KR20220055757A - Cosmetic composition containing lemon myrtle extract and its manufacturing method - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a cosmetic composition containing a lemon myrtle extract and a method for manufacturing the same, and more particularly, relates to a lemon myrtle ethanol extract, a solvent fraction thereof, and effects thereof. According to the present invention, the cosmetic composition is harmless to the human and does not cause side effects.

Description

레몬머틀 추출물이 포함된 화장료 조성물 및 그 제조 방법{COSMETIC COMPOSITION CONTAINING LEMON MYRTLE EXTRACT AND ITS MANUFACTURING METHOD}Cosmetic composition containing lemon myrtle extract and manufacturing method thereof

본 발명은 레몬머틀 추출물이 포함된 화장료 조성물 및 그 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing a lemon myrtle extract and a method for preparing the same.

피부는 신체의 외부를 덮고 있는 하나의 막으로 여러 가지 외부의 자극, 장해, 건조 등의 환경요소로부터 신체를 보호해 주는 다양한 생리적 기능을 수행하여 내부 장기와 그 밖의 체내 기관을 보호 조절하는 역할을 한다.The skin is a membrane that covers the outside of the body and performs various physiological functions to protect the body from environmental factors such as various external stimuli, obstacles, and dryness, thereby protecting and regulating internal organs and other internal organs. do.

그러나 나이가 들어감에 따라 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하며, 면역세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되고, 외적으로는 오존층 파괴와 같은 환경오염으로 인한 자외선, 자유 라디칼 및 활성산소의 증가로 인하여 발생하는 물리적, 화학적 자극 및 스트레스로 인한 피부의 정상기능이 약화되고 노화가 촉진되며 혈색이 나빠지고 피부가 주름지게 된다.However, as we age, the secretion of various hormones that control metabolism decreases, and the function and activity of immune cells decreases, leading to a decrease in the biosynthesis of immune proteins and proteins necessary for the living body, and externally, destruction of the ozone layer. The normal function of the skin is weakened, aging is accelerated, and the complexion is deteriorated and the skin is wrinkled due to physical and chemical stimulation and stress caused by the increase of ultraviolet rays, free radicals and free radicals caused by environmental pollution such as

피부는 크게 표피, 진피, 피하지방조직의 3개 층으로 구성된다. 표피(epidermis)는 바깥쪽에서 안쪽으로 각질층, 투명층, 과립층, 기저층으로 나뉜다. 표피의 최외곽 층인 피부 각질층(stratum corneum)은 피부장벽 기능의 가장 중요한 구조로서, 무핵의 편평한 각질세포(corneocytes)와, 각질세포간 지질(SC intercellular lipid)로 이루어져 있다. 정상적인 표피세포의 분열 및 분화과정을 통해 유지되는 피부장벽의 각질세포가 합성하는 세라마이드, 콜레스테롤, 및 지방산과 같은 세포간 지질로 형성된 다층지질막(multi lamella lipid layer)은 피부 내의 수분이 증발하지 않도록 방어막 역할을 한다.The skin is largely composed of three layers: the epidermis, dermis, and subcutaneous adipose tissue. The epidermis is divided from the outside to the inside into the stratum corneum, clear layer, granular layer, and basal layer. The stratum corneum, the outermost layer of the epidermis, is the most important structure of the skin barrier function and consists of non-nucleated flat corneocytes and SC intercellular lipids. The multi-lamellar lipid layer formed of intercellular lipids such as ceramide, cholesterol, and fatty acids synthesized by keratinocytes of the skin barrier maintained through the division and differentiation process of normal epidermal cells is a protective barrier to prevent moisture in the skin from evaporating. plays a role

피부 각질층의 각질세포 간에는 다양한 종류의 지질이 존재하고, 이러한 지질들은 각질세포 사이에 존재하여 피부 수분의 증발을 방지하고, 외부 자극이나 오염으로부터 피부를 보호하는 피부장벽의 기능을 한다.Various types of lipids exist between the keratinocytes of the stratum corneum of the skin, and these lipids exist between the keratinocytes to prevent evaporation of skin moisture and function as a skin barrier to protect the skin from external stimuli or contamination.

또한, 화장품 업계에서는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품이 다수 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.In addition, in the cosmetic industry, a number of products using natural products have been developed to reduce skin irritation caused by various chemicals. Natural ingredients have fewer side effects on the skin, and as consumers' response to cosmetics using natural ingredients increases, the value of development as a cosmetic raw material is increasing.

이에 따라, 생체 안전성이 우수하고 피부장벽 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장품 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.Accordingly, the need for the development of cosmetic products derived from natural products with excellent biosafety and skin barrier improvement effect is constantly emerging.

특히, 최근에는 다양한 피부 고민을 한 번에 케어하고 불필요한 스킨 케어 단계를 건너뛰는 스킵케어(Skip-care) 개념이 대두되면서 하나의 물질로 복합적인 효과를 얻을 수 있는 기능성 원료에 대한 관심이 급증하고 있다.In particular, as the skip-care concept, which takes care of various skin concerns at once and skips unnecessary skin care steps, has recently emerged, interest in functional ingredients that can achieve complex effects with one substance is rapidly increasing. there is.

일 예로, 비타민 C는 피부, 혈액 및 기타 조직에서 강력한 생체 항산화제로 작용하여 생체내에서 반응성이 높은 자유 라디칼 및 과산화물에 의해 단백질 등의 생체성분이 산화되거나 변성되는 것을 방지한다. 또한, 비타민 C는 멜라닌의 생성을 억제함으로써 색소침착 억제 효과를 나타낸다. As an example, vitamin C acts as a powerful bio-antioxidant in the skin, blood and other tissues to prevent oxidation or denaturation of biocomponents such as proteins by free radicals and peroxides with high reactivity in the living body. In addition, vitamin C exhibits a pigmentation inhibitory effect by inhibiting the production of melanin.

이렇듯 비타민 C는 쉽게 접할 수 있는 천연 물질임과 동시에 복합적인 효과를 보여 이를 이용하기 위한 많은 시도가 있었으나, 공기, 습기, 빛, 열, 금속이온, 산소, 염기 등에 의해 쉽게 산화되는 치명적인 단점 때문에 화장품으로 사용하기 까다로운 성분으로 여겨진다. As such, vitamin C is an easily accessible natural substance and has complex effects, so many attempts have been made to use it. It is considered a difficult ingredient to use.

