KR20220066703A - 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법에 관한 것으로써, 보다 상세하게는, 플라즈마를 통해 발생된 라디칼을 포함하는 플라즈마 라디칼 용액을 제조함으로써 살균, 항균, 상처 치유, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생 등 다양한 바이오 분야에 활용될 수 있는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

Description

플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법{PLASMA RADICAL SOLUTION AND MANUFACTURING METHOD THE SAME}
본 발명은 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법에 관한 것으로써, 보다 상세하게는, 플라즈마를 통해 발생된 라디칼을 포함하는 플라즈마 라디칼 용액을 제조함으로써 살균, 항균, 상처 치유, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생 등 다양한 바이오 분야에 활용될 수 있는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
플라즈마는 제 4의 물질 상태라 불리며, 음전하를 가진 전자와 양전하를 띤 이온 및 중성입자(분자와 원자)가 혼합된 상태를 말한다. 전자는 다양한 방식에 의해 쉽게 가속될 수 있으며 중성입자는 분자와 충돌하여 화학적 활성종을 생성하고, 이온은 처리하고자 하는 피 처리물의 표면을 화학 반응이 일어날 수 있는 조건을 조성함으로 활성종이 표면에서 활발한 화학 작용을 일으킬 수 있다. 또한, 플라즈마는 고진공으로부터 대기압 이상의 높은 압력에서도 발생이 가능하고 기체뿐만 아니라 액체 상태에서도 방전이 가능하므로 다양한 생산 조건에 맞는 플라즈마 발생 방식을 선택적으로 사용할 수 있는 장점 때문에 반도체, 디스플레이, 에너지, 기계, 화학 및 바이오 등 다양한 산업 분야에서 사용되고 있다. 특히, 플라즈마는 강한 산화력과 높은 반응성을 갖는 활성종 생성을 통해 우수한 살균력을 가질 수 있어 생명/의학 분야, 식품 산업 및 농업 등 바이오 분야에서 활발히 활용되고 있다. 최근에는 활성종을 이용하여 단백질과 관련된 질병인 아토피, 피부병, 알츠하이머, 파킨슨 및 암과 같은 난치병을 근본적으로 치료하려는 연구가 진행되고 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 플라즈마에서 발생된 이온, 라디칼 등이 포함된 활성종을 물과 반응시킴으로써 물 속에 다양한 활성종이 녹아있는 용액이다. 특히, 증류수에 플라즈마를 통해 발생된 활성종이 용해되면 전도도가 증가하고, 다양한 산소 활성종(Reactive Oxygen Species, ROS) 및 질소 활성종(Reactive Nitrogen Species, RNS)이 생성되어 pH, 산화-환원 전위(Oxidation/Reduction Potential, ORP) 값이 변화한다. 이 중에서 질소 활성종은 NO2 -(nitrate), NO3 -(nitrite), ONOO-(peroxynitrite) 등이 포함되어 세균, 진균 및 바이러스 등의 살균과 항균에 이용할 수 있다. 특히 퍼옥시나이트라이트(peroxynitrite)라 불리는 ONOO- 화합물은 상처 치유, 세포 활성 촉진 및 피부질환 치료 등 다양한 바이오 분야에 응용되고 있으나, 퍼옥시나이트라이트를 포함하는 용액은 제조하기 어려운 문제가 있다. 이는 플라즈마에 의해 발생되는 불안정한 라디칼들에 의해 용액 안에서 퍼옥시나이트라이트가 만들어지기 때문에 자연적으로 합성되기 어렵기 때문이다. 뿐만 아니라 다른 라디칼들은 불안정하기 때문에 용액에 용해되면 다른 물질로 변하게 되어 짧은 시간(life time: 수 나노세컨드)에 라디칼들의 특성을 잃어버리는 것이 기존 기술들의 문제였다. 하지만, 본 발명에서 제조된 플라즈마 라디칼 용액의 경우는 용액 내에서 퍼옥시나이트라이트의 생성 및 분해가 계속적으로 발생되어 오랫동안 바이오 특성을 유지할 수 있는 장점이 있다.
이 때, 플라즈마 라디칼 용액은 일정한 pH 및 NO3 - 농도 조건에서 살균 및 항균 효과를 갖는다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액의 pH 및 NO3 - 농도를 조절시키는 방법을 통해 살균 및 항균 효과를 유지시키는 기술이 필요한 실정이다. 본 발명의 경우 NaH2PO4를 이용하여 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 일정하게 조절함으로써 플라즈마 라디칼 용액의 살균 및 항균 효과를 유지할 수 있는 장점이 있다.
