KR20220016865A

KR20220016865A - 항원 결합 분자, 약학 조성물, 및 방법

Info

Publication number: KR20220016865A
Application number: KR1020217040554A
Authority: KR
Inventors: 히카루 고가
Original assignee: 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2019-05-15
Filing date: 2020-07-03
Publication date: 2022-02-10
Also published as: KR20220016865A9; AU2020275348A1; EP3969475A1; EP3969475A4; CA3137649A1; US20230002481A1; MX2021013441A; BR112021021689A2; WO2020230834A8; CN114096562A; JP2022532282A; WO2020230834A1; IL287920A

Abstract

본 발명은 C1s에 결합하고, 또한 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 포함하는 항원 결합 분자로서, (ⅰ) 상기 중쇄 가변 영역 및/또는 상기 경쇄 가변 영역이, 중성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값에 대한, 산성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값의 비인 KD(산성 pH 범위)/KD(중성 pH 범위)를 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고; (ⅱ) 상기 Fc 영역이 산성 pH 범위에서의 FcRn에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고; 및 (ⅲ) 상기 Fc 영역이 중성 pH 범위에서의 Fcγ 수용체에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자를 제공한다.

Description

항원 결합 분자, 약학 조성물, 및 방법

본 발명은 항원 결합 분자, 약학 조성물, 및 방법에 관한 것이다.

보체계는 병원체, 외래 항원 및 종양 세포에 대한 숙주의 방어에 있어 중요한 역할을 하는 약 25~30종의 보체 단백질을 포함한다. 보체계는 또한, 신체로부터 면역 복합체 및 아포토시스 세포를 제거함으로써 항상성의 유지에도 관여하고 있다. 보체 성분은 일련의 효소 프로세스와 막 결합 현상의 캐스케이드에 있어서 상호작용함으로써, 이들 기능을 수행한다. 이들 프로세스의 최종 결과는 용해, 면역 조절 및 옵소닌 기능을 갖는 산물의 생성이다.

보체계는 3가지 다른 경로: 고전 경로, 렉틴 경로 및 대체 경로로 분류할 수 있다고 널리 알려져 있다. 각 경로의 시작은 다르지만, 3가지 경로는 모두 수렴하여, 궁극적으로 표적 세포의 파괴의 원인이 되는 같은 말단 보체 성분(C5~C9)을 공유하고 있다.

C1 복합체는 고전 경로 캐스케이드의 주요 개시인자로서 기능하는 큰 단백질 복합체이다. C1 복합체는 몰 비가 각각 1:2:2인 C1q, C1r 및 C1s의 3가지 성분으로 이루어진다(비특허문헌 1). 고전 경로는 항체와 결합한 표적에 C1 복합체가 결합할 때 개시된다. 6개의 구형의 머리를 가진 C1q는 Fc 영역과의 어비디티(avidity) 상호작용에 의해 C1 복합체가 항체에 결합하는 것을 매개한다. 표적에 밀접하게 결합하면, C1 복합체 내의 C1r은 자기 활성화되고, 효소적으로 활성이 된다. 활성화된 C1r은 그 다음, C1 복합체 내의 전효소(proenzyme) C1s를 절단해 활성화시킨다(비특허문헌 2). 그 후, 활성화된 C1s는, 그 기질인 보체 성분 C2 및 C4를 절단하여, 각각 C2a/C2b 및 C4a/C4b 단편으로 한다. 이것에 의해, C3 전환효소(convertase)인 C4b2a의 집합체가 표적의 표면상에 나타나 C3을 절단해 C3b를 형성한다. C3b는 그 후 C5를 절단하여 C5b, C6, C7, C8 및 C9의 말단 막 공격 복합체의 형성을 개시하고, 이것이 구멍 형성을 통해 표적을 용해시킨다.

C1s는 칼슘 의존적으로 호모 이량체를 형성한다(비특허문헌 3). 1mM의 칼슘 이온 농도에서는 C1s 대부분이 이량체 상태에 있으며, 1nM의 칼슘 농도에서는 주로 단량체 상태에 있음이 보고되어 있다(비특허문헌 4). 혈중에서 C1s 및 C1r은 주로 칼슘 의존적 C1r2s2 헤테로 사량체로서 결합하고 있으며, 이것이 C1q와 1:1 비율로 가역적으로 결합하여 C1 복합체를 형성한다. 칼슘이 없거나 저농도일 경우, C1r2s2 사량체는 1개의 C1r 이량체 및 2개의 C1s 단량체로 해리된다(비특허문헌 5). C1s는 79kDa의 당단백질이며, 그 질량의 5~6%가 글리코실화에 기인한다(비특허문헌 6). 혈청 중 C1s의 농도는 대략 55μg/mL(0.7μM)라고 보고되어 있다(비특허문헌 7).

적절하게 기능하는 보체계는 숙주를 병원체로부터 방어하지만, 고전 경로의 이상 조절 또는 부적절한 활성화는 다양한 보체 매개성 장애, 예를 들어, 이에 한정되지 않지만 자가면역성 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemias: AIHA), 베체트병(Behcet's disease), 수포성 유사천포창(Bullous Pemphigus: BP), 면역성 혈소판감소성 자반증(immune thrombocytopenia purpura: ITP) 등을 일으킨다. 따라서 고전 경로의 과잉 또는 제어되지 않는 활성화의 저해는 그와 같은 장애가 있는 환자들에게 임상적 이익을 제공할 수 있다.

항체는 혈장 중에서 안정성이 있고, 그들의 표적에 대해 고도로 특이적이며, 일반적으로 우수한 약물 동태 프로파일을 나타내므로 매우 매력적인 의약품이다. 그러나 그들의 큰 분자 크기 때문에, 치료용 항체의 용량은 통상적으로 높다. 표적이 다량 존재할 경우, 필요한 항체의 치료 용량은 더 높아진다. 그 결과 항체의 약물 동태, 약력학 및 항원 결합 특성을 개선시키는 방법은 치료용 항체에 따른 용량 및 높은 제조비를 감소시키는 매력적인 방법이다.

몇몇 선행 보고가 항C1s 항체를 기재하고 있다. 예를 들면, Matsumoto et al. (1986)(비특허문헌 8)은, C1s상의 상이한 에피토프에 결합하는 3개의 항체를 기재하고 있다. 하나의 클론은 활성형 C1s에 우선적으로 결합하고, 다른 두 개는 전효소 및 활성형 C1s 양쪽에 결합했다. 이들 두 클론 중 하나만이 C1s에 의한 C2 및 C4의 절단을 저해할 수 있었다. 특허문헌 1은 C1s를 통한 C4의 절단을 저해하지만, C2의 절단은 저해하지 않는 항체를 기재하고 있다. 추가적으로, 특허문헌 2는 전효소와 비교하여 활성형 C1s에 선택적인 C1s상의 입체 구조 에피토프에 결합하는 몇몇 항체를 기재하고 있다. 특허문헌 3은 C4의 절단을 막을 수 있는 두 클론의 항C1s 항체를 기재하고 있다.

그 항원에 대한 항체의 친화도(affinity)는 그 항체가 얼마나 효과적으로 그 표적을 중화할 수 있는지를 결정한다. 치료 효과에 필요한 용량을 감소시키도록 항체의 친화도를 높이기 위해, 다양한 친화도 성숙 방법(비특허문헌 9)이 사용되고 있다. 그러나 하나의 항체 분자는 전형적으로 두 개의 결합 부위를 가지며, 따라서 투여 후 두 개의 표적(결합 부위 당 하나의 항원)을 중화할 수 있을 뿐이라는 제약이 있다. 항체가 공유 결합성 상호작용에 의해, 무한한 친화도로 표적에 결합할 수 있는 경우라도, 그 항체에 의해 중화되는 표적의 최대수는 여전히 2개가 상한이 된다.

pH 의존적으로 항원에 결합하는 항체(이후, 본 명세서에서 “pH 의존적 항체” 또는 “pH 의존적 결합 항체”라고도 말함)는 단일 항체 분자에 의해 여러 항원 분자를 중화할 수 있다고 보고되어 있다(비특허문헌 10, 특허문헌 4). pH 의존적 항체는 혈장 중의 중성 pH 조건에서 그 항원에 강하게 결합하지만, 세포의 엔도솜 내의 산성 pH 조건하에서 항원으로부터 해리한다. 항원으로부터 해리되면 항체는 FcRn 수용체에 의해 혈장 중에 리사이클되고, 해리된 항원은 세포의 리소좀 내에서 분해된다. 리사이클된 항체는 이후 다시 자유롭게 항원 분자에 결합해 이를 중화시키며, 이 과정은 항체가 혈중에 머무는 한 반복된다.

WO2014/071206 WO2014/066744 WO2014/186599 WO2009/125825

Wang et. al. Mol Cell. 2016 Jul 7;63(1):135-45 Mortensen et. al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Jan 31;114(5):986-991 Arlaud et. al. Biochim Biophys Acta. 1980 Nov 6;616(1):105-15 Rivas et. al. Biochemistry. 1992 Dec 1;31(47):11707-12 Rossi et.al. Methods Mol Biol. 2014;1100:43-60 Petillot et. al. FEBS Lett. 1995 Jan 30;358(3):323-8 Shi et. al. Blood. 2014 Jun 26;123(26):4015-22 Matsumoto et. al. J Immunol. 1986 Nov 1;137(9):2907-12 Kim et. al. Methods Mol Biol. 2014;1131:407-20 Igawa et. al. Nat Biotechnol. 2010 Nov;28(11):1203-7

본 발명은 항원 결합 분자, 약학 조성물, 및 방법을 제공한다.

본 발명은 C1s에 결합하고, 또한 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 포함하는 항원 결합 분자를 제공한다. 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 특정 양식으로 항원 결합능을 변화시킬 수 있는, 적어도 특정의 아미노산을 포함한다. Fc 영역은 특정 양식으로 그 기능을 변화시킬 수 있는, 적어도 특정의 아미노산을 포함한다.

구체적으로, 본 발명은 다음에 관한 것이다:

[1] C1s에 결합하고, 또한 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 포함하는 항원 결합 분자로서,

(ⅰ) 상기 중쇄 가변 영역 및/또는 상기 경쇄 가변 영역이, 중성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값에 대한, 산성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값의 비인 KD(산성 pH 범위)/KD(중성 pH 범위)를, 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하는 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고, 제 1 참조 항체의 중쇄 가변 영역이 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 제 1 참조 항체의 경쇄 가변 영역이 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하고;

(ⅱ) 상기 Fc 영역이 산성 pH 범위에서의 FcRn에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을, 쌍형성된(paired) Fc 영역을 포함하는 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고, 제 2 참조 항체의 Fc 영역이 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하며; 및

(ⅲ) 상기 Fc 영역이 중성 pH 범위에서의 Fcγ 수용체에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.

[2] 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이, 상기 항원 결합 분자의 안정성을 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 향상시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, [1]의 항원 결합 분자.

[3] 상기 항원 결합 분자가 불변 영역을 포함하고, 상기 항원 결합 분자의 Fc 영역이 상기 불변 영역 내에 있으며, 상기 불변 영역이 항원 결합 분자의 면역원성을 저하시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, [1] 또는 [2]의 항원 결합 분자.

[4] 상기 항원 결합 분자의 Fc 영역이 류마티스 인자(rheumatoid factor)에 대한 결합 활성을 저하시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 항원 결합 분자.

[5] 상기 (ⅰ)의 가변 영역이 이하의 아미노산 중 적어도 하나를 포함하는, [1] 내지 [4] 중 어느 하나의 항원 결합 분자;

중쇄 가변 영역에서의 27위의 히스티딘,

중쇄 가변 영역에서의 59위의 프롤린, 및

경쇄 가변 영역에서의 96위의 히스티딘

(모든 번호는 Kabat 넘버링 시스템에 따름).

[6] 상기 (ⅱ)의 Fc 영역이 428위의 류신, 434위의 알라닌, 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름)으로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, [1] 내지 [5] 중 어느 하나의 항원 결합 분자.

[7] 상기 (ⅲ)의 Fc 영역이 이하의 아미노산 중 적어도 하나를 포함하는, [1] 내지 [6] 중 어느 하나의 항원 결합 분자;

234위의 티로신,

235위의 트립토판,

236위의 아스파라긴,

238위의 아스파르트산,

250위의 발린,

264위의 아이소류신,

268위의 아스파르트산,

295위의 류신,

307위의 프롤린,

326위의 트레오닌, 및

330위의 라이신

(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름).

[8] 상기 (ⅲ)의 Fc 영역이 이하의 (a) 또는 (b)의 아미노산을 포함하는, [1] 내지 [7] 중 어느 하나의 항원 결합 분자;

(a) 235위의 트립토판, 236위의 아스파라긴, 268위의 아스파르트산, 295위의 류신, 326위의 트레오닌 및 330위의 라이신, 또는

(b) 234위의 티로신, 238위의 아스파르트산, 250위의 발린, 264위의 아이소류신, 307위의 프롤린 및 330위의 라이신

(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름).

[9] 안정성을 향상시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 중쇄 가변 영역에서의 96위의 알라닌 및 경쇄 가변 영역에서의 53위의 글루탐산 중 하나 또는 양쪽 모두인, [2]의 항원 결합 분자(양쪽 번호 모두 Kabat 넘버링 시스템에 따름).

[10] 면역원성을 저하시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 EU 넘버링 시스템에 따른 214위의 아르기닌인, [3]의 항원 결합 분자.

[11] 류마티스 인자에 대한 결합 활성을 저하시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 438위의 아르기닌 및 440위의 글루탐산 중 하나 또는 양쪽 모두인, [4]의 항원 결합 분자(양쪽 번호 모두 EU 넘버링 시스템에 따름).

[12] C1s에의 결합에 관해, 서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경합하는, 항원 결합 분자.

[13] 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 인간 유래 프레임워크(framework)를 포함하는, [1] 내지 [12] 중 어느 하나의 항원 결합 분자.

[14] 서열번호: 18의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VH 영역 및 서열번호: 19의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VL 영역 중 하나 또는 양쪽 모두를 포함하는, 항원 결합 분자.

[15] 서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 중 하나 또는 양쪽 모두를 포함하는, 항원 결합 분자.

[16] C1s에 결합하는 항원 결합 분자로서, C1s에 대한 C1q의 결합과 경합하지 않는 항원 결합 분자.

[17] [1] 내지 [15] 중 어느 하나의 항원 결합 분자인, [16]의 항원 결합 분자.

[18] 에피토프가 C1s의 CCP-SP 도메인 내에 있는, 항원 결합 분자.

[19] [1] 내지 [17] 중 어느 하나의 항원 결합 분자인, [18]의 항원 결합 분자.

[20] 개체에서의 혈장 중 C1q 농도를 상기 개체의 기준선의 20% 이하까지 저하시킬 수 있는, C1s에 결합하는 항원 결합 분자.

[21] [1] 내지 [19] 중 어느 하나의 항원 결합 분자인, [20]의 항원 결합 분자.

[22] 상기 개체가 필리핀원숭이(cynomolgus monkey)인, [20] 또는 [21]의 항원 결합 분자.

[23] 상기 항원 결합 분자의 용량이 10mg/kg인, [20] 내지 [22] 중 어느 하나의 항원 결합 분자.

[24] [1] 내지 [23] 중 어느 하나의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약학 조성물.

[25] 보체 매개성 질환 또는 장애가 있는 개체의 치료에 이용하기 위한, [24]의 약학 조성물.

[26] C1s 또는 C1q를 세포에 흡수시키는 방법으로서, C1s 및 상기 세포가 등장액 중에서 혼합되어 상기 세포가 Fcγ수용체를 발현하고, 상기 방법이 [1] 내지 [23] 중 어느 하나의 항원 결합 분자를 상기 등장액에 첨가하는 단계를 포함하는, 방법.

[27] 개체에서의 혈장 중 C1s 및/또는 C1q 농도를 저하시키는 방법으로서, [1] 내지 [23] 중 어느 하나의 항원 결합 분자를 상기 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

[28] 보체 매개성 질환 또는 장애가 있는 개체의 치료 방법으로서, 상기 개체에 [1] 내지 [23] 중 어느 하나의 항원 결합 분자를 유효량 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

[도 1] 도 1은 실시예 4.1에 기재되어 있는 필리핀원숭이 및 인간 C1r2s2에 대한 pH 의존성 및 교차 반응성을 평가하기 위한 COS0098bb와 인간 C1r2s2 및 필리핀원숭이 C1r2s2와의 상호작용을 보여주는 BIACORE(등록 상표) 센서그램을 나타낸다. 센서그램은 COS0098bb를 고정화한 센서 표면상에 인간 C1r2s2(실선), 필리핀원숭이 C1r2s2(점선)를 각각 주사함으로써 얻어진 것이다. 항체/항원 복합체는 pH 의존적 상호작용을 평가하기 위해, pH7.4에서 해리시킨 후에 pH5.8에서 추가로 해리시켰다(조건은 화살표로 표시함).
[도 2] 도 2는 실시예 4.1에 기재되어 있는 필리핀원숭이 및 인간 C1r2s2에 대한 pH 의존성 및 교차 반응성을 평가하기 위한 COS0098pHv1과 인간 C1r2s2 및 필리핀원숭이 C1r2s2와의 상호작용을 보여주는 BIACORE(등록 상표) 센서그램을 나타낸다. 센서그램은 COS0098pHv1을 고정화한 센서 표면상에 인간 C1r2s2(실선), 필리핀원숭이 C1r2s2(점선)를 각각 주사함으로써 얻어진 것이다. 항체/항원 복합체는 pH 의존적 상호작용을 평가하기 위해, pH7.4에서 해리시킨 후에 pH5.8에서 추가로 해리시켰다(조건은 화살표로 표시함).
[도 3] 도 3은 COS0098pHv1-SG1077에 의한 혈장 중 C1s의 제거를 보여주는 그래프이다(실시예 5).
[도 4] 도 4는 COS0098pHv1-SG1077에 의한 혈장 중 C1q의 제거를 보여주는 그래프이다(실시예 5).

본 명세서에 있어서 기재되거나 참고되는 기법 및 절차는, 일반적으로 충분히 이해되며, 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)에 기재된 광범위하게 이용되는 기법 등의 종래의 기법을 이용하여 통상의 기술자에 의해 일반적으로 사용된다.

I. 정의

별도로 정의하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 기술용어 및 과학용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994), 및 March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992)는 본 출원에서 사용되는 용어 다수에 대한 일반적 지침을 통상의 기술자에게 제공한다. 특허출원 및 간행물을 포함한 본 명세서에 인용되는 모든 참고문헌은 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 삽입된다.

본 명세서를 해석하기 위해 다음과 같은 정의가 적용되고, 해당될 경우 언제든지 단수형으로 사용된 용어는 복수형도 포함하며, 그 반대 또한 동일하다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 특정한 양태를 설명하는 것만을 목적으로 하며, 한정을 의도한 것이 아님이 이해되어야 한다. 아래의 정의 중 하나가 참조에 의해 본 명세서에 삽입된 임의의 문서와 모순되는 경우에는 아래의 정의가 우선하는 것으로 한다.

본 명세서의 취지에 있어서, “억셉터 인간 프레임워크”는 아래에서 정의하는 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크에서 유래한 경쇄 가변 도메인(VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인(VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역 글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크에서 “유래하는” 억셉터 인간 프레임워크는 이들의 같은 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 또는 아미노산 서열의 변경을 포함할 수 있다. 일부 양태에 있어서, 아미노산의 변경의 수는 10 이하, 9 이하, 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 또는 2 이하이다. 일부 양태에 있어서, VL 억셉터 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.

“친화도”는 분자(예를 들어, 항체)의 결합 부위 1개와 분자의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 비공유 결합적인 상호작용 합계의 강도를 말한다. 특별히 지시하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 “결합 친화도”는 어떤 결합쌍의 멤버(예를 들어, 항체 및 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유의 결합 친화도를 말한다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 친화도는, 일반적으로 해리 상수(Kd 또는 KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본 명세서에 기재된 것을 포함한 해당 기술 분야에서 알려진 통상적인 방법으로 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 실례가 되는 및 예시적인 양태에 대해서는 아래에서 기술한다. 용어 “결합 활성”은 어떤 분자(예컨대, 항체)의 단일 또는 복수의 결합 부위와 그 결합 파트너(예컨대, 항원) 간의 비공유 결합적인 상호작용 합계의 강도를 말한다. 본 명세서에서 결합 활성은 결합쌍의 멤버(예컨대, 항체 및 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 활성에 엄격하게 한정되는 것은 아니다. 결합쌍의 멤버가 1가결합 및 다가결합 모두의 방법으로 상호결합할 수 있는 경우, 결합 활성은 이들 결합 합계의 강도이다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 결합 활성은 일반적으로 해리 상수(KD)에 의해 나타낼 수 있다. 또는, 결합 속도 및 해리 속도(Kon 및 Koff)가 결합 평가에 사용될 수 있다. 결합 활성은 본 명세서에 기재되는 것을 포함한 해당 기술 분야에서 공지의 일반적 방법으로 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 실례가 되는 및 예시적인 양태에 대해서는 아래에서 기술한다.

“친화도 성숙”항체는 개변을 갖추고 있지 않는 모 항체와 비교하여, 1개 또는 복수의 초가변 영역(hypervariable region: HVR) 중에 항체의 항원에 대한 친화도의 개선을 초래하는 1개 또는 복수의 개변을 수반하는 항체를 말한다.

용어 “항C1s 항체” 및 “C1s에 결합하는 항체”는 충분한 친화도에서 C1s와 결합할 수 있는 항체로서, 그 결과 해당 항체가 C1s를 표적화했을 때 진단제 및/또는 치료제로서 유용한 항체를 말한다. 하나의 양태에 있어서, 무관한 비C1s 단백질에 대한 항C1s 항체의 결합 정도는, 예를 들어 방사면역 측정법(radioimmunoassay: RIA)에 의해 측정했을 때, 항체의 C1s에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 특정의 양태에 있어서, C1s에 결합하는 항체는 1μM 이하, 100nM 이하, 10nM 이하, 1nM 이하, 0.1nM 이하, 0.01nM 이하, 또는 0.001nM 이하(예를 들어 10^-8M 이하, 예를 들어 10^-8M~10^-13M, 예를 들어 10^-9M~10^-13M)의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 다른 종으로부터의 C1s간에 보존되어 있는 C1s상의 에피토프에 결합한다.

본 명세서에서 용어 “항체”는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한, 이에 한정되지는 않지만 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체) 및 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조를 포함한다.

“항체 단편”은 완전 항체가 결합하는 항원에 결합하는 해당 완전 항체의 일부분을 포함하는, 해당 완전 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는, 이에 한정되는 것은 아니지만, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 디아바디(diabody); 선상 항체; 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv); 및 항체 단편에서 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.

참조 항체와 “같은 에피토프에 결합하는 항체”는 경합 검정에서 그 참조 항체가 자신의 항원에의 결합을 50% 이상 저지하는 항체를 말하며, 반대로 말하자면 참조 항체는 경합 검정에서 전술한 항체가 자신의 항원에의 결합을 50% 이상 저지한다. 예시적인 경합 검정이 본 명세서에서 제공된다.

용어 “키메라” 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정 공급원 또는 종에서 유래하는 한편, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분이 다른 공급원 또는 종에서 유래하는 항체를 말한다.

항체의 “클래스”는 항체의 중쇄에 구비된 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 말한다. 항체에는 5개의 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있고, 이 중 몇 개는 서브클래스(아이소타입)로 더 나눌 수 있다. 예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁, 및 IgA₂이다. 다른 클래스의 면역글로불린에 대응하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ라 부른다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “세포 독성제”는 세포의 기능을 저해 또는 방해하고/하거나, 세포의 죽음 또는 파괴의 원인이 되는 물질을 말한다. 세포 독성제는, 이들에 한정되지는 않지만, 방사성 동위원소(예를 들어, ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²P, ²¹²Pb 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제 또는 화학요법약(예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카알칼로이드류(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신, 또는 기타 삽입제(intercalating agent)); 증식 억제제; 핵산 분해 효소 등의 효소 및 그의 단편; 항생제; 저분자 독소, 또는 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소와 같은 독소(그의 단편 및/또는 변이체를 포함함); 및 이하에 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함한다.

“이펙터 기능”은 항체의 Fc 영역에 기인하는 항체의 아이소타입에 따라 상이한 생물학적 활성을 말한다. 항체의 이펙터 기능의 예는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포 독성(complement dependent cytotoxicity: CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포 독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: ADCC); 식세포 작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화.

제제(예를 들어, 약학 제제)의 “유효량”은 원하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하는 데 유효한, 필요한 용량에서 및 필요한 기간 동안의 양을 말한다.

용어 “에피토프”는 항체에 의해 결합될 수 있는 임의의 결정기를 포함한다. 에피토프는 항원을 표적으로 하는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이며, 항체와 직접 접촉하는 특정 아미노산을 포함한다. 에피토프 결정기는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설폰일기와 같은 화학적으로 활성인 표면 분자군을 포함할 수 있고, 특이적인 3차원 구조 특성 및/또는 특정의 전하 특성을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정 표적 항원에 특이적인 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물 중에서 표적 항원상의 에피토프를 우선적으로 인식한다.

본 명세서에서 용어 “Fc 영역”은 적어도 불변 영역의 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 이 용어는 천연형 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 하나의 양태에 있어서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터, 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카복실 말단까지 연장된다. 그러나 Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447) 또는 글리신-라이신(잔기 446-447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본 명세서에서 달리 특정하지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 중의 아미노산 잔기의 번호는 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 1991에 기재된 EU 넘버링 시스템(EU 인덱스라고도 함)에 따른다.

“프레임워크” 또는 “FR”은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 의미한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3, 및 FR4로 구성된다. 이에 따라, HVR 및 FR의 서열은 일반적으로 다음 순서로 VH(또는 VL)에 나타난다:

FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

용어 “전장 항체”, “완전 항체”, 및 “전부 항체”는 천연형 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나, 또는 본 명세서에서 정의하는 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 가리키기 위해, 본 명세서에 있어서 상호 교환 가능하게 이용된다.

용어 “숙주 세포”, “숙주 세포주”, 및 “숙주 세포 배양물”은 상호 교환 가능하게 이용되고, 외래 핵산이 도입된 세포(그와 같은 세포의 자손을 포함한다)를 말한다. 숙주 세포는 “형질 전환체” 및 “형질 전환 세포”를 포함하고, 이는 초대의 형질 전환 세포 및 계대수에 상관 없이 그 세포에서 유래하는 자손을 포함한다. 자손은, 모 세포와 핵산의 내용에 있어서 완전히 동일하지 않아도 되고, 변이를 포함하고 있어도 된다. 본래의 형질 전환된 세포가 스크리닝되었을 때 또는 선택되었을 때에 이용된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손도, 본 명세서에서 포함된다.

“인간 항체”는 인간 혹은 인간 세포에 의해 산생된 항체 또는 인간 항체 레퍼토리 혹은 다른 인간 항체 코드 서열을 이용하는 비인간 공급원에서 유래하는 항체의 아미노산 서열에 대응하는 아미노산 서열을 구비하는 항체이다. 이 인간 항체의 정의는, 비인간의 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 제외하는 것이다.

“인간 컨센서스 프레임워크”는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택군에 있어서 가장 공통되게 생기는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 통상, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은, 가변 도메인 서열의 서브그룹으로부터이다. 통상, 서열의 서브그룹은, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3에 있어서의 서브그룹이다. 하나의 양태에 있어서, VL에 관해, 서브그룹은 상기의 Kabat et al. 등에 의한 서브그룹 κI이다. 하나의 양태에 있어서, VH에 관해, 서브그룹은 상기의 Kabat et al. 등에 의한 서브그룹 III이다.

“인간화” 항체는 비인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는, 키메라 항체를 말한다. 특정의 양태에 있어서, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함하고, 해당 가변 영역에 있어서는, 모든 혹은 실질적으로 모든 HVR(예를 들어, CDR)은 비인간 항체의 것에 대응하고, 또한, 모든 혹은 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 대응한다. 인간화 항체는, 임의로, 인간 항체에서 유래하는 항체 불변 영역의 적어도 일부분을 포함해도 된다. 항체(예를 들어, 비인간 항체)의 “인간화된 형태”는 인간화를 거친 항체를 말한다.

본 명세서에서 이용되는 용어 “초가변 영역” 또는 “HVR”은 서열에 있어서 초가변(“상보성 결정 영역” 또는 “CDR(complementarity determining region)”)이고, 및/또는 구조적으로 정해진 루프(“초가변 루프”)를 형성하고, 및/또는 항원 접촉 잔기(“항원 접촉”)를 포함하는, 항체의 가변 도메인의 각 영역을 말한다. 통상, 항체는 6개의 HVR을 포함한다: VH에 3개(H1, H2, H3), 및 VL에 3개(L1, L2, L3).

본 명세서에서의 예시적인 HVR은 이하의 것을 포함한다:

(a) 아미노산 잔기 26-32(L1), 50-52(L2), 91-96(L3), 26-32(H1), 53-55(H2), 및 96-101(H3)에서 생기는 초가변 루프(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987));

(b) 아미노산 잔기 24-34(L1), 50-56(L2), 89-97(L3), 31-35b(H1), 50-65(H2), 및 95-102(H3)에서 생기는 CDR(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));

(c) 아미노산 잔기 27c-36(L1), 46-55(L2), 89-96(L3), 30-35b(H1), 47-58(H2), 및 93-101(H3)에서 생기는 항원 접촉(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); 및

(d) HVR 아미노산 잔기 46-56(L2), 47-56(L2), 48-56(L2), 49-56(L2), 26-35(H1), 26-35b(H1), 49-65(H2), 93-102(H3), 및 94-102(H3)를 포함하는, (a), (b), 및/또는 (c)의 조합.

