KR20220047332A - 치료제 효과 및 이의 투여 경로 - Google Patents

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KR20220047332A
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비자얀티 크리쉬난
엠. 스캇 로벌츠
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알티뮨 인크.
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Abstract

포유동물 개체에서 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)/치료학적 면역원성 조성물의 비강내 투여를 통해 보호 면역원성 반응을 생성하는 방법이 본원에 개시된다.비공이 위쪽으로 기울어지도록 하는, 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 및/또는 앙와위와 같은 면역원성 제제의 투여 동안의 개체의 특정 투여 체위는, 놀랍게도 인간 및 동물 모두에서 강력한 면역원성 반응의 생성과 상관관계가 있다.

Description

치료제 효과 및 이의 투여 경로
관련 출원
본 출원은 2019년 8월 13일자로 출원된 미국 출원번호 제62/886,234호에 대한 우선권을 주장하며, 그 전체가 본원에 통합된다.
기술분야
본 출원은 일반적으로 치료 용량의 비강내 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 용량의 위치 투여에 관한 것이다.
연방 지원 연구 또는 개발에 관한 진술
본 발명은 미국의 생물의약품첨단연구개발국 (BARDA)이 수여한 계약 HHSO100201600008C 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 발명에 대한 특정 권리를 가지고 있다.
탄저병(Anthrax)은 독소를 생성하는 막대 모양의 그람 양성 호기성 세균인 탄저균(Bacillus anthracis)에 의해 발생하는 급성 및 중증 질병이다. 탄저병 감염은 접종, 섭취 또는 흡입 후 발아하는, 환경적으로 안정적인 포자를 통해 매개되며, 감염 경로(피부, 위장 또는 흡입 탄저병)에 따라 질병 징후가 나타난다. 흡입형의 경우 치사율이 90%를 넘는 것으로 보고되었다 (Wright JG, Quinn CP, Shadomy S, et al. Use of anthrax immunogenic composition (e.g., vaccine) in the United States: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), 2009. MMWR Recomm Rep. 2010;59(RR-6):1-30).
탄저균은 보호항원(protective antigen, PA), 치사인자(lethal factor, LF) 및 부종인자(edema factor, EF)로 알려진 3가지 단백질로 구성된 치명적인 독소를 생성한다. PA는 숙주 세포에 결합하고 LF 또는 EF와 결합하여 각각 치명적인 독소(LT) 및 부종 독소(ET)를 형성한다[Wright 2010]. PA는 두 가지 독소 모두의 구성요소이며 PA에 대한 항체는 탄저병으로부터 보호하는 데 매우 중요하다.
탄저균은 토양에서 자연적으로 발생하며 동물 감염, 특히 대형 초식 동물에서 동물 감염을 일으킨다. 자연적인 인간 감염은 일반적으로 감염된 동물이나 동물 가죽과의 접촉 후에 발생하지만 미국에서는 매우 드물다. 탄저균은 포자가 실험실에서 매우 쉽게 성장하고, 쉽게 분산되며, 환경에서 장기간 안정하기 때문에 생물테러 공격에 사용될 가능성이 가장 높은 제제 중 하나로 간주된다 (Anthrax: The threat. Centers for Disease Control and Prevention Web site; September 2017). 2001년에는 탄저균에 감염된 22명 중 5명이 생물테러 행위로 미국 우편 시스템을 통해 전달되어 사망했다.
현재 미국에서 탄저병 예방을 위해 허가된 유일한 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 Emergent BioSolutions(Lansing, MI)에서 제조한 BioThrax (흡착된 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신), AVA)이다. 이 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 질병을 유발할 수 없는 탄저균 균주 배양물의 무세포 여과액으로 만든 멸균 제품이다. 노출 전 예방요법 일정은 0, 1, 6개월에 3회 근육내 투여하는 것이다. 지속적인 보호를 위해서는 12개월, 18개월 및 이후 매년 추가 접종이 권장된다. 질병의 노출 후 예방요법 일정은 노출 후 0, 2, 4주에 3회 항균 요법과 함께 피하 투여하는 것이다. 이러한 예방접종 일정은 불편하고 시간이 많이 걸리며 상당한 반응성과 관련이 있다. 2016년 PHEMCE (Public Health Emergency Medical Countermeasures Enterprise) 전략 및 실행 계획에서는 의료 대책에 대한 접근 방식에 탄저균에 대한 2세대 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 개발이 포함된다고 결정했다 (U.S. Department of Health and Human Services. 2016 Public health emergency medical countermeasures enterprise (PHEMCE) strategy and implementation plan. Rockville, MD: U.S. Department of Health and Human Services; 2016).
군인, 기타 최초 대응자, 수의사 및 기타 동물 노동자는 일반 사용 또는 노출 전 일정에 따라 노출 전에 예방 접종을 받는다. 생물무기 또는 기타 노출의 경우, 미국 질병통제예방센터(CDC)는 백신을 접종하지 않은 개인에게 탄저균의 식물성 형태를 추정적으로 치료하기 위해 시프로플록사신 또는 독시사이클린과 같은 항생제를 투여함과 동시에, 보호 수준의 항독소를 달성하기 위해 예방접종을 받을 것을 권장한다 (Bell DM, Kozarsky PE, Stephens DS. Clinical issues in the prophylaxis, diagnosis, and treatment of anthrax. Emerg Infect Dis. 2002;8:222-5; Hendricks KA, Wright ME, et al. Centers for disease control and prevention expert panel meetings on prevention and treatment of anthrax in adults. Emerg Infect Dis. 2014;20). 항생제는 보호 역가를 달성하기에 충분한 시간이 지나면 중단된다. 명백히, 공중 보건 비상 사태가 발생할 경우, 고통스러운 반응성 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 다회 투여와 60일 간의 항생제 투여를 요구하는 CDC 권장 사항은 상당한 물류 및 대중 커뮤니케이션 문제를 야기한다. 2세대 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 내약성이 향상되고 보호의 개시가 더 빨라야 하고 투여 일정이 단순해야, 생물학적 독소에 노출된 인구가 많을 경우 수요가 많을 것으로 예상되는 의료 자원에 대한 부담을 줄일 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명은 NasoShield (이전에는 AdVAV로 알려짐)로서 출원인에 의해 개발된 예시적인 2세대 생물학적 독소 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)인, 비강내 투여를 위해 구성되고 단일 비강내 투여 후 빠르고 안정적인 보호를 제공하도록 설계된 바이러스 벡터화된 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 본원에서 NasoVAX로 지칭되는 예시적인 생물학적 인플루엔자 면역원성 조성물 (예를 들어, 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신)), 및 이를 투여하기 위한 새로운 방법을 제공한다. 부스터 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 요건의 제거 및 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 단순한 비강내 투여는 유의미한 개선이었지만 효과는 다양했다. 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 효과가 왜 그러한 가변성을 나타낼 수 있는지를 규명하고, 투여 후 보호 면역 반응을 유도하며 공기 중 감염원 및 생물독소(예를 들어, 흡입 탄저병)로부터 보호하는 면역원성 조성물(예를 들어, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신))을 제공해야 할 필요성이 제기되었다. 본 출원인은 이러한 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)의 유효성이 상당히 개선되는, 면역원성 조성물 또는 제형(예를 들면, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신))을 투여하는 방법을 제공한다.
본원에서 제공된 일부 구체예는 비강내 투여를 통해 병원체에 대한 보호 면역 반응과 같은 면역 반응을 유도하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다. 일부 구체예에서, 병원체는 호흡기 병원체(respiratory pathogen)이다.
특정 구체예에서, 호흡기 항원을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 치료 용량을 포유동물 개체에게 경점막 투여(transmucosal administration)하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 포유동물 개체에게 유효량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 기타 투여 체위에 있고, 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이다.
특정 구체예에서 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 기타 투여 체위에 있고, 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이다. 특정 구체예에서, 이종 항원은 인플루엔자 바이러스로부터 유래하고, 상기 방법은 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 것이고, 일부 바람직한 구체예에서, 인플루엔자 환자의 임상적 악화를 예방한다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 코로나바이러스 바이러스로부터 유래하고, 상기 방법은 SARS-CoV-2(COVID-19의 원인 인자)와 같은 코로나바이러스에 의한 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 것이고, 일부 바람직한 구체예에서, COVID-19 환자의 임상적 악화를 예방한다.
특정 구체예에서 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 기타 투여 체위에 있고, 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 구체예에서, 유도된 보호 면역 반응은 인플루엔자, 흡입 탄저병 또는 코로나바이러스를 포함하는 호흡기 병원체에 대한 것이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 환자에서 보호성 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 상기 방법은: 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 포유동물 개체로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및 투여시, 상기 환자에게 비강내 투여후 약 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하는 단계를 포함하며, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자에서 보호 면역 반응을 유도한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 바이러스 감염에 대해 환자에게 백신을 접종하는 방법을 제공하며, 상기 방법은: 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 포유동물 개체로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및 투여시, 상기 환자에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하는 단계를 포함하며, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자에서 보호 면역 반응을 유도한다.
특정 구체예에서, 본 발명은 환자에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은: 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 포유동물 개체로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및 투여시, 상기 환자에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하는 단계를 포함하며, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자에서 보호 면역 반응을 유도한다.
본 개시내용으로부터 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 다른 구체예들이 또한 고려된다.
본 명세서에 통합되고 본 명세서의 일부를 구성하는 첨부 도면은, 본 발명의 하나 이상의 구체예를 예시하고, 상세한 설명 및 실시예 항목과 함께 본 발명의 원리 및 구현을 설명하는 역할을 한다.
도 1은 탄저병 보호항원(PA) 유전자를 함유하는 대표적인 아데노바이러스 벡터의 개략도를 보여주며, 숫자는 야생형 Ad5 서열(GenBank ID AY339865.1)의 염기쌍 번호를 나타낸다.
도 2는 BioThrax 및 위약과 비교하여 4가지 다른 바이러스 입자(vp) 농도로 NasoShield를 인간 개체에게 투여한 1상 NasoShield 연구에서, 독소 중화 분석(toxin neutralizing assay, TNA)을 통한 면역원성의 결여를 보여준다. 실시예 2 참조.
도 3은 실시예 2의 최초 인간 임상 시험을 뒷받침하기 위한 전임상 토끼 연구로부터의 독소 중화 분석(TNA) 결과를 보여준다.
도 4는 NasoShield의 비강내 투여의 면역원성과 관련하여 면역원성 조성물의 투여 동안 토끼의 위치 효과(예를 들어, 복위 또는 배위(sternal or dorsal position))를 비교하기 위한 토끼 연구의 연구 설계를 나타낸다.
도 5는 백신접종 후 28일째에 검증된 TNA 분석에서 평가된, 백신접종된 토끼의 TNA ED50 및 TNA NF50을 보여준다. 복위 투여는 TNA 분석에서 면역원성을 나타내지 않았다.
도 6은 면역원성 조성물이 비강내 투여될 때 탄저균 치사인자(LT)를 중화시키는 혈청의 능력을 측정 및 정량화하는 기능적 분석인, 독소 중화 분석(TNA)에 의해 측정된, 면역원성에 대한 위치 효과를 나타낸다.
도 7은 탄저균 포자 공격(challenge) 후 배위(예를 들어, 비강내 투여를 위한 표준 토끼 위치) 또는 복위(임상적 등가 위치)에서 NasoShield를 투여한 토끼의 생존율을 보여준다. 배위(dorsal position)에서 면역원성 조성물이 투여된 동물의 생존율 54% 내지 79%과 비교하여, 복위(sternal position)에서 NasoShield가 투여된 동물은 탄저균 공격 후 0%의 생존을 입증했다.
도 8은 각각의 상이한 투여군에서 토끼의 생존과 비교한 TNA NF50 결과를 보여준다.
도 9는 NasoVAX의 비강내 투여의 면역원성과 관련하여 면역원성 조성물의 투여 동안 토끼의 위치 효과(예를 들어, 복위 또는 배위)를 비교하기 위한 토끼 연구의 연구 설계를 나타낸다.
도 10은 백신접종 후 0, 14 및 28일째에 평가된, 백신접종된 토끼로부터의 HAI 분석 기하평균역가를 나타낸다.
도 11은 백신접종 후 0일 및 28일째에 평가된, 백신접종된 토끼의 HAI 분석 기하평균역가를 나타낸다.
도 12는 백신접종 후 14일 및 28일째에 평가된, 백신접종된 토끼의 HAI 분석 기하평균비(GMR)를 나타낸다.
도 13은 백신접종 후 0일부터 28일까지 평가된 백신접종된 토끼의 평균 HAI 분석 점수를 보여준다.
서론
본 발명은 포유동물 개체에 대한 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)/치료학적 조성물의 비강내 투여를 통해 강한 면역원성 반응을 생성하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 면역원성 제제의 투여 동안 좌위, 리클라이닝 체위, 및/또는 앙와위에서 비공이 위쪽으로 기울어지도록 하는 특정 체위가 인간 및 동물 모두에서 강한 면역원성 반응의 생성과 상관관계가 있다. 투여 체위(예를 들어, 비강내 투여 동안 머리/비공의 체위)는 놀랍게도 비강내 투여된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 및 잠재적으로 다른 치료제에 대한 면역원성 반응을 생성하기 위한 중요한 매개변수로서 확인되었다. 실시예 3-4 참조. 출원인은 머리를 기울이면(비공이 위쪽으로 기울어짐) 치료제/면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이 비강, 부비동 및 인접 조직/기관의 특정 영역에 접근 및/또는 국소화할 수 있으며, 경점막 투여를 통해 면역 반응을 유도하는데 중요할 수 있다고 가정했다. 복위(동물의 경우) 및 좌위에서 비공이 아래를 향하도록 하는 자세(인간의 경우)에서 비강내 투여에 의해 접근되는 영역은 다르거나 및/또는 강한 면역 반응을 생성하기 위한 차선책일 수 있다.
특정 구체예에서, 병원체 유래의 항원 및/또는 하나 이상의 이종 항원을 포함하는 치료 용량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 유효량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에 비강내로 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 개체는 앙와위(supine position), 리클라이닝 체위(reclining position), 또는 포유동물 개체의 비공이 개체의 머리 위로 또는 위쪽으로 기울어진 기타 체위에 있고, 이로써 투여된 치료 용량은 보호 면역 반응을 유도한다. 특정 구체예에서, 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원 코딩 서열을 함유하고 발현하거나 또는 함유하지 않고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함하고, 상기 방법은 유효량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 개체는 앙와위(supine position), 리클라이닝 체위(reclining position), 또는 포유동물 개체의 비공이 개체의 머리 위로 또는 위쪽으로 기울어진 기타 체위에 있고, 이로써 투여된 치료 용량은 보호 면역 반응을 유도한다. 특정 구체예에서, 보호 면역 반응은 호흡기 병원체에 대한 것이다. 특정 구체예에서, 보호 면역 반응은 24시간 또는 1일 내지 수일 이내에 유도될 수 있고 최대 14일 또는 그 이상 지속될 수 있는 선천성 면역 반응이다. 특정 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이다.
일 구체예에서, 본 발명은 세포 배양에서 생산된, 아데노바이러스 벡터화(예를 들어, Ad5-벡터화), 비강내 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 제공하며(NasoShield), 본원에 전체가 참조로서 통합되는 미국 특허 제9,968,667호를 참조한다. 아데노바이러스는 자연적으로 발생하는 호흡기 바이러스로, 유전물질을 세포에 도입하는 벡터로서 자주 사용되어 왔다. 탄저균 보호항원(PA) 유전자를 복제-결핍(RD) 아데노바이러스에 통합하고(Ad-PA), Ad-PA를 코에 적용함으로써(비강내 투여 경로), 아데노바이러스 벡터는 PA 유전자를 비점막하 세포들(cells of the nasal sub-mucosa)에 형질도입하여 인코딩된 PA 단백질의 일시적인 발현을 유도할 수 있다. NasoShield는 전형적으로 비강내로 전달되지만, 본 발명은 비공이 위쪽으로 또는 머리 위로 기울어지도록(즉, 변형된 좌위, 배위 또는 앙와위) 투여될 때 놀랍게도 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이 강력한 면역원성 반응을 유도함을 입증한다. NasoShield 벡터에는 탄저균의 PA83(보호항원 - 83 kDa 형태) 유전자 (또는 인 트랜스(in trans)의 임의의 다른 관심 유전자)를 인코딩하는 전이유전자와 같은 유전자 삽입물이 포함되어 있다. 재조합 Ad5 벡터는 바이러스 게놈의 E1 영역이 결여되어 있어 바이러스 복제 결핍(RD)이며 숙주 세포에 들어갈 때 감염성 바이러스 입자를 생성할 수 없다. 벡터의 E3 영역에서 뉴클레오티드를 추가로 결실시키면 숙주 면역 반응을 회피하는 데 관여하고 바이러스 복제에 필수적인 유전자들이 제거된다. PA83 유전자의 발현을 유도하기 위한 사이토메갈로바이러스 전사 인핸서/프로모터, (또는 기타 특정 전이유전자), 및 시미안 바이러스 40 폴리아데닐화 신호로 구성된 발현 카세트가 E1 유전자 서열 대신 삽입되었다. 도 1은 RD-Ad5 벡터의 개략도를 제공하고, 벡터에 유지되는 모(parent) 아데노바이러스 게놈의 해당 서열을 식별한다. 실시예 1, 3 및 5 참조.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 그리고 본원의 일부 구체예에서, 독소 중화 항체(toxin neutralizing antibody, TNA) 반응의 측정은 "보호의 대리표지(surrogate of protection)"로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 공개된 연구에서 백신접종 후 토끼 혈청에서 측정된 0.56의 TNA NF50 항체(PA에 대한 독소 중화 항체) 역가는 탄저균 포자에 대한 치명적인 공격에서 생존할 확률 70%와 연관되었다 (Ionin et al. Evaluation of Immunogenicity and Efficacy of Anthrax Vaccine Adsorbed for Postexposure Prophylaxis; Clin. and Vaccine Imunol.; July 2013:20(7); p.1016-1026). "보호의 대리표지"는 임상 종료점을 대체할 수 있고 따라서 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 효능을 안정적으로 예측하는 데 사용할 수 있는 면역 마커를 의미한다 (Plotkin S.; Correlates of Protection Induced by Vaccination; Clin Immunogenic composition (e.g., vaccine) Immunol. 2010 July; 17(7): 1055-1065).
또 다른 구체예에서, 본 발명은 세포 배양에서 생산된, 아데노바이러스 벡터화(예를 들어, Ad5-벡터화), 비강내 인플루엔자("독감(flu)") 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 을 제공한다(NasoVAX). 아데노바이러스는 자연적으로 발생하는 호흡기 바이러스로, 유전물질을 세포에 도입하기 위한 벡터로서 자주 사용되어 왔다. 인플루엔자 헤마글루티닌(HA) 유전자를 복제-결핍(RD) 아데노바이러스에 통합하고(Ad-HA), Ad-HA를 코에 적용함으로써(비강내 투여 경로), 아데노바이러스 벡터는 HA 유전자를 비점막하 세포들(cells of the nasal sub-mucosa)에 형질도입하여 인코딩된 HA 단백질의 일시적인 발현을 유도할 수 있다. 일부 구체예에서, 인간 개체에 대해 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제-결핍 아데노바이러스 벡터(예를 들어, NasoVAX)는 Lui J. et al. (A protocol for rapid generation of recombinant adenoviruses using the AdEasy system; Nat. Protoc. (2007) 2(5):1236-47)에 기재된 절차에 따라 제조될 수 있다. 본원의 실시예에 사용된 NasoVAX는 호흡기 상피 세포 내에서 관심 단백질(예를 들어, 인플루엔자 HA 유형 A 또는 B)을 발현하는, E1/E3-결손된 복제 결핍(RD)-Ad5 벡터이다. 따라서, NasoVAX는 바이러스 게놈의 E1 영역(뉴클레오티드 343~3511)이 결여되어 있어 바이러스 복제 결핍(RD)이며 숙주 세포에 들어갈 때 감염성 바이러스 입자를 생성할 수 없다. NasoVAX는 숙주 면역 반응을 회피하는 데 관여하고 바이러스 복제에 필수적인 유전자들을 제거하는, 벡터의 E3 영역내 뉴클레오티드의 추가 결실을 포함한다. NasoVAX는 또한 HA 유전자의 발현을 유도하기 위한 사이토메갈로바이러스 전사 인핸서/프로모터, 생체공학적 HA 유전자, 및 시미안 바이러스 40 폴리아데닐화 신호로 구성된 발현 카세트가 E1 유전자 서열 대신 삽입되어 있다. 도 1은 RD-Ad5 벡터의 개략도를 제공하고, NasoVAX 벡터에 유지되는 모(parent) 아데노바이러스 게놈의 해당 서열을 식별한다. 특정 구체예에서, NasoVAX 벡터는 A/California/04/2009(H1N1)-유사 인플루엔자 균주(AdcoCA09.HA) 유래의 헤마글루티닌(HA) 표면 단백질 항원을 인코딩하는 유전자 삽입물을 함유한다. NasoVAX는 복제-허용 PER.C6 세포에서 이 RD-Ad5 벡터를 증식시킨 후 감염된 세포 수확물에서 바이러스를 정제하여 제조할 수 있으며, 최종 생성물은 Tris HCl(pH 7.4), 히스티딘, 수크로스, 염화나트륨, 염화마그네슘, 폴리소르베이트 80, 에틸렌디아민테트라아세트산 및 에탄올에서 선택된 부형제를 포함할 수 있다. NasoVAX는 A195 완충액에서 2Х1010 vp/mL로 제형화된 일부 구체예에서 0.7 mL의 공칭 부피의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 멸균 동결 현탁액을 각각 함유하는 일회용 유리 바이알로 제공될 수 있다. 바람직한 구체예에서, NasoVAX는 비강내로 전달될 수 있고, 본 발명은 비공이 위쪽으로 또는 머리 위로 기울어지도록(즉, 변형된 좌위, 앙와위, 또는 리클라이닝 체위(예를 들어, 배위)) 투여될 때 놀랍게도 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이 강력한 면역원성 반응을 유도함을 입증한다. 예를 들어, 실시예 4 및 6 참조.
