KR20220079561A - 항-줄기세포 인자 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-줄기세포 인자 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20220079561A
KR20220079561A KR1020227012536A KR20227012536A KR20220079561A KR 20220079561 A KR20220079561 A KR 20220079561A KR 1020227012536 A KR1020227012536 A KR 1020227012536A KR 20227012536 A KR20227012536 A KR 20227012536A KR 20220079561 A KR20220079561 A KR 20220079561A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
ser
fragment
val
seq
Prior art date
Application number
KR1020227012536A
Other languages
English (en)
Inventor
마틴 필립스
Original Assignee
옵시디오, 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 옵시디오, 엘엘씨 filed Critical 옵시디오, 엘엘씨
Publication of KR20220079561A publication Critical patent/KR20220079561A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 개시내용은 줄기세포 인자(SCF)에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 상기 항체 및 이의 항원-결합 단편은 SCF248에 특이적으로 결합한다. 본 개시내용은 추가로 항체의 제조 방법 및 염증성 및/또는 섬유증 질환 및 장애를 위한 치료 방법을 포함한 상기 항체의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

항-줄기세포 인자 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 가출원 제62/900,927호(출원일: 2019년 9월 16일)의 우선권 이익을 주장하며, 이 기초출원의 전문은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
기술분야
본 발명은 줄기세포 인자(SCF) 및 이의 특정 부분에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편 및 이러한 항체 및 항원-결합 단편의 사용 방법에 관한 것이다.
전자적으로 제출된 텍스트 파일의 설명
본 출원과 함께 전자적으로 제출된 텍스트 파일의 내용은 이의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독 가능한 형식의 복사본(파일명: OPSL_001_01WO_SeqList_ST25; 기록일: 2020년 9월 16일; 파일 크기: 58kb).
염증성 질환은 전세계적으로 이환율 및 사망률의 주요 원인이다. 일부 유형의 만성 염증은 섬유증으로 이어질 수 있는데, 이는 장기 또는 조직의 정상적인 구성요소로서 섬유 조직이 형성되는 것과는 대조적으로, 수복 또는 반응성 과정으로서 장기 또는 조직에서 과도한 섬유 결합 조직의 형성 또는 발달이다. 섬유증뿐만 아니라 만성 염증은 거의 모든 조직 및 장기 시스템에 영향을 미칠 수 있고, 섬유성 조직 리모델링은 암 전이에 영향을 미치고, 이식 수용자의 만성 이식 거부를 가속화할 수 있다.
줄기 세포 인자(SCF) 및 이의 수용체 c-Kit는 만성 염증 및 섬유증 질환의 지속의 중요한 인자이다(문헌[El-Koraie, et al., Kidney Int. 60: 167 (2001); Powell, et al., Am. J. Physiol. 289: G2 (2005); El Kossi, et al., Am. J. Kidney Dis. 41: 785 (2003); Powell, et al., Am. J. Physiol. 277: C183 (1999) Ding et al J Pathol. 2013 Jun;230(2):205-14., Berlin et al Lab Invest. 2006 Jun;86(6):557-65, Rasky et al Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2020 Jan 1;318(1):L200-L211]). c-Kit는 다수의 세포 유형에 존재하는 III형 수용체-티로신 키나제이다(문헌[Orr-Urtreger et al., Development 109: 911 (1990)]). 면역 세포, 예컨대, 비만 세포, 호산구 및 선천 림프구 세포 2 및 3(ILC2 및 ILC3)는 모두 관련 질환 및 장기에 따라서 만성 염증성 과정을 유발할 수 있는 c-Kit+ 세포이다. 염증 반응이 시작되면, SCF를 비롯한 다양한 매개인자가 c-Kit+ 면역 세포를 활성화하는데, 이것은 그 다음 섬유아세포가 활성화된 근섬유아세포가 되게 하는 사이토카인을 생산한다. 근섬유아세포는 세포외 기질 단백질, 콜라겐 및 피브로넥틴을 분비하여, 조직의 섬유증을 유발한다. 활성화된 근섬유아세포, 활성화된 상피, 내피, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 단핵구 및 기타 세포가 또한 세포 표면 상에서 SCF를 발현하는데, 이것은 더 많은 c-Kit+ 면역 세포를 활성화시켜, 더 많은 사이토카인을 방출하고 염증을 지속시킨다.
염증성 질환에 대한 보다 효율적이고 보다 구체적인 치료가 당업계에 요구되고 있다. 본 개시내용은 이러한 요구 및 다른 요구를 다룬다.
일 양상에서, 본 개시내용은 줄기세포 인자(SCF)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 SCF 아이소폼 SCF248에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 중쇄 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)을 포함하되, 중쇄 CDR1 CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 1, 2 및 3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 경쇄 CDR을 포함하되, 경쇄 CDR1 CDR2 및 CDR3은 각각 서열번호 4, 5 및 6을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 각각 서열번호 1, 37 및 3을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 서열번호 13, 14, 15, 16 및 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 13, 14, 15, 16 및 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1항의 항체 또는 이의 단편으로서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 9에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 11에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 12에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 인간화된다. 일부 실시형태에서, 항체는 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 IgG1 도메인 또는 인간 IgG4 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 항원 결합 단편이되, 단편은 Fab, F(ab')2, Fab', scFv 및 단일 도메인 항체(sdAb)로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 SCF(예를 들어, SCF248)와 c-Kit 간의 상호작용을 차단한다. 일부 실시형태에서, 항체는 SCF248에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 SCF220에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 항체는 SCF의 내재화를 초래함으로써 SCF248과 c-Kit의 상호작용을 방지하여, 그것이 세포 표면 상에서 사용될 수 없게 한다.
일 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다.
일 양상에서, 본 개시내용은 줄기세포 인자 아이소폼 248(SCF248)에 특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법을 제공하며, 이 방법은 숙주 동물을 서열번호 30(ASSLRNDSSSSNRKAKNPPGD) 또는 이의 단편을 포함하는 펩타이드로 면역화시키는 단계 및 상기 면역화된 숙주 동물로부터 항체를 얻는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 숙주 동물은 인간이 아니다. 일부 실시형태에서, 서열번호 30의 단편은 서열번호 30의 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개 또는 20개의 연속적인 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열번호 30의 단편은 서열번호 30의 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개의 연속적인 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열번호 30의 단편의 N-말단 아미노산은 서열번호 30의 N-말단의 1번 위치의 알라닌이다. 일부 실시형태에서, 방법은 숙주 동물을 서열번호 30으로 이루어진 펩타이드로 면역화시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역화된 숙주 동물로부터의 항체는 상기 숙주 동물로부터 단리된 면역 세포로부터 얻어진다. 일부 실시형태에서, 방법은 면역 세포를 사용하여 하이브리도마를 생성시키는 단계를 더 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 단클론성 항체를 생산하는 하이브리도마를 제공한다.
일 양상에서, 본 개시내용은 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 제공하되, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개 또는 적어도 13개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체는 SCF248와 c-키트의 상호작용을 저해한다. 추가 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 33 또는 서열번호 36을 포함한다. 더 추가의 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 33 또는 서열번호 36으로 이루어진다.
일 양상에서, 본 개시내용은 SCF와 c-Kit의 상호작용을 저해하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. C-Kit는 면역 세포, 조혈 줄기세포 및 일부 구조 세포 상에서 발현된다. C-Kit의 리간드 SCF248은 근섬유아세포, 활성화된 상피, 내피, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 단핵구 등 상에서 상향조절될 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물 및 방법은 SCF248과 c-Kit 간의 상호작용을 특이적으로 저해한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 조성물 및 방법은 근섬유아세포 상의 SCF248과 면역 세포 상의 c-Kit 간의 상호작용을 특이적으로 저해한다. 또 다른 예로서, 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물 및 방법은 근섬유아세포, 활성화된 상피, 내피, 대식세포, 호산구, 비만 세포 및/또는 단핵구 상의 SCF248과; 면역 세포 및/또는 구조 세포 상의 c-Kit의 상호작용을 특이적으로 저해한다. 일부 실시형태에서, 방법은 근섬유아세포 상의 SCF248을 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편은 c-Kit에 대한 SCF248의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, 차단은 입체 장애를 통해서이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편은 SCF248을 내재화시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 염증의 저해를 필요로 하는 대상체에서 염증을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 염증성 질환의 저해를 필요로 하는 대상체에서 염증성 질환을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 추가 실시형태에서, 염증성 질환은 만성 염증성 질환이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 염증 및/또는 만성 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 염증 및/또는 만성 염증성 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 섬유증의 저해를 필요로 하는 대상체에서 섬유증을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 섬유증 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 섬유증 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 실시형태에서, 방법은 1종 이상의 추가 요법 및/또는 치료제를 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 실시형태에서, 염증성 질환 또는 섬유증 질환은 두드러기, 아토피성 피부염, 수포성 유사천포창, 경피증, 전신 경화증, 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis: NASH), 원발성 경화 담관염, 간경화증, 폐 섬유증(예를 들어, 특발성 폐 섬유증(idiopathic pulmonary fibrosis: IPF), 경피증 폐 섬유증), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 낭포성 섬유증, 기관지주위 섬유증, 과민성 폐렴, 천식, 블레오마이신 폐, 심내막심근 섬유증, 섬유근육통, 호산구성 식도염, 방사선 섬유증, 류마티스 관절염 및 염증성 장 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
도 1은 조직 손상/염증성 질환 과정의 개략도를 제공한 도면.
도 2는 본 개시내용의 항-SCF248 항체인 5H10의 예시적인 기전을 도시한 도면. 5H10 항체는 도면에서 "OpSCF"로 지칭된다.
도 3은 SCF, SCF220 및 SCF 248; 및 단량체 절단된 세포외 도메인인 SCF165의 아이소폼을 도시한 도면. SCF165는 엑손 6 영역 내의 절단 부위에서 SCF248의 절단 시에 방출된다.
도 4A는 SCF를 발현하지 않는 대조군 세포(좌측 패널), SCF220을 발현하지만 SCF248을 발현하지 않는 세포(중간 패널), 및 SCF248을 발현하지만 SCF220을 발현하지 않는 세포(우측 패널)에 대한 뮤린 5H10 항체의 결합을 도시한 히스토그램 세트.
도 4B는 165개 아미노산의 절단된 SCF 세포외 도메인(ECD) 대 완전한 194개 아미노산 SCF ECD에 대한 뮤린 5H10 항체의 결합을 도시한 도면.
도 5는 배양된 인간 IPF 근섬유아세포를 pHrodo red-표지된 2G8, 5H10 또는 대조군 IgG 항체와 접촉시킨 후 유세포 분석법에 의해 측정된 평균 형광 강도(MFI)를 도시한 도면.
도 6은 5H10 항체 또는 IgG 대조군의 존재 하에서 호산구를 SCF248-발현 세포와 접촉시킨 후 c-kit 신호전달의 P13K/AKT 경로 및 MEK/ERK 경로의 활성화를 도시한 도면. 5H10 항체는 두 경로의 활성화를 유의하게 감소시켰다.
도 7A 내지 도 7B는 초기(도 7A) 및 후기(도 7B) 계대 Sl/Sl4 hSCF248(ATCC®　CRL2454™) 세포에 대한 뮤린 2G8 및 뮤린 5H10 항체의 유세포 분석법에 의한 결합을 도시한 도면.
도 8A 내지 도 8B는 초기 계대에서 Sl/Sl4 hSCF220(ATCC® CRL2453™) 세포(도 8A) 및 Sl/Sl4 hSCF248 세포(도 8B) 및 하이그로마이신 B 처리된 세포에 대한 뮤린 2G8 및 뮤린 5H10의 결합을 도시한 도면.
도 9A 내지 도 9B는 Sl/Sl4 hSCF220 세포(도 9A) 및 Sl/Sl4 hSCF248 세포(도 9B)에 대한 유세포 분석법에 의한 상이한 항체 농도에서의 2G8 인간화된 변이체의 결합을 도시한 도면.
도 10A 내지 도 10B는 Sl/Sl4 hSCF248 세포(도 10A) 및 Sl/Sl4 hSCF220 세포(도 10B)에 대한 유세포 분석법에 의한 상이한 항체 농도에서의 5H10 인간화된 변이체의 결합을 도시한 도면.
도 11A 내지 도 11D는 Sl/Sl4 hSCF248 세포에 대한 유세포 분석법에 의한 상이한 항체 농도에서의 2G8 인간화된 변이체(도 11A) 및 5H10 인간화된 변이체(도 11B, 도 11C, 도 11D)의 결합을 도시한 도면. 도 11c에서, 표시된 VH는 VK3과 쌍을 이룬다. 도 11d에서, 도시된 5H10 항체는 VH1/VK3이다.
도 12A 내지 도12C는 인간 IPF 근섬유아세포(Mfb)와 양성 대조군(관련없는 항체) 또는 도면에서 각각의 막대 하에 제시된 항체의 사전인큐베이션 후 CCL11(도 12A), 콜라겐 1A1(도 12B), 피브로넥틴(도 12C) 또는 콜라겐 3(도 12D)의 mRNA 수준 변화를 도시한 도면. 뮤린 모 항체는 도면에서 "5H10"으로 표시되고; 인간화된 5H10 항체 VH1/VK3, VH2/VK3, VH3/VK3, VH4/VK3 및 VH5/VK3을 또한 나타낸 바와 같이 시험하였다. 시험된 항체 농도는 1㎍/㎖ 또는 10㎍/㎖였다.
