KR20220140503A - 항-tmprss2 항체 및 항원 결합 단편 - Google Patents

항-tmprss2 항체 및 항원 결합 단편 Download PDF

Info

Publication number
KR20220140503A
KR20220140503A KR1020227026885A KR20227026885A KR20220140503A KR 20220140503 A KR20220140503 A KR 20220140503A KR 1020227026885 A KR1020227026885 A KR 1020227026885A KR 20227026885 A KR20227026885 A KR 20227026885A KR 20220140503 A KR20220140503 A KR 20220140503A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cdr
amino acid
acid sequence
seq
ser
Prior art date
Application number
KR1020227026885A
Other languages
English (en)
Inventor
알리나 바움
크리스토스 키랏소스
리사 퍼셀
Original Assignee
리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 filed Critical 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Publication of KR20220140503A publication Critical patent/KR20220140503A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 개시는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 바이러스 감염증(예를 들어 코로나바이러스 감염증 또는 인플루엔자 바이러스 감염증)을 치료하거나 예방하기 위해 이러한 항체 및 단편을 사용하는 방법을 제공한다.

Description

항-TMPRSS2 항체 및 항원 결합 단편
정부 라이선스 권리
본 발명은 미국 보건복지부(U.S. Department of Health and Human Services)에서 수여한 계약 HHSO100201700020C 하의 정부 지원을 통해 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에서 소정의 권리를 갖는다.
서열 목록
서열 목록의 공식 사본은 2021년 2월 9일자로 생성되고 "10737WO01_Sequence_Listing_ST25.txt"의 파일명을 가진 약 64 KB 크기의 ASCII 형식의 서열 목록으로서, EFS-Web을 통해 전자 방식으로 명세서와 함께 동시에 제출된다. 본 ASCII 형식의 문헌에 포함된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
기술분야
본 발명은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 단편, 및 상기 항체 및 단편으로 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스와 같은 바이러스는 바이러스 뉴라미니다아제(NA) 또는 이온 채널 단백질인 매트릭스 단백질 2(M2)를 표적으로 하는 현재 사용 중인 약물에 대한 내성을 획득하였다. 또한, 새롭게 식별된 바이러스(예: 코로나바이러스)는 그 특성이 충분히 분석되지 않았기 때문에 치료하기 어려울 수 있다. 약물 내성의 출현과 새롭게 식별된 바이러스는 새로운 항바이러스 전략의 개발이 필요함을 강조한다. 숙주 세포 표적화는 이탈 돌연변이체의 출현을 감소시키거나 피할 수 있지만, 광범위한 발현으로 인해 "싱크(sink)"를 생성하고 독성에 대한 우려를 제기할 수 있다. 인플루엔자를 포함하여(Zmora 등의 Non-human primate orthologues of TMPRSS2 cleave and activate the influenza virus hemagglutinin. PLoS ONE. 12, e0176597 (2017); Bφttcher-Friebertshδuser 등의 Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011); Bertram 등의 TMPRSS2 and TMPRSS4 facilitate trypsin-independent spread of influenza virus in Caco-2 cells. Journal of Virology. 84, 10016-10025 (2010); Tarnow 등의 TMPRSS2 is a host factor that is essential for pneumotropism and pathogenicity of H7N9 influenza A virus in mice. Journal of Virology (2014), May;88(9):4744-51) and coronavirus (Heurich 등의 TMPRSS2 and ADAM17 cleave ACE2 differentially and only proteolysis by TMPRSS2 augments entry driven by the severe acute respiratory syndrome coronavirus spike protein. Journal of Virology. 88, 2202-2013 (2014)) 다수의 호흡기 바이러스 융합 단백질은 활성화를 위해 숙주 프로테아제(들)에 의해 절단을 필요로 하는 것으로 나타났다(Shirato 등의 Clinical Isolates of Human Coronavirus 229E Bypass the Endosome for Cell Entry. Journal of Virology. 91, e01387-16 (2017); Reinke 등의 Different residues in the SARS-CoV spike protein determine cleavage and activation by the host cell protease TMPRSS2. PLoS ONE. 12, e0179177 (2017); Zhou 등의 Protease inhibitors targeting coronavirus and filovirus entry. Antiviral Research. 116, 76-84 (2015); Zmora et al. TMPRSS2 Isoform 1 Activates Respiratory Viruses and Is Expressed in Viral Target Cells. PLoS ONE. 10, e0138380 (2015)).
인플루엔자 A 헤마글루티닌 전구체(HA0)는 활성화를 위해 숙주 세린 프로테아제에 의해 HA1 및 HA2로의 절단을 필요로 한다. 예를 들어, 막관통 프로테아제 세린 2; TMPRSS2, TMPRSS4, 및 TMPRSS11D 뿐만 아니라 인간 기도 트립신 유사 프로테아제(HAT)도 HA 절단에 연루되어 온 것으로 보인다(Bertram 등의 TMPRSS2 and TMPRSS4 facilitate trypsin-independent spread of influenza virus in Caco-2 cells. Journal of Virology. 84, 10016-10025 (2010); Bottcher 등의 Proteolytic Activation of Influenza Viruses by Serine Proteases TMPRSS2 and HAT from Human Airway Epithelium. Journal of Virology. 2006 Oct;80(19):9896-8; 국제 특허 출원 공개 제WO2017/151453호). TMPRSS2는 또한 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)와 같은 코로나바이러스에서 스파이크 단백질을 절단하고 활성화시킨다(Heurich 등의 TMPRSS2 and ADAM17 cleave ACE2 differentially and only proteolysis by TMPRSS2 augments entry driven by the severe acute respiratory syndrome coronavirus spike protein. Journal of Virology. 88, 2202-2013 (2014)). 추가로, TMPRSS2는 항암 요법의 표적이다. 예를 들어 WO2008127347 및 WO2002004953 참조. TMPRSS2와 ERG 간의 융합체(TMPRSS2:ERG)은 ERα에 의해 촉발되고 ERα에 의해 억제되는 전립선 발암의 주요 동인으로 알려진 유전자 융합체이다. Bonkhoff의 문헌[Estrogen receptor signaling in prostate cancer: Implications for carcinogenesis and tumor progression, Prostate 78(1): 2-10 (2018)].
예를 들어, 면역조직화학에 유용한 TMPRSS2의 소분자 억제제 및 연구 항체가 있지만, 중화 치료 항-TMPRSS2 항체 및 바이러스 감염의 치료 및 예방을 위한 이들의 용도에 대한 요구가 당업계에 있다. 예를 들어 Shen 등의 문헌[Biochimie 142: 1-10 (2017)], WO2008127347; WO2002004953; US9498529; Abcam(Cambridge, MA)으로부터 입수 가능한 항체 ab92323또는 Santa Cruz Biotech(Dallas, TX)으로부터 입수 가능한 항체 sc-515727 및 sc-101847을 참조한다. 본 발명은 mAb8021, mAb8029, 및 mAb8028와 같은 인간 항-인간 TMPRSS2 항체, 및 예를 들어 항-인플루엔자 HA 항체(예: HA 1군 또는 HA 2군) 또는 항-코로나바이러스 스파이크 단백질 항체(예: 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 코로나바이러스(SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군(MERS) 코로나바이러스(MERS-CoV), 및 SARS-CoV-2 (COVID-19의 원인인 바이러스로서, 이전에 2019-nCoV로서 지칭됨))와 같은 다른 치료제와의 조합을 포함하는 이들의 조합을 제공하고, 바이러스 감염증을 치료하기 위한 이들의 사용 방법을 제공함으로써 이러한 요구를 부분적으로 다룬다.
본 발명은 인간 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 중화 인간 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단리된 재조합 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항원 결합 단백질은: (a) 서열번호 2, 22, 또는 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 및/또는 (b) 서열번호 10, 30, 또는 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 항원 결합 단백질은: (a) 서열번호 10, 30, 또는 50에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 2, 22, 또는 42에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다: (a) 서열번호 10, 30, 또는 50에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 10, 30, 또는 50에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3; 및/또는 (b) 서열번호 2, 22, 또는 42에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 2, 22, 또는 42에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 항원 결합 단백질은 다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역: (a) 아미노산 서열 F T F R S Y D (서열번호 4)를 포함하는 CDR-H1; (b) 아미노산 서열 G S A G D T (서열번호 6)를 포함하는 CDR-H2; (c) 아미노산 서열 R V G D W G S G Y L D Y (서열번호 8)를 포함하는 CDR-H3; 및 다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다: (a) 아미노산 서열 S I S I Y (서열번호 12); (b) 아미노산 서열 A S (서열번호 14); 및/또는 (c) 아미노산 서열 Q S Y G T P F T (서열번호 16). 본 발명은 다음을 포함하는 항원 결합 단백질을 또한 제공한다: (a) 서열번호 18, 38, 또는 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (b) 서열번호 20, 40, 또는 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린.
일부 양태에서, 인간 막관통 프로테아제 세린 2(TMPRSS2)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 단리된 재조합 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음의 특징 중 하나 이상을 갖는다:
(a) 약 10-9 M 미만의 EC50으로 TMPRSS2에 결합함;
(b) 감염 동물에게 투여된 된 후, 상기 투여가 없는 비슷한 코로나바이러스 감염 동물과 비교했을 때, 상기 코로나바이러스 감염 동물에서 생존율 증가를 나타냄; 및/또는
(c) 다음을 포함함:
(i) 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역(HCVR)에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 10에 제시된 경쇄 가변 영역(LCVR)에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3); 또는
(ii) 서열번호 22에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 30에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3); 또는
(iii) 서열번호 42에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 50에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3).
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 2에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 10에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역
(a) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
(b) 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
(c) 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
(a) 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
(b) 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
(c)서열번호 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 또는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 또는 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 22에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 30에 제시된 LCVR과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역
(a) 서열번호 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
(b) 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
(c) 서열번호 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
(a) 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
(b) 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
(c) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 또는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 또는 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: 서열번호 42에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 50에 제시된 LCVR과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
(b) 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
(c) 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
(a) 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
(b) 서열번호 54에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
(c) 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
일부 양태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: (a) 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역;
및/또는 (b) 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명은 또한 (예를 들어 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.)를 이용한 실시간 무표지 바이오층 간섭 검정을 사용하고 이를 토대로 결정했을 때) TMPRSS2에 결합하기 위해 본원에 제시된 임의의 항원 결합 단백질과 경쟁하거나; 본원에 제시된 임의의 항원 결합 단백질과 동일한, TMPRSS2(또는 이의 단편) 상의 에피토프 또는 중첩 에피토프에 결합하는 임의의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 TMPRSS2에 결합하고 또 다른 항원 또는 상이한 에피토프에 있는 TMPRSS2에 결합하는 다중특이적 항원 결합 단백질을 제공한다. 예를 들어, 다중특이적 분자는 (a) TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인; 및 (b) 또 다른 항원에 특이적으로 결합하거나 TMPRSS2에 특이적으로 결합하거나 제1 항원 결합 도메인의 에피토프와 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 다중특이적 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
본 발명은 또한 다음 특성 중 하나 이상을 포함하는 임의의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예를 들어 본원에 제시된 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편)을 제공한다:
TMPRSS2-발현 세포(예: Calu-3 세포)에서 인플루엔자 바이러스(예: A/푸에르토 리코/08/1934 (H1N1)) 또는 코로나바이러스(예: SARS-CoV, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV-2)의 성장을 억제함;
TMPRSS-발현 세포의 표면에 결합함;
TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의하게 결합하지 않음;
시험관 내에서 인플루엔자 바이러스 감염증 또는 코로나바이러스 감염증의 확산을 제한함; 및/또는
인간 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 인플루엔자 바이러스 감염증 또는 코로나바이러스 감염증으로 인한 사망 및/또는 체중 감소로부터 보호함.
본 발명은 또한, 예를 들어 시험관 내에서 또는 대상체의 체내에서 TMPRSS2 폴리펩티드에 결합된, 본원에 제시된 임의의 항원 결합 단백질을 포함하는 복합체를 제공한다.
본 발명은 또한 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029) 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은: (a) 상기 항원 결합 단백질의 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 사슬을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 도입하는 단계; (b) 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에 숙주 세포(예: 세포, 피치아 세포, 또는 피치아 파스토리스 세포)를 배양하는 단계; 및 (c) 임의로, 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬을 숙주 세포 및/또는 상기 숙주 세포를 성장시킨 배지로부터 단리하는 단계를 포함한다. 이러한 방법의 생성물인 항원 결합 단백질 및 면역글로불린 사슬은 발명의 일부분이다.
다음을 포함하는 폴리펩티드 또한 본 발명의 일부분을 구성한다: (a) 서열번호 2, 22, 또는 42 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 VH 도메인의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 또는 (b) 서열번호 10, 30, 또는 50 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VL 도메인의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3. 일부 구현예에서, 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
다음을 포함하는 폴리펩티드(예: 면역글로불린)(예를 들어, 숙주 세포 내에 있는 폴리펩티드) 또한 본 발명의 일부분을 구성한다: (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VH 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3; 또는 (b) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VL 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3. 유사하게, 본 발명은 다음을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 숙주 세포 내에 있는 폴리펩티드)를 제공한다: (a) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VH 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3; 또는 (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VL 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3. 유사하게, 본 발명은 다음을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 숙주 세포 내에 있는 폴리펩티드)를 제공한다: (a) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VH 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3; 또는 (b) 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VL 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3. 일부 구현예에서, 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩티드를 암호화한 폴리뉴클레오티드(예: DNA 또는 RNA)를 제공한다. 본 발명의 일 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 2개의 상이한 면역글로불린 사슬(예: 중쇄 및 경쇄)을 암호화한다. 본 발명의 일 구현예에서, 하나의 폴리뉴클레오티드는 면역글로불린 경쇄를 암호화하고, 다른 폴리뉴클레오티드는 면역글로불린 중쇄를 암호화한다(예를 들어, 여기서 사슬은 숙주 세포 또는 용기 내에 있음). 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 벡터(예: 플라스미드) 내에 있고/있거나 숙주 세포 염색체에 통합된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 것과 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명의 숙주 세포(예: CHO 세포, 피치아 세포, 또는 피치아 파스토리스 세포)는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029), 이의 폴리펩티드, 또는 이러한 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 및/또는 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 추가의 치료제(예: 항 바이러스제 및/또는 백신)과 함께 포함하는 조성물 또는 키트를 제공한다. 예를 들어, 조성물은 항원 결합 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 및 임의로 추가의 치료제를 포함하는 약학적 조성물일 수 있다. 추가의 치료제는 렘데시비르(remdesivir), 클로로퀸(chloroquine), 로피나비르(lopinavir), 리토나비르(ritonavir), 리바비린(ribavirin), 리디파스비르(ledipasvir), 소포스부비르(sofosbuvir), 리디파스비르와 소포스부비르의 조합, 오셀타미비르(oseltamivir), 자나미비르(zanamivir), 리바비린(ribavirin) 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 및/또는 인플루엔자 HA 또는 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 국제 특허 출원 공개 제 WO2016/100807에 제시된 것과 같이, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B. 본 발명의 일 구현예에서, 추가의 치료제는, 국제 특허 출원 공개 제WO/2015/179535호에 제시된 것과 같이, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2.
본 발명의 일 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 함께 제공되는 추가의 치료제는 H1H14611N2와 같은 인플루엔자 HA 2군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H14611N2의 VH 및 VL을 포함하거나; H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는, 항체 또는 단편이다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 함께 제공되는 추가의 치료제는 H1H14612N2와 같은 인플루엔자 HA 2군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H14612N2의 VH 및 VL을 포함하거나, H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 단편이다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 함께 제공되는 추가의 치료제는 H1H11729P와 같은 인플루엔자 HA 1군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H11729P의 VH 및 VL을 포함하거나; H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는, 항체 또는 단편이다.
본 발명은 또한 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029) 또는 이의 조성물(예: 약학적 조성물)을 포함하는 용기 또는 주사 장치를 제공한다.
본 발명은 또한 인플루엔자 바이러스 감염증 이외의 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예: 인간)에서 이를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 암(예: 전립선암, 대장암, 폐암, 췌장암, 요로암, 유방암, 난소암, 전립선 선암종, 신장 세포 암종, 결장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종, 및/또는 흉막 중피종) 또는 감염증(예를 들어 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, 파라인플루엔자 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 또는 C형 간염 바이러스(HCV)로 인한 감염증과 같은 바이러스 감염증)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예: 인간)에서 이를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 상기 방법은 항원 결합 단백질을 하나 이상의 추가 치료제(예: 항-바이러스제 및/또는 백신)와 함께 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 추가의 치료제는 렘데시비르, 클로로퀸, 로피나비르, 리토나비르, 리바비린, 리디파스비르, 소포스부비르, 리디파스비르와 소포스부비르의 조합, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 및 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원이다. 본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 국제 특허 출원 공개 제 WO2016/100807호에 제시된 것과 같이, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B. 본 발명의 일 구현예에서, 추가의 치료제는, 국제 특허 출원 공개 제WO/2015/179535호에 제시된 것과 같이, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2.
본 발명은 또한 본원에 제시된 항-TMRPSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 대상체(예: 인간)의 신체 내에 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내에 주입하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 항원 결합 단백질은 대상체의 신체에 비경구로(예: 피하, 정맥내 또는 근육내) 주입된다.
본 방법을 기술하기 전에, 본 발명은 기술된 특정한 방법 및 실험 조건으로 한정되지 않음을 이해해야 하는데, 이는 이러한 방법 및 조건이 다양할 수 있기 때문이다. 본원에서 사용되는 용어는 단지 특정 구현예를 기술하기 위한 것이고, 한정하도록 의도되지 않음을 또한 이해해야 하는데, 이는 본 발명의 범주가 첨부된 청구범위에 의해서만 한정될 것이기 때문이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업계의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명을 실시하거나 시험하는 데 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이제 기술된다. 본원에 언급된 모든 간행물은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
용어 “코로나바이러스” 또는 “CoV”는 MERS-CoV, SARS-CoV, 및 SARS-CoV-2를 포함하지만 이에 한정되지 않는 코로나바이러스 계열의 임의의 바이러스를 지칭한다. SARS-CoV-2는 COVID-19를 유발하는 새롭게 출현한 코로나바이러스를 지칭하는데, 이 바이러스는 중국 우한에서 시작하여 전 세계적으로 급속히 확산되는 심각한 발병의 원인으로 초기에 확인되었다. 이는 바이러스 스파이크 단백질을 통해 인간 숙주 세포 수용체 안지오텐신 전환 효소 2(ACE2)에 결합한다. 스파이크 단백질은 바이러스의 막 융합을 위해 스파이크 단백질을 활성화시키는 TMPRSS2에도 결합하고 이에 의해 절단된다.