당업자가 이해하는 바와 같이, 혈구응집반응 억제 분석 (hemagglutination inhibition assay, HAI) 항체의 측정은, 백신접종 후 혈청에서 측정된 ≥40의 HAI 항체 역가가 인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 투여에 의한 유도된 혈청보호를 나타내는 보호의 대리표지로서 사용된다(Trombetta CM. et al.; Overview of Serological Techniques for influenza immunogenic composition (e.g., vaccine) Evaluation: Past, Present and Future Immunogenic composition (e.g., vaccine) (Basel) (2014) Dec.2(4): 707-734). 위에서 언급한 바와 같이, "보호의 대리표지"은 임상 종료점을 대체할 수 있고 따라서 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 효능을 안정적으로 예측하는 데 사용할 수 있는 면역 마커를 지칭한다. 인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 경우, HAI 분석에서 측정된 항체가 보호의 대리표지이며, HAI 분석은 항체가 혈청에 존재하는 경우 적혈구와 바이러스 헤마글루티닌 간의 응집을 방지하는 항체의 능력을 기반으로 한다. 일반적으로 ≥40의 HAI 분석 항체 역가를 갖는 개체는, 대표되는 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 보호되는 것으로 이해된다. 다시 말해서, HAI 분석 항체 역가가 40 (또는 그 이상)이면 일반적으로 보호 역치 수준으로 간주되며, 이를 초과하면 인플루엔자 감염에 걸릴 가능성이 50% 이상 감소한다. 40 이상의 HAI 분석 역가는 면역학적 지표(Immunological correlates of protection)로 사용되며, 팬더믹 인플루엔자 백신에 대한 FDA 지침에 따르면 자연 감염으로부터 보호를 예측하는데 현재 사용할 수 있는 가장 좋은 매개변수로 간주된다 (Noah D.L., Hill H., Hines D., White E.L., Wolff M.C. Qualification of the hemagglutination inhibition assay in support of pandemic influenza vaccine licensure. Clin. Immunogenic composition (e.g., vaccine) Immunol. 2009;16:558-566). 일부 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신, NasoVAX)의 투여 후 면역 반응을 측정하기 위한 HAI 분석의 사용이 실시예 4에 기재되어 있고 그 결과가 도 10-13에 제시되어 있다. HAI 분석의 다른 구체예 및 이의 사용은 또한 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 본원에서 고려된다.
일 구체예에서, 본 발명은 세포 배양에서 생산된, 아데노바이러스 벡터화(예를 들어, Ad5-벡터화), 비강내 COVID-19 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 제공한다. 특정 구체예에서, 이종 항원은 코로나바이러스 바이러스 항원(예를 들어, 스파이크 단백질, 또는 이의 단편)이고, 이 방법은 SARS-CoV-2(COVID-19의 원인 인자)와 같은 코로나바이러스에 의한 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 것이고, 일부 바람직한 구체예에서, COVID-19 환자에서 임상적 악화를 예방한다. SARS-Cov-2 항원(예를 들어, 스파이크 단백질) 유전자를 복제-결핍(RD) 아데노바이러스에 통합하고(AdCOVID), AdCOVID를 코에 적용함으로써(비강 투여 경로), 아데노바이러스 벡터는 단백질 항원 유전자를 비점막하 세포들(cells of the nasal sub-mucosa)에 형질도입하여 인코딩된 항원 단백질 또는 이의 단편의 일시적인 발현을 유도할 수 있다. 특정 구체예에서, 복제-결핍(RD) 아데노바이러스는 이종 항원(예를 들어, 상이한 호흡기 병원체로부터의 전이유전자) 을 혼입하지 않지만(본원에서는 또한 "AdE"로 지칭됨), 비공이 위쪽으로 또는 머리 위로 기울어진 자세에서 개체의 비강내 투여되는 경우 SARS-Cov-2를 포함한 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 유도했다. 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는 비점막하 세포의 수용체에 결합하여 인간에서 호흡기 병원체로부터 보호할 수 있는 선천성 면역 반응을 유발한다. 구체예에서, 보호 면역 반응은 약 24시간 이내에, 또는 1-2일 이내에 유도되고, 적어도 약 14일 또는 적어도 약 21일 동안 지속될 수 있는 선천적 면역 반응이다. 본 발명은, 적어도 부분적으로는, 비공이 위쪽으로 또는 머리 위로 기울어지도록(즉, 변형된 좌위, 리클라이닝 체위(배위) 또는 앙와위) 투여될 때 놀랍게도 강력한 면역원성 반응을 유도하는 개시된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)에 관한 것이다. 실시예 6 참조.
본 발명으로부터 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 다른 구체예들이 또한 고려된다.
정의
본원에 사용된 단수 용어 ("a" 또는 "an")는 특허 문서에서 일반적인 바와 같이 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"의 임의의 다른 경우 또는 용법과 무관하게 하나 이상을 포함하도록 사용된다.
본원에 사용된 용어 "또는"은 비배타성을 지칭하거나, "A 또는 B"는 달리 지시되지 않는 한 "A이지만 B는 아님", "B이지만 A는 아님" 및 "A 및 B"를 포함하도록 사용된다.
본원에 사용된 용어 "약"은 명시된 양과 동일하거나 이와 대략, 가깝게, 거의 동일하거나 이의 부근에 있는 양, 예를 들어, 명시된 양 +/- 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1%를 지칭하기 위해 사용된다
본 발명의 조성물, 제형 및 방법은 본 발명의 구성성분 및 성분 뿐만 아니라 본원에 기재된 다른 성분을 포함하거나 이들로 필수적으로 이루어지거나 이들로 이루어질 수 있다. 본원에 사용된 "필수적으로 이루어지는(consisting essentially of)"은, 조성물, 제형 및 방법이 추가의 단계, 구성 성분 또는 성분을 포함할 수 있지만, 상기 추가의 단계, 구성 성분 또는 성분이 청구된 조성물, 제형 및 방법의 기본 및 신규 특성을 실질적으로 변경하지 않는 경우에만 포함할 수 있다는 것을 의미한다.
또한, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 "구성된(configured)"이라는 용어는 특정 작업을 수행하거나 특정 구성을 채택하도록 제작 (constructed) 또는 구성된 (configured) 시스템, 장치 또는 기타 구조를 설명한다는 것에 유의해야 한다. "구성된(configured)"이라는 용어는 배열 및 구성, 제작 및 배열, 조정 및 구성, 조정, 제작, 제조 및 배열 등과 같은 다른 유사한 구문과 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
본원에 사용된 "보조제(adjuvant)"는 항원에 대한 신체의 면역 반응을 증진시키는 별도의/제2의 물질을 의미한다. 일부 구체예에서, 본원의 1가 인플루엔자 약학 제제는 보조제가 첨가되지 않은 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신)이다.
"투여"는 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 개체에 도입하는 것을 의미하고; 이는 또한 (예를 들어, 처방에 의해) 개체에게 본 발명의 조성물을 제공하는 행위를 지칭할 수도 있다.
본원에 사용된 용어 "투여 체위(dosing position)"는 본원의 면역원성 조성물의 비강내 투여 동안 및 선택적으로는 투여 후 유지 기간 동안의 개체의 체위를 지칭한다. 이러한 투여 체위는 다음을 포함한다: a) 비공이 아래로 향하게 하는 정상 좌위(normal sitting position)로서, 눈높이에 있는 물체에 똑바로 초점을 맞춘 채 개체의 머리가 정면을 향하는 체위를 유지할 수 있음; 또는 2) 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 체위. 변형된 좌위는 개체가 비공을 머리 위로 올린 상태로 앉아 있는 투여 체위를 의미한다. 예를 들어, 이는 머리를 뒤로 젖히고 턱을 가능한 한 편안하게 들어올린 상태에서 눈의 초점을 천장(야외의 경우 하늘)으로 하여 수행된다. 앙와위는 개체가 (베개 없이) 등을 대고 눕고 머리는 앞을 향하고 눈은 정면으로 천장(야외의 경우 하늘)을 향하고 있는 체위를 의미한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 장치(예를 들어, 주사기 배럴)를 안면 평면에 배치한 상태에서 코의 중격을 향해 약간 안쪽으로 기울어진 비강내 장치(예를 들어, 분무기)를 통해 투여된다.
본원에 사용된 용어 "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 선천성, 점막성, 체액성 및/또는 세포 매개성 면역 반응을 유도할, 투여되는 화합물의 양을 지칭하며, 면역 반응은 면역원성, 치료학적 및/또는 보호성(예를 들어, 백신으로서)인 것으로 당업자에 의해 이해될 수 있다. 상기 용어는 또한 치료될 병태의 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화 또는 예방할, 본원의 조성물의 양, 또는 본원에 개시된 것과 같이 이를 투여하는 경로를 나타낼 수 있다. 본 발명의 조성물로 직접 치료될 수 있는 병태/질환과 관련하여, 치료학적 유효량은 질환에 걸리기 쉬울 수 있지만 병태/질환의 증상을 아직 경험하거나 나타내지 않는 포유 동물에서 병태/질환의 발생 예방 (예방적 치료), 병태/질환의 증상 완화, 병태/질환의 정도 감소, 병태/질환의 안정화 (예를 들어, 악화되지 않음), 병태/질환의 확산 방지, 병태/질환 진행의 지연 또는 둔화, 병태/질환 상태의 개선 또는 일시적 완화, 및 이들의 조합의 효과를 갖는 양을 지칭한다(예를 들어, 백신으로서). 용어 "유효량"은 화합물의 부재하에 발생할 반응과 다르게 반응을 생성할 투여되는 화합물의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료 용량"은 치료학적 유효량을 제공하는, 비강내 투여를 위해 구성된 및/또는 제형화된 본 발명의 면역원성 조성물의 양을 지칭한다. 특정 구체예에서, 치료 용량은 분할 용량으로 존재하며, 이는 제1 부분이 하나의 비공에 투여되고 제2 부분이 제2 비공에 투여되고 조합되어 치료 용량을 제공함을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "인간 아데노바이러스"는 마스트아데노바이러스(Mastadenovirus) 속의 구성원을 포함하는 아데노비리대(Adenoviridae) 과의 모든 인간 아데노바이러스를 포괄하는 것으로 의도된다. 현재까지, 51개 이상의 인간 혈청형의 아데노바이러스가 확인되었다(예를 들어, Fields et al., Virology 2, Ch. 67 (3d ed., Lippincott-Raven Publishers) 참조). 아데노바이러스는 혈청군(serogroup) A, B, C, D, E 또는 F일 수 있다. 인간 아데노바이러스는 혈청형 1 (Ad 1), 혈청형 2 (Ad2), 혈청형 3 (Ad3), 혈청형 4 (Ad4), 혈청형 5 (Ad5), 혈청형 6 (Ad6), 혈청형 7 (Ad7), 혈청형 8 (Ad8), 혈청형 9 (Ad9), 혈청형 10 (Ad10), 혈청형 11 (Ad11), 혈청형 12 (Ad12), 혈청형 13 (Ad13), 혈청형 14 (Ad14), 혈청형 15 (Ad15), 혈청형 16 (Ad16), 혈청형 17 (Ad17), 혈청형 18 (Ad18), 혈청형 19 (Ad19), 혈청형 19a (Ad19a), 혈청형 19p (Ad19p), 혈청형 20 (Ad20), 혈청형 21 (Ad21), 혈청형 22 (Ad22), 혈청형 23 (Ad23), 혈청형 24 (Ad24), 혈청형 25 (Ad25), 혈청형 26 (Ad26), 혈청형 27 (Ad27), 혈청형 28 (Ad28), 혈청형 29 (Ad29), 혈청형 30 (Ad30), 혈청형 31 (Ad31), 혈청형 32 (Ad32), 혈청형 33 (Ad33), 혈청형 34 (Ad34), 혈청형 35 (Ad35), 혈청형 36 (Ad36), 혈청형 37 (Ad37), 혈청형 38 (Ad38), 혈청형 39 (Ad39), 혈청형 40 (Ad40), 혈청형 41 (Ad41), 혈청형 42 (Ad42), 혈청형 43 (Ad43), 혈청형 44 (Ad44), 혈청형 45 (Ad45), 혈청형 46 (Ad46), 혈청형 47 (Ad47), 혈청형 48 (Ad48), 혈청형 49 (Ad49), 혈청형 50 (Ad50), 혈청형 51 (Ad51) 또는 이들의 조합일 수 있지만, 이러한 예에 제한되는 것은 아니다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스는 혈청형 5 (Ad5)이다.
본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는 담체"는 인간 개체에게 상당한 자극을 일으키지 않고 투여된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "혈청전환(seroconversion)"은 백신접종(예를 들어, 본 면역원성 조성물의 투여) 후 혈청 중화 항체 역가의 4배 이상의 증가로 정의된다. 인플루엔자와 관련하여 용어 "혈청전환"은 백신접종(현재 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 제형을 투여) 후 혈청 혈구응집 억제(haemagglutinin inhibition, HI) 역가가 4배 이상 증가한 백신접종된 개인의 백분율로서 정의된 비율이다. 본원에 사용된 "전환 계수(conversion factor)"는 백신접종 후 혈청 HI 기하평균역가(geometric mean titer, GMT)의 배수 증가로 정의된다.
본원에 사용된 용어 "혈청보호된(seroprotected)"은 혈청 중화 항체의 생성을 통해 감염으로부터 보호되는 백신접종 후 개체를 의미한다. 모집단에서, 이는 혈청보호된 개인의 백분율(%)(예를 들어, 50%)로서 지칭된다. 인플루엔자와 관련하여, 용어 "혈청보호(seroprotection)"는 백신접종 후 인간 개체의 혈청에서 측정된 40 이상의 HAI 항체 역가를 지칭한다. 인플루엔자와 관련하여 본원에 사용된 용어 "보호율(protection rate)"은 백신접종 후 1:40 이상의 혈청 HAI 역가를 갖는 백신접종된 개체의 백분율로 정의되며, 일반적으로 보호를 나타내는 것으로 허용된다. 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물 및 사용 방법은 SARS-CoV-2 감염에 대해 인간 개체와 같은 포유동물 개체에 혈청보호를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물 및 사용 방법은 탄저균 감염에 대해 인간 개체와 같은 포유동물 개체에 혈청보호를 제공한다.
용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 유익하거나 원하는 임상 결과를 얻기 위한 접근 방식이다. 특히, 유익하거나 원하는 임상 결과에는 증상의 완화, 질환의 정도 감소, 질병의 안정화 (예를 들어, 악화되지 않음), 질병 진환의 지연 또는 둔화, 질환의 실질적 확산 방지, 질환 상태의 개선 또는 일시적 완화, 및 검출 가능 여부에 관계 없이 관해 (부분 또는 전체)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있고/있거나 질환에 대한 부분적 또는 완전한 치료 및/또는 질환에 기인하는 역 효과의 측면에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "예방적으로 치료하다" 또는 "예방적으로 치료하는"은 숙주에서 질환/병태 또는 이의 하나 이상의 증상을 완전히, 실질적으로 또는 부분적으로 예방하는 것을 지칭한다. 유사하게, "병태의 발병을 지연하는"은 또한 "예방적으로 치료하는"에 포함될 수 있으며, 병태에 걸리기 쉬운 환자에서 병태의 실제 발병 이전의 시간을 증가시키는 행위를 지칭한다.
본원에 사용된 "면역원성 조성물"은 투여시 면역 반응(예를 들어, 선천성, 체액성, 점막성 및/또는 세포 매개성)을 유도하는 조성물을 지칭한다. 체액성, 점막성 및/또는 세포 매개성 면역 반응의 경우, 면역원성 조성물은 항원에 대한 면역 반응을 유도하고, 나아가 그것이 유래된 병원체를 숙주에 투여한다. 비강내 투여된 아데노바이러스 벡터에 의해 유발되는 선천성 면역 반응의 경우, 면역원성 조성물은 약 24시간 내지 적어도 14일의 기간 동안 보호할 수 있는, 호흡기 병원체에 대한 면역 반응을 유도한다. 본원에 사용된 "백신"은 투여시 감염원에 대한 보호 면역 반응을 유도하는 면역원성 조성물을 지칭한다. "보호 면역 반응(protective immune response)"은 면역원성 조성물 내의 적어도 하나의 성분, 전형적으로 이의 하나 이상의 항원(예를 들어, 이종 항원) 을 발현하거나 이에 대한 면역 반응에 민감한 병원체에 의한 감염으로부터 포유동물 개체(예를 들어, 환자)를 보호 및/또는 상기 병원체에 의한 감염의 증상을 완화시키는 것이다. 특정 구체예에서, 본원에 사용된 보호 면역 반응은 포유동물 개체(예를 들어, 환자)를 감염으로부터 보호 및/또는 감염 증상을 완화시키는 범-항-바이러스 선천성 면역 반응을 지칭한다. 특정 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은, 예를 들어 하나 이상의 보조제, 서방성 화합물, 용매, 완충제 등을 포함하는, 포유동물 숙주에 투여하기에 적합한 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 다른 성분들과 함께, 이종 항원을 함유 및/또는 발현하는, 또는 이종 항원을 함유 및/또는 발현하지 않는, 하나 이상의 바이러스 벡터(들)를 포함할 수 있다 특정 구체예에서, 면역원성 조성물 및/또는 백신은 단백질 및/또는 탄수화물 및/또는 지질 및/또는 기타 항원을 포함할 수 있으며, 하나 이상의 사멸된 항원(들)(예를 들어, 사멸되거나 완전히 불활성인 바이러스) 또는 약독화된 생 항원(예를 들어, 약독화된 바이러스)를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물(들) 및/또는 백신(들)은 항원 공급원 또는 그의 기능에 관계없이 임의의 항원에 대한 면역 반응을 개선한다.
본원에 언급된 "벡터"는 항원에 대한 유전 코드 또는 이의 일부를 전달하지만, 이는 항원 자체가 아니다. 예시적인 측면에서, 벡터는 바이러스 벡터 또는 박테리아 벡터를 포함할 수 있다. 본원에 언급된 "항원"은 인간 및/또는 동물을 포함하는 개체에서 특이적 면역 반응을 유도하는 물질을 의미한다. 항원은 사멸된, 약독화된 또는 살아있는 전체 유기체; 유기체의 서브유닛 또는 일부; 면역원성 특성을 갖는 삽입물을 함유하는 재조합 벡터; 숙주 동물에게 제시될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 조각 또는 단편; 폴리펩타이드, 에피토프, 합텐, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 다양한 측면에서, 항원은 바이러스, 박테리아, 유기체의 서브유닛, 자가-항원, 또는 암 항원이다. 바이러스 벡터의 맥락에서, 발현된 이종 항원은 바이러스 벡터에 사용된 바이러스와 다른 병원체로부터 유래된 항원이다.
본원에 사용된 "ED50"은 50% 유효 희석배수을 말하며, 이는 독소(예를 들어, 탄저병 치사 독소)의 50% 중화를 초래하는 혈청 샘플 희석배수의 역수이며, 곡선의 4-매개변수 로지스틱 핏의 변곡점('c' 매개변수)에 해당하는 희석배수의 역수로 결정된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "NF50"은 50% 중화 인자를 말하며, 이는 시험 샘플의 ED50과 기준 혈청의 ED50의 몫이다. NF50은 독소 중화의 상대적 측정치로 사용되며 분석의 일상적인 변동성에 의해 덜 영향을 받는다.
본 명세서에 사용된 TNA는 독소 중화 분석(toxin neutralization assay)을 지칭하며, TNA 분석은 시험관내 세포독성 분석을 사용하여 탄저균 LT 활성을 중화시키는 혈청의 기능적 능력을 측정하고 정량화하도록 설계된다. 이 분석은 테트라졸륨 염, 3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드 (MTT)를 리포터 또는 신호 시스템으로 사용하여 세포 생존율을 비색적으로 결정한다. 탄저병 LT의 혈청-매개 중화는 세포독성의 억제와 이에 따른 세포 생존력의 보존으로 나타난다.
면역원성 조성물 및 백신
포유동물 개체에 대한 비강내 투여에 적합한 및/또는 포유동물 개체에 대한 비강내 투여를 위해 구성되고 항원(예를 들어, 면역원)에 대한 면역 반응을 유도하거나 이의 감염을 치료하고 선택적으로 보호 면역 반응을 유도하도록 (즉, 백신으로서) 구성된, 약제학적으로 허용되는 조성물 (이는 또한 제제로서 지칭될 수 있음)이 본원에 제공된다. 일부 구체예에서, 약학 제제는 투여시 포유동물 개체에서 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 면역원성 조성물이다. 일부 구체예에서, 약학 제제는 투여시 항-바이러스성 면역 반응을 유도하여 호흡기 병원체를 치료 및/또는 보호하고 및/또는 포유동물 개체에서 호흡기 감염의 증상을 개선하는 면역원성 조성물이다. 일부 구체예에서, 약학 제제는 포유동물 개체에서 보호 면역 반응을 유도하도록 구성된 백신 또는 치료학적 조성물이며, 이는 박테리아, 바이러스 또는 진균 병원체와 같은 외래 감염원에 대해 보호적이거나, 특정 구체예에서는 비정상적인 세포 성장(예를 들어, 암)에 대한 보호 반응을 유도하거나 자극한다.
