KR20220092872A - 당뇨망막병증을 치료하기 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

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KR20220092872A
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리차드 코레스닉
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Abstract

본 발명은 항-세라미드 항체 및 항체 단편으로 당뇨망막병증 및 안구 염증 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 이전에 당뇨망막병증에 대한 치료를 받았던 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 용량으로 당뇨망막병증을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

Description

당뇨망막병증을 치료하기 위한 방법 및 조성물
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2019년 9월 27일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/907,287호에 대한 우선권을 주장하며, 이의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록에 관한 설명
본 출원과 연관된 서열 목록은 서류 사본 대신에 텍스트 형태로 제공되며, 본원에서 명세서에 참고로 포함된다. 서열 목록의 컴퓨터 판독가능한 포맷 사본: 파일명: CERA-011_01WO_SeqList_ST25.txt, 기록된 날짜: 2020년 9월 28일, 파일 크기 32.9 킬로바이트.
분야
본 발명은 당뇨망막병증의 치료를 위한 항-세라미드 조성물 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
배경
당뇨망막병증(DR)은 눈의 후방에 있는 망막으로 지칭되는 광-민감성 조직 내의 혈관에 영향을 미친다. 이는 당뇨병을 갖는 사람들 사이에서 시력 손실의 가장 일반적인 원인이며 작업-연령 성인 사이에서 시력 손상 및 실명의 선두적인 원인이다. 당뇨망막병증의 결과는 당뇨 황반 부종(DME)으로 지칭되는, 황반으로 지칭되는 망막의 영역에서의 종창이다.
DR 및 DME에 대한 기존의 치료는 항-VEGF 면역요법을 포함하며, 이는 신생혈관 당뇨망막병증(DR) 및 당뇨 황반 부종(DME) 둘 다를 치료시 일부 효능을 갖는다. 그러나, 몇몇 큰 임상 연구는 약 40%의 환자가 항-VEGF 요법에 반응하지 않는다는 것을 드러낸다. 또한, 항-VEGF 치료는 망막 손상의 완전 역전이 어려울 때, 질환에서 매우 늦은 단계에 지시된다.
DR 및 DME에 대한 안전하고 효과적인 치료에 대한 미충족된 필요성이 남아있다.
요약
본 발명은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 또한, 당뇨망막병증에 대해 이전에 치료를 받은 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 용량으로 당뇨망막병증을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 또한, 적어도 2 주 내지 적어도 1 년의 기간이 떨어진 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2 이상의 용량으로 당뇨망막병증을 치료하는 방법이 제공된다. 발명의 다른 양태는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 안구 염증 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다.
일부 실시양태에서, 안구 투여는 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여, 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 투여는 유리체내 투여이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였다. 일부 실시양태에서, 사전 치료는 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함하고, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다.
일부 실시양태에서, 투여는 안구 투여이다. 일부 실시양태에서, 안구 투여는 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안구 투여는 유리체내 투여이다.
일부 실시양태에서, 사전 치료는 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2 이상의 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 2 이상의 용량이 적어도 2 주 떨어진, 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다.
일부 실시양태에서, 투여는 안구 투여이다. 일부 실시양태에서, 안구 투여는 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안구 투여는 유리체내 투여이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였다. 일부 실시양태에서, 사전 치료는 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 안구 염증 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다.
일부 실시양태에서, 안구 투여는 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안구 염증 질환은 망막 혈관신생, 맥락막 혈관신생, 각막 혈관신생, 황반변성, 연령-관련 황반변성, 당뇨망막병증, 유리체 출혈, 망막 출혈, 맥락막염, 신생혈관 녹내장, 맥락막 질환, 모세혈관확장증, 망막 동맥 폐쇄, 망막 정맥 폐쇄, 맥락망막염, 망막전막, 맥락막 신생물, 미숙아 망막증, 낭포 황반 부종, 시각신경유두부종, 재발성 허혈, 눈 출혈 및 증식 유리체망막병증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 안구 투여는 유리체내 투여이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 대상체는 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였다. 일부 실시양태에서, 사전 치료는 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제였다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고 VL은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 scFv이다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화된 6B5(h6B5) 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 h6B5 scFv이다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체, scFv, 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 1 및 43으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44-47로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR3을 포함하고, VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH는 GYTFTNYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GLYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL은 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고 VL은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 scFv이다.
일부 실시양태에서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환을 예방하는 것은 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 개시를 지연시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상은 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 대상체에서 감소된다. 일부 실시양태에서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상은 망막 염증, 무세포 모세혈관 형성, 망막 혈관신생, 망막 내피 세포 사멸, 망막 혈관 투과성, 망막 허혈-재관류 손상, 망막 누수 영역 및 오큘리딘 방해로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상은 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소된다.
일부 실시양태에서, 눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준은 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 염증성 마커는 사이토카인, 성장 인자 및 부착 분자로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 사이토카인은 TNFα, IL-1β, IL-6 또는 MCP1로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 성장 인자는 VEGF이다. 일부 실시양태에서, 부착 분자는 ICAM-1 또는 VCAM-1이다. 일부 실시양태에서, 대상체의 눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준은 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 시력 파라미터는 대조군 대상체의 시력 파라미터 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 시력 파라미터과 비교하여 대상체에서 증가된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 시력 파라미터는 주변시; 야간 시력; 색각; 원거리 시력; 근거리 시력 및 시력 선명도로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 대상체의 눈에서 망막 혈관 투과성은 대조군 대상체의 눈에서의 망막 혈관 투과성 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소된다.
일부 실시양태에서, 대상체의 그룹에서 평균 조기 치료 당뇨망막병증 연구(ETDRS) 등급 스코어는 대조군 대상체의 그룹의 평균 ETDRS 등급 스코어 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 그룹에서의 평균 ETDRS 등급 스코어와 비교하여 적어도 0.2, 적어도 0.5, 적어도 1, 적어도 1.5, 적어도 2 또는 적어도 2.5 낮아진다.
도면의 간단한 설명
도 1은 허혈-재관류(I/R) 손상을 포함하는 당뇨망막병증의 뮤린 모델에서 유리체내 항-세라미드 scFv 투여의 효과를 측정하기 위한 예시적 실험 설계를 나타낸다.
도 2a-2b는 당뇨망막병증의 뮤린 모델에서 망막 허혈-재관류(I/R) 손상을 갖는 마우스에서 유리체내 항-세라미드 scFv 투여의 결과를 나타낸다. 도 2a는 다음 순서로 TNFα, IL-1β, IL6, ICAM-1, VCAM-1, 및 MCP1에 대한 발현에서의 변화를 나타낸다: 사이클로필린 A 발현에 대한 대조군 눈(백색 막대), I/R 눈(흑색 막대), 및 항-세라미드 scFv 투여를 갖는 I/R 눈(회색 막대). 도 2b는 형광 현미경검사 이미지 및 대조군 눈(좌측 패널, 좌측 막대), I/R 눈(중간 패널, 중간 막대) 및 항-세라미드 scFv 투여를 갖는 I/R 눈(우측 패널, 우측 막대)에서의 정량적 막대 그래프 분석을 통해 나타낸 바와 같은 망막 혈관 투과성을 나타낸다. 이미지에서 스케일 바(scale bar)는 50 μm를 나타낸다.
도 3은 당뇨병의 뮤린 모델에서 유리체내 항-세라미드 scFv 투여의 효과를 측정하기 위한 예시적 실험 설계를 나타낸다.
도 4는 당뇨병 래트에서 항-세라미드 scFv 투여의 결과를 나타낸다.
도 5는 당뇨망막병증의 뮤린 모델에서 유리체내 및 전신 항-세라미드 scFv 투여의 효과를 비교하기 위한 예시적 실험 설계를 나타낸다.
도 6은 당뇨망막병증의 뮤린 모델에서 항-세라미드 scFv 투여 및 DHA 투여의 효과를 비교하기 위한 예시적 실험 설계를 나타낸다.
도 7은 DHA-처치된 대조군 마우스에서의 무세포 모세혈관을 나타낸다.
상세한 설명
개요
본 발명은 당뇨망막병증을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편(예를 들어, scFv)의 조성물 및 당뇨망막병증의 치료 또는 예방에서 사용하는 방법이 제공된다. 이러한 조성물 및 방법은 이전에 당뇨망막병증을 위한 다른 치료, 예를 들어 항-VEGF 항체 요법에 실패했던 환자에서 당뇨망막병증의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 항-세라미드 scFv를 유리체내로 투여하기 위한 방법이 제공된다.
정의
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수형 "a", "an" 및 "the"는 내용이 달리 명확히 지시하지 않는 경우, 복수 참조를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "및/또는"은 달리 나타내지 않는 경우, 본 발명에서 "및" 또는 "또는"을 의미하기 위해 사용된다.
본 명세서에 걸쳐, 맥락이 달리 요구하지 않는 경우, 단어 "포함하다", 또는 변형, 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"은 나타낸 요소 또는 정수 또는 요소들 또는 정수들의 그룹을 포함하지만, 임의의 다른 요소 또는 정수 또는 요소들 또는 정수들의 그룹을 배제하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 등가물로서 사용된다. 약/대략이 있거나 없이 본 출원에 사용된 임의의 숫자는 관련 업계의 통상의 기술자에 의해 인식되는 임의의 정상적 변동을 포괄한다는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 나타내지 않거나 맥락으로부터 달리 명백하지 않은 경우, 나타낸 참조 값의 일 방향으로(초과 또는 미만) 10% 이하 이내에 속하는 값의 범위를 지칭한다(이러한 수가 가능한 값의 100%를 초과하거나 가능한 값의 0% 미만에 속하는 경우를 제외함).
용어 "샘플"은 분석 및/또는 변형을 거치는 생물학적 조성물(예를 들어, 세포 또는 조직의 일부)을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 "일차 샘플"이고, 즉 이는 대상체로부터 직접 얻어지고; 일부 실시양태에서, "샘플"은 예를 들어, 특정 구성요소를 제거하고/하거나 관심 특정 구성요소를 단리시키거나 정제하기 위한 일차 샘플의 처리의 결과이다.
용어 "대상체"는 동물, 예컨대 포유동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 영장류이다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 인간이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 가축, 예컨대 소, 양, 염소, 젖소, 돼지 등; 또는 길들여진 동물, 예컨대 개 및 고양이이다. 일부 실시양태에서(예를 들어, 특히 연구 맥락에서), 대상체는 설치류(예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터), 토끼, 영장류, 또는 돼지, 예컨대 근친교배 돼지 등이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 신생아, 청소년, 또는 성인일 수 있다. 특히 관심 있는 것은 포유동물 대상체이다. 본 방법으로 치료될 수 있는 포유동물 종은 개 및 고양이; 말; 소; 양 등 및 영장류, 특히 인간을 포함한다. 동물 모델, 특히 소형 포유동물(예를 들어, 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터, 토끼 등)이 실험 조사를 위해 사용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는", 또는 "개선하는"은 치료적 치료 또는 예방적/방지적 치료를 지칭한다. 치료는 치료를 받은 개체에서 질환의 적어도 하나의 증상이 개선되거나 치료가 개체에서 진행성 질환의 악화를 지연시킬 수 있거나, 추가 연관 질환의 개시를 예방할 수 있는 경우, 치료적이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유효량"은 특정 생리학적 효과를 야기하기 위해 요구되는 약제 또는 조성물의 최소량을 지칭한다. 특정 약제의 유효량은 약제의 특성, 예컨대 질량/부피, 세포/부피의 #, 입자/부피, (약제의 질량)/(대상체의 질량), 세포/(대상체의 질량)의 #, 또는 입자/(대상체의 질량)을 기초로 한 다양한 방식으로 나타낼 수 있다. 특정 약제의 유효량은 또한 반-최대 효과 농도(EC50)로서 나타낼 수 있으며, 이는 기준 수준과 최대 반응 수준 사이에 절반인 특정 생리학적 반응의 정도를 야기하는 약제의 농도를 지칭한다.
용어 "항체"는 Ig 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 하나의 에피토프 인식 부위를 통해 특정 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있는 면역글로불린(Ig) 분자를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어는 온전한 다클론성 또는 단클론성 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 천연 면역글로불린 분자는 2 개의 중쇄 폴리펩티드 및 2 개의 경쇄 폴리펩티드로 구성된다. 중쇄 폴리펩티드 각각은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 사이의 쇄간 이황화 결합에 의해 경쇄 폴리펩티드와 연합되어, 2 개의 헤테로다이머 단백질 또는 폴리펩티드(즉, 2 개의 비상동 폴리펩티드 쇄로 구성된 단백질)를 형성한다. 그 다음에, 2 개의 헤테로다이머 단백질은 중쇄 폴리펩티드 사이의 추가 쇄간 이황화 결합에 의해 연합되어, 면역글로불린 단백질 또는 폴리펩티드를 형성한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원-결합 단편"은 관심 항원의 적어도 하나의 에피토프에 결합하는 면역글로불린 중쇄 및/또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성-결정 영역(CDR)을 함유하는 폴리펩티드 단편을 지칭한다. 이와 관련하여, 본원에 기재된 항체의 항원-결합 단편은 세라미드에 특이적으로 결합하는 항체로부터의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 개 전부의 CDR을 포함할 수 있다. 항원-결합 단편은 전장 항체의 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역, 예컨대 Fab, F(ab')2, Fab', Fv 단편, 미니바디, 디아바디, 단일 도메인 항체(dAb), 단일-쇄 가변 단편(scFv), 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체, 및 요구되는 특이성의 항원-결합 부위 또는 단편을 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함하는 단백질을 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 온전한 항체 이외의 항원-결합 단편이 사용되어, 조직 침투 또는 종양 침투를 증가시킨다. 다른 실시양태에서, 항원-결합 단편은 추가로 변형되어, 혈청 반감기를 증가시킨다.
"Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"은 세포 상의 Fc 수용체 및/또는 보체의 C1q 구성요소에 결합하여, 항체의 이펙터 기능을 매개할 수 있는 항체의 부분에 대응하거나 이로부터 유래된 폴리펩티드 서열을 지칭한다. Fc는 단백질 결정을 용이하게 형성할 항체의 단편인 "단편 결정질"을 나타낸다. 본래 단백질 가수분해에 의해 기재된 별개의 단백질 단편은 면역글로불린 단백질의 전체 일반 구조를 정의할 수 있다. 본래 문헌에 정의된 바와 같이, Fc 영역은 이황화 결합에 의해 연합되고, 각각 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 2 개의 폴리펩티드를 포함하는 호모다이머 단백질이다. 그러나, 더욱 최근에는 상기 용어는 CH3, CH2, 및 이러한 제2 쇄와 이황화-연결된 다이머를 형성하기에 충분한 힌지의 적어도 일부로 구성된 단일쇄 모노머 구성요소에 적용되어 왔다. 이와 같이, 맥락에 따라, 용어 "Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"의 사용은 본원에서 다이머 형태 또는 다이머 단백질을 형성하기 위해 연합되는 개별 모노머를 지칭할 것이다. 면역글로불린 구조 및 기능의 검토를 위해 Putnam, The Plasma Proteins, Vol. V (Academic Press, Inc., 1987), pp. 49-140; 및 Padlan, Mol. Immunol. 31:169-217, 1994를 참고한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 Fc 도메인은 천연 발생 서열의 변이체를 포함한다.
용어 "면역글로불린 불변 영역" 또는 "불변 영역"은 면역글로불린의 하나 이상의 불변 도메인(예를 들어, CH1, CH2, CH3)의 일부 또는 전부에 대응하거나 이로부터 유래되는 펩티드 또는 폴리펩티드 서열을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 불변 영역은 CH1 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 불변 영역을 구성하는 불변 도메인은 인간이다.
용어 "경쇄 가변 영역"("경쇄 가변 도메인" 또는 "VL"로도 지칭됨) 및 "중쇄 가변 영역"("중쇄 가변 도메인" 또는 "VH"로도 지칭됨)은 각각 항체 경쇄 및 중쇄로부터의 가변 결합 영역을 지칭한다. 가변 결합 영역은 "상보성 결정 영역"(CDR) 및 "프레임워크 영역"(FR)으로 알려진 별개의 잘 정의된 하위-영역으로 구성된다.
용어 "면역글로불린 경쇄 불변 영역"("경쇄 불변 영역" 또는 "CL"로도 지칭됨)은 항체 경쇄로부터의 불변 영역이다.
용어 "면역글로불린 중쇄 불변 영역"("중쇄 불변 영역" 또는 "CH"로도 지칭됨)은 항체 중쇄로부터의 불변 영역을 지칭한다. CH는 항체 아이소타입에 따라 CH1, CH2, 및 CH3(IgA, IgD, IgG), 또는 CH1, CH2, CH3, 및 CH4 도메인(IgE, IgM)으로 추가로 분류가능하다.
용어 "F(ab)"는 효소 펩신에 의한 IgG 분자의 단백질 가수분해 절단으로부터 야기된 2 개의 단백질 단편을 지칭한다. 각각의 F(ab)는 VH 쇄 및 VL 쇄의 공유결합 헤테로다이머를 포함하고 온전한 항원-결합 부위를 포함한다. 각각의 F(ab)는 1가 항원-결합 단편이다. 용어 "Fab'"는 F(ab')2로부터 유래된 단편을 지칭하고 Fc의 작은 부분을 함유할 수 있다. 각각의 Fab의 단편은 1가 항원-결합 단편이다.
용어 "F(ab')2"는 효소 펩신에 의한 단백질 가수분해 절단에 의해 생성된 IgG의 단백질 단편을 지칭한다. 각각의 F(ab')2 단편은 2 개의 F(ab') 단편을 포함하고 따라서 2가 항원-결합 단편이다.
"Fd 단편"은 VH 및 CH1 도메인을 포함한다.
"Fv 단편"은 비-공유결합 VH::VL 헤테로다이머를 지칭하며, 이는 천연 항체 분자의 많은 항원 인식 및 결합 능력을 함유하는 항원-결합 부위를 포함하지만, Fab 내에 함유된 CH1 및 CL 도메인이 결여된다. Inbar et al. (1972) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 69:2659-2662; Hochman et al. (1976) Biochem 15:2706-2710; 및 Ehrlich et al. (1980) Biochem 19:4091-4096. 일부 실시양태에서, Fv 단편은 IgM의 우선적 단백질 가수분해 절단에 의해 생산될 수 있고, 드물게는 IgG 또는 IgA 면역글로불린 분자가 생산될 수 있다. 그러나, Fv 단편은 당업계에 알려진 재조합 기술을 사용하여 더욱 일반적으로 유래된다.
"dAb 단편"(Ward et al., Nature 341:544 546, 1989)은 VH 도메인을 포함한다.
"단일-쇄 항체" 또는 "scFv"는 10 내지 약 25 개 아미노산의 짧은 링커 펩티드로 연결된 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질이다. 링커는 유동성을 위한 글리신뿐 아니라, 가용성을 위한 세린 또는 트레오닌이 풍부할 수 있고, VH의 N-말단을 VL의 C-말단과, 또는 그 반대로 연결할 수 있다. scFv는 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고, 본래 면역글로불린의 특이성을 유지한다. 본 발명에서, 항체 또는 이의 항체 단편 또는 용도의 임의의 언급은 scFv 분자 및 이의 용도를 포함하는 것으로 의도된다.
"미니바디"는 CH3 도메인에 결합된 scFv를 포함하는 융합 단백질을 지칭하며 또한 본원에 포함된다(S. Hu et al., Cancer Res., 56, 3055-3061, 1996). 예를 들어, Ward, E. S. et al., Nature 341, 544-546 (1989); Bird et al., Science, 242, 423-426, 1988; Huston et al., PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988); PCT/US92/09965호; WO94/13804호; P. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 6444-6448, 1993; Y. Reiter et al., Nature Biotech, 14, 1239-1245, 1996; S. Hu et al., Cancer Res., 56, 3055-3061, 1996을 참고한다.
용어 "디아바디"는 VH 및 VL 도메인이 너무 짧은 링커를 사용하여 단일 폴리펩티드 쇄에서 발현되어, 동일한 쇄 상의 2 개의 도메인 사이를 페어링시켜, 도메인을 다른 쇄의 상보성 도메인과 페어링시키고 2 개의 항원-결합 부위를 생성하는 이중특이적 항체를 지칭한다(예를 들어, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993) 및 Poljak et al., Structure 2:1121-23 (1994) 참고).
용어 "나노바디" 또는 "단일 도메인 항체"는 단일 모노머 가변 항체 도메인으로 구성된 항원-결합 단편을 지칭한다. 나노클론 방법은 B-세포의 자동화된 고-처리량 선택을 기초로 하여 소망하는 표적에 대한 나노바디를 생성하기 위한 방법이다. (WO 2006/079372호 참고).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 상당한 동종 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하며, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 적은 양으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 나머지 쇄(들)가 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 상동성인 단클론성 항체뿐 아니라, 이들이 소망하는 생물학적 활성을 나타낼 만큼 긴 이러한 항체의 단편을 지칭한다.
용어 "단일쇄 가변 단편" 또는 "scFv"는 10 내지 약 25 개 아미노산의 짧은 링커 펩티드로 연결된 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질을 지칭한다. Huston et al. (1988) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85(16):5879-5883. 링커는 VH의 N-말단을 VL의 C-말단과, 또는 그 반대로 연결할 수 있다. 항원-결합 부위의 구조와 상당히 유사한 3 차원 구조로 폴딩될, 천연 응집된-그러나, 화학적으로 분리된-경쇄 및 중쇄 폴리펩티드를 항체 V 영역으로부터 scFv 분자로 전환하기 위한 화학적 구조를 파악하기 위한 다수의 방법이 기재되어 왔다. 예를 들어, Huston et al.에 대한 미국 특허 제5,091,513호 및 제5,132,405호; 및 Ladner et al.에 대한 미국 특허 제4,946,778호를 참고한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CDR"은 면역글로불린(항체) 분자의 "상보성 결정 영역"을 지칭한다. CDR은 항체가 이의 특이적 항원에 결합하는 항체 내의 가변 도메인의 부분이다. 가변 도메인 당 3 개의 CDR(즉, 경쇄의 가변 도메인 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 중쇄의 가변 도메인 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3)이 있다. 가변 도메인 내에서, CDR1 및 CDR2는 폴리펩티드 쇄의 가변(V) 영역에서 발견되고, CDR3은 최고 가변성을 나타내며, 이는 그것이 경쇄 영역의 경우에 VJ 및 중쇄 영역의 경우에 VDJ의 재조합에 의해 코딩되기 때문이다.
"단리된 항체"는 (1) 다른 천연-연합된 항체를 포함하여 천연-연합된 구성요소와 연합되지 않고, 이를 이의 천연 상태로 수반하거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 단백질이 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연에서 발생하지 않는 항체이다.
용어 "인간 항체"는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 및 불변 영역을 갖는 모든 항체를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 가변 및 불변 도메인 전부는 인간 면역글로불린 서열(완전 인간 항체)로부터 유래된다. 이들 항체는 하기 기재된 바와 같이 다양한 방식으로 제조될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간화된"은 원래 비-인간 항체의 항원-결합 특성을 유지하는 비-인간 종으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항체의 결합 단편(예를 들어, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, Fab, scFv)은 인간화된다. 비-인간 항원-결합 단편은 "재성형(reshaping)"(Verhoeyen, et al., 1988 Science 239:1534-1536; Riechmann, et al., 1988 Nature 332:323-337; Tempest, et al., Bio/Technol 1991 9:266-271), "하이퍼키메라화(hyperchimerization)"(Queen, et al., 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86:10029-10033; Co, et al., 1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873; Co, et al., 1992 J Immunol 148:1149-1154), 및 "비니어링(veneering)"(Mark, et al., "Derivation of therapeutically active humanized and veneered 항-CD18 antibodies." In: Metcalf BW, Dalton BJ, eds. Cellular adhesion: molecular definition to therapeutic potential. New York: Plenum Press, 1994: 291-312)을 포함한 CDR 이식(Jones et al., Nature 321:522 (1986))으로 알려진 기술 및 이의 변형을 사용하여 인간화될 수 있다. 비-인간 공급원으로부터 유래된 경우, 항체의 다른 영역, 예컨대 힌지 영역 및 불변 영역 도메인이 또한 인간화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약학적 허용"은 일반적으로 당업계에 잘 알려진 경로를 사용하여 투여될 때, 알레르기 또는 다른 심각한 역반응을 생산하지 않는 분자 독립체 및 조성물을 지칭한다. 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 동물, 및 더욱 구체적으로 인간에서 사용하기 위해 다른 일반적으로 인식된 약전에 열거된 분자 독립체 및 조성물은 "약학적 허용"인 것으로 고려된다.
용어 "예방하다", "예방", 및 "예방적으로"는 질환의 개시 전(예를 들어, 질환의 특정 증상의 개시 전)의 화합물, 예를 들어 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여를 지칭한다. 질환을 예방하는 것은 질환이 발생할 가능성을 감소시키는 것, 질환의 개시를 지연시키는 것, 장기 증상을 개선하는 것, 또는 질환의 궁극적 진행을 지연시키는 것을 포함할 수 있다.
본원에서, 용어 "특이적으로 결합하다"는 적어도 105 M-1의 결합 친화도(Ka)로 표적 항원에 결합하는 한편, 혼합물에 존재하는 다른 구성요소 또는 항원에 상당히 결합하지 않는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 능력을 지칭한다. 본원에서 항-세라미드 항체에 대한 참고는 세라미드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "서열 동일성"은 2 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 또는 2 이상의 폴리펩티드 서열 사이의 관련성을 지칭한다. 하나의 서열 내의 위치가 비교기 서열의 대응하는 위치에서의 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기에 의해 채워질 때, 서열은 상기 위치에서 "동일한" 것으로 지칭된다. % 서열 동일성은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 양측 서열에서 발생하는 위치의 수를 결정하여, 동일한 위치의 수를 산출함으로써 계산된다. 그 다음에, 동일한 위치의 수는 비교 윈도우에서 위치의 총 수로 나누어지고 100을 곱하여, 서열 동일성의 %를 산출한다. % 서열 동일성은 비교 윈도우에 대해 2 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된다. 폴리뉴클레오티드 서열에 대한 비교 윈도우는 예를 들어, 길이가 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000 개 이상 핵산일 수 있다. 폴리펩티드 서열에 대한 비교 윈도우는 예를 들어, 길이가 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300 개 이상 아미노산일 수 있다. 비교를 위해 서열을 최적으로 정렬하기 위해, 비교 윈도우에서 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 부분은 갭(gap)으로 지칭되는 첨가 또는 결실을 포함할 수 있는 한편, 기준 서열은 불변으로 유지된다. 최적 정렬은 갭을 가짐에도 불구하고 기준 및 비교기 서열 사이에 "동일한" 위치의 최대 가능 수를 생산하는 정렬이다. 2 개의 서열 사이의 % "서열 동일성"은 2004년 9월 1일자의 것과 같은 미국 국립생물정보센터(National Center for Biotechnology Information)로부터 이용가능하였던 프로그램 "BLAST 2 Sequences"의 버전을 사용하여 결정될 수 있으며, 프로그램은 프로그램 BLASTN(뉴클레오티드 서열 비교용) 및 BLASTP(폴리펩티드 서열 비교용)를 포함하고, 프로그램은 Karlin 및 Altschul(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993)의 알고리즘을 기초로 한다. "BLAST 2 Sequences"를 이용할 때, 2004년 9월 1일자의 것과 같은 기본 파라미터였던 파라미터가 문자 크기(3), 오픈 갭 페널티(open gap penalty)(11), 연장 갭 페널티(extension gap penalty)(1), 갭 드롭오프(gap dropoff)(50), 예상값(10) 및 비제한적으로, 매트릭스 옵션을 포함한 임의의 다른 요구되는 파라미터에 대해 사용될 수 있다. 2 개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열은 2 개의 서열이 서로에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 경우, "상당히 유사한 서열 동일성" 또는 "상당한 서열 동일성"을 갖는 것으로 고려된다.