“S 단백질”로도 불리는 용어 “CoV-S”는 코로나바이러스의 스파이크 단백질을 지칭하며, MERS-CoV-S, SARS-CoV-S, 및 SARS-CoV-2-S와 같은 특정 S 단백질을 지칭할 수 있다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질은 1273 아미노산 I형 막 당단백질로서, 외피형 코로나바이러스 입자의 표면에서 스파이크 또는 페플로머(peplomers)를 구성하는 삼량체로 조립된다. 단백질은 두 가지 필수 기능, 즉 숙주 수용체 결합 및 막 융합을 갖는데, 이는 S 단백질의 N-말단(S1) 절반 및 C-말단(S2) 절반에 기인한다. CoV-S는 S1 서브유닛에 존재하는 수용체 결합 도메인(RBD)을 통해 이의 동족 수용체에 결합한다. 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 아미노산 서열은 서열 번호 61에 제공된 아미노산 서열로 예시된다. 용어 “CoV-S”는 상이한 CoV 단리물로부터 단리된 CoV 스파이크 단백질의 단백질 변이체뿐만 아니라 재조합 CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편도 포함한다. 이 용어는 또한, 예를 들어 히스티딘 태그, 마우스 또는 인간 Fc, 또는 ROR1과 같은 신호 서열에 결합된 CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 “코로나바이러스 감염증” 또는 “CoV 감염증”은 MERS-CoV, SARS-CoV, 또는 SARS-CoV-2와 같은 코로나바이러스 감염증을 지칭한다. 이 용어는 종종 하기도에서의 호흡기 감염증을 포함한다. 증상은 고열, 기침, 호흡곤란, 폐렴, 설사와 같은 위장 증상, 장기 부전(신부전 및 신기능 장애), 패혈성 쇼크, 및 중증 사례에서의 사망을 포함한다. SARS-CoV-2 감염증은 코로나바이러스 질환 19(COVID-19)를 유발할 수 있는데, 이는 발열, 오한, 호흡곤란, 울혈, 기침, 피로, 몸살/근육통, 미각 및/또는 후각 상실과 같은 증상을 유발할 수 있다.
“인플루엔자 HA”로도 불리는 “인플루엔자 헤마글루티닌(influenza hemagglutinin)”이라는 용어는 인플루엔자 비리온의 표면에서 발견되는 3량체 당단백질로서, (α-2,3- 및 α-2,6-시알산에 대한 HA1 결합을 통한) 바이러스의 부착 및 (형태 변화를 통한) 숙주 세포 내로의 진입을 매개한다. HA는 다음 2개의 구조적 도메인을 포함한다: (고빈도의 항원성 돌연변이를 거치는) 수용체 결합 부위를 함유하는 구형 헤드 도메인; 및 (인플루엔자 바이러스의 다양한 균주 중에서 더 보존되는) 줄기 영역. 인플루엔자 HA는 전구체(HA0)로서 합성되고, 이는 단백질 분해 과정을 거쳐 2개의 아단위(HA1 및 HA2)를 생성하는데, 이들은 서로 결합하여 줄기/구형 헤드 구조를 형성한다. 바이러스 HA는 바이러스 상에서 가장 가변적인 항원이며, 줄기(HA2)는 각각의 군 내에서 고도로 보존된다.
“인플루엔자 NA”로도 불리는 “인플루엔자 뉴라미니다아제”라는 용어는 시알산(N-아세틸뉴라미닌)과 인접한 당 잔기 사이의 α-케토시드 결합을 절단하는 엑소시알리다아제(EC 3.2.1.18)이다.
전장 인플루엔자 HA의 아미노산 서열은 수탁번호 FJ966082.1로서 GenBank에 제공된 인플루엔자 단리물 H1N1 A/캘리포니아/04/2009의 아미노산 서열로 예시된다. 용어 “인플루엔자-HA”는 상이한 인플루엔자 단리물로부터 단리된 인플루엔자 HA의 단백질 변이체(GQ149237.1, NC_002017, KM972981.1 등)를 또한 포함한다. 용어 “인플루엔자-HA”는 또한 재조합 인플루엔자 HA 또는 이의 단편을 포함한다. 이 용어는 또한, 예를 들어, 히스티딘 태그, 마우스 또는 인간 Fc, 또는 신호 서열에 결합된 인플루엔자 HA 또는 이의 단편을 포함한다.
항-TMPRSS2 “항원 결합 단백질”은, 단일특이적인지 또는 다중특이적인지 여부에 상관없이, TMPRSS2 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 또는 둘 이상의 폴리펩티드의 복합체(예: 사량체 IgG 항체), 예를 들어 항-TMPRSS2 항체 또는 항원 결합 단편이다.
TMPRSS2
TMPRSS2(막관통 프로테아제 세린 2)는 인간 염색체 21 상에 위치한 단백질로서, 인플루엔자 바이러스 감염성에 중요한 세린 프로테아제 계열(2형 막관통 세린 프로테아제(TTSP))에 속한다. TMPRSS2는 인플루엔자 바이러스 HA0의 HA1 및 HA2로의 절단을 매개하는 것으로 입증되었다.
인간 TMPRSS2 유전자는 혈장 막에 고정되는 492개 아미노산의 예측 단백질을 암호화한다. 단백질은 Arg255와 Ile256 사이의 자가촉매 절단을 통해 성숙한 형태로 전환된다. 절단 후, 성숙한 프로테아제는 대부분 막에 결합되지만, 이들 중 일부는 세포외 환경 내로 유리될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 인간 TMPRSS2(V160M)는 다음 아미노산 서열을 포함한다:
MALNSGSPPAIGPYYENHGYQPENPYPAQPTVVPTVYEVHPAQYYPSPVPQYAPRVLTQASNPVVCTQPKSPSGTVCTSKTKKALCITLTLGTFLVGAALAAGLLWKFMGSKCSNSGIECDSSGTCINPSNWCDGVSHCPGGEDENRCVRLYGPNFILQMYSSQRKSWHPVCQDDWNENYGRAACRDMGYKNNFYSSQGIVDDSGSTSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVNLNSSRQSRIVGGESALPGAWPWQVSLHVQNVHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNNPWHWTAFAGILRQSFMFYGAGYQVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLQKPLTFNDLVKPVCLPNPGMMLQPEQLCWISGWGATEEKGKTSEVLNAAKVLLIETQRCNSRYVYDNLITPAMICAGFLQGNVDSCQGDSGGPLVTSKNNIWWLIGDTSWGSGCAKAYRPGVYGNVMVFTDWIYRQMRADG (서열번호 63; 메티오닌 160은 굵은 글씨체로 표시됨). 본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS2 폴리펩티드는 V160M 돌연변이를 포함하지 않는다. NCBI 수탁 번호 NM_005656.3을 또한 참조한다.
본 발명의 일 구현예에서, 히말라야 원숭이(Macaca mulatta) TMPRSS2(S129L, N251S, I415V, R431Q, D492G)는 다음 아미노산 서열을 포함한다:
MALNSGSPPGVGPYYENHGYQPENPYPAQPTVAPNVYEVHPAQYYPSPVPQYTPRVLTHASNPAVCRQPKSPSGTVCTSKTKKALCVTMTLGAVLVGAALAAGLLWKFMGSKCSDSGIECDSSGTCISLSNWCDGVSHCPNGEDENRCVRLYGPNFILQVYSSQRKSWHPVCRDDWNENYARAACRDMGYKNSFYSSQGIVDNSGATSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVRSNLSRQSRIVGGQNALLGAWPWQVSLHVQNIHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNSPWQWTAFVGTLRQSSMFYEKGHRVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLHTPLTFNEVVKPVCLPNPGMMLEPEQHCWISGWGATQEKGKTSDVLNAAMVPLIEPRRCNNKYVYDGLITPAMICAGFLQGTVDSCQGDSGGPLVTLKNDVWWLIGDTSWGSGCAQANRPGVYGNVTVFTDWIYRQMRADG
(서열번호 64). 본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS2 폴리펩티드는 S129L, N251S, I415V, R431Q, 및/또는 D492G 돌연변이를 포함하지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 생쥐(Mus musculus) TMPRSS2 mRNA는 NCBI 수탁번호 NM_015775.2에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
바이러스
본 발명은 대상체에서 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 포함한다. 용어 “바이러스”는 이로 인한 대상체의 신체 내 감염증이 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여에 의해 치료될 수 있거나 예방될 수 있는 임의의 바이러스를 포함한다(예를 들어, 여기서 바이러스의 감염성은 TMPRSS2에 따라 적어도 부분적으로 달라짐). 본 발명의 일 구현예에서, “바이러스”는 HA0, 스파이크 단백질(예: CoV-S), 또는 숙주 내 세포에 대한 바이러스의 완전한 감염성을 위해 단백질분해 절단이 요구되는 TMPRSS2의 또 다른 기질을 발현하는 임의의 바이러스이다. 용어 “바이러스”는 또한 대상체의 호흡기 조직(예를 들어 상기도 및/또는 하기도, 기관, 기관지, 폐)을 감염시키고 항-TMPRSS2의 투여에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 바이러스인 TMPRSS2-의존성 호흡기 바이러스를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-CoV(중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스), MERS-CoV(중동 호흡기 증후군(MERS) 코로나바이러스), SARS-CoV-2, 파라인플루엔자 바이러스, 센다이 바이러스(SeV), 인간 메타뉴모바이러스, 및/또는 C형 간염 바이러스(HCV)를 포함한다. “바이러스 감염증”은 바이러스가 대상체의 신체에 침입하고 증식하는 것을 지칭한다. 본 발명은 “바이러스”가 인플루엔자 바이러스를 배제하는 구현예, 예를 들어 바이러스 감염증이 인플루엔자 바이러스 감염증을 배제하는 구현예를 포함한다.
코로나바이러스 비리온은 직경이 약 125 nm인 구형이다. 코로나바이러스의 가장 두드러진 특징은 비리온의 표면에서 퍼져나오는 클럽 형상의 스파이크 돌기이다. 이들 스파이크는 비리온의 정의적인 특징이며, 코로나바이러스라는 명칭을 떠올리게 하는 태양의 코로나와 같은 외관을 제공한다. 비리온의 외피 내에는 뉴클레오캡시드가 있다. 코로나바이러스는 나선형으로 대칭된 뉴클레오캡시드를 가지고 있는데, 이는 양성-센스 RNA 바이러스 중에서는 드물지만 음성-센스 RNA 바이러스에서는 훨씬 더 흔하다. MERS-CoV(중동 호흡기 증후군 코로나바이러스), SARS-CoV(중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스), 및 SARS-CoV-2는 코로나바이러스 계열에 속한다. 숙주 세포에 대한 비리온의 초기 부착은 S 단백질과 이의 수용체 간의 상호작용에 의해 개시된다. 코로나바이러스 S 단백질의 S1 영역 내의 수용체 결합 도메인(RBD) 부위는 바이러스에 따라 달라지며, 일부는 S1의 C-말단에서 RBD를 갖는다. S-단백질/수용체 상호작용은 코로나바이러스가 숙주 종을 감염시키는 주요 결정인자이며, 바이러스의 조직 향성을 관장한다. 많은 코로나바이러스는 펩티다아제를 이들의 세포 수용체로서 사용한다. 수용체 결합 후, 바이러스는 다음으로 숙주 세포 시토졸에 대한 액세스를 획득해야 한다. 이는 일반적으로 카텝신, TMPRRS2, 또는 다른 프로테아제에 의한 S 단백질의 산-의존성 단백질 분해에 이어서, 바이러스와 세포막의 융합에 의해 달성된다.
인플루엔자 바이러스는 오르토믹소바이러스과(Orthomyxoviridae) 계열의 구성원이다. 이러한 계열은 외피 바이러스를 나타내는데, 이의 게놈은 분절화된 음성-센스 단일 가닥 RNA 분절을 갖는다. 이러한 계열에는 A형, B형, C형, 및 토고토바이러스(Thogotovirus)의 4가지 속이 있다. 인플루엔자 바이러스 부류 A, B, 및 C는 코어 단백질을 기준으로 하며, 바이러스 외피 당단백질인 헤마글루티닌(HA)과 뉴라미니다아제(NA)에 의해 결정된 아형으로 추가로 나누어진다(예: 아형 A/H1N1). 인플루엔자 아형을 정의하기 위해 사용된 적어도 18개의 인플루엔자 헤마글루티닌(“HA”) 단백질 아형(H1-H18 또는 HA1-HA18) 및 적어도 11개의 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 단백질 아형(N1-N11 또는 NA1-NA11)이 있다. 그룹 1 인플루엔자는 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, 및 H18 아형과 NA8, NA5, Na4, 및 NA1 아형을 갖는다. 그룹 2는 H3, H4, H7, H10, H14, 및 H15 아형과 NA6, NA9, NA7, NA2, 및 NA3 아형을 갖는다. 인플루엔자 A 바이러스는 다양한 포유동물과 조류 종을 감염시키는 반면, B형 및 C형 감염증은 주로 인간에게 제한된다. 인플루엔자 A 및 B 바이러스의 8개의 게놈 분절은 핵단백질에 의해 느슨하게 캡슐화된다.
이제 인간 파라인플루엔자 바이러스(HPIV)의 2개의 속, 즉 (HPIV-1 및 HPIV-3) 및 루불라바이러스(HPIV-2 및 HPIV-4)가 있다. 2개의 속(파라믹소바이러스) 모두는 인플루엔자 바이러스로부터 형태학적으로 분리될 수 있다.
쥣과 파라인플루엔자 바이러스로도 알려진 센다이 바이러스(sendai virus)는 레스피로바이러스 속의 유형 종이며, 인간 파라인플루엔자 바이러스 3, 소 파라인플루엔자 바이러스 3, 및 인간 파라인플루엔자 바이러스 1을 또한 포함한다. TMPRSS2는 파라인플루엔자 바이러스 및 센다이 바이러스(SeV)와 같은 호흡기 파라인플루엔자 바이러스에 대한 활성화 프로테아제이다. Abe 등의 문헌[J. Virol. 87(21): 11930-11935 (2013)] 참조.
인간 메타뉴모바이러스(HMPV)는 파라믹소바이러스 과(Paramyxoviridae)에 속하는 뉴모바이러스 아과(Pneumovirinae subfamily)의 메타뉴모바이러스 속(Metapneumovirus genus)의 제1 인간 구성원으로서 분류된다. 이는 외피를 가진 음성-센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. RNA 게놈은 9개의 상이한 단백질을 암호화하는 8개의 유전자를 포함한다. HMPV는 메타뉴모바이러스 속이기도 한 조류 뉴모바이러스(AMPV)와 유전자 순서가 동일하다. TMPRSS2는 인간 폐 상피에서 발현되고, HMPV F 단백질을 효율적으로 절단하고, HMPV의 증식을 뒷받침하며, HMPV 감염 환자에서 하기도 질환의 발생에 관여할 수 있다. Shirogane 등의 문헌[J Virol. 82(17): 8942-8946 (2008)] 참조.
C형 간염 바이러스(HCV)는 플라비바이러스 과(Flaviviridae)의 작고, 외피를 가진, 양성-센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 적어도 6개의 유전자형 및 다수의 아형을 갖는 HCV는 헤파시바이러스 속(hepacivirus genus)의 구성원이다. TMPRSS2는 결합 후 및 진입 단계에서 HCV 감염을 활성화시킬 수 있다. Esumi 등의 [Hepatology 61(2): 437-446 (2015)] 참조.
항-TMPRSS2 항체 및 항원 결합 단편
본 발명은 TMPRSS2 단백질 또는 이의 항원 단편에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 및 이의 항원 항원 결합 단편을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩티드 사슬, 즉 이황화 결합에 의해 상호 연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 면역글로불린 분자(즉, “완전 항체 분자”)뿐만 아니라 이의 다량체(예: IgM)을 지칭한다. 예시적인 항체는, 예를 들어 mAb8021, mAb8028, 및 mAb8029를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(“HCVR” 또는 “VH”)(예: 서열번호 2) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, CH2, 및 CH3으로 이루어짐)을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(“LCVR” 또는 “VL”)(서열번호 4) 및 경쇄 불변 영역(CL)을 포함한다. VH와 VL 영역은, 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는 더 보존적인 영역이 중간에 끼어 있는 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된 초가변 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단의 방향으로 다음 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 특정 구현예에서, 항체(또는 이의 항원 결합 단편)의 FR은 인간 생식계열 서열과 동일하거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형된다.
일반적으로, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존적인 프레임워크 영역(FR) 내에 위치한, 상보성 결정 영역(CDR)으로도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. 일반적으로, N-말단에서 C-말단 방향으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 각각의 도메인에 대한 아미노산의 할당은 Kabat 등의 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991)]; Kabat의 문헌[(1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75]; Kabat 등의 문헌[(1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616]; Chothia 등의 문헌[(1987) J Mol. Biol. 196:901-917]; 또는 Chothia 등의 문헌[(1989) Nature 342:878-883]의 정의에 따른다.
본 발명은 단클론 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 복수의 단리된 단클론 항원 결합 단백질을 포함하는 단클론 조성물을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “단클론 항체”는 실질적으로 균질한 항체의 집단을 지칭하며, 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에 있어서 동일하다. 조성물 중 “복수의” 이러한 단클론 항체 및 단편은 동일한 (즉, 전술한 바와 같이 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에 있어서 동일한) 항체 및 단편의 농도를 지칭하며, 여기서 농도는 자연에서, 예를 들어, 마우스 또는 인간과 같은 숙주 유기체의 혈액에서 정상적으로 발생하게 되는 것 보다 높다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 IgA(예: IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG(예: IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4), 또는 IgM 유형의 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 카파 또는 람다 유형의 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같이, “인간” 항원 결합 단백질, 예컨대 항체는 인간 세포에 존재하거나 마우스 세포와 같은 비인간 세포로 이식되었는지 여부와 상관없이, 인간 생식선 면역글로불린에서 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 예를 들어, US8502018, US6596541, 또는 US5789215 참조. 본 발명의 인간 mAb는 인간 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예컨대 시험관 내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체 내 체세포성 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 예를 들어 CDR과 특정 CDR3에 포함할 수 있다. 그러나, 본 설명에 사용된 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종(예: 마우스)의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 FR 서열 상에 이식된 항체를 포함하도록 의도되지는 않는다. 상기 용어는 비인간 포유동물 또는 비인간 포유동물의 세포에서 재조합적으로 생성되는 항체를 포함한다. 전술한 용어는 인간 대상체로부터 단리되었거나 인간 대상체에서 생성된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다. 아래 참조.