도 13은 pHrodo red 표지된 뮤린 5H10 항체, VH0/VK0 키메라 항체 및 인간화된 변이체 VH1/VK3 및 VH2/VK3의 내재화를 도시한 도면. 화살표는 내재화된 항체를 나타낸 예시적인 세포를 나타낸다.
도 14는 PBMC 생존력에 대한 5H10 인간화된 변이체의 효과를 도시한 도면.
도 15A 내지 도 15H는 EpiScreen™ 시간 경과 T 세포 증식 검정에서 표시된 5H10 인간화된 변이체에 의해 유도된 CD4+ T 세포 반응을 도시한 도면. 도 15G 및 도 15H에 제시된 Exenatide와 KLH는 각각 양성 대조군이다.
도 16은 EpiScreen™ 시간 경과 T 세포 증식 검정의 분산 분석(ANOVA).
도 17은 블레오마이신 대조군 동물(좌측 패널) 및 블레오마이신 및 5H10(20㎎/㎏)으로 처리된 동물의 폐 조직학을 도시한 도면. 도면에서, 5
도 18은 블레오마이신 및 대조군 IgG로 처리된 동물 대 블레오마이신 및 5H10(20 ㎎/㎏; 도면에서 항-SCF248으로 지칭됨)으로 처리된 동물에서의 폐 하이드록시프롤린의 감소를 도시한 도면.
도 19는 미경험(
Figure pct00001
) 마우스, 폐 섬유증을 유도하기 위해 블레오마이신 및 대조군 Ig 항체(Bleo + cIg)로 처리된 마우스 및 블레오마이신 및 뮤린 5H10 항체(도면에서 항-SCF248로 지칭됨)로 처리된 마우스에서 제0일에 측정된 체중의 %로서의 체중을 도시한 도면. 항체를 제시된 시점에 투여하였다.
도 20은 블레오마이신 및 대조군 IgG로 처리된 동물 대 블레오마이신 및 5H10(20 ㎎/㎏; 도면에서 항-SCF248으로 지칭됨)으로 처리된 동물에서 근섬유아세포 활성화의 염증성 사이토카인 및 마커(TGFβ, CCL2, Col1a1, 피브로넥틴(fn), 민무늬근 액틴(acta2) 및 줄기세포 인자(kitlg))에 대한 mRNA의 감소를 도시한 도면.
도 21은 블레오마이신 및 대조군 IgG로 처리된 동물 대 블레오마이신 및 5H10(20 ㎎/㎏; 도면에서 항-SCF248으로 지칭됨)으로 처리된 동물에서의 폐 비만 세포, 호산구 및 ILC2 림프구의 감소를 도시한 도면.
도 22는 강제 호기 부피(좌측 패널), 강제 호기 유량(중앙 패널) 및 폐압 변화(우측 패널)에 의해 측정된 폐 기능 시험이 블레오마이신 및 대조군 IgG로 처리된 동물과 비교하여 블레오마이신 및 5H10(20㎎/㎏; 도면에서 항-SCF248로 지칭됨)으로 처리된 동물에서 유의하게 개선되었음을 도시한 도면.
도 23은 인간화된 항체를 시험하기 위해 사용된 생체내 만성 알레르기 천식 모델에서 연구 설계의 개략도를 도시한 도면.
도 24A 내지 도 24E는 만성 알레르기성 천식의 생체내 모델에서 인간화된 5H10 항체를 사용한 치료 결과를 제공한 도면. 도 24A는 측정된 기도 저항이 PBS 대조군과 비교하여 VH1/VK3으로 처리된 동물에서 유의하게 감소되었음을 도시한 도면. 폐 조직에서 IL-13 mRNA(도 24B), 콜라겐 1 mRNA(도 24C) 및 콜라겐 3 mRNA(도 24D)는 또한 만성 천식(PBS) 대조군과 비교하여 VH1/VK3으로 처리된 동물에서 감소되었다. 도 24E는 PBS 대조군과 비교하여 VH1/VK3 5H10 항체로 처리된 동물에서 SCF248 mRNA 발현이 또한 감소되었음을 도시한 도면.
도 25A 내지 도 25C는 생체내에서 항체 VH1/VK3이 1㎎/㎏ 및 5㎎/㎏의 농도에서 점액 단백질 Gob5(도 25), IL-13(도 25B) 및 IL-5(도 25C)의 mRNA 수준을 감소시켰음을 나타낸 도면.
줄기세포 인자(SCF)는 급성 및 만성 염증, 섬유증 질환 및 조직 재모델링 질환의 주요 매개인자다. 면역 세포에서 SCF와 c-Kit의 상호작용은 염증 및 섬유증을 시작하고 지속시킨다. 본 개시내용은 SCF와 c-Kit의 상호작용을 저해하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 일 양상에서, 본 개시내용은 SCF의 염증성 형태인 SCF248이 c-Kit과 상호작용하는 것을 방지함으로써 면역 세포의 활성화를 감소시키고/시키거나 방지하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 만성 염증 및 섬유증 및 조직 재모델링 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일 양상에서, 본 개시내용은 장기 또는 조직에서 면역 세포의 축적 (예를 들어, 증식 및/또는 체류)을 감소시키기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 개시내용은 SCF248이 c-Kit과 상호작용하는 것을 방지함으로써 장기 또는 조직에서 면역 세포의 축적을 감소시키고/시키거나 방지하는 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 비만 세포, 호산구, 2형 선천 림프구(ILC2) 세포 및 3형 선천 림프구(ILC3) 세포의 장기 또는 조직에서 활성화 및/또는 축적을 감소시키거나 방지하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
특히, 본 개시내용은 SCF에 특이적으로 결합하고, 이와 c-Kit과의 상호작용을 차단하거나 저해하는 항체 및 이의 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 및 단편은 SCF에 결합하고, c-Kit 및 c-Kit+ 세포의 활성을 저해한다. 본 개시내용은 또한 SCF에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 단편을 생성시키는 방법, 뿐만 아니라 이의 사용의 진단 및 치료 방법을 제공한다. 일 양상에서, 본 명세서에 제공된 항체 및 이의 단편은 염증을 유발하는 SCF 아이소폼인 SCF248에 특이적으로 결합한다. 따라서, 본 개시내용은 염증 및 섬유증을 저해하고, 만성 염증성 질환 및 섬유증 질환을 치료하기 위한 구체적이고 효과적인 조성물 및 방법을 제공한다.
정의
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 적어도 하나의 항원 결합 도메인을 갖는 결합 단백질을 지칭한다. 본 발명의 항체 및 이의 단편은 전체 항체 또는 이의 임의의 단편일 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체 및 단편은 단클론성 항체 또는 이의 단편 및 항체 변이체 또는 이의 단편, 뿐만 아니라 면역접합체를 포함한다. 항원 결합 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), Fv, 단일 쇄 Fv 단백질("scFv"), 비스-scFv(scFv)2, 미니바디, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 이황화 안정화 Fv 단백질("dsFv"), 단일-도메인 항체(sdAb, 나노바디), 중쇄 단독 항체(예를 들어, 낙타류 VHH, 낙타류 나노바디, 상어 Ig NAR), 및 항원 결합을 담당하는 전장 항체의 부분을 포함한다. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이의 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다.
일부 실시형태에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 단리된 항체 및 이의 단편이다. 따라서, 본 발명은 단리된 항체 및 이의 항원 결합 단편 및 이러한 항체 및 단편을 암호화하는 핵산, 뿐만 아니라 이러한 단리된 항체, 단편 및 핵산을 포함하는 조성물을 제공한다. 용어 "단리된"은 자연 환경으로부터 분리된 관심 화합물(예를 들어, 항체 또는 핵산)을 지칭한다. 본 발명은 단리된 항체 또는 이의 단편 또는 이러한 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산을 포함하고, 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 예를 들어, 부형제, 희석제, 캡슐화 물질, 충전제, 완충제, 또는 다른 작용제를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 참조 항체 또는 다른 결합 단백질과 관련된 분자 또는 폴리펩타이드를 지칭하기 위해 사용되는 경우 용어 "유도된"은 참조 항체 또는 다른 결합 단백질과 동일한 에피토프에 특이적이고, 이에 결합할 수 있는 분자 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "에 대해 특이적"이라는 어구는 항체가 비-특이적 상호작용만으로는 표적에 결합하지 않는 것을 의미할 수 있으며, 이러한 특성은 아이소타입 대조군 등과 비교하여 결정될 수 있다. 특이적 결합은 단일 표적에 대한 배타적 결합을 포함할 수 있지만 반드시 필요한 것은 아니다. 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 SCF248에 특이적으로 결합하고, SCF220에는 결합하지 않는다.
용어 "숙주 세포"는 핵산 서열로 형질전환되었거나, 형질전환될 수 있어 관심 유전자를 발현하는 세포를 의미한다. 이 용어는 자손이 본래 모 세포와 형태학적으로 동일한지 이의 유전자 구성이 동일한지와 관계없이 관심 유전자가 존재하는 한 모 세포의 자손을 포함한다.
폴리펩타이드(예를 들어, 항원 결합 단백질 또는 항체)의 "변이체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 또 다른 폴리펩타이드 서열에 대해서 아미노산 서열에 삽입, 결실 및/또는 치환된 아미노산 서열을 포함한다. 변이체는 본 명세서에 제공된 항체 또는 단편 또는 언급된 DNA 또는 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 단편에 대해 언급된 동일성 백분율을 갖는 항체 및 이의 단편을 포함한다.
용어 "동일성"은 서열을 정렬하고 비교함으로써 결정된 바와 같은, 둘 이상의 폴리펩타이드 분자 또는 둘 이상의 핵산 분자의 서열 사이의 관계를 지칭한다. "동일성 백분율", "상동성 백분율", "서열 동일성" 또는 "서열 상동성" 등은 비교된 분자의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 간의 동일한 잔기의 백분율을 의미하고, 비교될 분자의 가장 작은 크기에 기초하여 계산된다. 이러한 계산을 위해서, 정렬 내의 갭(존재하는 경우)은 특정 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 처리되는 것이 바람직하다. 정렬된 핵산 또는 폴리펩타이드의 동일성을 계산하는 데 사용할 수 있는 방법은 문헌[Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), 1988, New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press; 및 Carillo et al., 1988, SIAM J. Applied Math. 48:1073]에 기재된 것을 포함한다. 동일성 백분율의 계산에서, 비교될 서열은 전형적으로 서열 간에 가장 큰 일치를 제공하는 방식으로 정렬된다.
용어 "경쇄"는 결합 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 경쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인 및 불변 영역 도메인을 포함한다. 경쇄의 가변 영역 도메인은 폴리펩타이드의 아미노-말단에 존재한다. 경쇄는 카파 쇄 및 람다 쇄를 포함한다.
용어 "중쇄"는 결합 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 가변 영역 도메인, 3개의 불변 영역 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 가변 중 도메인은 폴리펩타이드의 아미- 말단에 존재하고, CH 도메인은 카복실-말단에 존재하며, CH3은 폴리펩타이드의 카복시-말단에 가장 가깝다. 중쇄는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 하위유형 포함), IgA(IgA1 및 IgA2 하위유형 포함), IgM 및 IgE를 포함한 임의의 아이소타입일 수 있다. 용어 "아이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 부류를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 IgG4 중쇄 또는 특정 아미노산 돌연변이를 포함하는 IgG4 중쇄를 갖는다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, IgG4는 Fab 아암(arm) 교환을 저해하기 위해서, 228번 위치에서의 돌연변이(EU 넘버링 방식, 문헌[Kabat et al. Sequence of proteins of immunologic interest, 5th ed Bethesda, MD, NIH 1991])를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, IgG4 중쇄는 IgG4 S228P 중쇄이다. 일부 실시형태에서, 중쇄는 Fc 수용체에 대한 결합을 감소시켜 항체의 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 중쇄는 233, 234, 235, 236, 237, 265, 309, 331 및 409(EU 넘버링)번 위치 중 하나 이상에서 돌연변이를 포함할 수 있다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 일부를 지칭하며, 전형적으로 중쇄에 대략 아미노-말단 120 내지 130개의 아미노산 및 경쇄에 약 100 내지 110개 아미노산 말단 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 상이한 항체의 가변 영역은 동일한 종의 항체 사이에서도 아미노산 서열이 광범위하게 상이하다. 항체의 가변 영역은 전형적으로 표적에 대한 특정 항체의 특이성을 결정한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "표적"은 항원 결합 단백질에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 표적은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 표적은 항원이다. "항원 결합 단백질"이라는 어구에서 "항원"의 사용은 단순히 항원을 포함하는 단백질 서열이 항체에 의해 결합될 수 있음을 의미한다. 이러한 맥락에서, 단백질이 외인성이거나 면역 반응을 유도할 수 있을 필요는 없다.