달리 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인 중의 다른 잔기(예를 들어, FR 잔기)는 본 명세서에서 상기의 Kabat 등에 따라 넘버링된다.

“면역 접합체(immunoconjugate)”는 하나 이상의 헤테로 분자에 접합된 항체로, 헤테로 분자는, 이에 한정되지 않지만, 세포 독성제를 포함한다.

“개체”또는 “대상”은 포유동물이다. 포유동물은, 이에 한정되지 않지만, 사육동물(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예를 들어, 인간, 및 원숭이와 같은 비인간 영장류), 토끼, 및 설치류(예를 들어, 마우스, 및 래트)를 포함한다. 특정의 양태에 있어서, 개체 또는 대상은 인간이다.

“단리된” 항체는 그 원래의 환경 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 양태에 있어서, 항체는 예를 들어, 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 분리법(isoelectric focusing: IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에서 측정하여 95% 또는 99%를 초과하는 순도로 정제된다. 항체의 순도를 평가하기 위한 방법의 총설은 예를 들어, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)을 참조한다.

“단리된” 핵산은 원래의 환경 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 말한다. 단리된 핵산은 그 핵산 분자를 통상 포함하는 세포 중에 포함된 핵산 분자를 포함하지만, 그 핵산 분자는 염색체 외에 존재하고 있거나, 또는 본래의 염색체상의 위치와는 상이한 염색체상의 위치에 존재하고 있다.

“항C1s 항체를 코드하는 단리된 핵산”은 항체의 중쇄 및 경쇄(또는 그의 단편)를 코드하는 하나 이상의 핵산 분자를 말하며, 하나의 벡터 또는 별도의 벡터 중의 핵산 분자 및 숙주 세포 중의 하나 이상의 위치에 존재하는 핵산 분자를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “모노클로날 항체”는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 말한다. 즉, 그 집단을 구성하는 개별 항체는, 발생할 수 있는 변이체 항체(예를 들어, 자연 발생 돌연변이를 포함하는 변이 항체, 또는 모노클로날 항체 제제의 제조 중에 발생하는 변이 항체로, 그러한 변이체는 통상 소량 존재한다.)를 제외하고는, 동일하고/동일하거나, 같은 에피토프에 결합한다. 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 모노클로날 항체 제제의 각 모노클로날 항체는, 항원상의 단일 결정기에 대한 것이다. 따라서, 수식어 “모노클로날”은 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 얻어지는 것이라는 항체의 특징을 나타내며, 어떠한 특정의 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는, 이에 한정되지는 않지만, 하이브리도마법, 재조합 DNA법, 파지-디스플레이법, 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 포함하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하는 다양한 기법에 의해 제조될 수 있고, 모노클로날 항체를 제조하기 위한 이러한 방법 및 다른 예시적인 방법이 본 명세서에 기재되어 있다.

“네이키드(naked) 항체”는 이종 모이어티(moiety)(예를 들어, 세포 독성 모이어티) 또는 방사성 표지에 접합되지 않은 항체를 말한다. 네이키드 항체는 약학 제제 중에 존재해도 된다.

“천연형(native) 항체”는 다양한 구조를 수반하는 자연적으로 발생하는 면역글로불린 분자를 말한다. 예를 들어, 천연형 IgG 항체는 이황화 결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성되는 약 150,000 달톤의 헤테로 사량체 당단백질이다. N-으로부터 C-말단까지, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VH)을 가지며, 거기에 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)이 뒤따른다. 유사하게, N-으로부터 C-말단까지, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VL)을 가지며, 거기에 불변 경쇄(CL) 도메인이 뒤따른다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 κ 및 λ로 지칭되는 두 가지 유형 중 하나에 속할 수 있다.

용어 “첨부 문서”는 치료용품의 시판 패키지에 통상 포함되며, 그와 같은 치료용품의 사용에 관한 적응증, 용법, 용량, 투여 방법, 병용 요법, 금기, 및/또는 경고에 관한 정보를 포함하는 설명서를 가리키기 위해서 사용된다.

참조 폴리펩티드 서열에 대한 “퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성”은 최대의 퍼센트 서열 동일성을 얻도록 서열을 정렬시키고, 필요하다면 갭을 도입한 후의, 또한 임의의 보존적 치환이 서열 동일성의 일부로 간주되지 않을 때의, 참조 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 중의 아미노산 잔기의 퍼센트 비율로 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하는 목적의 얼라인먼트는 해당 기술 분야에서의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR) 소프트웨어 또는 GENETYX(등록 상표)(Genetyx Co., Ltd.)와 같은 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 통상의 기술자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 얼라인먼트를 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는, 서열의 얼라인먼트를 취하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.

ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨텍사의 저작이며, 그 소스 코드는 미국 저작권청(US Copyright Office, Wasington DC, 20559)에 사용자용 서류와 함께 제출되어 미국 저작권 등록번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 캘리포니아, 사우스 샌프란시스코 소재의 제넨텍사에서 공개적으로 입수 가능하며, 소스 코드로부터 컴파일(compile)할 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 Digital UNIX V4.0D를 포함한 UNIX 운영 체제상에서 사용하기 위해 컴파일된다. 모든 서열의 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변동하지 않는다. 아미노산 서열의 비교에 ALIGN-2가 사용되는 상황에서는, 주어진 아미노산 서열 A의, 주어진 아미노산 서열 B에의, 그와의, 또는 그에 대한 % 아미노산 서열 동일성(또는 주어진 아미노산 서열 B에의, 그와의, 또는 그에 대한 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라고도 할 수 있다)은 다음과 같이 계산된다:

X/Y 분율의 100배

여기서, X는 서열 얼라인먼트 프로그램 ALIGN-2에 의해 해당 프로그램의 A 및 B의 얼라인먼트에서 동일한 일치로 점수가 매겨진 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B 중의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않으면, A의 B에 대한 % 아미노산 서열의 동일성은 B의 A에 대한 % 아미노산 서열의 동일성과 같지 않다는 것을 알 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 % 아미노산 서열의 동일성 값은 이전 단락에서 기술된 바와 같이 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 얻어진 것이다.

용어 “약학 제제”는 그 중에 포함된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과를 발휘할 수 있는 형태의 제제로서, 제제가 투여되는 대상에게 허용될 수 없는 정도로 독성이 있는 추가의 요소를 포함하지 않는 제제를 말한다.

“약학적으로 허용가능한 담체”는 대상에 대해서 무독인, 약학 제제 중의 유효 성분 이외의 성분을 말한다. 약학적으로 허용가능한 담체는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 완충액, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “C1s”는 달리 지시되지 않는 한, 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함하는, 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연형 C1s를 말한다. 이 용어는 “전체 길이”의 프로세싱을 받지 않은 C1s뿐만 아니라 세포 중에서 프로세싱의 결과로 발생하는 임의의 형태의 C1s를 포함한다. 또한, 이 용어는 자연 발생 C1s 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립 유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 인간 C1s의 아미노산 서열을 서열번호: 1로 나타내었다. 예시적인 필리핀원숭이와 래트의 C1s의 아미노산 서열을 각각 서열번호: 3 및 2로 나타내었다.

본 명세서에서 사용되는 “치료”(및 그 문법적 파생어, 예를 들어 “치료하는”, “치료하는 것” 등)는 치료되는 개체의 자연 경과를 변경하는 것을 의도한 임상적 개입을 말하고, 예방을 위해, 또는 임상적 병태의 경과 도중에 실시될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는, 이에 한정되지 않지만, 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 경감, 질병에 의한 임의의 직접적 또는 간접적인 병리적 영향의 감소, 전이의 예방, 질환의 진행 속도의 감소, 질환 상태의 회복 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추기 위해 사용된다.

용어 “가변 영역” 또는 “가변 도메인”은, 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 말한다. 천연형 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은, 통상, 각 도메인이 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는, 유사한 구조를 갖는다. (예를 들어, Kindt et al. Kuby Immunology, 6^th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007) 참조.) 단일 VH 또는 VL 도메인으로, 항원 결합 특이성을 주는 데에 충분할 것이다. 더욱이, 어떤 특정한 항원에 결합하는 항체는, 해당 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 각각 VL 또는 VH 도메인의 상보적 라이브러리를 스크리닝하여 단리되어도 된다. 예를 들어, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)을 참조한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “벡터”는 그것이 연결된 다른 핵산을 증가시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 이 용어는 자가 복제 핵산 구조로서의 벡터뿐만 아니라, 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈 중에 도입되는 벡터를 포함한다. 특정의 벡터는 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 초래할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 “발현 벡터”로도 지칭된다.

II. 항원 결합 분자

본 발명의 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 포함한다.

하나의 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은, 중성 pH 범위에서의 C1s에 대한 항원 결합 분자의 KD 값에 대한 산성 pH 범위에서의 C1s에 대한 항원 결합 분자의 KD 값의 비인 KD(산성 pH 범위)/KD(중성 pH 범위)가, 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하는 제 1 참조 항체의 것에 비해 크게 할 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, 제 1 참조 항체의 중쇄 가변 영역은 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 제 1 참조 항체의 경쇄 가변 영역은 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함한다.

본 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치 중 하나 이상에 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H26, H27, H28, H29, H30, H31, H32, H33, H34, H35, H50, H51, H52, H52a, H53, H54, H55, H57, H58, H59, H60, H61, H62, H63, H64, H65, H93, H94, H95, H96, H97, H98, H99, H100, H100a, H101 및 H102; 및

경쇄: L24, L25, L26, L27, L27a, L28, L29, L30, L31, L32, L33, L50, L51, L52, L53, L54, L55, L56, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L96 및 L97.

일부 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치 중 하나 이상에 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H26, H27, H28, H29, H30, H32, H33, H34, H50, H51, H52a, H54, H57, H58, H59, H60, H61, H65, H93, H95, H99, H100 및 H100a; 및

경쇄: L25, L28, L91, L92, L94, L95, L96 및 L97.

일부 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치로부터 선택된 위치 중 하나 이상의 아미노산 잔기에 대해 치환된 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다:

일부 양태에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역 중 임의의 하나 이상의 아미노산은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치에서 히스티딘으로 치환된다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치의 아미노산 잔기에 대해 치환된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 Kabat 넘버링 시스템에 따른 하기 위치, 및 CDR 또는 FR 아미노산 위치 중 하나 이상에서 치환된 잔기인 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 Kabat 넘버링 시스템에 따른 하기 위치에서 치환된 잔기인 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다:

1) L92 및 L94

2) L92 및 L95

3) L94 및 L95

4) L92, L94, 및 L95

5) H65 및 L92

6) H65 및 L94

7) H65 및 L95

8) H65, L92, 및 L94

9) H65, L92, 및 L95

10) H65, L94, 및 L95

11) H65, L92, L94, 및 L95

12) H99 및 L92

13) H99 및 L94

14) H99 및 L95

15) H99, L92, 및 L94

16) H99, L92, 및 L95

17) H99, L94, 및 L95

18) H99, L92, L94, 및 L95

19) H65 및 H99

20) H65, H99, 및 L92

21) H65, H99, 및 L94

22) H65, H99, 및 L95

23) H65, H99, L92, 및 L94

24) H65, H99, L92, 및 L95

25) H65, H99, L94, 및 L95

26) H65, H99, L92, L94, 및 L95, 또는

27) H27, H99, 및 L95.

본 양태에 있어서, 가변 영역은 바람직하게는 다음 아미노산 중 적어도 하나를 포함한다; 중쇄 가변 영역에서 27위의 히스티딘, 중쇄 가변 영역에서 59위의 프롤린 및 경쇄 가변 영역에서 96위의 히스티딘(모든 번호는 Kabat 넘버링 시스템에 따름).

하나의 양태에 있어서, Fc 영역은 산성 pH 범위에서 FcRn에 대한 항원 결합 분자의 결합능을, 쌍형성된 Fc 영역을 포함하는 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 향상시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, 제 2 참조 항체의 Fc 영역은 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함한다.

본 양태에 있어서, Fc 영역은 다음을 포함한다:

(a) EU 넘버링에 따른 434위의 Ala; 438위의 Glu, Arg, Ser 또는 Lys; 및 440위의 Glu, Asp 또는 Gln;

(b) EU 넘버링에 따른 434위의 Ala; 438위의 Arg 또는 Lys; 및 440위의 Glu 또는 Asp;

(c) EU 넘버링에 따른 428위의 Ile 또는 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Ile, Leu, Val, Thr 또는 Phe; 438위의 Glu, Arg, Ser 또는 Lys; 및 440위의 Glu, Asp 또는 Gln;

(d) EU 넘버링에 따른 428위의 Ile 또는 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Ile, Leu, Val, Thr 또는 Phe; 438위의 Arg 또는 Lys; 440위의 Glu 또는 Asp;

(e) EU 넘버링에 따른 428위의 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Val 또는 Thr; 438위의 Glu, Arg, Ser, 또는 Lys; 및 440위의 Glu, Asp, 또는 Gln; 및

(f) EU 넘버링에 따른 428위의 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Val 또는 Thr; 438위의 Arg 또는 Lys; 및 440위의 Glu 또는 Asp.

WO2013/046704에서는 산성 조건하에서 FcRn에 대한 결합성을 향상시킬 수 있는 아미노산 치환과 조합된 경우에 류마티스 인자에 대한 결합성의 유의한 저하를 초래하는, EU 넘버링에 따른 Q438R/S440E, Q438R/S440D, Q438K/S440E 및 Q438K/S440D의 이중 아미노산 잔기의 치환이 구체적으로 보고되어 있다.

본 양태에 있어서, Fc 영역은 바람직하게는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환의 조합을 포함한다:

(I) EU 넘버링에 따라 (a)N434A/Q438R/S440E; (b)N434A/Q438R/S440D; (c)N434A/Q438K/S440E; (d)N434A/Q438K/S440D; (e)N434A/Y436T/Q438R/S440E; (f)N434A/Y436T/Q438R/S440D; (g)N434A/Y436T/Q438K/S440E; (h)N434A/Y436T/Q438K/S440D; (ⅰ)N434A/Y436V/Q438R/S440E; (j)N434A/Y436V/Q438R/S440D; (k)N434A/Y436V/Q438K/S440E; (l)N434A/Y436V/Q438K/S440D; (m)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440E; (n)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440D; (o)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440E; (p)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440D; (q)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440E; (r)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440D; (s)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440E; (t)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440D; (u)M428L/N434A/Q438R/S440E; (v)M428L/N434A/Q438R/S440D; (w)M428L/N434A/Q438K/S440E; (x)M428L/N434A/Q438K/S440D; (y)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (z)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440D; (aa)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440E; (ab)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440D; (ac)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E; (ad)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440D; (ae)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440E; (af)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440D; (ag)L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (ah)L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; 또는

(II) EU 넘버링에 따라 (a)N434A/Q438R/S440E; (b)N434A/Y436T/Q438R/S440E; (c)N434A/Y436V/Q438R/S440E; (d)M428L/N434A/Q438R/S440E; (e)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (f)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E; (g)L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; 및 (h)L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E.

또 다른 양태에 있어서, Fc 영역은 바람직하게는 428위의 류신, 434위의 알라닌 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, Fc 영역은 보다 바람직하게는 428위의 류신, 434위의 알라닌 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름)을 포함한다.

하나의 양태에 있어서, Fc 영역은 중성 pH 영역에서 Fcγ 수용체에 대한 항원 결합 분자의 결합능을 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 향상시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다.

본 양태에 있어서, Fc 영역은 바람직하게는 하기로부터 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 아미노산을 포함한다:

EU 넘버링에 따른 Fc 영역 부위에서,

아미노산 221위의 Lys 또는 Tyr 중 하나;

아미노산 222위의 Phe, Trp, Glu 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 223위의 Phe, Trp, Glu, 및 Lys 중 어느 하나;

아미노산 224위의 Phe, Trp, Glu, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 225위의 Glu, Lys, 및 Trp 중 어느 하나;

아미노산 227위의 Glu, Gly, Lys, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 228위의 Glu, Gly, Lys, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 230위의 Ala, Glu, Gly, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 231위의 Glu, Gly, Lys, Pro, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 232위의 Glu, Gly, Lys, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 233위의 Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 234위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 235위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 236위의 Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 237위의 Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 238위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 239위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 240위의 Ala, Ile, Met, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 241위의 Asp, Glu, Leu, Arg, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 243위의 Leu, Glu, Leu, Gln, Arg, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 244위의 His;

아미노산 245위의 Ala;

아미노산 246위의 Asp, Glu, His, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 247위의 Ala, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Thr, Val, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 249위의 Glu, His, Gln, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 250위의 Glu 또는 Gln 중 하나;

아미노산 251위의 Phe;

아미노산 254위의 Phe, Met, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 255위의 Glu, Leu, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 256위의 Ala, Met, 및 Pro 중 어느 하나;

아미노산 258위의 Asp, Glu, His, Ser, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 260위의 Asp, Glu, His, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 262위의 Ala, Glu, Phe, Ile, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 263위의 Ala, Ile, Met, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 264위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 265위의 Ala, Leu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 266위의 Ala, Ile, Met, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 267위의 Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 268위의 Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, 및 Trp 중 어느 하나;

아미노산 269위의 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 270위의 Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 271위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 272위의 Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 273위의 Phe 또는 Ile 중 하나;

아미노산 274위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 275위의 Leu 또는 Trp 중 하나;

아미노산 276위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 278위의 Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, 및 Trp 중 어느 하나;

아미노산 279위의 Ala;

아미노산 280위의 Ala, Gly, His, Lys, Leu, Pro, Gln, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 281위의 Asp, Lys, Pro, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 282위의 Glu, Gly, Lys, Pro, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 283위의 Ala, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Arg, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 284위의 Asp, Glu, Leu, Asn, Thr, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 285위의 Asp, Glu, Lys, Gln, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 286위의 Glu, Gly, Pro, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 288위의 Asn, Asp, Glu, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 290위의 Asp, Gly, His, Leu, Asn, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 291위의 Asp, Glu, Gly, His, Ile, Gln, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 292위의 Ala, Asp, Glu, Pro, Thr, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 293위의 Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 294위의 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 295위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 296위의 Ala, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, 및 Val 중 어느 하나;

아미노산 297위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 298위의 Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 299위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 300위의 Ala, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, 및 Trp 중 어느 하나;

아미노산 301위의 Asp, Glu, His, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 302위의 Ile;

아미노산 303위의 Asp, Gly, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 304위의 Asp, His, Leu, Asn, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 305위의 Glu, Ile, Thr, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 311위의 Ala, Asp, Asn, Thr, Val, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 313위의 Phe;

아미노산 315위의 Leu;

아미노산 317위의 Glu 또는 Gln 중 하나;

아미노산 318위의 His, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 320위의 Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 322위의 Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Pro, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 323위의 Ile;

아미노산 324위의 Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 325위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 326위의 Ala, Asp, Glu, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 327위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 328위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 329위의 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 330위의 Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 331위의 Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 332위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 333위의 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Val, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 334위의 Ala, Glu, Phe, Ile, Leu, Pro, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 335위의 Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Val, Trp, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 336위의 Glu, Lys, 및 Tyr 중 어느 하나;

아미노산 337위의 Glu, His, 및 Asn 중 어느 하나;

아미노산 339위의 Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, 및 Thr 중 어느 하나;

아미노산 376위의 Ala 또는 Val 중 하나;

아미노산 377위의 Gly 또는 Lys 중 하나;

아미노산 378위의 Asp;

아미노산 379위의 Asn;

아미노산 380위의 Ala, Asn, 및 Ser 중 어느 하나;

아미노산 382위의 Ala 또는 Ile 중 하나;

아미노산 385위의 Glu;

아미노산 392위의 Thr;

아미노산 396위의 Leu;

아미노산 421위의 Lys;

아미노산 427위의 Asn;

아미노산 428위의 Phe 또는 Leu 중 하나;

아미노산 429위의 Met;

아미노산 434위의 Trp;

아미노산 436위의 Ile; 및

아미노산 440위의 Gly, His, Ile, Leu, 및 Tyr 중 어느 하나.

본 양태에 있어서, Fc 영역은 더 바람직하게는,

EU 넘버링에 따른 Fc 영역 위치에서,

아미노산 238위의 Asp 및

아미노산 328위의 Glu

중 적어도 하나 이상을 포함한다.

본 양태에 있어서, Fc 영역은 보다 바람직하게는 하기 아미노산 중 적어도 하나를 포함한다; 234위의 티로신, 235위의 트립토판, 236위의 아스파라긴, 238위의 아스파르트산, 250위의 발린, 264위의 아이소류신, 268위의 아스파르트산, 295위의 류신, 307위의 프롤린, 326위의 트레오닌, 및 330위의 라이신(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름). Fc 영역은 더욱 바람직하게는 하기 (a) 또는 (b)의 아미노산을 포함한다;

(a) 235위의 트립토판, 236위의 아스파라긴, 268위의 아스파르트산, 295위의 류신, 326위의 트레오닌 및 330위의 라이신; 또는

(b) 234위의 티로신, 238위의 아스파르트산, 250위의 발린, 264위의 아이소류신, 307위의 프롤린 및 330위의 라이신(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름).

하나의 양태에 있어서, 항원 결합 분자의 등전점(pI)은 Fc 영역의 개변에 의해 상승한다. 본 양태에 있어서, pI가 상승한 항원 결합 분자는 Fc 영역에서 모 Fc 영역에 비해 적어도 2개의 아미노산 개변을 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 각 아미노산 개변은 Fc 영역의 등전점(pI)을 모 Fc 영역과 비교하여 상승시킨다. 추가의 양태에 있어서, 아미노산은 해당 영역의 표면에 노출될 수 있다. 추가의 양태에 있어서, 항원 결합 분자는 Fc 영역 및 항원 결합 도메인을 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 항원 결합 도메인의 항원 결합 활성은 이온 농도 조건에 따라 변한다.

추가의 양태에 있어서, 본 발명의 pI가 상승된 Fc 영역은 EU 넘버링에 따른 285, 311, 312, 315, 318, 333, 335, 337, 341, 342, 343, 384, 385, 388, 390, 399, 400, 401, 402, 413, 420, 422 및 431로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 위치에서 적어도 2개의 아미노산 개변을 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, pI가 상승한 Fc 영역은 선택된 각 위치에서 Arg 또는 Lys을 포함한다.

특정의 양태에 있어서, pI가 상승한 Fc 영역은 311위의 아르기닌 및 343위의 아르기닌(양쪽 번호 모두 EU 넘버링 시스템에 따름)을 포함한다.

하나의 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 항원 결합 분자의 안정성을 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 향상시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, 중쇄 가변 영역에서의 96위의 알라닌 및 경쇄 가변 영역에서의 53위의 글루탐산(양쪽 모두 Kabat 넘버링 시스템에 따름) 중 어느 하나 또는 양쪽 모두가 상기 아미노산으로서 바람직하다.

하나의 양태에 있어서, 항원 결합 분자는 불변 영역을 포함한다. 이 양태에 있어서, Fc 영역은 불변 영역 내에 존재한다. 본 양태에 있어서, 불변 영역은 바람직하게는 항원 결합 분자의 면역원성을 감소시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, EU 넘버링 시스템에 따른 214위의 아르기닌이 그러한 아미노산으로서 바람직하다.

하나의 양태에 있어서, 항원 결합 분자의 Fc 영역은 류마티스 인자에 대한 결합 활성을 감소시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 양태에 있어서, 438위의 아르기닌 및 440위의 글루탐산(양쪽 모두 EU 넘버링 시스템에 따름) 중 하나 또는 양쪽 모두가 그러한 아미노산으로서 바람직하다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고, 항원 결합 분자의 C1s에 대한 결합은 서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경합한다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고 서열번호: 18의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VH 영역, 및 서열번호: 19의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VL 영역 중 하나 또는 모두를 포함한다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고 서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 중 하나 또는 양쪽 모두를 포함한다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고 C1s에 대한 C1q의 결합과 경합하지 않는다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고, 그 에피토프는 C1s의 CCP-SP 도메인 내에 있다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 항원 결합 분자는 C1s에 결합하고, 개체의 혈장 중 C1q 농도를 개체의 기준선의 20% 이하로 감소시킬 수 있다. 이러한 측면에서, 항원 결합 분자는 상기 양태 중 어느 하나에서 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 가질 수 있다. 하나의 양태에 있어서, 개체는 필리핀원숭이이다. 하나의 양태에 있어서, 항원 결합 분자의 용량은 10mg/kg이다. 본 양태에 있어서, 항원 결합 분자는 0일째에 원숭이에 정맥 내 주사될 수 있다. 항원 결합 분자의 용량 설정은 주사 직후 생리학적 혈장 중 필리핀원숭이 C1s 및 C1q 농도에 대해 초과 농도가 되도록 조절될 수 있다. 혈액은 주사 1일 전 및 주사 5분, 2시간, 8시간, 1일, 2일, 4일, 7일, 14일, 21일 및 28일 후에 수집될 수 있다. 혈액 샘플은 혈장 샘플을 분리하기 위해 즉시 원심 분리될 수 있다. 필리핀원숭이 C1s 및 C1q의 혈장 농도는 각 샘플 수집 시점에 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정될 수 있다.

Ⅲ. 조성물 및 방법

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자는, 예를 들어 보체 매개성 질환 또는 장애의 진단 또는 치료에 유용하다.

하나의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 상기 항원 결합 분자로서 예시된다. 본 명세서에서 후술하는 항C1s 항체는, C1s에 결합하는 항원 결합 분자로 대체될 수 있다.

A. 예시적인 항C1s 항체

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 C1s에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 하나의 측면에 있어서, 본 발명은 C1s에 결합하는 단리된 항체로서, 그의 결합 활성이 이온 농도에 따라 변화하는 항체를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체의 결합 활성은 pH, 즉 수소 이온(양성자) 농도에 따라 변화한다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체의 결합 활성은 칼슘 농도에 따라 변화한다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체의 결합 활성은 pH 및 칼슘 농도 모두에 따라 변화한다. 이러한 항체는 환자에서의 투여량 및 투여 빈도를 감소시킬 수 있고, 그 결과 총 용량을 감소시킬 수 있기 때문에 의약품으로서 특히 우수할 것으로 예상된다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 2 이상이다. 하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값의 비(koff(산성 pH)/koff(중성 pH))는 2 이상이다. 하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정된 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 5 이상이다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 저칼슘 농도에서 측정된 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 2 이상이며, 여기서 항C1s 항체는 이량체 상태의 C1s에 결합한다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 저칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값의 비(koff(산성 pH)/koff(중성 pH))는 2 이상이며, 여기서 항C1s 항체는 이량체 상태의 C1s에 결합한다.

특정 이론에 구속되는 것은 아니지만, 1) 본 발명의 항체에 의해 결합된 C1s상의 에피토프 구조가 칼슘의 부재에 의해 입체 구조적으로 변화할 수 있고, 이에 의해 항체의 친화도가 변하는 경우, 또는 2) 본 발명의 항체의 상호작용(친화도 또는 어비디티)이 C1s의 상태(단량체 상태 또는 이량체 상태)에 의존하여 변화할 수 있는 경우, KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))를 평가하기 위해 특정 조건(중성 pH에서의 고칼슘 농도 및 산성 pH에서의 저칼슘 농도)을 사용하여 측정할 수 있다.

환언하면, 본 발명의 항체는 하기 (ⅰ) 또는 (ⅲ)에 기재된 바와 같이 산성 pH보다 중성 pH에서 높은 친화도로 C1s에 결합한다:

(ⅰ) 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정된 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 2 이상,

(ⅱ) 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정된 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값의 비(koff(산성 pH)/koff(중성 pH))가 2 이상,

(ⅲ) 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정된 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 5 이상.

보다 일반적으로는, 특정 이론에 제한되는 것은 아니지만, 1) 본 발명의 항체에 의해 결합되는 특정 항원의 에피토프 구조는 칼슘의 부재에 의해 입체 구조적으로 변화할 수 있고, 이에 의해 항체의 친화도가 변하는 경우, 또는 2) 본 발명의 항체의 상호작용(친화도 또는 어비디티)이 항원의 상태(단량체 상태 또는 이량체 상태)에 의존하여 변화할 수 있는 경우, KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))를 평가하기 위해 특정 조건(중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도)을 사용하여 측정할 수 있다. 이 비가 높으면, 산성 pH에서의 친화도는 중성 pH에서의 친화도보다 낮다. 대안적으로, 이하에서 언급되는 바와 같이, KD는 k_off/k_on의 비로서 정의된다. 산성 조건과 중성 조건 간의 koff 값의 비, 즉 (koff(산성 pH)/koff(중성 pH))도 산성 pH 및 중성 pH에서의 친화도 간의 비교를 위해 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 항체는 다음과 같이 산성 pH보다 중성 pH에서 높은 친화도로 항원에 결합한다: 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 항원 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 항원 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 5 이상이다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 2 이상이다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))은 5 이상이다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해 중성 및 산성 pH 모두에서 저칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 2 이상이며, 여기서 항C1s 항체는 이량체 상태의 C1s에 결합한다.

상기 KD 비, 즉 KD(산성 pH)/KD(중성 pH)는 모 항체(즉, 본 발명의 개변 전의 원래 항체) 및 해당 원래(모) 항체에 대해 하나 이상의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입된 항체와 비교될 수 있다. 원래(모) 항체는 C1s에 특이적으로 결합하는 한 임의의 공지된 항체 또는 새로 단리된 항체일 수 있다. 따라서, 하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 원래(모) 항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))보다 적어도 1.2배, 1.4배, 1.6배, 1.8배, 2배, 2.1배, 2.2배, 2.3배, 2.4배, 2.5배, 2.6배, 2.7배, 2.8배, 2.9배, 3배, 3.5배, 4배, 5배, 8배, 10배 더 높다. 환언하면, 본 발명은 모 항체에 하나 이상의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입되고, 하기 (ⅱ)에 대한 (ⅰ)의 비율이 적어도 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.5, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.5, 4, 5, 8 또는 10인 단리된 항C1s 항체를 제공한다: (ⅰ) 단리된 항C1s 항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH)); (ⅱ) 모(원래) 항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH)). 이들 KD 비는 임의의(높거나 낮은) 칼슘 농도에서 측정될 수 있거나, 예를 들어 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정될 수 있거나, 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정될 수 있다. 또 다른 측면에 있어서, 상기 KD 대신에 해리 속도 상수(kd)를 사용하여 pH 및/또는 Ca 의존성을 평가할 수있다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 항체는 세포 내 조건과 세포 외 조건 사이에서 상이한 항원 결합 활성을 갖는다. 세포 내 조건 및 세포 외 조건은 세포의 내부와 외부 사이의 상이한 조건을 말한다. 조건의 카테고리는 예를 들어 이온 농도, 보다 구체적으로는 금속 이온 농도, 수소 이온 농도(pH) 및 칼슘 이온 농도를 포함한다. “세포 내 조건”은 바람직하게는 엔도솜 내의 환경에 특징적인 환경을 말하고, “세포 외 조건”은 바람직하게는 혈장 내의 환경에 특징적인 환경을 말한다. 이온 농도에 따라 변화하는 항원 결합 활성을 갖는 특성을 갖는 항체는 이러한 특성을 갖는 도메인에 대해 다수의 항체를 스크리닝함으로써 획득할 수 있다. 예를 들어, 상기 특성을 갖는 항체는 하이브리도마법 또는 항체 라이브러리법에 의해 서열이 서로 상이한 다수의 항체를 생산하고, 상이한 이온 농도에서 그의 항원 결합 활성을 측정함으로써 획득할 수 있다. B 세포 클로닝 방법은 이러한 항체를 스크리닝하는 방법의 예시 중 하나이다. 더욱이, 후술하는 바와 같이, 이온 농도에 따라 변화하는 항원 결합 활성을 갖는 특성을 항체에 부여할 수 있는 적어도 하나의 특징적인 아미노산 잔기가 특정되고, 상기 특징적인 아미노산 잔기를 공통 구조로서 공유하면서 상이한 서열을 갖는 다수의 항체 라이브러리가 제조된다. 이러한 라이브러리는 상기 특성을 갖는 항체를 효과적으로 단리하기 위해 스크리닝될 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 산성 pH보다 중성 pH에서 높은 친화도로 C1s에 결합하는 항체를 제공한다. 또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 C1s에 대한 pH 의존적 결합을 나타내는 항C1s 항체를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 표현 “pH 의존적 결합”은 “중성 pH에서의 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 결합”을 의미하며, 두 표현은 상호 교환 가능할 수 있다. 예를 들어, “pH 의존적 결합 특성을 갖는” 항C1s 항체는 산성 pH보다 중성 pH에서 더 높은 친화도로 C1s에 결합하는 항체를 포함한다.

특정의 양태에 있어서, 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 2 이상이다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 중성 pH에서 산성 pH에서보다 적어도 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그보다 높은 친화도로 C1s에 결합한다.

특정의 양태에 있어서, 중성 pH 및 산성 pH 모두에서 고칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 koff 값의 비(koff(산성 pH)/koff(중성 pH))는 2 이상이다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 중성 pH에서 산성 pH에서보다 적어도 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그보다 높은 친화도로 C1s에 결합한다.

특정의 양태에 있어서, 중성 pH에서 고칼슘 농도 및 산성 pH에서 저칼슘 농도에서 측정되는 경우, 중성 pH에서 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서 C1s 결합 활성의 KD 값 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 2 이상이다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 중성 pH에서 산성 pH에서보다 적어도 2, 3, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그보다 높은 친화도로 C1s에 결합한다.

상기 예에서, 예를 들어, 산성 pH는 5.8이고, 중성 pH는 7.4이고, 이에 따라 KD(산성 pH)/KD(중성 pH)는 KD(pH5.8)/KD(pH7.4)이다. 이와 관련하여, 산성 pH 및 중성 pH의 예가 본 명세서에서 상세히 후술된다. 일부 양태에 있어서, KD(산성 pH)/KD(중성 pH), 예를 들어 KD(pH5.8)/KD(pH7.4)는 2 내지 10,000일 수 있다. 상기 예에서, 예를 들어, 산성 pH는 5.8이고, 중성 pH는 7.4이고, 이에 따라 koff(산성 pH)/koff(중성 pH)는 koff(pH5.8)/koff(pH7.4)이다. 이와 관련하여, 산성 pH 및 중성 pH의 예가 본 명세서에서 상세히 후술된다. 일부 양태에 있어서, koff(산성 pH)/koff(중성 pH), 예를 들어 koff(pH5.8)/koff(pH7.4)는 2 내지 10,000일 수 있다.

항원이 가용성 단백질인 경우, 항체가 항원 자체보다 혈장 중에서 더 긴 반감기를 가질 수 있고 항원의 담체로서 기능할 수 있기 때문에, 항체의 항원에 대한 결합은 항원의 혈장 중 반감기의 연장(즉, 혈장으로부터의 항원의 클리어런스 감소)을 초래할 수 있다. 이는 세포 내 엔도솜 경로를 통한 FcRn에 의한 항원-항체 복합체의 리사이클에 기인한다(Roopenian and Akilesh (2007) Nat Rev Immunol 7(9): 715-725). 그러나, 중성의 세포 외 환경에서는 항원에 결합하지만 세포 내로 침입한 후에는 산성의 엔도솜 구획 내에 항원을 방출하는 pH 의존적 결합 특성을 갖는 항체는, pH 비의존적인 방식으로 결합하는 대응물에 비해 항원의 중화 및 클리어런스의 점에서 우수한 특성을 가질 것으로 예상된다(Igawa et al (2010) Nature Biotechnol 28(11); 1203-1207; Devanaboyina et al (2013) mAbs 5(6): 851-859; 국제특허출원 공개번호: WO 2009/125825).

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 저칼슘 농도 조건하에서 보다 고칼슘 농도 조건하에서 높은 친화도로 C1s에 결합하는 항체를 제공한다.

본 발명에 있어서, 바람직한 금속 이온은, 예를 들면, 칼슘 이온을 포함한다. 칼슘 이온은 근육, 예를 들어 골격근, 평활근 및 심근의 수축; 백혈구의 운동, 식작용 등의 활성화; 혈소판의 형상 변화, 분비 등의 활성화; 림프구의 활성화; 히스타민의 분비를 비롯한 비만세포의 활성화; 카테콜아민 알파 수용체 또는 아세틸콜린 수용체에 의해 매개되는 세포 반응; 엑소사이토시스; 뉴론 말단으로부터의 전달 물질의 방출; 및 뉴론에서의 축삭류(axoplasmic flow)를 포함하는, 많은 생물학적 현상의 조정에 관여한다. 공지된 세포 내 칼슘 이온 수용체는 트로포닌 C, 칼모듈린, 파브알부민 및 미오신 경쇄를 포함하며, 이들은 몇몇 칼슘 이온 결합 부위를 가지며 분자 진화의 관점에서 공통 기원으로부터 파생된다고 생각된다. 또한, 많은 칼슘 결합 모티프가 공지되어 있다. 이러한 잘 알려진 모티프는 예를 들어, 캐드헤린 도메인, 칼모듈린의 EF 핸드, 단백질 키나아제 C의 C2 도메인, 혈액 응고 단백질 인자 IX의 Gla 도메인, 아시알로 당단백질(acyaroglycoprotein) 수용체 및 만노스 결합 수용체의 C형 렉틴, LDL 수용체의 A 도메인, 아넥신, 트롬보스폰딘 3형 도메인 및 EGF-유사 도메인을 포함한다.

본 발명에 있어서, 금속 이온이 칼슘 이온인 경우에는, 고칼슘 이온 농도 조건하의 항원 결합 활성보다도 저칼슘 이온 농도 조건하의 항원 결합 활성이 낮은 것이 바람직하다. 한편, 세포 내 칼슘 이온 농도는 세포 외 칼슘 이온 농도보다 낮다. 반대로, 세포 외 칼슘 이온 농도는 세포 내 칼슘 이온 농도보다 높다. 본 발명에 있어서, 저칼슘 이온 농도는, 바람직하게는 0.1μM 내지 30μM이며, 보다 바람직하게는 0.5μM 내지 10μM이며, 특히 바람직하게는 생체 내의 초기 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도에 가까운 1μM 내지 5μM이다. 한편, 본 발명에 있어서, 고칼슘 이온 농도는, 바람직하게는 100μM 내지 10μM이며, 보다 바람직하게는 200μM 내지 5mM이며, 특히 바람직하게는 혈장 중(혈중)의 칼슘 이온 농도에 가까운 0.5mM 내지 2.5mM 이다. 본 발명에서는, 저칼슘 이온 농도가 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도이고, 고칼슘 이온 농도가 혈장 중의 칼슘 이온 농도인 것이 바람직하다. 항원 결합 활성의 수준을 저칼슘 이온 농도와 고칼슘 이온 농도에서 비교한 경우, 본 발명의 항체의 결합은 저칼슘 이온 농도에서보다 고칼슘 이온 농도에서 강한 것이 바람직하다. 환언하면, 본 발명의 항체의 항원 결합 활성은 고칼슘 이온 농도보다 저칼슘 이온 농도에서 낮은 것이 바람직하다. 결합 활성의 수준을 해리 상수(KD)로 나타내는 경우, KD(저칼슘 이온 농도)/KD(고칼슘 이온 농도)의 값은 1 보다 크고, 바람직하게는 2 이상이며, 보다 바람직하게는 10 이상이고, 보다 더 바람직하게는 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 또는 그 이상이다. KD(저칼슘 이온 농도)/KD(고칼슘 이온 농도)의 값의 상한은 특별히 한정되지 않고, 통상의 기술자의 기술에 있어서 제조 가능한 한, 100, 400, 1000, 또는 10000 등, 어떠한 값이어도 된다. KD 대신 해리 속도 상수(kd)를 사용할 수도 있다. KD 값을 계산하기 어려운 경우, Biacore에서 동일한 농도로 분석물(analyte)을 흘릴 때의 결합 반응성의 수준에 기초하여 활성을 평가할 수 있다. 본 발명의 항원 결합 분자를 고정화한 칩상에 항원을 흘렸을 경우, 저칼슘 농도 조건하에서의 결합 반응성은, 고칼슘 농도 조건하에서의 결합 반응성의 바람직하게는 1/2 이하이며, 바람직하게는 1/3 이하이고, 보다 바람직하게는 1/5 이하이고, 특히 바람직하게는 1/10 이하이다. 일반적으로, 생체 내의 세포 외(예를 들어, 혈장 중)의 칼슘 이온 농도는 높고, 세포 내(예를 들어, 엔도솜 내)의 칼슘 이온 농도는 낮은 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 발명에서는 세포 외 조건이 고칼슘 이온 농도이고, 세포 내 조건이 저칼슘 이온 농도인 것이 바람직하다. 본 발명의 항원 결합 분자(예를 들어, 항체)에 세포 외의 칼슘 이온 농도 조건하에 비해 세포 내의 칼슘 이온 농도 조건하에서는 항원 결합 활성이 낮다는 특성을 부여하는 경우, 세포 외에서 본 발명의 항원 결합 분자에 결합된 항원은 세포 내에서 본 발명의 항원 결합 분자로부터 해리되어, 세포 외에서 세포 내로의 항원의 흡수가 증진된다. 이러한 항체를 생체에 투여하는 경우, 혈장 중의 항원 농도를 저하시키고, 생체에 있어서의 항원의 생리 활성을 저하시키는 것이 가능해진다. 따라서 본 발명의 항체는 유용하다. 고칼슘 이온 농도 조건하에 비해 저칼슘 이온 농도 조건하에서 항원 결합 활성이 낮은 항원 결합 도메인 또는 항체를 스크리닝하는 방법에는, 예를 들면 WO2012/073992(예를 들어, 단락 0200~0213)에 기재된 방법이 포함된다. 고칼슘 이온 농도 조건하에 비해 저칼슘 이온 농도 조건하에서 항원에 약하게 결합하는 특성을 본 발명의 항원 결합 도메인에 부여하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 어떠한 방법에 의해 수행해도 된다. 구체적으로, 상기 방법은 일본 특허출원 제2011-218006호에 기재되어 있으며, 예를 들어 항원 결합 도메인에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기로 치환하는 방법 및/또는 금속 킬레이트 작용을 갖는 적어도 하나의 아미노산 잔기를 항원 결합 도메인에 삽입하는 방법을 포함한다. 항원 결합 도메인의 적어도 하나의 아미노산 잔기가 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기로 치환되고, 및/또는 금속 킬레이트 작용을 갖는 적어도 하나의 아미노산 잔기가 항원 결합 도메인에 삽입되는 본 발명의 항원 결합 분자는 본 발명의 항원 결합 분자의 바람직한 양태 중 하나이다.

금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기는 바람직하게, 예를 들면, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 또한, 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 도메인의 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기는 바람직하게, 예를 들면, 칼슘 결합 모티프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. 칼슘 결합 모티프는 통상의 기술자에게 잘 알려져 있고 상세하게 보고되어 있다(예를 들어, Springer et al., (Cell (2000) 102, 275-277); Kawasaki and Kretsinger (Protein Prof. (1995) 2, 305-490); Moncrief et al., (J. Mol. Evol. (1990) 30, 522-562); Chauvaux et al., (Biochem. J. (1990) 265, 261-265); Bairoch and Cox (FEBS Lett. (1990) 269, 454-456); Davis (New Biol. (1990) 2, 410-419); Schaefer et al., (Genomics (1995) 25, 638 to 643); Economou et al., (EMBO J. (1990) 9, 349-354); Wurzburg et al., (Structure. (2006) 14, 6, 1049-1058)). 트로포닌 C, 칼모듈린, 파브알부민 및 미오신 경쇄의 EF 핸드; 단백질 키나아제 C의 C2 도메인; 혈액 응고 단백질 인자 IX의 Gla 도메인; 아시알로 당단백질 수용체 및 만노오스 결합 수용체, ASGPR, CD23, 및 DC-SIGN의 C형 렉틴; LDL 수용체의 A 도메인; 아넥신 도메인; 캐드헤린 도메인; 트롬보스폰딘 3형 도메인; 및 EGF 유사 도메인이 칼슘 결합 모티프로서 적합하게 사용된다.

본 발명의 항원 결합 도메인에는 상기 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기나 칼슘 결합 모티프를 형성하는 아미노산 잔기 등의 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기가 포함될 수 있다. 항원 결합 도메인 내에서의 이러한 아미노산 잔기의 위치는 특별히 한정되지 않고, 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 활성이 변화하는 한, 어떠한 위치라도 좋다. 또한, 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 활성을 변화시키는 한, 이러한 아미노산 잔기가 단독으로 포함되어 있어도 되고, 2개 이상 조합으로 포함되어 있어도 된다. 이러한 아미노산 잔기로는 바람직하게, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산 및 글루탐산이 예시로 포함된다. 항원 결합 도메인이 항체의 가변 영역인 경우, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 그의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 바람직한 양태에 있어서, 이들 아미노산 잔기는 중쇄 가변 영역의 CDR3에 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 중쇄 가변 영역의 CDR3의 Kabat 넘버링에 따른 95위, 96위, 100a위 및/또는 101위에 포함되어 있어도 된다.

다른 바람직한 양태에 있어서, 이들 아미노산 잔기는 경쇄 가변 영역의 CDR1에 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR1의 Kabat 넘버링에 따른 30위, 31위 및/또는 32위에 포함되어 있어도 된다. 또 다른 바람직한 양태에 있어서, 이들 아미노산 잔기는 경쇄 가변 영역의 CDR2에 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR2의 Kabat 넘버링에 따른 50위에 포함되어 있어도 된다. 또 다른 바람직한 양태에 있어서, 이들 아미노산 잔기는 경쇄 가변 영역의 CDR3에 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR3의 Kabat 넘버링에 따른 92위에 포함되어 있어도 된다.

또한, 상기 기재된 양태는 조합되어 있어도 된다. 예를 들어 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3으로부터 선택되는 2개 또는 3개의 CDR에 해당 아미노산 잔기가 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는, 경쇄 가변 영역의 Kabat 넘버링에 따른 30위, 31위, 32위, 50위 및/또는 92위 중 어느 하나 이상에 포함될 수 있다.

상기와 같은 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기를 공통의 구조로서 가지며 서로 서열이 다른 다수의 항원 결합 도메인을 라이브러리로서 제작하고, 그러한 라이브러리 중에서 스크리닝을 함으로써, 원하는 항원에 대한 결합 활성을 갖고, 또한 칼슘 이온 농도에 따라 항원 결합 활성이 변화하는 항원 결합 도메인을 효율적으로 취득할 수 있다.

C1s에 대한 항체의 “친화도”는 본 개시의 취지상, 그 항체의 KD로 표현된다. 항체의 KD는 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 가리킨다. 항체의 항원에 대한 결합의 KD 값이 클수록, 특정 항원에 대한 결합 친화도는 약하다. 따라서, 본 명세서에서 사용되는 표현 “산성 pH보다 중성 pH에서 높은 친화도”(또는 동등한 표현 “pH 의존적 결합”)는 산성 pH에서의 항체의 KD가 중성 pH에서의 항체의 KD보다 큰 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 문맥에 있어서, 산성 pH에서 항체의 C1s에 대한 결합의 KD가 중성 pH에서 항체의 C1s에 대한 결합의 KD보다 적어도 2배 큰 경우, 상기 항체는 산성 pH보다 중성 pH에서 높은 친화도로 C1s에 결합하는 것으로 간주된다. 따라서, 본 발명은 중성 pH에서 항체의 C1s에 대한 결합의 KD보다 적어도 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그 이상의 큰 KD로 산성 pH에서 C1s에 결합하는 항체를 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 중성 pH에서의 항체의 KD 값은 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M 또는 그 이하일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 산성 pH에서 항체의 KD 값은 10^-9M, 10^-8M, 10^-7M, 10^-6M 또는 그 이상일 수 있다.

또한, 특정 항원에 대한 항체의 결합 특성은 항체의 kd로 표현될 수 있다. 항체의 kd는 특정 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 가리키며, 초의 역수(즉, sec^-1)의 단위로 표현된다. kd 값의 증가는 항체의 항원에 대한 결합이 더 약하다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명은 중성 pH보다 산성 pH에서 높은 kd 값으로 C1s에 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명은 중성 pH에서의 C1s에 대한 항체 결합의 kd보다 적어도 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그 이상의 높은 kd로 산성 pH에서 C1s 결합하는 항체를 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 중성 pH에서의 항체의 kd 값은 10^-21/s, 10^-3 1/s, 10^-4 1/s, 10^-5 1/s, 10^-6 1/s 또는 그 미만일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 kd 값은 10^-31/s, 10^-2 1/s, 10^-1 1/s 또는 그 이상일 수 있다.

특정의 예시에 있어서, “중성 pH에서의 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 결합”은 중성 pH에서의 항체의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 항체의 KD 값의 비(또는 그 반대)로 표시된다. 예를 들어, 항체가 2 이상의 산성/중성 KD 비를 나타내는 경우, 본 발명의 목적에 있어서, 항체는 “중성 pH에서의 C1s에 대한 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 C1s에 대한 결합”을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 특정의 예시적인 양태에 있어서, 본 발명의 항체에서 산성/중성 KD 비는 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 이상일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 중성 pH에서 항체의 KD 값은 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M 이하일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 산성 pH에서 항체의 KD 값은 10^-9M, 10^-8M, 10^-7M, 10^-6M 또는 그 이상일 수 있다.

대안적으로, “중성 pH에서의 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 결합”은 중성 pH에서의 항체의 koff 값에 대한 산성 pH에서의 항체의 koff 값의 비(또는 그 반대)로 표시된다. 예를 들어, 항체가 2 이상의 산성/중성 koff 비를 나타내는 경우, 본 발명의 목적에 있어서, 항체는 “중성 pH에서의 C1s에 대한 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서 C1s에 대한 결합”을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 특정의 예시적인 양태에서, 본 발명의 항체에서 산성/중성 koff 비는 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 또는 그 이상일 수 있다.

특정의 예시에 있어서, “중성 pH에서의 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 결합”은 중성 pH에서의 항체의 kd 값에 대한 산성 pH에서의 항체의 kd 값의 비(또는 그 반대)로 표시된다. 예를 들어, 항체가 2 이상의 산성/중성 kd 비를 나타내는 경우, 본 발명의 목적에 있어서, 항체는 “중성 pH에서의 C1s에 대한 결합과 비교하여 감소된 산성 pH에서의 C1s에 대한 결합”을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 특정의 예시적인 양태에 있어서, 본 발명의 항체에서 산성/중성 kd 비는 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배 이상일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 중성 pH에서 항체의 kd 값은 10^-2 1/s, 10^-3 1/s, 10^-4 1/s, 10^-5 1/s, 10^-6 1/s 또는 그 이하일 수 있다. 또 다른 양태에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 kd 값은 10^-3 1/s, 10^-2 1/s, 10^-1 1/s 또는 그 이상일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 표현 “산성 pH”는 pH4.0 내지 6.5를 의미한다. 표현 “산성 pH”는 pH 값 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4 및 6.5를 포함한다. 특정의 측면에 있어서, “산성 pH”는 5.8 또는 6.0이다.

본 명세서에서 사용되는 표현 “중성 pH”는 pH6.7 내지 약 10.0을 의미한다. 표현 “중성 pH”는 pH 값 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 및 10.0을 포함한다. 특정의 측면에 있어서, “중성 pH”는 7.0 또는 7.4이다.

본 명세서에서 사용되는 표현 “고칼슘 농도 조건하” 또는 “고칼슘 농도에서”는 100μM 내지 10mM, 보다 바람직하게는 200μM 내지 5mM, 특히 바람직하게는 혈장 중(혈중)의 칼슘 이온 농도에 가까운 0.5mM 내지 2.5mM을 의미한다. 표현 “고칼슘 농도 조건하” 또는 “고칼슘 농도에서”는 100μM, 200μM, 300μM, 400μM, 500μM, 600μM, 700μM, 800μM, 900μM, 0.5mM, 0.7mM, 0.9mM, 1mM, 1.2mM, 1.4mM, 1.6mM, 1.8mM, 2.0mM, 2.2mM, 2.4mM, 2.5mM, 3mM, 4mM, 5mM, 6mM, 7mM, 8mM, 9mM 및 10mM Ca²⁺의 칼슘 농도 값을 포함한다. 특정의 측면에 있어서, “고칼슘 농도 조건하” 또는 “고칼슘 농도에서”는 1.2mM Ca²⁺를 말한다.

본 명세서에서 사용되는 표현 “저칼슘 농도 조건하” 또는 “저칼슘 농도에서”는 0.1μM 내지 30μM, 보다 바람직하게는 0.5μM 내지 10μM, 특히 바람직하게는 생체 내의 초기 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도에 가까운 1μM 내지 5μM을 의미한다. 표현 “저칼슘 농도 조건하” 또는 “저칼슘 농도에서”는 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 1.5μM, 2.0μM, 2.5μM, 2.6μM, 2.7μM, 2.8μM, 2.9μM, 3.0μM, 3.1μM, 3.2μM, 3.3μM, 3.4μM, 3.5μM, 4.0μM, 5.0μM, 6.0μM, 7.0μM, 8.0μM, 9.0μM, 10μM, 15μM, 20μM, 25μM 및 30μM Ca²⁺의 칼슘 농도 값을 포함한다. 특정의 측면에 있어서, “저칼슘 농도 조건하” 또는 “저칼슘 농도에서”는 3.0μM Ca²⁺를 말한다.

본 명세서에서 표현되는 KD 값 및 kd 값은 항체-항원 상호작용을 특징 짓기 위해, 표면 플라즈몬 공명에 기초한 바이오센서를 사용하여 측정될 수 있다. (예를 들어, 본 명세서의 실시예 2 참조). KD 값 및 kd 값은 섭씨 25도(℃) 또는 37℃에서 측정될 수 있다. 상기 측정은 150mM NaCl의 존재하에 수행될 수 있다. 일부 양태에 있어서, 상기 측정은 항체를 고정화하고 항원을 분석물로서 사용하고, 하기 조건을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용하여 수행될 수 있다: 섭씨 37도(℃)에서의 10mM MES 완충액, 0.05% 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노라우레이트 및 150mM NaCl.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 pH 의존성을 갖는 항C1s 항체로서, 가변 영역에 적어도 하나의 히스티딘을 포함하고, 가변 영역의 적어도 하나의 아미노산이,

1) 항체의 산성 pH 및/또는 중성 pH에서 비특이적 결합 활성이 감소되거나,

2) 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 증가하도록,

다른 아미노산으로 치환된 항체를 제공한다.

D, E, K, R 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환된 항체를 제공한다.

특정의 측면에 있어서, 표현 “비특이적 결합 활성”은 항체의 세포 외 매트릭스(ECM) 결합 활성을 의미한다. 특정의 측면에서, 표현 “비특이적 결합 활성”은 산성 pH에서 항체의 ECM 결합 활성을 의미한다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항C1s 항체에서 적어도 하나의 아미노산은 산성 pH에서 ECM 결합 활성이 감소되도록, 하나 이상의 아미노산으로 치환될 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항C1s 항체의 적어도 하나의 아미노산은 중성 pH에서 ECM 결합 활성이 감소되도록, 하나 이상의 아미노산으로 치환될 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 pH 의존성을 갖는 항C1s 항체로서, 상기 항체의 ECM 결합 활성이 감소되도록, 가변 영역에서 적어도 하나의 아미노산이 치환된 항체를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 산성 pH에서 ECM 결합 활성이 감소된다. 특정의 양태에 있어서, 중성 pH에서 ECM 결합 활성이 감소된다. 특정의 양태에 있어서, 이러한 항체는 이러한 개변을 갖지 않는 모 항체와 비교하여, 하나 이상의 초가변 영역(HVR)에 하나 이상의 개변을 갖는 항체로서, 이러한 개변은 항원에 대한 항체의 ECM 결합 활성을 개선시키는, 즉 ECM 결합 활성을 감소시키는 항체를 말한다.

“세포 외 매트릭스 결합”을 측정하는 방법은 특별히 한정되는 것은 아니고, 세포 외 매트릭스를 고정화한 플레이트에 폴리펩티드를 첨가하고, 그 폴리펩티드에 대한 표지된 항체를 첨가함으로써, 폴리펩티드와 세포 외 매트릭스 사이의 결합을 검출하는 ELISA 시스템을 사용하여 측정할 수 있다. 특히, 세포 외 매트릭스 결합능을 보다 고감도로 검출할 수 있기 때문에, 전기화학발광(ECL)법을 이용한 측정법이 바람직하다. 구체적으로는, 세포 외 매트릭스를 고정화한 플레이트에 폴리펩티드 및 루테늄 항체의 혼합물을 첨가하고, 루테늄의 전기화학 발광을 측정하는 ECL 시스템을 이용하여, 폴리펩티드와 세포 외 매트릭스 사이의 결합을 측정할 수 있다. 첨가하는 폴리펩티드의 농도는 임의로 설정할 수 있지만, 세포 외 매트릭스 결합의 검출 감도를 증가시키기 위해서는 고농도로 첨가하는 것이 바람직하다. 본 발명에서 사용되는 세포 외 매트릭스는 콜라겐, 프로테오글리칸, 피브로넥틴, 라미닌, 엔탁틴, 피브린 및 펠레칸 등의 당단백질을 포함하는 한, 식물 유래이거나 동물 유래일 수 있지만, 본 발명에서는 동물에서 유래된 세포 외 매트릭스가 바람직하고; 예를 들어, 인간, 마우스, 래트, 원숭이, 토끼 및 개와 같은 동물 유래의 세포 외 매트릭스가 사용될 수 있다. 특히, 인간에서의 약물 동태의 개선을 모니터링하기 위해서는, 인간 유래의 천연 인간 세포 외 매트릭스가 바람직하다. 또한, 세포 외 매트릭스에 대한 폴리펩티드의 결합을 평가하기 위한 조건은, pH7.4 부근의 중성 범위(생리학적 조건)가 바람직하지만, 중성 범위 내일 필요는 없고, 산성 범위(pH6.0 부근)에서 평가를 실시해도 된다. 또한, 세포 외 매트릭스에 대한 폴리펩티드의 결합을 평가할 때, 폴리펩티드가 결합하는 항원 분자는 세포 외 매트릭스에 대한 폴리펩티드/항원 분자 복합체의 결합을 평가하기 위해 공존하게 할 수 있다.

