KR20220034811A - 메탈로티오네인 항체 및 이의 용도 - Google Patents

메탈로티오네인 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20220034811A
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마이클 라인스
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유니버시티 오브 코네티컷
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Abstract

단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 그의 단편 및 장 염증, 당뇨병, 당뇨병전기, 내당능장애, 간염 및/또는 염증성 간 질환의 치료에 있어서의 그 용도가 본 명세서에 개시된다.

Description

메탈로티오네인 항체 및 이의 용도
교차 참조
본 출원은 2019년 7월 15일자로 출원된 미국 가출원 제62/874340호에 대한 우선권을 주장하며, 그 전체 내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
연방 자금 진술
이 발명은 미국 국립 보건원(National Institutes of Health)에서 수여한 보조금 번호 ES07408 하에 정부 지원으로 수행되었다. 정부는 본 발명에 대하여 특정 권리를 갖는다.
서열 목록 참조
본 출원에는 2020년 7월 13일에 생성된 21 kb 크기의 이름이 "19-1213-PCT_Sequence-Listing_ST25.txt"인 전자 텍스트 파일로 제출된 서열 목록이 포함되어 있다. 이 전자 파일에 포함된 정보는 37 CFR §1.52(e)(5)에 따라 그 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
당뇨병은 대부분 인슐린 보충요법으로 치료된다. 당뇨병으로 손상된 췌도(islet)를 대체하기 위한 연구가 진행되고 있지만, 인슐린을 생산하는 췌도를 손상시키는 염증 과정이 중단되지 않으면, 췌장에서 췌도 이식 또는 췌도의 줄기 세포 재증식은 단기 치료가 될 것이다. 유사하게, 간염 및/또는 염증성 간질환의 현재 시약 및 치료 방법은 부적절하다.
일 양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편을 제공한다:
아미노산 서열 QSIVHSNGNTYLE(서열번호 1)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(L-CDR1);
아미노산 서열 KVS (서열번호 2)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(L-CDR2); 및
아미노산 서열 FQGSHVPF(A/T)(서열번호 3)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 CDR3(L-CDR3):
아미노산 서열 GFSLSRYG(서열번호 4)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(H-CDR1);
아미노산 서열 IWSGGST(서열번호 5)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(H-CDR2); 및
아미노산 서열 WLLPGY(서열번호 6)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(H-CDR3).
여러 실시형태에서, 항체는 단일클론 항체 또는 이의 단편 및/또는 인간화 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
다른 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7 내지 9로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 경쇄는 서열번호 1 내지 3 각각의 아미노산을 포함하고, 경쇄는 하기 잔기: D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, F41, Q42, R44, R50, V88, V90, T102, Q105, 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 모두를 포함하고/거나; 서열번호 11 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기: E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함한다.
한 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 Fab' 단편을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 단리된 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산, 적합한 제어 서열에 작동가능하게 연결된 핵산을 포함하는 벡터, 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 숙주 세포, 및 하기를 포함하는 약학 조성물을 제공한다:
(a) 본 명세서에 개시된 단리된 항체 또는 이의 단편, 핵산, 벡터, 또는 숙주 세포; 및
(b) 약학적으로 허용 가능한 담체.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 장 염증, 당뇨병, 당뇨병전기, 내당능장애, 간염 및/또는 염증성 간질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애의 치료 또는 발병 제한 방법으로서, 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태 또는 실시형태들의 조합의 단리된 항체 또는 이의 단편 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 또는 약학 조성물의 장애를 치료하기에 효과적인 양을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
도 1의 A-B. (A) 인간화 카파 경쇄와 원래의 마우스 UC1MT 항-MT L 서열의 Clustal Omega 소프트웨어 비교. (B) UC1MT L-Hum1(VK1), UC1MT L-Hum2(VK2) 및 UC1MT L-Hum3(VK3)의 가변 영역들 간의 상대적 차이를 원래의 하이브리도마 경쇄 서열(UC1MT)과 비교한 계통도.
도 2의 A-B. (A) 인간화 중쇄 V 영역과 원래의 마우스 UC1MT 항-MT H 서열의 Clustal Omega 소프트웨어 비교. (B) UC1MT H-Hum1(VH1), UC1MT H-Hum2(VH2), UC1MT H-Hum3(VH3), UC1MT H-Hum4(VH4) 및 UC1MT L-Hum5(VH5)의 인간화 가변 영역들 간의 상대적 차이를 원래의 하이브리도마 중쇄 V 서열(UC1MT)과 비교한 계통도.
도 3. 고정화된 메탈로티오네인에 대해 시험된 인간화 항체의 ELISA 측정. Immulon 2HB 플레이트를 4℃에서 밤새 10 ug/mL MT로 코팅하고 웰을 PBST로 세척하고 실온에서 1.5시간 동안 2% BSA로 차단하였다. 플레이트를 세척하고, 각각의 재조합 Fab 단편의 희석물로 코팅하고, 실온에서 1.5시간 동안 배양하였다. 플레이트를 세척하고 실온에서 1시간 동안 1:1000 마우스 항-인간 Ig 경쇄 카파-비오틴과 함께 배양한 다음, 세척하고 실온에서 20분 동안 스트렙타비딘-HRP(Fab 함유 웰)과 배양하였다. 최종 세척 후, 기질을 첨가하고 정지 용액(2N H2SO4)을 첨가하기 전에 실온에서 15분 동안 배양하고 Spectramax 플레이트 판독기에서 OD450을 측정하였다. 차트는 OD405 값을 나타낸다. 각 클론의 반응성은 낮음(L), 중간(M) 또는 높음(H)으로 특성화되었다.
도 4a-b. (a) 실리코 모델링에서 메탈로티오네인에 결합하는 Fab' 단편의 그래프. (b) 개별 CDR은 대표적인 인간화 Fab 단편의 H 및 L 쇄 모두에 대해 표시된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 그리고 달리 표시되지 않는 한, 용어 "하나"는 "하나", "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 간주된다. 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 본 개시내용의 임의의 양태의 모든 실시형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 조합으로 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용된 아미노산 잔기는 다음과 같이 약칭된다: 알라닌(Ala; A), 아스파라긴(Asn; N), 아스파르트산(Asp; D), 아르기닌(Arg; R), 시스테인(Cys; C), 글루탐산(Glu; E), 글루타민(Gln; Q), 글리신(Gly; G), 히스티딘(His; H), 이소류신(Ile; I), 류신(Leu; L), 라이신(Lys; K), 메티오닌(Met; M), 페닐알라닌(Phe; F), 프롤린(Pro; P), 세린(Ser; S), 트레오닌 (Thr; T), 트립토판(Trp; W), 티로신(Tyr; Y) 및 발린(Val; V).
일 양태에서, 본 개시내용은 항-메탈로티오네인(MT) 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 예를 들어 장 염증, 당뇨병, 당뇨병 전증, 내당능장애, 간염 및/또는 염증성 간 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애를 치료하는 데 유용하다. 이러한 장애를 치료하기 위한 MT 저해제의 용도는 그 전체 내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 국제공개 WO2019/143767호에 기재되어 있다.
본 명세서에 개시된 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 메탈로티오네인 내의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭한다. 이와 같이, 용어 항체는 전체 항체 분자뿐만 아니라 항체 단편 및 항체 및 항체 단편의 변이체(유도체 포함)를 포함한다. 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 단일클론 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG, 재조합 단일쇄 Fv 단편(scFv), 2가 또는 이중특이적 분자, 다이아바디, 트리아바디 및 테트라바디를 포함할 수 있거나 이에 제한되지 않는다. 한 특정 실시형태에서, 항체는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 추가의 특정 실시형태에서, 항체는 인간화 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 한 실시형태에서, 항체는 Fab' 단편을 포함한다.
한 실시형태에서, 항체는 인간화된다. 본 명세서에 사용된 용어 "인간화 항체"는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체를 지칭한다. 한 실시형태에서, 인간화 항체는 수용자의 CDR의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및/또는 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 CDR의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 골격("FR") 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 뿐만 아니라, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체의 완전한 항원 결합 친화도 및 특이성을 유지하면서 인간에 도입하기 위해 항체 성능, 예컨대 결합 친화도, 발현 및 뮤린 항체와 같은 이종 항체의 면역원성의 감소를 추가로 개선하기 위해 수행될 수 있다.
본 명세서에 사용된 "단리된"은 표시된 분자가 동일한 유형의 다른 생물학적 거대분자의 실질적인 부재 하에 존재함을 의미한다.