"혈관신생"은 새로운 혈관의 형성을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "안구" 또는 "안구로"는 눈 및 주변 조직에 대한 의약의 투여를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 안구 투여는 국부 투여(예컨대, 눈의 표면, 예를 들어 공막에 대한 투여), 안구내 투여, 결막하(예컨대, 안구 결막 아래 또는 눈꺼풀의 결막 내벽 아래 투여), 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여, 또는 유리체내 투여를 포함한다.
항-세라미드 항체, 항체 단편, 및 유도체
본 발명의 당뇨망막병증의 치료를 위한 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 세라미드는 왁스형 지질 분자의 패밀리이다. 세라미드는 스핑고신 및 지방산으로 구성된다. 세라미드는 진핵 세포의 세포막 내에서 높은 농도로 발견되며, 이는 이들이 지질 이중층에서 주요 지질 중 하나인 스핑고마이엘린을 구성하는 구성요소 지질이기 때문이다. 세라미드는 세포의 분화, 증식, 및 프로그래밍된 세포 사멸(PCD) 조절을 포함한 다양한 세포 시그널링에 참여한다. 생체작용 지질로서, 세라미드는 아폽토시스, 세포 성장 저지, 분화, 세포 노화, 세포 이동 및 부착을 포함한 다양한 생리학적 기능에 연루되었음이 나타났다. 세라미드 및 이의 후속 대사물질에 대한 역할은 또한 암, 신경퇴행, 당뇨병, 미생물 발병, 비만, 및 염증을 포함한 다수의 병리학적 상태에서 제시되어 왔다.
예시적 항-세라미드 항체의 서열 및 특성은 또한 미국 특허 공보 제2010/0239572호 및 제2017/0335014호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 예시적 항-세라미드 항체의 서열이 표 1에 제공된다. 그러나, 임의의 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 개시된 방법 및 용도에 따라 이용될 수 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화된 6B5(h6B5)이다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, h6B5 항체의 서열은 2020년 3월 18일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/991,232호에서 제공되며, 이의 내용은 본원의 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 포함된다. h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 CDR 각각에 대한 서열은 본 명세서에 걸쳐 개시되며, 하기 표 2에 요약된다.
Figure pct00004
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체는 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 재조합 항체, 또는 합성 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항원-결합 항체 단편은 상술한 것 중 어느 하나의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항원-결합 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, Fd 단편, dAb 단편, 디아바디, scFv 등이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 재조합 DNA 기술을 사용하여 생산된다. 재조합 단백질의 발현 및 정제를 위한 절차는 당업계에 잘 수립되어 있다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시양태에서, scFv는 2A2, h2A2, 6C8, 7B10, 9H10, h6B5, 또는 6B5 항체의 CDR 서열 및/또는 가변 쇄 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허 공보 제2010/0239572호에 기재된 바와 같은 2A2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허 공보 제2017/0335014호에 기재된 바와 같은 6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 발명의 h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 scFv이다. 일부 실시양태에서, scFV는 표 1에 개시된 항체 중 임의의 것의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 2A2의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 6B5의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 h6B5의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 h2A2의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 6B5의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, scFv는 h6B5의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 면역글로불린 아이소타입을 갖는다. 면역글로불린은, 비제한적으로, IgA, 분비성 IgA, IgG 및 IgM을 포함한 일반적으로 알려진 아이소타입 중 임의의 것으로부터의 것일 수 있다. IgG 아이소타입은 특정 종에서 서브클래스로 분류된다: 인간에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, 및 마우스에서 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 영역에서 하나 이상의 변형을 포함한다. 특정 변형은 소망하는 이펙터 기능 또는 혈청 반감기를 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 적절한 Fc 영역으로, 세포 표면 상에 결합된 네이키드(naked) 항체는 예를 들어, 항체-의존적 세포독성(ADCC)을 통해 또는 보체 의존적 세포독성(CDC)에서 보체를 모집함으로써, 또는 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식하는 하나 이상의 이펙터 리간드를 발현하는 비특이적 세포독성 세포를 모집함으로써 세포독성을 유도하고 이어서 항체 의존적 세포-매개된 식세포작용(ADCP), 또는 일부 다른 메커니즘에서 표적 세포의 식세포작용을 야기할 수 있다. 이펙터 기능을 제거하거나 감소시켜, 부작용 또는 치료 합병증을 최소화하는 것이 바람직한 경우, 특정 다른 Fc 영역이 사용될 수 있다. 항체의 Fc 영역은 변형되어, FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시켜 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 대안적으로, Fc 영역은 혈청 반감기를 증가시키기 위한 PEG 또는 알부민, 또는 소망하는 효과를 야기하는 일부 다른 접합체에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능 표지 또는 태그를 포함한다. 예시적 검출가능 표지는 형광 태그, 친화도 태그, 방사성 동위원소, 발광 마커, 미립자 표지, 발색단, 인광성 마커, 및 효소 표지를 포함한다. 예시적 형광 표지는 GFP, RFP, 및 YFP를 포함한다. 예시적 효소 표지는 호스래디시 퍼옥시다아제 및 알칼리 포스파타아제를 포함한다. 예시적 펩티드 태그는 His-tag, MBP, 및 스트렙타비딘을 포함한다.
검출 수단은 선택된 표지에 의해 결정된다. 표지 또는 이의 반응 생산물의 출현은 표지가 미립자이고 적절한 수준에서 축적되는 경우에 맨눈을 사용하여, 또는 기구, 예컨대 분광광도계, 루미노미터, 형광광도계를 사용하여, 또는 ELISA 또는 웨스턴 블롯(Western blot)에 의해 달성될 수 있다.
당뇨망막병증
일부 실시양태에서, 본 발명은 당뇨망막병증을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 당뇨망막병증은 진성 당뇨병으로 인해 망막에 대해 손상이 발생하는 의학적 병태를 지칭한다. 당뇨병으로부터의 만성적 고혈당은 망막에서의 작은 혈관에 대한 손상과 연관되어, 당뇨망막병증을 야기한다. 당뇨망막병증은 망막에서의 혈관이 유체 또는 출혈을 누수시키도록 야기하여, 시야를 왜곡시킨다. 이의 대부분의 후기 단계에서는, 새로운 비정상 혈관이 망막의 표면 상에 증식하며, 이는 망막에서 흉터 및 세포 손실을 야기할 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시된 방법 및 조성물이 사용되어, 당뇨망막병증의 상이한 단계를 치료할 수 있다. 당뇨망막병증은 초기 단계로도 지칭되는 비-증식 단계, 및 후기 단계로도 지칭되는 증식 단계를 통해 진행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 비-증식 단계 동안 당뇨망막병증을 치료하기 위해 사용될 수 있는 방법 및 조성물을 제공한다. 비-증식성 당뇨망막병증(NPDR)은 경증, 중등증, 또는 중증일 수 있다. 경증 NPDR은 망막의 혈관에서의 미세동맥류가 특징이다. 이들 미세동맥류는 망막 내로 유체를 누수시킬 수 있다. 질환이 중등증 NPDR 단계로 진행될수록, 망막 혈관은 왜곡되고 혈액을 수송하는 이들의 능력이 소실되어, 망막의 외관에 대한 특징적 변화를 야기할 수 있고 당뇨 황반 부종에 기여할 수 있다. 중증 NPDR 단계에서, 더욱 많은 혈관이 차단되고, 망막의 영역에 대한 혈액 공급을 박탈한다. 그 다음에, 이들 영역은 친-혈관신생 성장 인자를 분비한다. 눈에서의 혈관신생 분자는 VEGF, FGF, PlGF, TGF-알파, TGF-베타, IGF, PDGF, MMP, HGF/SF, TNF-알파, CTGF, IL-1, IL-8, MCP-1, 렙틴, 인테그린, 및 안지오제닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 당뇨망막병증의 하나 이상의 마커를 예방 또는 감소시키는 것이 특징이다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 망막 미세동맥류, 망막액 누수, 당뇨 황반 부종, 및/또는 망막 친-혈관신생 성장 인자의 수준을 예방, 감소, 억제, 또는 하락시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, VEGF, FGF, PlGF, TGF-알파, TGF-베타, IGF, PDGF, MMP, HGF/SF, TNF-알파, CTGF, IL-1, IL-8, MCP-1, 인테그린, 및 안지오제닌 중 하나 이상은 본 방법에 의해 감소된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 증식 단계 동안 당뇨망막병증을 치료하기 위해 사용될 수 있는 방법 및 조성물을 제공한다. 증식성 당뇨망막병증(PDR)은 질환의 후기 단계이다. 이 단계에서, 망막에 의해 분비된 친-혈관신생 성장 인자는 새로운 혈관의 증식을 촉발시키며, 이는 망막의 내면을 따라 유리체 겔 내로 성장한다. 새로운 혈관은 허술하고 더욱 누수 및 출혈 가능성이 있다. 수반된 흉터 조직이 수축하고 망막 박리(즉, 기저 조직으로부터 망막의 떨어짐)를 야기할 수 있으며, 이는 영구적 시력 손실을 야기할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 망막 혈관신생, 망막 출혈, 망막 흉터, 망막 박리, 및 시력 손실의 수준을 예방, 감소, 억제, 또는 하락시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 당뇨망막병증의 개시 전, 예를 들어 이의 하나 이상의 증상의 개시 전에 당뇨병 대상체에 대한 투여에 의해 당뇨망막병증을 예방하기 위해 사용될 수 있는 방법 및 조성물을 제공한다. 가장 일관된 위험 인자 중에서, 당뇨병의 기간이 망막병증의 발생 및 진행에 대한 강한 예측변수이다. 어린-개시 당뇨병을 갖는 환자 중에서, 유병률은 대략 3 세에서 8%, 5 세에서 25%, 10 세에서 60%, 및 15 세에서 80%로 추정된다. 일부 실시양태에서, 개시된 방법 및 조성물이 사용되어, 예를 들어 당뇨병이 발생 후 3 세 초과, 5 세 초과, 10 세 초과, 또는 15 세 초과까지 당뇨망막병증의 개시를 지연시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시된 방법 및 조성물은 당뇨망막병증 발생 위험이 있는 대상체, 예를 들어 당뇨망막병증의 발생과 연관된 하나 이상의 위험 인자를 갖는 대상체에서 당뇨망막병증을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 고혈당증, 고혈압, 고지혈증, 및 신장 질환은 상당한 위험 인자이다. 남성 성별, 당뇨병의 높은 중증도(알약 단독에 대한 인슐린 및 경구 당뇨병 치료의 사용 또는 무치료에 대한 알약 단독의 사용에 의해 나타냄), 높은 평균 최대 혈압, 및 높은 헤모글로빈 A1c가 고려될 추가 인자이다.
증상 및 검출
일부 실시양태에서, 본 방법은 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상 및/또는 검출가능 마커에 영향을 미칠 수 있다. 당뇨망막병증의 초기, 비-증식 단계는 보통 증상을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 방법 및 조성물은 당뇨망막병증의 증상의 개시 전에 당뇨병 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 질환은 보통 그것이 시력에 영향을 미칠 때까지 간과된 채로 진행된다. 질환의 초기 단계 동안 망막 혈관으로부터의 출혈은 "떠있는" 반점의 출현을 야기할 수 있으며, 이는 저절로 사라질 수 있다. 즉각적 치료가 없으면, 출혈은 보통 재발하여, 영구 시력 손실의 위험을 증가시킨다. 당뇨 황반 부종이 발생하는 경우, 이는 흐려진 시야를 야기할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 떠있는 반점, 망막 출혈, 시력 손실, 및/또는 흐려진 시야의 발생률, 중증도, 또는 수준을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 비제한적으로, 전체 시력, 주변시, 야간 시력, 색각, 원거리 시력, 근거리 시력, 및 시력 선명도를 포함한 시력의 하나 이상의 파라미터가 본 방법에 의해 개선될 수 있다.
당뇨망막병증 및 당뇨 황반 부종은 시력 검사(다양한 거리에서 보는 대상체 능력을 측정하기 위한 시력 검사표 검사); 안압측정(눈 내부의 압력의 측정); 동공 확장; 및 광 간섭 단층촬영(OCT)을 포함하는 종합 눈 검사 동안 검출될 수 있다. 이러한 검사 동안, 의사는 새로운 혈관 형성, 종창, 및 출혈을 포함한 망막 혈관에서의 변화; 망막 혈관 누수 또는 누수 혈관의 경고 징후, 예컨대 지방 침전물, 약화된 혈관벽, 및 혈관벽의 불룩함; 황반의 종창; 곡률에서의 변화 또는 백내장을 포함한 수정체에서의 변화; 및 신경 조직에 대한 손상 중 하나 이상에 대해 확인할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 당뇨망막병증의 이들 증상 중 하나 이상을 갖는 대상체를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 이들 중상 중 어느 하나 이상을 예방, 치료, 또는 개선할 수 있다. 당뇨 황반 부종 또는 중증 당뇨망막병증이 의심되는 경우, 플루오레세인 혈관조영술이 사용되어, 손상되거나 누수된 혈관을 찾을 수 있다. 이 검사에서, 형광 염료는 혈류 내로, 보통 팔 정맥 내로 주사된다. 염료가 눈에 도달할 때, 망막 혈관의 사진이 촬영된다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 눈에서 손상되고/되거나 누수된 혈관의 발생률, 유병률, 또는 중증도를 예방 또는 저하시키기 위해 사용될 수 있다.
당뇨망막병증에 대한 기존의 치료는 항-VEGF 요법, 스테로이드, 레이저 수술, 및 유리체절제술을 포함한다.
항-VEGF 주사 요법. 항-VEGF 약물은 유리체 겔 내로 주사되어, 친-혈관신생 성장 인자 VEGF의 작용을 차단한다. VEGF 차단은 비정상 혈관 성장을 역전시키고 망막에서 유체를 감소시킬 수 있다. 이용가능한 항-VEGF 약물은 Avastin®(베바시주맙), Lucentis®(라니비주맙), 및 Eylea®(애플리버셉트)를 포함한다. Lucentis®(라니비주맙) 및 Eylea®(애플리버셉트)는 당뇨 황반 부종을 치료하기 위해 미국 식품의약국(FDA)에 의해 승인되어 있다. Avastin®(베바시주맙)은 암을 치료하기 위해 FDA에 의해 승인되었지만, 보통 당뇨 황반 부종을 포함한 눈 병태를 치료하기 위해 사용된다. 대부분의 사람들은 치료의 첫번째 6 개월 동안 매월 항-VEGF 주사를 요구한다. 그 후에, 주사는 덜 빈번하게 필요하다: 통상적으로 치료의 두번째 6 개월 동안 3 내지 4 회, 치료의 2 차 년도 동안 약 4 회, 3 차 년도에 2 회, 4 차 년도에 1 회, 및 5 차 년도에 없음. 최근 연구는 항-VEGF 치료가 당뇨 황반 부종을 치료하고 PDR을 포함한 당뇨망막병증의 진행을 늦추는데 효과적일 수 있어, 항-VEGF가 PDR에 대한 일선 치료로서 증가적으로 사용된다는 것을 나타내었다. 그러나, 몇몇 큰 임상 연구는 약 40%의 환자가 항-VEGF 요법에 반응하지 않는다는 것을 드러낸다. 또한, 항-VEGF 치료는 망막 손상의 완전 역전이 어려울 때, 질환에서 매우 늦은 단계에 지시된다.
레이저 수술. 초점/격자 황반 레이저 수술에서, 일부 내지 수백개의 작은 레이저 화상이 황반의 중심 근처의 부종의 영역에서 누수 혈관에 제조된다. 당뇨 황반 부종에 대한 레이저 화상은 유체의 누수를 늦춰, 망막에서 종창을 감소시킨다. 절차는 보통 하나의 세션에서 완료되지만, 일부 환자는 1 회 초과의 치료가 필요할 수 있다. 초점/격자 레이저 치료는 항-VEGF 요법과 조합되어 사용될 수 있다. 예를 들어, 초점/격자 레이저 치료는 때때로 항-VEGF 주사 전에, 때때로 항-VEGF 주사와 동일한 날에 또는 그 며칠 후에, 및 때때로 당뇨 황반 부종이 항-VEGF 요법의 6 개월 후 충분히 개선시키는데 실패할 때에만 적용된다.
PDR은 또한 때때로 범망막 레이저 수술 또는 범망막 광응고술로 지칭되는 산발 레이저 수술로 치료될 수 있다. 치료는 황반으로부터 떨어진 망막의 영역에서 1,000 내지 2,000 개의 작은 레이저 화상을 제조하는 것을 포함한다. 이들 레이저 화상은 비정상 혈관이 수축하도록 야기하는 것으로 의도된다. 치료는 하나의 세션에서 완료되지만, 2 회 이상의 세션이 때때로 요구된다. 이는 중심시를 보존할 수 있는 한편, 산발 레이저 수술은 측면(주변), 색, 및 야간 시력의 일부 손실을 야기할 수 있다. 산발 레이저 수술은 새로운 허술한 혈관이 출혈되기 시작하기 전에 가장 잘 작동한다.
코르티코스테로이드. 코르티코스테로이드는 단독으로 또는 당뇨 황반 부종을 치료하기 위한 다른 약물 또는 레이저 수술과 조합되어 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드는 눈 내로 주사되거나 이식될 수 있다. Ozurdex®(덱사메타손) 이식은 단기 사용을 위한 것인 한편, Iluvien®(플루오시놀론 아세토나이드) 이식은 더 오래 지속된다. 둘 다는 생물분해성이고 지효성 용량의 코르티코스테로이드를 방출하여, 당뇨 황반 부종을 억제한다.
유리체절제술. 유리체절제술은 눈의 중심에서 유리체 겔의 수술적 제거이다. 절차는 유리체 내의 중증 출혈을 치료하기 위해 사용되고, 국소 또는 전신 마취 하에 수행된다. 투명 염 용액이 하나 이상의 포트를 통해 눈 내로 부드럽게 펌핑되어, 수술 동안 안압을 유지하고 제거된 유리체를 대체한다. 유리체절제술 동안 사용된 동일한 기구가 또한 사용되어, 흉터 조직을 제거하거나 박리된 망막을 복구할 수 있다.
당뇨망막병증에서 세라미드 및 ASM의 역할
어느 하나의 이론에 구애됨 없이, 본 치료는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 안구 치료를 통해 망막에서 세라미드를 선택적으로 억제함으로써 망막 염증을 하향조절할 수 있다.
스핑고지질은 막 마이크로도메인의 주요한 구성요소를 나타내고, 세라미드-풍부화된 마이크로도메인은 염증성 사이토카인 시그널링에 대한 전제조건인 것으로 나타난다. 산 스핑고마이엘리나아제(ASM) 및 중성 스핑고마이엘리나아제(NSM)는 스핑고지질 대사의 핵심 조절 효소이고, 전염증성 세라미드로의 스핑고마이엘린 가수분해를 촉진한다. ASM은 염증성 사이토카인 시그널링에서 중요한 초기 반응인자이다. 스핑고마이엘리나아제 경로는 인간 망막 내피 세포(HREC), 당뇨망막병증에 의해 영향을 받은 상주 혈관구조에서 염증성 시그널링을 위해 중요하다. 염증성 사이토카인 TNFα 및 IL-1β는 세포 부착 분자(CAM) 발현 및 ASM에서의 신속한 증가 및 HREC에서의 NSM 활성을 유도한다.
이전의 연구는 예를 들어, ASM-/- 마우스 모델 및 ASM 억제제, 예컨대 DHA 및 이미프라민을 사용하여 당뇨망막병증에서 ASM 활성의 중요성을 나타내었다. 이러한 유전자 녹아웃(knockout) 모델 및 항-ASM 억제제 투여는 망막 염증성 마커를 감소시켰다. Fox et al., Diabetes 2006;55(12):3573-80; Opreanu et al., Diabetes 2011;60(9):2370-8; Opreanu et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science 2010;51(6):3253-63; 및 Chakravarthy et al., Stem Cells 2016; 34:972-83을 참고하며, 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
그러나, ASM은 필요한 효소이며, 이의 결여 또는 억제는 니만-피크(Niemann-Pick) 질환을 야기할 수 있고, 이는 치명적일 수 있다. 이와 같이, ASM 유전자 녹아웃 및 효소의 직접 억제는 당뇨망막병증의 치료를 위한 실행가능한 치료 전략이 아니다. 반대로, 본원의 -세라미드 항체 및 항원-결합 단편의 투여는 ASM의 직접 억제와 연관된 음성적 부작용을 유도하지 않으면서 염증성 마커, 혈관신생, 및 눈에서의 당뇨망막병증의 다른 증상을 선택적으로 억제하는 놀라운 결과를 제공한다.
추가 질환
일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 당뇨망막병증의 치료에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 당뇨 황반 부종을 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 망막 정맥 폐쇄(RVO) 후 황반 부종을 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 조성물 및 방법은 근시성 맥락막 혈관신생(mCNV)을 치료하기 위해 사용된다.
본 발명은 기저 혈관신생을 갖는 질환 또는 장애의 치료를 위한 방법을 제공한다. 눈의 예시적 질환 및 장애는 망막 혈관신생, 맥락막 혈관신생, 각막 혈관신생, 황반변성, 연령-관련 황반변성, 당뇨망막병증, 유리체 출혈, 망막 출혈, 맥락막염, 신생혈관 녹내장, 맥락막 질환, 모세혈관확장증, 망막 동맥 폐쇄, 망막 정맥 폐쇄, 맥락망막염, 망막전막, 맥락막 신생물, 미숙아 망막증, 낭포 황반 부종, 시각신경유두부종, 재발성 허혈, 눈 출혈, 및 증식 유리체망막병증을 포함한다.
약학 조성물, 투여 경로, 투여량, 및 투여 스케줄
일부 실시양태에서, 본 발명은 당뇨망막병증의 치료를 위한 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
투여를 위해, 본 발명의 항체 또는 단편(예를 들어, 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편)은 약학 조성물로서 제형화될 수 있다. 약학 조성물은 (i) 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 및 (ii) 약학적 허용 담체, 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다. 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및/또는 scFv를 포함하는 약학 조성물은 약학적으로 유용한 조성물을 제조하기 위해 알려진 방법에 따라 제형화되어, 치료 분자가 약학적 허용 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합물로 조합된다. 적합한 담체, 희석제 또는 부형제는 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다. (예를 들어, Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 19th ed. 1995) 참고). 제형은 하나 이상의 부형제, 보존제, 가용화제, 완충제, 알부민을 추가로 포함하여, 바이알 표면 상의 단백질 손실 등을 예방할 수 있다.
일부 실시양태에서, 약학 조성물은 경구 단위 투여량 형태, 정맥내 단위 투여량 형태, 비강내 단위 투여량 형태, 좌약 단위 투여량 형태, 피내 단위 투여량 형태, 근육내 단위 투여량 형태, 복강내 단위 투여량 형태, 피하 단위 투여량 형태, 경막외 단위 투여량 형태, 설하 단위 투여량 형태, 뇌내 단위 투여량 형태, 전방내 단위 투여량 형태, 결막하 단위 투여량 형태, 테논낭하 단위 투여량 형태, 안구뒤 단위 투여량 형태, 후방 공막옆 단위 투여량 형태, 및 유리체내 단위 투여량 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 투여량 형태로 제형화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 유리체내 투여량 형태로 제형화될 수 있다. 투여의 전신 경로는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 눈에 전달될 것으로 예상되지 않으며, 이는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 혈액-뇌 장벽을 가로지를 것으로 예상되지 않기 때문이다.
본원에 기재된 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 근육내, 피하, 정맥내, 심방내, 관절내, 비경구, 비강내, 폐내, 경피, 흉막내, 척추강내, 경구, 국부, 안구내, 전방내, 결막하, 테논낭하, 안구뒤, 후방 공막옆, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여, 및 투여의 유리체내 경로에 의한 것을 포함한 다양한 투여 방식에 의해 대상체에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 및 이의 약학 조성물은 국부(예를 들어, 점안액), 국소 안구, 유리체내, 전방내, 결막하, 테논낭하, 안구뒤, 및 후방 공막옆을 포함한 임의의 알려진 투여 경로에 의해 눈에 직접 투여될 수 있다.
비제한적으로, 안구내 적용 또는 국부 적용을 포함한 많은 가능한 전달 방식이 사용될 수 있다. 일 실시양태에서, 적용은 안구내이고, 비제한적으로, 결막하 주사, 두개내 주사, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 주사, 각막내 주사, 망막하 주사, 안방수 주사, 테논낭하 주사 또는 지효성 전달 장치, 또는 유리체내 주사(예를 들어, 전방, 중간 또는 후방 유리체 주사)를 포함한다. 일 실시양태에서, 적용은 국부이고, 비제한적으로, 각막에 대한 점안액을 포함한다.
일부 실시양태에서, 개시된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조성물은 유리체내 투여용으로 제조된다. 일부 실시양태에서, 개시된 항체, 항원-결합 단편, 및 이의 조성물은 유리체내로 투여된다.
예방 및 치료 목적을 위해, 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 단일 볼루스 전달로, 연장된 기간에 걸친 연속 전달(예를 들어, 연속 경피 전달)을 통해, 또는 반복된 투여 프로토콜(예를 들어, 매시간, 매일, 매주, 매월, 또는 매년 기반)로 대상체에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 상기 정의된 바와 같은 치료적 유효 용량, 투여량, 또는 양은 특정 생리학적 효과, 예를 들어 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 예방 또는 개선을 야기하기 위해 요구되는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 최소 양을 지칭한다. 본 맥락에서 치료적 유효 투여량의 결정은 통상적으로 인간 임상 시험에 의해 추적된 동물 모델 연구를 기초로 하고 모델 대상체에서 당뇨망막병증의 발생 또는 중증도를 유의미하게 감소시키는 유효 투여량 및 투여 프로토콜을 결정함으로써 안내된다. 본 발명의 조성물의 유효 용량은 투여의 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간 또는 동물인지 여부, 투여되는 다른 의약, 치료가 예방적이거나 치료적인지 여부뿐 아니라, 조성물 자체의 특이적 활성 및 개체에서 소망하는 반응을 유도하는 이의 능력을 포함한 많은 상이한 인자에 따라 달라진다. 통상적으로, 투여량 요법은 최적 치료 반응을 제공하기 위해, 즉 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 조정된다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용량은 약 0.1 ㎍ 내지 100 mg/kg 또는 1 ㎍/kg 내지 약 50 mg/kg, 또는 10 ㎍ 내지 5 mg/kg'이다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량은 약 1 ㎍/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 10 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg이다. 본원에 기재된 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 단일 용량 또는 2 이상의 용량으로 주어진 약 0.001 내지 약 10 밀리그램(mg)/체중의 킬로그램(mpk)의 투여량으로 투여될 수 있다. 인간 성인 환자에 대한 투여를 위해, 치료적 유효량은, 비제한적으로, 0.2 mg/용량, 0.5 mg/용량, 1 mg/용량, 5 mg/용량, 10 mg/용량, 25 mg/용량, 100 mg/용량, 200 mg/용량, 및 400 mg/용량을 포함하여 0.2 mg 내지 800 mg/용량 범위의 용량으로 투여될 수 있고, 1 회 이상의 용량이 치료의 과정에서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편의 총 일일 투여량은 약 1 mg 내지 약 2 g, 약 100 mg 내지 약 1.5 g, 또는 약 200 mg 내지 약 1200 mg의 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 이를 포함하는 조성물은 약 0.1 mg/mL, 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 5 mg/mL, 10 mg/mL, 15 mg/mL, 20 mg/mL, 25 mg/mL, 30 mg/mL, 35 mg/mL, 40 mg/mL, 45 mg/mL, 또는 50 mg/mL의 농도로 제형화될 수 있다. 농도는 0.1-1 mg/mL, 1-5 mg/mL, 5-10 mg/mL, 또는 10-50 mg/mL일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개시된 항체, 단편 또는 조성물은 유리체내로 약 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 또는 1 mg의 용량으로 투여될 수 있다. 용량의 부피는 약 0.005 mL, 0.01 mL, 0.02 mL, 0.03 mL, 0.04 mL, 0.05 mL, 0.06 mL, 0.07 mL, 0.08 mL, 0.09 mL, 또는 0.1 mL일 수 있다.
본원에 기재된 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 해당 일의 상이한 시간에 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, 용량은 밤에 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 용량은 아침에 투여될 수 있다. 투여량은 예를 들어, 복수의 주마다, 2 주마다, 매월, 또는 매년 투여를 포함하여 단일 또는 다중 투여로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 항체 단편의 단일 용량은 항-세라미드 항체 또는 항체 단편 투여를 필요로 하는 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 적어도 2 주, 적어도 3 주, 적어도 4 주, 적어도 5 주, 적어도 6 주, 적어도 7 주, 적어도 8 주, 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월, 적어도 11 개월, 또는 적어도 1 년의 기간이 떨어진 항-세라미드 항체 치료의 2 회 이상 용량을 투여받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 2 이상의 용량은 약 1 주 내지 약 2 주, 약 2 주 내지 약 4 주, 약 1 개월 내지 약 2 개월, 약 2 개월 내지 약 4 개월, 약 1 개월 내지 약 6 개월, 약 6 개월 내지 약 1 년, 또는 약 1 년 내지 약 2 년의 기간이 떨어져 2 이상의 용량 투여를 필요로 하는 환자에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 장애의 임상 증상을 모니터링함으로써 나타낸 바와 같이 불규칙적 기반일 수 있다.
항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물의 투여량은 표적 부위에 대한 소망하는 농도를 유지하기 위해 임상 주치의에 의해 달라질 수 있다. 높거나 낮은 농도는 전달 방식을 기초로 하여 선택될 수 있다. 항-세라미드 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체의 인생 동안 임의의 시간에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 당뇨망막병증의 증상 발생 전에 발생한다. 이러한 실시양태에서, 투여는 당뇨망막병증의 개시를 예방하거나 지연시키기 위해 예방약으로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 초기 단계 질환 동안 발생한다. 일부 실시양태에서, 투여는 후기 단계 질환 동안 발생한다.
치료 방법 & 용도
일부 실시양태에서, 본 발명은 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 염증성 안구 병태의 증상을 치료, 예방, 또는 개선하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 항-세라미드 항체 또는 항-세라미드 항체 단편의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공한다.
이전의 연구는 망막에서 염증 및 혈관 투과성 증가를 야기하는 초기 대사 손상이 스핑고지질 시그널링의 중심 효소인 산 스핑고마이엘리나아제(ASM)의 활성화를 포함하여, 스핑고마이엘린을 세라미드로 전환한다는 것을 상정하였다. ASM-/- 동물은 망막 허혈-재관류 모델에서 혈관 변성으로부터 보호되었고, 야생형 마우스 내로 이식된 ASM-/- 골수를 갖는 키메라는 또한 당뇨병-유도된 혈관 손상으로부터 보호되었다. 도코사헥사엔산(DHA)-풍부 어유 및 삼환계 항우울제 데시프라민의 투여를 포함하여 몇몇 전략이 ASM 활성을 억제하기 위해 시행되었다. 양측 전략은 세포 배양 모델에서 일부 효능을 나타낸다. 그러나, 데시프라민은 장기 연구(실시예 8 참고) 및 장기 고용량 DHA 치료에서 동물에 의해 잘 용인되지 않았으나, 이는 당뇨병 동물에서 망막 건강을 개선하고, 대조군 동물에서 망막 병리학을 야기하였다(실시예 9 참고). 또한, ASM은 필수 효소이고 ASM의 결여는 신경퇴행성 질환(니만-피크)을 야기한다. 따라서, ASM의 직접 억제는 DR의 치료에서 실행가능한 임상 전략이 아니다. 항-세라미드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 내피 및 다른 세포의 표면 상에 생성된 모노머 세라미드 결합에서 고도로 효과적이어서, ASM-유도된 세라미드-풍부 플랫폼 형성을 예방하고, 결과적으로 필수 리포솜 ASM 기능에 영향을 미치지 않으면서 전-염증성 및 아폽토시스 시그널링을 예방한다.
대상체
본원에 개시된 방법에 따른 치료를 위한 대상체는 당뇨망막병증을 갖거나 이의 발생 위험이 있는 대상체를 포함한다. 당뇨망막병증을 갖는 대상체는 초기 단계 또는 후기 단계 질환을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체는 이전에 당뇨망막병증에 대한 1 회 이상의 치료를 받았으나, 이전 치료에 대한 반응에 실패한 대상체이다. 이러한 실시양태에서, "반응에 대한 실패"는 이전 치료가 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상을 개선하고/하거나 나아지게 하는데 실패하였다는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 이전 요법은 시력 또는 망막 혈관 건강에서의 개선을 생산하는데 실패하였을 수 있다. 일부 실시양태에서, 이전 요법은 일부 결과를 나타내었을 수 있으나, 소망하는 성능을 달성하지 않았을 수 있거나 일부 기간 후에 나타나는 효능이 중지되었을 수 있다.
당뇨망막병증에 대한 기존의 치료는 치료 절차, 예컨대 유리체절제술 및 레이저 수술, 및 치료제, 예컨대 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 이전 당뇨망막병증 치료에 대해 부분적으로 반응하였을 수 있다: 즉, 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상이 충분히 개선되지 않았고/않았거나 이전 치료의 효과가 충분히 오래가지 않았다.
일부 실시양태에서, 대상체는 이전에 항-VEGF 치료를 받고 반응에 실패하였다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 치료는 Eylea®(애플리버셉트), Avastin®(베바시주맙), 또는 Lucentis® 치료(라니비주맙)로부터 선택된다.
치료 판독
당뇨망막병증의 치료 및/또는 예방은 다양한 수단에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 또는 예방은 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증에서의 아폽토시스, 염증, 무세포 모세혈관 형성, 혈관신생, 망막 내피 세포 사멸, 망막 혈관 투과성, 허혈 재관류 손상, 및 오큘리딘 방해 중 하나 이상을 치료 또는 예방하는 것을 포함한다. 방법은 당뇨병 환자에서 당뇨망막병증의 개시 전에 또는 당뇨병 환자에서 당뇨망막병증의 개시 후에 항-세라미드 항체, 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량의 투여를 포함한다.
항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 당뇨망막병증을 치료하는 방법이 제공된다. 이러한 치료의 효능은 몇몇 파라미터를 기초로 하여 특징화, 평가, 측정, 및/또는 모니터링될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 눈에서 감소된 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸을 야기한다. 세포 사멸은 알려진 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 세포 사멸을 검출하기 위한 예시적 방법은 핵 염색 기술, 예컨대 프로피디움 아이오다이드, Hoechst-33342, 4', 6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI), 아크리딘 오렌지-에티듐 브로마이드 염색 등을 포함한다. 비핵 염색 기술은 Annexin-V 염색을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 아폽토시스 및/또는 내피 세포 사멸의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 허혈-재관류(IR) 손상을 예방한다. IR 손상을 검출하기 위한 추가 방법은 플루오레세인 분석, 형광 아연 2,2'-디피콜릴아민 배위 착물 PSVue®794, 99mTc 글루카레이트, 및 망막전위도검사를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 하나 이상의 염증성 마커의 수준을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 염증성 마커는 TNFα, IL-1β, IL-6, VEGF, ICAM-1, VCAM-1, 및 MCP1로부터 선택된다. 염증성 마커 수준은 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), Luminex, 사이토카인 비드 배열, Proteo Plex, FAST Quant 등을 통해 모니터링될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 하나 이상의 염증성 마커의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 TNFα의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 TNFα의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 TNFα의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 TNFα의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 TNFα의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 TNFα의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 IL-1β의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-1β의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-1β의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-1β의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-1β의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-1β의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 IL-6의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-6의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-6의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-6의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-6의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 IL-6의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 VEGF의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VEGF의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VEGF의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VEGF의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VEGF의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VEGF의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 ICAM-1의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 ICAM-1의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 ICAM-1의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 ICAM-1의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 ICAM-1의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 ICAM-1의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 VCAM-1의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VCAM-1의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VCAM-1의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VCAM-1의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VCAM-1의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 VCAM-1의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 눈 샘플과 비교하여, 본 방법을 투여받은 눈 샘플에서 MCP1의 수준을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 MCP1의 수준을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 MCP1의 수준을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 MCP1의 수준을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 MCP1의 수준을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 MCP1의 수준을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성, 망막 혈관신생, 또는 망막 건강의 다른 증상을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관구조에서 당뇨망막병증의 통상적인 증상을 예방할 수 있거나 추가 악화를 예방할 수 있다. 혈관 투과성 및 망막 혈관 건강의 다른 척도는 예를 들어, 플루오레세인 혈관조영술에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 대상체 또는 본 발명의 방법을 투여받기 전의 대상체와 비교하여 대상체에서 망막 혈관 투과성을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성을 적어도 10% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성을 적어도 20% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성을 적어도 30% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성을 적어도 50% 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 망막 혈관 투과성을 적어도 70% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 하나 이상의 시력 파라미터를 개선하거나 하나 이상의 시력 파라미터의 감소를 예방한다. 시력 파라미터는 열악한 야간 시력, 흐려진 시야, 시야에서의 떠있는 반점, 흑색 반점 또는 섬광, 변동 시력, 손상된 색각, 당신의 시야에서 어둡거나 비어있는 영역, 시력 손실, 갑작스러운 중증 무통증 시력 손실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법에 따른 치료를 받고 있는 대상체는 시력 개선, 시력 손실 감소, 야간 시력 개선, 낮은 광 시야 개선, 읽기 능력 개선, 주변시 개선, 시야에서의 반점 감소, 시야에서의 섬광 감소, 통증 감소, 및 눈 모양 개선의 효과 중 하나 이상을 겪을 수 있다. 많은 이들 파라미터는 일상적 눈 검사를 통해 모니터링될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 당뇨망막병증을 갖는 대상체에서 조기 치료 당뇨망막병증 연구(ETDRS) 등급 스코어를 개선한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다. ETDRS 등급 스케일은 3 개의 표준 사진을 사용한다. 표준 사진 1은 미세동맥류 및 출혈의 경증 정도를 나타내고; 표준 사진 2A는 미세동맥류 및 출혈의 중등증 정도를 나타내고; 표준 사진 2B는 미세동맥류 및 출혈의 중증 정도를 나타낸다. ETDRS에서, 미세동맥류는 날카로운 가장자리를 갖는 이의 가장 긴 치수의 적색 반점 125 μm로서 정의된다. 이는 출혈로부터 구분되며, 이는 불규칙적인 가장자리 및 125 μm를 초과하는 치수를 갖는 적색 반점으로서 정의된다. 표준화된 안저 사진과의 비교를 위해 미세동맥류 및/또는 출혈에 의해 커버된 망막의 영역을 사용하는 경우, 비-증식성 당뇨망막병증(NPDR)의 설명을 위한 등급 스케일은 다음과 같다: 등급 0 = 미세동맥류 또는 출혈 없음; 등급 1 = 의심스러운 미세동맥류 또는 출혈; 등급 2 = 표준 사진 1에 비해 적은 명백한 미세동맥류 또는 출혈; 등급 3 = 표준 사진 1 이상이지만 표준 사진 2A 미만인 미세동맥류 또는 출혈; 등급 4 = 표준 사진 2A 이상이지만 표준 사진 2B 미만인 미세동맥류 또는 출혈; 등급 5 = 표준 사진 2B 이상인 미세동맥류 또는 출혈. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대조군 대상체 또는 본 발명의 방법을 투여받기 전의 대상체와 비교하여 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 0.1, 적어도 0.2. 적어도 0.3, 적어도 0.4, 적어도 0.5, 적어도 0.6, 적어도 0.7, 적어도 0.8, 적어도 0.9, 적어도 1.0, 적어도 1.2, 적어도 1.5, 적어도 1.7, 적어도 2, 적어도 2.2, 적어도 2.5, 적어도 2.7, 적어도 3.0, 적어도 3.2, 적어도 3.5, 적어도 3.7, 또는 적어도 4 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 0.2 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 0.5 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 1 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 1.5 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 2 낮춘다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 DR을 갖는 대상체에서 평균 ETDRS 등급 스코어를 적어도 2.5 낮춘다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 당뇨망막병증을 예방한다. 방법은 당뇨망막병증 발생 위험이 있는 환자에 투여될 수 있다. 이러한 대상체에서, 당뇨망막병증의 예방은 시력의 유지 또는 당뇨망막병증의 통상적 특징의 결여에 의해 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 예방적으로 투여된 대상체는 미세동맥류, 출혈, 망막내 미세혈관 이상, 염주정맥, 면모반, 다른곳 및 시신경 상에서 새로운 혈관의 형성(혈관신생), 다른곳 및 시신경 상에서 섬유화 증식, 망막앞 및 유리체 출혈, 흉터 조직 형성으로 인한 망막 박리, 녹내장, 열악한 야간 시력, 흐려진 시야, 시야에서의 떠있는 반점, 흑색 반점 또는 섬광, 변동 시력, 손상된 색각, 당신의 시야에서 어둡거나 비어있는 영역, 시력 손실, 갑작스러운 중증 무통증 시력 손실, 견인 망막 박리, 황반 부종, 정맥 확장증, 및 망막내 미세혈관 이상의 증상 중 하나 이상의 발생률 감소를 겪지 않거나 겪을 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 황반 부종을 예방하거나 감소시킬 수 있다. 황반 부종은 망막층의 융기 및 흐려짐으로서 세극등 현미경검사 상에서 나타날 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 당뇨망막병증의 개시를 지연시킨다. 따라서, 개시된 방법은 초기 당뇨병 진단 후 5 년 초과, 10 년 초과, 11 년 초과, 12 년 초과, 13 년 초과, 14 년 초과, 15 년 초과, 16 년 초과, 17 년 초과, 18 년 초과, 19 년 초과, 또는 20 년 초과까지 당뇨망막병증의 평균 개시를 지연시키기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시된 방법은 당뇨망막병증의 중증도를 감소, 개선, 저하시키거나, 이의 하나 이상의 증상을 역전시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 당뇨망막병증 치료 방법은 미세동맥류, 출혈, 망막내 미세혈관 이상, 염주정맥, 면모반, 다른곳 및 시신경 상에서 새로운 혈관의 형성(신생혈관), 다른곳 및 시신경 상에서 섬유화 증식, 망막앞 및 유리체 출혈, 흉터 조직 형성으로 인한 망막 박리, 시력의 손실, 녹내장, 열악한 야간 시력, 흐려진 시야, 시야에서의 떠있는 반점, 흑색 반점 또는 섬광, 갑작스러운 중증 무통증 시력 손실, 견인 망막 박리, 황반 부종, 정맥 확장증, 및 망막내 미세혈관 이상의 중증도 중 하나 이상을 감소, 개선, 저하시키거나 역전시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 당뇨망막병증을 치료하는 개시된 방법은, 비제한적으로, 투과성, NFkB 수준, 염증성 마커 수준, 아폽토시스 발생률, 스핑고지질 대사, 및 재내피화를 포함한 망막 혈관구조의 하나 이상의 파라미터에 영향을 미친다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 당뇨망막병증을 치료하는 방법은 망막 혈관 투과성을 감소시킨다. 망막 혈관 투과성은 형광, 추적 염료, 시력 검사 등을 통해 모니터링될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 당뇨망막병증을 치료하는 방법은 NFkB 및/또는 망막 혈관구조에서 다른 염증성 마커 수준을 감소시킨다. 상기 개시된 바와 같이, 염증성 사이토카인 수준은 종래의 수단(예를 들어, ELISA)을 통해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 당뇨망막병증을 치료하는 방법은 망막 혈관구조에서 아폽토시스의 발생률을 감소시킨다. 상기 개시된 바와 같이, 아폽토시스는 종래의 수단, 예를 들어 핵 및 비핵 염색 기술을 사용하여 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 당뇨망막병증을 치료하는 방법은 스핑고지질 대사를 억제하거나 하향조절한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 당뇨망막병증을 치료하는 방법은 건강한 조직 재내피화를 증가시킬 수 있다.
실시예
실시예 1: 항-세라미드 scFv는 당뇨망막병증의 뮤린 모델에서 I/R 염증 및 망막 혈관 투과성을 억제한다.
도 1에 나타낸 바와 같이 당뇨망막병증의 뮤린 허혈-재관류(I/R) 모델을 이용하여, 망막 혈관구조에 대한 당뇨망막병증의 손상 효과를 시뮬레이션하였다.
망막 허혈-재관류(I/R): 각각의 마우스는 하나의 I/R 눈 및 하나의 미손상된 대조군 눈을 가졌다. 망막 I/R을 다음과 같이 90 mmHg까지 안압(IOP)을 일시적으로 증가시킴으로써 생성하였다. 체중이 25 내지 35 g인 수컷 C57BL/6J 마우스를 마취시켰다. 하나의 눈의 전방에 생리식염수를 주입하는 라인에 부착된 30-게이지 바늘로 캐뉼러 삽입하였다. IOP를 마우스 눈에서 휴대용 안압계(TONO Pen; Medtronic Solan, Jacksonville, FL)에 의해 측정하고, 눈에서의 압력을 압력 주입기(Infu-surg; Ethox Corp., Buffalo, NY)로 80 내지 90 90 mm Hg로 조절하였다. 동일한 동물의 다른 눈을 대조군으로 설정하였다. 허혈의 기간은 마우스에 대해 90 분이었다. 허혈 후, 바늘을 회수하고, IOP를 정규화하고, 망막 순환의 재흐름을 시각적으로 기록하였다. 동물을 I/R 손상 후 다른 시간에 죽였다. 망막을 망막 I/R 후 2 또는 7 일에 단리시켰다.
비히클 대조군 또는 항-세라미드 scFv 투여: I/R 전 24 시간에, 대조군 마우스에 비히클(인산-완충 생리식염수) 주사를 투여하고 시험 마우스에 1.73 mg/mL로 항-세라미드 scFv 6B5 1 μL의 유리체내 주사를 투여하였다.
염증성 사이토카인 수준: I/R 후 48 시간에, 정량적 PCR 분석을 사용하여 TNFα, IL-1β, IL6, ICAM-1, VCAM-1, 및 MCP1에 대한 염증성 마커 발현 수준의 측정을 실시하였다.
실시될 수 있는 추가 측정: 도 2a-도 2b에 나타낸 바와 같이, 이 모델을 사용한 유사한 실험에서, 48 시간 후에 투과성, 염증성 마커, 및 스핑고지질 대사의 측정을 실시하고, 7 일 후에 아폽토시스, 무세포 모세혈관, 및 스핑고지질 대사의 측정을 실시한다.
망막 혈관 투과성: 망막을 I/R 후 48 시간에 단리시켰다. 간단하게는, 마우스에 FITC- 알부민(100 μL PBS 중 0.5 mg)(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)을 주사하였다. 2 시간 후에, 혈액을 각각의 마우스로부터 수집하고 원심분리하여, 혈장을 얻고; 동물을 1% 포름알데하이드로 관류시키고 적출하였다. 망막을 제거하고, 4 개의 슬릿으로 평면-장착하고 Fluoromount 봉입제(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)로 유리 슬라이드 상에 유지시켰다. 이미지를 Olympus FluoView 1000 스캐닝 레이저 공초점 현미경을 사용하여 획득하고 적어도 5 개의 상이한 가시 영역을 선택하여 각각의 샘플에 대한 이미지를 수집하였다. 망막을 기계적으로 파괴하고 원심분리에 의해 제거하였다. 상청액 중 FITC-알부민을 분광형광계를 사용하여 정량화하고 혈장 형광으로 정규화하였다(Kielczewski et al., 2011).
결과
도 2a에 나타낸 바와 같이, 항-세라미드 처치된 I/R 눈에서 사이토카인 발현은 시험된 마커(TNFα, IL-1β, IL6, ICAM-1, VCAM-1, 및 MCP1) 각각에 대해 미처치된 I/R 눈에 비해 낮았다. TNFα, IL6, ICAM-1, 및 MCP1에서 관찰된 감소는 통계적으로 유의미하였다. 도 2b는 형광 현미경검사 이미지 및 정량 분석을 통해 나타낸 바와 같이 망막 혈관 투과성에서 명확한 차이를 드러낸다. 투과성은 대조군 눈 또는 항-세라미드 처치된 I/R 눈에서에 비해 미처치된 I/R 눈에서 유의미하게 높았다.
이 실시예는 당뇨병의 개시 시에 항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사가 내피 세포 손실 및 망막에 대한 후속 손상을 예방함으로써 궁극적인 당뇨망막병증의 결과를 개선한다는 것을 나타낸다.
실시예 2: 당뇨망막병증의 래트 모델에서 항-세라미드 scFv 투여의 효능.
예를 들어, 도 3에 나타낸 바와 같이, 당뇨망막병증의 STZ-유도된 모델을 래트에서 이용하여, 망막 혈관구조에 대한 당뇨망막병증의 손상 효과를 시뮬레이션하였다.
동물 및 STZ-유도된 당뇨병의 유도: 체중이 237-283 g인 수컷 Sprague-Dawley 래트를 65 mg 스트렙토조토신(STZ)/kg 체중 wt의 단일 복강내 주사로 당뇨병에 걸리게 하였다. 래트를 Harlan-Teklad 실험실 식단(8,640호) 및 물 자유식에 유지시켰다. 대조군 및 STZ-유도된 당뇨병 그룹에 대해 체중 증가 및 혈액 글루코오스를 2 주마다 모니터링하였다.
비히클 대조군 또는 항-세라미드 scFv 투여: 당뇨병(250 mg/dL 초과의 고혈당증, STZ 주사 후 7-10 일)의 확인 후, 당뇨병 대조군 래트에 비히클 PBS 주사를 투여하고 당뇨병 시험 래트에 1.73 mg/mL로 항-세라미드 scFv 6B5 2 μL의 유리체내 주사를 투여하였다. 비-당뇨병 대조군 래트에 또한 비히클 대조군 또는 항-세라미드 scFv의 주사를 투여하였다.
망막 혈관 투과성 분석: 망막을 I/R 후 48 시간에 단리시켰다. 간단하게는, 마우스에 FITC- 알부민(100 μL PBS 중 0.5 mg)(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)을 주사하였다. 2 시간 후에, 혈액을 각각의 마우스로부터 수집하고 원심분리하여, 혈장을 얻고; 동물을 1% 포름알데하이드로 관류시키고 적출하였다. 망막을 제거하고, 4 개의 슬릿으로 평면-장착하고 Fluoromount 봉입제(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)로 유리 슬라이드 상에 유지시켰다. 이미지를 Olympus FluoView 1000 스캐닝 레이저 공초점 현미경을 사용하여 획득하고 적어도 5 개의 상이한 가시 영역을 선택하여 각각의 샘플에 대한 이미지를 수집하였다. 망막을 기계적으로 파괴하고 원심분리에 의해 제거하였다. 상청액 중 FITC-알부민을 분광형광계를 사용하여 정량화하고 혈장 형광으로 정규화하였다(Kielczewski et al., 2011).
추가 측정: 도 3에 나타낸 바와 같이, 유사한 실험에서, 실험을 db/db 렙틴 결핍인 뮤린 모델 또는 당뇨병 모델에서 수행한다. 또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, STZ-유도된 모델에서 당뇨병의 유도 후 6-8 주에, 각각의 동물의 망막 혈관구조를 투과성, NFkB 및 염증성 마커, 아폽토시스, 및 스핑고지질 대사에 대해 평가한다.