용어 "에피토프"는 항원 결합 단백질, 예컨대, 항체 또는 T-세포 수용체에 의해 결합될 수 있는 임의의 결정인자를 포함한다. 에피토프는 해당 항원을 표적으로 하는 항원 결합 단백질에 의해 결합되는 항원의 영역이며, 항원이 단백질인 경우에는 항원 결합 단백질과 직접 접촉하는 특정 아미노산을 포함한다. 대부분의 경우, 에피토프는 단백질에 상주하지만, 일부 예에서는 핵산과 같은 다른 종류의 분자에 상주할 수도 있다. 에피토프 결정인자는 분자, 예컨대, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설폰일기의 화학적으로 활성인 표면기를 포함할 수 있고, 특정 3차원 구조적 특성 및/또는 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정 표적 항원에 특이적인 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식할 것이다. 항체 에피토프는 선형 또는 입체배좌적일 수 있다. 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 에피토프는 선형 에피토프이다.
단수의 사용은 특별히 달리 언급되지 않는 한 복수를 포함한다. 단수 표현은 달리 명시되지 않는 한 "적어도 하나"를 의미한다. "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. "적어도 하나"라는 어구의 의미는 "하나 이상"이라는 어구의 의미와 동일하다. 추가로, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 "포함하다" 및 "포함된"과 같은 다른 형태의 사용은 제한적이지 않다. 또한, 용어, 예컨대, "요소" 또는 "성분"은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 하나의 유닛을 포함하는 요소 또는 성분 및 하나 초과의 유닛을 포함하는 요소 또는 성분 둘 다를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 언급된 매개변수 값보다 많거나 적은 양, 예를 들어, "약"이 수식하거나 또는 당업자가 문맥으로부터 인식할 바와 같이 대상의 플러스 또는 마이너스 5% 또는 10%(예를 들어, 값 사이 간격의 대략 50%)를 지칭한다. 용어 "약"은 참조된 값을 포함한다.
줄기세포 인자
인간에서, 상이한 구조 및 활성을 갖는 적어도 2개 형태의 SCF가 존재한다. SCF220은 조혈 및 정자생성을 포함한 몇몇 항상성 기능에서 기능하며, 골수, 고환 및 다른 조직 및 기관에서 발견된다. SCF220은 서서히 절단 가능하고, 때로는 "막 SCF"라고도 불린다. 대조적으로, SCF248은 신속하게 절단 가능하고, N-말단 c-kit 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치한 엑손 6에 절단 부위를 포함한다. SCF248은 "가용성 SCF"라고 지칭될 수 있다. 엑손 6은 대체 스플라이싱을 통해 SCF220에서 배제되고, 따라서 SCF220은 이러한 절단 부위가 없다. 단량체 세포외 도메인(SCF165)은 절단 산물이며, 만성 염증성 질환에 대한 혈장 중의 바이오마커 역할을 한다. 혈장은 또한 SCF220으로부터 유래한 검출 가능한 수준의 SCF 세포외 도메인을 함유할 수 있지만, 검출 가능한 세포외 도메인의 대부분은 SCF165일 것으로 예상된다. SCF248은 근섬유아세포, 활성화된 상피 세포 및 다른 세포에서 발견되는 아이소폼이며, 이것은 염증 중에 면역 세포를 활성화하고 섬유증의 지속에 기여한다. 보다 구체적으로, SCF248은 면역 세포 상의 c-Kit에 결합하여, 섬유아세포를 활성화시켜 세포외 기질 단백질, 콜라겐 및 피브로넥틴을 분비하는 근섬유아세포가 되도록 하는 사이토카인의 생산을 개시한다. 활성화된 근섬유아세포뿐만 아니라 활성화된 상피, 내피, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 단핵구 및 다른 세포가 또한 세포 표면 상에서 SCF를 발현하여, 더 많은 c-Kit+ 면역 세포를 활성화시켜, 추가 사이토카인 방출 및 면역 활성화 및 섬유증 반응을 유발한다.
본 명세서에 개시된 항체 및 이의 항원-결합 단편은 SCF에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 인간 SCF에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 SCF248에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 항체는 SCF248에 결합하고, SCF의 다른 아이소폼에는 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 항체는 SCF248에 결합하고, SCF220에는 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 SCF248에 특이적인 항체 또는 이의 단편을 제조하는 방법을 제공한다. SCF248에 특이적인 예시적인 항체 및 단편, 뿐만 아니라 항체 및 단편의 제조 및 사용 방법이 본 개시내용에 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 항체 및 이의 단편은 SCF248에 결합하고 SCF248과 c-Kit 사이의 상호작용을 차단함으로써, 다양한 세포 유형 상에서 발현된 SCF248과 cKit+ 면역 세포 사이의 양성 피드백 루프를 파괴한다.
항체 및 단편
본 개시내용은 단클론성 항체 및 이의 단편을 포함하는 항체를 제공한다. SCF(예를 들어, SCF248)에 특이적인 본 명세서에서 제공되는 항체 단편은 때때로 본 명세서에서 항원-결합 단편으로 지칭되며, 이는 이들이 표적 항원(SCF, 예를 들어, SCF248)에 결합할 수 있는 모 항체의 부분을 포함함을 의미한다. "항체 단편", "항원 결합 단편" 등은 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 항체 단편의 예는 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab)' 단편, Fv 단편, 단리된 CDR 영역, 이중특이적 Fab 이량체(Fab2), 삼중특이적 Fab 삼량체(Fab3), 단일 쇄 Fv 단백질("scFv"), 비스-scFv(scFv)2, 미니바디, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 이황화 안정화 Fv 단백질("dsFv"), 단일-도메인 항체(sdAb, 나노바디), 중쇄 단독 항체(예를 들어, 낙타류 VHH, 낙타류 나노바디, 상어 Ig NAR), 및 항원 결합을 담당하는 전장 항체의 부분을 포함한다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 CH1 및 가변 영역을 포함한다. Fab 분자의 중쇄는 또 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다. "Fab' 단편"은 1개의 경쇄 및 VH 도메인 및 CH1 도메인을 함유하는 1개의 중쇄의 부분 및 또한 CH1과 CH2 도메인 사이의 영역을 포함하여, 2개의 Fab'단편의 2개의 중쇄 사이에 쇄간 이황화 결합이 형성되어 F(ab')2　분자를 형성할 수 있다. "F(ab')2 단편"은 2개의 경쇄 및 CH1 및 CH2 도메인 사이의 불변 영역의 일부를 함유하는 2개의 중쇄를 함유하여, 2개의 중쇄 사이에 쇄간 이황화 결합이 형성된다. 따라서, F(ab')2 단편은 2개의 중쇄 사이의 이황화 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다. "Fv 단편"은 중쇄 및 경쇄 둘 다로부터의 가변 영역을 포함하지만, 불변 영역이 없다. "scFv"는 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 가요성 링커에 의해 연결되어 단일 폴리펩타이드 쇄를 형성하고, 이는 항원 결합 영역을 형성하는 Fv 분자이다.
일부 양상에서, 본 명세서에서 제공되는 항체 및 이의 단편은 이의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 정의된다. CDR은 항체 내의 가변 쇄의 일부이고; 경쇄 및 중쇄 가변 영역 각각은 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 항체의 CDR은 항원 특이성을 결정한다. 특정 실시형태에서, CDR의 명확한 묘사 및 항체의 결합 부위를 포함하는 잔기의 확인은 항체의 구조를 해결하고/하거나 항체-리간드 복합체의 구조를 해결함으로써 달성된다. 특정 실시형태에서, 이는 X-선 결정학과 같은 당업자에게 공지된 다양한 기술 중 임의의 것에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시형태에서, 다양한 분석 방법을 이용하여 CDR 영역을 확인하거나 근사화할 수 있다. 이러한 방법의 예는 카밧(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의, AbM 정의 및 접촉 정의를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
카밧 정의는 항체 내의 잔기를 넘버링하기 위한 표준이며, 전형적으로 CDR 영역을 식별하는 데 사용된다. 예를 들어, 문헌[Johnson & Wu, Nucleic Acids Res., 28: 214-8 (2000)] 참조. 코티아 정의는 카밧 정의와 유사하지만, 코티아 정의는 특정 구조 루프 영역의 위치를 고려한다. 예를 들어, 문헌[Chothia et al., J. Mol. Biol., 196: 901-17 (1986); Chothia et al., Nature, 342: 877-83 (1989)] 참조. AbM 정의는 항체 구조를 모델링하는 Oxford Molecular Group에서 제조된 통합 컴퓨터 프로그램 제품군을 사용한다. 예를 들어, 문헌[Martin et al., Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272 (1989)]; "AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies", Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd] 참조. AbM 정의는 지식 데이터베이스와 ab initio 방법의 조합, 예컨대, 문헌[Samudrala et al., "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198 (1999)]에 기재된 것을 사용한 1차 서열로부터의 항체의 3차 구조를 모델링한다. 접촉 정의는 사용 가능한 복잡한 결정 구조의 분석에 기초한다. 예를 들어, 문헌[MacCallum et al., J. Mol. Biol., 5:732-45 (1996)] 참조.
항체 및 이의 단편은 또한 재조합 폴리펩타이드, 융합 단백질 및 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 항-SCF 항체 및 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입일 수 있다. 일 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-SCF 항체 및 이의 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입의 것이다. 본 발명의 항-SCF 항체 및 이의 단편은 마우스, 래트, 토끼, 영장류, 라마, 낙타, 염소, 상어, 닭 및 인간을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. SCF 항체 및 이의 단편은 키메라, 인간화 또는 완전한 인간 항체일 수 있다. 일 실시형태에서, 항-SCF 항체는 뮤린 항체이다. 또 다른 실시형태에서, 항-SCF 항체는 키메라 항체이다. 추가 실시형태에서, 키메라 항체는 마우스-인간 키메라 항체이다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 마우스로부터 유래되고 인간화된다.
"키메라 항체"는 하나의 종으로부터 유래된 중쇄 가변 영역의 적어도 일부 및 경쇄 가변 영역의 적어도 일부; 및 또 다른 종으로부터 유래된 불변 영역의 적어도 일부를 갖는 항체를 포함한다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 키메라 항체는 뮤린 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함할 수 있다.
"인간화된 항체"는 비-인간 항체로부터 유래된 상보성 결정 영역(CDR); 및 프레임워크 영역뿐만 아니라 인간 항체로부터 유래된 불변 영역을 함유하는 항체이다. 예를 들어, 본 명세서에서 제공되는 항-SCF 항체는 하나 이상의 뮤린 항체 및 인간 프레임워크 및 불변 영역으로부터 유래된 CDR을 포함할 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 인간화된 항체는 항체의 CDR이 유래된 뮤린 항체와 동일한 SCF 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 항체 및 이의 단편은 각각 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 예시적인 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3(각각 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3(각각 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열이 하기 표 1에 제공된다. 표 1은 또한 예시적인 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에서 "5H10" 및 "2G8"로 지칭되는 항체를 제공한다. 인간화된 5H10 또는 2G8의 중쇄 가변 영역은 본 명세서에서 VH1, VH2, VH3, VH4 및 VH5로 지칭된다. 5H10 VH0는 본 명세서에 기재된 방법을 통해 생성된 뮤린 모 항체의 가변 중쇄이다. VH1, VH2, VH3, VH4 및 VH5는 각각 5H10 VH0 또는 2G8 VH0으로부터 유래된 인간화 중쇄 가변 영역이다. 5H10 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 뮤린 모 항체 가변 경쇄는 본 명세서에서 5H10 VK0로 지칭된다. VK1, VK2, VK3 및 VK4는 각각 VK0으로부터 유래된 인간화된 경쇄 가변 영역이다. 2G8 항체는 람다 경쇄를 포함한다. 뮤린 모 항체 가변 경쇄는 본 명세서에서 2G8 VL0으로 지칭된다. VL1, VL2, VL3 및 VL4는 각각 VL0으로부터 유래된 인간화된 경쇄 가변 영역이다.
Figure pct00002
Figure pct00003
당업자는 가변 중쇄 및 가변 경쇄가 본 명세서에서 제공되는 항체로부터 독립적으로 선택되거나 혼합 및 매칭될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 및 이의 단편은 VH0/VK0, VH0/VK1, VH0/VK2, VH0/VK3, VH0/VK4, VH1/VK0, VH1/VK1, VH1/VK2, VH1/VK3, VH1/VK4, VH2/VK0, VH2/VK1, VH2/VK2, VH2/VK3, VH2/VK4, VH3/VK0, VH3/VK1, VH3/VK2, VH3/VK3, VH3/VK4, VH4/VK0, VH4/VK1, VH4/VK2, VH4/VK3, VH4/VK4, VH5/VK0, VH5/VK1, VH5/VK2, VH5/VK3 및 VH5/VK4로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄와 경쇄 조합물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 7 내지 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 7 내지 12로 이루어진 군으로부터 선택된 서열에 따른 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 7 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공하되, 항체 또는 단편은 각각 서열번호 1, 2 및 3과 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 12의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공하되, 항체 또는 단편은 각각 서열번호 1, 37 및 3과 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열에 따른 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공하되, 항체 또는 단편은 각각 서열번호 4, 5 및 6과 동일한 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 7과 서열번호 13; 서열번호 7과 서열번호 14; 서열번호 7과 서열번호 15; 서열번호 7과 서열번호 16; 서열번호 7과 서열번호 17; 서열번호 7과 서열번호 13; 서열번호 7과 서열번호 14; 서열번호 7과 서열번호 15; 서열번호 7과 서열번호 16; 서열번호 7과 서열번호 17; 서열번호 8과 서열번호 13; 서열번호 8과 서열번호 14; 서열번호 8과 서열번호 15; 서열번호 8과 서열번호 16; 서열번호 8과 서열번호 17; 서열번호 9과 서열번호 13; 서열번호 9와 서열번호 14; 서열번호 9와 서열번호 15; 서열번호 9와 서열번호 16; 서열번호 9와 서열번호 17; 서열번호 10과 서열번호 13; 서열번호 10과 서열번호 14; 서열번호 10과 서열번호 15; 서열번호 10과 서열번호 16; 서열번호 10과 서열번호 17; 서열번호 11과 서열번호 13; 서열번호 11과 서열번호 14; 서열번호 11과 서열번호 15; 서열번호 11과 서열번호 16; 서열번호 11과 서열번호 17; 서열번호 12와 서열번호 13; 서열번호 12와 서열번호 14; 서열번호 12와 서열번호 15; 서열번호 12와 서열번호 16; 또는 서열번호 12와 서열번호 17과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, or 적어도 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 단편을 제공한다.