일부 양태에 있어서, 산성 pH에서 항체의 비특이적 결합 활성이 감소하는지 여부는, 예를 들어, ELISA 또는 ECL을 사용하여 측정할 수 있다. 추가의 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체의 경우, ECM 결합의 값은 모 항체(즉, D, E, K, R 및/또는 Q 치환 전의 원래 항체) 및 원래(모) 항체에 하나 이상의 아미노산 치환(D, E, K, R 및/또는 Q)을 도입한 항체의 사이에서 비교할 수 있고, 다만 항체는 가변 영역에 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다. 원래(모) 항체는 C1s에 특이적으로 결합하는 한, 임의의 공지된 항체이거나 새로 단리된 항체일 수 있다. 따라서, 하나의 측면에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체에 대해, 치환된 항체의 ECM 결합의 값은 원래(모) 항체의 ECM 결합의 값보다 적어도 1.2배, 1.4배, 1.6배, 1.8배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 5배, 8배, 10배 더 낮다.

특정 이론에 제한되는 것은 아니지만, 항체의 히스티딘 잔기는 그 항체의 히스티딘 잔기 주위의 다양한 잔기와 상호작용할 수 있다. 이러한 상호작용은 항체의 구조 또는 CDR의 입체 구조에 영향을 줄 수 있다. 히스티딘은 산성 pH에서 양성자화되어 양으로 하전된다. 아르기닌 또는 라이신과 같은 양전하 잔기를 히스티딘 주위의 위치에 도입하면, 산성 pH에서 양전하 잔기와 양성자화된 히스티딘 사이에 반발이 발생하여, 항체 또는 CDR의 구조 변화 또는 입체 구조 변화가 유도된다. 마찬가지로, 아스파르트산 또는 글루탐산과 같은 음전하 잔기를 히스티딘 주위의 위치에 도입하면, 산성 pH에서 음전하 잔기와 양성자화된 히스티딘 사이에 상호작용이 발생하여, 항체 또는 CDR의 구조 또는 입체 변화가 유도된다. 산성 pH에서 일어나는 항체 또는 CDR의 이러한 구조 또는 입체 변화는 항체의 항원 결합에 영향을 미치고, 산성 pH에서 항체의 항원에 대한 결합 친화도를 감소시킬 수 있다. 요약하자면, 항체의 히스티딘 잔기 주위의 위치에 하전 잔기(예를 들어, 아르기닌, 라이신, 아스파르트산 또는 글루탐산)의 도입은, 산성 pH에서 항원에 대한 항체의 결합 친화도를 감소시켜, 항체-항원 상호작용의 pH 의존성을 독특한 메커니즘으로 개선시킬 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 중성 pH에서 항원 결합 활성의 KD 값에 대한 산성 pH에서 항체의 항원 결합 활성의 KD 값의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))를 증가시키는 방법으로서,

1) 가변 영역에 적어도 하나의 히스티딘을 포함하는 pH 의존성을 갖는 항체를 제공하는 단계;

2) 항체의 가변 영역의 적어도 하나의 아미노산을 D, E, K, R, Q 및 H로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환하는 단계,

를 포함하는 방법을 제공한다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 혈장으로부터의 항원의 클리어런스(또는 제거)를 증가시키는 방법으로서,

를 포함하는 방법을 제공한다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 항원 결합 분자를 통한 항원의 세포 내로의 흡수를 촉진하는 방법으로서,

를 포함하는 방법을 제공한다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 하나의 항원 결합 분자가 결합할 수 있는 항원의 수를 증가시키는 방법으로서,

를 포함하는 방법을 제공한다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 혈장으로부터 항원을 제거하는 항원 결합 분자의 능력을 향상시키는 방법으로서,

를 포함하는 방법을 제공한다.

특정의 양태에 있어서, 본 발명의 상기 방법에서, 가변 영역에 포함된 히스티딘 잔기로 치환된 아미노산(즉, D, E, K, R, Q 또는 H) 사이의 거리는 20 옹스트롬 미만, 18 옹스트롬 미만, 16 옹스트롬 미만, 14 옹스트롬 미만, 12 옹스트롬 미만, 10 옹스트롬 미만, 8 옹스트롬 미만, 6 옹스트롬 미만, 4 옹스트롬 미만, 또는 2 옹스트롬 미만이다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 개체에서 혈장으로부터 C1s의 클리어런스를 향상시키는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 상기 방법은 혈장으로부터 C1s의 클리어런스를 증가시키는 데 유효한 양의 본 발명의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은, 또한 개체에서 혈장으로부터 C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 향상시키는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 상기 방법은 혈장으로부터 C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 향상시키는 데 유효한 양의 본 발명의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은, 또한 개체에서 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 향상시키는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 상기 방법은 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 향상시키는 데 유효한 양의 본 발명의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서: (a) 혈장으로부터 C1s를 제거할 필요가 있는 개체를 동정하는 단계; (b) C1s에 결합하는 항체를 제공하는 단계로서, 상기 항체가 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해 C1s에 결합하고, 2 내지 10,000의 KD(pH5.8)/KD(pH7.4) 값을 가지며, 여기서 KD(pH5.8)/KD(pH7.4)는 KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 결정될 때 pH5.8에서의 C1s에 대한 KD와 pH7.4에서의 C1s에 대한 KD의 비로 정의되고, 상기 항체가 생체 내의 혈장 중 C1s에 결합하고, 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서, 결합한 C1s로부터 해리되고, 상기 항체가 인간 IgG 또는 인간화 IgG인 단계; 및 (c) 상기 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라즈몬 공명 기술은 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라즈몬 공명 기술은 항체를 고정화하고 항원을 분석물로서 사용하고, 하기 조건: 37℃에서 10mM MES 완충액, 0.05% 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노라우레이트 및 150mM NaCl을 이용하여 사용될 수 있다. 또 다른 측면에 있어서, 전술한 KD 대신 해리 속도 상수(kd)를 사용할 수 있다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 대상의 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서, (a) 제 1 항체의 항원 결합 도메인을 통해 C1s에 결합하는 제 1 항체를 동정하는 단계; (b) 제 2 항체를 동정하는 단계로서, 상기 제 2 항체가 (1) 제 2 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해 C1s에 결합하고, (2) 제 1 항체의 가변 영역의 적어도 하나의 아미노산이 히스티딘으로 치환되어 있고/있거나 제 1 항체의 가변 영역에 적어도 하나의 히스티딘이 삽입되어 있는 것을 제외하고는, 제 1 항체와 아미노산 서열이 동일하고, (3) 제 1 항체의 KD(pH5.8)/KD(pH7.4) 값보다 높고 2 내지 10,000인 KD(pH5.8)/KD(pH7.4) 값을 가지며, 여기서 KD(pH5.8)/KD(pH7.4)는, KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용하여 결정될 때 pH5.8에서의 C1s에 대한 KD와 pH7.4에서의 C1s에 대한 KD의 비로 정의되고, (4) 생체 내의 혈장 중 C1s에 결합하고, (5) 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서는 결합한 C1s에서 해리되고, 또한 (6) 인간 IgG 또는 인간화 IgG인 단계; (c) 혈장 중 C1s 농도를 감소시킬 필요가 있는 대상을 동정하는 단계; 및 (d) 대상 혈장 중 C1s 농도가 감소하도록 제 2 항체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라스몬 공명 기술은 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라스몬 공명 기술은 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라즈몬 공명 기술은 항체를 고정화하고 항원을 분석물로서 사용하고, 동시에 하기 조건: 37℃에서 10mM MES 완충액, 0.05% 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노라우레이트 및 150mM NaCl을 이용하여 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 전술한 KD 대신 해리 속도 상수(kd)를 사용할 수 있다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 대상의 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서, (a) 제 1 항체를 동정하는 단계로서, 상기 제 1 항체가 (1) 제 1 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해 C1s에 결합하고, (2) 제 1 항체의 적어도 하나의 가변 영역이 제 2 항체에 대응하는 가변 영역보다 적어도 하나 이상의 히스티딘 잔기를 가질 것을 제외하고는, 제 2 항체 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해서 C1s에 결합하는 제 2 항체와 아미노산 서열이 동일하거나, (3) 제 2 항체의 KD(pH5.8)/KD(pH7.4) 값보다 높고 2 내지 10,000인 KD(pH5.8)/KD(pH7.4) 값을 가지며, 여기서 KD(pH5.8)/KD(pH7.4)는, KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용하여 결정될 때 pH5.8에서의 C1s에 대한 KD와 pH7.4에서의 C1s에 대한 KD의 비로 정의되고, (4) 생체 내의 혈장 중 C1s에 결합하고, (5) 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서는 결합한 C1s에서 해리되고, 또한 (6) 인간 IgG 또는 인간화 IgG인 단계; (b) 혈장 중 C1s 농도를 감소시킬 필요가 있는 대상을 동정하는 단계; 및 (c) 대상 혈장 중 C1s 농도가 감소하도록 제 1 항체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라스몬 공명 기술은 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라스몬 공명 기술은 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 측면에 있어서, 이러한 표면 플라즈몬 공명 기술은 항체를 고정화하고 항원을 분석물로서 사용하고, 동시에 하기 조건: 37℃에서 10mM MES 완충액, 0.05% 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노라우레이트 및 150mM NaCl을 이용하여 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 보체 성분 C4의 절단을 억제하는 방법으로서, 항체가 보체 성분 C2의 절단을 억제하지 않는 방법을 제공한다. 일부 경우에 있어서, 항체는 고전 보체 경로의 성분을 억제하고; 일부 경우에 있어서, 고전 보체 경로의 성분은 C1s이다. 추가의 측면에 있어서, 전술한 KD 대신 해리 속도 상수(kd)를 사용할 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 상기 방법은, 예를 들어 C4b2a의 생산을 감소시키기 위해 보체 활성화를 억제한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에 있어서, 보체 활성화를 조절하는 방법으로서, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 약학 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 약학 조성물은 본 개시의 항C1s 항체를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 이러한 방법은 보체 활성화를 억제한다. 일부 양태에 있어서, 개체는 포유동물이다. 일부 양태에 있어서, 개체는 인간이다. 투여는 본 명세서에 개시된 것을 포함하고, 통상의 기술자에게 공지된 임의의 경로에 의한 것일 수 있다. 일부 양태에 있어서, 투여는 정맥 내 투여이다. 일부 양태에 있어서, 투여는 척수강 내 투여이다.

특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항C1s 항체는 2 이상의 종으로부터의 C1s에 결합한다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 인간 및 비-인간 동물 유래의 C1s에 결합한다. 특정의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 인간, 래트 및 원숭이(예를 들어, 필리핀원숭이, 히말라야원숭이, 마모셋, 침팬지 및 비비)로부터의 C1s에 결합한다.

일부 양태에 있어서, WO2014/071206에 개시된 항체 VH1/Vk1, VH1/Vk2, VH1/Vk3, VH2/Vk1, VH2/Vk2, VH2/Vk3, VH3/Vk1, VH3/Vk2, VH3/Vk3, VH4/Vk1, VH4/Vk2, 또는 VH4/Vk3에 아미노산 개변을 도입함으로써 제조되는 항C1s 항체 변이체가 제공된다.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 항C1s 항체는 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치 중 하나 이상에 히스티딘을 포함한다:

경쇄: L25, L28, L91, L92, L94, L95, L96 및 L97.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 항C1s 항체는 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치로부터 선택된 위치 중 하나 이상의 아미노산 잔기에 대해 치환된 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다:

일부 양태에 있어서, 항C1s 항체 중 임의의 하나 이상의 아미노산은 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치에서 히스티딘으로 치환된다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체는 하기 Kabat 넘버링 시스템에 따른 위치의 아미노산 잔기에 대해 치환된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체는 Kabat 넘버링 시스템에 따른 하기 위치 및 CDR 또는 FR 아미노산 위치 중 하나 이상에서 치환된 잔기인 적어도 하나의 히스티딘을 포함한다:

중쇄: H51, H65 및 H99; 및

경쇄: L92, L94, L95 및 L96.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체는 Kabat 넘버링 시스템에 따른 하기 위치에서 치환된 적어도 하나의 히스티딘 잔기를 포함한다:

1) L92 및 L94

2) L92 및 L95

3) L94 및 L95

4) L92, L94, 및 L95

5) H65 및 L92

6) H65 및 L94

7) H65 및 L95

8) H65, L92, 및 L94

9) H65, L92, 및 L95

10) H65, L94, 및 L95

11) H65, L92, L94, 및 L95

12) H99 및 L92

13) H99 및 L94

14) H99 및 L95

15) H99, L92, 및 L94

16) H99, L92, 및 L95

17) H99, L94, 및 L95

18) H99, L92, L94, 및 L95

19) H65 및 H99

20) H65, H99, 및 L92

21) H65, H99, 및 L94

22) H65, H99, 및 L95

23) H65, H99, L92, 및 L94

24) H65, H99, L92, 및 L95

25) H65, H99, L94, 및 L95

26) H65, H99, L92, L94, 및 L95, 또는

27) H27, H99, 및 L95.

상기 양태 중 임의의 하나에서, 항C1s 항체는 인간화 항체이다. 하나의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 전술한 양태 중 임의의 것에서 HVR을 포함하고, 또한 억셉터 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 항C1s 항체는 전술한 양태 중 임의의 하나에서 HVR을 포함하고, FR 서열을 포함하는 VH 또는 VL을 추가로 포함한다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 본 명세서에 제공된 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 WO2014/066744에 개시된 IPN-M1, IPN-M2, IPN-M3, IPN-M8, IPN-M9, IPN-M10, IPN-M11, IPN-M13, IPN-M14, IPN-M15, IPN-M18, IPN-M23, IPN-M24, IPN-M27, IPN-M28, IPN-M29 및 IPN-M33으로 구성된 군에서 선택된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 단리된 항C1s 항체는 중성 pH에서 C1s에 대한 결합에 관해, WO2014/066744에 개시된 IPN-M1, IPN-M2, IPN-M3, IPN-M8, IPN-M9, IPN-M10, IPN-M11, IPN-M13, IPN-M14, IPN-M15, IPN-M18, IPN-M23, IPN-M24, IPN-M27, IPN-M28, IPN-M29 및 IPN-M33으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체와 경합한다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 보체 성분 Is(C1s)의 도메인 IV 및 V를 포함하는 영역 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는, pH 의존적 결합 특성을 갖는 단리된 인간화 모노클로날 항체를 제공한다. 일부 경우에 있어서, 항체는 보체 성분 4(C4)에 대한 C1s에의 결합을 억제한다. 일부 경우에 있어서, 항체는 C1s의 프로테아제 활성을 억제하지 않는다. 일부 경우에 있어서, 본 개시의 단리된 인간화 모노클로날 항체에 의해 결합된 에피토프는 입체구조 에피토프이다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 보체 C1s 단백질 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는, pH 의존적 결합성을 갖는 단리된 항체를 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시의 단리된 항C1s 항체는 활성화된 C1s 단백질에 결합한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시의 단리된 항C1s 항체는 불활성 형태의 C1s에 결합한다. 다른 예에서, 본 개시의 단리된 항C1s 항체는 활성화된 C1s 단백질 및 불활성 형태의 C1s 모두에 결합한다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 C1s의 도메인 IV 및 V를 포함하는 영역 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는, pH 의존적 결합성을 갖는 단리된 인간화 모노클로날 항체를 제공한다. 예를 들어, 본 개시는 서열번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 287-437위의 아미노산 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 인간화 모노클로날 항체를 제공한다. 일부 경우에 있어서, 단리된 인간화 모노클로날 항체는 서열번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 287-437위의 아미노산 내의 에피토프에 특이적으로 결합하고, C1s에 대한 C4의 결합을 저해한다. 본 개시는 또한 보체 매개성 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 서열번호: 3에 제시된 아미노산 서열의 287-437위의 아미노산 내의 에피토프에 특이적으로 결합하여 C1s에 대한 C4의 결합을 억제하는 유효량의 단리된 인간화 모노클로날 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 서열번호: 3에 제시된 인간 C1s 항원의 372위에 아스파르트산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는, pH 의존적 결합성을 갖는 단리된 인간화 모노클로날 항체를 제공한다.

본 발명의 추가의 측면에 있어서, 상기 양태 중 임의의 것에 따른 항C1s 항체는 키메라, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하는 모노클로날 항체이다. 하나의 양태에 있어서, 항C1s 항체는 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')₂ 단편과 같은 항체 단편이다. 또 다른 양태에 있어서, 항체는 예를 들어, 완전 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 또는 본 명세서에 정의된 다른 항체 클래스 또는 아이소타입의 전장 항체이다.

추가의 측면에 있어서, 상기 양태 중 임의의 것에 따른 항C1s 항체는 단독 또는 조합으로 하기 항목 1 내지 7에 기재된 임의의 특징을 포함할 수 있다:

1. 항체의 친화도

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공되는 항체는 1μM 이하, 100nM 이하, 10nM 이하, 1nM 이하, 0.1nM 이하, 0.01nM 이하, 또는 0.001nM 이하(예를 들어, 10^-8M 이하, 예를 들어 10^-8M~10^-13M, 예를 들어 10^-9M~10^-13M)의 해리 상수(Kd 또는 KD)를 갖는다.

하나의 양태에 있어서, Kd는 방사성 표지 항원 결합 측정법(radiolabeled antigen binding assay: RIA)에 의해 측정된다. 하나의 양태에 있어서, RIA는 목적의 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된다. 예를 들어, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 점증량 계열의 존재하에서 최소 농도의 (¹²⁵I)-표지된 항원에 의해 Fab를 평형화한 다음, 결합된 항원을 항Fab 항체로 코팅하고, 플레이트에 의해 포착하여 측정된다(예를 들어, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999) 참조). 검정의 조건을 구축하기 위해 MICROTITER(등록 상표) 멀티 웰 플레이트(Thermo Scientific)를 50mM 탄산나트륨(pH9.6) 중 5μg/ml의 포획 항-Fab항체(Cappel Labs)로 밤새 코팅한 후 실온(대략 23℃)에서 2-5시간 동안, PBS 중 2%(w/v)의 소혈청 알부민으로 차단하였다. 비흡착 플레이트(Nunc #269620)에서, 100pM 또는 26pM [¹²⁵I]-항원을, (예를 들어 Presta et al., Cancer Res. 57: 4593-4599 (1997)에서의 항VEGF 항체, Fab-12의 평가와 동일하게) 목적의 Fab 단계 희석액과 혼합한다. 이어서, 목적하는 Fab를 밤새 인큐베이션한다; 그러나, 이 인큐베이션은 평형이 확실하게 달성되도록 보다 장시간(예를 들어, 약 65시간) 계속될 수 있다. 이어서, 혼합물을 실온에서의 인큐베이션(예를 들어, 1시간)을 위해, 포획 플레이트로 옮긴다. 그 후, 용액을 제거하고 플레이트를 PBS 중 0.1% 폴리소르베이트 20(TWEEN-20(등록 상표))으로 8회 세척하였다. 플레이트가 건조되면 150μl/웰의 신틸란트(MICROSCINT-20™; Packard)를 첨가하고 TOPCOUNT™ 감마 카운터(Packard)에서 플레이트를 10분 동안 세었다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도는, 경합 결합 검정에 사용하기 위해 선택된다.

또 다른 양태에 있어서, Kd는 BIACORE(등록 상표) 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 예를 들어, BIACORE(등록 상표)-2000 또는 BIACORE(등록 상표)-3000(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 사용한 검정은 약 10의 반응 단위(response unit: RU)의 고정화된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 수행된다. 하나의 양태에 있어서, 카복시메틸화 덱스트란 바이오센서칩(CM5, BIACORE, Inc.)은 공급원의 지시에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)를 사용하여 활성화된다. 항원은 대략 10 반응 단위(RU) 단백질의 결합을 달성하기 위해, 5μL/분의 유속으로 주사되기 전에 10mM 아세트산 나트륨, pH4.8을 사용하여 5μg/ml(약 0.2μM)로 희석된다. 항원 주사 후, 미반응기를 차단하기 위해 1M 에탄올아민을 주사한다. 키네틱스 측정을 위해, 25℃에서 대략 25μL/분의 유속으로, 0.05% 폴리소르베이트 20(TWEEN-20™) 계면활성제 함유 PBS(PBST) 중 Fab의 2배 단계 희석물(0.78nM 내지 500nM)을 주사한다. 결합 속도(k_on) 및 해리 속도(k_off)는 간단한 일대일 랭뮤어 결합 모델(BIACORE(등록 상표) 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 결합 및 해리 센서그램을 동시에 조절하여 계산된다. 평형 해리 상수(Kd)는 k_off/k_on 비로 계산된다. 예를 들어, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)를 참조한다. 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 on-속도가 10⁶M^-1s^-1을 초과하는 경우, on-속도는 분광계(예를 들어, 정지 흐름 분광 광도계(Aviv Instruments) 또는 교반 큐벳을 사용하는 8000 시리즈 SLM-AMINCO™) 분광 광도계(ThermoSpectronic))로 측정되는 점증 농도의 항원의 존재하에서의 PBS, pH7.2 중 20nM의 항-항원 항체(Fab 형태)의 25℃에서의 형광 발광 강도(여기=295nm; 발광=340nm, 16nm 밴드-패스)의 상승 또는 감소를 측정하는 형광 소광 기술을 사용하여 결정할 수 있다.

일부 양태에 있어서, pH7.4 및 pH5.8에서의 본 발명의 각 히스티딘 치환 변이체의 결합 친화도는, 37℃에서 Biacore T200 기기(GE Healthcare)를 사용하여 결정된다. 재조합 단백질 A/G(Pierce)는 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 사용하여 CM4 센서칩의 모든 플로우 셀에 고정될 수 있다. 항체 및 분석물은 7(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH7.4), 5(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH5.8) 또는 5(-) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 3μM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH5.8)에서 제조될 수 있다. 각 항체는 단백질 A/G에 의해 센서 표면상에 포획될 수 있다. 항체 포획량은 전형적으로 200 공명 단위(resonance unit: RU)를 목표로 한다. 혈청 유래 인간 C1s(CompTech) 또는 제조된 재조합 C1s는 예를 들어 50 또는 200nM에서 주사되고, 이어서 해리될 수 있다. 센서 표면은 각 사이클마다, 예를 들어 10mM 글리신-HCl, pH1.5를 사용하여 재생된다. 결합 친화도는 예를 들어, Biacore T200 Evaluation 소프트웨어, 버전 2.0(GE Healthcare)을 사용하여 1:1 결합 모델에 데이터를 처리하고 맞춤으로써 결정될 수 있다.

본 발명의 Biacore 검정 단계의 구체적인 예는 다음과 같다.

pH7.4 및 pH5.8에서의 히스티딘 치환 변이체의 결합 친화도는 37℃에서 Biacore T200 기기(GE Healthcare)를 사용하여 결정된다. 재조합 단백질 A/G(Pierce)를 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 사용하여 CM4 센서칩의 모든 플로우 셀에 고정시킨다. 항체 및 분석물을 7(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH7.4) 또는 5(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH5.8)으로 제조한다. 각 항체는 단백질 A/G에 의해 센서 표면상에 포획된다. 항체 포획량은 전형적으로 200 공명 단위(RU)를 목표로 한다. 혈청 유래 인간 C1s를 pH7.4에서 12.5, 50nM, 또는 pH5.8에서 50, 200nM, 또는 pH5.8에서 200 및 800nM로 주사한 후 해리시킨다. 각 사이클마다 10mM 글리신-HCl pH1.5를 사용하여 센서 표면을 재생한다. Biacore T200 Evaluation 소프트웨어, 버전 2.0(GE Healthcare)을 사용하여 1:1 결합 모델에 데이터를 처리하고 맞춤으로써, 결합 친화도를 결정한다. pH7.4에서 해리 영역 바로 다음에 pH5.8에서 추가 해리 영역을 통합한다. 5(+) 완충액에서의 해리 속도는 Scrubber 2.0(BioLogic Software) 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 맞춤으로써 결정된다.

대안적으로, pH7.4 및 pH5.8에서 히스티딘 치환 변이체의 결합 친화도는 37℃에서 Biacore T200 기기(GE Healthcare)를 사용하여 결정된다. 재조합 단백질 A/G(Pierce)를 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 사용하여 CM4 센서칩의 모든 플로우 셀상에 고정화한다. 항체 및 분석물을 7(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH7.4) 또는 5(+) 완충액(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 0.05% Tween 20, 0.005% NaN₃, pH5.8)로 제조한다. 각 항체는 단백질 A/G에 의해 센서 표면 상에 포획된다. 항체 포획량은 전형적으로 200 공명 단위(RU)를 목표로 한다. 혈청 유래 인간 C1s를 50nM에서 주사한 다음 해리시킨다. 각 사이클마다 10mM 글리신-HCl, pH1.5를 사용하여 센서 표면을 재생한다. Biacore T200 Evaluation 소프트웨어, 버전 2.0(GE Healthcare)을 사용하여 1:1 결합 모델에 맞추어 데이터를 처리하고 맞춤으로써, 결합 친화도를 결정한다. pH7.4에서 해리 영역 바로 다음에 pH5.8에서 추가 해리 영역을 통합한다. 5(+) 완충액에서의 해리 속도는 Scrubber 2.0(BioLogic Software) 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 맞춤으로써 결정된다.

일부 양태에 있어서, 필요에 따라 pH7.4의 해리 영역 바로 다음에 pH5.8의 추가 해리 영역을 통합한다. 5(+) 완충액에서의 해리 속도는 Scrubber 2.0(BioLogic Software) 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 맞춤으로써 결정할 수 있다.

2. 항체 단편

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은, 이에 한정되지 않지만, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv 및 scFv 단편, 및 후술하는 다른 단편을 포함한다. 특정 항체 단편에 대한 총설로서, Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)를 참조한다. scFv 단편의 총설로서, 예를 들어, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp.269-315 (1994);를 참조하고, 또한, WO 93/16185; 및 미국특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호를 참조한다. 구제 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프 잔기를 포함하고 생체 내 반감기가 길어진 Fab 및 F(ab')₂ 단편에 대한 논설로서 미국특허 제5,869,046호를 참조한다.

디아바디는 2가 또는 이중 특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)를 참조한다. 트리아바디(triabody) 및 테트라바디(tetrabody)도 Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에 기재되어 있다.

단일 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정의 양태에 있어서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다(Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들어, 미국특허 제6,248,516 B1호 참조).

항체 단편은, 이에 한정되지 않지만, 본 명세서에 기재된 완전 항체의 단백질 분해 소화뿐만 아니라, 재조합 숙주 세포(예를 들어, 대장균(E. coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하는 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다.

3. 키메라 항체 및 인간화 항체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는, 예를 들어 미국특허 제4,816,567호 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)에 기재되어 있다. 하나의 예시에 있어서, 키메라 항체는 비인간 가변 영역(예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 원숭이와 같은 비인간 영장류로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예시에 있어서, 키메라 항체는 모 항체로부터의 클래스 또는 서브클래스가 변경된 “클래스 스위치” 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.

특정의 양태에 있어서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비인간 항체는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 하나 이상의 가변 도메인을 포함하며, 상기 가변 도메인에서 HVR(예를 들어, CDR(또는 이의 일부분))은 비인간 항체로부터 유래되고, FR(또는 이의 일부분)은 인간 항체 서열로부터 유래한다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 일부 양태에 있어서, 인간화 항체 중의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체의 특이성 또는 친화도를 회복 또는 개선하기 위해, 비인간 항체(예를 들어, HVR 잔기로부터 유래된 항체)로부터 상응하는 잔기로 치환된다.

인간화 항체 및 이의 제조 방법은, 예를 들어 Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)에서 총설되고 있으며, 예를 들어, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)； Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 미국특허 제5,821,337호, 제7,527,791호, 제6,982,321호, 및 제7,087,409호; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)（특이성 결정 영역(specificity determining region: SDR) 그래프팅을 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)（“리서페이싱(resurfacing)”을 기재)； Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)（“FR 셔플링”을 기재)； 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링을 위한 “가이드 셀렉션”접근법을 기재)에 추가로 기재되어 있다.

인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 이에 한정되지 않지만: “베스트-핏(best-fit)” 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어, Sims et al., J. Immunol. 151:2296 (1993) 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위 그룹의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992) 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993) 참조); 인간 성숙(체세포 돌연변이) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(예를 들어, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참조); 및 FR 라이브러리의 스크리닝에서 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996) 참조)을 포함한다.

4. 인간 항체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당업계 공지된 다양한 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 인간 항체는 van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)에 일반적으로 기재되어 있다.

인간 항체는 항원성 챌린지에 반응하여 완전 인간 항체 또는 인간 가변 영역이 있는 완전 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 포함하며, 이는 내인성 면역 글로불린 유전자좌를 대체하거나, 또는 염색체 외부에 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 혼입된다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 얻는 방법의 총설은 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)를 참조한다. 또한, 예를 들어, XENOMOUSE™ 기술을 기재한 미국특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호; HUMAB(등록 상표) 기술을 기재한 미국특허 제5,770,429호; K-M MOUSE(등록 상표) 기술을 기재한 7,041,870호; 및 VELOCIMOUSE(등록 상표) 기술을 기재한 미국특허 출원공개 제2007/0061900호도 함께 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 완전 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들어, 상이한 인간 불변 영역과 조합하여 추가로 변형될 수 있다.

인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법으로도 제조할 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주는 기재되어 있다. (예를 들어, Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147:86 (1991) 참조) 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체도 Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에 기재되어 있다. 추가적인 방법으로는, 예를 들어, 미국특허 제7,189,826호(하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 제조를 기재), 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마를 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마(Trioma) 기술)도 Volllmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)에 기재되어 있다.

인간 항체는 또한 인간 유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로서 생성될 수 있다. 이러한 가변 도메인 서열은, 이어서 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술을 아래에 설명한다.

5. 라이브러리 유래 항체

본 발명의 항체는 원하는 하나 이상의 활성을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로서 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 이러한 라이브러리를 원하는 결합 특성을 갖는 항체에 대해 스크리닝하기 위한 다양한 방법이 해당 기술 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법들은, 예를 들어, Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에 총설되고 있으며, 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554；Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)； Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)； Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)； Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2):299-310 (2004)； Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004)； Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)； 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)에 추가로 기재되어 있다.

특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 개별적으로 클로닝되고, 무작위로 파지 라이브러리에서 재조합된 후, Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에 기재된 바와 같이, 항원 결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 단일 사슬 Fv(scFv) 단편으로서, 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 제시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요없이, 면역원에 대한 고친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)에 기재된 바와 같이, 나이브 레퍼토리를 (예를 들어, 인간으로부터) 클로닝하여, 면역화하지 않고 광범위한 비자가 및 자가항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, 나이브 라이브러리는 Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)에 기재된 바와 같이, 배열되지 않는 V-유전자 단편을 줄기세포로부터 클로닝하여, 초가변 CDR3 영역을 코드하고, 시험관 내에서 재배열을 달성하도록 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 이용함으로써 합성하여 제조할 수도 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재한 특허문헌은, 예를 들어: 미국특허 제5,750,373호, 및 미국특허 출원공개 제2005/0079574호, 제2005/0119455호, 제2005/0266000호, 제2007/0117126호, 2007/0160598호, 제2007/0237764호, 제2007/0292936호 및 제2009/0002360호를 포함한다.

인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본 명세서에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.

6. 다중특이성 항체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체는 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)이다. 다중특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정의 양태에 있어서, 결합 특이성 중 하나는 C1s에 대한 것이며, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정의 양태에 있어서, 이중특이성 항체는 C1s의 상이한 2개의 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이성 항체는 C1s를 발현하는 세포에 세포 독성제를 국소화하는 데 사용될 수 있다. 이중특이성 항체는 전장 항체로서 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.

다중특이성 항체를 제조하기 위한 기술은, 이에 한정되지 않지만, 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공발현(Milstein and Cuello, Nature 305:537 (1983), WO 93/08829 및 Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991) 참조) 및 “놉-인-홀(knob-in-hole)” 기술(예를 들어, 미국특허 제5,731,168호 참조)을 포함한다. 다중특이성 항체는 또한, 항체 Fc-헤테로 이량체 분자를 제조하기 위해 정전기 스티어링 효과(electrostatic steering effects)를 조작하는 것(WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교시키는 것(예를 들어, 미국특허 제4,676,980호, 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985) 참조); 이중특이성 항체를 생산하기 위해 류신 지퍼를 사용하는 것(예를 들어, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992) 참조); 이중특이성 항체 단편을 생산하기 위해 “디아바디” 기술을 사용하는 것(예를 들어, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 참조); 및 단쇄 Fv(scFv) 이량체를 사용하는 것(예를 들어, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및 예를 들어, Tutt et al. J. Immunol. 147:60 (1991)에 기재된 삼중특이성 항체를 제조하는 것에 의해 제조할 수 있다.

“옥토퍼스 항체”를 포함하는, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위가 있는 조작된 항체도 본 명세서에 포함된다(예를 들어, 미국특허 출원공개 제2006/0025576 A1호 참조).

본 명세서에서 항체 또는 단편은 또한 C1s뿐만 아니라 다른 상이한 항원에 결합하는 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 “듀얼 액팅(Dual Acting) Fab” 또는 “DAF”를 포함한다(예를 들어, 미국특허 출원공개 제2008/0069820호 참조).

7. 항체 변이체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코드하는 뉴클레오티드 서열 내로 적절한 변형을 도입하거나, 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열로 내의 잔기 결실, 및/또는 삽입, 및/또는 치환을 포함한다. 최종 생성물이 원하는 특징(예를 들어, 항원 결합)을 포함하는 것을 전제로, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 최종 생성물에 이르기 위해 수행될 수 있다.

a) 치환, 삽입 및 결실 변이체

특정의 양태에 있어서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이 도입의 목적 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환을 표 1의 “바람직한 치환”의 표제 아래에 나타낸다. 보다 실질적인 변경을 표 1의 “예시적인 치환”의 표제 아래에 제공하고, 아미노산 측쇄의 클래스에 관해 아래에서 추가로 설명한다. 아미노산 치환은 목적의 항체에 도입될 수 있고, 생성물은 예를 들어, 유지/개선된 항원 결합성, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC와 같은 원하는 활성에 대해 스크리닝될 수 있다.

아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 의해 그룹으로 나눌 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족성: Trp, Tyr, Phe.

비보존적 치환은 이러한 클래스의 한 멤버를 다른 클래스의 것으로 교체하는 것을 수반한다.

치환 변이체의 하나의 유형은 모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된, 생성된 변이체는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성(예를 들어, 향상된 친화도, 감소된 면역원성)에서 변형(예를 들어, 개선)을 갖고/갖거나, 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화도 성숙 항체이며, 예를 들어 본 명세서에 기재된 것과 같은 파지-디스플레이 기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 적절하게 제조될 수 있다. 간략히 설명하면, 하나 이상의 HVR 잔기를 돌연변이시키고, 변이체 항체를 파지상에 제시하고, 특정 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝한다.

개변(예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체의 친화도를 개선하기 위해 HVR에서 수행될 수 있다. 이러한 개변은 HVR “핫스팟”, 즉 체세포 성숙 과정 동안 빈번하게 돌연변이가 일어나는 코돈에 의해 코드되는 잔기(예를 들어, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008) 참조) 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 수행될 수 있고, 생성된 변이체 VH 또는 VL을 결합 친화도에 대해 시험할 수 있다. 2차 라이브러리로부터의 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙이, 예를 들어, Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 양태에 있어서, 다양성은 임의의 다양한 방법(예를 들어, 에러-프론(error-prone) PCR, 쇄 셔플링 또는 올리고뉴클레오티드 지향 돌연변이 도입)에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자에 도입된다. 그 다음, 2차 라이브러리가 생성된다. 이 라이브러리는 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 동정하기 위해 스크리닝된다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 HVR 잔기(예를 들어, 동시에 4-6개 잔기)를 무작위화하는 HVR 지향 접근법을 포함한다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는, 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 도입 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.

특정의 양태에 있어서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 개변이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한 하나 이상의 HVR 내에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 개변(예를 들어, 본 명세서에 제공된 보존적 치환)이 HVR에서 수행될 수 있다. 이러한 개변은, 예를 들어, HVR의 항원 접촉 잔기의 외부일 수 있다. 상기 변이체 VH 및 VL 서열의 특정의 양태에 있어서, 각 HVR은 개변되지 않았거나, 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 포함한다.

돌연변이 도입을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 확인하는 데 유용한 방법은 Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 기재된 “알라닌 스캐닝 돌연변이 도입”으로 불리는 것이다. 이 방법에서, 하나의 잔기 또는 일군의 표적 잔기(예를 들어, 아르기닌, 아스파르트산, 히스티딘, 라이신 및 글루탐산과 같은 하전된 잔기)가 확인되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정한다. 이러한 초기 치환에 대해 기능적 감수성을 나타내는 아미노산 위치에 추가 치환이 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해, 항원 항체 복합체의 결정 구조가 분석될 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 치환 후보로서 표적화될 수 있거나, 치환 후보로부터 배제될 수 있다. 변이체는 이들이 원하는 특성을 포함하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.

아미노산 서열의 삽입은 서열 내로의 단일 또는 복수의 아미노산 잔기의 삽입뿐만 아니라, 아미노- 및/또는 카복실-말단에서 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드의 길이 범위에서의 융합도 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단에 메티오닐 잔기가 있는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는, 항체의 N- 또는 C-말단에 효소(예를 들어, ADEPT를 위한) 또는 항체의 혈장 반감기를 증가시키는 폴리펩티드를 융합시킨 것을 포함한다.

b) 글리코실화 변이체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 개변된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위를 생성 또는 제거하도록 아미노산 서열을 개변시킴으로써 편리하게 달성될 수 있다.

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부가되는 탄수화물이 개변될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생성된 천연 항체는 전형적으로 분지된 이분지형 올리고당을 포함하며, 상기 올리고당은 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-결합에 의해 부가된다. 예를 들어, Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)를 참조한다. 올리고당은 예를 들어 만노오스, N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산과 같은 다양한 탄수화물뿐만 아니라 이분지형 올리고당 구조의 “줄기” 내의 GlcNAc에 부가된 푸코오스를 포함한다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형이 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 수행될 수 있다.

하나의 양태에 있어서, Fc 영역에 (직접 또는 간접적으로) 부가된 푸코오스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체 내의 푸코오스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65%, 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코오스의 양은, 예를 들어 WO2008/077546에 기재된 바와 같이, MALDI-TOF 질량분석법에 의해 측정된, Asn297에 부가된 모든 당 구조체(예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고-만노오스 구조체)의 합계에 대한 Asn297에서 당 사슬 내의 푸코오스의 평균량을 계산함으로써 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 297위에 위치하는 아스파라긴 잔기를 말한다(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링); 그러나, 항체들에서 미미한 서열의 다양성으로 인해, Asn297은 297위의 약 ±3 아미노산 상위 또는 하위, 즉 294위 내지 300위 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국특허 출원공개 US2003/0157108(Presta, L.); US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조한다. “탈푸코실화” 또는 “푸코오스 결핍” 항체 변이체에 대한 간행물의 예는 US2003/0157108; WO2000/61739; WO2001/29246; US2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US2004/0110282; US2004/0109865; WO2003/085119; WO2003/084570; WO2005/035586; WO2005/035778; W02005/053742; W02002/031140; Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87:614 (2004)를 포함한다. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예로는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국특허 출원번호 제2003/0157108 A1호, Presta, L; 및 WO2004/056312 A1, Adams et al., 특히, 실시예 11) 및 녹아웃 세포주, 예를 들어 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포(예를 들어, Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87:614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.

예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부가된 이분지형 올리고당이 GlcNAc에 의해 이분되어 있는, 이분된 올리고당을 갖는 항체 변이체가 추가로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는, 예를 들어 WO2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국특허 제6,602,684호(Umana et al.); 및 US2005/0123546(Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부가된 올리고당에 적어도 하나의 갈락토오스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는 예를 들어 WO1997/30087(Patel et al.); WO1998/58964(Raju, S.); 및 WO1999/22764(Raju, S.)에 기재되어 있다.

c) Fc 영역 변이체

특정의 양태에 있어서, 하나 이상의 아미노산 개변이 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 개변(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4의 Fc 영역)을 포함할 수 있다.

특정의 양태에 있어서, 전부는 아니지만 일부 이펙터 기능을 보유하는 항체 변이체도 본 발명의 고려 내에 있으며, 상기 이펙터 기능은 항체를 그의 생체 내 반감기가 중요하지만, 특정 이펙터 기능(보체 및 ADCC 등)은 불필요하거나 유해한 경우의 적용에 바람직한 후보로 하는 것이다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/결핍을 확인하기 위해, 시험관 내 및/또는 생체 내 세포 독성 측정을 수행할 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 측정은 항체가 FcγR 결합성이 부족하지만(따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합능을 유지하는 것을 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포상의 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 p.464의 표 3에 정리되어 있다. 목적 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관 내 검정의 비제한적인 예가 미국특허 제5,500,362호(예를 들어, Hellstrom I. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 참조) 및 Hellstrom, I. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 미국특허 제5,821,337호(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조)에 기재되어 있다. 대안으로, 비방사성 검정법이 사용될 수 있다(예를 들어, 플로우 사이토메트리를 위한 ACT1™ 비방사성 세포 독성 검정법(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96(등록 상표) 비방사성 세포 독성 검정법(Promega, Madison, WI) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 부가적으로, 목적 분자의 ADCC 활성은 생체 내에서, 예를 들어 Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 기재된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다. 또한, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되는 것을 확인하기 위해, C1q 결합 검정을 수행해도 된다. 예를 들어, WO2006/029879 및 WO2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 또한 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004) 참조). 또한, FcRn 결합 및 생체 내 클리어런스/반감기 결정은 해당 기술 분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다(예를 들어, Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).

감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329의 하나 이상이 치환된 것을 포함한다(미국특허 제6,737,056호). 이러한 Fc 변이체는 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 “DANA” Fc 변이체(미국특허 제7,332,581호)를 포함하는, 아미노산의 265위, 269위, 270위, 297위 및 327위의 2개 이상이 치환된 Fc 변이체를 포함한다.

FcR에 대한 결합이 향상 또는 감소된 결합성을 수반하는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 미국특허 제6,737,056호; WO2004/056312 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001) 참조)

특정의 양태에 있어서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 또는 복수의 아미노산 치환(예를 들어, Fc 영역의 298위, 333위 및/또는 334위(EU 넘버링에서의 잔기)에서의 치환)을 수반하는 Fc 영역을 포함한다.

일부 양태에 있어서, 예를 들어 미국특허 제6,194,551호, WO 99/51642 및 Idusogie et al., J. Immunol. 164:4178-4184 (2000)에 기재된 바와 같이, 개변된(즉, 증가했거나 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포 독성(CDC)을 초래하는 개변이 Fc 영역에서 이루어진다.

반감기가 길어지고 신생아형(neonatal) Fc 수용체(FcRn: 모체의 IgG류를 태아로 이행시키는 역할을 담당함)(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1876) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))에 대한 결합성이 향상된 항체가 US2005/0014934 A1(Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 Fc 영역의 FcRn에 대한 결합성을 향상시키는 하나 이상의 치환을 수반하는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상이 치환(예를 들어, Fc 영역 잔기 434의 치환(미국특허 제7,371,826호))된 것을 포함한다.

Fc 영역 변이체의 다른 예에 대해서는, Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 미국특허 제5,648,260호; 미국특허 제5,624,821호; 및 WO94/29351을 참조한다.

d) 시스테인 조작 항체 변이체

특정의 양태에 있어서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작 항체(예를 들어, “thioMAb”)를 생성하는 것이 바람직 할 것이다. 특정의 양태에 있어서, 치환된 잔기는 항체의 접근 가능한 부위에서 발생한다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올기가 항체의 접근 가능한 부위에 위치되고, 반응성 티올기는 항체를 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티 등의 다른 모이어티에 접합하여, 본 명세서에서 추가로 설명하는 면역 접합체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205(Kabat 넘버링); 중쇄의 A118(EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 넘버링). 시스테인 조작 항체는, 예를 들어 미국특허 제7,521,541호에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.

e) 항체 유도체

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 항체는 해당 기술 분야에 공지되고 용이하게 입수 가능한 추가의 비단백질 모이어티를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는, 이에 한정되지 않지만, 수용성 중합체를 포함한다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는, 이에 한정되지 않지만, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸 셀룰로오스, 덱스트란, 폴리바이닐알콜, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머 중 하나), 및 덱스트란 또는 폴리(n-바이닐피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리바이닐 알콜, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에 대한 안정성 때문에 제조에 유리할 것이다. 중합체는 임의의 분자량일 수도 있고, 분지되거나, 분지되지 않을 수도 있다. 항체에 첨가되는 중합체의 수는 다양할 수 있고, 둘 이상의 중합체가 첨가되는 경우, 이들은 동일한 분자이거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 종류는, 이에 한정되지 않지만, 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건하에서 치료에 사용되는지 여부 등에 대한 고려에 따라 결정할 수 있다.

또 다른 양태에 있어서, 방사선에 노출시킴으로써 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질 모이어티와 항체의 접합체가 제공된다. 하나의 양태에 있어서, 비단백질 모이어티는 탄소 나노튜브이다(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수도 있고, 이에 한정되는 것은 아니지만, 통상의 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질 모이어티에 인접한 세포는 사멸시키는 온도까지 비단백질 모이어티를 가열하는 파장을 포함한다.

B. 재조합 방법 및 조성물

예를 들어, 미국특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같이, 항체는 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 제조될 수 있다. 하나의 양태에 있어서, 본 명세서에 기재된 항C1s 항체를 코드하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코드할 수 있다. 추가의 양태에 있어서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 또 다른 양태에 있어서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이러한 하나의 양태에 있어서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 제 1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 제 2 벡터를 포함한다(예를 들어, 형질전환된다). 하나의 양태에 있어서, 숙주 세포는 진핵성(예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포) 또는 림프구 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp2/0 세포)이다. 하나의 양태에 있어서, 항C1s 항체의 발현에 적합한 조건하에서, 상기 기재된 바와 같이 코드하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하고, 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 회수하는 것을 포함하는 항C1s 항체를 제조하는 방법이 제공된다.

항C1s 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어, 전술한 것과 같은 항체를 코드하는 핵산을 단리하고, 숙주 세포에서의 추가의 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상적인 과정을 이용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코드하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 시퀀싱될 것이다.

항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현과 관련하여, 예를 들어, 미국특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참조한다. (또한, 대장균에서의 항체 단편의 발현에 대해 기재된 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp.245-254 참조). 발현 후, 항체는 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.

원핵 생물에 더하여, 글리코실화 경로가 “인간화”되어 부분적 또는 완전한 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생산을 초래하는 균류 및 효모 균주를 포함하는, 사상균 또는 효모와 같은 진핵성 미생물이 항체-코딩 벡터의 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)를 참조한다.

다세포 생물체(무척추 생물 및 척추 생물)에서 유래된 것도 글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포이다. 무척추 생물 세포의 예로는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와의 접합, 특히 스포돕데라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질 감염에 사용되는 수많은 바큘로바이러스 균주가 확인되어 있다.

식물 세포 배양물도 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 미국특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호(트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIES™ 기술을 기재함)를 참조한다.

척추동물 세포도 숙주로 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 것이다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1주(COS-7); 인간 배아성 신주(예를 들어, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)에 기재된 293 또는 293 세포); 베이비 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)에 기재된 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부암 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK); 버팔로계 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방 종양(MMT 060562); 예를 들어, Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 총설로서, 예를 들어 Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp.255-268 (2003)를 참조한다.

pH 의존적 특성을 갖는 항체는, 예를 들어 WO 2009/125825에 기재된 바와 같은 스크리닝 방법 및/또는 돌연변이 유발 방법을 사용함으로써 획득될 수 있다. 상기 스크리닝 방법은 특정 항원에 특이적인 항체 집단 내에서 pH 의존적 결합 특성을 갖는 항체를 동정하는 임의의 단계를 포함할 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 상기 스크리닝 방법은 산성 pH 및 중성 pH 모두에서 초기 항체 집단 내의 개별 항체의 하나 이상의 결합 파라미터(예를 들어, KD 또는 kd)를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 항체의 결합 파라미터는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명, 또는 특정 항원에 대한 항체의 결합 특성의 정량적 또는 정성적 평가를 가능하게 하는 임의의 다른 분석 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 스크리닝 방법은 2 이상의 산성 KD/중성 KD 비로 항원에 결합하는 항체를 동정하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 스크리닝 방법은 2 이상의 산성 kd/중성 kd 비로 항원에 결합하는 항체를 동정하는 것을 포함할 수 있다.

또 다른 양태에 있어서, 돌연변이 유발 방법은 항원에 대한 항체의 pH 의존적 결합을 향상시키기 위해 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 내에 아미노산의 결실, 치환 또는 부가를 도입하는 것을 포함할 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 돌연변이 유발은 항체의 하나 이상의 가변 도메인 내, 예를 들어 하나 이상의 HVR(예를 들어, CDR) 내에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이 유발은 항체의 하나 이상의 HVR(예를 들어, CDR) 내의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 돌연변이 유발은 항체의 적어도 하나의 HVR(예를 들어, CDR) 내의 하나 이상의 아미노산을 히스티딘으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 특정의 양태에 있어서, “증가된 pH 의존적 결합”은 변이형 항체가 돌연변이 유발 이전의 원래 “모” 항체(즉, pH 의존성이 낮은 항체)보다 큰 산성 KD/중성 KD 비, 또는 큰 산성 kd/중성 kd 비를 나타내는 것을 의미한다. 특정의 양태에 있어서, 변이형 항체는 2 이상의 산성 KD/중성 KD 비를 갖는다. 대안적으로, 변이형 항체는 2 이상의 산성 kd/중성 kd 비를 갖는다.

폴리클로날 항체는 바람직하게는 관련 항원 및 아쥬반트(adjuvant)의 복수회의 피하(sc) 또는 복강 내(ip) 주사에 의해 동물에서 산생된다. 관련된 항원은 면역화되는 종에서 면역원성인 단백질, 예컨대 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에, 이작용성 물질 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스터(시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시 석신이미드(라이신 잔기를 통한), 글루타르알데하이드, 석신산 무수물, SOCl2 또는 R1N=C=NR(여기서 R 및 R1은 상이한 알킬기임)을 사용하여 접합하는 것이 유용할 수 있다.

동물(대개 비인간 포유동물)은, 예를 들어 100μg 또는 5μg의 단백질 또는 접합체(토끼 또는 마우스에 대해)를 3배 부피의 프로인드 완전 아쥬반트(Freund’s complete adjuvant)와 조합하여 용액을 여러 부위에 피내 주사함으로써, 항원, 면역원성 접합체 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1개월 후, 다수 부위에 피하 주사하여 동물을 초기 양의 1/5 내지 1/10의, 프로인드 완전 아쥬반트 중 펩티드 또는 접합체로 추가 면역화시킨다. 7 내지 14일 후, 동물로부터 채혈하고, 그 혈청을 항체 역가에 대해 검정한다. 역가가 안정기에 도달할 때까지 동물을 추가 면역화한다. 바람직하게는, 동일한 항원이지만 다른 단백질에 및/또는 다른 가교 시약을 통해 접합된 접합체를 사용하여 동물을 추가 면역화한다. 접합체는 재조합 세포 배양물에서 단백질 융합체로서 제조될 수도 있다. 또한, 면역 반응을 향상시키기 위해 명반(alum)과 같은 응집제가 적합하게 사용된다.

모노클로날 항체는 실질적으로 동종의 항체의 집단으로부터 얻는데, 즉, 해당 집단을 구성하는 개개의 항체는 미미한 양으로 존재할 수 있는 자연적으로 발생 가능한 돌연변이 및/또는 번역 후 수식(예를 들어, 이성질체화, 아마이드화)을 제외하고는 동일하다. 따라서 수식어 “모노클로날”은 별개의 항체의 혼합물이 아니라는 항체의 특징을 나타낸다.

예를 들어, 모노클로날 항체는 Kohler et al., Nature 256(5517):495-497 (1975)에 처음 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적합한 숙주 동물, 예를 들어 햄스터를 본 명세서에 기재된 바와 같이 면역화하여, 면역화에 사용되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하거나 제조할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다.

면역화제는 전형적으로 항원 단백질 또는 이의 융합 변이체를 포함한다. 일반적으로 인간 기원 세포가 필요한 경우 말초 혈액 림프구(PBL)가 사용되고, 비인간 포유동물 공급원이 필요한 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 그 후, 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여, 불멸화 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp.59-103).

불멸화 세포주는 일반적으로 형질 전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 래트 또는 마우스의 골수종 세포주가 이용된다. 이러한 방식으로 제조된 하이브리도마 세포는 바람직하게는 비융합된 모 골수종 세포의 증식 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 파종되고 증식된다. 예를 들어, 모 골수종 세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 부족한 경우, 하이브리도마용 배양 배지는 전형적으로, HGPRT 결핍 세포의 성장을 방해하는 물질인 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이다.

바람직한 불멸화 골수종 세포는 효율적으로 융합되고, 선택된 항체 생산 세포에 의한 항체의 안정한 높은 수준의 제조를 돕고, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 세포이다. 그 중에서도 뮤린(murine)의 골수종 균주, 예를 들어 미국 캘리포니아주 샌디에고의 Salk Institute Cell Distribution Center에서 입수할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양에서 유래 한 것, 및 미국 버지니아주 마나사스의 American Type Culture Collection에서 입수할 수 있는 SP-2 세포(및 이의 유도체, 예를 들어 X63-Ag8-653)가 바람직하다. 인간 모노클로날 항체의 제조를 위해, 인간 골수종 세포주 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주도 기재되어 있다(Kozbor et al., J. Immunol. 133(6):3001-3005 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, pp. 51-63 (1987)).

하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를 항원에 대한 모노클로날 항체의 제조에 대해 검정된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 제조된 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전 또는 시험관 내 결합 검정, 예를 들어 방사면역 측정법(RIA) 또는 효소결합 면역흡착 측정법(ELISA)에 의해 결정된다. 이러한 기법 및 검정은 해당 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 결합 친화도는 Munson, Anal. Biochem. 107(1):220-239 (1980)의 스케쳐드 분석에 의해 결정될 수 있다.

원하는 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 동정된 후, 클론을 한계 희석법으로 서브클로닝하고 표준 방법(Goding, 이전)에 의해 성장시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 더욱이, 하이브리도마 세포는 포유동물 내의 종양으로서 생체 내에서 성장할 수 있다.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 배양 배지, 복수, 또는 혈청으로부터, 예를 들어 단백질 A-세파로오스, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화도 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 방법에 의해 적절하게 분리된다.

C. 검정

본 명세서에 제공된 항C1s 항체는 해당 기술 분야에 공지된 다양한 검정법에 의해 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인되거나, 스크리닝되거나, 특징지어질 수 있다.

1. 결합 검정 및 기타 검정

하나의 측면에 있어서, 본 발명의 항체는 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 등의 공지된 방법에 의해 항원 결합 활성에 대해 시험된다.

또 다른 측면에 있어서, 경합 검정은 본 명세서에 기재된 임의의 항C1s 항체와 C1s에의 결합에 대해 경합하는 항체를 동정하기 위해 사용될 수 있다. 특정의 양태에 있어서, 이러한 경합 항체가 과량으로 존재하는 경우, 이는 C1s에 대한 참조 항체의 결합을 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 그 이상으로 차단한다(예를 들어, 감소시킨다). 특정의 양태에 있어서, 이러한 경합 항체는 본 명세서에 기재된 임의의 항C1s 항체에 의해 결합된 동일한 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체구조 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하는 상세한 예시적인 방법은 Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에 제공되어 있다. 특정의 양태에 있어서, 이러한 경합 검정은 중성 pH 조건에서 수행될 수 있다.

예시적인 경합 검정에 있어서, 고정화된 C1s는, C1s에 결합하는 제 1 표지 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들 중 하나) 및 C1s에의 결합에 관해 제 1 항체와 경합하는 능력이 시험된 제 2 비표지 항체를 포함하는 용액에서 인큐베이션된다. 제 2 항체는 하이브리도마 상청액에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정화된 C1s는 제 1 표지 항체를 포함하지만 제 2 비표지 항체를 함유하지 않는 용액에서 인큐베이션된다. 제 1 항체의 C1s에 대한 결합을 허용하는 조건하에서 인큐베이션한 후, 초과의 미결합 항체를 제거하고, 고정화된 C1s에 결합된 표지의 양을 측정한다. 고정화된 C1s에 결합된 표지의 양이 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서 실질적으로 감소하는 경우, 이는 제 2 항체가 C1s에의 결합에 관해 제 1 항체와 경합한다는 것을 보여준다. Harlow and Lane (1988), Antibodies: A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)를 참조한다.

또 다른 측면에 있어서, 본 명세서에 제공된 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나, 또는 본 명세서에 제공된 항C1s 항체와 C1s에의 결합에 관해 경합하는 항체는 샌드위치 검정을 사용하여 확인된다. 샌드위치 검정은 2개의 항체를 사용하는 것을 포함하며, 상기 항체는 각각 검출하고자 하는 단백질의 상이한 면역원성 부분 또는 에피토프에 결합할 수 있다. 샌드위치 검정에서, 고체 지지체상에 고정화된 제 1 항체가 시험 샘플 분석물에 결합된 후, 제 2 항체가 분석물에 결합되어 불용성의 3 부분 복합체가 형성된다. David & Greene, 미국특허 제4,376,110호를 참조한다. 제 2 항체는 그 자체가 검출 가능한 모이어티로 표지될 수 있고(직접 샌드위치 검정), 검출 가능한 모이어티로 표지된 항면역글로불린 항체를 사용하여 측정될 수 있다(간접 샌드위치 검정). 예를 들어, 샌드위치 검정 중 하나는 ELISA 검정이고, 이 경우 검출 가능한 모이어티는 효소이다. 본 명세서에 제공된 항C1s 항체와 동시에 C1s에 결합하는 항체는 상기 항C1s 항체와 상이한 에피토프에 결합하는 항체인 것으로 결정될 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 제공된 항C1s 항체와 동시에 C1s에 결합하지 않는 항체는 상기 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나, 또는 상기 항C1s 항체와 C1s에의 결합에 관해 경합하는 항체인 것으로 결정될 수 있다.

2. 활성 검정

하나의 측면에 있어서, 생물학적 활성을 갖는 항C1s 항체를 동정하기 위한 검정이 제공된다. 생물학적 활성은 고전 경로의 활성화를 차단하고, 상기 경로의 활성화에 의해 생성된 절단 산물인 C2a, C2b, C3a, C3b, C4a, C4b, C5a 및 C5b의 생성을 차단하는 것을 포함할 수 있다. 생체 내 및/또는 시험관 내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 또한 제공된다.