한국등록특허공보 제10-1621234호 한국등록특허공보 제10-1480096호
본 발명은 인체에 무해한 퍼옥시나이트라이트를 포함하는 용액을 제조하고, 이를 살균, 항균 및 피부 치료 등의 바이오 분야에 적용하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 플라즈마를 발생시켜 퍼옥시나이트라이트가 포함된 용액을 제조하고, 이를 세균, 진균 및 바이러스에 대한 살균과 항균, 피부 상처 치유, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생 등에 사용할 수 있는 바이오 특성을 가진 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 pH 및 NO3 - 농도를 일정하게 유지시킬 수 있는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 인체에 무해한 무독성 특성을 가지는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액은, 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 활성종; 및 상기 활성종이 용해된 용매;를 포함하고, 상기 활성종은, 플라즈마를 통해 생성되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 활성종은, 질소 활성종 및 산소 활성종 중 하나 이상을 포함하고, 상기 질소 활성종은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-)를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, pH 0 내지 4 에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, NO3 -(nitrite)의 농도가 400ppm 이상에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 전도도가 1000㎲/㎝ 이상에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 85℃ 이하의 온도에서 보관되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 6개월 이상의 유효 기간을 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 그람양성균(Gram positive bacteria) 및 그람음성균(Gram negative bacteria) 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 세균에 대해 살균 효과를 갖고, 상기 그람양성균은 포도상구균(Staphylococcus aureus), 세레우스균(Bacillus cereus), 고초균(Bacillus subtilis), 장내구균(Enterococcus), 연쇄상구균(Streptococcus) 및 락토코코스균(Lactococcus) 중 어느 하나 이상을 포함하고, 상기 그람음성균은 대장균(Escherichia coli), 쥐티푸스균(Salmonella typhimurium), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 폐렴막대균(Klebsiella penumoniae), 인플루엔자균(Haemophilus influenzae), 엔테로박터균(Enterobacter aerogenes) 및 페스트균(Yersinia pestis) 중 어느 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 칸디다(Candidia) 및 아스페르길루스(Aspergillus) 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 진균에 대해 살균 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 인플루엔자 바이러스를 포함하는 상기 바이러스에 대해 살균 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 플라즈마 라디칼 용액은, 항균, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생에 사용할 수 있는 바이오 특성을 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 용매는, 증류수 및 정제수 중 어느 하나가 선택되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액 제조방법은, (a) 플라즈마를 발생시켜 질소산화물을 포함하는 활성종을 생성하는 단계; (b) 상기 활성종을 코로나 방전 및 촉매 중 어느 하나 이상을 이용하여 산화시키는 단계; (c) 상기 산화된 활성종을 용매에 용해시켜 플라즈마 라디칼 용액을 제조하는 단계; 및 (d) 상기 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 조절하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 (c) 단계는, 버블링을 통해 상기 산화된 활성종을 상기 용매에 용해시키고, 상기 플라즈마 라디칼 용액은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-)를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 (d) 단계는, 상기 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 0 내지 4로 조절하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따르면, 플라즈마를 발생시켜 퍼옥시나이트라이트가 포함된 용액을 제조하고, 이를 세균, 진균 및 바이러스에 대한 살균 및 항균, 피부 상처 치유, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생 등에 사용할 수 있는 바이오 특성을 가진 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 효과가 발생한다.
또한, pH 및 NO3 - 농도를 일정하게 유지시킬 수 있는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 효과가 발생한다.
또한, 본 발명의 목적은 인체에 무해한 무독성 특성을 가지는 플라즈마 라디칼 용액 및 이의 제조방법을 제공하는 효과가 발생한다.
도 1(a)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 처리 시간에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 pH의 변화를 나타낸 그래프이고, 도 1(b)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 NO3 -(nitrite) 농도 변화를 나타낸 그래프이고, 도 1(c)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 전도도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 플라즈마 라디칼 용액을 보관하였을 경우, 보관 온도에 따른 살균 효과를 나타낸 도면이다.
도 3은 플라즈마 라디칼 용액을 제조 후, 6개월 이상 상온에서 보관하였을 경우, NO3 -(nitrite)의 농도 변화, 항균 및 살균 효과의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 대장균, 포도상구균, 쥐티푸스균, 녹농균 및 세레우스균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 플라즈마 라디칼 용액의 pH에 따라 쥐티푸스균 및 포도상구균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 플라즈마 라디칼 용액의 NO3 -(nitrite) 농도에 따른 포도상구균, 대장균 및 쥐티푸스균에 대한 항균 및 살균 유효 농도 시험을 나타낸 도면이다.
도 7은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-) 스캐빈저를 사용하여 플라즈마 라디칼 용액의 살균 유효 성분을 확인하기 위한 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 플라즈마를 사용하지 않은 서로 다른 질소산화물을 비교하여 플라즈마 라디칼 용액의 살균 유효 성분을 확인하기 위한 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 9는 플라즈마 라디칼 용액의 바이러스에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 10은 플라즈마 라디칼 용액의 피부 상처 치유 효과 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 11은 플라즈마 라디칼 용액의 여드름균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 12는 플라즈마 라디칼 용액의 XTT 및 CCK8 독성 평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 플라즈마 라디칼 용액의 Annexin V/PI 독성 평가 결과를 나타낸 도면이다.
도 14는 플라즈마 라디칼 용액의 Live and dead assay 평가 결과를 나타낸 도면이다.
도 15는 플라즈마 라디칼 용액의 안점막자극시험(BCOP) 평가 결과를 나타낸 도면이다.
도 16은 플라즈마 라디칼 용액의 피부자극성시험 평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 17은 플라즈마 라디칼 용액의 급성경구독성시험 평가 결과를 나타낸 도면이다.
도 18은 플라즈마 라디칼 용액의 광독성시험 평가 결과를 나타낸 도면이다.
도 19는 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액 제조방법의 순서도이다.