특정 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 VH1/VK1, VH1/VK2, VH1/VK3, VH2/VK1, VH2/VK2, VH2/VK3, VH3/VK1, VH3/VK2, VH3/VK3, VH4/VK1, VH4/VK2, VH4/VK3, VH5/VK1, VH5/VK2 및 VH5/VK3으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄와 경쇄 조합물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 8 또는 서열번호 9와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 및 서열번호 16과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8 또는 서열번호 9와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 및 서열번호 16과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하되; 항체 또는 단편은 각각 서열번호 1, 2 및 3과 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6과 동일한 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8 또는 서열번호 9와 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 및 서열번호 16과 적어도 95% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하되; 항체 또는 단편은 각각 서열번호 1, 2 및 3과 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6과 동일한 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 항체 또는 이의 단편은 SCF248에 특이적으로 결합할 수 있지만, SCF220에는 결합할 수 없다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 8에 따른 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 9에 따른 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 항체 및 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 또는 12에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함하고/하거나; 서열번호 13, 14, 15, 16, 또는 17에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함한다. 변이체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다. CDR 또는 가변 경쇄 또는 중쇄 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입, 결실 또는 이들의 조합을 갖는 본 명세서에 개시된 항-SCF 항체는 본 명세서에서 제공되는 서열에 대한 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖지 않는 상응하는 항-SCF 항체의 생물학적 활성을 보유한다. 따라서, 본 명세서에서 제공되는 변이체 항-SCF 항체는 SCF248에 대한 특이적 결합을 유지한다. 용어 상동성 백분율, 서열 동일성, 서열 상동성 등은 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용되며, 2개의 참조 서열이 공유하는 동일한 아미노산 서열의 수를 아미노산 위치의 총 수로 나누고 100을 곱한 것을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 예시적인 항체 중 임의의 하나와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에서 제공되는 예시적인 항체와 SCF에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 29로서 본 명세서에 제공된 아미노산 서열의 영역에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호 33(ASSLRNDSSSSNRK) 또는 서열번호 36(ASSLRNDSSSSNR)의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 33 또는 서열번호 36에 따른 아미노산 서열로 이루어진 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 33의 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개 또는 적어도 10개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 및 이의 단편은 본 명세서에 제공된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및/또는 LCDR3 또는 이의 변이체를 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체 및 이의 단편은 항체를 포함하되, HCDR은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 또는 12의 HCDR이고/이거나; LCDR은 서열번호 13, 14, 15, 16 또는 17의 LCDR이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 카밧 넘버링 방식에 의해서 정의되는 경우, 본 명세서에 제공된 중쇄 가변 영역 중 임의의 하나의 아미노산 31 내지 35, 50 내지 65 및 95 내지 102를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 및 이의 단편은 카밧 넘버링 방식에 의해서 정의되는 경우, 본 명세서에 제공된 경쇄 가변 영역 중 임의의 하나의 아미노산 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97을 포함한다.
예시적인 인간화된 항체가 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에서 제공되는 중쇄 및 경쇄 CDR, 또는 이의 변이체를 포함하는 추가의 항-SCF 항체가 임의의 인간 프레임워크 서열을 사용하여 생성될 수 있고, 또한 본 발명에 포함된다. 일 실시형태에서, 본 발명에서 사용하기에 적합한 프레임워크 서열은 본 명세서에서 제공되는 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 프레임워크 서열을 포함한다. 본 명세서에서 제공되는 항체의 특성을 개선하기 위해서 프레임워크 영역의 추가 변형이 이루어질 수 있다. 이러한 추가 프레임워크 변형은 화학적 변형; 면역원성을 감소시키거나 T 세포 에피토프를 제거하기 위한 점 돌연변이; 또는 본래 생식계열 서열의 잔기에 대한 역돌연변이를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 이러한 프레임워크 변형은 생식계열 서열에 대한 역돌연변이를 포함하여 본 명세서에 예시된 돌연변이에 상응하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 인간화된 항체의 VH 및/또는 VL의 인간 프레임워크 영역 내의 하나 이상의 아미노산은 모 뮤린 항체에서 상응하는 아미노산으로 역돌연변이된다. 본 발명은 또한 SCF(예를 들어, SCF248)에 결합하고, 임의의 적합한 프레임워크 서열과 관련하여 본 명세서에 기재된 예시적인 변형에 상응하는 프레임워크 변형, 뿐만 아니라 항체의 특성을 달리 개선시키는 다른 프레임워크 변형을 포함하는 인간화된 항체를 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 예를 들어, 탈아마이드화 또는 산화를 감소시키고/시키고, 이성질체화를 감소시키고/시키고, 소수성 코어 및/또는 전하 클러스터 잔기를 최적화하고/하거나, 소수성 표면 잔기를 제거하고/하거나, 가변 중쇄와 가변 경쇄 사이의 계면에 관련된 잔기를 최적화하고/하거나 등전점을 변형시키는 표적화 아미노산 변경에 의해서 안정성을 개선시키고/시키거나 용해도를 개선시키고/시키거나, 글리코실화를 변경시키고/시키거나, 면역원성을 감소시키기 위한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 제공된 항-SCF 항체 및 이의 단편은 효과기 기능을 변형시키기 위한 Fc 영역 변형을 추가로 포함할 수 있다. Fc 변형은 아미노산 삽입, 결실 또는 치환일 수 있거나 화학적 변형일 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 변형은 상보체 결합을 증가 또는 감소시키거나, 항체-의존성 세포 세포독성을 증가 또는 감소시키거나, 또는 항체의 반감기를 증가 또는 감소시키도록 만들어질 수 있다. 일부 Fc 변형은 Fcγ 수용체, 예컨대, FcγRI, FcγRII, FcγRIII 또는 FcRn에 대한 항체의 친화도를 증가시키거나 감소시킨다. 다양한 Fc 변형은 당업계, 예를 들어, 문헌[Shields et al., J Biol. Chem 276; 6591 (2001); Tai et al. Blood 119; 2074 (2012); Spiekermann et al. J Exp. Med 196; 303 (2002); Moore et al. mAbs 2:2; 181 (2010); Medzihradsky Methods in Molecular Biology 446; 293 (2008); Mannan et al. Drug Metabolism and Disposition 35; 86 (2007); 및 Idusogie et al. J Immunol 164; 4178 (2000)]에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, Fc 영역 글리코실화 패턴이 변경된다. 다른 실시형태에서, Fc 영역은 페길화(예를 들어, 항체 또는 이의 단편을 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 반응시킴)에 의해서 변형된다. 예시적인 Fc 변형은 228, 233, 234, 235, 236, 241, 248, 265, 297, 309, 331 및 409(카밧 넘버링; 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)])로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에 변형을 포함한다. 실시형태에서, 항체는 효과기 기능을 감소시키거나 제거하기 위한 변형을 갖는다. 실시형태에서, 항체는 E233P, L234V, L234A, L235V, L235A, G236(결실), D265A, D270A, N297A 및 N297Q로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 Fc 변형을 갖는 IgG1 항체이다. 실시형태에서, 항체는 S228P, E233P, F234A, F234V, L235A, L235V, S241P, L248E, D265A, D265T, L309L 및 R409K로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 Fc 변형을 갖는 IgG4 항체이다. 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항-SCF 항체는 S241P 돌연변이 및 L248E 돌연변이를 포함한다.
실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 40 및 서열번호 41에 따른 인간 IgG4 불변 영역을 포함하는 본 명세서에 제공된 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50에 대해서 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 약 99% 서열 동일성을 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 40에 따른 중쇄 및 서열번호 41에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42, 43, 44, 45 또는 46에 따른 중쇄 및 서열번호 47, 48, 49 또는 50에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 43에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 44에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 45에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 46에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법을 제공한다. SCF의 SCF248 아이소폼은 엑손 6을 포함하는데, 이것은 2개의 알라닌 잔기 사이에 절단 부위(서열번호 34의 아미노산 16 및 17, 이것은 엑손 6의 아미노산 서열을 제공함)를 포함한다. 이전 항-SCF 항체는 마우스를 엑손 6 및 엑손 7의 부분에 걸쳐있는 펩타이드로 면역화시킴으로써 생성되었다(예를 들어, 미국 특허 제8,911,729호 참조, 이것은 모든 목적을 위해서 이의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함됨). SCF220가 항상성 활성과 연관된 경우, SCF220과의 임의의 교차 반응성은 유해할 것인데, 그 이유는 이것이 대상체에서 다양한 표적외 효과를 초래할 것이기 때문이다. 유리하게는, 본 개시내용에 제공된 항체는 매우 높은 특이성으로 SCF248에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 SCF248에 특이적이고, SCF220에 결합하지 않는다. 따라서, 본 명세서에 제공된 항체는 만성 염증성 반응 섬유증을 유도하고, 지속시키는 SCF248과 c-Kit 간의 상호작용을 특이적으로 저해할 수 있다. 더욱이, 본 명세서에 제공된 항체는 SCF의 내재화를 특이적으로 유도하여, SCF248과 c-Kit의 상호작용을 감소시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서 본 개시내용은 SCF248에 특이적이고, 본 명세서에 논의되고 당업계에 공지된 다양한 염증성 및 섬유증 질환에 안전하고, 효과적인 항체를 제공한다.
단클론성 항체의 제조를 위해서, 배양물 중의 연속적 세포주에 의해서 항체 분자를 생산을 제공하는 임의의 기술이 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] 참조). 이것은
Figure pct00004
및 Milstein에 의해 본래 개발된 하이브리도마 기술 및 인간 B-세포 하이브리도마 기술인 트리오마 기술(예를 들어, 문헌[Kozbor et al., Immunol. Today, 4:72 (1983)] 참조) 및 인간 단클론성 항체를 생산하기 위한 EBV-하이브리도마 기술(문헌[Cole et al., in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96 (1985)])을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 대안적으로, 항체는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 예를 들어, 문헌[Clackson et al., Nature 352:624-28 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222(3):581-97 (1991)]에 기재된 기술을 사용하여 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단클론성 항체를 단리시킴으로써 제조될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간-유래 파지 디스플레이 또는 효모 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열(들)을 공지된 인간 불변 도메인 서열(들)과 조합함으로써 작제된 완전한 인간 항체이다.