그럼에도 불구하고, 비타민 C가 가지고 있는 높은 생리활성을 이용하기 위하여 비타민 C를 안정화하기 위한 많은 연구가 진행되어 점차 결과물이 나오고 있는 상황이다.Nevertheless, in order to take advantage of the high physiological activity of vitamin C, many studies have been conducted to stabilize vitamin C, and results are gradually coming out.

본 발명자는 상기와 같은 배경 하에서, 비타민 C와 비슷한 정도의 항산화 및 미백효과를 나타내면서도 높은 안정성을 지니는 천연물 유래의 화장료 조성물을 제공함으로써, 상대적으로 안정성이 떨어지는 비타민 C를 대체 내지 보완할 수 있는 성분을 개발하고자 하였다.The present inventors provide a cosmetic composition derived from a natural product with high stability while exhibiting antioxidant and whitening effects similar to vitamin C under the background described above, thereby replacing or supplementing vitamin C with relatively poor stability. was intended to develop.

한국등록특허 제10-2140652호Korean Patent Registration No. 10-2140652

본 발명의 목적은 레몬머틀 추출물 또는 이들의 분획물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition comprising a lemon myrtle extract or a fraction thereof.

본 발명의 다른 목적은 우수한 항산화 활성 및 미백 활성을 나타내며, 안정성이 높은 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition that exhibits excellent antioxidant activity and whitening activity, and has high stability.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 레몬머틀 추출물 및 이들의 분획물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing the lemon myrtle extract and a fraction thereof.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 측면은 레몬머틀 추출물 또는 이들의 분획물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention for solving the above problems provides a cosmetic composition comprising a lemon myrtle extract or a fraction thereof.

본 발명에서, “레몬머틀(Lemon myrtle)”은 도금양과(Myrtaceae)의 식물로 학명은 Backhousia citriodora이며, 레몬센티드 머틀(Lemon scented myrtle), 레몬센티드 아이언우드(Lemon scented ironwood), 스윗버베나 트리(Sweet verbena tree), 스윗버베나 머틀(Sweet verbena myrtle), 레몬 센티드 버베나(Lemon scented verbena), 레몬 센티드 백하우시아(Lemon scented backhousia) 등으로도 불린다. 레몬머틀은 호주의 퀸즐랜드 중앙과 남동지역 아열대 우림지방에서 주로 자생한다.In the present invention, "lemon myrtle" is a plant of the family Myrtaceae, and the scientific name is Backhousia citriodora , lemon scented myrtle, lemon scented ironwood, sweet verbena. It is also called sweet verbena tree, sweet verbena myrtle, lemon scented verbena, lemon scented backhousia, etc. Lemon myrtle is native to the subtropical rain forests of central and southeastern Queensland, Australia.

본 발명에서 상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다. 또한 레몬머틀의 추출물, 상기 추출물의 희석액이나 농축액, 상기 추출물을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출물의 조제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출물 자체 및 추출물을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함할 수 있다. 나아가, 상기 추출물은 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.In the present invention, the "extract" refers to a solvent in which the active ingredient contained in the extraction raw material is transferred by contacting the solvent and the extraction raw material under specific conditions. It can be included regardless of the type of For example, extracts of components soluble in solvents from natural products using water or organic solvents, specific components of natural products, for example, products obtained by extracting only specific components such as oil may be included. In addition, extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract, such as extracts of lemon myrtle, dilutions or concentrates of the extracts, dried products obtained by drying the extracts, preparations or purified products of the extracts, or mixtures thereof may include Furthermore, the extract may be extracted from natural, hybrid or variegated plants, and may also be extracted from plant tissue cultures.

본 발명의 추출물을 추출하는 방법은 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 냉침 추출, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법, 압출 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.The method of extracting the extract of the present invention may be extracted according to a method commonly used in the art. Non-limiting examples of the extraction method include cold extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, filtration, reflux extraction, extrusion extraction, and the like, and these may be performed alone or in combination of two or more methods.

본 발명에서 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 필요에 따라 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로, 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 아울러, 상기와 같이 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위해 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조시켜 사용할 수 있다.The type of the extraction solvent used in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used as needed. Non-limiting examples of the extraction solvent include water; C1-C4 lower alcohols, such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and butyl alcohol; polyhydric alcohols such as glycerin, butylene glycol and propylene glycol; and hydrocarbon solvents such as methyl acetate, ethyl acetate, acetone, benzene, hexane, diethyl ether, and dichloromethane; Alternatively, a mixture thereof may be used, and specifically, water, lower alcohol, 1,3-butylene glycol, and ethyl acetate may be used alone or in combination of two or more. In addition, the extract extracted as described above is filtered to remove floating solid particles, for example, filtered using nylon or the like, or filtered using freeze filtration, etc. It can be used after drying.

상기 “가공 또는 처리”는 예를 들어, 추출물을 추가적으로 발효 또는 효소 처리하는 것일 수 있다.The "processing or treatment" may be, for example, additional fermentation or enzymatic treatment of the extract.

따라서 본원에서 추출물은 분획물, 추출액 또는 분획물의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 희석액, 농축물, 건조물, 발효물, 또는 이들의 혼합물 등, 레몬머틀로부터 형성가능한 모든 제형의 추출물을 포함하는 광범위한 개념이다. Accordingly, as used herein, an extract is a fraction, an extract or a crude or purified product of a fraction, or a dilution, concentrate, dried product, fermented product, or mixture thereof, and the like, including extracts of all formulations formable from lemon myrtle. am.

본 발명에서, “레몬머틀 추출물”은 레몬머틀의 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 열매 및 이들의 조합인 초본 전체의 추출물일 수 있으며, 초본의 지상부 또는 뿌리부의 일부 또는 전부의 추출물일 수 있고, 바람직하게는 레몬머틀 전초의 추출물일 수 있고, 보다 바람직하게는 레몬머틀 잎의 추출물 일 수 있다.In the present invention, the “lemon myrtle extract” may be an extract of the whole herb, which is the leaf, flower, root, stem, and fruit of lemon myrtle, and a combination thereof, and may be an extract of a part or all of the above-ground part or the root part of the herb; Preferably, it may be an extract of lemon myrtle whole plant, and more preferably, it may be an extract of lemon myrtle leaves.