도 20은 플라즈마 전력에 따른 질소산화물 발생량을 나타낸 그래프이다.
본 발명을 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명하면 다음과 같다. 여기서, 반복되는 설명, 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 설명은 생략한다. 본 발명의 실시형태는 당 업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서, 도면에서 요소들의 형상 및 크기 등은 보다 명확한 설명을 위하여 과장될 수 있다.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 용이하게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
<플라즈마 라디칼 용액>
본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액은 활성종 및 용매를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 활성종은 플라즈마를 통해 생성될 수 있다. 이 때, 플라즈마 발생 장치는 플라즈마 방전을 수행할 수 있는 것이면 제한 없이 사용 가능하나, 바람직하게는 열플라즈마를 이용한다. 플라즈마는 유전체장벽방전(Dielectric Barrier Discharge, DBD), 코로나방전(Corona Discharge), 아크 방전(Arc Discharge), 전자파(Microwave) RF(Radio Frequency), LF(Low Frequency) 및 HF(High Frequency) 중 어느 하나에 의해 발생되어 활성종을 생성할 수 있다.
플라즈마를 통해 생성되는 활성종은 질소 활성종(Reactive Nitrogen Species, RNS) 및 산소 활성종(Reactive Oxygen Species, ROS) 중 하나 이상을 포함하고, 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균할 수 있다. 산소 활성종은 O2 -(superoxide anion), H2O2(hydrogen peroxide), OH(hydroxy radical), OH-(hydroxyl anion), O3(ozone) 등이 포함될 수 있다. 질소 활성종은 NO2 -(nitrate), NO3 -(nitrite), NO(nitric oxide radical), NO2(nitrogen dioxide radical), ONOO-(peroxynitrite) 등이 포함될 수 있다. 특히 퍼옥시나이트라이트(ONOO-)가 포함되어 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상에 뛰어난 살균 효과를 가질 수 있다.
본 발명에 따른 용매는 플라즈마에 의해 발생된 활성종을 용해할 수 있다. 용매는 활성종을 용해시킬 수 있는 물질이라면 제한 없이 사용가능하나, 바람직하게는 증류수 및 정제수 중 어느 하나가 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액은 활성종이 용매에 용해된 것으로써 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균할 수 있고, 피부 상처 치유, 여드름 완화 및 아토피 치료에 사용할 수 있는 바이오 특성을 가질 수 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 pH 0 내지 4, NO3 -(nitrite) 농도 400ppm 이상, 전도도 1000㎲/㎝ 이상일 때 바이오 특성을 가질 수 있다. 도 1(a)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 처리 시간에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 pH의 변화를 나타낸 그래프이고, 도 1(b)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 NO3 -(nitrite) 농도 변화를 나타낸 그래프이고, 도 1(c)는 본 발명의 일 실시예에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 전도도 변화를 나타낸 그래프이다. 도 1을 참고하면, 플라즈마 라디칼 용액은 활성종이 용매에 용해되고 3시간 이내로 pH 0 내지 4, 농도 400ppm 이상, 전도도 1000㎲/㎝ 이상인 것을 확인할 수 있다. 플라즈마 라디칼 용액은 pH가 0 내지 4에서 살균 효과를 가질 수 있으며, 바람직하게는 pH 1 내지 4에서 살균효과를 가질 수 있다. 플라즈마 라디칼 용액의 pH가 4를 초과하면 살균 효과가 감소하는 문제가 발생할 수 있다. 또한, 플라즈마 라디칼 용액의 NO3 -(nitrite) 농도가 400ppm 미만이거나 전도도가 1000㎲/㎝ 미만일 경우에도 살균 효과가 감소할 수 있다.
또한, 플라즈마 라디칼 용액은 85℃ 이하의 온도에서 보관할 수 있으며, 바람직하게는 -80℃ 내지 60℃에서 보관할 수 있다. 플라즈마 라디칼 용액의 보관 온도가 85℃를 초과하면 플라즈마 라디칼 용액이 변질되어 살균 효과가 감소할 수 있다. 도 2는 플라즈마 라디칼 용액을 보관하였을 경우, 보관 온도에 따른 살균 효과를 나타낸 도면이다. 도 2를 참고하면, 플라즈마 라디칼 용액을 각각 -80℃, 4℃, 상온 및 직사광선 조건 하에서 보관하고 대장균 및 포도상구균을 살균하기 위해 사용하였다. 이 때, 모든 온도 조건의 플라즈마 라디칼 용액에서 대장균 및 포도상구균에 대하여 살균 효과를 확인할 수 있다. 이에 따라, 플라즈마 라디칼 용액은 85℃ 이하의 온도에서 보관하여도 살균 효과가 유지되는 것을 확인할 수 있다.