본 명세서에서 제공되는 일부 실시형태에서, 항체는 하이브리도마로부터 제조된다. 일부 실시형태에서 본 명세서에 제공된, the 항체 are prepared from a 하이브리도마. 하이브리도마 방법을 사용하여, 마우스, 햄스터 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역화 펩타이드를 주입하여 면역화 항원에 특이적으로 결합할 항체의 림프구 생산을 도출함으로써 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 면역화 후, 림프구를 단리시키고, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 적합한 골수종 세포주와 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성하고, 그 다음 이것을 융합되지 않은 림프구 및 골수종 세포로부터 선택할 수 있다. 그 다음 면역침전, 면역블로팅에 의해서 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대, 방사성면역검정(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 결정된 바와 같은 선택된 항원에 대해 특이적으로 지향되는 단클론성 항체를 생산하는 하이브리도마를 표준 방법(문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986])을 사용하여 시험관내(예를 들어, 배양물에서)에서 또는 동물의 복수 종양으로서 생체내에서 증식시킬 수 있다. 그 다음 단클론성 항체를 상기 다클론성 항체에 대해 기재된 바와 같이 배양 배지 또는 복수액으로부터 정제시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 뮤린 하이브리도마 시스템을 사용하여 생성된다. 마우스에서 하이브리도마 생산은 널리 확립된 절차이다. 융합을 위한 면역화된 비장세포의 단리를 위한 면역화 프로토콜 및 기술은 당업계에 공지되어 있다. 융합 파트너(예를 들어, 뮤린 골수종 세포) 및 융합 절차 또한 공지되어 있다. 본 명세서에서 기술의 실시형태는 SCF 단백질의 일부 또는 단편인 펩티드로 마우스를 면역화시킴으로써 제조된 하이브리도마로부터 생산된 항체(예를 들어, 단클론성 항체)를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 SCF248에 특이적인 항체는 엑손 6 내에 대체로 또는 독점적으로 존재하는 아미노산 서열을 갖는 펩티드로 마우스를 면역화시킴으로써 생성된다. 예를 들어, 면역화 펩티드는 서열번호 34 내의 5개 이상의 아미노산의 임의의 스트레치를 포함한다. 또 다른 예로서, 면역화 펩티드는 서열번호 29의 20번 아미노산 위치에서 시작하는 5개 이상의 아미노산의 임의의 스트레치를 포함한다. 또 다른 예로서, 면역화 펩티드는 서열번호 29의 20번 아미노산 위치에서 시작하고, 서열번호 29의 25 내지 38번 위치 중 어느 하나에서 끝나는 5개 이상의 아미노산의 스트레치를 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 면역화 펩티드는 절단 부위 이후에 엑손 6의 아미노산 서열을 포함하고, 엑손 6 내에 완전히 함유되거나 엑손 7의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산만을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역화 펩티드는 서열번호 30을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 면역화 펩티드는 본 명세서에서 제공되는 임의의 펩티드 중 임의의 것 또는 이의 보존적 변이체를 포함한다. 변이체는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환 또는 결실, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기에 제공된 바와 같이, 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 면역화 펩티드를 사용하여 생성된 항체는 엑손 6 내에 완전히 또는 대부분 속하는 에피토프를 갖는다. "내에 대부분"이라는 것은, 펩타이드의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%가 엑손 6에 속한다는 것을 의미한다. 일부 실시형태에서, 에피토프는 엑손 6의 절단 부위(즉, 서열번호 29의 19번 아미노산 위치의 알라닌과 20번 아미노산 위치 사이)에서 시작하여 엑손 6의 단부까지 연장된다. 일부 실시형태에서, 에피토프는 엑손 6의 절단 부위에서 시작하여 막관통 도메인의 1, 2, 3, 4 또는 5번째 n-말단 아미노산까지 연장된다. 일부 실시형태에서, 에피토프는 서열 33을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 5H10으로 지칭되는 항체(뮤린, 키메라 및 인간화된 5H10 항체 포함)는 서열번호 33을 포함하거나 이로 이루어진 SCF의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법을 사용하여 본 명세서에서 5H10으로 지칭되는 항체를 생성하였다. 일부 실시형태에서, 항체 "5H10"은 또한 본 명세서에서 "OpSCF"로 지칭된다. 항체 5H10은 유리하게는 높은 특이성으로 SCF248에 결합하고, SCF220에는 결합하지 않는다. 뮤린 모 항체 5H10의 아미노산 서열뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체가 본 명세서에 제공된다(표 1 참조).
일 실시형태에서, 본 발명은 SCF 및 적어도 하나의 다른 항원 또는 에피토프에 특이적인 이중특이적 또는 다중특이적 항체를 제공한다. 본 명세서에서 제공되는 항-SCF 항체 및 이의 단편은 본 명세서에서 제공되는 결합 검정 또는 당업계에 공지된 임의의 다른 결합 검정을 사용하여 SCF에 대한 결합에 대해 시험될 수 있다.
달리 언급되지 않는 한, 본 발명의 실시는 당업계에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Methods in Molecular Biology, Humana Press; Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989), Current Protocols in Immunology (J. E. Coliganet al., eds., 1991); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Phage display: a laboratory manual (C. Barbas III et al, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001); 및 Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)]에 기재된 종래의 분자 생물학, 세포 생물학 생화학 및 면역학 기술을 사용한다.
치료 방법
일 양상에서, 본 개시내용은 면역 세포 상의 c-Kit와 SCF248의 상호작용을 통해서 면역 세포 이동, 활성화 및/또는 증식과 연관된 임의의 질환 또는 병태를 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 면역 세포의 활성화를 저해 또는 예방하는 방법을 제공하고; 뿐만 아니라 기관 또는 조직 내의 면역 세포의 축적을 감소 또는 예방함으로써, 염증을 수반하는 다양한 질환 및 장애를 치료 또는 예방한다. 일부 실시형태에서, 면역 세포는 비만 세포, 선천성 림프 세포(ILC, 예컨대, ILC2 또는 ILC3 세포) 및 호산구로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 치료적 조치 및 예방적 또는 예방적 조치를 둘 다를 지칭한다. 치료를 필요로 하는 대상체는 질환 또는 병태를 이미 갖고 있는 대상체뿐만 아니라 질환 또는 병태가 발병할 수 있는 대상체를 포함하고, 그 대상채에서 질환 또는 병태를 예방, 지연 또는 감소시키는 것이 목적이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물, 예컨대, 설치류, 고양이, 개 및 영장류를 지칭한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 대상체는 인간이다. 본 명세서에 사용된 용어 "치료적 유효량"은 대상체에게 치료 및/또는 예방 유익을 제공하는 데 필요한 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다.
일 양상에서, 본 발명은 염증성 질환, 섬유증 질환 및/또는 조직 재모델링 질환에 대해서 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 염증성 질환은 만성 염증성 질환이다.
만성 염증성, 섬유증 및 조직 리모델링 질환은 폐, 신장, 간, 심장, 피부, 결합 조직 및 기타 조직의 질환을 포함한다. 예시적인 염증성, 섬유증 또는 조직 리모델링 질환은 폐 섬유증(예를 들어, 특발성 폐 섬유증(idiopathic pulmonary fibrosis: IPF), 경피증 폐 섬유증, 경피증-관련 간질성 폐 질환(scleroderma-related interstitial　lung disease: SSc-ILD), 폐 감염 또는 폐렴 관련 폐 섬유증, 전신 홍반성 루푸스 및/또는 류마티스 관절염, 사르코이드증 관련 폐 섬유증), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 낭포성 섬유증, 기관지주위 섬유증, 블레오마이신 폐, 과민성 폐렴, 천식, 섬유흉, 종격동 섬유증, 만성 부비동염, 두드러기(예를 들어, 만성 자발성 두드러기), 아토피성 피부염, 피부근염, 결절성 표피하 섬유증, 경피증, 켈로이드, 신장 섬유증, 만성 신장 질환, 사구체신염, 만성 신장 동종이식 거부반응, 신병증(예를 들어, IgA 신병증, 국소 분절 사구체 경화증, 급속 진행성 사구체신염, 초승달 사구체신염, 루푸스 신염, 고혈압 신병증 또는 당뇨병성 신병증), 비-알코올성 지방간염(NASH), 간경화증, 간 섬유증, 원발성 경화 담관염, 원발성 담즙성 경화증, 섬유근육통, 치은 섬유증, 방사선-유도 섬유증, 호산구성 식도염, 관절섬유증 및 심방 섬유증, 심내막심근 섬유증, 실질 섬유증, 섬유 조직구종 또는 신경교 흉터를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체 및 이의 단편은 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절강내, 기관지내, 복강내, 피막내(intracapsular), 연골내, 강내, 복내(intracelial), 소뇌내, 뇌실내, 결장내(intracolic), 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골 반내, 심막내, 복강내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수강내, 윤활막내, 흉곽내, 자궁내, 방광내, 유리체내, 볼러스(bolus), 결막하, 경구, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내, 종양내 및 경피로부터 선택된 적어도 하나의 경로에 의해서 대상체에게 투여될 수 있다.
실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체 및 이의 단편은 1종 이상의 추가 요법과 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 1종 이상의 추가 요법은 수술 절차와 같은 절차일 수 있거나, 섬유증 및/또는 염증과 연관된 질환 또는 장애의 증상을 완화시키거나 감소시키도록 설계된 작용제와 같은 치료제일 수 있다.
본 발명은 하기 실시예를 참고로 추가로 설명된다. 그러나, 이들 실시예는 상기에 기재된 실시형태와 같이 예시적인 것이며, 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다는 것을 주목해야 한다.
실시예
하기 실시예는 본 개시내용의 다양한 실시형태를 예시하기 위해 제공되며, 어떠한 방식으로든 본 개시내용을 제한하는 것을 의미하지 않는다. 청구범위의 범주에 의해 정의된 바와 같이 본 개시내용의 사상 내에 포함되는 변경 및 다른 용도는 당업자에 의해 인식될 것이다.
조직 손상/질병 과정의 개요를 도 1에 요약한다. 질환 과정은 염증을 개시한다. c-Kit+ 면역 세포는 섬유아세포를 표면 상에서 SCF248을 발현하는 활성화된 근섬유아세포로 변화시키는 사이토카인을 생산한다. 근섬유아세포 및 다른 세포의 표면 상에서의 SCF248의 발현은 더 많은 면역 세포를 활성화시켜, IL-4, IL-9, IL-13, IL-25, TGFβ 및 다른 사이토카인의 사이토카인 방출을 유발하여 염증을 지속시킨다. 근섬유아세포는 세포외 기질 단백질, 콜라겐, 피브로넥틴을 분비하여, 섬유증 및 리모델링 질환, 예컨대, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 중증 천식 및 다른 질환을 유발한다.
SCF248(본 명세서에서 OpSCF 및/또는 5H10으로 언급된 상기 항체)을 표적으로 하는 본 개시내용의 항체의 예시적인 기전을 도 2에 요약한다.
상기에 제공된 바와 같이, SCF는 대체 스플라이싱으로부터 생성되는 2개의 아이소폼: SCF248 및 SCF220을 갖는다. SCF248 및 SCF220은 엑손 6이 다르다. SCF220은 항상성 기능과 연관되고, SCF248은 염증 및 섬유증과 연관된다. SCF248은 염증 동안 면역 세포를 활성화시키고, 때때로 "용해성 SCF"라고 불린다. SCF248은 근섬유아세포, 활성화된 상피세포, 내피세포, 대식세포, 호산구, 비만세포, 단핵구 등 다양한 세포 유형에서 발현된다(도 3). SCF248 아이소폼은 SCF165라고 불리는 단량체 절단된 세포외 도메인의 절단을 초래한다. 엑손 6의 아미노산 서열은 본 명세서에서 서열번호 34로 제공된다.
실시예 1: 하이브리도마 기술을 활용한 항-SCF mAb의 생산
ASSLRNDSSSSNRKAKNPPGD(서열번호 30)를 포함하는 펩티드를 사용하여 SCF248에 결합하는 항체를 생성시켰다. 면역화 펩티드는 엑손 6의 일부, 즉, 줄기세포 인자의 SCF248 아이소폼을 포함하였다. 특히, 면역화 펩티드는 본 명세서에 정의된 바와 같은 절단 부위 이후에 시작되는 엑손 6의 일부를 포함하였다. 마우스를 표준 프로토콜에 따라 서열번호 30에 따른 펩티드로 면역화시켰다. 고역가 혈청 항체의 결정은 적절한 면역화 및 융합 하이브리도마가 만들어졌음을 나타내었다. 배양 상청액을 SCF-특이적 항체에 대한 개별 클론으로부터 분석하였고, 특이성에 기초하여 선택하였다. 펩티드에 대한 특이적 단클론성 항체를 생산하는 하이브리도마를 증식시키고, 그 다음 생물학적으로 관련된 배양물에서 가장 높은 역가를 갖는 단클론을 시험하였다. 항체 5H10은 SCF248에 대해 높은 특이성을 가졌고, SCF220과 교차반응성은 없었다. 하이브리도마에 의해 생산된 다른 어떤 단클론성 항체도 SCF220과의 교차반응성 없이 SCF248에 대해 높은 특이성을 나타내지 않았다. 따라서 5H10을 추가 특징규명, 개발 및 키메라화 및 후속 인간화를 위해 선택하였다.
실시예 2. SCF248 완전한 세포외 도메인에 대한 5H10 결합
실시예 1에 기재된 바와 같이 얻어진 뮤린 5H10 항체를 형광 마커와 직접 접합시키고, 표지된 항체를 SCF248을 발현하는 Sl/Sl4 hSCF248 세포; SCF220을 발현하는 Sl/Sl4 hSCF220 세포; 또는 SCF를 발현하지 않는 대조군 세포와 함께 인큐베이션시켰다. 세포에 대한 표지된 항체의 결합을 유세포 분석법에 의해 평가하였다. SCF248에 대한 5H10의 특이성 및 SCF220과의 교차반응성 결여를 도 4A에 제시한다.
SCF의 아미노산 1 내지 165만을 함유하는 절단된 세포외 도메인(ECD) 대 SCF의 아미노산 1 내지 194를 함유하는 완전한 ECD에 대한 뮤린 5H10 항체의 결합을 ELISA 방법에 의해 평가하였다. 항체는 완전한 SCF ECD에 결합하였지만, 절단된 SCF ECD에는 결합하지 않았는데(도 4B), 이는 항체가 완전한 세포외 도메인에 대해 특이적이고, 혈액에서 순환하는 단량체 절단 ECD에 결합하지 않음을 입증한다.
근섬유아세포 상에서 SCF248을 내재화하는 2G8 및 5H10 항체의 능력을 평가하기 위해서, 항체를 pHrodo red로 표지하였는데 이는 중성 pH에서는 무색이고 엔도솜 내의 낮은 pH에서는 형광이다. 표지된 항체를 배양된 인간 IPF 근섬유아세포와 함께 45분 동안 인큐베이션시키고, 적색 형광을 현미경으로 가시화하였다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 대조군 IgG가 아닌 염료-표지된 항체는 빠르게 내재화되었다. 5H10은 더 빠르게 내재화되어, 2G8에 비해 더 높은 형광성을 나타내었다.
