KR20220059060A - 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명의 갯끈풀 추출물은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 염증 또는 아토피 피부염을 억제하면서도 염증이 유도된 약해진 세포에서 세포 독성을 나타내지 않아 안정성이 우수하며, 천연물로부터 수득하여 인체에 부작용이 없어 염증 또는 아토피 피부염에 대한 개선, 예방 또는 치료용 조성물로 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
염증 반응은 선천성 면역 반응의 일부이며, 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역 반응은 대식세포가 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 통해 비자기(non-self)로 인식하고 공격함으로써 시작된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다.
피부에서의 염증반응(inflammatory response)은 물리적 자극이나 화학물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될 때 이를 방어하기 위한 작용으로서 시작되며 다양한 면역세포와 염증 유도 싸이토카인이 관여한다. IL-6(interleukin-6), IL-8(interleukin-8), IL-1β(interleukin-β) 등이 대표적인 염증 유도 싸이토카인이다.
예를 들어, 염증성 싸이토카인에 의한 자극에 반응한 말초혈 단구, 조직 매크로파지, NK 세포, 섬유아세포, 혈관 내피 세포 등 여러 가지 세포에서 IL-8 발현이 유도된다. 상승된 IL-8 레벨에 관련된 염증성 질환으로서는, 염증성 각화증, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염 등의 염증성 피부질환 등이 포함된다.
특히 아토피 피부염(AD, Atopic Dermatitis)은 가려움을 동반하는 염증성 피부질환으로, 만성적이며 보통은 유아기에 시작된다. 아토피 피부염은 끊임없는 가려움증을 주 증상으로 하며, 특정한 이유 없이 회복과 악화를 반복하는 특징을 가지고 있다. 아토피 피부염은 최근 많은 연구에도 불구하고 아직까지도 아토피 피부염의 원인은 확실하게 밝혀지지 않았으며, 다양한 치료제도 개발되고 있지만 피부에 자극을 줄일 수 있는 천연 소재에 대한 관심이 증가하고 있다.
한편, 국제자연보호연맹(IUCN)에서 지정한 침략적 외래종인 갯끈풀(Spartina anglica)은 인천 강화도 남단에서 처음 정착하여 이후 지속적으로 개체수를 늘려 우리나라 갯벌 생태계를 교란시키고 있다. 갯끈풀은 생물분류학적으로 볏과 식물이다. 끈을 만든다고 해서 끈풀(cordgrass)이다. 갯끈풀 속(屬)은 현재 17개 종이 알려졌는데, 미국 뉴펀들랜드에서 플로리다까지, 그리고 멕시코만 해안을 따라 북아메리카 대서양 연안 지역에 자생한다. 일부 종은 중앙아메리카, 남아메리카, 유럽, 북아프리카가 원산이다.
갯끈풀은 땅속줄기를 길게 뻗고 강하며 잔뿌리가 많아 복잡한 근계(根系)를 형성한다. 직립하며, 잎은 두껍고 납작 편평하다. 30~50㎝의 다소 넓은 긴 칼날 모양으로 끝은 뾰족하다. 잎 폭은 0.6~1.5㎝, 높이는 0.5~3m까지 자란다. 서로 촘촘히 붙어 군생한다.
갯끈풀은 하구역의 염생습지나 갯벌 등의 상부 후미진 곳에 군락을 형성한다. 새로운 지역에 대한 1차 침입자로 잘 알려졌고, 한 개체가 어느 곳에 자리를 잡으면 방사상으로 확장한다. 성장하면 주변의 다른 집단과 합쳐지는데, 이때 갯골의 형태 등 지형 변화에 따라 집단의 크기와 모양이 달라진다. 또한 다년생풀로 황록에서 가을에 갈색으로 변하며, 자연염생식물인 칠면초 나문재, 채홍나물 등을 위협하며 번식하며, 우리나라 서해안 갯벌에서도 맹렬한 기세로 잠식하고 있다.
