KR20220107249A - Erk 억제제로서의 티아졸로락탐 화합물 및 이의 용도 - Google Patents

Erk 억제제로서의 티아졸로락탐 화합물 및 이의 용도 Download PDF

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KR20220107249A
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쳉더 우
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메드샤인 디스커버리 아이엔씨.
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Abstract

ERK 관련 질병을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서 티아졸로락탐 화합물 및 이의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명은 화학식 III으로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

Description

ERK 억제제로서의 티아졸로락탐 화합물 및 이의 용도
본 출원은 하기의 우선권을 주장한다:
2019년 12월 6일에 출원된 CN201911244773.3;
2019년 12월 10일에 출원된 CN201911257990.6;
2020년 2월 20일에 출원된 CN202010107001.1;
2020년 10월 22일에 출원된 CN202011138526.8; 및
2020년 12월 2일에 출원된 CN202011402966.X.
본 발명의 분야
본 개시내용은 티아졸로락탐 화합물의 부류 및 ERK와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 이의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 개시내용은 화학식 III으로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
Ras/Raf/MEK/ERK 경로는 전형적인 미토겐 활성화 단백질 키나아제(mitogen activated protein kinase; MAPK) 신호전달 캐스케이드(cascade) 경로로, 활성화 후 다양한 성장 인자, 사이토카인, 미토겐 및 호르몬 수용체의 신호 전달에 관여하며, 세포 성장, 분화 및 생존을 제어하는 가장 중요한 신호 전달 경로 중 하나이다.
연구에 따르면 돌연변이 또는 증폭으로 인한 Ras/Raf/MEK/ERK 경로의 비정상적인 활성화는 다양한 암의 결정 요인으로 보고된다. 인간 종양에서 RAS 돌연변이의 발병률은 약 22%, BRAF 돌연변이의 발병률은 약 7%, 및 MEK 돌연변이의 발병률은 약 1%이다. 따라서 이 경로의 핵심 노드(node) 단백질은 암 치료의 중요한 표적이 되었다(Cancer Discov. 2019, 9, 329-341). 현재, 다수의 BRAF 억제제 및 MEK1/2 억제제 뿐만 아니라 이들의 조합 요법이, 흑색종, BRAFV600E 돌연변이 비소세포폐암 및 기타 암의 치료에 대해 미국 FDA의 승인을 받았다. 그러나 이러한 업스트림 노드(upstream node)에 대한 BRAF 및 MEK 억제제의 사용은 돌연변이 또는 경로 재활성화로 인한 약물 내성 문제로 빠르게 이어져 임상 적용에 큰 제한이 있을 수 있다.
세포외 조절 단백질 키나아제(ERK)(특히 ERK1 및 ERK2 키나아제)는 Ras/Raf/MEK/ERK 경로에서 주요 역할 및 다운스트림(downstream) 핵심 노드이며, 이들의 과활성화(over-activation)는 많은 인간 암에서 발견될 수 있다. 이 경로의 말단 신호전달 키나아제인 ERK는 아직 약물 내성을 유발하는 돌연변이를 갖는 것으로 밝혀지지 않았다. 따라서 ERK 키나아제를 표적으로 하는 약물은 업스트림 표적 억제제 치료로 인한 약물 내성 문제를 극복하고 보다 잠재적인 치료 전략이 될 것으로 기대된다. 그러나 지금까지 ERK 억제제에 대한 연구는 아직 임상 단계에 있으며, ERK 억제제는 약물로 판매가 승인되지 않았다.
요약하면, 종양 치료의 필요성을 충족시키기 위해 안전하고 효과적인 ERK 억제제 약물의 개발이 시급하다.
본 개시내용은 화학식 III의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
[화학식 III]
Figure pct00001
상기 화학식 III에서,
R1은 H, C1-3알킬 및 C3-5사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬 및 C3-5사이클로알킬은 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-3알킬이고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고;
R4는 H, F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고;
R5는 F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고;
m은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
n은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
고리 A는 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐로부터 선택되고, 여기서, 상기 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐은 1, 2 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고;
Ra, Rb, Rc 및 Re는 각각 독립적으로 D, F, Cl, Br, I, OH 및 OCH3로부터 선택되고;
Rd는 F, Cl, Br, I, CH3 및 OCH3로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 H, CH3 및 사이클로프로필로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 사이클로프로필이 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 H, CH3, CHF2, CD3, CH2CH2OCH3 및 사이클로프로필로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3 및 CH2CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 CH2CH3이 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3이고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00002
및
Figure pct00003
로부터 선택되고, 여기서, 상기
Figure pct00004
,
Figure pct00005
및
Figure pct00006
가 1, 2, 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
및
Figure pct00010
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00011
가
Figure pct00012
,
Figure pct00013
및
Figure pct00014
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00015
가
Figure pct00016
,
Figure pct00017
및
Figure pct00018
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 개시내용은 화학식 III의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
[화학식 III]
Figure pct00019
상기 화학식 III에서,
R1은 H 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-3알킬이고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고;
R4는 H, F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고;
R5는 F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고;
m은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
n은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
고리 A는 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐로부터 선택되고, 여기서, 상기 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐은 1, 2 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고;
Ra, Rb, Rc 및 Re는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I 및 OH로부터 선택되고;
Rd는 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 H 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 CH3이고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3 및 CH2CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 CH2CH3이 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3이고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R5이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00020
,
Figure pct00021
및
Figure pct00022
로부터 선택되고, 여기서, 상기
Figure pct00023
,
Figure pct00024
및
Figure pct00025
가 1, 2, 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00026
및
Figure pct00027
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00028
가
Figure pct00029
,
Figure pct00030
및
Figure pct00031
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00032
가
Figure pct00033
,
Figure pct00034
및
Figure pct00035
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
[화학식 I]
Figure pct00036
상기 화학식 I에서,
R1은 H 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-3알킬이고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고;
R4는 H, F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고;
m은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
고리 A는 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐로부터 선택되고, 여기서, 상기 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐은 1, 2 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고;
Ra, Rb 및 Rc는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I 및 OH로부터 선택되고;
Rd는 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 H 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R1이 CH3이고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3 및 CH2CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 CH2CH3이 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3이고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00037
,
Figure pct00038
및
Figure pct00039
로부터 선택되고, 여기서, 상기
Figure pct00040
,
Figure pct00041
및
Figure pct00042
가 1, 2, 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 고리 A가
Figure pct00043
및
Figure pct00044
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00045
가
Figure pct00046
,
Figure pct00047
및
Figure pct00048
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 구조적 모이어티
Figure pct00049
가
Figure pct00050
,
Figure pct00051
및
Figure pct00052
로부터 선택되고, 다른 변수는 본 명세서에 정의된 것과 동일하다.
본 개시내용은 또한 상기 언급된 변수들 중 임의의 것을 조합함으로써 얻어지는 일부 양태를 포함한다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물이 하기 화학식들로부터 선택된다:
Figure pct00053
상기 화학식에서,
R1, R2, R3, R4, R5 및 m은 본 명세서에서 정의된 것과 동일하다.
본 개시내용은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, ERK와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서 상기 언급된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 개시된다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 상기 언급된 용도는 ERK 억제제에 관련된 약제가 고형 종양 치료용 약제인 것을 특징으로 한다.
기술적인 효과
본 개시내용의 화합물은 ERK2 키나아제에 대한 우수한 억제 활성을 나타낸다. 한편, 본 개시내용의 화합물은 HT29 세포 증식에 대한 우수한 억제 활성을 나타낸다. 본 개시내용의 화합물은 우수한 경구 노출 및 생체이용률을 나타낸다. 본 개시내용의 화합물은 종양의 성장을 상당히 억제할 수 있다. 투여 동안 동물의 체중이 크게 감소하는 것으로 관찰되지 않고 내성이 양호하다.
정의 및 용어
본 명세서에서 사용되는 다음의 용어 및 구절은, 달리 명시되지 않는 한, 다음과 같은 의미를 갖는 것으로 의도된다. 특정 용어 또는 구절은 특별한 정의가 없을 때 불분명하거나 불명확한 것으로 생각되어서는 안 되며, 통상적인 의미에서 이해되어야 한다. 상표명이 본 명세서에 나타날 때, 이의 해당 상품(commodity) 또는 활성 성분을 가리키는 것으로 의도된다.