본 발명에서 레몬머틀 추출물은 이 분야에 공지된 일반적 제조방법을 사용하여 제조될 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 감압 추출법 환류 추출법, 열수 추출법, 저온 열수 추출법, 고온 가압 추출법, 저온 고압 추출법, 초고압 추출법, 효소 추출법, 용매 추출법, 냉침 추출법, 수증기 증류법, 저온 고압 증류법, 용출법, 압착법, 가열 추출법, 또는 추출 용매를 사용하여 공지의 방법에 의해 제조하는 방법일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 바람직한 실험예에서, 레몬머틀 추출물은 저온 고압 증류법으로 수득된 것일 수 있다.In the present invention, the lemon myrtle extract may be prepared using a general preparation method known in the art, and is not particularly limited. For example, ultrasonic extraction method, supercritical extraction method, vacuum extraction method reflux extraction method, hot water extraction method, low temperature hot water extraction method, high temperature pressure extraction method, low temperature high pressure extraction method, ultra high pressure extraction method, enzyme extraction method, solvent extraction method, cold extraction method, steam distillation method, low temperature high pressure distillation method, It may be prepared by a known method using an elution method, a compression method, a heat extraction method, or an extraction solvent, but is not limited thereto. In a preferred experimental example of the present invention, the lemon myrtle extract may be obtained by low-temperature high-pressure distillation.

본 발명에서, 레몬머틀 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 추출 용매로 하여 추출액으로 제조될 수 있다. 상기 물은 예를 들어, 증류수, 정제수, 무균수를 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 유기용매는 예를 들어, 알코올, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르 및 디클로로메탄를 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. In the present invention, the lemon myrtle extract may be prepared as an extract using water, an organic solvent, or a mixture thereof as an extraction solvent. The water may include, for example, distilled water, purified water, or sterile water, but is not limited thereto. The organic solvent may include, for example, alcohol, glycerin, butylene glycol, propylene glycol, methyl acetate, ethyl acetate, acetone, benzene, hexane, diethyl ether, and dichloromethane, but is not limited thereto.

본 발명에서, 레몬머틀 추출물은 바람직하게는 물, C1-6 알코올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸 아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산, 시클로헥산 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 용매를 추출 용매로 하여 추출된 것일 수 있다. 상기 C1-6 알코올 의 농도는 10 % 내지 90 %일 수 있고, 바람직하게는 30 % 내지 90 % 일 수 있고, 더 바람직하게는 50 % 내지 90 % 일 수 있으며, 가장 바람직하게는 70% 에탄올을 이용하여 추출한 것일 수 있다. In the present invention, the lemon myrtle extract is preferably extracted with a solvent selected from the group consisting of water, C 1-6 alcohol, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane, cyclohexane, and mixtures thereof. It may be extracted with a solvent. The concentration of the C 1-6 alcohol may be 10% to 90%, preferably 30% to 90%, more preferably 50% to 90%, most preferably 70% ethanol It may be extracted using .

본 발명의 레몬머틀 추출물은 상업적으로 유통되는 제품을 구매하거나, 상기 기재된 공지의 추출 방법으로 제조될 수 있으며, 바람직하게는 저온의 증류수 중에서 추출될 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시예에서 레몬머틀 추출물은 70% 에탄올을 이용하여 추출한 것일 수 있다.The lemon myrtle extract of the present invention may be purchased commercially, or may be prepared by the known extraction method described above, and preferably extracted in distilled water at low temperature. In a preferred embodiment of the present invention, the lemon myrtle extract may be extracted using 70% ethanol.

본 발명의 다른 측면은 상기 제조방법으로 제조된 레몬머틀 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention provides a cosmetic composition comprising the lemon myrtle extract prepared by the above method.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 항산화 및 피부 미백 효과를 갖는 것일 수 있으며, 이러한 효과 각각을 구체적인 실험예를 통하여 확인하였다.Specifically, the cosmetic composition may have antioxidant and skin whitening effects, and each of these effects was confirmed through specific experimental examples.

본 발명의 화장료 조성물에서, 레몬머틀 추출물의 함량은 90 w/v% 이하, 바람직하게는 80 w/v% 이하, 보다 바람직하게는 70 w/v% 이하일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물에서, 레몬머틀 추출물의 함량은 0.1 w/v% 이상, 바람직하게는 5 w/v% 이상, 보다 바람직하게는 10 w/v% 이상일 수 있다. 본 발명의 구체적인 실시예에서, 레몬머틀 추출물의 함량은 10 내지 70 w/v%일 수 있다.In the cosmetic composition of the present invention, the content of the lemon myrtle extract may be 90 w/v% or less, preferably 80 w/v% or less, and more preferably 70 w/v% or less. In addition, in the cosmetic composition of the present invention, the content of the lemon myrtle extract may be 0.1 w/v% or more, preferably 5 w/v% or more, and more preferably 10 w/v% or more. In a specific embodiment of the present invention, the content of the lemon myrtle extract may be 10 to 70 w / v%.

본 발명에서 용어 “피부 미백"은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미한다. 구체적으로, 본 발명에서 피부 미백은 티로시나아제의 활성을 저해하여 색소침착을 억제함으로써 피부톤을 환하게 하여 명도를 높이는 효과를 의미하는 것으로 사용되었으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the term “skin whitening” refers to suppressing the production of various biomolecules such as melanin, oxidation-reduction hemoglobin, carotene, and melanoids that affect skin color, thereby alleviating skin pigmentation phenomena such as blemishes, freckles, and melasma. It refers to the effect of improving skin brightness and uniformity by alleviating yellowness and redness. Specifically, in the present invention, skin whitening inhibits the activity of tyrosinase to suppress pigmentation, thereby brightening the skin tone and increasing the brightness. used to mean, but is not limited thereto.

본 발명에서 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 미스트, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다. 구체적으로, 상기 화장료 조성물은 피부 미백 및 보습용 미스트의 형태로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the cosmetic composition comprises a softening lotion, a nutrient lotion, a moisture cream, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an ampoule, a gel, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a mist, a spray and a powder. It can be formulated with one or more selected from. Specifically, the cosmetic composition may be formulated in the form of a mist for skin whitening and moisturizing, but is not limited thereto.