본 발명은 항-TMPRSS2 키메라 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 이의 사용 방법을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, “키메라 항체”는 제1 항체 유래의 가변 도메인 및 제2 항체 유래의 불변 도메인을 갖는 항체이며, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이한 종에서 유래된다. (US4816567; 및 Morrison 등의 문헌[(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855]).
용어 "재조합" 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 스플라이싱 및 이식유전자 발현을 포함하는 재조합 DNA 기술과 같은, 당업계에 알려진 기술 또는 방법에 의해 생성, 발현, 단리 또는 수득된 이러한 분자를 지칭한다. 이 용어는 비인간 포유동물(예를 들어, 유전자이식 마우스와 같은 유전자이식 비인간 포유동물 포함) 또는 세포(예를 들어, CHO 세포) 발현 시스템에서 발현되거나, 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체를 포함한다.
본원에 개시된 재조합 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 항원 결합 단편은 대장균/T7 발현 시스템에서 생산될 수도 있다. 본 구현예에서, 본 발명의 항-TMPRSS2 항체 면역글로불린 분자(예를 들어 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)를 암호화하는 핵산은 pET 기반 플라스미드에 삽입되고 대장균/T7 시스템에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 숙주 세포(예를 들어 대장균과 같은 박테리아 숙주 세포, 예컨대 BL21 또는 BL21DE3)에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역글로불린 사슬을 발현시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은, T7 프로모터에 작동 가능하게 연결된 면역글로불린 사슬을 암호화하는 폴리뉴클레오티드도 포함하는 숙주 세포에서 T7 RNA 중합효소를 발현시키는 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 대장균과 같은 박테리아 숙주 세포는 lac 프로모터에 작동 가능하게 연결된 T7 RNA 중합효소 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 중합효소와 사슬의 발현은 숙주 세포를 IPTG(이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노시드)와 함께 인큐베이션함으로써 유도된다. US4952496 및 US5693489 또는 Studier & Moffatt의 문헌[Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol. 1986 May 5;189(1): 113-30] 참조.
재조합 항체를 생산하기 위한 당업계에 알려진 여러 가지 방법이 있다. 항체의 재조합 생산을 하나의 예시적인 방법은 US4816567에 개시되어 있다.
형질전환은 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하는 임의의 공지된 방법에 의해 이루어질 수 있다. 이종 폴리뉴클레오티드를 포유류 세포 내로 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 덱스트란-매개 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개 형질감염, 원형질 융합, 전기천공, 폴리뉴클레오티드(들)의 리포좀으로의 캡슐화, 유전자총 주사(biolistic injection) 및 핵 내로 DNA의 직접 미세주입을 포함한다. 또한, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유류 세포 내로 도입될 수 있다. 세포를 형질전환하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호 및 제4,959,455호를 참조한다.
따라서, 본 발명은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예컨대 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하기 위한 재조합 방법을 포함하며, 상기 방법은 (i) 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)의 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 사슬 또는 CDR을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드(예를 들어 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 또는 59 중 임의의 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함함)를 도입하는 단계(여기서, 폴리뉴클레오티드는 벡터 내에 있고/있거나 숙주 세포 염색체 내에 통합되어 있고/있거나 프로모터에 작동 가능하게 연결됨); (ii) 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에서 숙주 세포(예: CHO 또는 피치아 또는 피치아 파스토리스)를 배양하는 단계; 및 (iii) 임의로, 숙주 세포 및/또는 숙주 세포를 성장시키는 배지로부터 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 단편)을 단리하는 단계를 포함한다. 2개 이상의 면역글로불린 사슬, 예를 들어 2개의 중쇄 면역글로불린 사슬 및 2개의 경쇄 면역글로불린 사슬을 포함하는 항체를 포함하는 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)을 만들 때, 단일 숙주 세포 내에서 사슬을 공동 발현시키면 예를 들어 세포 내에서 또는 세포 표면 상에서 또는 (이러한 사슬이 분비되는 경우) 세포의 외부에서 사슬의 결합이 유도되어 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)이 형성된다. 상기 방법은, 면역글로불린 중쇄만 발현되거나 면역글로불린 경쇄만 발현되는 것들(예를 들어 성숙한 단편 및/또는 이의 가변 도메인을 포함하여 본원에서 논의되는 것들 중 어느 하나)을 포함한다. 이러한 사슬들은, 예를 들어 이러한 사슬을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 발현에 있어서 중간체로서 유용하다. 예를 들어, 본 발명은 또한, 서열번호 1에 제시된 뉴클로오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 중쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인) 및 서열번호 9에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인)을 포함하고 이러한 생산 방법의 산물인 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 및 이의 항원 결합 단백질); 및 임의로 본원에 제시된 정제 방법을 포함한다. 본 발명은 또한, 서열번호 21에 제시된 뉴클로오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 중쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인) 및 서열번호 29에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인)을 포함하고 이러한 생산 방법의 산물인 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 및 이의 항원 결합 단백질); 및 임의로 본원에 제시된 정제 방법을 포함한다. 본 발명은 또한, 서열번호 41에 제시된 뉴클로오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 중쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인) 및 서열번호 49에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 경쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인)을 포함하고 이러한 생산 방법의 산물인 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 및 이의 항원 결합 단백질); 및 임의로 본원에 제시된 정제 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 상기 방법의 산물은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질로서, 다음을 포함하는 항체 또는 단편이다: 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LC. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 방법의 산물은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질로서, 다음을 포함하는 항체 또는 단편이다: 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LC. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 방법의 산물은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질로서, 다음을 포함하는 항체 또는 단편이다: 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LC.
포유류 세포를 포함하여, 진핵 및 원핵 숙주 세포는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질의 발현을 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 이러한 숙주 세포는 당업계에 잘 알려져 있고, 많은 숙주 세포가 ATCC(American Type Culture Collection)으로부터 입수 가능하다. 이들 숙주 세포는, 특히 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, 헬라(HeLa) 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예: Hep G2), A549 세포, 3T3 세포, HEK-293 세포, 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 포유류 숙주 세포는 인간, 마우스, 랫트, 개, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 세포주는 곤충 세포주(예를 들어 열대거세미나방(Spodoptera frugiperda) 또는 양배추은무늬밤나방(Trichoplusia ni)), 양서류 세포, 박테리아 세포, 식물 세포, 및 진균 세포이다. 진균 세포는 효모 및 사상 진균 세포를 포함하며, 이에는, 예를 들어, 피치아(Pichia), 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 피치아 핀란디카(Pichia finlandica), 피치아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피치아 코클라메(Pichia koclamae), 피치아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피치아 미누타(Pichia minuta)(오가테아 미누타(Ogataea minuta), 피치아 린드네리(Pichia lindneri)), 피치아 오푼티에(Pichia opuntiae), 피치아 테르모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피치아 살릭타리아(Pichia salictaria), 피치아 구에르컴(Pichia guercuum), 피치아 피즈페리(Pichia pijperi), 피치아 스팁티스(Pichia stiptis), 피치아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피치아 종 사카로마이세스 세리비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 종 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 종 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니제르(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 트리코더마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리엄 럭노웬스(Chrysosporium lucknowense), 푸자리움(Fusarium) 종 푸자리움 그라미니아룸(Fusarium gramineum), 푸자리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens), 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)가 포함된다. 본 발명은 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029와 같은 항원 결합 단백질; 또는 이의 이러한 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 숙주 세포(예를 들어 CHO 세포)를 포함한다.
용어 “특이적으로 결합하는”은 이러한 항원 결합 단백질들(예: mAb)이 25℃ 또는 37℃에서 Octet® HTX 바이오센서와 같은 실시간 무표지 바이오층 간섭계 검정에 의해 측정했을 때, 또는 BIACORE™과 같은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정했을 때, 또는 용액 친화도 ELISA에 의해 측정했을 때, TMPRSS2 단백질(예: 인간 TMPRSS2)과 같은 항원에 대해 적어도 약 10-8 M(예를 들어, 2.81 X 10-9 M; 9.31 X 10-9M; 10-9 M; 10-10M, 10-11 M, 또는 10-12 M)의 KD로서 표현된 결합 친화도를 갖는 것을 지칭한다. 본 발명은 TMPRSS2 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 항체 또는 항원 결합 단백질의 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연 발생적이거나, 효소적으로 수득할 수 있거나, 합성 또는 유전자 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 항원 결합 단편의 비제한적 예는: (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역(예를 들어 CDR3 펩티드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR))을 모방하는 아미노산 잔기 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩티드로 이루어진 최소 인지 단위를 포함한다. 다른 조작된 분자, 예를 들어, 도메인 특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, (예를 들어 WO08/020079 또는 WO09/138519에 정의된 것과 같은) 나노바디(예를 들어, 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 작은 모듈형 면역치료제(SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인 등도 본원에서 사용되는 “항원 결합 단편”이란 표현에 포함된다. 본 발명의 일 구현예에서, 항원 결합 단편은 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029의 3개 이상의 CDR(예를 들어 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 또는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함한다.
항체의 항원 결합 단편은, 본 발명의 일 구현예에서, 적어도 하나의 가변 도메인을 포함하게 된다. 이러한 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성을 가질 수 있고, 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나 이들과 프레임 내에 있는 적어도 하나의 CDR을 일반적으로 포함하게 된다. VL 도메인과 결합된 VH 도메인을 갖는 항원 결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적절한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이량체로서, VH - VH, VH - VL 또는 VL - VL 이량체를 포함할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 단량체 VH 또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적 구성은 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 위에서 열거된 임의의 예시적인 구성을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 이러한 가변 및 불변 도메인은 직접적으로 상호간에 연결되거나 또는 전체 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩티드 분자의 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성 또는 반 가요성 연결을 초래하는 적어도 2개(예를 들어 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 구성될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편은 위에서 열거된 가변 및 불변 도메인 구성 중 어느 하나의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있으며, 이들은 (예를 들어, 이황화 결합(들)에 의해) 서로 비공유 결합되고/되거나, 하나 이상의 단량체 VH 또는 VL 도메인과 비공유 결합된다.
항원 결합 단백질(예: 항체 및 항원 결합 단편)은 단일 특이적이거나 다중특이적(예: 이중특이적)일 수 있다. 다중특이적 항원 결합 단백질은 본원에서 추가로 논의된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 리간드와 같은 모이어티에 접합되거나, 인플루엔자 바이러스 감염증과 같은 바이러스 감염증의 치료에 유용한 치료 모이어티(“면역접합체”), 예컨대 항바이러스 약물, 제2 항-인플루엔자 항체, 또는 임의의 다른 모이어티에 접합될 수 있다. 아래 참조.
본 발명은 또한, TMPRSS2 폴리펩티드 또는 이의 항원 단편과 복합체화된/되거나 항-TMPRSS2 항체 또는 단편에 특이적으로 결합하는 제2 항체 도는 이의 항원 결합 단편(예: 검출 가능하게 표지된 제2 항체)와 복합체화된 본원에서 논의된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)을 포함하는 복합체를 제공한다. 본 발명의 일 구현예에서, 항체 또는 단편은 시험관 내에 있거나 (예를 들어 고형 기질에 고정되어 있거나) 대상체의 신체 내에 있다. 본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS2는 시험관 내에 있거나 (예를 들어, 고형 기재에 고정되어 있거나) 세포 표면 상에 있거나 대상체의 신체 내에 있다. 불용성 매트릭스 물질(예를 들어 유리, 또는 아가로오스 또는 세파로오스와 같은 다당류, 예를 들어 비드 또는 이의 다른 입자)에 공유 연결된, 고정화된 항-TMRPSS2 항체 및 이의 항원 결합 단편 또한 본 발명의 일부이며; 임의로, 여기서 고정화된 항체는 TMPRSS2 또는 이의 항원 단편 또는 이차 항체 또는 이의 단편과 복합체화된다.
“단리된” 항원 결합 단백질, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 및 벡터는 이들이 생산되는 세포 또는 세포 배양물에서 유래된 다른 생물학적 분자가 적어도 부분적으로 없다. 이러한 생물학적 분자는 핵산, 단백질, 다른 항체 또는 항원 결합 단편, 지질, 탄수화물, 또는 세포 부스러기 및 성장 배지와 같은 다른 물질을 포함한다. 추가로, 단리된 항체 또는 항원 결합 단백질은 숙주 세포 또는 이의 성장 배지에서 유래된 생물학적 분자와 같은 발현 시스템 성분이 적어도 부분적으로 없을 수 있다. 일반적으로, 용어 “단리된”은 이러한 생물학적 분자의 완전한 부재, 또는 물, 완충제, 또는 염의 부재, 또는 항체 또는 단편을 포함하는 약학적 제형 성분의 부재를 지칭하도록 의도되지는 않는다.
용어 “에피토프”는 항원 결합 단백질의 특정 항원 결정 부위, 예를 들어 파라토프로서 알려진 항체 분자의 가변 영역과 상호 작용하는 (예를 들어 TMPRSS2 폴리펩티드 상의) 항원 결정인자를 지칭한다. 단일 항원은 둘 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 영역에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 효능을 가질 수 있다. 용어 “에피토프”는 또한 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 이는 또한 항체에 의해 결합되는 항원의 영역을 지칭한다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 정의될 수도 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 서브 세트이며, 상호 작용의 친화도에 직접 기여하는 잔기들을 갖는다. 에피토프는 선형이거나, 비선형 아미노산으로 이루어진 입체 구조일 수 있다. 특정 구현예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 기 또는 설포닐 기와 같은, 분자들의 화학적으로 활성 표면군인 결정기를 포함할 수 있으며, 소정의 구현예들에서, 특이적인 3차원 구조적 특성, 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수도 있다.
항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드의 에피토프를 결정하는 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩티드 블롯 분석(Reineke의 문헌[(2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63] 참조), 펩티드 절단 분석, 결정학적 연구, 및 NMR 분석을 포함한다. 추가로, 에피토프 절제, 에피토프 추출, 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 사용될 수 있다(Tomer의 문헌[(2000) Prot. Sci. 9: 487-496] 참조). 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드)(예: 커버신(coversin))과 상호 작용하는 폴리펩티드 내의 아미노산을 식별하는데 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분석법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로 말하자면, 수소/중수소 교환 방법은 관심 단백질을 중수소-표지하고, 이어서 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드를 중수소-표지된 단백질에 결합시키는 단계를 포함한다. 이어서, TMPRSS2 단백질/항체 결합 단백질 복합체를 물로 전달하고, 항체 복합체에 의해 보호되는 아미노산 내의 교환 가능한 양성자를 계면의 일부가 아닌 아미노산 내의 교환 가능한 양성자보다 느린 속도로 중수소-대-수소 역교환한다. 결과적으로, 단백질/항원 결합 단백질 계면의 일부를 형성하는 아미노산은 중수소를 보유할 수 있고, 따라서 계면에 포함되지 않은 아미노산에 비해 상대적으로 더 높은 질량을 나타낸다. 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드)의 해리 후, 표적 단백질을 대상으로 프로테아제 절단 및 질량 분광 분석을 수행하여, 항원 결합 단백질과 상호 작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 밝혀낸다. 예를 들어, Ehring의 문헌[(1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259]; Engen 및 Smith의 문헌[(2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A] 참조.
본원에서 사용되는 용어 “경쟁”은 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이 항원(예: TMPRSS2)에 결합하여 또 다른 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이 항원에 결합하는 것을 억제하거나 차단하는 것을 지칭한다. 상기 용어는 2개의 항원 결합 단백질(예: 항체) 간의 쌍방 경쟁, 즉 제1 항체가 결합하여 제2 항체의 결합을 차단하는 것 및 그 반대의 경우도 포함한다. 소정의 구현예에서, 제1 항원 결합 단백질(예: 항체) 및 제2 항원 결합 단백질(예: 항체)은 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 제1 및 제2 항원 결합 단백질(예: 항체)은 상이하지만, 예를 들어 중첩하는 에피토프에 결합할 수 있고, 여기서 한 항체의 결합은, 예를 들어 입체 장애(steric hindrance)에 의해 제2 항체의 결합을 억제하거나 차단한다. 항원 결합 단백질(예: 항체) 간의 경쟁은 당업계에 알려진 방법, 예를 들어, 실시간 비표지 바이오-층 간섭계 검정에 의해 측정될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 제1 및 제2 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체) 간의 경쟁은 (TMPRSS2 단백질과 초기에 복합체화되지 않은) 고정화된 제1 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체)이 제2 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체)과 복합체화된 가용성 TMPRSS2 단백질에 결합하는 능력을 측정함으로써 결정된다. 제1 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체)이 복합체화된 TMPRSS2 단백질에 결합하는 능력이 복합체화되지 않은 TMPRSS2 단백질에 결합하는 능력에 비해 감소한다는 것은 제1 및 제2 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체)이 경쟁한다는 것을 나타낸다. 경쟁의 정도는 결합 감소의 백분율로서 표현될 수 있다. 이러한 경쟁은, 예를 들어 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.)를 이용한 실시간 무표지 바이오층 간섭 분석, ELISA(효소-결합 면역흡착 분석), 또는 SPR(표면 플라스몬 공명)을 사용해 측정할 수 있다.
항-TMPRSS2 항원 결합 단백질들(예: 단클론 항체(mAb)) 간의 결합 경쟁은 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.)를 이용한 대한 실시간 무표지 바이오층 간섭 분석을 사용해 결정할 수 있다. 예를 들어, 2개의 항-인간 TMPRSS2 단클론 항체들 간의 경쟁을 결정하기 위해, Octet 바이오센서 팁(Pall ForteBio Corp., # 18-5060)을 항-인간 TMPRSS2 mAb(이하 “mAb1”로서 지칭함)에 잠기게 하여 항-hFc 항체를 코팅한 바이오센서 팁 상에 항-TMPRSS2 mAb를 먼저 포획할 수 있다. 그런 다음, 차단의 양성 대조군으로서, 항체가 포획된 바이오센서 팁을 차단 mAb 용액에 침지함으로써 이를 알려진 차단 이소형 대조군 mAb(이하 “차단 mAb”로서 지칭함)로 포화시킬 수 있다. 그런 다음, mAb2가 mAb1과 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해, 일정 기간 동안 사전 인큐베이션한 항-인간 TMPRSS2 mAb(이하 “mAb2”로서 지칭함)과 인간 TMPRSS2 폴리펩티드의 공 복합체 용액에 바이오센서 팁을 추가로 침지하고, mAb1이 TMPRSS2 폴리펩티드에 결합하는 것을 결정할 수 있다. 실험의 모든 단계 사이에, 바이오센서 팁을 완충액에서 세척할 수 있다. 실시간 결합 반응을 실험의 전체 과정 동안 모니터링할 수 있고, 모든 단계가 종료된 후 결합 반응을 기록할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 경쟁 검정은 25℃에서, 예를 들어 완충액, 염, 계면활성제, 및 비-특이적 단백질(예를 들어 소 혈청 알부민)이 존재하는 가운데 약 7(예: 7.4)의 pH에서 수행된다.
