 단백질을 포함하는 "공통적인 진화 기원"을 포함하는 두개 단백질간의 상관관계를 지칭하거나, 뿐만 아니라 상이한 유기체 종의 상동성 단백질을 지칭한다. 이러한 단백질 (그리고 이를 인코딩하는 핵산)은 서열 상동성을 갖고, 동일성 (%) 또는 특정 잔기 또는 모티프 및 보존된 위치의 존재 여부와 관계없이, 서열 유사성에 의해 반영되는 바와 같은 서열 상동성을 갖는다. 그러나, 일반적인 용도 및 당해 출원에서, "상동성"이라는 용어는 "매우"와 같은 부사로 수식될 때 서열 유사성을 지칭할 수 있고, 일반적인 진화적 기원과 관련 될 수도 있고 또는 그렇지 않을 수 도 있다.
용어 "서열 유사성(sequence similarity)"은 모든 문법적 형태에서 일반적인 진화론적 기원을 공유하거나 공유하지 않을 수 있는 핵산 또는 아미노산 서열 간의 동일성 또는 일치 정도를 의미한다.
기준 폴리펩티드 (또는 뉴클레오티이드) 서열에 대한 "서열 동일성 백분율(%)"은 후보 서열의 아미노산 잔기(또는 핵산)이 기준 폴리펩티드(뉴클레오티드) 서열에의 아미노산 잔기(또는 핵산)과 동일한 아미노산 잔기 (또는 핵산)의 백분율로 정의되는데, 이때 서열을 정렬시킨 후 최대 서열 동일성 백분율을 얻기 위하여 필요하다면 갭을 도입하고, 보존적 치환은 상기 서열의 동일성의 일부분으로 간주되지 않는다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 아미노산 (핵산) 서열 동일성 %값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 작성되었으며, 소스 코드(source code)는 미국 저작권청 (Washington D.C., 20559)에 사용자 문서로 제출되어 미국 저작권 등록 번호 TXU510087에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif.에서 공개적으로 입수할 수 있으며, 소스 코드에서 컴파일 할 수도 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함하여 UNIX 운영 체제에서 사용하도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 매개변수는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변경되지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 모든 문법적 형태로 "X에 실질적으로 결합하지 않는다"는 한 물질이 "X"에 대하여 약 10-7, 10-6, 10-5, 10-4, 또는 그 이상 (가령, KD 를 결정하는데 이용된 분석에 의해 탐지가능한 결합이 없음)의 KD를 갖는다는 의미한다.
"항진하다(agonize)"란 모든 문법적 형태로, 단백질 및/또는 유전자를 활성화 (가령, 단백질의 유전자 발현을 활성화 또는 증폭하거나 비활성 단백질을 활성화상태로 유도함으로써)하거나 단백질 및 단백질을 증가시키는 과정을 의미한다.
"길항하다(antagonize)"는 모든 문법적 형태로, 단백질 및/또는 유전자를 억제(가령, 단백질의 유전자 발현을 억제 또는 감소시키거나 활성 단백질을 비활성화상태로 유도함으로써)하거나 단백질 및 단백질을 감소시키는 과정을 의미한다.
명세서 및 청구 범위에 걸쳐 수치와 관련하여 사용되는 용어 "약(about)" 및 "대략(approximately)"이란 당업자에게 친숙하고 수용가능한 정확도의 구간을 나타낸다. 일반적으로, 이러한 정확도 구간은 ± 10%이다. 대안으로, 그리고 특히 생물학적 계통에서, 용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값의 크기의 차수, 바람직하게는 ≤5-배, 보다 바람직하게는 ≤2-배 이내의 값을 의미할 수 있다.
여기에 개시된 수치 범위는 범위를 정의하는 수치를 포함한다.
용어 "a" 및 "an"은 용어가 사용된 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수형을 포함한다. 용어 "하나 또는 그 이상의" 및 "적어도 하나의"는 물론 호환되는 용어로 "단수 관사("a" 또는 "an") 용어를 사용할 수 있다. 더욱이, 본 명세서에서 사용 된 "및/또는"은 둘 또는 그 이상의 특정 특징 또는 구성 요소의 각각의 구체적인 설명으로서 취해질 것이다. 따라서, 구절에서 사용된 용어 "및/또는", 이를 테면 "A 및/또는 B"는 "A와 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)을 포함한다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 문구에 사용된 "및/또는"이라는 용어는 다음 각 측면을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본 명세서 전반에 걸쳐, "포함한다(comprise)"라는 단어 또는 "포함하는(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만, 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하지 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
2. ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 단일-가지 이종다량체
특정 측면들에서, 본 명세서는 각각 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드을 포함하는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체에 관한 것이다. 특정 구체예들에서, 본원에서 기술된 폴리펩티드는 단백질 복합체들은 제 2 폴리펩티드와 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체 (가령, 이종다량체)를 형성할 수 있으며, 이때 제 1 폴리펩티드는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝(pair)의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하지 않는다. 상기 상호작용 짝은 복합체, 구체적으로, 이형이량체 복합체 복합체를 형성하기 위하여 상호작용하는 임의의 2개 폴리펩티드 서열일 수 있지만, 작업 구체예에서는 또한 동종이량체형 서열을 형성하는 상호작용 짝이 이용될 수도 있다. 본원에서 기술된 바와 같이, 상기 상호작용 짝의 하나의 구성요소는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 이를 테면, 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90, 및 91중 임의의 하나의 서열에 대해 적어도 70%, 75% 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 바람직하게는, 상기 상호작용 짝은 개선된 혈청 반감기를 부여하도록, 또는 단량체 형태의 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드와 비교하였을 때, 개선된 혈청 반감기를 제공하기 위해, 또다른 모이어티, 이를 테면, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티상에서 어뎁터로 작용하는 것으로부터, 부분적으로 선택된다.
본원에서 나타낸 것과 같이, 단량체 (단일-가지) 형태의 ActRIIA 또는 ActRIIB는 이들의 대응하는 동종이량체형 형태와 비교하였을 때, 실질적으로 변경된 리간드-결합 선택성을 나타내지만, 그러나 이들 단량체 형태는 혈청 잔류 시간 (반감기)이 짧은 경향이 있을 수 있으며, 이는 치료요법적 환경에서 바람직하지 않다. 혈청 반감기를 개선시키기 위한 공통 기전은 폴리펩티드를 IgG의 불변 도메인 부분 (가령, Fc 부분)을 갖는 동종이량체형 융합 단백질로 발현시키는 것이다. 그러나, 동종이량체형 단백질 (가령, Fc 융합 구조체에서)로 발현된 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 이 단량체 형태와 동일한 활성 프로파일을 나타내지 않을 수 있다. 본원에서 실증된 바와 같이, 반감기 연장 모이어티에 이 단량체 형태를 융합하여 문제를 해결할 수 있으며, 놀랍게도, 이렇게 함으로써 비대칭 이형이량체 융합 단백질과 같은 단백질을 발현시킴으로써 쉽게 달성될 수 있는데, 이때 상호작용 짝의 하나의 구성요소는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 융합되며,이 상호작용 짝의 또다른 구성요소는 모이어티에 융합되지 않거나, 또는 이종성(heterologous) 모이어티에 융합되어, 상기 상호작용 짝에 의해 부여되는 혈청 반감기 개선과 함께, 신규한 리간드-결합 프로파일을 얻는다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 (가령, 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90, 및 91중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드)를 포함하는 단일-가지 이종다량체에 관계하며, 본원에서 "본 명세서의 단일-가지 이종다량체" 또는 "단일-가지 ActRIIA 이종다량체" 또는 "단일-가지 ActRIIB 이종다량체"으로 불린다. 바람직하게는, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 가용성이며, 가령, 단일-가지 이종다량체는 적어도 하나의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 가용성 부분을 포함한다. 일반적으로, ActRIIA 또는 ActRIIB의 세포외 도메인은 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 가용성 부분에 상응한다. 따라서, 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함한다. ActRIIA 및 ACTRIIB의 예시적인 세포외 도메인은 본 명세서에서 설명되며, 뿐만 아니라 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 본 명세서의 발명에 따라 이용될 수 있다 (가령, 단일-가지 이종다량체 조성물 및 이의 용도). 일부 구체예들에서, ActRIIA 또는 ActRIIB 세포외 도메인의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다 (가령, 차례로, 서열 식별 번호: 88과 89, 또는 84, 86과 91).
3 개의 핑커-톡신 폴드(three-finger toxin fold)로 알려진 특정 구조적 모티프는 ActRIIA 또는 ActRIIB에 의한 리간드 결합에 중요하며, 각 단량체 수용체의 세포외 도메인 내에 다양한 위치에 배치된 10, 12, 또는 14개 보존된 시스테인 잔기에 의해 형성된다. 가령, Greenwald et al. (1999) Nat Struct Biol 6:18-22; Hinck (2012) FEBS Lett 586:1860-1870 참고. 본원에서 기술된 임의의 헤테로머 복합체는 ActRIIA 또는 ActRIIB의 이러한 도메인을 포함할 수 있다. 가장 바깥쪽에 의해 경계가 표시되는 ActRIIA 또는 ActRIIB의 코어 리간드-결합 도메인은 서열 식별 번호: 1 (ActRIIB 잔구체)의 위치 29-109와 서열 식별 번호: 9(ActRIIA 잔구체)의 위치 30-110에 상응한다. 이러한 시스테인으로-경계가 표시되는 코어 서열에 인접한 구조적으로 덜 규칙적인 아미노산들은 어느 말단에서건 반드시 리간드 결합을 바꾸지 않고도, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 또는 37개 잔기가 절두될 수 있다. N-말단 및/또는 C-말단 절두에 대한 예시적인 세포외 도메인에는 서열 식별 번호: 2, 3, 5, 6, 10, 11, 및 83이 내포된다.
다른 선호되는 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10을비롯한, 그러나, 이에 국한되지 않는 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 결합하고, 이의 활성을 억제(길항)한다 구체적으로, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 하나 또는 그 이상의 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 (가령, ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드)에 의해 개시되는 세포내 신호전달 변환 (가령, Smad 신호전달)의 길항에 이용될 수 있다. 본원에서 기술된 바와 같이, 이러한 길항 이종다량체는 TGF-베타 슈퍼패밀리의 하나 또는 그 이상의 리간드 (가령, ActRIIA 또는 ActRIIB의 리간드)에 의해 영향을 받는 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)을 비롯한, 다양한 TGF-베타 연합된 병태의 치료 또는 예방용일 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 이들의 대응하는 동종다량체 (가령, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 vs. 대응하는 단일-가지 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합)와 비교하여, 상이한 리간드-결합 프로파일을 갖는다. 본원에서 기술된 바와 같이, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체에는 단일-가지 통합된(unitary) 복합체를 기반으로 하여, 가령, 이형이량체, 이종삼량체, 이종사량체 그리고 더 많이 올리고머화된 구조들이 내포된다. 특정 바람직한 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 이형이량체다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "ActRIIB"는 임의의 종(species)으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ActRIIB 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체 유형 IIB (ActRIIB) 단백질의 패밀리를 나타낸다. ActRIIB에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ActRIIB 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상된 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 "ActRIIB 폴리펩티드"는 뿐만 아니라 ActRIIB 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드- 유사체를 포함)를 포함한다. 이러한 변이체 ActRIIB 폴리펩티드들의 예는 본 명세서 뿐만 아니라 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2006/012627 및 WO 2008/097541에서 제공되며, 이들은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 본원에 기술된 모든 ActRIIB 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ActRIIB 전구체 단백질 서열 (서열 식별 번호: 1)의 번호에 기초한다.
인간 ActRIIB 전구체 단백질 서열은 다음과 같다:
신호 펩타이드는 단일 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시되며; 잠재적인 내인성 N-연계된 당화 부위는 이중 밑줄로 표시된다.
프로세싱된 세포외 ActRIIB 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
일부 구체예들에 있어서, N-말단에 "SGR…" 서열을 갖는 상기 단백질이 만들어질 수 있다. 세포외 도메인의 C-말단 "꼬리(tail)"는 단일 밑줄로 나타낸다. 결손된 "꼬리"를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
서열 식별 번호: 1의 위치 64에 알라닌 (A64)을 갖는 ActRIIB 형태 또한 문헌에 보고되었다. 가령, Hilden et al. (1994) Blood, 83(8): 2163-2170 참고. A64 치환을 갖는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함하는 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 액티빈과 GDF11에 대하여 상대적으로 낮은 친화력을 갖는다는 출원인이 확인하였다. 대조적으로, 위치 64에 아르기닌 (R64)을 갖는 동일한 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 액티빈과 GDF11에 대하여 낮은 나노몰에서 높은 피코몰 범위의 친화력을 갖는다. 따라서, R64를 갖는 서열은 본 명세서에서 인간 ActRIIB의 "야생형" 기준 서열로 이용된다.
위치 64에 알라닌을 갖는 ActRIIB 형태 는 다음과 같다:
신호 펩타이드는 단일 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
대체 A64 형태의 프로세스된 세포외 ActRIIB 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
일부 구체예들에 있어서, N-말단에 "SGR…" 서열을 갖는 상기 단백질이 만들어질 수 있다. 세포외 도메인의 C-말단 "꼬리"는 단일 밑줄로 나타낸다. 결손된 "꼬리"를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
인간 ActRIIB 전구체 단백질를 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 식별 번호: 7), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001106.3의 뉴클레오티드 25-1560로 구성되며, 이것은 ActRIIB 전구체의 아미노산 1-513를 인코드한다. 나타낸 바와 같이, 서열은 위치 64에 아르기닌을 제공하며, 대신 알라닌을 제공하기 위하여 변형될 수 있다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
프로세스된 세포외 인간 ActRIIB 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다 (서열 식별 번호: 8). 나타낸 바와 같이, 서열은 위치 64에 아르기닌을 제공하며, 대신 알라닌을 제공하기 위하여 변형될 수 있다.
인간 ActRIIB 가용성 세포외 도메인과 인간 ActRIIA 가용성 세포외 도메인의 아미노산 서열 배열은 도 1에 도시된다. 이 정렬은 ActRIIA 리간드에 직접적으로 접촉하는 것으로 보이는 두 수용체 안에 아미노산 잔기들을 나타낸다. 도 2는 다양한 척추동물의 ActRIIB 단백질과 인간 ActRIIA의 다수-서열 정렬을 나타낸다. 이들 배열로부터, ActRII-리간드 결합의 정상적 활성에 중요한 리간드 결합 도메인 안에 주요 아미노산 위치를 예측할 수 있을 뿐만 아니라, 정상 ActRII-리간드 결합 활성을 크게 변화시키지 않으면서 치환을 용인할 수 있는 아미노산 위치를 예측할 수 있다. ActRIIA 단백질은 당해 분야에서 구조적 및 기능적 특징, 특히 리간드 결합에 관해 특징 지워져 왔다. 가령, Attisano et al. (1992) Cell 68(1):97-108; Greenwald et al. (1999) Nature Structural Biology 6(1): 18-22; Allendorph et al. (2006) PNAS 103(20: 7643-7648; Thompson et al. (2003) The EMBO Journal 22(7): 1555-1566; 뿐만 아니라 U.S. 특허 번호: 7,709,605, 7,612,041, 및 7,842,663 참고.
예를 들면, Attisano et al.은 ActRIIB의 세포외 도메인의 C- 말단에서 프롤린 매듭의 결손은 액티빈에 대한 수용체의 친화력을 감소 시킨다는 것을 보여 주었다. 본 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20-119을 함유하는 ActRIIB-Fc 융합 단백질, "ActRIIB(20-119)-Fc"는 ActRIIB(20-134)-Fc와 비교하여 GDF11 및 액티빈에 감소된 결합을 가지며, 이는 프롤린 매듭 영역과 완벽한 막에 인접한(juxtamembrane) 도메인을 포함한다 (가령, U.S. 특허 번호. 7,842,663 참고). 그러나, ActRIIB(20-129)-Fc 단백질은 비록 프롤린 매듭 영역이 파괴되었지만, 야생형에 비교하여 유사하지만, 다소 감소된 활성을 유지한다. 따라서, 아미노산 134, 133, 132, 131, 130 및 129 (서열 식별 번호: 1에 대하여)에서 끝나는 ActRIIB 세포외 도메인은 모두 활성인 것으로 예상되지만, 134 또는 133에서 끝나는 구조체는 대부분 활성일 것이다. 유사하게, 잔기 129-134(서열 식별 번호: 1에 대하여)중 임의의 위치에서 돌연변이는 큰 폭으로 리간드-결합 친화력을 변경시키지 않을 것으로 예상된다. 이를 뒷받침하는 것으로, P129 및 P130 (서열 식별 번호: 1에 대하여)의 돌연변이는 실질적으로 리간드 결합을 감소시키지 않는 것으로 알려져있다. 따라서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드는 아미노산 109 (최종 시스테인)와 같이 빨리 종료될 수 있지만, 그러나, 109와 119에서 또는 그 사이 (가령, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 또는 119)에서 끝나는 형태는 감소된 리간드 결합을 갖는 것으로 예상된다. 아미노산 119 (서열 식별 번호: 1에 대하여)은 잘 보존되지 않고, 따라서 용이하게 변경 또는 절두된다. ActRIIB 폴리펩티드 및 128 (서열 식별 번호: 1에 대해) 또는 그 이후에서 끝나는 ACTRIIB-기반 GDF 트랩은 리간드-결합 활성을 유지해야만 한다. ActRIIB 폴리펩티드 및 서열 식별 번호: 1에 대해 위치 119 및 127에서 끝나는 또는 이들 사이 (가령, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 또는 127)에서 끝나는 ACTRIIB-기반의 GDF 트랩은 중간정도의 결합 능력을 가질 것이다. 이들중 임의의 것은 임상 또는 실험 환경에 따라 바람직하게 사용될 수 있다.
ActRIIB의 N-말단에서, 아미노산 29 또는 그 전에 (서열 식별 번호: 1에 대하여) 시작하는 단백질은 리간드-결합 활성을 보유하는 것으로 예상된다. 아미노산 29는 최초 시스테인을 나타낸다. 위치 24 (서열 식별 번호: 1에 대하여)에서 알라닌-에서-아스파라긴으로의 돌연변이는 리간드 결합에 실질적인 영향없이 N-연계된 당화 서열을 도입한다. 가령, U.S. 특허 번호. 7,842,663 참조. 이로써 신호 절단(cleavage) 펩티드와 아미노산 20-29에 상응하는 시스테인 교차(cross)-연계된 영역에서 돌연변이는 잘 용인된다는 것이 확인된다. 구체적으로, ActRIIB 폴리펩티드 및 위치 20, 21, 22, 23, 및 24 (서열 식별 번호: 1에 대해)에서 시작하는 ACTRIIB-기반의 GDF 트랩은 전반적인 리간드-결합 활성을 유지해야 하며, 그리고 ACTRIIB 폴리펩티드 및 위치 25, 26, 27, 28, 및 29 (서열 식별 번호: 1에 대해) 에서 시작하는 ACTRIIB-기반의 GDF 트랩 또한 리간드-결합 활성을 유지하는 것으로 예상된다. 가령, U.S. 특허 번호 7,842,663에서 보여준 데이터는 22, 23, 24, 또는 25에서 시작하는 ActRIIB 구조체가 가장 큰 활성을 가질 것임을 보여준다.
종합하면, ActRIIB의 활성 부분 (가령, 리간드-결합 부분)은 서열 식별 번호: 1의 아미노산 29-109를 포함한다. 따라서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드는 예를 들면, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20-29에 대응하는 잔기에서 시작하고 (가령, 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29에서 시작), 그리고 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109-134에 대응하는 위치에서 끝나는 (가령, 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134에서 끝나는) ActRIIB의 부분에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 다른 예로는 서열 식별 번호: 1의 위치 20-29 (가령, 위치 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29) 또는 21-29 (가령, 위치 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 위치 119-134 (가령, 위치 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134), 119-133 (가령, 위치 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 또는 133), 129-134 (가령, 위치 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134), 또는 129-133 (가령, 위치 129, 130, 131, 132, 또는 133)에서 끝나는, 폴리펩티드들을 포함한다. 다른 예로는 서열 식별 번호: 1의 위치 20-24 (가령, 20, 21, 22, 23, 또는 24), 21-24 (가령, 21, 22, 23, 또는 24), 또는 22-25 (가령, 22, 22, 23, 또는 25)에서 시작하고, 그리고 109-134 (가령, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134), 119-134 (가령, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134) 또는 129-134 (가령, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134) 위치에서 끝나는 구조체들이 내포된다. 이 범위 안에 변이체들, 특히, 서열 식별 번호: 1의 대응하는 부분에 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 변이체들이 특히 고려된다.
본 명세서에는 복합 ActRIIB 구조들, (도 2에 나타냄)의 분석 결과가 내포되는데, 이 결과에서 리간드-결합 포켓은 잔기 Y31, N33, N35, L38 내지 T41, E47, E50, Q53 내지 K55, L57, H58, Y60, S62, K74, W78 내지 N83, Y85, R87, A92, 및 E94 내지 F101에 의해 부분적으로 한정됨을 나타낸다. 추가적으로, ActRIIB는 거의 모든 척추동물에 걸쳐 잘-보존되며, 세포외 도메인의 큰 스트레취(stretches)는 완벽하게 보존된다. 따라서, 다양한 척추동물 유기체의 ActRIIB 서열 비교는 변경될 수 있는 잔기에 대한 통찰력을 제공한다. 예를 들면, R40은 Xenopus에서 K이며, 이 위치의 염기성 아미노산이 허용됨을 나타낸다. L46은 제노푸스(xenopus) ActRIIB에서 발린이며, 따라서 이 위치는 변경될 수 있고, 임의선택적으로 또다른 소수성 잔기, 이를 테면, V, I 또는 F, 또는 비-극성 잔기, 이를 테면, A로 변경될 수 있다. E52는 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 부위가 다양한 광범위한 변화, 가령, 극성 잔기, 이를 테면, E, D, K, R, H, S, T, P, G, Y 및 아미도 A를 포함하는 변화를 용인할 것임을 나타낸다. Q53은 소의 ActRIIB에서 R이며, 제노푸스 ActRIIB에서 K이며, 따라서 R, K, Q, N 및 H를 비롯한 아미노산이 이 위치에서 용인될 것이다. T93은 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 다양한 구조적 변이를 용인하는데, 극성 잔기, 이를 테면 S, K, R, E, D, H, G, P, G 및 Y를 선호함을 나타낸다. F108은 제노푸스에서 Y이며, 따라서 Y 또는 소수성 기, 이를 테면, I, V 또는 L이 용인되어야 함을 나타낸다. E111은 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 D, R, K 및 H, 뿐만 아니라 Q와 N을 포함하는 하전된 잔기가 용인될 수 있음을 나타낸다. R112는 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 R 및 H를 포함하는 염기성 잔기가 용인됨을 나타낸다. 위치 119의 A는 상대적으로 덜 보존되며, 설치류에서는 P이고, 제노푸스에서는 V이며, 따라서 이 위치는 기본적으로 임의의 아미노산이 용인되어야 함을 나타낸다. 본 명세서에 설명된 변형은 다양한 방식으로 결합될 수 있다. 추가적으로, 당업계에 기술된 돌연변이유발 프로그램의 결과는 ActRIIB에서 종종 보존에 유익한 아미노산 위치들이 있음을 또한 확인한다. 서열 식별 번호: 1에 대해, 이들에는 위치 64 (염기성 아미노산), 위치 80 (산성 또는 소수성 아미노산), 위치 78 (소수성, 특히 트립토판), 위치 37 (산성, 특히 아스파르트산 또는 글루탐산), 위치 56 (염기성 아미노산), 위치 60 (소수성 아미노산, 특히 페닐알라닌 또는 티로신)가 내포된다. 따라서, 본원에서 기술된 ActRIIB 폴리펩티드에서, 본 명세서는 보존될 수 있는 아미노산 프레임워크를 제공한다. 보존되는 것이 바람직할 수 있는 기타 위치는 다음과 같다: 모두 서열 식별 번호:1에 대하여 위치 52 (산성 아미노산), 위치 55 (염기성 아미노산), 위치 81 (산성), 98 (극성 또는 하전된, 특히 E, D, R 또는 K).
따라서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드의 일반적인 형태는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 29-109에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, 임의선택적으로 위치 20-24 범위(가령, 20, 21, 22, 23, 또는 24) 또는 22-25(가령, 22, 23, 24, 또는 25) 범위에서 시작되고, 위치 129-134 (가령, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134) 범위의 위치에서 끝나는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 리간드-결합 포켓에서 단지 1, 2, 5, 10 또는 15개의 보존적 아미노산 변화를 포함하고, 이 리간드-결합 포켓의 위치 40, 53, 55, 74, 79 및/또는 82에서 0개, 하나 또는 그 이상의 비-보존적 변경을 포함하는 것이다. 가변성이 특히 잘 용인될 수 있는 결합 포켓 외부의 위치는 세포외 도메인의 아미노 및 카르복시 말단 (상기 언급 한 바와 같음) 및 위치 42-46 및 65-73 (서열 식별 번호: 1과 관련)을 포함한다. 위치 65에서 아스파라긴에서-알라닌으로의 변경(N65A)은 A64 배경에서 리간드 결합을 실질적으로 개선시키고, 따라서 R64 베경에서 리간드 결합에 유해한 효과를 가지지 않는 것으로 예상된다. 가령, U.S. 특허 번호. 7,842,663 참조. 이 변화는 아마도 A64 배경에서 N65의 당화를 제거하여, 이 영역에서의 중요한 변화가 용인될 수 있음을 보여준다. R64A 변화가 잘 용인되지는 않지만, R64K는 잘 용인되고, 따라서 H와 같은 또 다른 염기성 잔기는 64 번 위치에서 용인될 수 있다. 가령, U.S. 특허 번호. 7,842,663 참조.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 단일-가지 이종다량체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIB 폴리펩티드 (가령, ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 단일-가지 이종다량체와 이의 용도)은 가용성 (가령, ActRIIB의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIB 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 신호생성)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 예를 들면, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20-29에 대응하는 잔기에서 시작하고 (가령, 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29에서 시작), 그리고 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109-134에 대응하는 위치에서 끝나는 (가령, 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134에서 끝나는) ActRIIB의 부분에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이 서열로 구성된, 또는 이 서열로 필수적으로 구성된 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 예를 들면, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20-29에 대응하는 잔기에서 시작하고 (가령, 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29에서 시작), 그리고 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109-134에 대응하는 위치에서 끝나는 (가령, 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134에서 끝나는) ActRIIB의 부분에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이 서열로 구성된, 또는 이 서열로 필수적으로 구성된 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이다. 특정 바람직한 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호:1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 다른 선호되는 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호:1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이다. 다른 선호되는 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호:1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이 아니다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이 아니다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 이로 필수적으로 구성되고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 46, 48, 60, 61, 84, 86, 90, 또는 91중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 이로 필수적으로 구성되고, 이때 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)이 아니다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 서열 식별 번호: 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 적어도 하나의 ActRIIB 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성되고, 이때 L79에 대응하는 위치는 아스파르트산 (D)이다. 리더가 없는, 절두된 GDF 트랩 ActRIIB(L79D 25131)의 아미노산 서열, hFc 도메인, 및 링커 (서열 식별 번호: 83)는 하기에 나타낸다. 고유한 서열에서 79 번 위치에 치환된 아스파르테이트는 굵게, 밑줄로 표시되고, 시퀀싱에 의해 드러난 글루타메이트는 성숙한 융합 단백질에서 N-말단 잔기가 되기 때문이다.
특정 구체예들에서, 본 명세서는 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "ActRIIA"는 임의의 종(species)으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ActRIIA 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체 유형 IIA (ActRIIA) 단백질의 패밀리를 나타낸다. ActRIIA에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ActRIIA 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상된 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 "ActRIIA 폴리펩티드"는 뿐만 아니라 ActRIIA 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드- 유사체를 포함)를 포함한다. 이러한 변이체 ActRIIA 폴리펩티드들의 예는 본 명세서 뿐만 아니라 국제 특허 출원 공개 번호. WO 2006/012627에서 제공되며, 이들은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 본원에 기술된 모든 ActRIIA 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ActRIIA 전구체 단백질 서열 (서열 식별 번호: 9)의 번호에 기초한다.
인간 ActRIIA 전구체 단백질 서열은 다음과 같다:
신호 펩타이드는 단일 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시되며; 잠재적인 내인성 N-연계된 당화 부위는 이중 밑줄로 표시된다.
프로세싱된 세포외 ActRIIA 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
세포외 도메인의 C-말단 "꼬리(tail)"는 단일 밑줄로 나타낸다. 결손된 "꼬리"를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
인간 ActRIIA 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 식별 번호: 12), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001616.4의 뉴클레오티드 159-1700에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
프로세스된 세포외 ActRIIA 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
따라서, ActRIIA의 활성 부분 (가령, 리간드 결합)의 일반적인 형태는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 30-110을 포함하는, 이로 필수적으로 구성된, 또는 이로 구성된 폴리펩티드이다. 따라서, ActRIIA 폴리펩티드들은 예를 들면, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 21-30 중 임의의 하나에 대응하는 잔기 (가령, 서열 식별 번호: 9의 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 서열 식별 번호: 9의 임의의 하나의 아미노산 110-135에 대응하는 잔기 (가령, 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 또는 135중 임의의 하나에서 끝나는)에서 끝나는 ActRIIA의 부분에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 예컨데다른 예로는 서열 식별 번호: 9의 위치 21-30 (가령, 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작), 22-30 (가령, 아미노산 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작), 23-30 (가령, 아미노산 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작), 24-30 (가령, 아미노산 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작)으로부터 선택된 위치에서 시작되고, 서열 식별 번호: 9의 111-135 (가령, 아미노산 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 종료), 112-135 (가령, 아미노산 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 종료), 113-135 (가령, 아미노산 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 종료), 120-135 (가령, 아미노산 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 종료),130-135 (가령, 아미노산 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 종료), 111-134 (가령, 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 종료), 111-133 (가령, 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 또는 133중 임의의 하나에서 종료), 111-132 (가령, 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 또는 132중 임의의 하나에서 종료), 또는 111-131 (가령, 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 131중 임의의 하나에서 종료)에서 끝나는 구조체들이 내포된다. 이들 범위 내의 변형도 고려되는데, 특히, 서열 식별 번호: 9의 대응하는 부분에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이로 필수적으로 구성된, 또는 이로 구성된 것들이 고려된다. 따라서, 일부 구체예들에서, ActRIIA 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 30-110에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 폴리펩티드를 포함하는, 이로 필수적으로 구성된, 또는 이로 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ActRIIA 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 30-110에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, 리간드-결합 포켓에서 1, 2, 5, 10 또는 15개를 넘지 않는 보존적 아미노산 변화를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
ActRIIA는 척추동물간에 잘-보존되며, 세포외 도메인의 큰 스트레취(stretches)는 완벽하게 보존된다. 예를 들면, 도 3은 다양한 ActRIIA 오르소로그(orthologs)와 비교하여 인간 ActRIIA 세포외 도메인의 다중-서열 배열을 도시한다. ActRIIA에 결합하는 많은 리간드들 또한 매우 보존되어 있다. 따라서, 이들 배열로부터, ActRIIA-리간드 결합의 정상적 활성에 중요한 리간드 결합 도메인 안에 주요 아미노산 위치를 예측할 수 있을 뿐만 아니라, 정상 ActRIIA-리간드 결합 활성을 크게 변화시키지 않으면서 치환을 용인할 수 있는 아미노산 위치를 예측할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 방법에 따라 유용한 활성을 가진 인간 ActRIIA 변이체 폴리펩티드는 다른 척추 동물 ActRIIA의 서열의 상응하는 위치에 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 수 있거나, 또는 인간 또는 다른 척추 동물 서열에서와 유사한 잔기를 포함 할 수 있다.
