KR20220046565A - Egf(a) 유도체 및 n-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는 고형 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 EGF(A) 펩티드와 같은 PCSK9 억제제, 및 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 제조 방법 및 의약에 있어서 이들의 용도에 관한 것이다.

Description

EGF(A) 유도체 및 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는 고형 조성물
본 발명은 PCSK9 억제제 및 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는 고형 조성물, 이의 제조 방법, 및 의약에 있어서 이의 용도에 관한 것이다.
참조에 의한 서열 목록의 통합
"SEQUENCE LISTING"이라는 명칭의 서열 목록은 4 KB이고, 2020년 7월 1일에 생성되었으며, 참조로서 본원에 통합된다.
높은 LDL-C(저밀도 지단백 콜레스테롤) 수준 및 이상지질혈증은 널리 인지된 심혈관 질환의 원인이다.
스타틴(statin)은 25년 동안 이상지질혈증의 치료용으로 승인되어 왔다. 이러한 부류는 심혈관 사건을 허용 가능한 안전성 프로파일로 상당히 일관되게 감소시킨다는 것을 입증해 왔다. 베스트셀러 스타틴인 아토르바스타틴(LipitorTM)는 지금까지 세계에서 가장 많이 팔린 약물로서, 1996년부터 2012년까지 1,250억 달러 이상의 매출을 기록했다.
스타틴 및 다른 지질 저하제의 이용 가능성 및 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 환자들은 자신들이 목표로 하는 LDL-C 수준에 도달하지 못하고 심혈관 질환 발생의 고위험 상태로 남아있다. PCSK9(프로단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 타입 9)는 간 LDL-R(LDL 수용체) 분해를 촉진함으로써 간 LDL-R의 표면 발현을 감소시켜 결과적으로 LDL 입자를 제거한다. 역으로, PCSK9를 차단하면 LDL-C뿐만 아니라 다른 죽종형성 지단백(atherogenic lipoprotein)의 소실이 증가한다. 실제로, LDL 수용체는 LDL 이외의 죽종형성 지단백(예: 중간 밀도 지단백)과 잔류 입자의 소실에 기여한다. 중간 밀도 지단백 및 잔류 입자의 제거가 증가되면 LDL 감소에 의해 제공되는 것 이상으로 치료적 이점을 가질 수 있다.
스타틴은 SREBP2 전사 인자를 통한 LDL-R과 PCSK9 발현을 모두 증가시킨다. PCSK9의 발현이 증가하면 순환에서 스타틴이 LDL-C 제거에 미치는 영향을 감소시킬 수 있다.
LDL-R에 대한 PCSK9의 결합을 억제하여 LDL-R의 분해를 방지함으로써 스타틴의 효능이 강화된다. 종합하자면, PCSK9 억제는 지질 관리에 대한 신규한 접근법을 제공한다.
2개의 항PCSK9 항체인 알리로쿠맙(alirocumab)/프랄런트(Praluent)® 및 에볼로쿠맙(evolocumab)/레파타(Repatha)®는 고 수준의 LDL-C 치료용으로 승인되었다. 이들은 2주마다 1ml씩 피하 주사에 의해 투여된다.
LDL-R(LDL-R-(293-332))의 EGF(A)(표피 성장 인자 유사 도메인 A) 서열(40개 아미노산)은 PCSK9의 결합 부위로서 널리 인식되어 있다. 단리된 야생형 EGF(A) 펩티드는 낮은 μM 범위의 IC50으로 PCSK9가 LDL-R에 결합하는 것을 억제하는 것으로 나타났다(Biochemical and Biophysical Research Communication 375 (2008) 69-73 참조). 이러한 약한 효능으로 인해 EGF(A) 펩티드는 약학적으로 실제 사용할 수 없었다. 또한, 이러한 펩티드의 반감기는 치료적으로 사용하기에는 너무 짧을 것이 예상된다.
WO2012177741 및 J. Mol. Biol. (2012) 422, 685-696은 EGF(A)의 유사체 및 이의 Fc-융합물을 개시하고 있다.
연장된 반감기를 갖는 대안적인 EGF(A) 펩티드 기반 PCSK9 억제제가 WO2017/121850에 개시되어 있다. 이러한 약물의 유용성을 증가시키기 위해서는 적절한 경구 제형을 개발하는 것이 중요하다. 펩티드는 위장 계통에서 신속하게 분해되기 때문에 치료 펩티드의 경구 투여는 어렵다.
펩티드 화합물의 경구 생체이용률은 일반적으로 제한되지만, WO 2012/080471 및 WO 2013/139694에 기술된 바와 같이 세마글루티드에 대한 유용한 결과가 얻어졌다.
일 양태에서, 본 발명은 PCSK9 억제제 및 흡수 강화제 또는 전달제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 부형제는 아래 본원에 기술된 바와 같이 매우 높은 함량의 전달제 및 최소 함량의 추가 부형제를 포함한다. 제공된 조성물은 가속화된 용해를 나타내고, 이는 활성 약학적 성분의 신속한 흡수를 가능하게 한다.
본원에는 가속 용해를 나타내는 약학적 조성물이 기술되어 있으며, 따라서 경구 투여에 의한 PCSK9 억제제의 노출은 세마글루티드로 얻은 이전 데이터에 기초하여 예측할 수 있다. 본 발명자들은 PCSK9 억제제 조성물이 매우 높은 함량의 흡수 증강제와 최소 함량의 임의의 추가 부형제로 제조될 때 상기 조성물의 용해가 더 신속하에 발생한다는 것을 발견하였다.
일 양태에서, 본 발명은 전체 조성물에 대한 전달제의 중량비, 특히 조성물의 다른 부형제에 대한 전달제의 중량비가 매우 높은 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 PCSK9 억제제, 전달제, 및/또는 SNAC와 같은 흡수 강화제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 여기서 전달제/흡수 강화제는 조성물의 부형제의 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성한다.
일 구현예에서, 조성물은
a) 0.5~100 mg의 EGF(A) 유도체,
b) 20~1000 mg, 예컨대 50~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w)를 구성한다.
일 구현예에서, 본 발명은 PCSK9 억제제, 전달제, 및/또는 SNAC와 같은 흡수 강화제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 여기서 전달제/흡수 강화제는 조성물의 적어도 70%(w/w)를 구성한다.
추가 구현예에서, 조성물은 윤활제를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 조성물은
a) 0.5~100 mg의 EGF(A) 유도체,
b) 20~1000 mg, 예컨대 50~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
c) 0.5~50 mg, 예컨대 1~30 mg의 윤활제를 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w)를 구성한다.
일 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 약학적 조성물을 제조하는 방법, 예컨대 다음의 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다:
a) 전달제, PCSK9 억제제, 및 임의로 윤활제를 포함하는 혼합물을 과립화하는 단계 및
b) 단계 a)에서 수득된 과립을 정제로 압축하고, 압축 이전에 추가의 윤활제를 과립에 선택적으로 첨가하는 단계.
추가 양태에서, 본 발명은 예컨대 지질 파라미터를 개선하고/하거나 심혈관 질환을 예방하기 위한 의약에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 조성물 또는 과립에 관한 것으로서, 여기서 상기 조성물은 경구 투여된다.
추가 양태에서, 본 발명은 지질 파라미터를 개선하고/하거나 심혈관 질환을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 본원에서 정의된 바와 같은 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 조성물은 정제이고 경구 투여된다.
도 1은 시험 조성물 1 대비 시험 조성물 2, 3, 5, 6, 및 7의 신속한 용해를 보여준다.
본 발명의 일 양태는 PCSK9 억제제 및 흡수 강화제 또는 전달제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 조성물은 경구 투여에 적합한 형태, 예컨대 정제, 봉지(sachet) 또는 캡슐일 수 있다. 일 구현예에서 조성물은 경구 조성물, 또는 경구 약학적 조성물과 같은 약학적 조성물이다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물은 아래 본원에 기술된 바와 같이, 높은 함량의 전달제 및 최소 함량의 추가 부형제를 포함한다. 제공된 조성물은 가속화된 용해를 나타내고, 이는 활성 약학적 성분의 신속한 흡수를 가능하게 한다.
PCSK9 억제제
본원에서 사용되는 용어 "PCSK9 억제제"는 PCSK9가 인간 저밀도 지단백질 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 완전히 또는 부분적으로 방지하는 화합물을 지칭한다.
EGF(A) LDL-R(293-332) 펩티드는 PCSK9에 결합하지만, PCSK9에 비교적 약하게 결합하는 탓에 PCSK9 억제제로 간주되지는 않는다. EGF(A) 유사체가 PCSK9를 억제하는 능력은 Ki로서 보고된 EGF(A) 유사체 또는 EGF(A) 유사체를 포함하는 화합물의 겉보기 친화도를 제공하는 ELISA 검정(예컨대 본원의 검정 I)에서 측정할 수 있다. 따라서, 낮은 Ki는 WO2017/121850에 기술된 바와 같이 강한 억제 기능을 갖는 화합물의 특징이다. LDL-R과 PCSK9의 상호작용을 억제하는 능력에 기초하여, 이러한 화합물들은 PCSK9 억제제로서 지칭된다. WO2017/121850에 기술된 소견에 기초하여, 적합한 PCSK9 억제제는 8 nM 미만, 예컨대 5 nM 미만의 Ki를 갖는다. 일 구현예에서, PCSK9 억제제는 약 0.5~8 nM, 또는 예컨대 0.5~5 nM 또는 예컨대 1.0~4 nM의 Ki를 갖는다. Ki를 결정하는 데 적합한 검정은 본원에서 검정 I에 기술되어 있다.
일 구현예에서, PCSK9 억제제는 적어도 EGF(A) 301L과 비슷한 억제 기능을 갖는다. 일 구현예에서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 301L과 비슷한 PCSK9 억제 기능을 갖는다. 따라서, 본원에 기술된 검정 I과 같은 주어진 검정에서,
Figure pct00001
비율은 바람직하게는 2 미만, 예컨대 1.5 미만, 예컨대 1.2 미만이다. 일 구현예에서, 상기 비율은 최대 1.0, 예컨대 최대 0.8, 예컨대 최대 0.7, 예컨대 최대 0.6, 또는 최대 0.5이다. 일 구현예에서,
Figure pct00002
비율은 2.0~0.2, 예컨대 1.5~0.5 또는 예컨대 1.2~0.8이다.
일 구현예에서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 301L과 비슷한 억제 기능을 갖는다. 일 구현예에서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 301L, 309R, 310K와 비교해 개선된 PCSK9 억제 기능을 갖는다. 따라서, 본원에 기술된 검정 I과 같은 주어진 검정에서,
Figure pct00003
비율은 바람직하게는 2 미만, 예컨대 1.5 미만, 예컨대 1.2 미만이다. 일 구현예에서, 상기 비율은 최대 1.0, 예컨대 최대 0.8, 예컨대 최대 0.7, 예컨대 최대 0.6, 또는 최대 0.5이다. 일 구현예에서,
Figure pct00004
비율은 2.0~0.2, 예컨대 1.5~0.5 또는 예컨대 1.2~0.8이다.
일 구현예에서, PCSK9 억제제는 추가로 후술하는 것과 같은 EGF(A) 펩티드 유사체를 포함한다.
EGF(A) 화합물
용어 "EGF(A) 화합물"은 서열번호 1에 의해 정의된 바와 같은 wt-LDL-R(293-332)을 포함하는 EGF(A) 펩티드 및 이의 유사체를 포함하는 화합물을 일반적으로 지칭하도록 본원에서 사용된다. 용어 EGF(A) 화합물은 EGF-(A) 펩티드의 유도체 및 이의 유사체를 포함하며, 본원에 기술된 것과 같은 치환기를 갖는 EGF(A) 펩티드 유사체 EGF(A) 화합물의 전형적인 예이다.
EGF(A) 펩티드
예를 들어, 본 발명의 맥락에서 사용된 것과 같은 용어 "펩티드"는 아미드(또는 펩티드) 결합에 의해 상호 연결된 일련의 아미노산을 포함하는 화합물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 펩티드는 펩티드 결합에 의해 상호 연결된 아미노산으로 구성된다.
본 발명의 펩티드는 적어도 35개, 예컨대 36, 37, 38, 39, 또는 적어도 40개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 펩티드는 36개, 예컨대 38 또는 40개의 아미노산으로 이루어진다. 추가의 특정 구현예에서, 펩티드는 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개의 아미노산으로 이루어진다.
N-말단 및 C 말단 신장(elongations)으로서 본원에서 지칭되는 부가 아미노산이 존재하는 경우, 본 발명의 펩티드는 최대 140개의 아미노산을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드는 41개의 아미노산 잔기를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 특정 구현예에서, 펩티드는 40~140, 40~120, 40~100, 40~80, 40~60, 또는 40~50개의 아미노산을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "LDL-R의 EGF(A) 도메인", "LDL-R(293-332)", "천연 LDL-R(293-332), "야생형 EGF(A)", "wt EGF(A)", 또는 "천연 EGF(A)"는 서열번호 1의 서열로 이루어진 펩티드를 지칭한다.
서열번호 1은 다음과 같다:
Gly-Thr-Asn-Glu-Cys-Leu-Asp-Asn-Asn-Gly-Gly-Cys-Ser-His-Val-Cys-Asn-Asp-Leu-Lys-Ile-Gly-Tyr-Glu-Cys-Leu-Cys-Pro-Asp-Gly-Phe-Gln-Leu-Val-Ala-Gln-Arg-Arg-Cys-Glu.
이러한 식에서, 아미노산 잔기의 넘버링은 LDL-R(LDL-R-(293-332))의 EGF(A) 도메인에 대한 넘버링을 따르며, 첫 번째 (N-말단) 아미노산 잔기는 293으로 넘버링되거나 위치 번호가 부여되고, C-말단 방향으로 연속하는 아미노산 잔기는 294, 295, 296 등과 같은 식으로 마지막 (C-말단) 아미노산 잔기까지 넘버링되는데, LDL-R의 EGF(A) 도메인에서 마지막 아미노산 잔기는 Glu이고 번호는 332이다.
서열 목록에서는 넘버링이 상이하게 이뤄지는데, 서열번호 1의 첫 번째 아미노산 잔기(Gly)에 번호 1이 할당되고, 마지막(Glu)에는 번호 40이 할당된다. 이는 서열 목록의 다른 서열에 대해서도 동일하게 적용되는데, N-말단 아미노산에 할당되는 번호는 LDL-R(293-332)을 참조하여 치환되는 293Gly 또는 293 아미노산 잔기에 대한 이의 위치와 상관없이 1이다. 그러나, 본원에서 아미노산 위치의 넘버링은 전술한 바와 같이 LDL-R(293-332)을 참조하여 이루어진다.
본 발명은 서열번호 1에 의해 식별된 EGF(A) 펩티드의 유사체 및 서열번호 1에 의해 정의된 LDLR의 야생형 EGF(A) 도메인의 이러한 EGF(A) 펩티드 유사체에 관한 것이다.
용어 "유사체"는 일반적으로, 기준 아미노산 서열과 비교했을 때 하나 이상의 아미노산이 변화된 서열을 가진 펩티드를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "본 발명의 유사체", "본 발명의 펩티드 유사체", "LDL-R(293-332) 유사체", "EGF(A) 유사체", 또는 "서열번호 1의 유사체"는 서열번호 1에 비해 아미노산 치환(amino acid substitution), 즉 아미노산 대체(amino acid replacement)를 포함하는 서열을 가진 펩티드로서 지칭될 수 있다. "유사체"는 N-말단 및/또는 C-말단의 위치에서 아미노산 신장(elongation)을 포함하고/하거나 N-말단 및/또는 C-말단 위치에서 절단을 포함할 수도 있다.
서열번호 1에 대한 동일성은 서열번호 1에 대해 변하지 않는 아미노산의 수를 결정함으로써 계산할 수 있다. 서열번호 1은 40개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 3개의 아미노산 치환이 도입되면 동일성 수준은 37/40%=92.5%이다. 5개의 아미노산 잔기가 변하는 경우, 동일성 수준은 87.5%이다. 펩티드가 N-말단 또는 C-말단 늘임인 경우, 해당 부분은 일반적으로 비교에 포함되지 않은 반면, 하나 이상의 아미노산의 결실은 비교기를 줄인다. 예를 들어, 위의 실시예에서, N-말단 아미노산이 결실되면, 동일성 수준은 각각 36/39X100% 및 34/39X100%로 약간 감소한다. 유도체의 백본 서열 동일성을 논의할 때, 치환기의 아미노산 잔기, 예를 들어, 치환기가 부착되고 치환기의 아미노산 잔기로도 지칭되는 잔기는 야생형(wt)이거나 치환된 아미노산일 수 있다. 치환기의 아미노산 잔기가 N-말단 Gly 또는 312K와 같은 야생형 잔기인 경우, 이러한 잔기는 동일성 수준의 계산에 포함되는 반면, 293 내지 332의 임의의 다른 위치에 있는 Lys는 아미노산 치환일 것이며, 서열번호 1에 대한 아미노산 동일성을 계산할 때 포함되지 않게 될 것이다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해 1~15개의 아미노산 치환을 갖는다. 일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해 1~10개의 아미노산 치환을 갖는다. 일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해 1~8개의 아미노산 치환, 예컨대 1~7개, 1~6개, 1~5개의 아미노산 치환을 갖는다. 특정 구현예에서, 최대 7개의 아미노산 치환이 존재할 수 있으며, 예를 들어 최대 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 치환이 EGF-1 펩티드 유사체에 존재할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 절단이 없는 경우 서열번호 1에 대해 적어도 75%의 동일성, 예컨대 80%, 예컨대 85%, 예컨대 90%, 또는 심지어 95%의 동일성을 가지며, 이는 각각 서열번호 1에 대해 최대 10, 8, 6, 4, 및 2개의 아미노산 치환에 상응한다.
본 발명의 펩티드 유사체 각각은 i) 변하는 아미노산 잔기에 상응하는 천연 EGF(A)(LDL-R(293-332)) 내의 아미노산 잔기의 수(즉, 천연 LDL-R(293-332) EGF(A)에서의 상응하는 위치), 및 ii) 실제 변화를 참조하여 기술될 수 있다.
즉, 본 발명의 펩티드 유사체는 천연 LDL-R(293-332) EGF(A) 펩티드를 참조하여, 즉 천연 LDL-R(293-332) EGF(A)(서열번호 1)와 비교했을 때 다수의 아미노산 잔기가 변화된 이의 변이체로서 기술될 수 있다. 이러한 변화는 독립적으로, 하나 이상의 아미노산 치환을 나타낼 수 있다.
다음은 적절한 유사체 명명법의 비제한적인 예이다:
따라서, WO2017/121850 중 실시예 2의 유도체에 혼입된 EGF(A) 펩티드는 다음의 LDL-R(293-332) EGF(A) 유사체로서 지칭된다: (301Leu, 309Arg) LDL-R(293-332) EGF(A) 또는 (Leu301, Arg309)-LDL-R(293-332) EGF(A) 또는 (301L,309R) LDL-R(293-332) 또는 (L301,R309) LDL-R(293-332). 이는, 이러한 유사체가 천연 LDL-R(293-332)과 정렬될 때, 이러한 유사체가 i) 정렬에 따라, 천연 LDL-R(293-332) EGF(A)에서의 위치 301에 상응하는 유사체 내의 위치에서 Leu를 갖고, ii) 천연 LDL-R(293-332) EGF(A)에서의 위치 309에 상응하는 유사체 내의 위치에서 Arg를 갖는다는 것을 의미한다.