일반적으로, 어떤 방식으로 변형되는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하며, 예를 들어 결합 활성을 몰 기준으로 표현했을 때, (부모 항체와 비교했을 때) 이의 TMPRSS2 결합 활성의 적어도 10%를 보유한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 부모 항체 대비 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% 또는 이상의 TMPRSS2 결합 친화도를 보유한다. 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 그의 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환(항체의 “보존적 변이체” 또는 “기능 보존 변이체”로서 지칭됨)을 포함할 수 있는 것으로도 의도된다.
면역글로불린 사슬(예: mAb8021 VH, VL, HC, 또는 LC, mAb8028 VH, VL, HC, 또는 LC, 또는 mAb8029 VH, VL, HC, 또는 LC))과 같은 폴리펩티드의 “변이체”는, BLAST 알고리즘으로 비교를 수행했을 때, 본원에 제시된 기준 아미노산 서열(예를 들어 서열번호 2, 10, 18, 20, 22, 30, 38, 40, 42, 50, 58, 또는 60) 기준 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70~99.9%(예를 들어 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭하며; 여기서, BLAST 알고리즘의 파라미터는 각 기준 서열의 전장에 걸쳐 각 서열 간에 최대 일치를 나타내도록 선택된다(예: 예상 임계값: 10; 단어 크기: 3; 쿼리 범위에서 최대 일치: 0; BLOSUM 62 매트릭스; 갭 비용: 존재 11, 연장 1; 조건부 구성 점수 매트릭스 조정).
폴리뉴클레오티드의 “변이체”는, BLAST 알고리즘으로 비교를 수행했을 때, 본원에 제시된 기준 뉴클레오티드 서열(예: 서열번호 1, 9, 17, 19, 21, 29, 37, 39, 41, 49, 57, 또는 59)에 대해 적어도 약 70~99.9%(예: 적어도 약 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 또는 99.9%) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 지칭하며, 여기서 BLAST 알고리즘의 파라미터는 각 기준 서열의 전장에 걸쳐 각 서열 간에 최대 일치를 나타내도록 선택된다(예: 예상 임계값: 10; 단어 크기: 28; 쿼리 범위에서 최대 일치: 0; 일치/불일치 점수: 1, -2; 갭 비용: 선형).
항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 본 발명의 일 구현예에서, 서열번호 2, 18, 22, 38, 42, 또는 58에 제시된 아미노산에 대해 적어도 70%(예: 80%, 85%, 90%, 95%, 99%)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 서열 번호 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60에 제시된 아미노산에 대해 적어도 70%(예: 80%, 85%, 90%, 95%, 99%)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
추가로, 변이체 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 미스센스 돌연변이(예를 들어, 보존적 치환), 비-센스 돌연변이, 결실, 또는 삽입과 같은 하나 이상의(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의) 돌연변이를 제외한, 본원에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 서열번호 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하되 이러한 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 중쇄 변이체, 및/또는 서열번호 2, 18, 22, 38, 42, 또는 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하되 이러한 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 경쇄 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 변이체 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질은 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하되, 이러한 CDR 중 하나 이상(예: 1 또는 2 또는 3개)은 이러한 돌연변이(예: 보존적 치환) 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 경쇄 변이체, 및/또는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하되, 이러한 CDR 중 하나 이상(예: 1 또는 2 또는 3개)은 이러한 돌연변이(예: 보존적 치환) 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 중쇄 변이체를 포함한다.
본 개시는, 예를 들어 서열번호 4, 6, 8, 12, 14, 및/또는 16; 또는 24, 26, 28, 32, 34, 및/또는 36; 또는 44, 46, 48, 52, 54, 및/또는 56에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 99. 9%의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는, 본원에 제시된 하나 이상의 변이체 CDR(예: CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3 중 하나 이상)을 포함하는 변이체 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 추가로 제공한다.
본 발명의 구현예는 또한, 면역글로불린 VH 및 VL, 또는, HC 및 LC를 포함하는 변이체 항원 결합 단백질, 예를 들어 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 VH, VL, HC, 또는 LC는 본원에 구체적으로 제시된 상응하는 VH, VL, HC, 또는 LC의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 또는 그 이상의 (예: 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 또는 99%의) 전체적인 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함하지만, 이러한 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3은 변이체가 아니며 서열번호 4, 6, 8, 12, 14, 및 16; 또는 24, 26, 28, 32, 34, 및 36; 또는 44, 46, 48, 52, 54, 및 56에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함한다. 따라서, 이러한 구현예에서, 변이체 항원 결합 단백질 내의 CDR 자체는 변이체가 아니다.
보존적으로 변형된 변이체 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원 결합 단편 또한 본 발명의 일부이다. “보존적으로 변형된 변이체” 또는 “보존적 치환”은 폴리펩티드 내에 아미노산의 하나 이상의 치환이 존재하고, 다른 아미노산은 유사한 특성(예: 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 골격 형태 및 강성 등)을 갖는 변이체를 지칭한다. 이러한 변화는 항체 또는 단편의 생물학적 활성을 상당히 파괴하지 않고도 빈번하게 이루어질 수 있다. 당업자는 일반적으로, 폴리펩티드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인지한다(예를 들어, Watson 등의 문헌[(1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)] 참조). 또한, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환이 생물학적 활성을 상당히 파괴할 가능성은 적다.
유사한 화학적 성질을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산의 군의 예는 다음을 포함한다: 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 및 이소류신; 2) 지방족-히드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르트산염 및 글루탐산염; 및 7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌. 바람직한 보존적 아미노산 치환기는: 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루탐산염-아스파르트산염, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존적 치환은 Gonnet 등의 문헌에 개시된 PAM250 로그 우도 매트릭스에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다(Gonnet 등의 문헌[(1992) Science 256: 1443 45] 참조).
항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원 결합 단편의 기능 보존적 변이체도 본 발명의 일부이다. (본원에서 논의된 것과 같은) 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원 결합 단편의 변이체 중 어느 하나는 “기능 보존적 변이체”일 수 있다. 이러한 기능 보존적 변이체는, 일부 경우에, 보존적으로 변형된 변이체로서의 특징을 가질 수도 있다. 본원에서 사용된 “기능 보존적 변이체”는 항체 또는 단편의 하나 이상의 기능적 특성을 유의하게 변화시키지 않고 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경된 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 변이체를 지칭한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능 보존적 변이체는 변이체 아미노산 서열을 포함하고, 다음의 기능적 특성 중 하나 이상을 나타낸다:
TMPRSS2-발현 세포(예: Calu-3 세포)에서 인플루엔자 바이러스(예: A/푸에르토 리코/08/1934 (H1N1)) 또는 코로나바이러스(예: SARS-CoV-2)의 성장을 억제함;
TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의하게 결합하지 않음;
시험관 내에서 세포(예: Calu-3)의 (예를 들어 SARS-CoV-2에 의한) 코로나바이러스 감염증 또는 (예를 들어 H1_PR34; H1_CA09; H1_Bris; H9N2 또는 H3N2 인플루엔자 바이러스에 의한) 인플루엔자 바이러스 감염증의 확산을 제한함; 및/또는
인간 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 인플루엔자 바이러스 감염증(예: H1N1 또는 H3N2) 또는 코로나바이러스 감염증(예: SARS-CoV-2)으로 인한 사망으로부터 보호하되, 달리 바이러스 치사량으로 마우스를 감염시키고 임의로 항-HA 또는 항-스파이크 단백질 항체로 병용 치료한 경우에 사망으로부터 보호함.
인간 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 인플루엔자 바이러스 감염증(예: H1N1 또는 H3N2) 또는 코로나바이러스 감염증(예: SARS-CoV-2)으로 인한 체중 감소로부터 보호하되, 달리 체중 감소를 유발하게 되는 바이러스 치사량으로 마우스를 감염시키고 임의로 항-HA 또는 항-스파이크 단백질 항체로 병용 치료한 경우에 체중 감소로부터 보호함.
본 발명은, 마우스의 신체 내에서, mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029와 같은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)을 포함하는 인간 TMPRSS22 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 포함한다. 국제 특허 출원 공개 호WO2017/151453호 참조.
“중화” 또는 “길항제” 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)은 TMPRSS2의 활성을 임의의 검출 가능한 정도로 억제하거나, TMPRSS2의 프로테아제 활성, 예를 들어 HA; Cbz-Gly-Gly-Arg-AMC (Sigma)(여기서 Cbz는 벤질옥시카르보닐이고 AMC는 7-아미노-4-메틸쿠마린임); 인플루엔자 바이러스 HA0; 코로나바이러스 S 단백질; 또는 Arg255와 Ile256 사이에서 자가촉매적으로 절단되는 전구체 TMPRSS와 같은 기질의 프로테아제 활성을 억제하고/하거나, 인플루엔자 바이러스가 세포 내로 침투하는 것을 억제하고/하거나, 인플루엔자 바이러스가 대상체의 생체 내에서 증식하는 것을 억제하는 분자를 지칭한다.
mAb8021, mAb8028, 및 mAb8029는 아래에 제시된 것과 같은 중쇄 또는 VH(또는 이의 변이체) 및 경쇄 또는 VL(또는 이의 변이체)을 포함하거나; CDR을 포함하는 VH(CDR-H1(또는 이의 변이체), CDR-H2(또는 이의 변이체), 및 CDR-H3(또는 이의 변이체)) 및 CDR을 포함하는 VL(CDR-L1(또는 이의 변이체), CDR-L2(또는 이의 변이체), 및 CDR-L3 (또는 이의 변이체))을 포함하는 항원 결합 단백질(예: 항체 및 이의 항원 결합 단편)을 지칭하며, 예를 들어 여기서, 면역글로불린 사슬, 가변 영역, 및/또는 CDR은 아래에 기술된 특정 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8028은 서열번호 2 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3, 및 서열번호 10 또는 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8021은 서열번호 22 또는 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3, 및 서열번호 30 또는 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8029는 서열번호 42 또는 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3, 및 서열번호 50 또는 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8028은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8021은 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8029는 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8028은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8021은 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, mAb8029는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다.
본원에 기술된 항체는 VH가 (예를 들어 잔기 108이 S인) 야생형 IgG4 또는 (예를 들어 잔기 108이 P인) IgG4 변이체에 융합되는 구현예를 포함한다.
본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 본원에 제시된 아미노산 서열뿐만 아니라 항체에 대한 세포적 번역 후 변형 및 시험관 내 번역 후 변형도 포함하는 면역글로불린 사슬을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본원에 제시된 중쇄 및/또는 경쇄 아미노산 서열(예: CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3)을 포함하는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 하나 이상의 아미노산 잔기가 글리코실화되고, 하나 이상의 Asn 잔기가 탈아미드화되고, 하나 이상의 잔기(예: Met, Trp, 및/또는 His)가 산화되고, N-말단 글루타민은 피로글루타메이트(pyroE)이고/이거나, C-말단 리신이 소실된 항체 또는 단편도 포함한다.
항체의 투여
본 발명은 본 발명의 항-TMRPSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항원 결합 단백질을 대상체(예: 인간)의 신체 내에 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기 바늘을 대상체의 신체에 찔러 넣는 단계, 및 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내로, 예를 들어, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직에 주입하는 단계를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029를 포함하는 용기(예를 들어 플라스틱 또는 유리 바이알로서, 예를 들어 캡 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공형 천공 바늘 또는 주사기 실린더를 갖는 플라스틱 또는 유리 바이알)를 제공한다.
본 발명은 또한, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029), 또는 이의 약학적 조성물을 포함하는 주사 장치를 제공한다. 주사 장치는 키트 내에 포장될 수 있다. 주사 장치는 비경구 경로, 예를 들어, 근육 내, 피하 또는 정맥내 경로를 통해 대상체의 신체 내에 물질을 도입하는 장치이다. 예를 들어, 주사 장치는, 예를 들어, 주사할 유체(예를 들어 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 포함함)를 담기 위한 실린더나 통; 유체의 주입을 위해 피부 및/또는 혈관에 찔러 넣기 위한 바늘; 및 주사 바늘 구멍을 통해 유체를 실린더 밖으로 밀어 내기 위한 플런저를 포함하는 주사기(예: 약학적 조성물로 미리 채워진, 예컨대 자동 주사기)일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 조합물 유래의 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 또는 이의 약학적 조성물을 포함하는 주사 장치는 정맥 내(IV) 주사 장치이다. 이러한 장치는 항원 결합 단백질 또는 이의 약학적 조성물을 캐뉼라 또는 투관침/바늘에 포함할 수 있는데, 캐뉼라 또는 투관침/바늘은 튜브에 부착될 수 있고, 튜브는 캐뉼라 또는 투관침/바늘을 통해 대상체의 신체 내로 도입되는 유체(예를 들어 식염수)를 담기 위한 백 또는 저장조에 부착될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물은 투관침 및 캐뉼라가 대상체의 정맥 내로 삽입되고, 삽입된 캐뉼라로부터 투관침이 제거된 후 장치 내로 도입될 수 있다. IV 장치는, 예를 들어 말초 정맥(예를 들어 손 또는 팔) 내로 삽입되거나; 상대 정맥 또는 하대 정맥, 또는 심장의 우심방(예를 들어 중심 IV) 내로 삽입되거나; 쇄골하 정맥, 내부 경정맥, 또는 대퇴 정맥 내로 삽입될 수 있고, 예를 들어 상대 정맥 또는 우심방(예를 들어 중심 정맥선)에 도달할 때까지 심장을 향해 전진할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 주사 장치는 자기주사기; 제트 주입기, 또는 외부 주입 펌프이다. 제트 주사기는 표피를 관통하여 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 대상체의 신체 내로 도입하는 고압의 좁은 액체 기류를 사용한다. 외부 주입 펌프는 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 조절된 양으로 대상체의 신체에 전달하는 의료 장치이다. 외부 주입 펌프는 전동식 또는 기계식일 수 있다. 상이한 펌프는 상이한 방식으로 작동하는데, 예를 들어 주사기 펌프는 유체를 주사기의 저장조 내에 보유하며, 가동식 피스톤은 유체 전달을 조절하고, 탄성중합체 펌프는 유체를 신장 가능한 풍선 저장조 내에 보유하며, 풍선의 탄성 벽의 압력이 유체 전달을 유도한다. 연동 펌프의 경우, 한 세트의 롤러가 가요성 튜브를 길이 방향으로 눌러 유체를 앞으로 밀어낸다. 다채널 펌프의 경우, 유체는 다수의 저장조로부터 다수의 속도로 전달될 수 있다.
인간 항체의 제조
유전자 이식 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 임의의 공지된 방법을 본 발명의 맥락에서 사용하여, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조할 수 있다. 다음 중 어느 하나를 포함하는 면역원이 TMPRSS2에 대한 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 소정의 구현예에서, 본 발명의 항체는 전장 고유 TMPRSS2로 면역화되거나, 약독화되었거나 불활성화된 생 바이러스로 면역화되거나, 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA로 면역화된 마우스로부터 수득된다. 대안적으로, TMPRSS2 단백질 또는 이의 단편은 표준 생화학 기술을 사용하여 생산되고 변형되어 면역원으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 면역원은 재조합적으로 생산된 TMPRSS2 단백질 또는 이의 단편이다. 본 발명의 소정의 구현예에서, 면역원은 TMPRSS2 폴리펩티드 백신일 수 있다. 소정의 구현예에서, 하나 이상의 부스터 주사가 투여될 수 있다. 소정의 구현예에서, 면역원은 대장균(E. coli)에서 발현되거나 중국 햄스터 난소(CHO) 세포와 같은 임의의 다른 진핵생물 세포 또는 포유동물 세포에서 발현되는 재조합 TMPRSS2 폴리펩티드일 수 있다.
단클론 항체를 생성하기 위한 VELOCIMMUNE™ 기술(예를 들어, 미국 특허 제6,596,541호, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE® 참조) 또는 기타 알려진 방법을 사용해, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, TMPRSS2에 대한 고 친화도 키메라 항체를 먼저 단리할 수 있다. VELOCIMMUNE® 기술은 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동 가능하게 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 유전자 이식 마우스를 생성하는 것을 포함하며, 이 마우스는 항원 자극에 반응하여 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생산한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되어 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동 가능하게 연결된다. 그런 다음, DNA는 완전한 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.
일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스에게 관심 항원을 접종하고, 림프 세포(예컨대 B 세포)는 항체를 발현하는 마우스로부터 회수된다. 림프 세포를 골수종 세포주와 융합하여 불멸성 하이브리도마 세포주를 제조할 수 있고, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하여 관심 항원에 대해 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 식별한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 단리하여, 중쇄 및 경쇄의 바람직한 이소형 불변 영역에 연결할 수 있다. 이러한 항체 단백질은 CHO 세포와 같은 세포에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 항원 특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA를 항원 특이적 림프구로부터 직접 단리할 수 있다.
먼저, 고 친화도 키메라 항체를 인간 가변 영역과 마우스 불변 영역을 갖도록 단리한다. 아래의 실험 섹션에서와 같이, 항체의 특성을 분석하여 친화도, 선택도, 에피토프 등을 포함하는 바람직한 특성에 맞게 선택한다. 마우스 불변 영역을 원하는 인간 불변 영역과 교체하여 본 발명의 완전한 인간 항체, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성한다. 선택된 불변 영역은 특이적 용도에 따라 매우 다양할 수 있지만, 고친화도 항원 결합 특성 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.