특정 구체예에서, 본 조성물은 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이고, 일부 구체예에서 벡터(예를 들어, 아데노바이러스(Ad) 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 과 같이 병원성 항원을 발현하는 하나 이상의 벡터), 살아있는 약독화 병원체(예를 들어, 생산 감염을 일으키지 않는 인플루엔자 바이러스), 사멸되거나 정제된 항원(예를 들어, 활성(즉, 감염성) 바이러스가 없는 인플루엔자 항원;하나 이상의 면역원성 항원은 감염을 유도하지 않으면서 생체내 면역 반응을 유도함), 또는 살아있는 바이러스(예를 들어, FluMist® 4가 인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신); 정상 체온에서 효율적으로 복제되지 않는 4가지 인플루엔자 바이러스의 조합(예를 들어, 저온-적응 균주, 생 약독화 균주 또는 온도 민감성 균주))를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 이종 항원을 발현하지 않는 바이러스 벡터를 포함할 수 있고, 예시적인 구체예에서 바이러스 벡터는 복제 결핍일 수 있다. 비어있는 아데노바이러스 벡터(empty adenoviral vector, AdE)가 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 신속하게 유도하는, 미국 특허 제9,605,275호 참조 (이는 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 구체예에서, 호흡기 병원체는 인플루엔자 및 탄저병 감염으로부터 선택된다. 구체예에서, 본 방법에서 AdE의 사용은 SARS-Cov-2를 포함하는 코로나바이러스에 대한 보호 면역 반응을 유도한다.
더욱이, 본 조성물은 비강내 투여(예를 들어, 액체, 스프레이, 에어로졸)를 위해 구성되지만, 호흡기 병원체에 대한 면역 반응(예를 들어, 보호 면역 반응)을 유도하는 것으로 제한되지 않는다. 다시 말해서, 비강내 투여는 임의의 병원체에 대한 전신 및/또는 보호 반응(예를 들어, 백신으로서)을 유도하기 위한 투여 경로를 제공한다.
특정 구체예에서 포유동물 개체는 인간 개체이다. 일부 구체예에서, 본원의 제제는 병원체 유래의 이종 항원으로서 인간 개체에 대해 코돈 최적화된 항원을 코딩하는 DNA 를 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상 (108개 이상, 109개 이상, 1010개 이상 또는 1011개 이상)의 바이러스 입자(vp)의 유효량, 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다. 예시적인 구체예에서, 제제는 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 약학 제제이다. 다른 예시적인 구체예에서, 제제는 인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 약학 제제이다. 특정 구체예에서, 제제는 코로나바이러스 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신) 약학 제제이다. 특정 구체예에서, 제제는 호흡기 병원체 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신) 약학 제제이다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Tris HCl (pH 7.4), 히스티딘, 수크로스, 염화나트륨, 염화마그네슘, 폴리소르베이트 80, 에틸렌디아민테트라아세트산, 및 에탄올을 포함하는 제제 완충제 내에 존재한다.
예시적인 구체예에서, 인간 개체에 대한 비강내 투여에 적합한 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 약학 제제가 본원에 제공되며, 상기 제제는 인간 개체에 코돈 최적화된 탄저균 PA 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다.
다른 예시적인 구체예에서, 인간 개체에 대한 비강내 투여에 적합한 인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 약학 제제가 본원에 제공되며, 상기 제제는 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원(HA) 을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp), 108개 이상의 바이러스 입자(vp), 109개 이상의 바이러스 입자(vp), 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 또는 특정 구체예에서 약 1011개의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하되, 일부 구체예에서 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있고; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원(HA)을 함유하고 발현하는 본원의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는, 다른 인플루엔자 항원(예를 들어, 바이러스 벡터 발현된 항원)과 조합되어 다가 인플루엔자 약학 제제를 형성할 수 있다. 다른 구성성분은 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하는 본원의 아데노바이러스 벡터에 제시된 것과 상이한 에피토프에 대한 항체로 체액성 반응을 유도하기 위해 포함될 수 있다. 다른 구체예에서, 다른 구성성분(들)은 인플루엔자 항원에 대한 세포-매개성 또는 점막성 면역 반응과 같은 면역계의 상이한 부분을 유도하기 위해 포함될 수 있다.
예시적인 구체예에서, 인간 개체에 대한 단일 용량 비강내 투여에 적합한 1가 인플루엔자 약학 제제가 본원에 제공되며, 상기 제제는 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원(HA)을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp), 109개 이상의 바이러스 입자(vp), 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 또는 특정 구체예에서 약 1011개의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하되, 일부 구체예에서 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있고; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다. 특정 구체예에서, 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대해 1개월 이상(예를 들어, 28일 또는 4주), 2개월 이상, 3개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 또는 12개월 이상 동안 인간 개체에 혈청보호를 제공하도록 구성된 보호 면역 반응을 유도한다. 특정 구체예에서, 보호 면역 반응은 조합된 점막성 반응, 체액성 반응 및 T 세포 반응을 포함한다.
다른 예시적인 구체예에서, 인간 개체에 대한 단일 용량 비강내 투여에 적합한 인플루엔자 약학 제제가 본원에 제공되며, 상기 제제는 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원(HA)을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 109개 이상의 바이러스 입자(vp), 또는 일부 바람직한 구체예에서 약 1011개의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하되, 일부 구체예에서 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있고; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다. 특정 구체예에서, 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대해 1개월 이상(예를 들어, 28일 또는 4주), 2개월 이상, 3개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 또는 12개월 이상 동안 HA1 항체 역가 >40 로 인간 개체에 혈청보호를 제공하도록 구성된 보호 면역 반응을 유도한다. 특정 구체예에서, 보호 면역 반응은 조합된 점막성 반응, 체액성 반응 및 T 세포 반응을 포함한다.
특정 구체예에서, 비-복제 아데노바이러스 바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스이다. 대안적인 구체예에서, 아데노바이러스는 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스(예를 들어, 침팬지), 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스이다. 예시적인 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스이다.
일부 구체예에서, 비-복제 아데노바이러스 벡터는 진핵 세포로의 유전자 전달 및 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 개발 및 동물 모델에서 특히 유용하다.
일부 구체예에서, 인플루엔자 항원을 포함하고 발현할 수 있는, 당업자에게 공지되고 포유동물에 투여하기 위해 제조된 임의의 아데노바이러스 벡터(Ad-벡터)가 본 출원의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 이러한 Ad-벡터는 미국 특허 제6,706,693호; 제6,716,823호; 제6,348,450호; 또는 미국 특허공개 제2003/0045492호; 제2004/0009936호; 제2005/0271689호; 제2007/0178115호; 제2012/0276138호 (이들은 그 전체가 본원에 참조로 통합됨)에 기재된 임의의 Ad-벡터를 포함한다.
특정 구체예에서, 재조합 아데노바이러스 벡터는 복제를 위한 보완 E1 활성을 필요로 하는 비-복제 또는 복제-결핍일 수 있다. 구체예에서, 재조합 아데노바이러스 벡터는 E1-결손, E3-결손 및/또는 E4-결손 아데노바이러스 벡터, 또는 바이러스 유전자들이 결실된 "무장(gutless)" 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다. E1-결손 아데노바이러스 돌연변이는 비-허용 세포에서 복제가 불가능하기 때문에 E1 돌연변이는 벡터의 안전 마진(safety margin)을 높인다. E3 돌연변이는 아데노바이러스가 MHC 클래스 I 분자를 하향 조절하는 기전을 파괴함으로써 항원의 면역원성을 증진시킨다. E4 돌연변이는 후기 유전자 발현을 억제하여 아데노바이러스 벡터의 면역원성을 감소시키므로 동일한 벡터를 이용한 반복적인 재접종이 가능하다. 예시적인 구체예에서, 재조합 아데노바이러스 벡터는 E1 및 E3 결손 벡터이다.
"무장(gutless)" 아데노바이러스 벡터 복제는 헬퍼 바이러스 및 자연 환경에 존재하지 않는 조건인 E1a 및 Cre 둘 다를 발현하는 특별한 인간 293 세포주가 필요하며; 벡터에 바이러스 유전자들이 없으므로 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 운반체로서의 벡터는 비-면역원성이고 재접종을 위해 여러 번 접종될 수 있다. "무장(gutless)" 아데노바이러스 벡터는 또한 전이유전자를 수용하기 위한 36kb 공간을 포함하므로 많은 수의 항원 유전자들을 세포로 공동-전달할 수 있다. RGD 모티프와 같은 특정 서열 모티프는 감염성을 향상시키기 위해 아데노바이러스 벡터의 H-I 루프에 삽입될 수 있다. 아데노바이러스 재조합체는 특정 전이유전자 또는 전이유전자의 단편을 하기에 기재된 것과 같은 임의의 아데노바이러스 벡터로 클로닝함으로써 작제될 수 있다. 아데노바이러스 재조합 벡터는 면역제로 사용하기 위해 비침습적 방식으로 척추동물의 표피 세포를 형질도입하는데 사용된다. 아데노바이러스 벡터는 또한 정맥내, 근육내 또는 피하 주사와 같은 침습적 투여 방법에 사용될 수 있다.
투여량, 투여 경로, 제형, 보조제, 및 재조합 바이러스 및 이로부터의 발현 생성물에 대한 용도와 관련하여, 본 발명의 조성물은 비경구, 국소 또는 점막 투여, 바람직하게는 피내, 피하, 비강내 또는 근육내 경로에 의한 투여에 사용될 수 있다. 점막 투여 시 경구, 안구 또는 비강 경로를 사용할 수 있다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 비강내로 투여된다. 예시적이고 바람직한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 비강내 투여되고, 투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어지거나 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위, 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 다른 체위에 있다.
관심 있는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 조성물(예를 들어, 제형)은 약학 또는 수의학 분야의 숙련가에게 잘 알려진 표준 기술에 따라 제조될 수 있다. 실시예 1 및 4a 참조. 이러한 제형은 연령, 성별, 체중 및 투여 경로와 같은 인자를 고려하여 임상 분야의 숙련가에게 잘 알려진 기술 및 투여량으로 투여될 수 있다. 제형은 단독으로(즉, 유일한 활성제(들)로서) 투여될 수 있거나, 조성물들, 예를 들어 "기타" 면역학적 조성물, 또는 약독화된, 불활성화된 재조합 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 또는 치료학적 조성물과 함께 공동 투여되거나 순차적으로 투여됨으로써 본 발명의 다가 또는 "칵테일" 또는 조합 조성물 및 이들을 사용하는 방법을 제공할 수 있다. 일부 구체예에서, 제제는 동결보호제로서 수크로스 및 비이온성 계면활성제로서 폴리소르베이트-80을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 제제는 자유-라디칼 산화 억제제 에탄올 및 히스티딘, 금속-이온 킬레이트제 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 또는 유사한 활성(예를 들어, 금속-이온 촉매된 자유-라디칼 산화를 차단 또는 방지)을 갖는 기타 제제를 추가로 포함한다.
조성물(예를 들어, 제제)은 점막 투여, 예를 들어 경구, 비강, 안구 투여 등을 위한 액체 제제, 예컨대 현탁액 및, 비경구, 피하, 피내, 근육내, 비강내, 정맥내 (예를 들어, 주사 가능한 투여) 투여를 위한 제제, 예를 들어 멸균 현탁액 또는 에멀젼 내에 존재할 수 있다. 이러한 제제에서 아데노바이러스 벡터는 멸균수, 생리식염수, 점도 향상 부형제 등과 같은 적절한 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합될 수 있다. 점막부착제, 점막 침투제 및 점막 교란제를 포함하는, 점막 투여를 위한 특정 특수 제제가 사용될 수 있다. 제제는 또한 동결건조되거나 동결될 수 있다. 일부 구체예에서, 제제는 투여 전에 약 실온(약 25℃)으로 동결 및 해동되어 저장된다. 제제는 투여 경로 및 원하는 제제에 따라 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 보조제, 보존제 등과 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 제제는 하나 이상의 보조제 화합물을 함유할 수 있다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 보조제가 첨가되지 않는다.
"REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17th edition, 1985와 같은 표준 교재를, 과도한 실험 없이 적절한 제제를 제조하기 위해 참고할 수 있으며, 상기 문헌은 참조로서 본원에 통합된다.
일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터의 유효량(예를 들어, 보호 면역 반응을 유도하는 양)은 인간 개체에 코돈 최적화된 탄저균 PA 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp)이다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 코돈 최적화는 숙주 유기체에서 이종 유전자의 발현을 개선한다. 본 발명의 탄저균 PA 항원은 인간 개체를 포함하는 포유동물 숙주에 코돈 최적화되었다.
일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터의 유효량(예를 들어, 보호 면역 반응을 유도하는 양)은 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 HA 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp), 또는 일부 바람직한 구체예에서 약 1011 개의 vp이되, 일부 구체예에서 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있다. 본 발명의 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인간 개체를 포함하는 포유동물 숙주에 코돈 최적화되었다. 일부 구체예에서, 인간 개체는 COVID-19, 바람직하게는 초기 COVID-19와 같은 SARS-CoV-2 감염의 증상을 갖는다. 따라서, 일부 구체예에서, 항원은 인플루엔자 항원, 코로나바이러스 항원이거나, 또는 조성물은 AdE를 포함하고 인간은 초기 코로나바이러스 감염성 질환(즉, 초기 COVID-19)을 나타낸다.
특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 107개의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 108개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 특정 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 109개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 특정 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 특정 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 1011개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 비강내 투여를 사용하는 일부 바람직한 구체예에서, 공칭 용량은 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 1011개 vp 의 총 용량에 대해 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있다.
일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터의 유효량(예를 들어, 보호 면역 반응을 유도하는 양)은 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 109개 이상 바이러스 입자(vp)(예를 들어, 약 1010, 1011 또는 그 이상의 vp)이다. 일부 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 1가 인플루엔자 제제)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 108개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 1가 인플루엔자 제제)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 109개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 특정의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 1가 인플루엔자 제제)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 1010개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 1가 인플루엔자 제제)은 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 1011개 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함한다. 비강내 투여를 사용하는 일부 바람직한 구체예에서, 공칭 용량은 두 비공에 분할 용량(예를 들어, 1011개 vp 의 총 용량에 대해 비공당 5 x 1010 vp)을 제공하도록 분할될 수 있고, 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위(배위) (예를 들어, 개체의 머리 위로 또는 뒤로 기울어진 비공) 로 인간 개체에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)에서 아데노바이러스 벡터의 유효량은 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이 와위(lying position), 앙와위, 리클라이닝 체위, 또는 포유동물 개체의 비공이 포유동물 개체의 머리 위로 올라가 있는 기타 체위에서 개체에게 비강내 투여될 때 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 흡입 탄저병에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 계절성 또는 팬더믹 인플루엔자 감염을 유발하는 인플루엔자 바이러스를 포함한 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 SARS-CoV-2에 의한 감염, 또는 COVID-19의 발병 또는 증상에 대한 보호를 제공한다. 특정 구체예에서, 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 면역 보호를 제공할 수 있는(예를 들어, NasoVAX), 또는 초기 코로나바이러스 감염(바람직하게는 SARS-CoV-2 감염) 을 가진 인간 개체에게 투여될 수 있는 본 발명의 면역원성 조성물의 투여에 대한 반응은 그러한 인간 개체에서 임상적 악화를 방지한다. 구체예에서, 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물의 비강내 경로를 통한 투여는, 바이러스 벡터에 의해 발현되는 이종 항원(예를 들어, 전이유전자)과 무관한 호흡기 병원체에 대한 보호를 제공하는 선천성 면역 반응을 유발/유도하며, 또는 AdE가 투여되는 경우에도 그러하다.
구체예에서 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 인플루엔자 항원, RSV 항원, 코로나바이러스 항원 또는 이의 단편(예를 들어, 스파이크(S) 단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)), HIV 항원, SIV 항원, HPV 항원, HCV 항원, HBV 항원, CMV 항원, 스타필로코커스 항원, 또는 이들의 단편 또는 에피토프를 포함한다. 인플루엔자는, 인플루엔자 서브타입 H1N1, H3N2 인플루엔자, H7N9 인플루엔자 또는 H5N1 인플루엔자를 포함하나 이에 제한되지 않는, 돼지 인플루엔자, 계절성 인플루엔자, 조류 인플루엔자일 수 있다. 특정 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 인플루엔자 항원, 코로나바이러스 항원, RSV 항원, HIV 항원, SIV 항원, HPV 항원, HCV 항원, HBV 항원, CMV 항원, 스타필로코커스 항원, 또는 이들의 단편 또는 에피토프를 코딩하는 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 인플루엔자는 돼지 인플루엔자, 계절성 인플루엔자, 조류 인플루엔자, H1N1 인플루엔자 또는 H5N1 인플루엔자일 수 있으며 이들 항원의 인간-코돈-최적화 버전을 포함한다. 코로나바이러스는 SARS-Cov, SARS-Cov-2, MERS, 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), OC43 (HCoV-OC43), NL63 또는 HKU1일 수 있다. 구체예에서, 코로나바이러스 항원은 스파이크 단백질 또는 이의 단편(예를 들어, S1 도메인 또는 S1 도메인의 RBD)일 수 있다. 특정 구체예에서, 코로나바이러스 항원은 SARS-Cov-2 바이러스의 스파이크 단백질 또는 이의 단편(예를 들어, S1 도메인 또는 S1 도메인의 RBD)일 수 있다.
특정 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 인플루엔자 헤마글루티닌, 인플루엔자 핵 단백질, 인플루엔자 M2, 파상풍 독소 C-단편, 탄저병 보호항원, 탄저병 치사인자, 광견병 당단백질, HBV 표면 항원, HIV gp 120, HW gp 160, 인간 암배아 항원, 말라리아 CSP, 말라리아 SSP, 말라리아 MSP, 말라리아 pfg, 결핵균(mycobacterium tuberculosis) HSP 또는 이들의 돌연변이체 유래의 항원을 포함한다. 특정 다른 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 인플루엔자 헤마글루티닌, 인플루엔자 핵 단백질, 인플루엔자 M1 또는 M2, 인플루엔자 폴리머라제, 파상풍 독소 C-단편, 탄저병 보호항원, 탄저병 치사인자, 광견병 당단백질, HBV 표면 항원, HIV gp 120, HW gp 160, 인간 암배아 항원, 지카 바이러스 당단백질, 또는 이들의 변이체, 말라리아 CSP, 말라리아 SSP, 말라리아 MSP, 말라리아 pfg, 결핵균 HSP 또는 이들의 돌연변이체 또는 변이체를 코딩하는 아데노바이러스 벡터를 포함한다.
예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 포유동물 숙주에 코돈 최적화된 탄저균 PA 항원을 코딩하는 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 포유동물 숙주에 코돈 최적화된 인플루엔자 HA 를 코딩하는 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 포유동물 숙주에 코돈 최적화된 스파이크 단백질의 SARS-Cov-2 RBD 도메인을 코딩하는 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 호흡기 병원체의 이종 항원을 코딩하지 않는 아데노바이러스 벡터를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)에서 아데노바이러스 벡터의 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대한 인간 개체에서의 인플루엔자-특이적 점막성(IgA 측정을 통해 입증될 수 있음), 체액성(혈청 HA1을 통해 입증됨; 도 10-13 참조(또는 미세중화 항체)) 및 세포 매개성 (인플루엔자 HA 항원 특이적 T 세포 활성화를 통해 입증될 수 있음) 면역 반응의 조합을 유도한다. 일부 구체예에서, 혈청 항체는 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 6개월 이상, 12개월 이상, 13개월 이상 또는 14개월 이상 동안 혈청보호성이다. 일부 구체예에서, 조합된 면역 반응은 인플루엔자 A 바이러스에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 본원의 1가 인플루엔자 약학 제제에 의해 유도된 조합된 면역 반응은 인플루엔자 B 바이러스에 대한 보호를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)에서 아데노바이러스 벡터의 유효량은 호흡기 병원체에 대한 보호를 제공할 수 있는 선천성 면역 반응을 유도한다.