또한, 플라즈마 라디칼 용액은 6개월 이상의 유효 기간을 가질 수 있다. 도 3은 플라즈마 라디칼 용액을 제조 후, 6개월 이상 상온에서 보관하였을 경우, NO3 -(nitrite)의 농도 변화, 항균 및 살균 효과의 변화를 나타낸 그래프이다. 도 3을 참고하면, 플라즈마 라디칼 용액 제조 후 7 개월이 지나도 NO3 -(nitrite)의 농도는 크게 변화하지 않았으며, 포도상구균 및 대장균에 대해 살균 효과를 계속 확인할 수 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 그람양성균(Gram positive bacteria) 및 그람음성균(Gram negative bacteria)을 비롯한 다양한 세균에 대해 살균과 항균 효과를 가질 수 있다. 그람양성균은 그람양성구균 및 그람양성막대균으로 구분할 수 있다. 그람양성구균은 포도상구균(Staphylococcus aureus), 피부포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 연쇄폐렴상구균(Streptococcus pneumoniae), 화농사슬구균(Streptococcus pyogenes) 및 장내구균(Enterococcus) 등이 포함될 수 있으며, 그람양성막대균은 탄저균(Bacillus anthracis), 디피실균(Clostridium difficile), 파상풍균(Clostridium tetani), 보툴리즘균(Clostridium botulinum), 리스테리아균(Listeria monocytogenes), 디프테리아균(Corynebacterium diphtheria) 및 결핵균(Mycobacterium tuberculosis) 등이 포함될 수 있으며, 기재되지 않은 기타 그람양성균에 대해서도 살균 효과를 가질 수 있다. 바람직하게는, 포도상구균(Staphylococcus aureus), 세레우스균(Bacillus cereus), 고초균(Bacillus subtilis), 장내구균(Enterococcus), 연쇄상구균(Streptococcus) 및 락토코코스균(Lactococcus) 중 어느 하나 이상에 대해 뛰어난 살균 효과를 가질 수 있다. 그람음성균은 그람음성구균 및 그람음성막대균으로 구분할 수 있다. 그람음성구균은 임균(Meisseria gonorrhoeae) 및 수막구균(Meisseria meningitides) 등이 포함될 수 있으며, 그람음성막대균은 대장균(Escherichia coli), 폐렴막대균(Klebsiella penumoniae), 아시네토박터균(Acinetobacter baumannii), 엔테로박터균(Enterobacter aerogenes), 콜레라균(Vibrio cholera), 페혈증균(Vibrio vulnificus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 박테로이드균(Bacteroides fragilis) 등이 포함될 수 있으며, 기재되지 않은 기타 그람음성균에 대해서도 살균 효과를 가질 수 있다. 바람직하게는, 대장균(Escherichia coli), 쥐티푸스균(Salmonella typhimurium), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 폐렴막대균(Klebsiella penumoniae), 인플루엔자균(Haemophilus influenzae), 엔테로박터균(Enterobacter aerogenes) 및 페스트균(Yersinia pestis) 중 어느 하나 이상에 대해 뛰어난 살균 효과를 가질 수 있다. 또한, 그람 염색이 되지 않는 결핵균(Mycobacterium tuberculosis), 리케차(Rickettsia), 클라미디아(Chlamydia), 스피로헤타(Spirochaetales) 및 항산균(Acid fast bacteria) 등 기타 세균에 대해서도 살균 효과를 가질 수 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 병꼴균문(Chytridiomycota), 접합균문(Zygomycota), 자낭균문(Ascomycota), 담자균문(Basidiomycota) 및 불완전균문(Deuteromycota)으로 구성되는 다양한 진균에 대해 살균과 항균 효과를 가질 수 있다. 바람직하게는 칸디다(Candidia) 및 아스페르길루스(Aspergillus)에 대하여 뛰어난 살균 효과를 가질 수 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 다양한 바이러스에 대해 살균과 항균 효과를 가지며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스에 대해 뛰어난 살균 효과를 가질 수 있다.
플라즈마 라디칼 용액은 바이오 특성을 가지고 있어 피부 상처를 치유할 수 있는 물질로 사용할 수 있다. 또한, 여드름균과 아토피균에 대해 살균 및 항균 효과를 가지고 있어 여드름 완화 및 아토피 치료에 사용할 수 있다. 또한, 기타 피부 관련 질병인 건선, 피부염 및 바이러스성 피부병을 완화시킬 수 있다. 또한, 피부 진정 및 근육 재생에 사용될 수 있다.
<실시예>
도 4는 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 대장균, 포도상구균, 쥐티푸스균, 녹농균 및 세레우스균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다. 도 4를 참고하면, 상기 5종의 세균이 5분 후 살균된 것을 확인할 수 있으며, 5종 시험균에 대한 살균 시험은 다음과 같이 진행되었다.
첫째, 시험균인 대장균, 포도상구균, 쥐티푸스균, 녹농균 및 세레우스균 5종을 TSB(Tryptic soy broth)에 접종하여 34℃ 내지 36℃ 온도에서 18시간 내지 24시간 동안 배양하였다.
둘째, 생균수가 1.0*108CFU/ml 내지 9.9*108CFU/ml가 되도록 멸균생리식염수에 희석하여 시험균액으로 사용하였다.
셋째, 플라즈마 라디칼 용액 20ml에 시험균액 0.2ml를 첨가하여 혼합한 후 20℃ 내지 24℃에서 5분간 방치하였다.
넷째, D/E neutralizing broth에 최초 희석하여 중화된 시험액을 단계별로 희석하여 각 농도당 패트리 접시 2매에 1ml씩 분주하였다.
다섯째, 미리 준비한 45℃ 내지 50℃의 TSA를 패트리 접시에 15ml 내지 25ml 분주하여 상온에서 응고하였다.