Fc 변이체를 포함하는 항-TMPRSS2 항체
본 개시의 소정의 구현예에 따르면, 예를 들어 중성 pH와 비교했을 때 산성 pH에서 예를 들어 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 강화시키거나 감쇠시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단백질이 제공된다. 예를 들어, 본 발명은 Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역에서 돌연변이를 포함하는 항-TMPRSS2 항체를 포함하며, 여기서 돌연변이(들)는 산성 환경에서(예를 들어 pH가 약 5.5 내지 6.0 범위인 엔도솜에서) FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시킨다. 이러한 돌연변이는, 동물에게 투여되는 경우 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비제한적인 예는, 예를 들어, 위치 250(예를 들어 E 또는 Q)에서의 변형; 위치 250 및 428(예를 들어 L 또는 F)에서의 변형; 위치 252(예를 들어 L/Y/F/W 또는 T), 위치 254(예를 들어 S 또는 T), 및 위치 256(예를 들어 S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 위치 428 및/또는 433(예를 들어 H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 위치 434(예를 들어 A, W, H, F 또는 Y[N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y])에서의 변형; 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 위치 307 또는 308(예를 들어 308F, V308F) 및 위치 434에서의 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 변형은 428L 변형(예를 들어 M428L) 및 434S 변형(예를 들어 N434S); 428L, 259I 변형(예를 들어 V259I) 및 308F 변형(예를 들어 V308F); 433K 변형(예를 들어 H433K) 및 434 변형(예를 들어 434Y); 252, 254, 및 256 변형(예를 들어 252Y, 254T, 및 256E); 250Q 및 428L 변형(예를 들어 T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예를 들어 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 변형은 265A 변형(예를 들어 D265A) 및/또는 297A 변형(예를 들어 N297A)을 포함한다.
예를 들어, 본 발명은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 군을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다: 250Q 및 248L(예를 들어 T250Q 및 M248L); 252Y, 254T, 및 256E(예를 들어 M252Y, S254T, 및 T256E); 428L 및 434S(예를 들어 M428L 및 N434S); 257I 및 311I(예를 들어 P257I 및 Q311I); 257I 및 434H(예를 들어 P257I 및 N434H); 376V 및 434H(예를 들어 D376V 및 N434H); 307A, 380A, 및 434A (예를 들어 T307A, E380A, 및 N434A); 및 433K 및 434F(예를 들어 H433K 및 N434F).
전술한 Fc 도메인 돌연변이의 임의의 가능한 조합을 포함하는 본원에 제시된 것과 같은 VH 및/또는 VL을 포함하는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편은 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 고려된다.
본 발명은 또한, 본원에 제시된 VH 및 키메라 중쇄 불변(CH) 영역을 포함하는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 키메라 CH 영역은 둘 이상의 면역글로불린 이소형의 CH 영역으로부터 유래된 분절을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자에서 유래된 CH3 도메인의 일부 또는 전부와 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자에서 유래된 CH2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 CH 영역을 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 CH 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역 유래의 “하부 힌지” 서열(EU 넘버링에 따른 위치 228 내지 236에서의 아미노산 잔기)과 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역 유래의 “상부 힌지” 아미노산 서열(EU 넘버링에 따른 위치 216 내지 227에서의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 키메라 힌지 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 상부 힌지 유래의 아미노산 잔기, 및 인간 IgG2 하부 힌지 유래의 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기술된 바와 같은 키메라 CH 영역을 포함하는 항체는, 특정 구현예에서, 항체의 치료 특성 또는 약동학적 특성에 나쁜 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 효과기 기능을 나타낼 수 있다. (예를 들어 WO2014/022540 참조).
면역접합체(Immunoconjugate)
본 발명은 또 다른 모이어티, 예를 들어 인플루엔자 바이러스 감염증을 치료하기 위한 톡소이드 또는 항-바이러스제와 같은 치료 모이어티에 접합된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(“면역접합체”)을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 항-TMPRSS2 항체 또는 단편은 본원에 제시된 추가의 치료제 중 어느 하나에 접합된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “면역접합체”는 방사성 제제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드 또는 단백질, 또는 치료제에 화학적으로 또는 생물학적으로 연결되는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다. 항원 결합 단백질은 이들이 표적(TMPRSS2)에 결합할 수 있도록, 분자를 따라 임의의 위치에서 방사성 제제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드, 또는 치료제에 연결될 수 있다. 면역접합체의 예는 항체-약물 접합체 및 항체-독소 융합 단백질을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 제제는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제2의 상이한 항체일 수 있다. 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 단편)에 접합될 수 있는 치료 모이어티의 유형은 치료 대상 병태 및 달성하기를 원하는 치료 효과를 고려하게 된다. 예를 들어 Arnon 등의 문헌["Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)]; Hellstrom 등의 문헌["Antibodies For Drug Delivery", Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)]; Thorpe의 문헌["Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", Monoclonal Antibodies 1984: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985)]; Baldwin(eds.) 등의 문헌["Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, pp. 303-16 (Academic Press 1985)], 및 Thorpe 등의 문헌["The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62: 119-58 (1982)] 참조.
다중특이적 항체
본 발명은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 이의 사용 방법 및 이러한 항원 결합 단백질의 제도 방법도 포함한다. 용어 “항-TMPRSS2” 항원 결합 단백질(예: 항체 또는 항원 결합 단편)은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제1 항원 결합 도메인(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029에서 유래된 항원 결합 도메인) 및 상이한 항원에 결합하거나 제1 항원 결합 도메인과는 다른 TMPRSS2 내의 에피토프에 결합하는 적어도 하나의 제2 항원 결합 도메인(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029에서 유래된 항원 결합 도메인과 같은 인플루엔자 HA)를 포함하는 다중특이적(예: 이중특이적 또는 이중파라토픽) 분자를 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 항체는 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬을 포함하는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인, 및 (mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029와 같은 상이한 경쇄 및 중쇄 면역글로불린을 포함하는) 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 IgG 항체(예: IgG1 또는 IgG4)이다.
mAb8021, mAb8028, 및 mAb8029는 mAb8021, mAb8028, 및 mAb8029의 CDR-H 및 CDR-L, VH 및 VL, 또는 HC 및 LC를 각각 포함하는 (본원에 제시된 것과 같은 이들의 변이체도 포함함) 다중특이적 분자, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인으로서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
(1)
(i) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(2)
(i) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(3)
(i) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 서열; 및
(ii) 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 서열.
본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인으로서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
(1)
(i) 서열번호 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열번호 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(2)
(i) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(3)
(i) 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 서열; 및
(ii) 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 서열.
본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인으로서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
(1)
(i) 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 54에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(2)
(i) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열; 및
(ii) 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는
(3)
(i) 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 서열; 및
(ii) 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 서열.
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 항체 또는 단편은 3가지 이상의 상이한 결합 특이성(예: 삼중특이적 분자), 예를 들어 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인과 동일하거나 상이한 하나 이상의 추가 항원 결합 도메인을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 분자는 국제 특허 출원 공개 제WO/2015/179535호에 제시된 것과 같이, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위에 추가하여, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체로부터 선택된 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다: H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2.
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 분자는 국제 특허 출원 공개 제WO/2015/179535호에 제시된 것과 같이, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위에 추가하여, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체로부터 취한 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함한다:
H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B (예를 들어, 이들의 CDR-H, VH, 또는 중쇄; 및 이들의 CDR-L, VL, 또는 경쇄).
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 분자는, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위에 추가하여, 인플루엔자 HA 2군 단백질에 특이적으로 결합하고, 예를 들어 다음을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다: H1H14611N2의 VH 및 VL; 또는 H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린.
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 분자는, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위에 추가하여, 인플루엔자 HA 2군 단백질에 특이적으로 결합하고, 예를 들어 다음을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다: H1H14612N2의 VH 및 VL; 또는 H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린.
본 발명의 일 구현예에서, 다중특이적 분자는, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위에 추가하여, 인플루엔자 HA 1군 단백질에 특이적으로 결합하고, 예를 들어 다음을 포함하는 항원 결합 부위를 포함한다: H1H11729P의 VH 및 VL; 또는 H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린.
본 발명의 일 구현예에서, 이중 특이적 항원 결합 단편은 제1 에피토프(예: TMPRSS2)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 scFv(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029의 VH 및 VL을포함함) 및 제2의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 scFv(예: 항-인플루엔자 HA 항체의 VH 및 VL을 포함함)를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 제1 및 제2 scFv는 링커, 예를 들어 펩티드 링커(예를 들어, (GGGGS)n(서열번호 62)과 같은 GS 링커, 여기서 n은 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10임)를 통해 테더링된다. 다른 이중 특이적 항원 결합 단편은 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029의 중쇄 및 경쇄 CDR 및 상이한 에피토프에 결합하는 또 다른 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 이중 특이적 IgG 항체의 F(ab)2를 포함한다.
치료 방법
본 발명은 바이러스 감염증 또는 암(예: 전립선암)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예: 인간)에게 치료적 유효량의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 투여함으로써 바이러스 감염증 또는 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
코로나바이러스 또는 인플루엔자 바이러스 감염증은 대상체에게 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질을 투여함으로써 대상체에서 치료되거나 예방될 수 있다. 인플루엔자 바이러스는 코어 단백질을 기준으로 A, B, 및 C형으로 분류된다. 인플루엔자 A 바이러스의 아형은 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다아제(NA) 활성을 갖는 외피 당단백질에 의해 결정된다. 인플루엔자 A 아형을 지정하는 데 사용되는 인플루엔자 A 바이러스의 여러 HA 아형(예: HA1, HA2, HA3, HA4, HA5, HA6, HA7, HA8, HA9, HA10, HA11, HA12, HA13, HA14, HA15, HA16, HA17, 또는 HA18 - 이들 아형은 H1, H2, H3, 등으로 지정될 수 있음) 및 NA 아형(예: NA1, NA2, NA3, NA4, NA5, NA6, NA7, NA8, NA9, NA10, 또는 NA11 - 이들 아형은 N1, N2, N3, 등으로 지정될 수 있음)이 있다. 예를 들어, 인플루엔자 A 바이러스 H1N1 및 H3N2는 흔히 알려진 인간 병원균이다. 인간은 아형 H1, H2 또는 H3, 및 N1 또는 N2의 바이러스에 흔히 감염된다. 본 발명은 본원에서 논의된 인플루엔자 바이러스 아형으로 인한 감염증을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, TMPRSS2에 결합하는 다중특이적 항체 및 이의 항원 결합 단편은 코로나바이러스(예: SARS-CoV-2, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV)의 스파이크 단백질 또는 인플루엔자 바이러스의 HA 및/또는 NA(예: 본원에 제시된 인플루엔자 바이러스의 아형)에도 결합한다.
바이러스 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예: mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)의 유효 투여량 또는 치료적 유효 투여량은, 감염증의 하나 이상의 징후 및/또는 증상을 감소시키거나 퇴행시킴으로써 또는 이러한 징후 및/또는 증상의 퇴행을 유도함으로써, 치료받은 대상체에서 이러한 징후 및/또는 증상을 완화시키기에 충분한 항체 또는 단편의 양을 지칭한다. 투여량은 투여 대상체의 연령 및 체중, 표적 질환, 상태, 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 예를 들어 성인 인간 대상체에서 바이러스 감염증의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 유효 투여량 또는 치료적 유효 투여량은 약 0.01 내지 약 200 mg/kg, 예를 들어 최대 약 150 mg/kg이다. 본 발명의 일 구현예에서, 투여량은 최대 약 10.8 또는 11 그램(예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 그램)이다. 감염의 중증도에 따라, 치료의 빈도와 기간을 조정할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 초기 투여량으로 투여되고, 이어서 1회 이상의 이차 투여량이 투여될 수 있다. 소정의 구현예에서, 초기 투여량에 이어서 항체 또는 항원 결합 단편의 제2 또는 복수의 후속 투여량이 초기 투여량과 거의 동일하거나 적은 양으로 투여되며, 여기서 후속 투여량은 적어도 1 내지 3일; 적어도 1주; 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주만큼 간격을 둔다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “대상체”는 포유동물(예를 들어 랫트, 마우스, 고양이, 개, 소, 양, 말, 염소, 토끼), 바람직하게는 인간, 예를 들어 바이러스 감염증이나 암과 같은 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 인간을 지칭한다. 대상체는 바이러스 감염증, 예를 들어 인플루엔자 감염증을 가질 수 있거나, 감염증에 걸리기 쉬울 수 있다. 인플루엔자 바이러스 감염증에 걸리기 쉬운 대상체 또는 (예를 들어 코로나바이러스 또는 인플루엔자 바이러스의) 감염증에 걸릴 위험이 증가한 대상체는 자가면역 질환 때문에 면역체계가 손상된 대상체, (예를 들어 장기 이식 후) 면역억제 요법을 투여받고 있는 대상체, 인간 면역 결핍 증후군(HIV) 또는 후천성 면역 결핍증후군(AIDS)에 걸린 대상체, 백혈구를 고갈시키거나 파괴하는 형태의 빈혈증에 걸린 대상체, 방사선 또는 화학요법으로 치료 중인 대상체, 또는 염증성 장애에 걸린 대상체를 포함한다. 추가적으로, 매우 어린 대상체(예: 5세 이하) 또는 고령의 대상체(예: 65세 이상)는 위험이 증가한 대상체이다다. 또한, 대상체는 질환의 발병지의 근위에 있음으로써 바이러스 감염증에 걸릴 위험이 있을 수 있으며, 예를 들어 대상체가 인구가 밀집된 도시에 거주하거나, 바이러스 감염증이 확진되었거나 의심되는 대상체와 밀접한 근위에 있음으로써, 또는 직업 상의 이유(예: 병원 근무자, 제약 연구원, 감염 지역 여행자, 또는 출장이 잦은 직업)로 인해 바이러스 바이러스 감염증에 걸릴 위험이 있을 수 있다.
“치료(treat 또는 treating)”는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)을 (본원에서 논의된 것과 같은) 유효 투여량 또는 치료적 유효량 또는 치료적 유효 투여량으로 대상체에게 투여했을 때, 상기 항원 결합 단백질이 효과적인 질환 또는 감염증(예: 바이러스 감염증)의 하나 이상의 징후 또는 증상을 가진 대상체에게 이를 투여하는 것을 의미한다.
본 발명은 또한, 바이러스 감염증에 걸릴 위험이 있는 대상체에게 이러한 감염증을 예방하기 위해 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)을 예방적으로 투여하는 것을 포함한다. 수동 항체 기반 면역 예방법은 대상체를 바이러스 감염증으로부터 예방하는 데 효과적인 전략을 입증하였다. 예를 들어 Berry 등의 문헌[Passive broad-spectrum influenza immunoprophylaxis. Influenza Res Treat. 2014 ;2014:267594. Epub 2014 Sep 22]; 및 Jianqiang 등의 문헌[Passive immune neutralization strategies for prevention and control of influenza A infections, Immunotherapy. 2012 February ; 4(2): 175-186]; Prabhu 등의 문헌[Antivir Ther. 2009;14(7):911-21, Prophylactic and therapeutic efficacy of a chimeric monoclonal antibody specific for H5 hemagglutinin against lethal H5N1 influenza] 참조. “예방(prevent 또는 preventing)”은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)을 (본원에서 논의된 것과 같은) 유효 투여량 또는 치료적 유효량 또는 치료적 유효 투여량으로 대상체에게 투여했을 때, 상기 항원 결합 단백질이 효과적인 질환 또는 감염증(예: 바이러스 감염증)의 징후를 대상체의 신체에서 억제하기 위해, 대상체에게 이를 투여하는 것을 의미한다.
본 발명의 일 구현예에서, 대상체에서 바이러스 감염증의 징후 또는 증상은, 예를 들어 바이러스 역가 검정(예를 들어, 발육된 닭의 달걀에서 코로나바이러스 또는 인플루엔자 바이러스 전파, 코로나바이러스 스파이크 단백질 검정, 또는 인플루엔자 바이러스 혈구응집 검정)에 의해 결정했을 때, 대상체의 신체에서 바이러스가 생존 또는 증식하는 것이다. 바이러스 감염증의 다른 징후 및 증상은 본원에서 논의된다.
본 발명은 바이러스 감염증(예를 들어 인플루엔자 바이러스 또는 코로나바이러스 감염증)을 치료 또는 예방하거나, 다음과 같은 바이러스 감염증의 적어도 하나의 징후 또는 증상의 퇴행 또는 제거 유도, 또는 이러한 징후 또는 증상의 진행 억제를 필요로 하는 대상체(예: 인간)에서 이를 치료 또는 예방하거나 이러한 징후 또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하거나 이러한 징후 또는 증상을 억제하기 위한 방법으로서, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)의 치료적 유효량을 대상체에게 투여함으로써, 예를 들어 대상체의 신체 내로 상기 단백질을 주사함으로써 바이러스 감염증을 치료 또는 예방하거나, 바이러스 감염증의 이러한 징후 또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하거나 이러한 징후 또는 증상을 억제하는 방법을 제공한다:
- 발열 또는 열감/오한;
- 기침;
- 인후통:
- 콧물 또는 코막힘;
- 재채기;
- 근육통 또는 몸살;
- 두통;
- 피로(피곤함);
- 구토;
- 설사;
- 기도 감염;
- 흉부 불편감;
- 호흡곤란;
- 기관지염; 및/또는
- 폐렴
(여기서, 상기 징후 또는 증상은 바이러스 감염에 이차적인 것임).
본 발명은 또한, 대상체에서 암, 예를 들어 전립선암(예를 들어 TMPRSS2:ERG 융합체의 발현을 특징으로 하는 암), 대장암, 폐암, 췌장암, 요로암, 유방암, 난소암, 전립선 선암종, 신장 세포 암종, 결장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종, 및/또는 흉막 중피종과 같은 전이성 암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 치료적 유효량의 TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)을 대상체에게 투여함으로써, 예를 들어 상기 단백질을 대상체의 신체 내로 주사함으로써, 이를 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 대상체에게는 항암제와 같은 추가 치료제와 함께 TMPRSS2 항원 결합 단백질도 투여된다. 본 발명의 일 구현예에서, 암은 TMPRSS2 또는 이의 변이체를 발현하는 세포를 가진 종양이다.
병용 요법 및 약학적 조성물
항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)의 약학적 조성물을 제조하기 위해, 항원 결합 단백질을 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합한다. 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984); Hardman 등의 문헌[(2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.]; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis(eds.) 등의 문헌[(1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY]; Lieberman(eds.) 등의 문헌[(1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY]; Lieberman(eds.) 등의 문헌[(1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY]; Weiner와 Kotkoskie의 문헌[(2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.] 참조. 본 발명의 일 구현예에서, 약학적 조성물은 멸균 상태이다. 이러한 조성물은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 범주는 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029), 또는 이의 약학적 조성물(약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하지만 실질적으로 물은 포함하지 않음)을 포함하는 건조시킨, 예를 들어, 동결 건조된 조성물을 포함한다.
본 발명의 추가 구현예에서, 본원에 개시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)과 함께 대상체에게 투여되는 추가 치료제는 의사의 처방 참고집 2003(Physicians' Desk Reference)(Thomson Healthcare; 57th edition (Nov. 1, 2002))에 따라 대상체에게 투여된다.