그러나 아직까지 염증성 질환에 대해 천연 소재로 갯벌 생태계 교란을 일으키는 갯끈풀을 이용하여 염증 또는 아토피 피부염을 개선, 예방 또는 치료용 조성물로 적용한 사례는 보고되지 않았다.
상기와 같은 문제 해결을 위하여, 본 발명은 생태계 교란식물로 골칫거리였던 갯끈풀을 재활용하여 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
또한 본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
또한 본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
또한 본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
또한 본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
본 명세서에서 "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은, 상기 각각의 해당 식물의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.
본 명세서에서 "유효성분으로 포함하는"이란 본 발명의 갯끈풀 추출물의 염증 또는 아토피성 피부염의 개선, 치료 또는 예방 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 "예방"이란 본 발명에 따른 조성물을 개체에 투여하여 가려움증을 억제하거나 지연시키거나 완화하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 "치료"란 본 발명에 따른 조성물을 염증 또는 아토피성 피부염의 의심 개체에 투여하여 가려움증 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 발명은 갯끈풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
염증 또는 아토피 피부염은 가려움을 동반하는 염증성 피부질환으로 각질형성세포(HaCaT)에는 고농도의 TNF-α 및 IFN-γ와 같은 염증 유도 싸이토카인이 존재하는데, 이러한 염증 유도 싸이토카인은 TARC(thymus and activation-regulated chemokine)와 MDC 생성을 증가시킨다. 이로 인해 싸이토카인의 농도는 가려움을 동반한 염증 또는 아토피 피부염 증상과 밀접한 연관성이 밝혀진 바, TARC와 MDC가 이러한 질환을 가장 잘 반영하는 신뢰할 수 있는 바이오마커이다.
이에 본 발명에서는 TARC와 MDC와 같이 염증 또는 아토피 피부염의 염증성 질환을 나타내는 바이오마커들인 TARC와 MDC의 발현을 억제하고 염증 유도 물질인 TNF-α 및 IFN-γ를 처리한 세포에서 세포 독성을 나타내지 않는 신규 물질을 발굴하고자 노력한 결과, 생태계 교란식물로 골칫거리였던 갯끈풀을 재활용하여 갯끈풀 추출물, 특히 60 내지 80 중량%의 에탄올로 추출한 추출물이 염증 또는 아토피 피부염을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다. 특히, 본 발명의 갯끈풀 추출물은 플라보노이드(flavonoids) 계열의 항히스타민 물질인 이소-오리엔틴(Iso-orientin) 성분을 함유하고 있어 항아토피성 및 생리활성 효과가 현저히 우수하고, 천연소재를 사용하여 인체 부작용이 없으며 안정성이 우수함을 알 수 있었다.
구체적으로 본 발명은 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 갯끈풀 추출물은 이소-오리엔틴(Iso-orientin) 화합물을 유효 성분으로 포함할 수 있다. 상기 이소-오리엔틴 화합물은 플라보노이드계 항히스타민 활성을 가져 아토피 질환을 예방, 개선 또는 치료에 유용하며 생리활성이 우수한 이점이 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 프로판올, 에틸아세테이트, 아세톤, 핵산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출된 추출물일 수 있다. 바람직하게는 메탄올, 에탄올 및 부탄올로 이루어진 군에서 1종 이상의 용매일 수 있고, 가장 바람직하게는 에탄올일 수 있다.
특히, 상기 갯끈풀 추출물은 용매로 에탄올을 사용하는 경우 60 내지 80 중량%, 바람직하게는 65 내지 75 중량%, 가장 바람직하게는 70 중량%의 에탄올로 추출할 수 있다. 이때, 상기 에탄올의 함량이 60 중량% 미만이면 상기 갯끈풀 추출물로부터 유효 성분이 충분히 추출되지 못할 수 있고, 반대로 80 중량% 초과이면 더 이상의 향상된 추출수율을 기대할 수 없다.
상기 갯끈풀 추출물은 추출 방법이 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 용매 추출법, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. 바람직하게는 용매 추출법으로 수행될 수 있다.