상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.The cosmetic composition may be formulated by a conventional method. In the formulation of external skin preparations, reference may be made to the contents disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA, and in the formulation of cosmetic compositions, International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed (The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association) , Inc., Washington, 1995) may be referred to.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 화장료 조성물은, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.Specifically, the cosmetic composition can be prepared in general emulsified formulations and solubilized formulations. For example, lotion, such as a softening lotion or a nourishing lotion; emulsions such as facial lotions and body lotions; creams such as nourishing creams, moisturizing creams, and eye creams; essence; makeup ointment; spray; gel; pack; sunscreen; makeup base; foundations such as liquid type, solid type or spray type; powder; makeup removers such as cleansing creams, cleansing lotions, and cleansing oils; Alternatively, it may be formulated as a cleaning agent such as a cleansing foam, soap, body wash, but is not limited thereto. In addition, the cosmetic composition may be formulated as an ointment, patch, gel, cream or spray, but is not limited thereto.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.In the cosmetic composition, in addition to the essential components in each formulation, other components may be appropriately blended within the range that does not impair the purpose according to the present invention according to the type or purpose of use, etc. of the formulation.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition may include a conventionally acceptable carrier, for example, oil, water, surfactant, humectant, lower alcohol, thickener, chelating agent, colorant, preservative, fragrance, etc. may be appropriately blended, but is limited thereto not.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다The acceptable carrier may vary depending on the formulation. For example, when formulated into an ointment, paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide or their Mixtures can be used

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is formulated as a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, or mixtures thereof may be used as a carrier component, and in the case of a spray, chlorofluorohydro It may further contain a propellant such as carbon, propane, butane or dimethyl ether.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.When the cosmetic composition is formulated as a solution or emulsion, a solvent, solubilizer, or emulsifier may be used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-Butylglycol oil may be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol fatty esters, fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan may be used.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.When the cosmetic composition is formulated as a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier component, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester; Microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth and the like can be used.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.When the cosmetic composition is formulated as a soap, alkali metal salt of fatty acid, fatty acid hemiester salt, fatty acid protein hydrolyzate, isethionate, lanolin derivative, aliphatic alcohol, vegetable oil, glycerol, sugar, etc. can be used

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.The cosmetic composition is a fatty substance, organic solvent, solubilizer, thickening agent, gelling agent, softening agent, antioxidant, suspending agent, stabilizing agent, foaming agent, and fragrance commonly used in the industry depending on the quality or function of the final product. , surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering agents, chelating agents, preservatives, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, commonly used in cosmetics It may additionally contain adjuvants commonly used in the field of cosmetics or dermatology, such as any other ingredients.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.However, the adjuvant and its mixing ratio may be appropriately selected so as not to affect the desirable properties of the cosmetic composition according to the present invention.

본 발명의 레몬머틀 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 비타민 C와 유사한 복합 기능으로서 항산화 및 미백 효과를 나타내며, 천연물로부터 유래하여 인체에 무해하고 독성이 없으며, 인체에 적용하여도 부작용을 유발하지 않아 화장료 조성물로의 활용도가 높다. The cosmetic composition comprising the lemon myrtle extract of the present invention exhibits antioxidant and whitening effects as a complex function similar to vitamin C, is harmless and non-toxic to the human body derived from natural products, and does not cause side effects even when applied to the human body. The usability of the furnace is high.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 비타민 C와 비교하여 안정성이 현저히 개선된 것을 특징으로 하는 바, 비타민 C의 안정화를 위한 각종 첨가물 및 필수 공정을 생략할 수 있어 화장품 제조 공정의 비용 및 소요 시간을 개선할 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention is characterized in that the stability is remarkably improved compared to vitamin C, and various additives and essential processes for stabilizing vitamin C can be omitted, thereby improving the cost and required time of the cosmetic manufacturing process. can do.

상기 화장료 조성물은 이를 활용하여 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등의 피부 외용제로서 활용하는 데에 유용하다. The cosmetic composition is used as an external preparation for skin such as suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, and spray by utilizing it. useful for

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.It should be understood that the effects of the present invention are not limited to the above-described effects, and include all effects that can be inferred from the configuration of the invention described in the detailed description or claims of the present invention.

도 1은 레몬머틀 추출물 분획 과정 및 그 결과를 나타낸 것이다(A: 용매 분획 과정, B: 분획 결과).
도 2는 DPPH assay를 통한 레몬머틀 추출물 및 그 분획물의 항산화 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 ORAC assay를 통한 레몬머틀 추출물 및 그 분획물의 항산화 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 레몬머틀 추출물 및 그 분획물의 티로시네이즈 저해 활성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5 내지 7은 레몬머틀 추출물 및 그 분획물의 멜라닌 생성 저해 활성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
1 shows the lemon myrtle extract fractionation process and results (A: solvent fractionation process, B: fractionation result).
2 shows the results of confirming the antioxidant effect of lemon myrtle extract and its fractions through DPPH assay.
3 shows the results of confirming the antioxidant effect of lemon myrtle extract and its fractions through ORAC assay.
4 shows the results of confirming the tyrosinase inhibitory activity of a lemon myrtle extract and a fraction thereof.
5 to 7 show the results of confirming the melanin production inhibitory activity of the lemon myrtle extract and its fractions.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of Examples. However, the following examples only illustrate the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

실시예 1. 레몬머틀 추출물 및 분획물의 제조Example 1. Preparation of Lemon Myrtle Extract and Fractions

본 발명의 화장료 조성물을 제조하기 위하여, 깨끗이 씻어 건조된 레몬머틀 잎을 70% 에탄올을 이용하여 24시간동안 실온에서 교반추출을 진행하였으며 이를 3회 반복하였다. 상기 추출물을 150메쉬 및 0.5㎛ 필터에 의해 여과하였으며, 얻어진 추출물을 진공회전농축기를 이용하여 40℃에서 감압 농축하고 얻어진 농축물을 정제수로 세척한 뒤, 이를 비극성-극성 용매순서로 각각 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), n-부탄올(n-BuOH), 물(H2O)로 용매분획을 실시하였다.In order to prepare the cosmetic composition of the present invention, freshly washed and dried lemon myrtle leaves were stirred and extracted using 70% ethanol at room temperature for 24 hours, and this was repeated three times. The extract was filtered through a 150 mesh and 0.5 μm filter, and the obtained extract was concentrated under reduced pressure at 40° C. using a vacuum rotary concentrator, and the resulting concentrate was washed with purified water, and then ethyl acetate ( Ethyl acetate), n-butanol (n-BuOH), and water (H 2 O) were used for solvent fractionation.

