KR20210158867A - Hdl 콜레스테롤 수준 증가에 의한 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 메틸 시클로덱스트린 기재의 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, HDL 콜레스테롤 수준의 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도(MS)를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 신규 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환의 치료 및/또는 예방에서의 상기 제약 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 제약 조성물은 또한 순환하는 지방산 및 트리글리세리드 수준의 감소 및 죽종성 플라크의 감소 또는 방지를 자극하는 데 사용될 수 있다.

Description

HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의한 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 메틸 시클로덱스트린 기재의 조성물{COMPOSITIONS BASED ON METHYL CYCLODEXTRINS FOR THE TREATMENT AND/OR PREVENTION OF DISEASES BY INCREASING THE HDL CHOLESTEROL LEVEL}

본 발명은 개체에서의 HDL 콜레스테롤 수준 증가를 가능하게 하는 제약 조성물에 관한 것이다. 본 발명은, 보다 구체적으로 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의, 또는 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 또는 중추 신경계 질환의 치료 및/또는 예방에서의 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

콜레스테롤은 수많은 생화학적 과정에서 필수적 역할을 하는 스테롤 패밀리의 지질이다.

이는 동물 세포막의 안정성 및 인지질 사이의 삽입에 의한 동물 세포막의 구조 유지에 기여하는 동물 세포막의 주성분이다. 실로, 콜레스테롤은, 이것이 지방산 결정화를 방지하고 또한 수용성 분자에 대한 막 투과성을 감소시키기 때문에, 막의 겔화를 방지함으로써 막을 경화시킨다. 막 내로의 삽입에 의해, 콜레스테롤은 또한, 기능성 단백질의 정착에 필수적인 영역인 지질 래프트의 형성을 가능하게 한다.

게다가, 콜레스테롤은 또한 뉴런에서 발견되고, 여기서 콜레스테롤은 엑소사이토시스(exocytosis)에 의한 신경전달물질 합성 및 그에 따라 신경 메시지 전파를 가능하게 한다. 이는 베타-아밀로이드 펩티드의 형성 및 그에 따라 알츠하이머병의 발병에 직접적으로 관련된다. 죽상경화증과 알츠하이머병 사이의 연관성이 또한 입증되었다(Mikael Simons and al., "Cholesterol depletion inhibits the generation of b-amyloid in hippocampal neurons", Proc. Natl. Acad. Sci. USA; Vol. 95, pp. 6460-6464, May 1998, Neurobiology).

콜레스테롤 대사는 또한 수많은 분자, 예를 들어 스테로이드 호르몬(코르티솔, 코르티손 및 알도스테론), 스테로이드 성 호르몬(프로게스테론, 에스트로겐 및 테스토스테론), 비타민 D3, 헴 A, 프레닐화 및 파르네실화 단백질, 유비퀴논 또는 코엔자임 Q10, 돌리콜, 핵 인자 NF 카파 B, 타우 단백질 및 담즙산 염의 전구체이다.

콜레스테롤은 매우 다양한 역할을 갖는 수송 시스템, 즉 LDL 지질단백질(저밀도 지질단백질) 및 HDL 지질단백질(고밀도 지질단백질)에 의해 혈액 내에서 운반된다.

HDL 콜레스테롤은 심혈관 질환에 대하여 보호성을 갖는 것으로 여겨지고, 흔히 "좋은 콜레스테롤"로서 나타내어진다.

콜레스테롤-수송 LDL은 동맥 벽 내를 투과하고, 이어서 이 동맥 벽 내에 위치하는 단핵구 및 대식세포에 의해, 또한 평활근 세포에 의해 흡수된다. 이는 대식세포 및 평활근 세포 내의 과도한 지질 부하를 초래하고, 이는 이어서 죽상경화증의 과정의 원인이 되고, 죽종성 플라크 형성의 제1 단계에 상응하는 포말 세포로 전환된다. 따라서, 이는 "나쁜 콜레스테롤"의 문제가 된다.

죽종은 세계 보건 기구에 의해 "내측 변화와 연관된 지질, 복합 탄수화물, 혈액 및 칼슘 침착물의 중심 축적으로 이루어진 대직경 및 중직경 동맥의 내막에서의 변화의 가변적 조합"으로서 정의된다. 죽종은 대부분의 심혈관 질환의 원인이 되며, 산업화된 국가에서의 질병 및 사망의 주요 원인이다. 죽종은, 동맥의 내피와 중막 사이에 위치하는, 혈류에 대한 영향이 없는 지방의 단순 선형 침착물인 "지방 선조(fatty streak)"의 형성으로 시작된다. 시간 경과에 따라, 이 선조는 보다 커지고, 지질, 섬유소원, 혈소판 및 기타 다른 혈액 세포, 및 칼슘이 로딩되게 되어, "죽종성 플라크"를 구성할 수 있다. 상기 플라크는 다소 대형이 되고, 유속을 감소시키기에 충분히 동맥의 직경을 감소시킬 수 있다.

두 가지 유형의 합병증이 있는데, 첫번째는 장기간에 걸쳐 발생하는 것이며, 이는 상기 플라크의 느린 성장에 기인하며, 폐색에 의해 완전히 혈액의 통로를 막을 때까지 점점더 혈액의 통로를 손상시키는 것이다. 두번째는, 급속하며 급성 합병증의 원인이 되는 것이며, 이는 내피에 대한 손상 또는 내피의 파열로 이루어지고, 이어서 형성된 파열 틈이 혈소판의 응집 및 혈전의 형성에 의해 블록킹되고, 이는 급속히 전체적으로 혈관을 블록킹할 수 있다. 이러한 혈전이 또한 탈착되어 추가로 하류를 블록킹할 수 있다. 혈소판이 또한 부분적으로 탈착되어 또한 동맥을 블록킹할 수 있거나, 또는 보다 드물게는 혈소판의 내용물을 방출시켜 콜레스테롤 색전증을 생성할 수 있다. 마지막으로, 플라크의 부피 증가에 의해 유도되는 동맥 벽의 팽창이 파열 위험을 갖는 동맥류를 초래할 수 있다.

적절한 식이에 추가로, 죽종을 방지하기 위해 가장 폭넓게 사용되는 제약의 부류는, 순환하는 지질 및 LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키는 것을 목적으로 하는 스타틴이다. 그러나, 스타틴의 이점 및 유용성은, 모순적인 통계적 시험으로부터 논란이 되는 분석 후에 스타틴이 환자에게 기대되는 치료적 이점을 제공하지 않는다고 주장하는 일부 연구자 및 임상의에 의해 얼마간 혹평되어 왔다. 이러한 암시에 추가로, 유해한, 그리고 심지어 때로는 극적인 부작용이 규명되었고, 이는 일부 경우에 시장으로부터 회수되기에 이르렀다.

현재 제안된 기타 다른 약물 치료는,

- 혈소판 응집 억제제, 예컨대 아스피린 또는 클로피도그렐(죽종성 플라크로부터의 혈전의 형성을 감소시키는 것으로 추정됨);

- 항고혈압제, 예컨대 안지오텐신-전환 효소 억제제

이다.

따라서, 현존하는 제약 치료는 단지 죽종 연관 위험을 감소시키는 것을 목적으로 한다. 시장에 존재하는 약물 중 어느 것도 죽종성 플라크를 직접 공격하지는 않는다.

생명 예후가 작용하는 경우, 치료는 외과적 치료 또는 혈관내 치료이다. 이는 동맥 내강을 회복시키거나, 산소-결핍 영역을 관류세척하거나, 또는 동맥류를 제거하는 것을 목적으로 한다. 이들 기법 중, 혈관형성술, 동맥내막 절제에 의한 언블록킹, 및 우회술이 언급될 수 있다.

마지막으로, 죽종 및 그의 합병증을 방지하는 주요 수단은 현재 여전히 사실상 행동적인 것, 즉 흡연 포기, 신체 활동 발달, 혈압 조절, 이상지질혈증 치료, 당뇨병 조절, 식이에 남아있다.

따라서, 죽종의 치료 및/또는 예방에 대한 충족되지 않은 필요성이 명백히 오랫동안 존재하여 왔음을 인지하여야 한다.

다양한 접근이 시도되었지만, 새로운 해결책이 유지되지는 못하였다. 특히 HDL 콜레스테롤은 1975년에 연구되기 시작하였고, 이 때 연구자들은 높은 HDL 콜레스테롤 수준과 심혈관 질환의 발병 감소 사이의 관계를 입증하였다(Rye K.A. 2013. High density lipoprotein structure, function, and metabolism: a new Thematic Series. J. Lipid Res. 54:(8) 2031-2033). 이들 연구의 긍정적 결과는, HDL 콜레스테롤 수준의 증가를 목적으로 하는 치료의 개발을 고무시켰고, 구체적으로 이러한 목적을 위하여 이들 중 대규모로 최초로 개발되고 평가되었던 제제인 CETP(콜레스테롤 에스테르 전달 단백질) 효소의 억제제가 유지될 것이다. 그러나, 이들 치료 중 어느 것도 심혈관 사건의 발생률을 감소시킬 수는 없었다.

마지막으로, 환자에서 HDL 콜레스테롤 수준 증가를 효과적으로 유도할 수 있는 시장에서 이용가능한 약물은, 특히 관련되는 대사가 현재 여전히 해명되지 않고 있기 때문에, 여전히 존재하지 않는다. 특히, HDL 콜레스테롤 수준의 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환을 효과적으로, 그리고 활동적으로 방지할 수 있는 시장에서 이용가능한 약물은 존재하지 않는다. 추가로, 죽상경화증, 특히 죽종성 플라크 형성을 방지할 수 있는 약물에 대한 지속적인 필요성이 존재한다.

