KR20220125511A - Nanorization-treated fermented Hibiscus manihot with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content and manufacturing method thereof - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to nano-processed fermented Abelmoschus manihot products with an increased content of collagen, amino acids, polyphenols or flavonoids and a manufacturing method thereof. By nano-processing the Abelmoschus manihot products produced by using Bacillus subtilis, it was confirmed that antioxidant activity, anti-inflammatory activity and skin wrinkle reducing or skin whitening effects are enhanced compared to fermented Abelmoschus manihot products which have not undergone nano-processing, and thus the nano-processed fermented Abelmoschus manihot products of the present invention can be usefully used in related industries.

Description

콜라겐, 아미노산, 폴리페놀 또는 플라보노이드 함량이 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물 및 이의 제조방법{Nanorization-treated fermented Hibiscus manihot with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content and manufacturing method thereof}Nano-treated fermented Geumhwa beef with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content and manufacturing method thereof

본 발명은 콜라겐, 아미노산, 폴리페놀 또는 플라보노이드 함량이 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a nano-treated fermented Geumhwasil with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content, and a method for preparing the same.

최근, 전 세계적으로 이너뷰티(Inner Beauty) 열풍이 불고 있다. 이너뷰티는 내면(Inner)의 아름다움(Beauty)을 위한 식품 또는 먹는 화장품을 통해, 기존의 바르는 화장품처럼 피부의 겉만 일시적으로 좋게하는 것이 아니라, 생활습관 및 식습관을 개선하여 근본적인 건강 및 피부 문제를 해결하는 것을 의미한다. 대표적인 제품군으로는 히알루론산(피부 속 수분을 유지시켜 주는 성분), 콜라겐(피부 탄력과 노화방지에 효과적인 성분) 및 비타민을 포함하는 제품, 디톡스 주스 등이 있다. 이너뷰티는 미용기능식품(Nutricosmetics)으로 불리며, 외부로부터 영양을 공급받는 아우터 뉴트리션(Outer Nutrition)에 반대되는 이너 뉴트리션(Inner Nutrition)의 중요성이 강조되면서 화장품과 식품의 중간 형태로 이너뷰티 개념이 등장하였다. 2018년 8월에 시장전문기관인 Technavio에서 세계 이너뷰티 시장의 향후 전망에 대해 연평균 성장률 5.3%를 예상한다고 보고한 바 있다. Recently, the craze for inner beauty is blowing around the world. Inner beauty, through food or edible cosmetics for inner beauty, does not temporarily improve the outer surface of the skin like conventional cosmetics, but improves lifestyle and eating habits to solve fundamental health and skin problems. means to do Representative products include products containing hyaluronic acid (a component that maintains moisture in the skin), collagen (a component effective for skin elasticity and anti-aging) and vitamins, and detox juice. Inner beauty is called Nutricosmetics, and as the importance of inner nutrition as opposed to outer nutrition, which receives nutrition from the outside, is emphasized, the concept of inner beauty appeared as an intermediate form between cosmetics and food. did. In August 2018, Technavio, a market expert, reported that it expects a CAGR of 5.3% for the future outlook of the global inner beauty market.

이너뷰티 제품은 일반 식품과 달리 인체 안전성과 기능성을 중시하고 있어, 주요 원료에 대한 중요성이 확대되고 있으므로, 일일섭취량 안전성 여부, 독성 여부, 섭취 시 주의사항 등 건강기능식품의 안전지침을 반영하여 건강기능식품에 준하는 제품 개발에 대한 연구가 필요하다. 현재 이너뷰티 제품의 소재로 해외 수입 원료가 주로 활용되고 있어, 이에 다양한 국내 천연물 소재의 개발을 위한 활발한 연구 개발이 필요한 실정이다. Unlike general foods, inner beauty products emphasize human safety and functionality, and the importance of major raw materials is expanding. Research on product development equivalent to functional food is needed. Currently, overseas imported raw materials are mainly used as materials for inner beauty products, so active research and development for the development of various domestic natural materials is required.

한편, 금화규(Hibiscus manihot)는 아욱과의 한해살이풀로, 중국이 원산지이고 밭에서 재배하며 닥풀 또는 황촉규라고도 한다. 한방에서 꽃을 황촉규화, 뿌리를 황촉규근, 종자를 황촉규자라는 약재로 쓴다. 황촉규화는 통증 때문에 소변을 잘 못보는 증세를 치료하고 종기, 화상에 외용한다고 알려져 있다. On the other hand, Geumhwagyu ( Hibiscus manihot ) is an annual plant of the mallow family, which is native to China and is cultivated in the field. In oriental medicine, flowers are used as Hwangchok-gyu-hwa, the root is Hwang-chok-gyu-geun, and the seeds are used as medicinals. It is known to treat the symptoms of inability to urinate due to pain and to be used externally for boils and burns.