일부 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 인플루엔자 B 바이러스는 대부분 겨울철에 계절성 전염병을 일으키는 "계절성" 인플루엔자 바이러스이다. 다른 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스는 바이러스에 존재하는 새롭고 상이한 항원성 에피토프로 인해 광범위한 질병을 유발할 수 있는 "팬더믹" 인플루엔자 바이러스이다. A형 인플루엔자 바이러스는 바이러스 표면에 있는 헤마글루티닌(H)과 뉴라미니다제(N)의 두 가지 단백질에 따라 서브타입들로 나뉜다. 18개 이상의 상이한 헤마글루티닌 서브타입과 11개 이상의 상이한 뉴라미니다제 서브타입이 있다 (각각 H1 ~ H18 및 N1 ~ N11). 인플루엔자 A 바이러스는 다른 균주들로 더 세분화될 수 있다. 사람에게서 발견되는 인플루엔자 A 바이러스의 현재 서브타입들은 인플루엔자 A (H1N1)와 인플루엔자 A (H3N2) 바이러스이다. 인플루엔자 B 바이러스는 서브타입들로 분류되지 않지만 계통과 균주로 더 세분화될 수 있다. 현재 유행하는 인플루엔자 B 바이러스는 B/야마가타 및 B/빅토리아의 두 계통 중 하나에 속한다. 인플루엔자 바이러스의 명명 규칙은 여러 구성 요소를 포함하며, 다음 접근법을 따른다: 항원 유형 (예를 들어, A, B, C); 기원 숙주 (예를 들어, 돼지, 말, 닭 등). 인간 기원 바이러스의 경우, 어떠한 기원 숙주 지정도 제공되지 않으며; 지리적 기원 (예를 들어, 덴버, 대만 등); 바이러스주 번호 (예를 들어, 15, 7 등); 단리 연도 (예를 들어, 57, 2009 등); 및 인플루엔자 A 바이러스의 경우, 괄호 안에 헤마글루티닌 및 뉴라미니다아제 항원이 기재된다 (예를 들어, (H1N1), (H5N1)).
예시적인 구체예에서, 본원의 아데노바이러스 벡터는 A/California/04/2009(H1N1) 바이러스 유래의 HA 표면 단백질 항원을 코딩하는 유전자 삽입물을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 유래의 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 H3N2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 유래의 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 인플루엔자 B 바이러스 유래의 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현한다.
일부 구체예에서, 포유동물은 반려 동물, 사육 동물, 식품-생산 또는 사료-생산 동물, 가축, 사냥감 동물, 경주 동물, 또는 스포츠 동물, 예를 들어 소, 개, 고양이, 염소, 양, 토끼, 또는 돼지 또는 말, 또는 새, 예를 들어 칠면조, 오리 또는 닭이다. 예시적인 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이다.
사용 방법
비강내 투여를 통해 면역 반응(예를 들어, 백신으로서의 보호 면역 반응)을 유도하도록 구성된 본 발명의 치료적/예방적/면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 치료 용량의 경점막 투여 방법이 본원에 제공되며, 상기 개체는 상기 개체의 비공이 개체의 머리 위로 및/또는 위쪽으로 향하고/향하거나 기울어지는 변형된 좌위, 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 병원체로부터 포유동물 개체로의 항원을 포함한다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 비강내 투여를 통해 인간 개체에서 보호 면역 반응을 유도하는 단계를 포함하며, 상기 인간 개체는 투여 동안 상기 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있거나 위쪽을 향하는 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 리클라이닝 체위, 앙와위 또는 기타 체위에 있다. 특정 구체예에서, 비공은 개체의 머리 또는 이마 위로 올라간다. 일부 구체예에서, 병원체로부터 포유동물 개체로의 항원을 포함하는 치료 용량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 개체에 경점막 투여하는 방법은, 개체에게 유효량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 비강내로 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 상기 개체의 비공이 개체의 머리 또는 이마 위로 올라간 변형된 좌위 (예를 들어, 머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위, 또는 기타 체위에 있다.
특정 구체예에서, 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위(예를 들어, 개체의 얼굴의 나머지 부분 위에 비공이 위치한 상태로 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 구체예에서, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp), 109 개 이상의 바이러스 입자(vp), 1010 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구체예에서, 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 1011 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다.
특정 구체예에서, 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 이종 항원을 함유 및 발현(코딩)하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 구체예에서, 보호 면역 반응은 선천성 면역 반응이며 호흡기 병원체에 대한 보호를 제공한다. 구체예에서, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp), 109 개 이상의 바이러스 입자(vp), 또는 1010 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구체예에서, 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 경점막 투여하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 이종 항원을 함유 및 발현(코딩)하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 1011 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도한다. 구체예에서, 보호 면역 반응은 선천성 면역 반응이며 호흡기 병원체에 대한 보호를 제공한다.
특정 구체예에서, 개체가 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라간 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있었던 투여 후, 개체가 투여 체위에 남아 있는(즉, 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는) 투여 후 유지 기간이 존재한다. 구체예에서, 투여 후 유지 기간은 약 1분 내지 약 35분이다. 구체예에서, 투여 후 유지 기간은 약 1분, 약 2분, 약 3분, 약 4분, 약 5분, 약 7분, 약 10분, 약 12분, 약 15분, 약 17분, 약 20분, 약 22분, 약 25분, 약 27분, 약 30분, 또는 약 33분이다.
일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 인간 숙주에 코돈 최적화된 탄저균 PA 항원을 코딩한다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 인간 숙주에 대해 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 HA 항원을 코딩한다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 SARS-Cov-2 스파이크 단백질, 또는 이의 단편(예를 들어, S 단백질의 RBD 도메인)을 코딩한다. 특정 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 호흡기 병원체의 이종 항원을 코딩하지 않는다. 일부 구체예에서, 개체가 개체의 비공이 개체의 머리 위로 올라가 있는 변형된 좌위(머리 위로 비공이 올라간 상태에서 머리를 뒤로 기울임), 앙와위, 리클라이닝 체위 또는 기타 체위에 있을 때 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 인간 숙주에 비강내 투여하면 보호 면역 반응이 유도되는 반면(즉, 이는 백신으로 작용함), 개체가 비공을 아래로 향하게 하는 정상 좌위에 있을 때 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 비강내 투여하면 보호 면역 반응을 유도하지 않는다(즉, 백신으로 작용하지 않음).
일부 구체예에서, 본 발명은 인플루엔자 바이러스에 대해 인간 개체에서 보호성 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 이로써 인플루엔자 항원을 코딩하는 본원의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 108개의 바이러스 입자(vp) 의 비강내 유효 용량으로 투여 후 15일 이내에 또는 28일 이내에 개체가 혈청보호된다. 특정 구체예에서, 보호 면역 반응은 6개월 이상, 12개월 이상, 13개월 이상 지속된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 약 108개 이상의 바이러스 입자(vp) 의 유효량의 단일 용량을 비강내로 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여는 혈청 항체를 유도한다. 일부 구체예에서, 본원의 1가 인플루엔자 약학 제제는 계절성 인플루엔자 바이러스에 대한 보호를 제공하기 위해 사용된다. 특정 다른 구체예에서, 본 발명의 1가 인플루엔자 약학 제제는 팬더믹 인플루엔자 바이러스에 대한 보호를 제공하기 위해 사용된다. 일부 구체예에서, 본 방법은 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 의한 감염에 대한 보호를 제공한다. 특정 구체예에서, 본 방법은 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 H1N1 및/또는 H3N2에 의한 감염에 대한 보호를 제공한다. 다른 구체예에서, 본 방법은 인플루엔자 B 바이러스에 의한 감염에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 혈청보호는 약 13개월 이상 지속된다. 특정 구체예에서, 혈청보호는 적어도 약 14개월 또는 그 이상 지속된다.
일부 구체예에서, 본원의 (1가) 인플루엔자 약학 제제의 단일 용량을 투여하는 단계는 투여 후 28일 이내에 40 이상의 역가에서 HAI 항체를 유도하고 적어도 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 6개월 이상, 12개월 이상, 13개월 이상, 14개월 또는 그 이상 동안 지속된다. 구체예에서, 백신접종(본원의 인플루엔자 약학 제제의 투여) 후 28일째에 인간 개체에서 HAI 항체의 역가는 50 이상, 60 이상, 70 이상, 80 이상, 90 이상, 또는 100 이상 이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 코로나바이러스에 대해 인간 개체에서 보호 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 코로나바이러스 항원 또는 이의 하나 이상의 면역원성 단편을 코딩하는 코딩 서열을 포함하는 발현 카세트를 포함하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 특정 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 코로나바이러스 항원을 코딩하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 특정 구체예에서 포유동물 개체는 인간이고 코로나바이러스 항원은 SARS-CoV-2로부터 유래한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 SARS-CoV-2에 감염된 인간(예를 들어, 입원한 인간)이다. 일부 구체예에서, SARS-CoV-2 면역원성 조성물은 SARS-CoV-2 감염(예를 들어, 이러한 감염된 및/또는 입원한 인간에서)을 치료하는 데 사용될 수 있다.
구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 계절성 코로나바이러스에 대한 치료 및/또는 보호를 제공하는 데 사용된다. 특정 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 대유행 SARS-CoV-2에 대한 치료 및/또는 보호를 제공하기 위해 사용된다. 구체예에서, 치료는 선천성 면역 반응을 통해 약 24시간 이내에 시작된다. 특정 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 SARS-CoV-2에 대한 보호를 제공하기 위해 사용된다. 구체예에서, 혈청보호는 적어도 약 1개월 이상, 2개월 이상, 4개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 10개월 이상, 12개월 이상 또는 약 13개월 이상 동안 지속된다.
특정 구체예에서, 본 발명은 단일 용량의 투여를 통해 호흡기 병원체(예를 들어, 인플루엔자, 탄저균, 코로나바이러스)에 대해 인간 개체에서 보호 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 대안적 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물/제제/용량의 적어도 프라임 용량 및 부스트 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 호흡기 병원체에 대한 면역 반응을 유도하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구체예에서, 부스트 용량은 프라임 용량 투여 후 약 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 25주, 26주, 27주, 28주, 29주, 30주, 31주, 32주, 33주, 34주, 35주, 36주, 37주, 38주, 39주, 40주, 41주, 42주, 43주, 44주, 45주, 46주, 47주, 48주, 49주, 50주, 51주 또는 52주에 투여된다.
구체예에서, 프라임 및 부스트 용량은 적어도 7일 간격, 적어도 14일 간격 또는 그 이상의 간격으로 투여된다. 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 7일 간격, 약 14일 간격, 약 20일 간격, 약 25일 간격, 약 30일 간격, 약 35일 간격, 약 40일 간격, 약 45일 간격, 약 50일 간격, 약 55일 간격, 약 60일 간격 또는 약 65일 간격으로 투여된다. 유리하게는, 상기 용량은 약 40일 간격, 약 41일 간격, 약 42일 간격, 약 43일 간격, 약 44일 간격, 약 45일 간격, 약 46일 간격, 약 47일 간격, 약 48일 간격, 약 49일 간격 또는 약 50일 간격으로 투여된다. 특정 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 1주 간격, 약 2주 간격, 약 3주 간격, 약 4주 간격, 약 5주 간격, 약 6주 간격, 약 7주 간격, 약 8주 간격, 약 9주 간격, 약 10주 간격, 약 11주 간격 또는 약 12주 간격으로 투여된다. 특정 다른 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 1개월 간격, 약 2개월 간격, 약 3개월 간격, 약 4개월 간격, 약 5개월 간격, 약 6개월 간격, 약 7개월 간격, 약 8개월 간격, 약 9개월 간격, 약 10개월 간격, 약 11개월 간격 또는 약 12개월 간격으로 투여된다.
구현예에서, 프라임 부스트 용량은 상동성(homologous)이며, 이는 동일한 면역원성 조성물을 손상시킴을 의미한다. 특정 구체예에서, 제공된 방법 및 조성물은 면역 반응의 유도를 유도하는 이종성(heterologous)의 백신 프라임 용량 및 부스트 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 "이종성"은 부스트 용량과 프라임 용량이 상이함을 의미한다. 예를 들어, 면역원성 조성물(예를 들어, 이종 항원을 코딩하는 아데노바이러스 벡터)은 하나 이상의 호흡기 병원체(예를 들어, 인플루엔자)에 대한 신속한 (선천성) 면역 반응을 유도한 후 면역원성 조성물(예를 들어, 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는 아데노바이러스 벡터)의 부스트 용량으로 사용될 수 있으며, 상기 코딩된 이종 항원은 프라임 용량과 부스트 용량 간에 상이할 것이다. 제1 조성물은 면역 반응을 국소적으로 또는 전신적으로 프라이밍하기 위해 먼저 투여될 수 있고, 아데노바이러스와 같은 제2 백신은 프라이밍된 면역 세포를 국부적으로 "끌어내고" 항원 특이적 방식으로 재자극하기 위한 부스터로서 점막 투여될 수 있다.
구체예에서, 제1 또는 제2 면역원성 조성물은 적어도 7일 간격, 적어도 14일 간격 또는 그 이상의 간격으로 투여되는 프라임 및 부스트 용량으로 투여된다. 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 7일 간격, 약 14일 간격, 약 20일 간격, 약 25일 간격, 약 30일 간격, 약 35일 간격, 약 40일 간격, 약 45일 간격, 약 50일 간격, 약 55일 간격, 약 60일 간격 또는 약 65일 간격으로 투여된다. 유리하게는, 상기 용량들은 약 40일 간격, 약 41일 간격, 약 42일 간격, 약 43일 간격, 약 44일 간격, 약 45일 간격, 약 46일 간격, 약 47일 간격, 약 48일 간격, 약 49일 간격 또는 약 50일 간격으로 투여된다. 특정 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 1주 간격, 약 2주 간격, 약 3주 간격, 약 4주 간격, 약 5주 간격, 약 6주 간격, 약 7주 간격, 약 8주 간격, 약 9주 간격, 약 10주 간격, 약 11주 간격 또는 약 12주 간격으로 투여된다. 특정 다른 구체예에서, 프라임 용량 및 부스트 용량은 약 1개월 간격, 약 2개월 간격, 약 3개월 간격, 약 4개월 간격, 약 5개월 간격, 약 6개월 간격, 약 7개월 간격, 약 8개월 간격, 약 9개월 간격, 약 10개월 간격, 약 11개월 간격 또는 약 12개월 간격으로 투여된다.
보조제와 함께 또는 보조제 없이 사용될 때 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 투여량은 약 107 내지 약 1012 감염 단위 또는 플라크 형성 단위(ifu 또는 pfu)일 수 있거나, 투여 단위는 바이러스 입자(vp)일 수 있고, 1 vp는 약 1-100 ifu 또는 pfu와 같다. 일 구체예에서, 포유동물 개체에게 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 107 vp이다. 또 다른 측면에서, 포유동물 개체에 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 108 vp이다. 또 다른 측면에서, 포유동물 개체에게 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 109 vp이다. 또 다른 측면에서, 포유동물 개체에 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 1010 vp이다. 또 다른 측면에서, 포유동물 개체에게 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 1011 vp이다. 또 다른 측면에서, 포유동물 개체에게 투여되는 면역원성 조성물의 용량은 약, 또는 적어도 약 1012 vp이다.
구체예에서, (경)점막 투여용 조성물은 스퀴즈 스프레이 디스펜서, 펌프 디스펜서, 다중 용량 디스펜서, 점적기 유형 디스펜서, 분무기 또는 에어로졸 디스펜서에 의해 분배될 수 있는 형태일 수 있다. 에어로졸은 일반적으로 탄화수소에 의해 압력을 받고 있다. 펌프 디스펜서는 바람직하게는 계량된 용량 또는 특정 입자 크기를 갖는 용량을 분배할 수 있다.
따라서, 일부 구체예에서, 본 발명은 병원체로부터의 항원을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 치료 용량을 포유동물 개체로 경점막 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 비강내 투여하는 것을 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 좌위, 리클라이닝 체위, 앙와위, 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량은 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 이종 항원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스이다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E1 및 E3 결실된 아데노바이러스 벡터이다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스이다. 일부 구체예에서, 유효량은 E1 및/또는 E3 결실된 아데노바이러스의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)이다. 일부 구체예에서, 유효량은 E1 및/또는 E3 결실된 또는 파괴된 아데노바이러스의 108개 이상의 바이러스 입자(vp)이다. 일부 구체예에서, 유효량은 E1 및/또는 E3 결실된 또는 파괴된 아데노바이러스의 109개 이상의 바이러스 입자(vp)이다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 비강내로 투여받는다.
일부 구체예에서, 병원체는 호흡기 병원체이다. 일부 구체예에서, 병원체는 바이러스이다. 일부 구체예에서, 바이러스는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 리노바이러스 또는 코로나바이러스이다. 일부 구체예에서, 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 감기 바이러스 또는 홍역 바이러스이다. 일부 구체예에서, 감기 바이러스는 리노바이러스 또는 코로나바이러스이다. 일부 구체예에서, 병원체는 박테리아이다. 일부 구체예에서, 박테리아는 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 박테리아는 탄저균(Bacillus anthracis)이다. 일부 구체예에서, 항원은 탄저균 보호항원이다. 일부 구체예에서, 탄저균 보호항원은 PA83이다. 일부 구체예에서, 항원은 탄저균 치사인자이다. 일부 구체예에서, 병원체는 진균이다. 일부 구체예에서, 진균은 아스퍼질러스(Aspergillus)이다. 일부 구체예에서, 항원은 인플루엔자 항원이고, 선택적으로 상기 인플루엔자 항원은 계절성 인플루엔자 바이러스, 인플루엔자 A 바이러스, 및/또는 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래하고; 및/또는 인플루엔자 항원은 헤마글루티닌 (HA) 표면 단백질 항원이다.
일부 구체예에서, 치료 용량의 면역원성 조성물 (예를 들어, 백신) 이 인간 개체에 대한 단일 용량 비강내 투여에 적합한 1가 인플루엔자 약학 제제를 포함하고, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)은 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함하고, 상기 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HA1 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성된 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 상기 제제는 인플루엔자 바이러스에 대해 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 10개월 이상, 12개월 이상 인간 개체에 혈청보호를 제공하도록 구성되고, 선택적으로 HA1 항체 역가가 투여 후 28일 이내 및/또는 50 이상이다. 일부 구체예에서, 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이다.
일부 구체예에서, 제제는 보조제를 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 적어도 10개월, 적어도 12개월, 적어도 13개월 또는 적어도 14개월 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하여 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 반려 동물, 사육 동물, 식품- 또는 사료-생산 동물, 가축, 사냥감 동물, 경주 동물, 또는 스포츠 동물이다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 소, 말, 토끼, 개, 고양이, 염소, 양 또는 돼지이다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이고, 선택적으로 인간은 성인이다. 일부 구체예에서, 인간 개체는 SARS-CoV-2에 감염되고/되거나 COVID-19의 증상을 나타내는 개체일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 상기 방법은 초기 코로나바이러스 감염(바람직하게는 SARS-CoV-2 감염)이 있는 인간 개체에서 임상적 악화를 예방할 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 동일한 것의 다른 구체예들이 또한 본원에서 고려된다.
일부 구체예에서, 본 발명은 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 포유동물 개체에게 경점막 투여 방법을 제공하며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원 코딩 서열을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107 개 이상의 바이러스 입자(vp), 약 108 개 이상의 vp, 약 109 개 이상의 vp, 약 1010 개 이상의 vp, 또는 약 1011 개 이상의 vp 의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 을 포유동물 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 좌위(sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막으로 투여된 치료 용량은 보호 면역 반응을 유도한다(즉, 백신으로 작용함). 바람직한 구체예에서, "이종 항원"은 면역원성 조성물이 보호를 제공하도록 의도된 감염원에 대해 이종성이다. 예를 들어, SARS-CoV-2에 의한 감염 또는 COVID-19의 증상에 대한 보호를 제공하기 위해 본원에 공개된 NasoVAX의 사용은 이종 항원(즉, COVID-19를 포함한 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 및/또는 증상 완화를 위해 사용되는 인플루엔자 항원)의 사용으로 간주될 것이다. 일부 구체예에서, 코딩 서열은 호흡기 병원체; 바이러스; 오르토믹소바이러스; 파라믹소바이러스; 리노바이러스; 코로나바이러스; 선택적으로 계절성 인플루엔자 바이러스, 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 인플루엔자 B 바이러스인, 인플루엔자 바이러스; 호흡기 세포융합 바이러스(RSV); 감기 바이러스; 홍역 바이러스; 탄저균과 같은 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군에서 선택적으로 선택된 박테리아; 선택적으로 Aspergillus인 진균으로 이루어진 군에서 선택된 병원체의 하나 이상의 항원을 코딩한다. 일부 구체예에서, 항원은 탄저균 보호항원, 선택적으로 PA83 및/또는 탄저균 치사인자이다. 일부 구체예에서, 항원은 인플루엔자 항원, 선택적으로 헤마글루티닌(HA) 표면 단백질 항원이고, 조성물은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 HA1 항체 역가 40 이상으로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성되고, 선택적으로 HA1 항체 역가는 투여 후 28일 이내 및/또는 50 이상이고; 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이고; 조성물이 보조제를 포함하지 않고; 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이고; 상기 방법은 적어도 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 13 또는 14개월 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도하고; 및/또는 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하여 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 방법은 포유동물 개체가 배위(즉, 앙와위) 에 있는 동안 포유동물 개체의 두 비공 사이에 대략 균일하게 분할된 2개 용량으로 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 투여 동안 앙와위에 있고 투여 후 적어도 약 30분 동안 앙와위를 유지한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 약 1Х1011 개 이상의 바이러스 입자(vp)(예를 들어, NasoVAX 의약품)의 비강내 공칭 용량을 전달한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 약 0.5mL 용량의 NasoVAX 의약품 (바람직하게는 실온, 약 25℃로 해동됨)을 투여하여 0.25mL의 비강내 스프레이를 포유동물 개체의 각 비공에 전달하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 항원(즉, 병원체의 항원 또는 이종 항원(면역원성 조성물이 면역 반응을 생성하도록 의도된 감염원에 대해 이종임))은 인플루엔자 항원이고, 선택적으로 상기 인플루엔자 항원은 헤마글루티닌 (HA) 표면 항원이다. 일부 구체예에서, 항원은 인플루엔자 항원이고 포유동물 개체는 초기 코로나바이러스 감염성 질환(즉, 초기 COVID-19)에 걸린 인간이다. 일부 구체예에서, 이러한 방법은 인간에서 임상적 악화를 예방하며, 임상적 악화는 투여 후 2회의 연속 측정에서 맥박 산소 측정법(pulse oximetry)에 의해 결정된 안정시 SpO2의 기준선으로부터 적어도 약 4.0% 감소이다. 일부 구체예에서, 임상적 악화는 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 안정시 SpO2의 기준선로부터 안정시 SpO2의 평균 감소, 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 기준선으로부터의 안정시 맥박수의 평균 증가, 필요한 산소 공급 수준에 따른 투여 후 42일째에 입원이 필요한 환자의 비율, 및/또는 투여 후 42일까지 모든 원인에 의한 사망률에 의해 평가된, 치료 후 COVID-19의 최대 중증도로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 특징을 측정함으로써 결정될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 면역원성 조성물이 투여되는 포유동물 개체는 투여 후 심각한 부작용을 나타내지 않는다.