실험예 1. DPPH assay를 통한 레몬머틀 추출물의 항산화 효과 확인Experimental Example 1. Confirmation of antioxidant effect of lemon myrtle extract through DPPH assay

활성산소는 정상적인 인체의 대사과정에서 끊임없이 만들어지는 물질로, 통상 우리가 호흡하는 산소의 2~5% 정도는 활성산소로 변환된다. 활성산소는 강력한 산화작용을 일으켜 세포와 단백질, DNA를 손상시켜 세포구조나 기능, 신호전달 체계에 이상을 일으키게 되어 최종적으로는 체내에서 염증을 일으키거나 노화를 유도할 수 있다.Active oxygen is a substance that is constantly produced in the normal metabolic process of the human body, and about 2 to 5% of the oxygen we breathe is converted into active oxygen. Free radicals cause strong oxidation and damage cells, proteins, and DNA, causing abnormalities in cell structure, function, and signal transduction system, and ultimately can cause inflammation in the body or induce aging.

본 실험예에서는 레몬머틀의 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획 및 n-부탄올 분획 각각에 대하여 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl(DPPH) 소거능 평가를 통해 활성산소 소거능을 확인하였다. In this experimental example, 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl (DPPH) scavenging activity was confirmed for each of the ethanol extract, ethyl acetate fraction, and n-butanol fraction of lemon myrtle through evaluation of the scavenging ability of active oxygen.

본 실험은 대한피부과학연구소에 의뢰하여 시행되었으며(시험번호 KDRI-IV-2020-074), 시료를 농도 별로(0 내지 400ug/mL) 희석하여 준비하고, 에탄올 50 μL에 시료 12.5 μL를 첨가한 다음 0.1mM 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 62.5 μL를 첨가하였다. 4℃, 암상태에서 30분간 반응 후, 520nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH 라디칼의 농도를 확인하였다. 결과는 t-검정법을 통해 통계적 유의성을 확인하였고, p 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판단하였다.This experiment was commissioned by the Korean Dermatological Research Institute (Test No. KDRI-IV-2020-074), the sample was prepared by diluting it by concentration (0 to 400ug/mL), and 12.5 μL of the sample was added to 50 μL of ethanol. Then, 62.5 μL of 0.1 mM 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) was added. After reacting for 30 minutes at 4° C. in the dark, absorbance was measured at 520 nm to confirm the concentration of DPPH radicals. The statistical significance of the results was confirmed through the t-test, and when the p value was less than 0.05, it was judged to be statistically significant.

도 2에 나타난 실험 결과와 같이, 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 용매 분획 모두 3.13 내지 400 ㎍/㎖ 범위에서 농도 의존적이며 통계적으로 유의한(p<0.05) 수준의 DPPH radical 소거 활성을 나타내는 것을 확인하였다. As shown in the experimental results shown in FIG. 2 , it was confirmed that both the ethanol extract and the solvent fraction of lemon myrtle exhibited a concentration-dependent and statistically significant ( p <0.05) level of DPPH radical scavenging activity in the range of 3.13 to 400 μg/ml.

특히, 레몬머틀 에탄올 추출물 시료의 경우 400 ㎍/㎖ 농도에서는 85.99%의 DPPH radical 소거 활성이 나타났고(IC50=5.27 ㎍/㎖), 레몬머틀 추출물 n-BuOH 분획물의 경우 400 ㎍/㎖ 농도에서 86.94%의 DPPH radical 소거 활성이 나타났다(IC50=4.97 ㎍/㎖). 레몬머틀 추출물 Ethyl aceatae 분획물의 경우 400 ㎍/㎖ 농도에서 86.46%의 DPPH radical 소거 활성이 나타나는 것으로(IC50=7.01 ㎍/㎖) 항산화 효능을 확인할 수 있었다. In particular, in the case of the lemon myrtle ethanol extract sample, at a concentration of 400 μg/ml, 85.99% of DPPH radical scavenging activity was shown (IC 50 =5.27 μg/ml), and in the case of the lemon myrtle extract n -BuOH fraction at a concentration of 400 μg/ml, A DPPH radical scavenging activity of 86.94% was shown (IC 50 =4.97 μg/ml). In the case of the lemon myrtle extract Ethyl aceatae fraction, 86.46% of DPPH radical scavenging activity was shown at a concentration of 400 μg/ml (IC 50 =7.01 μg/ml), confirming the antioxidant effect.

즉, 본 발명 레몬머틀 추출물 및 그 분획은 50% 이상의 DPPH radical 소거 활성을 나타내어 우수한 항산화 활성을 가지고 있는 것을 확인하였다.That is, it was confirmed that the lemon myrtle extract and its fractions of the present invention exhibited DPPH radical scavenging activity of 50% or more and had excellent antioxidant activity.

실험예 2. ORAC assay를 통한 레몬머틀 추출물의 항산화 효과 확인Experimental Example 2. Confirmation of antioxidant effect of lemon myrtle extract through ORAC assay

활성산소 흡수능력(Oxygen radical absorbance capacity; ORAC) assay는 주로 천연물 시료의 항산화능을 확인하기 위해 개발된 시험방법이다. 이러한 ORAC assay가 가지는 장점 중 하나는 다양한 항산화물질이 혼합되어 있는 혼합물의 항산화 성능을 확인하기 적합하다는 점이며, 형광량을 확인하는 시험이므로 흡광도에 영향을 미치는 시료의 항산화 성능 확인에 적합한 점도 들 수 있다. 이 시험법은 AAPH(2,2'-azobis(2-amidino-propane) dihydrochloride)와 같은 Azo 반응 개시제(Azo-initiator) 등의 자유라디칼 형성제와 혼합하여 산화적으로 분해되는 형광 분자(beta-phycoerythrin 또는 fluorescein)의 형광량을 측정하는 시험이다. AAPH는 열에 의해 과산화라디칼을 생성하는 물질로 생성된 과산화라디칼이 형광 물질을 분해하여 형광량을 감소시키게 되며, 항산화능을 가진 물질이 이러한 자유라디칼의 형광물질 분해를 억제하게 되고 그 형광량의 변화를 형광광도분석기(Fluorometer)를 이용하여 측정하게 된다. 산화적 분해과정이 진행되면 이 과정에서 형광량은 감소하게 되며 이러한 형광량 변화를 일정시간 동안 측정하게 된다. 이렇게 얻어진 형광량 변화의 경시적 곡선, 특히 항산화 물질 존재여부에 따른 두 곡선 사이의 면적이 그 항산화 물질이 가지는 항산화 성능에 해당되게 된다. 동시에 표준 항산화제인 Vitamin E 유도체 Trolox가 농도 별로 가지는 형광량 변화 억제율을 확인하여 Trolox 농도별 형광량 변화 억제 표준곡선을 만들고 이를 이용하여 시료가 가지는 항산화능을 Trolox 당량(Trolox equivalents 또는 TEs)으로 표시하게 된다. Oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay is a test method mainly developed to confirm the antioxidant capacity of natural samples. One of the advantages of this ORAC assay is that it is suitable to check the antioxidant performance of a mixture in which various antioxidants are mixed. there is. This test method is a fluorescent molecule (beta-) that is oxidatively decomposed by mixing with a free radical former such as an Azo-initiator such as AAPH (2,2'-azobis(2-amidino-propane) dihydrochloride). This is a test to measure the amount of fluorescence of phycoerythrin or fluorescein). AAPH is a substance that generates radical peroxide by heat, and the radical peroxide decomposes the fluorescent substance to reduce the fluorescence. is measured using a fluorometer. When the oxidative decomposition process proceeds, the amount of fluorescence decreases during this process, and the change in the amount of fluorescence is measured for a certain period of time. The time-dependent curve of the fluorescence amount change obtained in this way, in particular, the area between the two curves depending on the presence or absence of an antioxidant corresponds to the antioxidant performance of the antioxidant. At the same time, check the inhibition rate of fluorescence change by concentration of the vitamin E derivative Trolox, a standard antioxidant, and create a standard curve for inhibiting fluorescence change by Trolox concentration. do.

