KR20220088623A - 보툴리눔 독소의 액상 제제를 장기 보관하기 위한 약제학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 보툴리눔 독소의 액상 제제를 저온에서 장기 보관하기 위한 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 (ⅰ) 보툴리눔 독소, (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물 및 이를 이용한 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 보툴리눔 독소의 물리·화학적 안정성 및 3차 구조의 변성 방지에 탁월한 효과를 나타내며, 따라서 건조 제제에 제한된 기존의 보툴리눔 독소의 제형을 액상 제제로 확대 적용할 수 있다. 이와 같은 액상 내 보툴리눔 독소의 안정성 증대로 보툴리눔 독소의 제제화 과정에서의 안정성을 담보하여 서방성이나 속방성 형태의 제어방출형 주사 약물제제에 적용하거나 마이크로니들 패치 등의 마이크로구조체를 이용한 경피 전달 의약품 개발 등에 활용할 수 있을 것으로 기대된다.

Description

보툴리눔 독소의 액상 제제를 장기 보관하기 위한 약제학적 조성물 {Pharmaceutical composition for long-term storage of liquid formulation of botulinum toxin}

본 발명은 보툴리눔 독소의 액상 제제를 저온에서 장기 보관하기 위한 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 (ⅰ) 보툴리눔 독소, (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물 및 이를 이용한 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법에 관한 것이다.

보툴리눔 독소는 그람 양성 혐기성 박테리아인 클로스트리디움 보툴리눔 (Clostridium botulinum)이 만들어내는 신경독소이다. 보툴리눔 독소는 8가지 신경독소로 분류되며, 이중 7종 (A, B, C, D, E, F 및 G형)은 신경의 마비를 유발할 수 있다. 그 중에서도 천연 생물학적 작용제로 알려진 가장 치명적인 보툴리눔 독소는 A형으로, 독소 단백질의 크기는 약 150 kDa 정도이며, 독소 단백질 외에 비독소의 복합체화 단백질이 결합되어 복합체를 이루는데, 이때 복합체의 크기는 신경 독소의 종류에 따라 최대 900 kDa까지 형성된다.

보툴리눔 독소는 근육의 일시적인 이완성 마비를 일으키는 효과가 있으며, 작용 기전으로는 운동신경 말단 (말초신경의 콜린성 말단에 결합하여 신경세포 내로 유입)의 신경근 접합부에서 아세틸콜린의 분비를 억제함으로써 국소적인 근육의 마비를 일으킨다고 알려져 있다. 보툴리눔 독소는 근육의 국소적 마비를 유발하여 만성 근막통, 요통, 근육 경직, 긴장성 두통 등에 의한 통증을 억제하는 효과가 있으며, 이는 위의 작용 기전에서 알려진 바와 같이 신경근접합부의 축삭으로부터 아세틸콜린의 방출을 억제함으로써 신경신호전달을 차단하여 통증의 억제 효과가 나타나는 것으로 여겨지고 있다.

보툴리눔 독소는 1989년 미국 식품의약국 (FDA)의 허가를 받은 물질로서, 사시 및 미간 주름을 개선할 목적으로 널리 사용되고 있다. 치료용으로는 사시, 얼굴 떨림, 눈꺼풀 경련, 근육 강직 등에 이용되고 있고, 미용 목적으로는 주름 제거, 사각턱 시술 등에 사용되고 있다.

근육 및 피부 조직에 주사된 보툴리눔 독소의 지속 시간은 3 내지 6 개월 이내이며, 주사 효과는 3일 이내에 시작되고 최고 효과는 1 내지 2주 사이에 나타난다. 보툴리눔 독소에 의해 신경 근접합부에서 아세틸콜린의 분비가 억제되어 신호전달이 차단되면, 이후 새로운 신경 가지가 생성되면서 보툴리눔 독소에 의한 신경 마비 효과가 경감되므로 보툴리눔 독소의 정기적인 투여는 필수적이다.

한편, 히알루론산은 결합조직, 상피조직 및 신경조직 전체에 널리 분포하는 음이온성 비황화 글리코사미노글리칸 (Glycosaminoglycans, GAGs)으로서, 세포외 기질의 주요 구성 요소 중 하나이다. 주로 세포의 증식과 이동에 크게 기여하며, 생체적합성이 높은 생체재료 중 하나로서 골관절염 등의 치료를 목적으로 의약품의 주성분으로서 사용되거나, 액상 제제 내 점성을 부여하기 위한 첨가제로도 사용되고 있다.

보툴리눔 독소와 같은 단백질 의약품은 3차 구조의 변성이 약물의 약리학적 활성 정도에 영향을 끼치기 때문에 제형 선택의 폭이 매우 좁다. 특히, 보툴리눔 독소의 3차 구조 변성에 영향을 주는 다양한 요인 중 완제품 내의 수분 함량은 약효의 안정성에 매우 큰 영향을 미친다. 이는 기존의 보툴리눔 독소를 이용한 제제가 완제품 내 수분이 충분히 제거된 진공건조 주사제나 동결건조 주사제에 국한되어 있는 원인 중 하나이다.

또한, 진공건조 주사제나 동결건조 주사제는 사용자가 직접 희석하여 사용하여야 하기 때문에 사용자의 희석 방법 또는 관리 상태에 따라 주성분의 투여 편차가 발생될 가능성이 높아 안전성에 문제가 있으며, 사용 편의성도 떨어진다는 단점이 있다.

그러므로 봉입된 보툴리눔 독소의 약리학적 활성을 유지하면서 사용자의 편의성을 증대시킬 수 있는 액상 제제로의 개발이 절실한 실정이다. 이러한 요구에 따라 보툴리눔 독소의 액상 안정화 제제를 개발하기 위한 많은 선행 연구들이 진행되어 있지만, 대부분의 연구 결과는 보툴리눔 독소의 초기 생물학적 활성을 유지하는데 실패하였다. 그러므로 액상 제제 내 함유된 보툴리눔 독소의 약리학적 안정성을 담보하기 위한 저온 보관이 가장 현실적인 대안으로 각광받고 있으며, 이에 따라 액상 제제 내 보툴리눔 독소의 약리학적 활성을 유지시킬 수 있는 신규한 첨가제와 그에 따른 저온 보관 안정성 확보가 극복해야할 기술적 과제로 남아 있다.

10-2020-0066152 A

본 발명의 목적은 (ⅰ) 보툴리눔 독소; (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 조성물을 이용하여 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (ⅰ) 보툴리눔 독소; (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 조성물을 이용하여 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법을 제공한다.

본 발명자들은, 보툴리눔 독소의 액상 제제를 저온에서 장기 보관하더라도 생물학적 활성이 감소되지 않고 안정적인 보관이 가능한, 히알루론산 및 첨가제를 포함하는 약리학적 액상 조성물을 개발하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 보툴리눔 독소를 5 내지 40 unit/mL로 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 보툴리눔 독소는 복합체화 단백질을 함유하지 않는 형태 또는 복합체화 단백질을 함유하는 복합체 형태일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 히알루론산은 분자량이 30,000 내지 5,000,000 달톤(Da)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 히알루론산을 5 내지 250 mg/mL 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 당류는 락토오스 모노하이드레이트 또는 프럭토스일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 당류를 0.01 내지 5 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 (Polyoxyethylene hydrogenated castor oil)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유는 산화에틸렌의 몰비가 10 내지 60일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 비이온성 계면활성제를 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 안정화제는 글리세린일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 안정화제를 0.1 내지 10 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 히알루론산은 500,000 내지 2,000,000 달톤이고; 상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 히알루론산은 500,000 내지 2,000,000 달톤이고; 상기 당류는 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 비이온성 계면활성제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 히알루론산은 2,500,000 내지 5,000,000 달톤이고;

상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고;

상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 및

상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 완충제로서 25 내지 100 mM의 인산나트륨을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 즉시 사용 가능한 (ready-to-use) 주사제형 제제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 보툴리눔 독소; 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 혼합하는 단계를 포함하는, 보툴리눔 독소의 장기 보관용 약제학적 액상 조성물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 포함하는 액상 조성물의 보툴리눔 독소의 안정화 용도를 제공한다. 상기 안정화 용도는 보툴리눔 독소의 새물확절 활성 유지 용도를 포함한다.