여섯째, 응고된 패트리 접시를 거꾸로 뒤집어 34℃ 내지 36℃의 온도에서 24 내지 48간 배양하였다.
일곱째, 배양 후 생균수의 관찰은 30개 내지 300개를 나타내는 패트리 접시를 선택하여 실시하였고, 최저 희석 단계에서만 생균수가 관찰되는 경우에는 관찰 범위에 상관없이 계수하였다. 세균이 증식한 경우, 배지 상의 균수에 희석 배수를 곱하여 산출하였고, 배지에서 세균이 증식하지 않은 경우는 중화단계에서 이루어진 희석배수를 곱하여 10미만(<10)으로 표시하였다. 생균수 계산은 [식 1]에 따라 측정하였고, 살균 효과에 대한 Log reduction(LR) 값은 [식 2]에 따라 계산하였다. 이 때, 초기 및 대조군 생균수의 측정은 멸균생리식염수를 사용하여 실시하였다.
[식 1]
Figure pat00001
(단, N=생균수, C=집략수(평균) 및 D=희석배수를 만족한다.)
[식 2]
Figure pat00002
(단, A=대조군 생균수의 로그 값 및 B=시험군 생균수의 로그 값을 만족한다.)
시험균 구분 생균수 (CFU/ml) Log value LR
대장균
(E.coli)		 대조군(초기) 4.4 x 106 6.64 >5.64
시험군(5분 후) <10 <1.00
포도상구균
(S.aureus)		 대조군(초기) 9.4 x 106 6.97 3.90
시험군(5분 후) 1.2 x 103 3.07
쥐티푸스균
(S.typhimurium)		 대조군(초기) 2.1 x 106 6.33 >5.33
시험군(5분 후) <10 <1.00
녹농균
(P.aeruginosa)		 대조군(초기) 8.2 x 106 6.91 >5.91
시험군(5분 후) <10 <1.00
세레우스균
(B.cereus)		 대조군(초기) 4.7 x 106 6.67 >5.67
시험군(5분 후) <10 <1.00
5종의 세균에 대하여 살균 시험을 진행한 결과 시험균의 LR 값은 대장균은 >5.64, 포도상구균은 3.90, 쥐티푸스균은 >5.33, 녹농균은 >5.91 및 세레우스균은 >5.67의 값이 나와 살균 효과가 99.9%이상인 것을 확인할 수 있다.
도 5는 플라즈마 라디칼 용액의 pH에 따라 쥐티푸스균, 포도상구균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다. 도 5를 참고하면, NaH2PO4를 첨가하여 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 3으로 조절하였을 때 살균 효과가 나타나는 것을 확인할 수 있으며, 살균 시험은 다음과 같이 진행되었다.
첫째, 쥐티푸스균 및 포도상구균을 액체 배지에 접종하여 37℃에서 18시간 배양하고, 배양된 균을 준비된 고체 배지에 각 희석 배율에 따라 분주하였다.
둘째, 각 샘플을 분주하고 37℃에서 18시간 배양하여 생균수가 1.0*105CFU/ml이 되도록 희석하여 시험균액으로 사용하였다.
셋째 희석한 균을 NaOH나 NaH2PO4를 이용하여 pH 3으로 조절된 플라즈마 라디칼 용액에 1ml 첨가하여 혼합하고 상온에서 5분 방치하였다. 이 때 대조군으로 멸균된 물(DW)을 사용하여 세척한 후 동일한 양이 균을 준비된 고체 배지에 분주하였다.
시험 결과 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 조절하기 위해 NaOH나 NaH2PO4를 이용하였을 때, NaOH를 이용한 것은 플라즈마 라디칼 용액의 살균 효과가 사라진 것을 확인할 수 있다. 반면, NaH2PO4를 이용하여 pH를 조절한 용액을 살균효과가 유지되는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 조절할 때 NaH2PO4를 사용해야 하는 것을 확인할 수 있다.
도 6은 플라즈마 라디칼 용액의 NO3 -(nitrite) 농도에 따른 포도상구균, 대장균 및 쥐티푸스균에 대한 항균 및 살균 유효 농도 시험을 나타낸 도면이다. 도 6을 참고하면 살균을 수행하는 화합물인 nitrate의 농도에 따라 살균 효과가 변하는 것을 확인할 수 있다. 포도상구균과 대장균은 662±27.2ppm 이상의 농도에서 99.99%의 살균 효과가 나타났고, 쥐티푸스균은 504.7±23.0ppm 이상의 농도에서 99.99%의 살균 효과가 나타났다.
도 7은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-) 스캐빈저를 사용하여 플라즈마 라디칼 용액의 살균 유효 성분을 확인하기 위한 시험 결과를 나타낸 도면이다. 플라즈마 라디칼 용액의 주요 살균 성분을 확인하기 위해 nitrate의 다른 형태인 ONOO- 스캐빈저(scavenger)로 MnTBAP를 사용한 결과, 플라즈마 라디칼 용액의 살균 효과가 사라진 것을 확인할 수 있었다. 따라서 플라즈마 라디칼 용액의 주요 살균 성분은 ONOO-인 것을 확인할 수 있다.