한 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 인간화 항체 또는 이의 단편이 제공된다:
아미노산 서열 QSIVHSNGNTYLE(서열번호 1)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(L-CDR1);
아미노산 서열 KVS (서열번호 2)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(L-CDR2); 및
아미노산 서열 FQGSHVPF(A/T)(서열번호 3)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(L-CDR3).
한 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 인간화 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편이 제공된다:
아미노산 서열 GFSLSRYG(서열번호 4)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(H-CDR1);
아미노산 서열 IWSGGST(서열번호 5)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(H-CDR2); 및
아미노산 서열 WLLPGY(서열번호 6)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(H-CDR3).
추가의 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 4, 5 또는 6개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 제1항의 인간화 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편이 제공된다:
아미노산 서열 GFSLSRYG(서열번호 4)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(H-CDR1);
아미노산 서열 IWSGGST(서열번호 5)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(H-CDR2); 및
아미노산 서열 WLLPGY(서열번호 6)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(H-CDR3);
아미노산 서열 QSIVHSNGNTYLE(서열번호 1)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(L-CDR1);
아미노산 서열 KVS (서열번호 2)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(L-CDR2); 및
아미노산 서열 FQGSHVPF(A/T)(서열번호 3)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(L-CDR3).
또 다른 양태에서, 표 1(또한 도 1 참조)에 제시된 서열번호 7 내지 9로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편이 제공되고, 경쇄는 서열번호 1 내지 3 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 경쇄는 하기 잔기(표 1에 볼드체 및 확대체로 표기): D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, F41, Q42, R44, R50, V88, V90, T102, Q105 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 모두를 포함한다.
Figure pct00001
볼드체 문자는 부모 마우스 하이브리도마에 대한 변화를 나타내며; CDR에는 밑줄이 그어져 있다.
한 특정 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 경쇄는 서열번호 1 내지 3 각각의 CDR을 포함하고, 경쇄는 하기 잔기(표 1에 볼드체 및 확대체로 표기): D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, R44, R50, V88, V90, Q105, 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편의 경쇄는 하기의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는 인간 경쇄로부터의 카파 불변 영역을 추가로 포함한다:
Figure pct00002
또 다른 양태에서 서열번호 11 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편이 제공되고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기(표 2에 볼드체 및 확대체로 표기; 또한 도 2 참조): E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함한다.
이어지는 서열에서 볼드체 문자는 부모 UC1MT 마우스 하이브리도마 서열에 대한 변화를 나타내며; CDR에는 밑줄이 그어져 있다.
Figure pct00003
한 특정 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 서열번호 14의 아미노산과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기(표 2에 볼드체 및 확대체로 표기; 또한 도 2 참조): K13, E16, V37, G42, K64, S70, N76, V78, S83, T86, A87, A88, 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두를 포함한다.
한 특정 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기(표 2에 볼드체 및 확대체로 표기; 또한 도 2 참조): E1, V5, G9, G15, G16, R19, L20, S21, A23, A40, G42, V48, S49, A60, D61, S62, V63, K64, G65, F67, T68, A74, K76, S77, V78, Y79, L80, Q81, N83, R86, A87, E88, V92, 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 또는 34개 모두를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 중쇄는 서열번호 27의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는, 글리코실화를 방지하는 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 불변 서열을 추가로 포함한다.
Figure pct00004
추가의 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열번호 7 내지 9로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로서, 서열번호 1 내지 3 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 하기 잔기: D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, F41, Q42, R44, R50, V88, V90, T102, Q105 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 모두를 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열번호 16 내지 26으로 이루어진 군으로부터 선택되거나 서열번호 11 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄로서, 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 하기 잔기(표 2에 볼드체 및 확대체로 표기; 또한 도 2 참조): E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함하는 중쇄.
또 다른 특정 실시형태에서, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로서, 서열번호 1 내지 3 각각의 CDR을 포함하고, 하기 잔기(표 1에 볼드체 및 확대체로 표기): D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, R44, R50, V88, V90, Q105, 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두를 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열번호 14 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄로서, 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 하기를 포함하는 중쇄:
(i) 하기 잔기: K13, E16, V37, G42, K64, S70, N76, V78, S83, T86, A87, A88, 및 Q109 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두; 또는
(ii) 하기 잔기(표 2에 볼드체 및 확대체로 표기; 또한 도 2 참조): E1, V5, G9, G15, G16, R19, L20, S21, A23, A40, G42, V48, S49, A60, D61, S62, V63, K64, G65, F67, T68, A74, K76, S77, V78, Y79, L80, Q81, N83, R86, A87, E88, V92, 및 Q109 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 또는 34개 모두.
본 개시내용의 항-MT 항체는 의도된 목적에 적합한 것으로 간주되는 임의의 다른 모이어티에 연결될 수 있다. 한 실시형태에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 검출가능한 표지를 추가로 포함한다. 이러한 실시형태는 예를 들어 치료 과정을 모니터링하는 데 유용할 수 있다. 임의의 적합한 검출 가능한 표지는 방사성 동위원소, 형광 분자, 자성 입자(나노 입자 포함), 금속 입자(나노 입자 포함), 인광 분자 및 효소를 포함하나 이에 제한되지 않는 항체에 공유적으로, 유전적으로 또는 임의의 다른 수단에 의해 결합될 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 추가의 치료제를 추가로 포함한다. 의도된 목적에 적합한 임의의 치료제는 인슐린, 메트포르민, 프람린티드, 술포닐우레아(글리부리드, 글리피지드 및 글리메피리드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 메글리티니드(레파글리니드 및 나테글리니드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하나 이에 제한되지 않음), DPP-4 저해제(시타글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴을 포함하나 이에 제한되지 않음), GLP-1 수용체 작용제(엑세나티드, 리라글루티드 및 세마글루티드를 포함하나 이에 제한되지 않음), SGLT2 저해제(카나글리플로진, 다파글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함하나 이에 제한되지 않음), 엔테카비르, 테노포비르, 라미부딘, 아데포비르, 텔비부딘, 시메프레비르, 소포스부비르, 사이토카인, 케모카인, 인터페론 또는 리바비린을 포함하나 이에 제한되지 않는 항체에 공유적으로, 유전적으로 또는 임의의 다른 수단에 의해 연결될 수 있다. 이러한 컨쥬게이트는 예를 들어 본 명세서에 개시된 방법에서 유용할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 세포 표적화 모이어티를 추가로 포함한다. 임의의 세포 표적화 모이어티는 췌장 또는 간 세포 표적화 모이어티(예컨대 췌장 β 세포에 우선적으로 결합하는 하나 이상의 펩티드 또는 다른 모이어티를 포함하는 췌장 세포 표적화 모이어티(글루카곤 유사 펩티드-1(GLP-1), 글루카곤 유사 펩티드-2(GLP-2), 펩티드 YY(PYY), 신경펩티드 Y(NPY), 췌장 펩티드(PPY) 및 엑센딘-4를 포함하지만 이에 제한되지 않음); 또는 간 세포 표적화 모이어티(간 세포 표적화 모이어티는 포자소체 단백질(CSP), CSP 영역 I, CSP I 플러스(plus), 락토오스아미노화된 인간 혈청 알부민, 글리코실화된 지질단백질 및 아라비노갈락탄을 포함하지만 이에 제한되지 않음))를 포함하나 이에 제한되지 않는 의도된 세포 표적에 적합한 것으로 간주되는 것으로 사용될 수 있다. 이러한 컨쥬게이트는 예를 들어 본 명세서에 개시된 방법에서 유용할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태 또는 실시형태들의 조합의 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 개시된다. 단리된 핵산 서열은 RNA 또는 DNA를 포함할 수 있다. 이러한 단리된 핵산 서열은, 폴리A 서열, 변형된 코작(Kozak) 서열, 및 에피토프 태그, 이출 신호, 및 분비 신호, 핵 국소화 신호 및 원형질 막 국소화 신호를 코딩하는 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는, 코딩된 단백질의 발현 및/또는 정제를 촉진하는데 유용한 추가의 서열을 포함할 수 있다.
추가 양태에서 본 개시내용의 단리된 핵산을 포함하는 발현 벡터가 제공된다. "발현 벡터"는 핵산 코딩 영역 또는 유전자를 유전자 생성물의 발현에 영향을 미칠 수 있는 임의의 프로모터에 작동가능하게 연결하는 벡터를 포함한다. 포유류 시스템에서 개시된 핵산 서열의 발현을 유도하는 데 사용되는 프로모터 서열은 구성적(CMV, SV40, RSV, 액틴, EF를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 프로모터 중 임의의 것에 의해 유도됨) 또는 유도성(테트라사이클린, 엑디손, 스테로이드 반응성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 유도성 프로모터 중 임의의 것에 의해 유도됨)일 수 있다. 발현 벡터는 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA로의 통합에 의해 적합한 숙주 유기체에서 복제가능하다. 다양한 실시형태에서, 발현 벡터는 플라스미드 또는 바이러스 벡터를 포함한다.
추가 양태에서, 본 개시내용의 항체, 핵산, 및/또는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 숙주 세포는 원핵생물 또는 진핵생물일 수 있다. 세포는 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염될 수 있다. 한 실시형태에서, 세포는 본 개시내용의 항체를 발현 및 분비하는 하이브리도마 세포이다. 따라서, 재조합 숙주 세포는 예를 들어 하기를 포함하는 항체 생성 방법에서 사용될 수 있다:
(a) 핵산 코딩된 항체의 발현에 적합한 조건 하에 재조합 숙주 세포를 배양하는 것; 및
(b) 배양된 세포로부터 항체를 단리하는 것.
핵산 코딩된 항체의 발현에 적합한 조건은 본 명세서의 교시, 사용된 특정 숙주 세포 및 벡터, 및 당업자의 일반적인 지식에 기초하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
또 다른 양태에서, 하기를 포함하는 약학 조성물이 제공된다:
(a) 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태 또는 실시형태들의 조합의 항체, 단리된 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주 세포; 및
(b) 약학적으로 허용 가능한 담체.
예를 들어, 본 개시내용의 항체는 약학 제형에 존재할 수 있다. 이 실시형태에서, 항체는 약학적으로 허용 가능한 담체와 조합된다. 이러한 염을 형성할 수 있는 적합한 산에는, 염산, 브롬화수소산, 과염소산, 질산, 티오시안산, 황산, 인산 등과 같은 무기산; 및 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 안트라닐산, 신남산, 나프탈렌 술폰산, 술파닐산 등과 같은 유기산이 포함된다. 이러한 염을 형성할 수 있는 적합한 염기에는, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼륨 등과 같은 무기 염기; 및 모노-, 디- 및 트리알킬 및 아릴 아민류(예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필아민, 메틸아민, 디메틸아민 등) 및 선택적으로 치환된 에탄올-아민류(예를 들어 에탄올아민, 디에틴올아민 등)와 같은 유기 염기가 포함된다.
상기 약학 조성물은 본 발명의 조성물에 더하여, (a) 동결건조보호제; (b) 계면활성제; (c) 증량제; (d) 등장성 조절제; (e) 안정화제; (f) 보존제 및/또는 (g) 완충제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 약학 조성물 중 완충제는 트리스(Tris) 완충제, 히스티딘 완충제, 인산염 완충제, 시트르산염 완충제 또는 아세트산염 완충제이다. 상기 약학 조성물은 또한 동결건조보호제, 예를 들어 수크로오스, 소르비톨 또는 트레할로오스를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 약학 조성물은, 보존제, 예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄, 클로로헥시딘, 페놀, m-크레졸, 벤질알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로부탄올, o-크레졸, p-크레졸, 클로로크레졸, 페닐질산수은, 티메로살, 벤조산 및 이들의 다양한 혼합물을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 글리신과 같은 증량제를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-40, 폴리소르베이트-60, 폴리소르베이트-65, 폴리소르베이트-80, 폴리소르베이트-85, 폴록사머-188, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 소르비탄 트리라우레이트, 소르비탄 트리스테아레이트, 소르비탄 트리올레에이트 또는 이들의 조합을 포함한다. 상기 약학 조성물은 또한 등장성 조절제, 예를 들어 상기 제형을 인간 혈액과 실질적으로 등장성 또는 등삼투성으로 만드는 화합물을 포함할 수 있다. 예시적인 등장성 조절제에는, 수크로오스, 소르비톨, 글리신, 메티오닌, 만니톨, 덱스트로오스, 이노시톨, 염화나트륨, 아르기닌 및 아르기닌 염산염이 포함된다. 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 안정화제, 예를 들어 관심 단백질과 조합될 때, 동결건조 또는 액체 형태에서 관심 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 실질적으로 방지하거나 감소시키는 분자를 추가로 포함한다. 예시적인 안정화제에는, 수크로오스, 소르비톨, 글리신, 이노시톨, 염화나트륨, 메티오닌, 아르기닌 및 아르기닌 염산염이 포함된다.
본 발명의 약학 조성물은 임의의 적합한 제형으로, 바람직하게는 주사에 의한 투여에 적합한 제형으로 구성될 수 있다. 이러한 약학 조성물은 예를 들어 본 명세서에 개시된 치료 방법에서 사용될 수 있다.
약학 조성물은 추가 치료제와 같이 주어진 용도에 적절한 것으로 간주되는 임의의 다른 성분을 함유할 수 있다. 한 실시형태에서, 약학 조성물은 인슐린, 메트포르민, 프람린티드, 술포닐우레아(글리부리드, 글리피지드 및 글리메피리드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 메글리티니드(레파글리니드 및 나테글리니드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하나 이에 제한되지 않음), DPP-4 저해제(시타글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴을 포함하나 이에 제한되지 않음), GLP-1 수용체 작용제(엑세나티드, 리라글루티드 및 세마글루티드를 포함하나 이에 제한되지 않음), SGLT2 저해제(카나글리플로진, 다파글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함하나 이에 제한되지 않음), 엔테카비르, 테노포비르, 라미부딘, 아데포비르, 텔비부딘, 시메프레비르, 소포스부비르, 사이토카인, 케모카인, 인터페론 또는 리바비린으로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 치료제를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 장 염증, 당뇨병, 당뇨병전기, 내당능장애, 간염 및/또는 염증성 간질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애의 치료 또는 발병 제한 방법으로서, 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태 또는 실시형태들의 조합의 단리된 항체 또는 이의 단편, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 및/또는 약학 조성물의 장애를 치료하기에 효과적인 양을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
본 명세서에 사용된 "치료적 유효량"은, 관련 장애를 치료하고/하거나 제한하는데 효과적인 조성물의 양을 나타낸다.
본 명세서에 사용된 "치료하다" 또는 "치료"는 언급된 장애 중 하나 이상을 앓고 있는 개체에서 하기 중 하나 이상을 달성하는 것을 의미한다: (a) 장애의 중증도를 감소시키는 것; (b) 치료되는 장애(들)의 특징적인 증상의 발증을 제한하거나 예방하는 것; (c) 치료되는 장애(들)의 특징적인 증상의 악화를 저해하는 것; (d) 이전에 장애(들)를 앓았던 환자에서 장애(들)의 재발을 제한하거나 예방하는 것; 및/또는 (e) 이전에 장애(들)에 대하여 증상이 있었던 환자에서 증상의 재발을 제한하거나 예방하는 것. 임의의 양의 이러한 "치료"는 언급된 장애를 앓고 있는 대상에게 크게 유익하다.
본 명세서에 사용된 "제한하다" 또는 "발병의 제한"은 언급된 장애 중 하나 이상의 위험이 있는 개체에서 하기 중 하나 이상을 달성하는 것을 의미한다: (a) 장애로의 진행을 늦추는 것; 및/또는 (b) 장애로의 진행에 특징적인 증상의 발증을 제한하거나 예방하는 것. 임의의 양의 이러한 "발병의 제한"은 언급된 장애의 위험이 있는 대상에게 크게 유익하다.
이러한 치료 또는 발병의 제한은 단독 치료제로서 세포외 MT 저해제의 사용을 포함할 수 있거나, 또는 주치의에 의해 적절하다고 판단되는 경우 다른 치료적 중재를 보완하거나 증강시키기 위한 이의 사용을 포함할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 상기 대상은 당뇨병을 앓고 있거나 당뇨병의 발병 위험이 있고, 상기 방법은 당뇨병을 치료하거나 이의 발병을 제한하는 역할을 한다.