0.05 내지 1.5의 특정 몰 치환도를 갖는 메틸 시클로덱스트린 기재의 제약 조성물이 HDL 콜레스테롤 수준, 특히 혈장 HDL 콜레스테롤 수준의 증가를 유도할 수 있고, 따라서 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환, 특히 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 또는 중추 신경계 질환의 치료 또는 예방에 매우 유리하다는 것을 발견하였다는 것은 본 출원인의 공로이다.

따라서, 본 발명의 목적은, HDL 콜레스테롤 수준의 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 또는 중추 신경계 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물을 제공하는 것이다.

우선적으로, 본 발명의 조성물은 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료 및/또는 예방에 사용된다. 죽종 관련 합병증은 통상적으로 허혈, 예를 들어 심근 허혈, 관상 동맥 질환, 협심증, 급성 관상 동맥 증후군, 심근 경색, 장간막 경색, 뇌졸중, 동맥류, 또는 하지 동맥병증 및 이들의 예후(저산소증/허혈 관련 예후, 예를 들어 죽상경화증에 이어지는 당뇨병)를 포함한다.

또 다른 바람직한 방식에서, 중추 신경계 질환의 치료 및/또는 예방에 사용되는 본 발명의 조성물은, 알츠하이머병, 파킨슨병 및 중추 신경계에 영향을 주는 리소좀 질환으로부터 선택된다. 중추 신경계에 영향을 주는 리소좀 질환은 바람직하게는 니만-피크(Niemann-Pick)병, 유선적으로는 니만-피크병 유형 A, 니만-피크병 유형 B, 또는 니만-피크병 유형 C로부터 선택된다.

본 발명의 제약 조성물에 사용되는 메틸 시클로덱스트린은 우선적으로 0.2 내지 1.2, 또한 훨씬 더 우선적으로는 0.4 내지 0.9의 몰 치환도를 갖는다. 유리하게는, 몰 치환도는 0.6 내지 0.8이다. 하나의 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은 메틸-β-시클로덱스트린이다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 또는 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆, 바람직하게는 C₂ 및 C₆ 탄소의 조합에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된다.

바람직하게, 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 및 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆, 바람직하게는 C₂ 및 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 메틸-β-시클로덱스트린을 포함하며, 상기 메틸-β-시클로덱스트린은 0.6 내지 0.8의 몰 치환도를 갖는다.

유리하게, 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 50%, 60% 또는 75% 이상의 메틸을 포함한다.

선택적으로, 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 조성물은 또한, 비치환된 시클로덱스트린, 특히 β-시클로덱스트린, 및/또는 바람직하게는 0.05 내지 1.5의 치환도를 갖는, 술포부틸 에테르(SBE-) 및 히드록시프로필(HP-) 기로 치환된 시클로덱스트린, 특히 β-시클로덱스트린을 포함한다.

본 발명과 관련하여 사용되는 제약 조성물은 또한 하나 이상의 추가의 활성제를 포함할 수 있다.

추가의 활성제는 우선적으로 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료에 사용되는 활성제, 우선적으로는

- 스타틴,

- 바람직하게는 아스피린, 클로피도그렐, 새로운 경구용 항혈액응고제(예컨대 다비가트란, 아픽사반 또는 리바록사반), 및 항비타민 K로부터 선택되는 혈소판 응집 억제제 또는 항혈액응고제,

- 바람직하게는 안지오텐신-전환 효소 억제제, 예컨대 페린도프릴, 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴 또는 라미프릴; 및 안지오텐신 II 수용체 길항제, 예컨대 로사르탄, 발사르탄 또는 칸데사르탄; 및/또는 베타-차단제, 예컨대 아세부톨롤, 라베탈롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 펜부톨롤, 핀돌롤 또는 프로프라놀롤로부터 선택되는 항고혈압제,

- 또는 이들의 조합

이다.

바람직하게, 추가의 활성제는 안지오텐신 II 수용체 길항제, 예컨대 로사르탄, 발사르탄 또는 칸데사르탄이다.

본 발명에 따른 제약 조성물은, 경구, 비경구, 피부 또는 점막 투여될 수 있다.

하나의 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 또한, 순환하는 지방산 및 트리글리세리드 수준의 감소를 촉진시키는 데 사용된다.

또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 사용된다.

또한, 또 다른 특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 조성물은 인지질 소포를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않는다.

본 발명의 추가의 주제는, 트리글리세리드 수준을 감소시키기 위한 및/또는 유리 지방산의 농도를 감소시키기 위한 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준을 증가시키기 위한, 0.05 내지 1.50, 바람직하게는 0.60 내지 0.80의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 조성물의 비-치료적 용도에 관한 것이다.

도면 설명
도 1: 본 발명에 따른 메틸-β-시클로덱스트린의 ¹H NMR 스펙트럼.
도 2: 메틸-β-시클로덱스트린의 MS의 함수로서의 콜레스테롤 유출 측정.
도 3: 메틸-β-시클로덱스트린의 MS의 함수로서의 ABCA1 수송체의 발현.
도 4: 메틸-β-시클로덱스트린의 MS의 함수로서의 ABCG1 수송체의 발현.
도 5: 메틸-β-시클로덱스트린의 MS의 함수로서의 SR-B1 수용체의 발현.

본 발명자들은, HDL 콜레스테롤 수준의 증가에 의해 및/또는 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 신규 용도를 규명하였다.

특히 본 발명자들은, 놀랍게도, 본 발명의 조성물이 개체에서의 HDL 콜레스테롤 수준을 증가시키고, 추가로 순환하는 지방산 및 트리글리세리드 수준을 감소시키며 죽종성 플라크를 감소시키는 효과를 갖는다는 것을 발견하였다. 따라서 본 발명자들은, 본 발명의 조성물이, 그의 다양한 특성에 의해, 특히 조직 내 콜레스테롤의 과부하, 및/또는 저장 및/또는 축적 연관 질환, 또한 이들의 예후의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다는 것을 입증하였다. 특히, 이들 질환은 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C를 포함한다.

따라서 본 발명은, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환, 특히 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 이는 또한, 죽종성 플라크의 감소에 의해 또는 죽종성 플라크 형성의 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 및/또는 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환, 특히 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C를 앓고 있는 개체에서의, 본 발명에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량 투여를 위한, 상기 제약 조성물의 사용 방법 또는 공정에 관한 것이다.

본 발명은 또한, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 및/또는 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환, 바람직하게는 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 제조에서의, 본원에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

메틸 시클로덱스트린

시클로덱스트린은 전분의 효소적 분해로부터 유래되는 시클릭 올리고사카라이드이다. 3 개의 가장 통상적인 천연 시클로덱스트린은, 서로 α-1,4 결합에 의해 연결된, 사슬 구조의 6, 7 또는 8 α-D-글루코피라노스 단위로 이루어진다. 이들은 보다 통상적으로 각각 α, β, 또는 γ 시클로덱스트린으로서 언급된다. 이들의 3차원 구조는, 그 외부에 시클로덱스트린의 고도 친수성 부분을 나타내는 히드록실 기가 있는 원뿔대 형태로 나타난다. 시클로덱스트린의 원뿔의 내부 또는 공동은 C₃ 및 C₅ 탄소에 의해 보유된 수소 원자, 또한 글리코시드 결합에 관여하는 산소 원자로 구성되고, 이는 따라서 시클로덱스트린에게 비극성 성질을 제공한다. 친수성 외부 부분 및 소수성 공동을 갖는 시클로덱스트린은 일반적으로 소수성 화합물을 캡슐화하는 이들의 능력을 위해, 그리고 그에 따라 이들의 소수성 활성 물질-보호 및 -가용화 역할에 대해 사용된다. 따라서, 시클로덱스트린은 통상적으로 식품-가공 분야에서 뿐만 아니라 생약학(galenics)에서 발견되고, 여기서 시클로덱스트린은 경구 투여 제약 제형에서 또는 국소 투여 화장품 제형에서 부형제로서 사용된다.

천연 시클로덱스트린의 수 용해도를 개선시킨다는 관점에서, 히드록실 관능기 상에 다양한 기를 그래프팅함으로써 많은 유도체가 합성되었다. 사실상 시클로덱스트린의 글루코피라노스 단위는 각각, C₂, C₃ 및 C₆ 탄소에 의해 보유된 3 개의 반응성 히드록실 기를 포함한다.

유도체의 예로서, 히드록시프로필 시클로덱스트린, 메틸 시클로덱스트린 및 시클로덱스트린의 "황산화된" 유도체가 언급될 수 있다. 특히,

및 Szetli는, 메틸 시클로덱스트린의 경우, 메틸화도의 증가가 가용화를 2의 몰 치환도까지 촉진시키고, 그 초과에서는 가용화가 감소한다는 것을 나타내었다.

일부 저자들은 또한, 제약학적 부형제 역할을 통하는 것 이외에서 시클로덱스트린 및 그의 유도체에 대한 관심을 나타내었다.

예를 들어, 특허 출원 WO 02/43742에는, 시클로덱스트린 또는 히드록시프로필 시클로덱스트린의 콜레스테롤 대사에서의, 그리고 특히 대식세포로부터의 콜레스테롤 유출 촉진을 위한 역할이 기재되어 있다. 이 출원에서, 저자들은 시클로덱스트린이 두 가지 작용 메커니즘을 가짐을 상기시킨다. 콜레스테롤에 대한 높은 친화력을 갖는 시클로덱스트린은 대식세포의 막 콜레스테롤을 복합체 형성함으로써 직접적으로 작용한다. 다른 한편으로, 콜레스테롤에 대한 낮은 친화력을 갖는 시클로덱스트린은 세포 막으로부터 인지질 소포인 세포외 수용체로의 콜레스테롤 유출에 대한 촉매로서 작용한다. 따라서, 후자의 경우, 콜레스테롤 유출은 외인 수용체 인지질 소포인 또 다른 요소의 존재 하에서만 수행될 수 있다. 따라서, 콜레스테롤에 대한 약리 효과가 선행 기술에 언급되어 있지만, 시클로덱스트린의 치료적 관심은 매우 논쟁이 여지가 있는 것으로 남아있다.

이는, 고-친화력 시클로덱스트린이, 콜레스테롤의 복합체 형성에서의 이들의 활성에 의해, 상당한 양으로 투여되어야 하고, 이는 제약상 허용가능하지 않으며 다량의 가용화된 콜레스테롤로 인해 독성 문제를 일으키기 때문이다.

저-친화력 시클로덱스트린의 경우에는, 이들이 인지질 소포와 공동-투여될 필요성으로 인해, 현 지식에 비추어, 특히 인지질 소포가 매우 불안정적이기 때문에, 매우 지나치게 복잡한 기술이 된다.

기타 다른 활성제 중에서도 메틸 시클로덱스트린의 사용이 죽상경화증의 치료에서 제안되었다(WO 2006/032905). 특히, 상기 특허 출원은, 메틸 시클로덱스트린이 산화된 LDL과 단핵구 사이의 결합을 억제할 수 있음을 제안한다. 혈장 콜레스테롤 수준을 변화시킴으로써 염증 반응을 조절하는 방법에서 메틸-β-시클로덱스트린의 사용이 제안되었다(US 2008/0032925). 상기 출원에서 사용된 메틸-β-시클로덱스트린은 Sigma Aldrich에서 시판되는 1.5 훨씬 초과의 몰 치환도를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린이다.

본 발명에서, 본 발명자들은, 환자에서 독성과 연관된 단점을 가능한 한 감소시키면서 혈장 HDL 콜레스테롤 수준을 현저히 증가시키는 것을 목적으로 하여 활성 성분으로서 작용하는 특정 시클로덱스트린의 조성물을 사용한다. 본 발명의 조성물은 이들의 특정한 특성, 즉 비교적 낮은 치환도, 특히 메틸화도, 또한 콜레스테롤에 대한 낮은 친화력에 의해 독성 문제를 무시할 수 있게 한다.

놀랍게도, 콜레스테롤에 대한 낮은 친화력에도 불구하고, 본 발명에 따라 사용되는 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은 이들의 효과를 발휘하기 위한 인지질 소포의 첨가를 필요로 하지 않는다.

본 발명자들에 의해 얻어진 결과는, 이들 특정 메틸 시클로덱스트린의 상이한 작용 방식을 제안하며, 이는 콜레스테롤의 복합체 형성이나 인지질 소포로의 수송의 촉매작용을 포함하지 않는 것으로 보인다.

전적으로 원래는, 이들 메틸 시클로덱스트린은, 시클로덱스트린과 또는 인지질 소포와 복합체 형성된 형태가 아닌, HDL 콜레스테롤 형태로 콜레스테롤의 유출을 촉진시키는 것으로 보인다.

이러한 이유로, 본 발명에 따른 조성물은 인지질 소포를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않는다. 본원에서 용어 "실질적으로 갖지 않는"은, 조성물이 조성물에 대하여 10 중량% 미만, 바람직하게는 5 중량%, 특히 바람직하게는 2 중량%, 1 중량% 또는 0.5 중량% 미만의 인지질을 포함함을 나타낸다. 용어 "실질적으로 갖지 않는"은 또한 100, 1000 또는 10 000 초과인 시클로덱스트린 양과 인지질 양 사이의 몰 농도비에 의해 정의될 수 있다.

따라서, 본 발명은, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 및/또는 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 신규한 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C의 치료 및/또는 예방에서의, 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 신규 용도에 관한 것이다. 용어 "몰 치환도(MS)"는, 글루코피라노스 단위 당 치환된(특히 메틸 기로 치환된) 히드록실의 수를 의미하는 것으로 의도된다. 몰 치환도(MS)는, 시클로덱스트린 분자 당 치환된(특히 메틸 기로 치환된) 히드록실의 수에 상응하며 따라서 메틸 시클로덱스트린을 구성하는 글루코피라노스 단위의 수를 고려하는 분자 치환도(DS)와 상이함을 인지하여야 한다.

MS는 본 발명에서 양성자 핵 자기 공명(NMR), 또는 질량 분광측정(전기분무 이온화 질량 분광측정(ESI-MS) 또는 매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 질량 분광측정(MALDI-MS))에 의해 결정될 수 있다. 이들 기법은 당업자에게 잘 공지되어 있으나, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 MS 결정에 대한 최적 조건은 특히 Romain JACQUET의 참조 논문 "Cyclodextrines hydrophiles:

et complexante. Utilisation de la chromatographie en phase liquide et de la

de masse"["Hydrophilic cyclodextrins: characterization and study of their enantioselective and complexing properties. Use of liquid chromatography and mass spectrometry"](생물학적 관심 화합물의 화학 및 물리화학에 대한 논문(Thesis on the chemistry and physicochemistry of compounds of biological interest). 프랑스 오를레앙 대학, 2006년. 특히 http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/18/55/42/PDF/jacquet.pdf(11.27.2013에 조사됨)에서 이용가능함, 특히 챕터 2, 파트 B(페이지 59 내지 83))에 잘 기재되어 있다.

바람직하게, MS는 하기 방법에 따라 NMR에 의해 결정된다: 측정은 25℃에서 Advance DPX 250 MHz 장치(Bruker, 독일 라인스테튼) 상에서 수행한다. 보정은 D₂O 신호에 의해 수행한다. 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린 및 천연 시클로덱스트린, 즉 비-메틸화된 시클로덱스트린의 샘플을 0.75 ml의 D₂O 중 5 mg의 농도로 제조한다. 용액을 질소 스트림 하에 건조물로 증발시키고, 이어서 0.75 ml의 D₂O 중에서 재구성한다. 이 작업을 2 회 반복하여 히드록실 관능기의 양성자의 전체 교환을 보장한다. 천연 시클로덱스트린의 스펙트럼과 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 스펙트럼 사이의 적분 차로부터 MS를 계산한다. 통상적인 스펙트럼이 도 1에 나타내어져 있다.

본 발명에 따라 사용되는 메틸 시클로덱스트린은 순수 생성물에 상응할 수도 있지만, 이는 일반적으로는 상이한 구조의 메틸 시클로덱스트린의 혼합물에 상응함을 인지하여야 한다. 이는, 예를 들어, 특히 Romain JACQUET의 상기 언급된 논문(특히 챕터 2, 파트 B(페이지 59 내지 83))에서 결정된 물리화학적 특성을 갖는, 본 출원인에 의해 상표명 KLEPTOSE^® CRYSMEB으로 시판되는 생성물의 경우에 그러하다.

그 결과로, 이 경우에 측정된 MS는 메틸 시클로덱스트린의 전체 혼합물의 모든 글루코피라노스 단위 상에서 일어나는 치환의 평균이다.

이 혼합물은 특히 잔류 천연 시클로덱스트린, 즉 비-메틸화된 시클로덱스트린을 함유할 수 있지만, 상기 시클로덱스트린은 일반적으로 무시할만한 양, 특히 메틸 시클로덱스트린의 총 건조 중량에 대하여 1%(건조 중량 기준) 미만, 우선적으로는 0.5% 미만, 더 우선적으로는 0.1% 미만으로 존재한다.

본 발명과 관련하여, 조성물은 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함한다. 유리하게, 메틸 시클로덱스트린은 0.1 내지 1.4, 우선적으로는 0.1 내지 1.3, 우선적으로는 0.2 내지 1.2, 우선적으로는 0.3 내지 1.1, 우선적으로는 0.3 내지 1, 우선적으로는 0.5 내지 0.9, 우선적으로는 0.6 내지 0.8, 예를 들어 0.7, 특히 0.67의 MS를 갖는다. 예를 들어, 메틸 시클로덱스트린은 0.10 내지 1.40, 0.10 내지 1.30, 0.10 내지 1.20, 0.15 내지 1.40, 0.15 내지 1.30, 0.15 내지 1.20, 0.20 내지 1.40, 0.20 내지 1.30, 0.20 내지 1.20, 0.20 내지 1.10, 0.25 내지 1.40, 0.25 내지 1.30, 0.25 내지 1.20, 0.25 내지 1.10, 0.15 내지 0.90, 0.15 내지 0.80, 0.25 내지 1.00, 0.25 내지 0.90, 0.25 내지 0.80, 0.30 내지 1.40, 0.30 내지 1.30, 0.30 내지 1.20, 0.30 내지 1.00, 0.50 내지 0.90, 그리고 0.60 내지 0.80의 MS를 가질 수 있다.

우선적으로, 본 발명과 관련하여 사용되는 메틸 시클로덱스트린의 메틸 기의 50% 이상, 우선적으로는 60% 내지 80%, 통상적으로는 약 75%는 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유되는 히드록실의 수준에 위치한다.

동시에, 기타 다른 메틸 기는 일반적으로 대부분 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유되는 히드록실의 수준에 위치한다.

당업자는, 예를 들어 NMR에 의해, 메틸 시클로덱스트린의 글루코피라노스 단위의 히드록실 상의 메틸 기의 분포를 결정하는 방법을 인식한다.

유리하게, 본 발명과 관련하여 사용되는 메틸 시클로덱스트린은 7 개의 α-D-글루코피라노스 단위를 포함한다. 따라서, 이는 메틸-β-시클로덱스트린이다.

하나의 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은 메틸-β-시클로덱스트린이고, 0.05 내지 1.5, 우선적으로는 0.1 내지 1.4, 우선적으로는 0.1 내지 1.3, 우선적으로는 0.2 내지 1.2, 우선적으로는 0.3 내지 1.1, 우선적으로는 0.4 내지 1, 우선적으로는 0.5 내지 0.9, 우선적으로는 0.6 내지 0.8, 예를 들어 0.7, 특히 0.67의 MS를 갖는다. 예를 들어, 메틸 시클로덱스트린은 0.10 내지 1.40, 0.10 내지 1.30, 0.10 내지 1.20, 0.15 내지 1.40, 0.15 내지 1.30, 0.15 내지 1.20, 0.20 내지 1.40, 0.20 내지 1.30, 0.20 내지 1.20, 0.20 내지 1.10, 0.25 내지 1.40, 0.25 내지 1.30, 0.25 내지 1.20, 0.25 내지 1.10, 0.25 내지 1.00, 0.25 내지 0.90, 0.25 내지 0.80, 0.30 내지 1.40, 0.30 내지 1.30, 0.30 내지 1.20, 0.30 내지 1.00, 0.50 내지 0.90, 0.60 내지 0.80의 MS를 가질 수 있다.

메틸 시클로덱스트린은, 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 또는 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆, 바람직하게는 C₂ 및 C₆의 조합에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환될 수 있다.

또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은, 메틸 기의 50% 이상, 바람직하게는 60% 내지 80%, 통상적으로는 약 75%가 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실의 수준에 위치하고, 0.05 내지 1.5, 우선적으로는 0.1 내지 1.4, 우선적으로는 0.1 내지 1.3, 우선적으로는 0.2 내지 1.2, 우선적으로는 0.3 내지 1.1, 우선적으로는 0.4 내지 1, 우선적으로는 0.5 내지 0.9, 우선적으로는 0.6 내지 0.8, 예를 들어 0.7, 특히 0.67의 MS를 갖는 메틸 시클로덱스트린, 바람직하게는 메틸-β-시클로덱스트린이다. 예를 들어, 메틸 시클로덱스트린은 0.10 내지 1.40, 0.10 내지 1.30, 0.10 내지 1.20, 0.15 내지 1.40, 0.15 내지 1.30, 0.15 내지 1.20, 0.20 내지 1.40, 0.20 내지 1.30, 0.20 내지 1.20, 0.20 내지 1.10, 0.25 내지 1.40, 0.25 내지 1.30, 0.25 내지 1.20, 0.25 내지 1.10, 0.25 내지 1.00, 0.25 내지 0.90, 0.25 내지 0.80, 0.30 내지 1.40, 0.30 내지 1.30, 0.30 내지 1.20, 0.30 내지 1.00, 0.50 내지 0.90, 및 0.60 내지 0.80의 MS를 가질 수 있다.

하나의 바람직한 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린의 조성물은, 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 및 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆, 바람직하게는 C₂ 및 C₆에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 0.05 내지 1.5, 우선적으로는 0.1 내지 1.4, 우선적으로는 0.1 내지 1.3, 우선적으로는 0.2 내지 1.2, 우선적으로는 0.3 내지 1.1, 우선적으로는 0.4 내지 1, 우선적으로는 0.5 내지 0.9, 우선적으로는 0.6 내지 0.8, 예를 들어 0.7, 특히 0.67의 MS를 갖는 하나 이상의 메틸- β-시클로덱스트린을 포함한다. 예를 들어, 메틸 시클로덱스트린은 0.10 내지 1.40, 0.10 내지 1.30, 0.10 내지 1.20, 0.15 내지 1.40, 0.15 내지 1.30, 0.15 내지 1.20, 0.20 내지 1.40, 0.20 내지 1.30, 0.20 내지 1.20, 0.20 내지 1.10, 0.25 내지 1.40, 0.25 내지 1.30, 0.25 내지 1.20, 0.25 내지 1.10, 0.25 내지 1.00, 0.25 내지 0.90, 0.25 내지 0.80, 0.30 내지 1.40, 0.30 내지 1.30, 0.30 내지 1.20, 0.30 내지 1.00, 0.50 내지 0.90, 그리고 0.60 내지 0.80의 MS를 가질 수 있다. 바람직하게는, 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 50%, 60% 또는 75% 이상의 메틸을 포함한다.

이전에 언급된 바와 같이, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린은 혼합물일 수 있다. 메틸-β-시클로덱스트린인 KLEPTOSE^® CRYSMEB 생성물의 질량 분광측정 분석에서는, 특히 이것이 DS가 서로 상이한, 7 개의 주요한 메틸 시클로덱스트린 기를 포함하는 다분산 생성물인 것으로 나타난다. 이론적으로 메틸-β-시클로덱스트린에 대해 0 내지 21의 범위일 수 있는 이 DS는, KLEPTOSE^® CRYSMEB 생성물에서 2 내지 8의 범위이다.

유리하게, 본 발명의 조성물은 0.2 내지 1.2의 MS를 갖는 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 메틸 시클로덱스트린의 혼합물을 포함한다. 바람직하게, 메틸 시클로덱스트린의 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상은 0.3 내지 1.1의 MS를 갖는다. 바람직하게, 메틸 시클로덱스트린의 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상은 0.5 내지 0.9의 MS를 갖는다. 훨씬 더 우선적으로, 메틸 시클로덱스트린의 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상은 0.6 내지 0.8의 MS를 갖는다.

메틸 시클로덱스트린의 조성물은 선택적으로, 정의된 MS를 갖는 다양한 메틸 시클로덱스트린을 첨가하여 본 발명에서 정의된 바와 같은 조성물을 얻음으로써 제조될 수 있거나, 또는 이들은 이들의 합성 결과로서 얻어질 수 있다.

따라서, 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 바람직하게는 메틸-β-시클로덱스트린의 조성물은, 몰 백분율로 표현되는 하기 치환 프로파일을 갖는다:

○ 0% 내지 5%의, 2 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 2);

○ 5% 내지 15%의, 3 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 3);

○ 20% 내지 25%의, 4 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 4);

○ 25% 내지 40%의, 5 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 5);

○ 15% 내지 25%의, 6 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 6);

○ 5% 내지 15%의, 7 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 7);

○ 0% 내지 5%의, 8 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 8);

여기서, 총 합계는 일반적으로 약 100%이지만, 조성물은 선택적으로 미량의 상이한 DS의 메틸 시클로덱스트린, 그리고 미량의 천연 시클로덱스트린, 즉 비-메틸화된 시클로덱스트린을 함유할 수 있다.

치환 프로파일은 당업자에게 잘 공지된 임의의 기법에 의해, 예를 들어 ESI-MS 또는 MALDI-TOF-MS에 의해 결정될 수 있다. 이들 두 방법을 사용한 치환 프로파일의 결정에 대한 최적 조건은 특히 Romain JACQUET의 상기 언급된 논문(챕터 2, 파트 B, 포인트 II.3 및 II.2(페이지 67 내지 82) 및 부록 II)에서 폭넓게 논의되어 있다.

하나의 바람직한 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 바람직하게는 메틸-β-시클로덱스트린의 조성물은, 50% 이상, 우선적으로는 60% 내지 80%, 통상적으로는 약 75%의 메틸 기가 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유되는 히드록실의 수준에 위치하고, 몰 백분율로 표현되는 하기 치환 프로파일을 갖는 것이다:

○ 0% 내지 5%의, 2 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 2);

○ 5% 내지 15%의, 3 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 3);

○ 20% 내지 25%의, 4 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 4);

○ 25% 내지 40%의, 5 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 5);

○ 15% 내지 25%의, 6 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 6);

○ 5% 내지 15%의, 7 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 7);

○ 0% 내지 5%의, 8 개의 메틸 기를 포함하는 메틸-β-시클로덱스트린(DS는 8);

여기서, 총 합계는 일반적으로 약 100%이지만, 조성물은 선택적으로 미량의 상이한 DS의 메틸 시클로덱스트린, 또한 미량의 천연 시클로덱스트린, 즉 비-메틸화된 시클로덱스트린을 함유할 수 있다.

또한, 전적으로, 메틸 시클로덱스트린 분자 또는 분자단을, 특히 이들의 DS에 따라, 단리하거나 그의 비율을 변화시키는 것을 고려할 수 있다.

따라서, 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은 2 내지 8 범위의 정수, 특히 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8로부터 선택되는 DS를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린이다.

또 다른 바람직한 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린은, 50% 이상, 우선적으로는 60% 내지 80%, 통상적으로는 약 75%의 메틸 기가 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유되는 히드록실의 수준에 위치하고, 2 내지 8 범위의 정수, 특히 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8로부터 선택되는 DS를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린이다.

또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.1 내지 0.3, 특히 0.2 내지 0.3, 특히 0.20 내지 0.30의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.3 내지 0.5, 특히 0.30 내지 0.50의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.5 내지 0.6, 특히 0.50 내지 0.60 의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.6 내지 0.7, 특히 0.60 내지 0.70 의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.7 내지 0.8, 특히 0.70 내지 0.80 의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.8 내지 0.9, 특히 0.80 내지 0.90 의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 0.9 내지 1.1, 특히 0.90 내지 1.10 의 MS를 갖는다. 또 다른 특정 구현예에서, 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 1.1 내지 1.2, 특히 1.10 내지 1.20의 MS를 갖는다.

일반적으로, 본 발명에 따라 사용되는 메틸 시클로덱스트린은 1%(건조 중량 기준) 미만, 우선적으로는 0.5% 미만의 환원 당 함량을 갖는다.

본 발명에 따른 메틸-β-시클로덱스트린의 조성물은 특허 US 6 602 860 B1에 기재된 방법에 의해 얻어질 수 있다. 이와 같은 조성물의 일례는 ROQUETTE FRERE 그룹에 의해 상표명 KLEPTOSE^® CRYSMEB으로 시판되며, 이는 글루코스 단위 당 0.7 개 또는 보다 구체적으로는 0.67 개 메틸의 몰 치환도를 갖는다.

선택적으로, 본 발명에 따른 조성물은 또한, 비치환된 시클로덱스트린, 특히 β-시클로덱스트린, 및/또는 술포부틸 에테르(SBE-), 히드록시에틸, 히드록시프로필(HP-), 카르복시메틸, 카르복시에틸, 아세틸, 트리아세틸, 숙시닐, 에틸, 프로필, 부틸, 술페이트 기, 바람직하게는 술포부틸 및 히드록시프로필 기로 치환되고, 바람직하게는 0.05 내지 1.5의 몰 치환도를 갖는 시클로덱스트린, 특히 β-시클로덱스트린을 포함할 수 있다.

선택적으로, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린, 특히 메틸-β-시클로덱스트린은, 추가의 기, 특히 상기에 나열된 것들로부터 선택되는 기로 치환될 수 있다. 따라서, 이는 예를 들어 황산화된 메틸-β-시클로덱스트린일 수 있다.

하나의 독특한 구현예에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 질환의 치료를 위한, 본 발명에 따른, 즉 0.05 내지 1.5, 우선적으로는 0.1 내지 1.4, 우선적으로는 0.1 내지 1.3, 우선적으로는 0.2 내지 1.2, 우선적으로는 0.3 내지 1.1, 우선적으로는 0.4 내지 1, 우선적으로는 0.5 내지 0.9, 우선적으로는 0.6 내지 0.8, 예를 들어 0.7의 몰 치환도를 갖는 기타 다른 시클로덱스트린 유도체, 바람직하게는 β-시클로덱스트린 유도체의 용도를 고려한다. 이들 시클로덱스트린 유도체, 바람직하게는 β-시클로덱스트린 유도체는, 술포부틸 에테르(SBE-) 및 히드록시프로필(HP-)로부터 선택되는 기로 치환된다. 바람직하게는, 이들 치환은 주로, 통상적으로 50%, 60%, 70% 또는 80%로 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된다.

본 발명의 하나의 대안적 방식에서는, 본 발명의 제약 조성물에서, 본 출원에서 정의된 바와 같고 α-1,4 결합에 의해 서로 연결된 α-D-글루코피라노스 단위로 구성된 메틸 시클로덱스트린이 부분적으로 또는 전체적으로 α-1,6 결합에 의해 서로 연결된 α-D-글루코피라노스 단위로 대체될 수 있다.

응용

본 발명과 관련하여, 본 출원에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물은 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 및/또는 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환, 특히 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 및/또는 중추 신경계 질환, 특히 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만 피크병 유형 C의 치료 및/또는 예방에 사용된다.

본 발명과 관련하여, HDL 콜레스테롤 수준의 증가는 임의의 유형의 생물학적 유체에서 측정된다. 이는 우선적으로 혈장 HDL 콜레스테롤 수준이다. 이 HDL 콜레스테롤 수준은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 침전에 의해, 또는 면역 기법을 사용한 직접적 균질-상 방법에 의해 측정될 수 있다. 또한 HDL을 구성하는 단백질 부분(아포(Apo) A1 단백질)을 검정할 수도 있다.

HDL 콜레스테롤 수준은 일반적으로 혈액 1 리터 당 고밀도 지질단백질(HDL)에 의해 수송되는 콜레스테롤의 몰수로서 표현된다. HDL 콜레스테롤은 LDL에 의해 수송되는 콜레스테롤과 달리 "좋은 콜레스테롤"로 여겨진다.

본 발명에 따라, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환은, HDL 콜레스테롤 수준이 치료 전 HDL 콜레스테롤 수준보다 높을 때 환자에서 증상 및/또는 원인이 사라지거나 감소되는 모든 질환이다. 바람직하게, 질환은 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 것들이다. 용어 "증가"는 5%, 7.5%, 10%, 15% 또는 20% 이상의 HDL 콜레스테롤 수준 증가를 의미하는 것으로 이해될 수 있다.

HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환은 우선적으로, 조직 내 콜레스테롤의 과부하, 및/또는 저장 및/또는 축적 연관 질환, 또한 이들의 예후이다.

조직 내 콜레스테롤의 과부하, 및/또는 저장 및/또는 축적과 연관될 수 있는 질환의 예로서, 심혈관 질환, 혈관 질환, 폐쇄성 말초 동맥 질환, 예컨대 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증이 언급될 수 있다.

다른 예로서는, 중추 신경계의 조직 내 콜레스테롤의 과부하, 및/또는 저장 및/또는 축적과 연관될 수 있는 중추 신경계 질환이 언급될 수 있다. 이와 같은 질환은, 비제한적으로, 알츠하이머병, 파킨슨병, 및 중추 신경계에 영향을 주는 리소좀 질환을 포함한다.

리소좀 질환의 예로서, 비제한적으로, 니만-피크병, 예컨대 니만-피크병 유형 A, 니만-피크병 유형 B, 또는 니만-피크병 유형 C가 언급될 수 있다.

특정 예는 중추 신경계(CNS)의 비-에스테르화된 콜레스테롤의 축적을 특징으로 하는, 니만-피크병 유형 C이다.

하나의 바람직한 구현예에서, 질환은 알츠하이머병, 파킨슨병 및 니만-피크병 유형 C로부터 선택된다.

또 다른 특정 예는 알츠하이머병에 관한 것이다. 뇌에서의 콜레스테롤의 축적이 또한 알츠하이머병의 원인이 될 수 있고, HDL 콜레스테롤 수준의 증가는 간(여기서 콜레스테롤이 분해됨)으로의 콜레스테롤의 수송을 촉진시킨다. 데이터는, 뇌에서의, 그리고 혈관계에서의 콜레스테롤 대사의 기능이상이 알츠하이머병에 밀접하게 관련될 가능성이 매우 높다는 것을 특별히 강조하여 제안한다.

지나치게 높은 콜레스테롤 수준의 존재는 종종 인지 장애, 치매 또는 파킨슨병의 발생에 대한 위험 인자인 것으로 여겨진다. 파킨슨병의 위험 증가에서의 콜레스테롤의 관련 또한 여러 연구에서 언급되었다.

이와 관련하여, 그 효과가 과량의 콜레스테롤의 간(여기서 콜레스테롤이 분해됨)으로의 수송에 기여하는 HDL 콜레스테롤 수준의 증가인 치료가 본 출원에 있어 완전한 의미를 이룬다. 실로, 분자 수준에서의 통계적 데이터 및 실험의 일련의 관찰은 알츠하이머병의 발생에서 콜레스테롤 대사에 점점 더 현저한 역할이 주어지게 한다. 특히, 죽상경화증과 알츠하이머병(AD) 사이의, 또한 알츠하이머병과 니만-피크병 유형 C 사이의 수렴이 확고히 확립되었다. 후자의 희귀병은 신경 세포 내의 콜레스테롤의 과도한 축적을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 또한, 죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환에 관한 것이다. 용어 " 죽종성 플라크의 감소"는, 바람직하게는 플라크가 치료의 부재 하에서보다 치료의 존재 하에 보다 작은 표면적을 가짐을 의미하는 것으로 의도된다. 특히, 플라크의 표면적의 감소가 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%이다. 바람직하게, 이 감소는 30% 또는 40% 이상이다. 죽종성 플라크의 표면적은 당업자에게 공지된 임의의 방법, 그리고 특히 의료 영상화 방법, 예컨대 MRI(자기 공명 영상화)에 의해 결정될 수 있다. 용어 "죽종성 플라크의 방지"는 이들 플라크의 발달 또는 형성의 감속을 의미하는 것으로 의도된다.

죽종성 플라크의 감소 또는 방지에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환은, 특히 심혈관 질환, 혈관 질환, 우선적으로는 폐쇄성 말초 동맥 질환, 예컨대 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증이다.

본 발명에 따라, 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환은, 우선적으로는 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증, 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 니만-피크병 유형 C, 그리고 유리하게는 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증이다.

본 발명의 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물의 사용에 의해 치료 및/또는 예방되는 죽종 관련 합병증은, 비제한적으로, 허혈, 예를 들어 심근 허혈, 관상 동맥 질환, 협심증, 급성 관상 동맥 증후군, 심근 경색, 장간막 경색, 뇌졸중, 동맥류 또는 하지 동맥병증이다.

또 다른 특정 구현예에서, 사용되는 본 발명의 조성물은 또한, 하나 이상의 추가의 활성제를 포함한다. 추가의 활성제는 우선적으로, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료 및/또는 예방을 위한 당업자에 의해 공지된 활성제의 군으로부터 선택된다.

치료되는 대상은 바람직하게 인간 또는 동물, 바람직하게는 인간이다. 이들은 입증된(진단된 또는 확립된) 질환을 갖거나 이 질환의 발달 위험을 가질 수 있다. 특히, 본 발명에서, 용어 "치료"는 질환의 원인 또는 증상의 감소, 질환의 출현 지연, 그의 발달 감속, 뿐만 아니라 그의 치유을 의미하는 것으로 의도된다.

죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료에 사용되는 활성제의 예로서, 하기의 것들이 언급될 수 있다:

- 스타틴;

- 항고혈압제, 특히:

○ 안지오텐신-전환 효소 억제제, 예를 들어 페린도프릴, 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴 또는 라미프릴;

○ 안지오텐신 II 수용체 길항제(또한 "사르탄", 예컨대 로사르탄, 발사르탄 또는 칸데사르탄으로서 공지됨);

○ 베타-차단제, 예컨대 아세부톨롤, 라베탈롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 펜부톨롤, 핀돌롤 또는 프로프라놀롤;

- 혈소판 응집 억제제 또는 항혈액응고제, 특히:

○ 아스피린;

○ 클로피도그렐(PLAVIX^®);

○ 새로운 경구용 항혈액응고제, 예컨대 다비가트란/Pradaxa^®, 아픽사반/Eliquis^®, 리바록사반/Xarelto^®(심방 세동 징후에서의 정맥염, 색전증 또는 뇌졸중의 예방에서 나타남);

○ 항비타민 K(이는 매우 효과적이지만, 매우 밀접한 응고 모니터링을 필요로 하기 때문에 현재 거의 사용되지 않음).

바람직하게, 추가의 활성제는 우선적으로 안지오텐신 II 수용체 길항제로부터 선택될 것이다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 비경구, 점막 또는 피부 투여될 수 있다. 비경구 경로는 우선적으로 피하, 정맥내, 근육내 또는 복강내 투여를 포함하지만, 복강내 투여가 동물에 대해 다소 지정된다. 점막 경로는 우선적으로 비내 투여, 폐 투여 또는 직장 점막을 통한 투여를 포함한다. 피부 경로는 유리하게는 경피 경로, 특히 경피 기구, 통상적으로는 패치를 통한 투여를 포함한다. 보다 특별하게 중추 신경계(CNS)에 영향을 주는 질환, 특히 니만-피크병 유형 C, 파킨슨병 또는 알츠하이머병과 관련한 다른 투여 경로는 경막내 또는 척추 경로이다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 제약상 허용가능한 부형제를 포함한다. 특히 전신 투여의 관점에서, 우선적으로 경구 투여, 비경구 투여, 피부 또는 점막 투여, 특히 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 비내, 폐, 직장, 경피, 경막내 또는 척추 경로를 통한 투여의 관점에서, 당업자에게 공지된 생약(galenical) 형태에 적합한 임의의 부형제를 사용할 수 있다. 예를 들어, 제약 용도와 상용성이며 당업자에게 공지된 완충된 등장 생리 식염수 등이 언급될 수 있다. 조성물은, 분산제, 가용화제, 안정화제, 보존제 등으로부터 선택되는 하나 이상의 작용제 또는 담체를 함유할 수 있다. (액체 및/또는 주사용) 제형에 사용될 수 있는 작용제 또는 담체는 특히 메틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리소르베이트 80, 만니톨, 젤라틴, 락토스, 식물성 오일, 아카시아, 리포솜 등이다. 조성물은 주사용 현탁액, 겔, 오일, 정제, 좌제, 분말, 겔 캡슐, 캡슐, 에어로졸 등의 형태로, 선택적으로 생약 형태 또는 지속 및/또는 지연 방출을 제공하는 기구에 의해 제형화될 수 있다. 이러한 유형의 제형에서는, 셀룰로스, 카르보네이트 또는 전분 등의 작용제가 유리하게 사용된다.

유리하게는, 본 발명에 따른 시클로덱스트린을 지질 물질과 복합체 형성된 형태로 투여하여, 이것이 비-침습성 경로에 의한 투여 후 혈류 내로 통과할 수 있게 하고/하거나, 혈액-뇌 장벽의 횡단이 요망되는 경우, 이 장벽을 횡단할 수 있게 하는 생약 형태를 생각할 수 있다. 이들 지질 물질 중에서, 특히 토코페롤이 언급될 수 있다.

본 발명과 관련하여 개체에게 투여될 수 있는 조성물은, 개체의 총 중량에 대하여, 1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 우선적으로는 20 mg/kg 내지 70 mg/kg, 훨씬 더 우선적으로는 30 mg/kg 내지 50 mg/kg, 훨씬 더 바람직하게는 40 mg/kg의, 본 발명에서 정의된 바와 같은 메틸 시클로덱스트린을 포함한다. 물론, 당업자는, 치료될 개체의 중량에 따라 본 출원에서 정의된 메틸 시클로덱스트린의 용량을 조정할 수 있다.

따라서, 유리하게, 조성물은 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환을 앓고 있는 개체에게, 또는 이와 같은 질환이 발달될 성향이 있는 개체에게 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 용어 "치료 유효량"은, 본 발명에서 정의된 바와 같은 질환의 예방 및/또는 치료를 위해 개체에게 투여될 수 있는 조성물의 충분한 양을 의미하는 것으로 의도된다.

본 발명에서 사용되는 조성물은 가변적 방식에 따라 투여될 수 있다. 특히, 이들은 주 당 1 화 내지 5 회로 1 주, 2 주, 3 주 또는 4 주 동안, 또는 심지어 1 개월, 2 개월, 3 개월 또는 수 개월 동안 주사될 수 있다. 투여 방식은 또한, 수 주 또는 수 개월 간격으로의 치료를 포함한다. 특히 죽상경화증의 치료 및/또는 예방에 대하여, 1 주의 지속기간을 갖는 3 개월 내지 6 개월(이는 12 개월까지의 범위일 수 있음) 간격의 투여가 유리하게 고려될 것이다.

본 발명의 또 다른 주제는, 또한 순환하는 지방산 및 트리글리세리드 수준의 감소를 촉진시키기 위한, 본 출원에서 정의된 바와 같은 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 주제는, 죽종성 플라크의 감소를 위한, 본 출원에서 정의된 바와 같은 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 조성물의 사용은, 동시에 HDL 콜레스테롤 수준 증가, 혈액 내에서 순환하는 트리글리세리드 및 지방산의 수준 감소 및 죽종성 플라크의 감소를 가능하게 한다. 본 발명의 조성물은 또한, 죽종성 플라크, 따라서 죽종 관련 합병증을 취약화시키는 원인이 되는 MMP-9의 감소를 유도할 수 있게 한다. 모든 이들 효과는 LDL-콜레스테롤 수준의 변형 없이, 그리고 인지되는 임의의 독성 없이 얻어진다. 또한, MMP-9의 감소는, 암의 치료 및/또는 예방에서의 사용에 대한 본 발명에 따른 조성물의 이점을 제안한다.

본 출원에서 정의된 바와 같은 조성물은 또한 건강한 대상체에서도 관심이 있다. 본 발명의 조성물은 특히 트리글리세리드 수준 및 유리 지방산의 농도의 감소 및 좋은 콜레스테롤(HDL 콜레스테롤)의 수준의 증가를 가능하게 하고, 따라서 대상체의 양호한 건강을 촉진시킨다. 결과적으로, 본 발명은 또한, 트리글리세리드 수준의 감소 및/또는 유리 지방산의 농도의 감소 및/또는 좋은 콜레스테롤(HDL 콜레스테롤)의 수준의 증가를 위한, 본 출원에서 상기에 정의된 바와 같은 메틸 시클로덱스트린의 조성물의 비-치료적 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 기능식품(nutraceutical) 조성물, 건강 식품, 기능성 식품 또는 식품 보조물로서 사용될 수 있다. 본원에서 용어 "기능식품 조성물, 건강 식품, 기능성 식품"은, 건강에 유익한 효과를 갖거나 생리적 기능을 개선시킬 수 있는 성분을 함유하는 식품을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "식품 보조물"은 정상 식이를 보충하는 것이 목적인 식품류를 의미하는 것으로 의도된다.

이들 조성물로부터 이득을 얻기에 가장 적합한 정상 또는 건강한 대상체는 40 세 이상, 바람직하게는 50 세 이상, 예를 들어 50 세 내지 70 세 연령의 개체이다. 이들 대상체는 임의의 병적 상태를 앓고 있지 않다.

인간 소비용의 식품으로 의도된 조성물은 임의의 형태를 취할 수 있고, 특히 액체, 페이스트 또는 고체일 수 있다. 특히, 조성물은 유제품, 예컨대 치즈, 버터, 요구르트 또는 크림, 과일 기재 생성물, 예컨대 과일 쥬스, 컴포트(compote) 또는 과일 젤리, 음료, 또는 고형식, 예컨대 스낵, 쿠키 등일 수 있다. 이는 또한 정제, 분말, 캡슐, 정제, 용액, 농축물, 시럽, 현탁액 또는 분산액 형태로 제제화될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 예시하고 본 발명의 기타 다른 측면 및 이점을 나타내기 위해 제공되며, 비제한적인 것으로 여겨져야 한다.

실시예

실시예 1: 본 발명의 메틸 시클로덱스트린의 시험관내 연구

수컷 11 주령 아포 E -/- 마우스를 사용하였다.

사용된 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 시판품 KLEPTOSE^® CRYSMEB(ROQUETTE)이었다.

마우스를 6 그룹으로 분할하였다:

- 2 그룹의 마우스에게 16 주 동안 정상 식이를 적용하였다. 이 죽종 모델은 조기 질환을 특징으로 한다. 제1 그룹은 플라시보 용액으로 치료하고(대조군 마우스, n=9), 제2 그룹은 40 mg/kg의 KLEPTOSE^® CRYSMEB으로 치료하였다(치료된 마우스, n=12);

- 2 그룹의 마우스에게 11 주 동안 콜레스테롤-풍부 식이를 적용하였다. 이 죽종 모델은 진행된 질환을 특징으로 한다. 제1 그룹은 플라시보 용액으로 치료하고(대조군 마우스, n=9), 제2 그룹은 40 mg/kg의 KLEPTOSE^® CRYSMEB으로 치료하였다(치료된 마우스, n=11).

치료는, 200 μl 부피의 플라시보(PBS 용액) 또는 KLEPTOSE^® CRYSMEB 용액의 주 당 3 회 복강내 주사에 의해 수행하였다. 치료 16 주 또는 11 주 후, 심장 천자에 의해 동물이 희생되었을 때 혈액 샘플을 채취하여 지질혈증에 대한 치료 효과를 측정하였다.

기타 다른 값, 예컨대 혈당증, 헤마토크리트 값(헤모글로빈 수준, 적혈구, 백혈구, 림프구 및 혈소판 카운트)을 측정하였고, 여기서 다양한 마우스 그룹 사이에서 임의의 차이는 나타나지 않았다. 결과적으로, 이들 결과는 본원에 나타내지 않는다.

또한, 희생 후, 문헌 "Caligiuri G, Groyer E, Khallou-Laschet J, Al Haj Zen A, Sainz J, Urbain D et al. Reduced immunoregulatory CD31+ T cells in the blood of atherosclerotic mice with plaque thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005;25:1659-1664"에 기재된 방법에 따라, 첨판막의 개시 후 200 μm, 400 μm, 600 μm 및 800 μm에서 얻은 헤마톡실린 및 오일-레드-오(Oil-red-O)로 염색된 4 개의 10 μm의 대동맥 섹션 상에서, 각각의 마우스 그룹에 대한 죽종 표면적의 정량화를 컴퓨터-보조 형태계측에 의해 수행하였다. 또한, 죽종성 플라크 MMP-9의 면역조직화학 라벨링을 수행하고 정량화하여 상기 플라크의 취약성을 측정하였다(R&D Systems kit).

얻어진 결과는 표 1 및 2에 나타내어져 있다.

정상 식이가 적용되고 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 조성물로 치료된 마우스

	대조군 마우스(n=9)	치료된 마우스(n=12)	p
체중(g)	31.84± 2.70	30.71± 3.09	0.4137
지질혈증
총 콜레스테롤(mmol/l)	14.49± 1.65	14.19± 3.02	0.8070
LDL 콜레스테롤(mmol/l)	9.29± 1.22	9.76± 2.34	0.8621
HDL 콜레스테롤(mmol/l)	2.77± 0.15	3.03± 0.38	0.1451
트리글리세리드(mmol/l)	2.20± 0.66	1.65± 0.55	0.0491
유리 지방산(mmol/l)	1.33± 0.36	1.03± 0.40	0.0955
대동맥 판막 공동
오일-레드-오, x 10 3 μm 2	295.06± 36.25	246.14± 46.38	0.0278
MMP-9, %	6.35± 4.78	3.26± 4.84	0.0481
대동맥
플라크 표면적(%)	5.56± 2.65	3.39± 1.26	0.0278

값은 평균 ± 표준 편차로 나타내어져 있다.p 값은 Mann-Whitney U 테스트에 따라 계산된 것이다.

콜레스테롤-풍부 식이가 적용되고 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 조성물로 치료된 마우스

	대조군 마우스(n=9)	치료된 마우스(n=11)	p
체중(g)	30.44± 2.34	28.34± 2.80	0.1194
지질혈증
총 콜레스테롤(mmol/l)	21.48± 1.37	20.17± 1.37	0.4119
LDL 콜레스테롤(mmol/l)	17.05± 3.81	17.51± 4.00	0.9999
HDL 콜레스테롤(mmol/l)	3.44± 0.49	4.16± 0.82	0.0334
트리글리세리드(mmol/l)	1.47± 0.65	0.90± 0.36	0.0136
유리 지방산(mmol/l)	0.99± 0.25	0.75± 0.20	0.0310
대동맥 판막 공동
오일-레드-오, x 103 μm2	465.56± 66.99	439.45± 86.58	0.4119
MMP-9, %	22.80± 15.88	12.45± 9.80	0.1119
대동맥
플라크 표면적(%)	24.73± 6.75	15.00± 7.56	0.0200

값은 평균 ± 표준 편차로 나타내어져 있다.p 값은 Mann-Whitney U 테스트에 따라 계산된 것이다.

이들 결과에서, 치료에 기인하는 값의 이동은 풍부 식이 후에 뿐만 아니라 놀랍게도, 그리고 유리하게, 콜레스테롤이 풍부화되지 않은 정상 식이 후에도 얻어진다는 것을 인지하여야 한다.

사실상, 두 경우 모두, HDL 콜레스테롤 수준 증가가 관찰되었고, 이는 HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의 사용에 대한 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 이점을 나타낸다.

두 경우 모두, 죽종성 플라크 표면적이 현저히 감소된다. 죽종 표면적의 40%에 가까운 상당한 감소가 관찰되었다. 이들 결과는, 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료 및/또는 예방에서의 사용에 대한 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 이점을 입증한다.

트리글리세리드, 유리 지방산의 수준 및 MMP-9 수준의 감소가 관찰되었고, 이는 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료 및/또는 예방에서의 사용에 대한 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 이점을 강화시킨다.

실시예 2: 본 발명의 메틸 시클로덱스트린의 시험관내 연구

본 실시예는, 대동맥 내피 세포를 사용하여 시험된 콜레스테롤 유출에 대한 다양한 시클로덱스트린의 효과를 나타내는 것이다. 대동맥 내피는, 혈액 구획과 직접 접촉되는, 그리고 그에 따라 HDL과 직접 접촉되는 죽종성 플라크 조직이다.

물질

세포: 내피 세포는 성체 소 대동맥 내피 세포(ABAE)였다.

시클로덱스트린: 사용된 시클로덱스트린은 하기와 같다: 비-메틸화된 β-시클로덱스트린(이하, "β-CD"로 나타냄), 0.2의 MS를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린(이하, "MβCD-0.2"로 나타냄), 0.67의 MS를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린(KLEPTOSE^® CRYSMEB, ROQUETTE FRERE)(이하, "MβCD-0.67"로 나타냄), 1.8의 MS를 갖는 메틸-β-시클로덱스트린(RAMEB^®, CYCLOLAB)(이하, "MβCD-1.8"로 나타냄).

시클로덱스트린을 사용한 세포의 인큐베이션:

방사성 콜레스테롤 풍부 배지를 얻기 위해 37℃에서 6 시간 동안 0.5 μCi/ml의 3H-콜레스테롤을 혈청(10% 말 혈청/송아지 혈청(HS/CS))에 혼입하였다. 이 혼입 후, 10% HS, 10% CS, 1 ng/ml bFGF(염기성 섬유아세포 성장 인자) , 2 mM 글루타민 및 50 μg/ml 젠타마이신이 보충된 DMEM(둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's medium))의 혼입에 의해 배지를 마무리 처리하였다.

이어서, 세포를 이 방사성 배지 내에서 36 시간 동안 배양하여 이들이 방사성 콜레스테롤을 혼입할 수 있게 하였다. 이어서, 배지를 제거하고, 세포를 0.1%의 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 가온 DMEM으로 2 회 헹구었다.

이어서, 세포를 1 mM의 각각의 시클로덱스트린을 함유하는 DMEM/1 ng/ml bFGF 중에서 24 시간 동안 배양하였다(1.4 ml/웰).

A. 시클로덱스트린에 의해 포획된 콜레스테롤의 측정

본 실시예에서, 본 출원인은, 메틸화도에 따른, 콜레스테롤 유출에 대한 시클로덱스트린의 효과를 연구하였다.

각각의 시클로덱스트린의 존재 하에 인큐베이션 개시 2 시간 후, 500 μl의 배지를 제거하고, 시클로덱스트린에 의해 포획된 방사성 콜레스테롤을 섬광 계수기(Tri-carb 2100TR)에 의해 검정하였다. 방사성을 분 당 붕괴(DPM)로 측정하였다. 이어서, 각각의 시클로덱스트린이 세포 콜레스테롤을 포획하는 용량을 하기 계산을 수행함으로써 추정하였다:((1.4 ml/0.5 ml) × 측정된 DPM).

이어서, 값을 백분율 형태로 환산하고, 이를 100%를 나타내는 시클로덱스트린 없이 인큐베이션된 조건(대조군)과 비교하였다.

각각의 실험을 3 중으로 수행하고, 2 회 반복하였다.

얻어진 결과는 도 2에 나타내어져 있다.

결과:

본 발명에 따른 MβCD-0.2 및 MβCD-0.67은, 본 발명에 따르지 않은 βCD 및 MβCD-1.8에 비해 훨씬 더 낮은 콜레스테롤 유출을 야기한다.

따라서, 본 발명자들은, 시클로덱스트린과, 또는 인지질 소포와 복합체 형성된 콜레스테롤 형태가 아닌, HDL 콜레스테롤 형태의 콜레스테롤의 유출을 나타내는, 본 발명에 따른 메틸화된 시클로덱스트린에 대하여 콜레스테롤에 대한 보다 낮은 친화력을 입증하였다.

B. 세포내 콜레스테롤 유출의 원인이 되는 수송체의 발현: ABCA1 및 ABCG1

본 실시예에서, 본 출원인은, 다양한 메틸화도를 갖는 시클로덱스트린으로의 처리 후, 콜레스테롤 유출의 원인이 되는 2 개의 수송체, 즉 ABCA1 수용체 및 ABCG1 수용체의 발현을 연구하였다.

각각의 시클로덱스트린으로의 처리 24 시간 후, 세포를 저온 PBS(8 g/l NaCl, 0.2 g/l KCl, 0.2 g/l KH₂PO₄, 2.87 g/l NA₂HPO₄(12H₂O), pH 7.4) 중에서 2 회 헹구고, 500 μl의 RLT 용균 완충제(Biorad)를 사용하여 용균시켰다. 3 개의 웰을 사용하여 각각의 조건에 대해 모았다. 제조업체의 권고에 따라 RNeasy 전체 RNA 추출 키트(퀴아겐(Qiagen))를 사용하여 메신저 RNA(mRNA) 정제를 수행하였다. 이 정제 단계 말기에, 260 nm, 280 nm 및 320 nm에서 얻어진 흡광도 값에 의해 mRNA 농도를 추정하였다. 260/280 비율을 계산하여 샘플의 순도를 확인하고, 2 초과의 값을 갖는 샘플만을 본 발명자들의 연구에서 고려하였다.

각각의 샘플에 대해, 제조업체의 지침에 따라 iScript Reverse Transcription Supermix 키트(Biorad)를 사용하여 250 ng의 mRNA로부터 cDNA를 합성하였다. Sso Fast EvaGreen Master Mix 키트(Biorad) 및 본 출원인에 의해 디자인되고 최적화된 프라이머를 사용하여(표 3) 실시간 PCR 실험을 수행하였다.

mRNA	종	서열	수탁 No
ABCA1	보스 타우루스(Bos taurus)	F 5'-gtgtctcgcctgttctcag-3'(서열번호 1) R 5'-gaaacatcacctcctgccg-3'(서열번호 2)	NM_001024693
ABCG1	호모 사피엔스(Homo sapiens)	F 5'-gaggaagaaaggatacaagacc-3'(서열번호 3) R 5'-gtcagtatctccttgaccattt-3'(서열번호 4)	BC029158

Biorad CFX96 열순환기를 사용하여 60℃의 부합화(hybridization) 온도로 40 사이클의 과정에 걸쳐 증폭을 수행하였다. 각각의 프라이머 쌍에 대하여, 용융 곡선을 생성하여 증폭 특이성을 확인하고, 희석 곡선을 생성하여 효율을 측정하였다. 이어서, 측정된 발현 수준을 ΔΔCt 방법을 사용하여 β-액틴 및 시클로필린 B의 발현 수준에 대하여 정규화하였다.각각의 실험을 3 중으로 수행하고, 2 회 반복하였다.

얻어진 결과는 도 3 및 4에 나타내어져 있다.

결과:

결과는, 시클로덱스트린으로의 처리에 반응하여, 일반적으로, 내피 세포에 의한 ABCA1 및 ABCG1 수용체의 발현이 대조군에 비해 감소함을 나타낸다.

특히, 본 발명에 따른 MβCD-0.2 및 MβCD-0.67은, βCD 및 MβCD-1.8에 비해, ABCA1 및 ABCG1 수용체 발현에서 보다 낮은 감소를 야기한다.

이들 결과를 상기에서 얻어진 결과와 조합함으로써(포인트 A), 본 발명자들은, 본 발명에 따르지 않은 βCD 및 MβCD-1.8이 ABCA1 및 ABCG1 수용체 발현을 강하게 감소시킴으로써 급속하고 상당한 콜레스테롤 유출 및 보다 강렬한 세포 반응을 유도하였음을 나타내었다.

다른 한편, 본 발명에 따른 MβCD-0.2 및 MβCD-0.67은, 이들이 보다 낮은 콜레스테롤 유출을 유도할지라도, 훨씬 낮은 정도로 ABCA1 및 ABCG1 수용체 발현을 감소시킨다.

따라서, 본 발명에 따른 메틸화된 시클로덱스트린의 콜레스테롤 유출 동력학은 본 발명에 따르지 않은 시클로덱스트린의 경우와 완전히 상이하다. 본 발명에 따른 메틸화된 시클로덱스트린의 이들 특정 동력학은 세포 콜레스테롤 항상성에 대한 보다 적은 붕괴를 야기한다는 이점을 갖는다는 것이 본 발명자들에 의해 상정된다.

C. 시클로덱스트린으로 처리된 내피 세포의 SR-B1 수용체(스캐빈저(scavenger) 수용체 클래스B 멤버 1), HDL 수용체의 발현 연구

본 실시예에서, 본 출원인은, 메틸화도에 따라, HDL 수용체, SR-B1 수용체의 발현에 대한 시클로덱스트린의 효과를 연구하였다.

내피에서의 SR-B1 수용체의 역할 중 하나는 순환에서 HDL에 대한 유리 콜레스테롤의 유출을 촉진시키는 것이다.

SR-B1 수용체의 발현을, 본 출원인에 의해 디자인되고 최적화된 프라이머를 사용하여(표 4) , 상기에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 연구하였다.

mRNA	종	서열	수탁 No
SCARB1	보스 타우루스	F 5'-cccttaatccacctcatcaatc-3'(서열번호 5) R 5'-gaagtttttgacccctgtgaac-3'(서열번호 6)	NM_174597

각각의 실험을 3 중으로 수행하고, 2 회 반복하였다.

얻어진 결과를 도 5에 나타내었다.

결과:

본 발명에 따른 MβCD-0.67은, 기저 발현의 대략 50%의, SR-B1 수용체의 강한 발현 증가를 야기한다.

결론적으로, 본 발명자들은, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린이 콜레스테롤에 대한 낮은 친화력을 나타내고, 콜레스테롤 유출의 원인이 되는 수송체 감소를 제한하고, HDL 수용체 SR-B1의 발현을 증가시켰으며, 이는 혈액으로의 세포질 콜레스테롤의 수송 촉진 및 그에 따라 혈장 콜레스테롤 수준, 특히 HDL 콜레스테롤의 증가 효과를 가짐을 나타내었다. 따라서, 본 발명자들은, 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린이, 콜레스테롤에 대한 그의 낮은 친화력에도 불구하고, 그의 효과를 발휘하기 위한 인지질 소포의 첨가를 필요로 하지 않았음(실시예 1의 생체내 결과(표 1 및 2)에 의해 나타남)을 입증하였다.

이들 결과는, HDL 콜레스테롤 수준 증가에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 질환의 치료 및/또는 예방에서의 사용에 대한 본 발명에 따른 메틸 시클로덱스트린의 이점을 강화시킨다.

SEQUENCE LISTING <110> ROQUETTE FRERES <120> COMPOSITIONS A BASE DE METHYL-CYCLODEXTRINES POUR LE TRAITEMENT ET/OU LA PREVENTION DE MALADIES PAR AUGMENTATION DU TAUX DE CHOLESTEROL-HDL <130> B1729PC00 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 1 gtgtctcgcc tgttctcag 19 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 2 gaaacatcac ctcctgccg 19 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 3 gaggaagaaa ggatacaaga cc 22 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 4 gtcagtatct ccttgaccat tt 22 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 5 cccttaatcc acctcatcaa tc 22 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> primer <400> 6 gaagtttttg acccctgtga ac 22

Claims (20)

1. 죽상경화증, 허혈, 심근 허혈, 관상 동맥 질환, 협심증, 급성 관상 동맥 증후군, 심근 경색, 장간막 경색, 뇌졸중, 동맥류, 하지 동맥병증 및 이들의 예후로부터 선택되는 적어도 하나의 질환의 치료 및/또는 예방, 및/또는 죽종성 플라크의 감소 및/또는 방지에 사용하기 위한, 0.4 내지 0.9의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 제약 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 0.6 내지 0.8의 몰 치환도를 갖는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 메틸-β-시클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆ 탄소의 조합에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 및 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 메틸-β-시클로덱스트린을 포함하며, 상기 메틸-β-시클로덱스트린은 0.6 내지 0.8의 몰 치환도를 갖는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 50%, 60% 또는 75% 이상의 메틸을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 조성물은 또한, 비치환된 시클로덱스트린, 및/또는 술포부틸 에테르(SBE-) 또는 히드록시프로필(HP-) 기로 치환된 시클로덱스트린을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 또한 하나 이상의 추가의 활성제를 포함하는 제약 조성물.
9. 제8항에 있어서, 추가의 활성제가 죽상경화증 또는 죽종 관련 합병증의 치료에 사용되는 활성제이며, 추가의 활성제는
   - 스타틴,
   - 아스피린, 클로피도그렐, 다비가트란, 아픽사반, 리바록사반, 및 항비타민 K로부터 선택되는 혈소판 응집 억제제 또는 항혈액응고제,
   - 페린도프릴, 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 또는 라미프릴으로부터 선택되는 안지오텐신-전환 효소 억제제; 및 로사르탄, 발사르탄, 또는 칸데사르탄으로부터 선택되는 안지오텐신 II 수용체 길항제; 및/또는 아세부톨롤, 라베탈롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 펜부톨롤, 핀돌롤 또는 프로프라놀롤로부터 선택되는 베타-차단제;로부터 선택되는 항고혈압제,
   - 또는 이들의 조합
   인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 추가의 활성제는 로사르탄, 발사르탄 또는 칸데사르탄으로부터 선택되는 안지오텐신 II 수용체 길항제인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 경구, 비경구, 피부 또는 점막 투여될 수 있는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 또한 순환하는 지방산 및 트리글리세리드 수준 감소를 촉진시키는 제약 조성물.
13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 인지질 소포를 갖지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
14. 죽상경화증, 허혈, 심근 허혈, 관상 동맥 질환, 협심증, 급성 관상 동맥 증후군, 심근 경색, 장간막 경색, 뇌졸중, 동맥류, 하지 동맥병증 및 이들의 예후, 알츠하이머병, 파킨슨병, 또는 니만-피크병 유형 C로부터 선택되는 적어도 하나의 질환의 예방 및/또는 개선에 사용하기 위한, 0.4 내지 0.9의 몰 치환도를 갖는 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 기능성 식품 조성물.
15. 제14항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 0.6 내지 0.8의 몰 치환도를 갖는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 메틸-β-시클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
17. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해, 또는 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆ 탄소의 조합에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
18. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 글루코피라노스 단위의 C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린, 및 글루코피라노스 단위의 C₂, C₃ 및/또는 C₆ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 메틸-β-시클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 메틸-β-시클로덱스트린을 포함하며, 상기 메틸-β-시클로덱스트린은 0.6 내지 0.8의 몰 치환도를 갖는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
19. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 메틸 시클로덱스트린의 조성물은 글루코피라노스 단위의 C₂ 탄소에 의해 보유된 히드록실 상에서 치환된 50%, 60% 또는 75% 이상의 메틸을 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
20. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 하나 이상의 메틸 시클로덱스트린을 포함하는 조성물은 또한, 비치환된 시클로덱스트린, 및/또는 술포부틸 에테르(SBE-) 또는 히드록시프로필(HP-) 기로 치환된 시클로덱스트린을 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.

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