소정의 명시된 변화를 "포함하는" 유사체는 야생형 서열번호 1과 비교했을 때 추가의 변화를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 유사체는 명시된 변화를 "갖거나(has)" "포함한다(comprises)". 특정 구현예에서, 유사체는 변화로 "이루어진다(consists of)". 용어 "이루어지다(consist 또는 consisting)"가 유사체와 관련하여 사용될 때, 예를 들어, 유사체가 명시된 아미노산 치환의 군으로 이어지는 경우, 명시된 아미노산 치환이 펩티드 유사체에서의 유일한 아미노산 치환임을 이해해야 한다. 대조적으로, 명시된 아미노산 치환의 군을 "포함하는" 유사체는 추가의 치환을 가질 수 있다.
상기 예에서 명백한 바와 같이, 아미노산 잔기는 이들의 전체 명칭, 1글자 코드, 및/또는 3글자 코드에 의해 식별될 수 있다. 이들 세 가지 방법은 완전히 동등하다.
"~와 동등한 위치" 또는 "상응하는 위치"라는 표현은 기준 서열인 천연 LDL-R(293-332) EGF(A)(서열번호 1)를 참조하여 변이체 LDL-R(293-332) EGF(A) 서열에서의 변화 부위를 특성화하는 데 사용될 수 있다. 등가 또는 상응하는 위치 뿐만 아니라 변경 횟수는 간단한 필기와 육안으로 쉽게 유추되고/유추되거나 Needleman-Wunsch 알고리즘에 기초한 "정렬(align)"과 같은 표준 단백질 또는 펩티드 정렬 프로그램이 사용될 수 있다.
다음에서, 2개의 연속된 화학 기가 모두 "결합"으로 선택될 수 있도록 화학식이 정의되는 경우가 생길 수 있다. 이러한 경우에, 2개의 연속된 화학 기는 실제로 존재하지 않을 것이고, 하나의 결합만이 주변 화학 기를 연결하게 될 것이다.
아미노산은 아미노기 및 카복실산기를 함유하는 분자이며, 종종 측쇄로서 지칭되는 하나 이상의 추가적인 기를 임의로 함유한다.
용어 "아미노산"은 (그의 20개 표준 아미노산 중에서) 단백질생성(또는 천연) 아미노산뿐만 아니라, 비단백질생성(또는 비천연) 아미노산을 포함한다. 단백질생성 아미노산은 자연적으로 단백질에 통합되는 것이다. 표준 아미노산은 유전자 코드에 의해 암호화된 것이다. 비단백질생성 아미노산은 단백질에서는 발견되지 않거나, 표준 세포 기구에 의해 생성되지 않는다(즉, 번역 후 변형의 대상이 될 수 있다). 비단백질원성 아미노산의 비제한적인 예에는 Aib(α-아미노이소부티르산 또는 2-아미노시소부티르산), 노르류신, 노르발린뿐만 아니라 단백질원성 아미노산의 D-이성질체도 있다.
다음에서, 광학 이성질체가 언급되지 않은 본 발명의 펩티드의 각 아미노산은 (달리 명시되지 않는 한) L-이성질체를 의미하는 것으로 이해될 것이다.
EGF(A) 펩티드 유사체
본 발명의 일 양태는 서열번호 1의 펩티드 유사체에 관한 것이다.
본 발명의 펩티드 유사체는 서열번호 1의 유사체인 아미노산 서열을 포함하는 펩티드로서 본원에서정의된다. 본 발명의 펩티드 유사체는 PCSK9에 결합하는 능력을 갖는다. 특정 구현예에서, 본 발명의 유사체는, 예를 들어 천연 LDL-R(293-332)(천연 EGF-(A)) 또는 다른 PCSK9-결합 화합물과 비교해 PCSK9에 결합하는 개선된 능력을 갖는다.
본 발명의 펩티드 유사체는 PCSK9가 LDL-R에 결합하는 것을 억제하는 능력을 갖는다. 일 구현예에서, 펩티드는 PCSK9 억제제이다. 일 구현예에서, 펩티드는 PCSK9가 인간 저밀도 지단백 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제한다. 이러한 결합은 본원의 검정 IV에서 기술된 검정법을 사용하여 평가할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체 및 펩티드 유도체는 PCSK9 억제제 펩티드 또는 단순히 PCSK9 억제제이다. 일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 1의 펩티드 유사체에 관한 것으로서, 여기서 펩티드 유사체는 PCSK9가 인간 저밀도 지단백 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체, 화합물, 또는 PCSK9 억제제는 EGF(A) LDL-R(293-332)(서열번호 1)과 비교해 PCSK9에 결합하는 개선된 능력을 갖는다.
전술한 바와 같이, EGF(A) 펩티드 유사체 또는 이를 포함하는 화합물은, EGF(A) LDL-R(293-332)(서열번호 1)과 비교해 PCSK9에 대한 개선된 결합을 가짐으로써 이러한 분자들이 LDL-R에 대한 PCSK9의 결합을 억제하는 능력을 가질 때, PCSK9 억제제로서 간주된다.
일 구현예에서, PCSK9-LDL-R 결합 경쟁 ELISA 검정(검정 I)에서 측정했을 때, 본원에 기술된 펩티드 유사체, 화합물, 또는 PCSK9 억제제의 Ki는 10 nM 미만, 예컨대 8 nM 미만, 또는 예컨대 5 nM 미만이다.
EGF(A) 유사체 및 이의 유도체의 기능은, WO2017/121850 실시예 D1.2에서 기술된 것과 같이, LDL 흡수를 개선하는 이들의 능력을 추가적인 특징으로 한다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체, 화합물, 또는 PCSK9 억제제는 PCSK9의 존재 시 LDL 흡수를 증가시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체, 화합물, 또는 PCSK9 억제제는 PCSK9 매개 LDL 흡수의 감소를 역전시키거나 감소시킬 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체, 화합물, 또는 PCSK9 억제제는 LDL 흡수 검정에서 측정했을 때 1500 nM 미만, 예컨대 1000 nM 미만 또는 예컨대 500 nM 미만의 EC50을 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해 적어도 1개의 아미노산 치환, 및 임의로 신장을 포함하는 것으로서 정의될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해 최대 15개, 최대 14개, 최대 13개, 최대 12개, 최대 11개, 최대 10개, 최대 9개, 최대 8개, 최대 7개, 최대 6개, 최대 5개, 최대 4개, 최대 3개, 최대 2개, 또는 1개의 아미노산(들) 치환(들), 및 임의로 신장을 포함하는 것으로서 정의될 수 있다. 이는 N-말단 및/또는 C-말단에서 연장을 포함하는 펩티드가 상기 신장에 더하여 293 내지 332의 위치에서 최대 15개의 아미노산 치환을 포함할 수 있음을 의미한다.
아미노산 "신장(elongation)"은 "연장(extension)"으로도 지칭될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 신장을 포함한다. 상기 신장은 서열번호 1의 N-말단 위치에서 N-말단 신장으로도 지칭되는 최대 50개의 아미노산 잔기 또는 이의 유사체가 추가되는 것일 수 있으며, 이는 본 발명의 펩티드가 위치 292에서 아래쪽으로 예를 들어 위치 242까지 최대 50개의 아미노산을 포함할 수 있음을 의미한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 상기 신장은 서열번호 1의 C-말단 위치에서 C-말단 신장으로도 지칭되는 최대 50개의 아미노산 잔기 또는 이의 유사체가 추가되는 것일 수 있으며, 이는 본 발명의 펩티드가 위치 333에서 위쪽으로 예를 들어 위치 383까지 최대 50개의 아미노산을 포함할 수 있음을 의미한다.
상기 신장은 N-말단, C-말단, 또는 둘 다에 존재할 수 있다. 상기 신장은 각 말단에서 서로 독립적으로 0개와 50개 사이의 임의의 아미노산 길이를 가질 수도 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 1~50, 1~40, 10~40, 1~30, 10~30, 20~30, 20~40, 20~50, 30~50, 1~10, 11~20, 21~30, 31~40, 또는 41~50개 아미노산 잔기 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50개 아미노산 잔기의 N-말단 신장을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 펩티드 유사체는 1~50, 1~40, 10~40, 1~30, 10~30, 20~30, 20~40, 20~50, 30~50, 1~10, 11~20, 21~30, 31~40, 또는 41~50개 아미노산 잔기 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50개 아미노산 잔기의 C-말단 신장을 포함할 수 있다.
일부 상황에서, 신장은 본원에서 예시된 292A, 292Lys, 또는 333Lys와 같은 새로운 아미노산 잔기가 도입될 때의 치환으로 지칭될 수 있다.
EGF(A) 펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에서의 경미한 절단이 EGF(A) 펩티드 유사체에 존재할 수 있다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드는 적어도 35개의 아미노산 잔기, 예컨대 36개의 아미노산 잔기, 예컨대 37개의 아미노산 잔기, 예컨대 38개의 아미노산 잔기, 또는 예컨대 39개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 따라서 1~2개 아미노산 잔기의 N-말단 절단을 포함한다. 일 구현예에서, 1개 또는 2개의 N-말단 아미노산 잔기가 결실된다. 추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 따라서 적어도 또는 특이적으로 아미노산 293Gly를 결실시키는 N-말단 절단을 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 적어도 또는 특이적으로 아미노산 293Gly-294Thr을 결실시키는 N-말단 절단을 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 1개의 아미노산 잔기의 C-말단 절단을 포함한다. 일 구현예에서, 단일 C-말단 아미노산 잔기가 결실된다. 일 구현예에서, 펩티드 유사체는 특이적으로 아미노산 332Glu를 결실시키는 C-말단 절단을 포함한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 펩티드 유사체는 N-말단 또는 C-말단에서, 예를 들어 위치 292 및/또는 333에서 적어도 하나의 아미노산 신장을 포함할 수 있다.
본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는, Asn301Leu 또는 단순히 301Leu로도 기술되는 아미노산 잔기 301의 Asn에서 Leu로의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 치환 301Leu를 포함한다.
추가적으로 또는 대안적으로, EGF(A) 펩티드 유사체는 아미노산 잔기 297Cys, 304Cys, 308Cys, 317Cys, 319Cys 및 331Cys를 포함한다. 이러한 Cys 잔기는 야생형 잔기로서, 이황화 브리지, 예컨대 297Cys와 308Cys 사이, 304Cys와 317Cys 사이, 및 319Cys와 331Cys 사이의 이황화 브리지에 관여할 수 있다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 전술한 것과 같이 301Leu 및 다수의 추가 아미노산 치환을 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 301Leu, 310Asp를 포함하고, 312Lys의 아미노산 치환을 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 301Leu 및 310Asp를 포함하며, 이 펩티드 유사체는 299Asp의 Glu, Val, 또는 His로의 치환을 갖지 않는다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 301Leu, 309Arg, 및 312Glu를 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체가 310Asp에서 310Lys로의 치환을 갖지 않을 때, 이 펩티드 유사체는 301Leu 및 309Arg를 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체가 299Asp의 Glu, Val, 또는 His로의 치환을 갖지 않을 때, 이 펩티드 유사체는 301Leu 및 309Arg를 포함한다.
추가의 구현예에서, 펩티드 유사체는 치환 D310K, D310N, D310Q, D310Q, D310R 및 D310A 중 어느 것도 갖지 않거나, 310Asp의 어떠한 치환도 갖지 않는다.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 1, 2, 3개, 또는 4개의 야생형 잔기 모두를 포함한다: 295Asn, 296Glu, 298Leu 및 302Gly.
일 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 1, 2, 3, 4개, 또는 5개의 야생형 잔기 모두를 포함한다: 295Asn, 296Glu, 298Leu, 302Gly 및 310Asp.
일 구현예에서, 펩티드는 295Asn을 갖는다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 296Glu를 갖는다. 일 구현예에서, 펩티드 유사체는 298Leu를 갖는다. 일 구현예에서, 펩티드 유사체는 302Gly를 갖는다. 일 구현예에서, 펩티드 유사체는 310Asp를 갖는다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 310Asp, 295Asn, 및 296Glu 중 2개 이상을 갖는다. 일 구현예에서, 펩티드 유사체는 310Asp, 295Asn, 및 296Glu의 3개 모두를 갖는다.
EGF(A) 펩티드 유사체는 본원에 기술된 것과 같은 추가의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 다음의 위치 군으로부터 선택된 위치(들)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다: 293, 294, 296, 299, 300, 303, 305, 306, 309, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 318, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 328, 329, 330 및 332.
일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 다음의 위치 군으로부터 선택된 위치(들)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다: 293, 294, 299, 300, 303, 305, 306, 309, 311, 312, 313, 314, 316, 318, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 328, 329, 330, 331 및 332.
일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 다음의 위치 군으로부터 선택된 위치(들)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다: 294, 299, 300, 303, 309, 312, 313, 314, 316, 318, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 328, 329, 330 및 332.
일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 다음의 위치 군으로부터 선택된 위치(들)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다: 299, 300, 309, 313, 316, 318, 321, 322, 323, 324, 326, 328, 329, 330 및 332.
일 구현예에서, 본 발명의 유사체는 다음의 위치 군으로부터 선택된 위치(들)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다: 309, 312, 313, 321, 324, 328 및 332.
추가의 구현예에서, 펩티드 유사체는 상기 본원에서 명시된 아미노산 잔기에 추가하여 특정한 위치에서 야생형 아미노산 잔기 또는 상이한 잔기, 즉 아미노산 치환을 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 293에서 아미노산 잔기 Gly(G) 또는 Asn(N)을 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 294에서 아미노산 잔기 Trp(W), Thr(T), 또는 Gly(G)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 299에서 아미노산 잔기 Asp(D), Gly(G), Pro(P), Arg(R), Lys(K), Ser(S), Thr(T), Asn(N), Gln(Q), Ala(A), Ile(I), Leu(L), Met(M), Phe(F), Tyr(Y) 또는 Trp(W)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 299에서 아미노산 잔기 Asp(D), Gly(G), Pro (P), Arg(R), Lys(K), Ser(S), Thr(T), Asn(N), Gln(Q), Ala(A), Met(M), Phe(F), Tyr(Y) 또는 Trp(W)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 299에서 아미노산 잔기 Asp(D), Ser (S), Arg(R), Leu (L), Ala (A), Lys(K) 또는 Tyr(Y)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 299에서 아미노산 잔기 Asp(D) 또는 Ala(A)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 300에서 아미노산 잔기 His(H) 또는 Asn(N)을 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 307에서 아미노산 잔기 Val(V), Ser(S), Thr(T), 또는 Ile(I)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 307에서 아미노산 잔기 Val(V) 또는 Ile(I)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 307에서 아미노산 잔기 Ser(S), Thr(T), 또는 Ile(I)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 307에서 아미노산 잔기 Ile(I)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 309에서 아미노산 잔기 Asn(N), Glu(E), His(H), Arg(R), Ser(S), 또는 Lys(K)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 309에서 아미노산 잔기 Asn(N), Arg(R), Ser(S), 또는 Lys(K)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 309에서 아미노산 잔기 Asn(N), Arg(R), 또는 Ser(S)을 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 309에서 아미노산 잔기 Asn(N) 또는 Arg(R)를 포함한다.
하나의 이러한 구현예에서, 본 발명의 유사체는 위치 309에서 아미노산 잔기 Lys(K) 또는 Arg(R)를 포함한다.
EGF(A) 펩티드 유사체는 본원에 기술된 바와 같은 여러 개의 아미노산 치환, 예컨대 다음의 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다: 299Ala, 307Ile, 및 321Glu.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 위치 321에서 아미노산 잔기 Asp(D), Lys(K), 또는 Glu(E)를 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 위치 321에서 아미노산 잔기 Asp(D) 또는 Glu(E)를 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 위치 321에서 아미노산 잔기 Glu(E)를 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 위치 324에서 아미노산 잔기 Gln(Q) 또는 Gly(G)를 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 위치 329에서 아미노산 잔기 Arg (R) 또는 His(H)를 포함한다.
추가의 구현예에서, EGF(A) 펩티드 유사체는 300Asn(N)의 Pro(P)로의 치환을 갖지 않는다.
LDL-R의 EGF(A) 도메인은 위치 312에서 본원에 기술된 바와 같은 치환에 유용할 수 있는 리신(Lysine)을 포함한다. 312에 대한 치환기의 부착이 바람직하지 않은 구현예에서, 312Lys는 본원에 기술된 바와 같은 다른 아미노산으로 치환될 수 있다.
일 구현예에서, 위치 312에서의 Lys는 다음으로부터 선택된 아미노산 잔기에 의해 치환된다: Gly, Pro, Asp, Glu, Arg, His, Ser, Thr, Asn, Gln, Ala, Val, Ile, Leu, Met, Phe 및 Tyr. 일 구현예에서, 위치 312에서의 Lys는 다음으로부터 선택된 아미노산 잔기에 의해 치환된다: Gly, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Ala, Val, Ile, Leu, Phe 및 Tyr. 일 구현예에서, 위치 312에서의 Lys는 다음으로부터 선택된 아미노산 잔기에 의해 치환된다: Asp, Glu, Thr, Asn, Ile, Leu, Phe 및 Tyr. 일 구현예에서, 312Lys는 312Asp, 312Glu, 312Thr, 312Asn, 312Ile 또는 312Phe로 치환된다. 일 구현예에서, 312Lys는 312Glu, 312Asp, 312Gln 또는 312Arg로 치환된다.
일 구현예에서, 312Lys는 312Glu, 312Thr, 312Asn, 312Ile, 312Phe 또는 312Tyr로 치환된다. 일 구현예에서, 312Lys는 312Glu, 312Asn 또는 312Ile로 치환된다.
일 구현예에서, 312Lys는 312Glu 또는 312Arg로 치환된다. 일 구현예에서, 312Lys는 312Arg로 치환된다. 일 구현예에서, 312Lys는 312Glu로 치환된다.
다양한 위치에서 치환기를 부착하기 위한 옵션을 포함하기 위해, Lys는 서열번호 1의 야생형 잔기의 아미노산 치환에 의하거나 서열번호 1의 펩티드 늘임에 의해(예: 292Lys 또는 333Lys) 도입될 수 있다.
2개 이상의 치환기가 바람직한 경우, 하나는 312Lys를 통하고 다른 하나는 Lys를 통해 서열번호 1의 펩티드 신장 또는 치환에 의해 도입될 수 있다.
일 구현예서, 서열번호 1의 펩티드 유사체는 다음의 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 Lys 잔기를 포함한다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 296Lys, 299Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
일 구현예서, 서열번호 1의 펩티드 유사체는 다음의 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 Lys 잔기를 포함한다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
일 구현예서, 서열번호 1의 펩티드 유사체는 다음의 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 Lys 잔기를 포함한다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
일 구현예서, 서열번호 1의 펩티드 유사체는 다음의 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 Lys 잔기를 포함한다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
일 구현예서, 서열번호 1의 펩티드 유사체는 다음의 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 Lys 잔기를 포함한다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 295Lys, 296Lys, 298Lys, 299Lys, 301Lys, 302Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 307Lys, 309Lys, 310Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 295Lys, 296Lys, 298Lys, 299Lys, 302Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 307Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 295Lys, 296Lys, 298Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 295Lys, 296Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 296Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 310Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 310Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 292Lys, 293Lys, 294Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 310Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys 및 333Lys로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 다음의 치환 중 어느 것도 포함하지 않는다: 296K, 298K, 301K, 302K, 및 307K.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 다음의 치환 중 어느 것도 포함하지 않는다: 296K, 298K, 301K, 302K, 307K, 및 310K.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 다음의 치환 중 어느 것도 포함하지 않는다: 296K, 298K, 301K, 302K, 307, 및 295K.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 다음의 치환 중 어느 것도 포함하지 않는다: 296K, 298K, 301K, 302K, 307K, 및 295D.