또한, 본 발명은 보툴리눔 독소의 액상 안정화제를 제조하기 위한, 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 신경근육 관련 질환은 두통, 편두통, 긴장성 두통, 부비동 두통, 경추성 두통, 발한 장애, 겨드랑이 다한증, 손 다한증, 발 다한증, 프레이 증후군, 과운동성 피부 주름 (hyperkinetic skin line), 안면 주름, 미간 주름, 눈가 주름, 입가 주름, 코입술 주름, 피부 장애, 여드름, 비염, 부비동염, 이완불능증, 사시, 만성 치열, 안검경련, 근골격 통증, 족부 통증, 족부근막염, 족저근막염, 섬유근통, 췌장염, 빈맥, 전립선 비대, 전립선염, 요폐, 요실금, 과민성 방광, 반측안면 경련, 진전, 떨림, 근경련, 위장관 장애, 당뇨병, 통풍, 타액과다증, 배뇨근-조임근 협동장애, 뇌졸중 후 강직, 상처 회복, 소아 뇌성마비, 평활근 경련, 재협착, 국소 근긴장이상, 간질, 경부 근긴장이상증, 갑상선 장애, 고칼슘혈증, 강박 장애, 골관절염, 측두하악 관절장애, 레이노 증후군, 튼살, 복막 유착, 혈관경련, 콧물, 근육 경축, 후두 근긴장이상, 필기 경련, 및 수근관 증후군으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 액상 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 액상 조성물의 신경근육 관련 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 신경근육 관련 질환의 치료제를 제조하기 위한 상기 액상 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명은 유효성분인 보툴리눔 독소와 히알루론산의 약리학적 활성을 유지하기 위한 첨가제를 포함하는 액상 조성물을 제공함으로써 보툴리눔 독소의 장기 보관시 안정성을 현저히 증가시킬 수 있다. 첨가제인 pH 조절제, 당류, 계면활성제, 안정화제 등을 특정 농도로 조합하여 이를 보툴리눔 독소 액상 제제에 추가해 줌으로써, 보툴리눔 독소의 물리·화학적 안정성 및 3차 구조의 변성 방지에 탁월한 효과를 나타낸다. 따라서 본 발명에 따른 조성물을 이용하면 건조 제제에 제한된 기존의 보툴리눔 독소의 적용 가능 제형을 액상 제제로 확대하여 다양한 유형의 제품을 개발할 수 있다.

나아가 본 발명의 조성물을 활용한 액상 내 보툴리눔 독소의 안정성 증대로 보툴리눔 독소의 제제화 과정에서의 안정성을 담보하여 서방성이나 속방성 형태의 제어방출형 주사 약물제제에 적용하거나 마이크로니들 패치 등의 마이크로구조체를 이용한 경피 전달 의약품 개발 등에 활용될 수 있다. 또한 유효성분인 생체적합성이 우수한 히알루론산에 의한 부가적인 항염효과와 완제품 내 점성을 부여함으로써 보툴리눔 독소의 국부적 치료효과를 기대할 수 있다.

도 1은 첨가제로 사용된 당의 종류 및 농도에 따른 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성을 확인하여 그래프로 나타낸 도이다 (첨가된 히알루론산의 분자량 = 1 MDa).
도 2는 첨가제로 사용된 비이온성 계면활성제의 농도에 따른 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성을 확인하여 그래프로 나타낸 도이다 (첨가된 히알루론산의 분자량 = 1 MDa).
도 3은 첨가제로 사용된 안정화제의 농도에 따른 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성을 확인하여 그래프로 나타낸 도이다 (첨가된 히알루론산의 분자량 = 1 MDa).
도 4는 각기 다른 복수의 첨가제를 각기 다른 농도로 배합하여 첨가한 후 보툴리눔 독소 액상 조성물의 안정화 효능을 비교 분석하여 그래프로 나타낸 도이다 (첨가된 히알루론산의 분자량 = 1 MDa).
도 5는 각기 다른 복수의 첨가제를 각기 다른 농도로 배합하여 첨가한 후 보툴리눔 독소 액상 조성물의 안정화 효능을 비교 분석하여 그래프로 나타낸 도이다 (첨가된 히알루론산의 분자량 = 3 MDa).

본 발명자들은 본 발명에 따른 조성물을 이용하면 보툴리눔 독소, 히알루론산 및 첨가제를 포함하는 액상 제제 내 보툴리눔 독소의 약리학적 활성을 저온에서 장기간 유지시킬 수 있음을 구체적으로 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 일 실시예에서는, 다양한 종류의 당에 대해 스크리닝 실험을 수행하여 락토오스 모노하이드레이트 및 프럭토스를 첨가제로 선정하고, 이들을 다양한 농도로 첨가하여 보툴리눔 독소 액상 조성물의 안정성을 평가한 결과 락토오스 모노하이드레이트 0.1 % (w/v) 함유 시험군과 프럭토스 0.5 % (w/v) 함유 시험군의 저온 안정성이 현저하게 향상됨을 확인하였다 (실시예 1, 표 1 및 도 1 참조).

본 발명의 다른 실시예에서는, 다양한 종류의 비이온성 계면활성제에 대해 스크리닝 실험을 수행하여 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유를 첨가제로 선정하고, 이를 다양한 농도로 첨가하여 보툴리눔 독소 액상 조성물의 안정성을 평가한 결과 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유를 0.2 % (w/v) 농도로 함유하는 시험군에서 저온 안정성이 15주차까지 확보될 수 있음을 확인하였다 (실시예 2, 표 2 및 도 2 참조).

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 다양한 종류의 안정화제에 대해 스크리닝 실험을 수행하여 글리세린을 첨가제로 선정하고, 이를 다양한 농도로 첨가하여 보툴리눔 독소 액상 조성물의 안정성을 평가한 결과 글리세린 1 % (w/v) 함유 시험군에서 저온 안정성이 25주차까지 확보될 수 있음을 확인하였다 (실시예 3, 표 3 및 도 3 참조).

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 상기 실시예를 바탕으로 1 MDa의 히알루론산 및 각각의 첨가제를 다양한 조합으로 배합한 조성물의 안정화 효능을 확인하였고, 그 결과 하기의 조성을 만족하는 첨가제를 배합한 조성물의 보툴리눔 독소의 안정화 효능이 특히 우수함을 확인하였다: HCO-40 0.2% (w/v) 함유 첨가제; 프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v) 함유 첨가제; HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유 첨가제; 프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유 첨가제; 및 프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.05 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유 첨가제 (실시예 4, 표 4 및 도 4 참조).