다음 실시예들은 활성 ActRIIA 변이체를 정의하는 접근법을 설명하지만, 이에 제한하고자 함은 아니다. 도 3에서 도시된 바와 같이, 인간 세포외 도메인에서 F13은 오비스 아리에스(Ovis aries) (서열 식별 번호: 76), 갈루스 갈루스(Gallus gallus) (서열 식별 번호: 79), 보스 타우루스(Bos Taurus) (서열 식별 번호: 80), 티토 알바(Tyto alba) (서열 식별 번호: 81), 및 미요티스 다비디(Myotis davidii) (서열 식별 번호: 82) ActRIIA에서 Y이며, 이것은 이 위치에서 F, W, 및 Y를 비롯한 방향족 잔기가 용인됨을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 Q24는 보스 타우루스(Bos Taurus) ActRIIA에서 R이며, 이것은 이 위치에서 D, R, K, H, 및 E를 비롯한 하전된 잔기들이 용인될 것임을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 S95는 갈루스 갈루스(Gallus gallus) 및 티토 알바(Tyto alba) ActRIIA에서 F이며, 이 것은 이 부위가 극성 잔기, 이를 테면, E, D, K, R, H, S, T, P, G, Y, 및 아마도 소수성 잔기, 이를 테면, L, I, 또는 F를 비롯한 다양한 변화를 용인할 수 있음을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 E52는 오비스 아리에스(Ovis aries) ActRIIA에서 D이며, 이것은 이 위치에서 D 및 E를 비롯한 산성 잔기가 용인됨을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 P29는 오비스 아리에스(Ovis aries) ActRIIA에서 S, 그리고 미요티스 다비디(Myotis davidii) ActRIIA에서 L인 것으로 나타나서 상대적으로 잘 보존되지 않고, 따라서 이 위치에서 임의의 아미노산이 용인되어야 한다는 것이 필수적이다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 단일-가지 이종다량체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIA 폴리펩티드 (가령, ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 단일-가지 이종다량체와 이의 용도)은 가용성 (가령, ActRIIA의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIA 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 신호생성)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 이종다량체는 서열 식별 번호: 9, 10, 11, 55, 57, 58, 59, 88, 또는 89중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 이종다량체는 서열 식별 번호: 9, 10, 10, 11, 55, 57, 58, 59, 88, 또는 89중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하고, 이로 구성되거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 치료 효과 또는 안정성을 강화시킬 목적으로(가령, 반감기 증가 및/또는 단백질분해에 대한 저항성 증가), ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 구조를 변경시켜 기능적 변이체의 제조를 고려한다. 아미노산 치환, 결손, 추가, 또는 이의 조합들에 의해 변이체들이 만들어질 수 있다. 예를 들면, 류신을 이소류신 또는 발린으로 치환, 아스파르테이트를 글루탐산염으로 치환, 트레오닌을 세린으로 치환, 또는 아미노산을 구조적으로 관련된 아미노산 (가령, 보존 돌연변이)으로 단리된 치환은 생성 분자의 생물학적 활성에 주요한 영향을 주지 않을 것으로 합리적으로 예측할 수 있다. 보존적 치환은 측쇄와 관련된 아미노산 패밀리 내에서 일어나는 것들이다. 본 명세서의 폴리펩티드의 아미노산 서열의 변화로 기능적 동소체가 생성되는 지의 여부는 생성된 변이체 폴리펩티드가 이의 야생형 폴리펩티드와 유사한 방식으로 세포 안에서 반응을 만드는 능력, 또는 예를 들면, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10을 포함하는 하나 또는 그 이상의 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 결합하는 능력을 평가함으로써 용이하게 결정될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 명세서는 상기 폴리펩티드의 당화를 변경하기 위해 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 특정한 돌연변이를 고려한다. 하나 또는 그 이상의 당화 부위, 이를 테면, O-연계된 또는 N-연계된 당화 부위를 도입시키거나, 또는 제거하기 위해 이러한 돌연변이들이 선택될 수 있다. 아스파라긴-연계된 당화 인지 부위는 일반적으로 적절한 세포의 당화 효소에 의해 특이적으로 인지되는 삼펩티드 서열, 아스파라긴-X-트레오닌 또는 아스파라긴-X-세린 (여기에서 "X"는 임의의 아미노산임)이다. 이러한 변경은 하나 또는 그 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 상기 폴리펩티드(O-연계된 당화 부위의 경우)에 추가 또는 치환시켜 만들 수도 있다. 당화 인지 부위의 제1 또는 제3 아미노산 위치중 하나 또는 둘 모두에서 다양한 아미노산 치환 또는 결손 (및/또는 제 2 위치에서 아미노산 결손)으로 변형된 삼펩티드(tripeptide) 서열에서 비-당화가 초래된다. 폴리펩티드의 탄소화물 모이어티의 수를 증가시키는 또다른 수단은 상기 단백질에 화학 또는 효소적으로 글리코시드를 결합시키는 것이다. 이용되는 결합 방식에 따라, 이들 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘; (b) 자유 카르복실기; (c) 자유 술포히드릴기, 이를 테면 시스테인의 기; (d) 자유 히드록실 기, 이를 테면 세린, 트레오닌, 또는 히드록시프롤린; (e) 방향족 잔기, 이를 테면 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판의 기; 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다. 폴리펩티드 상에 있는 하나 또는 그 이상의 탄수화물 모이어티는 화학적 및/또는 효소적으로 제거될 수 있다. 화학적 탈당화는 예를 들면, 트리플루오로메탄설폰산 또는 이에 등가의 화합물에 대한 폴리펩티드의 노출을 필요할 수 있다. 이 처리는 아미노산 서열을 손상시키지 않으면서, 연계당 (N-아세틸 글루코사민 또는 N-아세틸 갈락토사민)을 제외한 대부분 또는 모든 당을 절단하게 된다. 폴리펩티드상의 탄수화물 모이어티의 효소 절단은 Thotakura et al., [Meth. Enzymol. (1987) 138:350]에서 설명된 바와 같이, 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 이루어질 수 있다. 포유류, 효모, 곤충 및 식물 세포는 모두 펩티드의 아미노산 서열에 의해 영향을 받을 수 있는 상이한 당화 패턴을 도입시킬 수 있기 때문에 폴리펩티드의 서열은 이용되는 발현계 유형에 따라 적절하게 조정될 수 있다. 일반적으로, 인간에 사용하기 위한 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 적절한 당화를 제공하는 포유류 세포계, 이를 테면 HEK293 또는 CHO 세포계에서 발현될 수 있지만, 다른 포유류 발현 세포계 또한 마찬가지로 유용할 것으로 예상된다.
특정 구체예들에서, 본 명세서는 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 특정한 돌연변이를 고려한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 폴리펩티드의 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기는 변형될 수 있다. 일부 구체예들에서, 변형은 당화된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 페길화된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 파르네실화된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 아세틸화된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 바이오티닐화된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 지질 모이어티에 콘쥬게이트된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 변형은 유기 유도화된 물질에 콘쥬게이트된 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 제 1 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화된 아미노산, 페길화된 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 지질 모이어티에 콘쥬게이트된 아미노산, 및 유기 유도화된 물질에 콘쥬게이트된 아미노산으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 변형을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화되고, CHO 세포에서 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는다.
본 명세서는 돌연변이체, 특히 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 복합 돌연변이체, 뿐만 아니라 절두 돌연변이체를 만드는 방법을 더 고려한다. 복합 돌연변이체의 푸울은 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 서열을 동정하는데 특히 유용하다. 이러한 복합 라이브러리들을 스크리닝하는 목적은 변경된 성질, 이를 테면 변경된 약동학적 또는 변경된 리간드 결합을 갖는 폴리펩티드들 변이체를 만들기 위함을 수도 있다. 다양한 스크리닝 분석이 하기에 제공되며, 이러한 분석을 이용하여 변이체들을 평가할 수 있다. 예를 들면, ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드가 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 결합을 방지하고, 및/또는 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 의해 야기된 신호전달을 간섭하기 위해, ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10)에 결합하는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 변이체의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 이종다량체는 세포-기반 분석에서 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드의 활성을 억제시킨다.
본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 단일-가지 이종다량체의 활성은 예를 들면, 세포-기반 또는 생체내 분석에서 또한 테스트될 수 있다. 예를 들면, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에 연루된 유전자의 발현에 있어서 단일-가지 이종다량체의 영향이 평가될 수 있다. 이 평가는 필요에 따라, 하나 또는 그 이상의 재조합 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 단백질 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10)의 존재 하에서 실행될 수 있고, 세포는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 및 임의선택적으로, ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드를 만들기 위하여 형질감염될 수 있다. 유사하게, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 마우스 또는 다른 동물에게 투여될 수 있으며, 및 하나 또는 그 이상의 측정, 이를 테면, 알부민 크레아티닌 비율 (ACR), 사구체 여과율 (GFR), 및/또는 혈액 요소 질소 (BUN)가 당분야에서 인지된 방법들을 이용하여 평가될 수 있다. 유사하게, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 또는 이의 변이체의 활성은 골모세포, 지방세포, 및/또는 이들 세포의 성생에 임의의 효과를 위한 신경 세포에서 예를 들면, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 분석과 당분야의 공통적인 지식에 의해 테스트될 수 있다. SMAD-반응성 리포터 유전자를 이러한 세포계에서 이용하여 하류 신호전달에 대한 효과를 모니터할 수 있다.
기준 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체와 비교하여, 선택성이 증가된 또는 전반적으로 효능이 증가된 복합-유도된 변이체가 만들어질 수 있다. 이러한 변이체들은 재조합 DNA 구조체로부터 발현될 때, 유전자 요법 프로토콜에 이용될 수 있다. 유사하게, 돌연변이유발은 대응하는 대응하는 변형안된 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체와 상당히 상이한 세포외 반감기를 갖는 변이체를 만들 수 있다. 예를 들면, 상기 변경된 단백질은 변형되지 않은 폴리펩티드의 파괴 또는 그렇지 않으면 불활성화를 초래하는 단백질분해 또는 다른 세포 과정에 더 안정적이거나 또는 덜 안정적이 될 수 있다. 이러한 변이체 및 이들을 코딩하는 유전자는 폴리펩티드의 반감기를 조절함으로써 폴리펩티드 복합체 수준을 변경시키는데 이용 될 수 있다. 예를 들면, 짧은 반감기는 더욱 일시적인 생물학적 효과를 일으킬 수 있고, 유도성 발현 시스템의 일부는 세포 외부에 재조합 폴리펩티드 복합체 수준을 더 엄밀하게 조절할 수 있다. Fc 융합 단백질에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 반감기를 변경하기 위하여, 링커(존재한다면) 및/또는 Fc 부분에 돌연변이를 만들 수 있다.
잠재적 ActRIIA 또는 ActRIIB 서열의 최소한 일부분을 포함하는 각 폴리펩티드의 라이브러리를 인코드하는 유전자의 축중 라이브러리에 의해 복합 라이브러리가 만들어질 수 있다. 예를 들면, 합성 올리고뉴클레오티드의 혼합물은 유전자 서열에 효소적으로 결찰되어, 잠재적 ActRIIA 또는 ActRIIB를 인코드하는 뉴클레오티드 서열의 축중 세트는 개별 폴리펩티드로 발현되거나, 또는 대안으로, 더 큰 융합 단백질 (가령, 파아지 디스플레이의 경우)로 발현가능하다.
잠재적 상동체(homologs)의 라이브러리는 축중 올리고뉴클레오티드 서열로부터 만들어질 수 있는 많은 방법들이 있다. 축중(degenerate) 유전자 서열의 화학적 합성은 자동 DNA 합성기에서 실행될 수 있고, 그 다음 합성 유전자는 적절한 발현 벡터 안에 결찰될 수 있다. 축중성 올리고뉴클레오티드의 합성은 당업계에 잘 알려져 있다. 가령, Narang, SA (1983) Tetrahedron 39:3; Itakura et al. (1981) Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, ed. AG Walton, Amsterdam: Elsevier pp273-289; Itakura et al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakura et al. (1984) Science 198:1056; Ike et al. (1983) Nucleic Acid Res. 11:477 참고. 이러한 기술은 다른 단백질의 유도 진화에 사용되었다. 가령, Scott et al., (1990) Science 249:386-390; Roberts et al. (1992) PNAS USA 89:2429-2433; Devlin et al. (1990) Science 249: 404-406; Cwirla et al., (1990) PNAS USA 87: 6378-6382; 뿐만 아니라 U.S. 특허 번호 5,223,409, 5,198,346, 및 5,096,815 참고.
대안으로, 다른 형태의 돌연변이유발을 이용하여 조합 라이브러리를 만들 수 있다. 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 본 명세서의 이종다량체만들어지고, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발를 이용한 스크리닝[가령, Ruf et al. (1994) Biochemistry 33:1565-1572; Wang et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:3095-3099; Balint et al. (1993) Gene 137:109-118; Grodberg et al. (1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601; Nagashima et al. (1993) J. Biol. Chem. 268:2888-2892; Lowman et al. (1991) Biochemistry 30:10832-10838; 및 Cunningham et al. (1989) Science 244:1081-1085], 링커 스캐닝 돌연변이유발 [가령, Gustin et al., (1993) Virology 193:653-660; 그리고 Brown et al., (1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652; McKnight et al., (1982) Science 232:316], 포화 돌연변이유발 [가령, Meyers et al., (1986) Science 232:613]; PCR 돌연변이유발 [가령, Leung et al., (1989) Method Cell Mol Biol 1:11-19]; 또는 화학적 돌연변이유발을 포함하는 무작위 돌연변이유발[가령, Miller et al., (1992) A Short Course in Bacterial Genetics, CSHL Press, Cold Spring Harbor, NY; 그리고 Greener et al., (1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34]에 의해 단리될 수 있다. 링커 스캐닝 돌연변이유발은 특히 복합적 환경에서 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 절두된 (생활성) 형태를 확인하는 매력적인 방법이다.
점 돌연변이 및 절두에 의해 만들어진 복합 라이브러리의 유전자 산물을 스크리닝하기 위한, 그리고 이와 같은 경우, 특정 성질을 갖는 유전자 산물의 cDNA 라이브러리를 스크리닝하기 위한 광범위한 기술이 당분야에 공지되어 있다. 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 복합 돌연변이유발에 의해 생성된 유전자 라이브러리의 신속한 스크리닝에 일반적으로 적합할 것이다. 큰 유전자 라이브러리를 스크리닝하는 가장 광범위하게 이용되는 기술은 전형적으로 유전자 라이브러리를 복제가능한 발현 벡터에 클로닝하고, 적절한 세포를 벡터의 생성 라이브러리로 형질전환시키고, 원하는 활성의 탐지는 해당 유전자의 산물이 탐지되는 해당 유전자를 인코드하는 벡터를 상대적으로 용이하게 단리할 수 있는 조건하에 복합 유전자를 발현시키는 것을 포함한다. ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10)에 대한 결합 분석 및/또는 세포-신호전달 분석이 바람직한 분석에 내포된다.
특정 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 내에 자연적으로 존재하는 것에 더하여 해독-후 변형을 더욱 포함할 수 있다. 이러한 변형에는 아세틸화, 카르복실화, 당화, 인산화, 지질화 및 아실화가 내포되하나, 이에 한정되지 않는다. 그 결과, 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 단일-가지 이종다량체는 비-아미노산 원소, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 지질, 다당류 또는 단당류 및 인산염을 포함할 수 있다. 단일-가지 이종다량체의 기능에 대하여 본 명세서에 기재된 바와 같이, 다른 단일-가지 이종다량체 변이체 기능에서 이러한 비-아미노산 요소들의 효과를 테스트할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드가 초기 형태(nascent form)의 폴리펩티드를 절단함으로써 세포에서 생산되는 경우, 해독후-가공은 또한 단백질의 정확한 폴딩 및/또는 기능에 중요할 수 있다. 상이한 세포들 (가령, CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38, NIH-3T3 또는 HEK293)은 이러한 해독후 활성에 대하여 특이적 세포 기전 및 특징들을 보유하고, 그리고 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 정확한 변형 및 프로세싱을 확보하도록 선택될 수 있다.
특정 측면들에서, 본원에서 기술된 폴리펩티드는 상호작용 짝의 상보적 구성요소를 포함하는 적어도 하나의 폴리펩티드와 와 공유적으로, 또는 비-공유적으로 연합된 적어도 하나의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 단백질 이종다량체를 형성할 수 있다. 바람직하게는, 본원에 기술된 폴리펩티드 form 단일-가지 이형이량체를 형성하지만, 더 높은 차수의 이종다량체들도 내포되는데, 이를 테면, 이를 테면, 이형삼량체, 이형사량체, 및 추가 올리고머 구조들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 적어도 하나의 다량체화 도메인을 포함한다. 본 명세서에서 공개된 바와 같이, 용어 "다량체화 도메인(multimerization domain)"은 최소한 제 1 폴리펩티드와 최소한 제 2 폴리펩티드 사이에 공유 또는 비-공유 상호작용을 촉진시키는 아미노산 또는 아미노산 서열을 지칭한다. 본 명세서의 폴리펩티드들은 다량체화 도메인에 공유적 또는 비-공유적으로 결합될 수 있다. 바람직하게는, 다량체화 도메인은 단일-가지 폴리펩티드 (가령, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드)와 상호작용 짝의 상보적 구성요소 간의 상호작용을 촉진시켜, 이종다량체 형성 (가령, 이형이량체 형성)를 촉진시키고, 및 임의선택적으로 동종다량체 형성 (가령, 동종이량체 형성)을 방해, 또는 그렇지 않으면 이의 형성을 선호하지 않고, 이로 인하여 원하는 이종다량체의 수율이 증가된다.
당업계에 공지된 많은 방법을 사용하여 본 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 생성시킬 수 있다. 예를 들면, 제 1 폴리펩티드 (가령, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드)에 있는 자연 발생적 아미노산을 자유 티올-함유하는 잔기, 이를 테면 시스테인로 대체하여, 이러한 자유 티올이 제 2 폴리펩티드 (가령, 상호작용 짝의 상보적 구성요소)에 있는 또다른 자유 티올-함유하는 잔기과 반응하고, 이황화결합이 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드들 사이에 형성되도록 함으로써, 비-자연 발생적 이황화결합이 구축될 수 있다. 이형다량체 형성을 촉진시키는 상호작용의 추가 예로는 Kjaergaard et al., WO2007147901에서 설명된 이온 상호작용; Kannan et al., U.S.8,592,562에서 설명된 정전기적 스티어링; Christensen et al., U.S.20120302737에서 설명된 코일드-코일 상호작용; Pack & Plueckthun,(1992) Biochemistry 31: 1579-1584에서 설명된 류진 지퍼; Pack et al., (1993) Bio/Technology 11: 1271-1277에서 설명된 나선-턴-나선 모티프를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 다양한 세그먼트(segments)의 연계는 가령, 공유 결합 이를 테면 화학적 교차-연계, 펩티드 링커, 이황화물 다리 등을 통하여 얻어지거나, 또는 친화력 상호작용, 이를 테면 아비딘-비오틴 또는 류신 지퍼 기술에 의해 획득될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, 다량체화 도메인은 상호작용 짝의 하나의 성분을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 폴리펩티드들은 제 2 폴리펩티드와 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하는 이종다량체를 형성할 수 있으며, 이때 제 1 폴리펩티드는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 상기 상호작용 짝은 이종다량체, 구체적으로 이형이량체를 형성하기 위하여 상호작용하는 임의의 2개 폴리펩티드 서열일 수 있지만, 작업 구체예에서는 또한 동형이량체 복합체를 형성하는 상호작용 짝이 이용될 수도 있다. 상기 상호작용 쌍의 하나의 구성요소는 예를 들면, 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11중 임의의 하나의 서열에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 기본적으로 이로 구성된 또는 구성된 폴리펩티드 서열이 포함된, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 개선된 성질/활성 이를 테면, 증가된 혈청 반감기를 부여하거나, 또는 개선된 성질/활성을 제공하기 위하여 또다른 모이어티가 부착된 어뎁터로 작용하는 상호작용 짝이 선택될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 개선된 성질/활성, 이를 테면 개선된 혈청 반감기를 제공하기 위하여 상호작용 짝의 한 성분 또는 양쪽 성분에 부착될 수 있다.
상호작용 짝의 제 1 및 제 2 구성요소는 비대칭 짝일 수도 있는데, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 따라서, 비대칭 상호작용 쌍의 첫 번째와 두 번째 구성원은 연관하여 이형이량체형 상호작용-쌍을 형성할 수 있다. 대안으로, 상호작용 쌍은 비유도될 수 있는데, 이것은 상기 쌍의 구성원들이 실제적인 선호 없이 서로 연관되거나 또는 자가-연관될 수 있고, 그리고 따라서, 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 가질 수 있다는 것을 의미한다. 따라서, 비유도된 상호작용 쌍의 첫 번째와 두 번째 구성원은 연합하여 동종이량체 상호작용-쌍 또는 이형이량체형 상호작용-쌍을 형성할 수 있다. 임의선택적으로, 상호작용 짝(가령, 비-대칭 짝 또는 비-유도 상호작용 짝)의 제 1 구성 요소는 상호작용 짝의 제 2 구성요소와 공유적으로 연합한다. 임의선택적으로, 상호작용 짝(가령, 비-대칭 짝 또는 비-유도 상호작용 짝)의 제 1 구성 요소는 상호작용 짝의 제 2 구성요소와 비-공유적으로 연합한다.
특정 예로써, 본 명세서는 폴리펩티드에 융합된 적어도 하나의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는, 이종다량체 융합 단백질을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 면역글로불린의 불변 영역, 이를 테면, 면역글로불린의 CH1, CH2, 또는 CH3 도메인 또는 Fc 도메인을 포함하는 폴리펩티드에 융합된 적어도 하나의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이종다량체 융합 단백질을 제공한다. 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 유도된 Fc 도메인이 본 명세서에서 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, Fc 도메인들은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 중쇄의 불변 영역 으로부터 파생된다. 일부 구체예들에서, Fc 도메인들은 인간 IgG1의 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, Fc 도메인들은 인간 IgG2의 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, Fc 도메인들은 인간 IgG3의 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, Fc 도메인들은 인간 IgG4의 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, 면역글로불린 또는 Fc 도메인의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다 (가령, 서열 식별 번호: 85 및 87).
CDC 또는 ADCC 활성을 감소시키는 다른 돌연변이들이 공지되어 있고, 집합적으로 이들 임의의 변이체는 본 명세서에 포함되며, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체 융합 단백질의 유익한 성분으로 이용될 수 있다. 임의선택적으로, 서열 식별 번호: 22의 IgG1 Fc 도메인은 잔기, 이를 테면 Asp-265, Lys-322, 및 Asn-434 (대응하는 전장 IgG1에 따라 번호매김됨)에서 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 갖는다. 특정 경우들에서, 하나 또는 그 이상의 이들 돌연변이 (가령, Asp-265 돌연변이)를 갖는 돌연변이체 Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인와 비교하여 Fcγ 수용체에 대한 결합 능력이 감소된다. 다른 경우들에서, 하나 또는 그 이상의 이들 돌연변이 (가령, Asn-434 돌연변이)를 갖는 돌연변이체 Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인와 비교하여 MHC 부류 I-관련된 Fc-수용체 (FcRN)에 결합하는 능력이 증가된다.
인간 IgG1 의 Fc 부분(G1Fc)에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 식별 번호: 22). 점선은 힌지 영역을 나타내며, 직선은 자연 발생적 변이체를 갖는 위치를 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 식별 번호:22에 대하여 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. G1Fc에서 자연 발생적 변이체는 서열 식별 번호: 22에서 이용된 넘버링 체계에 따라 E134D 및 M136L을 포함할 수 있다(Uniprot P01857 참고).
인간 IgG2 의 Fc 부분(G2Fc)에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 식별 번호: 23). 점선은 힌지 영역을 나타내며, 이중 밑줄은 이 서열에서 데이터 베이스가 충돌하는 위치를 나타낸다 (UniProt P01859). 부분적으로, 본 명세서는 서열 식별 번호:23에 대하여 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
인간 IgG3의 Fc (G3Fc)부분에 이용될 수 있는 2가지 예시 아미노산 서열을 하기에 나타낸다. G3Fc의 힌지 영역은 다른 Fc 쇄의 길이의 최대 4배가 될 수 있고, 유사한 17개-잔기 세그먼트를 앞세우고, 3개의 동일한 15개-잔기 세그먼트를 포함한다. 하기에 나타낸 제 1 G3Fc 서열(서열 식별 번호: 24)은 단일 15개-잔기 세그먼트로 구성된 짧은 힌지 영역을 포함하며, 반면 제 2 G3Fc 서열 (서열 식별 번호: 25)은 전장 힌지 영역을 포함한다. 각 경우에서, 점선은 힌지 영역을 나타내며, 직선은 UniProt P01859에 따른 자연 발생적 변이체를 갖는 위치를 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 식별 번호:24 및 25에 대하여 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
G3Fc (예를 들면, Uniprot P01860)에서 자연 발생적 변이체들은 서열 식별 번호: 24에 이용된 넘버링 체계로 전환될 때 E68Q, P76L, E79Q, Y81F, D97N, N100D, T124A, S169N, S169del, F221Y를 포함하며, 본 명세서는 이들 변이중 하나 또는 그 이상을 함유하는 G3Fc 도메인이 포함된 융합 단백질을 제공한다. 또한, 인간 면역글로불린 IgG3 유전자 (IGHG3)는 상이한 힌지 길이에 의해 특징화되는 구조적 다형태를 나타낸다[Uniprot P01859]. 특히, 변이체 WIS는 대부분의 V 영역과 모든 CH1 영역이 부족하다. 힌지 영역에 정상적으로 존재하는 11개에 추가하여 위치 7에 여분의 쇄간 이황화결합이 있다. 변이체 ZUC는 대부분의 V 영역, 모든 CH1 영역, 그리고 일부 힌지가 부족하다. 변이체 OMM은 대립형질 형태 또는 또다른 감마 쇄 하위부류를 나타낼 수 있다. 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 이들 변이체를 함유하는 G3Fc 도메인이 포함된 추가적인 융합 단백질을 제공한다.
인간 IgG4 (G4Fc)의 Fc 부분에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 식별 번호: 26). 점선은 힌지 영역을 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 식별 번호:26에 대하여 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
Fc 도메인 안에 다양하게 조작된 돌연변이는 G1Fc 서열 (서열 식별 번호: 22)에 대하여 나타내며, G2Fc, G3Fc, 및 G4Fc에서 유사 돌연변이는 도 4에서 G1Fc와의 배열로부터 유도될 수 있다. 대등하지 않은 힌지 길이로 인해, 아이소타입 정렬 (도 4)에 근거된 유사한 Fc 위치는 서열 식별 번호: 22, 23, 24, 및 26에서 상이한 아미노산 번호를 소유한다. 힌지, CH2, 및 CH3 영역 (가령, 서열 식별 번호: 22, 23, 24, 및 26)으로 구성된 면역글로불린 서열에서 주어진 아미노산 위치는 Uniprot 데이타베이스와 같이, IgG1 중쇄 불변 도메인 (CH1, 힌지, CH2, 및 CH3 영역으로 구성됨) 전체를 포괄할 때, 동일한 위치가 아닌 상이한 번호로 확인될 것이라는 것을 또한 인지할 수 있을 것이다. 예를 들면, 인간 G1Fc 서열 (서열 식별 번호: 22), 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 (Uniprot P01857), 및 인간 IgG1 중쇄에서 선택된 CH3 위치 간의 대응성은 다음과 같다.
단일 세포계로부터 비대칭 면역글로불린-기반의 단백질의 대량 생산에서 발생되는 문제는 "쇄 연합 문제(chain association issue)"로 알려져 있다. 이중특이적 항체의 생산에서 주로 직면하는 바와 같이, 쇄 연합 문제는 상이한 중쇄 및/또는 경쇄가 단일 세포주에서 생성될 때 본질적으로 얻어지는 다수의 조합 중에서 원하는 다중 결합 단백질을 효율적으로 생산하려는 도전에 관한 것이다 [예를 들면, Klein et al (2012) mAbs 4:653-663 참고]. 이 문제는 두 개의 다른 중쇄와 두 개의 다른 경쇄가 동일한 세포에서 생산될 때 가장 심각한데, 이 경우 일반적으로 단 하나만을 원할 때, 총 16 개의 가능한 쇄 조합이 있다 (비록 일부는 동일하지만). 그럼에도 불구하고, 동일한 원리는 오직 2 개의 상이한 (비-대칭) 중쇄를 혼입시키는 원하는 다중쇄 융합 단백질의 수율 감소를 설명한다.
허용가능한 수율로 바람직한 비대칭 융합 단백질을 생산하기 위해 단일 세포주에서 Fc-함유 융합 폴리펩티드 쇄의 바람직한 페어링을 증가시키는 다양한 방법이 당업계에 공지되어있다[예를 들면, Klein et al (2012) mAbs 4:653-663 참고]. Fc-함유 쇄들의 바람직한 페어링을 얻는 방법은 하전-기반의 페어링 (정전기적 스티어링), "노브-인투-홀(knobs-into-holes)" 입체적 페어링, SEEDbody 페어링, 및 류신 지퍼-기반의 페어링을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.[예를 들면, Ridgway et al (1996) Protein Eng 9:617-621; Merchant et al (1998) Nat Biotech 16:677-681; Davis et al (2010) Protein Eng Des Sel 23:195-202; Gunasekaran et al (2010); 285:19637-19646; Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339; US5932448; WO 1993/011162; WO 2009/089004, 및 WO 2011/034605 참고.]
예를 들면, 이를 테면 Arathoon et al., U.S.7,183,076 및 Carter et al., U.S.5,731,168에서 설명된 바와 같이, 구멍에 맞는 돌기(protuberance-into-cavity) (노브-인투-홀) 상보적 영역을 작제함으로써 특정 폴리펩티드간의 상호작용이 촉진될 수 있다. "돌기(Protuberances)"는 제 1 폴리펩티드 (가령, 제 1 상호작용 짝)의 경계면의 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄 (가령, 티로신 또는 트립토판)로 대체함으로써 구축된다. 상기 돌기에 동일한 또는 더 작은 크기의 상보적 "구멍(cavities)"은 제 2 폴리펩티드 (가령, 제 2 상호작용 짝)의 경계면에서 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄 (가령, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 임의선택적으로 만든다. 제 1 또는 제 2 폴리펩티드의 경계면에 적절하게 위치되고, 적합한 크기의 돌기 또는 구멍이 존재하는 경우, 인접한 경계면에서 각각 대응하는 구멍 또는 돌기만 제조하면 된다.
중성 pH (7.0)에서, 아스파르트산 및 글루탐산은 음으로 하전되며, 리신, 아르기닌 및 히스티딘은 양으로 하전된다. 이들 하전된 잔기를 이용하여 이형이량체 형성을 촉진시키고, 동시에 동형이량체 형성을 방해할 수 있다. 인력 상호작용은 반대 하전 간에 일어나며, 척력 상호작용은 유사한 하전 사이에 발생된다. 부분적으로, 본 명세서에서 공개된 단백질 복합체들은 하전된 경계면 잔기의 부위 지향된 돌연변이유발을 실행함으로써,이형다량체 형성 (가령, 이형이량체 형성)을 촉진시키는 인력 상호작용, 그리고 임의선택적으로 동형이량체 형성 (가령, 동형이량체 형성)을 방해하는 척력 상호작용을 이용한다.
예를 들면, IgG1 CH3 도메인 경계면은 도메인-도메인 상호작용: Asp356-Lys439', Glu357-Lys370', Lys392-Asp399', 및 Asp399-Lys409' [제 2 쇄에서 잔기 넘버링은 (')로 표시됨]에 관여하는 4가지 독특한 하전 잔기 짝을 포함한다. IgG1 CH3 영역의 잔기를 지정하기 위해 여기에 사용된 넘버링 체계는 Kabat의 EU 번호 체계에 부합함을 유의해야 한다. CH3-CH3 도메인 상호 작용에 존재하는 2-배 대칭 때문에, 각각의 독특한 상호 작용은 구조에서 두 번 나타난다 (가령, Asp-399-Lys409' 및 Lys409-Asp399'). 야생형 서열에서, K409-D399'는 이형이량체와 동형이량체 형성을 모두 선호한다. 제 1 쇄에서 전하 극성을 전환시키는 단일 돌연변이 (가령, K409E; 양전하를 음전하로)는 제 1 쇄 동형이량체 형성에 바람직하지 않은 상호 작용을 유도한다. 부적절한 상호작용은 동일한 전하 사이에 발생하는 척력 작용으로 인해 발생한다(음성-음성; K409E-D399'과 D399-K409E'). 제 2 쇄에서 전하 극성을 전환시키는 단일 돌연변이 (D399K'; 음전하를 양전하로)는 제 2 쇄 동형이량체 형성에 바람직하지 않은 상호 작용을 유도한다(K409'-D399K'와 D399K-K409'). 그러나, 동시에 이들 두 돌연변이 (K409E와 D399K')는 이형이량체 형성에 대한 우호적인 상호작용 (K409E-D399K'와 D399-K409')을 유도한다.
이형이량체 형성 및 동형이량체 방지에 있어서 정전기 스티어링 효과(steering effect)는 추가적인 전하 잔기의 돌연변이에 의해 추가로 강화될 수 있는데, 이들은 제 2 쇄에서 예를 들면, Arg355 및 Lys360을 포함하는 반대 하전된 잔기와 페어링되거나, 또는 되지 않을 수 있다. 하기 표는 본원에서 기술된 이종다량체의 이종다량체 형성을 향상시키기 위해 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 가능한 전하 변화 돌연변이를 열거한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 출원의 융합 단백질에서 CH3-CH3 경계면을 만드는 하나 또는 그 이상의 잔기는 하전된 아미노산으로 대체되고, 따라서 상호작용은 정전기적으로 비선호적으로 된다. 예를 들면, 경계면에 있는 양-하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘)은 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루탐산)으로 대체된다. 전술한 치환에 대한 대안으로, 또는 이와 복합되어, 경계면에서 음으로-하전된 아미노산은 양으로-하전된 아미노산으로 대체된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 아미노산은 원하는 하전 특징을 갖는 비-자연 발생적 아미노산으로 대체된다. 음으로 하전된 잔기 (Asp 또는 Glu)를 His으로 돌연변이시키면, 측쇄 부피가 증가되고, 이는 입체적 문제를 야기할 수 있음을 주지해야 한다. 더욱이, His 양성자 공여자-형태 및 수용자-형태는 국소 환경에 따라 달라진다. 이러한 문제는 설계 전략과 함께 고려되어야 한다. 경계면 잔기는 인간 및 마우스 IgG 하위부류에서 매우 보존되어 있기 때문에, 본 명세서에서 공개된 정전기 스티어링 효과는 인간 및 마우스 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4에 적용될 수 있다. 이 전략은 또한 CH3 도메인 경계면에서 하전되지 않은 잔기를 하전된 잔기로 변형시키는 것으로 확장될 수 있다.
부분적으로, 본 명세서는 전하 페어링 (정전기적 스티어링)에 근거하여 상보적으로 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다. 정전기적 상보성을 갖는 한 쌍의 Fc 서열 중 하나는 선택적 링커가 있거나, 또는 링커 없이, 해당 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 임의선택적으로 융합되어, ActRIIA 또는 ActRIIB 융합 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 이 단일 쇄는 선택한 세포에서 첫 번째 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 공동-발현되어 원하는 다중 쇄 구조(가령, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체)의 생성을 도울 수 있다. 정전기적 스티어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 식별 번호: 14 [인간 G1Fc(E134K/D177K)] 및 서열 식별 번호: 15 [인간 G1Fc(K170D/K187D)]는 상보적 Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 이 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 14 또는 서열 식별 번호: 15에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 4 참고)으로 상보적 Fc 짝이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 짝(서열 식별 번호: 14 및 15)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 입체적 상보성에 근거하여 상보적으로 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다. 부분적으로, 본 명세서는 입체적 상보성의 예로써 노브-인투-홀 페어링(knobs-into-holes pairing)을 제공한다. 입체(steric) 상보성을 갖는 한 쌍의 Fc 서열 중에서 하나는 임의선택적 링커가 있거나 또는 없이, 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 임의적으로 융합되어 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합 구조체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합 구조체를 산출할 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중-쇄 구조체 (가령, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체) 생성을 선호하는 제1 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동-발현될 수 있다. 노브-인투-홀 페어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 식별 번호: 16 [인간 G1Fc(T144Y)] 및 서열 식별 번호: 17 [인간 G1Fc(Y185T)]은 상보적 Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 이 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 16 또는 서열 식별 번호: 17에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 4 참고)으로 상보적 Fc 짝이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 짝(서열 식별 번호: 16 및 17)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
조작된 이황화결합과 복합된 노브-인투-홀 페어링에 근거한 Fc 상보성의 예는 서열 식별 번호: 18 [hG1Fc(S132C/T144W)] 및 서열 식별 번호: 19 [hG1Fc(Y127C/T144S/L146A/Y185V)]에서 공개된다. 상기 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 18 또는 서열 식별 번호: 19에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 4 참고)으로 상보적 Fc 짝이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 짝(서열 식별 번호: 18 및 19)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 인간 IgG의 β-가닥 세그먼트와 IgA CH3 도메인이 서로 맞물리게 되도록 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다. 이러한 방법들은 가닥-교환 조작된(engineered) 도메인 (SEED) CH3 이형이량체를 이용하여 SEEDbody 융합 단백질이 형성되는 것을 포함한다 [예를 들면, Davis et al (2010) Protein Eng Design Sel 23:195-202 참고]. SEEDbody 상보성을 갖는 한 쌍의 Fc 서열 중에서 하나는 임의선택적 링커가 있거나 또는 없이, 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 임의적으로 융합되어 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합 구조체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 구조체를 산출할 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중-쇄 구조체 생성을 선호하는 제1 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동-발현될 수 있다. SEEDbody (Sb) 대합에 근거된 이러한 실례에서, 서열 식별 번호: 20 [hG1Fc(SbAG)] 및 서열 식별 번호: 21 [hG1Fc(SbGA)]은 상보성 IgG Fc 서열의 실례인데, 여기서 IgA Fc로부터 가공된 아미노산 치환은 이중 밑줄 표시되고, 그리고 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 20 또는 서열 식별 번호: 21에 융합될 수 있지만 둘 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG1Fc, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 3)으로 Fc 단량체가 생성되며, 이는 하기 상보적 IgG-IgA 쌍(서열 식별 번호: 20 및 21)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 Fc CH3 도메인의 C-말단에 부착된 절단가능한 류신 지퍼 도메인를 갖는 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄의 바람직한 페어링을 제공한다. 류신 지퍼의 부착은 이형이량체성 항체 중쇄들의 선호적 어셈블리를 제공하는데 충분하다. 가령, Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339 참고. 본원에서 기술된 바와 같이, 류신 지퍼-형성 가닥에 부착된 한 쌍의 Fc 서열 중에서 하나는 임의선택적 링커가 있거나 또는 없이, 구조체의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드에 임의적으로 융합되어 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합 구조체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합 구조체를 산출할 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중-쇄 구조체 생성을 선호하는 상보적 류신 지퍼-형성 가닥에 부착된 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동-발현될 수 있다. 정제 후 박테리아 엔도단백질분해효소 Lys-C로 이 구조체의 단백질분해성 절단으로 류신 지퍼 도메인이 방출되며, 고유의 Fc의 구조와 동일한 Fc 구조체가 생성된다. 류신 지퍼 페어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 식별 번호: 27 [hG1Fc-Ap1 (산성)] 및 서열 식별 번호: 28 [hG1Fc-Bp1 (염기성)]는 상보적 IgG Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 상보적 류신 지퍼 서열은 밑줄로 표시되며, 이 구조체의 ALK4 또는 ActRIIB 폴리펩티드 는 서열 식별 번호: 27 또는 서열 식별 번호: 28에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG1Fc, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc에 임의선택적 링커와 함께 또는 링커없이 부착된 류신 지퍼-형성 서열 (도 4 참고)은 하기 상보적 류신 지퍼-형성 짝(서열 식별 번호: 27 및 28)에 이용될 수 있는 Fc 단량체를 만들 수 있음을 인지할 것이다.
융합 단백질의 상이한 요소 (예를 들어, 면역 글로불린 Fc 융합 단백질)는 원하는 기능성과 일치하는 임의의 방식으로 배열될 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인은 이종성 도메인에 대해 C- 말단에 놓일 수 있거나, 또는 이종 도메인은 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인에 대해 C- 말단에 놓일 수있다. ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인 및 이형성 도메인은 융합 단백질에서 인접할 필요는 없으며, 어느 한 도메인 또는 도메인 사이에서 C 또는 N 말단에 추가 도메인 또는 아미노산 서열이 포함될 수 있다. 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합 구조체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합 구조체는 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 B 부분은 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인에 상응한다. 상기 A 부분과 C 부분은 독립적으로 0, 1, 또는 하나 이상의 아미노산일 수 있고, A와 C 부분 모두 존재하는 경우 B에 대하여 이종성(heterologous)이다. 상기 A 및/또는 C 부분은 B 부분에 링커 서열을 경유하여 부착될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, ActRIIA 또는 ActRIIB 융합 단백질은 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있는데, 이때 A는 리더(신호) 서열이며, B는 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인으로 구성되며, 그리고 C는 생체내 안정성, 생체내 반감기, 취입/투여, 조직 국소화 또는 분포, 단백질 복합체 형성, 및/또는 정제중 하나 또는 그 이상을 강화하는 폴리펩티드 부분이다. 특정 구체예들에서, ActRIIA 또는 ActRIIB 융합 폴리펩티드는 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있는데, 이때 A는 TPA 리더 서열이며, B는 ActRIIA 또는 ActRIIB 융합 폴리펩티드 도메인으로 구성되며, 그리고 C는 면역글로불린 Fc 도메인이다. 바람직한 융합 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90, 또는 91중 임의의 하나에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 원하는 성질을 부여하기 위하여 하나 또는 그 이상의 이종성 부분 (도메인)을 더 포함한다. 예를 들면, 일부 융합 도메인은 친화력 크로마토그래피에 의한 융합 단백질의 단리에 특히 유용하다. 이러한 융합 도메인의 잘 알려진 예로는 폴리히스티딘, Glu-Glu, 글루타티온 S-전달효소 (GST), 티오레독신, 단백질 A, 단백질 G,면역글로불린 중쇄 불변 영역 (Fc), 말토즈 결합 단백질 (MBP), 또는 인간 혈청 알부민을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 친화력 정제를 목적으로, 친화력 크로마토그래피를 위한 관련 매트릭스, 이를 테면 글루타티온-, 아밀라제-, 및 니켈- 또는 코발트- 콘쥬게이트된 수지가 이용된다. 이러한 매트릭스중 많은 것들이 '키트' 형태로 이용가능한데, 이를 테면 Pharmacia GST 정제 시스템 및 (HIS6) 융합 짝과 함께 유용한 QIAexpressTM 시스템(Qiagen)이 있다. 또다른 예로써, 리간드 트랩 폴리펩티드들의 탐지를 용이하게 하기 위하여 융합 도메인이 선택될 수 있다. 이러한 탐지 도메인의 예로는 다양한 형광 단백질 (가령, GFP) 뿐만 아니라 "에피토프 테그"를 포함하는데, 특이적 항체가 이용가능한 짧은 펩티드 서열이 일반적이다. 특정 단클론 항체에 용이하게 이용되는 잘 공지된 에피토프 테그는 FLAG, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 (HA), 및 c-myc 테그를 포함한다. 일부 경우에서, 융합 도메인은 프로테아제 절단 부위, 이를 테면, 인자(factor) Xa 또는 트롬빈에 대한 절단부위를 가지고, 이에 의해 관련 프로테아제가 이 융합 단백질을 부분적으로 절단하고, 이로 인하여 이로부터 재조합 단백질이 유리된다. 유리된 단백질은 후속 크로마토그래피 분리에 의해 융합 단백질로부터 단리될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 상기 폴리펩티드를 안정시킬 수 있는 하나 또는 그 이상의 변형을 포함한다. 예를 들면, 이러한 변형은 폴리펩티드의 시험관내 반감기를 강화시키고, 폴리펩티드의 순환 반감기를 강화시키고 및/또는 폴리펩티드의 단백질분해를 감소시킨다. 이러한 안정화 변형에는 융합 폴리펩티드 (예를 들면, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 도메인과 안정화 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드를 비롯하여), 당화 부위의 변형 (예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드에 당화 부위 추가 포함), 및 탄수화물 모이어티의 변형 (예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드로부터 탄수화물 모이어티 제거 포함)이 포함되나, 이에 국한되지 않는다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "안정화 도메인(stabilizer domain)"은 융합 단백질인 경우 융합 폴리펩티드 (가령, 면역글로불린 Fc 도메인)만을 지칭하는 것이 아니고, 뿐만 아니라 비단백질성(nonproteinaceous) 변형 이를 테면 탄수화물 모이어티, 또는 비단백질성 모이어티, 이를 테면 폴리에틸렌 글리콜을 또한 포함한다.
바람직한 구체예들에서, 본 명세서의 방법에 따라 이용되는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 단리된 이종다량체다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단리된 단백질 (가령, 이종다량체) 또는 폴리펩티드 (가령, 이종다량체)는 자연 환경의 성분으로부터 단리된 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 이종다량체는 예를 들면, 전기영동 (가령, SDS-PAGE, 등전초점조절 (IEF), 모세관전기이동) 또는 크로마토그래피 (가령, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 측정되었을 때, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 순도로 정제된다. 항체 순도의 측정 방법은 당분야에 공지되어 있다[가령, Flatman et al., (2007) J. Chromatogr. B 848:79-87 참조].
특정 구체예들에서, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 뿐만 아니라 이의 단일-가지 이종다량체는 당업계에 공지된 다양한 기술에 의해 생산될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드는 표준 단백질 화학 기술, 예를 들면, Bodansky, M. Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag, Berlin (1993) 및 Grant G. A. (ed.), Synthetic Peptides: A User's Guide, W. H. Freeman and Company, New York (1992)에서 설명된 것들을 이용하여 합성될 수 있다. 이에 더하여, 자동화된 펩티드 합성장치는 상업적으로 가용하다 (가령, Advanced ChemTech Model 396; Milligen/Biosearch 9600 참고). 대안으로, 본 명세서의 폴리펩티드들과 이의 변이체들을 비롯한 복합체들은 당분야에 공지된 다양한 발현 시스템 [가령, 대장균, 중국 헴스터 난소 (CHO) 세포, COS 세포, 베큘로바이러스]을 이용하여 재조합적으로 만들어질 수 있다. 추가 구체예에서, 본 명세서의 변형된 또는 변형되지 않은 폴리펩티드는 예로서, 프로테아제, 예를 들면, 트립신, 서몰리신, 키모트립신, 펩신, 또는 대합된 염기성 아미노산 전환 효소 (PACE)를 이용함으로써 재조합적으로 생산된 전장 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드의 소화에 의해 생산될 수 있다. 단백질분해가능한 절단 부위는 컴퓨터 분석(시판되는 소프트웨어, 가령, MacVector, Omega, PCGene, Molecular Simulation, Inc.)을 이용하여 식별해낼 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 제 2 폴리펩티드에 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하고, 이때 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIB의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드 ActRIIB를 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 및 6중 임의의 번호의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성되며; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 2의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 3의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 4의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 5의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 6의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 1의 L79에 상응하는 위치에 산성 아미노산을 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 1의 L79에 상응하는 위치에 아스파르트산 (D)을 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 2의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 2의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 3의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 3의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 3의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 5의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 5의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 6의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 6의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 84의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 84의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 84의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 61의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 61의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 61의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 86의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 86의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 86의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 90의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 90의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 91의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 서열 식별 번호: 91의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 제 2 폴리펩티드에 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하고, 이때 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIA의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드 ActRIIA를 포함하지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 9, 10, 및 11중 임의의 번호의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성되며; 또는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 9의 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 10의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 11의 아미노산 서열에 대하여 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 9의 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 9의 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 또는 135중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 10의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 10의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 11의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 11의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 11의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 88의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 88의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 88의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 59의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 59의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 89의 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 서열 식별 번호: 89의 아미노산 서열로 필수적으로 구성된다.
일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 이종다량체는 이형이량체다. 일부 구체예들에서, 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소는 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 14의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 15의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 16의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 17의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 18의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 19의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 20의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 21의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 22의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 23의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 24의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 25의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 26의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 27의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 28의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소는 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인이다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28로부터 선택된 임의의 하나의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 14의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 15의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 16의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 17의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 18의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 19의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 20의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 21의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 22의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 23의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 24의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 25의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 26의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 27의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 28의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90, 및 91중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 46의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 48의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 55의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 57의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 58의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 59의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 60의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 61의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 84의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 86의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 88의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 89의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 90의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 91의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 49, 51, 62, 63, 85, 및 87중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 41의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 51의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 62의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 63의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 85의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 87의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 이종다량체 복합체는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 액티빈 B 및 GDF11에 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 GDF8 및 액티빈 A에 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 액티빈 B 및 GDF11보다는 액티빈 A에 결합한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 GDF8에 결합한다.
3.
링커
본 명세서는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 제공하며, 이들 구체예에서 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드와 상호작용 짝의 제 1 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역)은 링커 수단에 의해 연계될 수 있다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 상기 ActRIIA 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 상기 ActRIIB 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 글리신 및 세린 풍부 링커다. Thr, Asn, Pro 및 Ala와 같은 다른 중성에 가까운 아미노산이 또한 링커 서열에 사용될 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 Gly 및 Ser을 함유하는 아미노산 서열의 다양한 순열치환(permutations)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커의 길이는 10개 이상의 아미노산이다. 추가 구체예들에서, 상기 링커는 최소한 12, 15, 20, 21, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 아미노산을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 40, 35, 30, 25, 22 또는 20 개 미만의 아미노산이다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 10-50, 10-40, 10-30, 10-25, 10-21, 10-15, 10, 15-25, 17-22, 20, 또는 21개의 아미노산 길이를 갖는다. 바람직한 구체예에서, 상기 링커는 아미노산 서열 GlyGlyGlyGlySer (GGGGS) (서열 식별 번호: 29), 또는 (GGGGS)n의 반복을 포함하며, 이때 n ≥ 2이다(서열 식별 번호: 30). 특정 구체예들에서, n ≥ 3, 또는 n = 3-10. 바람직한 구체예들에서, n ≥ 4, 또는 n = 4-10. 일부 구체예들에서, (GGGGS)n 링커에서 n은 4보다 크지 않다 (서열 식별 번호: 29). 일부 구체예들에서, n = 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6, 4-5, 5-8, 5-7, 또는 5-6. 일부 구체예들에서, n = 3, 4, 5, 6, 또는 7. 특정 구체예들에서, n = 4. 일부 구체예들에서, (GGGGS)n 서열 (서열 식별 번호: 29)을 포함하는 링커는 또한 N-말단 트레오닌을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 다음중 임의의 하나이다:
GGG (서열 식별 번호: 31)
GGGG (서열 식별 번호: 32)
GGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 33)
SGGG (서열 식별 번호: 34)
SGGGG (서열 식별 번호: 35)
TGGG (서열 식별 번호: 36)
TGGGG (서열 식별 번호: 37)
TGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 38)
TGGGGSGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 39)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 40)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 41)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 42) 또는
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 43).
일부 구체예들에서, 상기 링커는 TGGGPKSCDK (서열 식별 번호: 44)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 N-말단 트레오닌이 결여된, 서열 식별 번호: 31-44중 임의의 하나이다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 서열 식별 번호: 42 또는 43의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 상기 링커는 서열 식별 번호: 29-44중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
4. ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에서 개시된 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 (이의 단편, 기능적 변이체 및 융합 단백질 포함)를 인코드하는 단리된 및/또는 재조합 핵산을 제공한다. 예를 들면, 서열 식별 번호: 12는 자연 발생적 인간 ActRIIA 전구체 폴리펩티드를 인코드하고, 반면 서열 식별 번호: 13은 ActRIIA의 프로세싱된 세포외 도메인을 인코드한다. 대상 핵산은 단일-가닥이거나 또는 이중- 가닥일 수 있다. 이러한 핵산은 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다. 이들 핵산은 예를 들면, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 단일-가지 이종다량체를 만드는 방법에 이용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단리된 핵산(들)은 자연 환경의 성분으로부터 단리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산에는 핵산 분자를 통상적으로 내포하는 세포에 내포된 핵산 분자가 포함되지만, 상기 핵산 분자는 염색체외에 또는 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
특정 구체예들에서, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산은 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 및 13중 임의의 하나의 변이체인 핵산을 포함하는 것으로 이해된다. 특정 구체예들에서, 호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역)를 인코딩하는 핵산은 서열 식별 번호: 50의 변이체인 핵산을 포함하는 것으로 이해된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 Fc 융합체를 인코딩하는 핵산은 서열 식별 번호: 47 및 56중 임의의 하나의 변이체인 핵산을 포함하는 것으로 이해된다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합체는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체를 포함한다. 일부 구체예들에서, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합는 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 포함한다. 변이체 뉴클레오티드 서열에는 대립형질 변이체를 비롯한 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가, 또는 결손에 의해 상이한 서열이 내포되고, 따라서, 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13, 47, 50, 및 56중 임의의 하나에서 지명된 뉴클레오티드와는 상이한 코딩 서열이 내포될 것이다. 특정 구체예들에서, 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 단리된 또는 재조합 핵산 서열에 의해 인코드된다. 특정 구체예들에서, 본 명세서의 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역)는 서열 식별 번호: 50에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 단리된 또는 재조합 핵산 서열에 의해 인코드된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 융합체는 서열 식별 번호: 56에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 단리된 또는 재조합 핵산 서열에 의해 인코드된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 융합체는 서열 식별 번호: 47에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 단리된 또는 재조합 핵산 서열에 의해 인코드된다. 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13, 47, 50, 및 56에 대해 상보적인 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열 또한 본 명세서 범위 안에 있음을 당업자는 인지할 것이다. 추가 구체예들에서, 본 명세서의 핵산 서열은 단리되거나, 재조합되거나, 및/또는 이종성 뉴클레오티드 서열에 융합되거나 또는 DNA 라이브러리 안에 있을 수 있다.
다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 핵산에는 또한, 고도로 엄격한 조건 하에, 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13, 47, 50, 및 56에서 지정된 뉴클레오티드 서열, 서열 식별 번호: 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13, 47, 50, 및 56의 보체 서열, 또는 이들의 단편에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열이 내포된다. 당업자는 DNA 혼성화를 촉진시키는 적절한 엄격 조건은 가변적일 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 예를 들면, 6.0 x 염화나트륨/구연산나트륨 (SSC)에서 약 45℃에서 혼성화, 이어서 50℃에서 2.0 x SSC의 세척으로 실행할 수 있다. 예를 들면, 세척 단계에서 염 농도는 50℃에서 약 2.0 x SSC의 낮은 엄격성으로부터 50℃에서 0.2 x SSC의 높은 엄격성에서 선택될 수 있다. 또한, 세척 단계의 온도는 약 22℃의 낮은 엄격성 조건으로부터 약 65℃의 높은 엄격성 조건으로 증가될 수 있다. 온도 및 염이 변화될 수 있거나, 또는 다른 변수가 변화되는 동안 온도 또는 염 농도는 일정하게 유지될 수 있다. 한 구체예에서, 본 명세서는 실온에서 6 x SSC의 낮은 엄격성 조건하에 혼성화되고, 이어서 실온에서 2 x SSC에서 세척된 핵산을 제공한다.
유전자 코드에서 축중성으로 인해 서열 식별 번호: 7, 8, 12, 13, 47, 50, 및 56에서 제시된 바와 같은 핵산과 상이한 단리된 핵산 역시 본 발명의 범위 내에 있다. 예를 들면, 다수의 아미노산은 하나 이상의 삼중항으로 표시된다. 동일한 아미노산을 특정하는 코돈, 또는 동의 코돈 (예를 들면, CAU와 CAC는 히스티딘의 경우 동의코돈임)으로 이 단백질의 아미노산 서열에 영향을 주지 않은 "침묵(silent)" 돌연변이가 된다. 그러나, 포유류 세포 중에 본 단백질의 아미노산 서열의 변화를 유도하는 DNA 서열 다형성이 존재할 것으로 기대된다. 당업자는 특정 단백질을 코딩하는 핵산의 하나 이상의 뉴클레오티드 (뉴클레오티드의 최대 약 3 내지 5%)에서의 이러한 변이가 자연 대립 유전자 변이로 인해 주어진 종의 개체들 사이에 존재할 수 있음을 인식할 것이다. 임의의 그리고 모든 이러한 뉴클레오티드 변이 및 결과의 아미노산 다형성은 본 발명의 범위 안에 있다.
일정한 구체예에서, 본 명세서의 재조합 핵산은 발현 구조체 내에서 하나 또는 그 이상의 조절 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 조절 뉴클레오티드 서열은 일반적으로, 발현에 이용된 숙주 세포에 적합할 것이다. 다양한 숙주 세포에 있어서 다수 유형의 적절한 발현 벡터 및 적합한 조절 서열이 당분야에 공지되어 있다. 전형적으로, 전술한 하나 또는 그 이상의 조절 뉴클레오티드 서열은 프로모터 서열, 리더 또는 신호 서열, 리보좀 결합 부위, 전사 개시 및 종료 서열, 해독 개시 및 종료 서열, 및 인핸서 또는 활성자 서열을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 당분야에 공지된 구성적 프로모터 또는 유도성 프로모터가 본 명세서에서 고려된다. 상기 프로모터는 자연 발생적 프로모터이거나, 또는 하나 이상의 프로모터 요소들이 복합된 하이브리드 프로모터일 수 있다. 발현 구조체는 세포 안 에피좀 상에, 이를 테면 플라스미드로 존재하거나, 또는 발현 구조체는 염색체 안에 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 발현 벡터는 선택가능한 표지 유전자를 함유하고, 이로 인하여 형질전환된 숙주 세포의 선별이 가능하다. 선택가능한 표지 유전자는 당분야에 공지되어 있으며, 이용되는 숙주 세포에 따라 가변적일 것이다.
본 명세서의 특정 측면들에서, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 적어도 하나의 조절 서열에 작동가능하도록 연계된 대상 핵산이 발현 벡터에 제공된다. 조절 서열은 당분야에 공지되며, 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 발현을 지시한다. 따라서, 용어 "조절 서열"에는 프로모터, 인핸서, 및 기타 발현 조절 요소들이 내포된다. 예시적인 조절 서열은 Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Academic Press, San Diego, CA (1990)에서 설명되고 있다. 가령, 자신에게 작동가능하게 연결될 때 DNA 서열의 발현을 제어하는 임의의 매우 다양한 발현 제어 서열이 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 인코딩하는 DNA 서열을 발현하기 위해 이들 벡터에서 이용될 수 있다. 이러한 유용한 발현 조절 서열에는 예를 들면, SV40의 초기 및 후기 프로머터, tet 프로모터, 아데노바이러스 또는 사이토메갈로바이러스 즉각 초기 프로모터, RSV 프로모터, lac 시스템, trp 시스템, TAC 또는 TRC 시스템, T7 RNA 중합효소에 의해 발현이 지시되는 T7 프로모터, 파아지 람다의 주요 오퍼레이터 및 프로모터 영역, fd 피복 단백질의 조절 영역, 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 글리콜분해 효소의 프로모터, 산 포스파타제의 프로모터, 가령, Pho5, 효모 α-메이팅 인자들의 프로모터, 베큘로바이러스 시스템의 폴리헤드곤 프로모터, 또는 진핵 세포 또는 이의 바이러스의 발현을 제어하는 것으로 알려진 기타 서열, 및 다양한 이의 조합들이 내포된다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택 및/또는 발현되기를 원하는 단백질의 유형과 같은 인자에 좌우될 수 있음을 알아야 한다. 더욱이, 벡터의 복사체 수, 복사체 수를 조절하는 능력, 그리고 이 벡터에 의해 인코드되는 임의의 다른 단백질, 가령, 항생제 표지 등의 발현이 또한 고려된다.
본 명세서의 재조합 핵산은 원핵 또는 진핵 세포 (효모, 조류, 곤충 또는 포유류), 또는 이둘 모두에서 발현하는데 적합한 벡터에 클론된 유전자 또는 이의 일부분을 결찰시킴으로써 만들어질 수 있다. 재조합 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 생산을 위한 발현 비히클에는 플라스미드 및 기타 벡터들이 내포된다. 예를 들면, 적합한 벡터는 다음의 유형의 플라스미드를 포함한다: 원핵 세포, 이를 테면 대장균에서 발현을 위한 pBR322-유도된 플라스미드, pEMBL-유도된 플라스미드, pEX-유도된 플라스미드, pBTac-유도된 플라스미드 및 pUC-유도된 플라스미드.
일부 포유류 발현 벡터는 박테리아에서 벡터의 증식을 실행하는 원핵(prokaryotic) 서열과 진핵 세포에서 발현된 진핵(eukaryotic) 전사 단위를 모두 포함한다. pcDNAI/amp, pcDNAI/neo, pRc/CMV, pSV2gpt, pSV2neo, pSV2-dhfr, pTk2, pRSVneo, pMSG, pSVT7, pko-neo 및 pHyg 유도된 벡터는 진핵 세포의 형질감염에 적합한 포유류 발현 벡터의 예들이다. 이들 벡터중 일부는 박테리아 플라스미드, 이를 테면 pBR322의 서열로 변형되어, 진핵 세포와 원핵 세포 모두에서 복제 및 약물 저항성 선별이 가능하다. 대안으로, 바이러스, 이를 테면 소의 유두종 바이러스 (BPV-1), 또는 엡스타인-바 바이러스 (pHEBo, pREP-유도된 그리고 p205)의 유도체들이 진핵 세포에서 단백질의 일시적 발현에 이용될 수 있다. 다른 바이러스 (레트로바이러스 포함) 발현 시스템의 예는 하기 유전자 요법 운반 시스템의 설명에서 찾아볼 수 있다. 플라스미드의 준비 및 숙주 유기체의 형질전환에 이용되는 다양한 방법들이 당분야에 공지되어 있다. 원핵 세포와 진핵 세포 모두에 적합한 다른 발현 시스템, 뿐만 아니라 전반적인 재조합 과정은 Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)을 참고한다. 일부 경우들에 있어서, 베큘로바이러스 발현 시스템의 사용에 의해 재조합 폴리펩티드를 발현시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 베큘로바이러스 발현 시스템의 예로는 pVL-유도된 벡터 (이를 테면 pVL1392, pVL1393 및 pVL941), pAcUW-유도된 벡터 (이를 테면 pAcUW1), 및 pBlueBac-유도된 벡터 (이를 테면 ß-gal 함유 pBlueBac II)들이 내포된다.
바람직한 구체예에서, 벡터, 예를 들면, Pcmv-스크립트 벡터 (Stratagene, La Jolla, Calif.), pcDNA4 벡터 (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) 및 pCI-neo 벡터 (Promega, Madison, Wisc.)는 CHO 세포에서 상기 대상 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 생산하도록 설계될 것이다. 명백한 바와 같이, 주제 유전자 구조체는 예로서, 정제를 위한 융합 단백질 또는 변이체 단백질을 비롯한 단백질을 생산하기 위해, 배양액에서 증식된 세포에서 대상 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 발현을 유발하는데 이용될 수 있다.
본 명세서는 상기 대상 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체중 하나 또는 그 이상에 대한 코딩 서열이 내포된 재조합 유전자로 형질감염된 숙주 세포에 또한 관계한다. 상기 숙주 세포는 임의의 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 예를 들면, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 , 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 박테리아 세포, 이를 테면 대장균, 곤충 세포 (가령, 베큘로바이러스 발현 시스템을 이용), 효모, 또는 포유류 세포 [가령, 중국 헴스터 난소 (CHO) 세포계]에서 발현될 수 있다. 당업자들에게는 다른 적합한 숙주 세포들이 또한 알려져 있다.
따라서, 본 명세서는 상기 대상 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 만드는 방법에 추가 관계한다. 예를 들면, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 인코딩하는 발현 벡터로 형질 감염된 숙주 세포를 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 발현이 허용되는 적절한 조건 하에서 배양시킬 수 있다. 상기 폴리펩티드(들)는 분비되고, 이 폴리펩티드(들)를 함유하는 세포와 배지 혼합물로부터 단리될 수 있다. 대안으로, 상기 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 수거되고, 용해된 세포에서 얻은 세포질 또는 막 분획에서 단리될 수 있다. 세포 배양물은 숙주 세포, 배지 및 다른 부산물을 포함한다. 세포 배양에 적합한 배지는 당분야에 공지되어 있다. 해당 폴리펩티드들은 이온-교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 한외여과, 전기영동, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 특정 에피토프에 특이적인 항체를 이용한 면역친화력 정제, 그리고 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체에 융합된 도메인에 결합하는 물질을 이용한 친화력 정제 (가령, 단백질 A 컬럼을 이용하여 본원에 기술된 임의의 폴리펩티드를 정제시킬 수 있다)를 포함하는 단백질을 정제하는데 공지된 기술을 이용하여 세포 배양 배지, 숙주 세포, 또는 이 둘 모두로부터 단리될 수 있다. 일부 구체예들에서, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 정제에 용이한 도메인을 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 예를 들면, 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제된다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다. 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지, ActRIIB 이종다량체는 크기 압출 크로마토그래피에 의해 측정하였을 때, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98% 또는 >99%의 순도이고, SDS PAGE에 의해 측정하였을 때 >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98% 또는 >99%의 순도를 가질 수 있다. 목표 수준의 순도는 포유류 시스템, 특히 비-인간 영장류, 설치류(마우스), 및 인간에 바람직한 결과를 얻는데 충분한 정도이어야 한다.
다른 구체예에서, 재조합 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 상호작용 짝의 제 1 및/또는 제 2 구성요소 (가령, IgG 중쇄의 불변 영역), 및/또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 원하는 부분의 N 말단에서 정제 리더 서열, 예를 들면, 폴리-(His)/엔테로키나아제 개열 부위 서열을 코딩하는 융합 유전자는 Ni2+ 금속 수지를 이용한 친화성 크로마토그래피에 의한 발현된 구조체의 정제를 허용할 수 있다. 이후, 정제 리더 서열은 정제된 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질 복합체를 제공하기 위해, 엔테로키나아제로 처리에 의해 차후 제거될 수 있다. 가령, Hochuli et al. (1987) J. Chromatography 411:177; 그리고 Janknecht et al. (1991) PNAS USA 88:8972 참고.
융합 유전자를 만드는 기술은 공지되어 있다. 기본적으로, 상이한 폴리펩티드 서열을 인코드하는 다양한 DNA 단편의 결합은 결찰을 위한 블런트-단부 또는 스태거(stagger)-단부를 이용, 적절한 말단을 제공하기 위한 제한효소 절단, 바람직하지 못한 결합 및 효소적 결찰을 피하기 위하여 적절한 알칼리 포스포타제 처리와 같은 코헤시브 단부(cohesive ends)의 메우기를 이용하는 통상의 기술에 따라 실행된다. 또다른 구체예에서, 융합 유전자는 자동화된 DNA 합성기가 포함된 통상적인 기술에 의해 합성될 수 있다. 대안으로, 유전자 단편들의 PCR 증폭은 2개의 연속 유전자 단편 간에 상보적 오버헹(overhangs)을 만드는 엥커 프라이머를 이용하여 실행되고, 후속적으로 어닐링시켜 키메라 유전자 서열을 만들 수 있다. 가령, Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al., John Wiley & Sons: 1992참고.
5.
스크리닝 분석
특정 측면들에서, 본 명세서는 ActRIIA 또는 ActRIIB의 항진제 또는 길항제인 화합물(물질)을 동정하는데 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이용하는 것에 관계한다. 이번 스크리닝을 통해 확인된 화합물은 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)을 치료하는 이들의 능력에 대해 평가하기 위해 테스트될 수 있다. 이들 화합물은 예를 들면, 동물 모델에서 테스트될 수 있다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 진행 속도 및/또는 중증도를 치료, 예방 또는 감소에, 구체적으로, 신장-연합된 합병증의 하나 또는 그 이상의 진행 속도 및/또는 중증도를 치료, 예방 또는 감소에 이용될 수 있는 화합물(작용제)를 식별해내는데 상기 대상 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 사용에 관계한다.
하나 또는 그 이상의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드의 신호전달 (가령, Smad 신호전달)을 표적으로 함으로써, 신장 질환 또는 병태용 치료요법적 작용제을 스크리닝하는 다수의 접근법이 있다. 특정 구체예들에 있어서, 선택된 세포 계통에서 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드-매개된 효과를 교란시키는 물질을 동정하기 위해 화합물의 고효율 스크리닝이 수행될 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 분석은 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 또는 BMP10)가 이의 결합 파트너, 이를 테면, ActRIIA 또는 ActRIIB에 결합하는 것을 특이적으로 억제 또는 감소시키는 화합물을 스크리닝 및 동정하기 위하여 실행된다. 대안으로, 상기 분석은 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드가 이의 결합 파트너, 이를 테면, ActRIIA 또는 ActRIIB에 대한 결합을 향상시키는 화합물을 동정하는데 사용될 수 있다. 추가 구체예에서, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드와 상호 작용하는 능력에 의해 이 화합물이 동정될 수 있다.
다양한 분석 형태가 충분할 것이며, 본 명세서의 내용에서, 본 명세서에서 명시적으로 설명되지 않았던 분석 또한 당업자에 의해 인지될 수 있다. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 본 발명의 테스트 화합물 (작용제들)은 임의의 복합 화학적 방법에 의해 만들어질 수 있다. 대안으로, 대상 화합물은 생체내 또는 시험관내에서 합성된 자연 발생 생체 분자일 수 있다. 조직 성장의 조절자로서 작용하는 능력에 대하여 테스트되는 화합물 (작용제)은 예를 들어, 박테리아, 효모, 식물 또는 다른 유기체 (가령, 천연 생성물)에 의해 생성될 수 있고, 화학적으로 만들어질 수 있거나 (가령, 펩티도모방체를 포함하는 소분자), 또는 재조합 적으로 생산 될 수 있다. 본 발명에 의해 고려되는 테스트 화합물은 비-펩티딜 유기 분자, 펩티드, 폴리펩티드, 펩티드 모방체, 당, 호르몬 및 핵산 분자를 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 테스트 물질은 분자량이 약 2,000 달톤 미만인 작은 유기 분자이다.
본 명세서의 테스트 화합물은 단일의 별개 엔터티로 제공되거나, 또는 조합 화학에 의해 만들어진, 더 큰 복합체 라이브러리로 제공될 수 있다. 이들 라이브러리는 예를 들어, 알코올, 알킬 할로겐화물, 아민, 아미드, 에스테르, 알데히드, 에테르 및 다른 부류의 유기 화합물을 포함 할 수 있다. 테스트 화합물을 테스트 시스템에 특히 초기 스크리닝 단계에 제공하는 것은 단리된 형태 또는 화합물의 혼합물의 형태가 될 수 있다. 임의선택적으로, 화합물은 임의로 다른 화합물로 유도체화될 수 있고, 이 화합물의 단리를 용이하게 하는 유도체화기를 가질 수 있다. 유도체화기의 비-제한적인 예는 바이오틴, 플루오레세인, 디옥시게닌, 녹색 형광 단백질, 동위 원소, 폴리히스티딘, 자성 비드, 글루타티온 S-전이효소(GST), 광활성 가교제 또는 이들의 임의 조합물을 포함한다.