특정 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 이러한 Lys 치환 중 1개 또는 2개를 포함한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 펩티드는 312Lys 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 2개의 Lys 잔기를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 펩티드 유사체는 다음으로 이루어진 쌍들로부터 선택된 2개의 Lys 잔기를 포함한다:
i. 293K 및 294K xiv. 313K 및 321K
ii. 293K 및 312K xv. 313K 및 324K
iii. 293K 및 333K xvi. 313K 및 328K
iv. 309K 및 313K xvii. 313K 및 332K
v. 309K 및 324K xviii.313K 및 333K
vi. 309K 및 328K xix. 314K 및 333K
vii. 309K 및 332K xx. 321K 및 332K
viii. 309K 및 333K xxi. 321K 및 333K
ix. 311K 및 313K xxii. 324K 및 333K
x. 312K 및 333K xxiii.324K 및 328K
xi. 312K 및 313K xxiv. 328K 및 333K
xii. 312K 및 314K xxv. 330K 및 333K, 및
xiii. 313K 및 314K xxvi. 332K 및 333K
상기 본원에서 알 수 있듯이, 다양한 펩티드 유사체가 본 발명에 의해 제공된다. 추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해, 아래에 표시된 군 i~xxiv 중 어느 하나에 의해 식별된 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 아래에 표시된 것과 같은 군 i~xxiv 중 어느 하나에 의해 식별된 아미노산 치환으로 이루어진다.
추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해, 아래에 표시된 군 i~xvi 중 어느 하나에 의해 식별된 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 아래에 표시된 것과 같은 군 i~xvi 중 어느 하나에 의해 식별된 아미노산 치환으로 이루어진다.
i. 301Leu 및 309Arg
ii. 301Leu, 309Arg, 312Glu
iii. 301Leu, 307Ile 및 309Arg
iv. 301Leu, 307Ile, 309Arg 및 312Glu
v. 301Leu, 309Arg 및 321Glu
vi. 301Leu, 309Arg, 321Glu 및 312Glu
vii. 301Leu, 307Ile, 309Arg 및 299Ala
viii. 301Leu, 307Ile, 309Arg, 299Ala 및 312Glu
ix. 301Leu 및 309Arg, 및 적어도 하나의 Lys 치환
x. 301Leu, 309Arg, 312Glu 및 적어도 하나의 Lys 치환
xi. 301Leu, 307Ile 및 309Arg 및 적어도 하나의 Lys 치환
xii. 301Leu, 307Ile, 309Arg 및 312Glu 및 적어도 하나의 Lys 치환
xiii. 301Leu, 309Arg 및 321Glu 및 적어도 하나의 Lys 치환
xiv. 301Leu, 309Arg, 321Glu 및 312Glu 및 적어도 하나의 Lys 치환
xv. 301Leu, 307Ile, 309Arg 및 299Ala 및 적어도 하나의 Lys 치환, 또는
xvi. 301Leu, 307Ile, 309Arg, 299Ala 및 312Glu 및 적어도 하나의 Lys 치환.
추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해, 아래에 표시된 군 xvii~xx 중 어느 하나에 의해 식별된 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 아래에 표시된 것과 같은 군 xvii~xx 중 어느 하나에 의해 식별된 아미노산 치환으로 이루어진다.
xvii. 301Leu 및 309Lys
xviii. 301Leu, 309Lys 및 312Glu
xix. 301Leu 및 309Lys 및 적어도 하나의 추가 Lys 치환
xx. 301Leu, 309Lys 및 312Glu 및 적어도 하나의 추가 Lys 치환.
추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 펩티드 유사체는 서열번호 1과 비교해, 아래에 표시된 군 xxi~xxiv 중 어느 하나에 의해 식별된 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 펩티드 유사체는 아래에 표시된 것과 같은 군 xxi~xxiv 중 어느 하나에 의해 식별된 아미노산 치환으로 이루어진다.
xxi. 301Leu 및 307Ile,
xxii. 301Leu, 307Ile 및 312Glu
xxiii. 301Leu 및 307Ile 및 적어도 하나의 추가 Lys 치환, 및
xxiv. 301Leu, 3307Ile 및 312Glu 및 적어도 하나의 추가 Lys 치환.
추가의 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 펩티드 유사체 또는 화합물의 펩티드 유사체는 서열번호 1 내지 114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~47 및 49~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~44, 46, 47, 및 49~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~44, 46, 47, 49~53, 55, 58~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~4, 6~44, 46, 47, 49~53, 55, 58~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~4, 6~19, 21~44, 46, 47, 49~53, 55, 58~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 2~4, 6~19, 21~44, 46, 47, 49~53, 55, 58~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 3, 6, 및 81에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, EGF(A) 유사체는 서열번호 4, 8, 11, 15-19, 21, 22, 24, 31~42, 44, 51~53, 70~73, 77~78, 91, 94, 95, 97~102, 104~109, 112~114에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 서열번호 4, 6, 32, 72, 76, 78, 98, 104, 및 105에 의해 식별된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하거나 이로 이루어진다.
중간체 화합물
본 발명은 또한 본 발명의 유도체에 혼입될 수 있는 펩티드 유사체에 관한 것이다. 이러한 펩티드 유사체는 "중간체 생성물" 또는 "중간체 화합물"로서 지칭될 수 있다. 이들은 신규한 LDL-R(293-332) 유사체의 형태이며, 이는 전술한 바와 같이 추가로 후술될 본 발명의 EGF(A) 유도체에 혼입될 수 있다. 이러한 펩티드 유사체는 상기 섹션에서 정의된 바와 같다.
특히, 본 발명에 따른 펩티드 유사체 또는 중간체 펩티드는 서열 번호 1의 펩티드 유사체로서 지칭될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 EGF(A) 화합물의 제조에 사용하기 위한 본원에 기술된 것과 같은 EGF(A) 펩티드 유사체, 예컨대 EGF(A) 유도체에 관한 것이다.
본 발명의 펩티드 유사체와 관련하여 본원에 개시된 다른 특징, 정의, 양태, 및 구현예는 본 발명의 중간체 생성물에도 적용될 수 있다.
EGF(A) 유도체
본 발명의 펩티드 유사체는 치환기를 추가로 포함하여 유도체 화합물이 될 수 있다.
용어 "유도체"는 대체로 화학적 변형에 의해, 특히 1개 또는 2개의 치환기의 공유 부착에 의해 천연 펩티드 또는 이의 유사체로부터 제조될 수 있는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "본 발명의 유도체", "EGF(A) 유도체", "LDL-R(293-332) 유도체의 EGF(A) 유도체", 또는 "LDL-R(293-332) 유사체의 유도체"는 1개 또는 2개의 치환기가 부착되는 펩티드를 지칭한다. 이들 각각은 측쇄로서 지칭될 수도 있거나, 대안적으로 측쇄로서 지칭될 수 있다. 즉, "본 발명의 유도체"는 펩티드(본원에서는 EGF(A) 펩티드 유사체), 즉 펩티드 서열, 및 적어도 하나의 (예를 들어, 1개 또는 2개를 포함함) 치환기(들)를 포함한다.
용어 "치환기"는 EGF(A) 펩티드에 공유 결합하는 모이어티를 기술하도록 사용되며, 예를 들어, 치환기는 EGF(A) 펩티드 자체의 일부가 아닌 모이어티이다.
일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 질소 원자에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 아미노기에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산에 부착되거나 EGF(A) 펩티드 유사체의 Lys 잔기에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산 잔기의 알파-질소에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 Lys 잔기에 부착된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 치환기(들)는 EGF(A) 펩티드 유사체의 Lys 잔기의 엡실론-질소에 부착된다.
치환기의 예는 다양하며 이하에서 추가로 기술된다.
일 양태에서, 본 발명은 EGF(A) 펩티드 유사체 및 적어도 하나의 치환기를 포함하는 EGF(A) 유도체에 관한 것이다. 일 구현예에서, 유도체의 치환기는 적어도 하나의 지방산기를 포함한다. 모든 구현예의 경우, 용어 EGF(A) 유도체는 임의의 약학적으로 허용 가능한 이의 염, 아미드, 또는 에스테르를 또한 포함한다.
일 구현예에서, EGF(A) 유도체는 TFA 염, 암모늄 염, 나트륨, 아세테이트 염, 또는 염화물 염이다. 일 구현예에서, EGF(A) 유도체는 암모늄 염 또는 나트륨 염이다.
치환기
치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체에 부착된 모이어티이다. 본 발명에 따르면, 모이어티(예: 치환기)는 경구 투여 후 반감기 증가 및/또는 노출 개선과 같은 다른 유익한 특성을 추가하면서 EGF(A) 펩티드의 기능성에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치는 것이 바람직하다.
따라서 전술한 본 발명의 유사체뿐만 아니라 유도체도 PCSK9에 결합할 수 있는 능력을 갖는다. PCSK9에 대한 이러한 결합은 LDL-R에 대한 PCSK9 결합을 억제하여, LDL-R 분해를 방지함으로써 LDL-C 및 죽종형성 지단백질의 제거를 증가시킨다.
특정 구현예에서, 본 발명의 유도체 및 유사체는, 예를 들어 천연 LDL-R(293-332) 또는 다른 PCSK9-결합 화합물과 비교해 PCSK9에 결합하는 개선된 능력을 갖는다. 본 발명의 유사체 및 유도체는, 예를 들어 본원의 검정 I에 기술된 검정을 사용하여 PCSK9가 LDL-R에 결합하는 것을 억제하는 이들의 능력에 대해 시험될 수 있다.
일 구현예에서, 치환기는 펩티드의 기능성을 개선하는 것을 목표로 한다.
일 구현예에서, 치환기는, 백본 펩티드 및 치환기를 포함하는 유도체의 혈장 반감기가 백본의 반감기와 비교해 증가된 반감기를 갖는 방식으로 펩티드 유사체의 반감기를 증가시킨다. 상이한 종에서 반감기를 결정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, WO2017/121850에서 마우스 및 개를 대상으로 예시되어 있다(섹션 D2 및 D5).
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 4시간이 넘는 반감기를 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 피하 또는 정맥 내 투약 후 마우스에서 측정했을 때, 6시간이 넘는 반감기, 예컨대 8시간이 넘는 반감기, 또는 예컨대 10시간이 넘는 반감기를 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 개에서 25시간이 넘는 반감기를 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 개에서 50시간이 넘는 반감기, 예컨대 100시간이 넘는 반감기 또는 예컨대 150시간이 넘는 반감기를 갖는다.
일 구현예에서, 반감기 연장 치환기는 단백질 모이어티이다. 추가의 이러한 구현예에서, 단백질 모이어티는 인간 알부민, Fc-도메인 또는 비정형 단백질 연장부(unstructured protein extension)를 포함할 수 있다. 추가의 구현예에서, 단백질 모이어티는 펩티드 유사체에 융합될 수 있다. 추가의 구현예에서, 단백질 모이어티는 Fc 도메인이고 Fc 도메인은 펩티드 유사체에 융합된다. Fc 융합이 이뤄지면, 2개의 폴리펩티드가 하나의 Fc 도메인을 형성하게 되므로, 생성되는 화합물은 2가가 된다.
일 구현예에서, 치환기는 단백질 모이어티가 아니다. 일 구현예에서, 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체에 융합된 단백질 모이어티가 아니다. 일 구현예에서, 단백질 모이어티는 Fc 도메인이 아니다.
또 다른 구현예에서, 치환기는 비-단백질 모이어티이다.
특정 구현예에서, 치환기는 알부민과 함께 비공유 복합체를 형성하여, 혈류 내에서 유도체의 순환을 촉진할 수 있고, 유도체의 작용 시간을 연장하는 효과도 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 치환기는 PCSK9에 대한 EGF(A) 화합물의 결합 능력을 실질적으로 감소시키지 않고도 EGF(A) 화합물의 작용 시간을 연장할 수 있다.
일 구현예에서, EGF(A) 유도체는 반감기 연장 치환기를 포함한다. 다양한 반감기 연장 치환기는 당업계에 잘 알려져 있고, 추가로 후술하는 바와 같은 지방산기를 포함하는 특정 알부민 결합제를 포함하며, 이러한 알부민 결합제는 비-단백질 치환기이다.
치환기는 적어도 1개의 지방산기를 포함한다.
특정 구현예에서, 지방산기는 적어도 8개의 연속 -CH2-기를 함유하는 탄소 사슬을 포함한다. 일 구현예에서, 지방산기는 적어도 10개의 연속 -CH2-기, 예컨대 적어도 12개의 연속 -CH2-기, 적어도 14개의 연속 -CH2-기, 적어도 16개의 연속 -CH2-기, 적어도 18개의 연속 -CH2-기를 포함한다.
일 구현예에서, 지방산 기는 8~20개의 연속 -CH2-기를 포함한다. 일 구현예에서, 지방산 기는 10~18개의 연속 -CH2-기를 포함한다. 일 구현예에서, 지방산 기는 12~18개의 연속 -CH2-기를 포함한다. 일 구현예에서, 지방산 기는 14~18개의 연속 -CH2-기를 포함한다.
유도체가 2개의 치환기를 포함하는 상황에서, 증가된 반감기는 짧은 지방산기를 사용하여 얻어질 수 있으므로, 유도체가 2개의 치환기를 포함하는 구현예에서, 지방산기는 적어도 8개의 연속 -CH2-기, 예컨대 적어도 10개의 연속 -CH2-기, 예컨대 적어도 12개의 연속 -CH2-기, 예컨대 적어도 14개의 연속 -CH2-기, 예컨대 적어도 16개의 연속 -CH2-기를 포함할 수 있다.
유도체가 2개의 치환기를 포함하는 추가의 구현예에서, 치환기는 8~18개의 연속 -CH2-기를 포함하는 지방산기를 각각 포함한다. 추가의 이러한 구현예에서, 지방산기는 10~18개의 연속 CH2-기, 예컨대 12~18개의 연속 -CH2-기, 예컨대 14~18개의 연속 -CH2-기를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "지방산기"는 7 미만의 Pka를 갖는 브뢴스테드-로우리산(Brønsted-Lowry acid)인 적어도 하나의 작용기를 포함하는 화학기로서 지칭될 수 있다. 브뢴스테드-로우리산인 이러한 작용기의 비제한적인 예는 카복실산(카복시페녹시도 포함함), 설폰산, 테트라졸 모이어티를 포함한다.
일 구현예에서, 상기 지방산기는 카복시산, 설폰산, 테트라졸 모이어티, 메틸설포닐카바모일아미노(MSU) 모이어티, 및 3-하이드록시-이속사졸이속사졸 모이어티로부터 선택된 작용기를 포함한다. 따라서, 일 구현예에서 본 발명의 반감기 연장 치환기는 카복시산, 설폰산, 테트라졸 모이어티, 메틸설포닐카바모일아미노 모이어티, 또는 다음에 의해 정의된 것과 같은 8~20개의 연속 -CH2- 기를 추가로 포함하는 하이드록시-이속사졸이속사졸 모이어티를 포함한다:
화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 C(n+2) 이산으로서 지칭되거나 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 1b:
Figure pct00005
(식 중 n은 8~20 범위의 정수임),
화학식 2: 5-테트라졸릴-(CH2)n-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 2b:
Figure pct00006
(식 중 n은 8~20 범위의 정수임)
화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 3b:
Figure pct00007
(식 중 카복시기는 화학식 3의 (C6H4)기의 위치 2, 3, 또는 4에 있고, m은 8~11 범위의 정수임)
화학식 4: HO-S(O)2-(CH2)n-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 4b:
Figure pct00008
(식 중 n은 8~20 범위의 정수임),
화학식 5: MeS(O)2NH(CO)NH-(CH2)n-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 5b:
Figure pct00009
(식 중 n은 8~20 범위의 정수임),
화학식 6: 3-HO-이속사졸-(CH2)n-CO-* (식 중 n은 8~20 범위의 정수임) 이 화학식은 다음으로서 지칭될 수도 있음
화학식 6b:
Figure pct00010
(식 중 n은 8~20 범위의 정수임).
산성 형태의 작용기라는 용어는 FG-H로서 지칭되고, 접합 염기로서의 이의 형태는 FG-로서 지칭된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "pKa가 7 미만인 작용기"는 브뢴스테드-로우리산으로서 지칭될 수 있는데, 이는 수용액 중 메틸 유도체(CH3-FG-H)의 형태일 때 7 미만의 평형 pKa를 가지며, 여기서 pKa는 아래 나타낸 평형의 평형 상수(Ka)에 대한 -log이다:
CH3-FG-H + H2O
Figure pct00011
CH3-FG- + H3O+.
pKa의 결정 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 이러한 방법은 예를 들어 Reijenga 등의 문헌[Anal Chem Insights 2013(2013; 8: 53-71)]에 기술되어 있다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 치환기는 하나 이상의 링커 요소를 포함한다. 링커 요소는 아미드 결합에 의해 지방산기에 연결될 수 있고, Z2-Z10으로서 지칭될 수 있다. 아래 본원에서 추가로 정의되는 바와 같이, 링커 요소의 수는 최대 10개일 수 있다.
특정 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이며:
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [I]
식 중 Z1은 다음으로부터 선택된다:
화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-* 또는
화학식 1b:
Figure pct00012
,
화학식 2: 5-테트라졸릴-(CH2)n-CO-* 또는
화학식 2b:
Figure pct00013
,
화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-* 또는
화학식 3b:
Figure pct00014
(식 중 카복시기는 -(C6H4 )-의 위치 2, 3 또는 4에 있음),
화학식 4: HOS(O)2-(CH2)n-CO-* 또는
화학식 4b:
Figure pct00015
,
화학식 5: MeS(O)2NH2N(CO)NHN-(CH2)n-CO-* 또는
화학식 5b:
Figure pct00016
, 및
화학식 6: 3-HO-이속사졸-(CH2)n-CO-* 또는
화학식 6b:
Figure pct00017
(식 중 n은 8~20 범위의 정수이고, m은 8~11 범위의 정수임).
특정 구현예에서, 화학식 1 또는 1b에서 n은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다. 특정 구현예에서, 화학식 2 또는 2b에서 n은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다. 특정 구현예에서, 화학식 4 또는 4b에서 n은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다. 특정 구현예에서, 화학식 3 또는 3b에서 m은 8, 9, 10, 또는 11이다.
특정 구현예에서, 화학식 5 또는 5b에서 n은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다.
특정 구현예에서, 화학식 6 또는 6b에서 n은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다.
특정 구현예에서, 기호 *는 Z2에서 질소에 대한 부착점을 나타낸다. 또 다른 구현예에서, Z2가 결합인 경우, 기호 *는 이웃하는 Z 요소의 질소에 대한 부착점을 나타낸다.
식 I의 맥락에서 사용된 용어 "결합"은 공유 결합을 의미한다. 식 I의 성분(Z1-Z10)이 결합으로서 정의되는 경우, 이는 상기 성분이 부재하는 식 I과 등등하다.
Z2-Z10 중 어느 하나가 결합이라는 아래 본원의 표시도 Z2-Z10 중 어느 하나가 부재하는 것으로 판독될 수 있다. 논리적으로 "결합" 다음에 "결합"에 이어질 수는 없다. 따라서, "결합"(또는 부재)이라는 표시는 이전의 Z 요소가 "결합"이 아닌 다음 Z 요소에 공유 결합된다는 것을 의미한다.
링커 요소 Z2-Z10은 아미노산 유사 모이어티를 포함하여 아미드 결합을 형성할 수 있는 화학적 모이어티, 예컨대 Glu, γGlu(감마 Glu 또는 gGlu로도 지칭되며 *-NH-CH-(COOH)-CH2-CH2-CO-*에 의해 정의됨), Gly, Ser, Ala, Thr, Ado, Aeep, Aeeep, 및 TtdSuc 및 아래에 기술된 추가의 모이어티로부터 선택된다.