특히, 상기 실시예에서 HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v)를 함유하는 첨가제; 및 프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v)를 함유하는 첨가제를 배합한 조성물은 12개월 이상의 장기적인 보툴리눔 독소 안정성 유지 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 상기 실시예를 바탕으로 3 MDa의 히알루론산 및 각각의 첨가제를 다양한 조합으로 배합한 조성물의 안정화 효능을 확인하였고, 그 결과 HCO-40 0.2% (w/v) 함유 첨가제; 프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유 첨가제; 및 HCO-40 0.05 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유 첨가제를 배합한 조성물의 보툴리눔 독소의 안정화 효능이 특히 우수함을 확인하였으며, 12개월 이상의 장기적인 보툴리눔 독소 안정성 유지 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다 (실시예 5, 표 5 및 도 5 참조).

따라서 본 발명은 (ⅰ) 보툴리눔 독소; (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 (ⅰ) 보툴리눔 독소; (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물을 이용하여, 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 약제학적 액상 조성물은, 바람직하게는 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 12개월 이상, 10개월 이상, 8개월 이상, 6개월 이상, 또는 5개월 이상 유지할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 명세서에서 사용된 용어, “보툴리눔 독소”는 세균에 의해 생산되거나 또는 재조합 기법에 의해 생산될 수 있으나, 공지된 임의의 종류의 보툴리눔 독소, 및 조작된 변이체 또는 융합 단백질을 포함한, 또는 뒤이어 발견될 수 있는 모든 종류의 보툴리눔 독소를 의미한다. 보툴리눔 독소는 8가지 혈청형 (serotype)으로 구분되며, 혈청형 A, B, C, D, E, F, 및 G형의 7종은 신경 마비를 유발할 수 있다. 본 발명에 따른 보툴리눔 독소는 보툴리눔 독소 A형일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 보툴리눔 독소는 세균 또는 재조합에 의해 생성되는 모든 혈청형 (serotype) 및 이의 유도체 또는 융합 단백질을 포함한다. 본 발명에서, “보툴리눔 독소 유도체”는 보툴리눔 독소 활성을 갖는 천연 보툴리눔 독소 또는 재조합 원형 보툴리눔 독소의 일부 또는 일부 사슬 상에 하나 이상의 화학적 또는 기능적 변형을 포함하는 유도체일 수 있다. 예를 들어, 보툴리눔 독소 유도체는 결실, 변형 또는 치환된 하나 이상의 아미노산을 갖는 변형된 독소일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 보툴리눔 독소를 5 내지 40 unit/mL로 함유하는 것일 수 있다.

상기 보툴리눔 독소 1 유닛 (Unit, U)은 체중이 17 내지 22 g인 암컷 스위스 웹스터 마우스 (Swiss Webster mice) 에 복강내 주사를 통한 사망률이 50%인 LD50으로 정의할 수 있다. 마우스에서 보툴리눔 독소 혈청형 A의 LD50은 약 50 피코그램이다.

본 발명에 있어서, 상기 보툴리눔 독소는 복합체화 단백질을 함유하지 않는 형태 또는 복합체화 단백질을 함유하는 복합체 형태일 수 있다. 상기 보툴리눔 독소는 복합체를 포함하는 단백질과 포함하지 않는 단백질로 나뉘며, 순수한 독소 단백질의 분자량은 약 150 KDa이고 복합체의 형성 유무에 따라 300 KDa, 500 KDa, 900 KDa 등 다양한 크기의 단백질이 생성된다.

본 발명에 있어서, 상기 히알루론산은 분자량이 30,000 내지 5,000,000 달톤(Da)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 본 발명에 따른 조성물은 30,000 내지 5,000,000 Da, 30,000 내지 4,500,000 Da, 30,000 내지 4,000,000 Da, 30,000 내지 3,500,000 Da, 30,000 내지 3,000,000 Da, 500,000 내지 5,000,000 Da, 500,000 내지 4,500,000 Da, 500,000 내지 4,000,000 Da, 500,000 내지 3,500,000 Da, 500,000 내지 3,000,000 Da, 1,000,000 내지 5,000,000 Da, 1,000,000 내지 4,500,000 Da, 1,000,000 내지 4,000,000 Da, 1,000,000 내지 3,500,000 Da, 1,000,000 내지 3,000,000 Da, 500,000 내지 2,000,000 Da, 500,000 내지 1,800,000 Da, 500,000 내지 1,700,000 Da, 500,000 내지 1,500,000 Da, 700,000 내지 1,300,000 Da, 800,000 내지 1,200,000 Da, 900,000 내지 1,100,000 Da, 1,500,000 내지 5,000,000 Da, 2,000,000 내지 5,000,000 Da, 2,500,000 내지 5,000,000 Da, 2,500,000 내지 4,500,000 Da, 2,500,000 내지 4,000,000 Da, 2,500,000 내지 3,500,000 Da, 2,700,000 내지 3,300,000 Da, 2,800,000 내지 3,200,000 Da, 또는 2,900,000 내지 3,100,000 Da의 분자량을 갖는 히알루론산을 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 히알루론산을 5 내지 250 mg/mL 농도로 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 예를 들어, 5 내지 250 mg/mL, 10 내지 250 mg/mL, 15 내지 250 mg/mL, 20 내지 250 mg/mL, 30 내지 250 mg/mL, 40 내지 250 mg/mL, 50 내지 250 mg/mL, 70 내지 250 mg/mL, 90 내지 250 mg/mL, 100 내지 250 mg/mL, 150 내지 250 mg/mL, 200 내지 250 mg/mL, 5 내지 200 mg/mL, 10 내지 200 mg/mL, 15 내지 200 mg/mL, 20 내지 200 mg/mL, 30 내지 200 mg/mL, 40 내지 200 mg/mL, 50 내지 200 mg/mL, 70 내지 200 mg/mL, 90 내지 200 mg/mL, 100 내지 200 mg/mL, 150 내지 200 mg/mL, 5 내지 150 mg/mL, 10 내지 150 mg/mL, 15 내지 150 mg/mL, 20 내지 150 mg/mL, 30 내지 150 mg/mL, 40 내지 150 mg/mL, 50 내지 150 mg/mL, 70 내지 150 mg/mL, 90 내지 150 mg/mL, 100 내지 150 mg/mL, 5 내지 100 mg/mL, 10 내지 100 mg/mL, 15 내지 100 mg/mL, 20 내지 100 mg/mL, 30 내지 100 mg/mL, 40 내지 100 mg/mL, 50 내지 100 mg/mL, 70 내지 100 mg/mL, 90 내지 100 mg/mL, 5 내지 90 mg/mL, 10 내지 90 mg/mL, 15 내지 90 mg/mL, 20 내지 90 mg/mL, 30 내지 90 mg/mL, 40 내지 90 mg/mL, 50 내지 90 mg/mL, 70 내지 90 mg/mL, 5 내지 70 mg/mL, 10 내지 70 mg/mL, 15 내지 70 mg/mL, 20 내지 70 mg/mL, 30 내지 70 mg/mL, 40 내지 70 mg/mL, 50 내지 70 mg/mL, 5 내지 50 mg/mL, 10 내지 50 mg/mL, 15 내지 50 mg/mL, 20 내지 50 mg/mL, 30 내지 50 mg/mL, 40 내지 50 mg/mL, 5 내지 40 mg/mL, 10 내지 40 mg/mL, 15 내지 40 mg/mL, 20 내지 40 mg/mL, 30 내지 40 mg/mL, 5 내지 30 mg/mL, 10 내지 30 mg/mL, 15 내지 30 mg/mL, 20 내지 30 mg/mL, 5 내지 20 mg/mL, 10 내지 20 mg/mL, 15 내지 20 mg/mL, 5 내지 15 mg/mL, 10 내지 15 mg/mL, 또는 5 내지 10 mg/mL의 농도로 함유하는 것일 수 있다. 상기 히알루론산은 염화나트륨 용액에 용해하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 용어, “히알루론산”은 아미노산과 우론산으로 이루어지는 복잡한 다당류 중의 하나로, 다양한 분자량을 가지며, 인체내 존재하는 히알루론산과 동일한 분자량을 갖는 히알루론산은 생물학적으로 안전할 뿐 아니라 피하내 주사 시 활액의 염증 수치 감소와 유동학적인 회복에 있어 효과적이다.