투여 방법은 다양할 수 있다. 투여 경로는 경구, 직장, 경점막, 장, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 경막내, 직접 뇌실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 안구내, 흡입, 취입, 국소, 피부, 경피, 또는 동맥내를 포함한다.
본 발명은 항-TMRPSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021 또는 mAb8028 또는 mAb8029)을 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단백질을 대상체의 신체 내에 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기 바늘을 대상체의 신체에 찔러 넣는 단계, 및 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내로, 예를 들어, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직에 주입하는 단계를 포함한다.
본 발명은 다음 중 어느 하나를 포함하는 용기(예를 들어 플라스틱 또는 유리 바이알로서, 예를 들어 캡 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공형 천공 바늘 또는 주사기 실린더를 갖는 플라스틱 또는 유리 바이알)를 제공한다: 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029), 폴리펩티드(예를 들어 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029의 HC, LC, VH, 또는 VL) 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터, 또는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 이의 약학적 조성물.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)은 하나 이상의 추가 치료제와 조합된다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 항바이러스제 및/또는 백신이다. 본원에서 사용되는 용어 "항바이러스제(anti-viral drug)"는 대상체에서 바이러스 감염증을 치료, 예방 또는 개선하는데 사용되는 임의의 항감염 약물 또는 요법을 의미한다. 용어 “항바이러스제”는 양이온성 스테로이드 항균제, 류펩틴(leupeptin), 아프로티닌(aprotinin), 아만타딘(amantadine), 리만타딘(rimantadine), 오셀타미비르(oseltamivir), 자나미비르(zanamivir), 리바비린(ribavirin), 또는 인터페론-알파2b(interferon-alpha2b)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 추가 치료제와 함께 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029를 투여함으로써 상기 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 바이러스(예를 들어 코로나바이러스 또는 인플루엔자 바이러스) 감염증을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 일부이다.
예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 백신, 예를 들어 코로나바이러스 백신 또는 인플루엔자 백신이다. 본 발명의 일 구현예에서, 백신은 불활성화된/바이러스 사백신(killed virus vaccine), 약독화된 생바이러스 백신, 또는 바이러스 서브유닛 백신이다.
예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 다음과 같다:
Figure pct00001
(카모스타트 메실레이트);
Figure pct00002
(나파모스타트 메실레이트);
Figure pct00003
(브롬헥신 하이드로클로라이드 (BHH));
Figure pct00004
(4-(2-아미노메틸)벤젠설포닐 플루오라이드 하이드로클로라이드 (AEBSF));
Figure pct00005
;
Figure pct00006
; 또는
Figure pct00007
(폴리아마이드). Shen 등의 문헌[Biochimie 142: 1-10 (2017)] 참조.
본 발명의 일 구현예에서, 항바이러스제는 코로나바이러스, 예를 들어 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 항-CoV-S 항체는 국제 특허 출원 공개 제WO/2015/179535호에 제시된 것과 같은 다음 중 어느 하나: H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; and H1H15249P2, 또는 이의 항원 결합 단편이며, 예를 들어 상기 항체 또는 단편은 전술한 항-CoV-S 항체 중 어느 하나의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3(예를 들어 이의 VL 또는 경쇄)를 포함하는 경쇄 면역글로불린; 및 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3(예를 들어 이의 VH 또는 중쇄)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 항바이러스제는 인플루엔자 바이러스, 예를 들어 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 항-HA 항체는, 국제 특허 출원 공개 제 WO2016/100807호에 제시된 것과 같이, 다음 중 어느 하나: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 또는 H1H18335B, 또는 이의 항원 결합 단편이며, 예를 들어 상기 항체 또는 단편은 전술한 항-인플루엔자 HA 항체 중 어느 하나의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3(예를 들어 이의 VL 또는 경쇄)를 포함하는 경쇄 면역글로불린; 및 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3(예를 들어 이의 VH 또는 중쇄)를 포함하는 중쇄를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 H1H14611N2와 같은 인플루엔자 HA 2군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H14611N2의 VH 및 VL을 포함하거나, H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 단편이다. “H1H14611N2”는 이러한 서열을 포함하는 임의의 항-HA 2군 항체를 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 H1H14612N2와 같은 인플루엔자 HA 2군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H14612N2의 VH 및 VL을 포함하거나, H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 단편이다. “H1H14612N2”는 이러한 서열을 포함하는 임의의 항-HA 2군 항체를 지칭한다.
본 발명의 일 구현예에서, 추가 치료제는 H1H11729P와 같은 인플루엔자 HA 1군 단백질에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편; 또는 H1H11729P의 VH 및 VL을 포함하거나, H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 단편이다. “H1H11729P”는 이러한 서열을 포함하는 임의의 항-HA 1군 항체를 지칭한다.
본 발명의 소정의 구현예에서, 추가 치료제는 아만타딘, 리만타딘, 오셀타미비르, 자나미비르, 아프로티닌, 류펩틴, 양이온성 스테로이드 항균제, 인플루엔자 백신(예를 들어 사백식, 생백신, 약독화된 전체 바이러스 백신 또는 서브유닛 백신), 또는 인플루엔자 바이러스에 대한 항체(예를 들어, 항-헤마글루티닌 항체)가 아니다.
용어 “함께(in association with)”는 성분인 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편이 오셀타미비르와 같은 다른 제제와 함께, 예를 들어 동시 전달을 위한 단일 조성물로 제형화되거나, 2가지 이상의 조성물로 (예를 들어 키트로) 별도로 제형화될 수 있음을 나타낸다. 각각의 성분은 다른 성분이 투여되는 시간과 다른 시간에 대상체에게 투여될 수 있으며; 예를 들어, 각각의 투여는 주어진 기간에 걸쳐 간격을 두고 비동시적으로 (예를 들어, 개별적으로 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 또한, 별도의 성분은 (예를 들어 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원 결합 단편과) 동일하거나 상이한 경로로 대상체에게 투여될 수 있다.
키트
본원에서 논의된 것과 같은 추가 치료제를 포함하되 이들로 한정되지는 않는 하나 이상의 추가 성분과 함께, 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 포함하되 이들로 한정되지는 않는 하나 이상의 성분을 포함하는 키트가 추가로 제공된다. 항원-결합 단백질 및/또는 추가 치료제는 단일 조성물로서 제형화되거나, 예를 들어 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 두 가지 이상의 조성물로 제형화되거나, 하나의 약학적 조성물로 제형화될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 키트는 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029), 또는 이의 약학적 조성물을 하나의 용기에 (예를 들어 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알에) 포함하고, 추가 치료제는 다른 용기에 (예를 들어 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알에) 포함한다.
또 다른 구현예에서, 키트는 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029) 또는 이의 약학적 조성물을, 임의로 약학적 조성물로서 함께 제형화된 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 단일 공통 용기에 포함하는 본 발명의 조합물을 포함한다.
키트가 대상체에게 비경구 투여하기 위한 약학적 조성물을 포함하는 경우, 키트는 이러한 투여를 수행하기 위한 장치(예를 들어, 주사 장치)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)이 담긴 전술한 것과 같은 하나 이상의 피하 바늘 또는 다른 주사 장치를 포함할 수 있다.
키트는, 키트 내의 약학적 조성물 및 투여 형태에 관한 정보를 포함하는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 정보는 환자 및 의사가 동봉된 약학적 조성물 및 투여 형태를 효과적이고 안전하게 사용하는 것을 돕는다. 예를 들어, 본 발명의 조합물에 관한 다음의 정보가 삽입물로 제공될 수 있다: 약동학, 약력학, 임상 연구, 효능 파라미터, 표시 및 용도, 금기, 경고, 주의, 부작용, 과량 투여, 적절한 투여량 및 투여, 공급 방법, 적절한 저장 조건, 참조, 제조업체/유통업체 정보 및 특허 정보.
항체의 진단적 사용
본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)은 샘플에서 TMPRSS2를 검출 및/또는 측정하는 데 사용될 수 있다. TMPRSS2에 대한 예시적인 검정은, 예를 들어 샘플을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질은 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나, 샘플로부터 TMPRSS2를 선택적으로 단리하기 위한 포획 리간드로서 사용된다. 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질이 TMPRSS2와 복합체화된 상태로 존재한다는 것은 샘플에 TMRPSS2가 존재한다는 것을 나타낸다. 대안적으로, 표지되지 않은 항-TMPRSS2 항체가 자체적으로 검출 가능하게 표지된 보조 항체와 병용으로 사용될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 3H, 14C, 32P, 35S 또는 125I와 같은 방사성 동위원소; 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 로다민과 같은 형광 모이어티 또는 화학발광 모이어티; 또는 알칼라인 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제, 또는 루시페라아제와 같은 효소일 수 있다. 샘플에서 TMPRSS2를 검출하거나 측정하는 데 사용할 수 있는 특정 예시적인 검정은 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성 면역분석(RIA), 및 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 포함한다. 따라서, 본 발명은 샘플에서 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질의 존재를 검출하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 샘플을 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계, 및 TMPRSS/항-TMPRSS2 항원 결합 단백질의 존재를 검출하는 단계를 포함하되, 복합체의 존재는 TMPRSS2의 존재를 나타낸다.
본 발명은 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)을 사용하여 세포 상에서 TMPRSS2의 존재를 검출하는 세포 기반 ELISA 방법을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다:
(i) TMPRSS2의 존재를 시험할 고형 표면(예: 마이크로플레이트)에 고정된 세포를 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계;
(ii) 임의로, 혼합물을 세척하여 결합되지 않은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질을 제거하는 단계;
(iii) 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질을 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질에 결합하는 표지된 이차 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계;
(iv) 임의로, 복합체를 세척하여 결합되지 않은 항원 결합 단백질을 제거하는 단계; 및
(v) 이차 항체 또는 단편 상에서 표지의 존재를 검출하되, 표지의 검출은 세포가 TMPRSS2를 함유하고 있음을 나타내는 단계. 예를 들어, 본 발명은 샘플에서 TMPRSS2+ 세포를 식별하기 위한 이러한 세포 기반 ELISA 방법을 포함한다.
본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)은 샘플에서 TMPRSS2 또는 이의 단편의 존재를 검출하기 위한 웨스턴 블롯 또는 면역 단백질 블롯 방법에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 본 발명의 일부를 형성하며, 이러한 방법은 예를 들어 다음 단계를 포함한다:
(1) TMPRSS2의 존재를 시험할 샘플을 포함하는 막 또는 다른 고형 기질을 제공하는 단계로서, 예를 들어 당업계에 알려진 방법(예: 반건조 블롯팅 또는 탱크 블롯팅)을 사용해, TMPRSS2의 존재를 시험할 샘플로부터 단백질을 (예를 들어 샘플 내 단백질의 PAGE 또는 SDS-PAGE 전기영동 분리에 의해) 막 또는 다른 고형 기질 상에 전달하는 단계; 및 TMPRSS2 또는 이의 단편의 존재를 시험할 막 또는 다른 고형 기질을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계를 임의로 포함하는, 단계.
이러한 막은, 예를 들어 비-변성 PAGE(폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔 또는 SDS-PAGE(도데실황산나트륨 폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔에서 TMPRSS2의 존재를 시험할 단백질이 (겔에서의 전기영동 분리 후에) 이미 전달된 니트로셀룰로오스 막 또는 비닐계(예를 들어 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF)) 막의 형태를 취할 수 있다. 막을 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키기 전에, 막 상의 비특이적 단백질 결합 부위를 결합시키기 위해 막을 예를 들어 무지방 분유 등으로 임의로 차단한다.
(2) 막을 1회 이상 세척하여 결합되지 않은 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질 및 기타 결합되지 않은 물질을 제거하는 단계; 및
(3) 결합된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질을 검출하는 단계.
결합된 항원 결합 단백질의 검출은 TMPRSS2 단백질이 막 또는 기질 및 시료 내에 존재함을 나타낸다. 결합된 항원 결합 단백질의 검출은 항원 결합 단백질을 검출 가능하게 표지된 이차 항체(항-면역글로불린 항체)와 결합시킨 다음, 이차 항체 표지의 존재를 검출함으로써 이루어질 수 있다.
본원에 개시된 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질(예를 들어 항체 및 항원 결합 단편(예: mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029)) 또한 면역조직화학에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 본 발명의 일부를 형성하고, 이러한 방법은 예를 들어 다음 단계를 포함한다:
(1) TMPRSS2 단백질의 존재를 시험할 조직을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계; 및
(2) 조직 상에서 또는 조직 내에서 항원 결합 단백질을 검출하는 단계.
항원 결합 단백질 자체가 검출 가능하게 표지되는 경우, 이를 직접 검출할 수 있다. 대안적으로, 항원 결합 단백질은 검출 가능하게 표지된 이차 항체에 의해 결합될 수 있으며, 그런 다음 표지가 검출된다.
실시예
다음의 실시예들은 당업자에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시된 것으로, 본 발명자들이 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 사용된 숫자(예를 들어 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력을 기울였으나 약간의 실험 오차와 편차를 고려해야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부(parts)는 중량 부(parts by weight)이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 실온은 약 25℃이며, 압력은 대기압이거나 거의 대기압이다.
실시예 1: TMPRSS2에 대한 인간 항체의 생성
TMPRSS2에 대한 인간 항체를 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스에서 생성하였다. TMPRSS2를 발현하는 벡터로 마우스를 면역화한 다음, TMPRSS2를 부스터 투여하였다. 항체 면역 반응은 TMPRSS2-특이적 면역 검정으로 모니터링하였다. 미국 특허 제7582298호(그 전체가 구체적으로 본원에 참조로서 통합됨)에 기술된 바와 같이, 항-TMPRSS2 항체를 골수종 세포와 융합시키지 않고 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리하였다. 이러한 방법을 사용하여, 완전한 인간 항-TMPRSS2 항체(즉, 인간 가변 도메인 및 인간 불변 도메인을 포함한 항체)를 수득하였다.
본원에 기술된 예시적인 항체는 mAb8028, mAb8021, 및 mAb8029로 지정된다. 본 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항체의 생물학적 특성은 아래에 제시된 실시예에서 상세히 기술된다.
실시예 2: 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 핵산 서열
표 1은 예시적인 항-TMPRSS2 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역(각각, HCVR 및 LCVR) 및 CDR(HCDR-1, HCDR-2, HCDR-3, LCDR-1, LCDR-2, 및 LCDR-3)의 아미노산 서열 식별자뿐만 아니라 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열을 제시한다. 상응하는 핵산 서열 식별자는 표 2에 제시되어 있다.
아미노산 서열 식별자
서열 식별자
HCVR CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 LCVR CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 HC LC
mAb8028 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
mAb8021 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
mAb8029 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60
핵산 서열 식별자
서열 식별자
HCVR CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 LCVR CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 HC LC
mAb8028 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
mAb8021 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
mAb8029 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59
본원에 개시된 항체는 완전한 인간 가변 영역을 갖지만, 마우스 불변 영역(예를 들어, 마우스 IgG1 Fc 또는 마우스 IgG2 Fc(a 또는 b 이소형)), 또는 인간 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1 Fc 또는 인간 IgG4 Fc)을 가질 수 있다. 당업자가 이해할 수 있듯이, 특정 Fc 이소형을 갖는 항체는 상이한 Fc 이소형을 갖는 항체로 변환될 수 있지만(예를 들어, 마우스 IgG1 Fc를 갖는 항체는 인간 IgG4를 갖는 항체 등으로 변환될 수 있지만), 어떤 경우에도, 표 1 및 표 2에 나타낸 수치 식별자에 의해 표시되는 가변 도메인(CDR 포함)은 동일하게 유지될 것이고, 항체에 대한 결합 특성은 Fc 도메인의 성질에 상관없이 동일하거나 실질적으로 유사할 것으로 예상된다.
실시예 3 : 시험관 내에서의 다중 사이클 복제
mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029로 치료한 후 인플루엔자 바이러스, 인플루엔자 A/푸에르토 리코/08/1934(H1_PR34)가 Calu3 세포에서 복제하는 능력을 평가하였다.
사용된 시약
설명 공급자
Calu-3 세포 ATCC
EMEM Gibco
비필수 아미노산 Invitrogen
F12 Gibco
3.5mL 30% 저 IgG BSA Sigma
Pen/Strep Gibco
저 IgG BSA Sigma
PBS Life Technologies
소 태아 혈청 Life Technologies
인플루엔자 A/푸에르토 리코/08/1934 (H1_PR34) ATCC
항-인플루엔자 NP (마우스) Millipore
Calu-3 세포를 5% FBS가 포함된 DMEM:F12 배지 중 96-웰 플레이트에서 40,000 세포/웰로 시딩하였다. 다음 날, 인플루엔자 바이러스를 0.01의 MOI로 희석하고 항체를 25 μg/mL로 희석하였다. HA 항체를 별도의 플레이트에서 37℃에서 1시간 동안 인플루엔자 바이러스와 함께 사전 배양하였다. 사전 인큐베이션 기간 후, 감염되지 않은 Calu-3 세포를 항-HA 항체/바이러스 혼합물로 감염시키거나, 항-TMPRSS2 항체인 mAb8021, mAb8028, 또는 mAb8029 중 하나와 인플루엔자 바이러스로 병용 감염하였다. 그런 다음, 감염된 Calu-3 세포를 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 동안 감염시킨 후, 세포를 PBS로 3회 세척하고, 신선한 항체(이전 항체와 동일한 항-HA 또는 항-TMPRSS2)를 새로운 배지와 함께 각각의 웰에 첨가하였다. 감염 후 24시간 및 48시간차에 추가 항체를 첨가하였다. 감염 후 72시간차에, 세포를 항-NP로 염색하고 CTL-ImmunoSpot® S6 범용 분석기(Cellular Technology Limited, Cleveland, OH)를 이용해 영상화하였다.