Z2는 다음으로부터 선택된다:
화학식 7: *-NH-SO2-(CH2)3-CO-* 또는
화학식 7b:
Figure pct00018
,
화학식 8: *-NH-CH2-(C6H10)-CO-* 또는
화학식 8b:
Figure pct00019
, 및
결합.
Z3은 γGlu, Glu, 또는 결합으로부터 선택된다.
Z3은 γGlu, Glu, 또는 Z2가 화학식 7 또는 화학식 7b인 경우의 결합으로부터 선택된다.
Z3은 γGlu, Glu, 또는 결합으로부터 선택되되, Z2가 화학식 8인 경우, Z3은 γGlu, Glu로부터 선택된다.
Z3은, Z2가 화학식 8인 경우 γGlu 및 Glu로부터 선택된다.
Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9는 Glu, γGlu, Gly, Ser, Ala, Thr, Ado, Aeep, Aeeep, TtdSuc, 및 결합으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
Glu, Gly, Ser, Ala, Thr은 당업계에 잘 알려진 것과 같은 아미노산 잔기이다.
γGlu는 화학식 9: *-NH-CH(COOH)-(CH2)2-CO-*의 것이며, 이는 화학식 9b:
Figure pct00020
와 동일하고, gGlu로서 지칭될 수도 있다.
TtdSuc는 화학식 10: *-NH-(CH2)3-O-(CH2)2-O-(CH2)2O-(CH2)3-NHCO* 또는
*-NH-CH2CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2CH2NHCO*의 것이며, 이는 화학식 10b:
Figure pct00021
와 동일하다.
Ado는 화학식 11: *-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*의 것이며, 이는 8-아미노-3,6-디옥사옥타논산으로 지칭될 수도 있고, 이는 화학식 b 11b:
Figure pct00022
와 동일하다.
Aeep는 화학식 12: *NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2CO*의 것이며, 이는 화학식 12b:
Figure pct00023
로서 지칭될 수도 있다.
Aeeep는 화학식 13: *NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2CO*의 것이며, 이는 화학식 13b:
Figure pct00024
로서 지칭될 수도 있다.
Z10은 결합 및 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*로부터 선택되며, 화학식 14는 화학식 14b:
Figure pct00025
로서 지칭될 수도 있다.
특정 구현예에서, Z10이 화학식 14인 경우, 치환기는 상기 펩티드의 N-말단 아미노기에 부착된다.
또 다른 구현예에서, Z10이 결합인 경우, 상기 치환기는 상기 펩티드에 존재하는 Lys 잔기의 엡실론 위치에 부착되거나 상기 펩티드의 N-말단 아미노산 잔기에 부착된다.
일 구현예에서, 유도체는 2개의 치환기를 포함한다. 이러한 일 구현예에서, 2개의 치환기는 동일하다. 이러한 일 구현예에서, 2개의 치환기는 상이하다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 질소 원자에 부착된다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 아미노기에 부착된다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 N-말단 아미노산 EGF(A)에 부착되고 EGF(A) 펩티드 유사체의 Lys 잔기에 부착된다. 일 구현예에서, 하나의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산 잔기의 알파-질소에 부착되고, 다른 하나의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 Lys 잔기에 부착된다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산에 부착된다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체의 상이한 Lys 잔기에 부착된다. 일 구현예에서, 2개의 치환기는 EGF(A) 펩티드 유사체 내의 상이한 Lys 잔기의 엡실론-질소에 부착된다.
2개의 치환기가 존재하는 일 구현예에서, Z10은 펩티드 유사체의 N-말단 아미노기에 부착되는 하나의 치환기에서는 화학식 14이고, Z10은 상기 펩티드 유사체에 존재하는 Lys 잔기의 엡실론 위치에 부착되는 다른 하나의 치환기에서는 결합이다.
2개의 치환기가 존재하는 또 다른 구현예에서, Z10은 펩티드 유사체의 N-말단 아미노기에 부착되는 하나의 치환기에서는 결합이고, Z10은 상기 펩티드 유사체에 존재하는 Lys 잔기의 엡실론 위치에 부착되는 다른 하나의 치환기에서는 결합이다.
2개의 치환기가 존재하는 또 다른 구현예에서, Z10은 두 치환기 모두에서 결합이고, 2개의 치환기 각각은 펩티드 유사체에 존재하는 상이한 Lys 잔기의 엡실론 위치에 부착된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 유도체는 1개 또는 2개의 치환기(들)의 공유 부착에 의해 EGF(A) 펩티드 유사체로부터 제조될 수 있다.
특정 구현예에서, 2개의 치환기는 식 I의 치환기이다: Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [I]. Z1 내지 Z10은 위에서 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, 2개의 치환기는 화학식 I의 치환기이고 동일한데, 이는 선택된 Z1 내지 Z10은 2개의 치환기 모두에서 동일함을 의미한다. 또 다른 구현예에서, 2개의 치환기는 화학식 I의 치환기이고 상이한데, 이는 선택된 Z1 내지 Z10 중 하나 이상이 하나의 치환기와 다른 하나의 치환기 간에 상이함을 의미한다.
특이적 치환기
전술한 바와 같이, 다양한 치환기 당업자에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 본 출원에 포함된 치환기는 본 발명을 제한하는 것으로 간주되지 않는다.
일 구현예에서, 1개 또는 2개의 치환기(들)는 다음으로 이루어진 치환기의 군으로부터 선택된다:
HOOC-(CH2)18-CO-gGlu-2xADO
HOOC-(CH2)18-CO-NH-CH2-(C6H10)-CO-gGlu-2xADO
HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2xADO
HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2xADO-NH-CH2-(C6H4)-CH2
HOOC-(CH2)16-CO-gGlu
HOOC-(CH2)16-CO-NH-CH2-(C6H10)-CO-gGlu-2xADO
HOOC-(CH2)14-CO-gGlu-2xADO
HOOC-(CH2)14-CO-gGlu-
HOOC-(CH2)14-CO-gGlu-2xADO-
HOOC-(CH2)12-CO-gGlu-2xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu-2xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu-3xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-2xgGlu
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu-3xGly
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-2xgGlu-2xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu-TtdSuc
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)9-CO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-gGlu-4xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)10-CO-NH-CH2-(C6H10)-CO-gGlu-2xADO
4-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)9-CO-gGlu-2xADO
3-HOOC-(C6H4)-O-(CH2)9-CO-gGlu-2xADO
3-HO-이속사졸-(CH2)12-CO-gGlu-2xADO
HOS(O)2-(CH2)15-CO-gGlu-2xADO-NH-CH2-(C6H4)-CH2
HOS(O)2-(CH2)13-CO-gGlu-2xADO
테트라졸릴-(CH2)15-CO-NH-SO2-(CH2)3-CO-ADO-ADO-NH-CH2-(C6H4)-CH2
테트라졸릴-(CH2)12-CO-gGlu-2xADO
테트라졸릴-(CH2)15-CO-gGlu-2xADO 및
MeS(O)2NH(CO)NH-(CH2)12-CO-gGlu-2xADO.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 14 또는 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9의 전부는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16 또는 18임); Z2는 화학식 8 (Trx)이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 2: 테트라졸릴-(CH2)n-CO- *이고(식 중 n은 15임); Z2는 화학식 7 (설폰이미드)이고; Z3은 결합이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 2: 테트라졸릴-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 15임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 2: 테트라졸릴-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 12임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 결합이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9의 전부는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9의 전부는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 하나는 γGlu이고 나머지 5개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 1개는 γGlu이고 2개는 Ado이고 나머지 3개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 3개는 Gly이고 나머지 3개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 3개는 Ado이고 나머지 3개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 4개는 Ado이고 나머지 2개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 하나는 TtdSuc이고 나머지 5개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 화학식 8 (Trx)이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 9임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 하나는 TtdSuc이고 나머지 5개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 4: HO-S(O)2-(CH2)n-CO- *이고(식 중 n은 15임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5 , Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 4: HO-S(O)2-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 15임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5 , Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 5: MeS(O)2NH(CO)NH-(CH2)n-CO -*이고(식 중 n은 12임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 치환기는 식 I의 치환기이고, 식 중, Z1은 화학식 6: 3-OH-이속사졸-(CH2)12-CO-*이고(식 중 n은 12임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
특이적 치환기 조합:
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 식 I의 2개의 치환기를 포함하거나 가지며, 여기서 Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 식 I의 2개의 치환기를 포함하거나 가지며, 여기서 Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 14임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 식 I의 2개의 치환기를 포함하거나 가지며, 여기서 Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 14임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 4개 모두는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 식 I의 2개의 치환기를 포함하거나 가지며, 여기서 Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 포함하거나 가지되, 하나는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*이며; 다른 하나의 치환기는 식 I의 치환기이며, 여기서 Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 포함하거나 가지되, 하나는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*인 치환기이고; 다른 하나의 치환기는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 포함하거나 가지되, 하나는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이고; 다른 하나의 치환기는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 포함하거나 가지되, 하나는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 1: HOOC-(CH2)n-CO-*이고(식 중 n은 16임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이고; 다른 하나의 치환기는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 4: HOS(O)2-(CH2)n-CO-*이고(식 중 m은 15임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*인 치환기이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 포함하거나 가지되, 하나는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 3: HOOC-(C6H4)-O-(CH2)m-CO-*이고(식 중 m은 10임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 결합인 치환기이고; 다른 하나의 치환기는 식 I의 치환기로서, Z1은 화학식 4: HOS(O)2-(CH2)n-CO-*이고(식 중 m은 15임); Z2는 결합이고; Z3은 γGlu이고; Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, 및 Z9 중 2개는 Ado이고 나머지 4개는 결합이고; Z10은 화학식 14: *-NH-CH2-(C6H4)-CH2-*인 치환기이다.
펩티드 및 부착 부위
본 발명에 따른 EGF(A) 유도체 또는 화합물은 서열번호 1에 의해 정의된 바와 같은 LDL-R의 EGF(A) 도메인의 EGF(A) 펩티드 유사체를 포함한다. 이러한 펩티드 서열은 본원의 상기에서 상세히 설명되었으며, 본 발명의 유도체 또는 화합물의 펩티드는 동일한 용어로 기술되고 정의될 수 있다. EGF(A) 유도체 또는 화합물은 전술한 바와 같은, 펩티드 서열에 연결된 적어도 하나의 치환기를 추가로 갖는다.
본 발명의 화합물에서, 치환기는 펩티드에 공유 부착되어, 펩티드 서열의 하나의 아미노산 잔기에 공유 부착된다.
일 구현예에서, 본 발명의 EGF(A) 유도체는 다음 위치 중 어느 하나에 부착되지 않은 치환기를 포함한다: 295, 296, 298, 301, 302, 및 307. 추가의 구현예에서, 치환기는 다음 위치 중 어느 하나에 부착되지 않는다: 295, 296, 298, 301, 302, 307, 및 310. 추가의 이러한 구현예에서, 치환기는 다음 위치 중 어느 하나에 부착되지 않는다: 299 및 320.
특정 구현예에서, 치환기는 위치 297, 304, 308, 317, 319, 및 331 중 어느 하나를 제외하고 292 내지 333의 임의의 위치를 통해 부착된다.
특정 구현예에서, 치환기는 위치 297, 298, 301, 302, 304, 307, 308, 317, 319, 및 331 중 어느 하나를 제외하고 292 내지 333의 임의의 위치를 통해 부착된다.
특정 구현예에서, 치환기는 위치 295, 296, 297, 298, 301, 302, 304, 307, 308, 317, 319, 및 331 중 어느 하나를 제외하고 292 내지 333의 임의의 위치를 통해 부착된다. 특정 구현예에서, 치환기는 위치 295, 296, 297, 298, 301, 302, 304, 307, 308, 310, 317, 319, 320, 및 331 중 어느 하나를 제외하고 292 내지 333의 임의의 위치를 통해 부착된다. 특정 구현예에서, 치환기는 위치 295, 296, 297, 298, 301, 302, 304, 307, 308, 309, 310, 317, 319, 320, 및 331 중 어느 하나를 제외하고 292 내지 333의 임의의 위치를 통해 부착된다.
일 구현예에서, 치환기(들)는 EGF(A) 유사체의 위치 292, 293, 294, 299, 300, 303, 305, 306, 309, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 318, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 및 333 중 임의의 1개 또는 2개의 위치에 부착된다.
일 구현예에서, 치환기(들)는 EGF(A) 유사체의 위치 292, 293, 294, 300, 303, 305, 306, 309, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 318, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 및 333 중 임의의 1개 또는 2개의 위치에 부착된다.
일 구현예에서, 치환기(들)는 EGF(A) 유사체의 위치 292, 293, 294, 300, 303, 305, 306, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 318, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 및 333 중 임의의 1개 또는 2개의 위치에 부착된다.
일 구현예에서, 치환기는 펩티드 서열의 N-말단 아미노산에 부착된다. 특정 구현예에서, N-말단 아미노산은 Gly이다. 특정 구현예에서, N-말단 아미노산은 293Gly이다. 특정 구현예에서, N-말단 아미노산은 293Lys이다. 특정 구현예에서, N-말단 아미노산은 292Lys이다. 이는 Lys 또는 Gly일 수도 있고, N-말단 위치(293일 수 있음) 또는 N-말단으로부터 더 먼 임의의 위치에 있는 또 다른 아미노산 잔기, 예컨대 294Thr, 294Gly 또는 294Lys 또는 295Asn일 수도 있다. 특정 구현예에서, 치환기는 펩티드 유사체의 N-말단 아미노산 잔기의 알파-질소에 부착된다. 또 다른 구현예에서, N-말단 아미노산 잔기가 Lys인 경우, 치환기는 리신 잔기의 알파-질소에 공유 연결되거나 엡실론 아미노기에 공유 연결될 수 있다.
특정 구현예에서, 치환기는 펩티드에 존재하는 Lys 잔기의 ε-아미노기에 부착된다.
또 다른 구현예에서, 치환기는 C-말단 위치에서 Lys에 부착되며, C-말단 위치는 위치 332, 333이거나 C-말단에 더 가까운 임의의 위치일 수 있다.
본 발명의 펩티드가 N-말단 또는 C-말단에서 신장을 포함하는 구현예에서, 치환기(들)는 상기 신장(들)의 아미노산 잔기에 부착될 수 있다. N-말단 신장의 존재 시, 치환기는 상기 신장의 N-말단 아미노산에 부착되거나 신장 서열 내에 존재하는 Lys에 부착될 수 있다. C-말단 신장의 존재 시, 치환기는 C-말단 위치에서 Lys에 부착되거나 신장 서열 내에 존재하는 Lys에 부착될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 치환기는 펩티드 서열에 존재하는 아미노산에 부착된다. 특정 구현예에서, 치환기는 펩티드에 존재하는 리신 잔기에 연결된다. 특정 구현예에서, 치환기는 펩티드에 존재하는 리신 잔기의 엡실론 아미노기에 연결된다. 치환기가 연결되는 리신 잔기는, 펩티드의 N-말단 위치 또는 C-말단 위치를 포함하여 LDL-R(293-332) EGF(A) 유사체의 임의의 위치, N-말단 신장이 존재하는 경우 N-말단 신장의 N-말단 단부 잔기에 있거나 내에 있는 임의의 위치, C-말단 신장이 존재하는 경우 C-말단 신장의 C-말단 단부 잔기에 있거나 내에 있는 임의의 위치에 위치할 수 있다.
본원에서 전술한 바와 같이, EGF(A) 펩티드 유사체는 하나 이상의 Lys 잔기를 가질 수 있고; 이들 잔기는 치환기를 부착하는 데 유용하다.
특정 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 다음의 군으로부터 선택된다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
특정 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 293Lys, 294Lys, 295Lys, 296Lys, 298Lys, 299Lys, 301Lys, 302Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 307Lys, 309Lys, 310Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 293Lys, 294Lys, 298Lys, 299Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 다음으로부터 선택된다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 299Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 315Lys, 316Lys, 318Lys, 320Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
또 다른 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 다음으로부터 선택된다: 292Lys, 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
또 다른 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 다음으로부터 선택된다: 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 309Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
또 다른 구현예에서, 치환기(들)가 연결되는 리신(들)은 다음으로부터 선택된다: 293Lys, 294Lys, 300Lys, 303Lys, 305Lys, 306Lys, 311Lys, 313Lys, 314Lys, 316Lys, 318Lys, 321Lys, 322Lys, 323Lys, 324Lys, 325Lys, 326Lys, 327Lys, 328Lys, 329Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys.
치환기가 C-말단 신장에 부착되는 구현예에서, 치환기가 연결되는 리신은 333Lys 내지 242Lys 위치 및/또는 333Lys 내지 383Lys 위치 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물이 2개의 치환기를 갖는 구현예에서, 치환기들은 위에서 정의된 바와 같이 서로 독립적으로 연결될 수 있는데, 이는 2개의 치환기 중 어느 하나는 펩티드의 N-말단 아미노산에 부착되거나, 펩티드의 C-말단 아미노산에 부착되거나, 펩티드의 아미노산 서열 내의 아미노산에 부착될 수 있음을 의미한다.
Lys가 N-말단 위치에 존재하는 구현예에서, 2개의 치환기는 모두 펩티드의 N-말단 Lys에 연결될 수 있다. 하나는 상기 Lys의 N-말단 알파-아민에 연결되는 반면, 다른 하나는 상기 Lys의 엡실론 질소에 연결될 수 있다. 2개의 치환기가 존재할 때, 하나는 펩티드의 N-말단 아미노산에 연결될 수 있는 반면, 다른 하나의 치환기는 펩티드 내의 아미노산, 예컨대 Lys에 연결된다. 대안적으로, 하나는 펩티드의 C-말단 위치에서 Lys에 연결될 수 있는 반면, 다른 하나의 치환기는 펩티드 내의 아미노산, 예컨대 Lys에 연결된다. 대안적으로, 하나의 치환기는 신장을 포함하여 펩티드 내의 아미노산 잔기, 예컨대 Lys에 연결될 수 있으며, 다른 하나의 치환기는 신장을 포함하여 펩티드 내의 또 다른 아미노산 잔기, 예컨대 Lys에 연결된다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하나의 치환기를 가지며, 상기 치환기는 N-말단에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 292Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 293Lys에서 펩티드에 연결되거나, 상기 치환기는 위치 299Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 300Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 309Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 311Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 312Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 313Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 314Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 315Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 316Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 318Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 320Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 321Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 322Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 323Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 324Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 325Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 326Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 328Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 329Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 330Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 332Lys에서 펩티드에 연결되거나; 상기 치환기는 위치 333Lys에서 펩티드에 연결된다.
본 발명의 유도체가 2개의 치환기를 갖는 구현예에서, 상기 치환기는 N-말단 및 전술한 Lys 위치 중 어느 하나, 예컨대 293Lys, 309Lys, 313Lys, 324Lys, 328Lys, 330Lys, 332Lys, 및 333Lys를 통해 펩티드에 연결될 수 있다.
유도체가 2개의 치환기를 포함하는 추가의 구현예에서, 2개의 치환기는 2개의 상이한 Lys 잔기, 예컨대 다음의 Lys 잔기 쌍 중 어느 하나에 연결될 수 있다:
i. 293K 및 294K xiv. 313K 및 321K
ii. 293K 및 312K xv. 313K 및 324K
iii. 293K 및 333K xvi. 313K 및 328K
iv. 309K 및 313K xvii. 313K 및 332K
v. 309K 및 324K xviii.313K 및 333K
vi. 309K 및 328K xix. 314K 및 333K
vii. 309K 및 332K xx. 321K 및 332K
viii. 309K 및 333K xxi. 321K 및 333K
ix. 311K 및 313K xxii. 324K 및 333K
x. 312K 및 333K xxiii.324K 및 328K
xi. 312K 및 313K xxiv. 328K 및 333K
xii. 312K 및 314K xxv. 330K 및 333K, 및
xiii. 313K 및 314K xxvi. 332K 및 333K
일 구현예에서, 2개의 치환기는 333Lys 및 다음으로부터 선택된 Lys를 통해 연결된다: 293Lys, 309Lys, 312Lys, 313Lys, 314Lys, 321Lys, 324Lys, 328Lys, 330Lys, 및 332Lys.