한편, 한국등록특허 제1857528호에서는 '금화규 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1951156호에서는 '금화규가 함유된 비누의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 금화규 비누'가 개시되어 있으나, 본 발명의 '콜라겐, 아미노산, 폴리페놀 또는 플라보노이드 함량이 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물 및 이의 제조방법'에 대해서는 기재된 바가 없다.On the other hand, Korean Patent No. 1857528 discloses 'a cosmetic composition for skin whitening containing Geumhwagyu extract,' and Korean Patent No. 1951156 discloses 'Method for producing a soap containing Geumhwagyu and the manufacturing method. 'Geumhwagyu Soap' is disclosed, but there is no description of 'Fermented Geumhwagyu Soap with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content and manufacturing method thereof' of the present invention.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 미세 비드(bead)를 이용한 나노화 공정을 통해 금화규 발효물의 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 또는 피부 미백 효과가 증진되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다. The present invention was derived from the above needs, and the present inventors confirmed that the antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement, or skin whitening effect of fermented gold ginseng was enhanced through the nano-processing using fine beads. , the present invention was completed.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In order to solve the above problems, the present invention provides a health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing nano-treated fermented Geumhwagyu as an active ingredient.

또한, 본 발명은 나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for anti-oxidation, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing nano-treated fermented Geumhwagyu as an active ingredient.

또한, 본 발명은 (a) 물, 금화규 꽃 분말 및 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 접종하여 발효하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 처리하는 단계;를 포함하는 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 및 피부 미백 효과가 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물의 제조방법을 제공한다. In addition, the present invention comprises the steps of (a) mixing and sterilizing water, Keumhwagyu flower powder and glucose; (b) inoculating and fermenting the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a); And (c) nano-processing the fermented product of step (b); provides a method for producing a nano-treated fermented gold fermented product containing antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement and skin whitening effect.

본 발명은 콜라겐, 아미노산, 폴리페놀 또는 플라보노이드 함량이 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 고초균(Bacillus subtilis)을 이용하여 제조한 금화규 발효물을 나노화 처리하여, 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 또는 피부 미백 효과가 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 대비 증진되는 것을 확인하였으므로 관련 산업 분야에 유용하게 이용될 수 있다. The present invention relates to a nano-treated fermented gold flavonoid with enhanced collagen, amino acid, polyphenol or flavonoid content and a method for preparing the same. Since it was confirmed that the activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement, or skin whitening effect is improved compared to the fermented Geumhwagyu not treated with nano, it can be usefully used in related industrial fields.

도 1은 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 단백질 함량을 측정한 결과이다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 나노화 처리한 금화규 발효물의 단백질 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 2는 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 아미노산 함량을 측정한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 나노화 처리한 금화규 발효물의 아미노산 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 3은 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 콜라겐 함량을 측정한 결과이다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 나노화 처리한 금화규 발효물의 콜라겐 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 4는 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 DPPH 자유 라디칼 소거 활성을 측정한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. 0.1% BHT는 양성 대조군으로 사용한 부틸화 하이드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene)이다. *, ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 0.01% BHT 또는 나노화 처리한 금화규 발효물의 자유 라디칼 소거 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, ***은 p<0.001이다.
도 5는 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 폴리페놀(A) 및 플라보노이드(B) 함량을 측정한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. **, ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 나노화 처리한 금화규 발효물의 폴리페놀 또는 플라보노이드 함량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다.
도 6은 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 리폭시게나아제 저해 활성을 측정한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. 0.1% IDM은 양성 대조군으로 사용한 인도메타신(indomethacin)이다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 0.1% IDM 또는 나노화 처리한 금화규 발효물의 리폭시게나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 7은 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 엘라스타아제 저해 활성을 분석한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. 0.1% US는 양성 대조군으로 사용한 우르솔산(ursolic acid)이다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 0.1% US 또는 나노화 처리한 금화규 발효물의 엘라스타아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 8은 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 티로시나아제 저해 활성을 측정한 결과로, 증류수 처리군 대비(%)로 나타내었다. 0.1% ABT는 양성 대조군으로 사용한 알부틴(arbutin)이다. ***은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물에 비해 0.1% ABT 또는 나노화 처리한 금화규 발효물의 티로시나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
1 is a result of measuring the protein content of the nano-treated fermented Geumhwagyu of the present invention. *** indicates that the protein content of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented komhwa compared to the fermented fermented gold fermented with nano-treated silica was statistically significantly increased, and *** is p<0.001.
2 is a result of measuring the amino acid content of the nano-treated fermented Geumhwagyu according to the present invention, and is expressed as a percentage (%) compared to the distilled water treatment group. *** means that the amino acid content of the nano-treated fermented Kumhwa silicon was increased statistically significantly compared to the fermented Kumhwa silicon that was not nano-treated, and *** is p<0.001.
3 is a result of measuring the collagen content of the nano-treated fermented Geumhwagyu of the present invention. *** indicates that the collagen content of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented komhwa compared to the fermented fermented fermented fermented fermented fermented gold with nano-treatment was statistically significant, and *** is p<0.001.
Figure 4 is the result of measuring the DPPH free radical scavenging activity of the nano-treated fermented Kumhwa silica of the present invention, and is shown as (%) compared to the distilled water treatment group. 0.1% BHT is butylated hydroxytoluene used as a positive control. *, *** mean that the free radical scavenging activity of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented gold with 0.01% BHT or nano-treated with 0.01% BHT, compared to the fermented fermented fermented fermented fermented fermented gilts, * means p<0.05, * ** is p<0.001.
Figure 5 is the result of measuring the polyphenol (A) and flavonoid (B) content of the nano-treated fermented Geumhwa silica of the present invention, and is shown as (%) compared to the distilled water treatment group. ** and *** mean that the polyphenol or flavonoid content of the fermented fermented fermented fermented fermented komhwa compared to the fermented fermented fermented Kumhwa silica was statistically significant, and ** is p<0.01, ** * is p<0.001.
6 is a result of measuring the lipoxygenase inhibitory activity of the nano-treated fermented Geumhwagyu silicate of the present invention, and is shown as (%) compared to the distilled water treatment group. 0.1% IDM is indomethacin used as a positive control. *** means that the lipoxygenase inhibitory activity of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented komhwag with 0.1% IDM or nano-treated Kumhwa silica was statistically significant, and *** is p<0.001. .
7 is a result of analysis of the elastase inhibitory activity of the nano-treated fermented Geumhwagyu of the present invention, and is shown as (%) compared to the distilled water treatment group. 0.1% US is ursolic acid used as a positive control. *** indicates that the elastase inhibitory activity of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented gold hwasil with 0.1% US or nano-treated silica was statistically significant, and *** is p<0.001. .
8 is a result of measuring the tyrosinase inhibitory activity of the nano-treated fermented Geumhwasil of the present invention, and is shown as (%) compared to the distilled water treatment group. 0.1% ABT is arbutin used as a positive control. *** indicates that the tyrosinase inhibitory activity of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented Kumhwa silica with 0.1% ABT or nano-treated with 0.1% ABT was statistically significant, and *** is p<0.001. .