Calu-3은 외인성 트립신이 없는 상태에서 인간 인플루엔자 바이러스의 다주기 복제를 허용하는 것으로 나타난 불멸화 인간 기도 상피 세포주이다(Zeng 등의 문헌[Highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses elicit an attenuated type I interferon response in polarized human bronchial epithelial cells. J Virol. 81:12439-12449 (2007)]). 추가로, Calu-3 세포는 항-TMPRSS2 항체를 시험하는 데 중요한 TMPRSS2를 발현하는 것으로 나타났다. 이들 항체를 인플루엔자 PR8 바이러스의 다주기 복제를 예방하는 이들의 능력에 대해 분석하였지만, 당업자는 TMPRSS2가 코로나바이러스 감염증에 관여하고, 따라서 TMPRSS2를 차단하는 것이 코로나바이러스 감염증에 유사한 영향을 미친다는 것을 이해할 것이다. 또한, TMPRSS2를 차단하는 것은 특정 바이러스 단백질을 차단하는 것보다 더 넓은 바이러스 감염성을 억제할 가능성이 있기 때문에 유익할 수 있다. 양성 대조군으로서는 항-HA 중화 항체를 감염성 억제에 사용하였다. 음성 대조군으로서는 이소형 대조군 항체를 사용하였다. 감염된 세포의 영상화는 CTL-ImmunoSpot® S6 범용 분석기(Cellular Technology Limited, Cleveland, OH)를 이용해 수행하였다. TMPRSS2 mAb는 항-TMPRSS2 mAb로 치료한 세포와 이소형 대조군으로 치료한 세포 간의 감염된 세포 수의 차이를 조사함으로써 관찰된 바와 같이, 인플루엔자 감염증 억제를 입증하였다. 바이러스 복제의 mAb-매개 억제의 상대적인 정도는 아래 표 4에 보고되어 있다.
mAb8021, mAb8028, 및 mAb8029에 의한 바이러스 억제
mAb mAb 표적 바이러스 억제 수준
mAb8021 TMPRSS2 +++
mAb8028 TMPRSS2 +++
mAb8029 TMPRSS2 +++
양성 대조군 인플루엔자 HA ++++
음성 대조군 이소형 대조군 -
감염된 미치료 대조군 대비 바이러스 억제 수준. 억제 없음(-), 바이러스 양성 세포 없음(++++), 바이러스 양성 세포 거의 없음(+++).
실시예 3 : 항-TMPRSS2 항체의 결합 동역학
TMPRSS2 단클론 항체(mAb)에 결합하는 TMPRSS2에 대한 평형 해리 상수(KD)는 Biacore T200 기기를 사용해 실시간 표면 플라스몬 공명 바이오센서로 결정하였다. 모든 결합 연구는 25℃ 및 37℃에서 10mM HEPES, 150mM NaCl, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH 7.4 (HBS-P) 러닝 완충액에서 수행하였다. Biacore CM5 센서 칩 표면을 항-인간 Fc mAb(REGN2567)와 아민 결합시킴으로써 먼저 유도체화시켜, 발현된 상이한 TMPRSS2 mAb를 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘(MMH) 태그로 포획하였다. HBS-P 러닝 완충액에서 제조한 상이한 농도의(100~3.7 nM, 3배 연속 희석물) 인간 TMPRSS2-myc-myc-His(hTMPRSS2-MMH), 필리핀 원숭이 TMPRSS2-MMH(mfTMPRSS2-MMH), 랫트 TMPRSS2-MMH(rTMPRSS2-MMH)의 세포외 도메인을 TMPRSS2 mAb가 포획된 표면에 30 μL/분의 유속으로 150초 동안 주입하고, HBS-P 러닝 완충액에서 이들의 해리를 10분 동안 모니터링하였다. 각 사이클의 종료 시, TMPRSS2 mAb가 포획된 표면을 20 mM 인산을 12초 동안 주입하여 재생시켰다.
결합 속도(ka) 및 해리 속도(kd)는 Scrubber 2.0c 곡선-피팅 소프트웨어를 사용해 질량 수송에 제한이 있는 1:1 결합 모델에 실시간 결합 센서그램을 피팅하여 결정하였다. 결합 해리 평형 상수 (KD) 및 해리 반감기(t½)를 동역학 속도로부터 다음과 같이 계산하였다:
K D (M) =
Figure pct00008
, 및 t½ (분) =
Figure pct00009
25℃ 및 37℃에서 본 발명의 상이한 TMPRSS2 mAb에 결합하는 TMPRSS2에 대한 결합 동역학 파라미터는 표 5 내지 표 12에 나타나 있다. mAb8021 및 mAb8029 둘 다는 TMPRSS2에 대한 강한 결합을 나타냈고, 특히 mAb8021은 rTMPRSS2 및 mTMPRSS2에 비해 hTMPRSS2 및 mfTMPRSS2에 대해 우선적 결합을 나타냈다.
25℃에서 hTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM hTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군* 226.2±1.9 58.4 6.02E+06 4.09E-04 6.80E-11 28.2
mAb8021 199.4±1.5 62.6 3.08E+06 9.19E-05 2.99E-11 125.7
mAb8029 234.6±2 64.5 2.18E+06 1.29E-04 5.92E-11 89.5
*국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
37℃에서 hTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM hTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군* 144.9±1.3 28.5 9.93E+06 2.21E-03 2.22E-10 5.2
mAb8021 134.9±1.1 40.1 4.17E+06 2.61E-04 6.27E-11 44.2
mAb8029 147.8±0.5 35.9 3.12E+06 6.73E-04 2.16E-10 17.2
*국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
25℃에서 mfTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM mfTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군* 231.4±4.4 47.2 6.60E+06 8.78E-03 1.33E-09 1.3
mAb8021 201.5±1.9 63.4 4.48E+06 1.13E-04 2.52E-11 102.2
mAb8029 233.5±2.2 66.7 3.20E+06 1.96E-04 6.09E-11 59.1
*국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
37℃에서 mfTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM mfTMPRSS-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군* 144.7±0.8 11.8 1.08E+07 3.96E-02 3.66E-09 0.3
mAb8021 134.4±0.6 36.7 7.71E+06 1.09E-04 1.41E-11 106.3
mAb8029 146.0±0.2 35.3 5.17E+06 3.92E-04 7.58E-11 29.5
*국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
25℃에서 rTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM rTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군** 207.6±2.4 0.24 NB* NB* NB* NB*
mAb8021 300.2±0.9 -0.31 NB* NB* NB* NB*
mAb8029 326.7±1.3 41.21 1.07E+05 3.64E-04 3.40E-09 31.8
*현재의 실험 조건 하에서 결합이 관찰 되지 않았음
**국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
37℃에서 rTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM rTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군** 259.6±0.9 0.5 NB* NB* NB* NB*
mAb8021 365.6±1 -0.6 NB* NB* NB* NB*
mAb8029 404.1±3.7 65.4 6.82E+04 1.72E-03 2.51E-08 6.7
*현재의 실험 조건 하에서 결합이 관찰 되지 않았음
**국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
25℃에서 mTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM mTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군** 204.6±1.6 -0.81 NB* NB* NB* NB*
mAb8021 298.6±0.8 -0.8 NB* NB* NB* NB*
mAb8029 324.2±1 41.99 1.33E+05 4.42E-04 3.33E-09 26.2
*현재의 실험 조건 하에서 결합이 관찰 되지 않았음
**국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
37℃에서 mTMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 결합 동역학
포획된 mAb mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100nM mTMPRSS2-MMH (RU) k a
(1/Ms)		 k d
(1/s)		 KD
(M)		 t½
(분)
양성 대조군** 258.4±2.4 0.0 NB* NB* NB* NB*
mAb8021 363.0±1.0 -0.5 NB* NB* NB* NB*
mAb8029 402.4±3.3 64.7 2.14E+05 2.09E-03 9.75E-09 5.5
* 현재의 실험 조건 하에서 결합이 관찰 되지 않았음을 나타냄.
**국제 특허 공개 제WO/2019/147831호 기술된 것과 같은 양성 대조군 항체 H4H7017N
실시예 4 : 항-TMPRSS2 항체의 pH 민감도
정제된 항-TMPRSS2 단클론 항체에 결합하는 TMPRSS에 대한 해리 속도 상수(kd)는 실시간 표면 플라스몬 공명 기반의 Biacore T200 바이오센서 플랫폼을 사용해 결정하였다. 모든 결합 연구는 37℃에서 2개의 러닝 완충액, 즉 (i) 1.9mM NaH2PO4, 8.1mM Na2HPO4, 2.7mM KCl, 137mM NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH7.4 (PBS-T-pH7.4), 및 (ii) 8.8mM NaH2PO4, 1.2mM Na2HPO4, 2.7mM KCl, 137mM NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH6.0 (PBS-T-pH6.0)을 사용해 수행하였다. 항-인간 Fc 특이적 마우스 mAb와의 아민 결합에 의해 유도체화된 CM5 Biacore 센서 표면을 사용해 상이한 항-TMPRSS2 mAb를 포획하였다. 모든 TMPRSS2 시약을 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(이하 TMPRSS2-MMH로 지칭함)로 발현시켰다. PBS-T-pH7.4 러닝 완충액(25 nM~6.25 nM; 4배 연속 희석물)에서 제조한 상이한 농도의 인간 TMPRSS2-MMH, 필리핀 원숭이(macaca fascicularis) TMPRSS2-MMH, 랫트 TMPRSS2-MMH, 또는 마우스 TMPRSS2-MMH를 30 μL/분의 유속으로 2.5분 동안 주입한 다음, 결합된 TMPRSS2-MMH 단백질을 PBS-T-pH7.4 또는 PBS-T-pH6.0 러닝 완충액에서 8분 동안 해리시켰다.
두 가지 러닝 완충액에서의 해리 속도 상수(kd)는 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용해 실시간 결합 센서그램을 1:1 결합 모델에 피팅하여 결정하였다.
37℃에서 PBS-T-pH7.4 및 PBS-T-pH6.0 중에서 인간 TMPRSS2-MMH, 원숭이 TMPRSS2-MMH, 랫트 TMPRSS2-MMH, 및 마우스 TMPRSS2-MMH에 결합하는 항-TMPRSS2 mAb의 해리 속도 값은 표 13 내지 표 16에 나타나 있다. 항체 중 어느 것도 pH 민감도를 나타내지 않았다.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
실시예 5 : 항-TMPRSS2 단클론 항체들 간의 Octet 교차 경쟁
TMPRSS2 단클론 항체(mAb)들 간의 결합 경쟁은 Octet HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp.)을 이용한 실시간, 무표지 바이오층 간섭(BLI) 검정을 사용해 결정하였다. 전체 실험은 25℃에서, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 1 mg/mL BSA, 0.02% NaN3, pH7.4 (HBS-P) 완충액 중에서, 플레이트를 1000rpm의 속도로 진탕시키면서 수행하였다. 두 가지 mAb가 TMPRSS2 상에서 이들 각각의 에피토프에 결합하기 위해 서로 경쟁할 수 있는지 여부를 평가하기 위해 먼저, 바이오센서 팁을 10 μg/mL의 hTMPRSS2-MMH 용액이 담긴 웰에 1.5분 동안 침지시켜 항-펜타-His 항체(HIS1K)로 코팅한 Octet 바이오센서 팁 상에 인간 TMPRSS2-MMH(hTMPRSS2-MMH)의 세포외 도메인을 포획하였다. 그런 다음, hTMPRSS2-MMH가 포획된 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 mAb-1 용액이 담긴 웰에 5분 동안 침지하여 제1 TMPRSS2 mAb(이하 mAb-1로서 지칭함)로 포화시켰다. 그런 다음, 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 제2 TMPRSS2 mAb(이하 mAb-2로서 지칭함) 용액이 담긴 웰에 5분 동안 추가로 침지하였다. 실험의 모든 단계 사이에, HBS-P 완충액에서 바이오센서 팁을 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험의 전체 과정 동안 모니터링하고, 모든 단계가 끝난 후 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 미리 복합체화된 hTMPRSS2-MMH에 결합하는 mAb-2의 반응을 비교하고, 상이한 항-TMPRSS2 mAb의 경쟁적/비경쟁적 거동을 표 17에 나타낸 바와 같이 결정하였다.
두 가지 러닝 완충액에서의 해리 속도 상수(kd)는 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용해 실시간 결합 센서그램을 1:1 결합 모델에 피팅하여 결정하였다.
Figure pct00014
*****************
본원에 인용된 모든 참조 문헌은 각각의 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원, 또는 특허가 구체적으로 및 개별적으로 참조로서 통합되도록 표시된 것과 동일한 정도로 참조로서 통합된다. 참조에 의한 이러한 인용문은 통합은, 비록 이러한 인용이 참조에 의한 통합에 대한 전적인 인용문에 밀접하지는 않더라도, 모든 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예를 들어 Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원, 또는 식별된 특허와 관련되도록 출원인에 의해 의도된다. 참조에 의한 전용 인용문의 통합이 본 명세서 내에 포함된 경우, 이는 어떠한 방식으로도 참조에 의한 일반 인용문의 통합을 약화시키지 않는다. 본원에서 참조 문헌의 인용은 해당 참조 문헌이 관련 선행 기술임을 인정하는 것으로 의도되지 않으며, 이들 간행물 또는 문서의 내용 또는 날짜에 대해 인정하는 것으로 간주되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Baum, Alina Kyratsous, Christos Purcell, Lisa <120> ANTI-TMPRSS2 ANTIBODIES AND ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS <130> 10737WO01 <140> TBD <141> 2021-02-09 <150> 62/972,338 <151> 2020-02-10 <150> 63/021,016 <151> 2020-05-06 <150> 63/094,199 <151> 2020-10-20 <160> 64 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgaag cctctggatt caccttcagg agctacgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggttctg ctggtgacac actctatcca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagagaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatggaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agttggagac 300 tggggatcgg ggtacttaga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357 <210> 2 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ser Ala Gly Asp Thr Leu Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Gly Asp Trp Gly Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 ggattcacct tcaggagcta cgac 24 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Asp 1 5 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 attggttctg ctggtgacac a 21 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Ile Gly Ser Ala Gly Asp Thr 1 5 <210> 7 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 gcaagagttg gagactgggg atcggggtac ttagactac 39 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Ala Arg Val Gly Asp Trp Gly Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 9 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc atctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggagagccc ctaaactcct gatctatgtt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacggta ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Gly Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 cagagcatta gcatctat 18 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Gln Ser Ile Ser Ile Tyr 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 gttgcatcc 9 <210> 14 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Val Ala Ser 1 <210> 15 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 caacagagtt acggtacccc attcact 27 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Gln Gln Ser Tyr Gly Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgaag cctctggatt caccttcagg agctacgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggttctg ctggtgacac actctatcca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagagaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatggaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agttggagac 300 tggggatcgg ggtacttaga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc 360 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 420 acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac gaagacctac 600 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagtccaaa 660 tatggtcccc catgcccacc ctgcccagca cctgagttcc tggggggacc atcagtcttc 720 ctgttccccc caaaacccaa ggacactctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca ggaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggatggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agttcaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccatccc aggaggagat gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caggctcacc gtggacaaga gcaggtggca ggaggggaat 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca gaagtccctc 1320 tccctgtctc tgggtaaatg a 1341 <210> 18 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ser Ala Gly Asp Thr Leu Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Gly Asp Trp Gly Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 19 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc atctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggagagccc ctaaactcct gatctatgtt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacggta ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645 <210> 20 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Gly Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 21 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 21 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgagggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc aattatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcagcgttt acaatggtaa cacagaatat 180 gcagagaaat tccagggcag agtctccatg accacagaca catccacgac cacagcctac 240 ttggagctga ggagcctgaa atctgacgac acggccgtct atttctgtgc gagagggcaa 300 ctggactact tcgacccctg gggccaggga accctggtca ctgtctcctc a 351 <210> 22 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Glu Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Arg Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Leu Asp Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 23 ggttacacct ttaccaatta tggt 24 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 24 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 25 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 25 atcagcgttt acaatggtaa caca 24 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 26 Ile Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr 1 5 <210> 27 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 27 gcgagagggc aactggacta cttcgacccc 30 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 28 Ala Arg Gly Gln Leu Asp Tyr Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 29 gaaattgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccaggaga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttaga agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccagtctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtctgcag tataataact ggtggacgtt cggccaaggg 300 accaaggtgg aaatcaaa 318 <210> 30 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 30 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Asn Asn Trp Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 31 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 31 cagagtgtta gaagcaac 18 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 32 Gln Ser Val Arg Ser Asn 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 33 ggtgcatcc 9 <210> 34 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 34 Gly Ala Ser 1 <210> 35 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 35 ctgcagtata ataactggtg gacg 24 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 Leu Gln Tyr Asn Asn Trp Trp Thr 1 5 <210> 37 <211> 1335 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgagggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc aattatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcagcgttt acaatggtaa cacagaatat 180 gcagagaaat tccagggcag agtctccatg accacagaca catccacgac cacagcctac 240 ttggagctga ggagcctgaa atctgacgac acggccgtct atttctgtgc gagagggcaa 300 ctggactact tcgacccctg gggccaggga accctggtca ctgtctcctc agcctccacc 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 660 cccccatgcc caccctgccc agcacctgag ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc 720 cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780 gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 840 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 900 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 960 tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020 cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200 ttcttcctct acagcaggct caccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1260 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagtc cctctccctg 1320 tctctgggta aatga 1335 <210> 38 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Glu Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Arg Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Leu Asp Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 39 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 gaaattgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccaggaga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttaga agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccagtctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtctgcag tataataact ggtggacgtt cggccaaggg 300 accaaggtgg aaatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 642 <210> 40 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 40 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Asn Asn Trp Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 41 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcaac agtaatagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaagggact ggagtggatt gggagtatct attatgatag gaacacctac 180 tacaccccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgacctctgt gaccgccgca gacacggctg tatattattg tgcgagagag 300 caggtccccg gctactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 42 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 42 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Asn 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Asp Arg Asn Thr Tyr Tyr Thr Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Gln Val Pro Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 43 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 ggtggctcca tcaacagtaa tagttactac 30 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 Gly Gly Ser Ile Asn Ser Asn Ser Tyr Tyr 1 5 10 <210> 45 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 45 atctattatg ataggaacac c 21 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 Ile Tyr Tyr Asp Arg Asn Thr 1 5 <210> 47 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 gcgagagagc aggtccccgg ctactacggt atggacgtc 39 <210> 48 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 Ala Arg Glu Gln Val Pro Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 49 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agatatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaaaccc ctaaactcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcactggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcaa cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttgatagtt acccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 50 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 51 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 cagggcatta gcagatat 18 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 Gln Gly Ile Ser Arg Tyr 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 gctgcatcc 9 <210> 54 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 Ala Ala Ser 1 <210> 55 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 caacagtttg atagttaccc gtggacg 27 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Gln Gln Phe Asp Ser Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 57 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcaac agtaatagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaagggact ggagtggatt gggagtatct attatgatag gaacacctac 180 tacaccccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgacctctgt gaccgccgca gacacggctg tatattattg tgcgagagag 300 caggtccccg gctactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660 tccaaatatg gtcccccatg cccaccctgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca 720 gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctcaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260 gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320 tccctctccc tgtctctggg taaatga 1347 <210> 58 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Asn 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Asp Arg Asn Thr Tyr Tyr Thr Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Gln Val Pro Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 59 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agatatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaaaccc ctaaactcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcactggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcaa cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttgatagtt acccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645 <210> 60 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 61 <211> 1273 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 1 5 10 15 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 35 40 45 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 50 55 60 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 65 70 75 80 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 100 105 110 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 115 120 125 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 130 135 140 Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 145 150 155 160 Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 165 170 175 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 180 185 190 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 195 200 205 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 210 215 220 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 225 230 235 240 