상기 용매 추출법은 10 내지 80℃, 바람직하게는 15 내지 60℃의 추출 온도에서 2 시간 내지 10일, 바람직하게는 12 시간 내지 5일의 추출 시간 동안 추출할 수 있으며, 상기 건조 및 파쇄물을 포함하여 1회 내지 5회 연속하여 추출하여 액상의 조추출물을 수득하는 과정을 포함할 수 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 화장료 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml, 바람직하게는 10 내지 250 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 250 ㎍/ml, 가장 바람직하게는 250 ㎍/ml의 농도로 포함될 수 있다. 이때, 상기 갯끈풀 추출물의 함량이 1.25 ㎍/ml 미만이면, 세포 생존율은 우수하나 상대적으로 갯끈풀 추출물의 함유량이 적어 염증 또는 아토피 피부염을 효과적으로 억제할 수 있는 효과가 미미할 수 있다. 반대로 250 ㎍/ml 초과이면 강한 세포 독성으로 인해 세포 생존율이 급격하게 저하될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 염증성 싸이토카인(pro-inflammatory cytokines) 또는 케모카인(chemokine)에 대하여 억제활성을 가지는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 갯끈풀 추출물을 유효 성분으로 포함함으로써 염증성 싸이토카인 물질인 TNF-α 및 IFN-γ로 유도된 HaCaT와 같은 세포에서 세포 독성을 나타내지 않으며, TNF-α 및 IFN-γ에 의해 염증 또는 아토피 피부염이 유발된 세포에서 TARC 및 MDC의 바이오마커들의 발현을 억제하고 저해하여 염증 또는 아토피성 피부염의 예방 또는 개선에 현저한 효과가 있다. 상기 염증 또는 아토피 피부염은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 갯끈풀 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어서 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 아토피용 비누, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 목욕제, 스킨 소프너, 스킨 토너, 로션, 크림, 에센스, 아스트린젠트, 유액, 젤, 립스틱, 분무제, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 바디클렌져, 팩, 마사지제, 페이스파우더, 콤팩트, 파운데이션, 투웨이케이크 및 메이크업베이스로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 식물성유, 왁스, 전분, 셀룰로오스, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 산화아연 등을 더 포함할 수 있고, 제형이 파우더 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실리케이트 등의 파우더를 더 포함할 수 있다. 상기 화장료 조성물의 제형이 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제를 더 포함할 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 글리세린, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 프로필렌글라이콜, 부틸렌글라이콜, 1,2-헥산디올, 글리세롤 지방족 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르가 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 프로필렌글라이콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록사이드, 벤토나이트, 아가 등을 더 포함할 수 있다.
한편, 본 발명은 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 갯끈풀 추출물은 60 내지 80 중량%, 바람직하게는 65 내지 75 중량%, 가장 바람직하게는 70 중량%의 에탄올로 추출한 것일 수 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 약학적 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml, 바람직하게는 10 내지 250 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 250 ㎍/ml, 가장 바람직하게는 250 ㎍/ml의 농도로 포함될 수 있다.
상기 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 바람직한 구현예에 따르면, 상기 약학적 조성물의 1일 투여량은 0.001 내지 10g/㎏이다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
상기 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때, 제형은 과립제, 산제, 정제, 피복제, 캡슐제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 및 주사 액제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있다
상기 약학적 조성물은 인간용 및 동물용 의약을 포함한다. 구체적으로 상기 갯끈풀 추출물은 다양한 동물용 의약품 제조에 활용될 수 있다. 이때 상기 동물용 의약품으로는 동물의 아토피 피부염 질환을 효율적으로 치료, 예방할 수 있는 동물용 의약 혹은 보조제 및 치료효능을 증강시킬 수 있는 보조치료제, 사료첨가제 등으로서 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.
상기 갯끈풀 추출물은 60 내지 80 중량%, 바람직하게는 65 내지 75 중량%, 가장 바람직하게는 70 중량%의 에탄올로 추출한 것일 수 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 피부외용제 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml, 바람직하게는 10 내지 250 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 250 ㎍/ml, 가장 바람직하게는 250 ㎍/ml의 농도로 포함될 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 크림, 젤, 연고, 유화액, 현탁액, 분무제 및 경피 전달성 패치제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 갯끈풀 추출물은 60 내지 80 중량%, 바람직하게는 65 내지 75 중량%, 가장 바람직하게는 70 중량%의 에탄올로 추출한 것일 수 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 의약외품 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml, 바람직하게는 10 내지 250 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 250 ㎍/ml, 가장 바람직하게는 250 ㎍/ml의 농도로 포함될 수 있다.
상기 의약외품 조성물에는 상기 성분 외에 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 해하지 않는 한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 소독 청결제, 샤워폼, 연고액, 물티슈, 코팅제 등을 예시할 수 있으나 이에 제한되는 것이 아니며, 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 적절히 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 갯끈풀 추출물은 60 내지 80 중량%, 바람직하게는 65 내지 75 중량%, 가장 바람직하게는 70 중량%의 에탄올로 추출한 것일 수 있다.
상기 갯끈풀 추출물은 건강기능식품 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml, 바람직하게는 10 내지 250 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 250 ㎍/ml, 가장 바람직하게는 250 ㎍/ml의 농도로 포함될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 캡슐, 정제, 분말, 과립, 액상, 환, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리 및 바로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 유효성분으로서 갯끈풀 추출물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함할 수 있다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다.
상기 향미제는 천연 향미제로 타우마틴, 스테비아 추출물 및 합성 향미제를 사용할 수 있다. 이때, 상기 스테비아 추출물은 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등일 수 있고, 합성 향미제는 사카린, 아스파르탐 등일 수 있다. 예컨대, 상기 건강기능식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 갯끈풀 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명에 따른 갯끈풀 추출물은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 염증 또는 아토피 피부염을 억제하면서도 염증이 유도된 약해진 세포에서 세포 독성을 나타내지 않아 안정성이 우수하여 염증 또는 아토피 피부염에 대한 개선, 예방 또는 치료용 조성물로 활용될 수 있다.
또한 본 발명에 따른 갯끈풀 추출물은 천연물로부터 수득하여 인체에 대한 부작용이 없고 안정성이 우수하여 이를 이용한 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 적용할 수 있다.
본 발명의 효과는 이상에서 언급한 효과로 한정되지 않는다. 본 발명의 효과는 이하의 설명에서 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 할 것이다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물이 처리된 HaCaT 세포 생존율 평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 본 발명의실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MDC(a) 및 TARC(b)의 mRNA 발현량을 비교한 그래프이다.
도 3은 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 본 발명의실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 TARC(a) 및 MDC(b)의 단백질 발현량을 비교한 그래프이다.
도 4는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포들에 대하여 본 발명의 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MAPKs 경로를 나타낸 것이다.
도 5는 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물에 대한 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 본 발명의실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MDC(a) 및 TARC(b)의 mRNA 발현량을 비교한 그래프이다.
도 3은 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 본 발명의실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 TARC(a) 및 MDC(b)의 단백질 발현량을 비교한 그래프이다.
도 4는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포들에 대하여 본 발명의 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MAPKs 경로를 나타낸 것이다.
도 5는 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물에 대한 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
이하 본 발명을 실시예에 의거하여 더욱 구체적으로 설명하겠는 바, 본 발명이 다음 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 갯끈풀 추출물의 제조
강화 남단에서 채집한 갯끈풀(Spartina anglica)에 70 중량%의 에탄올을 첨가하고, 상온에서 24 시간 동안 추출한 후 (What man filter paper) 185 mm 필터로 여과하여 45 ℃에서 농축한 후 고형분을 수득하였다. 그 다음 DMSO 1 ml에 상기 농축 고형분 200 mg을 첨가한 후 희석하여 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물을 제조하였다.
실험예 1: 갯끈풀 추출물에 따른 세포 생존율 분석
상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물에 대하여 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT keratinocyte 세포 생존율에 미치는 영향을 알아보기 위하여 세포독성을 측정하였다. 구체적으로 37 ℃, 5% CO2 조건 하에서, 사람 유래 각질형성세포인 HaCaT 세포주를 각각 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin) 및 10% 우태혈청(fetal bovine serum)을 함유한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지(Gibco BRL사, 미국)에서 배양하였다. 상기 조건으로 배양한 HaCaT 세포주를 96웰 플레이트 또는 10 ㎖ 배양접시에 1 ㅧ 105 균주 수(cell)/㎖로 분주하고 24 시간 배양한 다음, 배지를 제거하고 새로운 배지를 첨가하였다. 대조군은 염증 유발 인자, 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물을 포함하지 않고, 배지만을 첨가한 것이고, 실험군은 각각의 세포에 실시예 1에서 수득한 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물(1.25, 2.5, 5, 10, 12.5, 25, 50, 100, 125, 250, 500 ㎍/㎖)을 첨가한 것이다. 상기 대조군과 실험군은 24 시간 동안 배양한 후, 세포 생존율을 측정하였다.
갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물의 농도에 따른 세포 생존율을 비교하기 위하여, 상기 실험예 1로부터 제조된 각각의 세포를 회수한 후, MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium) 용액(0.05 ㎎/㎖ 농도)을 첨가하고, 4 시간 동안 세포배양기에서 배양하면서 환원반응을 유도한 다음, MTT 용액을 제거하고 DMSO를 첨가하여 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해시켰다. 이를 각각 웰에 200 ㎕씩 넣고 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 570 ㎚의 흡광도로 측정하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1은 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물이 처리된 HaCaT 세포 생존율 평가 결과를 나타낸 그래프이다. 상기 도 1을 참조하면, 상기 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물을 1.25 μg/ml부터 500 μg/ml까지 처리하였을 때, 80% 이상의 세포 생존률을 보이는 최고농도가 250 μg/ml까지임을 확인하였다.
실험예 2: 아토피 관련 유전자 발현량 분석
상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물을 이용하여 싸이토카인(cytokine) 중 항아토피 바이오마커(biomaker)인 TARC와 MDC를 타겟(target)으로 한 RT-PCR 및 ELISA을 차례로 분석하였다. 평가 방법은 ELISA를 통해 HaCaT cell에 자극(TNF-α, IFN-γ) 싸이토카인(cytokine)을 처리하였을 때 갯끈풀(Spartina anglica) 70 중량% 에탄올 추출물의 농도별 TARC와 MDC 케모카인(chemokine) 발현량을 측정하였고, 이를 통해 단백질 레벨(protein level)에서의 항아토피 효과를 확인하였다. 그 결과는 도 2에 나타내었다.
도 2는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MDC(a) 및 TARC(b)의 mRNA 발현량을 비교한 그래프이다. 상기 도 2를 참조하면, MDC 및 TARC의 각 mRNA 발현량은 모두 유사한 경향을 나타내었고, 가장 낮은 농도인 10 μg/ml에서도 mRNA 발현량이 유의하게 감소한 것을 확인하였다. 또한 10 μg/ml의 농도 이후부터 농도에 의존적으로 MDC 및 TARC의 mRNA 발현량이 감소하는 것을 알 수 있었다.
도 3은 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포에 대하여 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 TARC(a) 및 MDC(b)의 단백질 발현량을 비교한 그래프이다. 상기 도 3을 참조하면, TARC 및 MDC 단백질 발현량은 모두 유사한 경향을 나타내었으며, 대조군(control)에 비하여 IFN-γ, TNF-α 두 싸이토카인이 처리된 군에서는 TARC와 MDC 발현량이 유의하게 증가하였다. 상기 TARC의 경우에는 50 μg/ml의 농도부터 농도 의존적으로 단백질 발현량이 저해되었다. 상기 MDC의 경우, 가장 낮은 농도인 5 μg/ml에서부터 농도 의존적으로 단백질 발현량이 저해되는 것을 확인할 수 있었다.
이를 통해 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 추출물이 HaCaT 세포 내 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로부터 TARC 및 MDC의 발현을 저해하여 염증 또는 아토피성 피부염을 억제하는데 매우 효과적임을 알 수 있었다.
실험예 3: 아토피 관련 HaCaT cell 내 염증 경로 분석
상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물을 이용하여 HaCaT cell 내 염증경로인 신호전달경로 기전(MAPKs pathway)을 확인하기 위해 웨스턴 블롯(Western Blot)을 이용하여 측정하였다. 측정 방법은 1차적으로 세포내에 단백질을 분리하고 정량하여 SDS-PAGE를 거쳐 1차 항체와 2차 항체로 목표로 하는 단백질만을 검출하는 방법으로 실시하였다. 이때, IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포로 GAPDH (REFERENCE), ERK, pERK, p38, p-p38, JNK 및 pJNK를 이용하였으며, 그 결과는 도 4에 나타내었다.
도 4는 IFN-γ 및 TNF-α 싸이토카인으로 유도된 HaCaT 세포들에 대하여 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 처리에 따른 MAPKs 경로를 나타낸 것이다. 상기 도 4를 참조하면, 염증 관련 경로로 알려진 MAPKs 경로의 ERK, JNK, p38 인산화된 시그널링(signaling)이 갯끈풀 추출물에 의하여 농도에 의존적으로 하향 조절되는 것이 확인되었다. 이는 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물이 포함된 조성물이 MAPKs 경로를 조절함으로써 아토피 피부염에 대하여 항염증 효과를 나타냄을 알 수 있었다.
실험예 4: 갯끈풀 추출물의 HPLC 분석
상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물에 대하여 지표성분을 확인하기 위해 HPLC를 이용하여 분석하였으며, 그 결과는 도 5에 나타내었다.
도 5는 상기 실시예 1에서 제조된 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물에 대한 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다. 상기 도 5를 참조하면, 갯끈풀 70 중량% 에탄올 추출물 내에 이소-오리엔틴(iso-orientin) 성분이 검출되는 것을 확인하였다.
Claims (19)
- 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 갯끈풀 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 프로판올, 에틸아세테이트, 아세톤, 핵산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출된 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 갯끈풀 추출물은 60 내지 80 중량%의 에탄올로 추출한 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 갯끈풀 추출물은 화장료 조성물 총 함량에 대하여 1.25 내지 250 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 갯끈풀 추출물은 이소-오리엔틴(Iso-orientin) 화합물을 유효성분으로 포함하는 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 아토피용 비누, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 목욕제, 스킨 소프너, 스킨 토너, 로션, 크림, 에센스, 아스트린젠트, 유액, 젤, 립스틱, 분무제, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 바디클렌져, 팩, 마사지제, 페이스파우더, 콤팩트, 파운데이션, 투웨이케이크 및 메이크업베이스로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 염증성 싸이토카인(pro-inflammatory cytokines) 또는 케모카인(chemokine)에 대하여 억제활성을 가지는 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 염증 또는 아토피 피부염은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 염증 또는 아토피 피부염은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 과립제, 산제, 정제, 피복제, 캡슐제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 및 주사 액제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
- 제13항에 있어서,
상기 염증 또는 아토피 피부염은 MDC 또는 TARC의 발현에 의해 유도된 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
- 제13항에 있어서,
상기 피부외용제 조성물은 크림, 젤, 연고, 유화액, 현탁액, 분무제 및 경피 전달성 패치제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
- 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
- 제16항에 있어서,
상기 의약외품 조성물은 소독 청결제, 샤워폼, 연고액, 물티슈 및 코팅제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
- 갯끈풀(Spartina anglica) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제18항에 있어서,
상기 건강기능식품 조성물은 캡슐, 정제, 분말, 과립, 액상, 환, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리 및 바로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 염증 또는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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