KR20220154743A - 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편, 및 아드레노메둘린에 대한 결합제에 의한 치료 - Google Patents

코로나 바이러스에 감염된 환자에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편, 및 아드레노메둘린에 대한 결합제에 의한 치료 Download PDF

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아드레노메드 아게
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Abstract

본 발명의 대상은
- 코로나 바이러스에 감염된 환자의 체액 샘플에서 프로-아드레노메둘린 (서열식별번호 31) 또는 그의 단편의 수준을 결정하고,
- 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 사전 결정된 역치 또는 이전 수준과 비교하고,
- 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건과 연관시키거나, 또는
- 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 중증도와 연관시키거나, 또는
- 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 치료 또는 중재의 성공과 연관시키는 것을 포함하는, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법이며,
상기 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편은 PAMP (서열식별번호 32), MR-프로ADM (서열식별번호 33), ADM-NH2 (서열식별번호 20), ADM-Gly (서열식별번호 21) 및 CT-프로ADM (서열식별번호 34)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

Description

코로나 바이러스에 감염된 환자에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편, 및 아드레노메둘린에 대한 결합제에 의한 치료
본 발명의 대상은
ㆍ 코로나 바이러스에 감염된 환자의 체액 샘플에서 프로-아드레노메둘린 (서열식별번호(SEQ ID NO) 31) 또는 그의 단편의 수준을 결정하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 사전 결정된 역치 또는 이전에 측정된 수준과 비교하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 중증도와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 치료 또는 중재의 성공과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 특정한 치료 또는 중재와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 상기 환자의 관리와 연관시키는 것을 포함하는, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며,
상기 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편은 PAMP (서열식별번호 32), MR-프로ADM (서열식별번호 33), ADM-NH2 (서열식별번호 20), ADM-Gly (서열식별번호 21) 및 CT-프로ADM (서열식별번호 34)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.
펩티드 아드레노메둘린 (ADM)은 인간 크롬친화세포종 세포주로부터 단리된 52 개 아미노산을 포함하는 신규한 혈압강하 펩티드 (서열식별번호: 20)로서 1993년에 최초로 기재되었다 ( Kitamura et al., 1993. Biochem Biophys Res Comm 192 (2): 553-560 ). 같은 해에, 185 개 아미노산을 포함하는 전구체 펩티드 및 이 전구체 펩티드의 완전 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 또한 기재되었다. 특히 N-말단에서 21 개 아미노산의 신호 서열을 포함하는 전구체 펩티드는 "프리-프로아드레노메둘린" (프리-프로ADM)으로 지칭된다. 본 명세서에서, 명시된 모든 아미노산 위치는 일반적으로 185 개 아미노산을 포함하는 프리-프로ADM에 관한 것이다. 프리-프로ADM은 후속적으로 N-말단 신호-펩티드의 절단에 의해 164 개 아미노산 프로-ADM (서열식별번호 31)으로 전환된다. 프로-ADM은 프로-ADM N-말단 20 개 펩티드 (PAMP; 서열식별번호 32), 중간 영역 프로-ADM (MR-프로ADM; 서열식별번호 33), 아드레노텐신 프로-ADM 153-185 (CT-프로 ADM; 서열식별번호 34) 및 ADM의 C-말단 글리신-연장된 버전인 미성숙 ADM (ADM-Gly; 서열식별번호 21)으로 추가로 가공된다. 이는 그의 C-말단의 효소적 아미드화에 의해 ADM의 성숙한 생활성 형태 (바이오-ADM; ADM-NH2; 서열식별번호 20)로 전환된다. 절반이 넘는 공지된 신경 및 내분비 펩티드가 완전한 생물학적 활성을 얻기 위해 C-말단 알파-아미드 기의 형성을 필요로 한다 ( Guembe et al. 1999. J Histochem Cytochem 47(5): 623-36; Vishwanatha et al. 2013. Handbook of Biologically Active Peptides Peptidylglycine Amidating Monoxygenase (PAM). Second Edi. Elsevier Inc .). 펩티드 호르몬 생합성의 이 최종 단계는 이 기질에서 C-말단 글리신 (CT-Gly) 잔기를 특이적으로 인식하는 이관능성 효소인 펩티딜글리신 알파-아미드화 모노옥시게나제 (PAM)의 작용을 수반한다. PAM은 2 단계 효소 반응에서 펩티드 CT-Gly 잔기로부터 글리콜레이트를 절단하여, c-말단 알파-아미드화 펩티드 호르몬을 형성하고, 생성된 알파-아미드 기는 절단된 CT-Gly로부터 생성된다 ( Prigge et al. 2000. Cellular and Molecular Life Sciences 57(8): 1236-59 ). 이 아미드화 반응은 아미드화 생성물의 엑소시토시스 전에 분비 과립의 내강에서 일어난다 ( Martinez et al. 1996. Am J Pathol 149(2):707-16 ).
1993 년도에 ADM의 발견 및 특징분석은 집중적인 연구 활동을 촉발시켰고, 그 결과, 다양한 검토 논문에서 요약되었으며, 본 명세서의 맥락에, 특히 ADM에 전념한 "펩티드" 호에서 찾을 수 있는 기사를 특히 참고한다 ( Takahashi 2001. Peptides 22: 1691; Eto 2001. Peptides 22: 1693-1711 ). 추가의 검토는 [Hinson et al. 2000] ( Hinson et al. 2000. Endocrine Reviews 21(2):138-167 )이다. 지금까지의 과학적 조사에서, 특히 ADM이 다기능성 조절 펩티드로서 간주될 수 있음이 밝혀졌다. 상기 언급된 바와 같이, 이는 글리신에 의해 확장된 불활성 형태로 순환으로 방출된다 ( Kitamura et al. 1998. Biochem Biophys Res Commun 244(2): 551-555 ). ADM에 대해 특이적이며, 아마도 ADM의 효과를 조절할 가능성이 있는 결합 단백질 또한 있다 ( Pio et al. 2001. The Journal of Biological Chemistry 276(15): 12292-12300 ). 지금까지의 조사에서 가장 중요한 ADM 뿐만 아니라 PAMP의 이들 생리학적 효과는 혈압에 영향을 미치는 것이었다.
따라서, ADM은 효과적인 혈관확장제이며, 따라서 혈압강하 효과가 ADM의 C-말단 부분에서 특정한 펩티드 세그먼트와 연관이 있을 가능성이 있다. 추가로, 심지어 ADM과는 상이한 작용 메카니즘을 갖는 것으로 보이더라도, 프리-프로ADM으로부터 형성된 상기 언급된 생리학적으로 활성인 펩티드 PAMP도 마찬가지로 혈압강하 효과를 나타낸다는 것이 확인되었다 (상기 언급된 검토 문헌 외에도 [ Eto et al. 2001 및 Hinson et al. 2000 또한 Kuwasaki et al. 1997. FEBS Lett 414(1): 105-110; Kuwasaki et al. 1999. Ann. Clin. Biochem. 36: 622-628; Tsuruda et al. 2001 Life Sci. 69(2): 239-245 and EP-A2 0 622 458 ] 참고). 추가로, 순환 및 다른 생물학적 액체에서 측정될 수 있는 ADM의 농도는 수많은 병리학적 상태에 있으며, 건강한 대조군 대상체에서 확인된 농도보다 훨씬 높다는 것이 확인되었다. 따라서, 급성 쇼크 단계에서 및 패혈증 및 패혈성 쇼크에서 울혈성 심부전, 심근 경색, 신장 질환, 고혈압 장애, 진성 당뇨병을 가진 환자에서 ADM 수준은 정도가 상이하긴 하지만 상당히 증가한다. PAMP 농도 또한 상기 병리학적 상태 중 일부에서 증가하지만, 혈장 수준은 ADM에 비해 낮다 ( Eto 2001. Peptides 22: 1693-1711 ). 높은 농도의 ADM이 패혈증에서 관찰되고, 패혈성 쇼크에서 농도가 가장 높았다고 보고되었다 ( Eto 2001. Peptides 22: 1693-1711; Hirata et al. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 81(4): 1449-1453; Ehlenz et al. 1997. Exp Clin Endocrinol Diabetes 105: 156-162; Tomoda et al. 2001. Peptides 22: 1783-1794; Ueda et al. 1999. Am. J. Respir. Crit. Care Med.160: 132-136 and Wang et al. 2001. Peptides 22: 1835-1840 ). 더욱이, ADM의 혈장 농도는 심부전을 가진 환자에서 상승되고, 질환 중증도와 상관관계가 있다 ( Hirayama et al. 1999. J Endocrinol 160: 297-303; Yu et al. 2001. Heart 86: 155-160 ). 높은 혈장 ADM은 이들 대상체에서 독립적인 음성 예후 지표이다 ( Poyner et al. 2002. Pharmacol Rev 54: 233-246 ).
Kitamura 및 동료들은 성숙한 ADM 및 ADM-Gly의 농도가 건강한 지원자와 비교하여 고혈압 환자의 혈장에서 유의하게 상승되었음을 나타내었다 ( Kitamura et al. 1998. Biochem Biophys Res Comm 244(2): 551-5 ). 두 그룹에서 성숙한 ADM은 ADM-Gly에 비해 훨씬 더 낮았다. 그러나, 성숙한 ADM 대 ADM-Gly의 비는 고혈압 및 비-고혈압 대상체 사이에서 유의하게 상이하지 않았다.
패혈증의 초기 단계에서, ADM이 심장 기능, 및 간, 비장, 신장 및 소장에서 혈액 공급을 개선시키는 것으로 보고된다. 항-ADM-중화 항체는 패혈증의 초기 단계 동안에 앞서 언급된 효과를 중화시킨다 ( Wang et al. 2001. Peptides 22: 1835-1840 ). 다른 질환의 경우 ADM의 차단이 어느 정도 유익할 수 있다. 그러나, 몇몇 생리학적 기능에는 특정량의 ADM이 필요할 수 있기 때문에, ADM이 완전히 중화되면 이는 또한 유해할 수 있다. 여러 보고에서, ADM의 투여가 특정한 질환에서 유익할 수 있음이 강조되었다. 그와 대조적으로, 다른 보고에서는 ADM이 특정한 상태에서 투여될 때 생명을 위협하는 것으로 보고되었다.
WO2013/072510은 환자의 사망 위험을 감소시키기 위해 상기 환자의 중증 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태의 치료에 사용하기 위한 비-중화 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다.
WO2013/072511은 장기 기능장애 또는 장기 부전의 예방 또는 감소를 위해 환자의 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태의 치료에 사용하기 위한 비-중화 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다.
WO2013/072513은 순환을 안정화시키기 위해 환자의 급성 질환 또는 상태의 치료에 사용하기 위한 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다.
WO2013/072514는 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태를 갖는 환자에서 유체 균형을 조절하기 위한 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다.
WO2019/154900은 치매의 치료 및 예방에 사용하기 위한 비-중화 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다. 더욱이, WO2019/154900은 성숙한 ADM의 수준 대 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준의 비를 결정함으로써 치매의 (예방적) 치료를 진단 및 모니터링하기 위한 방법을 기재한다.
WO2013/072512는 혈청, 혈액, 혈장에서 아드레노메둘린의 반감기 (t1/2 절반 체류 시간)를 증강시키는 ADM 안정화 항체인 비-중화 N-말단 항-ADM 항체를 기재한다.
ADM의 N-말단에 대해 표적화된 비-중화 항체의 효능은 마우스에서 CLP-유도된 패혈증에 대한 생존 연구에서 조사되었다. 비-중화 항체로의 전처리는 감소된 카테콜아민 주입 속도, 신장 기능장애, 및 궁극적으로 개선된 생존을 일으켰다 ( Struck et al. 2013. Intensive Care Med Exp 1(1):22; Wagner et al. 2013. Intensive Care Med Exp 1(1):21 ). 또한, ADM의 중간 영역 부분에 대한 항체 (MR-ADM 항체) 또한 CLP-유도된 패혈증을 가진 마우스에서 생존을 유의하게 개선시켰지만, N-말단 항-ADM 항체와 비교할 때 더 낮은 정도였다 ( Struck et al. 2013. Intensive Care Med Exp 1(1):22 ).
이들 긍정적인 결과로 인해, 아드레시주맙으로 명명되는 N-말단 항-ADM 항체의 인간화 버전은 추가의 임상 개발을 위해 개발되었다. 혈관 장벽 기능 및 생존에 대한 아드레시주맙의 유익한 효과는 전신 염증 및 패혈증의 임상전 모델에서 최근에 입증되었다 ( Geven et al. 2018. Shock 50(6):648-654 ). 이 연구에서, 아드레시주맙으로의 전처리는 내독소혈증 래트에서 뿐만 아니라 CLP-유도된 패혈증을 가진 마우스에서 신장 혈관 누출을 약화시켰고, 이는 보호성 펩티드 Ang-1의 증가된 신장 발현 및 유해한 펩티드 혈관 내피 성장 인자의 감소된 발현과 일치하였다. 또한, 아드레시주맙으로의 전처리는 마우스에서 CLP-유도된 패혈증의 7 일 생존을 단일 용량 투여의 경우 10에서 50%로 및 반복 용량 투여의 경우 0에서 40%로 개선시켰다. 더욱이, I 상 연구에서, 우수한 안전성 및 내약성이 입증되었으며: 중증 유해 사건은 관찰되지 않았고, 아드레시주맙-처리된 대상체에서 더욱 빈번하게 발생하는 유해 사건의 신호가 검출되지 않았으며, 다른 안전성 파라미터에서의 관련 변화가 관찰되지 않았다 ( Geven et al. 2017. Intensive Care Med Exp 5 (Suppl 2): 0427 ). 아드레시주맙의 제안된 작용 메카니즘이 특히 관심의 대상이다. 동물 및 인간 데이터 둘 다 이 항체의 투여 후 순환 ADM의 잠재적인 용량-의존적인 증가를 나타내었다. 약동학적 데이터, 및 MR-프로ADM (ADM과 동일한 프로호르몬으로부터 유래된 불활성 펩티드 단편)의 증가 결여를 기반으로 하여, 보다 높은 순환 ADM 수준은 증가된 생성에 의해 설명될 수 없다.
이 증가에 대한 메카니즘적 설명은 ADM이 내피 장벽을 가로지를 만큼 충분히 작지만, 항체는 그렇지 않기 때문에, 순환에서 과잉 항체가 ADM을 간질에서 순환으로 배출시킬 수 있다는 것이다 ( Geven et al. 2018. Shock. 50(2):132-140 ). 또한, 항체와 ADM의 결합은 ADM의 반감기를 연장시킨다. NT-ADM 항체가 부분적으로 ADM-매개된 신호전달을 억제하지만, 순환 ADM의 더 큰 증가는 혈액 구획에서 ADM 활성의 전반적인 "순" 증가를 일으켜서, EC의 유익한 효과 (주로 장벽 안정화)를 발휘하는 반면에, 간질에서 VSMC에 대한 ADM의 유해한 효과 (혈관 확장)는 감소된다.
달리 말하면, 기능적 혈장 ADM 수준을 증가시킴으로써, NT-ADM 항체는 패혈증- 및 염증-기반 혈관 및 모세관 누출을 표적화하는 것으로 가정된다. 후자는 중증 코비드-19를 패혈성 쇼크 및 ARDS로 악화시킨다 ( Veerdonk et al. 2020. Preprints, 2020040023 (doi: 10.20944/preprints202004.0023.v1 )). 매우 최근에, 내피의 안정화가 코비드-19의 치료 목적으로 명시적으로 확인되었다 ( Varga et al. 2020.395(10234):1417-1418 ).
아드레시주맙 (HAM 8101)으로 명명되는 N-말단 ADM 항체를 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 8 명의 위중증 코비드-19 환자에게 투여하였다 ( Karakas et al. 2020. Biomolecules 10: 1171 ). 단일 용량의 아드레시주맙을 환자에게 제공하였고, 기계적 환기의 시작 후 1 내지 3 일째에 투여되었다. SOFA (중간값 12.5) 및 SAPS-II (중간값 39) 점수는 가장 높은 위험에 처한 집단을 명백하게 증명하였다. 추적은 13 내지 27 일의 범위였다. 아드레시주맙 투여 후, 저용량 그룹에서 1 명의 환자는 전격성 폐색전증으로 인해 4 일째에 사망한 반면에, 4 명은 안정한 상태였고, 3 명은 중환자실 (ICU)에서 퇴원하였다. 12 일 내에, SOFA점수 뿐만 아니라 질환 중증도 점수 (0-16의 범위, ICU에서 중요 자원 반영, 점수가 높을수록 더 중증의 질병을 나타냄)는 7 명의 생존 환자 중에서 5 명에서 감소하였다 (모두 고용량 환자). PaO2/FiO2는 12 일 내에 증가한 반면에, 염증 파라미터인 C-반응성 단백질, 프로칼시토닌, 및 인터류킨-6은 감소하였다. 중요하게는, 사망률은 예상보다 낮았고, SOFA 점수에 의해 계산되었다. 결론적으로, 생명을 위협하는 코비드-19 및 ARDS를 가진 8 명의 쇼크 환자에 대한 이러한 예비의 제어되지 않는 사례 시리즈에서, 아드레시주맙의 투여 후 유리한 결과가 나타났다.
코로나 바이러스는 인간 및 몇몇 다른 척추동물에서 퍼지며, 호흡기, 장, 간 및 신경계 질환을 유발한다. 특히, 2003 년도의 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (사스-CoV) 및 2012 년도의 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스 (메르스-CoV)는 인간 전염병을 유발하였다. 사스-CoV와 비교하면 몇몇 유의한 차이점 및 유사점이 있다. 메르스 CoV 및 사스-CoV 둘 다 치사율이 훨씬 더 높다 (각각 40% 및 10%) ( de Wit et al. 2016. SARS and MERS: recent insights into emerging coronaviruses. Nat Rev Microbiol 14(8):523-34; Zhou et al. 2020. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. Nature 579(7798):270-273 ). 현재의 사스 CoV-2가 사스-CoV와 게놈의 79%를 공유하지만, 이는 훨씬 더 큰 전염성을 나타낸다. 두 사스-CoV 모두 안지오텐신 전환 효소 2 (ACE2) 수용체를 통해 세포에 들어간다 ( Wan et al. 2020. Receptor recognition by novel coronavirus from Wuhan: An analysis based on decade-long structural studies of SARS. J Virol 94(7):e00127-20 ). 사스-CoV-2에 의해 유발된 질환은 코로나-바이러스-질환 2019 (코비드-19)로 지칭된다.
사스-CoV-2는 먼저 하기도를 주로 감염시키고, 폐포 상피 세포 상의 ACE2에 결합한다. 두 바이러스 모두 염증성 시토카인의 잠재적인 유도인자이다. "시토카인 폭풍" 또는 "시토카인 캐스케이드"는 장기 손상에 대해 가정된 메카니즘이다. 바이러스는 면역 세포를 활성화시키고, 염증성 시토카인 및 케모카인의 폐 혈관 내피 세포로의 분비를 유도한다.
사스-CoV-2 감염의 임상적인 스펙트럼은 무증상 감염, 경증 상기도 질병, 및 호흡 부전 및 심지어 사망을 동반한 중증 바이러스성 폐렴을 포함하여 광범위한 것으로 보이며, 여러 환자가 폐렴으로 입원하였다 ( Huang et al. 2020 Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China. Lancet 395: 497-506; Wang et al. 2020 Clinical characteristics of 138 hospitalized patients with 2019 novel coronavirus-infected pneumonia in Wuhan, China. JAMA 323(11):1061-1069; Chen et al. 2020. Epidemiological and clinical characteristics of 99 cases of 2019 novel coronavirus pneumonia in Wuhan, China: a descriptive study. Lancet 395: 507-13 ).
매우 최근에, 임상의가 불량한 예후를 갖는 이들 코비드-19 환자를 초기에 확인하는데 있어서 고령, 상승된 d-이량체 수준, 및 높은 SOFA 점수가 도움이 되는 것으로 제안되었다 ( Zhou et al. 2020. Clinical course and risk factors for mortality of adult inpatients with COVID-19 in Wuhan, China: a retrospective cohort study. The Lancet, 395(10229):1054-1062 ).