본 발명 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 분획에 대하여 ORAC assay를 이용해 in-vitro 상에서의 Free radical 소거능을 확인하였다.For the ethanol extract and fraction of lemon myrtle of the present invention, free radical scavenging ability was confirmed using ORAC assay.

본 실험 또한 대한피부과학연구소에 의뢰하여 시행하였으며(시험번호 KDRI-IV-2020-076), 그 결과는 도 3에 나타내었다.This experiment was also commissioned by the Korean Dermatological Research Institute (test number KDRI-IV-2020-076), and the results are shown in FIG. 3 .

그 결과, 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 용매 분획 모두 2 내지 50 μg/ml 농도 범위에서 통계적으 로 유의하며(p<0.05), 농도 의존적인 과산화 라디칼 소거 활성을 나타내었다. 이를 단위 중량 당 Trolox equivalent 인 ORAC value (μM TE/100g)로 환산한 결과, 레몬머틀의 에탄올 추출물은 20 μg/ml 처리군에서 100g 당 119.85 × 106 μM TE의 ORAC value를 확인할 수 있었으며, n-부탄올 분획은 20 μg/ml 처리군에서 100g 당 110.86 × 106 μM TE의 ORAC value를, 에틸 아세테이트 분획은 20 μg/ml 처리군에 서 100g 당 143.53 × 106 μM TE의 ORAC value를 나타내었다.As a result, both the ethanol extract of lemon myrtle and the solvent fraction were statistically significant ( p <0.05) in the concentration range of 2 to 50 μg/ml, and showed concentration-dependent peroxidation radical scavenging activity. As a result of converting this into Trolox equivalent ORAC value (μM TE/100g) per unit weight, the ethanol extract of lemon myrtle was able to confirm the ORAC value of 119.85 × 106 μM TE per 100g in the 20 μg/ml treatment group, n- The butanol fraction showed an ORAC value of 110.86 × 106 μM TE per 100 g in the 20 μg/ml treatment group, and the ethyl acetate fraction showed an ORAC value of 143.53 × 106 μM TE per 100 g in the 20 μg/ml treatment group.

즉, 본 발명 레몬머틀 추출물 및 그 용매 분획 모두 우수한 항산화능을 가지는 것을 확인하였다.That is, it was confirmed that both the lemon myrtle extract of the present invention and its solvent fraction had excellent antioxidant activity.

실험예 3. 레몬머틀 추출물의 티로시네이즈 저해활성 확인Experimental Example 3. Confirmation of tyrosinase inhibitory activity of lemon myrtle extract

티로시네이즈(Tyrosinsase, TRP1, TRP2)는 멜라닌 형성 관련 효소로서, 멜라닌 형성관련 효소에 의해 멜라닌이 형성되면 피부에 착색이 일어난다.Tyrosinase (Tyrosinsase, TRP1, TRP2) is a melanin formation-related enzyme, and when melanin is formed by the melanin formation-related enzyme, pigmentation occurs on the skin.

즉, 생체내에서의 멜라닌 합성과정에 티로시네이즈 활성이 매우 중요한 요소이므로, 티로시네이즈의 활성을 억제하는 물질은 미백제로서 사용 가능하다. 대표적인 티로시네이즈 활성 억제 성분으로는 Kojic acid, Arbutin, Vitamin C화합물이 있다. That is, since tyrosinase activity is a very important factor in the melanin synthesis process in vivo, a substance inhibiting the activity of tyrosinase can be used as a whitening agent. Representative tyrosinase activity inhibitory ingredients include Kojic acid, Arbutin, and Vitamin C compounds.

본 발명자는 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 용매 분획에 대하여 Mushroom 유래 티로시네이즈에 의해 개시되는 멜라닌 생합성 과정에 미치는 영향을 in-vitro 상에서 확인하고 이를 통해 미백 기능성 소재로서의 가능성을 확인하였다.The present inventors confirmed the effect on the melanin biosynthesis process initiated by Mushroom-derived tyrosinase with respect to the ethanol extract and solvent fraction of lemon myrtle in-vitro , and confirmed the potential as a whitening functional material through this.

본 실험 또한 대한피부과학연구소에 의뢰하여 시행하였으며(시험번호 KDRI-IV-2020-075), 그 결과는 도 4에 나타내었다.This experiment was also commissioned by the Korean Dermatological Research Institute (test number KDRI-IV-2020-075), and the results are shown in FIG. 4 .