일 구현예에서, 2개의 치환기는 333Lys 및 다음으로부터 선택된 Lys를 통해 연결된다: 312Lys, 313Lys, 314Lys, 321Lys, 324Lys, 328Lys, 및 330Lys.
일 구현예에서, 2개의 치환기는 333Lys 및 다음으로부터 선택된 Lys를 통해 연결된다: 313Lys, 324Lys, 및 328Lys.
전술한 바와 같이, 펩티드는 하나 이상의 아미노산 치환기를 가질 수 있으며, 이들 치환기는 본원에 기술된 것과 같이 특정 위치에서 특정 아미노산 잔기와 조합될 수 있다. 이러한 특이적 아미노산 잔기는 유지되어야 하는 야생형 아미노산 잔기(예: 시스테인)일 수 있으며, 일련의 바람직한 구현예에서, 이들은 예를 들어 본원에 기술된 다른 특징과 조합된 상태로 펩티드 유사체에 존재할 수 있다. 이러한 구현예에서, 펩티드 유사체는 위치 297Cys-308Cys, 304Cys-317Cys, 및 319Cys-331Cys에서 3개의 이황화 브리지를 포함한다. 이러한 구현예의 추가적인 예에서, 펩티드 유도체의 펩티드 유사체는 위치 297Cys-308Cys, 304Cys-317Cys, 및 319Cys-331Cys에서 3개의 이황화 브리지 및 적어도 하나의 치환기를 포함하되, 치환기(들)는 상기 펩티드 유사체의 위치 295, 296, 298, 301, 302, 및 307로부터 선택된 위치에 부착되지 않는다. 당업자는 펩티드 서열 정보의 조합을 치환기의 위치 및 동일성에 대한 정보와 조합하여 본 발명의 다양한 특정 구현예를 정의할 수 있음을 이해할 것이다.
일 구현예에서, 펩티드 유사체는 치환기가 연결된 위치 이외의 다른 위치에서 Lys를 포함하지 않는다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하나의 치환기를 가지며, 상기 치환기는 N-말단 위치 또는 임의의 위치에서 Lys에 연결되고, 펩티드 유사체는 다른 모든 위치에서 Lys를 포함하지 않는다. 일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하나의 치환기를 가지며, 상기 치환기는 위치 312 이외의 다른 임의의 위치에서 Lys에 연결되고, 펩티드 유사체는 위치 312Arg에서 Arg를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 2개의 치환기를 가지며, 펩티드 유사체는 치환기가 연결된 위치 이외의 위치에서 Lys를 포함하지 않는다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 다음으로 이루어진 EGF(A) 유도체의 군으로부터 선택된다: WO2017/121850에 개시된 실시예 1~47, 51~102, 및 106~159.
추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 다음으로 이루어진 EGF(A) 유도체의 군으로부터 개별적으로 선택된다: WO2017/121850에 개시된 실시예 1~47, 51~102, 및 106~159.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 다음으로 이루어진 EGF(A) 유도체의 군으로부터 선택된다: WO2017/121850에 개시된 실시예 1~44, 46~47, 51~55, 57, 60~64, 66~69, 71~102, 및 106~159.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 EGF(A) 유도체는 다음으로 이루어진 EGF(A) 유도체의 군으로부터 선택된다: WO2017/121850에 개시되고 아래에 도시된 구조를 갖는 실시예 31, 95, 128, 133, 143, 144, 150, 151, 152, 및 153.
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
전달제
N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염
본 발명에 사용된 전달제는 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이다. N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴레이트의 구조식은 식 (I)로 표시된다:
Figure pct00036
(I).
일부 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 1개의 일가 양이온, 2개의 일가 양이온 또는 1개의 이가 양이온을 포함한다. 일부 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 나트륨염 및 칼륨염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 나트륨염, 칼륨염 및/또는 암모늄염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 나트륨염 또는 칼륨염이다. 일 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 나트륨염 및 암모늄염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴레이트의 염은 예를 들어 WO96/030036, WO00/046182, WO01/092206 또는 WO2008/028859에 기술된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 결정질 및/또는 비정질일 수 있다. 일부 구현예에서, 전달제는 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염의 무수물, 일수화물, 이수화물, 삼수화물, 용매 화합물 또는 수화물의 1/3뿐만 아니라 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 전달제는 WO2007/121318에 기술된 것과 같이 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염이다.
일부 구현예에서, 전달제는 8-(살리실로일아미노)옥타논산나트륨으로도 알려져 있는 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산나트륨(본원에서 "SNAC"로 지칭됨)이다.
조성물
본 발명의 조성물 또는 약학적 조성물은 아래에 후술하는 바와 같이 경구 경로에 의한 투여에 적합한 고형 또는 건식 조성물이다.
일부 구현예에서, 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "부형제(excipient)"는 활성 치료 성분(들) 또는 약학적 성분(들)(API) 이외의 임의의 성분을 광범위하게 지칭한다. 부형제는 약학적 불활성 물질, 비활성 물질 및/또는 치료적으로 또는 의약적으로 비활성인 물질일 수 있다.
부형제는 다양한 목적으로, 예를 들어, 담체, 비히클, 필러, 결합제, 윤활제, 활택제, 붕해제, 유동 조절제, 결정화 억제제, 가용화제, 안정화제, 착색제, 향미제, 계면활성제, 유화제 또는 이들의 조합으로서 사용될 수 있고/있거나 치료적 활성 물질(들) 또는 활성 약학적 성분(들)의 투여 및/또는 흡수를 개선하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같이, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 전달제로서 작용하는 부형제이다. 사용된 각각의 부형제의 양은 당업계의 통상적인 범위 내에서 다양할 수 있다. 경구 투여 형태를 제형화하는 데 사용될 수 있는 기술 및 부형제는 Handbook of Pharmaceutical Excipients, 8th edition, Sheskey 등 Eds., American Pharmaceuticals Association and the Pharmaceutical Press, publications department of the Royal Pharmaceutical Society of Great Britain (2017); 및 Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 22nd edition, Remington and Allen, Eds., Pharmaceutical Press (2013)에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 부형제는 결합제(예: 폴리비닐 피롤리돈(포비돈) 등); 필러(예: 셀룰로오스 분말; 미정질 셀룰로오스; 하이드록시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스 및 하이드록시-프로필메틸셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유사체; 이염기 인산칼슘; 옥수수 전분; 전젤라틴화 전분 등); 윤활제 및/또는 활택제(예: 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아릴푸마르산나트륨, 글리세롤 트리베헤네이트 등); 유동 조절제(예: 콜로이드성 실리카, 탈크 등); 결정화 억제제(예: 포비돈 등); 가용화제(예: 플루로닉, 포비돈 등); 산화철 적색 또는 황색, 이산화티타늄, 탈크 등과 같은 염료와 안료를 포함하는 착색제; pH 조절제(예: 구연산, 타르타르산, 푸마르산, 구연산나트륨, 이염기성 인산칼슘, 이염기 인산나트륨 등); 계면활성제; 및 유화제(예: 플루로닉, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카복시메틸 셀룰로오스, 폴리에톡실화 및 수소화 피마자유 등); 및 이들 부형제 및/또는 보조제(adjuvant) 중 2개 이상의 혼합물로부터 선택될 수 있다.
조성물은 결합제, 예컨대, 포비돈; 전분; 셀룰로오스 및 이들의 유도체, 예컨대 미정질 셀룰로오스, 예를 들어, FMC(Philadelphia, PA)의 Avicel PH, Dow Chemical Corp.(Midland, MI)의 Avicel PH, Dow Chemical Corp.(미들랜드 소재)의 하이드록시프로필 셀룰로오스 히드록시에틸 셀룰로오스 및 하이드록실프로필메틸 셀룰로오스 METHOCEL; 수크로오스; 덱스트로오스; 옥수수 시럽; 다당류; 및 젤라틴을 포함할 수 있다. 결합제는 건식 결합제 및/또는 습식 과립화 결합제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 적절한 건식 결합제는, 예를 들어, Avicel PH 102 및 Avicel PH 200과 같은 셀룰로오스 분말 및 미정질 셀룰로오스이다. 일부 구현예에서, 조성물은 Avicel PH 102와 같은 Avicel을 포함한다. 습식 과립화 또는 건식 과립화에 적합한 결합제는 옥수수 전분; 폴리비닐 피롤리돈(포비돈); 비닐피롤리돈-비닐아세테이트 공중합체(코포비돈); 및 하이드록시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스 및 하이드록실-프로필메틸셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체이다. 일부 구현예에서, 조성물은 포비돈을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 락토오스, 만니톨, 에리쓰리톨, 수크로오스, 소르비톨, 인산칼슘(예: 인산수소칼슘), 미정질 셀룰로오스, 분말화된 셀룰로오스, 정제당(confectioner's sugar), 압축성 당(compressible sugar), 덱스트레이트(dextrates), 덱스트린 및 덱스트로오스로부터 선택될 수 있는 필러를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 Avicel PH 102 또는 Avicel PH 200과 같은 미정질 셀룰로오스를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 윤활제 및/또는 활택제를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 윤활제 및/또는 활택제, 예컨대, 탈크, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산아연, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 다이베헤네이트, 베헤노일 폴리옥실-8 글리세리드, 폴리에틸렌 옥사이드 중합체, 라우릴 황산나트륨, 라우릴 황산마그네슘, 올레산나트륨, 스테아릴 푸마르산나트륨, 스테아르산, 수소화 식물성 오일, 이산화규소 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 스테아린산마그네슘 또는 글리세릴 다이베헤네이트(예컨대, 베헨산(C22)의 모노-, 다이- 및 트리에스테르로 이루어지되 다이에스테르 분획이 지배적인 제품 Compritol® 888 ATO)를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 붕해제, 예컨대 전분 글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 전분 글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 또는 건조 옥수수 전분 등을 포함한다.
조성물은 하나 이상의 계면활성제(surfactants), 예를 들어, 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2개의 상이한 계면활성제를 포함할 수 있다. 용어 "계면활성제"는 수용성(친수성) 부분 및 지용성(친유성) 부분으로 이루어진 임의의 분자 또는 이온을 지칭한다. 계면활성제는, 예를 들어 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제 및/또는 쌍성이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물은 매우 높은 함량의 전달제를 갖는다. 이러한 매우 높은 함량은 활성 약학 성분(즉, PCSK9 억제제)을 또한 포함하는 정제의 전체 함량에 대해 정의되거나, 대안적으로는 활성 약학 성분을 제외한 부형제의 총 함량에 대해 정의될 수 있다. 아래 본 발명을 구현하기 위한 구체적인 내용도 특이적 성분인 PCSK9 억제제 및 부형제로 이루어진 조성물을 지칭하는데, 그럼에도 불구하고 "이루어진(consisting)"이란 용어는 조성물의 기능에 영향을 미치지 않는 미량의 임의의 물질을 포함하는 것으로 이해해야하며, 이는 "본질적으로 이루어진(consisting essential of)"으로도 지칭될 수 있다. 이러한 물질은 PCSK9 억제제를 작용제를 제조하거나 NAC의 염을 생성하는 도중에 남아있는 불순물이거나, 제형의 품질 또는 흡수에 영향을 미치지 않는 임의의 약학적으로 허용 가능한 부형제의 최소량일 수 있다.
본 발명의 일 양태는 다음을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로서,
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 조성물의 적어도 60%(w/w) 또는 그 이상을 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 상기 조성물의 70%(w/w) 초과, 예컨대 75%(w/w) 초과, 예컨대 80%(w/w) 초과, 예컨대 85%(w/w) 초과, 예컨대 90%(w/w) 초과를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 상기 조성물의 적어도 70%(w/w), 예컨대 적어도 75%(w/w), 예컨대 적어도 80%(w/w), 예컨대 적어도 85%(w/w), 예컨대 적어도 90%(w/w)를 구성한다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w)를 구성한다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은
a) PCSK9 억제제 및
b) 부형제로 이루어지되, 부형제는
i. N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및
ii. 하나 이상의 추가 부형제이고,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w)를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 부형제의 적어도 91%(w/w), 예컨대 적어도 92%(w/w), 예컨대 적어도 93%(w/w), 예컨대 적어도 94%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 부형제의 95%(w/w) 초과, 예컨대 96%(w/w) 초과, 예컨대 97%(w/w) 초과, 또는 예컨대 98%(w/w) 초과를 구성한다.
본 발명의 일 양태는 다음을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로서,
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성한다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은
a) PCSK9 억제제 및
b) 부형제로 이루어지며, 여기서 부형제는
i. N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및
ii. 하나 이상의 추가 부형제이고,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 부형제의 적어도 91%(w/w), 예컨대 적어도 92%(w/w), 예컨대 적어도 93%(w/w), 예컨대 적어도 94%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 부형제의 95%(w/w) 초과, 예컨대 96%(w/w) 초과, 예컨대 97%(w/w) 초과, 또는 예컨대 98%(w/w) 초과를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 60%(w/w) 초과, 예컨대 70%(w/w) 초과, 예컨대 75%(w/w) 초과, 또는 예컨대 80%(w/w) 초과를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 적어도 60%(w/w), 예컨대 적어도 70%(w/w), 예컨대 적어도 75%(w/w), 또는 예컨대 적어도 80%(w/w)를 구성한다.
추가의 이러한 구현예에서, NAC의 염은 조성물의 부형제의 적어도 95%(w/w), 예컨대 적어도 96%(w/w), 예컨대 적어도 97%(w/w), 예컨대 적어도 98%(w/w)를 구성한다.
전술한 바와 같이, 전달제제 외에 부형제의 함량은 본 발명에 따르며, 바람직하게는 최소 함량이다. 일 구현예에서, 약학적 조성물은 적어도 하나의 윤활제를 포함한다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은
a) PCSK9 억제제,
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및
c) 적어도 하나의 윤활제를 포함하거나 이들로 이루어진다.
이러한 구현예에서, 윤활제는 스테아린산마그네슘 또는 글리세릴 디베헤네이트일 수 있다. 일 구현예에서, 윤활제는 스테아린산마그네슘이다. 일 구현예에서, 윤활제는 글리세릴 디베헤네이트이다.
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이 조성물의 부형제의 적어도 95%(w/w)를 구성하는 전술한 것과 같은 조성물은 추가로 상기 염이 조성물의 적어도 60%(w/w) 또는 그 이상을 구성하는 조성물일 수 있다.
마찬가지로, 상기 염이 조성물의 적어도 60%(w/w) 또는 그 이상을 구성하는 전술한 조성물은 추가로 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하는 조성물일 수 있다.
약학적 조성물은 추가로 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 나트륨염, 칼륨염으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 대안적으로 나트륨염과 칼륨염으로만 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물일 수 있다. 일 구현예에서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산나트륨이다.
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w)를 구성하는 구현예에서, 임의의 추가 부형제는 부형제의 최대 10%(w/w)를 구성한다. 즉, 임의의 추가 결합제, 필러, 및/또는 윤활제/활택제는 조성물의 부형제 총 중량의 최대 10%(w/w)를 구성한다. 일부 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 90%(w/w) 또는 그 이상의 전달제 및 5%(w/w) 미만의 임의의 추가 부형제, 예컨대 결합제, 필러, 및/또는 윤활제/활택제를 포함한다. 일 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 90%(w/w)의 전달제 및 최대 5%(w/w) 이하의 윤활제를 포함한다. 일 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 90%(w/w)의 전달제 및 3%(w/w) 미만의 윤활제를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 90%(w/w) 또는 그 이상의 전달제 및 0.1~10%(w/w), 예컨대 0.5~8%(w/w), 예컨대 1~5%(w/w)의 윤활제를 포함한다. 추가의 이러한 구현예에서, 조성물의 부형제는 1~3%(w/w) 또는 예컨대 2~2.5%(w/w)의 윤활제를 포함한다.
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염이 조성물의 부형제의 적어도 95%(w/w)를 구성하는 구현예에서, 조성물의 임의의 추가 부형제는 부형제의 최대 5%(w/w)를 구성한다. 즉, 임의의 이러한 결합제, 필러, 및/또는 윤활제/활택제는 조성물의 부형제 총 중량의 최대 5%(w/w)를 구성한다. 일부 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 95%(w/w)의 전달제 및 5%(w/w) 미만의 윤활제를 포함한다. 일 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 95%(w/w)의 전달제 및 3%(w/w) 미만의 윤활제를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물의 부형제는 적어도 95%(w/w)의 전달제 및 0.1~5%(w/w), 예컨대 0.5~4%(w/w) 또는 1~3%(w/w)의 윤활제를 포함한다. 추가의 이러한 구현예에서, 조성물의 부형제는 2~2.5%(w/w)의 윤활제를 포함한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 경구 투여에 적합한 투여 형태로 생산된다. 이하에서, 본 발명의 조성물의 성분의 절대량은 투여 유닛 중 함량, 즉 정제, 캡슐 또는 봉지 당 함량을 기준으로 제공된다.
추가 구현예에서의 본 발명의 약학적 조성물은 투여 단위 당 최대 1000 mg의 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명은 투여 단위가 최대 600 mg의 상기 염을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 투여 단위 당 N-(8-(2-하이드록시벤조일) 아미노)카프릴산의 염의 양은 적어도 0.05 mmol, 예컨대 적어도 0.075 mmol, 예컨대 적어도 0.1 mmol, 예컨대 적어도 0.125 mmol, 예컨대 적어도 0.15 mmol, 예컨대 적어도 0.20 mmol, 예컨대 적어도 0.25 mmol, 적어도 0.30 mmol, 적어도 0.35 mmol, 적어도 0.40 mmol, 적어도 0.45 mmol, 적어도 0.50 mmol, 적어도 0.55 mmol, 또는 적어도 0.60 mmol이다.
일부 구현예에서, 조성물의 투여 단위 당 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염의 양은 최대 3 mmol, 예컨대 최대 2.75 mmol, 예컨대 최대 2.5 mmol, 예컨대 최대 2.25 mmol, 예컨대 2 mmol, 예컨대 최대 1.5 mmol, 최대 1 mmol, 최대 0.75 mmol, 최대 0.6 mmol, 최대 0.5 mmol, 최대 0.4 mmol, 최대 0.3 mmol 및 최대 0.2 mmol이다.
일부 구현예에서, 조성물의 투여 단위 당 N-(8-(2-하이드록시벤조일) 아미노)카프릴산의 염의 양은 0.05~3 mmol의 범위, 0.10~2.5 mmol의 범위, 0.15~2.0 mmol의 범위, 0.20~1.5 mmol의 범위, 0.25~1.0 mmol의 범위, 0.30~0.75 mmol의 범위 또는 예컨대 0.45~0.65 mmol의 범위이다.
NAC의 염이 SNAC인 일부 구현예에서, 조성물 내 SNAC의 양은 투여 단위 당 적어도 20 mg, 예컨대 적어도 25 mg, 예컨대 적어도 50 mg, 예컨대 적어도 75 mg, 적어도 100 mg, 적어도 125 mg, 적어도 150 mg, 적어도 175 mg, 적어도 200 mg, 적어도 225 mg, 적어도 250 mg, 적어도 275 mg 및 적어도 300 mg이다.