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing fermented Geumhwagyu fermented with nano-treatment as an active ingredient.

상기 금화규는 바람직하게는 금화규 꽃인 것이나, 이에 제한되지 않는다. The Keumhwagyu is preferably a Keumhwagyu flower, but is not limited thereto.

본 발명의 일 구현 예에 따른 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물에서, 상기 나노화 처리한 금화규 발효물은 금화규 꽃 분말에 고초균(Bacillus subtilis) 배양액을 접종하여 20~40℃에서 1~5일 동안 발효한 후, 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 30~50℃에서 1~5시간 동안 나노화 처리하여 획득한 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 30℃에서 3일 동안 발효한 후, 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 40℃에서 2시간 또는 4시간 동안 나노화 처리하여 획득한 것이나, 이에 제한되지 않는다.In the health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening according to an embodiment of the present invention, the nano-treated fermented Geumhwagyu flower powder is inoculated with a Bacillus subtilis culture solution to 20 After fermentation at ~40 ° C. for 1 to 5 days, it is preferably obtained by nanoizing treatment at 30 to 50 ° C. for 1 to 5 hours using fine beads in a nano device, more preferably at 30 ° C. After fermentation for 3 days, it is obtained by nano-treatment for 2 hours or 4 hours at 40° C. using fine beads in a nano-device, but is not limited thereto.

본 발명의 용어 '나노화(nanorization)'는 발효물 내 입자를 나노 크기로 분쇄하는 것으로, 바람직하게는 미세 비드(bead)을 사용할 수 있으나, 이에 제한하는 것은 아니다.As used herein, the term 'nanoization' refers to pulverizing particles in a fermented product to a nano size, and preferably, fine beads may be used, but is not limited thereto.

상기 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 대비 단백질 함량, 아미노산 함량, 콜라겐 함량, 폴리페놀 함량, 플라보노이드 함량, 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 효과 또는 피부 미백 효과가 증진되었다. The nano-treated fermented Geumhwagyu has improved protein content, amino acid content, collagen content, polyphenol content, flavonoid content, antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement effect, or skin whitening effect compared to fermented fermented Geumhwagyu beef that is not nano-treated. became

본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 이에 한정하지 않는다.The health functional food composition of the present invention may be prepared in any one formulation selected from powder, granule, pill, tablet, capsule, candy, syrup and beverage, but is not limited thereto.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.When the health functional food composition of the present invention is used as a food additive, the health functional food composition may be added as it is or used together with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The active ingredient may be used appropriately depending on the purpose of its use (prevention or improvement). In general, in the production of food or beverage, the health functional food composition of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, based on the raw material. However, in the case of long-term intake for health purposes, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount greater than the above range.

상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the type of the health functional food. Examples of foods to which the health functional food composition can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea There are drinks, alcoholic beverages, vitamin complexes, etc., and includes all health foods in the ordinary sense.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.In addition, the health functional food composition of the present invention may be prepared as a food, particularly a functional food. The functional food of the present invention may include ingredients that are commonly added. Examples include proteins, carbohydrates, fats, nutrients and seasonings. For example, when manufactured as a drink, natural carbohydrates or flavoring agents may be included as additional ingredients in addition to the active ingredient. The natural carbohydrates include monosaccharides (eg, glucose, fructose, etc.), disaccharides (eg, maltose, sucrose, etc.), oligosaccharides, polysaccharides (eg, dextrin, cyclodextrin, etc.) or sugar alcohols (eg, , xylitol, sorbitol, erythritol, etc.). As the flavoring agent, natural flavoring agents (eg, taumatine, stevia extract, etc.) and synthetic flavoring agents (eg, saccharin, aspartame, etc.) may be used.

상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the health functional food composition, various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonic acid It may further contain a carbonation agent and the like used in beverages. The ratio of these added ingredients is not very important, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight based on 100 parts by weight of the health functional food composition of the present invention.

또한, 본 발명은 나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for anti-oxidation, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing nano-treated fermented Geumhwagyu as an active ingredient.

본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨 토너, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징워터, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더 중에서 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.In the cosmetic composition according to an embodiment of the present invention, the cosmetic composition is a skin, skin softener, skin toner, lotion, milk lotion, moisture lotion, nourishing lotion, massage cream, nourishing cream, eye cream, moisture cream, hand It may have any one formulation selected from cream, essence, nutritional essence, pack, cleansing foam, cleansing water, cleansing cream, body lotion, body cleanser, soap, and powder, but is not limited thereto. The cosmetic composition consisting of each of these formulations may contain various bases and additives necessary and appropriate for the formulation of the formulation, and the types and amounts of these components can be easily selected by those skilled in the art.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a paste, cream or gel, animal fiber, vegetable fiber, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide as a carrier component etc. may be used.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydro It may contain a propellant such as carbon, propane-butane or dimethyl ether.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solvating agent or emulsifying agent is used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene. fatty acid esters of glycol, 1,3-butylglycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or sorbitan.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester; Microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tracanth may be used.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, acetionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate as carrier components , fatty acid amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester and the like can be used.

또한, 본 발명은 Also, the present invention

(a) 물, 금화규 꽃 분말 및 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계;(a) mixing and sterilizing water, Keumhwagyu flower powder and glucose;

(b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 접종하여 발효하는 단계; 및(b) inoculating and fermenting the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a); and

(c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 처리하는 단계;를 포함하는 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 및 피부 미백 효과가 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물의 제조방법을 제공한다.(c) nano-treating the fermented product of step (b); provides a method for producing a nano-treated fermented gold fermented product with enhanced antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement and skin whitening effect.

구체적으로, 본 발명의 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 및 피부 미백 효과가 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물은Specifically, the nano-treated fermented Geumhwagyu with enhanced antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement and skin whitening effect of the present invention

(a) 물 100 중량부에 대하여 0.5~1.5 중량부의 금화규 꽃 분말 및 0.5~1.5 중량부의 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계;(a) mixing 0.5 to 1.5 parts by weight of Keumhwagyu flower powder and 0.5 to 1.5 parts by weight of glucose with respect to 100 parts by weight of water and sterilizing;

(b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 5~15%(v/v) 농도로 접종하여, 20~40℃에서 1~5일 동안 발효하는 단계; 및(b) inoculating the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a) at a concentration of 5 to 15% (v/v), and fermenting at 20 to 40° C. for 1 to 5 days ; and

(c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 30~50℃에서 1~5시간 동안 나노화 처리하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,(c) nano-treating the fermented product of step (b) at 30-50° C. for 1 to 5 hours using fine beads in a nano-device; can be prepared including,

바람직하게는preferably

(a) 물 100 중량부에 대하여 1 중량부의 금화규 꽃 분말 및 1 중량부의 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계;(a) mixing and sterilizing 1 part by weight of Keumhwagyu flower powder and 1 part by weight of glucose with respect to 100 parts by weight of water;

(b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 10%(v/v) 농도로 접종하여, 30℃에서 3일 동안 발효하는 단계; 및(b) inoculating the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a) at a concentration of 10% (v/v), and fermenting at 30° C. for 3 days; and

(c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 40℃에서 2시간 또는 4시간 동안 나노화 처리하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.(c) nano-treating the fermented product of step (b) at 40° C. for 2 hours or 4 hours using fine beads in a nano-device; may be prepared including, but not limited thereto .

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail using Preparation Examples and Examples. These preparations and examples are only for explaining the present invention in more detail, and it is obvious to those of ordinary skill in the art that the scope of the present invention is not limited thereto.

제조예 1. 나노화 처리한 금화규 발효물의 제조Preparation Example 1. Preparation of nano-treated fermented Kumhwa silicon

본 발명에 사용된 금화규는 충청북도 청주시 소재의 ㈜고운블랙에서 구입한 금화규 꽃 분말을 사용하였다. 증류수 100㎖에 금화규 꽃 분말 1g과 포도당 1㎖을 첨가한 후, 오토클레이브(autoclave)를 이용하여 121℃에서 15분 동안 멸균하여 금화규 꽃 멸균액을 준비하였다. TSB(tryptic soy broth) 배지에서 1일 동안 전배양한 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis, KACC 91157) 균주의 배양액을 상기 금화규 꽃 멸균액에 10%(v/v)로 접종하고, 30℃에서 3일 동안 발효하여 금화규 발효물을 제조하였다. 상기 금화규 발효물을 미세 비드(bead)를 사용한 Nano Max Mill(ARMSTEC) 장치에서 40℃로 2시간 및 4시간 동안 입자를 분쇄하여, 나노화 처리한 금화규 발효물을 제조하였다. Geumhwagyu flower powder purchased from Fine Black Co., Ltd. located in Cheongju-si, Chungcheongbuk-do was used for the present invention. After adding 1 g of Geumhwagyu flower powder and 1ml of glucose to 100 ml of distilled water, it was sterilized at 121° C. for 15 minutes using an autoclave to prepare a sterilized solution for Geumhwagyu flowers. Bacillus subtilis pre-cultured for 1 day in TSB (tryptic soy broth) medium ( Bacillus subtilis , KACC 91157) strain was inoculated with 10% (v/v) in the sterilized solution for Geumhwagyu flowers, and fermented at 30° C. for 3 days to prepare a fermented Geumhwagyu. The fermented gold-silicon silicate was pulverized into particles in a Nano Max Mill (ARMSTEC) apparatus using fine beads at 40° C. for 2 hours and 4 hours to prepare a nano-treated fermented gold-silver gold fermented product.

비교예로서, TSB(tryptic soy broth) 배지에서 1일 동안 전배양한 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis, KACC 91157) 균주의 배양액을 상기 금화규 꽃 멸균액의 10%(v/v)로 접종하고, 30℃에서 3일 동안 발효하였고, 원심분리한 후 상등액을 회수하여 금화규 발효물을 제조하였다. As a comparative example, Bacillus subtilis pre-cultured for 1 day in TSB (tryptic soy broth) medium ( Bacillus subtilis , KACC 91157) strain was inoculated with 10% (v/v) of the sterilized Keumhwagyu flower, fermented at 30° C. for 3 days, and the supernatant was recovered after centrifugation to prepare a fermented Keumhwagyu.

실시예 1. 나노화 처리한 금화규 발효물의 특성 분석Example 1. Characterization of nano-treated fermented Kumhwa silica

(1) 당도 및 pH 측정(1) Measurement of sugar content and pH

나노화 처리한 금화규 발효물의 당도와 pH를 각각 측정하였다. 당도는 총 가용성 고형물(total soluble solids, Brix) 함량을 당도계(Hand refractormeter, Germany)로 측정하여 나타내었고, pH는 pH 미터기(SevenCompactTM pH/Ion S220, Switzerland)를 이용하여 3회 측정한 평균값으로 나타내었다. The sugar content and pH of the nano-treated fermented Kumhwa silicon were measured, respectively. The sugar content was expressed by measuring the total soluble solids (Brix) content with a saccharometer (Hand refractormeter, Germany), and the pH was expressed as an average value measured three times using a pH meter (SevenCompact™ pH/Ion S220, Switzerland). It was.

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물과 다른 특성을 나타내는 것을 확인하였다(표 1).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented silicon dioxide of the present invention exhibited different characteristics from that of the non-nanized fermented silica (Table 1).

나노화 처리한 금화규 발효물의 pH 및 당도 pH and sugar content of fermented Keumhwa silica treated with nano 실험군experimental group pHpH 당도sugar content 금화규 발효물Fermented Geumhwa Beef 8.788.78 6.86.8 2시간 나노화 처리한 금화규 발효물Fermented Geumhwagyu fermented with nano-treatment for 2 hours 8.878.87 6.76.7 4시간 나노화 처리한 금화규 발효물Fermented Geumhwagyu fermented with nano treatment for 4 hours 9.049.04 6.76.7

(2) 단백질 함량 측정(2) Protein content measurement

BCA(bicinchoninic acid)를 이용한 단백질 정량법을 통하여 나노화 처리한 금화규 발효물 내의 단백질 함량을 측정하였다. The protein content in the nano-treated fermented Geumhwagyu was measured through a protein quantification method using bicinchoninic acid (BCA).

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 단백질 함량이 높은 것을 확인하였다(도 1).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silicon of the present invention had a higher protein content than the nano-treated fermented Kumhwa silicon ( FIG. 1 ).

(3) 아미노산 함량 측정(3) Measurement of amino acid content

닌하이드린(Ninhydrin)을 이용한 아미노산 정량법을 통하여 나노화 처리된 금화규 발효물 내의 아미노산(시스틴, 메티오닌, 세린, 글루탐산, 글리신, 알라닌, 시트룰린, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 아미노뷰티르산, 히스티딘, 오르니틴, 리신, 암모니아 및 아르기닌) 총 함량을 측정하였다.Amino acids (cystine, methionine, serine, glutamic acid, glycine, alanine, citrulline, isoleucine, leucine, phenylalanine, aminobutyric acid, histidine, ornithine) in the nano-treated fermented Geumhwasil through amino acid quantification method using ninhydrin , lysine, ammonia and arginine) were measured.

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 아미노산 함량이 높은 것을 확인하였다(도 2).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silicon of the present invention had a higher amino acid content than the nano-treated fermented Kumhwa silicon ( FIG. 2 ).

(4) 콜라겐 함량 분석(4) Collagen content analysis

나노화 처리한 금화규 발효물 내의 콜라겐 함량을 측정하였다. 검은색 평판( black flat-bottom) 96웰 플레이트에 0, 15, 30 및 50㎍/㎖ 콜라겐과 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 나노화 처리한 금화규 발효물을 각각 20㎕ 분주한 후, Digest Mix 30㎕를 넣고 혼합하여 호일로 감싼 뒤, 37℃에서 60분간 반응시켰다. 그 다음, 염색 시약 40㎕을 넣고 37℃에서 10분간 반응시킨 뒤, 현상액(developer) 10㎕를 넣고 37℃에서 10분간 반응시킨 후, 흡수 파장은 375 nm이고 발광 파장은 465 nm로 하는 조건으로 형광 강도를 측정하였으며, 하기 식에 따라 계산하였다. The collagen content in the nano-treated fermented Keumhwagyu was measured. 20 μl of 0, 15, 30, and 50 μg/ml collagen and non-nanized fermented or nano-treated fermented gold whammys were dispensed in a black flat-bottom 96-well plate, respectively, and then digested. 30 μl of Mix was added, mixed, wrapped in foil, and reacted at 37° C. for 60 minutes. Then, 40 μl of dyeing reagent is added and reacted at 37° C. for 10 minutes, 10 μl of developer is added and reacted at 37° C. for 10 minutes, and the absorption wavelength is 375 nm and the emission wavelength is 465 nm under the condition that The fluorescence intensity was measured and calculated according to the following formula.