화합물 및 천연 추출물의 라이브러리를 테스트하는 많은 약물-스크리닝 프로그램에서, 주어진 시간 동안 조사되는 화합물의 수를 최대화하기 위해서는 고-처리량 분석이 바람직하다. 정제되거나 반-정제된 단백질로 유도될 수 있는 것과 같이, 세포가 없는 시스템에서 수행되는 분석은 신속한 개발을 가능하게 하고, 시험 화합물에 의해 중재되는 분자 표적의 상대적으로 용이한 탐지하기 위해 생성될 수 있다는 점에서 대개 "1 차"스크린으로 선호된다. 더욱이, 테스트 화합물의 세포 독성 또는 생물이용성의 효과는 시험관 시스템에서 일반적으로 무시될 수 있지만, 대신 이 분석은 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 또는 BMP10)와 이의 결합 파트너, 이를 테면, ActRIIA 또는 ActRIIB 간의 결합 친화력의 변경으로 현시될 수 있는, 분자 표적 상에 약물의 효과에 주로 집중한다.
단순히 설명을 하기 위해, 본 발명의 예시적인 스크리닝 분석에서, 목적 화합물은 분석 의도에 적합하다면, ActRIIB 리간드에 통상적으로 결합 할 수 있는, 분리 및 정제된 ActRIIB 폴리펩티드에 접촉시킨다. 상기 화합물 및 ActRIIB 폴리펩티드의 혼합물에 ActRIIB 리간드 (가령, GDF11)가 함유된 조성물이 추가된다. ActRIIB/ActRIIB-리간드 복합체의 탐지 및 정량화는 ActRIIB 폴리펩티드와 이의 결합 단백질 사이에 복합체 형성을 억제(또는 강화)하는데 있어서 이 화합물의 효과를 측정하는 수단을 제공한다. 화합물의 효능은 다양한 농도의 테스트 화합물을 사용하여 얻은 데이터로부터 용량-반응 곡선을 생성함으로써 평가할 수 있다. 더욱이, 대조군 분석은 비교를 위한 기준을 제공하기 위해 수행될 수있다. 예를 들면, 대조군 분석에서, 단리 및 정제된 ActRIIB 리간드가 ActRIIB 폴리펩티드 (가령, 단일-가지 ActRIIB 이종다량체)를 함유하는 조성물에 첨가되고, ActRIIB/ActRIIB 리간드 복합체의 형성은 테스트 화합물의 부재 하에서 정량화된다. 일반적으로, 반응물이 혼합되는 순서는 다양할 수 있고, 동시에 혼합될 수 있음을 이해할 것이다. 더욱이, 정제된 단백질 대신하여 세포 추출물 및 용해물을 사용하여 적절한 무-세포 검정 시스템을 만들 수 있다.
ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드와 이의 결합 단백질 사이에 복합체 형성은 다양한 기술에 의해 탐지될 수 있다. 예를 들면, 복합체 형성의 조절은 예를 들면, 탐지가능하도록 라벨된 단백질 이를 테면 방사능라벨된 (가령, 32P, 35S, 14C 또는 3H), 형광으로 라벨된 (가령, FITC), 또는 효소적으로 라벨된 ActRIIB 폴리펩티드 및/또는 이의 결합 단백질을 이용하거나, 면역분석에 의해, 또는 크로마토그래피 탐지에 의해 정량화될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드와 이의 결합 단백질 간에 상호작용을 직접적으로, 또는 간접적으로 측정함에 있어서, 형광 편광 분석 및 형광 공명 에너지 전달 (FRET) 분석의 이용을 고려한다. 더욱이, 다른 방식의 탐지, 이를 테면 광학 도파관(waveguides) (가령, PCT 공개 WO 96/26432 및 U.S. 특허 번호 5,677,196 참고), 표면 플라스몬 공명 (SPR), 표면 전하 센서, 및 표면력 센서등은 본 명세서의 많은 구체예에 양립가능하다.
더욱이, 본 명세서는 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드와 이의 결합 짝 사이의 상호작용을 파괴 또는 강화시키는 물질들을 동정하기 위한 "2-하이브리드 분석"으로 알려진 상호작용 트랩 분석의 사용을 고려한다. 령, U.S. Pat. No. 5,283,317; Zervos et al. (1993) Cell 72:223-232; Madura et al. (1993) J Biol Chem 268:12046-12054; Bartel et al. (1993) Biotechniques 14:920-924; 그리고 Iwabuchi et al. (1993) Oncogene 8:1693-1696) 참고. 특정 구체예에서, 본 명세서는 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드와 이의 결합 단백질 간의 상호작용을 해리시키는 화합물 (가령, 소분자 또는 펩티드)를 동정하기 위한 역 2-하이브리드 시스템의 사용을 고려한다 [Vidal and Legrain, (1999) Nucleic Acids Res 27:919-29; Vidal and Legrain, (1999) Trends Biotechnol 17:374-81; 및 U.S. 특허 5,525,490; 5,955,280; 그리고 5,965,368 참고].
특정 구체예들에 있어서, 상기 대상 화합물은 본 명세서의 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드와 상호작용하는 능력에 의해 동정된다. 상기 화합물과 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 간의 상호작용은 공유 또는 비-공유적일 수 있다. 예를 들면, 광-가교, 방사능라벨된 리간드 결합, 및 친화력 크로마토그래피가 포함된 시험관내 생화학적 방법을 이용하여 단백질 수준에서 이러한 상호작용이 동정될 수 있다. [Jakoby WB et al. (1974) Methods in Enzymology 46:1 참고]. 특정 경우에서, 상기 화합물은 기전-기반의 분석, 이를 테면 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드에 결합하는 화합물을 탐지하는 분석에서 스크리닝될 수 있다. 이 분석은 고형-상 또는 유체-상 결합 사건을 포함할 수 있다. 대안으로, ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드를 인코드하는 유전자는 리포터 시스템 (가령, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 또는 녹색 형광 단백질)과 함께 세포 안으로 형질감염되고, 라이브러리, 바람직하게는 고처리량 스크리닝 또는 이 라이브러리의 개별 구성요소들에 대하여 스크리닝될 수 있다. 다른 기전-기반의 결합 분석이 이용될 수 있는데, 예를 들면, 자유 에너지의 변화를 탐지하는 결합 분석이 이용될 수 있다. 결합 분석은 웰, 비드 또는 칩에 고정된 표적으로 또는 고정된 항체에 의해 포집된 표적 또는 모세관 전기영동에 의해 해리되는 표적으로 실행될 수 있다. 상기 결합된 화합물은 발색 종점 또는 형광 또는 표면 플라스몬 공명을 이용하여 탐지될 수 있다.
6.
치료요법적 용도
부분적으로, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 치료하는 방법에 관계하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 조합의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 조합은 ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드, 및/또는 ActRIIA 또는 ActRIIB 리간드 (가령, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10)의 비-정상적인 활성과 연관된 질환 또는 병태를 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 본원에서 기술된 바와 같이, 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 추가 활성제 및/또는 보조 요법과 병용하여, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체, 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 조합의 치료요법적 효과량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여함으로써, 해당 개체를 치료하는 방법을 제공한다.
용어 "콩팥"과 " 신장"라는 용어는 본원에서 상호호환적으로 사용된다.
용어 "치료", "치료하는", "완화" 및 이와 유사한 것등은 본원에서 일반적으로 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미하는 것으로 사용되며, 치료되는 임상적 합병증들중 하나 또는 그 이상의 중증도의 개선, 완화 및/또는 감소를 지칭하기 위해 사용될 수도 있다. 상기 효과는 질환, 상태 또는 이의 합병증의 개시 또는 재발을 완전하게 또는 부분적으로 방지하는 점에 있어서 예방적이거나, 및/또는 질환 또는 상태 및/또는 이 질환 또는 상태의 원인이 되는 역 효과의 부분적인 또는 완전한 치료에 있어서 치료요법적일 수 있다. 본원에 사용된 "치료"는 포유동물, 특히 인간의 질병 또는 병태의 임의의 치료를 포괄한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 장애 또는 병태를 "방지하는" 치료는 통계적 시료에서 처리안된 대조 시료와 비교하여 처리된 시료에서 장애 또는 상태의 발생이 감소되거나, 또는 처리안된 대조 시료와 비교하여 장애 또는 병태의 개시를 지연시키는 화합물을 지칭한다.
일반적으로, 본 명세서에서 설명된 질환 또는 상태의 치료 또는 예방은 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 "유효량"을 투여하여 이루어진다. 작용제의 유효량이란 필요한 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 본 발명의 약제의 "치료학적 유효량"은 질환 상태, 개체의 나이, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 약제의 능력에 따라 달라질 수 있다. 물질의 "예방차원의 유효량"이란 원하는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
용어 "환자", "대상체" 또는 "개체"는 본원에서 인간 또는 비-인간 동물 (가령, 포유류)를 지칭하는데 호환적으로 이용된다. 이러한 용어에는 인간, 비-인간 영장류, 실험실 동물, 가축 (소, 돼지, 낙타 등 포함), 반려 동물 (가령, 개, 고양이, 기타 길들인 동물 등) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 렛)를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 환자, 대상체 또는 개체는 인간이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "기준선"이란 비교될 수 있는 최초 측량을 지칭한다. 일부 경우에, 기준선 측량은 대상에게 표준 치료(SOC)만 투여하는 동안 이루어진 측량일 수 있다. 일부 경우에, SOC를 투여받는 대상체 없이 기준선 측정이 이루어질 수 있다. 기준선 측량은 또한 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 및/또는 SOC의 투여 전에 이루어진 측량일 수 있다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)의 치료 또는 예방을 위한 하나 또는 그 이상의 추가 활성제 또는 기타 보조 요법과 병용하여, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 사용을 고려한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "~와 복합하여", "~의 조합" "~와 조합된" 또는 "공동(conjoint)" 투여는 추가 활성제 또는 보조 요법(가령, 제2, 제3, 제 4 등)이 여전히 신체에서 효과적게 투여하는 임의의 형태를 의미한다 (예를 들어, 다수 화합물이 일정 기간 동안 환자에서 동시에 효과적이며, 이들 화합물의 공조상승효과를 포함할 수 있음). 유효성은 혈액, 혈청 또는 혈장에서 측정가능한 약물 농도와 관련이 없을 수도 있다. 예를 들면, 상이한 치료 화합물은 동일한 제형 또는 별도 제형으로, 동시, 순차적 또는 상이한 일정에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 그러한 치료를 받는 대상체는상이한 활성제 또는 치료법의 결합된 효과로부터 이익을 얻을 수 있다. 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 이를 테면, 본원에서 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 다른 추가적인 물질들 또는 보조 요법과 동시에, 이보다 앞서, 또는 후속적으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 활성 작용제 또는 요법은 특정 작용제에 대해 결정된 투여량 및/또는 일정으로 투여될 것이다. 요법에 사용되는 특정 조합은 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체와 추가 활성제 또는 요법 및/또는 원하는 효과의 양립 가능성을 고려할 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 여병을 치료하는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 여병을 예방하는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 진행 속도를 감소시키는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 여병의 진행 속도를 감소시키는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 중증도를 감소시키는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 여병의 중증도를 감소시키는 방법을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태는 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 및 만성 신장 질환으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태는 알포트 증후군이다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태는 국소 분절 사구체경화증 (FSGS)이다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태는 다낭성 신장 질환이다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태는 만성 신장 질환이다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 신장 기능의 감소를 겪는다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 신장 기능의 감소를 느리게 만든다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료, 예방하거나, 또는 이의 진행 속도를 감소시키거나 및/또는 이의 중증도를 감소시키는 방법들을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 알포트 증후군이 있는 대상체를 치료하는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 확정적으로 유전적으로 진단된 알포트 증후군이 있는 개체를 치료하는 것에 관한 것이다.
유전성 신염이라고도 알려진 알포트 증후군은 유형 IV 콜라겐의 알파-3, 알파-4, 및 알파-5 쇄를 인코드하는 유전자의 돌연변이로 발생되는, 유전적으로 이질적인 질환이다. 유형 IV 콜라겐 알파 쇄는 일반적으로 신장을 비롯한, 몸 전체의 다양한 기저막에 위치한다. 이들 쇄의 비정상으로 이 부위에 결함이 있는 기저막을 초래할 수 있으며, 이는 차례로 알포트 증후군의 임상적 특징(가령, 진행성 사구체 질환)으로 이어질 수 있다.
알포트 증후군의 전파는 X-연계된, 상염색체 열성 또는 상염색체 우성일 수 있다. 일부 구체예들에서, 대상체는 X-연계된 알포트 증후군을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 X-연계된 알포트 증후군을 가진 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. X-연계된 전파는 영향을 받는 환자의 대부분을 차지하며, X 염색체의 COL4A5 유전자 돌연변이로 인해 발생된다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A5 유전자에 유전적 결함을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 COL4A5 유전자에 하나 또는 그 이상의 유전적 결함을 가지고 있는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 상염색체 열성 변이체는 알포트 증후군 환자의 약 15%를 차지하며, COL4A3 또는 COL4A4 유전자의 유전적 결함으로 인해 발생한다. 일부 구체예들에서, 대상체는 상염색체 열성 알포트 증후군을 가지고 있다. 상염색체 우성 질환은 알포트 증후군 환자의 약 20~30%를 차지하는 것으로 보이며, COL4A3 또는 COL4A4 유전자의 이형 돌연변이로 인해 발생한다. 일부 구체예들에서, 대상체는 상염색체 우성 알포트 증후군을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A3 유전자에 이형접합성 돌연변이를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A4유전자에 이형접합성 돌연변이를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A3 유전자에 유전적 결함을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 COL4A3 유전자에 하나 또는 그 이상의 유전적 결함을 가지고 있는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A4 유전자에 유전적 결함을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 COL4A4 유전자에 하나 또는 그 이상의 유전적 결함을 가지고 있는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 대상체는 COL4A3 유전자 및 COLA4A 유전자에 유전적 결함을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 COL4A3 유전자 및 COLA4A 유전자에 유전적 결함을 가지고 있는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 가족은 3개의 유전자(COL4A3, COL4A4, COL4A5) 중 2개의 돌연변이 전달로 인해 이유전자적(digenic) 유전을 나타낸다. 일부 구체예들에서, 대상체는 3개 유전자 (COL4A3, COL4A4, COL4A5)중 2 개에서 돌연변이를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 COL4A3, COL4A4 및/또는 COL4A5 유전자에 하나 또는 그 이상의 유전적 결함을 가지고 있는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다.
알포트 증후군의 고전적 표현은 X-연계된 질환이 있는 영향을 받은 남성의 임상 증상을 기반으로 한다. 일부 구체예들에서, X-연계된 질환이 있는 대상체는 말기 신장 질환(ESRD)으로 진행되는 사구체 질환을 갖는다. 상염색체 열성 질환 환자의 임상 양상 및 경과는 X-연계된 질환 환자와 유사하다. 상염색체 우성 질환이 있는 환자는 일반적으로 신장 기능의 점진적인 상실을 나타낸다.
초기에, 알포트 증후군의 신증상은 전형적으로 무증상의 지속적인 미세한 혈뇨(가령, 소변에 혈액 존재)이며, 이는 일반적으로 영향을 받은 환자의 유아기에 나타난다. 선별 요검사는 일상적인 소아 1차 진료에서 거의 수행되지 않기 때문에, 환자가 영향을 받는 가족 구성원으로 인해 드러나거나, 또는 다른 문제에 대한 우발적 소견으로 발견되지 않는 한, 미세적 혈뇨가 감지되지 않을 수 있다. 육안적 혈뇨는 초기의 소견일 수 있으며, 종종 상부 호흡기 감염 후에 발생한다. 그러나, 육안적 혈뇨의 재발은 특히 어린 시절에 드문 일이 아니다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 무증상의 지속성 미세적 혈뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 육안적 혈뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 육안적 혈뇨가 있는 대상체의 재발성 경우를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 무증상의, 지속성 미세적 혈뇨, 육안적 혈뇨, 또는 지속성 미세적 혈뇨의 중증도, 발생 및/또는 지속기간을 감소를 필요로 하는 대상체(가령, 알포트 증후군이 있는 대상체)에서 이를 위한 방법에 관한 것이다.
알포트 증후군 환자는 일반적으로 신체의 면역 방어에서 필수적인 역할을 하는 보체 경로의 구성요소인 정상적인 C3 수준을 가지고 있다. C3 감소는 다른 병태들중에서, 급성 사구체신염, 막-증식성 사구체신염, 면역복합체 질환, 활동성 전신 홍반성 루푸스, 패혈성 쇼크, 말기 간 질환 등과 관련될 수 있다. 유아기에 혈청 크레아티닌 및 혈압 측정값도 일반적으로 정상 수준이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 정상 수준의 C3을 갖는 알포트 증후군을 가진 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 기선 시점 측량과 비교하여, C3 수준이 감소된 알포트 증후군을 가진 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 C3 수준을 증가시킬 필요가 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군을 갖는 대상체)에서 이를 증가시키는 방법에 관한 것이다.
알포트 증후군을 갖는 대상체에서 단백뇨, 고혈압, 및 진행성 신장 신부전이 발달될 수 있다. 단백뇨는 소변에 과량의 단백질이 존재하는 것을 포함한다. 알부민은 간에서 생성되는 단백질로 혈액 내 단백질의 약 50~60%를 구성한다. 이 때문에, 일상적인 단백뇨 검사와 비교하여, 소변 내 알부민 농도는 특히, 당뇨병이나 고혈압이 있는 환자의 경우 모든 신장 질환의 가장 민감한 지표 중 하나다. 이 측정을 종종 알부민뇨라고 지칭한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단백뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 고혈압을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 진행성 신장 신부전을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단백뇨, 고혈압, 및 진행성 신장 신부전중 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간의 감소를 요하는 대상체(가령, 알포트 증후군을 갖는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.
알포트 증후군을 갖는 대상체에서 말기-단계 신장 질환 (ESRD)이 발달할 수 있다. ESRD는 다른 많은 신장 질환 및 병태들 중에서, X-연계된 또는 상염색체 열성 알포트 증후군 환자에서 일반적으로 16세 ~ 35세에 발생한다. 일부 가족에서는, 특히 상염색체 우성 알포트 증후군이 있는 가족에서 신부전은 45세 ~ 60세까지 지연되어, 경과가 더 나쁘다. X-연계된 알포트 증후군이 있는 여성은 육안적 혈뇨, 단백뇨 및 미만성 사구체 기저막(GBM) 비후가 반복적으로 나타날 수 있고, 이들은 더 이른 나이에 더 심각한 신장 기능 장애 및 ESRD와 관련있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 ESRD가 있는 알포트 증후군을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 X-연계된 알포트 증후군을 갖는 여성들을 치료하는 방법에 관계한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 더 심각한 신장 기능이상 및 ESRD와 연합된, 육안적 혈뇨, 단백뇨, 및 미만성 사구체 기저막 (GBM) 비후의 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킬 필요가 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군을 갖는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.
알포트 증후군은 분자 유전자 검사나 피부 또는 신장 생검으로 진단 내릴 수 있다. 분자 유전적 차세대 분석은 가족력에 관계없이, 지속적인 혈뇨 및/또는 말기 신장 질환(ESRD)에 대한 가족력이 양성인 환자 및 만성 신장 질환(CKD) 환자를 진단하는 데 선호되는 방법이다. 알포트 증후군은 신장 생검 샘플, 면역염색 또는 COL4A3, COL4A4, 또는 COL4A5에서 하나 또는 그 이상의 돌연변이 확인에 의한 IV형 콜라겐 이상으로부터 사구체 기저막(GBM)의 적층의 특징적인 소견의 존재에 의해 다른 사구체 질환과 구별될 수 있다. FSGS의 징후가 있거나 또는 없고, COL4A3, COL4A4, 또는 COL4A5 돌연변이 돌연변이가 있는 대상체의 얇은 사구체 기저막은 알포트 증후군으로 적절하게 진단된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 지속적 혈뇨 및/또는 말기-단계 신장 질환 (ESRD)에 대해 양성인 가족력을 가지고 있는, 알포트 증후군을 갖는 대상체 및/또는 만성 신장 질환 (CKD)이 있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료, 예방하거나, 또는 이의 진행 속도를 감소시키거나 및/또는 이의 중증도를 감소시키는 방법들을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS)을 갖고 있는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 원발성 FSGS을 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 유전적 FSGS을 가지고 있다.
FSGS는 신장 생검에서 족세포 발의 소실을 특징으로 하는 사구체 반흔 질환이다. FSGS를 앓고 있는 피험자의 소변 샘플을 분석할 때, 일반적으로 다량의 소변 단백질 손실이 관찰되며, 이는 신부전으로 진행될 수 있다. FSGS는 미국의 특발성 신증후군 성인에서 흔한 조직병리학적 병변으로 전체 사례의 약 35%를 차지한다. FSGS는 또한 미국에서 말기 신장 질환(ESRD) 환자에서 확인된 가장 흔한 원발성 사구체 질환이다. ESRD와 관련된 병변으로서 FSGS의 유병률이 증가했다. FSGS는 광학 현미경(LM), 면역형광(IF) 또는 전자 현미경(EM)으로 검사할 때, 신장 생검 표본의 적어도 하나의 사구체(초점)의 부분(분절)에 경화증이 존재하는 것을 특징으로 한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 뇨 단백질 상실의 중증도, 발생 및/또는 기간을 줄일 필요가 있는 대상체(가령, FSGS가 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신부전의 중증도, 발생 및/또는 기간을 줄일 필요가 있는 대상체(가령, FSGS가 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 말기 신장 질환 (ESRD)의 중증도, 발생 및/또는 기간을 줄일 필요가 있는 대상체(가령, FSGS가 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 사구체의 경화증의 중증도, 발생 및/또는 기간을 줄일 필요가 있는 대상체(가령, FSGS가 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.
FSGS는 사구체의 모세혈관을 감싸는 신장의 보우만낭(Bowman's Capsule)에 있는 세포인 족세포(podocyte)에 손상을 초래하는 개별적 또는 집합적 다중 경로의 결과로 발생한다. FSGS와 관련된 5개의 알려진 병인이 있고, 6번째 병인도 이와 연관된 것으로 제안되고 있다. FSGS의 병인은 원발성(가령, 특발성), 이차적(가령, 채택성), 유전, 바이러스 관련, 약물 관련 및 APOL1 위험 대립유전자-연합된 것을 포함한다. 원발성 또는 특발성 FSGS는 면역억제 요법에 대한 반응성 및 신장 이식-후 재발 위험이 있는 혈장 인자와 관련이 있다. 원발성 FSGS에서, 족세포에 대해 독성이 있는 것으로 추정되는 순환 인자는 일반화된 족세포 기능 장애를 유발한다. 원발성 FSGS는 가장 흔히 신장-계통과 함께 나타난다. 이차적(가령, 채택성) FSGS는 체격 증가, 네프론 용량 감소, 또는 특정 질환과 관련된 단일 사구체 과다-여과로 인한 과도한 네프론 작업량과 관련있다. 이차적 FSGS는 일반적으로 네프론 질량의 감소로 인한 적응 현상으로 발생하거나, 또는 약물(가령, 헤로인, 인터페론 및 파미드로네이트)의 직접적인 독성에 의해 약물 유발, 또는 바이러스 감염(가령, HIV)으로 인하여 발생되는 것일 수 있다. 이차적 FSGS는 종종 비-신장성 단백뇨 및/또는 어느 정도의 신부전과 함께 나타난다. 이차적 FSGS는 가장 일반적으로 사구체 비대 또는 과다-여과에 대한 적응 반응으로 발전하는 FSGS를 지칭한다. 40개에 가까운 유전자들중 하나에서 고-침투성 유전적 FSGS (유전적 FSGS), 바이러스-연합된 FSGS, 그리고 약물-연합된 FSGS를 비롯한, 추가 병인들이 FSGS의 동인으로 인식된다. 새로이 뜨오르는 데이터는 여섯 번째 병인의 확인을 뒷받침한다: 사하라 사막 이남 조상을 가진 개체들에서 APOL1 위험 대립유전자-관련된 FSGS. 때때로, 이차 FSGS는 바이러스-관련 FSGS 및/또는 약물-관련 FSGS를 포괄한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 원발성 또는 특발성 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 이차적 또는 채택성 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 유전적 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 바이러스-연합된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 약물-연합된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 APOL1 위험 대립유전자-연합된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
원발성 FSGS는 몇 가지 원형적(prototypical) 특성을 포함한다. 원발성 FSGS는 청소년 및 젊은 성인에서 가장 흔한 형태의 FSGS이며, 일반적으로 신증-범위의 단백뇨(때로는 다량의 단백뇨, 예를 들어, 소변 내 >10 g의 단백질), 감소된 혈장 알부민 수준 및/또는 고지혈증과 관련있다. 일부 구체예들에서, 신증-범위 단백뇨는 단백뇨 >3.5 g 단백질/1일, 및/또는 저-알부민혈증 <3.5 g 알부민/dL 뇨 (<35 g/L), 및/또는 신증 증후군의 기타 현시 (가령, 부종, 고-지질혈증)를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신증-범위 단백뇨, 감소된 혈장 알부민 수준, 또는 고-지질혈증중 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간 감소를 요하는 대상체(가령, 원발성 FSGS를 가지고 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단백뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간의 감소를 요하는 대상체 (가령, 원발성 FSGS를 가지고 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.
이차적 또는 채택성 FSGS를 갖는 대상체는 시간이 지남에 따라, 일반적으로 서서히 증가하는 단백뇨 및 신부전을 보인다. 이차적 FSGS가 있는 대상체의 단백뇨는 종종 비-신증 범위에서 나타낸다 (가령, 신증-범위는 일반적으로 하루에 소변에서 3g 또는 그 이상의 단백질 손실, 및/또는 소변 내 크레아티닌 1g당 단백질 2g이 존재한다). 때로, 이차적 FSGS를 갖는 대상체들의 단백뇨는 정상적인 혈청 알부민 수준을 포함한다. 이차적 FSGS가 있는 대상체는 사구체 여과율(GFR)이 상승할 수 있는데, 이 여과율은 신장을 통한 여과된 유체의 유속 측도이다. 일부 구체예들에서, 이차적 FSGS를 갖고, GFR가 증가된 대상체는 선천성 청색증 심장병, 겸상 적혈구 빈혈, 비만, 안드로겐 남용, 수면무호흡증, 고단백 식이로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 추가적인 및/또는 연합된 병태를 가지고 있을 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 이차적 FSGS를 갖고, 정상적인 GFR을 보유한 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 이차적 FSGS를 갖고, 감소된 GFR을 보유한 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단백뇨 및/또는 신장 신부전의 중증도, 발생 및/또는 기간 감소를 요하는 대상체 (가령, 원발성 FSGS를 가지고 있는 대상체)에서 이를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.
바이러스가 FSGS를 유발하는 것과 관련있다. HIV-1은 FSGS, 특히 붕괴성 사구체병증 변이체와 관련될 수 있다. FSGS를 일으키는 것과 관련된 다른 바이러스에는 사이토메갈로바이러스, 파르보바이러스 B19 및 엡스타인-바 바이러스가 내포되지만, 이에 국한되지 않는다. 열원충(말라리아), 쉬소토조마 만소니(Schistosoma mansoni) 및 사상충증이 내포되지만, 이에 국한되지 않는 기생충은 또한 FSGS와 연관되었다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 HIV-1이 연합된 FSGS가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 HIV-1, 사이토메갈로바이러스, 파르보바이러스 B19, 및 엡스타인-바 바이러스중 하나 또는 그 이상과 연합된, FSGS가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 열원충(말라리아), 쉬소토조마 만소니(Schistosoma mansoni) 및 사상충증이 내포되지만, 이에 국한되지 않는 기생충과 연합된, FSGS가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 HIV, 사이토메갈로바이러스, 파르보바이러스 B19, 엡스타인-바 바이러스, 폐 결핵, 리슈만편모충증, 말라리아가 내포되지만, 이에 국한되지 않는 감염과 연합된, FSGS가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 성인 스틸병, 전신성 홍반성 루푸스 및 혼합 결합 조직 장애를 포함하나, 이에 국한되지 않은 FSGS를 유발하는 것에 연루된 자가면역 장애와 연합된, FSGS가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 혈구포식성 림프조직구증, 다발성 골수종 및 급성 단모구성 백혈병을 포함하나 이에 제한되지 않는 FSGS를 유발하는 악성 종양과 관련된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 혈전성 미세혈관병증, 신장 경색, 죽상색전증 및 친수성 중합체 색전증을 포함하나, 이에 제한되지 않는 FSGS를 유발하는 것에 연루된 급성 사구체 허혈과 관련된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 APOL1 고-위험 대립 유전자, 겸상 적혈구 질환, 미토콘드리아 장애(코엔자임 Q 결핍증), 급성 간대성 근경련성 신부전 증후군 및 갤로웨이-모와트 증후군을 포함하나, 이에 제한되지 않는 FSGS를 유발하는 것에 연루된 유전적 장애와 관련된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 동맥병증/혈전성 미세혈관병증, 급성 거부반응 및 바이러스 감염 (사이토메갈로바이러스, 엡스타인-바 바이러스, BK 폴리오마바이러스)을 포함하나, 이에 국한되지 않은 FSGS를 유발하는 것에 연루된 이식후 사건과 관련된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 특정 약물과 관련된 FSGS로 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, IFN-α, -β, 또는 -γ 요법은 붕괴성 사구체병증의 발병과 관련있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 MCD, FSGS, 특히 비스포스포네이트를 복용 및/또는 복용 중인 붕괴성 FSGS(붕괴성 사구체병증)를 비롯한, 하나 또는 그 이상의 족세포 손상과 관련된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 리튬 요법을 받았던, 또는 현재 받고 있는 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 시롤리무스를 복용했거나, 및/또는 여전히 복용 중인 FSGS 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 독소루비신(아드리암시인) 및 다우노마이신을 비롯한 안트라사이클린 약물을 복용 및/또는 여전히 복용하고 있는 FSGS 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 비스포스포네이트, 인터페론(알파, 베타 또는 감마), 단백 동화 스테로이드, 칼시뉴린 억제제 및 라파마이신(mTOR) 억제제의 포유동물(기계적) 표적을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 FSGS를 유발하는 것에 연루된 약물을 복용했거나, 및/또는 여전히 복용중인 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
유전적 FSGS는 두 가지 형태를 취하고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 감수성 유전자의 하나 또는 그 이상의 변이체와 관련된 유전적 FSGS를 갖는 대상체(가령, 특정 변이를 가진 일부 개인에서는 FSGS가 발생하며, 다른 개인은 그렇지 않다)를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 APOL1 및 PDSS1을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 하나 또는 그 이상의 유전적 감수성과 연합된 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 멘델 유전(핵 유전자의 경우) 또는 모계 유전(미토콘드리아 DNA에 의해 코딩되는 유전자의 경우)을 나타내는 하나 또는 그 이상의 고-침투 돌연변이와 관련된 유전적 FSGS를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. TFSGS와 관련된 유전자의 수는 매년 증가하는데, 대부분은 전체 엑솜 시퀀싱의 보급 때문이다. 적어도 38개의 유전자가 유전적 FSGS와 관련하여 확인되었다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 전적 FSGS에서 COL4A3, COL4A4, COL4A5, ITGB4, LAMB2, NPHS, NPHS2, CD2AP, PTPRO, MYO1E, ACTN4, INF2, AHRGP24, AHRGDIA, MYH9, INF1, MT-TL1, MT-TL2, MT-TY, COQ2, COQ6, PDSS2, ADCK, WT1, NUP95, NUP203, XP05, NXF5, PAX2, LMX1B, SMARCAL1, NXF5, EYA1, WDR73, LMNA, PLCE1, TRPC6, KANK4, SCARB2, 및 TTC21B를 포함하는 하나 또는 그 이상의 유전자와 연합된 FSGS를 갖는 대상체들을 치료하는 방법에 관계한다.
일부 구체예들에서, FSGS를 갖는 것으로 의심되는 대상체는 신장 생검을 받는다. 신장 생검은 사구체 크기, FSGS의 조직학적 변이, 소낭성 세뇨관 변화 및 세뇨관 비대 중 하나 또는 그 을 결정하기 위해, 광학 현미경으로 분석할 수 있다. 더욱이, 신장 생검의 분석에 의해 면역형광법으로 분석함으로써, 다른 원발성 사구체병증을 배제하거나, 및/또는 전자 현미경으로 분석함으로써, 족세포 족돌기 소실, 족세포 미세융모 형질전환 및 세뇨망상 봉입체 중 하나 또는 이상을 결정할 수 있다. 신장 조직학의 완전한 평가는 분절 사구체 경화증의 실질조직 설정을 확립하는 데 중요하며, 이는 다른 많은 사구체 질환 중 하나와 관련된 FSGS를 FSGS의 임상-병리학적 증후군과 구별할 수 있다. 일부 구체예들에서, 유전자 검사는 유전적 FSGS 병인에 대한 대상을 추가로 분석하는 데 사용된다.