하나의 이러한 실시형태에서, 상기 대상은 제1형 당뇨병의 위험이 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 제1형 당뇨병의 발병을 제한하는 역할을 한다. 국제공개 WO2019/143767호에 기재된 바와 같이, 인간 MT1 저해제는 NOD 마우스 모델에서 제1형 당뇨병의 발병을 예방하였다. 따라서, 이러한 실시형태의 방법은 제1형 당뇨병(T1D)의 위험이 있는 대상에서 제1형 당뇨병(T1D)의 발병을 제한하는데 사용될 수 있다. T1D의 발병을 제한하는 것은, T1D로의 진행을 늦추고/늦추거나 T1D의 특징적인 증상의 발증을 늦추는 것을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 실시형태에서, T1D에 대한 위험이 있는 대상은 주치의에 의해 치료가 적절하다고 판단되는 T1D에 대한 하나 이상 위험 인자를 갖는다. 이러한 T1D 위험 인자에는, 제1형 당뇨병을 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 췌장종양, 췌장염, 췌도 세포 자가항체, 인슐린 자가항체, 글루탐산 데카르복실라아제 자가항체(GADA), 인슐린종 관련(IA-2) 자가항체, 아연 수송체 자가항체(ZnT8), 및/또는 DRB1 0401, DRB1 0402, DRB1 0405, DQA 0301, DQB1 0302 및 DQB1 0201로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IDDM1 유전자의 변이체가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 대안적으로 또는 조합으로, 상기 대상은 하나 이상의 T1D 증상을 나타낼 수 있으며(아직 T1D로 진단되지는 않음); 이러한 증상은, 다뇨증(배뇨 증가), 다음증(갈증 증가), 구강건조, 다식증(허기 증가), 피로 및 체중감소를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 당업자가 이해할 수 있는 바와 같이, T1D 또는 이의 증상의 발병에 대한 임의의 제한은 이의 위험이 있는 대상에게 큰 유익을 제공한다.
인슐린 의존성(제1형) 진성 당뇨병 1(IDDM1) 유전자는 염색체 6의 MHC II형 영역에 위치한다. 이러한 유전자의 특정 변이체는 제1형 당뇨병의 특징인 조직적합성 감소의 위험을 증가시킨다. 이러한 변이체에는, DRB1 0401, DRB1 0402, DRB1 0405, DQA 0301, DQB1 0302 및 DQB1 0201이 포함된다. 유사하게, 췌도 세포 자가항체, 인슐린 자가항체, 글루탐산 데카르복실라아제 자가항체(GADA), 인슐린종 관련(IA-2) 자가항체, 아연 수송체 자가항체(ZnT8)와 같은 당뇨병 관련 자가항체의 출현은, 종종 고혈당증이 발증하기 전에 고혈당증 제1형 당뇨병보다 먼저 나타난다. T1D의 위험은 항체 유형의 수에 따라 증가하며, 자가항체의 출현에서 임상적으로 진단 가능한 T1D까지의 시간 간격은 영유아의 경우 수개월일 수 있으나, 일부 사람들에서는 수년이 걸릴 수 있다. 이러한 자가항체는, 예를 들어 면역형광 또는 결합분석법에 의해 결정될 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 제1형 당뇨병을 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 제1형 당뇨병을 치료하는 역할을 한다. 이러한 실시형태에서, 상기 대상은 T1D로 이미 진단되었고, 상기 방법은 T1D를 치료하기 위해 사용될 수 있다. T1D는 췌장에서 베타 세포의 자가면역 파괴, 인슐린 생산이 거의 없거나 없음, 및 고혈당증과 관련이 있다. 따라서, T1D의 치료는 상기 대상에게의 인슐린의 투여를 포함한다. T1D를 앓고 있는 대상은, 저혈당증, 다뇨증, 다식증, 다음증, 체중감소, 흐린 시야, 피로, 상처 치유 능력의 감소, 요로감염, 성기능장애, 구강건조, 당뇨병성 케톤산증, 심혈관질환, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 뇌졸중, 신부전 및 족부궤양을 포함하나 이에 제한되지 않는 증상 또는 합병증을 가질 수 있다. 일부 경우에, T1D를 앓고 있는 대상은 췌장 또는 췌도 이식이 필요할 수 있다. 따라서, 다양한 실시형태에서, 상기 치료는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 인슐린 주사에 대한 필요 빈도를 감소시키는 것; 상기 대상에서, 췌장 베타 세포의 파괴, 고혈당증, 저혈당증, 다뇨증, 다식증, 다음증, 체중감소, 흐린 시야, 피로, 상처 치유 능력의 감소, 요로감염, 성기능장애, 구강건조, 당뇨병성 케톤산증, 심혈관질환, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 뇌졸중, 신부전 및 족부궤양을 포함하나 이에 제한되지 않는 제1형 당뇨병 합병증의 발증 또는 진행을 늦추는 것; 및 췌장 또는 췌도 세포 이식의 필요를 지연시키는 것. 하나의 실시형태에서, 상기 치료는, 예를 들어 상기 저해제의 투여 후 20 내지 120분 이내에 혈당 수준(mg/dL)의 10%, 15%, 20% 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 제2형 당뇨병의 위험이 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 제2형 당뇨병(T2D)의 발병을 제한하는 역할을 한다. T2D는 고혈당증, 인슐린내성 및 인슐린의 상대적 부족을 특징으로 하는 대사 장애이다. 증상 및/또는 합병증에는, 저혈당증, 인슐린내성, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 단백뇨, 사구체 청소 장애, 당뇨병성 순환장애, 신부전, 심혈관질환, 다뇨증, 다음증, 체중감소 및 뇌졸중이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 하나의 실시형태에서, 제2형 당뇨병의 발병을 제한하는 것은, 예를 들어 상기 저해제의 투여 후 20 내지 120분 이내에 혈당 수준(mg/dL)의 10%, 15%, 20% 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다.
T2D에 대한 위험 인자에는, 비만, 흡연, 비활동적 생활방식(sedentary lifestyle), 제2형 당뇨병을 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 당뇨병전기, 당뇨병전기를 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 불량한 식습관(예를 들어: 고지방, 섬유질 부족, 단순 탄수화물 과다 등), 50세 이상, 고혈압, 고콜레스테롤, 테스토스테론 결핍, 메탈로티오네인 1 A (MT1A) rs8052394 유전자위(G 변경) 단일염기다형성 및 임신성 당뇨병의 병력이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 따라서, 다양한 실시형태에서, 상기 대상은 이러한 위험 인자 중 하나 이상을 갖고, 상기 방법은 T2D로의 진행을 늦추고/늦추거나 (b) T2D의 특징적인 증상의 발증을 제한하거나 예방한다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 T2D를 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 T2D를 치료하는 역할을 한다. 이러한 실시형태에서, 상기 치료는, 고혈당증, 저혈당증, 인슐린내성, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 단백뇨, 사구체 청소 장애, 당뇨병성 순환장애, 신부전, 심혈관질환, 다뇨증, 다음증, 체중감소, 뇌졸중을 포함하나 이에 제한되지 않는 제2형 당뇨병 합병증 중 하나 이상을 제한하고, 인슐린 또는 다른 치료제의 필요 빈도를 감소시키는 것을 포함할 수 있다. 임의의 양의 이러한 증상/합병증의 제한은 T2D를 앓고 있는 대상에게 크게 유익하다. 하나의 실시형태에서, 상기 치료는, 예를 들어 상기 저해제의 투여 후 20 내지 120분 이내에 혈당 수준(mg/dL)의 10%, 15%, 20% 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 당뇨병전기를 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 당뇨병전기를 치료하는 역할을 한다. 이러한 실시형태에서, 상기 대상은 당뇨병전기를 앓고 있는 대상이다. 본 명세서에 사용된 "당뇨병전기"는, 당뇨병의 진단 기준에 전부는 아니지만 일부가 충족된 상태이다. 따라서, 당뇨병전기 대상은 (a) 경구 포도당 부하(OGT)에 대한 베타 세포의 반응이 부족한 상태인, 공복 내당능장애를 가질 수 있거나, 또는 (b) 공복 혈당이 정상 수준으로 간주되는 수준보다 높지만 진성 당뇨병으로 분류되기에는 충분히 높지 않은 상태인, 지속적으로 상승되는 공복 혈당(IFG)을 가질 수 있다. 당뇨병전기 상태는 인슐린내성과 관련이 있으며, 심혈관 병리의 위험이 증가될 수 있다. 당뇨병전기 상태에 있는 개체는 T2D의 발병 위험이 상대적으로 높다. 본 개시내용의 방법은, T2D, 고혈당증, 인슐린내성 및/또는 심혈관질환을 포함하나 이에 제한되지 않는 당뇨병전기의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦춤으로써, 당뇨병전기를 앓고 있는 대상을 치료하는데 사용될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 치료는, 예를 들어 상기 저해제의 투여 후 20 내지 120분 이내에 혈당 수준(mg/dL)의 10%, 15%, 20% 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 내당능장애를 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 내당능장애를 치료하는 역할을 한다. 본 명세서에 사용된 내당능장애는, 종종 75 g 경구 포도당 부하 검사에서 dL당 140 내지 199 mg(7.8 내지 11.0 mmol/l)의 2시간 포도당 수준으로 정의된다. 환자는 포도당 수준이 2시간 후 중간 수준으로 증가되었지만 제2형 진성 당뇨병에 해당하는 수준보다는 낮게 증가된 IGT의 상태에 있다고 여겨진다. 공복시 포도당은 정상이거나 약간 상승될 수 있다. 내당능장애는 인슐린내성과 관련이 있고 심혈관 병리의 위험이 증가된 고혈당증의 당뇨병전기 상태이다. IGT는 제2형 진성 당뇨병보다 수년 앞서 있을 수 있다. 이러한 실시형태에서, 상기 치료는, 제2형 당뇨병, 고혈당증, 인슐린내성 및/또는 심혈관질환을 포함하나 이에 제한되지 않는 내당능장애의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함할 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 치료는, 예를 들어 상기 저해제의 투여 후 20 내지 120분 이내에 혈당 수준(mg/dL)의 10%, 15%, 20% 또는 그 이상의 감소를 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 간염을 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 간염을 치료하는 역할을 한다. 국제공개 WO2019/143767호에 기재된 바와 같이, MT 저해제는 조직 염증을 제한하는데 효과적이며, 간 조직에서 항-염증성 IL-10 신호를 증가시키면서 전염증성 사이토카인 MCP-1 및 TNF-a를 감소시킨다. 간염은 간 조직의 염증이다. 증상에는, 피부 및 눈의 흰자위의 황변, 식욕부진, 구토, 피로, 복통, 설사, 급성 간부전, 간의 반흔형성, 간부전 또는 간암이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 간염의 가장 일반적인 원인은 바이러스 감염(A, B, C, D 및 E형), 중증 알콜 사용(heavy alcohol use), 특정 약물, 독소, 다른 감염, 자가면역질환 및 비알콜성 지방간염(NASH)이다. 따라서, 다양한 실시형태에서, 상기 치료는, 피부 및/또는 눈의 흰자위의 황변, 식욕부진, 구토, 피로, 복통, 설사, 급성 간부전, 간의 반흔형성, 간부전 및 간암을 포함하나 이에 제한되지 않는 간염의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함할 수 있다.
추가의 실시형태에서, 상기 대상은 염증성 간질환을 앓고 있고, 상기 방법은 상기 대상에서 염증성 간질환을 치료하는 역할을 한다. 본 명세서에 사용된 "염증성 간질환"은, 지방증(즉, 세포 내 지질의 비정상인 보유)을 통해 간 세포에서 트리글리세리드 지방의 거대 액포의 세포질내 축적과 관련된 병태이다. 간은 전신 대사에 큰 역할을 하며, 에너지 불균형은 특히 간 지질 대사에서의 결함과 관련이 있다. 구체적으로, 비만 및 인슐린내성은 종종 비알콜성 지방간질환(NAFLD)의 특징인 간에서의 지질 침착 증가와 관련이 있다. 지질 대사가 고도로 역동적이지만, 만성 지질 과부하는 간에서 조직 손상을 유발하여 간에 거주하는 및 거주하지 않는 면역 세포를 동원하며, 이는 비알콜성 지방간염(NASH)의 특징인 섬유증을 유발할 수 있다. 간섬유증은 간경화, 암으로 이어질 수 있으며, 심혈관질환의 위험을 유의하게 증가시킨다. 이는, 비알콜성 지방간질환(NAFLD)의 위험을 개선시키기 위해 간으로의 면역 세포의 동원을 차단할 가능성을 증가시킨다. 하기 실시예에 제시된 바와 같이, MT 저해제 치료는 부고환 백색 지방 조직의 습윤 조직 중량의 증가 및 총 트리글리세리드 수준의 감소뿐 아니라, 항-염증성 IL-10 신호를 증가시키면서 전염증성 사이토카인 MCP-1 및 TNF-a의 감소에 영향을 미쳤다. 염증성 간질환은 지방증(비알콜성 지방간(NAFL))일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 지방간질환은 비알콜성 지방간질환(NAFLD)일 수 있으며, 이는 NAFLD의 가장 극단적인 형태인 비알콜성 지방간염(NASH)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. NAFLD는 과도한 알콜 사용이외의 원인에 의해 지방이 간에 침착될 때(지방증) 일어나는 염증성 간질환의 유형 중 하나이다. NASH 및 NAFLD의 증상은, 피로, 권태감, 우상복부의 둔한 불편감, 경증 황달, 및 통상의 혈액 검사 동안의 비정상 간 기능 검사를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않으며; NASH 및 NAFLD의 합병증은, 간섬유증, 간암 및/또는 간경변을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 따라서, 하나의 실시형태에서, 염증성 간질환은 비알콜성 지방간염(NASH) 및/또는 비알콜성 지방간질환(NAFLD)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 추가의 실시형태에서, 상기 치료는, 피로, 권태감, 간섬유증, 간암 및/또는 간경변을 포함하나 이에 제한되지 않는 염증성 간질환의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 대상은 장 염증을 앓는다. 이러한 장 염증은 크론병, 궤양성 대장염, 교원성-, 림프구성-, 허혈성-, 전환- 및 불확정 대장염, 및 베체트병을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
하나의 실시형태에서, 항-MT 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는 MT 저해제는, 췌장 베타 세포와 같은 MT를 생산하는 췌장 세포를 특이적으로 표적화하기 위해 췌장 세포 표적화 모이어티에 연결될 수 있다. 이러한 실시형태는 T1D, T2D, 당뇨병전기 및/또는 내당능장애를 치료하거나 이의 발병을 제한하는데 특히 유용할 것이다. 하나의 실시형태에서, 췌장 β 세포 특이적 표적화 모이어티는, 글루카곤 유사 펩티드-1(GLP-1), 글루카곤 유사 펩티드-2(GLP-2), 펩티드 YY(PYY), 신경펩티드 Y(NPY), 췌장 펩티드(PPY) 및 엑센딘-4를 포함하나 이에 제한되지 않는, 췌장 β 세포에 우선적으로 결합하는 하나 이상의 펩티드 또는 다른 모이어티를 포함한다. 이러한 표적화 모이어티의 예시적인 아미노산 서열은 표 3에 제공된다.
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MT 항체 또는 이의 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는 MT 저해제에 췌장 세포 표적화 모이어티를 부착시키는 것은, 췌장 세포 표적화 모이어티 및 MT 항체 또는 이의 단편이 이의 각각의 활성을 보유하는 한, 2개의 분자를 결합하는 임의의 화학 반응에 의해 달성될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 세포외 MT 저해제가 항체 또는 이의 단편을 포함하는 경우, 상기 조성물은 재조합 융합 단백질을 포함한다. 다른 실시형태에서, 췌장 세포 표적화 모이어티와 MT 항체 또는 이의 단편 사이의 연결은 다수의 화학 메커니즘, 예를 들어 공유 결합, 친화성 결합, 삽입, 배위 결합 및 착물화를 포함할 수 있다. 공유 결합은 기존 측쇄의 직접 축합 또는 외부 브릿징 분자의 혼입에 의해 달성될 수 있다. 다수의 2가 또는 다가 결합제는 항체와 같은 단백질 분자를 다른 분자에 커플링하는데 유용하다. 예를 들어, 커플링제의 대표적이며 비제한적인 예는, 티오에스테르, 카르보디이미드, 숙신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민과 같은 유기 화합물일 수 있다.
모든 실시형태에서, 상기 대상은 포유류, 인간, 소, 개, 고양이, 말, 닭 등을 포함하는, 본 명세서에 개시된 치료 방법으로 유익할 수 있는 임의의 대상일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 대상은 인간이다.
투여용 조성물은 전형적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하도록 약학 조성물로 제형화된다. 약학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있는 적합한 산에는, 염산, 브롬화수소산, 과염소산, 질산, 티오시안산, 황산, 인산 등과 같은 무기산; 및 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 안트라닐산, 신남산, 나프탈렌 술폰산, 술파닐산 등과 같은 유기산이 포함된다. 이러한 염을 형성할 수 있는 적합한 염기에는, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼륨 등과 같은 무기 염기; 및 모노-, 디- 및 트리알킬 및 아릴 아민류(예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필아민, 메틸아민, 디메틸아민 등) 및 선택적으로 치환된 에탄올-아민류(예를 들어 에탄올아민, 디에틴올아민 등)와 같은 유기 염기가 포함된다.