NAC의 염이 SNAC인 일부 구현예에서, 조성물 내 SNAC의 양은 투여 단위 당 최대 1000 mg, 예컨대 최대 800 mg, 예컨대 최대 600 mg, 예컨대 최대 575 mg, 예컨대 최대 550 mg, 이하 최대 525 mg, 최대 500 mg, 최대 475 mg, 최대 450 mg, 최대 425 mg, 최대 400 mg, 최대 375 mg, 최대 350 mg, 최도 325 mg 또는 투여 단위 당 최대 300 mg이다.
NAC의 염이 SNAC인 일부 구현예에서, 조성물 내 SNAC의 양은 투여 단위 당 100~1000 mg, 예컨대 150~800 mg, 예컨대 200~750 mg, 예컨대 250~700 mg, 예컨대 300~700 mg, 예컨대 350~650 mg, 또는 예컨대 약 400 내지 약 600 mg의 범위, 예컨대 투여 단위 당 약 500 mg이다.
NAC의 염이 SNAC인 일부 구현예에서, 조성물 내 SNAC의 양은 투여 단위 당 20~800 mg, 예컨대 25~600 mg, 예컨대 50~500 mg, 예컨대 50~400 mg, 예컨대 75~400 mg, 예컨대 80~350 mg 또는 예컨대 약 100 내지 약 300 mg의 범위이다.
NAC의 염이 SNAC인 일 구현예에서, SNAC의 양은 투여 단위 당 200~800 mg, 예컨대 250~400 mg, 예컨대 250~350 mg, 예컨대 275~325 mg의 범위, 예컨대 약 300 mg이다.
NAC의 염이 SNAC인 일 구현예에서, SNAC의 양은 투여 단위 당 20~200 mg, 예컨대 25~175 mg, 예컨대 75~150 mg, 예컨대 80~120 mg의 범위, 예컨대 약 100 mg이다.
일 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 단위는 0.5~150 mg, 0.1~100 mg, 또는 0.2~100 mg의 PCSK9 억제제를 포함한다.
일부 구현예에서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 유도체이고, 조성물의 투여 단위는 0.5~150, 0.5~120, 0.5~100 mg, 1~80 mg, 1~70 mg, 1~60, 1~50 mg, 또는 1~40 mg 범위인 PCSK9 억제제의 양을 포함한다.
추가의 이러한 구현예에서, 투여 단위는 투여 단위 당 1~50 mg의 PCSK9 억제제, 예컨대 0.75~40 mg, 예컨대 10, 15, 20, 25, 또는 30 mg, 또는 35, 40, 45 mg, 예컨대 10~30 또는 30~50 mg의 PCSK9 억제제를 포함한다.
추가의 이러한 구현예에서, 투여 단위는 투여 단위 당 20 내지 150 mg의 PCSK9 억제제, 예컨대 20~120 mg, 예컨대 20~100 mg, 예컨대 20~80 mg, 예컨대 20, 30, 40, 60, 70, 또는 80 mg, 예컨대 20, 30, 40, 또는 50 mg, 예컨대 80, 85, 90, 95, 또는 100 mg, 또는 예컨대 100, 110, 120, 또는 130 mg, 또는 예컨대 50 mg, 또는 예컨대 75 mg의 PCSK9 억제제를 포함한다.
추가의 이러한 구현예에서, 투여 단위는 투여 단위 당 5~50 mg의 PCSK9 억제제, 예컨대 10~45 mg, 예컨대 20, 30, 또는 40 mg, 또는 예컨대 25, 35, 또는 45 mg, 또는 예컨대 30~50 mg, 또는 예컨대 20~40 mg의 PCSK9 억제제를 포함한다.
PCSK9 억제제의 양은 PCSK9 억제제의 동일성에 따라 달라질 수 있다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 0.5~50 mg의 스테아린산마그네슘, 예컨대 1~25 mg, 예컨대 1~10 mg, 예컨대 2~8 mg, 또는 예컨대 2~5 mg의 스테아린산마그네슘을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 스테아린산마그네슘의 양은 조성물의 단위 투여량이 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염(예: SNAC) 100 mg 당 1~10 mg, 예컨대 1~8 mg, 예컨대 2~5 mg, 또는 예컨대 2~3 mg의 스테아린산마그네슘을 포함하도록 NAC의 염(예: SNAC)의 양에 대해 결정된다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 80~1000 mg의 SNAC, 0.5~100 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~50 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 80~800 mg의 SNAC, 1.0~80 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~40 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 100~800 mg의 SNAC, 2~50 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~40 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 100~600 mg의 SNAC, 5~50 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~30 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 100~500 mg의 SNAC, 5~50 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~25 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 100~500 mg의 SNAC, 5~50 mg의 PCSK9 억제제, 및 1~25 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 80~1000 mg의 SNAC, 0.5~100 mg의 EGF(A) 유도체, 및 1~50 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 100~800 mg의 SNAC, 20~120 mg의 EGF(A) 유도체, 및 1~30 mg의 윤활제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조성물의 단위 투여량은 200~600 mg의 SNAC, 50~100 mg의 EGF(A) 유도체, 및 1~20 mg의 윤활제를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 시험관 내에서 신속하게 붕해되거나 용해된다. 붕해 또는 용해는 당업계에 공지된 바와 같이, 예컨대 본원에 기술된 검정 II 또는 검정 III을 사용하여 시험할 수 있다.
용해 또는 방출은 조성물의 PCSK9 억제제 총 함량 대비 주어진 시간 후 용액 중에서 측정된 PCSK9 억제제의 양으로서 표현될 수 있다. 상대량은 백분율(%)로서 주어질 수 있다.
일 구현예에서, PCSK9 억제제는 본 발명의 약학적 조성물로부터 15분 이내에 적어도 80% 방출되거나 30분 이내에 적어도 95% 방출된다. 이러한 일 구현예에서, 방출은 pH 6.8에서 측정된다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
여기서 PCSK9 억제제의 방출은 15분 이내에 80%에 도달하거나 30분 이내에 95%에 도달한다. 일 구현예에서, 방출은 pH 6.8에서 측정된다.
실험을 통해 본 발명에 따른 PCSK9 억제제/SNAC 조성물이 붕해 및 용해와 관련하여 세마글루티드/SNAC 조성물처럼 거동한다는 것을 입증하였다(본원의 실시예 2 및 3). WO 2012/080471 및 WO 2013/139694에 따라 제조되고 세마글루티드 및 다른 GLP-1 수용체 작용제(PCT/EP2019/052487)에 대해 이전에 관찰된 것과 유사한 PCSK9 억제제/SNAC 조성물과 비교하여, 본 발명에 따른 조성물을 사용한 PCSK9 억제제의 개선된 혈장 노출은 본원의 검정 V(실시예 4)를 사용하여 입증되었다.
일 구현예에서 본 발명의 약학적 조성물은 생체 내에서 조기 노출된다. 일 구현예에서 본 발명의 약학적 조성물은 생체 내에서 노출이 증가한다. 일 구현예에서 본 발명의 약학적 조성물은 생체 내에서 조기 노출이 증가한다. 이러한 생체 내 노출은 관련된 모델, 예컨대 본원에 기술된 검정 V에서 시험될 수 있다. 노출은 소정의 기간에 걸쳐, 예컨대 투여 후 t=0~30분 동안 계산된 누적 투여량 보정 AUC로서 측정될 수도 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 WO2013/139694에 기술된 바와 같이 GLP-1을 PCSK9 억제제로 치환하여 제조한 PCSK9 억제제 조성물에 비해 투여 후 t=30분에 투여량 보정 혈장 노출이 증가한 약학적 조성물에 관한 것이다. 대안적으로, 기준은 본원에 기술된 시험 조성물 1일 수 있다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
여기서 투여 후 t=30분에 투여량 보정 혈장 노출은 WO2013/139694의 F형으로서 제조된 PCSK9 억제제 조성물에 비해 증가된다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
여기서 투여 후 t=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 WO2013/139694의 F형으로서 제조된 PCSK9 억제제 조성물에 비해 증가된다.
일 구현예에서, 투여 후 t=0~30분 동안의 투여량 보정 노출 AUC는 WO2013/139694의 F형으로서 제조된 PCSK9 억제제 조성물과 비교해 적어도 1.2배, 예컨대 1.5배, 예컨대 2배 증가된다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
여기서 투여후 t=30분에 투여량 보정 혈장 노출은 본원의 시험 조성물 1에 비해 증가된다.
일 구현예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함하며
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
여기서 투여후 t=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 본원의 시험 조성물 1에 비해 증가된다.
일 구현예에서, t=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 본원의 시험 조성물 1과 비교해 적어도 1.2배, 예컨대 1.5배, 예컨대 2배 증가된다.
투여 형태
조성물은 여러 가지 투여 형태로, 예를 들어 정제; 코팅된 정제; 봉지(sachet) 또는 캡슐, 예컨대 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐로 투여될 수 있으며, 모든 이러한 조성물은 고형 경구 투여 형태로서 간주된다.
조성물은, 예를 들어 안정성 및/또는 가용성을 개선하기 위해 또는 추가로 생체이용률 개선하기 위해 약물 담체 또는 약물 전달 시스템으로 추가로 배합될 수 있다. 조성물은 동결 건조된 조성물 또는 분무 건조된 조성물일 수 있다.
조성물은 정제와 같은 투여 단위의 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 단위 투여량의 중량은 50 mg 내지 1000 mg의 범위, 예컨대 50~750 mg의 범위, 또는 예컨대 100~600 mg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여 단위의 중량은 75 mg 내지 350 mg의 범위, 예컨대 100~300 mg의 범위, 또는 200~350 mg의 범위이다.
일부 구현예에서, 투여 단위의 중량은 100 mg 내지 400 mg의 범위, 예컨대 50~300 mg의 범위, 또는 200~400 mg의 범위이다.
일부 구현예에서, 조성물은 압착되기 전에, 즉 정제로 압축되기 전에 과립화될 수 있다. 조성물은 하나 이상의 과립 내 부분과 과립 외 부분을 포함할 수 있고, 여기서 과립 내 부분은 과립화되고 과립 외 부분은 과립화 후에 첨가된다.
과립 내 부분은 PCSK9 억제제, 전달제 및/또는 부형제, 예컨대 윤활제 및/또는 활택제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 과립 내 부분은 전달제 및 윤활제 및/또는 활택제를 포함한다.
일부 구현예에서, 과립 외 부분은 PCSK9 억제제, 및/또는 윤활제 및/또는 활택제, 예컨대 스테아린산마그네슘을 포함한다. 일부 구현예에서, 과립 외 부분은 PCSK9 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 과립 외 부분은 부형제, 예컨대 윤활제 및/또는 활택제, 예컨대 스테아린산마그네슘을 포함한다.
추가 구현예에서, 과립 내 부분은 PCSK9 억제제, 전달제 및 윤활제 및/또는 활택제를 포함한다. 이러한 구현예에서, 과립화물은 정제로 직접 압축될 수 있고, 정제는 과립 외 부분을 갖지 않는다.
조성물의 제조
본 발명에 따른 조성물의 제조는 당업계에 공지된 방법에 따라 수행될 수 있다.
정제화 물질의 건식 블렌드(dry blend)를 제조하기 위하여, 다양한 성분을 임의로 덩어리를 풀거나 체로 거르고, 칭량한 다음 합친다. 성분을 혼합하는 단계는 균질한 블렌드가 수득될 때까지 수행될 수 있다.
용어 "과립화물(granulate 및 granulates)"은 후술한 바와 같이 제조될 수 있는 조성물 물질의 입자를 지칭하도록 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 상기 용어는 고형 투여 제형의 제조에 사용되는 입자, 과립, 및 응집체의 형태로 된 약학적 성분을 광범위하게 지칭한다. 일반적으로, 과립은 분말 또는 블렌드를 가공하여 고형분을 수득하여 얻어지고, 이어서 이는 원하는 크기의 과립을 수득하는 데 사용된다.
정제화 물질에 과립을 사용하고자 하는 경우, 과립은 당업자에게 알려진 방식으로, 예를 들어, "빌드업(built-up)" 과립 또는 "파쇄식(broken-down)" 과립의 생산용으로 알려진 습식 과립화(wet granulation)를 사용해 생산될 수 있다. 빌드업 과립의 형성 방법은, 예를 들어 드럼 제립기(drum granulator) 내에서, 팬 제립기(pan granulator) 내에서, 디스크 제립기(disc granulator) 상에서, 유동상(fluidized bed) 내에서 연속적으로 작동하거나, 예를 들어 유동상 내에서, 회전식 유동상 내에서, 회분식 혼합기(예: 고전단 혼합기(high shear mixer) 또는 저전단 혼합기(low shear mixer)) 내에서, 또는 분무-건조 드럼 내에서 불연속적으로 작동 할 수 있으며, 예를 들어 분무-건조, 분무-과립화 또는 분무-고형화에 의해 과립화 덩어리를 과립화 용액과 동시에 분무하고 건조하는 단계를 포함할 수 있다. 파쇄식 과립의 생산 방법은 연속적으로 또는 불연속적으로 수행될 수 있으며, 여기서 과립화 덩어리는 과립화 용액과 습식 혼합물(wet aggregate)을 먼저 형성하고, 이는 후속하여 파쇄되어 (또는 다른 수단에 의해) 원하는 크기의 과립으로 성형된 다음, 과립이 건조될 수 있다. 습식 과립화 단계에 적합한 장비는 유성 혼합기(planetary mixer), 저전단 혼합기, 고전단 혼합기, 압출기 및 구형화기(spheronizer), 예컨대 Loedige, Glatt, Diosna, Fielder, Collette, Aeschbach, Alexanderwerk, Ytron, Wyss & Probst, Werner & Pfleiderer, HKD, Loser, Fuji, Nica, Caleva 및 Gabler사의 장치이지만 이들로 한정되지는 않는다. 과립은, 부형제(들) 및/또는 활성 약학적 성분 중 하나 이상을 압축하여 상대적으로 큰 몰딩, 예를 들어 슬러그 또는 리본을 형성하고, 이를 그라인딩(grinding)에 의해 분쇄하고, 분쇄된 물질을 추후 압축용 정제화 물질로서 사용하는 건식 과립화 기술에 의해 형성될 수도 있다. 건식 과립화에 적합한 장비는 Gerteis의 롤러 압축 장비, 예컨대 Gerteis MICRO-PACTOR, MINI-PACTOR 및 MACRO-PACTOR 등이지만 이들로 한정되지는 않는다.
정제화 물질을 고형 경구 투여 형태, 예를 들어 정제로 압축하기 위하여, 정제 프레스(tablet press)가 사용될 수 있다. 정제 프레스에서, 정제화 물질은 주형(die)의 캐비티 내에 채워진다(예를 들어 강제 공급되거나 중력 공급된다). 그런 다음, 정제화 물질은 압력을 가하는 한 세트의 천공(punch)에 의해 압축된다. 이어서, 생성된 압축물, 또는 정제는 정제 프레스로부터 배출된다. 전술한 정제화 공정은 지금 이후 본원에서 "압축 공정(compaction process)"으로 지칭한다. 적합한 정제 프레스는 회전식 정제 프레스와 편심 정제 프레스를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 정제 프레스의 예시로는, 그것들에 국한되는 것은 아니지만, Fette 102i (Fette GmbH), Korsch XL100, Korsch PH 106 회전식 정제 프레스(Korsch AG, 독일), Korsch EK-O 편심 정제화 프레스(Korsch AG, 독일) 및 Manesty F-프레스(Manesty Machines Ltd., 영국)가 있다.
일반적으로, 과립화물은 습식, 용융 또는 건식 과립화, 바람직하게는 건식 과립화에 의해 제조될 수 있다. i, ii 및 iii을 포함하는 과립은 이렇게 본원의 블렌드의 건식 과립화에 의해, 예컨대 롤러 압착에 의해 수득될 수 있다. 대안적인 구현예에서, 습식 과립화가 과립을 수득하는 데 사용될 수 있다. 그런 다음, 이 물질을 직접 사용하거나 추가로 정제하여 최종 과립을 수득할 수 있다.
일 구현예에서 조성물은 적어도 하나의 과립화물을 포함한다. 일 구현예에서 조성물은 적어도 1가지 유형의 과립화물을 포함한다. 대안적으로, 조성물은 2가지 유형의 과립화물을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 조성물에 관한 것으로서:
a) PCSK9 억제제,
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및
c) 윤활제
여기서 조성물은 b) 및 임의로 c)의 과립화물을 포함한다.
추가 구현예에서, 과립 부분은 a) 및 b) 및 임의로 c)를 포함할 수 있다.
과립화는 전술한 바와 같은 다양한 방법에 의해 이루어질 수 있고, 여기서 a) 및 b) 및/또는 c)는 분말로서 초기에 혼합되거나, 하나 이상의 성분을 포함하는 용액을 제조함으로써 혼합된다.
일부 구현예에서, 정제를 제조하는 방법은: a) 전달제 및 선택적으로 윤활제를 포함하는 혼합물을 과립화하는 단계; b) 단계 a)의 과립화물을 PCSK9 억제제 및 임의로 추가 윤활제와 배합한 다음, c) 단계 b)의 배합물을 정제로 압축하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 정제를 제조하는 방법은: a) 전달제, PCSK9 억제제, 및/또는 임의로 윤활제를 포함하는 혼합물을 과립화하는 단계; b) 단계 a)의 과립화물을 정제로 압축하고, 추가 윤활제를 임의로 포함시키는 단계를 포함한다.
균질한 과립화물을 수득하기 위해, 최종 건식 과립화 단계/롤러 압착 또는 정제 압축 단계 이전에 하나 이상의 체 여과 단계(들)를 포함할 수 있다.
마지막으로, 윤활제와 같은 추가 부형제(들)가 과립 외 부분을 형성하는 정제 압축 단계 전에 첨가될 수 있다.
약학적 적응증
일 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 PCSK9 억제제, 예컨대 EGF(A) 펩티드 유사체 또는 EGF(A) 유도체의 용도에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 약물로서 및/또는 치료 방법에서 사용하기 위한 PCSK9 억제제, 예컨대 EGF(A) 펩티드 유사체 또는 EGF(A) 유도체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 조성물은 예컨대 다음을 위한 치료 방법에 사용하기 위한 것이다:
(i) 이상지질혈증의 예방 및/또는 치료, 총 혈청 지질의 저하와 같은 지질 파라미터의 개선; LDL-C 저하, HDL 증가; 작고 조밀한 LDL의 저하; VLDL 저하; 중성 지방 저하; 콜레스테롤 저하; 지단백 a(Lp(a))의 혈장 수준 저하; 아포지단백 A(apo(A))의 생성 억제;
(ii) 심장 증후군 X, 동맥경화증, 심근경색, 관상동맥 심장 질환, 재관류 손상, 뇌졸중, 내뇌 허혈증, 조기 심장 질환 또는 조기 심혈관 질환, 좌심실 비대증, 관상동맥 질환, 고혈압, 본태성 고혈압, 급성 고혈압 긴급증, 심근증, 심부전, 운동 불내성, 급성 및/또는 만성 심부전, 부정맥, 심장 부정맥, 실신, 협심증, 심장 우회 및/또는 스텐트 재폐색, 간헐적 파행증(동맥경화성 동맥폐쇄), 심장확장성 기능장애, 및/또는 심장수축성 기능장애와 같은 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료; 및/또는 수축기 혈압 강하와 같은 혈압 강하; 심혈관 질환의 치료.
이상지질혈증은 예컨대 콜레스테롤의 고혈장 농도일 수 있으며, 이는 혈장 콜레스테롤 농도가 정상 범위를 초과하여 5.0 mmol/l 이상인 상황을 지칭하는 고콜레스테롤혈증으로도 불린다. 일 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 고콜레스테롤혈증의 치료에 사용될 수 있다.