SCF는 MEK/ERK 경로 및 P13K/AKT 경로의 두 가지 별개의 경로에 의해 신호를 전달하도록 c-kit을 촉발한다. 뮤린 5H10 항체가 이들 경로 중 하나 또는 둘 다에서 c-kit 양성 세포의 세포내 신호전달을 저해하는지 여부를 결정하기 위한 연구를 수행하였다. 호산구를 5H10 또는 IgG 대조군의 존재 하에서 SCF248-발현 세포주와 함께 인큐베이션시키고, 인-단백질 발현을 BioRad Bio-Plex 검정 시스템으로 측정하였다. 5H10은 phospho-MEK 및 phosphor-AKT 수준을 유의하게 감소시켰는데, 이는 이 항체가 c-kit 매개 세포내 신호전달을 유의하게 감소시켰음을 나타낸다(도 6).
종합하면, 이들 연구의 결과는 항체 5H10이 SCF248에 특이적으로 결합하고, 이를 내재화하며, SCF220 아이소폼 또는 절단된 ECD와 교차반응하지 않는다는 것을 나타내었다. 또한, 5H10은 염증을 지속시키는 c-kit 양성 세포에서 세포내 신호전달 경로를 유의하게 저해한다.
실시예 3. 뮤린 항체 5H10의 인간화
중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 인간 IgG4 골격을 갖는 벡터로 서브클로닝함으로써 5H10으로부터 유래된 키메라 항체를 생산하였다. 키메라 항체를 표준 프로토콜을 사용하여 발현시키고, 정제시켰다. 2G8은 SCF248 및 SCF220에 결합하는 항체로 이미 개발되어 있고, 람다 경쇄를 함유한다. 2G8의 키메라 중쇄 및 경쇄를 각각 VH0 및 VL0으로 명명하였다. 본 명세서에서 제공되는 SCF248-특이적 항체인 5H10은 카파 경쇄를 함유한다. 5H10의 키메라 중쇄 및 경쇄를 각각 VH0 및 VK0으로 명명하였다.
키메라 항체를 인간화하였다. 인간화된 중쇄는 동일한 상보성-결정 영역(CDR)을 보유하였지만, 더 "인간-유사한" 프레임워크 영역 및 본 명세서에서 VH1, VH2, VH3, VH4 및 VH5로 지칭되는 5H10 가변 중쇄 및 2G8 각각의 몇몇 인간화된 변이체를 생성시켰다. 본 명세서에서 VK1, VK2, VK3 및 VK4로 지칭되는 5H10의 인간화된 카파 경쇄 변이체를 또한 생성시켰다. 2G8의 인간화된 람다 경쇄를 VL1, VL2, VL3 및 VL4로 명명하였다. 시험된 키메라 및 인간화 경쇄 및 중쇄의 2G8 및 5H10 조합을 각각 표 2 및 표 3에 나타내었다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 5H10 항체 변이체의 특정 중쇄 및 경쇄 조합은 hSCF248에 대한 높은 결합을 초래하였다. 결합 점수를 결정하기 위해 사용된 결합 데이터를 하기 실시예 5에 제공한다.
Figure pct00005
Figure pct00006
BiaCore 분석을 사용하여 결합 친화도를 또한 평가하였다. BiaCore 데이터는, VK1, VK2 또는 VK3 경쇄를 갖는 모든 인간화된 5H10 항체의 고정된 SCF248 펩티드 항원에 대한 친화도가 이러한 검정을 사용하여 모 뮤린 5H10의 결합 친화도와 매우 유사하였다는 것을 나타내었다. VK4 경쇄를 갖는 인간화된 5H10 항체는 펩티드에 결합하지 않았다.
Figure pct00007
실시예 4. 유세포 분석법에 의한 항-SCF 키메라 항체 결합의 평가
SCF248을 발현하는 형질주입된 세포주인 Sl/Sl4 hSCF248 세포를 사용하여 키메라 항체 2G8 및 5H10의 결합을 시험하였다. 항-SCF 항체를 SCF 결합에 대한 양성 대조군으로 사용하였다. 인간 IgG4 항체를 음성 아이소타입 대조군 항체로 사용하였다. 초기 계대(P3)의 Sl/Sl4 hSCF248 세포를 후기 계대(P5)의 세포와 비교하였다. 예상된 바와 같이, 음성 대조군(인간 IgG4 항체)은 어느 세포 집단에도 결합하지 않았다. 5H10은 초기 계대의 세포에 결합하였지만(도 7A), 다중 계대에 걸친 SCF248의 발현 손실로 인해서 후기 계대에서는 검출되지 않았다(도 7B). 유사하게, 10㎍/㎖의 2G8로 검출된 최대 평균 형광 강도(MFI)는 P3에 비해 P5에서 대략 4배 감소하였다.
하이그로마이신 B-처리된 세포에서 유사한 관찰이 인지되었다. 하이그로마이신 선택을 사용하여 관련 인간 SCF 서열을 발현하는 Sl/Sl4 세포의 분획을 풍부하게 하였다. 2개의 키메라 항-SCF mAb 2G8 및 5H10 및 인간화된 항-SCF 항체의 결합을 유세포 분석법을 통해 평가하였다. 각각 SCF248+ 및 SCF220+인 Sl/Sl4 hSCF248 세포 및 Sl/Sl4 hSCF220 세포를 사용하여 키메라 항체 2G8 및 5H10의 결합 및 특이성을 시험하였다. 항-SCF 항체를 SCF 결합에 대한 양성 대조군으로 사용하였다. 인간 IgG4 항체를 음성 아이소타입 대조군 항체로 사용하였다. 하이그로마이신 B 처리된 세포를 초기 계대(P3) 세포와 비교하였다. 최대 평균 형광 강도(MFI) 및 항체 용량 반응 곡선은 초기 계대(P3) 세포와 유사하였다(도 8A, 도 8B).
실시예 5. 유세포 분석법에 의하 2G8 및 5H10 인간화된 mAb의 결합 평가
각각 SCF248+ 및 SCF220+인 Sl/Sl4 hSCF248 세포 및 Sl/Sl4 hSCF220 세포를 사용하여 키메라 항체 2G8 및 5H10 및 이의 인간화된 변이체의 결합 및 특이성을 시험하였다. 두 실험 세트에서, 인간 IgG4 항체를 음성 아이소타입 대조군 항체로 사용하였다. 아이소타입 대조군은 Sl/Sl4 hSCF248 세포 또는 Sl/Sl4 hSCF220 세포에 결합하지 않았다(도 9A, 도 9B, 도 10A 및 도 10B). 상업적으로 입수 가능한 항-SCF 항체(압캠사(Abcam), 카탈로그 번호 EP665Y/ab52603)는 Sl/Sl4 hSCF220 세포에 결합하고, Sl/Sl4 hSCF248 세포에 약하게 결합하는 것을 발견하였다(1:25 희석 시에만)(도 9A, 도 9B, 도 10A 및 도 10B). 2G8 VH0/VL0(키메라 2G8)은 이의 인간화된 클론보다 더 강한 결합을 나타냈다. 그러나, 2G8 VH0/VL0은 또한 3.3 및 10㎍/㎖의 항체 농도에서 Sl/Sl4 hSCF220 세포에 대한 결합을 나타내었다(도 9A, 도 9B). 5H10 VH0/VK0은 인간화된 클론 5H10 VH3/VK2, 5H10 VH3/VK3, 5H10 VH4/VK2, 5H10 VH4/VK3, 5H10 VH5/VK2 및 5H10 VH5/VK3에 비해 더 높은 결합을 나타내었다(도 10A). Sl/Sl4 hSCF220 세포에 대한 5H10 또는 이의 임의의 인간화된 변이체의 결합은 관찰되지 않았다(도 10B). 본 연구에서 50% 최대 결합(BC50)과 관련하여 표시된 5H10 인간화 변이체 간의 차이를 표 5에 나타내었다. 5H10 클론의 결합은 Sl/Sl4 hSCF248 세포에서 3.3㎍/㎖에서 포화에 도달하였다(도 10A).
Figure pct00008
Sl/Sl4 hSCF248 세포를 사용하여 5H10 및 2G8의 추가적인 인간화 변이체의 결합을 시험하였다. 2G8 VH0/VL0(키메라)은 인간화된 변이체보다 더 강한 세포 결합을 나타내었다(도 11A). 인간화된 5H10 클론 5H10 VH1/VK1, 5H10 VH1/VK2, 5H10 VH1/VK3, 5H10 VH2/VK2, 5H10 VH2/VK3의 결합 프로파일은 5H10 VH0/VK0의 결합 프로파일과 대등하였다(도 11B). 상기에 제시된 Biacore 데이터와 일관되게, 인간화된 변이체 5H10 VH1/VK4는 표적 결합을 손실하였다(도 11B). 아이소타입 대조군은 Sl/Sl4 hSCF248 세포에 결합하지 않았다. 이들 연구에 제시된 데이터에 기초하여, 인간화된 2G8 및 5H10 mAb에 Sl/Sl4 hSCF248 세포에 대한 결합 점수를 할당하였는데, 이를 상기 표 2 및 3에 제시한다.
별도의 실험에서, 5H10 클론 VH1/VK3, VH2/VK3, VH3/VK3, VH4/VK3 및 VH5/VK3을 SCF248-발현 세포주에 대한 결합에 대해 유세포 분석법에 의해 평가하였다. 도 11C 및 도 11D에 도시된 바와 같이, VH1/VK3 및 VH2/VK3은 높은 결합을 나타내었고, 1㎍/㎖에서 최대값이었다. 음성 대조군은 이차 항체 단독이었다. 대조군 SCF220-발현 세포주(나타내지 않음)와의 결합은 관찰되지 않았다.
실시예 6. SCF와 c-Kit의 상호작용의 시험관내 차단
인간화된 5H10 항체를 시험관내에서 SCF-c-kit 상호작용 및 염증 피드-포워드 루프를 저해하는 능력에 대해 시험하였다. 표면 SCF248을 발현하는 배양된 인간 IPF 근섬유아세포(Mfb)를 SCF-반응성 세포주인 LAD2 비만 세포와 중첩시켰다. 어떠한 다른 개입 없이, Mfb는 LAD2 세포를 자극하는데, 이것은 사이토카인을 생산하여 Mfb를 자극하여 추가 사이토카인 및 세포외 기질 단백질을 생산한다. 이 검정에서, 염증 및 피드-포워드 루프에 대한 판독은 CCL11, 콜라겐 1 및 3 및 피브로넥틴에 대한 mRNA이다.
뮤린 5H10 및 인간화(VH1/VK3, VH2/VK3, VH3/VK3, VH4/VK3 및 VH5/VK3) 5H10 항체를 1㎍/㎖ 및 10㎍/㎖ 농도의 Mfb와 함께 사전 인큐베이션시켜 피드-포워드 루프를 저해하는 능력을 평가하였다. 결과를 도 12A 내지 도 12D에 도시한다. 인간화된 VH1/VK3 항체는 더 낮은 농도에서도 SCF-c-kit 상호작용의 저해를 일관되게 나타내었다.
근섬유아세포 상에서 SCF248을 내재화하는 인간화된 항체(5H10 VH1/VK3 및 VH2/VK3)의 능력을 평가하기 위해서, 항체를 pHrodo red로 표지하였고, 이는 중성 pH에서는 무색이고 엔도솜 내의 낮은 pH에서는 형광이다. 표지된 항체를 배양된 인간 IPF 근섬유아세포와 함께 45분 동안 인큐베이션시키고, 적색 형광을 현미경으로 가시화하였다. 도 13에 도시된 바와 같이, 뮤린 모 5H10 항체 및 키메라 항체(VH0/VK0)와 같이, 인간화된 항체는 빠르게 내재화되었다.
실시예 7. 키메라 항체 5H10 및 인간화된 리드 후보물질의 면역원성
5종의 인간화된 항체 5H10 VH1/VK3, 5H10 VH2/VK3, 5H10 VH3/VK3, 5H10 VH4/VK3 및 5H10 VH5/VK3의 면역원성을 키메라 항체5H10 VH0/VK0과 비교하였다.
PBMC 생존력에 대한 샘플의 임의의 세포독성 효과의 초기 평가를 EpiScreenTM 시간 경과 검정에 사용된 5명의 공여자에 대해 수행하였다. CD8+ T 세포 고갈된 PBMC를 샘플과 함께 인큐베이션시키고, 제7일에 Luna-FL™ Automated Cell Counter를 사용하여 세포의 생존력을 결정하였다. 결과는 항-SCF mAb로 처리된 5명의 공여자로부터의 PBMC의 평균 생존력이 배지 단독으로 처리된 세포의 생존력과 유사하다는 것을 나타내었고, 그 범위는 83% 내지 90%였다(도 14). KLH(Pierce, 라이프 테크놀로지즈사(Life Technologies), 영국 소재)를 신생항원으로 사용하였다. 엑세나타이드(Bydueon, 아스트라제네카사(AstraZeneca), 영국 소재)를 임상 벤치마크 대조군으로 사용하였다. 도 15A 내지 도 15H 및 표 6은 샘플 및 대조군에 의해 유도된 CD4+ T 세포 반응의 EpiScreen™ 시간 경과 T 세포 증식 검정에서 얻은 결과를 나타낸다. 임상 벤치마크인 엑세나타이드 및 신생항원인 KLH 둘 다 양성 증식 반응을 도출하였다. 4%에서 8% 범위의 낮은 빈도의 양성 반응(SI≥1.90, p<0.05) 비율은 5H10 VH1/VK3, 5H10 VH2/VK3 및 5H10 VH3/VK3에 의해 유도되었다. 샘플 5H10 VH5/VK3은 공여자 코호트의 17%에서 더 높은 양성 반응을 유도하였다. 5H10 VH0/VK0 및 5H10 VH4/VK3은 어떠한 양성 반응도 유도하지 않았다. 양성 T 세포 증식 반응의 평균 크기는 모든 샘플에 대해 2.14 내지 3.61이었다(표 7).