일부 구체예에서, 본 발명은 병원체로부터의 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 치료 용량을 포유동물 개체에 경점막 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 면역원성 조성물을 포유동물 개체에게 비강내 투여하는 것을 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 앙와위, 또는 기타 투여 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도하고; 선택적으로, 상기 면역원성 조성물은 백신이다. 일부 구체예에서, 본 발명은 포유동물 개체에서 보호 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 포유동물 개체에게 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 포유동물 개체로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 포유동물 개체는 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 포유동물 개체에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 35분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 포유동물 개체에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 바이러스 감염에 대해 환자(포유동물 개체의 유형)를 백신접종하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 환자로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 환자에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 35분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 환자 (포유류 개체의 유형)에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 환자로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 환자의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 환자에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 35분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체의 비공은 포유동물 개체의 머리 위로 올라와 있다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 포유동물 개체가 약 5분 내지 약 30분에서 선택되는 투여후 유지 기간 동안 상기 투여 체위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 치료 용량의 약 20% 미만이 배액(drainage)을 통해 비강 외부로 떠난다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 각각의 비공에 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 선택적으로 상기 분할 용량은 다중 용량 비강내 전달 장치를 사용하여 투여된다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 프라임 용량 및 부스트 용량으로 제공될 수 있으며, 선택적으로 면역원성 조성물은 프라임 용량 또는 부스트 용량으로서 이종 용량(heterologous dose)과 조합된 투여 요법으로 제공된다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 이종 항원을 코딩하고 발현하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 이종 항원을 코딩하지 않는 비-복제 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 비-복제 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E1 및 E3 결손된 아데노바이러스 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 유효량은 E1 및/또는 E3 결손된 아데노바이러스의 107개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 108개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 109개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 및 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 1011개 이상의 바이러스 입자(vp)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 비강내로 투여받을 수 있다. 일부 구체예에서, 병원체는 호흡기 병원체일 수 있다. 일부 구체예에서, 병원체는 바이러스일 수 있고, 일부 구체예에서 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 코로나바이러스는 SARS-Cov, SARS-Cov-2, MERS, 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), OC43 (HCoV-OC43), NL63, 및 HKU1로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 감기 바이러스 및 홍역 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 감기 바이러스는 리노바이러스 또는 코로나바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 병원체는 박테리아일 수 있다. 일부 구체예에서, 박테리아는 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 박테리아는 탄저균일 수 있다. 일부 구체예에서, 항원은 탄저균 보호항원이다. 일부 구체예에서, 탄저균 보호항원은 PA83일 수 있다. 일부 구체예에서, 항원은 탄저균 치사인자일 수 있다. 일부 구체예에서, 병원체는 진균일 수 있다. 일부 구체예에서, 진균은 아스퍼질러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 항원은 계절성 인플루엔자 바이러스 항원, 인플루엔자 A 바이러스 항원, 인플루엔자 B 바이러스 항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 인플루엔자 항원일 수 있다. 일부 구체예에서, 항원은 헤마글루티닌 (HA) 표면 단백질 인플루엔자 항원, 또는 이의 단편일 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 바와 같이 투여되는 면역원성 조성물의 치료 용량은 인간 개체에 대한 단일 용량 비강내 투여에 적합한 1가 인플루엔자 약학 제제를 포함하고, 면역원성 조성물은 인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량; 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함하고, 상기 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HAI (혈구응집반응 억제 분석) 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성된 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 제제 및 이를 이용한 방법을 제공하며, a) 제제는 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HAI 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성되며, 선택적으로 상기 HAI 항체 역가는 투여 후 50 이상 및/또는 28일 이내이고; b) 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이고; c) 제제가 보조제를 포함하지 않고; d) 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이고; e) 상기 방법은 12개월 이상 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도하고; f) 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하고 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공하고; 및/또는 g) 상기 면역 반응은 혈구응집반응 억제 분석 (HAI)에 의해 측정된다.
일부 구체예에서, 본 발명은 포유동물 개체에게 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물의 경점막 투여를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하거나 또는 함유하지 않고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 투여 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도하고; 선택적으로, 면역원성 조성물은 백신이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 포유동물 개체에서 보호 면역 반응을 유도하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 포유동물 개체에게 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 포유동물 개체로의 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하고, 비강내 투여 동안 포유동물 개체는 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 포유동물 개체에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 포유동물 개체에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 바이러스 감염에 대해 환자에게 백신접종하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 포유동물 개체로의 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 환자의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 환자에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자(포유동물 개체의 유형)에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 환자의 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 환자에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 상기 포유동물 개체로의 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하고, 비강내 투여 동안 환자는 환자의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는 변형된 좌위, 리클라이닝 체위, 또는 앙와위에 있는 단계; 및 상기 환자에게 비강내 투여 후 약 1분 내지 약 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하고, 이로써 비강내 투여된 치료 용량이 환자(포유동물 개체의 유형)에서 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체의 비공은 포유동물 개체의 머리 위로 올라갈 수 있다. 일부 구체예에서, 방법은 포유동물 개체가 약 5분 내지 약 30분에서 선택되는 투여후 유지 기간 동안 상기 투여 체위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 치료 용량의 약 20% 미만이 배액(drainage)을 통해 비강 외부로 떠난다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 각각의 비공에 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 선택적으로 상기 분할 용량은 다중 용량 비강내 전달 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 프라임 용량 및 부스트 용량으로 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 프라임 용량 또는 부스트 용량으로서 이종 용량과 조합하여 투여 요법으로서 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 보호 면역 반응은 약 24시간 이내에 유도될 수 있다. 일부 구체예에서, 보호 면역 반응은 약 1일 또는 2일 이내에 유도될 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스는 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E1 및 E3 결손된 아데노바이러스 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 유효량은 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 109개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 및 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스의 1011개 이상의 바이러스 입자(vp)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 호흡기 병원체로부터 유래할 수 있다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체는 바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 바이러스는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 코로나바이러스는 SARS-Cov, SARS-Cov-2, MERS, 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), OC43 (HCoV-OC43), NL63, 및 HKU1로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 감기 바이러스 및 홍역 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 감기 바이러스는 리노바이러스 또는 코로나바이러스일 수 있다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체는 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군으로부터 선택된 박테리아일 수 있다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체는 선택적으로 아스페르길루스인 진균일 수 있다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 탄저균 보호항원, 선택적으로 PA83 및/또는 탄저균 치사인자일 수 있다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 인플루엔자 항원, 선택적으로 헤마글루티닌(HA) 표면 단백질 항원일 수 있고: a) 조성물은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HAI 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성되며, 선택적으로 상기 HAI 항체 역가는 투여 후 50 이상 및/또는 28일 이내이고; b) 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이고; c) 조성물은 보조제를 포함하지 않고; d) 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이고; e) 상기 방법은 12개월 이상 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도하고; f) 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하고 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공한다. 일부 구체예에서, 본원에 개시된 방법은 유효량의 면역원성 조성물을 인간 개체의 비공에 비강내 투여하는 단계를 포함하며, 투여 동안 인간 개체의 비공은 위쪽으로 기울어지고; 유효량은 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 유효량은 약 109 개 이상의 vp를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 인간 개체의 2개의 비공 사이에 대략 균일하게 분할된 2개의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 인간 개체는 투여 동안 앙와위 위치에 있을 수 있고 투여 후 적어도 약 30분 동안 앙와위 위치에 남아 있을 수 있다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 인플루엔자 항원일 수 있으며, 선택적으로 인플루엔자 항원은 혈구응집소(HA) 표면 항원이다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 선택적으로 코로나바이러스 항원이 SARS-Cov-2 항원인 코로나바이러스 항원일 수 있다. 일부 구체예에서, 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는 이종 항원을 함유하지 않거나 발현하지 않는다. 일부 구체예에서, 인간 개체는 초기 코로나바이러스 감염 질환을 갖는 인간일 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 개시된 방법은 인간의 임상적 악화를 예방할 수 있으며, 이는 바람직한 구체예에서 투여 후 2회의 연속 측정에서 맥박 산소 측정법에 의해 결정된 안정시 SpO2의 기준선으로부터 적어도 약 4.0% 감소로 정의될 수 있다. 일부 구체예에서, 임상적 악화는 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 안정시 SpO2의 기준선로부터 안정시 SpO2의 평균 감소, 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 기준선으로부터의 안정시 맥박수의 평균 증가, 필요한 산소 공급 수준에 따른 투여 후 42일째에 입원이 필요한 환자의 비율, 및 투여 후 42일까지 모든 원인에 의한 사망률에 의해 평가된, 치료 후 COVID-19의 최대 중증도로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 특징을 측정함으로써 결정될 수 있다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응은 약 24시간 이내에 유도될 수 있다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응은 약 1일 내지 2일 이내에 유도될 수 있다. 일부 구체예에서, 방법은 포유동물 개체가 비강내 투여 후 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명은 인간 개체에게 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물의 경점막 투여를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하거나 또는 함유하지 않고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 투여 동안 상기 인간 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 체위에 있고; 이로써 경점막 투여된 치료 용량은 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 유도한다. 일부 구체예에서, 호흡기 병원체는 오르토믹소바이러스; 파라믹소바이러스; 리노바이러스; 코로나바이러스; 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV); 감기 바이러스; 및 홍역 바이러스로 이루어진 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는 인플루엔자 바이러스 항원 또는 코로나바이러스 항원으로부터 선택된 이종 항원을 함유하고 발현한다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 SARS-Cov-2 항원이다. 일부 구체예에서, 이종 항원은 인플루엔자 항원이다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 방법 및/또는 시약(예를 들어, 벡터)을 사용하여 치료되는 포유동물 개체는 반려 동물, 사육 동물, 식품- 또는 사료-생산 동물, 가축, 사냥감 동물, 경주 동물, 또는 스포츠 동물이다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 소, 말, 개, 고양이, 염소, 양 또는 돼지이다. 일부 구체예에서, 포유동물 개체는 인간이고, 선택적으로 인간은 성인이다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 동일한 것의 다른 구체예들이 또한 본원에서 고려된다.
실시예
하기 실시예는 본 출원에서 제공되는 실시 형태를 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 내용 및 설명을 당해 분야의 통상의 기술자들에게 제공하기 위해 제시되고, 개시 내용의 범위를 제한하도록 의도되지 않으며, 이들은 하기의 실시예가 모든 실험 또는 수행된 유일한 실험임을 의미하지는 않는다 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)에 관하여 정확성을 보장하기 위해 노력하였으나, 일부 실험적 오차와 편차들을 설명해야 한다. 달리 명시되지 않는다면, 부는 부피부이며, 온도는 섭씨 온도이다. 기재된 바와 같은 방법의 변형은 실시예가 예시하는 것으로 여겨지는 기본 양태를 변경하지 않고 이루어질 수 있다는 것을 이해해야 한다.
실시예 1: 탄저병 면역원성 조성물 약학 제제 (NasoShield) 의 제조
본 아데노바이러스 벡터는 호흡기 상피 세포 및/또는 기타 기관/조직 내에서 관심 단백질(예를 들어, 탄저균 PA)을 발현하는 E1/E3-결손된 복제 결핍(RD)-Ad5 벡터이다. 벡터에는 탄저균의 PA83(보호항원 - 83 kDa 형태) 유전자 (또는 인 트랜스(in trans)의 임의의 다른 관심 유전자)를 인코딩하는 전이유전자와 같은 유전자 삽입물이 포함되어 있다. 재조합 Ad5 벡터는 바이러스 게놈의 E1 영역이 결여되어 있어 바이러스 복제 결핍(RD)이며 숙주 세포에 들어갈 때 감염성 바이러스 입자를 생성할 수 없다. 벡터의 E3 영역에서 뉴클레오티드를 추가로 결실시키면 숙주 면역 반응을 회피하는 데 관여하고 바이러스 복제에 필수적인 유전자들이 제거된다. PA83 유전자의 발현을 유도하기 위한 사이토메갈로바이러스 전사 인핸서/프로모터, (또는 기타 특정 전이유전자), 및 시미안 바이러스 40 폴리아데닐화 신호로 구성된 발현 카세트가 E1 유전자 서열 대신 삽입되었다. 도 1은 RD-Ad5 벡터의 개략도를 제공하고, 벡터에 유지되는 모(parent) 아데노바이러스 게놈의 해당 서열을 식별한다.
보호항원(PA)은 숙주 세포를 결합하고 2개의 다른 단백질 중 1개와 결합하여 세포 사멸을 담당하는 외독소를 형성함으로써 탄저병에서 핵심적인 역할을 한다 [Wright 2010]. PA에 대한 항체는 탄저병 예방에 중요한 것으로 잘 확립되어 있다. TNA는 주요 바이오마커이자 현재 허가된 탄저병 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 동물 규칙 승인의 기초이다 (Moldovan IR, Tary-Lehmann M. Improving immunogenicity, efficacy and safety of vaccines through innovation in clinical assay development and trial design: the Phacilitate Vaccine Forum, Washington D.C. 2011. Hum Vaccin. 2011 Jun;7(6):610-2).
포유동물 개체에 코돈 최적화된 탄저균 보호항원(PA)을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는 [Lui J. et al.; A protocol for rapid generation of recombinant adenoviruses using the AdEasy system; Nat. Protoc. (2007) 2(5):1236-47]에 기재된 절차대로 제조하였다.
NasoShield는 복제 허용 PER.C6 세포에서 RD-Ad5 벡터를 증식시킨 후 감염된 세포 수확물에서 바이러스를 정제하여 제조했으며, 최종 생성물에는 다음 부형제가 포함되었다: Tris HCl(pH 7.4), 히스티딘, 수크로스, 염화나트륨, 염화마그네슘, 폴리소르베이트 80, 에틸렌디아민테트라아세트산 및 에탄올.
임상 연구(실시예 2)의 경우, NasoShield는 1 x 109, 1 x 1010, 또는 1 x 1011 바이러스 입자(vp)의 공칭 용량을 전달하도록 제형화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 멸균 동결 현탁액 0.7mL의 공칭 부피를 각각 포함하는 일회용 유리 바이알에 공급되었다.
동물 연구(실시예 3)의 경우, NasoShield (이전 연구에서는 AdVAV라고도 함)는 1.5×109 vp 를 함유하는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 멸균 동결 현탁액 0.7mL의 공칭 부피를 각각 포함하는 일회용 유리 바이알에 공급되었다 (배치 번호: 17255-001).
실시예 2: NasoShield의 안전성 및 면역원성을 평가하기 위한 최초의 1상 연구
NasoShield의 안전성과 면역원성을 평가하기 위해 최초의 1상 연구가 수행되었다. 이 연구의 목적은 1Х108, 1Х109, 1Х1010, 또는 1Х1011 의 단일 용량으로 및 이러한 용량 중 가장 내약성이 높은 용량의 2회 용량(3주 간격)으로 (예컨대 1Х1011 vp) 비강 내 스프레이로 투여된 NasoShield에 대한 항-보호항원(PA)-특이적 체액성 면역 반응과 관련된 NasoShield의 안전성과 면역원성을 평가하는 것이었고, 개체는 NasoShield 투여 시 정상 좌위(즉, 눈높이에 있는 물체에 똑바로 초점을 맞춘 채 머리가 정면을 향하고 비공은 아래로 향하게 함)에 있었다.
NasoShield는 1Х109, 1Х1010, 또는 1Х1011 의 공칭 용량의 바이러스 입자(vp)를 전달하도록 제형화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 무균 동결 현탁액 0.7mL의 공칭 부피를 각각 포함하는 일회용 유리 바이알에 제공되었다. 가장 낮은 용량(1Х108 vp)은 통제된 무균 구역에서 적절한 양의 희석 완충제로 1×109 vp 바이알을 희석하여 현장 약국에서 조제되었다. 0.5mL 용량을 2개의 비공 사이에 분할하고("분할 용량") 1일차(단일- 용량 코호트; 시험의 파트 A) 또는 1일차 및 22일차(2-용량 코호트; 시험의 파트 B)에 Teleflex LMATM MAD® Nasal Intranasal Mucosal Atomization Device (LMA MAD) 가 장착된 1 mL 투베르쿨린 주사기를 사용하여 비강내 스프레이로 투여하였다. 연구 대상 집단은 18세에서 49세 사이의 건강하고 면역 능력이 있는(immunocompetent) 성인이었다. 이 임상 시험의 피험자들은 정상적인 좌위에서 NasoShield를 투여 받았다.
이 임상 시험의 파트 A에서 120명의 개체가 각각 NasoShield 용량(1Х108, 1Х109, 1Х1010, 및 1Х1011 vp)으로 정의된 30명의 개체로 구성된 4개의 순차적 코호트에 등록되었다. 각 코호트 (및 첫 번째 용량 코호트의 센티넬 그룹(sentinel group)) 내에서 개체들은 4:1:1 비율로 무작위 배정되어 NasoShield 의 1회 비강내 용량 (1일차), 위약의 1회 비강내 용량 (즉, 비강내 스프레이)(1일차)을 투여받았다. 이 임상 시험의 파트 B에서는 25명의 개체는 4:1 비율로 무작위 배정되어 파트 A 에서 가장 내약성이 높은 용량(1x1011 vp)의 2회 비강내 용량 (즉, 비강내 스프레이) 또는 위약을 21일 간격으로 (1일차 및 22일차) 투여받았다.
계획된 중간분석(interim analysis)은, 파트 B의 57일차 방문(Dose 2 후 35일)까지의 모든 데이터가 이용 가능하고 모든 개체에 대해 모니터링되고 모든 개체에 대해 조사자가 확인했을 때 수행되었다. 반응원성 사건과, 중대한 이상사례(SAE), 의사가 검진한 이상사례 (MAE) 및 신규-발병 만성 질환(NCI) 이외의 이상사례(AE)에 대한 보고 기간은 중간분석 시점에 모든 피험자들에 대해 완료되었다. 모든 투여 후 국소 반응성 사건(P=0.439) 또는 전신 반응원성 사건(P=0.573)의 발생률에서 전체 NasoShield 그룹과 위약 그룹 간에 통계적으로 유의한 차이는 없었다. 8일까지 파트 A에서 NasoShield를 투여받은 대부분의 개체(92.0%)와 15일까지 모든 개체의 비인두에서 Ad5 벡터가 제거되었다(참고: 파트 B 샘플은 테스트되지 않음). 쉐딩(shedding)이 있는 개체의 수와 쉐딩 정도는 4일과 8일에 용량 의존적 패턴을 보였다.
파트 A에서 NasoShield 그룹의 소수의 개체들만이 IgG 또는 TNA에 대한 반응자의 정의(투여 후 28일째에 4배 이상 증가)를 충족했다. 파트 B에서 NasoShield 1x1011 vp 그룹의 10명의 개체(66.7%)가 Dose 1 후에 IgG 반응의 정의를 충족하고 Dose 2 후에 9명의 개체 (60.0%)가 IgG 반응의 정의를 충족했다. 그러나 반응자의 정의를 충족하는 사람들은 GMT가 매우 낮았다. 파트 A와 파트 B 모두에서 NasoShield 그룹의 소수의 개체만이 TNA NF50 또는 ED50에 대한 응답자의 정의를 충족했다. 29일째에 모든 용량에서 NasoShield는 개체의 21.0%에서만 IgG 반응을 유도했고, NF50 및 ED50으로 측정한 바와 같이 개체의 3.7% 및 5.4%에서 TNA 반응을 유도했다. 따라서 면역원성 분석은 1회 투여(29일차) 또는 2회 투여(50일차) 후 28일에 NasoShield에 의해 유발된 최소 면역글로불린 G (IgG) 반응을 보여주었다. 독소 중화 항체(TNA) 반응은 1 x1010 또는 1 x1011 용량 그룹 중 어떤 개체에서도 유발되지 않았고 더 낮은 용량 그룹의 개체 중 극소수에서 나타났다. 도 2 참조. NasoShield에 대한 제한된 반응으로 인해 투여 전 Ad5 혈청 항체 수준이 면역 반응에 미치는 영향을 평가하기가 어려웠다. 이 임상 시험에서 NasoShield는 정상 좌위(즉, 비공이 뒤로 기울어지거나 앙와위가 아닌)에 있는 개체에게 투여되었다는 점에 다시 주목한다. 이러한 발견은 예상치 못한 결과였으며 동일한 RD-Ad5 벡터를 기반으로 하고 동일한 투여 장치(LMA MAD Nasal Intranasal Mucosal Atomization Device) 및 절차를 사용하는 비강내 인플루엔자 백신인 NasoVAX의 이전 동물 연구 및 임상 시험과 일치하지 않은 것이었다.