그 결과 도 4에 나타난 바와 같이, 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 용매 분획 모두 6.25 내지 400 ㎍/㎖ 범위에서 농도 의존적이며 통계적으로 유의한 (p<0.05) 수준의 tyrosinsase 저해 활성을 나타내었다. 특히 레몬머틀 추출물의 경우 400 ㎍/㎖ 농도에서 93.67%(IC50=133.63 ㎍/㎖), 레몬머틀 추출물 n-BuOH 분획물의 경우 400 ㎍/㎖농도에서 79.75%(IC50=179.82 ㎍/㎖), 그리고 레몬머틀 추출물 Ethyl acetate 분획물의 경우 시료의 400 ㎍/㎖ 농도에서 82.03%(IC50=147.34 ㎍/㎖) 티로시네이즈 저해 활성이 나타나 미백 효능을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 4, both the ethanol extract and the solvent fraction of lemon myrtle showed a concentration-dependent and statistically significant ( p <0.05) level of tyrosinsase inhibitory activity in the range of 6.25 to 400 μg/ml. In particular, in the case of lemon myrtle extract, 93.67% (IC 50 = 133.63 μg/ml) at a concentration of 400 μg/ml, and 79.75% at a concentration of 400 μg/ml in the case of the lemon myrtle extract n-BuOH fraction (IC 50 =179.82 μg/ml) , and the lemon myrtle extract ethyl acetate fraction showed 82.03% (IC 50 =147.34 μg/ml) tyrosinase inhibitory activity at a concentration of 400 μg/ml of the sample, confirming the whitening effect.

즉, 본 발명의 레몬머틀 추출물 및 그 분획물들은 50% 이상의 티로시네이즈 저해 활성을 나타내어 미백 소재로서의 가능성을 가지고 있는 것을 확인하였다.That is, it was confirmed that the lemon myrtle extract and its fractions of the present invention exhibited tyrosinase inhibitory activity of 50% or more, thereby having potential as a whitening material.

실험예 4. 레몬머틀 추출물의 멜라닌 생성 저해활성 확인Experimental Example 4. Confirmation of melanin production inhibitory activity of lemon myrtle extract

상기 실험예 3을 통하여 본 발명 레몬머틀 추출물 및 그 분획물들이 멜라민 형성에 관여하는 티로시네이즈의 활성을 저해하는 것을 확인하였는 바, 실제 멜라닌 생성에 미치는 영향을 확인하기 위하여 B16-F10 melanoma 세포를 이용한 멜라닌 생성 저해활성을 확인 실험을 실시하였다.Through Experimental Example 3, it was confirmed that the lemon myrtle extract of the present invention and its fractions inhibited the activity of tyrosinase involved in melamine formation. In order to confirm the effect on actual melanin production, B16-F10 melanoma cells were used An experiment was conducted to confirm the melanin production inhibitory activity.

구체적으로, B16-F10 melanoma 세포를 10% fetal bovine serum(FBS) 및 1% penicillin/streptomycin (P/S)이 함유된 DMEM 배지를 이용하여 150mm cell culture dish를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에 배양하였다. 정족수에 도달한 세포는 Trypsin-EDTA를 사용하여 계대 배양을 유지하였다. Specifically, B16-F10 melanoma cells were cultured in a 150mm cell culture dish using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin/streptomycin (P/S) at 37°C, 5% CO 2 Cultured in an incubator. Cells that reached quorum were subcultured using Trypsin-EDTA.

이후 세포 생존율 실험을 통해 세포 독성을 나타내지 않는 농도범위를 확인하였다. 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 n-부탄올 분획은 50 μg/mL 이하의 농도에서 90% 이상의 세포 생존율을 나타내었으나, 에틸아세테이트 분획은 25 μg/mL 이하의 농도에서 90% 이상의 세포 생존율을 나타내었다.Thereafter, a concentration range that does not exhibit cytotoxicity was confirmed through a cell viability test. The ethanol extract of lemon myrtle and the n-butanol fraction showed a cell viability of 90% or more at a concentration of 50 μg/mL or less, but the ethyl acetate fraction showed a cell viability of 90% or more at a concentration of 25 μg/mL or less.

본 실험은 본 발명 레몬머틀 추출물 및 그 분획물들을 세포 독성을 나타내지 않는 농도까지의 농도별로 희석하여 처리하고 멜라닌의 생성량을 측정하였다.In this experiment, the lemon myrtle extract of the present invention and its fractions were diluted by concentration to a concentration that does not show cytotoxicity, and the amount of melanin production was measured.

구체적으로, 상기 실험은 다음과 같은 과정을 통하여 진행하였다.Specifically, the experiment was conducted through the following process.

① B16-F10 세포를 6well cell culture plate에 8×104 cells/well 농도로 10% FBS, 1% P/S가 첨가된 DMEM 배양액으로 24시간 배양하였다. ② 100 μM α-Melanocyte stimulating hormone(α-MSH)을 DMEM/Modified 배지에 희석하여 100 nM α-MSH를 함유하는 DMEM/Modified 배지를 제조하였다. ③ 시료와 양성대조군인 β-arbutin를 DMEM/Modified 배지 (100 nM α-MSH)에 농도별로 희석하여 준비하였다. ④ 24시간 배양한 세포의 배양액을 제거한 후 DPBS 2 mL로 세포를 세척하였다. ⑤ 농도별로 희석하여 준비한 시료를 3 mL씩 처리하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 48 ~ 72시간 배양하였다. ⑥ 배양이 완료된 후 세포와 배양액을 회수하여 원심분리하였다. ⑦ 상층액은 96well plate에 100 μL씩 분주한 다음 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 외 멜라닌 유리량을 측정하였다. ⑧ 남은 상층액은 제거 후 DPBS 1 mL로 세포를 세척한 다음 40℃에서 건조시켰다. ⑨ 건조시킨 세포에 1N NaOH (10% DMSO)를 120 μL 첨가한 후 60℃ water bath에서 1시간 중탕하여 세포를 용해시키고 15000rpm에서 1시간 동안 원심분리하였다. ⑩ 상층액을 96well plate에 100 μL씩 분주한 다음 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 내 멜라닌 생성량을 측정하였다. ⑪ 측정된 멜라닌 양은 BCA법 (Bicinchronic acid assay)으로 구한 총 단백질 양과 합성 melanin standard curve로 보정하였다. ① B16-F10 cells were cultured in a DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% P/S at a concentration of 8×10 4 cells/well in a 6-well cell culture plate for 24 hours. ② 100 μM α-Melanocyte stimulating hormone (α-MSH) was diluted in DMEM/Modified medium to prepare DMEM/Modified medium containing 100 nM α-MSH. ③ Samples and positive control, β-arbutin, were prepared by diluting each concentration in DMEM/Modified medium (100 nM α-MSH). ④ After removing the culture solution of the cells cultured for 24 hours, the cells were washed with 2 mL of DPBS. ⑤ The samples prepared by diluting each concentration were treated 3 mL each, and incubated at 37° C., 5% CO 2 in an incubator for 48 to 72 hours. ⑥ After the culture was completed, the cells and the culture medium were recovered and centrifuged. ⑦ 100 μL of the supernatant was dispensed into 96 well plates, and the absorbance was measured at 490 nm to measure the amount of extracellular melanin release. ⑧ After removing the remaining supernatant, the cells were washed with 1 mL of DPBS, and then dried at 40°C. ⑨ After adding 120 μL of 1N NaOH (10% DMSO) to the dried cells, the cells were lysed by boiling in a water bath at 60° C. for 1 hour and centrifuged at 15000 rpm for 1 hour. ⑩ 100 μL of the supernatant was dispensed into a 96-well plate, and the absorbance was measured at 490 nm to measure the amount of melanin production in the cells. ⑪ The measured amount of melanin was corrected with the total protein amount obtained by BCA (Bicinchronic acid assay) and the synthetic melanin standard curve.

멜라닌 생성 억제율은 다음과 같은 식을 통해 계산하였다.The inhibition rate of melanin production was calculated using the following formula.

[식 1] 멜라닌 생성 억제율 (%) = 100 - [(시료 첨가군의 멜라닌 생성량/α-MSH 처리 대조군의 멜라닌 생성량) x 100][Formula 1] Melanin production inhibition rate (%) = 100 - [(Melanin production in the sample addition group / Melanin production in the α-MSH treatment control group) x 100]

본 실험은 대한피부과학연구소에 의뢰하여 진행하였으며(시험번호 KDRI-IV-2020-077), 그 결과는 도 5 내지 7에 나타내었다.This experiment was commissioned by the Korean Dermatological Research Institute (test number KDRI-IV-2020-077), and the results are shown in FIGS. 5 to 7 .

그 결과, 레몬머틀 에탄올 추출물은 50 μg/mL 처리 농도에서 통계적으로 유의한 수준 (p<0.05)으로 세포 내 외 총 멜라닌 생성을 저해하는 것으로 확인되었으며 세포 총 멜라닌 생성을 17.49 % 저해하는 것으로 확인되었다. As a result, it was confirmed that the lemon myrtle ethanol extract inhibited the total intracellular and extracellular total melanin production at a statistically significant level (p<0.05) at the 50 μg/mL treatment concentration, and it was confirmed that it inhibited the total cell melanogenesis by 17.49%. .

에틸아세테이트 분획물의 경우에도, 25 μg/mL 처리 농도에서 통계적으로 유의한 수준(p<0.05)으로 세포 내 외 총 멜라닌 생성을 저해하는 것으로 확인되었으며 세포 총 멜라닌 생성을 14.47 % 저해하는 것으로 확인되었다.Even in the case of the ethyl acetate fraction, it was confirmed that it inhibited the intracellular and extracellular total melanin production at a statistically significant level (p<0.05) at the 25 μg/mL treatment concentration, and it was confirmed that 14.47% of the total cell melanogenesis was inhibited.

반면, 레몬머틀의 n-부탄올 분획물의 경우 B16-F10 세포 생존에 영향을 미치지 않는 농도 범위에서는 세포 내/외 총 멜라닌 생성 저해 효과가 나타나지 않았다.On the other hand, in the case of the n-butanol fraction of lemon myrtle, the inhibitory effect of intracellular/extracellular total melanin production did not appear in the concentration range that did not affect the B16-F10 cell survival.

즉, 본 발명 레몬머틀의 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물은 멜라닌 생성을 저해하여 미백 효능이 있는 것을 확인하였다.That is, it was confirmed that the ethanol extract and ethyl acetate fraction of lemon myrtle of the present invention inhibited melanin production and had a whitening effect.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.The above description of the present invention is for illustration, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not restrictive. For example, each component described as a single type may be implemented in a dispersed form, and likewise components described as distributed may be implemented in a combined form.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present invention is indicated by the following claims, and all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and their equivalents should be construed as being included in the scope of the present invention.

Claims (10)

레몬머틀 추출물 또는 이들의 용매 분획물을 포함하는, 조성물.A composition comprising a lemon myrtle extract or a solvent fraction thereof. 제1항에 있어서,
상기 레몬머틀 추출물은 냉침 추출, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 및 압출 추출법을 단독 또는 2 종 이상의 방법을 병용하여 추출된 것인, 조성물.
According to claim 1,
The lemon myrtle extract is extracted by cold extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, filtration, reflux extraction, and extrusion extraction alone or by using two or more methods in combination.
제2항에 있어서,
상기 추출물의 추출에 사용된 추출용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 또는 이들의 혼합물을 사용한 것인, 조성물.
3. The method of claim 2,
The extraction solvent used for extracting the extract is water, C1 to C4 lower alcohol, glycerin, butylene glycol, propylene glycol, methyl acetate, ethyl acetate, acetone, benzene, hexane, diethyl ether, dichloromethane, or their A composition using a mixture.
제1항에 있어서,
상기 용매 분획물은 n-부탄올 및 에틸아세테이트를 이용하여 수득한 것인, 조성물.
According to claim 1,
The solvent fraction is obtained by using n-butanol and ethyl acetate, the composition.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 항산화 및 미백 효과를 나타내는 것인, 조성물.
5. The method according to any one of claims 1 to 4,
The composition will exhibit antioxidant and whitening effects, the composition.
제5항에 있어서,
상기 항산화 효과는 활성산소(ROS) 및 자유라디칼(free radical)을 제거하는 것인, 조성물.
6. The method of claim 5,
The antioxidant effect is to remove active oxygen (ROS) and free radicals (free radicals), the composition.
제5항에 있어서,
상기 조성물은 티로시네이즈 저해 활성을 나타내는 것인, 조성물.
6. The method of claim 5,
The composition will exhibit tyrosinase inhibitory activity.
레몬머틀의 에탄올 추출물 또는 그 에틸 아세테이트 분획물 중 하나 이상을 포함하는, 활성 산소 및 멜라닌 생성 억제용 조성물.A composition for inhibiting active oxygen and melanin production, comprising at least one of an ethanol extract of lemon myrtle or an ethyl acetate fraction thereof. 제5항의 조성물을 포함하는, 피부 노화 방지 및 미백용 화장료 조성물.A cosmetic composition for skin anti-aging and whitening, comprising the composition of claim 5. 제8항의 조성물을 포함하는, 피부 노화 방지 및 미백용 화장료 조성물.A cosmetic composition for skin anti-aging and whitening, comprising the composition of claim 8.
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