상기 “이의 약제학적으로 허용되는 염”은 일반적으로 동물, 특히 사람에게 사용되는 것으로 인식되는 염을 의미하는 것으로, 이에는 염기 첨가 염을 생성시키는데 사용되는 염으로서, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 또는 알루미늄염과 같은 무기염; 또는 에틸아민, 다이에틸아민, 에틸렌 다이아민, 데탄올아민, 다이에탄올아민, 아르기닌, 리신, 히스티딘 또는 피페라진과 같은 유기염; 또는 산 첨가 염으로서, 예를 들어 아세트산염, 시트르산염, 락트산염, 말론산염, 말레산염, 타르타르산염, 푸마르산염, 벤조산 염, 아스파라진산염, 글루탐산염, 숙신산염, 올레산염, 트리플루오로아세트산염, 옥살산염, 파모산염 또는 글루 콘산염과 같은 유기염; 또는 염화물, 황산염, 붕산염 또는 탄산염과 같은 무기염 등이 포함되며, 이에 한정되는 것은 아니다. 약제학적으로 허용 가능하다는 전제하에, 염의 특성은 중요한 요소가 아니다. 본 발명의 조성물의 히알루론산의 약제학적으로 허용가능한 염은 당해 기술분야에 잘 알려진 통상적인 방법에 의해 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 당류는 단당류 (2 내지 7탄당) 또는 다당류일 수 있다. 상기 당류의 종류에는 제한이 없으나, 글루코스, 프럭토스, 갈락토스, 수크로스, 락토오스, 셀룰로스, 및 녹말 등에서 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 있어서 상기 당류는 락토오스 모노하이드레이트 또는 프럭토스일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 당류를 0.01 내지 5 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 상기 당류는 조성물 내에 0.01 내지 5 % (w/v), 0.05 내지 5 % (w/v), 0.1 내지 5 % (w/v), 0.5 내지 5 % (w/v), 1 내지 5 % (w/v), 1.5 내지 5 % (w/v), 2 내지 5 % (w/v), 2.5 내지 5 % (w/v), 0.01 내지 4.5 % (w/v), 0.05 내지 4.5 % (w/v), 0.1 내지 4.5 % (w/v), 0.5 내지 4.5 % (w/v), 1 내지 4.5 % (w/v), 1.5 내지 4.5 % (w/v), 2 내지 4.5 % (w/v), 2.5 내지 4.5 % (w/v), 0.01 내지 4 % (w/v), 0.05 내지 4 % (w/v), 0.1 내지 4 % (w/v), 0.5 내지 4 % (w/v), 1 내지 4 % (w/v), 1.5 내지 4 % (w/v), 2 내지 4 % (w/v), 2.5 내지 4 % (w/v), 0.01 내지 3.5 % (w/v), 0.05 내지 3.5 % (w/v), 0.1 내지 3.5 % (w/v), 0.5 내지 3.5 % (w/v), 1 내지 3.5 % (w/v), 1.5 내지 3.5 % (w/v), 2 내지 3.5 % (w/v), 2.5 내지 3.5 % (w/v), 0.01 내지 3 % (w/v), 0.05 내지 3 % (w/v), 0.1 내지 3 % (w/v), 0.2 내지 2.8 % (w/v), 0.4 내지 2.6 % (w/v), 0.5 내지 3 % (w/v), 1 내지 3 % (w/v), 1.5 내지 3 % (w/v), 2 내지 3 % (w/v), 2.5 내지 3 % (w/v), 0.01 내지 2.5 % (w/v), 0.05 내지 2.5 % (w/v), 0.1 내지 2.5 % (w/v), 0.5 내지 2.5 % (w/v), 1 내지 2.5 % (w/v), 1.5 내지 2.5 % (w/v), 또는 2 내지 2.5 % (w/v) 농도로 함유되는 것일 수 있다. 상기 당류는 인산나트륨 완충제에 용해하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, “비이온성 계면활성제”란 물에 이온화되지 않고 용해되는 계면활성제를 의미하며, 상기 비이온성 계면활성제는 분산, 침투, 유화 등에 우수한 효과를 가진다. 약한 친수기여서 피부 자극이 적고 유화력이 우수해 의약품의 부형제뿐 아니라 화장료 성분으로도 활용된다. 예컨대, 비이온 계면활성제 성분으로는 폴리에틸렌글라이콜, 세틸알코올, 스테아릴알코올, 지방알코올, 데실글로코사이드, 라우릴글로코사이드, 옥틸글로코사이드, 폴리소르베이트, 코카마이드, MEA, 코카마이드DEA 등이 있다.

본 발명에 따른 비이온성 계면활성제의 구체적인 종류에는 제한이 없으나, 폴리솔베이트 (polysorbate; 폴리솔베이트 20, 40, 60, 80 등), 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 옥틸도데세스-16 (octyldodeceth-16), 세테아레스-6올리베이트 (ceteareth-6 olivate) 등에서 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 있어서 상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 (Polyoxyethylene hydrogenated castor oil)일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유는 산화에틸렌의 몰비가 10 내지 60일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적으로, 피마자유 및 에틸렌옥사이드를 반응시켜 에틸렌옥사이드가 부가된 피마자유를 사용할 수 있으며, 이때, 에틸렌옥사이드는 피마자유 1 mol을 기준으로 10 내지 60 mol이 부가될 있다. 일 구체예에서는, 경화 (수소첨가된) 피마자유에 에틸렌옥사이드를 40 mol 부가중합하여 얻은 폴리옥시에틸렌 (40) 경화 피마자유 [Polyoxyethylene (40) hydrogenated castor oil]를 사용하였다. 상기 용어 “폴리옥시에틸렌 (40) 경화 피마자유”는 용어 “HCO-40”과 상호 교환적으로 사용되었다. 그러나 이는 구체적인 실시예 중 하나일 뿐, 본 발명에 따른 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유는 HCO-10, HCO-20, HCO-30, HCO-40, HCO-50, 및 HCO-60 등으로부터 제한 없이 선택될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 비이온성 계면활성제를 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 상기 비이온성 계면활성제는 조성물 내에 0.01 내지 1 % (w/v), 0.01 내지 0.9 % (w/v), 0.01 내지 0.8 % (w/v), 0.01 내지 0.7 % (w/v), 0.01 내지 0.6 % (w/v), 0.01 내지 0.5 % (w/v), 0.01 내지 0.4 % (w/v), 0.01 내지 0.3 % (w/v), 0.03 내지 1 % (w/v), 0.03 내지 0.9 % (w/v), 0.03 내지 0.8 % (w/v), 0.03 내지 0.7 % (w/v), 0.03 내지 0.6 % (w/v), 0.03 내지 0.5 % (w/v), 0.03 내지 0.4 % (w/v), 0.03 내지 0.3 % (w/v), 0.05 내지 1 % (w/v), 0.05 내지 0.8 % (w/v), 0.1 내지 0.8 % (w/v), 0.15 내지 0.8 % (w/v), 0.2 내지 0.8 % (w/v), 0.05 내지 0.7 % (w/v), 0.1 내지 0.7 % (w/v), 0.15 내지 0.7 % (w/v), 0.2 내지 0.7 % (w/v), 0.05 내지 0.6 % (w/v), 0.1 내지 0.6 % (w/v), 0.15 내지 0.6 % (w/v), 0.2 내지 0.6 % (w/v), 0.05 내지 0.5 % (w/v), 0.1 내지 0.5 % (w/v), 0.15 내지 0.5 % (w/v), 0.2 내지 0.5 % (w/v), 0.05 내지 0.4 % (w/v), 0.1 내지 0.4 % (w/v), 0.15 내지 0.4 % (w/v), 0.2 내지 0.4 % (w/v), 0.05 내지 0.3 % (w/v), 0.1 내지 0.3 % (w/v), 0.15 내지 0.3 % (w/v), 0.2 내지 0.3 % (w/v), 0.05 내지 0.25 % (w/v), 0.1 내지 0.25 % (w/v), 0.15 내지 0.25 % (w/v), 또는 0.2 내지 0.25 % (w/v) 농도로 함유되는 것일 수 있다. 상기 비이온성 계면활성제는 인산나트륨 완충제에 용해하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서 상기 “안정화제 (stabilizer)”는 활성성분의 안정성을 증가시키고, 활성성분이 임의로 변화되어 산화, 결정화되거나, 또는 유연 물질 등으로 변성되는 것을 방지하기 위한 임의의 첨가제를 의미한다. 안정화제의 안정화 효능에 대한 평가는 온도를 한정하지 않고 수행될 수 있으나, 본 발명은 특히 고온에서보다 저온에서 보툴리눔 독소의 안정화 효과가 장기적으로 유지되는 것으로 이해된다.