Figure pat00001
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그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 콜라겐 함량이 높은 것을 확인하였다(도 3).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silicon of the present invention had a higher collagen content than the nano-treated fermented Kumhwa silicon ( FIG. 3 ).

실시예Example 2. 항산화 활성 분석2. Antioxidant activity assay

(1) DPPH 자유 라디칼 소거능 분석(1) DPPH free radical scavenging activity analysis

항산화 활성은 Blois 등의 방법에 따라 분석하였다. 에탄올 100㎖에 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 16㎎을 녹인 후 증류수 100㎖을 혼합하여 와트만 여과지(Whatman filter paper, NO.2)에 여과시켜 DPPH 반응용액을 만들었다. DPPH 자유 라디칼 소거 활성은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 나노화 처리한 금화규 발효물 각각 0.4㎖에 상기 DPPH 반응용액 4.6㎖을 넣어 잘 혼합한 후 암실에서 30분간 반응시켜 분광광도계(Hitachi U-2900, Japan)로 528 nm에서 흡광도를 측정한 후 아래 식에 대입하여 산출하였다. 이때, 합성 항산화제 0.1% BHT(Butylated hydroxytoluene)를 양성 대조군으로 이용하였다.Antioxidant activity was analyzed according to the method of Blois et al. After dissolving 16 mg of DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) in 100 ml of ethanol, 100 ml of distilled water was mixed and filtered through Whatman filter paper (NO.2) to prepare a DPPH reaction solution. For DPPH free radical scavenging activity, add 4.6 ml of the DPPH reaction solution to 0.4 ml of each of the fermented fermented fermented gold wharf or fermented fermented fermented komhwa silica that has not been nano-treated, mixed well, and reacted in the dark for 30 minutes with a spectrophotometer (Hitachi U- 2900, Japan) was used to measure the absorbance at 528 nm, and then substituted into the equation below to calculate it. At this time, synthetic antioxidant 0.1% BHT (Butylated hydroxytoluene) was used as a positive control.

DPPH 자유 라디칼 소거 활성(%)=[1-(A/B)×100]DPPH free radical scavenging activity (%)=[1-(A/B)×100]

A : 528 nm에서 시료 첨가된 DPPH 용액의 흡광도A: Absorbance of sample-added DPPH solution at 528 nm

B : 528 nm에서 시료 무첨가 DPPH 용액의 흡광도B: Absorbance of sample-free DPPH solution at 528 nm

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 자유 라디칼 소거능이 우수한 것을 확인하였다(도 4).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented silicon dioxide of the present invention had better free radical scavenging ability than the non-nanized fermented silicon dioxide (FIG. 4).

(2) 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 분석(2) Analysis of polyphenol and flavonoid content

폴리페놀(polyphenol)은 대표적인 항산화 물질 중 하나로, 활성산소에 노출되어 손상되는 DNA를 보호하고 세포 구성 단백질 및 효소를 보호한다. 플라보노이드(flavonoid)는 식물 유래 폴리페놀 계열의 화합물로, 항산화, 항염, 항암 등의 효과가 있다고 알려져 있다. Polyphenol (polyphenol) is one of the representative antioxidants, it protects DNA damaged by exposure to free radicals, and protects cell constituent proteins and enzymes. Flavonoids are plant-derived polyphenol-based compounds and are known to have antioxidant, anti-inflammatory, and anti-cancer effects.

총 페놀성 화합물 측정 어세이(Total phenolic compounds measuring assay) 및 총 플라보노이드 화합물 측정 어세이(Total flavonoids compounds measuring assay)를 이용하여 나노화 처리한 금화규 발효물 내의 폴리페놀 및 플라보노이드 함량을 측정하였다. The content of polyphenols and flavonoids in the nano-treated Keumhwagyu fermented product was measured using a total phenolic compounds measuring assay and a total flavonoids compounds measuring assay.

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높은 것을 확인하였다(도 5).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silicon of the present invention had a higher polyphenol and flavonoid content than the non-nanized fermented Kumhwa silicon ( FIG. 5 ).

이상의 결과를 통해, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 항산화 활성이 우수한 것을 알 수 있었다.From the above results, it can be seen that the nano-treated fermented gold Hwa silicon of the present invention has superior antioxidant activity than the nano-treated fermented Keumhwa silicon.

실시예Example 3. 항염 활성 분석3. Anti-inflammatory activity assay

리폭시게나아제(lipoxygenase)는 정상적인 세포에서는 활성이 미비하지만, 염증이 유발되면 류코트리엔(leukotrienes) 물질의 증가로 인해 활성이 증가한다. 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 나노화 처리한 금화규 발효물 각각 100㎕에 200mM 보레이트 완충액(borate buffer, pH 9.0) 1㎖을 넣은 후, 기질인 리놀렌산(linoleic acid, 0.6 mM/㎖ in ethanol) 2㎖을 추가하여 혼합한 후 234 nm에서 보정값을 측정하였다. 이후, 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 나노화 처리한 금화규 발효물 각각에 10,000unit/㎖의 리폭시게나아제 100㎕를 넣고 상온에서 10분간 반응시킨 후 234 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 0.1% 인도메타신(indomethacin, IDM)을 사용하였으며, 리폭시게나아제 억제 활성(%)은 다음과 같은 식에 의해 산출하였다. Lipoxygenase (lipoxygenase) has insufficient activity in normal cells, but increases in activity due to an increase in leukotrienes when inflammation is induced. After adding 1 ml of 200 mM borate buffer (pH 9.0) to 100 μl of each 100 μl of the fermented fermented fermented fermented gold wharf or nano-treated fermented fermented gold whammy, linoleic acid as a substrate (linoleic acid, 0.6 mM/ml in ethanol) After mixing by adding 2 ml, the correction value was measured at 234 nm. Thereafter, 100 μl of 10,000 unit/ml lipoxygenase was added to each of the fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented fermented gold hwasil at room temperature at room temperature for 10 minutes, and then the absorbance was measured at 234 nm. As a positive control, 0.1% indomethacin (IDM) was used, and the lipoxygenase inhibitory activity (%) was calculated by the following formula.

리폭시게나아제 억제 활성(%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100Lipoxygenase inhibitory activity (%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100

a: 효소 무첨가군a: enzyme-free group

a': 효소 첨가군a': enzyme addition group

b: 효소 무첨가 및 시료 첨가군b: enzyme-free and sample-added group

b': 효소 및 시료 첨가군b': enzyme and sample addition group

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 리폭시게나아제 억제 활성이 우수한 것을 확인하였고, 양성 대조군인 0.1% 인도메타신보다 리폭시게나아제 억제 활성이 우수한 것을 확인함으로써, 나노화 처리한 금화규 발효물의 항염 효과가 증진된 것을 알 수 있었다(도 6).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silica of the present invention had superior lipoxygenase inhibitory activity than the fermented Kumhwa silicon that was not nano-treated, and had superior lipoxygenase inhibitory activity than the positive control 0.1% indomethacin. By confirming that, it was found that the anti-inflammatory effect of the nano-treated fermented Kumhwa silica was enhanced (FIG. 6).

실시예 4. 피부 주름개선 활성 분석Example 4. Analysis of skin wrinkle improvement activity

본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 피부 미백 활성을 분석하기 위하여 엘라스타아제(elastase) 저해 활성을 측정하였다. 엘라스타제 특이적인 기질인 N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide 1,300㎕에 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물 각각 100㎕와 0.12M Tris-HCl(pH 8.0) 100㎕를 혼합하여 96웰 플레이트에 분주하고, 엘라스타아제를 20초 간격으로 100㎕씩 분주하여 실온에 10분 반응시킨 뒤, 20초 간격으로 410 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기식에 대입하여 엘라스타아제 저해 활성을 산출하였다. 양성 대조군으로는 엘라스타아제 저해제로 알려진 0.1% 우르솔산(ursolic acid)을 사용하였다.Elastase inhibitory activity was measured to analyze the skin whitening activity of the nano-treated fermented Geumhwagyu fermented product of the present invention. 100 μl and 0.12M Tris-, respectively, of the non-nanized fermented Kumhwagyu or the nano-treated fermented material of the present invention in 1,300 μl of N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide, which is an elastase-specific substrate. 100 μl of HCl (pH 8.0) was mixed and dispensed in a 96-well plate, 100 μl of elastase was dispensed every 20 seconds, reacted at room temperature for 10 minutes, and absorbance was measured at 410 nm at 20 second intervals. Elastase inhibitory activity was calculated by substituting the following formula. As a positive control, 0.1% ursolic acid, known as an elastase inhibitor, was used.

엘라스타아제 저해 활성(%)=[1-(A/B)]×100Elastase inhibitory activity (%) = [1- (A / B)] × 100

A : 시료 처리군의 흡광도A: absorbance of the sample treatment group

B : 시료 무처리군의 흡광도B: Absorbance of the sample untreated group

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 엘라스타아제 저해 활성이 우수한 것을 확인하였고, 양성 대조군인 0.1% 우르솔산보다 엘라스타아제 저해 활성이 우수한 것을 확인함로써, 나노화 처리한 금화규 발효물이 피부 주름개선 활성이 있음을 알 수 있었다(도 7).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Keumhwagyu silicate of the present invention had superior elastase inhibitory activity than the non-nanized fermented Keumhwasil, and it was found that the elastase inhibitory activity was superior to that of the positive control, 0.1% ursolic acid. By confirming, it was found that the nano-treated fermented gold ginseng had skin wrinkle-improving activity (FIG. 7).

실시예 5. 피부 미백 활성 분석Example 5. Skin whitening activity assay

본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물의 피부 미백 활성을 분석하기 위하여 in vitro 머쉬룸 티로시나아제(mushroom tyrosinase) 저해 활성을 측정하였다. 1.5㎖ 플라스틱 큐벳(plastic cuvette)에 2.5mM L-DOPA(3,4-dihydroxyphenylalanine) 0.3㎖, 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 또는 나노화 처리한 금화규 발효물 각각 0.1㎖ 및 0.1M 인산완충용액(pH 6.8)을 혼합하여 25℃에서 반응시켰다. 이후, 1,380units/㎖ 머쉬룸 티로시나아제(Sigma, USA) 0.05㎖을 넣고 25℃에서 2분간 반응시켜 분광광도계를 이용하여 470 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기식에 대입하여 티로시나아제 저해 활성을 산출하였다. 대조구는 시료가 들어있지 않는 시료 용해 용액을 사용하였고, 양성 대조군으로는 티로시나아제 저해제로 알려진 0.1% 알부틴(arbutin)을 사용하였다. In order to analyze the skin whitening activity of the nano-treated fermented Geumhwagyu of the present invention, the mushroom tyrosinase inhibitory activity was measured in vitro . In a 1.5 ml plastic cuvette, 0.3 ml of 2.5 mM L-DOPA (3,4-dihydroxyphenylalanine), 0.1 ml of non-nanized or nano-treated fermented Keumhwagyu and 0.1 M phosphate buffer solution ( pH 6.8) was mixed and reacted at 25°C. Thereafter, 0.05 ml of 1,380 units/ml mushroom tyrosinase (Sigma, USA) was added, reacted at 25° C. for 2 minutes, and absorbance was measured at 470 nm using a spectrophotometer. calculated. As a control, a sample solution containing no sample was used, and as a positive control, 0.1% arbutin, known as a tyrosinase inhibitor, was used.

티로시나아제 저해 활성(%)=100-[(A-B)/A]×100Tyrosinase inhibitory activity (%)=100-[(A-B)/A]×100

A : 시료가 들어있지 않은 반응액의 0.5~1분 사이의 흡광도 차이A: The difference in absorbance between 0.5 and 1 minute of the reaction solution without the sample

B : 시료가 들어있는 반응액의 0.5~1분 사이의 흡광도 차이B: The difference in absorbance between 0.5 and 1 minute of the reaction solution containing the sample

그 결과, 본 발명의 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물보다 티로시나아제 저해 활성이 우수함을 확인함으로써, 나노화 처리한 금화규 발효물이 피부 미백 활성이 있음을 알 수 있었다(도 8).As a result, it was confirmed that the nano-treated fermented Kumhwa silicon of the present invention has superior tyrosinase inhibitory activity than the non-nanized fermented Kumhwa silicon, indicating that the nano-treated fermented Kumhwa silicon has skin whitening activity. There was (Fig. 8).

Claims (7)

나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.A health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing nano-treated fermented Geumhwagyu as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 금화규는 금화규 꽃인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.[Claim 2] The health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening according to claim 1, wherein the Keumhwagyu is Keumhwagyu flower. 제1항에 있어서, 상기 나노화 처리한 금화규 발효물은 금화규 꽃 분말에 고초균(Bacillus subtilis) 배양액을 접종하여 20~40℃에서 1~5일 동안 발효한 후, 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 30~50℃에서 1~5시간 동안 나노화 처리한 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.According to claim 1, wherein the nano-treated fermented Geumhwagyu flower powder is inoculated with a Bacillus subtilis culture solution and fermented at 20-40° C. for 1 to 5 days, and then fine beads (beads) in a nanoization device. ) for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement, or skin whitening health functional food composition, characterized in that it is nano-treated at 30-50° C. for 1 to 5 hours. 제1항에 있어서, 상기 나노화 처리한 금화규 발효물은 나노화 처리하지 않은 금화규 발효물 대비 단백질 함량, 아미노산 함량, 콜라겐 함량, 폴리페놀 함량, 플라보노이드 함량, 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 효과 또는 피부 미백 효과가 증진된 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.The method of claim 1, wherein the nano-treated fermented gold whammy fermented product has protein content, amino acid content, collagen content, polyphenol content, flavonoid content, antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement effect compared to non-nanized fermented gold wharf fermented product. Or a health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening, characterized in that the skin whitening effect is enhanced. 나노화 처리한 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 피부 주름개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물.A cosmetic composition for antioxidant, anti-inflammatory, skin wrinkle improvement or skin whitening containing nano-treated fermented Geumhwagyu as an active ingredient. (a) 물, 금화규 꽃 분말 및 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 접종하여 발효하는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 처리하는 단계;를 포함하는 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 및 피부 미백 효과가 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물의 제조방법.
(a) mixing and sterilizing water, Keumhwagyu flower powder and glucose;
(b) inoculating and fermenting the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a); and
(c) nano-treating the fermented product of step (b); a method for producing a nano-treated fermented gold fermented product with enhanced antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin wrinkle improvement and skin whitening effect, comprising a.
제6항에 있어서,
(a) 물 100 중량부에 대하여 0.5~1.5 중량부의 금화규 꽃 분말 및 0.5~1.5 중량부의 포도당을 혼합하고 멸균하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)의 금화규 꽃 멸균액에 고초균(Bacillus subtilis) 균주 배양액을 5~15%(v/v) 농도로 접종하여, 20~40℃에서 1~5일 동안 발효하는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 발효물을 나노화 장치에서 미세 비드(bead)를 이용하여 30~50℃에서 1~5시간 동안 나노화 처리하는 단계;를 포함하는 항산화 활성, 항염 활성, 피부 주름개선 및 피부 미백 효과가 증진된 나노화 처리한 금화규 발효물의 제조방법.
7. The method of claim 6,
(a) mixing 0.5 to 1.5 parts by weight of Keumhwagyu flower powder and 0.5 to 1.5 parts by weight of glucose with respect to 100 parts by weight of water and sterilizing;
(b) inoculating the Bacillus subtilis strain culture solution in the sterilized solution of Keumhwagyu flowers of step (a) at a concentration of 5 to 15% (v/v), and fermenting at 20 to 40° C. for 1 to 5 days ; and
(c) nano-processing the fermented product of step (b) at 30-50° C. for 1 to 5 hours using fine beads in a nano-device; antioxidant activity, anti-inflammatory activity, including skin wrinkle improvement and a method for producing a nano-treated fermented Geumhwagyu with enhanced skin whitening effect.
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