실시예 3: 뉴질랜드 백색 (NZW) 토끼에서 NasoShield의 위치 투여에 대한 면역원성 차이
임상 시험(실시예 2)의 면역원성 데이터는 매우 낮은 용량의 NasoShield에서도 전임상 연구에서 관찰된 높은 수준의 독소 중화 항체(TNA) 반응과 대조를 이룬다. 도 3 참조. 임상 연구에서 이러한 결과를 초래할 수 있는 잠재적인 근본 원인을 찾기 위한 조사를 시작하였다. 조사의 일환으로 제품 효능, 제형 성분, 오염 물질 프로파일 및 기타 주요 매개변수들을 평가했다. 전달 장치, 비강 투여 방식 및 투여 체위는 위에 표시된 매개변수와 관련되거나 종속될 수 있는 NasoShield에 의해 생성된 면역원성의 차이를 설명하기 위해 토끼 연구에서 연구되었다.
도 4는 연구 설계의 요약을 제공한다. 토끼는 복위(sternal position)(정상적인 안정위(resting position)에서 비공이 아래를 향하게 함; 실시예 2의 인간 임상 시험에서 정상 좌위에 해당함) 및 배위(dorsal position)(비공을 위로 향하게 한채 등을 대고 있는 토끼; 실시예 5 및 6의 인간 임상 시험에서 앙와위에 해당함)에 실시예 2의 임상 시험에 사용된 비강내 전달 장치를 사용하여 NasoShield 백신을 접종했다. 비교군(comparator arm)은 배위에서 투여된 NasoShield의 점적(액적)이었다. 이러한 유형의 투여는 임상 시험을 시작하기 전에 전임상 연구에 사용되었다. NasoShield 바이러스 입자(vp)는 네뷸라이저 또는 분무기(AeroGen 또는 LMA MAD/MAD300)를 사용하거나 이에 의해 액체 형태로 토끼를 배위 또는 복위에 배치하여 투여했다. 투여된 입자의 수는 3 x 108 vp로 장치와 체위를 달리하였고 완충제로만 처리한 대조군과 AeroGen 네뷸라이저를 사용하여 3 x 107 vp로 처리한 더 낮은 vp 수 비교군을 사용했다. 토끼의 복위는 임상 시험에서 NasoShield 투여를 위해 구현된 인간의 정상 좌위(비공이 아래로 향하거나 약간 기울어짐)를 가장 유사하게 모방한다.
NasoShield 면역원성은 두 가지 분석을 통해 평가하였다: PA-특이적인 IgG 수치를 측정하는 항-PA IgG Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA), 및 탄저병 치사인자(LT)를 중화하는 혈청의 능력을 측정하고 정량화하는 기능적 분석인 TNA(독소 중화 분석). 현재 연구는 비강내 액체 점적, LMA MAD®를 사용한 분무(atomization), 또는 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 투여용으로 설계된 비강 내 네뷸라이저를 사용한 분무(nebulization)를 통해 복위 및 배위의 다른 체위에서 NZW 토끼에게 투여할 때 NasoShield의 면역원성을 비교하고, 후속적으로, 치명적인 흡입 탄저균 에임즈(Ames) 포자 공격 후 생존에 의해 측정된 투여 용량의 효능을 비교하도록 설계되었다.
독소 중화 분석(TNA)은 샘플 혈청 내 항체가 배양된 세포를 독소로부터 보호하는 능력을 평가한다. 일 구체예에서 독소는 탄저균 치사인자(LT)이다. 세포는 일반적으로 플레이트 아래로 희석된 면역화된 동물의 샘플 혈청에 노출된다. 그런 다음 독소를 추가하고 세포를 배양한다. 모든 살아있는 세포는 생생한 색상을 제공하기 위해 살아있는 세포에 의해 대사될 디페닐테트라졸륨 브로마이드 (MTT)와 같은 시약을 사용하여 시각화할 수 있다(MTT의 경우 결과 색상은 보라색 포르마잔 결정임). 세포가 사멸에 가까워질수록 색이 덜 발색한다(즉, 감지됨). 완전히 죽은 세포는 색상을 제공하지 않을 것이다. 독소에 대한 항체가 있는 경우, 항체는 독소에 결합해야 하므로 세포에 대한 독소의 영향을 줄이는 데 도움이 되고 세포가 사멸되는 것을 방지해야 한다. 세포가 성장한 플레이트는 플레이트 판독기에서 분석되어, 각 웰의 흡광도와, 독소가 세포의 절반을 죽일 수 있는 농도를 평가할 수 있다.
백신접종된 토끼의 TNA ED5 및 TNA NF50은 백신접종 후 28일째에 검증된 TNA 분석에서 평가하였다. 도 5 참조.
데이터는 LMA MAD와 점적 모두 TNA 반응을 생성할 수 있음을 나타낸다. 그러나 LMA MAD(MAD300) 또는 AeroGen 모델 네뷸라이저를 사용한 등쪽 투여만이 면역 반응을 생성할 수 있었다. 도 4 참조.
시험된 24마리의 동물 모두에서, 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 복위(즉, 비-앙와위; 정상 좌위) 투여는 TNA 분석에서 면역원성 반응을 생성하지 않았다. 또한, 다른 장치(Aerogen)를 사용하여 10배 더 낮은 용량을 배위(즉, 앙와위) 에서 투여하더라도 적절한 용량의 면역 반응을 생성했다. 이는 투여 체위(예를 들어, 비강내 투여 동안 머리/비공의 위치)가 비강내 투여된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신) 및 잠재적으로 다른 치료제에 대한 면역원성 반응을 생성하기 위한 중요한 매개변수임을 나타낸다. 이 데이터는 머리를 기울이는 것(즉, 위쪽으로 또는 머리 위로 기울어진 비공, 배위 또는 앙와위)이 치료제/면역원성 조성물(예를 들어, 백신)이 비강 통로, 부비동 및 인접 조직/기관의 특정 영역에 접근 및/또는 국소화할 수 있게 할 수 있어, 면역 반응을 이끌어내는 데 중요할 수 있음을 나타낸다. 따라서 비공과 턱을 위로 들어 머리를 뒤로 젖히는 것이 NasoShield 투여에 선호되는 체위이다. 복위/정상 좌위(즉, 비공이 위쪽을 향하지 않음)에서는 비강내 투여에 의해 접근되는 영역이 다르거나 및/또는 강한 면역 반응을 생성하기 위한 차선책일 수 있다.
토끼의 NasoShield 면역화 및 포자 공격 후 생존율 데이터는 도 7에 나와 있다. 그룹당 24마리의 토끼 그룹은, AeroGen 네뷸라이저를 배위(dorsal position)에서 다양한 수의 바이러스 입자로 처리하고 (그룹 1 및 2), MAD300 네뷸라이저를 각각 복위 및 배위에서 사용하여 처리하고 (그룹 3 및 4), 배위에서 장치 없이, 즉 점적 처리하고 (그룹 5), 대조군으로서 토끼를 점적에 의해 완충액만 처리하였다(그룹 6). MAD300 분무기를 사용하여 투여된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)을 배위 체위에서 투여한 토끼에서 21%의 가장 낮은 사망률(79% 생존)이 관찰되었다(즉, 백신으로 작용함). 복위에서 MAD 300을 사용한 투여는 완충제 대조군과 유사하게 100% 사망률(제로 생존)로 탄저병에 대한 보호를 제공하지 않았다 (즉, 어느 쪽도 백신으로 작용하지 않음). 배위에서 AeroGen 네뷸라이저는, 비슷한 바이러스 입자 수에서 46%의 더 높은 사망률을 보였고 vp 수를 3 x107으로 낮추었을 때 훨씬 더 높은 사망률인 71%를 보여, 배위에서의 MAD300 분무기만큼 효과적이지 않았다. 그러나 이것은 여전히 MAD300을 사용한 복위에서의 투여보다 탄저병 공격으로부터 더 나은 보호 수단을 제공했다.
각 그룹에 대한 토끼 사망률 데이터에 대한 TNA 결과의 비교가 도 8에 나와 있으며, 여기서 TNA 반응은 일반적으로 NasoShield 백신을 접종하고 Anthrax 포자로 공격한 토끼의 생존에 해당한다.
변형된 좌위, 리클라이닝 체위 및/또는 앙와위에서 비공이 위쪽으로 기울어지거나 개체의 머리 위로 올라가는 것과 같은, 면역원성 제제 투여 중 개체의 체위는, 동물 및 인간 모두에서 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)/치료제의 비강내 투여를 통한 강한 면역원성 반응의 생성과 상관관계가 있다. 본원에 나타낸 바와 같이, 배위에서 개체에게 투여될 때, 면역원성 조성물은 백신으로서 작용할 수 있다.
실시예 4: 뉴질랜드 백색(NZW) 토끼에서 NasoVAX의 위치 투여에 대한 면역원성 차이
A. 1가 인플루엔자 약학 제제(NasoVAX)의 제조
인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제-결핍 아데노바이러스 벡터는 Lui J. et al. (A protocol for rapid generation of recombinant adenoviruses using the AdEasy system; Nat. Protoc. (2007) 2(5):1236-47)에 기재된 절차에 따라 제조하였다. 이 연구에 사용된 아데노바이러스 벡터(NasoVAX)는 호흡기 상피 세포 내에서 관심 단백질(예를 들어, 인플루엔자 HA)을 발현하는 E1/E3-결손된, 복제 결핍(RD)-Ad5 벡터이다. NasoVAX의 경우 벡터는 인플루엔자 A 또는 B의 HA 표면 단백질 항원을 코딩하는 유전자 삽입물을 포함한다. 재조합 Ad5 벡터는 바이러스 게놈의 E1 영역(뉴클레오티드 343~3511)이 결여되어 있어 바이러스 복제 결핍(RD)이며 숙주 세포에 들어갈 때 감염성 바이러스 입자를 생성할 수 없다. 벡터의 E3 영역에서 뉴클레오타이드를 추가로 삭제하면 숙주 면역 반응을 회피하는 데 관여하고 바이러스 복제에 필수적인 유전자가 제거된다. HA 유전자의 발현을 유도하기 위한 사이토메갈로바이러스 전사 인핸서/프로모터, 생체공학적 HA 유전자, 및 시미안 바이러스 40 폴리아데닐화 신호로 구성된 발현 카세트가 E1 유전자 서열 대신 삽입되었다. 도 1은 RD-Ad5 벡터의 개략도를 제공하고 벡터에 유지되는 모 아데노바이러스 게놈의 해당 서열을 식별한다. 이 연구를 위해 RD-Ad5 벡터에는 A/California/04/2009(H1N1)-유사 인플루엔자 균주(AdcoCA09.HA)의 헤마글루티닌 (HA) 표면 단백질 항원을 인코딩하는 유전자 삽입물이 포함되어 있다. NasoVAX는 복제-허용 PER.C6 세포에서 이 RD-Ad5 벡터를 증식시킨 후 감염된 세포 수확물에서 바이러스를 정제하여 제조했으며, 최종 생성물에는 다음 부형제가 포함되었다: Tris HCl(pH 7.4), 히스티딘, 수크로스, 염화나트륨, 염화마그네슘, 폴리소르베이트 80, 에틸렌디아민테트라아세트산 및 에탄올. NasoVAX는 각각 A195 완충액에서 2 x 1010 vp/mL로 제형화된 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 무균 동결 현탁액 0.7mL의 공칭 부피를 포함하는 1회용 유리 바이알에 제공되었으며 (배치 번호: 17143001), 아래 연구에서 사용된다.
B. NasoVAX를 사용한 뉴질랜드 백색(NZW) 토끼의 면역화
NasoVAX 바이러스 입자(vp)는 LMA MAD/MAD300 분무기(위에 설명됨) 또는 AeroGen 네뷸라이저를 사용하여 액체 형태로 토끼에게 비강내 투여했으며, 각 토끼는 배위(예를 들어, 앙와위) 또는 복위(예를 들어, 정상 좌위)에 위치했다. 배위에서 토끼는 비공이 위를 향하도록 등을 대고, 복위에서는 인간의 정상 좌위에 해당하는 정상 안정위에서 비공이 아래를 향하도록 하였다. LMA MAD/MAD300 장치를 사용하여 투여된 바이러스 입자(vp)의 수는 7.5E7 또는 3E8 vp였으며, 아래 표시된 대로 투여 체위(배위 또는 복위)를 변경했다. LMA MAD/MAD300과 함께 완충제만 처리한 대조군("A195 완충제")이 있었다. 배위에서 NasoVAX의 점적(액적)이 투여된 비교군도 포함되었다. 도 9는 연구 그룹(그룹 1-5)을 보여준다.
인플루엔자 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)의 경우, 혈구응집반응 억제 검정(HAI)에서 측정된 항체는 보호의 대리지표이며, 상기 HAI 분석은 항체가 혈청에 존재하는 경우 적혈구와 바이러스 헤마글루티닌 간의 응집을 방지하는 항체의 능력을 기반으로 한다. 이 연구에서 NasoVAX 면역원성은 HAI를 사용하여 평가되었다. 간단히 말해서, NasoVAX를 투여한 시험 토끼의 혈청을, HAI에 의해, 인플루엔자 바이러스에 대한 항체의 존재에 대해 시험하고, NasoVAX를 투여하지 않은 대조군 토끼의 혈청과 비교하였으며, 토끼는 투여시 표시된대로 배위 또는 복위에 있었다. 그 결과를 하기 표 1 및 2 (0일의 HAI가 0임) 및 도 10-13에 나타내었다.
Day 14 HAI Results 14일차 HAI 결과
그룹 체위 용량 (vp) 동물 # HAI
1 배횡와위(Dorsal Recumbency) 7.5 x107 1 10
2 10
3 5
4 20
5 10
6 5
2 복위(sternal) 7.5 x107 7 5
8 5
9 10
10 5
11 5
12 5
3 배횡와위 3 x108 13 10
14 80
15 80
16 5
17 40
18 20
4 복위 3 x108 19 5
20 5
21 5
22 5
23 10
24 5
5 배횡와위 A195 완충제 25 5
26 5
27 5
28 5
29 5
30 5
28일차 HAI 결과
그룹 체위 용량 (vp) 동물 # HAI
1 배위(Dorsal) 7.5 x107 1 5
2 10
3 5
4 60
5 20
6 5
2 복위(sternal) 7.5 x107 7 5
8 5
9 5
10 5
11 5
12 5
3 배위 3 x108 13 80
14 40
15 40
16 160
17 40
18 160
4 복위 3 x108 19 5
20 5
21 5
22 5
23 5
24 5
5 배횡와위(Dorsal Recumbency) 195 완충제 25 5
26 5
27 5
28 5
29 5
30 5
HAI 데이터의 기하평균역가(GEOMEAN) 및 GMR
투여 GEOMEAN GMR
Day 0 배위 7.5 x107 vp 6.3 -
복위 7.5 x107 vp 5 -
배위 3 x108 vp 5 -
복위 3 x108 vp 5 -
배위 위약 5 -
Day 14 배위 7.5 x107 vp 8.9 1.4
복위 7.5 x107 vp 5.6 1
배위 3 x108 vp 25 5.0
복위 3 x108 vp 5.6 1
배위 위약 5 1
Day 28 배위 7.5 x107 vp 10.7 1.7
복위 7.5 x107 vp 5 1
배위 3 x108 vp 71 14
복위 3 x108 vp 5 1
배위 위약 5 1
표 1-3에 제시된 데이터는 도 10-13에도 제시되어 있다. 도 10-13에 도시된 바와 같이, LMA MAD/MAD300 장치를 사용하여 배위의 토끼에게 3 x108 vp를 투여한 "배위 3 x108 vp" 그룹은, 이들 토끼가 14일까지 항-인플루엔자 바이러스 항체를 생산하고 있고 그 양이 28일까지 증가함을 보여주었다. 이러한 HIA 분석은 등쪽 또는 복위에 더 낮은 용량(7.5 x 107)을 투여한 동물 또는 복위에서 더 높은 용량(3 x 108)을 투여한 동물에 의해 검출 가능한 항-인플루엔자 항체가 생성되었음을 나타내지 않았다. 따라서, 이 연구는 놀랍게도 본원에 개시된 면역원성 조성물을 투여하는 동안 비공이 위쪽으로 기울어지도록 하는 개체의 체위(즉, 배위)가 면역원성 조성물(예를 들어, 백신)/치료제의 비강내 투여를 통한 강한 면역원성 반응의 생성과 상관관계가 있음을 보여준다.
실시예 5: 상이한 투여 체위에서 1회 또는 2회 용량으로 투여된 NasoShield의 안전성 및 면역원성에 대한 이중 맹검, 무작위, 위약 대조 연구
이 연구는 18~49세의 건강한 성인을 대상으로 NasoShield의 안전성과 면역원성을 평가하기 위한 무작위, 이중 맹검, 위약 대조 임상 1b상이다. 개체는 무작위화(1일차) 전 28일 이내에 스크리닝될 것이다. 모든 포함 기준을 충족하고 제외 기준에 해당하지 않고 서면 동의서를 제공한 약 42명의 개체를 등록하고 투여 체위(정상 좌위, 비공을 머리 위로 올린 좌위 또는 앙와위) 및 투여 횟수(1일차에 단일 용량 또는 1일차 및 29일차에 2회 용량)에 따라 정의된 3개의 병행그룹으로 무작위 배정하여 NasoShield (1x1011 vp) 또는 식염수 위약 0.5 mL 를 비강내 투여하였다. 다음 세 그룹 각각 내에서 개체는 5:2 비율로 맹검 방식으로 무작위 배정되어 NasoShield 1Х1011 vp 또는 식염수 위약을 비강 내 스프레이로 투여받는다. 그룹 1: 정상 좌위에서 1일째 NasoShield 1Х1011 vp 또는 식염수 위약 및 29일째 식염수 위약 (용량 유지 시간 없음); 그룹 2: 3분 동안 비공을 머리 위로 올린 (즉, 비공이 위쪽으로 기울어짐) 변형된 좌위에 이어 27분 동안 정상 좌위에서 1일째 및 29일째에 NasoShield 1Х1011 vp 또는 식염수 위약; 및 그룹 3: 30분 동안 앙와위 (등을 대고 비공이 위로 향하게 함)에서 1일째 및 29일째에 NasoShield 1Х1011 vp 또는 식염수 위약. 1일째에 NasoShield를 받은 그룹 1의 개체는 29일째에 위약을 받고, 1일째에 위약을 받은 개체는 29일째에도 위약을 받는다. 1일째에 NasoShield를 받은 그룹 2 및 3의 개체는 29일째에 NasoShield를 받고 1일째에 식염수 위약을 받은 개체는 29일째에 식염수 위약을 받는다. 개체는 투여 후 30분 동안 코를 풀지 않도록 지시받는다.
그룹 1: 정상 좌위. 개체를 의자에 앉히고, 발을 바닥에 평평하게 하고 똑바로 세운다(아래 사진 1). 눈높이에 있는 물체에 눈을 똑바로 초점을 맞추고 머리가 정면을 향하도록 개체에게 지시한다. 개체에게 이 자세를 유지하도록 지시한다. 즉, 투여 중에 머리를 앞 또는 뒤로 기울이지 않도록 한다. 투여가 완료되면 추가 유지 시간이 필요하지 않다. 개체는 30분 동안 코를 풀지 않도록 지시해야 한다.
그룹 2: 비공을 머리 위로 올린 좌위. 개체가 목을 완전히 펴거나 머리를 뒤로 젖힐 수 있는 의자, 즉 등이 낮은 의자에 앉힌다. 머리를 뒤로 젖히거나 턱을 최대한 편안하게 들어올리도록 지시하고 시선은 천장에 집중한다. 개체에게 이 자세를 유지하도록 지시한다. 즉, 투여 중 또는 투여 후 3분 동안 앞으로 기울이거나 턱을 내리거나 머리를 움직이지 않도록 한다. 필요한 경우 3분 동안 자세를 유지하기 위해 개체는 목 뒤에 수건을 잡고 지지할 수 있다. 3분 후 개체는 정상 좌위로 돌아와 27분 동안 유지해야 한다. 개체는 30분 동안 코를 풀지 않도록 지시해야 한다.
그룹 3: 앙와위. 개체를 베개 없이 평평한 누운 자세(등을 대고 눕는 자세)로 둔다. 개체에게 머리를 정면으로 향하게 하고 눈은 바로 위의 천장에 정면으로 초점을 맞추도록 지시한다. 개체에게 이 자세를 유지하도록 지시한다. 즉, 투여 중 또는 투여 후 30분 동안 앉거나 머리를 돌리지 않도록 한다.
이 연구의 주요 목적은 1x1011 바이러스 입자(vp)의 비강 내 스프레이로 투여된 NasoShield의 안전성을 투여 횟수 및 투여 체위의 함수로 평가하는 것이다. 이 주요 목적은 다음을 결정함으로써 측정된다. 1) 반응원성(Reactogenicity): 국소 사건이 있는 개체의 수 및 비율(%): 백신접종 후 7일 동안 코 자극, 재채기, 코 울혈, 코피, 인후통, 후각 변화, 미각 변화, 시력 변화, 눈 통증; 및, 2) 이상 사례(Adverse event, AE): 1일부터 57일까지 AE가 있는 개체의 수 및 비율(%); 1일부터 210일까지 의사가 검진한 이상사례 (MAAE), 중대한 이상사례 (SAE) 및 신규-발병 만성 질환 (NCI).