상기 약학 조성물은 상기 조성물 및 담체에 더하여, (a) 동결건조보호제; (b) 계면활성제; (c) 증량제; (d) 등장성 조절제; (e) 안정화제; (f) 보존제 및/또는 (g) 완충제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 약학 조성물 중 완충제는 트리스(Tris) 완충제, 히스티딘 완충제, 인산염 완충제, 시트르산염 완충제 또는 아세트산염 완충제이다. 상기 약학 조성물은 또한 동결건조보호제, 예를 들어 수크로오스, 소르비톨 또는 트레할로오스를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 약학 조성물은, 보존제, 예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄, 클로로헥시딘, 페놀, m-크레졸, 벤질알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로부탄올, o-크레졸, p-크레졸, 클로로크레졸, 페닐질산수은, 티메로살, 벤조산 및 이들의 다양한 혼합물을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 글리신과 같은 증량제를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-40, 폴리소르베이트-60, 폴리소르베이트-65, 폴리소르베이트-80, 폴리소르베이트-85, 폴록사머-188, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 소르비탄 트리라우레이트, 소르비탄 트리스테아레이트, 소르비탄 트리올레에이트 또는 이들의 조합을 포함한다. 상기 약학 조성물은 또한 등장성 조절제, 예를 들어 상기 제형을 인간 혈액과 실질적으로 등장성 또는 등삼투성으로 만드는 화합물을 포함할 수 있다. 예시적인 등장성 조절제에는, 수크로오스, 소르비톨, 글리신, 메티오닌, 만니톨, 덱스트로오스, 이노시톨, 염화나트륨, 아르기닌 및 아르기닌 염산염이 포함된다. 다른 실시형태에서, 상기 약학 조성물은 안정화제, 예를 들어 단백질계 조성물과 조합될 때, 동결건조 또는 액체 형태에서 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 실질적으로 방지하거나 감소시키는 분자를 추가로 포함한다. 예시적인 안정화제에는, 수크로오스, 소르비톨, 글리신, 이노시톨, 염화나트륨, 메티오닌, 아르기닌 및 아르기닌 염산염이 포함된다.
상기 조성물은 통상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 아쥬반트 및 비히클을 함유하는 단위 투여 제형으로, 경구, 비경구, 흡입 분무, 직장 또는 국소를 포함하는 임의의 적합한 경로를 통해 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된 비경구라는 용어에는, 피하, 정맥내, 동맥내, 근육내, 흉골내, 힘줄내, 척수내, 두개내, 흉각내, 주입 기법 또는 복강내가 포함된다. 투여 요법은 최적의 목적하는 반응(예를 들어 치료 또는 예방 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 적합한 투여량 범위는, 예를 들어 체중 1 kg당 0.1 ug 내지 100 mg일 수 있으며; 대안적으로 이는 체중 1 kg당 0.5 ug 내지 50 mg, 1 ug 내지 25 mg 또는 5 ug 내지 10 mg일 수 있다. 상기 조성물은 단일 볼루스로 전달될 수 있거나, 또는 주치의에 의해 결정 시 1회 초과(예를 들어 2회, 3회, 4회, 5회 또는 그 이상) 투여될 수 있다. 상기 조성물은 단독 치료제로 투여될 수 있거나, 또는 주치의에 의해 적절하다고 판단되는 경우 하나 이상의 다른 치료제와 함께 (별도로 또는 조합으로) 투여될 수 있다. 하나의 비제한적인 실시형태에서, 상기 대상은 T1D를 앓고 있거나 이의 위험이 있으며, 상기 저해제는 인슐린, 메트포르민 또는 프람린티드 중 하나 이상과 함께 사용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 상기 대상은 T2D, 당뇨병전기 및/또는 내당능장애를 앓고 있거나 이의 위험이 있으며, 상기 저해제는 메트포르민, 술포닐우레아(글리부리드, 글리피지드 및 글리메피리드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 메글리티니드(레파글리니드 및 나테글리니드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하나 이에 제한되지 않음), DPP-4 저해제(시타글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴을 포함하나 이에 제한되지 않음), GLP-1 수용체 작용제(엑세나티드, 리라글루티드 및 세마글루티드를 포함하나 이에 제한되지 않음), SGLT2 저해제(카나글리플로진, 다파글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함하나 이에 제한되지 않음) 또는 인슐린 중 하나 이상과 함께 사용될 수 있다. 하나의 비제한적인 실시형태에서, 상기 대상은 간염을 앓고 있거나 이의 위험이 있으며, 상기 저해제는 엔테카비르, 테노포비르, 라미부딘, 아데포비르, 텔비부딘, 시메프레비르, 소포스부비르, 인터페론 또는 리바비린 중 하나 이상과 조합으로 사용될 수 있다.
또 다른 실시형태에서,
(a) 본 명세서에 개시된 항-메탈로티오네인 항체; 및
(b) 인슐린, 메트포르민, 프람린티드, 술포닐우레아(글리부리드, 글리피지드 및 글리메피리드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 메글리티니드(레파글리니드 및 나테글리니드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하나 이에 제한되지 않음), DPP-4 저해제(시타글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴을 포함하나 이에 제한되지 않음), GLP-1 수용체 작용제(엑세나티드, 리라글루티드 및 세마글루티드를 포함하나 이에 제한되지 않음), SGLT2 저해제(카나글리플로진, 다파글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함하나 이에 제한되지 않음), 엔테카비르, 테노포비르, 라미부딘, 아데포비르, 텔비부딘, 시메프레비르, 소포스부비르, 인터페론 또는 리바비린 중 하나 이상을 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 조성물은, 예를 들어 본 개시내용의 방법에 사용될 수 있다. 상기 개시된 항체의 모든 실시형태 및 실시형태들의 조합은 이러한 양태의 조성물에 포함시키기에 적합하다. 하나의 실시형태에서, 상기 항-MT 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 항-MT 항체는 인간화 항-MT 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은
(a) 본 명세서에 개시된 항-메탈로티오네인 항체; 및
(b) 세포외 인간 MT의 저해제에 연결된 췌장 또는 간 세포 표적화 모이어티를 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 조성물은, 예를 들어 본 개시내용의 방법에 사용될 수 있다. 상기 개시된 항체의 모든 실시형태 및 실시형태들의 조합은 이러한 양태의 조성물에 포함시키기에 적합하다. 하나의 실시형태에서, 상기 항-MT 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 항-MT 항체는 인간화 항-MT 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 상기 세포 표적화 모이어티는 간 세포 표적화 모이어티이다. 예시적인 이러한 실시형태에서, 상기 간 세포 표적화 모이어티에는, 포자소체 단백질(CSP), CSP 영역 I, CSP 영역 I 플러스, 락토오스아미노화된 인간 혈청 알부민, 글리코실화된 지질단백질 및/또는 아라비노갈락탄이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 하나의 실시형태에서, 상기 간 세포 결합 모이어티는 펩티드이며, CSP, CSP 영역 I, CSP 영역 I 플러스 또는 이의 간 세포 결합 단편으로부터 선택된다. 간에서 플라스모듐 포자소체를 표적화하는 CSP는 플라스모듐 포자소체의 표면에 존재하는 포자소체 단백질(CSP)에 기인한다(문헌[Rathore D, et al. The Journal of Biological Chemistry. 2005;280(21):20524-20529]). CSP는 대략 400개의 아미노산 길이이며, "영역 I"로 명명되는 보존된 KLKQP 모티프를 함유하는 N-말단 도메인, 고도로 반복적인 중심 도메인, 및 "영역 II"로 명명되는 또 다른 보존된 서열을 함유하는 C-말단 도메인의 3개의 도메인으로 구성된다(문헌[Singh et al. Cell. 2007;131(3):492-504]). 보존된 영역 I KLKQP 서열에 더하여, N-말단 영역은 또한 영역 I의 업스트림에, 2개의 공통 헤파린 술페이트 결합 서열을 함유한다. 보존된 영역 I 아미노산과, 영역 I의 업스트림에 있는 2개의 공통 헤파린 결합 서열을 함유하는 펩티드는 "영역 I 플러스"로 명명되었다(문헌[Prudencio et al., Nature Reviews Microbiology. 2006;4(11):849-856]).
또 다른 실시형태에서, 상기 세포 표적화 모이어티는, 글루카곤 유사 펩티드-1(GLP-1), 글루카곤 유사 펩티드-2(GLP-2), 펩티드 YY(PYY), 신경펩티드 Y(NPY), 췌장 펩티드(PPY) 및 엑센딘-4를 포함하나 이에 제한되지 않는 췌장 세포 표적화 모이어티이며; 상기 펩티드에 대한 예시적인 아미노산 서열은 상기 기재되어 있다.
항-MT 항체 또는 이의 단편에 상기 세포 표적화 모이어티를 부착시키는 것은, 상기 세포 표적화 모이어티 및 항-MT 항체 또는 이의 단편이 이의 각각의 활성을 보유하는 한, 2개의 분자를 결합하는 임의의 화학 반응에 의해 달성될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 재조합 융합 단백질을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 세포 표적화 모이어티와 항-MT 항체 또는 이의 단편 사이의 연결은 다수의 화학 메커니즘, 예를 들어 공유 결합, 친화성 결합, 삽입, 배위 결합 및 착물화를 포함할 수 있다. 공유 결합은 기존 측쇄의 직접 축합 또는 외부 브릿징 분자의 혼입에 의해 달성될 수 있다. 다수의 2가 또는 다가 결합제는 항체와 같은 단백질 분자를 다른 분자에 커플링하는데 유용하다. 예를 들어, 커플링제의 대표적이며 비제한적인 예는, 티오에스테르, 카르보디이미드, 숙신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민과 같은 유기 화합물일 수 있다.
모든 실시형태에서, 상기 대상은 포유류, 인간, 소, 개, 고양이, 말, 닭 등을 포함하는, 본 명세서에 개시된 치료 방법으로 유익할 수 있는 임의의 대상일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 대상은 인간이다.
실시예
UC1MT 단일클론 항-메탈로티오네인 항체의 인간화
마우스 UC1MT 단일클론 항-메탈로티오네인(MT) 항체는 서열 PromabKV6,10(경쇄) 및 MHC2822HC/Promab(중쇄)를 사용하여 인간화되었다. 3개의 인간 경쇄 서열 및 5개의 인간 중쇄 서열을 설계하였다. 서열은 더 많은 변경에서 더 적은 변경까지 중첩 방식으로 대략적으로 설계되었다. 중쇄 및 경쇄 디자인은 부모 V 영역과 함께 가능한 모든 쌍 조합, 결과적으로 24개의 조합에서 시험되었다. 사용된 불변 영역은 공통 인간 중쇄였으며 이러한 순열에 사용된 모든 중쇄 및 경쇄에서 공유된다.
(중쇄 및 경쇄의 V 영역의) 원래 UC1MT 마우스 하이브리도마의 부모 서열
A. 중쇄(ProMab)에 대한 1차 UC1MT 하이브리도마 소스 서열
Figure pct00006
(원래의 ProMab 서열에 대한 레이크(lake) MHC2822HC 복제된 서열):
Figure pct00007
CDR에 대한 원래의 UC1MT 하이브리도마의 경쇄 소스 서열(밑줄)
Figure pct00008
서열 디자인 고려 사항
시작 서열을 먼저 마우스 생식계열 V 영역과 비교하여 불량한 폴딩을 유발할 수 있는 골격 영역의 잠재적 돌연변이를 확인하였다. 중쇄는 뮤린 IGHV2-2 생식계열 서열 및 J1 J 쇄와 가장 유사하였다. 골격 영역에서 4개의 돌연변이가 관찰되었다. 경쇄는 뮤린 Ig 카파 경쇄 IGKV6-13 및 IGKV6-15와 가장 유사했다. 6개의 돌연변이가 관찰되었다. 또한, 최종 경쇄 서열을 생성하기 위해 코딩 서열의 5' 말단 부근에서 IGKV6-13과 IGKV6-15 사이에 교차 이벤트가 있는 것으로 나타났다. J5 경쇄 뮤린 J 영역이 사용된 것으로 보인다.
서열은 인간 면역글로불린에서 코돈 사용을 위해 돌연변이되었고, 서열은 또한 소규모, 중간 및 다수의 변형으로 선택되었으며, 항원 결합 영역(ABR)/상보적 결정 영역(CDR)이 항체의 항원 결합 포켓 쪽으로 배향되도록 서열을 돌연변이시켰다.
생성된 이들 3개의 인간화 경쇄 및 5개의 인간화 중쇄 각각은 HEK 294 세포에서 H,L 쌍 방식으로 공동 발현되었고, 면역글로불린은 이들 세포로부터 친화성 정제되었다. 이들 항체는 표준 ELISA에서 MT에 대해 시험되었으며 결과는 도 3에 도시된다. 인간화된 중쇄 및 경쇄의 조합은 메탈로티오네인에 결합하는데, H 사슬과 L 사슬의 다른 순열 사이의 결합 가능성에 약간의 차이가 있다. 마우스 H 및 L V 영역의 부모 서열이 인간 면역글로불린 H 및 L 불변 영역과 조합되는 경우, 항체가 유사하게 작동하므로 불변 영역의 변이는 항원 인식에 크게 기여하지 않는다.
본 발명자들은 본 명세서에 서열번호 1 내지 6으로 기재된 항원 결합 영역 상보성 결정 영역(CDR)을 확인하기 위해 소프트웨어를 사용하였다. (문헌[Kunik V, et al., (2012). PLoS Comput Biol 8(2): e1002388. doi:10.1371/journal.pcbi.1002388]; 문헌[Kunik V, et al., Y (2012). Nucleic Acids Res. 2012 Jul;40(Web Server issue):W521-4] 참조.)
본 발명자들은 다른 금속 단백질(알콜 탈수소효소(ADH), 탄산 탈수효소(CA), 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD), 시토크롬 C 산화물(CC), 메탈로티오네인(MT) 및 인간 인슐린)에 대한 결합에 대해 MT와 최고의 반응성을 나타내는 인간화 항체를 평가했다. 시험된 모든 항체는 MT에 대해 높은 특이성을 유지한다(데이터는 도시되지 않음).
마지막으로, Fab' 단편은 중쇄 및 경쇄 조합의 최상의 결합 버전으로 만들어졌으며 메탈로티오네인에 대한 결합이 시험되었다. 데이터는 도 4에 제시되어 있으며, 이는 이들이 부모 UC1MT의 Fab' 단편에 비해 개선된 결합으로 메탈로티오네인에 결합함을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> UNIVERSITY OF CONNECTICUT LYNES, Michael <120> Metallothionein antibodies and their use <130> 19-1213-PCT <140> PCT/US2020/042064 <141> 2020-07-15 <150> US 62/874,340 <151> 2019-07-15 <160> 25 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 1 Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 2 Lys Val Ser 1 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa can be A or T <400> 3 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Xaa 1 5 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 4 Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Gly 1 5 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 5 Ile Trp Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met His Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Trp Leu Leu Pro Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 25 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 25 Ala Val Leu Met Ser Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Phe Ala Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu 100 105 110

Claims (45)

  1. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편:
    아미노산 서열 QSIVHSNGNTYLE(서열번호 1)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(L-CDR1);
    아미노산 서열 KVS (서열번호 2)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(L-CDR2); 및
    아미노산 서열 FQGSHVPF(A/T)(서열번호 3)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(L-CDR3).
  2. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편:
    아미노산 서열 GFSLSRYG(서열번호 4)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(H-CDR1);
    아미노산 서열 IWSGGST(서열번호 5)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(H-CDR2); 및
    아미노산 서열 WLLPGY(서열번호 6)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(H-CDR3).
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 4, 5 또는 6개 모두의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화 항체 또는 이의 단편을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 7 내지 9로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 경쇄는 서열번호 1 내지 3 각각의 아미노산을 포함하고, 경쇄는 하기 잔기 D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, F41, Q42, R44, R50, V88, V90, T102, Q105 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 모두를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  7. 제6항에 있어서, 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 경쇄는 서열번호 1 내지 3의 CDR을 포함하고, 경쇄는 하기 잔기 D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, R44, R50, V88, V90, Q105, 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는 인간 경쇄로부터의 카파 불변 영역을 추가로 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 11 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기: E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  10. 제9항에 있어서, 서열번호 14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기: K13, E16, V37, G42, K64, S70, N76, V78, S83, T86, A87, A88 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두, 14개를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 서열번호 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 중쇄는 하기 잔기: E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄가 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는, 글리코실화를 방지하는 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 불변 서열을 추가로 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편:
    (a) 서열번호 7 내지 9로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로서, 서열번호 1 내지 3 각각의 아미노산을 포함하고, 하기 잔기: D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, F41, Q42, R44, R50, V88, V90, T102, Q105 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 모두를 포함하는 경쇄; 및
    (b) 서열번호 16 내지 26으로 이루어진 군으로부터 선택되거나 서열번호 11 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄로서, 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 하기 잔기: E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두를 포함하는 중쇄.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편:
    (a) 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로서, 서열번호 1 내지 3의 CDR을 포함하고, 하기 잔기 D1, V3, T5, S7, T14, Q17, P18, R44, R50, V88, V90, Q105, 및 K112 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두를 포함하는 경쇄; 및
    (b) 서열번호 14 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄로서, 서열번호 4 내지 6 각각의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, 하기를 포함하는 중쇄:
    (i) 하기 잔기: K13, E16, V37, G42, K64, S70, N76, V78, S83, T86, A87, A88, 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 모두; 또는
    (ii) 하기 잔기: E1, V5, G9, K13, G15, E16 또는 G16, T17, R19, L20, S21, A23, S35, I37, P40 또는 A40, G42, I48 또는 V48, S49, N58, A60, P61 또는 D61, S62, L63 또는 V63, K64, G65, V67 또는 F67, T68, S70, V71, T73, A74, N76 또는 K76, S77, F78, S79 또는 Y79, L80, Q81, L82, S83 또는 N83, V85, T86 또는 R86, A87, A88 또는 E88, V92 및 Q109 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 또는 43개 모두.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 항체가 단일클론 항체 또는 이의 단편 및/또는 인간화 항체 또는 이의 단편을 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 Fab' 단편을 포함하는, 단리된 항-메탈로티오네인 항체 또는 이의 단편.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 검출가능한 표지를 추가로 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 단편.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 단편:
    (a)인슐린, 메트포르민, 프람린티드, 술포닐우레아(글리부리드, 글리피지드 및 글리메피리드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 메글리티니드(레파글리니드 및 나테글리니드를 포함하나 이에 제한되지 않음), 티아졸리딘디온(로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하나 이에 제한되지 않음), DPP-4 저해제(시타글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴을 포함하나 이에 제한되지 않음), GLP-1 수용체 작용제(엑세나티드, 리라글루티드 및 세마글루티드를 포함하나 이에 제한되지 않음), SGLT2 저해제(카나글리플로진, 다파글리플로진 및 엠파글리플로진을 포함하나 이에 제한되지 않음), 엔테카비르, 테노포비르, 라미부딘, 아데포비르, 텔비부딘, 시메프레비르, 소포스부비르, 사이토카인, 케모카인, 인터페론 또는 리바비린을 포함하나 이에 제한되지 않는, 항체 또는 이의 단편에 컨쥬게이트된 치료제, 및/또는
    (b) 췌장 또는 간 세포 표적화 모이어티(췌장 β 세포에 우선적으로 결합하는 하나 이상의 펩티드 또는 다른 모이어티를 포함하는 췌장 세포 표적화 모이어티(글루카곤 유사 펩티드-1(GLP-1), 글루카곤 유사 펩티드-2(GLP-2), 펩티드 YY(PYY), 신경펩티드 Y(NPY), 췌장 펩티드(PPY) 및 엑센딘-4를 포함하지만 이에 제한되지 않음); 또는 간 세포 표적화 모이어티(간 세포 표적화 모이어티는 포자소체 단백질(CSP), CSP 영역 I, CSP I 플러스(plus), 락토오스아미노화된 인간 혈청 알부민, 글리코실화된 지질단백질 및 아라비노갈락탄을 포함하지만 이에 제한되지 않음))를 포함하나 이에 제한되지 않는 항체 또는 이의 단편에 컨쥬게이트된 세포 표적화 모이어티.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산.
  20. 적합한 제어 서열에 작동가능하게 연결된 제19항의 핵산을 포함하는 벡터.
  21. 제19항의 핵산 및/또는 제20항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  22. 하기를 포함하는, 약학 조성물:
    (a) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 이의 단편 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 제19항의 핵산, 제20항의 벡터, 또는 제21항의 숙주 세포; 및
    (b) 약학적으로 허용 가능한 담체.
  23. 장 염증, 당뇨병, 당뇨병전기, 내당능장애, 간염 및/또는 염증성 간질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애의 치료 또는 발병 제한 방법으로서, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 이의 단편 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 제19항의 핵산, 제20항의 벡터, 제21항의 숙주 세포, 또는 제22항의 약학 조성물의 장애를 치료하기에 효과적인 양을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 대상이 당뇨병을 앓고 있거나 당뇨병의 발병 위험이 있고, 상기 방법이 당뇨병을 치료하거나 이의 발병을 제한하는 역할을 하는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 대상이 제1형 당뇨병의 위험이 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 제1형 당뇨병의 발병을 제한하는 역할을 하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 대상이, 제1형 당뇨병을 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 췌장종양, 췌장염, 췌도 세포 자가항체, 인슐린 자가항체, 글루탐산 데카르복실라아제 자가항체(GADA), 인슐린종 관련(IA-2) 자가항체, 아연 수송체 자가항체(ZnT8), DRB1 0401, DRB1 0402, DRB1 0405, DQA 0301, DQB1 0302 및 DQB1 0201로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IDDM1 유전자의 변이체, 다뇨증, 다음증, 구강건조, 다식증, 피로 또는 체중감소를 포함하나 이에 제한되지 않는 제1형 당뇨병에 대한 위험 인자 중 하나 이상을 갖는, 방법.
  27. 제23항에 있어서, 상기 대상이 제1형 당뇨병을 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 제1형 당뇨병을 치료하는 역할을 하는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 치료가 인슐린 주사에 대한 필요 빈도를 감소시키는 것; 상기 대상에서, 췌장 베타 세포의 파괴, 고혈당증, 저혈당증, 다뇨증, 다식증, 다음증, 체중감소, 흐린 시야, 피로, 상처 치유 능력의 감소, 요로감염, 성기능장애, 구강건조, 당뇨병성 케톤산증, 심혈관질환, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 뇌졸중, 신부전 및 족부궤양을 포함하나 이에 제한되지 않는 제1형 당뇨병 합병증의 발증 또는 진행을 늦추는 것; 및 췌장 또는 췌도 세포 이식의 필요를 지연시키는 것 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
  29. 제23항에 있어서, 상기 대상이 제2형 당뇨병의 위험이 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 제2형 당뇨병의 발병을 제한하는 역할을 하는, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 대상이, 비만, 흡연, 비활동적 생활방식(sedentary lifestyle), 제2형 당뇨병을 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 당뇨병전기, 당뇨병전기를 앓고 있는 부모 또는 형제자매, 불량한 식습관(예를 들어: 고지방, 섬유질 부족, 단순 탄수화물 과다 등), 50세 이상, 고혈압, 고콜레스테롤, 테스토스테론 결핍, 메탈로티오네인 1 A (MT1A) rs8052394 유전자위(G 변경) 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism) 및 임신성 당뇨병의 병력을 포함하나 이에 제한되지 않는 제2형 당뇨병에 대한 위험 인자 중 하나 이상을 갖는, 방법.
  31. 제23항에 있어서, 상기 대상이 제2형 당뇨병을 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 제2형 당뇨병을 치료하는 역할을 하는, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 치료가, 고혈당증, 저혈당증, 인슐린내성, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 단백뇨, 사구체 청소 장애, 당뇨병성 순환장애, 신부전, 심혈관질환, 다뇨증, 다음증, 체중감소, 뇌졸중을 포함하나 이에 제한되지 않는 제2형 당뇨병 합병증 중 하나 이상을 제한하는 것 및 인슐린 또는 다른 치료제의 필요 빈도를 감소시키는 것을 포함하는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 대상이 당뇨병전기를 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 당뇨병전기를 치료하는 역할을 하는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 치료가, 제2형 당뇨병, 고혈당증, 인슐린내성 및/또는 심혈관질환을 포함하나 이에 제한되지 않는 당뇨병전기의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함하는, 방법.
  35. 제23항에 있어서, 상기 대상이 내당능장애를 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 내당능장애를 치료하는 역할을 하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 치료가, 제2형 당뇨병, 고혈당증, 인슐린내성 및/또는 심혈관질환을 포함하나 이에 제한되지 않는 내당능장애의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함하는, 방법.
  37. 제23항에 있어서, 상기 대상이 간염을 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 간염을 치료하는 역할을 하는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 치료가, 피부 및/또는 눈의 흰자위의 황변, 식욕부진, 구토, 피로, 복통, 설사, 급성 간부전, 간의 반흔형성, 간부전 및 간암을 포함하나 이에 제한되지 않는 간염의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함하는, 방법.
  39. 제23항에 있어서, 상기 대상이 염증성 간질환을 앓고 있고, 상기 방법이 상기 대상에서 염증성 간질환을 치료하는 역할을 하는, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 염증성 간질환이 비알콜성 지방간염(NASH) 및/또는 비알콜성 지방간질환(NAFLD)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 치료가, 피로, 권태감, 간섬유증, 간암 및/또는 간경변을 포함하나 이에 제한되지 않는 염증성 간질환의 합병증 중 하나 이상의 진행을 제한하거나 늦추는 것을 포함하는, 방법.
  42. 제23항에 있어서, 상기 대상이 장 염증을 앓는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 장 염증이 크론병, 궤양성 대장염, 교원성-, 림프구성-, 허혈성-, 전환- 및 불확정 대장염, 및 베체트병으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  44. 제23항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 포유류인, 방법.
  45. 제23항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 인간인, 방법.
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