전통적으로, FSGS는 LM 검사를 기반으로 하는 FSGS 병변의 5가지 형태학적 변이를 정의한, Columbia 분류에 따라 분류되었다. 이 분류 시스템은 병리학적 기준에만 의존하도록 설계되었으며, 이러한 결과를 임상 및/또는 유전 정보와 통합하지 않는다. 일반적으로, 신장 생검에서 보이는 형태학적 특징은 FSGS의 유전적 형태와 비유전적 형태를 구별할 수 없다. 예외로는 NPHS1 및 액티닌 알파 4 유전자 돌연변이와 관련된 특징적인 특징, 그리고 파브리 질환, 알포트 증후군 및 레시틴-콜레스테롤 아실 트랜스퍼라제 결핍의 질환- 특이적 병변들이 내포된다. FSGS의 조직학적 변이체는 달리 명시되지 않은 FSGS(NOS)(이전에는 가장 일반적인 형태인 클래식 FSGS로 불림); 붕괴(collapsing) 변이체, 팁 변이체; 폐문주위(perihilar) 주변 변이체; 및 세포 변이체를 포함한다. LM에서 사구체의 모양은 정의에 따라 이러한 형태마다 다르지만, 이들 모두 족세포 변경의 미세 구조적 발견을 공유한다. 팁 병변은 세뇨관 극에 병치된 사구체 술의 부분에 영향을 미치고, 팁 병변 이상에는 팁에서 보우만 캡슐에 대한 유착, 과다-세포성, 포말(foam) 세포의 존재 및/또는 경화증 중 하나 또는 그 이상이 내포된다. 붕괴 변이체는 모세혈관-외 상피 비대 및/또는 증식과 관련하여 분절적 또는 전역의 간질 통합 및 모세혈관 내 개통의 상실을 보여준다. 폐문주위(perihilar) 변이체 및 NOS 변이체는 기질 증가(유리질증이 있거나 또는 없이)를 동반한 모세혈관 루프의 분절 경화증/분절 제거가 비문(hilum) 근처의 분절과 연관되는 지, 또는 특정 분절이 각각 결정될 수 없는지에 따라, 결정된다. 세포 병변은 재현가능하게 식별하기 가장 어려운 병변이다. 세포 병변은 포말 세포가 있거나 또는 없는 내강을 폐색하는 분절적 모세혈관 과다-세포성 및 핵붕괴(karyorrhexis)를 보여준다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료, 예방하거나, 또는 이의 진행 속도를 감소시키거나 및/또는 이의 중증도를 감소시키는 방법들을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량의 효과량을 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 다낭성 신장 질환 (PKD)이다.
다낭성 신장 질환은 두 가지 형태로 발생된다: 상염색체 열성 (ARPKD) 및 상염색체 우성 (ADPKD). 두 가지 형태의 질환은 뚜렷한 유전적 기초를 가지고 있으며, ADPKD에 관련된 두 개의 유전자가 확인되었고, ARPKD에 관련된 한 개의 유전자가 확인되었다. 두 가지 다른 유형의 질병의 징후는 매우 유사하며, 둘 다 세뇨관 상피 세포의 과다-증식으로 발생되며, 궁극적으로 낭종이 형성되어 세관 구조가 파괴되어 만성 신부전을 유발시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 상염색체 열성 다낭성 신장 질환 (ARPKD)을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환 (ADPKD)을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
상염색체 우성 다낭성 신장 질환 (ADPKD)은 신장 전체에 광범위한 낭종이 형성되는 현저하게 확대된 신장을 특징으로 하는 신장의 유전성 장애다. 이들 낭종은 신장 기능이 점차적으로 감소함에 따라 나이가 들면서 점진적으로 비대해진다. ADPKD의 진단은 가족력과 초음파 검사를 기반으로 한다. ADPKD 환자의 최대 25%에서 가족력이 확인되지 않으며, 이러한 경우의 약 5%에서 무증상 질환 또는 새로운 유전적 돌연변이와 관련될 수 있다. ADPKD의 특징은 양측성 신장 비대다. ADPKD 환자는 일반적으로 생후 50~60세까지 말기 신장 질환(ESRD)으로 진행한다. ADPKD의 진행 속도는 신장 용적과 직접 관련이 있으며, 치료 목표는 신장 용적 감소를 늦추어 진행을 지연시키는 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 상의 낭종의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 비대 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 용적(예를 들어, 총 신장 용적)의 증가의 중증도, 발생 및/또는 지속 기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
ADPKD는 16번 염색체(PKD1 유전자좌) 또는 4번 염색체(PKD2 유전자좌)의 이상에 기인할 수 있다. PKD1 돌연변이는 ADPKD 사례의 약 78%를 포함하는 반면, PKD2 돌연변이는 사례의 약 14%를 포함한다. PKD1 환자들은 PKD2 환자보다 이른 나이에 ESRD로 진행되는 경향이 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 PKD1 유전자좌에 돌연변이가 있는 ADPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 PKD2 유전자좌에 돌연변이가 있는 ADPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
PKD1 유전자 및 PKD2 유전자는 차례로, 폴리시스틴-1 단백질 및 폴리시스틴-2 단백질을 인코드한다. 이들 폴리시스틴은 통합 막 단백질이며, 신세뇨관 상피에서 발견된다. 폴리시스틴-1에서 비정상은 신세뇨관 상피에서 세포-세포 상호작용 및 세포-기질 상호작용을 손상시키는 반면, 폴리시스틴-2에서 비정상은 세포에서 칼슘 신호전달을 손상시키는 것으로 추정된다.
PKD로 인한 신장 병리 생리학의 결과적인 변화에는 혈뇨(흔히 육안적 혈뇨), 집중 결함(다뇨증 및 갈증 증가를 초래함), 경증 단백뇨, 신결석증(ADPKD 환자의 약 25%에서), 옆구리 통증 및 복통이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다. 더욱이, 흔한 합병증으로는 낭종 파열, 출혈 및 감염이 있다. 진행성 신장 기능 저하로 인해 종종 말기 신장 질환이 초래된다. 고혈압은 환자의 약 50~70%에서 발생하는, 가장 흔한 초기 임상 증상이며, ESRD 및 심혈관 합병증의 감소 속도와 직접적으로 관련된 가장 일반적인 특징이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 혈뇨, 집중 결손, 단백뇨, 신결석증, 옆구리 통증 및 복통 중 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 지속 기간 감소를 필요로 하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 낭종 파열, 출혈 및 감염의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 말기-단계 신장 질환 (ESRD)의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 고혈압의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
다낭성 신장 질환이 있는 대상체에게는 여러 개의 신장-외 증상이 종종 나타난다 뇌동맥류는 젊은 성인의 약 5%에서 발생되며, 60세 이상 환자의 20%에서 발생한다. 뇌동맥류 또는 지주막하 출혈의 위험은 가족력이 있는 대상체들에서 가장 높다. 신장외 낭종은 ADPKD에서 흔하다. 간낭종은 이 환자들에게서 흔히 관찰되며, 나이가 들면서 유병률이 증가한다. 35세 이상 환자의 94%가 간 낭종을 가지고 있는 것으로 보고되었다. 전체 낭종 유병률과 부피는 남성보다 여성에서 더 높다. ADPKD 환자의 간낭종은 간 기능 장애를 거의 일으키지 않는다. 드물게, 환자들에게서 급성 낭종 감염이나 출혈로 인해 통증이 발생된다. 추가적으로, ADPKD 환자의 약 7% 내지 약 36%에서 췌장 낭종이 발생하며, PKD2 돌연변이가 있는 ADPKD 환자에서 더 높은 유병률을 보인다. ADPKD 환자의 25~30%에서 심장 판막 질환이 관찰되었다. 심혈관 합병증, 특히 심장 비대 및 관상 동맥 질환은 ADPKD 환자의 주요 사망 원인이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 뇌동맥류의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장-외 낭종의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 간 낭종의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 췌장 낭종의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 심혈관 합병증(예를 들어, 심장 비대, 관상 동맥 질환)의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
상염색체 열성 다낭성 신장 질환 (ARPKD)은 어린이의 심각한 신장- 및 간-관련 이환율 및 사망률의 원인이다. ARPKD가 있는 대상체들의 대다수는 반향적(echogenic) 발생적 신장이 확대된 신생아기에 존재한다. 신장 질환은 신장 비대, 고혈압 및 다양한 정도의 신장 기능 장애를 특징으로 한다. ARPKD를 앓고 있는 환자의 50% 이상이 생후 10년 이내에 말기 신장 질환(ESRD)으로 진행하고, ESRD로 진행된 ARPKD 환자들은 신장 이식이 필요할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장비대증, 고혈압, 및 신장 기능장애의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 이식의 필요성을 예방하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 말기 신장 질환의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
ARPKD는 염색체 6p21에 위치한 PKHD1 유전자의 돌연변이에 기인할 수 있고, 이 유전자는 적어도 66개의 엑손을 포함하고, 큰 통합 막 단백질인 피브로시스틴(또한 폴리덕틴이라고도 함)을 인코드한다. 피브로시스틴의 기능은 현재 알려져 있지 않지만, 피질 및 수질 집합관과 신장의 두꺼운 상행지, 간담관의 상피 세포에서 발견된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 PKHD1에서 하나 또는 그 이상의 돌연변이와 연합된 ARPKD가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
PKHD1 돌연변이의 다양성 때문에 ARPKD의 경우 유전자형을 표현형과 연관시키는 것이 어려울 수 있다. 2개의 절두 돌연변이가 있는 대상체들은 더 심각한 신장 침범을 가질 수 있으며, 조기 신생아 사망의 위험이 있을 수 있다. 미스센스 돌연변이에 대한 동형접합체이거나, 또는 절두 돌연변이와 짝을 이루는 미스센스 돌연변이가 있는 대상체도 심각한 표현형을 가질 수 있다. 2개의 미스센스 돌연변이가 있는 이형접합체인 대상체들은 일반적으로 더 가벼운 질병을 가지고 있다. 신생아 기간을 살아남은 피험자는 가장 흔히 적어도 하나의 미스센스 돌연변이를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 2개의 절두 돌연변이를 포함하는 ARPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 미스센스 돌연변이를 포함하는 ARPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
ARPKD에 영향을 받는 두 가지 주요 기관 시스템은 신장과 간담도이다. 신장의 크기가 증가하거나 또는 소낭(보통 크기가 2mm 미만)이 있을 수 있고, 이는 수질에서 피질로 방사되고, 수정체 표면에 정확한 점으로 보인다. 신장 질환의 중증도는 낭종에 의해 영향을 받는 네프론의 비율에 비례한다. 더 큰 신장 낭종(최대 1cm)과 간질 섬유증이 발생하여, 신생아 기간을 초과하여 생존한 대상체에서 나타나는 신장 기능의 점진적인 악화에 기여한다. ARPKD는 다양한 정도의 간내 담관 및 간 섬유증을 포함하는 발달 결함으로 인한 담도 이형성증과 관련있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 크기의 증가 및/또는 낭종의 존재의 중증도, 발생 및/또는 지속기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
ARPKD의 임상적 현시는 증상의 발병 연령과 간 또는 신장 침범의 우세에 따라 다양하다. ARPKD는 종종 임신 24주 이후의 태아에서 일상적인 산전 초음파로 검출된다. 추정 진단은 피질수질 분화가 불량한, 현저하게 확대된 반향적 발생 신장의 특징적인 소견의 존재를 기반으로 한다. 직경 5~7mm 크기의 분리된 낭종이 감지될 수 있고; 그러나, 더 큰 낭종, 특히 >10 mm의 직경의 낭종은 흔하지 않다. ARPKD가 있는 대상체들은 일반적으로 혈압 변화, 신장 기능, 혈청 전해질 농도, 수화 상태, 영양 상태 및 성장에 대해 모니터링된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 혈압, 신장 기능, 혈청 전해질 농도, 수화 상태, 영양 상태 및 성장 중 하나 또는 그 이상을 모니터링하는 것을 추가로 포함하는, ARPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
신생아 기간 동안, 영아는 호흡 곤란을 동반하거나 동반하지 않을 수 있는 신장 증상을 나타낼 수 있다. ARPKD가 있는 영아는 양측 신장이 현저하게 확대될 수 있고, 위(stomach)의 신장 압박으로 인해 폐 기능에 영향을 미치거나 수유 곤란을 초래할 수 있다. ARPKD가 있는 영아는 혈청/혈장 크레아티닌 및 혈액 요소 질소(BUN) 농도 증가에 의해 반영되는 신장 기능 손상을 나타낼 수 있다. 말기 신장 질환(ESRD)이 있는 신생아는 생존을 위해 신대체 요법(RRT)이 필요할 수 있다. ARPKD가 있는 영아는 고혈압과 저나트륨혈증 중 하나 이상을 나타낼 수 있다(소변을 최대한 희석할 수 없기 때문에). 일부 구체예들에서, 본 명세서는 크레아티닌 및 혈액 요소 질소(BUN)의 증가된 혈청/혈장 농도에 의해 반영되는 신장 기능 손상의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 고혈압 및/또는 저나트륨혈증의 중증도, 발생 및/또는 지속기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
신생아기 이후에 생존한 환자들의 경우, 지속적인 신장 성숙으로 인해 신장 기능이 개선될 수 있다. 그러나, 시간이 지남에 따라 신장 기능의 점진적인 악화가 발생할 수 있으며, 이는 빠르거나 또는 느릴 수 있으며, ESRD를 유발할 수 있다. ARPKD가 있는 청소년 피험자는 신장 기능의 진행성 악화 중 (일반적으로 세뇨관 기능 장애 또는 부상, 농축 능력 감소로 인한 다뇨 및/또는 다갈증의 징후로 시작), 최대 요 삼투압이 500 mosmol/kg 미만인 경우, 요산화 능력 감소로 인한 대사성 산증, 고혈압, 요로 감염의 재발 사례, 요로 이상 (경미한 단백뇨, 글루코스뇨증, 과인산뇨 및/또는 마그네슘 배설 증가들이 내포되지만, 이에 국한되지 않음), 진행성 신장 손상 및 신장 성장률 및/또는 신장 크기 감소중 하나 또는 그 이상을 가지고 있을 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 기능의 진행성 악화, 진행성 신장 손상, 및 감소된 신장 성장률 및/또는 신장 크기 중 하나 이상의 중증도, 발생 및/또는 지속 기간 감소를 요하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
ARPKD의 초음파 소견은 피질수질 분화가 불량한 양측 큰 반향성 발생 신장이 특징이다. 골수 침범만 있는 환자의 경우, 표준 해상도 초음파 검사가 정상일 수 있지만, 그러나 고해상도 초음파촬영은 수질에 국한된 관 확장을 감지할 수 있다. 일반적으로 상염색체 우성 질환이 있는 대상체에서 볼 수 있는 대포낭은 일반적으로 ARPKD 환자의 유아기에는 나타나지 않지만, 나이가 많은 소아에서는 나타날 수 있다. 결과적으로, 고령의 대상체들의 경우 초음파로 상염색체 우성 다낭성 신장 질환(ADPKD)과 ARPKD를 구별하는 것이 더 어려울 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 초음파에 의한 질환의 분화를 추가로 포함하는, ARPKD 또는 ADPKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료, 예방하거나, 또는 이의 진행 속도를 감소시키거나 및/또는 이의 중증도를 감소시키는 방법들을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 만성 신장 질환 (CKD)을 갖고 있는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량의 효과량을 투여하는 것을 포함한다.
만성 신장 질환(CKD)은 신장이 손상되어 혈액과 건강한 신장을 걸러낼 수 없는 병태다. CKD가 있는 피험자는 일반적으로 체내에 과도한 체액과 혈액 폐기물이 남아 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 CKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 CKD를 갖는 대상체를 치료에 관계하며, 이때 상기 대상체는 빈혈 또는 적은 수의 적혈구, 감염 발생 증가, 낮은 칼슘 수치, 높은 칼륨 수치, 높은 칼륨 수치, 높은 인 수치, 식욕 감퇴 또는 덜 먹고, 우울증 또는 삶의 질로 구성된 그룹에서 선택된 하나 또는 이상의 다른 건강 상태를 또한 가지고 있다.
CKD는 다양한 정도의 심각성을 가지며, 일반적으로 시간이 지남에 따라 악화되지만 치료가 진행을 늦추는 것으로 나타났다. CKD를 치료하지 않고 방치하면, 이는 신부전, 말기 신장 질환(ESRD) 및/또는 조기 심혈관 질환으로 진행되어, 생존을 위한 투석 또는 신장 이식으로 이어질 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신부전, 말기 신장 질환(ESRD), 및/또는 초기 심혈관 질환의 중증도, 발생 및/또는 기간 감소를 필요로 하는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
CKD의 진단은 예상 사구체 여과율(eGFR)을 측정하기 위한 혈액 검사 및/또는 소변의 알부민 및/또는 전체 단백질을 측정하기 위한 소변 검사로 일반적으로 수행된다. 일반적으로, 소변의 단백질 증가는 CKD를 나타낸다. 근본적인 원인을 확인하기 위해, 초음파 또는 신장 생검을 시행할 수 있다.
일부 구체예들에서, CKD는 초기에 증상 없이 나타나며, 일반적으로 혈청 크레아티닌 및/또는 소변 내 단백질의 증가에 의해 일상적인 혈액 검사에서 검출된다. CKD 환자의 신장 기능이 저하됨에 따라, 체액 과부하 및 신장에서 레닌-안지오텐신계를 통해 생성되는 혈관 활성 호르몬 생성으로 인해 혈압이 상승하고, 이로 인하여 고혈압 및 심부전 발병 위험이 증가된다. CKD가 있는 대상체에서 요소가 축적됨에 따라, 질소혈증 및 궁극적으로 요독증(기면에서 심낭염 및 뇌병증에 이르는 증상)이 발생할 수 있다. 높은 전신 농도로 인해 요소는 고농도의 에크린 땀으로 배설되고, 땀이 증발함에 따라 피부에서 결정화된다(가령, "요독 서리(uremic frost)"). CKD가 있는 대상체에서 칼륨이 혈액에 축적될 수 있다(가령, 권태감 및 잠재적으로 치명적인 심장 부정맥을 포함한 다양한 증상을 갖는 고칼륨혈증). 고칼륨혈증은 일반적으로 사구체 여과율(GFR)이 약 20-25ml/분/1.73 m2 미만으로 떨어질 때까지 CKD가 있는 대상에서 발생하지 않으며, 이 시점에서 신장의 칼륨 배설 능력이 감소된다. CKD의 고칼륨혈증은 산성혈증(칼륨의 세포외 이동으로 이어짐) 및 인슐린 부족으로 인해 악화될 수 있다. CKD가 있는 대상체는 신장에서 인산염 제거가 잘 되지 않아 발생할 수 있는 고인산혈증을 가질 수 있다. 고인산혈증은 혈관 석회화를 유발하여, 심혈관 위험 증가에 기여한다. CKD가 있는 대상체는 저칼슘혈증을 가질 수 있다. CKD가 있는 대상체는 칼슘, 인(인산염), 부갑상선 호르몬 또는 비타민 D 대사의 이상을 유발할 수 있는 미네랄 및 뼈 대사, 골 회전율, 무기질화, 부피, 선형 성장 또는 강도의 이상(신장 골이영양증); 및/또는 혈관 또는 기타 연-조직 석회화중 하나 또는 그 이상의 변화가 있을 수 있다. CKD가 있는 대상체는 근위 세뇨관의 세포에서 충분한 암모니아를 생성하는 능력 감소로 인해 발생할 수 있는 대사성 산증이 있을 수 있다. CKD가 있는 대상체는 빈혈을 가질 수 있다. CKD의 후기 단계에서, 대상체는 악액질을 일으켜 의도하지 않은 체중 감소, 근육 소모, 쇠약 및 거식증을 유발할 수 있다. CKD가 있는 대상체들은 일반 인구보다 심혈관 질환을 동반한 죽상동맥경화증이 발병할 가능성이 더 높다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 다음으로 구성된 군에서 선택된 CKD의 하나 또는 그 이상의 병태 또는 여병의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관계한다: 혈압 상승, 고혈압 및/또는 심부전, 질소혈증, 요독증, "요독 서리", 고칼륨혈증, 신장의 칼륨 배설 능력 감소, 산혈증, 고인산혈증, 혈관 석회화, 저칼슘혈증 미네랄 및 뼈 대사의 변화(구체적으로 특히, 칼슘, 인(인산염), 부갑상선 호르몬 또는 비타민 D 대사의 이상을 유발할 수 있는 변화), 뼈 회전율, 광물화, 부피, 선형 성장 또는 강도의 이상(신장 골이영양증) 혈관 또는 기타 연조직 석회화, 대사성 산증, 빈혈, 악액질(특히 의도하지 않은 체중 감소, 근육 소모, 쇠약 및 거식증을 유발할 수 있는 악액질), 및 죽상동맥경화증(심혈관 질환을 유발할 수 있음).
CKD의 일반적인 원인은 당뇨병, 고혈압 및 사구체신염이다. 고혈압이 있는 성인 5명 중 약 1명과 당뇨병이 있는 성인 3명 중 1명이 CKD를 가지고 있다. CKD는 또한 다음중 하나 이상의 혈관 질환(양측 신장 동맥 협착과 같은 대혈관 질환 및 허혈성 신병증, 용혈성 요독 증후군, 혈관염과 같은 소혈관 질환들이 내포되나 이에 국한되지 않음), 원발성 사구체 질환(초점 분절 사구체 경화증(FSGS) 및/또는 IgA 신병증(또는 신염)),이차 사구체 질환(가령, 당뇨병성 신증 및 루푸스 신염), 세뇨관간질 질환 (약물 및 독소 유발 만성 세뇨관간질 신염 및 역류성 신병증 포함), 폐쇄성 신병증(양측 신장 결석 및 전립선의 양성 전립선 비대증으로 예시됨) 및 선천성 질환(가령, 다낭성 신장 질환)이 원인이 될 수도 있다. 드물게, 신장을 감염시키는 요충이 폐쇄성 신병증을 유발할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 다음중 하나 또는 그 이상의 원인으로 인한 CKD를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다: 당뇨병, 고혈압, 사구체신염, 혈관 질환(양측 신장 동맥 협착과 같은 대혈관 질환 및 허혈성 신병증, 용혈성 요독 증후군, 혈관염과 같은 소혈관 질환들이 내포되나 이에 국한되지 않음), 원발성 사구체 질환(초점 분절 사구체 경화증(FSGS) 및/또는 IgA 신병증(또는 신염)),이차 사구체 질환(가령, 당뇨병성 신증 및 루푸스 신염), 세뇨관간질 질환 (약물 및 독소 유발 만성 세뇨관간질 신염 및 역류성 신병증 포함), 폐쇄성 신병증(양측 신장 결석 및 전립선의 양성 전립선 비대증으로 예시됨) 및 선천성 질환(가령, 다낭성 신장 질환). 드물게, 신장을 감염시키는 요충이 폐쇄성 신병증을 유발할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 갖는 대상체를 알부민뇨 및/또는 단백뇨에 대해 모니터링하는 방법에 관한 것이다. 소변의 단백질 수치 상승은 많은 신장 질환이나 상태의 특징이다. 알부민뇨 및 단백뇨에 대한 연간 모니터링은 위험에 처한 어린이의 경우 1세부터 시작된다. 단백뇨는 소변에 비정상적인 양의 단백질이 존재하는 것을 포함한다. 단백뇨의 가장 민감한 마커는 소변 알부민 상승(가령, 알부민뇨)이다. 알부민은 일반적으로 혈액에서 순환하며, 신장 질환이나 상태가 없는 대상체의 소변에서는 미량의 알부민만이 발견된다. 중등도의 알부민뇨는 일반적으로 마이크로단백뇨라고 하고, 중증의 알부민뇨는 일반적으로 마크로단백뇨라고 한다. 상한값 이상의 알부민 수치를 중증 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨라고 한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 알부민뇨, 단백뇨, 마이크로알부민뇨, 및 마크로알부민뇨중 하나 또는 그 이상을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 알부민뇨, 단백뇨, 마이크로알부민뇨, 및 마크로알부민뇨중 하나 또는 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시킬 필요가 있는 대상체에서 이를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
알부민 측정은 측정 방법에 따라 다른 단위를 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 소변 내 알부민은 수집된 소변 기간당 알부민 질량으로 측정된다(가령, mg/24시간). 일부 구체예들에서, 소변 내 알부민은 수집된 소변 부피당 알부민 질량으로 측정된다(가령, mg/L). 일부 구체예들에서, 소변 내 알부민은 소변 내 크레아티닌 질량당 알부민 질량으로 측정된다(가령, μg/mg의 크레아티닌, 알부민-크레아틴 비율 또는 ACR이라고 함).
일부 구체예들에서, 대상체에 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)의 존재를 결정하기 위해 소변 테스트를 받는다. 일부 구체예들에서, 소변 검사는 특정 기간(가령, 24시간) 동안의 소변 수집을 포함한다. 중등도 알부민뇨 또는 미세알부민뇨는 24-시간 소변 수집에서 소변에서 검출된 알부민 수치가 24-시간당 약 30~300mg, 또는 1-분당 약 20~200μg 알부민의 1-분 소변 수집에서 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함한다. 중증 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨는 24-시간 소변 수집에서 소변에서 검출된 알부민 수치가 24-시간당 약 300mg 이상, 또는 1-분당 약 200μg 이상의 알부민의 1-분 소변 수집에서 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 24시간당 약 30 ~ 약 300 mg 알부민인, 24-시간 소변 수집으로부터 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 1분당 약 20 ~ 약 200 μg 알부민인, 1-분 소변 수집으로부터 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 24시간당 약 300 mg 이상의 알부민인, 24-시간 소변 수집으로부터 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중등도 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 1분당 약 200 μg 이상의 알부민인, 1-시간 소변 수집으로부터 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중등도 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예들에서, 소변 검사는 단일 소변 샘플을 사용하는 스팟 검사를 포함한다. 일부 구체예들에서, 소변 검사는 딥스틱 검사를 포함한다. 일부 구체예들에서, 소변 딥스틱 검사는 알부민뇨 수준의 추정치를 제공할 수 있다. 일부 구체예들에서, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨는 스팟 샘플로부터 뇨에서 검출되는 알부민 수준을 포함하는데, 뇨 L당 약 20 ~ 약 200 mg 알부민 수준이다. 일부 구체예들에서, 중증 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨는 뇨 L당 약 200 mg 알부민의 스팟 샘플로부터 뇨에서 검출되는 알부민 수준을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 뇨 L당 약 20 ~ 약 200 mg 알부민 수준인, 스팟 샘플에서 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 뇨 L당 약 200 mg 이상의 알부민 수준인, 스팟 샘플에서 소변에서 검출된 알부민 수준을 포함하는, 중증 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨가 있는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
시간 경과에 따른 더 큰 샘플 수집 및/또는 샘플 수집과 비교하여, 현장 검사 샘플의 소변 농도 변화를 보상하기 위해 샘플의 알부민 양을 크레아티닌의 소변 농도와 비교하는 것이 유용하다. 이것을 알부민/크레아티닌 비율(ACR)이라고 한다. 일부 구체예들에서, 알부민뇨의 존재 및/또는 중증도는 뇨에서 크레아티닌 배디 알부민의 비율 (가령, 알부민-크레아티닌 비율, ACR, 때때로 소변 알부민-크레아티닌 비율, 또는 uACR이라고도 한다)에 의해 결정된다. ACR 하한 및 상한은 남성과 여성에 따라 다를 수 있다. ACR은 소변의 크레아티닌 질량 단위당 알부민 질량 단위로 측정된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 크레아티닌 g 당 약 30 ~ 약 300 mg 알부민의 ACR을 포함하는 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 크레아티닌 g 당 약 300 mg 이상의 알부민의 ACR을 포함하는 중증 알부민뇨 또는 마크로알부민뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 정상적인 ACR은 보통 크레아티닌 g 당 30 mg 미만의 알부민이다. 알부민뇨 측정의 측정 단위는 다를 수 있음을 주지하는 것은 중요하다. 예를 들면, ACR은 크레아티닌 mg당 알부민 μg으로 측정할 수 있다. ACR은 또한 크레아티닌 g 당 알부민 g으로 측정할 수 있다. 알부민 mg/크레아티닌 g의 단위는 알부민 μg /크레아티닌 mg의 단위와 상호호환될 수 있다. 알부민과 크레아티닌이 모두 질량 측정으로 제공되는 경우, ACR은 때때로 단위 없이 제공된다.
ACR은 소변의 크레아티닌 농도당 알부민의 질량으로 측정할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 크레아티닌 mmol 당 약 2.5 ~ 약 35 mg의 알부민의 ACR을 포함하는 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 크레아티닌 mmol 당 약 35 mg 이상의 알부민의 ACR을 포함하는 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨 치료를 요하는 대상체에서 이를 치료하는 방법을 제공한다.
대상체에서 신장 손상 및 기능 상실의 정도를 설명하는 질병 단계가 일반적으로 신장 질환 또는 상태가 있는 대상체에게 부여된다. 알부민뇨 단계는 일반적으로 ACR의 관점에서 측정된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A1 알부민뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 단계 A1 알부민뇨는 뇨에서 알부민의 수준이 정상 수준에서 중등도으로 증가되는 것을 포함하는데, ACR은 크레아티닌의 g 당 30 mg 미만의 알부민 (또는 크레아티닌 mmol 당 3 mg 미만의 알부민)이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A2 알부민뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 단계 A2는 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 30 ~ 약 300 mg 알부민(크레아티닌 mmol 당 약 3 ~ 약 30 mg 알부민)인, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A3 알부민뇨를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 단계 A3는 ACR이크레아티닌의 g 당 300 mg 이상의 알부민 (또는 크레아티닌 mmol 당 30 mg 이상의 알부민)인, 중등도 알부민뇨 또는 마이크로알부민뇨를 포함한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 상태가 있는 대상체에 대한 요법의 투여로 말기 신장 질환의 발병을 지연시키거나 예방될 것이다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 상태가 있는 대상체에게 요법의 투여는 해당 대상체의 알부민뇨 단계를 낮출 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A1 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A2 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A3 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A1 알부민뇨를 갖는 대상체에서 단계 A2 알부민뇨로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 A2 알부민뇨를 갖는 대상체에서 단계 A3 알부민뇨로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 알부민뇨 병기 진행의 악화를 지연 및/또는 예방을 요하는 대상체에서 이를 위한 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 손상의 개선 및/또는 알부민뇨 병기 분류의 저하를 요하는 대상체에서 이를 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 대상체에서 알부민뇨 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선하는 방법을 제공한다.
일부 구체예들에서, 대상체는 신증-범위의 단백뇨를 가지고 있다. 일부 구체예들에서, 신증-범위의 단백뇨는 신체 표면적 1.73 m2 당 24시간 당 뇨에서 약 3 ~ 약 3.5 g의 단백질을 포함한다. 일부 구체예들에서, 신증 증후군을 갖는 대상체는 3.5g/24hrs/1.73m2 이상의 단백뇨를 갖는다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 ACR를 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 0.1 ~ 약 2.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 ACR를 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 약 0.5g에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 약 0.5g 미만의 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 약 0.3g 미만의 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 0.1 ~ 약 2.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 0.3 ~ 약 2.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 0.5 ~ 약 2.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 0.5 ~ 약 3.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg의 알부민으로 감소되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 2.5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량(가령, SOC)과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 10% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 15% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 20% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 25% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 30% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 30%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 40% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 30%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 50% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 50%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 60% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 70% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 80% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 90% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 95% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 ACR이 적어도 99% 감소되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 총 요단백을 측정할 수 있고, 소변의 크레아티닌 존재(가령, UPCR)와 비교할 수 있다. 일부 구체예들에서, UPCR은 단백뇨의 척도다. 일부 구체예들에서, 단백뇨는 뇨 단백질-크레아티닌 비율 (UPCR)이 0.2 mg/mg 이상인 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 단백뇨는 시간당 4 mg/m2 이상의 뇨 단백질 배출을 포함한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 상태의 완전 관해(CR)는 UPCR 측정이 일관되게 크레아티닌 g 당 0.2g 미만의 단백질로 정의된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 상태의 부분 관해(PR)는 UPCR 측정이 일관되게 기선 시점 단백뇨로부터 약 50% 감소 및 크레아티닌 g 당 약 2g 미만의 단백질을 갖는 것으로 정의된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 UPCR를 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 0.2 ~ 약 1 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 0.5 mg 미만의 소변 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 0.1 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 0.1 ~ 약 2.5 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 UPCR를 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 0.2 ~ 약 1 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 0.5 g 미만의 소변 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g 미만으로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.3g 미만으로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 0.1 ~ 약 100.0g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 0.1 ~ 약 2.5 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 2.5 ~ 약 3.5 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 3.5 ~ 약 5.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 5.0 ~ 약 7.5 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 7.5 ~ 약 10.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 10.0 ~ 약 15.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 15.0 ~ 약 20.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 20.0 ~ 약 25.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 30.0 ~ 약 35.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 40.0 ~ 약 45.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 45.0 ~ 약 50.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 50.0 ~ 약 60.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 60.0 ~ 약 70.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 70.0 ~ 약 80.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 80.0 ~ 약 90.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 90.0 ~ 약 100.0 g의 뇨 단백질로 감소시키는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 요법의 투여로 뇨단백 배출은 감소된다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 2.5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 10% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 15% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 20% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 25% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 30% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 30%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 40% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 40%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 50% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 크레아티닌의 g 당 알부민을 50%에 대등한 또는 이보다 더 큰 수준으로 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 60% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 70% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 80% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 90% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 95% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 UPCR이 적어도 99% 감소되는 것에 관계한다.
대상체의 해당 신장이 혈액을 얼마나 잘 여과시키는 지를 결정함으로써, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)의 존재를 결장하기 위해, 대상체는 혈액 테스트를 받게 될 수 있다. 일반적으로, 사구체 여과율(GFR)이 결정되며, 이는 여과된 체액(가령, 혈액)이 신장을 통해 보우만낭으로 유입되는 속도를 측정한다. GFR은 용질이 자유롭게 여과되고, 신장에서 재흡수되거나 분비되지 않을 때의 제거율과 같다. 따라서, GFR은 산출할 수 있는 혈액량에서 유래한 소변 내 물질의 양을 측정한 것이며, 일반적으로 시간당 부피 단위, 예를 들어, 분당 밀리리터(mL/분)로 기록된다. 체표면적에 따라 조정된, GFR의 정상 범위는 남성의 경우 약 100~130mL/min/1.73m2이고, 평균 GFR은 남성의 경우 125mL/min/1.73m2이다. 체표면적에 따라 조정된, GFR의 정상 범위는 40세 이전의 여성의 경우 약 90~120mL/min/1.73m2이다. 2세 미만 어린이의 이눌린 청소율로 측정한 GFR은 약 110mL/min/1.73m2 이며, 이는 점진적으로 감소된다. 연령 40 이후, GFR는 나이가 듦에 따라 점진적으로 감소되는데, 매년 약 0.4 ~ 약 1.2 mL/min으로 감소된다. GFR은 혈액 검사 결과(가령, eGFR)를 사용하여 추정되는 혈액 및 소변의 물질을 비교 측정하여 계산할 수도 있다. 일부 구체예들에서, eGFR는 혈청 크레아티닌, 연령, 민족성, 및 성별 변수를 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 상기 eGFR은 Cockcroft-Gault 공식, 신장 질환 (MDRD) 공식에서 식이 변화, CKD-EPI 공식, Mayo 이차 공식, 및 Schwartz 공식중 하나 또는 그 이상을 이용하여 측정된다.
사구체 여과율(GFR) ≥ 60 ml/min/1.73 m2는 신장 손상이 없는 경우 (혈액, 소변 또는 실험실 알부민/크레아티닌 비율(ACR) ≥ 30을 포함하는 영상 연구에서 보이는 손상 징후로 구성됨), 만성 신장 질환이 없는 피험자에서 정상으로 간주된다. 적어도 3개월 동안 GFR이 <60ml/min/1.73m2인 대상체는 만성 신장 질환이 있는 것으로 진단된다.
일반적으로, 소변의 단백질은 신장 기능 저하 및 심혈관 질환에 대한 독립적인 지표로 간주되고, 만성 신장 질환의 단계(종종 신장 질환 및/또는 일반적으로 상태에 사용됨)는 대상체의 GFR을 측정하여 결정된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 1 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 단계 1 CKD는 정상 신장 기능, 정상 또는 상대적으로 높은 GFR(가령, ≥90 ml/min/1.73 m2)을 갖는 신장 손상 및 더 낮은 크레아티닌 수치를 포함한다. 신장 손상은 혈액 또는 소변 검사 또는 영상 검사의 이상을 포함하여, 병리학적 이상 또는 손상의 표지자로 정의될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 2 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 단계 2 CKD는 신장 손상을 동반한 신장 기능 및 GFR(예를 들어, 약 60 ~ 약 89ml/min/1.73m2)의 경미한 감소를 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 단계 3 CKD는 경도 내지 중등도의 신장 기능 감소 및 GFR (가령, 약 30 ~ 약 59 ml/분/1.73 m2)를 포함한다. 단계 3 CKD는 단계 3a (가령, 신장 기능이 경도에서 중등도로 감소, 그리고 GFR은 약 45 ~ 약 59 ml/분/1.73 m2) 및 단계 3b (가령, 신장 기능이 중등도에서 중증으로 감소, 그리고 GFR은 약 30 ~ 약 44 ml/분/1.73 m2로)로 나눌 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3b CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 4 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 단계 4 CKD는 신장 기능의 중증 감소 및 GFR (가령, 약 15 ~ 약 29 ml/분/1.73 m2)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 5 CKD를 치료하는 방법을 제공한다. 단계 5 CKD는 확정된 신장 부전 (가령, GFR은 약 <15 ml/분/1.73 m2), 영구적인 신장 대체 요법, 말기-단계 신장 질환(ESRD), 및 높은 크레아티닌 수준을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 1 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 2 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3a CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3b CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 4 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 5 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 1 CKD를 갖는 대상체에서 단계 2 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 2 CKD를 갖는 대상체에서 단계 3 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 2 CKD를 갖는 대상체에서 단계 3a CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 2 CKD를 갖는 대상체에서 단계 3b CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3a CKD를 갖는 대상체에서 단계 3b CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3 CKD를 갖는 대상체에서 단계 4 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3a CKD를 갖는 대상체에서 단계 4 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 3b CKD를 갖는 대상체에서 단계 4 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 단계 4 CKD를 갖는 대상체에서 단계 5 CKD로 진행을 지연 또는 방지하기 위해, 해당 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 CKD 단계 진행의 악화를 지연 및/또는 예방을 요하는 대상체에서 이를 위한 방법을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 손상의 개선 및/또는 CKD 단계 분류의 저하를 요하는 대상체에서 이를 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 대상체에서 CKD 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선하는 방법을 제공한다.
특정 측면들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태(가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 치료, 예방하거나, 또는 이의 진행 속도를 감소시키거나 및/또는 이의 중증도를 감소시키는 방법들을 고려하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 1 CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 2 CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 3 CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 3a CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 3b CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 4 CKD을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 단계 5 CKD을 갖는다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 GFR 및/또는 eGFR을 증가시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 2.5% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 5% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 10% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 15% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 20% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 25% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 30% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 30%에 대등하거나, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 40% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 40%에 대등하거나, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 50% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 60% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 70% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 80% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 90% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 95% 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 GFR 및/또는 eGFR이 적어도 99% 증가되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR 및/또는 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 1 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 3 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 5 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 7 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 9 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 10 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 15 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 20 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 25 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 30 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 35 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 40 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 45 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 50 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 55 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 60 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 65 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 70 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 75 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 80 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 85 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 90 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 95 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 100 mL/분/1.73 m2 증가되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량 (가령, SOC)과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 1 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 1 mL/분/년에 대등하거나, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 2 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 3 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 3 mL/분/년에 대등하거나, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 5 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 7 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 9 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 10 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 15 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 20 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 25 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 30 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 35 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 40 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 45 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 50 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 55 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 60 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 65 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 70 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 75 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 80 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 85 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 90 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 95 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR이 적어도 약 100 mL/분/년 증가되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 eGFR 및/또는 GFR를 기선 시점 측량(가령, SOC)의 수준 또는 이에 근접한 수준으로 유지시키는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 이눌린 또는 이눌린-유사체 시니스트린을 혈장에 주입하여 결정할 수 있다. 이눌린과 시니스트린은 사구체 여과 후 신장에서 재흡수되거나 분비되지 않기 때문에, 그들의 배출 속도는 사구체 필터를 통한 물과 용질의 여과 속도에 정비례한다. 일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 방사성 물질을 사용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 크롬-51을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 51Cr-EDTA의 신장 또는 혈장 소거율을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 테크네튬-99m을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, GFR 및/또는 eGFR은 99mTc-DTPA을 이용하여 측정된다. 방사성 물질을 사용하는 이점은 이눌린의 이상적인 특성에 가깝지만(사구체 여과만 받음), 몇 개의 소변 또는 혈액 샘플만으로 보다 실질적으로 측정할 수 있다는 것이다. 신장 및 혈장 제거율 51Cr-EDTA는 이눌린과 비교하여 정확한 것으로 나타났다. 일부 구체예들에서, 이눌린 제거율은 사구체 기능을 약간 과대평가한다. 초기 단계의 신장 질환에서, 이눌린 제거율은 나머지 네프론의 과여과로 인해 정상으로 유지될 수 있다. 불완전한 소변 수집은 이눌린 제거율 측정의 중요한 오류 원인이다.
크레아티닌 제거율 (CCr 또는 CrCl)은 단위 시간당 크레아티닌이 제거되는 혈장의 부피이며, GFR을 근사하는 데 유용한 측정값이다. 시메티딘에 의해 차단될 수 있는 크레아티닌 분비로 인해, 크레아티닌 제거율이 GFR을 초과한다. GFR과 CCr은 모두 혈액과 소변의 물질을 비교 측정하여 정확하게 산출하거나, 또는 혈액 검사 결과(eGFR 및 eCCr)만을 사용하여 공식으로 추정할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 총 신장 용적을 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 총 신장 용적은 초음파에 의해 측정된다. 일부 구체예들에서, 총 신장 용적은 자기 공명 영상 (MRI)에 의해 측정된다. 일부 구체예들에서, 총 신장 용적은 신장 질환 또는 장애(가령, ADPKD)에서 신장 및 낭종의 총 용적을 반영한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 2.5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 10% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 15% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 20% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 25% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 30% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 40% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 50% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 60% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 70% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 80% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 90% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 95% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 총 신장 용적이 적어도 99% 감소되는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 혈액 요소 질소 (BUN)가 측정된다. 일부 구체예들에서, BUN 검사는 혈액 내 요소 질소의 양을 측정한다. 일부 구체예들에서, 신장이 손상되면 요소 질소의 양이 더 많을 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 BUN을 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 인간의 경우 정상적인 BUN 수준은 약 7 mg/dL ~ 약 20 mg/dL이다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 2.5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 10% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 15% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 20% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 25% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 30% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 40% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 50% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 60% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 70% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 80% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 90% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 95% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여, 상기 대상체의 BUN이 적어도 99% 감소되는 것에 관계한다.
소변 호중구 젤라티나제-연합된 리포칼린 (NGAL) 농도는 조기 손상에 매우 민감한 급성 신장 손상의 초기 바이오마커이며, 관상(tubular)-특이적 손상의 마커로 알려져 있다. 소변 NGAL (또는 uNGAL)은 혈청 크레아티닌 수치 전에 상승하는 경향이 있어서, 신세뇨관 손상을 예측할 수 있다. uNGAL은 신장 구조적 급성 신장 손상의 중증도에 따라 양적으로, 그리고 비례적으로 증가한다. 일부 구체예들에서, uNGAL 측정값이 <50 ng/mL이면 급성 신장 손상 위험이 낮음을 시사한다. 일부 구체예들에서, uNGAL 측정값이 약 50 ~ 약 149 ng/mL이면 급성 신장 손상 위험이 모호함을 나타낸다. 일부 구체예들에서, uNGAL 측정값이 약 150 ~ 약 300 ng/mL이면 급성 신장 손상 위험이 중등도임을 나타낸다. 일부 구체예들에서, uNGAL 측정값이 >300 ng/mL이면 급성 신장 손상 위험이 높다는 것을 나타낸다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 uNGAL을 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 50 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 100.0 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 150.0 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 200.0 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 250.0 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 300.0 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 25 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 25 ~ 약 50 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 50 ~ 약 100 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 100 ~ 약 150 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 150 ~ 약 200 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 200 ~ 약 250 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 250 ~ 약 300 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 300 ng/mL 이상으로 감소시키는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL을 약 0.1 ~ 약 300 ng/mL로 감소시키는 것에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 갖는 대상체에서 uNGAL을 감소시키는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 효과량의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 효과량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 2.5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 5% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 10% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 15% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 20% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 25% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 30% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 40% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 50% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 60% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 70% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 80% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 90% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 95% 감소되는 것에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 기선 시점 측량과 비교하여 상기 대상체의 uNGAL이 적어도 99% 감소되는 것에 관계한다.
임의선택적으로, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 치료, 예방, 또는 이의 진행 속도, 및/또는 중증도를 감소시키는, 구체적으로 신장 질환 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 여병 치료, 예방, 또는 이의 진행 속도, 및/또는 중증도를 감소시키는 본원에 기술된 방법들은 신장 질환 또는 병태 치료용 하나 또는 그 이상의 보조 요법 또는 추가적인 활성 작용제를 이 환자에게 투여하는 것을 더 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환) 치료용 보조 요법 및/또는추가 활성 작용제를 투여한다. 일부 구체예들에서, ARBs 및 ACE 억제제는 차선-요법으로써, 베타-차단 및 칼슘-채널 차단제와 함께, 신장 질환 및 상태(가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증(FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에 대한 주유 치료법이다. 일부 구체예들에서, 3차 요법으로, 신장 기능이 정상인 환자에게는 티아지드(thiazide)가 바람직하고, 신장 기능이 손상된 환자에게는 루프 이뇨제가 바람직하다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 갖는 대상체에게 레닌-안지오텐신-알도스테론 시스템 (RAAS)의 길항제가 투여된다. 일부 구체예들에서, RAAS 억제제에는 안지오텐신 길항제 (가령, 안지오텐신 차단 요법, 안지오텐신 시스템 억제제, 레닌-안지오텐신 시스템 억제제, 안지오텐신 II 차단, 안지오텐신 II 유형 1 수용체 차단제, ARB, 안지오텐신 II 수용체 길항제, AT1 수용체 길항제, 또는 사르탄) 및 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에서, RAAS 길항 작용, 특히 ACE 억제제와 ARB의 조합은 원심성 세동맥 혈관 긴장도를 감소시키고, 따라서, 사구체 여과의 원동력인 사구체내 모세혈관 압력을 감소시켜 GFR을 낮출 것이다. 따라서, GFR의 약간의 감소는 용인될 수 있으며, 이는 RAAS 길항작용이 달성되었다는 증거를 제공한다.
일부 구체예들에서, 대상체가 단백뇨 증상을 보일 때, 이 대상체에게 안지오텐신 길항제 (가령, 안지오텐신 수용체 차단제, ARB)를 투여한다. 일부 구체예들에서, ARB는 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체들에서 단백뇨를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 안지오텐신 길항제는 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에서 사구체경화증 속도를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, ARB의 투여로 신장 질환 진행이 감소된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 로사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 칸데사르탄, 발사르탄, 피마사르탄, 아질사르탄, 살프리사르탄, 및 텔미사르탄으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 ARBs를 투여한다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 로사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 이르베사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 올메사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 칸데사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 발사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 피마사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 아질사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 살프리사르탄이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 텔미사르탄이 투여된다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 ACE 억제제가 투여된다. 일부 구체예들에서, ACE 억제제는 베나제프릴, 캡토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 라미프릴(가령, 라미펜), 트란돌라프릴 및 조페노프릴로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 베나제프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 캡포프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 에날라프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 리시노프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 페린도프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 라미프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 트란돌라프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 조페노프릴이 투여된다. 일부 구체예들에서, ACE 억제제의 투여로 단백뇨가 있고, 정상적인 신장 기능을 갖는 대상체에게서 투석이 지연된다. 일부 구체예들에서, ACE 억제제의 투여는 대상체의 신장 기능 감소를 늦춘다. 일부 구체예들에서, ACE 억제제의 투여는 대사체에서 단백뇨를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, ACE 억제제의 투여는 대상체에서 신장 손상을 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 ARB 및 ACE 억제제를 투여한다. 일부 구체예들에서, 단백뇨 및/또는 마이크로알부민뇨를 포함하는 신장 질환 또는 병태를 가지고 있는 대상체에게 ARB 및 ACE 억제제를 투여한다.
일부 구체예들에서, 안지오텐신 길항작용에 대한 대안적 접근법은 ACE 억제제 및/또는 ARB를 알도스테론 길항제와의 조합이다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태 (가령, 원발성 FSGS)를 가지고 있는 대상체에게 면역억제 치료가 시행된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체는 면역억제 약물로 치료된다. 일부 구체예들에서, 면역억제는 이차적 FSGS를 갖는 대상체들에게 시행되지 않는다. 일부 구체예들에서, 면역억제제는 원발성 FSGS를 갖고 있지 않은 대상체에게 투여되지 않는다. 일부 구체예들에서, 면역억제제는 코르티코스테로이드, 칼시뉴린 억제제, 야누스 키나제 억제제, 포유류 표적 라파마이신(mTOR) 억제제, IMDH 억제제 및 생물학적 제제 (단클론항체를 비롯한, 그러나, 이에 국한되지 않음)로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 코르티코스테로이드를 투여한다. 일부 구체예들에서, 글루코코르티코이드는 코르티코스테로이드이다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 하나 또는 그 이상의 글루코코르티코이드를 투여한다. 일부 구체예들에서, 글루코코르티코이드의 투여는 초기 치료법이다. 일부 구체예들에서, 글루코코르티코이드는 베클로메타손, 베타메타손, 부데소니드, 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 메틸프레드니손, 프레드니손 및 트리암시놀론으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 프레드니손을 투여한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 프레드니솔론을 투여한다.
일부 구체예들에서, 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린 (가령, 사이클로스포린, 시클로스포린, 시클로스포린, Neoral, Sandimmune, SangCya) 및 타크로리무스 (가령, Astagraf XL, Envarsus XR, Prograf)로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 칼시뉴린 억제제는 지속적인 스테로이드 요법을 견딜 수 없는 스테로이드-민감성 피험자 및/또는 스테로이드-내성 신장 질환(가령, 스테로이드 내성 FSGS)이 있는 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 시클로스포린을 투여한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 타크로리무스를 투여한다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드 및/또는 칼시뉴린 억제제의 조합이 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 시클로스포린과 프레드니손이 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 타크로리무스 및 프레드니손이 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 시클로스포린 및 프레드니손은 크레아티닌 제거로 평가되는 신장 기능 보존을 위해 투여된다.
일부 구체예들에서, 글루코코르티코이드와 결합된 미코페놀레이트 모페틸(MMF) 치료는 칼시뉴린 억제제를 복용할 수 없는 피험자에게 유익할 수 있다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 하나 또는 그 이상의 글루코코르티코이드와 미코페놀레이트 모페틸(MMF)의 조합이 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 MMF 및 프레드니손이 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 프레드니솔론 및 MMF이 투여된다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 사이클로포스파미드 및/또는 프레드니손이 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 프레드니솔론 및/또는 클로람부칠이 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 사이클로포스파미드가 투여된다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체에게 클로람부칠이 투여된다.
일부 구체예들에서, 야누스 키나제 억제제는 토파시티닙 (가령, Xeljanz)이다.
일부 구체예들에서, mTOR 억제제는 시롤리무스(가령, Rapamune) 및 에베롤리무스(가령, Afinitor, Zortress)로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, IMDH 억제제는 아자티오프린(가령, Azasan, Imuran), 레플루노미드(가령, Arava) 및 미코페놀레이트(가령, CellCept, Myfortic)로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 생물학제는 아바타셉트(가령, 오렌시아), 아달리무맙(가령, 휴미라), 아나킨라(가령, 키네렛), 바실릭시맙(가령, Simulect), 세르톨리주맙(가령, Cimzia), 다클리주맙(가령, Zinbrycepta), 에타네르, 골리무맙(가령, Simponi), 인플릭시맙(가령, Remicade), 익세키주맙(가령, Taltz), 나탈리주맙(가령, Tysabri), 리툭시맙(가령, Rituxan), 세큐키누맙(가령, Cosentyx), 토실리주맙(가령, Actemra) 우스테키누맙(가령, Stelara) 및 베돌리주맙(가령, Entyvio)로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 스태틴 (가령, 베나제프릴, 발사르탄, 플루바스태틴, 프라바스태틴)이 투여된다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 라데미르센(lademirsen)이 투여된다. 라데미르센은 항-miRNA-21이다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 바르독솔론 메틸이 투여된다. 바르독솔론 메틸은 KEAP1-Nrf2 경로의 활성화제이며, 바르독솔론 메틸은 또한 염증성 전사 인자 NF-κB를 억제한다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 Achtar 겔이 투여된다. Achtar 겔은 오늘날 요구되는 것보다 덜 엄격한 기준에 따라, 신증 증후군에 대해 미국 식품의약국(FDA)에 의해 1950년대에 승인되었다. 일부 구체예들에서, 일부 사례 연구는 FSGS가 있는 일부 대상체에서 Acthar의 제한된 효능을 시사한다. 일부 구체예들에서, FSGS가 있는 대상체에게 Achtar 겔이 투여된다.
일부 구체예들에서, ADPKD을 갖는 대상체에게 톨바탄 (가령, OPC-41061)이 투여된다. 일부 구체예들에서, 톨바탄은 말기 만성 신장 질환 환자에서 1년 동안 eGFR에서 위약보다 느린 감소를 나타내었지만, 그러나, 빌리루빈 및 알라닌 아미노전이효소 수준의 상승과 관련있다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 갖는 대상체에게 스파르센탄, 알리스키렌, 알로푸리놀, ANG-3070, 아토르바스태틴, 블레셀루맙, 보수티닙, CCX140-B, CXA-10, D6-25-하이드록시비타민 D3, 다파글리플로진, MMF와 함께 덱사메타손, 에모딘, FG-3019, FK506, FK-506 및 MMF, FT-011, 갈락토즈, GC1008, GFB-887, 이소트레티노인, 란레오티드, 레바미솔, 리씨밥탄, 로스마피모드, 메트포르민, 미조르빈, N-아세틸만노사민, 옥트레오타이드, 파리칼시톨, PF-06730512, 피오글리타존, 프로파게르마늄, 프로파게르마늄 및 이르베사르탄, 라파무네, 라파마이신, RE-021 (가령, 스파센탄), RG012, 로시글리타존 (가령, Avandia), 사퀴나비르, SAR339375, 소마토스태틴, 스피로노락톤, 테세바티닙(KD019), 테트라코삭틴, 트립테리지움 윌포르디(tripterygium wilfordii) (TW), 발프로산, VAR-200, 벤글루스타트 (GZ402671), 베리누라드, 보클로스포린, VX-147와 조합하여 하나 또는 그 이상의 아바타셉트를 투여한다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 신장 투석을 한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 신장 이식을 한다. 일부 구체예들에서, ESRD을 갖는 대상체는 신장 이식을 한다. 일부 구체예들에서, 신장 이식을 한 대상체는 재발성 신장 질환을 경험하지 않는다. 일부 구체예들에서, 신장 이식을 한 대상체는 항사구체 기저막 항체 질환에 걸린다. 일부 구체예들에서, 항-사구체 기저막 항체 질환은 신장 이식-후 일년 이내에 발생한다. 일부 구체예들에서, 항사구체 기저막 항체 질환을 갖는 대상체에게 메틸프레드니손 및/또는 사이클로포스파미드를 투여한다. 일부 구체예들에서, 항-사구체 기저막 항체 질환을 갖는 대상체는 혈장분리교환술을 받는다.
일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 간엽 줄기 세포 치료제를 투여한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 골수 줄기 세포를 투여한다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 지단백질 제거를 받는다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에게 Liposorber LA-15 장치를 받는다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 혈장분리교환술을 받는다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 혈장 교환을 받는다. 일부 구체예들에서, 신장 질환 또는 병태를 갖고 있는 대상체 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)는 식단의 변화(가령, 식이 나트륨 섭취)를 받는다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 대상체에서 신장 질환 또는 병태의 임상적 악화 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)를 지연시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법들은 하나 또는 그 이상의 신장 질환 또는 병태의 연합된 합병증 (가령, 알포트 증후군, 국소 분절 사구체 경화증 (FSGS), 다낭성 신장 질환, 만성 신장 질환)에 대한 입원 위험을 감소시킨다.
7.
약제학적 조성물
특정 측면들에서, 본 명세서의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 단독으로 또는 약제학적 제형 (또한 치료 조성물 또는 약제학적 조성물로도 지칭됨)의 성분으로 투여될 수 있다. 약제학적 제형은 이 안에 포함된 활성 성분 (가령, 본 명세서의 물질)의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하고, 그리고 이 제형이 투여될 예정인 대상에 대하여 수용불가능한 독성이 있는 추가 성분을 포함하지 않는 형태의 제제를 말한다. 대상 화합물은 인간 또는 동물용 의약에 사용하기 위한 임의의 편리한 방법으로 투여 용으로 제형화 될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질들은 약제학적으로 수용가능한 운반체와 함께 제형화될 수 있다. 약제학적으로 수용가능한 운반체는 활성 성분이외에 약제학적 제형 안에 있는 성분을 말하며, 일반적으로 대상에게 비독성이다. 약학으로 수용가능한 운반체는 완충액, 부형제, 안정화제, 및/또는 보존제다. 일반적으로, 본 명세서에 이용되는 약제학적 제형은 대상에게 투여될 때, 발열원이 없고, 생리학적으로-수용가능한 형태이다. 본 명세서에서 설명된 것들 이외의 치료에 유용한 물질은 상기에서 설명된 바와 같이, 본 명세서의 방법에서 해당 물질과 복합 투여될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 명세서의 치료 방법은 상기 조성물을 전신 투여하거나, 또는 임플란트 또는 장치로부터 국소적으로 투여하는 것을 포함한다. 투여 될 때, 본원에서 사용하기 위한 치료용 조성물은 실질적으로 발열 원이 없거나, 또는 발열 원이 없고, 생리학적으로 허용가능한 형태이다. 전술한 바와 같이 조성물에 임의로 포함될 수 있는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 이외의 치료학적으로 유용한 제제는 본원에 개시된 방법에서 대상 화합물과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 본원에 개시된 단백질 치료요법적 작용제는 비경구적으로, 특히 정맥내 또는 피하로 투여될 것이다. 일부 구체예들에서, 비-경구 투여 경로는 근육내, 복강내, 피내, 유리체내, 경막외, 뇌내, 동맥내, 관절내, 해면체내, 병변내, 골내, 안내, 경막내, 정맥내, 경피, 경점막, 양막외 투여, 피하 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 비-경구 투여 경로는 피하 경로이다. 일부 구체예들에서, 비-경구 투여 경로는 피하 주사이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 조성물은 피하 주사에 의해 투여된다. 비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물들은 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체와 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 유화액, 또는 사용 직전에 멸균 주사 용액 또는 분산액으로 재구성 될 수 있는 멸균 분말을 포함할 수 있고, 여기에는 항산화제, 완충제, 정균제, 그리고 의도된 수령인의 혈액에 등장성인 제제를 제공하는 용지, 또는 현탁 또는 농후제가 포함될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사한 것들), 그리고 이의 적절한 혼합물, 식물성 오일, 가령 올리브 오일, 그리고 주사가능한 유기 에스테르, 가령, 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어, 코팅 물질, 가령, 레시틴의 사용, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지 그리고 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
조성물 및 제형은 원한다면, 활성 성분을 함유하는 하나 또는 그 이상의 단위 투여형을 함유할 수 있는 팩 또는 디스펜서 장치로 제공될 수 있다. 상기 팩은 예를 들어, 블리스터 팩과 같은 금속 또는 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서 장치에는 관리 지침이 수반될 수 있다.
또한, 상기 조성물은 표적 조직 부위에 운반하기 위한 형태에 포집되거나 또는 주입될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 표적 조직 부위에 하나 또는 그 이상의 치료 화합물 (예를 들어, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체)을 전달할 수 있는 매트릭스를 포함할 수 있고, 발달중인 조직을 위한 구조를 제공하고, 신체 내로 최적으로 재흡수될 수 있다. 예를 들면, 상기 매트릭스는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 지연 방출을 제공할 수 있다. 이러한 매트릭스는 다른 이식된 의학 용도에 현재 사용되는 재질로 형성될 수 있다.
매트릭스 재질은 생체적합성, 생분해성, 기계적 성질, 미용적 외관 및 경계면 성질에 의해 기초한다. 해당 조성물의 특정 용도가 적절한 제형을 규정할 것이다. 상기 조성물에 대한 잠재적 매트릭스는 생분해가능하며, 화학적으로 황산칼슘, 인산삼 칼슘, 히드록시아파타이트, 폴리락트산 및 폴리안하이드리드로 규정될 수 있다. 다른 잠재적 물질은 예를 들면, 뼈 또는 피부 콜라겐을 포함하는 생분해가능하며, 생물학적으로 잘 규정된 물질이다. 또한, 매트릭스는 순수 단백질 또는 세포외 매트릭스 성분들로 구성된다. 다른 잠재적 매트릭스는 비-생분해성이며, 화학적으로 예를 들면, 소결(sintered) 히드록시아파타이트, 바이오글라스, 알루미네이트 또는 기타 세라믹을 포함한 비-생분해성이며, 화학적으로 규정된다. 매트릭스는 예를 들면, 폴리락트산 및 히드록시아파타이트 또는 콜라겐 및 인산삼 칼슘을 포함하는 전술한 유형의 물질의 조합을 포함할 수도 있다. 바이오세라믹은 공극 크기, 입자 크기, 입자 형태 및 생분해성을 변경시키기 위하여 조성물, 이를 테면, 칼슘-알루미네이트-포스페이트 및 공정이 변경될 수 있다.
경구 투여용 고체 투여 제형 (캡슐, 테블릿, 알약, 당의정, 분말, 과립제 및 이와 유사한 것들)에서, 본 발명의 하나 또는 그 이상의 치료 화합물은 하나 또는 그 이상의 약학적으로 수용가능한 담체, 이를 테면 구연산 나트륨 또는 인산 이칼슘, 및/또는 다음중 임의의 것과 혼합될 수 있다: (1) 충전제 또는 연장제, 이를 테면 전분, 락토즈, 슈크로즈, 포도당, 만니톨, 및/또는 규산; (2) 결합제, 이를 테면, 예를 들면, 카르복시메틸셀룰로오스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 슈크로즈, 및/또는 아카시아; (3) 습윤제, 이를 테면 글리세롤; (4) 분해제, 이를 테면 한천-한천, 탄산 칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 규산염, 및 탄산 나트륨; (5) 용액 지체제, 이를 테면 파라핀; (6) 흡수 가속화제, 이를 테면 4급 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 이를 테면, 예를 들면, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 이를 테면 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 이를 테면, 활석, 스테아레이트 칼슘, 스테아레이트 마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 라우릴 술페이트 나트륨, 및 이의 혼합물; 그리고 (10) 발색제. 캡슐, 테블릿 및 알약의 경우, 상기 약제학적 조성물은 완충 물질을 또한 포함할 수 있다. 유사한 형태의 고체 조성물은 가령, 락토스 또는 유당과 같은 부형제, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사한 것을 이용하여 연질 및 경질 충전된 젤라틴 캡슐 안에 충전물로 이용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 투약형은 약학으로 수용가능한 에멀션, 마이크로에멀션, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함할 수 있다. 활성 성분에 추가하여, 액체 투약형은 당분야에서 통상적으로 이용하는 비활성 희석액, 예를 들면, 물 또는 기타 용매, 가용화 물질 및/또는 유화제, 가령, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (가령, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 검, 올리브, 피마자, 및 참깨유), 글리세롤, 테트라히드로퓨릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 및 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 불활성 희석제 외에도, 경구 조성물은 이를 테면, 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향료, 착색제, 향료 및 방부제와 같은 보조제를 포함할 수 있다.
현탁액은 활성 화합물 이외에, 예를 들어 에톡시화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨, 및 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로즈, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천, 그리고 트라가탄 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유 할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 파라벤, 클로로부탄올 및 페놀 소르브산 및 이와 유사한 것들과 같은 다양한 항박테리아 및 항진균제를 포함시킴으로써 확보될 수 있다. 상기 조성물에 설탕, 염화나트륨 등의 등장화제가 내포되는 것이 바람직할 수도 있다. 추가적으로, 예를 들어, 모노스테아르산 알루미늄 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 물질을 포함시킴으로써 주사가능한 약형의 연장된 흡수가 이루어질 수 있다.
투여 섭생은 본 발명의 대상 화합물(가령, (가령, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체)의 작용을 변형시키는 다양한 인자를 고려하는 주치의에 의해 결정될 것이다. 다양한 요인에는 대상체의 연령, 성별,식이, 중증도, 투여 시간 및 기타 임상 인자가 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다. 임의선택적으로, 투여량은 재구성에 사용 된 매트릭스의 유형 및 조성물 중의 화합물의 유형에 따라 다를 수 있다. 최종 조성물에 기타 공지의 성장 인자들을 추가하면 이 약형에 또한 영향을 줄 수 있다. 진행은 골 성장 및/또는 수복 (가령, X- 선 (DEXA 포함)), 조직 형태 측정 및 테트라사이클린 라벨링의 주기적 평가를 통해 모니터링 할 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 생체내 생산을 위한 유전자 요법을 또한 제공한다. 그러한 치료는 상기 나열된 바와 같은 하나 이상의 장애를 갖는 세포 또는 조직 내로 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 폴리뉴클레오티드 서열을 도입함으로써 그의 치료 효과를 얻을 수 있다. 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 폴리뉴클레오티드 서열의 전달은 예를 들어, 키메라 바이러스 또는 콜로이드성 분산 시스템과 같은 재조합 발현 벡터를 사용하여 달성 될 수 있다. 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 폴리뉴클레오티드서열의 바람직한 치료 전달은 표적화된 리포좀을 사용하는 것이다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에 따른 하나 또는 그 이상의 물질의 생체내 생산을 위한 유전자 요법을 또한 제공한다. 그러한 치료는 상기 나열된 바와 같은 하나 이상의 장애를 갖는 세포 또는 조직 내로 약물 서열을 도입함으로써 그의 치료 효과를 얻을 수 있다. 상기 물질 서열의 전달은 예를 들어, 키메라 바이러스 또는 콜로이드성 분산 시스템과 같은 재조합 발현 벡터를 사용하여 달성 될 수 있다. 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질 서열의 바람직한 치료 전달은 표적화된 리포좀을 사용하는 것이다.
본 명세서에서 교시된 바와 같이, 유전자 요법에 이용될 수 있는 다양한 바이러스 벡터는 아데노바이러스, 헤르페스 바이러스, 유두종, 또는 RNA 바이러스, 가령, 레트로바이러스를 포함한다. 바람직하게는, 레트로바이러스 벡터는 뮤린 또는 조류 레트로바이러스의 유도체다. 단일 외부 유전자가 삽입될 수 있는 레트로바이러스 벡터의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MoMuLV), 하베이 뮤린 육종 바이러스 (HaMuSV), 뮤린 유방 종양 바이러스 (MuMTV), 및 라우스 육종 바이러스 (RSV). 다수의 추가 레트로바이러스 벡터가 다중 유전자를 혼입할 수 있다. 이들 모든 벡터는 선택가능한 표지의 유전자를 전달 또는 혼입하여, 형질유도된 세포를 동정 및 생성할 수 있다. 레트로바이러스 벡터는 예를 들면, 당, 당지질, 또는 단백질을 부착시킴으로써, 표적-특이적으로 만들어질 수 있다. 항체를 이용한 바람직한 표적화가 이루어진다. 당업자는 특이적 폴리뉴클레오티드 서열을 레트로바이러스 게놈 안에 삽입시키거나 또는 바이러스 외피에 부착시켜, 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 폴리뉴클레오티드를 함유하는 레트로바이러스 벡터의 표적 특이적 운반이 가능하다는 것을 인지할 것이다. 바람직한 실시 양태에서, 벡터는 뼈 또는 연골을 표적으로 한다.
대안으로, 조직 배양 세포는 통상적인 인산칼슘 형질감염에 의해 레트로바이러스 구조 유전자 gag, pol, 및 env를 인코드하는 플라스미드로 직접적으로 형질감염될 수 있다. 이들 세포는 관심 대상의 유전자를 함유하는 벡터 플라스미드로 형질감염된다. 생성 세포는 레트로바이러스 벡터를 배양 배지로 방출한다.
단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 폴리뉴클레오티드에 대한 또다른 표적화된 전달 시스템은 콜로이드성 분산 시스템이다. 콜로이드성 분산 시스템은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구, 비드, 그리고 수중유 에멀션, 미셀, 혼합 미셀 및 리포좀을 포함하는 지질-기반 시스템을 포함한다. 본 명세서의 바람직한 콜로이드 시스템은 리포좀이다. 리포좀은 인공 막 소포로, 시험관 및 생체내 운반 비이클로 유용하다. RNA, DNA, 및 고유 비리온은 수성 내부에 포집되고, 생물학적 활성 형태로 세포로 운반된다(Fraley, et al., (1981) Trends Biochem. Sci., 6:77 참고). 리포좀 비이클을 이용한 효과적인 유전자 전달 방법은 당분야에 공지되어 있다, 가령, Mannino, et al., (1988) Biotechniques, 6:682, 1988 참고. 리포좀의 조성물은 통상 인지질의 조합으로, 스테로이드, 구체적으로, 콜레스테롤과 통상적으로 복합된다. 다른 인지질 또는 다른 지질도 사용될 수 있다. 리포좀의 물리적 성질은 pH, 이온 강도 그리고 이가양이온 존재에 따라 달라진다.
리포좀 생산에 유용한 지질의 예는 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜콜린, 포스파티딜 세린, 포스파티딜 에탄올 아민, 스핑고리피드, 세레브로시드 및 강글리오사이드와 같은 포스파티딜 화합물이 내포된다. 예시적인 인지질은 난 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 및 디스테아로일포스파티딜콜린이 내포된다. 리포좀의 표적화는 예를 들면, 장기(organ)-특이성, 세포-특이성, 및 소기관-특이성에 기반을 두고, 당분야에 공지되어 있다.
본 명세서는 pH를 조정하기 위해 산 및 염기를 포함하도록 다양할 수 있는 제제를 제공하고; pH를 좁은 범위로 유지하는 완충제를 포함한다.
투여 섭생은 본 발명의 대상 화합물(가령, 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체)의 작용을 변형시키는 다양한 인자를 고려하는 주치의에 의해 결정될 것이다. 다양한 요인에는 환자의 연령, 성별, 및/또는 식이, 중증도, 투여 시간 및 기타 임상 인자가 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다. 임의선택적으로, 투여량은 재구성에 사용 된 매트릭스의 유형 및/또는 조성물 중의 화합물의 유형에 따라 다를 수 있다. 최종 조성물에 기타 공지의 성장 인자들을 추가하면 이 약형에 또한 영향을 줄 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 하나 또는 그 이상의 투여 분량에서 투여된다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 0.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 0.50 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 0.75 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 1.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 1.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 1.50 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 1.75 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 2.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 2.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 2.50 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 2.75 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 3.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 3.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 3.50 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 3.75 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 4.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 4.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 4.50 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 4.75 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 5.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 5.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 6.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 7.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 8.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 9.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 10.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 20.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 30.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 적어도 0.25 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 TβRII 융합 길항체의 투여분량은 약 0.25 mg/to 약 30.00 mg/kg의 상기 이종다량체(들)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매일 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2일에 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3일 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4일 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5일 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6일 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매주 한 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2개월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3개월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4개월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5개월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6개월 한번 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매년 한번 투여된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매일 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2일에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3일에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4일에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5일에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6일에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매주 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2주에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3주에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4주에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격주 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매월 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 2개월에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3개월에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4개월에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5개월에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6개월에 두 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매년 두 차례 투여된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매일 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격일로 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3일에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4일 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5일 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6일 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매주 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격주로 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3주에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4주에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격주에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매월 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 격월로 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 3개월에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 4개월에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 5개월에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매 6개월에 세 차례 투여된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 단일-가지 ActRIIA 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIB 이종다량체의 투여분량은 매년 세 차례 투여된다.
일부 구체예들에서, 본 명세서는 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 약 0.25 mg/kg ~ 약 30.00 mg/kg의 투여분량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 적어도 매주 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 적어도 매 3주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 적어도 매 4주에 한 번 투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 피하로 투여된다.
구체예
지금부터 본 발명이 일반적으로 기술되며, 단지 본 발명의 특정 구체예 및 실시 양태는 예시하기 위한 목적으로 포함되는 것으로, 이에 본 발명을 제한하려는 의도는 아니며, 하기 실시 예를 참조함으로써 보다 용이하게 이해될 것이다.
실시예 1. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 생성 및 특징화
출원인은 짧은 N-말단 연장을 갖는 IgG 중쇄의 불변 영역 (가령, Fc 도메인)와 제 2 폴리펩티드를 포함하는 가용성 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 구축하였고, 이때 인간 ActRIIB의 세포외 도메인은 IgG 중쇄 (가령, Fc 도메인)의 별개 불변 영역은 세포외 도메인과 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역 (가령, Fc 도메인) 사이에 위치한 링커에 의해 융합된다. 개별 구조체는 차례로, 단량체 Fc 폴리펩티드와 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체로 지칭되며, 이들 각 서열은 하기에서 제시된다.
ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체 또는 Fc 동종이량체형 융합체와 달리, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진하는 방법은 비대칭 이형화학성 복합체 형성을 유도하기 위하여 Fc 도메인의 아미노산 서열에 변경을 도입시키는 것이다. Fc 도메인을 이용하여 비대칭 상호작용 짝을 만드는 많은 상이한 방법들이 본 명세서에서 설명된다.
한 가지 방법에서, 차례로, 서열 식별 번호: 46-48, 84 및 49-51, 85의 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. 상기 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 각각 조직 플라스미노겐 활성자 (TPA) 리더를 이용한다: MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP (서열 식별 번호: 45).
상기 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 서열 (서열 식별 번호: 46)은 하기에 제시된다:
리더 (신호) 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동종이량체형 복합체 (ActRIIB 동종이량체 Fc 융합 또는 동종이량체 Fc 융합)보다는 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 ActRIIB 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 46의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
이러한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체는 다음의 핵산 서열 (서열 식별 번호: 47)에 의해 인코드된다:
성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 (서열 식별 번호: 48)는 다음과 같다.
성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 (서열 식별 번호: 84)는하기에서 도시된 바와 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
상보적 인간 G1Fc 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 49)는 TPA 리더를 이용하고, 이는 다음과 같다:
리더 서열은 밑줄이 그어져 있고, Fc 폴리펩타이드의 선택적 N-말단 확장은 로 표시된다. 가능한 동종이량체형 융합체 보다는 상기 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 두 개 아미노산 치환 (리신을 음이온성 잔기로 대체)이 상기 로 나타낸 것과 같이, 단량체 Fc 폴리펩티드로 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 49의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
이러한 상보적 Fc 폴리펩티드는 다음 핵산 (서열 식별 번호: 50)에 의해 인코드된다:
성숙한 단량체 Fc 폴리펩티드의 서열은 다음과 같다 (서열 식별 번호: 51).
성숙한 단량체 Fc 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 85)의 서열은 하기에서 도시된 바와 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
차례로, 서열 식별 번호: 48 (또는 서열 식별 번호: 84)와 서열 식별 번호: 51 (또는 서열 식별 번호: 85)의 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 공동-발현되고, CHO 세포로부터 정제되어, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 폴리펩티드를 이용하여 이종다량체 형성을 촉진시키는 또다른 방법에서, 차례로, 서열 식별 번호: 60-61, 86, 90-91, 및 62-63, 87의 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드 서열에서 도시된 바와 같이, 상보적 소수성 상호작용 및 추가 분자간 이황화 결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다.
상기 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 서열 (서열 식별 번호: 60)은 TPA 리더를 이용하고, 이는 하기에 제시된다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이량체 복합체보다는 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린을 시스테인으로, 그리고 트레오닌을 트립토판으로 대체)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 60의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체는 다음과 같다:
대안적인 성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체는 다음과 같다:
성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체는 하기에서 도시된 바와 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
대안적인 성숙한 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체는 다음과 같다:
단량체 Fc 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 62)의 상보적 형태는 TPA 리더를 이용하고, 이는 다음과 같다.
리더 서열은 밑줄이 그어져 있고, Fc 폴리펩타이드의 선택적 N-말단 확장은 로 표시된다. 가능한 동종이량체형 복합체 보다는 상기 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 네 개 아미노산 치환이 상기 로 나타낸 것과 같이, 단량체 Fc 폴리펩티드로 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 62의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
성숙한 단량체 Fc 폴리펩티드 서열 (서열 식별 번호: 63)은 다음과 같다.
성숙한 단량체 Fc 폴리펩티드 서열 (서열 식별 번호: 87)은 하기에서 도시된 바와 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
차례로, 서열 식별 번호: 61 (또는 서열 식별 번호: 86)와 서열 식별 번호: 63 (또는 서열 식별 번호: 87)의 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 공동-발현되고, CHO 세포로부터 정제되어, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체가 생성될 수 있다.
차례로, 서열 식별 번호: 90 (또는 서열 식별 번호: 91)과 서열 식별 번호: 63 (또는 서열 식별 번호: 87)의 단일-가지 ActRIIB Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 공동-발현되고, CHO 세포로부터 정제되어, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체가 생성될 수 있다.
다양한 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
상기 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. 단일-가지 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체 및 ACTRIIB 동종이량체 Fc 융합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주사하였고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩과 전형적으로 연합된 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체보다 더 큰 리간드 선택성을 갖는다는 것이 증명된다. 반면, ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체는 5개의 중요한 리간드 (도 5에서 액티빈 A, 액티빈 B, BMP10, GDF8, 및 GDF11의 클러스터 참조)에 강력하게 결합하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 이들 리간드를 더 용이하게 구별한다. 따라서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 액티빈 B 및 GDF11에 강력하게 결합하고, GDF8 및 액티빈 A에 중간 강도 수준으로 결합한다. ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체와 더 대조적으로, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합는 BMP10에 단지 약한 결합을 나타내며, BMP9에는 결합하지 않는다. 도 5 참고.
이들 결과에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체보다 더 선택적인 길항제이다. 따라서, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체는 이러한 선택적 길항성이 유리한 특정 응용분야에서 ActRIIB 동종이량체 Fc 융합체보다 더 유용할 것이다. 실시예는 하나 또는 그 이상의 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 AB, GDF8, 및 GDF11의 길항작용을 유지하지만, 그러나 하나 또는 그 이상의 BMP9, BMP10, BMP6, 및 GDF3의 길항작용은 최소화시키는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다. 전자 그룹에서 리간드의 선택적 억제는 치료적으로 특히 유리할 것인데, 그 이유는 그들은 후자 그룹 및 관련 임상 조건 세트와 기능적으로 다른 경향이 있는 하위 패밀리를 구성하기 때문이다.
실시예 2. 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 생성 및 특징화
출원인은 짧은 N-말단 연장을 갖는 단량체 Fc 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드를 포함하는 가용성 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체를 구축하였고, 이때 인간 ActRIIA의 세포외 도메인은 별도의 Fc 도메인과 이 세포외 도메인과 제 2 Fc 도메인 사이에 위치한 링커에 의해 융합된다. 개별 구조체는 차례로, 단량체 Fc 폴리펩티드와 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체로 지칭되며, 이들 각 서열은 하기에서 제시된다.
단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 실시예 1에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체에 대해 기술된 것과 유사한 방식으로 유도되어 형성될 수 있다. 제 1 방식에서, 차례로, 서열 식별 번호: 서열 식별 번호: 55-57, 88 및 49-51, 85의 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다.
상기 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체는 TPA 리더를 이용하고, 이는 다음과 같이 제시된다:
리더 서열과 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동종이량체형 복합체 (ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체 또는 Fc 동종이량체형 융합체) 보다는 상기 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위해, 두 개 아미노산 치환 (음이온성 잔기를 리신으로 대체)은 상기 로 표시된 바와 같이, 이 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 55의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
이러한 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체는 다음의 핵산 서열에 의해 인코드된다: (서열 식별 번호: 56).
성숙한 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 서열은 다음과 같다 (서열 식별 번호: 57).
성숙한 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 서열은 다음과 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다(서열 식별 번호: 88).
실시예 1에서 기술된 바와 같이, 인간 G1Fc 단량체 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 49)의 상보적 형태는 TPA 리더를 이용하고, 임의선택적 N-말단 연장을 통합한다. 가능한 동종이량체형 복합체 보다는 상기 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 두 개 아미노산 치환 (리신을 음이온성 잔기로 대체)이 단량체 Fc 폴리펩티드로 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 49의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K) 없이 제공될 수 있다. 이러한 상보적 Fc 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 50의 핵산에 의해 인코드되며, 성숙한 단량체 Fc 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 51 또는 서열 식별 번호: 85)는 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다.
차례로, 서열 식별 번호: 57 (또는 서열 식별 번호: 88)과 서열 식별 번호: 51 (또는 서열 식별 번호: 85)의 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 공동-발현되고, CHO 세포로부터 정제되어, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 폴리펩티드를 이용하여 이종다량체 형성을 촉진시키는 또다른 방법에서, 차례로, 서열 식별 번호: 58-59, 89 및 62-63, 87의 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 및 Fc 폴리펩티드 서열에서 도시된 바와 같이, 상보적 소수성 상호작용 및 추가 분자간 이황화 결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다.
상기 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 (서열 식별 번호: 58)는 TPA 리더를 이용하고, 이는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이량체 복합체보다는 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린을 시스테인으로, 그리고 트레오닌을 트립토판으로 대체)이 상기 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 58의 아미노산 서열은 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된 것으로 제공될 수 있다 (서열 식별 번호: 89).
성숙한 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 (서열 식별 번호: 59)는 다음과 같다.
성숙한 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체는 다음과 같이, 임의선택적으로 C-말단 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다(서열 식별 번호: 89).
실시예 1에서 기술된 바와 같이, 인간 G1Fc 단량체 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 62)의 상보적 형태는 TPA 리더를 이용하고, 임의선택적 N-말단 연장을 통합한다. 가능한 동종이량체형 복합체 보다는 상기 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 네 개 아미노산 치환이 단량체 Fc 폴리펩티드로 도입될 수 있다. 서열 식별 번호: 62의 아미노산 서열과 성숙한 G1Fc 폴리펩티드 (서열 식별 번호: 63)는 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된 것으로 제공될 수 있다 (서열 식별 번호: 87).
차례로, 서열 식별 번호: 59 (또는 서열 식별 번호: 89) 및 서열 식별 번호: 63 (또는 서열 식별 번호: 87)의 단일-가지 ActRIIA Fc 융합 단량체 및 단량체 Fc 폴리펩티드는 공동-발현되고, CHO 세포로부터 정제되어, 단일-가지 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체가 생성될 수 있다.
다양한 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
상기 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. 상기 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체 및 ACTRIIA 동종이량체 Fc 융합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되었다. 리간드들을 주사하였고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩과 전형적으로 연합된 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이터에서 단일-가지 ActRIIA-Fc 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체와 상이한 리간드 선택성 (그리고 단일-가지 또는 동종체 ActRIIB-Fc와도 또한 상이함 - 실시예 1 참고)을 갖는다는 것을 나타낸다. 반면, ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체는 액티빈 A 및 GDF11에 강력하게 결합하는 것과 복합하여 액티빈 B에 우선 선호적 결합을 나타내며, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 GDF11 (약한 결합자)보다는 액티빈 A에 대해 상당히 강화된 선택성을 나타내는 것과 복합하여, 액티빈 B보다는 액티빈 A에 역전된 선호도를 갖는다. 도 6 참고. 또한, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체로 관찰하였을 때, GDF8 및 BMP10에 대해 중간수준의 결합을 대개 유지한다.
이들 결과에서 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체와 비교하였을 때, 실질적으로 변경된 리간드 선택성을 갖는 길항제다. 따라서, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합체는 이러한 길항성이 유리한 특정 응용분야에서 ActRIIA 동종이량체 Fc 융합체보다 더 유용할 것이다. 실시예에는 GDF11의 길항작용을 최소화하면서, 액티빈 B보다 액티빈 A를 우선적으로 길항하는 것이 바람직한 치료 응용 분야들이 내포된다.
전술한 실시예들을 종합하면, 단일-가지 이종체 단백질 복합체의 맥락에 있을 때, ActRIIA 또는 ActRIIB 폴리펩티드는 동종체 단백질 복합체의 유형에 비해 변경된 선택성을 나타내는 신규한 결합 포켓을 형성하고, 이것으로 치료요법적 작용제로 가능한 사용을 위한 신규한 단백질 작용제가 형성된다.
실시예 3. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질은 신장 섬유증 및 염증을 억제시키고, 신장 손상이 감소된다.
신장 질환에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질의 효과는 마우스 한측면 요관 폐색 (UUO) 모델에서 평가되었다. 가령, Klahr and Morrissey (2002) Am J Physiol Renal Physiol 283: F861-F875 참고.
16마리의 12주령의 C57BL/6 수컷 마우스는 신장의 하부 폴(pole) 수준에서 일측면 요관 결찰을 2회 받았다. 3 일 후, 마우스를 두 그룹으로 무작위 배정하였다: i) "UUO/PBS" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 피하 주사했고) 그리고 ii) "UUO/sa-IIB-hd" (외과술 후, 3일, 7일, 10일 및 14일차 시점에서 8마리의 마우스에게 10mg/kg의 투여분량으로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합체를 피하 주사했다). 두 집단은 관련 동물 관리 지침에 따라 17 일차에 희생되었다. UUO 신장과 반대쪽 신장 모두에서 조직학적 분석 (H & E, Masson 's 3색(Trichrome) 염색)을 위해 개별 동물의 절반 신장을 수집하고("대조군"), RNA 추출(RNeasy Midi Kit, Qiagen, IL)을 위해 1/4 신장을 사용했다.
다양한 유전자의 수준을 평가하기 위해 UUO 신장 시료에 대한 유전자 발현 분석을 수행했다. 다양한 섬유성 유전자 (피브로넥틴, PAI-1, CTGF, Col-I, Col-III, 및 a-SMA) (차례로, 도 7A-7F), 염증성 유전자 (MCP-1 및 TNFα) (차례로, 도 7G-H, ), 트롬보스폰딘 1 (Thbs1) (도 7I), 신장 손상 유전자 (NGAL) (도 7J), 및 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 (TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3, 및 액티빈 A) (차례로, 도 7K-7N)의 발현을 평가하기 위해, CFX ConnectTM Real-time PCR 탐지계 (Bio-Rad, CA)를 이용하여 QRT-PCR을 실행하였다. 이러한 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드의 상향 조절은 신장 섬유증/신장 기능 장애와 밀접한 관련이 있으며, 신장 손상의 좋은 지표 역할을 한다. 일반적으로, 본원에서 테스트된 것들을 비롯하여, 여러 섬유증 유전자는 섬유증 동안 TGFβ에 의해 상향조절된다. Thbs1은 TGFβ의 직접적인 하류 표적이며, 또한 섬유증 동안을 포함하여 TGFβ 활성화를 조절하는 역할을 한다. Thbs1 발현의 증가는 TGFβ 발현의 증가를 의미할 가능성이 높기 때문에, Thbs1의 발현 수준을 측정하면 섬유증 수준을 알 수 있다. "UUO/PBS" 처리된 마우스와 비교하여, "UUO/sa-IIB-hd" 처리된 마우스는 섬유성 유전자 및 염증성 유전자의 발현을 유의미적으로 낮았고, TGFβ 1/2/3, 액티빈 A, 및 Thbs1의 상향조절이 감소되었고, 그리고 신장 손상 유전자 발현이 감소되었다.
종합하면, 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 치료는 신장 섬유증 및 염증을 억제시키고, 신장 손상을 감소시킨다는 것이 증명된다. 더욱이, 이들 이들 데이터는 다른 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질, 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질도 신장 질환 또는 병태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있음을 나타낸다.
실시예 4. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 치료는 Alport 마우스 모델에서 알부민뇨를 감소시키고, 신장 기능을 개선시킨다.
신장 질환에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질의 효과는 마우스 Alport 모델 (Col4a3-/-)에서 평가되었다. 가령, Cosgrove D, et al (1996) Genes Dev 10(23): 2981-92 참고.
13마리의, 4주령의 Col4a3-/- 마우스를 무작위로 두 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (7마리 마우스에게 피하로 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)를 주당 2회 주사함), 그리고 ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (6마리 마우스에게 피하로 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단배길을 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 주사함). 6마리의 Col4a3+/+ 마우스 ("WT"), 7마리의 Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클"), 그리고 알부민 (마우스 알부민 ELISA kit, Molecular Innovations, MI) 및 크레아티닌 (크레아티닌 분석 키트, BioAssay Systems, CA) 수준을 측정하기 위해, 치료 시작 전날(4주차 시점)과 53일차(7.5주차)에 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)")로 치료된 6마리의 Col4a3-/- 마우스로부터 소변 샘플을 수집하였다. ACR는 소변에서 크레아티닌에 대한 알부민 비율의 척도이다. 알부민은 일반적으로 혈액에 존재하는 주요 단백질이며, 일반적으로 신장이 제대로 기능할 때 소변에 알부민이 거의 또는 전혀 존재하지 않는다. 알부민 대 크레아티닌 비율(ACR)은 얼마나 많은 알부민이 소변으로 방출되는지를 보다 정확하게 나타내기 위해 계산된다. 근육 대사의 부산물인 크레아티닌은 일반적으로 일정한 속도로 소변으로 방출되므로, 임의의 소변 샘플에서 알부민을 측정할 때 크레아티닌 측정이 소변 농도를 교정하는 방법으로 작용할 수 있다. ACR 측정값이 높을수록 신장이 제대로 기능하지 않는다는 것을 나타낸다. 6마리 Col4a3+/+ 마우스 ("WT"), 7마리 Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클"), 그리고 혈액 요소 질소 (BUN) 측정 (DRI-CHEM 7000 chemistry analyzer, HESKA, CO)을 위해, 치료 시작 전날(4주차 시점)과 53일차(7.5주차)에 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 ("Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)")로 치료된 6마리 Col4a3-/- 마우스로부터 혈액 샘플을 수집하였다. BUN은 노폐물인 요소로 인한 혈액 내 질소의 양을 측정한 것이다. 요소는 일반적으로 소변을 통해 몸 밖으로 빠져나간다. 혈액 내 요소 수치가 높다는 것은 신장이 제대로 기능하지 않는다는 것을 나타낸다. 두 집단은 관련 동물 관리 지침에 따라 53 일차(7.5주)에 희생되었다.
소변 알부민 대 크레아티닌 비율(ACR)은 알부민뇨를 측정하기 위해 계산되었다. 도 8A 참고. Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클") 마우스에서 알부민뇨가 4주에서 7.5주로 유의하게 증가했다. Col4a3 비히클 마우스와 비교하였을 때, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)로 마우스를 치료하면 알부민뇨가 49.9% (p<0.01) 감소되었고, 이것은 Col4a3 sa-IIB-hd 마우스에서 감소된 BUN과 연합되었다 (도 8B).
종합하면, 이들 데이터에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 치료는 Alport 마우스 모델에서 알부민뇨를 감소시키고, 신장 기능을 개선시킨다는 것이 실증된다. 더욱이, 이들 이들 데이터는 다른 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질, 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질도 신장 질환 또는 병태(가령, 알포트 질환)의 치료 또는 예방에 유용할 수 있음을 나타낸다.
실시예 5. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 치료는 Col4a3-/- Alport 마우스 모델에서 알부민뇨를 감소시키고, 생존 ACEi를 연장시킨다.
신장 질환에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질의 효과는 마우스 Alport 모델 (Col4a3-/-)에서 평가되었다. 가령, Cosgrove D, et al (1996) Genes Dev 10(23): 2981-92 참고.
58마리의, 6-주령 나이의 Col4a3-/- 마우스를 음용수에 라미프릴 (ACEi, 10mg/kg/일일)로 처리하였고, 무작위로 세 그룹으로 나누었다: i) "Col4a3 비히클" (27마리의 마우스에게 비히클 대조군, 인산염 완충 염수 (PBS)로, 피하로, 주당 2회 주사하였음); ii) "Col4a3 sa-IIB-hd (10 mpk)" (11마리 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 10mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음); 그리고 iii) "Col4a3 sa-IIB-hd (30 mpk)" (20마리의 마우스에게 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질을 30mg/kg의 투여분량으로 주당 2회 피하 주사하였음). "WT" 마우스는 처리를 받지 않은 Col4a3 +/+ 마우스이다. 알부민 (마우스 알부민 ELISA 키트, Molecular Innovations, MI), 호중구 젤라티나제-연합된 리포칼린 (NGAL) (Abcam, MA), 및 크레아티닌 (크레아티닌 분석 키트, BioAssay Systems, CA) 수준을 측정하기 위해, 치료 시작 전 (6주차), 53일차 (7.5주차), 63일차 (9주차), 그리고 70일차 (10주차)에 소변 샘플을 수집하였다. ACR는 소변에서 크레아티닌에 대한 알부민 비율의 척도이다. 알부민은 일반적으로 혈액에 존재하는 주요 단백질이며, 일반적으로 신장이 제대로 기능할 때 소변에 알부민이 거의 또는 전혀 존재하지 않는다. 알부민 대 크레아티닌 비율(ACR)은 얼마나 많은 알부민이 소변으로 방출되는지를 보다 정확하게 나타내기 위해 계산된다. NGAL은 신장 손상의 표지자이며, 증가된 수준의 요중 NGAL은 신장 손상의 중증도와 관련있다. ACR 측정값이 높을수록 신장이 제대로 기능하지 않는다는 것을 나타낸다. 관련 동물 관리 지침에 따라, 각 그룹의 생존을 평가하기 위해 치료를 계속했다.
소변 알부민 대 크레아티닌 비율(ACR)은 알부민뇨를 측정하기 위해 계산되었다. 도 9A 참고. ACEi 치료와 무관하게, Col4a3-/- 마우스 ("Col4a3 비히클")에서 6주에서부터 10주까지 알부민뇨는 유의미적으로 증가되었다. Col4a3 비히클 마우스과 비교하여, 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)을 10mg/pk 및 30mg/kg으로 마우스를 처리하면 ACEi 존재 하에서 알부민뇨가 상당히 감소되었다. 또한, 30mg/kg 처리는 ACEi 존재 하에서 소변 NGAL (가령, uNAGL) 수준을 상당히 감소시켰다 (도 9B).
도 9C에 나타낸 것과 같이, ACEi 존재 하에서, "Col4a3 비히클" 마우스의 정중 생존 기간은 76 일이었다. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 10mg/kg로 마우스 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)를 치료하면 수명이 증가되었고, 정중 생존 기간은 93 일이었다. 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 30mg/kg로 마우스 (Col4a3 sa-IIB-hd 마우스)를 치료하면 수명이 증가되었고, 정중 생존 기간은 109 일이었다 (p<0.001).
종합하면, 이들 데이터에서 Alport 마우스 모델에서 단일-가지 ActRIIB 이형이량체 Fc 융합 단백질 치료는 ACEi 존재 하에서 알부민뇨를 감소시키고, 생존을 연장시킨다는 것이 실증된다. 더욱이, 이들 이들 데이터는 다른 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질, 예를 들면, 단일-가지 ActRIIA 이형이량체 Fc 융합 단백질도 신장 질환 또는 병태(가령, 알포트 질환)의 치료 또는 예방에 유용할 수 있음을 나타낸다.
참고자료로의 편입
여기에 언급된 모든 간행물 및 특허는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적으로 개별적으로 참조로 포함되도록 지시된 것처럼 본원에 참고로 인용된다.
주제의 특정 실시 예들이 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이고, 이에 한정되지 않는다. 본 명세서 및 청구 범위를 검토하면 많은 변형이 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범위는 그 균등 물의 전체 범위 및 명세서와 함께 청구항을 참조하여 그러한 변형과 함께 결정되어야 한다.
SEQUENCE LISTING
<110> ACCELERON PHARMA INC.
<120> SINGLE-ARM ACTRIIA AND ACTRIIB HETEROMULTIMERS AND METHODS FOR
TREATING RENAL DISEASES OR CONDITIONS
<130> 1848179-136-WO1
<140> PCT/US2021/021991
<141> 2021-03-11
<150> 62/989,037
<151> 2020-03-13
<160> 92
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 512
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr
145 150 155 160
Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro
165 170 175
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln
195 200 205
Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys
210 215 220
Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys
225 230 235 240
His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn
245 250 255
Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser
260 265 270
Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys
275 280 285
His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp
290 295 300
Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg
305 310 315 320
Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val
325 330 335
Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro
340 345 350
Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu
355 360 365
Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile
370 375 380
Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys
385 390 395 400
Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu
405 410 415
Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val
420 425 430
His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro
435 440 445
Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp
450 455 460
Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu
465 470 475 480
Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu
485 490 495
Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile
500 505 510
<210> 2
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr
115
<210> 3
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 3
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala
100
<210> 4
<211> 512
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 4
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr
145 150 155 160
Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro
165 170 175
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln
195 200 205
Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys
210 215 220
Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys
225 230 235 240
His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn
245 250 255
Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser
260 265 270
Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys
275 280 285
His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp
290 295 300
Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg
305 310 315 320
Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val
325 330 335
Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro
340 345 350
Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu
355 360 365
Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile
370 375 380
Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys
385 390 395 400
Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu
405 410 415
Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val
420 425 430
His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro
435 440 445
Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp
450 455 460
Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu
465 470 475 480
Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu
485 490 495
Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile
500 505 510
<210> 5
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 5
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr
115
<210> 6
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 6
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala
100
<210> 7
<211> 1536
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
atgacggcgc cctgggtggc cctcgccctc ctctggggat cgctgtgcgc cggctctggg 60
cgtggggagg ctgagacacg ggagtgcatc tactacaacg ccaactggga gctggagcgc 120
accaaccaga gcggcctgga gcgctgcgaa ggcgagcagg acaagcggct gcactgctac 180
gcctcctggc gcaacagctc tggcaccatc gagctcgtga agaagggctg ctggctagat 240
gacttcaact gctacgatag gcaggagtgt gtggccactg aggagaaccc ccaggtgtac 300
ttctgctgct gtgaaggcaa cttctgcaac gaacgcttca ctcatttgcc agaggctggg 360
ggcccggaag tcacgtacga gccacccccg acagccccca ccctgctcac ggtgctggcc 420
tactcactgc tgcccatcgg gggcctttcc ctcatcgtcc tgctggcctt ttggatgtac 480
cggcatcgca agccccccta cggtcatgtg gacatccatg aggaccctgg gcctccacca 540
ccatcccctc tggtgggcct gaagccactg cagctgctgg agatcaaggc tcgggggcgc 600
tttggctgtg tctggaaggc ccagctcatg aatgactttg tagctgtcaa gatcttccca 660
ctccaggaca agcagtcgtg gcagagtgaa cgggagatct tcagcacacc tggcatgaag 720
cacgagaacc tgctacagtt cattgctgcc gagaagcgag gctccaacct cgaagtagag 780
ctgtggctca tcacggcctt ccatgacaag ggctccctca cggattacct caaggggaac 840
atcatcacat ggaacgaact gtgtcatgta gcagagacga tgtcacgagg cctctcatac 900
ctgcatgagg atgtgccctg gtgccgtggc gagggccaca agccgtctat tgcccacagg 960
gactttaaaa gtaagaatgt attgctgaag agcgacctca cagccgtgct ggctgacttt 1020
ggcttggctg ttcgatttga gccagggaaa cctccagggg acacccacgg acaggtaggc 1080
acgagacggt acatggctcc tgaggtgctc gagggagcca tcaacttcca gagagatgcc 1140
ttcctgcgca ttgacatgta tgccatgggg ttggtgctgt gggagcttgt gtctcgctgc 1200
aaggctgcag acggacccgt ggatgagtac atgctgccct ttgaggaaga gattggccag 1260
cacccttcgt tggaggagct gcaggaggtg gtggtgcaca agaagatgag gcccaccatt 1320
aaagatcact ggttgaaaca cccgggcctg gcccagcttt gtgtgaccat cgaggagtgc 1380
tgggaccatg atgcagaggc tcgcttgtcc gcgggctgtg tggaggagcg ggtgtccctg 1440
attcggaggt cggtcaacgg cactacctcg gactgtctcg tttccctggt gacctctgtc 1500
accaatgtgg acctgccccc taaagagtca agcatc 1536
<210> 8
<211> 345
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
gggcgtgggg aggctgagac acgggagtgc atctactaca acgccaactg ggagctggag 60
cgcaccaacc agagcggcct ggagcgctgc gaaggcgagc aggacaagcg gctgcactgc 120
tacgcctcct ggcgcaacag ctctggcacc atcgagctcg tgaagaaggg ctgctggcta 180
gatgacttca actgctacga taggcaggag tgtgtggcca ctgaggagaa cccccaggtg 240
tacttctgct gctgtgaagg caacttctgc aacgaacgct tcactcattt gccagaggct 300
gggggcccgg aagtcacgta cgagccaccc ccgacagccc ccacc 345
<210> 9
<211> 513
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe
20 25 30
Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu
35 40 45
Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp
50 55 60
Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu
65 70 75 80
Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp
85 90 95
Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu
100 105 110
Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn
115 120 125
Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu
130 135 140
Val Pro Leu Met Leu Ile Ala Gly Ile Val Ile Cys Ala Phe Trp Val
145 150 155 160
Tyr Arg His His Lys Met Ala Tyr Pro Pro Val Leu Val Pro Thr Gln
165 170 175
Asp Pro Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Leu Gly Leu Lys Pro Leu
180 185 190
Gln Leu Leu Glu Val Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys
195 200 205
Ala Gln Leu Leu Asn Glu Tyr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Ile Gln
210 215 220
Asp Lys Gln Ser Trp Gln Asn Glu Tyr Glu Val Tyr Ser Leu Pro Gly
225 230 235 240
Met Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Ile Gly Ala Glu Lys Arg Gly
245 250 255
Thr Ser Val Asp Val Asp Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Glu Lys
260 265 270
Gly Ser Leu Ser Asp Phe Leu Lys Ala Asn Val Val Ser Trp Asn Glu
275 280 285
Leu Cys His Ile Ala Glu Thr Met Ala Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His
290 295 300
Glu Asp Ile Pro Gly Leu Lys Asp Gly His Lys Pro Ala Ile Ser His
305 310 315 320
Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Asn Asn Leu Thr Ala
325 330 335
Cys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Leu Lys Phe Glu Ala Gly Lys Ser
340 345 350
Ala Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro
355 360 365
Glu Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg
370 375 380
Ile Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Ala Ser Arg
385 390 395 400
Cys Thr Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu
405 410 415
Glu Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Asp Met Gln Glu Val Val
420 425 430
Val His Lys Lys Lys Arg Pro Val Leu Arg Asp Tyr Trp Gln Lys His
435 440 445
Ala Gly Met Ala Met Leu Cys Glu Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His
450 455 460
Asp Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Gly Glu Arg Ile Thr
465 470 475 480
Gln Met Gln Arg Leu Thr Asn Ile Ile Thr Thr Glu Asp Ile Val Thr
485 490 495
Val Val Thr Met Val Thr Asn Val Asp Phe Pro Pro Lys Glu Ser Ser
500 505 510
Leu
<210> 10
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 11
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 11
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met
100
<210> 12
<211> 1539
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
atgggagctg ctgcaaagtt ggcgtttgcc gtctttctta tctcctgttc ttcaggtgct 60
atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 120
agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 180
tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 240
gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 300
tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccggagatg 360
gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccctatta caacatcctg 420
ctctattcct tggtgccact tatgttaatt gcggggattg tcatttgtgc attttgggtg 480
tacaggcatc acaagatggc ctaccctcct gtacttgttc caactcaaga cccaggacca 540
cccccacctt ctccattact aggtttgaaa ccactgcagt tattagaagt gaaagcaagg 600
ggaagatttg gttgtgtctg gaaagcccag ttgcttaacg aatatgtggc tgtcaaaata 660
tttccaatac aggacaaaca gtcatggcaa aatgaatacg aagtctacag tttgcctgga 720
atgaagcatg agaacatatt acagttcatt ggtgcagaaa aacgaggcac cagtgttgat 780
gtggatcttt ggctgatcac agcatttcat gaaaagggtt cactatcaga ctttcttaag 840
gctaatgtgg tctcttggaa tgaactgtgt catattgcag aaaccatggc tagaggattg 900
gcatatttac atgaggatat acctggccta aaagatggcc acaaacctgc catatctcac 960
agggacatca aaagtaaaaa tgtgctgttg aaaaacaacc tgacagcttg cattgctgac 1020
tttgggttgg ccttaaaatt tgaggctggc aagtctgcag gcgataccca tggacaggtt 1080
ggtacccgga ggtacatggc tccagaggta ttagagggtg ctataaactt ccaaagggat 1140
gcatttttga ggatagatat gtatgccatg ggattagtcc tatgggaact ggcttctcgc 1200
tgtactgctg cagatggacc tgtagatgaa tacatgttgc catttgagga ggaaattggc 1260
cagcatccat ctcttgaaga catgcaggaa gttgttgtgc ataaaaaaaa gaggcctgtt 1320
ttaagagatt attggcagaa acatgctgga atggcaatgc tctgtgaaac cattgaagaa 1380
tgttgggatc acgacgcaga agccaggtta tcagctggat gtgtaggtga aagaattacc 1440
cagatgcaga gactaacaaa tattattacc acagaggaca ttgtaacagt ggtcacaatg 1500
gtgacaaatg ttgactttcc tcccaaagaa tctagtcta 1539
<210> 13
<211> 345
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 60
agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 120
tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 180
gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 240
tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccggagatg 300
gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccc 345
<210> 14
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 14
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 15
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 15
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 16
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 16
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Tyr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 17
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 17
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Thr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 18
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 18
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 19
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 19
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
130 135 140
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 20
<211> 228
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 20
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Phe Arg Pro Glu Val His Leu
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Ala Arg Gly Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ser Arg Gln
165 170 175
Glu Pro Ser Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Thr Ile Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 21
<211> 228
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 21
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu
130 135 140
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
145 150 155 160
Glu Ser Asn Gly Gln Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ile Leu Arg
180 185 190
Val Ala Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Asp Arg
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 22
<211> 225
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 23
<211> 223
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
1 5 10 15
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
20 25 30
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
35 40 45
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
50 55 60
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75 80
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
85 90 95
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
100 105 110
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
115 120 125
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
145 150 155 160
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
165 170 175
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
180 185 190
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
195 200 205
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 24
<211> 232
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 24
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 25
<211> 279
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro
50 55 60
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
85 90 95
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp
100 105 110
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
115 120 125
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
145 150 155 160
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
165 170 175
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
180 185 190
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
195 200 205
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn
210 215 220
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
225 230 235 240
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser
245 250 255
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser
260 265 270
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
275
<210> 26
<211> 229
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 27
<211> 261
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 27
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys Gly Gly Ser Ala Gln Leu Glu Lys Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys
225 230 235 240
Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys Glu Leu
245 250 255
Ala Gln Gly Ala Thr
260
<210> 28
<211> 261
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 28
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys Gly Gly Ser Ala Gln Leu Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys
225 230 235 240
Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu
245 250 255
Ala Gln Gly Ala Thr
260
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 29
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<223> See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 31
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 31
Gly Gly Gly
1
<210> 32
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 32
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 33
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 34
Ser Gly Gly Gly
1
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 35
Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 36
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 36
Thr Gly Gly Gly
1
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 37
Thr Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 38
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 39
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 40
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser
20
<210> 41
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 41
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 42
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 42
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 43
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 43
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser
35
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 44
Thr Gly Gly Gly Pro Lys Ser Cys Asp Lys
1 5 10
<210> 45
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 45
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro
20
<210> 46
<211> 368
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 46
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr
20 25 30
Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His
50 55 60
Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys
65 70 75 80
Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys
85 90 95
Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro
115 120 125
Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr
130 135 140
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
165 170 175
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
180 185 190
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
195 200 205
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
210 215 220
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
225 230 235 240
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
260 265 270
Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
275 280 285
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
290 295 300
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys
305 310 315 320
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
325 330 335
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 47
<211> 1104
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 47
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg cctctgggcg tggggaggct gagacacggg agtgcatcta ctacaacgcc 120
aactgggagc tggagcgcac caaccagagc ggcctggagc gctgcgaagg cgagcaggac 180
aagcggctgc actgctacgc ctcctggcgc aacagctctg gcaccatcga gctcgtgaag 240
aagggctgct ggctagatga cttcaactgc tacgataggc aggagtgtgt ggccactgag 300
gagaaccccc aggtgtactt ctgctgctgt gaaggcaact tctgcaacga gcgcttcact 360
catttgccag aggctggggg cccggaagtc acgtacgagc cacccccgac agcccccacc 420
ggtggtggaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 480
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 540
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 600
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 660
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 720
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 780
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggaa ggagatgacc 840
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 900
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctgaag 960
tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1020
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1080
agcctctccc tgtctccggg taaa 1104
<210> 48
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 48
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 49
<211> 262
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 49
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
20 25 30
Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
35 40 45
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
50 55 60
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
65 70 75 80
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
85 90 95
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
100 105 110
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
115 120 125
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
130 135 140
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
145 150 155 160
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
165 170 175
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
180 185 190
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr
195 200 205
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp
210 215 220
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
225 230 235 240
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
245 250 255
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 50
<211> 786
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 50
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccagcaacac caaggtggac aagagagtta ccggtggtgg aactcacaca 120
tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca 180
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac 240
gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 300
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 360
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 420
aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa 480
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 540
acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 600
cagccggaga acaactacga caccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 660
ctctatagcg acctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 720
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 780
ggtaaa 786
<210> 51
<211> 238
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 51
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
20 25 30
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
35 40 45
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
50 55 60
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
85 90 95
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
100 105 110
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
115 120 125
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
180 185 190
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
195 200 205
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
210 215 220
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 52
<400> 52
000
<210> 53
<400> 53
000
<210> 54
<400> 54
000
<210> 55
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 55
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr
20 25 30
Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His
50 55 60
Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys
65 70 75 80
Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys
85 90 95
Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr
115 120 125
Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly
130 135 140
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
180 185 190
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
210 215 220
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
260 265 270
Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
275 280 285
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
Lys
<210> 56
<211> 1107
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 56
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccgctatact tggtagatca gaaactcagg agtgtctttt ctttaatgct 120
aattgggaaa aagacagaac caatcaaact ggtgttgaac cgtgttatgg tgacaaagat 180
aaacggcggc attgttttgc tacctggaag aatatttctg gttccattga aatagtgaaa 240
caaggttgtt ggctggatga tatcaactgc tatgacagga ctgattgtgt agaaaaaaaa 300
gacagccctg aagtatattt ctgttgctgt gagggcaata tgtgtaatga aaagttttct 360
tattttccgg agatggaagt cacacagccc acttcaaatc cagttacacc taagccaccc 420
accggtggtg gaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 480
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 540
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 600
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 660
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 720
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 780
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg gaaggagatg 840
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 900
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 960
aagtccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1020
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1080
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1107
<210> 57
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 57
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 58
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 58
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr
20 25 30
Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His
50 55 60
Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys
65 70 75 80
Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys
85 90 95
Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr
115 120 125
Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly
130 135 140
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
180 185 190
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
210 215 220
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
260 265 270
Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
275 280 285
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
Lys
<210> 59
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 59
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 60
<211> 368
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 60
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr
20 25 30
Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His
50 55 60
Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys
65 70 75 80
Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys
85 90 95
Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro
115 120 125
Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr
130 135 140
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
165 170 175
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
180 185 190
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
195 200 205
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
210 215 220
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
225 230 235 240
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
260 265 270
Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
275 280 285
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
290 295 300
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
305 310 315 320
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
325 330 335
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 61
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 61
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 62
<211> 262
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 62
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
20 25 30
Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
35 40 45
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
50 55 60
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
65 70 75 80
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
85 90 95
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
100 105 110
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
115 120 125
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
130 135 140
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
145 150 155 160
Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
165 170 175
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
180 185 190
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
195 200 205
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
210 215 220
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
225 230 235 240
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
245 250 255
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 63
<211> 238
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 63
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
20 25 30
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
35 40 45
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
50 55 60
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
85 90 95
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
100 105 110
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
115 120 125
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
145 150 155 160
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
180 185 190
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
195 200 205
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
210 215 220
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 64
<400> 64
000
<210> 65
<400> 65
000
<210> 66
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 66
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 67
<211> 150
<212> PRT
<213> Rattus sp.
<400> 67
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Pro
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 68
<211> 150
<212> PRT
<213> Sus sp.
<400> 68
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Val Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 69
<211> 150
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 69
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 70
<211> 150
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 71
<211> 150
<212> PRT
<213> Bos taurus
<400> 71
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Arg Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Val Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 72
<211> 150
<212> PRT
<213> Xenopus sp.
<400> 72
Met Gly Ala Ser Val Ala Leu Thr Phe Leu Leu Leu Leu Ala Thr Phe
1 5 10 15
Arg Ala Gly Ser Gly His Asp Glu Val Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr
20 25 30
Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Lys Thr Asn Gln Ser Gly Val Glu
35 40 45
Arg Leu Val Glu Gly Lys Lys Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Arg Asn Asn Ser Gly Phe Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp
65 70 75 80
Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Ile Ala Lys Glu
85 90 95
Glu Asn Pro Gln Val Phe Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Tyr Cys Asn
100 105 110
Lys Lys Phe Thr His Leu Pro Glu Val Glu Thr Phe Asp Pro Lys Pro
115 120 125
Gln Pro Ser Ala Ser Val Leu Asn Ile Leu Ile Tyr Ser Leu Leu Pro
130 135 140
Ile Val Gly Leu Ser Met
145 150
<210> 73
<211> 150
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 73
Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe
20 25 30
Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu
35 40 45
Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp
50 55 60
Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu
65 70 75 80
Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp
85 90 95
Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu
100 105 110
Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn
115 120 125
Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu
130 135 140
Val Pro Leu Met Leu Ile
145 150
<210> 74
<211> 154
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> T, A, or not present
<220>
<221> MOD_RES
<222> (121)..(121)
<223> P, A, V, or M
<400> 74
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Xaa Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu
1 5 10 15
Cys Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr
20 25 30
Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Ile Glu
35 40 45
Arg Leu Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Leu Glu Ile Val Lys Lys Gly Cys Trp
65 70 75 80
Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu
85 90 95
Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn
100 105 110
Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Xaa Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr
115 120 125
Glu Pro Lys Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr
130 135 140
Ser Leu Leu Pro Ile Gly Gly Leu Ser Met
145 150
<210> 75
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 75
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 76
<211> 115
<212> PRT
<213> Ovis aries
<400> 76
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Ile Phe Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Arg Asp Arg Thr Asn Arg Thr Gly Val Glu Ser Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Asp Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Arg Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 77
<211> 115
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
Talpidae family peptide sequence
<400> 77
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Arg Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Ala Pro
115
<210> 78
<211> 115
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 78
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Arg Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 79
<211> 115
<212> PRT
<213> Gallus gallus
<400> 79
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Lys Thr Asn Arg Ser Gly Ile Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Asn Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Phe Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Arg Phe Phe Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 80
<211> 115
<212> PRT
<213> Bos taurus
<400> 80
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Ile Phe Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Arg Asp Arg Thr Asn Arg Thr Gly Val Glu Ser Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Arg Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 81
<211> 115
<212> PRT
<213> Tyto alba
<400> 81
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Lys Thr Asn Arg Ser Gly Ile Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Asn Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Phe Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Arg Phe Phe Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 82
<211> 115
<212> PRT
<213> Myotis davidii
<400> 82
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Ile Phe Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Arg Asp Lys Thr Asn Arg Thr Gly Val Glu Leu Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Ile Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Arg Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 83
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 83
Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg
1 5 10 15
Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg
20 25 30
Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu
35 40 45
Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln
50 55 60
Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys
65 70 75 80
Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly
85 90 95
Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105
<210> 84
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 84
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 85
<211> 237
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 85
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
20 25 30
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
35 40 45
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
50 55 60
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
85 90 95
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
100 105 110
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
115 120 125
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
180 185 190
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
195 200 205
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
210 215 220
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235
<210> 86
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 86
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 87
<211> 237
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 87
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
20 25 30
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
35 40 45
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
50 55 60
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
85 90 95
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
100 105 110
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
115 120 125
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
145 150 155 160
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
180 185 190
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
195 200 205
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
210 215 220
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235
<210> 88
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 88
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 89
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 89
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 90
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 90
Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala
1 5 10 15
Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu
20 25 30
Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser
35 40 45
Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe
50 55 60
Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln
65 70 75 80
Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr
85 90 95
His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro
100 105 110
Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 91
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 91
Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala
1 5 10 15
Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu
20 25 30
Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser
35 40 45
Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe
50 55 60
Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln
65 70 75 80
Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr
85 90 95
His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro
100 105 110
Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
6xHis tag
<400> 92
His His His His His His
1 5
Claims (123)
- 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 단일-가지 ActRIIB 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 이종다량체는 제 2 폴리펩티드와 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하고, 이때:
a. 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIB의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
b. 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 ActRIIB의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. - 신장 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 단일-가지 ActRIIA 이종다량체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 이종다량체는 제 2 폴리펩티드와 공유적으로 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하고, 이때:
a. 상기 제 1 폴리펩티드는 상호작용 짝의 제 1 구성요소의 아미노산 서열과 ActRIIA의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
b. 상기 제 2 폴리펩티드는 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 ActRIIA의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. - 청구항 1에 있어서, 이때 상기 ActRIIB 폴리펩티드는 다음의 아미노산 서열을 포함하는, 방법:
a. 서열 식별 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 및 6중 임의의 하나의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열; 또는
b. 서열 식별 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 1의 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 끝나는 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열. - 청구항 3에 있어서, 이때 상기 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1의 L79에 상응하는 위치에 산성 아미노산을 포함하지 않는, 방법.
- 청구항 3에 있어서, 이때 상기 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 1의 L79에 대응하는 위치에 아스파르트산 (D)을 포함하지 않는, 방법.
- 청구항 2에 있어서, 이때 상기 ActRIIA 폴리펩티드는 다음의 아미노산 서열을 포함하는, 방법:
a. 서열 식별 번호: 9, 10, 및 11중 임의의 하나의 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열; 또는
b. 서열 식별 번호: 9의 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30중 임의의 하나에서 시작하고, 서열 식별 번호: 9의 아미노산 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 또는 135중 임의의 하나에서 끝나는, 폴리펩티드에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열. - 청구항 1-6중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이종다량체는 이형이량체인, 방법.
- 청구항 1-7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소는 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역을 포함하는, 방법.
- 청구항 1-7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 상호작용 짝의 제 2 구성요소는 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역을 포함하는, 방법.
- 청구항 8에 있어서, 이때 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인인, 방법.
- 청구항 9에 있어서, 이때 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 제 1 면역글로불린 Fc 도메인인, 방법.
- 청구항 8에 있어서, 이때 상기 IgG 중쇄의 제 1 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 청구항 9에 있어서, 이때 상기 IgG 중쇄의 제 2 불변 영역은 서열 식별 번호: 14-28중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 청구항 1-13중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 46, 48, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 84, 86, 88, 89, 90 및 91중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 49, 51, 62, 63, 85, 및 87중 임의의 하나로부터 선택된 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 청구항 1, 3-5, 또는 7-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 상기 ActRIIB 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함하는, 방법.
- 청구항 2, 6, 또는 7-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 상기 ActRIIA 폴리펩티드와 상기 상호작용 짝의 제 1 구성요소 사이에 위치한 링커-도메인을 포함하는, 방법.
- 청구항 16 또는 17에 있어서, 이때 상기 링커 도메인은 서열 식별 번호: 29-44중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 청구항 1-18중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화된 아미노산, 페길화된 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 및 지질 모이어티에 콘쥬게이트된 아미노산으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는, 방법.
- 청구항 1-19중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드는 당화되고, CHO 세포에서 제 1 폴리펩티드 및/또는 제 2 폴리펩티드로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는, 방법.
- 청구항 1-20중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이종다량체는 액티빈 A, 액티빈 B, GDF11, GDF8, GDF3, BMP5, BMP6, 및 BMP10으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 리간드에 결합하는, 방법.
- 청구항 1, 3-5, 또는 7-16, 18-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 액티빈 B 및 GDF11에 결합하는, 방법.
- 청구항 1, 3-5, 또는 7-16, 18-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체는 GDF8 및 액티빈 A에 결합하는, 방법.
- 청구항 2, 6, 7-15 또는 17-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 액티빈 A에 결합하는, 방법.
- 청구항 2, 6, 7-15, 또는 17-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 GDF8에 결합하는, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이종다량체는 세포-기반 분석에서 하나 또는 그 이상의 리간드의 활성을 억제하는, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 알포트 증후군인, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 국소 분절 사구체경화증 (FSGS)인, 방법.
- 청구항 28에 있어서, 이때 FSGS는 원발성 FSGS인, 방법.
- 청구항 28에 있어서, 이때 FSGS는 이차적 FSGS인, 방법.
- 청구항 28에 있어서, 이때 FSGS는 유전적 FSGS인, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 다낭성 신장 질환인, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 상염색체 우성 다낭성 신장 질환 (ADPKD)인, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 상염색체 열성 다낭성 신장 질환 (ARPKD)인, 방법.
- 청구항 1-26중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 만성 신장 질환 (CKD)인, 방법.
- 청구항 1-35중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 신장 기능의 감소를 갖는, 방법.
- 청구항 1-35중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 신장 기능의 감소를 느리게 하는, 방법.
- 청구항 1-37중 임의의 한 항에 있어서, 해당 대상체에게 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법를 더 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 청구항 38에 있어서, 이때 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 다음의 군에서 선택된다: 안지오텐신 수용체 차단제 (ARB) (가령, 로사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 칸데사르탄, 발사르탄, 피마사르탄, 아질사르탄, 살프리사르탄, 및 텔미사르탄), 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제 (가령, 베나제프릴, 캡토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 조페노프릴), 글루코코르티코이드 (가령, 베클로메타손, 베타메타손, 부데소니드, 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 메틸프레드니손, 프레드니손, 및 트리암시놀론), 칼시뉴린 억제제 (가령, 사이클로스포린, 타크로리무스), 시클로포스파미드, 클로람부실, 야누스 키나제 억제제 (가령, 토파시티닙), mTOR 억제제 (가령, 시롤리무스, 에베롤리무스), IMDH 억제제 (가령, 아자티오프린, 레플루노마이드, 마이코페놀레이트), 생물학제 (가령, 아바타셉트, 아달리무맙, 아나킨라, 바실릭시맙, 세르톨리주맙, 다클리주맙, 에타너셉트, 프레솔리무맙, 골리무맙, 인플릭시맙, 익세키주맙, 나탈리주맙, 리툭시맙, 세쿠키누맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙), 스태틴 (가령, 베나제프릴, 발사르탄, 플루바스태틴, 프라바스태틴), 라데미르센 (항-miRNA-21)바르독솔론 메틸, 아크타르 겔, 톨밥탄, 스파센탄과 조합된 아바타셉트, 알리스키렌, 알로푸리놀, ANG-3070, 아토르바스태틴, 블레셀루맙, 보수티닙, CCX140-B, CXA-10, D6-25-하이드록시비타민 D3, 다파글리플로진, MMF와 함께 덱사메타손, 에모딘, FG-3019, FK506, FK-506 및 MMF, FT-011, 갈락토즈, GC1008, GFB-887, 이소트레티노인, 란레오티드, 레바미솔, 리씨밥탄, 로스마피모드, 메트포르민, 미조르빈, N-아세틸만노사민, 옥트레오타이드, 파리칼시톨, PF-06730512, 피오글리타존, 프로파게르마늄, 프로파게르마늄 및 이르베사르탄, 라파무네, 라파마이신, RE-021 (가령, 스파센탄), RG012, 로시글리타존 (가령, 아반디아), 사퀴나비르, SAR339375, 소마토스태틴, 스피로노락톤, 테세바티닙(KD019), 테트라코삭틴, 트립테리지움 윌포르디(tripterygium wilfordii) (TW), 발프로산, VAR-200, 벤글루스타트 (GZ402671), 베리누라드, 보클로스포린, VX-147, 신장투석, 신장이식, 간엽줄기세포치료, 골수 줄기 세포, 지단백질 제거, Liposorber LA-15 장치, 혈장사혈, 혈장 교환 및 식단의 변화(가령, 식이 나트륨 섭취)인, 방법.
- 청구항 38에 있어서, 이때 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 로사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 칸데사르탄, 발사르탄, 피마사르탄, 아질사르탄, 살프리사르탄, 및 텔미사르탄으로 구성된 군에서 선택되는, 안지오텐신 수용체 차단제(ARB)인, 방법.
- 청구항 38에 있어서, 이때 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 베나제프릴, 캅토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 조페노프릴로 구성된 군에서 선택된 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제인, 방법.
- 청구항 38에 있어서, 이때 상기 추가 활성 작용제 및/또는 신장 질환 또는 병태 치료용 보조 요법은 ARB 및 ACE 억제제의 조합인, 방법.
- 청구항 1-42중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단백뇨를 갖고 있는, 방법.
- 청구항 1-42중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 알부민뇨를 갖고 있는, 방법.
- 청구항 1-42중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 중등도 알부민뇨를 갖는, 방법.
- 청구항 1-42중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 중증 알부민뇨를 갖는, 방법.
- 청구항 1-46중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에서 알부민뇨, 단백뇨, 마이크로알부민뇨, 및 마크로알부민뇨중 하나 또는 그 이상의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 45에 있어서, 이때 상기 대상체는 24시간의 소변 수집당 약 30 ~ 약 300mg 알부민의 알부민-크레아티닌 비율(ACR)를 갖는, 방법.
- 청구항 45에 있어서, 이때 상기 대상체는 크레아티닌 g 당 약 30 ~ 약 300 mg 알부민의 ACR을 갖는, 방법.
- 청구항 46에 있어서, 이때 상기 대상체의 알부민-크레아티닌 비율 (ACR)은 약 300 mg 이상의 알부민/24 시간인, 방법.
- 청구항 46에 있어서, 이때 상기 대상체는 크레아티닌 g 당 약 300 mg 이상의 알부민의 ACR을 갖는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 A1 알부민뇨를 갖고 있는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 A2 알부민뇨를 갖고 있는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 A3 알부민뇨를 갖고 있는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 A1 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 A2 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 A3 알부민뇨의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 A1 알부민뇨를 갖는 대상체가 단계 A2 알부민뇨로 진행하는 것을 지연시키거나, 또는 방지시키는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 방법은 단계 A2를 갖는 대상체가 단계 A3 알부민뇨로 진행하는 것을 지연시키거나, 또는 방지시키는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 알부민뇨 단계 진행이 악화되는 것을 지연 및/또는 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 이를 지연 및/또는 방지하는, 방법.
- 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 알부민뇨 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선시키는 방법.
- 청구항 1-61중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 ACR을 감소시키는, 방법.
- 청구항 62에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 ACR을 크레아티닌의 당 약 0.1 ~ 약 100.0 mg의 알부민 (가령, 크레아티닌의 당 약 0.1 ~ 약 2.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg 알부민, 크레아티닌의 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg 알부민)으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 62에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 ACR을 기선시점 측량과 비교하였을 때 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-64중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 뇨 단백질-크레아티닌 비율 (UPCR)을 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 크레아티닌 mg 당 약 0.1 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질 (가령, 크레아티닌 mg 당약 0.1 ~ 약 2.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 2.5 ~ 약 3.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 3.5 ~ 약 5.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 5.0 ~ 약 7.5 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 7.5 ~ 약 10.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 10.0 ~ 약 15.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 15.0 ~ 약 20.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 20.0 ~ 약 25.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 30.0 ~ 약 35.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 40.0 ~ 약 45.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 45.0 ~ 약 50.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 50.0 ~ 약 60.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 60.0 ~ 약 70.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 70.0 ~ 약 80.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 80.0 ~ 약 90.0 mg의 뇨 단백질, 크레아티닌 mg 당 약 90.0 ~ 약 100.0 mg의 뇨 단백질)으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 크레아티닌 g 당 약 0.1 ~ 약 100.0 g의 뇨 단백질 (가령, 크레아티닌 mg 당약 0.1 ~ 약 2.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 2.5 ~ 약 3.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 3.5 ~ 약 5.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 5.0 ~ 약 7.5 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 7.5 ~ 약 10.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 10.0 ~ 약 15.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 15.0 ~ 약 20.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 20.0 ~ 약 25.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 30.0 ~ 약 35.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 40.0 ~ 약 45.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 45.0 ~ 약 50.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 50.0 ~ 약 60.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 60.0 ~ 약 70.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 70.0 ~ 약 80.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 80.0 ~ 약 90.0 g의 뇨 단백질, 크레아티닌 g 당 약 90.0 ~ 약 100.0 g의 뇨 단백질)으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.5g 미만으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 해당 대상체의 절대 UPCR을 기선 시점 측정과 비교하여, 소변 단백질을 크레아티닌 g당 0.3g 미만으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 30%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 40%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 65에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 UPCR을 기선시점 측량과 비교하였을 때, 50%에 대등하게, 또는 그 이상으로 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-74중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 추정된 사구체 여과율 (eGFR) 및/또는 사구체 여과율 (GFR)을 증가시키는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR은 혈청 크레아티닌, 연령, 민족성, 및 성별 변수를 이용하여 측정하는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR은 Cockcroft-Gault 공식, 신장 질환 (MDRD) 공식에서 식이 변화, CKD-EPI 공식, Mayo 이차 공식, 및 Schwartz 공식중 하나 또는 그 이상을 이용하여 측정되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 30%에 대등하게, 또는 그 이상으로 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 40%에 대등하게, 또는 그 이상으로 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 약 1 mL/min/1.73 m2 (가령, 3, 5, 7, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 mL/min/1.73 m2 ) 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 약 1 mL/분/년 (가령, 2, 3, 5, 7, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 mL/분/년) 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 1 mL/분/년에 대등하게, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는, 방법.
- 청구항 75에 있어서, 이때 상기 eGFR 및/또는 GFR은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 3 mL/분/년에 대등하게, 또는 이보다 더 큰 수준으로 증가되는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 신장 질환 또는 병태는 만성 신장 질환 단계 (CKD)에서 평가되는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 1 만성 신장 질환 (CKD)을 갖는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 2의 만성 신장 질환 (CKD)을 갖는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 3의 만성 신장 질환 (CKD)을 갖는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 4개의 만성 신장 질환 (CKD)을 갖는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 단계 5의 만성 신장 질환 (CKD)을 갖는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 1 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 2 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 3 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 3a CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 3b CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 4 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 단계 5 CKD의 중증도, 발생 및/또는 기간을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 1 CKD에서 단계 2 CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 2 CKD에서 단계 3 CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 2 CKD에서 단계 3a CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 3a CKD에서 단계 3b CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 3 CKD에서 단계 4 CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 3b CKD에서 단계 4 CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 단계 4 CKD에서 단계 5 CKD로 진행을 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-104중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 CKD 단계 진행이 악화되는 것을 지연 및/또는 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 이를 지연 및/또는 방지하는, 방법.
- 청구항 1-105중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 신장 손상 CKD 분류를 하나 또는 그 이상의 단계로 개선시키는 방법.
- 청구항 1-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 대상체에서 총 신장 용적을 감소시키는 방법.
- 청구항 107에 있어서, 이때 총 신장 용적은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소되는, 방법.
- 청구항 1-108중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 혈액 요소 질소 (BUN)를 감소시키는, 방법.
- 청구항 109에 있어서, 이때 상기 BUN은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소되는, 방법.
- 청구항 1-110중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 소변 호중구 젤라티나제-연합된 리포칼린 (uNGAL) 농도를 감소시키는, 방법.
- 청구항 111에 있어서, 이때 uNGAL은 기선 시점 측령과 비교하였을 때, 적어도 2.5% (가령, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%) 감소되는, 방법.
- 청구항 1-112중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 <50 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 이는 낮은 위험의 급성 신장 손상을 시사하는, 방법.
- 청구항 1-112중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 약 50 ~ 약 149 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 급성 신장 손상에 대한 불확신한 위험을 시사하는, 방법.
- 청구항 1-112중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 약 150 ~ 약 300 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 중등도 위험의 급성 신장 손상을 시사하는, 방법.
- 청구항 1-112중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 >300 ng/mL의 uNGAL 측정값을 가지며, 고 위험의 급성 신장 손상을 시사하는, 방법.
- 청구항 1-116중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 대상체의 uNGAL를 약 0.1 ~ 약 300.0 ng/mL (가령, 약 0.1 ~ 약 50 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 100.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 150.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 200.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 250.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 300.0 ng/mL, 약 0.1 ~ 약 25 ng/mL, 약 25 ~ 약 50 ng/mL, 약 50 ~ 약 100 ng/mL, 약 100 ~ 약 150 ng/mL, 약 150 ~ 약 200 ng/mL, 약 200 ~ 약 250 ng/mL, 약 250 ~ 약 300 ng/mL, 300 ng/mL 이상으로) 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-117중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 신장 질환 또는 병태의 임상적 악화를 방지하거나, 또는 지연시키는, 방법.
- 청구항 1-118중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 하나 또는 그 이상의 신장 질환 또는 병태의 연합된 합병증으로 인한 입원 위험을 감소시키는, 방법.
- 청구항 1-119중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 피하로 투여되는, 방법.
- 청구항 1-120중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 2주에 한 번 투여되는, 방법.
- 청구항 1-120중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 3주에 한 번 투여되는, 방법.
- 청구항 1-120중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 단일-가지 ActRIIB 이종다량체 또는 단일-가지 ActRIIA 이종다량체는 매 4주에 한 번 투여되는, 방법.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US202062989037P | 2020-03-13 | 2020-03-13 | |
US62/989,037 | 2020-03-13 | ||
PCT/US2021/021991 WO2021183819A1 (en) | 2020-03-13 | 2021-03-11 | Single-arm actriia and actriib heteromultimers and methods for treating renal diseases or conditions |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20230002391A true KR20230002391A (ko) | 2023-01-05 |
Family
ID=77672098
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020227035212A KR20230002391A (ko) | 2020-03-13 | 2021-03-11 | 신장 질환 또는 병태를 치료하기 위한 단일-가지 actriia 및 actriib 이종다량체 및 치료 방법 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230134083A1 (ko) |
EP (1) | EP4117707A1 (ko) |
JP (1) | JP2023528117A (ko) |
KR (1) | KR20230002391A (ko) |
CN (1) | CN115515618A (ko) |
AU (1) | AU2021236249A1 (ko) |
BR (1) | BR112022018319A2 (ko) |
CA (1) | CA3171638A1 (ko) |
MX (1) | MX2022011364A (ko) |
WO (1) | WO2021183819A1 (ko) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117137924A (zh) * | 2023-09-28 | 2023-12-01 | 宜兴食品与生物技术研究院有限公司 | N-乙酰-d-甘露糖胺在制备促进骨生长的食品及药物中的应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6810702B2 (ja) * | 2015-04-06 | 2021-01-06 | アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド | シングルアームi型およびii型受容体融合タンパク質およびその使用 |
WO2016164503A1 (en) * | 2015-04-06 | 2016-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Alk7:actriib heteromultimers and uses thereof |
KR20190075078A (ko) * | 2016-10-05 | 2019-06-28 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | ALK4:ActRIIB 이형다량체 및 이의 용도 |
EP4026556A1 (en) * | 2016-10-05 | 2022-07-13 | Acceleron Pharma Inc. | Compositions and method for treating kidney disease |
-
2021
- 2021-03-11 MX MX2022011364A patent/MX2022011364A/es unknown
- 2021-03-11 KR KR1020227035212A patent/KR20230002391A/ko unknown
- 2021-03-11 US US17/911,347 patent/US20230134083A1/en active Pending
- 2021-03-11 CA CA3171638A patent/CA3171638A1/en active Pending
- 2021-03-11 JP JP2022554931A patent/JP2023528117A/ja active Pending
- 2021-03-11 EP EP21767054.6A patent/EP4117707A1/en active Pending
- 2021-03-11 AU AU2021236249A patent/AU2021236249A1/en active Pending
- 2021-03-11 BR BR112022018319A patent/BR112022018319A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2021-03-11 WO PCT/US2021/021991 patent/WO2021183819A1/en active Application Filing
- 2021-03-11 CN CN202180033625.6A patent/CN115515618A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2021236249A1 (en) | 2022-10-06 |
JP2023528117A (ja) | 2023-07-04 |
EP4117707A1 (en) | 2023-01-18 |
MX2022011364A (es) | 2022-11-30 |
CA3171638A1 (en) | 2021-09-16 |
WO2021183819A1 (en) | 2021-09-16 |
BR112022018319A2 (pt) | 2022-11-22 |
US20230134083A1 (en) | 2023-05-04 |
CN115515618A (zh) | 2022-12-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11827689B2 (en) | ALK7:ActRIIB heteromultimers and uses thereof | |
KR102512157B1 (ko) | 폐 고혈압 치료용 조성물 및 치료 방법 | |
US11001614B2 (en) | Method for treating a muscle-related disorder with follistatin-related fusion proteins | |
US20210363502A1 (en) | Alk4:actriib heteromultimers and uses thereof | |
CN105561295B (zh) | Gdf捕获物和促红细胞生成素受体激活剂联合应用以增加红细胞水平 | |
US20220289852A1 (en) | Alk7 antagonists and uses thereof | |
US20230134083A1 (en) | Single-arm actriia and actriib heteromultimers and methods for treating renal diseases or conditions | |
US20230183319A1 (en) | Variant actriib proteins and uses thereof | |
US20230190875A1 (en) | Single-arm actriia and actriib heteromultimers and methods for treating pulmonary hypertension | |
WO2023022968A2 (en) | Compositions and methods for treating renal diseases or conditions | |
US20230129812A1 (en) | Compositions and methods for treating pulmonary hypertension |