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 245 250 255 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 260 265 270 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 275 280 285 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 290 295 300 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 305 310 315 320 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 325 330 335 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 340 345 350 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 355 360 365 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 370 375 380 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 385 390 395 400 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 405 410 415 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 420 425 430 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 435 440 445 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 450 455 460 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 465 470 475 480 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 485 490 495 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 500 505 510 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 530 535 540 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 545 550 555 560 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 565 570 575 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 580 585 590 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 595 600 605 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 610 615 620 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 625 630 635 640 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 645 650 655 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 660 665 670 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala 675 680 685 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 690 695 700 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 705 710 715 720 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 725 730 735 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 740 745 750 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 755 760 765 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 770 775 780 Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 785 790 795 800 Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 805 810 815 Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 820 825 830 Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 835 840 845 Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 850 855 860 Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 865 870 875 880 Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 885 890 895 Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 900 905 910 Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 915 920 925 Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 930 935 940 Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 945 950 955 960 Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 965 970 975 Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln 980 985 990 Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 995 1000 1005 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn 1010 1015 1020 Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys 1025 1030 1035 Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro 1040 1045 1050 Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 1055 1060 1065 Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His 1070 1075 1080 Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn 1085 1090 1095 Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln 1100 1105 1110 Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val 1115 1120 1125 Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro 1130 1135 1140 Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn 1145 1150 1155 His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn 1160 1165 1170 Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 1175 1180 1185 Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu 1190 1195 1200 Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu 1205 1210 1215 Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met 1220 1225 1230 Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 1235 1240 1245 Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro 1250 1255 1260 Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1265 1270 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 63 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Met Ala Leu Asn Ser Gly Ser Pro Pro Ala Ile Gly Pro Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Asn His Gly Tyr Gln Pro Glu Asn Pro Tyr Pro Ala Gln Pro Thr Val 20 25 30 Val Pro Thr Val Tyr Glu Val His Pro Ala Gln Tyr Tyr Pro Ser Pro 35 40 45 Val Pro Gln Tyr Ala Pro Arg Val Leu Thr Gln Ala Ser Asn Pro Val 50 55 60 Val Cys Thr Gln Pro Lys Ser Pro Ser Gly Thr Val Cys Thr Ser Lys 65 70 75 80 Thr Lys Lys Ala Leu Cys Ile Thr Leu Thr Leu Gly Thr Phe Leu Val 85 90 95 Gly Ala Ala Leu Ala Ala Gly Leu Leu Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys 100 105 110 Cys Ser Asn Ser Gly Ile Glu Cys Asp Ser Ser Gly Thr Cys Ile Asn 115 120 125 Pro Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser His Cys Pro Gly Gly Glu Asp 130 135 140 Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly Pro Asn Phe Ile Leu Gln Met 145 150 155 160 Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His Pro Val Cys Gln Asp Asp Trp 165 170 175 Asn Glu Asn Tyr Gly Arg Ala Ala Cys Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn 180 185 190 Asn Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val Asp Asp Ser Gly Ser Thr Ser 195 200 205 Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys 210 215 220 Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser Lys Ala Val Val Ser Leu Arg 225 230 235 240 Cys Ile Ala Cys Gly Val Asn Leu Asn Ser Ser Arg Gln Ser Arg Ile 245 250 255 Val Gly Gly Glu Ser Ala Leu Pro Gly Ala Trp Pro Trp Gln Val Ser 260 265 270 Leu His Val Gln Asn Val His Val Cys Gly Gly Ser Ile Ile Thr Pro 275 280 285 Glu Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Lys Pro Leu Asn Asn 290 295 300 Pro Trp His Trp Thr Ala Phe Ala Gly Ile Leu Arg Gln Ser Phe Met 305 310 315 320 Phe Tyr Gly Ala Gly Tyr Gln Val Glu Lys Val Ile Ser His Pro Asn 325 330 335 Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Asn Asn Asp Ile Ala Leu Met Lys Leu Gln 340 345 350 Lys Pro Leu Thr Phe Asn Asp Leu Val Lys Pro Val Cys Leu Pro Asn 355 360 365 Pro Gly Met Met Leu Gln Pro Glu Gln Leu Cys Trp Ile Ser Gly Trp 370 375 380 Gly Ala Thr Glu Glu Lys Gly Lys Thr Ser Glu Val Leu Asn Ala Ala 385 390 395 400 Lys Val Leu Leu Ile Glu Thr Gln Arg Cys Asn Ser Arg Tyr Val Tyr 405 410 415 Asp Asn Leu Ile Thr Pro Ala Met Ile Cys Ala Gly Phe Leu Gln Gly 420 425 430 Asn Val Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Thr Ser 435 440 445 Lys Asn Asn Ile Trp Trp Leu Ile Gly Asp Thr Ser Trp Gly Ser Gly 450 455 460 Cys Ala Lys Ala Tyr Arg Pro Gly Val Tyr Gly Asn Val Met Val Phe 465 470 475 480 Thr Asp Trp Ile Tyr Arg Gln Met Arg Ala Asp Gly 485 490 <210> 64 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Met Ala Leu Asn Ser Gly Ser Pro Pro Gly Val Gly Pro Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Asn His Gly Tyr Gln Pro Glu Asn Pro Tyr Pro Ala Gln Pro Thr Val 20 25 30 Ala Pro Asn Val Tyr Glu Val His Pro Ala Gln Tyr Tyr Pro Ser Pro 35 40 45 Val Pro Gln Tyr Thr Pro Arg Val Leu Thr His Ala Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Val Cys Arg Gln Pro Lys Ser Pro Ser Gly Thr Val Cys Thr Ser Lys 65 70 75 80 Thr Lys Lys Ala Leu Cys Val Thr Met Thr Leu Gly Ala Val Leu Val 85 90 95 Gly Ala Ala Leu Ala Ala Gly Leu Leu Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys 100 105 110 Cys Ser Asp Ser Gly Ile Glu Cys Asp Ser Ser Gly Thr Cys Ile Ser 115 120 125 Leu Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser His Cys Pro Asn Gly Glu Asp 130 135 140 Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly Pro Asn Phe Ile Leu Gln Val 145 150 155 160 Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His Pro Val Cys Arg Asp Asp Trp 165 170 175 Asn Glu Asn Tyr Ala Arg Ala Ala Cys Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn 180 185 190 Ser Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val Asp Asn Ser Gly Ala Thr Ser 195 200 205 Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys 210 215 220 Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser Lys Ala Val Val Ser Leu Arg 225 230 235 240 Cys Ile Ala Cys Gly Val Arg Ser Asn Leu Ser Arg Gln Ser Arg Ile 245 250 255 Val Gly Gly Gln Asn Ala Leu Leu Gly Ala Trp Pro Trp Gln Val Ser 260 265 270 Leu His Val Gln Asn Ile His Val Cys Gly Gly Ser Ile Ile Thr Pro 275 280 285 Glu Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Lys Pro Leu Asn Ser 290 295 300 Pro Trp Gln Trp Thr Ala Phe Val Gly Thr Leu Arg Gln Ser Ser Met 305 310 315 320 Phe Tyr Glu Lys Gly His Arg Val Glu Lys Val Ile Ser His Pro Asn 325 330 335 Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Asn Asn Asp Ile Ala Leu Met Lys Leu His 340 345 350 Thr Pro Leu Thr Phe Asn Glu Val Val Lys Pro Val Cys Leu Pro Asn 355 360 365 Pro Gly Met Met Leu Glu Pro Glu Gln His Cys Trp Ile Ser Gly Trp 370 375 380 Gly Ala Thr Gln Glu Lys Gly Lys Thr Ser Asp Val Leu Asn Ala Ala 385 390 395 400 Met Val Pro Leu Ile Glu Pro Arg Arg Cys Asn Asn Lys Tyr Val Tyr 405 410 415 Asp Gly Leu Ile Thr Pro Ala Met Ile Cys Ala Gly Phe Leu Gln Gly 420 425 430 Thr Val Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Thr Leu 435 440 445 Lys Asn Asp Val Trp Trp Leu Ile Gly Asp Thr Ser Trp Gly Ser Gly 450 455 460 Cys Ala Gln Ala Asn Arg Pro Gly Val Tyr Gly Asn Val Thr Val Phe 465 470 475 480 Thr Asp Trp Ile Tyr Arg Gln Met Arg Ala Asp Gly 485 490

Claims (40)

  1. 인간 막관통 프로테아제인 세린 2(TMPRSS2)에 특이적으로 결합하는 단리된 재조합 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체는 다음의 특징 중 하나 이상을 갖는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (a) 약 10-9 M 미만의 EC50으로 TMPRSS2에 결합함;
    (b) 코로나바이러스 감염 동물에게 투여된 된 후, 상기 투여가 없는 비슷한 코로나바이러스 감염 동물과 비교했을 때, 상기 코로나바이러스 감염 동물에서 생존율 증가를 나타냄; 및/또는
    (c) 다음을 포함함
    (i) 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역(HCVR)에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 10에 제시된 경쇄 가변 영역(LCVR)에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3); 또는
    (ii) 서열번호 22에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 30에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3); 또는
    (iii) 서열번호 42에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 50에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3).
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 2에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 10에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    (b) 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
    (c) 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
    다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    (b) 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
    (c) 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역;
    및/또는
    (b) 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 22에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 30에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  9. 제1항 또는 제7항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역.
  10. 제1항 또는 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    (b) 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
    (c) 서열번호 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
    다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    (b) 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
    (c) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
  11. 제1항 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역;
    및/또는
    (b) 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  12. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 42에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3); 및 서열번호 50에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3)을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 또는 제12항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  14. 제1항 또는 제12항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역.
  15. 제1항 또는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    다음을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    (b) 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및/또는
    (c) 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 및/또는
    다음을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
    (a) 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    (b) 서열번호 54에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및/또는
    (c) 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3.
  16. 제1항 또는 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    (a) 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변영역;
    및/또는
    (b) 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린, 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변영역.
  17. TMPRSS2에 결합하기 위해 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁하는 항원 결합 단백질.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 결합하거나, TMPRSS2 상의 중첩 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적인 항체 또는 항원 결합 단편.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 다음 특성 중 하나 이상을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편:
    a) TMPRSS2-발현 세포에서 코로나바이러스의 성장을 억제함;
    b) TMPRSS2-발현 세포에서 인플루엔자 바이러스의 성장을 억제함;
    c) TMPRSS-발현 세포의 표면에 결합함;
    d) TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의하게 결합하지 않음;
    e) 시험관 내에서 세포의 코로나바이러스 감염 확산을 제한함;
    f) 시험관 내에서 세포의 인플루엔자 바이러스 감염 확산을 제한함;
    g) 인간 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 코로나바이러스 감염에 의한 사망 및/또는 체중 감소로부터 보호함; 및
    h) 인간 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 인플루엔자 바이러스 감염에 의한 사망으로부터 보호함.
  21. TMPRSS2 폴리펩티드에 결합된 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단백질을 포함하는 복합체.
  22. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편의 제조 방법으로서, 다음을 포함하는, 방법:
    (a) 상기 항체 또는 항원 결합 단백질을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내에 도입하는 단계;
    (b) 하나 이상의 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에서 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    (c) 임의로, 숙주 세포 및/또는 숙주 세포를 성장시키는 배지로부터 항체 또는 항원 결합 단백질을 단리하는 단계.
  23. 제22항에 있어서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포인, 방법.
  24. 제22항 내지 제23항 중 어느 한 항의 방법의 생성물인 항체 또는 항원 결합 단편.
  25. 다음을 포함하는 폴리펩티드:
    (a) 서열번호 2, 22, 또는 42 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 VH 도메인의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 또는
    (b) 서열번호 10, 30, 또는 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 VL 도메인의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3.
  26. 제25항의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
  27. 제26항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
  28. 제1항 내지 제20항 및 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  29. 제1항 내지 제20항 및 제24항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 추가의 치료제와 함께 포함하는 조성물 또는 키트.
  30. 제1항 내지 제20항 및 제24항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 및 임의로 추가의 치료제를 포함하는 약학적 조성물.
  31. 제29항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 항암제 또는 백신과 연계되는, 조성물 또는 키트.
  32. 제29항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제는 렘데시비르(remdesivir), 클로로퀸(chloroquine), 로피나비르(lopinavir), 리토나비르(ritonavir), 리바비린(ribavirin), 리디파스비르(ledipasvir), 소포스부비르(sofosbuvir), 리디파스비르와 소포스부비르의 조합, 오셀타미비르(oseltamivir), 자나미비르(zanamivir), 리바비린(ribavirin) 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 및 항암제, 및 인플루엔자 HA 또는 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원; 및/또는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 조성물 또는 키트:
    H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; H1H18335B; H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2.
  33. 제1항 내지 제20항, 제24항, 및 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 또는 조성물을 포함하는 용기 또는 주사 장치.
  34. 암 또는 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, 파라인플루엔자 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 또는 C형 간염 바이러스(HCV)로 인한 감염증의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하거나 예방하기 위한 방법으로서,제1항 내지 제20항 및 제24항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 대장암, 폐암, 췌장암, 요로암, 유방암, 난소암, 전립선 선암종, 신장 세포 암종, 결장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종, 및/또는 흉막 중피종인, 암의 치료 방법.
  36. 제34항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 하나 이상의 추가 치료제가 투여되는, 방법.
  37. 제36항에 있어서, 대상체에게 항-바이러스제 또는 백신인 하나 이상의 추가 치료제가 투여되는, 방법.
  38. 제34항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원인 하나 이상의 추가 치료제가 투여되는 방법: 렘데시비르, 클로로퀸, 로피나비르, 리토나비르, 리바비린, 리디파스비르, 소포스부비르, 리디파스비르와 소포스부비르의 조합, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 및 인플루엔자 HA 또는 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및/또는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; H1H18335B; H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2.
  39. 제1항 내지 제20항 및 제24항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내에 투여하는 방법으로서, 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내에 주사하는 단계를 포함하는, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 항원 결합 단백질은 대상체의 신체에 피하, 정맥내 또는 근육내 주입되는, 방법.
KR1020227026885A 2020-02-10 2021-02-09 항-tmprss2 항체 및 항원 결합 단편 KR20220140503A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062972338P 2020-02-10 2020-02-10
US62/972,338 2020-02-10
US202063021016P 2020-05-06 2020-05-06
US63/021,016 2020-05-06
US202063094199P 2020-10-20 2020-10-20
US63/094,199 2020-10-20
PCT/US2021/017290 WO2021163076A1 (en) 2020-02-10 2021-02-09 ANTl-TMPRSS2 ANTIBODIES AND ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220140503A true KR20220140503A (ko) 2022-10-18

Family

ID=74798119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227026885A KR20220140503A (ko) 2020-02-10 2021-02-09 항-tmprss2 항체 및 항원 결합 단편

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP4103619A1 (ko)
JP (1) JP2023513124A (ko)
KR (1) KR20220140503A (ko)
CN (1) CN115427457A (ko)
AU (1) AU2021219671A1 (ko)
CA (1) CA3163164A1 (ko)
IL (1) IL294529A (ko)
MX (1) MX2022009476A (ko)
WO (1) WO2021163076A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023199943A1 (ja) * 2022-04-12 2023-10-19 国立研究開発法人理化学研究所 コロナウイルス感染症を処置することに用いられる抗体
CN116003611B (zh) * 2022-08-17 2024-02-27 中南大学湘雅医院 抗tmprss2抗体及其用途

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4952496A (en) 1984-03-30 1990-08-28 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US5693489A (en) 1984-03-30 1997-12-02 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
ES2323407T3 (es) 2000-07-12 2009-07-15 Agensys, Inc. Nuevo antigeno tumoral util en el diagnostico y terapia del cancer de vejiga, ovario, pulmon y riñon.
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8354508B2 (en) 2006-07-21 2013-01-15 Diadexus, Inc. PRO115 antibody compositions and methods of use
CA2666599A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
WO2009138519A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ablynx Nv AMINO ACID SEQUENCES DIRECTED AGAINST CXCR4 AND OTHER GPCRs AND COMPOUNDS COMPRISING THE SAME
BR112014025339A8 (pt) 2012-04-16 2018-01-16 Regeneron Pharma método para tratamento ou prevenção ou redução de infecção do virus influenza e composição farmacêutica para o mesmo.
WO2014022540A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
JO3701B1 (ar) 2014-05-23 2021-01-31 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية لمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية - بروتين كورونا فيروس الشوكي
TWI701258B (zh) 2014-12-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
KR102493894B1 (ko) 2016-02-29 2023-01-31 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 tmprss 유전자를 갖는 설치류
MA46731B1 (fr) * 2018-01-26 2021-06-30 Regeneron Pharma Anticorps anti-tmprss2 et fragments de liaison à l'antigène

Also Published As

Publication number Publication date
EP4103619A1 (en) 2022-12-21
CN115427457A (zh) 2022-12-02
US20210246226A1 (en) 2021-08-12
WO2021163076A1 (en) 2021-08-19
AU2021219671A1 (en) 2022-07-14
IL294529A (en) 2022-09-01
MX2022009476A (es) 2022-08-22
JP2023513124A (ja) 2023-03-30
CA3163164A1 (en) 2021-08-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3889177B1 (en) Anti-sars-cov-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
EP3638698B1 (en) Anti-tmprss2 antibodies and antigen-binding fragments
JP6719490B2 (ja) 抗ｉｌ−３６ｒ抗体
JP6797111B2 (ja) イヌｐｄ−ｌ１と結合するｐｄ−ｌ１抗体
US20240043504A1 (en) Anti-SARS-CoV-2-Spike Glycoprotein Antibodies and Antigen-Binding Fragments
KR20220140503A (ko) 항-tmprss2 항체 및 항원 결합 단편
US11999799B2 (en) Anti-TMPRSS2 antibodies and antigen-binding fragments
US20230125469A1 (en) Anti-SARS-CoV-2-Spike Glycoprotein Antibodies and Antigen-Binding Fragments
WO2022187626A1 (en) Anti-sars-cov-2-variant-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments