KR20220151178A - Cbp/카테닌 신호전달 경로 억제제 및 그것의 용도 - Google Patents

Cbp/카테닌 신호전달 경로 억제제 및 그것의 용도 Download PDF

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KR20220151178A
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푸치앙 루안
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3＋2 파마, 엘엘씨
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Abstract

식 (Ia), (Ib) 및 (IIa)의 화합물, 및 그것의 제약학적으로 허용되는 염이 제공된다. 추가적으로 화합물을 포함하는 조성물 및 제약학적 조성물, 그것을 사용하여 비정상적인 CBP/β-카테닌 신호전달에 의해 매개된 상태, 질환 또는 장애(예컨대, 섬유증, 암, 신경학적 상태, 대사 장애(예컨대, 당뇨병, 등)), 및 피부 상태(피부염, 건선, 흉터, 탈모, 등)를 치료하는데 있어서 CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달을 조절(예컨대, 억제)하기 위한 치료 방법, 및 피부 상태(예컨대, 노화, 등)를 치료하기 위한 미용 방법이 제공된다. 추가적으로 화합물 및 조성물을 사용하여 백신 효능을 향상시키는 방법이 제공된다. 추가로 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 형성하기 위해(예컨대, 3+2 고리화첨가를 통해) GMP 조건 하에 마지막, 또는 마지막에서 두 번째 단계에서, 중간체 2-프로피닐-화합물을 사용하는 단계를 포함하는, 임상 등급 약물을 효율적으로 합성하는 방법이 제공된다.

Description

CBP/카테닌 신호전달 경로 억제제 및 그것의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 12일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 62/988,827호의 우선권의 이익을 주장하며, 상기 출원은 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
발명의 분야
본 발명의 분야는 일반적으로 포유류(인간 및 비인간 모두) 세포 및 조직에서 Wnt/β-카테닌 경로의 조절, 보다 구체적으로 CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달의 소분자 억제제, 보다 더 구체적으로, 한정하는 것은 아니지만 섬유증(fibrosis), 암, 신경 장애(neurological disorder), 대사 장애(metabolic disorder)(당뇨병 및 지방간 질환, 예컨대, 알코올성(ALD) 및 비알코올성 간 지방증(각각 ALD 및 NAFLD)을 포함하고, 비알코올성 지방간염(NASH)을 포함함), 피부 상태(예컨대, 피부염, 건선, 탈모, 노화 등), 상처 치유, 노화 중 하나 이상을 포함하여, 및 선택적으로 추가로 폐 고혈압(pulmonary hypertension), 울혈성 심부전(congestive heart failure), 만성 신장 질환, 신장 섬유증, 자궁내막증(endometriosis), 심장 섬유증, 다낭성 난소 증후군(PCOS), 및/또는 전신 섬유증/경피증(scleroderma) 중 하나 이상을 포함하여, CBP/β-카테닌 신호전달 매개 상태 및 장애를 조절하고 치료하는 데 광범위한 유용성을 가진 놀랍게도 활성이며 생체 이용 가능한 소분자 CBP/β-카테닌 억제제에 관한 것이다. 추가의 측면은 개시된 화합물 및 조성물을 사용하여 백신 효능을 향상시키는 것에 관한 것이다.
진화적으로 보존된 Wnt/β-카테닌 신호전달 경로는 배아 발달 및 성인 항상성에서 모두 기본적이고 필수적인 역할을 한다. 추가적으로, 섬유증, 암, 신경 장애, 피부 장애, 및 대사 장애(당뇨병 및 지방간 질환을 포함함) 및 노화, 및 다른 Wnt/β-카테닌 매개 상태 및 장애에서 조절 장애/과민성 CBP/β-카테닌 신호전달의 확립되고 중요한 역할을 고려하면, 바람직하게 CBP/β-카테닌 상호작용의 소분자 억제제를 사용하여 CBP/β-카테닌 신호전달을 조절(예컨대, 억제)하고/하거나, p300/β-카테닌 신호전달을 증가시킴으로써 치료적 및 미용적 개입 둘 다를 추구하는데 상당한 관심이 있었다. 그러나, 충분히 활성이며 생체 이용 가능하기도 한(바람직하게는 많은 경우에 치료적 적용을 위해 경구로 이용 가능한) CBP/β-카테닌 상호작용의 특정 소분자 억제제를 개발하는 것은 지금까지 그것의 치료적 및 미용적 잠재력의 실현을 실질적으로 방해한 도전으로 남아 있다.
본 발명의 특정 측면은, 아래에서 추가로 기술되는 것과 같이, 조성물과 함께 그러한 화합물, 화합물을 포함하는 제약학적 조성물, 및 치료적으로 및 미용적으로 화합물 및 조성물을 합성 및 사용하는 방법을 제공한다.
본 발명의 측면은 다음의 항목에서 기술될 수 있다:
1. 식 (Ia)의 화합물 및 그것의 제약학적으로 허용되는 염:
Figure pct00001
(Ia)
식에서:
Ra는 수소 또는 -CH3이고;
Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 및 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개의 고리 구성원을 가지는 단환식 아릴기이고;
R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기, 또는 치환된 이환식 아릴이며, 여기서 치환된 이환식 아릴 고리는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있고;
R2는 수소, 또는 -CH3이며;
Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, 여기서 X는:
Figure pct00002
또는
Figure pct00003
으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이며;
L은 -CH2-, -CF2-, 또는 -C(CH3)2-이고;
Q는
Figure pct00004
또는
Figure pct00005
로부터 선택된 0 - 2개의 치환기에 의해 치환된 5- 또는 6-원 질소 함유 헤테로고리이며, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택되고, Z1, Z2는 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, 및
Figure pct00006
으로부터 독립적으로 선택되며, 식에서 R1, R2 및 R3은 수소, C1-C6 알킬, 또는 하나 이상의 -OH를 함유하는 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, Z3은 수소, 할로겐, 또는 직접 결합된, 또는 -NH-연결된, -OC1-C3 알킬 연결된, 또는 -NHC1-C3 알킬 연결된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -NHC1-C4 알킬, -N(C1-C4 알킬)2로부터 선택되며, 이들 각각은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH- C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환된다.
2. 항목 1의 화합물로서, 알킬산 또는 지방산의 에스테르는:
Figure pct00007
(식에서 m은 1 내지 14임)
Figure pct00008
, 또는
Figure pct00009
으로부터 선택되는 것인 화합물.
3. 항목 1 또는 2의 화합물로서, R은 나프틸, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 퀴녹살린, 프탈라진, 퀴나졸린, 신놀린, 또는 나프티리딘, 또는 그것들의 치환된 변이체로부터 선택된 이환식 아릴인 것인 화합물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물로서, 화합물은 식 (Ib)의 화합물인 것인 화합물:
Figure pct00010
(Ib), 식에서 X1 및 X2는 N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택된다.
5. 항목 4의 화합물로서,
L은 -CH2-이고;
Q는
Figure pct00011
이며, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택되는 것인 화합물.
6. 항목 5의 화합물로서, A는 -CH이고, B는 N이며, D는 O이고(Q는 Z3-이소옥사졸임), W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, X는:
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며 여기서 R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2인 것인 화합물.
7. 항목 6의 화합물로서, Z3은 각각이 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH- C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환되는 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되는 것인 화합물.
8. 항목 7의 화합물로서, Z3은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, 또는 질소 결합 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환된 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되는 것인 화합물.
9. 항목 8의 화합물로서, 화합물은 다음인 것인 화합물:
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
.
10. 항목 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 또는 제약학적 조성물.
11. 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 비정상적인 CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달에 의해 매개된 질환 또는 장애를 가진 환자 또는 온혈 포유동물에게, CBP/카테닌 신호전달을 억제하고/하거나, p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키기에 충분한 양의 항목 1 내지 10 중 어느 하나의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
12. 항목 11의 화합물로서, 투여되는 화합물의 양은 치료적 유효량을 포함하는 것인 방법.
13. 항목 11 또는 12의 방법으로서, 화합물에서, W는 X이고, X는
Figure pct00028
또는
Figure pct00029
으로부터 선택되며, 식에서 Z는 OR4이고 R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이며, n은 1 또는 2인 것인 방법.
14. 항목 11 내지 13 중 어느 하나의 방법으로서, 화합물에서, X는
Figure pct00030
또는
Figure pct00031
이고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 에스테르이고, n은 1 또는 2인 것인 방법.
15. 항목 11 내지 14 중 어느 하나의 방법으로서, 질환 또는 장애는 섬유증, 암, 신경학적 상태, 대사 장애, 및 피부 상태 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
16. 항목 15의 방법으로서, 대사 장애는 당뇨병 및/또는 지방간 질환 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
17. 항목 16의 방법으로서, 지방간 질환은 알코올성 간 지방증(ALD), 비알코올성 간 지방증(NAFLD), 및/또는 비알코올성 지방간염(NASH) 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
18. 항목 15의 방법으로서, 섬유증은 폐, 간, 신장, 심장, 자궁내막, 피부의 섬유증 또는 전신 섬유증인 것인 방법.
19. 항목 18의 방법으로서, 섬유증은 SARS-CoV-2(COVID-19) 환자 조직의 섬유증을 포함하는 것인 방법.
20. 항목 15의 방법으로서, 암을 치료하는 단계는 CBP/β-카테닌 길항물질을 세포독성 및/또는 지정된 화학요법, 및/또는 방사선요법, 및/또는 체크포인트 억제(예컨대, 항-PD1, 항-PD-L1 또는 항-CTLA4, 등을 사용함), 키메라 항원 수용체(CAR-T) 및/또는 CAR-NK 세포 기반 요법을 포함한 면역요법 중 하나 이상과 함께, 또는 그것과의 보조 요법으로서 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
21. 항목 15의 방법으로서, 신경학적 상태는 헌팅턴병(HD), 파킨슨병(PD), 알츠하이머병(AD), 다발성 경화증(MS), 및/또는 근위축성 측삭 경화증(ALS), 근이영양증(MD), 및/또는 척추 근육 위축증(SMA) 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
22. 항목 15의 방법으로서, 피부 상태는 아토피성 피부염, 건선, 여드름, 섬유증, 상처, 흉터, 화상, 태양 또는 자외선 손상, 당뇨병성 궤양, 만성 궤양, 및/또는 탈모 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
23. 항목 22의 방법으로서, W는 알킬산 또는 지방산의 에스테르이고, 투여는 국소적 투여를 포함하는 것인 방법.
24. 피부 상태를 치료하기 위한 미용 방법으로서, 피부 상태를 가진 환자 또는 온혈 포유동물에게 항목 1 내지 10 중 어느 하나의 화합물의 미용적 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, W는 알킬산 또는 지방산의 에스테르이고, 투여는 국소적 투여를 포함하는 것인 방법.
25. 항목 24의 방법으로서, 피부 상태는 주름, 과색소침착, 발적, 주사비, 건조, 갈라짐, 생기 상실, 탄력 상실, 얇아짐, 생기 상실, 흉터, 여드름, 태양 손상, 탈모, 모발 착색 상실, 큐티클 성장 감소, 손톱 성장 감소로부터 선택된 하나 이상의 노화 피부 상태를 포함하는 것인 방법.
26. 임상 등급 약물을 효율적으로 합성하는 방법으로서, GMP 조건 하에 마지막에서 두 번째 또는 마지막 반응 단계에서 중간체 2-프로피닐 화합물을 사용하여 3 + 2 고리화첨가를 통해 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 형성하는 단계를 포함하는 방법.
27. 항목 26의 방법으로서, 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 제조하는 단계는, 마지막에서 두 번째 또는 마지막 반응 단계에서, 최종 제약학적으로 허용되는 염, 포스페이트 또는 포스페이트 염의 임의의 선택적인 형성 단계 전에 식 (IIa)의 중간체 2-프로피닐 화합물을 사용하여 청구항 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 것인 방법:
Figure pct00032
(IIa)
식에서:
Ra는 수소 또는 -CH3이고;
Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 또는 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개 고리 구성원을 가진 단환식 아릴기이며;
R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기이고;
R2는 수소, 또는 -CH3이며;
Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
W는 수소, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, X는:
Figure pct00033
또는
Figure pct00034
으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이다.
28. 항목 26 또는 27의 방법으로서, GMP 조건 하에 수행된 마지막 또는 마지막에서 두 번째 단계는 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 제조하기 위한 전체 반응 계획의 일부로서 비-GMP 조건 하에서 하나 이상의 반응 단계가 선행되는 것인 방법.
29. 식 (IIa)의 화합물:
Figure pct00035
(IIa),
식에서:
Ra는 메틸 또는 수소이고;
Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 또는 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개 고리 구성원을 가진 단환식 아릴기이며;
R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기이고;
R2는 수소, 또는 -CH3이며;
Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
W는 X이며, X는:
Figure pct00036
또는
Figure pct00037
으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이다.
30. 백신 효능을 향상시키는 방법으로서, 대상체에게 백신접종 전에, 및/또는 중에, 및/또는 후에 CBP/β-카테닌 매개 신호전달을 억제하고/하거나 p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키기에 충분한 양의 청구항 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
31. 항목 31의 방법으로서, 투여된 화합물의 양은 치료적 유효량을 포함하는 것인 방법.
32. 항목 30 또는 31의 방법으로서, 백신 효능을 향상시키는 단계는 백신 항원 특이적 항체의 증가된 수준; 제공되는 퍼센트 보호의 증가; 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성의 증가; 및/또는 보호 기간의 증가 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
33. 항목 30 내지 32 중 어느 하나의 방법으로서, CBP/β-카테닌 매개 신호전달을 억제하고/하거나 p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키는 단계는: 대상체에서 활성화된 T 세포의 분할 후 세포 비대칭의 대사적 유지; 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성을 증가시킴으로써 항원 특이적 면역의 향상; 및/또는 선천성 및 후천적 면역 체계 사이의 협동성을 향상시키기 위하여 항원 제공 세포에 의한 T 세포에의 항원 제공의 향상 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
34. 항목 30 내지 33 중 어느 하나의 방법으로서, 백신접종은 항-바이러스 백신의 투여를 포함하는 것인 방법.
35. 항목 30 내지 34 중 어느 하나의 방법으로서, 백신접종은 인플루엔자, SARS, SARS-CoV-2, HPV-A, HPV-B, 및/또는 헤르페스 조스터로부터 선택된 항-바이러스 백신의 투여를 포함하는 것인 방법.
36. 항목 30 내지 35 중 어느 하나의 방법으로서, 대상체는 55세-75세, 55세-85세, 50세 이상, 60세 이상, 또는 65세 이상의 나이의 인간인 것인 방법.
37. 항목 30 내지 36 중 어느 하나의 방법으로서, 투여 단계는: 백신접종 전 프라이머로서의 투여; 및/또는 백신접종과의 공동 투여; 및/또는 초기 백신에 후속적인 투여 또는 공동 투여를 포함하는 것인 방법.
도 1은, 본 발명의 비제한적인 측면에 따라, 본 발명의 3개의 예시의 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229로 코딩됨; 각각 16 내지 1000 nM의 농도에서 비교됨)의 CBP/β-카테닌 억제 활성을 양성 대조군으로서 사용된(1.25, 2.5, 5 및 10 μM에서) 기술분야에서 인정된 특정 CBP/β-카테닌 억제제 ICG-001과 비교하는, SuperTOPFLASH 세포 기반 루시페라제 검정(안정적으로 형질주입된 세포주, Hek293, STF1.1에서의 Wnt 구동 루시페라제 활성)의 결과를 도시한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 3개의 발명의 이소옥사졸 화합물은 일반적으로 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 약 10배 이상의 효능을 가진다.
도 2는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 본 발명의 3개의 예시의 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229로 코딩됨; 각각 0.1 내지 10 nM의 농도에서 비교됨)의 CBP/β-카테닌 억제 활성을 양성 대조군으로서 사용된(1.25, 2.5, 5 및 10 μM에서) 기술분야에서 인정된 특정 CBP/β-카테닌 억제제 ICG-001과 비교하는, 서바이빈 프로모터 구동 루시페라제 활성 검정(안정적으로 형질주입된 Hek293 세포주; 1Kb Hu-서바이빈/luc-Hek293에서 인간 서바이빈 1 Kb-프로모터 구동 루시페라제 활성의 검정)의 결과를 도시한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 3개의 발명의 이소옥사졸 화합물은 일반적으로 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 적어도 약 10배 이상의 효능을 가지는 IC50 값을 가진다.
도 3A 및 도 3B는, 본 발명의 추가적인 비제한적인 측면에 따라, 대조군 유전자로서 GAPDH를 사용하는, 서바이빈/BIRC5(CBP 특이적) 및 EphB2(p300 특이적) 유전자 발현에 대한 SYBR-Green　qPCR 검정의 결과를 도시한다. 도 3A는 CBP/β-카테닌 특이적 유전자(H. Ma et al Oncogene 2005, 24,3619-31)　서바이빈/Birc5 유전자 발현을 억제(△△Ct의 증가로서 반영됨)하는데 있어서 발명의 화합물 [3+2]-101(1　μM)을 기술분야에서 인정된 양성 대조군 ICG-001(10　μM)과 비교한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 발명의 이소옥사졸의 CBP/β-카테닌 발현 억제 활성은 대조군의 그것보다 적어도 10배 더 크다. 도 3B는 EphB2　(p300/β-카테닌 특이적 유전자(Kumar S, et. al. Cancer Res. 2009, 69,3736-45) 유전자 발현을 자극(△△Ct의 감소로서 반영됨)하는데 있어서 발명의 화합물 [3+2]-101(1　μM)을 기술분야에서 인정된 양성 대조군 ICG-001(10　μM)과 비교한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 발명의 이소옥사졸의 EphB2　유전자 발현 자극 활성은 대조군의 그것보다 적어도 10배 더 크다. 이것은 [3+2]-101 및 ICG-001의 특정 CBP/β-카테닌 억제 활성에 의해 매개된 p300/β-카테닌 기반 전사의 증가와 함께 CBP/β-카테닌 기반 전사의 감소를 반영한다.
도 4A 및 도 4B는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, ICG-001 및 [3+2]-117이 CBP에 대한 β-카테닌 결합을 선택적으로 파괴하는 한편(도 4A), p300에 대한 β-카테닌의 결합을 향상시키는(도 4B) 것을 추가로 확인하기 위하여 이전에 기술된(Emami K. et al. PNAS USA,　2004 Aug 24;101(34):12682-7) SW480 대장암 세포에서 수행된 공동 면역침전 검정을 도시한다. β-카테닌과 CBP와의 면역침전은 10　μM의 ICG-001에 의해(도 3A) 그리고 500 nM의 [3+2]-117에 의해 억제되었다. [3+2]-117은 ICG-001과 비교하여 대략 20배 더 활성이었다(레인 1(DMSO 대조군)을 레인 2 및 3과 비교함).　β-카테닌과 p300 사이에서 SW480 세포에서 볼 수 있는 최소 상호작용은 CBP 및 p300이 매우 상동한다는 사실에도 불구하고 ICG-001에 의해 차단되지 않았다. 실제로, 10　μM의 ICG-001로의 처리는 p300과 공동침전된 β-카테닌의 양을 약간 증가시키며(도 4B p300 IP, 레인 1과 2 비교), 이것은 CBP/β-카테닌 매개 전사로부터 분화의 개시와 관련된 p300/β-카테닌 매개 전사로의 전환과 일치한다. 500 nM의 [3+2]-117은 β-카테닌과 p300의 상호작용을 극적으로 증가시켰다(도 4B p300 IP, 레인 1과 3 비교). 픽셀화를 기반으로 한 면역블롯팅 데이터의 정량화는 면역블롯 아래에 도시된다.
도 5는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 마우스에서의 블레오마이신 유도 폐 섬유증 모델 연구에서(처리 기간: 7-20일) [3+2]-120A 및 [3+2]-120B로 처리된 마우스에서의 체중 증가에서 상당한(본페로니 다중 비교 테스트; 평균 +/- SD) 증가가 있었음을 도시한다.
도 6은, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 도 5의 연구에서 모든 마우스가 생존하였고(따라서 상이한 처리 그룹 곡선에 대한 생존 곡선은 겹쳐짐; 로그 순위 테스트), 반면에 이력적으로 대략 30%의 마우스는 이 블레오마이신 유도 폐 섬유증 모델에서 처리된 경우에도 21일 전에 사망한 것을 도시한다.
도 7A-7D는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 도 5 및 6의 이 연구에서 조직학적 분석을 토대로, [3+2]-120A 처리 및 [3+2]-120B 처리된 마우스에서 폐 중량 및 애쉬크로프트(Ashcroft) 점수에 상당한(본페로니 다중 비교 테스트; 평균 +/- SD) 감소가 있었음을 도시한다. 도 7A-7D는 다음과 같다: 희생 당일의 체중(7A); 좌측 폐 중량(7B); 대퇴골 후엽 중량(7C); 및 애쉬크로프트 점수(7D).
도 8A-8E는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, [3+2] 시리즈 화합물이 세포외 콜라겐 침착을 감소시키는 데 있어서 블레오마이신 유도 폐 섬유증 모델에서 효과적인 것을 보여주는, 도 5-7의 연구에 대한 대표적인 조직학적 데이터(Masson의 3색 염색 폐 섹션의 현미경 사진; 원래의 배율 X100)를 도시한다. 도 8A-8E는 다음과 같다: 이력적인 블레오마이신 단독 대조군(8A, "ID:103"); [3+2]-120A 저용량(8B, "ID:102"); [3+2]-120A 고용량(8C, "ID:201"); [3+2]-120B 저용량(8D, "ID:302"); 및 [3+2]-120B 고용량(8E, "ID:401").
도 9는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 아토피성 피부염의 NG/Nga 마우스 모델에서, 비히클 그룹과 치료(대표적인 발명의 화합물 [3+2]-121A(저용량) 및 [3+2]-121B)(화합물 [3+2]-121A의 고용량) 그룹 사이에 치료 기간 중 임의의 날에 평균 체중에 유의미한 차이가 없었음을 도시하며, 이것은 치료의 안전성을 증명한다.
도 10은, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 도 9의 연구에서, 비히클 대조군 그룹과 치료 그룹 사이에 마우스당 사료 소비("사료 섭취")에 유의미한 차이가 없었음을 도시한다.
도 11A 및 11B는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 도 9 및 10의 연구에서, [3+2]-121A 그룹(저용량)이 비히클 대조군 그룹과 비교하여 10일 및 14일에 주로 등에서의 총 피부염 중증도 점수의 유의미한 감소를 나타냈음을 도시한다. 도 11A 및 11B는 다음과 같다: 등 영역(11A); 및 총(등 영역 플러스 귓바퀴 영역)(11B).
도 12는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 도 9-11의 연구에서, [3+2]-121A 및 [3+2]-121B 그룹이 14일차에 TEWL의 유의미한 감소를 보였고 이것은 장벽 기능의 개선을 증명하는 것임을 도시한다.
도 13A-13C는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 대표적인 현미경 사진에서 알 수 있는 것과 같이, 도 9-12의 연구에서 취한 대표적인 조직학적 섹션이 [3+2]-121A 및 [3+2]-121B 그룹에서 모두 염증 및 염증 세포 유입의 유의미한 감소를 확인시켜주는 것을 도시한다. 도 13A-13C는 다음과 같다: 비히클 대조군(13A); [3+2]-121A(13B); 및 [3+2]-121B(13C).
식 (Ia)의 화합물:
Figure pct00038
(Ia)
및 그것의 입체이성질체, 기하학적 이성질체, 호변 이성질체, 용매화합물(예컨대, 수화물) 대사산물, 전구 약물, 동위원소로 표지된 유도체, 및 제약학적으로 허용되는 염을 포함하여 임의의 염이 제공되며, 식에서:
Ra는 수소 또는 -CH3이고;
Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 또는 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개의 고리 구성원을 가지는 단환식 아릴기이고;
R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기, 또는 치환된 이환식 아릴기이고, 여기서 치환된 이환식 아릴기는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실기로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있으며;
R2는 수소, 또는 -CH3이고;
Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되며;
W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이고, X는:
Figure pct00039
또는
Figure pct00040
으로부터 선택되며, Z는 OR4이고 R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이며, n은 1 또는 2이고;
L은 -CH2-, -CF2-, 또는 -C(CH3)2-이며;
Q는
Figure pct00041
또는
Figure pct00042
로부터 선택된 0 내지 2개의 치환기에 의해 치환된 5- 또는 6-원 질소 함유 헤테로아릴이고, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택되며, Z1, Z2는 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, 및
Figure pct00043
로부터 독립적으로 선택되고, 식에서 R1, R2 및 R3은 수소, C1-C6 알킬, 또는 하나 이상의 -OH를 함유하는 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되며, Z3은 수소, 할로겐, 또는 직접 결합, 또는 -NH-연결된, -OC1-C3 알킬 연결된, 또는 -NHC1-C3 알킬 연결된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -NHC1-C4 알킬, -N(C1-C4 알킬)2로부터 선택되고, 이들 각각은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH- C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 헤테로아릴 또는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2로부터 독립적으로 선택된 0-4개의 치환기에 의해 치환된다.
화합물에서, 알킬산 또는 지방산의 에스테르는 바람직하게:
Figure pct00044
(식에서 m은 1 내지 14임),
Figure pct00045
, 또는
Figure pct00046
로부터 선택될 수 있다.
화합물에서, R은 나프틸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴녹살린, 프탈라진, 퀴나졸린, 신놀린, 나프티리딘, 또는 그것들의 치환된 변이체로부터 선택된 이환식 아릴일 수 있다.
화합물에서, 화합물은 바람직하게는 식 (Ib)의 것일 수 있다:
Figure pct00047
(Ib), 식에서 X1 및 X2는 N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택된다.
화합물의 바람직한 측면으로:
L은 -CH2-이고;
Q는
Figure pct00048
이며, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택된다(바람직하게 A는 -CH이고, B는 N이며, D는 O이며(Q는 Z3-이소옥사졸임), W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, X는:
Figure pct00049
, 또는
Figure pct00050
로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이다).
화합물에서, Z3은 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있고, 이들 각각은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH-C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 또는 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2(바람직하게, Z3은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 0-4개의 치환기에 의해 치환된 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택됨), 또는 질소 결합 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0-4개의 치환기에 의해 치환된다.
특히 바람직한 화합물은 다음:
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
및 본원에 개시된 화합물, 및 제약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 조성물 또는 제약학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 측면은 Wnt/β-카테닌 경로의 강력한 조절제인 식 (Ia), (Ib) 및 (IIa)의 화합물을 제공한다. CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 매개 신호전달을 억제하는 강력한 화합물, 이들 화합물을 포함하는 조성물 및 제약학적 조성물, 및 한정하는 것은 아니지만 섬유증, 암, 신경 장애, 대사 장애(당뇨병 및 지방간 질환, 예컨대, 알코올성(ALD) 및 비알코올성 간 지방증(각각 ALD 및 NAFLD), 및 비알코올성 지방간염(NASH)을 포함함), 피부 상태(예컨대, 피부염, 건선, 탈모, 피부 노화, 등) 노화, 및 선택적으로 추가로 폐 고혈압, 울혈성 심부전, 만성 신장 질환, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 다낭성 난소 증후군(PCOS), 자궁내막증, 및/또는 전신 섬유증/경피증 중 하나 이상을 포함하여, 임의의 비정상적인 CBP/β-카테닌 매개 신호전달 질환 또는 장애의 치료를 위한 이들 화합물의 용도가 제공된다. 치료적, 및 미용적 방법이 모두 제공된다.
본 발명의 식 (Ia), (Ib) 및 (IIa)의 화합물은 키랄 중심을 함유할 수 있고, 그러므로 상이한 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 상기에서 정의된 구조를 가지는 화합물의 라세미 혼합물로서 및 개별 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체로서의 모든 광학 이성질체 및 모든 입체 이성질체, 및 그것들의 혼합물, 및 각각 그것들을 함유하거나 사용하는 아래에서 정의되는 모든 제약학적 조성물 및 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 화합물은 (S)-거울상 이성질체이다. 다른 구현예에서, 화합물은 (R)-거울상 이성질체이다.
본 발명의 화합물이 적어도 2개의 비대칭 중심을 가질 수 있기 때문에, 그것은 다양한 입체 이성질체 형태 또는 구성으로 발생할 수 있다. 그러므로, 화합물은 분리된 (+)- 및 (-)- 광학 활성 형태, 뿐만 아니라 그것의 혼합물로 존재할 수 있다. 본 발명은 발명의 범주 내에 모든 그러한 형태를 포함한다. 개별 이성질체는 공지된 방법, 예컨대 광학 분해, 광학 선택적 반응, 또는 최종 생성물 또는 중간체의 제조시 크로마토그래피 분리에 의해 얻어질 수 있다.
본 발명은 또한 비정상적인 CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달에 의해 매개된 질환 또는 장애를 가진 온혈 포유류 대상체에게 투여되었을 때 온혈 포유류 대상체 내에서 CBP/카테닌 매개 신호전달을 특이적으로 억제하기에 충분한 양으로 하나 이상의 개시된 화합물을 포함하는 제약학적 조성물 및 제형을 제공한다. 투여된 화합물의 양은 바람직하게 치료적 유효량을 포함하며, 그러한 경우에 제약학적 조성물 및 제형은 본원에 개시된 구조를 가지는 화합물 또는 그것의 제약학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량 및 그것을 위한 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함할 수 있다. 모든 이들 형태는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
정의:
"저급"은, 다르게 표시되지 않는 한, 주어진 라디칼을 구성하는 탄소 원자의 수가 1 내지 6인 것을 의미한다.
"할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.
"할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
"알킬"은 탄소 원자 사슬을 가진 선형 또는 분지형, 포화된, 지방족 라디칼을 의미한다.
"알케닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 선형 또는 분지형 탄소 사슬을 의미한다.
"알키닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 선형 또는 분지형 탄소 사슬을 의미한다.
"알킬렌"은, 다르게 표시되지 않는 한, 선형 또는 분지형, 포화된, 지방족, 다가 탄소 사슬을 의미한다.
"옥시"는 라디칼 -O-를 의미한다. 옥시 라디칼은 추가로 다양한 치환기로 치환되어 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시 등을 포함하는 상이한 옥시 기를 형성할 수 있는 것이 주지된다.
"포스페이트" 또는 "포스페이트 염"은 각각 PO3H2, 또는 PO3 -- 및 적절한 카운터이온(들)(예컨대, 1-2Na+, 1-2K+, 또는 Ca++, 등)을 의미한다.
"티오"는 라디칼 -S-를 의미한다. 티오 라디칼은 추가로 다양한 치환기로 치환되어 머캡토, 알킬티오, 아릴티오, 헤테로아릴티오 등을 포함하는 상이한 티오기를 형성할 수 있는 것이 주지된다.
"설피닐"은 라디칼 -SO-를 의미한다.　설피닐 라디칼은 추가로 다양한 치환기로 치환되어 알킬설피닐, 아릴설피닐, 헤테로아릴설피닐 등을 포함하는 상이한 설피닐기를 형성할 수 있는 것이 주지된다.
"설포닐"은 라디칼 -SO2-를 의미한다.　설포닐 라디칼은 추가로 다양한 치환기로 치환되어 알킬설포닐, 아릴설포닐, 헤테로아릴설포닐 등을 포함하는 상이한 설포닐기를 형성할 수 있는 것이 주지된다.
"알콕시"는 추가의 알킬 치환기를 가진 산소 모이어티를 의미한다.
"헤테로원자"는 탄소 원자 및 수소 원자가 아닌 원자를 나타낸다. 헤테로원자의 특정 예로는, 한정하는 것은 아니지만 질소, 산소, 및 황을 들 수 있다.
"아릴"은 각각의 고리가 방향족이거나 하나 이상의 고리와 융합되는 경우 방향족 고리를 형성하는 단환식 또는 다환식 라디칼을 의미한다.
"헤테로아릴"은 적어도 하나의 고리 원자가 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 탄소인 단환식 또는 다환식 방향족 라디칼을 의미한다. "사이클로알킬"은 비방향족, 포화된 또는 부분적으로 불포화된, 단환식, 융합된 이환식 또는 가교된 다환식 고리 라디칼을 의미한다.
"헤테로사이클로알킬"은 본 출원에서 정의된 사이클로알킬을 의미하며, 단 고리를 형성하는 원자의 하나 이상은 N, O, 또는 S로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자이다.
본원에서 사용되는 "융합된 고리"는 두 고리에 공통된 고리 원자가 서로에게 직접 결합될 때 이환식 구조를 가진 화합물을 형성하기 위해 또 다른 고리에 결합되는 고리를 나타낸다.
본원에서 사용되는 "가교 고리"는 두 고리에 공통된 2개의 고리 원자가 서로에게 직접적으로 결합되지 않는 이환식 구조를 가진 화합물을 형성하기 위해 또 다른 고리에 결합되는 고리를 나타낸다.
"보호된 유도체"는 반응성 부위 또는 부위들이 보호기로 차단되는 화합물의 유도체를 의미한다. 적합한 보호기의 포괄적인 목록은 T.W. Greene,　Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc. 1999에서 찾아볼 수 있다.
"이성질체"는 동일한 분자식을 갖지만 그것의 원자의 본질 또는 결합 순서 또는 그것의 원자의 공간에서의 배열이 상이한 임의의 화합물을 의미한다. 공간에서의 원자 배열이 상이한 이성질체는 "입체 이성질체"로 명명된다. 서로의 거울 이미지가 아닌 입체 이성질체는 "부분입체 이성질체"로 명명되며 겹쳐질 수 없는 거울 이미지인 입체 이성질체는 "거울상 이성질체" 또는 때로는 "광학 이성질체"로 명명된다. 4개의 동일하지 않은 치환기에 결합된 탄소 원자는 "키랄 중심"으로 명명된다. 하나의 키랄 중심이 있는 화합물은 반대 키랄성의 2개의 거울상 이성질체 형태를 가진다. 2개의 거울상 이성질체 형태의 혼합물은 "라세미 혼합물"로 명명된다. 하나 이상의 키랄 중심을 가진 화합물은 2 n -1　거울상 이성질체 쌍을 가지며, 여기서 n은 키랄 중심의 수이다. 하나 이상의 키랄 중심을 가진 화합물은 개별 부분입체 이성질체로서 또는 "부분입체 이성질체 혼합물"로 명명된 부분입체 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 하나의 키랄 중심이 존재할 때 입체 이성질체는 그 키랄 중심의 절대 구성에 의해 특성화될 수 있다. 절대 구성은 키랄 중심에 부착된 치환기의 공간에서의 배열을 나타낸다. 거울상 이성질체는 그것의 키랄 중심의 절대 구성에 의해 특징지어지며 Cahn, Ingold 및 Prelog의 R- 및 S-서열분석 규칙에 의해 기술된다. 입체화학 명명법, 입체화학의 측정 방법 및 입체이성질체 분리에 대한 규정 역시 기술분야에 잘 알려져 있다(예컨대, "Advanced Organic Chemistry", 4th edition, March, Jerry, John Wiley & Sons, New York, 1992 참고).
"동물"은 인간, 비인간 포유류(예컨대, 마우스, 래트, 개, 고양이, 토끼, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 사슴, 등) 및 비포유류(예컨대, 조류, 등)를 포함한다.
"질환"은 구체적으로 동물 또는 그 일부의 임의의 건강하지 못한 상태를 포함하며 그 동물에게 적용된 의학적 또는 수의학적 상태에 의해 유발될 수 있는, 또는 그로 인해 발생될 수 있는 건강하지 못한 상태, 즉, 그러한 치료법의 "부작용"을 포함한다.
"제약학적으로 허용되는"은 일반적으로 안전하고, 무독성이며 생물학적으로나 다른 방식으로 바람직하지 못한 것이 아닌 제약학적 조성물을 제조하는데 유용한 것을 의미하며 인간 제약학적 용도뿐만 아니라 수의학적 용도에 대해 허용되는 것을 포함한다.
"제약학적으로 허용되는 염" 또는 "염"은 상기에서 정의되는 것과 같이 제약학적으로 허용되며, 원하는 약물학적 활성을 가지고 있는 본 발명의 화합물의 염을 의미한다. 그러한 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 등과 같은 무기산으로; 또는 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 헵탄산, 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 석신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, o-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 신남산, 말델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄다이설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, p-톨루엔설폰산, 캄포설폰산, 4-메틸바이사이클로[2.2.2]옥트-2-엔-1-카르복실산, 글로코헵톤산, 4,4'-메틸렌비스(3-하이드록시-2-엔-1-카르복실산), 3-페닐프로피온산, 트라이메틸아세트산, 삼차 부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기산으로 형성된 산 부가염을 포함한다. 제약학적으로 허용되는 염은 또한, 존재하는 산성 양성자가 무기 또는 유기 염기와 반응할 수 있을 때 형성될 수 있는 염기 부가 염을 포함한다. 허용되는 무기 염기로는 수산화 나트륨, 탄산 나트륨, 수산화 칼륨, 수산화 알루미늄 및 수산화 칼슘을 들 수 있다. 허용되는 유기 염기로는 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등을 들 수 있다.
"치료하기에 효과적인 양" 또는 "치료적 유효량"은 질환을 치료하기 위해 동물에게 투여될 때 질환에 대한 그러한 치료가 효과를 나타내기에 충분한 양을 의미한다.
"예방하기에 효과적인 양"은 질환을 예방하기 위해 동물에게 투여될 때 질환에 대한 그러한 치료가 예방을 나타내기에 충분한 양을 의미한다.
"치료" 또는 "치료하다"는 본 발명의 화합물의 임의의 투여를 의미하며: (i) 질환에 걸릴 성향이 있지만 아직 질환에 걸리지 않았거나 질환의 병리 또는 증상을 나타내지 않은 동물에서 질환이 발생하는 것을 방지하는 것; (ii) 질환에 걸렸거나 질환의 병리 또는 증상을 나타내는 동물에서 질환을 억제하는 것(즉, 병리 및/또는 증상의 추가의 발달을 저지하는 것); 또는 (iii) 질환에 걸렸거나 질환의 병리 또는 증상을 나타내는 동물에서 질환을 개선하는 것(즉, 병리 및/또는 증상의 반전)을 포함한다.
"미용적 유효량"은 투여(예컨대, 경피적, 국소적)되었을 때 미용적 상태(예컨대, 주름, 과색소침착, 발적, 주사비, 건조, 갈라짐, 생기 상실, 탄력 상실, 얇아짐, 생기 상실, 흉터, 여드름, 태양 손상, 탈모, 모발 착색 상실, 큐티클 성장 감소, 손톱 성장 감소)의 미용적 치료를 이루기에 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 화합물의 치료적 용도 및 제약학적 조성물
본 발명의 측면에 따르면, 하기에서 논의되는 바 예시의 질환 및 상태는, 원인 또는 그것이 나타나는 조직과 관계 없이, 질환 상태에 의해 공유된 공통 경로(WNT-β-카테닌 신호전달)를 조절함으로써 치료될 수 있다. 예를 들어, 질환 또는 장애를 치료하는 것은 비정상적인 CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달에 의해 매개된 질환 또는 장애를 가진 환자 또는 온혈 포유동물에게, CBP/카테닌 신호전달을 억제하고/하거나 p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키기에 충분한 양의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함할 수 있다.
WNT-β-카테닌 경로는 광범위한 질환 배열에서 중요한 역할을 한다. 정상적인 항상성 및 손상 후 회복에서 실제로 모든 장기 시스템에서의 WNT 신호전달의 중요한 역할을 고려하면, 이 신호전달 캐스케이드의 비정상적인 조절이 질환 배열과 관련된 것이 놀라운 것이 아니다(예컨대, Kahn, M., NATURE REVIEWS | DRUG DISCOVERY VOLUME 13 | JULY 2014 | 513 참고). 여러 악성종양에서 명백한 역할을 하는 것 이상으로, 비정상적인 WNT 신호전달은 신경 질환, 염증성 및 섬유성 질환, 및 성인에서의 내분비 기능 및 뼈 대사의 장애를 포함하여 다양한 다른 질환에서 중요한 부분으로서 연루된다.
특정 측면으로, 비정상적인 WNT 신호전달은: 암(예컨대, 고형 종양(예컨대, 결장, 췌장, 폐, 간, 방광, 전립선, 흑색종, 신경교종(glioma), 속질모세포종(meduloblastoma), 골육종(osteosarcoma), 자궁, 자궁내막 및 유방 등) 및 액체 종양(예컨대, CML, CLL, AML, ALL 등) 모두에서 최소 잔류 질환에 암 줄기 세포 관여); 다발성 골수종(multiple myeloma); 제1형 당뇨병(Type I diabetes), 류머티스 관절염(rheumatoid arthritis), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease)을 포함한 자가면역 장애; 국소적 장애(예컨대, 건선, 백반증( vitiligo) 및 아토피성 피부염); 심장, 간, 폐, 신장 전신성 및 복막(자궁내막증) 및 안구 섬유증을 포함하여 섬유증; 골관절염 및 골다공증; 제2형 당뇨병을 포함하여 대사성 질환; 고혈압; 가족성 선종성 용종증(familial adenomatous polyposis); 골수이형성 증후군(MDS); 골수증식성 증식성 신생물(MPN); CHIP(불확실한 잠재력의 클론성 조혈); 전섬유성 상태(예컨대, AFLD, NASH, NAFLD, 경화증); 다낭성 신장 질환(polycystic kidney disease); 다낭성 난소 증후군(PCOS), 자궁내막증, 대사성 질환; 제2형 당뇨병; 고혈압; 폐 장애(예컨대, 천식 및 COPD); 한정하는 것은 아니지만 신경 발달, 자폐증(autism), 스펙트럼 장애(spectrum disorder), 정신 분열증(schizophrenia) 및 ALS, 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 전두측두엽 치매, 다발성 경화증(MS)를 포함하여 신경 퇴행성 질환을 포함하여 신경학적 질환; 및 심지어 보다 일반적으로는 노화에 연루된다. 특히 대표적인 질환에서 WNT 신호전달의 포함은 아래에서 보다 상세하게 개관된다.
암. WNT 신호전달의 비정상적인 조절은 암 생물학에서 반복되는 주제로서 부상하였다. WNT 신호전달의 구성요소는 기본적으로 양성적으로 또는 음성적으로 작용하는 구성요소로서 특성화될 수 있고, 여기서 주로 종양형성을 억제하는 작용을 하는 음성적으로 작용하는 구성요소는 암의 돌연변이된 또는 기능 상실 상태에서 발견되는 반면, 양성적 구성요소는 활성화된다. 1991년도에 종양 억제자 APC의 돌연변이가 WNT 신호전달의 비정상적인 활성화를 통해 대부분의 산발성 대장암과 관련되었다는 발견은 이 경로를 치료적으로 표적화하려는 시도에 상당한 추진력을 제공하였다. APC의 생식선 결핍은 가족성 선종성 용종증을 유발하는데, 영향을 받은 개인은 어린 나이에 대장에서 수백 개의 용종이 발생하고 궁극적으로 100% 침투율로 대장암으로 진행된다. APC의 두 대립유전자 모두의 기능 상실은 종양형성에 필요하며 염색체 안정성뿐만 아니라 β-카테닌 단백질 안정성을 조절하는 단백질의 능력과 연결된다. APC는 현재 인간 암에서 전반적으로 가장 빈번하게 돌연변이된 유전자로서 인지된다. WNT 경로에 영향을 미치는 돌연변이는 결장암에 한정되지 않는다. 예를 들어, AXIN에서의 기능 상실 돌연변이는 간세포 암종에서 발견되었고, 결장암 및 흑색종에서 먼저 설명되었던 종양형성 β-카테닌 돌연변이가 계속해서 간세포 암종, 갑상선 종양 및 난소 자궁내막양 선암종(ovarian endometrioid adenocarcinoma)을 포함하여 다양한 고형 종양에서 발생하는 것으로 나타났다. 후성적 침묵(Epigenetic silencing)이 또한 WNT-β-카테닌 경로의 음성 조절자의 발현 수준을 변경시키는 것으로 빈번하게 관찰된다. 예를 들어, 추정된 세포외 WNT 길항물질, 예컨대 분비된 프리즐 관련 단백질(SFRP)을 암호화하는 유전자의 메틸화가 결장, 유방, 전립선, 폐 및 다른 암에서 설명되었다. 디셰벌드(Dishevelled, DVL)를 포함하여, WNT 리간드 또는 이펙터 단백질의 증가된 발현이 또한 설명되었다. 특히, 비정상적인 WNT 신호전달은 고형 종양(예컨대, 결장, 췌장, 폐, 간, 방광, 전립선, 흑색종, 신경교종, 속질모세포종, 골육종, 자궁, 자궁내막 및 유방 등) 및 액체 종양(예컨대, CML, CLL, AML, ALL 등) 모두에서 최소 잔류 질환 및 재발에 관여하는 암 줄기 세포에 연루된다. 특정 소분자 CBP/β-카테닌 길항물질은 암 줄기 세포, 최소 잔류 질환 및 질환 재발을 제거하는데 효과적이다(예컨대 Kim, et al. Exp. Hematol. 2017 doi: 10.1016/j.exphem.2017.04.010). 나아가, 불확실한 잠재력의 클론성 조혈(CHIP), 골수이형성 증후군(MDS), 골수섬유증(MF) 및 골수증식성 신생물(MPN), 결함이 있는 줄기 세포에 의해 구동된 바렛 식도(Barrett's Esophagus)와 같은 전-악성종양 및 증후군은 특정 소분자 CBP/β-카테닌 길항물질에 의해 예방적으로 제거될 수 있다(Thomas and Kahn Cell Biol. Toxicol. 2016 doi: 10:1007/s10565-016-9318-0).
섬유증. 섬유증은 세포외 기질 구성요소의 과도한 축적을 특징으로 하며, 생리적 조직 구조를 파괴하여 영향을 받는 장기의 기능장애로 이어진다. 일반적으로 섬유증은 선진국에서 사망의 대략 45%를 차지하는 것으로 제안되었고, 그로써 효과적인 항섬유증 치료법에 대한 커다란 의학적 필요성이 강조된다. 활성화된 WNT-β-카테닌 신호전달은 폐를 포함한 많은 장기 시스템에서의 섬유증에 연루되었고, 그것은 이 발달상의 경로가 손상 후 성인 조직에서 재활성화될 수 있음을 나타낸다. 섬유증의 여러 쥐과 모델(예컨대 폐 및 신장 모델)에서 특정 소분자 WNT 조절은 극히 효과적인 것으로 증명되었다. CBP-β-카테닌 상호작용의 특이적인 억제는 폐, 신장, 간, 심장, 전신성 섬유증 및 자궁내막증의 쥐과 모델에서 말기 섬유성 손상을 개선할뿐만 아니라 반전시키는 것으로 나타났다(Sci Rep. 2019 Dec 27;9(1):20056. doi: 10.1038/s41598-019-56302-4; Akcora et al., Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2018 Mar;1864(3):804-818. doi: 10.1016/j.bbadis.2017.12.001; Xiao et al., Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2019 Jun 1;1865(6):1313-1322. doi: 10.1016/j.bbadis.2019.01.027. Epub 2019 Jan 30; Zhao et al., Sci Rep. 2018 Jun 12;8(1):8996. doi: 10.1038/s41598-018-27064-2; Kimura et al., EBioMedicine 2017 Sep;23:79-87. doi: 10.1016/j.ebiom.2017.08.016. Epub 2017 Aug 19. Safety, Tolerability, and Preliminary Efficacy of the Anti-Fibrotic Small Molecule PRI-724, a CBP/β-Catenin Inhibitor, in Patients with Hepatitis C Virus-related Cirrhosis: A Single-Center, Open-Label, Dose Escalation Phase 1 Trial). 이 실험에서 HCV 경화증이 있는 환자에게 12주 동안(1주 투여 및 1주 쉼) 10 내지 40 mg/m2/일의 용량으로 정맥내 주사에 의해 투여된 CBP/β-카테닌 길항물질 PRI-724는 안전한 것으로 나타났고, 약물의 용량 의존성 혈장 노출을 제공하였으며, 여러 환자에서 간 조직학 및 차일드 퍼(Child Pugh) 점수의 개선을 초래하였다.
폐 섬유증. 폐 섬유증은 산소 및 기타 가스를 혈액으로 또는 혈액 밖으로 수송하는 능력을 파괴한다. 이 질환은 섬세하고 탄력적인 폐 조직을 변형시켜서, 이들 조직을 더 두껍고, 단단한 섬유성 조직으로 변화시킨다. 원래의 조직의 이런 변화 또는 교체는 다른 손상된 조직에 발생할 수 있는 영구적인 흉터와 유사하다. 폐의 흉터는 가스(즉 산소, 이산화탄소)를 혈액으로 또는 혈액 밖으로 통과시키는 폐의 능력을 감소시킨다. 점차적으로, 폐의 기낭(air sac)은 섬유성 조직으로 교체되어간다. 흉터가 형성될 때, 조직은 더 두꺼워져서 산소를 혈류로 수송하는 조직의 능력의 비가역적인 손실을 유발한다. 증상으로는 특히 운동시 호흡 곤란; 만성적인 마른 기침; 피로와 약함; 가슴의 불편함; 식욕 상실; 및 급속한 체중 손실을 들 수 있다. 폐 섬유증의 여러 원인이 알려져 있고 직업적이고 환경적인 노출을 포함한다. 많은 직업, 특히 광업과 관련되거나 작업자를 석면 또는 금속 분진에 노출시키는 직업은 폐 섬유증을 유발할 수 있다. 이들 종류의 직업을 수행하는 작업자는 폐, 특히 작은 기도 및 기낭을 손상시킬 수 있는 작은 입자(실리카 먼지 또는 석면 섬유와 같은)를 흡입할 수 있고, 섬유증과 관련된 흉터를 유발할 수 있다. 농업 작업자도 또한 영향을 받을 수 있다. 일부 유기 물질, 예컨대 곰팡이가 핀 건초는 폐에 알레르기 반응을 유발할 수 있다. 이 반응은 농부의 폐로 불리며 폐 섬유증을 유발할 수 있다. 농장에서 발견되는 다른 연기는 폐에 직접적으로 독성이다. 또 다른 원인은 육아종(granuloma)(염증 세포 영역)의 형성을 특징으로 하는 질환인 유육종증(Sarcoidosis)이며, 이것은 신체의 어느 영역이든지 공격할 수 있지만 가장 빈번하게는 폐에 영향을 미친다. 유방암에 대한 치료와 같이 방사선이 그런 것처럼, 특정 의약이 폐 섬유증을 유발하는 바람직하지 못한 부작용을 가질 수 있다. 전신성 경화증과 같은 결합 조직 또는 콜라겐 질환이 또한 폐 섬유증과 관련이 있다. 비록 유전적 및 가족력 요인이 관여될 수 있긴 하지만, 이 원인은 위에서 열거된 다른 원인과 같이 흔하지는 않다. 만성 폐색성 폐 질환(COPD)에서, 결합 조직 증식 및 섬유증은 중증 COPD를 특징지을 수 있다. COPD는 흡연 또는 만성 천식의 결과로서 발생할 수 있다.
특발성 폐 섬유증(IPF). 간질성 폐 질환의 모든 알려진 원인이 배제된 경우, 상태는 "특발성"(기원이 알려지지 않은) 폐 섬유증(IPF)으로 불린다. 83,000명 이상의 미국인이 IPF를 안고 살아가며, 매년 31,000건 이상의 새로운 사례가 발생한다. 이런 약화시키는 상태는 폐의 흉터를 포함한다. 폐의 기낭은 흉터, 또는 섬유성 조직을 발생시키고, 그것은 점차로 산소를 혈류로 수송하는 신체 능력을 간섭하여 중요한 장기 및 조직이 정상적으로 기능하기 위해 충분한 산소를 얻는 것을 방해한다. SARS-CoV-2와 같은 바이러스 질병 및 알레르기 또는 환경적 노출(담배 연기 포함)을 포함하여 IPF의 여러 잠재적 원인이 있다. 또한 가족성 특발성 폐 섬유증으로서 알려져 있는, 질환의 가족성 형태가 있다. IPF가 있는 환자는 그들의 폐가 산소를 혈류로 수송하는 능력을 상실할 때 폐 섬유증으로 나타나는 증상과 유사한 증상으로 고생한다. 증상으로는 특히 신체 활동 중 또는 후의 호흡 곤란; 경련성 마른 기침; 점진적인, 의도하지 않은 체중 감소; 피로 및 약해짐; 가슴의 불편함; 조직의 증대로 인한 손가락(또는 때로는 발가락) 단부의 곤봉(clubbing), 또는 비대를 들 수 있다. 이들 증상은 TPF 환자의 삶의 질을 크게 떨어뜨릴 수 있다. 폐의 재활, 및 산소 요법은 IPF의 라이프스타일 변경 효과를 줄일 수 있지만, 치료를 제공하지는 못한다.
당뇨병 및 대사성 질환. Wnt 신호전달은 줄기 세포 유지, 분화, 및 이동에서뿐만 아니라, 장기 형성에서도 매우 중요하다. WNT 신호전달은 또한 다양한 내분비 기능에서 중요한 역할을 하며 그러므로 여러 내분비 장애에 연루되어 있다. WNT 신호전달은 인슐린 민감성의 조절에 중요하며 그것의 조절장애는 당뇨병의 발생에 연루된다. 특히, WNT10B는 골격근 세포에서 인슐린 민감성을 증가시킨다. WNT5B의 과다발현은 지방생성을 유도한다. 제2형 당뇨병을 가진 환자에서 입증된 β-카테닌 의존성 WNT5B의 감소된 발현은 제2형 당뇨병에 대한 감수성을 증가시킬 수 있다. β-카테닌/TCF7L2 의존성 Wnt 신호전달(규정된 경로)은 췌장 발달, 샘 기능, 및 인슐린 생성 및 분비에 관여한다. 글루카곤 유사 펩타이드-1(GLP-1) 및 케모카인 간질 세포 유래 인자-1(SDF1)은 규정된 Wnt 신호전달을 조절한다. 추가적으로, 전사 인자 TCF7L2(TCF4로도 알려짐)의 다형성은 제2형 당뇨병에 대한 증가된 감수성과 관련이 있다. TCF7L2의 위험 대립유전자를 가진 개체는 손상된 인슐린 분비를 나타내며, 췌장 β 세포에서 TCF7L2는 췌장 β 세포 질량의 조절을 통해 글루코스 대사에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다.
샘(islet)에서 TCF7L2 기능의 실험적 상실은 글루코스 자극 인슐린 분비를 손상시키고, 이것은 Wnt 신호전달 경로의 교란이 T2D에 대한 감수성, 및 발병에 실질적으로 기여할 수 있음을 시사한다. 흥미롭게도, 니코틴이 부분적으로 Wnt/β-카테닌 경로의 활성화를 통해 고글루코스 하에서 신장 세포 증식 및 피브로넥틴 생성을 향상시키는 것으로 나타났다. 증가된 Wnt/CBP/β-카테닌 신호전달은 초기에 췌장 β 세포 팽창을 유도할 수 있다; 그러나, 연속적인 Wnt 구동 유사분열성 신호전달은 궁극적으로 분화 능력 및 기능성의 상실로 이어질 수 있다.
최근에, 연구자들은 사체 유래 온전한 인간 샘을 WNT3A, R-스폰딘 3 및 노긴(Noggin)을 구성적으로 생성하는 L 세포로부터의 조건화된 배지로 처리하였고, 거기에 세포 생존을 증대시키기 위하여 RHO 관련 단백질 키나제(ROCK) 및 RHOA의 억제제를 첨가하였다. 이것은 글루코스 단독과 비교하여 β 세포 증식에서 대략 20배의 증가를 유도하였다. 중요하게도, 이 조건화된 배지로의 처리는 글루코스 자극된 인슐린 분비를 손상시키거나 세포의 인슐린 함량을 감소시키지 않았다. 전사체 전반의 유전자 발현 프로파일링 및 후속 신호전달 연구에서, 연구자들은 조건화된 배지 처리가 구체적으로 WNT 신호전달을 촉진한 것을 보였다.
신경 질환. 중추신경계의 배아 발생 중에 WNT 신호전달의 중요성은 잘 확립되어 있다. WNT 경로는 또한 신경계 패턴화 및 뉴런 가소성의 조절을 조절한다. WNT는 또한 시냅스 형성에 영향을 주는 것뿐만 아니라 축삭 안내에서도 역할을 한다. 그러므로, WNT 신호전달의 일탈이 성인기의 신경 질환에서 관찰된 것은 놀라운 일이 아니다. 예를 들어, 정신분열증, 우울 및 양극성 장애의 발생률이 높은 스코틀랜드 가족은 유전자 DISC1(정신분열증 1에서 파괴됨)을 포함하는 균형잡힌 염색체 전위를 수행하는 것으로 밝혀졌다. 계속해서, DISC1의 단백질 생성물은 신경 발달 및 신경 전구물질 증식에서 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. DISC1은 GSK3β 활성과 직접 상호작용하여 억제함으로써, β-카테닌 매개 전사를 향상시킨다.
신경해부학적 관찰 및 기능적 자기 공명 영상(MRI)은 자폐성 개인에서 주요 병리학적 특징이 대뇌 피질, 해마, 편도 및 소뇌의 조기 과성장일 수 있음을 나타냈다. 흥미롭게도, 신경 전구 세포에서 β-카테닌의 구성적으로 활성인 형태를 발현하는 형질도입 마우스는 크게 확대된 대뇌 피질, 해마 및 편도체를 나타냈다. 중요하게, 규정된 WNT 신호전달 경로에 관여하는 유전자(예를 들어, 프리즐 9(FZD9), B 세포 림프종 9(BCL9) 또는 캐드헤린 8(CDH8))의 미세결실 및 미세중복 복사물 수 변이가 자폐성 스펙트럼 장애를 가진 환자에게서 발견된다. WNT2, DISC1, MET, 세포질분열 단백질 4(DOCK4) 전용자 또는 Abelson 헬퍼 통합 부위 1(AHI1; 주베린(jouberin)으로도 알려짐)을 조사하는 협회 연구는 규정된 WNT 경로가 자폐증에 영향을 미칠 수 있다는 추가 증거를 제공하였다.
WNT 신호전달 캐스케이드는 또한 알츠하이머병에 연루되어 있다. 조기 발병 알츠하이머병과 관련된 프레세닐린(Presenilin) 단백질은 규정된 WNT 신호전달의 음성 조절자이다. WNT 수용체 LRP6(저밀도 리포단백질 수용체 관련 단백질 6)의 변이 대립유전자는 집단 기반 계통 분석에서 알츠하이머병과 연관이 있었다. 이것은 성인 신경발생의 비정상적인 WNT 매개 조절로 이어지는 다중 메커니즘이 알츠하이머병과 관련이 있을 수 있음을 시사한다. 알츠하이머병의 기저 원인(또는 원인들)이 분명하게 해명되지 않았기 때문에, 비정상적인 WNT 조절이 알츠하이머병에서 역할을 할 수 있을 것이라는 메커니즘 또한 알려진 것이 없다. WNT 신호전달은 뇌 혈관형성 및 혈액-뇌 장벽 형성에, 시냅스 형성에, 아밀로이드-β 유도 신경염증 및 신경독성에뿐만 아니라, 신경 퇴행에 관여한다. 임의의 또는 모든 이들 과정의 비정상적인 조절은 질환 개시 및 진행에 기여할 수 있을 것이다.
피부. WNT 신호전달 캐스케이드는 또한 피부 발달 및 유지에 연루되어 있다(예컨대, STEM CELLS 2018;36:22-35 참고). 분비된 Wnt 단백질은 댜중 세포내 신호전달 경로를 자극할 수 있고 세포 증식, 분화, 이동, 및 극성을 포함하여 다양한 과정을 조절하는 성장 인자로서 작용할 수 있다. Wnt 자극된 경로 중에서, Wnt/β-카테닌 신호전달이 조직 형태 형성 중에 발달 과정 및 운명 선택을 관장하는 중요한 조절 경로로서 알려져 있다. Wnt 신호전달은 피부 발달 및 유지를 지시하는 주요 단서 중 하나이다. 비록 Wnt 신호전달이 피부 발달 중에 주로 HF(모낭) 유도에 연루되었지만, 최근에 표피 층화(epidermal stratification)를 조절하는 것으로 밝혀졌다. 일차 인간 각질 형성 세포에서, Wnt5a는 Wnt/β-카테닌 경로와 커플링됨으로써 세포외 칼슘 유도 각질 형성세포 분화를 촉진하기 위한 자가분비 자극으로서 작용한다. 일생 동안 피부 표피는 정기적으로 재생된다. 자체 재생 및 분화를 할 수 있는 피부 표피 SC는 조직 항상성을 유지할뿐만 아니라, HF를 재생하고 손상 후 표피를 수복하기 위해 제한되지 않은 원천을 제공한다. Wnt 신호전달은 이들 과정에 중요하며 Wnt 의존성 신호전달은 SC 집단의 유지, 활성화, 및 운명 결정에 중요한 역할을 한다.
백신(예컨대, SARS-CoV-2(COVID-19), 인플루엔자, 등) 향상
연령. 나이를 먹어감에 따라, 면역 체계는 활기의 일부를 잃는데(면역노화(immunosenescence), 더 적은 수의 나이브 T 세포, 및 B 세포에 의해 반영됨), 이것은 COVID-19에 대한 더 높은 취약성 및 보다 일반적으로는 고령 대상체 그룹(예컨대, 인간의 경우 60세 이상 또는 65세 이상)에서의 감염에 기여하는 것으로 여겨진다. 추가적으로, 백신은 종종 만성 염증(면역 활성 부위로부터 죽은 세포 및 죽어가는 세포의 제거의 손상, 및 C 반응성 단백질(CRP) 및 사이토카인, 예컨대, 인터류킨-6(IL-6), 및 IL-8의 높은 기준성 혈청 농도를 특징으로 하는 염증)을 겪은 그러한 고령 대상체 그룹에서 불량하게 수행될 수 있고, 이 인자들은 항원 특이적(예컨대, 항-바이러스) 면역, 예컨대 인플루엔자 바이러스를 억제할 수 있다(Willyard, C., Nature Vol. 586, 2020; Akbar & Gilroy, Science 369 (6501), 256-257, 2020, DOI: 10.1126/science.abb0762; A. Parmigiani et al., PLOS ONE 8, e79816 (2013)).
고령자(55 내지 75세)를 우선으로 하는 현재의 인플루엔자 백신접종 전략은 이 집단에서 심각한 이환율 및 사망률을 감소시킬 것으로 여겨지는 것보다 덜 효과적인 것으로 나타났고, 이것은 본질적으로 면역 기억 및 소환에 좌우되는 백신접종의 유효성을 부스팅하기 위한 보충 전략이 필요할 것임을 시사한다(Anderson et al., Ann Intern Med. 2020;172:445-452. doi:10.7326/M19-3075).
마찬가지로, SARS-CoV-2는 젊은 개체에서는 대부분 경미 내지 보통 정도의 증상을 유도하지만 고령 개체에서는 치명적인 이환율 및 사망률을 유도하는 중증의 호흡기 질환(코로나바이러스 질환 2019, COVID-19)을 유발한다. 중증 질환의 핵심 특징은 환자의 기도의 과도한 염증이다(Merad & Martin, Nat. Rev. Immunol. 20, 355, 2020).
기억 T 세포. 노화 면역 체계의 특징은 장기 기억을 유도하진 못하는 것이다(Kim, Chulwoo, et al., Cell Reports 25, 2148-2162, November 20, 2018). 더욱이, 비대칭 세포 분할(ACD) 비율을 실행하는 것은 T 세포의 장기 생존 및 기능을 개선할 수 있고 백신접종에 대한 새로운 관점을 열어준다(Borsa, et al., Sci. Immunol. 4, eaav1730(2019). 비대칭 세포 분할은 항원 제공 세포의 맥락에서 항원 인식에 의해 활성화된 공통 전구체로부터의 기억 T 세포의 생성과 이펙터 세포 사이의 양분화의 원인인 것으로 입증되었다(Morrot, Alexandre, Ann Transl Med 2017;5(5):121; citing Verbist KC, Guy CS, Milasta S, et al. Metabolic maintenance of cell asymmetry following division in activated T lymphocytes(Nature 2016;532:389-93)). 더욱이, 기억 T 세포는 병원체 재도전을 직면했을 때 세포 이질성을 생성하기 위하여 비대칭 세포 분할을 사용하는 것으로 여겨진다(Ciocca, Maria, L. et al., The Journal of Immunology, 2012, 188: 4145-4148).
현재 백신 향상을 위해 제안된 접근법은 고령 집단 그룹에서 백신 반응을 개선시켜줄(예컨대, 면역 체계를 젊게 해줄) 백신 보조제, 더 높은 용량의 바이러스 항원, 또는 약물의 확인의 사용을 포함할 수 있다. 예를 들어, mTOR 억제제(Mannick, J. B. et al. Sci. Transl. Med. 10, 449, eaaq1564, 2020)(예컨대, RTB101, 라파마이신, 메트포르민)가 제안되었다. 항-염증 약물(예컨대, 로즈마피모드(losmapimod), 덱사메타손), 및 세놀리틱스(senolytics)(예컨대, 피세틴(fisetin))이 또한 면역 부스팅을 위해 제안되었다.
그러나, 아직도, 예를 들어, 예컨대: 대상체에서 활성화된 T 세포의 분할 후 세포 비대칭의 대사성 유지에 의해; 및/또는 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성을 증가시킴으로써 항원 특이적 면역을 향상시킴으로써; 및/또는 선천성 및 후천성 면역 체계 사이의 협력을 향상시키기 위하여 항원 제공 세포에 의해 T 세포에 대한 항원의 제공을 향상시킴으로써, 특히 고령(예컨대, 55-75세; ≥60세; ≥65세) 대상체에서 백신(예컨대, 인플루엔자, SARS, SARS-CoV-2, HPV, HEP-A, HEP-B, 헤르페스 조스터, 등에 대한 항-바이러스 백신) 반응을 향상시키기 위한 보다 효과적인 조성물 및 방법에 대한 시급한 필요성이 있다.
CBP/카테닌 억제제. ART 억제된 SIVmac251 감염 RM의 PRI-724(특이적 CBP/β-카테닌 억제제) 치료는 T 기억 줄기 세포(SCM) 및 중추 기억 T 세포(CM) T 세포의 증식을 감소시키고 SCM 및 CM CD4+ T 세포 전사체를 보다 분화된 기억 T 세포의 프로파일로 변형시키는 것으로 나타났고, 이것은 장기 기억 CD4+ T 세포의 줄기 세포 경로가 생체내에서 약물학적으로 조절될 수 있고, 그로써 HIV 지속성을 표적으로 하는 신규한 전략을 확립할 수 있음을 입증한다(Mavigner, M. et al., J. Virol. doi:10.1128/JVI.01094-19).
본 발명의 특정 측면에 따르면, "백신접종" 시기에 근본적인 노화 메커니즘을 표적으로 하는 안전하고 효과적인 치료(예컨대, 예방적 및/또는 치료적) 방법에 대한 필요성이 있다.
본 발명의 특정 측면에 따르면, 개시된 CBP/카테닌 억제제는, 특히 고령(예컨대, 55-75세; ≥60세; ≥65세) 개체에서, 예컨대, 대상체에서 활성화된 T 세포의 분할 후 세포 비대칭의 대사성 유지에 의해; 및/또는 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성을 증가시킴으로써 항원 특이적 면역을 향상시킴으로써; 및/또는 선천성 및 후천성 면역 체계 사이의 협력을 향상시키기 위하여 항원 제공 세포에 의해 T 세포에 대한 항원의 제공을 향상시킴으로써 백신접종(예컨대, 인플루엔자, SARS, SARS-CoV-2, HPV-A, HPV-B, 헤르페스 조스터 등에 대한 항-바이러스 백신)을 향상시키기 위한 실질적인 유용성을 가진다. 추가의 측면에 따르면, 화합물은 백신접종 전 프라이머로서의 투여, 및/또는 백신접종과의 공동 투여, 및/또는 초기 백신접종에 후속한 투여 또는 공동 투여(예컨대, 백신 부스터와 함께)를 포함하여, 예방적으로 및/또는 치료적으로 투여될 수 있다.
추가의 측면에 따르면, 화합물은 포유류(예컨대, 인간) 대상체에서 임의의 백신으로의 백신접종을 향상시키기 위해 사용될 수 있다.
SARS-CoV-2(COVID-19) 조직(폐, 간, 신장, 심장, 등) 파괴(예컨대, 폐 섬유증, ARDS)
위에서 논의된 것과 같이, 염증은 COVID-19 환자에 대해 많은 영향을 나타낸다(예컨대, Akbar & Gilroy, 상기에서 논의됨). 고령 환자의 기도에서 노화 세포의 축적이 존재하는 바이러스로 감염된 세포에 대한 T 세포 반응을 억제할 수 있을 염증 캐스케이드의 개시에 관여할 수 있는 한편, 높은 양의 염증 단독으로는 중증의 질환을 가진 COVID-19 환자의 폐에서 관찰되는 치명적인 조직 파괴를 설명하지 못하며, 그것은 T 세포의 연령 관련 변화가 면역병리에서 역할을 하는 것일 수 있다. 고도로 분화되고 노화 유사 특징을 나타내는 T 림프구는 고령 개체에서 축적된다. 이들 노화된 T 세포는 활성화 후에 증식하는 능력을 상실하고 DNA 손상 관련 단백질 [예컨대, 인산화된 히스톤 H2AX(gH2AX)] 및 사이클린 의존성 키나제 억제제(예컨대, p16INK4A)를 포함하여 노화의 다중 마커를 발현하지만, 그럼에도 불구하고 그것들은 고도로 효율적인 세포독성 세포이며, NKR을 발현하고, 노화된 비-림프성 세포를 포함하여, NKR 리간드를 발현하는 상이한 세포 유형을 사멸시킬 수 있다. 염증의 또 다른 결과는 NKR을 발현하는 T 세포를 침윤함으로써 사멸하기 쉽게 만들 폐의 세포에 의한 NKR 리간드 발현의 유도이다(Id).
폐 섬유증. 거의 모든 COVID-19 관련 심각한 결과는 폐렴을 특징으로 하며, 많은 경우 간 유리 음영(ground glass opacities) 등을 가지고, 많은 경우(약 40%) 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)으로 전개된다. 폐를 포함하여 일부 장기가 감염, 염증 및 분해 결핍 후 장기간 손상을 가질 것이라는 문제가 있다(예컨대, ARDS의 알려진 후유증인 폐 섬유증). 기계적 환기가 COVID-19 환자를 포함하여 ARDS를 가진 환자에게 가장 중요한 지지 요법이지만, 인공호흡기 유도 폐 손상(VILI)으로 언급되는 폐 손상을 유도하거나 악화시킬 수 있다(Slutsky and Ranieri NEJM 2013). 비록 COVID-19로부터 회복된 환자에서 바이러스가 근절되긴 하지만, 폐 손상의 원인의 제거는, 그 자체로는, 진행성, 섬유성 비가역적 간질성 폐 질환의 발병을 배제하지 못한다. 나아가, 상대적으로 작은 정도의 잔류하지만 비진행성인 섬유증이 COVID-19에 걸렸던 환자의 고령 집단에서 상당한 이환율 및 사망률을 초래할 수 있으며, 그 중 많은 사람이 기존의 폐 상태를 가지고 있을 것이다(Bem, Reinout A.; https://doi.org/10.1016/S2213-2600(20)30222-8). SARS-CoV-2 감염이 가장 치명적인 그룹의 설명은 또한 특발성 폐 섬유증(IPF)으로 고생하는 환자를 크게 대표한다. 이용 가능하거나 개발 중인 항-섬유증 요법은 IPF를 가진 환자에서 중증의 COVID-19를 예방하는데 가치가 있을 수 있고, IPF가 없는 환자에서 중증의 COVID-19를 치료할 잠재력을 가질 수 있으며, SARS-CoV-2 감염 후 섬유증을 예방하는데 역할을 할 것이다(George et al, Lancet August 2020).
급성 폐 손상 및 ARDS는 COVID-19의 사망률의 주요 원인이다. 종래의 치료법이 피르페니돈(pirfenidone) 및 닌테다닙(nintedanib)과 같은 작용제로 가능할 수 있지만, 피르페니돈 및 닌테다닙은 현재 경구 형태로만 상업적으로 이용 가능하고 따라서 삽관되고 기계적으로 환기되는 환자에게서는 사용될 수 없음으로써, 중환자실(ICU)에 있는 중증 COVID-19를 가진 개인에게서는 사용에 제한이 있다. 추가로, 피르페니돈은 만약 환자가 1.73 m2당 30 mL/분 미만의 추정된 사구체 여과율을 가진다면 피해야 한다. 더욱이, 피르페니돈 및 닌테다닙은 둘 다 간독성과 관련이 있을 수 있고, 간 기능장애는 SARS-CoV-2로 감염된 환자에서는 흔한 일이다. 추가의 불확실성은 항섬유화제가 작용하는 신속성(속도)과 관련이 있으며, 효과적인 치료의 기회가 이미 지나가버린(Id) 인공호흡기를 사용하는 환자에서 알려진 작용제는 거의 가치가 없을 수 있다.
본 발명의 특정 측면에 따르면, SARS-CoV-2(COVID-19) 폐 조직 파괴(예컨대, 폐 섬유증, ARDS)을 치료하는(예컨대, 예방적 및/또는 치료적) 안전하고 효과적인 방법에 대한 필요성이 있다.
"본 발명의 치료적 용도 및 제약학적 조성물" 하에 위에서 요약한 것과 같이, 섬유증의 치료 측면에 대한 CBP/β-카테닌 억제제의 유용성이 인정되었다.
그러므로, 본 발명의 특정 측면에 따르면, 개시된 CBP/카테닌 억제제는 특히 고령(예컨대, 55-75세; ≥60세; ≥65세) 개체에서, 또는 급성 질병 상태 및 장기간 합병증을 방지하는 것을 모두 포함하여, SARS-CoV-2(COVID-19) 조직(예컨대, 폐, 간, 등) 파괴(예컨대, 폐 섬유증, ARDS)을 치료하는데, 실질적인 유용성을 가진다. 추가의 측면에 따르면, 화합물은 예방적으로 및/또는 치료적으로 투여될 수 있고, 어느 경우든 바람직하게는 ARDS 발병의 처음 1-3주 전에 또는 내에 개시되고, 바람직하게는 첫 번째 주 이전에 또는 내에 개시된다.
투여:
본 발명의 제약학적 조성물은 그것의 의도된 투여 경로와 부합하도록 제형화된다. 투여 경로의 예로는 비경구, 예컨대, 경구(예컨대, 캡슐 또는 정제로), 정맥내, 피내, 피하, 흡입, 경피(국소적), 경점막, 및 직장 투여를 들 수 있다. 비경구(특히, 정맥내), 피내, 또는 피하 적용에 사용된 용액 또는 현탁액(예컨대, 주사)은 다음 구성요소를 포함할 수 있다: 주사용 물, 식염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매와 같은 멸균 희석제; 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤과 같은 항박테리아제; 아스코르브산 또는 아황산 나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌다이아민테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충제 및 염화 나트륨 또는 덱스트로스와 같은 긴장성 조정제. 더불어, pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화 나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰풀, 일회용 주사기 또는 다중 용량 바이알에 넣어질 수 있다.
주사 용도에 적합한 제약학적 조성물은 멸균 수성 용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균된 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여에 대해, 적합한 담체로는 생리 식염수, 정균수, Cremophor ELTM(BASF, Parsippany, NJ) 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS)를 들 수 있다. 모든 경우에, 조성물은 멸균되어야 하고 쉬운 주사 가능성이 존재할 정도로 유동적이어야 한다. 그것은 제조 및 보관 조건 하에서 안정적이어야 하고 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜, 등), 및 그것의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅을 사용함으로써, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살, 등에 의해 이루어질 수 있다. 많은 경우에, 등장성 작용제, 예를 들어, 당, 만니톨과 같은 폴리알코올, 소르비톨, 염화 나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 가져올 수 있다.
멸균된 주사 가능한 용액은 필요한 양의 활성 화합물, 예컨대, 일반식 (Ia)을 가지는 화합물을, 필요에 따라 위에서 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 혼입한 후, 멸균 여과함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 분산 배지 및 위에서 열거된 것들로부터 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균된 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균된 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균된 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분과 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 냉동 건조이다.
경구용 조성물은 일반적으로 비활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 그것은 젤라틴 캡슐에 넣어지거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료 투여의 목적의 경우, 활성 화합물은 부형제와 혼입되어 정제, 트로키, 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 경구용 조성물은 또한 구강 세척제로서 사용하기 위한 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있으며, 유체 담체 중의 화합물은 구강에 적용되고 헹구고 뱉어내거나 삼켜진다. 제약학적으로 부합되는 결합제, 및/또는 보조 물질은 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 등은 다음 성분 중 어느 것, 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 미정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토스와 같은 부형제, 알긴산, 프리모겔, 또는 옥수수 전분과 같은 붕해제; 스테아르산 마그네슘 또는 스테로테스와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 유동화제; 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지 풍미와 같은 향료 I.
흡입에 의한 투여의 경우, 화합물은 적합한 추진제, 예컨대 이산화탄소와 같은 가스를 함유한 가압 용기 또는 디스펜서, 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 전달된다.
전신성 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의해 이루어질 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우, 투과될 장벽에 적절한 침투제가 제형에 사용된다. 그러한 침투제는 일반적으로 기술분야에 알려져 있고, 예를 들어, 경점막 투여의 경우, 계면활성제, 담즙 염, 및 푸시딘산 유도체를 들 수 있다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌제의 사용을 통해 이루어질 수 있다. 경피 투여의 경우, 활성 화합물은 기술분야에 일반적으로 알려져 있는 연고, 고약, 젤, 또는 크림으로 제형화된다.
화합물은 또한 직장 전달을 위한 좌제(예컨대, 코코아 버터 및 다른 글리세라이드와 같은 종래의 좌제 베이스와 함께) 또는 보유 관장의 형태로 제조될 수 있다.
특정 구현예에서, 활성 화합물은 임플란트 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하여, 제어 방출 제형과 같이, 신체로부터의 신속한 제거에 반해 화합물을 보호할 담체와 함께 제조된다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 다가무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 그러한 제형의 제조 방법은 기술분야의 숙련자들에게 분명하다. 물질은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 얻을 수 있다. 리포솜성 현탁액이 또한 제약학적으로 허용되는 담체로서 사용될 수 있다.
경구용 또는 비경구 조성물을 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 유리할 수 있다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료될 대상체를 위해 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 나타내며; 각각의 단위는 필요한 제약학적 담체와 함께 원하는 치료 효과를 유발하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 발명의 투여 단위 형태에 대한 사양은 활성 화합물의 독특한 특징 및 달성하고자 하는 특정 치료 효과, 및 개인의 치료를 위해 그러한 활성 화합물을 합성하는 기술분야에 고유한 제한사항에 의해 명시되고 직접적으로 그것에 의존한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 약 1 mg 내지 약 10 g의 본 발명의 화합물을 함유하는 정제 또는 캡슐의 단위 투여 형태로 경구 투여하기에 적합한 것이다. 일부 다른 구현예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 주사에 적합한 것이다. 환자는 예를 들어 약 1 μg/kg 내지 약 1 g/lkg의 본 발명의 화합물의 정맥내, 피하 또는 근육내 용량을 받을 수 있다. 정맥내, 피하 또는 근육내 용량은 볼루스 주사에 의해 또는 일정 기간에 걸친 연속적 주입에 의해 제공될 수 있다. 대안으로 환자는 일일 비경구 용량과 거의 동등한 일일 경구 용량을 받을 것이며, 조성물은 1일당 1 내지 4회 투여된다.
화합물은 정맥내로(예컨대, 연속적인 점적 주입 또는 신속한 정맥내 투여에 의해) 인간을 포함한 포유류에게 투여될 수 있다. 그러한 경우에, 용량은 환자의 체중 및/또는 연령, 및/또는 증상의 정도 및 투여 경로와 같은 다양한 요인에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 투여를 위한 화합물의 용량은 일반적으로 연속적인 점적 주입 투여에 의해 1 내지 10000 mg/일/m2 인체 표면적의 범위, 바람직하게는 1 내지 5000 mg/일/m2　인체 표면적의 범위,　보다 바람직하게는 10　내지 5000 mg/일/m2　인체 표면적의 범위이다.
이들 치료제는 용량 사이 시간(예컨대 6시간마다), 용량이 투여되어야 할 시간(예컨대, 매일 오전 8시 및 오후 4시) 및 특정 시간에 제공될 치료제의 양(예컨대 캡슐의 수)을 포함하여, 1일 1회 투여 빈도(24시간 주기당 1회 이상)에 따라 투여될 수 있다.
작업예:
본 발명의 예시의 화합물의 제조의 예가 아래의 대표적인 실시예 및 도식으로 제시되며, 화합물의 구체적인 비제한적안 작업예는 본 발명의 특정한 예시의 구현예를 예시하기 위해 의도되고, 어떠한 방식으로든 명세서 또는 청구범위의 범주를 제한하려고 의도된 것이 아니다. 본 발명의 화합물은 아래의 비제한적인 실시예 및 도식에 제시된 합성 순서에 의해 제조될 수 있다. 숙련된 전문가는 다른 합성 경로 역시 사용될 수 있음을 인정할 것이다. 특히, 다른 합성 경로가 실제로 본 발명의 특정 측면에 적용될 수 있다. 숙련된 전문가는 일반적인 교과서, 예컨대 March's Advanced Organic Chemistry(Michael B. Smith & Jerry March, Wiley- Interscience, 2000), The Practice of Medicinal Chemistry(Camile G. Wermuth, Academia Press, 2003) 및 Protective Groups in Organic Synthesis(Theosora W. Greene & Peter G.M. Wuts; John Wiley & Sons Inc, 1999)를 참조하며, 모든 참고문헌은 각각의 교시에 대해 본원에 참조로 포함된다.
실시예 1
사용된 시약, 합성 방법, 및 생물학적 특성화 검정
다르게 언급되지 않는 한, 모든 시약, 출발 물질 및 용매는 상업적 공급처로부터 얻었고 추가의 정제 없이 사용하였다. 농축 또는 증발은 진공 하에서 Buchi 회전 증발기를 사용한 증발, 및/또는 이어서 고진공 하에 건조될 때까지의 증발을 나타낸다. 반응 생성물을 표시된 용매 시스템을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의해, 또는 용리액으로서 용매 A(물 중의 0.1% TFA) 및 용매 B(CH3CN 중의 0.1% TFA)를 포함한 C18 역상 반-분취 HPLC 칼럼을 사용하는 HPLC 정제에 의해 정제하였다. 모든 최종 생성물은 210 nm 및/또는 254 nm에서의 UV 검출을 포함한 분석용 HPLC 분석에 의해 측정되는 바 적어도 95% 순도를 가진다. 보고된 수율은 분리된 수율이다.
분석용 HPLC 분석을 Phenomenex Luna C18(2) 칼럼(3 마이크론, 150 x 4.6 mm id)을 포함한 Agilent 1100 HPLC 상에서 0.6 mL/분의 유량으로 수행하여, 120 내지 140 바(bar) 범위의 초기 작동 압력으로, 20분 동안 10% - 90% B 다음에 5분 동안 90% - 95% B의 구배 용출(구배 용출 1), 또는 25분 동안 70% - 95% B 다음에 3분 동안 95% - 100% B의 구배 용출(구배 용출 2)(A: 0.1% TFA를 포함한 Milli-Q 물; B: 0.1% TFA를 포함한 CH3CN)을 사용하는 2원 용매 시스템 A 및 B로 용출하였다. NMR 스펙트럼을 내부 표준으로서 TMS와 함께 DMSO-d6 또는 CDCl3을 사용하여 Bruker AV-300 or AV-301 300 MHz NMR 기기 상에 기록하였다. 질량 스펙트럼 데이터를 Bruker Esquire 액체 크로마토그래피-이온 트랩 질량 분석기를 사용하여 얻었다.
다음의 약어를 합성 예에서 사용한다: aq(수성), h(시간), min(분), sat'd(포화된), THF(테트라하이드로퓨란), rt(실온), Et3N(트라이에틸아민), NaCl(염화 나트륨), MgSO4(황산 마그네슘), CDCl3(중수소 클로로포름), H2O(물), HCl(염산), MeOH(메탄올), NaOH(수산화 나트륨), TFA(트라이플루오로아세트산), Na2CO3(탄산 나트륨), CH2Cl2(염화 메틸렌), EtOAC(에틸 아세테이트), DMF(다이메틸포름아미드), EtOH(에탄올), DMSO(다이메틸 설폭사이드), DMSO-d6(다이메틸 설폭사이드-d6), NaHCO3(중탄산 나트륨), HPLC(고성능 액체 크로마토그래피), ESI-MS 또는 MS(ESI)(전기분무 이온화-질량분석법), NMR(핵자기공명), DIEA(다이아이소프로필에틸아민), 염수(포화된 수성 NaCl 용액), NH4Cl(염화 암모늄), Boc2O(다이-tert-부틸 다이카보네이트), HATU(1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트), NaI(요오드화 나트륨), KI(요오드화 칼륨), Pd(OAc)2(팔라듐(II) 아세테이트), BINAP(2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-비나프틸), DIEA 또는 DIPEA(N,N-다이아이소프로필에틸아민), DCC(다이사이클로헥실카보다이이미드), NCS(N-클로로석신이미드), PPTS(피리디늄 p-톨루엔설포네이트), 및 기타 유사한 표준 약어가 본원에서 사용된다.
발명의 예시의 화합물의 생물학적 특성화를 적어도 다음의 검정으로 수행하였다:
SuperTOPFLASH 세포 기반 루시페라제 검정. Hek-293,STF1.1 세포를 200 μg/mL G418이 보충된 DMEM, 10%FBS, Pen-Strep에서 유지시킨다. 검정 전날에, 세포를 백색, 불투명한 96-웰 플레이트에 G418(Wnt-신호전달 억제제의 스크리닝을 위한 것으로, G418은 스크리닝 과정 중에 남겨질 수 있음)이 없는 50 μL의 완전 배지에서 웰당 10,000개 세포로 나눈다. 세포가 안정화되고 부착되도록 밤새 놓아둔 후, 최종 농도의 2.5배의 화합물 또는 DMSO 대조군을 함유한 40 μL의 완전 배지(G418 없음)를 세포에 첨가하고 1시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 후, 완전 배지(G418 없음)에서 제조된 10 μL의 100 mM LiCl 용액을 첨가한다. 24시간 후, 100 μL의 BrightGlo(Promega, Cat. #: G7573)를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 5분 동안 흔들어준 후 Perkin-Elmer EnVision 플레이트 판독기 상에서 판독한다. 예를 들어, 검정 전날에: 세포를 백색의 불투명한 96-웰 플레이트에 50 μL의 완전 성장 배지에서 웰당 10,000개 세포로 나누고; 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하고 세포가 부착되도록 허용하고; 다음날 테스트할 억제제를 완전 성장 배지에서 원하는 최종 농도의 2.5배로 제조하고(모든 조건은 이중으로 수행함), 2.5배 농도의 화합물을 함유한 40 μL의 배지를 각 웰에 첨가하고(자극 대조군에 대해 2개의 웰, DMSO 대조군에 대해 2개의 웰, 및 양성 대조군 ICG-001(예컨대, 2, 5, 및 10 마이크로몰)에 대한 웰을 포함함); 모든 억제제 및 대조군을 첨가한 후, 플레이트를 1시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고(플레이트를 인큐베이션하면서, 완전 성장 배지에서 신선한 100 mM LiCl을 제조함); 1시간 후, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고 100 mM LiCl을 함유한 10 μL의 배지를 각 웰에 첨가하고(비자극 대조군의 2개 웰은 제외함, 그것에는 50 마이크로리터의 완전 배지만을 첨가함); 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고; 24시간 후, 100 마이크로리터의 BrightGlo(Promega, Cat. #: G7573)를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 흔들어서 완전한 용해를 확실하게 한 후, 플레이트를 Perkin-Elmer EnVision 96-웰 플레이트 판독기 상에서 판독한다.
안정적으로 형질주입된 세포주, 1 Kb Hu-서바이빈\luc-Hek293에서 인간 서바이빈 1 Kb-프로모터 구동 루시페라제 활성의 검정. 간단히 설명하면, 1 Kb Hu-서바이빈\luc-Hek293 세포를 1 μg/mL 퓨로마이신이 보충된 DMEM, 10%FBS, Pen-Strep에서 유지시킨다. 검정 전날에, 세포를 백색, 불투명한 96-웰 플레이트에 퓨로마이신(CBP/β-카테닌 상호작용 억제제의 스크리닝을 위한 것으로, 퓨로마이신은 스크리닝 과정 중에 남겨질 수 있음)이 없는 50 μL의 완전 배지에서 웰당 10,000개 세포로 나눈다. 세포가 안정화되고 부착되도록 밤새 놓아둔 후, 최종 농도의 2배의 화합물 또는 DMSO 대조군을 함유한 50 μL의 완전 배지(G418 없음)를 세포에 첨가한다. 24시간 후, 100 μL의 BrightGlo(Promega, Cat. #: G7573)를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 5분 동안 흔들어준 후 Perkin-Elmer EnVision 플레이트 판독기 상에서 판독한다. 예를 들어, 검정 전날에, 세포를 백색의 불투명한 96-웰 플레이트에 50 μL의 완전 성장 배지에서 웰당 10,000개 세포로 나누고; 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하고 세포가 부착되도록 허용하고; 다음날 테스트할 억제제를 완전 성장 배지에서 원하는 최종 농도의 2배로 제조하고(모든 조건은 이중으로 수행함), 2배 농도의 화합물을 함유한 50 μL의 배지를 각 웰에 첨가하고(자극 대조군에 대해 2개의 웰, DMSO 대조군에 대해 2개의 웰, 및 양성 대조군 ICG-001(예컨대, 2, 5, 10, 및 20 μM)에 대한 웰을 포함함); 그런 후 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고; 24시간 후, 100 μL의 BrightGlo(Promega, Cat. #: G7573)를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 흔들어서 완전한 용해를 확실하게 하고, Perkin-Elmer EnVision 96-웰 플레이트 판독기 상에서 판독한다.
실시예 2
(S)-2-아미노-3-(4-tert-부톡시페닐)-N-(2,2-다이에톡시에틸)-N-(퀴놀린-5-일메틸)프로판아미드(1)의 합성
화합물 1을 담황색 오일로서 도식 1에서 나타낸 것과 같이, US 7,671,054에서 개시된 과정에 따라, 퀴놀린-5-카르복스알데하이드로부터 출발하여 제조하였다. MS(ESI): m/z 494.2(M+H)+.
도식 1:
Figure pct00065
Figure pct00066
실시예 3
(S)-2-아미노-3-(4-tert-부톡시페닐)-N-(2,2-다이에톡시에틸)-N-(나프탈렌-1-일메틸)프로판아미드(2)의 합성
화합물 2를 무색 오일로서 도식 2에서 나타낸 것과 같이, US 7,671,054에서 개시된 과정에 따라, 1-나프탈알데하이드로부터 출발하여 제조하였다. MS(ESI): m/z 493.3(M+H)+.
도식 2:
Figure pct00067
실시예 4
tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)하이드라지닐)아세테이트(3)의 합성
화합물 3을 아래의 도식 3의 단계 1-3에 제시된 과정에 따라 제조하였다.
도식 3:
Figure pct00068
단계 1: tert-부틸 2-(벤질카바모일)하이드라진카르복실레이트
0℃의 건조 CH2Cl2(50 mL) 중의 tert-부틸 하이드라진카르복실레이트(2.5 g, 19 mmol)의 용액에 DIEA를 첨가하고, 이어서 벤질 이소시아네이트(2.35 mL, 19 mmol)를 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 밤새 교반한 후, CH2Cl2(150 mL) 및 10% KHSO4(100 mL)에 넣었다. 유기 층을 포화 NaHCO3(100 mL), 포화 NaCl(100 mL)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4) 건조하게 증발시켰다. 백색 고체로서 얻은 표제 화합물(5.4 g)을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 8.54(br s, 1H), 7.70(s, 1H), 7.26(m, 5H), 6.81(br s, 1H), 4.22(d, J = 6 Hz, 2H), 1.40(s, 9H).
단계 2: N-벤질하이드라진카르복사미드
tert-부틸 2-(벤질카바모일)하이드라진카르복실레이트(5.4 g)를 CH2Cl2(50 mL) 및 TFA(50 mL)에서 실온에서 아르곤 하에 3시간 동안 처리하였다. 건조하게 증발 및 CHCl3로의 공증발을 2회 수행하여 표제 화합물(TFA 염; 5.6 g)을 담황색 고체로서 얻었고, 그것을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 7.24(m, 5H), 7.03(br s, 1H), 6.82(br s, 1H), 4.24(m, 4H).
단계 3: tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)하이드라지닐)아세테이트
건조 CH3CN(38 mL) 중의 N-벤질하이드라진카르복사미드(5.6 g)의 현탁액에 NaHCO3(4.8 g, 57 mmol), tert-부틸 2-브로모아세테이트(4.2 mL, 28.5 mmol) 및 NaI(0.28 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 아르곤 하에서 24시간 동안 교반한 후, EtOAc(100 mL)에 넣었다. 불용성 물질을 여과하였다. 여과물을 물(100 mL)로 세척하였다. 수성 층을 추가로 EtOAc로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. EtOAc/CH2Cl2(25% 및 50%)를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 표제 화합물(2.3 g)을 백색 고체로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.30(m, 5H), 6.38(br s, 1H), 6.29(s, 1H), 4.43(d, J = 6 Hz, 2H), 4.11(t, J = 6 Hz, 1H), 3.42(d, J = 9 Hz, 2H), 1.47(s, 9H).
실시예 5
(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-(프로프-2-이닐)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(4)의 합성
화합물 4를 아래의 도식 4의 단계 1-4에 제시된 과정을 따라 제조하였다.
도식 4:
Figure pct00069
Figure pct00070
단계 1: tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)-1-(프로프-2-이닐)하이드라지닐)아세테이트
건조 CH3CN(30 mL) 중의 tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)하이드라지닐)아세테이트(1.0 g, 3.58 mmol), 프로파길 브로마이드(0.7 mL, 톨루엔 중의 @ 9.2 M), NaHCO3(0.6 g, 7.14 mmol) 및 KI(60 mg)의 혼합물을 75℃에서 3일 동안 밀봉된 튜브에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 여과물을 증발시키고 50% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.63 g)을 무색 오일로서 얻었다. MS(ESI): m/z 318.0(M+H)+; 분석용 HPLC: 17.0분.
단계 2 - 3:(S)-N-벤질-2-(2-(3-(4-tert-부톡시페닐)-1-((2,2-다이에톡시에틸)(퀴놀린-5-일메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일아미노)-2-옥소에틸)-2-(프로프-2-이닐)하이드라진카르복사미드
tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)-1-(프로프-2-이닐)하이드라지닐)아세테이트(0.31 g, 0.98 mmol)를 CH2Cl2(10 mL) 및 TFA(10 mL)에서 실온에서 아르곤 하에 2시간 동안 처리하였다. 건조하게 증발 및 CHCl3으로의 공증발을 2회 수행하여 2-(2-(벤질카바모일)-1-(프로프-2-이닐)하이드라지닐)아세트산(TFA 염)을 황색 오일로서 얻었고, 그것을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. MS(ESI): m/z 261.9(M+H)+; 분석용 HPLC: 12.1분.
DMF(7 mL) 중의 (S)-2-아미노-3-(4-tert-부톡시페닐)-N-(2,2-다이에톡시에틸)-N-(퀴놀린-5-일메틸)프로판아미드(0.48 g, 0.98 mmol)의 용액에 DIEA(0.51 mL, 2.93 mmol) 및 위에서 제조한 2-(2-(벤질카바모일)-1-(프로프-2-이닐)하이드라지닐)아세트산(TFA 염)을 첨가하였다. 0℃로 냉각시킨 후, HATU(0.37 g, 0.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에서 0℃에서 0.5시간 동안, 그리고 실온에서 밤새 교반한 후, 에틸 아세테이트(50 mL) 및 물(50 mL)에 넣었다. 수성 층을 에틸 아세테이트(25 mL x 2)로 추출하고, 조합된 유기 추출물을 염수(25 mL)로 세척하고, 건조(Na2SO4) 및 증발시켰다. 5% MeOH/CH2Cl2를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 원하는 생성물(0.79 g)을 담황색 발포체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 737.4(M+H)+; 분석용 HPLC: 16.1분.
단계 4:(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-(프로프-2-이닐)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드
포름산(25 mL) 중의 (S)-N-벤질-2-(2-(3-(4-tert-부톡시페닐)-1-((2,2-다이에톡시에틸)(퀴놀린-5-일메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일아미노)-2-옥소에틸)-2-(프로프-2-이닐)하이드라진카르복사미드(0.79 g, 1.07 mmol)의 용액을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 나머지 잔류물을 EtOAc(25 mL) 및 포화 NaHCO3(25 mL)에 넣었다. 수성 층을 EtOAc(25 mL x 1)로 추가로 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 건조(MgSO4) 및 증발시켰다. 미정제 물질을 EtOAc를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 원하는 생성물(0.36 g)을 담황색 발포체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 589.2(M+H)+; 분석용 HPLC: 12.5분.
실시예 6
(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(5)의 합성
화합물 5를 아래의 도식 5의 단계 1-6에 제시된 과정을 따라 제조하였다.
도식 5:
Figure pct00071
Figure pct00072
단계 1 - 2: 5-(브로모메틸)-3-페닐이소옥사졸
MeOH(18 mL) 중의 벤즈알데하이드(2.0 g, 18.8 mmol)의 용액에 하이드록실아민 염산염(1.6 g, 22.6 mmol) 및 K2CO3(3.1 g, 22.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(50 mL)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다(50 mL x1, 25 mL x 2). 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. 무색 액체로서 얻어진 벤즈알데하이드 옥심(2.4 g)을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다.
실온의 물(60 mL) 중의 벤즈알데하이드 옥심(2.4 g, 19.4 mmol)의 혼합물에 KCl(1.5 g, 20.1 mmol) 및 프로파길 브로마이드(5.6 mL, 톨루엔 중의 @ 9.2 M)를 첨가하였다. 결과적으로 생성된 혼합물을 0℃로 냉각하고, 옥손(9.2 g, 15 mmol)을 소량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안, 그리고 실온에서 밤새 교반하고, EtOAc로 추출하였다(50 mL x 2). 유기 추출물을 포화 NaCl(25 mL)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4) 건조하게 증발시켰다. 표제 화합물(4.2 g)을 담황색 고체로서 얻었고 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.80(m, 2H), 7.47(m, 3H), 6.63(s, 1H), 4.52(s, 2H).
단계 3: tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)-1-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라지닐)아세테이트
건조 CH3CN(1.5 mL) 중의 5-(브로모메틸)-3-페닐이소옥사졸(56 mg, 0.24 mmol), tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)하이드라지닐)아세테이트(60 mg, 0.22 mmol), NaHCO3(36 mg, 0.43 mmol) 및 KI(3.7 mg)의 혼합물을 65℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 여과하였다. 여과물을 증발시키고, 결과적으로 생성된 잔류물을 EtOAc/헥산(비율: 1:1 내지 2:1)을 사용하여 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(61 mg)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 437.2(M+H)+.
단계 4: 2-(2-(벤질카바모일)-1-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라지닐)아세트산
tert-부틸 2-(2-(벤질카바모일)-1-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라지닐)아세테이트(61 mg, 0.14 mmol)를 CH2Cl2(1.5 mL) 및 TFA(1.5 mL)에서 실온에서 아르곤 하에 3시간 동안 처리하였다. 건조하게 증발 및 CHCl3으로 2회 공증발시켜서 표제 화합물(TFA 염)을 유백색 고체로서 얻었고, 그것을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 7.82(m, 2H), 7.53(m, 3H), 7.37(s, 1H), 7.13(s, 5H), 7.05(s, 1H), 6.94(t, J = 6 Hz, 1H), 4.20(s, 2H), 4.17(d, J = 6 Hz, 2H), 3.67(s, 2H).
단계 5: (S)-N-벤질-2-(2-(3-(4-tert-부톡시페닐)-1-((2,2-다이에톡시에틸)(퀴놀린-5-일메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일아미노)-2-옥소에틸)-2-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라진카르복사미드
DMF(1 mL) 중의 (S)-2-아미노-3-(4-tert-부톡시페닐)-N-(2,2-다이에톡시에틸)-N-(퀴놀린-5-일메틸)프로판아미드(69 mg, 0.14 mmol)의 용액에 DIEA(73 μL, 0.42 mmol) 및 2-(2-(벤질카바모일)-1-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라지닐)아세트산(TFA 염; 단계 4에서 제조됨)을 첨가하였다. 0℃로 냉각시킨 후, HATU(53 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에서 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고 실온에서 밤새 교반한 후, 에틸 아세테이트(10 mL) 및 물(10 mL)에 넣었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고(10 mL x 2), 조합된 유기 추출물을 염수(10 mL)로 세척하고, 건조(Na2SO4) 및 증발시켰다. MeOH/CH2Cl2(5% 및 10%)를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 원하는 생성물(104 mg)을 백색 발포체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 856.7(M+H)+; 분석용 HPLC: 18.0분.
단계 6: (6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드
포름산(5 mL) 중의 (S)-N-벤질-2-(2-(3-(4-tert-부톡시페닐)-1-((2,2-다이에톡시에틸)(퀴놀린-5-일메틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일아미노)-2-옥소에틸)-2-((3-페닐이소옥사졸-5-일)메틸)하이드라진카르복사미드(100 mg)의 용액을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 건조하게 증발시키고, 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 270:9:1 및 180:9:1)에 의한 정제 및 동결건조로 원하는 생성물(67 mg)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 708.3(M+H)+; 분석용 HPLC: 14.9분(> 99% 순수함).
실시예 7
(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-2-((3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(6)의 합성
화합물 6을 아래의 도식 6의 단계 1-9에 제시된 과정에 따라 제조하였다.
도식 6:
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
단계 1: 2-브로모-6-(1,3-다이옥솔란-2-일)피리딘
1,2-다이클로로에탄(14.4 mL) 및 DMSO(0.32 mL) 중의 6-브로모피콜린알데하이드(0.4 g, 2.15 mmol), 에틸렌 글리콜(0.62 mL, 11.1 mmol), p-톨루엔설폰산 1수화물(0.46 g, 2.67 mmol)의 반응 혼합물을 95℃에서 아르곤 하에 밤새 교반하고 실온으로 냉각시킨 후 건조하게 증발시켰다. 결과적으로 생성된 잔류물을 EtOAc(25 mL)로 희석하고 0.5 N NaOH(20 mL), 포화 NaCl(15 mL)로 세척하고, 건조(Na2SO4) 및 증발시켰다. 미정제 물질을 실리카겔 크로마토그래피(25% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 원하는 생성물(0.32 g)을 무색 오일로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.61(t, J = 4 Hz, 1H), 7.51(m, 2H), 5.83(s, 1H), 4.21 - 4.07(m, 4H).
단계 2: 4-(6-(1,3-다이옥솔란-2-일)피리딘-2-일)모르폴린
톨루엔(14 mL) 중의 2-브로모-6-(1,3-다이옥솔란-2-일)피리딘(0.32 g, 1.38 mmol), 모르폴린(0.14 mL, 1.65 mmol), Pd(OAc)2(40 mg), BINAP(104 mg), Cs2CO3(0.62 g)의 혼합물을 아르곤으로 2분 동안 퍼징한 후, 밀봉된 튜브에서 100℃에서 22시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 증발시켰다. 25% 및 50% EtOAc/헥산을 사용한 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 표제 화합물(0.26 g)을 갈색 고체로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.53(t, J = 4 Hz, 1H), 6.88(d, J = 4 Hz, 1H), 6.61(d, J = 6 Hz, 1H), 5.72(s, 1H), 4.19 - 4.05(m, 4H), 3.81(t, J = 4 Hz, 4H), 3.52(t, H = 4 Hz, 4H).
단계 3: 6-모르폴리노피콜린알데하이드
아세톤(7 mL) 및 물(7 mL) 중의 4-(6-(1,3-다이옥솔란-2-일)피리딘-2-일)모르폴린(0.26 g, 1.10 mmol)의 현탁액에 피리디늄 토실레이트(83 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류시키고 진공 농축하였다. EtOAc(30 mL)를 첨가하고, 혼합물을 포화 NaHCO3(15 mL), 포화 NaCl(15 mL)로 세척하고 건조시켰다(Na2SO4). 증발 및 실리카겔 크로마토그래피(25% EtOAc/헥산)에 의한 정제로 원하는 생성물(0.19 g)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 10.1(s, 1H), 7.71(t, J = 9, 및 4 Hz, 1H), 7.37(d, J = 9 Hz, 1H), 6.93(d, J = 6 Hz, 1H), 3.89(t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.68(t, H = 4.5 Hz, 4H).
단계 4: 6-모르폴리노피콜린알데하이드 옥심
MeOH(18 mL) 중의 6-모르폴리노피콜린알데하이드(0.19 g, 0.99 mmol)의 용액에 하이드록실아민 염산염(81 mg, 1.17 mmol) 및 K2CO3(0.16 g, 1.16 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(15 mL)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다(10 mL x 3). 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. 실리카겔 크로마토그래피(30% EtOAc/헥산)에 의한 정제로 원하는 생성물(0.18 g)을 백색 고체로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 11.5(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.58(d, J = 9, 및 4 Hz, 1H), 7.08(d, J = 6 Hz, 1H), 6.81(d, J = 6 Hz, 1H), 3.70(t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.46(t, H = 4.5 Hz, 4H).
단계 5: 4-(6-(5-(브로모메틸)이소옥사졸-3-일)피리딘-2-일)모르폴린
50% t-BuOH/물(2 mL) 중의 6-모르폴리노피콜린알데하이드 옥심(62 mg, 0.30 mmol)의 현탁액에 클로라민-T 3수화물(88.5 mg, 0.31 mmol), 구리(II) 설페이트 5수화물(3 mg), 구리 터닝(copper turning)(1 mg)을 첨가하고, 이어서 프로파길 브로마이드(35.9 μL, 톨루엔 중의 @ 9.2 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, EtOAc(10 mL) 및 물(10 mL)에 넣었다. 수성 층을 EtOAc로 추출하였다(10 mL x 2). 조합된 유기 추출물을 포화 NaCl(10 mL)로 세척하고 건조시켰다(Na2SO4). 증발 및 실리카겔 크로마토그래피(25% EtOAc/헥산)에 의한 정제로 표제 화합물(34 mg)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 324.0, 326.0(M+H)+; 분석용 HPLC: 17.8분.
단계 6 - 9: (6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-2-((3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드. 표제 화합물 6을 실시예 6의 단계 3-6에 기술된 과정에 따라 얻었다. MS(ESI): m/z 794.4(M+H)+; 분석용 HPLC: 14.1분(> 99% 순수함).
실시예 8
(6S,9aS)-N-벤질-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드 메탄설포네이트(7)의 합성
화합물 7을 아래의 도식 7의 단계 1-5에 제시된 과정을 따라 제조하였다.
도식 7:
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
단계 1: 5-플루오로피콜린알데하이드 옥심
MeOH(4 mL) 중의 5-플루오로피콜린알데하이드(0.5 g, 4.0 mmol)의 용액에 하이드록실아민 염산염(0.33 g, 4.8 mmol) 및 K2CO3(0.67 g, 4.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(10 mL)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다(10 mL x 3). 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. 백색 고체로서의 표제 화합물(0.52 g)을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 11.7(s, 1H), 8.59(d, J = 3 Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.87(m, 1H), 7.77(m, 1H).
단계 2: 5-플루오로-N-하이드록시피콜린이미도일 클로라이드
DMF(3 mL) 중의 5-플루오로피콜린알데하이드 옥심(0.4 g, 2.85 mmol)의 용액에 N-클로로석신이미드(0.42 g, 3.14 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에서 50℃에서 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시키고 Et2O(15 mL) 및 물(15 mL)에 부었다. 수성 층을 Et2O로 추출하였다(15 mL x 2). 유기 추출물을 물(10 mL), 포화 NH4Cl(10 mL) 및 포화 NaCl(10 mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. 백색 고체로서의 표제 화합물(0.49 g)을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 12.7(s, 1H), 8.68(d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.96(m, 1H), 7.84(m, 1H).
단계 3: 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페닐 아세테이트.
0℃의 건조 CH2Cl2(27 mL) 중의 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-4,7-다이옥소-2-(프로프-2-이닐)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페닐 아세테이트(0.60 g, 0.95 mmol; 실시예 11에 개시된 과정에 따라, 대신 염화 아세틸을 사용하여 제조됨)의 용액에 5-플루오로-N-하이드록시피콜린이미도일 클로라이드(0.16 g, 0.90 mmol)를 첨가하고, 이어서 CH2Cl2(1 mL) 중의 Et3N(0.25 mL, 1.80 mmol)을 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 건조하게 증발시키고 CH3OH/CH2Cl2를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 부분 정제된 표제 화합물(0.54 g)을 유성 잔류물로서 얻었다. MS(ESI): m/z 769.3(M+H)+; 분석용 HPLC: 14.9분.
단계 4: (6S,9aS)-N-벤질-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드
CH3OH(16 mL) 중의 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페닐 아세테이트(0.54 g; 상기 단계 3에 제시된 것과 같이 제조됨)의 용액에 포화 NaHCO3(5.3 mL)을 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 진공 증발시키고 EtOAc(15 mL) 및 물(15 mL)에 넣었다. 수성 층을 EtOAc로 추출하였다(15 mL x 2). 유기 추출물을 포화 NaCl(15 mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4) 건조하게 증발시켰다. EtOAc/CH2Cl2를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 표제 화합물(0.26 g)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 727.3(M+H)+; 분석용 HPLC: 13.8분(> 96% 순수함).
단계 5: (6S,9aS)-N-벤질-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드 메탄설포네이트
CH2Cl2(6 mL) 중의 (6S,9aS)-N-벤질-2-((3-(5-플루오로피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(176 mg, 0.24 mmol)의 용액에 아세톤 및 CH2Cl2 중의 메탄설폰산(23.3 mg, 0.24 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 실온에서 수분 동안 교반한 후, 헥산(약 10 mL)을 서서히 첨가하였다. 형성된 백색 침전물을 여과를 통해 수집하고 헥산 및 EtOAc로 세척하였다. 공기 건조 및 Milli-Q 물을 사용한 동결건조로 원하는 생성물(173 mg)을 담황색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 727.2(M+H)+; 분석용 HPLC: 13.8분(> 97% 순수함).
실시예 9
(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-(피라진-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(8)의 합성
화합물 8을 아래의 도식 8의 단계 1-2에 제시된 과정에 따라 제조하였다.
도식 8:
Figure pct00080
단계 1: N-하이드록시피라진-2-카브이미도일 클로라이드
표제 화합물을 담황색 고체로서 실시예 8의 단계 2에 기술된 과정을 따라 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 9.10(s, 1H), 8.77 - 8.73(m, 3H).
단계 2:(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-(피라진-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드
0℃의 건조 CH2Cl2(15 mL) 중의 4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-4,7-다이옥소-2-(프로프-2-이닐)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페닐 아세테이트(0.30 g, 0.51 mmol)의 용액에 N-하이드록시피라진-2-카브이미도일 클로라이드(76.1 mg, 0.48 mmol)을 첨가하고, 이어서 Et3N(134 μL, 0.97 mmol)을 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 건조하게 증발시키고, CH3OH/EtOAc를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제 및 CH3CN 및 Milli-Q 물에서의 동결건조로 표제 화합물(0.12 g)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 710.3(M+H)+; 분석용 HPLC: 12.6분(> 95% 순수함).
실시예 10
(6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-(피롤리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(9)의 합성
화합물 9를 아래의 도식 9의 단계 1-4에 제시된 과정에 따라 제조하였다.
도식 9:
Figure pct00081
Figure pct00082
단계 1 - 2: tert-부틸 2-(클로로(하이드록시이미노)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트
표제 화합물을 실시예 8의 단계 1-2에서 기술된 과정을 따라 얻었다. 분석용 HPLC: 15.4분(> 97% 순수함).
단계 3: tert-부틸 2-(5-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)다이하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-2(6H,7H,8H,9H,9aH)-일)메틸)이소옥사졸-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트
건조 CH2Cl2(5 mL) 중의 (6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-(프로프-2-이닐)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(70 mg, 0.12 mmol)의 용액에 tert-부틸 2-(클로로(하이드록시이미노)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(118 mg, 0.48 mmol)를 첨가하고, 이어서 Et3N(0.13 mL, 0.93 mmol)을 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 40℃에서 2일 동안 교반하였다. 건조하게 증발시키고 EtOAc를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 표제 화합물(26 mg)을 백색 잔류물로서 얻었다. MS(ESI): m/z 801.5(M+H)+; 분석용 HPLC: 14.7분(94% 순수함).
단계 4: (6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-(피롤리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드
tert-부틸 2-(5-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)다이하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-2(6H,7H,8H,9H,9aH)-일)메틸)이소옥사졸-3-일)피롤리딘-1-카르복실레이트(26 mg, 0.032 mmol)를 실온의 CH2Cl2(1 mL) 및 TFA(1 mL)에서 아르곤 하에 2시간 동안 교반하였다. 건조하에 증발 및 CHCl3으로의 2회의 공증발, 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 180:9:1 및 90:9:1)에 의한 정제 및 이어서 CH3CN 및 Milli-Q 물을 사용한 동결건조로 원하는 생성물(14 mg)을 백색 분말로서 얻었다. MS(ESI): m/z 701.3(M+H)+; 분석용 HPLC: 10.6분(>99% 순수함).
실시예 11
4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-2-((3-(4-플루오로페닐)이소옥사졸-5-일)메틸)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페닐 도데카노에이트(10)의 합성
화합물 10을 아래에 개시된 과정을 사용하여 도식 10에 따라 제조하였다.
도식 10:
Figure pct00083
0℃의 건조 CH2Cl2(47 mL) 중의 (6S,9aS)-N-벤질-2-((3-(4-플루오로페닐)이소옥사졸-5-일)메틸)-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(1.2 g, 1.67 mmol)의 용액에 Et3N(0.47 mL, 3.34 mmol)을 첨가하고, 라우로일 클로라이드(0.58 mL, 2.51 mmol)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 밤새 교반하고, 건조하게 증발시켰다. 결과적으로 생성된 잔류물을 EtOAc(100 mL) 및 포화 NaHCO3(50 mL)에 넣고, 유기 층을 포화 NaCl(50 mL)로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 증발, EtOAc/CH2Cl2를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제 및 동결건조로 표제 생성물(1.1 g)을 백색 발포체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 908.7(M+H)+.
실시예 12
에틸 2-(2-((4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-4,7-다이옥소-2-((3-(피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페녹시)카르보닐아미노)아세트아미도)아세테이트(11)의 합성
화합물 11을 아래에서 개시된 과정을 사용하여 도식 11에 따라 제조하였다.
도식 11:
Figure pct00084
단계 1: 에틸 2-(2-(tert-부톡시카르보닐아미노)아세트아미도)아세테이트
CH2Cl2(8 mL) 중의 2-(2-(tert-부톡시카르보닐아미노)아세트아미도)아세트산(0.5 g, 2.15 mmol)의 현탁액에 EtOH(0.14 mL, 2.37 mmol), DCC(0.49 g, 2.37 mmol) 및 DMAP(29 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 밤새 교반하고 여과하였다. 여과물을 CH2Cl2(25 mL)로 희석하고 물(25 mL) 및 10% KHSO4(25 mL)로 세척하고, 건조(MgSO4) 및 증발시켰다. 미정제 물질을 EtOAc/헥산을 사용하여 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 생성물(0.53 g)을 백색 유성 잔류물로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 8.17(t, J = 6 Hz, 1H), 7.0(t, J = 6 Hz, 1H), 4.09(q, J = 6 Hz, 2H), 3.82(d, J = 6 Hz, 2H), 3.56(d, J = 6 Hz, 2H), 1.38(s, 9H), 1.16(t, J = 6 Hz, 3H).
단계 2: 2-(2-에톡시-2-옥소에틸아미노)-2-옥소에타나미늄 클로라이드
에틸 2-(2-(tert-부톡시카르보닐아미노)아세트아미도)아세테이트(0.53 g, 2.04 mmol)를 EtOH(5 mL) 중의 6N HCl(5 mL)로 실온에서 밤새 처리하였다. 모든 휘발물질을 제거하는 증발로 원하는 생성물(0.36 g)을 백색 고체로서 얻었다. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 8.84(br s, 3H), 8.71(br s, 1H), 4.11(q, J = 6 Hz, 2H), 3.94(d, J = 6 Hz, 2H), 3.6(d, J = 3 Hz, 2H), 1.20(t, J = 7.5 Hz, 3H).
단계 3: 에틸 2-(2-((4-(((6S,9aS)-1-(벤질카바모일)-4,7-다이옥소-2-((3- (피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-6-일)메틸)페녹시)카르보닐아미노)아세트아미도)아세테이트
아르곤 하에 -15℃의 CH2Cl2 중의 (6S,9aS)-N-벤질-6-(4-하이드록시벤질)-4,7-다이옥소-2-((3-(피리딘-2-일)이소옥사졸-5-일)메틸)-8-(퀴놀린-5-일메틸)옥타하이드로-1H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트라이아진-1-카르복사미드(0.13 g, 0.18 mmol)의 용액에 디포스겐(31 μL, 0.26 mmol) 및 DIEA(44.6 μL, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물에 -5℃에서 2-(2-에톡시-2-옥소에틸아미노)-2-옥소에타나미늄 클로라이드(0.22, 1.13 mmol), DIEA(0.29 mL, 1.67 mmol) 및 CH2Cl2(2.3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 추가로 2시간 동안 계속 교반한 후 Et2O(5 mL)를 첨가하였다. 불용성 물질을 여과를 통해 제거하였다. 건조하게 증발 및 EtOAc/CH3OH를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제로 표제 생성물(116 mg)을 백색 고체로서 얻었다. MS(ESI): m/z 895.3(M+H)+.
실시예 13
표 1에 열거된 화합물 12 - 34를 실시예 6 - 12에서 사용된 것과 유사한 과정을 토대로, 실시예 2 - 5에서 예시된 화합물 1 - 4 및, 따라서 표 2에서 열거한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
화합물 구조 분석용 HPLC 순도 MS(ESI) [m/z (M+H)+]
12
Figure pct00085
 99% 707.3
13
Figure pct00086
 98% 727.3
14
Figure pct00087
 >99% 726.4
15
Figure pct00088
 >99% 708.2
16
Figure pct00089
 >99% 738.4
17
Figure pct00090
 >99% 709.3
18
Figure pct00091
 99% 744.4
19
Figure pct00092
 >97% 709.3
20
Figure pct00093
 98% 709.2
21
Figure pct00094
 98% 787.4,
789.2
22
Figure pct00095
 95% 775.2
23
Figure pct00096
 96% 737.2
24
Figure pct00097
 98% 793.4
25
Figure pct00098
 94% 737.2
26
Figure pct00099
 100% 709.3
27
Figure pct00100
 >98% 646.3
28
Figure pct00101
 99% 710.3,
712.2
29
Figure pct00102
 98% 716.5
30
Figure pct00103
 99% 715.3
31
Figure pct00104
 100% 794.4
32
Figure pct00105
 >98% 727.4
33
Figure pct00106
 100% 739.2
34
Figure pct00107
 >99% 889.5
실시예 14
실시예 및 표 1에서 열거된 본 발명의 예시의 화합물의 제조를 위해 사용된 출발 물질을 표 2에 열거한다.
중간체 및
출발 물질		 구조 CAS# 또는 합성시 논평
35
Figure pct00108
 886364-40-5
36
Figure pct00109
 26114-48-7
37
Figure pct00110
 5262-25-9
38
Figure pct00111
 721428-34-8
39
Figure pct00112
 14372-43-1
40
Figure pct00113
 36958-61-9
41
Figure pct00114
 88982-28-9
42
Figure pct00115
 4-메톡시벤즈알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
43
Figure pct00116
 3-메톡시벤즈알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
44
Figure pct00117
 4-플루오로-3-(트라이플루오로메틸)벤즈알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
45
Figure pct00118
 4-트라이플루오로메틸)벤즈알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
46
Figure pct00119
 피리딘-2-알독심으로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
47
Figure pct00120
 피콜린알데하이드 또는 피리딘-2-알독심으로부터 출발하여, 상기 실시예 8에서 기술된 과정에 따라 제조됨
48
Figure pct00121
 5-브로모피콜린알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
49
Figure pct00122
 865610-66-8
50
Figure pct00123
 테트라하이드로-2H-피란-4-카브알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 8 및 10에서 기술된 과정에 따라 제조됨
51
Figure pct00124
 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트로부터 출발하여, 상기 실시예 8 및 10에서 기술된 과정에 따라 제조됨
52
Figure pct00125
 6-플루오로피콜린알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
53
Figure pct00126
 5-메톡시피콜린알데하이드로부터 출발하여, 상기 실시예 6에서 기술된 과정에 따라 제조됨
54
Figure pct00127
 5-플루오로피콜린알데하이드로부터 출발하여, WO 2009027746에 기술된 과정에 따라 제조됨
실시예 15
3개의 대표적인 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229)은 일반적으로 기술분야에서 인식된 SuperTOPFLASH 세포 기반 루시페라제 활성 검정에서 양성 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 약 10배 이상의 효능을 가지는 것으로 나타났다
도 1은 본 발명의 비제한적인 측면에 따라, 본 발명의 3개의 예시의 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229로 코딩됨; 각각 16 내지 1000 nM의 농도에서 비교됨)의 CBP/β-카테닌 억제 활성을 양성 대조군으로서 사용된(1.25, 2.5, 5 및 10 μM에서) 기술분야에서 인정된 CBP/β-카테닌 억제제 ICG-001과 비교하는, SuperTOPFLASH 세포 기반 루시페라제 검정(안정적으로 형질주입된 세포주, Hek293, STF1.1에서의 Wnt 구동 루시페라제 활성)의 결과를 도시한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 3개의 대표적인 발명의 이소옥사졸 화합물은 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 적어도 약 10배 이상의 효능을 가진다. 대부분의 개시된 CBP/β-카테닌 억제제 화합물의 효능은 일반적으로 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 적어도 약 3배 이상인 것으로 측정되었다.
실시예 16
3개의 대표적인 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229)은 일반적으로 기술분야에서 인식된 서바이빈 프로모터 구동 루시페라제 검정에서 양성 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 약 10배 이상의 효능을 가지는 것으로 나타났다
도 2는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 본 발명의 3개의 예시의 이소옥사졸 화합물([3+2]-101, [3+2]-117 및 [3+2]-229로 코딩됨; 각각 0.1 내지 10 nM의 농도에서 비교됨)의 CBP/β-카테닌 억제 활성을 양성 대조군으로서 사용된(1.25, 2.5, 5 및 10 μM에서) 기술분야에서 인정된 CBP/β-카테닌 억제제 ICG-001과 비교하는, 서바이빈 프로모터 구동 루시페라제 활성 검정(안정적으로 형질주입된 Hek293 세포주; 1Kb Hu-서바이빈/luc-Hek293에서 인간 서바이빈 1 Kb-프로모터 구동 루시페라제 활성의 검정)의 결과를 도시한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 이들 3개의 대표적인 발명의 이소옥사졸 화합물은 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 적어도 약 10배 이상의 효능의 IC50 값을 가진다. 대부분의 개시된 CBP/β-카테닌 억제제 화합물의 IC50 값은 일반적으로 이 검정에서 대조군 화합물 ICG-001의 IC50 값보다 적어도 약 3배 이상인 것으로 측정되었다.
실시예 17
대표적인 이소옥사졸 화합물 [3+2]-101은 일반적으로 기술분야에서 인식된, 서바이빈/BIRC5에 대한 SYBR-Green　qPCR 검정에서 CBP/β-카테닌 기반 전사를 감소시키는 데 있어 양성 대조군 화합물 ICG-001의 효능보다 적어도 약 10배 이상의 효능을 가지는 것으로 나타났다
도 3A 및 도 3B는, 본 발명의 추가적인 비제한적인 측면에 따라, 대조군 유전자로서 GAPDH를 사용하는, 서바이빈/BIRC5(CBP 특이적) 및 EphB2(p300 특이적) 유전자 발현에 대한 SYBR-Green　qPCR 검정의 결과를 도시한다. 도 3A는 CBP/β-카테닌 특이적 유전자(H. Ma et al Oncogene 2005, 24,3619-31)　서바이빈 유전자 발현을 억제(△△Ct의 증가로서 반영됨)하는데 있어서 발명의 화합물 [3+2]-101(1　μM)을 기술분야에서 인정된 양성 대조군 ICG-001(10　μM)과 비교한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 발명의 이소옥사졸의 CBP/β-카테닌 발현 억제 활성은 대조군의 그것보다 적어도 10배 더 크다. 도 3B는 EphB2　(p300/β-카테닌 특이적 유전자(Kumar S, et. al. Cancer Res. 2009, 69,3736-45) 유전자 발현을 자극(△△Ct의 감소로서 반영됨)하는데 있어서 발명의 화합물 [3+2]-101(1　μM)을 기술분야에서 인정된 양성 대조군 ICG-001(10　μM)과 비교한다. 쉽게 분명한 바와 같이, 대표적인 발명의 이소옥사졸의 EphB2　유전자 발현 자극 활성은 대조군의 그것보다 적어도 10배 더 크다. 이것은 [3+2]-101 및 ICG-001의 특정 CBP/β-카테닌 억제 활성에 의해 매개된 p300/β-카테닌 기반 전사의 증가와 함께 CBP/β-카테닌 기반 전사의 감소를 반영한다.
실시예 18
공동 면역침전 검정을 SW480 세포에서 수행하여 양성 대조군 화합물 ICG-001 및 대표적인 발명의 화합물 [3+2]-117이 p300에 대한 β-카테닌의 결합을 향상시키면서 CBP에 대한 β-카테닌 결합을 선택적으로 파괴하는 것을 추가로 확인하였다
도 4A 및 도 4B는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, 양성 대조군 화합물 ICG-001 및 [3+2]-117이 CBP에 대한 β-카테닌 결합을 선택적으로 파괴하는 한편(도 4A), p300에 대한 β-카테닌의 결합을 향상시키는(도 4B) 것을 추가로 확인하기 위하여 이전에 기술된(Emami K. et al. PNAS USA,　2004 Aug 24;101(34):12682-7) SW480 세포에서 수행된 공동 면역침전 검정을 도시한다. β-카테닌과 CBP와의 면역침전은 10　μM의 ICG-001에 의해(도 3A) 그리고 500 nM의 [3+2]-117에 의해 억제되었다. [3+2]-117은 ICG-001과 비교하여 대략 20배 더 활성이었다(레인 1(DMSO 대조군)을 레인 2 및 3과 비교함). β-카테닌과 p300 사이에서 SW480 세포에서 볼 수 있는 최소 상호작용은 CBP 및 p300이 매우 상동한다는 사실에도 불구하고 ICG-001에 의해 차단되지 않았다. 실제로, 10　μM의 ICG-001로의 처리는 p300과 공동침전된 β-카테닌의 양을 약간 증가시키며(도 4B p300 IP, 레인 1과 2 비교), 이것은 CBP/β-카테닌 전사로부터 분화의 개시와 관련된 p300/β-카테닌 전사로의 전환과 일치한다. 500 nM의 [3+2]-117은 β-카테닌과 p300의 상호작용을 극적으로 증가시켰다(도 4B p300 IP, 레인 1과 3 비교). 픽셀화를 기반으로 한 면역블롯팅 데이터의 정량화는 면역블롯 아래에 도시된다.
실시예 19
특발성 폐 섬유증(IPF)의 블레오마이신 유도 마우스 모델을 사용하여 대표적인 본 발명의 화합물인 [3+2]-120A 및 [3+2]-120B의 효능이 피르페니돈 및 닌테다닙 둘 다에 대한 과거 대조군 데이터에 유리하게 비교되는 것을 입증하였다
IPF의 블레오마이신 유도 모델. 대표적인 발명의 화합물 [3+2]-120A(화합물 20)는, 이전에 제1(ICG-001) 및 제2(PRI-724) 세대 CBP/β-카테닌 길항물질로 나타낸 것과 같이, 마우스의 IPF의 블레오마이신 유도 모델(SMC Laboratories, Tokyo, Japan)에서 효능을 입증하였다. 구체적으로, 100 mg/kg/일(A-낮은) 및 400 mg/kg/일(A-높은)의 [3+2]-120A의 위관 영양에 의한 경구(p.o.) 투여를, 블레오마이신 후 7일 째에 투여를 시작하고 2주 동안 지속하였을 때 IPF에 대해 FDA 승인된 2개의 치료제, 즉, 피르페니돈(400 mg/kg/일 p.o.) 및 닌테다닙(100 mg/kg/일 p.o.)에 대해 전체 생존 및 애쉬크로프트 채점에 대한 과거 대조군 데이터와 유리하게 비교하였다. 400 mg/kg/일(높은)의 대표적인 발명의 화합물 [3+2]-120B(화합물 11)을 또한 과거 대조군 데이터와 유리하게 비교하였다.
결과. 도 5는, 본 발명의 추가의 비제한적인 측면에 따라, [3+2]-120A (두 투여량 그룹 모두) 및 [3+2]-120B (고 투여량 그룹)로 처리된 마우스에서의 체중 증가에서 상당한 증가가 있었고, 모든 마우스가 생존한 반면 (도 6), 이력적으로 대략 30%의 마우스가 이 모델에서 처리된 경우에도 21일 전에 사망한 것을 도시한다. 더욱이, 조직학적 분석(도 8A-8E)을 토대로, [3+2]-120A 처리된 마우스(두 가지 투여량 그룹) 및 [3+2]-120B(높은 투여량 그룹) 처리된 마우스에서 폐의 중량 및 애쉬크로프트 점수의 상당한 감소(표 3)를 볼 수 있었다(도 7A-7D). 도 8A-8E는 다음과 같다: 이력적인 블레오마이신 식염수 처리 대조군(8A, "ID:103"); [3+2]-120A 저용량(8B, "ID:102"); [3+2]-120A 고용량(8C, "ID:201"); [3+2]-120B 저용량(8D, "ID:302"); 및 [3+2]-120B 고용량(8E, "ID:401"). 모든 처리 그룹에서, Masson의 3색 청색 염색에 의해 판단되는 바 블레오마이신 식염수 처리된 이력적 대조군과 비교하여 세포외 콜라겐 침착에 상당한 감소가 있다.
이들 결과를 토대로, [3+2] 시리즈 화합물은 경구 투여될 때(per os, p.o) 특발성 폐 섬유증의 블레오마이신 유도 모델에서 효과적이다.
매개변수
(평균 +/- SD) 		화합물 A 낮은 (n=3) 화합물 A 높은
(n=3) 		화합물 B 낮은
(n=3) 		화합물 B 높은
(n=3)
체중(g) 18.2 +/- 0.7 16.9 +/- 3.8 15.1 +/- 3.8 19.5 +/- 1.6
대퇴골 후엽 중량(mg) 21 +/- 9 25 +/- 18 39 +/- 17 21 +/- 6
좌측 폐 중량(mg) 65 +/- 19 66 +/- 33 77 +/- 15 65 +/- 13
매개변수
(평균 +/- SD) 		화합물 A 낮은
(n=3) 		화합물 A 높은
(n=3) 		화합물 B 낮은
(n=3) 		화합물 B 높은
(n=3)
애쉬크로프트 점수 2.2 +/- 1.7 2.5 +/- 2.0 3.9 +/- 1.4 2.1 +/- 0.7
실시예 20
NASH-HCC의 STAM TM 마우스 모델을 사용하여 대표적인 발명의 화합물 [3+2]-120A의 효능을 입증하였다
대표적인 발명의 화합물 [3+2]-120A(화합물 20)은 마우스에서의 NASH-HCC의 등록된 STAMTM 마우스 모델(SMC Laboratories, Tokyo, Japan)에서 효능을 입증하였다. 구체적으로, 진행 중인 연구에서, 100 mg/kg/일(A-낮은) 및 400 mg/kg/일(A-높은)의 [3+2]-120A의 위관 영양에 의한 경구(p.o.) 투여를 처리 후 4주 후에 전체 생존에 대한 비히클 대조군 데이터와 유리하게 비교하였다. 비히클 대조군 처리 그룹에서는 8마리 마우스 중 5마리만이 생존한 반면, 100 mg/kg/일(A-낮은) 및 400 mg/kg/일(A-높은)의 [3+2]-120A에서는 8마리 마우스 중 각각 7마리 및 8마리가 생존하였다.
실시예 21
아토피성 피부염의 NG/Nga 마우스 모델을 사용하여 TEWL 점수 및 피부염 점수를 감소시키는데 있어 대표적인 발명의 화합물 [3+2]-121A의 효능을 비히클 대조군과 비교하여 입증하였다.
아토피성 피부염의 NG/Nga 마우스 모델:
NC/Nga 마우스(암컷)를 CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN INC.로부터 얻었다. 마우스를 체중 및 피부염 점수를 토대로 0일 째에 8마리 마우스의 4개 그룹으로 무작위로 나누었다. 8마리의 NC/Nga 마우스를 테스트 화합물 함유 [3+2]-121A(화합물 34) 연고(100 mg의 부피), 또는 비히클 대조군(친수성 바셀린)으로 0일부터 13일까지 매일 1회 국소적으로 투여하였다. 대표적인 화합물 [3+2]-121A는 낮은(100 uM) 및 높은(500 uM) 용량 수준에서 모두 TEWL 점수 및 피부염 점수를 비히클 대조군과 비교하여 상당히 감소시켰다.
대표적인 테스트 물질 [3+2]-121A를 친수성 바셀린에서 낮은(100 uM) 및 높은(500 uM) 투여량으로 제형화하였다(연구에서 각각 [3+2]-121A 및 [3+2]-121B로 언급됨). 생후 7주령의 암컷 NC/Nga 마우스를 사용하였다. 아토피성 피부염의 첫 번째 유도를 화합물 투여 전 3주 전에 수행하였고, 그것을 위해 마우스를 마우스 등과 귀 뒤의 털을 클리퍼와 면도기로 면도하였다. 그런 후 마우스는 제모제(EpilatTM, Kracie Home Products, Ltd.)로 완전히 털을 제거한 후에 100 mg의 Biostir AD® 연고를 면도한 등쪽 피부와 양쪽 귀 각각의 표면에 플라스틱 스푼을 사용하여 골고루 도포하였다. 아토피성 피부염의 두 번째 유도를 후속해서 수행하였다. 마우스를 등과 귀 뒤를 면도한 후, 150 μl의 4% 라우릴 황산 나트륨 용액을 등과 귀 뒤에 플라스틱 스푼을 사용하여 도포하였다. 그런 후, 헤어 드라이어(찬 공기)로 건조시킨 후 약 1 내지 2시간 동안 자연 건조되도록 놓아두었다. 100 mg의 Biostir AD® 연고를 면도한 등쪽 피부와 양쪽 귀 각각의 표면에 플라스틱 스푼을 사용하여 골고루 도포하였다. 이 과정을 3주 동안 주 2회 반복하였다. 24시간 아토피성 피부염 모델 마우스를 0일 아침에 체중 및 피부염 중증도 점수를 토대로 8마리 마우스의 3개 그룹으로 분류하였다. 비히클 대조군(친수성 바셀린), [3+2]-121A 또는 [3+2]-121B를 0일부터 13일까지 매일 1회 100 mg의 부피로 국소적으로 투여하였다. 체중 및 사료 소비를 0, 7 및 14일에 주 1회 측정하였다. 피부염의 중증도를 0, 3, 7, 10 및 14일에 평가하였다. 1) 홍반/출혈, 2) 흉터/건조, 3) 부종, 4) 찰과상/미란의 발생을 0(없음), 1(경미), 2(중간) 및 3(중증)으로 채점하였다. 개별 점수의 합을 피부염 점수로서 취하였다. TEWL을 0일 및 투여 후 14일에 평가하였다. 조직학적 분석을 10% 중성 포르말린에 고정하고, 파라핀에 매입하고 3-4 μm 섹션으로 절단하고 Carrazzi 헤마톡실린 용액을 사용하여 헤마톡실린-에오신으로 염색한 목 아래 등 피부와 귓바퀴에 대해 수행하였다. 피부 영역의 분석을 위해, HE 염색 섹션의 명시야 이미지를 디지털 카메라(DS-Fi3; Nikon)를 2 및 4배 배율로 사용하여 부작위로 포착하였다. 통계학적 분석을 프리즘 소프트웨어 6(GraphPad Software, USA)을 사용하여 수행하였다. 통계학적 분석을 Dunnett 비교 테스트를 사용하여 수행하였다. 다음 그룹간 비교를 시행하였다: 그룹 1(비히클) 대비 그룹 2([3+2]-121A) 및 그룹 3([3+2]-121B). <0.05의 P 값을 통계적으로 유의미한 것으로 간주하였다. 결과를 평균 ±SD로서 표시하였다. 비히클 그룹과 처리 그룹 사이에 치료 기간 중 임의의 날에 평균 체중에 유의미한 차이는 없었고, 이것은 치료의 독성이 없음을 증명한다(도 9). 비히클 그룹과 처리 그룹 사이에 마우스당 사료 소비의 유의미한 차이는 없었다(도 10).
피부염 중증도 점수: [3+2]-121A 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 10 및 14일에 등에서 피부염 중증도 점수의 상당한 감소를 보였다(도 11A 등, 11B 전체).
TEWL 분석(경표피 수분 손실(TEWL)은 피부 장벽 양쪽의 수증기압 구배로 인해 피부를 통해 외부 환경으로 수동적으로 증발하는 물의 양이며 피부 장벽 기능을 특성화하기 위해 사용됨): [3+2]-121A 및 121B 그룹은 14일에 TEWL의 상당한 감소를 보였으며(도 12), 이것은 치료와 관련된 증가된 장벽 기능을 증명한다.
조직학적 분석: 대표적인 현미경 사진에서 나타낸 것과 같이 [3+2]-121A 및 [3+2]-121B 그룹 모두에서 염증 및 염증 세포 유입의 상당한 감소를 보였다(도 13A-13C).
본 발명 및 그것을 사용하고 제조하는 방식 및 방법은 이제 발명이 속하는 기술분야에 숙련된 사람이 그것을 제조하고 사용할 수 있도록 완전하고, 명확하고, 간결하며, 정확한 용어로 기술된다.
비록 발명의 구체적인 구현예가 본원에서 예시의 목적으로 기술되었지만, 다양한 변형이 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 만들어질 수 있는 것이 인정될 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의한 것을 제외하고 제한되지 않는다.
본 명세서에서 언급된 상기 미국 특허, 미국 특허 출원 공보, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 출판물은 모두 본원에 참조로 포함된다.

Claims (37)

  1. 식 (Ia)의 화합물 및 그것의 제약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00128
    (Ia)
    식에서:
    Ra는 수소 또는 -CH3이고;
    Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 및 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개의 고리 구성원을 가지는 단환식 아릴기이고;
    R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기, 또는 치환된 이환식 아릴이며, 여기서 치환된 이환식 아릴은 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실기로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있고;
    R2는 수소, 또는 -CH3이며;
    Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
    W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, 여기서 X는:
    Figure pct00129
    또는
    Figure pct00130
    으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이며;
    L은 -CH2-, -CF2-, 또는 -C(CH3)2-이고;
    Q는
    Figure pct00131
    또는
    Figure pct00132
    로부터 선택된 0 - 2개의 치환기에 의해 치환된 5- 또는 6-원 질소 함유 헤테로아릴이며, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택되고, Z1, Z2는 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, 및
    Figure pct00133
    으로부터 독립적으로 선택되며, 식에서 R1, R2 및 R3은 수소, C1-C6 알킬, 또는 하나 이상의 -OH를 함유하는 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, Z3은 수소, 할로겐, 또는 직접 결합, 또는 -NH-연결된, -OC1-C3 알킬 연결된, 또는 -NHC1-C3 알킬 연결된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 -NHC1-C4 알킬, -N(C1-C4 알킬)2로부터 선택되며, 이들 각각은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH- C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환된다.
  2. 제1항에 있어서, 알킬산 또는 지방산의 에스테르는:
    Figure pct00134
    (식에서 m은 1 내지 14임)
    Figure pct00135
    , 또는
    Figure pct00136
    으로부터 선택되는 것인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R은 나프틸, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 퀴녹살린, 프탈라진, 퀴나졸린, 신놀린, 또는 나프티리딘, 또는 그것들의 치환된 변이체로부터 선택된 이환식 아릴인 것인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 (Ib)의 화합물인 것인 화합물:
    Figure pct00137
    (Ib),
    식에서 X1 및 X2는 N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택된다.
  5. 제4항에 있어서,
    L은 -CH2-이고;
    Q는
    Figure pct00138
    이며, 식에서 A, B, 및 D는 O, S, N, 또는 -CH로부터 독립적으로 선택되는 것인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, A는 -CH이고, B는 N이며, D는 O이고(Z3-이소옥사졸-), W는 수소, 포스페이트 또는 포스페이트 염, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, X는:
    Figure pct00139
    또는
    Figure pct00140
    으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며 R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2인 것인 화합물.
  7. 제6항에 있어서, Z3은 각각이 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, -OC1-C6 알킬-C(O)NH-OH, -NH2, -C(O)NH- C1-C6 알킬-헤테로아릴, -NHC(O)C1-C6 알킬-C(O)NH-OH, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 질소 결합 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, -NHC1-C4 알킬, 또는 -N(C1-C4 알킬)2로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환되는 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되는 것인 화합물.
  8. 제7항에 있어서, Z3은 수소, 중수소, 할로겐, C1-C4 알킬, C1-C3 할로알킬, -OH, -OC1-C6 알킬, 또는 질소 결합 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기에 의해 치환된 아릴 또는 헤테로아릴로부터 선택되는 것인 화합물.
  9. 제8항에 있어서, 화합물은 다음인 것인 화합물:
    Figure pct00141

    Figure pct00142

    Figure pct00143

    Figure pct00144

    Figure pct00145

    Figure pct00146

    Figure pct00147

    Figure pct00148

    Figure pct00149

    Figure pct00150

    Figure pct00151

    Figure pct00152

    Figure pct00153

    Figure pct00154
    .
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물, 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물 또는 제약학적 조성물.
  11. 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, CREB 결합 단백질(CBP)/β-카테닌 신호전달에 의해 매개된 질환 또는 장애를 가진 환자 또는 온혈 포유동물에게, CBP/카테닌 신호전달을 억제하고/하거나, p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키기에 충분한 양의 제1항 내지 제10항 중 어느 하나의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 투여되는 화합물의 양은 치료적 유효량을 포함하는 것인 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 화합물에서, W는 X이고, X는
    Figure pct00155
    또는
    Figure pct00156
    으로부터 선택되며, 식에서 Z는 OR4이고 R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이며, n은 1 또는 2인 것인 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물에서, X는
    Figure pct00157
    또는
    Figure pct00158
    이고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2인 것인 방법.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 장애는 섬유증, 암, 신경학적 상태, 대사 장애, 피부 상태 및 노화 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 대사 장애는 당뇨병 및/또는 지방간 질환 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 지방간 질환은 알코올성 간 지방증(ALD), 비알코올성 간 지방증(NAFLD), 및/또는 비알코올성 지방간염(NASH) 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  18. 제15항에 있어서, 섬유증은 폐, 간, 신장, 심장, 자궁내막, 피부의 섬유증 또는 전신성 섬유증인 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 섬유증은 SARS-CoV-2(COVID-19) 환자 조직의 섬유증을 포함하는 것인 방법.
  20. 제15항에 있어서, 암을 치료하는 단계는 CBP/β-카테닌 길항물질을 세포독성 및/또는 지정된 화학요법, 및/또는 방사선요법, 및/또는 체크포인트 억제, 키메라 항원 수용체(CAR-T) 및/또는 CAR-NK를 포함한 면역요법 중 하나 이상과 함께, 또는 그것과의 보조 요법으로서 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  21. 제15항에 있어서, 신경학적 상태는 헌팅턴병(HD), 파킨슨병(PD), 알츠하이머병(AD), 다발성 경화증(MS), 및/또는 근위축성 측삭 경화증(ALS), 근이영양증(MD), 및/또는 척추 근육 위축증(SMA) 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  22. 제15항에 있어서, 피부 상태는 아토피성 피부염, 건선, 여드름, 섬유증, 상처, 흉터, 화상, 태양 또는 자외선 손상, 당뇨병성 궤양, 만성 궤양, 및/또는 탈모 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, W는 알킬산 또는 지방산의 에스테르이고, 투여는 국소적 또는 경피 투여를 포함하는 것인 방법.
  24. 피부 상태를 치료하기 위한 미용 방법으로서, 피부 상태를 가진 환자 또는 온혈 포유동물에게 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 화합물의 미용적 유효량을 국소적으로 투여하는 단계를 포함하며, W는 알킬산 또는 지방산의 에스테르이고, 알킬산 또는 지방산의 에스테르는:
    Figure pct00159
    (식에서 m은 1 내지 14임)
    Figure pct00160
    , 또는
    Figure pct00161
    으로부터 선택되는 것인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 피부 상태는 주름, 과색소침착, 발적, 주사비, 건조, 갈라짐, 생기 상실, 탄력 상실, 얇아짐, 생기 상실, 흉터, 여드름, 태양 손상, 탈모, 모발 착색 상실, 큐티클 성장 감소, 손톱 성장 감소로부터 선택된 하나 이상의 노화 피부 상태를 포함하는 것인 방법.
  26. 임상 등급 약물을 효율적으로 합성하는 방법으로서, GMP 조건 하에 마지막에서 두 번째, 또는 마지막 반응 단계에서 중간체 2-프로피닐 화합물을 사용하여 3 + 2 고리화첨가를 통해 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 형성하는 단계를 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 제조하는 단계는, 마지막에서 두 번째 또는 마지막 반응 단계에서, 최종 제약학적으로 허용되는 염, 포스페이트 또는 포스페이트 염의 임의의 선택적인 형성 단계 전에 식 (IIa)의 중간체 2-프로피닐 화합물을 사용하여 청구항 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 것인 방법:
    Figure pct00162
    (IIa)
    식에서:
    Ra는 수소 또는 -CH3이고;
    Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 및 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개 고리 구성원을 가진 단환식 아릴기이며;
    R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기이고;
    R2는 수소, 또는 -CH3이며;
    Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
    W는 수소, 알킬산 또는 지방산의 에스테르, 또는 X이며, X는:
    Figure pct00163
    또는
    Figure pct00164
    으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이다.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, GMP 조건 하에 수행된 마지막 또는 마지막에서 두 번째 단계는 임상 등급 이소옥사졸 유도체를 제조하기 위한 전체 반응 계획의 일부로서 비-GMP 조건 하에서 하나 이상의 반응 단계가 선행되는 것인 방법.
  29. 식 (IIa)의 화합물:
    Figure pct00165
    (IIa),
    식에서:
    Ra는 메틸 또는 수소이고;
    Rb는 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자를 가질 수 있으며, 할라이드, 시아노, 및 저급 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 5 내지 7개 고리 구성원을 가진 단환식 아릴기이며;
    R은 페닐기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 것인 하나 이상의 치환기를 가지는 치환된 페닐기; 벤질기; 하나 이상의 치환기가 아미노, 아미디노, 구아니디노, 하이드라지노, 아미다조닐, C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퓨릴, 및 하이드록실 기 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 벤질기; 또는 8 내지 11개의 고리 구성원을 가지며, 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 가질 수 있는 이환식 아릴기이고;
    R2는 수소, 또는 -CH3이며;
    Y는 수소, 중수소, 또는 할로겐으로부터 선택되고;
    W는 X이며, X는 알킬산 또는 지방산,
    Figure pct00166
    ,
    Figure pct00167
    ,
    Figure pct00168
    , 또는
    Figure pct00169
    으로부터 선택되고, 식에서 Z는 OR4이며, R4는 수소 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 Z는 아미노산 또는 아미노산 에스테르이고, n은 1 또는 2이다.
  30. 백신 효능을 향상시키는 방법으로서, 대상체에게 백신접종 전에, 및/또는 중에, 및/또는 후에 CBP/β-카테닌 매개 신호전달을 억제하고/하거나 p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키기에 충분한 양의 청구항 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  31. 제31항에 있어서, 투여된 화합물의 양은 치료적 유효량을 포함하는 것인 방법.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 백신 효능을 향상시키는 단계는 백신 항원 특이적 항체의 증가된 수준; 제공되는 퍼센트 보호의 증가; 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성의 증가; 및/또는 보호 기간의 증가 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, CBP/β-카테닌 매개 신호전달을 억제하고/하거나 p300/카테닌 매개 신호전달을 향상시키는 단계는: 대상체의 활성화된 T 세포의 분할 후 세포 비대칭의 대사적 유지; 분화된 기억 T 세포의 수 및/또는 지속성을 증가시킴으로써 항원 특이적 면역의 향상; 및/또는 선천성 및 후천적 면역 체계 사이의 협동성을 향상시키기 위하여 항원 제공 세포에 의한 T 세포에의 항원 제공의 향상 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  34. 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 백신접종은 항-바이러스 백신의 투여를 포함하는 것인 방법.
  35. 제30항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 백신접종은 인플루엔자, SARS, SARS-CoV-2, HPV-A, HPV-B, 및/또는 헤르페스 조스터로부터 선택된 항-바이러스 백신의 투여를 포함하는 것인 방법.
  36. 제30항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 55세-75세, 55세-85세, 50세 이상, 60세 이상, 또는 65세 이상의 나이의 인간인 것인 방법.
  37. 제30항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계는: 백신접종 전 프라이머로서의 투여; 및/또는 백신접종과의 공동 투여; 및/또는 초기 백신에 후속적인 투여 또는 공동 투여를 포함하는 것인 방법.
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