본 발명에 있어서, 상기 안정화제는 글리세린 (glycerin)일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 안정화제를 0.1 내지 10 % (w/v) 농도로 함유하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 상기 안정화제는 조성물 내에 0.1 내지 10 % (w/v), 0.5 내지 10 % (w/v), 1 내지 10 % (w/v), 1.5 내지 10 % (w/v), 2 내지 10 % (w/v), 3 내지 10 % (w/v), 4 내지 10 % (w/v), 5 내지 10 % (w/v), 7 내지 10 % (w/v), 9 내지 10 % (w/v), 0.1 내지 9 % (w/v), 0.5 내지 9 % (w/v), 1 내지 9 % (w/v), 1.5 내지 9 % (w/v), 2 내지 9 % (w/v), 3 내지 9 % (w/v), 4 내지 9 % (w/v), 5 내지 9 % (w/v), 7 내지 9 % (w/v), 0.1 내지 7 % (w/v), 0.5 내지 7 % (w/v), 1 내지 7 % (w/v), 1.5 내지 7 % (w/v), 2 내지 7 % (w/v), 3 내지 7 % (w/v), 4 내지 7 % (w/v), 5 내지 7 % (w/v), 0.1 내지 5 % (w/v), 0.5 내지 5 % (w/v), 1 내지 5 % (w/v), 1.5 내지 5 % (w/v), 2 내지 5 % (w/v), 3 내지 5 % (w/v), 4 내지 5 % (w/v), 0.1 내지 4 % (w/v), 0.5 내지 4 % (w/v), 1 내지 4 % (w/v), 1.5 내지 4 % (w/v), 2 내지 4 % (w/v), 3 내지 4 % (w/v), 0.1 내지 3 % (w/v), 0.5 내지 3 % (w/v), 1 내지 3 % (w/v), 1.5 내지 3 % (w/v), 2 내지 3 % (w/v), 0.1 내지 2 % (w/v), 0.5 내지 2 % (w/v), 1 내지 2 % (w/v), 1.5 내지 2 % (w/v), 0.1 내지 1.5 % (w/v), 0.5 내지 1.5 % (w/v), 1 내지 1.5 % (w/v), 0.1 내지 1 % (w/v), 0.5 내지 1 % (w/v), 0.1 내지 0.5 % (w/v), 0.2 내지 2 % (w/v), 0.4 내지 1.8 % (w/v), 0.6 내지 1.6 % (w/v), 0.8 내지 1.4 % (w/v), 또는 0.8 내지 1.2 % (w/v) 농도로 함유되는 것일 수 있다. 상기 안정화제는 인산나트륨 완충제에 용해하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물이 당류를 포함하지 않는 경우, 상기 조성물에 포함된 비이온성 계면활성제 및 안정화제의 농도비는 0.01 내지 1 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.9 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.8 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.7 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.6 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.01 내지 0.4 : 1 (w/v), 또는 0.01 내지 0.3 : 1 (w/v) 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물이 비이온성 계면활성제를 포함하지 않는 경우, 상기 조성물에 포함된 당류 및 안정화제의 농도비는 1 내지 10 : 1 (w/v), 1 내지 9 : 1 (w/v), 1 내지 8 : 1 (w/v), 1 내지 7 : 1 (w/v), 1 내지 6 : 1 (w/v), 1 내지 5 : 1 (w/v), 1 내지 4 : 1 (w/v), 1 내지 3 : 1 (w/v), 2 내지 5 : 1 (w/v), 2 내지 4 : 1 (w/v), 또는 2 내지 3 : 1 (w/v) 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물이 안정화제를 포함하지 않는 경우, 상기 조성물에 포함된 당류 및 비이온성 계면활성제의 농도비는 1 내지 20 : 1 (w/v), 1 내지 18 : 1 (w/v), 1 내지 16 : 1 (w/v), 1 내지 14 : 1 (w/v), 1 내지 13 : 1 (w/v), 1 내지 10 : 1 (w/v), 1 내지 9 : 1 (w/v), 1 내지 8 : 1 (w/v), 1 내지 7 : 1 (w/v), 1 내지 6 : 1 (w/v), 1 내지 5 : 1 (w/v), 1 내지 4 : 1 (w/v), 1 내지 3 : 1 (w/v), 2 내지 5 : 1 (w/v), 2 내지 4 : 1 (w/v), 또는 2 내지 3 : 1 (w/v) 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물이 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제를 모두 포함하는 경우, 상기 조성물에 포함된 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제의 농도비는 0.1 내지 5 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 4.5 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 4 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 3.5 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 3 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 2.8 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 1 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.2 내지 0.9 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.3 내지 0.7 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.4 내지 0.6 : 0.01 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 1 : 0.02 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.1 내지 1 : 0.03 내지 0.5 : 1 (w/v), 0.2 내지 0.8 : 0.01 내지 0.4 : 1 (w/v), 0.3 내지 0.7 : 0.01 내지 0.3 : 1 (w/v), 또는 0.4 내지 0.6 : 0.03 내지 0.3 : 1 (w/v) 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명에 따른 액상 조성물에 포함된 히알루론산의 분자량이 500,000 내지 2,000,000 달톤인 경우, 상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 액상 조성물에 포함된 히알루론산의 분자량이 500,000 내지 2,000,000 달톤인 경우, 상기 당류는 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 비이온성 계면활성제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 액상 조성물에 포함된 히알루론산의 분자량이 2,500,000 내지 5,000,000 달톤인 경우, 상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 및 상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 완충제로서 인산나트륨을 더 포함할 수 있다. 상기 완충제는 전체 조성물을 기준으로 25 내지 100 mM, 25 내지 90 mM, 25 내지 80 mM, 25 내지 70 mM, 25 내지 60 mM, 30 내지 100 mM, 30 내지 90 mM, 30 내지 80 mM, 30 내지 70 mM, 30 내지 60 mM, 40 내지 100 mM, 40 내지 90 mM, 40 내지 80 mM, 40 내지 70 mM, 또는 40 내지 60 mM의 농도로 함유되는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 즉시 사용 가능한 (ready-to-use) 주사제형 제제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 주사제는 소르비톨, 이소말트, 에리스리톨, 트레할로스, 말티톨, 만니톨, 자일리톨 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 당 알코올을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 당 업계에서 일반적으로 공지된 것이라면 제한 없이 이용 가능하다.