전체 증식 데이터 세트의 분산 분석인 ANOVA(5 내지 8일의 최대 증식 크기 사용)를 사용하여 서로 그리고 임상 벤치마크인 엑세나타이드와 비교하여 시험 조건에 대한 CD4+ T 세포 반응의 최대 크기에 통계적으로 유의한 차이가 있는지를 결정하였다(도 16). 엑세나타이드에 대한 T 세포 증식 반응의 최대 크기는 모든 샘플에 대한 반응보다 통계적으로 더 높았다(표 8).
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
요약하면, 임상 면역원성의 위험은 EpiScreen™ 시간 경과 T 세포 검정에서 유럽 및 북미 인구(HLA 동종형 기반)를 대표하는 24명의 건강한 공여자로부터 단리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용하여 생체외 T 세포 반응을 측정함으로써 결정하였다. T 세포 반응은 증식 검정([3H]-티미딘 흡수)을 사용하여 측정하였다. 결과는 4개의 리드 인간화된 항체가 임상 면역원성에 대해서 낮은 잠재력을 가졌음을 나타내었다.
실시예 8. 폐 염증 및 섬유증의 블레오마이신 모델에서 뮤린 5H10의 평가
폐 섬유증의 블레오마이신 동물 모델을 사용하여 5H10의 생체내 효과를 평가하였다. 블레오마이신은 인간 및 동물에서 폐 섬유증을 유발하는 화학치료제이다. C57BL6 마우스에게 제1일에 기관내로 블레오마이신을 투여하였고, 제8일 및 제12일에 5H10을 20㎎/㎏ 또는 아이소타입-일치 대조군 항체로 복강내로 투여하였다. 제17일에 샘플을 수집하였다. 5H10-처리된 동물은 폐 조직학에서의 상당한 개선(도 17), 폐 하이드록시프롤린의 감소(섬유증의 정량적 측정, 도 18), 시간 경과에 따른 체중 유지(도 19), 염증성 사이토카인 및 근섬유아세포 활성화의 마커에 대한 mRNA(도 20) 및 폐 비만 세포, 호산구 및 ILC2 림프구(도 21)의 감소를 가졌다. 폐 기능 시험도 크게 개선되었다(도 22). 따라서, 연구는 폐 섬유증의 생체내 모델에서 5H10이 섬유증 및 염증을 감소시키고, 폐 기능을 개선시키는 데 효과적임을 입증하였다.
실시예 9. 만성 알레르기성 천식 모델에서 인간화된 5H10 항체의 평가
인간화된 5H10 항체를 만성 알레르기성 천식의 생체내 모델에서 시험하였다. 마우스를 복강내 및 피하로 바퀴벌레 항원(cockroach antigen: CRA)으로 감작시킨 후, 제14일, 제18일, 제22일 및 제26일에 비강내 부스팅하였다. 제26일, 제29일, 제32일 및 34일에, 이들에게 제시된 인간화된 5H10 항체 또는 PBS 대조군을 20 ㎎/㎏으로 또는 대조군 미관련 항체를 복강내로 투여하였다. 제30일 및 제34일에, 이들에게 또한 CRA를 기관내로 제공하였다. 제35일에 시편을 수집하였다. 연구 설계의 개략도를 도 23에 제공한다.
PBS 대조군뿐만 아니라 다른 인간화된 변이체 항체와 비교하여 항체 5H10 VH1/VK3으로 처리된 동물에서 기도 내성이 유의하게 더 낮았다(도 24A). 또한, VH1/VK3 또는 VH2/VK3으로 처리된 동물에서, 만성 천식 대조군과 관련하여 폐 IL-13 mRNA의 유의한 감소가 존재하였다(즉, 임의의 항체 처리 없이 CRA를 제공받은 동물(PBS 대조군)과 비교)(도 24B). 또한, 기질 유전자 발현은 VH1/VK3 항체 처리를 제공받은 동물에서 유의하게 감소하였다(도 24C에 도시된 콜라겐 1 mRNA; 도 24D에 도시된 콜라겐 3 mRNA). SCF248 mRNA 발현은 VH1/VK3으로 처리된 동물에서도 유의하게 감소하였다(도 24E). 도 25A, 도 25B 및 도 25C는 VH1/VK3 투여가 1㎎/㎏ 및 5㎎/㎏의 농도에서 점액 단백질 Gob5 및 사이토카인 IL-13 및 IL-5의 mRNA 수준을 감소시켰음을 나타낸다. 따라서, 이러한 데이터는 VH1/VK3 항체가 만성 천식 모델에서 생체내에서 사이토카인 및 기질 유전자 발현을 차단하였다는 것을 나타내었다.
실시예 12. 항-SCF248 항체의 안전성, 약동학 및 약력학을 평가하기 위한 1a상 임상 시험
1a상 연구는 110명의 건강한 지원자를 등록할 것이다. 1차 목적은 인간화된 항-SCF248 항체 5H10에 대한 안전성 평가 및 정확한 약동학 및 약력학 데이터를 얻는 것이다.
인간화된 5H10 또는 위약의 단일 및 다중 상승 용량을 정맥내 또는 피하로 투여할 것이다. 6 내지 8명의 대상체가 하나의 군을 구성할 것이다. 시작 용량은 우수 실험실 관행에 따라 수행된 독성 연구에 기초할 것이다. 모든 개발 및 생성물 수명 동안 기준 약동학을 얻을 것이다. 약력학을 평가하기 위해서, SCF165와 같은 혈청 염증 마커에 더하여 비만 세포 전구 세포 및 2형 선천 림프구(ILC2) 세포를 포함하는 순환 c-kit+ 세포의 수를 평가할 것이다.
실시예 13. 환자에서 항-SCF248 항체의 안정성 및 효능을 평가하기 위한 임상 연구
임상 연구는 아토피성 피부염, 만성 두드러기, 폐 섬유증 및/또는 다른 것과 같은 염증성 장애를 앓고 있는 환자를 등록할 것이다. 연구의 하나의 목적은 질환이 있는 환자의 인간화된 5H10 항체와 약력학적 마커 사이의 용량-반응 관계, 예를 들어, 순환 c-kit+ 세포, 예컨대, 비만 세포 전구 세포 및 2형 선천 림프구 세포(ILC2) 세포의 수를 확립하는 것이다. 염증성 바이오마커, 예컨대, ADAM8, CCL17, EPX, RNASE3, CCL2, CCL5, 트립타제, 히스타민 및 SCF165를 또한 측정할 것이다.
5H10 항체의 단일 상승 용량을 각각의 대상체 군에 제공할 것이다. 시작 용량은 1a상 약력학적 바이오마커에 기초할 것이다. 환자는 1개월, 2개월, 3개월 이상 동안 치료될 것이다. 연구 결과는 인간화된 5H10 항체가 염증성 장애 및 섬유증 질환의 진행을 안정화 및/또는 치료 및/또는 예방하는 데 효과적이라는 것을 나타낼 것이다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 및 특허 출원은 전문이 참조에 의해 참고로 구체적으로 원용된다. 기재된 발명이 이의 구체적인 실시형태를 참조하여 기재되었지만, 당업자는 본 발명의 진정한 사상 및 범주를 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있고 균등물이 대체될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 특정 상황, 물질, 물질의 조성, 공정, 공정 단계 또는 단계들을 기재된 발명의 객관적 정신 및 범주에 채택하기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변형은 본 명세서에 첨부된 청구범위의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Opsidio, LLC <120> ANTI-STEM CELL FACTOR ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> WO/2021/055408 <140> PCT/US2020/050973 <141> 2020-09-16 <150> US 62/900,927 <151> 2019-09-16 <160> 50 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Trp Gln Gly Thr His Leu Pro Gln Thr 1 5 <210> 7 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 8 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Heavy chain variable region VH1 <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Heavy chain variable region VH2 <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Heavy chain variable region VH3 <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Heavy chain variable region VH4 <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Heavy chain variable region VH5 <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Thr Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Ser Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Light chain variable region VK1 <400> 14 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Light chain variable region VK2 <400> 15 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 16 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Light chain variable region VK3 <400> 16 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized 5H10 Light chain variable region VK4 <400> 17 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 348 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 18 caggttcagc tgcagcagtc tggggctgag ctcgtgaggc ctgggtcctc agtgaagatt 60 tcctgcaagt cttctggcta tgcattcagt agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120 cctggacagg gtcttgagtg gattggacag atttatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tcaagggcaa agccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcaggctaac atctgaggac tctgcggtct atttctgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaagggact ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 19 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized heavy chain variable region VH1 <400> 19 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag ctgaagaagc ctgggtcctc ggtgaagatt 60 tcctgcaagt cttctggata tgcattcagc agctattgga tgaactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggacag atctatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tcaagggcaa agccacgctg accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgac atctgaggac tctgccgtgt atttctgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 20 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized heavy chain variable region VH2 <400> 20 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaagatt 60 tcctgcaagt cttctggata tgcattcagc agctattgga tgaactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggacag atctatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tcaagggcaa agccacgctg accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 21 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized heavy chain variable region VH3 <400> 21 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtt 60 tcctgcaagt cttctggata tgcattcagc agctattgga tgaactgggt gcgacagagg 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggacag atctatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tcaagggcaa agccacgctg accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 22 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized heavy chain variable region VH4 <400> 22 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtt 60 tcctgcaagt cttctggata tgcattcagc agctattgga tgaactgggt gcgacagagg 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggacag atctatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tcaagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 23 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized heavy chain variable region VH5 <400> 23 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtt 60 tcctgcaagt cttctggata tgcattcagc agctattgga tgaactgggt gcgacagagg 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggacag atctatcctg gagatggtga tactcactac 180 aatggaaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgttc aagttcaaac 300 tgggtcggga gttactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctca 348 <210> 24 <211> 336 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 24 gatgttgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca aacagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gaaagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120 ttgtcacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc tagactggac 180 tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgtt ggcaaggcac acatcttcct 300 cagacgttcg gtggaggcac caagctggag atcaaa 336 <210> 25 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized light chain variable region VK1 <400> 25 gatgttgtga tgactcagtc tccactcact ctgtcggtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca aagcctctta gaaagtgatg gaaagaccta cttgaattgg 120 ttgcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atctggtttc tagactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cactggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgct ggcaaggcac acatcttcct 300 cagactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 26 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized light chain variable region VK2 <400> 26 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca aagcctctta gaaagtgatg gaaagaccta cttgaattgg 120 ttgcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atctggtttc tagactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cactggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgct ggcaaggcac acatcttcct 300 cagactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 27 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized light chain variable region VK3 <400> 27 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca aagcctctta gaaagtgatg gaaagaccta cttgaattgg 120 ttgcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atctggtttc tagactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgct ggcaaggcac acatcttcct 300 cagactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 28 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized light chain variable region VK4 <400> 28 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca aagcctctta gaaagtgatg gaaagaccta cttgaattgg 120 tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atctggtttc tagactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgct ggcaaggcac acatcttcct 300 cagactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 29 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Pro Glu Lys Asp Ser Arg Val Ser Val Thr Lys Pro Phe Met Leu Pro 1 5 10 15 Pro Val Ala Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn Arg 20 25 30 Lys Ala Lys Asn Pro Pro Gly Asp 35 40 <210> 30 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn Arg Lys Ala Lys 1 5 10 15 Asn Pro Pro Gly Asp 20 <210> 31 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Ser Ser Asn Arg Lys Ala Lys Asn 1 5 <210> 32 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Ser Ser Ser Ser Asn Arg Lys Ala Lys Asn Pro Pro Gly Asp 1 5 10 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn Arg Lys 1 5 10 <210> 34 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Asp Ser Arg Val Ser Val Thr Lys Pro Phe Met Leu Pro Pro Val Ala 1 5 10 15 Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn Arg 20 25 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Ser Asn Arg Lys Ala Lys Asn 1 5 <210> 36 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn Arg 1 5 10 <210> 37 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH5 CDR2 <400> 37 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 38 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH0 IgG4 heavy chain <400> 38 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 39 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VK0 Kappa light chain <400> 39 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Thr Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Ser Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 40 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region <400> 40 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 41 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 42 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VH1 Heavy Chain <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 43 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VH2 Heavy Chain <400> 43 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 44 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VH3 Heavy Chain <400> 44 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 45 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VH4 Heavy Chain <400> 45 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 46 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VH5 Heavy Chain <400> 46 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr His Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Ser Ser Asn Trp Val Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 47 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VK1 Light Chain <400> 47 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 48 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VK2 Light Chain <400> 48 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 49 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VK3 Light Chain <400> 49 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 50 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H10 VK4 Light Chain <400> 50 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (61)

  1. 줄기세포 인자(stem cell factor: SCF)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편으로서, 상기 항체는 각각 서열번호 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 각각 서열번호 4, 5 및 6을 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 더 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 7, 8, 9, 10 및 11로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  4. 제3항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 7, 8, 9, 10 및 11로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 13, 14, 15 및 16으로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 13, 14, 15 및 16으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10 및 11로부터 선택된 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 13,1 4, 15 및 16으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  9. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  10. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 9에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  11. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 10에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  12. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 11에 따른 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호 16에 따른 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
  13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 인간화된, 항체 또는 이의 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체인, 항체 또는 이의 단편.