특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 이러한 생물학적 활성에 대해 시험된다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 닭 적혈구 세포(cRBC) 항원에 대한 항체에 의해 감작된 cRBC의 보체 매개성 용혈을 억제하는 그의 능력에 대해 평가될 수 있다. 보체 단백질의 공급원으로서 인간 혈청을 사용하면, 방출된 헤모글로빈의 양을 분광 광도법에 의해 측정함으로써 본 발명의 항체의 활성을 결정할 수 있다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 항체는 정제된 C4(C2가 아님)의 활성화 C1s 매개 절단을 억제하는 능력에 대해 평가될 수 있다. 항체의 이러한 활성은 절단된 C4 또는 C2의 양을 겔 전기영동법 또는 웨스턴 블롯법에 의해 측정함으로써 결정된다. 절단된 C4 또는 C2는 천연형의 비절단 형태와 비교하여, 그의 작은 분자량에 의해 검출될 수 있다.

3. 항원(C1s) 제거를 평가하기 위한 마우스 PK 시험

특정의 양태에 있어서, 본 발명의 항체에 의한 항원(예를 들어, 인간 C1s(hC1s로도 지칭됨))의 제거의 촉진은 생체 내에서(예를 들어, 마우스에서) 다음과 같이 평가할 수 있다.

고성능 액체 크로마토그래피-전기분무 탠덤 질량 분석(LC/ESI-MS/MS)에 의한 마우스 혈장 중 C1s 농도의 측정

마우스 혈장 중 hC1s(또는 항C1s 항체)의 농도는 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정될 수 있다. 규정된 양의 hC1s(또는 항C1s 항체)를 마우스 혈장에서 혼합 및 희석하여 교정 스탠다드를 제조한다. 교정 스탠다드 및 혈장 샘플을, 예를 들어 중탄산 암모늄에서 유레아, 다이티오트레이톨 및 라이소자임(달걀 흰자)과 혼합하고 인큐베이션한다. 그 다음, 아이오도아세트아마이드를 첨가하고 어두운 곳에서 인큐베이션한다. 이어서, 중탄산 암모늄 중의 트립신을 첨가하고 인큐베이션한다. 마지막으로, 트라이플루오로아세트산을 첨가하여 임의의 잔류 트립신을 불활성화 시킨다. 이 샘플을 LC/ESI-MS/MS로 분석한다. 인간 C1s-특이적 펩티드(예를 들어, LEEVPEGR)를 선택 반응 모니터링(SRM)으로 모니터링한다. SRM 전환은 인간 C1s의 경우 [M+2H]2+(m/z 456.8) 내지 y6 이온(m/z 686.4)일 수 있다. 교정 곡선은 농도에 대해 플롯된 피크 면적을 사용하는 가중(1/x2) 선형 회귀에 의해 생성될 수 있다. 이 교정 곡선으로부터 마우스 혈장 중의 농도를 계산한다.

마우스에서 항C1s 항체를 투여한 후의 총 hC1s의 약물 동태의 평가

hC1s, hC1q, 또는 항C1s 항체의 생체 내 약물 동태는 항원을 단독으로 또는 항C1s 항체와 함께 마우스에 투여한 후에 평가될 수 있다. hC1s(등)를 포함하는 용액/혼합물을 마우스에 정맥 내 주사한다. 항원 용액을 투여한 후, 동일한 개체에게 동일한 방식으로 항C1s 항체 용액을 즉시 투여한다. 용량 설정은 거의 모든 hC1s가 혈중에서 결합 형태가 되도록 적절하게 설계될 수 있다. 혈액은 시간의 경과에 따라, 예를 들어 주사 후 5분, 30분, 2시간, 7시간, 3일, 7일, 14일, 21일 및 28일에 수집된다. 혈액을 즉시 원심 분리하여 혈장 샘플을 분리한다. hC1s(등)의 혈장 농도는 각 샘플 수집 시점에서 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정된다. hC1s(등)의 PK 파라미터는 비구획 분석에 의해 추정된다. 예를 들어, 항C1s 항체에 대한 hC1s CL(클리어런스) 비를 계산한다. 이 비가 높으면, hC1s 제거가 더 촉진될 수 있음을 의미한다.

D. 면역 접합체

본 발명은 또한 하나 이상의 세포 독성제(예를 들어, 화학요법제 또는 약물), 증식 억제제, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소에 접합된 본 명세서의 항C1s 항체를 포함하는 면역 접합체를 제공한다.

하나의 양태에 있어서, 면역 접합체는 항체가 메이탄시노이드(maytansinoid)(미국특허 제5,208,020호, 제5,416,064호 및 유럽특허 제0425235 B1호 참조); 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호, 및 제7,498,298호 참조)와 같은 아우리스타틴; 돌라스타틴; 칼리키아마이신 또는 이의 유도체(미국특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호 및 제5,877,296호; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998) 참조); 다우노마이신 또는 독소루비신과 같은 안트라사이클린(Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); 및 미국특허 제6,630,579호 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀과 같은 탁산; 트리코테신; 및 CC1065를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 하나 이상의 약물에 접합된 항체-약물 접합체(ADC)이다.

또 다른 양태에 있어서, 면역 접합체는 본 명세서에 기재된 효소적으로 활성인 독소 또는 이의 단편과 접합된 항체를 포함하며, 독소 또는 단편은 이에 한정되지 않지만, 디프테리아 A쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A쇄(녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A쇄, 아브린 A쇄, 모데신 A쇄, 알파-살신, 유동(Aleurites fordii) 단백질, 다이안틴(dianthin) 단백질, 미국 자리공(Phytolacca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 여주(Momordica charantia) 억제제, 커신, 크로틴, 비누풀(Saponaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테신을 포함할 수 있다.

또 다른 양태에 있어서, 면역 접합체는 방사성 접합체를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본 명세서에 기재된 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성 접합체의 제조에 이용할 수 있다. 예로는 ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²P, ²¹²Pb 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성 접합체를 검출에 사용하는 경우, 방사성 접합체는 섬광조영술 검사용 방사성 원자(예를 들어, Tc-99m 또는 ¹²³I), 또는 핵자기 공명(NMR) 이미지(자기 공명 이미지, MRI로도 알려짐)를 위한 스핀 표지(예를 들어, 여기에서도 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간, 또는 철)를 포함할 수 있다.

항체와 세포 독성제의 접합체는 다양한 이작용성 단백질 커플링제를 사용하여 제조될 수 있고, 상기 커플링제는 예를 들어 N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이싸이오)프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 이미노싸이올란(IT), 이미드에스터의 이작용성 유도체(예를 들어, 다이메틸아디프이미드산 HCl), 활성 에스터(예를 들어, 수베르산 다이석신이미딜), 알데하이드(예를 들어, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스(p-아지도벤조일)헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예를 들어, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소사이아아네이트(예를 들어, 톨루엔 2,6-다이아이소사이아네이트) 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들어, 1,5-다이플루오로-2,4-다이나이트로벤젠)이다. 예를 들어, 리신 면역 독소는 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14로 표지된 1-아이소싸이오사이아나토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성 핵종의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. WO94/11026를 참조한다. 링커는 세포 내에서 세포 독성 약물의 방출을 촉진하는 “절단가능한 링커”일 수 있다. 예를 들어, 산 불안정성 링커, 펩티다아제 감수성 링커, 광 불안정성 링커, 다이메틸 링커 또는 다이설파이드 함유 링커(Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.

본 명세서의 면역 접합체 또는 ADC는 (예를 들어, 미국 일리노이주 락포드 소재의 Pierce Biotechnology로부터) 상업적으로 입수 가능한 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC 및 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-바이닐설폰)벤조산)를 포함하나, 이에 한정되지 않는 가교제를 사용하여 제조된 접합체를 명시적으로 고려하지만, 이에 한정되지 않는다.

E. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물

특정의 양태에 있어서, 본 명세서에 제공된 임의의 항C1s 항체는 생물학적 샘플에서 C1s의 존재를 검출하는 데 유용하다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “검출”은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 특정의 양태에 있어서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직, 예를 들어 혈청, 전혈, 혈장, 생검 샘플, 조직 샘플, 세포 현탁액, 타액, 가래, 구강액, 뇌척수액, 양수, 복수, 모유, 초유, 유선 분비물, 림프액, 소변, 땀, 눈물, 위액, 활액, 복막액, 안과용 렌즈액 또는 점액을 포함한다.

하나의 양태에 있어서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항C1s 항체가 제공된다. 추가의 측면에 있어서, 생물학적 샘플에서 C1s의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정의 양태에 있어서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 항C1s 항체와 생물학적 샘플을 C1s에 대한 항C1s 항체의 결합이 허용되는 조건하에서 접촉시키고, 항C1s 항체와 C1s의 사이에 복합체가 형성되었는지 여부를 검출하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 시험관 내 방법 또는 생체 내 방법일 수 있다. 하나의 양태에 있어서, 항C1s 항체는, 예를 들어, C1s가 환자의 선택을 위한 바이오마커인 경우, 항C1s 항체를 사용하는 치료에 적합한 대상을 선택하기 위해 사용된다.

본 발명의 항체를 이용하여 진단될 수 있는 예시적인 장애로는, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증, 아나필락시스, 은친화 과립성 치매(argyrophilic grain dementia), 관절염(예를 들어, 류마티스 관절염), 천식, 죽상 동맥 경화증, 비정형 용혈-요독 증후군, 자가면역 질환, 바라퀘 시몬스 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트병(Behcet's disease), 영국형 아밀로이드 혈관병증(British type amyloid angiopathy), 수포성 유사천포창, 버거씨병(Buerger's disease), C1q 신경병증, 암, 극증형 항인지질 항체 증후군(catastrophic antiphospholipid syndrome), 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 한랭응집소증(cold agglutinin disease), 피질기저핵변성(corticobasal degeneration), 크로이츠펠트 야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 크론병(Crohn's disease), 한랭글로불린혈증성 혈관염(cryoglobulinemic vasculitis), 권투선수 치매(dementia pugilistica), 루이소체 치매(dementia with Lewy Bodies: DLB), 석회화를 수반하는 확산성 신경원섬유변화병(diffuse neurofibrillary tangles with calcification), 원판상 홍반성 루푸스(Discoid lupus erythematosus), 다운증후군(Down's syndrome), 국소분절 사구체 경화증, 형식적 사고장애, 전두측두엽 치매(FTD), 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매, 전두측두엽 변성(frontotemporal lobar degeneration), 게스트르만 슈트라우슬러 샤인커병(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease), 길랭-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 할러포르덴-스파츠병(Hallervorden-Spatz disease), 용혈성 요독 증후군, 유전성 혈관 부종, 저인산효소증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체 질환, 봉입체 근염(inclusion body myositis), 감염증(예를 들어, 박테리아(예컨대, 수막염균 또는 연쇄상 구균), 바이러스(예컨대, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)) 또는 기타 감염 병원체에 의해 유발되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 손상, 경미한 인지 장애, 면역성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 몰리브덴 보조인자 결핍증(MoCD) A형, 막증식성 사구체 신염(MPGN) I, 막증식성 사구체 신염(MPGN) II(고밀도 침착병(dense deposit disease)), 막성 신염, 다발경색성 치매, 루푸스(예컨대, 전신성 홍반성 루푸스)(SLE)), 사구체 신염, 가와사키병(Kawasaki disease), 다초점성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증근무력증, 심근경색, 근강직성 이영양증, 시신경척수염, 니만-픽병 C형(Niemann-Pick disease type C), 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환(non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangles), 파킨슨병, 치매를 동반한 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창(Pemphigus vulgaris), 픽병, 뇌염 후 파킨슨병, 다발근염, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 생산성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 치매(Tangle only dementia), 이식편 거부, 혈관염(예컨대, ANCA 관련 혈관염), 베그너 육아종증(Wegner's granulomatosis), 겸상 적혈구증, 한랭글로불린혈증, 혼합성 한랭글로불린 혈증, 본태성 혼합성 한랭글로불린혈증, II형 혼합성 한랭글로불린혈증, III형 혼합성 한랭글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 수포성 유사천포창, 단순 수포성 표피박리증(Epidermolysis bullosa acquisita), 지연성 용혈 수혈 반응(delayed hemolytic transfusion reaction), 저보체혈증성 두드러기 유사 혈관염 증후군(hypocomplementemic urticarial vasculitis syndrome), 위수정체 수포각막병증(pseudophakic bullous keratopathy) 및 혈소판 수혈 불응증(platelet refractoriness)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

특정의 양태에 있어서, 표지된 항C1s 항체가 제공된다. 라벨은 직접적으로 검출되는 라벨 또는 모이어티(예를 들어, 형광 라벨, 발색 라벨, 고전자 밀도 라벨, 화학 발광 라벨 및 방사성 라벨)뿐만 아니라, 예를 들어 효소 반응 또는 분자 간 상호작용을 통해 간접적으로 검출되는, 효소 또는 리간드와 같은 모이어티를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 라벨은 이에 제한되지 않지만, 방사성 동위원소 ³²P, ¹⁴C, ¹²⁵1, ³H, 및 ¹³¹I, 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인과 같은 형광단 및 그의 유도체, 로다민 및 그의 유도체, 단실, 움벨리페론, 루시퍼라아제, 예컨대 반딧불이 루시퍼라아제 및 박테리아 루시퍼라아제(미국특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-다이하이드로프탈라진다이온, 홀스래디쉬 퍼옥시다아제(HRP), 알칼리포스파타아제, 베타-갈락토시다아제, 글루코아밀라아제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다아제(saccharide oxidases), 예컨대 글루코오스 옥시다아제, 갈락토오스 옥시다아제, 및 글루코오스-6-포스페이트 다이하이드로게나아제, 유리카아제 및 잔틴 옥시다아제와 같은 헤테로사이클릭 옥시다아제, HRP와 같은 염색 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 사용하는 효소와 결합하는 효소, 락토퍼옥시다아제, 또는 마이크로퍼옥시다아제, 비오틴/아비딘, 스핀 라벨, 박테리아 라벨, 안정 활성 산소 및 이의 유사체와 같다.

F. 약학 조성물

본 명세서에 기재된 항원 결합 분자의 약학 조성물은 원하는 순도를 갖는 상기 분자를 하나 이상의 임의의 약학적으로 허용가능한 담체(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))과 혼합하여 동결 건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용되는 용량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 이에 한정되지 않지만, 다음을 포함한다: 인산염, 시트르산염 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 염화물; 헥사메토늄 염화물; 벤즈알코늄 염화물; 벤제토늄 염화물; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤류; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 이하) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리바이닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린과 같은 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염-형성 반대이온; 금속 복합체(예컨대, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제. 본 명세서에서 예시적인 약학적으로 허용가능한 담체는 추가로 가용성 중성-활성형 히알루로니다아제 당단백질(sHASEGP)과 같은 간질성 약물 확산제(예컨대, rHuPH20(HYLENEX(등록 상표), Baxter International, Inc.)와 같은 인간 가용성 PH-20 히알루로니다아제 당단백질)를 추가로 포함한다. 특정의 예시적인 sHASEGP 및 이의 사용 방법(rHuPH20 포함)은 미국특허 출원 공개 제2005/0260186호 및 제2006/0104968호에 기재되어 있다. 하나의 측면에 있어서, sHASEGP는 콘드로이티나아제와 같은 하나 이상의 추가적인 글리코사미노글리카나아제와 조합된다.

예시적인 동결건조 항체 제형은 미국특허 제6,267,958호에 기재되어 있다. 수성 항체 제형은 미국특허 제6,171,586호 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제형은 히스티딘-아세테이트 완충액을 포함한다.

본 명세서의 제형은 치료되는 특정 적응증에 필요한 경우, 하나 이상의 활성 성분을 포함할 수 있고, 바람직하게 서로 악영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 수반한다. 예를 들어, 병용 요법에 사용되는 제형을 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 적절하게 조합되어 존재한다.

활성 성분은, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐(각각, 예를 들어, 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴 마이크로캡슐, 및 폴리-(메틸메타크릴레이트)마이크로캡슐)에 혼입될 수 있거나, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 소구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에 혼입될 수 있거나, 매크로에멀젼에 혼입될 수 있다. 이러한 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 개시되어 있다.

서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 바람직한 예는 분자를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 상기 매트릭스는 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐과 같은 성형품의 형태이다.

생체 내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균 상태이다. 멸균 상태는, 예를 들어 멸균 여과막을 통해 여과함으로써 쉽게 달성된다.

G. 치료 방법 및 조성물

본 명세서에 제공된 임의의 항원 결합 분자는 치료 방법에 사용될 수 있다.

하나의 측면에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 항원 결합 분자가 제공된다. 또 다른 측면에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 항원 결합 분자가 제공된다. 특정의 양태에 있어서, 치료 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자가 제공된다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하는 방법으로서, 상기 개체에 항원 결합 분자의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 사용하기 위한, 항원 결합 분자를 제공한다. 이러한 하나의 양태에 있어서, 상기 방법은 상기 개체에게 적어도 하나의 추가 치료제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 보체 매개성 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 항원 결합 분자를 제공한다. 추가의 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자는 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스의 증가에 사용하기 위한 것일 수 있다. 추가의 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자는 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 증가시키는 데 사용하기 위한 것일 수 있다. 추가의 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자는 보체 성분 C4의 절단을 억제하는 데 사용하기 위한 것일 수 있으며, 여기서 분자는 보체 성분 C2의 절단을 억제하지 않는다. 일부 경우에 있어서, 분자는 고전 보체 경로의 성분을 억제하고, 일부 경우에 있어서, 고전 보체 경로의 성분은 C1s이다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 보체 매개성 질환 또는 장애의 치료 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 혈장으로부터 C1s의 클리어런스를 향상시키는 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 향상시키는 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 보체 성분 C4의 절단을 억제하는 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자로서, 보체 성분 C2의 절단을 억제하지 않는 항원 결합 분자를 제공한다. 특정의 양태에 있어서, 본 발명은 고전 보체 경로의 성분을 억제하는 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자를 제공하며; 일부 경우에 있어서, 고전 보체 경로의 성분은 C1s이다. 상기 양태 중 임의의 것에서, “개체”는 바람직하게 인간이다.

하나의 측면에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 상기 방법은 예를 들어 C4b2a의 생산을 감소시키기 위해 보체의 활성화를 억제한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에서 보체의 활성화를 조절하는 방법으로서, 본 개시의 항원 결합 분자 또는 본 개시의 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 약학 조성물이 본 개시의 항원 결합 분자를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 이러한 방법은 보체 활성화를 억제한다. 일부 양태에 있어서, 개체는 포유동물이다. 일부 양태에 있어서, 개체는 인간이다. 투여는 본 명세서에 개시된 것을 포함하는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 경로에 의한 것일 수 있다. 일부 양태에 있어서, 투여는 정맥 내 또는 피하 투여이다. 일부 양태에 있어서, 투여는 척수강 내 투여이다.

보체 매개성 질환 또는 장애는 개체의 세포, 조직 또는 체액에서 비정상적인 양의 보체 C1s 또는 비정상적인 수준의 보체 C1s 단백질 분해 활성을 특징으로 하는 장애이다.

일부 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 세포, 조직 또는 체액에서 증가된(정상보다 많은) 양의 C1s 또는 상승된 수준의 보체 C1s 활성의 존재를 특징으로 한다. 예를 들어, 일부 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 뇌 조직 및/또는 뇌척수액에서 증가된 양의 C1s 및/또는 증가된 활성의 C1s의 존재를 특징으로 한다. 세포, 조직 또는 체액에서 “정상보다 많은” 양의 C1s는 세포, 조직 또는 체액 중의 C1s의 양이 정상 대조군 수준보다 더 많은, 예를 들어 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개인 집단의 정상 대조군 수준보다 많음을 나타낸다. 세포, 조직 또는 체액에서 “정상보다 높은” 수준의 C1s 활성은 세포, 조직 또는 체액에서 C1s에 의해 유발되는 단백질 분해 절단이 정상 대조군 수준보다 높은, 예를 들어 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개인 집단의 정상 대조군 수준보다 높음을 나타낸다. 일부 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체는 이러한 질환 또는 장애의 하나 이상의 추가 증상을 나타낸다.

또 다른 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 세포, 조직 또는 체액에서 정상보다 적은 양의 C1s 또는 낮은 수준의 보체 C1s 활성의 존재를 특징으로 한다. 예를 들어, 일부의 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 뇌 조직 및/또는 뇌척수액에서 적은 양의 C1s 및/또는 낮은 활성 C1s의 존재를 특징으로 한다. 세포, 조직 또는 체액에서 “정상보다 적은” 양의 C1s는 세포, 조직 또는 체액에서 C1s의 양이 정상 대조군 수준보다 적은, 예를 들어 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개체 집단의 대조 수준보다 적음을 나타낸다. 세포, 조직 또는 체액에서 “정상보다 낮은” 수준의 C1s 활성은 세포, 조직 또는 체액에서 C1s에 의해 유발되는 단백질 분해 절단이 정상 대조군 수준보다 낮은, 예를 들어 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개인 집단의 정상 대조군 수준보다 낮음을 나타낸다. 일부 경우에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체는 이러한 질환 또는 장애의 하나 이상의 추가 증상을 나타낸다.

보체 매개성 질환 또는 장애는 보체 C1s의 양 또는 활성이 개체에서 질환 또는 장애를 일으키는 정도의 질환 또는 장애이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 자가면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염 질환, 염증 질환, 허혈 및 재관류 손상, 신경 퇴행성 질환, 신경 퇴행성 장애, 안과 질환, 신장 질환, 이식편 거부, 혈관 질환 및 혈관염 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는자가면역 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 암이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 감염 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 염증 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 혈액 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 허혈 및 재관류 손상이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 안과 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 신장 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 이식편 거부이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 항체에 의한 이식편 거부이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 혈관 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 혈관염 장애이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 신경 퇴행성 질환 또는 장애이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환은 신경 퇴행성 질환이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개 장애는 신경 퇴행성 장애이다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 타우병증이다.

보체 매개성 질환 또는 장애의 예시로는, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증, 아나필락시스, 은친화 과립성 치매, 관절염(예를 들어, 류마티스 관절염), 천식, 죽상 동맥 경화증, 비정형 용혈-요독 증후군, 자가면역 질환, 바라퀘 시몬스 증후군, 베체트병, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 수포성 유사천포창, 버거씨병, C1q 신경병증, 암, 극증형 항인지질 항체 증후군, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 한랭응집소증, 피질기저핵변성, 크로이츠펠트 야콥병, 크론병, 한랭글로불린혈증성 혈관염, 권투선수 치매, 루이소체 치매(DLB), 석회화를 수반하는 확산성 신경원섬유변화병, 원판상 홍반성 루푸스, 다운증후군, 국소분절 사구체 경화증, 형식적 사고장애, 전두측두엽 치매(FTD), 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매, 전두측두엽 변성증, 게스트르만 슈트라우슬러 샤인커병, 길랭-바레 증후군, 할러포르덴-스파츠병, 용혈성 요독 증후군, 유전성 혈관 부종, 저인산효소증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체 질환, 봉입체 근염, 감염증(예를 들어, 박테리아(예컨대, 수막염균 또는 연쇄상 구균), 바이러스(예컨대, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)) 또는 기타 감염 병원체에 의해 유발되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 손상, 경미한 인지 장애, 면역성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 몰리브덴 보조인자 결핍증(MoCD) A형, 막증식성 사구체 신염(MPGN) I, 막증식성 사구체 신염(MPGN) II(고밀도 침착병), 막성 신염, 다발경색성 치매, 루푸스(예컨대, 전신성 홍반성 루푸스)(SLE)), 사구체 신염, 가와사키병, 다초점성 운동신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증근무력증, 심근경색, 근강직성 이영양증, 시신경척수염, 니만-픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 치매를 동반한 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염 후 파킨슨병, 다발근염, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 생산성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 치매, 이식편 거부, 혈관염(예컨대, ANCA 관련 혈관염), 베그너 육아종증, 겸상 적혈구증, 한랭글로불린혈증, 혼합성 한랭글로불린혈증, 본태성 혼합성 한랭글로불린혈증, II형 혼합성 한랭글로불린혈증, III형 혼합성 한랭글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 수포성 유사천포창, 단순 수포성 표피박리증, 지연성 용혈 수혈 반응, 저보체혈증성 두드러기 유사 혈관염 증후군, 위수정체 수포각막병증 및 혈소판 수혈 불응증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

알츠하이머병 및 특정 형태의 전두측두엽 치매(픽병, 산발성 전두측두엽 치매 및 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매)는 가장 흔한 형태의 타우병증이다. 따라서, 본 발명은 타우병증이 알츠하이머병, 픽병, 산발성 전두측두엽 치매, 및 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매인 상기 임의의 방법에 관한 것이다. 다른 타우병증은 진행성 핵상성 마비(PSP), 피질기저핵변성(CBD) 및 아급성 경화성 전뇌염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

신경 퇴행성 타우병증은 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증/파킨슨-치매 복합, 은친화 과립성 치매, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 피질기저핵변성, 크로이츠펠트 야콥병, 권투선수 치매, 석회화를 수반하는 확산성 신경원섬유변화병, 다운증후군, 전두측두엽 치매, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매, 전두측두엽 변성증, 게스트르만 슈트라우슬러 샤인커병, 할러포르덴-스파츠병, 봉입체 근염, 다계통 위축증, 근강직성 이영양증, 니만-픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 픽병, 뇌염 후 파킨슨병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 치매, 다발성 경색 치매(multi-infarct dementia), 허혈성 뇌졸중, 만성 외상성 뇌졸중(CTE), 외상성 뇌 손상(TBI) 및 뇌졸중이 포함된다.

본 개시는 또한 시누클레인병증(synucleinopathy), 예를 들어 파킨슨병(PD); 루이소체 치매(DLB); 다계통 위축증(MSA) 등을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 치매를 갖는 PD(PDD)는 본 개시의 방법을 사용하여 치료될 수 있다.

일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 알츠하이머병을 포함한다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 파킨슨병을 포함한다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 이식편 거부를 포함한다. 일부 양태에 있어서, 보체 매개성 질환 또는 장애는 항체 매개성 이식편 거부이다.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 개체에서 보체 매개성 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상의 발병을 방지 또는 지연시킨다. 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 개체에서 보체 매개성 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상을 경감시키거나 제거한다. 증상의 예로는 자가면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염 질환, 염증 질환, 허혈 및 재관류 손상, 신경 퇴행성 질환, 신경 퇴행성 장애, 신장 질환, 이식편 거부, 안과 질환, 혈관 질환 또는 혈관염 질환과 관련된 증상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 증상은 신경학적 증상, 예를 들어 인지 기능 장애, 기억 장애, 운동 기능 상실 등일 수 있다. 증상은 또한 개체의 세포, 조직 또는 체액 중의 C1s 단백질의 활성일 수 있다. 증상은 또한 개체의 세포, 조직 또는 체액에서 보체 활성화의 정도일 수 있다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 발명의 항원 결합 분자를 투여하는 것은 개체의 세포, 조직 또는 체액에서 보체 활성화를 조절한다. 일부 양태에 있어서, 개체에 대한 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체의 세포, 조직 또는 체액에서 보체 활성화를 억제한다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전의 개체에서의 보체 활성화와 비교하여, 개체에서 보체 활성화를 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 억제한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 적혈구에의 C3 침착을 감소시킨다; 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 RBC에의 C3b, iC3b 등의 침착을 감소시킨다. 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성의 적혈구 용해를 억제한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 혈소판에의 C3 침착을 감소시킨다; 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 혈소판에의 C3b, iC3b 등의 침착을 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자의 투여는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 결과를 가져온다: (a) 보체 활성화의 감소; (b) 인지 기능의 개선; (c) 뉴런 손실의 감소; (d) 뉴런의 인산화-타우 수준의 감소; (e) 신경 교세포 활성화의 감소; (f) 림프구 침윤의 감소; (g) 대식세포 침윤의 감소; (h) 항체 침착 감소, (ⅰ) 신경 교세포 손실의 감소; (j) 희소돌기아교세포 손실의 감소; (k) 수지상 세포 침윤의 감소; (l) 호중구 침윤의 감소; (m) 적혈구 용해 감소; (n) 적혈구 식세포 작용의 감소; (o) 혈소판 식세포 작용의 감소; (p) 혈소판 용해 감소; (q) 이식편 생존율 개선; (r) 대식세포 매개 식세포 작용의 감소 ; (s) 시력 개선; (t) 운동 조절의 개선; (u) 혈전 형성 개선; (v) 응고 개선; (w) 신기능의 개선; (x) 항체 매개 보체 활성화의 감소; (y) 자가항체 매개 보체 활성화의 감소; (z) 빈혈 개선; (aa) 탈수초 감소; (ab) 호산구증가증 감소; (ac) 적혈구에서의 C3 침착 감소(예컨대, RBC에서 C3b, iC3b 등의 침착 감소); 및 (ad) 혈소판에서의 C3 침착 감소(예컨대, 혈소판에서 C3b, iC3b 등의 침착 감소); 및 (ae) 아나필라톡신 독소 생성 감소; (af) 자가항체 매개 수포 형성의 감소; (ag) 자가항체 유발 수두염의 감소; (ah) 자가항체 유발 홍반 감소; (ai) 자가항체 매개 피부 침식 감소; (aj) 수혈 반응으로 인한 적혈구 파괴 감소; (ak) 동종항체로 인한 적혈구 용해 감소; (al) 수혈 반응으로 인한 용혈 감소; (am) 동종항체 매개 혈소판 용해 감소; (an) 수혈 반응으로 인한 혈소판 용해 감소; (ao) 비만 세포 활성화 감소; (ap) 비만 세포 히스타민 방출 감소; (aq) 혈관 투과성 감소; (ar) 부종 감소; (as) 이식편 내피상의 보체 침착 감소; (at) 이식편 내피에서의 아나필라톡신 생성 감소; (au) 진피-표피 접합부의 분리 감소; (av) 진피-표피 접합부에서의 아나필라톡신 생성 감소; (aw) 이식편 내피에서의 동종항체 매개 보체 활성화 감소; (ax) 신경근 접합부의 항체 매개 손실 감소; (ay) 신경근 접합부에서 보체 활성화 감소; (az) 신경근 접합부에서 아나필라톡신 생성 감소; (ba) 신경근 접합부에서 보체 침착 감소; (bb) 마비 감소; (be) 무감각의 감소; (bd) 방광 조절 강화; (be) 배변 조절 강화; (bf) 자가항체와 관련된 사망률의 감소; 및 (bg) 자가항체와 관련된 질병률의 감소.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 이하의 결과: (a) 보체 활성화; (b) 인지 기능의 감소; (c) 뉴런의 손실; (d) 뉴런의 인산화-타우 수준; (e) 신경 교세포 활성화; (f) 림프구 침윤; (g) 대식세포 침윤, (h) 항체 침착, (ⅰ) 신경 교세포 손실; (j) 희소돌기아교세포 손실; (k) 수지상 세포 침윤; (l) 호중구 침윤; (m) 적혈구 용해; (n) 적혈구 식세포 작용; (o) 혈소판 식세포 작용; (p) 혈소판 용해; (q) 이식편 거부; (r) 대식세포 매개 식세포 작용; (s) 시력 손실; (t) 항체 매개 보체 활성화; (u) 자가항체 매개 보체 활성화; (v) 탈수초; (w) 호산구 증가증 중 하나 이상을, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전의 개체에서의 결과의 수준 또는 정도와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소하는 데 효과적이다.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 이하의 결과: a) 인지 기능; b) 이식편 생존; c) 시력; d) 운동 조절; e) 혈전 형성; f) 응고; g) 신장 기능; 및 h) 헤마토크리트(적혈구 산정) 중 하나 이상을, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 결과의 수준 또는 정도와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 개선하는 데 효과적이다.

일부 양태에 있어서, 개체에 대한 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 보체 활성화를 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서 보체 활성화를, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 보체 활성화와 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 인지 기능을 개선한다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 인지 기능을, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 인지 기능과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 개선시킨다.

일부 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 인지 기능의 저하율을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 인지 기능 저하율을, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 인지 기능 저하율과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 발명의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서의 뉴런 손실을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 뉴런 손실을, 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 뉴런 상실과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 발명의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 인산화-타우 수준을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 인산화-타우를 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 인산화-타우 수준과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 발명의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 신경 교세포 활성화를 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 글리아 활성화는 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 신경 교세포 활성화와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다. 일부 양태에 있어서, 신경 교세포는 아스트로사이트 또는 마이크로글리아이다.

일부 양태에 있어서, 개체에 대한 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 림프구 침윤을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 림프구 침윤을 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 림프구 침윤과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 대식세포 침윤을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서 대식세포 침윤을 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 대식세포 침윤과 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 항체 침착을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서의 항체 침착을 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 항체 침착과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 개체에 대한 본 개시의 항원 결합 분자의 투여는 개체에서 아나필라톡신(예를 들어, C3a, C4a, C5a) 생산을 감소시킨다. 예를 들어, 일부 양태에 있어서, 본 개시의 항원 결합 분자는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에서 하나 이상의 용량으로 투여되는 경우, 개체에서 아나필라톡신 생산을 항원 결합 분자를 사용한 치료 이전 개체에서의 아나필라톡신 생산 수준과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과로 감소시킨다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자, 또는 본 개시의 항원 결합 분자와 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항C1s 항체의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 약제의 생산에서 본 개시의 항원 결합 분자의 사용을 제공한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 억제하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자, 또는 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에서 보체 활성화를 억제하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 또는 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에서 보체 활성화를 억제하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에서 보체 활성화를 억제하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하기 위한 약제의 생산에서 본 개시의 항원 결합 분자의 사용을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 약제는 보체 활성화를 억제한다. 일부 양태에 있어서, 약제는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에서 보체 활성화를 억제한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 약물 요법에 사용하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 또는 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 약물 요법에 사용하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자를 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 약물 치료에 사용하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자, 또는 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자를 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.　

일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 또는 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자를 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 개시는 보체 활성화를 조절하기 위한 본 개시의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 항원 결합 분자는 보체 활성화를 억제한다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 약제의 생산 또는 제조에서 항원 결합 분자의 사용을 제공한다. 하나의 양태에 있어서, 약제는 보체 매개성 질환 또는 장애의 치료를 위한 것이다. 추가의 양태에 있어서, 약제는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 유효량의 약제를 투여하는 단계를 포함하는 보체 매개성 질환 또는 장애의 치료 방법에 사용하기 위한 것이다. 이러한 하나의 양태에 있어서, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 추가의 치료제(예를 들어, 이하에 기재된 것)를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 약제는 혈장으로부터 C1s의 클리어런스(또는 제거)를 향상시키는 데 사용하기 위한 것이다. 추가의 양태에 있어서, 약제는 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스(또는 제거)를 향상시키는 데 사용하기 위한 것이다. 추가의 양태에 있어서, 약제는 보체 성분 C4의 절단을 억제하는 데 사용하기 위한 것으로, 여기서 분자는 보체 성분 C2의 절단을 억제하지 않는다. 추가의 양태에 있어서, 약제는 고전 보체 경로의 성분을 억제하는 데 사용하기 위한 것이며, 일부 경우에 있어서, 고전 보체 경로의 성분은 C1s이다.

또 다른 양태에 있어서, 약제는 개체에게 유효량의 약제를 투여하는 단계를 포함하는 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체의 치료 방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 양태 중 임의의 것에서 “개체”는 인간일 수 있다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 보체 매개성 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에 있어서, 상기 방법은 그러한 보체 매개성 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 유효량의 항원 결합 분자를 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 하나의 양태에 있어서, 상기 방법은 후술하는 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 양태 중 임의의 것에서 “개체”는 인간일 수 있다.

추가의 측면에 있어서, 본 발명은 개체에서 혈장으로부터 C1s의 클리어런스(또는 제거)를 향상시키는 방법을 제공한다. 추가의 측면에 있어서, 본 발명은 개체에서 혈장으로부터 C1q, C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스(또는 제거)를 증가시키는 방법을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 본 발명의 항원 결합 분자는, 개체에서 보체 성분 C2의 절단을 억제하지 않고 보체 성분 C4의 절단을 억제하는 방법을 제공한다. 일부 경우에 있어서, 본 발명은 개체에서 고전 보체 경로의 성분을 억제하는 방법을 제공하며, 일부 경우에 있어서 고전 보체 경로의 성분은 C1s이다. 하나의 양태에 있어서 “개체”는 인간이다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은, 예를 들어 상기 기재된 임의의 치료 방법에 사용하기 위한, 본 명세서에 제공된 임의의 항원 결합 분자를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 하나의 양태에 있어서, 약학 조성물은 본 명세서에 제공된 임의의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 또 다른 양태에 있어서, 약학 조성물은 본 명세서에 제공된 임의의 항원 결합 분자 및 적어도 하나의 추가의 치료제(예를 들어, 후술하는 것)를 포함한다.

본 발명의 항체는 요법에서 단독으로 또는 다른 제제와의 병용으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 적어도 하나의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다.

전술한 바와 같은 병용 요법은 병용 투여(2개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형에 포함됨) 및 개별 투여를 포함하며, 개별 투여의 경우, 본 발명의 분자의 투여가 추가 치료 제제 또는 제제들의 투여에 앞서, 동시에, 및/또는 이어서 수행될 수 있다. 하나의 양태에 있어서, 항원 결합 분자의 투여 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1개월 이내, 또는 약 1, 2, 또는 3주 이내, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 이내에 이루어진다. 본 발명의 분자는 방사선 요법과 병용하여 사용될 수 있다.

본 발명의 항원 결합 분자(및 임의의 추가의 치료제)는 비경구 투여, 폐 내 투여 및 비강 투여, 및 국소 치료를 위해 바람직한 경우 병소 내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주사는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 투여가 단기 또는 장기인지에 일부 따라서, 예를 들어, 정맥 내 주사 또는 피하 주사와 같은 주사의 임의의 적합한 경로에 의해 이루어질 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 반복 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주사를 포함하지만, 이들에 한정되지 않는 다양한 투여 스케쥴이 본 명세서에서 고려된다.

본 발명의 항원 결합 분자는 우수한 의료 규범과 일치하는 방식으로 제형화, 복용 및 투여된다. 이 관점에서 고려해야 할 요인은 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 증상, 장애의 원인, 약물 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케쥴 및 의료 종사자에게 알려진 다른 요소를 포함한다. 분자는 반드시 그렇지 않을 수도 있지만, 선택적으로 문제의 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 함께 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제형에 존재하는 분자의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로 본 명세서에 기재된 것과 동일한 용량 및 투여 경로에서, 또는 본 명세서에 기재된 용량의 약 1 내지 99%, 또는 경험적/임상적으로 적절하다고 판단되는 임의의 용량 및 임의의 경로에서 사용된다.

질병의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 항원 결합 분자의 적절한 용량(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제와 병용되는 경우)은 치료될 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 해당 분자가 예방적 목적으로 투여되는지 치료적 목적으로 투여되는지, 약력, 환자의 임상력 및 해당 분자에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 분자는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 적절하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 예를 들어, 1회 또는 복수회의 개별 투여에 의해, 또는 연속 주사에 의해 약 1μg/kg 내지 15mg/kg(예를 들어, 0.1mg/kg 내지 10mg/kg)의 분자가 환자에게 투여하기 위한 첫 번째 후보 용량이 될 수 있다. 하나의 전형적인 일일 용량은 전술한 인자에 따라 약 1μg/kg 내지 100mg/kg 이상까지의 범위를 가질 수 있다. 며칠 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 상황에 따라, 치료는 일반적으로 질환 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 유지될 것이다. 분자의 하나의 예시적인 용량은 약 0.05mg/kg 내지 약 10mg/kg 범위이다. 따라서, 약 0.5mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg 또는 10mg/kg의 하나 이상의 용량(또는 이들의 임의의 조합)이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주 또는 3주마다(예를 들어, 환자가 약 2 내지 약 20, 또는 예를 들어 약 6 용량의 상기 분자를 받도록) 투여될 수 있다. 높은 초기 부하 용량 후에, 1회 또는 다수의 저용량이 투여될 수 있다. 그러나 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이 치료 과정은 종래의 기술과 분석에 의해 쉽게 모니터링된다.

전술한 제형 또는 치료 방법 중 임의의 것에 대해, 항원 결합 분자 대신에 또는 이에 추가하여 본 발명의 면역 접합체를 사용하여 수행될 수 있음이 이해된다.

H. 다른 방법

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 C1s 또는 C1q를 세포에 혼입시키는 방법을 제공한다. 이러한 측면에 있어서, C1s와 세포는 등장액에서 혼합된다. 세포는 Fcγ 수용체를 발현한다. 상기 방법은 상기 항원 결합 분자 중 어느 하나를 등장액에 첨가하는 단계를 포함한다.

하나의 측면에 있어서, 본 발명은 개체에서 혈장 중 C1s 및/또는 C1q 농도를 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 항원 결합 분자 중 어느 하나를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

I. 제품

본 발명의 다른 측면에서, 전술한 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 기재를 포함하는 제품이 제공된다. 제품은 용기 및 상기 용기상의 라벨 또는 상기 용기에 부속된 첨부 문서를 포함한다. 바람직한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, IV 용액백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기는 조성물을 보유할 수 있고, 증상의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 다른 조성물과 조합하여 단독으로 보유할 수 있으며, 무균 액세스 포트(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 관통할 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥 내 투여용 백 또는 바이알) 일 수 있다. 조성물 중 적어도 하나의 활성 성분은 본 발명의 항원 결합 분자이다. 라벨 또는 첨부 문서는 조성물이 선택된 증상을 치료하는 데 사용되는 것을 나타낸다. 또한, 제품은 (a) 본 발명의 항원 결합 분자를 포함하는 조성물을 포함하는 제 1 용기; 및 (b) 추가의 세포 독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물을 포함하는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 양태에 있어서, 제품은 조성물이 특정 증상을 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 첨부 문서를 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제품은 주사용 박테리아수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로오스 용액과 같은 약학적으로 허용가능한 완충액을 포함하는 제 2 (또는 제 3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기와 같은 상업적 관점 또는 사용자의 입장에서 바람직한 다른 기재를 추가로 포함할 수 있다.

전술한 임의의 제품이 항원 결합 분자 대신 또는 이에 부가하여 본 발명의 면역 접합체를 포함할 수 있음이 이해될 것이다.

실시예

IV. 실시예

하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 전술한 일반적인 설명에 비추어 다양한 다른 양태가 구현될 수 있음이 이해될 것이다.

전술한 발명은 명확한 이해를 돕기 위한 목적으로 실례 및 예시를 사용하여 상세히 설명되었지만, 본 명세서에서의 설명 및 예시는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에 인용된 모든 특허문헌 및 과학문헌의 개시는 그 전체로 본 명세서에 참조로 명시적으로 포함된다.

실시예 1

재조합 C1r2s2의 제조

1.1. 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag 사량체의 발현 및 정제

발현 및 정제에 사용된 서열은 C-말단에 GGGGS 링커 및 Flag 태그를 갖는 필리핀원숭이 C1s(서열번호: 1), 및 C-말단에 GGGGS 링커 및 8x 히스티딘 태그를 갖는 필리핀원숭이 C1r이다. 필리핀원숭이 C1r 서열은 R463Q S654A 돌연변이를 갖는다(서열번호: 2). 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag 사량체의 발현을 위해, FreeStyle293-F 세포주(Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 필리핀원숭이 C1s-Flag 및 필리핀원숭이 C1r-His를 일시적으로 공동 발현시켰다. 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag 사량체를 발현하는 컨디션 배지(conditioned media)를 항-FlagM2 친화도 수지(Sigma)에 제공하고, Flag 펩티드(Sigma)를 사용하여 용출시켰다. 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag 사량체를 함유하는 분획을 IMAC 컬럼(GE healthcare)에 적용하고, 이미다졸 구배를 사용하여 용출시켰다. 재조합 C1r2s2 His/Flag 사량체를 포함하는 용출 분획을 수집하고 농축시킨 후, 1X TBS, 2mM CaCl₂ 완충액으로 평형화된 Superdex 200 겔 여과 컬럼(GE healthcare)에 적용하였다. 이어서, 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag를 함유하는 분획을 수집하고, 농축하고, -80℃에서 보관하였다.

1.2. 인간 C1r2s2 사량체의 발현 및 정제

발현 및 정제에 사용된 서열은 인간 C1s(NCBI 참조 서열: NP_958850.1)(서열번호: 3) 및 인간 C1r(NCBI 참조 서열: NP_001724.3)이다. 인간 C1r 서열은 R463Q S654A 돌연변이를 갖는다(서열번호: 4). 재조합 인간 C1r2s2 사량체의 발현을 위해, FreeStyle293-F 세포주(Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 인간 C1s 및 인간 C1r을 일시적으로 공동 발현시켰다. 재조합 인간 C1r2s2를 발현하는 컨디션 배지를 HiTrap Q HP 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼(GE healthcare)에 적용하고 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 재조합 인간 C1r2s2 사량체를 포함하는 용출 분획을 수집하고 농축시킨 후, 1X TBS, 2mM CaCl₂ 완충액으로 평형화된 Superdex 200 겔 여과 컬럼(GE healthcare)에 적용하였다. 이어서, 재조합 인간 C1r2s2 사량체를 포함하는 분획을 수집하고, 농축하고, -80℃에서 보관하였다.

실시예 2

2.1 필리핀원숭이 Fcγ 수용체(필리핀원숭이 FcγRs)의 제조

필리핀원숭이 FcγRs의 세포 외 도메인에 대한 유전자의 합성은 통상의 기술자에게 공지된 방법을 사용하여 필리핀원숭이로부터 각각의 FcγRs의 cDNA를 복제하여 구성되었다. 구성된 FcγRs의 세포 외 도메인의 아미노산 서열을 서열 목록에 나타냈다. (필리핀원숭이 FcγRIa의 경우 서열번호: 5, 필리핀원숭이 FcγRIIa1의 경우 서열번호: 6, 필리핀원숭이 FcγRIIa2의 경우 서열번호: 7, 필리핀원숭이 FcγRIIa3의 경우 서열번호: 8, 필리핀원숭이 FcγRIIb의 경우 서열번호: 9, 필리핀원숭이 FcγRIIIa(R)의 경우 서열번호: 10, 필리핀원숭이 FcγRIIIa(S)의 경우 서열번호: 11). 그 다음, His-tag를 C-말단에 추가하고, 수득된 각 유전자를 포유동물 세포 발현을 위해 설계된 발현 벡터에 삽입했다. 이 발현 벡터를 인간 배아 신장 세포 유래 FreeStyle293 세포(Invitrogen)에 도입하여 표적 단백질을 발현시켰다. 배양 후, 생성된 배양 상청액을 원칙적으로 이하의 4개의 공정에 의해 여과 및 정제하였다. 제 1 공정으로서 SP 세파로오스 FF를 이용한 양이온 교환 크로마토그래피, 제 2 공정으로서 His-태그에 대한 친화도 크로마토그래피(HisTrap HP), 제 3 공정으로서 겔 여과 컬럼 크로마토그래피(Superdex200), 및 제 4 공정으로서 멸균 여과를 수행했다. 분광 광도계를 이용하여 정제 단백질의 280nm에서의 흡광도를 측정하고, PACE법에 의해 산출된 흡광 계수를 이용하여 정제된 단백질 농도를 결정하였다(Protein Science 4:2411-2423 (1995)).

실시예 3

항C1s 항체의 제조

3.1 COS0098pHv1의 생성, 및 COS0098pHv1-SG1077 및 COS0098pHv1-SG1의 제조

항C1s 항체 COS0098bb의 일부의 가변 영역(PCT/JP2018/042054에 기재된 바와 같은 VH, 서열번호: 12; VL, 서열번호: 13)의 인간화를 이 항체의 잠재적 면역원성을 저하시키기 위하여 수행했다. 항C1s 토끼 항체의 상보성 결정 영역(CDR)을 종래의 CDR 그래프팅 접근(Nature 321:522-525 (1986))을 사용하여 상동성 인간 항체 프레임워크(FR)에 그래프팅하였다. 인간화 VH를 코드하는 유전자를 합성하고, 인간 IgG1 CH(SG1, 서열번호: 14), 변형된 인간 IgG1 CH, 예를 들어 SG1077(서열번호: 15) 및 SG1148(서열번호: 16)과 결합시켰다. 인간화 VL을 코드하는 유전자를 합성하고, 인간 CL(SK1, 서열번호: 26) 및 변형된 인간 CL(K0MC, 서열번호: 17)에 결합시켰다. 결합된 서열을 발현 벡터에 클로닝 하였다.

상기 리드 항체의 결합 특성을 향상시키는 돌연변이와 돌연변이의 조합을 확인하기 위해 많은 돌연변이 및 돌연변이의 조합을 조사했다. 그 다음, 중성 pH에서 C1s(인간 C1s 또는 C1r2s2 또는 필리핀원숭이 C1s2s2 His/Flag)에 대한 결합 친화도를 향상시키거나 산성 pH에서 C1s에의 결합 친화도를 감소시키기 위해, 인간화 가변 영역에 복수의 돌연변이가 도입되었다. 따라서, 최적화된 변이체 중 하나인 COS0098pHv1(VH, 서열번호: 18; VL, 서열번호: 19; HCDR1, 서열번호: 20; HCDR2, 서열번호: 21; HCDR3, 서열번호: 22; LCDR1, 서열번호: 23; LCDR2, 서열번호: 24; 및 LCDR3, 서열번호: 25)을 COS0098bb로부터 제조하였다. COS0098pHv1-SG1077(중쇄에 대해서는 COS0098pHv1의 VH, 서열번호: 18을 SG1077, 서열번호: 15와 조합, 경쇄에 대해서는 COS0098pHv1의 VL, 서열번호: 19를 SK1, 서열번호: 26과 조합)을 생체 내 PK 시험에서 필리핀원숭이에 사용하였다. COS0098pHv1-SG1(중쇄에 대해서는 COS0098pHv1의 VH, 서열번호: 18을 SG1, 서열번호: 14와 조합, 경쇄에 대해서는 COS0098pHv1의 VL, 서열번호: 19를 SK1, 서열번호: 26과 조합)을 필리핀원숭이 FcγRs 결합 검정에서 대조군 항체로서 사용하였다.

중쇄 발현 벡터 및 경쇄 발현 벡터의 혼합물과 공동 형질 감염된 HEK293 세포에서 항체를 발현시키고 단백질 A로 정제하였다. 필요에 따라 겔 여과를 추가로 수행하였다.

실시예 4

항C1s 항체의 결합 특성 평가

4.1. pH 의존성 및 교차 반응성 검사의 평가

재조합 인간 C1s(PCT/JP2018/042054에 기재되어 있음), 인간 C1r2s2 및 필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag(표 및 도면에서 필리핀원숭이 C1r2s2라고도 함)에 대한 항C1s 항체의 약동학 파라미터를 BIACORE(등록 상표) T200 기기(GE Healthcare) 또는 BIACORE 4000(GE Healthcare)을 사용하여 37℃, pH7.4 및 pH5.8에서 평가하였다. 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 GE Healthcare에 의해 권장된 설정에 따라 사용하여, ProA/G(Pierce)를 CM4 센서칩에 고정화했다. 항체 및 분석물을 각각의 러닝 버퍼인 ACES pH7.4 및 pH5.8(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 1mg/ml BSA, 1mg/ml CMD, 0.05% Tween 20, 0.05w/v% NaN₃)로 희석하였다. 각 항체를 ProA/G로 센서 표면에 포획했다. 항체 포획량은 전형적으로 100 내지 200 공명 단위(RU)였다. 이어서, 재조합 C1s를 25 및 50nM의 농도로 주사한 후, pH7.4 및 pH5.8로 해리시켰다. 표면을 10mM 글리신-HCl, pH1.5를 사용하여 재생시켰다. 중성 pH 조건에서의 약동학 파라미터를 BIACORE(등록 상표) T200 평가 소프트웨어, 버전 2.0(GE Healthcare) 또는 BIACORE 4000 평가 소프트웨어를 사용하여 센서그램을 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 결정했다. pH5.8에서의 해리 속도는 Scrubber 2.0(BioLogic Software) 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 맞추어 결정했다. 항원 농도 50nM에서의 모든 항체의 센서그램을 도 1 및 2에 나타내었다. 이들 항체의 pH7.4 조건에서의 결합 속도(ka), 해리 속도(kd), 결합 친화도(KD), 및 pH5.8 조건에서의 해리 속도(kd)를 표 2에 나타낸다. COS0098bb(VH, 서열번호: 12 및 VL, 서열번호: 13)는 pH7.4보다 pH5.8에서 빠른 해리 속도를 명확하게 나타내지 않았지만, COS0098pHV1(VH, 서열번호: 18 및 VL, 서열번호: 19)는 pH7.4보다 pH5.8에서 빠른 해리 속도를 나타냈다.

또한, 인간 C1r2s2 및 필리핀원숭이 C1r2s2(필리핀원숭이 C1r2s2 His/Flag)에 대한 항C1s 항체의 교차 반응성을 관찰하기 위해, BIACORE(등록 상표) 동태 분석을 수행하였다. pH7.4에서의 결합 동태 및 친화도를 표 2에 나타냈다. 모든 항C1s 항체는 인간 C1r2s2 및 필리핀원숭이 C1r2s2에 대해 동등한 KD를 나타냈다.

4.2. Biacore를 이용한 필리핀원숭이 FcγR에 대한 항체의 결합 활성의 평가

상기 기재된 바와 같이 제조된 항체와 FcγR 사이의 상호작용의 분석은 BIACORE(등록 상표) T200(GE Healthcare)을 사용하여 수행하였다. 150mM 염화나트륨 및 0.05w/v%-20을 포함하는 50mM 인산염 완충액(pH7.4)을 러닝 버퍼로 사용하고, 측정 온도를 25℃로 설정하였다. 아민 커플링법에 의해 단백질 L(BioVision)을 Series S 센서칩 CM4(GE Healthcare)에 고정화하여 제작된 칩을 사용하였다. 500 또는 1000 공명 단위(RU)의 목적 항체를 칩상에 포획한 후, 러닝 버퍼로 희석된 FcγR을 상호작용시키고, 항체에 대한 이들의 결합량을 측정하였다. 필리핀원숭이 FcγRIa를 8nM로 희석하고, 다른 것들은 1000nM로 희석하였다. 이어서, 칩상에 포획된 항체를 10mM 글리신-HCl, pH1.5로 세척하고, 칩을 재생하여 반복적으로 사용하였다. biacore 평가 소프트웨어를 사용하여, FcγRs의 결합량을 포획된 각 항체의 결합량으로 나누어 결합 활성을 얻고, 이들 값을 비교하였다. 또한, 각 FcγRs에 대한 COS0098pHv1-SG1077의 결합 활성의 COS0098pHv1-SG1(EU 넘버링에 따라 234-239위, 265-271위, 295위, 296위, 298위, 300위 및 324-337위에 천연 인간 IgG1의 서열을 갖는 항체)과 비교한 상대값을 산출하였다.

표 3은 항체의 결합 활성 값 및 COS0098pHv1-SG1에 대한 COS0098pHv1-SG1077의 상대적인 양을 나타낸다. 모든 유형의 필리핀원숭이 FcγRIIa 및 FcγRIIb에 대한 COS0098pHv1-SG1077의 결합 활성 값은 COS0098pHv1-SG1의 그것보다 높았다. COS0098pHv1-SG1과 비교하면, COS0098pHv1-SG1077의 결합 활성은 FcγRIIb에 대해 3.26배 상승하였고, 모든 종류의 필리핀원숭이 FcγRIIa에 대해 2.57 내지 5.74배 상승하였다.

실시예 5

5.1 필리핀원숭이 PK 시험

고성능 액체 크로마토그래피-전기분무 탠덤 질량 분석(LC/ESI-MS/MS)에 의한 원숭이 혈장 중 총 필리핀원숭이 C1s 및 C1q 농도의 측정

방법

고성능 액체 크로마토그래피-전기분무 탠덤 질량 분석(LC/ESI-MS/MS)에 의한 필리핀원숭이 혈장 중 총 필리핀원숭이 C1s 및 C1q 농도의 측정

[샘플의 제조]

혈장 중 필리핀원숭이 C1s의 총 농도를 LC/ESI-MS/MS로 측정하였다. 필리핀원숭이 C1s의 농도가 0.954, 1.91, 3.82, 7.63, 15.3, 30.5 및 61.1μg/mL가 되도록 규정량의 필리핀원숭이 C1s를 마우스 혈장에서 혼합 및 희석함으로써 교정 스탠다드를 제조하였다. 필리핀원숭이 혈장 샘플을 마우스 혈장으로 5회 희석하였다. 2μL의 교정 스탠다드 또는 희석된 혈장 샘플을 50mmol/L 중탄산암모늄 중 혼합 시약(7.5mol/L 유레아/ 100mmol/L 다이싸이오트레이톨/ 10μg/mL 라이소자임(달걀 흰자)/ 300μg/mL 인간 C1s=20/2/2.5/2) 26.5μL와 혼합하고, 56℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 500mmol/L 아이오도아세트아마이드 2μL를 첨가하고, 37℃의 어두운 곳에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 50mmol/L 중탄산암모늄 중 0.5μg/mL 시퀀싱 등급 변형된 트립신(sequencing grade modified trypsin)(Promega) 160μL를 첨가하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 마지막으로, 임의의 잔류 트립신을 불활성화시키기 위해 10% 트라이플루오로아세트산 5μL를 첨가하였다. 50μL의 소화 샘플을 LC/ESI-MS/MS로 분석하였다.

혈장 중의 필리핀원숭이 C1q의 농도를 LC/ESI-MS/MS로 측정하였다. 필리핀원숭이 C1q의 농도가 1.95, 3.91, 7.81, 15.6, 31.3, 62.5 및 100μg/mL가 되도록 규정량의 필리핀원숭이 C1q를 인간 혈장에서 혼합 및 희석함으로써 교정 스탠다드를 제조하였다. 필리핀원숭이 혈장 샘플을 인간 혈장으로 5회 희석하였다. 2μL의 교정 스탠다드 및 희석된 혈장 샘플을 각각 1% 소 혈청 알부민 중 40μL의 항-인간 C1q 항체(Cell Sciences) 및 투여된 항C1s 항체와 25℃에서 1.5시간 동안 혼합하였다. 각 샘플을 0.05% Tween-20 함유 PBS 중 10배 희석된 단백질 A 자기 비드(Protenova) 50μL와 25℃에서 1.5시간 동안 혼합하였다. 0.05% Tween-20 함유 PBS로 3회 세척한 후, 샘플을 50mmol/L 중탄산암모늄 중 혼합 시약(7.5mol/L 유레아/ 100mmol/L 다이싸이오트레이톨/ 10μg/mL 라이소자임(달걀 흰자)=20/2/2.5) 26.5μL와 혼합하고, 56℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 2μL의 500mmol/L 아이오도아세트아마이드를 첨가하고, 37℃의 어두운 곳에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 50mmol/L 중탄산암모늄 중 0.5μg/mL 시퀀싱 등급 변형된 트립신(Promega) 160μL를 첨가하고, 37℃에서 밤새 배양하였다. 마지막으로, 임의의 잔류 트립신을 불활성화시키기 위해 10% 트라이플루오로아세트산 5μL를 첨가하였다. 50μL의 소화 샘플을 LC/ESI-MS/MS로 분석하였다.

[LC/ESI-MS/MS 분석]

LC/ESI-MS/MS를, 2D I-클래스 UPLC(Waters)를 구비한 Xevo TQ-S 트리플 4중극 기기(Waters)를 사용하여 수행하였다. 각각 필리핀원숭이 C1s, 인간 C1s 및 필리핀원숭이 C1q에 특이적인 펩티드인 LLEVPEAR, LLEVPEGR 및 YQSVFTVAR을 선택 반응 모니터링(SRM)에 의해 모니터링했다. SRM 트랜지션은 [M+2H]2+(m/z 463.8 내지 y6 이온(m/z 700.3)), [M+2H]2+(m/z 456.8 내지 y6 이온(m/z 686.4)) 및 [M+2H]2+(m/z 535.8 내지 y7 이온(m/z 779.4))로 하였다. 각 교정 곡선은 농도에 대해 플롯된 피크 면적을 사용하는 가중(1/x2) 선형 회귀에 의해 생성되었다. 분석 소프트웨어 Masslynx 버전 4.1(Waters)을 사용하여 교정 곡선으로부터 필리핀원숭이 혈장의 농도를 계산했다.

필리핀원숭이에서의 항C1s 항체 투여 후 총 C1s 및 C1q의 약물 동태 평가

COS0098pHv1-SG1077을 필리핀원숭이에 투여한 후, 필리핀원숭이 C1s 및 C1q의 생체 내 약물 동태를 평가하였다. 3마리의 수컷 원숭이를 각 투여군에 할당하였다.

0일째, COS0098pHv1-SG1077을 10mg/kg의 일 용량으로 원숭이에게 정맥 주사하였다. COS0098pHv1-SG1077의 용량 설정은 주사 직후 혈장 필리핀원숭이 C1s 및 C1q의 농도의 초과 농도로 조절되었다. 주사 1일 전, 및 주사 5분, 2시간, 8시간, 1일, 2일, 4일, 7일, 14일, 21일 및 28일 후에 혈액을 수집하였다.

이 혈액 샘플을 즉시 원심 분리하고, 혈장 샘플을 분리했다. 각 샘플 수집 시점에서 필리핀원숭이 C1s 및 C1q의 혈장 농도를 LC/ESI-MS/MS로 측정하였다.

SG1077은 Fcγ 수용체 결합성을 향상시키는 돌연변이를 포함한다. 필리핀원숭이 C1s의 혈장 농도는 COS0098pHv1-SG1077 주사 후 기준치의 30% 미만으로 감소하였다(도 3). 마찬가지로, 필리핀원숭이 C1q의 혈장 농도는 COS0098pHv1-SG1077 주사 후 기준치의 20% 미만으로 감소하였다(도 4). 모든 샘플에서, 1차 주사 후 4일, 7일 및 14일째의 혈장 C1q 농도는 정량 한계 미만이었다(4일 및 7일: 9.75μg/mL, 14일: 19.5μg/mL). 이 결과는 COS0098pHv1-SG1077이 C1s 및 C1q의 제거를 촉진하는 강한 능력을 갖는다는 것을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> An antigen-binding molecule, a pharmaceutical composition, and a method <130> C1-A1913P <150> JP 2019-092472 <151> 2019-05-15 <150> JP 2019-155042 <151> 2019-08-27 <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 701 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 1 Met Trp Cys Ile Ile Leu Phe Ser Leu Leu Ala Trp Val Tyr Ala Glu 1 5 10 15 Pro Thr Met Tyr Gly Glu Ile Leu Ser Pro Asn Tyr Pro Gln Ala Tyr 20 25 30 Pro Ser Glu Val Glu Lys Ser Trp Asp Ile Glu Val Pro Glu Gly Tyr 35 40 45 Gly Ile His Leu Tyr Phe Thr His Leu Asp Ile Glu Leu Ser Glu Asn 50 55 60 Cys Ala Tyr Asp Ser Val Gln Ile Met Ser Gly Asp Ile Glu Glu Gly 65 70 75 80 Arg Leu Cys Gly Gln Arg Thr Ser Asn Asn Pro Tyr Ser Pro Ile Val 85 90 95 Glu Glu Phe Gln Val Pro Tyr Asn Lys Leu Gln Val Ile Phe Lys Ser 100 105 110 Asp Phe Ser Asn Glu Glu Arg Phe Thr Gly Phe Ala Ala Tyr Tyr Val 115 120 125 Ala Thr Asp Ile Asn Glu Cys Thr Asp Phe Val Asp Ala Pro Cys Ser 130 135 140 His Phe Cys Asn Asn Phe Ile Gly Gly Tyr Phe Cys Ser Cys Pro Pro 145 150 155 160 Glu Tyr Phe Leu His Asp Asp Met Lys Asn Cys Gly Val Asn Cys Ser 165 170 175 Gly Asp Val Phe Thr Ala Leu Ile Gly Glu Ile Ala Ser Pro Asn Tyr 180 185 190 Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Asn Ser Arg Cys Glu Tyr Gln Ile Arg Leu 195 200 205 Glu Lys Gly Phe Gln Val Val Val Thr Val Arg Arg Glu Asp Phe Asp 210 215 220 Val Glu Pro Ala Asp Ser Glu Gly Asn Cys Leu Asp Ser Leu Val Phe 225 230 235 240 Val Ala Gly Asp Gln Gln Phe Gly Pro Tyr Cys Gly Arg Gly Phe Pro 245 250 255 Gly Pro Leu Asn Ile Glu Thr Lys Ser Asn Val Leu Asp Ile Ile Phe 260 265 270 Gln Thr Asp Leu Thr Gly Gln Asn Lys Gly Trp Lys Leu Arg Tyr His 275 280 285 Gly Asp Pro Met Pro Cys Pro Lys Glu Glu Thr Pro Thr Ser Val Trp 290 295 300 Glu Pro Ala Lys Ala Lys Tyr Val Phe Arg Asp Val Val Arg Ile Thr 305 310 315 320 Cys Leu Asp Gly Phe Glu Val Val Glu Gly Arg Val Gly Ala Thr Ser 325 330 335 Phe His Ser Thr Cys Gln Ser Asn Gly Lys Trp Ser Asn Ser Lys Leu 340 345 350 Lys Cys Gln Pro Val Asp Cys Gly Ile Pro Glu Ser Ile Glu Asn Gly 355 360 365 Lys Val Glu Asp Pro Glu Ser Thr Leu Phe Gly Ser Val Thr Arg Tyr 370 375 380 Thr Cys Glu Glu Pro Tyr Tyr Tyr Met Glu Asn Gly Gly Asn Gly Gln 385 390 395 400 Tyr His Cys Ala Ser Asn Gly Ser Trp Val Asn Glu Ala Leu Ser Pro 405 410 415 Glu Leu Pro Lys Cys Val Pro Val Cys Gly Val Pro Arg Glu Pro Phe 420 425 430 Glu Gly Lys Gln Arg Ile Ile Gly Gly Ser Asp Ala Asp Ile Lys Asn 435 440 445 Phe Pro Trp Gln Val Phe Phe Asp Asn Pro Trp Ala Gly Gly Ala Leu 450 455 460 Ile Asp Glu Tyr Trp Val Leu Thr Ala Ala His Val Val Glu Gly Asn 465 470 475 480 Gln Glu Pro Thr Met Tyr Val Gly Ser Thr Ser Val Gln Thr Ser Arg 485 490 495 Leu Ala Lys Ser Lys Met Leu Thr Ser Glu Arg Val Phe Ile His Pro 500 505 510 Gly Trp Lys Leu Leu Glu Val Pro Glu Ala Arg Thr Asn Phe Asp Asn 515 520 525 Asp Ile Ala Leu Val Gln Leu Lys Asp Pro Val Lys Met Gly Pro Thr 530 535 540 Val Ala Pro Ile Cys Leu Pro Gly Thr Ser Ser Asp Tyr Asn Leu Met 545 550 555 560 Asp Gly Asp Leu Gly Leu Ile Ala Gly Trp Gly Arg Thr Glu Lys Arg 565 570 575 Asp Arg Ala Leu Arg Leu Lys Ala Ala Arg Leu Pro Val Ala Pro Leu 580 585 590 Arg Lys Cys Arg Glu Val Lys Val Glu Asn Pro Lys Ala Asp Ala Gly 595 600 605 Ala Tyr Val Phe Thr Pro Asn Met Ile Cys Ala Gly Gly Glu Lys Gly 610 615 620 Met Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Ala Phe Ala Val Gln Asp 625 630 635 640 Pro Asn Asp Lys Thr Lys Phe Tyr Val Ala Gly Leu Val Ser Trp Gly 645 650 655 Pro Gln Cys Gly Thr Tyr Gly Leu Tyr Thr Arg Val Gln Asn Tyr Val 660 665 670 Asp Trp Ile Lys Lys Thr Met Gln Glu Asn Ser Thr Pro Ser Lys Asp 675 680 685 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 690 695 700 <210> 2 <211> 718 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 2 Met Trp Leu Leu Tyr Leu Leu Val Pro Ala Leu Phe Cys Arg Ala Gly 1 5 10 15 Gly Ser Ile Pro Ile Pro Gln Lys Leu Phe Gly Glu Val Thr Ser Pro 20 25 30 Leu Phe Pro Lys Pro Tyr Pro Asn Ser Phe Glu Thr Thr Thr Val Ile 35 40 45 Thr Val Pro Thr Gly Tyr Arg Val Lys Leu Val Phe Gln His Phe Asp 50 55 60 Leu Glu Pro Ser Glu Gly Cys Phe Tyr Asp Tyr Val Lys Ile Ser Ala 65 70 75 80 Asp Lys Lys Asn Leu Gly Arg Phe Cys Gly Gln Leu Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Gly Asn Pro Pro Gly Lys Lys Glu Phe Leu Ser Gln Gly Asn Lys Met 100 105 110 Leu Leu Thr Phe His Thr Asp Phe Ser Asn Glu Glu Asn Gly Thr Ile 115 120 125 Met Phe Tyr Lys Gly Phe Leu Ala Tyr Tyr Gln Ala Val Asp Leu Asp 130 135 140 Glu Cys Ala Ser Gln Ser Glu Ser Gly Glu Lys Asp Pro Gln Pro Gln 145 150 155 160 Cys Gln His Leu Cys His Asn Tyr Val Gly Gly Tyr Phe Cys Ser Cys 165 170 175 Arg Pro Gly Tyr Glu Leu Gln Glu Asp Arg His Ser Cys Gln Ala Glu 180 185 190 Cys Ser Ser Glu Leu Tyr Thr Glu Ala Ser Gly Tyr Ile Ser Ser Leu 195 200 205 Glu Tyr Pro Arg Ser Tyr Pro Pro Asp Leu Arg Cys Asn Tyr Ser Ile 210 215 220 Arg Val Glu Arg Gly Leu Thr Leu His Leu Lys Phe Leu Glu Pro Phe 225 230 235 240 Glu Ile Asp Asp His Gln Gln Val His Cys Pro Tyr Asp Gln Leu Gln 245 250 255 Ile Tyr Ala Asn Gly Lys Asn Ile Gly Glu Phe Cys Gly Lys Gln Arg 260 265 270 Pro Pro Asp Phe Asp Thr Ser Ser Asn Ala Val Asp Leu Leu Phe Phe 275 280 285 Thr Asp Glu Ser Gly Asp Ser Arg Gly Trp Lys Leu Arg Tyr Thr Thr 290 295 300 Glu Ile Ile Lys Cys Pro Gln Pro Lys Thr Leu Asp Glu Phe Thr Val 305 310 315 320 Ile Gln Asn Leu Gln Pro Gln Tyr Gln Phe Arg Asp Tyr Phe Ile Ala 325 330 335 Thr Cys Lys Leu Gly Tyr Gln Leu Ile Glu Gly Asn Gln Val Leu His 340 345 350 Ser Phe Thr Ala Val Cys Gln Asp Asp Gly Thr Trp His Arg Ala Met 355 360 365 Pro Arg Cys Lys Ile Lys Asp Cys Gly Gln Pro Arg Asn Leu Pro Asn 370 375 380 Gly Ala Phe Arg Tyr Thr Thr Thr Met Gly Val Asn Thr Tyr Lys Ala 385 390 395 400 Arg Ile Gln Tyr Tyr Cys His Glu Pro Tyr Tyr Lys Met Gln Thr Arg 405 410 415 Ala Gly Ser Lys Glu Ser Glu Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Thr Ala Gln 420 425 430 Gly Ile Trp Lys Asn Glu Gln Lys Gly Glu Lys Ile Pro Arg Cys Leu 435 440 445 Pro Val Cys Gly Lys Pro Val Asn Pro Val Glu Gln Arg Gln Gln Ile 450 455 460 Ile Gly Gly Gln Lys Ala Lys Met Gly Asn Phe Pro Trp Gln Val Phe 465 470 475 480 Thr Asn Ile His Gly Arg Gly Gly Gly Ala Leu Leu Gly Asp Arg Trp 485 490 495 Ile Leu Thr Ala Ala His Thr Leu Tyr Pro Lys Glu His Glu Ala Gln 500 505 510 Ser Asn Ala Ser Leu Asp Val Phe Leu Gly His Thr Asn Val Glu Glu 515 520 525 Leu Met Lys Leu Ala Asn His Pro Ile Arg Arg Val Ser Ile His Pro 530 535 540 Asp Tyr Arg Gln Asp Glu Ser His Asn Phe Glu Gly Asp Ile Ala Leu 545 550 555 560 Leu Glu Leu Glu Asn Ser Val Thr Leu Gly Pro Asn Leu Leu Pro Ile 565 570 575 Cys Leu Pro Asp Asn Glu Thr Phe Tyr Asp Leu Gly Leu Met Gly Tyr 580 585 590 Val Ser Gly Phe Gly Val Met Glu Glu Lys Ile Ala His Asp Leu Arg 595 600 605 Phe Val Arg Leu Pro Val Ala Asn Arg Lys Asp Cys Glu Thr Trp Leu 610 615 620 Arg Gly Lys Asn Arg Leu Asp Val Phe Ser Gln Asn Met Phe Cys Ala 625 630 635 640 Gly His Pro Ser Leu Lys Gln Asp Ala Cys Gln Gly Asp Ala Gly Gly 645 650 655 Val Phe Ala Val Arg Asp Pro Asn Thr Asp Arg Trp Ile Ala Thr Gly 660 665 670 Ile Val Ser Trp Gly Ile Gly Cys Ser Lys Gly Tyr Gly Phe Tyr Thr 675 680 685 Lys Val Leu Asn Tyr Val Asp Trp Ile Lys Lys Glu Met Glu Glu Glu 690 695 700 Asp Gly Gly Gly Gly Ser His His His His His His His His 705 710 715 <210> 3 <211> 688 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Trp Cys Ile Val Leu Phe Ser Leu Leu Ala Trp Val Tyr Ala Glu 1 5 10 15 Pro Thr Met Tyr Gly Glu Ile Leu Ser Pro Asn Tyr Pro Gln Ala Tyr 20 25 30 Pro Ser Glu Val Glu Lys Ser Trp Asp Ile Glu Val Pro Glu Gly Tyr 35 40 45 Gly Ile His Leu Tyr Phe Thr His Leu Asp Ile Glu Leu Ser Glu Asn 50 55 60 Cys Ala Tyr Asp Ser Val Gln Ile Ile Ser Gly Asp Thr Glu Glu Gly 65 70 75 80 Arg Leu Cys Gly Gln Arg Ser Ser Asn Asn Pro His Ser Pro Ile Val 85 90 95 Glu Glu Phe Gln Val Pro Tyr Asn Lys Leu Gln Val Ile Phe Lys Ser 100 105 110 Asp Phe Ser Asn Glu Glu Arg Phe Thr Gly Phe Ala Ala Tyr Tyr Val 115 120 125 Ala Thr Asp Ile Asn Glu Cys Thr Asp Phe Val Asp Val Pro Cys Ser 130 135 140 His Phe Cys Asn Asn Phe Ile Gly Gly Tyr Phe Cys Ser Cys Pro Pro 145 150 155 160 Glu Tyr Phe Leu His Asp Asp Met Lys 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Gly Ser Val Ile Arg Tyr 370 375 380 Thr Cys Glu Glu Pro Tyr Tyr Tyr Met Glu Asn Gly Gly Gly Gly Glu 385 390 395 400 Tyr His Cys Ala Gly Asn Gly Ser Trp Val Asn Glu Val Leu Gly Pro 405 410 415 Glu Leu Pro Lys Cys Val Pro Val Cys Gly Val Pro Arg Glu Pro Phe 420 425 430 Glu Glu Lys Gln Arg Ile Ile Gly Gly Ser Asp Ala Asp Ile Lys Asn 435 440 445 Phe Pro Trp Gln Val Phe Phe Asp Asn Pro Trp Ala Gly Gly Ala Leu 450 455 460 Ile Asn Glu Tyr Trp Val Leu Thr Ala Ala His Val Val Glu Gly Asn 465 470 475 480 Arg Glu Pro Thr Met Tyr Val Gly Ser Thr Ser Val Gln Thr Ser Arg 485 490 495 Leu Ala Lys Ser Lys Met Leu Thr Pro Glu His Val Phe Ile His Pro 500 505 510 Gly Trp Lys Leu Leu Glu Val Pro Glu Gly Arg Thr Asn Phe Asp Asn 515 520 525 Asp Ile Ala Leu Val Arg Leu Lys Asp Pro Val Lys Met Gly Pro Thr 530 535 540 Val Ser Pro Ile Cys Leu Pro Gly Thr Ser Ser Asp Tyr Asn Leu Met 545 550 555 560 Asp Gly Asp Leu Gly Leu Ile Ser Gly Trp Gly Arg Thr Glu Lys Arg 565 570 575 Asp Arg Ala Val Arg Leu Lys Ala Ala Arg Leu Pro Val Ala Pro Leu 580 585 590 Arg Lys Cys Lys Glu Val Lys Val Glu Lys Pro Thr Ala Asp Ala Glu 595 600 605 Ala Tyr Val Phe Thr Pro Asn Met Ile Cys Ala Gly Gly Glu Lys Gly 610 615 620 Met Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Ala Phe Ala Val Gln Asp 625 630 635 640 Pro Asn Asp Lys Thr Lys Phe Tyr Ala Ala Gly Leu Val Ser Trp Gly 645 650 655 Pro Gln Cys Gly Thr Tyr Gly Leu Tyr Thr Arg Val Lys Asn Tyr Val 660 665 670 Asp Trp Ile Met Lys Thr Met Gln Glu Asn Ser Thr Pro Arg Glu Asp 675 680 685 <210> 4 <211> 705 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Trp Leu Leu Tyr Leu Leu Val Pro Ala Leu Phe Cys Arg Ala Gly 1 5 10 15 Gly Ser Ile Pro Ile Pro Gln Lys Leu Phe Gly Glu Val Thr Ser Pro 20 25 30 Leu Phe Pro Lys Pro Tyr Pro Asn Asn Phe Glu Thr Thr Thr Val Ile 35 40 45 Thr Val Pro Thr Gly Tyr Arg Val Lys Leu Val Phe Gln Gln Phe Asp 50 55 60 Leu Glu Pro Ser Glu Gly Cys Phe Tyr Asp Tyr Val Lys Ile Ser Ala 65 70 75 80 Asp Lys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Cys Gly Gln Leu Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Gly Asn 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Lys Cys Pro Gln Pro Lys Thr Leu Asp Glu Phe Thr Ile 305 310 315 320 Ile Gln Asn Leu Gln Pro Gln Tyr Gln Phe Arg Asp Tyr Phe Ile Ala 325 330 335 Thr Cys Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Ile Glu Gly Asn Gln Val Leu His 340 345 350 Ser Phe Thr Ala Val Cys Gln Asp Asp Gly Thr Trp His Arg Ala Met 355 360 365 Pro Arg Cys Lys Ile Lys Asp Cys Gly Gln Pro Arg Asn Leu Pro Asn 370 375 380 Gly Asp Phe Arg Tyr Thr Thr Thr Met Gly Val Asn Thr Tyr Lys Ala 385 390 395 400 Arg Ile Gln Tyr Tyr Cys His Glu Pro Tyr Tyr Lys Met Gln Thr Arg 405 410 415 Ala Gly Ser Arg Glu Ser Glu Gln Gly Val Tyr Thr Cys Thr Ala Gln 420 425 430 Gly Ile Trp Lys Asn Glu Gln Lys Gly Glu Lys Ile Pro Arg Cys Leu 435 440 445 Pro Val Cys Gly Lys Pro Val Asn Pro Val Glu Gln Arg Gln Gln Ile 450 455 460 Ile Gly Gly Gln Lys Ala Lys Met Gly Asn Phe Pro Trp Gln Val Phe 465 470 475 480 Thr Asn Ile His Gly Arg Gly Gly Gly Ala Leu Leu Gly Asp Arg Trp 485 490 495 Ile Leu Thr Ala Ala His Thr Leu Tyr Pro Lys Glu His Glu Ala Gln 500 505 510 Ser Asn Ala Ser Leu Asp Val Phe Leu Gly His Thr Asn Val Glu Glu 515 520 525 Leu Met Lys Leu Gly Asn His Pro Ile Arg Arg Val Ser Val His Pro 530 535 540 Asp Tyr Arg Gln Asp Glu Ser Tyr Asn Phe Glu Gly Asp Ile Ala Leu 545 550 555 560 Leu Glu Leu Glu Asn Ser Val Thr Leu Gly Pro Asn Leu Leu Pro Ile 565 570 575 Cys Leu Pro Asp Asn Asp Thr Phe Tyr Asp Leu Gly Leu Met Gly Tyr 580 585 590 Val Ser Gly Phe Gly Val Met Glu Glu Lys Ile Ala His Asp Leu Arg 595 600 605 Phe Val Arg Leu Pro Val Ala Asn Pro Gln Ala Cys Glu Asn Trp Leu 610 615 620 Arg Gly Lys Asn Arg Met Asp Val Phe Ser Gln Asn Met Phe Cys Ala 625 630 635 640 Gly His Pro Ser Leu Lys Gln Asp Ala Cys Gln Gly Asp Ala Gly Gly 645 650 655 Val Phe Ala Val Arg Asp Pro Asn Thr Asp Arg Trp Val Ala Thr Gly 660 665 670 Ile Val Ser Trp Gly Ile Gly Cys Ser Arg Gly Tyr Gly Phe Tyr Thr 675 680 685 Lys Val Leu Asn Tyr Val Asp Trp Ile Lys Lys Glu Met Glu Glu Glu 690 695 700 Asp 705 <210> 5 <211> 279 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 5 Gln Val Asp Thr Thr 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Pro Pro Gly Tyr Gln His His His His 180 185 190 His His <210> 11 <211> 194 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 11 Glu Asp Leu Pro Lys Ala Val Val Phe Leu Glu Pro Gln Trp Tyr Arg 1 5 10 15 Val Leu Glu Lys Asp Ser Val Thr Leu Lys Cys Gln Gly Ala Tyr Ser 20 25 30 Pro Glu Asp Asn Ser Thr Arg Trp Phe His Asn Glu Ser Leu Ile Ser 35 40 45 Ser Gln Thr Ser Ser Tyr Phe Ile Ala Ala Ala Arg Val Asn Asn Ser 50 55 60 Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Thr Ser Leu Ser Thr Leu Ser Asp Pro Val 65 70 75 80 Gln Leu Glu Val His Ile Gly Trp Leu Leu Leu Gln Ala Pro Arg Trp 85 90 95 Val Phe Lys Glu Glu Glu Ser Ile His Leu Arg Cys His Ser Trp Lys 100 105 110 Asn Thr Leu Leu His Lys Val Thr Tyr Leu Gln Asn Gly Lys Gly Arg 115 120 125 Lys Tyr Phe His Gln Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro Lys Ala Thr Leu 130 135 140 Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Ile Gly Ser Lys Asn 145 150 155 160 Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln Asp Leu Ala Val 165 170 175 Ser Ser Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln His 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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 <210> 15 <211> 328 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SG1077 <400> 15 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 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Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims

C1s에 결합하고, 또한 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 Fc 영역을 포함하는 항원 결합 분자로서,
(ⅰ) 상기 중쇄 가변 영역 및/또는 상기 경쇄 가변 영역이, 중성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값에 대한, 산성 pH 범위에서의 C1s에 대한 상기 항원 결합 분자의 KD 값의 비인 KD(산성 pH 범위)/KD(중성 pH 범위)를, 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하는 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고, 제 1 참조 항체의 중쇄 가변 영역이 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 제 1 참조 항체의 경쇄 가변 영역이 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하고;
(ⅱ) 상기 Fc 영역이 산성 pH 범위에서의 FcRn에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을, 쌍형성된(paired) Fc 영역을 포함하는 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하고, 제 2 참조 항체의 Fc 영역이 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하며; 및
(ⅲ) 상기 Fc 영역이 중성 pH 범위에서의 Fcγ 수용체에 대한 상기 항원 결합 분자의 결합능을 제 2 참조 항체의 것과 비교하여 증가시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.
제 1 항에 있어서,
상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이, 상기 항원 결합 분자의 안정성을 제 1 참조 항체의 것과 비교하여 향상시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 항원 결합 분자가 불변 영역을 포함하고, 상기 항원 결합 분자의 Fc 영역이 상기 불변 영역 내에 있으며, 상기 불변 영역이 항원 결합 분자의 면역원성을 저하시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 분자의 Fc 영역이 류마티스 인자(rheumatoid factor)에 대한 결합 활성을 저하시킬 수 있는 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 (ⅰ)의 가변 영역이 이하의 아미노산 중 적어도 하나를 포함하는, 항원 결합 분자;
중쇄 가변 영역에서의 27위의 히스티딘,
중쇄 가변 영역에서의 59위의 프롤린, 및
경쇄 가변 영역에서의 96위의 히스티딘
(모든 번호는 Kabat 넘버링 시스템에 따름).
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 (ⅱ)의 Fc 영역이 428위의 류신, 434위의 알라닌, 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름)으로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 (ⅲ)의 Fc 영역이 이하의 아미노산 중 적어도 하나를 포함하는, 항원 결합 분자;
234위의 티로신,
235위의 트립토판,
236위의 아스파라긴,
238위의 아스파르트산,
250위의 발린,
264위의 아이소류신,
268위의 아스파르트산,
295위의 류신,
307위의 프롤린,
326위의 트레오닌, 및
330위의 라이신
(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름).
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 (ⅲ)의 Fc 영역이 이하의 (a) 또는 (b)의 아미노산을 포함하는, 항원 결합 분자;
(a) 235위의 트립토판, 236위의 아스파라긴, 268위의 아스파르트산, 295위의 류신, 326위의 트레오닌 및 330위의 라이신, 또는
(b) 234위의 티로신, 238위의 아스파르트산, 250위의 발린, 264위의 아이소류신, 307위의 프롤린 및 330위의 라이신
(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 따름).
제 2 항에 있어서,
안정성을 향상시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 중쇄 가변 영역에서의 96위의 알라닌 및 경쇄 가변 영역에서의 53위의 글루탐산 중 하나 또는 양쪽 모두인, 항원 결합 분자(양쪽 번호 모두 Kabat 넘버링 시스템에 따름).
제 3 항에 있어서,
면역원성을 저하시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 EU 넘버링 시스템에 따른 214위의 아르기닌인, 항원 결합 분자.
제 4 항에 있어서,
류마티스 인자에 대한 결합 활성을 저하시킬 수 있는 상기 적어도 하나의 아미노산이 438위의 아르기닌 및 440위의 글루탐산 중 하나 또는 양쪽 모두인, 항원 결합 분자(양쪽 번호 모두 EU 넘버링 시스템에 따름).
C1s에의 결합에 관해, 서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경합하는, 항원 결합 분자.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 인간 유래 프레임워크(framework)를 포함하는, 항원 결합 분자.
서열번호: 18의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VH 영역 및 서열번호: 19의 아미노산 서열에 대해 95%의 동일성을 포함하는 VL 영역 중 하나 또는 양쪽 모두를 포함하는, 항원 결합 분자.
서열번호: 20의 HVR-H1, 서열번호: 21의 HVR-H2, 서열번호: 22의 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호: 23의 HVR-L1, 서열번호: 24의 HVR-L2, 서열번호: 25의 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 중 하나 또는 양쪽 모두를 포함하는, 항원 결합 분자.