치료 방법
추가로, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 본 발명에 따른 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상물에 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 방법은 (i) 지질 파라미터의 개선 및/또는 (ii) 심혈관 질환 및/또는 상기 명시된 추가 적응증의 예방 및/또는 치료를 위한 것이다.
일부 구현예에서, 치료 방법이 기술되며, 상기 방법은 PCSK9 억제제, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및 임의로 윤활제를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 당뇨병의 치료 방법이 기술되며, 상기 방법은 다음을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다:
a) PCSK9 억제제,
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산(NAC)의 염, 및
c) 전술한 것과 같은 윤활제.
스테아린산마그네슘을 포함하여, 윤활제의 다양한 예가 기술된다. 조성물은 경구 투여되고, 정제, 캡슐 또는 봉지의 형태이다.
추가의 이러한 구현예에서, 하나 이상의 투여 단위가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.
병용 치료
본 발명에 따른 PCSK9 억제제를 이용한 치료는, 예를 들어 항당뇨병제, 항비만제, 식욕 조절제, 항고혈압제, 당뇨병에 의해 야기되거나 이와 연관된 합병증의 치료 및/또는 예방을 위한 제제, 및 비만에 의해 야기되거나 이와 연관된 합병증 및 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 제제로부터 선택된 하나 이상의 추가 약리학적 활성 물질을 이용한 치료와 병용할 수 있다.
이러한 약리학적 활성 물질의 예는 다음과 같다: GLP-1 수용체 작용제, 인슐린, DPP-IV(디펩티딜 펩티다아제-IV) 억제제, 아밀린 작용제, 및 렙틴 수용체 작용제. 이러한 활성 물질의 특정 예는 GLP-1 수용체 작용제인 리라글루티드(liraglutide)와 세마글루티드(semaglutide) 및 인슐린 데글루덱(insulin degludec)이다.
본원에서 기술된 바와 같이, 본 발명은 본원에 기술된 구현예 및 본 문헌의 청구범위에 의해 추가로 정의되며, 이들로 한정되지는 않는다.
구현예
1. 약학적 조성물로서,
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 적어도 60%(w/w)을 구성하는, 약학적 조성물.
2. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하는, 약학적 조성물.
3. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제 및
b) 부형제로 이루어지되, 부형제는
i. N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염 및
ii. 하나 이상의 추가 부형제이고,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하는, 약학적 조성물.
4. 구현예 1 내지 구현예 3 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 윤활제를 포함하는, 약학적 조성물.
5. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제,
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염, 및
c) 적어도 하나의 윤활제로 이루어지는, 약학적 조성물.
6. 구현예 4 및 구현예 5 중 어느 하나에 있어서, 윤활제는 스테아린산마그네슘인, 약학적 조성물.
7. 구현예 1 내지 구현예 6 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염 100 mg 당 1~25 mg, 예컨대 1~10 mg, 예컨대 2~5 mg, 또는 예컨대 2~3 mg의 스테아린산마그네슘을 포함하는, 약학적 조성물.
8. 구현예 2 내지 구현예 7 어느 하나에 있어서, 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 적어도 60%(w/w)를 구성하는, 약학적 조성물.
9. 구현예 1, 구현예 5 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 95%(w/w)를 구성하는, 약학적 조성물.
10. 구현예 1 내지 구현예 9 중 어느 하나에 있어서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 나트륨염, 칼륨염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
11. 구현예 1 내지 구현예 10 중 어느 하나에 있어서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산나트륨(SNAC)인, 약학적 조성물.
12. 구현예 1 내지 구현예 11 어느 하나에 있어서, 투여 단위는 최대 1000 mg의 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는, 약학적 조성물.
13. 구현예 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 투여 단위는 0.1~100 mg의 PCSK9 억제제, 예컨대 1~100 mg의 PCSK9 억제제를 포함하는, 약학적 조성물.
14. 구현예 1 내지 구현예 13 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 301L과 적어도 비슷한 억제 기능을 갖는, 약학적 조성물.
15. 구현예 1 내지 구현예 14 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제에 대한 겉보기 결합 친화도(Ki)는 EGF(A) 301L에 대한 겉보기 결합 친화도(Ki) 이하인, 약학적 조성물.
16. 구현예 1 내지 구현예 15 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 301L, 309R, 312E와 적어도 비슷한 억제 기능을 갖는, 약학적 조성물.
17. 구현예 1 내지 구현예 16 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제에 대한 겉보기 결합 친화도(Ki)는 EGF(A) 301L, 309R, 312E에 대한 겉보기 결합 친화도(Ki) 이하인, 약학적 조성물.
18. 구현예 1 내지 구현예 17 중 어느 하나에 있어서,
Figure pct00037
는 2 미만인, 약학적 조성물.
19. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서,
Figure pct00038
는 2 미만인, 약학적 조성물.
20. 구현예 1 내지 구현예 19 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 10 nM 미만, 예컨대 8 nM 미만, 예컨대 5 mM 미만의 겉보기 결합 친화도(Ki)를 갖는, 약학적 조성물.
21. 구현예 14 내지 구현예 20 중 어느 하나에 있어서, 겉보기 결합 친화도(Ki)는 검정 I에 기술된 것과 같은 경쟁 ELISA에서 측정되는, 약학적 조성물.
22. 구현예 1 내지 구현예 21 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 미니피그에서 적어도 24시간의 T ½을 갖는, 약학적 조성물.
23. 구현예 1 내지 구현예 22 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 랫트에서 적어도 2시간의 T ½을 갖는, 조성물.
24. 구현예 1 내지 구현예 23 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 최대 50000 g/mol의 몰 질량을 갖는, 조성물.
25. 구현예 1 내지 구현예 24 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 유사체 또는 EGF(A) 유도체인, 조성물.
26. 구현예 1 내지 구현예 25 중 어느 하나에 있어서, 구현예 24에 따른 EGF(A) 유도체는 알부민 결합 치환기를 포함하는, 조성물.
27. 구현예 1 내지 구현예 26 중 어느 하나에 있어서, 구현예 24 또는 구현예 25에 따른 EGF(A) 유도체는 지방산 또는 지방이산을 포함하는, 조성물.
28. 구현예 1 내지 구현예 27 중 어느 하나에 있어서, 구현예 24, 25, 또는 26에 따른 EGF(A) 유도체는 C16, C18, 또는 C20 지방산을 포함하거나 C16, C18, 또는 C20 지방이산을 포함하는, 조성물.
29. 구현예 24 내지 구현예 27 중 어느 하나에 있어서, EGF(A) 펩티드 또는 EGF(A) 유도체는 서열번호 1에 의해 정의된 LDL-R의 EGF(A) 도메인과 비교하여 1~8개의 아미노산 치환을 갖는 EGF(A) 펩티드 유사체를 포함하는, 조성물.
30. 구현예 28에 있어서, EGF(A) 펩티드 유사체는 301Leu를 포함하는, 조성물.
31. 구현예 1 내지 구현예 30 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 작용제는 아래에 도시된 EGF(A) 유도체 31, 95, 128, 133, 143, 144, 150, 151, 152, 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물:
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
32. 구현예 1 내지 구현예 31 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 EGF(A) 유도체 150, 151, 152, 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
33. 구현예 1 내지 구현예 32 중 어느 하나에 있어서, PCSK9 억제제는 하기와 같은, 약학적 조성물:
Figure pct00049
34. 구현예 1 내지 구현예 33 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 과립화물을 포함하는, 약학적 조성물.
35. 구현예 34에 있어서, 적어도 하나의 과립화물은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하는, 약학적 조성물.
36. 구현예 34 내지 구현예 35 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 과립화물은 스테라인산마그세슘과 같은 윤활제를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
37. 구현예 34 내지 구현예 36 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 과립화물은 PCSK9 억제제를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
38. 구현예 34 내지 구현예 37 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 과립화물은 건식 과립화, 예컨대 롤러 압착(roller compaction)에 의해 제조되는, 약학적 조성물.
39. 구현예 34 내지 구현예 38 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 과립화 외 부분을 포함하는, 약학적 조성물.
40. 구현예 34 내지 구현예 39 중 어느 하나에 있어서, 조성물의 과립화 외 부분은 윤활제 또는 활택제, 예컨대 스테아린산마그네슘 및/또는 PCSK9 억제제를 포함하는, 약학적 조성물.
41. 약학적 조성물로서
a) 0.1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 20~800 mg, 예컨대 25~700 mg, 예컨대 50~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
42. 약학적 조성물로서
a) 1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 50~800 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
43. 약학적 조성물로서
a) 1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 75~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
44. 약학적 조성물로서
a) 1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 75~400 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
45. 약학적 조성물로서
a) 1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 100~400 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
46. 약학적 조성물로서
a) 1~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 200~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
47. 약학적 조성물로서
a) 5~100 mg의 PCSK9 억제제 및
b) 250~500 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하고, PCSK9 억제제는 WO2017/121850에서 실시예 151로서 도시된 EGF(A)인, 약학적 조성물.
48. 구현예 41 내지 구현예 47 중 어느 하나에 있어서, 1~26 mg의 윤활제, 예컨대 스테아린산마그네슘을 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
49. 구현예 41 내지 구현예 47 중 어느 하나에 있어서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염 100 mg 당 1~25 mg, 예컨대 1~10 mg, 예컨대 2~5 mg, 또는 예컨대 2~3 mg의 스테아린산마그네슘을 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
50. 구현예 41 내지 구현예 47 중 어느 하나에 있어서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산나트륨(SNAC)인, 약학적 조성물.
51. 구현예 1 내지 구현예 50 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 경구 투여용인, 약학적 조성물.
52. 구현예 1 내지 구현예 51 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 고형 조성물인, 약학적 조성물.
53. 구현예 1 내지 구현예 52 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 고형 조성물, 예컨대 정제, 캡슐 또는 봉지(sachet)인, 약학적 조성물.
54. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
PCSK9 억제제의 방출은 15분 이내에 80%에 도달하거나 30분 이내에 95%에 도달하는, 약학적 조성물.
55. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
투여 후 t=30분에 투여량 보정 혈장 노출은 시험 조성물 1에 증가되는, 약학적 조성물.
56. 약학적 조성물로서
a) PCSK9 억제제 및
b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
투여 후 t=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 시험 조성물 1에 비해 증가되는, 약학적 조성물.
57. 구현예 1 내지 구현예 53 중 어느 하나에 있어서,
a) PCSK9 억제제의 방출은 15분 이내에 80%에 도달하고,
b) PCSK9 억제제의 방출은 30분 이내에 95%에 도달하고,
c) 투여 후 t=30분의 투여량 보정 혈장 노출은 본원의 시험 조성물 1에 비해 증가되고/되거나,
d) 투여 후 t=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 본원의 시험 조성물 1에 비해 증가되는, 약학적 조성물.
58. 구현예 54 또는 구현예 57에 있어서, T=0~30분 동안의 투여량 보정 AUC는 적어도 1.2배, 예컨대 1.5배, 또는 적어도 2배 증가되는, 약학적 조성물.
59. 구현예 54 내지 구현예 58 중 어느 하나에 있어서, 방출은 본원의 검정 III에서와 같이 결정되고/되거나 투여량 보정 혈장 노출은 검정 V에서와 같이 결정되는, 약학적 조성물.
60. 구현예 41 내지 구현예 50 중 어느 하나에 있어서, 구현예 1 내지 구현예 13 및 구현예 34 내지 구현예 40 중 하나 이상의 특징에 의해 추가로 정의되는, 약학적 조성물.
61. 구현예 53 내지 구현예 59 중 어느 하나에 있어서, 구현예 1 내지 구현예 52 중 하나 이상의 특징에 의해 추가로 정의되는, 약학적 조성물.
62. 구현예 1 내지 구현예 60 중 어느 하나에 따른 약학적 조성물로서, 의약에 사용하기 위한 약학적 조성물.
63. 구현예 1 내지 구현예 61 중 어느 하나에 따른 약학적 조성물로서, i) 지질 파라미터를 개선하고/하거나 (ii) 심혈관 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하기 약학적 조성물.
64. 치료를 필요로 하는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 구현예 63 중 어느 하나의 조성물의 치료적 활성 양을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
방법 및 실시예
일반적인 검출 및 특징 분석 방법
검정 I: PCSK9-LDL-R 결합 경쟁 (ELISA)
본 검정은 LDL-R과 경쟁하는 PCSK9에 대한 겉보기 결합 친화도를 측정한다. 특히, 본 검정은 EGF(A) 유사체와 같은 PCSK9 억제제 및 EGF(A) 유사체를 포함하는 화합물의 겉보기 결합 친화도를 평가하는 데 사용된다.
분석은 다음과 같이 수행된다. 실험 전날, 재조합 인간 저밀도 지단백 수용체(rhLDL-R; NSO-유래; R & D 시스템 # 2148-LD)를 50 mM 탄산나트륨, pH 9.6에 1 μg/ml로 용해시킨 다음, 용액 100 μl를 분석 플레이트(Maxisorp 96, NUNC # 439454)의 각 웰에 첨가하여 4℃에서 밤새 코팅한다. 실험 당일, 비오탄화된 PCSK9(0.5 ug/ml, BioSite/BPSBioscience cat#71304)를 함유하는 EGF(A) 화합물의 8점 농도 곡선을 이중으로 만들었다. 시험 화합물과 비오틴화된 PCSK9의 혼합물을 제조하고, 25 mM Hepes, pH 7.2(15630-056, 100 ml, 1M), 150 mM NaCl (Emsure 1.06404.1000), 1% HSA (Sigma A1887-25G), 0.05% Tween 20(Calbiochem 655205), 2 mM CaCl2(Sigma 223506-500G)를 함유하는 분석 완충액 중에서 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한다. 그런 다음, 코팅된 분석 플레이트를 200 μl 분석 완충액 중에서 4회 세척한 다음, 시험 화합물과 비오틴화된 PCSK9의 혼합물 100 μl를 플레이트에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 200 μl 분석 완충액 중에서 4회 세척한 다음, 스트렙트에바딘-HRP(25 ng/ml; VWR # 14-30-00)와 함께 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한다. 50 μl TMB-on(KEM-EN-TEC)을 첨가하여 반응을 검출하고, 암소에서 10분 동안 인큐베이션한다. 그런 다음, 50 μl 4 M H3PO4를 전자 다중 피펫팅에 의해 혼합물에 첨가하여 반응을 중단시킨다. 그런 다음, 1시간 이내에 Spectramax 중에서 450 및 620 nm에서 플레이트를 판독한다. 620 nm에서의 판독은 백그라운드를 빼는 데 사용한다. IC50 값을 비선형 회귀 로그(억제제) 대 반응-변수 기울기(4개의 파라미터)에 의해 Graphpad Prism을 사용해 계산하고, 다음의 식을 사용해 Ki 값으로 변환한다: Ki=IC50/(1+(비오틴-PCSK9)/(kd(비오틴-PCSK9))), (식 중, 비오틴-PCSK9의 Kd는 1.096727714 μg/ml이고, [비오틴-PCSK9] = 0.5 μg/ml임).
Ki 값이 높을수록 PCSK9에 대한 겉보기 결합 친화성이 낮아짐을 반영하며, 그 반대도 동일하다. 500 nM을 초과하는 값은 관찰된 결합이 특이적이지 않음을 나타낼 것이다.
EGF(A) 펩티드 및 이의 유도체의 예에 대한 Ki 값이 아래에 포함되어 있는데, 이는 301L 및 임의로 309R, 312E, 및 321E 중 하나 이상을 포함하는 EGF(A) 펩티드를 갖는 화합물의 높은 친화도가 N-말단 또는 리신 잔기에 부착된 1개 또는 2개의 치환기를 갖는 화합물과도 매우 유사하다는 것을 보여준다.
Figure pct00050
EGF(A) 펩티드 유도체
Figure pct00051
검정 II: 붕해 시험
유럽 약전(Ph Eur 2.9.1)에 따른 표준 붕해 시험을 적절한 붕해 장치(예: USP 붕해 장치)에서 수행하여 시험 화합물의 붕해 시간을 시험관 내에서 측정할 수 있다.
검정 III: 용해 시험
유럽 약전(Ph Eur 2.9.3)에 따른 표준 용해 시험을 수행하여 시험 조성물로부터 PCSK9 억제제 및 SNAC의 방출을 시험관 내에서 측정할 수 있다.
용해 시험은 적절한 용해 장치(예: USP 용해 장치 2)에서 수행한다. 보다 구체적으로, 장치 2는 50 rpm의 패들 회전 속도를 사용하여 미국 약전 35에 따라 사용된다. pH 6.8에서의 시험을 위해, 0.05 M 인산 완충액의 500 mL 용해 매질을 37 ± 0.5℃의 온도로 사용한다. 용해 매질은 0.1% Brij®35의 함량을 갖는다. 샘플을 적절한 간격으로 꺼내서 PCSK9 억제제 및 SNAC의 이중 검출을 위한 RP-UHPLC 방법을 사용하여 샘플 함량을 결정한다.
샘플 함량은 크로마토그램에서 기준 PCSK9 억제제 및 SNAC의 피크 면적에 대한 PCSK9 억제제 및 SNAC의 피크 면적에 기초하여 각각 계산된다. PCSK9 억제제 및 SNAC의 방출된 양은 시험 조성물 중의 명목 함량 또는 실제 총 함량의 백분율로서 계산된다. 정제 중 총 함량은 검정 (IV)를 사용하여 결정된다.
검정 IV: PCSK9 억제제 및 SNAC의 양 분석
검정 분석을 위해, PCSK9 억제제 및 SNAC의 추출 전에 시험 조성물을 칭량한다. 정제를 20% 아세토니트릴이 포함된 적당량의 0.05 M 인산 완충액, pH 7.4에 용해시킨다. 2시간의 추출 시간을 사용한다. 샘플을 원심분리하고 적절한 부피를 HPLC 바이알로 옮긴다. 관련 PCSK9 억제제 및 SNAC의 표준은 샘플과 동일한 희석제를 사용하여 제조한다. PCSK9 억제제 및 SNAC 함량의 이중 결정을 위해 UV-검출기가 구비된 UHPLC를 사용한다. 정제 함량은 크로마토그램에서 기준 PCSK9 억제제 및 SNAC의 피크 면적에 대한 PCSK9 억제제 및 SNAC의 피크 면적에 기초하여 각각 계산된다.
검정 V: 비글견을 대상으로 한 약동학 연구
상이한 시험 조성물을 경구 투여한 후 PCSK9 억제제의 노출을 결정하는 약동학(PK) 연구를 비글견을 대상으로 수행한다.
약동학 연구를 위해, 연구 시작 시점에 나이가 1 내지 6세이고 체중이 대략 10~16 kg인 수컷 비글견을 사용한다. 개들을 무리지어 우리에 수용하고(12시간 채광 : 12시간 차광), 성견용 사료(Royal Canin, Denmark)를 1일 1회 개별적으로 제한 급식하였다. 기회가 있을 때마다, 운동과 집단 교류를 매일 허용하였다. 개들을 약동학 연구에 반복적으로 사용하였고, 각각의 투여 사이에 적절한 휴약기(wash-out period)를 두었다. 1차 약동학 연구를 개시하기 전에 적절한 순화기간(acclimatisation period)을 주었다. 동물의 모든 취급, 투약 및 혈액 채취는 훈련을 받은 숙련된 직원이 수행한다. 개들은 연구 전에 밤새 굶기고, 투여 후에는 0 내지 4시간 동안 굶긴다. 또한, 개들은 투여 1시간 전부터 투여 4시간 후까지 물을 마시지 못하게 하지만, 그렇지 않은 경우에는 전체 기간 동안 언제든지 물을 마실 수 있게 한다.
PCSK9 억제제를 함유하는 정제는 다음의 방식으로 투여한다: 정제 투여 10분 전에 대략 3 nmol/kg의 서열번호 115을 개들에게 피하 투여한다. 씹지 못하도록 개의 주둥이 뒷 부분에 PCSK9 억제제 정제를 넣는다(한 마리 당 1정). 그런 다음, 주둥이를 다물게 하고 수돗물을 주사기나 위관(gavage)으로 주입하여 정제의 연하(swallowing)를 용이하게 한다.
혈액 채취
혈액은, PCSK9 억제제의 전체 혈장 농도-시간 흡수 프로파일을 적절히 커버하도록, 투여 후 최대 10시간 동안 소정의 시점에 채취한다.
각각의 혈액 채취 시점마다, EDTA가 코팅된 1.3 mL 튜브에 대략 1.2 mL의 전혈을 채취하고, 튜브를 부드럽게 회전시켜 샘플이 EDTA와 잘 섞이도록 한다. 그런 다음, 혈액 샘플을 혈장 수집을 위해 원심분리(4분, 4℃, 4000 rpm)할 때까지 얼음 위에 보관된다. 혈장(200 μl)을 드라이아이스 상의 마이크로닉 튜브에 피펫팅하고, 분석할 때까지 -20℃로 보관한다.
혈액 샘플은 적절히 채취하는데, 예를 들어, 첫 2시간 동안은 앞 다리의 요측피정맥(cephalic vein)에 삽입된 벤플론(venflon)을 통해 채취한 다음, 나머지 시점 동안에는 경정맥에서 주사기로 채취한다(첫 몇 방울을 벤플론에서 흘려보내 벤플론의 헤파린 식염수가 샘플에 들어가는 것을 방지한다).
검정 VI: 바이오분석 검정
개를 대상으로 한 경구 및 i.v. PK 연구에서의 PCSK9 억제제의 혈장 농도를 다음 검정에 의해 분석하였다: 단백질 침전에 의해 충돌시킨 후 혈장 샘플을 구아니딘과 함께 인큐베이션하고, 터보플로우 액체 크로마토그래피 질량 분광분석(TF-LC-MS)에 의해 분석하였다. 일반적으로 0.5 내지 2000 nM(LLOQ는 2 nM임) 범위의 PCSK9 억제제를 블랭크 개 혈장에 첨가함으로써 캘리브레이터를 제조하였다. 캘리브레이터, 혈장 블랭크, 또는 연구 샘플을 8M 구아니딘-염화수소(GndHCl)와 1:1로 혼합하되 4M GndHCl의 최종 농도가 되도록 혼합하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하여 비공유 단백질 상호작용을 해리시켰다. 1 부피의 캘리브레이터, 혈장 블랭크, 또는 연구 샘플을 2.5 부피의 얼음처럼 차가운 메탄올로 침전시키고 4℃에서 15분 동안 6200 rpm으로 원심분리하였다. TF-LC-MS 분석에 의해 이어서, 상청액을 1% 포름산이 포함된 물로 1:2 비율로 희석하였다. 실온의 사이클론 터보플로우 컬럼(TurboFlow Cyclone 0.5 x 50 mm, Thermo Fischer Scientific) 및 60℃의 Aeris 펩티드 3.6 μm XB-C18 분석 컬럼(2.1 x 50 mm, Phenomenex)을 사용하였다. 이동상 A(1% 포름산 및 5% 메탄올/아세토니트릴(50/50)이 포함된 밀리-Q 물로 구성됨) 및 이동상 B(1% 포름산 및 5% 밀리-Q 물이 포함된 메탄올/아세토니트릴(50/50)로 구성됨)를 사용하여 구배 용리를 수행하였다. 단일 이온 모니터링 모드에서 검출기로서 QExactive Plus 질량 분광계를 사용하였다(m/z 1185-1188). 혈장 샘플에서의 농도를 계산하기 위해 선형 검량 곡선(1/x2의 가중치)을 사용하였다. 품질 관리 샘플을 포함시켰다. 캘리브레이터와 품질 관리 샘플에서 명목 농도와 계산 농도 사이의 편차는 15% 미만이었다.
일반적인 방법
방법 1: 건식 과립화
건식 과립화는 Gerteis MICRO-PACTOR 또는 MINI-PACTOR를 이용해 롤러 압착에 의해 수행한다. 롤러 속도는 1 또는 3 rpm으로, 롤러 압착력은 6 kN/cm으로, 갭은 1 mm로 설정한다. 건식 과립화에 이어서, 0.63 또는 0.8 mm 스크린을 사용하여 몰딩을 과립으로 분쇄한다.
건조 과립화 전에, SNAC 및 스테아린산 마그네슘 및 임의로 EGF(A) 유도체 및/또는 MCC의 일부를 Pharmatech V-쉘 블렌더 또는 Turbula 믹서와 같은 적절한 블렌더에서 혼합한다.
방법 2: 정제 압축
Fette 102i를 시뮬레이션한 Kilian Style One 또는 한 세트의 펀치가 장착된 Fette 102i를 이용해 정제를 생산하여, 분할선(score)이 없는 7 mm의 원형, 또는 7.2 Х 12 mm 또는 7.5 Х 13 mm 또는 7.5 Х 14 mm 또는 8.4 Х 15.5 mm의 타원형 정제를 만든다. 천공기 크기는 정제의 총 중량에 따라 선택된다. 프레스 속도는 20 rpm으로 설정한다. 충진 부피를 조정하여 107.6 내지 634 mg의 목표 중량을 갖는 정제를 수득한다. 약 4.5 내지 14 kN의 압축력을 인가하여 정제 크기에 대해 각각 약 50 내지 130 N의 파쇄 강도(crushing strength)를 갖는 정제를 수득한다.
정제 압축 전에, 방법 1에 의해 수득된 과립화물을 Turbula 믹서를 이용해 PCSK9 억제제 및 임의의 추가 부형제와 임의로 혼합한다(7분, 25 rpm).
방법 3: 염 교환
분무 건조된 EGF(A) 유도체 물질의 배치를 중성 pH의 100 mM Tris 완충액에 10~20 g/l의 최종 농도로 용해시켰다. 이어서, 상기 물질을 수지 1리터당 최대 20 g의 EGF(A)가 되도록 C18 역상 컬럼 상에 로딩하고, 다음의 순서로 세척하였다: a) 물 중 5% w/w 에탄올을 포함하는 1 컬럼 부피의 용액으로 세척한 다음; b) pH 7.5의 500 mM 염화나트륨 및 20 mM 인산나트륨이 함유된 10 컬럼 부피의 용액으로 세척하고; c) 5% w/w 에탄올을 포함하는 10 컬럼 부피의 용액으로 세척함. 그런 다음, 50% w/w 에탄올 용액을 사용하여 EGF(A)를 컬럼으로부터 용리시켰다. 이어서 진공을 인가하여 에탄올을 증발시켰다. 이어서, 용액을 분무 건조시켜 EGF(A) 유도체를 나트륨 염으로서 수득하였다.
실시예
실시예 1 - 조성물의 제조
펩티드계 PCSK9 억제제를 포함하는 시험 조성물들을 하기 표 1에 따라 제조하였다. 사용된 화합물은 친수성 링커 분자를 통해 부착된 지방 이산 형태의 2개의 치환기를 포함하는 LDLR293-332의 펩티드 유사체이다. EGF(A) 유도체는 WO 2017/121850 (실시예 151/161쪽) 및 WO19016300에 기술된 바와 같이 제조된다. 화합물은 본원에서 화합물 151로 지칭되고, 다음의 구조를 갖는다:
Figure pct00052
조성물은 전술한 방법의 조합을 사용하여 제조하였다. WO 2013/139694에 기술된 바와 같이 SNAC, 스테아린산마그네슘, 및 MCC의 배합물을 과립화하여 시험 조성물 1을 생산하였다. 이어서, 정제 압축 전에, 과립을 포비돈, PCSK9 억제제, 및 추가 MCC 및 스테아린산마그네슘과 배합하였다(방법 2). 건조 과립화 전에, SNAC와 스테아린산마그네슘을 배합하여 시험 조성물 2 내지 4를 제조하였다(방법 1). 이어서, 정제 압축 전에, 수득된 과립을 PCSK9 억제제와 배합하였다(방법 2). 시험 조성물 4는 본 연구와 무관한 10 mg의 GLP-1 기준 분자를 추가로 포함하였다. 조성물은 표 1.1에 기술되어 있다. 시험 조성물 1의 경우, 괄호 안의 숫자는 SNAC 과립에 포함된 스테아린산마그네슘 및 미정질 셀룰로오스의 양을 제공한다.
[표 1.1] PCSK9 억제제 정제의 조성물
Figure pct00053
하기 표 1.2에 제시된 바와 같이, PCSK9 억제제의 양을 증가시켜 추가 조성물을 제조하였다. 시험 조성물 5~7은 건조 과립화 전에 화합물 151, SNAC, 및 스테아린산마그네슘을 배합하여, 본원의 방법 3에 의해 수득된 EGF(A) 유도체 제제를 사용하여 제조하였다(방법 1). 수득된 과립을 정제로 압축하였다(방법 2).
[표 1.2] PCSK9 억제제 정제의 조성물
Figure pct00054
실시예 2 - 붕해 시험
본 연구의 목적은 실시예 1에 기술된 일련의 시험 조성물의 붕해를 평가하기 위한 것이었다.
붕해는 자동 검출을 채택한 유럽 약전에 따라 Pharmatech PTZ 자동 붕해 시험기를 사용하여 검정 II에 따라 측정하였다. 시험 조성물 1~6을 물(R)에서 시험하였고, 자동 검출이 시작되었을 때 조성물이 붕해된 것으로 간주하였다. 결과는 단일 값으로서 또는 3개 정제의 평균으로서 보고되어 있다. 표 2.1은 상기 실시예 1에 따라 제조된 시험 조성물에 대한 결과를 보여준다.
[표 2.1] 붕해 시간
Figure pct00055
수득된 결과는 시험 조성물 2, 3, 4, 및 5가 시험 조성물 1에 대해 관찰된 것보다 상당히 더 빠른 분해를 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 3 - 용해 시험
본 연구의 목적은 실시예 1에 기술된 일련의 시험 조성물의 용해를 평가하기 위한 것이었다.
검정 III에 따라 용해를 측정하고, PCSK9 억제제 및 SNAC의 양을 검정 IV에 따라 측정하였다. PCSK9 억제제 및 SNAC의 방출된 양을 시험 조성물 중의 실제 함량 또는 명목 함량의 백분율로서, 즉 정제 당 100 또는 300 또는 500 mg의 SNAC 및 정제 당 5 또는 50 또는 100 mg의 PCSK9 억제제로서 계산하였다.
PCSK9 억제제의 방출된 양은 단일 값 또는 3개의 정제의 평균으로서 보고되어 있다.
표 3.1은 상기 실시예 1에 따라 제조된 시험 조성물 1, 2, 및 3에 대한 결과를 보여주며, 여기서 방출은 "용액 중의 PCSK9 억제제 (%)"로서 제시되어 있는데, 이는 실험 시작 시점에 정제 중의 PCSK9 억제제의 총량에 대해 15, 30, 및 60분 후 용액 중의 PCSK9 억제제의 양을 의미한다. 정제 중의 PCSK9 억제제 및 SNAC의 총 함량은 검정 IV에 따라 결정하였다.
[표 3.1] 용액 중의 PCSK9 억제제 (%)
Figure pct00056
얻어진 결과는, 시험 조성물 1에 대해 관찰된 것과 비교하여 시험 조성물 2 및 3이 PCSK9 억제제의 더 신속한 방출을 나타낸다는 것을 보여준다. PCSK9 억제제의 훨씬 더 신속한 방출은 초기 시점, 즉 15분 및 30분 시점에 관찰되었다. 방출의 차이는 60분 후에는 덜 유의하였다. 15분 후에는 시험 조성물 중의 SNAC의 양은 PCSK9 억제제의 방출에 영향을 미치지 않았으며, 즉 15분 후 또는 그 이후에 측정했을 때, 100 mg SNAC를 포함하는 시험 조성물은 300 mg SNAC를 포함하는 시험 조성물만큼 빨리 용해된다.
시험 조성물 1 내지 3에 대해 5, 10, 15, 20, 30, 45, 및 60분 후에 수득된 추가 데이터는 도 1a에 도시되어 있으며, 시험 조성물 2 및 3이 모든 시점에서 시험 조성물 1보다 우수함을 입증한다.
전술한 바와 같이, 시험 조성물 5~7의 용해를 시험하여 결과를 표 3.2에 제공하였고, 시험 조성물 1과 함께 도 1b에 포함시켰다.
[표 3.2] 용액 중의 PCSK9 억제제 (%)
Figure pct00057
얻어진 결과는, 시험 조성물 1에 대해 관찰된 것과 비교하여 시험 조성물 5~7 또한 PCSK9 억제제의 더 신속한 방출을 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 4 - 개를 대상으로 한 약동학(PK) 연구
상기 실시예 1에 기술된 시험 조성물의 경구 투여의 약동학을 검정 V에 따라 평가하여 비글견을 대상으로 한 경구 노출을 평가하였으며, 개에게 투여하기 위해 10 ml 물을 사용하였다. 각각의 제형에 대해 수행한 시험 회수는 n으로 표시되어 있다.
분석 및 결과
PCSK9i 분자의 혈장 농도를 LCMS로 분석하였다. 개별 혈장 농도-시간 프로파일은 WinNonlin v. 5.0 또는 Phoenix v. 6.2 또는 6.3(Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA) 내의 비-구획 모델, 또는 PK 분석용 기타 관련 소프트웨어로 분석하였다. t=30분에 측정한 화합물의 노출을 결정하고, 체중 1 kg 당 투여량에 의해 정규화하였다.
경구 투여 후 첫 30분 동안의 혈장 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC, [시간 x 농도])을 (Pharsight 프로그램에 의해) 계산하고 (투여량/kg(체중))으로 정규화하여 투여량 보정 노출을 얻었다.
시험 조성물 1, 4, 6, 및 7을 투여한 후 수득된 PCSK9i의 혈장 노출, 투여량 보정 노출, 및 Cmax를 계산하였다. 아래 표 4에 포함된 데이터, 모든 값은 기하 평균으로서 표현된다.
[표 4] 시험 조성물 1, 4, 6, 및 7의 1회 투여 후 개에서 측정된 평균 노출.
Figure pct00058
본 발명에 따른 조성물의 경우 시험 조성물 1과 비교하여 증가되고 가속화된 노출이 관찰되었다.
본 발명의 특정 특징들이 본원에 예시되고 기술되었지만, 많은 변형, 치환, 변경 및 균등물이 이제 당업자에게 발생할 것이다. 따라서, 첨부된 청구범위는 본 발명의 진정한 사상 내에 속하는 모든 이러한 수정 및 변경을 포함하도록 의도된 것임을 이해해야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Novo Nordisk A/S <120> SOLID COMPOSITIONS COMPRISING A PSCK9 INHIBITOR AND A SALT OF N-(8-(2-HYDROXYBENZOYL)AMINO)CAPRYLIC ACID <130> 190063 <160> 115 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Asn Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Asn Asp Leu Lys Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 2 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence <400> 2 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Ala Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Ile Cys 1 5 10 15 Arg Lys Leu Lys Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 3 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence <400> 3 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Lys Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 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86 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp His Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Lys Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 87 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 87 Gly Trp Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 88 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 88 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Lys Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Lys Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 89 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 89 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Lys Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 90 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 90 Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys Arg 1 5 10 15 Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln Leu 20 25 30 Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 91 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 91 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Lys 20 25 30 Leu Val Ala Lys Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 92 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 92 Ala Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val 1 5 10 15 Cys Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe 20 25 30 Gln Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 93 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 93 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser Tyr Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 94 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 94 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Lys Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Lys 35 40 <210> 95 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 95 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Lys Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Lys 35 40 <210> 96 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 96 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp His Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Lys 35 40 <210> 97 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 97 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Lys 35 40 <210> 98 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 98 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 99 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 99 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Lys Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 100 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 100 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Lys Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 101 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 101 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Lys Ile Lys Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 102 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 102 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Lys Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 103 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 103 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp His Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 104 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 104 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Lys Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 105 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 105 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Lys 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu Lys 35 40 <210> 106 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 106 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Lys Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Lys 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 107 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 107 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Asp Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 108 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 108 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 109 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 109 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Ile Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 110 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser Tyr Val Cys 1 5 10 15 Asn Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 111 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp His Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 112 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Lys Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 113 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Lys 20 25 30 Leu Val Ala Gln Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 114 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Gly Thr Asn Glu Cys Leu Asp Asn Leu Gly Gly Cys Ser His Val Cys 1 5 10 15 Arg Asp Leu Glu Ile Gly Tyr Glu Cys Leu Cys Pro Glu Gly Phe Gln 20 25 30 Leu Val Ala Lys Arg Arg Cys Glu 35 40 <210> 115 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25

Claims (15)

  1. 약학적 조성물로서
    a) 0.5~100 mg의 EGF(A) 유도체,
    b) 20~1000 mg, 예컨대 50~600 mg의 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염을 포함하되,
    상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 부형제의 적어도 90%(w/w), 예컨대 적어도 95%(w/w)를 구성하는, 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 스테아르산마그네슘 또는 글리세릴 디베헤네이트와 같은 윤활제를 포함하는, 약학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 다음으로 이루어진, 약학적 조성물:
    a) EGF(A) 유도체
    b) N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염, 및
    c) 적어도 하나의 윤활제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 조성물의 적어도 70%(w/w)을 구성하는, 약학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 상기 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염 100 mg 당 1~10 mg의 스테아린산마그네슘을 포함하는, 약학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, EGF(A) 유도체는 다음의 구조를 갖는 EGF(A) 유도체 # 31, 95, 128, 133, 143, 144, 150, 151, 152, 및 153의 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물:
    Figure pct00059

    Figure pct00060

    Figure pct00061

    Figure pct00062

    Figure pct00063

    Figure pct00064

    Figure pct00065

    Figure pct00066

    Figure pct00067

    Figure pct00068
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염은 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산나트륨(SNAC)인 약학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, EGF(A) 유도체는
    Figure pct00069
    인, 약학적 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단위는 다음을 포함하는, 약학적 조성물:
    a) 5~100 mg의 EGF(A) 유도체,
    b) 50~1000 mg의 SNAC, 및
    c) 0.5~50 mg의 윤활제.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단위는 다음을 포함하는, 약학적 조성물:
    a) 5~100 mg의 EGF(A) 유도체,
    b) 100~800 mg의 SNAC, 및
    c) 1~40 mg의 스테아린산마그네슘.
  11. 제8항에 있어서, 투여 단위는 다음을 포함하는, 약학적 조성물:
    a) 20~100 mg의 EGF(A) 유도체,
    b) 100~600 mg의 SNAC, 및
    c) 1~30 mg의 윤활제.
  12. 제8항에 있어서, 투여 단위는 N-(8-(2-하이드록시벤조일)아미노)카프릴산의 염 100 mg당 다음을 포함하는, 약학적 조성물:
    a) 20~100 mg의 EGF(A) 유도체,
    b) 100~600 mg의 SNAC, 및
    c) 1~25 mg, 예컨대 1~10 mg, 예컨대 2~5 mg, 또는 예컨대 2~3 mg의 스테아린산마그네슘.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 경구 투여용 고형 조성물, 예컨대 정제인, 약학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물로서, 의약에 사용하기 위한 약학적 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물로서, i) 지질 파라미터를 개선하고/하거나 (ii) 심혈관 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물.

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