도 8은 플라즈마를 사용하지 않은 서로 다른 질소산화물을 비교하여 플라즈마 라디칼 용액의 살균 유효 성분을 확인하기 위한 시험 결과를 나타낸 도면이다. 플라즈마를 사용하지 않은 질소산화물의 살균 효과를 확인하기 위해 이온화 형태의 NO, NO2 및 NO3 용액을 제조한 후 쥐티푸스균, 포도상구균 및 대장균에 대해 살균 실험을 진행하였다. 그 결과 NO, NO2 및 NO3 용액 모두 살균 효과가 나타나지 않았다. 이 것으로 플라즈마 사용하지 않은 질소산화물의 경우 살균 효과가 나타나지 않는 것을 확인할 수 있다.
도 9는 플라즈마 라디칼 용액의 바이러스에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다. 먼저, 섬유아세포(fibroblast)와 HaCaT 셀의 정상 표피세포를 균일하게 배양하고, 각 세포에 PR8 인플루엔자 바이러스를 제공하여 세포를 감염시킨다. 그리고 나서 배양액과 플라즈마 라디칼 용액의 혼합물과 대조군인 배양액과 PBS 혼합물을 감염된 세포에 공급하였다. 그 결과, 플라즈마 라디칼 용액을 공급한 세포의 사망이 억제되는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액이 바이러스의 증식 억제 및 살균 효과를 가지는 것을 확인할 수 있다.
도 10은 플라즈마 라디칼 용액의 피부 상처 치유 효과 시험 결과를 나타낸 도면이다. 먼저, 섬유아세포(fibroblast)와 HaCaT 셀의 정상 표피세포를 균일하게 배양하고, 각 세포에 동일한 크기의 상처를 준다. 그리고 나서 배양액과 플라즈마 라디칼 용액의 혼합물과 대조군인 배양액과 PBS 혼합물을 상처가 난 세포에 공급하였다. 그 결과, 대조군의 세포에서는 상처가 치유되지 않은 반면, 플라즈마 라디칼 용액을 공급한 세포에서는 상처가 치유되는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액이 피부 상처 치유에 효과가 있는 것을 확인할 수 있다.
도 11은 플라즈마 라디칼 용액의 여드름균에 대한 살균 시험 결과를 나타낸 도면이다. 도 10을 참고하면 여드름균의 주요 균인 P.acnes에 대한 살균 시험을 진행한 결과 대조군에서는 여드름균이 남아있는 반면, 플라즈마 라디칼 용액을 여드름균에 공급하였을 때 여드름균이 살균된 것을 확인할 수 있다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액이 여드름 완화에 효과가 있는 것을 확인할 수 있다.
다음은 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 독성 평가를 실시한 결과이다.
도 12는 플라즈마 라디칼 용액의 XTT 및 CCK8 독성 평가 결과를 나타낸 그래프이다. 섬유아세포(fibroblast)와 HaCaT에서 플라즈마 라디칼 용액의 독성을 확인하기 위해 XTT assay 및 CCK8 assay를 진행한 결과, 육안으로 확인하였을 때 배양액의 색이 모두 변하지 않았다. 도 12를 참고하면, ELISA reader 기기를 통해 XTT 및 CCK8 시험 결과를 정량화한 결과, 플라즈마 라디칼 용액은 독성이 없는 것을 확인할 수 있다.
도 13은 플라즈마 라디칼 용액의 Annexin V/PI 독성 평가 결과를 나타낸 도면이다. Annexin V/PI 독성 평가는 세포가 죽을 경우 스팟이 우측 상단에 다수 존재한다. 도 13을 참고하면, H2O2를 처리하였을 때 스팟이 우측 상단에 다수 존재하였으나, 플라즈마 라디칼 용액의 경우 일반 정상 세포와 스팟이 큰 차이가 나지 않아 독성이 없는 것을 확인할 수 있다.
도 14는 플라즈마 라디칼 용액의 Live and dead assay 평가 결과를 나타낸 도면이다. Live and dead assay 평가는 세포가 살아있는 경우 녹색으로 염색된다. 도 14를 참고하면, 플라즈마 라디칼 용액의 경우 일반 정상 세포와 염색 부위가 큰 차이가 나지 않아 독성이 없는 것을 확인할 수 있다.
도 15는 플라즈마 라디칼 용액의 안점막자극시험(BCOP) 평가 결과를 나타낸 도면이다. 안점막자극시험은 혼탁도와 투과도를 이용하여 안점막에 대한 자극지수를 평가하는 시험이다. 도 15를 참고하면, 양성대조군(Ethyl alcohol)은 완전 혼탁된 반면, 플라즈마 라디칼 용액은 음성대조군(water)과 동일하게 무혼탁인 것을 확인할 수 있다. 각각의 혼탁도와 투과도를 측정하여 안점막자극지수(IVIS)를 계산할 수 있으며 [식 3]에 의해 IVIS 값을 계산할 수 있다.
[식 3]
Figure pat00003
시험군 혼탁도
(opacity unit)		 투과도
(흡광도(OD490))		 IVIS
음성대조군 -0.5±0.7 0.003±0.001 -0.5±0.7
양성대조군 19.9±0.6 1.300±0.203 39.4±3.6
플라즈마 라디칼 용액 0.7±2.4 0.007±0.004 0.8±2.5
플라즈마 라디칼 용액은 IVIS 값이 3 이하로 측정되어 안점막에 대한 자극이 없는 것을 확인할 수 있다.
도 16은 플라즈마 라디칼 용액의 피부자극성시험 평가 결과를 나타낸 그래프이다. 피부자극성시험은 SKINETHICTM 인체피부모델에 대해 흡광도를 측정하여 [식 4] 내지 [식 6]를 이용하여 세포생존율 값(%)을 계산하였다.
[식 4]
Figure pat00004
[식 5]
Figure pat00005
[식 6]
Figure pat00006
도 16을 참고하면, 양성대조군(Sodium dodecyl sulfate, SDS)은 세포생존율이 약 1.1%로 측정된 반면, 플라즈마 라디칼 용액은 음성대조군(Phosphate buffer saline, PBS)과 유사하게 약 92.7±4.7%가 측정되었다. 세포생존율은 GHS(Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals) 분류에 따라 50% 초과인 경우 피부 비자극성 물질로 분류되므로, 플라즈마 라디칼 용액은 피부 비자극성 물질임을 확인할 수 있다.
다음은 플라즈마 라디칼 용액의 인체피부 일차자극시험 평가 결과이다. 인체피부의 일차자극시험을 위해 플라즈마 라디칼 용액을 24시간 시험 부위에 첩포하고 피부 반응을 관찰하여 피부반응도 및 피부자극도를 측정한 결과, 피부반응도가 0.00으로 피부자극도는 무자극으로 나타나, 플라즈마 라디칼 용액은 피부 자극이 없는 물질임을 확인할 수 있다.
도 17은 플라즈마 라디칼 용액의 급성경구독성시험 평가 결과를 나타낸 도면이다. 급성경구독성시험은 시험물질을 24시간 이내에 1회 혹은 수회 투여한 후 단시간에 나타나는 악영향을 평가하는 시험으로, SD계 암컷 쥐(rat) 각각 3마리에 플라즈마 라디칼 용액을 1군과 2군은 300 mg/kg B.W.(Body weight) 1회 경구 투여하고, 3군과 4군은 2000 mg/kg B.W. 1회 경구 투여하였다.
군 성 동물번호 마리수 투여량
(mg/kg B.W.)		 투여액량
(mL/kg B.W.)		 투여경로
G1 암컷 2101~2103 3 300 10 경구
G2 암컷 2201~2203 3 300 10 경구
G3 암컷 2301~2303 3 2000 10 경구
G4 암컷 2401~2403 3 2000 10 경구
플라즈마 라디칼 용액 투여 후 14일 간 사망률, 일반 증상 및 체중 변화를 관찰하고, 장기의 이상 유무를 검사한 결과 사망동물은 관찰되지 않았다. 또한, 일반증상 및 부검소건 관찰결과 플라즈마 라디칼 용액 투여에 의한 이상소견은 관찰되지 않았다. 위의 결과로부터 플라즈마 라디칼 용액은 화학물질분류 및 표지에 관한 세계조화시스템 GHS(Globally Harmonized Classification System for Chemical Substances and Mixtures) 분류하였을 때 Category 5 or Unclassified로 판정되었다.
도 18은 플라즈마 라디칼 용액의 광독성시험 평가 결과를 나타낸 도면이다. 광독성시험은 자외선 등의 빛에 노출될 때 야기된 화학물질에 의해 유도되는 광독성(PIF)을 평가하는 시험으로, BALB/3T3 clone A31의 세포에 대한 플라즈마 라디칼 용액의 광독성을 평가하였다. 도 18을 참고하면, 플라즈마 라디칼 용액과 양성대조군(Chlorpromazine hydrochloride, CPZ)의 PIF(Photo irritation factor) 값 및 MPE(Mean photo effect) 값을 확인할 수 있다. 양성대조군의 경우 PIF 값이 18.882, MPE 값이 0.418로 측정되어 광독성이 나타나는 반면, 플라즈마 라디칼 용액은 PIF 값 이 1.000, MPE 값이 -0.008로 측정되어, 플라즈마 라디칼 용액은 광독성이 없는 물질임을 확인할 수 있다.
상기 시행한 다양한 독성 평가를 실시한 결과, 플라즈마 라디칼 용액은 무독성 물질임을 확인할 수 있다. 따라서, 플라즈마 라디칼 용액을 인체에 사용하였을 때 무해함으로 피부 상처 치유, 여드름 완화 및 아토피 치료 등 다양한 바이오 분야에 활용될 수 있다.
<플라즈마 라디칼 용액 제조방법>
도 19는 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액 제조방법의 순서도이다. 본 발명에 따른 플라즈마 라디칼 용액의 제조방법은 (a), (b), (c) 및 (d) 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 (a) 단계는 플라즈마를 발생시켜 질소산화물을 포함하는 활성종을 생성할 수 있다. 플라즈마를 발생시키기 위해 전자파(microwave) 플라즈마 발생장치를 이용하였다. 전자파 플라즈마를 발생시키기 위해 각각 500W 전력에서 공기 10lpm, 1.0kW 전력에서 공기 15lpm 1.2kW전력에서 공기 20lpm을 주입하였고 플라즈마가 발생됨에 따라 질소산화물을 포함하는 활성종이 생성될 수 있다. 도 20은 플라즈마 전력에 따른 질소산화물 발생량을 나타낸 그래프이다. 도 20을 참고하면, 높은 전력을 공급할수록 생성되는 질소산화물의 양이 증가되는 것을 확인할 수 있다. 이 때 생성되는 질소산화물은 대부분 NO 및 NO2인 것을 확인할 수 있다.
본 발명에 따른 (b) 단계는 상기 활성종을 코로나 방전 및 촉매 중 어느 하나 이상을 이용하여 산화시킬 수 있다. (a) 단계에서 생성된 질소산화물 중 상온에서 NO의 용해도는 약 56mg/L로 매우 낮기 때문에 액체에 용해시키기 어려워 NO2로 산화시켜 용매에 용해시켜야 한다. 이 때 NO를 NO2로 산화시키기 위해 코로나 방전 및 촉매 중 어느 하나 이상을 이용할 수 있다. NO2로 산화된 활성종은 액체 내에서 가수분해할 수 있어 용매에 용해시키기 용이하며, NO2가 용해되어 다량의 NO2 -, NO3 -, ONOO-가 생성될 수 있다.
본 발명에 따른 (c) 단계는 산화된 활성종을 용매에 용해시켜 플라즈마 라디칼 용액을 제조할 수 있다. 이 때 용매는 증류수 및 정제수 중 어느 하나가 선택되어 활성종이 용매에 용해될 수 있다. 이 때, 활성종은 버블링을 통해 용매에 용해될 수 있다. 버블링을 수행하면 용매에 미세 버블이 형성되므로, 활성종과 용매의 반응면적이 증가되고, 이에 따라 활성종이 용매에 더 잘 용해될 수 있다.
본 발명에 따른 (d) 단계는 제조된 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 0 내지 4로 조절함으로써, 플라즈마 라디칼 용액이 바이오 특성을 가질 수 있다. 이 때 pH를 조절하기 위해 NaH2PO4를 사용할 수 있다. 플라즈마 라디칼 용액의 pH가 4 초과일 경우 바이오 특성이 감소될 수 있다.
상기 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 당 업계의 통상의 지식을 가진 자라면 이하의 특허 청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.

Claims (15)

  1. 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 활성종; 및
    상기 활성종이 용해된 용매;를 포함하고,
    상기 활성종은, 플라즈마를 통해 생성되는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 활성종은,
    질소 활성종 및 산소 활성종 중 하나 이상을 포함하고,
    상기 질소 활성종은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-)를 포함하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    pH 0 내지 4 에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    NO3 -(nitrite) 농도가 400ppm 이상에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    전도도가 1000㎲/㎝ 이상에서 세균, 진균 및 바이러스 중 어느 하나 이상을 살균하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    85℃ 이하의 온도에서 보관되는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    6개월 이상의 유효 기간을 갖는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    그람양성균(Gram positive bacteria) 및 그람음성균(Gram negative bacteria) 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 세균에 대해 살균 효과를 갖고,
    상기 그람양성균은 포도상구균(Staphylococcus aureus), 세레우스균(Bacillus cereus), 고초균(Bacillus subtilis), 장내구균(Enterococcus), 연쇄상구균(Streptococcus) 및 락토코코스균(Lactococcus) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 그람음성균은 대장균(Escherichia coli), 쥐티푸스균(Salmonella typhimurium), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 폐렴막대균(Klebsiella penumoniae), 인플루엔자균(Haemophilus influenzae), 엔테로박터균(Enterobacter aerogenes) 및 페스트균(Yersinia pestis) 중 어느 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  9. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    칸디다(Candidia) 및 아스페르길루스(Aspergillus) 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 진균에 대해 살균 효과를 갖는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  10. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    인플루엔자 바이러스를 포함하는 상기 바이러스에 대해 살균 효과를 갖는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  11. 제 1항에 있어서,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은,
    항균, 피부 상처 치유, 여드름 완화, 아토피 치료, 건선 치료, 피부염 치료, 바이러스성 피부병 치료, 피부 진정 및 근육 재생에 사용할 수 있는 바이오 특성을 갖는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  12. 제 1항에 있어서,
    상기 용매는,
    증류수 및 정제수 중 어느 하나가 선택되는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액.
  13. (a) 플라즈마를 발생시켜 질소산화물을 포함하는 활성종을 생성하는 단계;
    (b) 상기 활성종을 코로나 방전 및 촉매 중 어느 하나 이상을 이용하여 산화시키는 단계;
    (c) 상기 산화된 활성종을 용매에 용해시켜 플라즈마 라디칼 용액을 제조하는 단계; 및
    (d) 상기 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 조절하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액 제조방법.
  14. 제 13항에 있어서,
    상기 (c) 단계는,
    버블링을 통해 상기 산화된 활성종을 상기 용매에 용해시키고,
    상기 플라즈마 라디칼 용액은 퍼옥시나이트라이트(ONOO-)를 포함하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액 제조방법.
  15. 제 13항에 있어서,
    상기 (d) 단계는,
    상기 플라즈마 라디칼 용액의 pH를 0 내지 4로 조절하는 것을 특징으로 하는,
    플라즈마 라디칼 용액 제조방법.

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