KR20220002963A - 시알릴화된 당단백질 - Google Patents

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KR20220002963A
KR20220002963A KR1020217037216A KR20217037216A KR20220002963A KR 20220002963 A KR20220002963 A KR 20220002963A KR 1020217037216 A KR1020217037216 A KR 1020217037216A KR 20217037216 A KR20217037216 A KR 20217037216A KR 20220002963 A KR20220002963 A KR 20220002963A
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시데쉬 디. 파틸
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얀센 바이오테크 인코포레이티드
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Abstract

과시알릴화된 면역글로불린을 함유하는 약제학적 제제가 기술된다. 제제는 전단 응력에 대해 안정하다. 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은, 전단 응력에 대해 안정하여(예를 들어, 제형이, 예를 들어, 운송 중 교반과 같은 전단 응력을 받을 때 상당한 수의 육안으로 보이지 않는 입자가 형성되지 않음) 액체 형태로 운송 및 취급될 수 있는 약제학적으로 허용가능한 hsIgG 조성물을 제공한다.

Description

시알릴화된 당단백질
우선권 주장
본 출원은 2019년 4월 18일자로 출원된 미국 가출원 제62/836,016호의 이익을 주장한다. 전술한 것들의 전체 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
정맥 면역글로불린(IVIg)은 인간 공여자의 풀링된(pooled) 혈장(예를 들어, 적어도 1,000명의 공여자로부터의 풀링된 혈장)으로부터 제조되며, 압도적으로 IgG 항체, 주로 IgG1 항체로 구성되지만 IVIg는 미량의 다른 항체 하위부류(subclass)도 포함할 수 있다. 구매가능한 IVIg 제제는 대체적으로 존재하는 항체의 Fc 도메인 상에서 낮은 수준의 시알릴화를 나타낸다. 구체적으로, 시판 IVIg 제제에서의 항체는 Fc 영역 상에서 분지형 글리칸의 낮은 수준의 다이시알릴화를 나타낸다.
본 명세서에는 과시알릴화된(hypersialylated) 면역글로불린(hsIgG)을 포함하는 약제학적 조성물이 기재된다. hsIgG는 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸 상에 매우 높은 수준의 시알산을 가지며, 예를 들어 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 50%(60%, 70%, 80%, 90% 이상)는 분지형 글리칸의 α1,3 아암 및 α1,6 아암 둘 모두에서 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 시알릴화된다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은, 전단 응력에 대해 안정하여(예를 들어, 제형이, 예를 들어, 운송 중 교반과 같은 전단 응력을 받을 때 상당한 수의 육안으로 보이지 않는(subvisible) 입자가 형성되지 않음) 액체 형태로 운송 및 취급될 수 있는 약제학적으로 허용가능한 hsIgG 조성물을 제공한다. 제형은 또한 희석 시에, 예를 들어 정맥내 투여를 위해 5% 덱스트로스 중에 희석 시에 안정하다. 제형은, 예를 들어, 5℃에서 적어도 7개월 동안 그리고 25℃에서 적어도 1개월 동안, 2 내지 8℃에서 2년 동안 및/또는 15 내지 30℃에서 2주 동안 안정하다.
250 mM 글리신 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20(pH 4 내지 7) 중의 면역글로불린을 포함하는 액체 약제학적 조성물이 본 명세서에 기재되어 있으며, 여기서 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 50%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화된다.
다양한 실시 형태에서, 면역글로불린의 농도는 50 내지250 mg/mL이고; 면역글로불린의 농도는 70 내지 130 mg/mL이고; 면역글로불린의 농도는 80 내지 120 mg/mL이고; 면역글로불린의 농도는 90 내지 110 mg/mL이고; 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린의 Fab 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린의 적어도 90%는 IgG 면역글로불린이고; 면역글로불린의 적어도 95%는 IgG 면역글로불린이고; 면역글로불린의 5 내지 20%는 이량체이고; 면역글로불린의 5 내지 10%는 이량체이고; 면역글로불린의 적어도 80%는 단량체 또는 이량체이고; 면역글로불린의 적어도 85%는 단량체 또는 이량체이고; 면역글로불린의 적어도 90%는 단량체 또는 이량체이거나 IgG 면역글로불린의 5 내지 20%는 이량체이고; IgG 면역글로불린의 5 내지 10%는 이량체이고; IgG 면역글로불린의 적어도 80%는 단량체 또는 이량체이고; IgG 면역글로불린의 적어도 85%는 단량체 또는 이량체이고; IgG 면역글로불린의 적어도 90%는 단량체 또는 이량체이고; IgG 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; IgG 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; IgG 면역글로불린의 Fab 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; pH는 4.7 내지 5.5 이고; pH는 5.1 내지 5.3 이고; 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 1000개 미만의 입자를 가지며; 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 500개 미만의 입자를 가지며; 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 200개 미만의 입자를 가지며; 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린의 Fab 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되고; 면역글로불린의 5 내지 10%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 이량체이고; 면역글로불린의 적어도 85%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 단량체 또는 이량체이고; 면역글로불린의 적어도 90%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 단량체 또는 이량체이고; 보관은 밀봉된 미국 약전 타입 1 유리 바이알 내에서 수행되며; 보관은 밀봉된 2R 타입 1 유리 주사 바이알 내에서 수행된다.
hsIgG에서, 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 50%(예를 들어, 60%, 70%, 80%, 82%, 85%, 87%, 90%, 92%, 94%, 95%, 97%, 98%, 최대 100%)는 α 1,3 아암 및 α 1,6 아암 둘 모두 상에 시알산 잔기를 갖는다(즉, NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화됨). 일부 실시 형태에서, Fc 시알릴화에 더하여, Fab 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 50%(예를 들어, 60%, 70%, 80%, 82%, 85%, 87%, 90%, 92%, 94%, 95%, 97%, 98% 또는 최대 100%)는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화된다. 일부 경우에, 총 분지형 글리칸(Fc 및 Fab 도메인 상의 글리칸의 합)의 적어도 85%(87%, 90%, 92%, 94%, 95%, 97%, 98% 내지 100%)는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화된다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 50% 미만(예를 들어, 40%, 30%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만)은 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 모노-시알릴화된다(예를 들어, α 1,3 아암 또는 α 1,6 아암 상에서만 시알릴화됨). HsIgG 제제의 면역글로불린은 주로 IgG 항체이다(예를 들어, 면역글로불린의 적어도 80%, 85%, 90%, 95% wt/wt는 다양한 동종형의 IgG 항체임).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 영역"은 2개의 "Fc 폴리펩티드"의 이량체를 지칭하며, 각각의 "Fc 폴리펩티드"는 CH1 도메인을 제외한 항체의 불변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, "Fc 영역"은 하나 이상의 이황화물 결합, 화학적 링커, 또는 펩티드 링커에 의해 연결된 2개의 Fc 폴리펩티드를 포함한다. "Fc 폴리펩티드"는 IgA, IgD, 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인을 지칭하며, 또한 이들 도메인에 대해 N-말단에 있는 가요성 힌지의 일부 또는 전부를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "글리칸"은 당으로서, 이는 당 잔기 - 예컨대 적어도 3개의 당 - 의 단량체 또는 중합체일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. "글리칸"은 천연 당 잔기(예를 들어, 글루코스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸 뉴라민산, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 헥소스, 아라비노스, 리보스, 자일로스 등) 및/또는 변형된 당(예를 들어, 2'-플루오로리보스, 2'-데옥시리보스, 포스포만노스, 6'-설포 N-아세틸글루코사민 등)을 포함할 수 있다. 용어 "글리칸"은 당 잔기의 동종중합체 및 이종중합체를 포함한다. 용어 "글리칸"은 또한 (예를 들어, 폴리펩티드, 당지질, 프로테오글리칸 등의) 당접합체의 글리칸 성분을 포함한다. 이 용어는 또한 유리 글리칸을 포함하는데, 이에는 당접합체로부터 절단되었거나 달리 방출된 글리칸이 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "당단백질"은 하나 이상의 당 모이어티(즉, 글리칸)에 공유 결합된 펩티드 골격을 함유하는 단백질을 지칭한다. 당 모이어티(들)는 단당류, 이당류, 올리고당류, 및/또는 다당류의 형태일 수 있다. 당 모이어티(들)는 당 잔기의 단일 비분지쇄를 포함할 수 있거나 하나 이상의 분지쇄를 포함할 수 있다. 당단백질은 O-연결된 당 모이어티 및/또는 N-연결된 당 모이어티를 함유할 수 있다.
IVIg는 적어도 1,000명의 인간 공여자의 혈장으로부터 추출된 4가지 IgG 동종형 모두를 포함하는 풀링된, 다가 면역글로불린의 제제이다. 미국에서 사용이 승인된 IVIg의 형태 중에는 감마가드(Gammagard)(박스터 헬스케어 코포레이션(Baxter Healthcare Corporation)), 감마플렉스(Gammaplex)(바이오 프로덕츠 래보러토리(Bio Products Laboratory)), 비비감(Bivigam)(바이오테스트 파마슈티칼스 코포레이션(Biotest Pharmaceuticals Corporation)), 카리뮨 엔에프(Carimmune NF)(씨에스엘 베링 에이지(CSL Behring AG)), 가뮨스-C(Gamunes-C)(그리폴스 테라퓨틱스, 인크.(Grifols Therapeutics, Inc.)), 글레보감마 DID(Glebogamma DID)(인스티튜토 그리폴스, 에스에이(Instituto Grifols, SA)) 및 옥타감(Octagam)(옥타파마 파마주티카 프로덕티온스게스 엠비에이치(Octapharma Pharmazeutika Produktionsges Mbh))이 있다. IVIg는 면역 결핍 환자를 위한 그리고 다른 용도를 위한 혈장 단백질 대체 요법으로서 승인되어 있다. IVIg Fc 글리칸 시알릴화의 수준은 IVIg 제제마다 다르지만, 대체적으로 20% 미만이다. 다이시알릴화의 수준은 대체적으로 훨씬 더 낮다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "Fc 폴리펩티드의 N-글리코실화 부위"는 글리칸이 N-연결된 Fc 폴리펩티드 내의 아미노산 잔기를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 Fc 폴리펩티드의 이량체를 함유하며, Fc 영역은 각각의 Fc 폴리펩티드 상에 하나씩, 2개의 N-글리코실화 부위를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "분지형 글리칸의 백분율(%)"은 존재하는 글리칸의 총 몰에 대한 글리칸 X의 몰 수를 지칭하며, 여기서 X는 관심 글리칸을 나타낸다.
용어 "약제학적 유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 본 명세서에 기재된 장애 또는 병태를 갖는, 환자를 치료하는 데 효과적인 양(예를 들어, 용량)을 지칭한다. "약제학적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 취해진, 1회 용량 또는 임의의 투여량 또는 경로에서 취해진, 원하는 치료 효과를 제공하는 양으로 해석될 수 있음이 또한 이해되어야 한다.
"약제학적 제제" 및 "약제학적 제품"은 제제 또는 제품 및 사용 설명서를 포함하는 키트에 포함될 수 있다.
"약제학적 제제" 및 "약제학적 제품"은 대체적으로 최종으로 미리 결정된 수준의 시알릴화가 달성되고, 공정 불순물이 없는 조성물을 지칭한다. 이를 위해, "약제학적 제제" 및 "약제학적 제품"에는 ST6Gal 시알릴트랜스퍼라제 및/또는 시알산 공여체(예를 들어, 시티딘 5'-모노포스포-N-아세틸 뉴라민산) 또는 이의 부산물(예를 들어, 시티딘 5'-모노포스페이트)이 실질적으로 없다.
"약제학적 제제" 및 "약제학적 제품"에는, 재조합인 경우, 대체적으로 당단백질이 생성된 세포의 다른 구성 요소(예를 들어, 소포체 또는 세포질 단백질 및 RNA)가 실질적으로 없다.
"정제된"(또는 "단리된")이란, 천연 환경에 존재하는 다른 성분들로부터 제거되거나 분리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 단리된 폴리펩티드는 이것을 생성한 세포의 다른 성분들(예를 들어, 소포체 또는 세포질 단백질 및 RNA)로부터 분리된 것이다. 단리된 폴리뉴클레오티드는 다른 핵 성분(예를 들어, 히스톤)으로부터 그리고/또는 상류 또는 하류 핵산으로부터 분리된 것이다. 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드에는 표시된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 천연 환경에 존재하는 다른 성분이 적어도 60% 없거나, 적어도 75% 없거나, 적어도 90% 없거나, 적어도 95% 없을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "시알릴화된"은 말단 시알산을 갖는 글리칸을 지칭한다. 용어 "모노-시알릴화된"은, 예를 들어 α1,3 아암 또는 α1,6 아암 상에 하나의 말단 시알산을 갖는 분지형 글리칸을 지칭한다. 용어 "다이시알릴화된"은, 2개의 아암 상에, 예를 들어 α1,3 아암 및 α1,6 아암 둘 모두 상에 말단 시알산을 갖는 분지형 글리칸을 지칭한다.
도 1은 분지형 글리칸의 예를 개략적으로 도시한다. 밝은 원은 Gal이고; 어두운 원은 Man이고; 삼각형은 Fuc이고, 다이아몬드는 NANA이며; 정사각형은 GlcNAc이다.
도 2 좌측 패널: 풀링된 면역글로불린을 hsIgG로 변환하기 위한 효소적 시알릴화 반응의 도식적 표현. 우측 패널: 출발 IVIg에 대한 그리고 IVIg로부터 효소적으로 제조된 hsIgG에 대한 IgG Fc 글리칸 프로파일. 상이한 IgG 하위부류에 대한 글리칸 프로파일은 글리코펩티드(glycopeptide) 질량 분석법 분석을 통해 유도된다. 상이한 IgG 하위부류에 대해 글리코펩티드를 정량화하는 데 사용되는 펩티드 서열은 다음과 같다: IgG1 = EEQYNSTYR, IgG2/3 EEQFNSTFR, IgG3/4 EEQYNSTFR 및 EEQFNSTYR.
도 3은 전단 응력을 받은 IVIg에 사용되는 통상적인 제형의 hsIgG의 바이알을 도시한다.
도 4는 전단 응력을 받은 본 발명의 제형의 hsIgG의 바이알을 도시한다.
면역글로불린은 그들의 중쇄의 불변 영역 내의 보존된 위치에서 글리코실화된다. 예를 들어, 인간 IgG는 CH2 도메인의 Asn297에서 단일 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는다. 각각의 면역글로불린 타입은 불변 영역 내에 별개의 다양한 N-연결된 탄수화물 구조를 갖는다. 인간 IgG의 경우, 코어 올리고당은 상이한 개수의 외부 잔기를 갖는 GlcNAc2Man3GlcNAc로 통상 구성된다. 한쪽 또는 양쪽 말단 GlcNAc에서의 갈락토스 및/또는 갈락토스-시알산의 부착을 통해 또는 제3 GlcNAc 아암(GlcNAc를 양분함)의 부착을 통해 개별 IgG 사이의 변형이 일어날 수 있다.
본 발명은, 부분적으로는, Fc 영역 내의 분지형 글리칸 둘 모두 상에 시알릴화된 특정 수준의 분지형 글리칸을 갖는 Fc 영역을 갖는 풀링된 인간 면역글로불린을 포함하는 약제학적 제제를 포함한다(예를 들어, NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 가짐).
IVIg 제제를 포함하는 풀링된 다가 인간 면역글로불린의 제제는 매우 복잡한데, 그 이유는 이들이 여러 면에 있어서 매우 불균질하기 때문이다. 이들은 수백명 또는 1000명 이상의 개체로부터 풀링된 면역글로불린을 포함한다. 면역글로불린의 적어도 약 90% 또는 95%가 (모든 하위부류의) IgG 동종형이지만, IgA 및 IgM을 포함하는 다른 동종형이 존재한다. IVIg 내의 면역글로불린 및 풀링된 다가 인간 면역글로불린의 제제는 특이성 및 글리코실화 패턴 둘 모두에서 다양하다.
풀링된 다가 면역글로불린의 과시알릴화는 면역글로불린 상에 존재하는 글리칸을 변경시킨다. 일부 글리칸의 경우, 변경은 하나 이상의 갈락토스 분자의 부가 및 하나 이상의 시알산 분자의 부가를 수반한다. 다른 글리칸의 경우, 변경은 하나 이상의 시알산 분자의 부가만을 수반한다. 더욱이, 본질적으로 모든 IgG 항체 중, 풀링된 다가 면역글로불린의 제제에서 우세한 면역글로불린은 Fc 영역을 형성하는 각 폴리펩티드 상에 글리코실화 부위를 갖지만, 모든 IgG 항체가 Fab 도메인 상에 글리코실화 부위를 갖는 것은 아니다. 면역글로불린 제제의 글리코실화의 변경은 제제에서 개별 면역글로불린의 구조 및 활성을 변경시키고, 중요하게는, 면역글로불린의 제제의 벌크 거동뿐만 아니라 개별 면역글로불린들 사이의 상호작용을 변경시킨다.
IVIg 제제에 사용되는 널리 사용되는 제형은, 적어도 제형이 hsIgG에 사용될 때 약제학적 제형의 정상적인 운송에서 일어나는 전단 응력에 대해 안정하지 않기 때문에 과시알릴화된 면역글로불린(hsIgG)의 약제학적 제제에 완전히 부적합하다. 이러한 타입의 전단 응력을 받을 때, 육안으로 보이지 않는 입자가 hsIgG 제형에서 형성된다. 항체 제제 내의 이러한 육안으로 보이지 않는 입자는 주사 부위 및 오프 타깃(off target) 면역 반응 부위에서 심각한 부작용을 야기할 수 있는 것으로 알려져 있다. 항체 제제 내의 육안으로 보이지 않는 입자는 또한 보체 시스템을 활성화하고, 색전증(embolism), 및 다른 음성 면역원성 반응을 야기할 수 있다. 비이온성 계면활성제의 첨가는 hsIgG 제제를 전단 응력에 대해 더욱 안정하게 만들고 육안으로 보이지 않는 입자의 형성을 크게 감소시키는 것으로 밝혀졌다.
hsIgG를 제조하는데 사용될 수 있는 천연 유래 폴리펩티드는, 예를 들어, 풀링된 인간 혈청으로부터 단리된 면역글로불린을 포함한다. HsIgG는 IVIg, 및 IVIg로부터 유래된 폴리펩티드로부터 또한 제조될 수 있다. HsIgG는 국제 특허 공개 WO2014/179601호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. hsIgG의 제조는 또한 문헌[Washburn et al (Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Mar 17;112(11):E1297-306)]에 기재되어 있다. hsIgG 제제에서의 시알릴화 수준은 Fc 도메인에 대해(예를 들어, Fc 도메인 내의 분지형 글리칸의 α1,3 아암, α1,6 암, 또는 둘 모두 상에서 시알릴화된 분지형 글리칸의 수) 또는 전체 시알릴화에 대해(예를 들어, Fc 도메인 상이든 Fab 도메인 상이든 간에 폴리펩티드의 제제에서 분지형 글리칸의 α1,3 아암, α1,6 아암, 또는 둘 모두 상에서 시알릴화된 분지형 글리칸의 수 또는 백분율) 측정될 수 있다.
일부 경우에, hsIgG를 제조하기 위한 면역글로불린의 공급원으로서 사용되는 풀링된 혈청은 특정 개체군, 예를 들어 COVID-19, SARS, 파라인플루엔자, 인플루엔자와 같은 하나 이상의 바이러스에 대한 항체를 생성하지만 활동성 감염을 갖지 않는 개체군으로부터 단리된다. 일부 경우에, 면역글로불린은 50%, 55%, 60%, 75% 초과가 선택된 바이러스에 대한 항체를 생성하는 개체군으로부터 단리된다.
N-연결된 올리고당 사슬은 소포체의 내강 내의 단백질에 부가된다. 구체적으로는, 초기 올리고당(전형적으로 14-당)이 Asn-X-Ser/Thr의 표적 컨센서스 서열 내에 함유된 아스파라긴 잔기의 측쇄 상의 아미노 기에 부가되며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있다. 이러한 초기 올리고당의 구조는 대부분의 진핵생물에 공통적이며, 3개의 글루코스, 9개의 만노스, 및 2개의 N-아세틸글루코사민 잔기를 함유한다. 이러한 초기 올리고당 사슬은 소포체 내의 특정 글리코시다제 효소에 의해 트리밍되어, 2개의 N-아세틸글루코사민 및 3개의 만노스 잔기로 구성된 짧은 분지형 코어 올리고당을 생성할 수 있다 도 1에 도시된 바와 같이, 분지들 중 하나는 당업계에서 "α 1,3 아암"으로 지칭되고, 제2 분지는 "α 1,6 아암"으로 지칭된다.
N-글리칸은 "고 만노스형(high mannose type)", "하이브리드형(hybrid type)", 및 "복합형(complex type)"으로 불리는 3개의 별개의 그룹으로 세분될 수 있으며, 3개의 그룹 모두에서 공통 오당 코어 (Man (α 1,6)-(Man(α 1,3))-Man(β 1,4)-GlcpNAc(β 1,4)-GlcpNAc(β 1,N)-Asn)가 존재한다.
소포체에서의 초기 처리 후, 폴리펩티드는 골지(Golgi)로 수송되고 여기서 추가의 처리가 일어날 수 있다. 글리칸이 코어 오당 구조로 완전히 트리밍되기 전에 골지에 전달되는 경우, 이는 "고-만노스 글리칸"을 생성한다.
추가적으로 또는 대안적으로, N-아세틸글루코사민의 하나 이상의 단당 단위가 코어 만노스 하위단위에 부가되어 "복합 글리칸"을 형성할 수 있다. 갈락토스가 N-아세틸글루코사민 하위단위에 부가될 수 있고, 시알산 하위단위가 갈락토스 하위단위에 부가될 수 있으며, 그 결과 시알산, 갈락토스 또는 N-아세틸글루코사민 잔기 중 어느 하나로 종결되는 사슬이 생성될 수 있다. 추가적으로, 푸코스 잔기가 코어 올리고당의 N-아세틸글루코사민 잔기에 부가될 수 있다. 이들 각각의 부가는 특정 글리코실 트랜스퍼라제에 의해 촉매된다.
"하이브리드 글리칸"은 고-만노스 글리칸 및 복합 글리칸 둘 모두의 특성을 포함한다. 예를 들어, 하이브리드 글리칸의 하나의 분지는 주로 또는 오로지 만노스 잔기만을 포함할 수 있는 반면, 다른 분지는 N-아세틸글루코사민, 시알산, 갈락토스 및/또는 푸코스 당을 포함할 수 있다.
시알산은 헤테로사이클릭 고리 구조를 갖는 9-탄소 단당의 패밀리이다. 이들은 상기 고리에 부착된 카르복실산 기를 통해 음전하를 가질 뿐만 아니라, N-아세틸 및 N-글리콜릴 기를 포함한 다른 화학적 장식(chemical decoration)을 통해 음전하를 가진다. 포유류 발현 시스템에서 생성되는 폴리펩티드에서 발견되는 2가지 주요 타입의 시알릴 잔기는 N-아세틸-뉴라민산(NeuAc) 및 N-글리콜릴뉴라민산(NeuGc)이다. 이들은 통상 N-연결된 글리칸 및 O-연결된 글리칸 둘 모두의 비환원성 말단에서 갈락토스(Gal) 잔기에 부착된 말단 구조로서 존재한다. 이들 시알릴 기에 대한 글리코시드 연결 구성은 α 2,3 또는 α 2,6 중 어느 하나일 수 있다.
Fc 영역은 보존된 N-연결된 글리코실화 부위에서 글리코실화된다. 예를 들어, IgG 항체의 각각의 중쇄는 CH2 도메인의 Asn297에서 단일 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는다. IgA 항체는 CH2 및 CH3 도메인 내에 N-연결된 글리코실화 부위를 갖고, IgE 항체는 CH3 도메인 내에 N-연결된 글리코실화 부위를 가지며, IgM 항체는 CH1, CH2, CH3, 및 CH4 도메인 내에서 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는다.
각각의 항체 동종형은 불변 영역 내에 별개의 다양한 N-연결된 탄수화물 구조를 갖는다. 예를 들어, IgG는 Fc 영역의 각각의 Fc 폴리펩티드 내의 CH2 도메인의 Asn297에서 단일 N-연결된 바이안테나리(biantennary) 탄수화물을 가지며, 이는 C1q 및 FcγR에 대한 결합 부위를 또한 함유한다. 인간 IgG의 경우, 코어 올리고당은 상이한 개수의 외부 잔기를 갖는 GlcNAc2Man3GlcNAc로 통상 구성된다. 한쪽 또는 양쪽 말단 GlcNAc에서의 갈락토스 및/또는 갈락토스-시알산의 부착을 통해 또는 제3 GlcNAc 아암(GlcNAc를 양분함)의 부착을 통해 개별 IgG 사이의 변형이 일어날 수 있다. 폴리펩티드의 글리칸은 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 글리칸 조성물의 시알릴화(예를 들어, α1,3 아암 및/또는 α1,6 아암 상에 시알릴화된 분지형 글리칸의 수준)는 국제 특허 공개 WO2014/179601호에 기재된 방법을 사용하여 특성화될 수 있다.
hsIgG를 함유하는 조성물은 항체 단량체 외에 항체의 이량체 및 응집체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, pH는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 중량% 순도에 의해 측정되는 바와 같은 조성물 중의 단량체, 이량체, 및 응집체 퍼센트를 조절하는 데 사용될 수 있다. 일부 경우에, pH를 낮추는 것은 용액 중 단량체 + 이량체의 중량%를 증가시킨다. 일부 경우에, pH를 낮추는 것은 용액 중 단량체의 중량%를 증가시킨다. 일부 경우에, pH의 증가는 용액 중 % 단량체를 낮춘다. 일부 경우에, 응집체의 중량%는 3.0% wt/wt 이하(예를 들어, 2.7, 2.5, 2.3, 2.0, 1.7, 1.5, 1.3, 1.0, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 또는 0.1% wt/wt 이하)이다. 일부 경우에, 단량체 + 이량체의 중량%는 97.0% wt/wt 이상(예를 들어, 98% wt/wt 또는 99% wt/wt 이상)이다. 일부 경우에, 단량체의 중량%는 80% wt/wt, 83% wt/wt, 85% wt/wt 또는 87% wt/wt 이상이다. 일부 경우에, pH는 5.3 이하(예를 들어, 5.2, 5.1, 5.0, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5, 4.4, 4.3, 4.2, 4.1, 또는 4.0 이하)이다. 일부 경우에, 약제학적 조성물의 pH는 단량체의 중량%가 변경되도록 조절된다. 일부 경우에, 약제학적 조성물의 pH는 단량체의 중량%가 증가하도록 낮아진다. 일부 경우에, 약제학적 조성물의 pH는 이량체 중량%가 증가하도록 증가된다. 일부 경우에, pH는 단량체의 중량%가 90% wt/wt 이상(예를 들어, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% wt/wt 이상)이 되도록 하는 것이다.
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 설명되며, 이는 청구범위에 기재된 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.
실시예 1: 250 mM 글리신 중에 제형화된 과시알릴화된 IgG
분지형 Fc 영역 글리칸의 60% 초과가 다이시알릴화된 과시알릴화된 IgG를 국제 특허 공개 WO2014/179601호에 대체적으로 기재된 바와 같이 제조하였다.
간략하게는, IVIg는 β1,4 갈락토실트랜스퍼라제1(B4-GalT) 및 α2,6-시알릴트랜스퍼라제(ST6-Gal1) 효소를 사용하는 1-포트(one-pot) 순차 효소 반응에 노출된다. 갈락토실트랜스퍼라제 효소는 IVIg에서 기존의 아스파라긴-연결된 글리칸에 갈락토오스 잔기를 선택적으로 부가한다. 생성된 갈락토실화된 글리칸은 IVIg에 부착된 아스파라긴-연결된 글리칸 구조를 캡핑하기 위해 시알산 잔기를 선택적으로 부가하는 시알산 트랜스퍼라제 효소에 대한 기질로서의 역할을 한다. 따라서, 전체 시알릴화 반응은 2개의 당 뉴클레오티드(UDPGal 및 CMP-NANA)를 이용하였다. 후자는 모노시알릴화된 생성물에 비해 다이시알릴화된 생성물을 증가시키기 위해 주기적으로 보충되었다. 반응은 보조-인자 염화망간을 포함한다.
출발 IVIg 및 반응 생성물에 대한 상응하는 IgG-Fc 글리칸 프로파일의 대표적인 예가 도 1의 우측 패널에 나타나 있다. 글리칸 데이터는 IgG 하위부류별로 나타나 있다. IgG3 및 IgG4 하위부류로부터의 글리칸은 개별적으로 정량화될 수 없다. 도시된 바와 같이, IVIg의 경우, 모든 시알릴화되지 않은 글리칸의 합은 80% 초과이고, 모든 시알릴화된 글리칸의 합은 20% 미만이다. 반응 생성물의 경우, 모든 시알릴화되지 않은 글리칸에 대한 합은 20% 미만이고 모든 시알릴화된 글리칸에 대한 합은 80% 초과이다. 글리코프로파일에 열거된 상이한 글리칸에 대한 명명법은 N 연결된 글리칸에 대한 옥스포드 표기법을 사용한다.
구매가능한 IVIg를 포함하는, 과시알릴화되지 않은 IVIg는 글리신 중에서 대체적으로 안정하며, 예를 들어, 운송 중 교반될 때 육안으로 보이지 않는 입자를 대체적으로 형성하지 않는다. 따라서, 초기 과시알릴화된 IgG(hsIVIg) 제형은 250 mM 글리신 중 109 mg/mL로 제조되었다. pH는 4.7 내지 5.5였다. 제형은 투명 내지 유백색, 무색 내지 옅은 황색 용액이었다. 이 제형을 또한 0.2 마이크로미터 PES 여과막을 통해 PETG 용기 내로 여과 후에 조사하였다. 표 1은 여과-전 및 여과-후 둘 모두에서 이러한 과시알릴화된 IgG 제형의 특성을 제공한다. 글리신 단독 제형은 여과-전 및 여과-후 둘 모두에서 허용가능한 제품 특성을 갖는 것으로 나타났다.
[표 1]
Figure pct00001
250 mM 글리신(pH 4.7 내지 5.5) 제형에 대한 추가 연구에서 hsIgG가 교반 응력을 받는 것으로 나타냈다. 여과-후 샘플을 유리 바이알로 옮기고, 이를 냉장 온도(2 내지 8℃) 조건 하에서 1000 RPM으로 최대 8시간 동안 진탕하였다. 교반 전 및 교반 후 4시간 및 8시간 후에 샘플을 시험하였다. 도 3의 사진으로부터 알 수 있는 바와 같이, 교반은 용액을 혼탁하게 만드는 육안으로 보이지 않는 입자의 형성을 야기하였다. 250 mM(pH 4.7 내지 5.5) 제형은 비행기로 객실 내에서 운송될 때에도 혼탁해지는 것으로 밝혀졌으며, 이는 제형이 의료 제공자와 환자에게 배포되는 동안 육안으로 보이지 않는 입자를 형성할 것임을 시사한다. 육안으로 보이지 않는 입자는 주사 부위 및 오프 타깃 면역 반응 부위에서 심각한 부작용을 야기할 수 있다. 육안으로 보이지 않는 입자는 또한 보체 시스템을 활성화하고, 색전증, 및 다른 음성 면역원성 반응을 야기할 수 있다. 따라서, 안정하며 교반 시에 육안으로 보이지 않는 입자를 형성하지 않을 제형을 설계하는 것이 중요하다.
실시예 2: hsIgG의 안정화된 제형
교반 응력에 안정하지만 250 mM 글리신 제형에 존재하는 바람직한 제품 속성을 여전히 보존하는 hsIVIG 제형을 개발하기 위한 연구가 착수되었다.
낮은 농도의 폴리소르베이트 20(2-[2-[3,4-비스(2-하이드록시에톡시)옥솔란-2-일]-2-(2-하이드록시에톡시)에톡시]에틸 도데카노에이트; 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트)은 바람직한 제품 특성을 유지하면서 교반 응력을 견디는 hsIgG 제형의 능력을 개선하는 것으로 밝혀졌다. 특히, 이러한 비이온성 계면활성제의 존재는 항체 단량체, 이량체 및 더 고도의 응집체의 상대적인 양을 유의미하게 변경시키지 않았다.
[표 2]
Figure pct00002
여과-후 250 mM 글리신/0.02% 폴리소르베이트 20(pH 4.7 내지 5.5) 제형의 샘플을 유리 바이알로 옮기고, 이를 냉장 온도(2 내지 8℃) 조건 하에서 1000 RPM으로 최대 8시간 동안 진탕하였다. 교반 전 및 교반 후 4시간 및 8시간 후에 샘플을 시험하였다. 도 4의 사진으로부터 알 수 있는 바와 같이, 제형은 교반 응력에 대해 안정하였다.
하기 표 3은 교반 응력 전 및 후에 두 제형의 제품 속성에 대한 정보를 제공한다. 알 수 있는 바와 같이, 0.02% 폴리소르베이트의 첨가는 교반 안정성을 크게 개선하였지만, 단량체/이량체 비를 변경시키지 않았다. 0.02% 폴리소르베이트 20의 첨가는, 교반 응력에 노출되기 전 또는 후에, 단백질 농도 또는 단량체, 이량체, 응집체 및 저분자량 종 백분율을 유의하게 변경시키지 않았다.
원래의 제형과 비교하여 폴리소르베이트 20-함유 제형에서 상당히 더 적은 육안으로 보이지 않는 입자 농도가 관찰되었다. 교반 응력에 노출된 후(4시간 및 8시간), 두 제형 모두에 대해 상응하는 비응력 조건과 비교하여 비견되는 입자 농도가 관찰되었다.
[표 3]
Figure pct00003
실시예 3: 5% 덱스트로스 주사제 중의 희석의 영향
환자에게 투여하기 위한 hsIgG를 제조하기 위하여, 농축된 hsIgG 제형을 2개의 0.2 마이크로미터 PES 여과막을 통해 사전 멸균된 USP 타입 1 유리 바이알 내로 멸균 여과하여 의약품을 생성한다. 바이알을 (여과 시점부터 시작하여) 제조 후 72시간 이내에 투여되도록 임상 현장으로 운송한다. 임상 현장에서, 투여 전에 의약품(100 mg/mL)을 IV 백에서 5% 덱스트로스 주사제, USP를 사용하여 60 mg/mL로 희석한다. 희석된 제품을, 선택적인 0.2 마이크로미터 인라인 필터를 갖는 표준 주입 라인 및 시스템을 사용하여 환자에게 투여한다.
성공하려면, 5% 덱스트로스 주사제, USP 중의 희석을 포함하는 이들 단계를 통해 제형이 안정하여야 한다.
이 연구에서는, 250 mM 글리신/0.02% 폴리소르베이트 20 중 100 mg/mL hsIgG를 제조하였다. 생성된 용액을 2개의 0.2 마이크로미터 PES 여과막을 통해 PETG 용기 내로 여과하였다. 옮겨진 샘플 분취물을 유리 바이알로 옮기고, 5% 덱스트로스 주사제, USP를 사용하여 60 mg/mL hsIgG로 희석하였다. 샘플을 하기 조건에서 시험하였다:
a) 5% 덱스트로스 주사제, USP 중에 60 mg/mL hsIgG로 희석;
b) 5% 덱스트로스 주사제, USP 중에 60 mg/mL hsIgG로 희석 + 5℃에서 72시간 보관; 및
c) 5% 덱스트로스 주사제, USP 중에 60 mg/mL hsIgG로 희석 + 5℃에서 72시간 보관 + 0.2 마이크로미터 PES 필터를 사용한 여과.
모든 조건 하에서, 초기 제형인, 250 mM 글리신 중 100 mg/mL hsIgG를 대조군으로 사용하였다. 이 연구의 결과가 표 4에 있으며, 여기서 250 mM 글리신/0.02% 폴리소르베이트 20 제형은 희석 시 우수한 안정성을 나타내었음을 알 수 있다.
[표 4]
Figure pct00004
이 연구에서는, 250 mM 글리신/0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20 중 100 mg/mL(hsIgG)를 제조하였다. 생성된 용액을 2개의 0.2 마이크로미터 PES 여과막을 통해 PETG 용기 내로 여과하였다. PETG 용기로부터의 샘플을 하기 조건에서 시험하였다:
a) T 제로(안정성 개시);
b) 5℃에서 1개월 보관;
c) 5℃ 및 25℃에서 3개월 보관; 및
d) 5℃에서 7개월 보관.
이 연구의 결과가 표 5에 제시되어 있으며, 여기서 250 mM 글리신/0.02% 폴리소르베이트 20 제형은 보관 시 우수한 안정성을 나타내었음을 알 수 있다.
[표 5]
Figure pct00005
실시예 4: 순도에 대한 pH의 영향
이 연구에서는, 3가지 제형을 평가하였다: H0: 100 mg/mL hsIgG, 250 mM 글리신, pH 5.2; H1: 100 mg/mL hsIgG, 250 mM 글리신, pH 5.2, 0.02% PS20; H2: 100 mg/mL hsIgG, 250 mM 글리신, pH 4.2; 및 H3: 100 mg/mL hsIgG, 250 mM 글리신, pH 4.2, 0.02% PS20. 생성된 제형을 0.2 μM PES 여과막을 통해 입자-무함유 PETG 용기 내로 여과하였다. 이어서, 제형을 2R 타입 1 유리 바이알로 옮기고 시험하였다.
Figure pct00006
더 낮은 pH를 갖는 샘플은 단량체의 SEC-HPLC에 의한 더 높은 %순도와 상관관계가 있었다. 더 낮은 pH를 갖는 샘플은 단량체 + 이량체의 SEC-HPLC에 의한 더 높은 %순도 및 더 낮은 %응집체와 상관관계가 있었다.
실시예 5: 육안으로 보이지 않는 입자 형성에 대한 폴리소르베이트 20의 영향
이 연구에서는, 전단 응력에 대한 저항성에 대한 폴리소르베이트 20의 영향을 조사하였다. 하기 3가지 제형을 제조하였다: H0: 100 mg/mL M254, 250 mM 글리신, pH 5.2; H1: 100 mg/mL M254, 250 mM 글리신, pH 5.2, 0.02% PS20; H2: 100 mg/mL M254, 250 mM 글리신, pH 4.2; 및 H3: 100 mg/mL M254, 250 mM 글리신, pH 4.2, 0.02% PS20. 제형을 0.2 μM PES 여과막을 통해 입자-무함유 PETG 용기 내로 여과하였다. 이어서, 제형을 2R 타입 1 유리 바이알로 옮기고 시험하였다.
Figure pct00007
실시예 6: 전단 응력에 대한 비이온성 계면활성제의 영향
전단 응력의 악영향으로부터 100 mg/ml의 hsIgG 제형을 보호하는 다른 계면활성제의 능력을 조사하였다. 0.02%, 0.06% 또는 0.10%의 PS20이 동일한 농도의 폴리소르베이트 80(2-하이드록시에틸 2-데옥시-3,5-비스-O-(2-하이드록시에틸)-6-O-{2-[(9E)-옥타데스-9-에노일옥시]에틸}헥소푸라노사이드; 폴리옥시에틸렌 20 소르비탄 모노올레에이트; PS80) 또는 F68(폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체 CAS 번호 9003-11-6. PubChem SID 24898182)과 마찬가지로 효과적인 것으로 밝혀졌다. 각각의 경우에, 2.4 ml의 제형 및 계면활성제-무함유 대조군이 담긴 바이알을 주위 온도에서 4시간 동안 1,000 rpm으로 교반하고 크기 배제 HPLC 및 입자 영상 분석에 의해 시각적으로 분석하였다. 교반 후, 비계면활성제 샘플은 정적 대응물과 비교할 때 약간의 혼탁함을 나타내었다. 계면활성제-함유 샘플은 투명하며, 가시적인 입자가 없었다. SE_HPLC 분석은 모든 계면활성제-함유 샘플이 유사한 단량체 백분율(88.2% 내지 89.3%)을 나타내는 것으로 나타났다. 교반 후, 비계면활성제 샘플은 그의 정적 대응물과 비교하여 더 높은 입자 농도를 나타내었다. 상당히 높은 입자 농도로 인해, 교반되는 비계면활성제 샘플은 디지털 방식으로 여과할 수 없었다. 계면활성제 함유 샘플은 비계면활성제 샘플과 비교하여 육안으로 보이지 않는 입자가 매우 낮은 수준이었다.
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 전술한 설명은 예시하고자 하는 것이고, 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정되는 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아님이 이해되어야 한다. 다른 태양, 이점, 및 변형이 하기 청구범위의 범주 내에 있다.

Claims (37)

  1. 250 mM 글리신 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 20(pH 4 내지 7) 중의 면역글로불린을 포함하고, 상기 면역글로불린의 Fc 영역 상의 분지형 글리칸의 적어도 50%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역글로불린의 농도는 50 내지 250 mg/mL인, 액체 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 면역글로불린의 농도는 70 내지 130 mg/mL인, 액체 약제학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 면역글로불린의 농도는 80 내지 120 mg/mL인, 액체 약제학적 조성물.
  5. 제2항에 있어서, 상기 면역글로불린의 농도는 90 내지 110 mg/mL인, 액체 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 Fc 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 Fab 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 90%는 IgG 면역글로불린인, 액체 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 95%는 IgG 면역글로불린인, 액체 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 5 내지 20%는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 5 내지 10%는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 80%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 85%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  15. 제13항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 90%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 5 내지 20%는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 5 내지 10%는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 적어도 80%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 적어도 85%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  20. 제18항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 적어도 90%는 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 Fc 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 면역글로불린의 Fab 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 상기 pH는 4.7 내지 5.5인, 액체 약제학적 조성물.
  25. 제1항에 있어서, 상기 pH는 5.1 내지 5.3인, 액체 약제학적 조성물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 1000개 미만의 입자를 갖는, 액체 약제학적 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 500개 미만의 입자를 갖는, 액체 약제학적 조성물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 2 내지 8℃에서 8시간 동안 1000 RPM으로 교반한 후 직경이 10 내지 100 마이크로미터인 200개 미만의 입자를 갖는, 액체 약제학적 조성물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 Fc 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 Fab 도메인 상의 분지형 글리칸의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 NeuAc-α 2,6-Gal 말단 연결을 통해 다이시알릴화되는, 액체 약제학적 조성물.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 5 내지 10%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 85%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린의 적어도 90%는 4℃에서 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24개월 동안 보관 후 단량체 또는 이량체인, 액체 약제학적 조성물.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 5℃에서 적어도 7개월 동안, 25℃에서 적어도 1개월 동안, 2 내지 8℃에서 2년 동안 및/또는 15 내지 30℃에서 2주 동안 안정한, 액체 약제학적 조성물.
  36. 제26항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보관은 밀봉된 미국 약전 타입 1 유리 바이알 내에서 수행되는, 액체 약제학적 조성물.
  37. 제26항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보관은 밀봉된 2R 타입 1 유리 주사 바이알 내에서 수행되는, 액체 약제학적 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2021009851A (es) 2019-02-18 2021-09-10 Lilly Co Eli Formulacion de anticuerpos terapeuticos.
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Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2004248155B2 (en) * 2003-06-09 2008-10-23 Redox-Reactive Reagents L.L.C. Method of altering the binding specificity of plasma proteins by oxidation-reduction reactions
EP1532983A1 (en) * 2003-11-18 2005-05-25 ZLB Bioplasma AG Immunoglobulin preparations having increased stability
CA2615122A1 (en) * 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
EP3708581A3 (en) * 2009-05-27 2021-10-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited A method to produce a highly concentrated immunoglobulin preparation for subcutaneous use
FR2961107B1 (fr) * 2010-06-15 2012-07-27 Lab Francais Du Fractionnement Composition d'immunoglobulines humaines stabilisee
EP2900264A4 (en) * 2012-09-26 2016-05-25 Momenta Pharmaceuticals Inc GLYKOPROTEINZUBEREITUNGEN
US20160108450A1 (en) * 2013-05-02 2016-04-21 Momenta Pharmaceutcals, Inc. Sialylated glycoproteins
CA2908407C (en) * 2013-05-29 2022-06-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Quantitative control of sialylation
WO2018131893A1 (ko) * 2017-01-11 2018-07-19 ㈜셀트리온 안정한 액체 제제

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