용어 "약제학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하면서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이, 신뢰할 수 있는 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 제형(dosage form)과 관련해서 본 명세서에서 사용된다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 본 명세서에 개시된 화합물의 염으로서, 본 명세서에 개시된 특정 치환기를 갖는 화합물을 비교적 독성이 없는 산 또는 염기와 반응시켜 제조된 화합물의 염을 의미한다. 본 명세서에 개시된 화합물이 비교적 산성인 작용기를 함유하는 경우, 화합물을, 순수한 용액 또는 적절한 비활성 용매 중에서 충분한 양의 염기와 접촉시켜, 염기 부가 염(base addition salt)이 수득될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘의 염, 또는 유사한 염을 포함한다. 본 명세서에 개시된 화합물이 비교적 염기성인 작용기를 함유하는 경우, 화합물을, 순수한 용액 또는 적절한 비활성 용매 중에서 충분한 양의 산과 접촉시켜, 산 부가 염(acid addition salt)이 수득될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염의 예시는 다음을 포함한다: 무기산 염 (여기서 무기산은, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 중탄산염, 인산, 인산일수소염(monohydrogen phosphate), 인산이수소염(dihydrogen phosphate), 황산, 황산 수소염(hydrogen sulfate), 요오드화수소산, 아인산 등을 포함한다); 및 유기산 염 (여기서, 유기산은, 예를 들면, 아세트산, 프로피온산(propionic acid), 이소부티르산(isobutyric acid), 말레산(maleic acid), 말론산(malonic acid), 벤조산, 숙신산, 수베르산(suberic acid), 푸마르산(fumaric acid), 젖산, 만델산(mandelic acid), 프탈산(phthalic acid), 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시트르산, 타르타르산(tartaric acid), 및 메탄설폰산 등을 포함한다); 및 아미노산의 염(예를 들면, 아르기닌 등), 및 글루쿠론산(glucuronic acid) 등의 유기산의 염. 본 명세서에 개시된 특정 화합물은 염기성 및 산성 작용기를 모두 함유하고 임의의 염기 또는 산 부가 염으로 전환될 수 있다.
본 명세서에 개시된 약제학적으로 허용가능한 염은, 통상적인 화학적 방법에 의해, 산성 또는 염기성 모이어티(moiety)를 함유하는 모 화합물(parent compound)로부터 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 물 또는 유기 용매 또는 이들의 혼합물에서 유리 산 또는 염기 형태의 화합물을 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "이성질체"는 기하 이성질체, 시스- 또는 트랜스-이성질체, 입체 이성질체, 거울상 이성질체, 광학 이성질체, 부분입체 이성질체 및 호변 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에 개시된 화합물은 특정 기하 또는 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 개시내용은 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미 혼합물 및 기타 혼합물, 예를 들어 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체가 풍부한 혼합물을 포함하는 이러한 모든 화합물을 고려하며, 이들 모두는 본 명세서에 개시된 범위 내에 포함된다. 알킬과 같은 치환기는 추가적인 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있다. 이들 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 본 명세서에 개시된 범위 내에 포함된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "거울상 이성질체" 또는 "광학 이성질체"는 서로 거울상 관계에 있는 입체 이성질체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "시스-트랜스 이성질체" 또는 "기하학적 이성질체"는 고리를 형성하는 탄소 원자들 사이의 이중 결합 또는 단일 결합이 자유롭게 회전할 수 없음에 의해 생성된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "부분입체 이성질체"는 한 분자 내에 2개 이상의 키랄 중심이 포함되고 분자 간에 거울상 관계가 없는 입체 이성질체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, "(+)"는 덱스트로 이성질체(dextroisomer)를 의미하고, "(-)"는 레보 이성질체(levoisomer)를 의미하며, "(±)"는 라세미 화합물(racemate)을 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 쐐기형(wedged) 실선 결합(solid bond) (
Figure pct00059
) 및 쐐기형 점선 결합(dashed bond) (
Figure pct00060
)은 입체 중심(stereocenter)의 절대 배치(absolute configuration)를 나타내거나; 직선 실선 결합 (
Figure pct00061
) 및 직선 점선 결합 (
Figure pct00062
)은 입체 중심의 상대 배치(relative configuration)를 나타내거나; 물결선 (
Figure pct00063
)은 쐐기형 실선 결합 (
Figure pct00064
) 또는 쐐기형 점선 결합 (
Figure pct00065
)을 나타내거나; 또는 물결선 (
Figure pct00066
)은 직선 실선 결합 (
Figure pct00067
)과 직선 점선 결합 (
Figure pct00068
)을 나타낸다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "하나의 이성질체가 풍부한", "이성질체가 풍부한", "하나의 거울상 이성질체가 풍부한" 또는 "거울상 이성질체가 풍부한"은 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 100% 미만이고, 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 60% 이상, 또는 70% 이상, 또는 80% 이상, 또는 90% 이상, 또는 95% 이상, 또는 96% 이상, 또는 97% 이상, 또는 98% 이상, 또는 99 % 이상, 또는 99.5% 이상, 또는 99.6% 이상, 또는 99.7% 이상, 또는 99.8% 이상, 또는 99.9% 이상이다.
달리 명시되지 않는 한, "이성질체 과잉" 또는 "거울상 이성질체 과잉"이라는 용어는 2개의 이성질체 또는 2개의 거울상 이성질체의 상대 백분율 간의 차이를 의미한다. 예를 들어, 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체가 90%의 양으로 존재하고 다른 이성질체 또는 거울상 이성질체가 10%의 양으로 존재하는 경우, 이성질체 또는 거울상 이성질체 과잉(ee 값)은 80%이다.
광학 활성 (R)- 및 (S)-이성질체, 또는 D 및 L 이성질체는 키랄 합성 또는 키랄 시약 또는 기타 통상적인 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본 명세서에 개시된 특정 화합물의 한 종류의 거울상 이성질체를 얻으려면, 비대칭 합성 또는 키랄 보조제의 유도체 작용에 이어 생성된 부분입체 이성질체 혼합물을 분리하고 보조기를 절단함으로써 순수한 목적하는 거울상 이성질체가 수득될 수 있다. 대안적으로, 분자가 염기성 작용기(예를 들면, 아미노) 또는 산성 작용기(예를 들면, 카르복실)를 함유하는 경우, 화합물은 적절한 광학 활성 산 또는 염기와 반응하여, 부분입체 이성질체의 염을 형성하고, 이는 그 후 순수한 거울상 이성질체를 제공하도록 당업계의 통상적인 방법을 통한 부분입체 이성질체를 분해한다. 또한, 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체는 일반적으로 키랄 고정상을 사용하고 선택적으로 화학적 유도체 방법(예를 들면, 아민에서 생성된 카바메이트)과 결합하는 크로마토그래피를 통해 분리된다.
본 명세서에 개시된 화합물은 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들면, 화합물은 삼중수소(3H), 요오드-125 (125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 표지될 수 있다. 또 다른 예를 들어, 수소는 중수소로 대체되어 중수소화 약물을 형성할 수 있다. 중수소와 탄소의 결합은 일반 수소와 탄소의 결합보다 강하다. 비중수소화 약물과 비교하여, 중수소화 약물은 독성 부작용 감소, 약물 안정성 증가, 효능 향상 및 약물의 생물학적 반감기 연장이라는 이점이 있다. 본 명세서에 개시된 화합물의 동위원소 조성의 모든 변화는 방사능에 관계없이 본 개시내용의 범위 내에 포함된다.
"선택적" 또는 "선택적으로"라는 용어는 후속 이벤트 또는 조건이 발생할 수 있지만 필수는 아님을 의미하며, 용어는 이벤트 또는 조건이 발생하는 경우와 이벤트 또는 조건이 발생하지 않는 경우를 포함한다.
"치환된"이라는 용어는, 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환된 화합물이 안정적인 한, 특정 원자의 하나 이상의 수소 원자(들)가 중수소 및 수소 변이체를 비롯한 치환기로 치환됨을 의미한다. 치환기가 옥소(즉, =O)인 경우, 2개의 수소 원자가 치환됨을 의미한다. 방향족 고리의 위치는 옥소로 치환될 수 없다. "선택적으로 치환된"이라는 용어는, 원자가 치환기에 의해 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있음을 의미하며, 달리 명시되지 않는 한, 치환기의 종 및 수는 화학적으로 달성 가능한 한 선택적일 수 있다.
어떤 변수(예를 들면, R)가 화합물의 구성이나 구조에 두 번 이상 나타날 때, 각 발생에서 변수의 정의는 독립적이다. 따라서, 예를 들면, 기가 0 내지 2개의 R로 치환되는 경우, 기는 최대 2개의 R로 선택적으로 치환될 수 있으며, 여기서 R의 정의는 각 경우에 독립적이다. 또한, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.
-(CRR)0-와 같이 연결기의 수가 0인 경우, 연결기가 단일 결합임을 의미한다.
치환기의 개수가 0인 경우, 치환기가 존재하지 않음을 의미한다. 예를 들어, -A-(R)0은 구조가 실제로 -A임을 의미한다.
치환기가 비어있는 경우, 치환기가 존재하지 않는 것을 의미한다. 예를 들어, A-X에서 X가 비어 있는 경우, A-X의 구조는 실제로 A이다.
변수 중 하나가 단일 결합인 경우, 단일 결합으로 연결된 두 기가 직접 연결되어 있음을 의미한다. 예를 들면, A-L-Z 중 L이 단일 결합을 나타낼 때, A-L-Z의 구조는 실제로 A-Z이다.
치환기의 결합이 고리 상의 2개 이상의 원자에 가교될 수 있는 경우, 그러한 치환기는 고리 상의 임의의 원자에 결합될 수 있다. 예를 들어, 구조적 모이어티
Figure pct00069
또는
Figure pct00070
은 사이클로헥실 또는 사이클로헥사디엔 상의 임의의 위치에서 치환될 수 있는 이의 치환기 R을 나타낸다. 열거된 치환기가 치환된 기에 연결된 원자를 나타내지 않는 경우, 이러한 치환기는 원자를 통해 결합될 수 있다. 예를 들어, 치환기인 피리딜기는 피리딘 고리 상의 탄소 원자 중 어느 하나를 통해 치환기에 연결될 수 있다.
열거된 연결기가 연결 방향을 나타내지 않는 경우, 연결 방향은 선택적이다. 예를 들어,
Figure pct00071
에서 연결기 L이 -M-W-인 경우, -M-W-는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 동일한 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어
Figure pct00072
을 구성하거나, 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 반대 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어
Figure pct00073
을 구성할 수 있다. 연결기, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성할 수 있는 경우에만 허용된다.
달리 명시되지 않는 한, 기가 하나 이상의 연결 가능한 위치를 가질 경우, 기의 임의의 하나 이상의 위치는 화학 결합을 통해 다른 기에 연결될 수 있다. 화학 결합의 연결 위치가 가변적이며, 연결 가능한 위치(들)에 H 원자(들)가 있는 경우, H 원자(들)를 갖는 연결 가능한 위치(들)가 화학 결합에 연결되면, 이 위치에서 H 원자(들)의 수는 연결된 화학 결합의 수가 증가함에 따라 상응하게 감소할 것이고, 기는 상응하는 원자가의 기가 될 것이다. 상기 위치와 기타 기들 사이의 화학 결합은 직선 실선 결합(
Figure pct00074
), 직선 점선 결합 (
Figure pct00075
) 또는 물결선(
Figure pct00076
)으로 표시될 수 있다. 예를 들어, -OCH3의 직선 실선 결합은 기가 기 중의 산소 원자를 통해 다른 기에 연결되어 있음을 나타내고;
Figure pct00077
중의 직선 점선 결합은 기가 기의 질소 원자의 두 말단을 통해 다른 기에 연결되어 있음을 나타내고;
Figure pct00078
의 물결선은 페닐기의 1- 및 2- 탄소 원자를 통해 기가 다른 기에 연결되어 있음을 나타내고;
Figure pct00079
는 피페리디닐기의 임의의 연결가능한 위치가 하나의 화학 결합을 통해 다른 기에 연결될 수 있음을 나타내는데,
Figure pct00080
및
Figure pct00081
의 적어도 4가지 연결 방식을 포함하고; H 원자가 -N- 상에 그려져 있더라도,
Figure pct00082
는 여전히
Figure pct00083
의 연결 방식을 포함하고; 하나의 화학 결합이 연결되는 경우, 이 위치에서 H가 하나로 줄어들 것이고, 기는 대응하는 1가 피페리디닐 기가 될 것이다.
달리 명시되지 않는 한, 고리 상의 원자의 수는 일반적으로 고리 구성원의 수로 정의되며, 예를 들어 "5 내지 7원 고리"는 원주 방향으로 배열된 5 내지 7 원자의 "고리"를 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자로 구성된 선형 또는 분지형 포화 탄화수소 기를 나타내기 위해 사용된다. C1-3알킬기는 C1-2 및 C2-3알킬기 등을 포함한다. 1가(예를 들어: 메틸), 2가(예를 들어: 메틸렌) 또는 다가(예를 들어: 메테닐)일 수 있다. C1-3알킬기의 예는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(n-프로필 및 이소프로필 포함) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, "C3-5사이클로알킬"은 모노사이클릭 고리 시스템인 3 내지 5개의 탄소 원자로 구성된 포화 사이클릭 탄화수소 기를 의미하고; C3-5사이클로알킬은 C3-4 및 C4-5사이클로알킬기 등을 포함하고; 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. C3-5사이클로알킬의 예는, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "보호기"는 "아미노 보호기", "하이드록시 보호기" 또는 "티오 보호기"를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 아미노의 질소 상에 부반응(side reaction)을 차단하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 아미노 보호기는 포르밀; 알카노일(예를 들어: 아세틸, 트리클로로아세틸 또는 트리플루오로아세틸)과 같은 아실; tert-부톡시카르보닐(Boc)과 같은 알콕시카르보닐; 벤질옥시카르보닐(Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc)과 같은 아릴메톡시카르보닐; 벤질(Bn), 트리틸(Tr), 1,1-비스-(4'-메톡시페닐)메틸과 같은 아릴메틸; 트리메틸실릴(TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴(TBS) 등과 같은 실릴을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "하이드록시 보호기"는 하이드록시에 대한 부반응을 차단하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 하이드록시 보호기는 메틸, 에틸 및 tert-부틸과 같은 알킬; 알카노일(예를 들어: 아세틸)과 같은 아실; 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 9-플루오레닐메틸(Fm) 및 디페닐메틸(벤즈히드릴, DPM)과 같은 아릴메틸; 트리메틸실릴(TMS) 및 tert-부틸 디메틸 실릴(TBS) 등과 같은 실릴을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에 개시된 화합물은 하기 열거된 양태, 다른 화학적 합성 방법과 조합하여 하기 열거된 양태에 의해 형성된 양태, 및 당업자에게 널리 공지된 등가 대체물을 비롯한 당업자에게 널리 공지된 다양한 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 대안적인 양태는 본 명세서에 개시된 양태를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에 개시된 화합물의 구조는 당업자에게 잘 알려진 통상적인 방법에 의해 확인될 수 있다. 본 개시내용이 화합물의 절대 배열에 관한 것이라면, 절대 배열은 단결정 X선 회절 (SXRD)과 같은 당업계의 통상적인 기술에 의해 확인될 수 있다. 단결정 X선 회절(SXRD)에서, 배양된 단결정의 회절 강도 데이터는
Figure pct00084
스캔의 스캐닝 모드에서 CuKα 방사선의 광원이 있는 Bruker D8 벤처 회절계를 사용하여 수집된다; 관련 데이터를 수집한 후, 결정 구조를 직접 방법(Shelxs97)으로 추가 분석하여 절대 구성을 확인한다.
본 개시내용에 사용된 용매는 상업적으로 입수가능하다.
하기 약어가 본 개시내용에서 사용된다: aq는 수성을 나타내고; eq는 동등한 또는 등가를 나타내고; DCM은 디클로로메탄을 나타내고; PE는 석유 에테르를 나타내고; DMSO는 디메틸 설폭사이드를 나타내고; EtOAc는 에틸 아세테이트를 나타내고; EtOH는 에탄올을 나타내고; MeOH는 메탄올을 나타내고; Cbz는 아민 보호기인 벤질옥시카르보닐을 나타내고; BOC는 아민 보호기인 tert-부톡시카르보닐을 나타내고; r.t.는 실온을 나타내고; O/N은 밤새를 나타내고; THF는 테트라하이드로푸란을 나타내고; Boc2O는 디-tert-부틸 디카보네이트를 나타내고; TFA는 트리플루오로아세트산을 나타내고; DIPEA는 디이소프로필에틸아민을 나타내고; iPrOH는 2-프로판올을 나타내고; mp는 융점을 나타낸다.
화합물은 당업계의 일반적인 명명 원칙에 따라 또는 ChemDraw® 소프트웨어에 의해 명명되고, 상업적으로 이용 가능한 화합물은 공급업체 디렉토리 이름으로 명명된다.
도 1: 용매 및 WX006을 각각 투여 후 모델 동물에서 인간 비소세포폐암 H358의 종양 성장 곡선;
도 2: 투여 동안 인간 비소세포폐암 H358의 모델 동물에서의 체중 변화율(%).
본 개시내용은 실시예에 의해 하기에 상세히 설명된다. 그러나, 이들 실시예가 본 개시내용에 불리한 제한을 갖는 것으로 의도되지 않는다. 본 개시내용은 본 명세서에 상세하게 설명되었고, 양태들이 또한 본 명세서에 개시된다. 본 명세서에 개시된 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서, 본 명세서에 개시된 양태에 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
참고예 1: 부분(Fragment) A-1
Figure pct00085
Figure pct00086
단계 1: 화합물 A-1-2의 합성
미리 건조된 1구 플라스크에 아세트산나트륨(4.64 g, 56.60 mmol, 5 당량), 모노과황산칼륨(13.92 g, 22.64 mmol, 2 당량) 및 물(47 mL)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. A-1-1(4.7 g, 11.32 mmol, 1 당량), 용매 테트라하이드로푸란(47 mL) 및 메탄올(47 mL)의 용액을 적가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 29℃에서 15시간 동안 오일 욕에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(200 mL)에 붓고, 수성상을 에틸 아세테이트(50 mL*3)로 추출하였다. 유기상들을 합하고, 결합된 유기상을 포화 염수(200 mL)로 순차적으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 수집하고 감압하에 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 A-1-2를 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.67 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 1.63 - 1.53 (m, 6H), 1.39 - 1.30 (m, 6H), 1.26 - 1.12 (m, 6H), 0.90 (t, J = 7.3 Hz, 9H).
단계 2: 화합물 A-1의 합성
반응 플라스크에 A-1-2(3.9 g, 8.72 mmol, 1 당량), A-1-3(1.02 g, 10.46 mmol, 1.2 당량) 및 테트라하이드로푸란(117 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 후, -35℃에서 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 18.31 mL, 2.1 당량)를 적가하였다. 혼합 용액을 -35℃에서 10분간 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL*2) 및 디클로로메탄(100 mL)으로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 회전 증발 건조시켜, 미정제 생성물을 수득했다. 상기 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 A-1을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.17 (d, J=4.85 Hz, 1 H), 7.46 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 6.91 (d, J=4.63 Hz, 1 H), 6.60 (s, 1 H), 6.32 (d, J=1.98 Hz, 1 H), 3.79 (s, 3 H), 1.52 - 1.61 (m, 6 H), 1.28 - 1.40 (m, 6 H), 1.03 - 1.20 (m, 6 H), 0.89 (t, J=7.28 Hz, 9 H).
실시예 1
Figure pct00087
합성 경로:
Figure pct00088
단계 1: WX001-3의 합성
반응 플라스크에 질소 하에 -78℃에서 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 리튬 디이소프로필아미드(2 M, 2.88 mL, 2.4 당량)의 용액을 첨가한 후, WX001-1(500 mg, 2.40 mmol, 1 당량)의 용액 및 테트라하이드로푸란(1 mL) 중 테트라메틸에틸렌디아민(418.94 mg, 3.61 mmol, 544.08μL, 1.5 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 반응시킨 후, WX001-2(279.18 mg, 4.81 mmol, 353.40 μL, 2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 추가로 2시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 0℃의 포화 염화암모늄 수용액 30 mL에 천천히 붓고, 염산(2 mol/L)으로 pH 약 3 내지 4로 조절하고, 에틸아세테이트(20 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(20 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 WX001-3을 수득했다.
단계 2: WX001-4의 합성
반응 플라스크에 WX001-3(250 mg, 939.45μmol, 1 당량) 및 아세토니트릴(8 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 진한 황산(110.57 mg, 1.13 mmol, 60.09 μL, 1.2 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합 용액을 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물 10 mL로 희석하고, 에틸 아세테이트(30 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(30 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 WX001-4를 수득했다.
단계 3: WX001-5의 합성
건조 반응 플라스크에 WX001-4(200 mg, 651.12 μmol, 1 당량) 및 아세트산 무수물(2 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후 45℃에서 오일 펌프로 감압 농축하여 WX001-5를 수득했다.
단계 4: WX001-6의 합성
건조 반응 플라스크에 WX001-5(60 mg, 207.51 μmol, 1 당량), 염산(2 M, 2 mL, 19.28 당량) 및 에탄올(2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 반응시킨 다음, 70℃에서 4시간 더 반응시켰다. 반응 종료 후, 45℃에서 워터펌프로 감압 농축하고, 에틸아세테이트(30 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(30 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취(preparative) 크로마토시트로 정제하여 WX001-6을 수득했다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d 6 )δppm 8.85(brs, 1H), 1.48(s, 6H).
단계 5: WX001-7의 합성
건조 반응 플라스크에 WX001-6(60 mg, 242.80 μmol, 1 당량) 및 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)를 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 수소화나트륨(14.57 mg, 364.21 μmol, 60% 순도, 1.5 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시킨 후, 3-클로로벤질 브롬화물(49.89 mg, 242.80 μmol, 31.78μL, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 용액을 천천히 25℃로 가온하고 2시간 더 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액에 물 20 mL를 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트(10 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(10 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX001-7을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.26 (s, 1H), 7.17 (s, 3H), 4.62 (s, 2H), 1.37 (s, 6H).
단계 6: WX001의 합성
반응 플라스크에 WX001-7(35 mg, 94.17 μmol, 1 당량), A-1(56.28 mg, 103.58 μmol, 1.1 당량) 및 톨루엔(2 mL)을 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 125℃로 가열하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(21.76 mg, 18.83 μmol, 0.2 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX001을 수득했다.
실시예 2
Figure pct00089
합성 경로:
Figure pct00090
단계 1: WX002-2의 합성
건조 반응 플라스크에 WX001-6(50 mg, 202.34 μmol, 1 당량) 및 디메틸포름아미드(1 mL)를 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 수소화나트륨 (12.14 mg, 303.51 μmol, 60% 순도, 1.5 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시킨 다음, WX002-1(38.25 mg, 202.34 μmol, 24.84 μL, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 용액을 천천히 20℃로 가온하고, 2시간 더 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액에 물 20 mL를 첨가하고, 에틸아세테이트(10 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(10 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX002-2를 수득했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ (ppm) 7.32-7.40 (m, 1H), 7.15-7.23 (m, 2H), 7.03-7.11 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 1.48 (d, J = 3.8 Hz, 6H).
단계 2: WX002의 합성
반응 플라스크에 WX002-2(60 mg, 168.91 μmol, 1 당량), A-1(100.94 mg, 185.80 μmol, 1.1 당량) 및 톨루엔 (1 mL)을 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 125℃로 가열하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(39.04 mg, 33.78 μmol, 0.2 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX002를 수득했다.
실시예 3
Figure pct00091
합성 경로:
Figure pct00092
단계 1: WX003-2의 합성
건조 반응 플라스크에 WX001-6(80 mg, 325.04 μmol, 1 당량) 및 디메틸포름아미드(4 mL)를 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 수소화나트륨 (19.50 mg, 487.56 μmol, 60% 순도, 1.5 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시킨 다음, WX003-1(67.29 mg, 325.04 μmol, 41.54 μL, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 용액을 천천히 25℃로 가온하고 2시간 더 반응시켰다. 반응 종료 후 반응 용액에 물 10 mL를 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트 (20 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(20 mL*3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 WX003-2를 수득했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ (ppm) 7.33-7.47 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 1.41-1.52 (m, 6H).
단계 2: WX003의 합성
반응 플라스크에 WX003-2(70 mg, 187.56 μmol, 1 당량), A-1(112.09 mg, 206.32 μmol, 1.1 당량) 및 톨루엔 (2 mL)을 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 125℃로 가열하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(43.35 mg, 37.51 μmol, 0.2 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX003을 수득했다.
실시예 4
Figure pct00093
합성 경로:
Figure pct00094
단계 1: WX004-1의 합성
반응 플라스크에 WX002-2(70 mg, 197.06 μmol, 1 당량), A-1-2(113.45 mg, 216.76 μmol, 1.1 당량) 및 톨루엔 (2 mL)을 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 125℃로 가열하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(45.54 mg, 39.41 μmol, 0.2 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX004-1을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ (ppm) 9.26 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.33-7.42 (m, 1H), 7.16-7.28 (m, 2H), 7.08 (td, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 1.55 (s, 6H).
단계 2: WX004의 합성
미리 건조된 반응 플라스크에 WX004-1(50 mg, 115.61 μmol, 1 당량) 및 WX004-2(11.69 mg, 115.61 μmol, 1 당량)를 첨가한 다음, 혼합물을 디메틸 설폭사이드(1 mL)로 용해시켰다. 혼합물을 100℃에서 14시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하고, 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX004를 수득했다.
실시예 5
Figure pct00095
합성 경로:
Figure pct00096
단계 1: WX005-2의 합성
반응 플라스크에 WX001-7(530 mg, 1.43 mmol, 1 당량), 염화아연(0.7 M, 1.83 mL, 0.9 당량) 및 테트라하이드로푸란(3.5 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, -25℃에서 n-부틸 리튬(2.5 M, 855.58 μL, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합 용액을 20℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 테트라하이드로푸란(0.5 mL) 중 WX005-1(379.45 mg, 1.43 mmol, 1 당량), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(65.29 mg, 71.30 μmol, 0.05 당량) 및 트리(2-푸릴)포스핀(33.11 mg, 142.60 μmol, 0.1 당량)의 용액을 -25℃에서 적가하고, 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(82.5 mg, 71.5 μmol, 0.05 당량)을 추가로 첨가하고, 혼합물을 65℃에서 20시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 메탄올로 켄칭하고 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 분취용 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX005-2를 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 8.75 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.26-7.41 (m, 3H), 4.72 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.53 (s, 6H).
단계 2: WX005-3의 합성
반응 플라스크에 WX005-2(140 mg, 324.85 μmol, 1 당량) 및 디클로로메탄(6 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 후, 0℃에서 m-클로로퍼옥시벤조산(210.22 mg, 974.54 μmol, 80% 순도, 3 당량)을 첨가하였다. 혼합 용액을 20℃로 천천히 가온하고 10시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 아황산나트륨(15 mL)과 포화 탄산수소나트륨 수용액(15 mL)으로 pH가 알칼리성이 되고, KI 시험지의 색이 변하지 않을 때까지 켄칭하고, 혼합물을 디클로로메탄(3 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 45℃에서 워터 펌프로 감압하에 농축 건조시켜 갈색 고체를 수득했다. 이어서, 갈색 고체를 에틸 아세테이트(3 mL)로 슬러리화하여 WX005-3을 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 9.18 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.30-7.39 (m, 3H), 4.73 (s, 2H), 3.48 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 1.55 (s, 6H).
단계 3: WX005의 합성
반응 플라스크에 A-1-3(15.73 mg, 162.00 μmol, 1.5 당량) 및 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)를 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 수소화나트륨(6.48 mg, 162.00 μmol, 60% 순도, 1.5 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 0.5시간 후, N,N-디메틸포름아미드(1 mL) 중 WX005-3(50 mg, 108.00 μmol, 1 당량)의 용액을 첨가하고, 혼합 용액을 20℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(5 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄(1 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 45℃에서 워터 펌프를 사용하여 감압하에 농축 건조시켜 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX005를 수득했다.
실시예 6
Figure pct00097
합성 경로:
Figure pct00098
단계 1: WX006-1의 합성
미리 건조된 반응 플라스크에 WX002-2(0.456 g, 1.28 mmol, 1 당량), 염화아연(0.7 M, 1.65 mL, 0.9 당량) 및 테트라하이드로푸란(10.5 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, 반응 시스템을 -25℃로 냉각하고, n-부틸 리튬(2.5 M, 770.22 μL, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 WX005-1(341.59 mg, 1.28 mmol, 1 당량) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(74.17 mg, 64.18 μmol, 0.05 당량)의 용액을 -25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 메탄올 3 mL로 켄칭하고 회전 증발 건조시켜 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX006-1을 수득했다.
단계 2: WX006-2의 합성
미리 건조된 반응 플라스크에 WX006-1(210 mg, 506.61 μmol, 1 당량) 및 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하였다. 반응 시스템을 0℃로 냉각시키고, m-클로로퍼옥시벤조산(327.85 mg, 1.52 mmol, 80% 순도, 3 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 천천히 실온(20℃)으로 가온하고, 12시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 탄산수소나트륨 수용액(5 mL)을 이용하여 반응 용액의 pH를 약 8로 조절하였다. 전분 KI 시험지가 청색을 나타내지 않을 때까지 포화 아황산나트륨 용액을 첨가하였다. 혼합 용액을 디클로로메탄(10 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(10 mL*2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX006-2를 수득했다.
단계 3: WX006의 합성
미리 건조된 반응 플라스크에 A-1-3(26.10 mg, 268.75 μmol, 1.2 당량) 및 N,N-디메틸포름아미드(3 mL)를 첨가하였다. 반응 시스템을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 수소화나트륨(13.44 mg, 335.93 μmol, 60% 순도, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하면서 반응시켰다. WX006-2(100 mg, 223.96 μmol, 1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(5 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(5 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(5 mL*4)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX006을 수득했다.
실시예 7
Figure pct00099
합성 경로:
Figure pct00100
단계 1: WX007-1의 합성
반응 플라스크에 WX001-7(50 mg, 134.52 μmol, 1 당량), A-1-2(77.45 mg, 147.98 μmol, 1.1 당량) 및 톨루엔(2 mL)을 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 125℃로 가열하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(31.09 mg, 26.90 μmol, 0.2 당량)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX007-1을 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 9.26 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.28-7.39 (m, 3H), 4.73 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 1.55 (s, 6H).
단계 2: WX007의 합성
미리 건조된 반응 플라스크에 WX007-1(30 mg, 66.82 μmol, 1 당량) 및 WX004-2(6.76 mg, 66.82 μmol, 1 당량)를 첨가하고, 이어서 혼합물을 디메틸 설폭사이드(1 mL)로 용해시켰다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하고, 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX007을 수득했다.
실시예 8
Figure pct00101
합성 경로:
Figure pct00102
단계 1: WX008-2의 합성
반응 플라스크에 WX008-1(9 g, 79.59 mmol, 1 당량), 탄산칼륨(13.20 g, 95.51 mmol, 1.2 당량) 및 N,N-디메틸포름아미드(100 mL)를 첨가하고, 대기를 질소 가스로 교체하였다. 혼합물을 120℃로 가열하고 10분 동안 교반하였다. 이어서, 나트륨 2-클로로-2,2-디플루오로아세테이트(24.27 g, 159.19 mmol, 2 당량)를 일부 첨가하였다. 혼합 용액을 120℃에서 20분간 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(800 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(200 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 포화 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 여과하였다. 여액을 워터 펌프로 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX008-2를 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 7.96-8.28 (m, 2H), 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
단계 2: WX008-3의 합성
반응 플라스크에 팔라듐-탄소(50 mg, 367.91 μmol, 10% 순도, 1 당량) 및 메탄올(1 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 다음, WX008-2(60 mg, 367.91 μmol, 1 당량)를 첨가하였다. 대기를 수소 가스로 교체한 다음, 혼합 용액을 15 psi의 수소(741.67 μg, 367.91 μmol, 1 당량) 대기의 압력 하에 25℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 셀라이트로 여과하고, 여액을 워터 펌프로 감압 농축 건조하여 WX008-3을 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 7.36-7.69 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.84 (br s, 2H), 5.31 (d, J = 1.3 Hz, 1H).
단계 3: WX008의 합성
반응 플라스크에 WX008-3(17.88 mg, 134.37 μmol, 1.5 당량), WX006-2(40 mg, 89.58 μmol, 1 당량), 디클로로메탄(0.5 mL) 및 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 188.12 μL, 2.1 당량)를 천천히 적가하고, 혼합 용액을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하고, 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX008을 수득했다.
실시예 9
Figure pct00103
합성 경로:
Figure pct00104
단계 1: WX009-3의 합성
반응 플라스크에 WX009-1(8.03 g, 75.67 mmol, 7.65 mL, 1 당량), WX009-2 (10 g, 75.67 mmol, 1 당량) 및 테트라하이드로푸란(100 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합 용액을 25℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 회전 증발 건조시켜 WX009-3을 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 10.86 (br s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.59 (br d, J = 6.6 Hz, 2H), 7.31-7.45 (m, 3H), 1.47 (s, 9H).
단계 2: WX009-4의 합성
반응 플라스크에 WX009-3(10 g, 45.40 mmol, 1 당량), 칼륨 tert-부톡사이드(6.11 g, 54.48 mmol, 1.2 당량) 및 테트라하이드로푸란(160 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 후, 중수소(deuterated) 요오도메탄(7.90 g, 54.48 mmol, 3.39 mL, 1.2 당량)을 천천히 적가하였다. 혼합 용액을 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(100 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 포화 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 여과하였다. 여액을 워터 펌프로 감압 농축하여 WX009-4를 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 7.81 (s, 1H), 7.64-7.72 (m, 2H), 7.32-7.46 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
단계 3: WX009-5의 합성
반응 플라스크에 습윤 팔라듐-탄소(2 g, 10% 순도) 및 메탄올(100 mL)을 첨가하였다. 대기를 아르곤 가스로 교체한 후, WX009-4(10.5 g, 44.25 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 혼합 용액을 50 psi 압력의 수소(89.19 mg, 44.25 mmol, 1 당량) 대기 하에, 50℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 셀라이트로 여과하고, 메탄올(20 mL*2)로 세척하였다. 여액을 워터 펌프로 감압 하에 농축 건조시켜 WX009-5를 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 4.48 (s, 2H), 1.40 (s, 9H).
단계 4: WX009-6의 합성
반응 플라스크에 WX009-5(6.6 g, 44.23 mmol, 1 당량) 및 에틸 아세테이트 중 염산 용액(4 M, 33.18 mL, 3 당량)을 첨가하고, 혼합 용액을 25℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 회전 증발 건조시켜, WX009-6를 수득했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 4.95 (br s, 3 H).
단계 5: WX009-8의 합성
반응 플라스크에 WX009-6(1.5 g, 17.53 mmol, 1 당량, HCl), WX009-7(2.51 g, 17.53 mmol, 2.63 mL, 1 당량), 아세트산(2.11 g, 35.07 mmol, 2.01 mL, 2 당량), 황산마그네슘(5.02 g, 41.73 mmol, 2.38 당량) 및 에탄올(75 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체한 후, 혼합 용액을 90℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL)으로 희석하고, 디클로로메탄(50 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 여과하였다. 여액을 45℃에서 워터 펌프로 감압 농축하여 미정제 생성물을 수득했고, 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 WX009-8을 수득했다. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (ppm) 6.98 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.09 (br s, 2H).
단계 6: WX009의 합성
반응 플라스크에 WX009-8(13.46 mg, 134.37 μmol, 1.5 당량), WX006-2(40 mg, 89.58 μmol, 1 당량), 디클로로메탄(0.5 mL) 및 테트라하이드로푸란(0.5 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 188.12 μL, 2.1 당량)를 천천히 적가하고, 혼합 용액을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(5 mL)으로 희석하고, 디클로로메탄(5 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수(5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 여과하였다. 여액을 45℃의 워터 펌프로 감압 농축하고, 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX009를 수득했다.
실시예 10
Figure pct00105
합성 경로:
Figure pct00106
단계 1: WX010의 합성
건조 반응 플라스크에 WX006-2(30 mg, 67.19 μmol, 1 당량) 및 WX010-1(15.68 mg, 141.09 μmol, 2.1 당량)을 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 및 디클로로메탄(1.5 mL)의 혼합 용액에 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 134.37 μL, 2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 25℃로 가온하고, 추가로 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(10 mL)로 희석하고, 디클로로메탄(10 mL*3)으로 추출하였다. 층을 분리하였다. 이어서, 유기상을 수집하고, 수집된 유기상을 포화 염수(10 mL*3)로 순차적으로 하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX010을 수득했다.
실시예 11
Figure pct00107
합성 경로:
Figure pct00108
단계 1: WX011-2의 합성
건조 반응 플라스크에 WX009-7(226.22 mg, 1.58 mmol, 237.13 μL, 1 당량), 황산마그네슘(452.63 mg, 3.76 mmol, 2.38 당량), 아세트산(189.75 mg, 3.16 mmol, 180.72 μL, 2 당량) 및 에탄올(2.5 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 이어서, WX011-1(200 mg, 1.58 mmol, 1 당량, HCl)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안, 90℃에서 추가로 12시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 수용액 3 mL에 부었다. 혼합물을 디클로로메탄(3 mL*2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 3 mL의 포화 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피로 정제하여 WX011-2를 수득했다. 1H NMR (CH3Cl-d, 400 MHz): δ (ppm) 7.25 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.15-4.22 (m, 2H), 3.83-4.11 (m, 2H), 3.68-3.73 (m, 2H), 3.34 (s, 3H).
단계 2: WX011의 합성
건조 반응 플라스크에 WX006-2(40 mg, 89.58 μmol, 1 당량) 및 WX011-2(26.56 mg, 188.12 μmol, 2.1 당량)를 테트라하이드로푸란(2 mL) 및 디클로로메탄(2 mL)의 혼합 용액에 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 179.16 μL, 2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 25℃로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(5 mL)로 희석하고, 디클로로메탄(5 mL*3)으로 추출하였다. 층을 분리하였다. 이어서, 유기상을 수집하고, 수집된 유기상을 포화 염수(5 mL*3)로 순차적으로 하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX011을 수득했다.
실시예 12
Figure pct00109
합성 경로:
Figure pct00110
단계 1: WX012의 합성
반응 플라스크에 WX006-2(40 mg, 89.58 μmol, 1 당량), WX012-1(16.55 mg, 134.37 μmol, 1.5 당량), 디클로로메탄(1 mL) 및 테트라하이드로푸란(1 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 188.12 μL, 2.1 당량)를 천천히 적가하고, 혼합 용액을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하고 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX012를 수득했다.
실시예 13
Figure pct00111
합성 경로:
Figure pct00112
단계 1: WX013-2의 합성
WX013-1(800 mg, 4.70 mmol, 1 당량) 및 수산화리튬 일수화물(986.42 mg, 23.51 mmol, 5 당량)을 물(8 mL)과 테트라하이드로푸란(8 mL)의 혼합 용액에 용해시켰다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 바로 회전 증발시켜 건조시킨 후, 물(10 mL) 및 디클로로메탄(10 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 수집하고, 포화 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 여과하였다. 여액을 회전 증발 건조시켜, WX013-2을 수득했다.
단계 2: WX013-3의 합성
WX013-2(500 mg, 3.20 mmol, 1 당량), 디페닐포스포릴 아지드(889.00 mg, 3.23 mmol, 700 μL, 1.01 당량) 및 트리에틸아민(1.45 g, 14.37 mmol, 2 mL, 4.49 당량)을 tert-부탄올(10 mL)에 용해시켰다. 대기를 질소로 3회 교체한 후, 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 회전 증발 건조시켜 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 WX013-3을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CD3Cl) δ ppm 1.50 (s, 9 H) 3.58 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 5.61 (br s, 1 H).
단계 3: WX013-4의 합성
반응 플라스크에 WX013-3(520 mg, 2.29 mmol, 1 당량) 및 에틸 아세테이트 중 염산 용액(4 M, 5 mL, 8.74 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물(10 mL)로 추출하였다. 수성상을 수집한 다음 회전 증발 건조시켜 미정제 생성물을 수득했다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 WX013-4를 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CD3Cl) δ ppm 3.53 (s, 3 H) 3.82 (s, 3 H) 5.01 (s, 1 H).
단계 4: WX013의 합성
건조 반응 플라스크에 WX006-2(50 mg, 111.98 μmol, 1 당량), WX013-4(29.90 mg, 235.15 μmol, 2.1 당량), 디클로로메탄(1 mL) 및 테트라하이드로푸란(1 mL)을 첨가하였다. 대기를 질소 가스로 교체하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 223.96 μL, 2 당량)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시키고, 25℃에서 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 물 10 mL로 켄칭하고, 디클로로메탄 20 mL로 추출하였다. 층을 분리하였다. 유기상을 수집하고, 수성상을 디클로로메탄(20 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 합한 유기상을 포화 염수(20 mL*3)로 순차적으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 감압 하에 농축시켰다. 농축 종료 후, 잔류물을 박층 분취 크로마토시트로 정제하여 WX013을 수득했다.
각 실시예의 1H NMR 스펙트럼 및 질량 스펙트럼의 데이터를 표 1에 나타내었다.
실시예 화합물 NMR MS m/z
1 WX001 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.82 (br s, 1H), 8.70 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.41 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.36 (s, 3H), 6.35 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 1.53 (s, 6H). 466[M+H]+
2 WX002 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ (ppm) 9.78 (br s, 1H), 8.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.31-7.42 (m, 2H), 7.16-7.24 (m, 2H), 7.07 (td, J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 1.52 (s, 6H). 450[M+H]+
3 WX003 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ (ppm) 9.80 (br s, 1H), 8.69 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.32-7.50 (m, 3H), 7.25 (m, 1H), 6.33 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 1.52 (s, 6H). 468[M+H]+
4 WX004 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ (ppm) 8.52 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.61 (br s, 1H), 7.33-7.48 (m, 1H), 7.18-7.30 (m, 3H), 7.04-7.15 (m, 1H), 4.73 (s, 2H), 3.83-4.05 (m, 3H), 3.43 (m, 2H), 1.89 (br s, 2H), 1.49-1.64 (m, 8H). 454[M+H]+
5 WX005 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ (ppm) 9.61 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.30-7.38 (m, 3H), 6.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). 480[M+1]+
6 WX006 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 9.61 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.40-7.33 (m, 2H), 7.25-7.18 (m, 2H), 7.04-7.11 (m, 1H), 6.31-6.35 (m, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.52 (s, 6H). 464[M+1]+
7 WX007 1H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ (ppm) 8.51 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.51-7.64 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.30-7.40 (m, 3H), 7.26 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.85-4.04 (m, 3H), 3.42 (br t, J = 11.2 Hz, 2H), 1.89 (br d, J = 4.5 Hz, 2H), 1.48-1.64 (m, 8H). 470[M+1]+
8 WX008 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 10.04 (br s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.59-7.94 (m, 2H), 7.31-7.42 (m, 1H), 7.16-7.27 (m, 2H), 7.08 (br t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.52 (s, 6H). 500[M+1]+
9 WX009 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.62 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.32-7.41 (m, 2H), 7.17-7.26 (m, 2H), 7.07 (td, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). 467[M+1]+
10 WX010 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.52 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.31-7.42 (m, 1H), 7.17-7.27 (m, 2H), 7.02-7.13 (m, 1H), 6.08 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.53 (s, 6H). 478[M+1]+
11 WX011 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.43 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 7.25 - 7.16 (m, 2H), 7.07 (dt, J=2.0, 8.6 Hz, 1H), 6.40 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.25 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.67 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.21 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). 508[M+1]+
12 WX012 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.88 - 0.95 (m, 2 H), 0.96 - 1.03 (m, 2 H), 1.51 (s, 6 H), 2.59 (s, 3 H), 3.54 (tt, J=7.24, 3.71 Hz, 1 H), 4.71 (s, 2 H), 6.35 (d, J=1.63 Hz, 1 H), 7.02 - 7.12 (m, 1 H), 7.17 - 7.26 (m, 2 H), 7.32 - 7.41 (m, 2 H), 8.61 (s, 1 H), 9.54 (s, 1 H). 490[M+1]+
13 WX013 1H NMR (DMSO-d 6, 400MHz) δ (ppm) 9.66 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.31-7.43 (m, 1H), 7.15-7.27 (m, 2H), 7.03-7.12 (m, 1H), 5.81 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.52 (s, 6H). 494[M+1]+
분석예 1. 시험관내 키나아제 활성 분석:
1. 분석의 목적:
ERK2 키나아제 활성을 억제하는 화합물의 능력을 측정하였다.
2. 분석 완충액:
20 mM 헤페스(pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM 에틸렌비스(옥시에틸렌니트릴로)테트라아세트산(EGTA), 0.02% Brij35, 0.02 mg/mL 소 혈청 알부민(BSA), 0.1 mM Na3VO4, 2 mM 디티오트레이톨 (DTT), 1% DMSO.
3. 화합물 처리:
분석 화합물을 100% DMSO에 용해하여 특정 농도의 저장 용액을 제조하였다. 화합물은 Integra Viaflo Assist 스마트 피펫을 사용하여 DMSO 용액에 연속적으로 희석되었다.
3. 분석 방법
1) 새로 준비된 반응 완충액에서 기질 MBP를 준비했다;
2) ERK2 키나아제를 상기 언급된 MBP 용액에 첨가하고 부드럽게 혼합하였다;
3) 100% DMSO에 용해된 화합물을 초음파 기술(Echo550; 나노리터 범위)을 사용하여 키나아제 반응 시스템에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20분 동안 배양하였다;
4) 33P-ATP(특정 농도 10 μCi/μL)를 반응 시스템에 첨가하고, 이때 반응을 개시하였다;
5) 혼합물을 실온에서 2시간 동안 배양했다;
6) 필터 결합법으로 방사능량을 검출하였다;
7) ERK2 키나아제 활성은 대조군(DMSO로 처리)의 키나아제 활성에 대한 분석 시료에서 나머지 키나아제 활성의 비율로 계산되었다. 곡선은 Prism(GraphPad 소프트웨어)을 사용하여 피팅되었고 IC50값이 계산되었다.
4. 분석 결과를 표 2에 나타냈다:
시험관 내 키나아제 활성 분석 결과
화합물 ERK2
IC 50 (nM)
WX001 0.24
WX002 0.35
WX003 0.37
WX004 0.25
WX005 0.05
WX006 0.30
WX007 0.39
WX008 0.52
WX009 0.64
WX0010 0.14
WX0011 0.98
WX0012 0.48
WX0013 0.19
결론: 본 개시내용의 화합물은 ERK2 키나아제를 억제하는 우수한 활성을 나타낸다.
분석예 2. 시험관내 세포 증식 억제 분석:
1. 분석의 목적:
HT29 종양 세포의 증식을 억제하는 화합물의 능력을 측정하였다.
2. 화합물 처리:
분석 화합물을 100% DMSO에 용해시켜, 10 mM 저장 용액을 제조하였다.
3. 분석 방법 및 단계
1) 생물안전실(biological safety cabin)의 UV 라이트를 켜고, 30분을 카운트다운했다;
2) 37℃ 물욕에서, RPMI1640 배지와 트립신을 예열했다;
3) UV 조사가 종료된 후, 생물안전실을 개방했다. 예열된 배지, 트립신 및 인산완충염수(phosphate buffered saline; PBS) 등을 알코올로 닦고 생물안전실에 넣었다;
4) 인큐베이터에서 HT29 세포를 제거하고, 생물안전실에서 오래된 배지를 제거했다. 10 ml의 PBS를 첨가하였다. 혼합물을 부드럽게 진탕한 다음 PBS를 제거했다;
5) 예열된 0.25% 트립신 1.5 ml를 첨가하였다. 트립신이 바닥의 세포를 고르게 덮도록 배양 용기를 수평으로 진탕한 다음 인큐베이터에 2분간 두었다;
6) 완전 배지로 세포 소화를 중단하고, 세포 현탁액을 균질해질 때까지 피펫팅하고 계수했다;
7) 세포 계수 결과에 따라, 세포 현탁액의 밀도를 웰(well)당 1500개 세포로 조정하고, 세포 현탁액을 웰당 50μl로 배양(seed)했다;
8) 화합물의 저장 용액을 DMSO 용액에 연속적으로 희석하고, Tecan을 사용하여 화합물을 세포 플레이트에 첨가하였다;
9) 화합물이 첨가된 세포 플레이트와 CellTiterGlo를 실온에서 평형화시킨 후, CellTiterGlo 25 마이크로리터를 각 웰에 첨가하였다. 세포 플레이트를 1 내지 2분 동안 진탕한 다음 10분 동안 방치하였다. 그런 다음 신호 값이 감지되었다. XL-Fit을 이용하여 데이터를 분석하고, 각 화합물의 IC50을 계산하였다.
4. 분석 결과를 표 3에 나타냈다:
시험관 내 세포 활성 분석 결과
화합물 HT29
IC50 (nM)
WX001 14
WX002 24
WX003 27
WX004 35
WX005 8
WX006 7
WX007 26
WX008 58
WX009 6
WX010 27
WX011 26
WX012 37
WX013 18
결론: 본 개시내용의 화합물은 HT29 세포의 증식을 억제하는 우수한 활성을 나타낸다.
분석예 3. 생체내 DMPK 분석:
마우스의 생체 내 DMPK 분석
1. 분석의 목적:
암컷 BALB/c 마우스를 분석 동물로 사용하여 화합물의 혈액 농도를 결정하고 단일 투여 후 약동학적 거동을 평가하였다.
2. 분석 절차:
8마리의 건강한 성체 암컷 BALB/c 마우스를 선택하였고, 4마리는 정맥 주사군에, 4마리는 경구 투여군으로 하였다. 정맥 주사군의 비히클은 5% DMSO+95% (20% HP-β-CD)였다. 분석하고자 하는 화합물을 적절한 양의 정맥 주사용 비히클과 혼합하고, 볼텍싱 및 초음파 처리하여 0.5 mg/mL의 투명한 용액을 제조하였다. 투명한 용액을 미세다공성 멤브레인으로 여과한 다음 사용할 준비가 되었다. 경구 투여군의 비히클은 5% DMSO+95%(20% HP-β-CD)였다. 분석될 화합물을 비히클과 혼합하고, 볼텍싱 및 초음파 처리하여 0.3 mg/mL의 용액을 제조하였다. 마우스에 1 mg/kg을 정맥내로 또는 3 mg/kg을 경구 투여한 후 일정 기간 동안 전혈을 수집했다. 혈장을 준비했다. 약물 농도는 LC-MS/MS 법으로 분석하였고, 약동학적 파라미터는 Phoenix WinNonlin 소프트웨어(Pharsight, USA)로 계산하였다.
비고: DMSO: 디메틸 설폭사이드; HP-β-CD: 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린.
3. 분석 결과를 표 4에 나타냈다:
화합물의 PK 분석 결과
화합물 Cmax (nM) F% 경구 DNAUC (nM.h/mpk) Vdss (L/kg) Cl (mL/min/kg) T1/2 (h)
WX001 3355 86% 2153 1.1 14.3 0.9
WX005 1029 NA 468 NA NA NA
WX006 1035 34% 530 1.7 23.0 1.0
WX009 1170 67% 820 1.7 28.0 1.7
비고: Cmax는 최대 농도이고; F%는 경구 생체이용률이고; DNAUC는 AUCPO/Dose이고, AUCPO는 경구 노출이고, Dose는 약물 용량이고; Vdss는 분포량이고; Cl은 제거율이고; T1/2는 반감기이고; 및 NA는 분석되지 않음을 의미한다.
결론: 본 개시내용의 화합물은 우수한 경구 노출 및 생체이용률을 나타낸다.
분석예 4. 마우스 H358 모델에서 생체내 효능 분석:
1. 분석의 목적:
WX006의 항종양 효과는 누드 마우스에서 인간 비소세포폐암 H358 세포의 피하 이종이식 종양 모델을 사용하여 평가되었다.
2. 동물 분석:
종: 마우스
계통: BALB/c 누드 마우스
나이: 생후 6-7주
성별: 암컷
무게: 20 g
공급업체: Shanghai Sippe-Bk Lab Animal Co., Ltd.
동물 증명서 번호: 20180006017149
3. 사육 환경:
동물은 20 내지 26℃의 온도, 40 내지 70% 습도의 SPF 등급 동물실에 있는 IVC(독립 공기 공급 시스템 및 항온 항습) 케이지(케이지당 4마리)에서 사육되었다.
케이지: 케이지는 폴리카보네이트로 제작되었으며, 부피는 300 mm × 180 mm × 150 mm였다. 침구 재료는 옥수수 속대였으며 일주일에 한 번 교체되었다.
먹이: 분석 동물은 분석 기간 내내 먹이(조사에 의해 멸균된 건조 펠릿 먹이)에 자유롭게 접근할 수 있었다.
식수: 분석 동물은 멸균된 물에 자유롭게 접근할 수 있었다.
케이지 식별: 각 케이지의 동물 정보 카드에는 수, 성별, 계통, 케이지에 있는 동물의 수령 날짜, 투여 일정의 분석 번호, 분석 그룹 및 시작 날짜가 표시되어야 한다.
동물 식별: 분석 동물은 귀 태그로 식별되었다.
4. 분석 절차:
1) 세포 및 배양 분석: 인간 비소세포폐암 H358 세포를 시험관내에서 단층으로 배양하였다. 배양 조건은 1640 배지 + 10% 소 태아 혈청 및 37℃ 5% CO2 인큐베이터였다. 트립신-EDTA를 사용한 일상적인 소화는 계대(passage)를 위해 주 3회 수행되었다. 세포 포화도가 80% 내지 90%이고, 양이 요건에 도달하면 세포를 채취하고 계수하고 배양했다.
2) 종양 조직 접종 및 그룹화: 0.1 mL(5 × 105) H358 세포를 각 마우스의 오른쪽 겨드랑이에 피하 접종하였다. 평균 종양 부피가 100 mm3에 도달했을 때, 동물을 무작위로 2개의 그룹으로 나누고 투여를 시작하였다. 분석 동물의 그룹화 및 투여 일정은 표 5에 나타냈다.
분석 동물의 그룹화 및 투여 일정
그룹 동물수 약물 복용량 (mg/kg) 투여 주기 투여 경로 및 빈도
1 6 용매 제어
(비히클)		 -- 28 일 경구 투여 (PO),
하루에 한 번 (QD)
2 6 WX006 30 28 일 경구 투여 (PO),
하루에 한 번 (QD)
3) 분석 동물의 일일 관찰: 이 분석 프로토콜의 개발 및 임의의 수정은 동물실험윤리위원회(Institutional Animal Care and Use Committee; IACUC)에 의해 평가되고 승인되었다. 분석 동물의 사용 및 복지는 국제 실험 동물 관리 평가 인증협회(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care; AAALAC)의 규정에 따라 수행되었다. 동물의 건강과 사망을 매일 모니터링했다. 일상적인 검사에는 행동 활동, 먹이 및 물 섭취(육안 검사만), 체중 변화(주 2회 체중 측정), 외모 징후 또는 기타 기형과 같은 동물의 일상적인 행동에 대한 종양 성장 및 약물 치료 효과의 관찰이 포함되었다. 각 그룹의 동물 수를 기준으로 각 그룹의 동물 사망 및 부작용을 기록했다.
4) 분석 화합물의 제형화
a) 비히클 그룹: 5% DMSO + 95%(20% HP-β-CD).
b) 분석 화합물 그룹: 정량적 양의 분석 화합물을 제형화 병에서 칭량하였다. 상응하는 부피의 DMSO를 첨가한 다음 혼합물을 볼텍싱하여 투명한 용액을 수득했다. 상응하는 부피의 20% HP-β-CD를 첨가한 다음 혼합물을 볼텍싱하여 균질한 현탁액을 수득했다. 화합물을 3일마다 제형화하였다.
5) 종양 측정 및 분석 지표:
a) 종양 직경은 버니어 캘리퍼스로 일주일에 두 번 측정되었다. 종양 부피의 계산 공식은 다음과 같다: TV=1/2×a×b2, 여기서 a 및 b는 각각 종양의 긴지름 및 짧은지름을 나타내고;
b) 화합물의 종양 억제 효능을 TGI(%)로 평가하였다. TGI(%)는 종양 성장의 억제율을 반영하였다. TGI(%)는 다음과 같이 계산되었다: TGI(%) = {[1-(치료군의 투여 종료 시 평균 종양 부피 - 이 치료군의 투여 시작 시 평균 종양 부피)]/(용매 대조군에서 치료 종료 시 평균 종양 부피 - 용매 대조군에서 치료 시작 시 평균 종양 부피)}×100%.
5. 분석 결과:
1) 표 6 및 도 1에 나타난 바와 같이, 누드 마우스의 인간 비소세포폐암 H358 세포의 피하 이종이식 종양 모델에서 28일까지 경구 투여했을 때, WX006 30mg/kg은 94%의 TGI로 종양 성장에 상당한 억제 효과가 있었다.
2) 약물 독성의 간접 측정을 위한 참고 지표로 분석 동물의 체중을 사용하였다. 도 2에 나타난 바와 같이, 28일째까지 투여하였을 때, 용매 대조군 및 WX006군의 모든 동물의 체중은 상당히 감소하지 않았고, 이환(morbidity) 또는 사망도 없었다.
마우스 H358 모델에서 생체내 효능 분석 결과
약물 TGI
WX006 (30 mg/kg, PO, QD) 94%
6. 분석 결론: WX006은 투여량 관리에서 종양의 성장을 상당히 억제할 수 있다. 투여 동안 동물의 체중이 크게 감소하는 것으로 관찰되지 않고, 내성이 양호하다.

Claims (17)

  1. 화학식 III의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    [화학식 III]
    Figure pct00113


    상기 화학식 III에서,
    R1은 H, C1-3알킬 및 C3-5사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬 및 C3-5사이클로알킬은 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-3알킬이고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되고;
    R4는 H, F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되고;
    R5는 F, Cl, Br, I 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 여기서, 상기 C1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되고;
    m은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
    n은 0, 1 및 2로부터 선택되고;
    고리 A는 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐로부터 선택되고, 여기서, 상기 피라졸릴 및 테트라하이드로피라닐은 1, 2 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되고;
    Ra, Rb, Rc 및 Re는 각각 독립적으로 D, F, Cl, Br, I, OH 및 OCH3로부터 선택되고;
    Rd는 F, Cl, Br, I, CH3 및 OCH3로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 H, CH3 및 사이클로프로필로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 사이클로프로필이 1, 2 또는 3개의 Ra로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서, R1이 H, CH3, CHF2, CD3, CH2CH2OCH3 및 사이클로프로필로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3 및 CH2CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3 및 CH2CH3이 1, 2 또는 3개의 Rb로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  5. 제4항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로 CH3인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항에 있어서, R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Rc로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  7. 제6항에 있어서, R4이 H, F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제1항에 있어서, R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되고, 여기서, 상기 CH3가 1, 2 또는 3개의 Re로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제8항에 있어서, R5이 F, Cl, Br, I 및 CH3로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제1항에 있어서, 고리 A가
    Figure pct00114
    ,
    Figure pct00115
    및
    Figure pct00116
    로부터 선택되고, 여기서, 상기
    Figure pct00117
    ,
    Figure pct00118
    및
    Figure pct00119
    가 1, 2, 또는 3개의 Rd로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  11. 제10항에 있어서, 고리 A가
    Figure pct00120
    ,
    Figure pct00121
    ,
    Figure pct00122
    및
    Figure pct00123
    로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제1항에 있어서, 상기 구조적 모이어티
    Figure pct00124
    가
    Figure pct00125
    ,
    Figure pct00126
    및
    Figure pct00127
    로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제12항에 있어서, 상기 구조적 모이어티
    Figure pct00128
    가
    Figure pct00129
    ,
    Figure pct00130
    및
    Figure pct00131
    로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식들로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    Figure pct00132

    Figure pct00133


    상기 화학식에서,
    R1은 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 동일하고,
    R2 및 R3은 제1항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 동일하고,
    R4은 제1항, 제6항, 또는 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 동일하고,
    R5은 제1항, 제8항 또는 제9항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 동일하고,
    m은 제1항에서 정의된 것과 동일하다.
  15. 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    Figure pct00134

    Figure pct00135

    Figure pct00136

    Figure pct00137
    .
  16. ERK와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  17. 제16항에 있어서, ERK 억제제 관련 약제는 고형 종양 치료용 약제인, 용도.
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IL309706A (en) * 2021-06-28 2024-02-01 D3 Bio Wuxi Co Ltd Dimethyl-converted thiazololactam compound and its uses
IL309711A (en) * 2021-06-28 2024-02-01 D3 Bio Wuxi Co Ltd THIAZOLE-LACTAM-SPIROHETEROCYCLIC COMPOUNDS AND THEIR USES

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2611798B1 (en) * 2010-09-01 2015-04-08 Gilead Connecticut, Inc. Pyridazinones, method of making, and method of use thereof
AU2016341520C1 (en) * 2015-10-21 2021-07-22 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Benzolactam compounds as protein kinase inhibitors
SG11201803066VA (en) 2015-11-09 2018-05-30 Astrazeneca Ab Dihydroimidazopyrazinone derivatives useful in the treatment of cancer
CN112638917B (zh) * 2018-05-22 2023-09-08 捷思英达控股有限公司 作为激酶抑制剂的杂环化合物、包括该杂环化合物的组合物、及其使用方法
WO2019233457A1 (zh) * 2018-06-08 2019-12-12 贝达药业股份有限公司 Erk抑制剂及其应用
WO2020073862A1 (zh) 2018-10-10 2020-04-16 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 一种二氢咪唑并吡嗪酮化合物及包含该化合物的组合物及其用途
CN109608444B (zh) * 2018-11-27 2022-02-11 中国药科大学 含异吲哚啉酮的erk抑制剂及其制备方法与用途
BR112021018924A2 (pt) * 2019-03-29 2022-02-01 Jiangsu Hengrui Medicine Co Derivado de heterocíclico pirrol, método de preparação do mesmo e aplicação do mesmo em medicamento
CN110950876B (zh) * 2019-12-10 2021-08-17 上海凌达生物医药有限公司 一类呋喃并内酰胺类化合物、制备方法和用途

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