  15. 제14항에 있어서, 상기 항체는 인간 IgG4 도메인을 포함하는, 항체.
  16. 제15항에 있어서, 상기 IgG4 도메인은 아미노산 잔기 241에 S241P 돌연변이 및 아미노산 잔기 248에 L248E 돌연변이를 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 카밧 넘버링 시스템(Kabat numbering system)의 넘버링인, 항체.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 42에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는, 항체.
  18. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 43에 따른 중쇄 및 서열번호 49에 따른 경쇄를 포함하는, 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 SCF와 c-Kit 사이의 상호작용을 차단하는, 항체 또는 이의 단편.
  20. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 SCF의 내재화를 초래하는, 항체 또는 이의 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 SCF248에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 이의 단편.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 SCF220에 결합하지 않는, 항체 또는 이의 단편.
  23. 제1항 내지 제14항 또는 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 Fab, F(ab')2, Fab' scFv 및 단일 도메인 항체(sdAb)로부터 선택되는, 항체 또는 이의 단편.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산 절편을 포함하는 발현 벡터.
  26. 제25항의 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.
  27. 줄기세포 인자 아이소폼 248(SCF248)에 특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법으로서, 숙주 동물을 서열번호 30 또는 이의 단편을 포함하는 펩타이드로 면역화시키는 단계 및 상기 면역화된 숙주 동물로부터 항체를 얻는 단계를 포함하는, 항체의 제조 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 단편은 적어도 5개의 아미노산을 포함하는, 항체의 제조 방법.
  29. 제27항에 있어서, 상기 단편은 적어도 10개의 아미노산을 포함하는, 항체의 제조 방법.
  30. 제27항에 있어서, 상기 펩타이드는 서열번호 30으로 이루어진, 항체의 제조 방법.
  31. 제27항에 있어서, 상기 펩타이드는 적어도 5개의 아미노산을 포함하고, 상기 펩타이드의 N-말단 아미노산은 서열번호 30의 1번 위치의 알라닌인, 항체의 제조 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 펩타이드는 적어도 10개의 아미노산을 포함하는, 항체의 제조 방법.
  33. 제27항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역화된 숙주 동물로부터의 항체는 상기 숙주 동물로부터 단리된 면역 세포로부터 얻어지는, 항체의 제조 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 면역 세포를 사용하여 하이브리도마를 생성시키는 단계를 더 포함하는, 항체의 제조 방법.
  35. 제27항 내지 제34항에 따른 방법에 의해서 제조된 항체로서, 상기 항체는 SCF248에 특이적으로 결합하는, 항체.
  36. 만성 염증 저해를 필요로 하는 대상체에서 만성 염증을 저해하는 방법으로서, 대상체에게 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 만성 염증을 저해하는 방법.
  37. 섬유증 저해를 필요로 하는 대상체에서 섬유증을 저해하는 방법으로서, 대상체에게 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증을 저해하는 방법.
  38. 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환을 치료하는 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환은 두드러기, 아토피성 피부염, 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis: NASH), 원발성 경화 담관염, 폐 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease: COPD), 급성 호흡곤란 증후군(acute respiratory distress syndrome: ARDS), 낭포성 섬유증, 기관지주위 섬유증, 과민성 폐렴, 천식, 블레오마이신 폐, 경피증, 간경화증, 심내막심근 섬유증, 섬유근육통 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환을 치료하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성 폐 섬유증 또는 경피증 폐 섬유증(scleroderma lung fibrosis)인, 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환을 치료하는 방법.
  41. 제37항에 있어서, 상기 방법은 추가 치료제를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 더 포함하는, 섬유증을 저해하는 방법.
  42. SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  43. 제42항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 33을 포함하는, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  44. 제42항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 33으로 이루어진, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  45. 제42항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 단편은 면역 세포 상의 c-Kit에 대한 SCF248의 결합을 차단하는, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  46. 면역 세포의 활성화를 저해하는 방법으로서, 상기 면역 세포를 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, 면역 세포의 활성화를 저해하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 방법은 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 수행되는, 면역 세포의 활성화를 저해하는 방법.
  48. 염증 저해를 필요로 하는 대상체에서 염증을 저해하는 방법으로서, 상기 대상체에게 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, 염증을 저해하는 방법.
  49. 섬유증 저해를 필요로 하는 대상체에서 섬유증을 저해하는 방법으로서, 상기 대상체에게 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, 섬유증을 저해하는 방법.
  50. 염증성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 염증성 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, 염증성 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 염증성 질환 또는 장애는 만성 염증성 질환 또는 장애인, 염증성 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
  52. 섬유증 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 섬유증 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, 섬유증 질환을 치료하는 방법.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증성 질환 또는 장애 또는 섬유증 질환은 두드러기, 아토피성 피부염, 비-알코올성 지방간염NASH), 원발성 경화 담관염, 폐 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 낭포성 섬유증, 기관지주위 섬유증, 과민성 폐렴, 천식, 블레오마이신 폐, 경피증, 간경화증, 심내막심근 섬유증, 섬유근육통 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성 폐 섬유증 또는 경피증 폐 섬유증인, 방법.
  55. 의약으로 사용하기 위한, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하는, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  56. 치료 방법에 사용하기 위한, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 33의 적어도 8개의 연속적인 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하되, 상기 항체는 SCF248와 c-Kit의 상호작용을 저해하고, 상기 방법은 대상체에서 면역 세포의 활성화의 저해, 대상체에서 염증의 저해, 대상체에서 섬유증의 저해, 염증성 질환 또는 장애의 치료, 만성 염증성 질환 또는 장애의 치료 및/또는 섬유증 질환의 치료를 포함하는, SCF248에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편.
  57. 의약으로 사용하기 위한, 제1항 내지 제21항, 제34항 및 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편 또는 제22항의 약제학적 조성물.
  58. 대상체에서 만성 염증의 저해 방법, 섬유증의 저해 방법, 만성 염증성 질환의 치료 방법 및/또는 섬유증 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, 제1항 내지 제21항, 제34항 및 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편 또는 제22항의 약제학적 조성물.
  59. 제56항 또는 제58항에 있어서, 상기 만성 염증성 질환 또는 섬유증 질환은 두드러기, 아토피성 피부염, 비-알코올성 지방간염(NASH), 원발성 경화 담관염, 폐 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 낭포성 섬유증, 기관지주위 섬유증, 과민성 폐렴, 천식, 블레오마이신 폐, 경피증, 간경화증, 심내막심근 섬유증, 섬유근육통 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 단편.
  60. 제59항에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성 폐 섬유증 또는 경피증 폐 섬유증인, 항체 또는 이의 단편.
  61. 제55항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 상기 대상체에게 추가 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는, 항체 또는 이의 단편.
KR1020227012536A 2019-09-16 2020-09-16 항-줄기세포 인자 항체 및 이의 사용 방법 KR20220079561A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962900927P 2019-09-16 2019-09-16
US62/900,927 2019-09-16
PCT/US2020/050973 WO2021055408A1 (en) 2019-09-16 2020-09-16 Anti-stem cell factor antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220079561A true KR20220079561A (ko) 2022-06-13

Family

ID=74868426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227012536A KR20220079561A (ko) 2019-09-16 2020-09-16 항-줄기세포 인자 항체 및 이의 사용 방법

Country Status (20)

Country Link
US (5) US20220324957A1 (ko)
EP (2) EP4031569A4 (ko)
JP (2) JP2022547733A (ko)
KR (1) KR20220079561A (ko)
CN (1) CN114729036A (ko)
AR (1) AR119979A1 (ko)
AU (2) AU2020348295A1 (ko)
BR (1) BR112022004776A2 (ko)
CA (2) CA3154649A1 (ko)
CL (1) CL2022000633A1 (ko)
CO (1) CO2022003661A2 (ko)
DO (1) DOP2022000058A (ko)
EC (1) ECSP22022676A (ko)
IL (1) IL291385A (ko)
MX (1) MX2022003159A (ko)
PE (1) PE20230090A1 (ko)
TW (1) TW202124434A (ko)
UY (1) UY38883A (ko)
WO (2) WO2021055408A1 (ko)
ZA (1) ZA202203272B (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202124434A (zh) 2019-09-16 2021-07-01 美商歐普西迪歐有限責任公司 抗-幹細胞因子抗體及其使用方法

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2657113B2 (ja) * 1989-10-16 1997-09-24 アムジエン・インコーポレーテツド 幹細胞因子
US5911988A (en) 1995-04-28 1999-06-15 Bayer Corporation Method for treating asthma using SCF antibody
AR037756A1 (es) 2001-12-17 2004-12-01 Bayer Corp Anticuerpo que inhibe la actividad del factor de las celulas precursoras y su uso para el tratamiento del asma.
US7902338B2 (en) * 2003-07-31 2011-03-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
MXPA06005941A (es) * 2003-12-10 2006-08-23 Medarex Inc Anticuerpos ip-10 y sus usos.
WO2005111083A2 (en) * 2004-04-29 2005-11-24 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Antibodies specific for glycoprotein vi and methods of producing these antibodies
US20080248050A1 (en) * 2006-06-30 2008-10-09 Uchicago Argonne, Llc Meta-specific vaccine, method for treating patients immunized with meta-specific vaccine
CA2721169A1 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Proscan Rx Pharma Inc. Prostate specific membrane antigen antibodies and antigen binding fragments
GB2502462B (en) * 2011-01-10 2018-08-08 Univ Michigan Regents Stem cell factor inhibitor
KR101384360B1 (ko) * 2012-05-04 2014-04-14 아주대학교산학협력단 Ｓｃｆ 또는 이의 수용체를 억제하는 물질을 포함하는 혈관 투과성 관련 질환의 치료 또는 예방용 조성물
WO2015006554A1 (en) 2013-07-10 2015-01-15 The Regents Of The University Of Michigan Therapeutic antibodies and uses thereof
BR112018001478A2 (pt) * 2015-08-19 2018-09-18 Pfizer Inc. anticorpos do inibidor da via do fator de tecidos e uso dos mesmos
CA3009488A1 (en) * 2015-12-22 2017-06-29 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-upk1b antibodies and methods of use
TW202124434A (zh) 2019-09-16 2021-07-01 美商歐普西迪歐有限責任公司 抗-幹細胞因子抗體及其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021055409A1 (en) 2021-03-25
EP4031176A4 (en) 2023-11-29
EP4031176A1 (en) 2022-07-27
CA3154648A1 (en) 2021-03-25
CL2022000633A1 (es) 2022-11-11
AU2020348295A1 (en) 2022-04-07
TW202124434A (zh) 2021-07-01
BR112022004776A2 (pt) 2022-06-21
IL291385A (en) 2022-05-01
JP2022547733A (ja) 2022-11-15
EP4031569A1 (en) 2022-07-27
US20220340655A1 (en) 2022-10-27
US20210079084A1 (en) 2021-03-18
ZA202203272B (en) 2022-12-21
AU2020351138A1 (en) 2022-03-31
CO2022003661A2 (es) 2022-04-08
US20240076367A1 (en) 2024-03-07
US20220324957A1 (en) 2022-10-13
DOP2022000058A (es) 2022-08-31
PE20230090A1 (es) 2023-01-16
CA3154649A1 (en) 2021-03-25
US20230019680A1 (en) 2023-01-19
ECSP22022676A (es) 2022-05-31
JP2022548646A (ja) 2022-11-21
CN114729036A (zh) 2022-07-08
AR119979A1 (es) 2022-01-26
UY38883A (es) 2021-04-30
EP4031569A4 (en) 2023-10-18
WO2021055408A1 (en) 2021-03-25
MX2022003159A (es) 2022-04-07
US11939373B2 (en) 2024-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2718322T3 (en) THERAPEUTIC ANTIBODIES
JP2019172677A (ja) 抗ｐｄ−ｌ１抗体並びにその治療及び診断のための使用
WO2022040345A1 (en) Anti-par-2 antibodies and methods of use thereof
US20240076367A1 (en) ANTI-STEM CELL FACTOR ANTIBODIES AND METHODS OF BLOCKING THE INTERACTION BETWEEN SCF AND c-KIT
JP7430137B2 (ja) 抗体および使用方法
WO2023078386A1 (zh) 抗cldn18.2抗体及其用途
KR20230119693A (ko) 면역글로불린 경쇄 항체 및 이의 용도
TW202229337A (zh) 犬抗體變異體
US20240182556A1 (en) Stem cell factor antibodies and methods of use thereof
WO2022095698A1 (zh) 抗人cd38抗体及其制备方法和用途
KR20240022546A (ko) 항il-36r 항체 및 그의 사용

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination