KR20220068581A - 암세포 특이적 유전자 발현을 조절하는 변형된 hTERT 프로모터 및 이를 포함하는 항종양 아데노바이러스 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 암세포 특이적 유전자 발현을 조절하는 변형된 hTERT 프로모터 및 이를 포함하는 종양 살상용 아데노바이러스에 관한 것으로, 본 발명의 변형된 hTERT 프로모터는 야생형 hTERT 프로모터를 이용하는 경우와 비교하여 목적 유전자의 암 특이적인 전사 활성을 증가시키며, 상기 변형된 hTERT 프로모터를 종양 살상능 아데노바이러스에 이용하는 경우, 야생형 hTERT 프로모터를 이용하여 아데노바이러를 제조한 경우와 비교하여, 종양을 살상하는 효과가 우수하다.
Description
본 발명은 암세포 특이적 유전자 발현을 조절하는 변형된 hTERT 프로모터 및 이를 포함하는 종양 살상용 아데노바이러스에 관한 것이다.
사람의 텔로미어 역전사 효소(human telomere reverse transcriptase : hTERT)는 염색체 복제동안 텔로미어(telomere)의 길이를 일정하게 유지하는데 관여하는 효소인 텔로머라제의 구성요소로서, 세포노화, 암, 세포불멸에 관여하는 것으로 알려졌다. 텔로머라제의 활성은 사람의 경우 난소와 고환의 생식세포 및 임파구에서 관찰되나 그 외 정상 체세포에서는 관찰되지 않고 있다. 따라서 정상 체세포는 제한된 회수의 세포분열 후에는 텔로미어의 길이가 일정길이 이하로 감소되어 더이상 분열하지 못하고 사멸하게 된다. 반면에, 암진행 전단계인 양성 종양 세포 및 암세포에서는 telomerase의 활성이 증가된다. 난소암에서 텔로머라제의 활성 증가가 최초로 보고된 이후, 혈액암, 위암, 폐암, 간암, 대장암, 뇌암, 전립선암, 두경부암, 유방암 등 거의 모든 인체 암에서 텔로머라제의 활성 증가가 관찰되고 있다.텔로머라제의 기능에 필수적인 역할을 하는 hTERT의 발현은 텔로머라제의 활성과 관련되어 있으며, 텔로머라제의 발현이 hTERT 프로모터의 활성, 즉 hTERT의 mRNA의 양에 따라 조절된다는 것이 밝혀졌다. hTERT의 활성을 조절하기 위한 최소의 프로모터의 크기는 181bp이며, 야생형 hTERT 프로모터에는 2개의 c-Myc 결합부위와 5개의 Sp1 결합부위가 포함되어 있다. 정상세포에 비해 암세포에서 월등히 높게 발현되는 발암단백질(oncoprotein)인 c-Myc 및 Sp1와 상기된 결합부위의 결합은 hTERT의 프로모터를 활성화시킨다는 것이 보고되었으며, c-Myc의 과다발현에 의해 hTERT 프로모터의 활성이 증가되는 것을 관찰하였다. 그러나 야생형 hTERT 프로모터만으로는 충분한 암세포 특이성을 달성하는데 한계가 있었다.
한편, 유전자 치료는 질병의 원인을 제거할 수 있는 기능을 가진 유전자를 직접 환자의 체내에 도입하여 질병을 치료하고자 하는 기술이다. 대표적인 예로는 돌연변이로 인해 기능을 상실하여 질병을 야기하는 유전자에 야생종 유전자를 삽입하여 상실된 기능을 회복시켜 주는 방법과, 암과 같이 질병의 원인이 되는 세포를 선택적으로 죽일수 있는 유전자를 특정 표적 세포에만 배달 및 발현시키는 방법 등이 있다. 후자의 경우 유전자 치료를 위한 표적 유전자를 암세포에서만 특이적으로 과발현시키는 프로모터를 개발하고자 많은 시도가 있었다. 현재까지 이분야에서 많이 개발된 프로모터로는 BIRC5(baculoviral IAP repeatcontaining 5, survivin)와 텔로머라아제 역전사효소(telomerase reverse transcriptase, TERT)가 있다. 상기 두 유전자는 암 특이적으로 발현된다는 것이 확인되었으나, TERT는 암 특이성은 강하지만 전사 활성이 약하다고 보고 되었다. 따라서, 이를 보완하기 위해 암세포의 특이적 환경인 무산소 상태에서 활성화되는 전사인자인 HIF-1α(Hypoxiainducible factor 1)의 결합 염기서열을 TERT 프로모터에 삽입한 수정된 프로모터가 개발되었고, 프로모터 성능개선을 위한 다양한 시도가 있었다. 그러나, 상기 방법들도 TERT 프로모터의 암세포 특이성 및 강한 전사활성을 유도하는 것에는 한계가 있었다.
본 발명은 암세포 특이성을 높이고, 강한 전사활성을 갖는 hTERT 프로모터의 돌연변이체, 상기 프로모터가 도입된 강한 종양 살상능을 갖는 아데노바이러스를 제공하는 것을 목적으로 한다.
따라서, 본 발명은 hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 프로모터를 제공한다.
본 발명은 hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 암세포에서 특이적 프로모터; 및
상기 프로모터에 작동가능하게 연결된 목적 유전자를 포함하는, 목적 유전자를 암세포 특이적으로 과발현 시키기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명은 hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 방광암 세포에서 특이적 프로모터를 포함하는 종양 살상용 아데노바이러스를 제공한다.
본 발명의 변형된 hTERT 프로모터는 야생형 hTERT 프로모터를 이용하는 경우와 비교하여 목적 유전자의 암 특이적인 전사 활성을 증가시키며, 상기 변형된 hTERT 프로모터를 종양 살상능 아데노바이러스에 이용하는 경우, 야생형 hTERT 프로모터를 이용하여 아데노바이러를 제조한 경우와 비교하여, 종양을 살상하는 효과가 우수하다.
도 1은 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 생산능을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 E4 생성능을 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능을 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능을 확인한 도이다.
도 6은 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 E1A 발현능을 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 생산능을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 E4 생성능을 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능을 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능을 확인한 도이다.
도 6은 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 E1A 발현능을 확인한 도이다.
이하, 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않으며 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
달리 지시되지 않는 한, 핵산은 좌측에서 우측으로 5'→3' 방향으로 기록된다. 명세서 내에서 열거된 수치 범위는 범위를 정의하는 숫자를 포함하고, 정의된 범위 내의 각각의 정수 또는 임의의 비-정수 분획을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명을 테스트하기 위한 실행에서 사용될 수 있지만, 바람직한 재료 및 방법이 본원에서 기술된다.
일 측면에서, 본 발명은 hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 프로모터에 관한 것이다.
일 구현예에서, 상기 프로모터는 목적유전자를 암세포 특이적으로 과발현시킬 수 있다.
일 구현예에서, 상기 프로모터는 서열번호 2로 표시되는 프로모터일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 프로모터는 서열번호 3으로 표시되는 프로모터일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 프로모터는 서열번호 4로 표시되는 프로모터일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 암세포에서 특이적 프로모터;및 상기 프로모터에 작동가능하게 연결된 목적 유전자를 포함하는, 목적 유전자를 암세포 특이적으로 과발현 시키기 위한 조성물에 과한 것이다.
일 구현예에서, 상기 목적 유전자는 암세포 사멸 유전자, 형광 단백질 유전자, 암세포 억제인자 유전자, 항원성 유전자, 세포 독성 유전자, 세포 증식 억제 유전자, 사이토카인 유전자, 친-세포사멸 유전자(pro-apoptotic gene) 및 항-신생혈관생성 유전자(anti-angiogenic gene)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 유전자일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 암세포 사멸 유전자는 BCL-2 계통 세포사멸 촉진(pro-apoptotic)유전자 또는 자살 수용체/리간드(death receptor/ligand) 유전자일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 형광 단백질 유전자는 루시퍼라아제(luciferase), 증강 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein, EGFP), 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 노랑 형광 단백질 (Yellow Fluorescent Protein, YFP), 적색 형광 단백질 (Red Fluorescent Protein, RFP)및 청색 형광 단백질(cyan fluorescent protein, CFP)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 암세포 억제인자 유전자는 p53 유전자, APC 유전자, DPC-4/Smad4 유전자, BRCA-1 유전자, BRCA-2 유전자, WT-1유전자, MMAC-1 유전자, MMSC-2 유전자, NF-1 유전자, MTS1 유전자, CDK4 유전자, NF-1 유전자, NF-2 유전자 및 VHL 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 용어 "작동가능하게 연결된"은 유전자 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절 인자 결합 위치의 어레이)과 다른 유전자 서열 사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 유전자 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다.
본 발명의 다른 측면에서는 TERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 방광암 세포에서 특이적 프로모터를 포함하는 종양 살상용 아데노바이러스에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 아데노바이러스는 야생형 hTERT 프로모터를 포함하는 아데노바이러스보다 종양 살상능이 증대된 것일 수 있다.
일 구현예에서, 아데노 바이러스의 내재적 유전자는 5'ITR-C1-C2-C3-C4-C5 3'ITR의 구조를 가지며; 상기 C1은 E1A, E1B 또는 E1A-E1B를 포함하고; 상기 C2는 E2B-L1-L2-L3-E2A-L4를 포함하며; 상기 C3는 E3를 포함하지 않거나 E3를 포함하고; 상기 C4는 L5를 포함하며; 및 상기 C5는 E4를 포함하지 않거나 E4를 포함할 수 있고, 서열번호 58의 염기서열을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 아데노 바이러스는 E3 영역이 일부 결실될 수 있다.
일 구현예에서, 아데노 바이러스는 발현 카세트를 포함할 수 있으며, 상기 발현 카세트는 아데노 바이러스의 내재적 유전자의 C3 부위에 위치할 수 있다.
일 구현예에서, hTERT 프로모터가 아데노 바이러스의 내재적 유전자의 E1A 및 E1B와 작동가능하게 연결될 수 있다.
일 구현예에서, 아데노 바이러스의 내재적 유전자의 E1A 및 E1B 사이에 IRES 서열이 추가로 포함될 수 있다.
일 구현예에서, 아데노바이러스는 야생형 hTERT 프로모터를 포함하는 아데노바이러스보다 E1A 발현이 증가된 것일 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스 제조
도 1과 같이, 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스를 제조하였다.
보다 구체적으로, Viral vector는 아데노바이러스의 genome을 포함하는 네 개의 셔틀벡터(shuttle vector;pAd1127, pAd1128, pAd1129, pAd1130)을 이용하여 제조하였다. 이중 pAd1127 벡터는 아데노바이러스의 초기 유전자(E1A, E1B)를 포함하는데 야생형 아데노바이러스에서 E1의 발현을 조절하는 E1 프로모터를 암 특이적인 hTERT 프로모터로 치환하여 암 특이적인 복제를 시도하였다. hTERT 프로모터의 -124, -146위치의 C가 T로 치환된 돌연변이 바이러스를 제조하기 위하여, pAd1127에 hTERT 프로모터의 특정 위치를 점 돌연변이를 유도하였다. 돌연변이형을 갖는 pAd1127 벡터와 아데노바이러스의 후기 유전자를 포함하는 pAd1128, pAd1129, pAd1130 벡터를 라이게이션하여 전장 유전체(full genome)를 포함하는 코스미드를 만든 다음 λ phage에 패킹하여 E.coli에 감염시켜 형질전환하였다. 이 후, 아데노바이러스의 유전체가 포함된 클론의 확인은 E.coli에서 플라스미드를 준비한 후, 제한효소를 이용한 패턴을 분석하여 확인하고, 서열분석을 통해 점돌연변이를 갖는 바이러스를 정확히 확인하였다.
[실시예 2]본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 생산성 또는 감염성 확인
본 발명의 hTERT 프로모터(hTERT C228T, C250T, C228T/C250T)가 도입된 아데노바이러스를 HEK-293 세포에 0.1 MOI로 각각 감염시킨 후, 48시간 이 후, 감염여부를 관찰하였다.
보다 구체적으로, 6-well plate에 HEK-293 세포를 2x106 cells을 접종 후, 0.1 MOI로 각 well에 포함된 세포를 감염시켰다. 48시간 후, 각 well에 포함된 세포와 바이러스 배양액에서 세포를 파쇄하여 생산된 바이러스를 회수하였다. 이 후, 생산된 감염성 바이러스를 정량하기 위하여, 다시 한번 12 well plate에 HEK-293 세포를 1x106 cells로 접종 후, 순차적으로 희석(serial dilution; 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6)하여 각 well에 100ul씩 넣어 세포를 재감염시켰다. 48시간 후, 세포를 100% 메탄올로 고정하고, 마우스 항-헥손 항체(1:1000)로 1시간동안 처리하였다. 각 well을 세척 후, 토끼-항-마우스-HRP 항체 (1:500)으로 1시간 처리한다. 다시한번 각 well을 세척하고, DAB 용액에 의해 발색된 부분을 계산하여 바이러스의 생산성을 측정하였다.
이의 결과, 본 발명의 hTERT 프로모터(C228T)를 이용하여 아데노바이러스를 제조한 경우, 야생형보다 2.28배 감염성이 높은 바이러스를 생산할 수 있음을 확인하였다(도 2, 표 1 참조).
[표 1]
[실시예 3]본 발명의 hTERT 프로모터를 아데노바이러스에 도입한 경우, E4 발현능 확인
6-well plate에 HEK-293 세포를 2x106cells를 접종 후, 0.1 MOI로 각 well에 포함된 세포를 감염시켰다. 48시간 후, 각 well에 포함된 세포와 바이러스 배양액에서 세포를 파쇄하여 생산된 바이러스를 회수하였다. 회수된 바이러스에서 gDNA를 추출하고 qPCR법으로 E4의 발현을 수치화하였다. 실험에 사용된 E4 프라이머는 하기와 같다. E4_F: 5`-GAC TCG GTA AAC ACA TCA GGT TGA-3`, E4_R: 5`-GGG CTA TTT CGG TCG CTT TT-3`
도 3에 나타난 바와 같이, C228T 돌연 변이 hTERT 프로모터를 이용하여 아데노바이러스를 제조한 경우, 야생형 hTERT 프로모터를 이용하여 아데노바이러스를 제조한 경우와 비교하여, E4 발현능이 현저히 증가함을 확인하였다.
[실시예 4]본 발명의 hTERT 프로모터를 아데노바이러스에 도입한 경우, 종양 살상능 확인
방광암 세포주(253J)에 본 발명의 hTERT 프로모터(C228T, C250T, C2 28T/C250T)가 도입된 아데노바이러스에 대하여, 세포사멸 효과를 확인하였다.
보다 구체적으로, 96-well plate에 방광암 세포주인 253J 세포주를 5X103 cells/well로 접종 후 바이러스를 MOI 별로 처리하였다. 72시간 후, 배양액을 모두 제거하고 crystal violet solution(crystal violet 0.5%, Acetic acid 0.5%, Methanol 95%)을 각 well 당 30uL씩 처리하였다. 상온에서 20분간 incubation(fixation & staining)후, crystal violet solution을 제거하였다. 흐르는 물에서 천천히 세척한 뒤 플레이트가 완전히 마르도록 air-dry하였다. Gell-doc으로 plate를 촬영하고 image J로 염색된 부분을 측정하여 데이터를 확보하였다. 이의 결과를 도 4 및 5에 나타내었다.
도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능이 야생형 hTERT 프로모터가 도 입된 아데노바이러스보다 종양 살상능이 현저히 높음을 확인하였다.
[실시예 5]본 발명의 hTERT 프로모터를 아데노바이러스에 도입한 경우, E1A 발현능 확인
6-well plate에 253J 세포를 2x106cells을 접종 후, 1MOI로 각 well에 포함된 세포를 감염시켰다. 48시간 후, 각 well에 포함된 세포와 바이러스 배양액에서 세포를 파쇄하여 생산된 바이러스를 회수하였다. 회수된 바이러스에서 gDNA를 추출하고 PCR법으로 E1A의 발현을 확인하였다. E1A의 발현을 확인하기 위하여 사용된 프라이머는 다음과 같다. E1A_F: 5`-tcc ggt cct tct aac aca cc-3`, E1A_R: 5`-ggc gtt tac agc tca agt cc-3`, GAPDH_F: 5`-tgt gca cca cca act gct tag c-3`, GAPDH_R: 5`-ggc atg gac tgt ggt cat gag-3`
도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스의 종양 살상능이 야생형 hTERT 프로모터가 도입된 아데노바이러스보다 E1A의 발현양이 현저히 증가함을 확인하였다.
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transcriptase for regulating cancer cell-specific gene expression
and anti-tumor adenovirus comprising the same
<130> PN2020
<160> 4
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 455
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> wt-hTERT promoter
<400> 1
tggcccctcc ctcgggttac cccacagcct aggccgattc gacctctctc cgctggggcc 60
ctcgctggcg tccctgcacc ctgggagcgc gagcggcgcg cgggcgggga agcgcggccc 120
agacccccgg gtccgcccgg agcagctgcg ctgtcggggc caggccgggc tcccagtgga 180
ttcgcgggca cagacgccca ggaccgcgct ccccacgtgg cggagggact ggggacccgg 240
gcacccgtcc tgccccttca ccttccagct ccgcctcctc cgcgcggacc ccgccccgtc 300
ccgacccctc ccgggtcccc ggcccagccc cctccgggcc ctcccagccc ctccccttcc 360
tttccgcggc cccgccctct cctcgcggcg cgagtttcag gcagcgctgc gtcctgctgc 420
gcacgtggga agccctggcc ccggccaccc ccgcg 455
<210> 2
<211> 455
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> C250T hTERT promoter
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ccgacccctt ccgggtcccc ggcccagccc cttccgggcc ctcccagccc ctccccttcc 360
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gcacgtggga agccctggcc ccggccaccc ccgcg 455
Claims (16)
- hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 프로모터.
- 제 1항에 있어서, 상기 프로모터는 목적유전자를 암세포 특이적으로 과발현시키는 것인, 프로모터.
- 제 1항에 있어서, 상기 프로모터는 서열번호 2로 표시되는 프로모터.
- 제 1항에 있어서, 상기 프로모터는 서열번호 3으로 표시되는 프로모터.
- 제 1항에 있어서, 상기 프로모터는 서열번호 4로 표시되는 프로모터.
- hTERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 암세포에서 특이적 프로모터;및
상기 프로모터에 작동가능하게 연결된 목적 유전자를 포함하는, 목적 유전자를 암세포 특이적으로 과발현 시키기 위한 조성물. - 제 6항에 있어서, 상기 목적 유전자는 암세포 사멸 유전자, 형광 단백질 유전자, 암세포 억제인자 유전자, 항원성 유전자, 세포 독성 유전자, 세포 증식 억제 유전자, 사이토카인 유전자, 친-세포사멸 유전자(pro-apoptotic gene) 및 항-신생혈관생성 유전자(anti-angiogenic gene)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 유전자인 것인, 조성물.
- 제 7항에 있어서, 상기 암세포 사멸 유전자는 BCL-2 계통 세포사멸 촉진(pro-apoptotic)유전자 또는 자살 수용체/리간드(death receptor/ligand) 유전자인 것인, 조성물.
- 제 7항에 있어서, 상기 형광 단백질 유전자는 루시퍼라아제(luciferase), 증강 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein, EGFP), 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 노랑 형광 단백질 (Yellow Fluorescent Protein, YFP), 적색 형광 단백질 (Red Fluorescent Protein, RFP)및 청색 형광 단백질(cyan fluorescent protein, CFP)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 조성물.
- 제 7항에 있어서, 상기 암세포 억제인자 유전자는 p53 유전자, APC 유전자, DPC-4/Smad4 유전자, BRCA-1 유전자, BRCA-2 유전자, WT-1유전자, MMAC-1 유전자, MMSC-2 유전자, NF-1 유전자, MTS1 유전자, CDK4 유전자, NF-1 유전자, NF-2 유전자 및 VHL 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 조성물.
- 제 1항의 프로모터를 포함하는 재조합 발현 벡터.
- 제 11항의 재조합 발현 벡터로 형질전환된 형질전환체.
- TERT 프로모터의 228번째 염기서열이 C에서 T로 치환; 및/또는 250번째 염기서열이 C에서 T로 치환된 방광암 세포에서 특이적 프로모터를 포함하는 종양 살상용 아데노바이러스.
- 제 13항에 있어서, 상기 아데노바이러스는 야생형 hTERT 프로모터를 포함하는 아데노바이러스보다 종양 살상능이 증대된 것인, 종양 살상용 아데노바이러스.
- 제 14항에 있어서, 상기 아데노바이러스는 야생형 hTERT 프로모터를 포함하는 아데노바이러스보다 E1A 발현이 증가된 것인, 종양 살상용 아데노바이러스.
- 제 13항에 있어서, 상기 프로모터는 E1A 및 E1B와 작동가능하게 연결된 것인, 종양 살사용 아데노바이러스.
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|---|---|---|---|
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