결과
도 4에 포함된 결과는 유리체내 용량의 항-세라미드 scFv를 투여받은 당뇨병 래트가 당뇨망막병증을 나타내는 혈관 누수가 발생하지 않았다는 것을 나타내며, 따라서 항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사가 이 조건의 래트 모델에서 고혈당증-유도된 당뇨망막병증을 제거하기에 충분하다는 것을 나타낸다.
실시예 3: DR에서 당뇨병-유도된 전-염증성 변화를 치료하기 위한 항-세라미드 scFv의 유리체내 대 전신 투여.
DR 마우스 모델에서 당뇨병-유도된 전-염증성 변화에 대한 유리체내 항-세라미드 처치 대 전신 항-세라미드 처치의 효과를 비교하기 위해 실험을 수행한다. STZ-유도된 1 형 당뇨병 마우스에 당뇨병의 개시 시에 6B5 scFv로 단일 유리체내 또는 전신(정맥내) 항-세라미드 처치를 투여한다. STZ 투여 후 6-8 주에, 대조군, 당뇨병 및 항-세라미드-처치된 당뇨병 동물을 희생시킨다. 각각의 동물로부터 망막을 단리시키고; 염증성 사이토카인, 성장 인자 및 부착 분자를 프로파일링하고; 내피 ASM 발현 및 활성을 망막에서 측정한다. 이들 측정을 qPCR, 웨스턴 블롯, ESI-MS/MS, 형광 현미경검사 및 면역금 전자 현미경검사 실험으로 수행한다. 예시적 실험 프로토콜이 도 5에 나타나 있다.
항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사가 DR의 발생에 대해 큰 치료 효과를 가질 것으로 예상된다. 기존의 DR 병리학을 치료하기 위한 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 유리체내 용량의 능력을 평가하기 위해 추가 실험을 수행한다.
실시예 4: DR 혈관 기능장애를 치료하기 위한 항-세라미드 scFv의 유리체내 대 전신 투여.
DR 마우스 모델에서 망막 혈관 투과성에 대한 유리체내 대 전신 항-세라미드 처치의 효과를 비교하기 위해 실험을 수행한다. 이 실험을 위해, 당뇨병-유도된 망막 혈관 손상에 대한 6B5 항-세라미드 scFv 투여의 효과를 측정한다. 초기 혈액-망막 장벽 분해를 평가하기 위해, 마우스에 당뇨병의 개시 시에 단일 유리체내 또는 전신(정맥내) 항-세라미드 scFv 처치를 투여한다. 당뇨병의 유도 후 6-8 주에, 망막 혈관 투과성을 실시예 2에 기재된 바와 같이 플루오레세인을 사용하여 평가한다. 예시적 실험 프로토콜이 도 5에 나타나 있다.
scFv의 단일 유리체내 주사가 DR 혈관 기능장애에 대해 큰 치료 효과를 가질 것으로 예상된다. 기존의 DR 병리학을 치료하기 위한 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 유리체내 용량의 능력을 평가하기 위해 추가 실험을 수행한다.
실시예 5: DR에서 전-염증성 변화를 감소시키기 위한 항-세라미드 scFv 대 DHA 또는 데시프라민.
DR 마우스 모델에서 당뇨병-유도된 전-염증성 변화에 대한 단일 항-세라미드 유리체내 또는 전신 scFv 처치의 효과 대 단일 DHA-풍부 어유 또는 데시프라민 처치의 효과를 비교하기 위해 실험을 수행한다. 당뇨병의 개시 시에 STZ-유도된 1 형 당뇨병 마우스에 위관영양에 의한 DHA-풍부 어유의 단일 용량, 데시프라민의 단일 정맥내 주사, 항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사, 또는 항-세라미드 scFv의 전신 주사를 투여한다. 당뇨병의 STZ 유도후 6-8 주에, 동물을 희생시키고 이들의 망막을 단리시킨다. 염증성 사이토카인, 성장 인자 및 부착 분자를 프로파일링한다. 내피 ASM 발현 및 활성을 측정한다. 이들 측정을 실시예 3에 기재된 바와 같이 일련의 qPCR, 웨스턴 블롯, ESI-MS/MS, 형광 현미경검사 및 면역금 전자 현미경검사 실험으로 수행한다. 예시적 실험 프로토콜이 도 6에 나타나 있다.
항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사가 DR의 발생에 대해 큰 치료 효과를 가질 것으로 예상된다. 기존의 DR 병리학을 치료하기 위한 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 유리체내 용량의 능력을 평가하기 위해 추가 실험을 수행한다.
실시예 6: DR 혈관 기능장애를 치료하기 위한 항-세라미드 scFv 투여 대 DHA 또는 데시프라민.
DR 마우스 모델에서 망막 혈관 투과성에 대한 단일 유리체내 또는 전신 항-세라미드 scFv 처치 대 단일 DHA-풍부 어유 또는 데시프라민 처치의 효과를 비교하기 위해 실험을 수행한다. 당뇨병의 개시 시에 STZ-유도된 1 형 당뇨병 마우스에 위관영양에 의한 DHA-풍부 어유의 단일 용량, 데시프라민의 단일 정맥내 주사, 항-세라미드 scFv의 단일 유리체내 주사, 또는 항-세라미드 scFv의 전신 주사를 투여한다. 당뇨병의 유도후 6-8 주에, 망막 혈관 투과성을 실시예 4에 기재된 바와 같이 플루오레세인을 사용하여 평가한다. 실시예 실험 프로토콜이 도 6에 나타나 있다.
scFv의 단일 유리체내 주사가 DR 혈관 기능장애에 대해 큰 치료 효과를 가질 것으로 예상된다. 기존의 DR 병리학을 치료하기 위한 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 유리체내 용량의 능력을 평가하기 위해 추가 실험을 수행한다.
실시예 7: 항-세라미드 scFv 투여는 스트레스-유도된 아폽토시스를 억제한다.
항-혈관신생 약물이 비효과적인 조건 하에서 스트레스-유도된 아폽토시스를 억제하기 위해 항-세라미드 scFv가 배양액 중 인간 망막 내피 세포(HREC)에서 효과적이라는 것을 입증하기 위해 실험을 수행한다. 항-세라미드 scFv 및 항-혈관신생 약물을 이용한 DR 요법의 메커니즘은 이전의 특징적 메커니즘과 별개이다. 이론에 구애됨 없이, 항-VEGF 처치에 의해 해결될 수 없지만, 항-세라미드에 대해 반응하지 않는 당뇨병에서의 진행중인 사멸 및 리모델링이 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 항-VEGF는 혈관신생만을 예방할 수 있는 한편, 항-세라미드 항체 투여는 진행중인 내피 세포 사멸을 예방하고, 혈관 회복을 향상시키고, 저산소증 및 뒤따르는 혈관신생을 예방할 수 있다. 항-혈관신생이 비효과적인 조건 하에서 항-세라미드 scFv가 시험관내에서(in vitro) 작동할지 여부를 시험하기 위해, HREC를 ASM/세라미드-매개된 아폽토시스 사멸을 유도하는 다양한 스트레스 조건을 거치게 한다(예를 들어, IL-1β 및 TNFα 사이토카인 또는 H2O2에 대한 노출). HREC를 항-VEGF 억제제(항 VEGFR2 DC101 Ab 또는 VEGFR TK 억제제 소라페닙) 또는 항-세라미드 항체로 처치한다.
항-세라미드 scFv 투여가 내피 세포 사멸 억제에 대해 큰 치료 효과를 가질 것으로 예상된다.
실시예 8: 당뇨병 마우스의 데시프라민 처치
당뇨병을 5 일 연속으로 SZT(65 mg/kg)의 복강내 주사에 의해 수컷 C57BL/6J 마우스(20-25 g)에서 유도하였다. 대조군 동물에 시트르산 비히클 주사(pH 4.5)를 투여하였다. 최종 주사 후 2 주에, 혈액 글루코오스를 발등 정맥으로부터 수집된 혈액의 방울로부터 측정하였다. 당뇨병을 혈액 글루코오스 수준 > 300 mg/dL에 의해 확인하였다. 체중 손실, 다뇨증, 물 및 식량 소비를 매일 모니터링하였다. 당뇨병이 확인된 제1 일에, 첫번째 SZT 주사 후 ~2 주에 처치의 시작을 위해 데시프라민을 물에 첨가하였다. 데시프라민 처치는 대조군 동물에 대해 효과가 없었다. 그러나, 당뇨병 동물은 실험이 IACUC 인간 동물 사용 규정에 따라 종료되어야 했던 시점의 2-4 일 이내에 탈수되었고 이들의 체중의 25% 초과가 소실되었다.
당뇨병 동물은 번갈증 및 폴리요소를 갖기 때문에, 수중 데시프라민은 음용 패턴에 영향을 미쳐 탈수를 야기할 수 있었다. 따라서, 실험을 20 mg/kg의 용량에 대해 2 mg/mL 데시프라민의 IP 주사를 사용하여 반복하였다. 수중 데시프라민 처치와 같이, 대조군 동물은 약물을 잘 견뎠다. 그러나, 당뇨병 동물은 실험이 IACUC 인간 동물 사용 규정에 따라 종료되어야 했던 시점인 매일 주사의 5-7 일 이내에 비정상적 떨림을 나타내었고, 약화되었고, 털 손질, 식사, 및 음용을 중지하였고, 이들의 체중의 25% 초과가 소실되었다.
실시예 9: 야생형 마우스의 DHA 처치
수컷 Sprague-Dawley 래트(237-283)에게 Dyets Inc.(Bethlehem, PA)로부터의 50.8% 리놀레산을 함유한 대두유로서 10% 칼로리 섭취를 갖는 대조군 AIN-93M 정제된 설치류 식단, 또는 대두유의 절반, 또는 5% 칼로리 섭취가 10.26% DHA 및 14.16% EPA를 함유한 멘헤이덴유(Menhaden oil)로 대체된 DHA-풍부 어유 식단을 공급하였다. 식단 9 개월 후, 래트 망막 혈관구조를 트립신 분해에 의해 단리시키고 무세포 모세혈관을 2 명의 독립 조사관에 의해 중간-망막에서 체계적으로 계수하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, DHA-풍부 어유 처치는 대조군 동물에서 유해하여, 무세포 모세혈관의 발생을 야기하였다.
트리글리세리드 저하제로서 어유의 건강 이득은 잘 수용되지만, 망막 효과를 위해 요구되는 용량은 인간에서 권고되는 것에 비해 3 배 높은 ~12 g의 어유/일에 대응하는 ~5% 칼로리 섭취였다. 인간에서, 특히 당뇨병에서 고용량의 DHA는 높은 혈액 글루코오스 수준, 과잉 출혈, 상처 치유 감소, 빈번한 감염, 위장 문제 및 체중 증가를 포함한 다수의 잘 알려진 부작용과 연관된다. 이들 우려로 인해, DHA는 당뇨병 합병증에 대해 권고되지 않는다.
추가 넘버링된 실시양태
본 발명의 추가 실시양태가 하기 넘버링된 실시양태에서 제공된다:
실시양태 1. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
실시양태 3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 투여가 유리체내 투여인, 방법.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
실시양태 6. 실시양태 5에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
실시양태 7. 실시양태 5 또는 6에 있어서, 사전 치료가 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제인, 방법.
실시양태 8. 실시양태 7에 있어서, 항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
실시양태 9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
실시양태 10. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 11. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 12. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 13. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 14. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 15. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 16. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 17. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 18. 실시양태 17에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 19. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함하고, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
실시양태 20. 실시양태 19에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
실시양태 21. 실시양태 19 또는 20에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
실시양태 22. 실시양태 19 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 투여가 안구 투여인, 방법.
실시양태 23. 실시양태 22에 있어서, 안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 24. 실시양태 22 또는 23에 있어서, 안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
실시양태 25. 실시양태 19 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 사전 치료가 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었던 것인, 방법.
실시양태 26. 실시양태 25에 있어서, 항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
실시양태 27. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
실시양태 28. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 29. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 30. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 31. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 32. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 33. 실시양태 19 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 34. 실시양태 19 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 35. 실시양태 19 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 36. 실시양태 19 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 37. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
실시양태 38. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2 이상의 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 2 이상의 용량이 적어도 2 주 떨어진, 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
실시양태 39. 실시양태 38에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 40. 실시양태 38에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 41. 실시양태 38에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 42. 실시양태 38에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 43. 실시양태 38에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 44. 실시양태 37 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
실시양태 45. 실시양태 37 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 투여가 안구 투여인, 방법.
실시양태 46. 실시양태 45에 있어서, 안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 46. 실시양태 45 또는 46에 있어서, 안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
실시양태 48. 실시양태 37 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
실시양태 49. 실시양태 48에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
실시양태 50. 실시양태 48 또는 49에 있어서, 사전 치료가 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었던 것인, 방법.
실시양태 51. 실시양태 50에 있어서, 항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
실시양태 52. 실시양태 37 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 53. 실시양태 37 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 54. 실시양태 37 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 55. 실시양태 37 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
실시양태 56. 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 안구 염증 질환을 치료하는 방법.
실시양태 57. 실시양태 56에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
실시양태 58. 실시양태 56 또는 57에 있어서, 안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 59. 실시양태 56 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 안구 염증 질환이 망막 혈관신생, 맥락막 혈관신생, 각막 혈관신생, 황반변성, 연령-관련 황반변성, 당뇨망막병증, 유리체 출혈, 망막 출혈, 맥락막염, 신생혈관 녹내장, 맥락막 질환, 모세혈관확장증, 망막 동맥 폐쇄, 망막 정맥 폐쇄, 맥락망막염, 망막전막, 맥락막 신생물, 미숙아 망막증, 낭포 황반 부종, 시각신경유두부종, 재발성 허혈, 눈 출혈 및 증식 유리체망막병증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 60. 실시양태 56 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
실시양태 61. 실시양태 56 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
실시양태 62. 실시양태 61에 있어서, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패한 것인, 방법.
실시양태 63. 실시양태 61 또는 62에 있어서, 사전 치료가 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제였던 것인, 방법.
실시양태 64. 실시양태 63에 있어서, 항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
실시양태 65. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
실시양태 66. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 67. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 68. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 69. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 70. 실시양태 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
실시양태 71. 실시양태 56 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 72. 실시양태 56 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
실시양태 73. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL이 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 74. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, VH가 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 75. 실시양태 1 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 6B5 항체인, 방법.
실시양태 76. 실시양태 1 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 6B5 scFv인, 방법.
실시양태 77. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 GYTFTNYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GLYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL이 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 78. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, VH가 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 79. 실시양태 1 내지 72, 77 및 78 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 2A2 항체인, 방법.
실시양태 80. 실시양태 1 내지 72, 77 및 78 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 2A2 scFv인, 방법.
실시양태 81. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고,
a) VH가 서열번호 1 및 43으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44-47로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR3을 포함하고,
b) VL이 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 82. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 83. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 84. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 85. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 86. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 87. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 88. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 89. 실시양태 81에 있어서, HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 90. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 91. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 92. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 93. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 94. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 95. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 96. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 97. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 98. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 99. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 100. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 101. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 102. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 103. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 104. 실시양태 81에 있어서, VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
실시양태 105. 실시양태 81 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 6B5(h6B5) 항체인, 방법.
실시양태 106. 실시양태 81 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 h6B5 scFv인, 방법.
실시양태 107. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 108. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 109. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 110. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 111. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 112. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 113. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 114. 실시양태 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 115. 실시양태 107 내지 114 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 항체인, 방법.
실시양태 116. 실시양태 107 내지 114 중 어느 하나에 있어서, 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 scFv인, 방법.
실시양태 117. 실시양태 1 내지 116 중 어느 하나에 있어서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환을 예방하는 것이 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 개시를 지연시키는 것을 포함하는 것인, 방법.
실시양태 118. 실시양태 1 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 대상체에서 감소되는 것인, 방법.
실시양태 119. 실시양태 118에 있어서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 망막 염증, 무세포 모세혈관 형성, 망막 혈관신생, 망막 내피 세포 사멸, 망막 혈관 투과성, 망막 허혈-재관류 손상, 망막 누수 영역 및 오큘리딘 방해로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 120. 실시양태 118 또는 119에 있어서, 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
실시양태 121. 실시양태 1 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준이 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 감소되는 것인, 방법.
실시양태 122. 실시양태 121에 있어서, 하나 이상의 염증성 마커가 사이토카인, 성장 인자 및 부착 분자로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 123. 실시양태 122에 있어서, 사이토카인이 TNFα, IL-1β, IL-6 또는 MCP1로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 124. 실시양태 122에 있어서, 성장 인자가 VEGF인, 방법.
실시양태 125. 실시양태 122에 있어서, 부착 분자가 ICAM-1 또는 VCAM-1인, 방법.
실시양태 126. 실시양태 121 내지 125 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준이 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
실시양태 127. 실시양태 1 내지 126 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 시력 파라미터가 대조군 대상체의 시력 파라미터 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 시력 파라미터과 비교하여 대상체에서 증가되는 것인, 방법.
실시양태 128. 실시양태 127에 있어서, 하나 이상의 시력 파라미터가 주변시; 야간 시력; 색각; 원거리 시력; 근거리 시력 및 시력 선명도로부터 선택되는 것인, 방법.
실시양태 129. 실시양태 1 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 눈에서 망막 혈관 투과성이 대조군 대상체의 눈에서의 망막 혈관 투과성 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
실시양태 130. 실시양태 1 내지 129 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 그룹에서 평균 조기 치료 당뇨망막병증 연구(ETDRS) 등급 스코어가 대조군 대상체의 그룹의 평균 ETDRS 등급 스코어 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 그룹에서의 평균 ETDRS 등급 스코어와 비교하여 적어도 0.2, 적어도 0.5, 적어도 1, 적어도 1.5, 적어도 2 또는 적어도 2.5 낮아지는 것인, 방법.
참고로 포함
본원에 원용된 모든 참고문헌, 논문, 공보, 특허, 특허 공보, 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 포함된다. 그러나, 본원에 원용된 임의의 참고문헌, 논문, 공보, 특허, 특허 공보, 및 특허 출원의 언급은 이들이 유효한 선행 기술을 구성하거나 세계 어느 국가의 공통 일반 지식의 일부를 형성한다는 시인 또는 임의의 형태의 제안이 아니며, 이와 같이 받아들여져선 안된다.
SEQUENCE LISTING <110> MEMORIAL SLOAN KETTERING CANCER CENTER BOARD OF TRUSTEES OF MICHIGAN STATE UNIVERSITY <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING DIABETIC RETINOPATHY <130> 115872-1233 <150> US 62/907,287 <151> 2019-09-27 <160> 55 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR1 <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Ile His 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody 6B5 HCDR2 <400> 2 Tyr Asn Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR3 <400> 3 Gly Phe Ile Thr Thr Val Val Pro Ser Ala Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 LCDR1 <400> 4 Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 LCDR2 <400> 5 Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 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Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR1 (IH-MH) <400> 43 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Met His 1 5 10 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR2 (DG) <400> 44 Tyr Asn Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR2 (DG-EG) <400> 45 Tyr Asn Tyr Pro Arg Glu Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody h6B5 HCDR2 (DG-DV) <400> 46 Tyr Asn Tyr Pro Arg Asp Val Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 47 <211> 17 <212> PRT <213> 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Claims (130)

  1. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    투여가 유리체내 투여인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
  6. 제5항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패한 것인, 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서,
    사전 치료가 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제인, 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  13. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
  17. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  18. 제17항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  19. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함하고, 대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
  20. 제19항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    투여가 안구 투여인, 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 및 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서,
    안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    사전 치료가 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었던 것인, 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
  27. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
  28. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  29. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  30. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  31. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  32. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  33. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
  34. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
  35. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  36. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  37. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 당뇨망막병증 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
  38. 대상체에 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2 이상의 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 2 이상의 용량이 적어도 2 주 떨어진, 대상체에서 당뇨망막병증을 치료 또는 예방하는 방법.
  39. 제38항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  40. 제38항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  41. 제38항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  42. 제38항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  43. 제38항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  44. 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
  45. 제37항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    투여가 안구 투여인, 방법.
  46. 제45항에 있어서,
    안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
  48. 제37항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
  49. 제48항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서,
    사전 치료가 유리체절제술, 레이저 수술, 스테로이드 및/또는 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법이었던 것인, 방법.
  51. 제50항에 있어서,
    항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
  52. 제37항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
  53. 제37항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
  54. 제37항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 비-증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  55. 제37항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 당뇨망막병증의 증식 단계 동안 투여되는 것인, 방법.
  56. 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안구로 투여하는 단계를 포함하는, 안구 염증 질환을 치료하는 방법.
  57. 제56항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일-쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서,
    안구 투여가 국부 투여, 안구내 투여, 결막하 투여, 전방내 투여, 측두 변연을 통한 전방 내로의 주사, 기질내 투여, 각막내 투여, 망막하 투여, 안방수 주사, 테논낭하 투여, 맥락막상 공간(SCS)에 대한 투여, 섬모상 공간에 대한 투여 또는 유리체내 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  59. 제56항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
    안구 염증 질환이 망막 혈관신생, 맥락막 혈관신생, 각막 혈관신생, 황반변성, 연령-관련 황반변성, 당뇨망막병증, 유리체 출혈, 망막 출혈, 맥락막염, 신생혈관 녹내장, 맥락막 질환, 모세혈관확장증, 망막 동맥 폐쇄, 망막 정맥 폐쇄, 맥락망막염, 망막전막, 맥락막 신생물, 미숙아 망막증, 낭포 황반 부종, 시각신경유두부종, 재발성 허혈, 눈 출혈 및 증식 유리체망막병증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  60. 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    안구 투여가 유리체내 투여인, 방법.
  61. 제56항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료를 받았던 것인, 방법.
  62. 제61항에 있어서,
    대상체가 당뇨망막병증에 대한 사전 치료에 대한 반응에 실패하였던 것인, 방법.
  63. 제61항 또는 제62항에 있어서,
    사전 치료가 유리체절제술 및 레이저 수술로부터 선택되는 치료 절차, 또는 스테로이드 및 항-혈관 내피 성장 인자(VEGF) 요법으로부터 선택되는 치료제였던 것인, 방법.
  64. 제63항에 있어서,
    항-VEGF 요법이 베바시주맙, 라니비주맙 및 애플리버셉트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-VEGF 항체인, 방법.
  65. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 용량으로서 투여되는 것인, 방법.
  66. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 2 주, 적어도 3 주 또는 적어도 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  67. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 2 주 내지 약 4 주 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  68. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 3 개월, 적어도 4 개월, 적어도 5 개월, 적어도 6 개월, 적어도 7 개월, 적어도 8 개월, 적어도 9 개월, 적어도 10 개월 또는 적어도 11 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  69. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 개월 내지 약 6 개월 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  70. 제56항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 적어도 1 년 떨어진 2 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  71. 제56항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 전에 투여되는 것인, 방법.
  72. 제56항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상의 개시 후에 투여되는 것인, 방법.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고,
    a) VH가 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
    b) VL이 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
  74. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH가 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  75. 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 6B5 항체인, 방법.
  76. 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 6B5 scFv인, 방법.
  77. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고,
    a) VH가 GYTFTNYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 GLYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
    b) VL이 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
  78. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH가 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  79. 제1항 내지 제72항, 제77항 및 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 2A2 항체인, 방법.
  80. 제1항 내지 제72항, 제77항 및 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 2A2 scFv인, 방법.
  81. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고,
    a) VH가 서열번호 1 및 43으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44-47로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR2 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HCDR3을 포함하고,
    b) VL이 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR2 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR3을 포함하는 것인, 방법.
  82. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  83. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  84. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  85. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  86. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  87. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  88. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  89. 제81항에 있어서,
    HCDR1이 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, HCDR2가 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  90. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  91. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  92. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  93. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  94. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  95. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  96. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  97. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  98. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  99. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  100. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  101. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  102. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  103. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  104. 제81항에 있어서,
    VH가 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고 VL이 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 방법.
  105. 제81항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 6B5(h6B5) 항체인, 방법.
  106. 제81항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 h6B5 scFv인, 방법.
  107. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  108. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  109. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  110. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  111. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  112. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  113. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  114. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, VH가 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  115. 제107항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 항체인, 방법.
  116. 제107항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간화된 scFv인, 방법.
  117. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서,
    당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환을 예방하는 것이 당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 개시를 지연시키는 것을 포함하는 것인, 방법.
  118. 제1항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서,
    당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 대상체에서 감소되는 것인, 방법.
  119. 제118항에 있어서,
    당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 망막 염증, 무세포 모세혈관 형성, 망막 혈관신생, 망막 내피 세포 사멸, 망막 혈관 투과성, 망막 허혈-재관류 손상, 망막 누수 영역 및 오큘리딘 방해로부터 선택되는 것인, 방법.
  120. 제118항 또는 제119항에 있어서,
    당뇨망막병증 또는 안구 염증 질환의 하나 이상의 증상이 대조군 대상체 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
  121. 제1항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준이 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 감소되는 것인, 방법.
  122. 제121항에 있어서,
    하나 이상의 염증성 마커가 사이토카인, 성장 인자 및 부착 분자로부터 선택되는 것인, 방법.
  123. 제122항에 있어서,
    사이토카인이 TNFα, IL-1β, IL-6 또는 MCP1로부터 선택되는 것인, 방법.
  124. 제122항에 있어서,
    성장 인자가 VEGF인, 방법.
  125. 제122항에 있어서,
    부착 분자가 ICAM-1 또는 VCAM-1인, 방법.
  126. 제121항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체의 눈에서 하나 이상의 염증성 마커의 발현 수준이 대조군 대상체의 눈에서의 발현 수준 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
  127. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 시력 파라미터가 대조군 대상체의 시력 파라미터 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 시력 파라미터과 비교하여 대상체에서 증가되는 것인, 방법.
  128. 제127항에 있어서,
    하나 이상의 시력 파라미터가 주변시; 야간 시력; 색각; 원거리 시력; 근거리 시력 및 시력 선명도로부터 선택되는 것인, 방법.
  129. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체의 눈에서 망막 혈관 투과성이 대조군 대상체의 눈에서의 망막 혈관 투과성 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 눈에서의 발현 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 감소되는 것인, 방법.
  130. 제1항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체의 그룹에서 평균 조기 치료 당뇨망막병증 연구(ETDRS) 등급 스코어가 대조군 대상체의 그룹의 평균 ETDRS 등급 스코어 또는 항-세라미드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한 치료 전의 대상체의 그룹에서의 평균 ETDRS 등급 스코어와 비교하여 적어도 0.2, 적어도 0.5, 적어도 1, 적어도 1.5, 적어도 2 또는 적어도 2.5 낮아지는 것인, 방법.
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