본 발명의 약제학적 액상 조성물은 신경근육 관련 질환의 치료를 위하여 사용될 수 있다. 즉, 본 발명은 본 발명에 따른 약제학적 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, “신경근육 관련 질환”이란 말초 신경 및/또는 근육의 이상으로 인해 유도되는 질환을 의미한다. 상기 신경근육 관련 질환은 근육긴장이상 질환이나 비근육긴장이상 운동질환 (반얼굴연축, 진전, 강직 등)은 물론, 콜린성 신경계에 의해 조절되는 선 (gland)의 과다분비로 인한 질환도 포함한다. 바람직하게는, 상기 신경근육 질환은 활동 항진성 골격근을 특징으로 하는 것일 수 있다.

본 발명에 따른 신경근육 관련 질환은 종래 보툴리눔 독소가 치료 효과를 보이는 것으로 알려진 질환이라면 제한 없이 포함될 수 있으나, 이의 비제한적인 예시로는 두통, 편두통, 긴장성 두통, 부비동 두통, 경추성 두통, 발한 장애, 겨드랑이 다한증, 손 다한증, 발 다한증, 프레이 증후군, 과운동성 피부 주름 (hyperkinetic skin line), 안면 주름, 미간 주름, 눈가 주름, 입가 주름, 코입술 주름, 피부 장애, 여드름, 비염, 부비동염, 이완불능증, 사시, 만성 치열, 안검경련, 근골격 통증, 족부 통증, 족부근막염, 족저근막염, 섬유근통, 췌장염, 빈맥, 전립선 비대, 전립선염, 요폐, 요실금, 과민성 방광, 반측안면 경련, 진전, 떨림, 근경련, 위장관 장애, 당뇨병, 통풍, 타액과다증, 배뇨근-조임근 협동장애, 뇌졸중 후 강직, 상처 회복, 소아 뇌성마비, 평활근 경련, 재협착, 국소 근긴장이상, 간질, 경부 근긴장이상증, 갑상선 장애, 고칼슘혈증, 강박 장애, 골관절염, 측두하악 관절장애, 레이노 증후군, 튼살, 복막 유착, 혈관경련, 콧물, 근육 경축, 후두 근긴장이상, 필기 경련, 및 수근관 증후군 등이 있으며 상기 질환의 질환 치료 및 미용 목적 등으로 다양하게 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, "약제학적으로 허용 가능한 염"이란 약제학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다. 상기 용어는 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 기타 문제점이나 합병증 없이 이득/위험 비가 합리적이어서 대상체(예를 들어, 인간)의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 건전한 의학적 판단의 범주 이내인 화합물 또는 조성물을 의미한다.

적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명에 개시된 임의의 화합물의 범위에는 약제학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 이성질체, 수화물 및 용매화물이 모두 포함될 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 조성물은 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물 내의 상기 액상 조성물의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은, 액상형 제제 외에도 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스 (HPMC), HPMC 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜 (PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스 (HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등의 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지 (PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염 (초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨 (NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨 (Na₂S₂O₅), 아황산나트륨 (Na₂SO₃), 질소가스 (N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날 (Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠 (Imhausen), 모놀렌 (모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스 (Adeps solidus), 부티룸 태고-G (Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테 (Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움 (Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로 (OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제(TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간 (경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 따른 약제학적 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 미스트, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 핸드로션, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징오일, 클렌징밤, 바디로션 또는 바디클렌저의 형태일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01-5% 중량 백분율 또는 0.01-3% 중량 백분율로 배합될 수 있다.

본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실험 재료 및 방법

1. 보툴리눔 독소 액상 조성물의 제조

첨가제의 종류 및 농도에 따른 보툴리눔 독소의 생물학적 활성 유지력을 평가하기 위해, 히알루론산 및 첨가제로서 당류, 비이온성 계면활성제, 안정화제 또는 이들의 조합을 포함하는 보툴리눔 독소 액상 제제를 제조하였다. 구체적으로, 히알루론산(실시예 1 내지 4에서 사용된 히알루론산의 분자량 = 1 MDa, 실시예 5에서 사용된 히알루론산의 분자량 = 3 MDa)을 10 mg/mL의 농도가 되도록 0.9 % (w/v) 염화나트륨 용액에 용해하였다. 다음으로, 첨가제 후보물질을 단독으로 또는 두 가지 이상의 첨가제를 배합하여 50 mM 인산나트륨 완충제 (Sodium phosphate buffer, pH 6.0)에 용해한 후 히알루론산 수용액에 10 % (v/v)로 첨가하였다. 상기 제조된 히알루론산-첨가제 혼합물에 최종 농도가 20 unit/mL가 되도록 보툴리눔 독소를 넣어준 뒤 1시간 동안 교반하여 혼합하였다. 상기와 같이 제조한 보툴리눔 독소 액상 조성물은 4℃에서 보관하였다.

2. 동물 역가 시험 1 - 첨가제에 따른 보툴리눔 독소의 안정성 평가

동물 역가 시험은 다양한 농도로 희석한 첨가제를 단독 또는 두 가지 이상의 첨가제를 배합하여 제조한 본 발명에 따른 액상 조성물을 각각 ICR-마우스 (5주령, 체중: 19-22 g, 각 그룹당 10 마리)의 복강에 마리당 0.1 mL씩 투여하고, 3일 동안 사망한 마우스의 수를 확인하였다. 70% 이상의 사망률을 보인 그룹에 대하여는 통계학적으로 유의한 생물학적 활성 유지가 관찰되었다고 평가하였다. 조성물의 점성으로 인한 샘플링 오차 및 기타 실험적 오차를 고려하여 기준 이하의 사망률을 보인 그룹에 대해서는 다음 주기에 추가 확인 시험을 진행하였고, 기준 이상의 사망률을 보인 그룹에 대해서는 시험을 계속 진행하였다. 이하, 본 발명에서의 다른 동물 역가 시험 결과도 동일한 방법에 의해 수행되었다.

3. 동물 역가 시험 2 - 역가 및 특이 역가의 산출

다양한 농도로 희석한 첨가제를 단독 또는 두 가지 이상의 첨가지를 배합하여 제조한 본 발명에 따른 액상 조성물을 각각 ICR-마우스 (5주령, 체중: 19-22 g, 각 그룹당 10 마리)의 복강에 마리당 0.1 mL씩 투여하고, 3일 동안 사망한 마우스의 수를 확인하였다. 이렇게 얻은 데이터로 통계 프로그램 (Combistats^®, version 4.0, EDQM)을 사용하여 보툴리눔 독소의 활성을 산출하였다.

실시예 1. 당(saccharide)을 포함하는 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성 확인

종래 보툴리눔 독소 액상 제제의 첨가제로서 사용되고 있는 당을 제외한 다양한 종류의 당에 대해 스크리닝 실험을 수행하였고, 그 결과 락토오스 모노하이드레이트 (lactose monohydrate) 및 프럭토스 (fructose)를 최종 후보군으로 선정하였다. 락토오스 모노하이드레이트 또는 프럭토스를 각기 다른 함량으로 첨가해준 후, 상기 실험 재료 및 방법의 목차 2에서 기술한 동물 역가 시험 1을 진행하였다.

그 결과 하기 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 다른 시험군과 비교하여 락토오스 모노하이드레이트 0.1 % (w/v) 함유 시험군과 프럭토스 0.5 % (w/v) 함유 시험군의 저온 안정성이 현저하게 향상됨을 확인하였으며, 상기 두 시험군은 보툴리눔 독소의 생물학적 활성이 10주차까지 유지되는 것으로 나타났다. 상기 시험 결과는 하기 복수의 첨가제를 배합한 경우의 안정화 효능 비교 시험에 반영하여 각 첨가제의 배합 농도를 결정하였다.

첨가제		사망 개체 수/총 개체수
종류	함량 (% (w/v))	0주차	5주차	10주차	15주차
락토오스 모노하이드레이트	0.1	9/10	7/10	6/10	0/10
	1	8/10	0/10	0/10	0/10
프럭토스	0.5	9/10	9/10	8/10	0/10
	5	8/10	6/10	1/10	0/10

실시예 2. 비이온성 계면활성제(surfactant)를 포함하는 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성 확인

종래 보툴리눔 독소 액상 제제의 첨가제로서 사용되고 있는 비이온성 계면활성제를 제외한 다양한 종류의 비이온성 계면활성제에 대해 스크리닝 실험을 수행하였고, 그 결과 폴리옥시에틸렌 (40) 경화 피마자유[Polyoxyethylene (40) hydrogenated castor oil, 이하 'HCO-40']가 최종 후보로 선정되었다. 이에, HCO-40을 각기 다른 함량으로 첨가해준 후, 상기 실험 재료 및 방법의 목차 2에서 기술한 동물 역가 시험 1을 진행하였다.

그 결과 하기 표 2 및 도 2에 나타난 바와 같이, HCO-40 0.2 % (w/v)를 함유하는 시험군에서 저온 안정성이 15주차까지 확보될 수 있는 것으로 나타났다. 상기 시험 결과는 하기 복수의 첨가제를 배합한 경우의 안정화 효능 비교 시험에 반영하여 각 첨가제의 배합 농도를 결정하였다.

첨가제		사망 개체 수/총 개체수
종류	함량 (% (w/v))	0주차	5주차	10주차	12주차	15주차
대조군	0	9/10	8/10	0/10	-	-
HCO-40	0.05	8/10	7/10	6/10	8/10	1/10
	0.2	9/10	9/10	6/10	6/10	5/10

실시예 3. 안정화제(stabilizer)를 포함하는 보툴리눔 독소 액상 조성물의 저온 안정성 확인

종래 보툴리눔 독소 액상 제제의 첨가제로서 사용되고 있는 안정화제를 제외한 다양한 종류의 안정화제에 대해 스크리닝 실험을 수행하였고, 그 결과 글리세린(glycerin)이 최종 후보로 선정되었다. 이에, 글리세린을 각기 다른 함량으로 첨가해준 후, 상기 실험 재료 및 방법의 목차 2에서 기술한 동물 역가 시험 1을 진행하였다.

그 결과 하기 표 3 및 도 3에 나타난 바와 같이, 글리세린 1 % (w/v) 함유 시험군에서 저온 안정성이 25주차까지 확보될 수 있는 것으로 나타났다. 상기 시험 결과는 하기 복수의 첨가제를 배합한 경우의 안정화 효능 비교 시험에 반영하여 각 첨가제의 배합 농도를 결정하였다.

첨가제		사망 개체 수/총 개체수
종류	함량 (% (w/v))	0주차	5주차	10주차	15주차	17주차	20주차	25주차
대조군	0	9/10	8/10	0/10	-	-	-	-
글리세린	0.1	10/10	6/10	0/10	-	-	-	-
	1.0	9/10	9/10	8/10	7/10	8/10	8/10	10/10
	5.0	3/10	-	-	-	-	-	-

실시예 4. 복수의 첨가제를 포함하는 보툴리눔 독소 액상 조성물 (1 MDa의 히알루론산 사용)의 안정화 효능 비교 확인

상기 실시예 1 내지 3에서 수행된 첨가제 후보들의 단독 첨가에 의한 동물 시험 결과를 참조하여, 각각의 첨가제를 다양한 조합으로 배합한 후 안정화 효능을 확인하였다. 단, 예외적으로 프럭토스의 경우 단독 첨가한 시험군에서 사용된 농도의 중간값인 2.5 % (w/v)를 첨가하였다. 대조군 (negative control)으로는 어떠한 첨가제도 포함되지 않은 시료를 사용하였다. 설정된 보툴리눔 독소의 안정성 유지에 대한 기준을 만족하는 시험군에 대한 주기적인 동물 시험이 진행되었다. 전체 시험군의 조성은 하기 표에 나타냈다.

[시험군 조성]

결과는 하기 표 4 및 도 4에 나타내었다. 52주 동안 보관 안정성을 확인한 결과, 첨가제 단독에 의한 시험군보다 첨가제를 배합한 시험군에서 평균적으로 더 높은 사망률을 보였다.

특히, 0, 3, 6, 10, 15, 20, 25, 36, 및 52주의 기간 동안 측정된 마우스 사망률에 따르면, 시험군 1 [HCO-40 0.2% (w/v) 함유], 시험군 2 [프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v) 함유], 시험군 4 [프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유], 및 시험군 7 [프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.05 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유]에서의 보툴리눔 독소가 안정성 기준값 (20주차까지의 모든 관찰 기간 동안 70% 이상의 사망률을 보임)을 만족하는 것으로 나타났다. 특히, 시험군 3 [HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유], 및 시험군 4 [프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유]는 52주차에도 80% 이상의 높은 사망률을 보인 바, 상기 조성을 만족하는 첨가제를 배합하였을 때 12개월 이상의 장기적인 보툴리눔 독소 안정성 유지 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다.

구분

첨가제 함량 (% (w/v))

사망 개체 수/총 개체수

프럭토스

HCO-40

글리세린

0주차

3주차

6주차

10주차

15주차

20주차

25주차

36주차

52주차

대조군

0

0

0

9/10

8/10

0/10

시험군 1

0

0.2

0

8/10

7/10

6/10

8/10

9/10

8/10

5/10

8/10

1/10

시험군 2

0.5

0.2

0

8/10

10/10

7/10

9/10

9/10

8/10

5/10

0/10

0/10

시험군 3

0

0.2

1.0

10/10

6/10

7/10

8/10

7/10

8/10

5/10

9/10

10/10

시험군 4

0.5

0.2

1.0

9/10

7/10

10/10

7/10

10/10

7/10

5/10

8/10

9/10

시험군 5

0.5

0.05

0

7/10

6/10

7/10

10/10

7/10

6/10

7/10

4/10

0/10

시험군 6

0

0.05

1.0

8/10

5/10

4/10

6/10

6/10

7/10

5/10

4/10

5/10

시험군 7

0.5

0.05

1.0

8/10

8/10

9/10

8/10

7/10

7/10

10/10

10/10

3/10

시험군 8

2.5

0

0

9/10

8/10

7/10

8/10

6/10

9/10

9/10

0/10

0/10

시험군 9

2.5

0.2

0

8/10

7/10

10/10

10/10

5/10

3/10

1/10

0/10

0/10

시험군 10

2.5

0

1.0

8/10

6/10

10/10

10/10

7/10

7/10

6/10

1/10

0/10

시험군 11

2.5

0.2

1.0

6/10

9/10

9/10

7/10

9/10

6/10

7/10

5/10

3/10

실시예 5. 복수의 첨가제를 포함하는 보툴리눔 독소 액상 조성물 (3 MDa의 히알루론산 사용)의 안정화 효능 비교 확인

상기 실시예 1 내지 3에서 수행된 첨가제 후보들의 단독 첨가에 의한 동물 시험 결과를 참조하여, 각각의 첨가제를 다양한 조합으로 배합한 후 안정화 효능을 확인하였다. 단, 예외적으로 프럭토스의 경우 단독 첨가한 시험군에서 사용된 농도의 중간값인 2.5 % (w/v)를 첨가하였다. 대조군 (negative control)으로는 어떠한 첨가제도 포함되지 않은 시료를 사용하였다. 설정된 보툴리눔 독소의 안정성 유지에 대한 기준을 만족하는 시험군에 대한 주기적인 동물 시험이 진행되었다. 시험군 1 내지 11에 대해 실험을 진행하였으며, 각 시험군의 첨가제 조성은 상기 실시예 4의 첨가제 조성표와 동일하다.