이 연구의 첫 번째 이차 목적은 1×1011 vp의 비강 내 스프레이로 투여된 NasoShield의 체액성 면역원성을 투여 횟수 및 투여 체위의 함수로 평가하는 것이다. 이 첫 번째 이차 목적은 다음을 결정함으로써 확인된다: 1) 기하평균역가(GMT)(로그-변환 역가의 평균의 역대수(antilog)), 기하평균비(GMR)(동일한 용량 그룹 내에서 백신접종 후 및 백신접종 전 GMT의 비율) 및 반응자 비율을 결정함으로써 혈청에서 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)에 의해 측정된 항-보호항원(PA) 면역글로불린 G (IgG) 역가; 및, 2) 혈청에서 독소 중화 분석(TNA)에 의해 측정된 50% 중화인자(NF50) 및 50% 유효 희석배수(ED50) 역가.
이 연구의 두 번째 이차 목적은 1x1011 vp의 비강 스프레이로 투여된 NasoShield에 대한 점막성 면역 반응을 투여 횟수 및 투여 체위의 함수로 평가하는 것이다. 이 두 번째 이차 목적은 ELISA (GMT GMR)에 의해 측정된 항-PA 면역글로불린 A (IgA) 역가를 결정함으로써 확인된다.
이 연구의 세 번째 이차 목적은 투여전 아데노바이러스 혈청형 5(Ad5) 혈청 항체 수준이 NasoShield의 면역원성에 미치는 영향을 투여 횟수 및 투여 체위의 함수로서 평가하는 것이다. 이 세 번째 이차 목적은 혈청에서 미세중화에 의해 측정된 투여전 Ad5 항체 수준을 기반으로 항-PA IgG, TNA NF50, 항-PA IgA GMT 및 GMR을 결정함으로써 확인된다.
이 연구의 네 번째 이차 목적은 항-Ad5 면역의 유도를 투여 횟수 및 투여 체위의 함수로서 측정하는 것이다. 이 네 번째 이차 목적은 혈청에서 미세중화에 의해 측정된 Ad5 항체 GMT를 결정함으로써 확인된다.
개체는 시험 전반에 걸쳐 다양한 시간에 표적화되고 증상-중심의 신체 검사를 받는다(예를 들어, 부작용(AE)을 연구하기 위해). 면역원성 시험(ELISA에 의한 항-PA IgG 역가 측정 및 TNA에 의한 NF50 및 ED50 역가 측정)을 위한 혈청 샘플을 15, 29, 57, 91 및 210일째에 얻는다. 미세중화 분석에 의한 Ad5 역가 측정을 위해 29일째 및 57일째에 추가 혈청 샘플을 채취한다. 4, 8, 15, 36 및 57일째에 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 분석에 의한 복제 결핍(RD)-Ad5 벡터 쉐딩(shedding)의 검출을 위해 비인두 스왑으로 15, 36, 57일째에 ELISA에 의해 항-PA IgA를 채취한다. 1일 또는 29일째 방문에서 NasoShield/위약 용량을 투여하기 전 14일 동안 스왑을 수집하지 않는다. 면역원성 및 안전성 데이터에 대한 두 가지 중간 분석(AE, 반응원성, 병용 약물 및 백신, 활력 징후, ECG, 실험실 데이터 및 바이러스 배양 결과 목록 포함) 이 수행된다: 첫 번째는 29일째 방문까지의 모든 데이터가 모든 개체에 대해 이용가능하고, 두 번째는 57일째 방문까지의 모든 데이터가 모든 개체에 대해 이용가능할 때 수행된다.
이 연구의 표본 크기는 통계적 검정력보다는 다른 투여 체위에서 제공되는 비강내 스프레이로 투여되는 NasoShield의 안전성 및 면역원성 프로파일을 검토하기에 적절하고 합리적인 것으로 선택된다. 표본 크기는 반응원성의 초기 추정을 허용한다. 총 30명의 개체가 NasoShield를 투여받는 경우, 연구는 5.2%의 비율로 발생하는 최소 1개의 AE를 감지할 확률이 80%이다. NasoShield를 투여받은 30명의 개체 중 SAE가 관찰되지 않는 경우, SAE 발생률에 대한 95% 신뢰구간(CI)의 단측 상한에 대한 근사치는 11.6%가 될 것이다. 다음 분석 집단이 사용된다: 1) 안전성 집단: 사전 동의를 제공하고, 무작위화되고, 연구용 제품(IP)의 최소 1회 용량을 받는 모든 개체; 2) 평가가능한 집단: 1일째 및 29일째에 항-PA IgG 결과를 갖는 안전성 집단의 모든 개체; 및, 3) 프로토콜별(PP) 집단: 프로토콜에 따라 시험 제품의 할당된 용량을 받은 안전성 집단의 모든 개체; 1일, 15일 및 29일째에 항-PA IgG 결과가 나타난다; 데이터베이스 잠금 이전에 후원자가 결정한 1차 면역원성 결과에 영향을 미치는 주요 프로토콜 편차가 없을 것이다. 1차 면역학 분석은 PP 집단을 기반으로 하는 민감도 분석과 함께 평가가능한 집단을 사용하여 수행된다. 누락된 데이터에 대한 전가는 수행되지 않는다. 데이터는 분석 전에 적절하게 변환된다. 기준선은 1일차에 IP 투여 전에 수집된 샘플로 정의된다. NasoShield에 대한 체액성 면역 반응을 평가하기 위한 주요 변수는 항-PA IgG 및 TNA NF50 및 ED50 역가이다. 다음 측정값과이들의 95% CI는 그룹별로 요약되어 있다: 기준선 및 백신접종 후 15, 29, 57, 91 및 210일째의 GMT; 15, 29, 57, 91 및 210일째의 GMR; 및 15, 29, 57, 91 및 210일째의 반응자 비율. 점막 반응(항-PA IgA)은 기준선 및 15, 36 및 57일째에 백신접종 후 기하평균으로 요약된다. 29일과 57일째에 NasoShield의 면역원성에 대한 투여전 Ad5 혈청 항체 수준의 효과의 경우, 공변량으로서 기준선 Ad5 역가를 이용한 공분산 분석(ANCOVA)을 사용하여 분석을 수행한다. 안전성 분석은 안전성 집단을 사용하여 수행된다. 국소 사건 및 전신 사건이 있는 개체의 수(백분율, 95% CI)는 그룹별로 요약된다. 반응원성 사건은 심각도에 따라 요약된다. 1일차부터 57일차까지 AE(MAAE, NCI, SAE 포함)가 있는 개체의 수(백분율, 95% CI)는 각각의 국제의약용어(MedDRA) 기관계 대분류 및 대표 용어에 대해 그룹별로 요약되어 있다. 1일부터 210일까지 MAAE, NCI 및 SAE가 있는 개체의 수(백분율)는 유사한 방식으로 요약된다. 중증도 및 IP와의 관계에 따른 AE가 있는 개체의 수(백분율, 95% CI)도 요약된다. 연속 매개변수(안전성 실험실 테스트 및 활력 징후)에 대한 요약 통계는 그룹별로 다음과 같이 표시된다: 백신접종 전, 백신접종 후, 및 백신접종 전에서 백신접종 후 평가로의 변화. 연구 백신접종 후 백신접종후 안전성 실험실 값 또는 활력징후 값이 새로 비정상으로 기록된(즉, 기준 값에 비해 독성 등급이 증가하고 중증도 등급이 중등도 이상인 사건) 개체의 수 및 백분율은 표로 만든다. 중증도 등급에 따라 각 개체의 백신접종 전 및 백신접종 후 안전성 실험실 값을 교차표로 만든 교대표가 준비된다. 정상, 임상적으로 유의하지 않은 비정상, 및 임상적으로 유의한 ECG 해석으로 비정상인 개체의 수 및 백분율에 대한 요약이 제시된다. RD-Ad5 벡터의 쉐딩의 경우, 데이터는 중앙 카피 수와 함께 시점별 카운트 및 퍼센트 양성으로 요약된다. Ad5 쉐딩의 중앙값, 사분위수 범위, Ad5 쉐딩의 최소 및 최대 기간은 각 NasoShield 그룹과 모든 NasoShield 용량 그룹을 결합하여 결정된다.
시험 종료점에는 안전성 정보가 포함될 수 있으며, 예를 들어 NasoShield는 여기에서 테스트한 모든 체위(예를 들어, 정상 좌위, 변형된 좌위 및 배위/앙와위)에서 인간에게 투여하기에 안전하다는 정보가 포함될 수 있으며, 변형된 좌위에서 NasoShield 의 투여(그룹 2)는 항-PA 체액성 면역원성(첫 번째 이차 목표에 따라) 및 항-PA 점막 면역 반응(두 번째 이차 목표에 따라)을 초래하고, 이러한 측정값이 그룹 1 (정상 좌위) 또는 그룹 3 (앙와위)에 비해 그룹 2 에서 우수함이 입증될 수 있다. NasoShield의 면역원성에 대한 투여전 Ad5 혈청 항체 수준은 허용 가능한 것으로 확인될 수 있는데(세 번째 이차 목표에 따라), 이는 특히 그룹 2에서 NasoShield에 의해 유도된 항-PA 면역 반응의 발달을 크게 방해하지 않음을 의미한다. 이 시험은 또한 NasoShield에 의해 유도된 항-Ad5 면역 유도가 있는 경우 허용 가능함을 보여줄 수 있는데(네 번째 이차 목표에 따라), 이는 특히 그룹 2에서 NasoShield에 의해 유도된 항-PA 면역 반응의 발달을 크게 방해하지 않음을 의미한다.
실시예 6: 초기 코로나바이러스 감염성 질환 2019 (COVID-19) 환자의 임상 악화 예방을 위한 NasoVAX
본 실시예는 초기 COVID-19 (SARS-CoV-2에 의해 유발된 질환) 환자에서 임상적 악화를 예방하는 데 있어 복제 결핍 아데노바이러스 벡터(전이유전자를 발현하거나(예를 들어, NasoVAX)가 발현하지 않는(예를 들어, AdE))의 효과를 평가하기 위한 임상 시험 설계를 제공하는 것을 주요 효능 목표로 삼는다. 이 연구의 이차 효능 목표는 안정시 말초 산소 맥박 포화도(SpO2) 및 안정시 맥박수의 변화 및/또는 입원율, 산소 보충 및 기계적 환기에 대한 NasoVAX의 영향으로 표시되는, COVID-19의 중증도에 대한 NasoVAX의 영향을 평가하는 것을 포함한다.
일차 효능 종료점은, 가정 추적 또는 입원 동안 2회의 연속 측정에서 이동식 맥박 산소 측정법(pulse oximetry)에 의해 결정된 안정시 SpO2의 기준선으로부터 적어도 약 4.0% 감소로 정의되는, "임상적 악화"가 있는 환자의 비율을 포함할 수 있다. 2차 효능 종료점은 비-제한적인 다음의 예들을 측정함으로써 결정할 수 있다. 1) 다음 측정에 의해 평가된 치료 후 COVID-19의 최대 중증도: 14일의 자택 추적 기간 또는 입원 동안 스크리닝 시 안정시 SpO2의 기준선으로부터 안정시 SpO2의 평균 감소, 14일의 자택 추적 기간 또는 입원 동안 스크리닝 시 기준선으로부터의 안정시 맥박수의 평균 증가, 필요한 산소 공급 수준에 따라 42일째에 입원이 필요한 환자의 비율(산소 공급 없음, 비강 캐뉼라를 통한 산소 공급, 고유량 장치 또는 비침습적 환기를 통한 산소 공급, 및/또는 기계적 환기); 및/또는 2) 42일째까지 모든 원인으로 인한 사망률.
이 연구의 주요 안전성 목표는 초기 COVID-19 환자에서 NasoVAX의 안전성과 내약성을 평가하는 것이다. 안전성 종료점에는 이상 사례의 발생률 및 심각도, 구강 온도, 해열제 및 기관지 확장제의 사용, 입원 기간 및/또는 중환자실(ICU) 입원 기간이 포함될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
초기 COVID-19 환자 약 96명이 등록되어 중증 COVID-19에 대한 연령 및 위험 인자로 정의된 3개의 연속 코호트에서 NasoVAX 또는 위약에 1:1로 무작위 배정된다. 코호트 1에는 35-49세의 사람들이 포함되며 위험 요소는 허용되지 않는다. 코호트 2에는 35세 이상인 사람이 포함되며 위험 요소는 허용되지 않는다. 코호트 3에는 위험 요소가 허용된 35세 이상의 사람이 포함된다. 각 코호트에는 각각 약 20명, 28명 및 48명의 환자가 포함되며 각 코호트 내에서 NasoVAX 그룹 또는 위약에 1:1로 무작위 배정된 환자가 있다. 코호트 2는 35-64세 및 65세 이상의 연령 그룹으로 계층화된 반면 코호트 3은 연령 그룹(35-64세, 65세 이상) 및 동반 질환(하나 이상의 위험 요소 존재, 위험 요소가 없음)으로 계층화된다. 이 시험에는 초기 스크리닝 단계에서 식별된 다음 기준(위험 요인일 수 있음) 중 하나 이상을 충족하는 환자는 포함되지 않는다: 임신 또는 수유 중인 여성 또는 향후 3개월 동안 아이를 잉태할 계획이 있는 여성; 실내 공기에서 안정시 호흡수 20회/분 초과 또는 안정시 맥박수 125회/분 이상; 치료 의사가 향후 24-48시간 이내에 입원하게 될 것이라고 생각하는 급속하게 악화되는 경과; 만성 폐쇄성 폐 질환 및 천식을 포함한 모든 만성 폐 질환 또는 COVID-19와 무관하게 악화될 수 있는 기타 호흡기 질환; 체질량 지수 40 kg/m2 초과로 정의되는 중증 비만; 울혈성 심부전을 포함하나 이에 제한되지 않는 중증 심혈관 질환의 병력, 관상동맥 질환, 선천성 심장 질환, 심근병증, 또는 폐고혈압, 당뇨병, 만성 또는 현재의 전자담배 또는 흡연, 투석이 필요한 만성 신장 질환, 만성 바이러스 간염을 포함하나 이에 제한되지 않는 만성 간 질환, 비알코올성 지방간염 또는 모든 원인의 간경변, 겸상 적혈구 질환 및 지중해빈혈을 포함한 헤모글로빈 장애; 벨 마비의 병력(history of Bell's Palsy); 만성 비염의 병력, 비중격 결손, 구개열, 비용종, 또는 미용 코성형 이외의 코 수술과 같은 비강 내 약물의 적합성에 영향을 미칠 수 있는 비강 병태; 지난 4개월 이내에 히드록시클로로퀸, 지난 9개월 동안 클로로퀸, 또는 지난 30일 이내에 COVID-19에 대한 기타 연구 약물 사용; 잘 조절되지 않는 HIV를 포함하나 이에 국한되지 않는 면역 저하와 관련된 병태의 병력, 또는 경구 또는 정맥내 코르티코스테로이드, 알킬화 약물, 항 대사물질, 세포독성 약물, 방사선, 면역-조절 생물학적 제제(IL-6, IL-12, 야누스 키나제 억제제 또는 길항제 포함)를 포함하나 이에 국한되지 않는 면역계에 영향을 미치는 것으로 알려진 치료, 및 스크리닝 후 30일 이내의 암 치료 또는 이 연구 참여 후 6개월 이내에 예상되는 사용; 및/또는 임상시험자의 판단에 따라 프로토콜 준수, 안전성 평가(반응원성 포함) 또는 사전 동의를 제공하는 환자의 능력을 방해하거나 금기로 작용할 의학적, 정신적 또는 사회적 상태 또는 직업적 또는 기타 책임; 스크리닝 후 4개월 이내에 하이드록시클로로퀸 치료 또는 스크리닝 후 9개월 이내에 클로로퀸 치료; 스크리닝 후 30일 이내에 경구 또는 정맥내 코르티코스테로이드, 알킬화 약물, 항 대사물질, 세포독성 약물, 방사선, 면역 조절 생물학적 제제를 포함하되 이에 국한되지 않는 면역 체계에 영향을 미치는 것으로 알려진 모든 치료; 스크리닝 후 30일 이내 및 연구 약물 투여 후 14일까지 생 백신(예를 들어, 생 인플루엔자 백신 또는 생 여행 백신접종); 및/또는 스크리닝 후 30일 이내에 연구용 약물 또는 치료의 수령. COVID-19로 인해 환자가 입원하는 경우 병용 약물에 대한 제한은 없다. 각 환자는 약 4주(28일)까지 연구에 참여했다. 28일이 끝날 때까지 입원 상태를 유지하는 환자는 42일째, 사망 또는 퇴원 중 더 빠른 날짜까지 추적된다.
NasoVAX는 전이유전자 삽입물(IND 21210에 따라 연구 중인 연구용 제제; AdcoCA09.HA로도 알려짐)을 통해 A/California/04/2009(H1N1)-유사 인플루엔자 균주의 헤마글루티닌(HA) 표면 항원을 발현하는 E1/E3-결손된, 복제-결핍, 아데노바이러스 혈청형 5 (RD-Ad5) 벡터이다. 실시예 4a 참조. NasoVAX 면역원성 조성물("의약품")은 2mL USP 유형 1 붕규산 유리 바이알에 0.7mL의 의약품을 포함하는 일회용 용량 바이알에 동결된 현탁액으로 공급되는 NasoVAX 벡터 입자의 현탁액으로 구성된다. 동결된 현탁액은 1 x 1011 바이러스 입자(vp)의 공칭 용량을 전달하도록 구성된다. NasoVAX 약물 제품의 0.5mL 용량(실온, 약 25℃로 해동)을 투여하여 개체가 앙와위로 각 비공에 0.25mL의 비강 스프레이를 전달한 후, 앙와위에서 투여 후 30분의 투여-후 기간을 갖고, 바람직하게는 투여 후 충분한 시간(예를 들어, 2시간) 동안 관찰하는 것이 바람직하다. 용량은 약 1 x 1011 vp를 전달하도록 설계되었으며 Teleflex LMA MAD300 비강내 점막 분무 장치(Nasal Intranasal Mucosal Atomization Device)가 장착된 1mL Luer-lock 주사기를 사용하여 투여된다. 2개의 0.1mL 용량 분할기가 주사기 플런저에 적용되어 분할 용량을 가능하게 한다 (즉, 각 비공에 1/2 용량, 이는 멸균 Teleflex LMA MAD 분무기가 Luer-lock에 부착되어 0.25mL의 비강 내 각 비공에 스프레이를 전달함을 의미함). 위약으로서, 시판되는 비강내 0.9% 염화나트륨 주사용액을 NasoVAX 용량과 동일한 주사기에 넣어 NasoVAX 용량과 동일한 방법으로 투여한다.
의약품 또는 위약 투여 후 첫날("제1일") 연구 센터에서 퇴원하기 전에 환자에게 다음이 제공된다: 안정시 SpO2 및 안정시 맥박수를 원격으로 측정하기 위해 환자에게 제공될 태블릿과 연결되는 핑거팁 맥박 산소 측정기 (환자는 장치 및 태블릿 사용에 대해 교육받음); 구강 온도 측정용 디지털 온도계; 및 위의 측정을 수행하고 웹-기반 전자 다이어리(eDiary)에 액세스하여 작성하는 방법에 대한 지침서. 제1일 퇴원 후, 환자는 연구 기간 동안 집으로 돌아간다. 환자는 의약품 또는 위약 투여 후 14일("제14일") 또는 입원 중 먼저 도래하는 때까지 COVID-19 증상 악화를 경험할 때 언제든지 안정시 SpO2, 안정시 맥박수 및 구강 온도를 매일 2회 09:00 및 16:00에 측정하고 각 시점을 1시간 간격으로 측정한다. 환자는 같은 기간 동안 매일 코로나19 관련 증상을 기록해야 한다. 연구 센터 직원은 이 기간 동안 매일 전화로 환자에게 연락하여 환자의 임상 상태를 문서화하고, 병용 약물을 기록하고, AE를 모니터링한다. 14일 후, 추가 14일 동안 연구 센터 직원은 약 7±2일마다 전화를 통해 환자에게 연락하여 환자가 입원했는지 확인하고 14일까지 해결되지 않은 AE를 추적한다. 환자가 언제든지 입원하는 경우, 해당하는 경우 입원/퇴원, ICU 입원/퇴원, 환기 요구 사항 및 날짜와 시간을 기록한다. 28일이 끝날 때까지 입원 상태를 유지하는 환자는 42일째, 사망 또는 퇴원 중 더 빠른 날짜까지 추적된다.
이중 맹검 설계를 포함하여 편향을 최소화하기 위해 이 연구에서 여러 설계 기능을 사용했으며, 환자는 1:1 기준으로 NasoVAX 또는 위약을 투여받도록 무작위로 할당되었다. 환자의 무작위 배정은 편향을 피하고 알려진 위험 요소와 알려지지 않은 위험 요소가 치료 그룹 간에 고르게 분포되도록 한다. 위약 대조군의 사용은 활성 치료군과 대조군 사이의 전향적 비교를 가능하게 한다. 연구 센터에서 SARS-CoV-2에 대한 노출 위험을 완화하고 개인 보호 장비의 사용을 줄이기 위해 연구 약물 투여 후 모든 데이터는 전자 또는 전화를 통해 원격으로 수집된다; 참가자가 평가를 위해 방문이 필요한 증상 또는 AE의 변화를 경험하지 않는 한 백신접종 후 직접 방문이 필요하지 않는다. 제1일에 연구 약물 투여 후, 환자는 원격으로 평가된다. 연구 설계는 COVID-19 팬더믹 동안 임상 시험 수행에 대한 2020년 3월 FDA 지침(미국 식품의약국 2020)을 준수한다.
이 임상 시험에서 생성된 데이터를 연구하는 데 사용되는 통계적 방법에는 해당 기술 분야의 숙련자에 의해 충분하다고 간주되는 검정력 및 표본 크기 가정이 포함된다. 위에서 설명한 이 연구를 위해 선택한 표본 크기는 연구 목표를 충족하기에 적절한 것으로 간주되며 통계적 유의성을 고려하지 않고 선택되었다. 통계 분석의 경우 안전성 분석 세트는 NasoVAX를 투여받는 모든 환자이다; 수정 치료 의향(mITT) 모집단은 모든 양의 NasoVAX를 투여받고 기준선과 기준선 이후 안정시 SpO2 측정이 최소 1회 있는 무작위 환자이다(환자는 받은 치료에 따라 분석됨); 프로토콜별(PP) 모집단은 올바른 치료 할당에 따라 임의의 양의 NasoVAX를 투여받고 14일째 또는 입원까지 안정시 SpO2 측정 결과의 80%가 하루 2회 결과인 무작위 환자이다. 기준선은 연구 약물 투여 전에 무작위화에 가장 가깝게 수집된 데이터로 정의된다. 안정시 SpO2 및 안정시 맥박수의 경우 기준선은 스크리닝 시 두 측정값의 평균으로 정의된다. 모든 분석 및 요약 통계는 모든 코호트에 걸쳐 풀링된 치료 그룹뿐만 아니라 코호트 전반에 걸쳐 치료 그룹(NasoVAX 또는 위약)별로 제공된다. 범주형 변수에 대한 숫자 및 백분율과 연속 변수에 대한 숫자, 평균, 표준 편차, 중앙값, 최소값 및 최대값을 포함한 기술 통계는 코호트 전반에 걸친 처리에 의해 제공된다. 환자를 NasoVAX 또는 위약에 1:1로 무작위 배정하고 코호트 1, 2 또는 3(위에 설명됨)으로 진행한다. 코호트가 오름차순으로 등록되며 코호트 1이 코호트 2보다 앞서고 코호트 2가 코호트 3보다 앞선다. 코호트 2는 35-64세 및 65세 이상의 연령 그룹으로 계층화된 반면 코호트 3은 연령 그룹(35-64세, 65세 이상) 및 동반 질환(하나 이상의 위험 요소 존재, 위험 요소가 없음)으로 계층화된다. 코호트 2와 3의 환자를 먼저 계층화한 다음 NasoVAX 또는 위약에 1:1로 무작위 배정한다. 35-49세 환자의 등록은 각 치료 부문의 무작위 모집단의 약 30%를 초과하지 않아야 한다. 효능 분석에서, 기술 통계는 기준선과 기준선 이후 효능 종료점 간의 차이를 평가하는 데 사용된다. 1차 분석을 위해, 14일의 자택 추적 관찰 또는 입원 기간 동안 평균 안정시 SpO2가 기준선에서 4.0% 감소한 것으로 정의된 "임상적 악화" 를 가진 환자의 비율을, Cochrane Mantel Haenszel 테스트를 사용하여 연령 그룹 및 위험 요인의 계층화를 고려하면서 단측 유의 수준 0.025에서 NasoVAX와 위약 간에 비교한다. 동일한 접근 방식이 본질적으로 범주형인 2차 또는 탐색적 평가변수에 적용된다. 민감도 분석은 연구 약물에 대한 반응에 대한 부위의 영향을 평가하기 위해 수행된다. 선형 및 로지스틱 회귀는 연령, 성별, 약물 및 의학적 동반 질환과 같은 기준 요소가 반응에 미치는 영향을 조사하는 데 사용된다. 기준선으로부터의 COVID-19 중증도 변화는 외래환자 맥박산소측정기에 의한 안정시 SpO2의 최대 감소 또는 안정시 맥박수 증가 및 자택 추적 관찰 중 COVID-19 증상(eDiary)으로 평가하고 반복되는 혼합 측정 모델을 사용하여 분석한다. 이 모델에는 치료, 주 및 방문별 치료 상호작용의 고정 효과와 기준선 수준의 연속 공변량이 포함된다. 이 모델은 환자 공분산 행렬 내에서 구조화되지 않은 것과 제한된 최대 가능도 추정 방법을 사용한다. 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법을 적용하여 안정시 SpO2 에서 시간 경과에 따른 치료 그룹 간의 변화를 비교한다. 연구 효능 종료점의 목적을 위해 안정시 SpO2 및 안정시 맥박수는 관찰된 데이터에서만 평가된다. 데이터가 누락된 경우 전가되지 않는다.
항원 전이유전자(예를 들어, NasoVAX)를 발현하거나 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터는 초기 COVID에 걸린 인간에게 앙와위에서 투여하기에 안전할 수 있고 그러한 환자에서 임상적 악화를 예방하는 데 효과적일 수 있다. 특정 구체예에서, 비강내 투여된 임의의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터(항원 전이유전자를 발현하거나 발현하지 않음)가 초기 감염 동안 COVID 증상 악화를 예방하기 위한 본 방법에 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 항원 전이유전자를 발현하거나 발현하지 않는 본원의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 비강내 투여는, 신속하게(예를 들어, 투여 후 24시간 이내, 또는 1-2일 이내) 바이러스 병원체에 대한 범-특이적 반응을 유도하여 병원체가 확인되거나 이해되기 전에 치료한다. 특정 다른 구체예에서, 항원 전이유전자를 발현하거나 발현하지 않는 본원의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 비강내 투여는 항바이러스제 또는 예방 백신과 동시에 사용된다. NasoVAX의 보호 효과는 호흡기 병원체에 대한 과도하고 병원성 면역 반응을 약화시키는 선천성 면역을 조절하는 생물학적 반응으로 볼 수 있다.
특정 실시 형태가 바람직한 실시 형태와 관련하여 설명되었지만, 변형 및 변경이 당해 분야의 통상의 기술자에게 일어날 것이라는 것을 이해해야 한다. 따라서, 첨부된 청구범위는 하기 청구범위에 속하는 이러한 모든 등가 변형을 포함하도록 의도된다.

Claims (89)

  1. 치료 용량의 병원체 유래의 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 경점막 투여(transmucosal administration)하는 방법으로서,
    상기 방법은 유효량의 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고,
    투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 투여 체위(dosing position)에 있고;
    이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도하고;
    선택적으로, 면역원성 조성물이 백신인, 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    포유동물 개체에게 약 5분 내지 약 30분에서 선택되는 투여후 유지 기간 동안 상기 투여 체위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  3. 바이러스 감염에 대해 인간에게 백신을 접종하는 방법으로서, 상기 방법은:
    유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 인간에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 인간으로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 인간은 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 인간의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및
    상기 인간에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하며,
    이로써 비강내 투여된 치료 용량이 인간에서 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  4. 인간에서 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서,
    유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 인간에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 인간으로의 항원을 포함하고, 비강내 투여 동안 인간은 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 인간의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및
    상기 인간에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하며,
    이로써 비강내 투여된 치료 용량이 인간에서 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체 또는 인간의 비공이 포유동물 개체 또는 인간의 머리 위로 올라가 있는 것인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료 용량의 약 20% 미만이 배액(drainage)을 통해 비강 외부로 떠나는 것인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 단일 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 각 비공에 분할 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    분할 용량이 다중 용량 비강내 전달 장치를 사용하여 투여되는 것인, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 프라임 용량 및 부스트 용량으로 제공되는 것인, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 프라임 용량 또는 부스트 용량으로서 이종 용량(heterologous dose)과 조합하여 투여 요법으로 제공되는 것인, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 이종 항원을 코딩하고 발현하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 것인, 방법.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 이종 항원을 코딩하지 않는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 것인, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 비-복제 아데노바이러스 벡터를 포함하는 것인, 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    아데노바이러스가 인간 아데노바이러스인, 방법.
  16. 제14항에 있어서,
    아데노바이러스가 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    아데노바이러스 벡터가 E1 및 E3 결손된 아데노바이러스 벡터인, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    유효량이 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 109개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 및 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 1011개 이상의 바이러스 입자(vp)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유류 개체 또는 인간은, 포유동물 개체 또는 인간에 대해 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 107개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 비강내로 투여받는 것인, 방법.
  20. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    병원체가 호흡기 병원체인, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    병원체가 바이러스인, 방법.
  22. 제21항에 있어서,
    바이러스가 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    코로나바이러스가 SARS-Cov, SARS-Cov-2, MERS, 인간 코로나바이러스 229E (HCoV-229E), OC43 (HCoV-OC43), NL63, 및 HKU1로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  24. 제21항에 있어서,
    바이러스가 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 감기 바이러스 및 홍역 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    감기 바이러스가 리노바이러스 또는 코로나바이러스인, 방법.
  26. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    병원체가 박테리아인, 방법.
  27. 제26항에 있어서,
    박테리아가 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  28. 제27항에 있어서,
    박테리아가 탄저균(Bacillus anthracis)인, 방법.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    항원이 탄저균 보호항원인, 방법.
  30. 제29항에 있어서,
    탄저균 보호항원이 PA83인, 방법.
  31. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    항원이 탄저균 치사인자인, 방법.
  32. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    병원체가 진균인, 방법.
  33. 제32항에 있어서,
    진균이 아스퍼질러스(Aspergillus)인, 방법.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    항원이 계절성 인플루엔자 바이러스 항원, 인플루엔자 A 바이러스 항원, 인플루엔자 B 바이러스 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는 인플루엔자 항원인, 방법.
  35. 제1항 내지 제22항 및 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    항원이 헤마글루티닌 (HA) 표면 단백질 인플루엔자 항원 또는 이의 단편인, 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서,
    치료 용량의 면역원성 조성물이 인간 개체에 대한 단일 용량 비강내 투여에 적합한 1가 인플루엔자 약학 제제를 포함하고,
    면역원성 조성물이:
    인간 개체에 코돈 최적화된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원을 함유하고 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량; 및
    약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함하고,
    상기 유효량은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 혈구응집반응 억제 분석 (hemagglutination inhibition assay, HAI) 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성된 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  37. 제36항에 있어서,
    a) 상기 제제는 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HAI 항체 역가로 인간 개체에게 혈청보호를 제공하도록 구성되며, 선택적으로 상기 HAI 항체 역가는 투여 후 50 이상 및/또는 28일 이내이고;
    b) 상기 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이고;
    c) 상기 제제가 보조제(adjuvant)를 포함하지 않고;
    d) 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이고;
    e) 상기 방법은 12개월 이상 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도하고;
    f) 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하고 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공하고; 및/또는
    g) 상기 면역 반응은 혈구응집반응 억제 분석 (hemagglutination inhibition assay, HAI)에 의해 측정되는, 방법.
  38. 제1항, 제2항 및 제5항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체가 반려 동물, 사육 동물, 식품- 또는 사료-생산 동물, 가축, 사냥감 동물, 경주 동물, 또는 스포츠 동물인, 방법.
  39. 제1항, 제2항 및 제5항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체가 소, 말, 토끼, 개, 고양이, 염소, 양 또는 돼지인, 방법.
  40. 제1항, 제2항 및 제5항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체가 인간 또는 인간 개체인, 방법.
  41. 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 경점막 투여(transmucosal administration)하는 방법으로서,
    상기 방법은 포유동물 개체에 코돈 최적화된 이종 항원을 함유하고 발현하거나 또는 함유하지 않고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물 개체에 비강내 투여하는 단계를 포함하고,
    투여 동안 상기 개체는 상기 포유동물 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 투여 체위에 있고;
    이로써 경점막 투여된 치료 용량이 보호 면역 반응을 유도하고;
    선택적으로, 면역원성 조성물이 백신인, 방법.
  42. 제41항에 있어서,
    포유동물 개체에게 약 5분 내지 약 30분에서 선택되는 투여후 유지 기간 동안 상기 투여 체위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  43. 바이러스 감염에 대해 인간에게 백신을 접종하는 방법으로서, 상기 방법은:
    유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 인간에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 인간으로의 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는, 108개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함하며, 비강내 투여 동안 인간은 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 인간의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및
    상기 인간에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하며,
    이로써 비강내 투여된 치료 용량이 인간에서 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  44. 인간에서 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은:
    유효량의 치료 용량의 면역원성 조성물을 인간에게 비강내 투여하는 단계로서, 상기 면역원성 조성물은 병원체로부터 인간으로의 이종 항원을 코딩하거나 코딩하지 않는, 108개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량의 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 포함하며, 비강내 투여 동안 인간은 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position)에 있고, 상기 인간의 비공이 위쪽으로 기울어져 있는, 단계; 및
    상기 인간에게 비강내 투여후 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하며
    이로써 비강내 투여된 치료 용량이 인간에서 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  45. 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체 또는 인간의 비공이 포유동물 개체 또는 인간의 머리 위로 올라가 있는 것인, 방법.
  46. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    약제학적 조성물의 약 20% 미만이 배액(drainage)을 통해 비강 외부로 떠나는 것인, 방법.
  47. 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 단일 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  48. 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 각 비공에 분할 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  49. 제48항에 있어서,
    분할 용량이 다중 용량 비강내 전달 장치를 사용하여 투여되는 것인, 방법.
  50. 제41항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 프라임 용량 및 부스트 용량으로 제공되는 것인, 방법.
  51. 제41항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물이 프라임 용량 또는 부스트 용량으로서 이종 용량(heterologous dose)과 조합된 투여 요법으로서 제공되는 것인, 방법.
  52. 제41항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    보호 면역 반응이 약 24시간 이내에 유도되는 것인, 방법.
  53. 제41항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    보호 면역 반응이 약 1 또는 2일 이내에 유도되는 것인, 방법.
  54. 제41항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    아데노바이러스가 인간 아데노바이러스인, 방법.
  55. 제41항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    아데노바이러스가 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 아데노바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  56. 제41항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
    아데노바이러스 벡터가 E1 및 E3 결손된 아데노바이러스 벡터인, 방법.
  57. 제41항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
    유효량이 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 109개 이상의 바이러스 입자(vp), E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 1010개 이상의 바이러스 입자(vp), 및 E1 및/또는 E3 결손 또는 파괴된 아데노바이러스 벡터의 1011개 이상의 바이러스 입자(vp)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  58. 제41항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 호흡기 병원체로부터 유래하는 것인, 방법.
  59. 제58항에 있어서,
    호흡기 병원체가 바이러스인, 방법.
  60. 제59항에 있어서,
    바이러스가 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  61. 제60항에 있어서,
    코로나바이러스가 SARS-Cov, SARS-Cov-2, MERS, 인간 코로나바이러스 229E(HCoV-229E), OC43(HCoV-OC43), NL63, 및 HKU1로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  62. 제59항에 있어서,
    바이러스가 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 감기 바이러스 및 홍역 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  63. 제62항에 있어서,
    감기 바이러스가 리노바이러스 또는 코로나바이러스인, 방법.
  64. 제58항에 있어서,
    호흡기 병원체가 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스 및 마이코플라스마로 이루어진 군으로부터 선택된 박테리아인, 방법.
  65. 제58항에 있어서,
    호흡기 병원체가 선택적으로 아스퍼질러스(Aspergillus)인 진균인, 방법.
  66. 제41항 내지 제58항 및 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 탄저균 보호항원, 선택적으로 PA83 및/또는 탄저균 치사인자인, 방법.
  67. 제41항 내지 제60항 및 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 인플루엔자 항원, 임의로 헤마글루티닌(HA) 표면 단백질 항원이고,
    a) 조성물은 인플루엔자 바이러스에 대한 투여 후 28일 이내에 40 이상의 HA1 항체 역가로 포유동물 개체에 혈청보호를 제공하도록 구성되며, 선택적으로 여기서 HA1 항체 역가는 투여 후 28일 이내 및/또는 50 이상이고;
    b) 상기 유효량은 109개 이상 또는 1010개 이상의 바이러스 입자(vp)이고;
    c) 상기 조성물이 보조제(adjuvant)를 포함하지 않고;
    d) 인플루엔자 바이러스 HA 항원은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래하고, 선택적으로 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 H1N1 및/또는 서브타입 H3N2이고;
    e) 상기 방법은 12개월 이상 동안 지속되는 혈청보호 면역 반응을 유도하고; 및/또는
    f) 상기 방법은 조합된 점막성, 체액성 및 T 세포 보호 면역 반응을 유도하여 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스 서브타입에 대한 보호를 제공하는, 방법.
  68. 제41항, 제42항 및 제45항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체가 반려 동물, 사육 동물, 식품- 또는 사료-생산 동물, 가축, 사냥감 동물, 경주 동물, 또는 스포츠 동물인, 방법.
  69. 제41항, 제42항 및 제45항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체가 소, 말, 토끼, 개, 고양이, 염소, 양 또는 돼지인, 방법.
  70. 제41항, 제42항 및 제45항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유동물 개체 또는 환자가 인간인, 방법.
  71. 제41항 내지 제67항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    유효량의 면역원성 조성물을 인간 개체의 비공에 비강내 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여 동안 인간 개체의 비공이 위쪽으로 기울어지고; 상기 유효량이 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 유도하는 것인, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 유효량이 약 109 vp 이상을 포함하는 것인, 방법.
  73. 제71항 또는 제72항에 있어서,
    면역원성 조성물이 인간 개체의 두 비공 사이에 대략 균일하게 분할된 2개 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  74. 제71항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간 개체가 투여 동안 앙와위에 있고 투여 후 적어도 약 30분 동안 앙와위를 유지하는 것인, 방법.
  75. 제71항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 인플루엔자 항원이고, 선택적으로 인플루엔자 항원이 헤마글루티닌(HA) 표면 항원인, 방법.
  76. 제71항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 코로나바이러스 항원이고, 선택적으로 코로나바이러스 항원이 SARS-Cov-2 항원인, 방법.
  77. 제71항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    복제 결핍 아데노바이러스 벡터가 이종 항원을 함유하거나 발현하지 않는 것인, 방법.
  78. 제71항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간 개체가 초기 코로나바이러스 감염 질환을 갖는 인간인, 방법.
  79. 제78항에 있어서,
    인간의 임상적 악화를 예방하는 방법.
  80. 제79항에 있어서,
    임상적 악화가 투여 후 2회의 연속 측정에서 맥박 산소 측정법(pulse oximetry)에 의해 결정된 안정시 SpO2의 기준선으로부터 적어도 약 4.0% 감소인, 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서,
    임상적 악화가, 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 안정시 SpO2의 기준선로부터 안정시 SpO2의 평균 감소, 투여 후 14일 동안 스크리닝 시 기준선으로부터의 안정시 맥박수의 평균 증가, 필요한 산소 공급 수준에 따른 투여 후 42일째에 입원이 필요한 환자의 비율, 및 투여 후 42일까지 모든 원인에 의한 사망률에 의해 평가된, 치료 후 COVID-19의 최대 중증도로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 특징을 측정함으로써 결정되는 것인, 방법.
  82. 제71항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
    호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응이 약 24시간 이내에 유도되는 것인, 방법.
  83. 제71항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
    호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응이 약 1일 내지 2일 이내에 유도되는 것인, 방법.
  84. 제1항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법이 상기 포유동물 개체 또는 인간에게 비강내 투여 후 30분 동안 변형된 좌위, 리클라이닝 체위 또는 앙와위를 유지하도록 지시하거나 유지시키는 단계를 포함하는, 방법.
  85. 치료 용량의 비-복제 바이러스 벡터화된 면역원성 조성물을 인간 개체에게 경점막 투여(transmucosal administration)하는 방법으로서,
    상기 방법은 인간 개체에 코돈 최적화된 이종 항원 코딩 서열을 함유하고 발현하거나 또는 함유하지 않고 발현하지 않는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터의 108 개 이상의 바이러스 입자(vp)의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 인간 개체에게 비강내 투여하는 단계를 포함하고,
    투여 동안 상기 인간 개체는 상기 인간 개체의 비공이 위쪽으로 기울어진 변형된 좌위(modified sitting position), 리클라이닝 체위(reclining position), 앙와위(supine position) 또는 기타 투여 체위에 있고;
    이로써 경점막 투여된 치료 용량이 호흡기 병원체에 대한 보호 면역 반응을 유도하는, 방법.
  86. 제85항에 있어서,
    호흡기 병원체가 오르토믹소바이러스; 파라믹소바이러스; 리노바이러스; 코로나바이러스; 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV); 감기 바이러스; 및 홍역 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서,
    복제 결핍 아데노바이러스 벡터가 인플루엔자 바이러스 항원 또는 코로나바이러스 항원으로부터 선택된 이종 항원을 함유하고 발현하는 것인, 방법.
  88. 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 SARS-Cov-2 항원인, 방법.
  89. 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
    이종 항원이 인플루엔자 항원인, 방법.
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