본 발명의 대상은
ㆍ 코로나 바이러스에 감염된 환자의 체액 샘플에서 프로-아드레노메둘린 (서열식별번호 31) 또는 그의 단편의 수준을 결정하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 사전 결정된 역치 또는 이전에 측정된 수준과 비교하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 중증도와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 치료 또는 중재의 성공과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 특정한 치료 또는 중재와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 상기 환자의 관리와 연관시키는 것을 포함하는, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며,
상기 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편은 PAMP (서열식별번호 32), MR-프로ADM (서열식별번호 33), ADM-NH2 (서열식별번호 20), ADM-Gly (서열식별번호 21) 및 CT-프로ADM (서열식별번호 34)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 코로나 바이러스는 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 유해 사건은 사망, 장기 기능장애, 쇼크, ARDS 및 ALI (급성 폐 손상)를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준은 사전 결정된 역치 초과이다.
본 발명의 구체적인 실시양태에서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준은 적어도 2 회 결정된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준의 상기 적어도 두번째 결정은 2 시간 내에, 바람직하게는 4 시간 내에, 더욱 바람직하게는 6 시간 내에, 훨씬 더 바람직하게는 12 시간 내에, 훨씬 더 바람직하게는 24 시간 내에, 가장 바람직하게는 48 시간 내에 결정된다.
이는 용어 "이전에 측정된 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준"에 따라, 본 발명의 모든 대상에 걸쳐, 상기 이전에 측정된 수준이 2 시간 내에, 바람직하게는 4 시간 내에, 더욱 바람직하게는 6 시간 내에, 훨씬 더 바람직하게는 12 시간 내에, 훨씬 더 바람직하게는 24 시간 내에, 가장 바람직하게는 48 시간 내에 측정된 수준인 것으로 이해되는 것임을 의미한다. 측정 및 이전의 측정 사이의 차이는 상이한 시점에서 상기 환자로부터 취한 상이한 샘플에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준 사이의 상대적인 차이이다.
바이오-ADM ≥70 pg/mL 또는 ≥25%는 다음 날 끝까지 증가한다 (모두 최소 50 pg/mL).
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준은 상이한 시점에서 상기 환자로부터 취한 상이한 샘플에서 결정된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상이한 시점에서 상기 환자로부터 취한 상이한 샘플에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준 사이의 차이가 결정된다. 차이는 절대적인 또는 상대적인 차이로서 결정될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상이한 시점에서 상기 환자로부터 취한 상이한 샘플에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준 사이의 상기 상대적인 차이가 100% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 훨씬 더 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 25% 이상일 때, 치료가 개시된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상기 두번째 또는 추가의 결정에서 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 상대적인 수준이 적어도 25%이고, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 절대적인 수준이 적어도 50 pg/ml일 때, 치료가 개시되며, 프로-아드레노메둘린의 상기 단편은 성숙한 ADM (ADM-NH2)이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 단편은 MR-프로ADM (서열식별번호 33)이고, 상기 대상체의 체액 샘플에서 MR-프로ADM의 사전 결정된 역치는 0.5 내지 2 nmol/L, 바람직하게는 0.7 내지 1.5 nmol/L, 바람직하게는 0.8 내지 1.2 nmol/L이고, 가장 바람직하게는 1 nmol/L의 역치가 적용된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 단편은 ADM-NH2 (서열식별번호 20)이고, 상기 대상체의 체액 샘플에서 ADM-NH2 (서열식별번호 20)의 사전 결정된 역치는 40 내지 100 pg/mL, 더욱 바람직하게는 50 내지 90 pg/mL, 훨씬 더 바람직하게는 60 내지 80 pg/mL이고, 가장 바람직하게는 상기 역치는 70 pg/mL이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 환자는 3 이상, 바람직하게는 7 이상의 SOFA 점수 또는 1 이상, 바람직하게는 2 이상의 퀵 SOFA 점수를 갖는다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 환자는 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준은 상기 체액 샘플을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획 결합제와 접촉시킴으로써 결정된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 결정은 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제는 항체, 항체 단편 또는 비-IgG 스캐폴드의 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준은 상기 대상체의 체액 샘플에서 결정되며, 상기 결정은 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제는 항체이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준은 상기 대상체의 체액 샘플에서 결정되고, 상기 결정은 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제는 표면 상에 고정된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며, 상기 환자는 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드로 처리되고, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 및/또는 중간 영역 부분 (aa 1-42): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 23)에 결합한다.
본 발명의 대상은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 코로나 바이러스는 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 환자는 상기 기재된 방법에 따른 방법에 의해 결정될 때 사전 결정된 역치 초과이거나 또는 이전에 측정된 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준보다 높은 상기 대상체의 체액 샘플에서의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준을 갖는다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 환자는 3 이상, 바람직하게는 7 이상의 SOFA 점수 또는 1 이상, 바람직하게는 2 이상의 퀵 SOFA 점수를 갖는다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 환자는 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 14)에 결합한다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 10-7 M 이하의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 대한 최소 결합 친화도를 나타낸다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 생활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하로 차단한다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항체는 모노클로날 항체 또는 모노클로날 항체 단편이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 중쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)은 하기 서열을 포함하고:
Figure pct00001
경쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00002
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항체 또는 단편은 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00003
Figure pct00004
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 각각 > 80% 동일한 서열을 포함하고,
VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00005
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 > 80% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항체 또는 단편은 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00006
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00007
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 인간화 모노클로날 항체 또는 인간화 모노클로날 항체 단편이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 모노클로날 항체이고, 아드레시주맙이며, 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00008
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00009
또는 그의 바이오시밀러를 포함한다.
한 특정한 실시양태에서, 본 발명에 따른 체액은 혈액 샘플이다. 혈액 샘플은 전혈, 혈청 및 혈장을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 진단 방법의 구체적인 실시양태에서, 상기 샘플은 인간 시트레이트 혈장, 헤파린 혈장 및 EDTA 혈장을 포함하는 군으로부터 선택된다.
D-이량체, 예컨대 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편과 같은 바이오마커 농도는 면역검정에서 측정될 수 있고, 상기 면역검정은 샌드위치 면역검정, 바람직하게는 완전 자동화 검정일 수 있다.
한 실시양태에서, ADM-Gly에 대한 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 ADM-Gly를 정량화할 수 있고, 20 pg/ml, 바람직하게는 15 pg/ml, 더욱 바람직하게는 10 pg/ml이다.
한 실시양태에서, PAMP에 대한 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 PAMP를 정량화할 수 있고, < 0.5 pmol/L, 바람직하게는 < 0.25 pmol/L, 더욱 바람직하게는 < 0.1 pmol/L이다.
한 실시양태에서, CT-프로ADM의 검출을 위한 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 CT-프로ADM을 정량화할 수 있고, < 100 pmol/L, 바람직하게는 < 75 pmol/L, 더욱 바람직하게는 < 50 pmol/L이다.
한 실시양태에서, ADM-NH2의 검출을 위한 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 ADM-NH2를 정량화할 수 있고, < 70 pg/ml, 바람직하게는 < 40 pg/ml, 더욱 바람직하게는 < 10 pg/ml이다.
한 실시양태에서, 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 MR-프로ADM을 정량화할 수 있고, < 0.5 nmol/L, 바람직하게는 < 0.4 nmol/L, 더욱 바람직하게는 < 0.2 nmol/L이다.
프로-아드레노메둘린 및/또는 그의 단편 이외의 추가의 바이오마커가 측정될 수 있다. 상기 추가의 바이오마커는 D-이량체, 프로칼시토닌 (PCT), C-반응성 단백질 (CRP), 락테이트, DPP3, 펜키드(penKid), NT-프로BNP, 백혈구 카운트, 림프구 카운트, 호중구 카운트, 헤모글로빈, 혈소판 카운트, 알부민, 알라닌 트랜스아미나제, 크레아티닌, 혈액 우레아, 락테이트 데히드로게나제, 크레아티닌 키나제, 심장 트로포닌 I, 프로트롬빈 시간, 혈청 페리틴, 인터류킨-6 (IL-6), IL-10, IL-2, IL-7, 종양 괴사 인자-α (TNF-α), 과립구 콜로니-자극 인자 (GCSF), IP-10, MCP-1, MIP-1α를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 출원의 또 다른 실시양태는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 및/또는 중간 영역 부분 (아미노산 1-42): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 23)에 결합한다.
본 출원의 한 실시양태는 코로나 바이러스에 감염된 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig-단백질 스캐폴드는
a. 상기 환자의 전신 순환을 안정화시키기 위해 환자의 치료에 사용하기 위한 것이며, 상기 환자는 전신 순환의 안정화를 필요로 하고, > 100 박동 /min의 심박동수 및/또는 < 65 mm Hg 평균 동맥 압력을 나타내고, 전신 순환의 안정화는 평균 동맥 압력을 65 mmHg 초과로 증가시키는 것을 의미하거나, 또는
b. 코로나바이러스에 감염된 환자에서 > 100 박동/min으로 심박동수 증가 및/또는 < 65 mm Hg으로 평균 동맥 압력 감소의 예방에 사용하기 위한 것이다.
본 출원의 또 다른 실시양태는 코로나 바이러스에 감염된 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig-단백질 스캐폴드는 상기 환자에서 장기 기능장애의 예방 또는 감소 또는 장기 부전의 예방을 위해 상기 환자의 치료에 사용하기 위한 것이며, 상기 장기는 심장, 신장, 간, 폐, 췌장, 소장 및 비장을 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 구체적인 실시양태에서, 상기 환자는 코로나 바이러스 감염으로 진단되었거나 또는 그를 가진 것으로 의심된다.
용어 "코로나 바이러스 감염"은 외피형, 포지티브-센스, 단일-가닥 RNA 바이러스의 패밀리인 코로나 바이러스 (코로나비리다에)에 의한 감염으로 정의된다. 바이러스 게놈은 26-32 킬로염기 길이이다. 입자는 전형적으로 대형의 (~20 nm) 곤봉- 또는 꽃잎-형상 표면 돌출부 ("페플로머" 또는 "스파이크")로 장식되어 있으며, 이는 구형 입자의 전자 현미경 사진에서 태양 코로나를 연상시키는 이미지를 생성한다. 코로나바이러스는 포유동물 및 조류에서 질환을 유발한다. 인간에서, 바이러스는 전형적으로 경증인 일반 감기를 비롯한 호흡기 감염을 유발하지만, 사스, 메르스 및 코비드-19와 같은 더 희귀한 형태는 치명적일 수 있다. 가장 최근에 사스-CoV-2가 추가되었다.
구체적인 실시양태에서, 코로나 바이러스에 의한 상기 감염은 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2에 의한 감염을 포함하는 군으로부터 선택된다.
WHO에 따르면, 사스-CoV-2 감염이 의심되는 중증 급성 호흡기 감염 (SARI)은 현재 발열 또는 ≥38℃의 측정 체온 및 기침의 이력, 지난 ~10 일 이내에 발병, 및 입원 필요성을 갖는 급성 호흡기 감염 (ARI)으로서 정의된다. 그러나, 발열이 없다고 바이러스 감염이 제외되는 것은 아니다.
사스-CoV 감염은 경증, 중등도 또는 중증 질병으로 존재할 수 있고; 후자에는 중증 폐렴, ARDS, 패혈증 및 패혈성 쇼크가 포함된다. 중증 징후를 갖는 이들의 초기 확인 (표 1 참고)은 제도적 또는 국가적 프로토콜에 따라 즉각적인 최적화된 지지 치료 및 안전하고 신속한 중환자실 입원 (또는 소견)을 가능하게 한다. 경증 질병을 가진 이들의 경우, 급격한 악화의 우려가 없다면 입원이 필요하지 않을 수 있다. 집으로 퇴원한 모든 환자는 질병이 악화되면 병원으로 되돌아가도록 지시되어야 한다.
표 1. 중증도에 의해 분류되는 (WHO 지침에 따른) 2019-nCoV 감염과 연관된 임상적 증후군
Figure pct00010
Figure pct00011
산소화 지수; OSI, SpO2를 이용하는 산소화 지수; PaO2, 산소의 분압; PEEP, 호기말 양압; SBP, 수축기 혈압; SD, 표준 편차; SIRS, 전신 염증 반응 증후군; SpO2, 산소 포화도. * 고도가 1000m보다 높은 경우에는, 보정 인자가 다음과 같이 계산되어야 한다: PaO2/FiO2 x 기압/760.
패혈성 쇼크는 감염에 대한 반응으로 장기 손상 또는 훼손인 패혈증이 위험하게 낮은 혈압 및 세포 대사 이상을 유발할 때 발생하는 잠재적으로 치명적인 의학적 상태이다. 패혈증 및 패혈성 쇼크에 대한 제3차 국제 합의 정의(Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock, Sepsis-3)는 특히 심각한 순환, 세포 및 대사 이상이 패혈증 단독에 비해 더 큰 사망 위험과 연관된 것인 패혈증의 하위집합으로 패혈성 쇼크를 정의한다. 패혈성 쇼크를 가진 환자는 저혈량증의 부재하에 65 mm Hg 이상의 평균 동맥압 및 2 mmol/L 초과의 (>18 mg/dL) 혈청 락테이트 수준을 유지하기 위해 혈관수축제를 필요로 하는 것으로 임상적으로 확인될 수 있다. 이 조합은 40% 초과의 병원 사망률과 연관이 있다 ( Singer et al. 2016. JAMA. 315 (8): 801-10 ). 일차 감염은 가장 흔하게는 박테리아에 의해 발생하지만, 진균, 바이러스 또는 기생충에 의해서도 발생할 수 있다. 이는 신체의 어느 부위에서는 위치할 수 있지만, 가장 흔하게는 폐, 뇌, 요로, 피부 및 복부 장기에 위치할 수 있다. 이는 다발성 장기 기능장애 증후군 (이전에는 다발성 장기 부전으로 공지되었음) 및 사망을 유발할 수 있다. 빈번하게, 패혈성 쇼크를 가진 사람은 중환자실에서 치료를 받는다. 이는 어린이, 면역손상된 개체, 및 노인에서 가장 흔하게 영향을 미치며, 이들의 면역계가 건강한 성인만큼 효과적으로 감염을 처리할 수 없기 때문이다. 패혈성 쇼크로 인한 사망률은 대략 25-50%이다.
질환의 중증도는 환자에 대한 장기 시스템 이상 또는 생리학적 보상의 정도로서 정의된다. 중증도는 예를 들어 평점 시스템을 이용하여 상이한 단계로 분류될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 장기 기능장애는 장기가 그의 예상된 기능을 수행하지 않는 병태 또는 질환 상태를 지칭한다. "장기 부전"은 외부의 임상적 중재가 없이는 정상적인 항상성을 유지할 수 없는 정도의 장기 기능장애를 지칭한다. 상기 장기 부전은 신장, 간, 심장, 폐, 신경계를 포함하는 군으로부터 선택된 장기에 관한 것일 수 있다. 대조적으로, 장기 기능은 생리학적 범위 내에서 각각의 장기의 예상된 기능을 나타낸다. 관련 기술분야의 기술자는 의료 진단 동안에 장기의 각각의 기능을 알고 있다.
장기 기능장애는 순차적인 장기 부전 평가 점수 (SOFA-점수) 또는 그의 구성요소에 의해 정의될 수 있다. 이전에는 공지된 패혈증-관련 장기 부전 평가 점수 ( Singer et al. 2016. JAMA 315(8):801-10 )로 공지된 SOFA 점수를 이용하여, 중환자실 (ICU)에 있는 동안에 개인의 상태를 추적하여, 개인의 장기 기능 또는 실패율의 정도를 결정한다. 점수는 6 가지 상이한 점수를 기반으로 하며, 호흡기, 심혈관, 간, 응고, 신장 및 신경계에 대해 각각 1 개씩 0 내지 4로 각각 점수를 매기며, 증가하는 점수는 악화되는 장기 기능장애를 반영한다. SOFA 점수의 평가에 대한 기준은 예를 들어 [Lamden et al. ( Lambden et al. 2019. Critical Care 23:374 ) 검토를 위해 참고]에 기재되어 있다. SOFA 점수는 전통적으로 ICU에 입원시 및 그 후에 24 시간 기간마다 계산될 수 있다. 특히, 상기 장기 기능장애는 신장 기능저하, 심장 기능장애, 간 기능장애 또는 호흡기 기능장애를 포함하는 군으로부터 선택된다.
퀵 SOFA 점수 (퀵SOFA 또는 qSOFA)는 감염에 의한 불량한 결과에 대한 위험이 높은 환자를 확인하는 초기 방법으로서 SOFA 점수의 간소화된 버전으로서 2016년 2월에 패혈증-3 그룹에 의해 도입되었다 ( Angus et al. 2016. Critical Care Medicine. 44 (3): e113-e121 ). qSOFA는 그의 3 가지 임상적 기준만을 포함시키고, GCS <15를 요구하는 대신에 "임의의 변경된 정신작용"을 포함시킴으로써 SOFA 점수를 대폭 간소화시켰다. qSOFA는 환자에 대해 용이하고 신속하게 연속적으로 반복될 수 있다. 점수는 0 내지 3 점 범위이다. 1 점은 하기에 대해 주어진다: 낮은 혈압 (SBP ≤100 mmHg), 높은 호흡률 ((≥ 22 호흡/min) 및 변경된 정신작용 (GCS ≤ 15). 감염 시작 근처에서 2 점 이상의 qSOFA의 존재는 사망 위험 증가 또는 장기간 중환자실 입원과 연관이 있었다. 이들은 단순 감염 환자에 비해 패혈증일 수 있는 감염된 환자에서 더욱 일반적인 결과이다. 이들 발견을 기반으로 하여, 패혈증에 대한 제3차 국제 합의 정의는 패혈증의 가능성이 있는 ICU 밖에 있는 감염 환자를 확인하기 위한 간단한 프롬프트로서 qSOFA를 권장한다 ( Seymour et al. 2016. JAMA 315(8):762-774 ).
생명을 위협하는 악화는 중추신경계 부전, 신장 부전, 간 부전, 대사 부전 또는 호흡 부전을 비롯한 중요한 장기 시스템 부전을 수반하는 사망 위험이 높은 환자의 상태로서 정의된다.
유해 사건은 사망, 장기 기능장애 또는 쇼크, ARDS 및 ALI (급성 폐 손상)으로서 정의된다.
본 발명에서, 용어 "예후" 또는 "예측하는"은 대상체의 (예를 들어, 환자의) 의학적 상태가 어떻게 진행될 것인지에 대한 예측을 나타낸다. 여기에는 상기 대상체에 대한 회복 가능성 또는 유해 사건 또는 결과의 가능성에 대한 추정이 포함될 수 있다.
사망을 비롯한 유해 사건의 상기 예후는 정의된 기간, 예를 들어 1 년 이하, 바람직하게는 6 개월 이하, 더욱 바람직하게는 3 개월 이하, 더욱 바람직하게는 90 일 이하, 더욱 바람직하게는 60 일 이하, 더욱 바람직하게는 28 일 이하, 더욱 바람직하게는 14 일 이하, 더욱 바람직하게는 7 일 이하, 더욱 바람직하게는 3 일 이하 동안 이루어질 수 있다.
구체적인 실시양태에서, 사망을 비롯한 유해 사건의 상기 예후는 28 일 이하의 기간 동안 이루어진다.
본 발명의 맥락에서 용어 "치료 모니터링"은 예를 들어 치료의 효능에 대한 피드백을 수득함으로써 상기 환자의 치료적 치료의 모니터링 및/또는 조정을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료 지침"은 하나 이상의 바이오마커의 값 및/또는 임상적 파라미터 및/또는 임상적 점수를 기반으로 하는 특정한 치료 또는 의학적 중재의 적용을 지칭한다.
이러한 임상적 파라미터 또는 임상적 점수는 저혈압 이력, 혈관수축제 요구, 삽관, 기계적 환기, 호로비츠 지수, SOFA 점수, 퀵 SOFA 점수를 포함하는 군으로부터 선택된다.
용어 "치료 계층화"는 특히 그들의 분류에 따라 치료적 처치를 제공받거나 또는 제공받지 않는 상이한 그룹, 예컨대 치료 그룹으로 환자를 그룹화 또는 분류하는 것을 지칭한다.
상기 치료 또는 중재는 약물 요법, 비침습적인 환기, 기계적 환기, 체외 막 산소화 (ECMO), 투석 또는 신장 대체 요법을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
비침습적인 환기는 안면 마스크, 비강 마스크 또는 헬멧을 통해 투여되는 호흡 지지의 사용이다. 일반적으로 산소가 첨가된 공기가 양압하에 마스크를 통해 제공된다.
기계적 환기 또는 보조적 환기는 인공적인 환기에 대한 의학적 용어이며, 기계적 수단이 자발 호흡을 보조하거나 또는 대체하기 위해 사용된다. 이는 인공호흡기로 지칭되는 기계를 수반할 수 있거나, 또는 호흡이 적합한 자격을 갖춘 전문가, 예컨대 마취과 의사, 호흡 치료사 (RT), 호흡 치료 등록 간호사, 또는 구급대원에 의해 백 밸브 마스크 기기를 압축시킴으로써 수동적으로 보조될 수 있다. 기계적 환기는 기관내 튜브와 같이 구강을 통해 또는 기관절개 튜브와 같이 피부를 통해 기관 내부에서 임의의 장비를 수반하는 경우, 이는 "침습적인" 것으로 명명된다. 적절하게 선택된 의식이 있는 환자에서 비침습적인 환기를 위해 안면 또는 비강 마스크가 사용된다.
체외 생명 유지 (ECLS)로도 공지된 체외 막 산소화 (ECMO)는 심장 및 폐가 생명을 유지하기 위해 적절한 양의 기체 교환 또는 관류를 제공할 수 없는 사람에게 장기간 심장 및 호흡기 지지를 제공하는 체외 기술이다. ECMO 기술은 주로 심폐 바이패스로부터 유래되고, 이는 차단된 고유 순환에 의해 단기간 지지를 제공한다. ECMO는 신체로부터 혈액을 제거하고, 인공적으로 그로부터 이산화탄소를 제거하고, 환자의 적혈구에 산소를 첨가함으로써 작동한다. 일반적으로, 이는 심폐 바이패스 이후에 또는 심각한 심장 및/또는 폐 부전을 가진 환자의 늦은 치료시에 사용되지만, 현재 특정한 센터에서는 심정지의 치료를 위해 사용되어, 순환 및 산소화를 지지하면서 근본적인 정지 원인을 치료한다. ECMO는 또한 인공적인 환기가 혈액 산소화 수준을 유지하는데 불충분한 경우에 코비드-19와 연관된 급성 바이러스성 폐렴을 가진 환자를 지지하기 위해 사용된다.
이러한 약물 요법은 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편, 항-ADM 비-Ig 스캐폴드, 항바이러스 약물, 코비드-19 폐렴에 걸렸던 완치 환자로부터의 면역글로불린, 코로나바이러스를 표적화하는 중화 모노클로날 항체, 면역증강제, 카모스타트 메실레이트, 코로나바이러스 프로테아제 억제제 (예를 들어 키모트립신-유사 억제제, 파파인-유사 프로테아제 억제제), 스파이크 (S) 단백질-안지오텐신-전환 효소-2 (ACE2) 차단제 (예를 들어 클로로퀸, 히드록시클로로퀸, 에모딘, 프로마진), 안지오텐신-수용체-효능제 및/또는 그의 전구체를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
사스-CoV 및 메르스-CoV를 표적화하는 상기 중화 모노클로날 항체는 [Shanmugaraj et al. ( Shanmugaraj et al. 2020. Asian Pac J. allergy Immunol 38: 10-18 )]에 요약된 군으로부터 선택될 수 있다.
상기 항바이러스 약물은 로피나비르, 리토나비르, 렘데시비르, 나파모스타트, 리바비린, 오셀타미비르, 펜시클로비르, 아시클로비르, 간시클로비르, 파비피라비르, 니타족사니드, 넬피나비르, 아르비돌을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
상기 면역증강제는 인터페론, 정맥내 감마글로불린, 티모신 α-1, 레바미솔, 시클로스포린-A의 비-면역억제성 유도체를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 상기 안지오텐신-수용체-효능제 및/또는 그의 전구체는 안지오텐신 I, 안지오텐신 II, 안지오텐신 III, 안지오텐신 IV를 포함하는 군으로부터 선택된다.
호로비츠(Horowitz) 지수 (동의어: 호로비츠 이후 산소화, 호로비츠 계수, P/F 비)는 환자, 특히 인공호흡기를 사용하는 환자에서 폐 기능을 평가하기 위해 사용되는 비이다. 이는 폐에 대한 손상 정도를 평가하는데 유용하다. 호로비츠 지수는 혈중 산소 분압 (PaO2) (수은 밀리미터) 및 흡입된 공기 중 산소의 분율 (FIO2)의 비 - PaO2/FiO2 비로서 정의된다. 건강한 폐에서, 호로비츠 지수는 연령에 따라 좌우되고, 일반적으로 350 내지 450에 속한다. 300 미만의 값은 경증 폐 손상에 대한 역치이며, 200은 중등도 중증 폐 손상을 나타낸다. 100 미만의 값은 중증 손상에 대한 기준이다. 호로비츠 지수는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)의 진단에서 중요한 역할을 한다. ARDS의 3 가지 중증도는 베를린 정의에 따라 호로비츠 지수를 사용하여 저산소혈증의 정도를 기반으로 하여 분류된다 ( Matthay et al. 2012. J Clin Invest. 122(8): 2731-2740 ).
급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)은 폐에서 광범위한 염증의 급속한 발병을 특징으로 하는 유형의 호흡 부전이다. 증상에는 숨가쁨, 빠른 호흡 및 푸르스름한 피부색이 포함된다. 생존한 사람들의 경우, 일반적으로 삶의 질이 감소된다. 원인에는 패혈증, 췌장염, 외상, 폐렴 및 흡인이 포함될 수 있다. 근본적인 메카니즘은 폐의 미세한 기낭의 장벽을 형성하는 세포에 대한 미만성 손상, 계면활성제 기능장애, 면역계 활성화, 및 혈액 응고에 대한 신체 조절의 기능장애를 수반한다. 실제로, ARDS는 폐가 산소 및 이산화탄소를 교환하는 능력을 손상시킨다. 진단은 5 cm H2O 초과의 호기말 양압 (PEEP)에도 불구하고 300 mm Hg 미만의 PaO2/FiO2 비 (동맥 산소 분압 및 흡기 산소의 분율의 비)를 기반으로 한다. 일차 치료는 근본적인 원인에 대한 치료와 함께 기계적 환기를 수반한다. 환기 전략에는 낮은 부피 및 낮은 압력을 이용하는 것이 포함된다. 산소화가 불충분하게 유지되는 경우, 폐 동원 요법 및 신경근 차단제가 사용될 수 있다. 이것이 불충분한 경우, 체외 막 산소화 (ECMO)가 옵션일 수 있다. 상기 증후군은 35 내지 50%의 사망률과 연관이 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자"는 질환으로 인해 의학적 치료를 제공받고 있거나 또는 의학적 치료를 제공받아야 하는 살아있는 인간 또는 비-인간 유기체를 지칭한다. 여기에는 병리학적 징후에 대해 조사 중인 정의된 질병이 없는 사람이 포함된다. 따라서, 본원에 기재된 방법 및 검정은 인간 및 수의학적 질환 둘 다에 적용가능하다.
본 발명의 맥락에서 용어 "환자 관리"는 하기를 지칭한다:
ㆍ 병원 또는 중환자실에 입원시키는 결정,
ㆍ 환자를 전문 병원 또는 전문 병원 단위로 재배치하는 결정,
ㆍ 중환자실 또는 병원으로부터 조기 퇴원에 대한 평가,
ㆍ 자원 할당 (예를 들어, 의사 및/또는 간호 직원, 진단제, 치료제),
ㆍ 치료적 치료에 대한 결정.
역치 수준은 예를 들어 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 분석으로부터 수득될 수 있으며, 질병의 발생은 집단에서 바이오마커의 사분위수와 상관관계가 있다. 이 분석에 따라, 바이오마커 수준이 75번째 백분위수 초과인 대상체는 본 발명에 따른 질환에 걸릴 위험이 유의하게 증가된다. 이 결과는 추가로 고전적인 위험 인자에 대한 완전한 조정에 의해 콕스(Cox) 회귀 분석에 의해 추가로 뒷받침된다: 다른 모든 대상체에 비해 가장 높은 사분위수는 본 발명에 따른 질환에 걸릴 위험이 증가하는 것과 매우 유의한 연관이 있었다.
다른 바람직한 컷오프 값은 예를 들어 정상 집단의 90번째, 95번째 또는 99번째 백분위수이다. 75번째 백분위수보다 높은 백분위수를 사용함으로써, 확인된 위양성 대상체의 수가 감소되지만, 중등도이지만 여전히 증가된 위험을 갖는 대상체를 확인하는 것을 놓칠 수 있다. 따라서, "위양성"을 확인하는 것 대신에 위험한 대상체의 대부분을 확인하는 것이 더욱 적절한 것으로 고려되는지 여부에 따라, 또는 중등도 위험을 가진 몇몇 대상체를 놓치는 대신에 고위험 대상체를 주로 확인하는 것이 더욱 적절한 것으로 고려되는지 여부에 따라 컷오프 값을 채택할 수 있다.
상기 언급된 역치 값이 본 발명에서 사용되는 검정 시스템으로부터 상이하게 보정된 경우, 이는 다른 검정에서 상이할 수 있다. 따라서, 상기 언급된 역치는 보정에서의 차이를 고려하여 그에 따라 이러한 상이하게 보정된 검정에 적용되어야 한다. 보정에서의 차이를 정량화하는 한 가지 가능성은 두 방법을 이용하여 샘플에서 각각의 바이오마커 (예를 들어 바이오-ADM)를 측정함으로써 본 발명에서 사용된 각각의 바이오마커 검정에 의한 해당 검정 (예를 들어 바이오-ADM 검정)의 방법 비교 분석 (상관관계)이다. 또 다른 가능성은 이 시험이 충분한 분석 민감도를 갖는 경우 해당 검정에 의해 대표적인 정상 집단의 중간 바이오마커 수준을 결정하고, 문헌 (예를 들어, [Weber et al. 2017. JALM 2(2): 222-233])에 기재된 바와 같이 중간 바이오마커 수준과 결과를 비교하고, 이 비교에 의해 수득된 차이를 기반으로 하여 보정을 다시 계산하는 것이다. 본 발명에서 사용된 보정에 의해, 정상 (건강한) 대상체로부터의 샘플을 측정하였다: 중간 혈장 바이오-ADM (성숙한 ADM-NH2)은 13.7 pg/ml (사분위수간 범위 [IQR] 9.6 - 18.7 pg/mL)이었다 (Weber et al. 2017. JALM 2(2): 222-233 ).
명세서 전반에 걸쳐, 본 발명에 따른 "항체" 또는 "항체 단편" 또는 "비-Ig 스캐폴드"는 ADM에 결합할 수 있고, 따라서 ADM에 대해 지시되고, 따라서 "항-ADM 항체", "항-ADM 항체 단편", 또는 "항-ADM 비-Ig 스캐폴드"로 지칭될 수 있다.
성숙한 ADM, 바이오-ADM 및 ADM-NH2는 본 출원 전반에 걸쳐 동의어로 사용되며, 서열식별번호: 20에 따른 분자이다.
진단 방법의 구체적인 실시양태에서, 상기 결합제는 적어도 107 M-1, 바람직하게는 108 M-1의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편 (서열식별번호: 20에 따른 ADM-NH2가 아님) 및 ADM-NH2에 대한 결합 친화도를 나타내고, 바람직한 친화도는 109 M-1 초과이고, 가장 바람직하게는 1010 M-1 초과이다. 관련 기술분야의 기술자는 더 높은 용량의 화합물을 적용함으로써 더 낮은 친화도를 보완하는 것이 고려될 수 있음을 알고 있으며, 이 수단은 본 발명의 범위를 벗어나지 않는다.
아드레노메둘린에 대한 항체의 친화도를 결정하기 위해, 고정된 항체에 대한 아드레노메둘린의 결합의 동역학은 비아코어 2000 시스템 (지이 헬쓰케어 유럽 게엠베하(GE Healthcare Europe GmbH) 독일 프라이부르크)을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되었다. 항체의 가역적인 고정은 제조자의 지침 (마우스 항체 포획 키트; 지이 헬쓰케어)에 따라 CM5 센서 표면에 고밀도로 공유적으로 커플링된 항-마우스 Fc 항체를 사용하여 수행되었다, ( Lorenz et al. 2011. Antimicrob Agents Chemother. 55 (1): 165-173 ).
진단 방법의 구체적인 실시양태에서, 검정은 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편 및 ADM-NH2의 수준을 결정하기 위해 사용되며, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준은 PAMP (서열식별번호 32), MR-프로ADM (서열식별번호 33), ADM-Gly (서열식별번호 21) 및 CT-프로ADM (서열식별번호 34)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이러한 검정은 샌드위치 검정, 바람직하게는 완전 자동화 검정이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 이는 완전 자동화 검정 시스템의 필요 없이 환자 근처에서 1 시간 미만 내에 시험을 수행할 수 있는 시험 기술인 소위 POC-시험 (현장 진단)일 수 있다. 이 기술의 한 예는 면역크로마토그래피 시험 기술이다.
진단 방법의 한 실시양태에서, 이러한 검정은 효소 표지, 화학발광 표지, 전기화학발광 표지를 비롯하여 이로 제한되지 않는 임의의 종류의 검출 기술을 이용하는 샌드위치 면역검정, 바람직하게는 완전 자동화 검정이다. 진단 방법의 한 실시양태에서, 이러한 검정은 효소 표지된 샌드위치 검정이다. 자동화 또는 완전 자동화 검정의 예에는 하기 시스템 중 하나를 위해 이용될 수 있는 검정이 포함된다: 로슈 엘렉시스(Elecsys)®, 애보트(Abbott) 아키텍트(Architect)®, 지멘스(Siemens) 센타우어(Centauer)®, 브람스(Brahms) 크립터(Kryptor)®, 바이오메리욱스(Biomerieux) 비다스(Vidas)®, 엘리어(Alere) 트리에이지(Triage)®.
다양한 면역검정이 공지되어 있고, 본 발명의 검정 및 방법을 위해 사용될 수 있으며, 이들에는 방사성 면역검정 ("RIA"), 균질한 효소-증배 면역검정 ("EMIT"), 효소 결합 면역흡착 검정 ("ELISA"), 아포효소 재활성화 면역검정 ("ARIS"), 딥스틱 면역검정 및 면역-크로마토그래피 검정이 포함된다.
진단 방법의 구체적인 실시양태에서, 상기 두 결합제 중 적어도 하나는 검출되기 위해 표지된다.
단일특이적인 것은 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 표적 ADM 내의 적어도 4 개 아미노산을 포함하는 1 개의 특이적인 영역에 결합함을 의미한다. 본 발명에 따른 단일특이적인 항체 또는 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 모두 동일한 항원에 대한 친화도를 갖는 항체 또는 단편 또는 비-Ig 스캐폴드이다. 모노클로날 항체는 단일특이적이지만, 단일특이적인 항체는 공통 생식 세포로부터 그를 생성하는 것 이외의 다른 방법에 의해 또한 생성될 수 있다.
상기 항-ADM 항체, 또는 ADM에 결합하는 항체 단편, 또는 ADM에 결합하는 비-Ig 스캐폴드는 비-중화 항-ADM 항체, 또는 ADM에 결합하는 항체 단편, 또는 ADM에 결합하는 비-Ig 스캐폴드이다.
본 발명에 따른 항체 또는 단편은 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 코딩되는 1 개 이상의 폴리펩티드를 포함하는 단백질이다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파 (IgA), 감마 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타 (IgD), 엡실론 (IgE) 및 뮤 (IgM) 불변 영역 유전자, 뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 경쇄는 일반적으로 약 25 Kd 또는 214 개 아미노산 길이이다.
전장 면역글로불린 중쇄는 일반적으로 약 50 Kd 또는 446 개 아미노산 길이이다. 경쇄는 NH2-말단에서 가변 영역 유전자 (약 110 개 아미노산 길이)에 의해 및 COOH-말단에서 카파 또는 람다 불변 영역 유전자에 의해 코딩된다. 중쇄는 유사하게 가변 영역 유전자 (약 116 개 아미노산 길이)에 의해 및 다른 불변 영역 유전자 중 하나에 의해 코딩된다.
항체의 기본 구조 단위는 일반적으로 면역글로불린 쇄의 2 개의 동일한 쌍으로 이루어진 사량체이며, 각각의 쌍은 1 개의 경쇄 및 1 개의 중쇄를 갖는다. 각각의 쌍에서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 항원에 결합하고, 불변 영역은 이펙터 기능을 매개한다. 면역글로불린은 또한 예를 들어 Fv, Fab, 및 (Fab')2, 뿐만 아니라 이관능성 혼성체 항체 및 단일 쇄를 비롯한 다양한 다른 형태로 존재한다 (예를 들어, [ Lanzavecchia et al. 1987. Eur. J. Immunol. 17:105; Huston et al. 1988. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85:5879-5883; Bird et al. 1988. Science 242:423-426; Hood et al. 1984, Immunology, Benjamin, N.Y., 2nd ed.; Hunkapiller and Hood 1986. Nature 323:15-16 ]). 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 지칭되는 3 개의 초가변 영역에 의해 개재된 프레임워크 영역을 포함한다 ([ Sequences of Proteins of Immunological Interest, E. Kabat et al. 1983, U.S. Department of Health and Human Services ] 참고). 상기 언급된 바와 같이, CDR은 주로 항원의 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 면역 복합체는 항체, 예컨대 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체, 또는 항원에 특이적으로 결합하는 기능적 항체 단편이다.
키메라 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 전형적으로 유전자 조작에 의해 상이한 종에 속하는 면역글로불린 가변 및 불변 영역 유전자로부터 구축된 것인 항체이다. 예를 들어, 마우스 모노클로날 항체로부터의 유전자의 가변 세그먼트는 인간 불변 세그먼트, 예컨대 카파 및 감마 1 또는 감마 3에 결합할 수 있다. 따라서, 한 예에서, 치료 키메라 항체는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인, 및 인간 항체로부터의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 혼성체 단백질이지만, 다른 포유동물 종이 사용될 수 있거나, 또는 가변 영역이 분자 기술에 의해 생성될 수 있다. 키메라 항체의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 미국 특허 번호 5,807,715를 참고한다. "인간화" 면역글로불린은 인간 프레임워크 영역 및 비-인간 (예컨대 마우스, 래트 또는 합성) 면역글로불린으로부터의 1 개 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린이다. CDR을 제공하는 비-인간 면역글로불린은 "공여자"로 명명되고, 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "수용자"로 명명된다. 한 실시양태에서, 모든 CDR은 인간화 면역글로불린에서 공여자 면역글로불린으로부터의 것이다. 불변 영역은 존재할 필요는 없지만, 존재한다면, 그들은 인간 면역글로불린 불변 영역과 실질적으로 동일해야 하고, 즉, 적어도 약 85-90%, 예컨대 약 95% 또는 그 초과로 동일해야 한다. 따라서, 가능하게는 CDR을 제외한 인간화 면역글로불린의 모든 부분은 천연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분과 실질적으로 동일하다. "인간화 항체"는 인간화 경쇄 및 인간화 중쇄 면역글로불린을 포함하는 항체이다. 인간화 항체는 CDR을 제공하는 공여자 항체와 동일한 항원에 결합한다. 인간화 면역글로불린 또는 항체의 수용자 프레임워크는 공여자 프레임워크로부터 취한 제한된 수의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 인간화 또는 다른 모노클로날 항체는 추가의 보존적 아미노산 치환을 가질 수 있으며, 이는 항원 결합 또는 다른 면역글로불린 기능에 실질적인 영향을 미치지 않는다. 예시적인 보존적 치환은 gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gln; ser, thr; lys, arg; 및 phe, tyr과 같은 것들이다. 인간화 면역글로불린은 유전자 조작 수단에 의해 구축될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,585,089 참고). 인간 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 인간 기원인 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 관심 항체를 분비하는 인간 B 세포를 불멸화시킴으로써 생성될 수 있다. 불멸화는 예를 들어 EBV 감염에 의해 또는 인간 B 세포를 흑색종 또는 하이브리도마 세포와 융합시켜 트리오마 세포를 생성함으로써 달성될 수 있다. 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 방법에 의해 생성될 수 있거나 (예를 들어 WO91/17271; WO92/001047; WO92/20791 참고), 또는 인간 조합 모노클로날 항체 라이브러리로부터 선택될 수 있다 (모르포시스(Morphosys) 웹사이트 참고). 인간 항체는 또한 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 동물을 사용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, WO93/12227; WO 91/10741 참고).
따라서, 항-ADM 항체는 관련 기술분야에 공지된 포맷을 가질 수 있다. 예는 인간 항체, 모노클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, CDR-그래프팅된 항체이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 재조합적으로 생성된 항체, 예를 들어 IgG, 전형적인 전장 면역글로불린, 또는 중쇄 및/또는 경쇄의 적어도 F-가변 도메인의 항체 단편, 예를 들어 화학적으로 커플링된 항체 (단편 항원 결합), 예컨대 비제한적으로 Fab-단편, 예컨대 Fab 미니바디, 단일 쇄 Fab 항체, 에피토프 태그를 갖는 1가 Fab 항체, 예를 들어 Fab-V5Sx2; CH3 도메인과 이량체화된 2가 Fab (미니-항체); 예를 들어 이종성 도메인의 도움에 의해 다량체화를 통해, 예를 들어 dHLX 도메인의 이량체화를 통해 형성된 2가 Fab 또는 다가 Fab, 예를 들어 Fab-dHLX-FSx2; F(ab')2-단편, scFv-단편, 다량체화된 다가 또는/및 다중특이적인 scFv-단편, 2가 및/또는 이중특이적인 디아바디, 바이트(BITE)® (이중특이적인 T-세포 인게이저), 삼관능성 항체, 예를 들어 G와는 상이한 부류로부터의 다가 항체; 단일-도메인 항체, 예를 들어 낙타 또는 어류 면역글로불린으로부터 유래된 나노바디 및 수많은 다른 것들이다.
항-ADM 항체 외에도 표적 분자와 착화하기 위한 다른 생체고분자 스캐폴드가 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 고도로 표적 특이적인 생체고분자의 생성을 위해 사용되었다. 예는 압타머, 스피겔머, 안티칼린 및 코노톡신이다. 항체 포맷의 예시에 대해서는 도 1a, 1b 및 1c를 참고한다.
바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체 포맷은 Fv 단편, scFv 단편, Fab 단편, scFab 단편, F(ab)2 단편 및 scFv-Fc 융합 단백질을 포함하는 군으로부터 선택된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항체 포맷은 scFab 단편, Fab 단편, scFv 단편 및 생체이용률 최적화된 그의 접합체, 예컨대 PEG화 단편을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 포맷 중 하나는 scFab 포맷이다.
비-Ig 스캐폴드는 단백질 스캐폴드일 수 있고, 이들이 리간드 또는 항원에 결합할 수 있기 때문에 항체 모방체로서 사용될 수 있다. 비-Ig 스캐폴드는 테트라넥틴-기반 비-Ig 스캐폴드 (예를 들어 US 2010/0028995 에 기재됨), 피브로넥틴 스캐폴드 (예를 들어 EP 1 266 025 에 기재됨; 리포칼린-기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/154420 에 기재됨); 유비퀴틴 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/073214 에 기재됨), 트랜스페린 스캐폴드 (예를 들어 US 2004/0023334 에 기재됨), 단백질 A 스캐폴드 (예를 들어 EP 2 231 860 에 기재됨), 안키린 반복부 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2010/060748 에 기재됨), 미세단백질, 바람직하게는 시스테인 노트를 형성하는 미세단백질) 스캐폴드 (예를 들어 EP 2314308 에 기재됨), Fyn SH3 도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/023685 에 기재됨) EGFR-A-도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2005/040229 에 기재됨) 및 쿠니츠(Kunitz) 도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 EP 1 941 867 에 기재됨)를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항-ADM 항체는 항원으로서 ADM의 단편을 합성함으로써 실시예 1에 개략된 바와 같이 수득될 수 있다. 그 후에, 상기 단편에 대한 결합제는 하기 기재된 방법 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 방법을 이용하여 확인된다.
뮤린 항체의 인간화는 하기 절차에 따라 수행될 수 있다: 뮤린 기원 항체의 인간화를 위해, 항체 서열을 프레임워크 영역 (FR)과 상보성 결정 영역 (CDR) 및 항원 사이의 구조적 상호작용에 대해 분석한다. 구조적 모델링을 기반으로 하여, 인간 기원의 적당한 FR이 선택되고, 뮤린 CDR 서열은 인간 FR로 번역된다. CDR 또는 FR의 아미노산 서열에서의 변형이 도입되어, FR 서열에 대한 종 스위치에 의해 폐지된 구조적 상호작용을 회복할 수 있다. 구조적 상호작용의 이러한 회복은 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하는 무작위 접근법에 의해 또는 분자 모델링에 의해 안내되는 직접적인 접근법을 통해 달성될 수 있다 ( Almagro and Fransson 2008. Front Biosci. 13:1619-33 ).
또 다른 실시양태에서, 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편, 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 전장 항체, 항체 단편, 또는 비-Ig 스캐폴드이다.
한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 및/또는 중간 영역 부분 (아미노산 1-42): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 23)의 바람직하게는 적어도 4 또는 적어도 5 개 아미노산 길이의 에피토프에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.
항원 결정기로도 공지된 에피토프는 면역계에 의해, 특이적으로 항체에 의해 인식되는 항원의 일부 (예를 들어, 펩티드 또는 단백질)이다. 예를 들어, 에피토프는 항체가 결합하는 항원의 특이적인 조각이다. 에피토프에 결합하는 항체의 부분은 파라토프로 지칭된다. 단백질 항원의 에피토프는 그들의 구조 및 파라토프와의 상호작용을 기반으로 하여 2 가지 카테고리, 입체형 에피토프 및 선형 에피토프로 나뉘어 진다.
선형 또는 순차적 에피토프는 아미노산의 선형 서열 또는 일차 구조에 의해 항체에 의해 인식되고, 인접한 아미노산 잔기의 상호작용에 의해 채택된 3-D 입체형에 의해 형성되는 에피토프이다. 입체형 및 선형 에피토프는 연관된 에피토프 잔기의 표면 특징 및 항원의 다른 세그먼트의 형태 및 3차 구조에 의해 결정되는 에피토프의 3-D 입체형을 기반으로 하여 파라토프와 상호작용한다. 입체형 에피토프는 인접하지 않은 아미노산 잔기의 상호작용에 의해 채택된 3-D 입체형에 의해 형성된다.
본 발명의 한 구체적인 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 14) 내의 바람직하게는 적어도 4, 또는 적어도 5 개 아미노산에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항-ADM-항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-14): YRQSMNNFQGLRSF (서열식별번호: 25) 내의 바람직하게는 적어도 4, 또는 적어도 5 개 아미노산에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 상기 항-ADM-항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-10): YRQSMNNFQG (서열식별번호: 26) 내의 바람직하게는 적어도 4, 또는 적어도 5 개 아미노산에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.
매우 구체적인 실시양태에서, 상기 항-ADM-항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-6): YRQSMN (서열식별번호: 27) 내의 바람직하게는 적어도 4, 또는 적어도 5 개 아미노산에 대해 지정되고, 그에 결합할 수 있으며, 결합을 위해 ADM 및/또는 ADM-Gly의 유리 N-말단 (아미노산 1)을 필요로 한다.
본 발명의 또 다른 매우 구체적 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 (아미노산 1)을 인식하여 그에 결합한다. N-말단은 아미노산 1, 즉, 서열식별번호 14, 20, 22, 23, 25, 26, 27의 "Y"를 의미하고, 항체 결합에 필수적이다. 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 N-말단 연장된 및 N-말단 변형된 ADM 및 N-말단 분해된 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2에 전혀 결합하지 않을 것이다. 이는 ADM의 N-말단이 유리되어 있는 경우, 상기 항-ADM-항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 서열 내의 영역에서만 결합한다는 것을 의미한다. 상기 서열이 예를 들어 프로-ADM 내에 포함된 경우, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 서열 내의 영역에 결합하지 않을 것이다.
명확성을 위해, "N-말단 부분 (아미노산 1-21)"과 같이 ADM의 특이적인 영역에 대한 괄호 안의 숫자는 ADM의 N-말단 부분이 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2 서열의 아미노산 1-21로 이루어지는 것으로 관련 기술분야의 기술자에 의해 이해된다.
본 발명에 따른 또 다른 구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 C-말단, 즉, ADM의 aa 43 - 52 (서열식별번호: 24)에 결합하지 않는다.
한 구체적인 실시양태에서, 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 사용하는 것이 바람직하며, 상기 항-아드레노메둘린 항체 또는 상기 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM-NH2 수준 또는 ADM-NH2 면역반응성의 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 >50%, 가장 바람직하게는 >100% 증가를 유발한다.
혈청, 혈액, 혈장에서 아드레노메둘린의 반감기 (절반 체류 시간)의 결정을 위해 사용될 수 있는 검정은 실시예 3에 기재되어 있다.
본 발명의 구체적인 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체 또는 그의 단편이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편은 인간 또는 인간화 항체이거나 또는 그로부터 유래된다. 한 구체적인 실시양태에서, 1 개 이상의 (뮤린) CDR은 인간 항체 또는 항체 단편에 그래프팅된다 ("인간화").
한 측면에서, 본 발명의 대상은 인간화 CDR-그래프팅된 항체 또는 그의 항체 단편이며, 상기 항체는 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재를 위해 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분을 인식하고, 그에 결합하며, 인간화 CDR-그래프팅된 항체 또는 그의 항체 단편은 하기를 포함하는 항체 중쇄 (H 쇄)를 포함하고/거나:
Figure pct00012
추가로 하기를 포함하는 항체 경쇄 (L 쇄)를 포함한다:
Figure pct00013
본 발명의 한 구체적인 실시양태는 인간화 및/또는 인간 모노클로날 항체 또는 그의 항체 단편이며, 상기 항체는 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재를 위해 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 14)을 인식하고, 그에 결합하며, 중쇄는 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 1 개의 CDR을 포함하고:
Figure pct00014
경쇄는 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 1 개의 CDR을 포함한다:
Figure pct00015
본 발명의 더욱 구체적인 실시양태에서, 본 발명의 대상은 인간화 및/또는 인간 모노클로날 항체 또는 그의 항체 단편이며, 상기 항체는 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재를 위해 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 14)을 인식하고, 그에 결합하며, 중쇄는 하기 서열을 포함하고:
Figure pct00016
경쇄는 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00017
매우 구체적인 실시양태에서, 항-ADM 항체는 서열식별번호 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 35 및 36을 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 갖는다.
본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 친화도 상수가 10-7 M 초과, 바람직하게는 10-8 M 초과이고, 바람직한 친화도는 10-9 M 초과, 가장 바람직하게는 10-10 M 초과이도록 인간 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2에 대한 친화도를 나타낸다. 관련 기술분야의 기술자는 더 높은 용량의 화합물을 적용함으로써 더 낮은 친화도를 보완하는 것이 고려될 수 있음을 알고 있으며, 이 수단은 본 발명의 범위를 벗어나지 않는다. 친화도 상수는 실시예 1에 기재된 방법에 따라 결정될 수 있다.
본 발명의 대상은 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2에 결합하는 인간 또는 인간화 모노클로날 항체 또는 단편이며, 상기 항체 또는 단편은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재를 위해 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 14)에 결합하고, 상기 항체 또는 단편은 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함한다:
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
본 발명의 대상은 추가로 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2에 결합하는 인간 및/또는 인간화 모노클로날 항체 또는 단편이며, 상기 항체 또는 단편은 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재를 위해 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 부분 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 14)에 결합하고, 상기 항체 또는 단편은 중쇄로서 하기 서열을 포함하고:
Figure pct00021
경쇄로서 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00022
본 발명의 구체적인 실시양태에서, 항체는 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00023
또는 그와 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함하고,
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00024
또는 그와 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함한다.
두 아미노산 서열 사이의 동일성을 평가하기 위해, 쌍별 정렬이 수행된다. 동일성은 정렬에서 직접적인 매칭을 갖는 아미노산의 백분율을 정의한다.
용어 "제약 제형"은 적어도 1종의 제약상 허용가능한 부형제와 조합된 제약학적 성분을 의미하며, 이는 그에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하기 위해 이러한 형태를 갖고, 제형이 투여되는 대상체에게 허용할 수 없는 독성을 갖는 추가의 성분을 함유하지 않는다. 용어 "제약학적 성분"은 제약 제형 또는 투여 형태를 제공하기 위해 제약상 허용가능한 부형제와 임의적으로 조합될 수 있는 치료 조성물을 의미한다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 또는 스캐폴드를 포함하는, 환자에서 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 용액, 바람직하게는 사용할 준비된 용액이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 냉동 건조된 상태이다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 근육내로 투여된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 혈관내로 투여된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 주입을 통해 투여된다.
본 발명의 대상은 본 발명에 따라 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 전신으로 투여된다.
실시양태
1. ㆍ 코로나 바이러스에 감염된 환자의 체액 샘플에서 프로-아드레노메둘린 (서열식별번호 31) 또는 그의 단편의 수준을 결정하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 사전 결정된 역치 또는 이전에 측정된 수준과 비교하고,
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 중증도와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 치료 또는 중재의 성공과 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 특정한 치료 또는 중재와 연관시키거나, 또는
ㆍ 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준을 상기 환자의 관리와 연관시키는 것을 포함하는, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 또는 (d) 치료 지침 또는 치료 계층화를 위한 또는 (e) 환자 관리를 위한 방법이며,
상기 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편은 PAMP (서열식별번호 32), MR-프로ADM (서열식별번호 33), ADM-NH2 (서열식별번호 20), ADM-Gly (서열식별번호 21) 및 CT-프로ADM (서열식별번호 34)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
2. 실시양태 1에 있어서, 상기 코로나 바이러스가 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 상기 유해 사건이 사망, 장기 기능장애, 쇼크를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
4. 실시양태 1 내지 3에 있어서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 상기 수준이 사전 결정된 역치 초과인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
5. 실시양태 1 내지 4에 있어서, 상기 단편이 MR-프로ADM (서열식별번호 33)이고, 상기 대상체의 체액 샘플에서 MR-프로ADM의 사전 결정된 역치가 0.5 내지 2 nmol/L, 바람직하게는 0.7 내지 1.5 nmol/L, 바람직하게는 0.8 내지 1.2 nmol/L이고, 가장 바람직하게는 1 nmol/L의 역치가 적용되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
6. 실시양태 1 내지 4에 있어서, 상기 단편이 ADM-NH2 (서열식별번호 20)이고, 상기 대상체의 체액 샘플에서 ADM-NH2 (서열식별번호 20)의 사전 결정된 역치가 40 내지 100 pg/mL, 더욱 바람직하게는 50 내지 90 pg/mL, 훨씬 더 바람직하게는 60 내지 80 pg/mL이고, 가장 바람직하게는 상기 역치가 70 pg/mL인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
7. 실시양태 1 내지 6에 있어서, 상기 환자가 3 이상, 바람직하게는 7 이상의 SOFA 점수를 갖거나, 또는 상기 환자가 1 이상, 바람직하게는 2 이상의 퀵SOFA 점수를 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
8. 실시양태 1 내지 7에 있어서, 상기 환자가 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1.0 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
9. 실시양태 1 내지 8에 있어서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준이 상기 체액 샘플을 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획 결합제와 접촉시킴으로써 결정되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
10. 실시양태 1 내지 9에 있어서, 상기 결정이 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제가 항체, 항체 단편 또는 비-IgG 스캐폴드의 군으로부터 선택될 수 있는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
11. 실시양태 1 내지 10에 있어서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준이 상기 대상체의 체액 샘플에서 결정되고, 상기 결정이 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제가 항체인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
12. 실시양태 1 내지 11에 있어서, 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준이 상기 대상체의 체액 샘플에서 결정되고, 상기 결정이 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준에 특이적으로 결합하는 포획-결합제의 사용을 포함하고, 상기 포획-결합제가 표면 상에 고정된 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
13. 실시양태 1 내지 12에 있어서, 상기 환자가 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드로 처리되고, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 및/또는 중간 영역 부분 (aa 1-42): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 23)에 결합하는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 (a) 생명을 위협하는 악화의 위험 또는 유해 사건을 진단하거나 또는 예측하기 위한 또는 (b) 중증도를 예측하기 위한 또는 (c) 치료 또는 중재의 성공을 예측하거나 또는 모니터링하기 위한 방법.
14. 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
15. 실시양태 14에 있어서, 상기 코로나 바이러스가 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
16. 실시양태 14 또는 15에 있어서, 상기 환자가 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 결정될 때 프로-아드레노메둘린의 사전 결정된 역치 초과이거나 또는 이전에 측정된 수준보다 높은 상기 대상체의 체액 샘플에서의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준을 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
17. 실시양태 14 내지 16에 있어서, 상기 환자가 3 이상, 바람직하게는 7 이상의 SOFA 점수를 갖거나, 또는 상기 환자가 1 이상, 바람직하게는 2 이상의 퀵SOFA 점수를 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
18. 실시양태 14 내지 17에 있어서, 상기 환자가 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1.0 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
19. 실시양태 14 내지 18에 있어서, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 14)에 결합하는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
20. 실시양태 14 - 19에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 10-7 M 이하의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 대한 최소 결합 친화도를 나타내는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
21. 실시양태 14 - 20에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM의 생활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하로 차단하는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
22. 실시양태 14 - 21에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체 또는 모노클로날 항체 단편인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
23. 실시양태 22에 있어서, 중쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하고:
Figure pct00025
경쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하는 것인:
Figure pct00026
코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
24. 실시양태 23에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00027
Figure pct00028
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 각각 > 80% 동일한 서열을 포함하고,
VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00029
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 > 80% 동일한 서열을 포함하는 것인,
코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
25. 임의의 실시양태 23 내지 24에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00030
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00031
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인,
코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
26. 임의의 실시양태 23 내지 25에 있어서, 상기 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 인간화 모노클로날 항체 또는 인간화 모노클로날 항체 단편인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
27. 실시양태 14-26에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 모노클로날 항체이고, 아드레시주맙이며, 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00032
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00033
또는 그의 바이오시밀러를 포함하는 것인,
코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
28. 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
29. 실시양태 28에 있어서, 상기 환자가 300 미만, 특히 200 미만, 특히 100 미만의 호로비츠 지수를 갖고/거나, 상기 환자가 기계적 환기를 필요로 하는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
30. 실시양태 28 또는 29에 있어서, 상기 환자가 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 결정될 때 프로-아드레노메둘린의 사전 결정된 역치 초과이거나 또는 이전에 측정된 수준보다 높은 상기 대상체의 체액 샘플에서의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준을 갖는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
31. 실시양태 28 내지 30에 있어서, 상기 환자가 3 이상, 바람직하게는 7 이상의 SOFA 점수를 갖거나, 또는 상기 환자가 1 이상, 바람직하게는 2 이상의 퀵SOFA 점수를 갖는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
32. 실시양태 28 내지 31에 있어서, 상기 환자가 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1.0 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
33. 실시양태 28 내지 32에 있어서, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 14)에 결합하는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
34. 실시양태 28 - 33에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 10-7 M 이하의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편에 대한 최소 결합 친화도를 나타내는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
35. 실시양태 28 - 34에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM의 생활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하로 차단하는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
36. 실시양태 28-35에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체 또는 모노클로날 항체 단편인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
37. 실시양태 36에 있어서, 중쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하고:
Figure pct00034
경쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하는 것인:
Figure pct00035
손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
38. 실시양태 37에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00036
Figure pct00037
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 각각 > 80% 동일한 서열을 포함하고,
VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
Figure pct00038
또는 각각의 상기 나타낸 서열과 > 80% 동일한 서열을 포함하는 것인,
손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
39. 임의의 실시양태 37 내지 38에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00039
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00040
또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인,
손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
40. 임의의 실시양태 37 내지 39에 있어서, 상기 모노클로날 항체 또는 항체 단편이 인간화 모노클로날 항체 또는 인간화 모노클로날 항체 단편인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
41. 실시양태 28-40에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 모노클로날 항체이고, 아드레시주맙이며, 중쇄로서 하기 서열:
Figure pct00041
경쇄로서 하기 서열:
Figure pct00042
또는 그의 바이오시밀러를 포함하는 것인,
손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
실시예
본 발명에 따른 실시예 부분의 항체, 항체 단편 및 비-Ig 스캐폴드가 ADM에 결합한다는 것이 강조되어야 하며, 따라서 항-ADM 항체/항체 단편/비-Ig 스캐폴드가 고려되어야 한다.
실시예 1 - 항체의 생성 및 그들의 친화도 상수의 결정
몇몇 항-인간 및 항-뮤린 ADM 항체를 생성하였고, 그들의 친화도 상수를 결정하였다 (표 2 및 3 참고).
면역화를 위한 펩티드/ 접합체:
소 혈청 알부민 (BSA)에 대한 펩티드의 접합을 위해 추가의 N-말단 시스테인 (선택된 ADM-서열 내에 시스테인이 존재하지 않는 경우) 잔기를 사용하여 면역화를 위한 펩티드를 합성하였다 (표 2 참고, 제이피티 테크놀로지즈(JPT Technologies), 독일 베를린). 술포인크-커플링 겔 (퍼바이오-사이언스(Perbio-science), 독일 본)을 사용하여 펩티드를 BSA에 공유 결합시켰다. 커플링 절차는 퍼바이오의 매뉴얼에 따라 수행하였다.
마우스 모노클로날 항체 생성:
Balb/c 마우스를 0 및 14 일째에 100μg 펩티드-BSA-접합체로 (100μl 완전 프로인트(Freund) 아주반트에 유화됨) 및 21 및 28 일째에 50μg으로 (100μl 불완전 프로인트 아주반트에 유화됨) 면역화시켰다. 융합 실험을 수행하기 3 일 전에, 동물에게 100μl 식염수에 용해된 50μg의 접합체를 1 회 복강내 및 1 회 정맥내 주사로서 제공하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장세포 및 흑색종 세포주 SP2/0으로부터의 세포와 1ml 50% 폴리에틸렌 글리콜을 37℃에서 30 초 동안 융합시켰다. 세척 후에, 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 시딩하였다. HAT 배지 [20% 태아 소 혈청 및 HAT-보충제로 보충된 RPMI 1640 배양 배지]에서 성장시킴으로써 혼성체 클론을 선택하였다. 2 주 후에, HAT 배지를 3 회 계대 동안에 HT 배지로 교체한 후, 정상 세포 배양 배지로 되돌렸다.
융합 3 주 후에 세포 배양물 상청액을 항원 특이적인 IgG 항체에 대해 일차 스크리닝하였다. 양성으로 시험된 미세배양물을 증식을 위해 24-웰 플레이트로 옮겼다. 재시험한 후, 선택된 배양물을 제한-희석 기술을 이용하여 클로닝 및 재클로닝하였고, 이소타입을 결정하였다 ([ Lane, R.D. 1985. J. Immunol. Meth. 81: 223-228; Ziegler et al. 1996. Horm. Metab. Res. 28: 11-15 ] 또한 참고).
항체는 표준 항체 생성 방법을 통해 생성하고 ( Marx et al, 1997. Monoclonal Antibody Production, ATLA 25, 121 ), 단백질 A를 통해 정제하였다. 항체 순도는 SDS 겔 전기영동 분석을 기반으로 하여 > 95%였다.
파지 디스플레이에 의한 인간 항체 집단:
인간 나이브 항체 유전자 라이브러리 HAL7/8은 아드레노메둘린 펩티드에 대한 재조합 단일 쇄 F-가변 도메인 (scFv)의 단리를 위해 사용되었다. 2 가지 상이한 스페이서를 통해 아드레노메둘린 펩티드 서열에 연결된 비오틴 태그를 함유하는 펩티드의 사용을 포함하는 패닝 전략에 의해 항체 유전자 라이브러리를 스크리닝하였다. 비특이적으로 결합된 항원 및 스트렙타비딘 결합된 항원을 사용하는 패닝 라운드의 혼합을 이용하여, 비특이적인 결합제의 백그라운드를 최소화하였다. 패닝의 제3 라운드로부터 용리된 파지를 모노클로날 scFv 발현 이. 콜라이(E. coli) 균주의 생성을 위해 사용하였다. 이들 클론 균주의 배양으로부터의 상청액을 항원 ELISA 시험을 위해 직접적으로 사용하였다 ([ Hust et al. 2011. Journal of Biotechnology 152, 159-170;Schutte et al. 2009. PLoS One 4, e6625 ] 또한 참고).
양성 클론은 항원에 대한 양성 ELISA 신호 및 스트렙타비딘 코팅된 미세 역가 플레이트에 대한 음성을 기반으로 하여 선택되었다. scFv를 추가로 특징분석하기 위해 오픈 리딩 프레임을 발현 플라스미드 pOPE107로 클로닝하고 ( Hust et al., J. Biotechn. 2011 ), 고정된 금속 이온 친화도 크로마토그래피를 통해 배양물 상청액으로부터 포획하고, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
친화도 상수:
아드레노메둘린에 대한 항체의 친화도를 결정하기 위해, 고정된 항체에 대한 아드레노메둘린의 결합의 동역학은 비아코어 2000 시스템 (지이 헬쓰케어 유럽 게엠베하 독일 프라이부르크)을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되었다. 항체의 가역적인 고정은 제조자의 지침 (마우스 항체 포획 키트; 지이 헬쓰케어)에 따라 CM5 센서 표면에 고밀도로 공유적으로 커플링된 항-마우스 Fc 항체를 사용하여 수행되었다 ( Lorenz et al. 2011. Antimicrob Agents Chemother. 55(1): 165-173 ).
모노클로날 항체는 각각 인간 및 뮤린 ADM의 하기 나타낸 ADM 영역에 대해 생성되었다. 하기 표는 추가의 실험에서 사용되는 수득된 항체의 선택을 나타낸다. 선택은 표적 영역을 기반으로 하였다:
표 2:
Figure pct00043
하기는 추가로 수득된 모노클로날 항체의 목록이다:
표 3:
Figure pct00044
Figure pct00045
효소적 소화에 의한 항체 단편의 생성:
Fab 및 F(ab)2 단편의 생성은 뮤린 전장 항체 NT-M의 효소적 소화에 의해 수행되었다. 항체 NT-M은 a) 펩신-기반 F(ab)2 제조 키트 (피어스 44988) 및 b) 파파인-기반 Fab 제조 키트 (피어스 44985)를 사용하여 소화되었다. 단편화 절차는 공급자에 의해 제공된 지침에 따라 수행되었다. 소화는 F(ab)2-단편화의 경우 37℃에서 8 시간 동안 수행되었다. Fab-단편화 소화는 각각 16 시간 동안 수행되었다.
Fab 생성 및 정제를 위한 절차:
0.5 ml의 소화 완충제로 수지를 세척하고, 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리함으로써 고정된 파파인을 평형화시켰다. 완충제를 나중에 폐기하였다. 탈염 컬럼은 보관 용액을 제거하고, 그를 소화 완충제로 세척한 후, 그를 매회 1000 x g에서 2 분 동안 원심분리함으로써 제조되었다. 0.5ml의 제조된 IgG 샘플을 평형화된 고정된 파파인을 함유하는 스핀 컬럼 튜브에 첨가하였다. 소화 반응의 인큐베이션 시간은 탁상용 로커 상에서 37℃에서 16 시간 동안 수행되었다. 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하여, 고정된 파파인으로부터 소화물을 분리하였다. 그 후, 수지를 0.5ml PBS로 세척하고, 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하였다. 세척 분획을 총 샘플 부피 1.0ml의 소화된 항체에 첨가하였다. NAb 단백질 A 컬럼을 PBS 및 IgG 용리 완충제로 실온에서 평형화시켰다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하여 보관 용액 (0.02% 아지드화나트륨을 함유함)을 제거하고, 2ml의 PBS를 첨가하여 평형화시키고, 1 분 동안 다시 원심분리하고, 통과액 폐기하였다. 샘플을 컬럼에 적용하고, 뒤집어서 재현탁시켰다. 인큐베이션을 실온에서 10 분 동안 회전(end-over-end) 혼합에 의해 수행하였다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하고, Fab 단편을 갖는 통과액을 저장하였다. (참고문헌: Coulter and Harris 1983. J. Immunol. Meth. 59, 199-203.; Lindner et al. 2010. Cancer Res. 70, 277-87; Kaufmann et al. 2010. PNAS. 107, 18950-5.; Chen et al. 2010. PNAS. 107, 14727-32; Uysal et al. 2009 J. Exp. Med. 206, 449-62; Thomas et al. 2009. J. Exp. Med. 206, 1913-27; Kong et al. 2009 J. Cell Biol. 185, 1275-840 ).
F(ab') 2 단편의 생성 및 정제를 위한 절차:
수지를 0.5 ml의 소화 완충제로 세척하고, 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리함으로써 고정된 펩신을 평형화시켰다. 완충제를 나중에 폐기하였다. 탈염 컬럼은 보관 용액을 제거하고, 그를 소화 완충제로 세척한 후, 그를 매회 1000 x g에서 2 분 동안 원심분리함으로써 제조되었다. 0.5ml의 제조된 IgG 샘플을 평형화된 고정된 파파인을 함유하는 스핀 컬럼 튜브에 첨가하였다. 소화 반응의 인큐베이션 시간은 탁상용 로커 상에서 37℃에서 16 시간 동안 수행되었다. 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하여, 고정된 파파인으로부터 소화물을 분리하였다. 그 후, 수지를 0.5ml PBS로 세척하고, 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하였다. 세척 분획을 총 샘플 부피 1.0ml의 소화된 항체에 첨가하였다. NAb 단백질 A 컬럼을 PBS 및 IgG 용리 완충제로 실온에서 평형화시켰다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하여 보관 용액 (0.02% 아지드화나트륨)을 제거하고, 2ml의 PBS를 첨가하여 평형화시키고, 1 분 동안 다시 원심분리하고, 통과액 폐기하였다. 샘플을 컬럼에 적용하고, 뒤집어서 재현탁시켰다. 인큐베이션을 실온에서 10 분 동안 회전 혼합에 의해 수행하였다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하고, Fab 단편을 갖는 통과액을 저장하였다. (참고문헌: Mariani et al. 1991. Mol. Immunol. 28: 69-77; Beale 1987. Exp Comp Immunol 11:287-96; Ellerson et al. 1972. FEBS Letters 24(3):318-22; Kerbel and Elliot 1983. Meth Enzymol 93:113-147; Kulkarni et al. 1985. Cancer Immunol Immunotherapy 19:211-4; Lamoyi 1986. Meth Enzymol 121:652-663; Parham et al. 1982. J Immunol Meth 53:133-73; Raychaudhuri et al. 1985. Mol Immunol 22(9):1009-19; Rousseaux et al. 1980. Mol Immunol 17:469-82; Rousseaux et al. 1983. J Immunol Meth 64:141-6; Wilson et al. 1991. J Immunol Meth 138:111-9 ).
NT-H-항체 단편 인간화:
항체 단편은 CDR-그래프팅 방법에 의해 인간화되었다 ( Jones et al. 1986. Nature 321, 522-525 ). 하기 단계를 수행하여 인간화 서열을 달성하였다:
퀴아젠(Qiagen) 키트를 사용하여 NT-H 하이브리도마로부터 총 RNA를 추출하였다. 제1 라운드 RT-PCR의 경우, 퀴아젠® 원스텝(OneStep) RT-PCR 키트 (카탈로그 번호 210210)를 사용하였다. RT-PCR은 중쇄 및 경쇄에 대해 특이적인 프라이머 세트에 의해 수행되었다. 각각의 RNA 샘플에 대해, 가변 영역의 리더 서열을 덮는 축퇴 정방향 프라이머 혼합물을 사용하여 12 개의 개별 중쇄 및 11 개의 경쇄 RT-PCR 반응을 설정하였다. 역 프라이머는 중쇄 및 경쇄의 불변 영역에 위치한다. 제한 부위는 프라이머로 조작되지 않았다.
반응 설정은 다음과 같았다: 5x 퀴아젠® 원스텝 RT-PCR 완충제 5.0 μl, dNTP 혼합물 (10 mM의 각각의 dNTP 함유) 0.8 μl, 프라이머 세트 0.5 μl, 퀴아젠® 원스텝 RT-PCR 효소 혼합물 0.8 μl, 주형 RNA 2.0 μl, RNase-무함유 물 20.0 μl까지, 총 부피 20.0 μl PCR 조건: 역전사: 50℃, 30 min; 초기 PCR 활성화: 95℃, 15 min 사이클링: 94℃, 25 sec; 54℃, 30 sec; 72℃, 30 sec의 20 사이클; 최종 연장: 72℃, 10 min 제2 라운드 세미-네스티드 PCR: 제1 라운드 반응으로부터의 RT-PCR 생성물을 제2 라운드 PCR에서 추가로 증폭시켰다. 항체 가변 영역에 대해 특이적인 세미-네스티드 프라이머 세트를 사용하여 12 개의 개별 중쇄 및 11 개의 경쇄 RT-PCR 반응을 설정하였다.
반응 설정은 다음과 같았다: 2x PCR 혼합물 10 μl; 프라이머 세트 2 μl; 제1 라운드 PCR 생성물 8 μl; 총 부피 20 μl; 하이브리도마 항체 클로닝 보고서 PCR 조건: 95℃에서 5 min의 초기 변성; 25 sec 동안 95℃, 30 sec 동안 57℃, 30 sec 동안 68℃의 25 사이클; 최종 연장은 10 min 68℃이었다.
PCR이 완료된 후, PCR 반응 샘플을 아가로스 겔 상에서 실행하여, 증폭된 DNA 단편을 시각화하였다. 시퀀싱한 후, 15 개 초과의 클로닝된 DNA 단편을 네스티드 RT-PCR에 의해 증폭시키고, 몇몇 마우스 항체 중쇄 및 경쇄를 클로닝하였고, 정확한 것으로 나타났다. 단백질 서열 정렬 및 CDR 분석은 1 개의 중쇄 및 1 개의 경쇄를 확인하였다. 상동성 인간 프레임워크 서열에 의한 정렬 후, 가변 중쇄에 대한 생성된 인간화 서열은 다음과 같다: 도 5를 참고한다. 가변 중쇄에서 위치 26, 40 및 55의 아미노산 및 가변 경쇄에서 위치 40의 아미노산이 결합 성질에 중요하기 때문에, 이들은 원래의 뮤린으로 되돌릴 수 있다. 생성된 후보는 하기와 같다. ( Padlan 1991. Mol. Immunol. 28, 489-498; Harris and Bajorath.1995. Protein Sci. 4, 306-310 ).
항체 단편 서열 (서열식별번호: 7-13, 35 및 36)에 대한 주석: 굵게 밑줄 친 것은 연대순으로 배열된 CDR 1, 2, 3이다.
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
실시예 2 - 항-ADM-생활성에 대한 선택된 항-ADM-항체의 효과
ADM-생활성에 대한 선택된 ADM-항체의 효과를 인간 재조합 아드레노메둘린 수용체 cAMP 기능적 검정 (아드레노메둘린 생물검정)에서 시험하였다. 하기 물질을 사용하였다: 세포주 CHO-K1, 아드레노메둘린 수용체 (CRLR + RAMP3), 수용체 기탁 번호 세포주: CRLR: U17473; RAMP3: AJ001016. 시험하기 전에 항생제가 없는 배지에서 성장시킨 인간 재조합 아드레노메둘린 수용체 (FAST-027C)를 발현하는 CHO-K1 세포를 PBS-EDTA (5 mM EDTA)로 부드럽게 플러싱하여 탈착시키고, 원심분리에 의해 회수하고, 검정 완충제 (KRH: 5 mM KCl, 1.25 mM MgSO4, 124 mM NaCl, 25 mM HEPES, 13.3 mM 글루코스, 1.25 mM KH2PO4, 1.45 mM CaCl2, 0.5 g/l BSA)에 재현탁시켰다. 용량 반응 곡선은 기준 효능제 (hADM 또는 mADM)와 병행하여 수행되었다.
길항제 시험 (96웰):
길항제 시험을 위해, 6 μl의 기준 효능제 (인간 (5.63 nM) 또는 마우스 (0.67 nM) 아드레노메둘린)를 상이한 길항제 희석에서 6 μl의 시험 샘플과 또는 6 μl 완충제와 혼합하였다. 60 분 동안 실온에서 인큐베이션한 후, 12 μl의 세포 (2,500 세포/웰)를 첨가하였다. 플레이트를 30 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 용해 완충제 첨가 후, 델타F의 백분율은 시스-바이오 인터내셔널(Cis-Bio International)로부터의 HTRF 키트 (카탈로그 번호 62AM2 PEB)에 의해 제조자 사양에 따라 추정될 것이며, hADM 22-52가 기준 길항제로서 사용되었다.
항체 시험 cAMP-HTRF 검정:
항-h-ADM 항체 (NT-H, MR-H, CT-H)를 하기 최종 항체 농도: 100 μg/ml, 20 μg/ml, 4 μg/ml, 0.8 μg/ml, 0.16 μg/ml에서 5.63 nM 인간 ADM 1-52 (서열식별번호 20)의 존재하에 인간 재조합 아드레노메둘린 수용체 (FAST-027C) cAMP 기능적 검정에서 길항제 활성에 대해 시험하였다. 항-m-ADM 항체 (NT-M, MR-M, CT-M)를 하기 최종 항체 농도: 100 μg/ml, 20 μg/ml, 4 μg/ml, 0.8 μg/ml, 0.16 μg/ml에서 0.67 nM 마우스 ADM 1-50 (서열식별번호 22)의 존재하에 인간 재조합 아드레노메둘린 수용체 (FAST-027C) cAMP 기능적 검정에서 길항제 활성에 대해 시험하였다. 데이터를 상대적인 억제 대 길항제 농도에 대해 플롯하였다 (도 2 a 내지 2 l 참고). 개별 항체에 의한 최대 억제는 표 4에 제공된다.
표 4: ADM-항체의 최대 억제
Figure pct00049
실시예 3 - 항-ADM 항체에 의한 hADM의 안정화
인간 ADM 항체에 의한 인간 ADM의 안정화 효과를 hADM 면역검정을 이용하여 시험하였다. 사용된 기술은 아크리디늄 에스테르 표지화를 기반으로 하는 샌드위치 코팅된 튜브 발광 면역검정이었다.
표지된 화합물 (추적자): 100μg (100 μl) CT-H (PBS 중 1mg/ml, pH 7.4, 아드레노메드 아게(AdrenoMed AG) 독일)를 10μl 아크리디늄 NHS-에스테르 (아세토니트릴 중 1mg/ ml, 인벤트 게엠베하(InVent GmbH), 독일) (EP 0353971)와 혼합하고, 20 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 표지된 CT-H를 바이오-실(Bio-Sil)® SEC 400-5 (바이오-라드 래버러토리즈, 인크.(Bio-Rad Laboratories, Inc.), 미국) 상에서 겔-여과 HPLC에 의해 정제하였고, 정제된 CT-H를 (300 mmol/L 인산칼륨, 100 mmol/L NaCl, 10 mmol/L Na-EDTA, 5 g/L 소 혈청 알부민, pH 7.0)에 희석하였다. 최종 농도는 200 μL당 대략 800,000 상대 광 단위 (RLU)의 표지된 화합물 (대략 20ng 표지된 항체)이었다. 아크리디늄에스테르 화학발광을 오토루맷(AutoLumat) LB 953 (베르톨드 테크놀로지즈 게엠베하 앤 코. 카게(Berthold Technologies GmbH & Co. KG))을 이용하여 측정하였다.
고체 상: 폴리스티렌 튜브 (그라이너 바이오-원 인터내셔널 아게(Greiner Bio-One International AG), 오스트리아)를 MR-H (아드레노메드 아게, 독일) (1.5 μg MR-H/0.3 mL 100 mmol/L NaCl, 50 mmol/L TRIS/HCl, pH 7.8)로 (18h 실온에서) 코팅하였다. 5% 소 혈청 알부민으로 차단시킨 후, 튜브를 PBS, pH 7.4로 세척하고, 진공 건조하였다.
보정: 250 mmol/L NaCl, 2 g/L 트리톤 X-100, 50 g/L 소 혈청 알부민, 20 tabs/L 프로테아제 억제제 칵테일 (로슈 다이아그노스틱스 아게(Roche Diagnostics AG), 스위스) 중에서 hADM (바켐 아게(BACHEM AG), 스위스)의 희석을 이용하여 검정을 보정하였다.
hADM 면역검정: 50 μl의 샘플 (또는 캘리브레이터)을 코팅된 튜브에 피펫팅하고, 표지된 CT-H (200μl)를 첨가한 후, 튜브를 4 시간 동안 4℃에서 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 추적자를 세척 용액 (20mM PBS, pH 7.4, 0.1 % 트리톤 X-100)으로 5 회 (각각 1ml) 세척함으로써 제거하였다. 튜브-결합된 화학발광을 LB 953 (베르톨드, 독일)을 이용하여 측정되었다. 도 3은 전형적인 hADM 용량/ 신호 곡선을 도시한다. 그리고, 100 μg/mL 항체 NT-H의 존재하에 hADM 용량 신호 곡선. NT-H는 기재된 hADM 면역검정에 영향을 미치지 않았다.
인간 아드레노메둘린의 안정성: 인간 ADM을 인간 시트레이트 혈장으로 희석하고 (최종 농도 10 nM), 24℃에서 인큐베이션하였다. 선택된 시점에서, -20℃에서 냉동시킴으로써 hADM의 분해를 중단시켰다. 인큐베이션은 NT-H (100 μg/ml)의 부재 및 존재하에 수행되었다. 나머지 hADM은 상기 기재된 hADM 면역검정을 이용하여 정량화되었다. 도 4는 NT-H 항체의 부재 및 존재하에 인간 혈장 (시트레이트)에서 hADM의 안정성을 도시한다. hADM의 반감기는 단독에서 7.8 시간이었고, NT-H의 존재하에 반감기는 18.3 시간이었다. (2.3 배 더 높은 안정성).
실시예 4 - 패혈증 사망률
a) 패혈증의 초기 치료
동물 모델: 12-15 주령의 수컷 C57Bl/6 마우스 (찰스 리버 래버러토리즈(Charles River Laboratories), 독일)를 연구에 사용하였다. 복막염은 가벼운 이소플루란 마취하에 수술에 의해 유도되었다. 복막강의 좌측 상부 사분면 (맹장의 정상 위치)을 절개하였다. 맹장을 노출시키고, 소장의 삽입에 대해 원위에서 맹장 주위를 봉합에 의해 단단히 결찰시켰다. 24-게이지 니들을 사용하여 맹장에 1 개의 천공 창상을 만들고, 소량의 맹장 내용물을 창상을 통해 짜내었다. 맹장은 복막강으로 대체되었고, 개복술 부위를 폐쇄하였다. 최종적으로, 동물을 음식 및 물에 자유롭게 접근가능한 그들의 케이지로 되돌려 보냈다. 유체 대체물로서 500μl 식염수를 s.c.로 제공하였다.
화합물 (NT-M, MR-M, CT-M)의 적용 및 투여: CLP 직후에 마우스를 처리하였다 (초기 치료). CLP는 맹장 라이게이션 및 천공 (CLP)의 약자이다.
연구 그룹: 3 가지 화합물을 비히클에 대해 및 대조군 화합물 처리에 대해 시험하였다. 각각의 그룹은 BUN (혈청 혈액 우레아 질소 시험) 결정을 위해 1 일 후 채혈을 위해 5 마리의 마우스를 포함하였다. 각각의 그룹당 추가 10 마리의 마우스가 4 일의 기간에 걸쳐 추적되었다.
그룹 처리 (10μl/ g 체중) 용량/ 추적:
1 NT-M, 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
2 MR-M, 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
3 CT-M, 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
4 비특이적인 마우스 IgG, 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
5 대조군 - PBS 10μl/g 체중 4 일에 걸쳐 생존
임상 화학: 신장 기능에 대한 혈액 우레아 질소 (BUN) 농도를 기준선 및 CLP 후 1 일째에 측정하였다. 혈액 샘플은 가벼운 에테르 마취하에 모세관이 있는 해면정맥동으로부터 수득하였다. AU 400 올림푸스 멀티애널라이저(Olympus Multianalyser)를 사용하여 측정을 수행하였다. 4 일째 사망률 및 평균 BUN 농도가 표 5에 제공된다.
표 5: 4 일째 사망률 및 BUN 농도
Figure pct00050
표 4로부터 NT-M 항체가 사망률을 상당히 감소시켰음을 알 수 있다. 4 일 후, NT-M 항체로 처리하였을 때 마우스의 70%가 생존하였다. 4 일 후에 MR-M 항체로 처리하였을 때 동물의 30%가 생존하였고, CT-M 항체로 처리하였을 때 동물의 10%가 생존하였다. 그와 대조적으로, 비특이적인 마우스 IgG로 처리하였을 때 4 일 후 모든 마우스가 사망하였다. PBS (인산염 완충된 식염수)를 마우스에게 투여한 대조군 그룹에서 동일한 결과가 수득되었다. 혈액 우레아 질소 또는 BUN 시험을 이용하여, 신장 기능을 평가하고, 신장 질환을 진단하는데 도움이 되고, 급성 또는 만성 신장 기능장애 또는 부전을 가진 환자를 모니터링한다. S-BUN 시험의 결과는 NT-M 항체가 신장을 보호하는데 가장 효과적임을 나타내었다.
b) 패혈증의 늦은 치료
동물 모델: 12-15 주령 수컷 C57Bl/6 마우스 (찰스 리버 래버러토리즈, 독일)를 연구에 사용하였다. 복막염은 가벼운 이소플루란 마취하에 수술에 의해 유도되었다. 복막강의 좌측 상부 사분면 (맹장의 정상 위치)을 절개하였다. 맹장을 노출시키고, 소장의 삽입에 대해 원위에서 맹장 주위를 봉합에 의해 단단히 결찰시켰다. 24-게이지 니들을 사용하여 맹장에 1 개의 천공 창상을 만들고, 소량의 맹장 내용물을 창상을 통해 짜내었다. 맹장은 복막강으로 대체되었고, 개복술 부위를 폐쇄하였다. 최종적으로, 동물을 음식 및 물에 자유롭게 접근가능한 그들의 케이지로 되돌려 보냈다. 유체 대체물로서 500μl 식염수를 s.c.로 제공하였다.
화합물 (NT-M FAB2)의 적용 및 투여: NT-M FAB2를 비히클에 대해 및 대조군 화합물 처리에 대해 시험하였다. 패혈증이 완전히 발달한 후에, CLP 이후 6 시간째에 처리를 수행하였다 (늦은 치료). 각각의 그룹은 4 마리의 마우스를 포함하였고, 4 일의 기간에 걸쳐 추적하였다.
그룹 처리 (10μl/ g 체중) 용량/ 추적:
1 NT-M, FAB2 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
2 대조군 비특이적인 마우스 IgG, 0.2 mg/ml 4 일에 걸쳐 생존
3 비히클: - PBS 10μl/g 체중 4 일에 걸쳐 생존
표 6: 4 일째 사망률
Figure pct00051
표 6으로부터 NT-M FAB 2 항체가 사망률을 상당히 감소시켰음을 알 수 있다. 4 일 후, NT-M FAB 2 항체로 처리하였을 때 마우스의 75%가 생존하였다. 그와 대조적으로, 비특이적인 마우스 IgG로 처리하였을 때 4 일 후에 모든 마우스가 사망하였다. PBS (인산염 완충된 식염수)를 마우스에게 투여한 대조군 그룹에서 동일한 결과가 수득되었다.
실시예 5 - 건강한 인간에서 NT-H의 투여
무작위화, 이중 맹검, 위약-대조 연구로서 건강한 남성 대상체에서 연구를 수행하였고, 단일 상승 용량의 NT-H 항체를 건강한 남성 대상체의 각각 8 명의 건강한 남성 대상체 (각각의 그룹에 대해 n=6 활성, n = 2 위약)의 3 개의 순차적 그룹 (1번째 그룹 0,5 mg/kg, 2번째 그룹 2mg/kg, 3번째 그룹 8 mg/kg)에서 정맥내 (i.v.) 주입으로서 투여하였다. 주요 포함 기준은 서면 동의서, 18 - 35 세, 신뢰간능한 피임 방법의 사용에 대한 동의, 및 18 내지 30 kg/m²의 BMI였다. 대상체에게 단일 i.v. 용량의 NT-H 항체 (0.5 mg/kg; 2 mg/kg; 8 mg/kg) 또는 위약을 연구실에서 1 시간 기간에 걸쳐 천천히 주입함으로써 제공하였다. 4 개의 그룹에서 기준선 ADM-값이 상이하지 않았다. 중간 ADM 값은 위약 그룹에서 7.1 pg/mL, 1번째 처리 그룹 (0.5mg/kg)에서 6.8 pg/mL, 2번째 처리 그룹 (2mg/kg)에서 5.5 pg/mL 및 3번째 처리 그룹 (8mg/mL)에서 7.1 pg/mL이었다. 결과는 ADM-값이 건강한 인간 개체에서 NT-H 항체의 투여 후 처음 1.5 시간 내에 급속히 증가한 다음, 평탄역에 도착하고, 천천히 감소하였음을 나타낸다 (도 6).
실시예 6 - 코로나 바이러스 (사스-CoV-2)에 감염된 환자에서 바이오-ADM
코로나 바이러스 (사스-CoV-2)에 감염된 것으로 진단된 12 명의 환자로부터의 혈장 샘플을 바이오-ADM에 대해 스크리닝하였다. 바이오-ADM 수준은 [Weber et al. 2017 ( Weber et al. 2017. JALM 2(2): 222-233 )]에 기재된 바와 같은 면역검정을 이용하여 측정하였다. 추가로, DPP3-수준은 ( Rehfeld et al. 2019. JALM 3(6): 943-953 )에 최근에 기재된 바와 같은 면역검정 (LIA)을 이용하여 측정하였다. 개별 샘플에서 각각의 바이오-ADM 및 DPP3 농도는 표 7에 요약되어 있다.
표 7: 코로나 바이러스 (사스-CoV-2)에 감염된 환자로부터의 샘플에서 바이오-ADM 및 DPP3 수준
Figure pct00052
코로나 바이러스 (사스-CoV-2)에 감염된 환자로부터의 샘플에서 바이오-ADM 농도는 35 내지 437 pg/ml의 범위였고, 중간값 (IQR)은 109 (56 - 210) pg/ml이었다. (건강한) 대상체로부터의 샘플에서 중간 혈장 바이오-ADM (성숙한 ADM-NH2)은 24.7 pg/ml이었고, 가장 낮은 값은 11 pg/ml이고, 99번째 백분위수는 43 pg/ml이었다 ( Marino et al. 2014. Critical Care 18:R34 ). 코로나 바이러스 (사스-CoV-2)에 감염된 환자에서 바이오-ADM은 건강한 대조군과 비교하여 유의하게 상승하였다.
DPP3 농도는 27 내지 975 ng/ml의 범위였고, 중간값 (IQR)은 156.0 (59.5 - 322.3) ng/ml이었다. DPP3 농도는 건강한 대상체와 비교하여 유의하게 상승하였다. 5,400 명의 정상 (건강한) 대상체로부의 샘플 (스웨덴 단일-센터 전향적 집단-기반 연구 (MPP-RES))을 측정하였다: 중간 (사분위수간 범위) 혈장 DPP3은 14.5 ng/ml (11.3 ng/ml - 19 ng/ml)이었다.
실시예 7 - 손상된 폐 기능을 가진 환자에서 NT-ADM 항체 처리하에 폐 기능의 변화 (AdrenOSS-2)
AdrenOSS-2는 패혈성 쇼크 및 상승된 아드레노메둘린을 가진 환자에서 아드레시주맙으로 명명되는 N-말단 ADM 항체의 안전성, 내약성 및 효능을 조사하기 위한 이중 맹검, 위약-대조, 무작위화, 다기관, 개념 증명 및 용량-확인 II 상 임상 실험이다 ( Geven et al. BMJ Open 2019;9:e024475 ). 패혈성 쇼크 및 바이오-ADM 농도 > 70 pg/mL를 가진 총 301 명의 환자를 위약 (n=152), 아드레시주맙 2 ng/kg (n=72) 또는 아드레시주맙 4 ng/kg (n=77)으로 대략 1 시간에 걸쳐 단일 정맥내 주입으로의 처리로 무작위화하였다 (2:1:1). 포함 후 28 (90) 일 내에 모든 원인으로 인한 사망률은 25.8% (34.8%)이었다. 평균 연령은 68.4 세였고, 61%가 남성이었다. 프로토콜별 분석을 위해, n=294 명의 환자가 적격성을 유지하였고, 14 일째 모든 원인으로 인한 사망률은 18.5%였다.
아드레시주맙으로 처리된 환자에서 (두 용량 조합됨, 프로토콜 집단별로), 위약과 비교하여 단기 사망률 (입원 후 14 일)이 더 낮은 경향이 관찰되었다 (유해 비 (HR) 0.701 [0.408-1.21], p=0.200).
추가로, 코호트의 상이한 하위집단을 분석하였다. 주요 결과는 28 일째 사망률, 호로비츠 지수 (PaO2/FiO2)에서의 변화 (24h/ 48h/ 72h), SOFA 점수에서의 변화 (24h/ 48h/ 72h) 또는 호흡기 SOFA 점수 구성요소에서의 변화 (PaO2/FiO2를 또한 기반으로 함) (24h/ 48h/ 72h)였다. 모든 p-값은 2-측이고, 0.20의 p-값이 유의한 것으로 고려되어야 한다.
하기 기준을 충족시키는 쇼크 환자의 하위집단: <170의 호로비츠-지수 및 기준선에서 기계적 환기가 분석되었다 (n=48). 이 그룹은 ICU에서 있으며 기계적 환기를 필요로 하는 위중증 코비드-19 환자를 모방한다. 28 일째 사망률은 위약과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 더 낮은 경향이 있었다 (p=0.37) (도 7). 호로비츠-지수에서의 변화는 48 (p=0.09) 및 72 시간 (p=0.11) 후에 유의하게 더 높았고 (도 8 B 및 C), 평균 증가는 각각 64.2 및 66.4이었으며, 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 24 시간 (0.48) 후에 더 높은 경향이 있었다 (도 8 A). SOFA 점수에서의 변화는 위약 그룹과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 각각 24 시간 (p=0.032), 48 (p=0.012) 및 72 시간 (p=0.028) 후에 유의하게 더 낮았다 (도 9 A, B 및 C).
입원시 호흡기 신체 검사를 통해 정의된 ALI/ARDS를 갖는 쇼크 환자의 하위집단 (n=80)을 추가로 분석하였다. SOFA 점수에서의 변화는 위약 그룹과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 각각 24 시간 (p=0.005) 및 48 (p=0.025) 후에 유의하게 더 낮았고 (도 10 A, B), 72 시간 (p=0.38) 후에 더 낮은 경향이 있었다 (도 10 C). 더욱이, ALI/ARDS를 갖는 환자에서 호흡기 SOFA 점수에서의 변화는 위약 그룹과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 각각 48 시간 (p=0.09) 후에 유의하게 더 낮았고, 24 시간 (p=0.26) 후에 더 낮은 경향이 있었다 (도 11 A, B).
기준선에서 기계적 환기의 기준을 충족시키는 쇼크 환자의 또 다른 하위집단을 선택하였다 (n=161). 28 일째 사망률은 위약과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 유의하게 더 낮았다 (p=0.157) (도 12). 호로비츠-지수에서의 변화는 각각 24 시간 (p=0.155), 48 시간 (p=0.007) 및 72 시간 (p=0.087) 후에 유의하게 더 높았고 (도 13 A, B 및 C), 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 24 시간째에 평균 증가는 56.2이었다. 더욱이, 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자에서 SOFA 점수에서의 변화는 위약 그룹과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 각각 24 시간 (p=0.002) 및 48 시간 (p=0.109) 후에 유의하게 더 낮았고, 72 시간 (p=0.31) 후에 더 낮은 경향이 있었다 (도 14 A, B 및 C). 특히, 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자에서 호흡기 SOFA 점수에서의 변화는 위약 그룹과 비교하여 아드레시주맙으로 처리된 환자에서 각각 24 시간 (p=0.021), 48 시간 (p=0.011) 및 72 시간 (p=0.066) 후에 유의하게 더 낮았다 (도 15 A, B 및 C). 이들 데이터는 NT-ADM 항체가 손상된 폐 기능을 가진 위중증 환자에서 내피 기능 및 혈관 온전성을 개선시킬 수 있음을 강력하게 뒷받침하며, 코비드-19 환자에 대한 그의 적용가능성을 시사한다.
실시예 8 - 코비드-19를 가진 위중증 환자에서 바이오-ADM의 예후 값
이 연구의 목적은 생활성 아드레노메둘린 (바이오-ADM)이 위중증 코비드-19 환자의 위험 계층화 및 임상적 관리를 보조할 수 있는지 결정하기 위한 것이었다.
8.1. 연구 집단 및 데이터 수집
윤리적 승인 (RWTH 대학 윤리 위원회, EK 100/20) 후에, 이 전향적 관찰적 연구를 독일 아첸 RWTH 대학 병원에서 2020년 3월 13일과 4월 16일 사이에 수행하였다. 모든 환자 또는 그들의 법적 대리인은 서면 동의서를 제공하였다. 사스-CoV-2 PCR 결과 양성이고 ICU 입원 중인 모든 환자를 이 연구에 포함시켰다. 제외 기준은 < 18 세의 연령, 임신, 및 완화 치료였다. 분석은 실시간 역전사 PCR (RT-PCR)을 이용하여 수행하였다. 환자의 처리는 기계적 환기, 정맥-정맥 ECMO, 및 RRT 및 노르에피네프린 (필요한 경우)을 비롯하여 본 발명자들의 ICU 관리 표준을 따랐다. 정맥-정맥 ECMO 요법의 사용에 대한 결정은 최근에 발표된 체외 생명 유지 기구 (Extracorporeal Life Support Organization, ELSO) 합의 지침을 기반으로 하였다 ( Bartlett et al. 2020. ASAIO Journal 66: 472-474 ). 인구통계, 바이탈 사인, 실험실 값, 혈중 기체 분석 및 장기 지지를 비롯한 모든 파라미터는 환자 데이터 관리 시스템으로부터 추출되었다 (인텔리스페이스 집중 관리 및 마취 (Intellispace Critical Care and Anesthesia, ICCA) 시스템, 필립스(Philips), 네덜란드).
8.2. 바이오-ADM 측정
바이오-ADM 및 표준 실험실 파라미터의 분석을 위해 입원한 날에 및 7 일째까지 매일 혈액을 샘플링하였다. 바이오-ADM은 원스텝 발광 샌드위치 면역검정에 의해 EDTA 혈장에서 측정되었다 ( Weber et al. 2017. JALM 2(2): 222-233 ). 간략히, 100 μL 샘플을 중간 영역 바이오-ADM에 대해 지시된 모노클로날 항체로 코팅된 미세역가 플레이트에서 바이오-ADM의 C-말단에 대해 지시된 150 μL 검출 항체와 함께 실온에서 1 시간 동안 진탕하면서 인큐베이션하였다. 합성 인간 바이오-ADM을 보정인자로서 사용하였다. 세척 후에, 화학발광 신호를 미세역가 플레이트 발광 판독기 (센트로(Centro) LB960, 베르톨드 테크놀로지즈, 독일 배드 와일드배드)에서 측정하였다. 검정은 3 pg/mL의 검출 하한을 가졌다. 200 명의 건강한 개체의 기준 집단에서, 중간 (99번째 백분위수) 바이오-ADM 수준은 20.7 pg/mL (43 pg/mL)이었다 ( Marino et al. 2014. Critical Care 18: R34 ).
8.3. 통계
값은 적절한 경우 중간값 및 사분위수간 범위 (IQR), 또는 카운트 및 백분율로 표현된다. 연속 변수의 그룹 비교는 크루스칼-월리스(Kruskal-Wallis) 시험을 이용하여 수행하였다. 카테고리 데이터는 카운트 데이터에 대한 피어슨의 카이-제곱 시험(Pearson's Chi-squared Test for Count Data)을 이용하여 비교하였다. 바이오마커 데이터는 로그 변환되었다. 박스플롯을 이용하여 카케고리 변수에서 바이오-ADM의 차이를 설명하였다. 콕스 비례-위험 회귀를 이용하여 단변수 실험에서 생존에 대한 (로그 변환된) 바이오-ADM의 효과를 분석하였다. 비례 위험의 가정이 시험되었다. 모델의 예측 값은 모델 우도비 카이-제곱 통계에 의해 평가되었다. 일치 지수 (C 지수)는 효과 척도로서 제공된다. 이는 이진 결과에 대해 채택된 AUC의 개념과 동일하다. 카플란-마이어 방법에 의해 플롯된 생존 곡선은 설명의 목적을 위해 사용되었다. 모든 통계 시험은 2-측이며, 0.05의 2-측 p-값이 유의한 것으로 고려되었다. 통계적 분석은 R 버전 3.4.3 (http://www.r-project.org, library rms, Hmisc, ROCR) 및 사회 과학용 통계 패키지 (SPSS) 버전 22.0 (에스피에스에스 인크.(SPSS Inc.), 미국 일리노이주 시카고)를 이용하여 수행되었다.
8.4. 결과
이 코호트 연구에서, 사스-CoV-2 감염 및 ICU 입원 필요가 확인된 후 코비드-19를 가진 53 명의 환자가 연속적으로 포함되었다 (n=40 남성 [76 %], 중간 [IQR] 연령 62 [57-70] 세) (표 7). 중간 ICU 입원 기간은 16 (7.5-20) 일이었다. 32 명의 환자 (60%)는 28 일째 이전에 ICU로부터 정상 병동으로 퇴원한 반면에, 8 명의 환자 (15%)는 ICU에 남았고, 13 명의 환자 (25%)는 사망하였다. 전신 염증의 마커를 표 7에 나타내었다.
표 7. 53 명의 코비드-19 위중증 환자에서 기준선 특징
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
변수는 중간 [사분위수간 범위] 또는 숫자 (%)로 제공된다. ARDS, 급성 호흡 곤란 증후군; 바이오-ADM, 생활성 아드레노메둘린; COPD, 만성 폐쇄성 폐 질환; CRP, C-반응성 단백질; ECMO, 체외 막 산소화; FiO2, 흡기 산소 분율; ICU, 중환자실; IL-6, 인터류킨-6; pCO2, 이산화탄소의 분압; PCT, 프로칼시토닌; PEEP, 호기말 양압; pO2, 산소의 분압; RRT, 신장 대체 요법; spO2, 말초 모세관 산소 포화도; SOFA, 순차적인 장기 부전 평가; WBC, 백혈구 카운트
38 명의 환자 중 높은 비율 (72 %)이 중등도 또는 중증 ARDS (25% 중등도, 47% 중증)를 나타내었다. 바이오-ADM 수준은 ARDS의 중증도에 따라 증가하였다 (p < .001, 각각 ARDS가 없는, 경증 ARDS, 중등도 ARDS 또는 중증 ARDS를 갖는 환자와 비교하여 바이오-ADM 28.3 [19.9-28.4], 39.0 [29.2-54.5], 48.1 [26.9-79.8] 및 101.9 [67.0-201.1] pg/mL) (도 16).
대부분의 환자 (n=44)는 ICU 입원 동안에 침습적 환기를 제공받았다 (표 7). 바이오-ADM 수준은 자발 호흡 환자와 비교하여 침습적으로 환기된 환자에서 유의하게 증가하였다 (68.2 [45.5-106.6] pg/mL 대 31.8 [18.6-48.4] pg/mL, p = 0.006) (도 17A). 참고로, 바이오-ADM 수준은 연구 기간 동안에 적절한 때에 기계적 환기를 필요로 하는 이들 환자 (n=6)와 비교하여 등록시 침습적인 환기를 제공받은 환자 (n=38)에서 유사하게 상승하였다 (69.8 [44.1-107.3] pg/mL 대 63.2 [51.0-88.7] pg/mL).
증가된 바이오-ADM 수준은 ECMO 요법을 제공받지 않은 환자와 비교하여 정맥-정맥 ECMO로 처리된 환자 (n=9)에서 관찰되었다 (101.9 [65.0-144.1] pg/mL 대 53.3 [29.2-91.0] pg/mL, p = 0.040) (도 17B). 특히, 가장 높은 바이오-ADM 수준은 ELSO 합의 지침에 따라 호흡 부전의 중증도로 인해 ECMO 요법에 적격하였지만 (n=7) ( Bartlett et al. 2020. ASAIO Journal 66: 472-474 ), 개별 환자 결정으로 인해 ECMO로 처리되지 않은 환자에서 관찰되었다 (262.1 [136.1-274.6] pg/mL, p < .001) (도 17B). 더욱이, 바이오-ADM 수준은 노르에피네프린의 용량과 유의한 상관관계가 있었다 (r = 0.47, p < 0.001). 노르에피네프린이 없는 환자는 가장 낮은 바이오-ADM 수준을 가졌고 (n=15, 중간 37.9 pg/mL), 낮은 노르에피네프린 용량을 갖는 환자 (0.1 μg/kg/min 이하, n=15)는 약간 상승된 바이오-ADM 수준을 가졌고 (중간 53.8 pg/mL), 높은 노르에피네프린 용량을 갖는 환자 (> 0.1 μg/kg/min, n = 23)는 가장 높은 바이오-ADM 수준을 가졌다 (중간 105.9 pg/mL, p=0.002).
신장 기능과 관련하여, 바이오-ADM과 혈청 크레아티닌 사이에 현저한 상관관계가 있었다 (r=0.62, p < 0.001). 이에 따라, 유의하게 더 높은 바이오-ADM 수준이 RRT가 없는 환자 (n=26)와 비교하여 RRT를 제공받은 환자 (n=27)에서 관찰되었다 (101.9 [67.7-182.9] pg/mL 대 40.2 [27.2-53.5] pg/mL, p < 0.001) (도 17C).
바이오-ADM 수준은 생존자 (n=40)에 비해 비생존자 (n=13)에서 더 높았다 (107.6 [51.0-262.1] pg/mL 대 53.3 [29.2-91.0] pg/mL, p=0.010). 특히, 바이오-ADM은 28 일째 사망률을 예측하였다 (C-지수 0.72, 95% 신뢰 구간 [CI] 0.56-0.87, p < 0.001) (도 18A). 다음으로 본 발명자들은 28 일째 사망률의 예측을 위해 바이오-ADM의 연속 측정의 추가 값을 설명하였다. 이전의 연구를 기반으로 하여 ( Mebazaa et al. 2018. Critical Care 22: 354 ), 본 발명자들은 70 pg/mL의 바이오-ADM에 대한 컷오프 값을 적용하였고, 그에 따라 환자를 그룹화하였다. 등록시 70 pg/mL 초과의 (높은) 및 해당 값 초과를 유지하는 (높은-높은) 바이오-ADM 수준을 나타내는 환자는 최악의 결과를 나타낸 반면에, 48 시간 이내에 개선된 (높은-낮은) 환자는 유리한 결과를 나타내었다. 마찬가지로, 48 시간째에 바이오-ADM의 증가를 나타내는 (낮은-높은) 환자는 불리한 결과를 나타내었다 (도 18B).
결론적으로, 바이오-ADM 혈장 수준은 질환 중증도, 체외 장기 보조의 필요, 및 초기 위험 계층화 및 코비드-19 환자 관리에서 바이오-ADM의 유망한 값을 강조하는 결과와 상관관계가 있다. 더욱이, 데이터는 코비드-19의 병리생리학에서 내피 기능장애의 역할을 명백히 강조하며, 위험 계층화 및 코비드-19 발병 환자의 모니터링을 위한 새로운 객관적인 도구로서 바이오-ADM을 전향적으로 평가하는 향후 무작위화 실험을 열어준다.
도면의 설명
도 1a:
항체 포맷의 예시 - Fv 및 scFv-변이체.
도 1b:
항체 포맷의 예시 - 이종성 융합 및 이관능성 항체.
도 1c:
항체 포맷의 예시 - 2가 항체 및 이중특이적인 항체.
도 2:
a: 인간 ADM의 용량 반응 곡선. 최대 cAMP 자극은 100% 활성화에 대해 조정되었다.
b: 5.63nM hADM의 존재하에 인간 ADM 22-52 (ADM-수용체 길항제)의 용량/ 억제 곡선.
c: 5.63 nM hADM의 존재하에 CT-H의 용량/ 억제 곡선.
d: 5.63 nM hADM의 존재하에 MR-H의 용량/ 억제 곡선.
e: 5.63 nM hADM의 존재하에 NT-H의 용량/ 억제 곡선.
f: 마우스 ADM의 용량 반응 곡선. 최대 cAMP 자극은 100% 활성화에 대해 조정되었다.
g: 0.67 nM mADM의 존재하에 인간 ADM 22-52 (ADM-수용체 길항제)의 용량/ 억제 곡선.
h: 0.67 nM mADM의 존재하에 CT-M의 용량/ 억제 곡선.
i: 0.67 nM mADM의 존재하에 MR-M의 용량/ 억제 곡선.
j: 0.67 nM mADM의 존재하에 NT-M의 용량/ 억제 곡선.
k: F(ab)2 NT-M에 의한 및 Fab NT-M에 의한 ADM의 억제를 도시한다.
l: F(ab)2 NT-M에 의한 및 Fab NT-M에 의한 ADM의 억제를 도시한다.
도 3:
이 도면은 전형적인 hADM 용량/ 신호 곡선을 도시한다. 그리고, 100 μg/mL 항체 NT-H의 존재하에 hADM 용량 신호 곡선.
도 4:
이 도면은 NT-H 항체의 부재 및 존재하에 인간 혈장 (시트레이트)에서 hADM의 안정성을 도시한다.
도 5:
상동성 인간 프레임워크 서열에 의한 Fab의 정렬.
도 6: 60 일까지 상이한 용량에서 NT-H 적용 후에 건강한 인간 대상체에서 ADM-농도.
도 7: <170의 호로비츠-지수 및 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=48)에서 28 일째 사망률
도 8: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 <170의 호로비츠-지수 및 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=48)에서 호로비츠 지수에서의 변화.
도 9: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 <170의 호로비츠-지수 및 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=48)에서 SOFA 점수에서의 변화.
도 10: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 ALI/ARDS를 갖는 환자 (n=80)에서 SOFA 점수에서의 변화.
도 11: 각각 24 시간 (A) 및 48 시간 (B) 후에 ALI/ARDS를 갖는 환자 (n=80)에서 호흡기 SOFA 점수에서의 변화.
도 12: 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=161)에서 28 일째 사망률.
도 13: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=161)에서 호로비츠 지수에서의 변화.
도 14: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=161)에서 SOFA 점수에서의 변화.
도 15: 각각 24 시간 (A), 48 시간 (B) 및 72 시간 (C) 후에 기준선에서 기계적 환기를 갖는 환자 (n=161)에서 호흡기 SOFA 점수에서의 변화.
도 16: 53 명의 코비드-19 환자에서 ARDS에 의한 바이오-ADM의 박스플롯 (p < 0.001). 70 pg/ml에서 가로선.
도 17: 53 명의 코비드-19 환자에서 침습적 환기 (A, p = 0.006), ECMO (B, p < 0.001) 및 RRT (C, p < 0.001)에 의한 바이오-ADM 수준의 박스플롯. 70 pg/mL에서 가로선. ECMO 치료에 대한 기준을 충족시켰지만, ECMO 치료를 제공받지 않은 환자는 "지정된" 것으로 명명된다.
도 18: 바이오-ADM에 대한 28 일째 사망률에 대한 카플란-마이어 플롯. (A) 곡선은 바이오-ADM 사분위수에 의해 플롯된다 (연속 바이오-ADM의 경우: 표준화된 HR 3.5 (95% CI 1.6-7.5), c 지수 0.72 (95% CI 0.56-0.87), p < 0.001). (B) 곡선은 등록시 및 48 시간째에 > 또는 < 70 pg/mL에 의해 바이오-ADM의 일련의 측정치의 잠재적인 값을 설명하기 위해 플롯된다 (우측, p=n.s.). 등록시 70 pg/mL 초과의 바이오-ADM을 갖고, 해당 값보다 높게 유지되는 환자 (높은-높은)는 최악의 결과를 갖는 반면에, 48 시간 내에 개선되는 환자 (높은-낮은)는 유리한 결과를 갖는다. 마찬가지로, 바이오-ADM의 증가를 나타내는 환자 (낮은-높은)는 불리한 결과를 갖는다. 48 시간째에 바이오-ADM 데이터가 누락된 환자는 그들의 초기 카테고리에 남는다.
서열
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
서열식별번호: 20 (성숙한 인간 아드레노메둘린 (성숙한 ADM); 아미드화 ADM; 바이오-ADM): 프로-ADM의 아미노산 1-52 또는 아미노산 95 - 146
Figure pct00060
서열식별번호: 21 (아드레노메둘린 1-52-Gly (ADM 1-52-Gly): 프리프로ADM의 아미노산 95 - 147)
Figure pct00061
Figure pct00062
서열식별번호: 32 (프로아드레노메둘린 N-20 말단 펩티드, PAMP: 프리프로ADM의 아미노산 22 - 41)
Figure pct00063
서열식별번호: 33 (중간 영역 프로아드레노메둘린, MR-프로ADM: 프리프로ADM의 아미노산 45 - 92)
Figure pct00064
서열식별번호: 34 (C-말단 프로아드레노메둘린, CT-프로ADM: 프리프로ADM의 아미노산 148 - 185)
Figure pct00065
Figure pct00066
SEQUENCE LISTING <110> SphingoTec GmbH, AdrenoMed AG <120> pro-Adrenomedullin or fragment thereof in patients infected with corona virus and treatments with binder against Adrenomedullin <130> S75375WO <150> EP20163406.0 <151> 2020-03-16 <150> EP20179738.8 <151> 2020-06-12 <150> EP21153847.5 <151> 2021-01-27 <150> US62990171 <151> 2020-03-16 <150> US63015102 <151> 2020-04-24 <150> US63142370 <151> 2021-01-27 <160> 38 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Trp 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr 1 5 <210> 6 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln Val Gln Leu 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Ser Ala Pro His Phe Leu 35 <210> 35 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 36 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 37 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115

Claims (15)

  1. 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 코로나 바이러스가 사스-CoV-1, 사스-CoV-2, 메르스-CoV, 특히 사스-CoV-2를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 환자가 프로-아드레노메둘린의 사전 결정된 역치 초과이거나 또는 이전에 측정된 수준보다 높은 상기 대상체의 체액 샘플에서의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준을 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 0.5 μg/ml 이상, 바람직하게는 1.0 μg/ml 이상인 D-이량체의 수준을 갖는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM-Gly 및/또는 ADM-NH2의 N-말단 (아미노산 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 14)에 결합하는 것인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체 또는 모노클로날 항체 단편인, 코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  7. 제6항에 있어서, 중쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하고:
    Figure pct00067

    경쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하는 것인:
    Figure pct00068

    코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  8. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
    Figure pct00069

    Figure pct00070

    또는 각각의 상기 나타낸 서열과 각각 > 80% 동일한 서열을 포함하고,
    VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
    Figure pct00071

    또는 각각의 상기 나타낸 서열과 > 80% 동일한 서열을 포함하는 것인,
    코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:
    Figure pct00072

    또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
    경쇄로서 하기 서열:
    Figure pct00073

    또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인,
    코로나 바이러스에 감염된 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  10. 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  11. 제10항에 있어서, 상기 환자가 300 미만, 특히 200 미만, 특히 100 미만의 호로비츠 지수를 갖고/거나, 상기 환자가 기계적 환기를 필요로 하는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 환자가 프로-아드레노메둘린의 사전 결정된 역치 초과이거나 또는 이전에 측정된 수준보다 높은 상기 대상체의 체액 샘플에서의 프로-아드레노메둘린 또는 그의 단편의 수준을 갖는 것인, 손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하고:
    Figure pct00074

    경쇄에서 상보성 결정 영역 (CDR)이 하기 서열을 포함하는 것인:
    Figure pct00075

    손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  14. 제13항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
    Figure pct00076

    Figure pct00077

    또는 각각의 상기 나타낸 서열과 각각 > 80% 동일한 서열을 포함하고,
    VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열:
    Figure pct00078

    또는 각각의 상기 나타낸 서열과 > 80% 동일한 서열을 포함하는 것인,
    손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:
    Figure pct00079

    또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
    경쇄로서 하기 서열:
    Figure pct00080

    또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인,
    손상된 폐 기능 및/또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)을 가진 환자에서 치료 또는 중재에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
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