결과는 하기 표 5 및 도 5에 나타내었다. 52주 동안 보관 안정성을 확인한 결과 첨가제 단독에 의한 시험군보다 첨가제를 배합한 시험군에서 평균적으로 더 높은 사망률을 보였다.

특히, 시험군 1 [HCO-40 0.2% (w/v) 함유], 시험군 4 [프럭토스 0.5 % (w/v), HCO-40 0.2 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유] 및 시험군 6 [HCO-40 0.05 % (w/v), 글리세린 1 % (w/v) 함유]에서의 보툴리눔 독소가 안정성 기준값 (모든 관찰 기간 동안 70% 이상의 사망률을 보임)을 만족하는 것으로 나타났을 뿐만 아니라, 52주차에도 80% 이상의 높은 사망률을 보인 바, 상기 조성을 만족하는 첨가제를 배합하였을 때 12개월 이상의 장기적인 보툴리눔 독소 안정성 유지 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다.

구분

첨가제 함량 (% (w/v))

사망 개체 수/총 개체수

프럭토스

HCO-40

글리세린

0주차

3주차

6주차

10주차

15주차

20주차

25주차

36주차

52주차

대조군

0

0

0

9/10

8/10

0/10

시험군 1

0

0.2

0

7/10

9/10

9/10

9/10

8/10

10/10

8/10

5/10

9/10

시험군 2

0.5

0.2

0

10/10

7/10

6/10

9/10

6/10

7/10

0/10

0/10

0/10

시험군 3

0

0.2

1.0

8/10

6/10

8/10

10/10

7/10

10/10

8/10

8/10

5/10

시험군 4

0.5

0.2

1.0

9/10

9/10

9/10

7/10

9/10

7/10

8/10

4/10

9/10

시험군 5

0.5

0.05

0

10/10

8/10

10/10

5/10

7/10

5/10

6/10

0/10

0/10

시험군 6

0

0.05

1.0

9/10

7/10

10/10

7/10

8/10

7/10

10/10

9/10

10/10

시험군 7

0.5

0.05

1.0

10/10

8/10

10/10

6/10

8/10

6/10

6/10

6/10

4/10

시험군 8

2.5

0

0

8/10

9/10

9/10

7/10

4/10

7/10

0/10

0/10

0/10

시험군 9

2.5

0.2

0

4/10

9/10

7/10

7/10

7/10

10/10

5/10

0/10

0/10

시험군 10

2.5

0

1.0

9/10

8/10

8/10

7/10

6/10

7/10

2/10

0/10

0/10

시험군 11

2.5

0.2

1.0

9/10

8/10

10/10

6/10

6/10

10/10

9/10

0/10

0/10

* 시험군 1 내지 시험군 11의 첨가제 조성은 상기 표 4와 동일

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (22)

1. 하기 (ⅰ) 내지 (ⅲ)을 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물:
   (ⅰ) 보툴리눔 독소;
   (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및
   (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 보툴리눔 독소를 5 내지 40 unit/mL로 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소는 복합체화 단백질을 함유하지 않는 형태 또는 복합체화 단백질을 함유하는 복합체 형태인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 히알루론산은 분자량이 30,000 내지 5,000,000 달톤 (Da)인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 히알루론산을 5 내지 250 mg/mL 농도로 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 당류는 락토오스 모노하이드레이트 또는 프럭토스인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 당류를 0.01 내지 5 % (w/v) 농도로 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 (Polyoxyethylene hydrogenated castor oil)인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유는 산화에틸렌의 몰비가 10 내지 60인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
   
10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 비이온성 계면활성제를 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
11. 제1항에 있어서,
    상기 안정화제는 글리세린인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
12. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 상기 안정화제를 0.1 내지 10 % (w/v) 농도로 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
13. 제1항에 있어서,
    상기 히알루론산은 500,000 내지 2,000,000 달톤이고;
    상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고;
    상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고;
    상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
14. 제1항에 있어서,
    상기 히알루론산은 500,000 내지 2,000,000 달톤이고;
    상기 당류는 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고;
    상기 비이온성 계면활성제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1% (w/v) 농도로 함유되어 있고;
    상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 10% (w/v) 농도로 함유되어 있는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
15. 제1항에 있어서,
    상기 히알루론산은 2,500,000 내지 5,000,000 달톤이고;
    상기 당류는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5 % (w/v) 농도로 함유되어 있고;
    상기 비이온성 계면활성제는 전체 조성물을 기준으로 0.01 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있고; 및
    상기 안정화제는 함유되어 있지 않거나, 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 1 % (w/v) 농도로 함유되어 있는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
16. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 완충제로서 25 내지 100 mM의 인산나트륨을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
17. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 즉시 사용 가능한 (ready-to-use) 주사제형 제제인 것을 특징으로 하는, 약제학적 액상 조성물.
    
18. 하기 (ⅰ) 내지 (ⅲ)을 유효성분으로 포함하는 약제학적 액상 조성물을 이용하여, 보툴리눔 독소의 생물학적 활성을 유지시키는 방법:
    (ⅰ) 보툴리눔 독소;
    (ⅱ) 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    (ⅲ) 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제.
    
19. 보툴리눔 독소; 히알루론산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 당류, 비이온성 계면활성제, 및 안정화제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 혼합하는 단계를 포함하는, 보툴리눔 독소의 장기 보관용 약제학적 액상 조성물의 제조방법.
    
20. 제1항의 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
    
21. 제20항에 있어서,
    상기 신경근육 관련 질환은 두통, 편두통, 긴장성 두통, 부비동 두통, 경추성 두통, 발한 장애, 겨드랑이 다한증, 손 다한증, 발 다한증, 프레이 증후군, 과운동성 피부 주름 (hyperkinetic skin line), 안면 주름, 미간 주름, 눈가 주름, 입가 주름, 코입술 주름, 피부 장애, 여드름, 비염, 부비동염, 이완불능증, 사시, 만성 치열, 안검경련, 근골격 통증, 족부 통증, 족부근막염, 족저근막염, 섬유근통, 췌장염, 빈맥, 전립선 비대, 전립선염, 요폐, 요실금, 과민성 방광, 반측안면 경련, 진전, 떨림, 근경련, 위장관 장애, 당뇨병, 통풍, 타액과다증, 배뇨근-조임근 협동장애, 뇌졸중 후 강직, 상처 회복, 소아 뇌성마비, 평활근 경련, 재협착, 국소 근긴장이상, 간질, 경부 근긴장이상증, 갑상선 장애, 고칼슘혈증, 강박 장애, 골관절염, 측두하악 관절장애, 레이노 증후군, 튼살, 복막 유착, 혈관경련, 콧물, 근육 경축, 후두 근긴장이상, 필기 경련, 및 수근관 증후군으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약제학적 조성물.
    
22. 제1항의 액상 조성물을 유효성분으로 포함하는 신경근육 관련 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

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